Способ выявления предрасположенности к проявлению коморбидности нарушений функции поджелудочной железы у взрослых с артериальной гипертензией в условиях контаминации крови бензолом
METHOD FOR DETECTING PREDISPOSITION TO COMORBIDITY OF PANCREATIC DYSFUNCTION IN ADULTS WITH ARTERIAL HYPERTENSION IN CONDITIONS OF BLOOD CONTAMINATION WITH BENZENE

Изобретение относится к области медицинской диагностики и терапии, и может быть использовано для прогнозирования высокой степени генной предрасположенности к проявлению коморбидности нарушений функции поджелудочной железы ассоциированной с развитием артериальной гипертензии у взрослых, проживающих на территории, характеризующейся повышенным содержанием бензола в атмосферном воздухе.
Данный способ может быть использован для раннего выявления вероятности проявлений коморбидности патологии поджелудочной железы у пациентов с артериальной гипертензией, проживающих в неблагополучных условиях аэрогенного воздействия бензола, а также для повышения эффективности комплекса профилактических мероприятий, направленных на снижение вредного воздействия бензола на иммунные события, проявляющиеся, например, со стороны пищеварительной системы в виде агрессивных воспалительных реакций (хронический панкреатит).
Бензол является представителем класса ароматических углеводородов и относится к высокоопасным химическим веществам (2-й класс опасности по ГОСТ 12.1.005). Характерной особенностью данного соединения является значительная распространенность в атмосферном воздухе населенных мест и высокая повреждающая способность при поступлении в организм, за счет образования в процессе биотрансформации агрессивных метаболитов.
Основной путь поступления бензола в организм - ингаляционный. При этом необходимо учитывать, что бензол является истинным ксенобиотиком и идентифицируется в биосредах организма только при экзогенном поступлении.
В уровне техники известны два подхода к диагностике предрасположенности к заболеваниям, как поджелудочной железы, так и артериальной гипертензии. Один из них заключается в установлении лабораторных показателей, по которым судят о возможном риске заболевания, а второй путь - генетическая диагностика через установление наличия генетических полиморфизмов.
Учитывая, что настоящее изобретение относится ко второму виду, то ниже приводим известные из уровня техники технические решения, направленные на выявление генетической предрасположенности к указанным заболеваниям. При этом следует отметить, что диагностику указанных коморбидных заболеваний: нарушения поджелудочной железы и артериальной гипертензии, медицинская генетика предусматривает по отдельности, т.е. не в сочетании.
Из уровня техники (Патент РФ №2732974) известен способ дифференциальной диагностики заболеваний поджелудочной железы. На этапе обследования в крови больного с заболеванием поджелудочной железы методом иммунофенотипирования определяют содержание дегидроэпиандростерона-сульфата - ДГЭА-S и 17-оксипрогестерона - 17-ОНР. При уровне ДГЭА-S=2,4±0,2 и 17-ОНР=0,42±0,40 у больного диагностируют нейроэндокринную опухоль поджелудочной железы. При уровне ДГЭА-S=3,7±0,37 и 17-ОНР=1,9±0,19 диагностируют аденокарциному поджелудочной железы. При уровне ДГЭА-S=6,42±0,69 и 17-ОНР=2,8±0,32 диагностируют хронический панкреатит. Способ обеспечивает возможность дифференциальной диагностики заболеваний поджелудочной железы на этапах первичного обследования.
Также из другого Патента РФ №2731693 известен способ прогнозирования развития острого панкреатита у жителей Республики Башкортостан. При реализации способа проводят выделение ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, генотипирование методом аллель-специфичной полимеразной цепной реакции синтеза ДНК. Исследуют полиморфный вариант Arg47His гена алкогольдегидрогеназы ADH1B, полиморфный вариант Glu487Lys гена альдегиддегидрогеназы ALDH2. При обнаружении у лиц мужского и женского пола русской национальности аллеля Arg гена ADH1B, у лиц женского пола русской, башкирской и татарской национальностей аллеля Lys гена ALDH2 прогнозируют высокий риск развития острого панкреатита.
Однако указанные методы не позволяют проводить предварительную диагностику на ранних стадиях коморбидности заболевания поджелудочной железы (далее - ПЖ) у пациента с артериальной гипертензией (далее - АГ).
Из патента РФ №2620566 известен способ прогнозирования развития коморбидной формы артериальной гипертензии (АГ) и хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ). У больного АГ или ХОБЛ определяют генотипы полиморфного локуса М235Т гена ангиотензиногена (AGT) и полиморфного локуса А1166С гена рецептора I типа агиотензина II (AGTR1). При наличии у больного генотипа Т/Т полиморфного локуса M235T гена AGT и генотипа А/С полиморфного локуса A1166C гена AGTR1 прогнозируют высокую вероятность развития коморбидной АГ и ХОБЛ в течение 10 лет после дебюта первого из заболеваний.
Из уровня техники также известен способ определения риска развития артериальной гипертензии (Патент РФ №2600442). При этом способе осуществляют забор венозной крови, выделение генетического материала, проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени и определение инсерции/делеции (I- и D-аллели) Alu-фрагмента гена ангиотензинпревращающего фермента. Риск развития артериальной гипертензии у работающих в условиях превышения уровня шума выше предельно допустимого при генотипе I/I гена ангиотензинпревращающего фермента оценивают ниже 50%, при генотипе I/D - 50-70%, а при генотипе D/D - выше 70%. Изобретение обеспечивает повышение скорости определения риска развития артериальной гипертензии у лиц, подвергающихся воздействию шума, и упрощение способа при одновременном повышении степени его достоверности.
Из патента РФ №2627443 известен способ прогнозирования риска развития артериальной гипертензии у шорцев - коренных жителей горной Шории, имеющих почечную дисфункцию (ПД). Способ включает учет возраста, массы тела, окружности талии (ОТ), отношения окружности талии к окружности бедер (ИТБ), наличия гиперурикемии, злоупотребления солью, уровня общего холестерина (ОХС), уровня триглицеридов (ТГ), уровня холестерина липопротеидов низкой плотности (ХС-ЛПНП). Дополнительно определяют маркеры: рост, уровень альбуминурии (АУ), уровень холестерина высокой плотности (ХС-ЛПВП), генетические маркеры: гены систем эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS), ангиотензинпревращающего фермента (ACE), метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR). Затем для каждого фактора устанавливают прогностический коэффициент (ПК) в баллах. Суммируют полученные ПК. При сумме ПК, равной +6 баллов и выше, прогнозируют предрасположенность к развитию АГ у шорцев - коренных жителей Горной Шории, имеющих почечную дисфункцию.
Все указанные известные способы не обеспечивают диагностику предрасположенности к коморбидным формам нарушения функции поджелудочной железы и артериальной гипертензии, что не позволяет их использовать при указанных патологиях при их коморбидности.
При этом из уровня техники не были выявлены известные способы оценки предрасположенности к проявлению коморбидности нарушений функции поджелудочной железы ассоциированной с артериальной гипертензией у взрослых в условиях контаминации бензолом, поэтому сделать выбор ближайшего аналога к заявляемому объекту не представляется возможным.
Технический результат, достигаемый предлагаемым изобретением, заключается в обеспечении возможности прогнозирования предрасположенности к проявлению коморбидности нарушений функции поджелудочной железы у взрослых с артериальной гипертензией в условиях контаминации бензолом, за счет использования генетических маркеров, расширения количества информационных показателей, а также связанных с комплексным использованием содержания в крови токсиканта - бензола.
3
Указанный технический результат достигается предлагаемым способом выявления предрасположенности к проявлению коморбидности нарушений функции поджелудочной железы у взрослых с артериальной гипертензией в условиях контаминации крови бензолом, согласно которому производят отбор проб крови у пациента, определяют в пробе содержание бензола и уровень иммуноглобулина G (IgG) к бензолу, также у указанного пациента отбирают пробу буккального эпителия, осуществляют выделение из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), затем посредством полимеразной цепной реакции проводят генотипирование полиморфизма гена eNOS (rs1799983), устанавливая при этом для указанного гена гомозиготное GG или гетерозиготное GT состояние генотипа, а также проводят генотипирование полиморфизма гена HL4-D7L4 (rs3135388), устанавливая при этом для указанного гена гомозиготное СС или гетерозиготное СТ состояние генотипа, и при одновременном обнаружении следующих диагностических маркеров: наличие гетерозиготного GT генотипа гена eNOS (rs1799983), наличие гомозиготного СС генотипа гена HLA-DRA (rs3135388), при условии наличия бензола в крови не ниже 0,00064 мг/дм, а также при превышении не менее, чем в 2,0 раза уровня IgG к бензолу по сравнению с верхней границей физиологической нормы, делают вывод о высокой степени предрасположенности пациента к проявлению коморбидности нарушений функции поджелудочной железы ассоциированной с артериальной гипертензией у взрослых в условиях избыточной контаминации крови бензолом.
Достигаемый технический результат обеспечивается за счет следующего.
В настоящее время большое внимание уделяется проблеме изучения влияния вредных химических факторов на формирование здоровья населения. Например, профессиональная заболеваемость работников нефтяной промышленности обусловлена комплексом неблагоприятных факторов производственной среды, в том числе загрязнением воздуха рабочей зоны вредными химическими веществами 1-го и 2-го классов опасности. Наличие сочетанного действия производственных факторов (тяжелый физический труд, воздействие химических веществ, повышенное нервно-эмоциональное напряжение) является главной причиной коморбидных состояний, в том числе гипертензии и патологии поджелудочной железы. Работы по оценке генотоксического эффекта такого ароматического углеводорода, как бензол, показали, что профессиональный контакт с данными продуктами является источником окислительного стресса и повреждения ДНК и играет определенную роль в бензольно-опосредованном канцерогенном эффекте (рак поджелудочной железы). Те же эффекты применимы, помимо нефтяников, и для другого населения, проживающего на неблагополучной в плане экологии территории.
Чрезвычайно актуальна на сегодня задача изучения влияния антропогенных химических факторов на формирование заболеваемости урбанизированного населения в условиях его детерминированной генетики. Такие болезни могут быть моногенными и полигенными. Для их реализации недостаточно только соответствующей генетической конституции индивида - нужен еще фактор или комплекс факторов среды, запускающих формирование фенотипа, опосредованного определенным генотипом. Таким образом, при участии средового фактора реализуется наследственная предрасположенность.
Одной из причин развития патология пищеварительной системы считается гипертония. Часто повышение артериального давления провоцирует панкреатит - заболевание воспалительного характера, протекающее в поджелудочной железе. Исходя из этого, следует понимать, что процесс нормализации пищеварительной системы должен начинаться с устранения первопричины, повышения артериального давления, повлекшего за собой гипертензию, в данном случае - с лечения указанного заболевания - гипертензии.
Развивается гипертоническая болезнь на фоне неправильного режима питания, когда люди выдерживают длительные перерывы между трапезами, злоупотребляют пересоленной, острой пищей, употребляют много крепкого чая, кофе. Это приводит к задержке жидкости в организме и спазму сосудов, а также к сильным болевым ощущениям в поджелудочной железе, сказывающимся на давлении. Иногда диагностируется гипертония на фоне панкреатита, если в поджелудочной железе произошли сильные нарушения, повлекшие за собой сбой выработки веществ, необходимых для поддержания нормального уровня сахара в крови. И наоборот возникновение скачков давления происходит из-за интоксикации продуктами распада.
В свою очередь и хронический воспалительный процесс в поджелудочной железе - панкреатит, развивается в течение длительного времени, вследствие дистонии питающих поджелудочную железу сосудов и прежде всего картированных в области сфинктерного аппарата паренхиматозного органа. Хроническое воспаление в железе также может возникать в результате длительно существующих сосудистых заболеваний - атеросклероза и гипертонической болезни.
Проведение исследований полиморфности кандидатных генов при коморбидных состояниях позволяет установить не только этиологический генетический фактор, но и провести анализ возможного механизма формирования болезни в условиях антропогенно измененной среды, что важно как для ранней диагностики, так и коррекции таких состояний. Многие болезни с генетической предрасположенностью проявляются в виде синдромов или комплекса патологических признаков, казалось бы, не связанных между собой, что определяется многофункциональностью кодирующих данные признаки генов.
К таким полифункциональным генам относятся гены эндотелиальной NO-синтазы (eNOS), а также ген главного комплекса гистосовместимости (HLA-DRA), которые связаны с заболеваниями сосудистой системы, а также поджелудочной железы.
Оксид азота (NO) является основным эндотелиальным фактором релаксации, участвующим в поддержании тонуса сосудистой стенки, тромбогенезе. Дикий аллельный вариант этого гена приводит к снижению уровня экспрессии NO-синтазы и, как следствие, к снижению устойчивости организма к гипертензивным влияниям со стороны внешней и внутренней среды. Фермент синтаза оксида азота (NOS) синтезирует метастабильный свободный радикал оксид азота, который вызывает вазодилятацию, нарушает транспорт кислорода и приводит к ухудшению кислородного статуса организма, NO также стимулирует секвестрацию тромбоцитов, увеличивает проницаемость различных мембран, вызывает метаболические и структурные повреждения клеток эндотелия, обладает цитотоксическим эффектом.
Кроме своей центральной роли вазодилататора, оксид азота выполняет функцию нейротрансмиттера и играет важную роль в долговременном потенцировании памяти нейронов, ингибирует адгезию форменных элементов крови к эндотелию.
Ген главного комплекса гистосовместимости HLA-DRA - большой регион генома, ответственный за сохранение биологической индивидуальности, играет жизненно важную роль в формирование экзокринной, эндокринной и аутоиммунной патологии, в частности поджелудочной железы, что в случае избыточной экспрессии гена ведет к формированию не только патологии хвостового отдела поджелудочной железы и диабету, но и агрессивности по отношению к экзокринной ее функции, определяя течение панкреатита. Генетические васкулярные и аутоиммунные компартменты патогенеза воспалительного процесса, в том числе в поджелудочной железе, запускаются с участием разрешающего действия внешних антропогенных химических факторов, в том числе ароматических углеводородов, таких как бензол.
HLA-DRA является одним из паралогов Альфа-цепи класса II HLA. Эта молекула класса II представляет собой гетеродимер, состоящий из альфа- и бета-цепей, закрепленных на мембране. Он играет центральную роль в иммунной системе, представляя пептиды, полученные из внеклеточных белков.
В качестве критерия возникновения коморбидности различных по степени нарушений функции поджелудочной железы и одновременно артериальной гипертензии у взрослых в условиях избыточной контаминации бензолом рекомендуется использовать гетерозиготное GT состояние генотипов гена эндотелиальной NO-синтазы eNOS (rs1799983), отвечающего за образование эндотелиальной синтазы 3 типа, создавая условия для перевода окиси азота в стабильные NO-метаболиты, в частности образование эндогенного нитрита, однако условия экзогенной экспозиции бензолом блокируют перевод нитратов в стабильную форму. Формирование избыточности агрессивных нестабильных оксидов определяет запуск и поддерживает воспалительные процессы в поджелудочной железе, переводя их в хроническое течение. Развивающаяся недостаточность ферментного функционала поджелудочной железы отражается на пищеварении с образованием избытка легкоусвояемых углеводов и обуславливает риск возникновения атеросклеротического процесса и явлений гипертонизации, ускоряемые дополнительной гаптенной экспозицией ароматическими углеводородами.
Одновременно гомозиготные СС варианты генотипа гена главного комплекса гистосовместимости HL4-DRA (rs3135388), отвечающего за функционирование клеточных образований врожденного иммунитета, ассоциированы с гиперэргическими иммунными событиями, проявляющимися со стороны пищеварительной системы в виде агрессивных воспалительных реакций (хронический панкреатит). Подтверждающим фактором иммунной гиперэргии служит нарастание показателя, характеризующего сам феномен специфической сенсибилизации по критерию содержания IgG к бензолу, а также нарастание уровня оксида азота, как реализация генетического дефекта синтазы оксидов азота.
Таким образом, сочетание полиморфности генов главного комплекса гистосовместимости HLA-DRA (СС генотип) и эндотелиальной NO-синтазы eNOS (GT гетерозиготный генотип) являются патогенетически значимыми для реализации предрасположенности к развитию коморбидных состояний - заболеваний поджелудочной железы, ассоциированных с артериальной гипертензией в условиях избыточной контаминации биосред пациента бензолом.
Исходя из вышеизложенного, можно сделать вывод, что поставленный технический результат обеспечивается за счет совокупности операций предлагаемого способа, их последовательности и режимов его реализации.
Предлагаемый способ реализуется следующим образом.
с.с.
1. На территории с повышенным содержанием бензола в атмосферном воздухе (0,3 мг/м3 - это норматив в атмосферном воздухе, составляет 1 ПДК) в объектах окружающей среды, отбирали пациентов, одной этнической популяции, проживающих постоянно на данной территории.
2. Проводили у них забор пробы цельной крови в специальные пробирки с антикоагулянтом (использовали тризол - для стабилизации РНК, и ЭДТА (Этилендиаминтетрауксусная кислота) (0,05М раствор ЭДТА в соотношении 500 мкл крови на 50 мкл антикоагулянта) - для выделения клеток крови и изучения маркеров клеточной дифференцировки.
3. В цельной крови пациентов определяли содержание бензола традиционным методом газохроматографического анализа «Метод газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием. Оборудование: хроматограф «Хроматэк-Кристалл 5000.2»
4. Также у указанного пациента отбирают пробу буккального эпителия (в виде мазка со слизистой оболочки щеки). После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную пробирку типа «Эппендорф» с 500 мкл транспортной среды (стерильный 0,9%-ный раствор NaCl). Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.
Далее производят выделение ДНК из пробы. Для этого пробы в количестве 100 мкл лизируют 300 мкл лизирующего раствора, представляющего собой 0,5%-ный раствор саркозила и протеиназы К (20 мг/мл) в ацетатном буфере (рН 7,5). Затем добавляют сорбент (каолин) и последовательными процедурами промывки отмывают фосфатно-солевым буфером (рН 7,2) пробы от белков и смесью изопропиловый спирт: ацетон от липидов. Нуклеиновые кислоты остаются при этом на сорбенте. Далее адсорбированные на сорбенте ДНК из пробы экстрагируют ТЕ-буфером, представляющим собой смесь 10 мМ трис-HCl и 1 мМ ЭДТА (рН 8,0). Экстракт подвергают центрифугированию. После центрифугирования пробирки надосадочная жидкость содержит очищенную ДНК.
Полученный материал готов к постановке полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПНР проводят на детектирующем амплификаторе с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» с использованием готовых наборов праймеров и зондов производства ЗАО «Синтол», Россия, в котором в качестве праймеров использовались участки ДНК генов eNOS (rs1799983) и HL4-DRA (rs3135388).
2
Проводят реакцию амплификации, это достигается тем, что для исследования аллельного состояния каждого гена у отдельного пациента готовят свою реакционную смесь. В каждую пробирку вносят 0,1 мкл готовой смеси праймеров (принятый в генетике термин, обозначающий конечные нуклеотиды с меткой, ограничивающие (отрезающие) амплифицируемую цепочку нуклеотидов гена) и зондов для выбранных генов eNOS (rs1799983) и (rs3135388) (использованы Наборы реагентов для определения полиморфизма указанных генов ЗАО «Синтол», Россия). В каждую пробирку добавляют остальные компоненты необходимые для осуществления ПЦР: нуклеотиды (дезоксинуклеозидтрифосфаты: по 10 мМ дАТФ, дТТФ, дГТФ, дЦТФ), буфера (100 мМ трис-HCl-буфера, 500 мМ KCl, 40 мМ MgCl) и Tag F-полимеразы. Вносят пробу в количестве 10 мкл. Таким образом, общий объем реакционной смеси составляет 25 мкл. Каждая пробирка плотно закрывается пробкой и устанавливается в амплификатор.
При проведении ПЦР амплификацию и детекцию проводят на детектирующем амплификаторе CFX96 фирмы Bio-Rad.
Используется универсальная программа амплификации, подобранная производителем реактивов. Она включает в себя несколько этапов: 1 этап - активация TaqF-полимеразы (режим «горячего старта») продолжается 15 мин при 95°С; 2 этап - установочные циклы амплификации без измерения флуоресценции (5 циклов); 3 этап - рабочие циклы амплификации с измерением флюоресценции (40 циклов).
Каждый цикл амплификации включает в себя денатурацию ДНК (5 с при 95°С), отжиг праймеров (20 с при 60°С) и саму реакцию полимеризации ДНК (15 с при 72°С).
Регистрация сигнала флюоресценции, возникающего при накоплении продуктов амплификации участков ДНК проводится в режиме «реального времени» после стадии отжига праймеров для выбранных генов по каналу VIC - для детекции одного из аллельных вариантов генов, и по каналу FAM - для альтернативного варианта.
Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флюоресценции с установленной на заданном уровне пороговой линией, что соответствует наличию (или отсутствию) значения порогового цикла (N) в соответствующей графе в таблице результатов, отображаемой в программном обеспечении для амплификатора CFX96.
По соотношению пороговых циклов, полученных по двум каналам детекции, определяют состояние гена в исследуемом участке ДНК (метод аллельной дискриминации). Возможных вариантов состояния гена было два: гомозиготное - в случае, когда одно из значений порогового цикла не определяется (ниже пороговой линии) и гетерозиготное - в случае, когда получено два значения пороговых циклов и по этим каналам получены параболические кривые флюоресценции. В зависимости от того, накопление какого продукта амплификации происходит в реакции, устанавливается гетерозиготное, или нормальное гомозиготное, или вариантное гомозиготное состояние гена.
3
5. И при выполнении следующих условий: наличие гетерозиготного GT генотипа гена eNOS (rs1799983), наличие гомозиготного СС генотипа гена HLA-DRA (rs3135388), наличия бензола в крови не ниже 0,00064 мг/дм, а также при превышении не менее, чем в 2,0 раза уровня IgG к бензолу по сравнению с верхней границей физиологической нормы, делают вывод о высокой степени предрасположенности пациента к проявлению коморбидности нарушений функции поджелудочной железы ассоциированной с артериальной гипертензией в условиях избыточной контаминации бензолом.
При проведении испытаний по реализации предлагаемого способа выполнено обследование населения при различных условиях по содержанию бензола в бисредах (кровь).
Были сформированы две группы: группа наблюдения, взрослые с наличием бензола в крови и группа сравнения с низким содержанием бензола или его отсутствием в крови. В группу наблюдения вошли 56 мужчин (средний возраст 43,1±0,7 года). В группу сравнения вошел 61 мужчина (средний возраст 45,4±0,8 года). Группы исследования были сопоставимы по возрасту, полу, этническому составу, сопутствующей патологии, социально-экономическому уровню, качеству и составу питания.
На территории проживания группы наблюдения отмечено превышение содержания бензола в воздухе более 1 ПДК с.с (0,3 мг/м3 норматив в атмосферном воздухе - 1ПДК с.с.).
У всех обследуемых взрослых была взята проба крови, исследование которых проводилось по вышеуказанной схеме. Также была взята проба буккального эпителия для установления по реакции ПЦР полиморфизма исследуемых генов.
Для доказательства достоверности заявляемых критериев диагностики предрасположенности пациента к проявлению коморбидности нарушений функции поджелудочной железы ассоциированной с хронической артериальной гипертензией в условиях избыточной контаминации бензолом, было установлено в пробе сыворотки крови содержание оксида азота (по методике «Количественного определения окиси азота в культуральной среде, сыворотке, плазме и моче» методом спектрофотометрического анализа, Кат.N KGE001 «БиоХимМак», Москва) и IgG к бензолу. Эти показатели являются подтверждающим фактором избыточной нагрузки (контаминации) бензолом, ассоциированной с особенностью генотипов генов eNOS и HLA-DRA, полиморфизм которых участвует в формировании сочетанной патологии поджелудочной железы и АГ.
Данные, полученные в результате исследований, приведены в таблице 1.
3
Данные, приведенные в указанной таблице 1, показывают, что при одновременном сочетании гетерозиготного состояния GT генотипа гена eNOS (rs1799983), гомозиготного состояния генотипа СС аллеля гена HLA-DRA (rs3135388), концентрации «виновного» фактора (бензола) в крови не ниже 0,00064 мг/дм, и при превышении не менее, чем в 2,0 раза уровня IgG к бензолу по сравнению с верхней границей физиологической нормы (норма 0-0,1 у.е.), у пациентов наблюдается повышение, причем более чем на 10% по сравнению с верхней границей физиологической нормы, содержания оксида азота (пациенты 1-3). А это значит, что при этом фиксируется реализация бензолом негативной генетической программы у человека, выражающейся в риске формирования коморбидности в виде патологии поджелудочной железы, ассоциированной с артериальной гипертензией у пациента. У всех указанных пациентов выявлена стойкая АГ и через 6-12 месяцев медицинского наблюдения появились признаки нарушения функции поджелудочной железы, выразившиеся болезненными ощущениями в левом подреберье, дополняемыми учащенным сердцебиением, чрезмерной потливостью, общей слабостью, диспептическими расстройствами.
Тогда как при отсутствии бензола в крови, даже в условиях наследования генотипов указанных генов GT eNOS (rs1799983) и СС HLA-DRA (rs3135388), уровень IgG и содержание оксида азота находятся в пределах физиологической нормы (пациент 4), что доказывает индуцирующее воздействие именно бензола на указанные гены.
3
В случае наличия содержания бензола в крови менее 0,00064 мг/дм, но при наличии гомозиготного варианта GG гена eNOS (rs1799983) и одновременно гетерозиготного варианта СТ гена HLA-DRA (rs3135388) (пациент 5), превышение уровня IgG и содержания оксида азота в крови над верхней границей физиологической нормы менее 10%, что является доказательством того, что при этих совокупностях гены коморбидность указанных состояний не реализуется.
У пациентов с гомозиготными генотипами обоих указанных генов GG eNOS (rs1799983) и СС HLA-DRA (rs3135388) и отсутствующим уровнем бензола в крови, уровень оксида азота находится в пределах физиологической нормы (пациенты 10, 12-13).
У пациентов 7 и 8, которые характеризуются содержанием бензола в крови и при этом имеют наследование гетерозиготного генотипа обоих из указанных генов, вывод о предрасположенности к нарушению функции поджелудочной железы при наличии АГ не диагностирован, при этом уровень IgG и содержание оксида азота находятся в пределах нормы, что указывает на отсутствие необходимых генетических условий (предрасположенности) для реализации имеющегося воздействия в виде коморбидного нарушения. Та же картина наблюдается и при отсутствии бензола в крови (пациенты 6 и 9).
Причем следует отметить, что все пациенты из обеих групп наблюдения и сравнения находились под медицинским наблюдением. В результате было установлено, что у пациентов даже с наличием АГ, но с отсутствием одновременности заявляемых диагностических критериев, нарушение функций поджелудочной железы за период наблюдения выявлено не было.
Для иллюстрации реализации предлагаемого способа приведены два примера по конкретным пациентам одного возраста и этнической принадлежности из группы с повышенным содержанием бензола в крови и с отсутствием бензола в крови.
3
Пример 1. Пациент, 46 лет, русский, работает оператором скважинной установки, страдает постоянным повышенным уровнем артериального давления (АГ) - систолическое - 140-160 мм.рт.ст. Установлен уровень бензола в крови 0,00085 мг/дм. У указанного пациента установлено наличие гетерозиготного генотипа GT гена eNOS (rs1799983) и гомозиготного генотипа СС гена HLA-DRA (rs 3135388). Значение содержания IgG в крови к бензолу 0,201 у.е., т.е. в 2 раза выше верхней границы нормы. Содержание оксида азота в крови - маркера нарушений работы эндотелия сосудистого русла и сфинктерного аппарата поджелудочной железы, 208,5 мкмоль/л, т.е. выше диапазона нормы (70,4-150 мкмоль/л). Учитывая наличие совокупности указанных генетических маркеров совместно с присутствием бензола в крови и высоким уровнем IgG к бензолу, было высказано предположение о возможности коморбидности нарушений функции поджелудочной железы на фоне течения АГ. Через 6 месяцев при медосмотре было установлено у пациента наличие периодических болевых ощущений в виде опоясывающей боли в левом подреберье после приема пищи. Проведенное ультразвуковое исследование (УЗИ) показало небольшое изменение эхоструктуры поджелудочной железы, что позволило установить нарушение функции поджелудочной железы. Для уточнение диагностики проводили врачебное наблюдение за этим пациентом сначала в амбулаторных условиях, затем в стационарном отделении гастроэнтерологии. Было установлено, что в течение наблюдения у указанного пациента наблюдалось 6 эпизодов обострения хронического панкреатита, которые потребовали стационарного лечения. Таким образом, была доказана точность совокупности диагностических критериев предлагаемого способа в прогнозировании предрасположенности такого пациента к коморбидности нарушений функции поджелудочной железы (панкреатита) в сочетании с наличием артериальной гипертензии.
Это доказывает то, что у данного пациента состояние от воздействия бензола оценивается как формирование проявлений патологии поджелудочной железы ассоциированной с АГ, имеющих генетическую предрасположенность.
Пример 2. Пациент, 45 лет, русский, патологии со стороны поджелудочной железы не выявлено, наличие редких повышений систолического артериального давления до 135 мм.рт.ст.
3
Содержание бензола в крови - 0,00035 мг/дм. Установлено наличие гетерозиготных генотипов GT гена eNOS (rs1799983) и генотипа СТ гена HLA-DRA (rs 3135388). Значение содержания IgG к бензолу 0,1 у.е., т.е. верхняя граница физиологической нормы и превышения нет. Содержание оксида азота в крови -144,4 мкмоль/л, т.е. в районе верхней границы диапазона нормы (70,4-150 мкмоль/л).
Таким образом, отсутствие одновременного наличия гетерозиготного генотипа GT гена eNOS (rs1799983) и гомозиготного гена СС HLA-DRA (rs 3135388), наряду с отсутствие повышенного уровня IgG даже на фоне наличия бензола в крови, не приводит к развитию негативных эффектов в виде нарушений со стороны поджелудочной железы, хотя и имеются некоторые отклонения со стороны функционирования сердечнососудистой системы в виде эпизодического повышения уровня артериального давления выше 140 мм.рт.ст.
Таким образом, приведенные данные показывают, что при реализации предлагаемого способа с использованием предлагаемых критериев обеспечивается его назначение.
Заявляемый способ позволяет с достаточной достоверностью установить предвестники патологии поджелудочной железы протекающей на фоне артериальной гипертензии (АГ), ассоциированные с влиянием бензола, по заявляемым генетическим критериям, содержанию бензола в крови и по уровню IgG к бензолу, и начать заблаговременно профилактические мероприятия.