КАТИОННЫЕ ЭМУЛЬСИИ МАСЛО-В-ВОДЕ

1. Эмульсия масло-в-воде, содержащая частицы, которые диспергированы в водной непрерывной фазе, где средний диаметр указанных частиц составляет от примерно 80 нм до 180 нм; где указанная эмульсия содержит масло и катионный липид, и где:
(i) соотношение масло/липид (моль : моль) составляет примерно 8:1 (моль : моль);
(ii) концентрация катионного липида в указанной эмульсии составляет по меньшей мере примерно 2,5 мМ; и
(iii) катионный липид не является DC-холестерином.
2. Эмульсия масло-в-воде по п. 1, где соотношение масло/липид (моль : моль) составляет от примерно 10:1 (моль : моль) до примерно 43:1 (моль : моль).
3. Эмульсия масло-в-воде по п. 1, где указанная эмульсия масло-в-воде содержит от примерно 0,2% до примерно 8% (мас./об.) масла.
4. Эмульсия масло-в-воде по п. 1, где указанное масло представляет собой сквален или сквалан.
5. Эмульсия масло-в-воде по п. 1, где указанные частицы дополнительно содержат поверхностно-активное вещество (ПАВ).
6. Эмульсия масло-в-воде по п. 1, где катионная эмульсия масло-в-воде содержит от примерно 0,01% до примерно 2,5% (об./об.) ПАВ.
7. Эмульсия масло-в-воде по п. 6, где указанное ПАВ представляет собой SPAN85 (сорбитана триолеат), Tween 80 (полисорбат 80) или их комбинацию.
8. Эмульсия масло-в-воде по п. 1, где головная группа катионного липида содержит четвертичный амин.
9. Эмульсия масло-в-воде по п. 1, где катионный липид выбирают из группы, состоящей из 1,2-диолеоилокси-3-(триметиламмонио)пропана (DOTAP), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-этилфосфохолина (DOEPC), Ν,N-диолеоил-N,N-диметиламмония хлорида (DODAC) и Ν-[1-(2,3-диолеилокси)пропил]-Ν,N,N-триметиламмония хлорида (DOTMA).
10. Эмульсия масло-в-воде по п. 1, где указанный катионный липид представляет собой DOTAP.
11. Эмульсия масло-в-воде по п. 10, где концентрация DOTAP в указанной эмульсии составляет от примерно 2,58 мМ (1,8 мг/мл) до примерно 7,16 мМ (5 мг/мл).
12. Способ получения эмульсии масло-в-воде по любому из пп. 1-11, включающий: (a) непосредственное растворение катионного липида в масле для образования масляной фазы; (b) предоставление водной фазы эмульсии; и (c) диспергирование масляной фазы в водной фазе путем гомогенизации.
13. Композиция, содержащая молекулу РНК, находящуюся в комплексе с частицей катионной эмульсии масло-в-воде, где частица содержит масло, которое находится в жидкой фазе при 25°C, и катионный липид; где:
(i) соотношение масло/липид (моль : моль) составляет по меньшей мере примерно 8:1 (моль : моль);
(ii) концентрация катионного липида в указанной композиции составляет по меньшей мере примерно 1,25 мМ; и
(iii) катионный липид не является DC-холестерином.
14. Композиция по п. 13, где соотношение N/P композиции составляет по меньшей мере примерно 4:1.
15. Композиция по п. 13, где указанная эмульсия масло-в-воде содержит от примерно 0,1% до примерно 5% (мас./об.) масла.
16. Композиция по п. 13, где указанное масло представляет собой сквален или сквалан.
17. Композиция по п. 13, где указанные частицы дополнительно содержат ПАВ.
18. Композиция по п. 17, где катионная эмульсия масло-в-воде содержит от примерно 0,005% до примерно 1,25% (об./об.) ПАВ.
19. Композиция по п. 18, где указанное ПАВ представляет собой SPAN85 (сорбитана триолеат), Tween 80 (полисорбат 80) или их комбинацию.
20. Композиция по п. 13, где головная группа катионного липида содержит четвертичный амин.
21. Композиция по п. 13, где указанный катионный липид выбирают из группы, состоящей из 1,2-диолеоилокси-3-(триметиламмонио)пропана (DOTAP), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-этилфосфохолина (DOEPC), N,N-диолеоил-N,N-диметиламмония хлорида (DODAC) и Ν-[1-(2,3-диолеилокси)пропил]-Ν,N,N-триметиламмония хлорида (DOTMA).
22. Композиция по п. 13, где указанный катионный липид представляет собой DOTAP.
23. Композиция по п. 22, где концентрация DOTAP в указанной композиции составляет от примерно 1,29 мМ (0,9 мг/мл) до примерно 3,58 мМ (2,5 мг/мл).
24. Композиция по п. 13, где молекула РНК представляет собой молекулу самореплицирующейся РНК, которая кодирует антиген.
25. Композиция по п. 24, где самореплицирующаяся РНК представляет собой РНК-репликон, полученный из альфавируса.
26. Композиция по п. 13, где молекула РНК представляет собой полицистронную РНК, кодирующую два или более антигена.
27. Композиция по п. 26, где полицистронная РНК представляет собой РНК репликон, полученный из альфавируса.
28. Композиция по п. 27, где РНК репликон, полученный из альфавируса, содержит (i) первую нуклеотидную последовательность, кодирующую первый антиген, где первая нуклеотидная последовательность функционально связана с первым регуляторным элементом, и (ii) вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую второй антиген, где вторая нуклеотидная последовательность функционально связана со вторым регуляторным элементом.
29. Композиция по п. 28, где РНК репликон, полученный из альфавируса, дополнительно содержит третью нуклеотидную последовательность, кодирующую третий белок или его фрагмент, где третья нуклеотидная последовательность функционально связана с третьим регуляторным элементом.
30. Композиция по п. 29, где РНК репликон, полученный из альфавируса, дополнительно содержит четвертую нуклеотидную последовательность, кодирующую четвертый белок или его фрагмент, где четвертая нуклеотидная последовательность функционально связана с четвертым регуляторным элементом.
31. Композиция по п. 30, где РНК репликон, полученный из альфавируса, дополнительно содержит пятую нуклеотидную последовательность, кодирующую пятый белок или его фрагмент, где пятая нуклеотидная последовательность функционально связана с пятым регуляторным элементом.
32. Композиция по любому из пп. 28-31, где первый, второй, третий, четвертый и пятый регуляторные элементы каждый независимо выбирают из группы, состоящей из субгеномного промотора, IRES и вирусного участка 2A.
33. Способ получения композиции, содержащей молекулу РНК, находящуюся в комплексе с частицей катионной эмульсии масло-в-воде, включающий:
(i) предоставление эмульсии масло-в-воде по любому из пп. 1-11;
(ii) предоставление водного раствора, содержащего молекулу РНК; и
(iii) объединение эмульсии масло-в-воде, полученной на этапе (i), и водного раствора, полученного на этапе (ii), получая таким образом композицию.
34. Способ по п. 33, где катионную эмульсию масло-в-воде, полученную на этапе (i), и раствор РНК, полученный на этапе (ii), объединяют при соотношении примерно 1:1 (об./об.).
35. Способ по п. 33, где водный раствор, содержащий молекулу РНК, содержит неионный регулирующий тоничность агент.
36. Эмульсия масло-в-воде, содержащая частицы, которые диспергированы в непрерывной водной фазе, где эмульсия содержит масло и катионный липид, средний диаметр указанных частиц находится в пределах от примерно 80 нм до 180 нм, где содержание масла составляет от 0,6% до 4% (мас./об.); и концентрация катионного липида в указанной эмульсии составляет по меньшей мере примерно 1,25 мМ.
37. Композиция, содержащая молекулу РНК, находящуюся в комплексе с частицей катионной эмульсии масло-в-воде по п. 36.
38. Эмульсия масло-в-воде, содержащая частицы, которые диспергированы в водной непрерывной фазе, где средний диаметр указанных частиц составляет от примерно 80 нм до 180 нм; где указанная эмульсия содержит масло и катионный липид, и где:
(i) соотношение масло/липид (моль : моль) составляет по меньшей мере примерно 4:1 (моль : моль);
(ii) концентрация катионного липида в указанной эмульсии составляет по меньшей мере примерно 2,5 мМ;
(iii) содержание масла составляет от примерно 0,2% до примерно 8% (мас./об.); и
(iv) катионный липид не является DC-холестерином.
39. Композиция, содержащая молекулу РНК, находящуюся в комплексе с частицей катионной эмульсии масло-в-воде, где частица содержит масло, которое находится в жидкой фазе при 25°C, и катионный липид, где:
(i) соотношение масло/липид (моль : моль) составляет по меньшей мере примерно 4:1 (моль : моль);
(ii) концентрация катионного липида в указанной композиции составляет по меньшей мере примерно 1,25 мМ; и
(iii) содержание масла составляет от примерно 0,1% до примерно 4% (мас./об.); и
(iv) катионный липид не является DC-холестерином.
40. Способ генерации иммунного ответа у субъекта, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту композиции по любому из пп. 13-32, 37 или 39.
41. Способ по п. 40, где общее количество катионного липида, вводимого субъекту за одно введение, составляет не более 30 мг.
42. Применение композиции по любому из пп. 13-32, 37 или 39 для генерации иммунного ответа у субъекта.