СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ХРОМОГЕННОГО КОМПЛЕКСА ТРУТОВИКА ПЛОСКОГО
METHOD FOR PREPARING CHROMOGENIC COMPLEX OF ARTIST'S CONK

Способ получения хромогенного комплекса трутовика плоского Изобретение относится к фармацевтической, пищевой и косметической промышленности и касается получения хромогенного комплекса трутовика плоского.
Известно, что трутовые грибы содержат темно окрашенные вещества, хромогенные комплексы, обладающие биологической активностью (противораковой, тонизирующей и т.п.). К трутовым грибам относятся, в частности, чага, трутовик плоский, трутовик окаймленный и другие.
7
7
Хромогенные комплексы получают из разных видов трутовых грибов. Например, разработаны способы получения хромогенных комплексов из чаги, обладающих высокой антиоксидантной и терапевтической активностями (патент RU №2336085, МПК А61К 36/06, опубл. 20.10.08; патент RU №2339390, МПК А61К 36/06, А61Р 39/06, опубл. 27.11.08; Исследование золя вводных извлечений чаги IV. Антиоксидантная активность. Влияние способа извлечения и применение комплексонов, гидроксида натрия / М.А. Сысоева [и др.] // Химия растительного сырья, 2005 - №1. - С.41-47). Однако, чага в природных условиях встречается реже, чем другие виды трутовых грибов, к которым относится трутовик плоский.
Так же, известен способ получения экстрактов из трутовика плоского, содержащих флавоноиды, танины, сапонины (Lignicolous fungi from northern Serbia as natural sources of antioxidants / M.A. Karaman, N.M. Mimica-Dukic, M.N. Matavuly // Central European journal of biology. - 2009. - №3. - P.387-396). Но, в указанном способе из гриба не извлекают хромогенный комплекс.
Наиболее близким техническим решением, принятым в качестве прототипа, является способ получения хромогенного комплекса трутовика плоского, в котором сырье, предварительно обезжиренное, экстрагируют водным раствором гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л (0,1н) в течение 2 часов при температуре 45-50°С, затем экстракт отделяют, меланин (хромогенный комплекс) осаждают добавлением к экстракту раствора хлористоводородной кислоты до рН 1,5 (Бакулин А.В. Физико-химические характеристики хитозан-меланиновых комплексов / А.В. Бакулин и [и др.] // Труды Белорусского государственного университета - 2006. - 4(2). - С.290-297).
Недостатками известного способа является низкий выход хромогенного комплекса.
Технической задачей изобретения является увеличение выхода хромогенного комплекса с сохранением его антиоксидантной активности.
Поставленная задача достигается тем, что в способе получения хромогенного комплекса гриба трутовика плоского, включающем экстрагирование измельченного плодового тела трутовика плоского водным раствором гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л, отфильтровывание экстракта, осаждение из экстракта хромогенного комплекса добавлением хлористоводородной кислоты до значения рН 1,5, согласно изобретению экстрагирование проводят при температуре 65-75°С ступенчато в течение 2-3 часов при массовом соотношении гриб:экстрагент на первой ступени 1:6, а на второй ступени 1:4 или 1:6, при этом на первой ступени экстрагирование проводят в течение 1 часа с получением экстракта первой ступени экстрагирования и жома, затем жом экстрагируют с получением экстракта второй ступени экстрагирования, экстракты первой и второй ступеней объединяют.
Техническим результатом изобретения является увеличение выхода хромогенного комплекса с сохранением его антиоксидантной активности на высоком уровне.
Сущность изобретения заключается в следующем.
Трутовые грибы накапливают в плодовом теле и мицелии хромогенные комплексы, выполняющие различные биологические функции (участвуют в дыхании, нейтрализации ядов, повышении резистентности к внешним физическим факторам и т.д.). Однако, хромогенные комплексы могут проявлять и антиоксидантную активность, открывая возможность для их применения в фармацевтической промышленности.
Экстракция хромогенных комплексов из клеток гриба затруднена ввиду плохой их растворимости в воде. Процесс экстракции интенсифицируется при повышении температуры за счет увеличения растворимости компонентов гриба и коэффициентов диффузии, что приводит к увеличению выхода хромогенного комплекса. Однако увеличение температуры выше 75°С отрицательно сказывается на терапевтических свойствах готового продукта (Андреева СМ. К характеристике доброкачественности препарата из чаги / СМ. Андреева // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений: сб. науч. тр. - М. - Л.: Наука, 1961. - С.144-150). При проведении процесса при температуре ниже 65°С снижается выход хромогенного комплекса. Таким образом, проведение экстракции при температуре 65-75°С способствует увеличению выхода целевого продукта с сохранением его терапевтических свойств.
Проведение процесса в две стадии поддерживает градиент концентрация хромогенного комплекса между экстрагируемым сырьем и экстрагентом на высоком уровне, что приводит к интенсификации экстракции и, в итоге, к увеличению выхода продукта.
Выбор массового соотношения гриб:экстрагент обусловлен тем, что именно при массовом соотношении гриб:экстрагент 1:6 или 1:4 достигаются условия для формирования коллоидной системы экстракта, благоприятной для экстрагирования хромогенного комплекса (Сысоева М.А. Исследование золя водных извлечений чаги Ч. II. Изменение изучаемой системы при проведении экстракции различными способами / М.А. Сысоева [и др.] // Вестник Казанского технологического университета (КГТУ). - 2003. - №2. - С.172-176). Использование соотношения менее 1:4 не позволяет экстрагенту закрыть поверхность сырья при проведении экстракции. Использование соотношения более 1:6 приведет к перерасходу экстрагента.
Проводить экстракцию продолжительностью более 3 часов нецелесообразно, поскольку это может привести к изменению физико-химических свойств хромогенного комплекса, например, к гидролизу его компонентов с образованием продуктов распада с меньшей терапевтической активностью, при этом выход продукта практически не изменится. Проведение первой ступени экстрагирования в течение 1 ч обусловлено тем, что при меньшей продолжительности выход хромогенного комплекса резко падает, а при большей продолжительности выход продукта возрастает незначительно.
Использование предлагаемого способа позволяет повысить выход хромогенного комплекса в 1,8-2,4 раза и сохранить его высокую антиоксидантную активность (33-40 кКл/100 г).
Способ осуществляют следующим образом. Измельченное плодовое тело трутовика плоского заливают водным раствором гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л при массовом соотношении трутовик:экстрагент 1:6, настаивают в течение 1 часа при температуре 65-75°С, затем экстракт отделяют от жома фильтрованием, получая экстракт первой ступени экстрагирования. Оставшийся жом заливают водным раствором гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л при массовом соотношении жом:экстрагент 1:4 или 1:6, настаивают в течение 1-2 часов при температуре 65-75°С, отделяют экстракт от жома фильтрованием, получая экстракт второй ступени экстрагирования. Экстракты, полученные на первой и второй ступенях экстрагирования, объединяют, подкисляют хлористоводородной кислотой до рН=1,5 для осаждения хромогенного комплекса, хромогенный комплекс отделяют.
Способ иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.
Пример 1. Навеску 10 г измельченного плодового тела трутовика плоского заливают 60 мл водного раствора гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л, настаивают в течение 1 часа при температуре 70°С, затем экстракт отделяют от жома фильтрованием, получая экстракт первой ступени экстрагирования. Оставшийся жом заливают 40 мл водного раствора гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л, настаивают в течение 2 часов при температуре 70°С, отделяют экстракт от жома фильтрованием, получая экстракт второй ступени экстрагирования. Экстракты, полученные на первой и второй ступенях экстрагирования, объединяют, подкисляют хлористоводородной кислотой до рН=1,5 для осаждения хромогенного комплекса. Хромогенный комплекс отделяют центрифугированием.
Примеры 2-3 аналогичны примеру 1, режимные условия приведены в таблице.
7
7
Пример 4. Получение хромогенного комплекса максимально близко к условиям, указанным в прототипе. Навеску 10 г измельченного плодового тела трутовика плоского заливают 100 мл водного раствора гидроокиси натрия с концентрацией 4,0 г/л, настаивают в течение 2 часов при температуре 48°С, затем экстракт отделяют, подкисляют хлористоводородной кислотой до рН=1,5 для осаждения хромогенного комплекса. Хромогенный комплекс отделяют центрифугированием. В прототипе соотношение гриба:экстрагента не было указано, для проведения экстракции было использовано соотношение 1:10, т.к. использование данного соотношения было показано для экстракции трутовых грибов (патент RU №2343930, МПК А61К 36/06, B01D 11/02, опубл. 20.01.09; патент RU №2406514, МПК А61К 36/06, B01D 11/02, А61Р 39/06, опубл. 20.12.10).
Выход хромогенного комплекса определяли согласно Государственной Фармакопее СССР (Государственная фармакопея СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 390 с.)
Антиоксидантную активность хромогенного комплекса определяли по способу определения интегральной антиоксидантной емкости биологических жидкостей (патент RU №2253114, МПК G01N 33/48, опубл. 27.05.05).
Результаты экспериментов обработаны с помощью программы «Статистика 6» и приведены в таблице, при доверительной вероятности Р=0,95, n=7 (n - объем выборки или количество экспериментов).
Таблица
№ примера
Условия проведения экстракции
Выход хромогенного комплекса, % от сырь
О Антиоксидантная активность хромогенно комплекса, кКл/100 г
Температура процесса, °С
Массовое соотношение гриб:экстрагент
Продолжительность процесса, ч
1
4,0
70
I стадия
1:6
1
4,82
33±2
II стадия
1:4
2
2
65
I стадия
1:6
1
6,28
40±2
II стадия
1:6
2
3
75
I стадия
1:6
1
5,69
37±2
II стадия
1:6
1
Прототип
48
-
1:10
2
2,63
39±2
Из таблицы видно, что выход хромогенного комплекса увеличивается в 1,8-2,4 раза по сравнению с прототипом, а антиоксидантная активность практически не изменяется (33-40 кКл/100 г).
Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет повысить выход хромогенного комплекса трутовика плоского более чем в 2 раза и сохранить его высокую антиоксидантную активность.
Использование хромогенных комплексов трутовика плоского, полученных с применением водных растворов гидроокиси натрия, может быть рекомендовано для создания лекарственных препаратов, биологически активных добавок для фармацевтической, пищевой и косметической промышленности.