Метаболическая модуляция противоопухолевого эффекта цитостатиков в эксперименте и клинике

Отечественные исследования в области фундаментальной и клинической онкологии

Метаболическая модуляция противоопухолевого эффекта цитостатиков в эксперименте и клинике

ВЛАДИМИРОВА Л. Ю., АБРАМОВА Н. А., ШИХЛЯРОВА А. И.

Резюме: При экспериментальной внутрибрюшинной химиотерапии циклофосфаном саркомы 45 и перитуморальном введениифакторов, ингибирующих цикл Кребса (дифенгидрамин и АТФ) изучены гистологические, ультрастуктурные и иммуноцитометрические показатели, характеризующие развитие инволютивных процессов опухоли и ее регрессии. Моделирование метаболического микроокружения на фоне проведения системной неоадьювантной химиотерапии у больных раком молочной железы Т 3-41М0-3М0 привело к увеличению непосредственного противоопухолевого эффекта. Оценка ответа опухоли коррелировала с цитохимическими показателями состояния ключевых ферментов цикла Кребса (СДГ, -ГФДГ) в лимфоцитах перитуморальной зоны.

Ключевые слова: саркома 45, рак молочной железы, неоадьювантная химиотерапия, АТФ, дифенгидрамин.

Контактная информация:

Владимирова Любовь Юрьевна, Абрамова Наталья Александровна, Шихлярова Алла Ивановна

VladimirovaLyubovYurievna, AbramovaNataliaAlexandrovna, ShikhliarovaAllaIvanovna

ФГБУ «РНИОИ» Минздрава РФ, г. Ростов-на-Дону, 14 линия 63, 344037, protasovatp@yandex.ru

Стандартная химиотерапия (ХТ) опухолей опирается на применение фармакологических средств с прямым цитостатическим или цитотоксическим действием. Однако ХТ не всегда эффективна в противоопухолевом отношении и далеко не безвредна для организма, что стимулирует поиск новых противоопухолевых средств и метаболических подходов, включая иммуно-, кар-дио-, нефро-, гепатокоррекцию [3]. Иными словами, лекарственное лечение рака вышло за рамки только ХТ опухолей и стимулировало поиск новых направлений патогенетической терапии, учитывающей перекисный и энергетический метаболизм, процессы пролиферации и дифференцировки, т.е. развитие альтернативных подходов к терапии опухоли [2, 9, 10,12]. Из работ последних лет явствует, что механизмы опухолевой прогрессии лежат в плоскости молекулярно-биологических изменений функции генома и протеома, однако существенную роль при этом играет метаболическое опухолевое микроокружение [9]. Гипоксия, как и повышенная кислотность опухолевой ткани, доминирует в формировании злокачественного фенотипа и всех химических процессов в клетке, однако в проблеме взаимосвязи гипоксии и опухолевого роста имеет место определенный парадокс. С одной стороны, гипоксия как неблагоприятный фактор для клеток и тканей может стимулировать апоптоз и элиминировать погибающие клетки. С другой - многочисленные исследования утверждают, что гипоксия способствует прогрессии злокачественных новообразований. Т. G. Graebergи соавт. [19] выявили участие апоптических клеток, соседствующих с гипоксическими очагами в солидных опухолях, происходящих из Р-53-отрицательных клеток у иммунодефицитных мышей. Это указывает на то, что низкий уровень кислорода путем селекции му-тантного гена Р-53 может способствовать формированию в опухоли иного фенотипа, а также является прямой причиной мутации Р-53. По данным А. Х Giaccia и соавт. [16],

гипоксия создает условия для отбора клеток. Согласно предложенной модели эволюции агрессивных опухолей, происходит экспансия популяций трансформированных клеток со сниженным или утраченным апоптическим потенциалом. Именно такие клетки имеют преимущество выживаемости в условиях эндо- и экзогенного стресса под влиянием различных факторов. Способность опухолевых клеток выживать при неблагоприятных условиях детерминирует усиленную опухолевую прогрессию путем промоции ангиогенеза. А это связано с индукцией проан-гиогенных белков, прежде всего VEGF, в которой независимо от гипоксии принимает участие и ацидоз [18].

Метаболический ацидоз является атрибутом многих экстремальных физиологических и патологических состояний с нарушением функций митохондрий, недостаточным снабжением тканей кислородом, и проявляется в виде сдвига рН в кислую сторону, накопления различных недоокисленных продуктов энергетического обмена: лактата, пирувата, ацетоновых тел, кислотцикла Кребса и жирных кислот [6,7].

Уместно отметить, что большинство предложений применять методы снижения рН опухоли базируются на том, что достигнутый рН должен быть ниже того критического уровня, который оптимален для опухолевых клеток, т.е. ниже 6,5-6,0, при котором даже приспособившаяся к «кислым условиям» злокачественная опухоль не сможет, вероятно, существовать [15].

Интересны в этом плане исследования, в которых предлагается применять ингибиторы клеточных насосов, обеспечивающих выход ионов водорода из клетки, для снижения внутриклеточного рН. Так, I. Х Stratfordи соавт. [24] продемонстрировали, что ионофор нигерицин, индуцирующий обмен внутриклеточного К+ на внеклеточный Н+ и тем самым снижающий рН, существенно усиливал противоопухолевое действие мелфалана в опытах шукшишутуо. Интересна работа Е. Miragliaи соавт.

Метаболическая модуляция противоопухолевого эффекта цитостатиков в эксперименте и клинике

[21], в которой показано, что активность и экспрессия №+/Н+-антипорта, участвующего в поддержаниивну-триклеточного рН, увеличивается в доксорубицинрези-стентных опухолевых клетках. Обработка клеток амило-ридом, ингибитором №+/Н+-антипорта, значительно уменьшала рН, и повышала внутриклеточное накопление доксорубицина, снижая уровень резистентности.

Представляется также целесообразным привести данные исследования, в котором снижение внеклеточного рН сопровождалось появлением противоопухолевого эффекта у цитостатика, к которому была индуцирована резистентность у исследуемой опухоли. Эксперимент заключался в том, что крысамс устойчивым к тиофосфа-мидуподштаммом карциномы Геренатиофосфамидвво-дилина фоне внутривенной инфузии 20%-го раствора глюкозы, которая сопровождаласьснижением рН опухоли в среднем на 0,8 [23]. В другом исследовании установлено, что ДНК-связывающая активность цисплатины в системе шиНо заметно возрастала при кислых условиях. Применение ингибитора водородного насоса бафиломи-цина, способствующего снижению рН опухолевых клеток, повышало цитотоксичностьцисплатины [22]. Таким образом, имеются экспериментальные данные о возможности усиления эффекта цитостатиков в условиях кислой среды и предпосылки для использования метаболического ацидоза в целях повышения эффективности химиотерапии.

Известны работы по применению искусственной гипергликемии, основной целью которой является снижение внеклеточного рН, не только в эксперименте, но и в клинике. Снижение рН опухолис помощью внутривенной инфузии раствора глюкозы в среднем на 0,7-0,9 и 0,4-0,6 в опухолях экспериментальных животных и человека соответственно, сочеталось с химиотерапиейи/ или лучевой терапией и вряде протоколов - с общей гипертермией, что привело к улучшению показателей вы-живаемостибольных с опухолями головы и шеи, рака легкого, грудной железы, прямой кишки, меланомы в 1,5-2 раза [1, 4, 8, 14]. Представлены даже попытки и приблизительная схеманецитостатической лекарственной терапии опухолей, основным компонентом которой является глюкозная терапия в сочетании с блокаторами системы удаления водородных ионов из клетки, а для достижения гипоксии - метод управляемой общей гипотонии и механическое сдавливание сосудов опухоли там, где позволяет ее анатомическое расположение [11]. Вместе с тем, системное применение инфузии глюкозы и целого комплекса препаратов с определенным, но не противоопухолевым действием, в особенности в условиях общей гипотонии, отнюдь не безвредно для организма пациента, не поддается контролю и не может быть рекомендовано для широкого клинического применения.

Представляется целесообразным поиск методов локального воздействия на кислотно-основное состояние в зоне опухоли. Известно, что перитуморальная зона является буферной между опухолевой и здоровой тканью. Происходящие в ней процессы не вполне однозначны: с одной стороны, она отделяет здоровую ткань от опухоли, ограничивая - или не ограничивая ее рост, инвазию и метастазирование, но и обеспечивает последней комфортное существование, микроокружение и кровоснабжение. Именно по периферии опухоли локализуется ак-

тивно пролиферирующий пул клеток. Представляется вероятным, что нарушение микроокружения опухоли, т.е. изменение условий в перитуморальной зоне, будет влиять на состояние опухоли и ее реакцию на противоопухолевую терапию.

Цель работы

Повышение эффективности противоопухолевого влияния цитостатиков путем моделирования нарушений энергетического метаболизма микроокружения периту-моральной зоны.

Материал и методы

Экспериментальный фрагмент работы был выполнен на крысах-самцах и самках (разводка питомника «Рапполово») с перевитой под кожу саркомой 45 (штамм опухоли предоставлен Институтом канцерогенеза ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» РАМН. Работа с животными осуществлялась в соответствии с регламентирующими условиями содержания, использования и принципами гуманного отношения [5]. Циклофосфан (ЦФ) вводили внутрибрюшинно дважды с интервалом 5 дней в дозе 5 мкг/кг. Ампульный 1% раствор АТФ или 1% раствор ди-фенгидрамина (димедрол) инфузировали по 0,25 мл пе-ритуморально в 4-х точках, расположенных по периметру опухоли на равном расстоянии.

Применение метода в клинических условиях осуществлялось после получения добровольного согласия пациентов и положительного заключения Этического комитета ФГБУ «РНИОИ» Минздрава РФ. Лечению подвергались первичные больные с цитологическим верифицированным диагнозом локального рака молочной железы (РМЖ) Т 3-4Ш-3М0, которым проводилось 2 курса нео-адювантнойполихимиотерапии по схеме CMFA, включающей на курс ЦФ в дозе 800 мг/м2, метотрексат - 30 мг/м2, фторурацил- 2000мг/м2, доксорубицин - 80 мг/м2, на фоне внутримаммарного введения 2 мл 1% раствора дифенги-драмина (Д) или 1% раствора АТФ в перитуморальнуюзо-ну по 0,5 мл в 4 различные точки, которые перед очередными инфузиями менялись с тем, чтобы за курс ХТ охватить воздействием весь периметр опухоли. ВведениеД или АТФ осуществляли за 30 минут до инфузиицитостатиков.

Для регистрации объективного противоопухолевого эффекта производили замер опухоли, а также осуществляли морфологическое, ультраструктурное, иммуноци-тометрическое, цитохимическое исследования опухоли и клеточного содержимого перитуморальной зоны. Микроскопическое изучение опухоли проводили после фиксации материала в 10% нейтральном формалине, заливки в парафин, микротомии и окраски гистологических препаратов гематоксилином-эозином с оценкой степени лечебного патоморфоза.Съемку проводили на микроскопе LeicaDM 4000 BcкамеройLeicaDFC 490 при помощи программного обеспеченияImageScope.

Материал для электронно-микроскопического исследования последовательно фиксировали в 2,5% растворе глутаральдегида, 1% 0б04 и после всех общепринятых

Отечественные исследования в области фундаментальной и клинической онкологии

этапов обработки заливали в Эпон-812. Ультратонкие срезы контрастировали цитратом свинца и оценивали в электронном микроскопе FEITecnai 12 Spiritпри ускоряющем напряжении 80 kV.

Для анализа ДНК в тканях опухоли использовали проточныйцитометрCicleTESTTMPLUSDNAReagentKit (kat. № 340242, BectonDickinson). Подготовка ткани опухоли для цитометрического анализа осуществлялась с использованием дезагрегирующего устройства BDMedimachine. Оценивали степень анеуплоидии и ди-плоидии опухолевых клеток с определением индекса ДНК (ИДНК). Полученные данные обрабатывали статистическими методами с использованием пакета компьютерных программ Microsoft Excel.

Результаты исследования. В опытах на крысах-самцах (n=60) с перевитой саркомой 45 после проведения лечения, включающего перитуморальное введение АТФ или Д с последующей внутрибрюшинной ХТ циклофос-

фаном, были отмечены следующие гисто- и ультрастук-турные преобразования опухоли. Во-первых, по периферии опухоли в подкапсульной зоне, как кайма, широким фронтом развивалась послойно организованная соедини-тельнотканая структура с обилием клеточных элементов: эритроцитов, лимфоцитов, фибробластов, гистиоцитов. Именно на периферийных участках опухоли, где всегда характерен плотный рост опухоли, наблюдалось значительное разряжение опухолевых клеток, дегенерация, расплавление цитоплазмы. Во-вторых, фиксировались крупные очаговые скопления лимфоидных элементов. В некоторых опухолевых узлах наблюдалось полное замещение соединительной тканью.На электроннограммах со всей очевидностью выступает на первый план опухоле-во-клеточная деградация: сжатие и уменьшение обьема клеток, уплотнение и разрывы шнуровидного эндоплаз-матического ретикулума, набухание и разрушение митохондрий (рис. 1).

в) г)

Рисунок 1. Саркома 45. Регрессия опухоли при химиотерапии в условиях перифокального ацидоза: а) формирование зоны ацидоза по краю опухоли; б) разряжение и инволютивные изменения опухолевых клеток; в) скопление лимфоидных элементов вокруг опухолевых клеток; г) саморазборка опухолевых клеток с элементами отшнуровывания фрагментов, конденсация хроматина.Окр. гемат.- эоз. Ув. *40. Эл микр. Ув. 23*8200

Метаболическая модуляция противоопухолевого эффекта цитостатиков в эксперименте и клинике

Известно, что первые события апоптоза связаны с ядром. Наше внимание привлеклитакие особенности, как: 1) гиперконденсация хроматина с расщеплением ядерного материала;2) формирование осьмиофильных скоплений, прилежащих к ядерной мембране;3) отшну-ровывание фрагментов ядра и других органоидов.Фак-тически это напоминало процесс саморазборки клетки, элементы которой быстро фагоцитируются.

Как уже было отмечено нами, у животных, подвергнутых воздействиям АТФ или Д и последующей химиотерапии ЦФ, наблюдалась значительная инфильтрация ткани опухоли клеточными элементами: лимфоцитами, макрофагами, плазмоцитами, тканевыми базофилами. На препаратах был отчетливо виден линейный или кольцевой тип окружения лимфоидными клетками мелких групп или единичных опухолевых клеток. Это свидетельствовало о важной роли иммунокомпетентных клеток в межклеточных взаимодействиях, в увеличении контак-

тов клеток. Какие же типы иммунных клеток были обнаружены в ткани опухоли?

Методом иммунофенотипирования было установлено, что при использовании в качестве ингибитора энергопроцессов димедрола ткань опухоли была инфильтрована преимущественно СДЗ клетками (Т-лф). В контроле (без воздействий) в ткани опухоли в наибольшем количестве встречались клетки СД45А (В-лф). Известно, что выживаемость активированных В-лф прямо связана с экспрессией белка Вс1-2, который локализуется на наружной мембране митохондрий и причастен к регуляции трансмембранного потенциала, т.е. определяет устойчивость к индукции апоптоза [13]. Наибольший интерес вызвал факт удвоения содержания СД161а (Ж-клетки) при сочетании ингибиторов энергетики с химиотерапией ЦФ.

При ДНК-цитометрическом исследовании опухолевых клеток было установлено, что у животных с использованием перитуморального введения АТФ или Д

в) г)

Рисунок 2. Саркома 45. Рост опухоли в контроле: а) клетки опухоли образуют плотные вихреобразные пучки с преобладанием веретеновидных форм. Окр. гемат.- эоз. Ув. х40; б) ультраструктура клеток растущей С-45. Эл микр. Ув. х8200; в), г) ультраструктура клеток С-45 при химиотерапии циклофосфаном. Эл микр. Ув. *9900

Отечественные исследования в области фундаментальной и клинической онкологии

в сочетании с ЦФ наблюдалось доминирование монокло-нальныхдиплоидных опухолевых клеток. Очевидность трансформирующего плоидность влияния преобразованной АТФ или Д биохимической среды микроокружения опухоли подтверждалась гетерогенностью опухолевых клеток при монотерапии ЦФ: частота содержания диплоидного типа клеток (52,7%) практически уравновешивалась частотой содержания анеуплоидных (43,7%), которая связана с уровнем патологических митозов. Максимальное содержание анеуплоидных клеток (более 60%) наблюдалось у контрольных животных, не подвергавшихся воздействиям. При этом в контроле выявлялось два клона анеуплоидных клеток: анеуплоид 1 (32,61%) и анеуплоид 2 (27,56%), что свидетельствовало о высокой степени злокачественности опухоли.

На микропрепаратах С-45 у таких животных хорошо был выражен полиморфизм клеток С-45 с преобладанием веретеновидных форм. По краю опухоли клетки плотно упакованы в вихреобразные пучки, определяются множественные фигуры патологического митоза.Ультра-структурная картина характеризовалась целостностью клеточных мембран и ядер, ядра содержали крупно и мелкодисперсный хроматин. Цитоплазма богата органоидами, особенно митохондриями. В ней были густо упакованы петли эндоплазматической сети с полирибосомами. Вытянутые митохондрии с четко определяемой двуслойной мембраной, образующей многочисленные кристы, служили показателем обеспечения энергопродукции.

На препаратах опухоли без применения перитумо-рального введения АТФ или Д и ограниченного только ХТ, отмечался некроз с характерным набуханием ядра, распылением хроматина, нарушением целостности мембран, лизосом гранул, деградацией органоидов, образованием детрита. Эти изменения клеток опухоли существенно отличались от структуры клеток в ситуации метаболического опухолевого окружения (АТФ, Д), которое, по-видимому, влияет на кинетику пролиферативных процессов в опухоли (рис. 2).

Сопоставляя морфо- и ультраструктурные изменения С-45 при прогрессии опухоли в контроле и ее ингибировании при дополнительном метаболическом воздействии в условиях ХТ, выявленные различия позволяют предположить следующее. В результате местного введения ингибиторов процессов энергообеспечения, например, АТФ, создается избыток макроэргического субстрата, что по принципу обратной связи тормозит поток электронов дыхательной цепи цитохромов. Наступает разобщение процессов дыхания и окислительного фос-форилирования, падение аэробного ресинтеза АТФ. Как следствие увеличивается скорость освобождения водорода и восстановление пиридиннуклеотидовНАД и НАДФ до 100%. При достижении кислородного нуля и избытке конечного продукта наступает остановка цикла Кребса, развивается метаболический ацидоз.

Данная экспериментальная разработка послужила обоснованием для применения метода в клинических условиях в комплексном лечении рака молочной железы в условиях метаболического ацидоза в перитуморальной зоне.

Лечению подверглись 60 пациенток, больных РМЖТ 3-4Ш-3М0, с узловой или узловой с вторичным отеком формой заболевания. В группу А (п=30) с проведени-

ем неоадьювантнойХТ входило 2 подгруппы: АТФ и Д, в группу В (п=30) - проведение ХТ без дополнительного метаболического воздействия. В результате только в группе А была достигнута полная регрессия опухоли в 16,7% (р=0,014) случаев (при АТФ -14,2%, Д -18,8%), частичная регрессия наступила в 71,5% случаев (при АТФ - 62,5%, при Д - 66,6% соответственно), что не отличалось от показателей группы В. Стабилизация процесса наблюдалась у 14,2% пациенток при АТФ и у 18,8% - при Д, что в среднем составило16,7% против 30% в группе В (р=0,019). Прогрессия опухоли отмечалась только в группе В и составляла 3,4%. Морфологическое исследование удаленных опухолей в случаях регистрации объективного противоопухолевого эффекта у тех пациенток, которые прошли хирургический этап комплексного лечения с перитуморальным введением АТФ и Д, выявило 3-4 степень лечебного патоморфоза.

Чтобы сопоставить ответ опухоли и направленность процессов окислительного фосфорилирования в пери-туморальной зоне под влияние АТФ и Д, была оценена ферментативная активность лимфоцитов с помощью тестирования ключевых ферментов цикла Кребса и гликолиза - СДГ и -ГФДГ, соответственно перед инъекцией и через 30 мин. после инъекции АТФ или Д. Было констатировано подавление активности СДГ посредством АТФ на 62% (р=0,021) и Д - на 57,9% (р=0,024). Реципрокно увеличилась активность -ГФДГ при АТФ и Д на 154,7% (р=0,022).

Обобщая полученные данные, можно убедиться в парадоксальности эффектов гипоксии и метаболического ацидоза, что согласуется с представлениями о причинной связи метаболического микроокружения опухоли с разнонаправленной динамикой ее развития [9]. Предметом дискуссии при этом является вопрос о про- и анти-апоптотической роли гипоксии и ацидоза. В одном случае клетки опухоли, в окружении которой существует дефицит кислорода, блокада аэробных энергодающих процессов, погибают путем включения программы апоптоза. В другом вариантеклетки выживают и опухоль прогрессирует через активацию ангиогенеза и гликолиза. В настоящее время признано, что гликолитический фенотип является почти универсальным феноменом опухолей человека [10]. Авторы постулируют один из возможных механизмов участия гликолитического фенотипа опухоли в инвазии: протоны диффундируют из опухоли в прилегающие нормальные ткани, воздействуя на нетрансформи-рованные клетки, прилегающие к краям опухоли, и способствуют снижению внеклеточного рН. Дальнейший путь характеризуется деградацией интерстициального матрикса, потерей межклеточного сцепления, ингиби-ции иммунных реакций. Подчеркивается роль митохондрий, как сенсоров и активных «участников» апоптоза и синтеза АТФ с участием Р-каталитической субъединицы Н+-АТФ-синтетазы [17].Гипотетически можно предполо-житьобратный алгоритм событий при перитуморальном введении АТФ или Д, когда в результате разобщения дыхания и окислительного фосфорилирования, как следствие, увеличивается скорость высвобождения протонов водорода, которые могут диффундировать из прилегающих тканей в опухоль, воздействуя прежде всего на ее края, что нашло морфологическое отражение при исследова-

Метаболическая модуляция противоопухолевого эффекта цитостатиков в эксперименте и клинике

нии С-45. Вместо плотно организованного клеточного слоя отмечалась значительная разрозненность клеток и окружение их лимфоцитами. Необходимо учесть и роль внеклеточного рН, которое может влиять на эффект химиотерапии. В работах TeicherB.A. [25], MatthewsJ.B. [20] отмечена четкая зависимость от кислорода препаратов циклофосфамид, карбоплатин, доксорубицин как ¡луйто, так шлугто, а в условиях гипоксии отмечено усиление

почти в 2,5 раза цитотоксического эффекта цисплати-ны, возрастание ее накопления и связывание с ДНК. Эта особенность также могла повлиять на эффекты терапии и С-45, и РМЖ. Заключая, необходимо подчеркнуть важность поисков факторов патогенетической терапии и механизмов «давления» на опухоль, среди которых гипоксия и ацидоз открывают новые аспекты старой проблемы.

Литература:

1. Александров Н. Н., Савченко Н. Е., Фрадкин С. З., Жаврид Э. А. Применение гипертермии

и гипергликемии при лечении злокачественных опухолей.- М.: Медицина, 1980.- 256 с.

2. Белоусова А. К. Молекулярно-биологические подходы к терапии опухолей. М., ВИНИТИ, 1993.- 302 с.

3. Гершанович М. Л., Филов В. А., Акимов М. А., Акимов А. А. Введение в фармакотерапию злокачественных опухолей. С-Пб: Сотис, 1999.- 152 с.

4. Жаврид Э. А., Осинский С. П.,

Фрадкин С. З. Гипертермия и гипергликемия в онкологии.- Киев: Наукова думка, 1987.- 256 с.

5. Европейская конвенция о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или

в иных научных целях. Страсбург. 1986. БТБ № 123.

6. Лукьянова Л. Д. Митохондриальные дисфункции при гипоксии - типовой патологический процесс.// Митохондрии в патологии. Материалы всероссийского рабочего совещания.- Пущино, 2001.- С. 66-67.

7. Маевский Е. И., Розенфельд А. С., Гришина Е. В., Кондрашова М. Н. Коррекция метаболического ацидоза путем поддержания функций митохондрий.- Пущино, 2001.- 135 с.

8. Мосин А. Ф., Габай В. Л., Григорьев А. Н. Способ создания гипергликемии при лечении опухолевых заболеваний. Патент РФ Яи № 2090206, 1997.

9. Осинский С., Ваупель П. Микрофизиология опухолей. Киев, Наукова думка. 2009.- 256 с.

10. Осинский С. П., Глузман Д. Ф., Клифф Й., Гизе Н. А., Фрисс Г. Молекулярная диагностика опухолей. Киев: «Д1А». 2007.- 246 с.

11. Раевский П. М. Нецитостатическая терапия злокачественных опухолей (попытка гипотетического рассмотрения). Рос.хим. ж. (Ж. Рос. хим. об-ва им. Д. И. Менделеева), 2002, т. XIV!, № 3.- С 90-95.

12. Ялкут С. И., Потебня Г. П. Биотерапия опухолей. Киев, Книга Плюс. 2010.- 470 с.

13. Ярилин А. А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме // Патол. физиол. и эксперим. терапия. 1998. № 2.- С. 38-47.

14. Лунгу В. I. Селективна внутрiшньоартерiальна полiхiмiотерапiя i штучна регiонарнагiперглiкемiя, як перший етап комплексного лкуванняхворих на рак слизовоТоболонкипорожнини рота: Дис... канд. мед. наук: 14.01.07 / АМН УкраТни; Ыститутонкологп.- К., 2001.- 137 арк.- Бiблiогр.: арк. 109-137.

15. Brent P. Mahoney, NatarajanRaghunand*, Brenda Baggett, Robert J. Gillies.Tumor acidity, ion trapping and chemotherapeutics.Biochemical Pharmacology 66 (2003) 1207-1218 Rotin D. e. a. Cancer Res., 1982, v.1/2, № 5, p. 1505.

16. Ciaccia A. G., Koumenis C., Denko N. The influence of tumor hypoxia on malignant progression // Tumor hypoxia: pathophysiology, clinical significance and therapeutic perspectives / Eds P. Vaupel, D. Kelleher. Stuttgart: Wiss enschaftlicheVerlagsgesellchaft. 1999. P. 115-124.

17. Cuezwa J. M., Kraejewska M., de Heredia M. L. et al. The bioenergetics signature of cancer: a market of tumor progression. Cancer Res. 2002, 62:6674-81.

18. Fukumura D., Xu L., Chen Y. et al. Hypoxia and acidisis independently upregulate vascular endothelial grovth factor trauscription in brain tumors in vivo // Cancer Res., 2001, 61. P. 6020-6024.

19. Graeber T. G., OsmanianC., Jacks T. et al. Hipoxia-mediated selection of cells with diminished potential in solid tumors // Nature, 1996. 379. P. 88-91.

20. Matthews J. B., Adoma T. H., Akov K. A. The effect of hypoxia on cytotoxicity, accumulation and DNA binding of cisplatin in Chinese hamster ovary cells//Anticancer Drugs, 1993,4. P.463-470.

21. Miraglia E. et al. Na+/H+ exchanger activity is increased in doxorubicin-resistant human colon cancer cells and its modulation modifies the sensitivity of the cells to doxorubicin. Int J Cancer. 2005 Jul 20;115 (6):924-9.

22. Murakami T et al. Elevated expression of vacuolar proton pump genes and cellular PH in cisplatin resistance.Int J Cancer. 2001 Sep;93 (6):869-74.

23. Osinsky S. et al..Tumour pH under induced hyperglycemia and efficacy of chemotherapy.1987 Mar-Apr;7 (2):199-201.

24. Stratford I. J. Reduction of tumour intracellular pH and enhancement of melphalan cytotoxicity by the ionophoreNigericin. International Journal of Cancer. 02/1995; 60 (2): 264-8. DOI: 10,1002.

25. Teicher B. A., Holden S. A., Al-Achi A.,

Herman T. S. Classification of antineoplastic treatments by their differential toxicity toward putative oxygenated and hypoxic tumor subpopulations in vivo in the FSa II murine fibrosarcoma // Cancer Res., 1990. 50. P. 3339-3344.