СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА ИЗЪЯЗВЛЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЖЕЛУДКА
METHOD OF PREDICTING RISK OF MUCOSAL ULCERATION OF STOMACH

Область применения: медицина, экспериментальная фармакология.
Существуют различные методы прогнозирования и контроля над процессами изъязвления желудочно-кишечного тракта. К ним относятся в основном визуальные методы исследования, такие как гастроскопия, контрастная рентгенография, фиброгастродуоденоскопия, в процессе выполнения которых измеряется диаметр эрозивно-язвенного дефекта. Однако эти методы имеют существенные ограничения в применении, которые обусловлены сопутствующей патологией и тяжестью состояния пациента [1].
В последние годы разрабатываются клинико-биохимические методы диагностики и прогнозирования изъязвлений слизистой желудочно-кишечного тракта. Среди них самые известные: определение перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности. Для оценки системы перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантной защиты организма необходимо определять ряд показателей, таких как малоновый диальдегид (МДА), диеновые конъюгаты, церулоплазмин, трансферрин, супероксиддисмутаза (СОД), каталаза [3].
Нами было определено содержание каталазы, диеновых конъюгатов, МДА, СОД в крови из подключичной вены и тканях желудка у шестнадцати крыс линии Вистар массой 180-200 г в исходном состоянии и при экспериментальной язве желудка через 7 суток с момента моделирования ацетатной язвы (Окабэ С., 1971) (табл.1).
Таблица 1
Состояние ПОЛ и антиоксидантной системы в эритроцитах из подключичной вены и тканях желудка в исходном состоянии и при экспериментальной язве желудка
Показатели
Эритроциты из подключичной вены
Ткань желудка
исходное состояние
язва ч/з 7 суток
р<sub>1</sub>
исходное состояние
язва ч/з 7 суток
р<sub>2</sub>
Диеновые конъюгаты
0,1248±0,016
0,1889±0,027
<0,05
0,176±0,0093
0,0922±0,015
<0,001
n=27
n=14
n=21
n=27
МДА
2,954±0,421
5,962±1,16
<0,05
0,758±0,11
1,59±0,36
<0,05
n=33
n=14
n=19
n=11
СОД
22,65±4,06
6,165±1,96
<0,01
18,52±2,1
11,9±2,22
>0,1
n=19
n=4
n=13
n=13
Каталаза
66,95±3,63
58,269±2,83
>0,1
66,95±3,63
58,269±2,83
<0,05
n=30
n=10
n=30
n=10
р - достоверность различия между показателями в исходном состоянии и при экспериментальной язве
Как видно из таблицы 1, достоверные различия между исходным состоянием и при экспериментальной язве желудка через 7 суток в эритроцитах из подключичной вены статистически достоверны при определении диеновых конъюгатов, МДА, СОД. Определение активности каталазы не выявляет достоверных различий между исходным состоянием и при экспериментальной язве желудка через 7 суток.
В тканях желудка достоверные различия наблюдаются при определении диеновых конъюгатов, МДА, каталазы. При определении СОД достоверных различий между исходным состоянием и при экспериментальной язве желудка через 7 суток нет.
Эти методы чрезвычайно трудоемки, реактивы дорогостоящи и токсичны. Для оценки интенсивности перекисного окисления и активности антиоксидантной системы этими способами потребуется целый рабочий день врача-лаборанта. В этой связи в практическом здравоохранении эти методы используются редко.
Интенсивность ПОЛ и активность антиоксидантной системы влияет на состояние клеточной мембраны. В литературе предложен интегративный тест определения проницаемости эритроцитарных мембран, отражающий уменьшение антиокислительной защиты организма, активацию ПОЛ, липаз, фосфолипазы и др. [2, 4].
Целью предложенного изобретения является расширение и упрощение диагностических возможностей по определению риска изъязвления тканей желудка.
Эксперименты выполнены на 21 крысах линии Вистар обоего пола весом от 147 до 235 г под нембуталовым наркозом (30 мг/кг нембутала). Животных содержали в условиях вивария при постоянной температуре и влажности воздуха. Кровь для исследования забирали из подключичной вены, в которой определяли осмотическую стойкость эритроцитов (ОСЭ). В исходном состоянии моделировалась ацетатная язва желудка по методу Окабэ С. (1971) [5]. По состоянию исходного уровня ОСЭ животные разделены на две группы. У 9 крыс (группа 1) ОСЭ была высокая, у 13 крыс ОСЭ низкая (табл.2).
Таблица 2
Осмотическая резистентность эритроцитов из подключичной вены в исходном состоянии
№ разведения
Кровь из подключичной вены
p
1 группа, n=5-9
2 группа, n=8-13
1
3,275±0,55
17,36±2,36
<0,001
2
6,784±1,22
38,739±3,6
<0,001
3
42,7±5,6
69,58±4,3
<0,01
4
69,3±5,32
84,13±2
<0,05
5
82,42±3,13
91,88±0,89
<0,01
6
90,85±3,8
99,08±0,55
<0,05
7
100±0
100±0
>0,1
р - достоверность различия между показателями в 1-й и 2-й группах в исходном состоянии
Сравнительный анализ ОСЭ первой и второй группы выявил значительное снижение осмотической стойкости у крыс второй группы.
Через 7 суток с момента моделирования язвы проводился забор крови из подключичной вены. Процесс язвообразования оценивали по площади язвенного дефекта. В крови из подключичной вены определяли осмотическую стойкость эритроцитов (ОСЭ) [2]. Через 7 суток с момента моделирования язвы сохраняется разделение крыс на две группы (табл.3).
Таблица 3
Осмотическая резистентность эритроцитов из подключичной вены через 7 суток после моделирования ацетатной язвы
№ разведения
Язва ч/з 7 суток
p
1 группа, n=7-9
2 группа, n=7-13
1
4,23±0,89
19,6±2,6
<0,001
2
8,68±0,45
25,6±4,05
<0,001
3
34,6±4,56
61,38±4,14
<0,001
4
82,6±3,82
77,8±4,24
>0,1
5
90,6±2,16
83,67±2,11
<0,05
6
97,6±1,17
98,06±0,98
>0,1
7
100±0
100±0
>0,1
р - достоверность различий между первой и второй группами при ацетатной язве
2
2
Сравнительный анализ результатов ОСЭ, полученных через 7 суток с момента моделирования ацетатной язвы желудка у крыс 1-й и 2-й групп, показывает, что ОСЭ в 1 группе в разведениях 1, 2, 3, 5 значительно выше, чем в аналогичных разведениях во 2 группе. У крыс 1 группы, с высокой осмотической стойкостью, площадь эрозивно-язвенного повреждения составляла от 0 до 5 мм, во 2 группе - от 7 до 19,6 мм.
Примеры конкретного выполнения экспериментов из подопытной серии
Опыт 1
2
Половозрелого самца массой 190 г, находящегося на стандартной диете, наркотизировали нембуталом (30 мг/кг). В исходном состоянии кровь для исследования получали из подключичной вены объемом 2 мл. Определяли ОСЭ. После получения крови из подключичной вены была смоделирована ацетатная язва по Окабэ С. (1971) путем нанесения на серозную оболочку желудка 70% уксусной кислоты на 30 с, после чего уксусная кислота удалялась фильтровальной бумагой. Проводили послойное ушивание раны. В течение 6 последующих суток крыса имела свободный доступ к воде и пище. За сутки до окончания эксперимента животное находилось в состоянии пищевой депривации при свободном доступе к воде. Через 7 суток с момента моделирования язвы под нембуталовым наркозом была получена кровь из подключичной вены, извлечен желудок. Желудок вскрывался по большой кривизне, промывался холодной водой в течение 1 мин. Визуально проводилось измерение диагоналей зоны повреждения с последующим вычислением площади дефекта. В данном эксперименте на малой кривизне в антральной зоне обнаружен язвенный дефект площадью 1,77 мм. ОСЭ определяли в первые 2 часа после получения крови. Полученные результаты представлены в таблице 4.
Таблица 4
Номер пробирки
Исход (% гемолиза)
Язва (% гемолиза)
1
5,8
3,75
2
8,3
7,9
3
35,0
28,75
4
50,0
62,5
5
83,3
83,3
6
83,3
91,6
7
100,0
100,0
Высокие показатели ОСЭ позволяют отнести животное к 1-й группе.
Опыт 2
2
Половозрелого самца массой 190 г, находящегося на стандартной диете наркотизировали нембуталом (30 мг/кг). В исходном состоянии кровь для исследования получали из подключичной вены объемом 2 мл. Определяли ОСЭ. После получения крови из подключичной вены была смоделирована ацетатная язва по Окабэ С. (1971) путем нанесения на серозную оболочку желудка 70% уксусной кислоты на 30 с, после чего уксусная кислота удалялась фильтровальной бумагой. Проводили послойное ушивание раны. В течение 6 последующих суток крыса имела свободный доступ к воде и пище. За сутки до окончания эксперимента животное находилось в состоянии пищевой депривации при свободном доступе к воде. Через 7 суток с момента моделирования язвы под нембуталовым наркозом была получена кровь из подключичной вены, извлечен желудок. Желудок вскрывался по большой кривизне, промывался холодной водой в течение 1 мин. Визуально проводилось измерение диагоналей зоны повреждения с последующим вычислением площади дефекта. В данном эксперименте на малой кривизне в антральной зоне обнаружен язвенный дефект площадью 7,065 мм. ОСЭ определяли в первые 2 часа после получения крови. Полученные результаты представлены в таблице 5.
Таблица 5
Номер пробирки
Исход (% гемолиза)
Язва (% гемолиза)
1
14,79
17,3
2
32,8
28,8
3
57,9
53,3
4
77,95
72,0
5
88,47
86,0
6
90,4
91,7
7
100,0
100,0
Низкие показатели позволяют отнести животное ко 2-й группе.
Выявленные закономерности соответствия характера ОСЭ и степени предрасположенности к изъязвлению отмечались у 19 крыс из 21. У двух крыс эта закономерность не прослеживалась.
1) Половозрелый самец, масса животного 147 г (табл.6)
Таблица 6
Номер пробирки
Исход (% гемолиза)
Язва (% гемолиза)
1
8,9
5,96
2
49,2
17,2
3
91,5
87,4
4
90,2
97,13
5
92,8
97,13
6
93,7
99,7
7
100,0
100,0
2
Высокий уровень ОСЭ позволяет отнести животное к 1-й группе, но площадь сформировавшегося у него язвенного дефекта достаточно большая и составляет 9,6 мм.
2) Половозрелый самец, масса животного 150 г (табл.7)
Таблица 7
Номер пробирки
Исход (% гемолиза)
Язва (% гемолиза)
1
57,14
25,0
2
64,28
31,25
3
85,7
37,5
4
85,7
43,75
5
85,7
43,75
6
100,0
68,75
7
100,0
100,0
2
Низкий уровень ОСЭ позволяет отнести животное ко 2-й группе, но площадь язвенного дефекта составляет 0 мм (регенерация).
2
2
Таким образом, у крыс с более высокой ОСЭ (1-я группа) резистентность тканей желудка к действию повреждающих факторов большая, риск изъязвления низкий, о чем свидетельствует малая площадь эрозивно-язвенного дефекта (от 0 до 5 мм). И наоборот, у крыс с низкой ОСЭ (2-я группа), резистентность тканей снижается, подтверждением чего служит большая площадь эрозивно-язвенного дефекта (от 7 до 19,6 мм). Специфичность метода 90,5%.
Литература
1) Неотложная гастроэнтерология: Руководство для врачей. / Крылов А.А., Земляной А.Г., Михайлович В.А., Иванов А.И. - Л.: Медицина, 1988. - 264 с.: ил.
2) Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: в 2 т. Т.2. - Ми.: Беларусь, 2000, с.195-211.
3) Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. - М.: Наука, 1972, 252 с.
4) Зайчик А.Ш. Чурилов Л.П. Основы общей патологии: Учеб. п. для мед. вузов: ч.1. - СПб. 1999.
5) Okabe S., Roth J.L.A., Pfeiffer C.J. A method for experimental, penetrating gastric and duodenal ulcer in rats. // Digestive Diseases. - 1971. - Vol.16, №3. - P.277-284.