ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ/УМЕНЬШЕНИЕ СВЯЗАННЫХ С ИШЕМИЕЙ ПОВРЕЖДЕНИЙ
PREVENTION/REDUCTION OF ISCHEMIA-RELATED DAMAGES

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится, в целом, к предотвращению и/или уменьшению повреждений, связанных с ишемией. Более конкретно, настоящее изобретение относится к соединениям для применения с целью предупреждения и/или уменьшения повреждений, связанных с ишемией.
Предпосылки создания изобретения
Ишемия возникает, когда приток крови к области клеток становится недостаточным для поддержания их обычной метаболической активности. Как следствие, пораженные ткани или органы могут получить серьезные повреждения. Ограничение кровотока приводит к накоплению продуктов метаболизма и недостаточности клеточной энергии, что приводит к нарушению клеточных функций и, в конечном итоге, к некрозу клеток. Кроме того, ишемия вызывает апоптоз и местное и системное воспаление, что приводит к дополнительному повреждению тканей.
Реперфузия (т.е. восстановление кровоснабжения пораженного органа или ткани после периода ишемии) приводит к дальнейшему повреждению вследствие воспаления и окислительного стресса (так называемое реперфузионное повреждение). Таким образом, хотя реперфузия и спасает ишемическую ткань, которая в противном случае умерла бы из-за накопления ишемического повреждения, восстановление кровотока в пораженной ткани усугубляет повреждение по сравнению с повреждением, имеющимся в начале реперфузии, тем самым увеличивая окончательный размер инфаркта. Окончательный размер инфаркта определяется как повреждение, вызванное ишемией, и повреждение, вызванное реперфузией, которое, в свою очередь, связано с ишемией. Тем не менее, для ограничения ишемического повреждения в период ограниченного кровотока необходимо немедленное вмешательство и меры по обеспечению реперфузии ишемического органа или ткани.
Нарушение перфузии сердечной ткани представляет собой пример ишемии. Это нарушение приводит к потере способности сердца функционировать должным образом, поскольку ткани сердца испытывают недостаток кислорода и энергии. Повреждение сердца напрямую связано с длительностью ишемического периода. Современные виды вмешательств для улучшения кровотока в поврежденной ткани сердца представляют собой, в основном, инвазивные вмешательства, включая чрескожные коронарные вмешательства с размещением стента или без этого, хирургическое шунтирование коронарных артерий, ангиопластику и эндартерэктомию. Однако существуют высокие риски, связанные с такими инвазивными процедурами.
+
+
2+
+
+
2+
На молекулярном уровне постоянный дефицит кислорода во время ишемии сдвигает метаболизм сердца в сторону анаэробного гликолиза, что приводит к снижению рН в клетках. Чтобы предотвратить накопление ионов водорода, Na/H-обменник выбрасывает избыточные ионы водорода, что вызывает большой приток ионов натрия и перегрузку ионами Ca. Ишемия также истощает запасы клеточного АТФ, что инактивирует АТФазы (например, Na/K АТФазу), уменьшает активный отток Ca и ограничивает обратный захват кальция эндоплазматическим ретикулумом (ER), тем самым вызывая перегрузку кальцием в клетке. Эти изменения сопровождаются открытием поры перехода митохондриальной проницаемости (МРТ), которое рассеивает мембранный потенциал митохондрий и дополнительно ухудшает продукцию АТФ, а также запускает гибель клеток. Как таковые, эти клеточные изменения в сердце сопровождаются активацией внутриклеточных протеаз (например, кальпаинов), которые повреждают миофибриллы и вызывают гиперконтрактуру и некроз полос сокращения. Эти изменения и, следовательно, степень повреждения ткани могут варьироваться в зависимости от величины и продолжительности ишемического периода.
+
+
+
+
+
+
+
2+
-
2
2
2
2
Существует взаимосвязь между ишемическим повреждением и реперфузионным повреждением. Чем выше ишемическое повреждение, тем выше воздействие реперфузионного повреждения. Например, во время ишемии происходит снижение внутриклеточного рН, которое активирует систему обмена Na/H с выбросом H из клетки в обмен на Na. Это приводит к увеличению внутриклеточного натрия, которое продолжается во время реперфузии. Нормальная система Na/K-АТФазы, которая выбрасывает натрий, ингибируется в этой кислотной среде. Это приводит к активации Na/Ca-обменника, приводящей к накоплению внутриклеточного кальция и, в конечном итоге, к гибели клеток. Другие биохимические события, которые происходят во время ишемии и также способствуют ишемическому/реперфузионному повреждению, - это индукция системного и местного воспалительного ответа и увеличение восприимчивости к активации тромбоцитов. Воспалительный ответ, возникающий при реперфузии, представляет собой скоординированное взаимодействие между циркулирующими лейкоцитами (главным образом, нейтрофилами) и эндотелием сосудов, а также находящимися в сердце макрофагами и тучными клетками. Возобновление подачи O приводит к явлению респираторного взрыва с образованием из кислорода токсичных свободных радикалов, таких как супероксид-анион (O), HO и гидроксильный радикал (OH •). Это образование оксидантов, превышающее возможности эндогенных систем улавливания свободных радикалов, приводит к активации комплемента, выработке лейкотриена (LT)B4 и фактора активации тромбоцитов (PAF), мобилизации P-селектина из телец Вейбеля-Палада, а также синтезу E-селектина и молекулы внутриклеточной адгезии (ICAM)-1 посредством активации ядерных факторов транскрипции (например, NF-κB). Также происходит изменение ионного состава цитоплазмы с повышением содержания кальция. Например, в миоцитах сердца происходит разобщение окислительного фосфорилирования и генерации сокращений из-за механизмов потери энергии, таких как повышенная активация транспорта кальция во внутренней митохондриальной мембране и саркоплазматическом ретикулуме. Это создает замкнутый круг, в котором кальций вызывает увеличение активности ксантиноксидазы, способствуя выработке кислородных радикалов, что приводит к дальнейшему притоку кальция. Выброс цитокинов, PAF3 и LTB4, способствует рекрутированию лейкоцитов, что приводит к локальному, а в конечном итоге, и к системному воспалению.
Несмотря на прогресс в понимании патофизиологии молекулярных событий, которые происходят во время ишемии, эффективные способы лечения для предотвращения или сведения к минимуму связанных с ишемией повреждений все еще недоступны. Таким образом, существует неудовлетворенная потребность в усовершенствованных способах предотвращения или уменьшения повреждений, связанных с ишемией, в частности, когда повреждения, связанные с ишемией, представляют собой ишемическое повреждение. Кроме того, существует потребность в способах предотвращения/уменьшения повреждений, связанных с ишемией, которые являлись бы менее рискованными для пациента, менее дорогостоящими и/или приводили к меньшему ущербу, связанному с ишемией, в особенности в том, что относится к размеру инфаркта, вызванного ишемией, повреждению ткани из-за вызванной ишемией гибели клеток (некроз и/или апоптоз), повреждению ткани, вызванному воспалительной реакцией, возникающей во время ишемии в ишемической ткани/органе, повреждению, вызванному системной воспалительной реакцией, вызванной ишемией, и/или образованию рубца в постишемической ткани. Кроме того, существует потребность в способах предотвращения/уменьшения связанных с ишемией повреждений, которые были бы менее рискованными для пациента, менее дорогостоящими и/или приводили к меньшим повреждениям, связанным с ишемией, в частности в том, что относится к повреждению миофибрилл, вызванному внутриклеточными протеазами. В особенности, существует потребность в средствах, позволяющих одновременно достигать нескольких из этих целей одним методом лечения.
Настоящее раскрытие позволяет удовлетворить указанные выше потребности и решает вышеописанные проблемы посредством различных аспектов и воплощений, описанных ниже.
Раскрытие изобретения
Прежде чем настоящее изобретение будет более подробно описано ниже, следует понимать, что настоящее изобретение не ограничено конкретной методологией, протоколами и реагентами, описанными в настоящем документе, поскольку они могут варьироваться. Также следует понимать, что применяемая в настоящем документе терминология предназначена только для описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения объема настоящего изобретения, который будет ограничен только прилагаемой формулой изобретения. Если не указано иное, то все технические и научные термины, применяемые в данном документе, имеют те же значения, которые обычно понимаются специалистом в данной области техники. Для цели настоящего изобретения все ссылки, цитируемые в данном документе, посредством этой ссылки включаются в текст во всей их полноте.
Кроме того, следующие варианты осуществления могут, где это не приводит к логическим противоречиям, комбинироваться друг с другом без ограничений. Таким образом, настоящее раскрытие должно охватывать, даже если это явно не оговорено ниже, любую возможную комбинацию описанных ниже воплощений. Кроме того, воплощения, относящиеся к одному аспекту настоящего изобретения, могут, где это не приводит к логическим противоречиям, комбинироваться с другим аспектом настоящего изобретения без ограничений.
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что внутривенное введение статина (например, аторвастатина или β-гидроксикислотной формы симвастатина) после наступления ишемии уменьшает повреждения, связанные с ишемией. В частности, они обнаружили на моделях мелких и крупных животных (грызуны и свиньи), что применение данного режима лечения на ранних сроках после ишемии миокарда защищает сердце, ограничивая повреждения, связанные с ишемией.
Как видно из прилагаемых примеров, внутривенная инфузия статина аторвастатина на ранней стадии после ишемии в свиной модели коронарной окклюзии баллонным катетером на закрытой грудной клетке ограничивала повреждение миокарда, вызванное ишемией, уменьшала гибель клеток при ишемическом миокарде и ограничивала воспалительный ответ в подвергшейся инфаркту ткани миокарда. Хотя авторы изобретения не хотят связывать себя какой-либо теорией, наблюдения, проведенные авторами настоящего изобретения, позволяют предположить, что защитные эффекты могут включать ингибирование RhoA и активацию AMPK (АМФ-активируемой протеинкиназы). Эти наблюдения на модели свиней, которые по физиологии очень похожи на человека, обладают высоким трансляционным потенциалом, который может быть реализован у пациентов-людей с целью предотвращения/уменьшения повреждений, связанных с ишемией, путем внутривенного введения статина на ранней стадии после появления ишемии.
Предпочтительно настоящее раскрытие определяют следующим образом:
[1] Соединение для применения в предупреждении и/или уменьшении повреждения, связанного с ишемией, у субъекта, где указанное соединение представляет собой статин, причем указанное соединение предназначено для введения указанному субъекту путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, причем соединение предназначено для введения как можно раньше после наступления ишемии.
[2] Соединение для применения по п. [1], в котором повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, вызванное ишемией в течение ишемического периода после наступления ишемии, но до реперфузии.
[3] Соединение для применения по любому из п.п. [1] или [2], в котором соединение следует вводить в виде однократной дозы.
[4] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[3], в котором соединение предназначено для введения не позднее, чем через 60 минут после наступления ишемии, предпочтительно не позднее, чем через 45 минут после наступления ишемии, более предпочтительно не позднее, чем через 30 минут после наступления ишемии, более предпочтительно не позднее, чем через 20 минут после наступление ишемии, более предпочтительно не позднее, чем через 15 минут после наступления ишемии.
[5] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[4], в котором соединение предназначено для введения по меньшей мере за 15 минут до реперфузии, предпочтительно по меньшей мере за 20 минут до реперфузии, более предпочтительно по меньшей мере за 30 минут до реперфузии, более предпочтительно по меньшей мере за 45 минут до реперфузии.
[6] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[5], выбранное из соединений, перечисленных в таблице 1 и предпочтительно выбранное из группы, состоящей из аторвастатина, β-гидроксикислотной формы симвастатина, симвастатина, церивастатина, флувастатина, ловастатина, мевастатина, питавастатина, правастатина и розувастатина, при этом более предпочтительно соединение представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина формулы II, при этом наиболее предпочтительно соединение представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина формулы III:
[7] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[6], где соединение предназначено для введения в дозировке в диапазоне от 0,1 до 1 мг/кг массы тела, предпочтительно от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела.
[8] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[7], где ишемия возникает в ткани или органе, выбранном из группы, состоящей из сердца, мозга, почек, кишечника, поджелудочной железы, печени, легких, скелетных мышц и их комбинаций, предпочтительно ишемия возникает в сердце.
[9] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[8], в котором повреждение, связанное с ишемией, вызвано ишемией, возникшей в результате атеросклероза, тромбоза, тромбоэмболии, липидной эмболии, кровотечения, установки стента, хирургического вмешательства, ангиопластики, шунтирования, трансплантации органов, стресс-индуцированной кардиомиопатии (синдрома Такоцубо), вазоконстрикции, инфаркта миокарда с повышением ST-сегмента, инфаркта миокарда без повышения ST-сегмента, нестабильной стенокардии или комбинации двух или более из перечисленного, причем предпочтительно ишемия связана с инфарктом миокарда с повышением ST-сегмента, инфарктом миокарда без повышения ST-сегмента или нестабильной стенокардией.
[10] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[9], в котором повреждение, связанное с ишемией, включает или представляет собой (предпочтительно представляет собой) по меньшей мере одно повреждение, выбранное из группы, состоящей из гибели клеток миоцитов (предпочтительно вследствие некроза и апоптоза, более предпочтительно вследствие некроза), повреждения, вызванного снижением внутриклеточного pH вследствие ишемии, и/или повреждения, вызванного воспалительным ответом из-за ишемии, предпочтительно индуцированного ишемией (и предпочтительно в дальнейшем усиливающегося во время реперфузии), при этом более предпочтительно указанное повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, вызванное снижением внутриклеточного рН вследствие ишемии.
[11] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[10], где повреждение, связанное с ишемией, включает или представляет собой (предпочтительно представляет собой) повреждение миофибрилл, вызванное внутриклеточными протеазами (которое вызывает гиперконтрактуру и/или некроз полос сокращения).
[12] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[11], где предупреждение/уменьшение повреждения, связанного с ишемией, включает или представляет собой уменьшение размера инфаркта, вызванного ишемией, предпочтительно уменьшение повреждения миокарда.
[13] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[12], где предотвращение/уменьшение повреждения, связанного с ишемией, приводит к уменьшению повреждения ткани из-за гибели клеток, вызванной ишемией/реперфузией, предпочтительно из-за гибели клеток, вызванной ишемией.
[14] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[13], где предупреждение/уменьшение повреждения, связанного с ишемией, включает или представляет собой предупреждение или уменьшение воспалительного ответа в ишемической ткани/органе.
[15] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[14], где предотвращение/уменьшение повреждения, связанного с ишемией, включает или представляет собой снижение воспалительного ответа клеток крови, предпочтительно лейкоцитов, вызванного ишемией и/или реперфузией, предпочтительно вызванного ишемией.
[16] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[15], где предупреждение/уменьшение повреждения, связанного с ишемией, включает или представляет собой уменьшение размера рубца в постишемической ткани, предпочтительно в постишемической ткани сердца.
[17] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[16], где субъект представляет собой человека.
[18] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[17], где субъект страдает дислипидемией, при этом предпочтительно указанная дислипидемия представляет собой гиперхолестеринемию.
[19] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[18], где статин не вводят во время и/или после реперфузии.
[20] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[19], где в статин не вводят во время реперфузии.
[21] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[20], где соединение предназначено для введения по меньшей мере за 15, предпочтительно по меньшей мере за 20 минут, более предпочтительно по меньшей мере за 30 минут, еще более предпочтительно по меньшей мере за 45 минут до реперфузии.
[22] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[21], где введение снижает уровень по меньшей мере одного маркера, связанного с повреждением сердца, выбранного из группы, состоящей из IMA (ишемически модифицированный альбумин), CFABP (связывающий жирные кислоты белок сердца) и миоглобина, при этом предпочтительно введение снижает уровень маркеров, связанных с повреждением сердца, IMA (ишемически модифицированный альбумин), CFABP (связывающий жирные кислоты белок сердца) и миоглобина.
[23] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[22], где указанное введение приводит к уменьшению размера инфаркта миокарда.
[24] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[23], где статин ингибирует активацию RhoA.
[25] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[24], где указанное введение активирует AMPK (путем фосфорилирования АМФ-активированной протеинкиназы).
[26] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[25], где указанное введение приводит к снижению клеточного уровня фосфорилированного (активного) р53.
[27] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[26], где указанное введение приводит к снижению клеточного уровня расщепленной (активной) каспазы-3.
[28] Соединение для применения по любому из п.п. [1]-[27], где указанное введение приводит к снижению клеточного уровня MCP-1/CCL2 на уровне мРНК и/или белка.
[29] Фармацевтическая композиция, включающая
- соединение для применения по любому из п.п. [1]-[28] и
- фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество или носитель,
предназначенная для применения в предупреждении/уменьшении ишемического повреждения у субъекта.
В предпочтительных воплощениях указанной фармацевтической композиции указанное соединение, указанное предотвращение/уменьшение, указанное повреждение, связанное с ишемией, и/или указанный субъект являются такими, как определено в любом из п.п. [2]-[28].
[30] Применение соединения для изготовления лекарственного средства для предотвращения/уменьшения ишемического повреждения у субъекта,
в котором указанное соединение представляет собой статин,
в котором указанное соединение предназначено для введения указанному субъекту путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии,
и в котором указанное соединение предназначено для введения как можно раньше после наступления ишемии.
В предпочтительных воплощениях указанного применения указанное соединение является таким, как определено в любом из п.п. [2]-[28].
[31] Способ лечения, включающий стадию введения субъекту, страдающему от повреждения, связанного с ишемией, фармацевтически эффективного количества соединения,
в котором указанное соединение представляет собой статин,
в котором указанное соединение вводят указанному субъекту путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии,
и в котором указанное соединение вводят как можно раньше после наступления ишемии.
В предпочтительных воплощениях указанного способа лечения указанное соединение является таким, как определено в любом из п.п. [2]-[28].
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 представляет собой блок-схему, показывающую экспериментальный протокол, лежащий в основе примера 1. MI: инфаркт миокарда. Sac: умерщвление; PBMC: мононуклеарные клетки периферической крови (тип лейкоцитов); atorva: аторвастатин.
Фиг. 2 показывает данные, полученные в результате эксперимента, посвященного решению вопроса, защищает ли внутривенное введение аторвастатина на ранней стадии после начала коронарной окклюзии от повреждения, связанного с ишемией, путем изучения влияния на маркеры, связанные с повреждением сердца, в течение 90-минутного ишемического периода. A. IMA: модифицированный ишемией альбумин; B. CFABP: связывающий жирные кислоты белок сердца; C. Миоглобин. D. Общий процент снижения по сравнению с контролем. Результаты выражены в виде увеличения по сравнению с базовыми уровнями. *р < 0,05 по сравнению с контролем и с течением времени; †р < 0,05 по сравнению с контролем. N = 7 животных/группу.
Фиг. 3 представляет собой данные показывающие, что аторвастатин ингибирует активацию RhoA (транслокацию к клеточной мембране) в ишемическом миокарде. А. Общая экспрессия RhoA. B. Ингибирование RhoA, выраженное как соотношение между RhoA, обнаруженным в цитоплазме (cyt; неактивная форма), и RhoA, обнаруженным в мембране (mb; активная форма). *Р < 0,05 по сравнению с контролем; isch: ишемический миокард.
Фиг. 4 представляет собой данные мышиной модели коронарного лигирования, показывающие кардиопротекторные эффекты, оказываемые различными типами статинов (аторвастатин и β-ОН-симвастатин) и специфическим ингибитором RhoA (CCG1423). (A) Лигирование коронарной артерии и индукция ишемии, оцененные с помощью EGC. (B) Гистологический анализ размера инфаркта. (C) Гистологический анализ окислительного повреждения окрашиванием 8-гидроксигуанозином (маркер окислительного повреждения ДНК). *р < 0,05 по сравнению с контролем. LV: левый желудочек; Atorva: аторвастатин; β-OH-simva: бета-гидроксикислотная форма симвастатина; RhoA inh: ингибитор RhoA.
Фиг. 5 показывает влияние аторвастатина на (А) уровни транскриптов миокарда кардиопротекторных молекул AMPK и eNOS (эндотелиальная синтаза оксида азота) и (B) маркеры апоптоза p53 и каспазы-3. Isch: ишемический миокард; Non-Isch: неишемический/внеинфарктный миокард.
Фиг. 6 показывает влияние аторвастатина на экспрессию/активацию белка и, как можно видеть на этой фигуре, аторвастатин активирует (фосфорилирует) AMPK (A), и в то же время аторвастатин не приводит к дополнительному усилению индуцированной ишемией активации eNOS (B). *р < 0,05 по сравнению с non-isch; †р < 0,05 по сравнению с контролем; Atorva: аторвастатин. Isch: ишемический миокард; Non-Isch: неишемический/внеинфарктный миокард.
Фиг. 7 представляет собой данные эксперимента, показывающие, что введение ингибитора AMPK (т.е. соединения С) перед введением аторвастатина нивелирует связанные с аторвастатином кардиопротекторные эффекты. (A) Влияние на размер инфаркта. (B) Влияние на окислительное повреждение. *p < 0,05 по сравнению с контролем и AMPK inh + аторвастатин; IS: размер инфаркта; Atorva: аторвастатин.
Фиг. 8 показывает данные, свидетельствующие, что внутривенное введение аторвастатина уменьшает реализацию апоптоза, оцениваемую по активации p53 (P-p53; фиг. 8A) и каспазы 3 (расщепленная каспаза 3; фиг. 8B) в ишемическом миокарде. *p < 0,05 по сравнению с контрольной группой Isch; n = 7 животных/группу. Atorva: аторвастатин; Isch: ишемический миокард; Non-Isch: неишемический миокард. Casp3: каспаза 3; T-Casp3: общая каспаза 3.
Фиг. 9 показывает, что внутривенное введение аторвастатина ослабляет экспрессию MCP-1/CCL2 в миокарде. *p < 0,05 по сравнению с Контролем-Isch; n = 7 животных/группу. Atorva: аторвастатин; Isch: ишемический миокард; Non-isch: неишемический миокард.
Фиг. 10 показывает данные, свидетельствующие, что противовоспалительные эффекты аторвастатина распространяются на системное кровообращение посредством предотвращения связанной с ишемией индукции MCP-1/CCL2 в РВМС. *p < 0,05 по сравнению с состоянием до isch; †p < 0,05 по сравнению с контролем после isch; Atorva: обработанные аторвастатином животные; Isch: ишемия.
Фиг. 11 показывает данные из крысиной модели инфаркта миокарда, полученного с помощью постоянного коронарного лигирования (фиг. 11A), исследующие вопрос о том, уменьшает ли разовая внутривенная доза аторвастатина сразу после ишемии образование рубца миокарда согласно оценке через 30 дней после индукции ишемии (фиг. 11B).
Фиг. 12 показывает данные, полученные из эксперимента на свиньях с гиперхолестеринемией, в которых рассматривается вопрос о том, защищает ли внутривенное введение аторвастатина на ранней стадии после начала коронарной окклюзии от ишемического повреждения даже при наличии гиперхолестеринемии, путем изучения влияния на маркеры, связанные с повреждением сердца, в течение 90-минутного ишемического периода. (A) IMA: модифицированный ишемией альбумин; (B) CFABP: связывающий жирные кислоты белок сердца; (С) Миоглобин; (D) Количественная оценка снижения по сравнению с контролем. * Р <0,05 по сравнению с контролем и с течением времени; † р <0,05 по сравнению с контролем.
Фиг. 13 показывает, что внутривенное введение аторвастатина свиньям с гиперхолестеринемией в ранний момент времени после начала коронарной окклюзии (ишемии) уменьшает нейтрофильную инфильтрацию в ишемическом миокарде. * р <0,05 по сравнению с контрольной группой.
Фиг. 14 показывает на модели ишемии и реперфузии у свиней, что внутривенное введение статина (β-ОН-симвастатина) во время ишемии защищает сердце от реперфузионного повреждения, связанного с ишемическим повреждением, приводя к общему уменьшению размера инфаркта (А), и, в ишемическом миокарде, к снижению активации каспазы-3 (B), инфильтрации нейтрофилов (C), повреждения, связанного с окислительным стрессом (D), и к более высокой сохранности мембранного потенциала митохондрий (активность JC-1; E).
Подробное описание изобретения
1. Определения
Чтобы облегчить понимание настоящей патентной заявки, ниже будет объяснено значение некоторых терминов и выражений в контексте настоящего раскрытия.
Применяемый в настоящем документе термин «ишемия» относится к состоянию, которое может возникнуть в любом органе или ткани, которые страдают от недостатка кислорода и/или метаболитов. Это происходит, когда существует дисбаланс между поставкой и потреблением кислорода из-за неадекватной перфузии (т.е. снабжения кровью). Недостаточное снабжение кислородом может быть вызвано образованием тромба, наличием стенотических атеросклеротических поражений, рестенозом, анемией, инсультом, закупоренными артериями, вазоконстрикцией и/или эндотелиальной дисфункцией микроциркуляторного русла (синдром Такоцубо).
Термины «повреждение вследствие ишемии» и «ишемическое повреждение» применяют в настоящем документе как синонимы. Эти термины относятся к повреждению органа или ткани, вызванному недостаточным кровоснабжением органа или ткани в течение периода ишемии до начала реперфузии (то есть повреждение вследствие ишемии - это повреждение, вызванное ишемией в период между началом ишемии и началом реперфузии). Типичным и патогномоничным проявлением ишемического повреждения служит то, что ишемическая зона становится бледной. Напротив, при реперфузии не некротизированная ишемическая ткань восстанавливает свой физиологический цвет.
Биохимически ишемическое повреждение характеризуется изменениями рН (закислением), изменениями концентрации АТФ, повышенной склонности тромбоцитов к активации, повышенной воспалительной реактивностью, как локально в ишемической ткани, так и системно в крови (лейкоциты, особенно, PBMC).
Ишемическое повреждение может быть вызвано, например, атеросклерозом, тромбозом, тромбоэмболией, липидной эмболией, кровотечением, установкой стента, хирургическим вмешательством, ангиопластикой, шунтированием во время операции, трансплантацией органов, общей ишемией, инфарктом миокарда, вазоконстрикцией, микрососудистой дисфункцией и/или сочетанием двух или более из перечисленного. Предпочтительно ишемия обусловлена разрывом атеросклеротической бляшки с наложением тромба (т.е. инфарктом миокарда).
Указанное ишемическое повреждение может включать гибель клеток миоцитов (предпочтительно вследствие некроза и/или апоптоза, более предпочтительно вследствие некроза), повреждение, вызванное снижением внутриклеточного рН из-за ишемии, и/или повреждение, вызванное воспалительным ответом, который запускается ишемией и усиливается при реперфузии. Предпочтительно указанное ишемическое повреждение представляет собой повреждение, вызванное снижением внутриклеточного рН вследствие ишемии. Например, указанное подкисление внутриклеточного рН может представлять собой ацидоз ниже рН 6,7, имеющий повреждающее действие на миокард (например, сократительную недостаточность). Предпочтительно указанное внутриклеточное снижение рН вследствие ишемии оказывает повреждающее действие на миокард, вызывая сократительную недостаточность.
+
+
+
+
2+
Во время ишемии преобладает анаэробный метаболизм, что приводит к снижению рН клеток. Чтобы предотвратить накопление ионов водорода, Na/H-обменник выделяет избыточные ионы водорода, что вызывает большой приток ионов натрия (см., например, фиг. 6.1 в публикации Kalogeris et al., Int Rev Cell Mol Biol. 2012; 298: 229-317, в которой кратко описывают основные патологические события, способствующие ишемическим и реперфузионным компонентам повреждения тканей). Ишемия также истощает клеточную АТФ, что инактивирует АТФазы (например, Na/K-АТФазу), уменьшает отток активного Ca и ограничивает обратный захват кальция эндоплазматическим ретикулумом (ER), вызывая тем самым перегрузку кальцием клетки. Эти изменения сопровождаются открытием поры перехода митохондриальной проницаемости (МРТ), которое рассеивает митохондриальный мембранный потенциал и еще больше ухудшает продукцию АТФ. В сердце эти клеточные изменения сопровождаются активацией внутриклеточных протеаз (например, кальпаинов), которые повреждают миофибриллы и вызывают гиперконтрактуру и некроз полос сокращения. Эти изменения и, следовательно, степень повреждения ткани варьируются в зависимости от степени снижения кровоснабжения и продолжительности ишемического периода (Kalogeris et al., Int Rev Cell Mol Biol. 2012; 298: 229-317).
Ишемическое повреждение может включать симптомы дискомфорта в груди, одышку, дискомфорт в других областях верхней части тела, тошноту и/или беспокойство.
Применяемый в настоящем документе термин «реперфузия» относится к восстановлению кровотока в ишемической ткани. Несмотря на однозначную пользу реперфузии крови в ишемической ткани, известно, что сама реперфузия может вызвать каскад побочных реакций, которые парадоксальным образом повреждают ткань.
+
+
+
-
Во время острой ишемии миокарда внутриклеточный рН снижается до менее чем 7,0, тогда как при реперфузии физиологический рН быстро восстанавливается путем вымывания лактата и активации Na-H-обменника, а также Na-HCO-симпортера. Этот резкий сдвиг pH приводит к гибели кардиомиоцитов из-за летального реперфузионного повреждения миокарда вследствие открытия MPTP (пора перехода проницаемости митохондрий) и гиперконтрактуры кардиомиоцитов в первые несколько минут реперфузии. Реперфузия сердец ишемических животных кислым буфером может уменьшить размер MI (инфаркт миокарда) (Hausenloy DJ и Yellon DM, J Clin Invest. 2013 Jan 2; 123(1): 92-100).
Применяемый в настоящем документе термин «реперфузионное повреждение» относится к повреждению органа или ткани, вызванному возвращением кровоснабжения органа или ткани после периода ишемии. Таким образом, реперфузионное повреждение - это ущерб, нанесенный в течение времени между началом реперфузии и окончанием реперфузии (как правило, основная часть этого ущерба имеем место в течение первых минут реперфузии). В основе реперфузионного повреждения лежат сложные, многофакторные механизмы, включающие в себя (1) образование активных форм кислорода (АФК), которое стимулируется возвращением молекулярного кислорода при восстановлении кровотока, (2) кальциевую перегрузку, (3) открытие МРТ-поры, (4) эндотелиальную дисфункцию, (5) появление протромбогенного фенотипа и (6) выраженные воспалительные реакции (Yellon и Hausenloy, New England Journal of Medicine(2007), Sep. 13; 357(11):1121-35). Отсутствие кислорода и питательных веществ в крови в течение ишемического периода создает состояние, при котором восстановление кровообращения приводит к воспалению и окислительному повреждению за счет индукции окислительного стресса, а не к восстановлению нормальной функции. Окислительный стресс, связанный с реперфузией, может привести к повреждению пораженных тканей или органов. Реперфузионное повреждение биохимически характеризуется истощением кислорода во время ишемического события, сопровождаемым реоксигенацией и сопутствующим образованием активных форм кислорода во время реперфузии. Травма, возникающая при реперфузии, представляет собой результат взаимодействия веществ, которые накапливаются во время ишемии, и веществ, доставляемых при реперфузии. Окислительный стресс, определяемый как дисбаланс между кислородными радикалами и эндогенной системой очистки, представляет собой краеугольный камень этих событий. В результате происходит повреждение и гибель клеток, которые поначалу локализованы, но в конечном итоге становятся системными, если воспалительную реакцию не удается контролировать.
Реперфузионное повреждение, в основном характеризующееся выбросом кислорода и воспалительным ответом, и последующее повреждение ткани может происходить после реваскуляризации инфарктной (ишемической) ткани (например, сердца). Это связано с ухудшением митохондриального мембранного потенциала, дальнейшим выполнением программы апоптоза, реперфузионными аритмиями, остановкой сердца и общим увеличением размера инфаркта, вызванного ишемией. Следовательно, окончательный размер инфаркта (повреждение ткани) зависит как от ишемического повреждения (повреждение ткани, возникшее в течение ишемического периода per se), так и в меньшей степени от повреждения ткани, вызванного реперфузией.
Реперфузионное повреждение может быть вызвано, например, механическим событием (например, восстановлением кровотока после инфаркта миокарда), или одной или несколькими хирургическими процедурами или другими терапевтическими вмешательствами, которые восстанавливают кровоток в ткани или органе, который подвергся уменьшенному снабжению крови (например, во время трансплантации). Такие хирургические процедуры включают, например, операцию по шунтированию коронарной артерии, коронарную ангиопластику, операцию по пересадке органов и тому подобное (например, операцию по шунтированию сердечно-легочной артерии). В конкретном воплощении реперфузионное повреждение возникает вследствие лечения ишемического процесса из-за разрыва/эрозии атеросклеротической бляшки с наложением тромба (инфаркт миокарда), тромбоэмболии, липид-эмболии, кровотечений, установки стента, хирургического вмешательства, ангиопластики, окончания шунтирования во время хирургического вмешательства, трансплантации органов, общей ишемии, вазоконстрикции или микрососудистой дисфункция или их комбинаций.
Реперфузионное повреждение может включать окислительное повреждение и повреждение вследствие воспалительной реакции, которая, хотя и является слабой, запускается во время ишемии и становится выраженной при реперфузии и/или гибели клеток миоцитов. Предпочтительно реперфузионное повреждение включает окислительное повреждение, повреждение вследствие воспалительной реакции и клеточную гибель миоцитов. Более предпочтительно реперфузионное повреждение включает окислительное повреждение, повреждение вследствие воспалительной реакции и клеточную гибель миоцитов, но не повреждение, вызванное снижением внутриклеточного рН.
Реперфузионное повреждение может включать такие симптомы, как учащенное сердцебиение, острый респираторный дистресс, усталость и/или отеки.
Применяемый в настоящем документе термин «повреждение, связанное с ишемией» относится к сумме повреждения, вызванного во время ишемии (повреждение ишемии), и повреждения, вызванного реперфузией, которое связано с ишемическим повреждением (реперфузионное повреждение). Таким образом, повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, вызванное в промежуток времени между началом ишемии и окончанием реперфузии. В наиболее предпочтительных воплощениях настоящего раскрытия термин «повреждение, связанное с ишемией» ограничен ишемическим повреждением, то есть повреждением, вызванным ишемией, в промежуток времени между началом ишемии и началом реперфузии (т.е. повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, вызванное в течение ишемического периода после наступления ишемии, но до реперфузии и, таким образом, включает «ишемическое повреждение», но не включает «реперфузионное повреждение»).
В предпочтительном воплощении указанное повреждение, связанное с ишемией, состоит по меньшей мере из одного повреждения, выбранного из группы, состоящей из гибели клеток миоцитов (предпочтительно вследствие некроза и/или апоптоза, более предпочтительно вследствие некроза), повреждения, вызванного снижением внутриклеточного рН вследствие ишемии, и/или повреждения, вызванного воспалительным ответом вследствие ишемии, то есть предпочтительно вызванного ишемией и дополнительно усиливающегося во время реперфузии. В более предпочтительных воплощениях указанное повреждение, связанное с ишемией, состоит из гибели клеток миоцитов (предпочтительно вследствие некроза и/или апоптоза, более предпочтительно вследствие некроза), повреждения, вызванного снижением внутриклеточного рН из-за ишемии, и повреждения, вызванного воспалительным ответом из-за ишемии, предпочтительно вызванного ишемией и дополнительно усиливающегося во время реперфузии. В еще более предпочтительных воплощениях указанное повреждение, связанное с ишемией, состоит из повреждения, вызванного снижением внутриклеточного рН вследствие ишемии.
Гибель клеток миоцитов может быть обнаружена путем молекулярного анализа апоптотических/некротических маркеров. Снижение pH можно оценить с помощью ЯМР-спектрометрии. Воспаление может быть обнаружено путем оценки маркеров воспаления в сыворотке (например, IL6, TNF-альфа).
В особенно предпочтительном воплощении указанное повреждение, связанное с ишемией, состоит из повреждения миофибрилл, вызванного внутриклеточными протеазами (такими как кальпаины), которое предпочтительно вызывает гиперконтрактуру и/или некроз полос сокращения. В наиболее предпочтительном воплощении указанное повреждение, связанное с ишемией, состоит из повреждения миофибрилл, вызванного внутриклеточными протеазами (предпочтительно кальпаинами), которое вызывает гиперконтрактуру и/или некроз полос сокращения.
Ультраструктурные изменения миоцитов могут быть оценены с помощью электронной микроскопии образцов, полученных путем биопсии миокарда.
Применяемый в настоящем документе термин «предупреждение», например в контексте предотвращения повреждения, связанного с ишемией, относится к способности предотвращать, сводить к минимуму или препятствовать возникновению или развитию заболевания или состояния до его возникновения.
Термин «уменьшение», как его применяют в настоящем документе в контексте уменьшения повреждения, связанного с ишемией, относится к способности ограничивать и/или уменьшать заболевание или состояние, которое уже развилось.
Термин «введение» или утверждение, что соединение «вводят» субъекту, как его применяют в данном документе, относится к доставке фармацевтического лекарственного средства субъекту. Внутривенное введение статина нуждающемуся в этом субъекту представляет собой подходящий путь введения для применения в соответствии с настоящим изобретением.
Если в заявке указано, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», это предпочтительно означает, что соединение следует вводить не позднее, чем через 60 минут после наступления ишемии. В предпочтительном воплощении это означает, что соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии. В более предпочтительном воплощении это означает, что соединение следует вводить не позднее, чем через 30 минут после наступления ишемии. В более предпочтительном варианте это означает, что соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии. В еще более предпочтительном воплощении это означает, что соединение следует вводить не позднее, чем через 15 минут после наступления ишемии.
В некоторых воплощениях соединение следует вводить по меньшей мере за 15 минут до реперфузии, предпочтительно по меньшей мере за 20 минут до реперфузии, еще более предпочтительно по меньшей мере за 30 минут до реперфузии, наиболее предпочтительно по меньшей мере за 45 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не позднее, чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не позднее, чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не позднее, чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не позднее, чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии. В некоторых воплощениях утверждение, что соединение следует вводить «как можно раньше после наступления ишемии», означает, что соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии.
Применяемый в настоящем документе термин «статин» относится к ингибитору 3-гидрокси-3-метилглутарил-КоА-редуктазы, т.е. ингибитору фермента HMG-CoA-редуктазы, который катализирует лимитирующую стадию биосинтеза холестерина, например преобразование HMG-CoA в мевалонат. Этот термин включает любой природный, синтетический или полусинтетический статин. Ингибирование HMG-КоА-редуктазы статинами снижает биосинтез холестерина в клетках печени и внепеченочных тканей.
В последнее время сфера применения статинов расширилась в результате появления данных, свидетельствующих о том, что из-за плейотропных эффектов статинов, не связанных напрямую с регуляцией уровня холестерина, они могут оказаться полезными для лечения ряда заболеваний. Плейотропные эффекты, связанные со статинами, которые могут влиять на патофизиологию заболеваний, включают модуляцию этими веществами иммунных реакций, усиление ими противовоспалительных процессов и изменения сигнальных путей, в которых участвуют интермедиаты синтеза холестерина. На сегодняшний день множество заболеваний, связанных с плейотропным действием статинов, включают рассеянный склероз (МС), воспалительные заболевания кишечника (IBDs), ревматоидный артрит (RA), системную красную волчанку (SLE), хроническую обструктивную болезнь легких (COPD), рак, инсульт, болезни Паркинсона и Альцгеймера, бактериальные инфекции, ВИЧ и запрограммированное чрескожное коронарное вмешательство. Эти полезные действия наблюдали при хроническом или субхроническом введении статинов (например, у пациентов, перенесших чрескожное коронарное вмешательство, уменьшение процедурного повреждения миокарда после 7-дневной предварительной обработки аторвастатином параллельно с сопутствующим ослаблением постпроцедурного увеличения уровней молекулы межклеточной адгезии-1 (ICAM-1) и E-селектина).
Некоторые статины могут находиться в закрытой форме (лактон) или в открытой форме (оксикислота). Гидроксикислоты (открытая форма) могут быть получены из соответствующих лактонов обычным гидролизом, например с гидроксидом натрия в метаноле, гидроксидом натрия в тетрагидрофуран-воде и тому подобными способами. В открытой форме (оксикислота) статины реагируют с образованием солей с фармацевтически приемлемыми катионами металлов и аминов, образованными из органических или неорганических оснований. Фармацевтически приемлемые соли статинов могут отличаться от соответствующих свободных кислот некоторыми физическими характеристиками, такими как растворимость и температура плавления. Свободная открытая форма (гидроксикислота) статинов может быть регенерирована из солевой формы, если это необходимо, путем контактирования соли с разбавленным водным раствором кислоты, такой как соляная кислота и ей подобные. Замкнутую форму (лактон) статинов можно регенерировать путем растворения открытой формы (гидроксикислоты) в инертном растворителе, таком как, например, толуол, бензол, этилацетат и тому подобное, при температурах приблизительно от 0°С приблизительно до температуры кипения растворителя, обычно (хотя и не обязательно) с одновременным отделением полученной воды и катализом с помощью сильных кислот, например соляной кислоты и ей подобных.
Как известно специалисту, реакция HMG-CoA-редуктазы также представляет собой стадию, ведущую к образованию геранилгеранил-PP. Геранилгеранил-PP необходим для геранилгеранилирования RhoA, стадии активации RhoA. Следовательно, статины обычно также обладают ингибирующей активностью в отношении транслокации белка RhoA из цитозоля в клеточную мембрану и, следовательно, в отношении активации RhoA. Статин по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой ингибитор редуктазы HMG-CoA и активации RhoA.
Дополнительные статины могут быть получены путем формирования, например, нитропроизводных известных статинов, как раскрыто в патенте США 7563909 В2, или путем включения группы лактозы (которые быстро гидролизуются в присутствии воды) в известный статин. Кроме того, дополнительные статины также могут быть получены в результате метаболизма известного статина клеточным ферментом, предпочтительно приводящим к активной форме статина или метаболита статина. В конкретном воплощении метаболит статина относится к гидроксикислотной форме статина согласно настоящему раскрытию. Предпочтительно метаболит статина представляет собой активную форму статина, то есть форму статина, проявляющую по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, или по меньшей мере 95% HMG-CoA редуктазной активности статина, из которого он был получен. Специалисту понятно, что статины обычно неактивны в форме лактона. Обычно их активная форма представляет собой метаболит статин-β-оксикислоту, образующуюся в результате гидролиза под действием карбоксиэстеразы как в плазме/печени, так и в слизистой оболочке кишечника. В частности, фермент цитохрома P450 (CYP3A4) участвует в метаболизме большинства статинов.
Применяемый в настоящем документе термин «симвастатин» относится к (1S,3R,7S,8S,8aR)-8-{2-[(2R,4R)-4-гидрокси-6-оксотетрагидро-2H-пиран-2-ил]этил}-3,7-диметил-1,2,3,7,8,8a-гексагидронафталин-1-ил-2,2-диметилбутаноату, соединению, понижающему уровень холестерина, которое широко применяют в качестве мощного ингибитора фермента HMG-CoA-редуктазы для лечения гиперхолестеринемии. Фермент HMG-CoA-редуктаза катализирует превращение HMG-CoA в мевалонат, что представляет собой ранний и скорость-лимитирующий этап биосинтеза холестерина. Химически симвастатин представляет собой неактивный лактон, который после перорального введения превращается в печени с помощью цитохрома P-450 (CYP)3A в 3',5'-дигидродиол симвастатин.
Если в настоящей заявке указано, что соединение «ингибирует активацию RhoA», представляет собой «ингибитор RhoA» или «агент, ингибирующий транслокацию RhoA к клеточной мембране», то это относится к ситуации, когда указанное соединение ингибирует или блокирует транслокацию белка RhoA из цитозоля (неактивная форма RhoA) к клеточной мембране (активная форма RhoA). Термин «RhoA», как он использован в настоящем документе, также известный как член А семейства генов Ras-гомологов, относится к небольшому белку GTPазе, который регулирует актиновый цитоскелет при образовании стрессовых волокон. Термин «RhoA» включает любой RhoA любого субъекта (например, млекопитающего). Белок RhoA человека кодируется геном RHOA (GeneID: 387, нуклеотидная последовательность мРНК 1926 п.о. с номером доступа NM 001664 в соответствии с базой данных нуклеотидов NCBI по состоянию на 27 апреля 2014 года). Подобно другим GTPазам, RhoA имеет как неактивные, связанные с GDP, так и активные, связанные с GTP, состояния, эти состояния чередуются между активными и неактивными посредством обмена GDP на GTP. RhoA, в основном встречающийся в цитоплазме, главным образом участвует в организации актина, поддержании клеточного цикла, развитии клеток и контроле транскрипции. Агент, ингибирующий транслокацию RhoA к клеточной мембране, помимо своей собственной активности, может также оказывать действие на транслокацию белка RhoA из цитозоля в клеточную мембрану.
Термин «субъект» или «индивидуум», или «животное», или «пациент», или «млекопитающее» означает любого субъекта, в особенности субъекта-млекопитающего, которому требуется терапия. Субъекты-млекопитающие включают людей, домашних животных, сельскохозяйственных животных и животных, содержащихся в зоопарках, спортивных или домашних животных, таких как собаки, кошки, морские свинки, кролики, крысы, мыши, лошади, крупный рогатый скот, коровы и тому подобные. В предпочтительном воплощении настоящего раскрытия субъект представляет собой млекопитающее. В наиболее предпочтительном воплощении настоящего раскрытия субъект представляет собой человека.
Термин «лечение», как он использован в настоящем документе, относится как к терапевтическим мерам, так и к профилактическим или предупредительным мерам, цель которых - предотвращение или замедление (уменьшение) нежелательных физиологических изменений или расстройств, таких как ишемическое повреждение. Благоприятные или желательные клинические результаты включают, без ограничений, ослабление симптомов, уменьшение степени заболевания, стабилизированное (т.е. не ухудшающееся) состояние заболевания, задержку или замедление прогрессирования заболевания, улучшение или смягчение состояния заболевания, и ремиссию (частичную или полную), как обнаруживаемую, так и не обнаруживаемую. «Лечение» также может означать увеличение выживаемости по сравнению с ожидаемой выживаемостью, если бы лечение не проводили. Те, кто нуждаются в лечении, включают тех, у кого уже есть обсуждаемое состояние или расстройство, а также тех, кто склонен иметь это состояние или расстройство, или тех, у которых состояние или расстройство необходимо предотвратить.
2. Применение статина в предупреждении и/или уменьшении связанного с ишемией повреждения
В одном аспекте настоящее раскрытие относится к соединению для применения в целях предупреждения и/или уменьшения связанного с ишемией повреждения у субъекта, где указанное соединение представляет собой статин (т.е. ингибитор 3-гидрокси-3-метилглутарил-СоА-редуктазы), причем указанное соединение предназначено для введения указанному субъекту путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, и соединение следует вводить как можно скорее после наступления ишемии.
Таким образом, согласно настоящему раскрытию, соединение для применения в предупреждении и/или уменьшении связанного с ишемией повреждения у субъекта представляет собой статин.
Статины представляют собой соединения, которые ингибируют фермент HMG-CoA-редуктазу, который представляет собой катализатор превращения HMG-CoA в мевалонат. Специалистам в данной области техники известны анализы, позволяющие определить HMG-CoA-редуктазную активность соединения, которые включают, без ограничения, анализы, описанные Liu (Liu L et al. 2003 J Pharm Biomed Anal 32(1): 107-123), Fang (Fang W et al. 2002 J Clin Lab Anal 16(5): 209-215), или Mozzicafreddo (Mozzicafreddo M et al. 2010 J Lipid Res 51(8): 2460-2463), а также посредством наборов, коммерчески доступных (но не ограниченных этим) в компании «Sigma-Aldrich» (№ по каталогу CS1090). Статины выполняют в основном функцию ингибиторов фермента HMG-CoA-редуктазы. Как хорошо известно, статин, как правило, также обладает ингибирующей активностью в отношении транслокации белка RhoA из цитозоля к клеточной мембране.
Первая группа статинов включает статины с замещенной структурой декалинового кольца и включает ловастатин, правастатин и симвастатин. Ловастатин, правастатин и симвастатин представляют собой неактивные лактоны, которые нуждаются в метаболизации до своих активных гидроксикислотных форм, чтобы ингибировать фермент HMG-CoA-редуктазу. Следовательно, статины в первой группе выполняют свою функцию при преобразовании их в гидроксикислотную форму статина. Вторая группа статинов включает статины, в которых бутирильная группа, как и в статинах в первой группе, заменена фторфенильной группой, которая ответственна за дополнительные полярные взаимодействия, вызывающие более прочное связывание с ферментом. Эта вторая группа статинов включает флувастатин, церивастатин, аторвастатин и розувастатин, которые представляют собой статины в активной оксикислотной форме.
Статины представляют собой соединения, которые могут быть получены специалистом способами, известными в данной области техники, включая, но не ограничиваясь указанным, способы, описанные в US 201 10223640 A1, US 8471045 B2, WO 2009133089 A1 и EP 1015600 A1. Статины также имеются в продаже у ряда поставщиков, включая, но не ограничиваясь этим, компании «Pfizer» и «Bayer».
Примеры статинов, которые могут быть использованы в настоящем изобретении, раскрыты ниже (таблица 1).
Статин и его формула
Другие родственные статины
Аторвастатин
<img file="00000002.jpg" he="27" wi="49" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Бета-окисленный аторвастатин, ненасыщенный бета-окисленный аторвастатин, бета-окисленный гидрокси-аторвастатин, 4-гидрокси-аторвастатин, пара-гидрокси-аторвастатиновая кислота, лактон аторвастатина, аторвастатина ацилглюкуронид, 2-гидрокси-аторвастатин, орто-гидрокси-аторвастатиновая кислота, 4-гидрокси-аторвастатина ацилглюкуронид, лактон 4-гидрокси-аторвастатина и лактон 2-гидрокси-аторвастатина
Церивастатин
<img file="00000003.jpg" he="27" wi="48" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Церивастатина 6-О-глюкуронид, церивастатина 3-О-глюкуронид, церивастатина 4-О-глюкуронид, М22, лактон церивастатина, m5, m1, m4, m10, m9, m11, m20, m17, m32, m29, m21, m30, m16, m15, m18, m19, m26, m23, m28, m24 и m25
Флувастатин
<img file="00000004.jpg" he="36" wi="55" img-content="undefined" img-format="jpg" />
5-гидрокси-флувастатин, 6-гидрокси-флувастатин и N-деизопропил флувастатин
Ловастатин
<img file="00000005.jpg" he="36" wi="53" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Ловастатиновая кислота, 3'-гидрокси-ловастатин, 6'-экзометилен-ловастатин и 6'-бета-гидрокси-ловастатин и 3''-β-гидрокси-ловастатин
Мевастатин
<img file="00000006.jpg" he="32" wi="50" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Питавастатин
<img file="00000007.jpg" he="33" wi="56" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Лактон питавастатина, 3-кетопитавастатин, кетолактон питавастатина, m1, m18, m12, m9, лактон гидроксипитавастатина, О-глюкуронид 3-дегидрокси-питавастатина, ацилглюкуронид 5-кетопитавастатина, О-глюкуронид 5-кетопитавастатина и ацилглюкуронид 3-дегидрокси-питавастатина
Правастатин
<img file="00000008.jpg" he="37" wi="50" img-content="undefined" img-format="jpg" />
3''-(S)-гидрокситетранорправастатин, 3'-альфа-5', 6'-эпоксиизоправастатин, 3'-альфа-7- гидроксиизоправастатин, 3'-альфа-кетоправастатин-5,6 диол, 3''-(S)-гидроксиправастатин, 3'-альфа-изоправастатин, 3'-альфа-5'-бета,6'-бета-тригидроксиправастатин, 6'-эпиправастатин, правастатина глюкуронид, десецилправастатин, 4'-альфа-5'-бета-эпоксиправастатин, конъюгат правастатина 4'-альфа-глутатиона, лактон правастатина, сульфат правастатина, М9 и М8
Розувастатин
<img file="00000009.jpg" he="30" wi="54" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Лактон розувастатина, N-деметилрозувастатин и розувастатина ацилглюкуронид
Симвастатин
<img file="00000010.jpg" he="37" wi="48" img-content="undefined" img-format="jpg" />
3',5'-дигидродиолсимвастатин, 6'-бета-гидроксиметилсимвастатин, 6'-бета-карбоксисимвастатин, 6'-бета-гидроксисимвастатин, 6'-бета-экзометиленсимвастатин, теривастатин симвастатиновой кислоты, глюкуронид симвастатиновой кислоты и 3'-гидроксисимвастатин
Предпочтительно, статин согласно настоящему раскрытию выбирают из группы, состоящей из (в скобках приведены примеры торговых наименований, под которыми продается статин): аторвастатина (Lipitor, Torvast), церивастатина (Lipobay, Baycol), флувастатина (Lescol), ловастатина (Mecavor, Altocor, Altoprev), мевастатина (Compactin), питавастатина (Livalo, Pitava), правастатина (Pravachol, Селектин, Lipostat), розувастатина (Crestor), симвастатина (Zocor, Lipex) и β-гидроксикислотной формы симвастатина.
Еще более предпочтительно статин выбирают из группы, состоящей из аторвастатина (см. формулу I) и β-гидроксикислотной формы симвастатина (см. формулу II). Аторвастатин представляет собой наиболее предпочтительный статин.
Фармакокинетические свойства статинов регулируются несколькими факторами, включая их активную или лактоновую форму, степень их липофильности/гидрофильности, а также их абсорбцию и метаболизм. Фармакологические свойства статина, включая дозы, вводимые в форме открытой кислоты и лактона, известны специалисту и показаны, например, в таблице 1, как в работе Gazerro P et al. 2012 Pharmacol Rev 64(1): 102- 146.
4
Термин «фармацевтически приемлемая соль» или «физиологически приемлемая соль» относится к соли, образованной либо с физиологически переносимой кислотой, то есть к солям соединения с неорганическими или органическими кислотами, которые представляют собой физиологически переносимые соли, особенно, если их применяют у млекопитающих, предпочтительно у людей, либо по меньшей мере с одним, предпочтительно неорганическим, катионом, который представляет собой физиологически переносимый катион, в особенности, если его применяют у млекопитающих, предпочтительно у людей. Таким образом, фармацевтически приемлемая соль представляет собой молекулярный объект, который представляет собой физиологически переносимый объект и который обычно не вызывает аллергическую реакцию или подобную неблагоприятную реакцию, такую как желудочный дискомфорт, головокружение и тому подобное, когда их вводят млекопитающему, предпочтительно человеку. Предпочтительно термин «фармацевтически приемлемый», как он используется в данном описании, означает одобренный государственным регулирующим органом или внесенный в список фармакопеи США или другой общепризнанной фармакопеи для применения у млекопитающих и, в особенности, у людей. Иллюстративные неограничивающие примеры фармацевтически приемлемых солей конкретных кислот включают соли соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, гидробромида, моногидробромида, моногидрохлорида или гидрохлорида, метиодида, метансульфоновой кислоты, муравьиной кислоты, уксусной кислоты, щавелевой кислоты, янтарной кислоты, яблочной кислоты, винной кислоты, миндальной кислоты, фумаровой кислоты, молочной кислоты, лимонной кислоты, глутаминовой кислоты, гиппуровой кислоты, пикриновой кислоты и/или аспарагиновой кислоты. Соли щелочных металлов и щелочноземельных металлов и соли с NH представляют собой примеры физиологически переносимых солей конкретных оснований. Сольваты, соли и пролекарства соединений формулы (I) или (II) могут быть получены способами, известными в данной области.
В конкретном воплощении настоящего раскрытия статин для применения согласно настоящему раскрытию в целях предупреждения и/или уменьшения связанного с ишемией повреждения у субъекта представляет собой симвастатин или статин, родственный симвастатину, такой как, например, оксимное производное симвастатина, проявляющее повышенную растворимость в воде (Gupta A et al. 2011 Asian J Pharmac Clin Res 5(1): 50-52), 3',5'-дигидродиол симвастатин, 6'-бета-гидроксиметил симвастатин, 6'-бета-карбокси-симвастатин, 6'-бета-гидрокси-симвастатин, 6'-экзометиленсимвастатин, теривастатин симвастатиновой кислоты, симвастатиновая кислота, глюкуронид симвастатиновой кислоты и 3'-гидроксимвастатин. В более конкретном воплощении производное симвастатина представляет собой бета-гидрокси производное симвастатина формулы (III):
(II)
В частности, производное симвастатина представляет собой бета-гидрокси-производное симвастатина формулы (III):
(III)
Согласно некоторым воплощениям статин ингибирует активацию RoA. Келлер описал молекулярные подходы для измерению цитозоль-мембранной транслокации RhoA, которая представляет собой признак активации RhoA (Keller J et al. 1997 FEBS Lett 403(3): 299-302). Определение общей и цитозоль-мембранной фракций RhoA, согласно настоящему раскрытию, было описано некоторыми авторами (например, Vilahur G et al. 2009 Atherosclerosis 206: 95-101).
Термин «терапевтически эффективное количество», как он использован в настоящем документе по отношению к соединению для применения по настоящему раскрытию, относится к количеству указанного соединения, которое обеспечивает желаемый эффект, например значительное предупреждение, излечение, задержку, уменьшение тяжести или ослабление одного или нескольких симптомов, возникающих из-за повреждения, связанного с ишемией. Терапевтически эффективное количество соединения, как правило, определяют с учетом различных особенностей, таких как, например, характеристики самого продукта и достигаемый терапевтический эффект, особенности подлежащего лечению субъекта, тяжесть травмы, полученной указанным субъектом, выбранной лекарственной формой и т.д. По этой причине указанные в настоящем документе дозы следует рассматривать только как ориентиры для специалиста в данной области техники, который должен корректировать дозы в зависимости от вышеупомянутых переменных. В одном из воплощений терапевтически эффективное количество соединения представляет собой количество, которое предупреждает, уменьшает, ослабляет, смягчает или устраняет один или несколько симптомов ишемического повреждения у субъекта, подвергаемого лечению.
Хотя индивидуальные потребности могут варьироваться, определение оптимальных диапазонов для терапевтически эффективных количеств соединений для применения согласно настоящему раскрытию относится к общему опыту специалистов в данной области техники. В целом, дозировка, необходимая для обеспечения эффективного лечения, которая может быть подобрана специалистом в данной области техники, будет варьироваться в зависимости от возраста, состояния здоровья, физической формы, пола, диеты, веса, степени изменения рецептора, частоты лечения, характера и состояния травмы, характера и степени нарушения или заболевания, состояния здоровья субъекта, способа введения, фармакологических факторов, таких как активность, эффективность, фармакокинетический и токсикологический профиль конкретного применяемого соединения, если применяется системная доставка лекарственного средства, и если соединение вводят как часть комбинации лекарственных средств. Количество соединения для применения по настоящему раскрытию, которое является терапевтически эффективным для предупреждения и/или лечения реперфузионного повреждения у субъекта, может быть определено обычными клиническими способами (см. например, The Physician's Desk Reference, Medical Economics Company, Inc., Oradell, NJ, 1995, и Drug Facts and Comparisons, Inc., St. Louis, MO, 1993).
Режим дозирования соединения для применения по настоящему раскрытию может варьироваться. В конкретном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию следует вводить в виде перфузии, которую следует начинать как можно скорее после наступления ишемии и прекращать перед реперфузией. В наиболее предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию следует вводить в однократной дозировке (т.е. путем болюсного введения).
Предпочтительно дозировка указанного соединения составляет от 0,1 до 1 мг/кг массы тела, более предпочтительно от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела, наиболее предпочтительно от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В конкретном воплощении указанное соединение для применения представляет собой аторвастатин или β-гидроксикислотную форму симвастатина формулы (II), и это соединение следует вводить указанному субъекту в однократной дозировке. В другом воплощении указанное соединение для применения представляет собой аторвастатин или β-гидроксикислотную форму симвастатина формулы (II), и соединение следует вводить указанному субъекту в однократной дозировке составляющей от 0,1 до 1 мг соединения на кг массы тела, более предпочтительно от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела, наиболее предпочтительно от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
Термины «фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество» или «фармацевтически приемлемый носитель» относятся к любому соединению или комбинации соединений, которые по существу нетоксичны для субъекта в применяемой дозировке и концентрации и совместимы с другими компонентами фармацевтической композиции. Таким образом, вспомогательное вещество представляет собой неактивное вещество, введенное в состав совместно с активным ингредиентом (то есть с соединением для применения согласно настоящему раскрытию, которое представляет собой статин) фармацевтической композиции с целью увеличения объема композиции, содержащей указанные активные ингредиенты. Увеличение объема позволяет удобно и точно дозировать лекарственное вещество при изготовлении лекарственной формы. Вспомогательные вещества также могут служить различным терапевтическим целям, таким как облегчение всасывания или растворимости соединения (лекарственного средства) или другие фармакокинетические соображения. Вспомогательные вещества также могут быть полезны в процессе производства, чтобы помочь в обращении с соответствующим активным веществом, например путем улучшения сыпучести порошка или свойств слипания/прилипания, в дополнение к приданию стабильности in vitro, такой как предотвращение денатурации в течение ожидаемого срока годности. Выбор подходящих вспомогательных веществ зависит от пути введения и лекарственной формы, а также от активного ингредиента и других факторов. Вспомогательное вещество может быть нетоксичным твердым, полутвердым или жидким наполнителем, разбавителем, инкапсулирующим материалом или вспомогательным препаратом любого традиционного типа. Иллюстративные, не ограничивающие примеры вспомогательных веществ или носителей включают воду, солевые растворы (растворы солей), спирт, декстрозу, растительные масла, полиэтиленгликоли, желатин, лактозу, амилозу, стеарат магния, тальк, поверхностно-активные вещества, кремниевую кислоту, вязкий парафин, масляную отдушку, моноглицериды и диглицериды жирных кислот, петроэтральные сложные эфиры жирных кислот, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон и тому подобное.
Соединение для применения по настоящему раскрытию следует вводить как можно скорее после наступления ишемии, но до реперфузии. Специалист знает, как распознать ишемию. Например, ишемия миокарда распознается по внезапному появлению характерных симптомов: сильной боли в области грудной клетки, одышки при физической активности, учащенного сердцебиения, общего недомогания, усталости, головокружения, тошноты и потливости. Боль может распространяться на левую руку, челюсть, плечо, спину или шею. Позднее ишемия миокарда может быть подтверждена такими методами, как электрокардиограмма (ЭКГ), эхокардиограмма.
Вводя соединение как можно скорее после наступления ишемии, можно гарантировать, что ишемический период до введения соединения будет сведен к минимуму, тогда как доля ишемического периода после введения соединения по сравнению с общим временем нахождения в состоянии ишемии (т.е. по сравнению с общим временем от начала ишемии до начала реперфузии) будет максимальным.
В некоторых предпочтительных воплощениях статин не вводят во время и/или после реперфузии.
В некоторых предпочтительных воплощениях статин не вводят во время реперфузии.
Статин следует вводить путем внутривенного введения. Это может быть достигнуто с помощью стандартных процедур, известных специалисту в данной области техники. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что для целей настоящего изобретения важно, чтобы статин достигал ишемической ткани как можно скорее после наступления ишемии, и внутривенное введение оказалось выгодным в этом отношении по сравнению, например, с пероральным введением.
В одном конкретном воплощении фармацевтическая композиция, содержащая соединение для применения согласно настоящему раскрытию, представляет собой фармацевтическую композицию для внутривенного введения. Как правило, фармацевтические композиции для внутривенного введения представляют собой растворы в стерильном изотоническом водном буфере. Как правило, ингредиенты поставляются либо по отдельности, либо в смешанном виде в стандартной лекарственной форме, например в виде сухого лиофилизированного порошка или безводного концентрата в герметически закрытом контейнере, таком как ампула или саше, с указанием количества активного ингредиента. Если фармацевтическая композиция предназначена для введения путем инфузии, то она может быть приготовлена во флаконе для инфузии, содержащем стерильную воду или физиологический раствор фармацевтического качества.
Специалисты в данной области техники знакомы с принципами и процедурами, обсуждаемыми в широко известных и доступных источниках, таких как Remington's Pharmaceutical Science (17th Ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985), Goodman и Gilman The Pharmaceutical Basis of Therapeutics (8th Ed., Pergamon Press, Elmsford, N.Y., 1990) и «Tratado de Farmacia Galenica», C. Fauli и Trillo, Luzan 5, S.A. de Ediciones, 1993 и в Remington's Pharmaceutical Sciences (A.R. Gennaro, Ed.), 20th edition, Williams & Wilkins PA, USA (2000), которые включены в настоящий документ посредством отсылки.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить как можно раньше после наступления ишемии в дозировке от 0,1 до 1мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить как можно раньше после наступления ишемии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить как можно раньше после наступления ишемии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях, повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях, повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях, повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии, и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II) и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 60 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 45 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 30 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 20 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 15 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 20 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 30 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. В предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,2 до 0,8 мг/кг массы тела. В более предпочтительном воплощении повреждение, связанное с ишемией, представляет собой повреждение, возникающее после наступления ишемии, но до реперфузии, соединение для применения по настоящему раскрытию представляет собой аторвастатин (формула I) или β-гидроксикислотную форму симвастатина (формула II), и его следует вводить путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, при этом соединение следует вводить не более чем через 15 минут после наступления ишемии и по меньшей мере за 45 минут до реперфузии в дозировке от 0,3 до 0,6 мг/кг массы тела.
Соединение для применения по настоящему раскрытию может быть введено отдельно или в комбинации с другими лекарственными средствами при условии, что по меньшей мере один из лекарственных агентов представляет собой соединение для применения согласно настоящему раскрытию.
«Инфаркт» относится к локализованной области ишемической гибели клеток, вызванной гипоксией, следующей за окклюзией артериального питания или венозного дренажа ткани или органа. Более конкретно инфаркт миокарда (MI), обычно известный как сердечный приступ, связан с событием, при котором кровь перестает правильно притекать к части сердца, и сердечная мышца травмируется из-за недостаточного поступления кислорода и питательных веществ. Обычно инфаркт представляет собой результат закупорки или окклюзии одной из коронарных артерий из-за разрыва или эрозии атеросклеротической бляшки и наложения тромба. Важные факторы риска, которые могут способствовать возникновению инфаркта миокарда, включают предшествующее сердечно-сосудистое событие, высокие уровни общего холестерина, высокие уровни холестерина ЛПНП и триглицеридов в крови, низкие уровни холестерина ЛПВП, старость, курение табака, диабет, высокое кровяное давление, недостаток физической активности, ожирения, хронических заболеваний почек, чрезмерного употребления алкоголя и употребления кокаина и амфетаминов. Способы определения того, страдал ли субъект от инфаркта, известны в данной области и включают, без ограничения, отслеживание электрических сигналов в сердце посредством электрокардиограммы (ЭКГ) и анализ образца крови на наличие веществ, связанных с повреждением сердечной мышцы, включая креатинкиназу (CK-MB) и тропонин. ЭКГ-тестирование применяют для дифференциации двух типов инфарктов миокарда на основе формы электрокардиограммы. Сегмент ST на электрокардиограмме выше базовой линии называется MI с повышением ST-сегмента (STEMI), что соответствует ситуации, которая, как правило, требует более энергичного лечения. Способы определения размера инфаркта известны специалисту и включают измерение маркеров сыворотки крови, включая уровни креатинкиназы (CK)-MB в образце сыворотки (Grande P et al. 1982 Circulation 65: 756-764), окрашивание ткани хлоридом трифенилтетразолия (Fishbein MC et al. 1981 Am Heart J 101(5): 593-600), однофотонную эмиссионную компьютерную томографию (SPECT) с технецием (Tc)-99m сестамиби, перфузионную томографию и магнитно-резонансную томографию (MRI) (Gibbons RJ et al. 2004 J Amer Coll Cardiol 44(8): 1533-1542). Эти биомаркеры повреждения сердца повышаются через несколько часов, тогда как известно, что такие маркеры, как IMA, CFABP и миоглобин, увеличиваются сразу после ишемии.
Термин «воспаление» или «воспалительный ответ» относится к ряду изменений, происходящих в ткани, которая подвергается воспалению. В частности, воспаление относится к биологическому ответу на вредные стимулы, включая патогены, поврежденные или лизированные клетки или раздражители. Способы определения воспаления известны в данной области техники и включают, без ограничения, показатель скорости оседания эритроцитов (СОЭ), при котором более высокая СОЭ свидетельствует о воспалении, показатель С-реактивного белка (СРБ), в котором более высокий уровень СРБ указывает на воспаление, и количество лейкоцитов (увеличивается при воспалении).
Местное воспаление ишемической ткани, например ишемический миокард, может быть определено путем молекулярного анализа (экспрессия генов и белков) маркеров воспаления, связанных как с врожденным, так и с приобретенным иммунитетом. В частности, представляет интерес измерение хемокинов и цитокинов, участвующих в активации и рекрутировании лейкоцитов в поврежденную область.
Системное воспаление из-за ишемии может поражать все органы. Анализ крови на маркеры воспаления (цитокины и хемокины) с применением наборов ELISA может обеспечить быстрый анализ степени/уровня системного воспаления.
«Окислительное повреждение» относится к биомолекулярному повреждению, которое может быть вызвано прямым воздействием активных форм кислорода во время восстановления уровня кислорода. Окислительное повреждение может включать перекисное окисление липидов, окислительное повреждение ДНК и окислительное повреждение белков. Способы определения перекисного окисления липидов включают, без ограничения, определение MDA (малонового диальдегида)-TBA (тиобарбитуровой кислоты) с помощью ВЭЖХ и количественное определение изопростанов (которые представляют собой специфические конечные продукты перекисного окисления полиненасыщенных жирных кислот) с помощью масс-спектрометрии. Способы определения окислительного повреждения ДНК включают, без ограничения, измерение 8-гидрокси-2'-дезоксигуанозина (8-OH-dG). Способы определения окислительного повреждения белков включают, без ограничения, количественную оценку индивидуальных продуктов окисления аминокислот, включая кинуренины (из триптофана), битирозин (который, по-видимому, метаболически стабилен и может быть обнаружен в моче), гидроксиды валина и лейцина, L-дигидроксифенилаланин (L-DOPA), орто-тирозин, 2-оксо-гистидин, глутаматный полуальдегид и адипиновый полуальдегид, а также анализ карбонила (включающий измерение карбонильных групп белка). Митохондриальный мембранный потенциал (Δψιη) относится к мембранному потенциалу в виде протонного градиента на митохондриальной внутренней мембране. Способы оценки потенциального повреждения митохондриальной мембраны известны специалисту и включают применение флуоресцентных зондов для мониторинга мембранного потенциала, включая краситель JC1 («Cell Technology»), и измерение общей флуоресценции при длинах волн возбуждения и испускания, позволяющих количественно оценить зеленую (485 нм и 535 нм) и красную флуоресценцию (550 нм и 600 нм). Известно, что длительная ишемия любой ткани или органа приводит к нарушению потенциала митохондриальной мембраны.
«Апоптоз» связан с регулируемой сетью биохимических событий, которые приводят к избирательной форме самоубийства клеток, и характеризуются легко наблюдаемыми морфологическими и биохимическими явлениями, такими как фрагментация дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), конденсация хроматина, которые могут быть или могут не быть связаны с эндонуклеазной активностью, миграцией хромосом, маргинализацией в клеточных ядрах, образованием апоптотических тел, набуханием митохондрий, расширением митохондриальных крист, открытием переходных пор митохондриальной проницаемости и/или диссипацией митохондриального протонного градиента. Способы определения апоптоза клеток известны специалисту и включают, без ограничения, анализы, которые измеряют фрагментацию ДНК (включая окрашивание хромосомной ДНК после пермеабилизации клеток), анализы, которые измеряют активацию каспаз, таких как каспаза 3 (включая анализы активности протеазы), анализы, которые измеряют продукты расщепления каспазой (включая обнаружение PARP и деградацию цитокератина 18), анализы, которые исследуют хроматографию хроматина (включая окрашивание хромосомной ДНК), анализы, которые измеряют разрывы цепей ДНК (ники) и фрагментацию ДНК (ступенчатые концы ДНК) (включая активное мечение клеточной ник-трансляции или ISNT и активное мечение клеток с помощью концевой метки или TUNEL), анализы, которые обнаруживают фосфатидилсерин на поверхности апоптотических клеток (включая обнаружение транслоцированного мембранного компонента), анализы, которые измеряют повреждение/утечку плазматической мембраны (включая анализ исключения трипанового синего и анализ исключения йодида пропидия). Типичные анализы включают анализ параметров рассеяния апоптотических клеток с помощью проточной цитометрии, анализ содержания ДНК с помощью проточной цитометрии (включая окрашивание ДНК в растворе флуорохрома, такого как йодид пропидия), флуорохромное мечение разрывов цепей ДНК с помощью терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы или TdT-анализа, анализ связывания аннексина-V с помощью проточной цитометрии и TUNEL-анализ.
Термин «рубец» относится к любому следу, оставленному на ткани после заживления раны или повреждения. В частности, этот термин относится к отметкам, оставленным в ишемической ткани. В контексте настоящего раскрытия образование рубца происходит из-за повреждения, связанного с ишемией.
Согласно настоящему раскрытию ишемия, вызывающая повреждение, связанное с ишемией и предотвращаемое/уменьшаемое согласно настоящему раскрытию, происходит в органе или ткани, выбранных из группы, состоящей из мозга, сердца, почек, печени, толстой кишки, легких, поджелудочной железы, тонкой кишки, желудка, мышц, мочевого пузыря, селезенки, яичников и яичек. В конкретном воплощении орган/ткань выбирают из группы, включающей сердце, мозг, почку, кишечник, поджелудочную железу, печень, легкие и скелетные мышцы. В более конкретном воплощении органом представляет собой сердце.
Связанное с ишемией повреждение, которое необходимо предотвратить/уменьшить, обычно происходит в ткани, где имела место ишемия с реперфузией или без нее. Кроме того, ишемическое повреждение может привести к дальнейшему повреждению, связанному с ишемией, в других тканях, что следует из системного воспалительного ответа, запускаемого ишемией.
Согласно настоящему раскрытию связанное с ишемией повреждение, которое должно быть предотвращено/уменьшено согласно настоящему раскрытию, происходит в органе или ткани, которые выбирают из группы, состоящей из мозга, сердца, почек, печени, толстой кишки, легких, поджелудочной железы, тонкой кишки, желудка, мышц, мочевого пузыря, селезенки, яичников, яичек и клеток крови. В конкретном воплощении орган/ткань выбирают из группы, включающей клетки сердца, мозга, почек, кишечника, поджелудочной железы, печени, легких, скелетных мышц и крови. В более конкретном воплощении ишемическое повреждение, которое должно быть предотвращено и/или уменьшено согласно настоящему раскрытию, возникает в сердце.
В некоторых воплощениях связанное с ишемией повреждение, которое должно быть предотвращено и/или уменьшено согласно настоящему раскрытию, происходит в сердце и в клетках крови (например, из-за системных воспалительных эффектов). В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, которое должно быть предотвращено/уменьшено согласно настоящему раскрытию происходи в миокарде и в PBMC (мононуклеарные клетки периферической крови).
Как признает специалист в данной области техники, существуют разные причины, которые могут вызвать ишемию и, следовательно, связанное с ишемией повреждение. В некоторых воплощениях ишемическое повреждение происходит из-за атеросклероза, тромбоза, тромбоэмболии, липид-эмболии, кровотечения, установки стента, хирургического вмешательства, ангиопластики, шунтирования, трансплантации органов, общей ишемии, сдавления сосудов опухолью, инфаркта миокарда, вазоконстрикции, микрососудистых дисфункций или их комбинаций. В некоторых воплощениях повреждение, связанное с ишемией, возникает во время реперфузии пораженного сосуда.
Термин «атеросклероз» относится к любому повышению жесткости артерий, вторичному по отношению к атероме или накоплению в интиме артериальной стенки липидов, воспалительных клеток (главным образом, макрофагов/пенистых клеток) и клеточного дебриса, который нагружен липидами, и клеток гладких мышц сосудов, которые мигрировали из окружающей среды. Стенка артерии утолщается в результате накопления кальция и жировых веществ, таких как холестерин и триглицерид. Эластичность стенок артерии уменьшается, и они могут выступать в направлении просвета сосудов, уменьшая кровоток. Они также могут стать уязвимыми для разрыва и стать причиной образования тромба (ишемическое событие).
Термин «тромбоз» относится к образованию тромба крови внутри кровеносного сосуда вследствие активации каскада коагуляции и активации/агрегации тромбоцитов. Следовательно, тромб препятствует кровотоку через систему кровообращения. «Тромбоэмболия» относится к образованию в кровеносном сосуде сгустка (тромба), который отрывается и переносится кровотоком, закупоривая другой сосуд. Сгусток может закупорить сосуд в легких (легочная эмболия), мозге (инсульт), желудочно-кишечном тракте, почках или ноге.
«Липид-эмболия» или «жировая эмболия» относится к часто бессимптомному присутствию жировых глобул в паренхиме легких и периферическом кровообращении после травмы длинной трубчатой кости или другой серьезной травмы.
Термин «кровотечение» относится к процессу потери крови или возникновению гемостатических дефектов, в особенности в результате хирургического вмешательства. В частности внутреннее кровотечение возникает, когда имеется повреждение артерии или вены, позволяющее крови выходить из кровеносной системы и накапливаться внутри организма. Внутреннее кровотечение может возникнуть в тканях, органах или в полостях тела.
Термин «стент» относится к распределяющему устройству, такому как трубка, вставленному в естественный проход/канал в организме для предотвращения или противодействия вызванному заболеванием локальному сужению потока.
Под «хирургическим вмешательством» или «хирургическим лечением» подразумевают любую лечебную процедуру, которая включает в себя системное действие руки или руки с инструментом на теле человека или другого млекопитающего для осуществления лечебного или восстановительного действия.
«Ангиопластика» относится к технике механического расширения суженных или закупоренных артерий, причем последние обычно возникают в результате атеросклероза. В суженные места вводят пустой и сжатый баллон на направляющей проволоке, известный как баллонный катетер, который затем надувают до фиксированного размера, применяя давление воды, примерно в 75-500 раз превышающее нормальное кровяное давление (от 6 до 20 атмосфер). Баллон принудительно расширяет внутренние отложения лейкоцитов/сгустков и окружающей мышечной стенки, открывая кровеносный сосуд для улучшения кровотока, и затем баллон спускают и удаляют. Стент может быть или может не быть вставлен во время раздувания, чтобы гарантировать, что сосуд остается открытым.
«Шунтирование» относится к классу операций, включающих перенаправление трубчатой части тела, и включает сердечно-легочное шунтирование, частичное шунтирование подвздошной кишки, илеоеюнальное шунтирование, шунтирование желудка и сосудистое шунтирование, такое как шунтирование коронарной артерии. Сердечно-легочный шунт (CBP) временно принимает на себя функцию сердца и легких во время операции, поддерживая кровообращение и содержание кислорода в организме. Частичное шунтирование подвздошной кишки - это хирургическая процедура, которая включает укорочение подвздошной кишки для сокращения общей длины тонкого кишечника. Илеоеюнальный шунт - это операция, разработанная как средство от морбидного ожирения. Сосудистое шунтирование - это хирургическая процедура, выполняемая при недостаточном кровоснабжении или при утрате кровоснабжения в какой-либо области тела. В частности, операция по аортокоронарному шунтированию, также известная как операция по шунтированию коронарной артерии (CABG), представляет собой хирургическую процедуру, выполняемую для облегчения стенокардии и снижения риска смерти от заболевания коронарной артерии.
Под «трансплантацией» понимают хирургическую процедуру, при которой клетку, ткань или орган переносят от донора к субъекту-реципиенту или от одной части тела к другой части тела у того же субъекта. «Субъект-донор» - это субъект, который сдает кровь, клетки, ткани или орган другому субъекту путем переливания крови или трансплантации органа. Субъектом-донором является человек или другое млекопитающее. «Субъект-реципиент» - это субъект, который получает кровь, клетки, ткани или орган от другого субъекта путем переливания крови или трансплантации органа. Субъектом-реципиентом является человек или другое млекопитающее. Трансплантируемые ткани включают костную ткань, сухожилия, ткань роговицы, клапаны сердца, вены и костный мозг, но не ограничиваются этим. Пересаженные органы включают сердце, легкие, печень, почки, поджелудочную железу и кишечник, но не ограничиваются этим. Конкретная хирургическая процедура трансплантации, в которой субъект-донор и субъект-реципиент представляют собой генетически не идентичных представителей одного и того же вида, называется аллотрансплантацией. Таким образом, термин аллотрансплантат (также известный как аллографт, аллогенный трансплантат или гомотрансплантат) относится к трансплантации клеток, тканей или органов, полученных от генетически неидентичного представителя того же вида, что и реципиент. Термин «аллотрансплантируемый» относится к органам или тканям, которые относительно часто или регулярно трансплантируются. Примеры аллотрансплантируемых органов включают сердце, легкое, печень, поджелудочную железу, почку и кишечник. Конкретная хирургическая процедура трансплантации, в которой субъект-донор и субъект-реципиент представлены разными видами, называется ксенотрансплантацией. Таким образом, термин ксенотрансплантат (также известный как ксенографт, ксеногенный трансплантат или гетеротрансплантат) относится к трансплантации клеток, тканей или органов, полученных от донора реципиенту, в котором донор и реципиент представлены разными видами.
«Полная ишемия» относится к ишемии, при которой артериальное и/или венозное кровоснабжение полностью перекрыто (отсутствие кровотока). В более конкретном воплощении связанное с ишемией повреждение обусловлено коронарной обструкцией (инфаркт миокарда). В другом воплощении поражение, связанное с ишемией, обусловлено реперфузией в связи с ишемическим повреждением.
«Инфаркт миокарда» (MI) включает ишемический некроз части миокарда из-за обструкции одной или нескольких коронарных артерий или их ветвей. Инфаркт миокарда характеризуется потерей/гибелью функциональных кардиомиоцитов, причем ткань миокарда повреждается необратимо. Миокард или сердечная мышца страдает от инфаркта, когда имеет место прогрессирующее ишемическое заболевание, в частности это происходит, когда атероматозная бляшка, расположенная внутри коронарной артерии, образует язвы или разрывы, вызывая образование тромба и острую обструкцию этого сосуда, что приводит к ишемии.
Субъект согласно настоящему раскрытию представляет собой любого субъекта, для которого связанное с ишемией повреждение органа или ткани должно быть предотвращено и/или уменьшено. В одном конкретном воплощении субъектом является млекопитающее, включая людей, домашних животных, сельскохозяйственных животных и животных, содержащихся в зоопарке, спортивных или домашних животных, таких как собаки, кошки, морские свинки, кролики, крысы, мыши, лошади, крупный рогатый скот, коровы и т.д. В более предпочтительном воплощении настоящего раскрытия, субъект представляет собой человека.
В одном конкретном воплощении субъект страдает дислипидимией. В наиболее предпочтительном воплощении изобретения (что касается группы пациентов) субъект страдает гиперхолестеринемией. Гиперхолестеринемия относится к патологическому состоянию, характеризующемуся высокими уровнями холестерина в крови, в особенности высокими уровнями общего холестерина и ЛПНП. Как этот термин используется в этом документе, «общий холестерин» относится к сумме субфракций холестерина ЛПНП (липопротеинов низкой плотности), ЛПВП (липопротеинов высокой плотности) и ЛПОНП (липопротеинов очень низкой плотности). Специалист в данной области знает эталонные значения уровней общего холестерина и ЛПНП в крови, которые будут варьироваться в зависимости от различных обстоятельств, таких как возраст, пол и т.д., и знает, как определить в каждом случае, страдает ли субъект гиперхолестеринемией.
Согласно настоящему раскрытию субъект считается страдающим дислипидимией, если субъект имеет аномальное количество липидов (например, триглицеридов, холестерина и/или жировых фосфолипидов) в крови. В развитых странах большинство дислипидемий представляют собой гиперлипидемии; то есть повышение уровня липидов в крови. Гиперлипидемии делятся на первичные и вторичные подтипы. Первичная гиперлипидемия обычно возникает из-за генетических причин (таких как мутация в рецепторном белке), тогда как вторичная гиперлипидемия возникает из-за других основных причин, таких как диабет, состояния, находящиеся на пересечении генетики и образа жизни.
Согласно настоящему раскрытию субъект считается страдающим гиперхолестеринемией, если был обнаружен уровень общего холестерина, превышающий 200 мг/дл, и/или был обнаружен уровень холестерина липопротеинов низкой, превышающий 100 мг/дл.
3. Применение для изготовления лекарственного средства
В дополнительном аспекте настоящее раскрытие относится к применению соединения для изготовления лекарственного средства для предотвращения/уменьшения связанного с ишемией повреждения у субъекта, в котором указанное соединение представляет собой статин, где указанное соединение следует вводить указанному субъекту путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, и в котором указанное соединение следует вводить как можно раньше после наступления ишемии.
В некоторых воплощениях указанное соединение, указанное предотвращение/уменьшение, указанная ишемия, указанное ишемическое повреждение, указанное реперфузионное повреждение, указанное повреждение, связанное с ишемией, указанный субъект, указанный статин и/или указанное введение являются такими, как определено выше.
4. Способы лечения
В дополнительном аспекте настоящее раскрытие относится к способу лечения, включающему стадию введения субъекту, страдающему ишемией, фармацевтически эффективного количества соединения, в котором указанное соединение представляет собой статин, где указанное соединение вводят указанному субъекту путем внутривенного введения после наступления ишемии, но до реперфузии, и в котором указанное соединение вводят как можно раньше после наступления ишемии.
В некоторых воплощениях указанное соединение, указанная ишемия, указанное ишемическое повреждение, указанное реперфузионное повреждение, указанное повреждение, связанное с ишемией, указанное фармацевтически эффективное количество, указанный субъект, указанный статин и/или указанное введение являются такими, как определено выше.
Настоящее изобретение будет подробно описано ниже с использованием следующих примеров, которые представляют собой просто иллюстративные примеры и никоим образом не ограничивают объем настоящего раскрытия.
ПРИМЕРЫ
Все протоколы исследований были одобрены ведомственным комитетом по этике (CSIC-ICCC), и все процедуры на животных проводили в строгом соответствии с принципами Директивы 2010/63/EU Европейского парламента о защите животных, применяемых в научных целях, или с принципами Национального института здравоохранения (NIH) (публикация NIH № 85-23, пересмотренная в 1996 году). Кроме того, мы следовали рекомендациям ARRIVE и мы взяли на себя обязательства в рамках концепции 3R по исследованиям на лабораторных животных.
Пример 1
Свиная модель для ишемии
Эксперименты на свиной модели ишемии миокарда, имитирующей инфаркт миокарда, проводили, как показано на фиг. 1.
У свиней, которых кормили обычным кормом (≈ 40 кг), экспериментально индуцировали ишемию путем индукции инфаркта миокарда в закрытых грудных клетках. С этой целью животных успокаивали и поддерживали анестезию изофлуораном в течение всей экспериментальной процедуры. Во время процедуры непрерывно контролировали сердечный ритм, оксиметрию и артериальное давление. Непосредственно перед началом процедуры была начата перфузия амиодарона и лидокаина в качестве предупреждения злокачественных аритмий левого желудочка. Все животные в исследовании были подвергнуты одинаковому антиаритмическому фармакологическому подходу, позволяющему проводить прямое сравнение между группами. При чрескожном доступе и флюороскопическом контроле индуцировали ишемию путем полной окклюзии средней левой передней нисходящей коронарной артерии с использованием коронарного баллона. Для обеспечения полной коронарной окклюзии выполняли контрастную ангиографию.
Через 15 минут после ишемии животные получали внутривенную инфузию аторвастатина (0,3 мг/кг) или носителя. Дозировки лекарственных средств определяли на основе нагрузочной дозы (80 мг) в условиях острого коронарного синдрома и/или предыдущего ЧКВ (чрескожного коронарного вмешательства) и пересчитывали на дозу для свиньи в соответствии с площадью поверхности тела. Контрольным животным внутривенно вводили плацебо (физиологический раствор) через 15 минут после ишемии.
Образцы крови (сыворотка) для дальнейшей оценки биомаркеров повреждения сердца брали в начале исследования (т.е. до индукции MI или во время = 0 мин), а также через 30, 60 и 90 мин после индукции MI (ишемия).
Образцы крови также собирали в EDTA в начале исследования (до ишемии) и через 90 минут после ишемии из бедренной артерии для выделения PBMC методом фракционирования в Ficoll.
После взятия 90-минутного образца крови свиней умерщвляли без реперфузии для получения ткани миокарда для молекулярных исследований и гистологии.
Пример 2
В этом примере было проверено, защищает ли внутривенное введение одной дозы аторвастатина после начала коронарной окклюзии от повреждения, связанного с ишемией (схема в примере 1). Эксперимент проводился на группах из 7 животных (обработанные аторвастатином против носитель-контроля).
Концентрацию IMA (альбумин, модифицированный ишемией), CFABP (белок, связывающий жирные кислоты сердца) и миоглобина определяли с помощью соответствующих наборов ELISA для свиней в образцах крови, взятых через 30 мин, 60 мин и 90 мин после индукции MI, и сравнивали с их исходными значениями (до индукции ишемии). Выбор этих белков был обоснован тем, что они представляют собой ранние маркеры для оценки повреждения сердца в результате ишемии.
Как показано в примере, во всех трех исследованных временных точках внутривенное введение аторвастатина значительно снижало уровни IMA (фиг. 2A), CFABP (фиг. 2B) и миоглобина (фиг. 2C) в крови по сравнению с контрольными группами. Левые панели четко отражают общее снижение трех маркеров повреждения сердца у животных, получавших аторвастатин, по сравнению с контрольной группой при комбинировании трех временных точек. Наконец, как видно из фиг. 2D, наблюдали общее снижение уровней IMA более чем на 50% и уровня CFABP и миоглобина у животных, получавших аторвастатин, более чем на 75% по сравнению животными, не получавшими лечения.
Таким образом, данный пример демонстрирует, что внутривенное введение статина аторвастатина сразу после индукции ишемии значительно снижает уровни маркеров ишемического повреждения по сравнению с животными, не получавшими статин.
Пример 3
В этом примере проверяли, влияет ли внутривенное введение статина аторвастатина на активацию RhoA в ишемическом миокарде свиней, описанных в примере 1 и примере 2.
После ишемического периода сердца животных останавливали хлоридом калия и быстро вырезали. Образцы тканей, полученные из ишемического миокарда всех животных, измельчали и гомогенизировали в буфере для лизиса для выделения белка и оценки общего RhoA. Кроме того, проводили разделение мембранной и цитозольной фракций путем модификации протокола буфера для лизиса. Вкратце, тканевый порошок гомогенизировали (1 моль/л NaCl, 20 ммоль/л Трис, рН 7,4, 1 ммоль/л DTT и ингибиторы протеазы) и центрифугировали. Супернатант собирали (обозначен как цитозольная фракция) и осадки ресуспендировали, а мембранные белки экстрагировали инкубацией в 500 ммоль/л трис-HCl pH 7,4, 20% додецилсульфате натрия, 100 ммоль/л ортованадате натрия и с ингибиторами протеаз. Экстракт центрифугировали и супернатант собирали в виде мембранной фракции.
Концентрацию белка (в общей ткани миокарда, во фракции цитоплазмы и во фракции мембран) количественно определяли методом Пирса. RhoA («Santa Cruz») определяли в суммарной и цитозольной и мембранной фракциях ишемической ткани сердца всех животных с помощью Вестерн-блот анализа. Интенсивность полос Вестерн-блоттинга определяли с помощью Chemi-Doc («Bio-Rad»), и их количественно определяли с помощью программного обеспечения Quantity one («Bio-Rad»). Интенсивность выражали в условных единицах (AU).
Как видно из фиг. 3, лечение статинами после наступления ишемии не повлияло на общее количество белка RhoA в ишемическом миокарде (фиг. 3A). Однако лечение статинами значительно повлияло на активацию RhoA. Однако необработанные контрольные животные показали сниженное отношение RhoAcyt/mb, что указывает на увеличение RhoA, связанного с мембраной (активная форма) (фиг. 3B). Напротив, у обработанных статинами животных RhoA был в основном локализован в цитоплазме (неактивен).
Таким образом, этот пример показывает, что однократная доза статина (например, аторвастатина) после наступления ишемии ингибирует активацию RhoA в ишемическом миокарде инфарктных свиней.
Пример 4
В данном примере проверяли, включает ли кардиопротекторное действие, связанное с лечением статинами, ингибирование RhoA.
Эксперимент проводили на мышиной модели ишемии миокарда, в которой ишемию вызвали перевязкой коронарных артерий (фиг. 4А).
Полная перевязка коронарной артерии LAD была выполнена следующим образом. Самцов мышей СН3 (8-10 недель, весом 25-30 г) интубировали и анестезировали смесью O2/изофлуран и механически вентилировали (скорость 90 вдохов/мин, дыхательный объем 0,1 мл). Температуру прямой кишки непрерывно контролировали на протяжении всей операции и поддерживали в пределах 37-38°C с помощью грелки и нагревательной лампы. Была выполнена передняя торакотомия; сердце было обнажено, и коронарная артерия LAD была закрыта интрамуральным швом (шелковый шов 7-0; последовательная перевязка левой коронарной артерии, когда она выходит из-под левого предсердия) в течение 45 минут. Успешность полной коронарной перевязки была подтверждена электрокардиографической визуализацией паттерна ST-Elevation-MI (инфаркт миокарда с повышением ST-сегмента), который отслеживали с помощью ультразвука высокой частоты с помощью Vevo2100 от «Visualsonics» и визуализацией бледного гипокинетического желудочка, дистального по отношению к месту окклюзии.
Через 15 минут после коронарного лигирования (т.е. через 15 минут после наступления ишемии) вводили внутрибрюшинно однократную дозу аторвастатина (0,3 мг/кг; n = 6), β-ОН-симвастатина (0,3 мг/кг; n = 6), специфического ингибитора RhoA CCG1423 («Sigma»; 0,15 мг/кг; n = 6) или объем PBS для носителя/контролей (n = 6). Ишемия поддерживали еще в течение 30 минут после введения однократной дозы (т.е. всего 45 минут ишемии), затем мышей умерщвляли и осторожно вырезали сердце для анализа размера инфаркта.
Размер инфаркта определяли морфометрическим анализом. Для этого все мышиные сердца были погружены в раствор фиксатора (4%-ный параформальдегид), залиты в соединение ОСТ и нарезаны от вершины до основания (срезы толщиной 10 мкм на расстоянии 200 мкм). Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, и определяли размер морфометрического инфаркта с применением программного обеспечения для анализа изображений (ImageJ, NIH). Размер инфаркта рассчитывали по сумме площадей инфаркта миокарда между срезами и выражали в процентах от общей стенки LV. Было проведено три измерения на каждый участок.
Кроме того, оценивали окислительное повреждение миокарда. Для этой цели ишемическую ткань миокарда нарезали на кусочки толщиной 5 мкм для окрашивания 8-OH-dG (Abcam ab48508), измерения, указывающего на вызванное окислительным стрессом повреждение ДНК. Окрашивание рассчитывали путем односторенного слепого анализа из среднего значения 5 полей/животное в % от окрашенной площади. Изображения были получены с помощью микроскопа Nikon Eclipse 80i и оцифрованы с помощью камеры Retiga 1300i Fast.
Как видно из гистологических изображений, представленных на фиг. 4B, размер инфаркта был явно уменьшен примерно на 50% обработкой статинами (аторвастатин и β-ОН-симвастатин), а также ингибитором RhoA CCG1423 по сравнению с контролем-носителем.
Введение статина и CCG1423 также было связано с более низким окислительным повреждением (снижение на 70%) в ишемическом миокарде (фиг. 4C).
Таким образом, этот пример показывает, что кардиопротекторные эффекты статинов опосредованы, в частности, ингибированием RhoA.
Пример 5
В данном примере эффект внутривенного введения статина во время ишемии определяли на уровне мРНК кардиопротекторных клеточных белков [AMPK (АМФ-активированная протеинкиназа) и eNOS (эндотелиальная синтаза оксида азота)] и связанных с апоптозом маркеров р53 и каспазы-3, как в ишемическом, так и в неишемическом миокарде. Исследование проводили на образцах миокарда, полученных от свиней, как описано в примерах 1 и 2.
Для этого образцы тканей, полученные из ишемического миокарда и неишемического миокарда всех животных, измельчали и гомогенизировали в Tripure («Roche») для выделения РНК. Мы выполнили транскриптомный анализ для оценки с помощью ПЦР в реальном времени экспрессии генов AMPK, eNOS, P53 и каспазы-3. Значения порогового цикла были определены и нормализованы по гену домашнего хозяйства 18SrRNA.
Как показано на фиг. 5, аторвастатин не приводил к каких-либо изменениям в уровнях мРНК AMPK, eNOS, p53 и каспазы-3 как в ишемическом, так и в неишемическом миокарде по сравнению с контролем.
Таким образом, лечение аторвастатином сразу после ишемического инсульта не изменяет уровни мРНК кардиопротекторных и апоптотических маркеров, оцененных через 90 минут после ишемии.
Пример 6
В данном примере было исследовано влияние внутривенного введения статина на ранних этапах после наступления ишемии на активацию AMPK и eNOS (белки, известные как обладающие кардиопротекторным действием).
Исследование проводили на образцах миокарда от свиней, как описано в примерах 1 и 2.
Для этого образцы тканей, полученные из ишемического миокарда и неишемического миокарда всех животных, измельчали и гомогенизировали в буфере для лизиса. Мы оценивали AMPK, AMPK, фосфорилированные по Thr172 (P-AMPK), или активированные AMPK, eNOS и eNOS, фосфорилированные по Ser1177 (P-eNOS), или активированные eNOS. Степень активации AMPK и eNOS оценивали путем расчета отношения P-AMPK к общему AMPK и отношения P-eNOS к общему eNOS, соответственно. Интенсивность полос определяли с помощью денситометрии и выражали в произвольных единицах (AU).
Как видно из фиг. 6А, уровни P-AMPK были значительно повышены в ишемическом миокарде у животных, получавших аторвастатин, по сравнению с контрольной группой. Никаких изменений не наблюдалось в P-AMPK в неишемической ткани сердца между животными, обработанными аторвастатином, и контрольными группами, показывающими уровни белка, сопоставимые с уровнями, обнаруженными в ишемическом миокарде животных, обработанных аторвастатином. Не было обнаружено изменений в общем содержании белка AMPK во всем сердце в обеих группах животных. Соответственно, отношение P-AMPK/AMPK было значительно увеличено у животных, получавших аторвастатин. Эти наблюдения показаны в репрезентативных полосах вестерн-блоттинга.
Как видно из фиг. 6B, лечение аторвастатином не усиливало (но и не уменьшало) индуцированную ишемией активацию eNOS. Снова, представлено репрезентативное изображение полос вестерн-блоттинга.
Таким образом, уже однократная доза статина аторвастатина, вводимая сразу после наступления ишемии, сохраняет активацию кардиопротекторного белка AMPK, при этом она не влияет на статус активации eNOS.
Пример 7
Чтобы определить, имела ли место связанная с аторвастатином активация AMPK в кардиопротекторных эффектах, которые дает статин, мы провели эксперимент на мышиной модели ишемии миокарда. Модель коронарного лигирования на животных подробно описана в примере 4 и на фиг. 4.
В этом случае ингибитор AMPK (соединение C; 30 мг/кг; растворенный в ДМСО) вводили внутрибрюшинно перед введением аторвастатина (0,3 мг/кг), чтобы блокировать любое потенциальное влияние статина на активацию AMPK. Аторвастатин вводили через 15 минут после ишемии, а через 30 минут (общий ишемический период 45 минут) мышей умерщвляли и обрабатывали сердца для определения размера инфаркта миокарда и оценки окисления, как подробно описано в примере 4.
Гистологический анализ размера инфаркта (фиг. 7A) показал, что блокада активации AMPK с помощью Соединения С нивелирует свойства уменьшения размера инфаркта, достигаемые введением аторвастатина вскоре после индукции ишемии. Кроме того, фиг. 7B указывает на то, что активация AMPK также защищает от окислительного повреждения [оцениваемого по окрашиванию 8-гидроксигуанозином (8-OHdG)], поскольку введение Соединения C устраняет эти защитные эффекты.
Таким образом, кардиопротективные эффекты аторвастатина против ишемического повреждения (включая снижение размера инфаркта и окислительное повреждение) частично опосредованы активацией AMPK.
Пример 8
Этот пример был осуществлен для изучения вопроса о том, предотвращает ли введение аторвастатина во время ишемии апоптоз в ишемическом миокарде свиней.
Ткань миокарда всех свиней, включенных в пример 1 и пример 2, была получена, измельчена и обработана лизирующим буфером для выделения белка, как подробно описано в примере 6. Белок определяли количественно по методу Пирса, и проводили Вестерн-блот анализ для оценки уровней фосфорилированного p53 (Ser15), общего р53, расщепленной каспазы-3 и общей каспазы-3. Соотношения фосфорилированный p53/общий p53 и расщепленный Casp3/общий каспаза 3 рассчитывали для определения того, сколько белка было активировано.
Из данных фиг. 8А видно, что введение аторвастатина сразу после ишемии снижало активацию р53 в ишемическом миокарде, в то же время не оказывало влияния на активацию р53 в неишемическом миокарде. Никаких изменений в общем уровне р53 во всем миокарде не наблюдалось. Соответственно, отношение P-p53/p53 было значительно снижено в ишемическом миокарде свиней, получавших аторвастатин.
Что касается влияния обработки аторвастатином на активацию каспазы-3, как это показано на фиг. 8B, то введение аторвастатина снижало уровни расщепленной (активной) каспазы 3 в ишемическом миокарде. Поскольку не сообщалось об изменениях общей каспазы-3, аторвастатин, следовательно, уменьшал соотношение расщепленной каспазы-3/общей каспазы-3, как видно из репрезентативных полос вестерн-блоттинга нВ фиг. 8B.
Таким образом, введение аторвастатина сразу после ишемии снижает уровни апоптоза в ишемическом миокарде, оцениваемые по сниженным уровням как фосфорилированного р53, так и расщепленной каспазы 3.
Пример 9
В этом примере изучали, оказывает ли применение аторвастатина сразу после индукции ишемии противовоспалительное действие на миокард. С этой целью влияние аторвастатина на экспрессию белка-1 хемоаттрактанта моноцитов (MCP-1/CCL2) оценивали на уровне мРНК и уровне белка, поскольку МСР-1 представляет собой один из ключевых хемокинов, который регулирует миграцию и инфильтрацию лейкоцитов (особенно моноцитов). Миграция моноцитов из кровотока через эндотелий сосудов происходит сразу после ишемического инсульта.
Миокард свиней, включенный в пример 1 и пример 2, был получен, измельчен и обработан буфером Tripure или лизирующим буфером для выделения мРНК и белка, как подробно описано в примере 5 и примере 6, соответственно. Были оценены как уровни мРНК, так и экспрессия белка МСР-1. Значения порогового цикла (Ct) были определены и нормализованы по отношению к гену 18SrRNA домашнего хозяйства с целью корректировки на равные количества РНК, тогда как β-актин был применен в качестве контроля нагрузки белка.
Как видно из фиг. 9, обработка аторвастатином значительно снижала экспрессию мРНК МСР-1 и белка в ишемическом миокарде по сравнению с необработанными свиньями.
Не было обнаружено изменений в экспрессии МСР-1 в неишемической ткани миокарда.
Таким образом, внутривенное введение аторвастатина вскоре после индукции ишемии оказывает противовоспалительное действие на ишемическую ткань сердца.
Пример 10
В данном примере исследуемый вопрос заключался в том, распространяются ли системно противовоспалительные эффекты аторвастатина, наблюдаемые в миокарде, также и на циркулирующие лейкоциты, в частности мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC).
С этой целью 20 мл крови собирали в пробирки с ЭДТА в трех протестированных временных точках (0, 30 и 90 мин) у всех животных. Все образцы крови немедленно подвергали центрифугированию в градиенте плотности Ficoll-paque Plus («Amersham Biosciences») для выделения PBMC. Образцы подсчитывали и затем непосредственно замораживали в жидком азоте и хранили при -80°C до выделения мРНК и белка, как описано в примере 5 и примере 6. Уровень экспрессии мРНК маркеров воспаления, связанных с врожденным иммунитетом TLR4 (Toll-подобный рецептор 4), и МСР-1, а также TF (тканевый фактор) определяли с помощью ПЦР-анализа в реальном времени, а также оценивали экспрессию белка МСР-1. Значения порогового цикла (Ct) были определены и нормализованы по отношению к гену 18SrRNA домашнего хозяйства с целью корректировки на равные количества РНК, тогда как красный Понсо был применен для контроля нагрузки белка.
Как показано на фиг. 10А, обработка аторвастатином не модифицировала экспрессию TLR4 или TF PBMC ни до (время 0 мин), ни после (время 90 мин) ишемической индукции. Напротив, аторвастатин заметно ослаблял вызванное ишемией увеличение экспрессии МСР-1 как на уровне генов, так и на уровне белка.
Таким образом, этот пример показывает, что противовоспалительное действие аторвастатина распространяется за пределы ишемической ткани, а также распространяется на системное кровообращение, предотвращая связанную с ишемией индукцию MCP-1/CCL2 в циркулирующих PBMC.
Пример 11
В данном примере исследовали вопрос о том, уменьшает ли разовая внутривенная доза аторвастатина, введенная сразу после ишемии, образование рубцов миокарда по оценке через 30 дней после индукции ишемии. Эксперимент проводили на крысиной модели ишемии, в которой ишемия миокарда вызвали постоянной перевязкой коронарной артерии (фиг. 11А).
Исследование проводили на самцах крыс SD (8-10 недель, весом 250-300 г; «Jackson Laboratory»). MI был вызван перевязкой LAD коронарной артерии в течение 45 минут. Через 15 минут после ишемии крысам случайным образом вводили внутрибрюшинную инъекцию 0,3 мг/кг аторвастатина или равный объем PBS для носителя/контролей (n = 6). Через тридцать минут после введения аторвастатина (45 минут ишемии) животным давали возможность выздороветь и их содержали их в течение следующих 30 дней, а затем умерщвляли. После этого сердца аккуратно вырезали для морфометрической оценки размера инфаркта.
Результаты этого эксперимента показаны на фиг. 11B. Как видно из данных, однократная доза аторвастатина через 15 минут после наступления ишемии привела к значительному уменьшению размера рубца на 60%, что оценивали после 30-дневной индукции после ишемии, по сравнению с контрольной группой.
Таким образом, введение аторвастатина сразу после индукции ишемии оказывает защитные эффекты, которые приводят к снижению образования рубцов в миокарде через 1 месяц после индукции ишемии.
Пример 12
В данном примере вопрос, который необходимо решить, заключался в том, уменьшает ли разовая внутривенная доза аторвастатина сразу после индукции ишемии повреждение миокарда при наличии сопутствующих заболеваний, таких как гиперхолестеринемия, являющаяся наиболее распространенным сердечно-сосудистым фактором риска, обнаруживаемым у пациентов, страдающих от инфаркта миокарда.
С этой целью 14 свиней кормили в течение 10 дней гиперхолестеринемической диетой западного типа [20% - насыщенный жир (говяжий жир), 2% - холестерин, 1% - холевая кислота]. Эта гиперлипидемическая диета содержит 24,82% белков, 64,20% углеводов, 10,98% жиров и 16834,7 кДж. Употребление этой богатой жирами диеты в течение 10 дней повышает уровень холестерина до уровней, сравнимых с таковым у людей с дислипидемией, и вызывает эндотелиальную дисфункцию.
После этого 10-дневного периода диеты животным проводили окклюзию коронарным баллоном средней левой передней нисходящей артерии (LAD) в закрытой грудной клетке в течение 90 минут и в том же экспериментальном дизайне, как описан в примере 1. Вкратце, через 15 минут после индукции ишемии, животным (n = 7 животных/группа) внутривенно вводили аторвастатин (0,3 мг/кг), а затем забирали кровь через 30, 60 и 90 минут ишемии для определения ранних маркеров повреждения сердца (IMA, MFABP, миоглобин).
Как видно из данных, одна доза аторвастатина через 15 минут после наступления ишемии привела к значительному снижению всех трех маркеров, связанных с повреждением миокарда. Таким образом, внутривенное введение аторвастатина привело к значительному снижению IMA (фиг. 12A), CFABP (фиг. 12B) и миоглобина (фиг. 12C), уже наблюдаемого через 30 минут после индукции ишемии (через 15 минут после введения аторвастатина). Процент снижения составил около 60-75% для всех трех маркеров (фиг. 12D).
Таким образом, этот эксперимент свидетельствует о том, что внутривенное введение аторвастатина сразу после индукции ишемии защищает миокард от ишемического повреждения даже в присутствии высоких уровней холестерина.
Пример 13
В данном примере исследуемый вопрос заключался в том, снижает ли однократная внутривенная доза аторвастатина сразу после ишемии рекрутирование нейтрофилов в ишемическое поврежденное место у свиней с гиперхолестеринемией.
С этой целью была получена ишемическая ткань миокарда всех гиперхолестеринемических свиней, включенных в пример 12, встроена в ОКТ и окрашена для обнаружения нейтрофилов (анти-нейтрофил эластаза; «Abcam»). Окрашивание рассчитывали путем односторенного слепого анализа из среднего значения 5 полей/животное в % от окрашенной площади. Изображения были получены с помощью микроскопа Nikon Eclipse 80i и оцифрованы с помощью камеры Retiga 1300i Fast.
Как видно из данных (фиг. 13), однократная внутривенная доза аторвастатина через 15 минут после наступления ишемии привела к значительному уменьшению нейтрофильной инфильтрации миокарда (снижение на 57%) по сравнению с контролем.
Таким образом, внутривенное введение аторвастатина свиньям сразу после индукции ишемии ограничивает рекрутирование нейтрофилов в ишемическое повреждение миокарда при дислипидемии.
Пример 14
В данном примере исследуемый вопрос заключался в том, ограничивает ли введение статина во время ишемического инсульта реперфузионное повреждение, связанное с ишемией, и, соответственно, уменьшает ли общее повреждение сердца.
Свиньям давали гиперхолестеринемическую диету, как в Примере 11. После этого 10-дневного периода диеты животным в течение 90 минут делали коронарную окклюзию средней левой передней нисходящей артерии (LAD) с закрытой грудной клеткой. После 75 минут ишемии животных рандомизировали для внутривенного вливания (бедренная вена) активного производного β-гидроксикислоты симвастатина (β-OH-S; 0,3 мг/кг; n = 12) или носителя (0,9% NaCl; n = 12). На 90-й минуте баллон спускали для достижения реперфузии коронарной артерии. Животных реперфузировали в течение 2,5 часов. Размер инфаркта определяли морфометрически, путем окрашивания синим Эванса. Для этого через 2,5 часа после реперфузии анестезированным свиньям через левое предсердие вводили краситель синий Эванса, чтобы обозначить зону риска (AAR), после чего сердца животных останавливали хлоридом калия и быстро извлекали. Сердца разделяли на 6 поперечных срезов, параллельных атриовентрикулярному кольцу. Последовательные срезы поочередно собирали для анализа размера инфаркта (трифенилтетразолия хлорид) и молекулярных исследований ишемического и неишемического миокарда. Образцы тканей, полученные из миокарда всех ишемических и неишемических животных, измельчали и гомогенизировали в Tripure или буфере для лизиса для выделения РНК и белка, соответственно. Оценивали уровень белка маркеров апоптоза (усеченная каспаза-3). Залитую в парафин ишемическую ткань миокарда всех животных разрезали на кусочки толщиной 5 мкм для окрашивания 8-гидроксигуанозином (Abcam ab48508), измерения, указывающего на вызванное окислительным стрессом повреждение ДНК, и залитую в OCT ишемическую ткань миокарда всех животных окрашивали для обнаружения нейтрофилов (анти-нейтрофил эластаза; «Abcam»). Окрашивание рассчитывали путем односторенного слепого анализа из среднего значения 5 полей/животное в % от окрашенной площади. Изображения были получены с помощью микроскопа Nikon Eclipse 80i и оцифрованы с помощью камеры Retiga 1300i Fast. Кроме того, митохондриальный мембранный потенциал (Δψm) измеряли в ишемическом миокарде всех животных методом проточной цитометрии с применением ратиометрического красителя 5,5',6,6'-тетрахлор-1,1',3,3'-тетраэтилбензимидазолкарбоцианина иодида. (JC-1; «Molecular Probes»). Величины выражали в виде активности красной флуоресценции. Изолированные митохондрии, обработанные валиномицином («Sigma»), который уменьшает Δψm, применяли в качестве контроля (данные не показаны).
Как показано на фиг. 14, инфузия β-OH-S во время ишемии привела к уменьшению размера повреждения миокарда (ишемическое повреждение + реперфузионное повреждение), оцененного через 2,5 часа после реперфузии (фиг. 14A). Кроме того, инфузия бета-OH-S при ишемии значительно снижала экспрессию расщепленной каспазы-3 (фиг. 14B), ограничивала рекрутирование нейтрофилов (фиг. 14C), снижала окислительный стресс (фиг. 14D) и сохраняла митохондриальный потенциал (фиг. 14E) в ишемической ткани миокарда всех животных, получавших аторвастатин.
Таким образом, инфузия β-OH-S во время ишемии уменьшает реперфузионное повреждение, связанное с ишемией, в целом ограничивая повреждение миокарда.