СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ РАНЕВОГО ПРОЦЕССА
METHOD FOR WOUND PROCESS COURSE PREDICTION

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторному методу исследования, и может быть использовано при прогнозировании течения раневого процесса.
Раневой процесс - это сложный комплекс общих и местных реакций организма в ответ на ранение, обеспечивающих заживление раны.
В неосложненных случаях раневой процесс протекает в 3 фазы: альтерация, экссудация и пролиферация.
Для начальных стадий раневого процесса (1-4-е сутки после ранения) характерно возбуждение симпатического отдела вегетативной нервной системы, сопровождающееся повышенным выбросом адреналина в кровь, под влиянием которого повышается жизнедеятельность организма, основной обмен, усиливается распад белков, жиров и гликогена, снижается проницаемость клеточных мембран, угнетаются механизмы регенерации, повышается свертываемость крови. Повышается активность коркового вещества надпочечников, выделяющего глюкокортикоидные гормоны, которые оказывают противовоспалительное действие. Таким образом, в ответ на полученную травму развивается адаптационный синдром.
Дальнейшее течение раневого процесса характеризуется (4-10-е сутки после ранения) повышенным влиянием парасимпатического отдела вегетативной нервной системы, действием минералокортикоидных гормонов, альдостерона, активируется процесс регенерации. В этой фазе происходит нормализация обмена веществ, особенно белкового, активизируется процесс заживления раны.
Известен способ прогнозирования течения раневого процесса при гнойно-воспалительных заболеваниях челюстно-лицевой области микробной этиологии (RU №2405456, А61В 10/00, 10.12.2010), суть данного метода заключается в исследовании микробиологической картины раневого отделяемого. При этом определяют наличие или отсутствие микроорганизмов и их концентрацию, а при иммунологическом исследовании регистрируют общее количество лейкоцитов в периферической крови, СОЭ, уровни средних циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), антитела к стрептококку.
Недостаток данного метода состоит в том, что для получения результатов исследования требуются большие затраты времени, метод является дорогостоящим, технически более сложный, результат прогнозирования формируется к моменту завершения лечебно-диагностических мероприятий.
Известен способ прогнозирования течения раневого процесса (RU №2285924, G01N 336/53, 20.10.2006), суть которого состоит в том, что в сыворотке крови определяют содержание провоспалительных интерлейкинов TNFα, IL-1α, противовоспалительных интерлейкинов IL-4, IL-10. У больных рассчитывают интегральные показатели провоспалительных и противовоспалительных интерлейкинов, далее производят расчет отношения их содержания у больного к среднему значению у здоровых лиц. Затем вычисляют прогностический индекс воспаления (ПИВ).
Недостаток данного метода состоит в том, что он является дорогостоящим, а расчет индекса является условным, и, соответственно, прогноз является относительно неточным.
Известен способ прогнозирования течения раневого процесса при глубоких отморожениях нижних конечностей (RU №2285928 G01N 33/66, 20.10.2006), суть которого состоит в том, что производят микроскопическое исследование кровотока в пораженной конечности с помощью лазерной доплеровской флоуметрии, рассчитывают показатели гемодинамики и косвенно определяют дальнейшее течение раневого процесса.
Недостаток данного метода состоит в том, что при отсутствии кровотока в тканях (глубокой ишемии) невозможно прогнозировать дальнейшее течение раневого процесса, также само исследование является высокозатратным по стоимости.
Известен способ прогнозирования исхода течения раневого процесса (RU №2142635, G01N 33/48, 10.12.1999), суть которого заключается в том, что проводят микроскопическое исследование анизотропных текстур высушенного биологического материала из отделяемого раны в количестве 10-100 мкл, при этом смешивают с 0,1-0,25 мл физиологического раствора хлорида натрия и высушивают в форме капли на открытой поверхности при 20-30°С. Данный способ выбран авторами в качестве прототипа.
Недостаток данного метода состоит в том, что белки становятся более разбавленными при смешивании с физиологическим раствором, введение кристаллообразующего раствора затрудняет интерпретацию полученных результатов по сравнению с использованием нативной сыворотки. Концентрация белка в раневом отделяемом значительно ниже по сравнению с таковой сыворотки крови, и поэтому данный метод является трудновоспроизводимым. Трудность заключается также в том, что при раневом процессе отделяемое встречается, как правило, в стадии экссудации, тогда как на других стадиях раневого процесса данная биологическая жидкость отсутствует, что делает невозможность прогнозирования осложнения заживления раневого процесса. Кроме того, недостатком данного метода является длительность прогноза, порядка 72 часов, что делает прогноз неактуальным к моменту получения диагностической информации.
Задача данного изобретения - разработка критериев прогнозирования течения раневого процесса на основе анализа изменения текстур высушенной сыворотки крови.
Технический результат, достигаемый изобретением, - оперативность получения диагностической информации, простота применения метода, возможность прогнозирования течения раневого процесса на молекулярном уровне на различных этапах заживления раны.
Поставленный технический результат достигается тем, что производят микроскопическое исследование текстур, полученных в результате высыхания исследуемой биологической жидкости на обезжиренном предметном стекле в форме капли при температуре 20-30°С, причем исследование проводят на изотропных текстурах, а в качестве биологической жидкости используют сыворотку крови, которую высушивают в течение 24 часов, а затем осуществляют микроскопическое исследование в проходящем свете, и, при выявлении изотропных текстур в форме языковых полей, выпуклых округлых образований, трехлучевых трещин, делают прогноз по дальнейшему течению раневого процесса, а именно: при наличии одного из видов или их сочетание свидетельствует об осложнении заживления раны.
Суть способа заключается в выявлении закономерностей межмолекулярного взаимодействия в системе белок-соль при высыхании капли сыворотки крови и прогнозировании заживления раны по наличию или отсутствию изотропных текстур.
Выявленные авторами изотропные текстуры в форме языковых полей, выпуклых округлых образований, трехлучевых трещин являются универсальными для типовых патофизиологических процессов, однако для прогнозирования течения раневого процесса ранее не применялись.
На сегодняшний день известно, что появление изотропных текстур типа «языковых полей» является признаком воспалительного процесса (Шабалин В.Н. и др. Морфология жидких сред глаза (новая теория инволютивного катарактогенеза): монография. - М.: Медицина, 2004. С. 157-160). Данная изотропная текстура является патогномоничной для активной фазы воспалительного процесса и свидетельствует о происходящих межмолекулярных нарушениях (Фиг. 1).
Появление выпуклых изотропных включений округлой формы типа «токсические бляшки» (Шатохина С.Н., Шабалин В.Н. Атлас структур неклеточных тканей человека в норме и патологии в 3 томах. Том II. Морфологические структуры сыворотки крови. - М. - Тверь: ООО «Издательство «Триада», 2013. С. 240-245) характеризуют глубину биохимических сдвигов и степень выраженности белковых нарушений, молекул средней массы, которые можно интерпретировать как степень уровня эндогенной интоксикации организма (Фиг. 2).
Появление изотропных текстур по типу «трехлучевых трещин» в фации сыворотки крови (Шабалин В.Н. и др. Морфология жидких сред глаза (новая теория инволютивного катарактогенеза): монография. - М.: Медицина, 2004. С. 158-159) свидетельствует о застойных явлениях в тканях, обусловленных изменением параметров перфузии тканей (Фиг. 3).
На практике способ осуществляют следующим образом.
У пациента выполняют забор крови из v. intermedia cubiti в объеме до 5 мл, затем центрифугируют в пробирке без консервантов от 2000 до 2500 об/мин в течение 15-20 минут, затем наносят 20 мкл сыворотки крови в форме капли на поверхность предметного стекла. Через 24 часа выдержки сыворотки крови при 20-30°С проводят микроскопическое исследование при увеличении, кратном от ×25 до ×100 в проходящем свете и определяют наличие или отсутствие в ней изотропных текстур. Делается заключение: о положительном прогнозе при отсутствии изотропных текстур, об отрицательном прогнозе (осложненное течение) при наличии изотропных текстур.
Данный способ позволяет выявить особенности физико-химического структурирования биоматериала при патологии, прост в исполнении, осуществим в короткие сроки до 24 часов и доступен в любой клинико-диагностической лаборатории.
Клинический пример 1
Пациент Б., 62 лет был оперирован в хирургическом отделении по поводу ущемленной послеоперационной вентральной грыжи.
Результаты исследования морфологической картины сыворотки крови в первые сутки после операции: наличие изотропных текстур в форме трехлучевых трещин, а также языковые поля, которые свидетельствовали о неблагоприятном течении раневого процесса.
Была назначена антибиотикотерапия. При повторном исследовании сыворотки крови на 5 сутки после операции подобных изотропных текстур выявлено не было. Рана зажила первичным натяжением, швы сняты на 12 день. Пациент выписан в удовлетворительном состоянии на 12 день после операции.
Клинический пример 2
Пациент Н., 34 лет был оперирован в хирургическом отделении по поводу ущемленной левосторонней косой паховой грыжи.
Результаты исследования морфологической картины сыворотки крови в первые сутки после операции: отсутствие изотропных текстур, которые свидетельствовали о благоприятном течении раневого процесса.
Дополнительной коррекции фармакотерапии не потребовалось. При повторном исследовании сыворотки крови на 5 сутки после операции также не было выявлено изотропных текстур. Рана зажила первичным натяжением, швы сняты на 7 день. Пациент выписан в удовлетворительном состоянии на 7 день после операции.