НАНОЧАСТИЦЫ КЛЕВИДИПИНА И ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ
CLEVIDIPINE NANOPARTICLES AND THEIR PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS

Перекрестная ссылка на родственные заявки
По настоящей заявке испрашивается приоритет на основании предварительной патентной заявки США № 62/000119, зарегистрированной 19 мая 2014 года, содержание которой, таким образом, конкретно включено в настоящее описание посредством ссылки.
Область изобретения
[0001] Настоящее изобретение относится к фармацевтическим составам, содержащим клевидипин в стерильной, готовой к применению водной дисперсии наночастиц, являющейся стабильной в отношении образования примесей и подходящей для парентерального введения.
[0002] Все документы, процитированные ниже, конкретно включены в настоящее описание посредством ссылок.
Предпосылки изобретения
[0003] Клевидипин является дигидропиридиновым блокатором кальциевых каналов, снижающим артериальное давление у индивидуума, которому его вводят. Его характеризуют как высокоселективное лекарственное средство быстрого действия, быстро метаболизирующееся и демонстрирующее время полужизни начальной фазы, составляющее приблизительно одну минуту. Таким образом, клевидипин применяют в больничных условиях в виде внутривенной инъекции. Клевидипин дополнительно отличается тем, что имеет несущественную растворимость в воде и умеренную растворимость в липидах. Кроме того, клевидипин является химически нестабильным при контакте с водой. Таким образом, клевидипин разрабатывали в качестве эмульсии "масло-в-воде" (Cleviprex). Хотя состав эмульсии Cleviprex позволяет решать физико-химические проблемы, связанные с клевидипином, и представляет собой готовый к применению продукт, остаются значительные ограничения.
[0004] Состав эмульсии содержит диэдетат натрия (ЭДТА) в качестве ингибитора роста микроорганизмов. Однако, даже при применении строго асептического способа при обращении, продукт необходимо выбрасывать в пределах 12 часов после вскрытия, т.к. длительное применение все равно может потенциально поддерживать рост микроорганизмов в случае непреднамеренной наружной контаминации. Кроме того, суточная доза Cleviprex ограничена по причине высокого содержания липидов в нем, и его использование ограничено у пациентов с гиперлипидемией и другими связанными липидными нарушениями. Кроме того, для Cleviprex необходимо охлаждение в случае длительного хранения, что является дорогостоящим и потенциально может ограничивать его применение в условиях скорой помощи и амбулаторной помощи.
[0005] Таким образом, существует потребность в водном составе клевидипина, имеющем длительную стабильность в условиях хранения при комнатной температуре, не поддерживающем рост микроорганизмов и не участвующем в жировой нагрузке, в то же время сохраняющем уникальную фармакокинетику (быстрое начало действия и конец действия) клевидипина. Создание такого состава для парентерального введения является затруднительным, учитывая несущественную растворимость клевидипина в воде, потребность в его стабильности для того, чтобы защитить его от контакта с водой, и потребность поддержания его уникальных фармакокинетических/фармакодинамических свойств. Такой состав будет обеспечивать более высокую простоту обращения и приводить к экономии затрат для медицинских учреждений и пациентов посредством снижения потерь клевидипина и снижения затратных по времени усилий, связанных с холодовой цепью и хранением и заменой неопустошенных сосудов по соображениям, касающихся роста микроорганизмов. Кроме того, такой состав будет делать возможным более легких доступ для пациентов, которым необходима амбулаторная помощь.
[0006] Общепринятые составы наночастиц, таких как твердые липидные наночастицы, стабилизированные альбумином наночастицы или липосомы, могут потенциально повышать стабильность клевидипина в воде при температуре окружающей среды. Однако по причине конкретных характеристик этих частиц такие составы не подходят для применения с немедленным высвобождением, где ожидают начала действия непосредственно после парентерального введения лекарственного средства. Составы наночастиц, указанные выше, имеют длительное время нахождения в крови и контролируемое высвобождение активного ингредиента с течением времени, что будет влиять на фармакокинетику клевидипина при их применении для его составления.
Сущность изобретения
[0007] Настоящее изобретение относится к терапевтической наночастице, содержащей клевидипин или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один эксципиент. В одном из вариантов осуществления клевидипин составляет сердцевину наночастицы, и по меньшей мере один эксципиент составляет внешнюю часть, по существу, окружающую сердцевину.
[0008] Изобретение дополнительно относится к терапевтической наночастице, содержащей клевидипин или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один эксципиент, получаемой посредством сталкивания клевидипина или его фармацевтически приемлемой соли и указанного по меньшей мере одного эксципиента в микроструйном реакторе.
[0009] Изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество терапевтической наночастицы, содержащей клевидипин или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один эксципиент и фармацевтически приемлемый носитель.
[0010] Изобретение дополнительно относится к способу лечения гипертензии, включающему этап введения нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества терапевтической наночастицы, содержащей клевидипин или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один эксципиент.
Краткое описание чертежей
[0011] Фигура 1 является фотографией, на которой показан аппарат микроструйного реактора, применимый для получения наночастиц по изобретению.
[0012] Фигура 2 является схематическим изображением, на котором представлен способ получения наночастиц внутри микроструйного реактора (вкладка представляет собой внешний вид реактора).
[0013] Фигура 3 является схематическим изображением, на котором представлены параметры способа, используемые для получения наночастиц по изобретению с использованием технологии микроструйного реактора.
[0014] Фигура 4 является схематическим изображением, на котором представлено осаждение наночастиц из реактора и в коллоидной суспензии.
[0015] Фигура 5 представляет собой продольный срез микроструйного реактора, на котором показано, как наночастицы растут из точки столкновения к краю сферической пластины.
[0016] Фигура 6 является графиком, на котором сравнивают кинетику метаболизма составов наночастиц клевидипина по изобретению и референсного продукта эмульсии клевидипина.
Подробное описание изобретения
[0017] Следует понимать, что фигуры и описание настоящего изобретения упрощены для иллюстрирования элементов, важных для четкого понимания настоящего изобретения, при одновременном удалении, в целях ясности, многих других элементов, обнаруживаемых в типичных фармацевтических композициях и способах стабилизации. Специалистам в этой области понятно, что другие элементы и/или этапы являются желательными и/или необходимыми в осуществлении настоящего изобретения. Однако, т.к. такие элементы и этапы хорошо известны в этой области, и т.к. они не облегчают понимание настоящего изобретения, обсуждение таких элементов и этапов не представлено в настоящем описании. Описание в настоящем описании относится ко всем таким вариантам и модификациям таких элементов и способов, известных специалистам в этой области. Кроме того, варианты осуществления, идентифицированные и проиллюстрированные в настоящем описании, предназначены исключительно для иллюстрирования и не предназначены для исключения или ограничения в их описании по настоящему изобретению.
[0018] Настоящее изобретение, главным образом, относится к наночастицам, включающим активное или терапевтическое средство или лекарственное средство, и способам получения и применения таких терапевтических наночастиц. Авторы настоящего изобретения обнаруживали, что можно получать стабильные и готовые к применению коллоидные дисперсии наночастиц клевидипина с размером частиц и гомогенностью частиц, подходящими для парентерального применения. Получали стабильные составы наночастиц клевидипина таким образом, что их можно хранить при температуре окружающей среды с желаемыми характеристиками немедленного высвобождения для парентерального применения. Это осуществляли, например, с применением трех различных подходов для электростатической и стерической стабилизация наночастиц. В этих трех подходах примененяли различные комбинации эксципиентов, при этом первый подход включает комбинацию нерастворимых в воде эксципиентов, второй подход - комбинацию растворимых в воде и нерастворимых в воде эксципиентов, и третий подход - комбинацию растворимых в воде эксципиентов.
[0019] В этих подходах ожидали, что нерастворимые в воде эксципиенты могут стабилизировать клевидипин, заключенный в наночастицы, в то время как растворимые в воде эксципиенты могут облегчать более быстрое высвобождение клевидипина из наночастиц. Таким образом, предполагали, что комбинация растворимых в воде и нерастворимых в воде эксципиентов может обеспечивать желаемую стабильность и немедленное высвобождение клевидипина, при этом компонент с немедленным высвобождением из профиля целевого продукта является основной проблемой. Однако неожиданно обнаруживали, что все из трех подходов демонстрировали желаемую стабильность в условиях окружающей среды, и наблюдали немедленное высвобождение в крови в случае составов, содержащих нерастворимые в воде эксципиенты, где ожидали наиболее полную защиту от воды, но медленное высвобождение.
[0020] Таким образом, один из вариантов осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, содержащей клевидипин или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один эксципиент.
[0021] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанный клевидипин составляет сердцевинную часть указанной наночастицы, и указанный по меньшей мере один эксципиент составляет внешнюю часть, по существу, окружающую указанную сердцевину.
[0022] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанный клевидипин, по существу, составляет сердцевину указанной наночастицы, и указанный по меньшей мере один эксципиент, по существу, составляет внешнюю часть указанной наночастицы.
[0023] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанный по меньшей мере один эксципиент является растворимым в воде или нерастворимым в воде, или несколько эксципиентов присутствуют в их комбинациях.
[0024] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанный растворимый в воде эксципиент является витамином E TPGS, полисорбатом 80, полисорбатом 20, Triton X-100, лаурилглюкозидом, NP-40, олеиловым спиртом, сорбитанами (моностеаратом, тристеаратом), стеариловым спиртом, ноноксинолами, кремофором (RH 60 или EL), Solutol HS 15, плутониевой кислотой, додецилсульфатом натрия (SDS), солями желчных кислот, полиэтиленгликолем или полипропиленгликолем или их комбинациями.
[0025] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанный нерастворимый в воде эксципиент является витамином E и его производными, желчной кислотой и ее производными и фосфолипидными производными, лецитином, лизолецитином, фосфатидилсерином, глицерофосфохолином, олеиновой кислотой, глицерином, инозитолом, диэтилентриаминпентауксусной кислотой, полиоксиэтиленкасторовым маслом, основанием полиоксиэтиленгидрогенизированного касторового масла или полиоксиэтиленсорбитан монолауратом, или их комбинациями.
[0026] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, содержащей по меньшей мере один растворимый в воде эксципиент и по меньшей мере один нерастворимый в воде эксципиент.
[0027] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер менее 900 нм.
[0028] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер менее 800 нм.
[0029] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер менее 700 нм.
[0030] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер менее 600 нм.
[0031] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер менее 500 нм.
[0032] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер менее 400 нм.
[0033] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер менее 300 нм.
[0034] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер менее 200 нм.
[0035] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер менее 100 нм.
[0036] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер менее 50 нм.
[0037] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер от 50 нм до 400 нм.
[0038] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер от 100 нм до 600 нм.
[0039] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер от 100 нм до 250 нм.
[0040] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, где указанная наночастица имеет размер от 200 нм до 450 нм.
[0041] Другой вариант осуществления изобретения относится к терапевтической наночастице, содержащей клевидипин или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один эксципиент, полученной посредством столкновения клевидипина или его фармацевтически приемлемой соли и указанного по меньшей мере одного эксципиента в микроструйном реакторе.
[0042] Другой вариант осуществления изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество терапевтической наночастицы, содержащей клевидипин или его фармацевтически приемлемую соль, и по меньшей мере один эксципиент и фармацевтически приемлемый носитель.
[0043] Другой вариант осуществления изобретения относится к фармацевтической композиции, где указанная терапевтическая наночастица находится в водной коллоидной суспензии.
[0044] Другой вариант осуществления изобретения относится к способу лечения гипертензии, включающему этап введения нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества терапевтической наночастицы, содержащей клевидипин или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один эксципиент.
[0045] Другой вариант осуществления изобретения относится к способу, где указанную терапевтическую наночастицу вводят парентерально.
[0046] Другой вариант осуществления изобретения относится к способу, где указанную терапевтическую наночастицу вводят внутривенно.
[0047] Как применяют в настоящем описании, термин "клевидипин" должен означать и включать все разновидности или формы клевидипина. Если не указано иначе, примеры таких форм включают все фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры, изомеры, стереоизомеры, кристаллические и аморфные формы. Количество клевидипина в составах по настоящему изобретению может варьироваться в зависимости от общего объема состава и концентрации других компонентов.
[0048] Как применяют в настоящем описании, термин "терапевтическая наночастица" должен означать наночастицу, содержащую терапевтическое средство или активный фармацевтический ингредиент. Терапевтическая наночастица обеспечивает терапевтический эффект при введении нуждающемуся в этом пациенту.
[0049] Как применяют в настоящем описании, термин "фармацевтически приемлемая соль" должен относиться к солям, полученным из фармацевтически приемлемых нетоксичных оснований или кислот, включая неорганические или органические основания и неорганические или органические кислоты. Примеры солей, полученных из неорганических оснований, включают соли алюминия, аммония, кальция, меди, железа (III), железа (II), лития, магния, марганца (III), марганца (II), калия, натрия, цинка и т.п. В определенных вариантах осуществления предпочтительными являются соли аммония, кальция, магния, калия и натрия. Соли, полученные из фармацевтически приемлемых органических нетоксичных оснований, включают соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, включая природные замещенные амины, циклические амины и основные ионообменные смолы, такие как аргинин, бетаин, кофеин, холин, N,N'-дибензилэтилендиамин, диэтиламин, 2-диэтиламиноэтанол, 2-диметиламиноэтанол, этаноламин, этилендиамин, N-этил-морфолин, N-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, лизин, метилглюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, полиаминовые смолы, прокаин, пурины, теобромин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин, трометамин и т.п.
[0050]
Как применяют в настоящем описании, термин "фармацевтически приемлемый сложный эфир" должен означать сложные эфиры, полученные посредством реакции оксокислоты с соединением, содержащим гидроксильную группу. Как правило, сложные эфиры получают из неорганической или органической кислоты и спирта. Чаще сложные эфиры получают посредством конденсации органической кислоты и спирта. Примеры подходящих сложных эфиров, которые можно использовать в составах по настоящему изобретению, включают сложные эфиры масляной кислоты, такие как получаемые в соответствии с руководствами в патентах США №№ 5856346, 5739152, 6350877 и т.п.
Наночастицы
[0051]
Наночастицы по изобретению являются небольшими частицами, содержащими клевидипин или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один эксципиент. В основном, термин "наночастица" относится к любой частице, имеющей средний размер менее 1000 нм. Термин "средний размер" означает средний эффективный диаметр, измеряемый способом динамического светорассеяния с применением, например, инструмента для определения размера частиц Brookhaven Instruments' 90Plus или Malvern Zetasizer Z90.
[0052] Средний размер наночастиц может составлять, например, менее 900 нм, менее 800 нм, менее 700 нм, менее 600 нм, менее 500 нм, менее 400 нм, менее 300 нм, менее 200 нм, менее 100 нм и менее 50 нм. Диапазон распределения размера частиц в суспензии определяется "полидисперсностью" или "PDI" частиц, определяемой как относительная дисперсия в корреляции распределения скорости распада, как известно специалисту в этой области. См. обсуждение кумулянтного диаметра и полидисперсности в B. J. Fisken, "Revisiting method of cumulants for the analysis of dynamic light-scattering data," Applied Optics, 40(24), 4087-4091 (2001). В другом варианте осуществления полидисперсность указанного состава наночастиц составляет менее 0,6. В другом варианте осуществления полидисперсность указанного состава наночастиц может составлять менее 0,5, менее 0,4, менее 0,3, менее 0,2 и менее 0,1.
[0053] Наночастицы могут иметь ряд различных конфигураций. В одном из вариантов осуществления наночастицы содержат сердцевину, содержащую клевидипин или его фармацевтически приемлемую соль. Как применяют в настоящем описании, термин "сердцевина" относится к внутренней части наночастицы. Наночастицы также имеют "поверхность" или "внешнюю" часть. Таким образом, наночастицы могут иметь сердцевину (т.е. внутреннюю часть) и поверхность или внешнюю часть, по существу, окружающую сердцевину. В одном из вариантов осуществления изобретения сердцевина, по существу, состоит из клевидипина, а внешняя часть, по существу, состоит из одного или нескольких эксципиентов.
[0054] В другом варианте осуществления концентрация клевидипина может варьировать по всей наночастице, при этом концентрация клевидипина является наиболее высокой, например, в сердцевине. Например, наночастицы по изобретению могут содержать матрикс из эксципиентов и клевидипина, таким образом, что количество клевидипина можно диспергировать во внешней части наночастицы, и количество эксципиента или комбинации эксципиентов можно диспергировать в сердцевине наночастицы, или их комбинации. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления клевидипин или его фармацевтически приемлемую соль можно связывать, по меньшей мере, с частью эксципиентной внешней части. Таким образом, некоторое количество клевидипина можно связывать с поверхностью, инкапсулировать, окружать и/или диспергировать или диффундировать по всей эксципиентной внешней части терапевтической наночастицы.
[0055] В некоторых вариантах осуществления, представленных в настоящем описании ниже, материалы могут адсорбироваться к поверхностной части наночастицы. Материалы, адсорбированные на поверхностной части наночастицы считают частью наночастицы, но отличающейся от сердцевины наночастицы. Способы различения материалов, присутствующих в сердцевине, и материалов, адсорбированных на поверхностной части наночастицы включают (1) термические способы, такие как дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC); (2) спектроскопические способы, такие как дифракция рентгеновских лучей (XRD), рентгеновская фотоэлектронная спектроскопия (XPS), трансмиссионная электронная микроскопия (TEM) с анализом рентгеновского спектра рассеивания энергии (EDX), инфракрасная спектроскопия с преобразованием Фурье (FTIR), и рамановская спектроскопия; (3) способы хроматографии, такие как высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), и гель-фильтрация (GPC); и (4) другие способы, известные в этой области.
Эксципиенты
[0056] В некоторых вариантах осуществления наночастицы клевидипина стабилизируют с использованием одного или нескольких растворимых в воде (например, гидрофильных) эксципиентов, одного или нескольких нерастворимых в воде (например, липофильных) эксципиентов или комбинации одного или нескольких растворимых в воде и одного или нескольких нерастворимых в воде эксципиентов.
[0057] Неограничивающие примеры растворимых в воде эксципиентов включают витамин E TPGS, полисорбат 80, полисорбат 20, Triton X-100, лаурилглюкозид, NP-40, олеиловый спирт, сорбитаны (моностеарат, тристеарат), стеариловый спирт, ноноксинолы, кремофор (RH 60 или EL), Solutol HS 15, плутониевую кислоту, додецилсульфат натрия (SDS), соли желчных кислот, полиэтиленгликоль и полипропиленгликоль и их комбинации. Соли желчных кислот выбирали из группы солей холевой кислоты, хенодезоксихолевой кислоты, дезоксихолевой кислоты и урсодезоксихолевая кислота. Эксципиенты, которые использовали в отдельности или в комбинации для стабилизации частиц клевидипина, включали, в качестве неограничивающих примеров, PEG/соли желчных кислот, соли желчных кислот/витамин E TPGS, PEG/витамин E TPGS.
[0058] Неограничивающие примеры нерастворимых в воде эксципиентов включают витамин E и его производные, желчную кислоту и ее производные и фосфолипидные производные, лецитин, лизолецитин, фосфатидилсерин, глицерофосфохолин, олеиновую кислоту, глицерин, инозитол, диэтилентриаминпентауксусную кислоту, полиоксиэтиленкасторовое масло, основание полиоксиэтиленгидрогенизированного касторового масла, полиоксиэтиленсорбитан монолаурат и их комбинации. Фосфолипид производные выбирали из группы природных фосфолипидов, таких как выделенные из яичного желтка или соевых бобов, синтетических фосфолипидов, фосфатидилхолина и гидрогенизированных фосфолипидов. Производные желчных кислот выбирали из группы холевой кислоты, хенодезоксихолевой кислоты, дезоксихолевой кислоты и урсодезоксихолевой кислоты. Эксципиенты, которые использовали в отдельности или в комбинации для стабилизации частиц клевидипина, включали, в качестве неограничивающих примеров, производные витамина E/производные желчных кислот, производные витамина E/фосфолипидные производные, производные желчных кислот/фосфолипидные производные.
[0059] В конкретном варианте осуществления наночастицы клевидипина стабилизируют с помощью комбинации одного или нескольких растворимых в воде эксципиентов, выбранных из PEG 200, дезоксихолата натрия и витамина E TPGS, и одного или нескольких нерастворимых в воде эксципиентов, выбранных из витамина E, дезоксихолевой кислоты и фосфатидилхолина.
[0060] Любой полимер можно применять в соответствии с настоящим изобретением. Полимеры могут являться природными или неприродными (синтетическими) полимерами. Полимеры могут являться гомополимерами или coполимерами, содержащими два или более мономера. В терминах последовательности coполимеры могут являться статистическими, блок-сополимерами или могут содержать комбинацию статистических и блок-последовательностей. Как правило, полимеры по настоящему изобретению являются органическими полимерами.
[0061] Как применяют в настоящем описании, термин "полимер" имеет свое общепринятое значение, используемое в этой области, т.е. означает молекулярную структуру, содержащую одну или несколько повторяющихся единиц (мономеров), соединенных ковалентными связями. Все повторяющиеся единицы могут являться идентичными, или в некоторых случаях может быть несколько типов повторяющихся единиц, присутствующих в полимере. В некоторых случаях полимер можно получать биологически, т.е. как биополимер. Неограничивающие примеры включают пептиды или белки. В некоторых случаях в полимере могут также присутствовать дополнительные остатки, например, биологические остатки, такие как описываемые ниже. Если в полимере присутствует несколько типов повторяющихся единиц, то полимер указывают как "coполимер." Следует понимать, что в любом варианте осуществления, в котором используют полимер, в некоторых случаях используемый полимер может являться coполимером. Повторяющиеся единицы, образующие coполимер, можно располагать любым образом. Например, повторяющиеся единицы можно располагать в случайном порядке, в чередующемся порядке или как блок-сополимер, т.е. содержащим одну или несколько областей, каждая из которых содержит первую повторяющуюся единицу (например, первый блок), и одну или несколько областей, каждая из которых содержит вторую повторяющуюся единицу (например, второй блок), и т.д. Блок-сополимеры могут иметь два (диблок-сополимер), три (триблок-сополимер) или большее количество отдельных блоков.
[0062] Описываемые частицы могут включать coполимеры, которые в некоторых вариантах осуществления включают два или более полимера (такие как представленные в настоящем описании), связанные друг с другом, как правило, посредством ковалентного связывания двух или более полимеров. Таким образом, coполимер может содержать первый полимер и второй полимер, конъюгированные друг с другом с образованием блок-сополимера, где первый полимер может являться первым блоком блок-сополимера, и второй полимер может являться вторым блоком блок-сополимера. Разумеется, специалистам в этой области будет понятно, что блок-сополимер в некоторых случаях может содержать множество блоков полимера, и что "блок-сополимер", как применяют в настоящем описании, не ограничен только блок-сополимерами, имеющими лишь один первый блок и один второй блок. Например, блок-сополимер может содержать первый блок, содержащий первый полимер, второй блок, содержащий второй полимер, и третий блок, содержащий третий полимер или первый полимер, и т.д. В некоторых случаях, блок-сополимеры могут содержать любое количество первых блоков первого полимера и вторых блоков второго полимера (и, в конкретных случаях, третьи блоки, четвертые блоки и т.д.). Кроме того, следует отметить, что в некоторых случаях блок-сополимеры также можно получать из других блок-сополимеров. Например, первый блок-сополимер можно конъюгировать с другим полимером (который может являться гомополимером, биополимером, другим блок-сополимером и т.д.) для получения нового блок-сополимера, содержащего множество типов блоков, и/или с другими остатками (например, неполимерными остатками).
[0063] В некоторых вариантах осуществления полимер (например, coполимер, например, блок-сополимер) может являться амфифильным, т.е. имеющим гидрофильную часть и гидрофобную часть или относительно гидрофильную часть и относительно гидрофобную часть. Гидрофильный полимер, как правило, может являться полимером, притягивающим воду, и гидрофобный полимер может являться полимером, как правило, отталкивающим воду. Гидрофильный или гидрофобный полимер можно идентифицировать, например, получая образец полимера и измеряя его угол контакта с водой (как правило, полимер будет иметь угол контакта менее 60°, в то время как гидрофобный полимер будет иметь угол контакта более приблизительно 60°). В некоторых случаях гидрофильность двух или более полимеров можно измерять относительно друг друга, т.е. первый полимер может являться более гидрофильным, чем второй полимер. Например, первый полимер может иметь меньший угол контакта, чем второй полимер.
[0064] В одном наборе вариантов осуществления полимер (например, coполимер, например, блок-сополимер), предусмотренный в настоящем описании, включает биосовместимый полимер, т.е. полимер, как правило, не вызывающий неблагоприятный ответ при введении или инъецировании живому организму, например, без значительного воспаления и/или острого отторжения полимера иммунной системой, например, с помощью T-клеточного ответа. Таким образом, терапевтические частицы, предусмотренные в настоящем описании, могут являться неиммуногенными. Как применяют в настоящем описании, термин "неиммуногенный" относится к эндогенному фактору роста в его нативном состоянии, в норме не вызывающему или вызывающему образование лишь минимальных уровней циркулирующих антител, T-клеток или реактивных иммунных клеток и в норме не вызывающему иммунный ответ индивидуума на него.
in vitro
6
[0065] Биосовместимость, как правило, относится к острому отторжению материала, по меньшей мере, частью иммунной системы, т.е. бионесовместимый материал, имплантированный индивидууму, провоцирует иммунный ответ у индивидуума, который может являться достаточно тяжелым, таким, что нельзя в достаточной степени контролировать отторжение материала иммунной системой, и часто он имеет такую степень, что материал необходимо удалять из индивидуума. Одним простым тестом для определения биосовместимости может являться подвергание полимера воздействию клеток ; биосовместимыми полимерами являются полимеры, которые, как правило, не приводят к значительной гибели клеток в умеренных концентрациях, например, в концентрациях 50 микрограммов/10 клеток. Например, биосовместимый полимер может вызывать гибель менее приблизительно 20% клеток при воздействии на такие клетки, как фибробласты или эпителиальные клетки, даже при фагоцитозе или ином захвате такими клетками. Неограничивающие примеры биосовместимых полимеров, которые могут быть применимыми в различных вариантах осуществления настоящего изобретения включают полидиоксанон (PDO), полигидроксиалканоат, полигидроксибутират, поли(глицерин себацинат), полигликолид, полилактид, поликапролактон или coполимеры или производные, включая эти и/или другие полимеры.
[0066] В определенных вариантах осуществления предусмотренные биосовместимые полимеры могут являться биодеградирующими, т.е. полимер способен деградировать химически и/или биологически в физиологической среде, такой как организм. Как применяют в настоящем описании, "биодеградирующими" полимерами являются те, которые при введении в клетки расщепляются клеточным аппаратом (биологически деградирующие) и/или посредством химического процесса, такого как гидролиз, (химически деградирующие) на компоненты, которые клетки могут повторно использовать или выводить без значительного токсического эффекта в отношении клеток. В одном из вариантов осуществления биодеградирующий полимер и побочные продукты его деградации могут являться биосовместимыми.
[0067] Например, предусмотренный полимер может являться полимером, гидролизующимся спонтанно после воздействия воды (например, внутри индивидуума), полимер может деградировать после воздействия высокой температуры (например, температуры приблизительно 37°C). Деградация полимера может происходить с различными скоростями в зависимости от применяемого полимера или coполимера. Например, время полужизни полимера (время, за которое 50% полимера может деградировать на мономеры и/или другие неполимерные остатки) может составлять порядка дней, недель, месяцев или лет в зависимости от полимера. Полимеры могут биологически деградировать, например, под действием ферментативной активности или клеточного аппарата, в некоторых случаях, например, под действием лизоцима (например, при относительно низком pH). В некоторых случаях полимеры могут расщепляться на мономеры и/или другие неполимерные остатки, которые клетки могут повторно использовать или выводить без значительного токсического эффекта в отношении клеток (например, полилактид может гидролизоваться с образованием молочной кислоты, полигликолид может гидролизоваться с образованием гликолевой кислоты и т.д.).
[0068] В некоторых вариантах осуществления полимеры могут являться катионными полимерами. В основном, катионные полимеры способны конденсироваться и/или защищать отрицательно заряженные цепи нуклеиновых кислот (например, ДНК, РНК или их производных). Амин-содержащие полимеры, такие как полилизиновые, полиэтилениминовые (PEI) и полиамидоаминовые дендримеры, предусмотрены для применения в описываемой частице в некоторых вариантах осуществления.
[0069] В некоторых вариантах осуществления полимеры могут являться деградирующими полиэфирами, несущими катионные боковые цепи. Примеры этих полиэфиров включают сополимер L-лактида и L-лизина, полимер сложного эфира серина, полимер сложного эфира 4-гидрокси-L-пролина.
[0070] Частицы, представленные в настоящем описании, могут содержать или не содержать PEG. Кроме того, конкретные варианты осуществления могут относиться к coполимерам, содержащим поли(сложный эфир-простой эфир), например, полимеры, имеющие повторяющиеся единицы, соединенные сложноэфирными связями (например, связями R-C(O)-O-R') и эфирными связями (например, связями R-O-R'). В некоторых вариантах осуществления изобретения биодеградирующий полимер, такой как гидролизуемый полимер, содержащий карбоксильные группы, можно конъюгировать с полиэтиленгликолевыми повторяющимися единицами для получения поли(сложный эфир-простой эфир). Полимер (например, coполимер, например, блок-сополимер), содержащий полиэтиленгликолевые повторяющиеся единицы, также можно обозначать как "пегилированный" полимер.
[0071] Предполагают, что PEG может являться терминированным и включает концевую группу, например, если PEG не конъюгируют с лигандом. Например, PEG может заканчиваться гидроксилом, метокси- или другой алкоксигруппой, метилом или другой алкильной группой, арильной группой, карбоксильной группой, аминогруппой, амидной, ацетильной группой, гуанидиногруппой или имидазолом. Другие предусмотренные концевые группы включают остатки азида, алкина, малеимида, альдегида, гидразида, гидроксиламина, алкоксиамина или тиола.
[0072] Специалистам в этой области известны способы пегилирования полимера, например, с использованием EDC (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорида) и NHS (N-гидроксисукцинимида) для проведения реакции полимера с PEG-группой, заканчивающейся амином, способом метатезисной полимеризации с раскрытием цикла (ROMP) или т.п.
[0073] В одном из вариантов осуществления для эффективного лечения молекулярную массу полимеров можно корректировать, как представлено в настоящем описании. Например, молекулярная масса полимера может влиять на скорость деградации частицы (например, если можно корректировать молекулярную массу биодеградирующего полимера), растворимость, поглощение воды и кинетику высвобождения лекарственного средства. Например, молекулярную массу полимера можно корректировать таким образом, что частица биодеградирует внутри индивидуума, подвергаемого лечению в пределах приемлемого периода времени (в диапазоне от нескольких часов до 1-2 недель, 3-4 недель, 5-6 недель, 7-8 недель и т.д.). Описываемая частица, например, может содержать диблок-сополимер PEG и PL(G)A, где например, часть PEG может иметь среднечисловую молекулярную массу приблизительно 1000-20000, например, приблизительно 2000-20000, например, от приблизительно 2 до приблизительно 10000, и часть PL(G)A может иметь среднечисловую молекулярную массу от приблизительно 5000 до приблизительно 20000, или приблизительно 5000-100000, например, приблизительно 20000-70000, например, приблизительно 15000-50000.
[0074] В определенных вариантах осуществления полимеры наночастиц можно конъюгировать с липидом. Полимер может являться, например, липид-терминированным PEG. Как описано ниже, липидную часть полимера можно использовать для самосборки с другим полимером, облегчая получение наночастицы. Например, гидрофильный полимер можно конъюгировать с липидом, который будет самособираться с гидрофобным полимером.
[0075] В другом варианте осуществления изобретения наночастицы можно составлять с антиоксидантами. Неограничивающие примеры антиоксидантов могут включать ацетилцистеин, аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол ("BHA"), бутилированный гидрокситолуол ("BHT"), монотиоглицерин, аскорбиновую кислоту, аскорбат натрия, формальдегид сульфоксилат натрия, метабисульфит натрия, бисульфит натрия, пропилгаллат, эдетат ("ЭДТА") (например, диэдетат натрия), диэтилентриаминпентауксусную кислоту ("DTPA") или любые их комбинации. Антиоксиданты также могут содержать аминокислоты, такие как метионин, гистидин, цистеин и аминокислоты, несущие заряженную боковую цепь, такие как аргинин, лизин, аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота. Кроме того, антиоксидант может являться любым стереоизомером (например, L-, D- или их комбинацией) любой конкретной аминокислоты.
Получение наночастиц по изобретению
3
[0076] Клевидипин можно производить посредством реакции 4-(2',3'-дихлорфенил)-1,4-дигидро-5-метоксикарбонил-2,6-диметил-3-пиридинкарбоновой кислоты с хлорметилбутиратом для получения клевидипина. Эту реакцию можно осуществлять, необязательно, в присутствие соответствующего гидрокарбоната, такого как KHCO, в подаваемом с помощью обратного холодильника ацетонитриле. Неорганические соли можно удалять посредством фильтрации и продукт кристаллизуют посредством добавления изопропанола и воды с последующим охлаждением. Его также можно кристаллизовать посредством замены растворителя с ацетонитрила на смесь спирта, такого как этанол или изопропанол, и воды с повторными выпариваниями. В дальнейшей очистке продукта кристаллы промывают смесью вода и этанола или изопропанола. Продукт можно растворять в подаваемом с помощью обратного холодильника изопропаноле, кристаллизовать посредством охлаждения, выделять посредством фильтрации и, в конечном итоге, промывать смесью воды и изопропанола. Более подробное описание способа производства клевидипина можно найти в патенте США № 6350877, содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.
[0077] В вариантах осуществления изобретения клевидипин может находиться в количестве от приблизительно 0,01 мг/мл и приблизительно 100 мг/мл, или от приблизительно 0,05 мг/мл и приблизительно 50 мг/мл, или от приблизительно 0,1 мг/мл и приблизительно 25 мг/мл, или от приблизительно 1,0 мг/мл и приблизительно 10 мг/мл или от приблизительно 2,5 мг/мл и 7,5 мг/мл, таком как 5,0 мг/мл. Кроме того, если желательной является конкретная концентрация клевидипина, концентрацию можно корректировать, например, посредством добавления воды.
[0078] Один из вариантов осуществления изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтические наночастицы клевидипина или его фармацевтически приемлемой соли, где в указанной композиции уровень любой отдельной примеси составляет не более 1,8% масс. при хранении в течение по меньшей мере трех месяцев при комнатной температуре. Другой вариант осуществления изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтические наночастицы клевидипина или его фармацевтически приемлемой соли, где в указанной композиции уровень примесей минимизируют до не более, чем 0,2% масс. в случае любого из вещества 23, вещества 24 и вещества 25 и не более, чем 1,5% масс. в случае H168/79 при хранении в течение по меньшей мере трех месяцев при комнатной температуре. На схеме ниже показаны пути деградации клевидипина, приводящие к примесям:
[0079] Наночастицы по изобретению, содержащие клевидипин, можно получать с применением любого устройства или способа, общеупотребительного в этой области. Такие устройства и способы можно найти, например, в патенте США № 8697131 и опубликованной патентной заявке США № 2013/0012551, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме. На фигурах 1-5 представлен способ получения наночастиц по настоящему изобретению с применением микроструйного реактора от MJR Pharmjet GmbH, Saarlouis, Germany.
[0080] В одном из вариантов осуществления можно применять микроструйные реакторы для получения микрочастиц или наночастиц растворимых в воде и нерастворимых в воде веществ посредством контролируемого осаждения, совместного осаждения и самоорганизации. В реакторе растворитель, содержащий по меньшей мере одну целевую молекулу, такую как клевидипин, и нерастворитель смешиваются в виде струй, сталкивающихся друг с другом в микроструйном реакторе при определенном давлении и скорости потока для осуществления очень быстрого осаждения, совместного осаждения или химической реакции, в течение которой образуются микрочастицы или наночастицы. Размер частиц контролируют с помощью температуры, при которой растворитель и нерастворитель сталкиваются, скорости потока растворителя и нерастворителя и/или количества газа, при этом меньших размеров частиц достигают при более низких температурах, высоких скоростях потока растворителя и нерастворителя и/или полном отсутствии газа.
[0081] В одном из вариантов осуществления способ получения частиц фармацевтического лекарственного средства с небольшим размером частиц, таких как наночастицы клевидипина, могут включать следующие этапы:
-растворения частицы фармацевтического лекарственного средства, такого как клевидипин, в смешиваемом с водой растворителе при высоких температурах под давлением, при необходимости;
-нагнетания этого раствора лекарственного средства через нагреваемые капилляры в нагреваемый микроструйный реактор;
-столкновения жидкой струи раствора лекарственного средства с жидкой струей из другого сопла реактора с осаждением/сушкой распылением, при этом последняя струя состоит из воды или водного раствора;
-поддержания газовой атмосферы в точке столкновения жидких струй посредством подачи газа для продува зоны осаждения, или посредством, по меньшей мере, частичного выпаривания растворителя и воды в зоне столкновения в результате падения давления после пропускания струй через соответствующие сопла, или где используют реактор со свободными струями, посредством удаления аэрозоля дисперсии с помощью гравитации;
-крайне быстрого смешивания по причине того, что его осуществляют в форме сталкивающихся струй в газовой атмосфере, при этом время смешивания составляет менее 100 мс, в другом варианте осуществления - менее одной мс; и
-образования ядра наночастиц посредством очень быстрого диффузионно-контролируемого осаждения растворителя/нерастворителя в точке столкновения и пластинчатой зоны смешивания жидких струй в газовой атмосфере.
[0082] Таким образом, в одном из вариантов осуществления для получения наночастиц сначала растворяют клевидипин в смешиваемом с водой органическом растворителе, таком как этанол, а затем в растворе растворяют модификатор поверхности. Насос используют для инъецирования раствора через трубку под растущим давлением до нескольких бар, в другом варианте осуществления - до более чем 5 бар, в другом варианте осуществления - до более чем 10 бар, через сопло в реактор с осаждением. Сопло реактора с осаждением одновременно служит клапаном для регуляции давления. Подводящую трубку, или линию подачи, можно нагревать снаружи с помощью электронагревателя или нагревательной бани, в другом варианте осуществления указанная линия подачи имеет спиральную конфигурацию (фигура 1).
[0083] Как видно на фигурах 2 и 3, в реакции применяют контролируемое осаждение растворителя/нерастворителя таким образом, что струи растворителя и нерастворителя со скоростями потока, превышающими 0,1 мл/мин, сталкиваются как сталкивающиеся струи, в другом варианте осуществления - при скорости более 1 м/с, в другом варианте осуществления - более 50 м/с. Растворитель и нерастворитель образуют в соплах струи, в другом варианте осуществления представляющие собой менее 1000 пм, в другом варианте осуществления - менее 500 пм, и наиболее предпочтительно - менее 300 пм, и имеют давление, как правило, 1 бар, в другом варианте осуществления - более 5 бар, и в другом варианте осуществления - более 10 бар.
[0084] Как показано на фигурах 4 и 5, эти две сталкивающиеся струи сталкиваются в микроструйном реакторе таким образом, что осаждение происходит в точке столкновения струй, которые, в зависимости от геометрии реактора, образуют структуру в форме двойного диска, содержащую быстро движущиеся жидкие струи. В области края диска происходит очень быстрое смешивание при скоростях смешивания, как правило, менее 1 миллисекунды, часто - менее 0,5 мс и, главным образом, менее 0,1 мс. Как видно на фигуре 4, неограничивающие примеры нерастворимых в воде полимерных эксципиентов включают токоферол, дезоксихолевую кислоту и липоид S 100 и их комбинации. На фигуре 4 также показано, что неограничивающие примеры растворимых в воде полимерных эксципиентов включают производные PEG, сывороточный альбумин, PVP, производные полисорбата и кремофор EL и их комбинации. Как показано на фигуре 5, наночастицы растут из точки столкновения к краю сферической пластины. Газ течет вокруг внешней поверхности сферической пластины, посредством чего контролируют время смешивания (как правило, менее 0,1 мс) и, таким образом, рост и размер наночастиц.
[0085] В настоящем описании, термин "растворитель" означает растворитель, содержащий одно или несколько активных целевых веществ вместе с одним или несколькими вспомогательными средствами, включая, в качестве неограничивающих примеров, фармацевтические эксципиенты, молекулы поверхностно-активного вещества, полимеры, сополимеры или блок-полимеры.
[0086] Термин "нерастворитель" также означает растворитель, содержащий одно или несколько активных целевых веществ или вспомогательных средств, применяемых для получения наночастиц или микрочастиц.
[0087] Эти жидкости можно нагревать или охлаждать, а именно, посредством внешнего нагрева или непосредственно в насосе, для растворения активного целевого вещества и/или вспомогательного средства, чтобы сделать возможным образование наночастиц с желаемым размером частиц и свойствами поверхности или стабилизировать полученные молекулы.
[0088] Настоящее изобретение включает способы получения частиц растворимых в воде и нерастворимых в воде веществ в микроструйном реакторе и одновременно их стабилизацию с применением одного или нескольких вспомогательных средств или модификаторов поверхности, полученные частицы имеют размеры частиц до 2000 нм, например, менее 1000 нм, менее 500 нм и менее 200 нм, с индексами полидисперсности, как правило, менее 2,0, например, менее 1,0, и дополнительно, например, менее 0,4.
[0089] Альтернативно, в другом варианте осуществления изобретения можно использовать способы и устройство, делающие возможной самоорганизацию, при которой одна или несколько активных целевых молекул химически реагируют с одним или несколькими подходящими вспомогательными средствами, растворимыми в нерастворителе, что приводит к получению продукта, нерастворимого в смеси растворителя/нерастворителя и, таким образом, делает возможным образование микрочастиц или наночастиц с размерами, которые варьируются в соответствии с параметрами, включающими, в качестве неограничивающих примеров, скорость потока или концентрацию веществ.
[0090] Также можно осуществлять совместное осаждение одного или нескольких активных целевых веществ с нерастворимым продуктом реакции одного или нескольких вспомогательных средств.
[0091] Кроме того, в настоящем изобретении можно применять способы совместного осаждения одного или нескольких активных целевых веществ с одним или несколькими подходящими вспомогательными средствами, в которых вещество растворяют на молекулярном уровне, например, для получения систем частиц, и обеспечивают поверхностное покрытие таких систем подходящими целевыми молекулами, включая, в качестве неограничивающих примеров, антитела.
[0092] Растворитель и нерастворитель являются растворами и смесями, представляющими собой жидкие компоненты, массовая доля которых может содержаться в растворе или в суспендированной форме.
[0093] Растворитель и нерастворитель, используемые в настоящем изобретении, могут представлять собой водную или органическую фазу или раствор, смесь, эмульсию или суспензию или их комбинацию.
[0094] Органические растворители этого типа могут являться смешиваемыми или несмешиваемыми с водой. Подходящие органические растворители включают, в качестве неограничивающих примеров, вещества, легко смешиваемые с водой, такие как этанол, метанол, тетрагидрофуран, диметилсульфоксид, ацетон и 2-изопропанол, и плохо смешиваемые вещества, такие как толуол, гексан, гептан, пентан и метиленхлорид.
[0095] Можно добавлять подходящие вспомогательные средства, такие как инертные дилюенты, солюбилизаторы, суспендирующие средства, вспомогательные вещества, увлажнители, подсластители, ароматизаторы, изотонические вещества, коллоидные дисперсанты и поверхностно-активные вещества, включая, в качестве неограничивающих примеров, заряженные фосфолипиды, такие как димиристоилфосфатидилглицерин, альгиновую кислоту, альгинаты, гуммиарабик, аравийская камедь, 1,3-бутиленгликоль, хлорид бензалкония, коллоидный диоксид кремния, цетилстеариловый спирт, цетомакроголевый эмульгирующий воск, казеин, стеарат кальция, цетилпиридинхлорид, цетиловый спирт, холестерин, карбонат кальция, CRODESTAS F-110, являющийся смесью стеарата сахарозы и дистеарата сахарозы (Croda Inc.), глины, каолин и бентонит, производные целлюлозы и их соли, такие как гидроксипропилметилцеллюлоза (HPMC), натрий-карбоксиметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза и их соли, метилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, некристаллическая целлюлоза, дифосфат кальция, бромид додецилтриметиламмония, декстран, диалкиловый эфир сульфосукцината натрия (например, AEROSEL OT, American Cyanamid), желатин, глицерин, моностеарат глицерина, глюкозу, p-изононилфеноксиполи(глицидол), также известный как поверхностно-активное вещество Olin 10-G или 10-GR (Olin Chemicals, Stamford, Conn.); глюкамиды, такие как октаноил-N-метилглюкамид, деканоил-N-метилглюкамид и гептаноил-N-метилглюкамид, лактоза, лецитин (фосфатиды), мальтозиды, такие как n-додецил-бета-D-мальтозид, маннит, стеарат магния, силикаты магния и алюминия, масла, такие как хлопковое масло, масло из семян, оливковое масло, касторовое масло и сезамовое масло; парафин, картофельный крахмал, полиэтиленгликоль (например, CARBOWAX 3350, CARBOWAX 1450 и CARBOPOL 9340 (Union Carbide), алкиловый сложный эфир полиоксиэтилена (например, простые эфиры макрогола, такие как цетомакрогол 1000), сложные эфиры полиоксиэтиленсорбита и жирных кислот (например, TWEENS, ICI Specialty Chemicals), производные полиоксиэтиленкасторового масла, стеараты полиоксиэтилена, поливиниловый спирт (PVA), поливинилпирролидон (PVP), фосфаты, полимер 4-(1,1,3,3-тетраметилбутил)фенола с этиленоксидом и формальдегидом (также известный как тилоксапол, SUPERIONE и TRITON), полоксамеры и полоксамины (например, плюроники F68LF, F87, FI08 и тетроник 908, доступные в BASF Corporation, Mount Olive, N.J.), пиранозиды, такие как n-гексил-.бета.-D-глюкопиранозид, n-децил-.бета.-D-глюкопиранозид, n-октил-.бета.-D-глюкопиранозид, соединения четвертичного аммония, диоксид кремния, цитрат натрия, крахмалы, сложные эфиры сорбита, карбонат натрия, твердые полиэтиленгликоли, додецилсульфат натрия, лаурилсульфат натрия (например, DUPONAL P, DuPont), стеариновую кислоту, сахарозу, тапиоковый крахмал, тальк, тиоглюкозиды, такие как n-гептил-.бета.-D-тиоглюкозид, трагакантовую камедь, триэтаноламин, TRITON X-200 (Rohm and Haas); и т.п.
[0096] Инертные дилюенты, солюбилизаторы, эмульгаторы, вспомогательные вещества, увлажнители, изотонические вещества, коллоидные детергенты и поверхностно-активные вещества являются коммерчески доступными или их можно получать способами, известными специалистам в этой области.
Конкретные варианты осуществления
[0097] В определенных вариантах осуществления наночастицы клевидипина стабилизировали с применением, например, трех различных подходов: в первом подходе для получения наночастиц применяли комбинацию нерастворимых в воде эксципиентов; во втором подходе - комбинацию растворимых в воде и нерастворимых в воде эксципиентов; и в третьем подходе - комбинацию растворимых в воде эксципиентов. Одной из целей для получения наночастиц являлось поддержание химической стабильности клевидипина и физической стабильности наночастиц при температуре окружающей среды и получение клевидипина с немедленным высвобождением после введения.
[0098] По первому аспекту наночастицы клевидипина стабилизировали с использованием нерастворимых в воде, липофильных эксципиентов, подходящих для парентерального применения, таких как, в качестве неограничивающих примеров, витамин E и его производные, желчные кислоты и их производные и фосфолипидные производные, лецитин, лизолецитин, фосфатидилсерин, глицерофосфохолин, олеиновая кислота, глицерин, инозитол, диэтилентриаминпентауксусная кислота, полиоксиэтиленкасторовое масло, основание полиоксиэтиленгидрогенизированного касторового масла, полиоксиэтиленсорбитан монолаурат и их комбинаций. Фосфолипидные производные выбирали из группы природных фосфолипидов, таких как выделенные из яичного желтка или соевых бобов, синтетические фосфолипиды, фосфатидилхолин и гидрогенизированные фосфолипиды. Производные желчных кислот выбирали из группы холевой кислоты, хенодезоксихолевой кислоты, дезоксихолевой кислоты и урсодезоксихолевой кислоты. Эксципиенты, которые применяли в отдельности или в комбинации для стабилизации частиц клевидипина, включали, в качестве неограничивающих примеров, производные витамина E/производные желчных кислот, производные витамина E/фосфолипидные производные, производные желчных кислот/фосфолипидные производные. Для получения наночастиц клевидипин растворяли в органическом растворителе, таком как, в качестве неограничивающих примеров, этанол, полиэтиленгликоль (PEG), DMSO, ацетон, тетрагидрофуран, диметилацетамид, ацетонитрил, бензилбензоат, N-метил-2-пирролидон, триэтаноламин, изопропанол, метанол, ацетон или их комбинации с концентрацией 0,5-200 мг/мл, например, 5-20 мг/мл, и в другом варианте осуществления 5-10 мг/мл в присутствие нерастворимых в воде эксципиентов, таких как витамин E и его производные с концентрацией 1-200 мг /мл, в другом варианте осуществления - 20-50 мг/мл, и в другом варианте осуществления - 30-50 мг/мл, и желчные кислоты и их производные с концентрацией 0,5-250 мг /мл, в другом варианте осуществления - 5-100 мг/мл, и в другом варианте осуществления - 20-50 мг/мл, и фосфолипидные производные с концентрацией 0,5-300 мг /мл, в другом варианте осуществления - 1-100 мг/мл, и в другом варианте осуществления - 3-4 мг/мл. Этот раствор осаждали нерастворителем для клевидипина, таким как, в качестве неограничивающих примеров, вода, с использованием технологии микроструйного реактора, как описано в патенте США № 8697131 и опубликованной патентной заявке США № 2013/0012551, включенных в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме, при давлении газа 0,05-2 бар, в другом варианте осуществления - 0,1-1 бар, и в другом варианте осуществления - 0,1-0,4 бар. Для получения наночастиц применяли различные коэффициенты смешения растворителя, содержащего клевидипин и эксципиенты, и водного нерастворителя.
[0099] Коэффициенты смешения растворителя/нерастворителя находились в диапазоне 0,1:10-9:1, в другом варианте осуществления - 0,5:9,5-1:1, и в другом варианте осуществления - от 0,5:9,5 до 1:5. Скорости потока растворителя и нерастворителя составляли 0,1-2000 мл/мин, в другом варианте осуществления - 0,1-100 мл/мин, в другом варианте осуществления - 0,1-50 мл/мин.
[00100]
По второму аспекту настоящего изобретения наночастицы клевидипина стабилизировали с применением комбинаций нерастворимых в воде, липофильных эксципиентов, подходящих для парентерального применения, таких как, в качестве неограничивающих примеров, витамин E и его производные, желчные кислоты и их производные и фосфолипидные производные, лецитин, лизолецитин, фосфатидилсерин, глицерофосфохолин, олеиновая кислота, глицерин, инозитол, диэтилентриаминпентауксусная кислота, полиоксиэтиленкасторовое масло, основание полиоксиэтиленгидрогенизированного касторового масла, полиоксиэтиленсорбитан монолаурат, и растворимых в воде, гидрофильных эксципиентов, таких как, в качестве неограничивающих примеров, полиэтиленгликоли, полипропиленгликоли, соли желчных кислот, витамин E TPGS, полисорбат 80, полисорбат 20, Triton X-100, лаурилглюкозид, NP-40, олеиловый спирт, сорбитаны (моностеарат, тристеарат), стеариловый спирт, ноноксинолы, Кремофор (RH 60 или EL), Solutol HS 15, плутониевая кислота, додецилсульфат натрия (SDS). Фосфолипидные производные выбирали из группы природных фосфолипидов, таких как выделенные из яичного желтка или соевых бобов, синтетических фосфолипидов, фосфатидилхолина и гидрогенизированных фосфолипидов. Производные желчных кислот в качестве растворимых в воде эксципиентов выбирали из группы холевой кислоты, хенодезоксихолевой кислоты, дезоксихолевой кислоты и урсодезоксихолевой кислоты или солевых производных указанных выше молекул. Различные комбинации нерастворимых в воде и растворимых в воде эксципиентов, применяемые для стабилизации наночастиц клевидипина, включали, в качестве неограничивающих примеров, фосфолипиды/соли желчных кислот, витамин E/соли желчных кислот, витамин E/PEG, желчные кислоты/PEG, фосфолипид/PEG, желчные кислоты/витамин E TPGS или фосфолипид/витамин E TPGS. Для получения наночастиц клевидипин растворяли в органическом растворителе, таком как в качестве неограничивающих примеров, этанол, полиэтиленгликоль (PEG), DMSO, ацетон, тетрагидрофуран, диметилацетамид, ацетонитрил, бензил бензоат, N-метил-2-пирролидон, триэтаноламин, изопропанол, метанол, ацетон или их комбинации с концентрацией 0,5-200 мг/мл, в другом варианте осуществления - 5-20 мг/мл, и в другом варианте осуществления - 5-10 мг/мл, в присутствие нерастворимых в воде эксципиентов, таких как витамин E и его производные с концентрацией 1-200 мг/мл, в другом варианте осуществления - 20-50 мг/мл, и в другом варианте осуществления - 30-50 мг/мл, и желчные кислоты и их производные с концентрацией 0,5-200 мг /мл, в другом варианте осуществления - 5-100 мг/мл, и в другом варианте осуществления - 20-50 мг/мл, или фосфолипидные производные с концентрацией 0,5-250 мг /мл, в другом варианте осуществления - 10-50 мг/мл, и в другом варианте осуществления - 20-30 мг/мл. Этот раствор осаждали нерастворителем для клевидипина, таким, как в качестве неограничивающих примеров, вода, в присутствие растворимых в воде эксципиентов, таких как соли желчных кислот с концентрацией 0,5-250 мг/мл, в другом варианте осуществления - 5-100 мг/мл, и в другом варианте осуществления - 15-20 мг/мл, полиэтиленгликоль с концентрацией 0,1-100 мг/мл, в другом варианте осуществления - 1-50 мг/мл, в другом варианте осуществления - 1-2 мг/мл, или витамин E TPGS с концентрацией 2-30 мг/мл, в другом варианте осуществления - 2,5-10 мг/мл, и в другом варианте осуществления - 2,5-5 мг/мл, с применением технологии микроструйного реактора, как описано в патенте США № 8697131 и опубликованной патентной заявке США № 2013/0012551, включенных в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме, при давлении газа 0,05-2 бар, в другом варианте осуществления - 0,1-1 бар, и в другом варианте осуществления - 0,1-0,4 бар. Для получения наночастиц применяли различные коэффициенты смешения растворителя, содержащего клевидипин и эксципиенты, и водного нерастворителя. Коэффициенты смешения растворителя/нерастворителя находились в диапазоне 0,1:10-9:1, в другом варианте осуществления - 0,5:9,5-1:1, и в другом варианте осуществления - от 0,5:9,5 до 1:5. Скорости потока растворителя и нерастворителя составляли 0,1-2000 мл/мин, в другом варианте осуществления - 0,1-100 мл/мин, в другом варианте осуществления - 0,1-50 мл/мин.
[00101]
По третьему аспекту настоящего изобретения наночастицы клевидипина стабилизировали с применением растворимых в воде гидрофильных эксципиентов, подходящих для парентерального использования, таких как, в качестве неограничивающих примеров, витамин E TPGS, полисорбат 80, полисорбат 20, Triton X-100, лаурилглюкозид, NP-40, олеиловый спирт, сорбитаны (моностеарат, тристеарат), стеариловый спирт, ноноксинолы, кремофор (RH 60 или EL), Solutol HS 15, плутониевая кислота, додецилсульфат натрия (SDS), соли желчных кислот, полиэтиленгликоль и полипропиленгликоль и их комбинации. Соли желчных кислот выбирали из группы солей холевой кислоты, хенодезоксихолевой кислоты, дезоксихолевой кислоты и урсодезоксихолевой кислоты. Эксципиенты, которые применяли в отдельности или в комбинации для стабилизации частиц клевидипина, включали, в качестве неограничивающих примеров, PEG/соли желчных кислот, соли желчных кислот/витамин E TPGS, PEG/витамин E TPGS. Для получения наночастиц клевидипин растворяли в органическом растворителе, таком как, в качестве неограничивающих примеров этанол, полиэтиленгликоль (PEG), DMSO, ацетон, тетрагидрофуран, диметилацетамид, ацетонитрил, бензил бензоат, N-метил-2-пирролидон, триэтаноламин, изопропанол, метанол, ацетон или их комбинации с концентрацией 0,5-200 мг/мл, в другом варианте осуществления - 5-20 мг/мл, и в другом варианте осуществления - 5-10 мг/мл. Этот раствор осаждали нерастворителем для клевидипина, таким как, в качестве неограничивающих примеров, вода, в присутствие растворимых в воде эксципиентов, таких как соли желчных кислот с концентрацией 0,5-250 мг/мл, в другом варианте осуществления - 5-100 мг/мл, и в другом варианте осуществления - 10-20 мг/мл, полиэтиленгликоль с концентрацией 0,1-100 мг/мл, в другом варианте осуществления - 0,5-20 мг/мл, в другом варианте осуществления - 0,5-1 мг/мл, или витамин E TPGS с концентрацией 2-30 мг/мл, в другом варианте осуществления - 2,5-10 мг/мл, и в другом варианте осуществления - 2,5-5 мг/мл с использованием технологии микроструйного реактора, описываемой в патенте США № 8697131 и опубликованной патентной заявке США № 2013/0012551, включенных в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме, при давлении газа 0,05-2 бар, в другом варианте осуществления - 0,1-1 бар и в другом варианте осуществления 0,1-0,4 бар. Для получения наночастиц применяли различные коэффициенты смешения растворителя, содержащего клевидипин и эксципиенты, и водного нерастворителя. Коэффициенты смешения растворителя/нерастворителя находились в диапазоне 0,1:10-9:1, в другом варианте осуществления - 0,5:9,5-1:1, и в другом варианте осуществления - 0,5:9,5 до 1:5. Скорости потока растворителя и нерастворителя составляли 0,1-2000 мл/мин, в другом варианте осуществления - 0,1-100 мл/мин, в другом варианте осуществления - 0,1-50 мл/мин.
[00102]
По другому аспекту изобретения параметры получения описываемых выше наночастиц корректировали для получения наночастиц размером менее 500 нм, в другом варианте осуществления - менее 400 нм, в другом варианте осуществления менее - 300 нм с PDIменее 0,8, в другом варианте осуществления - менее 0,6, в другом варианте осуществления - менее 0,4.
[0100]
По другому аспекту изобретения наночастицы, полученные как описано выше, лиофилизировали для удаления растворителя в присутствие криопротекторов с концентрацией 1-200 мг/мл, выбранных из группы моно- или дисахаридов и полиолов, таких как, в качестве неограничивающих примеров, маннит, глицерин, пропиленгликоль и сахароза.
[0101]
По другому аспекту изобретения удаление растворителей, применяемых для наночастиц, полученных как описано выше, осуществляли посредством диафильтрации.
[0102]
По другому аспекту изобретения удаление растворителей, применяемых для наночастиц, полученных как описано выше, осуществляли посредством диализа.
[0103]
По другому аспекту изобретения суспензии наночастиц автоклавировали при 120°C в течение 15 минут для демонстрации стабильности растворов наночастиц клевидипина в условиях автоклавирования, и чтобы сделать их стерильными и подходящими для парентерального использования.
[0104]
В другом варианте осуществления изобретения обнаруживали, что составы являлись стабильными, таким образом, что обнаруживали, например, низкие уровни примесей.
Способы применения
[0105]
Наночастицы клевидипина по изобретению можно применять для лечения, например, гипертензии при введении нуждающемуся в этом пациенту. Наночастицы, представленные в настоящем описании, можно комбинировать с фармацевтически приемлемыми носителями для получения фармацевтической композиции по другому аспекту изобретения. Как будет понятно специалисту в этой области, носители можно выбирать с учетом пути введения, как описано ниже, локализации проблемы, лекарственного средства, подвергаемого доставке, времени доставки лекарственного средства и т.д.
[0106] Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно вводить пациенту, например, парентеральными путями. Как применяют в настоящем описании, термин "пациент" относится к людям, а также не принадлежащим человеку видам, включая, например, млекопитающих, птиц, пресмыкающихся, амфибий и рыб. Например, не принадлежащими человеку видами могут являться млекопитающие (например, грызун, мышь, крыса, кролик, обезьяна, собака, кошка, примат или свинья). В определенных вариантах осуществления парентеральные пути являются желательными, т.к. они позволяют избежать контакта с пищеварительными ферментами, обнаруживаемыми в пищеварительном тракте. По таким вариантам осуществления композиции по настоящему изобретению можно вводить посредством инъекции (например, внутривенной, подкожной или внутримышечной, интраперитонеальной инъекции), ректально, вагинально, местно (с помощью порошков, кремов, мазей или капель) или посредством ингаляции (с помощью спреев).
TM
[0107] В конкретном варианте осуществления наночастицы по настоящему изобретению вводят нуждающемуся в этом индивидууму системно, например, посредством IV инфузии или инъекции. Инъецируемые препараты, например, стерильные инъецируемые водные или масляные суспензии можно составлять в соответствии с известным уровнем техники с применением подходящих диспергирующих средств или увлажнителей и суспендирующих средств. Стерильный инъецируемый препарат также может являться стерильным инъецируемым раствором, суспензией или эмульсией в нетоксичном парентерально приемлемом дилюенте или растворителе, например, в виде раствора в 1,3-бутандиоле. Приемлемые наполнители и растворители, которые можно использовать, включают воду, раствор Рингера, U.S.P. и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные жирные масла общепринято применяют в качестве растворителя или суспендирующей среды. С этой целью можно использовать любое легкое жирное масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, в получении инъецируемых препаратов применяют жирные кислоты, такие как олеиновая кислота. В одном из вариантов осуществления конъюгат по настоящему изобретению суспендируют в жидкости-носителе, содержащей 1% (масс./об.) натрий-карбоксиметилцеллюлозу и 0,1% (об./об.) TWEEN 80. Инъецируемые составы можно стерилизовать, например, посредством фильтрации через удерживающий бактерий фильтр или посредством включения стерилизующих средств в форме стерильных твердых композиций, которые можно растворять или диспергировать в стерильной воде или другой стерильной инъецируемое среде перед применением.
Примеры
[0108] Описание дополнительно проиллюстрировано следующими примерами, которые не следует истолковывать в качестве ограничений объема или сущности настоящего изобретения конкретными способами, представленными в настоящем описании. Следует понимать, что примеры представлены для иллюстрирования конкретных вариантов осуществления, и что, таким образом, не предусматривают ограничения объема настоящего изобретения. Также следует понимать, что можно обращаться к различным другим вариантам осуществления, их модификациям и эквивалентам, которые могут быть очевидны специалистам в этой области, без отклонения от сущности настоящего изобретения и/или объема формулы изобретения.
Пример 1
Наночастицы клевидипина, стабилизированные с применением нерастворимых в воде эксципиентов
[0109] Наночастицы клевидипина получали с применением различных комбинаций нерастворимых в воде эксципиентов, растворимых в растворителе, как показано в таблице 1. Наночастицы получали с применением технологии микроструйного реактора, как описано в патенте США № 8697131 и опубликованной патентной заявке США № 2013/0012551, включенных в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме, при 25°C с давлением азота 0,1 бар. Воду применяли в качестве нерастворителя для всех препаратов.
Таблица 1: Композиции наночастиц клевидипина, стабилизированные с применением нерастворимых в воде эксципиентов
<b>№ состава</b>
<b>Клевидипин [мг/мл]</b>
<b>Растворитель</b>
<b>Концентрация нерастворимых в воде эксципиентов (мг/мл)</b>
<b>Скорость потока раствор растворителя [мл/мин]</b>
<b>Скорость потока нерастворителя [мл/мин]</b>
<b>Соотношение растворителя/нерастворителя</b>
<b>Витамин E</b>
<b>Дезоксихолевая кислота</b>
<b>Фосфатидилхолин</b>
1
10
DMSO
50,0
50
-
1,0
9,0
1:9
2
10
Этанол
30,0
20
0,5
9,5
0,5:9,5
3
10
Этанол
25,0
3,75
1,0
4,0
1:4
4
5
Этанол
12,5
1,88
1,0
9,0
1:9
5
7
DMSO/EtOH 80:20
25
2,00
1,0
4,0
1:4
6
7
Этанол
-
50
2,00
1,0
9,0
1:9
Наночастицы, представленные в таблице 1, охарактеризовывали в терминах их размера частиц и PDI с применением динамического светорассеяния. Результаты (таблица 2) свидетельствовали о том, что наночастицы с различными размерами частиц получали с применением различных комбинаций нерастворимых в воде эксципиентов.
Таблица 2: Результаты определения размера частиц и PDI для наночастиц клевидипина, стабилизированных с применением нерастворимых в воде эксципиентов
<b>№ состава</b>
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>PDI</b>
1
192,7
0,094
2
186,2
0,126
3
586,9
0,524
4
155,2
0,171
5
216,7
0,063
6
281,6
0,245
Пример 2
Наночастицы клевидипина, стабилизированные с применением комбинации нерастворимых в воде и растворимых в воде эксципиентов
[0110]
Наночастицы клевидипина получали с применением различных комбинаций нерастворимых в воде эксципиентов, растворенных в органическом растворителе, и растворимых в воде эксципиентов, растворенных в воде (нерастворителе), как показано в таблице 3. Наночастицы получали с использованием технологии микроструйного реактора, как описано в патенте США № 8697131 и опубликованной патентной заявке США № 2013/0012551, включенных в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме, при 25°C с давлением азота 0,1 бар. Воду применяли в качестве нерастворителя для всех препаратов.
Таблица 3: Композиции наночастиц клевидипина, стабилизированные с применением комбинации растворимых в воде и нерастворимых в воде эксципиентов
<b>№ состава</b>
<b>Клевидипин [мг/мл]</b>
<b>Растворитель</b>
<b>Нерастворимые в воде эксципиенты</b>
<b>Растворимые в воде эксципиенты</b>
<b>Растворитель [мл/мин]</b>
<b>Нерастворитель [мл/мин]</b>
<b>Соотношение растворителя/нерастворителя</b>
<b>Витамин E [мг/мл]</b>
<b>Дезоксихолевая кислота</b>
<b>Фосфатидилхолин [мг/мл]</b>
<b>PEG 200 [мг/мл]</b>
<b>Дезоксихолат натрия [мг/мл]</b>
<b>TPGS [мг/мл]</b>
7
7
DMSO
30
-
-
1
-
-
0,5
9,5
0,5:9,5
8
10
Этанол
20
-
-
1
-
-
0,5
9,5
0,5:9,5
9
10
Этанол
-
-
30
1
-
1
9
1:9
10
8
DMSO/Этанол 80:20
-
-
48
1
-
1
1
1:1
11
7
Этанол
50
-
-
-
50
-
1
1
1:1
12
7
DMSO
40
-
-
-
40
-
1
2
1:2
13
7
DMSO
40
-
-
1
-
1
9
1:9
14
7
DMSO
20
-
2
-
-
1
9
1:9
15
10
Этанол
10
-
-
5
1
4
1:4
16
10
Этанол
-
10
-
-
5
1
9
1:9
17
10
Этанол
-
-
5
-
-
5
1
4
1:4
18
10
Этанол
-
20
-
-
5
1
9
1:9
Наночастицы, представленные в таблице 3, охарактеризовывали в терминах их размера частиц и PDI с применением динамического светорассеяния. Результаты, представленные в таблице 4, свидетельствовали о том, что наночастицы с разными размерами частиц получали с применением различных комбинаций нерастворимых в воде эксципиентов и растворимых в воде эксципиентов.
Таблица 4: Результаты определения размера частиц и PDI в случае наночастиц клевидипина, стабилизированных с применением комбинации растворимых в воде и нерастворимых в воде эксципиентов
<b>№ состава</b>
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>PDI</b>
7
229,8
0,083
8
213,1
0,043
9
196,7
0,470
10
125,0
0,196
11
243,8
0,276
12
191,3
0,121
13
329,9
0,094
14
392,4
0,153
15
153,0
0,042
16
59,99
0,102
17
90,42
0,094
18
65,48
0,202
Пример 3
Наночастицы клевидипина, стабилизированные с применением растворимых в воде эксципиентов
[0111]
Наночастицы клевидипина получали с применением различных комбинаций растворимых в воде эксципиентов, как показано в таблице 5. Наночастицы получали с применением технологии микроструйного реактора, как описано в патенте США № 8697131 и опубликованной патентной заявке США № 2013/0012551, включенных в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме, при 25°C с давлением азота 0,1 бар. Воду использовали в качестве нерастворителя для всех препаратов.
Таблица 5: Композиции наночастиц клевидипина, стабилизированные с применением растворимых в воде эксципиентов
<b>№ состава</b>
<b>Клевидипин [мг/мл]</b>
<b>Растворитель</b>
<b>Растворимые в воде эксципиенты</b>
<b>Растворитель</b><b>[мл/мин]</b>
<b>Нерастворитель [мл/мин]</b>
<b>Соотношение растворителя/нерастворителя</b>
<b>PEG 200</b><b>[мг/мл[</b>
<b>Дезоксихолат натрия [мг/мл]</b>
<b>TPGS [мг/мл]</b>
19
10
DMSO
-
5
2,5
1
5
1:5
20
10
DMSO
-
5
5
1
5
1:5
21
5
DMSO
5
2,5
1
4
1:4
22
5
DMSO
-
2,5
2,5
1
4
1:4
23
10
Этанол
-
10
2,5
1
9
1:9
24
10
Этанол
5
5
1
2
1:2
25
10
DMSO
1
-
2,5
1
9
1:9
26
10
DMSO
0,5
-
5
1
2
1:2
27
10
Этанол
1
10
-
0,5
9,5
0,5:9,5
28
10
DMSO
1,5
5
-
0,5
9,5
0,5:9,5
Наночастицы, представленные в таблице 5, охарактеризовывали в терминах их размера частиц и PDI с применением динамического светорассеяния. Результаты, представленные в таблице 6, свидетельствуют о том, что наночастицы с разными размерами частиц получали с применением различных комбинаций растворимых в воде эксципиентов.
Таблица 6: Результаты определения размера частиц и PDI в случае наночастиц клевидипина, стабилизированных с применением растворимых в воде эксципиентов
<b>Номер примера</b>
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>PDI</b>
19
211,2
0,007
20
216,3
0,170
21
209,6
0,027
22
155,5
0,023
23
371,1
0,151
24
196,4
0,095
25
101,0
0,140
26
65,95
0,084
27
228,6
0,273
28
400,2
0,012
Пример 4
Стабильность конкретных наночастиц клевидипина перед удалением растворителя
[0112]Стабильность суспензий наночастиц оценивали перед удалением растворителя. Три типичных состава выбирали и оценивали на стабильность в смесях растворителя/нерастворителя в течение 96 часов. Определение размера частиц, PDI и содержания клевидипина осуществляли каждые 24 часа. Обнаруживали, что наночастицы из примеров 7 и 9 являлись стабильными в течение 96 часов, в то время как наночастицы из примера 2 являлись стабильными в течение 96 часов.
Таблица 7: Результаты определения размера частиц, PDI и содержания в случае конкретных составов наночастиц
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>№ состава</b>
<b>t=0</b>
<b>t=24 ч.</b>
<b>t=48 ч.</b>
<b>t=72 ч.</b>
<b>t=96 ч.</b>
2
219,90
222,20
231,30
231,80
232,00
7
226,80
228,20
230,90
230,70
227,00
9
93,53
93,39
94,05
95,14
96,00
<b>PDI</b>
<b>№ состава</b>
<b>t=0</b>
<b>t=24 ч.</b>
<b>t=48 ч.</b>
<b>t=72 ч.</b>
<b>t=96 ч.</b>
2
0,09
0,18
0,11
0,13
0,20
7
0,02
0,03
0,03
0,01
0,07
9
0,20
0,20
0,19
0,24
0,26
<b>Содержание (%)</b>
<b>№ состава</b>
<b>t=0</b>
<b>t=24 ч.</b>
<b>t=48 ч.</b>
<b>t=72 ч.</b>
<b>t=96 ч.</b>
2
100,00
98,90
100,20
98,20
98,63
7
100,00
100,71
99,77
97,31
90,72
9
100,00
101,70
101,93
98,38
100,01
Пример 5
Стабильность конкретных наночастиц клевидипина после автоклавирования
[0113]
Выбранные составы лиофилизировали с применением следующей программы для удаления органического растворителя.
Таблица 8: Программа лиофилизации в случае конкретных составов наночастиц
<b>Способ</b>
<b>Нагрузка</b>
<b>Замораживание</b>
<b>Первичная сушка</b>
<b>Вторичная сушка</b>
<b>Этап</b>
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
<b>Время [ч:мин]</b>
-
18:00
0:01
6:30
4:30
4:00
1:00
4:00
0:01
30:00
<b>Температура хранения [°C]</b>
20
-85
-30
-30
20
20
30
30
30
30
<b>Вакуум [мбар]</b>
0,12
0,12
0,12
0,12
0,12
0,12
0,001
0,001
[0114]
После лиофилизации наночастицы восстанавливали в дистиллированной воде и автоклавировали при 121°C в течение 15 минут для определения стабильности составов наночастиц после автоклавирования. Результаты определения физической стабильности представлены в таблице 9 и результаты определения химической стабильность представлены в таблице 9.
Таблица 9: Результаты определения размера частиц и PDI до и после автоклавирования
<b>Перед автоклавированием</b>
<b>После автоклавирования</b>
<b>№ состава</b>
<b>Дзета-потенциал [мВ]</b>
2
-36,1
-35,9
9
-37,5
-32,6
7
-22,4
-21,8
<b>Размер частиц [нм]</b>
2
182,6
179,0
9
308,2
305,6
7
260,6
267,3
<b>PDI</b>
2
0,030
0,143
9
0,158
0,178
7
0,083
0,031
Таблица 10: Результаты анализов примесей после автоклавирования
<b>№ состава</b>
<b>Общее количество примесей в области</b>
<b>Теоретическая концентрация клевидипина [мг/мл]</b>
<b>Общее содержание примесей [%]</b>
2
не определено
0,125
0
9
574027
0,250
1,033
7
819051
0,500
0,737
[0115]
Не наблюдали изменения размера частиц и значений PDI наночастиц в течение автоклавирования. Пример 2 не демонстрировал изменения в профиле примесей после автоклавирования, в то время как наблюдали повышение содержания примесей в составах 9 и 7. С учетом этой информации, корректировали лиофилизацию для снижения стресса в отношении составов наночастиц в течение замораживания, что также влияет на стабильность образцов в течение автоклавирования.
[0116]
Следующую лиофилизацию применяли во втором исследовании.
Таблица 11: Скорректированная программа лиофилизации в случае конкретных составов наночастиц
<b>Способ</b>
<b>Нагрузка</b>
<b>Замораживание</b>
<b>Первичная сушка</b>
<b>Вторичная сушка</b>
<b>Этап</b>
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
<b>Время [ч:мин]</b>
-
18:00
0:01
6:30
4:30
4:00
1:00
4:00
0:01
30:00
<b>Температура хранения [°C]</b>
20
-30
-30
-30
20
20
30
30
30
30
<b>Вакуум [мбар]</b>
0,12
0,12
0,12
0,12
0,12
0,12
0,001
0,001
[0117]
После лиофилизации наночастицы восстанавливали в дистиллированной воде и автоклавировали при 121°C в течение 15 минут для определения стабильности составов наночастиц в течение автоклавирования. Сравнение химической стабильность автоклавированных наночастиц, восстановленных после исходных и скорректированных циклов лиофилизации, представлено в таблице 12. Результаты свидетельствуют о том, что скорректированная лиофилизация улучшала стабильность наночастиц в течение автоклавирования.
Таблица 12: Сравнение уровней примесей в автоклавированных образцах, полученных с применением исходного и скорректированного способа лиофилизации
<b>№ состава</b>
<b>Общее содержание примесей [%]</b><b>Исходный способ лиофилизации</b>
<b>Общее содержание примесей [%]</b><b>Скорректированный способ лиофилизации</b>
2
0
0
9
1,033
0,17
7
0,737
0
Пример 6
Оценка стабильности конкретных наночастиц в ускоренных условиях хранения
[0118]
Ускоренные исследования стабильности осуществляли с применением выбранных составов в течение 2 недель при 40°C, и образцы анализировали на уровни примесей для определения химической стабильности наночастиц. Как показано в таблице 13, все составы наночастиц являлись химически стабильными в течение 2 недель в ускоренных условиях.
Таблица 13: Сравнение уровней примесей конкретных прототипов наночастиц в ускоренных условиях
<b>№ состава</b>
<b>Общее содержание примесей [%]</b>
2 t=0
0,00
9 t=0
0,17
7 t=0
0,00
2 t=1 неделя
0,00
9 t=1 неделя
0,27
7 t=1 неделя
0,00
2 t=2 недели
0,37
9 t=2 недели
0,36
7 t=2 недели
0,23
Пример 7
[0119]
Сравнение химической стабильности автоклавированных наночастиц, восстановленных после скорректированного цикла лиофилизации, и эмульсии клевидипина представлено в таблице 14. Результаты свидетельствуют о том, что клевидипин в наночастицах демонстрировал улучшенную химическую стабильность в течение автоклавирования по сравнению с клевидипином в эмульсии.
Таблица 14: Сравнение уровней примесей автоклавированных образцов конкретных прототипов наночастиц с эмульсией клевидипина
<b>№ состава</b>
<b>Общее содержание примесей [%]</b>
2
0,00
9
0,17
7
0,00
Эмульсия клевидипина, лот A
1,1
Эмульсия клевидипина, лот B
1,3
Эмульсия клевидипина, лот C
1,4
Пример 8
Оценка метаболизма
in vitro
[0120]
in vitro
Высвобождение  из выбранных составов наносуспензий оценивали в цельной крови человека и сравнивали с референсной эмульсией Cleviprex (коммерческим продуктом).
[0121]
В образцы цельной крови человека индивидуально добавляли аликвоты прототипов наносуспензий и эмульсии Cleviprex, соответственно, а затем оценивали на содержание клевидипина с помощью LC/MS/MS. Временные профили снижения клевидипина в тестовых и референсных составах представлены на фигуре 6. Результаты свидетельствуют о том, что клевидипин снижался экспоненциально в случае всех составов. Профили выведения для наносуспензий в составах 7 и 2, по существу, совпадали с таковыми для эмульсии Cleviprex, в то время как профиль состава 9 являлся более медленным. Кажущуюся константу скорости выведения (λ) получали в виде угла наклона экспоненциального снижения и кажущееся время полужизни вычисляли как ln(2)/λ, данные представлены в таблице 15.
Таблица 15: Сравнение кажущегося времени полужизни конкретных составов наночастиц с эмульсией клевидипина
<b>№ состава</b>
<b>T½</b><b>(мин)</b>
2
6,89
9
33,38
7
6,96
Эмульсия клевидипина
7,96
[0122]
Показано, чтоэмульсия клевидипина имеет время полужизни 7,96 минут. Обнаруживали, что время полужизни составов наночастиц 2 и 7 является вполне сравнимыми, что являлось неожиданным, учитывая тот факт, что эти составы получали с использованием нерастворимых в воде эксципиентов. Состав 9 получали с использованием комбинации растворимых в воде эксципиентов и нерастворимых эксципиентов, и в этом случае неожиданно наблюдали более медленную кинетику по сравнению с референсным продуктом.
Пример 9
Дополнительные наночастицы клевидипина, стабилизированные с применением нерастворимых в воде эксципиентов
[0123]
Наночастицы клевидипина получали с применением различных комбинаций нерастворимых в воде эксципиентов, растворенных в растворителе, как показано в таблице 16. Наночастицы получали с применением технологии микроструйного реактора, как описано в патенте США № 8697131 и опубликованной патентной заявке США № 2013/0012551, включенных в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме, при 25°C с давлением азота 0,1 бар. Воду использовали в качестве нерастворителя для всех препаратов.
Таблица 16: Условия осаждения и композиции наночастиц клевидипина, полученные с применением нерастворимых в воде эксципиентов
<b>№ состава</b>
<b>Клевидипин [мг/мл]</b>
<b>Растворитель</b>
<b>Концентрация нерастворимых в воде эксципиентов (мг/мл)</b>
<b>Скорость потока растворителя [мл/мин]</b>
<b>Скорость потока нерастворителя [мл/мин]</b>
<b>Соотношение растворителя/</b>Не<b>растворителя</b>
<b>Витамин E</b>
<b>Дезоксихолевая кислота</b>
<b>Фосфатидилхолин</b>
29
5
Этанол
20
30
-
2,5
50
1:20
30
7,5
Этанол
20
10
-
2,5
50
1:20
31
5
Этанол
20
10
-
5
50
1:10
32
7,5
Этанол
20
10
-
7,5
50
1,5:10
33
7,5
Этанол
30
50
-
5
50
1:10
34
7,5
Этанол
30
30
-
2,5
50
1:20
35
7,5
Этанол
20
30
-
5
50
1:10
36
7,5
Этанол
20
50
-
2,5
50
1:20
37
7,5
Этанол
30
30
-
5
50
1:10
38
7,5
Этанол
30
10
-
5
50
1:10
39
8,2
Этанол
19,9
25,2
-
7,5
50
1:10
[0124]
Наночастицы, представленные в таблице 16, охарактеризовывали в терминах их размера частиц и PDIс использованием динамического светорассеяния. Результаты (таблица 17) свидетельствуют о том, что наночастицы с разными размерами частиц получали с использованием различных комбинаций нерастворимых в воде эксципиентов.
Таблица 17: Размер частиц и PDI в случае наночастиц клевидипина, полученных с применением нерастворимых в воде эксципиентов
<b>№ состава</b>
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>PDI</b>
29
112,0
0,074
30
152
0,132
31
150,6
0,130
32
110,4
0,072
33
116,4
0,156
34
138,2
0,118
35
104,9
0,082
36
72,7
0,128
37
93,8
0,086
38
134,8
0,097
39
119,2
0,165
Пример 10
Дополнительные наночастицы клевидипина, стабилизированные с применением комбинации нерастворимых в воде и растворимых в воде эксципиентов
[0125] Наночастицы клевидипина получали с применением различных комбинаций нерастворимых в воде эксципиентов, растворенных в органическом растворителе, и растворимых в воде эксципиентов, растворенных в воде (нерастворителе), как показано в таблице 18. Наночастицы получали с применением технологии микроструйного реактора, как описано в патенте США № 8697131 и опубликованной патентной заявке США № 2013/0012551, включенных в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме, при 25°C с давлением азота 0,1 бар. Воду использовали в качестве нерастворителя для всех препаратов.
Таблица 18: Условия осаждения и композиции наночастиц клевидипина, полученные с применением комбинации растворимых в воде и нерастворимых в воде эксципиентов
<b>№ состава</b>
<b>Клевидипин [мг/мл]</b>
<b>Растворитель</b>
<b>Нерастворимые в воде эксципиенты</b>
<b>Растворимые в воде эксципиенты</b>
<b>Растворитель [мг/мл]</b>
<b>Нерастворитель [мг/мл]</b>
<b>Соотношение растворителя/</b>Не<b>растворителя</b>
<b>Витамин E [мг/мл]</b>
<b>Дезоксихолевая кислота [мг/мл]</b>
<b>Фосфатидилхолин [мг/мл]</b>
<b>Tween</b><b>20 [мг/мл]</b>
<b>Коллифор EL [мг/мл]</b>
<b>Коллифор RH40</b><b>[мг/мл]</b>
40
2,5
EtOH
30
10
-
0,025
5
50
1:10
41
2,5
EtOH
50
10
-
0,025
5
50
1:10
42
2,5
EtOH
30
10
-
0,025
5
50
1:10
43
2,5
EtOH
50
10
-
0,025
5
50
1:10
44
2,5
EtOH
30
10
-
0,025
5
50
1:10
45
2,5
EtOH
30
10
-
0,025
10
50
2:10
46
2,5
EtOH
30
10
-
0,025
10
50
2:10
[0126]
Наночастицы, представленные в таблице 18, охарактеризовывали в терминах их размера частиц и PDI с применением динамического светорассеяния. Результаты, представленные в таблице 19 ниже, свидетельствовали о том, что наночастицы с разными размерами частиц получали с применением различных комбинаций нерастворимых в воде эксципиентов и растворимых в воде эксципиентов.
Таблица 19: Результаты определения размера частиц и PDI в случае наночастиц клевидипина, полученных с применением комбинации растворимых в воде и нерастворимых в воде эксципиентов
<b>№ состава</b>
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>PDI</b>
40
192,7
0,207
41
195,6
0,153
42
178,2
0,137
43
196,8
0,111
44
175,6
0,201
45
210,4
0,137
46
205,9
0,102
Пример 11
Удаление растворителя с помощью диафильтрации
[0127]
Удаление растворителя также оценивали с помощью диафильтрации с применением проницаемого для молекул фильтра и обменной среды, содержащей ионное или неионное поверхностно-активное средство. В течение диафильтрации для облегчения способа в ретентат добавляли свежую обменную среду с той же скоростью, с которой образовывался фильтрат. Краткие сведения о диафильтрации и результаты представлены в таблицах 20 и 21, соответственно, в случае обменной среды, содержащей ионные и неионные поверхностно-активные средства.
Таблица 20: Результаты диафильтрации в случае обменной среды, содержащей ионное поверхностно-активное вещество
Мембрана
MJR-M-21 70 kd
Среда для непрерывной диафильтрации
1 мг/мл дезоксихолата Na
Замена объема
10 раз
Состав
10
Перед диафильтрацией
Значение pH
4,651
Начальная концентрация клевидипина, [мкг/мл]
527,72
Размер частиц [нм]
123,1
PD1
0,227
После диафильтрации
Анализ выделения [%]
93,3
Значение pH
6,993
Концентрация клевидипина [мкг/мл]
361,98
Размер частиц [нм]
102,7
PDI
0,167
Таблица 21: Результаты диафильтрации в случае обменной среды, содержащей неионные поверхностно-активные средства
Мембрана
MJR-M-21 70 kd
MJR-M-21 70 kd
MJR-M-21 70 kd
MJR-M-21 70 kd
MJR-M-21 70 kd
MJR-M-21 70 kd
MJR-M-21 70 kd
Среда для непрерывной диафильтрации
0,025 мг/мл Tween 20
0,025 мг/мл Tween 20
0,025 мг/мл Коллифора EL
0,025 мг/мл Коллифора EL
0,025 мг/мл Коллифора RH40
0,025 мг/мл Tween 20
0,025 мг/мл Коллифора EL
Замена объема
5 раз
5 раз
5 раз
5 раз
5 раз
5 раз
5 раз
Состав
40
41
42
43
44
45
46
Перед диафильтрацией
Значение pH
4,752
5,843
5,454
5,885
5,781
4,952
5,056
Начальная концентрация клевидипина [пг/мл]
230,8
227,4
221,3
235,7
206,5
485,6
475,6
Размер частиц [нм]
192,7
195,6
178,2
196,8
175,6
210,4
205,9
PDI
0,207
0,153
0,137
0,111
0,201
0,137
0,102
Дзета-потенциал [мВ]
-29,1
-29,3
-30,3
-31,3
-29,4
-31,5
-30,8
После диафильтрации
Анализ выделения [%]
99,7
101,3
99,9
99,4
100,2
100,6
101,8
значение pH
4,479
5,194
4,803
5,316
4,759
5,085
5,293
Концентрация клевидипина [пг/мл]
255,8
265,9
245,6
270,4
228,7
505,4
500,9
Размер частиц [нм]
185,4
197,3
182,5
201,7
180,6
211,9
202,7
PDI
0,108
0,096
0,182
0,167
0,152
0,127
0,207
Дзета-потенциал [мВ]
-32,4
-27,6
-31,6
-29,7
-30,3
-28,7
-31,9
[0128] Не наблюдали значимого изменения размера частиц в случае всех составов. Кроме того, выходы выделения в случае всех составов составляли более 99%, что свидетельствует о том, что с помощью диафильтрации можно успешно удалять остаточный растворитель, не влияя на физико-химическую стабильность наночастиц.
Пример 12
Оценка стабильности выбранных наночастиц при замораживании-размораживании
[0129]
Выбранные составы наносуспензий после диафильтрации подвергали циклам замораживания-размораживания и их физико-химическую стабильность оценивали после каждого цикла замораживания-размораживания. Наночастицы замораживали при -20°C в течение 8 или 12 часов и размораживали при комнатной температуре в течение 12 часов при каждом цикле. Композиции наночастиц, содержащие клевидипин, применяемые для исследования стабильности при замораживании-размораживании, представлены в таблице 22. Результаты исследования стабильности при замораживании-размораживании представлены в таблицах 23 и 24, соответственно, для наночастиц, полученных с применением ионных и неионных поверхностно-активных средств. Несколько составов наночастиц, включая составы 47, 49, 54, 56, 57-63, не демонстрировали значительного изменения значений содержания и размера частиц после трех циклов замораживания-размораживания, что свидетельствует о потенциальной длительной физической стабильности этих составов.
Таблица 22: Композиции составов наночастиц, применяемые для оценки стабильности при замораживании-размораживании
<b>ID</b>
<b>Клевидипин (мг/мл)</b>
<b>Витамин E (мг/мл)</b>
<b>Дезоксихолевая кислота (мг/мл)</b>
<b>Дезоксихолат натрия (мг/мл)</b>
<b>Tween 20 (мг/мл)</b>
<b>Коллифор RH 40 (мг/мл)</b>
<b>Коллифор EL (мг/мл)</b>
<b>pH перед диафильтрацией</b>
<b>pH после диафильтрации</b>
47
0,24
0,95
1,43
1
0
0
0
48
0,36
0,95
0,48
1
0
0
0
4,65
6,93
48
0,45
1,82
0,91
1
0
0
0
4,614,67
7,0
50
0,98
2,61
1,30
1
0
0
0
51
0,68
2,73
4,55
1
0
0
0
4,43
6,83
52
0,36
1,43
1,43
1
0
0
0
4,62
7,08
53
0,68
1,82
2,73
1
0
0
0
4,49
7,06
54
0,36
0,95
2,38
1
0
0
0
4,49
6,79
55
0,68
1,82
2,73
1
0
0
0
56
0,68
2,73
0,91
1
0
0
0
4,54
6,87
57
0,23
2,73
0,91
0
0,023
0
0
4,75
4,48
58
0,23
4,55
0,91
0
0,023
0
0
5,84
5,19
59
0,23
2,73
0,91
0
0
0
0,023
5,45
4,80
60
0,23
4,55
0,91
0
0
0
0,023
5,89
5,33
61
0,23
2,73
0,91
0
0
0,023
0
5,78
4,76
62
0,42
5
1,67
0
0,021
0
0
4,55
5,09
63
0,42
5
1,67
0
0
0
0,021
5,06
5,29
Таблица 23: Результаты циклов замораживания-размораживания для составов наночастиц, полученных с применением ионных поверхностно-активных веществ
№
t0
Первый цикл
Второй цикл
Третий цикл
Размер частиц (нм)
PDI
Содержание (мкг/мл)
Размер частиц (нм)
PDI
Содержание (%)
Размер частиц (нм)
PDI
Содержание (%)
Размер частиц (нм)
PDI
Содержание (%)
47
112
0,074
206,0
113,2
0,103
99,9
112,19
0,228
100,4
110,68
0,253
99,7
48
152
0,132
335,5
149,9
0,102
98,5
134,6
0,181
76,2
118,9
0,212
63,4
49
150,6
0,130
436,9
153,6
0,197
98,6
147
0,155
99,5
136,1
0,180
99,0
50
110,4
0,072
739,6
113,3
0,099
11,3
111
0,391
11,4
122,1
0,307
10,7
51
116,4
0,156
524,5
119,3
0,178
2,5
189,8
0,422
3,2
386,5
0,749
3,1
52
138,2
0,118
262,2
135,73
0,097
61,9
135,12
0,154
61,2
136,81
0,208
56,0
53
104,9
0,082
765,9
112,3
0,129
4,7
211,1
0,484
4,6
244,8
0,513
4,5
54
72,7
0,128
182,4
76,75
0,089
99,0
74,9
0,160
99,6
76,2
0,203
101,8
55
93,8
0,086
430,7
118,3
0,126
7,4
280,4
0,584
7,6
228
0,469
7,2
56
134,8
0,097
616,4
133,2
0,111
99,8
134,1
0,107
100,1
134,5
0,153
100,2
Таблица 24: Результаты циклов замораживания-размораживания для составов наночастиц, полученных с применением неионных поверхностно-активных веществ
№
t0
Первый цикл
Второй цикл
Третий цикл
Размер частиц (нм)
PDI
Содержание (мкг/мл)
Размер частиц (нм)
PDI
Содержание (%)
Размер частиц (нм)
PDI
Содержание (%)
Размер частиц (нм)
PDI
Содержание (%)
57
192,7
0,207
255,8
192,2
0,102
99,1
198,4
0,172
99,5
195,4
0,202
99,3
58
195,6
0,153
265,9
198,7
0,167
98,9
225,6
0,110
95,6
259,1
0,184
93,1
59
178,2
0,137
245,6
169,2
0,207
99,6
182,5
0,167
98,7
185,1
0,106
99,2
60
196,8
0,111
270,4
202,4
0,163
99,5
193,8
0,149
99,9
201,7
0,119
99,1
61
175,6
0,201
238,7
186,7
0,182
99,6
200,7
0,173
92,8
227,3
0,167
90,7
62
210,4
0,137
505,4
210,5
0,07
99,4
206,7
0,192
99,8
212,9
0,161
99,4
63
205,9
0,102
500,9
208,9
0,118
99,3
205,1
0,134
99,8
207,3
0,181
99,3
Пример 13
Оценка стабильности выбранных наночастиц
[0130] Исследованиястабильности осуществляли с применением выбранных составов в условиях длительного (25°C) и ускоренного хранения (40°C) в течение 3 месяцев для определения длительной физико-химической стабильности наночастиц. Композиции составов наночастиц, применяемых для исследований стабильности, представлены в таблице 25.
Таблица 25: Краткие сведения о композициях наночастиц, применяемых для исследования стабильности
<b>№</b>
<b>Клевидипин (мг/мл)</b>
<b>Витамин E [мг/мл)</b>
<b>Дезоксихолевая кислота [мг/мл]</b>
<b>Дезоксихолат натрия (мг/мл)]</b>
64
0,5
2
3
1
65
0,5
2
1
1
66
0,5
1,33
3,33
1
67
0,5
2
0,67
1
68
0,5
1,25
1,56
1
[0131]Данные о физической стабильности (размер частиц и PDI) представлены в таблице 26 и таблице 27, соответственно, для наночастиц, хранящихся при 25°C и 40°C. Не наблюдали изменения размера частиц в составах 65 и 67 в течение 3 месяцев при обеих температурах, в то время как в оставшихся составах наночастиц наблюдали агломерацию после двух месяцев хранения.
Таблица 26: Результаты определения размера частиц и PDI до и после хранения при 25°C/60%RH
<b>№</b>
<b>0 месяцев</b>
<b>1 месяц</b>
<b>2 месяца</b>
<b>3 месяца</b>
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>PDI</b>
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>PDI</b>
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>PDI</b>
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>PDI</b>
64
117,9
0,204
122,8
0,185
агломерация
агломерация
65
145,6
0,127
140,2
0,164
132,7
0,219
135,8
0,186
66
82,4
0,137
80,3
0,172
агломерация
агломерация
67
130,5
0,234
121,9
0,204
127,6
0,153
120,9
0,219
68
119,2
0,165
121,8
0,149
агломерация
агломерация
Таблица 27: Результаты определения размера частиц и PDI до и после хранения при 40°C/70%RH
<b>№</b>
<b>t=0 месяцев</b>
<b>t=1 месяц</b>
<b>t=2 месяца</b>
<b>t=3 месяца</b>
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>PDI</b>
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>PDI</b>
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>PDI</b>
<b>Размер частиц (нм)</b>
<b>PDI</b>
64
117,9
0,204
121,4
0,104
агломерация
агломерация
65
145,6
0,127
141,9
0,201
147,5
0,186
141,6
0,109
66
82,4
0,137
76,4
0,209
агломерация meration
агломерация
67
130,5
0,234
122,9
0,157
125,4
0,111
123,7
0,205
68
119,2
0,165
127,6
0,163
агломерация
агломерация
[0132]Данные об активности для наночастиц, хранящихся в условиях 25°C и 40°C, представлены в таблице 28. Определение содержания не осуществляли для конкретных составов после 2 месяцев по причине агломерации образцов. Значения содержания в случае составов наночастиц 65 и 67 составляли более 95% к концу 3 месяцев при обеих температурах и, таким образом, являлись стабильными в течение 3 месяцев.
Таблица 28: Результаты определения содержания до и после хранения при 25°C/60%RH и 40°C/75%RH
<b>№</b>
<b>Исходно (время 0)</b>
<b>Содержание</b><b>(%) при 25°C/60%RH</b>
<b>Содержание</b><b>(%) при 40°C/75%RH</b>
<b>Содержание</b><b>(мкг/мл)</b>
<b>1 месяц</b>
<b>2 месяца</b>
<b>3 месяца</b>
<b>1 месяц</b>
<b>2 месяца</b>
<b>3 месяца</b>
64
503,6
95,7
ND
94,2
ND
65
495,6
99,6
98,1
97,6
99,1
95,6
96,3
66
507,1
93,4
ND
91,8
ND
67
486,3
99,2
97,7
96,3
99,2
97,1
95,3
68
493,1
99,4
ND
98,4
ND
ND - не определено
[0133] Образцы анализировали с применением обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детекцией при 220 нм. Краткие сведения о продуктах деградации, образующихся при хранении наночастиц в условиях 25°C и 40°C, представлены в таблице 29. Конкретные составы не анализировали после 1 месяца по причине агломерации. В целом, при хранении наблюдали деградацию клевидипина, что соответствовало известному механизму его деградации.
[0134] Клевидипин гидролизовался до соответствующей кислоты HI52/81 с последующим декарбоксилированием до H168/79 до степени приблизительно 1,5% или менее в течение 3 месяцев хранения. Кроме того, клевидипин также окислялся с образованием его пиридинового аналога H324/78. Потенциально это можно минимизировать, осуществляя соответствующий контроль для минимизации воздействия кислорода на клевидипин при получении, а также после хранения наночастиц.
Таблица 29: Краткие сведения о результатах определения примесей при хранении при 25°C/60%RH и 40°C/75%RH
№ состава
67
65
68
66
64
Хранение при
Исходно
25°C - 1 мес.
25°C - 2 мес.
25°C - 3 мес.
40°C - 1 мес.
40°C - 2 мес.
40°C - 3 мес.
Исходно
25°C - 1 мес.
25°C - 2 мес.
25°C - 3 мес.
40°C - 1 мес.
40°C - 2 мес.
40°C - 3 мес.
Исходно
25°C - 1 мес.
40°C ·1 мес.
Исходно
25°C - 1 мес.
40°C - 1 мес.
Исходно
25°C - I мес.
40°C - 1 мес.
Отдельные примеси
RT/мин
RRT
% масс./масс. примесей
HI 52/81
11,5
0,71
0,000
0,341
0,438
0,290
0,336
0,599
0,841
0,000
0,115
0,155
0,289
0,089
1,215
0,720
0,000
0,400
0,110
0,000
0,410
0,670
0,000
0,268
0,379
S24 или S25
13,5
0,83
0,000
0,000
0,000
0,025
0,000
0,000
0,026
0,000
0,000
0,000
0,038
0,017
0,000
0,070
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
S23
13,9
0,85
0,000
0,000
0,000
0,022
0,163
0,000
0,049
0,000
0,000
0,000
0,029
0,032
0,000
0,039
0,000
0,001
0,023
0,000
0,001
0,003
0,000
0,000
0,009
Неизвестно 1
14,4
0,88
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,076
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,038
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
H207/59
14,9
0,91
0,000
0,005
0,000
0,083
0,000
0,000
0,163
0,000
0,000
0,000
0,068
0,001
0,000
0,281
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
H324/78
15,9
0,98
0,000
0,002
0,877
1,062
0,002
0,980
1,922
0,000
0,002
0,878
1,760
0,001
1,282
3,177
0,000
0,000
0,002
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
H168/79
16,8
1,03
0,000
0,636
0,129
0,841
0,284
0,178
0,026
0,000
0,145
0,125
0,026
0,148
0,232
0,701
0,000
0,000
0,000
0,000
0,154
0,031
0,483
0,154
0,164
Суммарный % площади примесей<sup>1</sup>
0,000
0,977
1,444
2,193
0,783
1,757
2,926
0,00
0,260
1,158
2,049
0,148
2,729
4,879
0,00
0,400
0,110
0,00
0,564
0,670
0,483
0,422
0,543
1
Общее содержание примесей является суммой всех пиков выше предела количественного определения (0,1%).
Пример 14
Оценка окислительной деградации клевидипина
[0135]Составы наночастиц с клевидипином (№№ составов 31, 40 и 42), а также растворы клевидипина барботировали азотом или сжатым воздухом и подвергали воздействию естественного освещения для определения эффекта кислорода из свободного пространства над жидкостью в отношении образования продукта окислительной деградации H324/78. Результаты представлены в таблице 30. Результаты свидетельствовали о том, что, в основном, окислительную деградацию снижали при включении клевидипина в наночастицу по сравнению с раствором. Кроме того, результаты свидетельствовали о том, что можно дополнительно снижать образование продукта окислительной деградации H324/78 посредством барботирования азотом.
Таблица 30: Результаты окислительной деградации клевидипина: влияние содержания кислорода в пространстве над жидкостью
<b>Состав</b>
<b>H324/78 (% площади)</b>
31, N<sub>2</sub>
0,58
31, Воздух
0,65
40, N<sub>2</sub>
0,84
40, Воздух
1,08
42, N<sub>2</sub>
0,73
42, Воздух
1,02
Клевидипин, N<sub>2</sub>
2,54
Клевидипин, Воздух
3,06
Пример 15
Эффект антиоксиданта в отношении окислительной деградации клевидипина
[0136]Получали составы наночастиц, содержащие клевидипин, с различными уровнями антиоксидантов (аскорбиновой кислотой или аскорбатом натрия) и подвергали воздействию естественного освещения в течение 3 дней для определения их эффекта в отношении образования продукта окислительной деградации H324/78. Антиоксиданты добавляли после осаждения и диафильтрации наночастиц и суспензии барботировали азотом или сжатым воздухом перед запаиванием. В целях сравнения растворы клевидипина, содержащие антиоксидант, также подвергали воздействию естественного освещения. Краткие сведения о композициях наночастиц, содержащих клевидипин и антиоксидант, представлены в таблице 31:
Таблица 31: Краткие сведения о водных композициях наночастиц, содержащих антиоксидант
<b>№</b>
<b>Клевидипин (мг/мл)</b>
<b>Витамин E (мг/мл)</b>
<b>Дезоксихолевая кислота (мг/мл)</b>
<b>Tween 20 (мг/мл)</b>
<b>Коллифор EL (мг/мл)</b>
<b>Аскорбиновая кислота (мг/мл)</b>
<b>Аскорбат натрия (мг/мл)</b>
69
0,42
5
1,67
0,021
0
0,25
0
70
0,42
5
1,67
0,021
0
0,5
0
71
0,42
5
1,67
0,021
0
0,75
0
72
0,23
4,55
0,91
0
0,023
0,25
0
73
0,23
4,55
0,91
0
0,023
0,5
0
74
0,23
4,55
0,91
0
0,023
0,75
0
75
0,42
5
1,67
0,021
0
0
0,1
76
0,42
5
1,67
0,021
0
0
0,25
77
0,42
5
1,67
0,021
0
0
0,5
78
0,42
5
1,67
0,021
0
0
0,75
79
0,42
5
1,67
0,021
0
0
1
STD 1
0,2
0
0
0
0
0
0
STD 2
0,2
0
0
0
0
0
1
[0137] В таблице 32 показано, что образование продукта окислительной деградации H324/78, снижалось в присутствии антиоксиданта.
Таблица 32: Результаты окислительной деградации клевидипина: эффект антиоксиданта
<b>H324/78 (% площади)</b>
<b>№</b>
<b>Воздух</b>
<b>Азот</b>
75
0,708%
0,583%
76
0,676%
0,571%
77
0,396%
0,583%
78
0,384%
0,399%
79
0,331%
0,275%
STD 1
8,968%
2,400%
STD 2
1,549%
0,364%
[0138] Представленные выше результаты свидетельствуют о том, что, осуществляя соответствующий контроль для минимизации содержания кислорода в пространстве над жидкостью, или включая антиоксидант, или применяя их комбинацию, можно минимизировать окислительную деградацию клевидипина в наночастице при длительном хранении.
[0139] Следует понимать, что изобретение не ограничено конкретными вариантами осуществления изобретения, описываемыми выше, т.к. можно осуществлять изменения конкретных вариантов осуществления, и они все равно попадают в объем формулы изобретения.