СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ МЕТАСТАЗОВ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЖЕЛУДКА
METHOD FOR PREDICTION OF METASTASES IN PATIENTS WITH STOMACH CANCER

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при иммуногистохимическом исследовании маркеров у больных раком желудка с разной морфологической структурой, для прогнозирования метастазирования.
Известно, что в результате научных исследований с использованием новейших методов изучения рака мочевого пузыря на клеточном, молекулярно-генетическом уровнях, новых диагностических технологий, например иммуногистохимических, были выявлены и активно исследуются группы биологических факторов, способных прогнозировать возникновение рецидивов или прогрессирования опухолевого процесса (см. Матвеев Б.П., Фигурин К.М., Карякина О.Б. Рак мочевого пузыря. Москва: «Вердана», 2001, 243 с.). К таким маркерам относятся моноклональные антитела, Ki-67, гены опухолевой супрессии р53, RB, теломераза, эпидермальный фактор роста, ингибитор апоптоза Bcl-2, индекс апопотоза. В связи с тем, что в настоящий момент не существует абсолютной, 100% специфичности какого-либо маркера или группы маркеров для рака мочевого пузыря, клиническая ценность маркеров или их групп, оценка их чувствительности и специфичности для данной патологии активно исследуется во всем мире.
Дальнейшее изучение и клиническое использование факторов прогноза совместно с патоморфологической и цистоскопической характеристиками опухоли может способствовать более точному выбору адекватного метода лечения больных раком мочевого пузыря. Результаты исследования биологических маркеров позволяют говорить о широких возможностях их применения в клинической практике.
Известно, что желудок является сложным секреторным органом, в нем экспрессируется ряд характерных антигенов (см. «Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека». Издание 3-е дополненное и переработанное, под редакцией С.В.Петрова, Н.Т.Райхлина, Казань: «Татун». 2004, С.69-71), этот источник информации выбран нами в качестве прототипа.
Опухоли часто экспрессируют цитокератин-7, поэтому антитела к этому цитокератину не могут служить в дифференциальной диагностике аденокарцином в качестве негативного маркера желудочного рака. Пролиферативная активность аденокарцином, измеренная по Ki-67, не связана с гистоструктурой и дифференцировкой опухоли. Мутации гена р53 наблюдаются в раке желудка в 40% случаев и коррелируют с глубиной инвазии, стадией и агрессивным течением. Раковые опухоли, имеющие в геноме так называемый «дикий тип р53 (wild type), более чувствительны к химиотерапии, чем неопластические клетки с поврежденным (мутированным) геном р53, поэтому иммуногистохимический анализ р53 может помочь определить биологическое поведение рака и его ответ на терапию.
Сверхэкспрессия протоонкогена bc1-2, блокирующего апоптоз и отвечающего за иммортализацию трансформированных клеток, наблюдается на ранних фазах возникновения опухоли и встречается в кишечном типе рака желудка.
Пролиферативный индекс более 10% (реакция с антителами к белку Ki-67) может отражать высокий потенциал злокачественности GIST.
Онкоген bcl-2 является независимым прогностическим и предсказательным признаком, ведущим геном, определяющим механизм клеточной смерти, подавляя апоптоз. Этот ген кодирует образование белка, накапливающегося в митохондриях, что при иммуногистохимической реакции находит отражение в пятнистой окраске цитоплазмы.
Bcl-2 распознает источник метастаза при раке молочной железы, но при раке желудка и легкого редко дает положительную окраску. Р-53 является опухолевым геном-супрессором, белковый продукт которого представляет собой ядерный транскрипционный фактор со многими функциями, включая блокирование прохождения клеток по клеточному циклу и индукцию апоптоза. Мутация р53 очень часто встречается в опухолях, приводит к синтезу белка с потерей его функций, но обладающего высокой стабильностью и накапливающегося в ядре, что иммуногистохимически выражается в отчетливом ядерном окрашивании. Статус р53 может быть решающим фактором, определяющим чувствительность опухоли к химиолучевой терапии. Исследования доказывают, что мутированный р53 является фактором плохого прогноза и неэффективности адъювантной терапии при самых разнообразных новообразованиях: рак желудка, рак пищевода, толстой кишки, легкого, мочевого пузыря. Чрезмерная экспрессия mit р53 найдена в 40% рака желудка, но отсутствовала при полипах и язве желудка. В 86-90% случаев исследование mit р53 позволило уточнить диагноз рака желудка в трудных наблюдениях.
Однако известные исследования в совокупности факторов, выявляемых при иммуногистохимических исследованиях при раке желудка, не обеспечивают прогнозирования течения заболевания.
Целью изобретения является прогнозирование метастазирования у больных раком желудка при корреляции гистотипа опухоли с уровнем экспрессии белков регуляторов апоптоза и пролиферации.
Поставленная цель достигается тем, что проводят верификацию опухоли, при иммуногистохимическом исследовании операционного материала, определяют маркер пролиферативной активности Ki-67 и маркеры апоптоза р53, bcl-2 у больных раком желудка различного морфологического строения устанавливают, что при гиперэкспрессии белков-регуляторов в апоптозе и пролиферации и при абсолютном значении маркеров апоптоза при перстневидноклеточном раке р53 - 10, bcl-2 - 10 и маркера пролиферации Ki-67 - 12 и при абсолютном значении маркеров при недифференцированном раке апоптоза: р53 - 13, bcl-2 - 11 и пролиферации Ki-67 - 9, прогнозируют возникновение метастазов в лимфоузлах, по сравнению с больными раком желудка морфологического строения - аденокарцинома и пониженной экспрессии белков регуляторов апоптоза и пролиферации р53 - 16, bcl-2 - 5, Ki-67 - 10 прогнозируют отсутствие метастатического поражения лимфоузлов.
Изобретение «Способ прогнозирования метастазов у больных раком желудка» является новым, так как оно неизвестно при прогнозировании метастазирования у больных раком желудка при иммуногистохимическом исследовании корреляции гистотипа опухоли с уровнем экспрессии белков-регуляторов апоптоза и пролиферации.
Новизна изобретения заключается в том, что при иммуногистохимическом исследовании проводят корреляцию гистотипа опухоли с уровнем экспрессии белков-регуляторов апоптоза и пролиферации с использованием маркеров р53, bcl-2, Ki-67. В результате исследования больных раком желудка с разной морфологической структурой опухоли: аденокарцинома, перстневидно-клеточный рак и недифференцированный рак выявлена тенденция к гиперэкспрессии белков регуляторов апоптоза и пролиферации р53, bcl-2, Ki-67 и прогнозировании метастазов, и при пониженной экспрессии белков регуляторов апоптоза и пролиферации р53, bcl-2, Ki-67 прогнозируют отсутствие метастатического поражения лимфоузлов.
Изобретение является промышленно применимым, так как может быть использовано в здравоохранении при иммуногистохимическом исследовании маркера пролиферативной активности Ki-67 и маркеров апоптоза р53, bcl-2 у больных раком желудка в различных медицинских учреждениях, особенно онкологического профиля, НИИ онкологии, онкодиспансерах.
«Способ прогнозирования метастазов у больных раком желудка» выполняется следующим образом.
В основной и контрольной группах больных осуществляют верификацию опухоли до операции и иммуногистохимическое исследование операционного материала.
Нами было проведено иммуногистохимическое исследование маркера пролиферативной активности (Ki-67) и маркеров апоптоза (р53, bcl-2) у 30 больных раком желудка различного морфологического строения с наличием метастазов в лимфоузлы (основная группа). Аналогичное исследование было выполнено у 30 больных контрольной группы, т.е. без метастатического поражения лимфоузлов (группа сравнения). В каждой группе было по 10 человек с разной морфологической структурой опухоли: аденокарцинома, перстневидноклеточный рак и недифференцированный рак (табл.1).
Для группы больных раком желудка с метастазами оказалось характерна гиперэкспрессия белков-регуляторов апоптоза и пролиферации р53, bcl-2 и Ki-67 по сравнению с контрольной группой больных без метастазов.
Таблица 1
Гистотип опухоли
Основная группа, абс. (%)
Группа сравнения, абс. (%)
р53
bcl-2
Ki-67
р53
bcl-2
Ki-67
аденокарцинома
10(36)
9(30)
12(42)
6(22)
5(17)
10(34)
перстневидноклеточный рак
10(42)
10(34)
12(40)
8(28)
7(25)
9(32)
недифференцированный рак
13(45)
11(38)
9(32)
9(32)
8(27)
4(15)
Всего:
35
30
33
23
20
23
Маркер апоптоза bcl-2 в основной группе больных значительно выше при недифференцированном (38%) и перстневидноклеточном раке (34%) по сравнению с аденокарциномой (30%). Те же тенденции сохраняются в группе сравнения и составляют 27, 25 и 17% соответственно.
Маркер пролиферации Ki-67 заметно выше в группе больных с метастазами по сравнению с контрольной группой и четко отражает корреляцию между гистотипом рака желудка и метастатической активностью опухоли: при аденокарциноме Ki-67 выявляется у 42% больных основной группы и у 34% больных в группе сравнения (фиг.1, 1a).
Фиг.1. Аденокарцинома желудка. Окраска гематоксилином и эозином. Х 250.
Фиг.1а. Иммуногистохимическая характеристика прогностических маркеров при аденокарциноме желудка: интенсивная экспрессия Ki-67. Х 250.
При перстневидноклеточном раке Ki-67 был отмечен у 40% пациентов основной группы и у 32% - в группе сравнения (фиг.2, 2а)
Фиг.2. Перстневидноклеточный рак желудка. Окраска гематоксилином и эозином. Х 400.
Фиг.2а. Иммуногистохимическая характеристика прогностических маркеров при перстневидноклеточном раке желудка: слабая экспрессия Ki-67. Х 250.
При недифференцированном раке маркер пролиферации Ki-67 выявлен в 32% случаев у больных раком желудка с метастазами, а в группе сравнения - 15% случаев (фиг.3, 3а).
Фиг.3. Недифференцированный рак желудка. Окраска гематоксилином и эозином. Х 250.
Фиг.3а. Иммуногистохимическая характеристика прогностических маркеров при недифференцированном раке желудка: слабая экспрессия Ki-67. Х 250.
Многие авторы также отмечают, что раковая опухоль, обладая выраженным клеточным полиморфизмом и гетерогенностью, с различной степенью экспрессирует белки р53, bcl-2 и Ki-67. Так, сверхэкспрессия протоонкогена bc1-2, блокирующего апоптоз, наблюдается на ранних фазах возникновения опухоли и встречается в кишечном типе рака желудка. В исследовании высокая экспрессия маркера bcl-2 отмечена также при метастазах рака желудка с гистотипами недифференцированного и перстневидноклеточного рака (фиг.4).
Фиг.4. Иммуногистохимическая характеристика прогностических маркеров при недифференцированном раке желудка: интенсивная экспрессия bcl-2. Х 250.
Маркер апоптоза р53 в основной группе больных прямо коррелирует с метастатической активностью опухоли, причем уровень экспрессии значительно выше при недифференцированном (45%) и перстневидноклеточном раке (42%), чем при аденокарциноме (36%) - фиг.5, 5а.
В группе сравнения эти показатели заметно ниже (32, 28 и 22% соответственно).
Фиг.5. Иммуногистохимическая характеристика прогностических маркеров при недифференцированном раке желудка: интенсивная экспрессия р53. Х 250.
Фиг.5а. Иммуногистохимическая характеристика прогностических маркеров при перстневидноклеточном раке желудка: интенсивная экспрессия р53. Х 250.
Таким образом, увеличение экспрессии Ki-67, р53 и bcl-2, выявленное при раке желудка с метастазами, свидетельствует о прогностическом значении этих маркеров. С их помощью можно предсказать клинический исход заболевания, т.е. выживаемость и вероятность возникновения рецидива у пациентов при отсутствии лечения.
Примеры конкретного выполнения «Способа прогнозирования метастазов у больных раком желудка»
1. Б-ой К., 47 лет, - недифференцированный рак желудка. Опухоль на малой кривизне 4×5 см, инфильтративно-язвенная форма роста. Операция гастрэктомия 2001 г. Р53 - 13-45%, bcl-2 - 11-38%, Ki-67 - 9-32%. Выявлены метастазы в лимфоузлы.
2. Б-ая С., 50 лет, - перстневидноклеточный рак желудка. Опухоль в кардиоэзофагиальном отделе в виде 5×6 см. Операция гастрэктомия 2001 г. Р53 - 10%, bcl-2 - 10%, Ki-67 - 12%. Метастазы в лимфоузлы.
3. Б-ой Ш., 64 г., - аденокарцинома желудка. Опухоль в антральном отделе, инфильтративно-язвенная форма роста 6х7 см. Операция гастрэктомия 2001 г. Р53 - 10%, bcl-2 - 9%, Ki-67 - 12%. Метастазы в лимфоузлы.
Технико-экономическая эффективность «Способа прогнозирования метастазов у больных раком желудка» заключается в прогностическом значении белков-регуляторов апоптоза и пролиферации р53, bcl-2, Ki-67. С помощью этих прогностических факторов можно предсказать исход заболевания, выживаемость и вероятность возникновения метастазов у больных при отсутствии лечения, планирование лечебных мероприятий.