СПОСОБ ОЦЕНКИ УСТОЙЧИВОСТИ МЕМБРАНЫ ЭРИТРОЦИТОВ К ИШЕМИИ
METHOD FOR ASSESSING ERYTHROCYTE MEMBRANE RESISTANCE TO ISCHEMIA

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к биохимии и физиологии, и может быть использовано для оценки устойчивости мембраны эритроцитов у человека в норме и при гипертонической болезни.
Известен способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов периферической крови при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных. Для осуществления данного способа у беременных в мембранах эритроцитов определяют содержание лизофосфотидилхолина и протеина полосы 4.1. Используя полученные данные, определяют величину дискриминантной функции (D) с помощью дискриминантного уравнения:
D=-6,790 × белок полосы 4.1+0,609 × количество лизофосфотидилхолина.
При значении D, равном или меньше 19,01, прогнозируют неустойчивость мембран эритроцитов (Способ прогнозирования устойчивости мембран эритроцитов периферической крови при обострении герпес-вирусной инфекции у беременных: пат. 2409321 Рос. Федерация: A61B 10/00, G01N 33/50 / Луценко М.Т., Андриевская И.А.; опубл. 20.01.2011).
К недостаткам данного способа следует отнести то, что он предназначен для определения устойчивости мембран эритроцитов только у беременных в норме и при герпес-вирусной инфекции и не может быть использован для больных гипертонической болезнью. Кроме этого к недостаткам этого способа следует отнести и длительность определения, использование дорогостоящих оборудования и реактивов.
Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ оценки устойчивости эритроцитов к функциональной нагрузке, включающий определение биохимических параметров в крови пациента, показатели которых используют для вычисления коэффициента устойчивости эритроцитов к ишемии (Способ оценки устойчивости эритроцитов к функциональной нагрузке: пат. 2371723 Рос. Федерация: G01N 33/49, G01N 33/50 / Пивоваров Ю.И., Кузнецова Э.Э., Горохова В.Г., Корякина Л.Б.; опубл. 03.03.2008).
Известный способ осуществляют следующим образом: в крови пациента определяют содержание метгемоглобина, мембраносвязанного гемоглобина, окисленных нуклеотидов и суммарную оптическую плотность эритроцитов до и после проведения функциональной пробы, в качестве которой используют кратковременную локальную ишемию. Затем определяют разницу величин каждого показателя после и до проведения функциональной пробы, после чего коэффициент устойчивости эритроцитов к ишемии (К) вычисляют по формуле. По величине коэффициента К меньше «0» устойчивость эритроцитов к ишемии оценивают высокой, от «0» до 0,1 - нормальной, выше 0,1 - сниженной.
К недостаткам известного способа следует отнести то, что он может быть использован только для больных с ишемической болезнью сердца. Также к недостаткам известного способа следует отнести то, что он основан на показателях, требующих специальных трудоемких и дорогостоящих методов исследования.
Задачей заявляемого технического решения является разработка способа оценки устойчивости мембраны эритроцитов к ишемии (тканевой гипоксии) у больных гипертонической болезнью.
Техническим результатом заявляемого способа является повышение точности оценки за счет определения коэффициента устойчивости мембраны эритроцитов по уравнению канонических величин, а также упрощение способа за счет использования биохимических показателей широко применяемых в клинике и отсутствия необходимости проведения ишемической пробы.
Технический результат достигается тем, что способ оценки устойчивости мембраны эритроцитов к ишемии включает взятие пробы крови, определение ее биохимических показателей и вычисление коэффициента устойчивости мембраны эритроцита по формуле.
Отличие заявляемого способа заключается в том, что определяют: СОЭ, фибриноген, общий билирубин, простациклин, агрегацию эритроцитов, вязкость крови в сосудах микроциркуляции, мочевину, адгезию тромбоцитов, плазминоген и нитриты, после чего оценку устойчивости мембраны эритроцитов проводят по коэффициенту, рассчитываемому как каноническая величина:
Отличие способа заключается и в том, что оценку устойчивости мембраны эритроцитов определяют по коэффициенту, рассчитываемому как каноническая величина.
ум
К=10,24-0,155×СОЭ+2,107×Фг-0,087×ОБ+0,031×Пц-0,805×АГРэр-1,185×v20+3,33×v50+0,378×Мч-2,92×v100-0,135×АДГтр-0,059×Пг-0,355×Ηт, где:
ум
К - коэффициент устойчивости мембраны эритроцитов;
СОЭ - скорость оседания эритроцитов, мм/ч;
Фг - фибриноген, г/л;
ОБ - общий билирубин, мкмоль/л;
Пц - простациклин, %;
АГРэр - агрегация эритроцитов, %;
-1
v20, v50, v100 - вязкость крови в сосудах диаметром 20, 50, 100 мкм, мПа·с;
Мч - мочевина, ммоль/л;
АДГтр - адгезия тромбоцитов, %;
Пг - плазминоген, %;
Нт - нитриты, мкмоль/л.
ум
Авторами заявляемого способа установлено, что при величине К меньше или равной
ум
-0,1 мембрану эритроцитов у больных гипертонической болезнью оценивают неустойчивой, при величине К больше или равной 0,0 мембрана эритроцитов у таких больных является устойчивой к ишемии.
Проведенный сопоставительный анализ с прототипом показал, что предлагаемый способ отличается от известного вышеперечисленными приемами и, следовательно, соответствует критерию изобретения «новизна».
Из проведенного анализа патентной и специальной литературы установлено, что предлагаемый способ имеет признаки, отличающие его не только от прототипа, но и других технических решений в данной и смежных областях медицины. В доступной литературе авторами предлагаемого технического решения не выявлено способа оценки устойчивости мембраны эритроцитов к ишемии у больных гипертонической болезнью вышеперечисленными приемами.
Отличия заявляемого способа от известных заключаются в возможности оценки устойчивости мембраны эритроцитов к ишемии без использования специальных и трудоемких методов исследования. Так, в предлагаемом способе используют широко применяемые в клинике биохимические, гемостазиологические и гемореологические параметры мембраны эритроцитов. Кроме того, по заявляемому способу оценка устойчивости эритроцитов к ишемии не требует проведения ишемической пробы, что упрощает способ и сокращает время определения.
Анализ полученных результатов позволил авторам заявляемого способа определить устойчивость мембраны эритроцитов к ишемии и оценить ее как устойчивую и неустойчивую.
ум
Клинические наблюдения авторов свидетельствуют о том, что использование предлагаемого технического решения позволяет оценить устойчивость мембраны эритроцитов к ишемии у больных гипертонической болезнью. Авторами показано, что величина К может использоваться для количественной оценки индивидуальных особенностей устойчивости клеток (эритроцитов) к ишемии (тканевой гипоксии). Вероятность ошибки составляет 8,7%.
Изложенное позволяет сделать вывод о соответствии технического решения критерию «изобретательский уровень».
Способ, составляющий заявляемое изобретение, предназначен для использования в медицине, а именно в биохимии и физиологии. Возможность его осуществления подтверждена описанными в заявке примерами и средствами, следовательно, предлагаемое решение соответствует критерию изобретения «промышленная применимость».
Заявляемый способ осуществляют следующим образом.
Утром натощак из локтевой вены проводят забор крови в пробирку, содержащую 3,8% раствора цитрата натрия.
Все биохимические показатели крови определяют в исходном состоянии.
Скорость оседания эритроцитов определяют в капилляре.
Уровень фибриногена определяют фотометрическим методом на фотометре.
Концентрацию общего билирубина устанавливают прямым методом с диазореагентом.
Простациклиновую активность плазмы крови оценивают косвенно - по степени снижения агрегации тромбоцитов, индуцированной аденозиндифосфатом (АДФ) в образце обогащенной тромбоцитами плазмы с добавлением к нему плазмы того же пациента, но «бедной» тромбоцитами.
Измерение агрегации эритроцитов осуществляется автоматически в микрокапилляре анализатора СОЭ (мм/ч).
Определение вязкости крови в сосудах системы микроциркуляции соответствующего калибра (20, 50 и 100 мкм) осуществляют с помощью вискозиметрии на реологическом анализаторе.
Уровень мочевины исследуют на автоматическом биохимическом анализаторе «Синхрон-9» фирмы «Bekman».
Агрегацию тромбоцитов определяют на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов.
Уровень плазминогена оценивают на автоматическом коагулометре ВСТ.
Концентрацию нитритов в плазме крови определяют с помощью реактива Грисса, т.е. по интенсивности окраски при длине волны 540 нм в относительных единицах оптической плотности.
Полученные величины используют в нижеприведенной формуле для определения коэффициента устойчивости мембраны эритроцитов к ишемии:
ум
К=10,24-0,155×СОЭ+2,107×Фг-0,087×ОБ+0,031×Пц-0,805×АГРэр-1,185×v20+3,33×v50+0,378×Мч-2,92×v100-0,135×АДГтр-0,059×Пг-0,355×Ηт, где:
ум
К - коэффициент устойчивости мембраны эритроцитов;
СОЭ - скорость оседания эритроцитов, мм/ч;
Фг - фибриноген, г/л;
ОБ - общий билирубин, мкмоль/л;
Пц - простациклин, %;
АГРэр - агрегация эритроцитов, %;
-1
v20, v50, v100 - вязкость крови в сосудах диаметром 20, 50, 100 мкм, мПа·с;
Мч - мочевина, ммоль/л;
АДГтр - адгезия тромбоцитов, %;
Пг - плазминоген, %;
Нт - нитриты, мкмоль/л.
ум
ум
При величине К меньше или равном -0,1 мембрана эритроцитов неустойчива к ишемии, при величине К больше или равной 0,0 мембрана эритроцитов является устойчивой.
Предложенный способ поясняется примерами конкретного выполнения.
Пример 1. Больной С, история болезни 23, диагноз: гипертоническая болезнь 2 степени.
У больного были определены биохимические и реологические показатели в исходном состоянии.
СОЭ: 15,0 мм/ч
Фибриноген: 4,10 г/л
Общий билирубин: 12,0 мкмоль/л
Простациклин: 31,9%
АГРэр: 6,60%
-1
v20: 12,6 мПа·с
-1
v50: 9,3 мПа·с
Мочевина: 3,9 ммоль/л
-1
v100: 7,9 мПа·с
АДГтр: 9,9%
Плазминоген: 98,25%
Нитриты: 5,0 мкмоль/л
ум
К=10,24-0,155×15,0+2,107×4,10-0,087×12,0+0,031×31,9-0,805×6,60-1,185×12,6+3,33×9,3+0,378×3,9-2,92×7,9-0,135×9,9-0,059×98,25-0,355×5,0=-3,28
Рассчитанная величина коэффициента устойчивости мембраны эритроцита свидетельствует о том, что мембрана эритроцитов неустойчива к ишемии.
Пациенту была рекомендована комплексная терапия с назначением препаратов, влияющих на биохимические и реологические свойства крови.
Через 6 месяцев после проведенного курса лечения назначенными препаратами этому больному был проведен повторный анализ крови:
СОЭ: 2,0 мм/ч
Фибриноген: 4,00 г/л
Общий билирубин: 10,0 мкмоль/л
Простациклин: 86,7%
АГРэр: 4,00%
-1
v20: 12,5 мПа·с
-1
v50: 9,2 мПа·с
Мочевина: 3,9 ммоль/л
-1
v100: 7,6 мПа·с
АДГтр: 8,0%
Плазминоген: 120,0%
Нитриты: 5,0 мкмоль/л
ум
К=10,24-0,155×2,0+2,107×4,0-0,087×10,0+0,031×86,7-0,805×4,00-1,185×12,5+3,33×9,2+0,378×3,9-2,92×7,6-0,135×8,0-0,059×120,0-0,355×5,0=2,13
ум
Величина К, равная 2,13, свидетельствует о повышении устойчивости мембраны эритроцита к ишемии.
Пример 2. Донор К., практически здоров. В полученных образцах крови определены исследуемые показатели.
СОЭ: 2,0 мм/ч
Фибриноген: 3,80 г/л
Общий билирубин: 17,4 мкмоль/л
Простациклин: 11,9%
АГРэр: 0,16%
-1
v20: 12,0 мПа·с
-1
v50: 9,3 мПа·с
Мочевина: 5,4 ммоль/л
-1
v100: 7,6 мПа·с
АДГтр: 8,7%
Плазминоген: 106,0%
Нитриты: 3,5 мкмоль/л
ум
К=10,24-0,155×2,0+2,107×3,80-0,087×17,4+0,031×11,9-0,805×0,16-1,185×12,0+3,33×9,3+0,378×5,4-2,92×7,6-0,135×8,7-0,059×106,0-0,355×3,5=4,59
ум
Величина К, равная 4,59, свидетельствует об устойчивости мембраны эритроцита к ишемии.
Было обследовано 46 больных с гипертонической болезнью (ГБ) I-II стадии, 1-2 степени. Все пациенты были мужского пола. Диагноз ГБ устанавливали по данным анамнеза и клинико-инструментального обследования. Дифференциальную диагностику для исключения симптоматических АГ проводили в соответствии с рекомендациями Всероссийского научного общества кардиологов (ВНОК, 2008). Группу сравнения составили 22 клинически здоровых мужчины.
Общий процент дискриминации групп пациентов с устойчивой и неустойчивой мембраной эритроцитов составил 91,3%, вероятность ошибки составила 8,7%.
Таким образом, предложенный способ позволяет быстро, точно и объективно оценить индивидуальную устойчивость эритроцитов к ишемии без использования трудоемких методик.