СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАДИОАКТИВНО-МЕЧЕНОГО ПЕПТИДА

1. Способ получения радиоактивно-меченого пептида, включающий следующие стадии, на которых:
(a) готовят прекурсорную молекулу, которую выбирают из группы, состоящей из аминокислоты, пептида и первичного амина, в органическом растворителе;
(b) добавляют к прекурсорной молекуле радиоактивно-меченое соединение, которое имеет карбоксильную функциональную группу;
(c) активируют карбоксильную функциональную группу радиоактивно-меченого соединения; и
(d) проводят сочетание активированного радиоактивно-меченого соединения с прекурсорной молекулой с образованием радиоактивно-меченого пептида,
отличающийся тем, что
радиоактивно-меченое соединение представляет собой изоцианокарбоновую кислоту.
2. Способ по п.1,
отличающийся тем, что
что органический растворитель выбирают из группы, состоящей из метиленхлорида, хлороформа, дихлорэтана, диметилформамида, диметилацетамида, тетрагидрофурана, этилацетата, ацетонитрила и их комбинации.
3. Способ по п.1,
отличающийся тем, что
11
радиоактивно-меченая изоцианокарбоновая кислота включает радиоактивно-меченый углерод, предпочтительно С.
4. Способ по п.1, дополнительно включающий стадии, на которых:
(а1) проводят гидролиз присоединенной к прежней прекурсорной молекуле изоцианокарбоновой кислоты, причем из изоцианогруппы образуется аминогруппа;
(а2) прибавляют дополнительную аминокислоту или немаркированную изоцианокарбоновую кислоту, которые в каждом случае включают карбоксильную функциональную группу, к приготовленной прекурсорной молекуле;
(а3) активируют карбоксильную функциональную группу в дополнительной аминокислоте или немаркированной изоцианокарбоновой кислоте;
(а4) проводят сочетание приготовленной прекурсорной молекулы с дополнительной аминокислотой или немаркированной изоцианокарбоновой кислотой через амидную связь с образованием пептида; и
(а5) повторяют стадии (а2)-(а4) до достижения желательной величины пептида, причем для случая, что в стадии (а2) прибавляли немаркированную изоцианокарбоновую кислоту, также повторяют стадию (а1), и для случая, что в стадии (а2) использовали дополнительную аминокислоту, проводят отщепление защитной группы от аминной функциональной группы в основной цепи приготовленной прекурсорной молекулы.
5. Способ по п.1,
отличающийся тем, что
изоцианокарбоновая кислота представляет собой альфа-изоцианокарбоновую кислоту.
6. Способ по п.1,
отличающийся тем, что
активирование карбоксильной функциональной группы включает преобразование изоцианокарбоновой кислоты и/или дополнительной аминокислоты в реакционноспособное вещество, которое выбирают из группы, состоящей из активного сложного эфира, ангидрида, пентафторфенилового сложного эфира, сложного тиоэфира, имидазолида, галогенангидрида карбоновой кислоты и диметиламинопиридинового производного.
7. Способ по п.1,
отличающийся тем, что
изоцианокарбоновую кислоту преобразуют в активный сложный эфир реакцией со сшивающим реагентом, выбранным из группы, состоящей из реагента на основе соли гуанидиния, реагента на основе урониевой соли, предпочтительно гексафторфосфата 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (HBTU), тетрафторбората О-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония (TBTU), или гексафторфосфата 2-(1Н-7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (HATU), реагента на основе бензотриазола, предпочтительно 1-гидроксибензотриазола (HOBt) в качестве реагента, реагента на основе иммониевых солей, реагента на основе карбодиимида, предпочтительно N,N'-дициклогексилкарбодиимида (DCC) или диизопропилкарбодиимида (DIPCDI), реагента на основе соли имидазолия, фосфорорганического реагента, кислотного галогенированного реагента, реагента на основе фосфониевой соли, предпочтительно гексафторфосфата бензотриазол-1-ил-окси-трис-(диметиламино)фосфония (ВОР) или гексафторфосфата (бензотриазол-1-илокси)-трипирролидинофосфония (PyBOP), морфолинового реагента, предпочтительно N-метилморфолина (NMM), хлорформиатного реагента и их комбинации.
8. Способ по п.1,
отличающийся тем, что
по меньшей мере одну функциональную группу в одной боковой цепи прекурсорной молекулы, изоцианокарбоновой кислоте и/или дополнительной аминокислоте блокируют защитной группой, причем функциональную группу выбирают из группы, состоящей из гидроксильной функциональной группы, карбоксильной функциональной группы и аминной функциональной группы.
9. Способ по п.1,
отличающийся тем, что
карбоксильную функциональную группу и/или аминную функциональную группу в основной цепи прекурсорной молекулы и/или аминную функциональную группу в основной цепи дополнительной аминокислоты блокируют защитной группой.
10. Способ по п.8 или 9,
отличающийся тем, что
защитную группу выбирают из группы, состоящей из устойчивой к основаниям защитной группы, трет-бутилоксикарбонильной защитной группы и 9-флуоренилметоксикарбонильной защитной группы.
11. Способ по п.9, дополнительно включающий стадии, на которых;
(а1) отщепляют защитную группу от аминной функциональной группы в основной цепи приготовленной прекурсорной молекулы;
(а2) прибавляют дополнительную аминокислоту к прекурсорной молекуле, аминогруппа в основной цепи которой защищена;
(а3) активируют карбоксильную функциональную группу в основной цепи дополнительной аминокислоты
(а4) проводят сочетание прекурсорной молекулы с дополнительной аминокислотой через амидную связь с образованием пептида; и
(а5) повторяют стадии (а1)-(а4) до достижения желательной величины пептида.
12. Способ по п.10, дополнительно включающий стадии, на которых:
(а1) отщепляют защитную группу от аминной функциональной группы в основной цепи приготовленной прекурсорной молекулы;
(а2) прибавляют дополнительную аминокислоту к прекурсорной молекуле, аминогруппа в основной цепи которой защищена;
(а3) активируют карбоксильную функциональную группу в основной цепи дополнительной аминокислоты
(а4) проводят сочетание прекурсорной молекулы с дополнительной аминокислотой через амидную связь с образованием пептида; и
(а5) повторяют стадии (а1)-(а4) до достижения желательной величины пептида.
13. Способ по п.10,
отличающийся тем, что
9-флуоренилметоксикарбонильную защитную группу отщепляют аммиаком, первичным амином или вторичным амином, предпочтительно 4-аминометилпиперидином, пиперидином или трис-(2-аминоэтил)амином.
14. Способ по п.10,
отличающийся тем, что
трет-бутилоксикарбонильную защитную группу отщепляют протонами.
15. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию, на которой:
проводят гидролиз присоединенной к прекурсорной молекуле изоцианокарбоновой кислоты, причем из изоцианогруппы образуется аминогруппа.
16. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию, на которой:
отщепляют защитную группу от радиоактивно-меченого пептида.
17. Способ по п.1,
отличающийся тем, что
прекурсорная молекула связана с твердой фазой.
18. Способ по п.17,
отличающийся тем, что
твердую фазу выбирают из группы, состоящей из полистирольной смолы, 2',4'-диметоксифенил-гидроксиметил-феноксильной смолы, пара-метилбензгидриламинной смолы, фенилацетамидометильной смолы и оксимной смолы.
19. Способ по п.17 или 18, дополнительно включающий стадию, на которой:
отщепляют радиоактивно-меченый пептид от твердой фазы.
20. Способ по п.15,
отличающийся тем, что
одновременно с отщеплением прекурсорной молекулы от твердой фазы происходит гидролиз.
21. Способ по п.19,
отличающийся тем, что
одновременно с отщеплением прекурсорной молекулы от твердой фазы происходит гидролиз.
22. Способ по п.15 или 16,
отличающийся тем, что
гидролиз происходит синхронно с отщеплением радиоактивно-меченого пептида от твердой фазы и снятием защитных групп с радиоактивно-меченого пептида.
23. Способ по п.19,
отличающийся тем, что
гидролиз происходит синхронно с отщеплением радиоактивно-меченого пептида от твердой фазы и снятием защитных групп с радиоактивно-меченого пептида.
24. Применение радиоактивно-меченой изоцианокарбоновой кислоты для получения радиоактивно-меченого пептида.