Способ оценки адгезивных свойств холерных вибрионов Vibrio cholerae EI Tor и Vibrio cholerae 0139 на клеточной культуре Hu Tu-80

Способ оценки адгезивных свойств холерных вибрионов Vibrio cholerae El Tor и Vibrio cholerae O139 на клеточной культуре HuTu-80, включающей следующие стадии:
а) проводят подготовку монослоя клеток HuTu-80 путем их выращивания в пластиковых флаконах объемом 50 мл, по 100-150 тыс. на 1 мл с последующим трипсинизированием культуры и внесением ее в пенфлаконы с дисками (диски 12,0 X 0,11 SPL Lifesciences) по 50 тыс. клеток в объеме 1 мл;
б) готовят бактериальную суспензию штаммов Vibrio cholerae El Tor и Vibrio cholerae 0139, которые выращивают на агаре Мартена (рН 7,7) в течение 18 ч, после этого петлей засевают в бульон LB (рН 7,7) и выдерживаю в термостате при 37°С в течение 3 ч;
6
в) эксперимент проводят в пенфлаконах с дисками, на которых сформировался разреженный монослой HuTu-80, туда добавляют 10 мкл бактериальной суспензии и 1 мл среды DMEM с 5% сыворотки эмбриональной бычьей, до концентрации холерных вибрионов 10 м.к./мл, затем проводят инкубирование в течение 90 мин при 37°С, удаляют питательную среду, дважды промывают монослой раствором Хенкса рН 7,4, фиксируют 5% формалином 1 ч, после этого высушивают и окрашивают диски по Романовскому - Гимза 1:5 в течение 40 мин;
г) проводят по окрашенным дискам подсчет связанных бактериальных клеток, для этого диски промывают раствором Хенкса рН 7,4, достают из флаконов, высушивают, просматривают под микроскопом и определяют адгезивные свойства холерных вибрионов по числу вибрионов, связавшихся с 100 клетками HuTu-80, и рассчитывают по формуле индекс адгезии по формуле:
где ИА - индекс адгезии,
ΣКБ - суммарное количество клеток бактерий, прикрепившихся к одной клетке линии HuTu 80,
100К - 100 клеток линии HuTu-80,
оценивают результаты по полученному количественному индексу адгезии, если он больше 20 делают вывод, что исследуемый штамм - высокоадгезивный, от 10 до 20 - среднеадгезивный штамм, меньше 10 - штамм низкоадгезивный.