СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОЛЛАГЕНА ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА
METHOD FOR PRODUCTION OF COLLAGEN OF BIOLOGICAL MATERIAL

Изобретение относится к медицине, в частности к способам получения коллагена из биологического материала.
В качестве прототипа выбран способ получения коллагена путем механического измельчения биологического материала, обработки 10-20%-ным раствором щелочи и приливания коллагена после растворения в уксусной кислоте в ацетон при постоянном помешивании (патент РФ №2322249, 2008 г.).
Однако использование в качестве растворителя уксусной кислоты, обусловливающей кислую реакцию конечного продукта, и наличие в нем избыточного содержания уксусной кислоты и ее солей, высокая (до 20%) концентрация едкого натра, длительная (в течение 24 часов) промывка обработанного материала приводит к ограничению применения способа.
Задачей предлагаемого изобретения является получение нейтрального, очищенного от солей и остатков уксусной кислоты коллагена.
Поставленная задача решается за счет того, что в способе, включающем механическое измельчение, обработку и промывку материала, обработку сырья проводят насыщенным раствором хлорида натрия, содержащим едкий натр в концентрации 5% в течение 1-2 суток, нагревают обработанный материал до температуры, не превышающей +45°С, получая коллагенсодержащую субстанцию, нейтрализуют ее 0,6 н. раствором соляной кислоты и очищают замораживанием при температурах ниже -10°С в течение 4-6 часов, а осаждение конечного продута выполняют из расплавленной при температуре +45°С субстанции, приливая расплав в охлажденный до +4°С ацетон при постоянном перемешивании.
3
Способ осуществляется следующим образом. Свиную шкуру обрабатывают для получения ксенодермы, которую измельчают механическим способом до частиц размером от 0,15 до 0,5 см и помещают в щелочно-солевой раствор (ЩСР), состоящий из насыщенного водного раствора хлорида натрия, содержащего 5% едкого натра. Обработку проводят при комнатной температуре в течение 24-48 часов. ЩСР сливают и используют повторно, а обработанный материал промывают сначала проточной водой в течение 15 минут, а затем - дистиллированной. Промытый материал нагревают на водяной бане до температуры, не превышающей +45°С, для получения коллагенсодержащей субстанции. Ее профильтровывают через двухслойный марлевый фильтр для удаления нерасплавившихся частиц дермы и нейтрализуют 0,6 н. водным раствором соляной кислоты. Кислоту приливают небольшими порциями в субстанцию до образования нейтральной среды. Для очистки от солей и других примесей нейтрализованную субстанцию замораживают при температурах от -10°С и ниже в течение 4-6 часов (в зависимости от массы материала и температуры). Затем субстанцию размораживают в дистиллированной воде при комнатной температуре, отфильтровывают через марлю и нагревают на водяной бане при температуре +45°С до жидкого состояния. Выделение коллагена из расплавленной субстанции осуществляют осаждением, медленно приливая ее в охлажденный до +4°С ацетон при постоянном интенсивном перемешивании стеклянной мешалкой. Коллаген осаждается на мешалке в виде белого слоистого сгустка и может быть легко снят с нее. Готовый продукт разрезают на небольшие кусочки и высушивают в ламинарном потоке воздуха при UV-излучении или лиофилизируют.
Предлагаемый способ получения коллагена экономичен, не требует использования уксусной кислоты и исключает стадию диализа. Конечный продукт имеет нейтральную реакцию и очищен от солей и других примесей, что определяет его широкое применение (например, в качестве субстрата для клеточных культур, для изготовления микрочастиц-носителей биологически активных веществ и пр.).