Способ коррекции микроциркуляторных нарушений 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноатом при экспериментальной NMDA-опосредованной эксайтотоксичности в сетчатке
METHOD FOR CORRECTING MICROCIRCULATORY DISORDERS WITH 2-ETHYL-6-METHYL-3-HYDROXYPYRIDINIUM 5-HYDROXY-3-PYRIDINOCARBONATE IN EXPERIMENTAL NMDA-MEDIATED EXCITOTOXICITY IN THE RETINA

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и офтальмологии, и может быть использовано для коррекции микроциркуляторных нарушений сетчатки.
Из научных источников известно, что в условиях повышенного глазного давления, возрастает концентрация глутама, что приводит к эксайтотоксичности. При этом наблюдается ухудшение состояния сосудистого слоя сетчатки (Ueda K, Nakahara T, Hoshino M, Mori A, Sakamoto K, Ishii K. Retinal blood vessels are damaged in a rat model of NMDA-induced retinal degeneration. Neurosci Lett. 2010 Nov 12;485(1):55-9. doi: 10.1016/j.neulet.2010.08.061. Epub 2010 Aug 27. PMID: 20801189).
Известно новое соединение – магния бис-(2-аминоэтансульфокислоты)-бутандиоат, обладающий антигипоксической, нейропротекторной и гипокоагуляционной активностью (RU 2671982, публ. 08.11.2018).
Основным недостатком патента является выявление нейропротекторных свойств только центральной нервной системы, а также отсутствие экспериментальных данных о влиянии соединения на процессы эксайтотоксичности в сетчатке, в особенности на микроциркуляторное русло.
Наиболее близким к заявленному решению является способ профилактики эксайтотоксического повреждения сетчатки производным диметиалминоэтанола в эксперименте (RU 2765675, публ. 01.02.2022), который заключается в том, что моделирование патологии осуществляют путём однократного интравитреального введения крысам линии Wistar раствора NMDA объемом 2 мкл в дозе 160 нмоль, а бис-(-2- гидроксиэтил-N-диметиламиния 2[(2.6-дихлорфенил)амино]-фенилэтаноата (DMAE 10-19), вводят внутрибрюшинно в дозе 13,8  мг/кг за 40 минут перед введением NMDA. Способ обеспечивает выраженную коррекцию морфологических нарушений в сравнении с моделью патологии.
Основным недостатком способа является то, что данный способ фармакологической коррекции эксайтотоксичности имеет свои ограничения, так как предложен только для оценки морфологической структуры и не отражает влияния соединения на микроциркуляторное русло сетчатки.
Задачей предлагаемого изобретения является создание эффективного способа улучшения микроциркуляции при эксайтотоксическом повреждении сетчатки с использованием нового соединения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноата под лабораторным шифром LCHT 6-20 в эксперименте, подтверждаемого результатами лазерной допплеровской флоуметрии.
Техническим результатом предлагаемого изобретения является эффективный способ коррекции микроциркуляторного русла сетчатки, на фоне эксайтотоксического повреждении сетчатки, с использованием нового соединения – 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноата (LCHT 6-20) в эксперименте, подтверждаемого результатами лазерной допплеровской флоуметрии.
Поставленная задача достигается тем, что предложен способ коррекции гемодинамических нарушений микроциркуляторного русла сетчатки 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноатом в эксперименте, включающий моделирование патологии путём однократного интравитреального введения крысам линии Wistar раствора NMDA объемом 2 мкл в дозе 160 нмоль, а 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноат, вводят внутримышечно в дозе 25,5 мг/кг через 60 минут после введения NMDA, и далее производят введение ежедневно одноразово  в течение 7 дней. Это приводит к улучшению показателей микроциркуляторного состояния сетчатки, подтверждаемых результатами лазерной допплеровской флоуметрии.
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНОГО 5-ГИДРОКСИ-3-ПИРИДИНКАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ
Синтез нового соединения осуществляли путем взаимодействия эквимолярных количеств 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина и 5-гидрокси-3-пиридинкарбоновой кислоты.
Пример 1. Синтез 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноата.
пл.
В трехгорлую колбу, снабженную мешалкой, термометром и обратным холодильником, загружают 50,0 мл этилового спирта, затем при перемешивании постепенно добавляют 2,74 г (0,02 г/моль) 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина, после растворения к полученному раствору постепенно при перемешивании добавляют 2,78 г (0,02 г/моль) 5-гидрокси-3-пиридинкарбоновой кислоты. Полученный раствор при перемешивании нагревают до  60°С, выдерживают 40 минут, полученный раствор фильтруют, растворитель отгоняют в вакууме. Полученный осадок перекристаллизовывают из 2-пропанола. Получают 4,42 г (80 %) белого с кремоватым оттенком кристаллического порошка, Т = 135°С.
14
16
2
3
CHNO м.м. 276,29
Элементный анализ.
Найдено,%: С 60,81; Н 5,90; N 10,11.
Вычислено,%: С 60,86; Н 5,84; N 10,14; О 23,16.
-1
+
ИК-спектр, ν см: 3450 (ОН), 2910, 2891 (NH), 2410 (N), 1578 (С=N).
УФ-спектр, нм: 0,001% раствор в воде дистиллированной имеет максимум поглощения при 249 и 297.
Растворимость. Легко растворим в воде, растворим в этиловом спирте.
рН. 6,5 (1,0 % водный раствор, потенциометрически).
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЗАЯВЛЕННОГО СОЕДИНЕНИЯ
Эксперименты проведены на самцах крыс линии Wistar массой 200-250 г. Для исследования взяты крысы без внешних признаков заболевания, прошедшие карантинный режим. Моделирование патологии осуществляли под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг). Раствор NMDA вводили интравитреально однократно в дозе 160 нмоль в 2 мкл (Lambuk L, Jafri AJA, Iezhitsa I, et al. Dose-dependent effects of NMDA on retinal and optic nerve morphology in rats. Int J Ophthalmol. 2019;12(5):746-753. Published 2019 May 18. doi:10.18240/ijo.2019.05.08). Через 60 минут после моделирования патологии внутримышечно вводили 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноат в дозе 25,5 мг/кг и далее осуществляли его ежедневное однократное введение на протяжении 7 дней.
Каждая группа включала 10 крыс. Первая группа – группа интактных животных, вторая группа – с моделью эксайтотоксического повреждения сетчатки (контроль), третья группа – с коррекцией патологии LCHT 6-20; четвертая группа – с коррекцией патологии эмоксипином (ФГУП «Московский эндокринный завод», Россия (препарат сравнения).
Оценку эффективности коррекции осуществляли по уровню микроциркуляции методом лазерной допплеровской флоуметрии.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ
Через 7 дней после моделирования патологии осуществляли определение уровня микроциркуляции в сетчатке. Измерение уровня ретинальной микроциркуляции у крыс проводили методом лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ). Регистрацию осуществляли с использованием программно-аппаратного комплекса Biopac-systems MP-150 и датчика игольчатого типа TSD-144 (США), программы AcqKnowledge 4.2.
Результаты определения уровня микроциркуляции в сетчатке приведены в Таблице 1.
Через 7 дней после введения NMDA наблюдается снижение уровня микроциркуляции на 39,5%.  В группе с коррекцией LCHT 6-20 в дозе 25,5 мг/кг, показатель возрастал на  48,8% в сравнении с группой контроля и отличался достоверно как от группы интактных животных, так и от группы с препаратом сравнения (р<0,001).
Таким образом, изобретение обеспечивает выраженную коррекцию микроциркуляторных нарушений сетчатки, т.к. применение 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния 5-гидрокси-3-пиридинокарбоноата в дозе 25,5 мг/кг внутримышечно через 60 минут после моделирования эксайтотоксического повреждения сетчатки, и далее ежедневно один раз в день на протяжении 7 дней, достоверно улучшает показатель уровня микроциркуляции в сетчатке на 48,8% в сравнении с животными из группы с моделью патологии (р<0,001).