Изменение уровня TsPO и оксида азота у крыс при ультрафиолетовом облучении

Через 8-9 месяцев в 146 (97,3%) случаях пациенты жалоб не предъявляли. В течение минимум 5 минут могли стоять на поврежденной ноге без дополнительной опоры, движения в суставах соответствовали объему движений неповрежденной конечности. Результат лечения признан хорошим.

Достоинством интрамедуллярного остеосинтеза является обеспечение шинирования повреждений кости на всем ее протяжении при относительно небольшой операционной травме. Неустойчивость к ротационному смещению, невозможность обеспечить адаптацию костных фрагментов по ширине ограничивают применение интрамедуллярного остеосинтеза у пациентов с оскольчатыми, косыми и сегментарными переломами бедренной и большеберцовой костей [3,5,6].

Интрамедуллярные стержни с блокированием и расширяющиеся, исключая ротационное смещение костных отломков, не позволяют устранить смещение костных фрагментов по ширине, что создает препятствия для нормального течения процессов регенерации [2]. При появлении диастаза между отломками по длине необходимо выполнение дополнительного вмешательства по удалению проксимального блокирующего винта [1,2,4,7].

ЛИТЕРАТУРА

1. Анкин Л.Н., Анкин Н.Л. Травматология (Европейские стандарты). - М.: МЕДпресс-информ, 2005. - 496 с.

2. Минасов Т.Б., Ханин М.Ю., Минасов И.Б. Диафизарные переломы большеберцовой кости: блокированный или расширяющий гвоздь? // Гений ортопедии. - 2009. - №4. - С.110-113.

3. Мюллер М.Е. и др. Руководство по внутреннему остеосинтезу. Методика, рекомендованная группой АО (Швейцария) / Пер. с англ. - Изд. 3-е. - М.: Ad Marginem, 1996. - 750 с.

4. Birjandinejad A., et al. Augmentation plate fixation for treatment of femoral and tibial nonunion after intramedullary

Интрамедуллярный остеосинтез в сочетании с меж-фрагментарной компрессией костных фрагментов стягивающими скобами с эффектом памяти формы позволяет сохранить до момента сращения достигнутое в процессе репозиции положение костных фрагментов.

Использование комбинированного остеосинтеза в лечении пациентов с диафизарными переломами костей нижних конечностей позволило в 97,3% случаях получить хорошие функциональные результаты реабилитации.

Таким образом, у пациентов с переломами тип А1 при выполнении интрамедуллярного остеосинтеза для межфрагментарной компрессии костных отломков используются S-образные стягивающие скобы. Фиксация костных отломков при переломах типа А1, А2, В1, С1 выполняется кольцевидными скобами. При переломах с клиновидным фрагментом на 1/3 диаметра поврежденной кости и косопоперечных переломах рационально использование S-образной стягивающей скобы в сочетании с кольцевидной скобой, либо скобы с кольцевидным захватом. У пациентов с диафизарными переломами костей нижних конечностей интрамедуллярный остеосинтез в сочетании с межфрагментарной компрессией стягивающими скобами эффективен в 97,3% случаях.

nailing // Orthopedics. - 2009. - Vol. 32. - P.409.

5. Kumar A., et al. Effect of fibular plate fixation on rotational stability of simulated distal tibial fractures treated with intramedullary nailing // J. Bone Joint Surg. - Am. - 2003, Apr. -Vol. 85-A (4). - P.604-608.

6. Kumar P. Treatment of open fractures of tibial shaft: comparison of external fixation versus intramedulary nailing as the primary procedure // J. Orthopaedics. - 2004. - Vol. 1 (3).

- URL: http://www.jortho.org/2004/1/3/e3/index.htm (дата обращения: 28.01.2010).

7. Kim K.-C., et al. Percutaneous reduction during intramedullary nailing in comminuted tibial shaft fractures // Orthopedics. - 2008. - Vol. 31. - P.556.

Информация об авторах: 654034, Кемеровская область. г. Новокузнецк, ул. Шестакова, 14, кафедра травматологии и ортопедии, Тел./факс: (3843) 37-73-84, e-mail: imtamed@mail.ru, Каплун Виктор Аркадьевич - заведующий

травматологическим отделением, к.м.н.

© РУКША Т.Г., ЗОБОВА С.Н., САВЧЕНКО И.А., ВОЛКОВА А.В., КИБАЛЬЧИЧ А.И., КЕЛЬБЕРГ В.Г. - 2010

ИЗМЕНЕНИЕ УРОВНЯ TSPO И ОКСИДА АЗОТА У КРЫС ПРИ УЛЬТРАФИОЛЕТОВОМ ОБЛУЧЕНИИ

Т.Г. Рукша, С.Н. Зобова, И.А. Савченко, А.В. Волкова, А.И. Кибальчич, В.Г. Кельберг (Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого, ректор - д.м.н., проф. И.П. Артюхов, кафедра патофизиологии с курсом клинической патофизиологии

им. проф. В.В. Иванова, зав. - д.м.н. Т.Г. Рукша)

Резюме. TsPO (transporter protein, 18 kDa) является фоточувствительным белком, принимающим участие в регуляции клеточной пролиферации и апоптоза. Недавние исследования показали, что лиганды TsPO модулируют выраженность воспалительной реакции, а сам TsPO может являться маркером воспаления, в частности, в легочной ткани. В связи с этим, проведено исследование уровня TsPO в коже после воздействия ультрафиолетовым излучением. Проанализирована взаимосвязь между выраженностью клинических изменений в коже после воздействия ультрафиолетовым излучением, экспрессией TsPO в кератиноцитах эпидермиса и уровнями другого маркера воспаления - оксида азота.

Ключевые слова: ультрафиолетовое излучение, оксид азота, воспаление, TsPO.

TSPO AND NITRIC OXIDE LEVELS ALTERATIONS IN RATS AFTER ULTRAVIOLET RADIATION

S.N. Zobova, I.A. Savchenko, A.V. Volkova, A.I. Kibalchich, V.G. Kelbergand T.G. Ruksha

Summary. TsPO (transporter protein, 18 kDa) is a photosensitive protein which is involving in cell proliferation and apoptosis regulation. Recently it has been shown that TsPO ligands modulate inflammatory response and TsPO can be a marker of inflammation in pulmonary system. We investigated TsPO levels in rat skin after ultraviolet radiation. Correlation between clinical symptoms of ultraviolet radiation skin damage, TsPO levels in epidermal keratinocytes and another inflammation marker - nitric oxide has been analyzed.

Key words: ultraviolet radiation, nitric oxide, inflammation, TsPO.

TsPO (transporter protein, 18 kDa) является митохондриальным белком, регулирующим апоптоз и клеточную пролиферацию. Известно, что TsPO обеспечивает транспорт холестерина через наружную митохондриальную мембрану, что является необходимым для его метаболизма в стероидные гормоны [8]. Недавно было показано, что TsPO принимает участие в реализации воспалительного процесса, а лиганды TsPO демонстрируют противовоспалительную активность. В частности, обнаружено, что лиганд TsPO РК11195 обладает способностью в первые четыре часа развития воспалительной реакции снижать активность лейкоцитов, уменьшать явления экссудации, уровни оксида азота и аденозиндеаминазы [5]. Также показано, что TsPO может быть использован в качестве маркера воспаления. В частности, указывается на повышенное содержание [123I]-(R)-PK11195 в отделах грудной клетки мышей при воспалительном процессе в легочной ткани, индуцированном липополисахаридом [6]. В данном исследовании указывается, что экспрессия TsPO, регистрируемая с помощью биоимиджинга, может быть маркером при воспалительных заболеваниях легких.

В коже TsPO регистрируется в клетках эпидермиса, а также в фибробластах, меланоцитах, клетках сосудистого эндотелия [7]. Ранее нами было определено, что уровень TsPO снижается в коже при развитии злокачественных новообразований (меланома кожи, плоскоклеточный рак кожи, базально-клеточная карцинома), что является непонятным, поскольку при большинстве злокачественных новообразований различными авторами, наоборот, показано увеличение уровня данного белка в опухолевых клетках, объясняемое повышенным метаболизмом холестерина [3,4]. Помимо этого, известно, что при воздействии ультрафиолетовым излучением происходит полимеризация TsPO, сопряженная с изменением функциональной активности TsPO, в частности, изменением его способности связываться с холестерином. Помимо этого, было показано, что полимеризация TsPO коррелирует с интенсивностью пролиферации клеток меланомы кожи [1]. Таким образом, TsPO является молекулой-мишенью при реализации эффектов ультрафиолетового излучения в коже.

Цель работы: оценить уровень экспрессии TsPO при хроническом воздействии ультрафиолетовым излучением, а также определить связь с содержанием оксида азота в периферической крови.

Материалы и методы

Воздействию ультрафиолетовым излучением (длина волны источника ультрафиолетового света составляла 240-400 нм) подвергались белые беспородные крысы-самцы массой 220-240 г. Исследование выполнялось с соблюдением правил гуманного обращения с животными. У животных в области предполагаемого воздействия ультрафиолетовым излучением предварительно удалялся волосяной покров.

Было сформировано 2 группы (n=7 в каждой группе) и контрольная группа (n=6). Далее крысы групп I и II были подвергнуты облучению источником УФО 2 раза в неделю в течение 4-х недель. Время облучения для I группы 20 секунд соответствовало дозе 200 кДж/м2, для II группы 60 секунд - 600 кДж/м2. Через 2 недели у группы контроля были взяты биоптаты кожи размером 1,5-2 см. У I и II групп через 4 недели. Биопсия проводилась под местной анестезией - 2% раствор лидокаина, введение подкожно. Биоптаты кожи фиксировались в 10% нейтральном формалине с последующей заливкой в парафин.

Проводилось иммуногистохимическое исследование с моноклональными антителами к TsPO (Trevigen) по стандартным методикам. Использовались биотини-лированные вторичные антитела (BD Biosciences) и диа-минобензидин (BD Biosciences) в качестве хромогена. Микроскопия производилась при увеличении в 600 раз с помощью микроскопа Olympus с видеонасадкой Sanyo.

Оценивалось число TsPO+ клеток на 100 клеток эпидермиса.

Через 2 недели после начала эксперимента у группы контроля было произведено взятие периферической крови в количестве 3 мл для определения уровня оксида азота. У I и II группы через 4 недели. Взятие было произведено путем рассечения сонной артерии. К полученной крови было добавлено по 60 мкл гепарина, далее образцы были помещены в центрифугу (1000 оборотов - 5 минут). После чего был произведен забор плазмы в количестве 1,5 мл. Исследование концентрации оксида азота в периферической крови производили методом, основанным на способности омедненного кадмия восстанавливать нитрат-ионы до нитрит-ионов, с последующим определением концентрации нитрит-ионов с помощью реактива Грисса (1% сульфаниламид, 0,1% ^(1-нафтил)-этилендиамин, 2,5% ортофосфорная кислота, «Sigma»). Для осаждения белков к 1 мл сыворотки добавляли 1 мл 0,12 М раствора натриевой щелочи (NaOH) и 4 мл сульфата цинка (ZnSO4) в концентрации 5,4 г/л и нагревали в течение 6 мин на кипящей водяной бане. Затем пробу охлаждали и фильтровали через обез-золенный бумажный фильтр. В пробирку для редуктора наливали 1,8 мл фильтрата, добавляли 0,2 мл аммонийного буфера (pH=9), помещали редуктор и перемешивали в течение 5 мин на магнитной мешалке при комнатной температуре со скоростью вращения 150-200 оборотов в минуту. По истечении указанного времени к 2 мл готового образца добавляли 2 мл 0,6% реактива Грисса. Оптическую плотность определяли фотоколориметрически (КФК-2) при длине волны 540 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см относительно контроля, содержащего 2 мл дистиллированной воды и 2 мл реактива Грисса. Концентрацию нитрит-ионов рассчитывали с использованием калибровочного графика, который строили с помощью стандартных растворов нитрата калия (KNO3).

Статистическая обработка результатов осуществлялась с помощью метода Крускалла-Уоллиса. Значимыми считались различия при р<0,05.

Результаты и обсуждение

У животных, подвергнутых воздействию ультрафиолетовым излучением, на третьи стуки развивались эритема и отек, в дальнейшем - корочки, шелушение. Через 2 недели после воздействия ультрафиолетовым излучением в очаге воздействия появлялись признаки гиперпигментации.

В эпидермисе контрольной группы TsPO+ клетки визуализировались гомогенно, во всех слоях эпидермиса. Наблюдалась перинуклеарная локализация рецептора. Число TsPO+ клеток в нормальной коже составило 31,7 на 100 клеток эпидермиса. Значимое по отношению к контролю увеличение уровня экспрессии рецептора происходило в I и II группах (а=0,01), при этом различий между этими группами выявлено не было (табл. 1).

Таблица 1

Уровни Т8РО в эпидермисе крыс после воздействия ультрафиолетовым излучением

Контроль

Количество TsPO+ клеток, % 31,7 52,6* 50,7*

Примечание: * - различия значимы по отношению к контролю, б=0,01.

Уровень оксида азота в контрольной группе составил 6,77. По сравнению с контрольной группой в I группе отмечалось повышение уровня оксида азота в периферической крови на 28%, а в II группе - на 18% (табл. 2).

Таким образом, ультрафиолетовое излучение вне зависимости от дозы облучения индуцирует появление местных признаков воспаления в области воздействия.

Таблица 2

Показатели оксида азота в периферической крови крыс после воздействия ультрафиолетовым излучением

Контроль

Концентрация оксида азота, мкмоль/л 6,77 8,68 8,03

В это же время отмечается повышение уровня ТзРО в эпидермисе. Последнее позволяет расценивать вышеуказанный белок в качестве возможного маркера воспалительного процесса в коже, индуцированного ультрафиолетовым излучением.

Стоит отметить, что в данном случае при развитии воспалительного процесса в коже (дерматита, индуцированного воздействием ультрафиолетового излучения), регистрировалось повышение уровня ТзРО. Подобные изменения нами были отмечены в стадию прогрессирования распространенного псориаза, в то

ЛИТЕРАТУРА

1. Рукша Т.Г. Изменение структуры периферического бен-зодиазепинового рецептора в клетках меланомы кожи после воздействия ультрафиолетовым излучением // Российский онкологический журнал. - 2008. - №6. - С.22-24.

2. Рукша Т.Г., Прохоренков В.И., Салмина А.Б. и др. Апоптоз кератиноцитов и экспрессия периферических бен-зодиазепиновых рецепторов при псориазе // Вестник дерматологии и венерологии. - 2004. - №5. - С.4-6.

3. Рукша Т.Г., Салмина А.Б., Максимова Т.В., Анисимов Ю.А. Экспрессия периферического бензодиазепинового рецептора и уровень PCNA при базально-клеточной карциноме // Российский журнал кожных и венерических болезней.

- 2007. - №2. - С.4-7.

4. Рукша Т.Г., Салмина А.Б., Соколов В.Д. и др. Экспрессия периферического бензодиазепинового рецептора, PCNA, каспазы-3 в клетках меланомы и плоскоклеточного рака кожи // Бюллетень экспериментальной биологии и медици-

время как уже указывалось выше, при злокачественных новообразованиях кожи отмечалась противоположная тенденция [2]. При этом псориаз, как и злокачественные новообразования, характеризуется повышением пролиферативной активности клеток эпидермиса. Выявленные различия могут свидетельствовать об изменении регуляции функционирования TsPO при формировании опухолевого процесса.

Также необходимо отметить, что ультрафиолетовое излучение не вызывало выраженных изменений уровня оксида азота в периферической крови, что свидетельствует об отсутствии системных признаков дисфункции эндотелия при развитии в коже воспалительного процесса, вызванного ультрафиолетовым излучением в дозах 200-600 Дж/м2.

Является востребованным дальнейшее исследование функционирования TsPO, оценка его возможного использования в качестве терапевтической мишени и диагностического маркера при развитии воспалительных заболеваний кожи.

ны. - 2007. - №7. - С.87-89.

5. Da Silva M.B., Farges R.C., Frode T.S. Involvement of steroids in anti-inflammatory effects of PK11195 in a murine model of pleurisy // Mediators Iflammation. - 2004. - Vol. 13. -P.93-103.

6. Hardwick M.J., Chen M.K., Baidoo K., et al. In vivo imaging of peripheral benzodiazepine receptors in mouse lungs: a biomarker of inflammation // Molecular imaging. - 2005. - Vol.

4. - P.432-438.

7. Stoebner PE., Carayon P., Penarier G. The expression of peripheral benzodiazepine receptors in human skin: the relationship with epidermal cell differentiation // British Journal of Dermatology. - 1999. - Vol. 140. - P1010-1016.

8. Veenman L., Papadopoulos V., Gavish M. Channel-like functions of the 18kDa translocator protein (TSPO): regulation of apoptosis and steroidogenesis as part of the host-defense response // Current Pharmaceutical Design. - 2007. - Vol. 13. - P2385-2405.

Информация об авторах: 660022, г. Красноярск, ул. П. Железняка, 1, Тел. 3912-28-36-49, 3912-965-952, e-mail: tatyana_ruksha@mail.ru, Рукша Татьяна Геннадьевна - д.м.н., зав. кафедрой; Зобова Светлана Николаевна - к.м.н., с.н.с., ассистент кафедры; Савченко Ирина Алексеевна - лаборант кафедры; Волкова Анна Владимировна - студент 4-го курса; Кибальчич Александра Ивановна - студент 4-го курса; Кельберг Василий Геннадьевич - студент 6-го курса.

© МАКАРОВА Н.Г., ВАСИЛЬЕВА Л.С., ГАРМАЕВА Д.В. - 2010

СТРУКТУРА ПЕЧЕНИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ГИПОТИРЕОЗЕ

Н.Г. Макарова, Л.С. Васильева, Д.В. Гармаева

Резюме. При гипотиреозе, вызванном введением в организм в течение 2 месяцев мерказолила, в печени изменяется внутридольковый кровоток, развивается дистрофическое и некротическое поражение гепатоцитов, торможение пролиферации и дифференцировки клеток. Через 28 суток некротизация гепатоцитов не прекращается, хотя большая часть структурных нарушений устраняется.

Ключевые слова: печень, гипотиреоз, введение мерказолила.

STRUCTURE OF LIVER IN EXPERIMENTAL HYPOTHYREOSIS

N.G. Makarova, L.S. Vasilyeva, D.V Garmaeva

Summary. In hypothyreosis, caused by introduction of merkazolil in an organism within 2 months, in liver introlobular blood-flow changes, dystrophic and necrotic lesion of hepathocytes, braking of proliferation and differentiation of cells develops. In 28 days necrotization of hepatocytes does not stop, though the most part of structural infringements is eliminated.

Key words: liver, hypothyreosis, introduction of merkazolil.

Иркутская область относится к числу географиче- ности гипотиреоза. Основными объектами исследо-

ских районов с пониженным содержанием в биосфере вания при гипотиреозе являются щитовидная железа,

йода, что является причиной высокой распространен- состояние нервной системы и метаболический статус,