МУТАНТНЫЕ ВАРИАНТЫ Fc IgG1, ЛИШЕННЫЕ ЭФФЕКТОРНЫХ ФУНКЦИЙ

1. Рекомбинантная молекула, содержащая Fc IgG1 человека, которая содержит домен CH2, содержащий аминокислотную последовательность, являющуюся на по меньшей мере 80% идентичной по отношению к аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 60, и в котором аминокислота в положении 265 отличается от аспарагиновой кислоты (D), аминокислота в положении 297 отличается от аспарагина (N), и аминокислота в положении 329 отличается от пролина (P),
где молекула сохраняет связывание с FcRn, и где молекула характеризуется в по меньшей мере 20 раз сниженным связыванием с C1q и с по меньшей мере одним Fcγ-рецептором (FcγR) по сравнению с молекулой, содержащей Fc IgG1 человека дикого типа, которая содержит D в положении 265, N в положении 297 и P в положении 329, и где нумерация указана согласно индексу EU по Kabat.
2. Молекула по п. 1, где молекула характеризуется в по меньшей мере 50 раз сниженным связыванием с C1q и с по меньшей мере одним FcγR по сравнению с молекулой, содержащей Fc IgG1 человека дикого типа, которая содержит D в положении 265, N в положении 297 и P в положении 329.
3. Молекула по п. 1 или 2, где по меньшей мере один FcγR выбран из FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIa и FcγRIIIb.
4. Молекула по любому из пп. 1-3, где:
i. аминокислота в положении 265 представляет собой аланин (A), аспарагин (N) или глутаминовую кислоту (E),
ii. аминокислота в положении 297 представляет собой аланин (A), аспарагиновую кислоту (D) или глутамин (Q), и
iii. аминокислота в положении 329 замещена аланином (A), глицином (G) или серином (S).
5. Молекула по любому из пп. 1-4, где домен CH2 содержит аминокислотную последовательность, являющуюся на по меньшей мере 90% идентичной по отношению к аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 60.
6. Молекула по любому из пп. 1-5, где Fc-домен содержит аминокислотную последовательность, являющуюся на по меньшей мере 80%, предпочтительно на по меньшей мере 90% идентичной по отношению к аминокислотной последовательности Fc-домена IgG1 человека, содержащей SEQ ID NO: 43.
7. Молекула по любому из пп. 1-6, где молекула представляет собой антитело, Fc-область, слитый белок на основе Fc или слитый белок на основе антитела, такой как FynomAb.
8. Молекула по любому из пп. 1-7, где молекула содержит Fc-область, содержащую последовательность в соответствии с любым из SEQ ID NO: 43, 52, 53, 54, 55, 56, 57 или 58, где аминокислоты D в положении 265, N в положении 297 и P в положении 329 замещены другими аминокислотами.
9. Рекомбинантный полинуклеотид, кодирующий молекулу по любому из предыдущих пунктов.
10. Вектор, содержащий полинуклеотид по п. 9.
11. Клетка-хозяин, содержащая рекомбинантный полинуклеотид по п. 9 или вектор по п. 10.
12. Способ получения рекомбинантной молекулы, содержащей Fc IgG1 человека, которая содержит домен CH2, содержащий аминокислотную последовательность, являющуюся на по меньшей мере 80% идентичной по отношению к аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 60, и в котором аминокислоты в положениях 265, 297 и 329, указанных согласно индексу EU по Kabat, замещены другими аминокислотами, при этом способ включает стадии:
a. получения нуклеиновой кислоты, кодирующей молекулу, содержащую Fc IgG1 человека дикого типа,
b. модификации нуклеиновой кислоты, полученной на стадии (a), в целях получения нуклеиновой кислоты, кодирующей рекомбинантную молекулу, содержащую Fc IgG1 человека, в которой аминокислоты в положениях 265, 297 и 329 замещены аминокислотами, отличными от D, N и P соответственно, и
c. обеспечения экспрессии нуклеиновой кислоты, полученной на стадии (b), в клетке-хозяине и извлечения указанной рекомбинантной молекулы, содержащей Fc IgG1 человека,
где рекомбинантная молекула, содержащая Fc IgG1 человека, сохраняет связывание с FcRn, и где рекомбинантная молекула, содержащая Fc IgG1 человека, характеризуется в по меньшей мере 20 раз сниженным связыванием с C1q и с по меньшей мере одним Fcγ-рецептором (FcγR) по сравнению с молекулой, содержащей Fc IgG1 человека дикого типа, которая содержит D в положении 265, N в положении 297 и P в положении 329.
13. Рекомбинантный полипептид, содержащий:
a. по меньшей мере один связывающий домен, способный связываться с молекулой-мишенью; и
b. Fc-домен IgG1 человека, который содержит аминокислотную последовательность, являющуюся на по меньшей мере 80% идентичной по отношению к аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 60, и где аминокислоты в положениях 265, 297 и 329 в соответствии с индексом EU по Kabat отличаются от D, N и P соответственно,
где рекомбинантный полипептид сохраняет связывание с FcRn, и
где рекомбинантный полипептид способен связываться с молекулой-мишенью, не инициируя значительную активацию лимфоцитов, комплементзависимый лизис и/или клеточноопосредованное разрушение молекулы-мишени и/или клетки, на поверхности которой экспрессируется молекула-мишень.
14. Рекомбинантный полипептид по п. 13, где по меньшей мере один связывающий домен выбран из группы, состоящей из связывающего участка антитела, финомера, фермента, гормона, внеклеточного домена рецептора, цитокина, поверхностного антигена иммунных клеток, лиганда и адгезивной молекулы.
15. Рекомбинантный полипептид по п. 13 или 14, где Fc-домен является на по меньшей мере 80%, предпочтительно на по меньшей мере 90% идентичным по отношению к аминокислотной последовательности Fc-домена IgG1 человека, содержащей SEQ ID NO: 43.
16. Рекомбинантный полипептид по любому из пп. 13-15, где связывающий домен представляет собой связывающий участок антитела.
17. Фармацевтическая композиция, содержащая молекулу, содержащую Fc IgG1 человека, по любому из пп. 1-8, рекомбинантный полинуклеотид по п. 9, вектор по п. 10 или рекомбинантный полипептид по любому из пп. 13-16 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
18. Способ лечения заболевания или нарушения, включающий введение субъекту или пациенту молекулы, содержащей Fc IgG1 человека, по любому из пп. 1-8, рекомбинантного полинуклеотида по п. 9, вектора по п. 10, рекомбинантного полипептида по любому из пп. 13-16 или фармацевтической композиции по п. 17.
19. Способ по п. 18, где заболевание или нарушение представляет собой рак.
20. Способ получения рекомбинантной молекулы, содержащей Fc IgG1 человека, при этом способ включает обеспечение экспрессии рекомбинантного полинуклеотида по п. 9 в клетке-хозяине и сбор рекомбинантного полипептида.
21. Молекула, содержащая Fc IgG1 человека, по любому из пп. 1-8, рекомбинантный полинуклеотид по п. 9, вектор по п. 10, рекомбинантный полипептид по любому из пп. 13-16 или фармацевтическая композиция по п. 17 для применения при лечении заболевания или нарушения.
22. Молекула, содержащая Fc IgG1 человека, рекомбинантный полинуклеотид, вектор, рекомбинантный полипептид или фармацевтическая композиция для применения по п. 21, где заболевание или нарушение представляет собой рак.
23. Применение молекулы, содержащей Fc IgG1 человека, по любому из пп. 1-8, рекомбинантного полинуклеотида по п. 9, вектора по п. 10, рекомбинантного полипептида по любому из пп. 13-16 или фармацевтической композиции по п. 17 в изготовлении лекарственного препарата для лечения заболевания или нарушения.
24. Применение по п. 23, где заболевание или нарушение представляет собой рак.