ГЛИКОЗИЛИРОВАННЫЙ ПОЛИПЕПТИД И СОДЕРЖАЩАЯ ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ

1. Гликозилированная полипептидная цепь, характеризующаяся тем, что указанный гликозилированный полипептид является полипептидом, выбранным из группы, состоящей из:
(a) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID №1;
(b) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID №1, в которой одна или несколько аминокислот удалены, замещены или добавлены;
(c) аналога интерферона-β; и
(d) полипептида, имеющего 80% или более гомологии с полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID №1;
где полипептид имеет сахарную цепь на аминокислоте, соответствующей положению 80 в интерфероне-β, и обладает активностью интерферона-β, и
указанный гликозилированный полипептид имеет по существу однородные сахарные цепи.
2. Гликозилированный полипептид по п. 1, характеризующийся тем, что указанный гликозилированный полипептид приготовлен путем химического синтеза.
3. Гликозилированный полипептид, полученный способом, включающим этап синтеза гликозилированного пептидного фрагмента и по меньшей мере двух пептидных фрагментов, и этап сшивания указанного гликозилированного пептидного фрагмента и указанных по меньшей мере двух пептидных фрагментов, характеризующийся тем, что указанный гликозилированный полипептид является полипептидом, выбранным из группы, состоящей из:
(a) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID №1;
(b) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID №1, в которой одна или несколько аминокислот удалены, замещены или добавлены;
(c) аналога интерферона-β; и
(d) полипептида, имеющего 80% или более гомологии с полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID №1;
где полипептид имеет сахарную цепь на аминокислоте, соответствующей положению 80 в интерфероне-β, и обладает активностью интерферона-β.
4. Гликозилированный полипептид по п. 3, характеризующийся тем, что сахарная цепь в указанном гликозилированном полипептиде является сахарной цепью, связанной с аспарагином.
5. Гликозилированный полипептид по п. 4, характеризующийся тем, что сахарная цепь в указанном гликозилированном полипептиде является дисиало-сахарной цепью, представленной следующей формулой (а) или асиало-сахарной цепью, представленной следующей формулой (b).
6. Гликозилированный полипептид по п. 3, характеризующийся тем, что Цис, соответствующий положениям 31 и 141 интерферона-β, образует дисульфидную связь.
7. Гликозилированный полипептид по любому из пп. 3-6, характеризующийся тем, что он подвергнут тепловой обработке.
8. Гликозилированный полипептид по п. 1 или 2, характеризующийся тем, что он имеет чистоту 90% или больше.
9. Композиция, содержащая гликозилированный полипептид по любому из пп. 1-7, характеризующийся тем, что гликозилированные полипептиды в указанной композиции являются по существу однородными.
10. Композиция по п. 9, характеризующаяся тем, что гликозилированные полипептиды в указанной композиции являются однородными на 90% или более.
11. Композиция по п. 9 или 10, характеризующаяся тем, что гликозилированный полипептид в указанной композиции имеет чистоту 90% или более.
12. Фармацевтическая композиция, содержащая:
(I) гликозилированный полипептид по любому из пп. 1-7 и/или его фармацевтически пригодную соль; и
(II) фармацевтически пригодный носитель.
13. Фармацевтическая композиция по п. 12, характеризующаяся тем, что сахарные цепи являются по существу однородными в указанном гликозилированном полипептиде.
14. Фармацевтическая композиция по п. 13, характеризующаяся тем, что сахарные цепи являются однородными на 90% или более в указанном гликозилированном полипептиде.
15. Фармацевтическая композиция по п. 12, характеризующаяся тем, что указанный гликозилированный полипептид имеет чистоту 90% или более.
16. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 12-15, характеризующаяся тем, что ее применяют для лечения или профилактики интерферон-β-зависимого заболевания.
17. Фармацевтическая композиция по п. 16, характеризующаяся тем, что указанное интерферон-β-зависимое заболевание является по меньшей мере одним заболеванием, выбранным из группы, состоящей из опухоли головного мозга, включая мультиформную глиобластому, медуллобластому, и астроцитому; кожную злокачественную меланому, хронический активный гепатит В, хронический гепатит С, подострый склерозирующий панэнцефалит, компенсированный цирроз С, и рассеянный склероз.
18. Способ лечения или профилактики интерферон-β-зависимого заболевания, характеризующийся применением эффективного количества гликозилированного полипептида по любому из пп. 1-7.
19. Способ лечения или профилактики по п. 18, характеризующийся тем, что указанное интерферон-Р-зависимое заболевание является по меньшей мере одним заболеванием, выбранным из группы, состоящей из опухоли головного мозга, включая мультиформную глиобластому, медуллобластому, и астроцитому; кожную злокачественную меланому, хронический активный гепатит В, хронический гепатит С, подострый склерозирующий панэнцефалит, компенсированный цирроз С, и рассеянный склероз.
20. Гликозилированный полипептид, являющийся полипептидом, выбранным из группы, состоящей из:
(a) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID №1;
(b) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID №1, в которой одна или несколько аминокислот удалены, замещены или добавлены;
(c) аналога интерферона-β; и
(d) полипептида, имеющего 80% или более гомологии с полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID №1;
где полипептид имеет сахарную цепь на аминокислоте, соответствующей положению 80 в интерфероне-β, и имеет Цис, соответствующий положениям 17, 31 и 141 в интерфероне-β, защищенный защитной группой.
21. Гликозилированный полипептид по п. 20, характеризующийся тем, что указанная сахарная цепь является дисиало-сахарной цепью, представленной следующей формулой (с), или асиало-сахарной цепью, представленной следующей формулой (b).
2
2
2
2
2
2
2
2
2
(где R представлен -COOBn, -COOEt, -СООМе, -COOCHCOPh, -COOCHPhOMe, -COOCHPh(OMe), -COOCHPhNO, или -COOCHPh(NO). Bn указывает бензильную группу, Et указывает этильную группу, Me указывает метильную группу, a Ph указывает фенильную группу).
22. Гликозилированный полипептид по п. 20 или 21, характеризующийся тем, что Цис, соответствующий указанным положениям 17, 31 и 141 в интерфероне-β, защищен любой защитной группой, выбранной из Acm группы, алкоксиметильной группы, трифенилметильной группы, т-бутильной группы, бензильной группы, и этильной группы, с замещением в β-положении.
23. Способ получения гликозилированного полипептида, включающий этап снятия защиты Цис, соответствующего указанным положениям 17, 31 и 141 в интерфероне-β, защищенного защитной группой в гликозилированного полипептиде по любому из пп. 20-22.
24. Способ получения гликозилированного полипептида по п. 23, характеризующийся тем, что гликозилированный полипептид подвергнут тепловой обработке перед этапом удаления защитной группы с Цис.
25. Гликозилированный полипептид, являющийся полипептидом, выбранным из группы, состоящей из:
(a) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID №1;
(b) полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID №1, в которой одна или несколько аминокислот удалены, замещены или добавлены;
(c) аналога интерферона-β; и
(d) гликозилированного полипептида, имеющего 80% или более гомологии с полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID №1;
где полипептид имеет сахарную цепь на аминокислоте, соответствующей положению 80 в интерфероне-β, и
указанная сахарная цепь является дисиало-сахарной цепью, содержащей защищенную карбоксигруппу сиаловой кислоты, присутствующую на не-восстанавливающем конце сахарной цепи, представленной следующей формулой (с).
2
2
2
2
2
2
2
2
2
(где R представлено -COOBn, -COOEt, -СООМе, -COOCHCOPh, -COOCHPhOMe, -COOCHPh(OMe), -COOCHPhNO, или -COOCHPh(NO). Bn указывает бензильную группу, Et указывает этильную группу, Me указывает метильную группу, a Ph указывает фенильную группу).
26. Способ получения гликозилированного полипептида, включающий этап удаления защитной группы с карбоксигруппы сиаловой кислоты, присутствующей на не-восстанавливающем конце сахарной цепи в гликозилированном полипептиде по п. 25.
27. Способ получения гликозилированного полипептида по п. 23, дополнительно включающий этап фолдинга указанного гликозилированного полипептида.
28. Способ получения гликозилированного полипептида по п. 24, дополнительно включающий этап фолдинга указанного гликозилированного полипептида.
29. Способ получения гликозилированного полипептида по п. 26, дополнительно включающий этап фолдинга указанного гликозилированного полипептида.