НЕСТЕРОИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ, ПОЛЕЗНЫЕ В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРОВ РЕЦЕПТОРОВ ГЛЮКОКОРТИКОИДОВ
NONSTEROID COMPOUNDS EFFECTIVE AS GLUCOCORTICOID RECEPTOR MODULATORS

Описание
Настоящее изобретение относится к соединениям, модулирующим рецепторы глюкокортикоидов, а также к терапевтическому применению этих соединений.
Внутриклеточные рецепторы являются классом структурно-родственных белков, участвующих в регуляции генных белков. Стероидные рецепторы являются подклассом этих рецепторов, включающим глюкокортикоидный рецептор (GR), прогестероновый рецептор (PR), андрогенный рецептор (AR), эстрогенный рецептор (ER) и минералокортикоидный рецептор (МР). Регуляция гена этими рецепторами или факторами требует наличия внутриклеточного рецептора и соответствующего лиганда, способного селективно связываться с рецептором таким образом, который влияет на транскрипцию гена.
Современные стероидные модуляторы глюкокортикоидного рецептора (глюкокортикоиды), подобные преднизолону и т.п., являются очень эффективными противовоспалительными средствами, используемыми в настоящее время для лечения таких заболеваний, как ревматоидный артрит (RA), воспалительные заболевания кишечника (IBD), волчанка, аллергии, астма, псориаз, и для предупреждения отторжения трансплантата (J. D. Baxter, Advances in Internal Medicine 45; 317-349; 2000). Полагают, что противовоспалительные эффекты этих соединений опосредуются ингибированием экспрессии провоспалительных медиаторов, таких как молекулы адгезии, цитокины, хемокины и ферменты, по механизму, включающему взаимодействие GR, связанного с лигандом, с факторами траскрипции. Этот механизм называют трансрепрессией (M. Karin, Cell 93; 487-490; 1998).
Использование современных стероидных глюкокортикоидов сопровождается метаболическими и другими побочными эффектами (например, диабетом, гипертензией, остеопорозом, мышечной дистрофией и т.п.). Полагают, что часть этих побочных эффектов опосредуется прямым взаимодействием GR, связанным с лигандом, с элементами на ДНК, чувствительными к глюкокортикоидам (GRE), в целевых генах и последующей индукцией экспрессии гена (J. D. Baxter, Advances in Internal Medicine 45; 317-349; 2000; M. Karin, Cell 93; 487-490; 1998). Другая часть этих побочных эффектов может быть следствием перекрестной реактивности с другими стероидными рецепторами, подобными минералокортикоидному (МР) или прогестероновому рецептору (PR).
Нестероидные глюкокортикоиды не имеют молекулярного структурного сходства со стероидами, и поэтому можно предположить, что отличаются и их физико-химические свойства, фармакокинетические (ФК) параметры, распределение по тканям (например, в центральной или периферической нервной системе), и, что более важно, нестероидные глюкокортикоиды могут демонстрировать меньшую перекрестную реактивность (или ее отсутствие) с другими стероидными рецепторами или показывать меньшие метаболические или другие побочные эффекты (или их отсутствие).
in vitro
in vivo
Настоящее изобретение предлагает нестероидные соединения, которые модулируют глюкокортикоидную рецепторную активность. Более конкретно, настоящее изобретение предлагает высокоаффинные нестероидные соединения для связывания GR, которые демонстрируют противовоспалительные эффекты  и . В соответствии с настоящим изобретением предлагают соединения общей формулы I, или их пролекарства, или их фармацевтически приемлемые соли.
Настоящее изобретение предлагает нестероидные соединения, которые модулируют глюкокортикоидную рецепторную активность. Более конкретно, настоящее изобретение предлагает высокоаффинные нестероидные соединения, которые являются агонистами, частичными агонистами или антагонистами глюкокортикоидного рецептора. В соответствии с настоящим изобретением предлагают соединения общей формулы I
Формула I
или их фармацевтически приемлемые соли.
В этой формуле R-группы имеют следующие значения:
1
-R является -Н или -(1-4С)алкилом;
2
15
2
15
-R является -С(О)R или -S(О)R;
3
16
-R является -Н, -(1-4С)алкилом или -OR;
4
16
-R является -Н, -(1-4С)алкилом или -OR;
6
16
16
-R является -Н или -С(R)NOR;
7
-R является -Н, галогеном или цианогруппой;
-(1-6С)алкилом, -(2-6С)алкенилом или -(2-6С)алкинилом, все необязательно замещенными аминогруппой,
гидроксилом или галогеном;
8
-R является -Н, цианогруппой, галогеном, нитрогруппой;
-(1-6С)алкилом, -(2-6С)алкенилом, -(2-6С)алкинилом или -О(1-6С)алкилом, все необязательно замещенные аминогруппой, гидроксилом или галогеном;
-(гетеро)арилом, необязательно замещенным цианогруппой, галогеном, -(1-4С)алкилом, -(1-4С)алкоксигруппой, -(1-4С)алкокси(1-4С)алкилом или -(гетеро)арилом;
16
16
17
2
18
19
20
2
21
-C(R)NOR, -C(O)N(R), -C(O)R, -C(O)R, -NHC(O)R или -NHS(O)R;
9
-R является -H, галогеном, цианогруппой или -(1-4С)алкилом, необязательно замещенным галогеном;
10
-R является -H или -(1-4С)алкилом;
11
-R является -H;
12
-R является -H, цианогруппой или -(1-4С)алкилом;
13
-R является -H, -(1-4С)алкилом, галогеном или формилом;
14
-R является -H, галогеном, цианогруппой, -(1-4С)алкилом или -(гетеро)арилом;
15
-R является -H;
-(1-6С)алкилом, -(2-6С)алкенилом, -(2-6С)алкинилом, -О(2-6С)алкилом, -О(2-6С)алкенилом или -О(2-6С)алкинилом, все необязательно замещенные одним или более -ОН, галогеном, цианогруппой или -(гетеро)арилом;
2
-(гетеро)арилом, необязательно замещенным -(1-4С)алкилом, галогеном или -NH;
2
16
16
-NH, -(ди)(1-4С)алкиламиногруппой, -(1-4С)алкилтио(1-4С)алкилом, -(1-4С)алкокси(1-4С)алкилом или -NROR;
16
-R является -Н, -(1-6С)алкилом, -(2-6С)алкенилом или -(2-6С)алкинилом;
17
-R является -Н;
-(1-6С)алкилом, необязательно замещенным галогеном, -(1-4С)алкоксигруппой или -(гетеро)арилом, необязательно замещенным галогеном, -(1-4С)алкилом или -(1-4С)алкоксигруппой;
-(3-6С)циклоалкилом или -(гетеро)арилом, необязательно замещенным галогеном, -(1-4С)алкилом или -(1-4С)алкоксигруппой;
18
2
-R является -Н, -NH или -(1-4С)алкилом, необязательно замещенным -ОН, галогеном, цианогруппой или -S(1-4C)алкилом;
19
-R является -Н или -(1-6С)алкилом, необязательно замещенным -ОН или галогеном;
20
-R является -Н;
-(1-6С)алкилом или -(2-6С)алкенилом, оба необязательно замещенные галогеном, -О(1-6С)алкилом, -(гетеро)арилом, необязательно замещенным -(1-4С)алкилом или галогеном;
-(3-6С)циклоалкилом, -(1-6С)алкоксигруппой, -(1-6С)алкенилоксигруппой;
-(гетеро)арилом, необязательно замещенным -(1-4С)алкилом;
2
-NH, -NH(1-6C)алкилом или -NH((гетеро)арилом); и
21
-R является -Н или -(1-6С)алкилом.
Таким образом, было обнаружено, что указанный выше класс соединений, соответствующих Формуле I, или их фармацевтически приемлемых солей, обладает активностью, модулирующей глюкокортикоидный рецептор.
Термин -(1-6С)алкил, как он используется в определении этого изобретения, означает разветвленную или неразветвленную алкильную группу, имеющую 1-6 углеродных атомов, например метил, этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил и трет-бутил, пентил и гексил. Предпочтительными являются -(1-4С)алкилы. Термин -(1-4С)алкил, как он используется в определении этого изобретения, означает разветвленную или неразветвленную алкильную группу, имеющую 1-4 углеродных атомов, например метил, этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил и трет-бутил. Предпочтительными являются метил и этил. Наиболее предпочтительным является метил.
Термин -(3-6С)циклоалкил означает циклическую алкильную группу, имеющую 3-6 углеродных атомов.
Термин галоген означает фтор, хлор, бром или иод.
Термин -(2-6С)алкенил означает разветвленную или неразветвленную алкенильную группу, имеющую 2-6 углеродных атомов, такую как этенил, 2-бутенил, пентенил и гексенил. Предпочтительными являются -(2-4С)алкенилы.
Термин -(2-4С)алкенил означает разветвленную или неразветвленную алкенильную группу, имеющую 2-4 углеродных атомов, такую как этенил и 2-бутенил.
Термин -(2-6С)алкинил означает разветвленную или неразветвленную алкинильную группу, имеющую 2-6 углеродных атомов, такую как этинил, пропинил, бутинил, пентинил и гексинил. Предпочтительными являются -(2-4С)алкинилы.
Термин -(2-4С)алкинил означает разветвленную или неразветвленную алкинильную группу, имеющую 2-4 углеродных атомов, такую как этинил и пропинил.
Термин -О(1-6С)алкил означает -(1-6С)алкилоксигруппу, в которой -(1-6С)алкил имеет значение, определенное прежде.
Термин -О(2-6С)алкенил означает -(2-6С)алкенилоксигруппу, в которой -(2-6С)алкенил имеет значение, определенное прежде.
Термин -О(2-6С)алкинил означает -(2-6С)алкинилоксигруппу, в которой -(2-6С)алкинил имеет значение, определенное прежде.
Термин -(1-4С)алкилокси означает алкилоксигруппу, имеющую 1-4 углеродных атомов, причем алкильный компонент имеет значение, определенное прежде. -(1-2С)Алкоксигруппы являются предпочтительными. Наиболее предпочтительной является метоксигруппа.
Термин -(1-4С)алкокси(1-4С)алкил означает -(1-4C)алкоксильную группу, присоединенную к -(1-4С)алкильной группе, причем обе группы имеют значение, определенное прежде.
Термин -(ди)(1-4С)алкиламиногруппа означает амино группу с по крайней мере одним, необязательно, двумя, водородами, замещенными -(1-4С)алкильной группой, определенной прежде.
Термин -S(1-4C)алкил означает -(1-4С)алкилтиогруппу, в которой -(1-4С)алкильная группа имеет значение, определенное прежде.
Термин -NH(1-6C)алкил означает -(1-6C)алкиламиногруппу, в которой -(1-6C)алкильная группа имеет значение, определенное прежде.
Термин -NH(гетеро)арил означает -(гетеро)ариламиногруппу, в которой -(гетеро)арильная группа имеет значение, определенное прежде.
Термин -(1-4С)алкилтио(1-4С)алкил означает -(1-4С)алкилтиогруппу, присоединенную к -(1-4С)алкильной группе, причем обе группы имеют значения, определенные прежде.
Термин арил означает 6-членную ароматическую кольцевую систему.
Термин -(гетеро)арил означает 5- или 6-членную ароматическую кольцевую систему, содержащую один или более гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, O или S, такую как пиридинил, пиримидинил, пиразинил, тетразолил, тиадиазолил, изоксазолил, оксадиазолил, дигидрооксазолил или фуранил, но не ограничивающейся ими.
Термин фармацевтически приемлемая соль представляет те соли, которые в медицинском смысле пригодны для использования в контакте с тканями людей и низших животных без нежелательной токсичности, раздражения, аллергических реакций и тому подобного при разумном соотношении пользы и риска. Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны в данной области. Их можно получить во время конечного выделения и очистки соединений этого изобретения или отдельно по реакции свободной основной функции соединения с соответствующей неорганической кислотой (такой как хлористоводородная кислота, фосфорная кислота или серная кислота) или с органической кислотой (такой как, например, аскорбиновая кислота, лимонная кислота, винная кислота, молочная кислота, яблочная кислота, малоновая кислота, фумаровая кислота, гликолевая кислота, янтарная кислота, пропионовая кислота, уксусная кислота, метансульфокислота и им подобные). Кислотная функция соединения может реагировать с органическим или неорганическим основанием, подобным гидроксиду натрия, гидроксиду калия или гидроксиду лития.
Изобретение относится к соединениям Формулы I, определенной здесь выше.
3
6
7
9
12
13
14
4
16
Другой аспект изобретения касается соединений Формулы I, в которых -R, -R, -R, -R, -R, -R, -R являются -Н, -R и -R являются -Н или -(1-4С)алкилом, а другие группы имеют указанное значение.
Другой аспект изобретения относится к соединениям Формулы I, в которой
1
-R является -Н;
8
-R является -Н, цианогруппой или галогеном;
-(гетеро)арилом, необязательно замещенным -(1-4С)алкилом;
16
16
17
2
18
19
-С(R)NOR, -C(O)N(R), -C(O)R или -С(О)OR;
10
-R является -(1-4С)алкилом;
15
R является -(1-6С)алкилом, необязательно замещенным одним или более галогенами или -(гетеро)арилами;
2
-(гетеро)арилом, необязательно замещенным -(1-4С)алкилом или -NH; или
-(ди)(1-4С)алкиламиногруппой;
17
R является -(гетеро)арилом, необязательно замещенным -(1-4С)алкоксигруппой;
18
R является -(1-4С)алкилом и
19
R является -(1-6С)алкилом.
В еще одном аспекте это изобретение относится к соединениям Формулы I, в которой
8
-R является цианогруппой,
-(гетеро)арилом, необязательно замещенным -(1-4С)алкилом;
17
18
19
-CO(N)R, -C(O)R или -C(O)R.
8
В следующем аспекте это изобретение относится к соединениям, соответствующим Формуле I, в которой -(гетеро)арил в -R является 6-членным гетероароматическим кольцом.
8
В еще одном аспекте это изобретение относится к соединениям, соответствующим Формуле I, в которой гетероароматическое кольцо в -(гетеро)ариле группы -R содержит 1 или более атомов N.
2
15
В еще одном аспекте это изобретение относится к соединениям, соответствующим Формуле I, в которой -R является -C(O)R.
15
В следующем аспекте это изобретение относится к соединениям, соответствующим Формуле I, в которой -R является 5-членным -(гетеро)арилом.
15
В еще одном аспекте это изобретение относится к соединениям, соответствующим Формуле I, в которой -R является -(1-4С)алкилом, необязательно замещенным одним или более галогенами.
Это изобретение также относится к соединениям, соответствующим Формуле I, которые высоко специфичны к глюкокортикоидному рецептору. Специфичность можно определить, испытывая соединение так, как описано ниже для глюкокортикоидного рецептора, в тестах, проводимых для других хорошо известных рецепторов, таких как прогестероновый рецептор, андрогеновый рецептор, минералокортикоидный рецептор или эстрогеновый рецептор.
Кроме того, настоящее изобретение охватывает все возможные комбинации конкретных и предпочтительных групп, описанных выше.
Соединения настоящего изобретения обладают по крайней мере тремя хиральными углеродными атомами и поэтому могут быть получены в виде чистых энантиомеров, или смеси энантиомеров, или смеси диастереомеров. Способы получения чистых энантиомеров известны в данной области, например кристаллизация солей, полученных из оптически активных кислот и рацемической смеси, или хроматография с использованием хиральных колонок. Для разделения диастереомеров можно использовать колонки с прямой фазой или обращенной фазой.
Соединения настоящего изобретения можно синтезировать по последовательности реакционных стадий, представленных как стадии от А до I.
Стадия А
1
2
Обработка антрахинона () азидом натрия в концентрированной серной кислоте дает желаемый 5Н-дибензо[b,e]азепин-6,11-дион () с количественным выходом (Схема 1).
Стадия В
2
3
Соединения общей структуры  затем могут быть метилированы с образованием соединений общей структуры .
Стадия С
3
4
Соединения общей структуры  могут быть затем восстановлены до соединений общей структуры . Вышеупомянутую реакцию обычно проводят с использованием алюмогидрида лития в качестве реагента.
Стадия D
4
5
Соединения общей структуры  можно затем селективно окислить до морфантридинового производного .
Вышеупомянутую реакцию обычно проводят при комнатной температуре в присутствии диоксида марганца.
Стадии Е, F
5
6
7
in situ
Соединения общей структуры  могут затем реагировать по реакции Дильса-Адлера с образованием кольца D и получением тетрациклических соединений общей структуры . Эти соединения можно затем восстановить  до тетрациклических спиртов общей структуры , которые получают главным образом в транс-конформации.
Первую из вышеупомянутых реакций обычно проводят при пониженной температуре в присутствии диена Данишефского и трифторметансульфоната иттербия с использованием органического растворителя. Эти неочищенные продукты затем восстанавливают при комнатной температуре в присутствии боргидрида натрия с использованием органического растворителя.
Стадия G
7
8
Соединения общей структуры  могут затем реагировать в условиях реакции Мицунобу с образованием азидных соединений с общей структурой .
Вышеупомянутую реакцию обычно проводят при комнатной температуре в присутствии трифенилфосфина, диизопропилазодикарбоксилата и дифенилфосфорилазида с использованием органического растворителя.
Схема 1
Стадия Н
8
9
Соединения общей структуры  можно затем восстановить до свободных аминных соединений общей структуры . Вышеупомянутую реакцию обычно проводят при комнатной температуре в присутствии трифенилфосфина и воды с использованием органического растворителя.
Стадия I
9
10
Эти продукты  затем обычными процедурами переводят в желаемые амиды, карбаматы и производные мочевины, а также в сульфонамиды .
7
9
10
Соединения ,  и  являются ключевыми промежуточными соединениями при образовании всех других соединений, описанных здесь. Эти соединения, уже галогенированные или способные к галогенированию и другому модифицированию, могут быть затем модифицированы способами, описанными здесь, с образованием желаемых веществ с желаемой rel-(2R,10R,14bR)-стереоизомерией.
Соединения настоящего изобретения обладают по крайней мере тремя хиральными углеродными атомами и поэтому могут быть получены в виде чистых энантиомеров, или смеси энантиомеров, или смеси диастереомеров. Способы получения чистых энантиомеров известны в данной области, например кристаллизация солей, полученных из оптически активных кислот и рацемической смеси, процедуры ферментативного разделения или хроматография с использованием хиральных колонок. Для разделения диастереомеров можно использовать колонки с прямой фазой или обращенной фазой.
Было обнаружено, что эутомеры имеют (2S,10S,14bS)-стереохимию.
Соединения настоящего изобретения модулируют глюкокортикоидную рецепторную активность. Поэтому эти соединения могут быть использованы для лечения иммунологических и воспалительных заболеваний. В частности, эти соединения можно использовать для лечения ревматических заболеваний, таких как ревматоидный артрит, ювенильный артрит, анкилозирующий спондилит, дерматологические заболевания (включая псориаз и пемфигус), аллергические заболевания (включая аллергический ринит), атопический дерматит и контактный дерматит, легочные заболевания (включая астму и хроническое обструктивное заболевание легких) и другие иммунные и воспалительные заболевания, включая болезнь Крона, язвенный колит, системную красную волчанку, аутоиммунный хронический активный гепатит, остеоартрит, тендонит и бурсит. Кроме того, эти соединения можно использовать в качестве вспомогательных средств для предупреждения отторжения органов после их трансплантации.
Более конкретно, эти соединения можно использовать для лечения ревматоидного артрита, псориаза, астмы и хронического обструктивного заболевания легких, болезни Крона или язвенного колита, а также для предупреждения отторжения органов после их трансплантации.
in vitro
in vivo
Способы определения связывания с рецептором, а также тесты  и для определения биологической активности этих соединений хорошо известны в данной области. Обычно экспрессированный рецептор обрабатывают испытываемым соединением и измеряют связывание, стимуляцию или ингибирование функциональной реакции.
Для измерения связывания можно использовать отделенный цитозоль, содержащий экспрессированный GR. Можно также использовать радиоактивно или флуоресцентно меченные соединения. В качестве референсного соединения можно использовать нативный гормон или другие соединения, связывающиеся с этим рецептором. В качестве альтернативы можно выполнить тесты конкурентного связывания. Эти аналитические системы можно разработать в собственной лаборатории, или же можно приобрести соответствующие коммерческие наборы для определения связывания. Экспериментальные способы определения аффинности связывания хорошо известны в данной области.
-5
-7
-8
Для того чтобы быть выбранными в качестве модуляторов GR, соединения должны связываться с рецептором с аффиностью, характеризуемой величиной менее 10М. Более предпочтительно аффинность связывания составляет менее 10М и наиболее предпочтительно она составляет менее 10М.
Для измерения функциональной реакции изолированную ДНК, кодирующую ген глюкокортикоидного рецептора, предпочтительно человеческого рецептора, экспрессируют в подходящих клетках хозяина, например в человеческих остеобластных клетках U2OS.
Способы конструирования клеточных линий, экспрессирующих рекомбинантный глюкокортикоидный рецептор, хорошо известны в данной области (Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, latest edition). Экспрессия рецептора достигается экспрессией ДНК, кодирующей желаемый белок. Технология сайт-специфического мутагенеза, лигирования дополнительных последовательностей, PCR и конструирования подходящих систем экспрессии в настоящее время хорошо известны в данной области. Полная ДНК, кодирующая желаемый белок, или ее фрагменты могут быть построены синтетически с использованием стандартных твердофазных технологий, предпочтительно с включением сайтов рестрикции для облегчения лигирования. Подходящие контрольные элементы для транскирпции и трансляции включенной кодирующей последовательности могут быть предоставлены для кодирующих последовательностей ДНК. Как хорошо известно, в настоящее время доступны системы экспрессии, совместимые с многими различными хозяевами, включая прокариотические, такие как бактерии, и эукариотические, такие как дрожжи, растительные клетки, клетки млекопитающих, клетки птиц и им подобные.
in vitro
50
50
50
50
50
50
Воспаление можно моделировать в линии клеток человека, стабильно трансфецированных ДНК человеческого GR и стимулированных для секреции цитокинов, хемокинов и других воспалительных медиаторов. Противовоспалительные эффекты испытываемых соединений можно определить, количественно измеряя ингибирование воспалительной реакции в этой клеточной линии. По кривым зависимости интенсивности реакции от дозы можно рассчитать величины ЕС для испытываемых соединений и для референсного соединения типа преднизолона. Значения ЕС можно сравнить со значениями ЕС, полученными для преднизолона в том же клеточном тесте. Предпочтительно испытываемые соединения имеют значения ЕС в диапазоне ЕС, полученном для преднизолона. Более предпочтительно значения ЕС у испытываемых соединений меньше, чем у преднизолона.
50
50
50
-5
-7
Квалифицированным специалистам известно, что желаемые значения ЕС зависят от природы испытываемого соединения. Например, соединение с ЕС, меньшим 10М, обычно считают кандидатом для отбора в качестве лекарственного средства. Предпочтительно это значение меньше 10М. Однако соединение с большим значением ЕС, но селективно специфичное к конкретному рецептору, может оказаться даже лучшим кандидатом.
In vivo
противовоспалительный эффект испытываемых соединений можно проверить на мышах, подвергнутых воздействию липополисахарида (LPS). Испытываемые соединения вводят системно одновременно с воздействием LPC или прежде него. Противовоспалительные эффекты можно определить количественно как ингибирование LPS-индуцированного TNFα или другого воспалительного цитокина или хемокина в сыворотке мышей (S. R. Hyde & R. E. McCallum, Infection and Immunity, 60; 976-982 (1992)). Способность ингибировать артрит можно испытать на модели артрита, индуцированного у мышей коллагеном типа II (CIA), как способность ингибировать отек лап (D. E. Trentham et al. J Exp Med 146; 857-868 (1977)) или на другой модели артрита.
Это изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение, имеющее общую формулу I, или его соль. Таким образом, соединение, соответствующее формуле I, может быть использовано в терапии.
Подходящими способами введения соединений формулы I или их фармацевтически приемлемых солей, также называемых здесь активными ингредиентами, являются внутримышечные инъекции, подкожные инъекции, внутривенные инъекции, оральное и интраназальное введение. Предпочтительно оральное введение этих соединений. Точная доза и режим введения активного ингредиента или его фармацевтически приемлемой соли зависят от желаемого терапевтического эффекта (например, при лечении астмы, ревматоидного артрита, воспалительных заболеваний кишечника) и могут быть различными у конкретных соединений, а также при различных способах введения; они также могут зависеть от возраста и состояния индивида, которому вводят это лекарственное средство. Обычно терапевтически эффективная суточная доза для соединения этого изобретения находится в интервале от примерно 0,001 до примерно 15 мг/кг массы тела в день; предпочтительно от примерно 0,1 до примерно 10 мг/кг массы тела в день; и наиболее предпочтительно от примерно 0,1 до примерно 1,5 мг/кг массы тела в день. Некоторая оптимизация обычной дозы может потребоваться для определения оптимального уровня и графика дозирования.
Введение соединений этого изобретения, в чистом виде или в соответствующей фармацевтической композиции, можно выполнить, используя любой из принятых способов введения фармацевтических композиций. Так, возможно, например, введение оральное, буккальное (например, сублингвальное), назальное, парентеральное, местное, трансдермальное, вагинальное или ректальное, в твердой и/или полутвердой форме, в виде лиофилизованного порошка или жидких дозированных форм, таких как, например, таблетки, суппозитории, пилюли, мягкие эластичные и твердые желатиновые капсулы, порошки, растворы, суспензии или аэрозоли и т.п., предпочтительно, в виде единичных дозированных форм, пригодных для единичного введения точной дозы.
Дополнительный аспект этого изобретения заключается в применении соединений, соответствующих Формуле I, или их фармацевтически приемлемых солей, или сольватов для приготовления медикаментов для иммунотерапии.
Примеры
1
3
4
6
9
10
11
14
Нумерация в примерах соответствует Схеме 1, в которой R, R, R, R-R=H, R=Me, R-R=H, если не указано иначе.
1
2
+
Смесь концентрированной серной кислоты (25,2 мл) и ДХМ (дихлорметана) (8,4 мл) охладили до 0°С, добавили антрахинон () (5 г, 24 ммоль), затем малыми порциями в течение 1 часа добавили азид натрия (1,84 г, 28,3 ммоль) при 0-5°С. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и затем вылили в ледяную воду (300 мл). Продукт отфильтровали, промыли водой до удаления кислоты и высушили 5Н-дибензо[b,e]азепин-6,11-дион (), полученный в виде белого твердого вещества (5,3 г, 100%). Измерено: (m/z)=224 (М+Н).
2
3
2
+
К суспензии 5Н-дибензо[b,e]азепин-6,11-диона () (50 г, 0,22 моль) в толуоле (800 мл) добавили метилмагнийиодид (3М в EtO, 200 мл, 0,6 моль). Реакционную смесь нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 6 часов, затем вылили в водный раствор хлорида аммония и перемешивали в течение 10 минут. Продукт отфильтровали и высушили; получили 11-гидрокси-11-метил-5,11-дигидродибензо[b,e]азепин-6-он () в виде белого твердого вещества (51,6 г, 96%). Измерено: (m/z)=240 (М+Н).
3
4
4
4
2
4
2
4
+
11-Гидрокси-11-метил-5,11-дигидродибензо[b,e]азепин-6-он () (51,6 г, 0,22 моль) добавили к суспензии LiAlH (33 г, 0,88 моль) в диоксане (850 мл). Реакционную смесь нагрели до 105°С. После 2,5 часов кипячения с обратным холодильником реакционную смесь охладили, разложили избыток LiAlH водным NaSO (55 мл), добавили этилацетат (1,8 л) и NaSO (440 г) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут. Твердое вещество отфильтровали и фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния (гептан:этилацетат=6:4) и получили 28 г (61%) 6,11-дигидро-11-метил-5Н-дибензо[b,e]азепина (). Измерено: (m/z)=210 (М+Н).
4
4
3
2
4
8
+
Раствор 6,11-дигидро-11-метил-5Н-дибензо[b,e]азепина () (8 г, 38,3 ммоль) в ацетоне (1500 мл) охладили до 0°С и добавили НБС (N-бромсусцинамид; 6,81 г, 38,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 20 мин при 0°С, реакцию остановили водным NaHCO (300 мл) и смесь концентрировали при пониженном давлении. Продукт экстрагировали этилацетатом, который промыли солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния (гептан:этилацетат=8:2) и получили 32 г (97%) 2-бром-6,11-дигидро-11-метил-5Н-дибензо[b,e]азепина (, R=Br). Измерено: (m/z)=288/290 (М+Н).
4
5
8
2
8
+
К раствору 2-бром-6,11-дигидро-11-метил-5Н-дибензо[b,e]азепина (, R=Br; 32 г, 0,11 моля) в ДХМ добавили MnO (оксид марганца) (96,6 г, 1,11 моля) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь профильтровали через декалит и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния (гептан:этилацетат=8:2) и получили 29,4 г (92%) 2-бром-11-метил-11Н-дибензо[b,e]азепина (, R=Br). Измерено: (m/z)=286/288 (М+Н).
5
6
8
3
2
4
8
+
К раствору 2-бром-11-метил-11Н-дибензо[b,e]азепина (, R=Br; 666 мг, 2,33 ммоль) при перемешивании добавили 146 мг (0,23 ммоль) трифлата иттербия (III). После 10 минут перемешивания при комнатной температуре добавили 0,89 мл (4,66 ммоль) диена Данишефского. Реакционную смесь оставили стоять в течение ночи при комнатной температуре, затем реакцию остановили водным NaHCO, смесь экстрагировали этилацетатом, экстракт промыли солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния и получили 338 мг (41%) 8-бром-10,14b-дигидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2(1Н)-она (, R=Br). Измерено: (m/z)=354/356 (М+Н).
6
7
8
4
4
4
2
4
8
+
Суспензию 8-бром-10,14b-дигидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2(1Н)-она (, R=Br; 13,07 г, 37 ммоль) в этаноле (700 мл) охладили до 0°С и добавили 14 г (370 ммоль) NaBH. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь охладили, разложили избыток NaBH ацетоном (300 мл), перемешивали 30 минут и концентрировали при пониженном давлении. Продукт экстрагировали этилацетатом и водным NHCl, промыли солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния (гептан:этилацетат=7:3) и получили 7,8 г (60%) rel-[(2R,10R,14bR)-8-бром-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2(1H)-ола (, R=Br). Измерено: (m/z)=358/360 (М+Н).
7
8
8
8
+
Раствор rel-[(2R,10R,14bR)-8-бром-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2(1H)-ола (, R=Br; 5,0 г, 14 ммоль) и трифенилфосфина (4,76 г, 18,1 ммоль) в сухом ТГФ (150 мл) при перемешивании охладили до 0°С и добавили диизопропилазодикарбоксилат (3,60 мл, 18,1 ммоль). Добавили дифенилфосфорилазид (3,90 мл, 18,1 ммоль) и затем прекратили охлаждение. Реакционной смеси дали нагреться до комнатной температуры и оставили на ночь при перемешивании. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния (гептан:этилацетат=95:5) и получили 4,7 г (89%) rel-[(2R,10R,14bR)-2-азидо-8-бром-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепина (, R=Br). Измерено: (m/z)=383/385 (М+Н).
8
9
8
2
8
+
К раствору rel-[(2R,10R,14bR)-2-азидо-8-бром-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепина (, R=Br; 4,7 г, 12,3 ммоль) в ТГФ (150 мл) и НО (4,5 мл) при перемешивании добавили 3,86 г (14,7 ммоль) трифенилфосфина. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при 50°С, затем концентрировали при пониженном давлении и получили rel-[(2R,10R,14bR)-8-бром-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-3-амин (, R=Br). Измерено: (m/z)=357/359 (М+Н).
Пример 1,
10
8
2
3
rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-бром-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-2,2,2-трифторацетамид (, R=Br, R=COCF).
9
10
8
8
2
3
+
К неочищенному  (R=Br), растворенному в МеОН (150 мл), добавили триэтиламин (3,4 мл, 24,6 ммоль) и этилтрифторацетат (7,33 мл, 61,5 ммоль) и реакционную смесь нагрели до 50°С и выдержали в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и затем очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния (гептан:этилацетат=8:2) и получили 4,7 г (84%) rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-бром-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-2,2,2-трифторацетамида (, R=Br, R=COCF). Измерено: (m/z)=453/455 (М+Н).
Пример 2,
10
8
2
3
rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-2,2,2-трифторацетамид (, R=CN, R=COCF).
10
10
8
2
3
4
2
4
2
2
4
8
2
3
+
Раствор  (R=Br, R=COCF; 800 мг, 1,77 ммоль) в НМП (N-метилпирролидон) (15 мл) дегазировали при перемешивании барботированием азота в течение получаса. Добавили 395 мг (4,43 ммоль) CuCN и реакционную смесь перемешивали 7 часов при 200°С. Реакционную смесь разбавили 25% раствором NHOH в НО и продукт экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промыли 25% раствором NHOH в НО, солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния (гептан:этилацетат=8:2) и получили 630 мг (89%) rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-2,2,2-трифторацетамида (, R=CN, R=COCF). Измерено: (m/z)=400 (М+Н).
Пример 3,
10
8
2
2
rel-2,2-дихлор-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (, R=CN, R=COCHCl).
10
9
8
2
3
2
2
2
4
8
К раствору (R=CN, R=COCF; 78 мг, 0,195 ммоль) в EtOH (5 мл) добавили при перемешивании 1 мл 2н. раствора NaOH в НО. Реакционную смесь перемешивали 2 часа при комнатной температуре. Реакцию остановили разбавлением НО и смесь экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промыли солевым раствором, осушили (NaSO), концентрировали при пониженном давлении и получили неочищенный rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-3-амин (, R=CN; 60 мг, 100%).
9
10
8
3
2
2
8
2
2
+
Раствор  (R=CN; 108 мг, 0,356 ммоль) и триэтиламина (52 мл, 0,374 ммоль) в ДХМ (4 мл) при перемешивании охладили до 0°С. Добавили дихлорацетилхлорид (36 мл, 0,374 ммоль) и реакционную смесь 2 часа перемешивали при комнатной температуре. Реакцию остановили насыщенным раствором NaHCO в НО и продукт экстрагировали ДХМ. Органическую фазу осушили и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния с последующей препаративной ВЭЖХ. Лиофилизация из EtOH/НО дала 64 мг (46%) rel-2,2-дихлор-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (, R=CN, R=COCHCl). Измерено: (m/z)=415 (М+Н).
Пример 4,
10
2
3
rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CF).
5
10
2
3
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 1, из  с образованием rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CF). Измерено: (m/z)=375 (М+Н).
Пример 5,
10
8
2
3
3
2
rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5-карбоксамид (: R=CN, R=COCHNS).
9
10
8
8
2
3
3
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CN) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5-карбоксамида (: R=CN, R=COCHNS; 434 мг, 61%). Измерено: (m/z)=430 (М+Н).
Пример 6,
10
8
2
2
rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-2,2 дифторацетамид (: R=CN, R=COCHF).
9
10
8
3
2
2
4
8
2
2
+
К раствору дифторуксусной кислоты (8,5 мкл, 0,135 ммоль) в ДХМ (1 мл) добавили TBTU (тетрафторборат О-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония) (51 мг, 0,159 ммоль) и DIPEA (N,N-диизопропилэтиламин) (26 мкл, 0,149 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Спустя 10 минут добавили раствор  (R=CN; 25 мг, 0,082 ммоль) в ДХМ (1 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакцию остановили насыщенным раствором NaHCO в НО и смесь экстрагировали ДХМ. Органический слой осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния и получили 13 мг (34%) rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-2,2 дифторацетамида (: R=CN, R=COCHF). Измерено: (m/z)=382 (М+Н).
Пример 7,
10
8
2
2
rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]метансульфонамид (: R=CN, R=SOMe).
9
7
10
8
8
2
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CN) с образованием , rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]метансульфонамида (: R=CN, R=SOMe; 13 мг, 34%). Измерено: (m/z)=382 (М+Н).
Пример 8,
10
8
2
2
rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]этансульфонамид (: R=CN, R=SOEt).
9
10
8
8
2
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CN) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]этансульфонамида (: R=CN, R=SOEt; 12 мг, 30%). Измерено: (m/z)=396 (М+Н).
Пример 9,
10
8
2
2
3
2
rel-N'-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-N,N-диметиламиносульфамид (: R=CN, R=SON(CH)).
9
10
8
8
2
2
3
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CN) с образованием rel-N'-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-N,N-диметиламиносульфамида (: R=CN, R=SON(CH); 12 мг, 29%). Измерено: (m/z)=411 (М+Н).
Пример 10,
10
8
2
5
6
rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-3,5-диметилизоксазол-4-карбоксамид (: R=CN, R=COCHNO).
9
10
8
8
2
5
6
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CN) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-3,5-диметилизоксазол-4-карбоксамида (: R=CN, R=COCHNO; 15 мг, 35%). Измерено: (m/z)=427 (М+Н).
Пример 11
10
8
3
2
3
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-ацетил-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-2,2,2-трифторацетамид (, R=СОСН, R=COCF).
10
10
8
2
3
2
3
2
2
3
2
2
4
8
3
2
3
+
К раствору  (R=Br, R=COCF; 250 мг, 0,55 ммоль) в толуоле при перемешивании добавили 8 мг (0,011 ммоль) PdCl(PPh) и 587 мкл (1,73 ммоль) 1-этоксивинилтрибутилолова. Реакционную смесь перемешивали при кипичении с обратным холодильником в течение ночи. Добавили 3 мл 2н. раствора HCl в НО и смесь перемешивали в течение 10 минут при комнатной температуре. Реакцию остановили насыщенным раствором NaHCO в НО и продукт экстрагировали этилацетатом. Органический слой промыли солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния и получили 150 мг (65%) rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-ацетил-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-2,2,2-трифторацетамида (, R=СОСН, R=COCF). Измерено: (m/z)=417 (М+Н).
Пример 12
10
8
3
2
3
3
2
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-ацетил-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5-карбоксамид (: R=СОСН, R=COCHNS).
10 (
10
8
3
2
3
8
3
2
3
3
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из R=СОСН, R=COCF) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-ацетил-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5-карбоксамида (: R=СОСН, R=COCHNS; 27 мг, 54%). Измерено: (m/z)=447 (М+Н).
Пример 13
10
8
3
2
3
, rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-8-[1-(гидроксиимино)этил]-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=С(СН)NOH, R=COCF).
10
10
8
3
2
3
2
4
2
8
3
2
3
+
К раствору  (R=СОСН, R=COCF; 60 мг, 0,14 ммоль) в EtOH добавили при перемешивании гидроксиламин HCl (20 мг, 0,28 ммоль) и пиридин (35 мкл, 0,45 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 40 часов при комнатной температуре. Реакцию остановили разбавлением водой и продукт экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промыли водой и солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния. Лиофилизация из ацетонитрила/НО дала 50 мг (80%) rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-8-[1-(гидроксиимино)этил]-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=С(СН)NOH, R=COCF). Измерено: (m/z)=432 (М+Н).
Пример 14
10
8
5
4
2
3
, rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CHN, R=COCF).
10
10
8
2
3
2
2
3
2
3
4
2
3
3
2
2
4
8
5
4
2
3
-3
+
К раствору  (R=Br, R=COCF; 67 мг, 0,148 ммоль) в смеси диоксана (3 мл) и НО (0,5 мл) добавили при перемешивании PdCl(PPh) (6 мг, 8,8×10 ммоль), KPO×7HO (60 мг, 0,178 ммоль), AsPh (3 мг, 0,010 ммоль) и 2,2-диметилпропандиоловый циклический сложный эфир пиридин-4-бороновой кислоты (78 мг, 0,408 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кипении с обратным холодильником в течение ночи. Реакцию остановили насыщенным раствором NaHCO в НО и продукт экстрагировали в ДХМ, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния и получили 24 мг (36%) rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CHN, R=COCF). Измерено: (m/z)=452 (М+Н).
Пример 15
10
8
5
4
2
2
, rel-2,2-дихлор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CHN, R=COCHCl).
10
10
8
5
4
2
3
8
5
4
2
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CHN, R=COCF) с образованием rel-2,2-дихлор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CHN, R=COCHCl; 18 мг, 55%). Измерено: (m/z)=467 (М+Н).
Пример 16
10
8
5
4
2
2
, rel-2-хлор-2,2-дифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CHN, R=COCFCl).
9
10
8
5
4
8
5
4
2
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CHN) с образованием rel-2-хлор-2,2-дифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CHN, R=COCFCl; 20 мг, 61%). Измерено: (m/z)=468 (М+Н).
Пример 17
10
8
5
4
2
3
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CHN, R=COCH).
9
10
8
5
4
8
5
4
2
3
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CHN) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CHN, R=COCH; 7 мг, 26%). Измерено: (m/z)=398 (М+Н).
Пример 18
10
8
5
4
2
3
2
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]изоксазол-5-карбоксамид (: R=CHN, R=COCHNO).
9
10
8
5
4
8
5
4
2
3
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CHN) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]изоксазол-5 карбоксамида (: R=CHN, R=COCHNO; 19 мг, 57%). Измерено: (m/z)=451 (М+Н).
Пример 19
10
8
5
4
2
4
4
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-5-метилизоксазол-3-карбоксамид (: R=CHN, R=COCHNO).
9 (
10
8
5
4
8
5
4
2
4
4
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из R=CHN) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-5-метилизоксазол-3-карбоксамида (: R=CHN, R=COCHNO; 22 мг, 67%). Измерено: (m/z)=465 (М+Н).
Пример 20
10
8
5
4
2
3
3
2
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5-карбоксамид (: R=CHN, R=COCHNS).
9
10
8
5
4
8
5
4
2
3
3
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CHN) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5-карбоксамида (: R=CHN, R=COCHNS; 20 мг, 59%). Измерено: (m/z)=482 (М+Н).
Пример 21
10
8
5
4
2
5
5
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-2-тиофенацетамид (: R=CHN, R=COCHS).
9
10
8
5
4
8
5
4
2
5
5
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CHN) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-2-тиофенацетамида (: R=CHN, R=COCHS; 21 мг, 62%). Измерено: (m/z)=480 (М+Н).
Пример 22
8
5
4
2
2
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]метансульфонамид (R=CHN, 4-пиридин, R=SOMe).
9
8
5
4
8
5
4
2
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CHN) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]метансульфонамида (R=CHN, R=SOMe; 19 мг, 62%). Измерено: (m/z)=434 (М+Н).
Пример 23
8
5
4
2
2
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]этансульфонамид (R=CHN, R=SOEt).
9
10
8
5
4
8
5
4
2
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CHN) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]этансульфонамида (: R=CHN, R=SOEt; 10 мг, 32%). Измерено: (m/z)=448 (М+Н).
Пример 24
8
5
4
2
2
3
2
, rel-N'-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-N,N-диметиламиносульфамид (R=CHN, R=SON(CH)).
9
10
10:
8
5
4
8
5
4
2
2
3
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (: R=CHN) с образованием rel-N'-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-N,N-диметиламиносульфамида ( R=CHN, R=SON(CH); 14 мг, 42%). Измерено: (m/z)=463 (М+Н).
Пример 25
10
8
5
4
2
2
, rel-2,2-дифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CHN, R=COCHF).
9
10
8
5
4
8
5
4
2
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 6, из (R=CHN) с образованием rel-2,2-дифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CHN, R=COCHF; 15 мг, 50%). Измерено: (m/z)=434 (М+Н).
Пример 26
10
8
5
4
2
2
2
3
, rel-4-амино-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксамид (: R=CHN, R=COCHNO).
9
10
8
5
4
8
5
4
2
2
2
3
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 6, из (R=CHN) с образованием rel-4-амино-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксамида (: R=CHN, R=COCHNO; 23 мг, 70%). Измерено: (m/z)=467 (М+Н).
Пример 27,
10
8
4
3
2
2
3
rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-2-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CHN, R=COCF).
10
10
8
2
3
2
3
3
2
4
2
8
4
3
2
2
3
+
К раствору  (R=Br, R=COCF; 100 мг, 0,22 ммоль) в диоксане при перемешивании добавили трибутилстаннилпиримидин (98 мг, 0,26 ммоль), CsF (72 мг, 0,473 ммоль), Pd(dba) (палладий-дибензилиденацетон, 6 мг, 6,6 мкмоль) и P(tBu) (10% раствор в гексане, 26 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при кипении с обратным холодильником. Реакцию остановили разбавлением водой и органический материал экстрагировали этилацетатом. Органический слой промыли солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния с последующей препаративной ВЭЖХ. Лиофилизация из ацетонитрила/НО дала 31 мг (31%) rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-2-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CHN, R=COCF). Измерено: (m/z)=453 (М+Н).
Пример 28,
10
8
4
3
2
2
3
3
2
rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-2-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5-карбоксамид (: R=CHN, R=COCHNS).
10
10
8
4
3
2
2
3
8
4
3
2
2
3
3
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CHN, R=COCF) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-2-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5-карбоксамида (: R=CHN, R=COCHNS; 14 мг, 47%). Измерено: (m/z)=483 (М+Н).
Пример 29,
10
8
4
3
2
2
3
rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиразин-2-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CHN, R=COCF).
10
10
8
2
3
8
4
3
2
2
3
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 27, из (R=Br, R=COCF) с образованием rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиразин-2-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CHN, R=COCF; 24 мг, 24%). Измерено: (m/z)=453 (М+Н).
Пример 30,
10
8
3
2
3
метил-rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-2-(2,2,2,-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксилат (: R=СООСН, R=COCF).
10
8
2
3
2
2
К раствору  (R=CN, R=COCF; 400 мг, 1 ммоль) в EtOH (20 мл) добавили 8,5 мл 6н. раствора КОН в НО. Смесь нагревали в микроволновой печи при 120°С (175 ватт) в течение 3 часов. Реакционную смесь нейтрализовали 2н. раствором HCl в НО. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и растворитель отогнали с толуолом.
10
8
2
3
Остаток растворили в МеОН (30 мл) и добавили триэтиламин (277 мкл, 2 ммоль) и этилтрифторацетат (597 мкл, 5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при 55°С и затем концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния и получили 331 мг (79%)  (R=СООН, R=COCF).
10
10
8
2
3
3
2
2
4
2
8
3
2
3
+
К перемешиваемому раствору  (R=СООН, R=COCF; 30 мг, 0,072 ммоль) в метаноле (2 мл) при 0°С добавили тионилхлорид (300 мкл, 3,46 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавили насыщенным раствором NaHCO в НО и продукт экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промыли солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния (гептан:этилацетат=8:2). Лиофилизация из EtOH/НО дала 10,3 мг (33%) метил-rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-2-(2,2,2-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксилата (: R=СООСН, R=COCF). Измерено: (m/z)=433 (М+Н).
Пример 31,
10
8
2
3
2
3
этил-rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-2-(2,2,2,-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксилат (: R=СООСНСН, R=COCF).
10
10
8
2
3
8
2
3
2
3
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 30, из (R=СООН, R=COCF) с образованием этил-rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-2-(2,2,2-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксилата (: R=СООСНСН, R=COCF; 18,9 мг, 59%). Измерено: (m/z)=447 (М+Н).
Пример 32,
10
8
2
2
3
2
3
пропил-rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-2-(2,2,2-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксилат (: R=СОО(СН)СН, R=COCF).
10
10
8
2
3
8
2
2
3
2
3
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 30, из (R=СООН, R=COCF) с образованием пропил-rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-2-(2,2,2-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксилата (: R=СОО(СН)СН, R=COCF; 10,3 мг, 33%). Измерено: (m/z)=461 (М+Н).
Пример 33,
10
8
6
5
2
3
rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-N-фенил-2-(2,2,2-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксамид (: R=CONH(СН), R=COCF).
10
10
8
2
3
2
8
6
5
2
3
+
К раствору  (R=СООН, R=COCF; 40 мг, 0,096 ммоль) в ДМФА добавили при перемешивании TBTU (46 мг, 0,144 ммоль) и DIPEA (84 мкл, 0,48 ммоль). Затем добавили анилин (10 мкл, 0,11 ммоль) и реакционную смесь перемешивали 40 часов при комнатной температуре. Реакцию остановили добавлением НО и органический материал экстрагировали ДХМ. Огранический слой осушили на разделительном фильтре и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили с использованием препаративной ВЭЖХ и получили 27,3 мг (58%) rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-N-фенил-2-(2,2,2-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксамида (: R=CONH(СН), R=COCF). Измерено: (m/z)=494 (М+Н).
Пример 34,
10
8
6
4
2
3
rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-N-(пиридин-4-ил)-2-(2,2,2-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксамид (: R=CONH(CHN), R=COCF).
10
10
8
2
3
8
5
4
2
3
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 33, из (R=СООН, R=COCF) с образованием rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-N-(пиридин-4-ил)-2-(2,2,2,-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксамида (: R=CONH(CHN), R=COCF; 17,5 мг, 37%). Измерено: (m/z)=495 (М+Н).
Пример 35,
10
8
6
6
2
3
rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-N-(2-метоксипиримидин-5-ил)-10-метил-2-(2,2,2-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксамид (: R=CONH(CHNO), R=COCF).
10
10
8
2
3
8
6
6
2
3
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 33, из (R=СООН, R=COCF) с образованием rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-N-(2-метоксипиримидин-5-ил)-10-метил-2-(2,2,2-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксамида (: R=CONH(CHNO),R=COCF; 35,5 мг, 71%). Измерено: (m/z)=525 (М+Н).
Пример 36,
10
8
7
7
2
3
rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-N-(2-метоксифенил)-10-метил-2-(2,2,2-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксамид (: R=CONH(СНО), R=COCF).
10
10
8
2
3
8
7
7
2
3
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 33, из (R=СООН, R=COCF) с образованием rel-(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-N-(2-метоксифенил)-10-метил-2-(2,2,2-трифторацетиламино)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксамида (: R=CONH(СНО), R=COCF; 30,3 мг, 61%). Измерено: (m/z)=524 (М+Н).
Пример 37,
10
8
2
4
3
2
3
rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(2-метилтетразол-5-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CNH, R=COCF).
10
10
8
2
3
2
2
4
8
4
2
3
+
К раствору  (R=CN, R=COCF; 210 мг, 0,53 ммоль) в DME (3 мл) добавили триметилсилилазид (278 мкл, 2,12 ммоль) и оксид дибутилолова (52 мг, 0,21 ммоль). Смесь нагревали в микроволновой печи при 160°С (300 ватт) в течение 45 минут. Реакцию остановили разбавлением 0,2н. NaOH и смесь промыли этилацетатом. Затем щелочной водный слой подкислили 2н. HCl и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промыли НО и солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Получили 208 мг (89%)  (R=CNH, R=COCF). Измерено: (m/z)=443 (М+Н).
10
10
8
4
2
3
2
3
2
2
4
8
2
4
3
2
3
+
К раствору  (R=CNH, R=COCF; 200 мг, 0,45 ммоль) в ацетоне/ДМФА (1/1 20 мл) добавили NaCO (72 мг, 0,68 ммоль), а затем MeI (280 мкл, 4,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 3 часа при комнатной температуре. Реакцию остановили 2н. HCl и смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промыли НО и солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния (гептан:этилацетат=6:4). Получили 99 мг (48%) rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(2-метилтетразол-5-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CNH, R=COCF). Измерено: (m/z)=457 (М+Н).
Пример 38
10
8
2
4
3
2
2
, rel-2-хлор-2,2-дифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(2-метилтетразол-5-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CNH, R=COCClF).
10 (
10
8
2
4
3
2
3
8
2
4
3
2
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из R=CNH, R=COCF) с образованием rel-2-хлор-2,2-дифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(2-метилтетразол-5-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CNH, R=COCClF; 24 мг, 73%). Измерено: (m/z)=473 (М+Н).
Пример 39
10
8
2
4
3
2
3
3
2
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(2-метилтетразол-5-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5-карбоксамид (: R=CNH, R=COCHNS).
10 (
10
8
2
4
3
2
3
8
2
4
3
2
3
3
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из R=CNH, R=COCF) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(2-метилтетразол-5-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5карбоксамида (: R=CNH, R=COCHNS; 17 мг, 50%). Измерено: (m/z)=487 (М+Н).
Пример 40
10
8
4
2
3
2
3
, rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CNH, R=COCF).
10
10
8
2
3
2
2
2
2
4
8
6
12
2
2
3
+
Раствор  (R=Br, R=COCF; 1,9 г, 4,19 ммоль), КОАс (1,23 г, 12,6 ммоль) и биспинаколатоборона (1,17 г, 4,61 ммоль) в ДМФА (60 мл) дегазировали барботированием азота в течение 15 минут. Добавили PdCl(dppf) ([1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II); 103 мг, 0,13 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при 80°С. Реакцию остановили добавлением НО и продукт экстрагировали этилацетатом. Органический слой промыли солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния (гептан:этилацетат=85:15). Получили 1,06 г (51%)  (R=СНВО, R=COCF). Измерено: (m/z)=501 (М+Н).
10
10
8
6
12
2
2
3
2
2
3
2
3
4
2
3
3
2
2
4
8
4
2
2
2
3
+
К раствору  (R=СНВО, R=COCF; 1,12 г, 2,24 ммоль) в смеси диоксана (42 мл) и НО (7 мл) добавили при перемешивании PdCl(PPh) (47 мг, 0,067 ммоль), KРО×7НО (910 мг, 2,69 ммоль), AsPh (47 мг, 0,154 ммоль) и 4,6-дихлорпиримидин (918 мг, 6,16 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при 100°С. Реакцию остановили насышенным раствором NaHCO в НО и продукт экстрагировали этилацетатом, промыли солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния и получили 0,64 г (63%)  (R=CHNCl, R=COCF). Измерено: (m/z)=487 (М+Н).
10
10
8
4
2
2
2
3
3
2
2
4
8
4
3
2
2
3
+
К раствору  (R=CHNCl, R=COCF; 614 мг, 1,26 ммоль) в ТГФ (50 мл) и аммиаке (22 мл) при перемешивании добавили цинк (2,17 г, 33,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 5 часов при кипении с обратным холодильником. Реакцию остановили насыщенным раствором NaHCO в НО и профильтровали через декалит. Продукт экстрагировали этилацетатом, промыли солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния и получили 485 мг (85%) rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CHN, R=COCF). Измерено: (m/z)=453 (М+Н).
Пример 41
10
8
5
4
2
3
, rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-2-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CHN, R=COCF).
10
10
8
6
12
2
2
3
2
2
3
2
3
4
2
3
3
2
2
4
8
5
4
2
3
+
К раствору  (R=СНВО, R=COCF; 50 мг, 0,10 ммоль) в смеси диоксана (3 мл) и НО (0,5 мл) при перемешивании добавили PdCl(PPh) (6 мг, 8,55 мкмоль), КРО×7НО (40 мг, 0,12 ммоль), AsPh (6 мг, 19,6 мкмоль) и 2-бромпиридин (26,3 мкл, 0,28 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при 100°С. Реакцию остановили насыщенным раствором NaHCO в НО и продукт экстрагировали этилацетатом, промыли солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния с последующей препаративной ВЭЖХ и получили 8 мг (18%) rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиридин-2-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CHN, R=COCF). Измерено: (m/z)=452 (М+Н).
Пример 42
10
8
4
3
2
2
3
3
2
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5-карбоксамид (: R=CHN, R=COCHNS).
10 (
10
8
4
3
2
2
3
8
4
3
2
2
3
3
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из R=CHN, R=COCF) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5-карбоксамида (: R=CHN, R=COCHNS; 20 мг, 62%). Измерено: (m/z)=483 (М+Н).
Пример 43
10
8
4
3
2
2
2
, rel-2,2-дихлор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CHN, R=COCHCl).
10 (
10
8
4
3
2
2
3
8
4
3
2
2
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из R=CHN, R=COCF) с образованием rel-2,2-дихлор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CHN, R=COCHCl; 17 мг, 53%). Измерено: (m/z)=468 (М+Н).
Пример 44
10
8
4
3
2
2
2
3
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]метансульфонамид (: R=CHN, R=COSOCH).
10 (
10
8
4
3
2
2
3
8
4
3
2
2
2
3
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из R=CHN, R=COCF) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]метансульфонамида (: R=CHN, R=COSOCH; 22 мг, 72%). Измерено: (m/z)=435 (М+Н).
Пример 45,
8
4
3
2
2
2
rel-2-хлор-2,2-дифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (10: R=CHN, R=COCClF).
10 (
10
8
4
3
2
2
3
8
4
3
2
2
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из R=CHN, R=COCF) с образованием rel-2-хлор-2,2-дифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CHN, R=COCClF; 23 мг, 70%). Измерено: (m/z)=469 (М+Н).
Пример 46,
8
4
3
2
2
2
3
rel-5-амино-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-1,2,5-оксадиазол-4-карбоксамид (10: R=CHN, R=COCHNO).
10
10
8
4
3
2
2
3
8
4
3
2
2
2
3
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 6, из (R=CHN, R=COCF) с образованием rel-5-амино-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-(пиримидин-4-ил)дибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-1,2,5-оксадиазол-4-карбоксамида (: R=CHN, R=COCHNO; 22 мг, 68%). Измерено: (m/z)=468 (М+Н).
Пример 47
10
2
3
4
3
, rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-4,10-диметилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=COCF, R=СН).
9
10
4
3
2
3
4
3
+
К раствору  (R=СН; 34 мг, 0,12 ммоль) (приготовленного способом, аналогичным описанному выше в Примере 1) в МеОН (5 мл) добавили при перемешивании триэтиламин (81 мкл, 0,58 ммоль) и этилтрифторацетат (69 мкл, 0,58 ммоль) и реакционную смесь нагрели до 50°С и выдержали 5 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, затем очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния. Получили 24 мг (53%) rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-4,10-диметилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=COCF, R=СН). Измерено: (m/z)=389 (М+Н).
Пример 48
10
8
2
3
3
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-N'-метил-N'-метоксимочевина (: R=CN, R=CON(CH)O(CH)).
9
9
8
8
2
К раствору  (R=CN; 75 мг, 0,248 ммоль) в этилацетате (4 мл) добавили при перемешивании каталитическое количество активированного угля и 35 мл (0,298 ммоль) трихлорметилхлорформиата. Реакционную смесь нагревали до температуры кипения с обратным холодильником. Спустя 5 часов реакционную смесь профильтровали через декалит и концентрировали при пониженном давлении. Получили  (R=CN, R=CNO).
9
10
8
2
2
3
2
2
2
4
2
8
2
3
3
+
К раствору изоцианата  (R=CN, R=CNO) в этилацетате (10 мл) добавили при перемешивании EtN (173 мл, 1,25 ммоль) и N,O-диметилгидроксиламин×HCl (121 мг, 1,25 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при 50°С. Затем реакцию остановили насыщенным раствором NaHCO в НО и продукт экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промыли водой, насыщенным раствором NaCl в НО, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной храматографией на оксиде кремния с последующей препаративной ВЭЖХ. Лиофилизация из ацетонитрила/НО дала 30 мг (31%) rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-N'-метил-N'-метоксимочевины (: R=CN, R=CON(CH)O(CH)). Измерено: (m/z)=391 (М+Н).
Пример 49
10
8
2
2
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-2-гидроксиацетамид (: R=CN, R=COCHOH).
9
10
8
3
2
8
2
2
3
+
Раствор  (R=CN; 25 мг, 0,0825 ммоль) и триэтиламина (14 мл, 0,099 ммоль) в ДХМ (2 мл) охладили при перемешивании до 0°С. Добавили ацетоксиацетилхлорид (11 мл, 0,099 ммоль) и реакционную смесь 2 часа перемешивали при комнатной температуре. Реакцию остановили насыщенным раствором NaHCO в НО и продукт экстрагировали ДХМ. Органическую фазу осушили и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния. Получили 30 мг (90%)  (R=CN, R=COCHOC(О)CH). Измерено: (m/z)=404 (М+Н).
10
10
8
2
2
3
2
2
2
2
4
2
8
2
2
+
К раствору  (R=CN, R=COCHOC(О)CH; 30 мг, 0,075 ммоль) в МеОН (3 мл) добавили при перемешивании КОН (42 мг, 0,75 ммоль) в НО (1,5 мл) и реакционную смесь 15 минут перемешивали при комнатной температуре. Реакционную смесь вылили в НО и продукт экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промыли НО и солевым раствором, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния с последующей препаративной ВЭЖХ. Лиофилизация из ацетонитрила/НО дала 7,5 мг (28%) rel-N-[(2R,10R,14bR)-8-циано-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-2-гидроксиацетамида (: R=CN, R=COCHOH). Измерено: (m/z)=362 (М+Н).
Пример 50
10
8
6
5
2
3
2
, rel-(2R,10R,14bR)-2-[(N,N-диметиламинокарбонил)амино]-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-N-фенилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксамид (: R=CONH(СН), R=CON(CH)).
10
10
8
6
5
2
3
8
6
5
2
3
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 3, из (R=CONH(СН), R=COCF) с образованием rel-(2R,10R,14bR)-2-[(N,N-диметиламинокарбонил)амино]-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-N-фенилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-8-карбоксамид (: R=CONH(СН), R=CON(CH); 7,4 мг, 30%). Измерено: (m/z)=469 (М+Н).
Пример 51
10
8
3
4
2
3
, rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-8-[4,5-дигидрооксазол-2-ил]-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=CHNO, R=COCF).
10
10:
8
2
3
3
3
2
2
2
4
8
2
2
2
3
К раствору  (R=СООН, R=COCF; 200 мг, 0,48 ммоль) в ДХМ (4 мл) и ДМФА (одна капля) добавили при перемешивании оксалилхлорид (65 мл, 0,72 ммоль). Реакционную смесь 1 час перемешивали при комнатной температуре и затем концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный хлорид кислоты растворили в ДХМ (1 мл) и добавили к раствору аминоэтанола (60 мл, 0,96 ммоль) и EtN (130 мл, 0,96 ммоль) в ДХМ (3 мл). Реакционную смесь 1 час перемешивали при комнатной температуре, затем реакцию остановили насыщенным раствором NaHCO в НО и продукт экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промыли насыщенным раствором NaCl в НО, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния. Получили 152 мг (69%) ((R=C(O)NHCHCHOH, R=COCF).
10
10
8
2
2
2
3
2
3
2
2
2
4
8
3
4
2
3
+
К раствору (R=C(O)NHCHCHOH, R=COCF; 150 мг, 0,325 ммоль) в ДХМ (5 мл) добавили при перемешивании SOCl (90 мл, 0,65 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакцию остановили насыщенным раствором NaHCO в НО и продукт экстрагировали ДХМ. Органическую фазу промыли насыщенным раствором NaCl в НО, осушили NaSO и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния, получили 60 мг (42%) rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-8-[4,5-дигидрооксазол-2-ил]-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=CHNO, R=COCF). Измерено: (m/z)=444 (М+Н).
Пример 52
10
8
3
2
3
, rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-нитродибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=NO, R=COCF).
10
10
8
2
3
3
2
4
2
8
3
2
3
+
Раствор (R=Н, R=COCF; 76 мг, 0,2 ммоль) в ДХМ (1,5 мл) охладили до 0°С и по каплям добавили дымящую азотную кислоту (21 мкл, 0,5 ммоль). Удалили водно-ледяную баню, реакционная смесь окрасилась в красный цвет. Через 10 минут реакцию остановили водным NaHCO, продукт экстрагировали ДХМ, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния (гептан:этилацетат=7:3) с последующей препаративной ВЭЖХ. Лиофилизация из ацетонитрила/НО дала 6 мг (7%) rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метил-8-нитродибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=NO, R=COCF). Измерено: (m/z)=420 (М+Н).
Пример 53
10
8
2
3
, rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-8-формил-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамид (: R=СНО, R=COCF).
10
10
8
2
3
3
2
4
2
8
2
3
+
Оксалилхлорид (0,594 мл, 6,8 ммоль) по каплям добавили при перемешивании к раствору N,N-диметлформамида (3,5 мл) при 0°С. Реакционную смесь 25 минут перемешивали при 0°С, при этом образовался белый осадок. Затем к реакционной смеси добавили раствор  (R=Н, R=COCF; 510 мг, 1,36 ммоль) в N,N-диметлформамиде (2,5 мл) и смесь нагрели до 70°С. Через 1,5 часа реакционную смесь охладили, реакцию остановили водным NaHCO, продукт экстрагировали этилацетатом, осушили (NaSO) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очистили колоночной хроматографией на оксиде кремния (гептан:этилацетат=7:3) с последующей препаративной ВЭЖХ. Лиофилизация из ацетонитрила/НО дала 164 мг (30%) rel-2,2,2-трифтор-N-[(2R,10R,14bR)-8-формил-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]ацетамида (: R=СНО, R=COCF). Измерено: (m/z)=403 (М+Н).
Пример 54
10
8
3
2
3
3
2
, rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-8-[1-(гидроксиимино)этил]-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5-карбоксамид (: R=С(СН)NOH, R=COCHNS).
10
10
8
3
2
3
3
2
8
3
2
3
3
2
+
Это соединение получили способом, аналогичным описанному в Примере 13, из (R=СОСН, R=COCHNS) с образованием rel-N-[(2R,10R,14bR)-1,2,3,4,10,14b-гексагидро-8-[1-(гидроксиимино)этил]-10-метилдибензо[c,f]пиридо[1,2-a]азепин-2-ил]-4-метил-1,2,3-тиадиазол-5-карбоксамида (: R=С(СН)NOH, R=COCHNS; 170 мг, 49%). Измерено: (m/z)=462 (М+Н).
Пример 55
, Активность по связыванию с глюкортикоидным рецептором.

-8
-8
50
50
Аффинность соединений испытывали с использованием набора реагентов для конкурентного анализа глюкокортикоидного рецептора (PanVera). Компоненты этого набора разморозили с -80°С на льду (Fluormone GS1, рекомбинантный человеческий гормон роста (GR)) или при комнатной температуре (буфер для скрининга GR, стабилизирующий пептид и DTT). Испытываемые соединения в концентрации 10 мМ вручную разбавляли до 20 мкМ, затем серийно разбавляли до конечного диапазона концентраций от 10 мкМ до 0,1 нМ с использованием (диспенсера) BioMek 2000 (Beckman-Coulter) в черном 384-луночном планшете (Matrix technologies). В следующем порядке: флуормон GS1 (конечная концентрация 1 нМ) добавили во все лунки, кроме лунок с контрольным буфером; GR (конечная концентрация 4 нМ) добавили во все лунки, кроме минимума и лунок с контрольным буфером; кортизол (конечная концентрация 10 мкМ) добавили только в контрольные лунки флуормона GS1; буфер добавили во все лунки до конечного объема 40 мкл. Планшет накрыли крышкой и инкубировали на качалке при комнатной температуре в течение 90 минут. Результаты регистрировали с использованием аппарата Analyst (LJL) в режиме регистрации поляризации флюоресценции. Отношение MilliP рассчитывали по результатам cps, полученным при параллельном и перпендикулярном сканировании. Эффект (в процентах) связанного лиганда рассчитывали для каждой концентрации и строили кривые зависимости интенсивности реакции от дозы, что позволяло рассчитать ЕС. Эту величину сравнивали с величиной ЕС=10М, известной для стандарта, которым является (11β,17β)-11-(1,3-бензодиоксол-5-ил)-17-гидрокси-17-(1-пропинил)эстра-4,9-диен-3-он (CAS № 189035-07-2). Активность связывания всех описанных соединений характеризовалась значением <2×10M.
Пример 56
in vitro
, Функциональные реакции
in vitro
50
-8
Для определения способности соединений ингибировать экспрессию воспалительных генов  оценивали реакции соединений в человеческих клетках линии U2OS, которые стабильно трансфицированы ДНК человеческого рекомбинантного GR. Клетки U2OS были стимулированы TNFα и IFNγ, что ведет к секреции MCP-1 в супернатанте. Секрецию МСР-1 определяли количествено непрямым путем с использованием двух антител, специфичных к человеческому МСР-1, одно из которых было помечено донором флуоресценции европием, а второе было помечено акцептором флуоресценции аллофикоцианином (АФЦ). Секреция МСР-1 в супернатанте количественно определяли, измеряя испускание при длине волны АФЦ (665 нм) при возбуждении европия при 340 нм. Способность соединений (преднизолона или соединений, соответствующих формуле I) ингибировать экспрессию МСР-1 определяли количественно и рассчитывали значения ЕС. Все соединения, представленные в примерах, испытали в этом анализе, и они показали in vitro мощные противовоспалительные свойства (<2×10М).
Пример 57
in vivo
, Противовоспалительная активность
Способность соединений ингибировать воспаление можно определить количественно на модели, в которой на мышей действуют липополисахаридом (LPS). Противовоспалительные эффекты можно количественно определить как ингибирование LPS-индуцированного TNFα (S.R.Hyde & R.E.McCallum, Infection & Immunity, 60; 976-982 (1992)). Мышам LPS вводили внутрибрюшинно в дозе 0,5 мг/кг. Соединения, соответствующие формуле I, дозировали систематически при оральном введении за 1 час до индукции ЛПС. Через 1,5 ч после индукции LPS собирали сыворотку и мышей умерщвляли. Уровни TNFα в сыворотке определяли количественно с использованием коммерчески доступного набора ELISA по инструкции поставщика. Избранные соединения (описанные здесь в примерах 3, 5, 12, 16, 19, 20, 26, 38, 39, 42, 54) испытывали на этой модели. Все испытанные соединения показали на этой модели противовоспалительную активность с ED50<10 мг/кг.
Пример 58
in vivo
, Противоартритная активность
Способность соединений ингибировать артрит можно проверить на модели артрита, индуцированного у мышей коллагеном типа II (D. E. Trentham et al. J Exp Med 146; 857-868 (1977)). В этой модели самцов мышей Dba/1 иммунизируют и через 3 недели вводят дозу коллагена. Артрит оценивают по опуханию лап. Мышам с развившимся артритом вводили орально в течение 3 недель преднизолон или соединения, соответствующие формуле I (терапевтическая модель). В этой модели дальнейшее развитие артрита оценивали по опуханию лап 3 раза в неделю. Через 3 недели мышей умерщвляли. Способность соединений ингибировать артрит определяли количественно как способность ингибировать опухание лап. Избранные соединения (описанные здесь в примерах 5, 12, 19, 20, 39, 54) испытали на этой модели. Все испытанные соединения показали на этой модели противоартринную активность с ED50<10 мг/кг.