ИЗМЕРЕНИЯ БАРЬЕРНОЙ ФУНКЦИИ

1. Способ in vitro для определения модулирующего влияния исследуемого соединения на барьерную функцию эпителия, причем указанный способ включает стадии:
a) обеспечения микрофлюидной системы, содержащей множество полых микрофлюидных каналов, при этом указанный канал по меньшей мере частично заполнен гелем;
b) введения эпителиальных клеток в указанные микрофлюидные каналы и обеспечения приведения указанных эпителиальных клеток в контакт с указанным гелем;
c) культивирования указанных эпителиальных клеток, которые были введены в указанные микрофлюидные каналы, тем самым позволяя указанным клеткам образовывать на геле слой клеток с апикальной и базолатеральной стороной, тем самым, предпочтительно, позволяя указанным клеткам образовывать цилиндрическую структуру с апикальной и базолатеральной стороной в указанном микрофлюидном канале;
d) обеспечения указанных эпителиальных клеток в указанном микрофлюидном канале зондом и указанным исследуемым соединением, при этом указанный зонд и указанное исследуемое соединение независимо обеспечивают с апикальной стороны, с базолатеральной стороны или как с апикальной, так и базолатеральной стороны;
e) определения в различные моменты времени сигнала, обеспечиваемого указанным зондом в указанном микрофлюидном канале или в указанном геле, или как в указанном микрофлюидном канале, так и в указанном геле.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает стадию:
f) определения на основании сигналов, полученных на стадии е), времени, прошедшего с момента времени обеспечения указанных эпителиальных клеток указанным исследуемым соединением и/или указанным зондом до момента времени, при котором достигается заданное значение или заданное изменение значения флуоресценции в указанном микрофлюидном канале и/или в указанном геле, или до момента времени, при котором достигается заданное значение или заданное изменение значения соотношения флуоресценции в указанном микрофлюидном канале и указанном геле.
3. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанный способ осуществляют для более, чем одной концентрации исследуемого соединения, при этом, предпочтительно, определение согласно стадии f) осуществляют для более чем одной концентрации исследуемого соединения.
4. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что влияние исследуемого соединения на барьерную функцию эпителия определяют одновременно в более, чем одном микрофлюидном канале, содержащем культивируемые эпителиальные клетки, при этом предпочтительно одновременно определяют влияние более чем одной концентрации указанного исследуемого соединения на барьерную функцию эпителия.
5. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что независимым образом влияние более чем одного исследуемого соединения на барьерную функцию эпителия одновременно определяют, используя по меньшей мере часть указанных многочисленных микрофлюидных каналов, содержащих культивируемые эпителиальные клетки.
6. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, барьерную функцию нарушают до стадии d) или одновременно с указанной стадией.
7. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанные клетки обеспечивают указанным исследуемым соединением либо до, либо после, либо одновременно с указанным зондом.
8. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанные клетки, культивируемые на стадии с), образуют монослой, при этом предпочтительно указанный монослой, по существу, не позволяет указанному зонду диффундировать от апикальной стороны к базолатеральной стороне и/или от апикальной стороны к базолатеральной стороне.
9. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что два последовательных момента времени на стадии е) отделены друг от друга интервалом от 1 секунды до 24 часов.
10. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что различные моменты времени на стадии е) находятся в интервале между 10 минутами и 4 неделями включительно.
11. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что рядом с гелем присутствует еще один (дополнительный) канал, который находится в контакте с указанным гелем, причем указанный канал не находится в непосредственном контакте с микрофлюидным каналом, содержащим культивируемые эпителиальные клетки.
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что в указанном дополнительном канале присутствует поток, который удаляет указанный зонд из указанного геля, и при этом предпочтительно определение сигнала, обеспечиваемого указанным зондом на стадии е) в указанном геле, включает измерение сигнала в потоке, присутствующим в указанном дополнительном канале.
13. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что на стадии b) различные типы эпителиальных клеток вводят в один и тот же микрофлюидный канал и/или при этом на стадии b) различные микрофлюидные каналы обеспечивают различными типами эпителиальных клеток.
14. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанный гель представляет собой экстракт базальной мембраны, компонент внеклеточного матрикса, коллаген, коллаген I, коллаген IV, фибронектин, ламинин, витронектин, D-лизин, энтактин, гепарансульфидные протеогликаны или их комбинации, и при этом предпочтительно указанный гель не содержит искусственную мембрану или диффузионный барьер и/или при этом указанный гель находится в непосредственном контакте с клеточным слоем без какой-либо разделяющей их физической мембраны.
15. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанные эпителиальные клетки представляют собой эпителиальные клетки животных, клетки линии эпителиальных клеток животных, первичные эпителиальные клетки животных, эпителиальные клетки млекопитающих, клетки линии эпителиальных клеток млекопитающих, первичные эпителиальные клетки млекопитающих, эпителиальные клетки человека, клетки линии эпителиальных клеток человека или эпителиальные первичные клетки человека.
16. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что определение сигнала, обеспечиваемого указанным зондом на стадии е), включает измерение с применением устройства для визуализации, микроскопа, автоматизированного микроскопа, многопараметрического устройства для формирования изображения, планшета-ридера или многорежимного считывателя.
17. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанное микрофлюидное устройство обеспечивает непрерывный световой поток к указанному микрофлюидному каналу и/или к указанному гелю, и/или к указанному дополнительному каналу.
18. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанное модулирующее влияние нарушает или восстанавливает барьерную функцию эпителия.
19. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что на стадии d) эпителиальные клетки обеспечивают указанным зондом до обеспечения указанным исследуемым соединением, и при этом предпочтительно после обеспечения указанным зондом, обеспечиваемый указанным зондом в указанном микрофлюидном канале или в указанном геле, или как в указанном микрофлюидном канале, так и в указанном геле, определяют в различные моменты времени и до того, как обеспечивают указанное исследуемое соединение.
20. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанная микрофлюидная система содержит по меньшей мере 3, предпочтительно более, чем 10, еще более предпочтительно приблизительно 40, 96, 256, 384 микрофлюидных канала, при этом предпочтительно в по меньшей мере 3, предпочтительно в более, чем 10, еще более предпочтительно в приблизительно 40, 96, 256, 384 микрофлюидных каналах, содержащих эпителиальные клетки, измерения проводят одновременно, последовательно или параллельно.
21. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что на стадии d) обеспечивают зонды разного размера, при этом предпочтительно каждый зонд разного размера помечают при помощи разной флуоресцентной метки.
22. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что к стороне (базолатеральной или апикальной), которую обеспечивают указанным зондом, подают избыточное давление, при этом предпочтительно избыточное давление получают путем добавления большего количества флюида к стороне, которую обеспечивают указанным зондом, или к резервуарам, сообщающимся со стороной, которую обеспечивают указанным зондом, по сравнению с количеством флюида на другой стороне или в резервуарах, сообщающихся с другой стороной.
23. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что указанный гель структурируют в указанном микрофлюидном канале посредством средств, основанных на капиллярном давлении, таких как столбики, гребни, канавки, гидрофобные области или менее гидрофильные области в преимущественно более гидрофильном канале.
24. Способ по п. 19, отличающийся тем, что указанные эпителиальные клетки обеспечивают по меньшей мере одним зондом одновременно с указанным исследуемым соединением или в моменты времени после добавления указанного исследуемого соединения, и при этом по меньшей мере один указанный зонд можно отличить от указанного первого зонда, предпочтительно при помощи оптического средства.