ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ НЕЙРОМЕДИАТОРНОГО ОБМЕНА В ОБРАЗЦАХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ, СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАТЕХОЛАМИНОВ И ИХ МЕТАБОЛИТОВ С ЕЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

1. Тест-система для экспресс-определения низкомолекулярных маркеров нейромедиаторного обмена в образцах биологических жидкостей, представляющая собой планшет с нанесенной на поверхность лунок пленки хитозана с иммобилизованной пероксидазой растительного происхождения в количестве, достаточном для проведения реакции дериватизации при введении пробы биологической жидкости с дериватизирующим агентом в присутствии пероксида водорода.
2
2. Тест-система по п. 1, характеризующаяся тем, что пероксидазы содержится в количестве от 2 до 16 пмоль на 1 мм площади пленки.
2
3. Тест-система по п. 1, характеризующаяся тем, что хитозана содержится в количестве от 15 до 60 мг на 1 мм площади пленки.
4. Тест-система по п. 1, характеризующаяся тем, что толщина пленки составляет от 0,5 до 1,5 мкм.
5. Тест-система по п. 1, характеризующаяся тем, что в качестве пероксидазы растительного происхождения используют пероксидазу из корней хрена, соевых бобов, арахиса, листьев табака, клубней батата и листьев масличных пальм.
6. Тест-система по п. 1, характеризующаяся тем, что используют хитозан с распределением молекулярных масс 50-220 кДа и степенью дезацетилирования не менее 75%.
7. Способ получения тест-системы по п. 1, включающий приготовление водных растворов хитозана и пероксидазы растительного происхождения с последующим их нанесением на лунки планшета и высушиванием до образования пленки.
8. Способ по п. 7, характеризующийся тем, что для приготовления водного раствора хитозана используют водные растворы кислот с рН не менее 2 в количестве достаточном для растворения хитозана в воде, при этом предотвращающем реакцию сшивания хитозана.
9. Способ по п. 8, характеризующийся тем, что в качестве кислот используют уксусную, соляную, угольную.
10. Способ по п. 7, характеризующийся тем, что концентрация водного раствора хитозана составляет от 0,5 до 2 мас. %, а раствора пероксидазы от 15 до 20 мкМ.
11. Способ по п. 7, характеризующийся тем, что высушивание осуществляют при температуре до 23±3°С.
12. Способ по п. 7, характеризующийся тем, что в качестве пероксидазы растительного происхождения используют пероксидазу из корней хрена, соевых бобов, арахиса, листьев табака, клубней батата и листьев масличных пальм.
13. Способ по п. 7, характеризующийся тем, что используют хитозан с распределением молекулярных масс 50-220 кДа и степенью дезацетилирования не менее 75%.
14. Способ по п. 7, характеризующийся тем, что объемное соотношение растворов хитозана и пероксидазы при нанесении на лунку составляет от 1:1 до 6:1.
15. Способ экспресс-определения катехоламинов и их метаболитов в образцах биологических жидкостей, включающий нанесение пробы биологической жидкости на лунку тест-системы по п. 1, полученной способом по п. 7, с последующим внесением пероксида водорода и дериватизирующего агента в количестве обеспечивающем проведение реакции дериватизации с образованием флуоресцирующих производных; возбуждение флюоресценции в пробе с регистрацией полученных сигналов, и при выявлении максимума в характерном диапазоне для определяемого аналита делают вывод о его наличии в образце.
16. Способ по п. 15, характеризующийся тем, что вывод о наличии в образце биологической жидкости норадреналина делают при выявлении максимума в диапазоне от 452 до 458 нм, дофамина - в диапазоне от 455 до 465 нм, адреналина - в диапазоне от 475 до 485 нм, ванилилминдальной кислоты - в диапазоне от 417 до 423 нм, гомованилиновой кислоты - в диапазоне от 422 до 428 нм, L-ДОФА - в диапазоне от 456 до 460 нм, норметанефрина - в диапазоне от 460 до 460 нм, серотонина - в диапазоне от 463 до 473 нм, 5-гидроксииндол-3-уксусной кислоты - в диапазоне от 470 до 480 нм.
17. Способ по п. 15, характеризующийся тем, что в качестве дериватизирующего агента используют ароматические амины.
18. Способ по п. 17, характеризующийся тем, что в качестве ароматического амина используют бензиламин или 1,2-дифенилэтилендиамин.
19. Способ по п. 15, характеризующийся тем, что для определения количественного содержания аналитов в образцах биологических жидкостей измеряют интенсивность полученного сигнала, вывод о количественном содержании делают по предварительно рассчитанным градуировочным зависимостям.
20. Способ по п. 15, характеризующийся тем, что дополнительно проводят обработку полученных сигналов путем вычисления второй производной интенсивности флуоресцентных сигналов и при выявлении минимума в характерном диапазоне для определяемого аналита делают вывод о его наличии в образце: о наличии в образце биологической жидкости норадреналина делают при выявлении минимума в диапазоне от 452 до 458 нм, дофамина - в диапазоне от 455 до 465 нм, адреналина - в диапазоне от 475 до 485 нм, ванилилминдальной кислоты - в диапазоне от 417 до 423 нм, гомованилиновой кислоты - в диапазоне от 422 до 428 нм, L-ДОФА - в диапазоне от 456 до 460 нм, норметанефрина - в диапазоне от 460 до 460 нм, серотонина - в диапазоне от 463 до 473 нм, 5-гидроксииндол-5-уксусной кислоты - в диапазоне от 470 до 480 нм.
21. Способ по п. 15, характеризующийся тем, что пробу биологической жидкости используют объемом 10-30 мкл.
22. Способ по п. 15, характеризующийся тем, что для получения сигнала флуоресценции пробу облучают монохроматичным излучением с длиной волны в диапазоне 300-370 нм.
23. Способ по п. 15, характеризующийся тем, что на 1 объемную часть пробы используют 3 - 5 об. частей дериватизирующего агента и 1 - 5 об. частей пероксида водорода.