Агрегация нейтрофиаов у больных артериальной гипертонией с дислипидемией, поаучаюших розувастатин

YAK 615.22 ББК 28.70

И.А. СКОРЯТИНА, И.Н. МЕДВЕДЕВ

I.A. SKORJATINA, I.N. MEDVEDEV

АГРЕГАУИЯ НЕЙТРОФИЛОВ У БОЛЬНЫХ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТОНИЕЙ С ДИСЛИПИДЕМИЕЙ, ПОЛУЧАЮЩИХ РОЗУВАСТАТИН

NEUTROPHILS AGGREGATION OF PATIENTS WITH ARTERIAL HYPERTENSION WITH DYSLIPIDEMIC RECEIVING ROSUVASTATIN

Цель работы: установить динамику способности нейтрофилов к агрегации у лиц с артериальной гипертонией и дислипидемией на фоне приёма розувастатина. Обследовано 30 больных артериальной гипертонией 1-2 степени с дислипидемией II б типа, риск 4, среднего возраста. Контроль представлен 26 здоровыми людьми аналогичного возраста. Больные получали розувастатин 5 мг на ночь. В условиях артериальной гипертонии с дислипидемией выявлено усиление агрегации нейтрофилов. В результате применения розувастатина у больных артериальной гипертонией с дислипидемией уже через 16 недель отмечена нормализация липидного состава, процессов перекис-ного окисления липидов и агрегации нейтрофилов.

The article aims at examination of neutrophil ability to aggregation of patients with arterial hypertension and dyslipidemy in the setting of rosuvastatin. 30 patients of middle age, with arterial hypertension of 1-2 degrees and dyslipidemia, type II b, risk 4, were examined. The verification is presented by 26 healthy people of similar age. The patients received rosuvastatin 5 mg per night. The increased neutrophil aggregation was revealed. As a result of rosuvastatin the normalization of lipid composition, lipid peroxidation and neutrophil aggregation were pointed out within 16 weeks.

Ключевые слова: нейтрофилы, перекисное окисление липидов, артериальная гипертония, дислипидемия, розувастатин.

Key words: neutrophils, lipid peroxidation, arterial hypertension, dyslipidemia, rosuv-astatin.

В настоящее время в России по-прежнему сохраняется среди населения широкая распространённость артериальной гипертонии (АГ), все чаще сочетающейся с метаболическими нарушениями, видное место среди которых занимает дислипидемия (Д) [4, с. 18]. Данное сочетание часто ведёт к повышению агрегации форменных элементов крови [5, с. 8; 8, с. 68], в т. ч. лейкоцитов и наиболее многочисленной их популяции - нейтрофилов, способствуя повышению тромбогенной опасности [1, с. 661]. Не вызывает сомнений, что больным АГ с Д абсолютно показаны статины, использование которых способно снижать смертность от сердечно-сосудистых причин, значимо повышая качество жизни и улучшая общий прогноз [4, с. 21; 5, с. 19]. Вместе с тем, динамика выраженности агрегационной способности нейтрофилов у больных АГ с Д, получающих статины, изучена весьма недостаточно. При этом, остаётся не оценено влияние современного и все чаще применяемого в России розувастатина на выраженность агрегации нейтрофилов. В этой связи в настоящей работе сформулирована цель - установить динамику способности нейтрофилов к агрегации у лиц с АГ и Д на фоне приёма ими розувастатина.

Материалы и методы

Проведённая работа выполнена на 30 пациентах с АГ 1-2 степени и Д 11б типа, риск 4 [4, с. 4], среднего возраста. Группу контроля составили 26 здоровых людей аналогичного возраста. Количество общего холестерина

и триглицеридов (ТГ) в плазме оценивали энзиматическим колориметрическим методом набором фирмы «Витал Диагностикум». ХС липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) определяли набором фирмы «Ольвекс Диагностикум» энзиматическим колориметрическим методом. Уровень ХС липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) определяли расчётным путём [5, с. 13]. Содержание ХС (липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП) устанавливали по формуле (содержание ТГ/2,2). Полученные показатели общего ХС и ХС ЛПНП рассматривали как нормальные, пограничные или высокие в соответствии с V пересмотром Российских рекомендаций по диагностике и коррекции нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза [5, с. 11].

У всех обследованных определяли активность перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме по содержанию тиобарбитуровой кислоты (ТБК)-активных продуктов набором фирмы «Агат-Мед» и ацилгидроперекисей (АГП) [3, с. 34]. Антиокислительный потенциал жидкой части крови определяли по Волчегорскому И. А. и соавт. (2000) [2, с. 56].

После отмытия и ресуспендирования нейтрофилов в них количественно определены уровни ХС энзиматическим колориметрическим методом набором «Витал Диагностикум» и общих фосфолипидов (ОФЛ) по содержанию в них фосфора [7, с. 123]. Внутри отмытых и ресуспендированных нейтрофи-лов устанавливали перекисное окисление липидов по концентрации малонового диальдегида (МДА) и по содержанию АГП [3, с. 35] с оценкой активности в них каталазы и супераксиддисмутазы (СОД) [10, с. 10].

Агрегацию нейтрофилов регистрировали на фотоэлектроколориметре [6, с. 36], используя их суспензию в физрастворе после отмытия от плазмы. В качестве индукторов агрегации применялись лектин зародышей пшеницы в дозе 32 мкг/мл, конканавалин А - 32 мкг/мл и фитогемагглютинин - 32 мкг/мл.

Всем пациентам назначался препарат розувастатин 5 мг на ночь в сочетании с метаболически нейтральным эналаприлом по 10 мг два раза в сутки. Оценка всех учитываемых клинических и лабораторных показателей проводилась в начале лечения, через 4, 16, 52 и 104 недели терапии. Статистическая обработка полученных результатов проведена ^критерием Стьюдента.

Результаты исследований

У включённых в исследование больных в исходном состоянии отмечена дислипидемия, сопровождающаяся активацией ПОЛ плазмы - содержание в ней АГП в 2,2 раза, а уровень ТБК-активных продуктов в 1,4 раза превышали контрольные значения. При этом, антиоксидантный потенциал плазмы составлял у них всего 23,7±0,09%, уступая контролю в 1,4 раза (табл.).

Количественное содержание холестерина в нейтрофилах наблюдаемых пациентов превышало контроль на 33,9% при снижении ОФЛ до 0,35± ±0,004 мкмоль/109ней. Активности каталазы и СОД в нейтрофилах у наблюдаемых больных значимо уступали контролю, что создавало условия для образования в них большого количества АГП (повышен в 1,5 раза) и МДА (повышен в 2 раза) (табл.).

Агрегация нейтрофилов у больных была активирована со всеми испытанными индукторами (с лектином на 57,7%, с конканавалином А на 32,4%, с фитогемагглютинином на 37,9%).

Уже в результате четырёхнедельного приёма препарата у больных достигнуто снижение выраженности Д, сочетающееся с повышением АОА и снижением первичных и вторичных продуктов ПОЛ в плазме. Полученные позитивные изменения углублялись к 16 нед. лечения, обеспечив нормализацию липидного состава плазмы с его стойким закреплением в течение последующего наблюдения. Это сопровождалось достижением в эти сроки полной нормализацией антиокислительного потенциала плазмы (32,9±0,10%) и количества продуктов пероксидации липидов в ней. Так, концентрация АГП плазмы больных в эти сроки применения аторвастатина составила 1,42± ±0,06 Д233/1 мл, а ТБК-активных продуктов - 3,56±0,05 мкмоль/л, закрепляясь на достигнутом уровне при продолжении терапии.

Таблица

Учитываемые показатели плазмы и нейтрофилов больных, принимающих розувастатин

Параметры Розувастатин, п=30, М±m Контроль, п=26, М±m

Исход 4 нед. 16 нед. 52 нед. 104 нед.

ОХС, ммоль/л 6,5±0,05 5,4±0,04 р1<0,01 4,5±0,08 р1<0,01 4,4±0,06 4,4±0,05 4,8±0,05 р<0,01

ХС ЛПВП, ммоль/л 1,03±0,004 1,21±0,005 р1<0,01 1,64±0,007 р1<0,01 1,65±0,005 1,66±0,002 1,60±0,006 р<0,01

ХС ЛПНП, ммоль/л 4,18±0,05 3,05±0,06 р1<0,01 2,10±0,06 р1<0,01 1,99±0,05 1,98±0,08 2,43±0,04 р<0,01

ХС ЛПОНП, ммоль/л 1,29±0,005 1,14±0,005 р1<0,01 0,76±0,006 р1<0,01 0,76±0,007 0,76±0,003 0,77±0,005 р<0,01

ТГ, ммоль/л 2,83±0,06 2,50±0,04 р1<0,01 1,68±0,07 р1<0,01 1,68±0,05 1,67±0,08 1,70±0,02 р<0,01

АГП плазмы, Д233/1 мл 3,20±0,08 2,60±0,05 р1<0,01 1,42±0,06 р1<0,01 1,42±0,04 1,41±0,05 1,42±0,09 р<0,01

ТБК плазмы, мкмоль/л. 5,15±0,13 4,68±0,04 р1<0,01 3,56±0,05 р1<0,01 3,55±0,06 3,54±0,08 3,56 ±0,07 р<0,01

Антиокислительный потенциал плазмы, % 23,7±0,09 26,9±0,05 р1<0,01 32,9±0,10 р1<0,01 32,9±0,07 33,0±0,05 32,9±0,12 р<0,01

ХС нейтрофилов, мкмоль/109ней. 0,83±0,006 0,70±0,008 р1<0,01 0,61±0,006 р1<0,01 0,61 ±0,005 0,60±0,004 0,62±0,004 р<0,01

ОФЛ нейтрофилов, мкмоль/109ней. 0,35±0,004 0,47±0,007 р1<0,01 0,53±0,005 р1<0,01 0,52±0,004 0,53±0,007 0,51±0,003 р<0,01

АГП нейтрофилов, Д233/ 109 ней. 3,52±0,03 3,12±0,04 р1<0,01 2,35±0,05 р1<0,01 2,36±0,03 2,35±0,05 2,36 ±0,05 р<0,01

МДА нейтрофилов, нмоль/109 ней. 1,43±0,05 1,23±0,05 р1<0,01 0,73±0,04 р1<0,01 0,73±0,04 0,72±0,06 0,73±0,03 р<0,01

Каталаза нейтрофилов, МЕ/109 ней. 5234,0±20,21 5798,0±15,90 р1<0,05 9952,1±16,95 р1<0,01 9950,3±18,12 9951,5±17,65 9950,0±19,77 р<0,01

СОД нейтрофилов, МЕ/109 ней. 1236,1±3,85 1453,2±4,72 р1<0,01 1783,0±5,18 р1<0,01 1784,2±4,24 1781,0±4,58 1780,0±4,21 р<0,01

Агрегация с лектином, % 24,6±0,06 19,1±0,05 р1<0,01 15,6±0,04 р1<0,01 15,5±0,06 15,4±0,08 15,6±0,07 р<0,01

Агрегация с конканавалином А, % 19,6±0,04 16,2±0,05 р1<0,01 14,8±0,04 р1<0,01 14,7±0,07 14,6±0,08 14,8±0,04 р<0,01

Агрегация с фитоге- магглютинин, % 42,2±0,06 38,0±0,05 р1<0,01 30,6±0,07 р1<0,01 30,5±0,03 30,5±0,08 30,6±0,09 р<0,01

Условные обозначения: р - достоверность различий исходных значений и контроля, р1 - достоверность динамики показателей на фоне лечения.

Уже через четыре недели терапии выявлено снижение в них уровня ХС на 18,6% и повышение ОФЛ на 34,3%. В результате шестнадцатинедельного лечения произошла полная нормализация исследуемых показателей, сохраняющаяся при продолжении терапии до конца наблюдения.

Спустя месяц терапии, содержание АГП в нейтрофилах снизилось на 12,8%, МДА на 16,3% при достоверном усилении их антиоксидантной системы. Дальнейшее наблюдение за больными, принимавшими розувастатин, позволило отменить дополнительную положительную динамику ПОЛ в нейтро-филах и их антиоксидантной защищённости с достижением их нормализации к 16 нед. приёма препарата.

Через четыре недели терапии активность агрегации нейтрофилов с лек-тином сократилась на 28,8%, с конканавалином А на 20,9%, с фитогемагглю-тинином на 11,0% (табл.). Контроль эффективности 16 недельной терапии позволил выявить нормализацию агрегационной способности нейтрофилов

с лектином, с конканавалином А и фитогемагглютинином. Дальнейший приём розувастатина в течение 104 недель обеспечил у пациентов поддержание достигнутого уровня агрегации нейтрофильных лейкоцитов со всеми использованными индукторами на уровне нормы.

Обсуждение

Ведущую роль в формировании реологических дисфункций при АГ с Д играют форменные элементы крови, в т. ч. нейтрофилы, которые являются наиболее многочисленной популяцией лейкоцитов. Известно, что Д неизбежно нарушает многие биологические процессы, ослабляя АОА, приводя к активации ПОЛ в жидкой части крови [9, с. 59]. Интенсификация процесса пероксидации липидов плазмы у этих пациентов вызывает перестройку мембран лейкоцитов, способствуя изменению работы их рецептор-ного аппарата, а в результате интенсификации ПОЛ внутри них - их вторичных месенджеров. В условиях АГ и Д нейтрофилы начинают активироваться, усиливают выработку медиаторов воспаления и кислородных радикалов, что ведёт к экспрессии на их поверхности молекул адгезии - интегринов и селек-тинов.

Найденная при АГ с Д активация агрегации нейтрофилов была во многом вызвана повышением активности различных углеводных детерминант их гликопротеиновых рецепторов мембраны с лектинами. В виду того, что фитогемагглютинин способен специфически взаимодействовать с участками bD-галактозы гликопротеинов, лектин зародыша пшеницы - с ^ацетил-D-глюкозамином и ^ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислотой, а конкана-валин А - с содержащими маннозу ^гликанами [1, с. 661], то по активности данного процесса возможно оценивать состояние определённых вариантов рецепторов нейтрофилов, участвующих в их агрегационном процессе. В этой связи можно считать, что при АГ с Д повышение лектин-индуцированной агрегации нейтрофилов связано с экспрессией рецепторов адгезии и увеличением в их составе участков, содержащих ^ацетил^-глюкозамин, ^ацетил-нейраминовую кислоту, маннозу и bD-галактозу.

Выявленное усиление агрегации нейтрофилов у больных АГ с Д нуждалось в адекватной коррекции. В работе была испытана возможность влияния на агрегацию нейтрофилов одного из показанных им гиполипидемиче-ских средств - статинов, ранее показавших свою высокую эффективность в плане оптимизации реологических свойств эритроцитов [8, с. 69; 9, с. 62]. В ходе проведённых в настоящей работе исследований было установлено, что применение розувастатина приводит не только к улучшению липидного профиля плазмы, но и к оптимизации липидного состава мембран нейтрофи-лов, сопровождаясь ростом антиоксидантной защиты плазмы крови и данной популяции лейкоцитов с ослаблением в них ПОЛ. Терапия розувастатином способствовала быстрой полной нормализации агрегационной способности нейтрофилов, что указывает на восстановление у больных углеводной структуры гликопротеиновых рецепторов мембраны нейтрофильных лейкоцитов. Можно считать, что в результате терапии у пациентов с АГ и Д имела место оптимизация количества ^ацетил^-глюкозамина, ^ацетил-нейраминовой (сиаловой) bD-галактозы и маннозы в составе их рецепторов на поверхности нейтрофилов.

Выводы

1. Для больных АГ с Д свойственно повышение агрегации нейтрофилов, которое обуславливается липидным дисбалансом их мембраны, усилением в них ПОЛ и изменениями в углеводной структуре их гликопротеиновых рецепторов.

2. Уже через 16 недель применения розувастатина у пациентов с АГ и Д достигается нормализация липидного состава, интенсивность ПОЛ в плазме и нейтрофилах и агрегационной способности нейтрофильных лейкоцитов.

Литература

1. Белова, Л.А. Биохимия процессов воспаления и поражения сосудов. Роль нейтрофилов [Текст] / Л.А. Белова // Биохимия. - 1997. - 62 (6). - С. 659-668.

2. Волчегорский, И.А. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакций организма [Текст] / И.А. Волчегорский, И.И. Долгушин, О.Л. Колесников. - Челябинск, 2000. - 167 с.

3. Гаврилов, В.Б. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови [Текст] / В.Б. Гаврилов, М.И. Мишкоруд-ная // Лабораторное дело. - 1983. - № 3. - С. 33-36.

4. Диагностика и лечение артериальной гипертензии. Российские рекомендации (третий пересмотр) [Текст] // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2008. - № 6 (приложение 2). - 32 с.

5. Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза. Российские рекомендации (V пересмотр) [Текст] // Российский кардиологический журнал. - 2012. - № 4 (приложение 1). - 32 с.

6. Захария, Е.А. Упрощённый способ определения агрегации и дезагрегации тромбоцитов [Текст] / Е.А. Захария, М.В. Кинах // Лабораторное дело. -1989. - № 1. - С. 36-38.

7. Колб, В.Г. Справочник по клинической химии [Текст] / В.Г. Колб, В.С. Камышников. - Минск : Беларусь, 1982. - 367 с.

8. Медведев, И.Н. Реологические свойства эритроцитов у больных артериальной гипертонией с дислипидемией на фоне ловастатина [Текст] / И.Н. Медведев, И.А. Скорятина // Медицинский альманах. - 2011. - № 3 (16). - С. 67-70.

9. Медведев, И.Н. Сравнительная характеристика влияния отдельных стати-нов на реологические свойства эритроцитов у больных артериальной гипертонией с дислипидемией [Текст] / И.Н. Медведев, И.А. Скорятина // Вестник РУДН. Сер. Медицина. - 2012. - № 1.- С. 58-65.

10.Чевари, С. Определение антиоксидантных параметров крови и их диагностическое значение в пожилом возрасте [Текст] / С. Чевари, Т. Андял, Я. Штренгер // Лабораторное дело. - 1991. - № 10. - С. 9-13.