ВЕКТОРЫ ЭКСПРЕССИИ ДЛЯ ХИМЕРНЫХ РЕЦЕПТОРОВ ПОГЛОЩЕНИЯ, ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫЕ КЛЕТКИ-ХОЗЯЕВА И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Экспрессионная кассета, содержащая:
(a) полинуклеотид, кодирующий химерный рецептор поглощения (CER), содержащий:
внеклеточный домен, содержащий связывающий домен, который связывается с первым антигеном-мишенью;
сигнальный домен поглощения;
трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и сигнальным доменом поглощения и соединяющий их; и
(b) полинуклеотид, кодирующий химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий:
внеклеточный домен, содержащий связывающий домен, который связывается со вторым антигеном-мишенью;
внутриклеточный сигнальный домен; и
трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточным сигнальным доменом и соединяющий их.
2. Экспрессионная кассета, содержащая:
(a) полинуклеотид, кодирующий химерный рецептор поглощения (CER), содержащий:
внеклеточный домен, содержащий связывающий домен, который связывается с первым антигеном-мишенью;
сигнальный домен поглощения;
трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и сигнальным доменом поглощения и соединяющий их;
(b) полинуклеотид, кодирующий рекомбинантный T-клеточный рецептор (TCR), связывающий бета-цепь белка, содержащий вариабельную область бета-цепи TCR и константную область бета-цепи TCR; и
(c) полинуклеотид, кодирующий альфа-цепь рекомбинантного TCR, содержащую вариабельную область альфа-цепи TCR и константную область альфа-цепи TCR.
3. Экспрессионная кассета по п. 1 или 2, в которой связывающий домен CER содержит scFv, эктодомен рецептора или лиганд.
4. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1-3, в которой внеклеточный домен CER дополнительно содержит спейсерный домен.
5. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1-4, в которой трансмембранный домен CER содержит Tim1, Tim4, Tim3, FcR, CD8, CD28, MERTK, Axl, Tyro3, BAI1, CD4, DAP12, MRC1, FcR, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 или трансмембранный домен TLR9.
6. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1-5, в которой сигнальный домен поглощения CER содержит MERTK, Tyro3, ItgB5, MRC1, BAI1, ELMO, Axl, Syk, MyD88, Zap70, FcγR1, FcγR2A, FcγR2B2, FcγR2C, FcγR3A, FcεR1, FcαR1, BAFF-R, DAP12, NFAM1, CD79b, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, Traf6, Traf2 или сигнальный домен Traf3.
7. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1-6, в которой сигнальный домен поглощения CER содержит первичный сигнальный домен поглощения и вторичный сигнальный домен поглощения.
8. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1-7, в которой первичный и вторичный сигнальные домены поглощения CER отличаются.
9. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1-8, в которой первичный и вторичный сигнальные домены поглощения CER каждый независимо выбран из MERTK, Tyro3, ItgB5, MRC1, BAI1, ELMO, Axl, Syk, MyD88, Zap70, FcγR1, FcγR2A, FcγR2B2, FcγR2C, FcγR3A, FcεR1, FcαR1, BAFF-R, DAP12, NFAM1, CD79b, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, Traf6, Traf2 и сигнального домена Traf3.
10. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1-9, в которой первый антиген-мишень CER представляет собой промаркер поглощения, опухолевый антиген, вирусный антиген или паразитарный антиген.
11. Экспрессионная кассета по п. 10, в которой промаркером поглощения является фосфатидилсерин.
12. Экспрессионная кассета по п. 11, в которой связывающий домен CER содержит связывающий домен Tim4, который связывает фосфатидилсерин.
13. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1 и 3-12, в которой связывающий домен CAR содержит scFv.
14. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1 и 3-13, в которой внеклеточный домен CAR дополнительно содержит спейсерный домен.
15. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1 и 3-14, в которой трансмембранный домен CAR содержит трансмембранный домен CD28, CD2, CD4, CD8, CD3ε, CD3δ, CD3ζ, CD25, CD27, CD40, CD79A, CD79B, CD80, CD86, CD95 (Fas), CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD150 (SLAMF1), CD152 (CTLA4), CD200R, CD223 (LAG3), CD270 (HVEM), CD272 (BTLA), CD273 (PD-L2), CD274 (PD-L1), CD278 (ICOS), CD279 (PD-1), CD300, CD357 (GITR), A2aR, DAP10, FcRα, FcRβ, FcRγ, Fyn, GAL9, KIR, Lck, LAT, LRP, NKG2D, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, PTCH2, ROR2, Ryk, Slp76, SIRPα, pTα, TCRα, TCRβ, TIM3, TRIM, LPA5 или Zap70.
16. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1 и 3-15, в которой внутриклеточный сигнальный домен CAR содержит содержащий ITAM активирующий сигнальный домен, выбранный из сигнальных доменов CD3ζ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD5, CD22, CD79a, CD278 (ICOS), DAP10, DAP12, CD79b, FcR и CD66d.
17. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1 и 3-16, в которой внутриклеточный сигнальный домен CAR содержит первый костимулирующий сигнальный домен, выбранный из сигнального домена CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, функционально связанного антигена-1 лимфоцитов (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C и B7-H3.
18. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1 и 3-17, в которой внутриклеточный сигнальный домен CAR содержит второй костимулирующий сигнальный домен, выбранный из сигнального домена CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, функционально связанного антигена-1 лимфоцитов (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C и B7-H3.
19. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1 и 3-18, в которой CAR представляет собой CAR первого поколения, CAR второго поколения, CAR третьего поколения или TCR-CAR.
20. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1 и 3-19, в которой второй антиген-мишень CAR представляет собой опухолевый антиген, вирусный антиген или паразитарный антиген.
21. Экспрессионная кассета по п. 20, в которой второй антиген-мишень CAR представляет собой опухолевый антиген, выбранный из CD138, CD38, CD33, CD123, CD72, CD79a, CD79b, мезотелина, PSMA, BCMA, ROR1, MUC-16, L1CAM, CD22, CD19, CD20, CD23, CD24, CD37, CD30, CA125, CD56, c-Met, EGFR, GD-3, HPV E6, HPV E7, MUC-1, HER2, рецептора фолиевой кислоты α, CD97, CD171, CD179a, CD44v6, WT1, VEGF-α, VEGFR1, IL-13Rα1, IL-13Rα2, IL-11Rα, PSA, FcRH5, лиганда NKG2D, NY-ESO-1, TAG-72, CEA, эфрина A2, эфрина B2, антигена Lewis A, антигена Lewis Y, MAGE, MAGE-A1, RAGE-1, рецептора фолиевой кислоты β, EGFRviii, VEGFR-2, LGR5, SSX2, AKAP-4, FLT3, фукозила GM1, GM3, o-ацетил-GD2 или GD2.
22. Экспрессионная кассета по любому из пп. 2-12, в которой вторым антигеном-мишенью рекомбинантного TCR является WT-1, мезотелин, MART-1, NY-ESO-1, MAGE-A3, HPV E7, сурвивин, α фетопротеин или опухолевый неоантиген.
23. Экспрессионная кассета по любому из пп. 2-12 и 22, в которой альфа-цепь TCR включает замену LVL в позициях 12, 14 и 15.
24. Экспрессионная кассета по любому из пп. 2-12, 22 и 23, в которой константная область бета-цепи TCR включает цистеиновую замену в позициях 56, константная область альфа-цепи TCR включает цистеиновую замену в позициях 48 или и то, и другое.
25. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1-24, в которой полинуклеотид, кодирующий CER, находится перед полинуклеотидом, кодирующим CAR или TCR.
26. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1, 3-21 и 25, дополнительно содержащая полинуклеотид, кодирующий элемент IRES или пептид 2A между полинуклеотидом, кодирующим CER, и полинуклеотидом, кодирующим CAR.
27. Экспрессионная кассета по любому из пп. 2-12, 22-24 и 25, в которой полинуклеотиды, кодирующие CER, альфа-цепь TCR и бета-цепь TCR, отделены друг от друга первым полинуклеотидом, кодирующим элемент IRES или пептид 2A, и вторым полинуклеотидом, кодирующим элемент IRES или пептид 2A.
28. Экспрессионная кассета по любому из пп. 26 или 27, в которой пептид 2A представляет собой пептид T2A, P2A, E2A или F2A.
29. Экспрессионная кассета по п. 2, в которой:
(a) CER содержит аминокислотную последовательность любого из SEQ ID NO, перечисленных в таблице 1; и
(b) TCR содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:90.
30. Экспрессионная кассета по любому из пп. 1-29, дополнительно содержащая промотор, функционально связанный с экспрессионной кассетой.
31. Вектор, содержащий экспрессионную кассету по любому из пп. 1-30.
32. Вектор по п. 31, причем вектор представляет собой вирусный вектор.
33. Вектор по п. 32, причем вирусный вектор представляет собой ретровирусный вектор или лентивирусный вектор.
34. Клетка-хозяин, содержащая вектор по любому из пп. 31-33.
35. Клетка-хозяин по п. 34, причем клетка-хозяин представляет собой T-клетку.
36. Клетка-хозяин по п. 35, причем T-клетка представляет собой CD4 T-клетку, CD8 T-клетку или и то, и другое.
37. Клетка-хозяин по п. 35 или 36, причем T-клетка представляет собой наивную T-клетку, центральную T-клетку памяти, эффекторную T-клетку или любую их комбинацию.
38. Клетка-хозяин по любому из пп. 34-37, причем клетка-хозяин является человеческой.
39. Клетка-хозяин по любому из пп. 34-38, причем клетка-хозяин демонстрирует цитолитическую активность в отношении клетки, экспрессирующей антиген, на который нацелен CAR или TCR, и фагоцитарную активность в отношении клетки, экспрессирующей антиген, на который нацелен CER.
40. Способ лечения заболевание у субъекта, включающий введение эффективного количества клетки-хозяина по любому из пп. 34-39.
41. Способ по п. 40, в котором заболевание представляет собой рак, вирусную инфекцию, бактериальную инфекцию или паразитарную инфекцию.
42. Способ по п. 41, в котором рак представляет собой солидную опухоль, меланому, немелкоклеточный рак легкого, почечно-клеточный рак, рак почек, гематологический рак, рак предстательной железы, кастрационно-резистентный рак предстательной железы, рак толстой кишки, рак прямой кишки, рак желудочно-кишечного тракта, рак пищевода, рак мочевого пузыря, рак головы и шеи, рак щитовидной железы, рак молочной железы, трижды негативный рак молочной железы, рак яичников, рак шейки матки, рак легких, рак уротелия, рак поджелудочной железы, глиобластому, печеночноклеточный рак, миелому, множественную миелому, лейкоз, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, миелодиспластический синдром, рак головного мозга, рак ЦНС или злокачественную глиому.
43. Способ по любому из пп. 39-42, в котором клетка-хозяин является аутологичной или аллогенной субъекту.
44. Способ по любому из пп. 39-43, в котором клетку-хозяина вводят субъекту в комбинации с дополнительным терапевтическим средством.
45. Способ по п. 44, в котором дополнительное терапевтическое средство представляет собой антитело, лучевую терапию, химиотерапевтическое средство, низкомолекулярную терапию, клеточную иммунотерапию, онколитический вирус, электроимпульсную терапию, терапию ультрафиолетовым светом, высокочастотную ультразвуковую терапию, антибиотик, противогрибковое средство или противовирусное средство.
46. Способ по п. 44 или 45, в котором дополнительное терапевтическое средство вводят в субтерапевтической дозе.