АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ СПОСОБНОСТЬЮ СВЯЗЫВАТЬСЯ С CD3 И CD137, НО НЕ ОДНОВРЕМЕННО

1. Антигенсвязывающая молекула, содержащая:
-6
3
вариабельную область антитела, которая обладает способностью связываться с CD3 и CD137, но не связывается с CD3 и CD137 одновременно; где связывание антигенсвязывающей молекулы с CD137 характеризуется константной равновесия диссоциации (KD), составляющей менее чем 5×10 М, предпочтительно, измеренной с помощью SPR в следующих условиях: 37°С, рН 7,4, 20 мМ ACES, 150 мМ NaCl, 0,05% Твин 20, 0,005% NaN;
антигенсвязывающая молекула иммобилизована на сенсорном СМ4-чипе, антиген служит в качестве аналита.
2. Антигенсвязывающая молекула по п. 1, где антигенсвязывающая молекула связывается
(а) по меньшей мере с одним, двумя, тремя или большим количеством аминокислотных остатков внеклеточного домена CD3-эпсилон (CD3-эпсилон), который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 159; и/или
(б) по меньшей мере с одним, двумя, тремя или большим количеством аминокислотных остатков N-концевой области CD137, которая содержит аминокислотную последовательность  (SEQ ID NO: 152), предпочтительно  и/или  человеческого CD137.
3. Антигенсвязывающая молекула по одному из пп. 1 или 2, в которой вариабельная область антитела содержит любой из следующих компонентов:
(a1) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 16, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 30, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 44, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 63, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 68, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 73;
(а2) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 17, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 31, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 45, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 64, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 69, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 74;
(а3) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 18, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 32, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 46, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 63, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 68, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 73;
(а4) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 19, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 33, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 47, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 63, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 68, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 73;
(а5) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 19, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 33, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 47, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 65, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 70, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 75;
(а6) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 20, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 34, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 48, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 63, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 68, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 73;
(а7) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 22, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 36, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 50, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 63, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 68, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 73;
(а8) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 23, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 37, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 51, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 63, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 68, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 73;
(а9) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 23, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 37, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 51, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 66, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 71, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 76;
(а10) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 24, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 38, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 52, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 63, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 68, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 73;
(a11) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 25, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 39, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 53, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 66, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 71, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 76;
(а12) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 26, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 40, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 54, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 66, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 71, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 76;
(а13) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 26, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 40, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 54, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 63, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 68, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 73;
(а14) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 27, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 41, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 55, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 63 определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 68, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 73;
(а15) определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 28, определяющий комплементарность участок 2 тяжелой цепи (HCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 42, определяющий комплементарность участок 3 тяжелой цепи (HCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 56, определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 63, определяющий комплементарность участок 2 легкой цепи (LCDR2), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 68, и определяющий комплементарность участок 3 легкой цепи (LCDR3), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 73;
(б1) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73;
(б2) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 69, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 74;
(б3) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73;
(б4) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73;
(б5) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 75;
(б6) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73;
(б7) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73;
(б8) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73;
(б9) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76;
(б10) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73;
(б11) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 53, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76;
(б12) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76;
(б13) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73;
(б14) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 55, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73;
(б15) HCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, HCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42, HCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, LCDR1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, LCDR2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68, и LCDR3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73;
(в1) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 2, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 58;
(в2) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 3, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 59;
(в3) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 4, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 58;
(в4) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 5, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 58;
(в5) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 5, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 60;
(в6) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 6, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 58;
(в7) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 8, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 58;
(в8) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 9, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 58;
(в9) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 9, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 61;
(в10) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 10, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 58;
(в11) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 11, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 61;
(в12) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 12, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 61;
(в13) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 12, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 58;
(в14) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 13, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 58;
(в15) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 14, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 80% или 90% идентична SEQ ID NO: 58;
(г1) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 2 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 58;
(г2) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 3 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 59;
(г3) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 4 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 58;
(г4) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 5 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 58;
(г5) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 5 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 60;
(г6) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 6 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 58;
(г7) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 8 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 58;
(г8) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 9 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 58;
(г9) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 9 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 61;
(г10) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 10 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 58;
(г11) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 11 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 61;
(г12) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 12 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 61;
(г13) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 12 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 58;
(г14) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 13 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 58;
(г15) вариабельный домен тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 14 и вариабельный домен легкой цепи (VL) SEQ ID NO: 58
(д) вариабельную область антитела, которая конкурирует за связывание с CD3 с любой из вариабельных областей антитела, указанных в подпунктах (a1)-(г15);
(е) вариабельную область антитела, которая конкурирует за связывание с CD137 с любой из вариабельных областей антитела, указанных в подпунктах (а1)-(г15);
(ж) вариабельную область антитела, которая связывается с тем же эпитопом на CD3, что и любая из вариабельных областей антитела, указанных в подпунктах (а1)-(г15);
(з) вариабельную область антитела, которая связывается с тем же эпитопом на CD137, что и любая из вариабельных областей антитела, указанных в подпунктах (а1)-(г15).
4. Антигенсвязывающая молекула по одному из пп. 3 (a1)-(a15) или (в1)-(в15), которая содержит:
(а) аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, которая содержит в каждом из следующих положений (все пронумерованы по Кэботу) один или несколько следующих аминокислотных остатков, обозначенных для указанного положения:
A, D, Е, I, G, K, L, М, N, R, Т, W или Y в аминокислотном положении 26;
D, F, G, I, М или L в аминокислотном положении 27;
D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 28;
F или W в аминокислотном положении 29;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 30;
F, I, N, R, S, Т или V в аминокислотном положении 31;
А, Н, I, K, L, N, Q, R, S, Т или V в аминокислотном положении 32;
W в аминокислотном положении 33;
F, I, L, М или V в аминокислотном положении 34;
F, Н, S, Т, V или Y в аминокислотном положении 35;
E, F, Н, I, K, L, М, N, Q, S, T, W или Y в аминокислотном положении 50;
I, K или V в аминокислотном положении 51;
K, М, R, или Т в аминокислотном положении 52;
А, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, V, W или Y в аминокислотном положении 52b;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 52с;
А, Е, F, Н, K, L, М, N, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 53;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 54;
E, F, G, Н, L, М, N, Q, W или Y в аминокислотном положении 55;
A, D, Е, F, G, Н, I, KI, L, М, N, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 56;
A, D, Е, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т или V в аминокислотном положении 57;
A, F, Н, K, N, Р, R или Y в аминокислотном положении 58;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 59;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 60;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 61;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 62;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 63;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 64;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 65;
Н или R в аминокислотном положении 93;
F, G, Н, L, М, S, Т, V или Y в аминокислотном положении 94;
I или V в аминокислотном положении 95;
F, Н, I, K, L, М, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 96;
F, Y или W в аминокислотном положении 97;
A, F, G, Н, I, K, L, М, N, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 98;
A, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 99;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 100;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 100а;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 100b;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 100с;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 100d;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 100е;
А, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 100f;
А, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 100g;
A, D, Е, G, Н, I, L, М, N, Р, S, Т или V в аминокислотном положении 100h;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 100i;
A, D, F, I, L, М, N, Q, S, Т или V в аминокислотном положении 101;
A, D, Е, F, G, Н, I K, L, М, N, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 102;
и/или
(б) аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, которая содержит в каждом из следующих положений (все пронумерованы по Кэботу) один или несколько следующих аминокислотных остатков, обозначенных для указанного положения:
A, D, F, G, Н, I, K, L, М, N, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 24;
A, G, N, P, S, T или V в аминокислотном положении 25;
A, D, Е, F, G, I, K, L, М, N, Q, R, S, Т или V в аминокислотном положении 26;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 27;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 27а;
A, I, L, М, Р, Т или V в аминокислотном положении 27b;
А, Е, F, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, Т, W или Y в аминокислотном положении 27с;
А, Е, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 27d;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 27е;
G, N, S или Т в аминокислотном положении 28;
A, F, G, Н, K, L, М, N, Q, R, S, Т, W или Y в аминокислотном положении 29;
A, F, G, Н, I, K, L, М, N, Q, R, V, W или Y в аминокислотном положении 30;
I, L, Q, S, Т или V в аминокислотном положении 31;
F, W или Y в аминокислотном положении 32;
A, F, Н, L, М, Q или V в аминокислотном положении 33;
А, Н или S в аминокислотном положении 34;
I, K, L, М или R в аминокислотном положении 50;
А, Е, I, K, L, М, Q, R, S, Т или V в аминокислотном положении 51;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 52;
А, Е, F, G, Н, K, L, М, N, Р, Q, R, S, V, W или Y в аминокислотном положении 53;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 54;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V или Y в аминокислотном положении 55;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Р, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 56;
A, G, K, S или Y в аминокислотном положении 89;
Q в аминокислотном положении 90;
G в аминокислотном положении 91;
A, D, Н, K, N, Q, R, S или Т в аминокислотном положении 92;
A, D, Е, F, G, Н, I, K, L, М, N, Q, R, S, Т, V, W или Y в аминокислотном положении 93;
A, D, Н, I, М, N, Р, Q, R, S, Т или V в аминокислотном положении 94;
Р в аминокислотном положении 95;
F или Y в аминокислотном положении 96; и
A, D, Е, G, Н, I, K, L, М, N, Q, R, S, Т или V в аминокислотном положении 97.
5. Антигенсвязывающая молекула по одному из пп. 1-4, где антигенсвязывающая молекула имеет по меньшей мере одну из характеристик, выбранных из группы характеристик, указанных ниже в подпунктах (1)-(3):
(1) антигенсвязывающая молекула не связывается одновременно с CD3 и CD137, которые экспрессируются на различных клетках,
(2) антигенсвязывающая молекула обладает агонистической активностью в отношении CD137 и
3
(3) антигенсвязывающая молекула имеет эквивалентную или в 10, 20, 50, 100 раз более низкую величину KD, характеризующую связывание с человеческим CD137, по сравнению с референс-антителом, содержащим VH-последовательность SEQ ID NO: 1 и VL-последовательность SEQ ID NO: 57, где величину KD определяют с помощью SPR в следующих условиях: 37°С, рН 7,4, 20 мМ ACES, 150 мМ NaCl, 0,05% Твин 20, 0,005% NaN; антигенсвязывающая молекула иммобилизована на сенсорном СМ4-чипе, антиген служит в качестве аналита.
6. Антигенсвязывающая молекула по одному из пп. 1-5, дополнительно содержащая вариабельную область антитела, которая обладает способностью связываться с третьим антигеном, отличным от CD3 и CD137.
7. Антигенсвязывающая молекула по п. 6, где третий антиген представляет собой молекулу, которая специфически экспрессируется в раковой ткани.
8. Антигенсвязывающая молекула по одному из пп. 1-7, дополнительно содержащая Fc-область антитела.
9. Антигенсвязывающая молекула по п. 8, в которой Fc-область представляет собой Fc-область, которая обладает пониженной связывающей активностью в отношении Fc-гамма R по сравнению с Fc-областью встречающегося в естественных условиях человеческого антитела IgG1-подкласса.
10. Фармацевтическая композиция, содержащая антигенсвязывающую молекулу по одному из пп. 1-9 и фармацевтически приемлемый носитель.
11. Выделенный полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, которая кодирует антигенсвязывающую молекулу по одному из пп. 1-9.
12. Экспрессионный вектор, содержащий полинуклеотид по п. 11.
13. Клетка-хозяин, трансформированная или трансфектированная полинуклеотидом по п. 11 или экспрессионным вектором по п. 12.
14. Способ получения мультиспецифической антигенсвязывающей молекулы или мультиспецифического антитела, включающий культивирование клетки-хозяина по п. 13.
15. Способ получения или скрининга вариабельной области антитела, которая обладает способностью связываться с CD3 и CD137, но не связывается одновременно с CD3 и CD137, включающий:
(а) получение библиотеки, содержащей множество вариабельных областей антител,
(б) приведение в контакт библиотеки, полученной на стадии (а), либо с CD3, либо с CD137 в качестве первого антигена и сбор вариабельных областей антител, связанных с первым антигеном,
(в) приведение в контакт вариабельных областей антител, собранных на стадии (б), со вторым антигеном, выбранным из CD3 и CD137, и сбор вариабельных областей антител, связанных со вторым антигеном, и
(г) отбор вариабельной области антитела, которая:
-6
-6
-8
3
(1) связывается с CD 137, где связывание характеризуется константной равновесия реакции диссоциации (KD), составляющей менее чем примерно 5×10 М или от 5×10 М до 3×10 М, предпочтительно, определенной с помощью SPR в следующих условиях: 37°С, рН 7,4, 20 мМ ACES, 150 мМ NaCl, 0,05% Твин 20, 0,005% NaN; антигенсвязывающая молекула иммобилизована на сенсорном СМ4-чипе, антиген служит в качестве аналита;
и/или
-6
-8
3
(2) связывается с CD3, где связывание характеризуется константной равновесия диссоциации (KD), составляющей от 2×10 М до 1×10 М; предпочтительно, определенной с помощью SPR в следующих условиях: 25°С, рН 7,4, 20 мМ ACES, 150 мМ NaCl, 0,05% Твин 20, 0,005% NaN; антигенсвязывающая молекула иммобилизована на сенсорном СМ4-чипе, антиген служит в качестве аналита.