Влияние полиморфизма С589Т гена IL-4 на риск развития острого постстрептококкового гломерулонефрита и содержание иммуноглобулинов у детей

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Батаева Е.П., Витковский Ю.А.

Читинская государственная медицинская академия,

г. Чита

ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА С589Т ГЕНА IL-4 НА РИСК РАЗВИТИЯ ОСТРОГО ПОСТСТРЕПТОКОККОВОГО ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТА И СОДЕРЖАНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ У ДЕТЕЙ

Целью работы явилось изучение риска развития острого постстрептококкового гломерулонефрита и содержания иммуноглобулинов у детей с полиморфизмом С589Т гена IL-4. Исследования проведены среди 30 здоровых и 24 детей с острым постстрептококковым гломерулонефритом. Изучен полиморфизм С589Т гена IL-4 методом ПЦР и содержание иммуноглобулинов с помощью ИФА. Установлено, что полиморфизм С589Т гена IL-4 обуславливает повышенный риск развития ОПГН у обладателей генотипа Т/Т. При ОПГН аллель С589Т обуславливает неблагоприятное течение болезни, способствуя высокому риску возникновения осложнений. У детей с ОПГН в начальном периоде наблюдения увеличена концентрация 1дА, IgG3, снижено содержание IgG1. К концу госпитализации нормализовался уровень IдА, но оставалась повышенной концентрация IgG3 и низкой - IgG1. У больных, имеющих в генотипе полиморфизм С589Т гена IL-4, низкий уровень IgG1, IgG2 сохранялся в течение всего периода наблюдения.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: острый постстрептококковый геломерулонефрит у детей; полиморфизм гена IL-4; иммуноглобулины.

Batayeva E.P., Vitkovsky Yu^.

diita State Medical Academy, Chita

EFFECT OF GENE POLYMORPHISM S589T IL-4 ON THE RISK OF ACUTE POST-STREPTOCOCCAL

GLOMERULONEPHRITIS AND CONTENT OF IMMUNOGLOBULINS IN CHILDREN

Aim was to study the risk of development of the acute post streptococcal glomerulonephritis and immunoglobulin contents in children with С589Т polymorphism of IL-4 gene. 30 healthy children and 24 patients with acute post streptococcal glomerulonephritis were examined. The С589Т polymorphism of IL-4 gene by PCR and concentration of immunoglobulins by enzyme immunoassay were detected. It was established that С589Т polymorphism of IL-4 gene elevates the risk of development of the acute post streptococcal glomerulonephritis in children at genotype T/T. In acute post streptococcal glomerulonephritis the presence of С589Т allele associates with high risk for complications of disease. In children with glomerulonepritis С589Т polymorphism of IL-4 ^А, IgG3 concentration increased, IgG1 - decreased. After treatment the ^А level normalized, but IgG3 kept high, IgG1 low concentrations. In patients with С589Т polymorphism of IL-4 the low level of IgG1, IgG2 remained during all period of observation.

KEY WORDS: acute post streptococcal glomerulonephritis in children; polymorphism of IL-4 gene; immunoglobulins.

Несмотря на многочисленные экспериментальные исследования, патогенез острого постстрептококкового гломерулонефрита (ОПГН) продолжает оставаться одной из современных проблем педиатрической нефрологии [1]. Ранее выдвигались различные гипотезы о ведущих факторах развития заболевания, наиболее вероятной из которых является версия об участии IgG Fc-рецепторов стрептококков группы А, относящихся к семейству М-белков вирулентности [2]. Заболевание манифестирует далеко не у каждого ребенка, перенесшего стрептококковую инфекцию, и, возникнув, имеет разнообразные сроки и характер течения у больных одинаковых возрастных групп.

Изучение нефропатий тесно связано с развитием генетики и приобретенность болезней почек является относительной [3]. Известно, что в пределах каждой популяции у индивидуумов имеются наследс-

Корреспонденцию адресовать:

ВИТКОВСКИЙ Юрий Антонович,

672090, г. Чита, ул. Горького, 39-А,

ГОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия Росздрава».

Тел.: 8 (3022) 32-16-23; +7-914-468-77-66; +7-892-427-68-93. E-mail: yuvitkovsky@rambler.ru

твенные вариации в последовательности ДНК, называемые полиморфизмами, которые встречаются в человеческом геноме с частотой 1 на 1000 пар оснований. Несмотря на столь высокую распространённость, лишь небольшая их часть является функционально значимой, т.е. приводит к изменению продукции белков, в частности цитокинов, определяя тем самым индивидуальный ответ организма на повреждающие факторы [4]. Предполагается, что полиморфизм генов цитокинов может влиять на интенсивность воспалительного процесса, варианты изменения иммунного статуса. Выявление их может предупредить развитие некоторых почечных заболеваний и предположить их течение, исход, а также выбрать индивидуальный подход к лечению.

Цель работы — исследование риска развития острого постстрептококкового гломерулонефрита и содержания иммуноглобулинов у детей с полиморфизмом С589Т гена ]Ъ-4.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Клиническую группу составили 24 ребенка с ОПГН обоего пола в возрасте от 4 до 15 лет (11 девочек и 13 мальчиков). Средние сроки лечения в

ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА С589Т ГЕНА !Ь-4 НА РИСК РАЗВИТИЯ ОСТРОГО ПОСТСТРЕПТОКОККОВОГО ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТА И СОДЕРЖАНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ У ДЕТЕЙ

стационаре составили 23 койко-дня. Диагностика осуществлялась на основании анамнеза, принятых клинических и лабораторных критериев. Все больные находились на стандартной терапии, ни у одного из исследуемых в катамнезе не был прослежен переход в хронический гломерулонефрит. Забор венозной крови проводился при поступлении в стационар, то есть в период активных проявлений, а также к моменту выписки (период обратного развития). Контрольную группу составили 30 здоровых детей соответствующего возраста и пола.

Измерение концентрации иммуноглобулинов проводили методом твердофазного ИФА. Идентификация аллелей полиморфных маркеров гена IL-4 проводилась с использованием полимеразной цепной реакции.

Статистическая обработка полученных данных осуществлена при помощи электронной программы (Microsoft Office 2003 for Windows XP Professional, STATISTICA 6.0) с определением достоверности различий при достигнутом уровне значимости р < 0,05. Для сравнения частот при нормальном распределении признака применялся критерий Стьюдента. При ненормальном распределении признака для не связанных и связанных между собой признаков использовались критерии Манна-Уитни и Уилкоксона (U-тест) соответственно. Для сравнения групп по качественному бинарному признаку применялся критерий Пирсона. Соответствие наблюдаемых распределений частот генотипов теоретически ожидаемым по уравнению Харди-Вайнберга оценивали с использованием критерия х2. При попарном сравнении частот генотипов и аллелей между собой использовали точный критерий Фишера. Для оценки ассоциаций рассчитывали относительный риск (OR).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Установлено, что в группе больных ОПГН мутация С589Т в гене IL-4 обнаружилась в 7 случаях, из них 4 ребенка являлись гетерозиготами и 3 — гомозиготами по данному аллелю. По этническому признаку среди гетерозиготных мутаций выявились 3 русских и 1 бурят, а гомозиготными оказались 2 бурята и 1 русский. Всего из пациентов с гломерулонефритами 29,1 % являлись бурятами, а среди носителей полиморфизма — 42,8 %.

Дополнительные ассоциативные исследования с фенотипическими признаками заболевания позволяют оценить роль полиморфизма С589Т гена IL-4 в клинических особенностях течения ОПГН у детей. Выяснилось, что у всех детей с гетерозиготным полиморфизмом С589Т в гене IL-4 отмечались комбинированные нарушения почечных функций (фильтрационной, водовыделительной, концентрационной), сопровождающиеся отеками различной степени вы-

раженности, артериальной гипертензией во всех случаях. Все дети, имеющие гомозиготные варианты гена цитокина, имели клинические и лабораторные проявления почечной недостаточности острого периода. У одного ребёнка наблюдались клинические и рентгенологические критерии отёка лёгкого. Среди пациентов, не имеющих в своём генотипе каких-либо полиморфных аллелей из исследуемых, 4 ребенка не имели осложнений и нарушений почечных функций, 7 — парциальные или комбинированные нарушения и 5 — почечную недостаточность острого периода.

Ассоциации, рассчитанные при оценке аллелей и генотипов у больных ОПГН и здоровых детей Забайкалья, показывают повышенный риск развития ОПГН у обладателей генотипа Т/Т (табл. 1). В сравнении с группой контроля встречаемость генотипа С/Т оказалась существенно ниже, что расценено как фактор устойчивости к развитию данной патологии.

Таблица 1

Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера С-589Т гена ^-4 у больных с острым гломерулонефритом в сравнении с контрольной группой

Генетический маркёр Контроль (n = 66) Больные ОПГН (n = 23) р OR

Аллель С 0,788 0,792 > 0,05 1,02

Аллель Т 0,212 0,208 > 0,05 0,07

Генотип С/С 0,64 0,71 > 0,05 1,39

Генотип С/Т 0,3 0,17 > 0,05 0,46

Генотип Т/Т 0,06 0,12 < 0,05 2,21

Гены цитокинов имеют аллельные варианты, характеризующиеся большей или меньшей активностью белка, либо разным уровнем его экспрессии. Контрвоспалительный ^-4, являясь продуктом Т-лимфоцитов, выступает в качестве антагониста Т-ак-тивирующих цитокинов, способствуя поляризации иммунного ответа в направлении гуморального типа реагирования.

Обнаружено, что концентрация подкласса IgGl при ОПГН отличалась от контроля на протяжении всего заболевания. Однако в группе больных, имеющих мутантный ген ^-4, выявлено уменьшение концентрации IgGl более чем в два раза в сравнении с группой, не отягощённой данным полиморфизмом. Сниженный уровень IgGl в сравниваемой группе сохранялся до конца госпитализации (табл. 2).

Содержание ^2 при ОПГН оставалось нормальным в течение всего периода наблюдения, составив 2,9 ± 0,3 мг/мл и 3,05 ± 0,3 мг/мл, соответственно (р > 0,05), но у носителей полиморфизма в гене ^-4 концентрация его оказалась ниже, чем у детей, не имеющих мутации (р < 0,005). В процес-

Сведения об авторах:

БАТАЕВА Елена Петровна, ассистент кафедры пропедевтики детских болезней, ГОУ ВПО «ЧГМА Росздрава», г. Чита, Россия.

ВИТКОВСКИЙ Юрий Антонович, доктор мед. наук, профессор, зав. кафедрой нормальной физиологии с курсом клинической физиологии ГОУ ВПО «ЧГМА Росздрава», г. Чита, Россия.

ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА С589Т ГЕНА !Ь-4 НА РИСК РАЗВИТИЯ ОСТРОГО ПОСТСТРЕПТОКОККОВОГО ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТА И СОДЕРЖАНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ У ДЕТЕЙ

Таблица 2

Содержание иммуноглобулинов у детей с ОПГН, имеющих и не имеющих полиморфизм С589Т в гене ^-4

Больные ОПГН Без мутаций Мутация С589Т в гене ^-4

Показатель Контроль

(п = 30) В начале В конце В начале В конце В начале В конце

лечения лечения лечения лечения лечения лечения

№ 6,3 ± 0,4 3,4 ± 0,3 3,9 ± 0,5 4,7 ± 0,4 5,0 ± 0,5 2,0 ± 0,6 2,8 ± 0,2

р-1 < 0,05 р1 < 0,005 р1 < 0,05 р1 > 0,05 р1 < 0,005 р2 < 0,005 р1 < 0,005 р2 < 0,005

|дС2 3,6 ± 0,3 2,9 ± 0,2 3,05 ± 0,3 3,8 ± 0,3 р-| > 0,05 3,5 ± 0,2 р1 > 0,05 1,9 ± 0,1 р1 < 0,005 р2 < 0,005 2,4 ± 0,2 р1 < 0,005 р2 < 0,05

|дСз 0,4 ± 0,05 1,2 ± 0,2 0,75 ± 0,1 1,3 ± 0,2 0,8 ± 0,2 1,0 ± 0,3 0,7 ± 0,2

р-| < 0,001 р-1 < 0,005 р2 < 0,05 р-| < 0,001 р-| < 0,05 р3 < 0,05 р-1 < 0,001 р-| < 0,05 р3 > 0,05

^4 0,1 ± 0,04 0,2 ± 0,02 0,08 ± 0,01 0,2 ± 0,07 0,1 ± 0,02 0,2 ± 0,02 0,1 ± 0,01

р1 < 0,05 р1 < 0,05 р1 > 0,05 р3 < 0,001 р1 < 0,05 р1 > 0,05 р3 < 0,001

1дА 3,1 ± 0,7 4,7 ± 0,1 4,1 ± 0,2 5,1 ± 0,6 3,6 ± 0,2 4,2 ± 0,6 4,2 ± 0,5

р1 < 0,05 р1 < 0,05 р3 < 0,05 р1 > 0,05 р2 > 0,05 р1 > 0,05

!дМ 1,5 ± 0,2 1,35 ± 0,1 1,1 ± 0,09 1,4 ± 0,1 р1 > 0,05 1,35 ± 0,15 р1 > 0,05 1,0 ± 0,15 р1 > 0,05 р2 > 0,05 1,2 ± 0,09 р1 > 0,05

Примечание: р-| - достоверность различий в сравнении с контролем; р2 - достоверность различий в сравнении с группой, не имеющей мутации; рз - достоверность различий в сравнении с началом заболевания.

се наблюдения происходило нарастание содержания субкласса в этой группе, но все же оставалось ниже чем у пациентов группы сравнения (р < 0,05).

В период активных проявлений gоказатель IgGз повышался в три раза и несколько снижался моменту выписки. Уровень IgGз коррелировал со степенью нарушения почечных функций и с выраженностью клинических синдромов — самые низкие показатели отмечались у больных, имеющих только мочевой синдром и отсутствие нарушения почечных функций (г = 0,53, р < 0,04). Существенных различий в содержании IgGз внутри групп не обнаружено. Уровень ^4 у пациентов с ОПГН в начале лечения повышался в два раза в сравнении со здоровыми детьми, и не отличался внутри исследуемых групп.

Имеются данные, позволяющие предположить, что ^4 антитела защищают поверхность базального эпителия гломерул от повреждающих эффектов, вызываемых комплемент-фиксирущими субклассами IgG, которых в период активных проявлений значительно больше, чем в период обратного развития и выздоровления [1. 5]. Именно поэтому их содержание на момент выписки становилось нормальным, что способствовало, в свою очередь, снижению сенсибилизации к повреждающим агентам, так как ^4 обладают не только блокирующим, но и анафилактическим действием, и завершает воспаление [5. 6].

Итак, не исключается, что низкие значения концентраций указанных подклассов IgG у больных с полиморфным аллелем в гене ^-4 — есть результат вероятного снижения количества В-лимфоцитов, происходящего в результате недостаточной экспрессии противовоспалительного ^-4 в крови у этих детей.

Установлено, что у обследованных пациентов концентрация общего ^А в период активных проявлений заболевания повышалась, и это осуществлялось за счет сывороточной фракции. Ассоциаций полиморфизма С589Т в гене ^-4 и синтеза иммуноглобулина между сравниваемыми группами не наблюдалось.

Значение ^М при ОПГН не изменялось в процессе наблюдения, составив 1,35 ± 0,1 мг/мл в начале и 1,1 ± 0,09 мг/мл в конце лечения (р > 0,05). Известно, что первичное воздействие стрептококка предшествует клиническим проявлениям заболевания, а активация продукции ^М происходит при первом контакте с чужеродным агентом. Не исключено, что за две-три недели до начала исследования его концентрация превышала нормальные значения. Сравнительная количественная оценка ^М между носителями полиморфного гена больными не выявила особенностей.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о влиянии полиморфизма С589Т в гене ^-4 на некоторые показатели иммунитета при ОПГН у детей.

ВЫВОДЫ:

1. Полиморфизм С589Т гена ^-4 обуславливает повышенный риск развития ОПГН у обладателей генотипа Т/Т. При ОПГН аллель С589Т оказывает неблагоприятное течение болезни, способствуя высокому риску возникновения осложнений.

2. У детей с ОПГН в начальном периоде наблюдений увеличена концентрация ^А, IgGз, сниже-

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

но содержание IgGl. К концу госпитализации 3. У больных, имеющих в генотипе полиморфизм

нормализуется уровень ^А, остается повышен- С589Т гена ^-4, низкий уровень IgGl и IgG2 сох-

ной концентрация IgGз и низкой — IgGl. раняется в течение всего периода наблюдения.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Чеботарева, В.Д. Циркулирующие иммунные комплексы и показатели клеточного и гуморального иммунитета при пиело- и гломерулонефрите у детей /В.Д. Чеботарева, И.В. Багдасарова //Педиатрия. - 2006. - № 6. - С. 11-13.

2. Тотолян, А.А. Критический анализ предполагаемых механизмов патогенеза постстрептококкового гломерулонефрита /А.А. Тотолян,

Л.А. Бурова //Клин. микробиол. и антимикр. химиотер. - 2001. - Т. 3, № 4. - С. 316-323.

3. Игнатова, М.С. Диагностика и лечение нефропатий у детей /Игнатова М.С. - М., 2007. - 334 с.

4. Иллариошкин, С.Н. ДНК-диагностика и медико-генетическое консультирование /Иллариошкин С.Н. - М., 2004. - 207 с.

5. Офицеров, В.И. Подклассы иммуноглобулина Є: возможности использования в диагностической практике: метод. пособие /Офицеров В.И. - Кольцово, 2005. - 25 с.

6. Андросова, М.В. Свойства и клиническая значимость субклассов ІдЄ /М.В. Андросова, М.А. Годков //Лаб. диагностика. - 2006. -№ 5. - С. 12-18.

МОРЕПРОДУКТЫ ПОДНИМАЮТ НАСТРОЕНИЕ БЕРЕМЕННЫМ Употребление морепродуктов, богатых омега-3 жирными кислотами, может помочь женщинам, которые чувствуют себя подавленными во время беременности. К таким выводам пришли учёные после обследования британских женщин.

Д-р Jean Golding с коллегами из Бристольского университета установили связь между низким содержанием в рационе омега-3 жирных кислот из морепродуктов и повышенным риском появления симптомов депрессии во время беременности.

Результаты их исследования опубликованы на страницах свежего номера журнала "Эпидемиология" (Epidemiology).

Учёные обследовали 9960 беременных. На сроке 32 недели их попросили заполнить опросники, содержащие вопросы о настроении и количестве морепродуктов, которое они употребляли в 1991-1992 гг., когда морепродукты были единственным источником омега-3 жирных кислот в Великобритании.

У женщин, которые не употребляли морепродукты, вдвое чаще отмечалосьподавленное настроение или симптомы депрессии на сроке беременности 32 недели, чем у тех женщин, которые съедали 3 и более порций морепродуктов в неделю (более чем 1,5 г омега-3 жирных кислот). Связь между употреблением морепродуктов и настроением оставалась сильной даже после учёта ряда факторов, которые могли повлиять на результат.

Подавленное настроение во время беременности не приносит пользы ни матери, ни ребёнку, отмечают д-р Golding и коллеги. Распространённая на Западе, депрессия почти совсем не известна в тех странах, жители которых едят много рыбы.

Исследователи призывают к дальнейшему изучению взаимосвязи между употреблением морепродуктов и депрессией у беременных. Особенно это важно в свете появившихся недавно рекомендаций для беременных сократить приём морепродуктов, так как в них могут содержаться соединения ртути.

"Есть вероятность, - пишут авторы работы, - что, последовав этим ограничениям, мы повысим риск появления подавленного настроения и симптомов депрессии у будущих матерей".

Источник: Solvay-pharma.ru