ИММУНОМОДИФИЦИРУЮЩИЕ ЧАСТИЦЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА
IMMUNE-MODIFYING PARTICLES FOR CANCER TREATMENT

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0001]
Настоящее раскрытие в целом относится к способам лечения рака и пролиферативных заболеваний с использованием иммуномодифицирующих частиц в комбинации с противораковыми терапевтическими средствами, такими как модуляторы контрольных точек, малых молекул или биологических средств, посредством изменения cупрессорных клеток миелоидного происхождения (MDSC), опухоль-ассоциированных макрофагов (TAM), нейтрофилов и моноцитов в микросреде опухоли.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0002]
В настоящее время широко признаны различные популяции миелоидных клеток, входящих в микросреду опухоли. К данным клеткам относятся моноциты, опухоль-ассоциированные макрофаги (ТАМ), супрессорные клетки миелоидного происхождения (MDSC) и дендритные клетки (Kumar et al., Trends Immunol., 37(3):208-220 (2016); Richards et al., Cancer Microenviron., 6(2):179-91 (2013)). Значительный объем работы позволяет предположить, что данные клетки активно участвуют в местах опухолей и места метастазов, где они могут быть изменены раздражителями из местной среды для способствования иммуносупрессивной микросреде (Kumar et al., Trends Immunol.,37(3):208-220 (2016); Kitamura et al., Front Immunol., 8:2004 (2018); Kitamura et al., J Exp Med., 212(7): 1043-59 (2015)). Было показано, что ммуносупрессивная активность данных клеток способствует росту опухоли, пролиферации, ангиогенезу, метастазированию и уклонению опухоли от распознавания иммунной системой. Кроме того, наличие MDSC и TAM в микросреде опухоли (TME) связано с плохими исходами заболевания (Gabrilovich et al., Nat Rev Immunol.,12(4):253-68 (2012); Ouzounova et al., Nat Comm., 8:14979 (2017); Marvel et al J Clin Invest.,125(9): 3356-64 (2015)).
[0003]
Помимо иммунных клеток, опухолевая строма влияет на формирование микросреды опухоли и воздействует на рост опухоли и прогрессирование. Было показано, что все клеточные и молекулярные составляющие опухоль-ассоциированной стромы, в том числе фибробласты, мезенхимальные стромальные клетки, адипоциты, эндотелий и внеклеточный матрикс (ВКМ) способствуют онкогенезу (Valkenburg et al., Nat Rev Clin Oncol., 15(6):366-381 (2018)). Было показано, что фибробласты (CAF), связанные с раком, полученные из резидентных в тканях и мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (МСК), вырабатывают факторы роста и белки, которые изменяют противоопухолевые иммунные ответы и способствуют росту опухоли и метастазированию (Valkenburg et al., Nat Rev Clin Oncol., 15(6):366- 381 (2018); Shiga et al., Cancers, 7,2443-2548 (2015)). Подобным образом, сообщалось, что белки ВКМ, мезенхимальные стромальные клетки, эндотелиальные клетки и адипоциты ослабляют противоопухолевый иммунитет и способствуют прогрессированию опухоли (Lu et al., J Cell Biol., 196(4):395-406 (2012); Kumar et al., Cancer Cell 32(5):654-668.e5 (2017); Quante et al., Cancer Cell., 19, 257-272 (2011); Park et al., Endocr Rev., 32(4):550-70 (2011); Young et al., Cancer Immunol Immunother., 61 (10):1609-16 (2012); Hida et al., Int J Mol Sci., 19(5):1272 (2018)).
[0004]
Несмотря на то, что был достигнут значительный прогресс в разработке новых противораковых терапевтических средств, эффективность данных терапевтических средств продемонстрировал ограниченную перспективу вследствие того факта, что они нацелены на опухоли, но не на иммуносупрессивные факторы в микросреде опухоли (TME), которые ингибируют противоопухолевую иммунную функцию и способствуют прогрессированию опухоли.
[0005]
Передача сигналов через рецепторы иммунных контрольных точек (например, белок запрограммированной смерти клетки 1 (PD-1) и CTLA-4) и их лиганды (например, PD-L1) регулирует активность цитотоксичных T-клеток и, как было показано, играют ключевую роль в модулировании воспалительных иммунных ответов. Важно отметить, что, как известно, многочисленные виды опухолей используют сигнальные пути иммунных контрольных точек PD-1/PD-L1 и CTLA-4 с целью уклонения от опосредованных T-клетками противоопухолевых иммунных ответов. Таким образом, нацеливание сигнальных путей иммунных контрольных точек, с использованием специфичных подобных ингибиторам моноклональных антител, стало многообещающим подходом к лечению многих видов рака (Alsaab et al., Front Pharmacol 8:561 (2017)). Тем не менее было показано, что наличие cупрессорных клеток миелоидного происхождения (MDSC) и опухоль-ассоциированных макрофагов (TAM) в микросреде опухоли вместе с опухоль-ассоциированной стромой ослабляют противоопухолевую эффективность подобных ингибиторам контрольных точек иммунного ответа моноклональных антител против PD1 (Weber et al., Front Immunol.,9:1310, (2018); Highfill et al., Sci Transl Med., 6(237):237ra67 (2014); Zhao et al., Cancer Immunol Res., 6(12):1459-1471 (2016); Wang et al., Nat Commun., 9(1):3503 (2018)).
[0006]
Иммуномодифицирующие частицы (IMP) представляют собой отрицательно заряженные наночастицы, которые обладают иммуномодулирующими свойствами (см., например, публикации патентов США №№ US20150010631; US 20130323319).
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0007]
В настоящем раскрытии представлен способ лечения рака и пролиферативного заболевания, включающий введение иммуномодифицирующих частиц, не содержащих антигенов или других биоактивных веществ, способных подавлять моноциты и другие фагоциты у субъекта, в комбинации с противораковой терапией. Без ограничения какой-либо теорией предполагается, что IMP изменяют иммуносупрессивные образованные из моноцитов клетки в микросреде опухоли, что, в свою очередь, повысит эффективность других противораковых видов терапии при введении субъекту. В данном документе предполагается, что виды комбинированной терапии с использованием IMP и противораковых терапевтических средств, которые могут как нацеливаться на опухолевые клетки, так и преодолевать иммуносупрессивную микросреду опухоли, нацеливаясь на MDSC, ТАМ, нейтрофилы, другие клетки, образованные из моноцитов, и опухоль-ассоциированная строма может обеспечить больший терапевтический эффект по сравнению с монотерапией посредством противораковых терапевтических средств, таких как ингибиторы контрольных точек иммунного ответа.
[0008]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения рака у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид, антигенные фрагменты или другие биоактивные вещества, и причем введение изменяет популяцию cупрессорных клеток миелоидного происхождения (MDSC), опухоль-ассоциированных макрофагов (TAM), нейтрофилов, моноцитов, дендритных клеток и/или стромы в месте опухоли.
[0009]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения рака у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид, антигенные фрагменты или другие биоактивные вещества, и причем введение изменяет опухоль-ассоциированную строму.
[0010]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения рака у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид, антигенные фрагменты или другие биоактивные вещества, и причем введение изменяет стромальную соединительную ткань, фибробласты, эндотелий, жировую ткань, внеклеточный матрикс, периваскулярные клетки, раковые стволовые клетки, мезенхимальные стволовые клетки и/или мезенхимальные стромальные клетки.
[0011]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения рака у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид, антигенные фрагменты или другие биоактивные вещества, и причем введение уменьшает размер опухоли и/или снижает рост опухоли. В различных вариантах осуществления введение вызывает гибель клеток опухоли, апоптоз и/или некроз посредством прямого поглощения частиц опухолевыми клетками.
[0012]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения рака у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид, антигенные фрагменты или другие биоактивные вещества, и причем введение регулирует противоопухолевый иммунный ответ.
[0013]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения рака у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид, антигенные фрагменты или другие биоактивные вещества, и причем введение изменяет или модулирует опухолеспецифический иммунный ответ.
[0014]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения пролиферативного заболевания у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид, антигенные фрагменты или другие биоактивные вещества, и причем введение изменяет популяцию cупрессорных клеток миелоидного происхождения (MDSC), опухоль-ассоциированных макрофагов (TAM), дендритных клеток, нейтрофилов и/или моноцитов в месте опухоли.
[0015]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения пролиферативного заболевания у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид, антигенные фрагменты или другие биоактивные вещества, и причем введение изменяет опухоль-ассоциированную строму.
[0016]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения пролиферативного заболевания у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид, антигенные фрагменты или другие биоактивные вещества, и причем введение изменяет стромальную соединительную ткань, фибробласты, эндотелий, жировую ткань, внеклеточный матрикс, периваскулярные клетки, мезенхимальные стволовые клетки и/или мезенхимальные стромальные клетки.
[0017]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения пролиферативного заболевания у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид, антигенные фрагменты или другие биоактивные вещества, и причем введение уменьшает объем опухоли и/или снижает рост опухоли.
[0018]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения пролиферативного заболевания у субъекта включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид, антигенные фрагменты или другие биоактивные вещества, и причем введение регулирует противоопухолевый иммунный ответ.
[0019]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения пролиферативного заболевания у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид, антигенные фрагменты или другие биоактивные вещества, и причем введение регулирует опухолеспецифичный иммунный ответ.
[0020]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения рака или пролиферативного нарушения у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид, антигенные фрагменты или другие биоактивные вещества, и причем введение регулирует раковые стволовые клетки.
[0021]
В различных вариантах осуществления отрицательно заряженные частицы представляют собой частицы полигликолевой кислоты (PGA), частицы полимолочной кислоты (PLA), частицы полистирола, частицы сополимера молочной и гликолевой кислот (PLGA), частицы алмаза или частицы железа, цинка, кадмия, золота или серебра, или их комбинации.
[0022]
В некоторых вариантах осуществления отрицательно заряженные частицы представляют собой частицы сополимера молочной и гликолевой кислот (PLGA). В различных вариантах осуществления частица содержит около 50:50, от около 80:20 до около 100:0 полимолочной кислоты:полигликолевой кислоты или от около 50:50, от около 80:20 до около 100:0 полигликолевой кислоты:полимолочной кислоты. В различных вариантах осуществления частица содержит 50:50 полимолочной кислоты:полигликолевой кислоты. В различных вариантах осуществления частица содержит от около 99:1 до около 1:99 полимолочной кислоты:полигликолевой кислоты, включая все значения и диапазоны, которые находятся в пределах данных значений.
[0023]
В различных вариантах осуществления частицы являются поверхностно-функционализованными. В различных вариантах осуществления поверхностная функционализация достигается посредством карбоксилирования. В дополнительных вариантах осуществления поверхностная функционализация достигается посредством добавления нацеливающих средств. В некоторых вариантах осуществления нацеливающее средство содержит полипептиды, антитела, нуклеиновые кислоты, липиды, малые молекулы, углеводороды и поверхностно-активные вещества. В различных вариантах осуществления поверхностно-функционализированные наночастицы нацелены предпочтительно на моноциты, нейтрофилы, макрофаги, дендритные клетки, T-клетки, B-клетки, естественные киллерные клетки, естественные киллерные T-клетки, фибробласты, ассоциированные с раком фибробласты, эндотелиальные клетки, адипоциты, периваскулярные клетки, эндотелий, сосудистую систему, лимфатические сосуды, опухоль-ассоциированную сосудистую систему, мезенхимальные стромальные клетки, мезенхимальные стволовые клетки и/или внеклеточный матрикс.
[0024]
В различных вариантах осуществления частицы характеризуются дзета-потенциалом от -100 мВ до -1 мВ. В различных вариантах осуществления частицы характеризуются дзета-потенциалом от -80 мВ до -30 мВ. В некоторых вариантах осуществления дзета-потенциал частицы составляет от около -100 мВ до около -40 мВ, от около -75 мВ до около -40 мВ, от около -70 мВ до около -30 мВ, от около -60 мВ до около -35 мВ или от около -50 мВ до около -40 мВ. В различных вариантах осуществления дзета-потенциал составляет около -30 мВ, -35 мВ, -40 мВ, -45 мВ, -50 мВ, -55 мВ, -60 мВ, -65 мВ, -70 мВ, - 75 мВ, -80 мВ, -85 мВ, -90 мВ, -95 мВ или -100 мВ, включая все значения и поддиапазоны, которые находятся в пределах данных значений.
[0025]
В различных вариантах осуществления диаметр отрицательно заряженной частицы составляет от 0,1 пм до 10 пм. В различных вариантах осуществления частица имеет средний диаметр от около 0,2 пм до около 2 пм; от около 0,3 пм до около 5 пм; от около 0,5 пм до около 3 пм; или от около 0,5 пм до около 1 пм. В некоторых вариантах осуществления частица имеет диаметр от около 100 до 1500 нм, от около 200 до 2000 нм, от около 100 до 10000 нм, от около 300 до 1000 нм, от около 400 до 800 нм или от около 200 до 700 нм. В различных вариантах осуществления частица имеет средний диаметр около 100 нм, 200 нм, 300 нм, 400 нм, 500 нм, 600 нм, 700 нм, 800 нм, 900 нм, 1000 нм, 1100 нм, 1200 нм, 1300 нм, 1400 нм, 1500 нм или 2000 нм, включая все значения и поддиапазоны, которые находятся в пределах данных значений. В некоторых вариантах осуществления диаметр отрицательно заряженной частицы составляет от 400 нм до 800 нм.
[0026]
В различных вариантах осуществления субъект болен раком, выбранным из группы, состоящей из рака головного мозга, рака кожи, рака глаза, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака поджелудочной железы, рака легкого, рака пищевода, рака головы и шеи, рака шейки матки, рака печени, рака толстой кишки, колоректального рака, рака прямой кишки, рака кости, рака матки, рака яичника, рака мочевого пузыря, рака желудка, рака полости рта, рака щитовидной железы, рака почки, рака яичка, лейкоза, лимфомы и мезотелиомы. Дополнительные виды рака, охватываемые способами, раскрыты в подробном описании.
[0027]
В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство представляет собой химиотерапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из ингибиторов роста, ингибиторов репликации ДНК, ингибиторов киназы, ингибиторов сигнального каскада, ингибиторов ангиогенеза, ингибиторов обмена веществ, ингибиторов синтеза аминокислот, селективных ингибиторов онкогенных белков, ингибиторов метастазирования, ингибиторов антиапоптозных факторов, стимуляторов апоптоза, ингибиторов нуклеозидного сигнального пути, ингибиторов ферментов и средств, повреждающих ДНК.
[0028]
В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство содержит одно или более биологических средств, выбранных из группы, состоящей из цитокинов, ингибиторов ангиогенеза, ферментов, модуляторов контрольных точек иммунного ответа и моноклональных антител.
[0029]
В различных вариантах осуществления цитокины выбраны из группы, состоящей из трансформирующих факторов роста, факторов некроза опухоли, интерферонов и интерлейкинов. Иллюстративные цитокины включают без ограничения IFN-альфа, IFN-бета, IFN-гамма, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, члены надсемейства трансформирующих факторов роста бета, в том числе TGF-β1, TGF-β2 и TGF-β3, фактор некроза опухоли альфа, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор гранулоцитов (Г-КСФ) и гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ).
[0030]
В различных вариантах осуществления моноклональных антитела представляют собой моноспецифичные, биспецифичные, триспецифичные или биспецифичные антитела, активирующие T-клетки (BiTE).
[0031]
В различных вариантах осуществления моноклональные антитела являются агонистами костимулирующих молекул иммунных клеток, которые индуцируют противоопухолевый иммунный ответ. Иллюстративные костимулирующие молекулы включают без ограничения ICOS (индуцируемый Т-клеточный ко-стимулятор) (CD278), OX40 (CD134), 41BB, GITR (рецептор фактора некроза опухоли, вызванного глюкокортикоидами), CD40 и CD27.
[0032]
В различных вариантах осуществления модуляторы контрольных точек иммунного ответа нацеливаются на белок запрограммированной смерти клетки-1 (PD-1), лиганд белка запрограммированной смерти клетки-1 (PD-L1), цитотоксический Т-лимфоцит-ассоциированный белок 4 (CTLA-4), Т-клеточный иммуноглобулин и муциновый домен 3 (TIM-3), ген активации лимфоцитов 3 (LAG-3) и/или TIGIT (Т-клеточный иммунорецептор с доменами Ig и ITIM). В различных вариантах осуществления модулятор контрольных точек иммунного ответа представляет собой антитело, выбранное из группы, состоящей из ипилимумаба, тремелимумаба, пембролизумаба, ниволумаба, атезолизумаба, авелумаба, цемиплимаба и дурвалумаба.
[0033]
В различных вариантах осуществления моноклональные антитела, применяемые в способах, выбраны из группы, состоящей из алемтузумаба, бевацизумаба, брентуксимаба, цетуксимаба, деносумаба, ибритутомаба, трастузумаба, панитумумаба, пертузумаба и ритуксимаба. В различных вариантах осуществления моноклональные антитела, применяемые в способах, нацелены на рецепторную тирозинкиназу, EGFR, VEGF, VEGFR, PDGF, PDGFR, TGF-β, TGF-β-LAP, SIRP-α, CD47, CD39, CD73 и белок, активирующий фибробласты (FAP).
[0034]
В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство содержит фермент. В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство содержит фермент, который нацелен на T-клетки, В-клетки, APC, макрофаги, дендритные клетки, моноциты, MDSC, TAM, нейтрофилы, другие клетки, образованные из моноцитов, опухоль-ассоциированную строму, раковые стволовые клетки, мезенхимальные стволовые клетки, внеклеточный матрикс и аминокислоты. В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство содержит фермент, выбранный из группы, включающей аспарагиназу, кинурениназу, L-аргининдеиминазу, L-метионин-γ-лиазу, один или более разлагающих аминокислоты ферментов и один или более разлагающих нуклеозиды ферментов.
[0035]
В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство содержит одно или более клеточных терапевтических средств, выбранных из группы, состоящей из адоптивного переноса клеток, терапии на основе лейкоцитов, инфильтрирующих опухоль, терапии с использованием Т-клеток с химерными антигенными рецепторами (CAR-T), терапии с использованием естественных киллерных клеток и терапии с использованием стволовых клеток.
[0036]
В различных вариантах осуществления клеточная терапия представляет собой адоптивный перенос аутологичных клеток, полученных от пациентов. В различных вариантах осуществления клеточная терапия представляет собой адоптивный перенос аллогенных клеток, полученных от доноров.
[0037]
В различных вариантах осуществления клеточная терапия представляет собой перенос универсальных полученных от доноров или индуцированных клеток, полученных из полипотентных стволовых клеток, которые не специфичны для пациента и подлежат длительному хранению. Такие терапевтические средства также называют «стандартными способами лечения».
[0038]
В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство представляют собой гормональную терапию. В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство содержит один или более конъюгатов антитела с лекарственным средством. В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство содержит одну или более противораковых вакцин. В различных вариантах осуществления противораковая вакцина представляет собой белковую, полипептидную вакцину, вакцину на основе нуклеиновых кислот и/или вакцину на основе дендритных клеток.
[0039]
В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство представляет собой иммунотерапию, выбранную из группы, включающей онколитический вирус, бактерию, онколитическую бактерию или другие бактериальные композиции, бациллу Кальмета-Герена (BCG), модулятор микробиома и/или агонист Toll-подобного рецептора (TLR). В различных вариантах осуществления агонист TLR представляет собой агонист TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12 и/или TLR13. В различных вариантах осуществления агонист TLR образован из вируса, бактерии и/или получен посредством синтеза. В различных вариантах осуществления иммунотерапия представляет собой модулятор сигнального пути STING.
[0040]
В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство содержит вирусный или бактериальный вектор. В различных вариантах осуществления вирусный вектор выбран из группы, включающей аденовирус, адено-ассоциированный вирус (AAV), вирус простого герпеса, лентивирус, ретровирус, альфавирус, флавивирус, рабдовирус, вирус кори, вирус псевдочумы птиц, поксвирус, вирус осповакцины, модифицированный вирус осповакцины Анкара, вирус везикулярного стоматита, пикорнавирус, вирус табачной мозаики, Х-вирус картофеля, комовирус или вирус мозаики огурца. В различных вариантах осуществления вирус представляет собой онколитический вирус. В различных вариантах осуществления вирус представляет собой химерный вирус, синтетический вирус, мозаичный вирус или псевдотипированный вирус.
[0041]
Дополнительные противораковые терапевтические средства, предназначенные для применения в способах, приведены в подробном описании.
[0042]
В различных вариантах осуществления частицу и/или противораковое терапевтическое средство вводят два раза в неделю, один раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели, раз в 4 недели, раз в два месяца, раз в три месяца, раз в 6 месяцев или раз в год.
[0043]
В различных вариантах осуществления частицу и/или противораковое терапевтическое средство вводят внутривенно, перорально, назально, внутримышечно, через глаза, чрескожно или подкожно.
[0044]
В различных вариантах осуществления субъект является млекопитающим. В различных вариантах осуществления субъект является человеком.
[0045]
В различных вариантах осуществления введение снижает степень выраженности одного или более симптомов рака или пролиферативного нарушения. В различных вариантах осуществления один или более симптомов выбраны из группы, состоящей из размера опухоли или опухолевой нагрузки у субъекта, метастазирования опухоли и уровней воспалительных клеток в опухоли или в микросреде опухоли. В различных вариантах осуществления введение снижает размер опухоли или опухолевую нагрузку на 10%, 20%, 30% или более. В различных вариантах осуществления введение изменяет моноциты, макрофаги, гранулоциты, дендритные клетки и/или нейтрофилы в опухоли.
[0046]
В различных вариантах осуществления частица составлена в композицию, содержащую фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество. В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство составлено в композицию, содержащую фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество. В различных вариантах осуществления частица и противораковое терапевтическое средство может быть составлено в одну композицию или в разные композиции.
[0047]
Также предусмотрена композиция, содержащая любую из указанных выше частиц или композиции противоракового терапевтического средства по настоящему раскрытию, или их применение для получения лекарственного препарата, для лечения любого расстройства, описанного в данном документе, связанного с воспалением и раком и/или пролиферативными заболеваниями.
[0048]
Следует понимать, что каждая особенность или вариант осуществления, или комбинация, описанные в данном документе, являются неограничивающими иллюстративными примерами любого аспекта настоящего изобретения и, соответственно, считается, что они могут быть объединены с любыми другими особенностью или вариантом осуществления, или комбинацией, описанными в данном документе. Например, если особенности описаны с помощью таких выражений, как «один вариант осуществления», «некоторые варианты осуществления», «дополнительный вариант осуществления», «конкретные иллюстративные варианты осуществления» и/или «другой вариант осуществления», каждый из данных типов вариантов осуществления является неограничивающим примером особенности, который предназначен для объединения с любой другой особенностью или комбинацией особенностей, описанных в данном документе, без необходимости перечислять все возможные комбинации. Такие особенности или комбинации особенностей применяются к любому аспекту настоящего раскрытия. Если раскрыты примеры значений находящихся в пределах диапазонов, любые такие примеры рассматриваются как возможные конечные точки диапазона, предполагаются любые и все числовые значения между такими конечными точками, любые и все комбинации верхних и нижних конечных точек.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0049]
На фиг. 1 представлен примерный график лечения при введении IMP и антитела-ингибитора контрольных точек иммунного ответа против PD-1.
[0050]
На фиг. 2 показано, что при комбинированной терапии IMP в сочетании с антителом против PD-1 наблюдается более значительное снижение роста опухоли по сравнению с монотерапией в клетках LLC.
[0051]
На фиг. 3A-3B показана противоопухолевая эффективность IMP при введении отдельно или в комбинации с антителом-ингибитором контрольной точки иммунного ответа против PD1. Мышам имплантировали опухолевые клетки MC38 и обрабатывали их либо солевым контролем, либо с применением IMP, антитела против PD1, либо IMP + антитела против PD1 после образования пальпируемой опухоли. (Фиг. 3А) По сравнению с контрольным лечением, лечение с применением IMP ингибировало рост опухоли. Эффективность IMP была сравнима с лечением антителом против PD1. Лечение с применением IMP в сочетании с антителом против PD1 показало синергию с усиленным торможением роста опухоли. (Фиг. 3B) По сравнению с контрольным лечением, лечение с применением IMP характеризовалось длительной выживаемостью. Эффективность выживаемости при лечении посредством IMP превышала эффективность лечения антителом против PD1. Лечение с применением IMP в сочетании с антителом против PD1 показало синергию с длительной выживаемостью по сравнению с контролем и соответствующей монотерапией.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0052]
IMP представляют перспективную возможность для специфичного нацеливания на иммуносупрессивные моноциты в кровотоке и предупреждения их направленной миграции в места опухоли, где их иммуносупрессивное действие способствует росту опухоли, пролиферации и метастизированию. Ожидается, что сочетание нарушения/изменения иммуносупрессивной микросреды опухоли посредством терапии IMP с другими противораковыми терапевтическими средствами, такими как моноклональные антитела против PD1, будет обеспечивать значительный эффект по сравнению с монотерапией, нацеленной только на опухоли.
Определения
[0053]
Каждая публикация, заявка на патент, патент и другие справочные материалы, приведенные в данном документе, включены в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте в той мере, в какой это не противоречит настоящему раскрытию.
[0054]
Также отмечено, что применяемые в данном описании и приложенной формуле изобретения формы единственного числа включают упоминания форм множественного числа, если в контексте явно не указано иное.
[0055]
В контексте данного документа «частица» относится к любому составу вещества, не полученному из тканей, она может представлять собой сферу или сферический фрагмент, гранулу или липосому. Термин «частица», термин «иммуномодифицирующая частица» и термин «гранула» могут применяться взаимозаменяемо в зависимости от контекста. Кроме того, термин «частица» может применяться для включения гранул и сфер.
[0056]
В контексте данного документа «поверхностно-функционализированный» относится к включению химических функциональных групп на поверхности частицы. Поверхностно-функционализированные частицы могут быть получены посредством свободнорадикальной сополимеризации гидрофобных мономеров с карбоновыми кислотами, фосфатами, гидроксильными группами, сульфонатами, фосфонатами и аминными или аммониевыми группами, а также с другими функциональными группами. Общие способы получения поверхностно-функционализированных наночастиц описаны, например, в Froimowicz et al., Curr Org. Chem 17:900-912, 2013.
[0057]
В контексте данного документа «биоразлагаемый» относится к частице, содержащей полимер, который может подвергаться разложению, например, в результате реакции функциональных групп с водой в растворе. Применяемый в данном документе термин «разложение» относится к растворимости, либо посредством снижения молекулярной массы, либо посредством преобразования гидрофобных групп в гидрофильные группы. Биоразлагаемые частицы не сохраняются долгое время в организме, и время полного разложения можно контролировать. Биосовместимые биоразлагаемые полимеры, применяемые в соответствии с настоящим изобретением, включают полимеры или сополимеры капролактонов, карбонатов, амидов, аминокислот, сложных ортоэфиров, ацеталей, цианоакрилатов и разлагаемых уретанов, а также такие сополимеры с прямоцепочечными или разветвленными замещенными или незамещенными алканилом, галогеналкилом, тиоалкилом, аминоалкилом, алкенилом или ароматическими гидрокси- или дикарбоновыми кислотами. Кроме того, биологически важные аминокислоты с реакционноспособными группами боковых цепей, такими как лизин, аргинин, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, серин, треонин, тирозин и цистеин или их энантиомеры, могут быть включены в сополимеры с любыми указанными выше материалами для обеспечения конъюгирования реакционноспособных групп с пептидами антигена и белками или конъюгированными фрагментами. Биоразлагаемые материалы, применяемые в соответствии с настоящим изобретением, включают алмаз, PLA, PGA, сульфид полипропилена и полимеры PLGA, а также металлы, такие как железо (Fe), цинк (Zn), кадмий (Cd), золото или серебро. В частицах, описанных в данном документе, также могут применяться биосовместимые, но не являющиеся биоразлагаемыми, материалы. Например, могут применяться биоразлагаемые полимеры акрилатов, этиленвинилацетатов, ацилзамещенных ацетатов целлюлозы, неразлагаемых уретанов, стиролов, винилхлоридов, винилфторидов, винилимидазолов, хлорсульфонированных олефинов, этиленоксида, виниловых спиртов, TEFLON (DuPont, Уилмингтон, Делавер) и нейлоны.
[0058]
В контексте настоящего раскрытия «отрицательно заряженная частица» относится к частицам, которые были модифицированы для содержания фактического поверхностного заряда, который меньше нуля.
[0059]
Дзета-потенциал представляет собой заряд, который проявляется на границе раздела между поверхностью твердого вещества и его жидкой среды. «Отрицательный дзета-потенциал» относится к частице с дзета-потенциалом поверхности частицы, представленным в милливольтах (мВ) и измеренным посредством инструмента, известного в данной области для расчета дзета-потенциала, например, анализатора дзета-потенциала NanoBrook ZetaPlus или Malvern Zetasizer.
[0060]
«Карбоксилированные частицы» или «карбоксилированные гранулы», или «карбоксилированные сферы» включают любую частицу, которая была модифицирована или поверхностно-функционализирована для добавления одной или более карбоксильных групп на поверхность частицы. В некоторых вариантах осуществления добавления карбоксильной группы усиливает поглощение фагоцитов/моноцитов частиц из кровотока, например, посредством взаимодействия с фагоцитарными рецепторами, такими как MARCO. Карбоксилирование частиц может быть достигнуто с использованием любого соединения, которое добавляет карбоксильные группы, включая без ограничения сополимер этилена с малеиновым ангидридом (РЕМА).
[0061]
Применяемый в данном документе термин «регулирование» или «изменение» относится к модификации, модуляции или изменению иммунного ответа в месте опухоли или в микросреде опухоли. Примеры модификации или изменения иммунного ответа включают без ограничения снижение количества или активности иммуносупрессивных клеток в месте опухоли или в микросреде опухоли, снижение инфильтрации иммуносупрессивных иммунных клеток в месте опухоли или в микросреде опухоли, повышение количества провоспалительных иммунных клеток в месте опухоли или микросреде опухоли, повышение инфильтрации провоспалительных иммунных клеток в месте опухоли или микросреде опухоли, повышение активности или функционирования провоспалительных иммунных клеток в месте опухоли или микросреде опухоли, повышение количества противоопухолевых иммунных клеток в месте опухоли или микросреде опухоли, повышение инфильтрации противоопухолевых иммунных клеток в месте опухоли или в микросреде опухоли, повышение активности или функционирования противоопухолевых иммунных клеток в месте опухоли или в микросреде опухоли и/или уничтожение клеток, связанных с иммуносупрессией.
[0062]
Применяемый в данном документе термин «микросреда опухоли» (TME) относится к клеткам, молекулам и кровеносным сосудам, которые окружают и питают клетки опухоли (Словарь онкологических терминов Национального института онкологии (National Cancer Institute Dictionary of Cancer Terms)). Микросреда опухоли включает иммунные клетки, такие как полученные из костного мозга воспалительные клетки, миеломоноцитарные клетки, cупрессорные клетки миелоидного происхождения, опухоль-ассоциированные макрофаги, дендритные клетки и лимфоциты, строма, фибробласты, сигнальные молекулы и внеклеточный матрикс (ВКМ) (Joyce et al., Science 348:74-80, 2015).
[0063]
В контексте настоящего изобретения «субъект» относится к человеку или животному, отличающемуся от человека, в том числе млекопитающему или примату, которому вводят частицу, описанную в данном документе. Субъекты могут включать животных, таких как собаки, кошки, крысы, мыши, кролики, лошади, свиньи, овцы, крупный рогатый скот, люди и другие приматы.
[0064]
Применяемый в данном документе термин «терапевтически эффективное количество» означает количество мишень-специфической композиции по настоящему раскрытию, которое эффективно для улучшения или уменьшения одного или более симптомов или признаков заболевания или расстройства, подлежащих лечению.
[0065]
Термины «лечить», «подвергать лечению», «процесс лечения» и «лечение», применяемые относительно способов по настоящему раскрытию, относятся к уменьшению, снижению, подавлению или улучшению, либо временно, либо постоянно, либо частично, либо полностью, одного или более клинических симптомов, проявлений или прогрессирования явления, заболевания или состояния. Такое лечение не обязательно должно быть абсолютно применимым.
Модуляторы контрольных точек иммунного ответа
[0066]
Белок запрограммированной смерти клетки 1 (PD-1), также известный как дифференцировочный кластер 279 (CD279), представляет собой коингибиторный рецептор клеточной поверхности, экспрессируемый на активированных T-клетках, В-клетках и макрофагах, и является компонентов блокады контрольных точек иммунного ответа (Shinohara et al., Genomics., 23(3):704, (1994); Francisco et al., Immunol Rev., 236: 219, (2010)). PD-1 ограничивает активность T-клеток при взаимодействии с его двумя лигандами PD-L1 (также известным как B7-H1; CD274) и PD-L2 (B7-DC; CD273) (Postow et al., J Clin Oncol., 33: 9, (2015)). Взаимодействие PD-1 с PD-L1 и PD-L2 снижает пролиферацию T-клеток, выработку цитокинов и цитотоксичную активность (Freeman GJ et al., J Exp Med., 192:1027-34, (2000); Brown JA et al., J Immunol., 170:1257- 66, (2003)).
[0067]
Для иммунотерапии на основе ингибирования PD-1 Управлением США по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) было одобрено два моноклональных антитела. Пембролизумаб (КЕЙТРУДА, Merck Sharp & Dohme Corp.) одобрен для применения при лечении метастатической меланомы, а ниволумаб (Опдиво, Bristol-Myers Squibb) одобрен для применения при лечении метастатической меланомы и метастатического немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ). Оба данных антитела связываются с рецептором PD-1 и блокируют его взаимодействие с его лигандами, PD-L1 и PD-L2. В различных вариантах осуществления антитело против PD-1 ингибирует или блокирует связывание рецептора PD-1 с одним или обоими его лигандами, PD-L1 и PD-L2.
[0068]
Дополнительные антитела к PD-1 были описаны в патентах США №№ 8 735 553; 8 617 546; 8 008 449; 8 741 295; 8 552 154; 8 354 509; 8 779 105; 7 563 869; 8 287 856; 8 927 697; 8 088 905; 7 595 048; 8 168 179; 6 808 710; 7 943 743; 8 246 955; и 8 217 149.
[0069]
Также было показано, что ингибиторы PD-L1 эффективны для ингибирования солидных опухолей при раке мочевого пузыря, раке головы и шеи и видах рака пищевода (Herbst RS et al., J Clin Oncol., 31: 3000 (2013); Heery CR et al., J Clin Oncol., 32: 5s, 3064 (2014); Powles T et al., J Clin Oncol, 32: 5s, 5011(2014); Segal NH et al., J Clin Oncol., 32: 5s, 3002 (2014)).
[0070]

CTLA-4 (цитотоксический Т-лимфоцит-ассоциированный белок 4) (CD152) представляет собой белковый рецептор, который конститутивно экспрессируется в регуляторных Т-клетках, но только после активации в обычных Т-клетках. CTLA-4 является членом костимулирующего пути CTLA-4/CD28: B7-1/B7-2 передачи сигналов T-клеток и активации APC (Grosso et al., Cancer Immun. 13:5, 2013) и выступает в качестве отрицательного регулятора активации T-клеток посредством связывания с B7-1 или B7-2 для ослабления ответов T-клеток. Предполагается, что CTLA-4 функционирует в качестве иммунной контрольной точки. Антитела, специфичные к CTLA-4, включают тремелимумаб и ипилимумаб (ЕРВОЙ), которые были одобрены для лечения меланомы.
[0071]
+
+
LAG-3 (ген активации лимфоцитов 3)(CD223) представляет собой рецептор клеточной поверхности, который экспрессируется рядом иммунных клеток, включая активированные Т-клетки. LAG-3 представляет собой отрицательный регулятор CD8 T-клеток и его дефицит связан с усилением пролиферации CD8T-клеток (Workman et al. J Immunol 174:688-695 (2005)). Важно отметить, что LAG-3 экспрессируется совместно с PD-1 на лимфоцитах, инфильтрирующих опухоль, и истощенных Т-клетках как в доклинических моделях опухолей, так и в образцах раковых пациентов, и было показано, что он способствует уклонению опухоли от распознавания иммунной системой (Andrews et al., Immunol Rev., 276(1):80-96 (2017); Le Mercier et al. Front Immunol., 6:418 (2015); Woo et al. Cancer Res., 15;72(4):917-27 (2011); Zhou et al. Oncoimmunology 7(7):e1448332 (2018)). Ингибирование LAG-3 показало себя многообещающим в качестве терапевтической стратегии на доклинических моделях (Grosso et al. J Clin Invest., 117(11):3383-92 (2007); Woo et al. Cancer Res., 15;72(4):917-27 (2011)) и ингибирование LAG-3 с использованием только моноклональных антител или в комбинации с другими ингибиторами контрольных точек антител, такими как Ниволумаб и Пембролизумаб, в настоящее время изучаются в клинических испытаниях в отношении многочисленных видов рака.
[0072]
+
TIM-3 (T-клеточный иммуноглобулин и муциновый домен 3) представляет собой трансмембранный белок, который экспрессируется на терминально дифференцированных и активированных Т-клетках и отвечает за ингибирование Т-клеточных ответов и экспрессию воспалительных цитокинов, таких как IFN-γ. TIM-3 экспрессируется совместно с PD-1 на лимфоцитах, инфильтрирующих опухоль, и его экспрессия связана с истощением Т-клеток и подавлением Т-клеточных ответов (Linhares et al., Front Immunol., 9:1909 (2018); Das et al. Immunol Rev. 276(1):97-111 (2017)). Высокие уровни экспрессии TIM-3 на CD8 T-клетках связаны с уклонением опухоли от распознавания иммунной системой и связано с плохим прогнозом для пациентов с раком (Anderson et al. Immunity 17;44(5):989-1004 (2016); Das et al. Immunol Rev. 276(1):97-111 (2017)). Кроме того, было показано, что активация TIM-3 в PD-1, экспрессирующем инфильтрирующие опухоль лимфоциты, опосредует устойчивость к терапевтическим средствам против PD-1 (Koyama et al., Nat Commun., 7:10501 (2016)). В соответствии с данными наблюдениями, совместная блокада TIM-3, опосредованная моноклональными антителами, наряду с антителом против PD-1, показала многообещающие противоопухолевые эффекты на нескольких доклинических моделях опухолей (Ngiow et al., Cancer Res., 3540-3551 (2011); Anderson et al. Immunity 17;44(5):989-1004 (2016)) и в настоящее время проводится несколько клинических испытаний для оценки эффективности моноклональных антител против TIM-3 по отдельности или в комбинации с ингибиторными антителами контрольных точек иммунного ответа.
Иммуномодифицирующие частицы
[0073]
В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия представлено применение частицы с отрицательным дзета-потенциалом и не содержащей ассоциированных антигенов, пептидов или других биоактивных материалов в способах лечения. В различных вариантах осуществления частица представляет собой поверхностно-функционализированную частицу.
[0074]
Частицы могут быть образованы из широкого диапазона материалов. Частица предпочтительно состоит из материала, пригодного для биологического применения. Например, частицы могут состоять из стекла, оксида кремния, сложных полиэфиров гидроксикарбоновых кислот, полиангидридов дикарбоновых кислот или сополимеров гидроксикарбоновых кислот и дикарбоновых кислот и биосовместимых металлов. В различных вариантах осуществления частицы могут состоять из сложных полиэфиров прямоцепочечных или разветвленных, замещенных или незамещенных, насыщенных или ненасыщенных, линейных или сшитых алканил-, галогеналкил-, тиоалкил-, аминоалкил-, арил-, аралкил-, алкенил-, аралкенил-, гетероарил- или алкоксигидроксикислот, или полиангидридов прямоцепочечных или разветвленных, замещенных или незамещенных, насыщенных или ненасыщенных, линейных или сшитых алканил-, галогеналкил-, тиоалкил-, аминоалкил-, арил-, аралкил-, алкенил-, аралкенил-, гетероарил- или алкоксидикарбоновых кислот. Кроме того, частицы могут представлять собой квантовые точки или состоять из квантовых точек, таких как частицы полистирола квантовых точек (Joumaa et al. (2006) Langmuir 22: 1810-6). Также могут быть использованы частицы, включающие смеси сложноэфирных и ангидридных связей (например, сополимеры гликолевой и себациновой кислоты). Например, частицы могут содержать материалы, включающие полимеры полигликолевой кислоты (PGA), полимеры полимолочной кислоты (PLA), полимеры полисебациновой кислоты (PSA), сополимеры молочной и гликолевой кислот (PLGA или PLG; термины взаимозаменяемы), сополимеры молочной и себациновой кислот (PLSA), сополимеры гликолевой и себациновой кислот (PGSA), полимеры сульфида полипропилена, поликапролактон, хитозан и т.д. Другие биосовместимые, биоразлагаемые полимеры, применяемые в настоящем изобретении, включают полимеры или сополимеры капролактонов, карбонатов, амидов, аминокислот, ортоэфиров, ацеталей, цианоакрилатов и разлагаемых уретанов, а также их сополимеров с линейными или разветвленными, замещенными или незамещенными, алканил-, галогеналкил-, тиоалкил-, аминоалкил-, алкенил- или ароматическими гидрокси- или дикарбоновыми кислотами. Кроме того, биологически важные аминокислоты с реакционноспособными группами боковых цепей, такими как лизин, аргинин, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, серин, треонин, тирозин и цистеин или их энантиомеры, могут быть включены в сополимеры с любыми указанными выше материалами для обеспечения конъюгирования реакционноспособных групп с пептидами антигена и белками или конъюгированными фрагментами. Биоразлагаемые материалы, применяемые в соответствии с настоящим изобретением, включают алмаз, PLA, PGA, сульфид полипропилена и полимеры PLGA, а также металлы, такие как железо (Fe), цинк (Zn), кадмий (Cd), золото (Au) или серебро (Ag). В частицах, описанных в данном документе, также могут применяться биосовместимые, но не являющиеся биоразлагаемыми, материалы. Например, могут применяться биоразлагаемые полимеры акрилатов, этиленвинилацетатов, ацилзамещенных ацетатов целлюлозы, неразлагаемых уретанов, стиролов, винилхлоридов, винилфторидов, винилимидазолов, хлорсульфонированных олефинов, этиленоксида, виниловых спиртов, TEFLON (DuPont, Уилмингтон, Делавер) и нейлоны.
[0075]
Частицы по настоящему раскрытию могут быть получены посредством любых способов, известных в данной области техники. Иллюстративные способы получения частиц включают без ограничения микроэмульсионную полимеризацию, межфазную полимеризацию, полимеризацию осаждением, выпаривания эмульсии, диффузии эмульсии, вытеснения растворителя и высаливания (Astete и Sabliov, J. Biomater. Sci. Polymer Edn., 17:247-289(2006)). Способы получения частиц, представленные в данном документе, раскрыты в Патенте США 9,616,113 и публикации Международной заявки на патент WO/2017/143346. Посредством управления процессом получения частиц PLGA можно контролировать свойства частиц (например, размер, распределение по размерам, дзета-потенциал, морфологию, гидрофобность/гидрофильность, захват полипептидов и т.д.). На размер частицы влияет ряд факторов, включая без ограничения концентрацию полимера, например, PLGA, растворитель, применяемый для получения частицы, природу органической фазы, поверхностно-активных веществ, применяемых для получения, вязкость непрерывной и прерывистой фазы, природу применяемого растворителя, применяемую температуру воды, обработку ультразвуком, скорость выпаривания, добавки, напряжение сдвига, стерилизацию, и природу любого инкапсулированного антигена или полипептида.
[0076]
В различных вариантах осуществления частица содержит полимеры, сополимеры, дендримеры, наночастицу алмаза, наночастицы полистирола или металлы. В различных вариантах осуществления подразумевается, что частица содержит полимеры полигликолевой кислоты (PGA), полимолочной кислоты (PLA), полистирола, сополимеры PGA и PLA (сополимер лактида с гликолидом) (PLGA), алмаз (PLGA), липосому, PEG, циклодекстан или металлы, например железо (Fe), цинк (Zn), кадмий (Cd), золото (Au) или серебро (Ag).
[0077]
В различных вариантах осуществления частица представляет собой сополимер с молярным отношением около 50:50, от около 80:20 до около 100:0 полимолочной кислоты:полигликолевой кислоты или от около 50:50, от около 80:20 до около 100:0 полигликолевой кислоты:полимолочной кислоты. В некоторых вариантах осуществления частица представляет собой частицу сополимера молочной и гликолевой кислоты. В различных вариантах осуществления частица содержит 50:50 полимолочной кислоты:полигликолевой кислоты. В различных вариантах осуществления частица содержит от около 99:1 до около 1:99 полимолочной кислоты:полигликолевой кислоты, включая все значения и диапазоны, которые находятся в пределах данных значений.
[0078]
В некоторых вариантах осуществления дзета-потенциал частицы составляет от около -100 мВ до около -1 мВ. В некоторых вариантах осуществления дзета-потенциал частицы составляет от около -100 мВ до около -40 мВ, от около -80 мВ до около -30 мВ, от около -75 мВ до около -40 мВ, от около -70 мВ до около -30 мВ, от около -60 мВ до около -35 мВ или от около -50 мВ до около -40 мВ. В различных вариантах осуществления дзета-потенциал составляет около -30 мВ, -35 мВ, -40 мВ, -45 мВ, -50 мВ, -55 мВ, -60 мВ, -65 мВ, -70 мВ, -75 мВ -80 мВ, -85 мВ, -90 мВ, -95 мВ или -100 мВ, включая все значения и поддиапазоны, которые находятся в пределах данных значений.
[0079]
В некоторых вариантах осуществления частица имеет средний диаметр от около 0,1 мкм до около 10 мкм. В некоторых вариантах осуществления частица имеет средний диаметр от 0,2 мкм до около 2 мкм. В некоторых вариантах осуществления частица имеет диаметр от около 0,3 мкм до около 5 мкм. В некоторых вариантах осуществления частица имеет диаметр от около 0,5 мкм до около 3 мкм. В некоторых вариантах осуществления частица имеет диаметр от около 0,5 мкм до около 1 мкм. В некоторых вариантах осуществления частица имеет диаметр от около 100 до 1500 нм, от около 200 до 2000 нм, от около 100 до 10000 нм, от около 300 до 1000 нм, от около 400 до 800 нм или от около 200 до 700 нм, включая все значения и поддиапазоны, которые находятся в пределах данных значений.
[0080]
Для введения частиц, описанных в данном документе, человеку или другим млекопитающим, частица может быть составлена в стерильную композицию, содержащую один или более стерильных фармацевтически приемлемых носителей. Фраза «фармацевтически или фармакологически приемлемый» относится к молекулярным фрагментам и композициям, которые не вызывают аллергической или других побочных реакций при введении посредством способов, хорошо известных в данной области техники, как описано ниже. «Фармацевтически приемлемые носители» включают любые и все клинически применимые растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические средства и средства, замедляющие абсорбцию, и т.п.
[0081]
Фармацевтические композиции по настоящему раскрытию, содержащие частицу по настоящему раскрытию, могут содержать стерильные фармацевтически приемлемые носители или добавки в зависимости от способа введения. Примеры таких носителей или добавок включают воду, фармацевтически приемлемый органический растворитель, коллаген, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, карбоксивиниловый полимер, натрий карбоксиметилцеллюлозу, полиакрилат натрия, альгинат натрия, водорастворимый декстран, карбоксиметилкрахмал натрия, пектин, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, ксантановую камедь, аравийскую камедь, казеин, желатин, агар, диглицерин, глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, вазелин, парафин, стеариловый спирт, стеариновую кислоту, человеческий сывороточный альбумин (ЧСА), маннит, сорбит, лактозу, фармацевтически приемлемое поверхностно-активное вещество и т.п. Применяемые добавки выбраны без ограничения из вышеперечисленных веществ или их комбинаций, в зависимости от дозированной формы по настоящему изобретению. Для растворов или эмульсий, подходящие носители включают, например, водные или спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, включая физиологический раствор и забуференные среды. Носители для парентерального введения могут включать раствор хлорида натрия, декстрозу Рингера, декстрозу и хлорид натрия, лактат Рингера или нелетучие масла. Носители для внутривенного введения могут включать различные добавки, консерванты или жидкости, питательные вещества или вещества для восполнения электролитов. Подходящими являются различные водные носители, например, стерильные физиологические растворы с фосфатным буфером, бактериостатическая вода, вода, забуференная вода, 0,4% физиологический раствор, 0,3% глицин и т.п., и они могут включать другие белки для повышения стабильности, такие как альбумин, липопротеин, глобулин и т.п., подвергнутые умеренным химическим модификациям или т.п.
[0082]
Предполагается, что частица может дополнительно содержать поверхностно-активное вещество. Поверхностно-активное вещество может быть анионным, катионным или неионным. Обычно в синтезе частиц применяют поверхностно-активные вещества в семействе полоксамеров и полоаксаминов. Пригодные поверхностно-активные вещества включают без ограничения PEG, Tween-80, желатин, декстран, блок-сополимер этилена и оксида пропилена L-63, ПВС, метилцеллюлозу, лецитин, DMAB и РЕМА. Кроме того, биоразлагаемые и биосовместимые поверхностно-активные вещества, включая без ограничения витамин E TPGS (D-α-токоферилполиэтиленгликоль 1000 сукцинат). В некоторый вариантах осуществления применяют два поверхностно-активных вещества. Например, если частицу получают посредством способа двойного эмульгирования, два поверхностно-активных вещества могут включать гидрофобное поверхностно-активное вещество для первой эмульсии и гидрофобное поверхностно-активное вещество для второй эмульсии.
[0083]
th
Терапевтические составы частиц получают для хранения посредством смешивания частиц, имеющих необходимую степень чистоты, с необязательными физиологически приемлемыми носителями, вспомогательными веществами или стабилизаторами. (Remington's Pharmaceutical Sciences 16 edition, Osol, A. Ed. (1980)) в форме лиофилизированных составов или водных растворов. Приемлемые носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях, и включают буферы, например, фосфатная, цитратная, сукцинатная и другие органические кислоты; антиоксиданты, в том числе аскорбиновая кислота и метионин; консерванты (например, хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония, хлорид бензетония; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, например, метил- или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол; и м-крезол); низкомолекулярные полипептиды (менее около 10 остатков); белки, например, сывороточный альбумин, желатин, или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, например, поливинилпирролидон; аминокислоты, например, глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводороды, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие средства, например ЭДТА; сахара, например, сахарозу, маннит, трегалозу или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; или комплексные соединение металла (например, Zn-белковые комплексы).
[0084]
Препараты частиц могут быть стабилизированы посредством лиофилизации. Добавление криопротектора, такого как трегалоза, может уменьшить агрегацию компонентов при лиофилизации. Можно применять любые подходящие способы лиофилизации и восстановления. Специалистам в данной области будет понятно, что лиофилизация и восстановление могут приводить к различной степени потери активности антител и что уровни применения, возможно, придется скорректировать для компенсации.
Способы применения
[0085]
В настоящем документе представлен способ лечения рака или пролиферативного нарушения у субъекта, включающий введение отрицательно заряженной частицы в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем указанная частица не содержит прикрепленный пептид или антигенные фрагменты, и причем введение изменяет популяцию cупрессорных клеток миелоидного происхождения (MDSC), опухоль-ассоциированных макрофагов (TAM), нейтрофилов, дендритных клеток и/или моноцитов в месте опухоли.
[0086]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения рака или пролиферативного нарушения у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц, описанных в данном документе, в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем введение изменяет опухоль-ассоциированную строму, и/или причем введение изменяет стромальную соединительную ткань, фибробласты, эндотелий, жировую ткань, внеклеточный матрикс, периваскулярные клетки, мезенхимальные стволовые клетки, и/или мезенхимальные стромальные клетки, и/или причем введение снижает размер опухоли и/или рост опухоли, и/или причем введение регулирует противоопухолевый иммунный ответ, и/или причем введение регулирует опухолеспецифичный иммунный ответ.
[0087]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ лечения рака или пролиферативного нарушения у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц, описанных в данном документе, в комбинации с противораковым терапевтическим средством, причем введение регулирует раковые стволовые клетки.
[0088]
Способы, применяемые для определения эффектов терапевтических средств относительно иммунных клеток, включают без ограничения микроскопические анализы, гистологические исследования, цитологические исследования, проточную цитометрию, полимеразную цепную реакцию (ПЦР), количественную полимеразную цепную реакцию (кПЦР), секвенирование РНК (RNA-seq), секвенирование одноклеточной РНК (scRNA-seq), секвенирование следующего поколения, полноэкзомное секвенирование, эпигенетический поток, ATAC-seq, микроматричный анализ и масс-цитометрию или CyTOF. Биомаркеры, которые можно применять по отдельности или в комбинации для оценки иммунных клеток, включают маркеры клеточной поверхности и секретируемые белки. Иллюстративные биомаркеры включают без ограничения CD45, CD3, CD4, CD8, CD25, CD44, CD134, CD252, CD137, CD79, CD39, FOXP3, PD-1, LAG-3, TIM-1, IFN-γ, гранзим, перфорин, CD11b, CD11c, Ly6C, Ly6G, CD14, CD16, CD80, MARCO, CD68, CD115, CD204, CD205, CD206, CD163, CD103, CD103c, F4/80, PD-L1, PD-L2, аргиназу, iNOS, ROS, TNF-α, TGF-β, MHC-I, МНС-II, NK1.1, NKG2D, CD244, Ki67, CD19, CD20, CCR2, CXCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR10, CCL2, CCL5, Cx3CR1, CCL10, ICOS, CD40, CD40L, IL1α, IL1β, IL2, IL4, IL5, IL6, IL8, IL12, IL15, IL17, IL21, IL22, TCRγ/δ, TCRα/β, STAT3, ROR1c и RORγt.
[0089]
Раковые стволовые клетки (CSC) были описаны как подмножество клеток, обнаруженных в солидных и гематологических опухолях, которые являются канцерогенными и способны к самообновлению, дифференцировке. В нескольких отчетах описана важность CSC в патогенезе различных опухолей, рецидиве опухоли после терапии и развитии терапевтической резистентности. Для различения CSC в солидных и гематологических опухолях можно применять ряд маркеров клеточной поверхности. Маркеры CSC включают без ограничения CD19, CD20, CD24, CD34, CD38, CD44, CD90, CD133, альдегиддегидрогеназу 1, CEACAM-6/CD66c, BMI-1, коннексин 43/GJA1, DLL4, EpCAM/TROP1, GLI-1, GLI-2, интегрины, PON1, PTEN, ALCAM/CD166, DPPIV/CD26, Lgr5, Musashi-1, A20, ABCG2, CD15, фракталкин, HIF-2α, L1CAM, c-MAF, нестин, подопланин, SOX2, CD96, CD117, FLT3, AFP, CD13, CD90, NF2/Merlin, ABCB5, NGFR, синдекан-1, эндоглин, STRO-1 и PON1.
[0090]
CDxBRCA
PDGFRB
therascreen
therascreen
Множественные диагностические инструменты, предназначенные для характеристики опухолей на клеточном и молекулярном уровне, одобрены FDA и коммерчески доступны. Примеры утвержденной диагностики включают FOUNDATIONONE CDX, FOUNDATIONONE LIQUID, FOUNDATIONONE  HEME, BRACAnalysis CDx, набор Therascreen EGFR RGQ PCR, тест Cobase EGFR Mutation v2, PD-L1 IHC 22C3 pharmDx, Abbott Real Time IDH1, тест MRDx BCR-ABL, анализ VENTANA ALK (D5F3) CDx, Abbott RealTime IDH2, набор Praxis Extended RAS, тест Oncomine Dx Target, анализ мутации LeukoStrat CDx FLT3, анализ FoundationFocus , набор с зондом Vysis CLL FISH, набор реагентов для обнаружения мутаций KITD816V,  FISH, тест для обнаружения мутаций cobas KRAS, набор для ПЦР therascreen KRAS RGQ PCR, FerriScan, Dako c-KIT pharmDx, INFORM Her-2/neu, набор с зондом PathVysion HER-2 DNA, набор SPOT-LIGHT HER2 CISH, система Bond Oracle HER2 IHC, набор HER2 CISH pharmDx, смесь в комплекте с зондом INFORM HER2 DUAL ISH DNA, HercepTest, набор HER2 FISH pharmDx, набор THXID BRAF, набор с зондом Vysis ALK Break Apart FISH, тест для обнаружения мутаций cobas 4800 BRAF V600, анализ VENTANA PD-L1 (SP142), набор для ПЦР  FGFR RGQ RT-PCR и набор для ПЦР  PIK3CA RGQ PCR.
[0091]
В настоящем документе предполагается, что после лечения отрицательно заряженной частицей, описанной в данном документе, необязательно в комбинации с противораковым терапевтическим средством, уровень одного или более биомаркеров увеличивается в диапазоне от около 1,1 до около 10 раз, например, около 1,1, около 1,5, около 2, около 2,5, около 3, около 3,5, около 4, около 4,5, около 5, около 5,5, около 6, около 6,5, около 7, около 7,5, около 8, около 8,5, около 9, около 9,5 или около 10 раз. После лечения с помощью поверхностно-функционализированной частицы, описанной в данном документе, уровень одного или более биомаркеров снижается в диапазоне от около 1,1 до около 10 раз, например, около 1,1, около 1,5, около 2, около 2,5, около 3, около 3,5, около 4, около 4,5, около 5, около 5,5, около 6, около 6,5, около 7, около 7,5, около 8, около 8,5, около 9, около 9,5 или около 10 раз.
[0092]
Типичные заболевания, состояния или расстройства, которые можно лечить с использованием способов, описанных в настоящем документе, включают раковые заболевания, такие как рак пищевода, рак поджелудочной железы, метастатический рак поджелудочной железы, метастатическая аденокарцинома поджелудочной железы, рак мочевого пузыря, рак желудка, фиброзный рак, глиома, злокачественная глиома, диффузная глиома ствола головного мозга, рецидивирующее новообразование головного мозга у детей, почечно-клеточная карцинома, паренхиматозная метастатическая почечно-клеточная карцинома, рак почки, рак предстательной железы, метастатический кастрационно-резистентный рак предстательной железы, рак предстательной железы IV стадии, метастатическая меланома, меланома, злокачественная меланома, рецидивирующая меланома кожи, метастазы меланомы в мозг, меланома кожи IIIA стадии; меланома кожи IIIB стадии, меланома кожи IIIC стадии; меланома кожи IV стадии, злокачественная меланома головы и шеи, рак легкого, немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ), плоскоклеточный немелкоклеточный рак легких, рак молочной железы, рецидивирующий метастатический рак груди, гепатоцеллюлярная карцинома, лимфома Ходжкина, фолликулярная лимфома, лимфома неходжкина, развитая В-клеточная НХЛ, ХЛ, включая диффузную B-крупноклеточную лимфому (ДВККЛ), множественную миелому, хронический миелоидный лейкоз, острый миелоидный лейкоз взрослых в стадии ремиссии; острый миелоидный лейкоз у взрослых с Inv(16)(p13.1q22); CBFB-MYH11; острый миелоидный лейкоз у взрослых с t(16;16)(p13.1 ;q22); CBFB-MYH11; острый миелоидный лейкоз у взрослых с t(8;21)(q22;q22); RUNX1-RUNX1T1; острый миелоидный лейкоз у взрослых с t(9;11)(p22;q23); MLLT3-MLL; острый миелоидный лейкоз у взрослых с t(15;17)(q22;q12); PML-RARA; связанный с алкилирующим средством острый миелоидный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, синдром Рихтера; макроглобулинемия Вальденстрема, глиобластома взрослых; глиосаркома у взрослых, рецидивирующая глиобластома, рецидивирующая рабдомиосаркома у детей, рецидивирующая саркома Юинга/периферическая примитивная нейроэктодермальная опухоль, рецидивирующая нейробластома; рецидивирующая остеосаркома, колоректальный рак, колоректальный рак с положительным результатом на MSI; колоректальный рак с отрицательным результатом на MSI, некератинизирующая карцинома носоглотки; рецидивирующая недифференцированная карцинома носоглотки, аденокарцинома шейки матки; аденосквамозная карцинома шейки матки; плоскоклеточный рак шейки матки; рецидивирующая карцинома шейки матки; рак шейки матки IVA стадии; рак шейки матки IVB стадии, плоскоклеточный рак анального канала; метастатическая карцинома анального канала; рецидивирующая карцинома анального канала, рецидивирующий рак головы и шеи; карцинома, плоскоклеточный рак головы и шеи, плоскоклеточный рак головы и шеи (HNSCC), рак яичников, рак толстой кишки, колоректальный рак, рак прямой кишки, рак желудка, распространенный гастроинтестинальный рак, аденокарцинома желудка; аденокарцинома гастроэзофагеального перехода, новообразования костей, саркома мягких тканей; саркома костей, карцинома тимуса, уротелиальная карцинома, рецидивирующая карцинома из клеток Меркеля; карцинома из клеток Меркеля III стадии; карцинома из клеток Меркеля IV стадии, миелодиспластический синдром, рецидивирующий грибовидный микоз и синдром Сезари. В различных вариантах осуществления виды рака выбраны из рака головного мозга, рака кожи, рака глаза, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, рака пищевода, рака головы и шеи, рака шейки матки, рака печени, рака кости, рака матки, рака яичника, рака мочевого пузыря, рака желудка, рака ротовой полости, рака щитовидной железы, рака почки, рака яичка, лейкоза, лимфомы и мезотелиомы.
[0093]
Предполагается, что указанные в данном документе способы уменьшают размер опухоли или опухолевую нагрузку у субъекта и/или уменьшают метастазирование у субъекта. В различных вариантах осуществления способы уменьшают размер опухоли на 10%, 20%, 30% или более. В различных вариантах осуществления способы уменьшают размер опухоли на 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%, включая все значения и поддиапазоны, которые находятся в пределах данных значений.
[0094]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ снижения количества иммуносупрессивных клеток в области опухоли посредством секвестирования их в селезенке и/или печени, и индуцирования апоптоза у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством.
[0095]
В различных вариантах осуществления введение частиц у субъекта предупреждает накопления вызывающих патологию моноцитов, макрофагов, гранулоцитов и/или нейтрофилов в месте опухоли или микросреде опухоли.
[0096]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ снижения количества моноцитов, макрофагов, гранулоцитов и/или нейтрофилов в опухоли. В различных вариантах осуществления количество моноцитов, макрофагов, гранулоцитов и/или нейтрофилов в опухоли снижается приблизительно в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 раз или более.
[0097]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ изменения противоопухолевого иммунного ответа у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством. В различных вариантах осуществления изменение снижает уровни или активность противоопухолевых APC, макрофагов, дендритных клеток, T-клеток, B-клеток, естественных киллерных T-клеток и/или естественных киллерных клеток.
[0098]
В различных вариантах осуществления введение частиц у субъекта изменяет активность и/или работу иммунных клеток в месте опухоли или микросреде опухоли. В различных вариантах осуществления введение частиц повышает количество воспалительных иммунных клеток в месте опухоли или микросреде опухоли. В различных вариантах осуществления введение частиц субъекту повышает противоопухолевую воспалительную работу или активность иммунных клеток в месте опухоли или микросреде опухоли.
[0099]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ изменения опухоль-ассоциированной стромы, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством.
[0100]
В различных вариантах осуществления введение частиц субъекту изменяет фибробласты, опухоль-ассоциированные фибробласты, адипоциты, эндотелиальные клетки, периваскулярные клетки, мезенхимальные стромальные клетки и/или ВКМ в месте опухоли или опухоль-ассоциированной строме.
[0101]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ снижения размера опухоли и/или роста опухоли у субъекта, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством.
[0102]
В различных вариантах осуществления настоящего раскрытия представлен способ изменения раковых стволовых клеток и/или мезенхимальных стволовых клеток, включающий введение субъекту отрицательно заряженных частиц в комбинации с противораковым терапевтическим средством.
[0103]
В различных вариантах осуществления введение частиц субъекту индуцирует гибель клеток опухоли, апоптоз клеток опухоли, и/или некроз клеток опухоли посредством прямого захвата частиц.
Введение и дозирование
[0104]
В данном документе рассматриваются способы, включающие введение отрицательно заряженной частицы, описанной в данном документе, в комбинации с противораковым терапевтическим средством для лечения субъекта, страдающего раком или пролиферативным нарушением.
[0105]
Способы по настоящему раскрытию осуществляют с использованием любых приемлемые с медицинской точки зрения средств для введения терапевтического средства непосредственно или опосредованно субъекту-млекопитающему, включая без ограничения инъекции, пероральный прием, интраназальное, наружное, чрескожное, парентеральное введение, введение посредством спрея для ингаляции, вагинальное или ректальное введение. Применяемый в данном документе термин «парентеральный», включает подкожные, внутривенные, внутримышечные, внутрисуставные, внутрибрюшинные, интратекальные и интрацистернальные инъекции, а также методики с использованием катетера или инфузии. В различных вариантах осуществления частицу вводят внутривенно, но также ее можно вводить посредством других способов введения, например, без ограничения внутрикожно, подкожно, накожно, перорально, внутрисуставно и интратекально. В различных вариантах осуществления композиции вводят в месте опухоли.
[0106]
В различных вариантах осуществления частицу вводят в дозировке от около 0,1 до около 10 мг/кг. В различных вариантах осуществления частицу вводят в дозировке около 0,1 мг/кг, 0,5 мг/кг, 1,0 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг, 8,0 мг/кг или 10 мг/кг. В различных вариантах осуществления частицу вводят в дозировке около 8,0 мг, 80 мг, 320 мг, 640 мг или 800 мг. Также предусмотрены значения в пределах указанных конечных точек доз. Данные концентрации можно вводить в виде разовой лекарственной формы или в виде нескольких доз.
[0107]
Подразумевается, что противораковое терапевтическое средство, если оно представляет собой известное противораковое терапевтическое средство, вводят в соответствии с инструкциями производителя и лечащего врача. Если частицу и противораковое терапевтическое средство необходимо вводить в том же составе, они могут быть составлены, как описано в данном документе.
[0108]
Количества иммунного модулятора или противоракового терапевтического средства на основе биологического средства в указанной дозировке может варьировать в соответствии с размером индивида, которому вводят терапевтическое средство, а также характеристик расстройства, подлежащего лечению. В иллюстративных вариантах лечения может быть необходимо вводить около 1 мг/сутки, 5 мг/сутки, 10 мг/сутки, 20 мг/сутки, 50 мг/сутки, 75 мг/сутки, 100 мг/сутки, 150 мг/сутки, 200 мг/сутки, 250 мг/сутки, 500 мг/сутки или 1000 мг/сутки. Стандартные исследования зависимости реакции от дозы, сначала на животных моделях, а затем в ходе клинических испытаний, выявляют оптимальные дозировки для конкретных болезненных состояний и популяций пациентов.
[0109]
В различных вариантах осуществления модулятор контрольной точки иммунного ответа, например антитело к PD-1, антитело к CTLA-4 или антитело к PD-L1, вводят в диапазоне доз от 0,1 до 15 мг/кг. Данные концентрации можно вводить в виде разовой лекарственной формы или в виде нескольких доз.
[0110]
Состояния, поддающиеся лечению посредством способов по настоящему раскрытию, предпочтительно встречаются у млекопитающих. Млекопитающие включают, например, людей и других приматов, а также домашних животных или питомцев, таких как собаки и кошки, лабораторных животных, таких как крысы, мыши и кролики, и сельскохозяйственных животных, таких как лошади, свиньи, овцы и крупный рогатый скот. В различных вариантах осуществления субъект является человеком.
[0111]
В различных вариантах осуществления частицу вводят два раза в неделю, один раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели, раз в 4 недели, раз в два месяца, раз в три месяца, раз в 6 месяцев или раз в год.
[0112]
В настоящем раскрытии также предусмотрена стерильная фармацевтическая композиция, содержащая частицу, описанную в данном документе, противораковое терапевтическое средство и фармацевтически приемлемый носитель.
[0113]
В настоящем раскрытии дополнительно предусмотрена стерильная фармацевтическая композиция, содержащая частицу, описанную в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0114]
В настоящем раскрытии дополнительно предусмотрена стерильная фармацевтическая композиция, содержащая противораковое терапевтическое средство и фармацевтически приемлемый носитель.
[0115]
Также предусмотрены шприцы, например, одноразовые или предварительно заполненные шприцы, стерильные герметичные контейнеры, например, флаконы, ампулы, сосуды и/или наборы или упаковки, содержащие любое из вышеперечисленных антител или композиций, необязательно с подходящими инструкциями по применению.
Комбинированная терапия
[0116]
Предполагается, что описанную в данном документе частицу вводят в комбинации с противораковым терапевтическим средством для лечения рака или пролиферативного нарушения. В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство представляет собой химиотерапевтическое средство, биологическое средство, клеточную терапию, гормональную терапию, конъюгат антитела с лекарственным средством, онколитический вирус или противораковую вакцину. Гормональная терапия включает тамоксифен при раке молочной железы, золадекс при раке молочной железы и раке предстательной железы, ингибиторы ароматазы (например, анастрозол, летрозол, экземестан). Конъюгаты антител и лекарственных средств включают брентуксимаб ведотин для лечения лимфом. (мАТ к CD30 + монометилауристатин E), адотрастузумаб энтансин для лечения рака молочной железы. (анти-Her2/Neu + майтанзиноид) и инотузумаб озогамицин для лечения ОЛЛ (анти-CD22 + калихимицин). Онколитические вирусы включают Имлигик (Amgen). Противораковые вакцины включают Сипулейцел-Т для лечения рака предстательной железы. Некоторые противораковые вакцины находятся на стадии разработки и включают без ограничения вакцины на основе белков, полипептидов, нуклеиновых кислот и дендритных клеток.
[0117]
В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство представляет собой химиотерапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из ингибиторов роста, цитотоксического средства, ингибиторов репликации ДНК, ингибиторов киназы, ингибиторов сигнального каскада, ингибиторов ингиогенеза, ингибиторов обмена веществ, ингибиторов синтеза аминокислот, селективных ингибиторов онкогенных белков, ингибиторов метастазирования, ингибиторов антиапоптозных факторов, стимуляторов апоптоза, ингибиторов нуклеозидного сигнального пути, ингибиторов ферментов и средств, повреждающих ДНК.
[0118]
Цитотоксическое средство относится к веществу, которое ингибирует или предотвращает работу клеток и/или вызывает разрушение клеток. Термин предназначен для включения радиоактивных изотопов (например, I131, I125, Y90 и Re186), химиотерапевтических средств и токсинов, таких как ферментативно активные токсины бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения или синтетические токсины или их фрагменты. Нецитотоксическое средство относится к веществу, которое не ингибирует или не препятствует функции клеток и/или не вызывает разрушения клеток. Нецитотоксическое средство может включать средство, которое может быть активировано для приобретения свойств цитотоксичности.
[0119]
Химиотерапевтические средства, предназначенные для применения в способах по настоящему раскрытию, включают без ограничения те, что приведены в таблице 1:
Таблица 1
<b></b><b><u>Алкилирующие средства</u></b><b></b><u>Азотистый иприт </u>мехлорэтаминциклофосфамидифосфамидмелфаланхлорамбуцил
<u>Нитрозомочевины </u>кармустин (BCNU)ломустин (CCNU)семустин (метил-CCNU)
<u>Этиленимин/метил-меламин </u>триэтиленмеламин (ТЕМ)триэтилентиофосфорамид (тиотепа)гексаметилмеламин(HMM, алтретамин)
<u>Алкилсульфонаты</u>Бусульфан
<u>Триазины</u>дакарбазин (DTIC)
<b><u>Антиметаболиты</u></b><u>Аналоги фолиевой кислоты</u>метотрексаттриметрексатпеметрексед(Многоцелевой антифолат)
<u>Аналоги пиримидина</u>5-фторурацилфтородезоксиуридингемцитабинцитозин арабинозид(AraC, цитарабин)5-азацитидин2,2'-дифтордезоксицитидин
<u>Аналоги пурина</u>6-меркаптопурин6-тиогуаниназатиоприн2’-дезоксикоформицин(пентостатин) эритрогидроксинониладенин (EHNA)флударабин фосфат2-хлордезоксиаденозин(кладрибин, 2-CdA)
<b><u>Тип 1 Ингибиторы топоизомеразы</u></b>камптотецинтопотеканиринотекан
<b><u>Модификаторы биологической реакции</u></b>Г-КСФГМ-КСФ
<b><u>Средства дифференциации</u></b>производные ретиноевой кислоты
<b><u>Гормоны и антагонисты</u></b><u>Адренокортикостероиды/антагонисты</u>преднизон и эквивалентыдексаметазонааминоглутетимид
<u>Прогестины</u>гидроксипрогестерона капроатмедроксипрогестерона ацетатмегестрола ацетат
<u>Эстрогены</u>диэтилстилбестролэтинилэстрадиол/эквиваленты
<u>Антиэстроген</u>тамоксифен
<u>Андрогены</u>пропионат тестостеронафлуоксиместерон/эквиваленты
<u>Антиандрогены</u>флутамиданалоги гонадотропин-высвобождающего гормоналейпролид
<u>Нестероидные антиандрогены</u>флутамид
<b></b><b><u>Природные продукты</u></b><b></b><u>Антимитотические лекарственные средства</u><u>Таксаны</u>паклитакселалкалоиды барвинкавинбластин (VLB)винкристинвинорелбинТаксотер (доцетаксел)эстрамустинэстрамустина фосфат
<u>Эпиподофиллотоксин</u>этопозидтенипозид
<u>Антибиотики</u>актиномицин Dдауномицин (рубидомицин)доксорубицин (адриамицин)митоксантронейдарубицинблеомицинпликамицин (митрамицин)митомицин Cдактиномицинафидиколин
<u>Ферменты</u>L-аспарагиназаL-аргиназа
<b><u>Радиосенсибилизирующие средства</u></b>метронидазолмизонидазолдесметилмизонидазолпимонидазолэтанидазолниморазолRSU 1069EO9RB6145SR4233никотинамид5-бромдезоксиуридин5-йододезоксиуридинбромдезоксицитидин
<b><u>Различные средства</u></b><u>Платиновые координационные комплексы</u>ЦисплатинКарбоплатинОксалиплатинАнтрацендионМитоксантрон
<u>Замещенная мочевина</u>гидроксимочевина
<u>Производные метилгидразина</u>N-метилгидразин (MIH)прокарбазин
<u>Адренокортикоидное супрессивное средство</u>митотан <i>(o,p’-</i> DDD)аминоглутетимид
<b><u>Цитокины</u></b>интерферон (α, β, γ)интерлейкин-2
<b><u>Фотосенсибилизирующие средства</u></b>производные гематопорфиринаФотофринпроизводные бензопорфиринаNpe6этиопорфирин олова (SnET2)феоборид-aбактериохлорофилл-aнафталоцианиныфталоцианиныфталоцианины цинка
<b><u>Облучение</u></b>Рентгеновские лучиультрафиолетовое излучениегамма-излучениеизлучение в видимой части спектраинфракрасное излучениемикроволновое излучение
[0120]
Также предполагается, что противораковое терапевтическое средство включает одно или более биологических средств, таких как цитокины, ингибиторы ангиогенеза, модуляторы контрольных точек иммунного ответа и моноклональные антитела. Цитокины включают интерфероны (IFN) и интерлейкины (IL), например, IFN-альфа, IFN-бета, IFN-гамма, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, члены надсемейства трансформирующих факторов роста бета, включая TGF-β1, TGF-β2 и TGF-β3, фактор некроза опухоли альфа, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (Г-КСФ) и гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ).
[0121]

Биологические средства, такие как мишени модуляторов контрольных точек иммунного ответа PD1, PD-L1, CTLA-4, TIMP-3, LAG-3 и / или TIGIT (Т-клеточный иммунорецептор с доменами Ig и ITIM). В различных вариантах осуществления модуляторы контрольных точек иммунного ответа представляют собой антитела, специфичные к PD-1, PD-L1 или CTLA-4. Антитела, специфичные к белкам контрольных точек иммунного ответа включают ипилимумаб (ЕРВОЙ, Bristol-Myers Squibb Company), и тремелимумаб, которые связываются с CTLA-4; антитела к PD-1, такие как пембролизумаб (КЕЙТРУДА, Merck Sharp & Dohme Corp) и ниволумаб (ОПДИВО, Bristol-Myers Squibb); и антитела, которые нацеливаются на PD-L1, например, атезолизумаб (ТЕЦЕНТРИК), авелумаб (БАВЕНСИО) и дурвалумаб (ИМФИНЗИ) (одобренные для лечения уротелиальной карциномы и немелкоклеточного рака легкого), цемиплимаб (ЛИБТАЙО) (одобренный для лечения плоскоклеточного рака кожи).
[0122]
В различных вариантах осуществления моноклональные антитела, применяемые в способах, выбраны из группы, состоящей из алемтузумаба, бевацизумаба, брентуксимаба, цетуксимаба, деносумаба, ибритутомаба, трастузумаба, панитумумаба, пертузумаба и ритуксимаба. В различных вариантах осуществления моноклональные антитела, применяемые в способах, нацелены на рецепторную тирозинкиназу, EGFR, VEGF, VEGFR, PDGF, PDGFR, TGF-β, TGF- β-LAP, SIRP-α, CD47, CD39, CD73 и белок, активирующий фибробласты (FAP).
[0123]
Биологические средства включают моноклональные антитела, которые являются моноспецифичными, биспецифическими, триспецифическими или биспецифическими активаторами Т-клеток (BiTE). Моноклональные антитела, применяемые для лечения рака, включают бевацизумаб (АВАСТИН, Genentech), антитело к VEGF-A; эрлотиниб (ТАРЦЕВА, Genentech и OSI Pharmaceuticals), ингибитор тирозинкиназы, который действует на EGFR, дазатиниб (СПРАЙСЕЛ, Bristol-Myers Squibb Company), ингибитор тирозинкиназы Bcr-Abl для перорального применения; IL-21; пегилированный IFN-α2b; акситиниб (ИНЛИТА, Pfizer, Inc.), ингибитор тирозинкиназы; и траметиниб (МЕКИНИСТ, GlaxoSmithKline), ингибитор MEK (Philips and Atkins, Int Immunol., 27(1):39-46 (2015) которая включена в настоящий документ посредством ссылки). Биспецифичные антитела, применяемые для лечения рака, описаны у Krishnamurthy et al., (Pharmacol Ther. 2018 May;185:122-134), и Yu et al., (J. Hematol Oncol 2017, 10:155), включая блинатумомаб и катумаксомаб.
[0124]
В способе также представлено, что противораковое терапевтическое средство содержит одно или более клеточных терапевтических средств, включая адоптивный клеточный перенос, терапию с использованием лейкоцитов, инфильтрирующих опухоль, терапию с использованием Т-клеток с химерными антигенными рецепторами, терапию с использованием естественных киллерных клеток и терапию с использованием стволовых клеток.
[0125]
Предполагается, что противораковое терапевтическое средство включает один или более иммунотерапевтических препаратов, включая онколитический вирус, онколитическую бактерию или другие бактериальные композиции, регуляторы микробиома, бациллу Кальмета-Герена, агонисты TLR, модулятор микробиома, модуляторы пути STING, и противораковые вакцины. В способе также представлено. что противораковое терапевтическое средство содержит вирусный или бактериальный вектор. В различных вариантах осуществления агонист TLR представляет собой агонист TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TLR12 и/или TLR13. В различных вариантах осуществления агонист TLR образован из вируса, бактерии и/или получен посредством синтеза.
[0126]
В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство содержит фермент. В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство содержит фермент, который нацелен на T-клетки, В-клетки, APC, моноциты, MDSC, TAM, нейтрофилы, другие клетки, образованные из моноцитов, опухоль-ассоциированную строму, раковые стволовые клетки, мезенхимальные стволовые клетки, внеклеточный матрикс и аминокислоты. В различных вариантах осуществления противораковое терапевтическое средство содержит фермент, выбранный из группы, включающей аспарагиназу, кинурениназу, L-аргининдеиминазу, L- метионин-y-лиазу, один или более разлагающих аминокислоты ферментов и один или более разлагающих нуклеозиды ферментов.
[0127]
Предполагается, что частица и противораковое терапевтическое средство можно назначать параллельно, одновременно или последовательно. При параллельном введении двух терапевтических средств не требуется, чтобы средства вводили в одно и то же время или одним и тем же способом, до тех пор, пока существует перекрытие периода времени, в течение которого средства проявляют свой терапевтический эффект. Предполагается одновременное или последовательное введение, а также введение в разные дни или недели.
[0128]
Предполагается, что частицу и противораковое терапевтическое средство можно назначать одновременно в одном составе. Кроме того, предполагается, что средства вводят в отдельном составе и вводят одновременно, с параллельным обращением к средствам, вводимым с интервалом в 30 минут.
[0129]
В другом аспекте противораковое терапевтическое средство вводят до введения композиции частицы. Под предварительным введением понимают введение противоракового терапевтического средства в течение одной недели до лечения с использованием частиц, но не более чем за 30 минут до приема частиц. Также предполагается, что противораковое терапевтическое средство вводят после введения композиции частицы. Под последующим введением подразумевается введение в период от 30 минут после лечения с использованием частиц до одной недели после введения.
Наборы
[0130]
В качестве дополнительного аспекта настоящее раскрытие включает наборы, которые включают одно или более соединений или композиций, упакованных таким образом, чтобы облегчить их применение на практике в способах по настоящему раскрытию. В одном варианте осуществления такой набор включает соединение или композицию, описанные в данном документе (например, композицию, содержащую только частицу или в комбинации с противораковым терапевтическим средством), упакованные в контейнер, такой как герметичный флакон или сосуд, с этикеткой, прикрепленной к контейнеру или включенной в упаковку, в которой описано применение соединения или композиции на практике. Предпочтительно соединение или композиция упакованы в виде стандартной лекарственной формы. Набор может дополнительно включать устройство, подходящее для введения частиц, противоракового терапевтического средства или композиции в соответствии с конкретным способом введения или для проведения скринингового анализа. Предпочтительно набор содержит этикетку, на которой описано применение композиций ингибиторов.
[0131]
Дополнительные аспекты и подробности настоящего раскрытия будут очевидны из следующих примеров, которые предназначены для иллюстрации, а не ограничения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Терапевтическое нацеливание на опухоли с использованием IMP-терапии в комбинации с моноклональными антителами-ингибиторами контрольной точки иммунного ответа к PD-1
[0132]
Для определения противоопухолевой эффективности терапии IMP в комбинации с моноклональными антителами (mAb) PD-1 будут созданы модели ортотопической или сингенной опухоли с использованием мышей C57BL/6 в возрасте 6-8 недель, как описано в Kumar et al. (Cancer Cell 32, 654-668, (2017])). Например, мышам будут имплантированы клетки LLC (карцинома легкого Льюиса), MC38 или EL4 (9,10-диметил-1,2-бензантрацен-индуцированная тимома мышей) посредством подкожной инъекции и случайным образом разделены на 4 группы лечения, как описано ниже:
[0133]
Группа 1: Контрольная обработка (n=7)
[0134]
Группа 2: Только IMP (n=10)
[0135]
Группа 3: Только mAb к Anti-PD1 (n=10)
[0136]
Группа 4: IMP + mAb к PD1 (n=7)
[0137]
Через 24 часа после п/к инъекции опухолевых клеток, мышей обрабатывают с применением IMP (1 мг внутривенно) и/или mAb против PD1 (100 пг внутрибрюшинно). Соблюдается следующий график обработки, и он показан на фиг. 1:
[0138]
День 0: п/к введение клеток LLC или клеток EL4.
<b>Группа</b>
<b>Обработка</b>
<b>Дни обработки IMP</b>
<b>Дни обработки mAb к PD1</b>
<b>1</b>
Солевой раствор (контроль)
-
-
<b>2</b>
Только IMP
1,4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28
-
<b>3</b>
mAb к PD1
-
11, 14, 17, 20, 23, 26, 29
<b>4</b>
IMP + mAb к PD1
1,4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28
11, 14, 17, 20, 23, 26, 29
[0139]
Мышам, получавшим контрольную терапию, вводят физиологический раствор внутривенно и/или внутрибрюшинно вместо IMP и mAb к PD1. Рост опухоли в каждой группе лечения оценивают путем измерения площади опухоли с помощью стандартных штангенциркулей в дни 0, 14, 19, 22, 25 и 29.
[0140]
2
2
У мышей, получавших солевой раствор, к концу периода лечения развивались большие опухоли площадью от 500-600 мм, так что эвтаназия является оправданной. Напротив, ожидается, что комбинированная терапия с использованием как IMP, так и mAb против PD1 приведет к снижению или полному прекращению роста опухоли. Опухоли в группе комбинированного лечения могут вырасти всего до 5-10 мм в течение 40 дней.
[0141]
2
2
Ожидается, что мыши, получавшие только IMP или mAb против PD1, продемонстрируют промежуточный эффект со значительными задержками роста опухоли по сравнению с мышами, получавшими солевой раствор. Предполагается, что к концу лечения в данных группах будут наблюдаться опухоли площадью от 100 до 150 мм. Опухоли в данных группах лечения могут вырасти до 200-250 мм по площади, но не ожидается, что они достигнут размера опухолей, наблюдаемых у мышей, получавших солевой раствор.
[0142]
6
В первоначальном эксперименте мышам прививали опухолевые клетки LLC посредством подкожной инъекции в день 0. Опухолевые клетки LLC (ATCC) выдерживали в монослойной культуре в среде DMEM (Corning CellGro, 10-013-CV) с добавлением 10% FBS (Atlanta Biologicals), 5 нМ глутамина, 25 мМ HEPES и 1% антибиотиков (Invitrogen). Готовили суспензию 0,5×10 клеток LLC, которую вводили в правый нижний бок 7-10-недельных мышей C57BL/6. В день 1 мышей рандомизировали на группы обработки и обрабатывали в соответствии со следующим графиком. Рост опухоли в каждой группе лечения оценивали путем измерения площади опухоли с помощью стандартных штангенциркулей в дни 0, 14, 19, 22, 25 и 29. IMP представляли собой частицы PLGA.
<b>Группа</b>
<b>Обработка</b>
<b>Дни обработки IMP</b>
<b>Дни обработки mAb к PD1</b>
<b>1</b>
Солевой раствор (контроль)
-
-
<b>2</b>
Только IMP
1,4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28
-
<b>3</b>
mAb к PD1
-
11, 14, 17, 20, 23, 26, 29
<b>4</b>
IMP + mAb к PD1
1,4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28
11, 14, 17, 20, 23, 26, 29
[0143]
Результаты показаны на фиг. 2. Как и ожидалось, у мышей, получавших солевой раствор (контроль), к 29 дню развивались большие опухоли. Монотерапия только антителами против PD1 или IMP показала сравнимые противоопухолевые эффекты с медиальным ингибированием роста опухоли по сравнению с обработкой солевым раствором. Комбинированная терапия IMP и mAb против PD1 обеспечивала синергический эффект и усиленное ингибирование роста опухоли по сравнению с обработкой солевым раствором или монотерапией IMP или mAb против PD-1.
Пример 2
Терапевтический эффект монотерапии IMP или комбинации с антителами против PD1
[0144]
2
3
Для определения эффектов комбинированного лечения IMP на модели сингенной опухоли, мышам C57BL/6 в возрасте 6-8 недель имплантировали опухолевые клетки MC38 (аденокарцинома толстой кишки) посредством подкожной инъекции в бок. Мышиные опухолевые клетки MC38 выдерживали в монослойной культуре в среде DMEM с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 2 мМ L-глутамина при 37°C в инкубаторе для тканевых культур с 5% CO. После образования пальпируемой опухоли (размером ~100 мм) животных рандомизировали в одну из четырех групп лечения следующим образом:
[0145] Группа
1: Контрольная обработка (n=10)
[0146]  Группа 2:
IMP (n=10)
[0147] Группа 3:
антитело против PD1 (n=10)
[0148] Группа 4:
IMP + антитело против PD1 (n=10)
[0149]
6
3
Получали суспензию единичных клеток 1×10 95% жизнеспособных клеток, ресуспендированных в 0,1 мл бессывороточной среды DMEM, и вводили в правый нижний бок животных. Обработку начинали после того, как размер опухоли достигал примерно 100 мм. IMP (частички PLGA) (1 мг) вводили внутривенно (в/в), а антитело против PD-1 (100 мкд) вводили внутрибрюшинно (в/б) в соответствии со следующей схемой обработки:
<b>Группа</b>
<b>Обработка</b>
<b>Дни обработки IMP (после образования пальпируемой опухоли)</b>
<b>Дни обработки mAb против PD1 (после образования пальпируемой опухоли)</b>
<b>1</b>
Контроль (солевой раствор)
-
-
<b>2</b>
IMP
1,4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25
-
<b>3</b>
mAb к PD1
-
1,5, 8, 12, 15, 19, 22
<b>4</b>
IMP + mAb к PD1
1,4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25
1,5, 8, 12, 15, 19, 22
[0150]
2
3
Рост опухоли оценивали путем измерения размера опухоли в двух измерениях с помощью штангенциркуля. Объемы опухоли рассчитывали по формуле V = 0,5 × a × b, где a и b - длинный и короткий диаметр опухоли, соответственно. Размеры опухоли выражали в мм.
[0151]
Как показано на фиг. 3А, обработка с использованием IMP обеспечивала сильное ингибирование роста опухоли по сравнению с контрольной обработкой. Эффективность IMP была сравнима с лечением антителом против PD1. Обработка с использованием IMP и антитела против PD1 в комбинации продемонстрировало синергизм и обеспечивало усиление ингибирования роста опухоли по сравнению с соответствующими монотерапиями. Отражая его влияние на рост опухоли, обработка с использованием IMP обеспечивала увеличение выживаемости мышей с опухолью MC38. Эффективность выживаемости при использовании IMP была выше, при использовании антитела против PD1, и комбинированная терапия с использованием IMP и антитела против PD1 продемонстрировали синергетический эффект, который обеспечивал увеличение выживаемости по сравнению с соответствующими монотерапиями (фиг. 3B).
[0152]
Ожидается, что многочисленные модификации и вариации в настоящем раскрытии, изложенные в приведенных выше иллюстративных примерах, будут очевидны специалистам в данной области. Следовательно, в настоящее раскрытие следует помещать только такие ограничения, которые указаны в прилагаемой формуле изобретения.