СРЕДСТВО, УСИЛИВАЮЩЕЕ ЭФФЕКТ РЕАБИЛИТАЦИИ ПОСЛЕ НЕРВНОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ, КОТОРОЕ СОДЕРЖИТ ПРОИЗВОДНОЕ ПРОСТОГО АЛКИЛОВОГО ЭФИРА ИЛИ ЕГО СОЛЬ
AGENT ENHANCING EFFECT OF REHABILITATION AFTER NERVE DAMAGE WHICH CONTAINS SIMPLE ALKYL ETHER DERIVATIVE OR SALT THEREOF

Область техники
[0001]
Настоящее изобретение относится к превосходному средству, усиливающему эффект реабилитации после нервного повреждения, которое содержит производное простого алкилового эфира или его соль.
Уровень техники
[0002] Когда происходит повреждение ткани центральной нервной системы, такой как головной мозг или спинной мозг, высшие функции, которыми управляют поврежденные нервы, ослабевают. Число пациентов с инсультом, который является типичным примером нервного повреждения, в Японии достигает приблизительно 1300000, что ведет к серьезным общественным потерям.
[0003] Когда произошло нервное повреждение, такое как инсульт или повреждение спинного мозга, рекомендуют реабилитацию с целью восстановления функциональных нарушений. Однако эффект восстановления после функциональных нарушений, достигаемый при реабилитации, является недостаточным, и сообщалось о множестве случаев, когда нарушения сохранялись или возврат в общество невозможен, даже после реабилитации. Следовательно, эффект восстановления после функциональных нарушений, достигаемый при стандартной реабилитации, ограничен (непатентные документы 1 и 2).
[0004] На сегодняшний день известно, что производные простого алкилового эфира, описанные в патентных документах 1 и 2, обладают нейропротективным действием, нейрорегенерационным действием, действием, способствующим росту нейритов, и индуцирующим нейрогенез действием (патентные документы 1 и 2).
Документы известного уровня техники
Патентный документ
[0005] Патентный документ 1: WO 03/035647
Патентный документ 2: WO 2007/125913
Непатентный документ
[0006] Непатентный документ 1: Plos One, том 8, выпуск 12, e83468 (2013)
Непатентный документ 2: Journal of Neuroengineering and Rehabilitation, том 10, страницы 112-123 (2013)
Сущность изобретения
Техническая проблема
[0007] Необходимо соединение, которое обладает действием усиления эффекта реабилитации после нервного повреждения, и которое можно использовать в качестве средства, усиливающего эффект реабилитации после нервного повреждения.
Решение проблемы
[0008] В таких условиях авторы настоящего изобретения обнаружили, что производное простого алкилового эфира, представленное следующей общей формулой [1]:
1
2
3
1-6
1-6
1-6
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
или его соль, в котором R и R одинаковые или различные, и каждый представляет одну или несколько групп, выбранных из атома водорода, атома галогена, необязательно замещенной C алкильной группы, необязательно замещенной арильной группы, необязательно замещенной ар-C алкильной группы, необязательно замещенной C алкоксильной группы, необязательно замещенной арилокси группы, необязательно замещенной C алкилтио группы, необязательно замещенной арилтио группы, необязательно замещенной C алкенильной группы, необязательно замещенной C алкенилокси группы, необязательно замещенной C алкиламиногруппы, необязательно замещенной C алкилсульфонильной группы, необязательно замещенной арилсульфонильной группы, необязательно замещенной карбамоильной группы, необязательно замещенной гетероциклической группы, необязательно защищенной аминогруппы, необязательно защищенной гидроксильной группы, необязательно защищенной карбоксильной группы, нитрогруппы и оксогруппы; R представляет необязательно замещенную C алкиламиногруппу, необязательно защищенную аминогруппу или необязательно защищенную гидроксильную группу; и m и n представляют собой одно и то же или различное, и каждый представляет целое число от 1 до 6, обладает действием усиления эффекта восстановления после функциональных нарушений, достигаемого при реабилитации после нервного повреждения, и следовательно можно использовать в качестве средства, усиливающего эффект реабилитации после нервного повреждения, тем самым выполняя настоящее изобретение.
[0009] В соответствии с настоящим изобретением, предусмотрены следующие изобретения. (1) Средство, усиливающее эффект реабилитации после нервного повреждения, которое содержит производное простого алкилового эфира, представленное посредством общей формулой [1], или его соль.
1
2
1-6
(2) Средство, усиливающее эффект реабилитации после нервного повреждения, согласно (1), которое содержит производное простого алкилового эфира или его соль, в котором R и R представляют собой одно и то же или различное, и каждый представляет собой атом водорода, атом галогена или C алкоксильную группу.
(3) Средство, усиливающее эффект реабилитации после нервного повреждения, согласно (1) или (2), которое содержит производное простого алкилового эфира или его соль, в котором m равен 2; и n равен 2 или 3.
3
(4) Средство, усиливающее эффект реабилитации после нервного повреждения, согласно любому одному из (1)-(3), которое содержит производное простого алкилового эфира или его соль, в котором R представляет собой необязательно защищенную гидроксильную группу.
(5) Средство, усиливающее эффект реабилитации после нервного повреждения, согласно (1), в котором производное простого алкилового эфира представляет собой 1-(3-(2-(1-бензотиофен-5-ил)этокси)пропил)азетидин-3-ол.
(6) Средство, усиливающее восстановление функционального нарушения, и/или средство, усиливающее облегчение функционального нарушения, для пациента с нервным повреждением для прохождения реабилитации, которое содержит производное простого алкилового эфира, представленное общей формулой [1], или его соль.
1
2
1-6
(7) Средство, усиливающее восстановление функционального нарушения, и/или средство, усиливающее облегчение функционального нарушения, для пациента с нервным повреждением для прохождения реабилитации согласно (6), которое содержит производное простого алкилового эфира или его соль, в котором R и R представляют собой одно и то же или различное, и каждый представляет собой атом водорода, атом галогена или C алкоксильную группу.
(8) Средство, усиливающее восстановление функционального нарушения, и/или средство, усиливающее облегчение функционального нарушения, для пациента с нервным повреждением для прохождения реабилитации согласно (6) или (7), которое содержит производное простого алкилового эфира или его соль, в котором m равен 2; и n равен 2 или 3.
3
(9) Средство, усиливающее восстановление функционального нарушения, и/или средство, усиливающее облегчение функционального нарушения, для пациента с нервным повреждением для прохождения реабилитации согласно любому одному из (6)-(8), которое содержит производное простого алкилового эфира или его соль, в котором R представляет собой необязательно защищенную гидроксильную группу.
(10) Средство, усиливающее восстановление функционального нарушения, и/или средство, усиливающее облегчение функционального нарушения, для пациента с нервным повреждением для прохождения реабилитации согласно (6), в котором производное простого алкилового эфира представляет собой 1-(3-(2-(1-бензотиофен-5-ил)этокси)пропил)азетидин-3-ол.
[0010] В соответствии с настоящим изобретением, также предусмотрены следующие изобретения.
(a) Средство, усиливающее эффект реабилитации после инсульта, после повреждения головного мозга или после повреждения спинного мозга, которое содержит производное простого алкилового эфира, представленное общей формулой [1], или его соль.
(b) Средство, усиливающее восстановление функционального нарушения, и/или средство, усиливающее облегчение функционального нарушения, для пациента с инсультом, пациента с повреждением головного мозга или пациент с повреждением спинного мозга для прохождения реабилитации, которое содержит производное простого алкилового эфира, представленное общей формулой [1], или его соль.
(c) Применение производного простого алкилового эфира, представленного общей формулой [1], или его соли, для получения лекарственного средства для усиления эффекта реабилитации после нервного повреждения.
(d) Применение производного простого алкилового эфира, представленного общей формулой [1], или его соли, для получения лекарственного средства для лечения заболевания, против которого средство, усиливающее эффект реабилитации после нервного повреждения, проявляет эффект.
(e) Применение согласно (c) или (d), в котором нервное повреждение представляет собой инсульт, повреждение головного мозга или повреждение спинного мозга.
(f) Способ применения в лечении заболевания, против которого средство, усиливающее эффект реабилитации после нервного повреждения, проявляет эффект, который включает стадию введения субъекту (млекопитающему, в том числе человеку) эффективного количества производного простого алкилового эфира, представленного общей формулой [1], или его солью.
(g) Способ усиления эффекта реабилитации после нервного повреждения, который включает стадию введения субъекту (млекопитающему, в том числе человеку) производного простого алкилового эфира, представленного общей формулой [1], или его соли.
(h) Способ согласно (f) или (g), в котором нервное повреждение представляет собой инсульт, повреждение головного мозга или повреждение спинного мозга
Полезные эффекты изобретения
[0011] Производное простого алкилового эфира, представленное общей формулой [1], или его соль в соответствии с настоящим изобретением обладает действием усиления эффекта реабилитации после нервного повреждения, и его можно использовать в качестве средства, усиливающего эффект реабилитации после нервного повреждения.
Краткое описание фигур
[0012] [Фиг. 1] На фиг. 1 представлена диаграмма, показывающая сравнение эффектов реабилитации после нервного повреждения. Вертикальная ось представляет относительную скорость восстановления (выраженную в виде среднего значения±SEM), когда коэффициент результативности в финальные сутки моторного обучения определяют равным 1, и коэффициент результативности через 21 сутки после криоповреждения определяют равным 0. Горизонтальная ось представляет, с лева,финальные сутки моторного обучения (перед криоповреждение), 21 сутки, 28 суток, 35 суток, 42 суток и 49 суток после криоповреждения. * представляет присутствие значимого различия (p<0,05) при сравнении с контрольной группой ().
[Фиг. 2] На фиг. 2 представлена диаграмма, показывающая сравнение эффектов реабилитации после нервного повреждения. Вертикальная ось представляет относительную скорость восстановления (выраженную в виде среднего значения±SEM), когда коэффициент результативности в финальные сутки моторного обучения определяют равным 1, и среднее значение коэффициентов результативности через 7 суток, 14 суток и 21 сутки после индукции геморрагии внутренней капсулы определяют равным 0. Горизонтальная ось представляет, слева, финальные сутки моторного обучения (перед геморрагией внутренней капсулы), от 7 до 21 суток, 31 сутки, 38 суток и от 45 до 63 суток после индукции геморрагии внутренней капсулы. * представляет присутствие значимого различия (p<0,05) при сравнении с контрольной группой ().
[Фиг. 3] На фиг. 3 представлена диаграмма, показывающая доску со щелью, используемую в качестве аппарата для тестирования.
[Фиг. 4] На фиг. 4 представлена диаграмма, показывающая доску Клювера, которую использовали в качестве аппарата для тестирования. Верхняя диаграмма (круг) показывает вид сверху. Нижняя диаграмма (прямоугольник) показывает вид в поперечном разрезе, если смотреть в направлении с левой стороны.
[Фиг. 5] На фиг. 5 представлена диаграмма, показывающая доску с отверстиями, используемую в качестве аппарата для тестирования.
2
[Фиг. 6] На фиг. 6 представлена фотография, сделанная, когда был горизонтально предоставлен кусок яблока 7 мм, прикрепленный к кончику иглы через акриловую трубку.
[Фиг. 7] На фиг. 7 представлена фотография, сделанная, когда акриловую трубку, в которой формировали щель на ее кончике, делали обращенной вперед.
Описание вариантов осуществления
[0013] Далее в настоящем документе подробно описано настоящее изобретение.
Термины, используемые в настоящем описании, имеют следующие значения, если не указано иное.
«Лечение» обозначает предотвращение или терапию.
«Лечебное средство» обозначает вещество, предусмотренное для профилактических или терапевтических целей.
[0014] «Атом галогена» обозначает атом фтора, атом хлора, атом брома или атом йода.
1-6
1-6
«C алкильная группа» обозначает линейную или разветвленную C алкильную группу, такую как метильная, этильная, пропильная, изопропильная, бутильная, изобутильная, трет-бутильная, пентильная или гексильная группа.
2-6
2-6
«C алкенильная группа» обозначает C алкенильную группу, такую как винил, пропенил, бутенил, пентенил или гексенил.
1-6
1-6
«Ацил-C алкильная группа» обозначает ацил-C алкильную группу, такую как, например, ацетилметил, бензоилметил, п-нитробензоилметил, п-бромбензоилметил, п-метоксибензоилметил или 1-бензоилэтил.
1-6
1-6
«Ацилокси-C алкильная группа» обозначает ацилокси-C алкильную группу, такую как, например, ацетоксиметил, пропионилоксиметил или пивалоилоксиметил.
1-6
«Арилтио-C алкильная группа» обозначает группу, например, такую как фенилсульфенилметил или 2-(п-нитрофенилсульфенил)этил.
1-6
1-6
«Арилсульфонил-C алкильная группа» обозначает арилсульфонил-C алкильную группу, например, такую как п-толуолсульфонилэтил.
1-6
1-6
«Азотсодержащая гетероциклическая C алкильная группа» обозначает азотсодержащую гетероциклическую C алкильную группу, например, такую как фталимидометил или сукцинимидометил.
3-8
3-8
«C циклоалкильная группа» обозначает C циклоалкильную группу, такую как, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил.
1-6
1-6
1-6
1-6
«C-алкилтио-C алкильная группа» обозначает C-алкилтио-C алкильную группу, например, такую как метилтиометил, этилтиометил или пропилтиометил.
1-6
1-6
1-6
1-6
«C-алкокси-C алкильная группа» обозначает C-алкилокси-C алкильную группу, например, такую как метоксиметил или 1-этоксиэтил.
1-6
1-6
1-6
1-6
«Ар-C-алкилокси-C алкильная группа» обозначает ар-C-алкилокси-C алкильную группу, например, такую как бензилоксиметил или фенетилоксиметил.
1-6
1-6
[0015] «C алкоксильная группа» обозначает линейную или разветвленную C алкилоксигруппу, такую как метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, изобутокси, трет-бутокси, пентилокси или гексилоксигруппа.
2-6
2-6
«C алкенилокси группа» обозначает C алкенилоксигруппу, такую как винилокси, пропенилокси, бутенилокси, пентенилокси или гексенилоксигруппа.
1-6
1-6
[0016] «C алкилтио группа» обозначает C алкилтиогруппу, такую как метилтио, этилтио, пропилтио, изопропилтио, бутилтио, изобутилтио, трет-бутилтио, пентилтио или гексилтио.
[0017] «Арильная группа» обозначает фенильную, нафтильную, инданильную или инденильную группу.
«Арилоксигруппа» обозначает фенилокси, нафтилокси, инданилокси или инденилоксигруппу.
1-6
1-6
«Ар-C алкильная группа» обозначает ар-C алкильную группу, такую как бензильная, дифенилметильная, тритильная или фенетильньная группа.
«Арилтиогруппа» обозначает фенилтио, нафтилтио, инданилтио или инденилтиогруппу.
2-6
1-6
[0018] «Ацильная группа» обозначает формильную группу, C алканоильную группу, такую как ацетил, изовалерил, пропионил или пивалоил, ар-C-алкилкарбонильную группу, такую как бензилкарбонил, или ароильную группу, такую как бензоил или нафтоил.
1-6
1-6
«C алкилоксикарбонильная группа» обозначает линейную или разветвленную C алкилоксикарбонильную группу, например, такую как метоксикарбонил, этоксикарбонил, 1,1-диметилпропоксикарбонил, изопропоксикарбонил, 2-этилгексилоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил или трет-пентилоксикарбонил.
1-6
1-6
«Ар-C-алкилоксикарбонильная группа» обозначает ар-C-алкилоксикарбонильную группу, например, такую как бензилоксикарбонильная или фенетилоксикарбонильньная группа.
«Арилоксикарбонильная группа» обозначает группу, например, такую как фенилоксикарбонил.
«Гетероциклическая оксикарбонильная группа» обозначает группу, например, такую как 2-фурфурилоксикарбонил или 8-хинолилоксикарбонил.
1-6
1-6
[0019] «C алкилсульфонильная группа» обозначает C алкилсульфонильную группу, например, такую как метилсульфонил, этилсульфонил или пропилсульфонил.
«Арилсульфонильная группа» обозначает фенилсульфонильную, п-толуолсульфонильную или нафтилсульфонильньную группу.
1-6
1-6
[0020] «C алкиламиногруппа» обозначает моно- или ди-C алкиламиногруппу, такую как метиламино, этиламино, пропиламино, изопропиламино, бутиламино, диметиламино, диэтиламино, диизопропиламино или дибутиламино.
[0021] «Гетероциклическая группа» обозначает гетероциклическую группу с 5-членным или 6-членным кольцом, конденсированным кольцом или кольцом с мостиком, содержащую по меньшей мере один гетероатом, выбранный из атомов азота, кислорода и серы, такие как пирролидинильная, пиперидинильная, пиперазинильная, гомопиперазинильная, гомопиперидинильная, морфолильная, тиоморфолильная, тетрагидрохинолинильная, тетрагидроизохинолильная, хинуклидинильная, имидазолинильная, пирролильная, имидазолильная, пиразолильная, пиридильная, пиримидильная, хинолильная, хинолизинильная, тиазолильная, тетразолильная, тиадиазолильная, пирролинильная, пиразолинильная, пиразолидинильная, пуринильная, фурильная, тиенильная, бензотиенильная, пиранильная, изобензофуранильная, оксазолильная, изоксазолильная, бензофуранильная, индолильная, бензимидазолильная, бензоксазолильная, бензизоксазолильная, бензотиазолильная, хиноксалильная, дигидрохиноксалильная, 2,3-дигидробензотиенильная, 2,3-дигидробензопирролильная, 2,3-4H-1-тианафтильная, 2,3-дигидробензофуранильная, бензо[b]диоксанил, имидазо[2,3-a]пиридильная, бензо[b]пиперазинильная, хроменильная, изотиазолильная, изоксазолильная, оксадиазолильная, пиридазинильная, изоиндолильная, изохинолильная, 1,3-бензодиоксонильная или 1,4-бензодиоксанильная группа.
[0022] «Кислородсодержащая гетероциклическая группа» обозначает группу, например, такую как 2-тетрагидропиранил или 2-тетрагидрофуранил.
«Серусодержащая гетероциклическая группа» обозначает группу, например, такую как тетрагидротиопиранил.
«Замещенная силильная группа» обозначает группу, например, такую как триметилсилил, триэтилсилил или трибутилсилил.
1-6
1-6
«C-алкилсилил-C алкильная группа» обозначает группу, например, такую как 2-(триметилсилил)этил.
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
[0023] Защитные группы амина включают все группы, которые можно использовать в качестве общей защитной группы для аминогрупп, например, те группы, которые описаны у W. Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 4-е издание, страницы 696-868, 2007: John Wiley & Sons, INC. Конкретные примеры включают ацильную группу, C алкилоксикарбонильную группу, ар-C-алкилоксикарбонильную группу, арилоксикарбонильную группу, ар-C-алкильную группу, C-алкокси-C алкильную группу, ар-C-алкилокси-C алкильную группу, арилтиогруппу, C алкилсульфонильную группу, арилсульфонильную группу и замещенную силильную группу.
1-6
1-6
1-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
[0024] Защитные группы гидроксила включают все группы, которые можно использовать в качестве общих защитных групп для гидроксильных групп, например, те группы, которые описаны у W. Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 4-е издание, страницы 16-299, 2007: John Wiley & Sons, Inc. Конкретные примеры включают ацильную группу, C алкилоксикарбонильную группу, ар-C-алкилоксикарбонильную группу, гетероциклическую оксикарбонильную группу, C алкильную группу, C алкенильную группу, ар-C алкильную группу, кислородсодержащую гетероциклическую группу, серусодержащую гетероциклическую группу, C-алкокси-C алкильную группу, ар-C-алкилокси-C алкильную группу, C алкилсульфонильную группу, арилсульфонильную группу и замещенную силильную группу.
1-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
3-8
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
1-6
[0025] Защитные группы карбоксила включают все группы, которые можно использовать в качестве общих защитных групп для карбоксильных групп, например, те группы, которые описаны у W. Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 4-е издание, страницы 533-643, 2007: John Wiley & Sons, Inc. Конкретные примеры включают C алкильную группу, C алкенильную группу, арильную группу, ар-C алкильную группу, ацил-C алкильную группу, арилтио-C алкильную группу, арилсульфонил-C алкильную группу, кислородсодержащую гетероциклическую группу, C-алкилсилил-C алкильную группу, ацилокси-C алкильную группу, азотсодержащую гетероциклическую C алкильную группу, C циклоалкильную группу, C-алкокси-C алкильную группу, ар-C-алкилокси-C алкильную группу, C-алкилтио-C алкильную группу и замещенную силильную группу.
1-6
1-6
1-6
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
1-6
1-6
3-8
1-6
1-6
2-6
1-6
1-6
1
2
3
[0026] Примеры заместителей для C алкильной группы, арильной группы, ар-C алкильной группы, C алкоксильной группы, арилоксигруппы, C алкилтиогруппы, арилтиогруппы, C алкенильной группы, C алкенилоксигруппы, C алкиламиногруппы, C алкилсульфонильной группы, арилсульфонильной группы, карбамоильной группы и гетероциклической группы на R и R, а также заместители для C алкиламиногруппы на R включают группы, выбранные из атома галогена, C алкильной группы, C циклоалкильной группы, арильной группы, C алкоксильной группы, арилоксигруппы, C алкилтиогруппы, арилтиогруппы, C алкенильной группы, C алкилсульфонильной группы, арилсульфонильной группы, C алкиламиногруппы, необязательно защищенной аминогруппы, необязательно защищенной гидроксильной группы, необязательно защищенной карбоксильной группы, ацильной группы, гетероциклической группы и т. п.
[0027] Примеры солей соединения, представленного общей формулой [1], включают в целом известные соли с основными группами, такими как аминогруппы, или кислыми группами, такими как гидроксильные или карбоксильные группы.
Соли с основными группами включают, например, соли с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромистоводородная кислота, азотная кислота и серная кислота; соли с органическими карбоновыми кислотами, такими как муравьиная кислота, уксусная кислота, лимонная кислота, щавелевая кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, винная кислота, аспарагиновая кислота, трихлоруксусная кислота и трифторуксусная кислота; и соли с сульфоновыми кислотами, такими как метансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, мезитиленсульфоновая кислота и нафталинсульфоновая кислота.
[0028] Соли с кислыми группами включают, например, соли с щелочными металлами, такими как натрий и калий; соли с щелочноземельными металлами, такими как кальций и магний; соли аммония; и соли с азотсодержащими органическими основаниями, такими как триметиламин, триэтиламин, трибутиламин, пиридин, N,N-диметиланилин, N-метилпиперидин, N-метилморфолин, диэтиламин, дициклогексиламин, прокаин, дибензиламин, N-бензил-β-фенетиламин, 1-эфенамин и N,N'-дибензилэтилендиамин.
[0029] Среди описанных выше солей примеры предпочтительных солей включают фармакологически приемлемые соли и примером более предпочтительной соли является малеиновая кислота.
[0030] Когда изомеры (например, оптические изомеры, геометрические изомеры и таутомеры) присутствуют в производном простого алкилового эфира, представленном общей формулой [1], или его соли, настоящее изобретение относится ко всем изомерам, и также охватывает гидраты, сольваты и все их кристаллические формы.
[0031] Соединения, предпочтительные в качестве производного простого алкилового эфира, представленного общей формулой [1], или его соли, используемых в настоящем изобретении, включают следующие соединения.
1
1
1-6
Соединение, в котором R представляет собой атом водорода, атом галогена или C алкоксильную группу, является предпочтительным, и соединение, в котором R представляет собой атом водорода, является более предпочтительным.
2
2
1-6
Соединение, в котором R представляет собой атом водорода, атом галогена или C алкоксильную группу, является предпочтительным, и соединение, в котором R представляет собой атом водорода, является более предпочтительным.
3
3
Соединение, в котором R представляет собой необязательно защищенную гидроксильную группу, является предпочтительным, и соединение, в котором R представляет собой гидроксильную группу, является более предпочтительным.
Соединение, в котором m равен 2 и n равен 2 или 3, является предпочтительным, и соединение, в котором m равен 2 и n равен 3, является более предпочтительным.
Производное простого алкилового эфира, представленное общей формулой [1], особенно предпочтительно представляет собой 1-(3-(2-(1-бензотиофен-5-ил)этокси)пропил)азетидин-3-ол.
[0032] Производное простого алкилового эфира, представленного общей формулой [1], или его соль в соответствии с настоящим изобретением обладает действием усиления эффекта реабилитации после нервного повреждения, и фармацевтическую композицию, содержащую производное простого алкилового эфира, представленное общей формулой [1], или его соль, можно использовать для лечения заболевания, против которого средство, усиливающее эффект реабилитации после нервного повреждения, проявляет эффект.
Способ, в котором вводят производное простого алкилового эфира, представленное общей формулой [1], или его соль в соответствии с настоящим изобретением, можно использовать в качестве способа лечения заболевания, против которого средство, усиливающее эффект реабилитации после нервного повреждения, в соответствии с настоящим изобретением проявляет эффект.
[0033] «Реабилитация после нервного повреждения» предназначена для того, чтобы снижать длительность госпитализации после нервного повреждения, достигать самостоятельности при уходе за собой на ранней стадии и усовершенствовать QOL (качество жизни) и обозначает курс обучения, которое осуществляют для достижения восстановления функционального нарушения, обусловленного нервным повреждением, на более ранней стадии и/или облегчения функционального нарушения (например, для достижения восстановления функции, близкой к функциональному уровню до нервного повреждения).
Реабилитацию после нервного повреждения осуществляют, например, в острой фазе, фазе выздоровления и/или фазе поддержания, в зависимости от периода после нервного повреждения и состояния пациента. Конкретные примеры включают обучение для восстановления нарушения двигательных функций, например, увеличение мышечной силы, обучение объему движений в суставах для пальцев, коленей и т. п., а также обучение движениям, таким как ходьба; обучение для восстановления нарушения речевой функции; и/или обучение для восстановления нарушения когнитивных функций. Предпочтительным примером является обучение для восстановления нарушения двигательных функций.
[0034] «Эффект реабилитации» обозначает восстановление и/или облегчение функционального нарушения через реабилитацию.
«Функциональное нарушение», подлежащее восстановлению и/или облегчению посредством реабилитации обозначает функциональное нарушение, обусловленное нервным повреждением. Конкретные примеры включают нарушение двигательных функций, нарушение сенсорных функций и нарушение речевой функции. Предпочтительные примеры включают нарушение двигательных функций и нарушение речевой функции и более предпочтительный пример представляет собой нарушение двигательных функций. Еще более предпочтительный пример представляет собой нарушение двигательных функций конечностей. Однако следует отметить, что нарушения ментальных функций, такие как депрессивные симптомы, и нарушения когнитивных функций, такие как деменция, не исключены.
[0035] «Усиление эффекта реабилитации» обозначает вызывать более высокую степень восстановления от функционального нарушения и/или содействовать облегчению нарушения функции за более короткий период времени, чем в случае, когда осуществляют только реабилитацию.
[0036] Примеры нервного повреждения включают инсульт, повреждение головного мозга, повреждение спинного мозга, нейродегенеративные заболевания и демиелинизирующие заболевания, и предпочтительные примеры включают инсульт, повреждение головного мозга и повреждение спинного мозга.
[0037] Примеры инсульта включают инфаркт головного мозга, тромбоз головного мозга, эмболию головного мозга, атеротромботический инфаркт головного мозга, кардиогенную эмболию головного мозга, геморрагию головного мозга и субарахноидальную геморрагию.
[0038] «Повреждение головного мозга» обозначает состояние, при котором повреждена часть головного мозга, независимо от его причины. Примеры повреждения головного мозга включают травматическое повреждение головного мозга, травму головы, ушиб головного мозга, приобретенное повреждение головного мозга, опухоль головного мозга, удаление опухоли головного мозга и энцефалит.
[0039] «Повреждение спинного мозга» обозначает состояние, в котором повреждена часть спинного мозга, независимо от его причины. Примеры причин повреждения спинного мозга включают дорожно-транспортные происшествия, падение с высокого места, падения, ушибы, придавливание чем-то тяжелым и спорт.
[0040] Примеры нейродегенеративных заболеваний включают спинально-церебеллярную атаксию, болезнь Паркинсона, амиотрофический боковой склероз, хорею Гентингтона, прогрессирующий надъядерный паралич и множественную системную атрофию.
[0041] Примеры демиелинизирующих заболеваний включают рассеянный склероз, синдром Гийена-Барре и хроническую воспалительную демиелинизирующую полинейропатию.
[0042] «Нарушение двигательных функций» обозначает состояние, при котором произвольные движения затруднены, нарушены или не выполняются плавно, и обозначает двигательный паралич и атаксию. Конкретные примеры включают искажения точных движений, симптом Бабинского, спастический паралич, спастичность (хроническая фаза), глубокий сухожильный гиперрефлекс (хроническая фаза), мышечную ригидность, брадифагию, непреднамеренные движения (например, тремор, хорея, атетоз и дистонию), атаксию (конечностей/туловища), нарушение функции ходьбы и нарушение функций верхних конечностей, свойственном этому, а также нарушение речевой функции и нарушения приема пищи/глотания. Предпочтительные примеры включают нарушение функции ходьбы и нарушение функций верхних конечностей.
[0043] «Нарушение сенсорной функции» обозначает состояние, при котором церебральное нарушение делает невозможным нормальное распознавание поверхностной чувствительности, такого как тактильное ощущение, ощущение давления и ощущение температуры, глубокой чувствительности, такой как ощущение положения и ощущение вибрации, а также комбинированной чувствительности такой как различение двух точек и графестезия. Конкретные примеры включают сенсорное торможение (утрата), пониженную чувствительность (убывание), гиперестезию и дисестезию (парестезию). Нарушение сенсорной функции также включает сенсорные нарушения, обусловленные местами, где возникают такие сенсорные нарушения, как гемисенсорное нарушение, нарушение поверхностной чувствительности и нарушение всей чувствительности.
[0044] «Нарушение речевой функции» обозначает афазию, включающую снижение способности в аспектах речи, таких как слушание, чтение, произношении и написание слов, из-за повреждения в области, управляющей функцией речи; и дискинетическую дизартрию, включающую симптомы, такие как сложность голосообразования или артикуляции из-за паралича голосообразующих/речевых органов, таких как губа, язык и голосовые связки, а также нарушения управления движениями (атакию). Нарушение речевой функции предпочтительно обозначает дискинетическую дизартрию.
[0045] Примеры заболеваний, против которых средство, усиливающее эффект реабилитации после нервного повреждения, демонстрирует эффект, включают инсульт, повреждение головного мозга, повреждение спинного мозга, нейродегенеративные заболевания и демиелинизирующие заболевания, и предпочтительные примеры включают инсульт, повреждение головного мозга и повреждение спинного мозга.
[0046] Производное простого алкилового эфира, представленное общей формулой [1], или соль, используемые в настоящем изобретении, можно получать с использованием какого-либо из или подходящей комбинации способов, известных per se, или с использованием способа, который описан в патентном документе 1.
[0047] Производное простого алкилового эфира, представленное общей формулой [1], или его соль, используемые в настоящем изобретении, можно смешивать с различными фармацевтическими добавками, такими как эксципиенты, связывающие средства, дезинтегрирующие средства, ингибиторы дезинтеграции, средства против спекания/слипания, смазывающие средства, абсорбирующие/адсорбирующие носители, растворители, наполнители, изотонические средства, солюбилизаторы, эмульсификаторы, суспендирующие средства, загустители, покрывающие средства, усилители абсорбции, содействующие гелеобразованию/коагуляции средства, светостабилизаторы, консерванты, десиканты, стабилизаторы эмульсии/суспензии/дисперсии, средства, препятствующие окрашиванию, раскислители/антиоксиданты, ароматизаторы, красители, облегчающие взбивание средства, противовспенивающие средства, успокаивающие средства, антистатические средства и буферы/регуляторы pH, чтобы получать из них фармацевтические препараты, такие как пероральные препараты (таблетки, капсулы, порошки, гранулы, мелкозернистые гранулы, пилюли, суспензии, эмульсии, растворы, сиропы и т. п.), инъекции и глазные капли.
Описанные выше различные лекарственные средства можно получать с использованием общих способов.
[0048] Твердые пероральные препараты, такие как таблетки, порошки и гранулы, можно получать в соответствии со стандартными способами, используя фармацевтические добавки для твердых препаратов, например, эксципиенты, такие как лактоза, сахароза, хлорид натрия, глюкоза, крахмал, карбонат кальция, каолин, кристаллическая целлюлоза, безводный двухосновный фосфат кальция, частично прежелатинизированный крахмал, кукурузный крахмал и альгиновая кислота; связывающие средства, такие как простой сироп, раствор глюкозы, раствор крахмала, раствор желатина, поливиниловый спирт, простой поливиниловый эфир, поливинилпирролидон, карбоксиметилцеллюлоза, шеллак, метилцеллюлоза, этилцеллюлоза, альгинат натрия, аравийская камедь, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, вода и этанол; дезинтегрирующие средства, такие как сухой крахмал, альгиновая кислота, порошок агара, крахмал, сшитый поливинилпирролидон, сшитая карбоксиметилцеллюлоза натрия, карбоксиметилцеллюлоза кальция и крахмалгликолят натрия; ингибиторы дезинтеграции, такие как стеариловый спирт, стеариновая кислота, кокосовое масло и гидрогенезированное масло; средства против спекания/слипания, такие как силикат алюминия, гидрофосфат кальция, оксид магния, тальк и безводная кремниевая кислота; смазывающие средства, такие как карнаубский воск, легкая безводная кремниевая кислота, силикат алюминия, силикат магния, отвержденное масло, отвержденные производные растительных масел, сезамовое масло, отбеленный пчелиный воск, оксид титана, сухой гель гидроксида алюминия, стеариновая кислота, стеарат кальция, стеарат магния, тальк, гидрофосфат кальция, лаурилсульфат натрия и полиэтиленгликоль; усилители абсорбции, такие как четвертичные аммониевые соли, лаурилсульфат натрия, мочевина и ферменты; и абсорбирующие/адсорбирующие носители, такие как крахмал, лактоза, каолин, бентонит, безводная кремниевая кислота, гидратированный диоксид кремния, алюмометасиликат магния и коллоидная кремниевая кислота.
Кроме того, при необходимости, таблетки можно делать в виде таблеток, которые имеют обычные покрытия, например, таблеток с сахарным покрытием, таблетки с желатиновым покрытием, таблетки в желудочной оболочке, таблетки в кишечной оболочке и таблетки, покрытые водорастворимой пленкой.
Капсулы получают посредством смешивания с различными вышеперечисленными фармацевтическими средствами и заполнения твердых желатиновых капсул, мягких капсул и т. п. смесями.
Водные или масляные суспензии, растворы, сиропы и настойки также можно получать в соответствии со стандартными способами, используя различные описанные выше добавки для жидких препаратов, такие как растворители, наполнители, изотонические средства, солюбилизаторы, эмульсификаторы, суспендирующие средства и загустители.
[0049] Инъекции можно получать в соответствии со стандартными способами, используя фармацевтические добавки для жидких препаратов, например, разбавители, такие как вода, этиловый спирт, макрогол, пропиленгликоль, лимонная кислота, уксусная кислота, фосфорная кислота, молочная кислота, лактат натрия, серная кислота и гидроксид натрия; регуляторы pH и буферы, такие как цитрат натрия, ацетат натрия и фосфат натрия; стабилизаторы, такие как пиросульфит натрия, этилендиаминтетрауксусная кислота, тиогликолевая кислота и тиомолочная кислота; изотонические средства, такие как соль, глюкоза, маннит и глицерин; солюбилизаторы, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, пропиленгликоль, бензоат натрия, бензилбензоат, уретан, этаноламин и глицерин; успокаивающие средства, такие как глюконат кальция, хлорбутанол, глюкоза и бензиловый спирт; и местные анестетики.
[0050] Глазные капли можно получать в соответствии со стандартными способами посредством смешивания, по ситуации, консервантов, таких как хлорбутанол, дегидроацетат натрия, хлорид бензалкония, хлорид цетилпиридиния, фенетиловый спирт, метилпарагидроксибензоат и хлорид бензетония; буферы, такие как бура, борная кислота и дигидрофосфат калия; загустители, такие как метилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, поливиниловый спирт, карбоксиметилцеллюлоза натрия и хондроитинсульфат; солюбилизаторы, такие как полисорбат 80 и отвержденное полиоксиэтиленом касторовое масло 60; стабилизаторы, такие как эдетат динатрия и бисульфит натрия; и изотонические средства, такие как хлорид натрия, хлорид калия и глицерин.
[0051] Хотя способ введения описанных выше препаратов конкретно не ограничен, его определяют по ситуации, в зависимости от дозированной формы, возраста, пола пациента и других условий, а также от тяжести состояния пациента.
Хотя дозу активного ингредиента описанных выше препаратов выбирают по ситуации, например, в зависимости от использования, возраста, пола пациента, формы заболевания и других условий, в целом можно вводить от 0,1 до 1000 мг в сутки активного ингредиента взрослому в виде одной или разделенных доз, и предпочтительно можно вводить от 40 до 500 мг в сутки активного ингредиента в виде одной или разделенных доз.
[0052] Далее настоящее изобретение описано на основании тестовых примеров и примеров получения, которые не предназначены для того, чтобы ограничивать настоящее изобретение.
Малеатная соль 1-(3-(2-(1-бензотиофен-5-ил)этокси)пропил)азетидин-3-ола (далее в настоящем документе, обозначаемого как соединение A) использовали в качестве тестируемого соединения.
[0053] Тестовый пример 1
Исследовали действие усиливающего восстановление эффекта, достигаемого посредством обучения функции передней конечности, утраченной после повреждения головного мозга, индуцированного криоповреждением.
Тест осуществляли с использованием следующего способа, обратившись к способу, который описан в Journal of Neuroscience Methods, том 193, выпуск 1, страницы 82-85 (2010) и Nature, том 462, выпуск 7275, страницы 915-919 (2009).
[0054] В тесте использовали самцов мышей C57BL/6J в возрасте шести недель (Charles River Japan). Мышей содержали в среде, в которой они имели свободный доступ к пище и воде при цикле света-темноты 12 час (световой период: 7:00-19:00, темновой период: 19:00-7:00).
[0055] Тест осуществляли для групп, организованных, как показано в таблице 1. Мышей распределяли по группам случайно.
[0056] [Таблица 1]
Тестируемое соединение
Путь введения/Разы
Доза
Обучение
Число мышей
Легенда на фиг. 1
-
Перорально/Два раза в сутки
-
Нет
6
<img file="00000002.jpg" he="10" wi="11" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Соединение A
30мг/кг/раз
Нет
7
<img file="00000004.jpg" he="11" wi="11" img-content="undefined" img-format="jpg" />
-
-
Да (30мин/сутки)
11
<img file="00000003.jpg" he="10" wi="10" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Соединение A
30мг/кг/раз
Да (30мин/сутки)
11
<img file="00000005.jpg" he="10" wi="10" img-content="undefined" img-format="jpg" />
[0057] Использовали акриловое прямоугольное ограждение (длина×ширин×высота 15×8,5×20 см), в котором только передняя грань из четырех граней была прозрачной, а другие три грани были черными. Щель размерами 0,5 см в ширину × 13 см в высоту формировали на правой стороне передней поверхности, когда смотрят спереди. Прозрачную акриловую пластину размерами 8,5 см в ширину × 1,25 см в высоту использовали в качестве пластины для кормления. Кубики миндаля (K's Factory, Co., Ltd.) использовали в качестве корма для использования в оценке.
[0058] Для того чтобы позволить мышам акклиматизироваться к тестовой среде, мышей оставляли в камере для поведенческого теста в течение приблизительно 1 часа перед процедурой акклиматизации. Кроме того, чтобы снижать внимание мышей к аппарату для тестирования, щепотку подстилки из домашней клетки распространяли внутри аппарата для тестирования.
Для того чтобы позволять мышам акклиматизироваться к аппарату для тестирования, процедуру акклиматизации осуществляли в течение 4 суток. В частности, в сутки 1 мышей помещали внутрь аппарата для тестирования и оставляли свободно исследовать в течение 10 минут. После процедуры акклиматизации в сутки 1 мышей подвергали ограничению пищи (1,5 г/мышь) с использованием корма, состоящего из смеси кубиков миндаля и толченого нормального корма. После этого ограничение пищи применяли до завершения процедуры акклиматизации. В сутки 2 щепотку кубиков миндаля помещали в положение в щели внутри аппарата для тестирования и затем мышее помещали в аппарат для тестирования и оставляли свободно исследовать в течение 10 минут. В сутки 3 в дополнение к тому же положению, что в сутки 2, щепотку кубиков миндаля помещали в положение в щели на пластине для кормления, расположенной снаружи аппарата для тестирования, и затем мышей помещали в аппарат для тестирования и оставляли свободно исследовать в течение 10 минут. В сутки 4 щепотку кубиков миндаля помещали только в положение в щели на пластине для кормления, расположенной снаружи аппарата для тестирования, и затем мышей помещали внутрь аппарата для тестирования и оставляли свободно исследовать в течение 10 минут.
[0059] Для того, чтобы позволить мышам учиться брать кубики миндаля левой передней конечностью с пластины для кормления, расположенной за пределами аппарата для тестирования, процедуру моторного обучения осуществляли в течение 4 суток. С суток перед началом обучения мышей подвергали ограничению пищи, как в процедуре акклиматизации. Кроме того, как в процедуре акклиматизации, для того, чтобы позволять мышам акклиматизироваться к тестовой среде, мышей оставляли в камере для поведенческого теста в течение приблизительно 1 часа перед процедурой обучения. Кроме того, чтобы снижать внимание мышей к аппарату для тестирования, щепотку подстилки из домашней клетки распределяли внутри аппарата для тестирования.
Моторное обучение осуществляли посредством размещения одного из кубиков миндаля на продолженной линии левого конца щели и оценки способ взятия пищи. Положение этой пищи было таким, что мыши не могли касаться пищи правой передней конечностью. Число испытаний в сутки составляло 30. Длительность теста составляла 20 минут максимум, и испытания в эти сутки прекращали, когда проходило 20 минут с начала теста, даже если число испытаний не достигало 30.
Случай, когда мышь была способна протянуть левую переднюю конечность через щель и нести кубик миндаля в рот, не роняя его, определяли как успешный. Случай, когда мышь ударяла кубик миндаля, случай, когда мышь роняла кубик миндаля перед тем, как положить его в рот, случай, когда мышь протягивала переднюю конечность через щель, не касаясь кубика миндаля, или случай, когда мышь брала кубик миндаля языком, определяли как неудачу. Долю числа успешных испытаний относительно общего числа испытаний вычисляли как коэффициент результативности, и только индивидуумов, имеющих коэффициент результативности более 25% в сутки 4, использовали для следующего теста.
[0060] Офтальмологический криохирургический блок (Keeler Cryomatic: M-4000; Keeler & Y. Na, Ltd.) использовали в качестве аппарата для повреждения коры головного мозга.
[0061] Повреждали только индивидуумов, имеющих коэффициент результативности более 25% на финальные сутки моторного обучения.
Каждой мыши делали общую анестезию изофлураном. Анестезированную мышь фиксировали в стереотаксическом аппарате для головного мозга и выполняли разрез в скальпе вдоль средней линии, чтобы обнажить теменные кости. Кожным маркером рисовали линию параллельно средней линии в положении 1,0 мм в направлении правой стороны головы от темени. Затем кожным маркером рисовали линию, перпендикулярную средней линии, в положении 1,0 мм в направлении задней части головы от темени. Теменные кости кругообразно удаляли с использованием электрического трефина (диаметр: 2,0 мм) в положении, касающемся этих двух линий. После удаления теменных костей охлажденный зонд (диаметр: 2,5 мм) для отслоения сетчатки непосредственно накладывали на поверхность головного мозга два раза, каждый в течение 30 секунд, чтобы индуцировать криоповреждение. После выполнения криоповреждения, скальп зашивали и мышь оставляли восстанавливаться после анестезии. После восстановления, мышь поднимали, держа за хвост, и исследовали паралич левой передней конечности и сгибание туловища для того, чтобы подтверждать, было ли повреждение головного мозга индуцировано успешно или нет.
[0062] Начиная с суток после криоповреждения до 49 суток после криоповреждения, тестируемое соединение перорально вводили два раза в сутки, с интервалами 6 часов или больше. Мышей распределяли по группам случайно. Раствор соединения A (3 мг/мл), растворенного в дистиллированной воде, получали в качестве раствора для введения. Доза раствора соединения A составляла 10 мл/кг. Контрольной группе вводили дистиллированную воду.
[0063] Для обучения, при тех же условиях, которые использовали в сутки 4 процедуры акклиматизации, щепотку кубиков миндаля помещали в положение в щели на пластине для кормления, расположенной за пределами аппарата для тестирования, и затем мышей помещали в аппарат для тестирования и оставляли свободно исследовать в течение 30 минут. Обучение осуществляли каждые сутки между 22 сутками и 48 сутками после криоповреждения, за исключением суток, в которые осуществляли оценку функции передней конечности.
[0064] Оценку функции передней конечности осуществляли через 21 сутки, 28 суток, 35 суток, 42 суток и 49 суток после криоповреждения. Мышей подвергали ограничению пищи (1,5 г/мышь) в сутки перед осуществлением оценки. Кроме того, чтобы позволять мышам акклиматизироваться в тестовой среде, мышей оставляли в камере для поведенческого теста в течение приблизительно 1 часа перед осуществлением теста. Кроме того, чтобы снижать внимание мышей к аппарату для тестирования, щепотку подстилки из домашней клетки распределяли внутри аппарата для тестирования. Коэффициент результативности вычисляли с использованием того же способа, что и при моторном обучении. Относительную скорость восстановления определяли с использованием коэффициента результативности на финальные сутки моторного обучения (перед криоповреждением), который принимали за 1, и коэффициента результативности через 21 сутки после криоповреждения, который принимали за 0. Результаты представлены на фиг. 1.
[0065] Группа, которой вводили соединение A и которую обучали, () демонстрировала значительно более высокую относительную скорость восстановления за короткий период, по сравнению с другими группами (,  и ) (фиг. 1).
[0066] Тестовый пример 2
Исследовали действие усиливающего восстановление эффекта, достигаемого посредством обучения функции передней конечности, утраченной после повреждения головного мозга, индуцированного геморрагией внутренней капсулы, используя мышиные модели геморрагии внутренней капсулы.
Тест осуществляли с использованием следующего способа, со ссылкой на Plos One, том 8, e67691 (2013) и Behav Brain Res., том 20, выпуск 225, страницы 126-34 (2011).
[0067] В тесте использовали самцов мышей C57BL/6J возрасте шести недель (Charles River Japan). Мышей содержали в среде, в которой они имели свободный доступ к пище и воде, при цикле света-темноты 12 час (световой период: 7:00-19:00, темновой период: 19:00-7:00).
[0068] Тест осуществляли для групп, организованных, как показано в таблице 2. Мышей распределяли по группам случайно.
[0069] [Таблица 2]
Тестируемое соединение
Путь введения/Разы
Доза
Обучение
Число мышей
Легенда на фиг. 2
-
Перорально/Раз в сутки
-
Да (30 мин/сутки)
6
<img file="00000003.jpg" he="10" wi="10" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Соединение A
20 мг/ кг/раз
Да (30 мин/сутки)
6
<img file="00000005.jpg" he="10" wi="10" img-content="undefined" img-format="jpg" />
[0070] Использовали акриловое прямоугольное ограждение (длина×ширин×высота 15×8,5×20 см), в котором только передняя грань из четырех граней была прозрачной, а другие три грани были черными. Щель размерами 0,5 см в ширину × 13 см в высоту формировали на правой стороне передней поверхности, когда смотрят спереди. Прозрачную акриловую пластину размерами 8,5 см в ширину × 1,25 см в высоту использовали в качестве пластины для кормления. Кубики миндаля (K's Factory, Co., Ltd.) использовали в качестве корма для использования в оценке.
[0071] Для того чтобы позволить мышам акклиматизироваться к тестовой среде, мышей оставляли в камере для поведенческого теста в течение приблизительно 1 часа перед процедурой акклиматизации. Кроме того, чтобы снижать внимание мышей к аппарату для тестирования, щепотку подстилки из домашней клетки распространяли внутри аппарата для тестирования.
Для того чтобы позволять мышам акклиматизироваться к аппарату для тестирования, процедуру акклиматизации осуществляли в течение 4 суток. В частности, в сутки 1 мышей помещали внутрь аппарата для тестирования и оставляли свободно исследовать в течение 10 минут. После процедуры акклиматизации в сутки 1 мышей подвергали ограничению пищи (1,5 г/мышь) с использованием корма, состоящего из смеси кубиков миндаля и толченого нормального корма. После этого ограничение пищи применяли до завершения процедуры акклиматизации. В сутки 2 щепотку кубиков миндаля помещали в положение в щели внутри аппарата для тестирования и затем мышее помещали в аппарат для тестирования и оставляли свободно исследовать в течение 10 минут. В сутки 3 в дополнение к тому же положению, что в сутки 2, щепотку кубиков миндаля помещали в положение в щели на пластине для кормления, расположенной снаружи аппарата для тестирования, и затем мышей помещали в аппарат для тестирования и оставляли свободно исследовать в течение 10 минут. В сутки 4 щепотку кубиков миндаля помещали только в положение в щели на пластине для кормления, расположенной снаружи аппарата для тестирования, и затем мышей помещали внутрь аппарата для тестирования и оставляли свободно исследовать в течение 10 минут.
[0072] Для того, чтобы позволить мышам учиться брать кубики миндаля левой передней конечностью с пластины для кормления, расположенной за пределами аппарата для тестирования, процедуру моторного обучения осуществляли в течение 4 суток. С суток перед началом обучения мышей подвергали ограничению пищи, как в процедуре акклиматизации. Кроме того, как в процедуре акклиматизации, для того, чтобы позволять мышам акклиматизироваться к тестовой среде, мышей оставляли в камере для поведенческого теста в течение приблизительно 1 часа перед процедурой обучения. Кроме того, чтобы снижать внимание мышей к аппарату для тестирования, щепотку подстилки из домашней клетки распределяли внутри аппарата для тестирования.
Моторное обучение осуществляли посредством размещения одного из кубиков миндаля на продолженной линии левого конца щели и оценки способ взятия пищи. Положение этой пищи было таким, что мыши не могли касаться пищи правой передней конечностью. Число испытаний в сутки составляло 30. Длительность теста составляла 20 минут максимум, и испытания в эти сутки прекращали, когда проходило 20 минут с начала теста, даже если число испытаний не достигало 30.
Случай, когда мышь была способна протянуть левую переднюю конечность через щель и нести кубик миндаля в рот, не роняя его, определяли как успешный. Случай, когда мышь ударяла кубик миндаля, случай, когда мышь роняла кубик миндаля перед тем, как положить его в рот, случай, когда мышь протягивала переднюю конечность через щель, не касаясь кубика миндаля, или случай, когда мышь брала кубик миндаля языком, определяли как неудачу. Долю числа успешных испытаний относительно общего числа испытаний вычисляли как коэффициент результативности, и только индивидуумов, имеющих коэффициент результативности более 25% в сутки 4, использовали для следующего теста.
[0073] Коллагеназу (Коллагеназа IV-S, Sigma Aldrich, C5138) использовали для того, чтобы индуцировать геморрагию из внутренней капсулы.
[0074] Повреждали только индивидуумов, имеющих коэффициент результативности более 25% на финальные сутки моторного обучения.
Каждой мыши делали общую анестезию изофлураном. Анестезированную мышь фиксировали в стереотаксическом аппарате для головного мозга и выполняли разрез в скальпе вдоль средней линии, чтобы обнажить теменные кости. Кожным маркером отмечали положение 2,2 мм в направлении правой стороны головы от темени и положение 1,0 мм в направлении задней части головы от темени. Теменные кости кругообразно удаляли около отмеченных пятен с использованием электрического трефина (диаметр: 2,3 мм). Микрошприц (35 калибр) вводили на глубину 3,5 мм в центр места, из которого удаляли теменные кости, и оставляли в течение 5 минут, а затем общее количество коллагеназы 0,5 мкл (Коллагеназа IV-S, Sigma Aldrich, C5138), растворенной в физиологическом растворе и разбавленной до концентрации 0,03 мг/мл, инъецировали при скорости потока 0,1 мкл в минуту. После инъекции микрошприц оставляли в течение 7 минут и затем изымали. После изъятия скальп зашивали и мышь оставляли восстанавливаться после анестезии. Для индивидуума незамедлительно после индукции геморрагии внутренней капсулы, пищу, размягченную с использованием влаги, помещали около животного для того, чтобы содействовать приему пищи и воды.
[0075] Двигательную функцию передней конечности оценивали через 7, 14 и 21 сутки после индукции геморрагии внутренней капсулы, используя тот же способ, что и при моторном обучении, и среднее значение коэффициентов результативности определяли как конечный результат двигательной функции после геморрагии внутренней капсулы.
[0076] После завершения оценки через 21 сутки после индукции геморрагии внутренней капсулы тестируемое соединение перорально вводили раз в сутки. Мышей распределяли по группам случайно. Раствор соединения A (2 мг/мл), растворенного в дистиллированной воде, получали в качестве раствора для введения. Доза раствора соединения A составляла 10 мл/кг. Контрольной группе вводили дистиллированную воду.
[0077] Обучение осуществляли каждые сутки с 3 суток после начального введения тестируемого соединения. Для обучения щепотку кубиков миндаля помещали в положение в щели в пластине для кормления, расположенной за пределами аппарата для тестирования, и мышей оставляли свободно исследовать в течение 30 минут. Обучение осуществляли после 1 часа от введения тестируемого соединения.
[0078] Оценивали двигательную функцию передней конечности на 31, 38, 45, 52, 59 и 63 сутки после индукции геморрагии внутренней капсулы, используя тот же способ оценки, что и при моторном обучении, и вычисляли коэффициент результативности. Относительную скорость восстановления определяли с использованием коэффициента результативности на финальные сутки моторного обучения (перед геморрагией внутренней капсулы), который определяли как 1, и среднего значения коэффициентов результативности после 7, 14 и 21 суток (от 7 до 21 суток) от индукции геморрагии внутренней капсулы, которое определяли как 0. В качестве коэффициента результативности после 45-63 суток использовали среднее значение после 45, 52, 59 и 63 суток. Результаты представлены на фиг. 2.
[0079] Группа, которой вводили соединение A и которую обучали, () демонстрировала значительно более высокую относительную скорость восстановления по сравнению с контрольной группой () (фиг. 2).
[0080] Тестовый пример 3
Исследовали действие усиливающего восстановление эффекта, достигаемого с использованием реабилитационного обучения функции верхней конечности, утраченной после повреждения головного мозга, используя модели геморрагии внутренней капсулы на яванских макаках.
[0081] В тесте использовали двух самцов яванского макака (Tsukuba Primate Research Center, National Institute of Biomedical Innovation). Яванских макак содержали в клетке-питомнике для мартышковых (длина×ширина×высота 79×47×80 см), в которой они имели свободный доступ к пище и воде, при цикле света-тьмы 12 часов (световой период: 7:00-19:00, темновой период: 19:00-7:00).
[0082] Моторное обучение и оценку функции верхней конечности осуществляли, заставляя яванских макак брать пищу, предоставленную перед клеткой-питомником. Квадратный кусок яблока 3,5 или 7 ммиспользовали в качестве пищи для использования в оценке.
[0083] Для того чтобы позволять яванским макакам акклиматизироваться к аппарату для тестирования и определять ведущую руку у каждого из индивидуумов, квадратный кусок яблока 7 мм, прикрепленный к кончику иглы, предоставляли в центре передней грани клетки и наблюдали поведение яванского макака, берущего пищу. Руку, более часто используемую в суммарно 150 испытаниях (30 испытаний в сутки в течение 5 суток), определяли в качестве его ведущей руки.
[0084] Для того чтобы позволять яванским макакам учиться брать предоставленную пищу своей ведущей рукой, процедуру моторного обучения осуществляли 5 суток в неделю в течение 4 недель (в течение всего 20 суток). Моторное обучение осуществляли с использованием следующих шести заданий для использования в оценке функции верхней конечности и реабилитационного обучения. В сутки обучения яванские макаки выполняли задания в голодном состоянии.
[0085] Задание A: аппарат, представленный на фиг. 3, устанавливали на передней грани клетки-питомника, и доску Клювера, представленную на фиг. 4, устанавливали справа перед щелью в аппарате. Положение, где предоставляли пищу на доске Клювера, представляло собой положение, ближайшее к щели. Наблюдали поведение яванского макака, протягивающего свою руку через щель, чтобы брать пищу из отверстия, открытого в доске Клювера. Квадратный кусок яблока 3,5 мм использовали в качестве пищи для использования в оценке. Каждое испытание осуществляли 20 раз в порядке место без отверстия (пометка крестом на фиг. 4), большая лунка и маленькая лунка.
[0086] Задание B: аппарат для тестирования, представленный на фиг. 3 (для леворуких на фиг. 3), устанавливали на передней грани клетки-питомника, и наблюдали поведение яванского макака, протягивающего свою руку через щель в аппарате, чтобы брать пищу, расположенную в положениях a, b и c, показанных на фиг. 3. Квадратный кусок яблока 7 мм использовали в качестве пищи для использования в оценке. В каждом из положений осуществляли 20 испытаний, т. е., всего 60 испытаний.
[0087] Задание C: аппарат, представленный на фиг. 5, устанавливали на передней грани клетки-питомника, и квадратный кусок яблока 7 мм, прикрепленный к кончику иглы, горизонтально предоставляли через отверстие, открытое в аппарате. Шесть отверстий, показанных сплошными кругами на фиг. 5, использовали для праворуких, и шесть отверстий, показанных пунктирными кругами на фиг. 5, использовали для леворуких. Квадратный кусок яблока 7 мм использовали в качестве пищи для использования в оценке. Наблюдали поведение яванского макака, берущего пищу из отверстий. В каждом из отверстий осуществляли 10 испытаний, т. е., всего 60 испытаний.
[0088] Задание D: квадратный кусок яблока 7 мм, прикрепленный к кончику иглы, горизонтально предоставляли на передней грани клетки-питомника. Наблюдали поведение яванского макака, берущего пищу. Осуществляли всего 30 испытаний.
[0089] Задание E1: квадратный кусок яблока 7 мм, прикрепленный к кончику иглы, через акриловую трубку горизонтально предоставляли, как показано на фиг. 6. Наблюдали поведение яванского макака, берущего пищу из акриловой трубки. Осуществляли всего 30 испытаний.
[0090] Задание E2: щель формировали на кончике акриловой трубки того же типа, что использовали в E1, как показано на фиг. 7, и квадратный кусок яблока 7 мм, прикрепленный к кончику иглы, предоставляли как в задании E1. Наблюдали поведение яванского макака, берущего пищу через щель в акриловой трубке. Осуществляли всего 30 испытаний.
[0091] Случай, когда яванский макак затаскивал пищу в клетку своей ведущей рукой, не роняя ее, за одно испытание, определяли как успешный. Случай, когда яванский макак использовал свою неведущую руку или даже не мог взять пищу после предоставления в течение 10 секунд, определяли как неудачный. Когда яванский макак не мог взять пищу, даже несмотря на то, что прошло 10 секунд после предоставления пищи, пищу заменяли на свежую пищу прежде, чем перейти к следующему испытанию. Среднее значение коэффициентов результативности во время финальных двух суток (соотношение успешных испытаний относительно общего числа испытаний) определяли как конечный результат моторного обучения.
[0092] Индуцированное геморрагией внутренней капсулы повреждение головного мозга причиняли индивидуумам, которые выполнили моторное обучение.
[0093] MRI проводили в сутки перед получением моделей геморрагии внутренней капсулы. MRI проводили посредством транквилизации яванского макака через внутримышечную инъекцию гидрохлорида кетамина и сульфата атропина, после чего вводили трубку в трахею и фиксировали голову с помощью стерео-блока, при этом наблюдая показатели жизнедеятельности (кровяное давление, насыщение кислородом и пульс) под ингаляционной анестезией изофлураном.
[0094] Коллагеназу (Коллагеназа IV-S, Sigma Aldrich, C5138) использовали для того, чтобы индуцировать геморрагию из внутренней капсулы.
[0095] Посредством проведения MRI для навигации и обращаясь к T1-взвешенному изображению, идентифицировали заднюю ножку внутренней капсулы, контралатеральную ведущей руке. В верхней части головы выполняли разрез на коже диаметром приблизительно 3 см. Из краниотомии до идентификации твердой мозговой оболочки вводили маннит через яремную вену. Место в черепе, чтобы вставлять микрошприц, высверливали для того, чтобы удалять часть черепа размером приблизительно 10 мм в переднезаднем направлении и 5 мм в ширину. Завершали введение маннита и вставляли микрошприц, чтобы инъецировать 3 мкл коллагеназы 200 Ед/л, при этом наблюдая положение и глубину с использованием навигационной системы сверху обнаженной твердой мозговой оболочки. Центр определяли как находящийся в 3 мм позади кончика центральной борозды и непосредственно над верхней частью внутренней стороны скорлупы, и инъецировали коллагеназу в 9 точках в переднезаднем и вертикальном направлениях относительно центра. После инъекции поверх твердой мозговой оболочки накладывали Francetin и зашивали фасции и кожу.
[0096] Через одни сутки, 3-5 суток, 7 суток и 14 суток после индукции геморрагии внутренней капсулы проводили MRI и оценивали поврежденный объем головного мозга, обусловленный геморрагией внутренней капсулы, чтобы подтверждать, что значимые различия в поврежденном объеме отсутствовали.
[0097] От первых до 14 суток после индукции геморрагии внутренней капсулы, прежде чем наблюдали использование парализованной верхней конечности, пока наблюдали свободное поведение яванского макака в клетке, яванского макака заставляли осуществлять пассивное сгибание/разгибание и хватающие движения, каждое в течение 15 минут, для того, чтобы предотвращать неиспользование парализованной верхней конечности.
[0098] Одного из двух самцов поврежденных яванских макак подвергали введению соединения A и реабилитационному обучению. Другого яванского макака не подвергали какому-либо введению соединения A, но наблюдали ход самопроизвольного восстановления после индукции геморрагии внутренней капсулы и восстановление через реабилитационное обучение.
[0099] Тест осуществляли для групп, организованных как показано в таблице 3.
[0100] [Таблица 3]
Тестируемое соединение
Путь введения/Разы
Растворитель
Доза
Обучение
Число обезьян
-
Внутримышечно/Раз в сутки
Инъекция глюкозы Otsuka 5%
-
Да
1
Соединение A
3мг/кг/раз
Да
1
[0101] Квадратный кусок яблока 7 мм, прикрепленный к кончику иглы, предоставляли на передней грани клетки, и наблюдали, способен ли яванский макак произвольно достигать яблока. С суток после суток, в которые наблюдали произвольное достигание парализованной верхней конечностью, пищу предоставляли в месте без отверстия на доске Клювера (фиг. 4), и наблюдали, способен ли яванский макак произвольно достигать пищи парализованной верхней конечностью. Сутки, в которые наблюдали произвольное достигание доски Клювера парализованной верхней конечностью, определяли как сутки 0 использования парализованной верхней конечности, и со следующих суток (после одних суток от использования парализованной верхней конечности) осуществляли оценку двигательной функции верхней конечности, введение соединения A и реабилитационное обучение.
[0102] Каждые сутки утром после одних суток от первого использования парализованной верхней конечности, те же задания, как те, что в моторном обучении, описанном выше, осуществляли в качестве оценки функции верхней конечности. Используя цифровую видеокамеру, регистрировали видео для оценки того, успешно ли каждое испытание или нет.
[0103] От одних суток после первого использования парализованной верхней конечности до завершения теста соединение A внутримышечно вводили раз в сутки каждые сутки днем, после оценки двигательной функции верхней конечности. Раствор соединения A (15 мг/мл), растворенный в инъекции глюкозы Otsuka 5%, использовали в качестве раствора для введения, и его доза составляла 0,2 мл/кг.
[0104] При реабилитационном обучении те же задания, что и при моторном обучении, описанном выше, осуществляли каждые сутки до завершения оценки, от суток после суток, в которые яванский макак был способен произвольно достигать аппарата с заданием. Индивидуум, которому вводили соединение A, проходил реабилитационное обучение в пределах 2 часов после введения.
[0105] На записанном видео подробно наблюдали движения руки, берущей пищу, и осуществляли оценку того, было ли каждое испытание успешным или нет.
[0106] После повреждения головного мозга заметную тенденцию на восстановление наблюдали у индивидуума, у которого осуществляли введение соединения A и реабилитационное обучение. Кроме того, у этого индивидуума точное хватание, похожее на таковое до повреждения головного мозга наблюдали после начала реабилитационного обучения. У индивидуума, которому какое-либо введение соединения A не осуществляли, восстановление после нарушения было ограничено, даже после начала реабилитационного обучения, и точное хватание не наблюдали.
[0107] Пример получения 1
Смешивали смесь 50 мг соединения A, 60 мг лактозы, 60 мг Ceolus PH-302 (производства Asahi Kasei Chemicals Corporation), 4 мг Kollidon CL (производства BASF Corporation) и 1 мг стеарата магния и получали круглые таблетки диаметром 7 мм, каждая массой 175 мг, чтобы получать таблетки, содержащие 50 мг соединения A.
[0108] Пример получения 2
Смешивали смесь 50 мг соединения A, 60 мг D-маннита, 39 мг Starch 1500 (производства Colorcon Corporation) и 1 мг стеарата магния и заполняли желатиновые капсулы №4 с использованием 150 мг получаемого на капсулу, чтобы получать капсулы.