N-(1-Н-БЕНЗО[d]ИМИДАЗОЛ-2-ИЛ)-2-(2-(ДИФЕНИЛМЕТИЛЕН)ГИДРАЗИНИЛ)-5,5-ДИМЕТИЛ-4-ОКСОГЕКС-2-ЕНАМИД, ОБЛАДАЮЩИЙ АНАЛЬГЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ
N-(1-H-BENZO[d]IMIDAZOLE-2-yl)-2-(2-(DIPHENYLMETHYLENE)HYDRAZINYL)-5,5-DIMETHYL-4-OXOHEX-2-ENEAMIDE EXHIBITING ANALGESIC ACTIVITY

Изобретение относится к области органической химии, к новым биологически активным веществам класса производных 2-гидразоно-5,5-диметил-4-оксобут-2-еновых кислот, а именно к N-(1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2-(2-(дифенилметилен)гидразинил)-5,5-диметил-4-оксогекс-2-енамиду 1 структурной формулы:
обладающему выраженной анальгетической активностью при низкой токсичности, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве лекарственного средства с обезболивающими свойствами.
Аналогом по структуре заявляемому соединению является 4-(4-метилфенил)-4-оксо-2-[3-этоксикарбонил-4,5-диметилтиофен-2-иламино]бут-2-еновая кислота 2, обладающая анальгетической активностью [пат. 2 389 724 Рос. Федерация. №2008151813/04; заявл. 25.12.08; опубл. 20.05.10, Бюл. №14] формулы:
Приведены данные по анальгетической активности:
Эталоном сравнения выбран метамизол натрия структурной формулы:
И диклофенак натрия структурной формулы:
которые широко применяются в лечебной практике и являются аналогами по действию [Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - Москва: ООО «Новая волна», 2020. - С. 164, 185].
Задачей изобретения является поиск в ряду производных 4-замещенных 2-имино(гидразоно)-4-оксобутановых кислот веществ с выраженным анальгетическим действием, а также низкой токсичностью.
Поставленная задача достигается получением N-(1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2-(2-(дифенилметилен)гидразинил)-5,5-диметил-4-оксогекс-2-енамида 1, обладающего анальгетическим действием.
Заявляемое соединение 1 синтезируют взаимодействием 3-арилиденгидразоно-5-трет-бутил-3H-фуран-2-она 3 с 1H-бензо[d]имидазол-2-амином 4 при кипячении в среде абсолютного толуола с последующим выделением целевого продукта известными методами по схеме:
1
13
6
аром
аром
аром
аром
2
аром
аром
аром
аром
3
26
26
2
4
Получение N-(1H-бензо[d]имидазол-2-ил)-2-(2-(дифенилметилен)гидразинил)-5,5-диметил-4-оксогекс-2-енамида 1. К раствору 1 ммоль фуранона 3 в 10 мл абсолютного толуола добавляли 1 ммоль амина 4. Реакционную смесь кипятили при перемешивании в течение 10 мин до образования оранжевого раствора, затем оставляли при комнатной температуре в течение 24 часов. После удаления растворителя осадок перекристаллизовывали из смеси этанола и ацетонитрила 1:1. Выход 0.40 г (86%), желтые кристаллы, т. пл. 203-204°С. В растворе ДМСО существует в виде двух таутомерных форм (основная енгидразинная - форма А и минорная гидразонная - форма В). Спектр ЯМР Н (ДМСО-d), δ, м. д.: форма А (61%): 1.03 с (9Н, t-Bu), 5.60 с (1Н, СН), 7.17 м (2Н), 7.36 м (5Н), 7.50 м (5Н), 7.69 м (3Н), 12.08 уш с (1Н, CONH), 12.28 с (1Н, NH); форма В (39%): 1.13 с (9Н, t-Bu), 4.18 с (2Н, СН), 7.10 м (2Н), 7.28 м (5Н), 7.44 м (4Н), 7.61 м (4Н), 12.08 уш с (1H, CONH). Спектр ЯМР С (CDCl), δ, м. д.: 26.12, 26.96, 35.77, 42.04, 44.26, 90.08, 121.38, 121.68, 126.91, 127.86, 128.17, 128.38, 128.47, 128.74, 129.43, 129.49, 129.73, 129.85, 129.97, 130.79, 131.84, 134.09, 136.71, 136.83, 150.95, 154.40, 161.91, 205.59, 210.23. Найдено, %: С 72.45; Н 6.01; N 6.60. CHNO. Вычислено, %: С, 72.54; Н, 6.09; N, 6.51.
Полученное соединение 1 представляет собой желтое кристаллическое вещество, растворимое в ДМСО, ацетоне, малорастворимое в этаноле, труднорастворимое в толуоле и ацетонитриле, нерастворимое в воде и гексане.
50
Биологическая активность соединения 1. Острая токсичность (ЛД, мг/мл) определялась в опытах на белых нелинейных мышах-самках массой 16-18 г, содержащихся на обычном рационе вивария. Исследуемое соединение вводили однократно внутрибрюшинно в виде взвеси в 2% растворе крахмала. Каждую дозу вводили двум животным. За животными вели наблюдение в течение 10 суток, фиксируя поведение, интенсивность и характер двигательной активности, наличие и характер судорог, координацию движений, тонус скелетной мускулатуры, реакции на тактильные, звуковые и световые раздражители, частоту и глубину дыхательных движений, ритм сердечных сокращений, состояние волосяного и кожного покрова, окраску видимых слизистых оболочек, потребление воды и пищи, изменение массы тела.
Рассчитывали острую токсичность, соблюдая рекомендации государственного фармакологического комитета по изучению общетоксического действия биологически активных веществ [Методические рекомендации по изучению общетоксического действия фармакологических средств. Утв. 25,12,97 /Вестн. фармакоп. комитета. - 1998. - №1. - С. 27-32.].
50
Для исследуемого соединения 1 ЛД составляет >1200 мг/кг.
Согласно классификации токсичности препаратов, соединение 1 относится к классу практически нетоксичных веществ [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977. - С. 196-197].
50
Анальгетическую активность определяли на белых нелинейных мышах (самках) массой 18-22 г по методу термического раздражения «горячая пластина» [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств: монография / А.Н. Миронов, Н.Д. Бунятян, А.Н. Васильева [и др.]. - Москва: Гриф и К, 2012. - С. 944]. Животных помещали на разогретую до 54°С металлическую поверхность, окруженную цилиндром. Регистрировали время с момента помещения на горячую поверхность до появления поведенческого ответа на болевое раздражение (облизывание задних лап, прыжки, отдергивание задней лапы). Критерием анальгетического эффекта считали достоверное увеличение латентного периода реакции после введения вещества. Исследуемые соединения вводили внутрибрюшинно за 30 мин до тестирования в дозе 50 мг/кг в виде взвеси в 1% растворе крахмала. В качестве эталона сравнения использовали метамизол натрия (ООО «Фармхимкомплект», Россия) в дозе 50 мг/кг и диклофенак натрия («Alfa Aesar», США) в дозе 10 мг/кг (соответствует ЕД в связи с высокой токсичностью препарата). В контрольные и опытные группы было включено по 8 мышей. В опыте использовались животные с исходным временем наступления оборонительного рефлекса не более 15 с. Контрольной группе животных вводили 1% раствор крахмала.
Результаты экспериментов обрабатывали статистически с вычислением критерия Фишера-Стьюдента [Беленький, М.Л. Элементы количественной фармакологического эффекта / М.Л. Беленький. - 2-е изд. - Ленинград, 1963. - С. 152]. Результаты испытаний представлены в таблице 1.
50
50
Как видно из таблицы 1, эффект заявляемого соединения 1 значительно превышает эффект препарата сравнения метамизола натрия и на уровне препарата сравнения диклофенака натрия при низкой токсичности. Эффективная доза диклофенака натрия составляет 14% от его ЛД, а эффективная доза заявляемого соединения - 4% от его ЛД, что указывает на преимущества соединения 1 перед диклофенаком натрия относительно безопасности применения. Следовательно, заявляемое соединение 1 может найти применение в медицинской практике в качестве анальгетического лекарственного средства.