КОНЪЮГАТЫ АМАТОКСИНОВ С УЛУЧШЕННЫМИ ЛИНКЕРАМИ

1. Конъюгат, включающий связующую мишень часть, соединенную через линкер L с аматоксином, где линкер L соединяется с аматоксином через
(i) γ-атом С аминокислоты 1 аматоксина, в частности через амидную связь;
(ii) атом кислорода, связанный с δ-атомом С аминокислоты 3 аматоксина, в частности через сложноэфирную связь, простую эфирную связь или уретановую связь; или
(iii) 6'-атом С аминокислоты 4 аматоксина, в частности, через атом кислорода, связанный с 6'-атомом С аминокислоты 4 аматоксина;
где в каждом случае линкер L соединен с частью, связующей мишень, через остаток мочевины.
2. Конъюгат по п.1, где конъюгат имеет структуру, выбранную из следующих структур:
(i) аматоксин-γС(О)-NH-L-NH-C(О)-NH-(часть, связующая мишень);
(ii) аматоксин-δС-O-С(О)-L-NH-C(O)-NH-(часть, связующая мишень);
(iii) аматоксин-δC-O-L-NH-C(О)-NH-(часть, связующая мишень);
(iv) аматоксин-δС-О-С(О)-NH-L-NH-C(О)-NH-(часть, связующая мишень) и
(v) аматоксин-6'C-O-L-NH-C(О)-NH-(часть, связующая мишень).
3. Конъюгат по п.1 или 2, где часть, связующая мишень, соединена с линкером L через аминогруппу, присутствующую в указанной части, связующей мишень, где указанная аминогруппа образует часть указанного остатка мочевины.
4. Конъюгат по п.1, где аматоксин выбирают из α-аманитина, β-аманитина, γ-аманитина, ε-аманитина, аманина, аманинамида, амануллина, или амануллиновой кислоты, или их солей, или аналогов.
5. Конъюгат по п.1, где линкер L представляет собой алкиленовую, гетероалкиленовую, алкениленовую, гетероалкениленовую, алкиниленовую, гетероалкиниленовую, циклоалкиленовую, гетероциклоалкиленовую, ариленовую, гетероариленовую, аралкиленовую или гетероаралкиленовую группу, необязательно замещенную.
6. Конъюгат по п.1, где линкер L включает группу, выбранную из следующих групп: дисульфидная, простая эфирная, аминная, сложноэфирная, карбоксамидная, уретановая и мочевинная группа.
7. Конъюгат по п.1, где часть, связующая мишень, специфически связывается с эпитопом, который присутствует на опухолевой клетке, в частности, где часть, связующая мишень, специфически связывается с эпитопом молекулы фактора адгезии эпителиальных клеток (ЕрСАМ).
8. Конъюгат по п.1, где часть, связующую мишень, выбирают из группы, состоящей из
(i) антитела или его антигенсвязующего фрагмента;
(ii) антителоподобного белка, и
(iii) аптамера нуклеиновой кислоты.
9. Конъюгат по п.8, где антитело или его антигенсвязующий фрагмент выбирают из диатела, тетратела, нанотела, химерного антитела, деиммунизированного антитела, гуманизированного антитела или человеческого антитела.
2
10. Конъюгат части, связующей мишень, и токсина по п.8 или 9, где антигенсвязующий фрагмент выбирают из группы, состоящей из Fab, F(ab'), Fd, Fv, одноцепочечного Fv и дисульфидсоединенного Fv (dsFv).
11. Конъюгат по п.1 для применения в качестве лекарственного средства.
12. Конъюгат по п.1 для лечения рака у пациента, где рак выбирают из группы, состоящий из рака поджелудочной железы, холангиокарциномы, рака молочной железы, колоректального рака, рака легких, рака предстательной железы, рака яичников, рака желудка, рака почек, злокачественной меланомы, лейкоза и злокачественной лимфомы.
13. Фармацевтическая композиция, включающая конъюгат по любому из пп.1-10 и дополнительно включающая один или более фармацевтически приемлемых разбавителей, носителей, эксципиентов, наполнителей, связующих веществ, смазывающих веществ, глидантов, веществ, способствующих рассыпанию, адсорбентов и/или консервантов.
14. Конъюгирующая молекула аматоксина, включающая линкер L, соединенный с аматоксином через
(i) γ-атом С аминокислоты 1 аматоксина, в частности через амидную связь;
(ii) атом кислорода, связанный с δ-атомом С аминокислоты 3 аматоксина, в частности через сложноэфирную связь, простую эфирную связь или уретановую связь; или
(iii) 6'-атом С аминокислоты 4 аматоксина, в частности через атом кислорода, связанный с 6'-атомом С аминокислоты 4 аматоксина;
где в каждом случае линкер L включает производное карбаминовой кислоты -NH-C(O)-X, где Х представляет собой удаляемую группу, которую можно заменить первичным амином или частью, связующей мишень.
15. Конъюгирующая молекула аматоксина по п.14, где Х выбирают из -трет-бутилокси, -сукцинимидилокси, -1-O-сукцинимидилокси-3-сульфонатной группы (-сульфо-NHS), -О-(4-нитрофенилокси), -О-(3-нитрофенилокси), -О-(2,4-динитрофенилокси), -О-(2,4-дихлор-6-нитрофенилокси), пентафторфенилокси, -пентахлорфенилокси, -О-(2,4,5-трихлорфенилокси), -О-(3,4-дигидро-3-гидрокси-4-оксо-1,2,3-бензотриазин-3-ила), -О-(эндо-1-гидрокси-5-норборнен-2,3-дикарбоксимид-1-ила), -1-фталимидоилокси, 1-бензотриазолилокси, -1-(7-азабензотриазолил)окси и -N-имидазолила.
16. Способ синтеза конъюгата по любому из пп.1-12, включающий стадию осуществления реакции конъюгирующей молекулы аматоксина по п.14 или 15 со связующей мишень частью, включающей первичную аминогруппу.