Химиотерапия

познавания и архивирования полученного клинического материала для долговременного наблюдения за пациентами из группы риска. Сформирована электронная база данных, включающая цифровые фотографии и гистологические срезы удаленного новообразования в цифровом формате.

С 2004 г. комплексное обследование было проведено 36 пациентам. Использование разработанной методики комплексного обследования позволило поставить диагноз меланомы с чувствительностью 83 % и специфичностью 70 %. Ранее при установлении диагноза меланомы только по данным клинического осмотра чувствительность составляла 33 %, специфичность — 40 %.

Таким образом, разработанный комплекс ранней диагностики меланомы имеет перспективы для использования в онкологической практике.

И. А. Файнштейн, Е. В. Степанова, И. Н. Соколова,

А. Ю. Барышников

Экспрессия молекулярно-биологических маркеров при раке головки поджелудочной железы

ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Аденокарциномы поджелудочной железы относятся к группе опухолей плохого прогноза с 5-летней выживаемостью менее 3 %. В настоящее время только полная хирургическая резекция рака поджелудочной железы (РПЖЖ) является оптимальным лечением, химио- или лучевая терапия малоэффективна. Актуальность

поисков дополнительных критериев злокачественности опухолей и прогностических факторов несомненна.

Материал и методы. В исследование вошло 20 больных (12 мужчин и 8 женщин) аденокарциномой головки поджелудочной железы, проходившие лечение в РОНЦ. Средний возраст больных составил 58±5 лет. Всем больным была выполнена радикальная ГПДР. Проведено иммуногистохимическое исследование маркеров апоптоза (р53, Вс1-2, Вах), ангиогенеза (ТФ, Сох) ИЕЯ-2/пеи и Кі-67.

Результаты. Накопление р53 наблюдалось в 35 % случаев РПЖЖ. Экспрессия р53 чаще встречалась при Т4 стадии (60 %), чем при Т3 (35,7 %). Экспрессия маркеров апоптоза Вс1-2 и Вах наблюдалась в 25 и 35 % случаев соответственно. Гиперэкспрессия ИЕЯ-2/пеи (2+ и 3+) обнаружена у 25 % больных РПЖЖ. Отмечалась высокая экспрессия ангиогенных факторов в аденокарциномах ПЖЖ: экспрессия ТФ в 75 % случаев и ЦОГ-2 — в 35 %. Высокая пролиферативная активность опухоли (индекс Кі-67 более 10 %) отмечена в 55 % случаев, низкая — в 45 %. Среди молекулярно-биологических маркеров только экспрессия Вс1-2 показала прогностическую значимость. Ни один из Вс1-2 отрицательных больных не прожил более года, тогда как среди положительных случаев таких больных оказалось 50 %.

Выводы. Изучение молекулярно-биологических маркеров при РПЖЖ может помочь определить тактику лечения. Экспрессия Вс1-2 при РПЖЖ, мы предполагаем, может ассоциироваться с неблагоприятным прогнозом течения заболевания.

ХИМИОТЕРАПИЯ

М. А. Барышникова, О. Л. Орлова, А. П. Полозкова, И. С. Голубева, Н. П. Яворская, Н. А. Оборотова, Л. И. Смирнова, С. А. Партолина

Разработка лекарственной формы амиронина для перорального применения

ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

Алкилирующие агенты находят наиболее широкое практическое применение среди различных групп синтетических химических соединений. В соответствии с теорией о целесообразности применения производных аминокислот как потенциальных антиметаболитов аминокислотного обмена злокачественных опухолей в ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина синтезирована субстанция амиронина в виде основания, эфира и кислоты. В биологических экспериментах было показано, что амиронин в виде кислоты наиболее активен и менее токсичен. Амиронин представляет собой В,Ь-а-амино-Р(п-[п-бис(Р-хлорэтил)аминофенокси]фенил}пропионовой кислоты гидрохлорид. Тирониновая структура носителя алкилирующей группы придает препарату направленность на щитовидную железу и опухоли, исходящие из нее.

Поскольку амиронин практически не растворим ни в воде, ни в маслах, наиболее рациональной для него является лекарственная форма для перорального применения в виде таблеток. При разработке таблеток амиронина изучены технологические характеристики субстанции амиронина, которые предопределили вид прессования, необходимость введения дополнительных ингредиентов, обеспечивающих возможность процесса таблетирования и высокое (соответствующее требованиям ГФ) качество полученных таблеток (распада-емость, прочность и др.). Для коррекции технологических характеристик субстанции амиронина массу для таблетирования получали методом влажной грануляции. В присутствии влаги хлорэтиламины гидролизуются, поэтому наряду со вспомогательными веществами, необходимыми для улучшения текучести, коррекции насыпной массы и исключения залипаемости на прессующий инструмент, в табле-тируемую массу введен стабилизатор — натрия хлорид. Наибольшую сложность представляла коррекция распадаемости таблеток. Все исследуемые модели таблеток набухали, но не распадались. Введение разрыхлителя аэросила позволило получить таблетки, соответствующие требованию ГФ по тесту «распадаемость».

Таким образом, в ГУ РОНЦ им. H. Н. Блохина РАМН разработана лекарственная форма труднорастворимого хлорэтиламина амиронина в виде таблеток для перорального применения, которая в настоящее время проходит предклиническое изучение.

Т. А. Богуш, А. Б. Равчеева, А. В. Конухова, К. Е. Кузьмина,

В. Ю. Кирсанов, А. Ю. Барышников Дифференцированная оценка функциональной активности АВС-транспортеров, контролирующих внутриклеточное распределение противоопухолевых препаратов, методом проточной цитофлюориметрии ГУ РОНЦ им. H. Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Разработка методов оценки прогностически значимых опухолевых маркеров — одна из проблем, чрезвычайно важных для решения как фундаментальных, так и клинических задач онкологии.

Цель исследования. Разработка подхода к дифференцированной оценке функциональной активности АВС-транспортеров, маркеров множественной лекарственной резистентности (MDR), контролирующих накопление MDR-цитостатиков не только в цитоплазме, но и в ядре. Последнее наиболее важно, т. к. является определяющим в реализации специфической активности большинства противоопухолевых препаратов.

Материал и методы. Объектом исследования явились культуры клеток разных линий, а также опухолевые клетки, полученные из хирургического биопсийного материала опухолей человека с разным фенотипом MDR. Внутриклеточную флюоресценцию доксорубици-на (Док) оценивали методом проточной цитофлюориметрии (ПЦФ).

Результаты. Впервые описаны разнонаправленные изменения внутриклеточной флюоресценции Док при увеличении его внутриклеточного накопления под воздействием специфических ингибиторов активности АВС-транспортеров (верапамила и генистеина) — увеличение или уменьшение показателя. Учитывая характерное для антрациклинов тушение флюоресценции при связывании с ДНК, сделано заключение, что уменьшение внутриклеточной флюоресценции Док в условиях его повышенного накопления в клетке означает увеличение накопления препарата в ядре, тогда как повышение внутриклеточной флюоресценции Док свидетельствует об увеличении цитоплазматической аккумуляции препарата.

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

-о-

Выводы. 1. Методом ПЦФ по характеру (направленности) изменения внутриклеточной флюоресценции Док возможно определить распределение антрациклина между ядром и цитоплазмой, т. е. дифференцированно оценить активность АВС-транспортеров, регулирующих накопление препарата в ядре и цитоплазме. 2. Учитывая, что Док является универсальным субстратом АВС-транспортеров и моделирует «поведение» МОЯ-цитостатиков в целом, применение разработанного подхода в клинической практике повысит точность индивидуальной оценки фенотипа множественной лекарственной резистентности и прогноза чувствительности к химиотерапии у онкологических больных.

Исследования поддержаны Российским фондом фундаментальных исследований (грант № 04-04-49391).

Д. А. Бодягин1, Е. Б. Исакова1, В. М. Бухман1, М. С. Гинс2,

В. К. Гинс2, П. Ф. Кононков2

Противоопухолевая активность амарантина

1 ГУ НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г. Ф. Гаузе РАМН, Москва

2 Всероссийский НИИ селекции и семеноводства овощных культур, Московская область

Введение. В ВНИИССОК впервые созданы сорта амаранта овощного назначения, содержащие в листьях биологически активный алкалоид амарантин. В частности, амарантин проявляет протекторную функцию при окислительном стрессе. Он входит в состав ряда биологически активных добавок, приправ и чайных напитков.

Цель исследования. Изучение противоопухолевой активности амарантина.

Материал и методы. Противоопухолевую активность и общее влияние на организм амарантина изучали на модели роста перевиваемого лимфолейкоза Р388, привитого под кожу взрослым самцам мышей (С57Б1/61хВБЛ/2)р1, со средней массой тела 25 г. Раствор (7%) амарантина вводили по 0,5 мл через рот 1 раз в сутки ежедневно со 2-й по 6-й день (день прививки опухоли — 0). Кроме влияния самого амарантина изучали также комбинацию однократного (2-е сутки) низкодозового (50 мг/кг внутрибрюшинно) циклофосфамида (ЦФ) с последующим введением амарантина, как указано выше. Противоопухолевую активность оценивали по динамике роста опухоли, рассчитывая массу опухоли на основе определения взаимно перпендикулярных диаметров опухолевого узла. О влиянии на общее состояние организма судили по результатам периодических осмотров и определению массы тела подопытных животных.

Результаты. Показано, что перорально вводимый амарантин достоверно тормозит рост солидного варианта лимфолейкоза Р388. При комбинировании однократного низкодозового ЦФ с амаранти-ном наблюдается резкое увеличение противоопухолевого эффекта по сравнению с действием каждого препарата по отдельности. Токсического действия не наблюдалось.

Выводы. Полученные данные обосновывают дальнейшее изучение противоопухолевой активности амарантина.

И. С. Буренин, 3. В. Кузьмина, Н. И. Полянская Сравнительное изучение противоопухолевой активности соединений, полученных из мицелиальных грибов

ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. В последние годы в медицине для создания новых лекарственных препаратов все шире используются соединения, обладающие высокой антиоксидантной активностью. В этом отношении особый интерес вызывают каротиноиды грибов, которые благодаря наличию системы сопряженных двойных связей являются мощными антиоксидантами и находят применение для лечения онкологических, сердечно-сосудистых и ряда глазных заболеваний.

Исторически сложилось так, что первоначально как природный антиоксидант из каротиноидов использовали каротин. А в конце XX столетия начались исследования по использованию в медицине другого каротиноида — ликопина как средства, задерживающего развитие рака простаты, а также бесцветных полиенов (БП) — фитоина и фитофлуина (предшественников биосинтеза окрашенных полиенов-каротиноидов). Оказалось, что эти БП также сильные антиоксиданты. Так, фитоин задерживает развитие рака молочной железы.

Цель исследования. Сравнительное изучение противоопухолевой активности ликопина, фитоина и фитофлуина, полученных из мицелиальных грибов.

Материал и методы. Опыты проведены на мышах-самках линии С3Н с перевитой опухолью молочной железы и крысах линии ACI с перевитой аденокарциномой предстательной железы. Животные были разделены на группы по 15 особей в каждой. Опытные животные получали препараты в дозе 0,2, 1 и 2,5 мг/кг в суспензии масла per os путем принудительного кормления. 3 группы мышей получали фитоин, другие 3 группы мышей — фитофлуин, а еще 3 группы крыс — ликопин. Животные контрольных групп получали масло в тех же дозах.

Результаты. Наиболее значимые результаты были получены в группах, где животные получали ликопин в дозе 2,5 мг/кг массы тела. Процент торможения роста опухоли в этой группе составил 70 %. В группах, где животные получали фитоин и фитофлуин, большие дозы вызывали стимуляцию роста опухоли, тогда как доза в 0,2 мг/кг на 21-е сутки при введении фитоина вызывала торможение роста опухоли на 50 %, а фитофлуин не оказывал противоопухолевого действия.

Выводы. Полученные предварительные данные о противоопухолевом действии ликопина открывают новые возможности разработки приоритетных схем лечения гормонозависимых опухолей с использованием новых каротиноидов типа ликопина. Слабовыра-женный эффект фитоина и отсутствие его у фитофлуина в отличие от ликопина, несомненно, заставят вернуться к вопросам более глубокого изучения физиологии и биохимии образования этих кароти-ноидов у грибов, что расширит наши представления о биосинтезе каротиноидов и условиях их образования как сильнейших антиоксидантов.

В. М. Бухман1, E. М. Трещалина2, Л. М. Краснопольская1,

А. И. Усов3, В. П. Тихонов4, E. Б. Исакова1, Д. А. Бодягин1,

Л. А. Седакова2, А. В. Автономова1, И. В. Белицкий1, Н. Ю. Соболева1

Противоопухолевая активность препаратов, приготовленных из базидиальных грибов

1 ГУ НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г. Ф. Гаузе РАМН, Москва

2 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

3 Институт органической химии им. Н. Д. Зелинского, Москва

4 ОАО Завод экологической техники и экопитания «ДИОД», Москва

Введение. В народной медицине грибы и полученные из них продукты применяют тысячелетиями. Однако научное изучение продолжается несколько последних десятилетий. Хотя предстоит еще очень большая работа, уже получены экспериментальные и клинические доказательства эффективности применения этих продуктов в медицине и, в частности, в онкологии.

Цель исследования. Изучение противоопухолевой активности экстрактов и обогащенных полисахаридами фракций, полученных из ряда культивируемых базидиомицетов.

Материалы и методы. Противоопухолевую активность и общее влияние на организм изучаемых препаратов оценивали in vivo на моделях роста ряда перевиваемых опухолей мышей. В большинстве опытов препараты из грибов вводили через рот курсами различной продолжительности. В ряде экспериментов для облегчения проявления препаратами противоопухолевой активности использовали антисупрессорную обработку мышей путем однократного введения низкодозового (50-100 мг/кг внутрибрюшинно) циклофосфамида (ЦФ). О противоопухолевой активности судили по общепринятым в экспериментальной онкологии параметрам, о влиянии на организм — по результатам периодических осмотров, определению массы тела подопытных животных, результатам вскрытия.

Результаты. Выявлена противоопухолевая активность экстрактов и обогащенных полисахаридами фракций из таких культивируемых грибов, как Ganoderma lucidum, Hericium erinaceus, Lentinus edodes. Токсического действия не наблюдалось.

Выводы. Полученные данные обосновывают дальнейшее изучение противоопухолевой активности экстрактов и обогащенных полисахаридами фракций базидиомицетов.

П. М. Бычковский1, Т. Л. Юркштович1, С. А. Беляев1, Ф. Н. Капуцкий1, А. В. Ваккер2, И. В. Залуцкий2,

Э. А. Жаврид2

Применение полимерной формы цисплатина для локальной химиотерапии различных новообразований головы и шеи

1 НИИ физико-химических проблем Белгосуниверситета, Минск

2 НИИ онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова, Минск

Предупреждение развития рецидивов и продолжения роста опухоли после ее условно-радикального и нерадикального удаления — одна из наименее разработанных проблем онкологии. Особую актуальность этот вопрос приобретает при лечении больных с местнораспространенными и рецидивными опухолями головы и шеи, у которых в связи с анатомо-топографическими условиями локализации новообразования радикальное хирургическое лечение крайне затруднено, а порой и невозможно. Одним из перспективных способов профилактики рецидивов является локальное применение некоторых цитостатических лекарств, вносимых в ложе удаленной опухоли во время операционного вмешательства.

В лаборатории лекарственных средств на основе модифицированных полисахаридов НИИ ФХП БГУ (Минск, Беларусь) была получена полимерная форма противоопухолевого препарата цисплати-на (ЦП) на основе отечественного рассасывающегося полимера мо-нокарбоксилцеллюлозы (МКЦ), разрешенного в Республике Беларусь для имплантации в биологические ткани человеческого организма. Полимерная форма цисплатина (ПФЦП) представляет собой смесь цисплатина с МКЦ при соотношении компонентов (вес/%): цисплатин 3-5, МКЦ 95-97.

Исследованиями in vivo и in vitro установлено, что ПФЦП обладает цитостатическим эффектом, который по своей активности не уступает нативному ЦП и при этом не оказывает выраженного токсического действия.

Клинические испытания ПФЦП были проведены в НИИ онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова (Минск, Беларусь) на 45 больных с различными новообразованиями головы и шеи. В результате местного применения ПФЦП после первичных (17) и рецидивных (28) нерадикальных удалений различной локализации на голове и шее в настоящее время здоровы 23 (51 %) человека, арецидивы возникли у 22 (49 %) пациентов. Сравнение полученных результатов в исследуемой группе больных с результатами обычного комбинированного лечения (контрольная группа) больных раком решетчатого лабиринта, верхней челюсти и лиц с большими новообразованиями шеи свидетельствуют об эффективности местного применения пластинок ПФЦП. При использовании ПФЦП частота рецидивов уменьшилась в среднем на 25-40 % в зависимости от локализации опухоли.

П. М. Бычковский1, Т Л. Юркштович1, Ф. Н. Капуцкий1,

С. А. Беляев1, Е. А. Короткевич2, Э. А. Жаврид2,

С. В. Шелег2, А. Ф. Смеянович3

Получение новой лекарственной формы цисплатина и ее медико-биологические свойства

1 НИИ физико-химических проблем Белгосуниверситета, Минск

2 НИИ онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова, Минск

3 НИИ неврологии, нейрохирургии и физиотерапии МЗ РБ, Минск

Низкая эффективность современных комплексных схем лечения низкодифференцированных глиом головного мозга ставит вопрос

о разработке и использовании принципиально новых подходов в ее терапии и является одной из самых актуальных проблем нейрохирургии и онкологии.

В работе исследован процесс иммобилизации на биодеградируе-мом полимере — монокарбоксилцеллюлоза (МКЦ) цисплатина (ЦП) — одного из наиболее эффективных противоопухолевых препаратов для системной и внутриартериальной химиотерапии злокачественных новообразований.

Установлено, что процесс сорбции ЦП МКЦ из водных растворов описывается аналогом уравнения Лэнгмюра, определены константы сорбционного равновесия, предельной сорбционной емкости, коэффициенты межфазного равновесия, рассчитаны значения

свободной энергии сорбции. Методом ИК-спектроскопии показано отсутствие химического взаимодействия между ЦП и МКЦ.

В условиях in vitro и in vivo было показано, что полимерная форма ЦП (ПФЦП) не обладает выраженным нейротоксическим действием на интактную ткань головного мозга как в месте имплантации, так и на отдалении и полностью сохраняет цитостатические свойства исходного ЦП. Клинические испытания ПФЦП были проведены на 37 больных с низкодифференцированными глиомами головного мозга (рТ2МоОз 4 стадия опухоли), включающие в себя хирургическое удаление опухоли в пределах неизменной мозговой ткани с имплантацией на стенки послеоперационной раны ПФЦП с последующей лучевой терапией. Медиана выживаемости больных, которым была проведена локальная химиотерапия ПФЦП, составила 433 дня, что в 2 раза превышало этот показатель при стандартном комбинированном лечении (214 дней). При применении ПФЦП 7 больных пережило 1 год после операции, а в контрольной группе — только 2 больных.

Полученные данные доказывают возможность эффективного применения ПФЦП в лечении больных злокачественными новообразованиями головного мозга.

Л. Б. Горбачева1, А. Г. Тихомиров1, Л. Ю. Дедерер1,

Н. А. Иванова2, О. С. Ерофеева2, И. А. Ефименко2 Некоторые аспекты механизма действия комплекса палладия с циклическими аминами

1 Институт биохимической физики им. Н. М. Эмануэля РАН, Москва

2 Институт общей и неорганической химии им. Н. С. Курнакова РАН, Москва

В последнее время появляются единичные сообщения о цитотоксичности различных комплексов палладия, который, как известно, относится к металлам платиновой группы. В ИОНХ им. Н. С. Кур-накова РАН был синтезирован ацидокомплекс палладия II (Pd II), обладающий высокой противоопухолевой активностью в отношении широкого спектра экспериментальных опухолей [1]. В данной работе изучали некоторые аспекты механизма действия Pd II.

Межнитевые сшивки определяли флюориметрическим методом по Бренту. Взаимодействие Pd II с пуриновыми и пиримидиновыми основаниями изучали спектрофотометрически, используя Spekord M40. Внутриклеточное распределение в клетках опухолей Акатол, лейкозов Р388 и L1210 определяли методом дифференциального центрифугирования гомогенатов этих опухолей с последующим микроопределением палладия атомно-абсорбционным методом на спектрофотометре «Перкин Элмер», модель 2100 с электротермической атомизацией. Синтез ДНК в клетках опухолей исследовали по включению 2-С14-тимидина в ДНК.

Было показано, что Pd II in vitro не взаимодействует с фосфатами, но образует комплексы с пуриновыми и, в меньшей степени, с пиримидиновыми основаниями в составе ДНК, что приводит к появлению межнитевых сшивок. В присутствии Pd II наблюдается зависимое от дозы уменьшение доступности ДНК для актиноми-цина D, который интеркалирует в двойную спираль ДНК между соседними G-C-парами. Pd II преимущественно связывается с гуанином и аденином. Можно предположить, что Pd II, так же как и производные цис-платины, взаимодействует с К7-атомами этих оснований.

Было изучено внутриклеточное распределение палладия в опытах на мышах с опухолями Акатол и Р388. Установлено преимущественное накопление палладия во фракции цитозоля при внутривенном введении морфозола. Обнаружено глубокое и устойчивое торможение синтеза ДНК в клетках лейкоза L1210, менее выраженное в клетках Акатол.

Таким образом, морфозол подавляет синтез ДНК, взаимодействуя с пуриновыми и пиримидиновыми основаниями в составе ДНК. Поскольку морфозол отличается высокой реакционной способностью, вероятно, для этого препарата существуют и другие мишени, такие как ДНК-полимеразы и различные белковые факторы.

Литература

1. Трещалин И. Д. // Рос. биотер. журн. — 2002. — Т. 1, № 2. — С. 145-147.

-о-

Н. П. Ермакова, Л. М. Михайлова, А. И. Трифонов,

И. Ю. Малышев, Н. Ю. Кульбачевская Влияние терафтала и бинарной каталитической системы «терафтал + аскорбиновая кислота» на артериальное давление ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

Цель исследования. Изучение влияния терафтала (ТФ) и бинарной каталитической системы «терафтал + аскорбиновая кислота» («ТФ+AK») на артериальное давление (АД) животных.

Материал и методы. Исследовано 60 здоровых неинбредных крыс-самцов массой 200-250 г. ТФ вводили животным однократно внутривенно в дозе, равной МПД (максимально переносимой дозе) (30 мг/кг) и 1/i0 МПД (3 мг/кг). Бинарную каталитическую систему «ТФ+AK» вводили в дозе, равной МПД (20+44 мг/кг) и */10 МПД (2+4,4 мг/кг). Контрольным крысам вводили физиологический раствор натрия хлорида. АД измеряли непрямым бескровным методом на хвостовой артерии крыс с помощью установки Physiograph DMR-4F (Narco Bio-Systems, США) по методике Е. В. Манухиной, И. Ю. Малышева, В. Д. Микояна и соавт. (1996). Перед измерением давления животное помещалось на столик с подогревом Rat Holder Temperature Control Unit MK IV (Narco Bio-Systems, США). Через 15-20 мин на хвост прикрепляли датчик для измерения давления и манжетку. Далее следовала стандартная процедура измерения АД: до введения препарата и после (через 2 и 10 мин, 1, 3 и 24 ч).

Результаты. Введение животным ТФ в дозе 30 мг/кг приводило к резкому снижению АД со 115 до 90-80 мм рт. ст., которое не восстанавливалось в течение 24 ч. У 10 % крыс отмечали снижение АД ниже 80 мм рт. ст. (коллапс) и их гибель. При введении ТФ в дозе

3 мг/кг АД снижалось в среднем на 15 мм рт. ст. и восстанавливалось через 24 ч. При введении крысам одного ТФ в дозе 20 мг/кг наблюдали такое же снижение АД, что и при дозе 30 мг/кг. При введении АК через час после ТФ давление повышалось на 7 мм рт. ст., но через сутки не достигало исходного уровня. При введении крысам ТФ в дозе 2 мг/кг АД резко повышалось с 110 до 130 мм рт. ст. и сохранялось в течение часа после введения препарата. При введении АК через час после ТФ давление возвращалось к исходному значению. У контрольных животных после введения физиологического раствора натрия хлорида АД оставалось в пределах физиологической нормы для крыс (при непрямом бескровном методе измерения — 110-118 мм рт. ст.).

Выводы. ТФ и бинарная каталитическая система «ТФ+АК» оказывают дозозависимое действие на АД крыс, вызывая у них в МПД быстрое, выраженное и стойкое понижение АД, а в низких дозах (1/10 МПД) — менее выраженный гипотензивный эффект. ТФ в дозе ниже V10 МПД вызывает гипертензивное действие. АК частично восстанавливает АД животных после применения ТФ.

О. С. Жукова1, Н. А. Санина2, Л. В. Фетисова1, Г. К. Герасимова1

Цитотоксический эффект нитрозильных комплексов железа на опухолевые клетки человека in vitro

1 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

2 Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка

Открытие монооксида азота (NO) — эндогенного соединения, выполняющего функции посредника в межклеточных взаимодействиях и цитотоксического эффектора иммунологической защиты организма, стимулировало в последние годы интенсивные исследования по поиску соединений, генерирующих NO, с целью создания противоопухолевых препаратов нового поколения. Серонитрозиль-ные комплексы железа являются новым перспективным и неизученным классом неорганических NO-доноров. Эти соединения содержат одновременно 2 фрагмента (NO и RS) и, являясь структурными аналогами природных источников NO, могут рассматриваться в качестве нового класса соединений, обладающих противоопухолевым действием.

В настоящей работе изучен цитотоксический эффект ряда серо-нитрозильных комплексов железа на клетки карциномы яичника человека линии SCOV3. Соединение считали активным, если его концентрация, ингибирующая рост клеток на 50 %(ИКз0), выше 100 мкМ.

Кристаллические серонитрозильные комплексы железа [Fe2(SR)2(NO)4] синтезированы по методикам, впервые разработанным в ИПХФ РАН. Соединения, содержащие в качестве лигандов азагетероциклические тиолы — тиопроизводные имидазола, триазо-ла, тетразола, обладали высоким координационным потенциалом. Из всех 8 изученных комплексов активность проявили тетранитро-зильный сульфидный, фенольный и имидазольный комплексы железа (ИКз0=50 мкМ). Учитывая оригинальность структуры и механизма действия, активные нитрозильные комплексы железа рекомендуются для изучения на противоопухолевую активность in vivo.

Е. В. Игнатьева, А. П. Полозкова, О. Л. Орлова, М. А. Кортава, И. В. Ярцева, Л. Г. Гатинская, Н. А. Оборотова

Химико-фармацевтическая стандартизация лиофилизированной термозависимой липосомальной лекарственной формы доксорубицина

ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. В ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН разрабатывается новая лекарственная форма доксорубицина, которая представляет собой длительно циркулирующие термочувствительные липосомы, способные захватывать достаточное количество препарата и при нагревании до температуры 42±1 °С высвобождать его в окружающую среду.

Цель исследования — первичная химико-фармацевтическая стандартизация ТЛЛФД-лио.

Материал и методы. Для получения липосом использовали ди-пальмитоилфосфатидилхолин (DPPC) и дистеароилфосфатидилхо-лин (DSPC) фирмы Lipoid, взятые в соотношении 9:1. Для стериче-ской стабилизации липосом использовали PEG-2000-DSPE, в качестве криопротектора — 2% раствор лактозы. Свежеприготовленную липосомальную дисперсию доксорубицина помещали во флаконы вместимостью 10 мл и лиофилизировали.

Результаты. Стандартизация ТЛЛФД-лио проводилась по следующим основным критериям: описание, подлинность, средняя масса содержимого флакона, размер липосомальных везикул, рН, количественное определение доксорубицина. Подлинность препарата подтверждали электронным спектром поглощения, характерным для доксорубицина. Определяли средний диаметр везикул в проводящем лазерном луче с помощью фотонного корреляционного анализатора Submicron Particle Sizer Nicomp-380 (США), величину рН — потенциометрически. Содержание доксорубицина во флаконе (мг) определяли спектрофотометрически при длине волны 252±2 нм, используя рабочий стандартный образец. В качестве раствора сравнения использовали смесь липидов соответствующей концентрации. Основные показатели качества ТЛЛФД-лио приведены в табл. 1. На основании проведенных исследований разработан проект ФСП.

Таблица 1. Основные показатели качества ТЛЛФД-лио

Описание Подлинность Средняя масса содержимого флакона, м г pH Размер везикул, нм Содержание доксорубицина в 1 флаконе, мг

Лиофилизированная сухая пористая масса красновато-розового цвета ЭСП должен иметь максимумы при длине волны 232,252,288 и 498 нм 20-27 7,0-7,6 Не более 250 0,34-0,46

В. А. Каминский12, А. А. Фильченков3, М. П. Завелевич3,

Н. М. Храновская4, Р. С. Стойка12

Сравнительный анализ апоптозиндуцирующего действия алкалоидов чистотела на клетки лимфобластного лейкоза человека

1 Институт биологии клетки НАН Украины, Львов

2 Львовский национальный университет, Львов

3 Институт экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии НАН Украины, Киев

4 Институт онкологии АМН Украины, Киев

Препараты на основе производных алкалоидов чистотела используются в противоопухолевой химиотерапии. Путем модифика-

№1/том 5/2006

РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ

ции тиофосфамидом смеси алкалоидов чистотела на Украине получен оригинальный препарат амитозин. Вместе с тем противоопухолевая активность отдельных алкалоидов, входящих в состав этого препарата, исследована недостаточно. Нами изучено действие индивидуальных алкалоидов чистотела (сангвинарина, хелеритрина, коптизина и хелидонина) на индукцию апоптоза в перевиваемых клетках линии МТ-4 острого лимфобластного лейкоза человека в сопоставлении с их ДНК-интеркалирующей способностью. Уровень апоптоза и распределение клеток по фазам клеточного цикла определяли с помощью проточной цитофлюориметрии. Интеркалирую-щую способность алкалоидов оценивали по их влиянию на термоденатурацию ДНК опухолевых клеток. Двунитевые разрывы ДНК анализировали с помощью метода ДНК-комет, а образование олигонуклеосомных фрагментов — электрофорезом фрагментированной ДНК апоптотических клеток в геле агарозы.

Среди исследованных алкалоидов наиболее токсичным для клеток МТ-4 оказался сангвинарин, тогда как хелидонин и хелеритрин обладали умеренным цитотоксичным действием, а коптизин — слабым. Вместе с тем наиболее мощным индуктором апоптоза, судя по содержанию гиподиплоидных клеток и образованию олигонуклеосомных фрагментов ДНК, был хелидонин, который является единственным из

4 исследованных алкалоидов, непосредственно не взаимодействующих с ДНК. Из исследуемых алкалоидов только хелидонин вызывал дозозависимый блок клеток в фазе G2/M. Максимальное формирование ДНК-комет наблюдалось через 6 ч после внесения сангвинарина или хелеритрина, обладающих наиболее выраженной ДНК-интерка-лирующей способностью. В присутствии хелидонина ДНК-кометы клеток МТ-4 обнаруживались через 24 ч.

Таким образом, по характеру индукции апоптоза и специфическому эффекту в фазе G2/M именно действие хелидонина ближе всего к действию амитозина, причем эффект данного алкалоида не связан с его интеркаляцией в структуру ДНК.

С. М. Киселев1, Н. М. Перетолчина1, А. В. Аклеев2,

А. М. Козлов1

Противоопухолевая и антиметастатическая активность рулида в режиме монотерапии и в сочетании цисплатином

1 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

2 ФГУ Уральский научно-практический центр радиационной медицины, Челябинск

Введение. Препараты, обладающие антибактериальной активностью, часто применяются в онкологической практике для лечения вторичных инфекционных заболеваний, сопутствующих развитию онкопатологии. Одним из наиболее известных препаратов является рулид (рокситромицин) — антибиотик ряда макролидов. В настоящее время получены новые экспериментальные данные, показывающие, что ру-лид наряду с антибактериальной активностью проявляет активность в отношении некоторых биологических процессов, задействованных в механизме развития опухоли и ее метастазирования.

Цель исследования. Изучение противоопухолевой и антимета-статической активности рулида в отношении карциномы легкого Льюис в режиме монотерапии и в сочетании с цисплатином.

Материал и методы. Исследование выполнено на мышах BDF¡ с подкожно трансплантированной карциномой легкого Льюис. Рулид в режиме монотерапии вводили перорально 2 раза в сутки в дозе 25 мг/кг в течение 10 дней, начиная со 2-х суток после трансплантации опухоли. При комбинированном лечении рулид применяли по вышеуказанной схеме, цисплатин вводили внутрибрюшинно однократно в дозе 5 мг/кг на 2-е сутки (схема 1) или на 7-е сутки (схема 2) после перевивки опухоли. Противоопухолевый эффект оценивали по торможению роста опухоли (ТРО, %), антиметастатический эффект — по массе легких, пораженной метастазами, при забое животных контрольных и терапевтических групп в конце опыта (на 28-е сутки).

Результаты. Рулид в режиме монотерапии проявлял пролонгированный противоопухолевый эффект (ТРО после окончания лечения составило 56 %, на момент забоя — 30 %). Выявлено антимета-статическое действие препарата, торможение роста метастазов (ТРМ) составило 51 %. Экспериментальные данные, полученные in vivo, коррелируют с результатами, ранее полученными нами in vitro при изучении антиинвазивной активности препарата в отношении

клеток исследуемой опухоли. При комбинированном применении рулида и цисплатина отмечено потенцирование противоопухолевого эффекта. Так, ТРО у животных, получавших комбинированное лечение по схеме 1, на момент окончания курса терапии составило 78 %, тогда как ТРО у группы животных, получавших только цисплатин,

— 48 % (по объему опухоли). ТРО у животных на момент забоя в указанных группах составляло 34 и 5 % соответственно. При этом средняя масса легких с метастазами в группе комбинированного лечения была на 50 % меньше аналогичного показателя в группе с ци-сплатином. В режиме отсроченного введения цисплатина (схема 2) при комбинированной терапии с антибиотиком также показано увеличение противоопухолевой активности. ТРО у животных, получавших комбинированное лечение по схеме 2, на момент окончания курса терапии составило 57 %, тогда как в группе животных, получавших только цисплатин, эффект отсутствовал. ТРО у животных на момент забоя составляло 26 и +5 % соответственно. Эффект по ТРМ в указанной схеме также прослеживается и составляет 29 %.

Выводы. Выявлена противоопухолевая и антиметастатическая активность рулида в отношении карциномы легкого Льюис в режиме монотерапии и в сочетании с цисплатином. Полученные экспериментальные данные характеризуют рулид как перспективный компонент комплексной терапии злокачественных новообразований.

Н. П. Коновалова, В. Д. Сень, Т. Е. Сашенкова Синергизм противоопухолевого действия цисплатина и комплексов платины (IV) с аминонитроксильными радикалами

Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка

Введение. Ранее нами было показано, что введение нитроксиль-ных радикалов в структуру противоопухолевых цитостатиков приводит к значительному изменению их фармакологических свойств: меняется общая токсичность, снижается степень серьезных побочных эффектов, повышается противоопухолевая активность.

Цель исследования. Синтез и изучение противоопухолевой активности комплексов платины (IV) с аминонитроксильными радикалами. Учитывая, что в современной химиотерапии опухолей используются комбинации препаратов различной структуры и механизма действия, в работе был исследован эффект комбинированного применения цисплатина и его нитроксильных производных.

Материал и методы. Эксперименты проводили на лейкемии P388, перевиваемой по стандартной методике. В опытах использовали низкую, неэффективную дозу цисплатина, составляющую 1/ю ЛД50. Нитроксильные производные также вводили в низких, неэффективных дозах.

Результаты. Были синтезированы и исследованы три аминонит-роксильных комплекса платины различной структуры. При их комбинации с цисплатином отмечен значительный синергетический эффект. При индивидуальном введении цисплатина и платинонитроксильных комплексов в низких дозах излечения животных не наблюдалось.

При комбинированном применении выживали от 70 до 100 % животных. По-видимому, степень синергизма зависела от структуры нитроксильного фрагмента.

Аналогичные эксперименты были проведены с комбинацией карбоплатина и одного из платинонитроксильных комплексов. В этих случаях наблюдали значительное увеличение средней продолжительности жизни животных. Так, при введении одного кар-боплатина этот индекс составлял 20 %, а в сочетании с аминонит-роксильным комплексом — 350 %.

Выводы. Полученные экспериментальные данные указывают на значительный синергизм действия препаратов платиновой группы и платинонитроксильных комплексов. Учитывая, что препараты платиновой группы проявляют многочисленные побочные эффекты, возможность резко снизить дозы цисплатина и карбоплатина при сохранении противоопухолевого эффекта представляется весьма перспективной в практическом плане.

О. И. Коняева, Л. М. Михайлова, И. Б. Меркулова, Н. П. Ермакова, Е. Л. Членова, Н. Ю. Кульбачевская, Т. В. Абрамова

Влияние терафтала на токсичность доксорубицина

ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

-о-

Цель исследования. Изучение влияния терафтала (ТФ) на токсичность доксорубицина (Бох). Задачей исследования стало изучение возможных защитных (протекторных) свойств ТФ в терапии Бох-индуцированной кардиомиопатии и влияния ТФ на общетоксическое действие Бох.

Материал и методы. Исследования проведены на 60 здоровых неинбредных крысах-самцах массой 200-250 г. Для изучения потенциальных кардиопротекторных свойств ТФ моделировали Бох-ин-дуцированную кардиотоксичность: 3-кратное введение Бох крысам с интервалом 72 ч (1 раз в 3 дня). Указанный режим введения Бох экспериментально моделирует кардиотоксичность препарата (Р. У111ап1 е! а1., 1986; 8. Е. Ое1рег1па е! а1., 2002). Бох вводили внутривенно в разовой дозе 2,5 мг/кг (суммарная доза 7,5 мг/кг, равная МПД). ТФ применяли за 30 мин до Бох 3-кратно внутривенно в разовой дозе 0,8 и 2,5 мг/кг (суммарные дозы 2,5 и 7,5 мг/кг, равные 1/10 и 1/3 МПД соответственно). Параллельно 2 группам животных вводили только ТФ или Бох в той же дозе, что и при совместном применении.

Результаты. ТФ не оказывает влияния на количественную токсичность Бох, не защищает органы и ткани (сердце, печень, почки, периферическая кровь) животных от токсических повреждений, вызванных Бох, вызывая сходные с действием одного Бох морфофункциональные проявления токсичности. Однако ТФ усиливает гематологическую токсичность Бох, увеличивая в 1,5 раза лейкопению, уменьшая в 1,3-2,5 раза количество эритроцитов, тромбоцитов и уровень гемоглобина по сравнению с введением одного Бох. ТФ не оказывает существенного влияния на кардиотоксическое действие Бох. У животных, получавших Бох на фоне ТФ, так же как и при применении только Бох, наблюдали увеличение интервалов QT и 8Т на 27-26 и 33-36 % соответственно и систолического показателя на 38-34 % по сравнению с фоновыми и контрольными показателями. Изменения ЭКГ крыс сопровождаются умеренными очаговыми и дистрофическими изменениями мышечных волокон миокарда, которые сочетаются с немногочисленными микроочагами лимфомакрофагальной инфильтрации в интерстициальной ткани сердца животных.

Выводы. Установлено, что ТФ влияет на общетоксические свойства Бох и не обладает кардиопротекторными свойствами, т. е. не нормализует функции сердца при его поражении Бох и не ускоряет восстановления морфофункциональных изменений в сердечной мышце при Бох-индуцированной кардиомиопатии у животных.

Исследование поддержано Правительством Москвы.

А. В. Ланцова, Н. А. Оборотова, Н. М. Перетолчина,

А. П. Полозкова, 3. С. Шпрах, А. Ю. Барышников Биофармацевтическая стандартизация стерически стабилизованной липосомальной лекарственной формы БХНМ

ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. БХНМ — 1,3-бис(2-хлорэтил)-1-нитрозомочевина, воспроизведенная субстанция кармустина (ШСКИ), синтезирована в лаборатории антиметаболитов Института органического синтеза Уральского отделения РАН. Лекарственная форма препарата в виде лиофилизата для приготовления раствора для инъекций по 0,02 г разработана в РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН.

Цель и задачи. Цель исследования — разработать оптимальный состав стерически стабилизованной липосомальной лекарственной формы БХНМ для повышения биодоступности препарата и его избирательного накопления в опухолях. Основная задача — определение биофармацевтических характеристик липосом БХНМ.

Материал и методы. Для создания препарата в липосомах с пролонгированным временем циркуляции в кровяном русле в состав липидной оболочки включили РЕС-5000 Б8РЕ. Малые однослойные пэгилированные липосомы БХНМ получали гидратацией липидной пленки, образующейся после упаривания в вакууме спиртовых растворов липидов, с последующей экструзией липосомаль-ной дисперсии через поликарбонатные мембраны. Количественное определение содержания препарата в липосомах проводили методом прямой УФ-спектрофотометрии. Продукт перекисного окисления липидов — малоновый диальдегид (МДА) определяли пробой с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) на липосомах БХНМ, в липид-

ную оболочку которых включен антиоксидант а-токоферол. Определение противоопухолевой активности новой липосомальной лекарственной формы БХНМ проводили на экспериментальной модели опухоли мышей — лейкозе Ь1210.

Результаты. Получены стерически стабилизованные липосомы БХНМ, размер которых составил 240±23 нм, количество МДА — 4,71±0,21 нмоль/мл. БХНМ в липосомальной форме при однократном внутрибрюшинном введении в дозе 40 и 45 мг/кг проявила максимальный терапевтический эффект, при этом излечение животных составило 100 %. БХНМ в дозе 50 мг/кг вызывала гибель 100 % мышей от токсичности. При сравнительном исследовании со стандартной лиофилизированной лекарственной формой БХНМ в диапазоне доз от 30 до 50 мг/кг излечения животных не наблюдали, отмечали лишь увеличение продолжительности их жизни от 74 до 117 %.

Выводы. 1. Получена новая лекарственная форма БХНМ в виде стерически стабилизованных липосом со средним диаметром 240±23 нм, количеством МДА 4,71±0,21 нмоль/мл. 2. БХНМ в липо-сомальной лекарственной форме проявила высокий противоопухолевый эффект, при однократном внутрибрюшинном введении в дозе 40 и 45 мг/кг достигнуто 100%-е излечение животных.

Н. А. Лесная1, Е. М. Трещалина1, А. А. Кладиев2,

В. И. Романенко1

Проспидин в комбинации с аранозой и цисплатином

1 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

2 Биотехнологическая компания ТНК, Москва

Введение. В предварительных исследованиях нами было показано, что применение комбинации проспидин + араноза или араноза + цисплатин значительно эффективнее, чем использование препаратов в монорежиме. Эффективность комбинации араноза + циспла-тин подтверждена при лечении больных меланомой. Сочетание трех препаратов представляется перспективным в плане улучшения результатов химиотерапевтического лечения.

Цель исследования. Изучение эффективности и переносимости комбинации проспидин + цисплатин + араноза на мышах с перевиваемой меланомой.

Материал и методы. Работа выполнена на 50 мышах-самках ББр! с относительно устойчивой к химиотерапии развившейся внутримышечно меланомой В16 объемом около 0,4 см3. Препараты вводили внутрибрюшинно 3-кратно ежедневно в МПД и 3/4 МПД. В комбинации препараты вводили одновременно последовательно в тех же дозах и режиме. Интервал между комбинантами 7-10 мин. Группа контроля — мыши без специфического воздействия. В каждой группе по 7 мышей. Терапевтический эффект оценивали по ТРО (%) и УПЖ (%). О переносимости судили по гибели и состоянию внутренних органов мышей при аутопсии. Данные подвергали статистической обработке по стандартному методу Стью-дента в модификации Р. Б. Стрелкова.

Результаты. Показано, что араноза и цисплатин в МПД не действовали на рост развившейся внутримышечно меланомы В16, ТРО 29 % (р>0,05). После лечения цисплатином или аранозой продолжительность жизни мышей практически не изменялась, УПЖ 22 % (р>0,05). Проспидин в МПД достоверно ингибировал рост опухоли на 35-47 % (р<0,05). Эффект регистрировался в течение 3-й недели после отмены препарата, что является отличительной чертой про-спидина. После лечения проспидином продолжительность жизни мышей достоверно возросла, УПЖ — 47 % (р<0,05). В группе проспидин + цисплатин + араноза независимо от примененной дозы препаратов получено ингибирование роста опухоли на 65-75 % (суммарный эффект). Этот эффект регистрировали с 3-х по 25-е сутки после окончания лечения, т. е. в течение 3 нед., и он был достоверно выше, чем в группе проспидина (р<0,05). При тройной комбинации также независимо от примененной дозы препаратов получено существенное УПЖ — 71-82 %, которое было достоверно выше, чем в группе проспидина (р<0,05). Переносимость комбинированного лечения была удовлетворительной.

Выводы. Полученные результаты свидетельствуют о том, что комбинация проспидин + цисплатин + араноза при одновременном применении 3-дневным курсом по терапевтическому действию высокоэффективна и хорошо переносима даже при применении макси-

мальных доз препаратов. Комбинация перспективна для клинической апробации, в т. ч. при диссеминированной меланоме.

К. А. Лопатина, Т. Г. Разина, Н. В. Шилова, А. М. Гурьев Растительные полисахариды в экспериментальной онкологии

ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН, Томск

Имеются данные литературы о разнонаправленности фармакологического действия полисахаридов природного происхождения на развитие опухолевого процесса. В связи с этим цель нашей работы — оценить влияние различных полисахаридных фракций аира болотного и ольхи клейкой на развитие карциномы легких Льюис (ЬЬС) у мышей.

Эксперименты проводились на мышах-самках линии С57Б1/6. Полисахаридный комплекс (ПСК) корневищ аира болотного, его фракции (водорастворимые полисахариды — ВРПС), пектиновые вещества (ПВ), гемицеллюлозы (ГЦ)), а также ВРПС и ПВ из различных частей ольхи клейкой вводили мышам в дозе 10 мг/кг внут-рибрюшинно и 100, 200 мг/кг перорально ежедневно в течение 12 дней, контрольные животные получали соответствующие растворители. Эффективность лечения оценивали по изменению массы основного опухолевого узла, частоте возникновения метастазов в легких, их количеству и площади.

ПСК корневищ аира болотного, его отдельная фракция гемицеллюлоз и водорастворимые полисахариды листьев ольхи клейкой были неактивны в отношении карциномы легких Льюис у мышей с ЬЬС. При внутрибрюшинном назначении ВРПС корневищ аира болотного и пероральном применении ВРПС коры ольхи клейкой масса опухоли у животных уменьшалась по сравнению с группой контроля. Увеличение дозы ВРПС зрелых соплодий ольхи приводило к усилению противоопухолевого действия, что выражалось в снижении массы основного опухолевого узла и показателей, характеризующих процесс диссеминации ЬЬС. Лечение мышей ПВ листьев и зрелых соплодий ольхи клейкой приводило к уменьшению количества метастазов и площади метастатического поражения легочной ткани. При назначении экспериментальным животным ПСК шрота и ВРПС корневищ аира болотного увеличивалась площадь метастазов в легких мышей с ЬЬС, а при использовании ПВ этого растения наблюдалось увеличение их количества относительно значений у нелеченных животных. Введение мышам с ЬЬС ВРПС зрелых соплодий ольхи и ПВ корневищ аира приводило к значительной стимуляции процессов метастазирования опухоли по сравнению с контролем.

Полисахариды из растительного сырья в зависимости от химического состава, дозы и пути введения, части растения, из которой они извлечены, способа выделения могут разнонаправленно влиять на развитие ЬЬС, ингибируя или стимулируя рост опухоли. Перспективным для дальнейшего углубленного исследования с целью использования в клинической практике представляется изучение ВРПС коры ольхи клейкой и корневищ аира болотного с применением современных методик.

И. Б. Меркулова, И. С. Голубева, Н. П. Яворская, Т. В. Абрамова

Гистологическая оценка влияния амиронина и его производных на щитовидную железу крыс

ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Препарат амиронин синтезирован в РОНЦ РАМН и Санкт-Петербургском ТУ и представляет собой хлорэтиламинное производное тиронина — основного компонента гормонов щитовидной железы тироксина и трийодтиронина. Амиронин показал высокую противоопухолевую активность на перевиваемых опухолях. Учитывая структуру амиронина и его производных — основания амиронина и этилового эфира амиронина, предполагается их тропность к щитовидной железе и опухолям щитовидной железы.

Цель исследования. Сравнительное гистологическое исследование щитовидной железы крыс при пероральном применении ами-ронина и его производных.

Материал и методы. Проведено сравнительное гистологическое исследование щитовидной железы 30 неинбредных крыс-самок на 1-е и 5-е сутки после 5-кратного ежедневного перорального применения субстанций препаратов в виде водной суспензии на основе 1%

крахмала, а также щитовидной железы 10 контрольных крыс после перорального применения водной суспензии на основе 1% крахмала. Амиронин вводили в разовой дозе 180 мг/кг, основание амиронина — в разовой дозе 200 мг/кг, этиловый эфир амиронина — в разовой дозе 100 мг/кг в эквивалентных терапевтических дозах.

Результаты. Через 1 сут после прекращения перорального применения амиронина и основания амиронина в щитовидной железе крыс отмечали отек стромы, увеличение числа крупных тиреоид-ных фолликулов, содержащих коллоид, уплощение фолликулярного эпителия (снижение функциональной активности). У части крыс в щитовидной железе, кроме того, отмечены дистрофические изменения тироцитов и деструкция фолликулов. После применения этилового эфира амиронина деструктивные изменения в щитовидной железе крыс были более выраженными — вплоть до полной десквамации тиреоидного эпителия в большей части фолликулов. Через 5 сут после прекращения перорального введения амиронина и основания амиронина в щитовидной железе крыс наряду с остаточными деструктивными изменениями отмечались признаки регенерации и активации структурных элементов; после применения этилового эфира амиронина признаки восстановления были незначительными.

Выводы. Амиронин и основание амиронина при 5-кратном пе-роральном применении в эквивалентных терапевтических дозах оказывают умеренное, быстро обратимое повреждающее действие на щитовидную железу крыс. Этиловый эфир амиронина имеет более выраженный и стойкий повреждающий эффект.

М. В. Нехорошев1, В. А. Гринцов2, Г. Н. Апрышко2 Перспективы создания противоопухолевых препаратов из оболочников, культивируемых в Черном море

1 Институт биологии южных морей НАН Украины, Севастополь

2 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

В Институте биологии южных морей Национальной академии наук Украины, г. Севастополь, отработана методика успешного культивирования черноморского вида оболочников Botryllus schlosseri на коллекторах в Крыму. С1га марихозяйства (1000 коллекторов) можно собрать годовой урожай сырого веса оболочников Botryllus schlosseri, равный 5 тоннам. В лаборатории марикультуры и прикладной океанологии ведутся работы по выделению из культивируемого Botryllus schlosseri биологически активных препаратов. В частности, определены содержание и фракционный состав каротинои-дов. В 100 г сырого веса Botryllus schlosseri содержится 12,0±2,0 мг каротиноидов, что значительно выше, чем в традиционном морском сырье для их выделения — бурых водорослях. Основными пигментами являются аллоксантин, фукоксантин и фукоксантинол. Для 2 последних, по данным литературы, показана высокая антипролифе-ративная активность по отношению к клеткам рака предстательной железы человека PC-3 и способность индуцировать апоптоз, активируя каспазу-3.

На сегодняшний день оболочники являются наиболее перспективными организмами для получения противоопухолевых препаратов морского происхождения. Так, из оболочника Eсteinascidia turbinata выделен обладающий цитостатическим и проапоптотичес-ким действием избирательно ингибирующий транскрипцию ДНК алкалоид Ecteinascidin-743 (ET-743, Trabectedin, Yondelis), для которого по результатам II фазы клинических испытаний показана активность при резистентных к химиотерапии саркоме мягких тканей и раке яичника. В настоящее время находится в III фазе клинических испытаний. Для получения необходимого количества препарата Eсteinascidia turbinata специально культивируют у берегов Испании. Перспективный циклический пептид Aplidine, выделенный из средиземноморского оболочника Aplidium albicans, являющийся мощным индуктором апоптоза и обладающий антиангиогенными свойствами, проходит II фазу клинических испытаний.

В лаборатории также начаты работы по выделению из культивируемого в Черном море Botryllus schlosseri препаратов Ecteinascidin-743 и Aplidine или близких им аналогов.

Институт биологии южных морей заинтересован в сотрудничестве с учреждениями, проводящими биологические испытания и разработку противоопухолевых лекарств.

-Q-

Ю. Л. Осип1, Р. С. Стойка2, М. Д. Луцик2

Сравнительный анализ интеркалирующих свойств индивидуальных алкалоидов чистотела

1 Волынский государственный университет им. Леси Украинки, Луцк

2 Институт биологии клетки НАН Украины, Львов

Проведен сравнительный анализ интеркалирующих свойств 5 индивидуальных алкалоидов чистотела — хелидонина (X), сангви-нарина (С), хелеритрина (XE), коптизина (К) и берберина (Б). В качестве эталона сравнения применяли известный интеркалятор акти-номицин D. В анализах использовали препарат ДНК из семенников лосося («Сигма», США). Связывание лигандов с ДНК определяли с помощью трех методов: 1) уменьшение величины светопоглоще-ния алкалоида (для сангвинарина и хелеритрина при 325 нм, для коптизина при 345 нм, для берберина при 340 нм) при связывании алкалоида с ДНК вследствие сдвига максимума поглощения; 2) изменение температуры плавления ДНК в присутствии алкалоида, определяемого по кривым термоденатурации; 3) конкурентное вытеснение метилового зеленого из его комплекса с ДНК интеркалиру-ющим лигандом. С целью количественной оценки интеркалирую-щих свойств лиганда изучали его взаимодействие с ДНК при различных концентрациях лиганда и из полученных кривых определяли концентрацию полумаксимального эффекта.

Установлено, что исследованные алкалоиды чистотела, за исключением X, проявляют свойства интеркаляторов. Они повышали температуру плавления ДНК, наиболее значительное повышение наблюдалось в присутствии XE и С (на 16-17 С при концентрации алкалоида 10 мкг/мл). Полумаксимальный эффект повышения температуры плавления ДНК достигался при следующих концентрациях алкалоидов (мкг/мл): С — 4,4, XE — 4,6, К — 5,4, Б — 5,7, акти-номицин D — 5,7. Результаты теста на вытеснение метилового зеленого из ДНК комплекса дали аналогичный результат. Концентрации алкалоидов, обеспечивающие полумаксимальный эффект в данном тесте, составляли: С — 9, XE — 15,5, К — 34, Б — 41,5, актиноми-цин D — 42 мкг/мл. Количественно результаты отличались от таковых, полученных по температуре плавления, однако порядок размещения алкалоидов по ослаблению интеркалирующих свойств был идентичным. По эффективности интеркалирования актиномицин D соответствовал Б. Независимыми исследованиями установлено, что между цитотоксичностью и антипролиферативной активностью алкалоидов чистотела и их интеркалирующими свойствами существует тесная корреляция.

Ю. И. Патютко1, Э. И. Гальперин3, И. В. Сагайдак1, Г. К. Герасимова1, Г. Н. Ворожцов2, Т. Г. Дюжева3, А. Н. Поляков1

Результаты I фазы клинических испытаний по применению каталитичекой системы «терафтал + аскорбиновая кислота» при селективноокклюзионном введении в сосуды печени для лечения больных со злокачественными опухолями печени

1 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

2 ФГУП ГНЦ НИОПИК, Москва

3 Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова

Бинарная каталитическая система «терафтал + аскорбиновая кислота» («ТФ+АК») — новое средство, предназначенное для химиотерапии злокачественных новообразований, проходит клинические испытания при селективно-окклюзионном введении в печеночную артерию для лечения больных с метастатическими опухолями печени.

В I фазу исследования применения каталитической системы селективно-окклюзионным методом включено 10 больных. Из них у 8 выявлены метастазы колоректального рака, по 1 больному метастазы в печени рака желудка и рака предстательной железы. Все больные ранее получали без положительного эффекта многократные курсы химио- или гормонотерапии (больной раком простаты с метастазами в печени).

Селективно-окклюзионное введение каталитической системы «ТФ+АК» осуществлялось по следующей методике: под комбинированным наркозом выполнялась лапаротомия, производилась мо-

билизация печени. Во время полной сосудистой изоляции печени путем наложения турникета на печеночно-двенадцатиперстную связку и печеночные вены (или нижнюю полую вену выше и ниже впадения печеночных вен) производилась катетеризация собственно печеночной артерии, введение и 5-минутная экспозиция 0,05% раствора ТФ. Сразу после снятия турникетов вводился 0,1% раствор АК через ранее установленный катетер в печеночной артерии.

4 пациентам выполнено циторедуктивное хирургическое удаление метастазов на стороне большего поражения с воздействием на остающиеся определяемые очаги каталитической терапией. 1 пациенту по поводу метастазов рака толстой кишки выполнены паллиативная правосторонняя гемигепатэктомия, удаление имплантационного метастаза по париетальной брюшине, еще 1 пациенту по поводу метастазов рака толстой кишки — паллиативная бисегментэктомия 2-3-го сегмента печени, 1 пациентке также по поводу метастазов рака толстой китттки — паллиативная резекция 5-го сегмента печени. Кроме того,

1 пациентке с метастазами рака желудка выполнены резекция печени в объеме бисегментэктомии 11-111, а также лимфодиссекция печеночно-двенадцатиперстной связки, удаление имплантационного метастаза из послеоперационной раны.

Основной технической проблемой являлось выделение печеночных вен и надпеченочного отдела нижней полой вены, особенно при расположении массивных опухолевых узлов в верхнецентральных отделах печени (VIII, ^А сегменты). У 1 пациентки вмешательство на печени было повторным, что затруднило мобилизацию печени из-за массивного спаечного процесса. Еще у 1 пациентки выраженный рубцово-спаечный процесс в брюшной полости также объяснялся произведенным ранее оперативным вмешательством в объеме дистальной субтотальной резекции желудка.

Задачами I фазы являются отработка доз и режимов введения препаратов, оценка переносимости, определение максимально переносимой дозы и дозолимитирующей токсичности. В процессе лечения проведена эскалация доз компонентов каталитической системы по модифицированному методу Фибоначчи до 450 % стартовой дозы.

2 больным введено 0,9 мг/м2 ТФ и 1,98 мг/м2 АК. С учетом отсутствия серьезных токсических проявлений (у 1 больного отмечена гепатоспленомегалия, усиление активности печеночных ферментов без клинических признаков, что было расценено как проявление токсического гепатита), было решено увеличить дозу вводимых препаратов.

3 больным введенная доза ТФ составила 1,32 мг/м2, аскорбиновой кислоты — 2,96 мг/м2. У 1 больного отмечено осложнение в виде абсцесса в области резекции печени, который был дренирован (больному была выполнена паллиативная правосторонняя гемиге-патэктомия).

Еще 2 больным доза ТФ была увеличена до 1,49 мг/м2, АК — до 3,33 мг/м2. У 1 пациентки в послеоперационном периоде отмечены признаки холангита, гипербилирубинемия, которые были купированы консервативно. У другой пациентки после введения каталитической системы отмечены стойкая артериальная гипотензия, кожная сыпь, что было расценено как анафилактический шок. В связи с этим следующим пациентам доза препаратов была снижена: 2 пациента получили ТФ в дозе 1,32 мг/м2, АК — 2,96 мг/м2. Еще 1 пациентка получила каталитическую терапию с использованием ТФ (0,9 мг/м2) и АК (1,98 мг/м2). Токсических и побочных эффектов, так же как и осложнений после операции, у этих пациентов не отмечено. У всех пациентов наблюдалась временная артериальная гипотензия в момент пережатия нижней полой вены и введения ТФ, что не расценивалось как осложнение. Побочными эффектами, лимитирующим дальнейшую эскалацию дозы ТФ, явились развитие холанги-та в одном случае и стойкая артериальная гипотензия — в другом.

Выявлен противоопухолевый эффект каталитической терапии в виде длительных стабилизаций процесса. В настоящее время в группе больных колоректальным раком живы и продолжают наблюдаться 4 больных. Продолжительность жизни этих больных составляет 17 мес. без прогрессирования (доза ТФ 0,9 мг/м2); 10 мес., из них 7 мес. без прогрессирования (доза ТФ 1,32 мг/м2); 9 мес., из них 6 мес. без прогрессирования (доза ТФ 1,32 мг/м2) и 5 мес., из них 2 мес. без прогрессирования (доза ТФ 1,49 мг/м2). Судьба 1 пациентки неизвестна (доза ТФ 0,9 мг/ м2). Умерло 3 больных в сроки 8 мес. (доза ТФ 0,9 мг/м2), 4 мес. (доза ТФ 1,32 мг/м2) и 3 мес.

(доза ТФ 1,32 мг/м2) после проведения каталитической терапии. Больная раком желудка прожила 3 мес. (доза ТФ 1,49 мг/м2) после проведения каталитической терапии. Больной раком простаты с метастазами в печени жив 4 мес. без прогрессирования (доза ТФ 1,32 мг/м2). Зависимости продолжительности эффекта в виде стабилизации от дозы препаратов выявлено не было.

На основании полученных результатов для II фазы клинических испытаний селективно-окклюзионного метода применения каталитической системы «ТФ+АК» рекомендована доза ТФ 1,32 мг/м2 и АК 2,96 мг/м2.

Т. А. Раевская, С. А. Гончарова, Н. П. Коновалова Перспективы использования доноров оксида азота для повышения чувствительности лекарственно-устойчивых опухолей

Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка

Цель исследования. Изучить влияние доноров оксида азота из класса органических нитратов на чувствительность лекарственно-резистентных опухолей к противоопухолевым цитостатикам в эксперименте in vivo.

Материал и методы. Исследование проводилось на животных с лекарственно-устойчивыми штаммами лейкемии Р388, обладающими фенотипом и генотипом МЛУ. Использовались доноры оксида азота 3,3-бис(нитроксиметил)оксетан (NMO), нитроксиэтиламид никотиновой кислоты (никорандил), 3-нитроксиметил,3-гидрокси-метил-оксетан (К-27). Критериями оценки эффекта служили показатель увеличения продолжительности жизни животных по сравнению с контролем (ILS) и количество выживших животных.

Результаты. Эффект увеличения чувствительности МЛУ-опухо-лей Р388/руб и Р388/вкр был получен при применении циклофосфа-на (ЦФ) и цисплатина (cPt) в низких дозах (V2, V3, V4, и V8 терапевтической дозы) в комбинации с NMO. Наблюдалось значительное увеличение ILS животных (в 1,5—5,3 раза) и появление в группах излеченных животных. Использование, например, сPt в низкой дозе 1 мг/кг увеличивает ILS животных на 91 %, комбинация NMO с той же дозой сР увеличивает ILS до 248 %, и 33 % животных при этом выживают. Увеличение в комбинации дозы NMO с 1 до 9,5 мг/кг приводит к повышению эффекта, сам препарат NMO в использованных дозах не обладает антилейкемической активностью.

Применение cPt в уменьшенных в 2^ раза по сравнению с терапевтической дозой в сочетании с никорандилом давало эффект, сравнимый с таковым терапевтической дозы cPt. Например, 1 мг/кг cPt (1/4 терапевтической дозы) увеличивает ILS животных с МЛУ-опухолями Р388/руб и Р388/вкр более чем в 2 раза, тогда как монотерапия cPt в дозе 2 мг/кг дает значительно меньший эффект.

Использование в комбинации с низкой дозой ЦФ (30 мг/кг) одновременно 2 доноров NMO и К-27 было более эффективно (ILS 253 %), чем комбинация каждого донора с ЦФ (ILS 170 и 112 % соответственно).

Выводы. Таким образом, результаты настоящего исследования показывают, что применение доноров оксида азота в комбинации с цитостатиками в низких неэффективных дозах увеличивает химиотерапевтическую чувствительность резистентных опухолей.

С. Г. Романова1, Н. В. Плявник1, М. А. Маслов1,

А. А. Штиль2, Г. А. Серебренникова1

Бесфосфорные глицеролипиды алкильного типа —

новый класс противоопухолевых соединений

1 МИТХТ им. М. В. Ломоносова, Москва

2 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

Алкильные глицеролипиды

— перспективный класс противоопухолевых агентов благодаря их способности вызывать преимущественную гибель опухолевых клеток и отсутствию мутагенного эффекта. Фосфорсодержащие алкильные глицеролипиды эдельфозин, пирофозин, мелтифозин и другие используются для лечения, вместе с тем синтез подобных соединений достаточно сложен и включает работу с токсичными фосфорсодержащими группами.

Нами разработан синтез бесфосфорных производных алкильных глицеролипидов (аналогов эдельфозина; см. схему) с алифатическими и гетероциклическими основаниями в структуре полярного до-

Эдельфозин (1 -октадецил-2-метил- Общая структурная формула бесфосфорных

гас-глицеро-3-фосфохолин)

СНгОС^Нз?

НзС-О-НС 0

II ,

СН2-0 -Р -О-СНгСНг-ЫЧСНзЬ СГ

ЕГ- 18-О-Ме

катионных глицеролипидов алкильного типа

—OR, Ri_Ci8H37

—OR2 r2— ОН,-CH з,-СН2СНз

ZY+ Q" Z —(CH 2)rvn = 2,3,4

Y — аммониевого, реже сульфониевого типа Q—OTs";Hal"

мена и модифицирован спейсерный участок в положении С3 глицеринового остова. Получены серии новых катионных глицеролипи-дов алкильного типа, отличающихся длиной спейсерной группы между гидрофобной и гидрофильной частью молекулы и содержащих полярные «головки», представленные остатками ^^диметил-этаноламина и N,N,N1 ^-тетраметилэтилендиамина, а также различными гетероциклическими основаниями — пиридином, морфо-лином, гистидином и их производными. Преимущества синтеза бесфосфорных алкильных глицеролипидов — относительная простота, сокращение стадий и уменьшение времени лимитирующей стадии (алкилирование положения С2 глицеринового скелета). Отмечены высокие выходы конечных соединений. Исследована цитотоксичность новых бесфосфорных глицеролипидов алкильного типа на клеточных линиях МСБ7 (рак молочной железы), НСТ116 (рак толстой кишки), К562 (лейкоз). Отобраны соединения, цитотоксиче-ская активность которых не уступает эдельфозину. Эти препараты не обладают гемолитическим свойством в концентрациях, вызывающих гибель опухолевых клеток.

Таким образом, разработана стратегия синтеза оригинальных бесфосфорных глицеролипидов и установлены требования к их структуре, позволяющие получать активные противоопухолевые соединения. Анализируются механизмы гибели клеток при действии новых бесфосфорных глицеролипидов.

Т. А. Сидорова1, И. С. Северина2, А. Ю. Щеголев2,

Г. К. Герасимова1, О. Л. Калия3, Г. Н. Ворожцов3 Роль растворимой гуанилатциклазы в цитопротек-торных свойствах терафтала (ТФ) и эндогенных металлопорфиринов

1 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

2 Институт биологической и медицинской химии им. В. Н. Ореховича РАМН, Москва

3 ФГУП ГНЦ НИОПИК, Москва

Введение. Растворимая гуанилатциклаза (рГЦ) осуществляет синтез в клетках цГМФ, вторичного мессенджера сигнального пути рГЦ/цГМФ. Установлено, что в некоторых линиях опухолевых клеток рГЦ/цГМФ сигнальный путь обеспечивает их выживаемость при воздействии ряда стимулов, активирующих программу апопто-за. Однако неизвестно, вовлечен ли рГЦ/цГМФ сигнальный путь в защиту опухолевых клеток от цитотоксического действия антра-циклиновых антибиотиков. Ранее нами было показано, что ТФ (ок-та-4,5-карбоксифталоцианин кобальта) и эндогенные металлопор-фирины (гемин, цинк-протопорфирин) снижают цитотоксичность некоторых антрациклиновых антибиотиков.

Цель исследования. Оценить участие рГЦ/цГМФ сигнального пути в защите опухолевой клетки от токсического воздействия ант-рациклиновых антибиотиков.

Материал и методы. Культура клеток эритролейкоза человека линии К562 с эндогенной экспрессией растворимой гуанилатцикла-зы служила моделью для исследования роли рГЦ в цитотоксических и цитопротекторных эффектах изучаемых препаратов. Препараты: ТФ, доксорубицин, даунорубицин; специфические активаторы: нит-ропруссид натрия, (8№Р), УС-1 и ингибиторы (ЬУ83583, ODQ) рГЦ. Цитотоксическую активность исследуемых веществ и их комбинаций оценивали с помощью МТТ-метода. Базальный и индуцированный препаратами уровень экспрессии мРНК рГЦ оценивали методом РТ-ПЦР.

Результаты. Установлено, что в присутствии БКР (10 мкМ), активатора рГЦ, наблюдается снижение цитотоксической активности антрациклиновых антибиотиков относительно клеток К562. Принимая во внимание тот факт, что эти антибиотики являются ингибито-

-о-

рами каталитической активности рГЦ, можно предположить, что выявленная способность нитропруссида снижать цитотоксическую активность антрациклиновых антибиотиков связана с активацией рГЦ и ее сигнального пути в клетках К562. Однако оказалось, что прединкубация лейкозных клеток с ингибитором рГЦ ЬУ83583 также приводит к снижению цитотоксической активности антрацикли-новых антибиотиков. Такой сценарий развития событий в клетке возможен только в том случае, если в присутствии ингибитора рГЦ индуцируется экспрессия гена рГЦ, что можно оценить по уровню мРНК этого фермента, в результате чего происходит дополнительный синтез новых молекул белка и восстанавливается динамическое равновесие внутри клетки молекулярных форм белка-фермента, нарушенное ингибитором. Показано также, что в условиях угнетения рГЦ с помощью ЬУ83583 снижается способность ТФ и эндогенных металлопорфиринов (гемина и цинк-протопорфирина) защищать клетки от цитотоксичности антрациклиновых антибиотиков. Таким образом, угнетение рГЦ снижает цитопротекторные свойства ТФ и эндогенных металлопорфиринов.

Выводы. Механизм гибели опухолевых клеток при действии ан-трациклиновых антибиотиков реализуется через сигнальный путь, контролируемый рГЦ. Комбинирование антрациклиновых антибиотиков с препаратами, влияющими на функциональную активность рГЦ, может снизить их цитотоксическую активность.

Работа выполнена при финансовой поддержке НТП «Разработка и внедрение в медицинскую практику новых методов диагностики и лечения онкологических и других заболеваний» и гранта РФФИ N 050448577.

3. С. Смирнова, И. Ю. Кубасова, Л. М. Борисова, М. П. Киселева, Т. Д. Миникер, И. Л. Плихтяк, Л. В. Эктова, С. Я. Мельник

Изучение связи структуры и противоопухолевой активности в ряду ^гликозидов, производных индоло[2,3-а]карбазола

ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Данная работа является продолжением исследований по синтезу и изучению производных ^гликозидов индола. Ранее было показано, что соединения этого класса могут обладать иммуномодулирующей, антибактериальной и противоопухолевой активностью. Представлялось интересным изучить влияние заместителя в имидном цикле или структуры углеводного остатка на противоопухолевую активность. С этой целью были синтезированы следующие соединения: гликозиды I и II, различающиеся заместителем у имид-ного азота (X = Н (I), X = СН2СН2(4-шогрИо11по) (II)), и гликозиды III и IV, имеющие в своем составе различные углеводные фрагменты (01у = Р-Б-ва1 (III) и 01у = а-Ь-Лга (IV)), и исследованы их противоопухолевые свойства на перевиваемых опухолях животных.

X

I

в\у

Н

!-ГУ

Материал и методы. Сравнительное исследование противоопухолевой активности гликозидов I и II проводили на лимфоидной лейкемии Р388, а гликозидов III и IV — на эпидермоидной карциноме легкого ЬЬС. Гликозиды растворяли в ДМСО (10% раствор) и физиологическом растворе и вводили внутрибрютттинно ежедневно в течение 5 дней в широком диапазоне доз от 10 до 125 мг/кг. Критериями эффективности служили увеличение продолжительности жизни опытных животных по сравнению с контрольными (УПЖ, %) и торможение роста опухоли (ТРО, %).

Результаты. Показано, что гликозид II проявил более высокий противоопухолевый эффект на Р388 (УПЖ 119 %) по сравнению с гликозидом I (УПЖ 85 %). Терапевтические дозы для гликозидов составляли 100 (II) и 50 (I) мг/кг и для гликозида II выявлена ЬБ33, которая равна 125 мг/кг. Высокая и равная эффективность была вы-

явлена для гликозидов III и IV на ЬЬС — максимальное ТРО составляло 90 % в разных терапевтических дозах — 125 и 50 мг/кг соответственно.

Выводы. Гликозиды I и II с разными заместителями у имидного азота различаются по силе противоопухолевого эффекта и терапевтической дозе на Р388. Изменение структуры углеводного фрагмента приводит к равному противоопухолевому эффекту, но в разных терапевтических дозах гликозидов III и IV на ЬЬС. Из полученных данных следует, что на противоопухолевый эффект изученных соединений влияют не только заместители в агликоне, но и природа гликозидного остатка.

В. И. Соловьев, Е. Н. Семкина

Мюстофоран в паллиативном лечении больных с метастатическим поражением головного мозга

Областной онкологический клинический диспансер, Смоленск

Введение. В последние 2 десятилетия все большее значение в лечении злокачественных поражений головного мозга помимо лучевого воздействия приобретает химиотерапия. Хорошо зарекомендовал себя в данном случае мюстофоран.

Цель исследования. Оценить эффективность применения мюс-тофорана в улучшении качества жизни онкологических больных с метастатическим поражением головного мозга.

Материал и методы. В 2004 г. паллиативную химиотерапию мю-стофораном получили 12 человек с метастазами в головной мозг. Возраст больных варьировал от 32 до 74 лет, средний возраст составил 55,8 лет. Мужчин было 66,6 %, женщин — 33,4 %. Распределение пациентов в зависимости от локализации первичного очага выглядело следующим образом: рак легкого — 41,7 %, молочной железы — 25,0 %, почки — 8,3 %, тела матки — 8,3 % и меланома кожи — 16,7 %. Качество жизни (КЖ) оценивалось по трем критериям: степени физической активности по шкале ЕСОО, выраженности болевого синдрома и продолжительности ночного сна. Удовлетворительное КЖ при первичном обращении было отмечено лишь у каждого четвертого пациента. Мюстофоран использовался в режиме монотерапии в дозе 100 мг/м2, в 1, 8 и 15-й день с последующим перерывом в течение 5 нед. Количество курсов варьировало от 1 до 5.

Результаты. Эффективность химиотерапии оценивали по выраженности ответа опухоли на лечение или ремиссии. Наиболее эффективным лечение было при раке молочной железы и легкого. Общая эффективность лечения составила 33,3 %. Проведение паллиативной химиотерапии способствовало улучшению качества жизни пациентов в 65 % случаев, что проявлялось уменьшением или исчезновением неврологической симптоматики, снижением интенсивности хронического болевого синдрома и увеличением степени продолжительности ночного сна, что позволило отказаться от приема наркотических и сильнодействующих анальгетиков и седативных препаратов. Средняя продолжительность жизни больных от начала проведения лечения по поводу метастазов в головной мозг по рассматриваемым группам была следующей: рак легкого — 6,8 мес., рак молочной железы — 10,2 мес., меланома — 2,7 мес., рак почки — 24,3 мес., рак тела матки — 9,4 мес. Средняя продолжительность жизни составила 10,7 мес.

Выводы. Таким образом, в, казалось бы, безнадежных случаях паллиативная химиотерапия мюстофораном позволяет не только улучшить качество жизни у 65 % пациентов, но и увеличить среднюю продолжительность жизни с 4 мес. при симптоматической терапии до 10,7 мес.

И. М. Солопаева1, В. В. Новиков2, Н. М. Иванова1,

Т. В. Аксенова2, Е. Н. Филатова2 Влияние хорионического гонадотропина на лимфосаркому Плисса и иммунный ответ крыс-опухоленосителей

1 Нижегородская государственная медицинская академия

2 Нижегородский государственный университет им. Н. И. Лобачевского

Цель исследования. Изучение действия хорионического гонадотропина (ХГ) на митотическую активность (МИ) и апоптоз клеток лимфосаркомы Плисса (ЛСП) и на количество СБ4+ мононуклеар-ных клеток крови у крыс-опухоленосителей.

Материал и методы. Опыты поставлены на 80 самцах белых беспородных крыс массой 180-200 г. Опухолевые клетки и ХГ вводили подкожно, забивали крыс через 10 сут после перевивки опухоли, количество митозов подсчитывали в 400 полях зрения, при этом в среднем просматривали 68 клеток в 1 поле зрения. О темпах роста опухоли судили по результатам линейных замеров ее размеров. Апоптоз клеток опухоли и мононуклеарных клеток периферической крови определяли по наличию низкомолекулярной фрагментации ДНК. Относительное содержание СБ4+ мононуклеарных клеток периферической крови оценивали методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител ИКО-101 против СБ4-антигена крыс.

Результаты. При введении взвеси опухолевых клеток в разных объемах и ХГ в разных дозах обнаружено достоверное снижение МИ клеток ЛСП в 2 раза в сравнении с МИ клеток ЛСП у крыс, не получавших гормон. Через 10 дней после перевивки клеток ЛСП количество СБ4+-клеток периферической крови крыс-опухоленосите-лей снижалось в 3,7 раза в сравнении с интактными крысами. Содержание этих клеток у крыс-опухоленосителей, получавших ХГ, к этому сроку оказалось нормальным. Обнаружена способность ХГ индуцировать апоптоз в клетках ЛСП, причем гормон в дозе 75 ЕД оказался более эффективным, чем в дозе 150 ЕД, т. е. влияние ХГ на апоптоз оказалось дозозависимым. При этом ХГ не индуцировал апоптоза мононуклеарных клеток периферической крови крыс.

Выводы. Показано, что ХГ, тормозя воспроизводство клеток ЛСП и усиливая гибель этих клеток путем апоптоза, оказывает губительное действие на состояние опухоли, что приводит к торможению ее роста. Большое значение для коррекции онкозависимого иммунодефицита, развивающегося при росте ЛСП, имеет нормализация количества СБ4+-клеток под влиянием ХГ. Полученные результаты защищены патентами РФ № 2263513 от 10.11.2005 г. и № 2263514 от 10.11.2005 г.

А. Н. Стуков, В. А. Филов, Б. А. Ивин, С. А. Коньков Сравнительное изучение противоопухолевой активности хлонизола и CCNU в эксперименте

ГУ НИИ онкологии им. проф. Н. Н. Петрова, Санкт-Петербург

Цель исследования. Провести изучение противоопухолевой активности нового отечественного противоопухолевого препарата из класса алкилнитрозомочевин хлонизола в сравнении с CCNU на модели карциномы Льюис у мышей.

Материал и методы. Исследование проводили на 60 мышах С57Б1 (по 10 мышей в группе) с перевитой под кожу карциномой Льюис. Хлонизол и CCNU вводили в максимально переносимых дозах (соответственно 20 и 50 мг/кг) внутрибрюшинно однократно через сутки (1-я серия экспериментов) или через 5 сут (2-я серия) после перевивки опухоли. Результаты оценивали по торможению роста опухоли в разные сроки и по площади под кинетической кривой (ЛиС) роста опухоли.

Результаты. При введении хлонизола через сутки после перевивки торможение роста опухоли к 10-му дню после перевивки составило 100 %, к 14-му дню — 96 % и к 18-му дню — 92 %; при введении CCNU — соответственно 94, 52 и 18 %. ЛиС роста опухоли оказалась равной в контроле в среднем 7558±656, при лечении хлонизолом — 350±312, при лечении CCNU — 3988±532, или в процентах к контролю соответственно 100, 5 и 50 % (разница между группой «хлонизол» и группой «CCNU» статистически достоверна; ^<0,001). При введении хлонизола через 5 сут после перевивки торможение роста опухоли составило к 10-му дню — 92 %, к 14-му дню — 91 % и к 18-му дню — 92 %; при введении CCNU — соответственно 44, 35 и 44 %. AUC роста опухоли оказалась равной в контроле в среднем 8658±492, при лечении хлонизо-лом — 726±456, при лечении CCNU — 5092±448, или в процентах к контролю соответственно 100, 8 и 60 % (разница между группой «хлонизол» и группой «CCNU» статистически достоверна; ^<0,001).

Выводы. На модели карциномы Льюис у мышей установлено, что противоопухолевый препарат из класса алкилнитрозомочевин хлонизол обладает выраженным и устойчивым противоопухолевым эффектом, значительно превосходящим противоопухолевую активность широко применяемого в клинике препарата CCNU.

Л. В. Татьяненко, Н. П. Коновалова, Г. Н. Богданов,

О. В. Доброхотова, Б. С. Федоров Ингибирование активного транспорта ионов кальция металлокомплексами Pt (IV) и Pd (II). Корреляция этого процесса с антиметастатическим действием препаратов

Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка

Введение. Известно, что патогенез метастазирования включает в себя ряд последовательных процессов, в т. ч. образование тромбов с последующей адгезией метастазирующих клеток к эндотелию капилляров. Это послужило основанием для проведения исследования влияния металлокомплексов Pt (IV) и Pd (II) пиридинкарбоновых кислот на степень активного транспорта ионов Ca2+ в везикулы саркоплазматическо-го ретикулума (СР), приводящие к изменению нормального соотношения вне- и внутриклеточного содержания ионов Ca2+, и сопоставления этих данных со степенью ингибирования метастатического процесса.

Материал и методы. Са2+,М§2+-зависимую АТФазу СР выделяли из белых мышц задних конечностей кролика методом дифференциального центрифугирования. Гидролитическую активность фермента рассчитывали из tg угла наклона кинетической кривой гидролиза АТФ. О скорости изменения концентрации Са2+ судили по времени их полного поглощения везикулами СР.

Результаты. Показано, что ряд новых соединений металлокомплексов Pt (IV) и Pd (II) на основе пиридинкарбоновых кислот преимущественно ингибирует активный транспорт ионов Ca2+ по сравнению с гидролизом АТФ мембраносвязанной Са2+,Mg2+-АТФазой СР. При этом наблюдается разобщение гидролиза АТФ и активного транспорта ионов Са2+ в присутствии вышеуказанных соединений. Изменяющееся при этом соотношение вне- и внутриклеточного Са2+ вызывает нарушение адгезии тромбоцитов, их связи с метаста-зирующими клетками опухоли. Анализ связи степени антиметаста-тической активности и степени разобщения транспорта Са2+ указывает на прямую корреляцию этих эффектов.

Выводы. Полученные нами данные показывают, что одним из возможных механизмов торможения роста экспериментальных метастазов меланомы В16 исследованными металлокомплексами является ингибирование активного транспорта ионов Са2+ через биологические мембраны. Индекс ингибирования метастазов меланомы В16 составляет от 50 до 90 %.

И. И. Файнгольд1, Н. П. Коновалова1, Р. А. Котельникова1,

Г. Н. Богданов1, Е. С. Фрог1, Д. В. Мищенко1, В. С. Романова2 Фуллерилнитраты как адъюванты цитостатической химиотерапии

1 Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка

2 Институт элементоорганических соединений им. А. Н. Несмеянова РАН, Москва

Введение. Фуллерилнитраты (ФН) образуют особую группу новых производных фуллерена С60, особенностью которых является их способность выступать в качестве доноров монооксида азота. В экспериментальной онкологии для доноров NO установлена триада противоопухолевых свойств: подавление метастазирования, торможение развития резистентности к цитостатикам и адъювантное действие при комбинации с цитостатиками.

Цель исследования. Проанализировать способность ФН дониро-вать монооксид азота и изучить их противоопухолевую активность.

Материал и методы. В качестве исследуемых соединений в работе использовались впервые синтезированные фуллерилнитраты: фуллерилмононитрат (ФМН) и фуллерилдинитрат (ФДН). Объект исследования — лейкемия P388 у мышей линии ВDF1.

При комбинированной химиотерапии препараты вводили внут-рибрюшинно: циклофосфан (ЦФ) в дозе 0,1x10 3 моль/кг на 1-е и 6-е сутки, ФМН и ФДН ежедневно в течение 6 дней в дозе 0,5x 10 3 и 0,48x10 3 моль/кг соответственно. Критериями эффективности служили увеличение продолжительности жизни, а также количество выживших животных.

Результаты. При изучении механизма биотрансформации ФН установлено, что ФН ингибируют каталитическую активность цито-хром-с-оксидазы в митохондриях клеток головного мозга крыс вследствие генерации монооксида азота, который связывается с ге-мом активного центра фермента.

-Q-

Комбинированной терапией (ФДН+ЦФ) достигается почти двукратное увеличение продолжительности жизни животных по сравнению с терапией одним ЦФ (количество выживших животных при этом составило 15 %). При использовании комбинации (ФМН+ЦФ) увеличение продолжительности жизни составило 265 % при выживании 60 % животных.

Выводы. Полученные данные свидетельствуют о высокой активности фуллерилнитратов, усиливающих терапевтический эффект циклофосфана.

Б. С. Федоров, М. А. Фадеев, И. В. Выстороп, Н. П. Коновалова, Т. А. Сашенкова

Метаболически активные доноры NO в качестве антиметастатических и адъювантных средств в цитостатической терапии опухолей

Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка

В продолжение работ по изучению влияния природы группировок, способных генерировать монооксид азота в условиях биотрансформации, на антиметастатическую и противоопухолевую активность препаратов из группы метаболически активных соединений нами осуществлен синтез ряда оксиамидов. В него, в частности, вошли замещенные амиды на основе янтарной кислоты. Методом ЭПР in vitro показано, что эти соединения способны генерировать в условиях биотрансформации NO. В то же время обнаружено, что они обладают высокой растворимостью в физиологических средах и анти-метастатическим действием. Они способны в комбинированной ци-тостатической терапии усиливать терапевтический эффект известных цитостатиков (циклофосфана и цисплатина).

Использование нами ^(2-нитроксиэтил)изоникотинамида в сочетании с минимальными дозами цисплатина позволяет полностью ингибировать процесс метастазирования при экспериментальной меланоме В16. Полного ингибирования процесса метастазирования при экспериментальной меланоме В16 удается достичь и в случае использования нескольких оксиамидов (производных янтарной кислоты) в качестве хемосенсибилизаторов при цитостатической терапии в присутствии циклофосфана. Кроме того, несколько оксиами-дов (замещенных дикарбоновых кислот) при цитостатической комбинированной химиотерапии опухолей проявляют высокий терапевтический эффект при лейкозах (100%-е выживание животных при лейкемии Р388). Причем и оксиамид дикарбоновой кислоты, и цитостатик используется в очень низких дозах.

Особый интерес представляет группа циклических производных оксиамидов — продуктов конденсации оксиамидов с кетонами. Так, (DL) 1-гидрокси-3,7,7,9,9-пентаметил-1,4,8-триазасприро[4.5]де-кан-2-он (нетоксичный в дозе 1000 мг/кг) самостоятельно ингибирует процесс метастазирования при экспериментальной меланоме В16 на 87 % (для сравнения ИИМ цисплатина в сравнимых условиях составляет 92 %).

Таким образом, применение производных оксиамидов карбоновых кислот индивидуально или в качестве добавок к известным цитостатикам позволяет без потери лечебного эффекта резко снизить терапевтические дозы вводимых препаратов.

А. Е. Щекотихин1, А. А. Штиль2, В. Н. Буянов3, М. Н. Преображенская1

Цитотоксичность новых нафтоиндольных аналогов триптофана и триптамина для опухолевых клеток с лекарственной устойчивостью

1 ГУ НИИНА им Г. Ф. Гаузе, Москва

2 ГУ РОИЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва

3 РХТУ им. Д. И. Менделеева, Москва

Введение. Ранее нами было показано, что производные 4,11-ди-гидроксинафто[2,3-/]индол-5,10-диона вызывают гибель опухолевых клеток с множественной лекарственной устойчивостью. С другой стороны, спектр биологической активности производных триптофана и триптамина широк. Поэтому синтез аналогов триптофана и триптамина в ряду 4,11-дигидроксинафто[2,3-/]индол-5,10-диона перспективен для поиска новых важных соединений.

Цель исследования. Разработка методов синтеза аналогов триптофана и триптамина в ряду 4,11-дигидроксинафто[2,3-/]индол-

5,10-диона и изучение их антипролиферативной активности на культивируемых линиях клеток человека с экспрессией Р-гликопротеина (Pgp) или нефункционирующим р53 — важнейшими детерминантами лекарственной устойчивости.

Результаты. Для получения нафтоиндольных аналогов триптофана и триптамина нами адаптированы их традиционные методы синтеза на основе грамина с учетом лабильности нафтоиндольного хромофора к реакциям восстановления и гидролиза. Изучение антипролиферативной активности новых соединений показало, что нафтоиндольный аналог триптофана нетоксичен в концентрациях < 50 мМЕ, тогда как его этиловый эфир вызывает гибель клеток карциномы кишечника НСТ-116, хотя и в более высоких концентрациях, чем адриамицин (IC50 = 15,0 и 1,6 мМЕ соответственно). Среди аналогов триптамина 3-(2-ами-ноэтил)-4,11-дигидроксинафто[2,3-/]индол-5,10-дион (1) важен для преодоления лекарственной устойчивости опухолевых клеток. Так, для клеток лейкоза K562 и Pgp-положительной сублинии K562Í/S9 индекс резистентности для триптамина 1 ниже, чем для адриамицина (0,6 и 14,3 соответственно). Кроме того, соединение 1 одинаково токсично для клеток рака толстой кишки HCT116 (p53+/+) и ее варианта с инактивацией p53, причем активность в отношении клеток HCT116p53KO (p53 /-) выше, чем для адриамицина (IC50 = 1,2 и 4,4 мМЕ соответственно). Аналог а-метилтриптамина (3-(2-аминопропил-1)-4,11-дигидрок-синафто[2,3-/]индол-5,10-дион) в 3-4 раза менее активен.

Выводы. Новый аналог триптамина в ряду 4,11-дигидроксинаф-то[2,3-/]индол-5,10-диона вызывает гибель опухолевых клеток с различными механизмами устойчивости к противоопухолевым препаратам.

Н. К. Юркшшович1, С. А. Беляев1, Н. В. Голуб1,

Т. Л. Юркшшович1, Ф. Н. Капуцкии1, Д. П. Веевник2 Получение полимерной формы темозоломида на основе высокозамещенного фосфата декстрана

1 НИИ физико-химических проблем Белгосуниверсишеша, Минск

2 ЛПУ 9-я клиническая больница, Минск

Введение. Одним из перспективных методов повышения эффективности лекарственных веществ (ЛВ) является получение их полимерных форм с использованием полимеров-носителей. Полимерные формы лекарственных веществ позволяют уменьшить токсичность ЛВ, пролонгировать их действие, обеспечить целенаправленный транспорт ЛВ к пораженному участку.

Определенный интерес вызывает использование в качестве полимеров-носителей модифицированных полисахаридов благодаря удачному сочетанию их физико-химических (наличие ионогенных групп, высокая степень набухания) и медико-биологических свойств (биосовместимость, нетоксичность, способность рассасываться в тканях организма без воспалительной реакции, относительная устойчивость в биологических средах). Одним из наиболее перспективных полисахаридов является высокозамещенный фосфат декстрана (ВЗФД), представляющий собой ограниченно набухающий гель.

Цель исследования. Изучение закономерностей фосфорилиро-вания декстрана в системе H3PO4/P2O5/BU3PO4/CCI4, получение фосфата декстрана с высокой степенью замещения и создание на его основе полимерной формы темозоломида (temodal, Schering-Plough).

Результаты. Установлена зависимость накопления фосфорнокислых групп от соотношения компонентов реакционной смеси и температуры, а также от времени проведения реакции. Изучено влияние количества фосфорнокислых групп ВЗФД на степени набухания.

Токсиколого-гигиенические исследования показали, что ВЗФД не обладает раздражающими и сенсибилизирующими свойствами, генотоксичностью, мутагенной и потенциальной канцерогенной активностью в отношении тестерных штаммов Salmonella typhimurium ТА-100 (степень мутагенности 0 баллов).

Для создания полимерной формы темозоломида ЛВ вводили в рассчитанный объем геля фосфата декстрана, доводили рН до значения 7,2-7,4 и лиофильно сушили.

Выводы. Проведенные медико-биологические испытания показали, что полимерная форма темозоломида на основе ВЗФД хорошо себя зарекомендовала в локальной химиотерапии, используемой на этапе оперативного лечения, и способствует удлинению безреци-дивного периода у больных с наиболее злокачественными формами опухолей головного мозга.