УЛУЧШЕННЫЕ СПОСОБЫ ПРОИЗВОДСТВА СРЕДСТВ АДОПТИВНОЙ КЛЕТОЧНОЙ ТЕРАПИИ

1. Способ производства терапевтического средства на основе Т-клеток, включающий:
a) получение популяции клеток, которая содержит Т-клетки и антиген-презентирующие клетки (APC);
b) культивирование популяции клеток в среде для культивирования клеток, содержащей i) один или более цитокинов, ii) антитело к CD3 или его CD3-связывающий фрагмент и iii) антитело к CD28 или его CD28-связывающий фрагмент, B7-1 или его CD28-связывающий фрагмент, или B7-2 или его CD28-связывающий фрагмент, при этом культивирование активирует и стимулирует Т-клетки;
c) трансдукцию популяции активированных клеток с помощью вирусного вектора и
d) культивирование популяции клеток в ростовой среде для клеток для размножения трансдуцированных Т-клеток;
с производством тем самым терапевтического средства на основе T-клеток.
2. Способ по п. 1, где:
(a) популяцию клеток получают из периферической крови, мононуклеарных клеток периферической крови, костного мозга, ткани лимфатического узла, пуповинной крови, ткани тимуса, ткани из очага инфекции, асцитов, плеврального выпота, ткани селезенки или опухолей;
(b) Т-клетки получают из периферической крови, мононуклеарных клеток периферической крови, костного мозга, ткани лимфатического узла, пуповинной крови, ткани тимуса, ткани из очага инфекции, асцитов, плеврального выпота, ткани селезенки, опухолей или линии T-клеток;
(с) APC получают из периферической крови, мононуклеарных клеток периферической крови, костного мозга, ткани лимфатического узла, пуповинной крови, ткани тимуса, ткани из очага инфекции, асцитов, плеврального выпота, ткани селезенки или опухолей; или
(d) популяция клеток содержит мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC).
3. Способ по любому из пп. 1-2, где:
(a) сбор или получение популяции клеток включает лейкаферез;
(b) выделение популяции клеток включает осаждение;
(c) выделение популяции клеток включает осаждение, которое включает градиент FICOLL™ или PERCOLL™;
(d) выделение популяции клеток включает осаждение, которое выполняют с помощью полуавтоматической проточной центрифуги; или
(e) выделение популяции клеток включает осаждение, которое выполняют с помощью Cobe 2991 Cell Processor, Cell Saver 5+ или полуавтоматической проточной центрифуги Elutra.
4. Способ по любому из пп. 1-2, где способ дополнительно включает:
(a) промывку популяции клеток в буфере или среде для культивирования клеток;
(b) промывку популяции клеток в ростовой среде для T-клеток (TCGM), содержащей один или более цитокинов;
(c) промывку популяции клеток в ростовой среде для T-клеток (TCGM), содержащей один или более цитокинов, выбранных из группы, включающей: IL-2, IL7, IL-15, IL-9 и IL-21;
(d) промывку популяции клеток в ростовой среде для T-клеток (TCGM), содержащей IL-2; или
(e) промывку популяции клеток в ростовой среде для T-клеток (TCGM), содержащей 250 МЕ/мл IL-2.
5. Способ по п. 1, где:
(a) популяцию клеток культивируют с растворимым антителом к CD3 и растворимым антителом к CD28;
(b) популяцию клеток культивируют с растворимым антителом к CD3 при концентрации приблизительно 50 нг/мл и растворимым антителом к CD28; или
(c) популяцию клеток культивируют с растворимым антителом к CD3 и растворимым антителом к CD28 при концентрации приблизительно 50 нг/мл.
6. Способ по п. 1, где:
(a) популяцию клеток на стадии b) культивируют в течение от приблизительно 12 часов до приблизительно 48 часов перед трансдукцией;
(b) популяцию клеток на стадии b) трансдуцируют во время активации;
(c) популяцию клеток на стадии b) культивируют в течение от приблизительно 1 часа до приблизительно 12 часов перед трансдукцией;
(d) популяцию клеток на стадии b) культивируют в течение от приблизительно 16 часов до приблизительно 32 часов перед трансдукцией;
(e) популяцию клеток на стадии b) культивируют в течение по меньшей мере 18 часов перед трансдукцией;
(f) популяцию клеток на стадии b) культивируют в течение по меньшей мере 24 часов перед трансдукцией;
(g) популяцию клеток на стадии d) трансдуцируют с помощью ретровирусного вектора; или
(h) популяцию клеток на стадии d) трансдуцируют с помощью лентивирусного вектора.
8
9
9
7. Способ по п. 5 или 6, где для трансдукции 1 x 10 высеянных клеток применяют от приблизительно 1 x 10 TU до приблизительно 2 x 10 TU вирусного вектора.
8. Способ по любому из пп. 1, 2, 5, 6, где:
(a) вирусный вектор разводят до 20% объем/объем от общего объема культуры;
(b) вирусный вектор разводят до приблизительно 40% - приблизительно 50% объем/объем от общего объема культуры;
(c) популяцию клеток подвергают трансдукции в течение от приблизительно 18 до приблизительно 48 часов;
(d) популяцию клеток подвергают трансдукции в течение от приблизительно 18 до приблизительно 36 часов;
(e) популяцию клеток подвергают трансдукции в течение приблизительно 24 часов;
(f) вирусный вектор содержит полинуклеотид, кодирующий химерный антигенный рецептор.
9. Способ по п. 8, где CAR содержит
v
6
a) внеклеточный домен, который связывает антиген, выбранный из группы, включающей фолатный рецептор альфа, 5T4, αβ-интегрин, BCMA, B7-H3, B7-H6, CAIX, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD70, CD79a, CD79b, CD123, CD138, CD171, CEA, CSPG4, EGFR, семейство EGFR, в том числе ErbB2 (HER2), EGFRvIII, EGP2, EGP40, EPCAM, EphA2, EpCAM, FAP, фетальный AchR, FRα, GD2, GD3, 'глипикан-3 (GPC3), HLA-A1+MAGE1, HLA-A2+MAGE1, HLA-A3+MAGE1, HLA-A1+NY-ESO-1, HLA-A2+NY-ESO-1, HLA-A3+NY-ESO-1, IL-11Rα, IL-13Rα2, лямбда-цепь, Lewis-Y, каппа-цепь, мезотелин, Muc1, Muc16, NCAM, лиганды NKG2D, NY-ESO-1, PRAME, PSCA, PSMA, ROR1, SSX, сурвивин, TAG72, TEM и VEGFR2;
b) трансмембранный домен, полученный из полипептида, выбранного из группы, включающей CD8α; CD4, CD28, CD45, PD1 и CD152;
c) один или более внутриклеточных доменов передачи костимулирующего сигнала, выбранных из группы, включающей CD28, CD54 (ICAM), CD134 (OX40), CD137 (41BB), CD152 (CTLA4), CD273 (PD-L2), CD274 (PD-L1) и CD278 (ICOS); и
d) домен передачи сигнала CD3ζ.
10. Способ по п. 9, где:
(a) внеклеточный домен содержит антитело или антиген-связывающий фрагмент, которые связывают антиген;
(b) трансмембранный домен получен из CD8α или CD28;
(c) один или более доменов передачи костимулирующего сигнала выбраны из группы, включающей CD28, CD134 и CD137;
(d) CAR дополнительно содержит полипептид шарнирной области;
(e) CAR дополнительно содержит полипептид шарнирной области IgG1 или CD8α;
(f) CAR дополнительно содержит сигнальный пептид; или
(g) CAR дополнительно содержит сигнальный полипептид тяжелой цепи IgG1, сигнальный полипептид CD8α или сигнальный полипептид альфа-субъединицы рецептора GM-CSF человека.
11. Способ по п. 1, где:
(a) популяцию клеток на стадии d) культивируют для размножения в течение от приблизительно 5 до приблизительно 8 дней;
(b) популяцию клеток на стадии d) культивируют для размножения в течение от приблизительно 5 дней до приблизительно 8 дней в пакете для культивирования клеток;
(c) популяцию клеток на стадии d) культивируют для размножения в течение приблизительно 5 дней в пакете для культивирования клеток, а затем культивируют в течение приблизительно 3 дней в биореакторе; или
(d) популяцию клеток на стадии d) культивируют для размножения в течение от приблизительно 5 дней до приблизительно 8 дней в биореакторе.
12. Способ по п. 11, где биореактор представляет собой биореактор WAVE или биореактор GREX.
13. Способ по п. 1, где:
(a) количество Т-клеток возрастает по меньшей мере в 50 раз в ходе культивирования на стадии d);
(b) количество Т-клеток возрастает по меньшей мере в 100 раз в ходе культивирования на стадии d);
(c) количество Т-клеток возрастает по меньшей мере в 300 раз в ходе культивирования на стадии d);
(d) количество Т-клеток возрастает по меньшей мере в 400 раз в ходе культивирования на стадии d);
(e) количество Т-клеток возрастает по меньшей мере в 500 раз в ходе культивирования на стадии d); или
(f) количество Т-клеток возрастает по меньшей мере в 600 раз в ходе культивирования на стадии d).
14. Композиция, содержащая произведенные Т-клетки по любому из пп. 1-13 и физиологически приемлемый наполнитель.
15. Способ лечения новообразования у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту терапевтического средства на основе T-клеток по п. 14.