СПОСОБ СОХРАНЕНИЯ БЕЛКА МОЧИ, ВЗЯТОЙ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННОЙ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ МЕТОДОМ ПЦР
METHOD OF PRESERVING PROTEIN OF URINE, SAMPLED FOR DIAGNOSTICS OF INFECTIOUS HAEMORRHAGIC FEVER WITH RENAL SYNDROME BY PCR METHOD

Изобретение относится к медицине, в частности к проблеме вирусных инфекционных геморрагических лихорадок, и касается поиска новых возможностей в их диагностике.
Современным способом специфической лабораторной диагностики всех вирусных инфекционных геморрагических лихорадок, в том числе и геморрагической лихорадки с почечным синдромом, является определение РНК вируса в крови методом ПЦР - исследования / Б.П. Богомолов. Инфекционные болезни. - Изд - во Московского университета. - 2006 г. - 583 с., раздел 13 В. Геморрагические лихорадки, регистрируемые в России/. Этот способ выберем в качестве прототипа. Однако этот метод имеет ряд недостатков, которые ограничивают его значение в диагностике этой болезни.
Эти недостатки заключаются в следующем:
1. Вирус находится в крови в первые 5-7 дней болезни, а затем из крови исчезает, переходя в ткани. Больные же поступают в стационар на 3 - 5 дни заболевания, что значительно сокращает сроки взятия крови для исследования.
2. Для сохранения крови требуются холодильники, жидкий азот, что не всегда доступно, особенно в сельской местности, где в основном и встречаются данные больные.
3. Более доступный способ сохранения крови путем высушивания также может закончится загрязнением крови и гибелью возбудителя.
Задача изобретения состоит в создании способа сохранения белка мочи, взятой у пациентов для диагностики инфекционной геморрагической лихорадки с почечным синдромом методом ПЦР, и диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом, который гораздо проще, доступнее, не связан с использованием крови и может сохранять материал для исследования в течение 30-40 лет.
Сущность изобретения заключается в том, что в способе сохранения белка мочи, взятой для диагностики инфекционной геморрагической лихорадки с почечным синдромом методом ПЦР, характеризующемся тем, что осуществляют взятие мочи у пациента в острый период болезни, выделяют белок, который осаждают методом высаливания сернокислым аммонием с последующим его высушиванием и сохранением при t 20-24°C, диагностику методом ПЦР проводят после удаления соли методом диализа проточной водой в течение 24-48 часов массы, полученной смешиванием 3-5 г сухого белка и 8-12 мл дистиллированной воды.
Способ заключается в следующем:
Для исследования используют мочу больных, в которой обычно в остром периоде (3-9 дни болезни) выделяется много белка, который осаждается методом высаливания сернокислым аммонием, высушивается и затем может храниться долгое время.
Для лабораторного исследования полученной массы методом ПЦР берут 3-5 г сохраняемого белка с солью, помещают в целлофановый мешок, добавляют в него дистиллированной воды 8-12 мл и диализируют проточной водой в течение 24-48 часов.
Полноту диализа проверяют путем реакции диализата с хлористым барием. При наличии сернокислого аммония в диализате диализ продолжают. После вымывания сернокислого аммония из раствора белка полученную массу исследуют на наличие РНК вируса методом ПЦР.
На фиг. 1 представлена высоленная масса белка мочи.
Пример. Больной С., 46 лет, находился на лечении в Амурской областной инфекционной больнице в ноябре 1970 г. по поводу тяжелой формы ГЛПС. 21.11.70 г. при протеинурии 16,5 г/л белка белок был выделен высаливанием, высушен и сохранялся в сухом виде до марта 2011 г. В марте 2011 г. из общего количества белка было взято 5,0 г, помещено в целлофановый мешочек, добавлено 6 мл дистиллированной воды, и полученная масса была диализирована проточной водой в течение 46 час.
После исчезновения сернокислого аммония полученный раствор был взят для исследования и в нем методом ПЦР была обнаружена РНК вируса ГЛПС. Белок на сохранении в сухом высоленном виде находился более 40 лет.
Техническим результатом использования изобретения является простота и доступность способа, возможность проводить специфическую диагностику ГЛПС через многие годы путем использования сохраненного в сухом виде белка мочи.