СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТАФИЛОКОККОВОЙ АНАТОКСИН-ВАКЦИНЫ
METHOD FOR PRODUCTION OF STAPHYLOCOCCIC ANATOXIN-VACCINE

Изобретение относится к микробиологии, в частности к технологии изготовления биопрепаратов для специфической профилактики и лечения болезней животных стафилококковой этиологии.
Известные способы получения инактивированных (обезвреженных) анатоксинов и анатоксин-вакцин, аллергоидов (толерогенов), вакцин предусматривают детоксикацию токсинов и дезаллергизацию, инактивацию аллергенов, вирусов 0,5-1,0% раствором формалина или его производными (Бурчасов П.Н. «Руководство по вакцинному и сывороточному производству». М.: «Медицина», 1978, с.72-87).
В существующих руководствах, публикациях в основе получения стафилококкового анатоксина и анатоксин-вакцины используются мясо-гидролизатные и синтетические питательные среды для выращивания стафилококков с последующим автоклавированием и детоксикацией экзо- и эндотоксинов 0,8±0,2% раствором формалина. При этом установлено, что существуют генетически обусловленные различия в чувствительности к стафилококковой инфекции у разных пород и видов животных и людей, а лечебно-профилактическое действие анатоксина не всегда эффективно. Особенно это проявляется у стафилококковых энтеротоксинов и характеризуется не только антигенной специфичностью, термоустойчивостью, но и резистентностью к действиям трипсина, пепсина, формалина в диапазоне рН от 4,5 до 10,0.
Установлено, что стафилококковые энтеротоксины - это сильнейшие пищевые токсины, а по составу являются низкомолекулярными белками с молекулярной массой от 26 до 34 Кд со свойствами суперантигенов, устойчивые к действию формалина, и соответственно не могут быть превращены в анатоксины.
За прототип взят «Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины», Евглевский Ан.А., патент РФ на изобретение №2229893, от 10 июня 2004 г., включающий выращивание стафилококков на синтетической среде, стерилизацию и детоксикацию токсинов 0,8±0,2% раствором формалина.
Недостатком способа является проведение детоксикации стафилококковых экзо- и эндотоксинов с помощью 0,8% раствора формалина, который практически не обеспечивает детоксикацию стафилококковых суперэнтеротоксинов и соответственно не превращает их в анатоксины (Коротяев А.И., Бабичев С.А. «Медицинская микробиология, иммунология и вирусология». СПб.:, «Специальная литература», 1998, с.333).
До настоящего времени не обнаружены сведения о замене формалина или его производных на другие эффективные детоксикаторы при детоксикации стафилококковых экзо-, эндотоксинов и энтеротоксинов при изготовлении стафилококковых анатоксина или анатоксин-вакцины.
Целью предлагаемого изобретения является повышение эффективности и безопасности анатоксин-вакцины посредством полной детоксикации при замене 0,8% раствора формалина на детоксикатор, обеспечивающий детоксикацию стафилококковых экзо-, эндо- и суперэнтеротоксинов при получении стафилококкового анатоксина или анатоксин-вакцины, обладающей широким спектром действия для эффективной профилактики и лечения болезней стафилококковой этиологии.
Поставленная цель достигается путем использования 0,8±0,2% раствора этония (1,2-этилен-бис-(N-диметилкарбдецилоксиметил) аммония дихлорид - бисчетвертичное аммониевое соединение), обеспечивающего стабильную и полную детоксикацию стафилококковых экзо-, эндотоксинов и суперэнтеротоксинов при 40-45°С в течение 10-12 суток после 12-15-суточного выращивания стафилококков на синтетической среде до 10±0,1 миллиардной взвеси микроорганизмов в 1 мл при концентрации растворимого (молекулярного) комплекса токсинов 1-3 мг/мл, содержащего протеины, липиды, РНК, ДНК и полисахариды, сорбцией на гидроксиде алюминия из расчета 1-3 мг/мл и декантацией 50% надосадочной жидкости.
В патентной и научно-технической литературе не выявлены технические решения, аналогичные заявленному с использованием этония.
Только применение 0,8±0,2% раствора этония в предложенном режиме позволяет достичь технического эффекта, т.е. полной детоксикации стафилококковых токсинов и получения эффективной анатоксин-вакцины широкого спектра действия.
Нами установлена не только возможность полной детоксикации всего комплекса стафилококковых токсинов с помощью этония, но и определена его концентрация, температурный, временной режим и схема технологического процесса для получения анатоксин-вакцины в промышленных условиях.
Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Получение стафилококковой анатоксин-вакцины и изучение лечебно-профилактической эффективности CAB при стафилококкозе птиц.
3
Выращенные на жидкой синтетической среде золотистые стафилококки в 2-литровых биобутылях с объемом среды, равным 1 литру, до концентрации микроорганизмов 10-12 млрд/мл, подвергнуты стерилизации при 1,0 атм в течение 30 минут, а затем детоксикации 0,8% раствором этония при 42-45С° в течение 12 суток. Перед аэрозольным распылением к общему объему стафилококковой анатоксин-вакцины добавлялся гидроксид алюминия из расчета 3 мг на 1 мл препарата. Для профилактики стафилококкоза птиц провели 2-кратное аэрозольное распыление стафилококковой анатоксин-вакцины с интервалом 7 дней по 1 литру на один птичник с объемом 5000 м с 40 тысячами цыплят 15-дневного возраста. Сохранность вакцинированной птицы составила 97%, а увеличение привесов - 10-12%.
В птичниках, где не проводилась аэрозольная вакцинация, падеж птицы составлял 50±10%.
Присутствующий персонал и ветспециалисты не ощущали вредного воздействия.
Пример 2. Испытание профилактической эффективности анатоксин-вакцины на собаках.
В исследованиях использовано 18 беспородных щенков 1,5-2,5-месячного возраста путем двукратной подкожной вакцинации препарата в дозе 1,5-2,0 мл с интервалом 15 суток. Через 20 дней после 2-й вакцинации все щенки, в т.ч. 6 контрольных невакцинированных, были заражены смесью 2-х вирулентных штаммов стафилококков в дозе 5-6 млрд микробных клеток. Наблюдение за животными проводили в течение 15 суток. После заражения все вакцинированные животные не заболели, а у контрольных отмечались поражения, характерные для стафилококкоза.
Пример 3. Определение профилактической эффективности стафилококковой анатоксин-вакцины по истечении 2-х и 3-х лет хранения.
Исследования проводили с использованием 4-х щенков 3-5 месячного возраста, которые подвергались двукратной иммунизации, а затем заражению живыми стафилококками аналогично действиям, указанным в примере №2.
Испытания стафилококковой анатоксин-вакцины после 2-х и 3-х годичного хранения не выявили снижения профилактической эффективности.
Пример 4. Испытание на остаточную токсичность и безвредность.
Испытание проводили на 6 телятах, 8 поросятах и 10 курах путем одновременного подкожного и внутримышечного введения по 15-20 мл стафилококковой анатоксин-вакцины. Все животные в течение 10 дней остались живыми и не имели клинически выраженных проявлений.
Представленные примеры подтверждают высокое качество и безвредность стафилококковой анатоксин-вакцины, полученной заявленным способом.