УЛУЧШЕННЫЙ СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ

1. Способ количественного определения нуклеиновых кислот, содержащий этапы, на которых:
a) метят эталонный олигонуклеотид, имеющий заранее установленную длину, выявляемым маркером;
b) создают стандартную кривую, используя серийные разведения меченого эталонного олигонуклеотида, путем построения графика зависимости интенсивности выявляемого маркера от концентрации меченого эталонного олигонуклеотида;
c) амплифицируют целевую нуклеиновую кислоту в присутствии выявляемого маркера, который метит амплифицированную целевую нуклеиновую кислоту,
d) сравнивают интенсивность выявляемого маркера, связанного с меченой амплифицированной целевой нуклеиновой кислотой, со стандартной кривой и определяют количество амплифицированной целевой нуклеиновой кислоты, где указанная стандартная кривая не амплифицирована или совместно амплифицирована с целевой нуклеиновой кислотой.
2. Способ количественного определения нуклеиновых кислот, содержащий этапы, на которых:
a) метят эталонный олигонуклеотид, имеющий заранее установленную длину, выявляемым маркером;
b) создают стандартную кривую, используя серийные разведения меченого эталонного олигонуклеотида, путем построения графика зависимости интенсивности выявляемого маркера от концентрации меченого эталонного олигонуклеотида;
c) амплифицируют целевую нуклеиновую кислоту;
d) метят амплифицированную целевую нуклеиновую кислоту выявляемыми маркером;
e) сравнивают интенсивность выявляемого маркера, связанного с меченой амплифицированной целевой нуклеиновой кислотой, со стандартной кривой и определяют количество амплифицированной целевой нуклеиновой кислоты, где указанная стандартная кривая не амплифицирована или совместно амплифицирована с целевой нуклеиновой кислотой.
3. Способ по п.1 или 2, где выявляемый маркер представляет собой краситель.
4. Способ по п.3, где краситель связывается с дцДНК.
5. Способ по п.4, где краситель представляет собой интеркалирующий краситель.
6. Способ по п.3, где краситель представляет собой флюоресцентный краситель.
7. Способ по п.6, где используемый краситель выбран из любого одного из: SYBR зеленого I, SYBR зеленого II, SYBR золотого, EvaGreen, оксазола желтого, тиазола оранжевого, PicoGreen, ТОТО, ВЕВО или Deep Purple.
8. Способ по п.1 или 2, где эталонный олигонуклеотид имеет длину около 60 п.н. или больше.
9. Способ по п.1 или 2, где эталонный олигонуклеотид имеет содержание GC 45% или больше.
10. Способ по п.8, где эталонный олигонуклеотид имеет длину от около 60 п.н. до около 170 п.н.
11. Способ по п.9, где эталонный олигонуклеотид имеет содержание GC от около 45% до около 75%.
12. Способ по п.1 или 2, где эталонный олигонуклеотид имеет длину около 100 п.н. и содержание GC около 50%.
13. Способ по п.1 или 2, где эталонный олигонуклеотид длиннее или короче, чем целевая нуклеиновая кислота.
14. Способ по п.1 или 2, где амплификацию целевой нуклеиновой кислоты проводят с помощью способа полимеразной цепной реакции (ПЦР).
15. Способ по п.1 или 2, где одну стандартную кривую используют для многократных амплификации и количественных анализов целевой нуклеиновой кислоты.
16. Способ по п.15, где каждую из многократных амплификации и количественных анализов целевой нуклеиновой кислоты проводят за разное время.
17. Способ по п.14, где целевую нуклеиновую кислоту амплифицируют в течение 15 циклов.
18. Набор для применения в способе по любому одному из пп.1-17, содержащий один или несколько эталонных олигонуклеотидов и флюоресцентный краситель.
19. Набор по п.18, где, если присутствует более чем один эталонный олигонуклеотид, каждый имеет различную длину.
20. Набор для применения в способе по любому одному из пп.1-17, содержащий один или несколько эталонных олигонуклеотидов, меченых выявляемым маркером.
21. Набор для применения в способе по любому одному из пп.1-17, содержащий серийные разведения одного или нескольких эталонных олигонуклеотидов, меченых выявляемым маркером.
22. Набор по любому из пп.18-21, где по меньшей мере один эталонный олигонуклеотид имеет от около 60 п.н. до около 170 п.н. в длину с содержанием GC от около 45% до около 75%.