СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАКА ТОЛСТОЙ КИШКИ И НАБОР ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

1. Способ диагностики рака толстой кишки, включающий следующие стадии:
а) получение исходной пары образцов ткани от пациента, где один из образцов получен из предположительно пораженной раком ткани, а второй получен из прилегающей или расположенной на небольшом расстоянии от опухоли гистологически нормальной (условно-нормальной) ткани;
б) выделение и очистка препаратов РНК из исходной пары образцов;
в) синтез одноцепочечной кДНК на матрице РНК с использованием олигонуклеотидных праймеров;
г) нормирование концентрации кДНК по контрольному гену, уровень транскрипции которого постоянен в норме и при раке толстой кишки;
д) проведение количественной или полуколичественной реакции амплификации фрагмента генов ADH1B и ADH1C с использованием кДНК, полученной на стадии в), в качестве матрицы и пары геноспецифичных олигонуклеотидных праймеров с последовательностями SEQ ID NO: 1 и 2 для гена ADH1B и пары геноспецифичных олигонуклеотидных праймеров с последовательностями SEQ ID NO: 3 и 4 для гена ADH1C;
е) сравнение количества амплифицированных фрагментов ДНК ADH1B и ADH1C для образца, полученного из предположительно пораженной раком ткани, с количеством амплифицированных фрагментов ДНК для образца, полученного из нормальной ткани, где указанные количества амплифицированных фрагментов ДНК отражают уровень мРНК генов ADH1B и ADH1C, причем понижение количества мРНК генов ADH1B и ADH1C служит диагностическим признаком рака толстой кишки.
2. Способ по п.1, в котором на стадии в) олигонуклеотидные праймеры, используемые для синтеза одноцепочечной кДНК, выбирают из числа олиго(dТ)-содержащих праймеров, случайных гексамеров или их комбинации, а также геноспецифичных праймеров.
3. Способ по п.1, в котором на стадии д) количественная или полуколичественная реакция амплификации фрагментов генов ADH1B и ADH1C представляет собой ПЦР в реальном времени или стандартную ОТ-ПЦР.
4. Способ по п.1, в котором на стадии г) в качестве контрольного гена используют ген АСТВ, кодирующий глобулярный белок бета-актин или ген В2М, кодирующий низкомолекулярный белок поверхностных антигенов клеточных ядер, бета-2-микроглобулин.
5. Набор для диагностики рака толстой кишки по п.1, включающий праймеры для осуществления полимеразной цепной реакции для определения уровня мРНК гена ADH1B, имеющих последовательности SEQ ID NO: 1 и 2 и праймеры для осуществления полимеразной цепной реакции для определения уровня мРНК гена ADH1C, имеющих последовательности SEQ ID NO: 3 и 4.