2,3,5-ТРИЗАМЕЩЕННЫЕ ПИРРОЛЫ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО НА ИХ ОСНОВЕ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОЕДИНЕНИЙ (ВАРИАНТЫ)
2,3,5-TRISUBSTITUTED PYRROLS, BASED PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND DRUG, METHOD FOR PREPARING COMPOUNDS (VERSIONS)

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к новым соединениям, полученным из тризамещенных пирролов и конформационно ограниченных промежуточных ароматических циклов, а также способам их получения и их применению в качестве лекарственных препаратов для лечения рака в фармацевтических композициях, которое обусловлено их ингибирующим действием на гистондезацетилазы класса I и класса II.
Уровень техники
Деацетилазы гистонов (HDAC) составляют интересную терапевтическую мишень для лечения рака (см. статьи P.A. Marks et al. Nature Rev. Cancer 2001, 1, 194; J.E. Bolden et al. Nature Rev. Drug Discov. 2006, 5, 769; P. Gallinari et al. Cell Res. 2007, 17, 195; К.B. Glaser Biochem. Pharmacol. 2007, 74, 659; L. Pan et al. Cell. Mol. Immunol. 2007, 4, 337; M. Haberland et al. Nature Rev. Genetics 2009, 10, 32; Y. Zhang et al. Curr. Med. Chem. 2008, 15, 2840; S. Ropero, M. Esteller Mol. Oncol. 2007, 1, 19) и других заболеваний, таких как связанные с центральной нервной системой (см. статью A.G. Kazantsev, L.M. Thompson Nature Rev. Drug Discov. 2006, 7, 854).
Создано несколько семейств ингибиторов HDAC (HDACis), общие структуры которых можно найти в различных обзорах (см. статьи А. Villar-Garea, M. Esteller Int. J. Cancer 2004, 112, 171; T.A. Miller et al. J. Med. Chem. 2003, 46, 5097; T. Suzuki, N. Miyata Curr. Med. Chem. 2005, 12, 2867; M.
Paris et al. J. Med. Chem. 2008, 51, 1505). Общая структура данных ингибиторов состоит из циклической структуры, спейсера и хелатирующей группы, способной связываться с катионом Zn (II) активного центра различных изоформ HDAC, которые принадлежат к классу I (HDAC1, HDAC2, HDAC3 и HDAC8), классу II (HDAC4, HDAC5, HDAC6, HDAC7, HDAC9 и HDAC10) и классу IV (HDAC11). Несмотря на близкий механизм ингибирования, иногда наблюдают некоторую избирательность в ингибировании различных изоформ HDAC (см. статьи J.С.Wong et al. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 5586; G. Estiu et al. J. Med. Chem. 2008, 51, 2898). Упомянутая избирательность представляет терапевтический интерес (см. статьи K.V.Butler, А.Р.Kozikowski Curr. Pharm. Design 2008, 14, 505; Т.С.Karagiannis, A. EI-Osta Leukemia 2007, 21, 61).
Среди хелатирующих групп, способных связываться с катионом Zn в различных изоформах HDAC, создан ряд функциональных групп, таких как, в числе прочих, карбоновые кислоты, гидроксамовые кислоты, метил- и трифторметилкетоны, эпоксиды, сульфиды и дисульфиды, o-аминобензамиды, N-гидроксиформиловые производные, меркаптоамиды, сульфоны и фосфоны (см. статьи M.Paris et al. op.cit. (в цитируемой работе); Т.Suzuki, N.Miyata, op.cit.). В качестве спейсерных групп, которые связывают хелатирующую группу с противоположной стороной ингибиторов, описаны алифатические неразветвленные цепи, а также ароматические и гетероароматические группы. В качестве примеров HDACis, которые включают ароматические и гетероароматические спейсеры, можно упомянуть следующие: Белиностат (PXD101), Панобиностат (LBH-589), CRA-024781, MGDC0103, Энтиностат (MS-275, описанный также как SNDX-275), ITF2357, JNJ-16241199, Тацединалин (CI-994) и LAQ-824 (см. статью М. Paris et al. op.cit. и приведенные ссылки).
С другой стороны, в качестве концевых групп, которые находятся на противоположной стороне хелатирующих групп ингибиторов, исследован ряд циклических, гетероароматических и ароматических систем (см. статьи М. Paris et al. op.cit.; Т.A.Miller op.cit.; Т.Suzuki, N.Miyata op.cit.). В частности, для данной цели или в качестве спейсеров используют следующие группы: 2,4-замещенные-1H-пирролы с ароиловыми группами в положении 4 (см. статьи S.Massa et al. J.Med. Chem. 1990, 33, 2845; S.Massa et al. J.Med. Chem. 2001, 44, 2069; A.Mai et al. J.Med. Chem. 2003, 46, 512) или циннамоиловые группы в том же положении (см. работы D. Chen et al. Benzimidazole derivatives: Preparation and pharmaceutical applications (Бензимидазоловые производные, получение и фармацевтическое применение), WO/2005/028447, 2005; S. Inoue et al. Cancer Res. 2006, 66, 6785). Аналогичным образом, касательно однозамещенных 1H-пирролов, описано использование N-(7-(гидроксиамино)-7-оксогептил)-1H-пиррол-2-карбоксамида в качестве HDACi (см. статью Y.Dai et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003, 13, 1897). Наконец, некоторые авторы настоящего изобретения описывают синтез три- и тетразамещенных 1Н-пирролов (см. статью A.Arrieta et al. J.Org. Chem. 2007, 72, 4313), а также их применение в качестве концевых групп при получении HDACis (см. статьи A.Zubia et al. Oncogene 2009, 28, 1477; D.Otaegui et al. Cancer Chemother. Pharm. 2009, 64, 153; D.Otaegui et al. J.Chromatography В 2008, 870, 109; патентную заявку F.P.Cossfo et al. Nuevos derivados pirrOlicos con actividad inhibidora de desacetilasas de histonas (Новые пирроловые производные как активные ингибиторы гистондезацетилаз), WO/2007/074176, 2005). Однако, в данном случае описана только активность ингибиторов, содержащих пиррольные циклы с неразветвленными алифатическими цепями в качестве спейсеров. Активность 3,5-замещенных 2-карбоксамид-1Н-пирролов, связанных с хелатирующими группами посредством структур, содержащих ароматические или гетероароматические циклы, неизвестна.
В данном контексте в настоящем изобретении описывают химический синтез и активность HDACi новых тризамещенных пирроловых производных, связанных с хелатирующими группами посредством ароматических и гетероароматических групп, которые демонстрируют активность ингибирования в отношении ряда изоформ HDAC, в частности, тех, которые принадлежат к классам I и II.
Раскрытие изобретения
В одном аспекте настоящее изобретение относится к пирроловым производным общей формулы (I):
или их солям, сольватам либо пролекарственным формам. Аналогичным образом другой аспект настоящего изобретения представляет собой способ получения соединения общей формулы (I).
Другой аспект настоящего изобретения относится к соединению общей формулы (I) или его соли, сольвату либо пролекарственной форме, предназначенным для применения в качестве лекарственного средства.
Другой аспект настоящего изобретения относится к соединению общей формулы (I) или его соли, сольвату либо пролекарственной форме, предназначенным для применения в качестве лекарственного средства для лечения рака.
Другой аспект настоящего изобретения относится к применению соединения общей формулы (I) или его соли, сольвата либо пролекарственной формы для получения лекарственного средства для лечения рака.
Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к способу лечения рака, который предусматривает введение пациенту, нуждающемуся в данном лечении, терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения общей формулы (I) или его соли, сольвата либо пролекарственной формы.
Согласно конкретному варианту осуществления соединения общей формулы (I) используют для лечения различных типов рака путем ограничения роста опухоли или других процессов, которые останавливают развитие первичных или метастазирующих опухолей посредством ингибирования ряда гистодезацетилаз.
Наконец, в другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно соединение общей формулы (I) или его соль, сольват либо пролекарственную форму и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель.
Во-первых, настоящее изобретение представляет соединения, полученные из 2,3,5-тризамещенных 1H-пирроловых циклов, имеющих следующую формулу (I):
где:
1
2
6
10
R и R представляют собой независимо друг от друга необязательно замещенный C-C арильный радикал или необязательно замещенный гетероарильный радикал,
А и М представляют собой независимо друг от друга метиленовую группу или одинарную связь, причем в данном случае соседняя ароматическая группа будет присоединена непосредственно к амидной группе,
2
группа Y=Z непостоянно представляет собой атом кислорода (-O-), атом серы (-S-), цис-винилиденовую группу (-СН=СН-), иминогруппу (-N=CH- или -СН=N-) либо метиновую группу с sp-гибридизованным атомом углерода (=СН-),
Х непостоянно представляет собой метиновую группу (=СН-), цис-винилиденовую группу (-СН=СН-) или атом азота (=N-),
1
6
6
10
W представляет собой в равной степени гидроксильную группу (-ОН), необязательно замещенную C-C алкильную группу, необязательно замещенную гетероарильную группу или необязательно замещенную C-C арильную группу,
или их соль, сольват либо пролекарственную форму.
1
2
1
2
Согласно предпочтительному варианту осуществления R и R представляют собой независимо друг от друга необязательно замещенную фенильную группу или необязательно замещенную 5- или 6-членную гетероарильную группу. Более предпочтительно, когда R и R независимо друг от друга представляют собой необязательно замещенную фенильную группу, необязательно замещенный пиридиновый цикл, необязательно замещенный фуран или необязательно замещенный тиофен.
1
2
1
3
1
3
6
10
Согласно конкретному варианту осуществления, когда R и Rпредставляют собой замещенную группу, предпочтительно, когда данные заместители выбраны из C-C алкильной группы, галогена, нитро, циано, трифторметила, OR', SR', SOR', SOgR', NR'R”, C(O)R', C(O)OR', C(O)NR'R” или OC(O)R', где R' и R” независимо выбраны из атома водорода, C-C алкильной группы, предпочтительно метила, или C-C арильной группы, предпочтительно фенила.
1
2
Согласно конкретному варианту осуществления R и R независимо друг от друга представляют собой группу, выбранную из:
, , , ,
, , , ,
, , , ,
, , , и .
Согласно конкретному варианту осуществления по меньшей мере одной из групп А или М является метиленовая группа. Согласно другому конкретному варианту осуществления по меньшей мере одна из групп А или М представляет собой одинарную связь. В предпочтительном варианте осуществления А представляет собой метиленовую группу. В другом предпочтительном варианте осуществления М представляет собой одинарную связь.
Согласно конкретному варианту осуществления Y=Z и Х образуют вместе в атомами углерода, к которым они присоединены, фенильный, пиридиновый, пиразиновый или фурановый цикл.
1
6
1
3
6
10
Согласно конкретному варианту осуществления W представляет собой гидроксил (-ОН), C-C алкильную группу, предпочтительно необязательно замещенную С-C алкильную группу, 5- или 6-членную гетероарильную группу, предпочтительно 5- или 6-членную гетероарильную группу, содержащую азот, предпочтительно необязательно замещенную пиридиновую или пиримидиновую группу, либо C-С арильную группу, предпочтительно необязательно замещенную фенильную группу.
1
3
2
1
3
6
10
Согласно конкретному варианту осуществления, когда W представляет собой замещенную группу, предпочтительно, когда данные заместители выбраны из C-Салкила, галогена, нитро, циано, OR', SR', SOR', SOR', NR'R”, C(O)R', C(O)OR', C(O)NR'R” или OC(O)R', где R' и R" независимо выбраны из атома водорода, С-C алкильной группы, предпочтительно метила, или C-C арильной группы, предпочтительно фенила.
Согласно конкретному варианту осуществления W представляет собой группу, выбранную из:
, , , , , и .
В предпочтительном варианте осуществления соединения общей формулы (I) выбраны из:
5-(3-Фурил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-3-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-{4-[(Гидроксиамино)карбонил]бензил}-3-(4-гидроксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
6-[({[3-(4-Фторфенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-ил]карбонил} амино)метил]-N-гидроксиникотинамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(4-Фторфенил)-5-(3-фурил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-{4-[(Гидроксиамино)карбонил]бензил}-3-(4-гидроксифенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-{5-[(Гидроксиамино)карбонил]-2-фурил}-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(4-Фторфенил)-N-({5-[(гидроксиамино)карбонил]-2-фурил}метил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-{3-[2-(гидроксиамино)-2-оксоэтил]фенил}-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-(4-[(Гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-(4-гидроксифенил)-3-(3-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(3-Фурил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-(4-{[(2-Аминофенил)амино]карбонил}бензил)-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(4-Метоксифенил)-5-фенил-N-(4-{[(2-сульфанилфенил)амино] карбонил}бензил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(4-Метоксифенил)-5-фенил-N-(4-{[(2-сульфанилэтил)амино]карбонил} бензил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(4-Метоксифенил)-5-фенил-N-{4-[(пиридин-2- иламино)карбонил] бензил}-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(4-Метоксифенил)-5-фенил-N-{4-[(пиримидин-2-иламино)карбонил] бензил}-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]фенил}-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(3-Фурил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-(4-метоксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-(4-метоксифенил)-3-(3-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(4-Фторфенил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3,5-бис-(4-фторфенил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(4-Фторфенил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(4-Фторфенил)-N-{2-[(гидроксиамино)карбонил]-5-пиридил-метил}-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-(4-{[(2-Аминофенил)амино]карбонил]бензил}-5-(4-гидроксифенил)-3-(3-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-(4-{[(2-Аминофенил)амино]карбонил]бензил}-5-(3-фурил)-3-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-(4-{[(2-Аминофенил)амино]карбонил]бензил}-5-(4-гидроксифенил)-3-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имею1цего следующую структурную формулу:
N-(4-{[(2-Аминофенил)амино]карбонил]бензил}-3-(4-гидроксифенил)-5-(3-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-(4-{[(2-Аминофенил)амино]карбонил]бензил}-3-(3-фурил)-5-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-{4-[(Гидроксиамино)карбонил]бензил}-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-{4-[(Гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-фенил-3-(4-трифторметилфенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(4-бромфенил)-N-{4-[(Гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-{4-[(Гидроксиамино)карбонил]бензил}-3-(3,4-диметоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(3,4-дифторфенил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
N-{4-[(Гидроксиамино)карбонил]бензил}-3-(4-нитрофенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(3,4-дихлорфенил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(3-бромфенил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(4-Фторфенил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-(3-пиридинил)-1 Н-пиррол-2-карбоксамида, имеющего следующую структурную формулу:
3-(4-Фторфенил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-(4-метилфенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида,имеющегоследующуюструктурную формулу:
или его соли, сольвата либо пролекарственной формы.
В контексте настоящего изобретения следующие термины имеют значения, подробно описанные ниже:
1
6
1
3
Термин "С-Салкил" относится к неразветвленной или разветвленной углеводородной цепи, состоящей из атомов углерода и водорода, не содержащей ненасыщенности, имеющей от 1 до 6 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 3 ("С-Салкил"), и присоединенной к остальной части молекулы посредством одинарной связи, включая в качестве примера и без ограничения перечисленным метил, этил, н-пропил, и-пропил, н-бутил, трет-бутил, н-пентил и т.п.
6
10
Термин "С-Сарил" относится к ароматической группе, имеющей 6-10 атомов углерода, содержащей 1, 2 или 3 ароматических цикла, связанных углерод-углеродной связью или конденсированных, включая в качестве примера и без ограничения перечисленным фенил, нафтил, бифенил, инденил и т.п. Предпочтительно, когда термин "арил" относится к фенилу.
Термин "гетероарил" относится к стабильному 3-10-членному ароматическому циклу, предпочтительно 5- или 6-членному ароматическому циклу, который состоит из атомов углерода и от одного до пяти гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы. Для целей данного изобретения гетероарильный радикал может представлять собой моноциклическую, бициклическую или трициклическую систему, которая может включать системы конденсированных циклов, и атомы азота, углерода или серы в гетероарильном радикале необязательно могут быть окисленными, и атом азота необязательно может быть переведен в четвертичный. Примеры данных гетероарилов включают, но без ограничения перечисленным, бензимидазол, бензотиазол, фуран, тиофен, пиррол, пиридин, пиримидин, изотиазол, имидазол, индол, пурин, хинолин, тиадиазол.
1-6
6
10
2
1
6
Термин "галоген" относится к брому, хлору, йоду или фтору. Как обычно имеют в виду в данной области техники, у вышеприведенных радикалов может быть степень замещения. Так, замещение может быть в любой группе, соответствующей настоящему изобретению. Ссылки в данном документе относительно замещенных групп в группах, соответствующих настоящему изобретению, показывают, что определенный радикал может быть замещенным в одном или более положений, доступных для одного или более заместителей. Данные заместители включают в качестве примера и без ограничения перечисленным Салкил, C-арил, гетероарил, галоген, циано, нитро, трифторметил, -N(R')(R"), -OR', -SR', -SOR', -SOR', -C(O)R', -C(O)OR', -C(O)N(R')(R”), -OC(O)R', где R' и R” независимо выбраны из водорода, C-Cалкила, арила, гетероарила и трифторметила.
Соединения формулы (I) могут находиться в форме солей, предпочтительно в виде фармацевтически приемлемых солей, в виде сольватов и в виде пролекарственных форм.
Термин "фармацевтически приемлемые соли" относится к солям, которые при введении реципиенту могут образовывать (прямо или косвенно) соединение, как описано в настоящем документе. Предпочтительно, когда термин "фармацевтически приемлемый" относится к композициям и молекулярным структурам, которые являются физиологически переносимыми и обычно не вызывают аллергическую реакцию или аналогичную неблагоприятную реакцию, например, желудочные нарушения, головокружение и т.п. при введении человеку или животному. Предпочтительно, когда термин "фармацевтически приемлемый" означает, что соединение одобрено регулирующим ведомством штата или федеральным правительством либо включено в Фармакопею США или другую общепризнанную фармакопею для применения животным и в особенности человеку.
Получение солей можно осуществить способами, известными в области техники. Например, фармацевтически приемлемые соли соединений, представленных в данном контексте, синтезируют из исходного соединения, которое содержит основные остатки, с помощью принятых химических способов. Как правило, данные соли получают, например, путем реакции форм свободных оснований данных соединений с подходящим основанием или кислотой в воде или в органическом растворителе либо в смеси обоих.
Обычно предпочтительными являются неводные среды, такие как эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил. Примеры кислотно-аддитивных солей включают аддитивные соли минеральных кислот, такие как, например, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, сульфат, нитрат, соли фосфорной кислоты и аддитивные соли органических кислот, такие как, например, соли уксусной, малеиновой, фумаровой, лимонной, щавелевой, янтарной, винной, яблочной, миндальной, метансульфоновой и п-толуолсульфоновой кислот. Примеры основно-аддитивных солей включают неорганические соли, такие как, например, соли натрия, калия, кальция, аммония, магния, алюминия и лития, и органические соли, такие как, например, соли этилендиамина, этаноламина, N,N-диалкиленэтаноламина, триэтаноламина, глюкамина и основные соли аминокислот.
Термин "пролекарственная форма" используют в его самом широком смысле, и он охватывает те производные, которые превращаются in vivo в соединения, соответствующие изобретению. Специалисты в области техники легко получат данные производные, которые включают, в зависимости от функциональных групп, находящихся на молекуле и без ограничения перечисленным, следующие производные настоящих соединений: дисульфиды, тиоэфиры, сложные эфиры, сложные эфиры аминокислот, эфиры фосфорной кислоты, сложные эфиры солей металлов, сульфонаты, карбаматы и амиды.
Термин "сольват", согласно данному изобретению, следует понимать как любую форму активного соединения, соответствующего изобретению, которые содержат другую молекулу (чаще всего полярного растворителя), присоединенную к соединению посредством нековалентных связей. Примеры сольватов включают гидраты и алкоголяты, например, метанолат. Соединения, соответствующие изобретению, могут находиться в кристаллической форме либо в виде свободных соединений, либо в виде сольватов. Способы сольватации известны в области техники. В конкретном варианте осуществления сольват представляет собой гидрат.
Соли, сольваты и пролекарственные формы можно получить способами, известными в уровне техники. Отметим, что фармацевтически неприемлемые соли, сольваты и пролекарственные формы также входят в объем изобретения, поскольку их можно использовать для получения фармацевтически приемлемых солей, сольватов и пролекарственных форм.
11
13
14
15
Кроме того, предусматривают, что соединения, соответствующие изобретению, включают соединения, которые отличаются только присутствием одного или более изотопно обогащенных атомов. Например, соединения, имеющие представленные структуры за исключением замещения водорода дейтерием или тритием либо замещения углерода углеродом, обогащенным С, С или С, либо обогащенным N азотом, входят в объем данного изобретения.
Другой аспект изобретения относится к различным способам получения соединений общей формулы (I). В следующих способах А-С описывают процессы получения соединений общей формулы (I) или их солей, сольватов либо пролекарственных форм, в число которых включены соединения формулы (Ia).
Способ А
Способ А представляет собой процесс получения соединений общей формулы (Ia):
1
2
где R, R, A, M, X, Y и Z имеют значения, приведенные выше в отношении соединения формулы (I), который предусматривает проведение реакции между
а) соединением формулы (II)
1
2
где R и R имеют вышеприведенные значения,
b) соединением формулы (III)
1
2
3
1
6
где R и R имеют вышеприведенные значения, и R представляет собой C-Cалкильную группу,
с) по меньшей мере одним реагентом, предназначенным для активации карбоксильной группы, и
3
10
9
15
d) третичным амином, предпочтительно третичным амином, выбранным из циклических или ациклических алифатических аминов с С-С атомами углерода и алканоароматических аминов с С-С атомами углерода, для получения соединения общей формулы (IV)
1
2
где R, R, А, М, X, Y и Z имеют вышеприведенные значения, и проведение реакции полученного соединения формулы (IV) со смесью гидроксиламин гидрохлорида и фенолфталеина в присутствии избытка метоксида натрия в метаноле.
Для целей изобретения реакционную смесь, состоящую из четырех соединений а)-d), можно получить добавлением одного из компонентов к смеси, образованной тремя другими компонентами в органическом растворителе и при температуре, лежащей в интервале от -85°C до +25°C, предпочтительно при температурах, близких 0°C. После завершения добавления реакционную смесь перемешивают до окончания реакции при достижении комнатной температуры. После завершения формирования амида сложный эфир, полученный согласно упомянутому процессу, добавляют к смеси гидроксиламина гидрохлорида и фенолфталеина в присутствии избытка метоксида натрия в метаноле. Когда реакция завершена, после соответствующей обработки получают соединения общей формулы (Ia).
Способ В
Способ В представляет собой процесс получения соединений общей формулы (I), который предусматривает:
а) получение соединения общей формулы (IV), как описано в Способе А;
b) проведение реакции гидролиза указанного соединения, предпочтительно в присутствии гидроксида щелочного металла и воды, а также спирта и/или циклического или ациклического эфира при температуре, лежащей в интервале от 0°C до 100°C, предпочтительно при температурах, близких к интервалу от 50°C до 100°C, с получением кислоты общей формулы (V)
1
2
где R, R, А, М, X, Y и Z имеют значения, приведенные выше в отношении соединения формулы (I), и
с) проведение реакции соединения формулы (V) с соединением общей формулы (VI)
где W имеет значение, приведенное выше в отношении соединения
формулы (I),
в присутствии реагента для активации карбоксильной группы, органического растворителя и третичного амина, предпочтительно при температурах, лежащих в интервале от 0°С до +25°C.
Способ С
Способ С представляет собой процесс получения соединений общей формулы (I), который предусматривает проведение реакции смеси, состоящей из:
а) соединения общей формулы (II)
1
2
где R и R имеют имеют значения, приведенные выше в отношении соединения формулы (I);
b) соединения общей формулы (VII)
где А, М, X, Y, Z и W имеют значения, приведенные выше в отношении соединения формулы (I),
c) по меньшей мере одного реагента для активации карбоксильной группы и
3
10
9
15
d) третичного амина, предпочтительно третичного амина, выбранного из циклических или ациклических алифатических аминов с С-С атомами углерода и алканоароматических аминов с С-С атомами углерода.
Для целей изобретения реакционную смесь, состоящую из четырех соединений а)-d), можно получить добавлением одного из компонентов к смеси, образованной тремя другими компонентами в органическом растворителе и при температуре, лежащей в интервале от -85°C до +25°C, предпочтительно при температурах, близких 0°C. После завершения добавления реакционную смесь перемешивают до окончания реакции при достижении комнатной температуры. Когда реакция завершена, после осуществления соответствующих способов выделения и очистки получают соединения общей формулы (I).
Способы А-С могут включать стадии защиты и снятия защиты функциональных групп при необходимости. Защитные группы и способы защиты и снятия защиты хорошо известны компетентным специалистам в области техники. Иллюстративные примеры данных защитных групп описаны в монографии Green T.W. et al. "Protective Groups in Organic Synthesis" (Защитные группы в органическом синтезе), 3 изд. (1999), под ред. John Wiley&Sons.
Согласно конкретному варианту осуществления, при использовании тритильной группы (трифенилметила) в качестве защитной группы тиола в любом из соединений, соответствующих изобретению, предпочтительно, когда реакцию снятия защиты осуществляют путем реакции стризамещенным силаном, предпочтительно триэтилсиланом, кислотой, предпочтительно трифторуксусной кислотой, подходящим органическим растворителем, предпочтительно дихлорметаном, и солью с основными свойствами, предпочтительно бикарбонатом натрия.
В качестве общего элемента для способов А-С предпочтительно, когда реагент или группа реагентов для активации карбонильной группы представляет собой систему оксалилхлорид, фенилдихлорфосфат, диэтилцианофосфат (DEPC) или систему 1-гидроксибензотриазола (HOBt) и N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида (EDC). Кроме того, предпочтительно, когда органический растворитель представляет собой полярный органический растворитель, наиболее предпочтительно -N,N-диметилформамид или 1,2-диметоксиэтан, и предпочтительно, когда третичный амин выбран из триэтиламина, пиридина, N-метилпирролидина или N-метилморфолина.
Получение вышеописанных соединений формулы (II) осуществляют с помощью процесса, который предусматривает проведение реакции смеси, образованной следующими компонентами:
а) α,β-ненасыщенное карбонильное соединение следующей формулы (VIII):
1
2
где R и R имеют значения, приведенные выше в отношении соединения формулы (I);
b) сложный эфир нитроуксусной кислоты общей формулы (IX):
3
где R имеет значение, приведенное выше в отношении соединения формулы (III) или (IV), и
с) первичный, вторичный или третичный амин или неорганическое основание, предпочтительно циклический или ациклический алифатический или мононенасыщенный третичный амин, более предпочтительно, триэтиламин, N,N-диизопропил этиламин (DIPEA), N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (DBU) или их смеси.
Полученную в результате смесь перемешивают при температуре, лежащей в интервале от 50°C до 100°C. После завершения реакции полученный в результате продукт, содержащий смесь диастереомеров α-нитро-δ-оксоэфира общей формулы (X):
1
2
3
™
где R, R и R имеют вышеприведенные значения, можно окислить до соединения общей формулы (XI). В конкретном варианте осуществления стадию окисления осуществляют в присутствии перманганата калия, диметилдиоксирана, пероксомоносульфата калия (Оксон), хлорида титана (III), м-хлоропероксибензойной кислоты (МСРВА), свежеприготовленного хлорида хрома (II) или их смесей. В предпочтительном варианте осуществления соединение общей формулы (X) обрабатывают избытком метоксида натрия в метаноле или этоксида натрия в этаноле при температуре, лежащей в интервале от -25°C до +50°C, предпочтительно при температурах, близких к +2°C. Полученный таким образом нитронат гидролизуют в присутствии сильной кислоты и протонного растворителя при температуре, лежащей в интервале от -85°C до 0°C, предпочтительно при температурах, близких к -25°C. Для целей изобретения предпочтительный вариант осуществления относится к использованию метанола и серной кислоты для получения соответствующих α,δ-диоксоэфиров общей формулы (XI):
1
2
3
где R, R и R имеют вышеприведенные значения.
1Н-Пиррол-2-карбоновые кислоты общей формулы (II) получают путем обработки ранее описанных сложных эфиров формулы (XI) гидроксидом аммония или аммониевой солью алифатической карбоновой кислоты из меньше чем 5 атомов углерода в присутствии уксусной кислоты при температуре, лежащей в интервале от 25°C до 100°C и последующего гидролиза, предпочтительно в присутствии гидроксида щелочного металла, воды, спирта и циклического или ациклического эфира при температуре от 0°C до 100°C, предпочтительно при температурах, близких к интервалу от 50°C до 100°C с получением после соответствующей обработки соединения общей формулы (II).
Другой аспект настоящего изобретения относится к соединению общей формулы (I) или его соли, сольвату либо пролекарственной форме, предназначенным для применения в качестве лекарственного средства.
Другой аспект настоящего изобретения относится к соединению общей формулы (I) или его соли, сольвату либо пролекарственной форме, предназначенным для применения в качестве лекарственного средства для лечения рака.
Другой аспект настоящего изобретения относится к применению соединения общей формулы (I) или его соли, сольвата либо пролекарственной формы при получении лекарственного средства для лечения рака.
В конкретном варианте осуществления рак выбран из рака молочной железы, хронического миелогенного (или миелоидного) лейкоза (ХМЛ), колоректального рака, фибросаркомы, рака желудка, глиобластомы, рака почки, рака печени, рака легкого, меланомы, носоглоточного рака, рака полости рта, ортотопической множественной миеломы, остеосаркомы, рака яичников, рака поджелудочной железы и рака простаты.
Механизм действия соединения формулы (I) объясняют его антагонистическими свойствами в отношении гистодезацетилазы, включенной в регуляцию процессов, относящихся к апоптозу, росту клеток, развитию опухолей, метастазированию рака, клеточной адгезии и др. Данные свойства препятствуют связыванию гистонов диацетилазы (HDACs) с их природными лигандами, которые могут представлять собой гистоны или цитоплазматические белки, такие как тубулин, а также их нормальной каталитической активации, а именно дезацетилированию остатков ε-N-ацетиллизина, присутствующих в данных белках.
Другой аспект изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно соединение общей формулы (I) или его соль, сольват либо пролекарственную форму и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель.
Соединения, соответствующие настоящему изобретению, можно использовать по меньшей мере с одним из других лекарственных препаратов для получения комбинированного препарата. Данный другой лекарственный препарат или препараты могут представлять собой часть той же самой композиции или могут быть представлены в виде отдельной композиции, и их можно вводить в то же самое время или в другое время.
Термин "лечение" или "проведение лечения" в контексте данного документа означает введение соединения или препарата, соответствующего изобретению, с целью предупреждения, улучшения состояния или устранения заболевания либо одного или более симптомов, ассоциированных с заболеванием. Термин "лечение" охватывает также предупреждение, улучшение состояния или устранение физиологических последствий заболевания.
Термин "наполнитель" относится к носителю, разбавителю или адъюванту, которые вводят с активным ингредиентом. Данные фармацевтические наполнители могут представлять собой стерильные жидкости, такие как вода и масла, включая масла нефтяного, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и подобные масла. Предпочтительно, когда воду или солевые водные растворы, а также водную декстрозу и глицерин используют в качестве носителей, особенно для инъекционных растворов. Подходящие фармацевтические носители описаны в "Remington's Pharmaceutical Sciences" (Ремингтоновский справочник по фармацевтическим наукам), E.W.Martin, 1995.
Примеры фармацевтических композиций включают любую твердую композицию (таблетки, пилюли, капсулы, гранулы и т.п.) или жидкую композицию (растворы, суспензии или эмульсии) для перорального, местного или парентерального введения.
В предпочтительном варианте осуществления фармацевтические композиции находятся в форме для пероральной доставки. Фармацевтические формы, подходящие для перорального введения, могут представлять собой таблетки и капсулы и могут содержать принятые наполнители, известные в области техники, такие как связующие компоненты, например, сироп, гуммиарабик, желатин, сорбит, трагакант или поливинилпирролидон, наполнители, например, лактозу, сахар, кукурузный крахмал, фосфат кальция, сорбит или глицин, смазывающие ингредиенты для получения таблеток, например, стеарат магния, разрыхлители, например, крахмал, поливинилпирролидон, натрий крахмал гликолят или микрокристаллическую целлюлозу, либо фармацевтически приемлемые увлажняющие компоненты, такие как лаурилсульфат натрия.
Твердые пероральные композиции можно получить принятыми способами смешивания, наполнения или изготовления таблеток. Повторные операции смешивания можно использовать с целью распределения активного ингредиента во всех композициях, в которых используют большие количества наполнителей. Данные операции приняты в области техники. Таблетки можно изготовить, например, путем сухой или мокрой грануляции, и они необязательно могут быть покрыты с помощью хорошо известных способов, соответствующих надлежащей фармацевтической практике, в частности, при использовании энтеросолюбильного покрытия.
Фармацевтические композиции могут быть также адаптированы для парентерального введения, например, стерильные растворы, суспензии или лиофилизированные продукты в соответствующей унифицированной лекарственной форме. Могут быть использованы подходящие наполнители, такие как инертные наполнители, забуферивающие компоненты или поверхностно-активные вещества.
Упомянутые препараты получают при использовании стандартных способов, таких как описаны или на которые ссылаются в Испанской фармакопее и Фармакопее США и аналогичной справочной литературе.
Как правило, эффективное количество соединения, соответствующего изобретению, которое предназначено для введения, будет зависеть от относительной эффективности выбранного соединения, тяжести нарушения, которое предусматривают лечить, и массы тела пациента. Однако активные соединения, будут, как правило, вводить один или более раз в день, например, 1, 2, 3 или 4 раза в день при типичных общих суточных дозах, лежащих в интервале от 0,01 до 1000 мг/кг/день.
Для того чтобы облегчить понимание представленных выше концепций, ниже описывают несколько примеров вариантов осуществления настоящего изобретения. Данные примеры являются только иллюстративными.
Осуществление изобретения
Пример 1.
Получение 3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты, имеющей следующую структурную формулу:
2
4
Раствор (2Е)-3-(4-метоксифенил)-1-фенилпроп-2-ен-1-она (5 г, 20,98 ммоль) и этилнитроацетата (2,32 мл, 20,98 ммоль) в триэтиламине (8,77 мл, 62,94 ммоль) перемешивают при 75°C в течение 4 час. Добавляют этилацетат (500 мл) и полученный раствор промывают 1Н HCl (4×250 мл), сушат над NaSO и упаривают при пониженном давлении с получением 7,21 г этил 3-(4-метоксифенил)-2-нитро-5-оксо-5-фенилпентаноата.
2
2
2
2
4
К данному материалу добавляют 0,5 М раствор метоксида натрия в метаноле (58,2 мл) и перемешивают смесь в течение 4 часов. Затем ее выливают в смесь 42804 (12 мл) и МеОН (59 мл) при -20°C. Полученную в результате смесь перемешивают при -20°C в течение 5 минут и затем позволяют достигнуть комнатной температуры. Добавляют HO (50 мл), метанол удаляют при пониженном давлении и полученный в результате водный раствор экстрагируют CHCl (2×1000 мл). Объединенные органические слои промывают NaOH (2×360 мл, 1% водный раствор) и NaCl (2×360 мл, насыщенный водный раствор), сушат над NaSO и упаривают при пониженном давлении с получением 5,14 г этил 3-(4-метоксифенил)-2,5-диоксо-5-фенилпентаноата.
3
2
4
К данному материалу добавляют ацетат аммония (4,53 г, 11,75 ммоль) и ледяную уксусную кислоту (7,2 мл) и перемешивают смесь при 75°C в течение 1 час. После достижения комнатной температуры добавляют этилацетат (800 мл) и полученный в результате раствор промывают NaHCO (3×200 мл, насыщенный водный раствор), сушат над NaSO и упаривают при пониженном давлении с получением 3,28 г этил 3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксилата.
2
4
Данный материал растворяют в этаноле (105 мл) идиметиловом эфире этиленгликоля (3 мл) и по каплям добавляют 10% NaOH (38,4 мл, водный раствор). Полученную в результате смесь перемешивают при нагревании с обратным холодильником и протекание реакции контролируют с помощью ТСХ (тонкослойной хроматографии). После завершения реакции этанол удаляют при пониженном давлении и полученный в результате водный раствор охлаждают до 0°C, нейтрализуют 6N HCl и экстрагируют этилацетатом (3×100 мл). Объединенные органические слои сушат над NaSO и упаривают при пониженном давлении с получением 2,86 г 3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты: Выход 41%;
-1
1
13
6
6
Температура плавления 198°C (с разложением); Данные ИК-спектрометрии 3467, 1643 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО (диметилсульфоксид)-d) 11.72 (с, 1Н), 7,88 (д, 2Н, J=7,7 Гц), 7,51 (д, 2Н, J=8,4 Гц), 7,38 (т, 2Н, J=7,6 Гц), 7,26 (т, 1Н, J=7,2 Гц), 6,91 (д, 2Н, J=8,4 Гц), 6,69 (с, 1Н), 3,78 (с, ЗН), 3,34 (с ушир., 1Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 162,5, 157,9, 134,4, 131,3, 131,2, 130,3, 128,6, 127,9, 127,0, 125,1, 119,8, 113,0, 112,9, 109,3, 55,0, 54,9.
Пример2.
Получение 3-(4-гидроксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты, имеющей следующую структурную формулу:
-1
1
1
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 1, из (2Е)-3-(4-гидроксифенил)-1- фенилпроп-2-ен-1-она с получением заявленного соединения. 3-(4-Гидроксифенил)-5-фенил-1 Н-пиррол-2-карбоновая кислота: Выход 53%; Температура плавления 192-193°С; Данные ИК-спектрометрии 3466, 3321, 1644, 1504, 1252, 1142, 804, 747 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, м.д., ДМСО-d) 12,14 (с ушир., 1Н), 11,63 (с, 1Н), 9,29 (с, 1Н), 7,87 (д, J=7,5 Гц, 2Н), 7,38 (м, 4Н), 7,27 (т, J=7,3 Гц, 1Н), 6,74 (д, J=8,3 Гц, 2Н), 6,64 (с, 1Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (75 МГц, м.д., ДМСО-d) 162,0, 156,2, 134,9, 132,4, 131,2, 130,4, 128,5, 127,1, 126,1, 125,2, 118,7, 114,4, 109,4.
Пример 3. Получение 3-(4-фторфенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты, имеющей следующую структурную формулу:
-1
1
16
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 1, из (2Е)-3-(4-фторфенил)-1-(2-тиенил)проп-2-ен-1-она с выходом титульного соединения.3-(4-Фторфенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоновая кислота: Выход 56%; Температура плавления 194-195 С; Данные ИК-спектрометрии 3425, 1635, 1380 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (300 МГц, м.д., ДМСО-d) 7,92 (с, 1Н), 7,82 (дд, J=8,5 Гц, J'=5,9 Гц, 2Н), 7,53 (с, 1Н), 7,36 (д, J=5,1 Гц, 1Н), 7,10-6,99 (м, 4Н), 6,41 (с, 1Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, м.д., ДМСО-d) 163,2, 161,5, 161,2, 145,0, 134,1, 132,8, 130,9, 130,8, 129,5, 129,4, 128,5, 127,8, 126,9, 115,4, 115,3, 113,8, 108,1.
Пример 4. Получение 5-(3-фурил)-3-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты:
1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 1, из (2Е)-1-(3-фурил)-3-(4-гидроксифенил)проп-2-ен-1-она с выходом титульного соединения. 5-(3-Фурил)-3-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоновая кислота: Выход 52%; Температура плавления 154-156°С; Данные ИК-спектрометрии 3431, 3326, 1652, 1507, 1252, 1145, 782 см'; Данные H ЯМР-спектроскопии (300 МГц, м.д., ДМСО-d) 11,47 (с, 1Н), 9,31 (сушир., 1Н), 8,22 (с, 1Н), 7,66 (т, J=1,7 Гц, 1Н), 7,42 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 6,97 (с, 1Н), 6,71 (д,и=8,6 Гц,2Н), 6,42 (с, 1Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, м.д. ДМСО-d) 163,1, 156,0, 143,6, 139,1, 136,6, 132,1, 130,3, 127,0, 126,4, 118,2, 114,4, 109,0, 108,9.
Пример 5. Получение метил 4-[({[5-(3-фурил)-3-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил]бензоата:
2
2
3
3
2
4
6
6
-1
1
13
Раствор 5-(3-фурил)-3-(4-гидроксифенил)-1 Н-пиррол-2-карбоновой кислоты (1,45 г, 5,5 ммоль) и метил 4-(аминометил)бензоат гидрохлорида (1,10 г, 5,5 ммоль) в ДМФ (диметилформамид) (27,5 мл) охлаждают до 0°C. Последовательно добавляют триэтиламин (4,22 мл, 30,25 моль), 1-гидроксибензотриазол (0,81 г, 6,0 ммоль), N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимид гидрохлорид (1,17 г, 6,0 ммоль) и N-метилморфолин (0,61 мл, 5,5 ммоль) и перемешивают смесь в течение 2 час при 0°С и в течение дополнительных 96 час при комнатной температуре. Добавляют этилацетат (400 мл) и полученный раствор промывают водой (75 мл), 1Н NaSO (75 мл, водный раствор), водой (75 мл), NaHCO (75 мл, насыщенный водный раствор) и NaCl (75 мл, насыщенный водный раствор), сушат над NaSO и упаривают при пониженном давлении с получением 1,43 г (3,47 ммоль) метил 4-[({[5-(3-фурил)-3-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил]бензоата: Выход 63%; Температура плавления 223-224°С; Данные ИК-спектрометрии 3390, 3321, 1700, 1616, 1532, 1272 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, м.д., ДМСО-d) 11,51 (с, 1Н), 9,35 (с, 1Н), 8,13 (с, 1Н), 7,91 (д. J=8,2 Гц, 2Н), 7,67 (т ушир., 1Н), 7,37 (д, J=8,3 Гц, 3H), 7,26 (д, J=8,5 Гц, 2Н), 6,93 (д, J=0,9 Гц, 1Н), 6,73 (д, J=8,5 Гц, 2Н), 6,38 (д, J=2,6 Гц, 1Н), 4,45 (д, J=5,8 Гц, 2Н), 3,85 (с, ЗН); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, м.д., ДМСО-d) 166,0, 161,2, 156,3, 145,0, 143,6, 138,5, 129,9, 129,1, 128,1, 127,5, 127,4, 126,0, 125,9, 121,3, 118,2, 115,1, 108.7, 108,3, 51,9, 42,1.
Пример 6. Получение метил 6-[({[3-(4-фторфенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил]никотината:
-1
1
13
3
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 5, из 3-(4-фторфенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты и метил 6-(аминометил)никотинат гидрохлорида с выходом титульного соединения. Метил 6-[({[3-(4-фторфенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-ил]карбонил} амино)метил]никотинат: Выход 91%; Температура плавления 174-176°C; Данные ИК-спектрометрии 3378, 3245, 1723, 1618, 1505, 1433, 1218, 1113, 843 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., CDCl) 9,45 (с ушир., 1Н), 8,95 (с, 1Н), 8,21 (дд, J=8,1 Гц, J=2,1 Гц, 1Н), 7.48 (дд, J=8,6 Гц, J=5,4 Гц, 2Н), 7,31-7,23 (м, 2Н), 7,21 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 7,15 (т, J=8,6 Гц, 2Н), 7,06 (дд, J=5,0 Гц, J'=3,7 Гц, 1Н), 6,88 (т ушир., J=4,6 Гц, 1Н), 6,40 (д, J=3,0 Гц, 1Н), 4,65 (д, J=5,0 Гц, 2Н), 3,96 (с, 3H); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 165,9, 162,9, 161,0, 157,9, 150,0, 142,4, 138,7, 138,3, 136,7, 130,8, 128,6, 128,0, 127,6, 127,2, 122,6, 122,4, 119,3, 116,2, 116,0, 109,1. 51,5, 48,7.
Пример 7. Получение метил 5-[({[3-(4-фторфенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил]пиридин-2-карбоксилата:
11
1
13
3
3
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 5, из 3-(4-фторфенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты и метил 5-(аминометил)пиридин-2-карбоксилат гидрохлорида с выходом титульного соединения. Метил 5-[({[3-(4-фторфенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-ил] карбонил}амино)метил]пиридин-2-карбоксилат: Выход 66%; Температура плавления 174-175°C; Данные ИК-спектрометрии 3398, 3255, 1733, 1643, 1541, 1432, 1258, 1121 см; Данные Н ЯМР-спектроскопии (500 МГц, 6 промилле, CDCl) 9,59 (сушир., 1Н), 8,56 (с, 1Н), 8,07 (д, J=8,0 Гц, 1Н), 7,66 (дд, J=8,0 Гц, J'=2,1 Гц, 1Н), 7,41 (дд, J=5,3 Гц, J'=2,1 Гц, 2Н), 7,25 (дд, J=5,1 Гц, J'=1,0 Гц, 1Н), 7,22 (дд, J=3,6 Гц, J'=1,0 Гц, 1Н), 7,10 (т, J=8,6 Гц, 2Н), 7,05 (дд, J=5,0 Гц, J'=3,6 Гц, 1Н), 6,38 (д, J=3,0 Гц, 1Н), 6,01 (tb, J=5,9 Гц, 1Н), 4,53 (д, J=6,1 Гц, 2Н), 4,01 (с, 3H); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.р., CDCl) 165,6, 163,8, 161,8, 161,4, 149,1, 147,3, 137,9, 136,2, 134,3, 131,4, 131,3, 131,2, 129,7, 128,1, 127,6, 125,2, 124,8, 123,5, 121,6, 116,5. 116,3, 110,4, 53,1, 40.8.
Пример 8. Получение метил 5-[({[3-(4-фторфенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил]пиразин-2-карбоксилата:
1
3
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 5, из 3-(4-фторфенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты и метил 5-(аминометил)пиразин-2-карбоксилат гидрохлорида с выходом титульного соединения. Метил 5-[({[3-(4-фторфенил)-5-(2-тиенил)-1 Н-пиррол-2-ил] карбонил}амино)метил]пиразин-2-карбоксилат: Выход 76%; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, 6 м.д., CDCl 9,47 (с ушир., 1Н), 9,07 (с, 1Н), 8,64 (с, 1Н), 7,47 (дд, J=8,3 Гц, J'=5,5 Гц, 2Н), 7,24 (д. J=4,5 Гц, 1Н), 7,21 (д, J=3,0 Гц, 1Н), 7,16 (т, J=8,6 Гц, 2Н), 7,06 (дд, J=4,5 Гц, J'=4,1 Гц, 1Н), 6,64 (т, J=4,6 Гц, 1Н), 6,40 (д, J=2,9 Гц, 1Н), 4,72 (д, J=5,2 Гц, 2Н), 4,04 (с, 3H).
Пример 9. Получение 5-(3-фурил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-3-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
2
2
2
4
6
6
-1
1
13
К раствору гидроксиламин гидрохлорида (0,48 г, 7,5 ммоль) и фенолфталеина (1 мг) в метаноле (1,25 мл) в инертной атмосфере по каплям добавляют аликвоту метоксида натрия в метаноле (взятом из раствора 2,70 г, 50 ммоль метоксида натрия в 10 мл метанола) до появления постоянного розового окрашивания. Последовательно добавляют метил 4-[({[5-(3-фурил)-3-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил]бензоат (0,52 г, 1,25 ммоль) и метоксид натрия в метаноле (12,5 ммоль, 2,46 мл предварительно приготовленного раствора). Реакционную смесь перемешивают в течение 26 час, пока не наблюдают появление густого осадка. Добавляют воду (3 мл) и данный раствор подкисляют ледяной уксусной кислотой и экстрагируют CHCl (3×10 мл). Объединенные органические фракции сушат над NaSO и упаривают при пониженном давлении с получением 0,49 г 5-(3-фурил)-N-{4-[(гидроксиамино) карбонил]бензил}-3-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида: Выход 94%; Температура плавления 159-160°C; Данные ИК-спектрометрии 3406, 3243, 1626, 1526, 1268 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,50 (с, 1Н), 11,13 (с, 1Н), 9,36 (с, 1Н), 8,94 (с, 1Н), 8,13 (с, 1Н), 7,69 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,67 (т ушир., 1Н), 7,34 (т, J=5,7 Гц, 1Н), 7,30 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,26 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 6,93 (с, 1Н), 6,74 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 6,37 (д, J=2,5 Гц, 1Н), 4,41 (д, J=5,8 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 164,0, 161,2, 156,3, 143,6, 142,6, 138,5, 131,2, 129,9, 127,4, 127,1, 126,8, 125,9, 121,3, 118,2, 115,1, 108,7, 108,3, 42,0.
Пример 10. Получение N-{4-[(гидроксиамино)карбонил] бензил}-3-(4-гидроксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, из метил 4-[({[3-(4-гидроксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил]бензоата с выходом титульного соединения. N-{4-[(Гидроксиамино)карбонил]бензил}-3-(4-гидроксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамид: Выход 69%; Температура плавления 139-141°C; Данные ИК-спектрометрии 3407, 3251, 1627, 1527, 1494, 1260 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,48 (с, 1Н), 11,14 (с, 1Н), 9,32 (с, 1Н), 8,94 (с, 1Н), 7,79 (д, J=7,9 Гц, 3H), 7,71 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,39 (т, J=7,6 Гц, 2Н), 7.34 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,31 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,25 (т, J=7,2 Гц, 1Н), 6,73 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 6,61 (д, J=2,5 Гц, 1Н), 4,44 (д, J=5,6 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 164,1, 161,2, 156,2, 142,7, 141,1, 132,9, 131,6, 129,9, 128,7, 128,6, 127,2, 126,8, 126,7, 125,0, 124,6, 122,4, 114,8, 108,4, 42,1.
Пример 11. Получение 6-[({[3-(4-фторфенил)-5-(2-тиенил)-1 Н-пиррол-2-ил] карбонил} амино)метил]-Н-гидроксиникотинамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, из метил 6-[({[3-(4-фторфенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил]никотината с выходом титульного соединения. 6-[({[3-(4-Фторфенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил]-N-гидрокси никотина мид: Выход 96%; Температура плавления 151-152°C; Данные ИК-спектрометрии 3406, 3202, 1620, 1547, 1504 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,80 (с, 1Н), 11,33 (с.1Н), 9,13 (с, 1Н), 8,81 (с, 1Н), 8,11 - 8,04 (м, 2Н), 7,54 (дд, J=8,5 Гц. J'=5,8 Гц, 2Н), 7,51 (д, J=3,4 Гц, 1Н), 7,46 (д, J=5,0 Гц, 1Н), 7,42 (д, J=8,2 Гц, 1Н), 7,15 (т, J=8,9 Гц, 2Н), 7,10 (дд, J=4,9 Гц, J'=3,7 Гц, 1Н), 6,47 (д, J=2,1 Гц, 1Н), 4,54 (д, J=5,6 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 162,6, 162,2, 161,0, 160,9, 160,2, 147,2, 135,2, 134,4, 131,6, 131,5, 130,9, 130,8, 128,0, 127,9, 127,3, 126,9, 124,5, 123,3, 122,4, 120,9, 114,8, 114,6, 108,7,44,2.
Пример 12. Получение 3-(4-фторфенил)-5-(3-фурил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, из метил 4-[({[3-(4-фторфенил)-5-(3-фурил)-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил]бензоата с выходом титульного соединения. 3-(4-Фторфенил)-5-(3-фурил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-1Н-пиррол-2-карбоксамид: Выход 72%; ТП 162-164°C; Данные ИК-спектрометрии 3427,3378,3206, 1627, 1538, 1293, 1012 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (200 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,70 (с, 1 Н), 11,20 (с ушир., 1 Н), 9,04 (с ушир., 1Н), 8,13 (с, 1Н), 7,96 (т ушир., J=5,4 Гц, 1Н), 7,72-7,68 (м, 3H), 7,48 (дц, J=8,3 Гц, J'=5,8 Гц, 2Н), 7,33 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,14 (т, J=8,8 Гц, 2Н), 6,93 (с, 1Н), 6,48 (с, 1Н), 4,41 (д, J=5,4 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 164,0, 161,9, 161,0, 160,0, 143,7, 142,7, 138,5, 131,9, 131,8, 131,2, 130,6, 130,6, 127,2, 126,8, 126,5, 125,9, 121,8, 118,1, 114,7, 114,6, 108,7, 108,2, 42,1.
Пример 13. Получение N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-3-(4-гидроксифенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. N-{4-[(Гидроксиамино)карбонил] бензил}-3-(4-гидроксифенил)-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамидВыход 64%; Температура плавления 171-172°C; Данные ИК-спектрометрии 3415, 3255, 1639, 1545, 1503, 1260 см'; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,66 (с, 1Н), 11,14(с ушир., 1Н), 9,35 (с ушир., 1Н), 8,95 (с ушир., 1Н), 7,70 (д, J=7,6 Гц, 2Н), 7,67 (т, J=5,7 Гц, 1Н), 7,49 (д, J=3,5 Гц, 1Н), 7,42 (д, J=4,9 Гц, 1Н), 7,32 (д, J=7,9 Гц, 2Н), 7,28 (д, J=7,8 Гц, 2Н), 7,07 (дд, J=4,9 Гц, J'=3,7 Гц, 1Н), 6,72 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 6,36 (с, 1Н), 4,42 (д, J=5,7 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 161,0, 156,2, 142,6, 134,6, 131,2, 129,9, 128,0, 127,8, 127,7, 127,1, 126,7, 125,6, 124,1, 122,9, 122,0, 114,9, 108,4, 42,1.
Пример 14. Получение N-{4-[(гидроксиамино)карбонил] бензил}-5-(4-гидроксифенил)-3-(3-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Т-{4-[(Гидроксиамино)карбонил] бензил}-5-(4-гидроксифенил)-3-(3-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамид: Выход 97%; Температура плавления 121-122°С; Данные ИК-спектрометрии 3373, 3199, 1652, 1612, 1536, 1501, 1270 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (300 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,24 (с, 1Н), 11,15 (с, 1Н), 9,51 (с, 1Н), 8,95 (с, 1Н), 8,17 (т, J=5,6 Гц, 1Н), 7,81 (дц, J=2,6 Гц, J'=1,2 Гц, 1Н), 7,72 (д, J=8,2 Гц, 2Н), 7,60 (д, J=8,6 Гц, 2Н), 7,48-7,42 (м, 2Н), 7,40 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 6,80 (д, J=8,6 Гц, 2Н), 6,64 (д, J=2,5 Гц, 1Н), 4,49 (д, J=5,6 Гц, 2Н); С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д,., ДМСО-d) 164,0, 161,0, 156,7, 142,8, 135,9, 133,6, 131,3, 129,1, 127,2, 126,8, 126,1, 124,5, 123,6, 122,6, 121,9, 121,4, 115,4, 106,9,42,1.
Пример 15. Получение 3-(3-фурил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. 3-(3-Фурил)-N-{4-[(гидроксиамино) карбонил]бензил}-5-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамид: Выход 92%; Температура плавления 122-123°C; Данные ИК-спектрометрии 3390, 3245, 1655, 1614, 1539, 1264 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (300 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,15 (с, 2Н), 9,53 (с, 1Н), 8,95 (с, 1Н), 8,29 (т, J=5,7 Гц, 1Н), 8,25 (д, J=0,9 Гц, 1Н), 7,73 (д, J=8,2 Гц, 2Н), 7,61 (т, J=1,7 Гц, 1Н), 7,57 (д, J=8,7 Гц, 2Н), 7,42 (д, J=8,2 Гц, 2Н), 6,89 (д, J=1,2 Гц, 1Н), 6,82 (д, J=8,7 Гц, 2Н), 6,69 (д, J=2,6 Гц, 1Н), 4,52 (д, J=5,6 Гц, 2Н); С-ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 164,0, 160,7, 156,8, 142,9, 142,2, 140,9, 133,9, 131,3, 129,3, 127,2, 126,9, 126,1, 122,6, 120,9, 120,3, 119,6, 115,5, 111,4, 106,3, 42,0.
Пример 16. Получение N-{5-[(гидроксиамино)карбонил]-2-фурил}-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. N-{5-[(гидроксиамино)карбонил]-2-фурил}-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамид: Выход 74%; Температура плавления 160-162°C; Данные ИК-спектрометрии 3344, 3210, 1638, 1525, 1247, 1035 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,65 (с, 1Н), 11.02 (с, 1Н), 10,85 (с ушир., 1Н), 8,98 (с, 1Н), 7,82 (д, J=7,7 Гц, 2Н), 7,50 (д, J=8,6 Гц, 2Н), 7,45 (т, J=7,7 Гц, 2Н), 7,32 (т, J=7,3 Гц, 1Н), 7,08 (д, J=3,0 Гц, 1Н), 6,94 (д, J=8,6 Гц, 2Н), 6,75 (с, 1Н), 6,36 (д, J=3,5 Гц, 1Н), 3,79 (с, 3Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 158,1, 156,8, 149,1, 137,5, 134,1, 131,6, 131,2, 130,1, 128,7, 127,6, 127,3, 124,6, 120,5, 113,2, 109,2, 94,6, 55,0, 54,8.
Пример 17. Получение 3-(4-фторфенил)-N-({5-[(гидроксиамино)карбонил]-2-фурил}метил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. 3-(4-Фторфенил)-N-({5-[(гидроксиамино) карбонил]-2-фурил}метил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамид: Выход 78%; Температура плавления 152-153°C; Данные ИК-спектрометрии 3408, 3239, 1635, 1527, 1493, 1214, 1041 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,62 (с, 1Н), 11,05 (с, 1Н), 9,06 (с, 1Н), 8,18 (т, J=5,4 Гц, 1Н), 7,79 (д, J=7,4 Гц, 2Н), 7,54 (дц, J=8,6 Гц, 5,7, 2Н), 7,41 (т, J=7,7 Гц, 2Н), 7,27 (т, J=7,3 Гц, 1Н), 7,14 (т, J=8,9 Гц, 2Н), 6,99 (с, 1Н), 6,72 (с, 1Н), 6,41 (д, J=3,2 Гц, 1Н), 4,45 (д, J=5,4 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 161,9, 160,7, 160,0, 156,5, 154,5, 145,0, 133,1, 131,8, 131,8, 131,4, 130,6, 130,6, 128,6, 127,7, 126,9, 124,6, 122,5, 114,5, 114,3, 113,5, 108,6, 108,4, 35,7.
Пример 18. Получение N-{3-[2-(гидроксиамино)-2-оксоэтил]фенил}-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. N-{3-[2-(Гидроксиамино)-2-оксоэтил]фенил}-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамид: Выход 82%; Температура плавления 205-206°C; Данные ИК-спектрометрии 3431, 3369, 3202, 1645, 1553, 1448, 1256 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ промилле, ДМСО-d) 11,75 (с, 1Н), 10,66 (с, 1Н), 9,55 (с, 1Н), 8,82 (с, 1Н), 7,84 (д, J=7,7 Гц, 2Н), 7,55 (с, 1Н), 7,50 (д, J=7,8 Гц, 2Н), 7,45-7,41 (м, 3H), 7,28 (т, J=7,2 Гц, 1Н), 7,23 (т, J=7,8 Гц, 1Н), 6,97-6,92 (м, 3H), 6,75 (с, 1Н), 3,78 (с, 3H), 3,25 (с, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 166,8, 159,5, 158,0, 139,0, 136,4, 133,2, 131,5, 129,7, 128,6, 128,3, 127,7, 126,9, 124,6, 123,9, 122,9, 120,1, 117,8, 113,5, 108,3, 55,0, 36,5.
Пример 19. Получение N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]фенил}-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]фенил}-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамид:Выход 95%; Температура плавления 234-235°C; Данные ИК-спектрометрии 3349, 3247, 1637, 1528, 1438, 1245 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ промилле, ДМСО-d) 11,84 (с, 1Н), 11,10 (с, 1Н), 9,81 (с, 1Н), 8,93 (с ушир., 1Н), 7,86 (д, J=7,6 Гц, 2Н), 7,72 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,66 (д, J=8,5 Гц, 2Н), 7,50 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,43 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 7,29 (т, J=7,2 Гц, 1Н), 6,94 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 6,78 (д ушир., J=1,9 Гц, 1Н), 3,77 (с, 3H); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 163,9, 159,8, 158,1, 141,7, 133,6, 131,4, 129,8, 129,1, 128,7, 127,6, 127,1, 127,0, 124,7, 122,7, 118,7, 113,5, 108,4, 55,0.
Пример 20. Получение 4-[({[3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил] бензойной кислоты:
2
4
6
6
1
1
13
К раствору метил 4-[({[3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-ил] карбонил}амино)метил]бензоата(1,5 г,3,41 ммоль), растворенному в этаноле (85 мл), и диметиловом эфире этиленгликоля (3,41 мл) по каплям добавляют 10% NaOH (34,1 мл, водный раствор). Полученную в результате смесь перемешивают при нагревании с обратным холодильником и мониторируют развитие реакции с помощью ТСХ. После завершения реакции этанол удаляют при пониженном давлении и полученный в результате водный раствор охлаждают до 0°C, нейтрализуют 6N HCl и экстрагируют этилацетатом (3×100 мл). Объединенные органические слои сушат над NaSO и упаривают при пониженном давлении с получением 1,26 г 4-[({[3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил] бензойной кислоты: Выход 88%; Температура плавления 260°C (с разложением); Данные ИК-спектрометрии 3408, 3268, 1684, 1525, 1496, 1264 см'; Данные H ЯМР-спектроскопии (300 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,57 (с, 1 Н), 8,00 (т, J=5,9 Гц, 1Н), 7,90 (д, J=8,2 Гц, 2Н), 7,80 (д, J=7,3 Гц, 2Н), 7,46-7,35 (м, 7Н), 7,27 (д, J=7,0 Гц, 1Н), 6,88 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 6,67 (д, J=2,2 Гц, 1Н), 4,47 (д, J=5,5 Гц, 2Н), 3,76 (с, 3H); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, 6 м.д., ДМСО-d) 167,1, 160,9, 157,9, 144,8, 133,0, 131,5, 130,1, 129,2, 128,8, 128,5, 128,0, 127,3, 126,7, 124,6, 122,3, 113,1, 108,5, 55,0, 42,0.
Пример 21. Получение N-(4-{[(2-аминофенил)амино]карбонил}бензил)-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
2
2
3
3
2
4
6
6
-1
1
13
Раствор 4-[({[3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил] бензойной кислоты (0,213 г, 0,5 ммоль) и фенилендиамина (0,108 г, 1,0 ммоль) в ДМФ (10 мл) охлаждают до 0°C. Последовательно добавляют триэтиламин (0,40 мл, 2,87 моль), 1-гидроксибензотриазол (0,101 г, 0,75 ммоль) и N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимид гидрохлорид (0,144 г, 0,75 ммоль) и перемешивают смесь в течение 2 часов при 0°C и в течение дополнительных 96 часов при комнатной температуре. Добавляют этилацетат (40 мл) и полученный раствор промывают водой (7 мл), 1Н NaSO (7 мл, водный раствор), водой (7 мл), NaHCO (7 мл, насыщенный водный раствор) и NaCl (7 мл, насыщенный водный раствор), сушат над NaSO и упаривают при пониженном давлении с получением 0,142 г (0,27 ммоль) N-(4-{[(2-аминофенил)амино]карбонил}бензил)-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида: Выход 55%; Температура плавления 142-143°C (с разложением); Данные ИК-спектрометрии 3407, 3296, 1627, 1530, 1493, 1246 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (300 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,54 (с, 1Н), 9,61 (с, 1Н), 7,95 (д, J=7,8 Гц, 3H), 7,80 (д, J=7,4 Гц, 2Н), 7,45-7,38 (м, 6Н), 7,26 (т, J=7,3 Гц, 1Н), 7,17 (д, J=7,7 Гц, 1Н), 6,97 (дт, J=8,0 Гц, J'=1,4 Гц, 1Н), 6,90 (д, J=8,7 Гц, 2Н), 6,79 (дц, J=7,9 Гц, J'=1,1 Гц, 1Н), 6,67 (д, J=2,6 Гц, 1Н), 6,60 (дт, J=7,5 Гц, J'=1,0 Гц, 1Н), 4,86 (с, 2Н), 4,49 (д, J=5,7 Гц, 2Н), 3,77 (с, 3H); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 165,0, 161,1, 157,9, 143,0, 142,9, 133,1, 132,9, 131,5, 129,9, 128,6, 127,9, 127,8, 127,7, 127,1, 126,7, 126,6, 126,4, 124,5, 123,3, 122,6, 116,2, 116,1, 113,4, 108,3, 55,0, 42,1.
Пример 22. Получение 3-(4-метоксифенил)-5-фенил-N-(4-{[(2-сульфанилфенил)амино]карбонил}бензил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
2
2
2
4
2
2
3
2
2
2
4
3
6
-1
1
13
К раствору фенилдихлорфосфата (0,1 мл, 0,625 ммоль) вДМФ (0,1 мл) при 0°C в инертной атмосфере по каплям добавляют раствор 4-[({[3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил]бензойной кислоты (0,206 г, 0,5 ммоль) в CHCl (2,5 мл) и полученную в результате смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Последовательно добавляют 2-(тритилсульфанил)анилин (0,404 г, 1,0 ммоль) и триэтиламин (4,17 мл, 30 ммоль) и перемешивают смесь при комнатной температуре в течение 16 час. Добавляют этилацетат (40 мл) и полученный раствор промывают 0,1Н HCl (3×7 мл), водой (7 мл) и 1Н NaOH (3×7 мл), сушат над NaSO и упаривают при пониженном давлении. Данный материал растворяют в CHCl (5 мл) и охлаждают до 0°C. Последовательно добавляют трифторуксусную кислоту (0,49 мл, 6,4 ммоль) и триэтилсилан (0,09 мл, 0,55 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 час. Добавляют NaHCO (7,7 мл, насыщенный водный раствор) и полученную в результате смесь перемешивают в течение 30 мин. Отделяют органический слой и водный слой экстрагируют CHCl (3×15 мл). Объединенные органические фракции сушат над NaSO и упаривают при пониженном давлении с получением 0,216 г (0,404 ммоль) 3-(4-метоксифенил)-5-фенил-N-(4-{[(2-сульфанилфенил)амино]карбонил}бензил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида: Выход 81%; Температура плавления 134-135°C; Данные ИК-спектрометрии 3407, 3384, 3233, 1681, 1638, 1525, 1493, 1249 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (300 МГц, δ м.д., CDCl) 10,22 (с, 1Н), 8,93 (с, 1Н), 8,48 (дд, J=8,3 Гц, J'=1,0 Гц, 1Н), 7,63 (д, J=8,3 Гц, 4Н), 7,43-7,35 (м, 6Н), 7,34-7,20 (м, 4Н), 6,97-6,90 (м, 3H), 6,49 (д, J=3,0 Гц, 1Н), 6,24 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,51 (д, J=6,0 Гц, 2Н), 3,81 (с, 3H); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 165,4, 161,2, 158,0, 143,5, 135,9, 133,5, 133,0, 132,3, 131,6, 129,9, 128,7, 127,9, 127,8, 127,6, 127,4, 127,1, 126,9, 126,8, 124,6, 123,9, 122,6, 114,0, 113,4, 108,3, 55,0, 42,2.
Пример 23. Получение 3-(4-метоксифенил)-5-фенил-N-(4-{[(2-сульфанилэтил)амино]карбонил}бензил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
3
3
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 22, из 4-[({[3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-ил]карбонил}амино)метил]бензойной кислоты и 2-(тритилсульфанил)этанамин гидрохлорида с выходом титульного соединения. 3-(4-метоксифенил)-5-фенил-N-(4-{[(2-сульфанилэтил)амино]карбонил}бензил)-1Н-пиррол-2-карбоксамид: Выход 70%; Температура плавления 131-132°C; Данные ИК-спектрометрии 3396, 3280, 1635, 1524, 1499, 1246 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., CDCl) 9,99 (с, 1 Н), 7,72 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,59 (д, J=7,6 Гц, 2Н), 7,38 (т, J=7,7 Гц, 2Н), 7,35 (д, J=8,5 Гц, 2Н), 7,28 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 7,17 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,03 (т, J=5,5 Гц, 1Н), 6,89 (д, J=8,5 Гц, 2Н), 6,47 (д, J=2,9 Гц, 1Н), 6,17 (т, J=5,8 Гц, 1Н), 4,45 (д, J=5,9 Гц, 2Н), 3,85-3,73 (м, 5Н), 2,97 (т, J=6,2 Гц, 2Н), 1,62 (с, 1Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (75 МГц, δ м.д., CDCl) 167,7, 161,7, 159,6, 142,4, 134,6, 133,4, 131,6, 130,8, 129,6, 129,2, 128,7, 128,5, 128,3, 127,7, 127,6, 124,9, 122,3, 114,7, 109,8, 55,6, 43,1, 39,5, 38,4, 29,9.
Пример 24. Получение 4-(аминометил)-N-пиридин-2-илбензамид гидрохлорида:
2
4
3
3
2
4
6
6
-1
1
13
К раствору4-{[(трет-бутоксикарбонил)амино]метил}бензойной кислоты (0,75 г, 3 ммоль) в толуоле (12 мл) в инертной атмосфере добавляют безводный ДМФ (0,03 мл), пиридин (1,5 мл, 18,62 ммоль) и оксалилхлорид (0,52 мл, 6 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивают в течение 6 час, пока не наблюдают образование осадка. Данный осадок отфильтровывают и промывают толуолом. Объединенные фильтраты сушат над NaSO и упаривают при пониженном давлении с получением хлорида соответствующей кислоты. Данное твердое вещество растворяют в пиридине (9,3 мл, 115 ммоль) в инертной атмосфере и добавляют 2-аминопиридин (0,31 г, 3,3 ммоль). Полученную в результате смесь перемешивают в течение 16 час, добавляют CHCl (100 мл) и полученный в результате раствор промывают NaHCO (3×15 мл, насыщенный водный раствор) и NaCl (3×15 мл, насыщенный водный раствор), сушат над NaSO и упаривают при пониженном давлении. Полученный материал растворяют в метаноле (100 мл) и полученный в результате раствор охлаждают до 0°C. Добавляют 6Н HCl (7,5 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 час. Раствор концентрируют в вакууме с получением 0,406 г (1,54 ммоль) 4-(аминометил)-N-пиридин-2-илбензамид гидрохлорида: Выход 51%; Температура плавления 258-259°C; Данные ИК-спектрометрии 3442, 3303, 1672, 1609, 1571, 1437, 1249 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 10,89 (с, 1Н), 8,41 (д, J=3,4 Гц, 1Н), 8,39-8,31 (м, 3H), 8,19 (д, J=8,4 Гц, 1Н), 8,09 (д, J=8,0, 2H), 7,89 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 7,61 (д, J=8,0, 2H), 7,21 (т, J=5,6 Гц, 1Н), 4,12 (д, J=5,4 Гц, 2H); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 165,9, 150,6, 144,7, 141,1, 138,5, 133,0, 128,8, 128,3, 120.2, 115,6, 41,7.
Пример 25. Получение 3-(4-метоксифенил)-5-фенил-N-{4-[(пиридин-2-иламино)карбонил]бензил}-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
3
3
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 5, из 3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты и 4-(аминометил)-N-пиридин-2-илбензамид гидрохлорида с выходом титульного соединения. 3-(4-Метоксифенил)-5-фенил-N-{4-[(пиридин-2-иламино) карбонил]бензил}-1Н-пиррол-2-карбоксамид: Выход 71%; Температура плавления 196°C (с разложением); Данные ИК-спектрометрии 3402, 3239, 1623, 1536, 1432, 1304, 1246 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (300 МГц, δ м.д., CDCl) 9,75 (с, 1Н), 8,77 (с, 1Н), 8,39 (д, J=8,4 Гц, 1Н), 8,29 (д, J=4,8 Гц, 1Н), 7,88 (д, J=8,3 Гц, 2H), 7,77 (дт, J=7,0 Гц, J'=1,8 Гц, 1Н), 7,57 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,45-7,27 (м, 7Н), 7,07 (ддд, J=7,3 Гц, J'=5,0 Гц, J”=0,8 Гц, 1Н), 6,90 (д, J=8,7 Гц, 2H), 6,49 (д, J=3,0 Гц, 1Н), 6,13 (т, J=5,8 Гц, 1Н), 4,52 (д, J=5,9 Гц, 2H), 3,82 (с, 3H); Данные С ЯМР-спектроскопии (75 МГц, δ м.д., CDCl) 165,7, 161,6, 159,7, 151,9, 148,1, 143,0, 138,8, 134,7. 133,6, 131,6, 130,9, 129,2, 128,3, 127,9, 127,8, 127,7, 125,0, 122,4, 120,1, 114,7, 109,9, 55,6, 43,1.
Пример 26. Получение 3-(4-метоксифенил)-5-фенил-N-{4-[(пиримидин-2-иламино)карбонил]бензил}-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
1
1
13
3
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 5, из 3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты и 4-(аминометил)-N-пиримидин-2-илбезамид гидрохлорида с выходом титульного соединения. 3-(4-Метоксифенил)-5-фенил-N-{4-[(пиримидин-2-иламино) карбонил]бензил}-1Н-пиррол-2-карбоксамид: Выход 58%; Температура плавления 190-191°C; Данные ИК-спектрометрии 3396, 3251, 1623, 1571, 1525, 1429, 1243 см'; Данные H ЯМР-спектроскопии (300 МГц, δ м.д., CDCl) 9,72 (с, 1Н), 8,83 (с, 1 Н), 8,66 (д, J=4,9 Гц, 2Н), 7,88 (д, J=8,3 Гц, 3H), 7,57 (д, J=7,1 Гц, 2Н), 7,44-7,23 (м, 6Н), 7,06 (т, J=4,9 Гц, 1 Н), 6,90 (д, J=8,7 Гц, 2Н). 6,49 (д, J=3,1 Гц, 1Н), 6,12 (т, J=5,8 Гц, 1Н), 4,51 (д, J=5,9 Гц, 2Н), 3,82 (с, 3H); Данные С ЯМР-спектроскопии (75 МГц, 6 промилле, СОС!з) 164,9, 161,6, 159,7, 158,7, 158,2, 143,1, 134,7, 133,6, 131,6, 130,9, 129,2, 128,4, 128,2, 127,9, 127,6, 125,0, 122,3, 117,1, 114,7, 109,9, 55,6, 43,1.
Пример 27. Получение 3-(3-фурил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил] бензил}-5-(4-метоксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 75%; Температура плавления 189-190°C; Данные ИК-спектрометрии 3390, 3292, 1626, 1600, 1534, 1435, 1258 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,33 (с, 1Н), 11,18 (с, 1Н), 8,99 (с, 1Н), 8,42 (с, 1Н), 8,27 (с, 1Н), 7,73 (д, J=8,1 Гц, 4Н), 7,63 (с, 1Н), 7,43 (д, J=7,9 Гц, 2Н), 7,01 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 6,91 (с, 1Н), 6,78 (с, 1Н), 4,53 (д, J=5,3 Гц, 2Н), 3,80 (с, 3H); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 164,1, 160,8, 158,52, 142,9, 142,2, 141,0, 133,5, 131,3, 127,2, 126,9, 126,0, 124,1, 121,3, 120,4, 119,6, 114,2, 111,4, 106,8, 55,2, 42,1.
Пример 28. Получение N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-(4-метоксифенил)-3-(3-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 70%; Температура плавления 185°С (с разложением); Данные ИК-спектрометрии 3384, 3303, 1619, 1612,1530, 1434, 1254 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (300 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,42 (с, 1 Н), 8,27 (т, J=5,0 Гц, 1Н), 7,80 (с, 1Н), 7,73 (дд, J=8,1 Гц, J'=4,0 Гц, 4Н), 7,49-7,35 (м, 4Н), 6,99 (д, J=8,6 Гц, 2Н), 6,72 (с, 1Н), 4,49 (д, J=5,2 Гц, 2Н), 3,79 (с, 3H); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 164,1, 161,2, 158,5, 142,9, 135,9, 133,3, 131,3, 129,2, 127,3, 126,9, 126,1, 124,7, 124,3, 123,8, 122,1, 121,9, 114,2, 107,5, 55,2, 42,2.
Пример 29. Получение 3-(4-фторфенил)-N-{4-[(гидроксиамино) карбонил]бензил}-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 85%; Температура плавления 215-216°C; Данные ИК-спектрометрии 3404, 3296, 1619, 1614, 1523, 1439, 1258 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,85 (с, 1Н), 11,17 (с, 1Н), 8,97 (с, 1Н), 8,57 (т, J=5,4 Гц, 1Н), 8,17 (д, J=8,5 Гц, 2Н), 7,80 (т, J=8,9 Гц, 4Н), 7,73 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,45 - 7,40 (м, 4Н), 7,29 (т, J=7,2 Гц, 1Н), 6,91 (д, J=1,9 Гц, 1Н), 4,48 (д, J=5,6 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 164,9, 161,8, 146,4, 143,7, 143,4, 134,4, 132,3, 132,1, 130,3, 130,2, 129,7, 128,3, 128,0, 127,8, 126,8, 125,6, 125,3, 123,9, 109,1, 43,2.
Пример 30. Получение 3,5-бис-(4-фторфенил)-N-{4-[(гидроксиамино) карбонил]бензил}-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 62%; Температура плавления 219-220°C; Данные ИК-спектрометрии 3430, 3269, 1668, 1633, 1523, 1498, 1267 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,62 (с, 1Н), 11,18 (с, 1Н),8,99(с, 1Н), 8,17 (т, J=5,0 Гц, 1Н), 7,83 (дд, J=6,9 Гц, J'=5,9 Гц, 2Н), 7,71 (д, J=7,7 Гц, 2Н), 7,52 (дд, J=6,9 Гц, J'=5,9 Гц, 2Н), 7,37 (д, J=7,9 Гц, 2Н), 7,26 (т, J=8,4 Гц, 2Н), 7,14 (т, J=8,5 Гц, 2Н), 6,70 (с, 1Н), 4,44 (д, J=5,2 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 164,0, 162,2, 161,9, 160,9, 160,2, 160,0, 142,6, 132,1, 131,8, 131,3, 130,6, 129,2, 128,1, 127,4, 127,2, 127,1, 126,8, 126,6, 126,5, 122,9, 115,6, 115,4, 114,6, 114,4, 108,3, 42,1.
Пример 31. Получение 3-(4-фторфенил)-Н-{4-[(гидроксиамино) карбонил]бензил}-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 31%; Температура плавления 214-216°C; Данные ИК-спектрометрии 3430, 3356, 1667, 1632, 1523, 1419, 1267 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (200 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,78 (с, 1Н), 11,19 (с, 1Н), 9,01 (с, 1Н), 8,13 (т, J=5,3 Гц, 1Н), 7,71 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,54 - 7,45 (м, 4Н), 7,35 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,17-7,07 (м, 3H), 6,47 (с, 1Н), 4,43 (д, J=5,5 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 164,6, 162,4, 161,5, 160,4, 142,5, 134,4, 131,5, 130,6, 130,6, 129,2, 127,9, 127,8, 127,4, 127,3, 127,1, 126,9, 126,8, 124,4, 123,1, 122,6, 114,6, 114,5, 108,4, 42,1.
Пример 32. Получение 3-(4-фторфенил)-N-{2-[(гидроксиамино) карбонил]-5-пиридил-метил}-5-(2-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 24%; Температура плавления 189-191°C; Данные ИК-спектрометрии 3411, 3226, 1616, 1538, 1502, 1421, 1293, 1221, 1020 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,71 (с ушир., 1 Н), 11,40 (с ушир., 1 Н), 9,01 (с ушир., 1 Н), 8,54 (с, 1Н), 8,17 (с, 1Н), 7,95-7,91 (м, 1Н), 7,86 (д, J=6,5 Гц, 1Н), 7,52-7,43 (м, 4Н), 7,15-7,07 (м, 4Н), 6,48 (с, 1Н), 4,47 (с, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 162,0, 161,1, 160,1, 158,9, 148,7, 147,8, 137,6, 137,2, 136,5, 134,4, 131,4, 130,6, 130,5, 127,9, 127,0, 124,4, 123,2, 122,5, 121,4, 114,7, 114,5, 108,4, 107,5, 40,1.
Пример 33. Получение N-(4- {[(2-аминофенил)амино]карбонил]бензил}-5-(4-гидроксифенил)-3-(3-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 21, с выходом титульного соединения. Выход 20%; Данные ИК-спектрометрии 3370,3256, 1643, 1613, 1501, 1450, 1259 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,25 (с, 1Н), 9,60 (с, 1Н), 9,52 (с, 1Н), 8,19 (т, J=5,8 Гц, 1Н), 7,95 (д, J=8,2 Гц, 2Н), 7,82 (дд, J=2,7 Гц, J'=1,3 Гц, 1Н), 7,60 (д, J=8,6 Гц, 2Н), 7,48-7,43 (м, 4Н), 7,17 (д, J=7,0 Гц, 1Н), 6,96 (т, J=7,1 Гц, 1Н), 6,84-6,76 (м, 3H), 6,65 (д, J=2,6 Гц, 1Н), 6,60 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 4,86 (с, 2Н), 4,53 (д, J=5,6 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 172,5, 161,0, 158,5, 149,5, 141,3, 139,6, 138,7, 132,2, 128,9, 128,4, 128,3, 128,2, 127,3, 127,0, 125,5, 125,1, 124,7, 123,0, 122,8, 122,6, 118,9, 116,4, 114,5, 113,2, 43,7.
Пример 34. Получение N-(4-{[(2-аминофенил)амино]карбонил] бензил}-5-(3-фурил)-3-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 21, с выходом титульного соединения. Выход 50%; Температура плавления 70-72°C; Данные ИК-спектрометрии 3397, 3223, 1621, 1522, 1450, 1265 см; Данные H ЯМР-спестроскопии (300 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,53 (с, 1Н), 9,60 (с, 1Н), 9,40 (с, 1Н), 8,14 (с, 1Н), 7,93 (д, J=8,2 Гц, 2Н), 7,68 (т, J=1,7 Гц, 1Н), 7,36 (д, J=8,3 Гц, 3H), 7,28 (д, J=8,5 Гц, 2Н), 7,17 (д, J=6,9 Гц, 1Н), 7,02 - 6,91 (м, 2Н), 6,77 (т, J=8,1 Гц, 3H), 6,60 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 6,39 (д, J=2,6 Гц, 1Н), 4,86 (с, 2Н), 4,45 (д, J=5,9 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 172,5, 161,0, 158,5, 149,5, 144,1, 141,3, 139,5, 138,7, 138,5, 132,2, 130,1, 129,3, 127,3, 127,0, 125,5, 125,1, 124,2, 122,8, 119,3, 118,9, 116,4, 114,5, 111,1, 108,8, 43,7.
Пример 35. Получение N-(4- {[(2-Аминофенил)амино]карбонил] бензил}-5-(4-гидроксифенил)-3-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичногоспособу, представленному в Примере 21, с выходом титульного соединения. Выход 25%; Температура плавления 241-242°C; Данные ИК-спектрометрии 3372, 3266, 1640, 1625, 1566, 1449, 1258 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (300 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,37 (с, 1Н), 9,60 (с, 1Н), 9,50 (с, 1Н), 8,00 (т, J=5,8 Гц, 1Н), 7,94 (д, J=8,2 Гц, 2Н), 7,61 (д, J=8,7 Гц, 2Н), 7,51 (д, J=7,0 Гц, 2Н), 7,41 (д, J=8,2 Гц, 2Н), 7,33 (т, J=7,3 Гц, 2Н), 7,26 (т, J=1,3 Гц, 1Н), 7,17 (д, J=7,0 Гц, 1Н), 7,02-6,93 (м, 1Н). 6,84-6,75 (м, 3H), 6,60 (тд, J=7,7 Гц, J'=1,2 Гц, 1Н), 6,54 -6,49 (м, 1Н), 4,86 (с ушир., 2Н), 4,48 (д, J=5,5 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 165,3, 161,6, 157,2, 149,5, 143,3, 136,3, 134,2, 133,6, 129,4, 128,9, 128,3, 128,2, 127,6, 127,1, 126,9, 126,6, 123,8, 123,3, 122,3, 119,3, 116,8, 116,6, 115,9, 107,5, 42,6.
Пример 36. Получение N-(4-{[(2-аминофенил)амино]карбонил]бензил}-3-(4-гидроксифенил)-5-(3-тиенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 21, с выходом титульного соединения. Выход 15%; Температура плавления 135-137°С; Данные ИК-спектрометрии 3528, 3229, 1732, 1612, 1524, 1449, 1263 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (300 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,54 (с, 1Н), 9,60 (с, 1Н), 9,37 (с, 1Н), 8,15-8,07 (м, 1Н), 7,93 (д, J=8,2 Гц, 2Н), 7,90-7,87 (м, 1Н), 7,59-7,51 (м, 2Н), 7,38 (д, J=8,2 Гц, 2Н), 7,30 (д, J=8,5 Гц, 2Н), 7,18 (дд, J=7,9, 1,2 Гц, 1Н), 7,01-6,93 (м, 1Н), 6,80 (д, J=1,3 Гц, 1Н), 6,75 (д, J=8,6 Гц, 2Н), 6,60 (тд, J=7,6 Гц, J'=1,4 Гц, 1Н), 6,51 (д, J=2,6 Гц, 1Н), 4,88 (с ушир., 2Н), 4,47 (д, J=5,7 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 165,6, 161,8, 156,8, 143,5, 143,4, 133,8, 133,6, 130,5, 130,1, 128,2, 127,6, 127,54, 127,1, 127,0, 126,9, 126,5, 126,3, 125,3, 123,8, 122,0, 119,3, 116,7, 116,6, 115,5, 109, 42,6.
Пример 37. Получение N-(4-{[(2-аминофенил)амино]карбонил]бензил}-3-(3-фурил)-5-(4-гидроксифенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 21, с выходом титульного соединения. Выход 23%; Данные ИК-спектрометрии 3387, 3221, 1641, 1523, 1450, 1257 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,24 (с, 1Н), 9,60 (с, 1Н), 9,55 (с, 1Н), 8,18 (т, J=5,8 Гц, 1Н), 7,95 (д, J=8,2 Гц, 2Н), 7,69 (д, J=1,8 Гц, 1Н), 7,49 (д, J=8,3 Гц, 2Н), 7,41 (д, J=8,1Hz, 2Н). 7,37-7,33 (м, 2Н), 7,17 (д, J=7,0 Гц, 2Н), 6,86 (д, J=1,4 Гц, 2Н), 6,79 (д, J=8,6 Гц, 2Н), 6.60 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 4,86 (с, 2Н), 4,51 (д, J=5,7 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 167,5, 161,3, 158,5, 149,5, 144,1, 141,3, 138,7, 138,5, 132,2, 129,3, 128,9, 128,4, 127,3, 127,0, 125,5, 125,1, 123,0, 122,8, 122,6, 118,9, 116,4, 114,5, 113,2, 109,8,42,7.
Пример 38. Получение N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 90%; Температура плавления 187-188°С; Данные ИК-спектрометрии 3394, 3198, 1636, 1612, 1526, 1493, 1243 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,51 (с, 1Н), 11,15 (с, 1Н), 8,94 (с, 1Н),7,91 (т, J=5,7 Гц, 1Н), 7,79 (д, J=7,8, 2Н), 7,71 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,46-7,33 (м, 6Н), 7,25 (т, J=7,2 Гц, 1Н), 6,88 (д, J=8,6 Гц, 2Н), 6,66 (д, J=8,6 Гц, 1Н), 4,44 (д, J=5,7 Гц, 2Н), 3,76 (с, 3H); Данные С ЯМР-спектроскопии (75 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 163,0, 161,0, 160,6, 141,3, 139,5, 138,7, 132,2, 131,2, 129,7, 129,2, 128,7, 127,5, 127,3, 127,0, 123,9, 119,3, 114,8, 111,1, 55,8, 43,7.
Пример 39. Получение N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-фенил-3-(4-трифторметилфенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 17%; Температура плавления 137-138°С; Данные ИК-спектрометрии 3431, 3355, 1622, 1620, 1533, 1321, 1121 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,82 (c, 1Н), 11,17 (с, 1Н), 8,99 (с, 1Н), 8,52 (с, 1Н), 7,82 (д, J=7,1 Гц, 2Н), 7,73 (д, J=7,0 Гц, 4Н), 7,66 (д, J=7,5 Гц, 2Н), 7,42 (дц, J=17,0 Гц, J'=8,3 Гц, 4Н), 7,29 (т, J=6,8 Гц, 1Н), 6,83 (с, 1Н), 4,47 (д, J=4,5 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (75 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 163,5, 161,0, 141,3, 139,9, 138,7, 133,3, 132,2, 131,4, 131,0, 129,3, 128,8, 127,8, 127,4, 127,3, 126,9, 125,6, 123,7, 119,3, 108,3, 42,3.
Пример 40. Получение 3-(4-бромфенил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
3
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 28%; Температура плавления 174-176°С; Данные ИК-спектрометрии 3427, 3218, 1630, 1624, 1534, 1487, 130 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., CDCl) 11,67 (с, 1Н), 11,17 (с, 1Н),8,97(с, 1Н), 8,32 (с, 1Н), 7,79 (д, J=7,7 Гц, 2Н), 7,72 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,56-7,43 (м, 4Н), 7,43-7,32 (м, 4Н), 7,27 (т, J=7,3 Гц, 1Н), 6,75 (с, 1Н), 4,46 (д, J=5,6 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 164,0, 160,9, 142,6, 139,5, 138,7, 133,1, 131,4, 130,8, 129,7, 129,2, 128,7, 127,5, 127,3, 126,9, 123,1, 121,7, 119,3, 108,1, 43,1.
Пример 41. Получение N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-3-(3,4-диметоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
3
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 18%; Температура плавления 134-136°С; Данные ИК-спектрометрии 3396, 3295, 1631, 1628, 1530, 1501, 1260 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., CDCl) 11,56 (с, 1Н), 11,16 (с, 1Н), 8,96 (с, 1Н), 7,87 (т, J=5,9 Гц, 1Н),7,81 (д, J=7,9 Гц, 2Н), 7,70 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,39 (т, J=7,6 Гц, 2Н), 7,35 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,25 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 7,12 (д, J=1,1 Гц, 1Н), 7,02 (дд, J=8,2 Гц, J-=1,4 Гц, 1Н), 6,90 (д, J=8,3 Гц, 1Н), 6,70 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 4,44 (д, J=5,5 Гц, 2Н), 3,76 (с, 3H), 3,69 (с, 3H); Данные С ЯМР-спектроскопии (75 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 163,3, 161,2, 150,3, 149,8, 141,3, 139,5, 138,7, 132,9, 131,6, 129,7, 129,2, 128,6, 127,5, 127,1, 126,7, 122,8, 120,9, 113,6, 111,7, 108,8, 55,5, 55,3, 42,2.
Пример 42. Получение 3-(3,4-дифторфенил)-N-{4-[(гидроксиамино) карбонил]бензил}-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 13%; Температура плавления 148-150°С; Данные ИК-спектрометрии 3431, 3349, 1634, 1603, 1527, 1495, 1275 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (300 МГц, 6 м.д., ДМСО-d) 11,65 (с, 1Н), 11,15 (с, 1Н), 8,97 (с, 1Н), 8,37 (с, 1Н), 7,79 (д, J=6,4 Гц, 2Н), 7,72 (д, J=6,1 Гц, 2Н), 7,65-7,52 (м, 1Н), 7,45-7,33 (м, 5Н), 7,28 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 6,79 (с, 1Н), 4,47 (с, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (75 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 163,0, 161,0, 150,0, 149,5, 141,3, 139,5, 138,7, 133,6, 132,2, 131,2, 129,2, 128,7, 127,5, 127,3, 127,0, 126,4, 119,3, 118,6, 115,1, 111,1, 43,7.
Пример 43. Получение N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-3-(4-нитрофенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 95%; Температура плавления 179-180°С; Данные ИК-спектрометрии 3390, 3230, 1634, 1595, 1514, 1339, 1149 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,59 (с, 1Н), 11,16 (с, 1Н), 8,96 (с, 1Н), 8,19 (т, J=5,6 Гц, 1Н), 7,79 (д, J=7,8 Гц, 2Н), 7,72 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,53 (дд, J=8,1 Гц, 5,8 Гц, 2Н), 7,44-7,34 (м, 4Н), 7,27 (т, J=7,3 Гц, 1Н), 7,13 (т, J=8,7 Гц, 2Н), 6,72 (д, J=2,1 Гц, 1Н), 4,45 (д, J=5,6 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 163,9, 161,8, 160,9, 159,9, 142,5, 132,9, 131,3, 130,6, 130,5, 128,6, 127,2, 126,8, 126,7, 124,5, 122,8, 114,5, 114,3, 108,3, 42,0.
Пример 44. Получение 3-(3,4-дихлорфенил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 60%; Температура плавления 187-188°С; Данные ИК-спектрометрии 3398, 3202, 1630, 1618, 1534, 1481, 1296 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,70 (с, 1Н), 11,17 (с, 1Н), 8,97 (с, 1Н), 8,44 (т, J=5,7 Гц, 1Н), 7,80 (д, J=6,8 Гц, 2Н), 7,73 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,55 (д, J=8,3 Гц, 1Н), 7,50 (дд, J=8,4 Гц, J-=1,8 Гц, 1Н), 7,44-7,39 (м, 5Н), 7,28 (т, J=7,4 Гц, 1Н), 6,84 (д, J=2,2 Гц, 1Н), 4,47 (д, J=5,7 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, 6 м.д., ДМСО-d) 164,0, 160,9, 142,6, 136,3, 133,3, 131,3, 130,4, 130,3, 129,8, 128,9, 128,7, 128,5, 127,3, 127,0, 126,8, 125,7, 124,6, 123,4, 108,3, 42,2.
Пример 45. Получение 3-(3-бромфенил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 34%; Температура плавления 145-146°С; Данные ИК-спектрометрии 3418, 3259, 1632, 1616, 1536, 1483, 1294 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,69 (с, 1Н), 11,18 (с, 1Н),8,97(с, 1Н), 8,37 (с, 1Н), 7,81 (д, J=7,5 Гц, 2Н), 7,73 (д, J=8,3 Гц, 2Н), 7,51 (д, J=7,7 Гц, 1Н), 7,46-7,36 (м, 5Н), 7,28 (т, J=7,7 Гц, 2Н), 6,81 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 6,81 (д, J=2,4 Гц, 1Н), 4,47 (д, J=5,5 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 164,0, 161,0, 142,6, 138,0, 133,1, 131,2, 129,9, 128,8, 128,7, 127,7, 127,3, 126,9, 126,8, 126,5, 125,2, 124,6, 123,4, 121,2, 108,3, 42,2.
Пример 46. Получение 3-(4-фторфенил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-(3-пиридинил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 15%; Данные ИК-спектрометрии 3406, 3283, 1733, 1630, 1522, 1438, 1258 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, δ м.д., ДМСО-d) 11,78 (с, 1Н), 11,19 (с, 1Н), 9,00 (с, 1Н), 8,11 (с, 1Н), 7,71 (д, J=7,5 Гц, 2Н), 7,52-7,43 (м, 5Н), 7,37 (м, 2Н), 7,15 (м, 3H), 6,50 (с, 1Н), 4,49 (д, J=5,5 Гц, 2Н); Данные С ЯМР-спектроскопии (75 МГц, 6 м.д., ДМСО-d) 163,0, 162,9, 161,0, 147,9, 147,5, 141,3, 139,5, 138,7, 134,0, 133,0, 132,2, 130,8, 127,3, 127,2, 127,0, 124,0, 119,3, 116,0, 111,1, 43,7.
Пример 47. Получение 3-(4-фторфенил)-N-{4-[(гидроксиамино)карбонил]бензил}-5-(4-метилфенил)-1Н-пиррол-2-карбоксамида:
-1
1
13
6
Данный материал получают при использовании способа, в существенной степени аналогичного способу, представленному в Примере 9, с выходом титульного соединения. Выход 26%; Температура плавления 213-215°С; Данные ИК-спектрометрии 3370, 3210, 1636, 1619, 1538, 1438, 1270 см; Данные H ЯМР-спектроскопии (500 МГц, 6 м.д., ДМСО-d) 11,57 (с, 1Н), 11,18 (с, 1Н),8,99(с, 1Н),8,27(с, 1Н),7,71 (м, 4Н), 7,56-7,48 (м, 2Н), 7,37 (д, J=7,8 Гц, 2Н), 7,22 (д, J=7,8 Гц, 2Н), 7,13 (т, J=8,6 Гц, 2Н), 6,66 (с, 1Н), 4,44 (д, J=5,5 Гц, 2Н), 2,32 (с, 3H); Данные С ЯМР-спектроскопии (126 МГц, δ м.д., ДМСО-с1б) 164,0, 161,8, 160,9, 159,9, 142,6, 136,2, 133,1, 132,1, 131,2, 130,6, 129,2, 128,7, 127,5, 127,2, 126,8, 124,5, 122,4, 114,5, 114,3, 107,9, 42,0, 20,5.
Пример 48. Активность ингибирования гистодезацетилазы in vitro: HDAC крысиной печени, человеческие изоформы HDAC1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и 11 и ядерный экстракт клеточной линии HeLa (данные IC50). Компоненты анализа
Субстратные пептиды: Анализы всех HDAC (диацетилаз гистонов) проводят с использование мацетилированного меченного АМС (аминометилкумарином) пептидного субстрата:
- Субстрат для изоформ HDAC1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11 и анализов ядерных экстрактов HeLa: Ацетилированный флуорогенный пептид из остатков 379-382 р53 (RHKKAc) (BioMol, No по каталогу К1-104).
- Субстрат для анализов HDAC8: Ацетилированный флуорогенный пептид из остатков 379-382 р53 (RHKAcKAc) (BioMol, No по каталогу KI-178).
- Субстрат для анализов HDAC крысиной печени: Ацетилированный флуорогенный пептид Boc-Lys(Ac)-AMC (Bachem, Switzerland, No no каталогу I-1875).
2
Буфер для анализов: 50 мМ Трис-HCl, рН 8,0, 137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 1 мМ MgCl (с добавлением 1 мг/мл BSA (бычий сывороточный альбумин) для разведения) (BioMol No по каталогу KI-143).
Ферменты:
Анализ HDAC1: 75 нМ человеческая HDAC1 (GenBank, регистрационный No. NM_004964): полной длины с C-концевой меткой GST, мол. масса = 79,9 кД, экспрессируется бакуловирусной экспрессирующей системой в клетках Sf9 (BioMol No по каталогу SE-456).
- Анализ HDAC2: 5 нМ человеческая HDAC2 (GenBank, регистрационный No. Q92769): полной длины с C-концевой меткой His, мол. масса = 60 кД, экспрессируется бакуловирусной экспрессирующей системой в клетках Sf9 (BioMol No по каталогу SE-500).
- Анализ HDAC3: 2,3 нМ человеческая HDAC3/NcoR2 (GenBank, регистрационный No. NM_003883 для HDAC3, GenBank, регистрационный No. NM_006312 для NcoR2): комплекс человеческой HDAC3, полной длины с C-концевой меткой His, мол. масса = 49,7 кД, и человеческой NCOR2, N-концевая метка GST, мол. масса = 39 кД, соэкспрессируются в бакуловирусной экспрессирующей системе (BioMol No по каталогу SE-507).
- Анализ HDAC4: 266 нМ человеческая HDAC4 (GenBank, регистрационный No. NM_006037): Аминокислоты 627-1085 с N-концевой меткой GST, мол. масса = 75,2 кД, экспрессируются в бакуловирусной экспрессирующей системе (BioMol, Hamburg, Germany).
- Анализ HDAC5: 588 нМ человеческая HDAC5 (GenBank, регистрационный No. NM_001015053): полной длины с N-концевой меткой GST, мол. масса = 150 кД, экспрессируется бакуловирусной экспрессирующей системой в клетках Sf9 (BioMol, Hamburg, Germany).
- Анализ HDAC6: 13 нМ человеческая HDAC6 (GenBank, регистрационный No. BC069243): полной длины с N-концевой меткой GST, мол. масса = 159 кД, экспрессируется бакуловирусной экспрессирующей системой в клетках Sf9 (BioMol, No по каталогу SE-508).
- Анализ HDAC7: 962 нМ человеческая HDAC7 (GenBank, регистрационный No. AY302468): Аминокислоты 518-конец с N-концевой меткой GST, мол. масса = 78 кД, экспрессируется в бакуловирусной экспрессирующей системе (BioMol, Hamburg, Germany).
- Анализ HDAC8: 119 нМ человеческая HDAC8 (GenBank, регистрационный No. NM018486): полной длины, мол. масса = 42 кД, экспрессируются в экспрессирующей системе Е. coli (BioMol, No по каталогу SE-145).
- Анализ HDAC9: 986 нМ человеческая HDAC9 (GenBank, регистрационный No. NM178423): Аминокислоты 604-1066 с C-концевой меткой His, мол. масса = 50,7 кД, экспрессируются в бакуловирусной экспрессирующей системе (BioMol, Hamburg, Germany).
- Анализ HDAC10: 781 нМ человеческая HDAC10 (GenBank, регистрационный No. NM_032019): Аминокислоты 1-631 с М-концевой меткой GST, мол. масса=96 кД, экспрессируется бакуловирусной экспрессирующей системой в клетках Sf9 (BioMol, No по каталогу SE-559).
- Анализ HDAC11: 781 нМ человеческая HDAC11 (GenBank, регистрационный No. NM_BC009676) с N-концевой меткой GST, мол. масса=66 кД, экспрессируются в бакуловирусной экспрессирующей системе (BioMol, No по каталогу SE-560).
- Анализ ядерного экстракта HeLa: 25 нг/мл ядерного экстракта из клеток HeLa: получают экстракцией высокой концентрацией соли ядер HeLa (человеческая клеточная линия рака шейки матки), причем данный экстракт является богатым источником активности HDAC (BioMol, No по каталогу KI-140).
50
2
50
- Анализ HDAC крысиной печени: 7,8 нг/мкл нативной, ферментно активной частично очищенной гистодезацетилазы из крысиной печени (Calbiochem, No по каталогу 382165). Способ анализа 50 мкМ субстратного пептида (см. выше раздел "субстратные пептиды") и оптимальную концентрацию соответствующего фермента (см. выше раздел "ферменты") в буфере для анализов и 1% конечной концентрации ДМС инкубируют в присутствии градиента концентраций ингибиторов (10-дозный способ IC (50% ингибирующая (подавляющая) концентрация) с 3-кратным серийным разведением) при 30°С в течение 2 час. Реакции осуществляют в 96-луночном микропланшете для флуорометрии при объеме реакции 50 мкл. После реакции дезацетилирования в каждую лунку добавляют проявитель Fluor-de-Lys-Developer (BioMol No по каталогу KI-105) для разложения дезацетилированного субстрата с получением, таким образом, флуоресцентного сигнала. Реакции дают протекать в течение 45 минут при 30°C с 5% CO, затем измеряют флуоресцентный сигнал при длине волны возбуждения 360 нм и длине волны излучения 460 нм во флуорометре для чтения микропланшетов (GeminiXS; Molecular Devices, Sunnyvale, CA). Кривая дезацетилированного стандарта (Biomol, No по каталогу KI-142; получен из 100 мкМ с разведением 1:2 и с 10 дозами, 6 мкл) позволяет перевести величину флуоресцентного сигнала в количество микромолей дезацетилированного продукта. Все эксперименты проводят в трех повторностях. IC рассчитывают по соответствию экспериментальных данных кривой зависимости доза-эффект. ДМСО используют в качестве отрицательного контроля; трихостатин A (Biomol No по каталогу GR-309), SAHA (субероуланилид гидроксамовая кислота, полученная в лаборатории, где проводят исследования) и кендин 91 (название IUPAC (Международный союз теоретической и прикладной химии, ИЮПАК): N-[6-(гидроксиамино)-6-оксогексил]-3-(4-метоксифенил)-5-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксамид, полученный в лаборатории, где проводят исследования) используют в качестве ингибиторов положительного контроля.
Соединение SAHA
IC<sub>50</sub> (нМ) активности фермента
DAC1
HDAC2
HDAC3
HDAC4
HDAC5
HDAC6
HDAC7
HDAC8
HDAC9
HDAC10
HDAC11
HeLa
Крысиная печень
254,2
1045
460,4
-
-
44,8
-
335,2
-
-
-
24,5
-
Кендин 91
508,3
1690
612,9
-
-
34,9
-
146
-
-
-
43,0
-
Пример 9
378
909
298
-
-
6,8
-
227
-
-
-
26,0
-
Пример 10
473,1
1393
512,3
-
-
10,8
-
340,1
-
-
-
34,0
66
Пример 11
744,5
2529
753,7
-
-
52
-
180,6
-
-
-
68,3
Пример 12
383,7
1147
451,3
-
-
42,8
-
124,2
-
-
-
46,4
56
Пример 13
865
1909
614
-
-
6,6
-
559
-
-
-
42
-
Пример 14
84,2
317,8
123,9
956
172
0,44
692
64,1
277
316
319
6,7
-
Пример 15
49,9
144,4
46,1
338
60
0,7
178
74,8
59
35
72
3,4
-
Пример 16
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
>10000
Пример 17
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
9790
Пример 18
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
>10000
Пример 19
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
101
Пример 21
390
1265
3900
-
-
>5000
-
>5000
-
-
-
7010
>10000
Пример 22
>5000
>5000
>5000
-
-
>5000
-
>5000
-
-
-
>5000
>10000
Пример 23
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
>10000
Пример 25
>5000
>5000
>5000
-
-
>5000
-
>5000
-
-
-
>5000
-
Пример 26
>5000
>5000
>5000
-
-
>5001
-
>5001
-
-
-
>5000
-
Пример 27
71
157
75
1083
222
1,6
290
148
163
294
341
3,9
-
Пример 28
184
392
273
2431
640
2
762
174
478
723
718
22
-
Соединение
IC<sub>50</sub> (нМ) активности фермента
DAC1
HDAC2
HDAC3
HDAC4
HDAC5
HDAC6
HDAC7
HDAC8
HDAC9
HDAC10
HDAC11
HeLa
Крысиная печень
Пример 29
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
73
71
Пример 30
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
90
82
Пример 31
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
58
49
Пример 32
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
390
-
Пример 33
103
364
732
-
-
>5000
-
>5000
-
-
-
3270
-
Пример 34
86
349
770
-
-
1255
-
>5000
-
-
-
1537
-
Пример 35
108
433
806
-
-
>5000
-
>5000
-
-
-
4277
-
Пример 36
222
752
2068
-
-
>5000
-
>5000
-
-
-
4079
-
Пример 37
332
1836
5830
>5000
8644
2886
>5000
>5000
>5000
8547
5662
1075
-
Пример 38
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
70
Пример 39
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
170
Пример 40
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
99
Пример 41
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
119
Пример 42
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
129
Пример 43
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
62
Пример 44
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
153
Пример 45
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
115
Пример 46
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
70
Пример 47
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
108
Пример 49. Биологическая активность в раковых клеточных линиях
Анализы на основе клеточных культур используют для оценки способности соединений, соответствующих изобретению, ингибировать рост раковых клеток.
2
Клетки получают из Американской коллекции типовых культур (American Type Culture Collection (ATCC)). Клетки культивируют при 37°C с 5% CO в подходящей среде для роста (см. таблицу ниже) и собирают, соответственно, в период логарифмического роста и подсчитывают на гемоцитометре. Выживаемость клеток составляет более 98% по данным исключения трипанового синего. Концентрации клеток доводят до 5×104 и 2×105 клеток/мл при использовании соответствующей среды.
Форма человеческого рака
Клеточная линия
Среда
Рак молочной железы
ВТ474
MEM
CF-7
МЕМ+0,1 mMNEAA
CF-7-218
DMEM
CF-7- FL
DMEM
DA-MB-231
L15
K-BR-3
Среда МакКоя 5а
Рак простаты
DU145
RPMI-1640
МСаР
RPMI-1640
С-3
F12K
Колоректальный рак
Colo205
RPMI-1640
Colo205LD-1
RPMI-1640
СТ-116
Среда МакКоя 5а
Т-29
DMEM+F12
oVo
F12K
W620
L15
Рак легкого
А549
F12K
alu-б
МЕМ+0,1 mMNEAA
CI-H226
RPMI-1640
CI-H460
RPMI-1640
K-MES-1
МЕМ+0,1 mMNEAA
Форма человеческого рака
Клеточная линия
Среда
Глиобластома
U87MG
DMEM+0,1 mMNEAA
Фибросаркома
НТ-1080
МЕМ+0,1 mMNEAA
Рак поджелудочной железы
MIAPACA-2
DMEM
х-РС-3
RPM1-1640
ANC-1
DMEM
Рак почки
786-0
RPM1-1640
Рак печени
Hep3B
DMEM+0,1 mMNEAA
ер02
DMEM
K-НЕР-1
MEM+0,1 mMNEAA
Остеосаркома
143b
EMEM
Меланома
А375
DMEM
K-MEL-5
MEM+0,1 mMNEAA
Носоглоточный рак
CNE2
DMEM (с низким содержанием
Рак желудка
MCG803
DMEM (с низким содержанием
GC823
RPM1-1640
Рак яичников
SK-OV-3
McCoys' 5a
VCAR3
DMEM (с низким содержанием
Хронический миелолейкоз
К562
RPM1-1640
Рак полости рта
KB
RPM1-1640
Ортотропная множественная миелома
RPMI-8226
RPM1-1640
MEM - минимальная основная среда
DMEM - среда Игла в модификации Дульбекко
RPMI - питательная среда для иммунобиологической диагностики
Исходные растворы тест-соединений и лекарственных препаратов положительного действия доксорубицина (Zhejiang, Haizheng, China), паклитаксела (Beijing, Xiehe, China), винкристина (Shenzhen Wanie, China), 5-ФУ (Tianjin jinyaoanjisuan, China), иринотекана (Jiangsu Hengrui, China) и цисплатина (Nanjing zhiyao, China) готовят в диметилсульфоксиде (ДМСО) или PBS (фосфатно-солевой буферный раствор) в концентрации 20 мМ.
50
2
50
С целью определения IC на 72 час для каждого соединения эксперименты проводят в 96-луночных планшетах и высевают клеточные линии с густотой 5000-20000 клеток/лунку. В каждой клеточной линии значения 1050 после 72-часовой обработки определяют для каждого соединения с использованием анализа MTD. Все варианты обработки проводят в трех повторностях. 10 мкг раствора лекарственного препарата добавляют в каждую лунку и инкубируют в течение 72 час. В конце инкубирования добавляют 20 мкл свежеприготовленного раствора смеси MTS/PMS в каждую лунку и инкубируют в течение 4 часов при 37°С в атмосфере с повышенной влажностью и содержанием 5% CO. Поглощение читают при длине волны 490 нм, используя спектрофотометр для микропланшетов SpectraMAX Plus. Для анализа результатов их представляют графически с помощью программы GraphPad Prism 5.0. Чтобы рассчитать IC, строят кривую зависимости доза-эффект, используя модель нелинейной регрессии с сигмоидальной кривой зависимости доза-эффект.
Форма рака человека
Клеточные линии
IC<sub>50</sub> (мкМ)
Лекарственный препарат с
Образец
Образец
Образец
Образец
Образец
Рак молочной железы
ВТ474
Доксорубицин
4,502
3,632
1,626
0,4422
0,1191
12,94
CF-7
Цисплатин
7,746
4,490
10,10
2,091
0,3765
2,765
CF-7-218
Паклитаксел
0,2850
12,77
37,57
26,52
-
-
CF-7-FL
Доксорубицин
2,374
7,724
6,636
3,308
-
-
DA-MB-231
Цисплатин
99,76
4,255
4,065
1,826
1,49
73,83
K-BR-3
Цисплатин
1,738
1,495
0,3345
0,4529
0,7714
4,085
Рак простаты
DU145
Цисплатин
4,009
4,514
1,519
0,4601
0,3385
1,862
МСаР
Цисплатин
8,920
9,910
4,109
1,720
0,3659
3,066
С-3
Цисплатин
11,48
3,000
2,405
0,2806
0,4196
1,312
Колоректальный рак
Colo 205
Иринотекан
16,64
4,914
1,563
0,3651
0,2482
3,099
LD-1
Цисплатин
18,29
6,867
24,52
4,483
0,5917
3,221
СТ-116
5-ФУ
1,708
1,993
0,08038
0,08197
0,4161
1,461
Т-29
Цисплатин
14,93
10.67
5,781
2,294
1,015
25,88
oVo
Цисплатин
4,645
1,908
0,4977
0,1500
0,4301
3,854
W480
Цисплатин
10,76
-
-
-
0,5742
2,375
W620
Цисплатин
84,28
1,822
1,531
0,3341
0,3771
1,997
Рак легкого
А549
Цисплатин
28,41
11,39
10,97
2,462
1,021
3,434
alu-6
Цисплатин
1,612
9,605
4,067
1,217
0,4924
0,7259
CI-H226
Цисплатин
9,501
11,90
21,30
3,052
1,765
12,56
CI-H460
Цисплатин
6,931
10,48
26.68
6,292
1,682
12,11
K-MES-1
Цисплатин
5,123
7,762
18,53
3,512
0,5878
1,776
Глиобластома
U87MG
Цисплатин
7,611
10,79
9,354
6,559
1,391
8,963
Фибросаркома
НТ-1080
Доксорубицин
0,02565
1,837
1,528
0,5939
0,1605
1,093
Рак поджелудочной железы
MIAPACA-2
5-ФУ
7,614
2,814
0,4282
0,27
0,8808
7,518
х-РС-3
Цисплатин
6,118
7,726
6,834
2,250
0,7753
8,279
ANC-1
Цисплатин
24,83
10,73
9,844
6,445
0,9651
11,48
Рак почки
786-0
Цисплатин
4,323
13,43
8,658
2,290
1,91
10,03
Рак печени
Hep3B
Цисплатин
3,959
3,179
2,699
0,8592
0,6136
4,271
epG2
5-ФУ
3,277
5,009
2,008
2,28
0,4982
1,772
K-НЕР-1
Доксорубицин
0,1645
4,471
1,754
0,4502
1,096
9,926
Остеосаркома
143b
Доксорубицин
0,08614
12,87
2,621
1,933
2.573
11,07
Меланома
А375
Цисплатин
6,553
10,20
7,696
3,684
1,036
4,271
K-MEL-5
Цисплатин
2,871
3,335
0,8512
0,2925
0,2555
3,786
Носоглоточный рак
CNE2
Цисплатин
11,80
9,537
11,39
16,15
0,5903
5,014
Рак желудка
MCG803
Цисплатин
11,38
1,099
3,274
2,009
0,738
6,082
C1-N87
Цисплатин
8.242
-
-
-
0,1531
1,48
GC823
Цисплатин
1,293
9,675
13,73
5,136
0,6761
7,795
Рак яичников
SK-OV-3
Цисплатин
4,425
4,17
1,628
0,6513
1.666
8,433
VCAR3
Цисплатин
11,68
9,989
25,25
8,048
0,9042
4,764
Хронический миелолейкоз
K562
Цисплатин
13,16
1,044
1,300
0,7391
0,3068
1,374
Рак полости рта
KB
Цисплатин
3,969
2,960
0,7021
0,1836
0,3151
3,425
Ортотрофическая множественная миелома
RPMI-8226
Цисплатин
1,059
1,311
0,3361
0,4263
0,05857
0,4621