МОДИФИЦИРОВАННЫЕ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ ПОЛИПЕПТИДНЫЕ КОНСТРУКЦИИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Выделенная антигенсвязывающая полипептидная конструкция, содержащая, по меньшей мере, первый гетеродимер и второй гетеродимер, причем
первый гетеродимер содержит первую полипептидную последовательность тяжелой цепи иммуноглобулина (H1) и первую полипептидную последовательность легкой цепи иммуноглобулина (L1), а второй гетеродимер, содержит вторую полипептидную последовательность тяжелой цепи иммуноглобулина (H2), и вторую полипептидную последовательностью легкой цепи иммуноглобулина (L2), при этом, по меньшей мере, одна из H1 или L1 последовательностей первого гетеродимера отличается от соответствующей последовательности Н2 или L2 второго гетеродимера, и при этом
H
H1
каждый H1 и H2 содержит, по меньшей мере, вариабельный домен тяжелой цепи (V) и константный домен тяжелой цепи (домен C);
L
L
каждый L1 и L2 содержит, по меньшей мере, вариабельный домен легкой цепи (домен V ) и константный домен легкой цепи (домен C); и
по меньшей мере, один из H1, H2, L1 и L2 содержит, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию, причем H1 преимущественно спаривается с L1 по сравнению с L2, и Н2 преимущественно спаривается с L2 по сравнению с L1; или
H1, L1, H2 и L2 содержат множество аминокислотных модификаций, причем H1 преимущественно спаривается с L1 по сравнению с L2 и Н2 преимущественно спаривается с L2 по сравнению с L1;
причем термическая стабильность области Fab, измеренная на основе температуры плавления (Tm), по меньшей мере, одного из первого и второго гетеродимеров находится в пределах около 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10°C от Tm соответствующего гетеродимера без, по меньшей мере, одной аминокислотной модификации или множества аминокислотных модификаций.
2. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в L124, K145, D146, Q179 и S186, и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в Q124, S131, V133, Q160, S176, T178 и T180.
3. Конструкция по п. 2, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из L124R, L124E, K145M, K145T, D146N, Q179E, Q179K, S186R и S186K, и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из Q124E, S131R, S131K, V133G, Q160E, S176R, S176D, T178D, T178E и T180E.
4. Конструкция по п. 3, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L124E, K145M, K145T и Q179E или их комбинации;
L1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из S131R, S131K, V133G и S176R или их комбинации;
H2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L124R, D146N, Q179K, S186R и S186K или их комбинации; и
L2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q124E, V133G, Q160E, S176D, T178D, T178E и T180E или их комбинации.
5. Конструкция по п. 4, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L124E, K145T и Q179E;
L1 содержит аминокислотные модификации S131K, V133G и S176R;
H2 содержит аминокислотные модификации L124R и S186R; и
L2 содержит аминокислотные модификации V133G, S176D и T178D.
6. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в L124, L143, K145, D146, Q179 и S186; и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в Q124, V133, Q160, S176, T178 и T180.
7. Конструкция по п. 6, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из L124E, L124R, L143E, L143D, K145T, K145M, D146N, Q179K, S186R и S186K; и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из Q124K, Q124E, V133G, Q160K, S176R, S176D, T178E, T178K, T178R, T178D и T180E.
8. Конструкция по п. 7, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L124E, L143E, L143D, K145T и K145M или их комбинаций;
L1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q124K, V133G, Q160K, S176R, T178K и T178R или их комбинаций;
H2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L124R, D146N, Q179K, S186R и S186K или их комбинаций; и
L2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q124E, V133G, S176D, T178E, T178D и T180E или их комбинаций.
9. Конструкция по п. 8, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L124E, L143E и K145T;
L1 содержит аминокислотные модификации Q124K, V133G и S176R;
H2 содержит аминокислотные модификации L124R и Q179K; и
L2 содержит аминокислотные модификации V133G, S176D и T178E.
10. Конструкция по п. 8, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L124E, L143E и K145T;
L1 содержит аминокислотные модификации Q124K, V133G и S176R;
H2 содержит аминокислотные модификации L124R и S186R; и
L2 содержит аминокислотные модификации V133G, S176D и T178D.
11. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в Q39, L45, L124, L143, L122 и H172, и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в Q38, P44, Q124, S131, V133, N137, S174, S176 и T178.
12. Конструкция по п. 11, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из Q39E, Q39R, L45P, L122C, L124E, L124R, L143L, H172T и H172R; и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из Q38R, Q38E, P44L, Q124C, S131T, S131E, V133G, N137K, S174R, S176R, S176K, S176D, T178Y и T178D.
13. Конструкция по п. 12, отличающаяся тем, что
H1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q39E, L45P, F122C, L124E, L143F, H172T и H172R или их комбинаций;
L1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q38R, P44F, Q124C, S131T, V133G, N137K, S174R, S176R, S176K и T178Y или их комбинаций;
H2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q39R, L124R и H172R или их комбинаций; и
L2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q38E, S131E, V133G, S176D и T178D или их комбинаций.
14. Конструкция по п. 13, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации Q39E и L124E;
L1 содержит аминокислотные модификации Q38R, V133G и S176R;
H2 содержит аминокислотные модификации Q39R и L124R; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q38E, V133G и S176D.
15. Конструкция по п. 13, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L45P и L124E;
L1 содержит аминокислотные модификации P44F, V133G и S176R;
H2 содержит аминокислотную модификацию L124R; и
L2 содержит аминокислотные модификации V133G, S176D и T178D.
16. Конструкция по п. 13, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L124E и L143F;
L1 содержит аминокислотные модификации V133G и S176R;
H2 содержит аминокислотную модификацию L124R; и
L2 содержит аминокислотные модификации V133G, S176D и T178D.
17. Конструкция по п. 13, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации F122C и L124E;
L1 содержит аминокислотные модификации Q124C, V133G и S176R;
H2 содержит аминокислотную модификацию L124R; и
L2 содержит аминокислотные модификации V133G и S176D.
18. Конструкция по п. 13, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L124E и H172T;
L1 содержит аминокислотные модификации V133G, N137K, S174R и S176R;
H2 содержит аминокислотные модификации L124R и H172R; и
L2 содержит аминокислотные модификации V133G, S176D и T178D.
19. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в L124, A125, H172 и K228, и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в S121, V133, N137, S174, S176 и T178.
20. Конструкция по п. 19, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из L124E, L124R, A125S, A125R, H172R, H172T и K228D; и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из S121K, V133G, N137K, S174R, S176K, S176R, S176D и T178D.
21. Конструкция по п. 20, отличающаяся тем, что
H1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L124E, A125S, H172R и K228D или их комбинаций;
L1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из S121K, V133G и S176R или их комбинаций;
H2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L124R, A125R и H172T или их комбинаций; и
L2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из V133G, N137K, S174R, S176D и T178D или их комбинаций.
22. Конструкция по п. 21, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L124E и K228D;
L1 содержит аминокислотные модификации S121K, V133G и S176R;
H2 содержит аминокислотные модификации L124R и A125R; и
L2 содержит аминокислотные модификации V133G и S176D.
23. Конструкция по п. 21, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L124E и H172R;
L1 содержит аминокислотные модификации V133G и S176R;
H2 содержит аминокислотные модификации L124R и H172T; и
L2 содержит аминокислотные модификации V133G, S174R и S176D.
24. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в L124, A139 и V190, и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в F116, V133, L135 и S176.
25. Конструкция по п. 24, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из L124E, L124R, A139W, A139G и V190A; и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из F116A, V133G, L135V, L135W, S176R и S176D.
26. Конструкция по п. 25, отличающаяся тем, что
H1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L124E и A139W или их комбинаций;
L1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из F116A, V133G, L135V и S176R или их комбинаций;
H2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L124R, A139G и V190A или их комбинаций; и
L2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из V133G, L135W и S176D или их комбинаций.
27. Конструкция по п. 26, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L124E и A139W;
L1 содержит аминокислотные модификации F116A, V133G, L135V и S176R;
H2 содержит аминокислотные модификации L124R, A139G и V190A; и
L2 содержит аминокислотные модификации V133G, L135W и S176D.
28. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в Q39, L45, K145, H172, Q179 и S186, и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в Q38, P44, Q124, S131, Q160, T180 и C214.
29. Конструкция по п. 28, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из Q39E, Q39R, L45P, K145T, H172R, Q179E и S186R; и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из Q38R, Q38E, P44F, Q124E, S131K, Q160E, T180E и C214S.
30. Конструкция по п. 29, отличающаяся тем, что
H1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q39E, L45P, K145T, H172R и Q179E или их комбинаций;
L1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q38R, P44F и S131K или их комбинаций;
H2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q39R, H172R и S186R или их комбинаций; и
L2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q38E, Q124E, Q160E, T180E и C214S или их комбинаций.
31. Конструкция по п. 30, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации Q39E, K145T и Q179E;
L1 содержит аминокислотные модификации Q38R и S131K;
H2 содержит аминокислотные модификации Q39R и S186R; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q38E, Q124E, Q160E и T180E.
32. Конструкция по п. 30, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L45P, K145T, H172R и Q179E;
L1 содержит аминокислотные модификации P44F и S131K;
H2 содержит аминокислотные модификации H172R и S186R; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q124E, Q160E и T180E.
33. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в A139, L143, K145, Q179 и V190, и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в F116, Q124, L135, Q160, T178 и T180.
34. Конструкция по п. 33, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из A139W, A139G, L143E, K145T, Q179E, Q179K и V190A; и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из F116A, Q124R, Q124E, L135V, L135W, Q160E, T178R и T180E.
35. Конструкция по п. 34, отличающаяся тем, что
H1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из A139W, L143E, K145T и Q179E или их комбинаций;
L1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из F116A, Q124R, L135V и T178R или их комбинаций;
H2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из A139G, Q179K и V190A или их комбинаций; и
L2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q124E, L135W, Q160E и T180E или их комбинаций.
36. Конструкция по п. 35, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации A139W, L143E, K145T и Q179E;
L1 содержит аминокислотные модификации F116A, Q124R, L135V и T178R;
H2 содержит аминокислотную модификацию Q179K; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q124E, L135W, Q160E и T180E.
37. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в Q39, L143, K145, D146, H172 и Q179, и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в Q38, Q124, Q160, T178 и T180.
38. Конструкция по п. 37, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из Q39E, Q39R, L143E, K145T, D146G, H172R, Q179E и Q179K; и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из Q38R, Q38E, Q124R, Q124E, Q160K, Q160E, T178R и T180E.
39. Конструкция по п. 38, отличающаяся тем, что
H1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q39E, L143E, K145T, H172R и Q179E или их комбинаций;
L1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q38R, Q124R, Q160K и T178R или их комбинаций;
H2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q39R, H172R и Q179K или их комбинаций; и
L2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q38E, Q124E, D146G, Q160E и T180E или их комбинаций.
40. Конструкция по п. 39, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации Q39E, L143E, K145T и Q179E;
L1 содержит аминокислотные модификации Q38R, Q124R, Q160K и T178R;
H2 содержит аминокислотные модификации Q39R, H172R и Q179K; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q38E, Q124E, Q160E и T180E.
41. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в L45, L143, K145, D146, H172 и Q179, и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в Q38, P44, Q124, N137, Q160, S174, T178, T180 и C214.
42. Конструкция по п. 41, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из L45P, L143E, K145T, D146G, H172R, H172T, Q179E и Q179K; и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из Q38E, P44F, Q124R, Q124E, N137K, Q160K, Q160E, S174R, T178R, T180E и C214S.
43. Конструкция по п. 42, отличающаяся тем, что
H1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L45P, L143E, K145T, H172R и Q179E или их комбинаций;
L1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из P44F, Q124R, Q160K и T178R или их комбинаций;
H2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из D146G, H172R, H172T и Q179K или их комбинаций; и
L2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q38E, Q124E, N137K, Q160E, S174R, T180E и C214S или их комбинаций.
44. Конструкция по п. 43, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L45P, L143E и K145T;
L1 содержит аминокислотные модификации P44F, Q124R, Q160K и T178R;
H2 содержит аминокислотные модификации D146G и Q179K; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q38E, Q124E, Q160E и T180E.
45. Конструкция по п. 43, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L143E, K145T и H172R;
L1 содержит аминокислотные модификации Q124R, Q160K и T178R;
H2 содержит аминокислотные модификации H172T и Q179K; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q124E, Q160E, N137K, S174R и T180E.
46. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в L124, L143, K145 и Q179, и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в Q124, S131, V133, S176, T178 и T180.
47. Конструкция по п. 46, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из L124W, L124A, L143E, L143L, K145T, Q179E и Q179K; и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из Q124R, Q124K, Q124E, S131K, V133A, V133W, S176T, T178R, T178L, T178E и T180E.
48. Конструкция по п. 47, отличающаяся тем, что
H1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L124W, L143E, K145T и Q179E или их комбинаций;
L1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q124R, Q124K, S131K, V133A, S176T, T178R и T178L или их комбинаций;
H2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L124A, L143F и Q179K или их комбинаций; и
L2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q124E, V133W, S176T, T178L, T178E и T180E или их комбинаций.
49. Конструкция по п. 48, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L124W, L143E, K145T и Q179E;
L1 содержит аминокислотные модификации Q124R, V133A, S176T и T178R;
H2 содержит аминокислотные модификации L124A, L143F и Q179K; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q124E, V133W, S176T, T178L и T180E.
50. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в A139, L143, K145, Q179 и S186, и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в F116, Q124, V133, Q160, T178 и T180.
51. Конструкция по п. 50, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из A139C, L143E, L143D, L143R, L143K, K145T, Q179E, Q179D, Q179R, Q179K, S186K, S186R; и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из F116C, Q124R, Q124K, Q124E, V133E, V133D, Q160K, Q160E, T178R, T178K, T178E и T180E.
52. Конструкция по п. 51, отличающаяся тем, что
H1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из A139C, L143E, L143D, K145T, Q179E и Q179D или их комбинаций;
L1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из F116C, Q124R, Q124K, Q160K, T178R и T178K или их комбинаций;
H2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L143R, L143K, Q179R, Q179K, S186K и S186R или их комбинаций; и
L2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q124E, V133E, V133D, Q160E, T178E и T180E или их комбинаций.
53. Конструкция по п. 52, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации A139C, L143E, K145T и Q179E;
L1 содержит аминокислотные модификации F116C, Q124R и T178R;
H2 содержит аминокислотную модификацию Q179K; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q124E, Q160E и T180E.
54. Конструкция по п. 52, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L143E, K145T и Q179E;
L1 содержит аминокислотные модификации Q124R и T178R;
H2 содержит аминокислотную модификацию S186K; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q124E, Q160E и T178E.
55. Конструкция по п. 52, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L143E, K145T и Q179E;
L1 содержит аминокислотные модификации Q124R и T178R;
H2 содержит аминокислотную модификацию L143R; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q124E и V133E.
56. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в L124, L143, K145, D146, Q179, S186 и S188, и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в Q124, S131, V133, Q160, S176, T178 и T180.
57. Конструкция по п. 56, отличающаяся тем, что
(i) H1 и/или Н2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из L124A, L143A, L143R, L143E, L143K, K145T, D146G, Q179R, Q179E, Q179K, S186R, S186K и S188L; и
(ii) L1 и/или L2 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из Q124R, Q124E, S131E, S131T, V133Y, V133W, V133E, V133D, Q160E, Q160K, Q160M, S176L, T178R, T178E, T178L, T178Y и T180E.
58. Конструкция по п. 57, отличающаяся тем, что
H1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L143E, K145T, Q179E и S188L или их комбинаций;
L1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q124R, Q160K и T178R или их комбинаций;
H2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из L124A, L143A, L143R, L143K, D146G, Q179R, Q179K, S186R и S186K или их комбинаций; и
L2 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q124E, S131E, S131T, V133Y, V133W, V133E, V133D, Q160E, Q160M, S176L, T178E, T178F, T178Y и T180E или их комбинаций.
59. Конструкция по п. 58, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L143E, K145T, Q179E и S188L;
L1 содержит аминокислотные модификации Q124R и T178R;
H2 содержит аминокислотную модификацию S186K; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q124E, S176L и T180E.
60. Конструкция по п. 58, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L143E, K145T, Q179E и S188L;
L1 содержит аминокислотные модификации Q124R и T178R;
H2 содержит аминокислотную модификацию S186K; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q124E, S131T, T178Y и T180E.
61. Конструкция по п. 58, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L143E и K145T;
L1 содержит аминокислотные модификации Q124R, Q160K и T178R;
H2 содержит аминокислотную модификацию S186K; и
L2 содержит аминокислотную модификацию S131E.
62. Конструкция по п. 58, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации L143E и K145T;
L1 содержит аминокислотную модификацию Q124R;
H2 содержит аминокислотную модификацию L143R; и
L2 содержит аминокислотные модификации Q124E и V133E.
63. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что
(i) H1 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в F122 и C233, и
(ii) L1 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций в Q124 и C214.
64. Конструкция по п. 63, отличающаяся тем, что
(i) H1 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из F122C и C233S; и
(ii) L1 содержит, по меньшей мере, одну или множество аминокислотных модификаций, выбранных из Q124C и C214S.
65. Конструкция по п. 64, отличающаяся тем, что
H1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из F122C и C233S или их комбинаций;
L1 содержит аминокислотные модификации, выбранные из группы, состоящей из Q124C и C214S или их комбинаций;
Н2 содержит немодифицированную аминокислотную последовательность или аминокислотную последовательность дикого типа; и
L2 содержит немодифицированную аминокислотную последовательность или аминокислотную последовательность дикого типа.
66. Конструкция по п. 65, отличающаяся тем, что:
H1 содержит аминокислотные модификации F122C и C233S;
L1 содержит аминокислотные модификации Q124C и C214S;
Н2 содержит немодифицированную аминокислотную последовательность или аминокислотную последовательность дикого типа; и
L2 содержит немодифицированную аминокислотную последовательность или аминокислотную последовательность дикого типа.
67. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что H1 спаривается преимущественно с L1 по сравнению с L2, и Н2 спаривается преимущественно с L2 по сравнению с L1, в случае если H1, H2, L1 и L2 коэкспрессируются в клетке или клетке млекопитающего, или в случае если H1, H2 , L1 и L2 коэкспрессируются в бесклеточной системе экспрессии, или в случае если H1, H2, L1 и L2 получают совместно, или в случае если H1, H2, L1 и L2 получают совместно с помощью окислительно-восстановительного способа получения.
68. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что по меньшей мере, одна из H1, H2, L1 и L2 содержит, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию домена VH и/или VL и/или, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию домена CH1 и/или CL таким образом, что H1 спаривается преимущественно с L1 по сравнению с L2, и/или Н2 спаривается преимущественно с L2 по сравнению с L1.
69. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что если H1 содержит, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию в домене CH1, то, по меньшей мере, один из L1 и L2 содержит, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию в домене CL; и/или, если H1 содержит, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию в домене VH, то, по меньшей мере, один из L1 и L2 содержит, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию в домене VL; или причем если H2 содержит, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию в домене CH1, то, по меньшей мере, один из L1 и L2 содержит, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию в домене CL; и/или, если H2 содержит, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию в домене VH, то, по меньшей мере, один из L1 и L2 содержит, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию в домене VL.
70. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что H1, L1, H2 и/или L2 содержат, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных мутаций в области Fab.
71. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что, по меньшей мере, одна из H1, H2, L1 и L2 содержит, по меньшей мере, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных модификаций, по меньшей мере, одного константного домена и/или, по меньшей мере, одного вариабельного домена.
72. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что в случае если обе L1 и L2 коэкспрессируются с, по меньшей мере, одной из H1 и H2, значение относительного спаривания, по меньшей мере, одной из пар гетеродимера Н1-L1 и Н2-L2 по отношению к соответствующей паре гетеродимера H1-L2 или Н2-L1 составляет больше, чем 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99 %, и в которой значение относительного спаривания модифицированной пары гетеродимеров H1-L1 или Н2-L2 больше, чем соответствующее значение относительного спаривания, наблюдаемого в соответствующей паре гетеродимера Н1-L1 или Н2-L2 без, по меньшей мере, одной аминокислотной модификации.
73. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что термическая стабильность области Fab, по меньшей мере, одного из первого и второго гетеродимеров находится в пределах около 0, 1, 2 или 3° C от Tm соответствующего гетеродимера без, по меньшей мере, одной аминокислотной модификации.
74. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что аффинность каждого гетеродимера к антигену, с которым он связывается, находится в пределах около 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50-кратного значения аффинности соответствующего немодифицированного гетеродимера по отношению к тому же антигену, как измерено с помощью поверхностного плазмонного резонанса (SPR) или FACS.
75. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что,
по меньшей мере, одна из H1 и L1 содержит, по меньшей мере, один домен, содержащий, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию, что приводит к большей стерической комплементарности аминокислот, в случае если H1 спаривается с L1 по сравнению с L2; или
причем, по меньшей мере, одна из H2 и L2 содержит, по меньшей мере, один домен, содержащий, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию, что приводит к большей стерической комплементарности аминокислот, в случае если H2 спаривается с L2 по сравнению с L1; или
при этом, по меньшей мере, одна из H1 и L1 содержит, по меньшей мере, один домен, содержащий, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию, что приводит к большей электростатической комплементарности между заряженными аминокислотами, в случае если H1 спаривается с L1 по сравнению с L2; или
при этом, по меньшей мере, одна из H2 и L2 содержит, по меньшей мере, один домен, содержащий, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию, что приводит к большей электростатической комплементарности между заряженными аминокислотами, в случае если H2 спаривается с L2 по сравнению с L1; или
при этом, по меньшей мере, одна из H1 и L1 содержит, по меньшей мере, один домен, содержащий, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию, что приводит к большей стерической и электростатической комплементарности аминокислот, в случае если H1 спаривается с L1 по сравнению с L2; или
при этом, по меньшей мере, одна из H2 и L2 содержит, по меньшей мере, один домен, содержащий, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию, что приводит к большей стерической и электростатической комплементарности аминокислот, в случае если H2 спаривается с L2 по сравнению с L1; или
при этом, по меньшей мере, одна из H1 и L1 содержит, по меньшей мере, один домен, содержащий, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию, что приводит к ковалентной связи между H1 и L1; или
при этом, по меньшей мере, одна из H2 и L2 содержит, по меньшей мере, один домен, содержащий, по меньшей мере, одну аминокислотную модификацию, что приводит к ковалентной связи между H2 и L2.
76. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что H1, H2, L1 и L2 содержат множество аминокислотных модификаций, выбранных из группы, состоящей из наборов конструкции уникального идентификатора, проиллюстрированных в Таблицах 5 – 6, 15 – 27 или 28a – 28c.
77. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что дополнительно содержит Fc, содержащий, первую последовательность CH3 и вторую последовательность CH3, причем первая последовательность CH3 спарена, с помощью или без помощи одного или более линкеров, с первым гетеродимером, а вторая последовательность CH3 спарена, с помощью или без помощи одного или более линкеров, со вторым гетеродимером.
78. Конструкция по п. 77, отличающаяся тем, что Fc представляет собой человеческий Fc, Fc человеческого IgG1, Fc человеческого IgA, Fc человеческого IgG, Fc человеческого IgD, Fc человеческого IgE, Fc человеческого IgM, Fc человеческого IgG2, Fc человеческого IgG3 или Fc человеческого IgG4.
79. Конструкция по п. 77 или 78, отличающаяся тем, что Fc представляет собой гетеродимерный Fc.
80. Конструкция по пп. 77-79, отличающаяся тем, что Fc содержит одну или более модификаций в, по меньшей мере, одной из последовательностей CH3.
81. Конструкция по любому из пп. 77-80, отличающаяся тем, что температура плавления (Tm) димеризованных последовательностей СН3, как измерено с помощью DSF, составляет около 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 77,5, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84 или 85 ° C, или выше.
82. Конструкция по любому из пп. 77-81, отличающаяся тем, что Fc представляет собой гетеродимер, образованный с чистотой более чем около 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99 % при получении; или в которой Fc представляет собой гетеродимер, образованный с чистотой более чем около 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99 % при экспрессии или при экспрессии посредством одной клетки.
83. Конструкция по любому из пп. 77-82, отличающаяся тем, что Fc содержит одну или более модификаций, по меньшей мере, в одной из последовательностей CH3, которые способствуют образованию гетеродимерного Fc со стабильностью, сравнимой со стабильностью гомодимерного Fc дикого типа.
84. Конструкция по любому из пп. 78-84, отличающаяся тем, что Fc содержит:
i) гетеродимерный Fc IgG1, имеющий модификации L351Y_F405A_Y407V в первом полипептиде Fc и модификации T366L_K392M_T394W во втором полипептиде Fc;
ii) гетеродимерный Fc IgG1, имеющий модификации L351Y_F405A_Y407V в первом полипептиде Fc и модификации T366L_K392L_T394W во втором полипептиде Fc;
iii) гетеродимерный Fc IgG1, имеющий модификации T350V_L351Y_F405A_Y407V в первом полипептиде Fc и модификации T350V_T366L_K392L_T394W во второй полипептиде Fc;
iv) гетеродимерный Fc IgG1, имеющий модификации T350V_L351Y_F405A_Y407V в первом полипептиде Fc и модификации T350V_T366L_K392M_T394W во втором полипептиде Fc; или
v) гетеродимерный Fc IgG1, имеющий модификации T350V_L351Y_S400E_F405A_Y407V в первом полипептиде Fc и модификации T350V_T366L_N390R_K392M_T394W во втором полипептиде Fc;
85. Конструкция по любому из пп. 77-84, отличающаяся тем, что Fc дополнительно содержит, по меньшей мере, одну последовательность CH2.
86. Конструкция по п. 85, отличающаяся тем, что последовательность(-и) CH2 Fc содержит одну или более модификаций.
87. Конструкция по любому из пп. 77-86, отличающаяся тем, что Fc содержит одну или более модификаций для содействия избирательному связыванию Fc-гамма-рецепторов.
88. Конструкция по любому из пп. 77-87, отличающаяся тем, что Fc спарен с гетеродимерами с помощью одного или более линкеров, или в которой Fc спарен с H1 и H2 с помощью одного или более линкеров.
89. Конструкция по п. 88, отличающаяся тем, что один или более линкеров представляют собой один или более полипептидных линкеров.
90. Конструкция по п. 88, отличающаяся тем, что один или более линкеров содержит одну или более шарнирных областей антитела.
91. Конструкция по п. 88, отличающаяся тем, что один или более линкеров содержит одну или более шарнирных областей IgG1.
92. Конструкция по любому из пп. 88-91, отличающаяся тем, что один или более линкеров содержат одну или более модификаций.
93. Конструкция по п. 92, отличающаяся тем, что одна или более модификаций содействуют избирательному связыванию Fc-гамма-рецепторов.
94. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что, по меньшей мере, одна аминокислотная модификация представляет собой, по меньшей мере, одну аминокислотную мутацию или в которой, по меньшей мере, одна аминокислотная модификация представляет собой, по меньшей мере, одну аминокислотную замену.
95. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что каждая из последовательностей H1, H2, L1 и L2 является человеческой последовательностью.
96. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что конструкция является мультиспецифической или биспецифической.
97. Конструкция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что конструкция является мультивалентной или бивалентной.
98. Выделенный полинуклеотид или набор выделенных полинуклеотидов, содержащих по меньшей мере одну последовательность, которая кодирует конструкцию по любому из предшествующих пунктов.
99. Выделенный полинуклеотид или набор выделенных полинуклеотидов по п. 98, отличающийся тем, что полинуклеотид или набор полинуклеотидов представляет собой кДНК.
100. Вектор или набор векторов, содержащих один или более полинуклеотидов или наборов полинуклеотидов по п. 98 или 99.
101. Вектор или набор векторов по п. 100, выбранные из группы, состоящей из плазмиды, мультицистронного вектора, вирусного вектор, неэписомального вектора млекопитающих, вектора экспрессии и рекомбинантного вектора экспрессии.
102. Выделенная клетка, содержащая полинуклеотид или набор полинуклеотидов по п. 98 или п. 99, или вектор или набор векторов по п. 100 или 101.
103. Выделенная клетка по п. 102, отличающаяся тем, что клетка представляет собой дрожжевую клетку, бактериальную клетку, гибридому, клетку яичника китайского хомячка (СНО) или клетку HEK293.
104. Фармацевтическая композиция, содержащая конструкцию по любому из предшествующих пунктов и фармацевтически приемлемый носитель.
105. Фармацевтическая композиция по п. 104, дополнительно содержащая одно или более из веществ, выбранных из группы, состоящей из буфера, антиоксиданта, молекулы с низкой молекулярной массой, лекарственного средства, белка, аминокислоты, углевода, липида, хелатирующего агента, стабилизатора и наполнителя.
106. Использование конструкции по любому из пп. 1-96 или фармацевтической композиции по п. 104 или 105 для лечения заболевания или нарушения у субъекта, или в производстве лекарственного средства.
107. Способ лечения субъекта, имеющего заболевание или нарушение, включающий введение субъекту конструкции по любому из пп. 1-96 или фармацевтической композиции по п. 104 или 105.
108. Способ получения конструкции по любому из пп. 1-96 из культуры клетки-хозяина, причем способ включает стадии:
(а) получения культуры клетки-хозяина, содержащей, по меньшей мере, одну клетку-хозяина, содержащую одну или более последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих конструкцию; и
(b) выделения конструкции из культуры клетки-хозяина.
109. Способ получения конструкции по любому из пп. 1-96, включающий стадии:
(a) получения H1, L1, H2 и L2;
(b) позволения H1 спариваться преимущественно с L1 по сравнению с L2 и Н2 спариваться преимущественно с L2 по сравнению с L1; и
(с) получения конструкции.
110. Способ получения конструкции по любому из пп. 1-96, включающий:
a.  Получение полинуклеотида или набора полинуклеотидов, кодирующих, по меньшей мере, одну конструкцию;
b.  Определение оптимальных соотношений каждого из полинуклеотидов или набора полинуклеотидов для введения, по меньшей мере, в одну клетку-хозяина, причем оптимальные соотношения определяются путем оценки количества пар гетеродимеров Н1-L1 и Н2-L2, образующихся при экспрессии H1, L1, Н2 и L2 по сравнению с неправильно спаренными парами гетеродимеров H1-L2 и Н2-L1, образующихся при экспрессии H1, L1, H2 и L2;
c.  Выбор предпочтительного оптимального соотношения, причем трансфекция, по меньшей мере, одной клетки-хозяина с предпочтительным оптимальным соотношением полинуклеотида или набора полинуклеотидов приводит к экспрессии конструкции;
d.  Трансфекцию, по меньшей мере, одной клетки-хозяина с оптимальным соотношением полинуклеотида или набора полинуклеотидов; и
e.  Культивирование, по меньшей мере, одной клетки-хозяина для экспрессии конструкции.
111. Способ по п. 110, отличающийся тем, что выбор оптимального соотношения оценивается путем трансфекции в системе временной трансфекции.
112. Способ по п. 110 или 111, отличающийся тем, что трансфекция, по меньшей мере, одной клетки-хозяина с предпочтительным оптимальным соотношением полинуклеотида или набора полинуклеотидов приводит к оптимальной экспрессии конструкции.
113. Способ по любому из пп. 110-112, отличающийся тем, что конструкция содержит Fc, содержащий, по меньшей мере, две последовательности CH3, причем Fc спарен с помощью или без помощи одного или более линкеров, с первым гетеродимером и вторым гетеродимером.
114. Способ по п. 113, отличающийся тем, что Fc представляет собой гетеродимер, необязательно содержащий одну или несколько аминокислотных модификаций.
115. Машиночитаемый носитель данных, хранящий
данные, представляющие комплементарные мутации в первом гетеродимере, содержащем первую полипептидную последовательность тяжелой цепи иммуноглобулина (H1) и первую полипептидную последовательность легкой цепи иммуноглобулина (L1); и второй гетеродимер, содержащий вторую полипептидную последовательность тяжелой цепи иммуноглобулина (H2) и вторую полипептидную последовательность легкой цепи иммуноглобулина (L2), причем H1 и H2 каждый содержит по меньшей мере вариабельный домен тяжелой цепи (домен VH) и константный домен тяжелой цепи (домен CH1); при этом L1 и L2 каждый содержит по меньшей мере вариабельный домен легкой цепи (домен VL) и константный домен легкой цепи (домен CL), и при этом набор данных комплементарных мутаций содержит данные, представляющие мутации, перечисленные в Таблицах 4 – 6, 15 – 27, 28a – 28c, или множество этих мутаций.
116. Способ получения биспецифической антигенсвязывающей полипептидной конструкции, в котором указанная биспецифическая конструкция, содержит первый гетеродимер, содержащий первую полипептидную последовательность тяжелой цепи иммуноглобулина (H1) и первую полипептидную последовательность легкой цепи иммуноглобулина (L1) из первого моноспецифического антигенсвязывающего полипептида; и второй гетеродимер, содержащий вторую полипептидную последовательность тяжелой цепи иммуноглобулина (H2) и вторую полипептидную последовательность легкой цепи иммуноглобулина (L2) из второго моноспецифического антигенсвязывающего полипептида, причем каждая из H1 и H2 содержит, по меньшей мере, вариабельный домен тяжелой цепи (домен VH) и константный домен тяжелой цепи (домен CH1); причем каждая из L1 и L2 содержит, по меньшей мере, вариабельный домен легкой цепи (домен VL) и константный домен легкой цепи (домен CL), при этом способ включает:
a. введение одной или более комплементарных мутаций из набора данных по п. 115 в первый гетеродимер и/или второй гетеродимер; и
b. коэкспрессию первого гетеродимера и второго гетеродимера, в по меньшей мере, одной клетке-хозяине для получения продукта экспрессии, содержащего биспецифическую конструкцию.
117. Способ по п. 116, дополнительно включающий этап определения количества биспецифической конструкции в продукте экспрессии по отношению к другим полипептидным продуктам для выбора предпочтительного подмножества комплементарных мутаций.
118. Способ по п. 116 или 117, отличающийся тем, что биспецифическая конструкция производится с чистотой более 70 % по сравнению с другими полипептидными продуктами.
119. Способ по любому из пп. 116-118, дополнительно включающий этап добавления дополнительных аминокислотных модификаций, к по меньшей мере, одной из H1, H2, L1 или L2 для увеличения чистоты биспецифической конструкции по сравнению с другими полипептидными продуктами.
120. Способ по любому из пп. 116-119, отличающийся тем, что конструкция содержит Fc, содержащий, по меньшей мере, две последовательности CH3, причем Fc спарен с помощью или без помощи одного или более линкеров, с первым гетеродимером и вторым гетеродимером.
121. Способ по п. 120, отличающийся тем, что Fc представляет собой гетеродимер, необязательно содержащий одну или более аминокислотных модификаций.
122. Способ по любому из пп. 116-121, отличающийся тем, что антигенсвязывающий полипептид представляет собой антитело, одноцепочечное моноклональное антитело, Fab или одноцепочечный Fab
123. Способ получения выделенной антигенсвязывающей полипептидной конструкции по любому из пп. 1-96, включающий экспрессию H1, H2, L1 и L2 в, по меньшей мере, одной системе экспрессии для получения продукта экспрессии; выявление продукта экспрессии; и выбор системы экспрессии, в которой более чем 90 % продукта экспрессии является выделенной антигенсвязывающей полипептидной конструкцией.
124. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что аминокислотные модификации выбраны из конструкций SMCA, соответствующих уникальным идентификаторам
9561-9095_1, 9561-9095_2, при этом HI содержит L124W, L143E, K145T и Q179E, LI содержит Q124R, V133A, S176T и T178R, H2 содержит L124A, L143F и Q179K, и L2 содержит Q124E, V133W, S176T, T178L и T180E;
9121-9373_1, 9121-9373_2, при этом HI содержит L124E и H172T, LI содержит V133G, N137K, S174R и S176R, H2 содержит L124R и H172R, и L2 содержит V133G, S176D и T178D;
9116-9349 1, 9116-9349 2, при этом HI содержит L124E и A139W, LI содержит F116A, V133G, L135V и S176R, H2 содержит L124R, A139G и VI90A, и L2 содержит V133G, L135W и S176D;
9134-9521_1, 9134-9521_2, при этом HI содержит L124E, K145T и Q179E, LI содержит S131K, V133G и S176R, H2 содержит L124R и S186R, и L2 содержит V133G, S176D и T178D;
9286-9402_l, 9286-9402_2, при этом HI содержит L124E, L143E и K145T, LI содержит Q124K, V133G и S176R, H2 содержит L124R и Q179K, и L2 содержит V133G, S176D и T178E;
9667-9830 1, 9667-9830 2, при этом HI содержит L143E, K145T и Q179E, LI содержит Q124R и T178R, H2 содержит S186K, и L2 содержит Q124E, Q160E и T178E;
9696-9848 1, 9696-9848 2, при этом HI содержит L143E, K145T, Q179E и S188L, LI содержит Q124R и T178R, H2 содержит S186K, и L2 содержит Q124E, S176L и T180E;
9060-9756_l, 9060-9756_2, при этом HI содержит A139W, L143E, K145T и Q179E, LI содержит F116A, Q124R, L135V и T178R, H2 содержит Q179K, и L2 содержит Q124E, L135W, Q160E и T180E;
9682-9740_l, 9682-9740_2, при этом HI содержит L143E, K145T и Q179E, LI содержит Q124Rи T178R, H2 содержит L143R, и L2 содержит Q124E и V133E;
9049-9759_1, 9049-9759_2, при этом HI содержит A139C, L143E, K145T и Q179E, LI содержит F116C, Q124Rи T178R, H2 содержит Q179K, и L2 содержит Q124E, Q160E и T180E; и
9820-9823_l, 9820-9823_2 при этом HI содержит Q39E, L143E, K145T и Q179E, LI содержит Q38R, Q124R, Q160K и T178R, H2 содержит Q39R, H172R и Q179K, и L2 содержит Q38E, Q124E, Q160E и T180E, из Таблицы 35a.
125. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что аминокислотные модификации выбраны из конструкций SMCA, соответствующих уникальным идентификаторам
9327-6054 1, при этом HI содержит L124E и L143F, LI содержит V133Gи S176R, H2 содержит L124R, и L2 содержит V133G, S176D и T178D;
9815-9825 1, 9815-9825 2, при этом HI содержит Q39E и L124E, LI содержит Q38R, V133Gи S176R, H2 содержит Q39Rи L124R, и L2 содержит Q38E, V133G и S176D;
9587-9735_l, 9587-9735_2, при этом HI содержит L143E и K145T, LI содержит Q124R, H2 содержит L143R, и L2 содержит Q124E и VI33E;
3522_1, 3522_2, при этом HI содержит L45P, L143E и K145T, LI содержит P44F, Q124R, Q160K и T178R, H2 содержит D146G и Q179K, и L2 содержит Q124E, Q160E и T180E; и
3519 1, 3519 2, при этом HI содержит L45P, K145T, H172Rи Q179E, LI содержит P44F и S131K, H2 содержит H172R и S186R, и L2 содержит Q124E, Q160E и T180E, из Таблицы 35b.
126. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что аминокислотные модификации выбраны из конструкций SMCA, соответствующих уникальным идентификаторам
9060-9756, при этом HI содержит A139W, L143E, K145T и Q179E, LI содержит FI 16A, Q124R, L135V и T178R, H2 содержит Q179K, и L2 содержит Q124E, L135W, Q160E и T180E;
9820-9823, при этом HI содержит Q39E, L143E, K145T и Q179E, LI содержит Q38R, Q124R, Q160K и T178R, H2 содержит Q39R, H172R и Q179K, и L2 содержит Q38E, Q124E, Q160E и T180E,
3519, при этом HI содержит L45P, K145T, H172R и Q179E, LI содержит P44F и S131K, H2 содержит H172R и S186R, и L2 содержит Q124E, Q160E и T180E,
9049-9759, при этом HI содержит A139C, L143E, K145T и Q179E, LI содержит FI 16C, Q124R и T178R, H2 содержит Q179K, и L2 содержит Q124E, Q160E и T180E;
3522, при этом HI содержит L45P, L143E и K145T, LI содержит P44F, Q124R, Q160K и T178R, H2 содержит D146G и Q179K, и L2 содержит Q124E, Q160E и T180E;
9696-9848, при этом HI содержит L143E, K145T, Q179E и S188L, LI содержит Q124Rи T178R, H2 содержит S186K, и L2 содержит Q124E, S176L и T180E;
9692-9846, при этом HI содержит L143E, K145T, Q179E и S188L, LI содержит Q124Rи T178R, H2 содержит S186K, и L2 содержит Q124E, SI3IT, T178Y и T180E;
9986-9978, при этом HI содержит L143E и K145T, LI содержит Q124R, Q160K и T178R, H2 содержит S186K, и L2 содержит S131E, и
9667-9830, при этом HI содержит L143E, K145T и Q179E, LI содержит Q124Rи T178R, H2 содержит S186K, и L2 содержит Q124E, Q160E и T178E.
127. Конструкция по п. 1, отличающаяся тем, что аминокислотные модификации являются выбранными из конструкций SMCA, соответствующих уникальным идентификаторам
9587-9735, при этом HI содержит L143E и K145T, LI содержит Q124R, H2 содержит L143R, и L2 содержит Q124E и V133E;
9561-9095, при этом HI содержит L124W, L143E, K145T, и Q179E, LI содержит Q124R, V133A, S176T, и T178R, H2 содержит L124A, L143L, и Q179K, и L2 содержит Q124E, V133W, S176T, T178L, и T180E;
9611-9077, при этом HI содержит L143E, K145T и H172R, LI содержит Q124R, Q160K и T178R, H2 содержит H172T и Q179K, и L2 содержит Q124E, N137K, Q160E, S174Rи T180E;
9168-9342, при этом HI содержит L124E и K228D, LI содержит S121K, V133G и S176R, H2 содержит L124R и A125R, и L2 содержит V133G и S176D;
9164-9555, при этом HI содержит L124E, K145T и Q179E, LI содержит S131R, V133G и S176R, H2 содержит L124R и S186R, и L2 содержит V133G, S176D и T180E;
9279-9518, при этом HI содержит L124E, L143E и K145T, LI содержит Q124K, V133G и S176R, H2 содержит L124R и S186R, и L2 содержит V133G, S176D и T178D;
9290-9432, при этом HI содержит L124E, L143E и K145T, LI содержит Q124K, V133G и S176R, H2 содержит L124R и Q179K, и L2 содержит V133G, S176D и T180E;
9142-9414, при этом HI содержит L124E, K145T и Q179E, LI содержит S131K, V133G и S176R, H2 содержит L124R и Q179K, и L2 содержит V133G, S176D и T178E;
9060-9756, при этом HI содержит A139W, L143E, K145T и Q179E, LI содержит L116A, Q124R, LI35V и T178R, H2 содержит Q179K, и L2 содержит Q124E, L135W, Q160E и T180E;
9121-9373, при этом HI содержит L124E и H172T, LI содержит V133G, N137K, S174R, и S176R, H2 содержит L124R и H172R, и L2 содержит V133G, S176D, и T178D;
9066-9335, при этом HI содержит L122C и L124E, LI содержит Q124C, V133Gи S176R, H2 содержит L124R, и L2 содержит V133G и S176D;
9820-9823, при этом HI содержит Q39E, L143E, K145T и Q179E, LI содержит Q38R, Q124R, Q160K и T178R, H2 содержит Q39R, H172R и Q179K, и L2 содержит Q38E, Q124E, Q160E и T180E;
9814-9828, при этом HI содержит Q39E, K145T и Q179E, LI содержит Q38R и S131K, H2 содержит Q39R и S186R, и L2 содержит Q38E, Q124E, Q160E и T180E;
9696-9848, при этом HI содержит L143E, K145T, Q179E и S188L, LI содержит Q124R и T178R, H2 содержит S186K, и L2 содержит Q124E, S176L и T180E;
9667-9830, при этом HI содержит L143E, K145T и Q179E, LI содержит Q124R и T178R, H2 содержит S186K, и L2 содержит Q124E, Q160E и T178E;
9986-9978, при этом HI содержит L143E и K145T, LI содержит Q124R, Q160K и T178R, H2 содержит S186K, и L2 содержит S131E;
3522, при этом HI содержит L45P, L143E и K145T, LI содержит P44L, Q124R, Q160K и T178R, H2 содержит D146G и Q179K, и L2 содержит Q124E, Q160E и T180E, и
3519, при этом HI содержит L45P, K145T, H172R и Q179E, LI содержит P44L и S131K, H2 содержит H172R и S186R, и L2 содержит Q124E, Q160E и T180E.