ИЗОПРОПИЛМАЛАТ СИНТАЗА ИЗ NICOTIANA TABACUM И СПОСОБЫ И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Мутантная, не встречающаяся в природе или трансгенная растительная клетка, содержащая:
(i) по меньшей мере, один полинуклеотид, содержащий, состоящий или состоящий в основном из последовательности, кодирующей изопропилмалат синтазу, и, по меньшей мере, на 60% идентичной SEQ ID NO:1, или SEQ ID NO:10, или SEQ ID NO: 12, или SEQ ID NO:14; или
(ii) полипептид, кодируемый указанным полинуклеотидом (полинуклеотидами); или
(iii) полипептид, по меньшей мере, на 60% идентичный последовательности SEQ ID NO:2, или SEQ ID NO:11, или SEQ ID NO:13, или SEQ ID NO:15; или
(iv) конструкцию, вектор или вектор экспрессии, содержащие указанную последовательность (последовательности) полинуклеотида, где указанная конструкция, вектор или вектор экспрессии необязательно дополнительно содержат промотор, содержащий, состоящий или состоящий в основном из последовательности, приведенной в SEQ ID NO:8, или его вариант, который, по меньшей мере, на 60% идентичен ему, или промотор трихомы, или встречающийся в природе промотор изопропилмалат синтазы.
2. Мутант, не встречающееся в природе или трансгенное растение, содержащее растительную клетку по п. 1.
3. Способ модулирования количества или типов сложных эфиров сахарозы, по меньшей мере, в части растения, включающий стадии:
(i) модулирования экспрессии или активности изопропилмалат синтазы в растении, предпочтительно, где изопропилмалат синтаза содержит полинуклеотид, содержащий, состоящий или состоящий в основном из последовательности, кодирующей изопропилмалат синтазу и, по меньшей мере, на 60% идентичной последовательности SEQ ID NO:1, или SEQ ID NO:10, или SEQ ID NO: 12, или SEQ ID NO:14; или кодирует полипептид, кодируемый указанным (указанными) полинуклеотидом (полинуклеотидами); или где изопропилмалат синтаза кодирует полипептид, последовательность которого, по меньшей мере, на 60% идентична последовательности SEQ ID NO:2, или SEQ ID NO:11, или SEQ ID NO:13, или SEQ ID NO:15;
(ii) необязательно, измерения количества или определения типа одного или нескольких сложных эфиров сахарозы, по меньшей мере, в части мутанта, не встречающегося в природе или трансгенного растения, полученного на стадии (i); и
(iii) идентификации мутанта, не встречающегося в природе или трансгенного растения, в котором количество или тип одного или нескольких сложных эфиров сахарозы было изменено по сравнению с контрольным растением, в котором экспрессия или активность изопропилмалат синтазы не модулировалась и, предпочтительно, где внешний вид указанного мутанта, не встречающегося в природе или трансгенного растения такой же, как у контрольного растения.
4. Способ по п. 3, где один или несколько сложных эфиров сахарозы имеют структуру, показанную на Фигуре 5, и где R3 представляет собой ацетил или водород, предпочтительно ацетил; один или несколько из R1, R2 и R4 содержат ацильную цепь с 6 атомами углерода, предпочтительно бета-метилвалерил; и R5 представляет собой ацетил или водород, предпочтительно, водород.
5. Мутант, не встречающееся в природе или трансгенное растение, полученное или получаемое способом по п. 3.
6. Мутант, не встречающееся в природе или трансгенное растение по п. 5, в котором один или несколько сложных эфиров сахарозы имеют структуру, показанную на Фигуре 5, и где R3 представляет собой ацетил или водород, предпочтительно ацетил; один или несколько из R1, R2 и R4 содержат ацильную цепь с 6 атомами углерода, предпочтительно бета-метилвалерил; и R5 представляет собой ацетил или водород, предпочтительно, водород.
7. Мутант, не встречающееся в природе или трансгенное растение, в котором модулируется экспрессия изопропилмалат синтазы или активность кодируемого таким образом белка и, по меньшей мере, в части растения изменен состав одного или нескольких сложных эфиров сахарозы по сравнению с контрольным растением, в котором экспрессия или активность изопропилмалат синтазы не модулировалась, и где внешний вид указанного растения по существу такой же, как у контрольного растения.
8. Мутант, не встречающееся в природе или трансгенное растение по п. 7, в котором один или несколько сложных эфиров сахарозы имеют структуру, показанную на Фигуре 5, и где R3 представляет собой ацетил или водород, предпочтительно ацетил; один или несколько из R1, R2 и R4 содержат ацильную цепь с 6 атомами углерода, предпочтительно бета-метилвалерил; и R5 представляет собой ацетил или водород, предпочтительно, водород.
9. Растительный материал, включающий биомассу, семена или листья, содержащие клетки или ткани из растения по пп. 5 или 7.
10. Табачное изделие, содержащее часть растения по пп. 5 или 7 или растительный материал по п. 9.
11. Способ получения композиции, содержащей один или несколько сложных эфиров сахарозы, включающий стадии:
(i) получения, по меньшей мере, части мутанта, не встречающегося в природе или трансгенного растения по п. 5 или п. 7, растительного материала по п. 9 или табачного изделия по п. 10;
(ii) экстракции из них сложного эфира (эфиров) сахарозы; и
(iii) необязательно, выделения или очистки экстрагированного сложного эфира (эфиров) сахарозы.
12. Способ по п. 11, где один или несколько сложных эфиров сахарозы имеют структуру, показанную на Фигуре 5, и где R3 представляет собой ацетил или водород, предпочтительно ацетил; один или несколько из R1, R2 и R4 содержат ацильную цепь с 6 атомами углерода, предпочтительно бета-метилвалерил; и R5 представляет собой ацетил или водород, предпочтительно, водород.
13. Способ модулирования аромата табака или табачного изделия, включающий: (i) добавление к табаку или табачному изделию части растения, предпочтительно листьев, из мутанта, не встречающегося в природе или трансгенного растения по пп. 2, 5 или 7, или растительного материала по п. 9; или (ii) добавление к табаку или табачному изделию композиции, содержащей сложные эфиры сахарозы, полученной или получаемой способом по пп. 11 или 12.
14. Способ получения бета-метилвалериановой кислоты, включающий стадии:
(i) получения, по меньшей мере, части мутанта, не встречающегося в природе или трансгенного растения по любому из пп. 2, 5 или 7, растительного материала по п. 9 или табачного изделия по п. 10;
(ii) гидролиза материала или его экстракта, полученных на стадии (i); и
(iii) необязательно, выделения или очистки бета-метилвалериановой кислоты.
15. Выделенный полинуклеотид, содержащий, состоящий или состоящий в основном из последовательности, кодирующей изопропилмалат синтазу и, по меньшей мере, на 60% идентичной последовательности SEQ ID NO:1, или SEQ ID NO:10, или SEQ ID NO: 12, или SEQ ID NO:14.
16. Выделенный полипептид, кодируемый полинуклеотидом по п. 15.
17. Выделенный полипептид, по меньшей мере, на 60% идентичный SEQ ID
NO:2, или SEQ ID NO:11, или SEQ ID NO:13, или SEQ ID NO:15.
18. Конструкция, содержащие выделенную полинуклеотидную последовательность по п. 15, где необязательно указанные конструкция, вектор или вектор экспрессии дополнительно содержат промотор, содержащий, состоящий или состоящий из в основном последовательности, приведенной в SEQ ID NO:9, или его вариант, который, по меньшей мере, примерно на 60% идентичен ему, или промотор трихомы или природный промотор изопропилмалат синтазы.