ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫЕ БАКТЕРИИ, СТАБИЛЬНО ЭКСПРЕССИРУЮЩИЕ ИЛ-10 И ИНСУЛИН

1. Рекомбинантная молочнокислая бактерия (МКБ) для лечения диабета 1 типа (T1D), содержащая две хромосомно-интегрированные экзогенные нуклеиновые кислоты, при этом первая экзогенная нуклеиновая кислота кодирует интерлейкин-10 человека (чИЛ-10), и при этом вторая экзогенная нуклеиновая кислота кодирует проинсулин человека (hPINS).
2. Рекомбинантная МКБ по п. 1, отличающаяся тем, что указанная МКБ конститутивно экспрессирует и секретирует указанный чИЛ-10 и указанный hPINS.
3. Рекомбинантная МКБ по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанная рекомбинантная МКБ представляет собой рекомбинантную Lactococcus lactis.
4. Рекомбинантная МКБ по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что указанная первая экзогенная нуклеиновая кислота характеризуется по меньшей мере одним признаком, выбранным из группы признаков, состоящей из:
a) содержит последовательность нуклеотидов, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 2;
b) транскрипционно регулируется промотором hllA (PhllA; и
c) хромосомно интегрирована в локус thyA указанной рекомбинантной МКБ.
5. Рекомбинантная МКБ по любому из пп. 1-4, отличающаяся тем, что указанный чИЛ-10 характеризуется по меньшей мере одним признаком, выбранным из группы признаков, состоящей из:
a) экспрессируется в виде слитого белка, содержащего лидерную последовательность секреции Usp45 (SSusp45);
b) содержит замену пролина (Pro) на аланин (Ala) в положении 2 в зрелом hIL-10; и
c) содержит последовательность аминокислот, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 1.
6. Рекомбинантная МКБ по любому из пп. 1-5, отличающаяся тем, что указанная вторая экзогенная нуклеиновая кислота характеризуется по меньшей мере одним признаком, выбранным из группы признаков, состоящей из:
a) содержит последовательность нуклеотидов, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 4, и
b) вставлена в первую полицистронную экспрессионную кассету, содержащую, в порядке от 5' до 3', промотор gapB, ген gapB, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую лидерную последовательность секреции Usp45 (SSusp45), и указанную вторую экзогенную нуклеиновую кислоту, где указанная первая полицистронная экспрессионная кассета экспрессирует слитый белок hPINS, содержащий лидерную последовательность секреции Usp45 (SSusp45).
7. Рекомбинантная МКБ по п. 6, отличающаяся тем, что указанная первая полицистронная экспрессионная кассета дополнительно содержит, между указанным геном gapB и указанной второй экзогенной нуклеиновой кислотой, межгенную область, непосредственно расположенную в направлении 5' от гена rpmD.
8. Рекомбинантная МКБ по любому из пп. 1-6, отличающаяся тем, что указанный hPINS характеризуется по меньшей мере одним признаком, выбранным из группы признаков, состоящей из:
a) содержит последовательность аминокислот, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 3; и
b) экспрессируется в виде слитого белка, содержащего лидерную последовательность секреции Usp45 (SSusp45).
9. Рекомбинантная МКБ по любому из пп. 1-8, дополнительно характеризующаяся по меньшей мере одним признаком, выбранным из группы признаков, состоящей из:
a) экспрессирует экзогенную трегалоза-6-фосфат-фосфатазу;
b) конститутивно сверхэкспрессирует ген, кодирующий по меньшей мере один транспортер трегалозы;
c) не имеет активности трегалоза-6-фосфат-фосфатазы (TrePP); и
d) не имеет активности компонента IIC целлобиоза-специфической фосфотрансферазной системы (PtcC).
10. Рекомбинантная МКБ по п. 9, отличающаяся тем, что
указанная трегалоза-6-фосфат-фосфатаза представляет собой OtsB из Escherichia coli;
указанный по меньшей мере один транспортер трегалозы кодируется геном ptsI и геном ptsII;
указанная рекомбинантная МКБ содержит инактивированный эндогенный trePP, таким образом, что в указанной рекомбинантной МКБ отсутствует активность Trepp; и
указанная рекомбинантная МКБ содержит инактивированный эндогенный ptcC, таким образом, что в указанной рекомбинантной МКБ отсутствует активность PtcC.
11. Рекомбинантная МКБ по п. 3, содержащая:
a. экспрессионную кассету, хромосомно-интегрированную в локус thyA указанной рекомбинантной МКБ, при этом указанная экспрессионная кассета содержит промотор hllA (PhllA), который транскрибирует последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую лидерную последовательность секреции Usp45 (SSusp45) и указанную первую экзогенную нуклеиновую кислоту, и при этом указанный чИЛ-10 экспрессируется в виде слитого белка, содержащего указанную SSusp45;
b. первую хромосомно-интегрированную полицистронную экспрессионную кассету, содержащую, в порядке от 5' до 3', промотор gapB, ген gapB, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую лидерную последовательность секреции Usp45, и указанную вторую экзогенную нуклеиновую кислоту, при этом указанный hPINS экспрессируется в виде слитого белка, содержащего указанную SSups45;
c. вторую хромосомно-интегрированную полицистронную экспрессионную кассету, содержащую, в порядке от 5' до 3', промотор usp45, ген usp45, межгенную область, непосредственно расположенную в направлении 5' от гена rpmD, и третью экзогенную нуклеиновую кислоту, кодирующую OtsB из Escherichia coli;
d. третью полицистронную экспрессионную кассету, содержащую, в порядке от 5' до 3', промотор hllA (PhllA), и нуклеиновую кислоту, содержащую ген pstI и ген pstII;
e. инактивированный эндогенный ген trePP, где указанный ген trePP инактивирован делецией гена, таким образом, что в указанной рекомбинантной МКБ отсутствует активность Trepp; и
f. инактивированный эндогенный ген ptcC, где указанный ген ptcC инактивирован инсерцией преждевременного стоп-кодона, таким образом, что в указанной рекомбинантной МКБ отсутствует активность PtcC.
12. Фармацевтическая композиция для лечения T1D, содержащая эффективное количество рекомбинантной МКБ по любому из пп. 1-11 и фармацевтически приемлемый носитель.
13. Применение рекомбинантной МКБ по любому из пп. 1-11 или фармацевтической композиции по п. 12 при лечении диабета I типа (T1D) у нуждающегося в этом человека.
14. Применение рекомбинантной МКБ по любому из пп. 1-11 для получения медикамента для лечения диабета I типа (T1D) у нуждающегося в этом человека.
15. Способ лечения диабета 1 типа (T1D) у нуждающегося в этом человека, включающий введение указанному человеку терапевтически эффективного количества рекомбинантной МКБ по любому из пп. 1-11 или фармацевтической композиции по п. 12.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что у указанного человека имеется недавно возникший T1D.
17. Способ по п. 15, отличающийся тем, что кровь указанного человека является положительной в отношении наличия аутоантитела, выбранного из группы, состоящей из: аутоантитела к инсулину (IAA), аутоантитела к островковым клеткам, аутоантитела к декарбоксилазе глутаминовой кислоты (GAD65) и антитело ICA512.
18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что кровь указанного человека является положительной в отношении наличия указанного IAA.
19. Способ по п. 15, дополнительно включающий измерение количества аутоантитела к инсулину (IAA) в крови указанного человека.
20. Способ по п. 19, отличающийся тем, что указанное количество IAA в крови указанного человека указывает на прогрессирование T1D или на результат указанного лечения T1D.
21. Способ по п. 19, отличающийся тем, что измерение указанного количества IAA происходит:
a) до введения указанной рекомбинантной МКБ или указанной фармацевтической композиции для предсказания результата указанного лечения T1D; или
b) после введения указанной рекомбинантной МКБ или указанной фармацевтической композиции для мониторинга и оценки результата указанного лечения T1D.
22. Способ по п. 15, дополнительно включающий введение иммуномодулирующего агента указанному человеку.
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что указанный иммуномодулирующий агент представляет собой антитело к CD3.