КОНСТРУИРОВАНИЕ ОБЛИГАТНОГО ВЕКТОРА НА ОСНОВЕ ОНКОЛИТИЧЕСКИХ ВИРУСОВ ПРОСТОГО ГЕРПЕСА (oHSV) И КОНСТРУКЦИИ ДЛЯ ТЕРАПИИ РАКА

L
S
1. Модифицированный вирус простого герпеса типа 1 (HSV-1), способный выполнять функцию вектора клеточных и или вирусных генов, содержащий модифицированный геном HSV-1, причем указанная модификация включает делецию между промотором гена U56 и промотором гена U1 генома HSV-1 дикого типа, такую, что (i) одна копия всех представленных в двух копиях генов отсутствует, и (ii) последовательности, необходимые для экспрессии всех существующих открытых рамок считывания (ОРС) в вирусной ДНК, после делеции являются интактными.
2. Модифицированный HSV-1 по п. 1, характеризующийся тем, что указанные представленные в двух копиях гены включают гены, кодирующие ICP0, ICP4, ICP34.5, ORF Р и ORF О, и дуплицированные некодирующие последовательности, расположенные между делегированными областями.
3. Модифицированный HSV-1 по п. 1, характеризующийся тем, что указанный HSV-1 содержит изомер генома прототипа (Р).
4. Модифицированный HSV-1 по п. 1, характеризующийся тем, что указанный HSV-1 выбран из штаммов любого существующего изолята HSV, включая штаммы F, KOS и 17.
5. Модифицированный HSV-1 по п. 3, характеризующийся тем, что указанная делеция приводит к вырезанию положений нуклеотидов с 117005 по 132096 в геноме штамма F.
6. Рекомбинантный онколитический вирус простого герпеса типа 1 (HSV-1), содержащий
L
S
модифицированный вирус HSV-1, способный выполнять функцию вектора клеточных и или вирусных генов, причем указанная модификация включает делецию между промотором U56 и промотором U1 генома HSV-1 дикого типа, такую, что (i) одна копия всех представленных в двух копиях генов отсутствует, и (ii) последовательности, необходимые для экспрессии всех существующих открытых рамок считывания (ОРС) в вирусной ДНК, после делеции являются интактными; и
последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую иммуностимулирующий и/или иммунотерапевтический агент, причем указанная последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты стабильно встроена по меньшей мере в делетированную область модифицированного генома HSV-1.
7. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 6, характеризующийся тем, что указанный иммуностимулирующий агент выбран из ГМ-КСФ (гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора), ИЛ (интерлейкина)-2, ИЛ-5, ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-24 и ИЛ-27.
8. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 6, характеризующийся тем, что указанный иммунотерапевтический агент выбран из анти-PD-1 агента и анти-CTLA-4 агента.
9. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 6, характеризующийся тем, что указанный рекомбинантный онколитический HSV-1 содержит последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую ИЛ-12, анти-PD-1 агент и/или анти-CTLA-4 агент.
10. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 6, характеризующийся тем, что указанный рекомбинантный онколитический HSV-1 содержит первую последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую ИЛ-12, и вторую последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую анти-PD-1 агент или анти-CTLA-4 агент.
11. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 6, характеризующийся тем, что указанный рекомбинантный онколитический HSV-1 содержит первую последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую анти-PD-1 агент, и вторую последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую анти-CTLA-4 агент.
12. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 6, характеризующийся тем, что указанный рекомбинантный онколитический HSV-1 содержит первую последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую ИЛ-12, вторую последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую анти-PD-1 агент, и третью последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты, кодирующую анти-CTLA-4 агент.
13. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 6, характеризующийся тем, что указанный рекомбинантный онколитический HSV-1 дополнительно содержит последовательность промотора, функционально связанную с последовательностью гетерологичной нуклеиновой кислоты.
L
L
L
14. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 10 или 11, характеризующийся тем, что указанная первая последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты встроена в делетированную область модифицированного генома HSV-1, и указанная вторая последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты встроена между генами с U3 по U4 в компоненте U модифицированного генома HSV-1.
L
L
L
L
L
L
15. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 12, характеризующийся тем, что указанная первая последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты встроена в делетированную область модифицированного генома HSV-1, указанная вторая последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты встроена между генами с U3 по U4 в компоненте U модифицированного генома HSV-1, и указанная третья последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты встроена между генами с U37 по U38 в компоненте U модифицированного генома HSV-1.
L
L
L
L
L
L
16. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 12, характеризующийся тем, что указанная первая последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты встроена в делетированную область модифицированного генома HSV-1, указанная вторая последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты встроена между генами с U37 по U38 в компоненте U модифицированного генома HSV-1, и указанная третья последовательность гетерологичной нуклеиновой кислоты встроена между генами с U3 по U4 в компоненте U модифицированного генома HSV-1.
17. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 13, характеризующийся тем, что указанная последовательность промотора представляет собой промотор цитомегаловируса (CMV) или промотор Egr.
18. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 6, характеризующийся тем, что указанный иммуностимулирующий и/или иммунотерапевтический агент является гуманизированным.
19. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 8, характеризующийся тем, что указанный анти-PD-1 агент или анти-CTLA-4 агент содержит вариабельную область антитела, которая обеспечивает специфичное связывание с эпитопом PD-1 или CTLA-4, соответственно.
20. Рекомбинантный онколитический HSV-1 по п. 19, характеризующийся тем, что указанная вариабельная область антитела представляет собой полное антитело, фрагмент антитела или рекомбинантное производное антитела либо фрагмента антитела.
21. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество рекомбинантного онколитического HSV-1 по любому из пп. 6-20 и фармацевтически приемлемый носитель.
22. Фармацевтическая композиция по п. 21, характеризующаяся тем, что указанная композиция выполнена в форме для внутриопухолевого введения.