Вклад полиморфизма генов цитокинов IL-1Ra, IL-1p, TNFa, IL-10 в вариабельность течения синдрома раздражённого кишечника

Вестник Челябинского государственного университета. 2013. № 7 (298). Биология. Вып. 2. С. 18-20.

Д. С. Сташкевич, Е. Л. Иванова, А. Л. Бурмистрова

ВКЛАД ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ 1Ь-Ша, 1Ь-1р, ТОТа, 1Ь-10

В ВАРИАБЕЛЬНОСТЬ ТЕЧЕНИЯ СИНДРОМА РАЗДРАЖЁННОГО КИШЕЧНИКА

Приведены данные по распределению аллельных вариантов и генотипов генов ГНИа, ГИР, TNFa. ГЬ-10 при различных вариантах синдрома раздражённого кишечника. Показано, что полиморфизм гена ГНИа ассоциирован с клинико-морфологическими вариантами и психопатологическими осложнениями при синдроме раздражённого кишечника.

Ключевые слова: синдром раздражённого кишечника, полиморфизм генов цитокинов.

Введение. Синдром раздражённого кишечника (СРК) относится к одному из наиболее частых гастроинтестинальных нарушений. Недавно высказано предположение о важной роли в развитии патологии неадекватного иммунного ответа на антигены микрофлоры кишки, в основе которого лежит дисбаланс цитокинов про/противовоспалительного профиля [7; 8]. Согласно современным представлениям, СРК является примером поломки интеграции иммунной и нервной систем, что подтверждается рядом исследований, в которых установлен повышенный уровень провоспалительных цитокинов, обладающих нейромодулирующими свойствами [1; 4; 8]. Большинство межклеточных медиаторов воспаления, в том числе и цитокины, не синтезируются клетками вне воспалительной реакции и иммунного ответа. Именно поэтому вклад иммунной системы в патогенез функциональных заболеваний кишечника, в частности СРК, учёные долгое время не рассматривали и исследования в этом направлении не проводили [6]. Однако в некоторых исследованиях было показано изменение цитокинового баланса при по-стинфекционном варианте СРК и не исключается генетическая предрасположенность, ассоциированная с аллельным полиморфизмом генов цитокинов [6-8].

Цель. Анализ распределения аллелей, генотипов генов ^-Жа, ^-1р, -308 G/A, -863 С/А ЮТа,

-1082 О/А 1Ь-10 при различных вариантах СРК у европеоидов Челябинской области.

Материалы и методы. В исследование включён 81 больной СРК русской популяции. Пациенты находились на лечении в гастроэнтерологическом отделении Дорожной клинической больницы МПС на станции Челябинск в период с 2001 по 2007 г. Для диагностики заболевания использовались Римские критерии III (2007) [5]. Средний возраст начала заболевания составил 32,8±1,4 года, длительность заболевания варьировала от 3 до 10 лет. Распределение больных по клиническим и морфологическим вариантам СРК проводилось согласно Римским критериям III (2007) и представлено в таблице.

Группы СРК с различными психопатологическими состояниями выделены согласно [3]: СРК без психоневротических расстройств — 20 человек (24,7 %), СРК с тревожными расстройствами — 20 (24,7 %), СРК с депрессивным синдромом — 19 человек (23,5 %), СРК с ипохондрическим синдромом — 22 человека (27,1 %).

Определение полиморфизма генов цитокинов проводилось с использованием модификаций метода полимеразной цепной реакции (ПЦР): прямая ПЦР — амплификация применялась для анализа участка длиной 86 п. н. (VNTR) во втором интроне гена ^-Жа, SNP в точке -1082 гена ^-10; типирование SNP в точке +3953 гена ^-ф и в точках -308 и -863 гена TNFa осуществлялось

Клинические варианты и морфологические изменения у больных СРК

Больные СРК, п = 81

Клинические варианты СРК N

Диарея 16

Запор 47

Неклассифицируемый, смешанный варианты 18

с помощью анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) с последующей обработкой эндонуклеазами рестрикции (TaqI при 65 °С, №о! при 37 °С, ТаИ при 65 °С соответственно). Детекция результатов — электрофорез в 8 % ПААГе.

Статистическая обработка результатов: критерии х2, х2 с поправкой Йейтса (для одной степени свободы — df), точный двусторонний критерий Фишера, отношение шансов (OR) с расчётом 95 % доверительного интервала (И). Во всех случаях различия считали статистически значимыми при р < 0,05, незначимыми при р > 0,10; для промежуточных значений р (0,05 < р < 0,10) обсуждали тенденцию к различиям.

Результаты и обсуждение. 1. Среди всех клинических вариантов достоверные данные установлены для группы «СРК, запор», которая характеризовалась сниженной частотой гомозиготного генотипа 4г/4г ^-1Яа (40,4 %; х2 = 7,75; df =

3; р < 0,1).

2. При оценке распределения частот аллельных вариантов и генотипов генов ^-ф, ^-1Яа, ТОТа в группах СРК с различной морфологией показано, что морфологические изменения могут быть ассоциированы с носительством определённых генотипов ^-1Яа.

В группе с атрофическими изменениями повышена частота генотипа 2Я/2Я (29,4 % против 7,3 %; точный двусторонний критерий Фишера р = 0,04; ОЯ = 0,19; 95 % а = 0,038-0,94) и достоверно снижена частота гетерозиготного генотипа 4Я/2Я по сравнению с группой с воспалительными изменениями слизистой толстой кишки (5,6 % против 41,5 %; р = 0,01; ОЯ = 11,3; 95 % а = 1,3-98,2).

3. Установлены особенности распределения аллелей и генотипов ^-1Яа при различных психоневротических расстройствах. У больных СРК с тревожным синдромом повышена частота аллеля 2Я, связанного с гиперпродукцией ^-ф, и снижена частота другого распространённого аллеля — 4Я х2 = 8,05; р < 0,05 — по сравнению с группой СРК без психоневрологических расстройств. Достоверно снижена частота гомозиготного генотипа 4Я/4Я с аллелем «нормальной продукции» ^-1Яа (30 % против 70 %, х2 = 4,90; р < 0,05; ОЯ = 0,18; 95 % а = 0,045-0,74) и на уровне тенденции повышена частота гомозиготного генотипа 2Я/2Я. Согласно литературным данным, VNTR полиморфизм ^-1Яа может быть ассоциирован с другими заболеваниями кишеч-

ника, прежде всего с неспецифическим язвенным колитом и болезнью Крона [2].

Выводы и заключение. 1. Носительство генотипа 2R/2R IL-1Ra может являться маркером атрофических изменений слизистой кишечника и повышать вероятность развития тревожного синдрома у больных СРК.

2. Частота генотипа 4R/4R IL-1Ra снижена у больных СРК с клиническим вариантом «запор» и с тревожным синдромом.

3. Частоты аллелей и генотипов генов IL-ф, -308 G/A, -863 C/A TNFa, -1082 G/A IL-10 не различались между группами больных СРК с различными клинико-морфологическими вариантами и психопатологическими расстройствами.

Таким образом, только VNTR полиморфизм в гене IL-1Ra ассоциирован с вариабельностью течения СРК, а остальные исследуемые гены не имеют решающего значения при формировании предрасположенности клинико-морфологических вариантов и психопатологических осложнений СРК либо оказывают непрямое влияние через межгенные взаимодействия, что требует дополнительного изучения.

Наше исследование вносит вклад в развитие представлений об иммуногенетическом компоненте синдрома раздражённого кишечника. Вовлечение в исследование новых полиморфизмов генов цитокинов и их рецепторов позволит существенно увеличить информативность индивидуальных прогностических критериев, что, в свою очередь, даст возможность оценивать предрасположенность человека к развитию СРК, характеру его течения, а значит, своевременно проводить профилактику и лечение.

Список литературы

1. Бурмистрова, А. Л. Иммунный гомеостаз и микробиоценоз. Метаморфозы и пути развития воспалительных заболеваний кишечника. Челябинск, 1997. 231 с.

2. Кетлинский, С. А. Цитокины / С. А. Кетлинский, А. С. Симбирцев. СПб. : Фолиант, 2008. 552 с.

3. Климушева, Т. А. Синдром раздражённого кишечника глазами психиатра // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 2008. № 4. С. 82-86.

4. Маев, И. В. Психосоциальные факторы в развитии синдрома раздражённого кишечника: возможности терапии / И. В. Маев, С. В. Черё-мушкин // Consilium Medicum. Гастроэнтерология. 2006. Т. 8, № 7. С. 1-15.

5. Маев, И. В. Синдром раздражённого кишечника. Римские критерии III / И. В. Маев, С. В. Че-рёмушкин // Consilium Medicum. Гастроэнтерология. 2008. № 1. С. 29-34.

6. Родионова, О. Н. Патогенетическая роль сывороточных цитокинов при синдроме раздражённого кишечника / О. Н. Родионова, А. Р. Бабаева // Цитокины и воспаление. 2011. Т. 10, № 3. С. 45-48.

7. Gonsalkorale, W. M. Interleukin 10 genotypes in irritable bowel syndrome: evidence for an inflam-

matory component / W. M. Gonsalkorale, C. Perrey, V. Pravica, P. J. Whorwell, I. V. Hutchinson // Tissue Antigens. 2003. Vol. 52. P. 91-93.

8. Rodriguez-Fandino, O. From cytokines to tolllike receptors and beyond — current knowledge and future research needs in irritable bowel syndrome / O. Rodriguez-Fandino, J. Hernandez-Ruiz, M. Schmulson // J. of Neurogastroenterology and Motility. 2010. Vol. 16. P. 363-373.