Способ диагностики нарушений гормонального фона у мужчин
DIAGNOSTIC TECHNIQUE FOR HORMONAL DISORDERS IN MEN

Изобретение относится к медицине, к андрологии, а именно к лабораторной диагностике.
Уровень техники.
Аналогами данного изобретения являются описанные в отечественной и зарубежной литературе методы лабораторного исследования, имеющие своей целью диагностику мужского бесплодия.
В настоящее время по данным литературы нет единой точки зрения на состав микрофлоры урогенитального тракта мужчин. В большинстве научных работ приводятся данные микробиологических исследований, результаты которых не в полной мере отражают качественные и количественные особенности микробиоты, в частности не идентифицируются некультивируемые микроорганизмы (факультативно-облигатные микроорганизмы, некоторые виды лактофлоры).
Известно, что лактобактерии выявляются в микробиоме эякулята у мужчин, которые проходили обследование с целью прегравидарной подготовки или бесплодия, при этом соблюдали все необходимые условия для исключения транзиторного характера присутствия лактобактерий в эякуляте, поэтому у этих пациентов неправомочно выставлять диагноз по присутствию транзиторной микрофлоры. (Почерников Д.Г., Галкина И.С., Постовойтенко Н.Т., Герасимов A.M. Сравнительный анализ биотопа эякулята и цервикального канала методом ПЦР-РВ с тестами "Андрофлор" и "Фемофлор" в супружеских парах. Вестник РГМУ 2017; (02): 37-41).
Не исключена роль Lactobacillus spp.в поддержании воспаления в предстательной железе (Chronic Prostatitis: An Infectious Disease. Curtis Nickel, Infect Urol 13(2):31-38, 2000).
По мнению других авторов, лактобактерии входят в состав транзиторной микрофлоры урогенитального тракта мужчин, но у части больных с этим трудно согласится, так как они соблюдают все необходимые условия исключающие транзиторный характер присутствия лактобактерий в эякуляте. (Методическое пособие. Коллектив авторов компании «ДНК-Технология», Москва. «ПЦР в реальном времени: новые возможности технологии в решении репродуктивных проблем»).
В доступной нам литературе мы не обнаружили данных о связи присутствия лактобактерий в эякуляте и нарушений гормонального фона у мужчин.
3
У мужчин, соблюдающих правила подготовки к исследованию эякулята методом ПЦР-РВ с применением теста "Андрофлор" (половой покой или барьерную контрацепцию), выявление в анализе лактобактерий в титре 10 и более служит признаком гормональных нарушений и требует дальнейшего обследования мужчины, даже несмотря на нормальные показатели спермограммы.
Технический результат предлагаемого способа заключается в том, что, информация о идентификации лактобактерий, полученная при исследовании эякулята мужчины методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) с использованием теста «Андрофлор» позволяет делать заключение о нарушении гормонального фона у мужчины.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в разработке способа диагностики нарушении гормонального фона у мужчины, основанного на результатах лабораторного исследования.
Мы приводим результаты молекулярно-генетического исследования с применением теста "Андрофлор", эта методика позволяет оценивать все основные группы бактерий, микробиома эякулята, включая лактобактерии.
3
3,0
6,2
Исследование гормонов по общепринятой методике и анализ эякулята методом ПЦР-РВ с применением теста «Андрофлор» (Липова Е.В., Чекмарев А.С., Болдырева М.Н. Новый метод диагностики инфекционно-воспалительных заболеваний нижних отделов мочеполового тракта у мужчин тест «Андрофлор», «Андрофлор Скрин». М.:, 2017, 48 с.) проводились в лаборатории «Ситилаб»или «Инвитро». В исследовании принимали участие 41 мужчины, которые обратились в урологическую клинику ФГБОУ ВО ИвГМА МЗ РФ г. Иваново с асимптоматическим хроническим простатитом (категориия IV по классификации National Institutes of Health, USA, 1999), бесплодием, или проходящих прегравидарную подготовку. Все пациенты в течение последних четырех недель не получали гормональных и/или антибактериальных препаратов, а также других лекарственных средств, влияющих на микробном эякулята, уровни гормонов ЛГ (5,2±1,4 мМЕ/мл) и ФСГ (4,4±2,2 мМЕ/мл) не выходили за пределы референсных значений. У всех обследованных мужчин в эякуляте идентифицированы лактобактерии, в титре 10 и более (10-10). При исследовании уровня гормонов у этих пациентов (Фиг. 1) обнаружено повышение пролактина (46%), ГСПГ - глобулин связывающий половые гормоны (39%), эстрадиола (15%) и снижение тестостерона в 29% наблюдений.
Новизна заявки на изобретение связана с тем, что впервые уточняется роль лактобактерий в качестве маркера гормонального дисбаланса мужчин, делается попытка дать объяснение взаимосвязи состояния микрофлоры урогенитального тракта, включая уровень лактобактерий в эякуляте и гормонального статуса мужчин.
Клинический пример 1.
Больной «С», 34 года, обратился с жалобами на бесплодие. Вышеперечисленные жалобы беспокоят с 2013 года. Дизурии и болей нет. Половые контакты 2-3 раза в неделю, продолжительностью от 5 до 15 мин, эрекция стабильная. Оволосение по мужскому фенотипу. Молочные железы без особенностей. Вес 95 кг, рост 180 см, ИМТ=29,32; талия 106 см. Употребление алкогольных напитков ежедневно, 0,5-1 л пиво. Употребление табачных изделий отрицает. Per rectum: простата эластической консистенции, нормальных размеров, безболезненная, междолевая борозда дифференцируется. При физикальном исследовании: гепатомегалия; безболезненное, пальпируемое образование в придатке правого яичка, 1 см в диаметре - киста. По органам и системам без особенностей.
При первичном обследовании:
4,8
1. ПЦР-РВ эякулята с тестом «Андрофлор»: ОБМ - 10
4,8
Lactobacillus spp. - 10 (100%); Megasphaera spp./Velionella
3,6
spp./Dialister spp. - 10 (11%); Bacteroides
4,5
spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp. - 10 (75%);
2,4
Anaerococcus spp. - 10 (7%); Peptostreptococcus
4,3
4,1
spp./Parvimonas spp. - 10 (53%) Eubacterium spp. - 10
(31%). Заключение: Превышение пороговых значений транзиторной микрофлоры.
2. Гормональное исследование: пролактин - 5,78 нг/мл; эстрадиол - 60,4 пг/мл; тестостерон 7,75 нг/мл; индекс свободного тестостерона - 56,14%; ГСПГ - 47,9 нмоль/мл; Ингибин В - 62,8 пг/мл. Заключение: Гиперэстрадиолемия.
3. Спермограмма: объем - 5,0 мл; цвет - желтоватый; разжижжение - 25 мин.; вязкость - 1,0 см; Ph - 7,4; сперматозойдов в 1 мл - 5 млн.; прогрессивно-подвижные - 7%; непрогрессивно-подвижные - 5%; неподвижные - 88%; морфологически нормальные - 2%; агрегация - нет; агглютинация - нет; лейкоциты - 10 млн/мл; эритроциты - нет. Заключение: Олигоастенотератозооспермия. Лейкоспермия.
4. Генетическое исследование - кариотип, AZF: в норме.
5. Биохимическое исследование крови: Билирубин общий - 8,9 мкмоль/л; АЛТ - 34,0 Ед/л; ACT - 28,0 Ед/л; ГГТП - 35,0 Ед/л. Заключение: показатели в пределах нормы.
6. Индекс инсулинорезистентности: 3,04. Заключение: повышение уровня.
3
3
7. УЗИ органов мошонки: V правого яичка - 8,5 см, V левого яичка - 7,8 см. Киста головки придатка правого яичка 10 мм, левого 5 мм. Гипоплазия яичек. Киста головки придатка яичка с обеих сторон.
На основании жалоб, анамнеза, клинического обследования выставлен диагноз: Первичное бесплодие. Олигоастенотератозооспермия.
Лейкоспермия. Гипоплазия яичек. Киста головки придатка яичка с обеих сторон. Инсулинорезистентность. Избыточная масса тела. Пациенту проведен курс лечения антиэстрогенами, метформин.
При контрольном обследовании:
3,7
1. ПЦР-РВ эякулята с тестом «Андрофлор»: ДНК человека - 10; ОБМ - отсутствует. Заключение: Нормофлора. Исчезли лактобактерии и другие микроорганизмы.
2. Гормональное исследование: пролактин - 5,78 нг/мл; эстрадиол - менее 10,0 пг/мл; тестостерон 9,4 нг/мл; индекс свободного тестостерона - 75,92%; ГСПГ - 43,1 нмоль/мл. Заключение: Значения в пределах нормы. Нормализация уровня эстрадиола.
3. Спермограмма: объем - 5,5 мл; цвет - серовато-белый; разжижжение - 40 мин.; вязкость - 1,0 см; Ph - 7,7; сперматозойдов в 1 мл - 7,1 млн.; прогрессивно-подвижные - 28,2%; непрогрессивно-подвижные - 33,8%; неподвижные - 38%; морфологически нормальные - 3%; агрегация - нет; агглютинация - нет; лейкоциты - 17 млн/мл; эритроциты - нет. Заключение: Олигоастенотератозооспермия. Лейкоспермия.
4. Индекс инсулинорезистентности: 2,38. Заключение: Нормальное значение.
3
Таким образом, наличие в эякуляте лактобактерии в титре 10 и более обусловлено гиперэстрадиолемий и инсулинорезистентностью. После проведенного лечения (антиэстогены, метформин) нормализовался уровень эстрадиола и индекс инсулинорезистентности, что позволило в контрольном анализе эякулята добиться исчезновения лактобактерий. У данной пары наступила беременность.
Клинический пример 2.
Пациент «П», 42 года, обратился с жалобами на ухудшение эректильной функции, снижение либидо, бесплодие несколько лет. Вышеперечисленные жалобы беспокоят на протяжении 6 месяцев. Лечение не принимал. Дизурии и болей нет. Половые контакты 1-2 раза в неделю, продолжительностью 3-5 мин, эрекция вялая. Оволосение по мужскому фенотипу. Молочные железы без особенностей. Вес 74 кг, рост 173 см, ИМТ=24,73; талия 97 см. Употребление алкогольных напитков и табачных изделий отрицает. В настоящем браке имеет сына 2005 г.р. Per rectum: простата эластической консистенции, нормальных размеров, безболезненна, междолевая борозда дифференцируется. По органам и системам без особенностей. Аритмия, периодически принимает антиаритмики.
При первичном обследовании:
6,2
1. ПЦР-РВ эякулята с тестом «Андрофлор»: ОБМ - 10
6,2
3,4
Lactobacillus spp. - 10 (100%); Staphylococcus spp. - 10
4,3
(0,2%)); Streptococcus spp. - 10 (1,3%); Corynebacterium
4,3
3,1
spp. - 10 (1,6%); Gardnerella vaginalis - 10 (0,1%);
3,8
Megasphaera spp./Velionella spp./Dialister spp. - 10 (0,4%);
3,2
Sneathia spp./Leptotrichia spp,/Fusobacterium spp. - 10
3,6
(0,1%); Atopobium cluster - 10 (0,3%); Bacteroides
4,5
spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp. - 10 (2,1%);
3,4
4,0
Anaerococcus spp. - 10 (0,2%); Eubacterium spp. - 10
3,7
(0,6%); Haemophilus spp.- 10 (0,4%). Заключение:
Превышение пороговых значений транзиторной микрофлоры.
2. Гормональное исследование: пролактин - 22,5 нг/мл; эстрадиол - 46,0 пг/мл; тестостерон 9,59 нг/мл; индекс свободного тестостерона - 65,77%; ГСПГ - 50,6 нмоль/мл; ТТГ - 1,250 мкМЕ/мл. Заключение: Гиперэстрадиолемия, гиперпролактинемия.
3. Спермограмма: объем - 1,8 мл; цвет - сероватый; разжижжение - 40 мин.; вязкость - 0,3 см; Ph - 7,8; сперматозойдов в 1 мл - 0 млн.; прогрессивно-подвижные - 0%; непрогрессивно-подвижные - 0%; неподвижные - 0%; морфологически нормальные - 0%; агрегация - нет; агглютинация - нет; лейкоциты - 1,2 млн/мл; эритроциты - нет. Заключение: Азооспермия. Лейкоспермия.
4. Биохимическое исследование крови: Билирубин общий - 11,1 мкмоль/л; АЛТ - 18,4 Ед/л; ACT - 22,9 Ед/л; ГГТП -21,0 Ед/л. Заключение: показатели в пределах нормы.
5. Магнитно-резонансная томография гипофиза с контрастным усилением. Заключение: МРТ-признаки микроаденомы гипофиза. Консультирован эндокринологом, назначено лечение.
3
3
6. УЗИ op-нов мошонки: V правого яичка 10,5 см, V левого яичка 8 см. Киста придатка правого яичка 8 м. Вены лозовидного сплетения диаметром: справа до 1,5 мм; слева до 1,9 мм. Патологическая извитость и варикозное расширение вен слева. На высоте пробы Вальсальвы патологические рефлюксы выявлены слева; диаметр вен слева стоя до 2,9 см. Заключение: Гипоплазия обоих яичек. Субклиническое варикоцеле слева.
3
7. ТРУЗИ: V - 28 см. Наличие периуретрального фиброза, очаговой кальцификации. Заключение: Эхо-признаки хронического простатита.
3
8. Бактериологическое исследование спермы: Staphylococcus saprophyticus 10 КОЕ/мл.
На основании жалоб, анамнеза, клинического обследования выставлен диагноз: Микроаденома гипофиза, пролактинсекретирующая. Хронический простатит категории IV. Эректильная дисфункция. Бесплодие. Гипоплазия яичек. Киста придатка правого яичка. Субклиническое варикоцеле слева.
Пациенту проведен курс лечения препаратом каберголин.
При контрольном обследовании:
4,3
1. ПЦР-РВ эякулята с тестом «Андрофлор»: ОБМ - 10
3,8
Corynebacterium spp. - 10 (21%); Bacteroides
4,2
spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp. - 10 (40%);
3,3
3,4
Anaerococcus spp. - 10 (11%); Eubacterium spp. - 10
3,8
(15%); Haemophilus spp. - 10 (23%). Заключение: Дисбиоз с
преобладанием условно-патогенных анаэробных
микроорганизмов. Исчезли лактобактерии.
2. Гормональное исследование: пролактин - 11,9 нг/мл; эстрадиол - 39,1 пг/мл; тестостерон 7,45 нг/мл; индекс свободного тестостерона - 33,98%; ГСПГ - 76,08 нмоль/мл. Заключение: Нормализация уровня пролактина.
3. Спермограмма: объем - 1,6 мл; цвет - сероватый;
разжижжение - 40 мин.; вязкость - 0,2 см; Ph - 7,8;
сперматозойдов в 1 мл - 0 млн.; прогрессивно-подвижные - 0%;
непрогрессивно-подвижные - 0%; неподвижные - 0%;
морфологически нормальные - 0%; агрегация - нет;
агглютинация - нет; лейкоциты - 1,8 млн/мл; эритроциты - нет.
Заключение: Азооспермия. Лейкоспермия.
3
Таким образом, наличие в эякуляте лактобактерий в титре 10 и более связано с гиперпролактинемией, после проведенного лечения препаратом каберголин и нормализации уровня пролактина в контрольном анализе эякулята отсутствуют лактобактерии. Данному пациенту планируется биопсия яичек.
Клинический пример 3.
Больной «В», 40 лет, обратился с жалобами на бесплодие. Вышеперечисленные жалобы беспокоят с 2008 года. Данный брак второй. В первом браке имеет сына (2002 г.р.). У супруги привычное невынашивание беременности (2014, 2015, 2016 года). Дизурии и болей нет. Половые контакты 2-3 раза в неделю, продолжительностью 15-25 мин. Эрекция стабильная. Оволосение по мужскому фенотипу. Молочные железы без особенностей. Вес 94 кг, рост 175 см, ИМТ=30,69; талия 100 см. Употребление алкогольных напитков 1 раз в месяц, 250 мл водка. Употребление табачных изделий отрицает. Per rectum: простата эластической консистенции, нормальных размеров, безболезненна, междолевая борозда дифференцируется. По органам и системам без особенностей.
При первичном обследовании:
3,6
1. ПЦР-РВ эякулята с тестом «Андрофлор»: ОБМ - 10
3,4
3,1
Lactobacillus spp. - 10; Streptococcus - 10. Заключение: нормофлора.
2. Гормональное исследование: пролактин - 149 мЕд/л;
эстрадиол - 43 пмоль/л; тестостерон 11,06 нмоль/л;
свободный тестостерон - 51,2%; ГСПГ - 21,6 нмоль/л; ЛГ -
1,44 мМЕд/мл; ФСГ - 2,0 мМЕд/мл. Заключение:
Гипотестостеронемия. Нормогонадотропный гипогонадизм.
3. Спермограмма: объем - 2,5 мл; цвет - желтоватый;
разжижжение - 30 мин.; вязкость - 6,0 см; Ph - 7,7;
сперматозойдов в 1 мл - 30 млн.; прогрессивно-подвижные
- 33,3%; непрогрессивно-подвижные - 17%; неподвижные -
49,7%; морфологически нормальные - 3%; агрегация - нет;
агглютинация - нет; лейкоциты - менее 1 млн/мл;
эритроциты - нет. Заключение: Тератозооспермия.
3
4. УЗИ op-нов мошонки: V правого яичка 12,2 см, V левого
3
яичка 11,4 см. Вены лозовидного сплетения диаметром:
справа до 1,7 мм; слева до 2,8 мм. Патологическая
извитость и варикозное расширение вен слева. На высоте
пробы Вальсальвы патологические рефлюксы выявлены
слева; диаметр вен слева до 3,3 см. Заключение:
Варикоцеле слева.
На основании жалоб, анамнеза, клинического обследования выставлен диагноз: Вторичное бесплодие. Нормогонадотропный гипогонадизм. Варикоцеле слева. Ожирение I степени.
Пациенту проведен курс лечения венотониками + антиэстрогены (клостилбегит).
При контрольном обследовании:
3,1
1. ПЦР-РВ эякулята с тестом «Андрофлор»: ДНК человека - 10; ОБМ - отсутствует. Заключение: Нормофлора. Исчезли лактобактерии.
2. Гормональное исследование: пролактин - 5,78 нг/мл; эстрадиол - 119 пмоль/л; тестостерон 19,74 нмоль/л; индекс свободного тестостерона - 91,4%; ГСПГ - 21,6 нмоль/л; ЛГ - 4,40 мМЕд/мл; ФСГ - 2,77 мМЕд/мл. Заключение: значения в пределах нормы.
3. Спермограмма: объем - 2,5 мл; цвет - желтоватый; разжижжение - 25 мин.; вязкость - 2,0 см; Ph - 7,8; сперматозойдов в 1 мл - 21,5 млн.; прогрессивно-подвижные - 17,2%; непрогрессивно-подвижные - 15,4%; неподвижные - 67,4%; морфологически нормальные - 1%; агрегация - нет; агглютинация - нет; лейкоциты - менее 1 млн/мл; эритроциты - нет. Заключение: Астенотератозооспермия.
3
Таким образом, наличие в эякуляте микроорганизма лактобактерий в титре 10 и более связано с низким уровнем тестостерона, после проведенного лечения антиэстрогенами и нормализации уровня тестостерона, когда в контрольном анализе эякулята отсутствуют лактобактерии.