ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ТЕЛЯТ И СПОСОБ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ
PREPARATION TO TREAT GASTROINTESTINAL DISEASES OF CALVES AND METHOD OF ITS APPLICATION

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к препаратам и способам лечения желудочно-кишечных болезней телят.
Известно использование ксилотрофных базидиомицетов в качестве продуцентов биологически активных веществ и разработки на их основе экологически чистых безотходных технологий получения эффективных лекарственных препаратов для медицины и ветеринарии, в том числе обладающих антимикробным, иммуностимулирующим действием (Wasser S.P. Medicinal mushrooms as a source of antitumor and immunomodulating polisaccharids // Appl. Microbiol. - 2002. - Vol.60. - p.258-274; Белова H.B Базидиомицеты - источники биологически активных веществ // Раст. ресурсы. - 1991. - Вып.2. - с.8-18; Chkhenkeli V.A. Some aspects of study and use of biologically active substances of wood-rotting mushroom Trametes pubescens (Shumach.) Pilat. // Mat. of XV Congress of Europen Mycologists, St. Petersburg, 2007 - p.185-186).
Наиболее близким решением, принятым за прототип, является способ лечения колибактериоза телят путем внесения препарата Леван-2, полученного методом глубинного культивирования грибов класса Basidiomycetes рода Trametes вида Trametes pubescens, в выпаиваемое молоко в дозе 30-90 мл (0,75-2,25 мл на 1 кг живой массы животного) в сутки до излечения в течение 10-14 суток (Чхенкели В.А. Биологически активные вещества базидиомицета Coriolus pubescens (Schum.: Fr.) Quel, и их использование / РАСХН. Сиб. отд-ние. ИФ ИЭВС и ДВ. - Новосибирск, 2006. - 288).
Недостатком прототипа является достаточно низкая активность препарата в отношении бактерий семейства Enterobacteriaceae и ограниченный спектр действия препарата Леван-2 на других возбудителей желудочно-кишечных заболеваний телят, а также необходимость проведения длительного лечения.
Задачей заявляемого изобретения является расширение арсенала средств и способов лечения желудочно-кишечных болезней молодняка сельскохозяйственных животных.
Задача решается тем, что препарат для лечения желудочно-кишечных болезней телят, включающий стерильную культуральную жидкость, полученную путем культивирования гриба Trametes pubescens (штамм 0663) на стандартных твердой и жидкой питательных средах, согласно изобретению, стерильная культуральная жидкость получена путем культивирования гриба Trametes pubescens (штамм 0663) на стандартных твердой и жидкой питательных средах с дополнительно включенной в них микрокристаллической целлюлозой.
Кроме того, задача решается также тем, что препарат для лечения желудочно-кишечных болезней телят согласно изобретению, содержит раствор микрокристаллической целлюлозы в количестве 2,40 г/л.
Задача решается также тем, что в способе лечения желудочно-кишечных болезней телят, включающем внесение препарата в молоко для выпаивания, согласно изобретению, вносят препарат в дозе 1,5 -2,5 мл на 1 кг живой массы животного 1 раз в сутки в течение 4-5 дней.
Получение препарата для лечения желудочно-кишечных болезней молодняка крупного рогатого скота.
Начальным этапом получения препарата является поддержание продуцента, т.е. культуры гриба Trametes pubescens (штамма 0663) на твердой питательной среде - на сусле-агаре. Посевной материал выращивают на стандартной твердой питательной среде Сабуро, в которую предварительно добавляют микрокристаллическую целлюлозу, активирующую природную метаболическую активность продуцента. Далее выращивают посевной материал на жидкой питательной среде. Для посевного материала и ферментации используется среда следующего состава (г/л):
Калий фосфорнокислый однозамещенный
1,88
Калий хлористокислый
0,94
Магний сернистокислый
0,94
Сахароза
40,0
Целлюлоза микрокристаллическая
2,40
Пептон ферментативный pH 6,0±0,2
12,50
Посевной материал выращивается в колбах Эрленмейера в шейкере-инкубаторе при 220 об./мин при температуре 28-30°C в течение 4 суток. Посевной материал вносится в ферментационную среду в количестве 5-10% по объему.
Ферментация осуществляется в течение 5-7 суток при 220 об./мин и температуре 28-30°C.
Таким образом, изменение рецептуры при культивировании продуцента, а именно внесение в питательную среду для ферментации продуцента дополнительного компонента - микрокристаллической целлюлозы способствует активизации природной метаболической активности продуцента. Это приводит к повышению эффективности препарата и расширению спектра его активности в отношении возбудителей желудочно-кишечных болезней телят.
Затем культуральную жидкость отделяют от биомассы культурального мицелия центрифугированием в течение 10 мин при 6000 об./мин, автоклавируют при 0,8 атм в течение 30 мин.
50
Полученный препарат представляет собой стерильную культуральную жидкость, получаемую путем глубинного культивирования Trametes pubescens (штамма 0663). Препарат представляет собой прозрачную жидкость с желтым оттенком и приятным запахом. Препарат малотоксичен при введении в желудок и область брюшины лабораторным животным - белым мышам и крысам. ЛД составляет 50000 мг/кг и близка к пороговой в остром опыте по общетоксическому и дисбиотическому эффектам. Местнораздражающее и аллергическое действие препарата выражено слабо. Содержание в нем солей тяжелых металлов находится на уровне следовых количеств. Остаточных количеств ядохимикатов, микотоксинов и нитрозоаминов не содержится.
Примеры применения препарата.
Пример 1. За оптимальный способ введения препарата был принят только пероральный, так как внутримышечный и подкожный способы являются неприемлемыми вследствие сильной реактогенности препарата, раздражительности, болезненной реакции на месте введения.
Для определения лечебных доз препарата при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят с симптомокомплексом диареи, преимущественно токсической диспепсии и колибактериоза было подобрано 72 теленка 1-10-дневного возраста черно-пестрой породы, которых распределили в 8 групп по 9 голов (табл.1).
Таблица 1
Группы животных
Доза препарата, мл/кг веса
Продолжительность лечения, дней
Лечебная эффективность, %
Сохранность, %
1 опыт
0,8
6-7
83,5
92,5
2 опыт
1,5
4-5
87,3-100
100,0
3 опыт
2,0
4-5
87,3-100
100,0
4 опыт
2,5
4-5
87,3-100
100,0
5 опыт
3,0
4-5
87,3-100
100,0
6 опыт
4,0
4-5
87,3-100
100,0
7 Контроль с Леваном-2
1,5
6-7
83,1
100,0
8 контроль (без лечения)
-
-
-
57,5
Первые 7 групп - опытные и 7, 8-я группа - контрольные. Телятам 6 опытных групп препарат давали один раз в сутки в следующих дозах: 0,8; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 4,0 мл на 1 кг живой массы животных до выздоровления. Препарат вносили в молоко перед выпойкой. Телята 7 группы получали препарат Леван-2 в дозе 1,5 мл на 1 кг живой массы, который вносили в молоко перед выпойкой. За телятами вели клиническое наблюдение в течение 10 дней, определяли биохимические, морфологические показатели крови, подсчитывали лейкоцитарную формулу, учитывали продолжительность болезни и сохранность. У больных телят наблюдали вялость, малоподвижность, отсутствие аппетита, усиленную перистальтику кишечника, сероватые, зернистые испражнения с пузырьками газа. При аускультации в области кишечника прослушивали переливание жидкости и прочие шумы. При пальпации стенок живота телята испытывали боль. Шерсть у телят была взъерошена и влажная, кожа промежности и в области хвоста измазана жидкими испражнениями. Определяли слабый и замедленный пульс, сердечный ритм был ослаблен, дыхание замедленное, температура тела нормальная или субфебрильная. При бактериологическом исследовании патологического материала была выделена кишечная палочка (непатогенная для мышей при их экспериментальном заражении) и другая условно-патогенная микрофлора (Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Streptococcus faecalis и др.). При вскрытии было установлено, что слизистые оболочки анемично-цианотичны, кровоизлияния отсутствовали, селезенка и лимфатические узлы бледного цвета и не увеличены.
При лечении телят препаратом в дозах 1,5-2,5 мл на 1 кг живой массы выздоровление телят наступает через 4-5 суток, при этом эффективность лечения составляет 87,3-100,0%. При уменьшении дозы препарата его лечебная эффективность снижается до 83,5%, продолжительность лечения увеличивается до 6-7 суток. В таблицах 2-4 приведены результаты биохимических, морфологических исследований крови телят всех групп, а также лейкограммы.
Данные таблиц 2-4 свидетельствуют о том, что оптимальными лечебными дозами препарата следует считать дозы 1,5-2,5 мл на 1 кг живой массы животного.
При анализе биохимических показателей телят (табл.3), получавших препарат, установлено, что уровень общего количества белка возрастал незначительно (на 3,3-5,3%), других существенных различий не отмечалось. Количество эритроцитов у телят во 1-6-группах возрастало на 17,3, гемоглобина - на 8,7-9,0% (табл.2). Содержание лейкоцитов во всех опытных группах по сравнению с контрольной группой практически не изменялось (табл.2). Более высокие дозы (>2,5 мл на 1 кг живой массы) и менее низкие (<1,5 мл на 1 кг живой массы) были недостаточно эффективными. Применение препарата до клинического выздоровления приводит не только к сокращению сроков заболевания, исключению рецидивов, а также дальнейшему интенсивному росту и развитию телят.
Пример 2. Для определения лечебных доз препарата при колибактериозе телят было подобрано 72 теленка 10-15-дневного возраста черно-пестрой породы, которых распределили в 8 групп по 9 голов (табл.5).
Таблица 5
Группы животных
Доза препарата, мл/кг веса
Продолжительность лечения, дней
Лечебная эффективность, %
Сохранность, %
1 опыт
0,8
6-7
82,1
93,5
2 опыт
1,5
4-5
87,5-100,0
100,0
3 опыт
2,0
4-5
87,5-100,0
100,0
4 опыт
2,5
4-5
87,5-100,0
100,0
5 опыт
3,0
4-5
87,5-100,0
100,0
6 опыт
4,0
4-5
87,5-100,0
100,0
7 контроль (с Леваном-2)
1,5
6-7
83,5
100,0
8 контроль (без лечения)
-
-
-
67,8
9
26
Первые 6 групп - опытные и 7, 8 группы - контрольные. Телятам опытных групп препарат давали в следующих дозах: 0,8; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 4,0 мл на 1 кг живой массы животных до выздоровления. За телятами вели клиническое наблюдение в течение 10 дней, определяли биохимические, морфологические показатели крови, подсчитывали лейкоцитарную формулу, учитывали продолжительность болезни и сохранность. У больных телят наблюдали угнетение, снижение аппетита, усиленную перистальтику кишечника, жидкий, бежевого цвета кал, частота дефекаций составляла до 7 раз в сутки, наблюдали также вялость, шаткость походки, одышку. Температура тела составляла 39,0-40,1°C, частота дыхания составляла 28-32. При бактериологическом исследовании фекалий были выделены бактерии Е.coli сероваров O и O, патогенные для белых мышей.
При лечении телят препаратом в дозах 1,5-2, 5 мл на 1 кг живой массы выздоровление телят наступает через 4-5 суток, при этом эффективность лечения составляет 87,5-100,0%. При уменьшении дозы препарата его лечебная эффективность снижается до 82,1%, продолжительность лечения увеличивается до 6-7 суток. Данные наблюдений приведены в таблицах 6-8. Данные таблиц 6-8 свидетельствуют о том, что оптимальными лечебными дозами препарата следует считать дозы 1,5-2,5 мл на 1 кг живой массы животного.
При анализе биохимических показателей телят (табл.6), получавших препарат, установлено, что уровень общего количества белка возрастал на 16,7-17,4%, других существенных различий не отмечалось. Количество эритроцитов у телят во 2-4-х группах возрастало на 11,5-14,6%, гемоглобина - на 23,5-34,7%) (табл.7). Содержание лейкоцитов во всех опытных группах по сравнению с контрольной группой снижалось на 7,2-10,0%, в основном, за счет палочкоядерных нейтрофилов и эозинофилов (табл.8). Более высокие дозы (>2,5 мл на 1 кг живой массы) и менее низкие (<1,5 мл на 1 кг живой массы) оказались недостаточно эффективными.
Пример 3. Для определения лечебных доз препарата при сальмонеллезе телят было подобрано 72 теленка 80-90-дневного возраста черно-пестрой породы, которых распределили в 8 групп по 9 голов (табл.9).
Таблица 9
Группы животных
Доза препарата, мл/кг веса
Продолжительность лечения, дней
Лечебная эффективность, %
Сохранность, %
1 опыт
0,8
6-7
84,5
100,0
2 опыт
1,5
4-5
94,8-100,0
100,0
3 опыт
2,0
4-5
94,8-100,0
100,0
4 опыт
2,5
4-5
94,8-100,0
100,0
5 опыт
3,0
4-5
94,8-100,0
100,0
6 опыт
4,0
4-5
94,8-100,0
100,0
7 контроль с Леван-2
1,5
6-7
82,3
83,6
8 контроль без лечения
64,5
У больных телят наблюдалось угнетение, снижение аппетита, температура в начале заболевания была 39,9-40,9°C, а затем у большинства снижалась до 39,1-39,5°C, фекалии выделялись с большим содержанием слизи, от бежевого до темного цвета, водянистой, кашицеобразной консистенции. При бактериологическом исследовании фекалий были выделены культуры Salmonella dublin и S.thyphymurium. Первые 6 групп - опытные и 7, 8-я группы - контрольные. Телятам опытных групп препарат давали в следующих дозах: 0,8; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 4,0 мл на 1 кг живой массы животных до выздоровления. За телятами вели клиническое наблюдение в течение 10 дней, определяли биохимические, морфологические показатели крови, подсчитывали лейкоцитарную формулу, учитывали продолжительность болезни и сохранность. При лечении телят в дозах 1,5-2,5 мл на 1 кг живой массы выздоровление телят наступает через 4-5 суток, при этом эффективность лечения составляет 94,8-100,0%. При уменьшении дозы препарата его лечебная эффективность снижается до 84,5%, продолжительность лечения увеличивается до 6-7 суток. Данные наблюдений приведены в таблицах 10-12.
Данные таблиц свидетельствуют о том, что оптимальными лечебными дозами следует считать дозы 1,5-2,5 мл на 1 кг живой массы. При анализе биохимических показателей телят, получавших препарат, установлено, что уровень общего белка возрастал на 16,9-17,3% (табл.10). Количество эритроцитов у телят во 2-4-й-группах возрастало на 8,1-10,6%, гемоглобина - на 24,8-32,7% (табл.11). Содержание лейкоцитов во всех опытных группах по сравнению с контрольной группой снижалось на 1,6-9,1% (табл.11), в основном, за счет палочкоядерных нейтрофилов и эозинофилов (табл.12). Более высокие дозы (>2,5 мл на 1 кг живой массы) и менее низкие (<1,5 мл на 1 кг живой массы) оказались неэффективными. Это связано прежде всего с тем, что препарат в дозах менее 1,5 мл на 1 кг живой массы обладает более низким антимикробным действием, а в более высоких дозы - раздражающим действием на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта.
Обоснованием курса лечения телят в течение четырех-пяти дней является средняя продолжительность желудочно-кишечных болезней телят, т.е. наиболее оптимальный период, когда происходит исчезновение клинических признаков и выздоровление животного.
Наиболее оптимальным вариантом лечения желудочно-кишечных болезней телят, вызываемых бактериями семейства Enterobacteriaceae - колибактериоза и сальмонеллеза телят, является внесение препарата в молоко при выпойке в дозах от 1,5 до 2,5 мл на 1 кг живой массы животного 1 раз в день. При внесении препарата в молоко при выпойке в дозе 1,5-2,5 мл на 1 кг живой массы телят 1 раз в сутки продолжительность лечения колибактериоза и сальмонеллеза телят составляет 4 -5 суток, эффективность лечения - 87,5-100%.
Пример 4. Научно-производственные опыты по применению препарата с лечебной целью были проведены в двух хозяйствах Иркутского района Иркутской области по согласованию с Государственной службой ветеринарии Иркутской области - на МТФ ОАО «Хомутовское» и на МТФ ГУП «ОПХ Байкало-Сибирское» СО Россельхозакадемии на 167 телятах.
Препарат вводили по описанной выше методике перорально с молоком в дозах 1,5-2,5 мл на 1 кг живой массы телят, т.е. 60-100 мл/гол. при колибактериозе и по 120-200 мл/гол. при сальмонеллезе телят, т.к. телята, больные колибактериозом, были 10-15-дневного возраста, а телята, больные сальмонеллезом - 2,5-3-месячного возраста. Препарат вводили один раз в сутки в течение 4-5 дней. Терапевтическая эффективность метода подтверждена проведенными исследованиями: из 167 телят, которых лечили препаратом, выздоровело 151 голов, что составляет 96,8% от общего числа. Из общего числа контрольных животных (165 голов), которых лечили по общепринятым в хозяйствах схемам, выздоровело 126 голов или 76,4%. Таким образом, на основании проведенных опытов были получены положительные результаты, свидетельствующие о высоком терапевтическом эффекте препарата при данном способе его применения.
Использование предлагаемого препарата и способа лечения позволяет расширить арсенал комплексных препаратов, применяемых для лечения желудочно-кишечных болезней телят, вызываемых бактериями семейства Enterobacteriaceae.