ПОВЫШЕНИЕ ФЕРТИЛЬНОСТИ БАРАНОВ-ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДОСТИЖЕНИЙ БИОТЕХНОЛОГИИ

doi: 10.24411/0235-2451-2020-10210 УДК 636.2:57.045

Повышение фертильности баранов-производителей с использованием достижений биотехнологии*

Б. С. ИОЛЧИЕВ, Н. А. ВОЛКОВА, П. М. КЛЕНОВИЦКИЙ, В. А. БАГИРОВ

Федеральный научный центр животноводства - ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста, пос. Дубровицы, 60, Подольский р-н, Московская обл., 142132, Российская Федерация

Резюме. Не все высокоценные племенные животные производят семя требуемого качества, поэтому, чтобы использовать их более эффективно, необходимо проводить подготовку спермы. Цель исследований - определение возможности использования метода флотации (swim-up) для улучшения качества спермы высокоценных баранов-производителей. Работу проводили в 2018-2019 гг. Объектом исследования были животные (n = 5) разного генотипа: гибрид (n = 1) первого поколения (У архар, % романовская порода), гибриды (n = 2) второго поколения (% архар, % романовская порода) и чистопородные романовские бараны (n = 2). Возраст животных составил 4...8 лет. Материалами для исследования служили свежеполученные, замороженно-оттаянные образцы спермы, а также пробы после процедуры swim-up. Подвижность сперматозоидов оценивали с использованием CASA-технологии (computer-assisted semen analysis). Целостность акросом определяли путем дифференциального окрашивания набором Дифф-Квик, степень фрагментации ДНК сперматозоидов - с помощью акридин-оранжевого теста. Цикл замораживания-оттаивания спермы привел к увеличению доли неподвижных сперматозоидов с 7 до 46 %, сперматозоидов с непрогрессивным движением - с 6,0 до 12,5 %. Количество клеток с анормальной морфологией увеличилось в два раза, индекс фрагментации ДНК - с 12 до 18 %. Использование процедуры swim-up позволило выделить прогрессивно подвижные сперматозоиды. Их содержание в образцах, полученных из супернатанта (надосадочной жидкости), было больше на 5,7 % по сравнению со свежеполученным семенем и на 224 % - с замороженно-оттаянным. В пробах после процедуры swim-up достоверно снижалась доля спермиев с анормальной морфологией: по сравнению со свежеполученным семенем в 2,12 раза (с 8,5 до 4,0 %), с замороженно-оттаянным - в 4,45 раза (с 17,8 до 4,0 %).

Ключевые слова: акросома, активность сперматозоидов, ДНК сперматозоидов, сперматозоиды, флотация, swim-up. Сведения об авторах: Б. С. Иолчиев, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник (e-mail: baylar1@yandex.ru); Н. А. Волкова, доктор биологических наук, зав. лабораторией; П. М. Кленовицкий, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник; В. А. Багиров, доктор биологических наук, член-корреспондент РАН.

Для цитирования: Повышение фертильности баранов-производителей с использованием достижений биотехнологии / Б. С. Иолчиев, Н. А. Волкова, П. М. Кленовицкий и др. // Достижения науки и техники АПК. 2020. Т. 34. № 2. С. 48-52. doi: 10.24411/0235-2451-2020-10210.

*работа выполнена в рамках государственного задания, рег. № АААА-А18-118021590132-9.

Increasing fertility of stud rams using the achievements of biotechnology

B. S. Iolchiev, N. A. Volkova, P. M. Klenovitsky, V. A. Bagirov

Federal Scientific Center of Animal Husbandry -Ernst All-Russian Research Institute of Animal Husbandry, pos. Dubrovitsy, 60, Podol'skii r-n, Moskovskaya obl., 142132, Russian Federation

Abstract. Not all high-value breeding animals produce semen of the required quality; therefore, to use them more efficiently, it is necessary to prepare sperm. The purpose of the study was to determine the possibility of using the flotation method (swim-up) to improve the sperm quality of high-value stud rams. The work was performed in 2018-2019. The object of the study were animals (n = 5) of different genotypes: a hybrid (n = 1) of the first generation (1/2 argali, 1/2 Romanovskaya breed), hybrids (n = 2) of the second generation (1/4 argali, 3/4 Romanovskaya breed), and purebred Romanov rams (n = 2). The age of the animals was 4-8 years. Materials for the study were freshly obtained, frozen-thawed sperm samples, as well as samples after the swim-up procedure. Sperm motility was evaluated using CASA technology (computer-assisted semen analysis). Acrosome integrity was determined by differential staining with a Diff-Quick kit; the degree of spermatozoid DNA fragmentation was determined using an acridine-orange test. A cycle of freezing and thawing of sperm led to an increase in the proportion of motionless spermatozoids from 7% to 46% and spermatozoids with nonprogressive movement - from 6.0% to 12.5%. The number of cells with abnormal morphology doubled; the DNA fragmentation index increased from 12% to 18%. The swim-up procedure allowed isolating progressively motile spermatozoa. Their content in the samples obtained from the supernatant was 5.7% higher compared to freshly obtained sperm and 224% higher compared to frozen-thawed spermatozoa. In the samples after the swim-up procedure, the percentage of sperm cells with abnormal morphology was significantly reduced - 2.12 times (from 8.5 to 4.0%) compared to freshly obtained semen and 4.45 times (from 17.8% to 4.0%) compared to the frozen-thawed semen.

Keywords: acrosome; spermatozoa activity; DNA spermatozoa; spermatozoa; flotation; swim-up.

Author Details: B. S. Iolchiev, D. Sc. (Biol.), leading research fellow (e-mail:baylar1@yandex.ru); N. A. Volkova, D. Sc. (Biol.), head of laboratory; P. M. Klenovitsky, D. Sc. (Biol.), leading research fellow; V. A. Bagirov, D. Sc. (Biol.), corresponding member of the RAS. For citation: Iolchiev BS, Volkova NA, Klenovitsky PM, et al. Increasing fertility of stud rams using the achievements of biotechnology. Dostizheniya nauki i tekhniki APK. 2020;34(2):48-52.Russian. doi: 10.24411/0235-2451-2020-10210.

Интенсивность селекции в животноводстве в значительной степени зависит от качества используемых производителей. Необходимо отобрать особей и подобрать родительские пары, имеющие высокую племенную ценность по определенным признакам, для закрепления необходимых характеристик и получения потомства с желательным генотипом [1, 2, 3]. Для селекции важны не только показатели хозяйственно-полезных признаков, но и репродуктивные качества, так как эффективность ведения отрасли животноводства во многом определяет воспроизводство стада [4, 5, 6]. Фертильность самцов зависит

от комплекса биотических и абиотических факторов [7, 8, 9]. Качество спермы должно соответствовать определенным требованиям, и на практике большую часть эякулятов выбраковывают [10, 11]. Поэтому для использования высокоценных племенных животных в воспроизводстве необходимо проводить подготовку семени для дальнейшего использования.

В эякуляте содержатся неоднородные сперматозоиды. Они различаются по характеру движения, скорости, морфологии, состоянию акросомы, ДНК и так далее. Наряду с живыми подвижными сперматозоидами, в эякуляте есть и мертвые, продукты

распада которых оказывают отрицательное влияние на жизнеспособность остальных клеток. Развитие вспомогательной репродуктивной технологии позволило разработать такие эффективные методы сортировки сперматозоидов, как фильтрация, отмывание от плазмы, центрифугирование эякулята в градиенте плотности, swim-up (всплытие, флотация) [12, 13, 14]. С помощью этих техник можно разделить сперматозоиды на популяции с прогрессивным и непрогрессивным движением, а также неподвижные [15, 16]. Наиболее часто применяют метод swim-up, который основан на способности сперматозоидов мигрировать в половых путях. Среды, используемые для метода swim-up (например, Спермопреп, ПанЭко), по параметрам напоминает цервикальную слизь [17].

Мнения ученых и практиков относительно лучшего метода предварительной обработки сперматозоидов расходятся [18, 19, 20]. Результаты исследований показывают, что swim-up наиболее эффективен для отбора сперматозоидов с нормальной ядерной ДНК [21], но он не позволяет отделить микроорганизмы и клетки с патологической морфологией [22, 23].

Цель исследования - изучить эффективность метода флотации (swim-up) семени для улучшения фертиль-ности высокоценных баранов-производителей.

Условия, материалы и методы. Работу выполняли в 2018-2019 гг. в условиях физиологического двора Федерального научного центра животноводства - ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста. Объектом исследования были бараны-производители (n = 5) разного генотипа: гибрид (n = 1) первого поколения (У архар, У романовская порода), гибриды (n = 2) второго поколения (У архар, % романовская порода) и чистопородные романовские бараны (n = 2). Условия содержания и уровень кормления животных были одинаковыми. Возраст баранов-производителей - 4...8 лет. Материалом для исследования служили свежеполученные и замороженно-оттаянные образцы спермы, а также образцы после процедуры swim-up. Оценку подвижности сперматозоидов проводили с использованием пакета программ для оценки качества спермы «Зоосперм 1.0» (ВидеоТесТ, Санкт-Петербург).

Сбор спермы осуществляли в искусственную вагину в сезон размножения овец (октябрь-декабрь). Оценивали такие органолептические показатели, как объем, цвет и запах эякулята. Сперму разбавляли средой OVIXCell в отношении 1:1.

PR спермии NP спермии IM спермии спермиис спермиис

интактной анормальной акросомой морфологией

Рисунок. Сравнительная характеристика свежеполученной и замороженно-оттаянной спермы. РЯ спермии - прогрессивно-подвижные спермии, NP спермии - непрогрессивно подвижные спермии, 1М спермии - неподвижные спермии, DIF - индекс фрагментации ДНК сперматозоидов: - свежеполученная сперма; - заморожено-оттаянная сперма.

Для криоконсервации разбавленное семя эквили-брировали при +4 °С в течение 4 ч. Криоконсервацию осуществляли в открытых гранулах объемом 0,25 мл. Оттаивание сперматозоидов осуществляли в 1 мл 2,9%-ного цитрата натрия при температуре 37,5 °С.

Процедуру swim-up выполняли с использованием среды для подготовки сперматозоидов фирмы ПанЭко. Для этого приоткрытый флакон со средой поместили на 2 ч в СО2-инкубатор (содержание СО2 5...6 %) при температуре 37 °С. Концентрацию и жизнеспособность сперматозоидов оценивали с помощью CASA-технологии. Для этого на 0,5 мл спермы осторожно наслаивали 1,0 мл среды Спермопреп, для увеличения поверхности соприкосновения спермы со средой пробирки устанавливали под наклоном 45°. Затем их на 60 мин помещали в СО2-инкубатор при температуре 37 °С. После инкубирования отбирали 0,5 мл суперна-танта и оценивали концентрацию и жизнеспособность сперматозоидов.

Целостность акросом определяли методом дифференциального окрашивания набором Дифф-Квик (Диахим, Россия) в соответствии с инструкцией [24], степень фрагментации ДНК сперматозоидов - с помощью акридин-оранжевого теста[25].

Разделение сперматозоидов на прогрессивно-подвижные (PR, progressive motility), непрогрессивно подвижные (NP, non-progressive motility) и неподвижные (IM, immobility) проводили с использованием среды Спермопреп (по три образца каждого эякулята).

Статистическую обработку данных осуществляли с использованием программы Microsoft Excel. Определяли средние величины (M) и стандартные ошибки (m). Для сравнения средних значений между группами использовали f-критерий Стьюдента.

Результаты и обсуждение. Объем свежеполученной спермы в среднем составил (1,8±0,1) мл, цвет и запах эякулята соответствовали нормальным. Содержание в нем прогрессивно-подвижных (PR), непрогрессивно подвижных (NP) и неподвижных (IM) сперматозоидов после разбавления составило 87,0 %, 6 % и 7 %, соответственно. В разбавленной сперме 92 % сперматозоидов имели интактные акросомы. В исследуемых образцах разбавленной спермы индекс фрагментации ядерной ДНК составил 12,5 %.

Цикл замораживания-оттаивания сопровождался повреждением сперматозоидов. Эти изменения выражались в увеличении в замороженно-оттаянных эякулятах доли IM и NP сперматозоидов на 39 % и

7 %, соответственно. Одновременно доля сперматозоидов с анормальной морфологией возросла в 2 раза, индекс фрагментации ДНК сперматозоидов -на 6 % (см. рисунок).

Содержание сперматозоидов с прямолинейно-поступательным движением, полученных из супер-натанта, составило 92 %, что было в 2,2 раза больше по сравнению с аналогичным показателем, установленным для замороженно-оттаянной спермы. Разница средних величин содержания прогрессивно-

DIF

Таблица. Качество семени баранов-производителей в зависимости от процедуры предварительной обработки семени

Показатель Сперма

свежепо-лученная заморо-женно-оттаянная после процедуры swim-up

Доля прогрессивно подвижных спермиев, % 87,00 ± 3,0 41,0 ± 2,0 92,0 ± 5,2* Доля спермиев с интактной акросомой, % 91,6 ± 3,6 82,4 ± 4,5 90,0 ± 3,2 Доля анормальных спермиев, % 8,5 ± 1,5 17,8 ± 2,3 4,0 ± 0,5* Индекс фрагментации ДНК спермиев, % 12,5 ± 2,5 18,4 ± 3,6 6,0 ± 1,5*

*разница между показателями замороженно-оттаянной спермы и после процедуры swim up достоверна при р < 0,01

подвижных сперматозоидов в замороженно-оттаянных образцах и после процедуры swim-up была статистической значимой при р < 0,01 (см. табл.).

Доля сперматозоидов с интактной акросомой в разбавленной сперме и после процедуры swim-up была практически одинаковой - 91,6 и 90,0 % соответственно. При этом величина аналогичного показателя, установленная для замороженно-оттаянной спермы, была ниже на 8.9 %.

Среда, которую использовали для процедуры swim-up, по своим свойствам напоминает естественную среду органов размножения самок, поэтому в надосадочный слой всплывают сперматозоиды с прямолинейно-поступательным движением и без аномальной морфологии. Как правило, большинство клеток с аномальной морфологией неподвижны или имеют непрогрессивное движение. В образцах семени после процедуры swim-up отмечено снижение доли сперматозоидов с патологией морфологии, по сравнению с замороженно-оттаянной спермы, в 4,5 раза (р < 0,01).

В популяции всплывших сперматозоидов также снизилась частота встречаемости спермиев с нарушенной структурой ДНК, по сравнению со свежеполученной и замороженно-оттаянной спермой, на 6,5 % и 12,4 %, соответственно (р < 0,01).

Использование вспомогательной репродуктивной технологии позволяет спермой одного производителя осеменить сотни маток [26, 27]. Для осуществления искусственного осеменения и криоконсервации сперму подвергают различным технологическим обработкам и процедурам. Некоторые из этих процедур приводят к повреждению отдельных сегментов и органоидов сперматозоидов, а также к снижению ряда качественных показателей. Результаты наших исследований показали, что цикл замораживание-оттаивание спермы баранов-производителей сопровождался увеличением доли сперматозоидов с непрогрессивным движением с 7,0 % до 46,5 %, неподвижных сперматозоидов - с 6 до 12,5 %. Исследования, проведенные S. Ozkavukcu [28],

показали, что в результате замораживания-оттаивания содержание живых сперматозоидов снизилось с 83 % до 38 %, прогрессивно подвижных - с 63 % до 30 %. Цикл замораживание-оттаивание сопровождался увеличением количества сперматозоидов с анормальной морфологией, в частности, жгутика. В наших исследованиях количество таких сперматозоидов после оттаивания было в 2 раза больше (до криоконсервации 8,5 %, после оттаивания 17,8 %). M. E. Hammadeh [29] также отмечал увеличение доли сперматозоидов с аномальной морфологией в результате криоконсервации и оттаивания. Предполагается, что основная причина повреждения жгутика при проведении этих процедур - разрушение плазматической мембраны.

Наиболее эффективный метод улучшения фертиль-ности самцов - выделение из эякулята прогрессивно подвижных сперматозоидов с наилучшими показателями активности и морфологии [30]. Это позволяет получить популяцию сперматозоидов со значительно лучшими морфологическими характеристиками, по сравнению с нативным эякулятом, как при нормо-, так и при патоспермии [31, 32]. В наших исследованиях после процедуры swim-up содержание сперматозоидов с фрагментированной яДНК, по сравнению с нативной спермой, было меньше в 2 раза, а с замороженно-оттаянным семенем - в 3 раза. Аналогичные результаты получены L. Gandini [33]. По данным этих авторов индекс фрагментации ДНК в хроматине спермиев после процедуры swim-up был в 2 раза меньше, чем в свежеполученном семени.

Выводы. Использование метода swim-up (всплытие живых сперматозоидов) позволяет улучшить биологическую полноценность семени самцов-производителей. Проведение этой процедуры способствовало повышению содержания сперматозоидов с прогрессивным поступательным движением, по сравнению со свежеполученным семенем, на 5,7 %, с замороженно-оттаянным - в 2,24 раза (с 41 % до 92 %). При этом в образцах, полученных из надосадочной жидкости, достоверно снижалась доля спермиев с анормальной морфологией: по сравнении со свежеполученным семенем - в 2,12 раза (с 8,5 до 4,0 %) и с замороженно-оттаянным - в 4,45 раза (с 17,8 до 4,0 %). Содержание сперматозоидов с фрагментированной ядерной ДНК в образцах из супернатанта было в 3,06 раза меньше, чем после цикла замораживание-оттаивание.

Литература.

1. Влияние селекции быков-производителей и продуктивных качеств женских предков на интенсивность выращивания телок/ Г. Н. Левина, Е. В. Калмит, В. М. Артюх и др. // Молочное и мясное скотоводство. 2017. № 6. С. 12-15.

2. Dekkers J. C. M. Application of genomics tools to animal breeding // Current Genomics. 2012. Vol. 13. No. 3. P. 207-212. doi: 10.2174/138920212800543057.

3. A strategy to exploit surrogate sire technology in livestock breeding programs / P. Gottardo, G. Gorjanc, M. Battagin, et al. // G3: Genes, genomes, genetics. 2019. Vol. 9. No. 1. P. 203-215. doi: 10.1534/g3.118.200890.

4. Luo J., Wang W., Sun S. Research advances in reproduction for dairy goats //Asian-Australasian Journal of Animal Sciences. 2019. Vol. 32. No. 8. P. 1284-1295. doi: 10.5713/ajas.19.0486.

5. Омаров А. А., Скорых Л. Н., Коваленко Д. В. Мясная продуктивность, химический состав мышечной ткани молодняка создаваемого типа скороспелых овец в возрастном аспекте // Сборник научных трудов Всероссийского научно-исследовательского института овцеводства и козоводства. 2016. Т. 2. № 9. C. 19-25.

6. Айбазов А. М. М., Аксёнова П. В., Сеитов М. С. Современные биотехнические методы направленного воспроизводства мелкого рогатого скота // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2013. № 4 (42). С. 241-242.

7. Новиков М. В., Шумилина Н. Н. Репродуктивные способности и пути повышения плодовитости шиншиллы (Chinchilla laniger Molina) // Вавиловский журнал генетики и селекции. 2015. Т. 19. № 3. С. 292-295.

8. Таджиева А. В., Сулима Н. Н. Использование метода CASA при оценке качества семени у быков-производителей // Вестник РУДН. Серия: Агрономия и животноводство. 2015. № 4. С. 89-93.

9. David I., Kohnke P., Lagriffoul G. Mass sperm motility is associated with fertility in sheep // Animal Reproduction Science. 2015. Vol. 161. P. 75-81.

10. Гуминская Е. Ю., Бабаева С. С. Методы оценки биологической полноценности сперматозоидов быков-производителей // Веснк МДПУ iмя I. П. Шамякна. 2010. № 2 (27). С. 20-24.

11. Бойко Е. В., Коропец Л. А., Кузебный С. В. Связь между количественными, качественными и физиологическими показателями спермы быков-производителей голштинской породы // Зоотехническая наука Беларуси. 2015. Т. 50. № 1. С. 10-15.

12. Pourlis A. F. A review of morphological characteristics relating to the production and reproduction of fat-tailed sheep breeds // Trop Anim Health Prod. 2011. Vol. 43. P. 1267-1287. doi:10.1007/s11250-011-9853-x.

13. Mohammadzadeh S., Hoseini S. A., Kadivar A. Сравнительное изучение семени баранов романовской породы и породы Lori Bakhtiari// Сельскохозяйственная биология. 2018. № 2. С. 318-325. doi:10.15389/agrobiology.2018.2.318rus.

14. Effect of season and age on main characteristics of sperm production in the Ouled-Djellal rams / A. R. Benia, M. A. Saadi, A. Ait-Amrane, et al. // Livestock Research for Rural Development. 2018. Vol. 30. P. 67-79.

15. Оценка эффективности получения эмбрионов крупного рогатого скота in vitro с использованием спермы, разделенной по полу/ Г. Н. Сингина, Т. Е. Тарадайник, Е. Н. Шедова и др. //Достижения науки и техники АПК. 2019. Т. 29. № 12.

C. 95-97.

16. The pellet swim-up is the best technique for sperm pre separation during in vitro fertilization procedures / A. Volpes, F. Sammartano, S. Rizzari, et al. // J Assist Reprod Genet. 2016. Vol. 33. No. 6. P. 765-777.

17. Плосконос М. В. Сравнительная характеристика методов выделения сперматозоидов из нативного эякулята мужчин // Клиническая лабораторная диагностика. 2016. № 6. C. 342-348.

18. Prognostic value on recovery rates for the application of sperm preparation techniques and their evaluation in sperm function / G. Barroso, M. Chaya, R. Bolanos, et al. // Ginecol Obstet Mex. 2005. Vol. 73. No. 5. P. 221-228.

19. Brandeis V. T., Manuel M. T. Effects of four methods of sperm preparation on the motile concentration, morphology, and acrosome status of recovered sperm from normal semen samples // J Assist Reprod Genet. 1993. Vol. 10. No. 6. P.409-416.

20. Плосконос М. В., Николаев А. А. Апоптоз и мужская фертильность//Врач. 2014. № 3. С. 23-25.

21. Плосконос М. В. Применение эозина и йодистого пропидия для оценки жизнеспособности сперматозоидов человека // Клиническая лабораторная диагностика. 2014. Т. 59. № 11. С. 22-25.

22. Воробьёва О. А., Воскресенская А. В., Одинцов А. А. Мужское бесплодие и нарушение структурной организации хроматина сперматозоидов. Существует ли связь? // Проблемы репродукции. 2005. № 6. С. 56-62.

23. Tomlinson M. J., Moffatt O., Manicardi G. C. Interrelationships between seminal parameters and sperm nuclear DNA damage before and after density gradient centrifugation: implications for assisted conception // Hum. Reprod. 2001. Vol. 16. No. 10. P. 2160-2165.

24. Борунова С. М., Иолчиев Б. С., Абрамов П. Н. Эффективный метод определения целостности акросомы сперматозоида у быков-производителей//Ветеринария, зоотехния и биотехнология. 2017. № 4. С. 29-34.

25. Иолчиев Б. С., Багиров В. А., Кленовицкий П. М. Индекс фрагментации ДНКхроматина в сперматозоидах при оценке качества семени у быков-производителей// Сельскохозяйственная биология. 2012. Т. 47. № 4. С. 31-35.

26. Колосов Ю. А., Дегтярь А. С., Ганзенко Е. А. Прижизненные показатели мясности помесных овец // Овцы, козы, шерстяное дело. 2016. № 1. С. 37-40.

27. Cliff G. C., DiLorenzo N. Current and future reproductive technologies and world food production lamb // Series. 2014. No. 752. P. 249.

28. Effects of cryopreservation on sperm parameters and ultrastructural morphology of human spermatozoa / S. Ozkavukcu, E. Erdemli, A. Isik, et al. // J Assist Reprod Genet. 2008. Vol. 26. No. 8. P. 403-411. doi: 10.1007/s10815-008-9232-3.

29. Effect of freeze-thawing procedure on chromatin stability, morphological and membrane integrity of human spermatozoa in fertile and subfirtile men / M. E. Hammadeh, A. S. Askari, T. Georg, et al.// Int J Androl. 1999. Vol. 22. P. 155-162. doi:10.1046/ j.1365-2605.1999.00162.x.

30. Leont'eva O. A., Vorob'eva O. A. Comparative analysis of human sperm morphology: the native ejaculate - progressively moving fraction // Problemy reproduktsii. 1999. No. 3. P. 29-36.

31. Henkel R. Sperm preparation: state-of-the-art-physiological aspects and application of advanced sperm preparation methods // Asian J Androl. 2012. Vol. 14. P. 260-269. doi: 10.1038/aja.2011.133.

32. Sperm processing by swim-up and density gradient effective in elimination of sperm with DNA damage / V. Jayaraman,

D. Upadhya, P. K. Narayan, et al. // J Assist Reprod Genet. 2012. Vol. 29. P. 557-563. doi: 10.1007/s10815-012-9742-x.

33. Full-term pregnancies achieved with ICSI despite high levels ofsperm chromatin damage/L. Gandini, F. Lombardo, D. Paoli, et al. // Hum. Reprod. 2004. Vol. 19. No. 6. P. 1409-1417.

References

1. Levina GN, Kalmit EV, Artyukh VM, et al. [The influence of breeding bulls and the productive qualities of female ancestors on the intensity of heifers' growth]. Molochnoe i myasnoe skotovodstvo. 2017;(6):12-5. Russian.

2. Dekkers JCM. Application of genomics tools to animal breeding. Current Genomics. 2012;13(3):207-12. doi: 10.2174/138920212800543057.

3. Gottardo P, Gorjanc G, Battagin M, et al. A strategy to exploit surrogate sire technology in livestock breeding programs. G3: Genes, genomes, genetics. 2019;9(1):203-15. doi: 10.1534/g3.118.200890.

4. Luo J, Wang W, Sun S. Research advances in reproduction for dairy goats. Asian-Australasian Journal of Animal Sciences. 2019;32(8):1284-95. doi: 10.5713/ajas.19.0486.

5. Omarov AA, Skorykh LN, Kovalenko DV. [Meat productivity, chemical composition of muscle tissue of young animals of the created type of precocious sheep in the age aspect]. Sbornik nauchnykh trudov Vserossiiskogo nauchno-issledovatel'skogo instituta ovtsevodstva i kozovodstva. 2016;2(9):19-25. Russian.

6. Aibazov AMM, Aksenova PV, Seitov MS. [Modern biotechnological methods of directed reproduction of sheep and goats]. Izvestiya Orenburgskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta. 2013;(4):241-2. Russian.

7. Novikov MV, Shumilina NN. [Reproductive abilities and ways to increase the fertility of chinchilla (Chinchilla laniger Molina)]. Vavilovskii zhurnal genetiki i selektsii. 2015;19(3):292-5. Russian.

8. Tadzhieva AV, Sulima NN. [Using the CASA method in assessing seed quality in bulls]. Vestnik RUDN. Seriya: Agronomiya i zhivotnovodstvo. 2015;(4):89-93. Russian.

9. David I, Kohnke P, Lagriffoul G. Mass sperm motility is associated with fertility in sheep. Animal Reproduction Science. 2015;161:75-81.

10. Guminskaya EYu, Babaeva SS. [Methods for assessing the biological usefulness of sperm of bulls]. Vesnik MDPU imya I. P. Shamyakina. 2010;(2):20-4. Russian.

11. Boiko EV, Koropets LA, Kuzebnyi SV. [The relationship between quantitative, qualitative and physiological indicators of sperm of bulls-producers of Holstein breed]. Zootekhnicheskaya nauka Belarusi. 2015;50(1):10-15. Russian.

12. Pourlis AF. A review of morphological characteristics relating to the production and reproduction of fat-tailed sheep breeds. Trop Anim Health Prod. 2011;43:1267-87. doi:10.1007/s11250-011-9853-x.

13. Mohammadzadeh S, Hoseini SA, Kadivar A. [A comparative study of the ram semen of Romanovskaya breed and Lori Bakhtiari breed]. Sel'skokhozyaistvennaya biologiya. 2018;(2):318-25. Russian. doi:10.15389/agrobiology.2018.2.318rus.

14. Benia AR, Saadi MA, Ait-Amrane A, et al. Effect of season and age on main characteristics of sperm production in the Ouled-Djellal rams. Livestock Research for Rural Development. 2018;30:67-79.

15. Singina GN, Taradainik TE, Shedova EN, et al. [Evaluation of the effectiveness of obtaining in vitro cattle embryos using semen divided by sex]. Dostizheniya nauki i tekhniki APK. 2019;29(12):95-7. Russian.

16. Volpes A, Sammartano F, Rizzari S, et al. The pellet swim-up is the best technique for sperm pre separation during in vitro fertilization procedures. J Assist Reprod Genet. 2016;33(6):765-77.

17. Ploskonos MV. [Comparative characteristics of methods for the isolation of sperm from the native ejaculate of men]. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2016;(6):342-8. Russian.

18. Barroso G, Chaya M, Bolanos R, et al. Prognostic value on recovery rates for the application of sperm preparation techniques and their evaluation in sperm function. Ginecol Obstet Mex. 2005;73(5):221-8.

19. Brandeis VT, Manuel MT. Effects of four methods of sperm preparation on the motile concentration, morphology, and acrosome status of recovered sperm from normal semen samples. J Assist Reprod Genet. 1993;10(6):409-16.

20. Ploskonos MV, NikolaevAA. [Apoptosis and male fertility]. Vrach. 2014;(3):23-5. Russian.

21. Ploskonos MV. [The use of eosin and propidium iodide to assess human sperm viability]. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2014;59(11):22-5. Russian.

22. Vorob'eva OA, Voskresenskaya AV, Odintsov AA. [Male infertility and violation of the structural organization of sperm chromatin: Is there a connection?]. Problemy reproduktsii. 2005;(6):56-62. Russian.

23. Tomlinson MJ, Moffatt O, Manicardi GC. Interrelationships between seminal parameters and sperm nuclear DNA damage before and after density gradient centrifugation: implications for assisted conception. Hum. Reprod. 2001;16(10):2160-5.

24. Borunova SM, lolchiev BS, Abramov PN. [An effective method for determining the integrity of sperm acrosome in bulls-producers]. Veterinariya, zootekhniya i biotekhnologiya. 2017;(4):29-34. Russian.

25. lolchiev BS, Bagirov VA, Klenovitskii PM. [Chromatin DNA fragmentation index in spermatozoa in assessing seed quality in bulls]. Sel'skokhozyaistvennaya biologiya. 2012;47(4):31-5. Russian.

26. Kolosov YuA, Degtyar' AS, Ganzenko EA. [Intravital indices of meatiness of cross-breeding sheep]. Ovtsy, kozy, sherstyanoe delo. 2016;(1):37-40. Russian.

27. Cliff GC, DiLorenzo N. Current and future reproductive technologies and world food production lamb. Series. 2014;(752):249.

28. Ozkavukcu S, Erdemli E, Isik A, et al. Effects of cryopreservation on sperm parameters and ultrastructural morphology of human spermatozoa. J Assist Reprod Genet. 2008;26(8):403-11. doi: 10.1007/s10815-008-9232-3.

29. Hammadeh ME, Askari AS, Georg T, et al. Effect of freeze-thawing procedure on chromatin stability, morphological and membrane integrity of human spermatozoa in fertile and subfirtile men. Int J Androl. 1999;22:155-62. doi:10.1046/j.1365-2605.1999.00162.x.

30. Leont'eva OA, Vorob'eva OA. Comparative analysis of human sperm morphology: the native ejaculate - progressively moving fraction. Problemy reproduktsii. 1999;(3):29-36.

31. Henkel R. Sperm preparation: state-of-the-art-physiological aspects and application of advanced sperm preparation methods. Asian J Androl. 2012;14:260-9. doi: 10.1038/aja.2011.133.

32. Jayaraman V, Upadhya D, Narayan PK, et al. Sperm processing by swim-up and density gradient effective in elimination of sperm with DNA damage. J Assist Reprod Genet. 2012;29:557-63. doi: 10.1007/s10815-012-9742-x.

33. Gandini L, Lombardo F, Paoli D, et al. Full-term pregnancies achieved with ICSI despite high levels ofsperm chromatin damage. Hum. Reprod. 2004;19(6):1409-17.

Требования к оформлению статей в журнале «Достижения науки и техники АПК»

В статье должно быть кратко изложено состояние дел по изучаемой проблеме со ссылками на публикации (желательно не менее трех ссылок). Затем указаны цели, задачи, условия и методы исследований. Подробно представлены результаты экспериментов и их анализ. Сделаны выводы и даны предложения производству. В статье следует по возможности выделять следующие блоки: введение; цель и задачи исследований; условия, материалы и методы исследований; результаты исследований; выводы.

Вместе со статьей должны быть представлены перевод названия на английский язык; аннотация (200-250 слов) на русском и английском языках; ключевые слова на русском и английском языках; полные почтовые адреса всех учреждений, в которых работают авторы, на русском и английском языке; ученые степени и должности авторов на русском и английском языке код УДК; библиографический список.

В тексте ссылка на источник отмечается соответствующей цифрой в квадратных скобках в порядке цитирования. В списке литературы приводятся только те источники, на которые есть ссылка в тексте. Использование цитат без указания источника информации запрещается.

Материал для подачи в журнал набирается в текстовом редакторе Word версия не ниже 97 файл с расширением *.rtf.

Объем публикации 12-16 стр. машинописного текста набранного шрифтом Times New Roman, размер кегля 14 с полуторным интервалом. На 2,5 страницы текста допускается не более 1 рисунка или таблицы.

Статьи необходимо направлять с сопроводительным письмом с указанием сведений об авторах (фамилия, имя, отчество -полностью, ученая степень, место работы и занимаемая должность) на русском и английском языке, контактных телефонов и адреса электронной почты для обратной связи.

На публикацию представляемых материалов необходимо письменное разрешение и рекомендация руководства организации, на средства которой проводились исследования. Его вместе с одним экземпляром рукописи, подписанным авторами, и статьей в электронном виде нужно отправлять по адресу: 101000, г. Москва, Моспочтамт, а/я 166, ООО «Редакция журнала «Достижения науки и техники АПК». Для ускорения выхода в свет материалы в электронном виде можно направлять по адресу: agroapk@mail.ru.

Плата с аспирантов за публикацию рукописей не взимается.

Несоответствие статьи по одному из перечисленных пунктов может служить основанием для отказа в публикации.

Все рукописи, содержащие сведения о результатах научных исследований, рецензируются, по итогам рецензирования принимается решение о целесообразности опубликования материалов.