СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ БАКТЕРИЕМИИ
DIAGNOSTIC METHOD FOR BACTEREMIA

Изобретение относится к медицине, а именно к бактериологии, микологии, реаниматологии и интенсивной терапии и касается способа выявления бактериальных и грибковых возбудителей нозокомиальных инфекций из крови больных с подозрением на сепсис.
Известен способ выявления бактериемии при использовании заводских флаконов для посева крови (фирмы BD, Bio Merieux и др.), в которые осуществляется забор крови для дальнейшей инкубации в бактериологическом геманализаторе. При наличии роста микроорганизмов производится высев на стандартные питательные среды с последующей идентификацией возбудителя. Высеваемость микроорганизмов из крови при сепсисе колеблется в пределах от 10,8% до 29% по данным анализа в Онкологическом центре за 12 лет или от 30 до 50% по данным зарубежных авторов [Багирова Н.С., Дмитриева Н.В. Бактериемия истинная и ложная: значение критериев оценки клинической зничимости положительной гемокультуры. Клиническая лабораторная диагностика. Том 60,8, 2015, с. 55-61. Weinstein MP, Reller LB, Murphy JR, Lichtenstein KA. The clinical significance of positive blood cultures: a comprehensive analysis of 500 episodes of bacteremia and fungemia in adults I. Laboratory and epidemiologic observations. Rev Infect Dis. 1983 Jan-Feb;5(l):35-53.]
Этот способ является наиболее близким аналогом к предлагаемому нами новому способу диагностики бактериемии и принят за прототип.
Недостатками данного способа являются:
- большой процент (до 50%) ложно-положительных результатов вследствие нарушения технологии забора крови (микробная контаминация вследствие неадекватной обработки флаконов, кожи рук и пр.);
- недостаточное количество крови для исследования может приводить к ложно-отрицательным результатам в более чем 46% случаев. Вероятность выделения положительной гемокультуры находится в прямой зависимости от количества исследуемой крови. Оптимальным является исследование 60 мл крови с сутки у взрослого (у ребенка - в зависимости от веса), которое не всегда возможно выполнить. Количество крови, набираемой во флакон должно быть строго определенным - 10 мл. При превышении этого количества возможно проявление бактерицидного действия крови, при недостаточном количестве - меньше шансов попадания микроорганизма во флакон. Как следствие всего этого - отсутствие роста микроорганизма во флаконе;
- несоблюдение временного фактора забора крови: следует производить забор при повышении температуры тела и на высоте лихорадки, что часто на практике не выполнимо.
Задачей заявляемого изобретения является создание нового способа диагностики (выявления?) бактериемии, более эффективного и связанного с меньшим количеством ложных результатов.
Технический результат. Заявляемый способ прост в исполнении, высокоэффективен, осуществляется без использования дополнительного дорогостоящего оборудования, универсален, может использоваться в любой бактериологической лаборатории.
Задача решается тем, что заявляемый способ включает микробиологическое исследование гемофильтра, используемого в процессе экстракорпоральной детоксикации больным с подозрением на сепсис. Содержимое (жидкость) из использованного гемофильтра высевают на стандартный набор жидких и твердых питательных микробиологических сред. В гемофильтр заливают стерильный физиологический раствор, затем его помещают в термостат на 24 часа, после чего производят повторный высев этой жидкости на те же питательные среды. В случае роста микроорганизмов производят их идентификация и определение антибиотикочувствительности.
Изобретение иллюстрируется фигурой и таблицей.
На фигуре представлено строение гемофильтра CVVHF, используемого при разработке данного способа. Верхней стрелкой обозначена точка входа крови; нижней - точка выхода крови; боковыми - точка выхода и точка входа замещающего раствора.
На таблице представлен рост микроорганизмов из гемофильтра до и после инкубации в течение 24 часов.
Заявляемый способ осуществляется следующим образом.
Гемофильтрацию больным с сепсисом выполняют на сертифицированном оборудовании (Multifiltrat (Fresenius) и др.) с использованием стандартных наборов KIT 4 и KIT 8. Продолжительность каждой процедуры составляет от 8 до 24 часов. Скорость кровотока в процессе гемофильтрации составляет 200-240 мл/мин, что соответствует прохождению через гемофильтр 120-144 л крови за 10 часов процедуры. Постоянный контакт крови больного с полупроницаемой мембраной гемофильтра обеспечивает осаждение на ней микроорганизмов или проникновение их в замещающий раствор в случае бактериемии (полупроницаемая мембрана гемофильтра пропускает частицы массой до 60 КДа, масса микроорганизмов колеблется от 30 до 114 КДа). По окончании процедуры гемофильтр помещают в стерильный пакет, запаковывают и доставляют в бактериологическую лабораторию. В ламинарном шкафу колонку протирают дезинфицирующим раствором над лотком. Подписывают три контейнера - N/N 1, 2, 3. Точку входа крови (фиг.) колонки открывают над контейнером N 1, сливают в него остаточную кровь (или элементы крови), промывают 5 мл физиологического раствора, снимают сгусток крови при его наличии и также опускают в контейнер, после чего добавляют в точку входа около 5 мл физиологического раствора и закрывают. Аналогичные действия производят с точкой выхода крови из колонки, используя контейнер N 2. В контейнер N 3 сливают фильтрат из точек входа замещающего раствора и выхода фильтрата. Из всех контейнеров делается высев на микробиологические твердые питательные среды - среда Эндо, Маннит-солевой агар, среда Сабуро и кровяной агар. Содержимое контейнеров заливают сердечно-мозговым экстрактом в соотношении 1:1. Колонку в новом стерильном пакете, посевы и контейнеры помещают в термостат на 24 часа при Т 37°С (оптимальная температура для роста большинства микроорганизмов). Через 24 часа делают повторный высев из контейнеров NN 1, 2, 3, а также из точек входа и выхода крови колонки на те же питательные среды, после чего колонка утилизируется, согласно установленным правилам. Одновременно изучаются результаты посева на средах от 1-го дня. При наличии роста производится идентификация выросшего микроорганизма и определяется его чувствительность к антибиотикам. Все посевы при отсутствии роста через 24 часа инкубируются до 5 суток с ежедневным анализом посевов.
Исследованию подлежали 23 гемофильтра (табл.), полученные после гемофильтрации в 16 случаях (5 больным гемофильтрация проводилась неоднократно по медицинским показаниям). 9 больным гемофильтрация выполнялась в связи с верифицированным (клиническими признаками, уровень прокальцитонина колебался от 4 до 200 нг/мл) сепсисом, 7 случаев составили контрольную группу: роста микроорганизмов при обследовании больных или гемофильтрата получено не было ни в одном случае
Описание опытной группы (16 случаев гемофильтрации, 13 больных).
В течение суток до начала гемофильтрации проводили бактериологический анализ крови из периферической вены/катетера. Из 16 случаев проведения гемофильтрации в 3-х случаях бактериологический анализ крови не проводили. Из оставшихся 13 - в 5 случаях (38,5%) - роста микрофлоры из крови получено не было. Рост был получен в 8 (61,5%) случаях и представлен 8 микроорганизмами.
До инкубации колонки (контейнеры 1-3) получен рост 8 (NN 1, 2, 3, 10, 6 и 8- по 2 контейнера) микроорганизмов, в то время как после инкубации колонки - 11 микроорганизмов (8-11, 16 по 2 контейнера). В 3-х случаях микроорганизмы выросли только до инкубации. В 1 (N 6) случае A.baumannii выросла до инкубации и из контейнера N 3 - содержащего фильтрат. Этот факт обращает внимание на вероятность прохождения микроорганизма через поры фильтра. В 2-х случаях микроорганизмы выросли только после инкубации (NN 9 и 16). До инкубации роста не отмечено.
Таким образом, в целом при полном бактериологическом анализе гемофильтров получен рост 18 микроорганизмов, в то время как в прототипе - только 8. Рост отмечен во всех исследуемых колонках в части случаев до, в части после инкубации. В первых 6 случаях инкубация фильтров не проводилась и результаты получены только до инкубации.
Выводы
1. Выделенные микроорганизмы из крови и из колонок совпадали.
2. Полное (до и после инкубации) бактериологическое исследование гемофильтров может быть дополнительным методом выявления случаев бактериемии у больных с подозрением на сепсис.
3. При суммарной оценке обоих способов выделения микроорганизмов из крови результат составил 75% (12 из 16 случаев). Это значительно превышает результаты прототипа.