АНТИТЕЛА ПРОТИВ PD-1 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, связывающееся с PD-1 (белком 1 программируемой гибели клеток), содержащее:
вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую определяющие комплементарность области (CDR) 1, 2 и 3, где область CDR1 VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична выбранной аминокислотной последовательности CDR1 VH, область CDR2 VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична выбранной аминокислотной последовательности CDR2 VH, и область CDR3 VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична выбранной аминокислотной последовательности CDR3 VH; и
вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую CDR 1, 2 и 3, где область CDR1 VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична выбранной аминокислотной последовательности CDR1 VL, область CDR2 VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична выбранной аминокислотной последовательности CDR2 VL, и область CDR3 VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична выбранной аминокислотной последовательности CDR3 VL,
где выбранные аминокислотные последовательности CDR 1, 2 и 3 VH и выбранные аминокислотные последовательности CDR 1, 2 и 3 VL представляет собой одно из следующих:
(1) выбранные аминокислотные последовательности CDR 1, 2, 3 VH приведены в SEQ ID NO:1, 2, 3 соответственно, и выбранные аминокислотные последовательности CDR 1, 2, 3 VL приведены в SEQ ID NO:4, 5, 6 соответственно;
(2) выбранные аминокислотные последовательности CDR 1, 2, 3 VH приведены в SEQ ID NO:7, 8, 9 соответственно, и выбранные аминокислотные последовательности CDR 1, 2, 3 VL приведены в SEQ ID NO:10, 11, 12 соответственно;
(3) выбранные аминокислотные последовательности CDR 1, 2, 3 VH приведены в SEQ ID NO:7, 13, 14 соответственно, и выбранные аминокислотные последовательности CDR 1, 2, 3 VL приведены в SEQ ID NO:10, 11, 15 соответственно.
2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где VH содержит CDR 1, 2, 3 с аминокислотными последовательностями, приведенными в SEQ ID NO:1, 2 и 3 соответственно, и VL содержит CDR 1, 2, 3 с аминокислотными последовательностями, приведенными в SEQ ID NO:4, 5 и 6 соответственно.
3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где VH содержит CDR 1, 2, 3 с аминокислотными последовательностями, приведенными в SEQ ID NO:7, 8 и 9 соответственно, и VL содержит CDR 1, 2, 3 с аминокислотными последовательностями, приведенными в SEQ ID NO:10, 11 и 12 соответственно.
4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где VH содержит CDR 1, 2, 3 с аминокислотными последовательностями, приведенными в SEQ ID NO:7, 13 и 14 соответственно, и VL содержит CDR 1, 2, 3 с аминокислотными последовательностями, приведенными в SEQ ID NO:10, 11 и 15 соответственно.
5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-4, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент специфически связывается с PD-1 человека.
6. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-5, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент является гуманизированным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом.
7. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент является одноцепочечным вариабельным фрагментом (scFV).
8. Нуклеиновая кислота, содержащая полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий:
(1) тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую определяющие комплементарность области (CDR) 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:1, 2 и 3 соответственно, и где VH при спаривании с вариабельной областью легкой цепи (VL), содержащей аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:29, 30, 31 или 40, связывается с PD-1;
(2) легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VL, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:4, 5 и 6 соответственно, и где VL при спаривании с VH, содержащей аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:26, 27, 28 или 39, связывается с PD-1;
(3) тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:7, 8, и 9 соответственно, и где VH при спаривании с вариабельной областью легкой цепи (VL), содержащей аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:36, 37, 38 или 42, связывается с PD-1;
(4) легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VL, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:10, 11 и 12 соответственно, и где VL при спаривании с VH, содержащей аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:32, 33, 34, 35 или 41, связывается с PD-1;
(5) тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:7, 13, и 14 соответственно, и где VH при спаривании с вариабельной областью легкой цепи (VL), содержащей аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:44, связывается с PD-1;
(6) легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VL, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:10, 11 и 15 соответственно, и где VL при спаривании с VH, содержащей аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:43, связывается с PD-1.
9. Нуклеиновая кислота по п.8, где нуклеиновая кислота содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VH, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:1, 2 и 3 соответственно.
10. Нуклеиновая кислота по п.8, где нуклеиновая кислота содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VL, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:4, 5 и 6 соответственно.
11. Нуклеиновая кислота по п.8, где нуклеиновая кислота содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VH, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:7, 8 и 9 соответственно.
12. Нуклеиновая кислота по п.8, где нуклеиновая кислота содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VL, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:10, 11 и 12 соответственно.
13. Нуклеиновая кислота по п.8, где нуклеиновая кислота содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VH, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:7, 13 и 14 соответственно.
14. Нуклеиновая кислота по п.8, где нуклеиновая кислота содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, содержащие VL, содержащую CDR 1, 2 и 3, содержащие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:10, 11 и 15 соответственно.
15. Нуклеиновая кислота по любому из пп.8-14, где VH при спаривании с VL специфически связывается с PD-1 человека, или VL при спаривании с VH специфически связывается с PD-1 человека.
16. Нуклеиновая кислота по любому из пп.8-15, где тяжелая цепь иммуноглобулина или ее фрагмент является гуманизированной тяжелой цепью иммуноглобулина или ее фрагментом, и легкая цепь иммуноглобулина или ее фрагмент является гуманизированной легкой цепью иммуноглобулина или ее фрагментом.
17. Нуклеиновая кислота по любому из пп.8-16, где нуклеиновая кислота кодирует одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv).
18. Нуклеиновая кислота по любому из пп.8-17, где нуклеиновая кислота является кДНК.
19. Вектор, содержащий одну или более из нуклеиновых кислот по любому из пп.8-18.
20. Вектор, содержащий две из нуклеиновых кислот по любому из пп.8-18, где вектор кодирует область VL и область VH, вместе связывающиеся сPD-1.
21. Пара векторов, где каждый вектор содержит одну из нуклеиновых кислот по любому из пп.8-18, где пара векторов совместно кодирует область VL и область VH, вместе связывающиеся с PD-1.
22. Клетка, содержащая вектор по п.19 или 20 или пару векторов по п.21.
23. Клетка по п.22, где клетка является клеткой CHO.
24. Клетка, содержащая одну или более из нуклеиновых кислот по любому из пп.8-18.
25. Клетка, содержащая две из нуклеиновых кислот по любому из пп.8-18.
26. Клетка по п.25, где две нуклеиновые кислоты совместно кодируют область VL и область VH, вместе связывающиеся с PD-1.
27. Способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающий:
(a) культивирование клетки по любому из пп.22-26 в условиях, достаточных для того, чтобы клетка продуцировала антитело или антигенсвязывающий фрагмент; и
(b) сбор антитела или антигенсвязывающего фрагмента, продуцируемых клеткой.
28. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, связывающееся с PD-1, содержащее
вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична выбранной последовательности VH, и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична выбранной последовательности VL, где выбранная последовательность VH и выбранная последовательность VL являются одними из следующих:
(1) выбранная последовательность VH представляет собой SEQ ID NO:26, 27, 28 или 39, и выбранная последовательность VL представляет собой SEQ ID NO:29, 30, 31 или 40;
(2) выбранная последовательность VH представляет собой SEQ ID NO:32, 33, 34, 35 или 41, и выбранная последовательность VL представляет собой SEQ ID NO:36, 37, 38 или 42;
(3) выбранная последовательность VH представляет собой SEQ ID NO:43, и выбранная последовательность VL представляет собой SEQ ID NO:44.
29. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.28, где VH содержит последовательность SEQ ID NO:26, и VL содержит последовательность SEQ ID NO:31.
30. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.28, где VH содержит последовательность SEQ ID NO:27, и VL содержит последовательность SEQ ID NO:31.
31. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.28-31, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент специфически связывается с PD-1 человека.
32. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.28-32, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент является гуманизированным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом.
33. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.28-30, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент является одноцепочечным вариабельным фрагментом (scFV).
34. Конъюгат антитело-лекарственное средство, содержащий антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7 и 28-33, ковалентно связанные с терапевтическим средством.
35. Конъюгат антитело-лекарственное средство по п.34, где терапевтическое средство является цитотоксическим или цитостатическим средством.
36. Способ лечения индивидуума, имеющего злокачественное новообразование, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества композиции, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7 и 28-33 или конъюгат антитело-лекарственное средство по п.34 или 35.
37. Способ по п.36, где индивидуум имеет солидную опухоль.
38. Способ по п.36, где злокачественное новообразование является неоперабельной меланомой или метастазирующей меланомой.
39. Способ по п.36, где злокачественное новообразование является немелкоклеточным раком легких (NSCLC), плоскоклеточной карциномой головы и шеи (SCCHN), раком головы и шеи, почечноклеточной карциномой (RCC), меланомой, раком мочевого пузыря, раком желудка, уротелиальным раком, карциномой из клеток Меркеля, трижды негативным раком молочной железы (TNBC) или колоректальной карциномой.
40. Способ снижения скорости роста опухоли, включающий приведение опухолевой клетки в контакт с эффективным количеством композиции, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7 и 28-33 или конъюгат антитело-лекарственное средство по п.34 или 35.
41. Способ уничтожения опухолевой клетки, включающий приведение опухолевой клетки в контакт с эффективным количеством композиции, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7 и 28-33 или конъюгат антитело-лекарственное средство по п.34 или 35.
42. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7 и 28-33 и фармацевтически приемлемый носитель.
43. Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат антитело-лекарственное средство по п.34 или 35 и фармацевтически приемлемый носитель.