Оксиксантеновые красители как реагенты для количественного определения антиаритмических лекарственных средств

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ

А.И. Жебентяев, В.М. Ёршик

ОКСИКСАНТЕНОВЫЕ КРАСИТЕЛИ КАК РЕАГЕНТЫ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИАРИТМИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

Витебский государственный медицинский университет

Исследованы фотометрические и флуоресцентные реакции оксиксантеновых красителей с лекарственными веществами, обладающими антиаритмической активностью. Определены оптимальные условия образования ионных пар в водной и хлороформной фазах, основные химико-аналитические характеристики образующихся ионных ассоциатов. Разработаны методики количественного определения лекарственных веществ, обладающих антиаритмической активностью.

Фотометрические реакции с оксик-сантеновыми красителями применяются в трёх вариантах: экстракционная фотометрия, экстракционная флуориметрия и без-экстракционная фотометрия.

Безэкстракционные фотометрические методики количественного определения основаны на образовании ассоциатов органических оснований с оксиксантено-выми красителями в водной фазе, что сопровождается батохромным смещением спектра поглощения раствора. Так как спектры поглощения красителя и ионного ассоциата перекрываются, для практических целей используют длину волны, при которой разность оптических плотностей комплекса и красителя максимальна. Поскольку с течением времени возможно выпадение ассоциатов в осадок, что неблагоприятно сказывается на результатах количественного определения, для повышения устойчивости в раствор вводят поливиниловый спирт [1, 2, 3]. В работе [4] разработана методика количественного определе-

ния бензилдиметилоктадециламмония с этиловым эфиром 2,4,5,7-

тетрабромфлуоресцеина, для стабилизации растворов прибавляли этанол.

При проведении количественного определения органических оснований без-экстракционным методом в качестве фотометрического реагента чаще всего используют эозин. Так, например, сравнительное исследование взаимодействия ок-сазила [1], аминазина [2], этония [5], цик-лобутония [3] с эозином, эритрозином, флоксином, бенгальским розовым А и бенгальским розовым Б показало, что наибольшей чувствительностью обладают фотометрические реакции с эозином и флок-сином А [5].

В работе [6] проведено сравнительное исследование трифенилметановых красителей пирокатехинового фиолетового, бромфенолового синего, бромкрезоло-вого зелёного, бромтимолового синего, фенолового красного, тимолового синего, алюминона, ксиленолового оранжевого, флуоресцеина, флуорексона, эритрозина, бенгальского красного, эозина для безэкс-тракционного определения хлорида поли-диаллилдиметиламмония. Только для

ксантеновых красителей эозина, флуорес-цеина, флуорексона, эритрозина и бенгальского красного наблюдался батохромный сдвиг (5-30 нм) в присутствии органического основания. Несмотря на то, что максимальной чувствительностью обладает фотометрическая реакция с эозином, в качестве оптимального реагента авторы выбрали эритрозин, поскольку пределы обнаружения фотометрической реакции ниже.

Разработаны так же безэкстракци-онные методики количественного определения кватерона [7] с эозином; декаметок-сина[8, 9], папаверина [10] с флоксином.

Образование флуоресцирующих ас-социатов, экстрагирующихся неполярными растворителями, используется для количественного определения декамина с флоксином [11], хлорохина, амодиахина, примахина [12], прохлорперазина малеата, тиоэтилперазина г/х и трифлуоперазина

[13] с эозином, имипрамина [14] с эритро-зином B.

Разработаны экстракционно-

фотометрические методики количественного определения кодеина, физостигмина, папаверина, хинидина, димедрола, этил-морфина, хинина, атропина, платифилина и сальсолина по реакции с эозином [15], N-цетилпиридиния, триметилбензиламмония, триэтилбензиламмония, N,N-

диметилморфолиния, тетраметиламмония, тетрабутиламмония, бутироилхолиния с эритрозином [16]; оксибупрокаина с бенгальским розовым, эритрозином B и эозином [17; 18].

Добавки полярных органических растворителей улучшают воспроизводимость и чувствительность экстракционнофотометрических и экстракционно-флуориметрических методик определения веществ основного характера с ксантено-выми красителями. В работе [19] исследовано влияние добавок метанола, пропанола-1, ацетона, ацетонитрила, диметилфор-мамида и этанола на экстрагируемость ионных ассоциатов декмина, декаметокси-на, этония, квалидила, берберина бисульфата с эозином и флоксином А. Для практических целей выбран наиболее доступный этанол.

В работе [20] разработана экстракционно-фотометрическая методика количественного определения малых количеств

ЧАС (цетилпиридиния, берберина, бензэ-тония) в лекарственных средствах, основанная на образовании тройных ассоциа-тов с ксантеновыми красителями (эозин, тетрайодфлуоресцеин) и цинхоновыми алкалоидами (хинин, хинидин).

Целью настоящей работы является проведение сравнительного исследования различных вариантов применения оксик-сантеновых красителей (ОКК) эозина (ЭО) и флоксина (ФЛА) для количественного определения лекарственных веществ, обладающих антиаритмической активностью: этацизина (ЭТА), верапамила (ВП), амиодарона (АМ).

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Реагенты. Использовали лекарственные вещества и красители, формулы которых представлены на рис. 1. Исследуемые растворы готовили растворением лекарственных веществ (этацизина, верапамила, амиодарона) фармакопейной чистоты и натриевых солей красителей (эозина, флоксина-А) в дистиллированной воде. Нужное значение pH создавали путём введения необходимого количества хлороводородной кислоты, цитратных, фосфатных буферных растворов [21]. Применяли хлороформ фармакопейной чистоты.

-О

N

Амиодарон I

N

Этацизин

CH

H3C -CH3

I 3 CH * = V

(CH2)2-N-(CH2)3-C“\ f CN ---------------------

Верапамил

NH

О

ll

N

OCH3

OCH3

NaO.

Br

О

Br

Na

COO

Эозин-натрий

Br

Br

NaO

Br

O

Br

Cl

Флоксин А

Рис. 1. Исследуемые лекарственные вещества и красители

H3CO

Аппаратура. Светопоглощение исследуемых растворов ассоциатов измеряли с помощью спектрофотометра СФ-46 и фотометра фотоэлектрического КФК-З в кюветах с толщиной слоя 1 см. Значения pH водной фазы контролировали универсальным иономером И-160, используя в качестве индикаторного стеклянный электрод. Интенсивность флуоресценции измеряли с помощью флуориметра БИАН. Спектры флуоресценции измеряли с помощью спектрофлуориметра Solar СФЛ 1211 А.

ИССЛЕДОВАНИЕ ХЛОРОФОРМНЫХ ЭКСТРАКТОВ АССОЦИАТОВ АНТИАРИТМИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ С ОКК

Оптимальные значения pH водной фазы. Оптимальные значения pH экстракции ионных ассоциатов с эозином и флок-сином А практически совпадают, что объясняется близостью констант кислотности указанных красителей. Для эозина значения рКа1 и рКа2 составляют 2,81 и 3,75 [22], для флоксина А - 2,41 и 3,13 соответственно [23]. Зависимость интенсивности флуоресценции экстрактов ионных ассо-циатов от значения pH представлена на рис. 2. Равновесие экстракции устанавливается через 3 минуты.

0

2

pH

Рис. 2. Влияние значения pH водной фазы на интенсивность флуоресценции экстрактов ассоциатов

Скрасителя С основания 8,°'10 М^

1. Этацизин; 2. Верапамил; 3. Амиодарон сплошной линией обозначен эозин, пунктирной - флоксин А

График зависимости оптической плотности экстрактов ассоциатов от значения pH водной фазы аналогичен.

Исследуемые ионные ассоциаты не экстрагируются углеводородами (гексан, толуол) и тетрахлорметаном, экстрагируются хлороформом, 1,2-дихлорэтаном, ди-хлорметаном. Это объясняется слабыми кислотными свойствами неполностью замещённых галогенпроизводных углеводо-

родов [5], что обеспечивает эффективную сольватацию полярных группировок ионных ассоциатов и стабилизацию их в органической фазе. В качестве оптимального экстрагента выбран доступный хлороформ. Сами ОКК так же экстрагируются хлороформом в виде бесцветных лактонных форм [24].

Спектральные характеристики.

1

З

З

Максимумы спектров поглощения хлороформных экстрактов исследуемых

(^погл) и испускания флуоресценции (исп) ассоциатов представлены в таблице 1.

Таблица 1

Спектральные характеристики экстрактов ионных ассоциатов

Основание Эозин Флоксин А

^иогл п о ^иогл п о

Амиодарон 530-535 554-558 533-537 555-559

Верапамил 530-535 554-558 533-537 555-559

Этацизин 530-535 554-558 533-537 555-559

Влияние добавок полярных органических растворителей на экстрагируемость ионных ассоциатов с ОКК

При смешивании оксиксантеновых красителей с лекарственными веществами, обладающими антиаритмической активностью, происходит образование полимерных форм ассоциатов в водной фазе, выпадающих в осадок. Это приводит к ухудшению перехода ассоциатов в органическую фазу и как следствие снижению воспроизводимости результатов анализа. После разделения фаз оптическая плотность экстрактов ассоциатов падает вследствие их разрушения и сорбции на стенках кювет. Согласно литературным данным [5] введе-

ние добавок полярных органических растворителей приводит к улучшению экстра-гируемости ионных ассоциатов. Таким образом, необходимы добавки таких полярных органических растворителей, которые способны препятствововать образованию осадка в водной фазе и стабилизируют ас-социаты в органической. Среди доступных растворителей этим требованиям удовлетворяют растворители, способные к распределению между водной и хлороформной фазой: этанол, изопропанол, ацетон.

На рис. 3. представлено влияние добавок полярных органических растворителей (ПОР) на оптическую плотность экстрактов ассоциатов верапамила с эозином.

Рис. 3. Влияние объёмной доли этанола (%) на разность (ДА) оптической плотности экстрактов ассоциатов верапамила с эозином и холостого опыта

1. Этанол; 2. Изопропанол; 3. Ацетон СЭО = 2-10"4 М; СВП = 1-10"4 М; pH = 4,5; X = 535 нм

При дальнейшем увеличении содержания полярных органических растворителей не удаётся достичь плато полезного аналитического сигнала. При введении

в водную фазу спиртов и ацетона происходит значительное изменение соотношения объёмов полярной и неполярной фаз, вследствие распределения полярного орга-

нического растворителя между фазами. Время, требующееся для разделения фаз после перемешивания, также увеличивается. Поэтому в качестве оптимального содержания добавки выбирали такое содержание полярного органического растворителя, при котором не происходит образования осадка в водной фазе в течение 20 минут. Этого времени достаточно для проведения анализа методом экстракционной фотометрии и флуориметрии. В случае ионных ассоциатов верапамила с ОКК преимуществ в использовании в качестве добавки ацетона, этанола или изопропанола нет. Нами выбран наиболее доступный и малотоксичный этанол. Оптимальное содержание этанола составляет 30 % (об). В случае образования ионных ассоциатов этацизина в присутствии этанола или ацетона наблюдается низкая воспроизводимость значений оптической плотности и интенсивности флуоресценции. Поэтому оптимальным является использование добавки 20% (об) изопропанола в водную фазу. В случае экстракционной фотометрии ионных ассоциатов амиодарона с ОКК оптимальным является прибавление 35% (об.) этанола в водную фазу.

После отделения органической фазы, содержащей проэкстрагированные ас-социаты, и переноса органической фазы в кювету происходит некоторое изменение оптической плотности вследствие разрушения ассоциатов и сорбции их на стенках кювет. Для примера на рис. 4 представлена зависимость интенсивности флуоресценции ионных ассоциатов верапамила с ОКК. Вначале происходит резкое уменьшение интенсивности флуоресценции, затем интенсивность флуоресценции остаётся практически постоянной в течение часа. Поэтому интенсивность флуоресценции и оптическую плотность ионных ассоциатов верапамила с ОКК следует измерять через 5 минут после разделения фаз, этацизи-на — через 3 минуты. В случае ионных ас-социатов ОКК с амиодароном вначале происходит резкое уменьшение интенсивности флуоресценции ассоциатов вследствие адсорбции последних на стенках кювет. Затем уменьшение интенсивности флуоресценции происходит незначительно. Поэтому измерять флуоресценцию ионных ассоциатов ОКК с амиодароном целесообразно в промежутке времени 5-10 минут после разделения фаз.

Рис. 4. Изменение интенсивности флуоресценции хлороформных экстрактов

верапамила с ОКК во времени 1. Сэо = Свп = 4-10'5М; pH = 4,5 2. Сфла = Свп = 4-10'5М; pH = 4,5

Соотношение компонентов в ионных ассоциатах определяли по методу изомолярных серий, насыщения, Асмуса. Во всех случаях оно составляет 1:1.

Исследованы основные химикоаналитические характеристики ионных ас-социатов. Рассчитаны условные молярные коэффициенты поглощения (є). Методом

повторных экстракций определены степень однократной экстракции (Я, %) и коэффициенты распределения (Б) образующихся ионных ассоциатов, а так же коэффициенты Сендела (ш8), Коха и Кох-Дедица (Ск) (таблица 2). При проведении экстракционно-флуориметрического определения лекарственных веществ чувствительность флуориметра регулирует сам оператор. Поэтому интенсивность флуоресценции экстрактов ассоциатов является величиной относительной и непригодной для характеристики чувствительности флуориметрических реакций. Для сравнения чувствительности флуориметрических реакций используют значения квантового выхода флуоресценции (д, %) и объективного критерия чувствительности (в'О) [26].

Согласно [25] квантовый выход флуоресценции рассчитывают по формуле 1

•л лст

?х • А

дх _ д ст ^

Бст • АХЯ

дх д ст

где ^ и ^ - квантовые выходы

флуоресценции растворов исследуемого вещества и стандартного вещества соответственно;

пх ост

^ и ^ - площади, ограниченные

кривыми спектров флуоресценции растворов исследуемого и стандартного веществ

соответственно, измеренные в одинаковых условиях;

Ах Аст

1. - 1. - ______ ___________

Я и Я - оптические плотности растворов исследуемого и стандартного веществ, измеренные при длине волны возбуждающего света X.

Так как хлороформом наряду с ионными ассоциатами могут экстрагироваться флуоресцирующие формы красителей, расчет проводили по формуле 2.

0х _ 0с

о хол

где ^ - площадь под кривой

спектра флуоресценции контрольного опыта (экстракта, не содержащего органическое основание);

д хол

Я - оптическая плотность контрольного опыта при длине волны возбуждающего света X.

В качестве стандартного вещества использовали этанольный раствор родамина С, квантовый выход флуоресценции которого равен 97% [25]. Родамин С обладает спектральными характеристиками близкими к спектральным характеристикам ионных ассоциатов, образованных оксик-сантеновыми красителями. В таблице 2 представлены полученные значения квантового выхода флуоресценции и объективного критерия чувствительности.

Таблица 2

Химико-аналитические характеристики экстрагирующихся ионных ассоциатов

Ассоциат ^шах'10 0, % є-0 Я, % Б ш8-102,2 мкг/см Ск, мкг/мл

ЭТА-ФЛА 13,8±0,4 60 828000 86,2±2,0 6,2 3,26 0,163

ЭТА-ЭО 15,6±0,8 61 951600 87,4±2,8 6,9 2,88 0,144

ВП-ФЛА 4,9±0,2 59 289100 67,1±3,3 2,0 10,00 0,500

ВП-ЭО 5,5±0,5 63 346500 81,9±4,0 4,5 8,93 0,446

АМ-ФЛА 5,7±0,3 41 233700 91,2±6,2 10,4 11,90 0,595

АМ-ЭО 6,0±0,3 39 234000 89,9±3,1 8,9 11,36 0,568

Исследована зависимость оптической плотности экстрактов ассоциатов от количества органического основания при различных концентрациях ОКК. В качестве оптимальной (Сопт) принимали такую концентрацию реагента, при которой зависимость поглощения экстрактов от кон-

центрации антиаритмического лекарственного вещества остаётся прямолинейной до величины А, равной не менее 0,8. В случае экстракционно-флуори-метрического определения создавали такую концентрацию красителя, при которой получаются воспроизводимые значения интенсивности

флуоресценции, незначительная окраска раствора (при этом отклонения интенсивности флуоресценции от истинного значения вследствие эффекта внутреннего фильтра минимальны), не требуется значительное разбавление аналита (при этом по-

грешности, связанные с разбавлением минимальны).

Оптимальные концентрации реагентов, область прямолинейной зависимости и пределы обнаружения представлены в таблице 3.

Таблица 3

Оптимальная концентрация красителя (Сопт), область прямолинейной зависимости (Сл.с.) и пределы обнаружения (Смин) экстракционно-фотометрического и экстракционно-______флуориметрического определения антиаритмических лекарственных веществ_______

Экстракционная фотометрия Экстракционная флуориметрия

Ассоциат Сопт, моль/л Сл.с.-105 моль/л С -106 ^мин А'-' моль/л Сопт, моль/л Сл.с.-106 моль/л С -106 ^мин А'-' моль/л

ЭТА-ФЛА 7,0-10'5 0,4 - 6,5 2,5 4-10'5 4,0 - 40,0 2,2

ЭТА-ЭО 6,0-10'5 0,4 - 6,0 3,5 4-10'5 4,0 - 40,0 1,5

ВП-ФЛА 1,7-10'4 10 - 150 6,1 4-10'5 4,0 - 40,0 3,2

ВП-ЭО 1,5-10'4 20 - 140 15,3 4-10'5 4,0 - 40,0 2,6

АМ-ФЛА 1,4-10'4 16 - 140 7,8 4-10'5 4,0 - 40,0 2,9

АМ-ЭО 1,2-10'4 18 - 120 9,0 4-10'5 4,0 - 40,0 2,8

ИССЛЕДОВАНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ ИОННЫХ АССОЦИАТОВ В ВОДНОЙ ФАЗЕ

Ионные ассоциаты с ОКК могут так же образовываться в водной фазе. При прибавлении к растворам ОКК веществ

основного характера происходит изменение окраски исследуемых растворов. Для примера на рис. 5 представлены спектры поглощения растворов ионного ассоциата амиодарона с эозином, эозина и разностный спектр.

Рис. 5. Спектры поглощения растворов ионного ассоциата амиодарона с эозином (1), эозина (2), разностный спектр (3) pH = 3,0; Сэо = Сам = 2-10-5 М

Для аналитических целей выбирали такую длину волны, при которой разность

между поглощением ионных ассоциатов и холостого опыта максимальна. Для ионных

ассоциатов с эозином она состаляет 545 Влияние значения pH на образова-

нм, с флоксином А - 550 нм. ние ионных ассоциатов в водной фазе

представлено на рис. 6.

Рис. 6. Влияние значения pH водной фазы на разность (ДА) оптической плотности ионных ассоциатов и холостого опыта 1. Сэо = Сэта = 6-10 5 М; 2. Сфла = Сэта = 6-10 5 М;

3. Сэо = Свп = 6-10 5 М; 4. Сфла = Свп = 6-10 5 М;

5. Сэо = Сам = 2-10'5 М; 6. Сфла = Сам = 2-10'5 М

Для стабилизации окраски ассоциатов в систему вводили 0,1% поливинилового спирта. Окраска развивается через 3 минуты в случае ионных ассоциатов с эта-цизином, через 5 минут с верапамилом и амиодароном и остаётся устойчивой не менее одного часа. Порядок смешивания компонентов раствора оказывает влияние на величину оптической плотности: для

достижения максимального значения оптической плотности между стадиями введения органического основания и красителя должна присутствовать стадия введения буферного раствора и поливинилового спирта.

Основные химико-аналитические

характеристики образующихся ионных ассоциатов представлены в таблице 4.

Таблица 4

Основные характеристики чувствительности фотометрических реакций исследуемых лекар-

Лекарственное средство Краситель ^шах'10 А 1% Л1см ш8-102,2 мкг/см Ск, мкг/мл

Этацизин ФЛА 8,6±0,4 206 4,85 0,243

ЭО 17,3±2,5 414 2,42 0,121

Верапамил ФЛА 15,1±5,4 361 2,77 0,139

ЭО 20,2±3,1 483 2,07 0,104

Амиодарон ФЛА 21,8± 1,1 522 1,91 0,096

ЭО 29,6±2,5 708 1,41 0,071

Методами изомолярной серии, на- тах, образующихся в водном растворе, со-

сыщения, Асмуса установлено, что соот- ставляет 1:1.

ношение компонентов в ионных ассоциа-

Оптимальные концентрации ксан-теновых красителей подбирали таким образом, чтобы градуировочный график был линеен вплоть до значений оптической плотности экстрактов ассоциатов 0,8-1,0.

Оптимальные концентрации красителей, область прямолинейной зависимости, пределы обнаружения представлены в таблице

5.

Оптимальная концентрация красителя (Со

Таблица 5

т), область прямолинейной зависимости (Сл.с.) и

пределы обнаружения (Смин) безэкстракционного фотометрического определения антиарит-

Лекарственное средство Краситель Сопт, моль/ л Сл.с.'105моль/л Смин-106моль/л

Верапамил Эозин 6-10"5 1,1 - 3,6 9,2

Флоксин А 6-10"5 1,5 - 3,6 10,2

Этацизин Эозин О °С, 4, - 7,5

Флоксин А 4-10"5 1,3 - 8,0 5,2

Амиодарон Эозин 4-10"5 ,4 - ,5 0, 2,3

Флоксин А 4-10"5 0,5 - 3,2 2,1

На основании полученных данных разработаны безэкстракционные и экс-тракционныо-фотометрические и экстрак-ционно-флуориметрические методики количественного определения верапамила, этацизина, амиодарона ОКК. Правильность определения лекарственных веществ контролировалась методом добавок. Ниже в качестве примера приведены методики определения амиодарона в таблетках без-экстракционным фотометрическим методом с эозином, этацизина в таблетках методом экстракционной фотометрии с эозином, верапамила методом экстракционной флуориметрии с эозином.

Определение амиодарона в таблетках безэкстракционным фотометрическим методом

0,2 г таблеточной массы помещают в мерную колбу на 100 мл, прибавляют 20 мл этанола и встряхивают 20 мин. Прибавляют 15 мл 0,1 М НС1, и доводят водой до метки. Фильтруют через бумажный

фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата (раствор А). 5 мл раствора А вносят в мерные колбы на 100 мл, прибавляют 1 мл 0,1 М НС1, и доводят водой до метки (раствор Б). В пенициллиновые флаконы вносят 1 мл раствора Б, 1 мл воды, 1 мл 1% ПВС, 1 мл ацетатного буферного раствора (pH = 4,0), 1мл 2-10"4 М эозина. Выдерживают 5 минут и измеряют оптическую плотность полученного раствора при

545 нм. Концентрацию амиодарона рассчитывают по градуировочному графику.

При анализе таблеток амиодарона 0,2 г (серия 611) найдено (п = 7, Р = 0,95): 0,198±0,001 г, Бг = 0,011. Воспроизводимость и среднее значение результата анализа статистически не отличается от полученных фармакопейным методом (УФ-спектрофотометрия): 0,200±0,002 г, Бг = 0,013.

Определение этацизина в таблетках 0,05 г методом экстракционной фотометрии с ОКК

4 таблетки этацизина по 0,05 г растирают в ступке и количественно переносят в мерную колбу на 200 мл, прибавляют 5 мл 0,1М НС1, 50 мл воды и встряхивают 5 минут, затем доводят водой до метки и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата (раствор А). В мерную колбу на 100 мл вносят

4.5 мл раствора А, доводят водой до метки и перемешивают (раствор Б). В пенициллиновые флаконы вносят по 1 мл раствора Б, 1 мл изопропанола, 1 мл цитратного буферного раствора со значением pH = 4,5,

1.5 мл 2^10"4 М эозина, 0,5 мл воды, 5 мл хлороформа и экстрагируют 3 минуты. В кювету помещают хлороформный экстракт и через 3 минуты измеряют оптическую плотность при X= 535 нм относительно воды очищенной.

Концентрацию этацизина в исследуемом растворе определяют по градуировочному графику.

Содержание этацизина в таблетках рассчитывают по формуле:

m =

C•5•100•200

4,5 • 4 • 1000

где т - масса этацизина в таблетке, мг;

С - концентрация этацизина в исследуемом растворе, мкг/мл.

При анализе таблеток этацизина

0,05 г (серия 10105) найдено (п = 7, Р = 0,95): 0,0530±0,0007 г, Бг = 0,014. Воспроизводимость и среднее значение результата анализа статистически не отличается от полученных фармакопейным мето-

дом (УФ-спектрофотометрия):

0,0541±0,0005 г, Бг = 0,010.

Определение верапамила методом экстракционной флуориметрии с флокси-ном А

В пенициллиновые флаконы помещают 1 мл исследуемого раствора, 1,75 мл 96% этанола, 1 мл цитратного буферного раствора со значением pH 4,5, 1 мл 2-10'4 М раствора флоксина А, воды до 5 мл. Экстрагируют 5 мл хлороформа и измеряют интенсивность флуоресценции полученного экстракта. Содержание верапами-ла в растворе рассчитывают по градуировочному графику. Результаты определения верапамила в растворах представлены в таблице 6.

Таблица 6

Результаты количественного определения верапамила в растворах

Введено, моль/л •Ю5 Найдено моль/л 105

1,20 1,15±0,13

2,00 1,95±0,08

2,80 2,91±0,07

3,60 3,65±0,07

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. Определены основные химико-

аналитические характеристики ионных ас-социатов лекарственных веществ, обладающих антиаритмической активностью с ОКК: молярные коэффициенты поглощения, квантовые выходы флуоресценции, значения объективного критерия чувствительности, коэффициенты Сендела, Коха и Кох-Дедица. Наибольшей чувствительностью обладают экстракционно-

флуориметрические методики количественного определения антиаритмических лекарственных веществ с ОКК. Чувствительность безэкстракционных фотометрических методик анализа с ОКК выше, чем экстракционно-фотометрических.

2. При проведении экстракционной флуориметрии и фотометрии необходимы добавки спиртов для предотвращения выпадения осадка в водной фазе. Оптималь-

ным является прибавление 20-35% этанола или изопропанола.

3. Разработаны экстракционно-фотометрические, экстракционнофлуориметри-ческие и безэкстракционные фотометрические методики количественного определения верапамила, этацизина, амиодарона. Воспроизводимость и среднее значение результатов анализа не отличается от воспроизводимости и среднего значения результатов анализа, полученных по методикам, описанным в нормативной документации.

SUMMARY

A.I.Zhebentyaev, V.M.Yorshyk OXYXANTHENE DYES AS REAGENTS FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF ANTIARRHYTHMIC DRUGS Photometric and fluorescent oxyxanthene dyes reactions with antiarrhythmic medicinal substances were examined. The optimal con-

ditions of ion pair formation in water and chloroformic phase were established. The main chemico-analytical properties of received ion associates were studied. The procedures for the of quantitative determination of antiarrhythmic drugs were elaborated.

ЛИТЕРАТУРА

1. Жебентяев А.И. Исследование гало-генпроизводных флуоресцеина для спектрофотометрического определения оксазила// Фармация. - 1984. - N. 5. -С. 47-49.

2. Жебентяев А.И., Мчедлов-Петросян Н.О. Исследование взаимодействия аминазина с оксиксантеновыми красителями// Известия ВУЗов, химия и химическая технология. - 1987. - Т. 30, вып. 6. - С. 30-33.

3. Жебентяев А.И. Спектрофотометрические характеристики ассоциатов цик-лобутония с оксиксантеновыми красителями// Весщ АН БССР, сер. хiм. на-вук - 1985. - N. 3. - С. 11-13.

4. Пинкас М. А., Тутунару М. Н., Ропот

B. М. Взаимодействие хлорида бензил-

диметилоктадециламмония с этиловым эфиром 2,4,5,7-тетрабромф-

луоресцеина// Журнал аналитической химии. - 1977. - Т. XXXII, вып. 9. - С. 1807-1811.

5. Жебентяев А.И., Жерносек А.К. Химико-аналитические свойства флуоресцирующих ассоциатов этония с галоген-производными флуоресцеина// Весщ АН Беларуа, сер. хiм. навук. - 1996. -№ 2. - С. 18-24.

6. Антонова Т.В., Вершинин В.И., Дедков Ю.М. Использование трифенилметано-вых красителей для спектрофотометрического определения полимерных флокулянтов в водных растворах// Журнал аналитической химии. -2005. - Т. 60, № 3. - С. 278-283.

7. Жебентяев А.И. Спектрофотометрическое определение кватерона// Весщ АН БССР, сер. хiм. навук - 1985. - N. 5. -

C. 115-117.

8. Жебентяев А.И. Спектрофотометрическое определение декаметоксина//

Вєсці АН БССР, сер. хім. навук -1982. - N. 4. - С. 25-27.

9. Жебентяєв О.І, Серба Р.М., Сокирко Ві. Фотометричне визначення декаме-токсину в таблетках// Фармацевтичний журнал. - 1991. - N. 1. - С. 46-48.

10. Жебентяев А.И. Спектрофотометрическое определение папаверина гидрохлорида по реакции с флоксином// Химия природных соединений. - 1988. -№ 6. - С. 836-838.

11. Жебентяев А.И., Жерносек А.К., Его-

рова С.И., Мчедлов-Петросян Н.О. Взаимодействие оксиксантеновых красителей с катионами в двухфазной системе. Экстракционно-флуоримет-

рическое определение декамина с флоксином А// Журнал аналитической химии. - 1997. - Т. 52, N. 9. - С. 944951.

12. Ibrahim F.A., Belal F., El-Brashy A. Fluorimetric determination of some ami-noquinoline antimalarials using eosin// Microchem. J. - 1989. - Vol. 39, N. 1. -P. 65-70.

13. Zakhari N.A., Rizk M., Walash M.I., Ibrahim F. Fluorimetric determination of certain phenothiazine derivatives using eosin// Anal. Lett. - 1985. - Vol. 18, N. B11. - P. 1405-1417.

14. Perez-Ruiz T., Carmen Martinez-Lozano., Ciriaco Sidrach. Automatic extraction-spectrofluorimetric method for the determination of imipramine in pharmaceutical preparations// Analyst. - 1995. - Vol. 120, N. 4. - P. 1103-1106.

15. Бензар Т.П. Екстракційно-фотометричне визначення фармацевтичних препаратів у вигляді еозинатів// Фармацевтичний журнал. - 1971. - N. 2. -С. 42-45.

16. Черновьянц М.С., Гольева В.Е., Пыщев А.И. Спектрофотометрическое определение полийодгалогенидов органических азотсодержащих катионов// Журнал аналитической химии. - 2003. - Т. 58, N. 2. - С. 161-165.

17. Abdel-Gawad F.M. Spectrophotometric determination of oxybuprocaine hydrochloride with halofluorescein derivatives// Farmaco. - 1995. - Vol. 50, N. 3. - P. 197-200.

18. Abdel-Gawad F.M. Spectrophotometric determination of trace amounts of oxybu-procaine hydrochloride with halofluo-rescein derivatives// Egypt. J. Anal. Chem. - 1994. - Vol. 3, N. 1. - P. 168172.

19. Жерносек А.К., Жебентяев А.И. Влияние полярных органических растворителей на экстракцию ассоциатов четвертичных аммониевых соединений с галогенпроизводными флуоресцеина// Весщ АН Беларусь Сер. хiм. навук. -1997. - № 1. - С. 11-15.

20. Sakai T., Hirose A. Mixed ternary ion associate formation between xanthene dye, cinchona-alkaloid and quaternary ammonium ion and its application to the determination of trace amounts of quaternary ammonium salts in pharmaceuticals// Ta-lanta. - 2003. - Vol. 59, Issue 1. - P. 167175.

21. Лурье Ю.Ю. Справочник по аналитической химии. - М.: Химия, 1989. - С. 268-269.

22. Мчедлов-Петросян Н.О., Адамович Л.П., Никитина Л.Е. Константы ионизации и таутомерное равновесие эозина в водном растворе// Журнал аналитической химии. - 1980. - Т. 35, № 8. - С. 1495-1502.

23. Матвеец М. А., Щербов Д.П., Ахметова С. Д. Исследование спектрофотометрических и люминесцентных свойств ок-сиксантеновых красителей в водных растворах// Журнал аналитической химии. - 1979. - Т. 34, № 6. - С. 10491054.

24. Мчедлов-Петросян Н.О. Дифференцирование силы органичесих кислот в истинных и организованных растворах -Харьков, 2004. - 326 с.

25. Паркер С. Фотолюминесценция растворов — М.: Мир, 1972. - 510 с.

26. Пилипенко А.Т., Жебентяев А.И., Волкова А.И. Флуоресцентная реакция вольфрама с морином// Журнал аналитической химии. - 1974. - Т. 29, № 9. -

С. 1854-1856.

Поступила 15.09.2006 г.