ПОЛУЧЕНИЕ ВИРУСОПОДОБНОЙ ЧАСТИЦЫ ВИРУСА БЕШЕНСТВА В РАСТЕНИЯХ

1. Способ получения вирусоподобной частицы вируса бешенства (VLP) в растении, включающий:
a) введение нуклеиновой кислоты, содержащей регуляторный участок, активный в растении, функционально связанный с нуклеотидной последовательностью, кодирующей нативный гликопротеин (G) вируса бешенства, в растение или часть растения,
b) инкубацию растения или части растения в условиях, которые обеспечивают экспрессию нуклеиновой кислоты, с получением, таким образом, VLP вируса бешенства,
c) сбор растения, и
d) экстракцию VLP, при этом размер VLP варьирует в диапазоне 40-300 нм, и
при этом VLP содержат липид, полученный из плазматической мембраны растения.
2. Способ получения вирусоподобной частицы вируса бешенства (VLP) в растении, включающий:
a) обеспечение растения или части растения, содержащего нуклеиновую кислоту, содержащую регуляторный участок, активный в растении, функционально связанный с нуклеотидной последовательностью, кодирующей один или более нативных гликопротеинов (G) вируса бешенства,
b) инкубацию растения или части растения в условиях, которые обеспечивают экспрессию нуклеиновой кислоты, с получением, таким образом, VLP вируса бешенства.
c) сбор растения, и
d) экстракцию VLP, при этом размер VLP варьирует в диапазоне 40-300 нм, и
при этом VLP содержит липид, полученный из плазматической мембраны растения.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором нуклеотидная последовательность дополнительно кодирует, содержит или одновременно кодирует и содержит один или более элементов амплификации.
4. Способ по п. 3, в котором один или более элементов амплификации представляют собой элемент амплификации на основе геминивируса.
5. Способ по п. 4, в котором один или более элементов амплификации на основе геминивируса выбраны из длинного межгенного участка вируса желтой карликовости фасоли (BeYDV LIR) и короткого межгенного участка вируса желтой карликовости фасоли (BeYDV SIR).
6. Способ по п. 1, в котором вторая нуклеиновая кислота, содержащая второй регуляторный участок, активный в растении и функционально связанный со второй нуклеотидной последовательностью, кодирующей матриксный белок (M) вируса бешенства или его фрагмент, вводят в растение или часть растения и экспрессируют при инкубации растения или части растения на стадии b).
7. Способ по п. 2, в котором растение или часть растения дополнительно содержит вторую нуклеиновую кислоту, содержащую второй регуляторный участок, активный в растении и функционально связанный со второй нуклеотидной последовательностью, кодирующей матриксный белок (M) вируса бешенства или его фрагмент, и экспрессируют при инкубации растения или части растения на стадии b).
8. Способ по п. 1, в котором на стадии введения (стадия a) нуклеиновую кислоту транзиентно экспрессируют в растении.
9. Способ по п. 1, в котором на стадии введения (стадия а) нуклеиновую кислоту стабильно экспрессируют в растении.
10. Способ по п. 1 или 2, в котором VLP экстрагируют путем биохимической экстракции.
11. Вирусоподобная частица (VLP) растительного происхождения, содержащая один или более нативных гликопротеинов (G) вируса бешенства, при этом VLP содержит липид, полученный из плазматической мембраны растения.
12. Вирусоподобная частица (VLP), полученная способом по п. 1 или 2.
13. Вирусоподобная частица (VLP) по п. 12, при этом липид включает один или более липидов, происходящих из растения.
14. Вирусоподобная частица (VLP) по п. 12, при этом один или более гликопротеинов (G) содержат растение-специфические N-гликаны или модифицированные N-гликаны.
15. Композиция, содержащая эффективную дозу VLP по п. 12 для индукции иммунного ответа у субъекта и фармацевтически приемлемый носитель.
16. Способ индукции иммунитета к инфекции, вызванной вирусом бешенства, у субъекта, включающий введение композиции по п. 15.
17. Способ по п. 16, в котором композицию вводят субъекту перорально, внутрикожно, интраназально, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно или подкожно.
18. Вирусоподобная частица (VLP) по п. 12 для применения в индукции иммунитета к инфекции, вызванной вирусом бешенства, у субъекта.
19. Пищевая добавка, содержащая VLP по п. 12.
20. Способ по п. 1 или 6, дополнительно включающий введение дополнительной последовательности нуклеиновой кислоты, при этом добавочная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует супрессор сайленсинга, репликазу геминивируса, или и то и другое.
21. Способ по п. 20, в котором супрессор сайленсинга и репликаза геминивируса кодируются двумя различными дополнительными последовательностями нуклеиновой кислоты, которые вводят в растение или часть растения.
22. Способ по п. 20, в котором супрессор сайленсинга выбран из группы HcPro и p19.
23. Способ по любому из пп. 1, 2, 6 и 7, в котором нативный гликопротеин (G) вируса бешенства имеет, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 14.
24. Способ по любому из пп. 1, 2, 6 и 7, в котором нативный гликопротеин (G) вируса бешенства имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14.
25. Способ по п. 6 или 7, в котором матриксный белок (M) вируса бешенства имеет, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 6.
26. Способ по п. 6 или 7, в котором матриксный белок (M) вируса бешенства имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6.
27. Способ по любому из пп. 1, 2, 6 и 7, в котором последовательность нуклеиновой кислоты, содержащая регуляторный участок, дополнительно функционально связана с одним или несколькими энхансерами на основе комовируса.
28. Способ по п. 27, в котором один или несколько энхансеров на основе комовируса представляют собой UTR комовируса.
29. Способ по п. 28, в котором UTR комовируса представляет собой UTR вирус мозаики коровьего гороха (CPMV).
30. Способ по п. 1 или 2, в котором VLP не содержит вирусный матриксный или коровый белок.