Способ прогнозирования степени тяжести течения пруриго методом определения уровня концентрации триптазы в крови
METHOD FOR PRURIGO SEVERITY PREDICTION BY BLOOD TRYPTASE CONCENTRATION DETERMINATION METHOD

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования степени тяжести течения пруриго.
Известен способ оценки тяжести течения почесухи (пруриго), основанный на оценке различных клинико-лабораторных показателей [Федеральные клинические рекомендации. Дерматовенерология 2015: Болезни кожи. Инфекции, передаваемые половым путем. - 5-е изд., перераб. и доп. - М.: Деловой экспресс, 2016. 406 с]. Недостаток этого способа в том, что он достаточно субъективен, так как лабораторные показатели, используемые в способе, являются общими при многих кожных заболеваниях. Кроме этого, этот способ не позволяет сделать прогноз течения заболевания.
Наиболее близким аналогом изобретения является способ оценки степени тяжести пруриго, заключающийся в том, что в момент обострения заболевания проводят забор венозной крови, определяют концентрацию иммуноглобулинов (IgE и IgG) и цитокинов (ИЛ-6, ИЛ-18, ИЛ-8, ИЛ-17, ИЛ-4) в сыворотке крови. При пруриго наблюдается дисбаланс Th1 и Th2 субклассов Т-лимфоцитов в пользу последних с соответствующим им цитокиновым профилем, что приводит к гиперпродукции IgE. При дисбалансе цитокинов прогнозируют более тяжелое течение пруриго, при уравновешенности цитокинов - благоприятное течение пруриго [М.А. Вандышева, Б.Г. Яровинский. Исследование цитокинов сыворотки крови больных почесухой взрослых в фазе клинического обострения // Вестник новых медицинских технологий - 2011 - T. XVIII, №4 - С. 79].
Недостатком прототипа является трудоемкость, т.к. при его осуществлении производится большое количество технологических операций. Этот способ требует высоких материальных затрат в связи с использованием дорогостоящих реактивов для выполнения множества лабораторных исследований. Отсутствие его специфичности по отношению к пруриго также относится к недостатку метода.
Пруриго относится к группе аллергических дерматозов, протекающих на фоне патологии со стороны желудочно-кишечного тракта (панкреатит, холецистит, гастродуоденит) и/или нервной системы (стрессы, неврозы, психозы различного генеза) и/или вегетативной-нервной системы, нередко осложняющихся вторичной инфекцией из-за наличия входных ворот. Поэтому при сочетанной патологии нельзя дифференцировать острую фазу воспаления и, следовательно, оценить тяжесть течения пруриго [К.М. Мухамадиева, С.С. Исматуллоева, Ал-Маамари Ахмед Мухиддин Абдуруб. Роль психовегетативных дисфункций в патогенезе почесухи. Вестник Авиценны. 2017. Т 19. №3. С. 407.].
Задачей изобретения является разработка способа прогнозирования степени тяжести пруриго, специфичного для данного заболевания.
Технический результат - повышение точности способа.
Предлагаемый способ прогнозирования степени тяжести течения пруриго осуществляется следующим образом: при поступлении за медицинской помощью у больного проводят забор венозной крови. В сыворотке крови определяют уровень концентрации β-триптазы методом иммунофлюоресценции на трехмерной пористой фазе с применением коммерческих реагентов согласно инструкции производителя («UniCAP 100», Phadia, Швеция). При значении концентрации β-триптазы в сыворотке крови 29±10 мкг/л прогнозируют легкое течение заболевания. При концентрации β-триптазы 71±15 мкг/л прогнозируют тяжелое течение заболевания.
В предлагаемом способе используется определение концентрации β-триптазы, являющейся трипсиноподобным ферментом, обнаруживаемым в гранулах мастоцитов (тучных клеток) и базофилов. Термин «триптаза» включает в себя несколько различных форм фермента: α, β, γ и δ, свойства которых имеют некоторые различия [Tryptase: Genetic and functional considerations / L.  [et al.] // Allergol Immunopathol (Madr). 2012. V. 40. №6. P. 385-389. 56]. Наиболее охарактеризована к настоящему времени преобладающая в тучных клетках β-триптаза, которая чаще всего и подразумевается при использовании термина «триптаза». Полагают, что именно β-триптаза способна оказывать наибольшие эффекты в экстрацеллюлярном пространстве и тесно вовлечена в развитие патологических (например, воспаления) либо физиологических (например, адаптивных) реакций [Caughey G.Н. Mast cell proteases as protective and inflammatory mediators / G.H. Caughey // Adv Exp Med Biol. 2011. 716. P. 212-234. 13.; Caughey G. H. Mast cell tryptases and chymases in inflammation and host defense / G.H. Caughey // Immunol Rev. 2007. 217. P. 141-154.]
Биологические эффекты β-триптазы зависят от механизма дегрануляции и имеют важное значение в развитии воспаления, аллергии, формировании защиты организма от инфекционных агентов. Полифункциональность позволяет триптазе выступать ключевым объектом при исследовании роли тучных клеток в формировании фенотипа физиологических и патологических состояний, а также представлять собой информативный диагностический маркер ряда заболеваний. В последние годы экспериментальные сведения о биологическом значении триптазы постоянно расширяются и позволяют считать данные протеазы актуальными объектами исследования, как в лабораторной практике, так и при терапии социально значимых заболеваний в роли перспективной мишени фармакологических препаратов [Атякшин Д.А., Бурцева А.С., Алексеева Н.Т. Триптаза как полифункциональный компонент секретома тучных клеток. Журнал анатомии и гистопатологии, 2017, Т. 6, №1, С. 121-122].
Учитывая роль тучных клеток в патогенезе почесухи [Обыденова К.В. Федоровская А.В. Почесуха. Евразийский Союз Ученых, 10(19), 2015, С. 106-108], мы предлагаем использовать результаты нашего исследования по определению показателей фермента для прогнозирования степени тяжести пруриго.
Обследовано 60 больных пруриго в возрасте 45-60 лет. В сыворотке крови оценивали содержание β-триптазы в мкг/л. У больных с легким течением заболевания (n=37) наблюдалось увеличение концентрации β-триптазы в сыворотке крови до 29±10 мкг/л по сравнению с контрольной группой (8±5 мкг/л). У больных с тяжелым течением заболевания (n=23) уровень концентрации β-триптазы повышался и достигал 71±15 мкг/л.
В ходе проведенных нами исследований анализ иммунологического обследования больных с пруриго до лечения у пациентов без негативной динамики развития процесса и с последующей трансформацией процесса в тяжелый вариант течения (диссеминация поражения кожи) показал у последних достоверно более высокие показатели концентрации триптазы в сыворотке крови.
Авторами в доступной научно-медицинской и патентной литературе не было обнаружено сведений об использовании определения концентрации β-триптазы в сыворотке крови для прогнозирования степени тяжести течения пруриго. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «новизна».
Исследованиями авторов была впервые доказана возможность определения концентрации β-триптазы в сыворотке крови для достоверного прогноза степени тяжести течения пруриго. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».
Предлагаемый способ прогнозирования иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Больная А. 56 лет поступила на стационарное лечение в Республиканский кожно-венеро логический диспансер. Считает себя больной в течение 5-6 лет. Ранее несколько раз получала стационарное лечение в РКВД. Обострение с временем года не связывает. Лечилась амбулаторно в поликлинике по месту жительства без эффекта.
При поступлении общее состояние больной удовлетворительное. Больную беспокоит интенсивный зуд, и высыпания на коже. Объективно при осмотре: поражены кожные покровы туловища (груди, живота, спины), разгибательных поверхностей верхних конечностей, наблюдаются лентикулярные папулы красно-коричневого цвета, плотной консистенции, куполообразной формы. Все имеющиеся поражения покрыты экскориациями с геморрагическими корочками. На месте предыдущих высыпаний видны гипопигментированные атрофические рубчики. До лечения проведено комплексное лабораторное обследование (OAK, ОАМ, Б/х анализ крови, кал на я/г). При дополнительном обследовании в сыворотке крови определена высокая концентрация β-триптазы - 86 мкг/л. У больной прогнозируется тяжелое течение почесухи. Выставлен клинический диагноз: почесуха взрослых, тяжелой степени тяжести. Было назначено лечение с использованием топических ГКС в виде аппликаций 2 раза в сутки в течение 14 дней, лоратадин 10 мг 1 раз в сутки в течение 14 дней, тиосульфат натрия 30% (10,0 в/в), ацесоль (200,0 в/в кап.), УФО, наружно - метилурациловая мазь 5%, раствор фукорцин (2 р/д). Несмотря на лечение, через два дня у пациента произошла диссеминация кожного процесса, появились высыпания на голенях и бедрах, а ранее было только на туловище и руках. В связи с этим было принято решение - назначить глюкокортикостероиды перорально, преднизолон 20 мг/в сутки в течение 10 дней, что позволило добиться положительной динамики (новые элементы не появлялись, старые - эпителизировались). Продолжительность лечения 21 день.
Пример 2. Больная В. 48 лет поступила на стационарное лечение в Республиканский кожно-венерологический диспансер. Считает себя больной в течение 10 лет. Ранее несколько раз получала стационарное лечение в РКВД.
При поступлении общее состояние больной удовлетворительное. Больную беспокоит высыпания на коже и интенсивный зуд. Объективно при осмотре: симметрично поражены кожные покровы сгибательных поверхностей нижних конечностей, наблюдаются папулы плотной консистенции, округлой формы. На месте предыдущих высыпаний видны гипопигментированные атрофические рубчики. До лечения проведено комплексное лабораторное обследование (OAK, ОАМ, Б/х анализ крови, кал на я/г). При дополнительном обследовании в сыворотке крови определена высокая концентрация β-триптазы - 72 мкг/л. У больной прогнозируется тяжелое течение пруриго. Выставлен клинический диагноз: почесуха взрослых, тяжелой степени тяжести. Было назначено лечение с использованием топических ГКС в виде аппликаций 2 раза в сутки в течение 14 дней, лоратадин 10 мг 1 раз в сутки в течение 14 дней, тиосульфат натрия 30% (10,0 в/в), ацесоль (200,0 в/в кап.), УФО, наружно - раствор фукорцина (2 р/д). Несмотря на лечение, через два дня у пациента произошла диссеминация кожного процесса, появились высыпания на верхних конечностях, животе, груди, а ранее было только на сгибательных поверхностях нижних конечностей. В связи с этим было принято решение - назначить глюкокортикостероиды перорально, преднизолон 20 мг/в сутки в течение 7 дней, что позволило добиться положительной динамики (новые элементы не появлялись, старые - эпителизировались). Продолжительность лечения 21 день.
Пример 3. Больная Г. 53 лет поступила на стационарное лечение в Республиканский кожно-венерологический диспансер. Считает себя больной в течение 3-х лет. Ранее несколько раз получала стационарное лечение в РКВД. Обострение связывает с нервными расстройствами.
При поступлении общее состояние больной удовлетворительное. Больную беспокоит интенсивный зуд и высыпания на коже. Объективно при осмотре: поражены кожные покровы верхних конечностей груди, живота. Высыпания характеризуются полушаровидными плотными папулами, резко выступающими над уровнем кожи. Все имеющиеся элементы покрыты экскориациями с геморрагическими корочками. На месте предыдущих высыпаний видны гипопигментированные атрофические рубчики. До лечения проведено комплексное лабораторное обследование (OAK, ОАМ, Б/х анализ крови, кал на я/г). При дополнительном обследовании в сыворотке крови определена высокая концентрация β-триптазы - 56 мкг/л. У больной прогнозируется тяжелое течение почесухи. Выставлен клинический диагноз: почесуха взрослых, тяжелой степени тяжести. Было назначено лечение с использованием топических ГКС в виде аппликаций 2 раза в сутки в течение 14 дней, лоратадин 10 мг 1 раз в сутки в течение 14 дней тиосульфат натрия 30% (10,0 в/в), ацесоль (200,0 в/в кап.), УФО, наружно - метилурациловая мазь 5%, раствор фукорцин (2 р/д). Несмотря на лечение, через три дня у пациента произошла диссеминация кожного процесса, появились высыпания на нижних конечностях, а ранее было только на руках, груди, животе. В связи с этим было принято решение - назначить глюкокортикостероиды перорально, преднизолон 20 мг/в сутки в течение 5 дней, что позволило добиться положительной динамики (новые элементы не появлялись, старые - эпителизировались). Продолжительность лечения 21 день.
Пример 4. Больная Н. 48 лет поступила на стационарное лечение в Республиканский кожно-венерологический диспансер с жалобами на поражение кожи, зуд. Болеет в течение 1 года. Лечилась амбулаторно по месту жительства, отмечала временные улучшения. Обострение отмечает второй день. Объективно при осмотре: на коже верхних и нижних конечностей (преимущественно разгибательных поверхностей) имеются единичные высыпания в виде твердых, полушаровидных папул буровато-красного цвета, резко выступающих над поверхностью кожи размерами от 0,4 до 1,0 см в диаметре. До лечения проведено лабораторное исследование (OAK, ОАМ, Б/х анализ крови, кал на я/г), а также определение уровня концентрации β-триптазы в сыворотке крови методом иммуннофлюоресценции. Данный показатель равен 25 мкг/л. У больной прогнозируется легкое течение почесухи. Выставлен клинический диагноз: почесуха взрослых, легкой степени тяжести. Назначено стандартное лечение - супрастин (1,0 в/м 2 р/д), тиосульфат натрия 30% (10,0 в/в), ацесоль (200,0 в/в кап.), наружно: на очаги поражения раствор фукорцин (2 р/д). Последующее наблюдение подтвердило прогноз. Продолжительность лечения 14 дней.
Пример 5. Больной А. 50 лет поступает на стационарное лечение в Республиканский кожно-венерологический диспансер с жалобами на высыпания на нижних конечностях, зуд, жжение. Считает себя больным в течение 3 лет. Лечился амбулаторно по месту жительства, отмечал временные улучшения. Обострение 1 раз в два года, в весенне-летний период. Две недели назад заметил появление сыпи на ногах. Объективно при осмотре: на коже нижних конечностей имеются папулы плотной консистенции величиной с чечевицу. До лечения проведено лабораторное исследование (OAK, ОАМ, Б/х анализ крови, кал на я/г), а также определение уровня концентрации β-триптазы в сыворотке крови методом иммуннофлюоресценции. Данный показатель равен 19 мкг/л. У больного прогнозируется легкое течение почесухи. Выставлен клинический диагноз: почесуха взрослых, легкой степени тяжести. Назначено стандартное лечение - лоратадин перорально 1раз в сутки в течение 14 дней, тиосульфат натрия 30% (10,0 в/в), ацесоль (200,0 в/в кап.), наружно: на очаги поражения раствор фукорцин (2 р/д). Последующее наблюдение подтвердило прогноз. Продолжительность лечения 14 дней.
Пример 6. Больной М. 55 лет поступил на стационарное лечение в Республиканский кожно-венерологический диспансер с жалобами на зуд, преимущественно вечером и ночью, высыпания на коже разгибательных поверхностей конечностей. Болеет в течение 5 лет. Обострение на фоне стресса. Объективно при осмотре: на коже разгибательных поверхностей конечностей имеются единичные высыпания в виде плотных папул, резко выступающих над поверхностью кожи размерами от 0,5 до 0,8 см в диаметре. До лечения проведено лабораторное исследование (OAK, ОАМ, Б/х анализ крови, кал на я/г), а также определение уровня концентрации β-триптазы в сыворотке крови методом иммуннофлюоресценции. Данный показатель равен 39 мкг/л. У больного прогнозируется легкое течение почесухи. Выставлен клинический диагноз: почесуха взрослых, легкой степени тяжести. Назначено стандартное лечение - супрастин (1,0 в/м 2 р/д), тиосульфат натрия 30% (10,0 в/в), ацесоль (200,0 в/в кап.), наружно: на очаги поражения раствор метиленовый синий (2 р/д). Последующее наблюдение подтвердило прогноз. Продолжительность лечения 14 дней.
Предлагаемым способом был проведен прогноз степени тяжести течения пруриго у 25 больных, и во всех случаях был достигнут указанный технический результат. Способ может широко использоваться в практическом здравоохранении, так как предусматривает проведение лабораторного исследования методом иммунофлюоресцентного анализа, являющегося доступным даже для амбулаторного звена. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «промышленная применимость».