СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА "МЕЛИССЫ НАСТОЙКА"
METHOD OF PRODUCTION THE TINCTURA MELISSA MEDICINAL PRODUCT

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к способу получения препарата «Мелиссы настойка», обладающего седативной активностью.
Известны способы получения лекарственных средств из травы мелиссы лекарственной (Melissa officinalis L., сем. Яснотковых - Lamiaceae) с использованием в качестве экстрагента воды дистиллированной (настой) и водных спиртов (комбинированные препараты) [1, 2, 4-7]. Однако недостатком известных способов является сложность технологического процесса, особенно в случае получения комбинированных препаратов, неполная экстракция целевых веществ (фенилпропаноиды, эфирное масло и другие соединения) и, как следствие, низкий выход целевых веществ и низкое содержание фенилпропаноидов в готовом продукте (настой мелиссы, настойка мелиссы).
По литературным данным [3-5], в траве мелиссы лекарственной в качестве ведущей группы биологически активных соединений (БАС) содержится эфирное масло, представленное преимущественно терпеноидами (гераниол, гераниаль, нерол, нераль, цитронеллол, цитронеллаль и др.), хотя в фармакологический эффект вносит и вторая группа БАС - фенилпропаноиды, среди которых доминирующим веществом является розмариновая кислота (1). Это обстоятельство учитывалось нами при разработке технологического способа получения настойки из травы мелиссы лекарственной.
За прототип изобретения нами взят способ получения седативного и противовоспалительного средства из травы мелиссы лекарственной, путем экстракции 35-45% этилового спирта при комнатной температуре с последующей термической экстракцией (40°С), в соотношении сырье-экстрагент 1:5 [7]. Недостатками этого метода являются неполная экстракция сырья, ферментативное расщепление и окисление (40°С - это оптимальная температура для проявления активности большинства растительных ферментов) целевых веществ в условиях предложенной термической экстракции и, как следствие, низкий выход целевых веществ, в том числе розмариновой кислоты (1) и других фенилпропаноидов, и невысокое их содержание в готовом продукте (табл.1).
Среди аналогов, нашедших применение в медицине, наиболее известен настой мелиссы - единственная в настоящее время отечественная лекарственная форма, зарегистрированная в РФ [2]. Для приготовления настоя 2-3 г (1 ст. ложка) измельченного сырья помещают в эмалированную посуду, заливают 200 мл кипяченой воды, накрывают крышкой и нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин, охлаждают 45 мин при комнатной температуре, процеживают, оставшееся сырье отжимают. Объем полученного настоя доводят кипяченой водой до 200 мл. Несмотря на простоту технологического процесса, данный способ имеет существенный недостаток - неполнота экстракции целевых веществ и, как следствие, невысокое их содержание в препарате (табл.1). Метод экстракции 70% этиловым спиртом на кипящей водяной бане, используемый в методике количественного определения, не обеспечивает положительного эффекта из-за жесткого температурного режима, который приводит к частичной деструкции целевых веществ, а соотношение сырье-экстрагент 1:40 не позволяет достигать высокой концентрации суммы фенилпропаноидов [1].
В ходе проведенных исследований нами были получены образцы настоек из травы мелиссы лекарственной различными методами (заявляемый способ, метод мацерации, метод модифицированной мацерации) и с использованием различных концентраций этилового спирта (табл.1). На хроматограмме настойки (фиг.1), полученной заявляемым способом, в УФ-свете при длине волны 366 нм обнаруживается доминирующее пятно вещества, принадлежащего розмариновой кислоте. Спектрофотометрическое изучение мелиссы настойки показало, что данный препарат имеет кривую поглощения (фиг.2), характерную для розмариновой кислоты (максимум поглощения при длине волны 326 нм). Содержание суммы фенилпропаноидов в образцах препаратов, полученных заявляемым способом, в пересчете на розмариновую кислоту варьирует от 0,74% до 0,80% (табл.1).
Цель изобретения - повышение выхода целевых веществ из травы мелиссы лекарственной и их содержания в целевом продукте, обладающего седативной активностью.
Сущность заявляемого способа заключается в том, что для экстракции травы мелиссы лекарственной в качестве экстрагента используют 50%…80% этиловый спирт, а экстракцию сырья вначале осуществляют при комнатной температуре, а затем при нагревании в интервале температур 60-90°С при соотношении «сырье-экстрагент» в интервале значений 1:6÷1:10. Данный метод позволяет, с одной стороны, в щадящем режиме получать наиболее обогащенные вытяжки, а с другой, - достигать исчерпывающей экстракции (выход целевых веществ составляет 98,2% по сравнению с 65,1% в прототипе). Проведенный заявителем поиск по научно-техническим и патентным источникам информации и выбранный из перечня аналогов прототип [7] позволили выявить отличительные признаки в заявляемом техническом решении. Следовательно, заявляемый способ получения удовлетворяет критерию изобретения «новизна». Проведенный заявителем дополнительный поиск известных технических решений [1-6] с целью обнаружению в них признаков, сходных с признаками отличительной части формулы заявляемого способа получения, показал, что эти признаки отсутствуют, следовательно, заявляемое техническое решение удовлетворяет критерию «изобретательский уровень».
Критерий изобретения «промышленная применимость» подтверждается тем, что предлагаемый способ получения средства «Мелиссы настойка» позволяет получать в промышленном производстве лекарственный препарат с высоким содержанием целевых веществ, достаточно простой в изготовлении и относительно дешевый из-за отсутствия в технологической схеме дорогостоящего оборудования, но обладающий выраженными седативными свойствами (табл.2 и 3). Кроме того, положительный эффект подтверждается также тем, что средство «Мелиссы настойка», полученное заявляемым способом, за счет более высокого содержания суммы фенилпропаноидов обладает выраженным анксиолитическим действием (табл.4).
Заявляемый способ иллюстрируется следующими примерами (1-10) и нижеприведенной схемой (фиг.3).
Пример 1. Первый день. В три экстрактора емкостью 3 л помещают 300 г измельченной травы мелиссы лекарственной по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1000 мл 50% этилового спирта (соотношение «сырье-экстрагент» 1:10) и оставляют для настаивания в течение 8 часов. Во 2-й экстрактор помещают 200 мл 50% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. Через 8 ч извлечение из 1-го экстрактора (около 700 мл) сливают в сборник 1, переносят его во 2-й экстрактор и оставляют для настаивания в течение 8 ч. В 1-й экстрактор заливают свежий экстрагент (500 мл 50% этилового спирта) и оставляют для настаивания на 8 ч. В 3-й экстрактор помещают 200 мл 50% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. По истечении 8 ч извлечение из 2-го экстрактора (600 мл) сливают в сборник 2, переносят его в 3-й экстрактор и настаивание проводят в течение 8 часов.
Второй день. По истечении 8 ч извлечение из 3-го экстрактора (500 мл или 1/3 готового продукта) сливают в сборник 3 и переносят в емкость, в которую собирают готовый продукт. Извлечение из 2-го экстрактора (500 мл) сливают в сборник 2, переносят в 3-й экстрактор и настаивают в течение 8 ч. По истечении 8 ч извлечение из 3-го экстрактора (около 500 мл извлечения, то есть 1/3 готового продукта) сливают в сборник 3 и переливают в емкость с готовым продуктом. По истечении указанного времени извлечение из 1-го экстрактора (500 мл) сливают в сборник 1, переносят во 2-й экстрактор и оставляют для настаивания в течение 8 ч. В 1-й экстрактор заливают свежий экстрагент (500 мл 50% этилового спирта) и затем осуществляют термическую экстракцию при температуре 90°С в течение 30 мин. Данное извлечение (около 500 мл) сливают в сборник 1 и переносят во 2-й экстрактор. Затем во 2-м экстракторе осуществляют термическую экстракцию при температуре 90°С в течение 30 мин и полученное извлечение (500 мл) сливают в сборник 2.
Третий день. Извлечение из сборника 2 переносят в 3-й экстрактор и осуществляют термическую экстракцию при температуре 90°С в течение 30 мин. Полученное извлечение (500 мл или 1/3 готового продукта) сливают в сборник 3 и переносят в емкость с готовым продуктом. Сливы с готовым продуктом перемешивают и отстаивают в течение двух суток при температуре не выше 8°С. Затем настойку мелиссы фильтруют и получают 1500 мл готового продукта.
Содержание суммы фенилпропаноидов (целевые вещества), определенное с использованием спектрофотометрического метода [3], составляет в настойке мелиссы 0,78% (табл.1). Выход целевого продукта из сырья достигает 95,8% от теоретического содержания (содержание суммы фенилпропаноидов в траве мелиссы лекарственной в пересчете на розмариновую кислоту составляет 4,07%) (табл.1).
Пример 2. Первый день. В три экстрактора емкостью 3 л помещают 300 г измельченной травы мелиссы лекарственной по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 600 мл 50% этилового спирта (соотношение «сырье-экстрагент» 1:6) и оставляют для настаивания в течение 8 часов. Во 2-й экстрактор помещают 200 мл 50% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. Через 8 ч извлечение из 1-го экстрактора (около 400 мл) сливают в сборник 1, переносят его во 2-й экстрактор и оставляют для настаивания в течение 8 ч. В 1-й экстрактор заливают свежий экстрагент (600 мл 50% этилового спирта) и оставляют для настаивания на 8 ч. В 3-й экстрактор помещают 200 мл 50% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. По истечении 8 ч извлечение из 2-го экстрактора (500 мл) сливают в сборник 2, переносят его в 3-й экстрактор и настаивание проводят в течение 8 часов.
Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1. Содержание суммы фенилпропаноидов в полученном препарате «Мелиссы настойка» составляет 0,76% (табл.1). Выход целевого продукта из сырья составляет 93,4% от теоретического содержания (содержание суммы фенилпропаноидов в траве мелиссы лекарственной - 4,07%) (табл.1).
Пример 3. Первый день. В три экстрактора емкостью 3 л помещают 300 г измельченной травы мелиссы лекарственной по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 600 мл 50% этилового спирта (соотношение «сырье-экстрагент» 1:6) и оставляют для настаивания в течение 8 часов. Во 2-й экстрактор помещают 200 мл 50% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. Через 8 ч извлечение из 1-го экстрактора (около 400 мл) сливают в сборник 1, переносят его во 2-й экстрактор и оставляют для настаивания в течение 8 ч. В 1-й экстрактор заливают свежий экстрагент (600 мл 50% этилового спирта) и оставляют для настаивания на 8 ч. В 3-й экстрактор помещают 200 мл 50% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. По истечении 8 ч извлечение из 2-го экстрактора (500 мл) сливают в сборник 2, переносят его в 3-й экстрактор и настаивание проводят в течение 8 часов. Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1, проводя термическую обработку при температуре 60°С. Содержание суммы фенилпропаноидов в полученном препарате «Мелиссы настойка» составляет 0,74% (табл.1). Выход целевого продукта из сырья составляет 90,9% от теоретического содержания (содержание суммы фенилпропаноидов в траве мелиссы лекарственной - 4,07%) (табл.1).
Пример 4. Первый день. В три экстрактора емкостью 3 л помещают 300 г измельченной травы мелиссы лекарственной по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1000 мл 50% этилового спирта (соотношение «сырье-экстрагент» 1:10) и оставляют для настаивания в течение 8 часов. Во 2-й экстрактор помещают 200 мл 50% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. Через 8 ч извлечение из 1-го экстрактора (около 700 мл) сливают в сборник 1, переносят его во 2-й экстрактор и оставляют для настаивания в течение 8 ч. В 1-й экстрактор заливают свежий экстрагент (500 мл 50% этилового спирта) и оставляют для настаивания на 8 ч. В 3-й экстрактор помещают 200 мл 50% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. По истечении 8 ч извлечение из 2-го экстрактора (600 мл) сливают в сборник 2, переносят его в 3-й экстрактор и настаивание проводят в течение 8 часов.
Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1, проводя термическую обработку при температуре 60°С.
Содержание суммы фенилпропаноидов в полученном препарате «Мелиссы настойка» составляет 0,77% (табл.1). Выход целевого продукта из сырья составляет 94,6% от теоретического содержания (содержание суммы фенилпропаноидов в траве мелиссы лекарственной - 4,07%) (табл.1).
Пример 5. Первый день. В три экстрактора емкостью 3 л помещают 300 г измельченной травы мелиссы лекарственной по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1000 мл 60% этилового спирта (соотношение «сырье-экстрагент» 1:10) и оставляют для настаивания в течение 8 часов. Во 2-й экстрактор помещают 200 мл 60% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. Через 8 ч извлечение из 1-го экстрактора (около 700 мл) сливают в сборник 1, переносят его во 2-й экстрактор и оставляют для настаивания в течение 8 ч. В 1-й экстрактор заливают свежий экстрагент (500 мл 60% этилового спирта) и оставляют для настаивания на 8 ч. В 3-й экстрактор помещают 200 мл 60% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. По истечении 8 ч извлечение из 2-го экстрактора (600 мл) сливают в сборник 2, переносят его в 3-й экстрактор и настаивание проводят в течение 8 часов.
Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1.
Содержание суммы фенилпропаноидов в полученном препарате «Мелиссы настойка» составляет 0,79% (табл.1). Выход целевого продукта из сырья составляет 97,0% от теоретического содержания (содержание суммы фенилпропаноидов в траве мелиссы лекарственной - 4,07%) (табл.1).
Пример 6. Первый день. В три экстрактора емкостью 3 л помещают 300 г измельченной травы мелиссы лекарственной по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1000 мл 70% этилового спирта (соотношение «сырье-экстрагент» 1:10) и оставляют для настаивания в течение 8 часов. Во 2-й экстрактор помещают 200 мл 50% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. Через 8 ч извлечение из 1-го экстрактора (около 700 мл) сливают в сборник 1, переносят его во 2-й экстрактор и оставляют для настаивания в течение 8 ч. В 1-й экстрактор заливают свежий экстрагент (500 мл 70% этилового спирта) и оставляют для настаивания на 8 ч. В 3-й экстрактор помещают 200 мл 70% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. По истечении 8 ч извлечение из 2-го экстрактора (600 мл) сливают в сборник 2, переносят его в 3-й экстрактор и настаивание проводят в течение 8 часов.
Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1.
Содержание суммы фенилпропаноидов в полученном препарате «Мелиссы настойка» составляет 0,80% (табл.1). Выход целевого продукта из сырья составляет 98,2% от теоретического содержания (содержание суммы фенилпропаноидов в траве мелиссы лекарственной составляет 4,07%) (табл.1).
Пример 7. Первый день. В три экстрактора емкостью 3 л помещают 300 г измельченной травы мелиссы лекарственной по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1000 мл 80% этилового спирта (соотношение «сырье-экстрагент» 1:10) и оставляют для настаивания в течение 8 часов. Во 2-й экстрактор помещают 200 мл 80% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. Через 8 ч извлечение из 1-го экстрактора (около 700 мл) сливают в сборник 1, переносят его во 2-й экстрактор и оставляют для настаивания в течение 8 ч. В 1-й экстрактор заливают свежий экстрагент (500 мл 80% этилового спирта) и оставляют для настаивания на 8 ч. В 3-й экстрактор помещают 200 мл 80% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. По истечении 8 ч извлечение из 2-го экстрактора (600 мл) сливают в сборник 2, переносят его в 3-й экстрактор и настаивание проводят в течение 8 часов.
Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1.
Содержание суммы фенилпропаноидов в полученном препарате «Мелиссы настойка» составляет 0,78% (табл.1). Выход целевого продукта из сырья составляет 95,8% от теоретического содержания (содержание суммы фенилпропаноидов в траве мелиссы лекарственной - 4,07%) (табл.1).
Пример 8. Первый день. В три экстрактора емкостью 3 л помещают 300 г измельченной травы мелиссы лекарственной по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1000 мл 80% этилового спирта (соотношение «сырье-экстрагент» 1:10) и оставляют для настаивания в течение 8 часов. Во 2-й экстрактор помещают 200 мл 80% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. Через 8 ч извлечение из 1-го экстрактора (около 700 мл) сливают в сборник 1, переносят его во 2-й экстрактор и оставляют для настаивания в течение 8 ч. В 1-й экстрактор заливают свежий экстрагент (500 мл 80% этилового спирта) и оставляют для настаивания на 8 ч. В 3-й экстрактор помещают 200 мл 80% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. По истечении 8 ч извлечение из 2-го экстрактора (600 мл) сливают в сборник 2, переносят его в 3-й экстрактор и настаивание проводят в течение 8 часов.
Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1, проводя термическую обработку при температуре 60°С.
Содержание суммы фенилпропаноидов в полученном препарате «Мелиссы настойка» составляет 0,77% (табл.1). Выход целевого продукта из сырья составляет 94,6% от теоретического содержания (содержание суммы фенилпропаноидов в траве мелиссы лекарственной - 4,07%) (табл.1).
Пример 9. Первый день. В три экстрактора емкостью 3 л помещают 300 г измельченной травы мелиссы лекарственной по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 600 мл 80% этилового спирта (соотношение «сырье-экстрагент» 1:6) и оставляют для настаивания в течение 8 часов. Во 2-й экстрактор помещают 200 мл 80% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. Через 8 ч извлечение из 1-го экстрактора (около 400 мл) сливают в сборник 1, переносят его во 2-й экстрактор и оставляют для настаивания в течение 8 ч. В 1-й экстрактор заливают свежий экстрагент (500 мл 80% этилового спирта) и оставляют для настаивания на 8 ч. В 3-й экстрактор помещают 200 мл 80% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. По истечении 8 ч извлечение из 2-го экстрактора (500 мл) сливают в сборник 2, переносят его в 3-й экстрактор и настаивание проводят в течение 8 часов.
Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1.
Содержание суммы фенилпропаноидов в полученном препарате «Мелиссы настойка» составляет 0,75% (табл.1). Выход целевого продукта из сырья составляет 92,1% от теоретического содержания (содержание суммы фенилпропаноидов в траве мелиссы лекарственной - 4,07%) (табл.1).
Пример 10. Первый день. В три экстрактора емкостью 3 л помещают 300 г измельченной травы мелиссы лекарственной по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 600 мл 80% этилового спирта (соотношение «сырье-экстрагент» 1:6) и оставляют для настаивания в течение 8 часов. Во 2-й экстрактор помещают 200 мл 80% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. Через 8 ч извлечение из 1-го экстрактора (около 400 мл) сливают в сборник 1, переносят его во 2-й экстрактор и оставляют для настаивания в течение 8 ч. В 1-й экстрактор заливают свежий экстрагент (500 мл 80% этилового спирта) и оставляют для настаивания на 8 ч. В 3-й экстрактор помещают 200 мл 80% этилового спирта для замачивания сырья и оставляют на 8 ч. По истечении 8 ч извлечение из 2-го экстрактора (500 мл) сливают в сборник 2, переносят его в 3-й экстрактор и настаивание проводят в течение 8 часов.
Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1, проводя термическую обработку при температуре 60°С.
Содержание суммы фенилпропаноидов в полученном препарате «Мелиссы настойка» составляет 0,74% (табл.1). Выход целевого продукта из сырья составляет 90,9% от теоретического содержания (содержание суммы фенилпропаноидов в траве мелиссы лекарственной - 4,07%) (табл.1).
Использование в качестве экстрагента 90% этилового спирта, а также других запредельных параметров технологического процесса не приводит к положительному эффекту, так как в этих условиях не достигается исчерпывающая экстракция целевых веществ - фенилпропаноидов. Сравнительная характеристика заявляемого способа и способа прототипа (табл.1) свидетельствует о том, что заявляемый способ обеспечивает более высокий выход фенилпропаноидов (в 1,40-1,51 раза) из травы мелиссы лекарственной и более высокое содержание целевых веществ в препарате «Мелиссы настойка» (табл.1).
Таблица 1
Выход целевых веществ и качество целевого продукта в зависимости от способа получения настойки из травы мелиссы лекарственной
№№ п/п
Способ получения
Выход целевых веществ, %
Содержание фенилпропаноидов, %
Продолжительность технологического процесса
1.
Заявляемый способ: Пример 1.50% этиловый спирт
95,8
0,78
3 дня
2.
Заявляемый способ: Пример 2.50% этиловый спирт
93,4
0,76
3 дня
3.
Заявляемый способ: Пример 3.50% этиловый спирт
90,9
0,74
3 дня
4.
Заявляемый способ: Пример 4.50% этиловый спирт
94,6
0,77
3 дня
5.
Заявляемый способ: Пример 5.60% этиловый спирт
97,0
0,79
3 дня
6.
Заявляемый способ: Пример 6.70% этиловый спирт
98,2
0,80
3 дня
7.
Заявляемый способ: Пример 7.80% этиловый спирт
95,8
0,78
3 дня
8.
Заявляемый способ: Пример 8.80% этиловый спирт
94,6
0,77
3 дня
9.
Заявляемый способ: Пример 9.80% этиловый спирт
92,1
0,75
3 дня
10.
Заявляемый способ: Пример 10.80% этиловый спирт
90,9
0,74
3 дня
11.
Мацерация [6]
51,6
0,42
7 дней
12.
Модифицированная мацерация [1]
73,7
0.60
6 дней
13.
Настой (2 г сырья на 200 мл) [2]
49,1
0,02
1 ч
14.
Прототип (40% этиловый спирт) [7]
65,1
0,53
3 дня
Положительный эффект заявляемого способа заключается в том, что выход целевых веществ из сырья повышается до 98,2% по сравнению с 65,1% в прототипе, т.е. увеличивается в 1,5 раза по сравнению с аналогичным показателем в способе прототипа, а содержание целевых веществ (сумма фенилпропаноидов в пересчете на розмариновую кислоту) в готовом продукте составляет 0,74-0,80%, т.е. увеличивается в 1,5 раза по сравнению с аналогичным показателем в препарате (0,53%), полученным способом, описанным в прототипе [7]. Положительный эффект проявляется также и в том, что позволяет минимизировать окислительные и ферментативные процессы, которым подвержена розмариновая кислота в процессе экстракции, особенно при температуре 40°С (прототип), в условиях которой обеспечивается оптимум активности для большинства растительных ферментов.
Кроме того, препарат «Мелиссы настойка», полученный заявляемым способом, обладает выраженными седативными свойствами (табл.2 и 3). Седативные эффекты настойки мелиссы изучали на модели сна у мышей, вызванного гексеналом и барбиталом натрия. Настойку мелиссы вводили белым мышам массой 18-20 г в дозах 20, 50 и 100 мг/кг внутрибрюшинно, а контрольным животным вводили по 0,2 мл дистиллированной воды, за 20 мин до подкожного введения снотворных агентов. Анализаторы (гексенал, барбитал натрия), угнетающие деятельность ЦНС, вводили в дозах, вызывающих тестируемый сон в боковом положении животных. Снотворное действие гексенала (80 мг/кг, в/бр) и барбитал натрия (155 мг/кг, в/бр) оценивали по продолжительности бокового положения.
Таблица 2
Влияние препарата «Мелиссы настойка» на продолжительность сна, вызванного гексеналом (80 мг/кг, в/бр)
Группа, доза препарата, мг/кг
Латентный период
Длительность сна
Минуты
% эффекта
Минуты
% эффекта
Контроль
3,5±0,3
100
25,3±1,8
Настойка, 20
3,1±0,3
-11,4
30,4±2,5*
+20,2
Настойка, 50
2,7±0,2
-22,9
55,1±3,8*
+117,8
Настойка, 100
2,5±0,2
-28,6
56,2±4,2*
+122,1
*р<0,05 по сравнению с контролем
Регистрировали латентные периоды сна и длительность сна по рефлексу переворачивания из бокового положения. Введение настойки мелиссы сокращало латентные периоды сна на 11,4-28,6% в зависимости от дозы, длительность сна увеличивалась на 20,2-122,1% (табл.2). Причем наиболее предпочтительной является доза настойки 50 мг/кг, при введении которой хотя и наблюдается значительное сокращение латентного периода наступления сна по сравнению с контролем, но длительность сна для доз 50 и 100 мг/кг почти не различается, то есть эффект пролонгирования действия гексенала достигает своего максимального значения в дозе 50 мг/кг. Результаты опытов свидетельствуют о том, что препарат «Мелиссы настойка» значительно увеличивает снотворный эффект гексенала, то есть оказывает седативное действие.
Таблица 3
Влияние препарата «Мелиссы настойка» на продолжительность сна, вызванного барбиталом натрия (155 мг/кг, в/бр)
Группа, доза препарата, мг/кг
Латентный период
Длительность сна
Минуты
% эффекта
Минуты
% эффекта
Контроль
6,7±0,5
180,7±10,8
Настойка, 20
5,8±0,5
-13,4
190,3±11,5*
+5,3
Настойка, 50
5,3±0,4
-20,9
220,1±13,7*
+21,8
Настойка, 100
5,1±0,4
-23,9
229,8±15,6*
+27,2
*р<0,05 по сравнению с контролем
Препарат «Мелиссы настойка» удлиняет сон, вызванный барбиталом натрия, на 5,3%, 21,8%, 27,2% в дозах 20 мг/кг, 50 мг/кг, 100 мг/кг соответственно (табл.3). При этом введение настойки мелиссы сокращало латентные периоды сна на 13,4-23,9% в зависимости от дозы (табл.3). Причем в отношении сравнительного влияния доз вводимой настойки на длительность латентного периода и продолжительности сна наблюдается аналогичная тенденция, что и в случае с гексеналом, то есть доза 50 мг/кг является наиболее предпочтительной.
Таким образом, проведенные исследования показывают, что по седативному действию на центральную нервную систему наиболее выраженным действием обладает препарат «Мелиссы настойка» в дозе 50-100 мг/кг, причем наиболее предпочтительна доза 50 мг/кг, что может быть принято за основу при расчете терапевтической дозы.
Кроме того, лекарственное средство «Мелиссы настойка», полученное заявляемым способом, обладает выраженной анксиолитической активностью (табл.4). При исследовании анксиолитической активности в качестве эталонного препарата использован анксиолитик (транквилизатор) диазепам [2]. Изучение анксиолитической активности препаратов проводили на белых беспородных крысах обоего пола с исходной массой тела 170-210 г с использованием методики «конфликтная ситуация» (вариант Vogel) и методики приподнятого крестообразного лабиринта. В основе методики «конфликтная ситуация» лежит прием столкновения двух рефлексов - питьевого условного и безусловного рефлекса избегания электроболевого раздражения. Для этого животных предварительно оставляли на 3 суток без воды, затем в течение 4-х суток на 20 мин ежедневно помещали в пластиковую камеру размерами 30×40×20 см, в одной из торцевых стенок которой была устроена ниша с поилкой, где крыса могла напиться. Фитопрепараты и вещества вводили, начиная с первого дня обучения, в желудок за 30 мин до помещения в камеру, контрольные животные получали воду. В день регистрации крыс помещали в камеру на 10 мин и между металлическим полом камеры и электродом, опущенным в поилку, создавали разность потенциалов в 1 мА. Таким образом, через 10 сек после взятия воды животное получало удар током. Об анксиолитической активности судили по разнице числа взятий воды, несмотря на удар током (наказуемое взятие воды), в контрольной и опытной группах. Принцип методики состоит в том, что наказующий фактор (болевое раздражение) подавляет привычное для животного поведение, в результате чего создается ситуация невозможности осуществления необходимой мотивации, рассогласование желаемого и действительности, что подкрепляется страхом получения болевого раздражения. При этом транквилизаторы, устраняя чувство страха и тревоги, увеличивают число наказуемых взятий воды.
Методика приподнятого крестообразного лабиринта (ПКЛ) основана на навыке предпочтения грызунами темных нор, естественного страха нахождения в открытых площадках и падения с высоты. Установка представляет собой крестообразно расходящихся от центральной площадки рукава: 2 противоположных, открытых, без стенок и два закрытых, темных. Центральная площадка и пол открытых рукавов прозрачны, тогда как пол и стенки закрытых рукавов покрашены в темный цвет. Размеры ПКЛ: рукава 10×10×50 см, центральная площадка 10×10×10 см; приподнят ПКЛ на 80 см. Непосредственно пред экспериментом животных выдерживали 5 мин в темных клетках. Затем животное помещали в ПКЛ на центральную площадку, головой к открытому рукаву, и в течение 5 мин регистрировали время пребывания животных в открытых рукавах, а также на центральной площадке, латентный период первого захода в открытый рукав. Анксиолитический эффект препарата оценивался по увеличению времени нахождения в светлых рукавах.
В условиях методики «конфликтная ситуация» лекарственное средство «Мелиссы настойка» проявляет отчетливое анксиолитическое действие (табл.4).
Несмотря на получение болевых раздражении, крысы пытались взять воду, увеличивая этот показатель поведения по сравнению с данными в контроле на 240,1% что сопоставимо с эффектом диазепама (653%).
Таблица 4
Влияние лекарственного средства «Мелиссы настойка» на число наказуемых взятий воды из поилки (М±m)
Препарат, доза, мг/кг
Количество животных
Количество наказуемых взятий воды из поилки
контроль, n=10
опыт
Диазепам, 2
10
12,8±1,8
97,1±15,0**
Мелиссы настойка, 200
10
10,±2,3
25,7±3,8*
*Примечание: Р<0,05 по сравнению с контролем;
**Примечание: Р<0,01 по сравнению с контролем.
В случае методики ПКЛ в контроле интактные животные предпочитали большую часть времени проводить в закрытых, темных рукавах, чем в светлых. Введение лекарственного средства «Мелиссы настойка» сдвигало это соотношение в сторону увеличения пребывания животных в открытых рукавах: соответственно в темных 200,6±10,1 сек в контроле и 181,9±7,5 сек (на 9,3% по сравнению с контролем. Сопоставимый показатель выявлен в случае диазепама: пребывания животных в открытых рукавах уменьшилось с 199,7±21,0 в контроле до 156,9±13,3 в опыте (16,4%). Лекарственное средство «Мелиссы настойка» увеличивало число выходов в открытые рукава с 1,7±0,5 до 2,4±0,3 (в 1,4 раза). При этом диазепам увеличивал число выходов в открытые рукава в 2,7 раза: с 1,5±0,4 в контроле до 4,1±0,4 в опыте.
Таким образом, в исследованиях анксиолитической активности в тестах как наказуемого, так и ненаказуемого поведения обнаружены транквилизирующие свойства лекарственного средства «Мелиссы настойка».
Следовательно, оптимальными параметрами способа получения являются: экстракция травы мелиссы лекарственной 50…80% этиловым спиртом (при комнатной температуре) и последующая термическая обработка при температуре 60-90°С соответствующим экстрагентом в соотношении «сырье-экстрагент» в интервале 1:6-1:10. Данные параметры позволяют получать целевой продукт из травы мелиссы лекарственной (примеры 1-10) с высоким выходом целевых веществ и с высоким содержанием действующих веществ в препарате (табл.1), обладающем выраженной седативной и анксиолитической активностью (табл.2-4).
Таким образом, заявляемый способ имеет следующие преимущества по сравнению со способом прототипа:
1. Содержание целевых веществ в готовом продукте, полученным заявляемым способом, составляет 0,74-80% по сравнению с 0,53% в прототипе (увеличение в 1,5 раза).
2. Выход целевых веществ в целевом продукте, полученным заявляемым способом, составляет 98,2%, тогда как в случае прототипа - 65,1%.
3. Целевой продукт, полученный заявляемым способом, наряду с выраженным седативным действием обладает анксиолитической активностью.
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ
1. Болтабекова З.В. Фармакогностическое исследование по созданию новых лекарственных средств на основе травы мелиссы лекарственной. - Автореферат на соискание ученой степени канд. фармац. наук. - М., 2003. - 25 с.
2. Государственный реестр лекарственных средств. - Т.1. Официальное издание, М.: ООО «Информационно-издательское агентство «Ремедиум», 2008. - 1398 с.
3. Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Авдеева Е.В., Болтабекова З.В., Вандышев В.В. Качественный и количественный анализ сырья и настойки мелиссы лекарственной Melissa officinalis L. // Растительные ресурсы. - 1999. - Т.35, №3. - С.116-121.
4. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов.). - 2-е изд., перераб. и доп. - Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2007. - 1239 с.
5. Куркин В.А. Основы фитотерапии: Учебное пособие для студентов фармацевтических вузов. - Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2009. - 963 с.
6. Муравьев И.А. Технология лекарств. - Изд. 3-е, перераб. и доп. - Том I. - М.: Медицина, 1980. - С.180-183.
7. Патент РФ 2275931 С1 (Макаров И.Ю.). 10.05.2006 г.