Дифференциация видов Dirofilaria repens и Dirofilaria immitis методом масс-спектрометрии

Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»

Инфекция и иммунитет

следуемые значения снижались. Определение рецепторов к IL-2 и IL-4 и TNF на мембране лимфоцитов во все сроки исследования были в пределах контрольных значений.

Таким образом, наибольшее повышение уровня моноцитов и нейтрофилов экспрессирующих рецепторы к IL-2, IL-4 и TNF наблюдалось на 5—14 сутки в процессе формирования иммунного ответа у белых мышей при вакцинации В. abortus 19 BA.

КЛИНИКО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГЛПС В САНКТ-ПЕТЕРБУРГЕ ПО ДАННЫМ СПб КИБ им. С.П. БОТКИНА ЗА 2011-2013 гг.

М.Е. Котов1, Е.В. Куликова1, А.Г. Шевалдин1, Л.Р. Городничева2

1ГБОУ ВПО Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова МЗ РФ 2ГБУЗ Клиническая инфекционная больница им. С.П. Боткина, Санкт-Петербург

Проанализированы 50 историй болезни пациентов с геморрагической лихорадкой с почечным синдромом (ГЛПС), находившихся на стационарном лечении в КИБ им. С.П. Боткина в 2011—2013 гг. Возраст больных составил от 24—77 лет (47,5±2,2 года). Преобладали мужчины (70%) трудоспособного возраста 24—59 лет (76%). У всех больных диагноз был подтвержден с помощью МФА или ИФА. У 88% установлен диагноз среднетяжелой формы, у 8% — тяжелой формы ГЛПС. В пригородную зону выезжали 68% больных, из них 28% не исключали контакта с грызунами. Преимущественно ГЛПС регистрировали в осенний период (36% в октябре).

На догоспитальном этапе предварительный диагноз ГЛПС был установлен лишь в 4 случаях. Частым диагнозом при направлении в стационар были ОРВИ (54%), у 5 пациентов подозревали пневмонию, у двух — псевдотуберкулез. У 94% больных наблюдалась фебрильная лихорадка, интоксикационный синдром проявлялся общей слабостью (90%), головной болью (56%), миалгиями (54%). Частые жалобы на кашель (30%) и гиперемия зева (52%) по-видимому определяли ошибочный диагноз ОРВИ. Вместе с тем, дискомфорт в пояснице и снижение остроты зрения, типичные для ГЛПС, отмечали соответственно 44 и 24% пациентов. Болезненность при поколачивании по пояснице выявили у 44% больных, снижение суточного диуреза — у 32%. У 6 больных обнаружена негеморрагическая сыпь и только у одного выявили петехии на переходной складке нижнего века. По данным УЗИ диффузные изменения интерстиция паренхимы почек обнаружены у 68%, увеличение печени — у 62% пациентов. Креатинин был повышен у 60% больных. Средний уровень креатинина сыворотки при поступлении составил 0,191+0,027 ммоль/л. Число тромбоцитов в среднем составило 172,4+19,8 х 109/л. При тяжелой форме ГЛПС отмечено более значимое снижение тромбоцитов (143,2+52,2 х 109/л), наиболее выраженная протеинурия и гематурия.

Таким образом, диагностика ГЛПС в неэндемичном регионе с преобладанием среднетяжелых форм (отсутствие клинических проявлений геморрагического синдрома) представляет сложную задачу. Вместе с тем, очевидна недооценка данных эпидемиологического анамнеза, типичных признаков поражения почек и снижения остроты зрения при ГЛПС.

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ВИДОВ DIROFILARIA REPENS И DIROFILARIA IMMITIS МЕТОДОМ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ

Е.Ю. Криворотова, С.А. Нагорный, А.В. Алешукина, С.О. Коршунов

ФБУН Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии Роспотребнадзора, г. Ростов-на-Дону

Идентификация видовой принадлежности паразитов предопределяет успешную работу специалистов в диагностике и лечении пациентов. Определение микроорганизмов до вида с помощью масс-спектрометрии с матрично-активированной лазерной десорбцией/ионизацией (MALDI-TOF MS) хорошо изучено и широко используется в практике. В меньшей степени протеомный анализ применяется как таксономический инструмент для идентификации многоклеточных организмов. Определение вида членистоногих с использованием MALDI-TOF MS исследовано для дрозофил, мокрецов, мухи цеце и других насекомых.

Цель исследования: проверка возможности дифференциации видов Dirofilaria repens и D. immitis методом масс-спектрометрии.

Гельминтов D. repens и D. immitis многократно отмывали в физрастворе, гомогенизировали механически и ультразвуком. Для улучшения качества спектра проводили экстракцию в 20 мкл 70% муравьиной кислоты. Затем в пробирку добавляли аналогичное количество (20 мкл) 50% ацетонитрила. Гомогенаты центрифугировали при 13 000 оборотах в минуту в течение 2 мин 1 мкл супернатанта наносили на стальную пластину (Bruker Daltonics) в 2-х последовательностях. Мишень сушили в течение нескольких минут при комнатной температуре. Затем на каждый образец наносили 1 мкл матрицы (CHCA), просушивали и помещали в прибор MALDI-TOF MS для анализа. В общей сложности 16 образцов были подвергнуты MALDI-TOF MS анализу.

Профили масс белков получены с использованием Microflex LT MALDI-TOF MS (Bruker Daltonics) с программным обеспечением FlexControl (Bruker Daltonics). Профили полученного спектра визуализированы с помощью программного обеспечения Flex analysis 3.3 (Bruker Daltonics).

Качество спектров и интенсивность спектральных пиков согласуется у всех образцов одного вида. Профили спектров, полученные из белков дирофиля-рий, отличаются, что делает возможным дифференцировать по белковому профилю D. repens и D. immitis.

MALDI-TOF MS обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами определения видов: подготовка образца сравнительно проста; не требуются дорогостоящие расходные материалы и генетическая информация об организмах, рабочий процесс автоматизирован.

ИММУНОГЕННОСТЬ И КРОСС-РЕАКТИВНОСТЬ ВИРУСОВ ГРИППА С РАЗЛИЧНОЙ РЕЦЕПТОРНОЙ СПЕЦИФИЧНОСТЬЮ НА МОДЕЛИ МЫШЕЙ

В.А. Кузнецова, С.А. Кузнецова, И.Н. Исакова-Сивак

ФГБУ НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН, Санкт-Петербург

Известно, что вирусы гриппа птиц и человека имеют сродство к сиаловым рецепторам типа а2-3 и а2-6 соответственно. Возможность размножаться в клетках млекопитающих птичьи вирусы получа-