КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ МОДУЛИРОВАНИЯ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПУТЕЙ
COMPOSITIONS AND METHODS FOR METABOLIC PATHWAY MODULATION

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА
[0001] Данная заявка испрашивает приоритет следующих заявок: заявки США № 61/508139, поданной 15 июля 2011 года; заявки США № 61/636597, поданной 20 апреля 2012 года; заявки США № 61/636598, поданной 20 Апреля 2012 года; заявки США № 61/636603, поданной 20 апреля 2012 года; заявки США № 61/636605, поданной 20 апреля 2012 года; заявки США № 61/636608, поданной 20 апреля 2012 года; заявки США № 61/636610, поданной 20 апреля 2012 года; причем все данные заявки включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0002] У всех организмов развиты совершенные метаболические пути, которые поддерживают энергетический гомеостаз за счет уравновешивания своего потребления и метаболизма энергии со своими потребностями расходования организма. У млекопитающих данные пути регулируют потребление пищи, гомеостаз глюкозы, сохранение энергии в жире и/или мышцах и мобилизацию энергии, например, посредством физической активности. Неудовлетворительное функционирование данных путей, часто обусловленное избыточным потреблением энергии относительно расходования энергии, приводит к разбалансированию энергетического гомеостаза и может вести к широкому диапазону метаболических нарушений, таких как ожирение, диабет, гипертензия, артериосклероз, высокий холестерин и гиперлипидемия.
2
[0003] Высокая частота возникновения метаболических нарушений у людей и связанное с ними влияние на здоровье и смертность представляет существенную угрозу для здоровья населения. Например, ожирение, клинически определяемое как индекс массы тела свыше 30 кг/м, по оценкам, затрагивает 35,7% взрослого населения США. Ожирение повышает вероятность многих заболевания, например, сердечных заболеваний и диабета II типа, который является одной из ведущих предотвратимых причин смертности по всему миру. В США ожирение по оценкам вызывает приблизительно 110000-365000 смертей в год. Диабет представляет собой метаболическое нарушение, характеризующееся высокими уровнями глюкозы в крови или низкой переносимостью глюкозы и, по оценкам, затрагивает 8% населения США. Диабет также в значительной степени ассоциируется с повышенным риском смерти от сосудистого заболевания, рака, болезни почек, инфекционных заболеваний, экзогенных факторов, умышленного членовредительства, заболеваний нервной системы и хронического заболевания легких (N Engl J Med 2011; 364:829-841). Метаболический синдром, при котором у больных имеется центральное ожирение и по меньшей мере два других метаболических нарушения (например, высокий холестерин, высокое артериальное давление или диабет), по оценкам, затрагивает 25% населения США.
[0004] Сиртуины представляют собой высоко консервативные дезацетилазы и/или ADP-рибосилтрансферазы белков, которые, как было показано, повышают продолжительность жизни у низших модельных организмов, например, дрожжей, C. elegans и дрозофил. У млекопитающих сиртуины, как было показано, выступают в качестве метаболических датчиков, реагирующих на сигналы окружающей среды для координации активности генов, которые регулируют многочисленные пути энергетического гомеостаза. Например, исследования показали, что активация сиртуина имитирует результаты ограничения калорий, вмешательства, продемонстрировавшего существенное повышение продолжительности жизни, и активирует гены, которые улучшают гомеостаз глюкозы и преобразование жира в энергию за счет окисления жирных кислот.
[0005] Было затрачено множество усилий для разработки способов лечения метаболических нарушений посредством воздействия на конкретные пути энергетического метаболизма. Результатом данных усилий стала разработка, например, изофлавонов (Патентная Заявка США № 20110165125), тетрагидролипстатина (Патент США № 6004996) и композиций, которые модулируют пути SIRT1 и AMPK (Патентные Заявки США № 20100210692, 20100009992, 20070244202 и 20080176822). Однако, данные усилия имели ограниченный успех. Например, использование активатора SIRT1 ресвератрола у людей затрудняется его ограниченной биодоступностью, требуя высоких дозировок, которые ставят проблемы с безопасностью. Соответственно, сохраняется большая потребность в способах лечения, которые могут устранять широкий диапазон метаболических нарушений посредством безопасной регуляции метаболических путей.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0006] Представленная заявка предоставляет композиции, пригодные для стимулирования увеличения окисления жирных кислот и митохондриального биогенеза у больного. Композиции также вызывают активацию SIRT1 и SIRT3, опосредуя тем самым последующие положительные действия, включая предупреждение и лечение диабета, сердечно-сосудистого заболевания и воспалительного заболевания. Подобные композиции содержат в своем составе синергетические количества активатора сиртуинового пути (например, ресвератрола) в комбинации с аминокислотой с разветвленной цепью и/или ее метаболитами (например, бетагидроксиметилбутиратом (HMB), лейцин, кетоизокапроновую кислоту (KIC) или комбинации HMB, KIC и/или лейцина). Представленная заявка также предоставляет способы повышения окисления жирных кислот у больного, включающие введение раскрытых композиций.
[0007] Изобретение предусматривает композицию, содержащую: (a) один или более типов разветвленных аминокислот (например, лейцин) и/или их метаболитов и (b) активатор сиртуинового пути, который необязательно может присутствовать в субтерапевтическом количестве, при этом композиция является синергетически эффективной для увеличения пропускной способности сиртуинового пути по меньшей мере приблизительно 1-кратно (например, по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5 или более кратно) по сравнению с пропускной способностью компонента (a) или (b) при его использовании отдельно. В некоторых вариантах осуществления, синергетическое действие наблюдается, когда (i) среду из мышечных трубочек или адипоцитов, обработанных композицией, вводят в другие мышечные трубочки или адипоциты, (ii) композицию вводят в мышечные трубочки или адипоциты, и/или (iii) композицию вводят больному.
[0008] В некоторых вариантах осуществления любого аспекта, описанного в данном документе, увеличение пропускной способности сиртуинового пути подтверждается увеличением физиологического действия, выбранного из группы, состоящей из митохондриального биогенеза, окисления жирных кислот, поглощения глюкозы, поглощения пальмитата, поглощения кислорода, продуцирования углекислого газа, потери массы, выработки тепла, потери висцеральной жировой ткани, дыхательного коэффициента, чувствительности к инсулину, уровня маркера воспаления, температуры тела, побурения жировых клеток, продуцирования иризина и расширения кровеносных сосудов. Увеличение пропускной способности сиртуинового пути может подтверждаться повышением уровня экспрессии или активности одного или более из группы, состоящей из SIRT1, SIRT3 и PGC1-α. Увеличение пропускной способности сиртуинового пути может быть по меньшей мере приблизительно 1, 3, 5, 6, 8, 10, 15, 20 или 50-кратным.
[0009] Еще один аспект изобретения предусматривает композицию, содержащую: (a) один или более типов разветвленных аминокислот (например, лейцин) и/или их метаболитов, и (b) активатор сиртуинового пути, при этом молярное отношение компонента (a) к (b) в указанной композиции больше, чем приблизительно 20, и при этом композиция при введении нуждающемуся в этом больному синергетически усиливает митохондриальный биогенез, который измеряется снижением прибавления массы больного, уменьшением объема висцерального жира у больного, повышением окисления жира у больного, увеличением продуцирования иризина у больного, повышением чувствительности больного к инсулину, увеличением поглощения глюкозы мышцами у больного, уменьшением маркеров воспаления, увеличением расширения кровеносных сосудов и/или повышением температуры тела. В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение компонента (a) к (b) в указанной композиции больше, чем приблизительно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 60, 80, 100, 150, 200, 250 или более.
[0010] Еще один аспект изобретения предусматривает композицию, содержащую: однократную дозу, подходящую для перорального приема внутрь, при этом указанная разовая доза содержит: (a) один или более типов разветвленных аминокислот (например, лейцин) и/или их метаболитов, и (b) по существу гомогенную популяцию молекул полифенола или прекурсора полифенола, и в котором разовая доза является эффективной для стимулирования повышения пропускной способности сиртуинового пути, которое измеряется снижением прибавления массы больного, уменьшением объема висцерального жира у больного, повышением окисления жира у больного, повышением чувствительности больного к инсулину, увеличением поглощения глюкозы мышцами у больного, увеличением расширения кровеносных сосудов и/или повышением температуры тела. В некоторых вариантах осуществления, однократную дозу составляют в виде таблетки, капсулы или желатиновой капсулы.
[0011] Молекулы полифенола или прекурсора полифенола могут присутствовать в количестве, эффективном для увеличения пропускной способности сиртуинового пути (например, приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 1-кратно, 3-кратно, 5-кратно, 6-кратно, 8-кратно, 10-кратно, 15-кратно, 20-кратно, 50-кратно, или более). Молекулы полифенола или прекурсора полифенола могут присутствовать в количестве, эффективном для пропускной способности сиртуинового пути по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5 или более кратно. Молекулы полифенола могут активировать SIRT1 и/или SIRT3. Полифенол может активировать AMPK. Полифенол может активировать PGC1-α. Полифенолом может быть ресвератрол или его аналог. Полифенолом может быть хлорогеновая кислота. Полифенол может быть выбран из группы, состоящей из хлорогеновой кислоты, ресвератрола, кофеиновой кислоты, хинной кислоты, пицеатаннола, эллаговой кислоты, галлата эпигаллокатехина, экстракта виноградных косточек, коричной кислоты, феруловой кислоты и любого их аналога.
[0012] Еще один аспект изобретения предусматривает пищевую композицию, содержащую: (a) один или более типов разветвленных аминокислот (например, лейцин) и/или их метаболитов; (b) активатор сиртуинового пути, в котором (a) и (b) присутствуют в количестве, которое синергетически влияет на увеличение пропускной способности сиртуинового пути, которое измеряется снижением прибавления массы больного, уменьшением объема висцерального жира у больного, повышением окисления жира у больного, повышением чувствительности больного к инсулину, увеличением поглощения глюкозы мышцами у больного, увеличением расширения кровеносных сосудов и/или повышением температуры тела; и (c) пищевой носитель.
[0013] Композицией может быть пищевая добавка, предложенная в виде жидкости (например, напитка), твердой фазы (например, твердой пищи) или полутвердой фазы (например, полутвердой пищи). В некоторых вариантах осуществления, пищевым носителем является сок, кофе, чай, сода или снековая плитка. Композиция может быть составлена в виде пероральной лекарственной формы. Композиция может быть предложена в виде однократной дозы. Разовая доза может быть составлена в виде таблетки, капсулы или желатиновой капсулы.
[0014] Еще один аспект изобретения предусматривает композицию, содержащую: синергетически эффективное количество (a) одного или более типов разветвленных аминокислот (например, лейцин) и/или их метаболитов; и (b) активатора сиртуиновых путей, при этом композиция по существу не содержит неразветвленных аминокислот, при этом комбинация при введении нуждающемуся в этом больному усиливает митохондриальный биогенез в большей степени по сравнению с введением больному только компонента (a) или компонента (b), и при этом усиленный митохондриальный биогенез измеряется снижением массы больного, уменьшением объема висцерального жира у больного, увеличением окисления жира у больного, повышением чувствительности больного к инсулину, увеличением поглощения глюкозы мышцами у больного, увеличением расширения кровеносных сосудов и/или повышением температуры тела. Увеличение митохондриального биогенеза может быть по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 15, 20 или 50 кратным (причем 1-кратное увеличение эквивалентно 100% увеличению). В некоторых вариантах осуществления, изменение митохондриального биогенеза и/или одного или более его показателей составляет приблизительно или более чем приблизительно 10%, 20%, 50%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, 750%, 1000%, 2000%, 5000% или более.
[0015] Еще один аспект изобретения предусматривает композицию, содержащую: (a) один или более типов разветвленных аминокислот (например, лейцин) и/или их метаболитов, и (b) сигнальную молекулу после PGC1-α на сиртуиновом сигнальном пути. Сигнальной молекулой после PGC1-α может быть иризин или его аналог. В некоторых вариантах осуществления, один или более типов разветвленных аминокислот и/или их метаболитов могут быть выбраны из группы, состоящей из лейцина, валина, изолейцина, 4-гидроксиизолейцина, кетоизокапроновой кислоты (KIC), альфагидроксиизокапроновой кислоты и HMB. Композиция по существу не содержит неразветвленных аминокислот.
[0016] В одном аспекте, изобретение предоставляет композицию, содержащую: (a) один или более типов разветвленных аминокислот (например, лейцин) и/или их метаболитов, и (b) субтерапевтическое количество одного или более противодиабетических средств, выбранных из группы, состоящей из бигуанида, меглитинида, сульфонилмочевины, тиазолидинедиона, ингибитора альфа-глюкозидазы и алкалоида спорыньи; при этом комбинация при введении больному синергетически повышает у указанного больного чувствительность к инсулину по сравнению с введением больному только компонента (a) или компонента (b). В некоторых вариантах осуществления, противодиабетическим средством является активатор сиртуинового пути. В некоторых вариантах осуществления, противодиабетическим средством является бигуанид (например, метформин или любой его аналог). В некоторых вариантах осуществления, повышение чувствительности к инсулину составляет по меньшей мере приблизительно 1-кратное увеличение (например, по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 15, 20 или 50 кратное). В некоторых вариантах осуществления, изобретение предоставляет способ повышения терапевтической эффективности бигуанида, включающий введение больному одновременно или последовательно компонента (a) и компонента (b) композиции изобретения, при этом введение (a) и (b) происходит в количестве, которое синергетически повышает чувствительность к инсулину, и при этом компонентом (b) является бигуанид (например, метформин).
[0017] Изобретение также предусматривает способ повышения терапевтической эффективности одного или более противодиабетических средств, выбранных из группы, состоящей из бигуанида, меглитинида, сульфонилмочевины, тиазолидинедиона, ингибитора альфа-глюкозидазы и алкалоида спорыньи, включающий введение больному одновременно или последовательно (a) субтерапевтического количества указанного противодиабетического средства и (b) одной или более разветвленных аминокислот, при этом введение (a) и (b) является эффективным для устранения диабетического симптома указанного больного. Примеры диабетических симптомов включают, но без ограничения, полиурию, полидипсию, потерю массы, полифагию, нечеткое зрение, гипертензию, нарушения липопротеинового обмена и пародонтоз. Бигуанидом может быть метформин. Одно или более противодиабетических средств могут содержать глипизид и/или метформин. Одно или более противодиабетических средств может представлять собой тиазолидинедион.
[0018] В одном аспекте, изобретение предоставляет способ повышения уровня иризина, например, увеличение продуцирования иризина клеткой или у больного. В некоторых вариантах осуществления, способ включает введение композиции, содержащей: (a) один или более типов разветвленных аминокислот (например, лейцин) и/или их метаболитов и (b) активатор сиртуинового пути; при этом введение повышает продуцирование иризина клеткой. В некоторых вариантах осуществления, увеличение продуцирования иризина (или индикатора, обеспечивающего подтверждение этого) составляет увеличение, равное, приблизительно, менее чем, приблизительно, или более чем, приблизительно, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200% или более. В некоторых вариантах осуществления, увеличение продуцирования иризина (или индикатора, обеспечивающего подтверждение этого) составляет увеличение, приблизительно, менее чем, приблизительно, или более чем, приблизительно, в 1 раз, 3 раза, 5 раз, 6 раз, 8 раз, 10 раз, 15 раз, 20 раз, 50 раз или более. В некоторых вариантах осуществления, увеличение продуцирования иризина подтверждается увеличением экспрессии FNDC5 (например, при измерении исходя из мРНК и/или уровня белка). В некоторых вариантах осуществления, увеличение продуцирования иризина подтверждается увеличением одного или более признаков побурения жировых клеток (например, окислением жирных кислот, и/или увеличением экспрессирования одного или более селективных генов бурого жира в жировой ткани). В некоторых вариантах осуществления, увеличение продуцирования иризина подтверждается повышенной секрецией иризина из клетки или у больного (например, которую измеряют в среде, в которой клетка культивируется, или в циркулирующей плазме у больного). В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит лейцин и ресвератрол. В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит лейцин и коричную кислоту. В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит HMB и ресвератрол. В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит HMB и коричную кислоту.
[0019] В некоторых вариантах осуществления любого из аспектов, описанных в данном документе, композиция подходит для перорального употребления. Композицией может быть жидкая форма, не подходящая для перорального введения больному. Композицией может быть жидкая форма, подходящая для инъекционного введения больному. Композиция может быть составлена для перорального введения больному.
[0020] Изобретение предусматривает способ усиления окисления жира у нуждающегося в этом больного, включающий введение больному любой из композиций, описанных в данном документе, в течение некоторого времени, при этом в течение данного периода времени окисление жиров у больного увеличивается. Изобретение предусматривает способ уменьшения воспалительной реакции у нуждающегося в этом больного, включающий введение больному любой из композиций, описанных в данном документе, в течение некоторого времени, при этом в течение данного периода времени воспалительная реакция у больного уменьшается. Изобретение предусматривает способ повышения или сохранения температуры тела больного, включающий введение больному любой из композиций, описанных в данном документе, в течение некоторого времени, при этом в течение данного периода времени температура тела у больного повышается. Изобретение предусматривает способ стимулирования расширения кровеносных сосудов, включающий введение больному любой из композиций, описанных в данном документе, в течение некоторого времени, при этом в течение данного периода времени у больного вызывают расширение кровеносных сосудов. Изобретение предусматривает способ лечения диабета, включающий введение больному любой из композиций, описанных в данном документе, в течение некоторого времени, при этом в течение данного периода времени у больного повышается чувствительность к инсулину. В некоторых вариантах осуществления, повышение чувствительности к инсулину подтверждается снижением уровней инсулина в плазме и/или увеличением использования глюкозы (например, более быстрое поглощение глюкозы в ответ на глюкозотолерантный тест). В некоторых вариантах осуществления, повышение окисления жира и/или повышение чувствительности к инсулину составляет приблизительно, менее чем приблизительно, или более чем приблизительно 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200% или более. В некоторых вариантах осуществления, повышение окисления жира и чувствительности к инсулину составляет более чем приблизительно 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200% или более. В некоторых вариантах осуществления, повышение окисления жира и/или повышение чувствительности к инсулину является приблизительно, менее чем приблизительно, или более чем приблизительно 1-кратным, 3-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 8-кратным, 10-кратным, 15-кратным, 20-кратным, 50-кратным или более. В некоторых вариантах осуществления, повышение окисления жира и/или повышение чувствительности к инсулину является более чем приблизительно 1-кратным, 3-кратным, 5-кратным, 6-кратным, 8-кратным, 10-кратным, 15-кратным, 20-кратным, 50-кратным или более.
[0021] Изобретение предусматривает способ изготовления любой из композиций, описанных в данном документе, включающий смешивание компонентов для образования по существу гомогенной смеси и формование композиции в однократную дозу.
[0022] В некоторых вариантах осуществления любого из аспектов, описанных в данном документе, один или более типов разветвленных аминокислот и/или их метаболитов выбирают из группы, состоящей из лейцина, валина, изолейцина, 4-гидроксиизолейцина, кетоизокапроновой кислоты (KIC), альфагидроксиизокапроновой кислоты и гидроксиметилбутирата (HMB). Композиция может по существу не содержать неразветвленных аминокислот. Композиция может содержать по меньшей мере приблизительно 500 мг лейцина и/или по меньшей мере приблизительно 200 мг одного или более метаболитов.
[0023] В некоторых вариантах осуществления любого из аспектов, описанных в данном документе, активатор сиртуинового пути может активировать одно или более из SIRT1, SIRT3, AMPK, и PGC1-α. В некоторых вариантах осуществления, активатором сиртуиновых путей является полифенол или прекурсор полифенола. В некоторых вариантах осуществления, активатором сиртуиновых путей является ресвератрол или его аналог. Полифенолом может быть хлорогеновая кислота. Полифенол или прекурсор полифенола могут быть выбраны из группы, состоящей из хлорогеновой кислоты, ресвератрола, кофеиновой кислоты, коричной кислоты, феруловой кислоты, пицеатаннола, эллаговой кислоты, галлата эпигаллокатехина, экстракта виноградных косточек и любого их аналога. Активатор сиртуинового пути может быть выбран из группы, состоящей из коричной кислоты, хинной кислоты, фукоксантина, бигуанида, росиглитазона или любого их аналога. Бигуанидом может быть метформин.
[0024] В некоторых вариантах осуществления любого из аспектов, описанных в данном документе, композиция обладает одной или более дополнительными характеристиками. В некоторых вариантах осуществления, композицией является пищевая композиция. Композицией может быть пища или пищевая добавка, предложенная в виде жидкости (например, напитка), твердой фазы (например, твердой пищи) или полутвердой фазы (например, полутвердой пищи). В некоторых вариантах осуществления, композицию составляют в виде пероральной лекарственной формы. В некоторых вариантах осуществления, композиция может быть предложена в виде однократной дозы. Разовая доза может быть составлена в виде таблетки, капсулы или желатиновой капсулы. В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит фармацевтически активное средство. В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит противодиабетическое средство. Композицией может быть фармацевтическая композиция, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый эксципиент. В некоторых вариантах осуществления, введение композиции больному синергетически повышает митохондриальный биогенез по меньшей мере приблизительно 1-кратно, 3-кратно, 5-кратно, 6-кратно, 8-кратно, 10-кратно, 15-кратно, 20-кратно или 50-кратно или более. В некоторых вариантах осуществления, введение композиции больному синергетически повышает пропускную способность сиртуинового пути по меньшей мере приблизительно 1-кратно, 3-кратно, 5-кратно, 6-кратно, 8-кратно, 10-кратно, 15-кратно, 20-кратно или 50-кратно или более.
[0025] Кроме того, также предоставлены следующие неограничивающие варианты осуществления:
[0026] Изобретение предусматривает композицию, содержащую синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество бетагидроксиметилбутирата (HMB), синергетическое количество кетоизокапроновой кислоты (KIC); и/или синергетическое количество лейцина. В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит синергетическое количество ресвератрола и синергетическое количество HMB, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг, а указанное синергетическое количество HMB составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,20 г и приблизительно 3,0 г.
[0027] В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит синергетическое количество ресвератрола и синергетическое количество лейцина, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг; а указанное синергетическое количество лейцина составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,75 г и приблизительно 3,0 г. Композиция может содержать синергетическое количество ресвератрола и синергетическое количество KIC, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг; а указанное синергетическое количество KIC составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,75 г и приблизительно 3,0 г. Композиция может содержать синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество HMB и синергетическое количество лейцина при условии, что общее количество HMB и лейцина в указанной композиции составляет менее чем (или менее чем приблизительно) 3,0 г, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг; указанное синергетическое количество HMB составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,20 г и приблизительно 3,0 г; а указанное синергетическое количество лейцина составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,50 г и приблизительно 3,0 г. Композиция может содержать синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество KIC и синергетическое количество лейцина при условии, что общее количество KIC и лейцина в указанной композиции составляет менее чем (или меньше, чем приблизительно) 3,0 г, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг; указанное синергетическое количество KIC составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,50 г и приблизительно 3,0 г; а указанное синергетическое количество лейцина составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,50 г и приблизительно 3,0 г. Композиция может содержать синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество HMB и синергетическое количество KIC при условии, что общее количество HMB и KIC в указанной композиции составляет менее чем (или меньше, чем приблизительно) 3,0 г, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг; указанное синергетическое количество HMB составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,20 г и приблизительно 3,0 г; а указанное синергетическое количество KIC составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,50 г и приблизительно 3,0 г.
[0028] Композиция может содержать синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество KIC, синергетическое количество HMB и синергетическое количество лейцина при условии, что общее количество KIC, HMB и лейцина в указанной композиции составляет менее чем (или меньше, чем приблизительно) 3,0 г, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг; указанное синергетическое количество HMB составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,20 г и приблизительно 3,0 г; указанное синергетическое количество KIC составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,50 г и приблизительно 3,0 г; а указанное синергетическое количество лейцина составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,50 г и приблизительно 3,0 г.
[0029] В некоторых вариантах осуществления, указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 50 мг и приблизительно 500 мг; а указанное синергетическое количество HMB составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,40 г и приблизительно 3,0 г. В других вариантах осуществления, указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 50 мг и приблизительно 500 мг; а указанное синергетическое количество лейцина составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,75 г и приблизительно 3,0 г. В некоторых вариантах осуществления, указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 50 мг и приблизительно 500 мг; указанное синергетическое количество HMB составляет между по меньшей мере 0,40 г и приблизительно 3,0 г; а указанное синергетическое количество лейцина составляет между по меньшей мере 0,75 г и приблизительно 3,0 г. В других вариантах осуществления, указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 50 мг и приблизительно 500 мг; указанное синергетическое количество KIC составляет между по меньшей мере 0,75 г и приблизительно 3,0 г; а указанное синергетическое количество лейцина составляет между по меньшей мере 0,75 г и приблизительно 3,0 г. В некоторых вариантах осуществления, указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 50 мг и приблизительно 500 мг; указанное синергетическое количество HMB составляет между по меньшей мере 0,40 г и приблизительно 3,0 г; а указанное синергетическое количество KIC составляет между по меньшей мере 0,75 г и приблизительно 3,0 г.
[0030] В некоторых вариантах осуществления, указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 50 мг и приблизительно 500 мг; указанное синергетическое количество HMB составляет между по меньшей мере 0,40 г и приблизительно 3,0 г; указанное синергетическое количество KIC составляет между по меньшей мере 0,75 г и приблизительно 3,0 г; а указанное синергетическое количество лейцина составляет между по меньшей мере 0,75 г и приблизительно 3,0 г.
[0031] В некоторых из вариантов осуществления, описанных в данном документе, количество HMB, KIC, лейцина или комбинаций лейцина, KIC и/или HMB может быть меньше или равно 3,0 г.
[0032] В некоторых из вариантов осуществления, описанных в данном документе, указанная композиция может исключать одну или более аминокислот, выбранных из группы, состоящей из лизина, глутамата, пролина, аргинина, валина, изолейцина, аспарагиновой кислоты, аспарагина, глицина, треонина, серина, фенилаланина, тирозина, гистидина, аланина, триптофана, метионина, глутамина, таурина, карнитина, цистина и цистеина.
[0033] В некоторых из вариантов осуществления, описанных в данном документе, композиция может исключать один или более следующих ингредиентов: ниацин, витамин B6, витамин B12, пантотеновую кислоту, кофеин, экстракт зеленого чая, экстракты из семян гуараны или экстракты из растений гуараны.
[0034] В некоторых из вариантов осуществления, описанных в данном документе, указанная композиция может исключать одну или более аминокислот, выбранных из группы, состоящей из лизина, глутамата, пролина, аргинина, валина, изолейцина, аспарагиновой кислоты, аспарагина, глицина, треонина, серина, фенилаланина, тирозина, гистидина, аланина, триптофана, метионина, глутамина, таурина, карнитина, цистина и цистеина.
[0035] В некоторых из вариантов осуществления, описанных в данном документе, композиция может исключать один или более следующих ингредиентов: ниацин, витамин B6, витамин B12, пантотеновую кислоту, кофеин, экстракт зеленого чая, экстракты из семян гуараны или экстракты из растений гуараны.
[0036] В некоторых из вариантов осуществления, описанных в данном документе, указанная композиция может исключать одну или более аминокислот, выбранных из группы, состоящей из лизина, глутамата, пролина, аргинина, валина, изолейцина, аспарагиновой кислоты, аспарагина, глицина, треонина, серина, фенилаланина, тирозина, гистидина, аланина, триптофана, метионина, глутамина, таурина, карнитина, цистина и цистеина. В некоторых вариантах осуществления, композиция исключает валин и/или изолейцин.
[0037] В некоторых из вариантов осуществления, описанных в данном документе, композиция может дополнительно содержать ароматизатор. В любом одном из вариантов осуществления, описанных в данном документе, указанная композиция представляет собой твердую фазу, жидкость, эмульсию, гель или пасту.
[0038] Изобретение предусматривает способ повышения окисления жирных кислот у больного, включающий введение больному композиции, содержащей синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество бетагидроксиметилбутирата (HMB), синергетическое количество кетоизокапроновой кислоты (KIC) и/или синергетическое количество лейцина в количестве, эффективном для увеличения окисления жирных кислот.
[0039] В одном аспекте, изобретение предусматривает способ уменьшения прибавления массы или стимулирования потери массы у больного, включающий введение больному композиции, содержащей синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество бетагидроксиметилбутирата (HMB), синергетическое количество кетоизокапроновой кислоты (KIC) и/или синергетическое количество лейцина в количестве, эффективном для уменьшения прибавления массы или индуцирования потери массы.
[0040] В еще одном аспекте, изобретение предусматривает способ стимулирования SIRT1 или SIRT3, включающий введение больному композиции, содержащей синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество бетагидроксиметилбутирата (HMB), синергетическое количество кетоизокапроновой кислоты (KIC) и/или синергетическое количество лейцина в количестве, эффективном для стимулирования SIRT1 или SIRT3.
[0041] Изобретение предусматривает способ активизации метаболической активности адипоцитов, гладкой мускулатуры, скелетной мускулатуры или сердечной мышцы, включающий введение больному композиции, содержащей синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество бетагидроксиметилбутирата (HMB), синергетическое количество кетоизокапроновой кислоты (KIC) и/или синергетическое количество лейцина в количестве, достаточном для активизации метаболической активности указанных мышц.
[0042] В других вариантах осуществления, изобретение предусматривает способ повышения или сохранения температуры тела у больного, включающий введение больному композиции, содержащей синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество бетагидроксиметилбутирата (HMB), синергетическое количество кетоизокапроновой кислоты (KIC) и/или синергетическое количество лейцина в количестве, достаточном для увеличения или сохранения температуры тела указанного больного.
[0043] Изобретение предусматривает способ лечения диабета 2 типа у больного, включающий введение больному композиции, содержащей синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество бетагидроксиметилбутирата (HMB), синергетическое количество кетоизокапроновой кислоты (KIC) и/или синергетическое количество лейцина в количестве, достаточном для лечения диабета 2 типа у указанного больного.
[0044] Изобретение также предусматривает способ уменьшения воспалительной реакции у больного, включающий введение больному композиции, содержащей синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество бетагидроксиметилбутирата (HMB), синергетическое количество кетоизокапроновой кислоты (KIC) и/или синергетическое количество лейцина в количестве, достаточном для уменьшения воспалительной реакции у указанного больного.
[0045] Изобретение предусматривает способ стимулирования расширения кровеносных сосудов, включающий введение композиции, содержащей синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество бетагидроксиметилбутирата (HMB), синергетическое количество кетоизокапроновой кислоты (KIC) и/или синергетическое количество лейцина в количестве, достаточном для индуцирования расширения кровеносных сосудов у указанного больного.
[0046] В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит синергетическое количество ресвератрола и синергетическое количество HMB, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг, а указанное синергетическое количество HMB составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,20 г и приблизительно 3,0 г.
[0047] В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит синергетическое количество ресвератрола и синергетическое количество лейцина, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг, а указанное синергетическое количество лейцина составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,75 г и приблизительно 3,0 г.
[0048] В других вариантах осуществления, композиция содержит синергетическое количество ресвератрола и синергетическое количество KIC, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг, а указанное синергетическое количество KIC составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,75 г и приблизительно 3,0 г.
[0049] В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество HMB и синергетическое количество лейцина при условии, что общее количество HMB и лейцина в указанной композиции составляет менее чем (или меньше, чем приблизительно) 3,0 г, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг, указанное синергетическое количество HMB составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,20 г и приблизительно 3,0 г, а указанное синергетическое количество лейцина составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,50 г и приблизительно 3,0 г.
[0050] В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество KIC и синергетическое количество лейцина при условии, что общее количество KIC и лейцина в указанной композиции составляет менее чем (или меньше, чем приблизительно) 3,0 г, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг, указанное синергетическое количество KIC составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,50 г и приблизительно 3,0 г, а указанное синергетическое количество лейцина составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,50 г и приблизительно 3,0 г.
[0051] В других вариантах осуществления, композиция содержит синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество HMB и синергетическое количество KIC при условии, что общее количество HMB и KIC в указанной композиции составляет менее чем (или меньше, чем приблизительно) 3,0 г, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг, указанное синергетическое количество HMB составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,20 г и приблизительно 3,0 г, а указанное синергетическое количество KIC составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,50 г и приблизительно 3,0 г.
[0052] В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит синергетическое количество ресвератрола, синергетическое количество KIC, синергетическое количество HMB и синергетическое количество лейцина при условии, что общее количество KIC, HMB и лейцина в указанной композиции составляет менее чем (или меньше, чем приблизительно) 3,0 г, при этом: указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 35 мг и приблизительно 500 мг, указанное синергетическое количество HMB составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,20 г и приблизительно 3,0 г, указанное синергетическое количество KIC составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,50 г и приблизительно 3,0 г, а указанное синергетическое количество лейцина составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,50 г и приблизительно 3,0 г.
[0053] В некоторых вариантах осуществления, указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 50 мг и приблизительно 500 мг, а указанное синергетическое количество HMB составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,40 г и приблизительно 3,0 г.
[0054] В некоторых вариантах осуществления, указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 50 мг и приблизительно 500 мг, а указанное синергетическое количество лейцина составляет между приблизительно (или по меньшей мере) 0,75 г и приблизительно 3,0 г.
[0055] В некоторых вариантах осуществления, указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 50 мг и приблизительно 500 мг, указанное синергетическое количество HMB составляет между по меньшей мере 0,40 г и приблизительно 3,0 г, а указанное синергетическое количество лейцина составляет между по меньшей мере 0,75 г и приблизительно 3,0 г.
[0056] В некоторых вариантах осуществления, указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 50 мг и приблизительно 500 мг, указанное синергетическое количество KIC составляет между по меньшей мере 0,75 г и приблизительно 3,0 г, а указанное синергетическое количество лейцина составляет между по меньшей мере 0,75 г и приблизительно 3,0 г.
[0057] В некоторых вариантах осуществления, указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 50 мг и приблизительно 500 мг, указанное синергетическое количество HMB составляет между по меньшей мере 0,40 г и приблизительно 3,0 г, а указанное синергетическое количество KIC составляет между по меньшей мере 0,75 г и приблизительно 3,0 г.
[0058] В некоторых вариантах осуществления, указанное синергетическое количество ресвератрола составляет между по меньшей мере 50 мг и приблизительно 500 мг, указанное синергетическое количество HMB составляет между по меньшей мере 0,40 г и приблизительно 3,0 г, указанное синергетическое количество KIC составляет между по меньшей мере 0,75 г и приблизительно 3,0 г, а указанное синергетическое количество лейцина составляет между по меньшей мере 0,75 г и приблизительно 3,0 г.
[0059] В некоторых из вариантов осуществления, описанных в данном документе, количество HMB, KIC, лейцина или комбинаций лейцина, KIC и/или HMB составляет меньше или равно 3,0 г.
[0060] В некоторых из вариантов осуществления, описанных в данном документе, композиция дополнительно содержит ароматизатор. В любом одном из вариантов осуществления, описанных в данном документе, указанная композиция представляет собой твердую фазу, жидкость, эмульсию, гель или пасту. В любом одном из вариантов осуществления, описанных в данном документе, больным является человек или животное, не являющееся человеком. В любом одном из вариантов осуществления, описанных в данном документе, указанную композицию вводят перорально, парентерально, внутривенно или внутрибрюшинно. В любом из вариантов осуществления для уменьшения прибавления массы или стимулирования потери массы согласно любому одному из вариантов осуществления, указанный больной находится на неограниченной диете.
[0061] В любом из вариантов осуществления для уменьшения прибавления массы или стимулирования потери массы согласно любому одному из вариантов осуществления, указанный больной находится на ограниченной по калориям диете. В любом одном из вариантов осуществления, описанных в данном документе, указанная композиция содержит: a) приблизительно от 50 до 100 мг ресвератрола и от приблизительно 400 мг до приблизительно 500 мг HMB, b) приблизительно от 50 до 100 мг ресвератрола и от приблизительно 750 мг до приблизительно 1250 мг лейцина или c) приблизительно от 50 до 100 мг ресвератрола и от приблизительно 750 мг до приблизительно 1250 мг KIC.
[0062] В любом одном из вариантов осуществления, описанных в данном документе, указанная композиция содержит от приблизительно 50 мг до приблизительно 100 мг ресвератрола и a) комбинацию HMB и KIC в количестве приблизительно 400 мг и приблизительно 1250 мг, b) комбинацию HMB и лейцина в количестве приблизительно 400 мг и приблизительно 1250 мг, c) комбинацию KIC и лейцина в количестве приблизительно 400 мг и приблизительно 1250 мг или d) комбинацию HMB, KIC и лейцина в количестве приблизительно 400 мг и приблизительно 1250 мг.
ВКЛЮЧЕНИЕ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ
[0063] Все публикации, патенты и патентные заявки, упомянутые в данном описании, включены в данное описание посредством ссылки в равной мере, как если бы было конкретно и индивидуально указано, что каждая отдельная публикация, патент или патентная заявка включена посредством ссылки.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0064] Новые признаки изобретения подробно изложены в приложенной формуле изобретения. Более хорошее понимание признаков и преимуществ представленного изобретения будет получено посредством ссылки на следующее подробное описание, которое излагает иллюстративные варианты осуществления, в которых использованы принципы изобретения, и сопровождающие чертеж (чертежи), на которых:
[0065] Фигура 1 изображает диаграмму, показывающую воздействие лейцина и рапамицина на окисление жирных кислот.
[0066] Фигура 2 изображает диаграмму, показывающую воздействие HMB, KIC и лейцина на окисление жирных кислот.
[0067] Фигура 3 изображает диаграмму, показывающую воздействие HMB, KIC, лейцина и валина на митохондриальный биогенез.
[0068] Фигура 4 изображает диаграмму, показывающую воздействие HMB, KIC и лейцина на экспрессию митохондриальных регуляторных и компонентные гены.
[0069] Фигура 5 изображает диаграмму, показывающую воздействие ресвератрола, сурамина, лейцина, KIC, HMB и лейцина на активацию SIRT1.
[0070] Фигура 6 изображает диаграмму, показывающую воздействие ресвератрола, лейцина, HMB и комбинированной композиции HMB и Ресвератрола на активацию SIRT3.
[0071] Фигура 7 изображает диаграмму, показывающую синергетические эффекты лейцина и HMB с ресвератролом на окисление жирных кислот в условиях низкой глюкозы.
[0072] Фигура 8 изображает диаграмму, показывающую синергетические эффекты лейцина и HMB с ресвератролом на окисление жирных кислот в условиях высокой глюкозы.
[0073] Фигура 9 изображает два изображения FDG-PET, показывающие синергетические эффекты ресвератрола и HMB на поглощение глюкозы с использованием растрового анализа FDG-PET.
[0074] Фигура 10 изображает диаграмму, показывающую воздействие ресвератрола, лейцина и HMB на активность SIRT1 жировой ткани у мышей, находящихся на рационе, вызывающем ожирение.
[0075] Фигура 11 изображает схему, показывающую сиртуиновый путь.
2
2
[0076] Фигура 12 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия хлорогеновой кислоты (500 нМ) с HMB (5 мкМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
[0077] Фигура 13 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия хлорогеновой кислоты (500 нМ) и HMB (5 мкМ) на окисление жирных кислот (данные выражены как % изменения от контрольного значения. *p=0,05).
[0078] Фигура 14 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия хлорогеновой кислоты (500 нМ) с HMB (5 мкМ) и лейцином (0,5 мМ) на активность SIRT1 в адипоцитах 3T3-L1 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,005; **p=0,0001).
[0079] Фигура 15 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия хлорогеновой кислоты (500 нМ) с HMB (5 мкМ) и лейцином (0,5 мМ) на использование глюкозы (*p=0,045; **p=0,007). Использование глюкозы измеряли как реакцию закисления внеклеточной среды в ответ на инъекцию глюкозы. Реакция на инсулин (5 нМ) приведена для информации.
2
2
[0080] Фигура 16 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия кофеиновой кислоты (1 мкМ) с лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
2
2
[0081] Фигура 17 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия кофеиновой кислоты (1 мкМ) с HMB (5 мкМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
[0082] Фигура 18 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия кофеиновой кислоты (1 мкМ), HMB (5 мкМ), лейцина (0,5 мМ) и ресвератрола (200 нМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12 и адипоцитах 3T3-L1 (данные выражены как % изменения от контрольного значения;*p=0,05; **p=0,016).
2
2
[0083] Фигура 19 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия хинной кислоты (500 нМ) с HMB (5 мкМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
2
2
[0084] Фигура 20 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия хинной кислоты (500 нМ) с лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
[0085] Фигура 21 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия хинной кислоты (500 нМ), HMB (5 мкМ), лейцина (0,5 мМ) и ресвератрола (200 нМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12 и адипоцитах 3T3-L1 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,05; **p=0,012).
[0086] Фигура 22 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия хинной кислоты (500 нМ), HMB (5 мкМ), лейцина (0,5 мМ) и ресвератрола (200 нМ) на активность AMPK (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,0001).
[0087] Фигура 23 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия хинной кислоты (500 нМ), HMB (5 мкМ), лейцина (0,5 мМ) и ресвератрола (200 нМ) на использование глюкозы. Использование глюкозы измеряли как реакцию закисления внеклеточной среды в ответ на инъекцию глюкозы (*p=0,05; **p=0,0003).
2
2
[0088] Фигура 24 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия коричной кислоты (500 нМ) с HMB (5 мкМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
2
2
[0089] Фигура 25 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия коричной кислоты (500 нМ) с лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
[0090] Фигура 26 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия коричной кислоты (500 нМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,004; **p=0,006).
[0091] Фигура 27 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия коричной кислоты (500 нМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,02; **p=0,05).
[0092] Фигура 28 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия коричной кислоты (500 нМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на активность AMPK (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,0001).
2
2
[0093] Фигура 29 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия феруловой кислоты (500 нМ) с HMB (5 мкМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
[0094] Фигура 30 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия феруловой кислоты (500 нМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,018)
2
2
[0095] Фигура 31 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия феруловой кислоты (500 нМ) с лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
[0096] Фигура 32 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия феруловой кислоты (500 нМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,034).
[0097] Фигура 33 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия феруловой кислоты (500 нМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на активность AMPK (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,05).
2
2
[0098] Фигура 34 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия пицеатаннола (1 нМ) с лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
2
2
[0099] Фигура 35 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия пицеатаннола (1 нМ) с HMB (5 мкМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
[00100] Фигура 36 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия пицеатаннола (1 нМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,039).
[00101] Фигура 37 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия галлата эпигаллокатехина (EGCG) (1 мкМ), HMB (5 мкМ), лейцина (0,5 мМ) и ресвератрола (200 нМ) на использование глюкозы в мышечных трубочках C2C12. Использование глюкозы измеряли как реакцию закисления внеклеточной среды в ответ на инъекцию глюкозы (*p=0,015; **p=0,017).
2
2
[00102] Фигура 38 изображает диаграмму, показывающую воздействие фукоксантина (100 нМ) с HMB (5 мкМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
2
2
[00103] Фигура 39 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия фукоксантина (100 нМ), лейцина (0,5 мМ) и ресвератрола (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
[00104] Фигура 40 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия фукоксантина (100 нМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,033; **p=0,05).
[00105] Фигура 41 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия фукоксантина (100 нМ), HMB (5 мкМ) и лейцина (0,5 мМ) на использование глюкозы в мышечных трубочках C2C12. Использование глюкозы измеряли как реакцию закисления внеклеточной среды в ответ на инъекцию глюкозы (*p<0,04).
[00106] Фигура 42 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия фукоксантина (100 нМ), HMB (5 мкМ), лейцина (0,5 мМ) и ресвератрола (200 нМ) на использование глюкозы в адипоцитах 3T3-L1. Использование глюкозы измеряли как реакцию закисления внеклеточной среды в ответ на инъекцию глюкозы (*p=0,02; **p=0,003).
2
2
[00107] Фигура 43 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия экстракта виноградных косточек (1 мкг/мл) с HMB (5 мкМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
[00108] Фигура 44 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия экстракта виноградных косточек (1 мкг/мл) с HMB (5 мкМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,04).
[00109] Фигура 45 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия экстракта виноградных косточек (1 мкг/мл) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на активность AMPK в адипоцитах 3T3-L1 и мышечных трубочках C2C12 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,01).
[00110] Фигура 46 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия метформина (0,1 мМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,03; **p=0,0001; ***p=0,001).
[00111] Фигура 47 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия метформина (0,1 мМ) с HMB (5 мкМ) и лейцином (0,5 мМ) на использование глюкозы в мышечных трубочках C2C12. Использование глюкозы измеряли как реакцию закисления внеклеточной среды в ответ на инъекцию глюкозы (*p=0,03).
[00112] Фигура 48 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия метформина (0,1 мМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на активность AMPK в мышечных трубочках C2C12 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,031; **p=0,026; ***p=0,017).
[00113] Фигура 49 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия метформина (0,1 мМ) с HMB (5 мкМ) и лейцином (0,5 мМ) на митохондриальный биогенез (*p=0,001; **p=0,013).
[00114] Фигура 50 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия росиглитазона (1 нМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,009).
[00115] Фигура 51 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия росиглитазона (1 нМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,004; **p=0,023; ***p=0,003).
[00116] Фигура 52 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия росиглитазона (1 нМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на использование глюкозы в мышечных трубочках C2C12. Использование глюкозы измеряли как реакцию закисления внеклеточной среды в ответ на инъекцию глюкозы (*p=0,05; **p=0,001).
[00117] Фигура 53 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия кофеина (10 нМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ), ресвератролом (200 нМ) и метформином (0,1 мМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,03; **p=0,05; ***p=0,013).
[00118] Фигура 54 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия кофеина (10 нМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ), ресвератролом (200 нМ) и метформином (0,1 мМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1 (данные выражены как % изменения от контрольного значения. *p=0,008).
2
2
[00119] Фигура 55 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия кофеина (10 нМ) с HMB (5 мкМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
[00120] Фигура 56 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия теофиллина (1 мкМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в мышечных трубочках C2C12 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,03; **p=0,05).
2
2
[00121] Фигура 57 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия теофиллина (1 мкМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
[00122] Фигура 58 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия теофиллина (1 мкМ) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,006).
2
2
[00123] Фигура 59 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия экстракта какао/теобромина (0,1 мкг/мл) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1. Окисление жирных кислот измеряли как реакцию потребления О в ответ на инъекцию пальмитата и выражали как % изменения от исходного уровня перед инъекцией (вертикальная линия показывает время от инъекции пальмитата; экспериментальные точки влево от данной линии являются исходными измерениями, а экспериментальные точки вправо от линии показывают реакцию потребления О).
[00124] Фигура 60 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия экстракта какао/теобромина (0,1 мкг/мл) с HMB (5 мкМ), лейцином (0,5 мМ) и ресвератролом (200 нМ) на окисление жирных кислот в адипоцитах 3T3-L1 (данные выражены как % изменения от контрольного значения; *p=0,021; **p=0,00035).
[00125] Фигура 61 изображает диаграмму, показывающую воздействие стандартной дозы метформина (в данном случае 1,5 г метформина/кг рациона), низкой дозы метформина (в данном случае 0,75 г метформина/кг рациона) и очень низкой дозы метформина (в данном случае 0,25 г метформина/кг рациона) по сравнению с [низкой дозой метформина + 12,5 мг ресвератрола и 2 г CaHMB/кг рациона] и с [очень низкой дозой метформина + 12,5 мг ресвератрола и 2 г CaHMB/кг рациона] на инсулин в плазме у мышей db/db (*p<0,02 vs. контроля).
IR
[00126] Фигура 62 изображает диаграмму, показывающую воздействие стандартной дозы метформина (в данном случае 1,5 г метформина/кг рациона), низкой дозы метформина (в данном случае 0,75 г метформина/кг рациона) и очень низкой дозы метформина (в данном случае 0,25 г метформина/кг рациона) по сравнению с [низкой дозой метформина + 12,5 мг ресвератрола и 2 г CaHMB/кг рациона] и с [очень низкой дозой метформина + 12,5 мг ресвератрола и 2 г CaHMB/кг рациона] на HOMA (гомеостатическую оценку резистентности к инсулину) у мышей db/db (*p<0,025 vs. контроля).
[00127] Фигура 63 изображает диаграмму, показывающую воздействие стандартной дозы метформина (в данном случае 1,5 г метформина/кг рациона), низкой дозы метформина (в данном случае 0,75 г метформина/кг рациона) и очень низкой дозы метформина (в данном случае 0,25 г метформина/кг рациона) по сравнению с [низкой дозой метформина + 12,5 мг ресвератрола и 2 г CaHMB/кг рациона] и с [очень низкой дозой метформина + 12,5 мг ресвератрола и 2 г CaHMB/кг рациона] на реакцию глюкозы в плазме спустя 30 минут после инсулина (0,75 Ед/кг массы тела) у мышей db/db (*p<0,02 vs. контроля).
[00128] Фигура 64 изображает диаграмму, показывающую воздействие стандартной дозы метформина (в данном случае 1,5 г метформина/кг рациона), низкой дозы метформина (в данном случае 0,75 г метформина/кг рациона) и очень низкой дозы метформина (в данном случае 0,25 г метформина/кг рациона) по сравнению с [низкой дозой метформина + 12,5 мг ресвератрола и 2 г CaHMB/кг рациона] и с [очень низкой дозой метформина + 12,5 мг ресвератрола и 2 г CaHMB/кг рациона] на массу внутреннего жира у мышей db/db (*p<0,03 vs. контроля).
[00129] Фигура 65 изображает диаграмму, показывающую воздействие стандартной дозы метформина (в данном случае 1,5 г метформина/кг рациона), низкой дозы метформина (в данном случае 0,75 г метформина/кг рациона) и очень низкой дозы метформина (в данном случае 0,25 г метформина/кг рациона) по сравнению с [низкой дозой метформина + 12,5 мг ресвератрола и 2 г CaHMB/кг рациона] и с [очень низкой дозой метформина + 12,5 мг ресвератрола и 2 г CaHMB/кг рациона] на массу внутреннего жира у мышей db/db (*p<0,05 vs. контроля).
[00130] Фигура 66 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия ресвератрола (200 нМ), лейцина (0,5 мМ), HMB (5 мкМ) и коричной кислоты (1 мкМ) на окисление жирных кислот (*p=0,035 vs. контроля).
[00131] Фигура 67 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия ресвератрола (200 нМ), лейцина (0,5 мМ), HMB (5 мкМ) и коричной кислоты (1 мкМ) на экспрессию белка-предшественника иризина FNDC5 в клеточных лизатах C2C12, измеренную с помощью вестерн-блоттинга (значения представляют собой нормализованные единицы интенсивности полосы; *p<0,03 vs. контроля).
[00132] Фигура 68 изображает типичный вестерн-блоттинг секреции иризина в культуральную среду в ответ на лейцин (0,5 мМ) или HMB (5 мкМ), объединенные либо с ресвератролом (200 нМ), либо с коричной кислотой (1 мкМ). Количественные данные, нормализованные к контролю: ресвератрол/HMB: увеличение 73% (p<0,01); ресвератрол/лейцин, увеличение 271% (p<0,01), коричная кислота/HMB 7% (незначимое), коричная кислота/лейцин, 238% (p<0,01).
[00133] Фигура 69 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия ресвератрола (200 нМ), лейцина (0,5 мМ) и HMB (5 мкМ) на секрецию иризина мышечными трубочками C2C12 в культуральную среду (*p=0,0008 vs. контроля; **p=0,00001 vs. контроля).
[00134] Фигура 70 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия ресвератрола и комбинации ресвератрола/лейцина на иризин в плазме у мышей, находящихся на рационе, вызывающем ожирение (*p=0,03 vs. контроля).
[00135] Фигура 71 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия хинной кислоты (QA; 500 нМ), лейцина (Leu; 0,5 мМ), HMB (5 мкМ) на экспрессию белка FNDC5 в клеточных лизатах C2C12, измеренную с помощью вестерн-блоттинга. Значения представляют собой нормализованные единицы интенсивности полосы (*p<0,005 vs. контроля).
[00136] Фигура 72 изображает типичный вестерн-блоттинг секреции иризина клетками C2C12 в культуральную среду в ответ на лейцин (0,5 мМ) или HMB (5 мкМ), объединенные с хинной кислотой (500 нМ).
[00137] Фигура 73 изображает диаграмму, показывающую количественную оценку воздействия лейцина (0,5 мМ) или HMB (5 мкМ), объединенных с хинной кислотой (500 нМ), на секрецию иризина клетками C2C12 в культуральную среду (*p<0,05 vs. контроля).
[00138] Фигура 74 изображает диаграмму, показывающую результаты воздействия хлорогеновой кислоты (CA; 500 нМ), кофеина (Caf; 10 нМ), лейцина (Leu; 0,5 мМ) и HMB (5 мкМ) на секрецию иризина мышечными трубочками C2C12 в культуральную среду (*p<0,05 vs контроль).
[00139] Фигура 75 изображает диаграмму, показывающую воздействие ресвератрола, комбинации ресвератрола/лейцина и ресвератрола/HMB на подкожную экспрессию мРНК UCP1 у мышей, находящихся на рационе, вызывающем ожирение. Данные нормализованы к 18S (*p=0,05 vs. контроля).
[00140] Фигура 76 изображает диаграмму, показывающую воздействие ресвератрола, комбинации ресвератрола/лейцина и ресвератрола/HMB на подкожную экспрессию мРНК PGC1-α у мышей, находящихся на рационе, вызывающем ожирение. Данные нормализованы к 18S (*p=0,04 vs. контроля).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[00141] Ниже для иллюстрации описаны некоторые аспекты изобретения со ссылкой на приведенные для примера варианты применения. Должно быть понятно, что многочисленные конкретные детали, взаимные связи и способы изложены для обеспечения полного понимания изобретения. Однако, рядовой специалист в соответствующей области легко поймет, что изобретение может быть реализовано на практике без одной или более конкретных деталей или другими способами. Если не утверждается иное, представленное изобретение не ограничено проиллюстрированным упорядочиванием действий или событий, так как некоторые действия могут происходить в иных порядках и/или одновременно с другими действиями или событиями. Кроме того, не все проиллюстрированные действия или события требуются для осуществления методологии в соответствии с представленным изобретением. Концентрации различных компонентов в раскрытых композициях являются иллюстративными и сами по себе не подразумевают ограничения перечисленными концентрациями.
[00142] Как использовано в данном описании, термин "больной" или "индивидуум" включает млекопитающих. Неограничиваюшие примеры млекопитающих включают людей и мышей, включая трансгенных и нетрансгенных мышей. Способы, описанные в данном документе, могут использоваться как при лечении людей, так и в предклинических и ветеринарных вариантах применения. В некоторых вариантах осуществления больным является млекопитающее, а в некоторых вариантах осуществления больным является человек. Другие млекопитающие включают, без ограничения, приматов, шимпанзе, орангутангов, обезьян; одомашненных животных (комнатных животных), например, собак, кошек, морских свинок, хомяков, мышей, крыс, кроликов и хорьков; одомашненных сельскохозяйственных животных, например, коров, буйволов, бизонов, лошадей, ослов, свиней, овец и коз; или экзотических животных, обычно находящихся в зоопарках, например, медведей, львов, тигров, пантер, слонов, бегемотов, носорогов, жирафов, антилоп, ленивцев, газелей, зебр, гну, луговых собачек, медведей коала, кенгуру, панд, бамбуковых медведей, гиен, тюленей, морских львов и морских слонов.
[00143] Термины "вводить", "введенный", "вводит" и "введение" определяются, как предоставление композиции больному посредством пути, известного в данной области, включая, но без ограничения, внутривенный, внутриартериальный, пероральный, парентеральный, внутриротовой, местный, трансдермальный, ректальный, внутримышечный, подкожный, внутрикостный, чресслизистый или внутрибрюшинный пути введения. В некоторых вариантах осуществления представленной заявки, пероральные пути введения композиции могут быть предпочтительными.
[00144] Как использовано в данном описании, "средство" или "биологически активное средство" относится к биологическому, фармацевтическому или химическому соединению или другой функциональной группе. Неограничивающие примеры включают простые или сложные органические или неорганические молекулу, пептид, белок, пептид-нуклеиновую кислоту (PNA), олигонуклеотид (включая например, аптамер и полинуклеотиды), антитело, производное антитела, фрагмент антитела, производное витамина, углевод, токсин или хемотерапевтическое соединение. Различные соединения могут представлять собой синтезированные, например, небольшие молекулы и олигомеры (например, олигопептиды и олигонуклеотиды), и синтетические органические соединения на основании различных фибриллярных центров. В дополнение, различные природные источники могут предоставлять соединения для скрининга, например, растительные или животные экстракты и тому подобное. Квалифицированный специалист легко может узнать, что нет ограничения относительно структурной природы средств представленного изобретения.
[00145] Термин "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" относится к такому количеству соединения, описанного в данном документе, которое является достаточным для осуществления предназначенного применения, включая, но без ограничения, лечение заболеваний, которые определены ниже. Терапевтически эффективное количество может варьировать в зависимости от предназначенного применения (in vitro или in vivo) или состояния больного и заболевания, подлежащего лечению, например, массы и возраста больного, тяжести состояния заболевания, способа введения и тому подобное, которые легко могут определяться рядовым специалистом в данной области. Термин также применяется для дозы, которая будет индуцировать конкретную реакцию в клетках-мишенях, например, снижение пролиферации или понижающую регуляцию активности белка-мишени. Конкретная доза будет варьировать в зависимости от конкретных выбранных соединений, режима дозирования, которому необходимо следовать, вводят ли ее в комбинации с другими соединениями, синхронности введения, ткани, в которую ее вводят, и физической системы доставки, в которой ее переносят.
[00146] "Модулятор" пути относится к веществу или средству, которое модулирует активность одного или более клеточных белков, картированных для одного и того же конкретного пути передачи сигнала. Модулятор может увеличивать или подавлять активность и/или уровень или паттерн экспрессии сигнальной молекулы. Модулятор может активировать компонент в пути за счет непосредственного связывания с компонентом. Модулятор может также опосредованно активировать компонент в пути за счет взаимодействия с одним или более ассоциированными компонентами. Пропускная способность пути может быть измерена в показателях уровня экспрессии или активности белков. Уровень экспрессии белка в пути может отражаться уровнями соответствующей мРНК или родственных факторов транскрипции, а также уровнем белка в субклеточной локализации. Например, некоторые белки активируются за счет перемещения в конкретный субклеточный компонент или из него, включая, но без ограничения, ядра, митохондрии, эндосомы, лизосомы или другие мембранные структуры клетки. Пропускная способность пути также может измеряться в показателях физиологических действий, например, митохондриального биогенеза, окисления жирных кислот или поглощения глюкозы.
[00147] "Активатор" относится к модулятору, который влияет на путь способом, который повышает пропускную способность пути. Активация конкретной мишени может быть прямой (например, за счет взаимодействия с мишенью) или опосредованной (например, за счет взаимодействия с белком до мишени в сигнальном пути, содержащем мишень).
[00148] "Супрессором" может быть модулятор, который влияет на путь способом, который снижает пропускную способность пути.
[00149] Термин "по существу не содержат", как использован в данном описании, относится к композициям, которые имеют менее чем приблизительно 10%, менее чем приблизительно 5%, менее чем приблизительно 1%, менее чем приблизительно 0,5%, менее чем 0,1% или даже меньше указанного компонента. Например, композиция, которая по существу не содержит аминокислот с неразветвленной цепью, может иметь менее чем приблизительно 1% лизина, аминокислоты с неразветвленной цепью.
[00150] "Субтерапевтическим количеством" средства, активатора или терапии является количество меньшее, чем эффективное количество для данного средства, активатора или терапии, но при объединении с эффективным или субтерапевтическим количеством другого средства или терапии оно может производить необходимый результат, вследствие, например, синергизма в получающихся в результате эффективных действиях, и/или уменьшенных побочных эффектов.
[00151] "Синергическое" или "синергетическое" действие может быть таким, что одно или более действий комбинированных композиций являются более выраженными, чем одно или более действий каждого отдельного компонента, или они могут быть более выраженными, чем сумма одного или более действий каждого отдельного компонента. Синергетическое действие может составлять приблизительно, или более чем, приблизительно, 10, 20, 30, 50, 75, 100, 110, 120, 150, 200, 250, 350 или 500% или даже больше, чем воздействие на больного только одним из компонентов, или аддитивные эффекты каждого из компонентов при введении по отдельности. Действием может быть любое из поддающихся измерению действий, описанных в данном документе.
[00152] Композиции
[00153] Изобретение предусматривает композиции, которые могут увеличивать или модулировать пропускную способность сиртуинового пути. Сиртуиновый путь включает, без ограничения, сигнальные молекулы, например, SIRT1, SIRT3 и AMPK. Пропускная способность пути может определяться уровнем экспрессии и/или активностью пути и/или физиологическим действием. В некоторых вариантах осуществления, активация пути SIRT1 включает стимулирование PGC1-α и/или последующее стимулирование митохондриального биогенеза и окисления жирных кислот. В общем, активатором сиртуинового пути является соединение, которое активирует или повышает один или более компонентов сиртуинового пути. Увеличение или активацию сиртуинового пути можно наблюдать посредством увеличения активности белка компонента пути. Например, белком может быть SIRT1, PGC1-α, AMPK, Epacl, аденилатциклаза, SIRT3 или любые другие белки и их соответствующие ассоциированные белки вдоль сигнального пути, изображенного на Фигуре 11 (Park et. al, "Resveratrol Ameliorates Aging-Related Metabolic Phenotypes by Inhibiting cAMP Phosphodiesterases", Cell 148, 421-433 February 3, 2012). Неограничивающие примеры физиологических действий, которые могут служить в качестве размеров пропускной способности сиртуинового пути, включают митохондриальный биогенез, окисление жирных кислот, поглощение глюкозы, поглощение пальмитата, поглощение кислорода, продуцирование углекислого газа, потерю массы, выработку тепла, потерю висцеральной жировой ткани, дыхательный коэффициент, чувствительность к инсулину, уровень маркера воспаления, расширение кровеносных сосудов, побурение жировых клеток и продуцирование иризина. Примеры признаков побурения жировых клеток включают, без ограничения, увеличение окисления жирных кислот и экспрессию одного или более селективных генов бурого жира (например, Ucpl, Cidea, Prdml6 и Ndufsl). В некоторых вариантах осуществления, изменения одного или более физиологических действий, которые могут служить в качестве размеров пропускной способности сиртуинового пути, индуцируют увеличением продуцирование иризина, например, посредством введения композиции изобретения.
[00154] Увеличение митохондриального биогенеза может подтверждаться увеличением образования новых митохондрий и/или увеличением митохондриальных функций, например, повышенным окислением жирных кислот, повышенным образованием тепла, повышенной чувствительностью к инсулину, повышенным поглощением глюкозы, повышенным расширением кровеносных сосудов, сниженной массой, сниженным жировым объемом и сниженной воспалительной реакцией или маркерами у больного.
[00155] Композициями могут быть комбинированные композиции, которые могут включать один или более синергических компонентов. В некоторых вариантах осуществления, синергетическое действие комбинированных композиций может предусматривать уменьшенные величина дозировки, приводящие к меньшим побочным эффектам для больного и уменьшенной стоимости лечения. В других вариантах осуществления, синергетическое действие может обеспечивать результаты, которые не достижимы посредством любых других общепринятых способов лечения. Представленные комбинированные композиции обеспечивают существенное улучшение регуляции энергетического метаболизма.
[00156] В некоторых вариантах осуществления, композициями могут быть комбинированные композиции из одной или более аминокислот с разветвленными цепями и/или их метаболитов, а активатор сиртуинового пути может иметь одну или более характеристик. Комбинированные композиции (a) могут обладать синергетическим действием для увеличения пропускной способности сиртуинового пути, (b) увеличивают пропускную способность сиртуинового пути по меньшей мере приблизительно 1, 2, 5, 7, 10 или 20-кратно, (c) имеют молярное отношение аминокислот с разветвленными цепями и/или их метаболитов для пропускной способности сиртуинового пути более чем приблизительно 20, (d) подлежат составлению в виде однократной дозы для перорального приема внутрь, при этом активатором сиртуиновых путей является по существу гомогенная популяция молекул полифенола, и (e) могут обладать синергетическим действием и дополнительно содержать пищевой носитель. Любая из композиций, описанных в данном документе, может иметь одну или более из данных характеристик.
[00157] В некоторых вариантах осуществления, представленное изобретение предоставляет композицию, содержащую (a) один или более типов разветвленных аминокислот и/или их метаболитов и (b) активатор сиртуинового пути, присутствующий в субтерапевтическом количестве, при этом композиция является синергетически эффективной для увеличения пропускной способности сиртуинового пути по меньшей мере приблизительно 5, 10, 50, 100, 200, 500 или более кратно по сравнению с пропускной способностью компонента (b), когда его используют отдельно.
[00158] В некоторых вариантах осуществления, активатором сиртуинового пути или активатором пути AMPK может быть полифенол. Например, полифенолом может быть хлорогеновая кислота, ресвератрол, кофеиновая кислота, пицеатаннол, эллаговая кислота, галлат эпигаллокатехина (EGCG), экстракт виноградных косточек или любой их аналог. В некоторых вариантах осуществления, активатором может быть ресвератрол, его аналог или его метаболит. Например, активатором может быть птеростильбен или низкомолекулярный аналог ресвератрола. Примеры низкомолекулярных аналогов ресвератрола описаны в патентных заявках США № 20070014833, 20090163476 и 20090105246, которые включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.
[00159] Полифенолом может быть по существу гомогенная популяция полифенолов. Полифенолом может быть один тип полифенола, при этом композиция может исключать все другие типы полифенолов. В других вариантах осуществления, композиция может содержать два, три или четыре типа полифенолов и исключать все другие типы полифенолов. В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать 1, 2, 3 или 4 типа полифенолов и менее чем 0,1, 0,5, 1 или 2% любых других типов полифенолов. В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит ингибитор фосфодиэстеразы (PDE) и/или другой активатор сиртуинового пути.
[00160] В некоторых вариантах осуществления, активатором сиртуина является любое одно или более соединений, показанных ниже:
[00161] В одном варианте осуществления, активатором сиртуина является стильбеновое или халконовое соединение формулы 1:
в котором, независимо для каждого местонахождения,
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
2
2
R, R, R, R, R, R’, R', R', R' и R' представляют H, алкил, арил, гетероарил, аралкил, алкарил, гетероаралкил, галид, NO, SR, OR, N(R) или карбоксил;
R представляет H, алкил, арил, гетероарил или аралкил;
M представляет O, NR или S;
A-B представляет бивалентную алкильную, алкенильную, алкинильную, амидо, сульфонамидо, диазо, простую эфирную, алкиламино, алкилсульфидную, гидроксиламиновую или гидразиновую группу; а
n представляет собой 0 или 1.
2
2
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
2
4
3
2
4
2
3
3
5
2
3
1
3
5
2
3
2
2
4
3
3
2
4
3
3
[00162] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором n представляет собой 0. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором n представляет собой 1. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором A-B представляет собой этенил. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором A-B представляет собой -CHCH(Me)CH(Me)CH-. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором M представляет собой O. В дополнительном варианте осуществления, способы включают соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором R, R, R, R, R, R’, R', R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором R, R и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором R, R, R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором R, R, R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором R, R, R, R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором R и R' представляют собой OH; R представляет собой Ο-β-D-глюкозид; а R' представляет собой OCH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором R представляет собой OH; R представляет собой Ο-β-D-глюкозид; а R' представляет собой OCH.
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
2
4
3
1
3
5
1
2
4
5
2
4
2
3
1
3
5
1
4
5
3
5
2
3
1
2
4
1
4
5
1
3
5
2
3
2
4
1
4
5
2
2
4
3
3
1
3
5
1
4
5
2
4
3
3
1
3
5
1
2
4
5
2
2
2
3
2
3
1
4
5
1
4
5
[00163] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором n представляет собой 0; A-B представляет собой этенил; а R, R, R, R, R, R’, R', R', R' и R' представляют собой Н (транс стильбен). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором n представляет собой 1; A-B представляет собой этенил; M представляет собой O; а R, R, R, R, R, R’, R', R', R' и R' представляют собой Н (халкон). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором n представляет собой 0; A-B представляет собой этенил; R, R и R' представляют собой OH; а R, R, R, R’, R', R' и R' представляют собой Н (ресвератрол). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором n представляет собой 0; A-B представляет собой этенил; R, R, R' и R' представляют собой OH; а R, R, R, R’, R' и R' представляют собой Н (пицеатаннол). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором n представляет собой 1; A-B представляет собой этенил; M представляет собой O; R, R, R' и R' представляют собой OH; а R, R, R, R’, R' и R' представляют собой Н (бутеин). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором n представляет собой 1; A-B представляет собой этенил; M представляет собой O; R, R, R, R' и R' представляют собой OH; а R, R, R’, R' и R' представляют собой Н (3,4,2',4',6'-пентагидроксихалкон). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором n представляет собой 0; A-B представляет собой этенил; R и R' представляют собой OH, R представляет собой Ο-β-D-глюкозид, R' представляет собой OCH; а R, R, R, R’, R' и R' представляют собой Н (рапонтин). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором n представляет собой 0; A-B представляет собой этенил; R представляет собой OH, R представляет собой Ο-β-D-глюкозид, R' представляет собой OCH; а R, R, R, R’, R', R' и R' представляют собой Н (деоксирапонтин). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 1 и сопровождающих определений, в котором n представляет собой 0; A-B представляет собой -CHCH(Me)CH(Me)CH-; R, R, R' и R' представляют собой OH; а R, R, R, R’, R' и R' представляют собой Н (NDGA).
[00164] В еще одном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение флаванона формулы 2:
в котором, независимо для каждого местонахождения,
1
2
3
4
1
2
3
4
5
2
2
R, R, R, R, R’, R', R', R', R' и R" представляют H, алкил, арил, гетероарил, аралкил, алкарил, гетероаралкил, галид, NO, SR, OR, N(R) или карбоксил;
R представляет H, алкил, арил, гетероарил или аралкил;
2
M представляет H, O, NR или S;
Z представляет CR, O, NR или S;
X представляет CR или N; а
Y представляет CR или N.
2
1
[00165] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором как X, так и Y представляют собой CH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором M представляет собой O. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором M представляет собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором Z представляет собой O. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором R" представляет собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором R" представляет собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором R" представляет собой алкоксикарбонил. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором R представляет собой
1
2
3
4
1
2
3
4
5
2
4
3
4
2
3
2
4
2
3
2
4
2
3
4
[00166] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором R, R, R, R, R’, R', R', R', R' и R" представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором R, R и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором R, R', R' и R" представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором R, R, R', R' и R" представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором R, R, R', R', R' и R" представляют собой OH.
1
2
3
4
1
2
3
4
5
2
4
3
1
3
1
2
4
5
2
4
2
3
1
3
1
4
5
2
2
4
2
3
1
3
1
4
5
2
2
4
2
3
4
1
3
1
5
2
[00167] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором X и Y представляют собой CH; M представляет собой O; Z и O; R" представляет собой H; а R, R, R, R, R’, R', R', R', R' и R" представляют собой Н (флаванон). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором X и Y представляют собой CH; M представляет собой O; Z и O; R" представляет собой H; R, R и R' представляют собой OH; а R, R, R’, R', R' и R' представляют собой Н (нарингенин). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором X и Y представляют собой CH; M представляет собой O; Z и O; R" представляет собой OH; R, R, R' и R' представляют собой OH; а R’, R, R’, R' и R' представляют собой Н (3,5,7,3',4'-пентагидроксифлаванон). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором X и Y представляют собой CH; M представляет собой H; Z и O; R" представляет собой OH; R, R, R' и R', представляют собой OH; а R, R, R’, R' и R' представляют собой Н (эпикатехин). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором X и Y представляют собой CH; M представляет собой H; Z и O; R" представляет собой OH; R, R, R', R' и R' представляют собой OH; а R, R, R’ и R' представляют собой Н (галлокатехин). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 2 и сопровождающих определений, в котором X и Y представляют собой CH; M представляет собой H; Z и O; R" представляет собой
2
4
2
3
4
1
3
1
5
R, R, R', R', R', и R" представляют собой OH; а R, R, R’ и R' представляют собой Н (галлат эпигаллокатехина).
[00168] В еще одном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение изофлаванона формулы 3:
в котором, независимо для каждого местонахождения,
1
2
3
4
1
2
3
4
5
1
2
2
R, R, R, R, R’, R', R', R', R' и R" представляют H, алкил, арил, гетероарил, аралкил, алкарил, гетероаралкил, галид, NO, SR, OR, N(R) или карбоксил;
R представляет H, алкил, арил, гетероарил или аралкил;
2
M представляет H, O, NR или S;
2
Z представляет C(R), O, NR или S;
X представляет CR или N; а
Y представляет CR или N.
[00169] В еще одном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение флавона формулы 4:
в котором, независимо для каждого местонахождения,
1
2
3
4
1
2
3
4
5
2
2
R, R, R, R, R’, R', R', R' и R' представляют H, алкил, арил, гетероарил, аралкил, алкарил, гетероаралкил, галид, NO, SR, OR, N(R) или карбоксил;
R представляет H, алкил, арил, гетероарил или аралкил;
2
M представляет H, O, NR или S;
Z представляет CR, O, NR или S; а
X представляет CR" или N, при этом
2
2
R" представляет собой H, алкил, арил, гетероарил, алкарил, гетероаралкил, галид, NO, SR, OR, N(R) или карбоксил.
1
2
3
4
1
2
3
4
5
2
2
3
2
4
2
3
4
2
4
2
3
3
2
3
2
4
2
3
2
2
3
4
2
4
3
2
3
4
3
2
4
3
3
1
3
2
3
1
2
2
3
3
1
2
3
4
3
2
4
2
4
1
3
4
2
4
2
3
4
2
2
3
4
1
2
4
2
3
[00170] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой С. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой CR. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором Z представляет собой O. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором M представляет собой O. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R" представляет собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R" представляет собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R, R, R, R’, R', R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R, R', R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R, R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R, R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R', R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R, R и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R’ и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R, R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R’ и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R' представляет собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R и R представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R, R’ и R’ представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R представляет собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R, R', R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R', R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором R, R, R, R' и R' представляют собой OH.
1
2
3
4
1
2
3
4
5
2
2
3
1
3
4
1
4
5
2
4
2
3
4
1
3
1
5
2
4
2 и
3
1
3
1
4
5
3
2
3
1
2
4
1
4
5
2
4
2
3
1
3
1
4
5
2
2
3
4
1
3
4
1
5
2
4
3
1
3
1
2
4
5
2
3
4
3
1
1
2
4
5
2
4
3
1
3
1
2
4
5
3
1
3
1
2
4
2
4
5
2
3
1
3
4
1
2
4
5
1
2
2
3
1
2
4
3
4
5
3
1
2
1
2
4
3
4
5
3
1
2
3
4
1
2
4
5
4
3
1
2
3
1
2
4
5
2
4
1
3
1
2
3
4
5
2
4
1
3
1
3
2
4
5
4
1
2
3
1
2
3
4
5
2
4
2
3
4
1
3
1
5
2
2
3
4
1
3
4
1
5
1
2
4
2
3
3
1
4
5
[00171] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой СН; Z представляет собой О; M представляет собой O; а R, R, R, R, R’, R', R', R' и R' представляют собой Н (флавон). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой COH; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R' и R' представляют собой OH; а R, R, R, R’, R' и R' представляют собой Н (физетин). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой СН; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R, R', R' и R' представляют собой OH; а R, R, R’ и R' представляют собой Н (5,7,3',4',5'-пентагидроксифлавон). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой СН; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R, R' R' представляют собой OH; а R, R, R’, R' и R' представляют собой Н (лютеолин). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой COH; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R' и R' представляют собой OH; а R, R, R, R’, R' и R' представляют собой Н (3,6,3',4'-тетрагидроксифлавон). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой COH; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R, R' и R' представляют собой OH; а R, R, R’, R' и R', представляют собой Н (кверцетин). В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой СН; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R', R' и R' представляют собой OH; а R, R, R, R’ и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой COH; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R и R' представляют собой OH; а R, R, R’, R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой СН; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R, R и R' представляют собой OH; а R, R’, R', R' и R' представляют собой дополнительный вариант осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой СН; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R и R' представляют собой OH; а R, R, R’, R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой COH; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R’ и R' представляют собой OH; а R, R, R, R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой СН; Z представляет собой О; M представляет собой O; R и R' представляют собой OH; а R, R, R, R’, R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой COH; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R, R' и R' представляют собой OH; а R, R, R, R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой COH; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R’ и R' представляют собой OH; а R, R, R; R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой СН; Z представляет собой О; M представляет собой O; R' представляет собой OH; а R, R, R, R, R’, R, R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой СН; Z представляет собой О; M представляет собой O; R и R' представляют собой OH; а R, R, R, R’, R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой СН; Z представляет собой О; M представляет собой O; R и R представляют собой OH; а R, R, R’, R', R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой COH; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R, R’ и R' представляют собой OH; а R, R, R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой СН; Z представляет собой О; M представляет собой O; R представляет собой OH; а R, R, R, R’, R', R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой COH; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R, R', R' и R' представляют собой OH; а R, R, R’ и R', представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой COH; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R', R' и R' представляют собой OH; а R, R, R, R’ и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 4 и сопровождающих определений, в котором X представляет собой COH; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R, R, R' и R' представляют собой OH; а R, R’, R' и R' представляют собой H.
[00172] В еще одном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение изофлавона формулы 5:
в котором, независимо для каждого местонахождения,
1
2
3
4
1
2
3
4
5
2
2
R, R, R, R, R’, R', R', R' и R', представляют H, алкил, арил, гетероарил, аралкил, алкарил, гетероаралкил, галид, NO, SR, OR, N(R) или карбоксил;
R представляет H, алкил, арил, гетероарил или аралкил;
2
M представляет H, O, NR или S;
2
Z представляет C(R), O, NR или S; а
Y представляет CR" или N, в котором
2
2
R" представляет H, алкил, арил, гетероарил, алкарил, гетероаралкил, галид, NO, SR, OR, N(R) или карбоксил.
2
3
2
4
3
[00173] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 5 и сопровождающих определений, в котором Y представляет собой CR". В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 5 и сопровождающих определений, в котором Y представляет собой CH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 5 и сопровождающих определений, в котором Z представляет собой O. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 5 и сопровождающих определений, в котором M представляет собой O. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 5 и сопровождающих определений, в котором R и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 5 и сопровождающих определений, в котором R, R и R' представляют собой OH.
2
3
1
3
4
1
2
4
5
2
4
3
1
3
1
2
4
5
[00174] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 5 и сопровождающих определений, в котором Y представляет собой СН; Z представляет собой О; M представляет собой O; R и R' представляют собой OH; а R, R, R, R’, R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 5 и сопровождающих определений, в котором Y представляет собой СН; Z представляет собой О; M представляет собой O; R, R и R' представляют собой OH; а R, R, R’, R', R' и R' представляют собой H.
[00175] В еще одном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение антоцианидина формулы 6:
в котором, независимо для каждого местонахождения,
3
4
5
6
7
8
2
3
4
5
6
2
2
R, R, R, R, R, R, R', R', R', R'и R' представляют H, алкил, арил, гетероарил, аралкил, алкарил, гетероаралкил, галид, NO, SR, OR, N(R) или карбоксил;
R представляет H, алкил, арил, гетероарил или аралкил; а
-
-
-
-
Α представляет анион, выбранный из следующего: Cl, Br, или I.
-
-
3
5
7
4
3
5
7
3
4
3
5
7
3
4
5
[00176] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 6 и сопровождающих определений, в котором Α представляет собой Cl. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 6 и сопровождающих определений, в котором R, R, R и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 6 и сопровождающих определений, в котором R, R, R, R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 6 и сопровождающих определений, в котором R, R, R, R', R' и R' представляют собой OH.
-
-
-
-
-
-
3
5
7
4
4
5
8
2
3
5
6
3
5
7
3
4
4
5
8
2
5
6
3
5
7
3
4
5
4
6
8
2
6
[00177] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 6 и сопровождающих определений, в котором Α представляет собой Cl; R, R, R и R' представляют собой OH; а R, R, R, R', R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 6 и сопровождающих определений, в котором Α представляет собой Cl; R, R, R, R' и R' представляют собой OH; а R, R, R, R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение формулы 6 и сопровождающих определений, в котором Α представляет собой Cl; R, R, R, R', R' и R' представляют собой OH; а R, R, R, R' и R' представляют собой H.
[00178] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является стильбен, халкон или соединение флавона, представленное формулой 7:
[00179] в котором, независимо для каждого местонахождения,
M отсутствует или представляет собой O;
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
2
2
R, R, R, R, R, R’, R', R', R' и R' представляют H, алкил, арил, гетероарил, аралкил, алкарил, гетероаралкил, галид, NO, SR, OR, N(R) или карбоксил;
a
a
R представляет Н или два экземпляра R образуют связь;
R представляет H, алкил, арил, гетероарил, аралкил; а
n представляет собой 0 или 1.
a
a
[00180] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором n представляет собой 0. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором n представляет собой 1. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором M отсутствует. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором M представляет собой O. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором R представляет собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором M представляет собой O, а два R образуют связь.
5
5
l
3
3
2
4
2
3
2
2
3
2
4
[00181] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором Rпредставляет собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором R представляет собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором R, R и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором R, R, R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором R, R' и R' представляют собой OH. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором R и R представляют собой OH.
a
5
l
3
3
2
4
1
2
4
5
a
5
2
4
2
3
1
3
1
4
5
a
5
2
2
3
1
3
4
1
4
5
[00182] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором n представляет собой 0; M отсутствует; R представляет собой H; R представляет собой H; R, R и R' представляют собой OH; а R, R, R’, R', R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором n представляет собой 1; M отсутствует; R представляет собой H; R представляет собой H; R, R, R' и R' представляют собой OH; а R, R, R’, R' и R' представляют собой H. В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является активирующее соединение, представленное формулой 7 и сопровождающими определениями, в котором n представляет собой 1; M представляет собой O; два R образуют связь; R представляет собой OH; R, R' и R' представляют собой OH; а R, R, R, R’, R' и R' представляют собой H.
[00183] Другие активаторы сиртуина включают соединения, имеющие формулу, выбранную из группы, состоящей из формул 8-25 и 30, изложенных ниже.
1
2
R=Н, галоген, NO, SR (R=H, алкил, арил), OR (R=H,алкил,арил), NRR’ (R,R’=алкил, арил), алкил, арил, карбокси
2
2
R=Н, галоген, NO, SR (R=H, алкил, арил), OR (R=H, алкил, арил), NRR’ (R,R’=алкил, арил), алкил, арил, карбокси
3
2
R=Н, галоген, NO, SR (R=H, алкил, арил), OR (R=H, алкил, арил), NRR’ (R,R’=алкил, арил), алкил, арил, карбокси
4
2
R=Н, галоген, NO, SR (R=H, алкил, арил), OR (R=H, алкил, арил), NRR’ (R,R’=алкил, арил), алкил, арил, карбокси
5
2
R=Н, галоген, NO, SR (R=H, алкил, арил), OR (R=H, алкил, арил), NRR’ (R,R’=алкил, арил), алкил, арил, карбокси
1
2
R’=Н, галоген, NO, SR (R=H, алкил, арил), OR (R=H, алкил, арил), NRR’ (R,R’=алкил, арил), алкил, арил, карбокси
2
2
R’=Н, галоген, NO, SR (R=H, алкил, арил), OR (R=H, алкил, арил), NRR’ (R,R’=алкил, арил), алкил, арил, карбокси
3
2
R’=Н, галоген, NO, SR (R=H, алкил, арил), OR (R=H, алкил, арил), NRR’ (R,R’=алкил, арил), алкил, арил, карбокси
4
2
R’=Н, галоген, NO, SR (R=H, алкил, арил), OR (R=H, алкил, арил), NRR’ (R,R’=алкил, арил), алкил, арил, карбокси
5
2
R’=Н, галоген, NO, SR (R=H, алкил, арил), OR (R=H, алкил, арил), NRR’ (R,R’=алкил, арил), алкил, арил, карбокси
1
2
R”=Н, галоген, NO, SR (R=H, алкил, арил), OR (R=H, алкил, арил), NRR’ (R,R’=алкил, арил), алкил, арил, карбокси
А-В = этен, этин, амид, сульфонамид, диазо, алкил, эфир, алкиламин, аклкисульфид, гидроксиамин, гидразин
Х = CR, N
Y = CR, N
2
Z = O, S, C(R), NR
R = H, алкил, арил, аралкил
в которой, независимо для каждого местонахождения,
R=H, алкил, арил, гетероциклил, гетероарил или аралкил; а
2
2
R'=H, галоген, NO, SR, OR, NR, алкил, арил или карбокси.
в которой, независимо для каждого местонахождения,
R=H, алкил, арил, гетероциклил, гетероарил или аралкил.
в которой, независимо для каждого местонахождения,
2
2
R'=H, галоген, NO, SR, OR, NR, алкил, арил, аралкил или карбокси; а
R=H, алкил, арил, гетероциклил, гетероарил или аралкил.
в которой, независимо для каждого местонахождения,
2
L представляет CR, O, NR или S;
R представляет H, алкил, арил, аралкил или гетероаралкил; а
2
2
R' представляет H, галоген, NO, SR, OR, NR, алкил, арил, аралкил или карбокси.
в которой, независимо для каждого местонахождения,
2
L представляет CR, O, NR или S;
W представляет CR или N;
R представляет H, алкил, арил, аралкил или гетероаралкил;
Ar представляет соединенное ариловое или гетероариловое кольцо; а
2
2
R' представляет H, галоген, NO, SR, OR, NR, алкил, арил, аралкил или карбокси.
в которой, независимо для каждого местонахождения,
2
L представляет CR, O, NR или S;
R представляет H, алкил, арил, аралкил или гетероаралкил; а
2
2
R' представляет H, галоген, NO, SR, OR, NR, алкил, арил, аралкил или карбокси.
в которой, независимо для каждого местонахождения,
2
L представляет CR, O, NR или S;
R представляет H, алкил, арил, аралкил или гетероаралкил; а
2
2
R' представляет H, галоген, NO, SR, OR, NR, алкил, арил, аралкил или карбокси.
В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является стильбен, халкон или соединение флавона, представленное формулой 30:
в которой, независимо для каждого местонахождения,
D представляет собой фенильную или циклогексильную группу;
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
2
2
R, R, R, R, R, R’, R', R', R' и R' представляют H, алкил, арил, гетероарил, алкарил, гетероаралкил, галид, NO, SR, OR, N(R), карбоксил, азид, простой эфир; или любые две соседние группы R или R’ взятые вместе образуют соединенную бензеновую или циклогексиловую группу;
R представляет H, алкил, арил или аралкил; а
A-B представляет этиленовую, этениленовую или иминную группу;
3
3
l
2
4
5
2
4
l
3
5
3
l
2
4
5
при условии, что когда A-B представляет собой этенилен, D представляет собой фенил, а R' представляет собой H: R не является OH, когда R, R, R и R представляют собой H; а R и R не являются OMe, когда R, R и R представляют собой H; а R не является OMe, когда R, R, R и R представляют собой H.
[00184] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором D представляет собой фенильную группу.
[00185] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этениленовую или иминную группу.
[00186] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой представляет собой этениленовую группу.
2
[00187] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором R представляет собой OH.
4
[00188] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором R представляет собой OH.
2
4
[00189] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором R и R представляют собой OH.
[00190] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором D представляет собой фенильную группу; а A-B представляет собой этениленовую группу.
2
4
[00191] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором D представляет собой фенильную группу; A-B представляет собой этениленовую группу; а R и R представляют собой OH.
2
4
3
[00192] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой Cl.
2
4
3
[00193] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой OH.
2
4
3
[00194] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой H.
2
4
3
2
3
[00195] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой CHCH.
2
4
3
[00196] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой F.
2
4
3
[00197] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой Me.
2
4
3
[00198] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой азид.
2
4
3
[00199] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой SMe.
2
4
3
2
[00200] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой NO.
2
4
3
3
2
[00201] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой CH(CH).
2
4
3
[00202] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой OMe.
2
4
2
3
[00203] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; R' представляет собой OH; а R' представляет собой OMe.
2
4
3
[00204] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R представляет собой OH; R представляет собой карбоксил; а R' представляет собой OH.
2
4
3
[00205] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой карбоксил.
2
4
3
4
[00206] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' и R' взятые вместе образуют соединенное бензеновое кольцо.
4
[00207] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; а R представляет собой OH.
2
4
2
3
3
[00208] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OCHOCH; а R' представляет собой SMe.
2
4
3
[00209] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой карбоксил.
2
4
[00210] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой циклогексиловое кольцо; а R и R представляют собой OH.
3
4
[00211] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; а R и R представляют собой OMe.
2
4
3
[00212] В дополнительном варианте осуществления, активатором сиртуина является соединение, представленное формулой 30 и сопровождающими определениями, в котором A-B представляет собой этенилен; D представляет собой фенильное кольцо; R и R представляют собой OH; а R' представляет собой OH.
[00213] В одном варианте осуществления, модулирующие сиртуин соединения изобретения представлены формулой 31:
или их солями, где:
Кольцо А необязательно замещено; а
Кольцо B замещено по меньшей мере одной карбокси или полициклической арильной группой.
[00214] В еще одном варианте осуществления, модулирующие сиртуин соединения изобретения представлены формулой 32:
[00215] или их солями, где:
Кольцо А необязательно замещено;
1
2
3
4
5
2
5
5
2
5
5
6
5
6
5
5
5
3
n
5
n
5
n
5
6
5
6
5
6
5
6
2
R, R, R и R независимо выбирают из группы, состоящей из -H, галогена, -OR, -CN, -COR, -OCOR, -OCOR, -C(О)NRR, -OC(О)NRR, -C(О)R, -COR, -SR, -OSOH, -S(О)R, -S(О)OR, -S(О)NRR, -NRR, -NRC(О)OR, -NRC(О)R и -NO;
5
6
R и R представляют собой независимо -H, замещенную или незамещенную алкильную группу, замещенную или незамещенную арильную группу или замещенную или незамещенную гетероциклическую группу; а n представляет собой 1 или 2.
1
2
3
4
5
5
5
3
[00216] В некоторых вариантах осуществления, R, R, R и R независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -OR и -SR, в частности, -H и -OR (например, -H, -OH, -ОСН).
[00217] Кольцо A, предпочтительно, замещено. Подходящие заместители включают галогены (например, бромин), ацилокси группы (например, ацетокси), аминокарбонильные группы (например, ариламинокарбонил, например, замещенный, в частности, карбокси-замещенный, фениламинокарбонильные группы) и алкокси (например, метокси, этокси) группы.
[00218] В еще одном аспекте, изобретение предоставляет новые модулирующие сиртуин соединения формулы (III):
или их соли, где:
Кольцо А необязательно замещено;
5
6
R и R представляют собой независимо -H, замещенную или незамещенную алкильную группу, замещенную или незамещенную арильную группу или замещенную или незамещенную гетероциклическую группу;
7
9
10
11
5
5
2
5
5
2
5
5
6
5
6
5
5
5
3
n
5
n
5
n
5
6
5
6
5
6
5
6
2
R, R, R и R независимо выбирают из группы, состоящей из -H, галогена, -R, -OR, -CN, -COR, -OCOR, -OCOR, -C(О)NRR, -OC(О)NRR, -C(О)R, -COR, -SR, -OSOH, -S(О)R, -S(О)OR, -S(О)NRR, -NRR, -NRC(О)OR, -NRC(О)R и -NO;
8
R представляет собой полициклическую арильную группу; а
n представляет собой 1 или 2.
7
9
10
11
7
9
10
11
[00219] В некоторых вариантах осуществления, один или более из R, R, R и R представляют собой -H. В отдельных вариантах осуществления, каждый из R, R, R и R представляет собой -H.
8
8
7
9
10
11
[00220] В некоторых вариантах осуществления, R представляет собой гетероарильную группу, например, оксазоло[4,5-b]пиридильную группу. В отдельных вариантах осуществления, R представляет собой гетероарильную группу, а один или более из R, R, R и R представляют собой -H.
[00221] Кольцо A предпочтительно замещено. Подходящие заместители включают галогены (например, бромин), ацилокси группы (например, ацетокси), аминокарбонильные группы (например, ариламинокарбонил, например, замещенные, в частности, карбокси-замещенные, фениламинокарбонильные группы) и алкокси (например, метокси, этокси) группы, в частности, алкокси группы. В некоторых вариантах осуществления, Кольцо A замещено по меньшей мере одной алкокси или галогруппой, в частности, метокси.
1
3
1
3
1
3
2
[00222] В некоторых вариантах осуществления, Кольцо А необязательно замещено заместителями, вплоть до 3, независимо выбранными из (C-C прямого или разветвленного алкила), O-(C-C прямого или разветвленного алкила), N(C-C прямого или разветвленного аллила), гало или 5-6-членного гетероцикла.
[00223] В некоторых вариантах осуществления, Кольцо A не замещено нитрильной или пирролидильной группой.
8
8
8
8
[00224] В некоторых вариантах осуществления, R представляет собой замещенную или незамещенную бициклическую гетероарильную группу, например, бициклическую гетероарильную группу, которая содержит атом N кольца и 1-2 дополнительных гетероатомов кольца, независимо выбранных из N, O или S. Предпочтительно, R соединен с остальной частью соединения углерод-углеродной связью. В некоторых подобных вариантах осуществления, присутствуют 2 дополнительных гетератома кольца, и обычно по меньшей мере один указанный дополнительный гетератом кольца представляет собой O или S. В некоторых подобных вариантах осуществления, присутствуют 2 атома азота общего кольца (при этом не присутствует или присутствует один O или S), и обычно каждый атом азота находится в другом кольце. В некоторых подобных вариантах осуществления, R не замещен содержащей карбонил функциональной группой, в частности, когда R представляет собой тиенопиримидил или тиенопиридинил.
8
8
[00225] В некоторых подобных вариантах осуществления, R выбирают из оксазолопиридила, бензотиенила, бензофуранила, индолила, квиноксалинила, бензотиазолила, бензооксазолила, бензимидазолила, квинолинила, изоквинолинила или изоиндолила. В некоторых подобных вариантах осуществления, R выбирают из тиазолопиридила, имидазотиазолила, бензооксазинолила или имидазопиридила.
8
[00226] Отдельные примеры R, где
обозначает соединение с остальной частью формулы 33, включают:
1
3
1
3
1
3
8
где до 2 атомов углерода кольца, не прилегающих непосредственно к обозначенной точке соединения, независимо замещены O-C-C прямым или разветвленным алкилом, C-C прямым или разветвленным алкилом или гало, в частности, C-C прямым или разветвленным алкилом или гало. В некоторых вариантах осуществления, R представляет собой
8
[00227] В некоторых вариантах осуществления, R представляет собой
1
3
1
3
1
3
2
1
3
1
3
1
3
1
3
1
3
1
3
при этом Кольцо А необязательно замещено заместителями, вплоть до 3, независимо выбранными из (C-C прямого или разветвленного алкила), O-(C-C прямого или разветвленного аллила), N(C-C прямого или разветвленного алкила), гало или 5-6-членного гетероцикла. В некоторых подобных вариантах осуществления, Кольцо A не замещено одновременно во 2- и 6-положениях O-(C-C прямым или разветвленным алкилом). В некоторых подобных вариантах осуществления, Кольцо A не замещено одновременно во 2-, 4- и 6-положениях O-(C-C прямым или разветвленным алкилом). В некоторых подобных вариантах осуществления, Кольцо A не замещено одновременно во 2-, 3- и 4-положениях O-(C-C прямым или разветвленным алкилом). В некоторых подобных вариантах осуществления, Кольцо A не замещено в 4-положении 5-6-членным гетероциклом. В некоторых подобных вариантах осуществления, Кольцо A не замещено отдельно в 3- или 4-положении (обычно в 4-положении) O-(C-C прямым или разветвленным алкилом). В некоторых подобных вариантах осуществления, Кольцо A не замещено в 4-положении O-(C-C прямым или разветвленным алкилом), а во 2- или 3-положении C-C прямым или разветвленным алкилом.
8
[00228] В некоторых вариантах осуществления, R представляет собой
1
3
1
3
1
3
1
3
2
1
3
1
3
1
3
при этом Кольцо А необязательно замещено заместителями, вплоть до 3, независимо выбранными из (C-C прямого или разветвленного алкила), (C-C прямого или разветвленного галоалкила, причем галоалкильной группой является алкильная группа, замещенная одним или более атомами галогенов), O-(C-C прямого или разветвленного алкила), N(C-C прямого или разветвленного алкила), гало или 5-6-членного гетероцикла. В некоторых подобных вариантах осуществления, Кольцо A не замещено отдельно в 3- или 4-положении O-(C-C прямым или разветвленным алкилом). В некоторых подобных вариантах осуществления, Кольцо A не замещено в 4-положении O-(C-C прямым или разветвленным алкилом), а во 2- или 3-положении C-C прямым или разветвленным аллилом.
8
[00229] В некоторых вариантах осуществления, R представляет собой
1
3
1
3
1
3
2
1
3
(например, где один или оба гало представляет собой хлорин), а Кольцо А необязательно замещено заместителями, вплоть до 3, независимо выбранными из (C-C прямого или разветвленного алкила), O-(C-Cпрямого или разветвленного алкила), N(C-Cпрямого или разветвленного алкила), гало или 5-6-членного гетероцикла, но не замещено отдельно в 3-положении O-(C-C прямым или разветвленным алкилом).
8
3
2
8
[00230] В некоторых вариантах осуществления, например, когда R имеет одно из значений, описанных выше, Кольцо A замещено заместителями, вплоть до 3, независимо выбранными из хлора, метила, O-метила, Ν(СН) или морфолино. В некоторых подобных вариантах осуществления, R выбирают из
1
3
7
9
11
10
2
2
2
3
2
2
3
2
2
2
3
2
8
где до 2 атомов углерода кольца, не прилегающих непосредственно к обозначенной точке соединения, независимо замещены C-C прямым или разветвленным алкилом или гало; каждый из R, R и R представляет собой -H; а R выбирают из -H, -CHOH, -COH, -COCH, -CH- пиперазинила, CHN(CH), -C(O)-NH- (CH)-N(CH) или -C(О)-пиперазинила. В некоторых подобных вариантах осуществления, когда R представляет собой
7
9
10
11
2
3
2
2
2
3
2
8
а Кольцо A представляет собой 3-диметиламинофенил, ни один из R, R, R и R не является -CH-N(CH) или -C(O)-NH-(CH)-N(CH), и/или когда R представляет собой
7
9
10
11
3
а Кольцо A представляет собой 3,4 диметоксифенил, ни один из R, R, R и R не является C(О)OCH или C(О)OH.
8
7
9
10
11
7
9
10
11
[00231] В некоторых вариантах осуществления, например, когда R имеет одно из значений, описанных выше и/или Кольцо А необязательно замещено, как описано выше, по меньшей мере один из R, R, R и R представляет собой -H. В некоторых подобных вариантах осуществления, каждый из R, R, R и R представляет собой -H.
7
9
10
11
3
2
2
2
3
2
2
2
2
2
2
3
2
2
n
2
n
2
n
2
n
2
n
2
n
3
2
10
3
2
2
2
3
2
2
2
2
2
2
3
2
2
n
2
n
2
n
2
n
2
n
2
n
3
2
7
9
11
[00232] В некоторых вариантах осуществления, R, R, R или R выбирают из -C(О)OH, -N(CH), -CHOH, -CHOCH, -CH-пиперазинила, -CH-метилпиперазинила, -CH-пирролидила, -CH-пиперидила, -CH-морфолино, -CH-N(CH), -C(O)-NH-(CH)-пиперазинила, -C(O)-NH-(CH)-метилпиперазинила, -C(O)-NH-(CH)-пирролидила, -C(O)-NH-(CH)-морфолино, -C(O)-NH-(CH)-пиперидила или -C(O)-NH-(CH)-N(CH), при этом n представляет собой 1 или 2. В некоторых подобных вариантах осуществления, R выбирают из -C(О)OH, -N(CH), -CHOH, -CHOCH, -CH-пиперазинила, -CH-метилпиперазинила, -CH-пирролидила, -CH-пиперидила, -CH-морфолино, -CH-N(CH), -C(O)-NH-(CH)-пиперазинила, -C(O)-NH-(CH)-метилпиперазинил-C(O)-NH-(CH)-пирролидила, -C(O)-NH-(CH)-морфолино, -C(O)-NH-(CH)-пиперидила или -C(O)-NH-(CH)-N(CH), при этом n представляет собой 1 или 2, а каждый из R, R и R представляет собой H.
[00233] В некоторых вариантах осуществления, Кольцо A замещено нитрильной группой или замещено в параположении 5- или 6-членным гетероциклом. Типичные примеры гетероцикла включают пирролидил, пиперидинил и морфолинил.
[00234] В одном варианте осуществления, модулирующие сиртуин соединения изобретения представлены формулой 34:
или их солями, при этом:
1
4
два из X-X выбирают из -CR*- и -N-;
1
4
другие два из X-X представляют собой -CR*-;
1
R представляет собой солюбилизирующую группу;
2
3
2
R представляет собой фенильную группу, необязательно замещенную низшим алкилом, низшим алкокси, галогеном, нитрилом или -CF или R представляет собой 5-6-членный гетероцикл, содержащий в своем составе гетероатом N и, необязательно, второй гетероатом, выбранный из N, O или S, при этом указанный гетероцикл необязательно замещен метилом или галогеном;
R* независимо выбирают в каждом местоположении из -H, низшего алкила или галогена;
3
R представляет собой -H или -CH;
3
R' представляет собой -CH или галоген; а
n представляет собой целое число из 0-4.
[00235] Обычно, R представляет собой -H, а n представляет собой 0, так что соединения формулы 34 представлены формулой 35:
или их солями.
Предпочтительные значения в соединениях формул 34 и 35 выглядят следующим образом:
1
4
два из X-X выбирают из -CR*- и -N-;
1
4
другие два из X-X представляют собой -CR*-;
R* независимо выбирают в каждом местоположении из -H, низшего алкила или галогена;
1
R представляет собой солюбилизирующую группу; а
2
1
4
2
3
R выбирают из фенила, необязательно замещенного одним или более заместителями, независимо выбранными из -CN, -F, -Cl и -CF, а когда каждый из X-X представляет собой -CR*-, R дополнительно выбирают из 5-6-членного гетероцикла, содержащего в своем составе гетероатом N и, необязательно, второй гетероатом, выбранный из N, O или S, при этом указанный гетероцикл необязательно замещен метилом.
1
4
1
4
1
4
1
4
1
2
1
4
1
4
1
4
1
[00236] В некоторых вариантах осуществления, каждый из X-X представляет собой -CR*-. В других вариантах осуществления, один из X-X представляет собой -N-, а остальные представляют собой -CR*-. В некоторых вариантах осуществления, два из X-X представляют собой -N-, а остальные представляют собой -CR*-. В некоторых вариантах осуществления, в которых два из X-X представляют собой -N-, X и X представляют собой -N-. В некоторых вариантах осуществления, в которых два из X-X представляют собой -N-, X и X представляют собой -N-. В некоторых вариантах осуществления, когда один из X-X представляет собой -N-, X представляет собой -N-. В некоторых вариантах осуществления, R* представляет собой H.
1
4
2
2
2
[00237] В некоторых вариантах осуществления, например, когда каждый из X-X представляет собой -CR*-, R выбирают из фенила, фторфенила, дифторфенила, хлорфенила, метилтиазолила, пиримидинила, пиридила и пиразолила. В некоторых подобных вариантах осуществления, R выбирают из фенила, фторфенила, дифторфенила, хлорфенила, 2-метилтиазол-4-ила, пиридила и пиразол-1-ил. Предпочтительно, R представляет собой фенил или пиридил.
1
3
3
1
4
2
2
2
3
1
4
2
1
4
1
4
[00238] В некоторых вариантах осуществления, R представляет собой -CH-R, а R представляет собой содержащий азот гетероцикл, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из C-C алкила, амино, галогена, метокси и метокси-C-C-алкила. В данных вариантах осуществления, X-X и R могут иметь любое из значений, описанных выше. В некоторых подобных вариантах осуществления, R представляет собой фенил, пиридил или 3-фторфенил; X и X представляют собой -CR*-, а X и X независимо выбирают из -CR*- или -N-; или из того и другого.
1
3
3
1
4
2
2
2
3
1
4
2
[00239] В некоторых вариантах осуществления, R представляет собой -CH-R; а R выбирают из пиперазин-1-ила, 4-(метоксиэтилпиперазин-1-ила, 3,5-диметилпиперазин-1-ила, морфолин-4-ила, пиперидин-1-ила, 4-аминопиперидин-1-ила, пирролидин-1-ила, 3-фторпирролидин-1-ила, -NH-(пирролидин-3-ила) и 1,4-диаза-бицикло[2,2,1]гептан-1-ила. В данных вариантах осуществления, X-X и R могут иметь любое из значений, описанных выше, но обычно R представляет собой фенил, пиридил или 3-фторфенил; X и X представляют собой -CH-, а X и X независимо выбирают из -CH- или -N-; или из того и другого.
3
3
2
2
3
1
4
1
4
2
3
2
1
3
3
2
[00240] В некоторых подобных вариантах осуществления, R выбирают из 4-(метоксиэтил)-пиперазин-1-ила, морфолин-4-ила, пиперидин-1-ила и 4-аминопиперидин-1-ила. Когда R имеет данные значения, R обычно представляет собой фенил, 3-фторфенил или пиридил. Также, обычно X и X представляют собой -CH-, а X и X независимо выбирают из -CH- или -N-. В отдельных вариантах осуществления, X и X независимо выбирают из -CH- или -N-; Xи X представляют собой -CH-; R представляет собой фенил, 3-фторенил или пиридил; а R представляет собой -CH-R, где R выбирают из 4-(метоксиэтил)-пиперазин-1-ила, морфолин-4-ила, пиперидин-1-ила и 4-аминопиперидин-1-ила.
[00241] В определенном варианте осуществления, модулирующие сиртуин соединения, охваченные Формулой 34, представлены Формулой 36:
или их солями, при этом:
1
3
один из X-X выбирают из -CH- и -N-;
1
3
другие два из X-X представляют собой -CH-;
1
R представляет собой солюбилизирующую группу;
2
2
3,
R представляет собой фенильную группу, необязательно замещенную метилом, галогеном или -CF или R представляет собой 5-6-членный гетероцикл, содержащий в своем составе гетероатом N и, необязательно, второй гетероатом, выбранный из N, O или S, при этом указанный гетероцикл необязательно замещен метилом или галогеном;
3
R представляет собой -H или -CH;
3
R' представляет собой -CH или галоген; а
n представляет собой целое число из 0-4.
[00242] Обычно, R представляет собой -H, а n представляет собой 0, так что соединения формулы 36 представлены формулой 37:
[00243] Предпочтительные значения в соединениях формулы 36 и 37 выглядят следующим образом:
1
3
один из X-X выбирают из -CH- и -N-;
1
3
другие два из X-X представляют собой -CH-;
1
R представляет собой солюбилизирующую группу; а
2
1
3
2
R выбирают из фенила и фторфенила, и, когда каждый из X-X представляет собой -CH-, R дополнительно выбирают из 5-6-членного гетероцикла, содержащего в своем составе гетероатом N и, необязательно, второй гетероатом, выбранный из N, O или S, при этом указанный гетероцикл необязательно замещен метилом.
1
3
1
3
1
3
1
[00244] В некоторых вариантах осуществления, каждый из X-X представляет собой -CH-. В других вариантах осуществления, один из X-X представляет собой -N-, а остальные представляют собой -CH-. Обычно, когда один из X-X представляет собой -N-, X представляет собой -N-.
1
3
2
2
2
[00245] В некоторых вариантах осуществления, например, когда каждый из X-X представляет собой -CH-, R выбирают из фенила, фторфенила, метилтиазолила, пиримидинила, пиридила и пиразолила. В некоторых подобных вариантах осуществления, R выбирают из фенила, фторфенила, 2-метилтиазол-4-ила, пиридила и пиразол-1-ила. Предпочтительно, R представляет собой фенил или пиридил.
1
3
3
1
3
2
2
2
3
1
2
1
4
1
4
[00246] В некоторых вариантах осуществления, R представляет собой -CH-R, а R представляет собой содержащий азот гетероцикл, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из C-C алкила, амино, галогена, метокси и метокси-C-C-алкила. В данных вариантах осуществления, X-X и R могут иметь любое из значений, описанных выше. В некоторых подобных вариантах осуществления, R представляет собой фенил, пиридил или 3-фторфенил; X и X представляют собой -CH-, а X представляет собой -CH- или -N-; или и то и другое.
1
3
3
1
3
2
2
2
3
1
2
[00247] В некоторых вариантах осуществления, R представляет собой -CH-R; а R выбирают из пиперазин-1-ила, 4-метоксиэтилпиперазин-1-ила, 3,5-диметилпиперазин-1-ила, морфолин-4-ила, пиперидин-1-ила, 4-аминопиперидин-1-ила, пирролидин-1-ила, 3-фторпирролидин-1-ила, -NH-(пирролидин-3-ила) и 1,4-диаза-бицикло[2,2,1]гептан-1-ила. В данных вариантах осуществления, X-X и R могут иметь любое из значений, описанных выше, но обычно R представляет собой фенил, пиридил или 3-фторфенил; X и X представляют собой -CH-, а X представляет собой -CH- или -N-; или и то и другое.
3
3
2
2
3
1
1
2
3
2
1
3
3
2
[00248] В некоторых подобных вариантах осуществления, R выбирают из 4-(метоксиэтил)-пиперазин-1-ила, морфолин-4-ила, пиперидин-1-ила и 4-аминопиперидин-1-ила. Когда R имеет данные значения, R обычно представляет собой фенил, 3-фторфенил или пиридил. Также, обычно X и X представляют собой -CH-, а X представляет собой -CH- или -N-. В отдельных вариантах осуществления, X представляет собой -CH- или -N-; X и X представляют собой -CH-; R представляет собой фенил, 3-фторфенил или пиридил; а R представляет собой -CH-R, где R выбирают из 4-(метоксиэтил)-пиперазин-1-ила, морфолин-4-ила, пиперидин-1-ила и 4-аминопиперидин-1-ила.
[00249] В еще одном варианте осуществления, модулирующие сиртуин соединения изобретения представлены формулой 38:
или их солями, при этом:
кольцо A выбирают из:
1
R представляет собой солюбилизирующую группу; а
#
3
R представляет собой -H или -O-CH.
В еще одном варианте осуществления, модулирующие сиртуин соединения изобретения представлены Формулой 39:
или их солями, при этом:
кольцо B выбирают из:
1
R представляет собой солюбилизирующую группу.
[00250] В некоторых вариантах осуществления, соединением, активирующим сиртуиновый путь, является любое соединение, описанное в патентах США № 7829556, 7855289, 7893086, 8044198, 8088928 и 8093401, каждый из которых включен в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.
[00251] В некоторых вариантах осуществления, активирующее сиртуин соединение представлено
или их солями.
[00252] В некоторых вариантах осуществления, соединение, активирующее сиртуиновый путь, представляет собой соединение формулы:
или его соль, при этом:
7
8
9
10
1
20
каждый из X, X, X и X независимо выбирают из N, CR или CR', при этом:
20
каждый из R независимо выбирают из Н или солюбилизирующей группы;
1
1
3
1
1
2
2
3
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
k
k
2
a
a
a
a
a
a
a
b
a
b
a
a
b
a
a
a
b
a
a
a
a
b
c
c
a
c
a
b
a
a
b
c
C
a
C
a
b
a
a
b
c
c
a
c
a
b
d
d
a
d
a
b
d
C
d
c
a
d
c
a
b
a
a
b
a
a
b
a
a
b
c
a
b
c
a
c
a
b
a
a
a
каждый из R' независимо выбирают из Н или необязательно замещенного C-C прямого или разветвленного алкила, в котором, когда R’ замещен, R’ замещен одним или более из -OH, галогена, -OR, -O-COR, -COR, -C(О)R, -CN, -NO, -COOH, -COOR, -OCOR, -C(О)NRR, -OC(О)NRR, -SOH, -NH, -NHR, -N(RR), -COOR, -CHO, -CONH, -CONHR, -CON(RR), -NHCOR, -NRCOR, -NHCONH, -NHCONRH, -NHCON(RR), -NRCONH, -NRCONRH, -NRCON(RR), -C(=NH)-NH, -C(=NH)-NHR, -C(=NH)-N(RR), -C(=NR)-NH, -C(=NR)-NHR, -C(=NR)-N(RR), -NH-C(=NH)-NH, -NH-C(=NH)-NHR, -NH-C(=NH)-N(RR), -NH-C(=NR)-NH, -NH-C(=NR)-NHR, -NH-C(=NR)-N(RR), -NRH-C(=NH)-NH, -NR-C(=NH)-NHR, -NR-C(=NH)-N(RR), -NR-C(=NR)-NH, -NR-C(=NR)-NHR, -NR-C(=NR)-N(RR), -NHNH, -NHNHR, -NHRR, -SONH-S0NHR, -SONRR, -CH=CHR, -CH=CRR, -CR=CRR, CR=CHR, -CR=CRR, -CCR, -SH, -SOR, -S(О)OR и -NH-C(=NH)-NH, при этом
k представляет собой 0, 1 или 2;
a
d
каждый из R-R независимо представляет собой алифатическую, замещенную алифатическую, бензильную, замещенную бензильную, ароматическую или замещеную ароматическую группу; а
a
b
-NRR, взятые вместе, также могут образовать замещенную или незамещенную неароматическую гетероциклическую группу;
при этом неароматическая гетероциклическая группа, бензиловая группа или арильная группа в качестве заместителя также могут иметь алифатическую или замещенную алифатическую группу; a замещенная алифатическая группа в качестве заместителя также может иметь неароматическое гетероциклическое кольцо, замещенное неароматическое гетероциклическое кольцо, бензильную, замещенную бензильную, арильную или замещенную арильную группу; а замещенная алифатическая, неароматическая гетероциклическая группа, замещенная арильная или замещенная бензильная группа могут иметь более чем один заместитель;
7
8
9
10
1
20
один из X, X, X и X представляет собой N, а другие выбирают из CR или CR'; а
20
от нуля до одного R представляет собой солюбилизирующую группу;
19
R выбирают из:
в которых:
10
11
12
13
1
20
каждый Z, Z, Z и Z независимо выбирают из N, CR или CR'; а
14
15
16
1
1
20
каждый Z, Z и Z независимо выбирают из N, NR', S, O, CR или CR', при этом:
10
11
12
13
от нуля до двух из Z, Z, Z и Z представляют собой N;
14
15
16
1
по меньшей мере один из Z, Z и Z представляет собой N, NR', S или O;
14
15
16
от нуля до одного из Z, Z и Z представляет собой S или O;
14
15
16
1
от нуля до двух из Z, Z и Z представляют собой N или NR';
20
от нуля до одного R представляет собой солюбилизирующую группу;
1
1
3
от нуля до одного R' необязательно замещен C-C прямым или разветвленным алкилом; а
21
31
1
1
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
1
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
1
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
R выбирают из -NR'-C(O)-, -NR'-S(О)-, -NR'-C(O)-NR'-, -NR’-C(S)-NR’-, -NR'-C(S)-NR'-CR'R’-, -NR’-C(O)-CR’R’-NR'-, -NR'-C(=NR')-NR'-, -C(O)-NR'-, -C(O)-NR'-S(О)-, -NR'-, -CR'R’-, -NR’-C(O)-CR’=CR’-, -NR’-S(О)-NR’-, -NR'-C(O)-NR’-S(О)-, -NR’-CR'R’-C(О)-NR’-, -CR'R’-C(O)-NR'-, -NR'-C(O)-CR'=CR'-CR'R’-, -NR’-C(=N-CN)-NR’-, -NR'-C(O)-CR'R’-O-, -NR'-C(O)-CR'R’-CR'R’-O-, -NR'-S(О)-CR'R’-, -NR’-S(О)-CR’R’-CR’R’-, -NR’-C(O)-CR’R’-CR’R’-, -NR’-C(S)-NR'-CR'R’-CR'R’-, -NR'-C(O)-O- или -NR'-C(O)-CR'R’-; а R выбирают из необязательно замещенного моноциклического или бициклического арила или необязательно замещенного моноциклического или бициклического гетероарила, при условии, что:
7
19
когда X представляет собой N, R представляет собой
10
11
12
13
1
20
а каждый из Z, Z, Z и Z независимо выбирают из CR или CR', то:
8
9
10
1
3
a) по меньшей мере один из X, X и X представляет собой C-(C-C прямой или разветвленный алкил) или C-(солюбилизирующая группа); или
10
11
12
13
20
20
b) по меньшей мере один из Z, Z, Z и Z представляет собой CR, при этом R представляет собой солюбилизирующую группу.
[00253] В некоторых вариантах осуществления, соединение, активирующее сиртуиновый путь, представляет собой соединение формулы:
или ее соль, при этом:
1
4
два из X-X выбирают из -CR*- и -N-;
1
4
другие два из X-X представляют собой -CR*-;
R* независимо выбирают в каждом местоположении из -H, низшего алкила или галогена;
1
R представляет собой солюбилизирующую группу; а
2
1
4
2
3
R выбирают из фенила, необязательно замещенного одним или более заместителями, независимо выбранными из -CN, -F, -Cl и -CF, а когда каждый из X-X представляет собой -CR*-, R дополнительно выбирают из 5-6-членного гетероцикла, содержащего в своем составе гетероатом N и, необязательно, второй гетероатом, выбранный из N, O или S, при этом указанный гетероцикл необязательно замещен метилом.
[00254] В некоторых вариантах осуществления, соединение, активирующее сиртуиновый путь, представляет собой соединение формулы:
или его соль.
[00255] В некоторых вариантах осуществления, соединение, активирующее сиртуиновый путь, представляет собой соединение формулы:
или его соль, при этом:
7
8
9
10
1
20
каждый из X, X, X и X независимо выбирают из N, CR и CR', при этом:
20
каждый R независимо выбирают из Н и солюбилизирующей группы;
1
1
3
1
1
2
2
3
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
k
k
2
a
a
a
a
a
a
a
b
a
b
a
a
b
a
a
a
b
a
a
a
a
b
c
c
a
c
a
b
a
a
b
C
C
a
C
a
b
a
a
b
c
c
a
c
a
b
d
d
a
d
a
b
d
c
d
c
a
d
c
a
b
a
a
a
b
a
a
b
c
a
b
c
a
c
a
b
a
a
a
каждый R' независимо выбирают из Н и необязательно замещенного C-C прямого или разветвленного алкила, при этом когда R’ замещен, R’ замещен одним или более из -ОН, галогена, -OR, -O-COR, -COR, -C(О)R, -CN, -NO, -COOH, -COOR, -OCOR, -C(О)NRR, -OC(О)NRR, -SOH, -NH, -NHR, -N(RR), -COOR, -CHO, -CONH, -CONHR, -CON(RR), -NHCOR, -NRCOR, -NHCONH, -NHCONRH, -NHCON(RR), -NRCONH, -NRCONRH, -NRCON(RR), -C(=NH)-NH, -C(=NH)-NHR, -C(=NH)-N(RR), -C(=NR)-NH, -C(=NR)-NHR, -C(=NR)-N(RR), -NH-C(=NH)-NHR, -NH-C(=NH)-N(RR), -NH-C(=NR)-NH, -NH-C(=NR)-NHR, -NH-C(=NR)-N(RR), -NR-C(=NH)-NH, -NR-C(=NH)-NHR, -NR-C(=NH)-N(RR), -NR-C(=NR)-NH, -NR-C(=NR)-NHR, -NR-C(=NR)-N(RR), -NHNH, -NHNHR, -SONH, -SONHR, -SONRR, -CH=CHR, -CH=CRR, -CR=CRR, CR=CHR, -CR=CRR, -CCR, -SH, -SOR, -S(О)OR и -NH-C(=NH)-NH, при этом
k представляет собой 0, 1 или 2;
a
d
каждый из R-R независимо представляет собой алифатическую, замещенную алифатическую, бензильную, замещенную бензильную, ароматическую или замещеную ароматическую группу; а
a
b
-NRR, взятые вместе, также могут образовать замещенную или незамещенную неароматическую гетероциклическую группу;
при этом неароматическая гетероциклическая группа, бензиловая группа или арильная группа в качестве заместителя также могут иметь алифатическую или замещенную алифатическую группу; a замещенная алифатическая группа в качестве заместителя также может иметь неароматическое гетероциклическое кольцо, замещенное неароматическое гетероциклическое кольцо, бензильную, замещенную бензильную, арильную или замещенную арильную группу; а замещенная алифатическая, неароматическая гетероциклическая группа, замещенная арильная или замещенная бензильная группа могут иметь более чем один заместитель;
7
8
9
10
1
20
20
один из X, X, Х и X представляет собой N, а другие выбирают из CR и CR’; а от нуля до одного R представляет собой солюбилизирующую группу;
19
R выбирают из:
в которой:
10
11
12
13
1
20
каждый Z, Z, Z и Z независимо выбирают из CR и CR';
при этом:
20
от нуля до одного R представляет собой солюбилизирующую группу;
1
1
3
от нуля до одного R' необязательно замещен C-C прямым или разветвленным алкилом; а
21
1
1
R выбирают из -NR'-C(O)-, и -C(O)-NR' а
31
R выбирают из необязательно замещенного моноциклического или бициклического арила и необязательно замещенного моноциклического или бициклического гетероарила при условии, что: указанное соединение не является:
[00256] В некоторых вариантах осуществления, соединение, активирующее сиртуиновый путь, представляет собой соединение формулы:
или его соль, при этом:
23
24
3
каждый из R и R независимо выбирают из H, CH и солюбилизирующей группы;
25
R выбирают из Н и солюбилизирующей группы; а
19
R представляет собой:
в которой:
10
11
12
13
1
20
каждый Z, Z, Z и Z независимо выбирают из CR и CR";
при этом:
20
от нуля до одного R представляет собой солюбилизирующую группу; а
1
1
3
от нуля до одного R" необязательно замещен C-C прямым или разветвленным алкилом;
20
каждый R независимо выбирают из Н и солюбилизирующей группы;
21
1
1
R выбирают из -NR'-C(O)- и -C(O)-NR’; а
1
1
3
1
1
1
1
2
2
3
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
k
k
2
a
a
a
a
a
a
a
b
a
b
a
a
b
a
a
a
b
a
a
a
a
b
c
c
a
c
a
b
a
a
b
C
c
a
c
a
b
a
a
b
c
c
a
c
a
b
d
d
a
d
a
b
d
C
d
c
a
d
c
a
b
a
a
a
b
a
a
b
c
a
b
c
a
c
a
b
a
a
a
каждый R' независимо выбирают из Н и необязательно замещенного C-C прямого или разветвленного алкила, при этом когда R' и/или R" замещен, R' и/или R" замещен одним или более из -OH, галогена, -OR, -O-COR, -COR, -C(О)R, -CN, -NO, -COOH, -COOR, -OCOR, -C(О)NRR, -OC(О)NRR, -SOH, -NH, -NHR, -N(RR), -COOR, -CHO, -CONH, -CONHR, -CON(RR), -NHCOR, -NRCOR, -NHCONH, -NHCONRH, -NHCON(RR), -NRCONH, -NRCONRH, -NRCON(RR), -C(=NH)-NH, -C(=NH)-NHR, -C(=NH)-N(RR), -C(=NR)-NH, -C(=NR)-NHR, -C(=NR)-N(RR), -NH-C(=NH)-NHR, -NH-C(=NH)-N(RR), -NH-C(=NR)-NH, -NH-C(=NR)-NHR, -NH-C(=NR)-N(RR), -NR-C(=NH)-NH, -NR-C(=NH)-NHR, -NR-C(=NH)-N(RR), -NR-C(=NR)-NH, -NR-C(=NR)-NHR, -NR-C(=NR)-N(RR), -NHNH, -NHNHR, -SONH, -SONHR, -SONRR, -CH=CHR, -CH=CRR, -CR=CRR, CR=CHR, -CR=CRR, -CCR, -SH, -SOR, -S(О)OR и -NH-C(=NH)-NH, при этом k представляет собой 0, 1 или 2;
a
d
каждый из R-R независимо представляет собой алифатическую, замещенную алифатическую, бензильную, замещенную бензильную, ароматическую или замещеную ароматическую группу; а
a
b
-NRR, взятые вместе, также могут образовать замещенную или незамещенную неароматическую гетероциклическую группу;
при этом неароматическая гетероциклическая группа, бензиловая группа или арильная группа в качестве заместителя также могут иметь алифатическую или замещенную алифатическую группу; a замещенная алифатическая группа в качестве заместителя также может иметь неароматическое гетероциклическое кольцо, замещенное неароматическое гетероциклическое кольцо, бензильную, замещенную бензильную, арильную или замещенную арильную группу; а замещенная алифатическая, неароматическая гетероциклическая группа, замещенная арильная или замещенная бензильная группа могут иметь более чем один заместитель; а
31
31
R выбирают из необязательно замещенного моноциклического или бициклического арила и необязательно замещенного моноциклического или бициклического гетероарила, при условии, что R не является 2,4-диметоксифенилом.
[00257] В различных других вариантах осуществления, композиции изготовлены в виде готовой формы таким образом, чтобы они не содержали в своем составе (или исключали) один или более следующих ингредиентов: кофеин, экстракт зеленого чая или экстракты из семян гуараны или растений гуараны.
[00258] В других вариантах осуществления, активатором сиртуинового пути или активатором пути AMPK может быть иризин, хинная кислота, коричная кислота, феруловая кислота, фукоксантин, бигуанид (например, метформин), росиглитазон или любой их аналог. В качестве альтернативы активатором сиртуинового пути или активатором пути AMPK могут быть изофлавоны, пиролоквинолин (PQQ), кверцетин, L-карнитин, липоевая кислота, кофермент Q10, пируват, 5-аминоимидазол-4-карбоксамид риботид (ALCAR), безфибрат, олтипраз и/или квенистеин. В некоторых вариантах осуществления, активатором сиртуинового пути является ингибитор PDE.
[00259] В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать комбинации метформина, ресвератрола и аминокислоты с разветвленной цепью или ее метаболита. Например, композиция может содержать метформин, ресвератрол и HMB, или композиция может содержать метформин, ресвератрол и лейцин. Комбинации метформина, ресвератрола и аминокислоты с разветвленной цепью могут вызывать увеличение окисления жирных кислот свыше 700, 800, 900, 1000, 1200, 1400, 1600 или 1800%.
[00260] В некоторых вариантах осуществления, композиция может содержать синергические комбинации активаторов сиртуинового пути. Например, композиция может содержать синергические количества метформина и ингибитора PDE. В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит метформин и кофеин.
[00261] В некоторых вариантах осуществления, активатором сиртуинового пути может быть средство, которое стимулирует экспрессию Fndc5, PGC1-α или UCP1. Экспрессия может быть измерена в показателях уровня экспрессии гена или белка. В качестве альтернативы, активатором сиртуинового пути может быть иризин. Способы повышения уровня иризина описаны у Bostrom et al, "A PGC1-α-dependent myokine, that drives brown-fat-like development of white fat and thermogenesis," Nature, Jan 11, 2012.
2
[00262] В некоторых вариантах осуществления, активатором являются флавоны или халкон. В одном варианте осуществления, иллюстративными активаторами сиртуина являются активаторы, описанные у Howitz et al. (2003) Nature 425:191, которые включают, например, ресвератрол (3,5,4'-Тригидрокси-транс-стильбен), бутеин (3,4,2',4'-Тетрагидроксихалкон), пицеатаннол (3,5,3',4'-Тетрагидрокси-транс-стильбен), изоликвиритигенин (4,2',4'-Тригидроксихалкон), физетин (3,7,3',4'-Тетрагидроксифлавон), кверцетин (3,5,7,3’,4'-пентагидроксифлавон), деоксирапонтин (3,5-Дигидрокси-4'-метоксистильбен 3-Ο-β-D-глюкозид); транс-Стильбен; Рапонтин (3,3',5-Тригидрокси-4'-метоксистильбен 3-Ο-β-D-глюкозид); цис-Стильбен; Бутеин (3,4,2',4'-Тетрагидроксихалкон); 3,4,2'4'6'-пентагидроксихалкон; Халкон; 7,8,3',4'-Тетрагидроксифлавон; 3,6,2',3'-Тетрагидроксифлавон; 4'-Гидроксифлавон; 5,4'-Дигидроксифлавон 5,7-Дигидроксифлавон; Морин (3,5,7,2',4'-пентагидроксифлавон); Флавон; 5-Гидроксифлавон; (-)-Эпикатехин (Гидрокси участки: 3,5,7,3',4'); (-)-Катехин (Гидрокси участки: 3,5,7,3',4'); (-)-Галлокатехин (Гидрокси участки: 3,5,7,3',4',5') (+)-Катехин (Гидрокси участки: 3,5,7,3',4'); 5,7,3',4',5'-пентагидроксифлавон; лютеолин (5,7,3',4'-тетрагидроксифлавон); 3,6,3’,4'-тетрагидроксифлавон; 7,3',4',5'-тетрагидроксифлавон; кемпферол (3,5,7,4'-тетрагидроксифлавон); 6-Гидроксиапигенин (5,6,7,4'-тетрагидроксифлавон); Скутеллареин); Апигенин (5,7,4'-тригидроксифлавон); 3,6,2',4'-Тетрагидроксифлавон; 7,4'-дигидроксифлавон; дайдзеин (7,4'-Дигидроксиизофлавон); квенистеин (5,7,4'-Тригидроксифлаванон); Нарингенин (5,7,4'-тригидроксифлаванон); 3,5,7,3',4'-Пентагидроксифлаванон; Флаванон; пеларгонидинхлорид (3,5,7,4'-Тетрагидроксифлавилиум хлорид); хинокитиол (b-Туйяплицин; 2-гидрокси-4-изопропил-2,4,6-циклогептатриен-1-он); L-(+)-Эрготионеин ((S)-a-карбокси-2,3-дигидро-N,N,N-триметил-2-тиоксо-1H-имидазол-4-этанаминиум внутренняя соль); сложный фениловый эфир кофеиновой кислоты; MCI-186 (3-метил-1-фенил-2-пиразолин-5-он); HBED (N,N'-ди-(2-гидроксибензил) этилендиамин-N,N'-диацетилуксусная кислота-HO); амброксол (транс-4-(2-Амино-3,5-дибромбензиламино) циклогексан-HCl; и U-83836E ((-)-2-((4-(2,6-ди-1-Пирролидинил-4-пиримидинил)-1-пиперзаинил)метил)-3,4-дигидро-2,5,7,8-тетраметил-2H-1-бензопиран-6-ол.2HCl). Также могут быть использованы их аналоги и производные.
[00263] Представленная заявка предоставляет композиции, пригодные для стимулирования увеличения окисления жирных кислот и митохондриального биогенеза у больного. Подобные композиции содержат в своем составе: HMB в комбинации с ресвератролом; лейцин в комбинации с ресвератролом; как лейцин, так и HMB в комбинации с ресвератролом; KIC в комбинации с ресвератролом; как KIC, так и HMB в комбинации с ресвератролом; как KIC, так и лейцин в комбинации с ресвератролом; или KIC, HMB и лейцин в комбинации с ресвератролом.
[00264] Ингибиторы фосфодиэстеразы
[00265] В некоторых вариантах осуществления, активатор сиртуинового пути модулирует активность фосфодиэстеразы (PDE). В некоторых вариантах осуществления, активатором сиртуинового пути является ингибитор PDE, например, неспецифический ингибитор PDE. Ингибиторы PDE могут встречаться в природе или не встречаться в природе (например, изготовленные), и могут быть предоставлены в виде природного источника, содержащего ингибитор PDE или его экстракт (например, очищенный). Примеры неспецифических ингибиторов PDE включают, но без ограничения, кофеин, теофиллин, теобромин, 3-изобутил-1-метилксантин (IBMX), пентоксифиллин (3,7-дигидро-3,7-диметил-1-(5оксогексил)-1H-пурин-2,6-дион), аминофиллин, параксантин и соли, производные, метаболиты, катаболиты, анаболиты, прекурсоры и их аналоги. Неограничивающие примеры природных источников ингибиторов PDE включают кофе, чай, гуарану, падуб парагвайский, какао и шоколад (например, темный шоколад).
[00266] В некоторых вариантах осуществления, ингибитор PDE вводят вместо ресвератрола или в дополнение к нему или другому активатору сиртуинового пути. В некоторых вариантах осуществления, композиции, содержащие один или более компонентов, описанных в данном документе, содержат ингибитор PDE вместо ресвератрола или в дополнение к нему или другому активатору сиртуинового пути. Обычно, ингибитор PDE предоставляют в количестве, которое является синергическим с одним или более другими компонентами композиции или способа лечения.
[00267] Аминокислоты с разветвленными цепями
[00268] Изобретение предусматривает композиции, которые включают аминокислоты с разветвленными цепями. Аминокислоты с разветвленными цепями могут иметь алифатические боковые цепи с атом углерода ответвления, который связан с двумя или более другими атомами. Другими атомами могут быть атомы углерода. Примеры аминокислот с разветвленными цепями включают лейцин, изолейцин и валин. Аминокислоты с разветвленными цепями также могут включать другие соединения, например, 4-гидроксиизолейцин. В некоторых вариантах осуществления, композиции могут по существу не содержать одну или более или все аминокислоты с неразветвленными цепями. Например, композиции могут не содержать аланин, аргинин, аспарагин, аспарагиновую кислоту, цистеин, глутаминовую кислоту, глутамин, глицин, гистидин, лизин, метионин, фенилаланин, пролин, серин, треонин, триптофан и/или тирозин. В некоторых вариантах осуществления, композиции могут по существу не содержать изолейцин и/или валин.
[00269] Не ограничиваясь теорией, прием внутрь аминокислот с разветвленными цепями, например, лейцина, могут стимулировать синтез белка ткани посредством как mTOR-зависимых, так и независимых путей, а также оказывать антипротеолитическое действие. Данные действия преобладают в мышцах, но также могут проявляться в других тканях, включая жировую ткань. Учитывая энергетическую стоимость синтеза и обмена белка, лейцин может увеличивать окисление жирных кислот и использование чистой энергии и ослаблять ожирение. На самом деле, сообщалось, что лейцин оказывает термогенный эффект и повышает потерю массы и жировой ткани в процессе энергетического ограничения. Также, лейцин и диеты, обогащенные лейцином, могут благоприятно модулировать паттерны воспалительных цитокинов в адипоцитах и у мышей.
[00270] В некоторых вариантах осуществления, любые из композиций, описанных в данном документе, могут включать соли, производные, метаболиты, катаболиты, анаболиты, прекурсоры и аналоги любой из аминокислот с разветвленными цепями. Например, метаболиты аминокислот с разветвленными цепями могут включать гидроксиметилбутират (HMB), α-гидроксиизокапроновую кислоту и кетоизокапроновую кислоту (KIC), кетоизовалерат и кетоизокапроат. Неограничивающие иллюстративные анаболиты аминокислот с разветвленными цепями могут включать глутамат, глутамин, треонин, α-кетобутират, α-ацето-α-гидроксибутират, α,β-дигидрокси-β-метилвалерат, α-кето-β-метилвалерат, α,β-дигидроксиизовалерат и α-кетоизовалерат.
[00271] В некоторых вариантах осуществления изобретения, любая из композиций, раскрытых в данном описании, может быть составлена таким образом, чтобы они не содержали в своем составе (или исключали) одну или более аминокислот, выбранных из группы, состоящей из лизина, глутамата, пролина, аргинина, валина, изолейцина, аспарагиновой кислоты, аспарагина, глицина, треонина, серина, фенилаланина, тирозина, гистидина, аланина, триптофана, метионина, глутамина, таурина, карнитина, цистина и цистеина. Композиции могут по существу не содержать каких-либо аминокислот с неразветвленной цепью. Масса или молярное количество аминокислоты с неразветвленной цепью может быть менее чем 0,01, 0,1, 0,5, 1, 2 или 5 % общей композиции.
[00272] Витамин B6
[00273] Не ограничиваясь какой-либо конкретной теорией или режимом действия, увеличение активного метаболита B6 (пиридоксаль фосфата) может уменьшить тонус и активность кальциевого канала адипоцитов. Внутриклеточный свободный Ca2+ является основным регулятором экспрессии и активности синтазы жирных кислот адипоцитов, который может приводить к подавлению как экспрессии, так и активности синтазы жирных кислот, что, в свою очередь, является одной из лимитирующих скорость стадий синтеза нейтральных липидов в адипоцитах.
[00274] Как использовано в данном описании, витамин B6 содержит различные формы, включая пиридоксин, пиридоксин 5’-фосфат, пиридоксал, пиридоксаль фосфат, пиридоксаль 5’-фосфат, пиридоксамин, пиридоксамин 5’-фосфат. В других вариантах осуществления, витамин B6 также может содержать 4-пиридоксиновую кислоту, которая является катаболитом приведенных выше форм экскретируемого витамина B6. Композиции, описанные в данном документе, могут включать любую одну или более из данных форм витамина B6.
[00275] Активной формой витамина B6 в организме является пиридоксаль 5-фосфат, который представляет собой кофермент для всех реакций трансаминирования и некоторых реакций декарбоксилирования и деаминирования. Кроме того, пиридоксаль 5-фосфат необходим в качестве кофермента для всех реакций трансаминирования, которые происходят в организме (Peterson D L, Martinez-Carrion M. The mechanism of transamination. Function of histidyl residue at the active site of supernatant aspartate transaminase. J Biol Chem. 1970 Feb. 25; 245(4):806-13).
[00276] В некоторых вариантах осуществления, любая из композиций, описанных в данном документе, может содержать соли, производные, метаболиты, катаболиты, анаболиты, прекурсоры и аналоги любой из форм витамина B6. Иллюстративные катаболиты витамина B6 включают 2-метил-3-гидрокси-5-формилпиридин-4-карбоксилат и 3-гидрокси-2-метилпиридин-4,5,-дикарбоксилат. Иллюстративные аналоги витамина B6 описаны в патентах США № 7230009 и 6369042. Иллюстративные прекурсоры витамина B6 описаны в патенте США № 7495101.
[00277] Фармацевтически активные средства
[00278] Комбинированные композиции могут дополнительно содержать одно или более фармацевтически активных средств. Примеры терапевтически активных средств включают ибупрофен, альдорил и гемфеброзил, верапамил, максизид, диклофенак и метролол, мапролтилин, триазолам и миноксидил. Например, комбинированные композиции могут содержать фармацевтически активное противодиабетическое средство, средство для потери массы или средство регулирования кальция. Патент США № 7109198 и патентная Заявка США № 20090142336 описывают множество фармацевтически активных средств или терапевтически активных средств, подходящих для включения в комбинированную композицию, описанную в данном документе. Примеры противодиабетических средств включают бигуаниды (например, метформин), тиазоладиндионы и меглитиниды (например, Репаглинид, пиоглитазон и росиглитазон), ингибиторы альфаглюкозидаз (например, акарбозы), сульфонилмочевины (например, толбутамид, ацетогексамид, толазамид, хлорпропамид, глипизид, глибурид, глимепирид, гликлазид), инкретины, алкалоиды спорыньи (например, бромокриптин) и ингибиторы DPP (например, ситаглиптин, вилдаглиптин, саксаглиптин, линглиптин, дутоглиптин, гемиглиптин, алоглиптин и берберин). Противодиабетическим средством может быть пероральное противодиабетическое средство. Противодиабетическим средством также могут быть инъекционные противодиабетические лекарственные препараты, включая инсулин, аналоги амилина (например, прамлинтид) и инкретиномиметики (например, эксенатид и лираглутид). Примеры терапевтических средств против ожирения включают ингибиторы липазы (например, орлистат), допаминергические, норадренергические и серотонинэргические соединения, антагонисты каннабиноидных рецепторов (например, римонабант), эксенатид, прамлинтид и агенты ЦНС (например, топимерат). Данные примеры предоставлены только с целью обсуждения, и предназначены для показа широкой сферы применения изобретения для большого разнообразия лекарственных препаратов. Это никоим образом не подразумевает ограничение объема правовых притязаний изобретения.
[00279] В некоторых вариантах осуществления, один или более компонентов, описанных в данном документе, например, ресвератрол, лейцин, HMB и KIC, могут быть объединены с двумя или более фармацевтически активными средствами. Например, активатор сиртуинового пути может быть объединен с глипизидом и метформином, глибуридом и метформином, пиоглитазоном и глимепиридом, пиоглитазоном и метформином, репаглинидом и метформином, росиглитазоном и глимепиридом, росиглитазоном и метформином, или ситаглиптином и метформином.
[00280] Количество фармацевтического средства или любого другого компонента, используемого в комбинированной композиции, описанной в данном документе, может быть использовано в количестве, которое является субтерапевтическим. В некоторых вариантах осуществления, использование субтерапевтических количеств средства или компонента может уменьшить побочные действия средства. Использование субтерапевтических количеств может все-таки быть эффективным, в частности, при использовании в синергизме с другими агентами или компонентами.
[00281] Субтерапевтическое количество средства или компонента может быть такое, чтобы оно составляло количество ниже того, которое считалось бы терапевтическим. Например, директивы FDA могут предлагать точно определенный уровень дозирования для лечения конкретного состояния, и субтерапевтическим количеством был бы любой уровень, который ниже предлагаемого FDA уровня дозирования. Субтерапевтическое количество может быть приблизительно на 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 50, 75, 90 или 95% меньше, чем количество, которое считается терапевтическим количеством. Терапевтическое количество может оцениваться для отдельных больных или для групп больных. Группой больных могут быть все потенциальные больные или больные, имеющие отдельную характеристику, например, возраст, масса, раса, пол или уровень физической активности.
[00282] В случае метформина гидрохлорида, предлагаемая врачом начальная доза составляет 1000 мг ежедневно, при этом специфичное для больного дозирование имеет диапазон, составляющий от 500 мг до максимально 2500 мг ежедневно (маркировка таблеток с пролонгированным высвобождением метформина гидрохлорида www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/ label/2008/021574s0101bl.pdf). Конкретное дозирование для больного может определяться клиницистом с помощью титрования дозы и измерения терапевтической реакции. Терапевтический уровень дозирования может определяться посредством измерения уровней глюкозы в плазме натощак и измерения гликозилированного гемоглобина. Субтерапевтическим количеством может быть любой уровень, который будет ниже рекомендованного дозирования метформина. Например, если определено, что терапевтический уровень дозирования больного составляет 700 мг ежедневно, субтерапевтическим количеством будет доза, равная 600 мг. В качестве альтернативы, вместо отдельного больного субтерапевтическое количество может быть определено по отношению к группе больных. Например, если среднее терапевтическое количество метформина для больных с массой свыше 300 фунтов составляет 2000 мг, то субтерапевтическим количеством может быть любое количество ниже 2000 мг. В некоторых вариантах осуществления, дозирование может быть рекомендовано поставщиком медицинских услуг, включая, но без ограничения, врача пациента, медсестру, диетолога, фармацевта или другого работника здравоохранения. Работник здравоохранения может включать персону или субъекта, который связан с системой здравоохранения. Примеры работников здравоохранения могут включать хирургов, стоматологов, отоларингологов, дефектологов, врачей (включая врачей общей практики и специалистов), ассистентов врачей, медсестер, акушерок, фармаэкономистов/фармацевтов, диетологов, терапевтов, психологов, физиотерапевтов, флеботомистов, специалистов по трудотерапии, оптиков, хиропрактов, клинических служащих, специалистов по оказанию неотложной помощи, фельдшеров, специалистов медицинских лабораторий, рентгенологов, социальных работников, медицинских техников-протезистов и большое множество других трудовых ресурсов, обученных обеспечивать некоторую область здравоохранения.
[00283] Величина дозировки
[00284] В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит некоторое количество активатора сиртуинового пути, например, полифенола (например, ресвератрола). Количеством активатора сиртуинового пути может быть субтерапевтическое количество и/или количество, которое является синергическим с одним или более других соединений в композиции или одним или более других соединений, вводимых одновременно или в непосредственной временной близости с композицией. В некоторых вариантах осуществления, активатор сиртуинового пути вводят в низкой дозе, средней дозе или высокой дозе, которая описывает связь между двумя дозами, и в общем не определяет какой-либо конкретный диапазон доз. Например, суточная низкая доза ресвератрола может содержать приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 0,5 мг/кг, 1 мг/кг, 2,5 мг/кг, 5 мг/кг, 7,5 мг/кг, 10 мг/кг, 12,5 мг/кг, 15 мг/кг, 20 мг/кг, 25 мг/кг, 50 мг/кг, 75 мг/кг, 100 мг/кг или более; суточная средняя доза ресвератрола может содержать приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 20 мг/кг, 25 мг/кг, 50 мг/кг, 75 мг/кг, 100 мг/кг, 125 мг/кг, 150 мг/кг, 175 мг/кг, 200 мг/кг, 250 мг/кг или более; а суточная высокая доза ресвератрола может содержать приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 150 мг/кг, 175 мг/кг, 200 мг/кг, 225 мг/кг, 250 мг/кг, 300 мг/кг, 350 мг/кг, 400 мг/кг или более.
[00285] В некоторых вариантах осуществления изобретения, больному необходимо вводить следующие количества лейцина, HMB, KIC, витамина D, витамина K2 и/или ресвератрола: лейцина приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 0,5-3,0 г/день (например, 0,5, 0,75, 1, 1,25, 1,5, 1,75, 2, 2,5, 3 или более г/день); HMB приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 0,20-3,0 г/день (например, 0,2, 0,4, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3 или более г/день); KIC приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 0,2-3,0 г/день (например, 0,2, 0,4, 0,5, 0,75, 1, 1,25, 1,5, 1,75, 2, 2,5, 3 или более г/день); витамина D приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 2,5-25 мкг/день (например, 2,5, 5, 7,5, 10, 12,5, 15, 17,5, 20, 25 или более мкг/день); витамина K2 приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 5-200 мкг/день (например, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200 или более мкг/день); и/или ресвератрола приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 10-500 мг/день (например, 10, 25, 50, 51, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500 или более мг/день). Соответственно, один вариант осуществления предоставляет композицию, содержащую лейцин в количестве от приблизительно 0,75 до приблизительно 3,0 г (0,75-3,0 г) и ресвератрол в количестве между приблизительно 50 и приблизительно 500 мг (или от 50 до 500 мг). Еще один вариант осуществления предоставляет композицию, содержащую HMB в количестве 0,40-3,0 г (или 0,40-3,0 г) и ресвератрол в количестве между 50-500 мг (или от 50 до 500 мг). Еще один вариант осуществления предусматривает композицию, содержащую лейцин в количестве приблизительно 0,75 - приблизительно 3,0 г (или 0,75-3,0 г), HMB в количестве приблизительно 0,40 и приблизительно 3,0 г (или 0,40-3,0 г) и ресвератрол в количестве между приблизительно 50 и приблизительно 500 мг (или от 50 до 500 мг). В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит ингибитор PDE в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит активатор сиртуинового пути в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, ресвератрол заменяют ингибитором PDE или другим активатором сиртуинового пути в синергетическом количестве. В композициях, содержащих ингибитор PDE, или в способах, включающих введение ингибитора PDE (раздельно или одновременно с одним или более другими компонентами), ингибитор PDE может быть предоставлен в количестве, которое создает пиковую концентрацию в плазме приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500, 1000, 2500, 5000, 10000 или более нМ.
[00286] Еще один аспект изобретения предоставляет композиции, содержащей синергетические количества ресвератрола и лейцина; ресвератрола и HMB; ресвератрола, лейцина и HMB; ресвератрола и KIC; ресвератрола, KIC и лейцина; ресвератрола, KIC и HMB; или ресвератрола, KIC, лейцина и HMB. В некоторых вариантах осуществления, синергетическим количеством ресвератрола является количество, равное по меньшей мере 35 мг ресвератрола и не больше чем 500 (или приблизительно 500) мг ресвератрола (например, 35, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 или 500 мг ресвератрола) в комбинации с лейцином и/или HMB. Синергетические количества лейцина и/или KIC в композиции, содержащей в своем составе лейцин и/или KIC и ресвератрол, могут колебаться от приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 0,50 до 3,0 г (или от приблизительно 0,50 до приблизительно 3,0 г; например, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3 или более грамм) или 0,75-3,0 г (или от приблизительно 0,75 до 3,0 г; например, 0,75, 1, 1,25, 1,5, 1,75, 2, 2,5, 3 или более грамм). Синергетические количества HMB, предоставленные в композиции, содержащий в своем составе HMB и ресвератрол, содержат HMB в количестве приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 0,20-3,0 г (или от приблизительно 0,20 до приблизительно 3,0 г; например, 0,2, 0,4, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3 или более грамм). В некоторых вариантах осуществления, где в композиции используются комбинации лейцина и KIC, общее количество лейцина и KIC меньше или равно 3,0 г (или меньше, чем приблизительно 3,0 г; например, меньше, чем приблизительно 0,7, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3 грамм) и по меньшей мере (или по меньшей мере приблизительно) 0,70 г (например, по меньшей мере приблизительно 0,7, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3 грамм). В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит ингибитор PDE в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит активатор сиртуинового пути в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, ресвератрол заменяют ингибитором PDE или другим активатором сиртуинового пути в синергетическом количестве. В композициях, содержащих ингибитор PDE, или в способах, включающих введение ингибитора PDE (раздельно или одновременно с одним или более другими компонентами), ингибитор PDE может быть предоставлен в количестве, которое создает пиковую концентрацию в плазме приблизительно, менее чем приблизительно или более чем приблизительно 0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500, 1000, 2500, 5000, 10000 или более нМ.
[00287] Еще один вариант осуществления предусматривает композицию, содержащую в своем составе синергетические количества HMB, лейцин и ресвератрол. В подобных композициях, общее количество лейцина и HMB в композиции может быть меньше, чем 3,0 г (или меньше, чем приблизительно 3,0 г; например, меньше, чем приблизительно 0,7, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3 грамм) и по меньшей мере 0,70 г (или по меньшей мере приблизительно 0,70 г; например, по меньшей мере приблизительно 0,7, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3 грамм). Композиции, содержащие в своем составе как лейцин, так и HMB, могут содержать количества лейцина и HMB, которые составляют в общей сложности приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно от 0,70 г до 3,0 г (от приблизительно 0,70 г до приблизительно 3,0 г; например, 0,7, 1, 1,25, 1,5, 1,75, 2, 2,5, 3 или более грамм), от 0,75 г до 3,0 г (от приблизительно 0,75 г до приблизительно 3,0 г) или от 1,0 г до 3,0 г (от приблизительно 1,0 г до приблизительно 3,0 г) в композиции, и ресвератрол в синергетических количествах (по меньшей мере 35 мг ресвератрола и не более чем 500 (или приблизительно 500) мг ресвератрола (например, приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 35, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 или 500 мг ресвератрола) или количество ресвератрола между 50 и 500 мг (или от приблизительно 50 до приблизительно 500 мг). В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит ингибитор PDE в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит активатор сиртуинового пути в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, ресвератрол заменяют ингибитором PDE или активатором сиртуинового пути в синергетическом количестве. В композициях, содержащих ингибитор PDE, или в способах, включающих введение ингибитора PDE (раздельно или одновременно с одним или более другими компонентами), ингибитор PDE может быть предоставлен в количестве, которое создает пиковую концентрацию в плазме приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500, 1000, 2500, 5000, 10000 или более нМ.
[00288] Еще один вариант осуществления предусматривает композицию, содержащую в своем составе синергетические количества HMB, лейцина, KIC и ресвератрола. В подобных композициях, общее количество лейцина, KIC и HMB в композиции может быть меньше, чем 3,0 г (или меньше, чем приблизительно 3,0 г; например, меньше, чем приблизительно 0,7, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3 грамм) и по меньшей мере 0,70 г (или по меньшей мере приблизительно 0,70 г; например, по меньшей мере приблизительно 0,7, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3 грамм). Соответственно, композиции, содержащие в своем составе лейцин, KIC и HMB, могут содержать количества лейцина, KIC и HMB, которые составляют в общей сложности приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно от 0,70 г до 3,0 г (от приблизительно 0,70 г до приблизительно 3,0 г; например, 0,7, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3 грамм), от 0,75 г до 3,0 г (от приблизительно 0,75 г до приблизительно 3,0 г) или от 1,0 г до 3,0 г (от приблизительно 1,0 г до приблизительно 3,0 г) в композиции, и ресвератрол в синергетических количествах (по меньшей мере 35 мг ресвератрола и не более чем 500 (или приблизительно 500) мг ресвератрола (например, приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 35, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 или 500 мг ресвератрола) или количество ресвератрола между 50 и 500 мг (или от приблизительно 50 до приблизительно 500 мг). В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит ингибитор PDE в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит активатор сиртуинового пути в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, ресвератрол заменяют ингибитором PDE или активатором сиртуинового пути в синергетическом количестве. В композициях, содержащих ингибитор PDE, или в способах, включающих введение ингибитора PDE (раздельно или одновременно с одним или более другими компонентами), ингибитор PDE может быть предоставлен в количестве, которое создает пиковую концентрацию в плазме приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500, 1000, 2500, 5000, 10000 или более нМ.
[00289] Другие варианты осуществления также предоставляют композиции, содержащие: a) приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно от 50 до 100 мг ресвератрола (например, 50, 60, 70, 80, 90, 100 или более мг) и приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно от 400 мг до 500 мг HMB (например, 400, 425, 450, 475, 500 или более мг); b) приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно от 50 до 100 мг ресвератрола (например, 50, 60, 70, 80, 90, 100 или более мг) и приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно от 750 мг до 1250 мг лейцина (например, 750, 850, 950, 1050, 1150, 1250 или более мг); c) приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно от 50 до 100 мг ресвератрола (например, 50, 60, 70, 80, 90, 100 или более мг) и приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно от 750 мг до 1250 мг KIC (например, 750, 850, 950, 1050, 1150, 1250 или более мг); или d) приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно от 50 мг до приблизительно 100 мг ресвератрола (например, 50, 60, 70, 80, 90, 100 или более мг) и i) комбинацию HMB и KIC в количестве, равном приблизительно 400 мг и приблизительно 1250 мг (например, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1250 или более мг); ii) комбинацию HMB и лейцина в количестве, равном приблизительно 400 мг и приблизительно 1250 мг (например, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1250 или более мг); iii) комбинацию KIC и лейцина в количестве приблизительно 400 мг и приблизительно 1250 мг (например, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1250 или более мг); или iv) комбинацию HMB, KIC и лейцина в количестве, равном приблизительно 400 мг и приблизительно 1250 мг (например, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1250 или более мг). В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит ингибитор PDE в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит активатор сиртуинового пути в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, ресвератрол заменяют ингибитором PDE или активатором сиртуинового пути в синергетическом количестве. В композициях, содержащих ингибитор PDE, или в способах, включающих введение ингибитора PDE (раздельно или одновременно с одним или более другими компонентами), ингибитор PDE может быть предоставлен в количестве, которое создает пиковую концентрацию в плазме приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500, 1000, 2500, 5000, 10000 или более нМ.
[00290] В некоторых вариантах осуществления разовая доза может содержать ресвератрол в комбинации с одним или более другими компонентами. В некоторых вариантах осуществления, разовая доза содержит одно или более из: приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 50, 100, 200, 300, 400, 500 или более мг HMB; приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 10, 20, 30, 40, 50, 75, 100 или более мг ресвератрола; приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 2,5, 5, 7,5, 10, 12,5, 15, 17,5, 20 или более мг витамина B6; приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 2,5, 5, 7,5, 10, 12,5, 15, 17,5, 20, 25 или более мкг витамина D; приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 5, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200 или более мкг витамина K2; и приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1250, 1500 или более мг лейцина. Разовая доза может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 500 мг бета гидроксила, бета метилбутирата и приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 50 мг ресвератрола. Разовая доза может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 500 мг бета гидрокси, бета метилбутирата; и приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 50 мг ресвератрола; и приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 15 мг витамина B6. Разовая доза может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 1,125 г лейцина и приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 50 мг ресвератрола. Разовая доза может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 1,125 г лейцин, 50 мг ресвератрола и 15 мг витамина B6. Разовая доза может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 750 мг лейцина, 35 мг ресвератрола и 10 мг витамина B6. Разовая доза может содержать приблизительно 500 мг HMB, 51 мг ресвератрола (98%), 12,5 мкг витамина D, и 50 мкг витамина K2. В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит ингибитор PDE в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит активатор сиртуинового пути в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, ресвератрол заменяют ингибитором PDE или активатором сиртуинового пути в синергетическом количестве. В композициях, содержащих ингибитор PDE, или в способах, включающих введение ингибитора PDE (раздельно или одновременно с одним или более другими компонентами), ингибитор PDE может быть предоставлен в количестве, которое создает пиковую концентрацию в плазме приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500, 1000, 2500, 5000, 10000 или более нМ.
[00291] В некоторых вариантах осуществления разовая доза может содержать хлорогеновую кислоту (например, приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 25, 50, 75, 100, 150, 200 или мг) в комбинации с одним или более другими компонентами в приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно указанных количествах. Разовая доза может содержать 500 мг бета гидрокси, бета метилбутирата (например, 50, 100, 200, 300, 400, 500 или более мг) и 100 мг хлорогеновой кислоты. Разовая доза может содержать 500 мг бета гидрокси, бета метилбутирата (например, 50, 100, 200, 300, 400, 500 или более мг); и 100 мг хлорогеновой кислоты; и 15 мг витамина B6. Разовая доза может содержать 1,125 г лейцина (например, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1250 или более мг) и 100 мг хлорогеновой кислоты. Разовая доза может содержать 1,125 г лейцина (например, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1250 или более мг); 100 мг хлорогеновой кислоты; и 15 мг витамина B6 (например, 2,5, 5, 7,5, 10, 12,5, 15, 17,5, 20 или более мг). Разовая доза может содержать 750 мг лейцина, 75 мг хлорогеновой кислоты и 10 мг витамина B6.
[00292] В некоторых вариантах осуществления разовая доза может содержать хинную кислоту в приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно указанных количествах (например, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50 или более мг), в комбинации с одним или более другими компонентами в приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно указанных количествах. Разовая доза может содержать 500 мг бета гидрокси, бета метилбутирата (например, 50, 100, 200, 300, 400, 500 или более мг) и 25 мг хинной кислоты. Разовая доза может содержать 500 мг бета гидрокси, бета метилбутирата (например, 50, 100, 200, 300, 400, 500 или более мг), 25 мг хинной кислоты и 15 мг витамина B6 (например, 2,5, 5, 7,5, 10, 12,5, 15, 17,5, 20 или более мг). Разовая доза может содержать 1,125 г лейцина (например, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1250 или более мг) и 25 мг хинной кислоты. Разовая доза может содержать 1,125 г лейцина (например, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1250 или более мг), 25 мг хинной кислоты и 15 мг витамина B6 (например, 2,5, 5, 7,5, 10, 12,5, 15, 17,5, 20 или более мг). Разовая доза может содержать 750 мг лейцина, 15 мг хинной кислоты и 10 мг витамина B6.
[00293] В некоторых вариантах осуществления разовая доза может содержать фукоксантин в приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно указанных количествах (например, 0,5, 0,75, 1, 1,25, 1,5, 1,75, 2, 2,25, 2,5, 3, 5 или более мг) в комбинации с одним или более другими компонентами в приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно указанных количествах. Разовая доза может содержать 500 мг бета гидрокси, бета метилбутирата (например, 50, 100, 200, 300, 400, 500 или более мг) и 2,5 мг фукоксантина. Разовая доза может содержать 500 мг бета гидрокси, бета метилбутирата (например, 50, 100, 200, 300, 400, 500 или более мг), 2,5 мг фукоксантина и 15 мг витамина B6 (например, 2,5, 5, 7,5, 10, 12,5, 15, 17,5, 20 или более мг). Разовая доза может содержать 1,125 г лейцина (например, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1250 или более мг) и 2,5 мг фукоксантина. Разовая доза может содержать 1,125 г лейцина (например, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1250 или более мг), 2,5 мг фукоксантина и 15 мг витамина B6 (например, 2,5, 5, 7,5, 10, 12,5, 15, 17,5, 20 или более мг). Разовая доза может содержать 750 мг лейцина, 1,5 мг фукоксантина и 10 мг витамина B6.
[00294] В некоторых вариантах осуществления, композиция содержит некоторое количество противодиабетического средства, например, бигуанида (например, метформина). Количеством противодиабетического средства может быть субтерапевтическое количество и/или количество, которое является синергическим с одним или более другими соединениями в композиции или с одним или более другими соединениями, вводимыми одновременно или в тесной временной близости с композицией. В некоторых вариантах осуществления, антидиабетическое средство вводят в очень низкой дозе, низкой дозе, средней дозе или высокой дозе, которая описывает связь между двумя дозами, и в общем не определяет какой-либо конкретный диапазон доз. Например, суточная очень низкая доза метформина может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 5 мг/кг, 10 мг/кг, 25 мг/кг, 50 мг/кг, 75 мг/кг, 100 мг/кг или более; суточная низкая доза метформина может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 75 мг/кг, 100 мг/кг, 150 мг/кг, 175 мг/кг, 200 мг/кг или более; суточная средняя доза метформина может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 150 мг/кг, 175 мг/кг, 200 мг/кг, 250 мг/кг, 300; а суточная высокая доза метформина может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 200 мг/кг, 250 мг/кг, 300 мг/кг, 350 мг/кг, 400 мг/кг, 500 мг/кг, 700 мг/кг или более.
[00295] В некоторых вариантах осуществления разовая доза может содержать метформин в приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно указанных количествах (например, 25, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500 или более мг) в комбинации с одним или более другими компонентами в приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно указанных количествах (например, 10, 20, 30, 40, 50, 75, 100 или более мг ресвератрола; 50, 100, 200, 300, 400, 500 или более мг HMB; и/или 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1250 или более мг лейцина). Разовая доза может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 50 мг метформина, 500 мг бета гидрокси, бета метилбутирата и 50 мг ресвератрола. Разовая доза может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 50 мг метформина, 1,125 г лейцина и 50 мг ресвератрола. Разовая доза может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 100 мг метформина, 500 мг бета гидрокси, бета метилбутирата и 50 мг ресвератрола. Разовая доза может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 100 мг метформина, 1,125 г лейцина и 50 мг ресвератрола. Разовая доза может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 250 мг метформина, 500 мг бета гидрокси, бета метилбутирата и 50 мг ресвератрола. Разовая доза может содержать приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 250 мг метформина, 1,125 г лейцина и 50 мг ресвератрола. В некоторых вариантах осуществления, композиция дополнительно содержит ингибитор PDE в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, метформиновая композиция дополнительно содержит активатор сиртуинового пути в синергетическом количестве. В некоторых вариантах осуществления, ресвератрол в иллюстративной композиции заменяют ингибитором PDE или активатором сиртуинового пути в синергетическом количестве. В композициях, содержащих ингибитор PDE, или в способах, включающих введение ингибитора PDE (раздельно или одновременно с одним или более другими компонентами), ингибитор PDE может быть предоставлен в количестве, которое создает пиковую концентрацию в плазме приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500, 1000, 2500, 5000, 10000 или более нМ.
[00296] В некоторых вариантах осуществления изобретения, комбинированные композиции могут иметь указанное соотношение аминокислот с разветвленными цепями и/или их метаболитов с активатором сиртуинового пути. Указанное соотношение может предусматривать эффективное и/или синергическое регулирование энергетического метаболизма. Например, указанное соотношение может вызывать уменьшение прибавления массы больного, уменьшение объема висцерального жира у больного, повышение окисления жира у больного, повышение чувствительности больного к инсулину, увеличение поглощения глюкозы мышцами у больного, уменьшение маркеров воспаления, увеличение расширения кровеносных сосудов и/или повышение температуры тела. Подобные положительные действия могут быть обусловлены, частично, увеличением митохондриального биогенеза или множеством других изменений энергетического метаболического пути. Соотношением аминокислот с разветвленными цепями и/или их метаболитов с активатором сиртуинового пути может быть массовое соотношение, молярное соотношение или объемное соотношение.
[00297] В некоторых вариантах осуществления, молярное соотношение (a) аминокислот с разветвленными цепями и/или их метаболитов с (b) активатором сиртуинового пути составляет приблизительно или более чем приблизительно 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 100, 120 или 150. В других вариантах осуществления, молярное соотношение одной или более аминокислот с разветвленными цепями и/или их метаболитов с активатором сиртуинового пути, содержащимся в представленных композициях, составляет приблизительно или более чем приблизительно 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 95, 100, 105, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 220, 250, 300, 350, 400 или 500. В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение компонента (a) к (b) в указанной композиции больше, чем приблизительно 20, 40, 60, 80, 100, 120 или 150. В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение компонента (a) к (b) в указанной композиции больше, чем приблизительно 80, 100, 120 или 150. В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение компонента (a) к (b) в указанной композиции больше, чем приблизительно 80, 100, 120 или 150. В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение компонента (a) к (b) в указанной композиции больше, чем приблизительно 200, 250 или 300. В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение компонента (a) к (b) в указанной композиции больше, чем приблизительно 40, 150, 250 или 500.
[00298] В некоторых вариантах осуществления, молярными или массовыми соотношениями являются молярные или массовые соотношения в кровотоке, достигаемые после введения одной или более композиций больному. Композициями могут быть комбинированные композиции, описанные в данном документе. Молярное соотношение комбинированной композиции в лекарственной форме можно регулировать для достижения необходимого молярного соотношения в кровотоке. Молярное соотношение можно регулировать с учетом биодоступности, поглощения и метаболической переработки одного или более компонентов комбинированной композиции. Например, если биодоступность компонента низкая, то молярное количество данного компонента может быть увеличено относительно других компонентов в комбинированной композиции. В некоторых вариантах осуществления, молярное или массовое соотношение в кровотоке достигается в пределах приблизительно 0,1, 0,5, 0,75, 1, 3, 5 или 10, 12, 24 или 48 часов после введения. Молярное или массовое соотношение в кровотоке может сохраняться в течение некоторого времени приблизительно или более чем приблизительно 0,1, 1, 2, 5, 10, 12, 18, 24, 36, 48, 72 или 96 часов.
[00299] В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение в кровотоке лейцина к ресвератролу (или активатору сиртуинового пути) составляет приблизительно или более чем приблизительно 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 10000, 50000 или более. В некоторых вариантах осуществления, массовое отношение лейцина к ресвератролу составляет приблизительно или более чем приблизительно 750, 1000, 1200, 1500, 1700, 2000 или 2500.
[00300] Молярное соотношение в кровотоке HMB к ресвератролу (или активатору сиртуинового пути) может быть приблизительно или более чем приблизительно 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 75, 100, 250, 500 или более. В некоторых вариантах осуществления, массовое соотношение HMB к ресвератролу составляет приблизительно или более чем приблизительно 1, 3, 6, 9, 12, 15, 20 или 25.
[00301] В некоторых вариантах осуществления, массовое соотношение в кровотоке HMB к ресвератролу (или активатору сиртуинового пути) составляет приблизительно или более чем приблизительно 100, 120, 140, 160, 180, 200, 220 или 250. В некоторых вариантах осуществления, массовое соотношение HMB к ресвератролу составляет приблизительно или более чем приблизительно 400, 600, 800, 1000, 1200 или 1400.
[00302] В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение в кровотоке HMB к хлорогеновой кислоте составляет приблизительно или более чем приблизительно 5, 10, 20 или 40. В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение лейцина к хлорогеновой кислоте составляет приблизительно или более чем приблизительно 500, 1000, 2000 или 4000.
[00303] В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение в кровотоке HMB к кофеиновой кислоте составляет приблизительно или более чем приблизительно 2, 5, 10 или 20. В некоторых вариантах осуществления, молярное соотношение лейцина к кофеиновой кислоте составляет приблизительно или более чем приблизительно 200, 500, 1000 или 2000.
[00304] В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение в кровотоке HMB к хинной кислоте составляет приблизительно или более чем приблизительно 5, 10, 20 или 40. В некоторых вариантах осуществления, молярное соотношение лейцина к хинной кислоте составляет приблизительно или более чем приблизительно 500, 1000, 2000 или 4000.
[00305] В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение в кровотоке HMB к коричной кислоте составляет приблизительно или более чем приблизительно 5, 10, 20 или 40. В некоторых вариантах осуществления, молярное соотношение лейцина к коричной кислоте составляет приблизительно или более чем приблизительно 500, 1000, 2000 или 4000.
[00306] В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение в кровотоке HMB к феруловой кислоте составляет приблизительно или более чем приблизительно 5, 10, 20 или 40. В некоторых вариантах осуществления, молярное соотношение лейцина к феруловой кислоте составляет приблизительно или более чем приблизительно 500, 1000, 2000 или 4000.
[00307] В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение в кровотоке HMB к пицеатаннолу составляет приблизительно или более чем приблизительно 2000, 5000, 10000 или 20000. В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение лейцина к пицеатаннолу составляет приблизительно или более чем приблизительно 200000, 500000, 1000000 или 2000000.
[00308] В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение в кровотоке HMB к эллаговой кислоте составляет приблизительно или более чем приблизительно 0,05, 0,1, 0,2 или 0,4. В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение лейцина к эллаговой кислоте составляет приблизительно или более чем приблизительно 5, 10, 20 или 40.
[00309] В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение в кровотоке HMB к галлату эпигаллокатехина составляет приблизительно или более чем приблизительно 2, 5, 10 или 20. В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение лейцина к галлату эпигаллокатехина составляет приблизительно или более чем приблизительно 200, 500, 1000 или 2000.
[00310] В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение в кровотоке HMB к фукоксантину составляет приблизительно или более чем приблизительно 20, 50, 100 или 200. В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение лейцина к фукоксантину составляет приблизительно или более чем приблизительно 2000, 5000, 10000 или 20000.
[00311] В некоторых вариантах осуществления, массовое отношение в кровотоке HMB к экстракту виноградных косточек составляет приблизительно или более чем приблизительно 0,3, 0,6, 1,2 или 2,4. В некоторых вариантах осуществления, массовое отношение лейцина к экстракту виноградных косточек составляет приблизительно или более чем приблизительно 30, 65, 130 или 260.
[00312] В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение в кровотоке HMB к метформину составляет приблизительно или более чем приблизительно 0,02, 0,05, 0,1 или 0,2. В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение лейцина к метформину составляет приблизительно или более чем приблизительно 2, 5, 10 или 20.
[00313] В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение в кровотоке HMB к росиглитазону составляет приблизительно или более чем приблизительно 10, 25, 50 или 100. В некоторых вариантах осуществления, молярное отношение лейцина к росиглитазону составляет приблизительно или более чем приблизительно 1000, 2500, 5000 или 10000.
[00314] Лекарственные формы
[00315] Композиции, описанные в данном документе, могут быть соединены в множестве различных лекарственных форм. Их можно использовать перорально в виде таблетки, жевательной таблетки, капсуловидных таблеток, капсулы, мягких желатиновых капсул, пастилок или раствора. Они также могут быть использованы в виде назального спрея или для инъекции, когда находятся в виде раствора. В некоторых вариантах осуществления, композицией может быть жидкая композиция, подходящая для перорального употребления. Композиции изобретения, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в виде отдельных лекарственных форм, например, капсул, крахмальных капсул или таблеток, или жидкостей или аэрозольных спреев, каждый из которых содержит в своем составе предварительно заданное количество активного ингредиента в виде порошка или в гранулах, раствора или суспензии в содержащей воду или не содержащей воду жидкости, эмульсии типа масло-в-воде или жидкой эмульсии типа вода-в-масле, включая жидкие лекарственные формы (например, суспензию или кашицу) и пероральные твердые лекарственные формы (например, таблетку или рыхлый порошок). Пероральные лекарственные формы могут быть составлены в виде таблеток, пилюль, драже, капсул, эмульсий, липофильных и гидрофильных суспензий, жидкостей, гелей, сиропов, кашиц, суспензий и тому подобное для перорального приема внутрь индвидуумом или пациентом, подлежащим лечению. Подобные лекарственные формы могут быть изготовлены посредством любого из способов технологии получения лекарственного препарата. Например, активные ингредиенты могут быть введены в соединение с носителем, который составляет один или более необходимых ингредиентов. Капсулы, подходящие для перорального введения, включают твердые капсулы, изготовленные из желатина, а также мягкие, герметичные капсулы, изготовленные из желатина и пластификатора, например, глицерина или сорбитола. Твердые капсулы могут содержать в своем составе активные ингредиенты в смеси с наполнителем, например, лактозой, связующими веществами, например, крахмалами, и/или смазочными веществами, например, тальком или стеаратом магния, и, необязательно, стабилизаторами. Необязательно, композиция изобретения для перорального использования может быть получена посредством перемешивания композиции и твердого эксципиента, необязательного измельчения полученной в результате смеси, и обработки смеси гранул, после добавления подходящих вспомогательных веществ, если необходимо, для получения таблеток или сердцевин драже. Подходящими эксципиентами в частности, являются наполнители, например, сахара, включая лактозу, сахарозу, маннитол или сорбитол; препараты целлюлозы, такие как например, кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, желатин, трагакантовая камедь, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, натриевая карбоксиметилцеллюлоза и/или поливинилпирролидон (PVP). В общем, композиции изготавливают посредством равномерного и тщательного перемешивания активного ингредиента с жидкими носителями или тонкоизмельченными твердыми носителями или и с тем и с другим, а затем, если необходимо, формования продукта в необходимую форму выпуска. Например, таблетка может быть изготовлена посредством прессования или формовки, необязательно с одним или более вспомогательными ингредиентами. Спрессованные таблетки могут быть изготовлены посредством прессования в подходящей машине активного ингредиента в сыпучей форме, например, порошка или гранул, необязательно перемешанного с эксципиентом, например, без ограничения, связующим веществом, смазочным веществом, инертным разбавителем и/или поверхностно-активным или диспергирующим средством. Формованные таблетки могут быть изготовлены посредством формовки в подходящей машине смеси порошкообразного соединения, смоченного инертным жидким разбавителем.
[00316] Жидкие формы, в которых лекарственные формы, раскрытые в данном описании, могут быть заключены для введения перорально или посредством инъекции, включают водный раствор, ароматизированные соответствующим образом сиропы, водные или масляные суспензии и ароматизированные эмульсии с пищевыми маслами, например, хлопковым маслом, кунжутным маслом, кокосовым маслом или арахисовым маслом, а также настойки и аналогичные фармацевтические среды. Подходящие диспергирующие или суспендирующие агенты для водных суспензий включают синтетические натуральные смолы, например, трагакант, камедь, альгинат, декстран, натриевую карбоксиметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, поливинилпирролидон или желатин.
[00317] Больной может быть подвергнут лечению комбинацией инъецируемой композиции и перорально принимаемой внутрь композиции.
[00318] Жидкие препараты для перорального введения могут принимать форму, например, растворов, сиропов или суспензий, или перед применением они могут быть представлены в виде сухого продукта для восстановления водой или другими подходящими средами. Подобные жидкие препараты могут быть изготовлены с помощью общепринятых средств с фармацевтически приемлемыми добавками, например, суспендирующими агентами (например, сорбитоловым сиропом, метилцеллюлозой или гидрогинизированными пищевыми жирами); эмульгирующими агентами (например, лецитином или камедью); неводными средами (например, миндальным маслом, масляными сложными эфирами или этиловым спиртом); консервантами (например, метиловым или пропиловым p-гидроксибензоатами или сорбиновой кислотой); и искусственными или натуральными красителями и/или подсластителями.
[00319] Получение фармацевтических композиций данного изобретения проводят в соответствии с общими принятыми методиками для получения фармацевтических препаратов. См. например, Remington's Pharmaceutical Sciences 18th Edition (1990), E. W. Martin ed. Mack Publishing Co. PA. В зависимости от предполагаемого использования и режима введения, при получении фармацевтических композиций может быть необходимо дополнительно обрабатывать соединение противоионов магния. Соответствующая обработка может включать смешивание с соответствующими нетоксичными и непротиворечащими компонентами, стерилизацию, разделение на единицы дозы и помещение в устройство доставки.
[00320] Данное изобретение дополнительно охватывает безводные композиции и лекарственные формы, содержащие активный ингредиент, поскольку вода может способствовать разрушению некоторых соединений. Например, вода может добавляться (например, 5%) в изделия в качестве средства имитирования долгосрочного хранения для того, чтобы определить характеристики, например, срок годности или стабильность лекарственных препаратов с течением времени. Безводные композиции и лекарственные формы изобретения могут быть изготовлены с использованием безводных ингредиентов или ингредиентов с низким содержанием влаги, и условий с низким содержанием влаги или низкой влажностью. Композиции и лекарственные формы изобретения, которые содержат в своем составе лактозу, могут быть изготовлены безводными, если ожидается существенный контакт с влагой и/или влажность в процессе производства, упаковывания и/или хранения. Безводная композиция может изготавливаться и храниться таким образом, чтобы сохранялась ее безводная природа. Соответственно, безводные композиции можно упаковывать с использованием материалов, которые как известно предотвращают воздействие воды, так что они могут быть включены в подходящие формулярные наборы. Примеры подходящей упаковки включают, но без ограничения, герметично закрытые из фольги, пластмассы и тому подобное, контейнеры с однократной дозой, блистерные упаковки и контурные упаковки.
[00321] Ингредиент, описанный в данном документе, может быть объединен с тщательным перемешиванием с фармацевтическим носителем согласно общепринятым фармацевтическим технологиям составления смесей. Носитель может принимать широкое множество форм в зависимости от формы препарата, необходимой для введения. При изготовлении композиции для пероральной лекарственной формы, в случае пероральных жидких препаратов (например, суспензий, растворов и эликсиров) или аэрозолей в качестве носителей может быть использована любая из обычных фармацевтических сред, такая как, например, вода, гликоли, масла, спирты, ароматизирующие средства, консерванты, окрашивающие средства и тому подобное; или в случае пероральных твердых препаратов, в некоторых вариантах осуществления не задействующих применение лактозы, могут быть использованы носители, например, крахмалы, сахара, микрокристаллическая целлюлоза, разбавители, гранулирующие агенты, смазочные вещества, связующие вещества и вещества для улучшения распадаемости таблеток. Например, подходящие носители включают порошки, капсулы и таблетки с твердыми пероральными препаратами. Если необходимо, таблетки могут быть покрыты с помощью стандартных водных или безводных технологий.
[00322] Некоторые примеры материалов, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают: (1) сахара, например, лактозу, глюкозу и сахарозу; (2) крахмалы, например, кукурузный крахмал и картофельный крахмал; (3) целлюлозу и ее производные, например, натриевую карбоксиметилцеллюлозу, этилцеллюлозу и ацетат целлюлозы; (4) порошковый трагакант; (5) солод; (6) желатин; (7) тальк; (8) эксципиенты, например, какао масло и воски для суппозиториев; (9) масла, например, арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; (10) гликоли, например, пропиленгликоль; (11) полиолы, например, глицерин, сорбитол, маннитол и полиэтиленгликоль; (12) сложные эфиры, например, этил олеат и этиллаурат; (13) агар; (14) буферные агенты, например, гидроксид магния и гидроксид алюминия; (15) альгиновую кислоту; (16) апирогенную воду; (17) изотонический раствор; (18) раствор рингера; (19) этиловый спирт; (20) фосфатно-буферные растворы; и (21) другие нетоксичные совместимые вещества, используемые в фармацевтических лекарственных формах.
[00323] Связующие вещества, подходящие для использования в лекарственных формах, включают, но без ограничения, кукурузный крахмал, картофельный крахмал или другие крахмалы, желатин, натуральные и синтетические смолы, например, камедь, альгинат натрия, альгиновую кислоту, другие альгинаты, порошковый трагакант, гуаровую камедь, целлюлозу и ее производные (например, этилцеллюлозу, ацетат целлюлозы, кальциевую карбоксиметилцеллюлозу, натриевую карбоксиметилцеллюлозу), поливинилпирролидон, метилцеллюлозу, предварительно желатинизированный крахмал, гидроксипропилметилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу и их смеси.
[00324] Смазочные вещества, которые могут быть использованы для образования композиций и лекарственных форм изобретения, включают, но без ограничения, стеарат кальция, стеарат магния, минеральное масло, легкое минеральное масло, глицерин, сорбитол, маннитол, полиэтиленгликоль, другие гликоли, стеариновую кислоту, лаурилсульфат натрия, тальк, гидрогенизированное растительное масло (например, арахисовое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло), стеарат цинка, этилолеат, этиллауреат, агар или их смеси. Дополнительные смазочные вещества включают, например, силоид силикагель, коагулированный аэрозоль синтетического кремния или их смеси. Необязательно может быть добавлено смазочное вещество в количестве меньше, чем приблизительно 1 массовый процент композиции.
[00325] Смазочные вещества также могут быть использованы в сочетании с тканевыми барьерами, которые включают, но без ограничения, полисахариды, полигликаны, сепрафильм, интерсид и гиалуроновую кислоту.
[00326] Разрыхлители могут быть использованы в композициях изобретения для предоставления таблеток, которые распадаются, подвергаясь воздействию водных окружающих условий. Слишком много разрыхлителя может создавать таблетки, которые могут распадаться во флаконе. Слишком мало может быть недостаточно для того, чтобы происходило распадение и может соответственно изменять скорость и степень высвобождения активного ингредиента (ингредиентов) из лекарственной формы. Соответственно, для образования лекарственных форм соединений раскрытых в данном описании, может быть использовано достаточное количество разрыхлителя, которое не является не слишком маленьким, ни слишком большим для негативного изменения высвобождения активного ингредиента (ингредиентов). Количество используемого разрыхлителя может варьировать на основании типа лекарственного препарата и режима введения, и может быть ясно видно рядовым специалистам в данной области. В фармацевтической композиции может быть использовано от приблизительно 0,5 до приблизительно 15 массовых процентов разрыхлителя или от приблизительно 1 до приблизительно 5 массовых процентов разрыхлителя. Разрыхлители, которые могут быть использованы для образования композиций и лекарственных форм изобретения, включают, но без ограничения, агар-агар, альгиновую кислоту, карбонат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, кроскармеллозу натрия, кросповидон, полакрилин калия, натрий кликолят крахмала, картофельный или маниоковый крахмал, другие крахмалы, предварительно желатинизированный крахмал, другие крахмалы, глины, другие альгины, другие целлюлозы, смолы или их смеси.
[00327] Примеры подходящих наполнителей для использования в композициях и лекарственных формах, раскрытые в данном описании включают, но без ограничения, тальк, карбонат кальция (например, гранулы или порошок), микрокристаллическую целлюлозу, порошковую целлюлозу, декстраты, каолин, маннитол, кремниевую кислоту, сорбитол, крахмал, предварительно желатинизированный крахмал и их смеси.
[00328] Когда для перорального введения необходимы водные суспензии и/или эликсиры, активный ингредиент в них может быть объединен с различными подслащивающими или ароматизирующими средствами, красящим веществом или красителями и, если необходимо, с эмульгирующими и/или суспендирующими агентами, вместе с такими разбавителями, как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин и их различные комбинации.
[00329] Таблетки могут иметь или не иметь покрытие с помощью известных технологий для отсрочки распадения и поглощения в желудочно-кишечном тракте и обеспечения пролонгированного действия в течение более длительного периода. Например, может быть использован материал с временной задержкой, например, глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат. Лекарственные формы для перорального использования также могут быть представлены в виде твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент перемешан с инертным твердым разбавителем, например, карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент перемешан с водой или масляной средой, например, арахисовым маслом, жидким парафином или оливковым маслом.
[00330] В одном варианте осуществления, композиция может содержать солюбилизатор для обеспечения хорошей солюбилизации и/или растворения соединения представленного изобретения и для минимизации осаждения соединения представленного изобретения. Это может быть особенно важно для композиций для неперорального использования, например, композиций для инъекции. Солюбилизатор также можно добавлять для увеличения растворимости гидрофильных лекарственных средств и/или других компонентов, например, поверхностно-активных веществ или для сохранения композиции в виде стабильного или гомогенного раствора или дисперсии.
[00331] Композиция может дополнительно содержать одну или более фармацевтически приемлемых добавок и эксципиентов. Подобные добавки и эксципиенты включают, без ограничения, средства для уменьшения вязкости, противовспенивающие средства, буферные агенты, полимеры, антиоксиданты, консерванты, комплексообразующие агенты, модуляторы вязкости, модифицирующие тоничность агенты, ароматизаторы, красители, отдушки, замутнители, суспендирующие агенты, связующие вещества, наполнители, пластификаторы, смазочные вещества и их смеси. Не исчерпывающий перечень примеров эксципиентов включает моноглицериды, стеарат магния, модифицированный пищевой крахмал, желатин, микрокристаллическую целлюлозу, глицерин, стеариновую кислоту, двуокись кремния, желтый пчелиный воск, лецитин, гидроксипропилцеллюлозу, кроскармелозу натрия и кросповидон.
[00332] Композиции, описанные в данном документе, также могут быть получены в виде готовой формы с пролонгированным высвобождением, с длительным высвобождением или с замедленным высвобождением, так чтобы один или более компонентов высвобождались с течением времени. Отсроченное высвобождение может достигаться посредством получения готовой формы с одним или более компонентами в матрице из множества материалов или посредством микрокапсулирования. Композиции могут быть получены в виде готовых форм с высвобождением одного или более компонентов в течение некоторого времени, равного 4, 6, 8, 12, 16, 20 или 24 часов. Высвобождение одного или более компонентов может происходить с постоянной или изменяющейся скоростью.
[00333] С использованием предоставленных в данном описании лекарственных форм с регулированным высвобождением, один или более кофакторов могут высвобождаться в лекарственной форме с более низкой скоростью, чем наблюдалась для готовой формы с немедленным высвобождением одного и того же количества компонентов. В некоторых вариантах осуществления, скорость изменения в биологическом образце, измеренная в виде изменения концентрации в течение определенного периода времени от введения до максимальной концентрации для готовой формы с регулируемым высвобождением составляет меньше, чем приблизительно 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% или 10% скорости готовой формы с немедленным высвобождением. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления, скорость изменения концентрации с течением времени составляет меньше, чем приблизительно 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% или 10% скорости для готовой формы с немедленным высвобождением.
[00334] В некоторых вариантах осуществления, скорость изменения концентрации с течением времени уменьшается за счет увеличения времени до максимальной концентрации относительно пропорциональным образом. Например, двукратное увеличение времени до максимальной концентрации может уменьшить скорость изменения концентрации приблизительно в 2 раза. В результате, один или более кофакторов могут быть предоставлены таким образом, что они достигают своей максимальной концентрации со скоростью, которая существенно уменьшена по сравнению с лекарственной формой немедленного высвобождения. Композиции представленного изобретения могут быть получены в виде готовой формы для обеспечения сдвига в максимальной концентрации на 24 часа, 16 часов, 8 часов, 4 часа, 2 часа или по меньшей мере 1 час. Связанное уменьшение скорости изменения концентрации может быть с коэффициентом приблизительно 0,05, 0,10, 0,25, 0,5 или по меньшей мере 0,8. В некоторых вариантах осуществления, это осуществляется за счет высвобождения меньше, чем приблизительно 30%, 50%, 75%, 90% или 95% одного или более кофакторов в кровоток в пределах одного часа подобного введения.
[00335] Необязательно, лекарственные формы с регулируемым высвобождением демонстрируют кривые концентрации в плазме, имеющие первоначальные (например, от 2 часов после введения до 4 часов после введения) уклоны меньше, чем 75%, 50%, 40%, 30%, 20% или 10% от уклонов для готовой формы с немедленным высвобождением той же самой дозировки того же самого кофактора.
[00336] В некоторых вариантах осуществления, скорость высвобождения кофактора, которая измеряется при изучении растворения, составляет меньше, чем приблизительно 80%, 70%, 60% 50%, 40%, 30%, 20% или 10% скорости для готовой формы с немедленным высвобождением того же самого кофактора на протяжении первых 1, 2, 4, 6, 8, 10 или 12 часов.
[00337] Лекарственные формы с регулируемым высвобождением, предоставленные в данном описании, могут принимать множество форматов. В некоторых вариантах осуществления, готовая форма представлена в виде пероральной лекарственной формы, включая жидкие лекарственные формы (например, суспензию или кашицу), и пероральные твердые лекарственные формы (например, таблетку или рыхлый порошок), например, но без ограничения, лекарственные формы, описанные в данном документе.
[00338] Таблетка с регулируемым высвобождением препарата, раскрытого в данном описании, может представлять собой матрицу, резервуар или осмотическую систему. Хотя подходит любая из этих трех систем, последние две системы могут иметь более оптимальную емкость для инкапсулирования относительно большой массы, например, для включения большого количества единственного кофактора или для включения множества кофакторов, в зависимости от генетического строения индивидуума. В некоторых вариантах осуществления таблетка с медленным высвобождением основана на резервуарной системе, в которой сердцевина, содержащая в своем составе один или более кофакторов, инкапсулирована пористым мембранным покрытием, которое, при гидратации, обеспечивает возможность диффундирования через него одного или более кофакторов. Вследствие того, что общая масса эффективных ингредиентов в общем составляет количество в граммах, эффективная система доставки может обеспечить оптимальные результаты.
[00339] Соответственно, таблетки или пилюли также могут быть покрыты или иным образом составлены в виде смеси для предоставления лекарственной формы, обеспечивающей преимущество пролонгированного действия. Например, таблетка или пилюля может содержать внутренний дозирующий и внешний дозирующий компонент, при этом последний находится в виде оболочки над первым. Два компонента могут быть разделены энтеросолюбильным слоем, который служит для противодействия распадению в желудке и обеспечивает возможность прохождения внутреннего компонента нетронутым в двенадцатиперстную кишку или отсрочки его высвобождения. Множество материалов может быть использовано для подобных энтеросолюбильных слоев или покрытий, при этом подобные материалы включают ряд полимерных кислот и смесей полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы. В некоторых вариантах осуществления, готовая форма, содержащая множество кофакторов может иметь различные кофакторы, высвобождаемые с разными скоростями или в разное время. Например, могут быть дополнительные слои кофакторов, перемежающихся с энтеросолюбильными слоями.
[00340] Способы изготовления таблеток с пролонгированным высвобождением известны в данной области, см. например, публикации патентов США 2006/051416 и 2007/0065512 или другие ссылки, раскрытые в данном описании. Способы, например, описанные в патентах США № 4606909, 4769027, 4897268 и 5395626, могут быть использованы для изготовления готовых форм с пролонгированным высвобождением одного или более кофакторов, определяемым генетическим строением индивидуума. В некоторых вариантах осуществления, готовую форму получают с использованием технологии OROS, описанной, например, в патентах США № 6919373, 6923800, 6929803 и 6939556. Другие способы, например, описанные в патентах США № 6797283, 6764697 и 6635268, также могут быть использованы для изготовления готовых форм, раскрытых в данном описании.
[00341] В некоторых вариантах осуществления, композиции могут быть изготовлены в виде готовой формы с пищевой композицией. Например, композиции могут представлять собой напиток или другие жидкости, твердую пищу, полутвердую пищу, с пищевым носителем или без него. Например, композиции могут включать черный чай, дополненный любой из композиций, описанных в данном документе. Композицией может быть молочный продукт, дополненный любой из композиций, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, композиции могут быть изготовлены в виде готовой формы с пищевой композицией. Например, композиции могут содержать напиток, твердую пищу, полутвердую пищу или пищевой носитель.
[00342] В некоторых вариантах осуществления, могут быть использованы жидкие пищевые носители, например, в виде напитков, например, соков, кофе, чая, соды, ароматизированной воды и тому подобное с добавками. Например, напиток может содержать лекарственное средство, а также жидкий компонент, например, в общепринятых напитках присутствуют различные дезодорирующие средства или натуральные углеводы. Примеры натуральных углеводов включают, но без ограничения, моносахариды, например, глюкозу и фруктозу; дисахариды, например, мальтозу и сахарозу; общепринятые сахара, например, декстрин и циклодекстрин; и сахарные спирты, например, ксилитол и эритритол. Также может быть использовано натуральное дезодорирующее средство, например, тауматин, экстракт посконника крапиволистного, леваудиозид A, глицирризин, и синтетическое дезодорирующее средство, например, сахарин и аспартам. Также могут быть использованы средства, например, ароматизирующие средства, окрашивающие средства и другие. Например, также могут быть использованы пектиновая кислота и ее соль, альгиновая кислота и ее соль, органическая кислота, защитный коллоидный клей, средство регулирования pH, стабилизатор, консервант, глицерин, спирт или карбонизирующие средства. При приготовлении пищи или напитков, содержащих лекарственные формы, обсуждавшиеся в данном описании, также могут быть использованы фрукты и овощи.
[00343] В качестве альтернативы, композициями может быть снековая плитка, дополненная любой из композиций, описанных в данном документе. Например, снековой плиткой может быть шоколадная плитка, плитка кранола или плитка со смесью сухофруктов и орехов. В еще одном варианте осуществления, представленная пищевая добавка или пищевые композиции изготовлены в виде готовой формы, имеющей подходящие для употребления и желательные вкус, текстуру и вязкость. В представленных пищевых композициях может быть использован любой подходящий пищевой носитель. Пищевые носители представленного изобретения включают практически любой пищевой продукт. Примеры подобных пищевых носителей включают, но без ограничения, пищевые плитки (плитки гранола, белковые плитки, сладкие батончики и т.д.), зерновые продукты (толокно, готовые завтраки, гранола и т.д.), хлебобулочные изделия (хлеб, пончики, крекеры, бэйглы, кондитерские изделия, пирожные и т.д.), напитки (молочный напиток, спортивные напитки, фруктовые соки, спиртные напитки, бутилированная вода), макаронные изделия, зерно (рис, кукуруза, овес, рожь, пшеница, мука и т.д.), продукты переработки яиц, снеки (конфеты, чипсы, жевательная резинка, шоколад и т.д.), мясо, фрукты и овощи. В варианте осуществления, пищевые носители, используемые в данном описании, могут маскировать нежелательный вкус (например, горечь). где необходимо, пищевая композиция, представленная в данном описании, демонстрирует более желательную текстуру и аромат, чем текстура и аромат любых компонентов, описанных в данном документе. Например, согласно изобретению жидкие пищевые носители могут быть использованы для получения представленных пищевых композиций в виде напитков, например, соков, кофе, чая и тому подобное с добавками. В других вариантах осуществления, согласно изобретению твердые пищевые носители могут быть использованы для получения представленных пищевых композиций в виде пищевых заменителей, например, снековых плиток, макаронных изделий, хлеба и тому подобное с добавками. В других вариантах осуществления, согласно изобретению полутвердые пищевые носители могут быть использованы для получения представленных пищевых композиций в виде жевательной резинки, жевательных конфет или снеков и тому подобное.
[00344] Дозу комбинированных композиций можно вводить приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более раз в сутки. Больной может получать дозу в течение периода приблизительно, меньше чем приблизительно или более чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или более дней, недель или месяцев. Разовая доза может быть частью суточной дозы, например, суточной дозы, разделенной на ряд разовых доз, подлежащих введению за сутки. Разовая доза может быть частью суточной дозы, то есть суточной дозой, разделенной на ряд разовых доз, подлежащих введению за сутки, и дополнительно разделенной на ряд разовых доз (например, таблеток) на введение. Количество разовых доз на введение может составлять приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более. Количество доз за сутки может составлять приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более. Количество разовых доз за сутки можно определить посредством деления суточной дозы на разовую дозу, и может составлять приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 6, 17, 18, 19, 20 или более разовых доз за сутки. Например, разовая доза может составлять приблизительно 1/2, 1/3, 1/4, 1/5, 1/6, 1/7, 1/8, 1/9, 1/10. Разовая доза может составлять приблизительно одну треть суточного количества и вводиться больному три раза за сутки. Разовая доза может составлять приблизительно половину суточного количества и вводиться больному два раза за сутки. Разовая доза может составлять приблизительно четвертую часть суточного количества с двумя разовыми дозами, вводимыми больному два раза за сутки. В некоторых вариантах осуществления, разовая доза содержит приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 50 мг ресвератрола. В некоторых вариантах осуществления, разовая доза содержит приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 550 мг лейцина. В некоторых вариантах осуществления, разовая доза содержит приблизительно, меньше чем приблизительно или больше чем приблизительно 200 мг одного или более метаболитов лейцина. В некоторых вариантах осуществления, разовую дозу (например, разовую дозу, содержащую лейцин) вводят в виде двух разовых доз два раза за сутки. В некоторых вариантах осуществления, разовую дозу (например, разовую дозу, содержащую один или более метаболитов лейцина, например, HMB) вводят в виде одной разовой дозы два раза за сутки.
[00345] Композиции, раскрытые в данном описании, могут дополнительно содержать ароматизатор и могут представлять собой твердое вещество, жидкость, гель или эмульсию.
[00346] Способы
[00347] Представленная заявка предоставляет способы повышения пропускной способности сиртуинового пути (включая AMPK, сигнальную молекулу в сиртуиновом пути) у больного. Как описано в данном документе, пропускная способность сиртуинового пути может быть охарактеризована на молекулярном уровне или посредством полученного в результате физиологического действия. В некоторых вариантах осуществления, изобретение предусматривает способы повышения окисления жирных кислот у больного, включающие введение больному композиций, которые раскрыты в данном описании. В различных вариантах осуществления изобретения, композицию вводят больному в количестве, которое доставляет в клетки больного синергетические количества одной или более разветвленных аминокислот и полифенола, достаточные для увеличения окисления жирных кислот.
[00348] Способы, описанные в данном документе, могут использоваться для множества вариантов применения. Данные варианты применения включают (a) увеличение пропускной способности сиртуинового пути, (b) увеличение митохондриального биогенеза, (c) увеличение образования новых митохондрии, (d) увеличение митохондриальных функций, (e) увеличение окисления жирных кислот, (f) увеличение образования тепла, (g) повышение чувствительности к инсулину, (h) увеличение поглощения глюкозы, (i) увеличение расширения кровеносных сосудов, (j) снижение массы, (k) снижение жирового объема, (1) уменьшение воспалительной реакции или маркеров у больного и (m) увеличение продуцирования иризина. Любой из данных вариантов применения может достигаться посредством введения одной или более композиций, описанных в данном документе.
[00349] Соответственно, изобретение предоставляет способ введения композиции, содержащей (a) один или более типов разветвленных аминокислот и/или их метаболитов и (b) активатор сиртуиновых путей, присутствующий в субтерапевтическом количестве, при этом композиция является синергетически эффективной для увеличения пропускной способности сиртуинового пути по меньшей мере приблизительно 5-кратно по сравнению с пропускной способностью компонента (b) при его использовании отдельно.
3
[00350] Пропускная способность путей может быть измерена с использованием одного или более способов, раскрытых в данном описании и/или известных в данной области. Например, окисление жирных кислот может определяться посредством измерения поглощения кислорода или окисленияH-меченого пальмитата. Митохондриальный биогенез может быть измерен с использованием митохондриального зонда посредством использования флуоресценции. Активность AMPK может определяться посредством измерения фосфорилирования AMPK посредством ELISA или с помощью вестерн-блоттинга. Активность SIRT1 может определяться посредством измерения деацетилирования субстрата, который может быть выявлен с использованием флуорофора.
[00351] Увеличение SIRT1, SIRT2 или SIRT3 наблюдается посредством применения соответствующего субстрата в анализе деацилирования, проводимого in vitro. Субстратом для измерения активности SIRT1 может быть любой субстрат, известный в данной области (например, пептид, содержащий в своем составе аминокислоты 379-382 человека p53 (Arg-His-Lys-Lys[Ac]). Субстратом для измерения активности SIRT3 может быть любой субстрат, известный в данной области (например, пептид, содержащий в своем составе аминокислоты 317-320 человека p53 (Gln-Pro--Lys-Lys[Ac])). В некоторых случаях, увеличение активности SIRT в одном или более анализов, проводимых в присутствии одной или более комбинированных композиций, описанных в данном документе, приводит к увеличению активности по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 5 или 10 кратно, по сравнению с активностью, измеренной в присутствии только одного компонента комбинированных композиций. Например, использование комбинированной композиции, содержащей (a) активатор сиртуинового пути (например, ресвератрол) и (b) аминокислоту с разветвленной цепью или ее метаболит (например, HMB) приводит к увеличению активности SIRT3 по меньшей мере приблизительно 5-кратно по сравнению с активностью, измеренной в присутствии только (a) или (b). Также, использование комбинированной композиции, содержащей ресвератрол и лейцин, приводит к увеличению активности SIRT1, которая в 1,5, 2, 5 или 10 раз больше, чем активность, измеренная в присутствии только ресвератрола или лейцина.
[00352] Изобретение предоставляет способ введения композиции, содержащей: (a) один или более типов разветвленных аминокислот и/или их метаболитов и (b) активатор сиртуинового пути, при этом молярное отношение компонента (a) к (b) в указанной композиции больше, чем приблизительно 20, и при этом композиция при введении нуждающемуся в этом больному синергетически усиливает митохондриальный биогенез, который измеряется снижением прибавления массы больного, уменьшением объема висцерального жира у больного, повышением окисления жира у больного, повышением чувствительности больного к инсулину, увеличением поглощения глюкозы мышцами у больного, уменьшением маркеров воспаления, увеличением расширения кровеносных сосудов и/или повышением температуры тела.
[00353] Изобретение предоставляет способ введения композиции, содержащей: разовую дозу, подходящую для перорального приема внутрь, при этом указанная разовая доза содержит: (a) один или более типов разветвленных аминокислот и/или их метаболитов и (b) по существу гомогенную популяцию молекул полифенола, и при этом разовая доза является эффективной для стимулирования уменьшения прибавления массы больного, уменьшения объема висцерального жира у больного, повышения окисления жира у больного, повышения чувствительности больного к инсулину, увеличения поглощения глюкозы мышцами у больного, увеличения расширения кровеносных сосудов и/или повышения температуры тела.
[00354] Изобретение предоставляет способ введения пищевой композиции, содержащей: (a) один или более типов разветвленных аминокислот и/или их метаболитов; (b) активатор сиртуинового пути, при этом (a) и (b) присутствуют в количестве, которое синергетически влияет на уменьшение прибавления массы больного, уменьшение объема висцерального жира у больного, повышение окисления жира у больного, повышение чувствительности больного к инсулину, увеличение поглощения глюкозы мышцами у больного, увеличение расширения кровеносных сосудов, снижение окислительного стресса, снижение воспалительного стресса и/или повышение температуры тела; и (c) пищевой носитель.
[00355] Изобретение предоставляет способ введения композиции, содержащей: синергетически эффективное количество (a) одного или более типов разветвленных аминокислот и/или их метаболитов; и (b) активатор сиртуиновых путей, при этом композиция по существу не содержит неразветвленных аминокислот, при этом комбинация при введении нуждающемуся в этом больному усиливает митохондриальный биогенез в большей степени по сравнению с введением больному только компонента (a) или компонента (b), и при этом усиленный митохондриальный биогенез измеряется снижением массы больного, уменьшением объема висцерального жира у больного, увеличением окисления жира у больного, повышением чувствительности больного к инсулину, увеличением поглощения глюкозы мышцами у больного, увеличением расширения кровеносных сосудов, снижением окислительного стресса, снижением воспалительного стресса и/или повышением температуры тела.
[00356] Изобретение предоставляет способ введения композиции, содержащей: синергетически эффективное количество (a) одного или более типов разветвленных аминокислот и/или их метаболитов; и (b) активатор сиртуиновых путей, при этом композиция по существу не содержит неразветвленных аминокислот, при этом комбинация при введении нуждающемуся в этом больному усиливает митохондриальный биогенез в большей степени по сравнению с введением больному только компонента (a) или компонента (b), и при этом усиленный митохондриальный биогенез измеряется снижением массы больного, уменьшением объема висцерального жира у больного, увеличением окисления жира у больного, повышением чувствительности больного к инсулину, увеличением поглощения глюкозы мышцами у больного, увеличением расширения кровеносных сосудов, снижением окислительного стресса, снижением воспалительного стресса и/или повышением температуры тела.
[00357] Изобретение предоставляет способ введения композиции, содержащей: (a) один или более типов разветвленных аминокислот и/или их метаболитов и (b) сигнальную молекулу после PGC1-α в сиртуиновом сигнальном пути.
[00358] Изобретение предусматривает способ усиления окисления жира у нуждающегося в этом больного, включающий введение больному любой из композиций, описанных в данном документе, в течение некоторого времени, при этом в течение данного периода времени окисление жиров у больного увеличивается. Окисление жиров может быть увеличено приблизительно или более чем приблизительно на 5, 10, 15, 20, 50, 100, 200 или 500%.
[00359] Изобретение предусматривает способ уменьшения воспалительной реакции у нуждающегося в этом больного, включающий введение больному состава любой из композиций, описанных в данном документе, в течение некоторого времени, при этом в течение данного периода времени воспалительная реакция у больного уменьшается. Воспалительная реакция может быть уменьшена приблизительно или более чем приблизительно на 5, 10, 15, 20, 50 или 100%.
[00360] Маркер воспаления и уровни цитокина, включая, но без ограничения, уровни IL-6, адипонектин, TNF-α и CRP в плазме можно определять посредством иммунных анализов, например, ELISA (Assay Designs, Ann Arbor, MI; Linco Research, St. Charles, MO; and Bioscience, San Diego, CA).
[00361] Изобретение предусматривает способ повышения или сохранения температуры тела у больного, включающий введение больному состава любой из композиций, описанных в данном документе, в течение некоторого времени, при этом в течение данного периода времени температура тела у больного повышается. Температура тела может быть повышена приблизительно или более чем приблизительно на 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15 или 20%.
[00362] Изобретение предусматривает способ стимулирования расширения кровеносных сосудов, включающий введение больному состава любой из композиций, описанных в данном документе, в течение некоторого времени, при этом в течение данного периода времени у больного вызывают расширение кровеносных сосудов. Расширение кровеносных сосудов может быть увеличено приблизительно или более чем приблизительно на 1, 2, 3, 5, 10, 20, 50 или 100%. Расширение кровеносных сосудов может быть измерено оптически, посредством измерения вазорестрикции или с помощью множества других технологий. Данные технологии включают мануальные инвазивные методы, метод ультразвукового исследования плечевой артерии и анализ пульсовой волны. Способы измерения расширения кровеносных сосудов описаны у Lind et al., "Evaluation of four different methods to measure endothelium-dependent vasodalation in the human peripheral circulation", Clinical Science 2002, 102, 561-567.
[00363] Изобретение предусматривает способ повышения продуцирования иризина, включающий введение больному любой из композиций, описанных в данном документе, при этом продуцирование иризина у больного повышается в течение некоторого времени. В некоторых вариантах осуществления, увеличение продуцирования иризина (или индикатора, обеспечивающего подтверждение этого) составляет увеличение, равное приблизительно или более чем приблизительно 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200% или более. В некоторых вариантах осуществления, увеличение продуцирования иризина (или индикатора, обеспечивающего подтверждение этого) составляет увеличение приблизительно или более чем приблизительно 1-кратное, 3-кратное, 5-кратное, 6-кратное, 8-кратное, 10-кратное, 15-кратное, 20-кратное, 50-кратное или более. В некоторых вариантах осуществления, увеличение продуцирования иризина подтверждается увеличением экспрессии FNDC5 (например, при измерении уровня мРНК и/или белка). В некоторых вариантах осуществления, увеличение продуцирования иризина подтверждается увеличением одного или более признаков побурения жировых клеток (например, окислением жирных кислот, и/или увеличением экспрессирования одного или более селективных генов бурого жира в жировой ткани). Неограничивающие примеры селективных генов бурого жира включают UCP1, Cidea, Prdml6 и Ndufs. В некоторых вариантах осуществления, увеличение продуцирования иризина подтверждается повышенной секрецией иризина из клетки (например, при измерении в среде, в которой культивируется клетка, или в циркулирующей плазме у больного). Повышение уровней генов можно измерять непосредственно (например, изменения уровней мРНК или белков) или опосредованно (изменения результатов, связанных с увеличением экспрессии, например, повышенной экспрессией гена, регулирующего последующие звенья сигнальных каскадов). В данной области известны способы выявления изменений уровня экспрессии генов, которые включают, без ограничения, способы обнаружения мРНК (например, ПЦР С обратной транскрипцией, Нозерн-блоттинг и гибридизацию на микрочипах), обнаружение белковых продуктов (например, вестерн-блоттинг и ELISA), обнаружение одной или более функций транслированного белка (например, анализы ферментативной активности).
[00364] Изобретение предусматривает способ лечения диабета, включающий введение больному любой из композиций, описанных в данном документе, в течение некоторого времени, при этом в течение данного периода времени у больного повышается чувствительность к инсулину. Чувствительность к инсулину может быть увеличена приблизительно или более чем приблизительно на 1, 2, 3, 5, 10, 20, 50, 100 или 200%. В некоторых вариантах осуществления, аминокислоту с разветвленной цепью (или ее метаболит) и/или активатор сиртуинового пути вводят в количестве, которое уменьшает терапевтически эффективную дозу метформина для больного. В некоторых вариантах осуществления, терапевтически эффективная доза метформина уменьшается приблизительно или более чем приблизительно на 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97,5%, 99,9%, 99,99% или более. В некоторых вариантах осуществления, введение композиций изобретения уменьшает жир в организме (например, висцеральный жир) приблизительно или более чем приблизительно на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 50% или более.
IR
IR
IR
IR
[00365] Чувствительность к инсулину может быть измерена с использованием множества технологий, включая HOMA. HOMA, которая представляет собой оценку гомеостатической модели резистентности к инсулину, может быть использована в качестве индекса скрининга изменений чувствительности к инсулину. HOMA может быть рассчитана с помощью стандартной формулы из инсулина и глюкозы в плазме натощак следующим образом: HOMA=[Инсулин (мкЕд/мл) × глюкоза (мМ)]/22,5.
[00366] В некоторых вариантах осуществления, также может измеряться передача инсулинового сигнала. Передача инсулинового сигнала может быть измерена посредством измерения общего и фосфорилированного Akt, GSK-3β, IGF-1R, IR, IRS-1, p70S6K и PRAS40 в лизатах ткани с помощью наборов Luminex "Akt Pathway Total 7-Plex Panel" (Cat# LHO0002) и "Akt Pathway Phospho 7-Plex Panel" (Cat# LHO0001) от Invitrogen Life Science.
[00367] Представленная заявка также предоставляет способы повышения митохондриального биогенеза у больного, включающие введение больному композиции, раскрытой в данном описании. В различных вариантах осуществления изобретения, композицию вводят больному в количестве, которое доставляет синергетические количества HMB и ресвератрола, достаточные для увеличения митохондриального биогенеза в клетках больного. Еще один вариант осуществления предусматривает введение больному композиции, содержащей синергетические количества лейцина и ресвератрола, в количестве, достаточном для увеличения митохондриального биогенеза в клетках больного. Другие варианты осуществления предусматривают введение больному композиции, содержащей синергетические количества лейцина, HMB и ресвератрола, в количестве, достаточном для увеличения у больного митохондриального биогенеза. Митохондриальный биогенез и окисление жиров могут быть индуцированы в различных клетках, включая мышечные клетки и адипоциты.
2
[00368] Еще один аспект изобретения предоставляет способы уменьшения прибавления массы или уменьшения жирового объема у больного, включающие введение композиций, раскрытых в данном описании. Масса тела может быть измерена по градуированной шкале, а рост измерен установленным на стене ростомером, и индекс массы тела может быть рассчитан посредством стандартного уравнения (кг/м). Масса жира может оцениваться посредством двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии на исходном уровне и на 12 и 24 неделях. Для применения можно содержать и откалибровать двухэнергетическую рентгеновскую абсорбциометрическую систему LUNAR Prodigy (GE Healthcare, Madison, WI) или любую другую рентгеновскую абсорбциометрическую систему, известную в данной области. Каждый день можно оценивать трансимиссионным фантом для определения, произошло ли в машине какое-либо отклонение, с последующим блоком ежедневной калибровки.
[00369] В данном аспекте изобретения, композицию вводят больному в количестве, которое доставляет синергетические количества HMB и ресвератрола, достаточные для уменьшения прибавления массы у больного. Еще один вариант осуществления предусматривает введение больному композиции, содержащей синергетические количества лейцина и ресвератрола, в количестве, достаточном для уменьшения прибавления массы у больного. Другие варианты осуществления предусматривают введение больному композиции, содержащей синергетические количества лейцина, HMB и ресвератрола, в количестве, достаточном для уменьшения прибавления массы у больного.
[00370] Введение раскрытых в данном описании композиций, которые увеличивают активность SIRT1 и SIRT3, может быть полезно для любого больного, нуждающегося в метаболической активации адипоцитов или одной или более своих мышц, например, скелетной мускулатуры, гладкой мускулатуры или сердечной мышцы или своих мышечных клеток. Больным может быть больной, имеющий истощение или мышечную атрофию. Увеличение активности SIRT3 также может быть использовано для увеличения или сохранения температуры тела, например, у больных с гипотремией, а увеличение активности SIRT1 полезно для лечения диабета (диабета 2 типа) и нарушенной переносимости глюкозы и уменьшения воспалительных реакций у больного.
[00371] Увеличение активности SIRT3 также может быть использовано для лечения или предотвращения сердечно-сосудистых заболеваний, уменьшения артериального давления за счет расширения кровеносных сосудов, улучшения состояния сердечно-сосудистой системы и увеличения сократительной функции сосудистых тканей, например, кровеносных сосудов и артерий (например, за счет воздействия на гладкую мускулатуру). В общем, активация SIRT3 может быть использована для стимулирования метаболизма адипоцитов или любого типа мышц, например, мышц кишечника или пищеварительной системы или мочевыводящих путей, и тем самым может быть использована для регулирования перистальтики кишечника, например, запора и недержания. Активация SIRT3 также может быть полезна при эректильной дисфункции. Она также может быть использована для стимулирования, например, подвижности сперматозоидов и быть использована в качестве лекарства от бесплодия. Другие варианты осуществления, в которых она была бы полезна для увеличения SIRT3, включают восстановление мышц, например, после хирургического вмешательства и несчастных случаев, увеличение мышечной массы; и увеличение спортивных способностей.
[00372] Соответственно, изобретение предоставляет способы, в которых положительные результаты создаются за счет контакта одной или более мышечных клеток с агентом, который повышает белок или уровень активности SIRT3 в клетке. Данные способы эффективно способствуют, повышают или стимулируют одно или более из следующего: имитацию пользы калорийного ограничения или тренировки мышечной клетки, увеличение митохондриального биогенеза или метаболизма, увеличение митохондриальной активности и/или выносливости мышечной клетки, повышение чувствительности мышечной клетки к поглощению глюкозы, увеличение окисления жирных кислот в мышечной клетке, снижение активных форм кислорода (ROS) в мышечной клетке, увеличение экспрессии PGC-1α и/или UCP3 и/или GLUT4 в мышечной клетке и активирование AMP активированной протеинкиназы (AMPK) в мышечной клетке. В соответствии с изобретение могут контактировать различные типы мышечных клеток. В некоторых вариантах осуществления, мышечная клетка представляет собой клетку скелетной мускулатуры. В некоторых вариантах осуществления, мышечная клетка представляет собой клетку медленно сокращающейся мышцы, например, клетку камбаловидной мышцы.
2
2
[00373] Скорость метаболизма в состоянии покоя (RMR)/ окисление субстрата измеряют с помощью непрямой калориметрии с использованием технологии открытого контура между 6 и 10 часами после полудня после 12-часового голодания и 48-часового воздержания от упражнений с использованием метаболической тележки SensorMedics Vmax 29n (Sensor Medics, Anaheim, CA). После опорожнения мочевого пузыря, участник спокойно отдыхает в течение 30 минут в изолированном помещении в окружающих условиях с регулируемой температурой (21-24°C). Затем больного помещают в вентилируемый колпак как минимум на 30 минут, до достижения стабильного состояния. Критерием для достоверного измерения может быть минимум 15 минут стабильного состояния, причем стабильное состояние определяют, как меньше, чем 10% колебания минутной вентиляции и поглощения кислорода, и меньше, чем 5% колебания дыхательного коэффициента. Метаболическую скорость рассчитывают с использованием уравнения Вейра, RQ рассчитывают, как продуцирование CO/потребление О, а окисление субстрата рассчитывают из RQ после корректировки на потери азота мочи.
[00374] Поглощение глюкозы может быть измерено с использованием технологий in vivo или in vitro. Например, поглощение глюкозы может быть измерено in vivo с использованием ПЭТ в сочетании с меченой глюкозой или аналогом глюкозы. Измерения поглощения глюкозы могут быть количественно определены из ПЭТ или посредством любой другой технологии, известной в данной области. В некоторых вариантах осуществления, поглощение глюкозы может быть измерено посредством количественного определения поглощения введенной экзогенно 18-F-дезоксиглюкозы посредством ПЭТ.
2α
[00375] ROS/Окислительный стресс может быть измерен посредством втягивания крови в обработанные EDTΑ пробирки, центрифугирования для отделения плазмы и аликвотирования образцов для индивидуальных анализов. Плазма должна храниться при -80°C в азоте для предотвращения окислительных изменений перед измерениями. Малональдегид (MDA) плазмы необходимо измерять с использованием фторометрического анализа, а 8-изопростан F плазмы измеряли посредством ELISA (Assay Designs, Ann Arbor, MI).
[00376] Еще один вариант осуществления предусматривает введение больному композиции, содержащей синергетические количества лейцина и ресвератрола, в количестве, достаточном для увеличения окисления жирных кислот в клетках больного. Другие варианты осуществления предусматривают введение больному композиции, содержащей синергетические количества лейцина, HMB и ресвератрола, в количестве, достаточном для увеличения окисления жирных кислот у больного.
[00377] Композиции можно вводить больному перорально или любыми другими способами. Способы перорального введения включают введение композиции в виде жидкости, твердой или полутвердой фазы, которые можно принимать в виде пищевой добавки или пищевого продукта.
[00378] Композиции можно вводить через определенные промежутки времени. Например, композиции можно вводить один, два, три, четыре раза в день или даже более часто. Объект можно вводить каждые 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дней. В некоторых вариантах осуществления, композиции вводят три раза за сутки. Введение может быть одновременным с временем приема пищи больного. Период лечения или дополнения рациона может продолжаться в течение приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 дней, 2 недель, 1-11 месяцев или 1 года, 2 лет, 5 лет или даже дольше. В некоторых вариантах осуществления изобретения, дозировки, которые вводят больному, могут изменяться или оставаться постоянными на протяжении периода лечения. Например, на протяжении периода введения величина суточной дозировки может увеличиваться или уменьшаться.
[00379] Продолжительность периода введения и/или величину дозировки может определить врач, диетолог или клиницист любого другого типа. Врач, диетолог или клиницист могут наблюдать реакцию больного на вводимые композиции и регулировать дозировку на основании состояния больного. Например, дозировка для больных, которые показывают пониженные результаты энергетического регулирования, может быть увеличена для достижения необходимых результатов.
[00380] В некоторых вариантах осуществления, композиции, вводимые больному, могут быть оптимизированы для данного больного. Например, можно регулировать соотношение аминокислот с разветвленными цепями с активатором сиртуинового пути или отдельных компонентов в комбинированной композиции. Соотношение и/или конкретные компоненты можно выбирать после оценки больного после введения одной или более композиций с изменением соотношений аминокислот с разветвленными цепями с активатором сиртуинового пути или изменения компонентов комбинированной композиции.
[00381] Еще один аспект изобретения предусматривает достижение необходимых результатов у одного или более больных после введения комбинированной композиции, описанной в данном документе, в течение указанного периода времени.
[00382] Спустя период введения композиции в 6 недель, комбинированная композиция, содержащая (a) уровень дозирования ресвератрола и уровень дозирования HMB или (b) уровень дозирования ресвератрола и уровень дозирования лейцина, может уменьшить набор массы у одного или более больных по меньшей мере приблизительно на 10, 15, 20 или 20,5%. p-значение может быть меньше, чем 0,05 (например, меньше, чем приблизительно 0,05, 0,03, 0,02, 0,01, 0,001, 0,0001 или ниже). Один или более больных, получавших лечение с одним и тем же уровнем дозирования одного из компонентов (ресвератрола, лейцина или HMB) может иметь несущественное снижение массы или снижение массы, которое составляет меньше, чем приблизительно 0, 5 или 10%.
[00383] Спустя период введения в 2 недели, композиция, содержащая (a) уровень дозирования ресвератрола и уровень дозирования HMB или (b) уровень дозирования ресвератрола и уровень дозирования лейцина, может увеличить окисление жиров всего организма у одного или более больных по меньшей мере приблизительно на 10, 15 или 20%. p-значение может быть меньше, чем 0,05 (например, меньше, чем приблизительно 0,05, 0,03, 0,02, 0,01, 0,001, 0,0001 или ниже). Увеличение окисления жира всего организма может быть пролонгировано пока больные вводят композицию или в течение периода, равного по меньшей мере 2, 4, 6, 10, 13, 26 или 52 недель. Один или более больных, получавших лечение с одним и тем же уровнем дозирования одного из компонентов (ресвератрола, лейцина или HMB) может иметь несущественное увеличение окисления жира всего организма или увеличение окисления жира всего организма, которое составляет меньше, чем приблизительно 0, 5 или 10%.
[00384] Спустя период введения в 2 недели, композиция, содержащая (a) уровень дозирования ресвератрола и уровень дозирования HMB или (b) уровень дозирования ресвератрола и уровень дозирования лейцина, может увеличивать теплотворный эффект пищи у одного или более больных по меньшей мере приблизительно на 10, 15, 17 или 20%. p-значение может быть меньше, чем 0,05 (например, меньше, чем приблизительно 0,05, 0,03, 0,02, 0,01, 0,001, 0,0001 или ниже). Увеличение теплотворного эффекта пищи может быть пролонгировано пока больные вводят композицию или в течение периода, равного по меньшей мере 2, 4, 6, 10, 13, 26 или 52 недели. Один или более больных, получавших лечение с одним и тем же уровнем дозирования одного из компонентов (ресвератрола, лейцина или HMB) может иметь несущественное увеличение теплотворного эффекта пищи или увеличение теплотворного эффекта пищи, которое составляет меньше, чем приблизительно 0, 5 или 10%.
[00385] Спустя период введения в 2 недели, композиция, содержащая (a) уровень дозирования ресвератрола и уровень дозирования HMB или (b) уровень дозирования ресвератрола и уровень дозирования лейцина, может увеличивать общее расходование энергии у одного или более больных по меньшей мере приблизительно на 10, 15, 17 или 20%. p-значение может быть меньше, чем 0,05 (например, меньше, чем приблизительно 0,05, 0,03, 0,02, 0,01, 0,001, 0,0001 или ниже). Увеличение общего расходования энергии может быть пролонгировано пока больные вводят композицию или в течение периода, равного по меньшей мере 2, 4, 6, 10, 13, 26 или 52 недели. Один или более больных, получавших лечение с одним и тем же уровнем дозирования одного из компонентов (ресвератрола, лейцина или HMB) может иметь несущественное увеличение общего расходования энергии или увеличение общего расходования энергии, которое составляет меньше, чем приблизительно 0, 5 или 10%.
[00386] Введение больному композиции, описанной в данном документе, например, комбинированной композиции, может предусматривать регулирование или поддержание энергетического метаболизма больного. Регулирование или поддержание энергетического метаболизма может предусматривать испытывание больным ряда положительных эффектов. Данные положительные эффекты включают снижение массы, уменьшение жировой ткани, увеличение окисления жирных кислот, увеличение побурения жировой ткани (на что указывает один или более признаков побурения жировых клеток), повышение чувствительности к инсулину, снижение окислительного стресса и/или уменьшение воспаления. По сравнению с исходным уровнем перед лечением, данные эффекты могут приводить к улучшению приблизительно или более чем приблизительно на 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 75% или более. В некоторых вариантах осуществления, по сравнению с исходным уровнем перед лечением, данные эффекты могут приводить к улучшению приблизительно или более чем приблизительно на 100%, 125%, 150%, 200%, 250%, 300%, 400%, 500% или более. В качестве альтернативы, введение композиции, описанной в данном документе, может предусматривать сохранение массы больного, количество жировой ткани, величину окисления жирных кислот, уровень чувствительности к инсулину, уровень окислительного стресса и/или уровень воспаления. Данные количества и/или уровни могут сохраняться в пределах приблизительно 0%, 1%, 5% или 10% количеств и/или уровней в начале введения.
[00387] Изобретение предусматривает способ лечения больных, включающий идентификацию пула больных, поддающихся лечению. Стадия идентификации может включать один или более скрининговых тестов или анализов. Например, для лечения могут быть выбраны больные, которых идентифицируют как диабетиков или которые имеют индексы масса тела и/или массу выше среднего или существенно больше, чем средние. Стадия идентификация может включать генетический тест, который идентифицирует один или более генетических вариантов, которые предполагают, что больной поддается лечению. Затем идентифицированных больных можно подвергать лечению одной или более композиций, описанных в данном документе. Например, их можно подвергать лечению комбинированной композицией, содержащей активатор сиртуинового пути и аминокислоту с разветвленной цепью.
[00388] Изобретение также предусматривает способы получения композиций, описанных в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, получение композиции, описанной в данном документе, включает смешивание или соединение двух или более компонентов. Данные компоненты могут включать сиртуин или активатор пути AMPK (например, полифенол или прекурсор полифенола, такой как ресвератрол, хлорогеновая кислота, кофеиновая кислота, коричная кислота, феруловая кислота, EGCG, пицеатаннол или экстракт виноградных косточек, или еще одно средство, такое как хинная кислота, фукоксантин или ингибитор PDE), аминокислоты с разветвленными цепями или их метаболиты (например, лейцин, валин, изолейцин, HMB или KIC) и/или противодиабетическое средство (например, метформин). В некоторых вариантах осуществления, активатором сиртуина является полифенол. В других вариантах осуществления, активатором сиртуина является прекурсор полифенола. Количество или соотношение компонентов может быть такое, как описано в данном документе. Например, массовое соотношение лейцина, соединенного с ресвератролом, может быть больше, чем приблизительно 80.
[00389] В некоторых вариантах осуществления, композиции могут быть соединены или перемешаны с фармацевтически активным средством, носителем и/или эксципиентом. Примеры подобных компонентов описаны в данном документе. Объединенные композиции могут быть сформованы в разовую дозу в виде таблеток, капсул, желатиновых капсул, таблеток с медленным высвобождением и тому подобное.
[00390] В некоторых вариантах осуществления, композицию изготавливают таким образом, чтобы получалась твердая композиция, содержащая в своем составе по существу гомогенную смесь одного или более компонентов, так чтобы один или более компонентов равномерно распределялись по всей композиции, для того чтобы композицию можно было легко разделить на равно эффективные готовые формы разовой дозы, например, таблетки, пилюли и капсулы.
[00391] Наборы
[00392] Изобретение также предоставляет наборы. Наборы включают одну или более композиций, описанных в данном документе, в подходящей упаковке и письменный материал, который может содержать инструкции для применения, обсуждение клинических исследований, перечень побочных эффектов и тому подобное. Подобные наборы также могут содержать информацию, например, ссылки на научную литературу, листок-вкладыш в упаковке, результаты клинических испытаний и/или краткое изложение всего этого и тому подобное, которые показывают или обосновывают функции и/или преимущества композиции и/или которые описывают дозировку, введение, побочные эффекты, взаимодействия с лекарственными средствами или другую информацию, полезную для специалиста, обеспечивающего медицинское обслуживание. Подобная информация может быть основана на результатах различных исследований, например, исследований с использованием моделей in vivo с вовлечением экспериментальных животных, и исследований, основанных на клинических испытаниях с людьми. Набор может дополнительно содержать другое средство. В некоторых вариантах осуществления, соединение представленного изобретения и средство предоставлены в виде отдельных композиций в отдельных контейнерах внутри набора. В некоторых вариантах осуществления, соединение представленного изобретения и средство предоставлены в виде единой композиции внутри контейнера в наборе. В данной области известны подходящая упаковка и дополнительные предметы для использования (например, измерительная кружка для жидких препаратов, обертка из фольги для минимизации воздействия воздуха и тому подобное), которые могут содержаться в наборе. Наборы, описанные в данном документе, могут предоставляться, продаваться и/или рекламироваться специалистам, обеспечивающим медицинское обслуживание, включая врачей, медсестер, фармацевтов, формулярных чиновников и тому подобное. Также в некоторых вариантах осуществления наборы могут продаваться непосредственно потребителям.
ПРИМЕРЫ
[00393] Пример 1 - Воздействие лейцина, KIC и HMB на митохондриальный биогенез по-отдельности или в комбинации с ресвератролом.
[00394] Эксперимент показывает, что лейцин стимулирует синтез мышечного белка посредством частично независимого от mTOR механизма. Авторы показали, что катаболические системы также побуждаются активизировать данный процесс, приводя в результате к повышенному митохондриальному биогенезу и окислению жирных кислот (FAO). Для устранения механизма данного действия, авторы определили сначала его зависимость от mTOR посредством оценки лейцинового стимулирования FAO в присутствии и отсутствии 20 нМ рапамицина; хотя рапамицин ингибировал FAO в мышечных трубочках c2cl2, степень лейцинового стимулирования сохранялась (~50%, p<0,03; фигура 1).
[00395] Затем авторы исследовали роль неповрежденного лейцина (0-0,5 мМ) vs. его метаболитов, α-кетоизокапроновой кислоты (KIC) (0-0,5 мМ) и HMB (0-50 мкМ). Все три соединения индуцировали сравнимое увеличение FAO (~60-70%, p<0,001; фигура 2). Как лейцин, так и HMB повышали митохондриальный биогенез мышечных трубочек (оцениваемый флуорометрически посредством связывания NAO) на ~50%, (p<0,005, фигура 3). С учетом этого, как HMB, так и лейцин стимулировали экспрессию митохондриальных регуляторных (PGC-1α и NRF-1) и компонентных (UCP3) генов (p<0,01, фигура 4). Эти данные демонстрируют, что лейцин стимулирует митохондриальный биогенез и окисление жирных кислот независимо от mTOR, и похоже, что данные эффекты опосредуются его метаболитом, например, HMB.
[00396] Пример 2 - Стимулирование SIRT1 и SIRT 3
+
[00397] Воздействие лейцина, KIC и HMB на активацию SIRT1 оценивали в присутствии и отсутствии ресвератрола в не содержащей клеток системе. Активность SIRT1 измеряли с помощью использования флуориметрического набора изучения лекарственных средств для SIRT1 (BML-AK555, ENZO Life Sciences International, Inc. PA, USA). В данном анализе, активность SIRT1 оценивали по степени деацетилирования стандартизированного субстрата, содержащего боковую цепь ацетилированного лизина. Использованный субстрат представляет собой пептид, содержащий в своем составе аминокислоты 379-382 человека p53 (Arg-His-Lys-Lys[Ac]), общепринятую мишень активности SIRT1; активность SIRT1 прямо пропорциональна степени деацетилирования Lys-382. Образцы инкубировали с пептидным субстратом (25 мкМ) и NAD(500 мкМ) в забуференном фосфатом физиологическом растворе при 37°C на горизонтальном встряхивателе в течение 45 минут. Реакцию останавливали добавлением 2 мМ никотинамида и проявляющего раствора, который связывается с деацетилированным лизином с образованием флуорофора. Вслед за 10 минутами инкубирования при 37°C, флуоресценцию считывали во флуорометре для прочтения планшетов при длине волны возбуждения, равной 360 нм и при длине волны излучения, равной 450 нм. Ресвератрол (100 мМ) служил в качестве активатора SIRT1 (положительный контроль), а сурамин натрия (25 мМ) в качестве ингибитора SIRT1 (отрицательный контроль). Строили стандартную кривую с использованием деацетилированного субстрата (0-10 мкМ). Лейцин, KIC и HMB все существенно повышали активность SIRT1 с реагированием на дозу, тогда как валин (контрольная аминокислота с разветвленной цепью) не оказывал существенного действия. Фигура 5 демонстрирует действие лейцина и его метаболитов на активность SIRT1 при физиологических концентрациях каждого соединения, проявляемое после обогащенной лейцином пищи. Как показано на фигуре, данные эффекты количественно сравнимы (и незначительно отличаются от) с эффектами, оказываемыми низкой дозой ресвератрола (например, 10 мкМ).
[00398] Для анализа активности SIRT3, адипоциты (3T3-L1) выращивали до конфлюэнтности, дифференцировали и инкубировали с лейцином (0,5 мМ), HMB (5 мкМ), ресвератролом (200 нМ), HMB (5 мкМ) + ресвератролом (200 нМ) или средой в течение 4 часов. Затем митохондриальный белок выделяли из клеток, и оценивали активность SIRT3 с помощью флюорометрического измерения деацетилирования субстрата SIRT3, по аналогии с методикой, описанной выше для SIRT1. Субстратом SIRT3 был пептид, содержащий аминокислоты 317-320 человека p53 (Gln-Pro--Lys-Lys[Ac]). Ресвератрол, лейцин и HMB не оказывали существенного независимого эффекта на активность SIRT3. Однако, соединение ресвератрола (200 нМ) с HMB (5 мкМ) приводило к 58% увеличению активности SIRT3 (p<0,03, фигура 6).
[00399] Пример 3 - Лейцин и HMB усиливают ресвератролом для стимулирования окисления жирных кислот
3
[00400] Адипоциты (3T3-L1) выращивали до конфлюэнтности, дифференцировали и инкубировали с лейцином (0,5 мМ), HMB (5 мкМ), ресвератролом (200 нМ), HMB (5 мкМ) + ресвератролом (200 нМ) или средой в течение 4 часов в присутствии низкой (5 мМ) или высокой (25 мМ) глюкозы, и окисление жирных кислот измеряли с использованием H-пальмитата. В присутствии низкой глюкозы, только способы комбинированного лечения (200 нМ ресвератрол + 5 мкМ HMB; 200 нМ ресвератрол + 0,5 мМ лейцин) стимулировали незначительное увеличение окисления жирных кислот (18%, p<0,05), тогда как отдельные компоненты не оказывали независимого действия (фигура 7). Среда с высокой глюкозой уменьшала окисление жирных кислот на 46% (p<0,05). Применяемая низкая доза ресвератрола не оказывала действия на окисление жирных кислот в условиях высокой глюкозы, тогда как лейцин и HMB оказывали несущественное, но значимое, воздействие (27% и 29%, соответственно, p<0,05 vs. контроля, фигура 8). В отличие от этого, каждая из комбинаций лейцина-ресвератрола и HMB-ресвератрола оказывала заметно больший эффект (стимулирование 118% и 91%, соответственно; p<0,005 vs. контроля и vs. независимого действия лейцина, HMB и ресвератрола; фигура 8). Эти данные демонстрируют синергизм между ресвератролом и лейцином или его метаболитом, HMB, в стимулировании окисления жира и содействии более оксилительному проявлению в условиях, которые моделируют гипергликемию.
3
3
3
[00401] Окисление жирных кислот измеряли с использованием окисленияH-меченого пальмитата, с H меткой, захваченной в виде воды в результате окисления жира. Затем H измеряли посредством сцинтилляционного счетчика.
[00402] Пример 4 - Набор массы, окисление жиров, чувствительность к инсулину и воспалительный стресс у животных, получавших лечение ресвератролом и лейцином или HMB.
[00403] Чтобы вызвать ожирение, шестинедельные самцы мышей c57/BL6 в течение 6 недель получали рацион с высоким содержанием жиров, с энергией жира, повышенной до 45% (Диеты исследования D12451). В конце данного периода индуцирования ожирения, животные были произвольно разделены на следующие семь групп с различной диетотерапией с 10 животными в группе (всего 70 животных) и содержали на данных диетах в течение 6 недель:
• группа 1 (обозначенная "контрольная группа"): только рацион с высоким содержанием жиров (такая же, как в период индуцирования ожирения (Диеты исследования D12451)).
Данная диета была модифицирована для групп 2-7 следующим образом:
• группа 2 (обозначенная "низкая доза ресвератрола"): рацион с высоким содержанием жиров, перемешанных с 12,5 мг ресвератрола/кг рациона.
• группа 3 (обозначенная "высокая доза ресвератрола"): рацион с высоким содержанием жиров, перемешанных с 225 мг ресвератрола/кг рациона.
• группа 4 (обозначенная "низкая доза HMB"): рацион с высоким содержанием жиров, перемешанных с 2 г кальциевой соли гидроксиметилбутирата, встречающийся в природе метаболит лейцина (CaHMB).
• группа 5 (обозначенная "низкая доза ресвератрола плюс низкая доза CaHMB"): высокожирная диета, перемешанная с 12,5 мг ресвератрола/кг рациона и 2 г CaHMB/кг рациона.
• группа 6 (обозначенная "низкая доза ресвератрола плюс высокая доза HMB"): высокожирная диета, перемешанная с 12,5 мг ресвератрола/кг рациона и 10 г CaHMB/кг рациона.
• группа 7 (обозначенная "низкая доза ресвератрола плюс лейцин"): высокожирная диета, перемешанная с 12,5 мг ресвератрола/кг рациона и лейцином, увеличенным до 200% от его нормального уровня (от 1,21 до 2,42% по массе) контрольной диеты
[00404] Животных содержали в полипропиленовых клетках при комнатной температуре 22±2°C и режиме 12 ч цикла свет/темнота. На протяжении всего эксперимента животные имели свободный доступ к воде и пище своего эксперимента. В период лечения (6 недель) всех животных гуманно умертвили, а кровь и ткани собирали для дальнейших экспериментов.
2
2
2
2
[00405] Поглощение кислорода/использование субстрата: в конце периода индуцирования ожирения (0 день группы лечения) и на 2 неделе и 6 неделе лечения, поглощение кислорода и использование субстрата измеряли посредством метаболических камер с использованием Комплексных Систем Мониторинга Лабораторных Животных (CLAMS, Columbus instruments, Columbus, OH) в подгруппах каждой группы лечения. Каждое животное помещали в отдельные клетки без подстилки, что обеспечивало возможность автоматизированного неинвазивного сбора данных. Каждая клетка представляет собой непрямой калориметр открытого контура, который обеспечивает измерение поглощения кислорода, продуцирование углекислого газа и одновременное измерение потребления пищи. Всех мышей акклиматизировали в камерах в течение 24 часов перед экспериментом и содержали с регулярным циклом свет/темнота 12:12 со свободным доступом к воде и пище. Все эксперименты начинали утром, а данные собирали в течение 24 часов. Через каждую камеру пропускали 0,61 воздуха/мин, и отбирали пробы в течение 2 мин с 32-минутными интервалами. Содержание выпускаемых О и CO из каждой камеры сравнивали с внешним содержание О и CO. Употребление пищи измеряли с помощью электронных весов.
[00406] МикроPET/CT (поглощение глюкозы и пальмитата): в конце периода лечения (6 недель лечения) подгруппы каждой группы лечебной диеты (5 животных/группа, всего 35 животных) использовали для измерения общего поглощения глюкозы и пальмитата в организме посредством PET/КТ визуализации. Для визуализации данных соединений с использованием микроPET визуализации, глюкозу или пальмитат метили фтором-18 (полураспад 108 минут) или углеродом-11 (полураспад 20 минут), соответственно. Каждую мышь не кормили в течение 4 часов, затем анестезировали с использованием 1-3% изофлурана, доставляемого через носовой конус, или в индукционной камере с размерами для мышей, специально сконструированной для протоколов визуализации небольших животное. Находящихся под анестезией мышей инъецировали в/в < 2 мКи каждой метки, затем оставляли в течение некоторого времени (от минут до 1 часа), обеспечивая возможность поглощения метки. В процессе сканирования, мышей содержали теплыми, используя термостатически регулируемую подстилку с обогревом и обрабатывали глазной мазью перед сканированием. После оперативного сканирования, мышей возвращали в свои клетки и приводили в сознание. Все это время за мышами постоянно следили. После получения оперативных данных мышей умерщвляли сверхдозой изофлурана, а органы брали для дальнейших экспериментов.
[00407] Извлечение РНК: набор для выделения РНК Ambion ToTALLY (Ambion, Inc. Austin, Tex. USA) использовали для извлечения общей РНК из ткани согласно инструкциям производителя. Концентрация, чистота и качество выделенной РНК будет оцениваться посредством измерения соотношения 260/280 (1,8-2,0) и соотношения 260/230 (близко к 2,0) с помощью использования спектрофотометра (ND-1000 NanoDrop Technologies Inc. Del. USA). Биомаркеры сиртуинового пути, цитокины и маркеры воспаления (включая, но без ограничения, C-реактивный белок, IL-6, MCP-1 и молекулы адипонектина) можно оценивать на уровне РНК.
[00408] Экспрессия Генов: Экспрессия 18S, SIRT1, SIRT3, PGC1-α, цитохрома с субъединицей VIIc1 оксидазы (COX 7), митохондриальной дегидрогеназы NADH, ядерного респираторного фактора 1 (NRF1), несвязанного белка (UCP2 (адипоцит)/UCP3 (миоцит), p53, AMPK, Akt/PKB и GLUT4 измеряется посредством количественной ПЦР реального времени с использованием системы ПЦР в реальном времени ABI 7300 (Applied Biosystems, Branchburg, NJ) с базовым набором реактивов TaqMan. Все комплекты праймеров и зондов можно получить из Applied Biosystems TaqMan Assaya-on-Demand и использовать в соответствии с инструкциями производителя. Собранную РНК из каждого типа клеток серийно разбавляли в диапазоне 0,0156-50 нг и использовали для постороения стандартной кривой; общую РНК для каждого неизвестного образца также разбавляли в данном диапазоне. Реакции ПЦР с обратной транскрипцией проводили согласно инструкциям системы ABI Real-Time PCR и TaqMan Real Time PCR Core Kit. Экспрессию каждого интересующего гена затем нормировали с использованием соответствующей количественной оценки 18S.
+
[00409] Активность SIRT1: активность SIRT1 измеряли с использованием Флуориметрического Набора для SIRT1 для изучения лекарственных средств (BML-AK555, ENZO Life Sciences International, Inc. PA, USA). В данном анализе, активность SIRT1 оценивали по степени деацетилирования стандартизированного субстрата, содержащего боковую цепь ацетилированного лизина. Использованный субстрат представляет собой пептид, содержащий аминокислоты 379-382 человека p53 (Arg-His-Lys-Lys[Ac]), общепринятую мишень активности SIRT1; активность SIRT1 прямо пропорциональна степени деацетилирования Lys-382. Образцы инкубировали с пептидным субстратом (25 мкМ), и NAD(500 мкМ) в забуференном фосфатом физиологическом растворе при 37°C на горизонтальном встряхивателе в течение 45 минут. Реакцию останавливали добавлением 2 мМ никотинамида и проявляющего раствора, который связывается с деацетилированным лизином с образованием флуорофора. Вслед за 10 минутами инкубирования при 37°C, флуоресценцию считывали во флуорометре для прочтения планшетов при длине волны возбуждения, равной 360 нм и при длине волны излучения, равной 450 нм. Ресвератрол (100 мМ) служил в качестве активатора SIRT1, а сурамин натрия (25 мМ) в качестве ингибитора SIRT1; лунки, содержащие каждый из них, использовали в качестве положительного и отрицательного контролей в каждом наборе реакций. Строили стандартную кривую с использованием деацетилированного субстрата (0-10 мкМ). Данные нормировали к концентрации клеточного белка, измеренной посредством BCΑ-анализа.
[00410] Анализ вестерн-блоттинг: образцы ткани (жировой и мышечной) гомогенизировали в ледяном лизирующем буфере RIPA, содержащем 150 мМ хлорида натрия, 1,0% Triton X-100, 0,5% дезоксихолата натрия, 0,1% SDS и 50 мМ Tris (pH 8,0), апротинина (1 мкг/мл), леупептина (10 мкг/мл), пепстатина (1 мкг/мл), 1 мМ PMSF, 5 мМ EDTA, 1 мМ EGTA, 10 мМ NaF, 1 мМ Na ортованадата электрическим гомогенизатором, затем содержали при постоянном взбалтывании в течение 2 часов при 4°C и центрифугировали при 4000 г в течение 30 мин при 4°C. Аликвоты супернатанта (содержащие 15-25 мкг общего белка) обрабатывали буфером для образца 2x Laemmli, содержащем 100 мМ дитиотреитола и проводили 10% или 15% ДСН-ПАГ-электрофорез (для SIRT3). Распавшиеся белки переносили на мембрану PVDF и блокировали в 5% нежирном сухом молоке в Tris-буферизированном физрастворе, содержащем 0,1% Tween 10, pH 7,5. После блокирования мембран, мембраны промывали в TBST, инкубировали в течение ночи с соответствующим антителом, промывали в TBST и инкубировали в течение 120 мин с противокроличьим IgG, конъюгированным с пероксидазой хрена. Связанный с антителом белок визуализировали с помощью усиленной хемолюминисценции (ECL, Amersham).
[00411] Используют следующие антитела: антитело Анти-SIRT3 (Cell Sygnaling Technology, Beverly, MA), Анти-Idh2 (Изоцитрат дегидрогеназа 2) (Santa Cruz, CA), антитело Анти-COX (Santa Cruz).
[00412] Низкие дозы ресвератрола и HMB не оказывали существенного независимого влияния на массу тела, набор массы, массу висцеральной жировой ткани, окисление жиров, дыхательный коэффициент (RER) или выработку тепла, тогда как высокая доза ресвератрола существенно увеличивала как выработку тепла, так и окисление жиров скелетной мускулатуры и снижала RER, показывая сдвиг всего организма в сторону окисления жира (таблица 1); однако, высокая доза ресвератрола не оказывала существенного влияния на массу тела, набор массы или массу висцеральной жировой ткани. В отличие от отсутствия независимого влияния низкой дозы ресвератрола или HMB, соединение низкой дозы ресвератрола либо с HMB или лейцином приводило к существенному снижению массы тела, прибавления массы, массы висцеральной жировой ткани, окисления жира и выработки тепла и связанному снижению RER (таблица 1).
Таблица 1Влияние ресвератрола, лейцина и HMB на массу тела, набор массы, ожирение и окисление жиров у мышей, находящихся на рационе, вызывающем ожирение<sup>1</sup>
Контроль
Низкий ресвератрол<sup>2</sup>
Высокий ресвератрол<sup>3</sup>
Низкий HMB<sup>4</sup>
Низкий ресв/Низкий HMB
Низкий ресв/высокий HMB<sup>5</sup>
Низкий ресв/ лейцин<sup>6</sup>
Значение р
Масса (г)
40,5±0,5<sup>а</sup>
40,8±2,5<sup>а</sup>
38,7±1,2<sup>а</sup>
40,3±2,1<sup>а</sup>
36,2±3,2<sup>b</sup>
34,4±1,1<sup>b</sup>
38,3±2,3<sup>b</sup>
P<0,05
Набор массы (г)
22,4±1,1<sup>а</sup>
20,9±1,5<sup>а</sup>
22,3±2,4<sup>а</sup>
22,5±1,2
18,2±1,2<sup>b</sup>
19,2±1,0<sup>b</sup>
19,2±1,6<sup>b</sup>
P<0,01
Висцеральной жировой объем (мм<sup>3</sup>)
6556±143
6551±575<sup>а</sup>
6031±323<sup>а</sup>
6184±460<sup>а</sup>
5302±324<sup>b</sup>
4879±243<sup>b</sup>
4259±321<sup>b</sup>
P<0,01
Окисление жиров (поглощение PET пальмитата; мышечный SUV)
1,34±0,15<sup>а</sup>
1,51±0,44<sup>а</sup>
2,29±0,11<sup>b</sup>
1,90±0,29<sup>а</sup>
2,09±0,30<sup>b</sup>
1,97±0,28<sup>b</sup>
1,76±0,09<sup>а,b</sup>
P<0,05
Дыхательный коэффициент (24 ч RER)
0,850±0,008<sup>а</sup>
0,847±0,008<sup>а</sup>
0,825±0,007<sup>b</sup>
0,844±0,012<sup>а</sup>
0,815±007<sup>b</sup>
0,8818±0,09<sup>b</sup>
0,811±0,010<sup>b</sup>
P<0,01
Выработка тепла
0,521±0,015<sup>а</sup>
0,517±0,014<sup>а</sup>
0,552±0,015<sup>b</sup>
0,526±0,011<sup>а</sup>
0,544±0,010<sup>b</sup>
0,547±0,009<sup>b</sup>
0,550±0,012<sup>b</sup>
P<0,05
<sup>1</sup> несовпадающие буквенные индексы в каждом ряду обозначают существенные различия в указанном p значении
<sup>2</sup> низкий ресвератрол: 12,5 мг ресвератрола/кг рациона
<sup>3</sup> Высокий ресвератрол: 225 мг ресвератрола/кг рациона
<sup>4</sup> низкий HMB: 2 г гидроксиметилбутирата (кальциевая соль)
<sup>5</sup> Лейцин: Лейцин повышали в два раза, с 1,21% в других диетах до 2,42%
IR
18
[00413] Таблица 2 показывает влияние способов лечения диетой на показатели чувствительности к инсулину. Ни один из способов лечения не оказывал какого-либо влияния на глюкозу в плазме. Ни ресвератрол в любой дозе ни HMB не оказывали какого-либо существенного влияния на инсулин в плазме или на поглощение глюкозы мышцами. Однако, комбинация низкой дозы ресвератрола либо с HMB, либо с лейцином приводила к существенному, значительному снижению инсулина в плазме. Данное снижение инсулина без изменения глюкозы в плазме отражает существенное улучшение чувствительности к инсулину мышц и всего организма, что показывает значительное и существенное снижение HOMA (гомеостатической оценки резистентности к инсулину) и соответствующее повышение поглощения F-дезоксиглюкозы в скелетной мускулатуре (таблица 2 и фигура 9).
Таблица 2Влияние ресвератрола, лейцина и HMB на показатели чувствительности к инсулину у мышей с вызванным диетой ожирением<sup>1</sup>
Контроль
Низкий ресвератрол<sup>2</sup>
Высокий ресвератрол<sup>3</sup>
Низкий HMB<sup>4</sup>
Низкий ресв/Низкий HMB
Низкий ресв/высокий HMB<sup>5</sup>
Низкий ресв/ лейцин<sup>6</sup>
Значение р
Глюкоза (мМ)
4,97±0,60<sup>а</sup>
5,14±0,85<sup>а</sup>
5,14±0,75<sup>а</sup>
4,28±0,49<sup>а</sup>
4,67±0,49<sup>а</sup>
4,33±0,41<sup>а</sup>
5,05±0,92<sup>а</sup>
NS
Инсулин (мкЕд/мл)
12,5±3,4<sup>а</sup>
10,4±1,6<sup>а</sup>
10,1±2,7<sup>а</sup>
8,3±1,1<sup>а</sup>
5,8±0,7<sup>b</sup>
3,9±1,2<sup>b</sup>
5,5±1,4<sup>b</sup>
Р<0,005
HOMA<sub>IR</sub>
2,61±0,82<sup>а</sup>
2,41±0,66<sup>а</sup>
0,59±0,26<sup>b</sup>
1,93±0,32<sup>а</sup>
1,18±0,25<sup>с</sup>
0,87±0,31<sup>b</sup>
1,14±0,37<sup>с</sup>
Р<0,01
Поглощение глюкозы мышцами (<sup>18</sup>F-дезоксиглюкоза SUV)
3,64±0,88<sup>a</sup>
3,63±1,29<sup>a</sup>
3,87±0,32<sup>a</sup>
2,99±0,42<sup>a</sup>
5,90±0,41<sup>b</sup>
5,93±1,63<sup>b</sup>
5,68±0,75<sup>b</sup>
Р<0,02
<sup>1</sup> несовпадающие буквенные индексы в каждом ряду обозначают существенные различия в указанном p значении
<sup>2</sup> низкий ресвератрол: 12,5 мг ресвератрола/кг рациона
<sup>3</sup> Высокий ресвератрол: 225 мг ресвератрола/кг рациона
<sup>4</sup> низкий HMB: 2 г гидроксиметилбутирата (кальциевая соль)
<sup>5</sup> Лейцин: Лейцин повышали в два раза, с 1,21% в других диетах до 2,42%
[00414] Фигура 10 показывает влияние способов лечения диетой на активность SIRT1 жировой ткани. Ни ресвератрол, ни HMB не оказывали существенного независимого влияния на активность SIRT1, хотя высокая доза ресвератрола демонстрировала незначительный тренд в сторону увеличения. В отличие от этого, соединение низкой дозы ресвератрола либо с HMB, либо с лейцином приводило к двукратному увеличению активности SIRT1 в ткани. Подобная активация сиртуина должна предполагать уменьшение воспалительной реакции. С учетом этой концепции, высокая доза ресвератрола существенно уменьшала циркуляцию IL-6, тогда как комбинация низкой дозы ресвератрола (которая не оказывала независимого действия) с HMB приводила к заметно большему уменьшению IL-6 (таблица 3). Аналогичным образом, тогда как ни HMB, ни низкая доза ресвератрола не оказывали какого-либо влияния на MCP-1 или c-реактивный белок, комбинация низкой дозы ресвератрола либо с HMB, либо с лейцином приводила к существенному снижению обоих биомаркеров воспаления. Кроме того, противовоспалительный цитокин адипонектин повышался в ответ на низкую дозу ресвератрола в комбинации либо с HMB, либо с лейцином, тогда как отдельные компоненты в данных дозах не оказывали существенного влияния (таблица 3).
Таблица 3Влияние ресвератрола, лейцина и HMB на биомаркеры воспаления у мышей с вызванным диетой ожирением<sup>1</sup>
контроль
Низкий ресвератрол<sup>2</sup>
Высокий ресвератрол<sup>3</sup>
Низкий HMB<sup>4</sup>
Низкий ресв/Низкий HMB
Низкий ресв/высокий HMB<sup>5</sup>
Низкий ресв/лейцин<sup>6</sup>
Значение р
С-реактивный белок (нг/мл)
95,6±9,6<sup>а</sup>
134,8±8,5<sup>а</sup>
123,9±35,3<sup>а</sup>
98,6±5,1
67,4±12,2<sup>b</sup>
58,3±12,4<sup>b</sup>
55,9±17,7<sup>b</sup>
P<0,01
IL-6 (пг/мл)
29,0±6,4<sup>а</sup>
23,2±2,9<sup>а</sup>
14,1±1,3<sup>b</sup>
19,9±3,1<sup>а</sup>
6,9±1,2<sup>c</sup>
4,5±2,6<sup>c</sup>
11,2±4,1<sup>b</sup>
P<0,005
МСР-1(пг/мл)
115,8±19,7<sup>а</sup>
104,4±16,5<sup>а</sup>
27,3±6,8<sup>b</sup>
116,8±9,3<sup>а</sup>
24,2±6,2<sup>b</sup>
15,2±3,7<sup>b</sup>
34,9±5,9<sup>b</sup>
P<0,001
Адипонектин (пг/мл)
11,0±0,9<sup>а</sup>
12,4±1,1
14,8±1,8<sup>b</sup>
11,1±1,6<sup>а</sup>
14,1±0,8<sup>b</sup>
16,3±3,0<sup>b</sup>
14,5±1,0<sup>b</sup>
P<0,03
<sup>1</sup> несовпадающие буквенные индексы в каждом ряду обозначают существенные различия в указанном p значении
<sup>2</sup> низкий ресвератрол: 12,5 мг ресвератрола/кг рациона
<sup>3</sup> Высокий ресвератрол: 225 мг ресвератрола/кг рациона
<sup>4</sup> низкий HMB: 2 г гидроксиметилбутирата (кальциевая соль)
<sup>5</sup> Лейцин: Лейцин повышали в два раза, с 1,21% в других диетах до 2,42%
[00415] Все вместе, эти данные демонстрируют синергизм между низкими дозами ресвератрола и лейцина или его метаболита HMB при активизации SIRT1 и SIRT1 зависимых результатов. Они включают повышенное окисление жиров и уменьшение тучности и ожирения, повышение чувствительности к инсулину и аннулирование резистентности к инсулину, и ослабление системного воспалительного стресса.
[00416] Пример 5 - Синергетические эффекты полифенолов и Родственных Соединений на Активацию Сиртуина и Последующих Путей
[00417] Все соединения тестировали на потенциал независимого или синергетического модулирования подачи сиртуиновых сигналов либо посредством прямого стимулирования, либо непрямого посредством подачи более ранних сигналов посредством AMPK. Основным результатом подачи SIRT1 сигналов является стимулирование PGC1-α и последующее стимулирование митохондриального биогенеза и окисления жирных кислот. Соответственно, окисление жирных кислот, измеренное как пальмитат-индуцированное поглощение кислорода, которое описано ниже, использовали в качестве чувствительного первого уровня скрининга для аэробного митохондриального метаболизма. Зависимую от дозы кривую окисления жирных кислот строили для каждого изученного соединения, а "субтерапевтическую дозу" определяли как самую высокую дозу, которая не оказывала влияния в данной системе. Данную дозу, обычно находящуюся в диапазоне 200-1000 нМ для большинства изученных соединений, затем использовали для оценки синергетических эффектов с лейцином, HMB или субтерапевтическими дозами других соединения. Данные эксперименты проводили в полностью дифференцированных адипоцитах (3T3-L1) и мышечных трубочках (C2C12). Для оценки влияния данных комбинаций на взаимовлияние между жировыми и мышечными тканями, адипоциты обрабатывали в течение 48 часов, среду собирали (кондиционированную среду, CM), а затем подвергали действию мышечных трубочек; аналогичные эксперименты проводили с обработанными мышечными трубочками, CM собирали и подвергали действию адипоцитов. Вслед за оценкой окисления жирных кислот, для ведущих комбинаций и соответствующих контролей оценивали активность SIRT1, активность AMPK, митохондриальный биогенез и использование глюкозы (измеренное, как глюкозоиндуцированное закисление внеклеточной среды в отсутствии жирных кислот в среде).
2
2
2
[00418] Культура клеток: преадипоциты C2C12 и 3T3-L1 (Американская коллекция типовых культур) высевали в чашку Петри с плотностью, равной 8000 клеток/см (планшет 10 см) и выращивали в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (DMEM), содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и антибиотики (питательная среда) при 37°C в 5% CO. Индуцировали дифференцировку конфлюэнтных преадипоцитов 3T3-L1 с помощью стандартной дифференцировочной среды, состоящей из среды DMEM, с добавлением 10% FBS, 250 нМ дексаметазона, 0,5 мМ 3-изобутил-1-метилксантина (IBMX) и 1% пенициллин-стрептомицина. Преадипоциты содержали в данной дифференцировочной среде в течение 3 дней, а после культивировали в питательной среде. Культуры подпитывали каждые 2-3 дня, обеспечивая, чтобы >90% клеток достигали полной дифференцировки перед проведением химической обработки. Для дифференцировки клеток C2C12, клетки выращивали до 100% конфлюэнции, переносили в дифференцировочную среду (DMEM с 2% лошадиной сыворотки и 1% пенициллин-стрептомицина), и подпитывали свежей дифференцировочной средой каждый день до полного формирования мышечных трубочек (3 дней).
[00419] Измерения:
2
2
2
2
2
2
[00420] Окисление жирных кислот: Клеточное поглощение кислорода измеряли с использованием анализатора Seahorse Bioscience XF24 (Seahorse Bioscience, Billerica, MA) в 24-луночных планшетах при 37°C, как описано у Feige с соавт. (Feige J, Lagouge M, Canto C, Strehle A, Houten SM, Milne JC, Lambert PD, Mataki C, Elliott PJ, Auwerx J. Specific SIRT1 activation mimics low energy levels and protects against diet-induced metabolic disorders by enhancing fat oxidation. Cell Metabolism 2008; 8:347-358) с незначительными модификациями. Клетки высевали по 40000 клеток в лунку, дифференцировали, как описано выше, обрабатывали в течение 24 часов указанными обработками, промывали два раза незабуференной не содержащей карбонат DMEM с pH 7,4 и низкой глюкозой (2,5 мМ), содержащей карнитин (0,5 мМ), уравновешенной 550 мкл той же самой среды в инкубаторе без CO в течение 45 минут, а затем вставляли в инструмент в течение 15 минут дополнительного уравновешивания, с последующим измерением потребления О. Три последующих измерения базового уровня с пятиминутными интервалами проводили перед инъекцией пальмитата (200 мкМ итоговая концентрация). Затем проводили четыре последующих 5-минутных измерения потребления О с последующим 10 минутным повторным уравновешиванием и другими 3-4 5-минутными измерениями. Данную схему измерений затем повторяли на протяжении 4-6 часового периода. Данные для каждого образца нормировали к базовому уровню перед инъекцией пальмитата для данного образца и выражали как % изменения от данного базового уровня. Значения перед инъекцией пальмитата составляли 371±14 пмоль О/минуту для мышечных трубочек и 193±11 пмоль О/минуту для адипоцитов. Затем для каждого образца рассчитывали площадь под кривой изменения потребления О от базового уровня, которое использовали для последующего анализа.
2
[00421] Использование глюкозы: В отсутствии источника жирных кислот и окислительного метаболизма, гликолиз и последующее продуцирование лактата приводит к закислению внеклеточной среды, которое также измеряли с использованием анализатора Seahorse Bioscience XF24. Клетки получали и уравновешивали аналогично способам, описанным выше, для окисления жирных кислот с исключением карнитина из среды. Вслед за уравновешиванием инструмента и тремя исходными измерениями, в каждую лунку инжектировали глюкозу до финальной концентрации 10 мМ. Измерения проводили, как описано выше, используя датчики для закисления внеклеточной среды вместо потребления О. В качестве положительного контроля в некоторые лунки добавляли инсулин (итоговая концентрация 5 нМ). Данные для каждого образца нормировали к базовому уровню перед инъекцией глюкозы для данного образца и выражали как % изменения от данного базового уровня. Затем для каждого образца рассчитывали площадь под кривой изменения закисления внеклеточной среды от базового уровня, которое использовали для последующего анализа.
[00422] Митохондриальный биогенез: Митохондриальный биогенез оценивали, как изменение митохондриальной массы, как описано у Sun с соавт. (Sun X and Zemel MB (2009) Leucine modulation of mitochondrial mass and oxygen consumption in skeletal muscle cells and adipocyted. Nutrition and Metabolism 6:26 (doi: 10.1.1186/1743-707S-6-26)). Митохондриальный зонд NAO (Invitrogen, Carlsbad, CA) использовали для анализа митохондриальной массы с помощью флуоресценции (возбуждение 485 нм и излучение 520 нм). И количественные данные получали со считывающего устройства флуоресценции для микропланшетов (Synergy HT, BioTek Instruments, Winooski, VT). Интенсивность флуоресценции выражали, как произвольные единицы на мкг белка, и нормировали к контрольным значениям в каждом анализе.
[00423] Активность AMPK: AMP-активированную протеинкиназу (AMPK) измеряли с использованием коммерческого набора (CycLex AMPK Kinase Assay Kit, CycLex Co, Ltd, Nagano, Japan). Анализ основан на фосфорилировании AMPK IRS-1 S789. Затем фосфорилированный IRS-1 S789 выявляли с помощью антифосфомышиного IRS-1 S789 моноклонального антитела, которое затем связывали с антимышиным IgG, конъюгированным с пероксидазой хрена, который катализирует хромогенную реакцию с тетраметилбензидином. Цветообразование пропорционально активности AMPK, и его измеряли в 96-луночных планшетах ELISA при двух длинах волн (450/540 нм) с использованием считывающего устройства для микропланшетов (Synergy HT, BioTek Instruments, Winooski, VT). Данные значения выражали, как единицы флуоресценции/мг белка и нормализованные к контрольным значениям °в каждом анализе.
+
[00424] Активность SIRT1: активность SIRT1 измеряли с использованием Флуориметрического Набора для изучения лекарственных средств для SIRT1 (BML-AK555, ENZO Life Sciences International, Inc. PA, USA). Анализ измеряет активность SIRT1 по степени деацетилирования стандартизированного субстрата, содержащего боковую цепь ацетилированного лизина. Использованный субстрат представляет собой пептид, содержащий аминокислоты 379-382 человека p53 (Arg-His-Lys-Lys[Ac]), общепринятую мишень активности SIRT1; активность SIRT1 прямо пропорциональна степени деацетилирования Lys-382. Образцы инкубировали с пептидным субстратом (25 мкМ), и NAD(500 мкМ) в забуференном фосфатом физиологическом растворе при 37°C на горизонтальном встряхивателе в течение 45 минут. Реакцию останавливали добавлением 2 мМ никотинамида и проявляющего раствора, который связывается с деацетилированным лизином с образованием флуорофора. Вслед за 10 минутами инкубирования при 37°C, флуоресценцию считывали во флуорометре для прочтения планшетов (Synergy HT, BioTek Instruments, Winooski, VT) при длине волны возбуждения, равной 360 нм, и при длине волны излучения, равной 450 нм. Ресвератрол (100 мМ) служил в качестве активатора SIRT1 (положительный контроль), а сурамин натрия (25 мМ) в качестве ингибитора SIRT1 (отрицательный контроль). Строили стандартную кривую с использованием деацетилированного субстрата (0-10 мкМ).
[00425] Статистика: Данные анализировали посредством однофакторного дисперсионного анализа и тест на минимальное значимое различие использовали для разделения значимо различных групповых средних
[00426] Результаты:
[00427] Ресвератрол-лейцин и ресвератрол-HMB: Лейцин (0,5 мМ) и HMB (5 мкМ) стимулировали активность SIRT1 и окисление жирных кислот на 30-50%, аналогично действию 10 мкМ ресвератрола, тогда как более низкие уровни ресвератрола (в данном случае 200 нМ) не оказывала действия; лейцин, HMB и низкая доза ресвератрола не оказывали независимого влияния на SIRT3. Однако, комбинация либо лейцина, либо HMB с 200 нМ ресвератролом приводила к ~90% стимулированию SIRT1, ~60% стимулированию SIRT3 и на 91%-118% повышает окисление жирных кислот (p<0,005).
[00428] Концентрации лейцина и HMB во всех экспериментах, описанных ниже, составляют 0,5 мМ (лейцин) и 5 мкМ (HMB). Каждое из соединений, изученных в комбинации с лейцином или HMB, изучали с концентрациями, которые не оказывали независимого действия на переменные при исследовании, для того чтобы оценить потенциальный синергизм. Данные концентрации определяли для каждого соединения ниже.
[00429] Хлорогеновая кислота: Хлорогеновая кислота представляет собой встречающийся в природе полифенол, описанный как гидроксикоричная кислота; он является сложным эфиром кофеиновой кислоты и L-хинной кислоты (оценивается ниже). Кривые зависимости от дозы хлорогеновой кислоты показывают, что концентрации, составляющие 500 нМ или ниже, не оказывают влияния; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм.
[00430] Фигура 12 показывает влияние комбинаций хлорогеновой кислоты в мышечных трубочках, а на Фигуре 3 суммарно приведены существенные количественные данные. Хлорогеновая кислота (500 нМ)/HMB вызывала 42% увеличение окисления жирных кислот при 6 часовой обработке (p=0,003) и 441% свыше 24 часов (p=0,05) в клетках скелетной мускулатуры (мышечные трубочки), тогда как в адипоцитах не наблюдалось никакого существенного эффекта. В особенности, добавление ресвератрола (200 нМ) ослабляло или устраняло данные эффекты, предполагая потенциальную конкуренцию за общий участок действия (Фигура 13).
[00431] Комбинация хлорогеновая кислота/HMB стимулировала 40% активность SIRT1 адипоцитов (p=0,005), тогда как комбинация хлорогеновая кислота/лейцин стимулировала SIRT1 на 67% (p=0,0001) (Фигура 14) и более умеренно стимулировала активность AMPK (30-35%, NS: p=0,078). В отличие от мышечных трубочек, комбинации хлорогеновая кислота/HMB и хлорогеновая кислота/лейцин не оказывали прямого влияния на окисление жирных кислот адипоцитов; однако, эксперименты с кондиционированными средами адипоцитов показали, что обработка адипоцитов данными комбинациями в течение 48 часов приводила к кондиционированной среде, которая стимулировала окисление жирных кислот мышечных трубочек на 76% (p=0,013).
[00432] Как хлорогеновая кислота-лейцин, так и хлорогеновая кислота-HMB оказывали существенное влияние на использование глюкозы, которое измеряли посредством реакций закисления внеклеточной среды на добавление глюкозы (хлорогеновая кислота-лейцин: 53%, p=0,007; хлорогеновая кислота - HMB: 35%, p=0,045; Фигура 15).
[00433] Кофеиновая кислота: Кофеиновая кислота представляет собой еще одно встречающееся в природе фенольное соединение, описанное как еще одна гидроксикоричная кислота. Кривые зависимости от дозы кофеиновой кислоты показывают, что концентрации, равные 1 мкМ или ниже, не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм.
[00434] Фигуры 16 и 17 показывают действие комбинаций кофеиновой кислоты в мышечных трубочках, и количественные данные суммарно приведены на Фигуре 18. Комбинация кофеиновая кислота-лейцин оказывала незначительное, статистически незначимое увеличение окисления жирных кислот в мышечных трубочках (35%), тогда как комбинация кофеиновая кислота-HMB оказывала существенное влияние на окисление жирных кислот как в адипоцитах (361%, p=0,05), так и в мышечных трубочках (182%, p=0,016). Данные действия подавлялись за счет добавления 200 нМ ресвератрола, предполагая конкуренцию, по аналогии с конкуренцией, наблюдаемой для хлорогеновой кислоты (Фигура 17).
[00435] Хинная кислота: Хинная кислота представляет собой встречающийся в природе полиол, обнаруженный в кофейных зернах и некоторых других растительных продуктах. Хотя и не полифенол, ее оценивают в данном описании вследствие того, что она представляет собой компонент хлорогеновой кислоты и может быть получена посредством гидролиза хлорогеновой кислоты. Кривые зависимости от дозы хинной кислоты показывают, что концентрации, составляющие 500 нМ или ниже, не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм.
[00436] Фигуры 19 и 20 показывают действия комбинаций хинной кислоты в адипоцитах, и количественные данные суммарно приведены на Фигуре 21. Комбинации хинная кислота-HMB и хинная кислота-лейцин производила сильное увеличение окисления жирных кислот в адипоцитах (141% для комбинации хинная кислота-HMB, p=0,05; 320% для комбинации хинная кислота-лейцин, p=0,012; Фигура 21) и более умеренное увеличение в мышечных трубочках (~30%, p=0,03). В отличие от хлорогеновой кислоты и кофеиновой кислоты, добавление ресвератрола (200 нМ) не ослабляет данные эффекты. Похоже, что комбинации хинной кислоты не оказывают свое действие непосредственно на SIRT1, так как не было краткосрочного влияния на активность SIRT1 и вместо этого действуют раньше с существенным увеличением активности AMPK (47%, p<0,0001; Фигура 22). Комбинации как хинной кислоты-лейцина, так и хинной кислоты-HMB оказывали существенное влияние на использование глюкозы, которое измеряли с помощью реакций закисления внеклеточной среды на добавление глюкозы как в адипоцитах, так и в мышечных трубочках (хинная кислота-HMB, 99%, p=0,05; хинная кислота-лейцин, 224%, p=0,0003; Фигура 23).
[00437] Другие Полиолы: Как отмечалось выше, хинную кислоту оценивали, как продукт гидролиза хлорогеновой кислоты. Для определения, отражало ли сильное влияние хинной кислоты влияние уникальной молекулы (хинной кислоты) или полиолов, как класса соединений, другие полиолы оценивали следующим образом. Эти данные предполагают, что действие хинной кислоты нелегко экстраполировать на другие полиолы.
[00438] Сорбитол представляет собой сахарный спирт аналог глюкозы. Кривые зависимости от дозы сорбитола показывают, что концентрации, составляющие 500 нМ или ниже, не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм. Добавление данного уровня сорбитола либо к HMB, либо к лейцину приводило к стимулированию окисления жирных кислот в мышечных трубочках (44-70%, p=0,023). Однако, данные действия не имеют значимого отличия от независимого действия лейцина и HMB в отсутствии сорбитола, указывая на отсутствие синергизма.
[00439] Миоинозитол представляет собой метаболит полиола глюкозы. Кривые зависимости от дозы миоинозитола показывают, что концентрации, составляющие 100 нМ или ниже, не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм. Соединение 100 нМ миоинозитола с лейцином или HMB производило 60% повышение окисления жира, сравнимое с независимым действием лейцина и HMB в отсутствии миоинозитола, указывая на отсутствие синергизма.
[00440] Малтитол представляет собой дисахарид, полученный за счет гидрогенизации мальтозы. Кривые зависимости от дозы малтитола показывают, что концентрации, составляющие 100 нМ или ниже, не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм. Однако, никакого синергизма замечено не было.
[00441] Коричная кислота: Коричная кислота представляет собой встречающееся в природе фенольное соединение, обнаруженное в коричном масле. Она имеет сильную структурную гомологию как с кофеиновой кислотой, так и с хлорогеновой кислотой. Кривые зависимости от дозы коричной кислоты показывают, что концентрации, составляющие 500 нМ или ниже, не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм.
[00442] Комбинации коричной кислоты оказывали сильное влияние как в адипоцитах, так и в мышечных трубочках. Фигуры 24 и 25 показывают действия комбинаций коричной кислоты в мышечных трубочках, и количественные данные для адипоцитов и мышечных трубочек суммарно приведены на Фигурах 26 и 27, соответственно. Комбинации коричная кислота-HMB и коричная кислота-лейцин повышали окисление жирных кислот в адипоцитах на 290% (p=0,004) и 1227% (p=0,006), соответственно (Фигура 26). В мышечных трубочках, те же самые комбинации увеличивали окисление жирных кислот на 199% (p=0,02) и 234% (p=0,05) (Фигура 27). Дополнительно, обработка адипоцитов данными комбинациями коричной кислоты для создания кондиционированной среды для адипоцитов, которую затем применяли для мышечных трубочек, приводила к увеличению окисления жирных кислот в мышечных трубочках на 273% (p=0,0002). Как с хинной кислотой, данные действия не ослабевали за счет добавления 200 нМ ресвератрола, и не было краткосрочного влияния на активность SIRT1. Вместо этого, похоже, что основное действие данных комбинаций опосредовано AMPK, причем влияние на SIRT1 возникает позже в течение более длительного периода времени, так как комбинации приводили к увеличению активности AMPK на 136-157% (p=0,0001; Фигура 28).
[00443] Феруловая кислота: Феруловая кислота является еще одной гидроксикоричной кислотой. Феруловая кислота встречается в природе в кофе и яблоках, а также в некоторых других фруктах, бобовых и зернах. Кривые зависимости от дозы феруловой кислоты показывают, что концентрации, составляющие 500 нМ или ниже, не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм. Комбинации феруловой кислоты оказывали сильное влияние на окисление жирных кислот. Комбинация феруловая кислота-HMB увеличивала окисление жирных кислот на 1281% (p=0,018) в адипоцитах (Фигуры 29 и 30) и на 82% в мышечных трубочках (p=0,05) (Фигуры 31 и 32). Однако, комбинация феруловая кислота-лейцин не оказывала существенного действия в адипоцитах (Фигура 30), но увеличивала окисление жирных кислот на 137% в мышечных трубочках (p=0,034; Фигура 32). Аналогично коричной кислоте, действия комбинации феруловая кислота - HMB в адипоцитах и комбинации феруловая кислота-лейцин в миоцитах не ослабевали за счет добавления ресвератрола и не было краткосрочного прямого влияния на активность SIRT1, но было существенное стимулирование активности AMPK (55-62%, p=0,05; Фигура 33).
[00444] Пицеатаннол: пицеатаннол представляет собой полифенол, классифицированный как стильбен. Он представляет собой метаболит ресвератрола и встречается в природе в красном вине. Кривые зависимости от дозы пицеатаннола показывают, что концентрации, составляющие 1 нМ или ниже, не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм. К настоящему времени, были проведены эксперименты только на окисление жирных кислот (Фигуры 34-36). Данные этих экспериментов показывают существенное влияние обеих комбинаций как в адипоцитах, так и в мышечных трубочках. Комбинация пицеатаннол-лейцин вызывала увеличение окисления жирных кислот в адипоцитах на 73% (p=0,05) и увеличение окисления жирных кислот в мышечных трубочках на 2301% (p=0,039), а комбинация пицеатаннол-HMB вызывала увеличение в адипоцитах на 60% (p=0,05) и увеличение в мышечных трубочках на 6085% (Фигура 36).
[00445] Эллаговая кислота: Эллаговая кислота представляет собой большой полифенол, встречающийся в природе в клубнике, малине и винограде, а также в ряде других растительных продуктов. Данная полифенол не оказывает существенного действия в большинстве анализов авторов, и кривые зависимости от дозы эллаговой кислоты показывали слабую активность, даже при высоких концентрациях (50 мкМ).
[00446] Галлат эпигаллокатехина (EGCG): EGCG представляет собой полифеноловый сложный эфир эпигаллокатехина и галлиевой кислоты. EGCG является преобладающим катехином в зеленом чае. Несмотря на заявления об обратном, авторы находят, что данное соединение является минимально активным для прямого стимулирования окисления жирных кислот и не выявляет синергетических эффектов либо с HMB, либо с лейцином для стимулирования окисления жирных кислот. Однако, EGCG (1 мкМ) оказывал существенное влияние на использование глюкозы, которое измеряли закислением внеклеточной среды. Данный уровень EGCG не оказывал независимого действия на использование глюкозы, но стимулировал увеличение на 94% использования глюкозы при объединении с HMB (p=0,015; Фигура 37) и увеличение на 156% использования глюкозы при объединении с лейцином (p=0,017; Фигура 37). В частности, добавление ресвератрола к данной комбинации не оказывало дополнительного эффекта, но также не ослабляло наблюдаемых эффектов. Влияние данных комбинаций на активность AMPK и SIRT1 еще не определялось.
[00447] Фукоксантин: Фукоксантин представляет собой неполифенольный пигмент, обнаруженный в бурой морской водоросли ("Sea Mustard"; Undaria pinnatifida). Кривые зависимости от дозы фукоксантина показывают, что концентрации, составляющие 100 нМ или ниже, не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм.
[00448] Обе комбинации фукоксантин-HMB и фукоксантин-лейцин оказывали потенциальное влияние на окисление жирных кислот в адипоцитах (фукоксантин-HMB, увеличение на 425%, p=0,033; фукоксантин-лейцин, увеличение на 148%, p=0,05; Фигуры 38-40) и в мышечных трубочках (фукоксантин-HMB, увеличение на 236%, p=0,05; фукоксантин-лейцин, увеличение на 82%, p=0,024). Добавление ресвератрола ни ослабляло, ни увеличивало данные эффекты.
[00449] Комбинация фукоксантина как с HMB, так и с лейцином существенно повышала использование глюкозы в мышечных трубочках и адипоцитах (Фигуры 41 и 42). Комбинация фукоксантин-HMB приводила к увеличению на 59% (p=0,038), а комбинация фукоксантин-лейцин приводила к увеличению на 63% (p=0,034) в мышечных трубочках (Фигура 41). В адипоцитах, комбинация фукоксантин-HMB приводила к увеличению на 321% (p=0,02), а комбинация фукоксантин-лейцин приводила к увеличению на 551% (p=0,003; Фигура 42).
[00450] Влияние комбинаций фукоксантина на активность AMPK и SIRT1 еще не определялось.
[00451] Экстракт виноградных косточек: Экстракт виноградных косточек (GSE) представляет собой недифференцированную смесь полифенолов, включая ресвератрол и другие встречающиеся в природе соединения в винограде. Он был выбран для изучения в качестве широкого примера синергизма с встречающейся в природе группой полифенолов. Поскольку он представляет собой смесь, невозможно определить концентрации в молярных единицах, поэтому для данного раздела используются массовые единицы. Кривые зависимости от дозы GSE показывают, что концентрации, составляющие 1 мкг/мл или ниже, не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм. GSE-лейцин повышал окисление жирных кислот в адипоцитах на 74%, но оно не достигало статистической значимости. Комбинация GSE-HMB увеличивала окисление жирных кислот на 2262% (p=0,04; Фигуры 43 и 44). Действие обеих комбинаций ослаблялось за счет добавления ресвератрола в комбинации (Фигура 44). Комбинации GSE-лейцин и GSE-HMB незначительно повышали как активность AMPK (на 40-80%, p<0,01; Фигура 45), так и активность SIRT1 (на 15-20%, p<0,03).
[00452] Метформин: Метформин, бигуанид, представляет собой широко описанное ранее пероральное гипогликемическое средство. Его известный механизм действия происходит посредством стимулирования AMPK, приводя в результате к повышенной чувствительности к инсулину, а также к повышенному окислению жиров. Соответственно, метформин, HMB, лейцин и некоторые полифенолы, обсуждавшиеся выше, сходятся на одних и тех же сигнальных путях. Соответственно, авторы стремились определить, оказывают ли комбинации метформина с данными соединениями синергетическое действие, снижая тем самым концентрацию метформина, необходимую для достижения терапевтического эффекта.
[00453] Кривые зависимости от дозы метформина показывают, что концентрации, составляющие 0,1 мМ или ниже, не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм. Данный уровень существенно ниже, чем концентрации, используемые для оценки независимого влияния метформина в клеточных исследованиях (2-10 мМ). Соединение метформина с ресвератролом (200 нМ) и HMB приводило к увеличению на 1607% окисления жирных кислот в мышечных трубочках (p=0,0001; Фигура 46), тогда как комбинация метформин-лейцин-ресвератрол вызывала увеличение на 1039% (p=0,001). Исключение ресвератрола из комбинации приводило к статистически существенным, но более незначительным, синергическим взаимодействиям с метформином (Фигура 46). Метформин-HMB вызывали увеличение на 58% окисления жирных кислот в мышечных трубочках (p=0,05), тогда как метформин-лейцин вызывали увеличение на 176% (p=0,03). Данные комбинации также существенно повышали использование глюкозы в мышечных трубочках на 61 и 51%, соответственно (p=0,028 для обеих). Как метформин-HMB, так и метформин-лейцин стимулировали использование глюкозы в мышечных трубочках на 50-60% (p=0,03; Фигура 47).
[00454] В соответствии с этими данными, данные комбинации также существенно повышали активность AMPK (Фигура 48). Комбинация метформин-HMB повышала активность AMPK в мышечных трубочках на 50% (p=0,031), а комбинация метформин-лейцин на 22%. Включение ресвератрола (200 нМ) существенно повышало данные эффекты; метформин-HMB-ресвератрол повышали активность AMPK на 86% (p=0,026), а комбинация метформин-лейцин-ресвератрол приводила к увеличению на 95% (p=0,017). Данные комбинации оказывали аналогичные воздействия на активность SIRT1. Метформин-HMB повышали активность SIRT1 на 38% и 58% в адипоцитах и мышечных трубочках, соответственно (p=0,001 для обеих). Сравнимые эффекты наблюдались для митохондриального биогенеза (метформин-HMB-ресвератрол, на 35%, p=0,001; метформин-лейцин-ресвератрол, на 27%, p=0,013; Фигура 49).
[00455] В частности, соединение метформина либо с экстрактом виноградных косточек, либо с хлорогеновой кислотой приводило к аналогичному стимулированию активности SIRT1. Метформин-экстракт виноградных косточек повышали активность на 24% (p=0,001), а метформин-хлорогеновая кислота повышали активность на 42% (p=0,004).
[00456] Росиглитазон: Росиглитазон представляет собой пероральное гипогликемическое средство в классе тиазолидинедионов (TZD). Его профиль неблагоприятных событий вызывает существенные опасения, ограничивающие его текущее применение, хотя он все-таки одобрен. TZD влияют на связывание с гамма рецептором (PPARγ), активируемым пролифератором пероксисом. Одной из мишеней PPARγ является коактиватор 1-альфа (PGC-1α) гамма рецептора, активируемого пролифератором пероксисом, регулятор митохондриального биогенеза и окисления жирных кислот, который представляет собой расположенный дальше медиатор SIRT1. Соответственно, авторы стремились определить, оказывают ли комбинации росиглитазона с соединениями, исследуемыми в данной заявке, синергетическое действие, уменьшая тем самым концентрацию метформина, необходимую для достижения терапевтического эффекта.
[00457] Кривые зависимости от дозы росиглитазона показывают, что концентрации ниже 1 нМ не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм. Данный уровень ниже, чем уровень, обычно используемый в экспериментах с клеточными культурами (10 нМ - 10 мкМ) и заметно ниже, чем уровни в плазме, обычно достигаемые вслед за в/в или пероральным дозированием (400 нМ - 1,7 мкМ).
[00458] Соединение росиглитазона либо с лейцином, либо HMB приводило к существенному стимулированию окисления жирных кислот как в мышечных трубочках (Фигура 50), так и в адипоцитах (Фигура 51). Комбинация росиглитазон-HMB стимулировала окисление жирных кислот на 521% (p=0,004), а комбинация росиглитазон-лейцин стимулировала окисление жирных кислот на 231% (p=0,023), а окисление жирных кислот в мышечных трубочках на 92% (p=0,009). Соединение росиглитазона с ресвератролом (200 нМ) также приводило к стимулированию окисления жирных кислот (на 177%, p=0,003); однако, добавление ресвератрола к комбинациям росиглитазон-HMB или росиглитазон-лейцин было не более эффективно, чем у комбинаций в отсутствии ресвератрола в мышечных трубочках и ослабляло эффект комбинаций в адипоцитах.
[00459] Соединение росиглитазона либо с HMB, либо с лейцином приводило к значительному повышению использования глюкозы (Фигура 52). Комбинация росиглитазон-HMB стимулировала увеличение на 322% (p=0,05), а комбинация росиглитазон-лейцин стимулировала увеличение на 341%. Сравнимое увеличение было обнаружено, когда ресвератрол (200 нМ) объединяли с росиглитазоном (415%, p=0,001), но добавление ресвератрола к комбинациям либо росиглитазон-HMB или росиглитазон-лейцин не увеличивало дополнительно использование глюкозы.
[00460] Ингибиторы фосфодиэстеразы (PDE): Влияние ресвератрола на активацию SIRT1 может быть частично опосредовано посредством ингибирования Фосфодиэстеразы cAMP, приводя в результате к повышающей регуляции AMPK и последующей активации SIRT1 вместо прямого эффекта. Однако, другой данный эффект может иметь отношение только к высоким (>50 мкМ) концентрациям ресвератрола. Соответственно авторы оценивали влияние различных неспецифических ингибиторов PDE следующим образом.
[00461] Кофеин представляет собой встречающийся в природе метил-ксантин, обнаруженный главным образом в кофе, чае, гуаране и падубе парагвайском. Кофеин является как антагонистом аденозина, так и неспецифичным ингибитором PDE. Кривые зависимости от дозы кофеина показывают, что концентрации ниже 10 нМ не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм. Данный уровень составляет ~0,1% концентрации в плазме, наблюдаемой вслед за употреблением кофеина (1-10 мкМ). Соединение 10 нМ кофеина с ресвератролом (200 нМ) приводило к увеличению на 254% окисления жирных кислот в мышечных трубочках (p=0,03; Фигура 53), тогда как ни один компонент не оказывал независимого действия. Соединение кофеина с 0,5 мМ лейцина стимулировало окисление жирных кислот в адипоцитах на 732% (p=0,008; Фигуры 54 и 55), а соединение кофеина с 5 мкМ HMB приводило к повышение на 334% окисления жира в мышечных трубочках (p=0,05; Фигура 53). Комбинация кофеин-лейцин также заметно улучшало использование глюкозы мышечными клетками, которое измеряли с помощью реакций закисления внеклеточной среды при добавлении глюкозы (улучшение на 574%, p=0,003). Кофеин также демонстрировал существенный синергизм с метформином (0,1 мМ), приводя в результате к увеличение на 240% окисления жирных кислот в мышечных трубочках (p=0,013; Фигура 53), хотя он не оказывал синергетического действия на использование глюкозы.
[00462] Теофиллин представляет собой метаболит кофеина, который также встречается в природе в чае и какао. Кривые зависимости от дозы теофиллина показывают, что концентрации ниже 1 мкМ не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм. Соединение теофиллина с 5 мкМ HMB приводило к увеличению на 396% окисления жирных кислот в мышечных трубочках (p=0,03; Фигура 56). Аналогичный синергизм происходил между теофиллином и ресвератролом (486%, p=0,03), тогда как соединение HMB, ресвератрола и HMB не увеличивало дополнительно данный эффект (382%, p=0,05; Фигура 56). Теофиллин демонстрировал аналогичный синергизм с HMB и лейцином в адипоцитах (Фигуры 57 и 58), хотя с ресвератролом синергизм в адипоцитах не наблюдался.
[00463] Теобромин представляет собой встречающийся в природе метилксантин, обнаруженный главным образом в какао и темном шоколаде, а также в падубе парагвайском и чае. Эксперименты проводили с экстрактом какао, стандартизированном по 12% теобромину; кривые зависимости от дозы показали, что концентрации ниже 0,1 мкг/мл не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм. Соединение экстракта какао/теобромина с 5 мкМ HMB приводило к повышению на 260% окисления жира (p=0,021), а комбинация экстракта какао/теобромина с 0,5 мМ лейцина приводила к увеличению на 673% (p=0,00035) (Фигуры 59 и 60). Соединение экстракта какао/теобромина с ресвератролом не оказывало существенного действия на окисление жиров (Фигуры 59 и 60).
[00464] Изобутилметилксантин (3-изобутил-l-метилксантин; IBMX) представляет собой метилксантин, аналогичный кофеину. Он служит в качестве как антагониста аденозина, так и в качестве неспецифичного ингибитора PDE. Кривые зависимости от дозы IBMX показывают, что концентрации ниже 50 нМ не оказывают действия; соответственно, именно эту концентрацию использовали в экспериментах на синергизм. IBMX демонстрировал слабый, но статистически значимый синергизм с HMB, но не лейцином, для стимулирования окисление жиров (увеличение на 73%, p=0,05) и использования глюкозы (на 66%, p=0,05) в мышечных трубочках.
[00465] Эти данные показывают существенные синергетические эффекты некоторых встречающихся в природе полифенолов на окисление жиров и использование глюкозы, когда данные полифенолы объединяют либо с HMB, либо с лейцином. Данные действия происходят на уровнях, которые не оказывают независимого влияния и которые легко достигаются посредством диеты или добавок. Данные действия, опосредованные подачей сигналов SIRT1 и AMPK, существенно более надежные для некоторых полифенолов, чем действия, которые авторы наблюдали ранее для низкой дозы ресвератрола, объединенной либо с HMB, либо с лейцином, и более надежные, чем действия, наблюдаемые авторами и другими для высокой дозы ресвератрола. Хлорогеновая кислота (гидроксикоричная кислота) и ее продукт гидролиза, хинная кислота, а также соединения, структурно родственные хлорогеновой кислоте (коричная кислота, феруловая кислота), оказывали особенно сильное влияние. Эффекты высокой значимости также наблюдались с метаболитом ресвератрола пицеатаннолом, а также с неполифенольным соединением из морских водорослей (фукоксантин, ксантофил, который демонстрирует высоко резонансную структуру, обычно наблюдаемую у полифенолов). Данные действия также могут быть воспроизведены с встречающимися в природе неспецифическими ингибиторами PDE. Соответственно, средние уровни лейцина и HMB могут быть использованы в синергических комбинациях с рядом полифенолов и родственных соединений для стимулирования подачи сигналов AMPK и сиртуина и достижения преимуществ, сравнимых или превышающих преимущества, обнаруженные с высокой дозой ресвератрола.
[00466] Эти данные также демонстрируют, что лейцин и HMB проявляют существенный синергизм с лекарственными препаратами, которые сходятся на одних и тех же сигнальных путях, придавая тем самым эффективность иным нетерапевтическим дозам данных лекарственных препаратов. Это может быть эффективной стратегией для снижения уровней данных лекарственных препаратов, требующихся для достижения терапевтической эффективности, ослабляя тем самым побочные эффекты и неблагоприятные события, иным образом связанные с ними.
[00467] Пример 6 - Синергетическое влияние метформина со смесью ресвератрол-гидроксиметилбутират на чувствительность к инсулину у диабетических мышей
db
db
[00468] Восьми-десяти недельных самцов диабетических мышей db/db (C57BLKS/J-lepr/lepr) рандомизировали в шесть лечебных групп (как описано ниже) с 10 животными/группе и содержали их на диете в течение 2 недель:
• группа 1 (обозначенная "контрольная группа"): только стандартная диета (AIN 93G)
• группа 2 (обозначенная "высокий метформин" (в данном случае 300 мг/кг МТ)): стандартная диета, перемешанная с 1,5 г метформина/кг рациона (расчет: среднее потребление пищи = 8 г/день, средняя МТ = 40 г, 300 мг × 0,04 кг = 12 мг метформина/день/8 г пищи = 1,5 мг Met/г рациона)
• группа 3 (обозначенная "низкий метформин" (в данном случае 150 мг/кг МТ): стандартные диета, перемешанная с 0,75 г метформина/кг рациона
• группа 4 (обозначенная "очень низкий метформин" (в данном случае 50 мг/кг МТ): стандартная диета, перемешанная с 0,25 г метформина/кг рациона
• группа 5 (обозначенная "низкий метформин плюс Resv и CaHMB"): стандартные диета, перемешанная с 0,75 г Метформина плюс 12,5 мг ресвератрола и 2 г CaHMB/кг рациона
• группа 6 (обозначенная "очень низкий метформин плюс Resv и CaHMB"): стандартная диета, перемешанная с 0,25 г Метформина плюс 12,5 мг ресвератрола и 2 г CaHMB/кг рациона.
[00469] Животных содержали в полипропиленовых клетках при комнатной температуре, равной 22±2°C и режиме 12 ч цикла свет/темнота. На протяжении всего эксперимента животные имели свободный доступ к воде и пище своего эксперимента. В период лечения (2 недели) всех животных не кормили в течение ночи, а на следующее утро гуманно умерщвляли, а кровь и ткани собирали для дальнейших экспериментов, как описано ниже.
[00470] Тест на переносимость Инсулина (ITT): тесты на переносимость Инсулина проводили в 2 часа пополудни на 7 день. Мышей внутрибрюшинно инъецировали инсулином (0,75 Ед/кг) в ~0,1 мл 0,9% NaCl. Перед инъекцией инсулина и спустя 15, 30, 45 и 60 мин из разрезанной хвостовой вены брали каплю крови (5 микролитров) для определения глюкозы в крови. Затем рассчитывали изменение глюкозы в крови на прямом участке кривой реагирования.
[00471] Инсулин: инсулин крови в сыворотке измеряли с помощью набора ELISA для инсулина от Millipore (Cat.#EZRMI-13K).
[00472] Глюкоза: глюкозу в крови измеряли с помощью набора для анализа глюкозы от Cayman (Cat. # EZRMI-13K).
[00473] Статистический Анализ: все данные выражали, как среднее±СО. Данные анализировали с помощью однофакторного дисперсионного анализа, и групповые средние с существенным различием (p< 0,05) разделяли с помощью теста наименьшего значимого различия с использованием SPSS (SPSS Inc, Chicago,IL).
[00474] Результаты
IR
IR
[00475] Высокая доза (300 мг/кг МТ) снижала инсулин в плазме на 27% (с 62 до 45 мкЕд/мл, p<0,02, фиг.61) и индекс HOMA на 35% (с 29 до 18 единиц, p<0,025, фиг.62), но не оказывала существенного влияния на глюкозу в плазме у данных животных с высокой резистентностью к инсулину. Однако не было существенного влияния на композицию тела. Низкая доза метформина (в данном случае 150 мг/кг) и очень низкая доза (50 мг/кг) не оказывали существенного независимого влияния на какие-либо изучаемые переменные. В отличие от этого, соединение либо низкой, либо очень низкой дозы метформина с HMB приводило к существенному снижению инсулина в плазме с 62 мкЕд/мл до 43 мкЕд/мл (p<0,02, фиг.61), сравнимому со снижением, наблюдаемым при высокой дозе метформина, и не было существенного различия между смесью метформин-HMB с низкой дозой по сравнению со смесью метформин-HMB с очень низкой дозой. С учетом этого наблюдения, индекс HOMA понизился с 29 единиц на контрольной диете до 19 на смеси низкий метформин-HMB и до 16 на смеси очень низкий метформин-HMB (p<0,025, фиг.62), отражая улучшение чувствительности к инсулину, сравнимое с чувствительностью, обнаруженной при высокой дозе метформина. Это также отражено в результатах теста на переносимость инсулина; животные с контролем, низкой дозой или очень низкой дозой метформина демонстрировали минимальные изменения глюкозы в крови в ответ на введение инсулина (фиг.63). В отличие от этого, животные со стандартной дозой метформина и животные либо с низкой, либо с очень низкой дозой метформина, объединенной с HMB, демонстрировали снижение на ~60 мг/дл глюкозы в крови на протяжении 30 минутного прямолинейного участка кривой реагирования (p<0,02; фиг.63). Кроме того, смеси метформин-HMB уменьшали висцеральное ожирение (фиг.64). Животные с контрольной диетой имели среднюю массу внутреннего жира, равную 4,5 г, и в отсутствии HMB на нее не оказывал влияния метформин ни с какой дозировкой. Низкая доза метформина+HMB и очень низкая доза метформина+HMB уменьшала висцеральный жир на ~20%, до 3,8 и 3,6 г, соответственно, (p<0,03; фиг.64). Данные способы лечения также уменьшали массу печени, с 2,78 г (контроль) до 2,35 г и 2,41 г, соответственно (p<0,05 и для того и для другого, фиг.65).
[00476] Пример 7 - Синергическое Влияние Системы клеточных сигналов метформина со Смесью ресвератрол-гидроксиметилбутират на Чувствительность к инсулину у диабетических мышей
[00477] Шесть групп мышей обрабатывали, как в примере 6, включая взятие крови и тканей для дальнейших экспериментов, как описано ниже.
+
[00478] Активность SIRT1: активность SIRT1 в клеточных лизатах измеряют с использованием Флуориметрического Набора для изучения лекарственных средств для SIRT1 (BML-AK555, ENZO Life Sciences International, Inc. PA, USA). В данном анализе, активность SIRT1 оценивали по степени деацетилирования стандартизированного субстрата, содержащего боковую цепь ацетилированного лизина. Использованный субстрат представляет собой пептид, содержащий аминокислоты 379-382 человека p53 (Arg-His-Lys-Lys[Ac]), мишень активности SIRT1; активность SIRT1 прямо пропорциональна степени деацетилирования Lys-382. Образцы инкубировали с пептидным субстратом (25 мкМ), и NAD(500 мкМ) в забуференном фосфатом физиологическом растворе при 37°C на горизонтальном встряхивателе в течение 45 минут. Реакцию останавливали добавлением 2 мМ никотинамида и проявляющего раствора, который связывается с деацетилированным лизином с образованием флуорофора. Вслед за 10 минутами инкубирования при 37°C, флуоресценцию считывали во флуорометре для прочтения планшетов при длине волны возбуждения, равной 360 нм, и при длине волны излучения, равной 450 нм. Ресвератрол (100 мМ) служит в качестве активатора SIRT1, а сурамин натрия (25 мМ) в качестве ингибитора SIRT1; лунки, содержащие каждый, использовали в качестве положительного и отрицательного контролей в каждой группе реакций. Стандартную кривую строили с использованием деацетилированного субстрата (0-10 мкМ). Данные нормировали к концентрации клеточного белка, измеренной посредством BCΑ-анализа.
[00479] Выделение митохондрий из клеточных лизатов: Митохондрии из ткани выделяли и лизировали с использованием набора для выделения митохондрий от BioChain (Cat# KC010100).
[00480] Активность SIRT3: активность SIRT3 измеряется с использованием Флуориметрического Набора для изучения лекарственных средств для SIRT3 (ENZO, BML-AK557) после выделения митохондрий из клеточных лизатов. Данный анализ аналогичен активности SIRT1, но использует другую аминокислотную последовательность p53 (317-320: Gln-Pro-Lys(Ac)), чем субстрат. Данный субстрат наиболее эффективно деацетилировали с помощью SIRT3.
[00481] Передача инсулинового сигнала: общие и фосфорилированные Akt, GSK-3β, IGF-1R, IR, IRS-1, p70S6K и PRAS40 в тканевых лизатах измеряют с помощью Наборов Luminex "Akt Pathway Total 7-Plex Panel" (Cat# LHO0002) и "Akt Pathway Phospho 7-Plex Panel" (Cat# LHO0001) от Invitrogen Life Science.
[00482] Активность AMPK: активность AMPK в клеточных лизатах измеряется с помощью набора для Анализа нерадиоизотопной AMPK киназы от Cyclex (Cat# CY-1182).
[00483] Выделение РНК: набор для выделения РНК Ambion ToTALLY (Ambion, Inc. Austin, tex. USA) использовали для выделения общей РНК из ткани согласно инструкциям производителей. Концентрацию, чистоту и качество и выделенной РНК оценивали посредством измерения соотношения 260/280 (1,8-2,0) и соотношения 260/230 (близко к 2,0) с помощью спектрофотометра.
[00484] Экспрессия Генов: Экспрессию 18S, SIRT1, SIRT3, PGC1-α, цитохрома c оксидазной субъединицей VIIc (COX 7), митохондриальной NADH дегидрогеназы, ядерного респираторного фактора 1 (NRF1), несвязанного белка (UCP2 (адипоцит)/UCP3 (миоцит) и GLUT4 измеряли посредством количественной ПЦР реального времени с использованием системы ПЦР реального времени ABI 7300 (Applied Biosystems, Branchburg, NJ) с базовым набором реактивов EaqMan. Все комплекты праймеров и зондов можно получить из Applied Biosystems TaqMan Assaya-on-Demand и использовать в соответствии с инструкциями производителя. Собранную РНК из каждого типа клеток серийно разбавляли в диапазоне 0,0156-50 нг и использовали для постороения стандартной кривой; общую РНК для каждого неизвестного образца также разбавляли в данном диапазоне. Реакции ПЦР с обратной транскрипцией проводили согласно инструкциям системы ABI Real-Time PCR и TaqMan Real Time PCR Core Kit. Экспрессию каждого интересующего гена затем нормировали с использованием соответствующей количественной оценки 18S рРНК. Данные для каждого гена представлены в виде соотношения с 18S рРНК.
[00485] Пример 8 - Синергистическое действие лейцина и его Метаболитов с полифенолами на иризин
[00486] Соединения с дозами, не имеющими независимого влияния на окисление жирных кислот тестировали на синергические комбинаторные эффекты на окисление жирных кислот и на секрецию иризина. Использованные соединения включали ресвератрол (200 нМ), коричную кислоту (1 мкМ), хлорогеновую кислоту (0,5 мкМ), хинную кислоту (500 нМ), кофеин (10 нМ), лейцин (0,5 мМ) и HMB (5 мкМ). Как описано в примере 5, мышечные трубочки C2C12, обработанные указанными комбинациями соединений, использовали для создания кондиционированной среды, которой затем обрабатывали адипоциты 3T3-L1. Окисление жирных кислот измеряли, как в примере 5. Уровни иризина измеряли с помощью вестерн-блоттинга и ELISA, как в кондиционированной среде, так и в плазме мышей, обработанных согласно примеру 4.
[00487] Вестерн-блоттинг: антитела FNDC5 (которые связывают иризин) были получены от Abcam (Cambridge, MA). Мышечные трубочки C2C12 обрабатывали, как описано в примере 5, с указанными комбинациями соединений, а среду и клеточные фракции получали, как описано у Bostrom et al (Nature (2012) 481:463-468). Белок измеряли с помощью набора BCA (Thermo Scientific). Для вестерн-блоттинга, 6 мкг белка (среда) или 25 мкг (клеточный лизат) разлагали на 4-20% градиентных полиакриламидных гелях (Criterion precast gel, Bio-Rad Laboratroies, Hercules, CA), переносили на мембраны PVDF, инкубировали в блокирующем буфере (3% BSA в TBS), а затем инкубировали с основным антителом (FNDC5), промывали и инкубировали с дополнительным антителом, конъюгированным с пероксидазой хрена. Визуализацию и хемилюминесцентное выявление проводили с использованием инструментария BioRad ChemiDoc и программного обеспечения (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), а интенсивность полосы оценивали с использованием Image Lab 4,0 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), с корректировкой по исходному уровню и загруженным контролям. Очищенный FNDC5 (Abeam, Cambridge, MA) использовали в качестве положительного контроля в данных окрашиваниях. FNDC5 выявляли при 26-28 кДА, а иризин выявляли при 22-24 кДА.
[00488] ELISA: иризин также выявляли в инкубационной среде C2C12 из обработанных клеток и в плазме мышей с использованием коммерческого набора для ферментного иммуноанализа, полученного от Phoenix Pharmaceuticals, Inc. (Burlingame, CA). Данный набор использует выявление с помощью иризина (FNDC5 [16-127] фрагмент) и стрептавидин-пероксидазы хрена на считывающем устройстве для микропланшетов при 450 нМ.
Результаты:
[00489] In vitro: Кондиционированная среда из клеток, обработанных комбинациями ресвератрола и лейцина, ресвератрола и HMB, коричной кислоты и лейцина, и коричной кислоты и HMB увеличивала окисление жирных кислот в адипоцитах, чего не наблюдалось для соединений при использовании по-отдельности (Фигура 66). Комбинации ресвератрола либо с лейцином, либо с HMB, коричной кислоты с HMB и хлорогеновой кислоты либо с лейцином, либо с HMB приводило к существенному увеличению экспрессии белка FNDC5 в мышечных клетках (Фигура 67), тогда как отдельные компоненты не оказывали влияния. Соединение хинной кислоты с лейцином также приводит к существенному увеличению экспрессии FNDC5 (Фигура 71) и секреции иризина в среду (Фигуры 72 и 73), тогда как отдельные компоненты не оказывают влияния. Измерение секреции иризина в среду проводили с помощью вестерн-блоттинга (Фигуры 68 и 72) и с помощью ELISA (Фигура 69). Соединение ресвератрола с лейцином приводило к увеличению секреции иризина на 234%, с 6,76 до 22,55 нг/мл (p=0,008), а комбинация ресвератрол-HMB вызывала увеличение на 122,5% (p=0,00001, Фигуры 68 и 69). Аналогичным образом, комбинация коричная кислота-лейцин стимулировала увеличение на 40% (p=0,0005), тогда как комбинация коричная кислота-HMB не стимулировала значительное высвобождение иризина в среду (Фигура 68). Хотя комбинации хлорогеновой кислоты с лейцином или HMB повышали экспрессию белка FNDC5 в мышцах, данная комбинация приводила только к незначительному, несущественному повышению секреции иризина в среду. Однако, тройная комбинация хлорогеновой кислоты, кофеина и либо лейцина, либо HMB приводит к существенному повышению как экспрессии белка FNDC5 в клетках скелетной мускулатуры, так и секреции иризина в среду (Фигура 74).
[00490] In vivo: Дополнение рациона у мышей, находящихся на рационе, вызывающем ожирение низкой дозой ресвератрола (12,5 мг/кг рациона) и двукратное увеличение лейцина диеты (с 1,21 до 2,42%) в течение шести недель приводило к увеличению на 86% иризина в плазме, с 200±23 до 372±49 нг/мл (p=0,03, Фигура 70). Низкая доза ресвератрола не оказывала независимого действия на данную переменную.
[00491] Эти данные показывают, что в дополнение к прямому стимулированию сиртуиновой сигнальной системы и окислению жирных кислот в скелетной мускулатуре и жировых клетках, комбинации лейцин-полифенол также стимулируют высвобождение иризина из скелетной мускулатуры, тем самым дополнительно способствуя окислению жиров в адипоцитах.
[00492] Пример 9 - Сигнальная система BCAA плюс композиции активатора сиртуинового пути через иризин in vitro
[00493] Мышечные трубочки C2C12 обрабатывали аминокислотой с разветвленной цепью или ее метаболитом (BCAA), активатором сиртуинового пути, и тем и другим или не обрабатывали в качестве контроля, как в примере 5. Аминокислотой с разветвленной цепью может быть лейцин, например, при 0,5 мМ. Активатором сиртуинового пути может быть ресвератрол, например, при 200 нМ. Мышечные трубочки обрабатывали согласно одному или более экспериментов, описанных в примере 5, для создания кондиционированной среды. Кондиционированную среду разделяли на два образца, один из которых не обрабатывают, и один, который обрабатывают для уменьшения или удаления иризина. Обработка для удаления или инактивации иризина может включать иммунопреципитацию иризина, добавление нейтрализующего иризин антитела или гель-фильтрацию (например, посредством фильтрования или сокультивирования мышечных трубочек с адипоцитами, где два типа клеток разделяют мембраной, имеющей размер пор меньше, чем размер иризина). Измерение мРНК и/или уровней белка Fndc5 (белка-предшественника иризина) используют для подтверждения повышенной экспрессии FNDC5, синергетически индуцированной обработкой комбинированной композицией. Измерение уровней иризина перед и после обработки кондиционированной средой (например, с помощью вестерн-блоттинга или ELISA, как описано в примере 8) используют для подтверждения повышенного продуцирования иризина в необработанной среде и степени снижения в обработанной среде. Затем адипоциты 3T3-L1 обрабатывают либо обработанной, либо необработанной кондиционированной средой. Затем измеряют пропускную способность митохондриального биогенеза, например, окисление жирных кислот, использование глюкозы, поглощение кислорода, митохондриальную массу или один или более признаков побурения жировых клеток (например, экспрессию связанных с побурением генов, например, UCP1; и увеличение окисления жирных кислот). Экспрессия генов может быть измерена, как в примере 4. Другие измерения митохондриального биогенеза могут быть проведены, как в примере 5. Ожидается, что комбинации BCAA (или метаболитов BCAA) и активаторов сиртуинового пути синергетически повышают экспрессию иризина, и что адипоциты, подвергнутые воздействию необработанной среды (как в примере 5), покажут признаки синергического повышения митохондриального биогенеза. Дополнительно ожидается, что обработка кондиционированной средой для удаления или инактивации иризина из кондиционированной среды, придающая синергетическое действие, будет существенно уменьшать митохондриальный биогенез, наблюдаемый иным образом. Подобный результат будет показывать, что комбинированные композиции данного типа оказывают по меньшей мере часть своих синергетических действий через сигнальную систему иризин.
[00494] Пример 10 - Сигнальная система BCAA плюс композиции активатора сиртуинового пути через иризин in vivo
[00495] Шестинедельные самцы мышей c57/BL6 получали рацион с высоким содержанием жиров с жиром, повышенным до 45% энергии (Диеты исследования D 12451) в течение 6 недель, чтобы вызвать ожирение. В конце данного периода индуцирования ожирения, животные были произвольно разделены на семь различных групп диетотерапии по 10 животных в группе (всего 70 животных), и их содержали на данной диете в течение 6 недель, согласно группам в примере 4. Измерения, образцы и ткани собирали, как в примере 4. Собранные ткани включали подкожную жировую ткань, которой обычно бывает белая жировая ткань. Из подкожной жировой ткани выделяли РНК, и оценивали экспрессию генов согласно способам, описанным в примере 4. Анализ экспрессии генов включал определение уровней экспрессии PGC1-α (известного активатора экспрессии Fndc5, который является прекурсором иризина) и UCP1 (селективного гена бурого жира, увеличение экспрессии которого стимулирует иризин). Также оценивали уровни иризина в плазме, результаты чего описаны в примере 8 и проиллюстрированы на Фигуре 70. Также можно оценивать мышей на увеличение других индикаторов индуцирования побурения жировых клеток, включая повышенную экспрессию в подкожном жире и другой жировой ткани одного или более других селективных генов бурого жира (например, Cidea, Prdm16 и Ndufs1). Также можно определять экспрессию белка с помощью вестерн-блоттинга или ELISA, как в примере 8. На побурение жировых клеток также указывает увеличение окисления жирных кислот в жировых клетках.
[00496] Минимальная экспрессия UCP1 была выявлена в белой подкожной жировой ткани у контрольных мышей. Однако, дополнение диеты данных мышей, находящихся на рационе, вызывающем ожирение низкой дозой ресвератрола (12,5 мг/кг рациона) и двукратное увеличение лейцина в диете (с 1,21 до 2,42%) в течение шести недель приводило к увеличению на 344% экспрессии UCP1 (p<0,05, Фигура 75). Низкая доза ресвератрола не оказывала независимого действия на данную переменную, а комбинация HMB-ресвератрол не оказывала ощутимого эффекта. В соответствии с данными наблюдениями, была соответствующая двукратная повышающая регуляция экспрессии PGC1-α в белой жировой ткани в ответ на введение комбинации ресвератрол-лейцин (p=0,04, Фигура 76).
[00497] Эти данные показывают, что в дополнение к прямому стимулированию сиртуиновой сигнальной системы и окислению жирных кислот в скелетной мускулатуре и жировых клетках, комбинация ресвератрол-лейцин также стимулирует побурение белой жировой ткани. Это коррелирует с наблюдениями авторов, что комбинация лейцина-ресвератрола стимулирует высвобождение иризина из мышц как in vitro, так и in vivo (см., например, пример 8).
[00498] Из изложенного выше должно быть понятно, что, несмотря на то что были проиллюстрированы и описаны отдельные варианты осуществления, в них могут быть сделаны и в данном описании предполагаются различные модификации. Также не предполагается, что изобретение должно быть ограничено конкретными примерами, предоставленными в пределах описания. Несмотря на то, что изобретение было описано со ссылкой на изложенное выше описание, описания и иллюстрации предпочтительных вариантов осуществления в данном описании не означают толкование в смысле ограничения. Кроме того, должно быть понятно, что все аспекты изобретения не ограничены конкретными изображениями, конфигурациями или относительными соотношениями, изложенными в данном описании, которые зависят от множества условий и переменных. Различные модификации в форме и подробностях вариантов осуществления изобретения будут ясны квалифицированным специалистам в данной области. Вследствие этого предполагается, что изобретение также будет охватывать любые подобные модификации, варианты и эквиваленты.