СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКОЙ И АНТИАТЕРОСКЛЕРОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ
HYPOLIPIDEMIC AND ANTIATHEROSCLEROTIC AGENT

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии.
Изобретение касается биологически активного соединения, а именно натрия тиосульфата (Natrii thiosulfas), расширяющего арсенал гиполипидемических и антиатеросклеротических средств при лечении сердечно-сосудистых заболеваний, связанных с нарушением обменных процессов. Натрия тиосульфат снижает уровень холестерина и триглицеридов в сыворотке крови и уменьшает содержание холестерина в аорте. Способность к уменьшению содержания липидов сыворотки крови свидетельствует о выраженном гиполипидемическом действии, а снижение содержания холестерина в аорте отражает антиатеросклеротическое действие тиосульфата натрия.
Ранее этот препарат описан в качестве противотоксического, противовоспалительного и антиаллергического средства (Справочник Видаль, 1999, Е-211). Синтез его прост и доступен.
Натрия тиосульфат проявляет гиполипидемическую активность на различных экспериментальных моделях дислипопротеинемии (гиперлипидемии), обладает низкой токсичностью.
Проведенный фармакологический анализ показал, что натрия тиосульфат помимо нормализации липидных показателей в крови и аорте снижает содержание холестерина и триглицеридов в печени и холестерина в надпочечниках, а также значительно уменьшает величину индекса атерогенности (показатель риска развития атеросклероза).
Доклинические испытания препарата позволяют рекомендовать его в качестве гиполипидемического и антиатеросклеротического средства при лечении сердечно-сосудистых заболеваний: гиперхолестеринемии, дислипопротеинемии атерогенного характера, атеросклерозе различной локализации.
Экспериментальные, клинические и эпидемиологические исследования свидетельствуют о связи нарушений липидного и липопротеинового обменов с развитием атеросклероза (Ат) и его тяжелых осложнений [Hansson G.K. N. Engl. J. Med. 2005; 352: 1685-1695; Бубнова М.Г., Оганов Р.Г. Терапевт, архив, 2004; 1:73-78; Шальнова С.А., Деев А.Д., Оганов Р.Г. Кардиоваскулярная терапия и профилактика, 2005; 352: 1685-1695].
Ведущей причиной развития Ат является дислипопротеинемия (ДЛП) атерогенного характера, представляющая собой стойкое, длительное повышение в крови липидов: триглицеридов (ТГ), общего холестерина (ХС) и/или ХС атерогенных липопротеинов (ЛП) низкой плотности (ЛПНП) и ЛП очень низкой плотности (ЛПОНП), а также особых ЛП(а). Липидный профиль крови больного Ат характеризуется значительным уменьшением концентрации ХС антиатерогенных ЛП высокой плотности (ЛПВП) [Климов А.Н. Мед. акад. ж. 2007; 1(7): 4-11; Нагорнев В.А. Патогенез атеросклероза. М.: СПб., 2006].
Ат - главная причина временной нетрудоспособности, инвалидности и смертности взрослого населения России [ВНОК. Российские рекомендации. Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза. М., 2004]. Ат приводит к стенозированию и обтурации коронарных артерий, опасному поражению мозговых артерий и артерий нижних конечностей.
В прогрессировании атеросклеротического процесса важную роль играет сосудистая эндотелиальная дисфункция, которая, в настоящее время, рассматривается как независимый фактор риска Ат и атеротромбоза [Сидоренко Б.А. Кремлевская медицина, 1999; 2: 51-54; Нагорнев В.А. Патогенез атеросклероза. М.: СПб., 2006].
Дислипопротеинемия (ДЛП) атерогенного характера у пациентов с Ат различной локализации определяется в липидных центрах инструментально, при этом оценивается характер липидного профиля крови; для чего используют классификацию по фенотипам, предложенную Фредриксоном: от I типа до V типа. Этой классификацией руководствуются кардиологи и терапевты при назначении гиполипидемической терапии [Fredrickson D.S., Levy R.I., Lees R.S. New Engi J. Med., 1967; 276: 34-42].
Атеросклероз (Ат) представляет собой сложный, периодически обостряющийся хронический процесс повреждения сосудов, обусловленный нарушением свойств сосудистого эндотелия, холестеринового обмена, разрастанием соединительной ткани, что приводит к формированию атеросклеротической бляшки (Ат бляшки). Ат и его осложнения - ишемическая болезнь сердца, инсульт, поражение сосудов нижних конечностей Ат продолжают оставаться наиболее частой причиной инвалидизации и смертности населения в экономически развитых странах Европы, США и особенно России [European Guidelines on Cardiovascular Disease. Eur.Heart J. 2003; 24(17): 1601-1610; NCEP. Adult Treatment Panel III Guidelines. Circulation 2004; 110: 227-239; ВНОК. Российские рекомендации. Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза. М., 2004; 36 с.].
Установлено, что атеросклерозом поражаются различные органы и системы: коронарные артерии сердца, артерии головного мозга, грудная и брюшная аорта, сонные артерии, артерии почек и нижних конечностей. Первые проявления Ат в виде липидных пятен могут возникать у человека уже в раннем возрасте. Их появление связано с местным отложением липопротеинов в интиме артерий, именно из липидных пятен в дальнейшем развиваются атеросклеротические поражения - Ат бляшки. Избыточному накоплению ЛП в интиме артерий способствует длительная повышенная концентрация ХС и ХС-содержащих атерогенных ЛП и/или низкий уровень ХС антиатерогенных ЛП высокой плотности (ЛПВП). Кроме того, в прогрессировании атеросклеротических поражений имеют значение и другие модифицируемые факторы риска развития Ат: артериальная гипертония, сахарный диабет, курение, ожирение, малоподвижный образ жизни [Марцевич С.Ю. Атеросклероз. Клиническая значимость и возможность предупреждения. М., 2005; Аронов Д.М., Ахмеджанов Н.М., Гутковская Л.А. Росс. кардиол. ж., 2006; 3(59):34-40].
На ранних этапах Ат бляшки никак не нарушают процесса кровотока и поэтому Ат не проявляется клинически. Однако возникновение атеросклеротического стеноза сосудов приводит к постепенному снижению кровотока, появлению и развитию окклюзионных атеросклеротических поражений. На поверхности Ат бляшек возникают разрывы. На поздних стадиях прогрессирования Ат наблюдаются нарушения в свертывающей системе крови: происходит адгезия тромбоцитов, образуются тромбы, внезапно закупоривается просвет сосуда. Этот процесс приводит к сердечно-сосудистым катастрофам: инфаркту миокарда, инсульту, критической ишемии артерий конечностей [Покровская Е.В., Грацианский Н.А., Ваулин Н.А., Деев А.Д. Кардиология, 2004; 7:40-45].
Важно отметить, что в инициации атерогенеза (помимо нарушений обмена липидов) большое значение имеют метаболические нарушения артериальной стенки, приводящие к ее гипоксии, увеличению проницаемости, экспрессии адгезивных, провоспалительных, ростовых факторов. Снижается синтез таких защитных субстанций как простациклин, оксид азота, гепарансульфат, а также фибринолитических и ряда других веществ [Насонов Е.А. Кардиология, 1999; 39(2): 81-85; Климов А.Н., Нагорнев В.А., Денисенко А.Д. Мед. акад. ж., 2005; 2(5): 18-32].
Инструментальное прижизненное обнаружение атеросклеротических поражений в стенках сосудов представляет собой сложную процедуру, которая осуществляется по показаниям только в специализированных центрах под контролем кардиологов и кардиохирургов. Но в реальной жизни наличие Ат чаще констатируют уже после смерти больных. Поэтому так важна своевременная постоянная терапия антиатеросклеротическими средствами.
Для профилактики и лечения Ат и его основных клинических проявлений необходима ранняя интенсивная фармакотерапия с помощью эффективных гиполипидемических и/или антиатеросклеротических средств [European guidelines on Cardiovascular Disease Prevention in Clinical Practice. Eur.Heart J. 2003; 24(17): 1601-1610; The National Cholesterol Education Program. Expert Panel of detection, evaluation and treatment of high blood cholesterol in adults. JAMA, 2001; 285: 2486-2497; ВНОК. Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза. М., 2004].
Лечение больных ДЛП и пациентов с Ат осуществляется двумя путями:
1) за счет снижения ДЛП атерогенного характера и улучшения липидного профиля крови; 2) посредством улучшения метаболизма сосудистой стенки и уменьшения содержания липидных компонентов в Ат бляшках.
В качестве гиполипидемических средств для коррекции атерогенных ДЛП в клинике используют несколько групп препаратов: желчные секвестранты (холестирамин, колестипол); препараты никотиновой кислоты (ниаспан, ниацин); фибраты (клофибрат, пробукол, гемфиброзил); статины (ловастатин, правастатин, флувастатин, симвастатин, аторвастатин и розувастатин) [С.Дж.Робинс. Коррекция липидных нарушений. Основные принципы и практическое осуществление терапевтических вмешательств. М., 2001: 108-109].
Холестирамин и колестипол снижают уровень атерогенных липопротеинов низкой плотности и ХС на 25% за счет связывания ХС в кишечнике и выделения из организма. Применение этих препаратов нарушает деятельность желудочно-кишечного тракта и печени, что вынуждает пациентов отказываться от их использования [Видаль. Лекарственные препараты в России, 1995; с.963].
Ниаспан и ниацин уменьшают на 20-35% скорость синтеза липопротеинов очень низкой плотности, содержащих большое количество триглицеридов. Побочными эффектами препаратов никотиновой кислоты являются гиперемия кожи, гиперурикемия, гипергликемия, желудочно-кишечные расстройства [Видаль. Лекарственные препараты в России, 1999; Б-772; С.Дж.Робинс. Коррекция липидных нарушений. Основные принципы и практическое осуществление терапевтических вмешательств. М., 2001: 108-109].
Клофибрат относится к первому поколению производных фибриковой кислоты. Экспериментальные и клинические исследования выявили у него ряд негативных побочных явлений (гепатомегалия, увеличение смертности больных). Клофибрат является аналогом заявляемого препарата как лекарственного средства с гиполипидемическим действием [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 13 изд-е, 1998; т.1: 456].
Пробукол используют для коррекции нарушенного липидного обмена, но он снижает концентрацию антиатерогенных липопротеинов высокой плотности. Пробукол является аналогом заявляемого препарата как лекарственного средства гиполипидемического действия [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 13 изд-е, 1998; т.1: 457].
Гемфиброзил используют для снижения уровня ТГ, общего ХС, ЛПОНП; но при приеме он вызывает сухость во рту, тошноту, рвоту, запоры, диарею [Видаль. Лекарственные препараты в России, 1995: с.371; С.Дж.Робинс. Коррекция липидных нарушений. Основные принципы и практическое осуществление терапевтических вмешательств. М., 2001]. Гемфиброзил является прототипом заявляемого препарата как лекарственного средства гиполипидемического действия [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 13 изд-е, 1998; т.1: 457].
Ловастатин, правастатин, флувастатин, симвастатин, аторвастатин и розувастатин используются для терапии ДЛП. Выраженное липидснижающее действие этих препаратов сопровождается серьезными побочными эффектами: поражение печени и почек, мозговая патология, боли в мышцах, развитие катаракты и рабдомиолиза [Law M.R., Wald N.J., Rudnicka A.R. BMJ 2003; 326(7404): 1423-1438; Кухарчук В.В., Бубнова М.Г., Кательницкая Л.И. и др. Кардиология, 2003; 5: 42-47; Olsson A.G. Rosuvastatin in dyslipidemia and coronary heart disease. Science Press, 2004; 1-77].
В качестве антиатеросклеротических средств применяют препараты рыбьего жира: максепа, эйконол и Vitrum cardio омега-3 - с высоким содержанием омега-3-полиненасыщенных жирных кислот [Мазур Н.А. Омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты и их роль в профилактике атеросклероза, 2007; 16 с.]. Эти препараты используются для снижения атеросклеротического процесса в стенке сосудов. Применение препаратов на основе рыбьего жира затруднено побочными явлениями со стороны желудочно-кишечного тракта [С.Дж.Робинс. Коррекция липидных нарушений. Основные принципы и практическое осуществление терапевтических вмешательств. М., 2001, 108-109].
Гемфиброзил, безафибрат, фенофибрат положительно влияют при прогрессировании Ат процесса, оказывая атеропротективное действие. Они оказывают побочное действие на желудочно-кишечный тракт и печень. Гемфиброзил является аналогом заявляемого соединения в качестве антиатеросклеротического средства. [Видаль. Лекарственные препараты в России, 1999; Е-194, Е-28, Е-102, Е-57, Б-358].
Симвастатин, аторвастатин и розувастатин используются для интенсивной терапии атеросклероза. Они уменьшают липидный компонент в Ат бляшках. Препараты оказывают побочное действие: поражают печень и почки, усугубляют развитие катаракты [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 13 изд-е, 1998; т.1: 458-460].
Пармидин признается специфическим препаратом для комплексного лечения Ат [Рыженков В.Е и соавт., 1976; 5: 558-559]. Он уменьшает степень атеросклеротического поражения аорты и снижает содержание ХС в Ат бляшках. Пармидин является прототипом заявляемого препарата в качестве антиатеросклеротического средства [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 13 изд-е, 1998; т.1: 448-449].
Для лечения дислипопротеинемии и атеросклероза авторами заявки предлагается натрия тиосульфат - специфический антидот, сульфосодержащее соединение, обладающее антитоксическими свойствами, которое применяется в медицинской практике при отравлении тяжелыми металлами. Оно способно ослаблять боль и реакции при лечении артритов, невралгии, аллергии [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 13 изд-е, 1998; т.2: 213]. Доклиническое изучение гиполипидемического и антиатеросклеротического действия заявляемого соединения - натрия тиосульфата проведено в соответствии с требованиями Фармакологического комитета РФ [Методические указания по изучению гиполипидемического и антиатеросклеротического действия фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному доклиническому изучению новых фармакологических веществ. М., 2000: 224-227]. Экспериментальное исследование активности этого соединения осуществлено в сравнении с известными препаратами (клофибрат, пробукол, гемфиброзил, пармидин), применяемыми в клинике [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 13 изд-е, 1998; т.1: 448; 455-456; 457].
При проверке препарата натрия тиосульфата установлено, что он достоверно снижает уровень общего ХС в сыворотке крови, а также его содержание в печени и аорте у кроликов с экспериментальным Ат. Он более значительно уменьшает содержание ХС в надпочечниках по сравнению с гемфиброзилом. Натрия тиосульфат эффективно защищает аорту кроликов от поражения Ат, также как антиатеросклеротический препарат пармидин (прототип препарата антиатеросклеротического действия), и активно снижает содержание ХС в крови, печени и надпочечниках как гиполипидемическое средство гемфиброзил (прототип препарата гиполипидемического действия).
Сущностью изобретения является то, что тиосульфат натрия активно снижает уровень липидов сыворотки крови - ХС и ТГ, а также атерогенных ЛП в опытах на животных разных видов. Найдено принципиально новое свойство натрия тиосульфата - гиполипидемическое. Кроме того, натрия тиосульфат обладает другим ценным свойством - антиатеросклеротическим. Натрия тиосульфат по выраженности гипохолестеринемического действия не уступает антиатеросклеротическому препарату пармидину и приближается к препарату гемфиброзилу. Препарат эффективен при пероральном введении. Натрия тиосульфат, проявляющий выраженное действие на модели атеросклероза у кроликов, заявляется как средство для лечения атеросклероза.
По степени выраженности гиполипидемического действия натрия тиосульфат приближается к препаратам-аналогам из группы фибратов - клофибрату и пробуколу, а также к прототипу - гемфиброзилу, но отличается от них отсутствием побочных эффектов, таких как гепатомегалия, нарушения функции печени и желудочно-кишечного тракта. Препарат эффективен при пероральном введении. Натрия тиосульфат, проявляющий выраженное действие на моделях ДЛП у разных видов животных (крысы, морские свинки, кролики), заявляется как средство для лечения дислипопротеинемии.
Аналогов в России и за рубежом препарат не имеет.
50
50
Натрия тиосульфат относится к малотоксичным соединениям. Авторам заявки не удалось определить его ЛД - dosis letalis при пероральном введении мелким лабораторным животным. Но определена доза, не вызывающая токсического действия: при пероральном введении мышам она составляет 5000 мг, крысам - 4000 мг. Введение больших доз вызывало технические трудности.
В предварительных опытах были использованы следующие дозы исследуемого препарата: 25, 100 и 250 мг/кг однократно, при пероральном введении половозрелым крысам-самцам, в условиях экспериментальных ДЛП: тритоновой ДЛП и этаноловой гипертриглицеридемии. Обнаружено, что минимальная доза натрия тиосульфата 25 мг/кг не оказывает существенного влияния на липиды крови и печени в условиях вышеперечисленных моделей. Большая доза 250 мг/кг вызывает повышенную постишемическую гиперемию печени у крыс. Доза 100 мг/кг, составляющая 1/40 часть от дозы, не оказывающей токсического действия, была оптимально эффективной, поскольку у опытных животных не наблюдалось видимых побочных явлений.
Материал и методы исследования
Изучение гиполипидемического и антиатеросклеротического действия заявляемого препарата - натрия тиосульфата на уровень ТГ и ХС у животных с экспериментальной ДЛП атерогенного характера проводили у крыс, морских свинок и кроликов, используя модели патологического состояния, в соответствии с требованиями Фармакологического комитета МЗ РФ [Методические рекомендации по экспериментальному доклиническому изучению новых фармакологических веществ. М., 2000: 224-227].
Для этого использовали следующие биохимические методики.
Определение ХС в сыворотке крови
Уровень ХС в сыворотке крови крыс и морских свинок определяли в соответствии с рекомендациями Всероссийского научного общества кардиологов (ВНОК, 2004) колориметрическим ферментативным методом (CHOD-PAP) с применением набора реагентов фирмы "Vital Diagnostics". Принцип метода основан на получении ХС из эфиров под воздействием холестеринэстеразы с последующим окислением его до холестенона и выделением перекиси водорода. Затем при действии пероксидазы образуется окрашенный продукт, концентрацию которого анализируют на спектрофотометре СФ-26.
Определение холестерина ЛПВП в сыворотке крови
Изучение содержания ХС ЛПВП в сыворотке крови крыс проводилось описанным выше методом с применением реактивов фирмы "Vital Diagnostics", при длине волны 546 нм на СФ-26, после предварительного осаждения атерогенных ЛП гепарином в присутствии ионов марганца.
Определение ТГ в сыворотке крови
Для определения ТГ в сыворотке крови крыс и морских свинок применялся стандартный набор реактивов той же фирмы. В основе унифицированного метода лежит каскад реакций расщепления ТГ, в завершении которых из 4-аминоантипирина и 4-фенола при участии перекиси водорода и пероксидазы образуется окрашенное соединение. Полученный хинонимин с максимумом поглощения 500 нм определяется фотометрически пропорционально концентрации ТГ в пробе [Wahlfeld A.W. In: Methods of enzymatic analysis. Acad. Press, NY; 1974: 1831].
Определение содержания ХС в печени
Содержание ХС осуществляли колориметрически, используя после экстракции навески печени смесью хлороформа с карбинолом реакцию Либермана-Бурхарда [Bragdon G.H. In: Lipids and steroid hormons in clinical medicine. Ph. 1960: 6-10].
Определение содержания ТГ в печени
Содержание ТГ в печени определяли по методу Нэри и Фрингс (1973), модифицированному авторами, состоящему в замене в качестве сорбента цеолитной смеси окисью алюминия [Окуневич И.В., Сапронов Н.С., Инденбом М.Л. Хим.-фарм. ж., 1999; 11: 14-16].
Определение содержания общего ХС в аорте
Содержание общего ХС осуществляли колориметрически, используя реакцию Либермана-Бурхарда после экстракции навески аорты. Аорту выделяли по всей длине до бифуркации и растирали с кварцевым песком для приготовления хлороформного экстракта [Рыженков В.Е., Хромов-Борисов Н.В., Мосина И.В., Инденбом М.Л. Фармакол. токсикол., 1979; 6: 632-635].
Определение содержания ХС в надпочечниках
Содержание ХС в надпочечниках определяли как указано выше, после гомогенизации навески ткани смесью хлороформа с карбинолом и последующей реакции Либермана-Бурхарда [Окуневич И.В., Рыженков В.Е. Пат. физиол. экспер. тер., 2002; 2: 14-18].
Результаты исследований активности заявляемого препарата - натрия тиосульфата - на экспериментальных моделях дислипопротеинемии.
Модель тритоновой гиперлипидемии у крыс
Изучение гиполипидемической активности натрия тиосульфата проводили на модели тритоновой гиперлипидемии, вызванной детергентом тритоном WR-1339 (225 мг/кг однократно внутрибрюшинно) («Serva», Швейцария). Данная модель характеризуется развитием мощной, стойкой гиперлипидемии у крыс-самцов массой 250-300 г [Shurr P.E., Shultz Y.R. Lipids 1972; 7(1): 68-74]. Тритон, являясь липоуглеводом, образует на поверхности ЛПОНП слой, препятствующий образованию энзимо-субстратного комплекса с ЛП. При этом происходит увеличение уровня ХС в 5-6 раз, а ТГ - в 10-20 раз по сравнению с содержанием этих показателей у нормолипидемических животных.
Натрия тиосульфат вводили крысам перорально в дозе 100 мг/кг двукратно (до введения и вместе с введением тритона WR-1339). Степень гиперлипидемии оценивали по уровню липидов: ХС и ТГ в сыворотке крови крыс. В качестве препарата сравнения применяли клофибрат перорально в дозе 100 мг/кг. Спустя 10 часов степень развития гиперлипидемии определяли по величине ХС и ТГ в сыворотке крови. Результаты представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы, под влиянием натрия тиосульфата наблюдается достоверное снижение повышенных в условиях тритоновой гиперлипидемии уровней ХС и ТГ на 36% и 40% соответственно. Пероральное введение клофибрата в такой же дозе 100 мг/кг вызывает такие же сдвиги: уровень ХС и ТГ снижается на 40% и 41% соответственно.
Таким образом, на одной из моделей экспериментальной дислипопротеинемии - тритоновой гиперлипидемии у крыс было показано гиполипидемическое действие натрия тиосульфата.
Модель алкогольной гипертриглицеридемии у крыс
В опытах на крысах-самцах массой 220-250 г для создания алкогольной гипертриглицеридемии использовали метод Woicicki J. [Woicicki J. Azneimittel-Forsch. 1976; 26(11): 2047-2048]. Он заключается в трехкратном введении перорально 50% раствора этанола в дозе 6 г/кг. В сыворотке крови и печени крыс значительно возрастает содержание ТГ. Исследуемое вещество - натрия тиосульфат - вводили предварительно в дозе 100 мг/кг перорально в течение 5 дней (последнее введение за 30 минут до введения этанола). В качестве эталонного использовали гемфиброзил - другой препарат из группы фибратов. Гемфиброзил применяли в тех же условиях, в дозе 50 мг/кг, перорально. Результаты данной серии опытов представлены в таблице 2.
Как видно из таблицы, в результате введения этанола в опытной группе крыс наблюдается увеличение уровня ТГ в сыворотке крови в 5,6 раза, в печени - в 3,5 раза (группа 2). Под влиянием изучаемого соединения натрия тиосульфата происходит достоверное снижение содержания ТГ в крови на 53% и в печени - на 62%. На фоне действия препарата сравнения гемфиброзила уровень ТГ сыворотки крови снижается на 55%, содержание ТГ в печени - на 66%.
Таким образом, на модели алкогольной гипертриглицеридемии у крыс обнаружено, что применение натрия тиосульфата оказывает выраженное снижающее ТГ действие.
Алиментарная дислипопротеинемия у крыс
2
Липидный и ЛП спектры крови экспериментальных животных-грызунов различаются: у кроликов ХС распределен по фракциям ЛП равномерно, у морских свинок почти весь ХС содержится в атерогенных ЛП, а у крыс, в основном, содержится в антиатерогенных ЛПВП. В связи с этим крысы более устойчивы к индукции экспериментальной ДЛП [Wilgram G.F. J.Exp.Med. 1959; 109(3): 293-309]. Для создания модели дислипопротеинемии (ДЛП) у крыс необходимо добавлять к диете, содержащей ХС, такие повреждающие агенты как тиреоидсупрессорный агент 6-метилтиоурацил (6-МТУ), натрия холат, витамин D [Thomas W.A., Hartroft W.S. Circulation, 1959; 19: 65-72].
Опыты проведены на крысах-самцах массой 230-250 г в условиях алиментарной ДЛП, характеризующейся повышенным уровнем липидов и ЛП в сыворотке крови и печени и одновременно сниженным содержанием ХС антиатерогенных ЛПВП. Эти нарушения вызывали с помощью диеты, содержащей 3% ХС, 0,12% 6-МТУ и 30% смеси животных жиров и прогретого подсолнечного масла (2:1). Длительность такой модели составляла 21 день [Окуневич И.В., Сапронов Н.С., Инденбом М.Л. и др. Хим.- фарм. ж., 1999; 11: 14-16]. Особенностью примененной диеты является то, что на ее фоне можно изучать не только гиполипидемический эффект новых соединений, но и, анализируя холестериновый индекс атерогенности, судить об их потенциальном антиатеросклеротическом действии.
Натрия тиосульфат в дозе 100 мг/кг перорально вводили в течение 21 дня на фоне специальной гиперхолестеринемической диеты (ГХС диеты). Для сравнения использовали препарат пробукол в дозе 100 мг/кг перорально, вводимый в тех же условиях. В сыворотке крови крыс определяли уровни общего ХС, ТГ и ХС ЛПВП. На основе этих показателей по формуле (ХС-ХС ЛПВП)/ХС ЛПВП рассчитывали холестериновый индекс атерогенности. В печени тестировали содержание ХС и ТГ. Полученные результаты приведены в таблице 3.
Как видно из таблицы, скармливание ГХС диеты крысам приводит к повышению уровня ХС в 2,8 раза, ХС и ТГ печени - в 6,4 и в 10,3 раза соответственно. Следует отметить, что использование в диете тиреоидсупрессорного агента 6-МТУ приводит к снижению ТГ сыворотки крови и значительному увеличению содержания ТГ в печени крыс за счет подавления функции щитовидной железы, поэтому повышение уровня ТГ авторами заявки рассматривается как положительное изменение. Под влиянием ГХС диеты также наблюдается снижение ХС ЛПВП - антиатерогенной фракции ЛП (группа 2). В этих условиях применение натрия тиосульфата приводит к отчетливому гипохолестеринемическому эффекту - на 25% снижается содержание ХС в сыворотке крови и на 45% - в печени (таблица 3, группа 3).
Величина холестеринового индекса атерогенности, рассчитанного по формуле (общ. ХС - ХС ЛПВП)/ХС ЛПВП, уменьшается почти в 2 раза по сравнению с группой крыс, получавших только ГХС диету (группы 2 и 3). В связи с этим у натрия тиосульфата предполагается наличие антиатеросклеротического действия. Важно подчеркнуть, что обнаруженное повышение ХС антиатерогенных ЛПВП под влиянием натрия тиосульфата характерно, в основном, для гиполипидемических препаратов из группы статинов и фибратов. В данном опыте у пробукола не обнаружено повышения ХС ЛПВП, так как ему свойственно снижать уровень антиатерогенных ЛПВП (группа 4).
Таким образом, на модели алиментарной дислипопротеинемии у крыс выявлено выраженное гипохолестеринемическое действие натрия тиосульфата.
Алиментарная дислипопротеинемия у морских свинок
У морских свинок, в связи с особенностями липидного профиля крови, алиментарная ГЛП индуцируется следующим образом: перорально вводится прогретая смесь 2% пищевого ХС со свиным жиром и подсолнечным маслом (2:1) в течение 15-20 дней [Sapronov N.S., Khnychenko L.K., Okunevich I.V. and Gavrovskaya L.K. Adv. Exp. Med. Biol. 2006, v.583 (Taurine Book 6): 515-521].
Результаты данной серии опытов представлены в таблице 4.
Как видно из таблицы, под влиянием ГХС-диеты наблюдается многократное повышение уровней ХС и ТГ, в 3 раза снижается концентрация ХС антиатерогенных ЛПВП. В связи с этим рассчитанный по формуле (общ. ХС-ХС ЛПВП) / ХС ЛПВП, холестериновый индекс атерогенности увеличивается в 18 раз по сравнению с нормолипидемическими животными. В этих условиях применение у опытных морских свинок натрия тиосульфата оказывает достоверное липидснижающее действие на содержание липидов крови и печени. Так, уровень ХС сыворотки крови снижается в 2,8 раза, а содержание ТГ крови - на 22%. Под влиянием натрия тиосульфата за счет его значительного гипохолестеринемического действия в 2 раза уменьшается величина холестеринового индекса атерогенности, что подтверждает наличие у данного соединения потенциальных антиатеросклеротических свойств. В результате лечения крыс тиосульфатом натрия достоверно снижается липидоз печени: содержание общего ХС и ТГ уменьшается в 1,6 раза по сравнению с группой гиперлипидемических животных (группы 2 и 3).
Таким образом, на модели алиментарной дислипопротеинемии у морских свинок выявлено выраженное гиполипидемическое действие натрия тиосульфата.
Модель экспериментального атеросклероза у кроликов
Данные об эффективности натрия тиосульфата, полученные в опытах с моделированным алиментарным Ат у кроликов для определения гиполипидемического и антиатеросклеротического действия у заявляемого препарата, представлены в таблице 5.
Как видно из таблицы, моделирование алиментарного Ат у кроликов сопровождалось созданием мощной ДЛП в крови и значительным накоплением липидов в органах: печени, надпочечниках и аорте. Так, уровень общего ХС вырос в 40 раз, ТГ - в 15 раз, при этом в 3,6 раза снижалась концентрация ХС антиатерогенных ЛПВП в сыворотке крови по сравнению с интактными животными. Наблюдался выраженный липидоз печени - содержание липидов в печени увеличилось: ХС - в 16 раз, ТГ - в 8 раз (группа 2). Накопление ХС в надпочечниках (в 1,8 раза) - органах гипофизарно-адреналовой системы - рассматривается как неблагоприятный фактор липидного обмена. В аортах контрольных кроликов произошло многократное увеличение ХС и степени поражения аорт Ат, что при визуальной оценке и анализе с помощью морфометрического исследования выражалось в значительном количестве Ат поражений как многослойного, так и диффузного характера (группа 2).
В условиях развившейся ДЛП и Ат введение натрия тиосульфата способствовало улучшению липидного профиля крови и снижению липидной инфильтрации печени, надпочечников и аорты. Так, под влиянием натрия тиосульфата уровень ХС сыворотки крови снизился в 1,5 раза, а показатель величины ХС ЛПВП повысился в 2 раза. Содержание ХС в печени и надпочечниках было ниже по сравнению с контрольными кроликами на 28,1% и 43% соответственно (группа 3). Гипохолестеринемическое и антиатеросклеротическое действие изучаемого соединения натрия тиосульфата выразилось в уменьшении липидоза аорты и степени поражения ее стенки Ат: содержание ХС аорты снизилось на 31%, а величина атеросклеротического поражения - в 3 раза по сравнению с гиперлипидемическими животными.
Обнаруженные свойства натрия тиосульфата оказались близки к таковым антиатеросклеротического препарата пармидина, у которого несмотря на умеренный характер гиполипидемического действия наблюдался выраженный защитный эффект в отношении аорты (группа 4). Что касается эффективности гиполипидемического препарата гемфиброзила, то его антиатеросклеротическое действие было выражено в несколько меньшей степени, чем у изучаемого соединения (группа 5). Важно подчеркнуть, что под влиянием гемфиброзила не наблюдалось положительного эффекта - снижения содержания ХС в надпочечниках, которое было отмечено у заявляемого препарата - натрия тиосульфата (группы 3 и 5).
Таким образом, в опытах на кроликах с алиментарным атеросклерозом было установлено гиполипидемическое и антиатеросклеротическое действие натрия тиосульфата.
Поиск новых гиполипидемических и антиатеросклеротических средств заключается в скрининге соединений, способных устранять нарушения в обмене липидов и атерогенных липопротеинов, метаболические нарушения в артериальной стенке, нормализуя ее проницаемость, снижать содержание липидного компонента в атеросклеротических бляшках и другие негативные изменения.
Анализируя приведенные результаты исследований, видно, что в экспериментах на крысах с индуцированной дислипопротеинемией выявлено выраженное гиполипидемическое действие натрия тиосульфата на липиды сыворотки крови, печени и холестерин аорты. Соединение обладает также способностью повышать сниженный уровень холестерина антиатерогенных липопротеидов высокой плотности.
В опытах на морских свинках с алиментарной дислипопротеинемией и липидозом печени и аорты показан гиполипидемический эффект натрия тиосульфата на липиды сыворотки крови, печени и ткани аорты, равный аналогичному гиполипидемическому действию препарата сравнения гемфиброзила. Натрия тиосульфат существенно снижает главный фактор атеросклероза - дислипопротеинемию атерогенного характера.
Под действием натрия тиосульфата в опытах с экспериментально вызванным алиментарным атеросклерозом у кроликов выявлено его выраженное гипохолестеринемическое действие на холестерин сыворотки крови, печени, надпочечников и аорты. Соединение способно защищать от атеросклеротического поражения стенку аорты опытных животных.
Низкая токсичность натрия тиосульфата, его эффективность при применении в небольшой дозе перорально указывают на перспективность применения этого вещества в качестве гиполипидемического и антиатеросклеротического средства для лечения дислипопротеинемии и атеросклероза.