ПРЕПАРАТЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЖИРОВОЙ ТКАНИ, КОЖНОЙ ТКАНИ И РАССТРОЙСТВ, И МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ
PREPARATIONS FOR TREATING ADIPOSE TISSUE, SKIN TISSUE AND DISORDERS, AND MUSCULAR TISSUE

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА
Данная заявка устанавливает приоритет предварительной заявки на патент США №№60/852221, поданной 17 октября 2006 г.; 60/898009, поданной 29 января 2007 г., и 60/919011, поданной 13 апреля 2007 г., причем данные заявки включены сюда посредством ссылки во всей их полноте.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
В современном обществе избыток жира в организме представляет собой серьезную проблему здравоохранения. Хронические состояния здоровья, стимулируемые избытком жира в организме, включают, например, сердечно-сосудистые заболевания и сахарный диабет 2 типа. Кроме того, избыток жира в организме весьма отрицательно влияет на внешний вид и представление о самом себе.
Отложение запасов жира в организме может происходить неравномерно. Например, у некоторых людей жир может накапливаться преимущественно в брюшной полости, тогда как у других - преимущественно в подкожной ткани. Гендерные различия также могут быть очевидными, причем у женщин жир накапливается на бедрах и боковой части ягодиц, а у мужчин - в области талии. Жировые отложения у женщин могут накапливаться на бедрах, которые выглядят помятыми или напоминают кожуру апельсина, что приводит к состоянию, называемому целлюлитом. Целлюлит может быть связан с архитектурой кожи, которая делает возможным выпячивание подкожного жира, которое иногда называют жировыми бугорками. Другие факторы, которые могут быть связаны с целлюлитом, включают измененные и/или редуцированные перегородки соединительной ткани, сосудистые и лимфатические изменения, которые приводят к накоплению жидкости и воспалению. Жировая ткань также может накапливаться в виде волокнистого отложения жира, известного как липома. Утилизация жировых запасов может происходить неравномерно. Люди, которые потяряли значительную массу, все еще могут иметь регионарные очаги отложения жира, которые не поддаются уменьшению, если не достигается опасная для здоровья выраженная потеря массы. Физические упражнения могут влиять на подкожные жировые запасы по-разному, причем более глубокие ткани отвечают липолизом, а поверхностные запасы являются более устойчивыми. Целлюлит также все еще может присутствовать, несмотря на потерю массы, и липомы обычно не подвержены влиянию потери массы.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Жировая ткань представляет собой основную запасающую энергию ткань организма. Жировые клетки или адипоциты хранят эту энергию в виде триглицеридов. Триглицериды мобилизуются из жировых запасов для обеспечения организма энергией посредством гормональной индукции гидролиза триглицеридов. В этом процессе в кровь высвобождаются свободные или неэтерифицированные жирные кислоты и глицерин для использования другими тканями организма. Расщепление триглицеридов из жировых запасов называется липолизом. Также наблюдается рост новых адипоцитов, который называется липогенезом. Основными гормонами и нейромедиаторами, которые контролируют липолиз в организме, являются катехоламины. Жировая ткань имеет бета-1, 2 и 3 адренергические рецепторы и альфа-2 адренергические рецепторы. Связывание агонистов бета-адренергических рецепторов ("бета-адренергические агонисты") с бета-адренергическими ("бета") рецепторами в жировой ткани приводит к липолизу адипоцитов, тогда как связывание агонистов альфа-рецепторов ингибирует липолиз. Активация бета-адренергических рецепторов также ингибирует липогенез. У людей бета-2 рецептор часто является наиболее распространенным на поверхностях жировых клеток и представляет собой главный медиатор липолиза, стимулируемого бета-адренергическими рецепторами. Стимуляция липолиза бета-адренергическими агонистами опосредуется аденилатциклазой и повышенным образованием циклического аденозинмонофосфата (циклический АМФ, цАМФ).
Более длительное воздействие бета-адренергических агонистов на адипоциты приводит к десенсибилизации и понижающей регуляции рецептора и потере липолитической активности. Соответственно, здесь описаны композиции, препараты, способы и системы для обработки отложений в адипоцитах путем приведения целевого отложения жира в контакт с композицией, содержащей по меньшей мере один агонист бета-2-адренергического рецептора длительного действия и соединение, которое уменьшает десенсибилизацию ткани-мишени к агонисту бета-2-адренергического рецептора длительного действия, например по меньшей мере один глюкокортикостероид, антигистаминное средство или любую их комбинацию.
В одном аспекте здесь предложен способ уменьшения регионарного отложения жира у субъекта, нуждающегося в этом (например, субъекта, страдающего от ожирения), включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции с замедленным высвобождением, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию с замедленным высвобождением вводят парентеральным, местным, внутримышечным, трансдермальным, трансваскулярным, подкожным путем введения или путем введения в глазницу. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение содержит глюкокортикостероид, антигистаминное средство или их комбинацию. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение содержит дексаметазон, преднизолон, метилпреднизолон, флутиказона пропионат, будесонид, кетотифен или любую их комбинацию. В некоторых воплощениях терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения содержит суспензию кристаллических микрочастиц по меньшей мере одного соединения. В некоторых воплощениях терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения высвобождается в течение от примерно 12 часов до примерно 45 суток (например, от примерно 3 суток до примерно 10 суток). В некоторых воплощениях вышеупомянутая фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением дополнительно содержит терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора и приготовлен в виде суспензии кристаллических микрочастиц. В некоторых воплощениях начало высвобождения по меньшей мере одного бета-адренергического агониста отсрочено относительно начала высвобождения по меньшей мере одного соединения. В некоторых воплощениях субъекту, которого лечили упомянутой выше фармацевтической композицией с замедленным высвобождением, назначают или проводят процедуру липосакции. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением дополнительно содержит терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста в солюбилизированной форме.
В некоторых воплощениях данный способ дополнительно включает введение, помимо по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов, композиции, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора (например, сальметерола, формотерола, бамбутерола, эформотерола, изопротеренола, альбутерола, фенотерола или любой их комбинации). В некоторых воплощениях терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста вводят субъекту от примерно одних суток до примерно двух недель после введения по меньшей мере одного соединения. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов вводят путем инъекции перед введением описанной выше композиции, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста. В некоторых воплощениях композицию, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, вводят перорально. В некоторых воплощениях композицию, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, вводят в виде суспензии кристаллических микрочастиц.
В другом аспекте здесь предложен способ проведения липосакции, включающий проведение липосакции у субъекта, нуждающегося в этом, которому ввели фармацевтическую композицию с замедленным высвобождением, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора.
В другом аспекте здесь предложен способ уменьшения регионарного отложения жира у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества одного или более чем одного соединения, стимулирующего путь, ассоциированный с адренергическим рецептором (например, катехоламина, альфа-адренергического антагониста, форсколина, аминофиллина, их аналогов или любой их комбинации); и терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов (например, в форме суспензии кристаллических микрочастиц). В некоторых воплощениях описанный выше способ дополнительно включает введение композиции, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора. В некоторых воплощениях вышеописанная композиция дополнительно содержит терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов. В некоторых воплощениях композицию, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, вводят примерно через одни сутки - две недели после по меньшей мере одного соединения. В некоторых воплощениях терапевтически эффективное количество одного или более чем одного соединения, стимулирующего путь, ассоциированный с адренергическим рецептором, и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора, вводят совместно.
В еще одном аспекте здесь предложена фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением (например, инъецируемый препарат), содержащая терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов, где терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения содержит суспензию кристаллических микрочастиц по меньшей мере одного соединения. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение представляет собой глюкокортикостероид, антигистаминное средство или любую их комбинацию. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение содержит дексаметазон, преднизолон, метилпреднизолон, флутиказона пропионат, будесонид, кетотифен или любую их комбинацию. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением дополнительно содержит суспензию кристаллических микрочастиц по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора (например, сальметерола, формотерола, бамбутерола, эформотерола, изопротеренола, альбутерола или фенотерола, или любой их комбинации). В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением, содержащая суспензию кристаллических микрочастиц по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, дополнительно содержит терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста в солюбилизированной форме. В некоторых воплощениях скорость высвобождения по меньшей мере одного бета-адренергического агониста ниже, чем скорость высвобождения по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов. В некоторых воплощениях вышеописанная фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением, помимо содержания по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов и по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора, дополнительно содержит терапевтически эффективное количество тиреоидного гормона (например, Т3 или Т4).
В другом аспекте здесь предложен способ увеличения мышечной массы у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции с замедленным высвобождением, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста.
В другом аспекте здесь предложен способ лечения состояния кожи у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции с замедленным высвобождением, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста.
В еще одном аспекте здесь предложен способ лечения обструктивного апноэ во сне у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции с замедленным высвобождением, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста.
В еще одном аспекте здесь предложен способ лечения косоглазия у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции с замедленным высвобождением, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста.
ВКЛЮЧЕНИЕ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ
Все публикации и патентные заявки, упомянутые в данном описании изобретения, включены здесь посредством ссылки в такой же степени, как если бы каждая отдельная публикация или патентная заявка была конкретно и отдельно указана как включенная посредством ссылки.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
Новые признаки данного изобретения конкретно изложены в прилагаемой формуле изобретения. Лучшее понимание признаков и преимуществ настоящего изобретения будет получено посредством ссылки на следующее подробное описание, в котором изложены иллюстративные воплощения, в которых используются приниципы данного изобретения, и на сопровождающие графические материалы.
На фиг.1 представлена схематическая иллюстрация липолиза адипоцитов.
На фиг.2 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимую индукцию липолиза в культивируемых адипоцитах с помощью бета-2-агониста длительного действия формотерола после трехчасовой инкубации.
На фиг.3 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимую индукцию липолиза в культивируемых адипоцитах с помощью бета-2-агониста длительного действия сальметерола после трехчасовой инкубации.
На фиг.4 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимую индукцию липолиза в культивируемых адипоцитах с помощью глюкокортикостероида будесонида после короткого периода инкубации (три часа) и подавление липолиза после более длительных периодов инкубации (18 часов).
На фиг.5 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимое подавление липолиза в культивируемых адипоцитах бета-2-агонистом длительного действия сальметеролом, который давали один в течение 18 часов, и дозозависимую индукцию липолиза сальметеролом после 18 часов, когда его давали в комбинации с глюкокортикостероидом будесонидом.
На фиг.6 представлена гистограмма, иллюстрирующая среднее значение различий массы эпидидимального жирового тела у животного (левое жировое тело по сравнению с правым жировым телом) в жировых телах, в которые инъецировали раствор носителя (2% ПЭГ (полиэтиленгликоль)), один формотерол или формотерол плюс будесонид, в течение трехсуточного периода обработки.
На фиг.7 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимое уменьшение массы жирового тела для двух разных комбинаций доз бета-2-агониста формотерола и глюкокортикостероида будесонида в течение трехсуточного периода обработки (введение через сутки).
На фиг.8 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимое уменьшение массы эпидидимальных и паховых жировых тел бета-2-агонистом формотеролом в комбинации с фиксированной дозой глюкокортикостероида будесонида в течение трехсуточного периода обработки.
На фиг.9 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимое уменьшение массы эпидидимального жирового тела бета-2-агонистом формотеролом в комбинации с фиксированной дозой глюкокортикостероида метилпреднизолона в течение трехсуточного периода обработки.
На фиг.10 представлена гистограмма, иллюстрирующая уменьшение массы жирового тела, уменьшение среднего диаметра жировых клеток и уменьшение числа жировых клеток после введения препарата. Уменьшение числа клеток в основном заметно после 2 недель обработки и согласуется с необходимостью дополнительного времени обработки для того, чтобы эти эффекты стали измеримыми. Эти результаты согласуются с механизмом действия данного препарата. Q3D = инъекция на каждые третьи сутки в течение 2 недель. QOD = инъекция через сутки в течение 1 недели.
На фиг.11 представлена гистограмма, иллюстрирующая потерю жира, ожидаемую для дозировки, эквивалентной человеческой (спроецированные значения на основе данных, полученных на грызунах). Ожидается, что ежесуточная дозировка, эквивалентная человеческой, например, посредством препарата с замедленным высвобождением, дает более чем двухкратное уменьшение массы жира под влиянием QOD дозы. Q3D = инъекция на каждые третьи сутки в течение 2 недель. QOD = инъекция через сутки в течение 1 недели.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОГО ВОПЛОЩЕНИЯ
Катехоламины являются основными регуляторами жировой ткани через адренергические рецепторы. Жировая ткань имеет бета-1, 2 и 3 адренергические рецепторы и альфа-2 адренергические рецепторы. Связывание бета-адренергических агонистов с бета-адренергическими рецепторами в жировой ткани может приводить к липолизу адипоцитов, тогда как связывание агонистов альфа-рецепторов может ингибировать липолиз. Активация бета-адренергических рецепторов также может ингибировать липогенез. У человека бета-2 рецептор часто является наиболее распространенным на поверхностях жировых клеток и представляет собой основной медиатор липолиза, стимулируемого бета-адренергическими рецепторами. Стимуляция липолиза бета-адренергическими агонистами опосредуется аденилатциклазой и повышенным образованием циклического аденозинмонофосфата (циклический АМФ, цАМФ). Альфа-2 рецепторы уменьшают липолиз в зрелых жировых клетках. Альфа-2 адренергические рецепторы могут участвовать в пролиферации преадипоцитов. Глюкокортикостероиды увеличивают ответы (например, липолиз) на стимуляцию катехоламинами. Это действие, вероятно, обусловлено повышающей регуляцией бета-адренергических рецепторов и других компонентов, включенных во вторичные внутриклеточные мессенджеры.
Здесь предложены фармацевтические композиции, препараты, способы и системы для осуществления редукционной терапии регионарного жира, жировой ткани и адипоцитов посредством модуляции адренергической системы. Как использовано здесь, термин "модуляция" обычно используется в его общем смысле и более конкретно относится к агонизму адренергических рецепторов, антагонизму адренергических рецепторов и/или изменениям в сигнальных путях, ассоциированных с рецептором. Один пример изменения в сигнальных путях, ассоциированных с рецептором, включает увеличение циклического АМФ, например, как схематически проиллюстрировано на фиг.1. В некоторых воплощениях "модуляция" относится к повышающей регуляции рецепторов или увеличению числа адренергических рецепторов, снижению дезактивации или секвестрации рецепторов, изменениям активности рецепторов (например, увеличению активности) и/или изменениям аффинности рецепторов.
Не желая быть связанными теорией, считают, что в некоторых воплощениях способов, описанных здесь, пролонгированная модуляция адренергических рецепторов в жировой ткани приводит к комбинации пролонгированного липолиза, уменьшенного содержания липидов в адипоцитах, уменьшенного размера клеток-адипоцитов, уменьшенной массы жировой ткани или отложения жира и/или улучшенного внешнего вида. Кроме того, не желая быть связанными теорией, также считают, что пролонгированная адренергическая модуляция приводит к пролонгированному ингибированию пролиферации жировых клеток (липогенеза). Соответственно, в некоторых воплощениях в описанных здесь способах предложено селективное уменьшение регионарных и/или подкожных отложений жировой ткани и адипоцитов, включая целлюлит, посредством пролонгированной адренергической модуляции. В некоторых воплощениях описанные здесь композиции являются полезными для лечения целлюлитного отложения жира и/или липом. В некоторых воплощениях субъекта, подлежащего лечению, диагностируют как страдающего ожирением, например, имеющего более 25% жира в организме (мужчины) или более 30% жира в организме (женщины).
В различных воплощениях один или более чем один селективный агонист бета-2-адренергического рецептора длительного действия вводят отдельно или в комбинации с одним или более чем одним соединением, которое уменьшает десенсибилизацию ткани-мишени к агонисту(ам) бета-адренергического рецептора, например, с глюкокортикостероидами или кетотифеном, или их аналогами. Термин "десенсибилизация" включает как кратковременную десенсибилизацию (тахифилаксию), так и долговременную десенсибилизацию, а также десенсибилизацию на протяжении других периодов времени. Агонисты бета-2-адренергического рецептора также называются здесь "бета-2-агонистами" и "агонистами бета-2 рецептора". Если не указано иначе, то ссылки на агонисты бета-2-адренергического рецептора также включают их аналоги, физиологически приемлемые соли и/или сольваты. В некоторых воплощениях композиция содержит селективный бета-2-агонист длительного действия и глюкокортикостероид в соотношении от примерно 100:1 до примерно 1:100.
Как обсуждалось выше, считают, что липолитическая активность и ингибирование пролиферации адипоцитов опосредованы модуляцией адренергических рецепторов в жировой ткани и/или на адипоцитах. В некоторых воплощениях редукционная терапия усиливается посредством пролонгированного воздействия или пролонгированной активности одного или более чем одного агониста адренергического рецептора и/или соединения, стимулирующего сигнальный путь, ассоциированный с рецептором, например катехоламинов, бета-адренергических агонистов, альфа-антагонистов, форсколина, аминофиллина, их аналогов или их комбинаций.
В некоторых воплощениях предложена пролонгированная адренергическая модуляция посредством применения фармацевтических композиций, содержащих один или более чем один по существу селективный агонист бета-2 рецептора длительного действия. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция с пролонгированной активностью содержит один или более чем один подходящий селективный бета-2-агонист длительного действия, например сальметерол 1, формотерол 2, бамбутерол 3, их физиологически приемлемые соли или сольваты, или их комбинации.
Пролонгированная адренергическая модуляция не наблюдается с типичными адренергическими композициями, поскольку адренергическое соединение обычно быстро удаляется из жировой ткани через кровь и/или лимфу, отчасти благодаря их гидрофильности. Кроме того, длительное воздействие адренергических агентов на жировую ткань, в частности агонистов бета-адренергических рецепторов, приводит к десенсибилизации рецепторов посредством фосфорилирования и секвестрации рецепторов. Эти эффекты ограничивают способность адренергически модулирующей композиции лечить жировую ткань и приводят к тахифилаксии, состоянию, при котором организм демонстрирует быстро уменьшающийся ответ на агонист после введения первоначальных доз относительно желаемого липолитического и антилипогенного эффекта. Соответственно, эффект лечения является кратковременным.
Бета-2-агонисты кратковременного действия часто приводят к тахифилаксии, как обсуждалось выше. Однако поскольку предпочтительные воплощения селективных бета-2-агонистов длительного действия имеют по существу селективную к бета-2 рецептору активность и высокую липофильность, активности бета-2-агонистов длительного действия сохраняются в жировой ткани в течение более длительных периодов времени по сравнению с бета-2-агонистами кратковременного действия. Активность частичного антагониста бета-2 рецептора, которая наблюдается при применении сальметерола, предотвращает некоторую десенсибилизацию, которая происходит при непрерывном воздействии полных адренергических агонистов на адипоциты. Кроме того, сальметерол может не полностью активировать аррестиновый сигнальный путь, который приводит к интернализации и деградации рецепторов и к долговременной понижающей регуляции рецептора. По сравнению с бета-2-агонистами кратковременного действия липолиз также происходит в течение более длительного периода времени после введения, поскольку селективные бета-2-агонисты длительного действия имеют более продолжительные периоды полувыведения. Комбинация более продолжительных периодов полувыведения и активностей уменьшает необходимую частоту введения фармацевтических композиций. Следовательно, в некоторых воплощениях не требуется ежесуточное введение композиции или ее введение более чем один раз в сутки. Кроме того, в предпочтительных воплощениях селективных бета-2-агонистов длительного действия также продемонстрирована большая селективность в отношении бета-2 рецепторов, что обеспечивает по существу аналогичные терапевтические эффекты соединения с бета-2-агонистами кратковременного действия при более низкой дозировке. Кроме того, более селективная бета-2 активность может ограничивать побочное эффекты на сердце, которые часто индуцируются стимуляцией бета-1 рецепторов в сердце.
Как обсуждалось выше, липолиз и/или ингибирование липогенеза и накопления липидов стимулируются бета-1, 2 или 3 подтипами рецептора. Таким образом, агонисты к одному, двум и/или ко всем трем рецепторам способны стимулировать липолиз и/или ингибировать липогенез. Считают, что у людей активность бета-2 рецепторов является более важной для стимуляции липолиза, особенно в присутствии противовоспалительного стероида или глюкокортикостероида.
Селективные бета-2-агонисты длительного действия, например сальметерол 1 (±2-(гидроксиметил)-4-[1-гидрокси-2-[6-(4-фенилбутокси)гексиламино]этил]фенол, CAS рег. №94749-08-3) и формотерол 2 (±N-[2-гидрокси-5-[1-гидрокси-2-[1-(4-метоксифенил)пропан-2-иламино]этил]-фенил]метанамид, CAS рег. №73573-87-2), являются предпочтительными в некоторых воплощениях. В некоторых воплощениях данные композиции содержат один или более чем один селективный бета-2-агонист длительного действия в виде физиологически приемлемых солей или сольватов, например, сальметерола ксинафоат и/или формотерола фумарат. Во многих случаях соли и/или сольваты бета-2-агонистов будут иметь желаемую активность. Если не указано иначе, ссылки на активный ингредиент, например на сальметерол 1, формотерол 2, изопротеренол 4, альбутерол 5, фенотерол и форсколин, включают сами соединения, а также их физиологически приемлемые аналоги, соли и/или сольваты, или их комбинации.
Некоторые предпочтительные бета-адренергические агонисты длительного действия демонстрируют высокую собственную аденилатциклазную активность, которая увеличивает синтез цАМФ. Например, некоторые воплощения включают формотерол 2 в качестве бета-2 селективного агониста длительного действия, который демонстрирует некоторую комбинацию более высокой активности, уменьшенных системных эффектов, высокой собственной активации аденилатциклазы и/или увеличения циклического АМФ, медиатора липолиза.
В некоторых предпочтительных воплощениях формотерол 2 присутствует в виде его физиологически приемлемой соли и/или сольвата. Подходящие физиологически приемлемые соли формотерола 2 включают, например, соли присоединения кислоты, полученные из неорганических и органических кислот, такие как гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, малеат, фумарат, тартрат, цитрат, бензоат, 4-метоксибензоат, 2-гидроксибензоат, 4-гидроксибензоат, 4-хлорбензоат, пара-толуолсульфонат, метансульфонат, аскорбат, салицилат, ацетат, сукцинат, лактат, глутарат, глюконат, трикарбаллилат, гидроксинафталинкарбоксилат, олеат, их комбинации и тому подобное. Предпочтительные воплощения содержат формотерол 2 в виде его фумаратной соли и/или в виде дигидрата. Подходящая концентрация формотерола 2 в ткани для лечения жировой ткани составляет от примерно 1 пМ до примерно 100 мкМ, например, от примерно 0,01 мкМ до примерно 50 мкМ, от 0,5 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 2,0 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 75 мкМ, или любую другую концентрацию формотерола в ткани от примерно 0,1 нМ до примерно 100 мкМ.
В некоторых воплощениях в описанных здесь композициях и способах используют сальметерол. Сальметерол 1 демонстрирует частичную агонистическую активность, которая, как считают, уменьшает десенсибилизацию рецептора и может ограничивать аррестиновый сингнальный путь, приводя к меньшей понижающей регуляции рецептора. В некоторых воплощениях сальметерол 1 присутствует в виде его физиологически приемлемой соли и/или сольвата. Подходящие физиологически приемлемые соли сальметерола 1 включают, но не ограничиваются этим, соли присоединения кислоты, полученные из неорганических и органических кислот, такие как гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, малеат, тартрат, цитрат, бензоат, 4-метоксибензоат, 2-гидроксибензоат, 4-гидроксибензоат, 4-хлорбензоат, пара-толуолсульфонат, метансульфонат, аскорбат, салицилат, ацетат, фумарат, сукцинат, лактат, глутарат, глюконат, трикарбаллилат, гидроксинафталинкарбоксилат, 1-гидрокси-2-нафталинкарбоксилат, 3-гидрокси-2-нафталинкарбоксилат, олеат, их комбинациями и тому подобным. В некоторых воплощениях сальметерол 1 предложен в виде 1-гидрокси-2-нафталинкарбоксилатной соли (гидроксинафтоата).
В некоторых воплощениях подходящая концентрация сальметерола 1 в ткани для лечения жировой ткани варьирует от примерно 1 пМ до примерно 100 мкМ, предпочтительно от примерно 1,0 нМ до примерно 1 мкМ, например от примерно 10 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 40 нМ до примерно 3 мкМ, от примерно 0,1 мкМ до примерно 1 мкМ, или представляет собой любую другую концентрацию сальметерола в ткани от примерно 1,0 нМ до примерно 10 мкМ.
В некоторых воплощениях селективный бета-2-агонист длительного действия, подлежащий введению, представляет собой формотерол, и терапевтически эффективное количество формотерола составляет от примерно 0,001 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, например от примерно 0,001 мкг/сутки до примерно 50 мкг/сутки, от 0,01 мкг/сутки до примерно 1,0 мкг/сутки, от примерно 0,1 мкг/сутки до примерно 10 мкг/сутки, от примерно 1 мкг/сутки до примерно 20 мкг/сутки, от примерно 5 мкг/сутки до примерно 40 мкг/сутки, от примерно 25 мкг/сутки до примерно 75 мкг/сутки, от примерно 50 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки формотерола, или любую другую дозу формотерола от примерно 0,001 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки.
В некоторых воплощениях селективный бета-2-агонист длительного действия, подлежащий введению, представляет собой сальметерол, и терапевтически эффективное количество сальметерола, подлежащее введению, составляет от примерно 0,01 мкг/сутки до примерно 1000 мкг/сутки, например от примерно 0,1 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, от примерно 1 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, от примерно 10 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, от примерно 50 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, или любую другую дозу сальметерола от примерно 0,01 мкг/сутки до примерно 1000 мкг/сутки.
Используемый здесь термин "терапевтически эффективное количество" относится к достаточному количеству вводимого агента (например, бета-2-агониста длительного действия) или соединения, которое будет в некоторой степени ослаблять один или более симптомов заболевания или состояния, которое лечат. Результатом может быть уменьшение и/или облегчение признаков, симптомов или причин заболевания, или любое другое желаемое изменение биологической системы. Например, "эффективное количество" для терапевтических применений представляет собой количество композиции, содержащей соединение, как здесь раскрыто, необходимое для обеспечения клинически значимого уменьшения симптомов заболевания без нежелательных вредных побочных эффектов. Подходящее "эффективное количество" в каждом отдельном случае можно определить с использованием таких методов, как исследование увеличения дозы. Термин "терапевтически эффективное количество" включает, например, профилактически эффективное количество. "Эффективное количество" соединения, раскрытого здесь, такого как селективный бета-2-агонист, используемого отдельно или в комбинации с другими соединениями (например, с соединением для уменьшения десенсибилизации бета-2-адренергического рецептора) представляет собой количество, эффективное для достижения желаемого фармакологического эффекта или терапевтического улучшения без нежелательных побочных эффектов. Понятно, что "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" может варьировать от субъекта к субъекту вследствие варьирования метаболизма бета-2-агонистов и соединений, используемых в комбинации с бета-2-агонистами (например, глюкокортикостероидов), возраста, массы, общего состояния субъекта, состояния, которое лечат, тяжести состояния, которое лечат, и решения практикующего врача.
Используемый здесь термин "совместно вводимые" относится к введению двух или более терапевтических агентов в одном препарате или в отдельных препаратах или к путям введения в любом порядке с целью лечения одного и того же состояния здоровья (например, липомы) у одного и того же субъекта.
Некоторые воплощения включают оптически чистые изомеры бета-адренергического(их) агониста(ов), которые улучшают липолиз и ингибирование липогенеза и уменьшают потенциальные побочные эффекты. В некоторых воплощениях эти оптически чистые изомеры позволяют получать препараты, содержащие большие нагрузки активного ингредиента, например, путем устранения одного или более чем одного изомера, не оказывающего физиологического эффекта, с меньшим физиологическим эффектом, с отрицательным эффектом и/или с невыясненным физиологическим эффектом. Удаление нежелательных связей из рацемической смеси позволяет выделить активный изомер, или эутомер, обеспечивая таким образом большую нагрузку эутомера в данном препарате путем удаления неактивных компонентов.
Два стереогенных центра в молекуле обычно образуют два диастереомера, названных здесь (R*,R*) и (R*,S*), и их энантиомеры. Диастереомеры представляют собой стереоизомеры, которые не являются энантиомерами, т.е. зеркальное изображение одного диастереомера не накладывается на другой диастереомер. Энантиомеры представляют собой стереоизомеры, которые являются зеркальными изображениями друг друга. Рацемат представляет собой смесь 1:1 энантиомеров. Энантиомеры (R*,R*)-диастереомеров называются (R,R)- и (S,S)-энантиомерами, которые являются зеркальными изображениями друг друга и, следовательно, имеют некоторые общие химические и физические свойства, например температуры плавления. Аналогично, (R,S)- и (S,R)-изомеры являются энантиомерами (R*,S*)-диастереомера. Например, формотерол 2 доступен в виде рацемата (R,R)- и (S,S)-изомеров в соотношении 1:1, типично в виде дигидрата фумаратной соли. Некоторые воплощения включают (R,R)-энантиомер, (R,R)-формотерол, который более активен в качестве бета-2-агониста длительного действия. Некоторые воплощения включают оптически чистые изомеры других бета-2-агонистов, например (R)-сальметерол.
Кроме того, в некоторых воплощениях по меньшей мере один селективный бета-2-агонист длительного действия является высоколипофильным, обеспечивая таким образом фармацевтическую композицию с пролонгированной активностью в жировой ткани. Считают, что высокая растворимость в липидах продлевает время пребывания бета-2-агониста в жировой ткани, посредством этого устраняя или снижая в некоторых воплощениях необходимость в носителе для замедленного высвобождения и/или контролируемого высвобождения. В препаратах, содержащих носитель для замедленного высвобождения, например полимер для замедленного высвобождения, высокая липофильность бета-2-агониста облегчает включение в носитель для замедленного высвобождения, как обсуждается более подробно ниже.
Сальметерол 1 и формотерол 2 имеют высокие растворимости в липидах, что продлевает время их пребывания в жировой ткани и/или в одной или более чем одной жировой клетке. В некоторых воплощениях композиция содержит высоколипофильный бета-адренергический агонист, который уменьшает или устраняет необходимость в носителе для замедленного или контролируемого высвобождения из-за распределения и секвестрации в жировой ткани, посредством чего пролонгируется эффект лечения. В некоторых воплощениях используют бета-адренергические агонисты с коэффициентом распределения в масле-воде по меньшей мере примерно 1000 или по меньшей мере примерно 10000 к 1. Например, сальметерол 1 является по меньшей мере в 10000 раз более липофильным, чем альбутерол 5, гидрофильный бета-адренергический агонист кратковременного действия.
Пролонгированная бета-адренергическая активность дополнительно усиливается путем предотвращения или уменьшения десенсибилизации (тахифилаксии), которая может происходить при непрерывном воздействии адренергических агонистов на адипоциты, как обсуждалось выше. "Соединения, которые уменьшают десенсибилизацию бета-адренергических рецепторов" (например, уменьшают десенсибилизацию ткани-мишени к бета-адренергическому агонисту) включают все подходящие соединения, которые снижают толерантность ткани-мишени к агонистам бета-адренергических рецепторов, включая глюкокортикостероиды и подходящие антигистаминные средства, например кетотифен, и тиреоидные гормоны, например Т3 и Т4. Глюкокортикостероиды также называются здесь "противовоспалительными стероидами", "глюкокортикостероидами" и/или "кортикостероидами". Считают, что глюкокортикостероиды сенсибилизируют регионарные отложения жира путем увеличения числа поверхностных бета-2 рецепторов, тем самым благоприятствуя липолизу или уменьшению жира по сравнению с запасанием жира. Глюкокортикостероиды также уменьшают число альфа-2 рецепторов. Глюкокортикостероиды также стабилизируют или уменьшают понижающую регуляцию рецепторов, особенно когда их дают одновременно с бета-адренергическим агонистом. Примечательно, что эстроген может индуцировать экспрессию альфа-2 адренергических рецепторов в подкожной жировой ткани у женщин, приводя к отношению бета-2 рецепторов к альфа-2 рецепторам менее 1. Считают, что отношение бета-2 рецепторов к альфа-2 рецепторам выше, чем примерно 1, вызывает уменьшение жира, а не накопление жира в адипоцитах.
В некоторых воплощениях композиция, содержащая один или более чем один глюкокортикостероид, является эффективной при обработке участков жира, содержащих пониженное число бета-2 рецепторов и/или повышенное число альфа-2 рецепторов, которые являются резистентными к бета-адренергической стимуляции липолиза или ингибированию липогенеза, например, в подкожной жировой ткани, особенно у женщин.
Не желая быть связанными теорией, считают, что глюкокортикостероиды или другие соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов усиливают липолиз, ингибирование липогенеза и/или уменьшение регионарного жира во время воздействия бета-адренергического агониста. Таким образом, в некоторых воплощениях терапевтически эффективное количество соединения (например, глюкокортикостероида) для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов вводят для увеличения липолитической активности и/или увеличения числа бета-рецепторов в ткани-мишени и, посредством этого, для стимуляции уменьшения жировых отложений. В некоторых воплощениях пациенту вводят фармацевтическую композицию с замедленным высвобождением, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов. Например, соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов можно приготовить в виде суспензии кристаллических микрочастиц так, чтобы обеспечить длительное высвобождение в течение желаемого периода времени от примерно 12 часов до примерно 12 месяцев, например в течение одних суток, 3 суток, 7 суток, 10 суток, 1 месяца, 45 суток, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев или любого другого периода времени от примерно 12 часов до примерно 12 месяцев. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением дополнительно содержит терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора (например, сальметерол или формотерол). В некоторых воплощениях по меньшей мере один бета-адренергический агонист приготовлен в виде суспензии кристаллических микрочастиц для длительного высвобождения. В некоторых воплощениях кристаллические микрочастицы имеют диаметр, варьирующий от примерно 5 мкм до примерно 150 мкм, например от 10 мкм до 130 мкм, от 20 мкм до 100 мкм, от 30 мкм до 75 мкм, или любой другой диаметр, варьирующий от примерно 5 мкм до примерно 150 мкм. В некоторых воплощениях средний диаметр частиц составляет от примерно 10 мкм до примерно 50 мкм, например примерно 15 мкм, 20 мкм, 25 мкм, 30 мкм, 40 мкм или любой другой средний диаметр от примерно 10 мкм до примерно 50 мкм. В некоторых воплощениях бета-адренергический агонист приготовлен в виде препарата так, чтобы иметь профиль высвобождения, которое является замедленным относительно высвобождения соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов.
В некоторых воплощениях соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов представляет собой глюкокортикостероид. Примеры подходящих кортикостероидов включают дексаметазон 6, флутиказона пропионат 7, будесонид 8, преднизолон 9, метилпреднизолон 10 и их аналоги. В некоторых воплощениях глюкокортикостероид представляет собой дексаметазон. В некоторых воплощениях кортикостероид представляет собой метилпреднизолон 6, (9-фтор-11,17-дигидрокси-17-(2-гидроксиацетил)-10,13,16-триметил-6,7,8,11,12,14,15,16-октагидроциклопента[а]фенантрен-3-он, CAS рег. №50-02-2) и/или флутиказона пропионат 7.
Как обсуждалось выше, в некоторых воплощениях подходящим соединением для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов является кетотифен 11, который также является полезным в качестве антигистаминного средства. В некоторых воплощениях композиция содержит одно соединение, которое уменьшает десенсибилизацию жировой ткани к бета-2-агонисту.
В некоторых воплощениях используют множество соединений для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов, например множество глюкокортикостероидов. Некоторые предпочтительные воплощения содержат по меньшей мере один глюкокортикостероид и антигистаминное средство кетотифен или аналог кетотифена.
В некоторых воплощениях в адипоцитах в регионарном жировом отложении увеличивается активность или плотность бета-2 рецепторов в ответ на введение кортикостероида или кетотифена, особенно в присутствии бета-адренергического агониста. В некоторых воплощениях увеличивающаяся активность и/или плотность бета-2 рецепторов потенцирует эффект бета-2-агонистов длительного или кратковременного действия. Таким образом, в некоторых воплощениях глюкокортикостероид сенсибилизирует жировую ткань в регионарном жировом отложении к эффектам стимуляции бета-2 рецепторов, например липолиз, ингибирование липогенеза и/или апоптоз, и/или увеличивает отношение бета-2-адренергических рецепторов к альфа-2 адренергическим рецепторам, посредством этого сдвигая баланс в жировой ткани от накопления жира к потере жира и приводя к уменьшению регионарного отложения жира. В некоторых воплощениях число бета-2 рецепторов увеличивается или поддерживается, особенно глюкокортикоидом или кетотифеном.
Подходящие концентрации глюкокортикостероидов в ткани, используемых для описанных здесь терапевтических способов, варьируют от примерно 0,001 мкМ до примерно 10 мМ, например от примерно 1,0 мкМ до примерно 5 мМ, от примерно 40 мкМ до примерно 3 мМ, от примерно 100 мкМ до примерно 1 мМ, или являются любыми другими концентрациями глюкокортикостероида в ткани от примерно 10 мкМ до примерно 10 мМ.
В некоторых воплощениях глюкокортикостероид, подлежащий введению, представляет собой будесонид, и фармацевтически эффективное количество будесонида составляет от примерно 1,0 до примерно 320 мкг/сутки, например от примерно 80 мкг/сутки до примерно 300 мкг/сутки, от примерно 100 мкг/сутки до примерно 280 мкг/сутки, от примерно 120 мкг/сутки до примерно 260 мкг/сутки, от примерно 140 мкг/сутки до примерно 240 мкг/сутки, от примерно 160 мкг/сутки до примерно 220 мкг/сутки, от примерно 180 мкг/сутки до примерно 200 мкг/сутки, от примерно 185 мкг/сутки до примерно 195 мкг/сутки будесонида, или (представляет собой) любую другую дозу будесонида от примерно 60 мкг/сутки до примерно 320 мкг/сутки.
В некоторых воплощениях глюкокортикостероид, подлежащий введению, представляет собой флутиказон, и терапевтически эффективное количество флутиказона составляет от примерно 1,0 мкг/сутки до примерно 500 мкг/сутки, например, от примерно 120 мкг/сутки до примерно 480 мкг/сутки, от примерно 140 мкг/сутки до примерно 460 мкг/сутки, от примерно 160 мкг/сутки до примерно 440 мкг/сутки, от примерно 180 мкг/сутки до примерно 420 мкг/сутки, от примерно 200 мкг/сутки до примерно 400 мкг/сутки, от примерно 220 мкг/сутки до примерно 380 мкг/сутки, от примерно 240 мкг/сутки до примерно 360 мкг/сутки, от примерно 260 мкг/сутки до примерно 340 мкг/сутки, от примерно 275 мкг/сутки до примерно 310 мкг/сутки, или от примерно 290 мкг/сутки до примерно 300 мкг/сутки флутиказона, или любую другую дозу флутиказона от примерно 100 мкг/сутки до примерно 500 мкг/сутки.
В некоторых воплощениях глюкокортикостероид, подлежащий введению, представляет собой метилпреднизолон в дозе от примерно 1,0 мкг/сутки до 10000 мкг/сутки или более, например от 50 мкг/сутки до 5000 мкг/сутки, от 100 мкг/сутки до 5000 мкг/сутки, от 500 мкг/сутки до 5000 мкг/сутки, от 700 мкг/сутки до 3000 мкг/сутки, от 800 мкг/сутки до 2500 мкг/сутки, от 1000 мкг/сутки до 2000 мкг/сутки, или в любой другой дозе от примерно 1,0 мкг/сутки до 10000 мкг/сутки. В некоторых воплощениях метилпреднизолона сукцинат можно солюбилизировать в суспензии кристаллических микрочастиц метилпреднизолона ацетата или вводить совместно с суспензией кристаллических микрочастиц метилпреднизолона ацетата с получением дозы для немедленного введения или дозы для пролонгированного введения.
В некоторых воплощениях для увеличения числа бета-2-адренергических рецепторов используют тиреоидный гормон.
В некоторых воплощениях композиция содержит один или более чем один антилиполитический блокирующий агент (т.е. агенты, которые снимают ингибирование липолиза), например, селективный антагонист альфа-2 рецептора, такой как фентоламин 12 (CAS рег. №73-05-2) или йохимбин 13 (CAS рег. №146-48-5), и блокирует антилиполитические эффекты в регионарном отложении жира. Антилиполитические эффекты в адипоцитах и в жировой ткани обычно наблюдаются в подкожных и регионарных участках отложения жира. Например, под влиянием бета-адренергических агонистов подкожный жир имеет меньшую липолитическую скорость, чем висцеральный жир. В некоторых воплощениях воздействие антилиполитических блокирующих агентов на глазничный жир улучшает липолитическую активность.
В некоторых воплощениях композиция содержит соединения, стимулирующие сигнальный путь, ассоциированный с адренергическим рецептором, которые усиливают эффект селективного бета-2-агониста длительного действия. Например, аминофиллин 14 (1,3-диметил-7H-пурин-2,6-дион, диэтиламин CAS рег. №317-34-0) и теофиллин 15 (CAS рег. №58-55-9) представляют собой липолитические агенты, которые блокируют расщепление циклического АМФ.
Другие возможные ингредиенты усиливают вторичные сигналы, вызванные связыванием бета-адренергических агонистов. Например, в некоторых воплощениях композиция содержит форсколин 16 (CAS рег. №66575-29-9), который стимулирует аденилатциклазу, увеличивая таким образом синтез циклического АМФ, инициированный бета-адренергическим агонистом длительного действия. Повышенная концентрация циклического АМФ помогает поддерживать липолитическую активность.
В некоторых воплощениях описанные здесь композиции дополнительно содержат один или более чем один неселективный бета-адренергический агонист, например изопротеренол 4, и/или селективный бета-2-агонист кратковременного действия, например тербуталин. Некоторые композиции содержат по меньшей мере один альфа-2 антагонист или его физиологически приемлемые соли или сольваты. В некоторых воплощениях композиция содержит гормон роста в комбинации с бета-адренергическим агонистом длительного действия и глюкокортикостероидом, что, по-видимому, стимулирует липолиз.
В некоторых воплощениях, помимо лечения субъекта с помощью любой из композиций, описанных здесь, лечащий врач или другое уполномоченное лицо, осуществляющее уход за больным, прописывает субъекту процедуру липосакции или проводит у субъекта процедуру липосакции для дополнительного уменьшения регионарных жировых отложений.
В некоторых воплощениях процедуру липосакции проводят у субъекта, которому ввели фармацевтическую композицию с замедленным высвобождением, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов (например, глюкокортикостероид) или фармацевтическую композицию с замедленным высвобождением, содержащую и бета-адренергический агонист, который является селективным в отношении бета-2 рецепторов, и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов. Не желая быть связанными теорией, введение любой из описанных выше фармацевтических композиций с замедленным высвобождением субъекту перед липосакцией, вероятно, увеличит эффективность процедуры липосакции.
st
Воплощения данной композиции приготовлены в виде препаратов для введения любым подходящим способом, например, как описано в Remington: The Science And Practice Of Pharmacy (21 ed., Lippincott Williams & Wilkins). Примерные пути введения включают, но не ограничиваются этим, парентеральный, пероральный, подкожный, местный, внутримышечный, трансдермальный, через слизистую, сублингвальный, интраназальный, трансваскулярный, подкожный, введение в глазницу или в дыхательные пути. В некоторых воплощениях данную композицию готовят в виде препарата для инъекции в область, в которой лечение является желательным, например в регионарное жировое отложение.
В некоторых воплощениях бета-адренергические агонисты, соединения для предотвращения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов или и те, и другие готовят в виде суспензии кристаллических микрочастиц для увеличения продолжительности высвобождения и, посредством этого, для дополнительного пролонгирования адренергической модуляции.
Можно использовать любой подходящий фармацевтически приемлемый эксципиент, подходящий для конкретного пути введения. Примеры фармацевтически приемлемых носителей включают, но не ограничиваются этим, буферы, физиологический раствор или другие водные среды. Соединения по изобретению предпочтительно являются растворимыми в носителе, который используют для их введения (например, подкожного). В качестве альтернативы используют суспензию активного соединения или соединений (например, суспензию кристаллических микрочастиц) в подходящем носителе. В некоторых воплощениях один или более чем один агонист бета-2 рецептора или глюкокортикостероид готовят в виде препарата в жидком носителе, например в виде раствора, суспензии, геля и/или эмульсии. Некоторые воплощения включают любой подходящий липофильный носитель, например модифицированные масла (например, Cremophor BASF, Германия), соевое масло, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, производные полиэфиров, их комбинации и тому подобное. Некоторые воплощения включают носитель в виде микрочастиц и/или наночастиц по меньшей мере для одного из агонистов бета-2 рецептора и/или глюкокортикостероидов, что обсуждается более подробно ниже. Некоторые воплощения включают один или более чем один носитель или агент для замедленного или контролируемого высвобождения, например полимерные микросферы. Некоторые воплощения включают эксципиенты, подходящие для стабильных суспензий микронизированных частиц агонистов бета-2 рецептора или глюкокортикостероидов.
Инъецируемые препараты вводят с использованием любого способа, известного в данной области, например, с использованием одной иглы, множества игл и/или с использованием безыгольных инъекционных устройств. В некоторых воплощениях дозу активных ингредиентов, нагружаемую в ткань, готовят в виде препарата в подходящем носителе, доставляемом посредством инъекции. В некоторых воплощениях доставка включает инъекцию одной иглой. В некоторых воплощениях доставка включает инъекцию с использованием многоигольного набора, который в некоторых воплощениях обеспечивает широкое распределение данного препарата в ткани-мишени. В некоторых воплощениях препараты инъецируют способом, который обеспечивает распределение в подходящем слое подкожного жира в участках отложения регионарного жира.
В некоторых воплощениях бета-2-агонист и соединение, которое уменьшает десенсибилизацию, вводят, например инъецируют, в виде отдельных препаратов или, в качестве альтернативы, вводят раздельными путями, например глюкокортикостероид вводят перорально с последующей инъекцией бета-2-агониста длительного действия. В некоторых воплощениях соединение, которое уменьшает десенсибилизацию, вводят перед введением бета-2-агониста. В других воплощениях бета-2-агонист вводят перед введением соединения, которое уменьшает десенсибилизацию.
Интервал между введением соединения, которое уменьшает десенсибилизацию, и введением бета-2-агониста может представлять собой интервал от примерно 5 минут до примерно 1 месяца, например 30 минут, 1 час, 6 часов, 12 часов, одни сутки, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 7 суток, 10 суток, 2 недели, 3 недели, или любой другой интервал времени от примерно 5 минут до примерно 1 месяца. В предпочтительном воплощении соединение, которое уменьшает десенсибилизацию (например, кортикостероид), вводят перорально за время вплоть до 7 суток, например 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 7 суток, 8 суток, 9 суток или 10 суток до введения бета-2-агониста (например, путем местной инъекции препарата в виде суспензии кристаллических микрочастиц в жировое отложение).
В других воплощениях бета-2-агонист совместно вводят (например, в виде части того же самого препарата) с соединением, которое уменьшает десенсибилизацию бета-адренергического рецептора (например, с глюкокортикостероидом).
В некоторых воплощениях препарат (для) субъекта, подлежащего лечению, дают в виде депо-препарата, который содержит один или более чем один агент для замедленного или контролируемого высвобождения для обеспечения замедленного или контролируемого высвобождения бета-2-агониста или соединения (например, глюкокортикостероида) для ингибирования десенсибилизации бета-адренергических рецепторов. В таких препаратах бета-2-агонист, соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов или они оба инкапсулированы в агент или носитель для замедленного или контролируемого высвобождения, связаны и/или конъюгированы с агентом или носителем для замедленного или контролируемого высвобождения. В некоторых воплощениях биосовместимые, биодеградируемые препараты с замедленным или контролируемым высвобождением обеспечивают местную активность в ткани. Замедленное высвобождение может осуществляться в течение периода от примерно 12 часов до примерно 12 месяцев, например в течение одних суток, 3 суток, 7 суток, 10 суток, 1 месяца, 45 суток, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 6 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев или в течение любого другого периода времени от примерно 12 часов до примерно 12 месяцев. Подходящие агенты или носители для замедленного или контролируемого высвобождения включают полимеры, макромолекулы, конъюгаты активного ингредиента, гидрогели, их комбинации и тому подобное. Некоторые воплощения носителя для замедленного высвобождения имеют в качестве мишени жир, например липосомы. Предпочтительно, вещества для замедленного высвобождения выбирают для облегчения доставки по существу равного количества активного вещества в единицу времени. Для обработки одной области с течением времени можно осуществлять несколько циклов инъекций препарата с замедленным высвобождением. В некоторых воплощениях замедленное высвобождение происходит в результате приготовления бета-2-агониста, соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов или их обоих в виде суспензии кристаллических микрочастиц лекарственного средства.
В некоторых воплощениях агент для замедленного высвобождения содержит полимер, например полилактиды, полигликолиды, поли(лактидгликолиды), полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полиангидриды, полиортоэфиры, полимеры на основе простых и сложных эфиров, поликапролактоны, полиэфирамиды, поликарбонаты, полицианоакрилаты, полиуретаны, полиакрилаты и комбинации, их смеси или сополимеры, которые используют для инкапсуляции, связывания или конъюгации с активным ингредиентом(ами) (например, бета-адренергическими агонистами и/или глюкокортикостероидами). Некоторые предпочтительные воплощения полимеров для замедленного высвобождения содержат полиэтиленгликолевые группы, с которыми конъюгирован один или более чем один активный ингредиент. В некоторых предпочтительных воплощениях агент для замедленного высвобождения содержит сополимер поли(лактидгликолида) (PLGA, сополимер молочной и гликолевой кислоты) 17.
Некоторые воплощения агента для замедленного высвобождения содержат один или более чем один гидрогель, включающий модифицированные альгинаты. Примеры подходящих модифицированных альгинатов включают альгинаты, раскрытые в WO 98/12228. Некоторые воплощения агента для замедленного высвобождения содержат носитель или эксципиент в виде наночастиц на основе альбумина.
В некоторых воплощениях препарат, содержащий раствор преполимера, инъецируют в участок ткани-мишени, где он затем полимеризуется (например, путем фотополимеризации) или отверждается (например, при использовании температурочувствительных гелеобразующих веществ) in vivo.
В некоторых воплощениях вещества для контролируемого высвобождения имеют характеристики высвобождения, разработанные для конкретного применения по редукции ткани. В некоторых воплощениях агент для замедленного высвобождения или контролируемого высвобождения имеют форму микрочастиц, таких как микросферы, которые готовят в виде инъецируемого раствора и/или геля. В некоторых воплощениях размер микрочастиц варьирует от примерно 10 мкм до примерно 100 мкм в диаметре (например, примерно 15 мкм, 20 мкм, 25 мкм, 30 мкм, 40 мкм, 50 мкм, 60 мкм, 70 мкм, 80 мкм, 90 мкм или любой другой диаметр от примерно 10 мкм до примерно 100 мкм). В некоторых воплощениях микрочастицы являются однородными по размеру. В других воплощениях микрочастицы варьируют по размеру примерно на 10-300%, например, на 30%, 40%, 50%, 70%, 80%, 90% 120%, 150%, 170%, 190%, 200%, 225%, 250%, 275%, или на любое другое относительное изменение в процентах от примерно 10% до примерно 300%. В некоторых воплощениях предложены препараты, содержащие альгинаты и/или поли(лактид-со-гликолид)ы 17, в виде инъецируемого геля или переработанные в микросферы. В других воплощениях бета-2-агонист или кортикостероид (или другое соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов) имеют форму кристаллических микрочастиц. Другие примеры подходящих инъецируемых биодеградируемых биосовместимых веществ, подходящих для образования микрочастиц, включают хитозан, декстран, гидроксиапатит и кремний.
Микросферы и/или микрочастицы образуют с использованием любого способа, включая упаривание растворителя и/или полимеризацию эмульсии. В некоторых воплощениях микросферы имеют средний диаметр от примерно 5 мкм до примерно 60 мкм, предпочтительно примерно 20 мкм. В некоторых воплощениях изготавливают PLGA с варьирующими соотношениями лактида к гликолиду, в зависимости от желаемой скорости высвобождения активного(ых) ингредиента(ов). Поскольку скорость деградации этого сополимера пропорциональна его кристалличности и доле гликолида в данном препарате, нерацемические смеси лактида и/или гликолида увеличивают кристалличность и снижают скорость деградации. Более высокие соотношения гликолида увеличивают скорость деградации. В некоторых воплощениях соотношение примерно 65%-75% лактида к примерно 25%-35% гликолида обеспечивает высвобождение активных ингредиентов в течение периода времени от примерно 2 недель до примерно 45 суток. В других воплощениях соотношение лактида к гликолиду составляет от примерно 0:100 до примерно 100:0, обеспечивая тем самым другие скорости высвобождения.
Некоторые воплощения микросфер или микрочастиц имеют полое и/или пористое внутреннее строение. В некоторых воплощениях микросферы содержат твердую или пористую наружную оболочку.
В некоторых воплощениях препараты, содержащие пористую наружную оболочку и/или микросферы, демонстрируют двухфазный профиль высвобождения активного(ых) ингредиента(ов) с первоначальным взрывным высвобождением активного(ых) ингредиента(ов) и последующим замедленным высвобождением, связанным с деградацией полимерных микросфер. Не желая быть связанными теорией, считают, что первоначальный взрыв высвобождения нагружает ткань эффективной липолитической/ингибирующей липогенез концентрацией активного(ых) ингредиента(ов), причем последующее, более медленное высвобождение поддерживает желаемую концентрацию. В некоторых воплощениях разные структуры микросфер и профили высвобождения активного ингредиента оптимизируют эффект лечения ткани с жировыми отложениями и адипоцитов через модуляцию адренергических рецепторов. Например, в препаратах, содержащих как бета-адренергический агонист, так и соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов, данный бета-адренергический агонист можно приготовить в виде препарата так, чтобы отсрочить начало его высвобождения, т.е. замедлить относительно высвобождения соединения для уменьшения десенсибилизации, например, примерно на одни сутки - две недели, например на 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 7 суток, 10 суток, 12 суток или на любой другой период задержки от примерно одних суток до примерно двух недель. В некоторых предпочтительных воплощениях долговременные локальные концентрации селективных бета-2-адренергических агентов длительного действия в ткани, таких как сальметерол 1 и/или формотерол 2, составляют от примерно 1,0 пМ до примерно 10 мкМ, например от примерно 0,01 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 0,1 мкМ до примерно 5 мкМ, от 0,5 мкМ до примерно 4 мкМ, или любую другую концентрацию от примерно 0,001 мкМ до примерно 10 мкМ. В разных воплощениях подходящие долговременные локальные концентрации глюкокортикостероидов в ткани могут варьировать от примерно 0,01 мкМ до примерно 10 мМ.
В некоторых воплощениях один или более чем один активный ингредиент является инкапсулированным, связанным и/или конъюгированным с полимером в соотношении примерно 10-12% по массе к полимерным микросферам. Количество активного ингредиента в виде массовой процентной доли относительно носителя (например, микрочастиц или микросфер) обозначают здесь как "нагрузку активного ингредиента". Термины "нагруженный" и "нагрузка" в том виде, как они здесь используются, относятся к активным ингредиентам, по существу инкапсулированным, связанным и/или конъюгированным с носителем. В некоторых воплощениях нагрузка активного ингредиента составляет вплоть до примерно 75%. Таким образом, некоторые предпочтительные препараты содержат один или более чем один бета-2-адренергически активный ингредиент, такой как сальметерол 1, формотерол 2 и/или их физиологически приемлемые соли и сольваты, нагруженные на полимерные микросферы в концентрации от примерно 1 мг до примерно 20 мг активного ингредиента (например, примерно 2 мг, 5 мг, 7 мг, 10 мг, 12 мг, 14 мг, 15 мг, 17 мг, 18 мг или любое другое количество активного ингредиента от примерно 1 мг до примерно 20 мг) на от примерно 10 мг до примерно 200 миллиграммов полимера. В некоторых воплощениях препарата с этой нагрузкой активного ингредиента достаточно для обеспечения от примерно 12 часов до примерно 45 суток (например, примерно 3 суток, 7 суток, 16 суток, 20 суток, 25 суток, 30 суток, 35 суток, 40 суток, 42 суток или любого другого периода от примерно 12 часов до примерно 45 суток) высвобождения активного ингредиента в концентрации, подходящей для осуществления липолиза и/или ингибирования липогенеза, как здесь описано. Аналогично, в некоторых воплощениях глюкокортикостероиды будесонид и флутиказон в фармацевтически приемлемых формах нагружают в концентрации от примерно 1 мг до примерно 20 мг активного ингредиента на от примерно 10 до примерно 200 мг полимера.
В некоторых воплощениях два или более активных ингредиента нагружают в одну и ту же микрочастицу, например в липосому или PLGA. Таким образом, в некоторых воплощениях полимер, инкапсулирующий глюкокортикостероид в адренергическом соединении, доставляют в жировую ткань одновременно. В качестве альтернативы, два активных ингредиента нагружают в отдельные микрочастицы. Два типа микросфер затем смешивают с получением препарата с желаемым соотношением агониста бета-рецептора и глюкокортикостероида, затем их вводят одновременно. В качестве альтернативы, два типа микрочастиц вводят последовательно.
2
2
2
Микросферы, содержащие активный(е) ингредиент(ы), суспендируют в примерно от 10 мл до примерно 20 мл подходящего физиологически приемлемого жидкого носителя. В некоторых воплощениях, где используются отдельные микросферы с активными ингредиентами, указанные микросферы смешивают друг с другом в жидком носителе. В других воплощениях каждый тип микросфер смешивают с жидким носителем по отдельности. В некоторых воплощениях суспензию микросфер затем подкожно инъецируют непосредственно ниже дермы в 1,0 мл аликвотах для охвата примерно 2,0 см участка на мл суспензии микросфер, например, для лечения целлюлита. В некоторых воплощениях от примерно 10 до примерно 20 инъекций вводят для охвата участка от примерно 20 см до примерно 40 см. В разных воплощениях обрабатывают большие и/или меньшие участки. В качестве альтернативы, в некоторых воплощениях болюсные инъекции 1,0-10,0 мл вводят в отложения жира, такие как подбородочные участки, боковые поверхности бедра и ягодицы. В качестве альтернативы, описанные выше инъекции осуществляют раздельно и последовательно в одни и те же участки с использованием двух препаратов микросфер, инкапсулирующих каждый активный ингредиент.
В некоторых воплощениях используют безыгольную инъекцию для введения препаратов микрочастиц в виде суспензий или микрочастиц, нагруженных порошком, т.е. без жидкого носителя.
Микросферы из PLGA 15 инкапсулируют гидрофобные соединения гораздо легче, чем гидрофильные соединения. Для увеличения нагрузки гидрофильных активных ингредиентов, в некоторых воплощениях микросферы модифицируют звеньями полиэтиленгликоля, как обсуждалось выше. Микросферы определенных размеров по существу не поглощаются в кровь или не удаляются лимфой, обеспечивая таким образом локализованное высвобождение активного(ых) ингредиента(ов) в целевом участке. Например, в некоторых воплощениях микросферы имеют диаметр от примерно 20 мкм до примерно 200 мкм, например от примерно 30 мкм до примерно 175 мкм, от примерно 50 мкм до примерно 150 мкм, от примерно 75 мкм до примерно 125 мкм или любой другой диаметр от примерно 20 мкм до примерно 200 мкм. Размер микросфер также влияет на профиль высвобождения активного(ых) ингредиента(ов) в ткань. В общем, большие микросферы обеспечивают более длительный и более однородный профиль высвобождения. Соответственно, в некоторых воплощениях средний размер частиц в препарате будет выбран на основе желаемой продолжительности высвобождения.
В примерном воплощении препарат с замедленным высвобождением содержит от примерно 0,5 мг до примерно 7,5 мг (например, примерно 0,7 мг; 1 мг; 1,5 мг; 2,0 мг; 2,5 мг; 3 мг; 3,5 мг; 4 мг; 4,5 мг; 5 мг; 5,5 мг; 6 мг; 6,5 мг, 7 мг или любое другое количество от примерно 0,5 мг до примерно 7,5 мг) сальметерола 1 и/или формотерола 2, и от примерно 1,5 мг до примерно 7,5 мг (например, примерно 2 мг; 2,5 мг; 3 мг; 3,5 мг; 4 мг; 4,5 мг; 5 мг; 5,5 мг; 6 мг; 6,5 мг; 7 мг или любое другое количество от примерно 1,5 мг до примерно 7,5 мг) дексаметазона 6, флутиказона пропионата 7 и/или будесонида 8, инкапсулированного в примерно 100 миллиграммов микросфер из полилактидгликолидного (PLGA) 15 сополимера в соотношении примерно 70% лактида: 30% гликолида. Количество каждого активного ингредиента в препарате с замедленным высвобождением зависит от необходимого периода контролируемого/замедленного высвобождения (от примерно 3 суток до примерно 12 месяцев, например 4 суток, 5 суток, 7 суток, 10 суток, 1 месяц, 45 суток, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев или любой другой период высвобождения от примерно 3 суток до примерно 12 месяцев). В некоторых воплощениях сополимерное соотношение и инкапсуляция активного ингредиента доставляют вплоть до примерно 1,0 мкг/сутки (например, примерно 0,02 мкг/сутки; 0,04 мкг/сутки; 0,06 мкг/сутки; 0,07 мкг/сутки; 0,1 мкг/сутки; 0,2 мкг/сутки; 0,4 мкг/сутки; 0,5 мкг/сутки; 0,6 мкг/сутки; 0,8 мкг/сутки или любое другое количество от примерно 0,02 мкг/сутки до примерно 1,0 мкг/сутки) сальметерола 1 и/или вплоть до примерно 0,5 мкг/сутки (например, примерно 0,02 мкг/сутки; 0,04 мкг/сутки; 0,06 мкг/сутки; 0,07 мкг/сутки; 0,08 мкг/сутки; 0,09 мкг/сутки; 0,1 мкг/сутки; 0,2 мкг/сутки; 0,3 мкг/сутки; 0,4 мкг/сутки или любое другое количество от примерно 0,02 мкг/сутки до примерно 0,5 мкг/сутки) формотерола и вплоть до 5 мкг/сутки (например, примерно 0,2 мкг/сутки; 0,4 мкг/сутки; 0,5 мкг/сутки; 0,7 мкг/сутки; 0,9 мкг/сутки; 1,0 мкг/сутки; 1,5 мкг/сутки; 2 мкг/сутки, 2,5 мкг/сутки; 3 мкг/сутки; 3,5 мкг/сутки; 4 мкг/сутки; 4,5 мкг/сутки или любое другое количество от примерно 0,2 мкг/сутки до примерно 5 мкг/сутки) флутиказона и/или будесонида 6 на примерно 1 мг сополимера в течение вплоть до примерно 30 суток (например, в течение примерно 1 суток, 2 суток, 3 суток, 5 суток, 7 суток, 10 суток, 14 суток, 18 суток, 21 суток, 24 суток, 27 суток или в течение любого другого периода вплоть до примерно 30 суток). В другом примерном воплощении препарат с замедленным высвобождением, подлежащий введению, содержит метилпреднизолона ацетат в виде суспензии кристаллических микрочастиц с бета-2-адренергическим агонистом. В разных воплощениях бета-2-адренергический агонист приготавливают в солюбилизированной форме, в форме суспензии кристаллических микрочастиц или в обеих формах. В некоторых воплощениях препарат с замедленным высвобождением также содержит солюбилизированный метилпреднизолона сукцинат для обеспечения немедленных эффектов (благодаря быстрому высвобождению), в дополнение к пролонгированному эффекту от кристаллической формы метилпреднизолона ацетата.
В некоторых воплощениях предложены один или более чем один бета-2-агонист и метилпреднизолон, смешанные друг с другом перед введением (например, инъекцией). В других воплощениях один или более чем один бета-2-агонист и метилпреднизолон смешивают во время введения (например, инъекции).
В некоторых воплощениях выбранный препарат кортикостероида с замедленным высвобождением (например, суспензию кристаллов метилпреднизолона, раствор метилпреднизолона или комбинацию суспензии кристаллов и раствора) доставляют один за примерно 7 суток до бета-2-агониста (например по меньшей мере 12 часов, одни сутки, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток или любой другой период времени от примерно 12 часов до примерно 7 суток) для обеспечения повышающей регуляции бета-адренергического рецептора.
В некоторых воплощениях субъекту, подлежащему лечению, дают препарат с незамедленным высвобождением. В некоторых воплощениях препарат с незамедленным высвобождением после одной дозы обеспечивает активность одного или более чем одного селективного бета-2-агониста длительного действия в течение периода времени от примерно 4 часов до примерно 24 часов, например в течение примерно 6 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 16 часов, 18 часов, 21 часа или в течение любого другого периода активности бета-2-агониста от примерно четырех часов до примерно 24 часов.
В других воплощениях субъекту, подлежащему лечению, дают препарат с незамедленным высвобождением, содержащий селективные бета-2-агонисты кратковременного действия, которые имеют активности, продолжительность которых составляет меньше чем примерно четыре часа (например, примерно 3,5 часа, 3 часа, 2,5 часа, 2 часа, 1,5 часа, 1,3 часа, примерно 1 час, 0,5 часа или любой другой промежуток времени от менее примерно четырех часов до примерно 0,5 часа).
В примерном воплощении инъецируемый препарат с незамедленным высвобождением содержит от примерно 100 мкг до примерно 250 мкг сальметерола ксинафоата (например, примерно 105 мкг, 110 мкг, 125 мкг, 150 мкг, 175 мкг, 190 мкг, 200 мкг, 210 мкг, 225 мкг или любое другое количество сальметерола ксинафоата от примерно 100 мкг до примерно 250 мкг) и от примерно 500 мкг до примерно 1000 мкг флутиказона пропионата (например, примерно 600 мкг, 650 мкг, 700 мкг, 730 мкг, 740 мкг, 800 мкг, 825 мкг, 875 мкг, 900 мкг, 930 мкг, 950 мкг или любое другое количество флутиказона пропионата от примерно 500 мкг до примерно 1000 мкг), приготовленных в виде препарата в объеме вплоть до примерно 10 мл (например, примерно 0,1 мл; 0,3 мл; 0,5 мл; 0,7 мл; 1,1 мл; 1,5 мл; 2 мл; 2,5 мл; 3 мл; 3,5 мл; 4 мл; 5 мл; 6 мл; 7 мл; 8 мл; 9 мл или в любом другом объеме от примерно 0,1 мл до примерно 10 мл) эксципиента, совместимого с введением в глазницу. В некоторых воплощениях концентрацию эксципиента поддерживают на уровне менее 1% (например, примерно 0,05%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,8% или любая другая концентрация от примерно 0,05% до менее чем примерно 1%).
В некоторых воплощениях препараты доставляют трансдермально с использованием любого подходящего способа, известного в данной области, например, в виде крема для местного нанесения или посредством пластыря. В качестве альтернативы, полезными являются также другие способы трансдермальной доставки, известные в данной области, например электрический. В частности, бета-2-агонисты длительного действия, такие как формотерол 2, сальметерол 1 или бамбутерол 3, и глюкокортикостероиды подходят для местного нанесения на кожу благодаря их гидрофобности. Предложены воплощения трансдермально доставляемых препаратов с замедленным высвобождением, например, с использованием биодеградируемого биосовместимого препарата, включающего активный ингредиент и полимер, или липосомного препарата, как здесь описано.
В некоторых воплощениях в один из вышеупомянутых препаратов включают тиреоидный гормон для повышающей регуляции бета-адренергических рецепторов или для увеличения числа бета-адренергических рецепторов на поверхности клеток, или для понижающей регуляции альфа-рецепторов, или для уменьшения числа альфа-рецепторов на поверхности клеток. Для этой цели в разных воплощениях используют тироксин (Т4) 18, трийодтиронин (Т3) 19, стереоизомеры этих гормонов или любую их комбинацию. Левотироксин представляет собой стереоизомер тироксина, который имеет более продолжительное время полувыведения. В некоторых воплощениях любой из этих тиреоидных гормонов объединяют с одним или более чем одним бета-адренергическим агонистом и вводят в регионарное отложение жира.
В некоторых воплощениях препарат для применения в описанных здесь способах содержит комбинацию селективных бета-2-агонистов длительного действия сальметерола или формотерола и их физиологических солей или сольватов. Не желая быть связанными теорией, считают, что комбинация этих соединений имеет усиленный эффект в улучшении внешнего вида регионарных отложений жира и целлюлита. Данные гормоны можно объединять также с бета-адренергическими агонистами в препарате с замедленным высвобождением, таком как суспензия кристаллических микрочастиц, как здесь описано, для уменьшения частоты введения. Т3 и Т4 можно объединять с селективными бета-2-агонистами длительного действия в препаратах в форме суспензии кристаллических микрочастиц для инъекции и замедленного высвобождения в регионарных отложениях жира.
Предсердный натрийуретический пептид (ANP) является членом семейства натрийуретических пептидов, которые, как было продемонстрировано, индуцируют липолиз в человеческих жировых клетках. Мозговой натрийуретический пептид (BNP), натрийуретический пептид С-типа и натрийуретический пептид dendroaspis также являются членами этого семейства, причем ANP имеет наибольшую липолитическую активность. Натрийуретические пептиды опосредуют свои биологические активности через специфические рецепторы. Рецептор натрийуретического пептида A (NPrA) и NPrB обладают собственной гуанилциклазной активностью и вызывают увеличение концентрации цГМФ при стимуляции. NPrC служит в качестве рецептора-"мусорщика" для натрийуретических пептидов. В жировой ткани экспрессируются мРНК NprA, а также NPrC, что свидетельствует о том, что натрийуретические пептиды играют в данной ткани функциональную роль. В человеческих жировых клетках ANP может активировать гормончувствительную липазу (HSL) через увеличение продукции цГМФ и фосфорилирование HSL. HSL затем расщепляет триглицериды до неэтерифицированных жирных кислот (НЭЖК) и глицерина. В некоторых воплощениях натрийуретические пептиды, в частности ANP и BNP, используют для обработки регионарных отложений жира и для улучшения внешнего вида этих отложений жира и целлюлита. В некоторых воплощениях натрийуретические пептиды используют в препарате с замедленным высвобождением, как здесь описано, для уменьшения частоты введения и улучшения эффекта.
Бета-адренергические рецепторы (B-AR) присутствуют в тканях кожи. Адренергический рецептор подтипа бета-2 (B2-AR) представляет собой единственный рецептор, экспрессирующийся на мембранах основных типов клеток кожи, включая кератиноциты, фибробласты и меланоциты. B2-AR также находятся в антигенпрезентирующих клетках Лангерганса кожи. Нарушения в B2-AR рецепторах кожи и функции ассоциированы с кожными заболеваниями. Например, пациенты с диффузным нейродермитом имеют низкую плотность B2-AR на кератиноцитах. Кроме того, псориатические поражения ассоциированы с пониженным числом B2-AR и с низкими уровнями цАМФ (главный вторичный мессенджер при активации B2-AR рецептора) даже после воздействия селективных бета-адренергических агонистов. B2-AR также обнаружены на лейкоцитах, лимфоцитах и макрофагах. Эти клетки также присутствуют в коже при различных воспалительных состояниях, таких как диффузный нейродермит и псориаз.
Стимуляция или ингибирование B2-AR может вызывать различные ответы в этих клетках кожи. Например, стимуляция B2-AR лекарственными средствами может вызывать пролиферацию фибробластов и продукцию коллагена. В кератиноцитах стимуляция B2-AR может ингибировать пролиферацию, миграцию и дифференцировку. Меланоциты будут отвечать на стимуляцию B2-AR увеличением продукции меланина. Миграция и презентация антигена клетками Лангерганса уменьшаются при воздействии агонистов B2-AR рецептора. Миграция и пролиферация лимфоцитов ингибируются агонистами B2-AR. Активация B2-AR рецепторов в фибробластах кожи вызывает пролиферацию и увеличение миграции фибробластов, увеличивает продукцию коллагена. В некоторых воплощениях для лечения состояний кожи используют форсколин для получения вышеупомянутых эффектов, где дефекты B2-AR ограничивают активность бета-адренергического агониста длительного действия.
В некоторых воплощениях вышеупомянутые лекарственные средства и комбинации используют для лечения иммунных и связанных с воспалением состояний кожи, включая псориаз, диффузный нейродермит, витилиго, гипопигментацию, атрофические полосы кожи, морщины и глубокие морщины. В одном из воплощений вводят комбинацию селективного бета-2-агониста длительного действия и кетотифена. Принцип повышающей регуляции числа бета-адренергических рецепторов и уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов посредством применения кетотифена (или глюкокортикостероида) в комбинации с селективным бета-2-агонистом, таким как сальметерол или формотерол, является полезным в лечении состояний кожи, таких как нейродермит (например, диффузный) и псориаз. Другие лекарственные средства для лечения состояний кожи, которые стабилизируют B2-AR и/или осуществляют повышающую регуляцию рецептора, включают, но не ограничиваются этим, тиреоидный гормон, 1,25-дигидрокси-витамин D3 или его аналог и биофлаваноиды, такие как кверцетин или физетин. В некоторых воплощениях потемнение кожи или гипопигментированные участки, которые появляются, например, при витилиго, атрофических полосах кожи или при недостатке солнечного света, лечат предложенными комбинациями и с использованием принципов повышающей регуляции и/или стабилизации бета-адренергических рецепторов, как здесь описано. В одном из воплощений для лечения только вышеупомянутых состояний используют комбинацию бета-адренергических агонистов длительного действия с другими лекарственными средствами, которые стабилизируют и/или увеличивают B2-AR. В некоторых воплощениях используют комбинацию бета-адренергических агонистов длительного действия с другими лекарственными средствами, которые усиливают ответ цАМФ на стимуляцию B2-AR рецептора. В одном из воплощений для лечения псориаза используют комбинацию формотерола с кетотифеном. В некоторых воплощениях, когда B2-AR имеет нарушенную активность, в комбинации используют форсколин. В некоторых воплощениях для лечения псориаза используют формотерола фумарат и кетотифена фумарат и/или другие физиологические соли или сольваты этих лекарственных средств, или стереоизомеры кетотифена фумарата и формотерола фумарата, или другие физиологические соли или сольваты этих лекарственных средств. Презентация антигена клетками Лангерганса может стимулировать иммунный компонент данного заболевания. Патогенез псориаза включает гиперпролиферацию кератиноцитов и иммунные воспалительные реакции, включающие миграцию лимфоцитов (таких как Т-клетки) и активацию псориатического поражения. Псориаз может характеризоваться ответами Т-хелперов 1 типа (Th1). В некоторых воплощениях бета-адренергические агонисты длительного действия используют для контроля пролиферации кератиноцитов и лимфоцитов, включая Т-клетки. В некоторых воплощениях бета-адренергические агонисты длительного действия также используют для ингибирования Th1-ответов. В некоторых воплощениях обработку бета-адренергическими агонистами длительного действия используют для уменьшения миграции клеток Лангерганса и презентации антигена. В некоторых воплощениях можно использовать кетотифен для стабилизации и повышающей регуляции B2-AR на лимфоцитах, кератиноцитах или фибробластах кожи. Кроме того, кетотифен ингибирует высвобождение цитокинов, таких как фактор некроза опухолей альфа (TNF-альфа). TNF-альфа играет роль в патогенезе псориаза. Таким образом, блокирование действия этого цитокина (например, антителами) или уменьшение высвобождения данного цитокина уменьшает тяжесть поражений кожи. В некоторых воплощениях кетотифен вводят для ингибирования активности Т-клеток и посредством этого для уменьшения воспалительных иммунных ответов.
В другом воплощении бета-адренергические агонисты длительного действия, такие как формотерола фумарат, его стереоизомеры в виде их физиологических солей или сольватов объединяют с 1,25-дигидрокси-витамином D3 или его аналогами. 1,25-дигидрокси-витамин D3 может усиливать бета-адренергические аденилатциклазные ответы в кератиноцитах. При состояниях, таких как псориаз, уровни цАМФ являются низкими или образование цАМФ снижено. Соответственно, в некоторых воплощениях, когда субъект страдает от псориаза, витамин D3 вводят в комбинации с одним или более чем одним бета-адренергическим агонистом длительного действия.
В некоторых воплощениях агонисты B2-AR вводят для лечения морщин кожи и атрофических полос кожи или растяжек. Атрофические полосы кожи характеризуются истончением дермы с потерей коллагена и гипопигментацией. Бета-адренергические агонисты длительного действия стимулируют рекрутинг, пролиферацию и продукцию коллагена фибробластами дермы в атрофических полосах кожи. Кроме того, они стимулируют меланоциты к репигментации атрофических полос кожи. Таким образом, в некоторых воплощениях один или более чем один бета-адренергический агонист длительного действия используют в комбинации с другими лекарственными средствами для стабилизации и повышающей регуляции B2-AR, с такими как лекарственные средства, раскрытые выше, включая кетотифен, глюкокортикостероиды, тиреоидный гормон и биофлаваноиды кверцетин и физетин. В некоторых воплощениях для лечения атрофических полос кожи и морщин используют форсколин с бета-адренергическим агонистом длительного действия или без него и в комбинации с соединениями, раскрытыми ранее (например, с кверцетином, физетином, глюкокортикостероидом или кетотифеном).
В некоторых воплощениях используют местное нанесение лекарственных средств или комбинаций лекарственных средств. В одном из воплощений выбранным бета-адренергическим агонистом длительного действия является формотерол. Для отдельного вещества коэффициент распределения обычно измеряют как отношение октанол:вода или "Log P", и оно представляет собой меру относительной аффинности данного вещества к октанолу по сравнению с водой. Чем выше Log P, тем больше тенденция вещества притягиваться к октанолу и наоборот. Другими словами, он дает относительную меру липофильности по сравнению с гидрофильностью для данного вещества. Для доставки агентов в кожу оптимальный Log P варьирует от 1,0 до 5,0. Формотерол имеет Log P в интервале 2-4. Кетотифен имеет аналогичные физические свойства, которые обеспечивают его доставку в кожу и через кожу.
Для доставки лекарственных средств или комбинаций лекарственных средств в кератиноциты и фибробласты кожи подходит целый ряд местных препаратов, включая мази и кремы. Типичные местные носители для предложенных комбинаций включают, но не ограничиваются этим, терпены (например, цинеол, линалилацетат, ментанон, d/I-ментол), сложные эфиры жирных кислот (например, изопропилмиристат, этилолеат, изопропилпальмитат, бутилмиристат) и длинноцепочечные спирты (I-октанол, I-деканол, I-додеканол). N-метилпирролидон объединяют с терпенами, сложными эфирами жирных кислот и длинноцепочечными спиртами. Отношения терпенов, сложных эфиров жирных кислот и длинноцепочечных спиртов к N-метилпирролидону могут составлять от 100:0 вплоть до максимум 60:40 по массе. В некоторых воплощениях для лечения морщин и других состояний кожи используют безыгольную внутрикожную инъекцию лекарственных средств или комбинаций лекарственных средств.
Комбинация селективного бета-адренергического агониста длительного действия и кетотифена также подходит для лечения кахексии. Формотерол и кленбутерол представляют собой бета-адренергические агонисты с анаболическими эффектами, которые увеличивают мышечную массу. Кетотифен может вызывать увеличение массы, которое может быть обусловлено усиленным потреблением пищи, вторичным относительно влияния на аппетит и насыщение. Следовательно, данная комбинация может оказывать выраженные эффекты на кахексию или синдром атрофии, вторичные относительно других медицинских состояний, таких как ВИЧ-инфекция, рак или сердечная недостаточность. Кроме того, как было раскрыто ранее, данная комбинация формотерола или кленбутерола и кетотифена может оказывать усиленные эффекты посредством увеличения числа бета-адренергических рецепторов и уменьшения дезактивации рецепторов.
В некоторых воплощениях B2-AR агонисты вводят для увеличения массы скелетных мышц и для того, чтобы вызвать гипертрофию и усиленный синтез белка, эффекты, которые опосредованы увеличениями внутриклеточных уровней цАМФ. Подобно адипоцитам, воздействие агонистов B2-AR приводит к понижающей регуляции рецептора. Таким образом, раскрытые композиции, препараты и комбинации также можно использовать для лечения повреждения скелетных мышц или состояний, когда увеличение массы скелетных мышц является важным. В некоторых воплощениях описанные здесь способы используют для увеличения тонуса мышц лица и достижения более молодого внешнего вида. В некоторых воплощениях описанные здесь способы используют для лечения косоглазия и амблиопии путем укрепления мышц глаза. В некоторых воплощениях описанные здесь лекарственные средства и комбинации лекарственных средств предложены в препарате на основе носителя с замедленным высвобождением. Конкретные комбинации включают бета-адренергические агонисты длительного действия, такие как формотерола фумарат или сальметерола ксинафоат, и соединения, которые уменьшают десенсибилизацию B2-AR, например глюкокортикостероиды или кетотифен, осуществляющие стабилизацию/повышающую регуляцию B2-AR. В некоторых воплощениях данные комбинации готовят в виде препарата с носителем для замедленного высвобождения, таким как микрочастицы PLGA. В некоторых воплощениях для уменьшения десенсибилизации B2-AR также используют биофлаваноиды, такие как кверцетин или физетин. В некоторых воплощениях глюкокортикостероиды и бета-адренергические агонисты длительного действия совместно вводят субъекту для восстановления повреждения мышц. В некоторых воплощениях для лечения повреждения скелетных мышц или улучшения тонуса мышц лица используют агенты, которые увеличивают уровень цАМФ, такие как форсколин.
В некоторых воплощениях раскрытые композиции, препараты (например, препараты с замедленным высвобождением) и комбинации, описанные здесь, используют для обработки висцерального отложения жира, обычно ассоциированного с сопутствующими заболеваниями, связанными с ожирением, такими как диабет и гипертензия. В некоторых воплощениях препараты лекарственного средства или комбинации лекарственных средств доставляют в висцеральное отложение жира с использованием эндоваскулярного катетера для введения канюли в питающую(ие) артерию или артерии висцерального жирового тела. В некоторых воплощениях канюлирование проводят, получая сосудистый доступ в бедренную артерию, передвигая проволочный направитель в артерию чревного ствола и затем дистально в желудочную артерию большой кривизны желудка. Эта артерия имеет множество артерий, питающих регионарные сальниковые отложения жира. Затем полый катетер для доставки помещают в артерию над проволочным направителем, обеспечивая введение лекарственного средства или комбинации лекарственных средств, или препаратов лекарственных средств или комбинации лекарственных средств с замедленным высвобождением, как раскрыто ранее. В некоторых воплощениях для проникновения через мембрану капилляров отложения в ткани изготавливают микрочастицы для доставки. В некоторых воплощениях катетер передвигают в верхнюю и нижнюю брыжеечную артерии для доставки лекарственного средства, комбинаций лекарственных средств, или препаратов лекарственных средств или комбинации лекарственных средств с замедленным высвобождением в брыжеечные регионарные отложения жира.
В некоторых воплощениях индукция липолиза и ингибирование роста жировых клеток в регионарных отложениях жира как висцеральных, так и подкожных, имеют дополнительную пользу для здоровья через уменьшение среднего диаметра или объема жировых клеток. Жировые клетки большого объема активно секретируют провоспалительные и вредные гормоны, такие как TNF-альфа и интерлейкины ("адипокины"), которые способствуют сопутствующим заболеваниям, связанным с (отложением) жира, таким как диабет. Ослабление опосредованных жиром заболеваний осуществляется путем уменьшения размера этих жировых клеток и, следовательно, секреции вредных адипокинов.
В некоторых воплощениях раскрытые композиции, препараты (например, препараты с замедленным высвобождением) и комбинации, описанные здесь, используют для лечения обструктивного апное во сне. Обструктивное апное во сне происходит, когда дыхательные пути временно блокируются во время сна, приводя к гипоксии, повышенному кровяному давлению, сердечной аритмии и повышенному риску смерти. Считают, что избыточный жир в глотке и мягком небе способствует этому блокированию. Тучные люди имеют более высокую заболеваемость расстройствами сна, а люди, страдающие апное во сне, имеют избыточный жир в небе и глотке согласно МРТ (магнитно-резонансная томография). Таким образом, в некоторых воплощениях описанные препараты вводят субъекту для уменьшения симптомов апное во сне. В некоторых воплощениях данные препараты вводят местно (например, путем инъекции) в небо или глотку через рот. В некоторых воплощениях данные препараты вводят подкожно в участок шеи для уменьшения обструктивных симптомов.
Несмотря на то, что были описаны конкретные воплощения, эти воплощения были представлены только в качестве примера, и подразумевается, что они не ограничивают объем описания изобретения. Описанные здесь препараты, способы и системы могут быть реализованы в целом ряде других форм. Кроме того, можно делать разные исключения, замены и изменения в форме описанных здесь препаратов, способов и систем без отклонения от сущности данного описания изобретения. Прилагаемая формула изобретения и ее эквиваленты предназначены для охвата таких форм или модификаций.
ПРИМЕРЫ
Следующие конкретные примеры следует истолковывать лишь как иллюстративные и не ограничивающие остальное описание каким-либо образом.
Пример 1: Анализ липолиза адипоцитов in vitro под влиянием бета-адренергических агонистов и глюкокортикостероидов
В анализе липолиза in vitro определяли глицерин в средах для культивирования клеток посредством спектрофотометрического измерения после химического окисления перекисью водорода. Глицерин измеряли в течение трех часов. Уровни липолиза в культивируемых человеческих адипоцитах тестировали после воздействия одного бета-агониста, одного глюкокортикостероида или комбинации их двух в течение одного или более чем одного периода предварительной инкубации, как описано более подробно ниже.
Выделение преадипоцитов и дифференцировка в адипоциты
2
В анализе липолиза использовали человеческие подкожные адипоциты. Жировую ткань отбирали путем липосакции или липэктомии, и преадипоциты выделяли следующим образом. Кратко, жировую ткань измельчали и инкубировали при 37°С в бикарбонатном буфере Кребса-Рингера, содержащем 1% бычьего сывороточного альбумина и 0,1% коллагеназы, в камере со встряхиванием, обогащенной кислородом (5% CO; 75 встряхиваний/мин) в течение 1 часа. Суспензию фильтровали через нейлоновую сеть с ячейками 400 мкм и центрифугировали в течение 1 мин при 100g. Преадипоциты в супернатанте дважды промывали и затем переносили в 96-луночные планшеты при плотности клеток/лунку. Преадипоциты культивировали в поддерживающей среде в течение семи суток, пока они дифференцировались в адипоциты.
Реактивы
Буфер для промывки (буфер Кребса-Рингера (KRB) без сыворотки; [Sigma, K4002-10X1L]) - хранили при 4°С
Буфер для анализа (KRB с 1% FBS (сыворотка плодов коровы); [FBS от Gibco, 26140-079]) - хранили при 4°С
Поддерживающую среду хранили при 4°С
Глицериновый реактив A (Zen-Bio, RGTL-15 или RGTL-40) - после растворения хранили при 4°С в защищенном от света месте.
Маточный раствор глицерина (1 М), полученный путем разведения глицерина [Sigma G2025-500ML) в буфере для промывки (без сыворотки) - хранили при -20°С.
Анализ липолиза
За 21 час до анализа липолиза из каждой лунки удаляли среду и заменяли ее 75 мкл поддерживающей среды, содержащей подходящие концентрации лекарственного средства или ДМСО (диметилсульфоксид) (носитель) (см. раздел Схема эксперимента, приведенный ниже). Обработку каждым тестируемым лекарственным средством или контрольную обработку проводили в 8 лунках/группу (12 групп обработки на 96-луночный планшет). За 3 часа до анализа липолиза каждую лунку два раза промывали промывочным буфером (200 мкл/промывку), наполняли тестируемым или контрольным растворами, приготовленными на буфере для анализа (75 мкл/лунку) и затем инкубировали в течение трех часов, т.е. до момента измерения содержания глицерина в буфере для анализа. Для некоторых групп лекарственное средство добавляли только в течение трехчасового периода инкубации (см. раздел Экспериментальные и контрольные группы, приведенный ниже). За один час до анализа готовили семь глицериновых стандартов с концентрацией, варьирующей от 200 мкМ до 3,125 мМ, путем серийного разведения в буфере для анализа.
Содержание глицерина в буфере для анализа из каждой лунки после инкубации использовали как индекс липолиза, где увеличение содержания глицерина свидетельствовало о липолизе. Уровни глицерина анализировали колориметрически с помощью имеющегося в продаже набора для анализа глицерина (Randox Laboratory, United Kingdom) и количественно оценивали путем сравнения со стандартной кривой последовательного разведения глицерина (3 мкМ - 200 мкМ). Концентрации глицерина для каждой лунки стандартизировали к плотности клеток.
Схема эксперимента
В каждой из следующих контрольных или экспериментальных групп n=8 соответствует измерениям глицерина для 8 лунок из 96-луночного планшета для культуры клеток.
Таблица 1
Обобщение схемы эксперимента по анализу липолиза in vitro
Группа(ы)
18-часовая инкубация
3-часовая инкубация
Результаты показаны на Фиг.
Эксперимент 1
1 (отрицательный контроль)
0,1% ДМСО
0,1% ДМСО
2<sup>*</sup>
2-11
0,1% ДМСО
Формотерол (10<sup>-13</sup> М-10<sup>-14</sup> М)
2
12 (положительный контроль)
0,1% ДМСО
Изопротеренол 10<sup>-6</sup> М
2
Эксперимент 2
13 (отрицательный контроль)
0,1% ДМСО
0,1% ДМСО
3<sup>*</sup>
14-18
0,1% ДМСО
Сальметерол (10<sup>-8</sup> М-10<sup>-4</sup> М)
3
19 (положительный контроль)
0,1% ДМСО
Изопротеренол 10<sup>-6</sup> М
3
Эксперимент 3
20 (отрицательный контроль)
0,1% ДМСО
0,1% ДМСО
4<sup>*</sup>
21-22
0,1% ДМСО
Будесонид 10<sup>-10</sup> М и 10<sup>-7</sup> М
4
23-26
Будесонид (10<sup>-12</sup> М-10<sup>-6</sup> М)
Будесонид (10<sup>-12</sup> М-10<sup>-6</sup> М)
4
27 (положительный контроль)
0,1% ДМСО
Изопротеренол 10<sup>-6</sup> М
4
Эксперимент 4
28 (отрицательный контроль)
0,1%ДМСО
0,1% ДМСО
5<sup>*</sup>
29
Сальметерол 10<sup>-6</sup> М
Сальметерол 10<sup>-6</sup> М
5
30
Сальметерол 10<sup>-6</sup> М+
Сальметерол 10<sup>-6</sup> М+
5
Будесонид 10<sup>-6</sup> М
Будесонид 10<sup>-6</sup> М
31
Сальметерол 10<sup>-8</sup> М
Сальметерол 10<sup>-8</sup> М
5<sup>*</sup>
32
Сальметерол 10<sup>-8</sup> М + Будесонид 10<sup>-6</sup> М
Сальметерол 10<sup>-8</sup> М + Будесонид 10<sup>-6</sup> М
5
33 (положительный контроль)
Изопротеренол 10<sup>-6</sup> М
Изопротеренол 10<sup>-6 </sup>М
5
Данные для всех групп представлены на графике как кратность или % различий относительно данных для группы отрицательного контроля
-6
Как показано на фиг.2, агонист бета-2-адренергического рецептора длительного действия формотерол индуцировал дозозависимое увеличение липолиза более чем в шесть раз после трехчасовой инкубации, которое для концентрации 10 М и выше было большим, чем увеличение, наблюдавшееся для изопротеренола. Аналогично, агонист бета-2-адренергического рецептора длительного действия Сальметерол также индуцировал дозозависимое увеличение липолиза после трехчасовой инкубации, хотя данный эффект (несколько больше, чем двухкратное увеличение липолиза) не был таким сильным, как эффект, наблюдавшийся для формотерола. Липолиз, индуцированный сальметеролом, был равным или меньшим, чем липолиз, наблюдавшийся для изопротеренола.
Как показано на фиг.4, глюкокортикостероид будесонид индуцировал небольшое увеличение (вплоть до примерно 1,5-кратного) липолиза через три часа, которое было меньшим, чем увеличение, наблюдавшееся для изопротеренола (примерно 2,5-кратное). Напротив, инкубация с одним будесонидом в течение 18 часов фактически вызывала небольшое подавление липолиза in vitro.
-6
Инкубация адипоцитов с сальметеролом (10 М) в течение 18 часов уменьшала липолиз (фиг.4). Аналогично, обработка изопротеренолом в течение 18 часов приводила к пониженному липолизу. Однако когда сальметерол объединяли с будесонидом в течение 18-часового периода инкубации, наблюдали увеличение липолиза (фиг.5).
На основе этих данных авторы изобретения сделали вывод, что формотерол и сальметерол эффективно индуцируют липолиз в культивируемых адипоцитах в течение трехчасового периода времени. Однако сальметерол фактически уменьшает липолиз при использовании в течение 18 часов, вероятно, из-за десенсибилизации или понижающей регуляции рецептора. Кроме того, в присутствии глюкокортикостероида будесонида сальметерол способен индуцировать липолиз даже после 18 часов. Таким образом, будесонид можно использовать для поддержания или восстановления способности бета-2-адренергического агониста индуцировать липолиз на протяжении длительных периодов времени, вероятно, путем предотвращения понижающей регуляции бета-2-адренергических рецепторов.
Пример 2: Ингибирование липогенеза бета-адренергическими агонистами и глюкокортикостероидами
Неограничивающий пример анализа ингибирования липогенеза является следующим
Культура клеток
5
5
2
Клеточную линию преадипоцитов 3T3-L1 (АТСС, Manassas, VA) сеяли с плотностью 4×10 клеток на Т75 мл сосуд в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), с 10% нормальной телячьей сыворотки и 1% антибиотиков (пенициллин/стрептомицин). Клетки инкубировали при 37°С, 5% CO. Через трое суток клетки открепляли трипсином, подсчитывали и ресуспендировали в 24-луночных планшетах при плотности 6×10 клеток на лунку в 2 мл среды. Через 1-2 суток клетки были близки к конфлюентности и готовы клипогенезу.
Вещества для липогенеза
Среда для инициации липогенеза: DMEM/10% сыворотки плодов коровы/0,5 мМ IBMX/1 мкМ дексаметазон
Среда для развития липогенеза: DMEM/10% сыворотки плодов коровы/10 мкг/мл инсулина
Среда для поддержания липогенеза: DMEM/10% сыворотки плодов коровы
Среда для отрицательного контроля: DMEM/10% нормальной телячьей сыворотки
Протокол липогенеза
2
2
2
1,8 мл среды удаляют из лунок и добавляют 2 мл среды для инициации липогенеза на лунку. Планшеты инкубируют в течение 48 часов при 37°С, 5% CO. 2 мл среды удаляют и добавляют 2 мл среды на лунку для развития липогенеза. Планшеты инкубируют в течение 48 часов при 37°С, 5% СО. 2 мл среды удаляют и добавляют 2 мл среды на лунку для поддержания липогенеза. Планшеты инкубируют в течение по меньшей мере 48 часов при 37°С, 5% СО. Внутриклеточные капельки липидов накапливаются в клетках в течение по меньшей мере 5 суток.
Схема эксперимента
Перед липогенезом преадипоцитные клетки 3T3-L1 предварительно обрабатывают на разных стадиях бета-2-агонистом и/или глюкокортикостероидом. За 24 ч до добавления среды для инициации липогенеза клетки обрабатывают следующим образом:
Группа 1: нет обработки
-10
Группа 2: 10 М сальметерола
-8
Группа 3: 10 М сальметерола
-6
Группа 4: 10 М сальметерола
-4
Группа 5: 10 М сальметерола
-10
-6
Группа 6: 10 М сальметерола + 10 М будесонида
-8
-6
Группа 7: 10 М сальметерола + 10 М будесонида
-6
-6
Группа 8: 10 М сальметерола + 10 М будесонида
-4
-6
Группа 9: 10 М сальметерола + 10 М будесонида
-6
Группа 10: 10 М будесонида
-10
Группа 11: 10 М будесонида
-6
Группа 12: 10 М капсаицина, известного ингибитора липогенеза
Другую партию клеток обрабатывают приведенными выше группами за 24 часа до добавления среды для развития липогенеза, и еще одну партию обрабатывают за 24 часа до добавления среды для поддержания липогенеза. В контрольной партии клетки обрабатывают приведенными выше группами за 24 часа до добавления среды для отрицательного контроля. В двух других партиях из 12 групп сальметерол заменен на бета-2-агонист длительного действия формотерол в одной партии и на бета-2-агонист кратковременного действия альбутерол в другой партии.
Визуализация внутриклеточных липидов
Клетки собирают через 5 суток после добавления среды для поддержания липогенеза. Клеточную среду удаляют, и планшеты дважды промывают фосфатно-солевым буферным раствором (PBS). Добавляют 0,5 мл раствора Oil Red O (0,36% Oil Red O в 60%-ном изопропаноле) на лунку, и планшеты инкубируют в течение 15 минут при комнатной температуре. Раствор для окрашивания удаляют, и лунки три раза промывают 60%-ным изопропанолом. Окрашенные планшеты затем фотографируют и/или сканируют для визуального анализа. Липиды окрашены в красный цвет.
Количественная оценка липидов
В окрашенные лунки добавляют 0,25 мл раствора для экстракции красителя (CHEMICON International). Планшеты устанавливают на орбитальный встряхиватель или шейкер на 15-30 мин. Раствор с экстрагированным красителем переносят в кювету и оптическую плотность считывают на спектрофотометре при 520 нм.
Пример 3: Бета-2-агонисты в комбинации с глюкокортикостероидами снижают массу эпидидимальных жировых тел
Авторы изобретения пытались определить, может ли глюкокортикостероид снижать содержание жира in vivo способом, согласующимся с данными авторов изобретения по липолизу in vitro, как описано в Примере 1. Для этого авторы данного изобретения измеряли массу эпидидимальных жировых тел у крыс, обработанных бета-2-адренергическим агонистом длительного действия формотеролом, одним или в комбинации с будесонидом.
Самцов крыс Sprague Dawley (~500 г) подвергали анестезии под 4% изофлураном с использованием испарителя Matrix 3000. Затем животным, как перечислено в Таблице 2 ниже, инъецировали в 5 мм спереди от заднего конца жирового тела 0,4 мл носителя (2% ПЭГ); формотерола (3,48 мкг/мл; доза = 1,39 мкг) в носителе или формотерола (3,48 мкг/мл) и будесонида (10 мкг/мл; доза = 1,39 мкг формотерола и 4 мкг будесонида) в носителе. Каждое животное получало обработку лекарственным средством на одной стороне и обработку носителем (2% ПЭГ) на противоположной стороне; для каждой группы обработки правой и левой сторон были уравновешены в отношении лекарственного средства и носителя (см. Таблицу 2).
Таблица 2
Экспериментальная схема анализа липолиза in vivo
Группа
№ животного
Правое эпидидимальное жировое тело
Левое эпидидимальное жировое тело
1
1
Формотерол
Носитель
2
Формотерол
Носитель
3
Носитель
Формотерол
4
Носитель
Формотерол
2
5
Формотерол + Будесонид
Носитель
6
Формотерол + Будесонид
Носитель
7
Носитель
Формотерол + Будесонид
8
Носитель
Формотерол + Будесонид
Инъекции повторяли через 24 и 48 часов, всего осуществляли три инъекции. Через двадцать четыре часа после последней инъекции животных умерщвляли внутрибрюшинной избыточной дозой пентобарбитала (150 мг/кг), левые и правые эпидидимальные жировые тела от каждого животного собирали и взвешивали (результаты показаны в Таблице 3 и на фиг.6). Для статистического анализа использовали парный t-критерий и стандартный t-критерий.
Таблица 3
Изменение массы жировых тел (лекарственное средство-носитель)
Группа
1
2
Животное 1 и 5
-0,036
-0,599
Животное 2 и 6
-0,138
-0,115
Животное 3 и 7
0,118
-0,574
Животное 4 и 8
0,166
-0,124
Среднее
0,028
-0,353
SD
0,140
0,270
Данные по обработке одним формотеролом и формотеролом + будесонидом, показанные в Таблице 3, анализировали с помощью парного t-критерия Стьюдента, результаты этого анализа показаны в Таблице 4.
Таблица 4
Статистический анализ изменений массы жировых тел (лекарственное средство-носитель) после обработки одним формотеролом или формотеролом + будесонидом
Группы
Значение двухстороннего р
Группа 1 (формотерол) относительно носителя
0,63
Группа 2 (формотерол + будесонид) относительно носителя
0,0792
Как показано в Таблице 4, животные Группы 1 (обработанные одним формотеролом) демонстрировали различия и изменчивость, соответствующие наивному необработанному контролю. Средний эффект обработки одним формотеролом составлял + 0,028 г ± 0,140 г. Статистический анализ дал значение р 0,72, которое согласуется с отсутствием тенденции к эффекту обработки. С другой стороны, животные Группы 2 (обработанные формотеролом + будесонидом) демонстрировали тенденцию к значимому эффекту обработки. Средний эффект обработки составлял - 0,353±0,270 со значением р=0,07.
Авторы данного изобретения также провели статистический анализ (t-критерий Стьюдента) значимых различий между эффектом обработки одним лекарственным средством и комбинацией лекарственных средств, а также значимых различий между обработкой комбинацией по сравнению с необработанными контрольными животными. Результаты этих статистических анализов показаны в Таблице 5.
Таблица 5
Статистический анализ различий эффектов одного формотерола относительно формотерола + будесонида и формотерола + будесонида относительно необработанных
Сравнение (среднее различие массы эпидидимальных жировых тел)
Значение двухстороннего Р
Группа 2 (формотерол + будесонид) относительно Группы 1 (один формотерол)
0,05
Группа 2 относительно необработанных
0,0131
Как показано в Таблице 5 и на фиг.6, имело место статистическое различие между Группой 2 и Группой 1 (р=0,05). Имело место значимое различие между средним уменьшением массы жировых тел в Группе 2 относительно необработанных животных с р=0,013.
В следующем эксперименте авторы данного изобретения проверили способность формотерола плюс будесонида снижать массу жировых тел в анализе, описанном выше. Как показано на фиг.7, введение комбинации доз 1,4 мкг/сутки формотерола + 4,0 мкг/сутки будесонида приводило к значимому различию средней эпидидимальной массы в обработанной группе относительно необработанной группы (р=0,01). Аналогично, даже при более низкой комбинации доз (0,7 мкг/сутки формотерола + 2,0 мкг/сутки будесонида, которая достигалась путем дозировки через день) различие между обработанными комбинацией и необработанными контрольными животными было значимым (р=0,04).
Наконец, авторы данного изобретения провели исследование зависимости ответа от дозы путем совместной инъекцирования в эпидидимальные жировые тела целого ряда доз формотерола (от 0,01 мкг до 100 мкг) наряду с постоянной дозой будесонида (4,0 мкг). Затем авторы данного изобретения определили изменения массы эпидидимальных и паховых жировых тел. Как показано на фиг.8, имело место дозозависимое уменьшение массы эпидидимальных жировых тел. Кроме того, по мере уменьшения дозы формотерола исчезал эффект на потерю пахового жирового тела, тогда как потеря эпидидимального жира сохранялась. Как и ожидалось, этот результат показал, что эффект обработки в эпидидимальном жировом теле был локальным в месте, куда вводили инъекцию формотерола и будесонида. В другом эксперименте авторы данного изобретения заменили будесонид приблизительно равносильной дозой метилпреднизолона (100 мкг). Авторы данного изобретения зафиксировали дозу формотерола на уровне 0,1 мкг и протестировали дозу одного формотерола. Инъекцию в правые эпидидимальные жировые тела проводили один раз в сутки в течение трех суток. В группе, обработанной комбинацией, средняя потеря массы эпидидимального жира составляла 0,8 г по сравнению с контрольной группой, которой инъецировали носитель, а в группе, обработанной только формотеролом, потеря жира по существу не наблюдалась (фиг.9).
На основании этих данных и их анализа, авторы данного изобретения сделали вывод, что комбинация бета-2-агониста длительного действия (например формотерола) и глюкокортикостероида (например будесонида), по-видимому, является эффективной для индукции локального липолиза и уменьшения жира in vivo.
Пример 4: Бета-2-агонисты в комбинации с глюкокортикостероидами снижают массу паховых жировых тел
Провели исследования на крысах для определения эффекта комбинации селективного бета-2-адренергического агониста длительного действия сальметерола в комбинации с флутиказона пропионатом на паховое подкожное жировое тело. Маточные растворы сальметерола и флутиказона в пропиленгликоле разводили 1:20 нормальным стерильным физиологическим раствором с получением приблизительно 1,0 мкг сальметерола и приблизительно 2,0 мкг флутиказона на 1 мл препарата. Препарат активного лекарственного средства инъецировали в правое паховое жировое тело с использованием безыгольного инъекционного устройства. Контрольный препарат, состоящий из пропиленгликоля, разведенного 1:20, инъецировали в левое паховое жировое тело животного. Животных из дозовой группы 1 (n=6) инъецировали на каждые третьи сутки в течение 2 недель. Животных из дозовой группы 2 (n=6) инъецировали через сутки в течение 1 недели. В конце периода обработки жировые тела отбирали и взвешивали для сравнения массы правого жирового тела с левым. Образцы из каждого жирового тела брали для анализа числа жировых клеток и среднего диаметра жировых клеток.
Для животных из дозовой группы 2 средняя масса жирового тела обработанной стороны составляла 5,08 г по сравнению с 6,2 г для контрольной стороны. Это давало статистически значимую (р=0,014) потерю жира 1,12 г +/-0,46 г (среднее +/-стандартное отклонение) жира относительно контрольной стороны (фиг.10). Для дозовой группы 1 средняя масса жирового тела обработанной стороны составляла 5,43 грамма, а средняя масса жирового тела контрольной стороны составляла 6,14 г. Это давало статистически значимую (р=0,0006) потерю жира 0,72 г +/-0,23 г (среднее +/- стандартное отклонение) (фиг.10). Образцы обрабатывали для подсчета клеток и анализа размера клеток с использованием счетчика Coulter. Средний диаметр клеток для животных из дозовой группы 2 был на 7,64 микрометра меньше для обработанной стороны по сравнению с контролем (фиг.10). Средний диаметр клеток для животных из дозовой группы 1 был на 3,8 микрометра меньше для обработанной стороны по сравнению с контролем (фиг.10). У животных из дозовой группы 1 после 2-недельного периода обработки наблюдали статистически значимое (р=0,029) уменьшение числа жировых клеток, составляющее в среднем 1840000 клеток (фиг.10). Это представляло собой приблизительно 34%-ное уменьшение числа жировых клеток в проанализированном образце. Эти данные являются особенно неожиданными и впечатляющими, когда отмечено, что жировая ткань крыс не экспрессирует бета-2-адренергические рецепторы.
Скорости потери жира, полученные в исследованиях на грызунах, составляли 0,036 г жира/сутки/мкг лекарственного средства для дозовой группы 2 и 0,008 г жира/сутки/мкг лекарственного средства для дозовой группы 1. Эквивалентная доза для человека составляла бы 100 мкг на инъекцию сальметерола, что давало бы скорость 3,6 г жира/сутки в дозовой группе 2 при схеме дозировки через сутки. Как раскрыто ранее, данный препарат идеально подходит для включения в вариант с замедленным высвобождением для обеспечения высвобождения лекарственного средства в течение вплоть до 1 месяца. В варианте с замедленным высвобождением предполагается, что однократная инъекция человеческой эквивалентной дозировки будет давать потерю регионарного жира вплоть до 109 г (121 мл) (фиг.11). Эта человеческая эквивалентная доза, описанная выше, представляет собой половину максимальной дозы, одобренной FDA (Федеральное управление США по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов) для этого препарата, поэтому, вероятно, с помощью ежесуточного дозового эквивалента можно будет достичь даже больших показателей уменьшения количества жира (возможно в 2 раза). Уменьшение количества жира этого объема могут быть подходящими для лечения регионарных отложений жира и улучшения внешнего вида жира.
Приведенные выше данные дополнительно поддерживают вывод авторов данного изобретения, что комбинация бета-2-агониста длительного действия (например, сальметерола) и глюкокортикостероида (например, флутиказона пропионата), по-видимому, будет эффективной для индукции липолиза и уменьшения содержания жира in vivo.
Пример 5: Клиническое тестирование лечения регионарных жировых отложений композициями, содержащими бета-адренергический агонист и глюкокортикостероид
Неограничивающий пример такой клинического тестирования лечения регионарных жировых отложений представляет собой следующее.
Выбор пациентов
Пациенты должны быть в возрасте 18 лет или старше и не должны иметь гиперчувствительности к вводимым лекарственным средствам. У них диагностированы липома или другие нежелательные регионарные жировые отложения. Все исследования должны проводиться при условии одобрения институционального комитета по этике и согласия пациента.
Схема исследования
Тест 1: Это многоцентровое исследование с увеличением дозы комбинированной терапии бета-2-агонистом длительного действия сальметеролом с глюкокортикостероидом будесонидом. Пациенты получают ежесуточную инъекцию парентеральной композиции лекарственного средства. Пациенты, у которых не достигается уменьшения жировой массы или диаметра липомы после 1-3 недель терапии, будут получать дополнительную 1-3-недельную терапию более высокой дозой, чем та, которую назначают исходно. Когорты из 3-6 пациентов получают возрастающие дозы комбинированного лекарственного средства до тех пор, пока не будет определена максимально переносимая доза (МПД). МПД определяют как дозу, предшествующую дозе, при которой 2 из 3 или 2 из 6 пациентов испытывают дозолимитирующую токсичность.
Тест 2: Это рандомизированное многоцентровое исследование. Продолжительность данного исследования составляет 60 суток. Пациентов рандомизируют в 1 из 18 групп обработки. В группе 1 пациентам ежесуточно дают один сальметерол в МПД. В группе 2 пациентам ежесуточно дают один будесонид в МПД. В группе 3 пациентам одновременно дают сальметерол и будесонид в МПД. В группе 4 пациентам ежесуточно дают сальметерол, и будесонид - через сутки. В группе 5 пациентам ежесуточно дают будесонид, и сальметерол - через сутки. В группе 6 пациентам дают будесонид в каждые нечетные сутки, и сальметерол - в каждые четные сутки. Группы 7-12 имеют ту же самую схему дозировки, что и группы 1-6, за исключением того, что дозировка составляет одну четвертую МПД. Группы 13-18 также имеют ту же самую схему дозировки, что и группы 1-6, за исключением того, что дозировка составляет одну десятую МПД. В дополнение к обработанным группам, контрольную группу оставляют необработанной.
Оценка ожидаемых результатов
Пациентов оценивают по уменьшению массы регионарных жировых отложений в момент завершения исследования. Уменьшение жировой массы по меньшей мере на 10%, измеренное МРТ (магнитно-резонансная томография) или ультразвуком, в пределах 60 суток указывает на положительный результат.
Пример 6: Фармацевтические композиции
Парентеральные композиции
Пример 6А: Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, примерно от 10 до 100 мкг водорастворимой соли формотерола или сальметерола и примерно от 40 мкг до 400 мкг будесонида растворяют в ПЭГ и затем смешивают 0,9%-м стерильным физиологическим раствором до конечного объема 10 мл. Данную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.
Пример 6В: Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, примерно от 10 до 100 мкг водорастворимой соли формотерола или сальметерола и от примерно 100 мкг до примерно 500 мкг метилпреднизолона сукцината растворяют в забуференном 0,9%-ном стерильном физиологическом растворе до конечного объема 10 мл. Полученную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.
Пример 6С: Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, от примерно 10 мкг до примерно 100 мкг кристаллических микрочастиц соли формотерола или сальметерола суспендируют в 10 мл ПЭГ и забуференного стерильного 0,9%-ного физиологического раствора. Данную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.
Пример 6D: Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, от примерно 100 мкг до примерно 500 мкг кристаллических микрочастиц метилпреднизолона ацетата или будесонида суспендируют в 10 мл ПЭГ и забуференного стерильного 0,9%-ного физиологического раствора. Полученную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.
Пример 6Е: Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, от примерно 10 мкг до примерно 100 мкг кристаллических микрочастиц соли формотерола или сальметерола и от примерно 100 мкг до примерно 500 мкг кристаллических микрочастиц будесонида или метилпреднизолона ацетата суспендируют в 10 мл ПЭГ и забуференного стерильного 0,9%-ного физиологического раствора. Полученную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.
Композиции в виде геля для местного введения
Пример 6F: Для получения фармацевтической композиции в виде геля для местного введения примерно 100 мкг сальметерола и примерно 100 мкг преднизолона смешивают с 1,75 г гидроксипропилцеллюлозы, 10 мл пропиленгликоля, 10 мл изопропилмиристата и 100 мл очищенного спирта USP (Фармакопея США). Полученную смесь в виде геля затем помещают в контейнеры, такие как тюбики, которые подходят для местного введения.
Пример 6G: Для получения фармацевтической композиции в виде геля для местного введения примерно 100 мкг формотерола и примерно 100 мг будесонида смешивают с 1,75 г гидроксипропилцеллюлозы, 10 мл пропиленгликоля, 10 мл изопропилмиристата и 100 мл очищенного спирта USP. Полученную смесь в виде геля затем помещают в контейнеры, такие как тюбики, которые подходят для местного введения.
Пример 6Н: Для получения фармацевтической композиции в виде геля для местного введения примерно 100 мг сальметерола смешивают с примерно 10 мл ПЭГ-400, 1,75 г гидроксипропилцеллюлозы, 10 мл изопропилмиристата и 100 мл очищенного спирта USP. Полученную смесь в виде геля затем помещают в контейнеры, такие как тюбики, которые подходят для местного введения.
Пример 6I: Для получения фармацевтической композиции в виде геля для местного введения примерно 100 мг преднизолона смешивают с примерно 10 мл ПЭГ-400, 1,75 г гидроксипропилцеллюлозы, 10 мл изопропилмиристата и 100 мл очищенного спирта USP. Полученную смесь в виде геля затем помещают в контейнеры, такие как тюбики, которые подходят для местного введения.
Пероральные композиции
Пример 6J: Для получения пероральной фармацевтической композиции примерно 100 мг соединения преднизолона смешивают с 750 мг крахмала. Данную смесь включают в пероральную лекарственную форму, такую как твердая желатиновая капсула, которая подходит для перорального введения.
Пример 6K: Для получения пероральной фармацевтической композиции примерно 50 мг соединения будесонида смешивают с 375 мг желатина. Данную смесь включают в пероральную лекарственную форму, такую как твердая желатиновая капсула, которая подходит для перорального введения.
Пример 6L: Для получения пероральной фармацевтической композиции примерно 200 мг соединения кетотифена и 100 мкг формотерола смешивают с 1500 мг гидроксипропилметилцеллюлозы. Данную смесь включают в пероральную лекарственную форму, такую как твердая желатиновая капсула, которая подходит для перорального введения.
Пример 6М: Для получения пероральной фармацевтической композиции примерно 50 мг соединения флутиказона пропионата смешивают с 600 мг крахмала. Данную смесь включают в пероральную лекарственную форму, такую как твердая желатиновая капсула, которая подходит для перорального введения.
Пример 7: Схемы введения бета-адренергических агонистов и глюкокортикостероида
Неограничивающие примеры таких схем введения являются следующими
2
Пример 7А: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6А в сутки 1 и в каждые последующие нечетные сутки лечения. Для липомы от 0,2 до 0,5 мл препарата инъецируют в центр липомы. Для липом размером более 2 см можно проводить более чем одну инъекцию. Для регионарных отложений жира от 5 до 20 инъекций 0,1-0,2 мл препарата 6А вводят по всему участку (например, в боковую часть живота). Каждая инъекция от 0,1 до 0,5 мл будет обрабатывать от 1 до 5 см жира.
Пример 7В: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6С и 6D в сутки 1 и затем каждые 3-7 суток.
Пример 7С: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6D в сутки 1 и затем совместно вводят композиции 6С и 6D каждые 3-7 суток.
Пример 7D: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6Е каждые 3-7 суток.
Пример 7Е: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6D в сутки 1 с последующими выходными в течение двух суток. Во второй двухсуточный период пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 6С. Это введение затем повторяют.
Пример 7F: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6D в сутки 1 с последующими выходными в течение двух суток. Во второй двухсуточный период пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 6С. Это введение затем повторяют.
Пример 7G: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 61 в сутки 1 и в каждые последующие нечетные сутки лечения. В четные сутки пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 6С.
Пример 7Н: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, ежесуточно вводят терапевтически эффективное количество композиции 6С. В четные сутки пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 61.
3
3
2
Пример 7I: Пациенту с обструктивным апноэ во сне вводят терапевтически эффективное количество композиции 6А билатерально в мягкое небо и в заднюю и боковую часть глотки в сутки 1 и затем через сутки. Вводят приблизительно от 0,1 до 0,5 см. Каждая инъекция от 0,1 до 0,5 см будет обрабатывать приблизительно от 1 до 5 см жира.
3
3
2
Пример 7J: Пациенту с обструктивным апноэ во сне вводят терапевтически эффективное количество композиции 6Е билатерально в мягкое небо и в заднюю и боковую часть глотки в сутки 1 и затем каждые 3-7 суток до уменьшения симптомов. Вводят приблизительно от 0,1 до 0,5 см. Каждая инъекция от 0,1 до 0,5 см будет обрабатывать приблизительно от 1 до 5 см жира.
Пример 7K: Пациенту с повреждением мышц, таким как разрыв, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6Е в поврежденную область в сутки один и затем в каждые 3-7 суток.
Пример 7L: Пациенту с атрофией мышц или кахексией вводят терапевтически эффективное количество 6L дважды в сутки.
Пример 7М: Пациенту с псориазом на участок кожи, имеющий псориазную бляшку, наносят терапевтически эффективное количество 6F.
Описанные здесь примеры и воплощения служат только для иллюстративных целей, и различные модификации или изменения находятся в пределах сущности и содержания данной заявки и объема прилагаемой формулы изобретения. Все публикации, патенты и патентные заявки, процитированные здесь, таким образом включены посредством ссылки во всей их полноте для всех целей.