Характеристика лекарственно устойчивых штаммов Mycobacterium tuberculosis с помощью молекулярно-генетических методов

ческая симптоматика в виде спастического парапареза с формированием ДЦП наблюдалась в 25% случаев.

Все дети с ПВЛ средней степени к 24 месяцам СВ имели выраженные нарушения неврологического статуса в виде ДЦП и судорожного синдрома; вентрикуломе-галия, интеллектуальный дефицит и задержка речевого развития отмечались более чем у половины детей.

Исходом ПВЛ тяжелой степени явилось формирование тяжелого ДЦП и грубые нарушения интеллектуального развития.

В группе пациентов, у которых в неонатальном периоде по данным ультразвукового исследования не было диагностировано структурных изменений головного мозга в половине случаев не выявлено отклонений в двигательном и психическом развитии к 24 месяцам СВ. В одном случае наблюдались психомоторные нарушения легкой степени и в одном случае развились

судорожные припадки в виде миоклонических спазмов (синдром Веста).

Таким образом, частота тяжелой инвалидности у выживших младенцев с ЭНМТ составила приблизительно 31,6%. Основные маркеры тяжести неврологической патологии: продолжительность ИВЛ, длительность зависимости от кислорода, сопутствующая бронхолегочная дисплазия, изменения выявленные при проведении ЭЭГ и при УСГМ. Большое значение имеют изменения ЭЭГ, так как ОФИ обнаруживаются еще до повышения эхо-генности белого вещества перивентрикулярной зоны, что имеет большое прогностическое значение.

Пациенты с высоким риском неблагоприятного неврологического исхода должны находиться под пристальным наблюдением специалистов в целях своевременного получения рекомендаций по поводу раннего корректирующего вмешательства.

ЛИТЕРАТУРА

1. ЖурбаЛ.Т., МастюковаЕ.М. Нарушение психомоторного развития детей первого года жизни. — М.: Медицина,1981. — 350 с.

2. Пальчик А.Б. Введение в неврологию развития. — СПб.: Коста, 2007. — 368 с.

3. Пальчик А.Б., Шабалов Н.П. Гипоксически-ишемическая энцефалопатия новорожденных. — СПб.: Питер, 2001. — 244 с.

4. Электроэнцефалография в неонатологии. / Под ред.

Н.Н. Володина. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. — 280 с.

5. Ancel P.Y., et al. Cerebral Palsy Among Very Preterm Children in Relation to Gestational Age and Neonatal Ultrasound Abnormalities: The EPIPAGE Cohort Study // Pediatrics. — 2006. — Vol. 117. — P. 828-835.

6. de Weerd Al.W., van den Bossche R.A.S. The development of sleep during the first months of life. // Sleep Medicine Reviews. — 2003. — Vol.7. N2. — P.179-191.

7. Kidokoro H., Okumura A., Hayakawa F., et al. Chronologic Changes in Neonatal EEG Findings in Periventricular Leukomalacia. // Pediatrics. — 2009. — Vol. 124. — e468-e475.

8. Mikkola Kaija et al. Neurodevelopmental Outcome at 5 Years of Age of a National Cohort of Extremely Low Birth Weight Infants Who Were Born in 1996-1997. // Pediatrics. — 2005. — Vol. 116. — P. 1391-1400.

9. Stoll B.J., et al. Neurodevelopmental and Growth Impairment Among Extremely Low-Birth-Weight Infants With Neonatal Infection.// JAMA. — 2004. — Vol. 24. — P. 2357-2365.

Информация об авторах: 664049, г. Иркутск, микрорайон Юбилейный, 100, тел. (3952)407917 e-mail neonatal-irk@yandex.ru Павлова Татьяна Ивановна — к.м.н., заведующая отделением, Арбатская Ольга Юрьевна — врач невролог,

Хайкина Елена Борисовна — врач функциональной диагностики, Павлов Александр Борисович — к.м.н., заведующий отделением

в ЖДАНОВА С.Н., ЗОРКАЛЬЦЕВА Е.Ю., ОГАРКОВ О.Б., ВОРОБЬЕВА О.А., УНТАНОВА Л.С., АЛЕКСЕЕВА Г.И., САВИЛОВ Е.Д. — 2011 УДК 579.873.21: 579.253.2

ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕКАРСТВЕННО УСТОЙЧИВЫХ ШТАММОВ MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS С ПОМОЩЬЮ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ

Светлана Николаевна Жданова1, Елена Юльевна Зоркальиева2, Олег Борисович Огарков1-3, Ольга Александровна Воробьева2, Лариса Семеновна Унтанова4, Галина Ивановна Алексеева5, Евгений Дмитриевич Савилов1-2 ОШучный центр проблем семьи и репродукции человек СО PAMH, директор — д.м.н., член-корр. PAMH, проф. Л.И. Kолecниковa, лaбоpaтоpия эпидемиологии aнтpопонозных инфекций, зaв. — д.м.н., проф. E^. Caвилов; 2Иркутский гоcyцapcтвeнный институт ycовepшeнcтвовaния вpaчeй, ректор — д.м.н., проф. — В.В. Шпpaх, кaфeдpa эпидемиологии и микробиологии, зaв. — д.м.н., проф. E^. Caвилов, кaфeдpa фтизтатрии, зaв. — д.м.н., проф. E^. Зоpкaльцeвa; 3ГУЗ Иркутский облacтной противотуберкулезный дистнсер, гл. вpaч — к.м.н. M.E. Кощеев; 4ГУЗ Pecпyбликaнcкий клинический противотуберкулезный дистансер, гл. вр. — A.H. Зapбyeв; 5НПЦ «Фтизтатрия» PC

Резюме. Дана молекулярно-генетическая характеристика 258 штаммам M. tuberculosis (МБТ) с известной лекарственной чувствительностью. Делеционным анализом по RD105 и MIRU-VNTR-типированием выявлены территориальные особенности распространения генотипов МБТ. В Иркутской области и в Республике Бурятия около 50% лекарственно устойчивых МБТ принадлежали генотипу Пекин (Beijing). Показана высокая эпидемическая активность генотипа Пекин на исследуемой территории.

Ключевые слова: M. tuberculosis, MIRU-VNTR, RD105, генотип Пекин, лекарственная устойчивость.

DESCRIPTION OF DRUG RESISTANT STRAINS MYCOBATERIUM TUBERCULOSIS BY THE MOLECULAR GENETIC TECHNIQUES

S.N. Zhdanova1, E.U. Zorkalzeva2, O.B. Ogarkov1-3, L.S. Untanova4, G.I. Alekseeva5, E.D. Savilov1-2 ^Institute of Epidemiology and Microbiology, Siberian Division of Russian Academy of Medical Sciences, Irkutsk ; 2Irkutsk State Institute of improvement of doctors; 3Irkutsk Regional TB-prevention Dispensary, Irkutsk; 4National TB-prevention Dispensary, Ulan-Ude; 5Phthisiology Sakha Republic

Summary. Genetic variability of 258 strains of M. tuberculosis with known drug sensibility was described by the using

of two methods — RD105 deletion analysis and MIRU-VNTR-typing. This approach has allowed us to identify features of territorial distribution of those isolates. About 50% of drug-resistant MBT in the Irkutsk region and republic of Buryatia belonged to genotype Beijing. The high epidemic activity Beijing genotype in the study territory was identified.

Key words: M. tuberculosis, MIRU-VNTR, RD105, Beijing genotype, drug resistant.

Напряженная эпидемическая ситуация по туберкулезу в Восточно-Сибирском регионе [1,2], сопровождающаяся активным накоплением резервуара инфекции за счет клинических форм с обильным бактериовыделе-нием и, вместе с тем, снижением эффективности лечебных мероприятий и увеличением распространенности случаев заболевания с первичной лекарственной устойчивостью, настоятельно требует формирования новых подходов в понимании и управлении эпидемическим процессом этой социально значимой инфекцией.

В сложившейся ситуации для эффективного осуществления эпидемиологического надзора необходимы данные по идентификации и дифференциации клинически важных штаммов М. tuberculosis, характеризующихся лекарственной устойчивостью (ЛУ). В качестве перспективных следует выделить молекулярнобиологические методы, обладающие значительной дискриминационной способностью, и позволяющие достаточно быстро и точно оценить популяцию микобактерий туберкулеза (МВТ), циркулирующую на исследуемой территории [1-6]. Структура популяции МВТ в ряде регионов России отличается значительным представительством генотипа Пекин (Beijing) [1,7,8].

Именно с этим генотипом часто ассоциируется ЛУ [8,11,12 и др.].

Цель настоящего исследования: охарактеризовать лекарственно устойчивые штаммы М. tuberculosis с помощью молекулярногенетических методов (MIRU-VNTR и деле-ционного анализа по региону различий RD 105).

Материалы и методы

В работе проведен ретроспективный анализ ЛУ к изониазиду, рифампицину, стрептомицину, этамбутолу, канамицину, этионамиду, пиразиамиду, выявленной методом абсолютных концентраций. В анализ включены 258 случайно отобранных, эпидемически не связанных штаммов МВТ, выделенных от больных ле-точными формами туберкулеза и проживающих на территориях Иркутской области, Республик Вурятия (РВ) и Саха (Якутия) (РС (Я)). Собранные нами за 2009-2010 годы изоляты генотипировали по 12 локусам MIRU-VNTR согласно протоколу Supply et al. [10] с детекцией ПЦР электрофорезом в 2% агарозном геле в трис-боратном буфере. Для идентификации генетических семейств использовали открытую базу данных и пакет программ MIRU-VNTRplus [13]. Анализ на наличие или отсутствие делеции RD105 в геноме МВТ осуществляли по методике, описанной M. Reet и соавт. [9].

Статистические тесты проводили для уровня значимости p=0,05. Для подтверждения наличия различий исследуемых признаков использовался метод х-квадрат.

Результаты и обсуждение

В исследуемой выборке лекарственно устойчивые штаммы МВТ встречались в 70,5 % случаев. К одному антибиотику устойчивость имели лишь 13 (7,1%) штаммов (к изониа-зиду — 2, рифампицину — 2, стрептомицину — 6, этамбу-толу — 2, канамицину — 1).

Остальные 169 проанализированных случаев туберкуле-

за характеризовались резистентностью к двум и более препаратам в различных сочетаниях. Это может быть связано с тем, что в исследование были включены случаи как впервые выявленного туберкулеза, так и хронические и рецидивирующие формы. Среди пациентов с хроническим течением отмечена более выраженная пропорция устойчивых/чувствительных штаммов (12:1) по сравнению с больными с впервые выявленной инфекцией (1,8:1), что представляется вполне закономерным следствием длительной неэффективной антибактериальной терапии.

Две трети лекарственно устойчивых МВТ были представлены изолятами Восточно-Азиатской линии, выявляемой наличием специфической делеции в RD105, которая присутствует и у генотипа Пекин. Штаммы без делеции в RD105 (45,3%) были представлены генотипами, выявленными с помощью MIRU-VNTR (Cameroon, Ghana, Haarlem, LAM, S, Uganda, X, TUR, Ural и несколькими уникальными профилями) без значимого приоритета в их структуре. При этом частота

Таблица 1

лекарственной резистентности у штаммов с наличием и отсутствием изучаемой делеции существенно не отличалась при обобщенном анализе всех изучаемых территорий (х2=1,906; р>0,05). При рассмотрении территориальной структуры в Иркутской области обнаружено значимое превышение числа лекарственно устойчивых штаммов с делецией в RD105 по сравнению с другими исследуемыми регионами (х2=6,6; р=0,01) (табл.1). Это может быть связано с тем, в выборке исследуемых культур Иркутской области со значимым перевесом преобладали изоляты, имеющие делецию в RD105 (67,1% из 131 штаммов) по сравнению с РС (Я) (28,2 % из 101 штамма) (х2=34,6; р<0,01).

Молекулярное типирование методом MIRU-VNTR в группе с делецией в RD105 позволили выявить неоднородность изучаемой популяции МВТ. Структура МШи^КШ профилей у лекарственно устойчивых штаммов генотипа Пекин, выявленных согласно I. Мокго^оу и соавт. [7] отличалась наибольшим количеством подтипов М11 и суммарным представительством единичных изолятов ряда подтипов, отсутствующих среди чувствительных МВТ (М8, М75, М7,

Таблица 2

Распределение клинических штаммов ИВТ с делецией в RD105

Штаммы Генотип Пекин, n (%) Другие профили

M2 M11 M8, M75, M7, M107,M14, M54, M1, M18, M19, M21,M33,M4, M44 M87, M12, M40

Чувствительные, 21 1 0 7 7

n=36

Устойчивые 27 41 22 3 12

n=105

Всего 36 42 22 10 19

Распределение клинических штаммов МБТ по результатам делеционного анализа и лекарственной устойчивости

Штаммы, п (%) Чувствительные Устойчивые Всего

Восточно-Азиатская линия штаммов

19

Штаммы с отсутствием делецией в №105: Иркутская область Республика Саха

12

Итого 76 (29,5) 182 (70,5) 258

М107,М14, М54, М1, М18, М19, М21, М33, М4, М44).

Таким образом, в половине изучаемой группы МВТ (54,7%) была выявлена делеция RD105, свидетельствующая о значительном представительстве ВосточноАзиатской линии, включающей генотип Пекин (Beijing), относящийся к эпидемически значимым (пандемическим) штаммам. Молекулярно-генетическая характеристика ЛУ МВТ также позволила выявить генетическую вариабельность штаммов, проявившую территориаль-

ную привязанность. В Иркутской области обнаружено значимое превышение числа лекарственно устойчивых штаммов с делецией в RD105 по сравнению с Р (С)Я. Этот факт, наряду с тем, что выявлено более широкое разнообразие MIRU-VNTR профилей ЛУ штаммов, в частности генотипа Пекин, может быть отражением региональных особенностей распределения популяций МВТ на этих территориях и характеристикой напряженности эпидемической ситуации по туберкулезу.

ЛИТЕРAТУРA

1. Огарков О.Б., Медведева Т.В., Zozio T. и др. Молекулярное типирование штаммов микобактерий туберкулеза в Иркутской области (Восточная Сибирь) в 2000-2005 гг. //Молекулярная медицина. — 2007. — № 2. — С. 33-38.

2. Савилов E. Д., Синьков В.В., Огарков О.Б. Пекинский генотип M. tuberculosis // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2010. — №4. — С. 50-53.

3. Flores L., Van T., Narayanan S.K., et al. Large Sequence Polymorphisms Classify Mycobacterium tuberculosis Strains with Ancestral Spoligotyping Patterns // J. Clin. Microbiol. — 2007. — №10 — Р. 3393-3395.

4. Gagneux, S., DeRiemer K., Van T., et al. Variable host-pathogen compatibility in Mycobacterium tuberculosis //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 2006. — V. 103. — P. 2869-2873.

5. Kato-Maeda M., Kim E.Y., Flores L., et al. Differences among sublineages of the East-Asian lineage of Mycobacterium tuberculosis in genotypic clustering //Int. J. Tuberc. Lung Dis. — 2010.-V. 14. — № 5. — P. 538-544.

6. Lopez B., Aguilar D., Orozco H., et al. A marked difference in pathogenesis and immune response induced by different Mycobacterium tuberculosis genotypes //Clin. Exp. Immunol. — 2003. — V. 133. — P. 30-37.

7. Mokrousov I., Narvskaya O., Limeschenko E., et al. Analysis of the allelic diversity of the mycobacterial interspersed repetitive units in Mycobacterium tuberculosis strains of the Beijing family: practical implications and evolutionary considerations

//J. Clin. Microbiol. — 2004. — V. 42. — №6. — P. 2438-2444.

8. Mokrousov I., Otten T., Zozio T., et al. At Baltic crossroads: a molecular snapshot of Mycobacterium tuberculosis population diversity in Kaliningrad, Russia // FEMS Immunology & Medical Microbiology. — 2009. — №55. — P. 13-22.

9. Reed M.B., Pichler V.K., McIntosh F., et al. Major Mycobacterium tuberculosis lineages associate with patient country of origin //J. Clin. Microbiol. — 2009. — V.47. №4. — P. 1119-1128.

10. Supply P., Lesjean S., Savine E.? et al. Automated high-throughput genotyping for study of global epidemiology of Mycobacterium tuberculosis based on mycobacterial interspersed repetitive units //J. Clin. Microbiol. — 2001. V.39. — № 10. — P. 3563-3571.

11. Tsenova L., Ellison E., Harbacheuski R., et al. Virulence of selected Mycobacterium tuberculosis clinical isolates in the rabbit model of meningitis is dependent on phenolic glycolipid produced by the bacilli //J. Infect. Dis.- 2005. — V.192. — P. 98-106.

12. Tsolaki A.G., Gagneux S., Pym A.S., et al. Genomic deletions classify the Beijing/W strains as a distinct genetic lineage of Mycobacterium tuberculosis //J. Clin. Microbiol. — 2005. — № 43. — P. 3185-3191.

13. Weniger T., Krawczyk J., Supply P, et al. MIRU-VNTRplus: a web tool for polyphasic genotyping of Mycobacterium tuberculosis complex bacteria // Nucleic Acids Res. — 2010. — V.38. — Suppl:W326-331.URL: http://www.miru-vntrplus.org

Информация об авторах: 664025 Иркутск, Карла Маркса, 3 Институт эпидемиологии и микробиологии НЦ ПЗСРЧ СО РАМН, тел. (3952)33-34-25, e-mail: svetnii@mail.ru Жданова Светлана Николаевна — к.м.н., с.н.с Зоркальцева Елена Юльевна — д.м.н., профессор, заведующий кафедрой,

Огарков Олег Ворисович — к.б.н., заведующий отделением,

Воробьева Ольга Александровна — к.м.н., доцент кафедры,

Унтанова Лариса Семеновна — к.м.н., заведующий отделом,

Алексеева Галина Ивановна — д.м.н., заведующий лабораторией,

Савилов Евгений Дмитриевич — д.м.н., профессор, e-mail: savilov47@gmail.com

© АНГАНОВА Е.В., ДУХАНИНА А.В., КИЧИГИНА Е.Л. — 2011 УДК 616.34-002.1-02:616.9] —036.2

АНАЛИЗ ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ ОСТРЫМИ КИШЕЧНЫМИ ИНФЕКЦИЯМИ НАСЕЛЕНИЯ ИРКУТСКОЙ ОБЛАСТИ

Елена Витальевна Анганова1'2, Алла Владимировна Духанина2, Елена Леонидовна Кичигина1-2

Резюме. В статье приведены результаты анализа заболеваемости населения Иркутской области острыми кишечными инфекциями за 2000-2010гг. Показано повышение уровней заболеваемости острыми кишечными инфекциями установленной и неустановленной этиологии, понижение заболеваемости дизентерией на фоне стабилизации сальмонеллеза. Установлено превышение показателей заболеваемости ОКИ на территории области по сравнению с общероссийскими показателями.

Ключевые слова: заболеваемость, острые кишечные инфекции

THE АМА1УБ!Б OF THE INCIDENCE OF ACUTE INTESTINAL INFECTIONS IN POPULATION OF IRKUTSK REGION

E.V. Anganova 1 •2, A.V. Dukhanina2, E.L.Kichigina h2 ('Irkursk State Institute for Postgraduate Medical Education; Scientific Centre of the Problems of Family Health and

Human Reproduction SB RAMS)

Summary. In the paper are shown the results of the analysis of morbidity with acute intestinal infections of the population of the Irkutsk region during 2000-2010. It is shown the increased levels of morbidity with аcute intestinal infections of