Противоопухолевая активность gd2специфичных антител и их Fab-фрагментов в мышиной модели рака

ИММУНОЛОГИЯ № 4, 2013

IL-8. Нарушенная цитокинпродуцирующая активность иммунокомпетентных клеток может играть ключевую роль в гиперактивации эндотелия, которая обусловливает тромботические осложнения, реализующиеся в прерывание беременности. В связи с этим перспективным направлением исследований является изучение иммунологической реактивности ex vivo при беременности, протекающей на фоне генетической предрасположенности к тромбофилии или индуцированной вспомогательными репродуктивными технологиями, с целью выявления наиболее ранних предикторов возможных осложнений.

ЛИТЕРАТУРА

1. Амчиславский Е. И., Соколов Д. И., Старикова Э. А., Фрейд-лин И. С. Цитокиновый контроль процесса ангиогенеза // Мед. иммунол. - 2003. - Т. 5, № 5-6. - С. 493-506.

2. Бурлев В. А., Дубинская Е. Д., Ильясова Н. А. Антиангиогенная терапия в гинекологии: настоящее и будущее // Пробл. репрод. - 2005. - № 6. - С. 14-20.

3. Гусев Е. Ю., Черешнев В. А., Юрченко Л. Н. Системное воспаление с позиции теории типового патологического процесса // Цитокины и воспаление. - 2007. - Т. 6, № 4. - С. 9-21.

4. Орлов В. И., Авруцкая В. В., Крымшокалова З. С., Крукиер И. И. Продукция факторов роста и вазоактивных веществ при синдроме задержки роста плода // Журн. акуш. и жен. бол. -2008. - Т 57, вып. 2. - С. 84-89.

5. Павлов О. В., Сельков С. А. Продукция IL-10 и IL-11 in vitro как проявление «альтернативной активации» макрофагов плаценты // Иммунология. - 2011. - № 6. - С. 301-306.

6. Рыжикова С. Л., Дружинина Ю. Г., Рябичева Т. Г., Вараксин

Н. А. Стандартизация методики определения продукции цитокинов клетками крови ex vivo // Клин. лаб. диагн. - 2011.

- № 11. - С. 49-53.

7. Сароян Т. Т., Корнеева И. Е. Тактика ведения индуцированной беременности, наступившей на фоне тяжелого течения синдрома гиперстимуляции яичников // Акуш. и гин. - 2011.

- № 8. - С. 107-111.

8. Сухих Г. Т., Вихляева Е. М., Ванько Л. В. и др. Эндотелиальная дисфункция в генезе перинатальной патологии // Акуш. и гин. - 2008. - № 5. - С. 3-7.

9. Bujak M., Frangogiannis N. G. The role of Interleukin-1 in the pathogenesis of heart disease // Arch. Immunol. Ther. Exp. (War-sz.). - 2009. - Vol. 57, N 3. - P. 165-176.

10. Christiansen O. B., Nielsen H. S., Kolte A. M. Inflammation and miscarriage // Semin. Fetal Neonatal Med. - 2006. - Vol. 11, N 5. - P. 302-308.

11. DemirR., Seval Y., HuppertzB. Vasculogenesis and angiogenesis in the early human placenta // Acta Histochem. - 2007. - Vol. 109. - P. 257-265.

12. Smith G. C. First-trimester determination of complications of late pregnancy // J.A.M.A. - 2010. - Vol. 303, N 6. - P. 561-562.

13. WangX., Athayde N., Trudinger B. A proinflammatory cytokine response is present in the fetal placental vasculature in placental insufficiency // Am. J. Obstetr. Gynecol. - 2003. - Vol. 189, N 5. - P. 1445-1451.

14. Westphal E., Rohrbach S., Buerke M. et al. Altered interleukin-1 receptor antagonist and interleukin-18 mRNA expression in myocardial tissues of patients with dilatated cardiomyopathy // Mol. Med. - 2008. - Vol. 14, N 1-2. - P. 55-63.

Поступила 29.03.12

ИММУНООНКОЛОГИЯ

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 615.373.03:616-006.441.04].076.9

И.В. Холоденко, И.И. Доронин, П.А. Вишнякова, Е.Л. Болховитина, И.М. Молотковская,

Р.В. Холоденко

ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ GD2-CПЕЦИФИЧHЫХ АНТИТЕЛ И ИХ FAB-ФРАГМЕНТОВ В МЫШИнОЙ МОЦЕлИ РАКА

ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997, г. Москва

Ранее нами было показано эффективное цитотоксическое действие антител (АТ), специфичных к опухолеассоциированному ганглиозиду GD2, на клетках мышиной лимфомы EL-4 [1]. Подобные цитотоксические эффекты обусловлены прямым взаимодействием АТ с опухолеспецифичным антигеном и запуском программы гибели раковых клеток. Fab-фрагменты GD2-специфичных АТ сохраняют в модели in vitro цитотоксические свойства [2]. Данные результаты открывают перспективный подход использования фрагментов антител в терапии GD2-позитивных опухолей, поскольку Fc-фрагменты полноразмерных АТ вызывают ряд нежелательных побочных эффектов при их использовании в противоопухолевой терапии. В связи с этим представлялось важным в модели in vivo определить вклад прямого цитотоксического действия в общие противоопухолевые эффекты GD2-специфичных АТ и оценить перспективность их Fab-фрагментов использования в терапии GD2-позитивных опухолей. Для этого нами была создана мышиная модель перевиваемой опухоли, на которой мы показали, что GD2-специфичные АТ и их Fab-фрагменты дают заметные противоопухолеве эффекты. Однако в зависимости от стадии развития опухоли эффективность действия АТ и их фрагментов различается. В случае сформированной метастазирующей GD2-позитивной опухоли Fab-фрагменты в отличие от полноразмерных АТ не способны полностью элиминировать опухоль, они только замедляют ее рост. Таким образом, использование Fab-фрагментов является перспективным, но требует улучшения их противоопухолевых свойств, возможно, за счет увеличения времени полужизни в организме и повышения аффинности путем создания рекомбинантных форм.

Ключевые слова: GD2-сnецuфuчные антитела, Fab-фрагменты, лимфома EL-4, перевиваемая опухоль, противоопухолевая терапия

- 198 -

ИММУНООНКОЛОГИЯ

I.V Kholodenko, I.I. Doronin, P.A. Vishnyakova, E.L. Bolkhovitina, I.M. Molotkovskaya, R.V Kholodenko ANTITUMOR ACTIVITY OF GD2-SPECIFIC ANTIBODIES AND THEIR FAB-FRAGMENTS IN THE MOUSE TUMOR MODEL

Shemyakin-Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry of the Russian Academy of Sciences, 117997, Moscow, Russian Federation

We have previously shown strong cytotoxic effect of GD2-specific antibodies on the mouse lymphoma EL-4 cell line. These cytotoxic effects are caused by direct interaction of antibodies with tumor-specific antigen and subsequent initiation of cancer cell death process. In vitro the Fab-fragments of GD2-specific antibodies remain cytotoxic properties. These results provide a promising approach to use this antibody fragments in the treatment of GD2-positive tumors, as the Fc-fragments of full-length antibodies cause a number of unwanted side effects when used in cancer therapy. In this regard, it is important to determine the contribution of direct cytotoxic action into general antitumor effects of GD2-specific antibodies, and to evaluate the promise of their Fab-fragments in the treatment of GD2-positive tumors in vivo. We have created a mouse model of transplantable tumors and showed that GD2-specific antibodies and Fab-fragments have appreciable anti-tumor effects. However, effectiveness of the antibodies and their fragments are different depending on the stage of the tumor progression. In the case of formed metastatic GD2-positive tumor the Fab-fragments are not able to completely eliminate the tumor, and only slow its growth in contrast to full-length antibodies. Thus, the approach of using a Fab-fragment in cancer therapy is promising, but needs to improve their antitumor properties, possibly by increasing the half-life in the body and increase the affinity by creating recombinant forms.

Key words: GD2-specific antibodies, Fab-fragments, lymphoma EL-4, transplantable tumor, antitumor therapy

Введение. Ежегодно в РФ от онкологических заболеваний умирают около 400 тыс. человек. С каждым годом уровень заболеваемости и смертности от рака непрерывно растет и на данный момент уступает лишь болезням сердечно-сосудистой системы. Имеющиеся в арсенале онкологов широко распространенные методы лечения онкологических заболеваний дают сильные побочные эффекты. В связи с невысокой избирательностью таких методов негативному воздействию подвергаются также нормальные нетрансформированные клетки и ткани. Поэтому первостепенной задачей многих научных и клинических исследований являются разработка новых и усовершенствование имеющихся методов эффективной терапии рака и минимизация побочных эффектов. Один из таких методов - иммунотерапия с использованием моноклональных антител (АТ).

Гиперэкспрессия ганглиозидов на различных видах опухолей делает их привлекательной мишенью для иммунотерапии с использованием моноклональных АТ (mAb). Высокий уровень ганглиозида GD2 обнаружен на клетках нейробластомы, лимфомы, мелкоклеточного рака легких, большинства меланом, поэтому GD2 является удачной мишенью для воздействия опухолеспецифичных АТ. Первые и вторые стадии клинических испытаний анти-GD2-мышиных АТ 14G2a показали долгосрочную и полную ремиссию в 50% случаев

[3] . Противоопухолевые эффекты моноклональных АТ могут быть обусловлены комплементзависимой цитотоксичностью

[4] , антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичностью [5] и индукцией апоптоза [6, 7]. Таким образом, антитела к опухолеассоциированным ганглиозидам являются удачным инструментом в иммунотерапии рака.

Ранее в нашей группе была показана высокая апоптозин-дуцирующая активность GD2-специфичных АТ на клетках мышиной лимфомы EL-4 in vitro и изучены сигнальные пути этого процесса [1]. В данной работе поставлена задача оценить противоопухолевые эффекты GD2-специфичных моноклональных АТ и их Fab-фрагментов в мышиной модели перевиваемой опухоли.

Материалы и методы. Клетки мышиной Т-лимфомы EL-4 культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота

Холоденко Ирина Викторовна (Kholodenko Irina Viktorovna); Доронин Игорь Игоревич (Doronin Igor' Igorevich); Вишнякова Полина Александровна (Vishnyakova PolinaAleksandrovna); Бол-ховитина Елена леонидовна (Bolkhovitina Elena Leonidovna); Молотковская Ирина Михайловна (Molotkovskaya Irina Mikhaylovna) Холоденко роман васильевич (Kholodenko Roman Vasil'evich): e-mail khol@mail.ru

(HyClone, США), 2 мМ L-глутамина, 100 мкг/мл стрептомицина, 10 ЕД/мл пенициллина и 250 нг/мл амфотерицина (все Sigma, США). Пересев клеток осуществляли каждые 2-3 дня, посадочная концентрация клеток 75-50 тыс. клеток в 1 мл ростовой среды соответственно.

Для создания опухолевой модели использовали самцов мышей линии C57BL/6 в возрасте 3-4 нед. Клетки линии EL-4 собирали с подложки тщательным суспендированием, отмывали 2 раза центрифугированием (8 мин при 1200 об/мин) и ресуспендировали в стерильном PBS (Helicon, Россия). Экспериментальным животным в хвостовую вену вводили 3-104 клеток в 100 мкл стерильного PBS, контрольным - такой же объем PBS без клеток. Для иммунотерапии рака у экспериментальных мышей использовали GD2-специфичные АТ МЕ361 и их Fab-фрагменты. АТ МЕ361 получали из гибридомы НВ9326, Fab-фрагменты АТ - ферментативным способом, как описано ранее в нашей работе [2].

Всех животных (n = 40) разделили на восемь групп:

1- я группа (n = 5) - контрольные животные (без опухоли, вводили PBS);

2- я группа (n = 5) - животные, которым внутривенно (в/в) вводили 3-104 клеток линии EL-4;

3- я группа (n = 5) - животные, которым одновременно в/в вводили опухолевые клетки и GD2-mAb (200 мкг/мышь);

4- я группа (n = 5) - животные, которым одновременно в/в вводили опухолевые клетки и Fab GD2-mAb (200 мкг/ мышь);

5- я группа (n = 5) - животные, которым в/в вводили GD2-mAb (200 мкг/мышь) через 24 ч после введения опухолевых клеток;

6- я группа (n = 5) - животные, которым в/в вводили GD2-mAb (200 мкг/мышь) через 7 дней после введения опухолевых клеток;

7- я группа (n = 5) - животные, которым через 7 дней после введения опухолевых клеток в/в вводили Fab GD2-mAb (200 мкг/мышь);

8- я группа (n = 5) - животные, которым двукратно в/в вводили Fab GD2-mAb через 7 и 14 дней (200 мкг/мышь) после введения опухолевых клеток.

Животных содержали в стандартных условиях вивария Института биоорганиеской химии БХ РАН (12 ч - день, 12 ч - ночь) со свободным доступом к брикетированному корму и воде. 2 раза в неделю производили взвешивание мышей на аналитических весах. Животных забивали методом цервикальной дислокации через 30 дней после инъекции опухолевых клеток EL-4. После вскрытия визуально оценивали наличие и количество метастаз в паренхиматозных органах, извлекали печень и почки, измеряли их массу.

- 199 -

ИММУНОЛОГИЯ № 4, 2013

Рис. 1. Почки животных.

а - почки здоровой контрольной мыши (1-я группа); б - почки мыши через 30 дней после введения опухолевых клеток (2-я группа).

Для того чтобы оценить активацию иммунной системы в ответ на развитие опухоли, из селезенок мышей выделяли спленоциты и методом проточной цитофлюориметрии определяли процентное соотношение cD8+, cD4+ Т-лимфоцитов и В-клеток. Для этого после выделения спленоциты дважды отмывали в PBS, содержащем 1% FBS и 0,02% азида натрия и инкубировали в течение 1 ч при 4°С с первичными АТ анти-CD8, анти-CD4 и анти-CD19 (все Caltag, США) в конечной концентрации 0,5 мкг/образец. По окончании инкубации клетки отмывали центрифугированием (5 мин при 1500 об/мин) и инкубировали еще 40 мин при 4°С со вторичными антивидовыми антителами, меченными FITC (1:1000) (Sigma, США). После этого клетки 2 раза отмывали PBS и готовые образцы переводили в цитометрические пробирки для дальнейшего анализа на проточном цитофлюориметре EPICS ELITE (Coulter, США). Для каждого образца регистрировали не менее 10-103 событий. Обработку результатов проводили в программе WinMDI.

Результаты и обсуждение.

Для того чтобы оценить противоопухолевую активность GD2-специфичных АТ и их Fab-фрагментов, создали сингенную мышиную модель. Для этого животным в хвостовую вену вводили клетки Т-лимфомы EL-4. Из литературных данных известно, что при таком способе введения клеток лимфомы EL-4 метастазы в основном образуются в печени [8]. После вскрытия мышей 2-й группы через 30 дней после прививания опухолевых клеток обнаружили обширное метастазирование, проявляющееся в поражении большинства органов. Почти для всех животных этой группы было характерно ожирение.

Наиболее выраженные метастазы были выявили в печени и почках (n = 5), при этом у 3 из 5 животных метастазами

Рис. 2. Средние значения массы (в г) почек в группах животных. Здесь и на рис. 4: 1 - 1-я группа; 2 - 2-я; 3 - 3-я; 4 - 4-я; 5 - 5-я; 6 - 6-я; 7 - 7-я; 8 - 8-я.

была поражена только одна почка, тогда как у 2 оставшихся животных метастазы содержали обе почки в равной степени (рис. 1).

Метастазы в почках также обнаружили в 7-й и 8-й группах, однако степень развития и метастазирования опухоли у этих животных существенно отличалась от животных из 2-й группы. Так, у животных из 7-й и 8-й групп, которым в/в вводили Fab-фрагменты АТ однократно через 7 дней и двукратно через 7 и 14 дней соответственно, после прививания опухолевых клеток развитие неоплазии было выражено слабее, причем у мышей из 8-й группы (двукратное введение Fab-фрагментов), незначительные метастазы наблюдали только в почках, но не в печени. Измерение массы почек животных во всех группах показало, что существенно от контрольных значений (почки здоровых животных) отличаются значения массы почек в 2-й и 7-й группах (рис. 2), что дополнительно подтверждает наличие в них метастаз.

Множественные метастазы в печени наблюдали только у животных во 2-й группе, которым прививали клетки лимфомы EL-4 и не производили последующей терапии. При этом

Рис. 3. Печень животных.

а - печень здоровой контрольной мыши (1-я группа); б - печень мыши через 30 дней после введения опухолевых клеток (2-я группа).

- 200 -

ИММУНООНКОЛОГИЯ

Рис. 4. Средние значения массы (в г) печени в группах животных.

печень животных из 2-й группы в отличие от таковой у контрольных животных существенно увеличилась в объеме и приобрела специфический сероватый оттенок (рис. 3).

Следует отметить, что по массе печень животных из 2-й группы не существенно отличалась от печени контрольных животных из 1-й группы. Также слабовыраженные метастазы визуально определили в печени животных из 7-й группы, которым однократно вводили Fab-фрагменты через 7 дней после прививания опухолевых клеток. Изменений по массе печени в данном случае не выявили (рис. 4).

Возможно, наблюдаемые эффекты неполного ингибирования Fab-фрагментами роста метастазирующей GD2-позитивной опухоли обусловлено их коротким временем полужизни в организме, которое составляет несколько часов. Время полужизни терапевтических белков зависит от ряда факторов, таких как размер молекулы, доступность последовательностей для протеолитического расщепления, степень гидрофильности и т. д. Молекулярная масса глобулярных белков, равная 60 кД, является критической для периода полужизни в организме; обычно если масса ниже, то период полужизни короткий, больший - выше. Молекулярная масса Fab-фрагментов примерно 45-50 кД, что и обусловливает их быстрое выведение из организма и, как следствие, слабовыраженные терапевтические эффекты.

В 3, 4, 5 и 6-й группах метастаз не обнаружили ни в почках, ни в печени. Это свидетельствует об эффективности терапии GD2-специфичными моноклональными АТ перевиваемой опухоли у мышей. Причем одинаково эффективными оказались обе используемые нами схемы введения АТ, т. е. введение АТ на ранних стадиях развития рака (3-я группа -одновременное введение опухолевых клеток и АТ; 5-я груп-

Рис. 5. Результаты цитометрического анализа CD8+ Т-клеток в популяции спленоцитов мышей 1-й (а) и 2-й (б) групп.

па - введение АТ через 24 ч после имплантации опухолевых клеток) и введение АТ после развития метастаз (6-я группа - введение АТ через 7 дней после имплантации опухолевых клеток) привело к одинаковому результату, а именно к элиминации опухоли. Более того, одновременное введение опухолевых клеток и Fab-фрагментов АТ (4-я группа) также не привело к формированию опухоли.

Для того чтобы установить возможные механизмы противоопухолевого действия GD2-специфичных АТ и их Fab-фрагментов и оценить активацию иммунной системы, мы проанализировали количественное соотношение различных классов лимфоцитов в селезенке опытных и контрольных животных. Оказалось, что существенное увеличение количества цитотоксических CD8+ Т-лимфоцитов происходило у животных, которым прививали опухолевые клетки EL-4, т. е. во 2-й группе (рис. 5), тогда как в других группах существенных изменений в количестве Т-киллеров по сравнению с таковыми в контроле не обнаружили (данные не представлены). Из этих данных следует, что, несмотря на тот факт, что в нашей работе мы использовали сингенную опухолевая модель, иммунная система реагирует на возникновение опухоли. Известно, что клеточный иммунитет, в котором цитотоксические Т-лимфоциты и натуральные киллерные клетки являются основными эффекторными клетками, играет важную роль в противоопухолевых защитных механизмах [9]. Однако увеличение количества CD8+ Т-клеток в нашем эксперименте не привело к элиминации опухоли, а значит, собственные защитные иммунные механизмы оказались неэффективными. В нашем случае увеличение количества CD8+ Т-лимфоцитов стало дополнительным маркером развития опухолевого процесса. Значимое увеличение в популяции количества CD8+ Т-лимфоцитов наблюдали только при введении опухолевых клеток без последующей терапии АТ или их фрагментами. У мышей, получавших эту терапию, изменений в количественном составе субпопуляций Т-лимфоцитов не наблюдали

Таким образом, в наших условиях была создана сингенная модель GD2-позитивной опухоли. В/в введение клеток EL-4, гиперэкспрессирующих опухолеассоциированный ганглио-зид GD2, позволяет исследовать влияние GD2-специфичных АТ и их Fab-фрагментов на опухолевый процесс, характеризующийся обширным метастазированием и поражением большинства органов, и прежде всего почек и печени. Так, основными критериями оценки развития опухоли стали изменения в массе почек и печени, а также в количестве CD8+ Т-лимфоцитов. В данной модели GD2-специфичные АТ и Fab-фрагменты АТ проявили сильные противоопухолевые эффекты. Однако в зависимости от стадии развития опухоли эффективность действия АТ и их фрагментов различается. ВслучаесформированнойметастазирующейGD2-позитивной опухоли Fab-фрагменты в отличие от полноразмерных АТ не способны полностью элиминировать опухоль, а только замедляют ее рост. Использование Fab-фрагментов позволяет in vivo вычленить вклад в противоопухолевые эффекты GD2-специфичных АТ прямого цитотоксического действия. Действительно, комплементзависимая цитотоксичность и антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность обусловлены взаимодействием с Fc-фрагментом АТ, и его отсутствие на Fab-фрагментах позволяет определить вовлеченность апоптоза, вызванного непосредственным взаимодействием фрагмента АТ с опухолевым маркером. Как видно из представленных результатов, этот механизм, изученный с использованием Fab-фрагментов, участвует в элиминации опухоли, однако полностью предотвратить метастазирование не способен. Этот результат можно объяснить определенными ограничениями использования Fab-фрагментов в качестве инструмента оценки вклада апоптоза в противоопухолевую активность АТ, специфичных к GD2. Во-первых, в наших экспериментах in vitro [2] Fab-фрагменты достигают эффективности в супрессии пролиферации клеток EL-4 лишь при

- 201 -

ИММУНОЛОГИЯ № 4, 2013

молярной концентрации в 3 раза выше, чем у полноразмерных АТ, что, вероятно, обусловлено их более низкой константой связывания с ганглиозидом GD2. Во-вторых, как описано выше, время полужизни Fab-фрагментов значительно ниже, чем у АТ. Для более эффективного использования свойства GD2-специфичных АТ индуцировать апоптоз в опухолевых клетках представляется перспективным использование модифицированных Fab-фрагментов, имеющих увеличенную молекулярную массу (например, за счет пегилирования) и, как следствие, увеличенное времени полужизни в организме. Другим подходом может служить создание рекомбинантных бивалентных фрагментов АТ, имеющих аффинность связывания, сравнимую с полноразмерными АТ,и массу более 60 кД, но лишенных Fc-фрагментов, которые вызывают ряд побочных эффектов терапевтических АТ, направленных на GD2-позитивные опухоли.

Работа выполнена при поддержке федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 гг., государственные контракты № П1065 и № 8165.

ЛИТЕРАТУРА

1. Холоденко Р.В. Апоптозиндуцирующая активность моноклональных антител 14G2a к опухолевому ганглиозиду GD2 в Т-клеточной лимфоме EL-4. Современные проблемы венерологии, иммунологии и врачебной косметологии. 2010; 8(1): 17-23.

2. Доронин И.И., Холоденко И.В., Молотковская И.М., Холоденко Р.В. Получение Fab-фрагментов GD2-специфичных антител (GD2-mAb) и анализ их противоопухолевой активности in vitro. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2012; 154(11): 616-23.

3. Холоденко И.В., Доронин И.И., Холоденко Р.В. Клинические испытания антител к ганглиозиду GD2 для терапии онкологических заболеваний: перспективы и ограничения. Современные проблемы венерологии, иммунологии и врачебной косметологии. 2010; 13(6): 79-83.

REFERENCES

1. Kholodenko R.V Sovremennye problemy venerologii, immu-nologii i vrachebnoy kosmetologii. 2010; 8(1): 17-23 (in Russian).

2. Doronin I.I., Kholodenko I.V., Molotkovskaya I.M., Kholodenko R.V. Byulleten’ eksperimental’noy biologii i meditsiny. 2012; 154(11): 616-23 (in Russian).

3. Kholodenko I.V., Doronin I.I., Kholodenko R.V. Sovremennye problemy venerologii, immunologii i vrachebnoy kosmetologii. 2010; 13(6): 79-83 (in Russian).

4. Alvarez-Rueda N., Leprieur S., Clemenceau B., et al. Binding activities and antitumor properties of a new mouse/human chimeric antibody specific for GD2 ganglioside antigen. Clin Cancer Res. 2007; 13: 5613-20.

5. Barker E., Reisfeld R. Mechanism for neutrophil-mediated lysis of human neuroblastoma cells. Cancer Res. 1993; 53(2): 362-67.

6. Aixinjueluo W., Furukawa K., Zhang Q., et al. Mechanisms for the apoptosis of small cell lung cancer cells induced by anti-GD2 monoclonal antibodies. Journal of biological chemistry. 2005; 280(33): 29828-36.

7. Kowalczyk A., Gila M., Horwacika I., Odrowa Z., Kozborb D., Rokitaa H. The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells. Cancer Letters. 2009; 281: 171-82.

8. Zhang Z., Knoepp S.M., Ku H., Sansbury H.M., Xie Y., Chahal M.S., Tomlinson S., Meier K.E. Differential expression of FAK and Pyk2 in metastatic and non-metastatic EL4 lymphoma cell lines. Clin Exp Metastasis. 2011; 28: 551-65.

9. KurokiM., Hachimine K., Huang J., Shibaguchi H., Kinugasa T., Maekawa S.-I., Kuroki M. Re-targeting of cytotoxic T lymphocytes and/or Natural killer cells to CEA-expressing tumor cells with anti-CEA antibody activity. Anticancer Research. 2005; 25: 3725-32.

Поступила 28.10.12

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013

УДК 616-006.441.04-08:615.361.4-013.3]-07

Е.Р. Черных, Е.В. Баторов, Е.Я. Шевела, Н.В. Пронкина, И.В. Крючкова, В.В. Сергеевичева, А.В. гилевич, Д.С. Баранова, В.С. Кожевников, А.А. йстани

ВЛИЯНИЕ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК НА РАННЕЕ

восстановление т-лимфоцитов у больных злокачественными лимфомами с аутологичной трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток

НИИ клинической иммунологии СО РАМН, 630099, г. Новосибирск

В работе проанализировано влияние котрансплантации мезенхимальных стромальных клеток (МСК) на раннее восстановление содержания лимфоцитов и особенности реконституции Т-клеток у больных злокачественными лимфомами с аутологичной трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК). Котрансплантацию МСК в средней дозе 0,17106/кг провели у 22 больных. Группу сравнения составили пациенты (n = 31) со стандартной аутологичной ТГСК, сопоставимые по возрасту, полу, предлеченности, режимам мобилизации, исходному содержанию и субпопуляционному составу лимфоцитов и количеству трансплантированных гемопоэтических стволовых клеток. Пациенты с котрансплантацией МСК характеризовались более эффективным ранним восстановлением содержания лимфоцитов (х2 = 0,004), более интенсивным восстановлением относительного и абсолютного количества наивных CD4+ Т-клеток (ри = 0,047 и ри = 0,022) и тенденцией к более активной реконституции CD4+-лимфоцитов в целом (pU= 0,058). При этом котрансплантация МСК не влияла на восстановление пула CD8+T-клеток. Обсуждаются возможные механизмы влияния МСК на восстановление субпопуляций Т-лимфоцитов.

Ключевые слова: реконституция лимфоцитов, мезенхимальные стромальные клетки, гемопоэтические стволовые клетки, трансплантация

- 202 -