АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ, СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С 5T4 И 4-1BB, И ОТНОСЯЩИЕСЯ К НИМ КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ

1. Полиспецифичный полипептид, содержащий 5T4-связывающий домен, специфично связывающийся с 5T4 человека, и 4-1BB-связывающий домен, где указанный 5T4-связывающий домен содержит: (i) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и (ii) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где
(а) HCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30;
(b) HCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32;
(c) HCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34;
(d) LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42;
(e) LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и
(f) LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36.
2. Полиспецифичный полипептид по п. 1, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 38 и 46.
3. Полиспецифичный полипептид по п. 1, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 38 и 46.
4. Полиспецифичный полипептид по п. 1, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 44, 48 и 50.
5. Полиспецифичный полипептид по п. 1, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 44, 48 и 50.
6. Полиспецифичный полипептид по п. 1, где указанный 5Т4-связывающий домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 38, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 44; или
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 46, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 48; или
iii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 46, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 50.
7. Полиспецифичный полипептид по п. 1, где указанный 5Т4-связывающий домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44; или
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48; или
iii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50.
8. Полиспецифичный полипептид, содержащий 5T4-связывающий домен, специфично связывающийся с  5T4 человека, и 4-1BB-связывающий домен, специфично связывающийся с 4-1BB человека, где каждый из указанных 4-1BB-связывающего домена и 5T4-связывающего домена содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи (VH) иммуноглобулина, содержащую HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и (ii) вариабельную область легкой цепи (VL) иммуноглобулина, содержащую LCDR1, LCDR2 и LCDR3,
где область VH и/или VL указанного 5T4-связывающего домена содержит одну или более мутаций в каркасной области; и
при этом указанный 5T4-связывающий домен содержит
(а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36.
9. Полиспецифичный полипептид по п. 8, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 38.
10. Полиспецифичный полипептид по п. 8, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38.
11. Полиспецифичный полипептид по п. 8, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 40.
12. Полиспецифичный полипептид по п. 8, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40.
13. Полиспецифичный полипептид по п. 8, где указанный 5Т4-связывающий домен содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 38, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 40.
14. Полиспецифичный полипептид по п. 8, где 5Т4-связывающий домен содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40.
15. Полиспецифичный полипептид, содержащий 5T4-связывающий домен, специфично связывающийся с  5T4 человека, и 4-1BB-связывающий домен, специфично связывающийся с 4-1BB человека, где каждый из указанных 4-1BB-связывающего домена и 5T4-связывающего домена содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи (VH) иммуноглобулина, содержащую HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и (ii) вариабельную область легкой цепи (VL) иммуноглобулина, содержащую LCDR1, LCDR2 и LCDR3,
где область VH и/или VL указанного 4-1BB-связывающего домена содержит одну или более мутаций в каркасной области; и
при этом 5T4-связывающий домен содержит
(а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36.
16. Полиспецифичный полипептид по п. 15, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 38 и 46.
17. Полиспецифичный полипептид по п. 15, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 38 и 46.
18. Полиспецифичный полипептид по п. 15, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 44, 48 и 50.
19. Полиспецифичный полипептид по п. 15, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 44, 48 и 50.
20. Полиспецифичный полипептид по п. 15, где указанный 5Т4-связывающий домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 38, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 44; или
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 46, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 48; или
iii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 46, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 50.
21. Полиспецифичный полипептид по п. 15, где указанный 5Т4-связывающий домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44; или
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48; или
iii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50.
22. Полиспецифичный полипептид, содержащий 5T4-связывающий домен, специфично связывающийся с  5T4 человека и 4-1BB-связывающий домен, специфично связывающийся с 4-1BB человека, где каждый из указанных 4-1BB-связывающего домена и 5T4-связывающего домена содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи (VH) иммуноглобулина, содержащую HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и (ii) вариабельную область легкой цепи (VL) иммуноглобулина, содержащую LCDR1, LCDR2 и LCDR3,
где область VH и/или VL 4-1BB-связывающего домена содержит одну или более мутаций в каркасной области; и
при этом указанный 5T4-связывающий домен содержит
(a) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36.
23. Полиспецифичный полипептид по п. 22, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 56.
24. Полиспецифичный полипептид по п. 22, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56.
25. Полиспецифичный полипептид по п. 22, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 58.
26. Полиспецифичный полипептид по п. 22, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58.
27. Полиспецифичный полипептид по п. 22, где указанный 5Т4-связывающий домен содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 58.
28. Полиспецифичный полипептид по п. 22, где 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58.
29. Полиспецифичный полипептид, содержащий 5T4-связывающий домен, специфично связывающийся с 5T4 человека, и 4-1BB-связывающий домен, специфично связывающийся с 4-1BB человека, где каждый из указанных 4-1BB-связывающего домена и 5T4-связывающего домена содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи (VH) иммуноглобулина, содержащую HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и (ii) вариабельную область легкой цепи (VL) иммуноглобулина, содержащую LCDR1, LCDR2 и LCDR3,
где область VH и/или VL 4-1BB-связывающего домена содержит одну или более мутаций в каркасной области; и
при этом указанный 5T4-связывающий домен содержит
(а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36.
30. Полиспецифичный полипептид по п. 29, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 64.
31. Полиспецифичный полипептид по п. 29, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64.
32. Полиспецифичный полипептид по п. 29, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 58.
33. Полиспецифичный полипептид по п. 29, где указанный 5T4-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58.
34. Полиспецифичный полипептид по п. 29, где 5Т4-связывающий домен содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 64, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 58.
35. Полиспецифичный полипептид по п. 29, где указанный 5Т4-связывающий домен содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58.
36. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 1-35, где указанный 4-1BB-связывающий домен специфично связывается с  4-1BB человека.
37. Полиспецифичный полипептид по п. 36, где указанный 4-1BB-связывающий домен связан с 5T4-связывающим доменом посредством линкера связывающих доменов.
38. Полиспецифичный полипептид по п. 36, содержащий, в направлении от аминоконца к карбоксиконцу, (i) 5T4-связывающий домен, (ii) линкер связывающих доменов и (iii) 4-1BB-связывающий домен.
39. Полиспецифичный полипептид по п. 36, где указанный 5T4-связывающий домен представляет собой одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv).
40. Полиспецифичный полипептид по п. 39, где вариабельная область легкой цепи указанного scFv является карбоксиконцевой относительно вариабельной области тяжелой цепи указанного scFv.
41. Полиспецифичный полипептид по п. 39, где вариабельная область легкой цепи указанного scFv является аминоконцевой относительно вариабельной области тяжелой цепи указанного scFv.
42. Полиспецифичный полипептид по п. 39, где указанный scFv содержит линкерный полипептид.
43. Полиспецифичный полипептид по п. 42, где указанный линкерный полипептид находится между вариабельной областью легкой цепи и вариабельной областью тяжелой цепи указанного scFv.
4
44. Полиспецифичный полипептид по п. 42, где указанный линкерный полипептид содержит линкер GlySer.
4
n
45. Полиспецифичный полипептид по п. 43, где указанный линкерный полипептид содержит структуру формулы (GlySer), где n = 1-5.
46. Полиспецифичный полипептид по п. 45, где указанный линкерный полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 85-108.
47. Полиспецифичный полипептид по п. 44, где указанный линкерный полипептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98 (GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS).
48. Полиспецифичный полипептид по п. 39, где scFv содержит последовательность, обладающую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134 и 170.
49. Полиспецифичный полипептид по п. 48, где scFv содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134 и 170.
50. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 1-49, где указанный 5Т4-связывающий домен связывается с внеклеточным доменом человеческого 5Т4.
51. Полиспецифичный полипептид, содержащий 4-1BB-связывающий домен, специфично связывающийся с 4-1BB человека, и 5T4-связывающий домен, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит: (i) вариабельную область тяжелой цепи (VH) иммуноглобулина, содержащую HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и (ii) вариабельную область легкой цепи (VL) иммуноглобулина, содержащую LCDR1, LCDR2 и LCDR3, где
(а) HCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2;
(b) HCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4;
(c) HCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6;
(d) LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8;
(e) LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и
(f) LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
52. Полиспецифичный полипептид по п. 51, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 14.
53. Полиспецифичный полипептид по п. 51, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.
54. Полиспецифичный полипептид по п. 51, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 16.
55. Полиспецифичный полипептид по п. 51, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16.
56. Полиспецифичный полипептид по п. 51, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 14, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 16.
57. Полиспецифичный полипептид по п. 51, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16.
58. Полиспецифичный полипептид, содержащий 5T4-связывающий домен, специфично связывающийся с 5T4 человека, и 4-1BB-связывающий домен, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит: (i) вариабельную область тяжелой цепи (VH) иммуноглобулина, содержащую HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и (ii) вариабельную область легкой цепи (VL) иммуноглобулина, содержащую LCDR1, LCDR2 и LCDR3,
и где указанная область VH и/или VL 4-1BB-связывающего домена содержит одну или более мутаций в каркасной области,
и при этом указанный 4-1BB-связывающий домен содержит
(а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
59. Полиспецифичный полипептид по п. 58, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 20.
60. Полиспецифичный полипептид по п. 58, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.
61. Полиспецифичный полипептид по п. 58, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 22.
62. Полиспецифичный полипептид по п. 58, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
63. Полиспецифичный полипептид по п. 58, где 4-1BB-связывающий домен содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 20, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 22.
64. Полиспецифичный полипептид по п. 58, где 4-1BB-связывающий домен содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
65. Полиспецифичный полипептид, содержащий 5T4-связывающий домен, специфично связывающийся с 5T4 человека, и 4-1BB-связывающий домен, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит: (i) вариабельную область тяжелой цепи (VH) иммуноглобулина, содержащую HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и (ii) вариабельную область легкой цепи (VL) иммуноглобулина, содержащую LCDR1, LCDR2 и LCDR3,
и где указанная область VH и/или VL 4-1BB-связывающего домена содержит одну или более мутаций в каркасной области,
и при этом указанный 4-1BB-связывающий домен содержит
(а) HCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24;
(b) HCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4;
(c) HCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6;
(d) LCDR1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8;
(e) LCDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и
(f) LCDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
66. Полиспецифичный полипептид по п. 65, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 26.
67. Полиспецифичный полипептид по п. 65, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.
68. Полиспецифичный полипептид по п. 65, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 16.
69. Полиспецифичный полипептид по п. 65, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16.
70. Полиспецифичный полипептид по п. 65, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 26, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 97% идентичностью SEQ ID NO: 16.
71. Полиспецифичный полипептид по п. 65, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит
вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16.
72. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 51-71, где указанный 4-1BB-связывающий домен представляет собой одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv).
73. Полиспецифичный полипептид по п. 72, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит последовательность, обладающую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 110, 112, 114 и 116.
74. Полиспецифичный полипептид по п. 72, где указанный 4-1BB-связывающий домен содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 110, 112, 114 и 116.
75. Полиспецифичный полипептид по п. 72, где вариабельная область легкой цепи указанного scFv является карбоксиконцевой относительно вариабельной области тяжелой цепи указанного scFv.
76. Полиспецифичный полипептид по п. 72, где вариабельная область легкой цепи указанного scFv является аминоконцевой относительно вариабельной области тяжелой цепи указанного scFv.
77. Полиспецифичный полипептид по п. 72, где scFv содержит линкерный полипептид.
78. Полиспецифичный полипептид по п. 77, где линкерный полипептид находится между вариабельной областью легкой цепи и вариабельной областью тяжелой цепи указанного scFv.
4
79. Полиспецифичный полипептид по п. 77, где линкерный полипептид содержит линкер GlySer.
4
n
80. Полиспецифичный полипептид по п. 79, где линкерный полипептид содержит структуру формулы (GlySer), где n = 1-5.
81. Полиспецифичный полипептид по п. 79, где линкерный полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 85-108.
82. Полиспецифичный полипептид по п. 79, где линкерный полипептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98 (GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS).
83. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 51-82, где указанный 4-1BB-связывающий домен связывается с внеклеточным доменом человеческого 4-1BB.
84. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 51-83, где указанный 4-1BB-связывающий домен конъюгирован с лекарственным средством или токсином.
85. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 51-84, где указанный 4-1BB-связывающий домен связан с 5T4-связывающим доменом посредством линкера связывающих доменов.
86. Полиспецифичный полипептид по п. 85, содержащий, в направлении от аминоконца к карбоксиконцу, (i) 5T4-связывающий домен, (ii) линкер связывающих доменов и (ii) 4-1BB-связывающий домен.
87. Полиспецифичный полипептид по п. 85, содержащий, в направлении от аминоконца к карбоксиконцу, (i) 4-1BB-связывающий домен, (ii) линкер связывающих доменов и (iii) 5T4-связывающий домен.
88. Полиспецифичный полипептид по п. 87, где указанный 5Т4-связывающий домен слит или конъюгирован с константной областью иммуноглобулина.
89. Полиспецифичный полипептид по п. 88, где константная область иммуноглобулина представляет собой Fc-домен иммуноглобулина человека.
90. Полиспецифичный полипептид по п. 89, где указанный  Fc-домен иммуноглобулина человека содержит последовательность SEQ ID NO: 158 или SEQ ID NO: 160.
91. Полиспецифичный полипептид по п. 85, содержащий, в направлении от аминоконца к карбоксиконцу, (i) 5T4-связывающий домен, (ii) шарнирную область, (iii) константную область иммуноглобулина, (iv) линкер связывающих доменов и (v) 4-1BB-связывающий домен.
4
92. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 85-91, где линкер связывающих доменов содержит последовательность GlySer.
4
n
93. Полиспецифичный полипептид по п. 92, где линкер связывающих доменов содержит структуру формулы (GlySer), где n = 1-5.
94. Полиспецифичный полипептид по п. 92, где линкер связывающих доменов содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 85-108.
95. Полиспецифичный полипептид по п. 94, где линкер связывающих доменов содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 107 (SGGGGSGGGGSGGGGSPS).
96. Полиспецифичный полипептид, содержащий первый scFv-домен и второй scFv-домен, где указанные первый и второй scFv-домены связаны друг с другом посредством линкера связывающих доменов или линкера связывающих доменов и Fc-домена иммуноглобулина, где указанный Fc-домен иммуноглобулина содержит шарнирную область и константную область иммуноглобулина; и где указанный второй scFv-домен специфично связывается с 4-1BB человека и содержит:
(i) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность HCDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 18, 24, аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 4, и аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 6; и
(ii) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8, аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10, и аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 12.
97. Полиспецифичный полипептид, содержащий первый scFv-домен и второй scFv-домен, где указанные первый и второй scFv-домены связаны друг с другом посредством линкера связывающих доменов или линкера связывающих доменов и Fc-домена иммуноглобулина, где указанный Fc-домен иммуноглобулина содержит шарнирную область и константную область иммуноглобулина; и где указанный второй scFv-домен специфично связывается с 4-1BB человека и содержит:
(i) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 2, аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 4, и аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 6; и
(ii) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8, аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10, и аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 12.
98. Полиспецифичный полипептид, содержащий первый scFv-домен и второй scFv-домен, где указанные первый и второй scFv-домены связаны друг с другом посредством линкера связывающих доменов или линкера связывающих доменов и Fc-домена иммуноглобулина, где указанный Fc-домен иммуноглобулина содержит шарнирную область и константную область иммуноглобулина; и где указанный первый scFv-домен специфично связывается с 5T4 человека и содержит:
(i) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 30, аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 32, и аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 34; и
(ii) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 42, аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10, и аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 36.
99. Полиспецифичный полипептид, содержащий первый scFv-домен и второй scFv-домен, где указанные первый и второй scFv-домены связаны друг с другом посредством линкера связывающих доменов или линкера связывающих доменов и Fc-домена иммуноглобулина, где указанный Fc-домен иммуноглобулина содержит шарнирную область и константную область иммуноглобулина;
где указанный первый scFv-домен специфично связывается с 5T4 человека и содержит:
вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 30, аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 32, и аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 34, и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 42, аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10, и аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 36; и
где указанный второй scFv-домен специфично связывается с 4-1BB человека и содержит:
вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 2, аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 4, и аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 6; и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8, аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10, и аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 12.
100. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 96-99, содержащий, в направлении от аминоконца к карбоксиконцу, (i) первый scFv-домен, (ii) линкер связывающих доменов и (iii) второй scFv-домен.
101. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 96-99, содержащий, в направлении от аминоконца к карбоксиконцу, (i) второй scFv-домен, (ii) линкер связывающих доменов и (iii) первый связывающий scFv-домен.
102. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 96-99, содержащий, в направлении от аминоконца к карбоксиконцу, (i) первый scFv-домен, (ii) шарнирную область, (iii) константную область иммуноглобулина, (iv) линкер связывающих доменов и (v) второй связывающий scFv-домен.
4
103. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 96-99, где линкер связывающих доменов содержит последовательность GlySer.
4
n
104. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 96-99, где линкер связывающих доменов содержит структуру формулы (GlySer), где n = 1-5.
105. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 96-99, где линкер связывающих доменов содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 85-108.
106. Полиспецифичный полипептид по п. 105, где линкер связывающих доменов содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107 (SGGGGSGGGGSGGGGSPS).
107. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 97, где второй scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 2;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 4;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 6;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 12.
108. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 97, где второй scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 18;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 4;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 6;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 12.
109. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 97, где второй scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 24;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 4;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 6;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 12.
110. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 97, где второй scFv-домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16.
111. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 97, где второй scFv-домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 22.
112. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 97, где второй scFv-домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16.
113. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 97, где второй scFv-домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16.
114. Полиспецифичный полипептид по п. 96, где первый scFv-домен содержит
(i) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность HCDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 30, 52 и 60, аминокислотную последовательность HCDR2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 32 и 62, и аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 34; и
(ii) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность LCDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8, 42 и 54, аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10, и аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 36;
и где второй scFv-домен содержит
(i) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность HCDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 18, 24, аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 4, и аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 6; и
(ii) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8, аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10, и аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 12.
115. Полиспецифичный полипептид по п. 114, где второй scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 2;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 4;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 6;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 12.
116. Полиспецифичный полипептид по п. 115, где первый scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 30;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 32;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 34;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 36.
117. Полиспецифичный полипептид по п. 115, где первый scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 30;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 32;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 34;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 42;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 36.
118. Полиспецифичный полипептид по п. 115, где первый scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 30;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 32;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 34;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 42;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 36.
119. Полиспецифичный полипептид по п. 115, где первый scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 52;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 32;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 34;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 54;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 36.
120. Полиспецифичный полипептид по п. 115, где первый scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 60;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 62;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 34;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 54;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 36.
121. Полиспецифичный полипептид по п. 114, где второй scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 18;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 4;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 6;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 12.
122. Полиспецифичный полипептид по п. 121, где первый scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 30;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 32;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 34;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 42;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 36.
123. Полиспецифичный полипептид по п. 114, где второй scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 24;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 4;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 6;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 12.
124. Полиспецифичный полипептид по п. 123, где первый scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 52;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 32;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 34;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 54;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 36.
125. Полиспецифичный полипептид по п. 114, где второй scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 24;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 4;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 6;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 12.
126. Полиспецифичный полипептид по п. 125, где первый scFv-домен содержит:
(а) аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 30;
(b) аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 32;
(c) аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 34;
(d) аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8;
(e) аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10; и
(f) аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 36.
127. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 102, где первый scFv-домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40,
и где второй scFv-домен содержит
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16.
128. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 102, где первый scFv-домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44,
и где второй scFv-домен содержит
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16.
129. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 102, где первый scFv-домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48,
и где второй scFv-домен содержит
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16.
130. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 102, где первый scFv-домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58,
и где второй scFv-домен содержит
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16.
131. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 102, где первый scFv-домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58,
и где второй scFv-домен содержит
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16.
132. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 102, где первый scFv-домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50,
и где второй scFv-домен содержит
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 22.
133. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 102, где первый scFv-домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58,
и где второй scFv-домен содержит
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16.
134. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 102, где первый scFv-домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68,
и где второй scFv-домен содержит
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16.
135. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 102, где первый scFv-домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70,
и где второй scFv-домен содержит
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 16.
136. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 102, где первый scFv-домен специфично связывается с 5Т4 человека и содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134 и 170; и где второй scFv-домен специфично связывается с 4-1BB человека и содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 110, 112, 114 и 116.
137. Полиспецифичный полипептид по п. 136, где первый scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118, и второй scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110.
138. Полиспецифичный полипептид по п. 136, где первый scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120, и второй scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110.
139. Полиспецифичный полипептид по п. 136, где первый scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 122, и второй scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110.
140. Полиспецифичный полипептид по п. 136, где первый scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 124, и второй scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112.
141. Полиспецифичный полипептид по п. 136, где первый scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126, и второй scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114.
142. Полиспецифичный полипептид по п. 136, где первый scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126, и второй scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110.
143. Полиспецифичный полипептид по п. 136, где первый scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 128, и второй scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110.
144. Полиспецифичный полипептид по п. 136, где первый scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 130, и второй scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116.
145. Полиспецифичный полипептид по п. 136, где первый scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 170, и второй scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116.
146. Полиспецифичный полипептид по п. 136, где первый scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 132, и второй scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116.
147. Полиспецифичный полипептид по п. 136, где первый scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134, и второй scFv-домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116.
148. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 102, содержащий аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичностью с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 172 и 174.
149. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 102, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 172 и 174.
150. Полиспецифичный полипептид по п. 96 или 102, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 136, 138 и 146.
151. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 96-147, где первый scFv-домен связывается с внеклеточным доменом 5T4, и где второй scFv-домен связывается с внеклеточным доменом 4-1BB.
152. Полиспецифичный полипептид, содержащий первый scFv-домен и второй scFv-домен, где указанные первый и второй scFv-домены связаны друг с другом посредством линкера связывающих доменов или линкера связывающих доменов и Fc-домена иммуноглобулина, где указанный Fc-домен иммуноглобулина содержит шарнирную область и константную область иммуноглобулина; где полиспецифичный полипептид способен образовывать гомодимер путем ассоциации со вторым идентичным полиспецифичным полипептидом; и где указанный первый scFv-домен специфично связывается с 5T4 человека и содержит:
(i) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 30, аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 32, и аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 34; и
(ii) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 42, аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10, и аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 36.
153. Полиспецифичный полипептид по п. 152, где первый scFv-домен содержит мутацию в каркасной области по сравнению с каркасной областью SEQ ID NO: 130 или 170.
154. Полиспецифичный полипептид по п. 153, где мутация приводит к появлению стабилизирующей дисульфидной связи.
155. Полиспецифичный полипептид по п. 152, где первый scFv-домен содержит
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44; или
ii) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48.
156. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 152-155, где второй scFv-домен специфично связывается с 4-1BB человека и содержит:
(i) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность HCDR1 SEQ ID NO: 2, аминокислотную последовательность HCDR2 SEQ ID NO: 4, и аминокислотную последовательность HCDR3 SEQ ID NO: 6; и
(ii) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность LCDR1 SEQ ID NO: 8, аминокислотную последовательность LCDR2 SEQ ID NO: 10, и аминокислотную последовательность LCDR3 SEQ ID NO: 12.
157. Полиспецифичный полипептид по п. 156, где второй scFv-домен содержит:
i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16.
158. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 152-157, содержащий, в направлении от аминоконца к карбоксиконцу, (i) первый scFv-домен, (ii) линкер связывающих доменов и (iii) второй scFv-домен.
159. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 152-157, содержащий, в направлении от аминоконца к карбоксиконцу, (i) второй scFv-домен, (ii) линкер связывающих доменов и (iii) первый scFv-домен.
160. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 152-157, содержащий, в направлении от аминоконца к карбоксиконцу, (i) первый scFv-домен, (ii) шарнирную область, (iii) константную область иммуноглобулина, (iv) линкер связывающих доменов и (v) второй scFv-домен.
4
161. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 149-157, где линкер связывающих доменов содержит последовательность GlySer.
4
n
162. Полиспецифичный полипептид по п. 161, где линкер связывающих доменов содержит структуру формулы (GlySer), где n = 1-5.
163. Полиспецифичный полипептид по п. 161, где линкер связывающих доменов содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 85-108.
164. Полиспецифичный полипептид по п. 161, где линкер связывающих доменов содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107 (SGGGGSGGGGSGGGGSPS).
165. Полиспецифичный полипептид, содержащий первый scFv-домен и второй scFv-домен, где указанные первый и второй scFv-домены связаны друг с другом посредством линкера связывающих доменов и Fc-домена иммуноглобулина, где указанный Fc-домен иммуноглобулина содержит шарнирную область и константную область иммуноглобулина;
где указанный первый scFv-домен специфично связывается с 5Т4 человека и содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичную SEQ ID NO: 120; и
где указанный второй scFv-домен специфично связывается с 4-1BB человека и содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичную SEQ ID NO: 110.
166. Полиспецифичный полипептид, содержащий первый scFv-домен и второй scFv-домен, где указанные первый и второй scFv-домены связаны друг с другом посредством линкера связывающих доменов и Fc-домена иммуноглобулина, где указанный Fc-домен иммуноглобулина содержит шарнирную область и константную область иммуноглобулина;
где указанный первый scFv-домен специфично связывается с 5T4 человека и содержит или состоит из SEQ ID NO: 120;
где указанный второй scFv-домен специфично связывается с 4-1BB человека и содержит или состоит из SEQ ID NO: 110; и
где указанный линкер связывающих доменов содержит или состоит из SEQ ID NO: 107.
167. Полиспецифичный полипептид, содержащий, в направлении от аминоконца к карбоксиконцу: (i) второй scFv-домен, (ii) Fc-домен иммуноглобулина, (iii) линкер связывающих доменов и (iv) первый scFv-домен;
где указанный первый scFv-домен специфично связывается с 5T4 человека и содержит или состоит из SEQ ID NO: 120;
где указанный второй scFv-домен специфично связывается с 4-1BB человека и содержит или состоит из SEQ ID NO: 110;
где указанный Fc-домен иммуноглобулина содержит или состоит из SEQ ID NO: 160; и
где указанный линкер связывающих доменов содержит или состоит из SEQ ID NO: 107.
168. Полиспецифичный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 172, где полиспецифичный полипептид специфично связывается с 5Т4 человека и с 4-1BB человека.
169. Полиспецифичный полипептид, содержащий или состоящий из SEQ ID NO: 172, где полиспецифичный полипептид специфично связывается с 5Т4 человека и с 4-1ВВ человека.
170. Полиспецифичный полипептид, содержащий первый scFv-домен и второй scFv-домен, где указанные первый и второй scFv-домены связаны друг с другом посредством линкера связывающих доменов и Fc-домена иммуноглобулина, где указанный Fc-домен иммуноглобулина содержит шарнирную область и константную область иммуноглобулина;
где указанный первый scFv-домен специфично связывается с 5Т4 человека и содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичную SEQ ID NO: 122; и
где указанный второй scFv-домен специфично связывается с 4-1BB человека и содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичную SEQ ID NO: 110.
171. Полиспецифичный полипептид, содержащий первый scFv-домен и второй scFv-домен, где указанные первый и второй scFv-домены связаны друг с другом посредством линкера связывающих доменов и Fc-домена иммуноглобулина, где указанный Fc-домен иммуноглобулина содержит шарнирную область и константную область иммуноглобулина;
где указанный первый scFv-домен специфично связывается с 5T4 человека и содержит или состоит из SEQ ID NO: 122;
где указанный второй scFv-домен специфично связывается с 4-1BB человека и содержит или состоит из SEQ ID NO: 110; и
где указанный линкер связывающих доменов содержит или состоит из SEQ ID NO: 107.
172. Полиспецифичный полипептид, содержащий, в направлении от аминоконца к карбоксиконцу: (i) второй scFv-домен, (ii) Fc-домен иммуноглобулина, (iii) линкер связывающих доменов и (iv) первый scFv-домен;
где указанный первый scFv-домен специфично связывается с 5T4 человека и содержит или состоит из SEQ ID NO: 122;
где указанный второй scFv-домен специфично связывается с 4-1BB человека и содержит или состоит из SEQ ID NO: 110;
где указанный Fc-домен иммуноглобулина содержит или состоит из SEQ ID NO: 160; и
где указанный линкер связывающих доменов содержит или состоит из SEQ ID NO: 107.
173. Полиспецифичный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85%, 90%, 95% или 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 174, где полиспецифичный полипептид специфично связывается с 5Т4 человека и с 4-1BB человека.
174. Полиспецифичный полипептид, содержащий или состоящий из SEQ ID NO: 174, где полиспецифичный полипептид специфично связывается с 5Т4 человека и с 4-1ВВ человека.
175. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 96-174, где связывание полиспецифичного полипептида с эффекторной клеткой приводит к усилению активации эффекторной клетки.
176. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 96-174, где связывание полиспецифичного полипептида с эффекторной клеткой повышает активацию эффекторной клетки и/или пролиферацию эффекторной клетки.
177. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 96-174, где связывание полиспецифичного полипептида с эффекторной клеткой и 5T4-экспрессирующей клеткой усиливает зависимый от эффекторной клетки лизис указанной 5T4-экспрессирующей клетки.
178. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 1-177, где 5T4-связывающий домен способен связывать 5T4 со значением kD менее 50 нМ.
179. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 1-178, где вариабельная область легкой цепи и/или вариабельная область тяжелой цепи 5Т4-связывающего домена является гуманизированной.
180. Полиспецифичный полипептид по любому из пп. 1-179, где вариабельная область легкой цепи и/или вариабельная область тяжелой цепи 4-1BB-связывающего домена является гуманизированной.
181. Димер, содержащий два идентичных полипептида, где каждый из двух полипептидов представляет собой полипептид по любому из пп. 1-180.
182. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по любому из пп. 1-180 или белок по п. 181 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество.
183. Фармацевтическая композиция по п. 182, выполненная в дозированной форме, выбранной из группы, состоящей из: пероральной формы однократной дозы, внутривенной формы однократной дозы, интраназальной формы однократной дозы, суппозиторной формы однократной дозы, внутрикожной формы однократной дозы, внутримышечной формы однократной дозы, внутрибрюшинной формы однократной дозы, подкожной формы однократной дозы, эпидуральной формы однократной дозы, сублингвальной формы однократной дозы и интрацеребральной формы однократной дозы.
184. Фармацевтическая композиция по п. 182, выполненная в виде пероральной формы однократной дозы, выбранной из группы, состоящей из таблеток, пилюль, пеллетов, капсул, порошков, таблеток для рассасывания, гранул, растворов, суспензий, эмульсий, сиропов, эликсиров, составов с замедленным высвобождением, аэрозолей и спреев.
185.Способ усиления активации эффекторной клетки, направленной против клетки, экспрессирующей 5T4, включающий: приведение указанной 5T4-экспрессирующей клетки в контакт с полипептидом по любому из пп. 1-180 или белком по п. 181, где указанное приведение в контакт проводят в условиях, при которых индуцируется усиленная активация эффекторной клетки, направленной против указанной 5T4-экспрессирующей клетки.
186. Способ лечения расстройства у субъекта, где указанное расстройство характеризуется экспрессией 5T4, включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества полипептида по любому из пп. 1-180, или белка по п. 181, или фармацевтической композиции по любому из пп. 182-184.
187. Способ по п. 186, где расстройство представляет собой рак.
188. Способ по п. 187, где рак представляет собой рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак яичника, немелкоклеточный рак легкого, мезотелиому, хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), мантийноклеточный лейкоз (МКЛ), острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), плоскоклеточную карциному, меланому, рак надпочечника, рак мочевого пузыря, рак шейки матки, рак почки, рак желудка, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, рак печени, рак матки, нейрофиброму, саркому, карциному или рак головы и шеи.
189. Применение полипептида по любому из пп. 1-180 или белка по п. 181 для изготовления лекарственного средства для лечения расстройства у субъекта, где указанное расстройство характеризуется экспрессией 5Т4.
190. Применение по п. 189, где расстройство представляет собой рак.
191. Применение по п. 190, где рак представляет собой рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак яичника, немелкоклеточный рак легкого, мезотелиому, хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), мантийноклеточный лейкоз (МКЛ), острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), плоскоклеточную карциному, меланому, рак надпочечника, рак мочевого пузыря, рак шейки матки, рак почки, рак желудка, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, рак печени, рак матки, нейрофиброму, саркому, карциному или рак головы и шеи.
192. Полипептид по любому из пп. 1-180 или белок по п. 181 для применения для лечения расстройства у субъекта, где указанное расстройство характеризуется экспрессией 5Т4.
193. Полипептид или белок по п. 192, где расстройство представляет собой рак.
194. Полипептид или белок по п. 193, где рак представляет собой рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак яичника, немелкоклеточный рак легкого, мезотелиому, хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), мантийноклеточный лейкоз (МКЛ), острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), меланому, плоскоклеточную карциному, рак надпочечника, рак мочевого пузыря, рак шейки матки, рак почки, рак желудка, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, рак печени, рак матки, нейрофиброму, саркому, карциному или рак головы и шеи.
195. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид по любому из пп. 1-180 или белок по п. 181.
196. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 195, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 171 и 173.
197. Вектор экспрессии, содержащий выделенную молекулу нуклеиновой кислоты по п. 195 или 196.
198. Вектор экспрессии по п. 197, где молекула нуклеиновой кислоты функционально связана с регуляторными последовательностями, подходящими для экспрессии сегмента нуклеиновой кислоты в клетке-хозяине.
199. Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая вектор экспрессии по п. 197 или 198.
200. Способ получения полипептида, содержащего 5T4-связывающий домен, при этом указанный способ включает культивирование рекомбинантной клетки-хозяина, содержащей вектор экспрессии по п. 197 или 198, в условиях, при которых экспрессируется сегмент нуклеиновой кислоты, с получением тем самым полипептида, содержащего 5T4-связывающий домен.