СИСТЕМЫ И СПОСОБЫ ДВУМЕРНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ RPLC-SFC

1. Система хроматографии для разделения образца, содержащая:
первый разделяющий блок, содержащий:
а) первый насосный узел для продвижения первой подвижной фазы через первый разделяющий блок,
б) инжектор образца для введения образца в первый разделяющий блок; и
в) колонку жидкостной хроматографии с обращенной фазой (RPLC); второй разделяющий блок, содержащий:
а) второй насосный узел для продвижения второй подвижной фазы через второй разделяющий блок и
б) колонку сверхкритической жидкостной хроматографии (SFC);
и
первый жидкостный направляющий блок, содержащий целый ряд пробоотборных петель, причем указанный первый жидкостный направляющий блок соединяется с первым разделяющим блоком и со вторым разделяющим блоком,
где по меньшей мере одна из целого ряда пробоотборных петель содержит захватывающую колонку, причем указанная захватывающая колонка содержит неподвижную фазу;
и
где система хроматографии сконфигурирована для первоначального разделения образца в первом разделяющем блоке и последующего введения по меньшей мере части образца, элюированного из колонки RPLC первого разделяющего блока, во второй разделяющий блок.
2. Система хроматографии по п. 1, в которой первый жидкостный направлющий блок содержит две пробоотборные петли; где одна из двух пробоотборных петель находится в жидкостном сообщении с первым разделяющим блоком, и другая одна из двух пробоотборных петель находится в жидкостном сообщении со вторым разделяющим блоком.
3. Система хроматографии по п. 1, в которой первый жидкостный направлющий блок содержит по меньшей мере три пробоотборные петли; и где по меньшей мере одна из пробоотборных петель находится в жидкостной изоляции от первого разделяющего блока и второго разделяющего блока.
4. Система хроматографии по п. 3, в которой по меньшей мере одна пробоотборная петля, содержащая вещество неподвижной фазы, находится в жидкостной изоляции от первого разделяющего блока и второго разделяющего блока.
5. Система хроматографии по п. 1, в которой первый жидкостный направлющий блок содержит целый ряд захватывающих колонок, причем каждая размещается в пробоотборной петле.
6. Система хроматографии по любому пп. 1-5, в которой первый жидкостный направлющий блок сконфигурирован для обеспечения потока жидкости через пробоотборную петлю в первом направлении, когда указанная пробоотборная петля размещается в жидкостном сообщении с первым разделяющим блоком, и для обеспечения потока жидкости через указанную пробоотборную петлю в направлении, противоположном первому направлению, когда указанная пробоотборная петля размещается в жидкостном сообщении со вторым разделяющим блоком.
7. Система хроматографии по любому пп. 1-5, в которой первый жидкостный направлющий блок сконфигурирован для обеспечения потока жидкости через пробоотборную петлю в первом направлении, когда указанная пробоотборная петля размещается в жидкостном сообщении с первым разделяющим блоком, и для обеспечения потока жидкости через указанную пробоотборную петлю в том же самом направлении, что и первое направление, когда указанная пробоотборная петля размещается в жидкостном сообщении со вторым разделяющим блоком.
8. Система хроматографии по любому пп. 1-7, в которой колонка RPLC содержит неподвижную фазу с обращенной фазой.
9. Система хроматографии по п. 8, в которой неподвижная фаза с обращенной фазой содержит С-18 фазу.
10. Система хроматографии по п. 8 или 9, в которой неподвижная фаза в захватывающей колонке содержит вещество с обращенной фазой.
11. Система хроматографии по п. 9, в которой вещество с обращенной фазой содержит С-18 фазу.
12. Система хроматографии по любому пп. 1-11, в которой второй разделяющий блок содержит одну колонку SFC.
13. Система хроматографии по п. 12, в которой колонка SFC содержит неподвижную фазу с нормальной фазой.
14. Система хроматографии по п. 13, в которой неподвижная фаза с нормальной фазой содержит силикагель.
15. Система хроматографии по любому пп. 1-14, в которой второй разделяющий блок дополнительно содержит фокусирующую колонку, расположенную выше по потоку от колонки SFC.
16. Система хроматографии по п. 15, в которой фокусирующая колонка содержит вещество с обращенной фазой.
17. Система хроматографии по любому пп. 1-11, в которой второй разделяющий блок содержит:
а) комплект колонок SFC, где колонки SFC в комплекте организованы в параллельной конфигурации; и
б) второй жидкостный направляющий блок для направления потока второй подвижной фазы в заранее идентифицированную колонку SFC в комплекте.
18. Система хроматографии по п. 17, в которой второй разделяющий блок дополнительно содержит фокусирующую колонку, расположенную выше по потоку от каждой колонки SFC в комплекте колонок SFC.
19. Система хроматографии по любому пп. 1-18, дополнительно содержащая первый детектор, размещенный ниже по потоку от колонки RPLC.
20. Система хроматографии по любому пп. 1-19, дополнительно содержащая второй детектор, размещенный ниже по потоку от колонки SFC.
21. Система хроматографии по любому пп. 1-20, дополнительно содержащая по меньшей мере одно управляющее устройство, соединенное функциональным образом с одним или более чем одним из следующих:
а) первый насосный узел;
б) инжектор образца;
в) первый детектор;
г) первый жидкостный направляющий блок;
д) второй насосный узел; и
е) второй детектор.
22. Способ разделения образца, включающий следующие стадии:
(i) захват по меньшей мере части образца на захватывающей колонке, причем указанная часть получается посредством разделения образца жидкостной хроматографией с обращенной фазой (RPLC), причем указанная захватывающая колонка содержит неподвижную фазу; и
(ii) подвергание части образца, захваченной на захватывающей колонке, дальнейшему разделению посредством сверхкритической жидкостной хроматографии (SFC).
23. Способ по п. 22, дополнительно включающий разделение образца жидкостной хроматографией с обращенной фазой, включающий:
(i) введение образца в первую подвижную фазу;
(ii) продвижение первой подвижной фазы, содержащей образец, через колонку RPLC; и
(iii) разделение образца на колонке RPLC.
24. Способ по п. 23, дополнительно включающий выявление присутствия компонента образца в первой подвижной фазе после пропускания через колонку RPLC.
25. Способ по любому из пп. 22-24, дополнительно включающий элюирование части образца, захваченной на захватывающей колонке, из захватывающей колонки.
26. Способ по любому из пп. 22-25, дополнительно включающий выявление компонента образца после дополнительного разделения SFC.
27. Способ по любому из пп. 22-26, дополнительно включающий размещение захватывающей колонки в пути потока первой подвижной фазы ниже по потоку от колонки RPLC для захвата по меньшей мере части образца, разделенного колонкой RPLC.
28. Способ по п. 27, дополнительно включающий переключение захватывающей колонки, несущей захваченную часть, в путь потока второй подвижной фазы для элюирования захваченной части из захватывающей колонки.
29. Способ по п. 28, в котором стадия размещения захватывающей колонки в пути потока первой подвижной фазы или стадия переключения захватывающей колонки в путь потока второй подвижной фазы осуществляется в жидкостном направляющем блоке, связанном с жидкостным путем RPLC и с жидкостным путем SFC.
30. Способ по любому из пп. 22-29, дополнительно включающий повторный захват по меньшей мере части образца, элюированного из захватывающей колонки, на фокусирующей колонке перед дальнейшим разделением посредством SFC.
31. Способ по любому из пп. 22-30, в котором первая подвижная фаза течет через захватывающую колонку в первом направлении, и часть образца, захваченная на захватывающей колонке, элюируется из захватывающей колонки посредством протекания второй подвижной фазы через захватывающую колонку в направлении, противоположном первому направлению.
32. Способ по любому из пп. 22-30, в котором первая подвижная фаза течет через захватывающую колонку в первом направлении, и часть образца, захваченная на захватывающей колонке, элюируется из захватывающей колонки посредством протекания второй подвижной фазы через захватывающую колонку в том же самом направлении, что и первое направление.
33. Способ по п. 22, включающий следующие стадии:
(i) введение образца в первую подвижную фазу;
(ii) продвижение первой подвижной фазы, содержащей образец, через колонку RPLC;
(iii) разделение образца на колонке RPLC;
(iv) выявление присутствия компонента образца в первой подвижной фазе после пропускания через колонку RPLC;
(v) захват на первой захватывающей колонке по меньшей мере первой части образца, разделенного на колонке RPLC, причем указанная первая захватывающая колонка содержит неподвижную фазу;
(vi) элюирование первой части образца, захваченного на первой захватывающей колонке, из первой захватывающей колонки;
(vii) подвергание первой части образца, захваченного на первой захватывающей колонке, дальнейшему разделению посредством SFC; и
(viii) выявление компонента образца после дальнейшего разделения посредством SFC.
34. Способ по п. 33, дополнительно включающий следующие стадии:
(ix) захват на второй захватывающей колонке по меньшей мере второй части образца, разделенного на колонке RPLC, причем указанная вторая захватывающая колонка содержит неподвижную фазу;
(x) элюирование второй части образца, захваченного на второй захватывающей колонке, из второй захватывающей колонки;
(xi) подвергание второй части образца, захваченного на второй захватывающей колонке, дальнейшему разделению посредством SFC.
35. Способ по любому из пп. 22-34, в котором колонка RPLC содержит неподвижную фазу с обращенной фазой.
36. Способ по любому из пп. 22-35, в котором неподвижная фаза в захватывающей колонке содержит вещество с обращенной фазой.
37. Способ по любому из пп. 22-36, в котором дополнительное разделение посредством SFC осуществляется на колонке SFC, содержащей неподвижную фазу с нормальной фазой.
38. Способ по любому из пп. 22-36, в котором дополнительное разделение посредством SFC осуществляется на системе SFC, содержащей комплект колонок SFC.
39. Способ по п. 38, в котором каждая из колонок SFC независимо содержит неподвижную фазу с нормальной фазой.
40. Способ по п. 39, дополнительно включающий направление части образца, захваченного на захватывающей колонке, в колонку SFC для дальнейшего разделения, причем указанная колонка SFC содержит неподвижную фазу, адаптированную для разделения компонентов в образце.
41. Способ проведения анализа образца с использованием системы хроматографии по п. 1, включающий:
разделение сложного образца на первый набор фракций посредством жидкостной хроматографии с обращенной фазой (RPLC) на первом разделяющем блоке; и
дополнительное разделение одной или более чем одной фракции посредством сверхкритической жидкостной хроматографии (SFC) на втором разделяющем блоке.
42. Способ по п. 41, в котором разделение посредством RPLC на первом разделяющем блоке отчасти основывается на первой характеристике сложного образца, и разделение посредством SFC на втором разделяющем блоке отчасти основывается на второй характеристике сложного образца, причем указанная вторая характеристика сложного образца отличается от первой характеристики сложного образца.
43. Способ по п. 41, в котором сложный образец содержит смесь стереоизомерных компонентов.
44. Способ по п. 43, в котором диастереомерные компоненты разделяются на одну или более чем одну фракцию посредством RPLC на первом разделяющем блоке, причем каждая указанная фракция содержит энантиомерную пару.
45. Способ по п. 44, в котором разделение посредством RPLC на первом разделяющем блоке отчасти основывается на гидрофобности сложного образца.
46. Способ по п. 44 или 45, в котором энантиомерная пара дополнительно разделяется на индивидуальные энантиомеры посредством SFC на втором разделяющем блоке.
47. Способ по п. 46, в котором разделение посредством SFC на втором разделяющем блоке отчасти основывается на хиральности сложного образца.
48. Способ ахирального-хирального анализа образца, содержащего смесь стереоизомерных компонентов, с использованием системы хроматографии по п. 1, включающий:
разделение одного или более чем одного интересующего диастереомерного компонента в образце посредством RPLC на первом разделяющем блоке; и
разделение интересующей(щих) энантиомерной(ных) пар(ы) посредством SFC на втором разделяющем блоке в том же самом аналитическом цикле.
49. Способ по п. 48, дополнительно включающий определение ахиральной чистоты на основе хроматограммы из разделения RPLC и определение хиральной чистоты на основе хроматограммы из разделения SFC.