Вольтамперометрический способ определения тилозина тартрата в лекарственных препаратах, применяемых в ветеринарии

лансировку рациона для интенсивно растущих свиней по основным параметрам. Такой рацион не требует обогащения синтетическими аминокислотами или использования традиционных дорогостоящих белковых добавок животного происхождения.

Новая белковая добавка из пшеницы дает возможность подсобным свиноводческим хозяйствам Сибири на основе собственной сырьевой базы, без использования дорогостоящих покупных кормов, обеспечить гипотетически рентабельное экологичное производство качественной свинины.

Литература.

1. Концепция долгосрочного социально-экономического развития Российской Федерации на период до 2020 года // Собрание законодательства Российской Федерации, выпуск№47, 2008 г., ст. 5489.

2. Рядчиков В.Г. Нормы потребления свиней мясных пород и кроссов в энергии и переваримых аминокислотах// Научный журнал КубГАУ. 2007. №10. С.111-139.

3. Стрельцов В.А., Рябичева А.Е., Пинчук В.Ф., Стрельцова З.С.. Качество свинины в зависимости от толщины шпика // Вестник Казанского ГАУ. 2013. № 3(29). С.144-147.

4. Справочник сибирского животновода / РАСХН. Сиб. Отд-ние. СибНИПТИЖ; под ред. М.Д.Чамуха, А.С.Донченко. Новосибирск, 2000. 220 с.

5. Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных: Справочное пособие. 3-е изд. перераб. и доп. / А.П.Калашников, В.И. Фисинин, В.В. Щеглов и др. М., 2003. 456 с.

6. Хосни Р.К. Зерно и зернопродукты: пер. с англ. - СПб: Профессия, 2006. - 336 с.

7. ЯкубкеХ.-Д., ЕшкайтХ. Аминокислоты. Пептиды. Белки.- М.: Мир,1985. - 81 с.

8. Химический состав пищевых продуктов//Справочные таблицы содержания основных пищевых веществ и энергетической ценности пищевых продуктов/Под ред. И.М. Скурихина, М.Н. Волгарева. 2-е изд., перераб. и доп. М.: ВО «Агропромиздат», 1987. 224 с.

9. Химический состав пищевых продуктов // Справочные таблицы содержания аминокислот, жирных кислот, витаминов, макро- и микроэлементов, органических кислот и углеводов / Под ред. И.М. Скурихина, М.Н. Волгарева. 2-е изд., перераб. и доп. М.: Агропромиздат, 1987. 360 с.

pRocEssiNG oF ШНЕАТ pRoTEiN sUppLEMENT AND iTs UsE iN MAKING DiETs

for fattening pigs farms siberia

V.G. Ermokhin1, N.A. shkil2, V.A.Uglov1, s.V. stankevich1

1 siberian Research Institute of Agriproducts processing Russian Academy of Agricultural sciences

2 Institute of Experimental Veterinary science of siberia and the Far East Russian Academy of Agricultural sciences summary. For production of high-quality pork, including household farms Siberia, requires balanced by main indicators of feed rations. The aim was to obtain from wheat protein Supplement that provides-in combination with native grain balance and standard amino acids in the diet intensively growing pigs. New experimental additive from wheat obtained with the method of its enzymatic hydrolysis with subsequent separation by centrifuging of the liquid component of the hydrolysate. Pre-wheat were ground up to module 3 mm grinding and mixed with water. Water duty 1:2 (one part of ground wheat and 2 parts water). PH pH 6.6-7.5. Used enzyme complex action - It GSH. The concentration of enzyme -0.3 %, proteolytic activity - 70 u/G. the Duration of hydrolysis (turbulence) - 22 hours, at a temperature 50-53°N Centrifugation was carried out at 3000 Rev/min for 3 minutes. Enzymes derived additives MPEI inachtivirovti method of heating up to 90 degrees With aged 20 minutes. Humidity obtained supplements - 82.3%, the concentration of protein in recalculation to dry substance - 59.2%. The method of obtaining supplements patented. Using the additive in combination with barley prepared for intensive growing of pigs regulatory balanced by main indicators basis of a diet consisting of 1.96 kg of barley (13%humidity) and 2.81 kg experimental supplements from wheat (humidity 82.3%). Amino acid and energy parameters of the prepared food for pigs live weight of 60 kg, with an average growth 650 g fully correspond to the norm. Thus balancing the diet, for the first time in the practice of formulation for pigs, made without the use of traditional protein additives of animal origin, animal or synthetic amino acids. The proposed method, given hypothetically low resource cost of new additives, opens up the prospect of subsidiary pig farms Siberia on the basis of own raw materials base, without the use of expensive purchase of feed to produce quality pork.

Key words: protein fodder additive, enzymatic hydrolysis, essential amino acids for pigs, balanced feed rations.

УДК 543.55.054.1

вольтамперометрический способ определения тилозина тартрата в лекарственных препаратах, применяемых в ветеринарии

В.И. ДЕРЯБИНА1, кандидат химических наук, зав. лабораторно-аналитическим центром

Фам Кам НЬУНГ2, кандидат химических наук, научный сотрудник

Ю.А. АКЕНЕЕВ2, научный сотрудник Д.Н. САФОНОВ1, аспирант

1Сибирский научно-исследовательский институт сельского хозяйства и торфа

2Национальный исследовательский Томский политехнический университет E-mail: dvitomsk@rambler.ru

Резюме. При интенсивном развитии животноводства актуально применение антибиотиков. На российском рынке особой попу-

лярностью пользуются препараты на основе антибиотика широкого спектра действия тилозин тартрата. Однако он имеет побочный эффект и противопоказания, поэтому необходим контроль подлинности и количественная оценка. Для определения тилозина тартрата используют микробиологический и физико-химические (планарная хроматография, высокоэффективная жидкостная хроматография, капиллярный электрофорез) методы анализа. В качестве альтернативы могут выступить электрохимические методы, к числу которых относится вольтамперометрия (ВА), сочетающая высокие информационные возможности с простотой процесса измерения сигнала при небольшой стоимости оборудования. Получаемая вольтампернаяхарактеристика используется как для идентификации вещества, так и для определения его концентрации. А именно, положение аналитического сигнала (Еп) дает качественную характеристику, а его высота - количественную. Цель наших исследований заключалась в разработке ВА-способа измерения тилозина тартрата и методики его опреде-

ления в лекарственных препаратах, применяемых в ветеринарии. В ходе исследования модельных растворов установлены рабочие условия получения аналитического сигнала тилозина тартрата на ртутно-пленочном электроде: потенциал электролиза - минус (0,45 ± 0,05) В, фоновый электролит - 0,1 моль/дм3 С6Н807 •2ЫНу Концентрацию антибиотика определяли методом добавок аттестованных смесей, измеряя высоту пика в диапазоне потенциала минус (0,75 ± 0,05) В. Разработанная методика позволяет определять содержание тилозина тартрата в водных растворах лекарственных препаратов в диапазоне концентраций от 10 до 950 мг/г (аг не более 16 %). Она проста в исполнении, не требует больших затрат и может быть использована для выявления фальсифицированных препаратов, содержащих тилозин тартрат. Ключевые слова: вольтамперометрия, методика, антибиотик, тилозин тартрат.

При промышленном ведении животноводства, когда на ограниченных площадях содержится большое поголовье, возрастает необходимость применение различных лечебно-профилактических лекарственных средств, большую часть которых составляют антибиотики.

В Российской Федерации к ним предъявляют такие требования, как удобство в применении, быстрая всасываемость и длительная элиминация, высокая лечебно-профилактическая эффективность, стабильность готовых лекарственных форм, низкая стоимость. Перечисленным параметрам соответствуют широко используемые антибиотики на основе тилозина тартрата (Tiltar). Препараты отличаются широким терапевтическим действием и хорошей переносимостью у всех видов животных и птицы. Выпускаются в форме порошка и микрогранул. Применяют их с питьевой водой, в виде смеси с кормом, при аэрозольных обработках и обработках инкубационного яйца. В случае использования с питьевой водой доза препарата составляет 0,25.. .0,5 г/дм3, в смеси с кормом - 10...100 г/т в зависимости от вида птицы и животных.

Однако при превышении допустимых уровней содержания препараты на основе упомянутого антибиотика могут проявлять токсические и аллергические свойства. Поэтому необходим контроль их подлинности и количественная оценка [1].

К числу первых методов количественного определения Tiltar можно отнести микробиологические, основанные на способности антибиотика сдерживать рост чувствительных штаммов (тест-культуры), в сравнении со стандартными образцами. В качестве тест-культуры чаще всего используют Bacillus subtilis [2, 3]. Этот метод сравнительно прост, однако малоспецифичен, занимает много времени (2.3 сут.) и требует строгого соблюдения условий стерильности [4]. Кроме того, существует необходимость постоянного контроля морфолого-физиологических свойств тест-микробов и поддержания определенных условий их хранения.

Сегодня для анализа тилозина тартрата используют такие физико-химические методы, как планарная хроматография (современная тонкослойная хроматография), высокоэффективная жидкостная хроматография и капиллярный электрофорез [5.7]. Еще одной альтернативой могут стать варианты вольтамперометрии (ВА). Эти методы, наряду с небольшой стоимостью анализа и оборудования, сочетают высокие информационные возможности с простотой процесса измерения сигнала, поскольку выдаваемую вольтамперную характеристику можно использовать как для идентификации вещества, так и для определения его концентрации. А именно, положение аналитического сигнала (Еп) дает качественную характеристику, а его высота - количественную.

Цель наших исследований заключалась в разработке вольтамперометрического способа измерения

тилозина тартрата и методики его определения в лекарственных препаратах, применяемых в ветеринарии.

Условия, материалы и методы. Работа выполнена на вольтамперометрическом анализаторе «СТА» (ООО «ИТМ», г. Томск), который представляет собой прибор, состоящий из электронного блока, измерительного блока с тремя электрохимическими ячейками в комплекте с IBM-совместимым компьютером и установленным пакетом программ «СТА».

Измерения проводили в двух электродной системе. Индикаторным электродом служил ртутно-пленочный электрод (РПЭ) с рабочей поверхностью 73 мм2 и сопротивлением не более 1,0 кОм. Электрод сравнения - хлоридсеребряный в насыщенном растворе хлорида калия с сопротивлением не более 3,0 кОм. Основной раствор, содержащий 1000,0 мг/дм3 тилозина тартрата, готовили растворением навески фармакопейного препарата сухого порошка (с содержанием основного вещества не менее 99,5%) в бидистиллированной воде.

Рабочие растворы - аттестованные смеси (АС) получали последовательным разбавлением основных растворов в бидистиллированной воде. Модельные растворы готовили из рабочих растворов. Все остальные реактивы имели квалификацию ч.д.а. или ос.ч.

Массовую концентрацию антибиотика рассчитывали по методу добавки АС тилозина тартрата в анализируемый раствор.

На модельных растворах проведены исследования по выбору рабочих условий (фоновый электролит, потенциал электролиза) получения аналитического сигнала Tiltar. В качестве фонового электролита использовали 0,1 моль/дм3 растворы: KCl, C4H6O6, С6Н8О7 C6H8O7-2HN3, (NH4)2SO4, C4H5O6Na-H2O и буферный раствор Бриттона-Робинсона.

результаты и обсуждение. Установлено, что хорошо воспроизводимые аналитические сигналы Tiltar регистрируются в 0,1 моль/дм3 C6H8O7 -2NH3 при потенциале электролиза Еэ = - 0,45 В, а линейная зависимость градуировочного графика сохраняется в

рис. 1. Вольтамперограммы тилозина тартрата: 1 - фон (0,1 моль /дм3 CeH8O7-2NH3); 2 - C (Tyltar)= 0,2 г/дм3; 3 -C(Tyltar) = 0,4 г/дм3.

Навеска

(1-2)г

Растворение

100 см3

Фильтрование /

Центрифугирование

Гидролиз, Высаливание

Аликвота

(1-2) см3 + (9 - 8) см3 Н20 + 0,3 г СбН807 -2NH3

ВА - измерения

рис. 2. Общая схема ВА-определения Tiltar. диапазоне концентраций от 0,1 до 1,7 г/дм3. При более высоких концентрациях наблюдается отклонение гра-дуировочного графика от линейности, что, возможно, связано с насыщением поверхности индикаторного электрода.

В таких условиях на вольтамперограмме (рис. 1, график 2) при потенциале минус 0,75 В наблюдается хорошо выраженный пик, который увеличивается от добавления тилозина тартрата. Аналитический сигнал антибиотика возрастает пропорционально введенным концентрациям (график 3), что свидетельствует о возможности количественной оценки его содержания.

На основании полученных результатов предложен алгоритм методики определения тилозина тартрата (рис. 2). Этап пробоподготовки при его реализации прост и сводится к двум стадиям: растворению пробы в воде и отделению матрицы. В некоторых случаях для более полного осаждения матрицы требуется про-

ведение гидролиза 0,1 моль/дм3 соляной кислотой и высаливание сульфатом цинка.

Метод ВА-измерения тилозина тартрата основан на способности антибиотика восстанавливаться на поверхности индикаторного электрода при потенциале Еп = - (0,45 ± 0,05) В на фоне 0,1 моль/дм3 раствора цитрата аммония в отсутствии кислорода, с последующей регистрацией пиков в диапазоне потенциалов от -0,5 до -1,0 В.

Концентрацию антибиотика определяют методом добавок аттестованных смесей по высоте пика тока в диапазоне потенциала минус (0,75 ± 0,05) В.

Используя предложенный алгоритм, мы проанализировали препарат «Фармазин» с заявленным содержанием тилозина тартрата 0,5 г/г. Результаты проведенных измерений подтвердили эти сведения (см. табл.).

Таблица. содержание тилозина тартрата в препаратах «Фармазин», проверка правильности методом «введено-найдено»,

Препарат

Содержание Tiltar, г/г

по рецептуре.

в пробе

вве дено

Найдено

«Фармазин  500» (АО «BIOVET»,

Болгария) 0,5 0,48 ± 0,05 0,50 0,93 ± 0,08 «Фармазин» (АО «Балканфарма

Холдинг» Болгария) 0,5 0,49 ± 0,05 0,30 0,81 ± 0,07

выводы. На основании результатов исследований разработаны способ вольтамперометрического измерения тилозина тартрата и методика анализа ветеринарных препаратов в виде порошка, содержащего тилозин тартрат в диапазоне от 10 до 950 мг/г (ar не более 16 %). Методика проста в исполнении, не требует больших затрат и может быть использована при выявлении фальсифицированных препаратов содержащих тилозин тартрат.

Литература.

1. Аксенова И. А. Тилозин. Производство и применение продуктов микробиологических производств: обзор. информ. М.: ВНИИСЭНТИ Минмедбиопрома СССР. 1988. Вып. 2. С. 8-17.

2. МУК 4.2.1068-01 Метод микробиологического измерения концентрации клеток штамма-продуцента тилозина Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны. М., 2002. 5 с.

3. ГОСТР 53912-2010 Продукты пищевые. Экспресс-метод определения антибиотиков.

4. Пасет Б.В, Антипов М.А. Практикум по техническому анализу и контролю в производстве химико-фармацевтических препаратов и антибиотиков. М.: Медицина, 1981, 272 с.

5. Анализ макролидных, тетрациклиновых и пептидных антибиотиков методом тонкослойной хроматографии/ Т.А. Воейкова, Б.В. Тяглов, С.В. Антонова, Е.Д. Барсуков, И.А. Сизова, И.И. Малахова, В.Д. Красиков//Биотехнология. 2008. №. 2. С. 74-87.

6. Антонова С.В. Количественный анализ культуральныхжидкостей штаммов-продуцентов промышленных антибиотиков различных классов методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии: автореф. дис. ... канд. хим. наук. Москва, 2009. 26 с.

7. М 08-01 -2012. Определение антибиотиков в готовых лекарственных средствах ветеринарного назначения [Электронный ресурс] - Электрон. Текстовые дан. - Санкт -Петербург, 2012. - режим доступа: http://lumex.ru, свободный.

VoLTAMMETRic METHoD FoR DETERMiNATioN oF TYLosiN TARTRATE DRUGs UsED

iN veterinary medicine

V. Deryabina, pham cam Nhung, Yu. Akeneev, D. safonov

summary. With vigorous development of animal husbandry, the use of antibiotics is especially important. Drugs on the basis of tylosin tartrate are very popular in Russian market. Tylosin tartrate - is a broad spectrum antibiotic, however, it has side effects and contraindications. Therefore we need control of its authenticity and quantification. To determine tylosin tartrate microbiological method and physico-chemical methods of analysis are using: Planar chromatography (modern TLC), high performance liquid chromatography and capillary electrophoresis. Alternatively to these methods electrochemical methods may be performed. Voltammetry method (VA) - one of the modern electrochemical analysis of drug that combines the high information capacity with ease of process of signal measurement at a low cost of the equipment. The resulting voltage-current characteristic is used for identifying a substance and to determine its concentration. Namely, the position of the analytical signal (E) gives a qualitative characteristic, and its height - quantitative. The aim was to develop a method of measuring the VA-tylosin tartrate and development of a methodology of determination in medicinal drugs used in veterinary medicine. During the study of model solutions the working conditions of obtaining the analytical signal of tylosin tartrate at mercury film electrode are determined: the potential electrolysis minus (0,45 ± 0,05) V, supporting electrolyte, 0,1 mole/dm3 C6H8O7 2NH3. Antibiotic concentration was determined by addition of certified mixtures of additives and measuring of peak hight in a potential range of minus (0,75 ± 0,05) V. Based on the research for the first time proposed methodology of voltammetric determination tylosin

tartrate in aqueous solutions of drugs used in veterinary medicine in contents ranging from 10 to 950 mg/g (ar is less than 16%). The method is simple to perform, inexpensive and can be used for the detection of adultterated drugs containing t^losin tartrate. Keywords: voltammetry, a technique, an antibiotic, tylosin tartrate.

УДК 636.5-616:619

особенности заболеваний африканских чёрных страусов при акклиматизации в условиях

республики татарстан

В.О. ЕЖКОВ1, доктор ветеринарных наук, старший научный сотрудник

А.Х. ЯППАРОВ1, доктор сельскохозяйственных наук, директор

Г.О. ЕЖКОВА2, доктор биологических наук, профессор, зав. кафедрой

1Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения Российской академии сельскохозяйственных наук

2Казанский национальный исследовательский технологический университет, Е-mail: niiaxp2@mail.ru

Резюме. В Республике Татарстан созданы предпосылки и имеются положительные результаты акклиматизации африканских черных страусов. Исследованы особенности кормления, содержания, состояние метаболизма птиц этого вида в условиях Среднего Поволжья для развития страусоводства, обеспечивающего получение нетрадиционного диетического мяса. Проведены исследования клинических, патоморфологических изменений птицы с определением нозологических форм проявления заболеваний при нарушении метаболизма на поголовье 10 половозрелых в возрасте 3-5 лет, 12 одномесячных, 18 восьмимесячных, 16 одно-двухлетних страусов в разные сезоны года. При исследовании клинического состояния учитывали пищевую возбудимость по целостности кормов, ориентировочные рефлексы на обслуживающий и врачебный персонал, яйценоскость самок и этологию самцов. Патоморфологические изменения изучали при убое птицы с макроскопическим исследованием органов и тканей после их полной эвисцерации и проведением фотографии. Взрослую птицу размещают в переоборудованных помещениях для откорма молодняка крупного рогатого скота с наличием выгульных площадок-вольеров. Молодняк до одного месяца содержат групповым методом в отдельных блоках, затем до восьмимесячного возраста - в боксахбетоноблочного корпуса с выгульными площадками. Кормление страусов осуществляется комбикормами для цыплят-бройлеров без кокцидиостатиков с добавлением ежедневных кормовыхдобавок микроэлементов и витаминов на всем протяжении года, в осенне-зимний период -травяной муки и сенажа, в весеннее-летний - зеленой травяной массы. Акклиматизация страусов к природным условиям республики, как при низких зимних температурах, так и в жаркие летние месяцы протекала без резких изменений общего состояния птицы, но у некоторых особей отмечали нарушение метаболизма. У взрослых страусов незаразная патология в этом случае проявлялась преимущественно подострым катаральным и катарально-геморрагическим гастроэнтеритом, гепатозом, кутикулитом, что было обусловлено воздействием неблагоприятных алиментарных факторов. У молодняка, кроме признаков незаразной патологии, были выявлены грибковые и паразитарные заболевания, обусловленные нарушением ветеринарно-санитарных правил.

Ключевые слова: африканский черный страус, метаболизм, желточный перитонит, овариосальпингит, гемосидероз, гепатоз.

В последние годы отмечается интерес птицеводов к разведению страусов. По прогнозам специалистов страус станет птицей XXI века [1]. На сегодняшний день в мире насчитывается около 2 млн африканских страусов, причем птицу в основном содержат на фермах и в зоопарках. Число особей в диком состоянии не превышает 4% от общего поголовья. Однако эти сведения весьма приблизительны и не носят официального характера [2]. За два последних десятилетия любительское разведение страусов во многих странах мира превратилось в высокодоходную отрасль животноводства. Большой интерес к этой самой крупной не летающей птице объясняется экономической выгодой. На один килограмм прироста живой массы страусы расходуют 3,5...4,0 кг корма, тогда как в мясном скотоводстве величина этого показателя составляет 8.10 кг. Обладая высокой энергией роста, они к годовалому возрасту увеличивают свою массу в 120 раз [3,4]. Страусы легко приспосабливаются к новым условиям проживания и одинаково комфортно чувствуют себя как при низких зимних температурах (при 10.15 градусных морозах их выгул ограничивают), так и в жаркие летние месяцы [5].

Цель наших исследований - изучение особенностей кормления, содержания и состояния метаболизма африканских черных страусов в условиях Среднего Поволжья для совершенствования технологий страу-соводства в регионе.

Условия, материалы и методы. Объектом исследования были африканские черные страусы, содержавшиеся на ферме в населенном пункте Бишня Зеленодольского района. В работе изучена технология содержания, кормления и разведения страусов в условиях Республики Татарстан, клинические, пато-морфологические изменения птицы с определением нозологических форм проявления заболеваний при нарушении метаболизма. Исследования проводили в разные сезоны года на поголовье 10 половозрелых страусов в возрасте 3-5 лет, 12 одномесячных, 18 восьмимесячных, 16 одно-двухлетних. При изучении клинического состояния учитывали пищевую возбудимость по целостности кормов, ориентировочные рефлексы на обслуживающий и врачебный персонал, яйценоскость самок и этологию самцов. Патоморфологические из- 75