СПОСОБ ГЛИКОКОНЪЮГАЦИИ

1. Способ получения гликоконъюгата, содержащего сахарид, конъюгированный с белком-носителем, включающий стадии:
а) приведения сахарида во взаимодействие со стабильным нитроксил-радикальным соединением и окислителем с получением активированного сахарида; и
б) приведения активированного сахарида во взаимодействие с белком-носителем, содержащим одну или более чем одну аминогруппу.
2. Способ по п. 1, где указанное стабильное нитроксил-радикальное соединение представляет собой пиперидин-N-окси- или пирролидин-N-окси-соединение, обладающее способностью селективно окислять первичные спирты в присутствии окислителя с образованием альдегидных групп без воздействия на вторичные гидроксильные группы.
3. Способ по п. 1, где указанное стабильное нитроксил-радикальное соединение представляет собой пиперидин-N-окси- или пирролидин-N-окси-соединение, обладающее способностью селективно окислять первичные спирты в присутствии окислителя с образованием альдегидных групп без сверхокисления до карбоксильных групп.
4. Способ по п. 1, где указанное стабильное нитроксил-радикальное соединение представляет собой молекулу, несущую группировку TEMPO (2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси) или PROXYL (2,2,5,5-тетраметил-1-пирролидинилокси), обладающую способностью селективно окислять первичные спирты в присутствии окислителя с образованием альдегидных групп без воздействия на вторичные гидроксильные группы.
5. Способ по п. 1, где указанное стабильное нитроксил-радикальное соединение представляет собой молекулу, несущую группировку TEMPO или PROXYL (2,2,5,5-тетраметил-1-пирролидинилокси), обладающую способностью селективно окислять первичные спирты в присутствии окислителя с образованием альдегидных групп без сверхокисления до карбоксильных групп.
6. Способ по п. 1, где указанное нитроксил-радикальное соединение выбрано из группы, состоящей из TEMPO, 2,2,6,6-тетраметил-4-(метилсульфонилокси)-1-пиперидиноокси, 4-фосфоноокси-ТЕМРО, 4-оксо-TEMPO, 4-метокси-ТЕМРО, 4-изотиоцианато-ТЕМРО, свободного радикала 4-(2-йодацетамидо)-ТЕМРО, 4-гидрокси-ТЕМРО, 4-циано-ТЕМРО, 4-карбокси-ТЕМРО, 4-(2-бромацетамидо)-ТЕМРО, 4-амино-ТЕМРО, 4-ацетамидо-2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксила.
7. Способ по п. 1, где указанное нитроксил-радикальное соединение выбрано из группы, состоящей из 3β-DOXYL-5α-холестана (3β-4,4-диметил-3-оксазолинилокси-5α-холестана), 5-DOXYL-стеариновой кислоты, 16-DOXYL-стеариновой кислоты, метил-5-DOXYL-стеарата, 3-(аминометил)-PROXYL, 3-карбамоил-PROXYL, 3-карбамоил-2,2,5,5-тетраметил-3-пирролин-1-оксила, 3-карбокси-PROXYL, 3-циано-PROXYL.
8. Способ по п. 1, где указанное нитроксил-радикальное соединение представляет собой TEMPO или его производное.
9. Способ по п. 1, где указанный окислитель представляет собой молекулу, несущую группировку N-галоген, обладающую способностью селективно окислять первичные спирты в присутствии нитроксил-радикального соединения с образованием альдегидных групп.
10. Способ по п. 1, где указанный окислитель выбран из группы, состоящей из N-хлорсукцинимида, N-бромсукцинимида, N-йодсукцинимида, дихлоризоциануровой кислоты, 1,3,5-трихлор-1,3,5-триазинан-2,4,6-триона, дибромизоциануровой кислоты, 1,3,5-трибром-1,3,5-триазинан-2,4,6-триона, дийодизоциануровой кислоты и 1,3,5-трийод-1,3,5-триазинан-2,4,6-триона.
11. Способ по п. 1, где указанный окислитель представляет собой N-хлорсукцинимид.
12. Способ по п. 1, где стадию (а) приведения во взаимодействие осуществляют в водном растворителе.
13. Способ по п. 1, где стадию (а) приведения во взаимодействие осуществляют в апротонном растворителе.
14. Способ по п. 1, где стадию (а) приведения во взаимодействие осуществляют в DMSO (диметилсульфоксидном) растворителе.
15. Способ по п. 1, где сахарид приводят во взаимодействие с 0,1-10 молярными эквивалентами окислителя.
16. Способ по п. 15, где сахарид приводят во взаимодействие с 0,5-1,5 молярными эквивалентами окислителя.
17. Способ по любому из пп. 1-16, где указанное стабильное нитроксил-радикальное соединение присутствует в каталитическом количестве.
18. Способ по любому из пп. 1-16, где сахарид приводят во взаимодействие с менее чем примерно 0,3 молярными эквивалентами стабильного нитроксил-радикального соединения.
19. Способ получения гликоконъюгата, содержащего сахарид, конъюгированный с белком-носителем, включающий стадии:
а) приведения сахарида во взаимодействие с 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси (TEMPO) и N-хлорсукцинимидом (NCS) в водном растворителе с получением активированного сахарида; и
б) приведения активированного сахарида во взаимодействие с белком-носителем, содержащим одну или более чем одну аминогруппу.
20. Способ по п. 1 или 19, где степень окисления активированного сахарида находится в диапазоне от 3 до 40.
21. Способ по п. 20, где степень окисления активированного сахарида находится в диапазоне от 6 до 14.
22. Способ по п. 1 или 19, где сахарид представляет собой бактериальный капсульный полисахарид.
23. Способ по п. 22, где капсульный полисахарид имеет происхождение из S. pneumoniae.
24. Способ по п. 23, где капсульный полисахарид выбран из капсульных полисахаридов Pn-серотипа 3 (пневмококкового серотипа 3), Pn-серотипа 10А, Pn-серотипа 12F и Pn-серотипа 33F.
25. Способ по п. 24, где капсульный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Pn-серотипа 12F.
26. Способ по п. 22, где капсульный полисахарид имеет происхождение из N. meningitidis.
27. Способ по п. 26, где капсульный полисахарид выбран из капсульных полисахаридов менингококков (Mn)-серотипов А, С, W135 и Y.
28. Способ по п. 26, где капсульный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид менингококков (Mn)-серотипа X.
29. Способ по п. 22, где капсульный полисахарид имеет происхождение из Streptococcus группы В (GBS).
30. Способ по п. 29, где капсульный полисахарид выбран из серотипов GBS Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII и VIII.
31. Способ по п. 1 или 19, где белок-носитель представляет собой столбнячный, дифтерийный, коклюшный токсин, токсин Pseudomonas, Е. coli, Staphylococcus или Streptococcus.
197
32. Способ по п. 1 или 19, где белок-носитель представляет собой CRM.
33. Способ по п. 1 или 19, где сахарид имеет синтетическое происхождение.
34. Способ по п. 1 или 19, где перед стадией (а) сахарид доводят до требуемого размера.
35. Способ по п. 34, где сахарид гидролизуют или механически доводят до требуемого размера.
36. Способ по п. 34, где сахарид гидролизуют или механически доводят до требуемого размера посредством гомогенизации под давлением с получением молекулярной массы от 50 до 500 кДа.
37. Способ по п. 1 или 19, где перед стадией (а) сахарид гидролизуют до молекулярной массы в диапазоне от 100 до 400 кДа.
38. Способ по п. 37, где сахарид гидролизуют до молекулярной массы в диапазоне от 150 до 350 кДа.
39. Способ по п. 1 или 19, дополнительно включающий стадию очистки активированного полисахарида перед стадией (б).
40. Способ по п. 1 или 19, дополнительно включающий стадию добавления восстановителя после стадии (б).
3
41. Способ по п. 40, где восстановитель представляет собой NaCNBH.
4
3
42. Способ по п. 41, дополнительно включающий стадию добавления NaBH после добавления NaCNBH.
4
43. Способ по п. 42, дополнительно включающий стадию очистки после добавления NaBH.
44. Гликоконъюгат, полученный способом по любому из пп. 1-43.
45. Гликоконъюгат, получаемый способом по любому из пп. 1-43.
46. Гликоконъюгат по п. 44 или 45, имеющий молекулярную массу от примерно 50 кДа до примерно 20000 кДа.
47. Гликоконъюгат по п. 44 или 45, имеющий молекулярную массу от примерно 500 кДа до примерно 5000 кДа.
48. Гликоконъюгат по п. 44 или 45, имеющий молекулярную массу от примерно 1000 кДа до примерно 3000 кДа.
49. Гликоконъюгат по п. 44 или 45, имеющий молекулярную массу от примерно 600 кДа до примерно 2800 кДа; от примерно 700 кДа до примерно 2700 кДа; от примерно 1000 кДа до примерно 2000 кДа; от примерно 1800 кДа до примерно 2500 кДа; от примерно 1100кДа до примерно 2200 кДа; от примерно 1900 кДа до примерно 2700 кДа; от примерно 1200 кДа до примерно 2400 кДа; от примерно 1700 кДа до примерно 2600 кДа; от примерно 1300 кДа до примерно 2600 кДа или от примерно 1600 кДа до примерно 3000 кДа.
50. Гликоконъюгат по п. 44 или 45, содержащий бактериальный капсульный полисахарид, имеющий молекулярную массу от 10 до 2000 кДа.
51. Гликоконъюгат по п. 44 или 45, содержащий бактериальный капсульный полисахарид, имеющий молекулярную массу от 50 до 1000 кДа.
52. Гликоконъюгат по п. 44 или 45, содержащий менее чем примерно 30% свободного сахарида относительно общего количества полисахарида.
53. Гликоконъюгат по п. 44 или 45, содержащий менее чем примерно 20, 15, 10 или 5% свободного полисахарида относительно общего количества полисахарида.
197
54. Гликоконъюгат по п. 44 или 45, где белок-носитель представляет собой CRM.
55. Гликоконъюгат по п. 44 или 45, где соотношение сахарид: белок-носитель (мас./мас.) составляет от 0,2 до 4.
56. Гликоконъюгат по п. 44 или 45, где соотношение сахарид: белок-носитель (мас./мас.) составляет от 1,1 до 1,7.
57. Гликоконъюгат по п. 44 или 45, где на каждые 100 повторяющихся сахаридных единиц полисахарида присутствует по меньшей мере одна ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом.
58. Гликоконъюгат по п. 57, где ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом встречается по меньшей мере один раз на каждые 4 повторяющиеся сахаридные единицы полисахарида.
59. Гликоконъюгат по п. 57, где ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом встречается по меньшей мере один раз на каждые 10 повторяющихся сахаридных единиц полисахарида.
60. Гликоконъюгат по п. 57, где ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом встречается по меньшей мере один раз на каждые 15 повторяющихся сахаридных единиц полисахарида.
61. Гликоконъюгат по п. 57, где ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом встречается по меньшей мере один раз на каждые 20 повторяющихся сахаридных единиц полисахарида.
62. Гликоконъюгат по п. 57, содержащий по меньшей мере одну ковалентную связь между белком-носителем и сахаридом на каждые 5-10 повторяющихся сахаридных единиц.
63. Гликоконъюгат по п. 57, содержащий по меньшей мере одну ковалентную связь между белком-носителем и сахаридом на каждые 2-7 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 3-8 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 4-9 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 6-11 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 7-12 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 8-13 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 9-14 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 10-15 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 2-6 повторяющихся сахаридных единиц, на каждые 3-7 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 4-8 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 6-10 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 7-11 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 8-12 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 9-13 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 10-14 повторяющихся сахаридных единиц; на каждые 10-20 повторяющихся сахаридных единиц или на каждые 4-25 повторяющихся сахаридных единиц.
64. Иммуногенная композиция, содержащая гликоконъюгат по любому из пп. 44-63 и фармацевтически приемлемый эксципиент, носитель или разбавитель.
65. Иммуногенная композиция по п. 64, дополнительно содержащая дополнительный антиген.
66. Иммуногенная композиция по п. 65, где дополнительный антиген содержит белковый антиген или гликоконъюгат капсульного полисахарида, имеющего происхождение из S. pneumoniae.
67. Иммуногенная композиция по п. 66, где дополнительный антиген содержит гликоконъюгат капсульного полисахарида, выбранного из капсульных полисахаридов Pn-серотипов 1, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 8, 9V, 11А, 14, 15В, 18С, 19А, 19F, 22F и 23F.
68. Иммуногенная композиция по п. 65, где дополнительный антиген содержит белковый антиген или гликоконъюгат капсульного полисахарида, имеющего происхождение из N. meningitidis.
69. Иммуногенная композиция по п. 68, где дополнительный антиген содержит гликоконъюгат капсульного полисахарида, выбранного из капсульных полисахаридов серотипов А, С, W135 и Y.
70. Иммуногенная композиция по п. 65, где дополнительный антиген содержит гликоконъюгат капсульного полисахарида, имеющего происхождение из Streptococcus группы В (GBS).
71. Иммуногенная композиция по п. 70, где дополнительный антиген содержит гликоконъюгат капсульного полисахарида, выбранного из серотипов GBS Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII и VIII.
72. Иммуногенная композиция по п. 64, дополнительно содержащая адъювант.
73. Иммуногенная композиция по п. 72, где адъювант представляет собой адъювант на основе алюминия.
74. Иммуногенная композиция по п. 73, где адъювант на основе алюминия выбран из группы, состоящей из фосфата алюминия, сульфата алюминия и гидроксида алюминия.
75. Иммуногенная композиция, содержащая Pn-серотип 12F, конъюгированный с белком-носителем, где количество свободного полисахарида Pn-серотипа 12F в композиции составляет менее 35% после 120 суток от ее изготовления.
76. Иммуногенная композиция по п. 75, где количество свободного полисахарида Pn-серотипа 12F составляет менее 30% после 120 суток от ее изготовления.
77. Иммуногенная композиция по п. 75, где белок-носитель представляет собой столбнячный, дифтерийный, коклюшный токсин, токсин Pseudomonas, E. coli, Staphylococcus или Streptococcus.
197
78. Иммуногенная композиция по п. 75, где белок-носитель представляет собой CRM.
79. Иммуногенная композиция по п. 75, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый эксципиент, носитель или разбавитель.
80. Иммуногенная композиция по п. 75, дополнительно содержащая дополнительный антиген.
81. Иммуногенная композиция по п. 80, где дополнительный антиген содержит белковый антиген или гликоконъюгат капсульного полисахарида, имеющего происхождение из S. pneumoniae.
82. Иммуногенная композиция по п. 81, где дополнительный антиген содержит гликоконъюгат капсульного полисахарида, выбранного из капсульных полисахаридов Pn-серотипов 1, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 8, 9V, 11А, 14, 15В, 18С, 19А, 19F, 22F и 23F.
83. Иммуногенная композиция по п. 82, где дополнительный антиген содержит белковый антиген или гликоконъюгат капсульного полисахарида, имеющего происхождение из N meningitidis.
84. Иммуногенная композиция по п. 83, где дополнительный антиген содержит гликоконъюгат капсульного полисахарида, выбранного из капсульных полисахаридов серотипов А, С, W135 и Y.
85. Иммуногенная композиция по п. 83, где дополнительный антиген содержит гликоконъюгат капсульного полисахарида серотипа X.
86. Иммуногенная композиция по п. 80, где дополнительный антиген содержит гликоконъюгат капсульного полисахарида, имеющего происхождение из Streptococcus группы В (GBS).
87. Иммуногенная композиция по п. 86, где дополнительный антиген содержит гликоконъюгат капсульного полисахарида, выбранного из серотипов GBS Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII и VIII.
88. Иммуногенная композиция по п. 75, дополнительно содержащая адъювант.
89. Иммуногенная композиция по п. 88, где адъювант представляет собой адъювант на основе алюминия.
90. Иммуногенная композиция по п. 89, где адъювант на основе алюминия выбран из группы, состоящей из фосфата алюминия, сульфата алюминия и гидроксида алюминия.
91. Способ предупреждения, лечения или облегчения бактериальной инфекции, заболевания или состояния у субъекта, включающий введение субъекту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по любому из пп. 64-90.
92. Способ по п. 91, где инфекция, заболевание или состояние ассоциированы с бактериями S. pneumoniae.
93. Способ по п. 91, где инфекция, заболевание или состояние ассоциированы с бактериями N. meningitidis.
94. Способ по п. 91, где инфекция, заболевание или состояние ассоциированы с бактериями Streptococcus группы В (GBS).
95. Способ индуцирования защитного иммунного ответа у субъекта, включающий введение субъекту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по любому из пп. 64-90.
96. Иммуногенная композиция по любому из пп. 64-90 для применения в качестве лекарственного средства.
97. Гликоконъюгат по п. 44 или 45 для применения в качестве лекарственного средства.
98. Иммуногенная композиция по любому из пп. 64-90 для применения в качестве вакцины.
99. Иммуногенная композиция по любому из пп. 64-90 для применения в способе предупреждения, лечения или облегчения бактериальной инфекции, заболевания или состояния у субъекта.
100. Иммуногенная композиция по любому из пп. 64-90 для применения в способе индуцирования защитного иммунного ответа у субъекта.