КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ИНСУЛЬТА
COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING A STROKE

Область техники
[1] Настоящее изобретение относится к композиции для предотвращения или лечения инсультов и, более конкретно, к композиции для предотвращения или лечения инсультов, пищевой композиции для предотвращения или облегчения последствий инсультов и кормовой композиции для предотвращения или облегчения последствий инсультов, каждая из которых содержит (S)-2-(((4'-трифторметилбифенил-4-ил)метил)амино)пропанамид метансульфонат, к способу предотвращения или лечения инсультов и к применению этого соединения для предотвращения или лечения инсультов.
[2]
Уровень техники
[3] Инсульт представляет собой цереброваскулярное заболевание, которое является одной из трех основных причин смерти наряду с заболеваниями сердца и раком, а также заболеванием, которое чаще всего влияет на прогноз продолжительности жизни и увеличение возраста населения по мере постепенного увеличения его частоты. Известно, что артериальная гипертензия, гиперлипидемия, атеросклероз и гиперхолестеринемия являются важными факторами риска церебрального инсульта.
[4] Инсульты в целом делятся на два типа инсульта, а именно ишемические инсульты, вызванные ишемией ткани головного мозга из-за уменьшения или блокирования кровоснабжения ткани головного мозга, и геморрагические инсульты, вызывающие кровотечение в ткани головного мозга из-за разрыва кровеносных сосудов. На ишемические инсульты приходится около 80% всех случаев инсульта. Смертность от инсультов растет с каждым годом в зарубежных странах, а также в Корее, и в наши дни существует большой интерес к разработке лекарственных препаратов для лечения инсультов.
[5] Документ предшествующего уровня техники
[6] Патентный документ
[7] (Патентный документ 1) Патент Кореи No. 10-1795562.
[8] (Патентный документ 2) Патент Кореи No. 10-1781060.
[9]
Раскрытие
Техническая проблема
[10] Авторы настоящего изобретения обнаружили, что соединение (S)-2-(((4'-трифторметилбифенил-4-ил)метил)амино)пропанамид метансульфонат настоящего изобретения обладает действием восстановления нарушенной двигательной функции, вызванной инсультом, и уменьшения размер очага омертвения во внутренней капсуле и, таким образом, полезно для профилактики и лечения инсультов. На основании этого открытия было выполнено настоящее изобретение.
[11]
Техническое решение
[12] В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения вышеупомянутые и другие цели могут быть достигнуты путем получения фармацевтической композиции для предотвращения или лечения инсультов, содержащей в качестве активного ингредиента соединение, представленное следующей Формулой 1, или его фармацевтически приемлемую соль.
[13] Формула 1
[14]
[15] В другом аспекте настоящее изобретение относится к пищевой композиции для предотвращения или облегчения последствий инсультов, содержащей в качестве активного ингредиента данное соединение.
[16] В другом аспекте настоящего изобретения относится к способу предотвращения или лечения инсультов, включающему в себя введение данного соединения субъекту, не являющемуся человеком.
[17] В другом аспекте настоящего изобретения относится к применению данного соединения для предотвращения или лечения инсультов.
[18]
Полезный эффект изобретения
[19] Композиция, содержащая соединение Формулы 1 настоящего изобретения, обладает превосходным действием по предотвращению, облегчению последствий и лечению инсультов за счет восстановления ухудшения двигательных функций, вызванного инсультом, и уменьшения размера очага омертвения во внутренней капсуле.
[20]
Описание чертежей
[21] Фиг. 1 представляет собой схематическую диаграмму, иллюстрирующую модель инсульта у грызуна;
[22] На фиг. 2 показан эффект восстановления двигательных функций на модели инсульта у грызуна при введении KDS2010, в частности, фиг. 2A представляет собой диаграмму, показывающую общий период эксперимента и период введения лекарственного средства, фиг. 2B представляет собой изображение, иллюстрирующее тест «Задача достать одну гранулу корма» (SPRT), На Фигурах 2C и 2D показаны результаты SPRT, На фиг. 2E показан тест «Цилиндр», а на Фигурах 2F и 2G показано нарушение использования передних конечностей (%) и использование противоположных передних конечностей во время циклов в целом в тесте «Цилиндр» (Контроль: нормальная контрольная группа, Инсульт: модель инсульта, Инсульт + реабилитация: модель инсульта с реабилитационной тренировкой, Инсульт + KDS2010: модель инсульта с введением лекарственного средства, Инсульт + реабилитация + KDS2010: модель инсульта с введением лекарственного средства и с реабилитационной тренировкой); и
[23] На фиг. 3 показано влияние введения KDS2010 на восстановление поврежденной ткани мозга на модели инсульта у грызуна.
[24]
Лучший вариант осуществления изобретения
[25] Далее настоящее изобретение будет описано подробно. При этом, каждое описание и вариант осуществления, раскрытые в настоящем изобретении, могут применяться к другим описаниям и вариантам осуществления. То есть все комбинации различных элементов, раскрытых в настоящем изобретении, входят в объем настоящего изобретения. Кроме того, объем настоящего изобретения не ограничивается конкретным описанием, приведенным ниже.
[26]
[27] В одном аспекте для достижения цели настоящего изобретения настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для предотвращения или лечения инсультов, содержащей в качестве активного ингредиента соединение, представленное следующей Формулой 1, или его фармацевтически приемлемую соль.
[28] Формула 1
[29]
[30]
[31] В настоящем изобретении соединение, представленное Формулой 1, представляет собой (S)-2-(((4'-трифторметилбифенил-4-ил)метил)амино)пропанамид метансульфонат. В настоящем изобретении данное соединение может именоваться «KDS2010».
[32] Хотя изучение специфической фармакологической активности данного соединения все еще продолжается, на сегодняшний день не было выявлено, оказывает ли это соединение прямое действие на предотвращение и лечение инсультов.
[33] В настоящем изобретении нет особых ограничений в отношении способа получения (S)-2-(((4'-трифторметилбифенил-4-ил)метил)амино)пропанамид метансульфоната, и это соединение может быть химически синтезировано известным в данной области техники способом или может быть выбрано из коммерчески доступных веществ.
[34] (S)-2-(((4'-трифторметилбифенил-4-ил)метил)амино)пропанамид метансульфонат настоящего изобретения может присутствовать в сольватированной или несольватированной форме. (S)-2-(((4'-трифторметилбифенил-4-ил)метил)амино)пропанамид метансульфонат настоящего изобретения может присутствовать в кристаллической или аморфной форме, и все эти физические формы включены в объем настоящего изобретения.
[35]
[36] Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может включать в себя не только соединение, представленное Формулой 1, но также его фармацевтически приемлемую соль. Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемая соль» означает соль соединения в комбинации с другим веществом и относится к веществу, способному проявлять фармакологически подобную активность.
[37] Типы фармацевтически приемлемых солей включают в себя без ограничений соли неорганических кислот, такие как гидрохлорид, гидробромид, фосфат или сульфат, и соли органических кислот, такие как карбоксилат или сульфонат. Кроме того, тип карбоксилата включает в себя без ограничений ацетат, малеат, фумарат, малат, цитрат, тартрат, лактат или бензоат. Кроме того, тип сульфоната включает в себя без ограничений метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, толуолсульфонат или нафталиндисульфонат.
[38]
[39] Используемый здесь термин «инсульт» означает симптом местного неврологического дефекта, который внезапно вызван нарушением мозгового кровообращения. Такой инсульт может включать в себя ишемический инсульт, при котором гибель клеток головного мозга вызвана закупоркой церебральных кровеносных сосудов из-за тромбов и тому подобного, или кровоизлияние в мозг, вызванное разрывами церебральных кровеносных сосудов. Специфичные симптомы инсульта включают в себя внезапную головную боль и рвоту, паралич мышц одной половины тела или паралич частей тела, сенсорный паралич и потерю функции частей тела, расстройства речи (дисфазия или нарушение произношения), расстройства лицевого нерва, атаксию и тому подобное. Инсульт в настоящем изобретении может означать паралич.
[40] Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может способствовать восстановлению при ухудшении двигательных функций, вызванных инсультом, и уменьшению размера очага омертвения во внутренней капсуле.
[41] В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения результат лечения животной модели инсульта соединением Формулы 1 настоящего изобретения показывает, что восстановление двигательной функции облегчалось, а размер очага омертвения во внутренней капсуле уменьшался по сравнению с животной моделью инсульта, которой не вводили лекарственное средство (Фигуры 2 и 3).
[42] Результат продемонстрировал, что композиция, содержащая соединение Формулы 1 настоящего изобретения, обладает превосходным эффектом предотвращения или лечения инсультов.
[43] Используемый здесь термин «предотвращать» или «предотвращение» относится к любому действию, которое ингибирует или задерживает начало инсульта путем введения композиции, содержащей соединение Формулы 1 настоящего изобретения. Используемый здесь термин «лечение» относится к любому действию, которое облегчает или благоприятно изменяет симптомы заболевания путем введения композиции, содержащей соединение Формулы 1 настоящего изобретения.
[44]
[45] Фармацевтическая лекарственная форма композиции для предотвращения или лечения инсультов настоящего изобретения может быть ее фармацевтически приемлемой солью, и композиция может применяться отдельно или совместно с другим фармацевтически активным соединением или в подходящей комбинации с ним.
[46] Композиция для предотвращения или лечения инсульта настоящего изобретения может дополнительно включать в себя фармацевтически приемлемый носитель.
[47] Композиция для предотвращения или лечения инсультов настоящего изобретения может быть получена в виде фармацевтического препарата с использованием способа, хорошо известного в данной области техники, для обеспечения быстрого, замедленного или отсроченного высвобождения активного ингредиента после введения млекопитающему. При получении композиции активный ингредиент предпочтительно смешивают с или разбавляют носителем или инкапсулируют в носитель в форме контейнера.
[48] Соответственно, композиция для предотвращения или лечения инсульта настоящего изобретения применяется в виде перорального препарата, такого как порошок, гранула, таблетка, капсула, суспензия, эмульсия, сироп или аэрозоль, или препарата, такого как препарат для наружного применения, суппозиторий или стерильный раствор для инъекций общепринятым способом. Композиция может дополнительно включать в себя подходящий носитель, вспомогательное вещество и разбавитель, обычно используемые при приготовлении композиций.
[49] Например, носитель, который может быть включен в композицию настоящего изобретения, включает в себя без ограничений лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, гуммиарабик, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, минеральное масло и тому подобное. Приготовление осуществляется с использованием обычного разбавителя или вспомогательного вещества, такого как наполнитель, разбавитель, связующее вещество, смачивающий агент, разрыхлитель или поверхностно-активное вещество.
[50] Твердые препараты для перорального введения включают в себя таблетки, пилюли, порошки, гранулы, капсулы и тому подобное, и твердый препарат готовят путем смешивания, по меньшей мере, одного вспомогательного вещества, такого как крахмал, карбонат кальция, сахароза, лактоза или желатин. Кроме того, в дополнение к простым вспомогательным веществам также могут использоваться смазывающие вещества, такие как стеарат магния и тальк.
[51] Жидкие препараты для перорального введения включают в себя суспензии, жидкости/растворы, эмульсии, сиропы и тому подобное. В дополнение к обычно используемым простым разбавителям, воде и жидкому парафину, в состав препарата также могут быть включены различные вспомогательные вещества, такие как смачивающие вещества, подсластители, ароматизаторы и консерванты.
[52] Препараты для парентерального введения включают в себя стерильные водные растворы, неводные растворители, суспензии, эмульсии, лиофилизированные препараты и суппозитории. Неводные растворители и суспензии могут включать в себя пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, и сложные эфиры для инъекций, такие как этилолеат. В качестве основы для суппозиториев можно использовать витепсол, макрогол, твин 61, масло какао, масло с лаурином и глицерожелатин.
[53] Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может вводиться в виде единственного терапевтического агента или в комбинации с другим терапевтическим агентом и может вводиться последовательно или одновременно с обычным терапевтическим агентом. Фармацевтическая композиция может вводиться один или несколько раз. Принимая во внимание все факторы, описанные выше, важно вводить композицию в количестве, позволяющем получить максимальный эффект в минимальном количестве, не вызывая побочных эффектов, и такое количество может быть легко определено специалистами в данной области техники.
[54] Используемый здесь термин «введение» относится к введению фармацевтической композиции настоящего изобретения пациенту любым подходящим способом, и путь введения композиции настоящего изобретения может быть любым из множества пероральных или парентеральных путей, позволяющих композиции достичь ткани-мишени.
[55] Способ введения фармацевтической композиции настоящего изобретения специально не ограничивается и может представлять собой любой способ, обычно используемый в данной области техники. В качестве неограничивающего примера способа введения композиция может вводиться пероральным или парентеральным способом. Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может быть получена в виде различных препаратов в соответствии с желаемым способом введения.
[56] Частота введения композиции настоящего изобретения специально не ограничивается, но может составлять один или несколько раз в день порциями.
[57] Типичная суточная доза композиции, содержащей в качестве активного ингредиента соединение Формулы 1 настоящего изобретения, может составлять от 1 до 1000 мг/кг, в частности от 11 до 100 мг/кг, и композиция может вводиться один или несколько раз порционно.
[58]
[59] В другом аспекте настоящее изобретение относится к пищевой композиции для предотвращения или облегчения последствий инсультов, содержащей в качестве активного ингредиента соединение, представленное Формулой 1.
[60] Пищевая композиция для предотвращения или облегчения последствий инсультов настоящего изобретения включает в себя препараты, такие как пилюли, порошки, гранулы, агенты для акупунктуры, таблетки, капсулы или жидкости, и пищевые продукты, к которым может быть добавлена композиция настоящего изобретения, включают в себя, например, различные пищевые продукты, такие как напитки, жевательная резинка, чаи, витаминные комплексы и продукты питания с биологически активными пищевыми добавками.
[61] Пищевая композиция для предотвращения или облегчения последствий инсульта настоящего изобретения может включать в качестве основного ингредиента композицию или ее активный компонент или его физиологически приемлемую соль, и нет особых ограничений в отношении других ингредиентов. Подобно обычным продуктам питания, пищевая композиция может дополнительно включать в себя дополнительные ингредиенты, такие как различные экстракты трав, пищевые добавки или натуральные углеводы.
[62] Как упоминалось выше, пищевые добавки также могут быть добавлены, и эти пищевые добавки включают в себя пищевые добавки, обычно используемые в данной области техники, например вкусовые добавки, ароматизаторы, красители, наполнители, стабилизаторы и тому подобное.
[63] Примеры натуральных углеводов включают в себя обычные сахара, включая моносахариды, такие как глюкоза и фруктоза, дисахариды, такие как мальтоза и сахароза, и полисахариды, такие как декстрин и циклодекстрин, и сахарные спирты, такие как ксилит, сорбит и эритрит. В дополнение к ингредиентам, описанным выше, в качестве вкусовых добавок с успехом можно использовать натуральные вкусовые добавки (например, ребаудиозид А, глицирризин или тому подобное) и синтетические вкусовые добавки (сахарин, аспартам или тому подобное).
[64] В дополнение к ингредиентам, описанным выше, пищевая композиция для предотвращения или облегчения последствий инсульта настоящего изобретения может включать в себя ряд питательных веществ, витаминов, минералов (электролитов), вкусовых добавок, таких как синтетические вкусовые добавки и натуральные вкусовые добавки, красителей и наполнителей (таких как сыр или шоколад), пектиновую кислоту и ее соли, альгиновую кислоту и ее соли, органические кислоты, защитные коллоидные загустители, агенты, регулирующие pH, стабилизаторы, консерванты, глицерин, спирт, карбонизирующие агенты, используемые в газированных напитках, и тому подобное. Кроме того, пищевая композиция может включать в себя натуральный фруктовый сок и фруктовую мякоть для производства напитков из фруктовых соков и овощных напитков. Эти ингредиенты можно использовать по отдельности или в комбинации.
[65] В настоящем изобретении продукт питания с биологически активными пищевыми добавками включает в себя здоровое функциональное питание, здоровое питание и тому подобное.
[66] Термин «здоровое функциональное питание» имеет то же значение, что и пищевые продукты, предназначенные для оздоровления (FoSHU), и означает продукты питания, обладающие прекрасным фармацевтическим и лечебным действием, которые проходят специальную обработку для эффективного обеспечения функций биорегуляции и обеспечения питанием. Используемый здесь термин «функция» (или «функциональный») означает получение эффектов, полезных для здоровья, таких как контроль питательных веществ или физиологические воздействия на структуры и функции организма человека. Пищевой продукт настоящего изобретения можно производить способом, обычно используемым в данной области техники, и его можно производить путем добавления сырья и ингредиентов, обычно добавляемых в данной области техники. Кроме того, любую рецептуру пищевого продукта можно использовать без ограничений, если она приемлема в качестве пищи. Пищевая композиция настоящего изобретения может быть приготовлена в виде рецептур различных типов, и ее преимущества заключаются в отсутствии побочных эффектов, которые могут возникнуть при длительном введении лекарственного средства, поскольку в отличие от обычных лекарственных средств она в качестве сырья содержит пищевой продукт. Кроме того, благодаря прекрасной совместимости пищевой продукт настоящего изобретения можно принимать в качестве добавки для улучшения действия по предотвращению или облегчению последствий инсультов.
[67]
[68] В другом аспекте настоящее изобретение относится к кормовой композиции для предотвращения или облегчения последствий инсультов, содержащей в качестве активного ингредиента соединение, представленное Формулой 1.
[69] Кормовая композиция настоящего изобретения может означать любой подходящий натуральный или искусственный рацион, однократный прием корма или его компонента, который съедается, принимается или переваривается животным, и может быть приготовлен в различных формах, известных в данной области техники.
[70] Тип корма специально не ограничивается, и может быть использован корм, обычно применяемый в данной области техники. Неограничивающие примеры кормов включают в себя растительные корма, такие как зерна, орехи, побочные продукты пищевой промышленности, водоросли, волокна, побочные продукты фармацевтической промышленности, жиры и масла, крахмалы, бахчевые культуры или побочные продукты переработки зерна; и корма животного происхождения, такие как белки, неорганические вещества, жиры и масла, минералы, жиры и масла, белки одноклеточных, зоопланктон и продукты питания. Эти ингредиенты можно использовать по отдельности или в комбинации двух или более из них.
[71] Для введения, кроме описанного выше соединения композиция кормовой добавки настоящего изобретения может включать в себя комбинацию одной или нескольких органических кислот, таких как лимонная кислота, фумаровая кислота, адипиновая кислота и молочная кислота, фосфаты, такие как такие как фосфат калия, фосфат натрия и полимеризованный фосфат, и природные антиоксиданты, такие как полифенолы, катехин, токоферол, витамин С, экстракты зеленого чая, хитозан и дубильная кислота, и необязательно может включать в себя другие обычно применяемые добавки, такие как буферы и бактериостатические агенты. Кроме того, композиция может быть приготовлена путем дополнительного добавления разбавителей, диспергирующих агентов, поверхностно-активных веществ, связующих и смазывающих агентов.
[72] Кормовая композиция легко может быть введена, будучи смешанной непосредственно с кормом для животных, или в сочетании с другими ингредиентами. Доза варьируется в широком диапазоне в зависимости от таких факторов, как вес животного, состояние здоровья, рацион, способ введения и тяжесть заболевания.
[73]
[74] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу предотвращения или лечения инсультов, включающему в себя введение соединения, представленного Формулой 1, субъекту, не являющемуся человеком.
[75] Способ предотвращения или лечения инсультов может дополнительно включать в себя реабилитационную тренировку.
[76] Используемый здесь термин «субъект» может означать любое животное, включая человека, у которого есть или у которого может развиться инсульт. Животное может быть человеком или млекопитающим, таким как корова, лошадь, овца, свинья, коза, верблюд, антилопа, собака или кошка, которые нуждаются в лечении подобных симптомов, но не ограничивается этим.
[77] Способ предотвращения или лечения инсультов в соответствии с настоящим изобретением может, в частности, включать в себя введение фармацевтически эффективного количества композиции субъекту, который имеет инсульт или у которого он может развиться.
[78]
[79] В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению соединения, представленного Формулой 1, для предотвращения или лечения инсультов.
[80] Композиция и профилактика или лечение инсультов были описаны выше.
[81]
Лучший вариант осуществления изобретения
[82] Далее конфигурации и эффекты настоящего изобретения будут описаны более подробно со ссылкой на примеры. Однако специалистам в данной области техники будет очевидно, что эти примеры представлены только для иллюстрации настоящего изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения.
[83]
Пример 1: Метод испытания
[84]
[85]
1-1. Получение лекарственного средства для введения
[86]
[87]
[88] Целевое лекарственное средство получали для определения его терапевтического эффекта при инсультах. Вводимое лекарственное средство получали как описано в корейской патентной заявке с регистрационным № 10-1746060. В частности, (S)-2-(((4'-трифторметилбифенил-4-ил)метил)амино)пропанамид метансульфонат, описанный в Примере 9 этой заявки, (далее именуемый «KDS2010») синтезировали способом синтеза, описанным в Патентном бюллетене.
[89]
1-2. Получение модели инсульта у грызуна
[90]
[91]
[92] Для создания животной модели ишемического инсульта белого вещества головного мозга к задней ножке внутренней капсулы 9-недельной крысы линии Спрег-Доули применяли воздействие световыми стимулами.
[93] В частности, животное анестезировали анестезирующим препаратом, комбинацией кетамина (кетамина гидрохлорид, 100 мг/кг) и ксилазина (7 мг/кг), и просверливали отверстие на 2,0 мм сзади и на 3,1 мм латерально наружу от брегмы черепа с использованием стереотаксиса, и оптическое волокно (внутренний диаметр 62,5 мкм, внешний диаметр 125 мкм) вставляли на глубину 7,2 мм для нацеливания на заднюю ножку внутренней капсулы. Краситель бенгальский розовый (20 мг/кг) вводили в хвостовую вену и проводили оптическую стимуляцию с использованием зеленого лазера мощностью 3,7 мВт в течение 1,5 минут через оптическое волокно. Затем оптическое волокно удаляли, и операция была завершена, для обезболивания вводили кетопрофен (2 мг/кг), а затем животному давали возможность восстановиться. Животным контрольной группы вместо бенгальского розового вводили 0,9% физиологический раствор.
[94] Схема структуры мозга полученной животной модели ишемического инсульта показана на фиг. 1.
[95]
1-3. Введение лекарственного средства и реабилитационная тренировка
[96]
[97]
[98] Крысам в группе животных, которым вводили KDS2010 в качестве лекарственного средства, перорально вводили раствор KDS2010 в физиологическом растворе в концентрации 10 мг/кг один раз в сутки (фиг. 2A).
[99] Крысы в группе животных, прошедших реабилитационную тренировку, практиковали задача достать одну гранулу корма (SPRT) в течение 20 минут ежедневно в течение 3 недель после вызывающей инсульт операции. При этом крысы в группе животных, не прошедших реабилитационную тренировку, практиковали SPRT только два раза в неделю в течение трех недель.
[100]
1-4. Поведенческий тест
[101]
[102]
[103] Чтобы определить влияние KDS2010 в модели инсульта у грызуна, проводили тест «Цилиндр» для определения асимметрии использования передней конечности, а также тест «Задача достать одну гранулу корма» для оценки сложных двигательных навыков.
[104] Для теста «Цилиндр» животных помещали в прозрачный цилиндр (диаметром 20 см и высотой 30 см), чтобы наблюдать, какая конечность использовалась больше при опоре на стенку цилиндра передними конечностями. Всего было зарегистрировано 20 движений, и было рассчитано соотношение использования передней конечности, соответствующей стороне инсульта, и противоположной передней конечности в течение общего количества циклов.
[105] Для теста «Задача достать одну гранулу корма» использовали акриловый ящик (45 см × 13 см × 40 см) с вертикальной щелью 1 см на передней стенке, и перед этой щелью помещали гранулу сахара. Животных тестировали в состоянии, в котором они искали пищу, голодая до тех пор, пока их масса тела не снижалась до 90% от их первоначальной массы тела. Рассчитывали отношение количества гранул, оставшихся во рту без выпадения, к общему количеству гранул, равному 20.
[106]
1-5. Окрашивание нервных волокон
[107]
[108]
[109] Чтобы определить размер очага омертвения во внутренней капсуле, крыс после поведенческого теста умерщвляли для гистологического исследования, и из них извлекали ткани головного мозга. Нервные волокна окрашивали с использованием извлеченной ткани мозга, антитела к нервным волокнам (SMI-31R, BioLegend, Калифорния, США) и набора реагентов для окрашивания DAB (TL-060-QHD, Thermo, MA, США).
[110]
Пример 2: Результаты тестирования
[111]
[112]
2-1. Определение эффекта восстановления двигательных функций с помощью тестов «Задача достать одну гранулу корма» и «Цилиндр»
[113]
[114]
[115] Как можно видеть на фиг. 2 B-D, результат оценки двигательной функции с помощью теста «Задача достать одну гранулу корма», как описано Примере 1-4 выше, показал, что модель инсульта у грызуна демонстрирует значительно нарушенную двигательную функцию. Модель инсульта у грызуна практически не смогла восстановить двигательные навыки, даже если они были реабилитированы посредством тренировки после индуцировния инсульта. С другой стороны, группа, получавшая препарат KDS2010 и прошедшая курс реабилитации, восстанавливала двигательную функцию почти до нормального уровня.
[116]
[117] Кроме того, результат определения эффекта восстановления двигательной функции с помощью теста «Цилиндр», как можно видеть на фиг. 2 E-G, показал, что модель инсульта у грызуна имела значительно нарушенную двигательную функцию, тогда как группа, получавшая лекарственное средство (Инсульт + KDS2010), значительно восстановила двигательную функцию по сравнению с контрольной группой.
[118]
[119] Таким образом, данный результат продемонстрировал, что введение препарата KDS2010 в модели инсульта может восстановить нарушенную инсультом двигательную функцию.
[120]
2-2.
Определение эффекта восстановления двигательной функции с помощью тестов «Задача достать одну гранулу корма» и «Цилиндр»
[121]
[122]
[123] Нервные волокна окрашивали таким же образом, как описано выше в Примерах 1-5, чтобы определить размер очагов омертвения во внутренних капсулах.
[124] Как видно на фиг. 3, результат показал, что в модели инсульта у грызуна значительно увеличен размер очагов омертвения во внутренних капсулах, при этом в группе, получавшей лекарственное средство (Инсульт + KDS), размер очагов омертвения во внутренних капсулах был значительно больше, чем в контрольной группе. В частности, в опытной группе (Инсульт + реабилитация + KDS), которая проходила реабилитационную тренировку в сочетании с приемом лекарственного средства, размеры очагов омертвения во внутренних капсулах в дальнейшем уменьшились.
[125]
[126] Таким образом, описанный выше результат показал, что KDS2010 может уменьшать область очага омертвения и восстанавливать двигательную функцию, что делает его пригодным для предотвращения или лечения паралича, в частности инсультов.
[127]
[128] Из приведенного выше описания специалистам в данной области техники будет понятно, что настоящее изобретение может быть реализовано в других конкретных вариантах осуществления без изменения его технической идеи или обязательных признаков. В этом отношении описанные выше варианты осуществления изобретения предоставлены только для иллюстративных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения во всех отношениях. Таким образом, следует понимать, что значения и объем прилагаемой формулы изобретения и всех изменений или модификаций, производных от ее эквивалентов, а не от лучшего варианта осуществления изобретения, включены в объем настоящего изобретения.