Способ выявления генома возбудителя вируса парагриппа 3 типа у крупного рогатого скота

3
Способ выявления генома возбудителя вируса парагриппа 3 типа у крупного рогатого скота, включающий выделение РНК из биологического материала по выбору: мазки из носа, горла, носоглотки, носоглоточные аспираты, назальные смывы, мокроту сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контрольных образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции - с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченного зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией Threshold, согласно изобретению для выделения РНК используют биологический материал, взятый от животных инфицированных возбудителем вируса парагриппа 3 типа, а для внутреннего контрольного образца - суспензию бактериофага МS2 с концентрацией 5×10/мл, а для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома вируса парагриппа 3 типа ВРI и фрагмент генома бактериофага МS2, взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями:
BPIF 5'-ТСGАСАТСАТTGAATTСАТАС-3' - прямой праймер
BPIR 5'-ТСААGТТGGTAGАТТGТСGТGС-3' - обратный праймер
BPI-z 5'-JОЕ-ТGССGТGТТСТСТТGGGАGТСG-ВНQ1 - зонд
МS2F, 5'-ТGGСАСТAСCССТСТССGТАТТСАС-3' - прямой праймер
МS2R, 5'-GТАСGGGCGAСCССАСGАТGАС-3' - обратный праймер
МS2Р, 5'- Су5-САСAТСGAТАGАТCААGGТGССТАСААGС-3' ВНQ2 - зонд,
при этом накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: JOE/ Yellow для специфического сигнала; Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.