СПОСОБ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИНОРНЫХ КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ В ГЕТЕРОГЕННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЯХ

1. Способ определения одного или более связанных с клетками аналитов в жидкой пробе, характеризующийся тем, что его осуществляют с использованием устройства, содержащего:
по меньшей мере одну загрузочную зону (5), предназначенную для нанесения жидкой пробы;
пористую мембрану (2), пригодную для проникновения клеточных компонентов, причем на этой мембране имеется по меньшей мере одна индикаторная зона, способная взаимодействовать со связанным с клетками аналитом и содержащая по меньшей мере один элемент, связывающий связанный с клетками аналит; и
по меньшей мере одну абсорбирующую область (3) на мембране, которая поглощает жидкость после прохождения ею индикаторных зон,
причем между загрузочной зоной (5) и абсорбирующей областью (3) расположена по меньшей мере одна индикаторная зона, а данный способ используют для концентрирования и количественной оценки минорных клеточных популяций в гетерогенных клеточных популяциях, например, в случае фетоматеринской геморрагии или в случае химер, для выявления аналита, присутствующего на поверхности клеток в малых концентрациях, для определения гематокрита и/или для параллельного определения связанных с клетками аналитов в случае реакций смешанного типа.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что он включает в себя следующие этапы:
а) нанесение пробы, содержащей клетки, на загрузочную зону;
б) нанесение разбавителя;
в) проведение анализа и
г) оценку результатов анализа посредством определения того, имеются ли клетки, связанные с индикаторной зоной.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что его используют для определения фетоматеринской геморрагии (ФМГ), при этом проба содержит эритроциты, а индикаторная зона предпочтительно содержит антитело или смесь антител.
4. Способ по п.2, отличающийся тем, что его используют для определения аналита, присутствующего на поверхности клеток в малых концентрациях, предпочтительно слабых D-антигенов группы крови, в частности DEL, а индикаторная зона предпочтительно содержит антитело или смесь антител.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что он дополнительно включает в себя этап а) получения эритроцитарного осадка посредством центрифугирования пробы крови; инкубирования осадка с раствором бромелаина, папаина или фицина и повторного суспендирования обработанного ферментом осадка.
6. Способ по п.2, отличающийся тем, что на этапе а) наносят примерно от 100 до 500 мкл пробы крови или ресуспендированного эритроцитарного осадка.
7. Способ по п.2, отличающийся тем, что на этапе б) наносят примерно от 100 до 200 мкл разбавителя.
8. Способ по п.2, отличающийся тем, что анти-D-антитело выбрано из RUM-1, LDM-3, ESD1M, ТН-28, MS-201, MS-26 и LDM-1.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что устройство содержит по меньшей мере две индикаторные зоны, которые расположены друг за другом в направлении потока, так чтобы жидкость, содержащаяся в пробе, двигаясь по каждой проточной дорожке, проходила более чем одну индикаторную зону, причем индикаторные зоны содержат связывающие элементы, которые связывают связанные с клетками аналиты, и способ включает в себя:
а) нанесение пробы, содержащей клетки, на загрузочную зону;
б) нанесение разбавителя на загрузочную зону;
в) проведение анализа и
г) оценку результатов анализа посредством определения того, имеются ли эритроциты, связанные с индикаторной зоной (или с индикаторными зонами):
причем способ используют для параллельного определения связанных с клетками аналитов при фетоматеринской геморрагии (ФМГ), для определения реакций смешанного типа, для выявления гомологичной трансфузии или для определения значения гематокрита.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что его используют для определения гематокрита, при этом индикаторная зона предпочтительно содержит антитело или смесь антител, и на этапе г) определяют общую картину связывания эритроцитов и индикаторных зон.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что устройство содержит по меньшей мере две индикаторные зоны, которые расположены в одной проточной дорожке, причем индикаторные зоны содержат идентичные связывающие элементы, направленные против одних и тех же связанных с клетками аналитов.
12. Способ по п.10, отличающийся тем, что устройство содержит по меньшей мере две проточные дорожки с по меньшей мере двумя индикаторными зонами, а концентрация связывающего элемента увеличивается или уменьшается по направлению от стороны, проксимальной относительно загрузочной зоны, к дистальной стороне.
13. Способ по п.10, отличающийся тем, что устройство содержит по меньшей мере две проточные дорожки с по меньшей мере двумя индикаторными зонами, и концентрация антитела в первой проточной дорожке отличается от концентрации во второй проточной дорожке.
14. Способ по п.9, отличающийся тем, что его используют для параллельного определения связанных с клетками аналитов в реакциях смешанного типа или для выявления гомологичной трансфузии, причем устройство содержит по меньшей мере две индикаторные зоны, расположенные друг за другом в направлении потока, так чтобы жидкость, содержащаяся в пробе, двигаясь по каждой дорожке, проходила более чем через одну индикаторную зону, а индикаторные зоны содержат связывающие элементы, связывающие различные связанные с клетками аналиты.
15. Способ по п.1, отличающийся тем, что связанный с клетками аналит выбран из антигенов группы крови, таких как A, B, AB, D, C, c, E, e, Cw, K, k, Jka и/или Jkb.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что антигены группы крови определяют посредством реакционных пар A, B; D+, D-; K, k; C, c и/или E, e.
17. Способ по п.1, отличающийся тем, что связывающий элемент, ориентированный против аналита, выбран из антитела, фрагмента антитела, лектина, фрагмента лектина или их смесей.
18. Способ по п.1, отличающийся тем, что мембрана или мембраны (2) предпочтительно состоят из полиэтилена, нитроцеллюлозы или нейлона.
19. Способ по п.1, отличающийся тем, что за загрузочной зоной (5) и перед индикаторными зонами на мембране (2) расположен по меньшей мере один уплотнительный элемент (4).
20. Способ по п.1, отличающийся тем, что компоненты устройства с целью механического укрепления прикреплены к опорному слою (1).
21. Способ по п.1, отличающийся тем, что компоненты устройства встроены в корпус.
22. Применение устройства для определения фетоматеринской геморрагии или химер, для определения аналита, присутствующего на клетках в малых концентрациях, для определения значения гематокрита и/или для параллельного определения связанных с клетками аналитов в реакциях смешанного типа в жидкой пробе, причем устройство содержит:
загрузочную зону (5) для нанесения на нее жидкой пробы;
пористую мембрану, пригодную для проникновения клеточных компонентов, с по меньшей мере одной индикаторной зоной на мембране, которые могут вступать во взаимодействие со связанным с клетками аналитом, причем мембрана содержит по меньшей мере один связывающий элемент, связывающий связанный с клетками аналит, и
по меньшей мере одну абсорбционную зону (3) на мембране, которая принимает жидкость после прохождения индикаторных зон,
причем индикаторная зона расположена между загрузочной зоной (5) и абсорбционной зоной (3).
23. Применение по п.22, отличающееся тем, что устройство применяют для определения ФМГ.
24. Применение по п.22, отличающееся тем, что устройство применяют для определения аналита, присутствующего на поверхности клеток в малых концентрациях.
25. Применение по п.24, отличающееся тем, что аналит является слабым D-антигеном группы крови, предпочтительно DEL.
26. Применение по п.22, отличающееся тем, что устройство применяют для определения значения гематокрита.
27. Устройство для прямого определения связанного с клетками аналита в жидкой пробе, содержащее:
загрузочную зону (5) для нанесения на нее жидкой пробы;
пористую мембрану, пригодную для проникновения клеточных компонентов, с по меньшей мере двумя индикаторными зонами на мембране, которые могут вступать во взаимодействие со связанным(и) с клетками аналитом (аналитами), причем индикаторные зоны содержат по меньшей мере один связывающий элемент, связывающий связанные с клетками аналиты, и
по меньшей мере одну абсорбционную зону (3) на мембране, которая принимает жидкость после прохождения индикаторных зон,
причем индикаторные зоны расположены между загрузочной зоной (5) и абсорбционной зоной (3), причем по меньшей мере две индикаторные зоны расположены друг за другом в направлении потока, так что жидкость, содержащаяся в пробе, при движении по проточной дорожке проходит более чем через одну индикаторную зону.
28. Устройство по п.27, отличающееся тем, что связанный с клетками аналит выбран из антигенов группы крови, таких как A, B, AB, C, c, E, e, Cw, K, k, Jka и/или Jkb.
29. Устройство по п.28, отличающееся тем, что антигены группы крови выбраны в виде реакционной пары A, B; D+, D-; K, k; C, c и/или Е, e.
30. Устройство по п.29, отличающееся тем, что на мембране имеются по меньшей мере две проточные дорожки с по меньшей мере двумя индикаторными зонами, содержащими различные связывающие элементы.
31. Устройство по п.28, отличающееся тем, что индикаторные зоны исполнены в виде точек, штрихов или клиньев.