ВЛИЯНИЕ БАКТЕРИАЛЬНОГО БИОНЕМАТИЦИДА НА ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ ЛИЧИНОК МЕЛОЙДОГИН

DOI: 10.31016/978-5-9902341-5-4.2020.21.142-146

УДК 632.811.651

влияние бактериального бионематицида

на жизнеспособность личинок мелойдогин

Конрат А. Н.

младший научный сотрудник лаборатории фитопаразитологии

Alenakonrat@vniigis.ru

Аннотация

Целью исследования было установить нематицидный эффект бактериальной суспензии штамма Bacillus BZR 86 на личинках галловых нематод рода Meloidogyne spp. при разной концентрации бактериальной культуры. В опыте было пять вариантов и контроль. В ячейки планшета вносили по 1 мл суспензии личинок и 1 мл бактериальной суспензии. Ячейки планшета накрыли стеклянной пластиной и хранили при температуре 25 0С в течении 24, 48, 72 часов. В эти периоды под бинокулярной лупой подсчитывали количество подвижных и не подвижных личинок в каждой ячейке. После 48 часов промыли стерильной водопроводной водой. После прохождения 24 часов после промывки подсчитывали количество живых и мертвых нематод. При изучении влияния бионематицида на жизнеспособность личинок галловых нематод установлено, что для неразведенной суспензии Bacillus BZR 86 смертность личинок составила 97,5%, при разведении в пять раз 89%, в десять раз 64%, при разведении в 100 и 1000 раз и в контроле личинки сохранили жизнеспособность. Нематицидная активность исследуемого штамма Bacillus BZR 86 достигает 64—97,5%. Можно заключить, что штамм бактерии Bacillus BZR 86 может являться основой для создания биологического препарата для борьбы с галловыми нематодами.

Ключевые слова: бактериальный бионематицид, мелойдогины.

1 Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений — филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр — Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук»

effect of bacterial bionematicides on the viability of larvae meloidogyne

Konrat A. N.

Junior Researcher, Laboratory of the Phytoparasitology

Alenakonrat@vniigis.ru

Abstract

The aim of this study was to establish the nematicidal effect of bacterial suspension of the Bacillus BZR 86 strain on the larvae of gall nematodes of the genus Meloidogyne spp. at different concentrations of bacterial culture. The experiment had 5 options and control. 1 ml of larval suspension and 1 ml ofbacterial suspension were added to the tablet cells. The tablet cells were covered with a glass plate and stored at a temperature of 25 0C, for 24, 48, 72 hours. During these periods, the number of mobile and non-mobile larvae in each cell was counted under a binocular magnifying glass. After 48 hours, they were washed with sterile tap water. After passing 24 hours after washing, the number of living and dead nematodes was counted. When studying the effect of bionematicide on the viability of gall nematode larvae, it was found that for an undiluted suspension of Bacillus BZR 86, the mortality of larvae was 97.5%, when diluted five times 89%, ten times 64%, when diluted 100 and 1000 times, and in control, the larvae retained viability. The nematicidal activity of the studied Bacillus BZR 86 strain is high and reaches 64—97.5%. We can conclude that Bacillus BZR 86 can be the basis for creating a biological drug to reduce the harmfulness of gall nematodes. Keywords: bacterial bionematicides, meloidogyne.

Введение. Мелойдогины (Meloidogyne spp.) поражают практически все виды культурных растений, уничтожают ежегодно около 10% мировой растительной продукции. В отдельных случаях потери урожая достигают 70—90%. Из-за сильного поражения этими патогенами многие растения погибают, на зараженных площадях продолжительное время не культивируют экономически важные культуры [2]. Одной из возможностей контролировать численность фитопаразитических нематод в почве является использование биопрепаратов на основе микроорганизмов-антагонистов. Целью наших исследований было

1 All-Russian Scientific Research Institute for Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plant — a branch of the Federal State Budget Scientific Institution "Federal Scientific Centre VIEV"

изучение влияния бактериального бионематицида на жизнеспособность личинок галловых нематод.

Материалы и методы. Объектом исследований являлись штаммы бактерий, предоставленные из ВНИИБЗР г. Краснодар. Из имеющихся в коллекции бактерий в результате скрининга был отобран штамм бактерий, обладающий нематицидным эффектом — Bacillus sp. BZR86 [1]. Оценку нематицидной эффективности штамма бактерий проводили in vitro.

Бактерии Bacillus sp. BZR86 выращивали на жидкой питательной среде 925. Подготовленную среду разлили в колбы по 100 мл и стерилизовали. В остывшую среду (до комнатной температуры, 25 0С) инокулировали штамм бактерий BZR86 — Bacillus sp. с пробирки бактериальной иглой. Наращивали в колбах на качалке 190 об/мин. при температуре 29 0С в течении 45 часов. После получения бактериальной суспензии штамма BZR86 — Bacillus sp. провели тест на нема-тицидную активность культуры штамма. Определили концентрацию маточной суспензии по общепринятой методике [1]. Для изучения влияния бактериального бионематицида на жизнеспособность личинок мелойдогин маточную суспензию Bacillus BZR86 с концентрацией 107 КОЕ/мл разводили стерильной водой в следующих пропорциях: 1:5, 1:10, 1:100, 1:1000.

Предварительно приготовили суспензию личинок галловых нематод, в 1 мл которой содержалось от 90 до 110 личинок. В ячейки планшета внесли по 1 мл суспензии личинок нематод и по 1 мл суспензии бактерии Bacillus BZR86 разных разведений. В опыте было пять вариантов и контроль в шести повторностях. Ячейки планшета накрыли стеклянной пластиной и хранили при температуре 25 0С в течении 24, 48, 72 часов. В эти периоды под бинокулярной лупой подсчитывали количество подвижных и неподвижных личинок в каждой ячейке. После 48 часов промыли стерильной водопроводной водой нематод в ячейках, через 24 часа после промывания подсчитывали количество живых и мертвых нематод.

Смертности личинок галловых нематод от совместного инкубирования с бактериями определяли по формуле Шнайдера Орелли [3].

Результаты исследований. При изучении влияния бионематицида штамма Bacillus BZR86 на жизнеспособность личинок галловых нематод установлено, что через 24, 48, 72 часа проведения эксперимента процент смертности нематод от суспензии бактерий при разведении в 5 и 10 раз практически не изменился, в варианте с добавлением

маточной суспензии бактерии смертность личинок галловых нематод составила 97,5%. Данный штамм показал высокую нематицидную активность. В контроле — все личинки живые ( табл. 1).

Таблица 1

Влияния концентрации суспензии штамма Bacillus BZR86 на жизнеспособность личинок галловых нематод через 72 часа

Вариант Смертность, %

Контроль (стерильная вода) 0

Bacillus sp. BZR86, 107 КОЕ/мл, разведение 1:1000 0

Bacillus sp. BZR86, 107 КОЕ/мл, разведение 1:100 0

Bacillus sp. BZR86, 107 КОЕ/мл, разведение 1:10 64

Bacillus sp. BZR86, разведение 1:5 89

Bacillus sp. BZR86 суспензия без разведения 97,1

После 48 часов содержания в суспензии и через 24 часа промывки в стерильной воде в варианте с неразведенной суспензией бактерий смертность личинок галловых нематод составила 97,1%. При разведении суспензии штамма Bacillus sp. BZR86 нематицидная активность снижалась.

При концентрации 107 КОЕ/мл в маточной культуре смертность достигала 97,1%, при разведении суспензии в 5 и 10 раз смертность нематод снижалась до 89% и 64% соответственно. При разведении в 100 и 1000 раз гибель личинок нематод не отмечена.

Воздействие суспензии бактерии на личинок галловых нематод по своему действию идентично воздействию на нематод химическими не-матицидами [2]. Снижение концентрации суспензии бактерии уменьшала эффективность воздействия на личинок галловых нематод.

Заключение. В результате проведенного эксперимента было установлено, что нематицидная активность исследуемого штамма Bacillus BZR86 высокая и достигает 64—97,5%. Можно заключить, что Bacillus BZR86 может являться основой для создания биологического препарата для снижения численности галловых нематод (Meloidogyne spp.).

Литература

1. Мигунова В.Д., Конрат А.Н., Лычагина С.В., Асатурова А. М, Sasanelli N. Первичный скрининг нематицидной активности бактерий по отношению к галловым нематодом. Материалы Международной науч.-практ. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». 2015. Вып. 16. С. 259-260.

2. Шестеперов А.А, Лычагина С.В., Колесова Е.А., Конрат А.Н. Мелойдо-гиноз овощных культур защищенного грунта и меры борьбы с ним. М., 2015. 192 с.

3. Puntener W. Manual for field trials in plant protection. Second edition. Basle, Switzerland: Agricultural Division, Ciba-Geigy Limited, 1981. P. 51, 205.

References

1. Migunova V.D., Konrat A.N., Lychagina S.V., Asaturova A.M., Sassanelli N. Primary screening of nematicidal activity of bacteria in relation to gall nematodes. In.: International Scientific Conference "Theory and practice of fighting parasitic diseases". 2015;

2. Shesteperov A.A, Lychagina, S. V., Kolesova, E. A., Konrat A. N. Meloydoginosis of vegetable crops of protected soil and measures to combat it. Moscow, 2015. 192 p.

3. Puntener W. Manual for field trials in plant protection. Second edition. Basle, Switzerland: Agricultural Division, Ciba-Geigy Limited, 1981. P. 51, 205.