СПОСОБ ОЦЕНКИ УСТОЙЧИВОСТИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА К ТУБЕРКУЛЕЗУ
METHOD FOR ASSESSMENT OF CATTLE RESISTANCE TO TUBERCULOSIS

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано при оценке устойчивости и восприимчивости к туберкулезу крупного рогатого скота.
Известны способы определения активности туберкулеза по биохимическим показателям крови (например, авторское свидетельство СССР №1287010, патенты РФ №2187818, №2238564, №2161313, №2305286). В частности, известен способ диагностики степени тяжести туберкулеза (а.с. СССР №1287010, МПК G01N33/68, опубл. 30.01.87) путем определения в крови больного содержания глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6ФДГ). В способе по патенту РФ №2187818 (МПК G01N 33/68, опубл. 20.08.02) определяют соотношение церулоплазмин (Цп)/трансферрин (Тр) и наличие свободнорадикальных соединений (СРС) методом электронного парамагнитного резонанса. Известен также способ оценки тяжести туберкулезной инфекции путем определения концентрации в плазме крови таурина и глутаминовой кислоты (патент РФ №2305286, МПК G01N 33/68, опубл. 27.08.2007). При этом способ проверен только в эксперименте на морских свинках.
Однако все вышеуказанные способы используются только в медицине и предназначены для оценки состояния больных туберкулезом людей.
Известен также способ отбора крупного рогатого скота на устойчивость к туберкулезу здоровых животных (см. патент РФ №2080061, МКИ А01K 67/02, опубл. 27.05.97). Способ основан на отборе животных по комплексу аллелей групп крови и антигенов BoLA-системы, маркирующих устойчивость. Данный метод направлен на решение задачи определения генетической устойчивости животных и позволяет отбирать для воспроизводства животных конкретной породы - крупный рогатый скот.
Однако способ длителен и сложен в исполнении, требует большого количества ингредиентов.
Наиболее близким к заявляемому является способ оценки устойчивости организма животного к туберкулезу (патент РФ №2352938, МПК G01N 33/48, опубл. 20.04.2009) путем исследования активности креатинкиназы и лактатдегидрогеназы, определения среднего значения каждого из этих показателей для конкретной группы животных, сравнения значения показателя каждого животного со средней величиной этого же показателя для конкретной группы животных. Об устойчивости организма животного к туберкулезу судят по повышению активности креатинкиназы и одновременному понижению активности лактатдегидрогеназы относительно среднего значения каждого показателя для конкретной группы животных.
Однако способ имеет высокую себестоимость из-за дороговизны реагентов, необходимых для определения креатинкиназы и лактатдегидрогеназы, способ сложен в исполнении ввиду широкого диапазона референтных значений определяемых показателей, особенно креатинкеназы, которая в норме колеблется от 10 до 200 Е/л. Кроме этого, показатель лактатдегидрогеназа отражает активность гликолиза, который является одним из важных этапов углеводного обмена, зависящего, в свою очередь, от содержания углеводов в кормах.
Изобретение направлено на решение задачи создания дешевого, простого в исполнении и более эффективного способа оценки устойчивости организма здорового животного к туберкулезу, основанного на изучении показателей азотистого обмена, отражающих общую метаболическую активность организма вне зависимости от качества кормов.
Техническим результатом изобретения является быстрота и простота исполнения способа при снижении затрат на его осуществление.
Для решения поставленной задачи в способе оценки устойчивости крупного рогатого скота к туберкулезу, заключающемся в формировании группы клинически здоровых животных, исследовании некоторых биохимических показателей крови, определении среднего значения показателя для конкретной группы животных, сравнении значения показателя каждого животного со средней величиной этого же показателя для конкретной группы животных, оценке устойчивости животного к туберкулезу по соотношению биохимических показателей, согласно изобретению, исследуют мочевую кислоту и при понижении ее значения относительно среднего значения для конкретной группы животных судят об устойчивости организма животного к туберкулезу.
В известных авторам источниках патентной и научно-технической информации не описано способа оценки устойчивости крупного рогатого скота к туберкулезу, позволяющего проводить дифференциацию физиологически здоровых животных одной породы на восприимчивых и устойчивых к заболеванию туберкулезом по показателю азотистого обмена - мочевой кислоте.
Азотистый обмен - совокупность химических превращений азотсодержащих веществ в организме, включает белковый обмен, а также обмен нуклеиновых кислот, продуктов их распада, азотсодержащих липидов, аминосахаров, гормонов, витаминов и др.
Известно, что содержание мочевой кислоты в крови возрастает при усиленном распаде нуклеопротеидов. Это происходит при гемолитической болезни новорожденных и пневмонии у детей, лейкозе, полицитемии, сердечной и печеночной недостаточности у беременных с преэклампсией.
Как известно, туберкулез относится к числу низко контагиозных заболеваний. Развитие инфекционного процесса, представляющего собой процесс взаимодействия макро- и микроорганизма, в случае низкоконтагиозных заболеваний в большей степени зависит от состояния макроорганизма, нежели от вирулентности возбудителя. Это позволяет говорить о существовании потенциальной восприимчивости и устойчивости животных к туберкулезу, выражающейся в особенностях их обмена веществ.
В метаболизме основная роль принадлежит азотистому обмену, т.к. азот входит в состав двух важнейших видов биополимеров - белков и нуклеиновых кислот. Туберкулез является системным заболеванием, следовательно, предрасположенность к нему также должна иметь системный характер. А главные внутриклеточные системы - это совокупность белков и нуклеиновых кислот.
4
6
4
3
У человека и приматов мочевая кислота (2,6,8-триоксипурин) является конечным продуктом пуринового обмена. У других млекопитающих, в частности у парнокопытных, мочевая кислота окисляется до аллантоина (CHNО), который и выводится с мочой. Пуриновый обмен включает обмен азотистых оснований аденина и гуанина, а также ксантина и гипоксантина. Гипоксантин, наряду с аденином и гуанином, обнаруживается в нуклеиновых кислотах, в частности, в составе антикодона тРНК (в виде инозина); образуется при спонтанном дезаминировании аденина. Ксантин - продукт ферментативной деградации гаунина.
Сравнительно низкий уровень мочевой кислоты у клинически здоровых животных указывает на снижение интенсивности пуринового обмена, высокую степень включения пуриновых оснований в состав нуклеиновых кислот и пониженную скорость распада клеток. В то время как повышенный распад клеток у здоровых животных свидетельствует об излишней активации системы иммунитета и, как следствие, повышении риска развития туберкулеза в случае инфицирования за счет увеличения фагоцитарного числа и снижения индекса завершенности фагоцитоза, невысокая скорость распада клеток, на которую указывает сравнительно низкая концентрация мочевой кислоты, говорит об адекватности иммунного ответа, сопряженной с высоким индексом завершенности фагоцитоза и, как следствие, повышенной устойчивостью к туберкулезу.
Понижение фагоцитарного числа на фоне повышения индекса завершенности фагоцитоза при внутриклеточных инфекциях, к которым относится и туберкулез, предотвращает диссеминирование инфекции и способствует локализации и быстрому уничтожению инфекта, что делает животных устойчивыми к заражению туберкулезом.
Животные, в организме которых распад клеток понижен, более устойчивы к внутриклеточным инфекциям, таким как туберкулез.
Сравнение показателя мочевой кислоты производят со средним значением этого показателя, полученного для конкретной, образованной из здорового стада группы животных, количество голов в которой выбирают не менее 10, исходя из соображений удобства сравнения результатов.
При снижении значения этого показателя относительно его среднего значения для конкретной группы животных одной породы судят об устойчивости организма животного к туберкулезу.
В заявляемом изобретении впервые выявлена возможность оценки здорового животного с точки зрения его потенциальной устойчивости к туберкулезу по снижению значения мочевой кислоты относительно ее среднего значения для группы здоровых животных.
Таким образом, неизвестность использования мочевой кислоты в качестве критерия оценки устойчивости организма здорового животного к туберкулезу позволяет нам сделать вывод о наличии в заявляемом способе «изобретательского уровня».
2
2
Концентрация мочевой кислоты определялась уриказным методом (см., например, Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: В 2 т. Т.1 / B.C.Камышников // Мн.: Беларусь. - 2000. - 495 с.), в соответствии с которым уриказа катализирует реакцию окисления мочевой кислоты с образованием аллантоина и пероксида водорода. НО взаимодействует с 4-аминоантипирином и 2,4,6-трибром-3-оксибензойной кислотой с образованием хромофора. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевой кислоты.
Для проверки устойчивости животных к заражению туберкулезом проводили диагностические исследования путем постановки внутрикожной туберкулиновой пробы. В соответствии с «Наставлением по диагностике туберкулеза животных», утвержденным Департаментом ветеринарии МСХ Российской Федерации 18 ноября 2002 г., коровам подкожно вводили очищенный ППД-туберкулин для млекопитающих в дозе 0,2 мл. Учет и оценку результатов проводили через 72 часа. Животных считали реагирующими на туберкулин при утолщении кожной складки на 3 мм и независимо от характера припухлости (отечности, болезненности и повышения местной температуры).
Способ осуществляется следующим образом.
1. Формируют группу клинически здоровых животных одной породы, например по 10 голов симментальской породы в группе.
2. У этих животных берут кровь, стабилизируют гепарином, получают плазму и определяют в ней мочевую кислоту.
3. Находят среднее арифметическое значение мочевой кислоты для данной группы животных.
4. Выявляют животных, у которых значение мочевой кислоты ниже найденного среднего арифметического значения этого показателя для конкретной группы животных. Таких животных считают устойчивыми к заражению туберкулезом.
Пример.
Формируют группу коров в количестве 10 голов.
Берут у них кровь, стабилизируют гепарином, получают плазму и определяют в ней мочевую кислоту.
Для сравнения и обоснования полученных результатов определяли также общий белок, содержание альбуминов и мочевины.
Результаты представлены в таблице.
Как видно из таблицы, значения общего белка, альбуминов и мочевины не имеют корреляционной зависимости с устойчивостью и восприимчивостью организма животного к заболеванию туберкулезом.
Наименование показателя
Номер животного
Среднее значение показателя
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Мочевая кислота, мкмоль/л
98,0
126,0
112,0
82,0
104,0
55,28
63,54
56,05
72,84
75,68
82,0
Общий белок, г/л
60,3
61,0
64,0
58,8
61,1
57,0
53,4
44,9
62,5
53,9
57,7
Альбумин, г/л
28,6
35,1
28,6
30,0
30,6
28,6
32,7
28,2
32,2
30,6
30,5
Мочевина, ммоль/л
6,0
5,9
7,2
6,2
6,3
9,9
5,6
8,52
4,06
3,49
6,3
Показатели мочевой кислоты имеют значения ниже среднего у 5 животных (с №6 по №10), у остальных животных этот показатель выше среднего значения (с №1 по №5).
Проведенная туберкулиновая проба подтвердила, что животные №6-10 устойчивы к заражению туберкулезом, а другие (№1-5) - восприимчивы.
Таким образом, заявляемый способ позволяет оценить потенциальную восприимчивость животных к заболеванию туберкулезом, при этом о наличии самого заболевания речь не идет. Способ прост в исполнении и эффективен, отражает общую метаболическую картину организма животного, позволяет формировать стада из потенциально устойчивых к заражению туберкулезом животных.