Способ прогнозирования угрозы прерывания беременности при обострении цитомегаловирусной инфекции путем определения сосудистого эндотелиального фактора роста и докозагексаеновой кислоты в сыворотке крови
METHOD FOR PREDICTION OF THREATENING MISCARRIAGE IN AGGRAVATING CYTOMEGALOVIRUS INFECTION BY DETERMINING VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR AND DOCOSAHEXAENOIC ACID IN BLOOD SERUM

Область применения:
изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, а также к области научных исследований - патологической физиологии, и предназначено для прогнозирования угрозы прерывания беременности ранних сроков при обострении цитомегаловирусной инфекции.
Уровень техники
Невынашивание беременности ранних сроков представляет собой актуальную проблему современного акушерства, так как является полиэтиологическим состоянием, объединяющим различные нарушения, как в репродуктивной системе, так и в организме женщины в целом [3]. Нередко факт невынашивания беременности связывают с инфекционным фактором, в частности с цитомегаловирусной инфекцией [10]. Угроза прерывания беременности существует у каждой четвертой женщины с обострением цитомегаловирусной инфекции [8].
Рост и развитие плода зависит от функции плаценты и, главным образом, от плацентарного кровообращения. В свою очередь правильное развитие плаценты определяется содружественным взаимодействием сосудистых факторов роста и их рецепторов [2, 12, 14]. К циркулирующим проангиогенным факторам роста, секретируемым плацентой, относят фактор роста эндотелия сосудов (VEGF-1), который во многом определяет процесс ангиогенеза плаценты и функциональную активность трофобласта [9].
VEGF-1 в эндотелии сосудов отвечает за два основных события: увеличение проницаемости сосудов и пролиферацию эндотелиальных клеток, обо события необходимы для успешного развития эмбриона. Увеличение проницаемости сосудов обеспечивает выход из сосудов плазменных белков (фибронектина, витронектина, фибриногена, факторов коагуляции), которые способствуют формированию «зацепок» для миграции эндотелиальных и гладкомышечных клеток рецепторов [2].
У плода VEGF-1 принимает участие как в васкулогенезе (развитие сосудов), так и ангиогенезе (росте новых микрососудов из уже существующих). Избыток или недостаток фактора ведет к гибели эмбриона в результате нарушения васкуло- и ангиогенеза [6].
Ангиогенез играет решающее значение для успешной плацентации и дальнейшего развития беременности. Следовательно, факторы, его регулирующие, принимают непосредственное участие в ее развитии.
В последнее десятилетие активно изучают сосудистые факторы роста в контексте регуляции ангиогенеза и их роли в патологии беременности. Отечественными исследователями показано, что увеличение оксидативного стресса и дисбаланс между про- и антиангиогенными факторами, такими как VEGF-1 и растворимых рецепторов к VEGF-1 (Flt-1, KDL/Flk-2, FLT-4), могут играть определенную роль в развитии эндотелиальной дисфункции [2]. Согласно современным исследованиям VEGF-1 является одним из ключевых факторов в сосудистой дисфункции при невынашивании беременности [11]. Снижение его экспрессии связано с нарушением перфузии в эндометрии, что делает эндометрий невосприимчивым, и, в конечном итоге, приводит к ранней потери беременности [7].
Таким образом, недостаточная продукция VEGF-1 может являться одной из причин самопроизвольного прерывания беременности, так как VEGF-1 является важным фактором плацентации и инвазии трофобласта.
В настоящее время появились литературные данные о вовлечении в процесс ангиогенеза длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот ω-3 семейства и их метаболитов [16]. Так, зарубежные авторы отмечают, что для транспорта полиненасыщенных жирных кислот необходим VEGF-1, снижение концентрации которого уменьшает доступность кислот для эндотелиальных клеток. Это приводит к снижению образования противовоспалительных и ангиогенных факторов: липоксинов, резолвинов, протеинов и марезинов из полиненасыщенных жирных кислот, которые подавляют синтез IL-6, TNFα, окислительный стресс, эндотелиальную дисфункцию; и увеличивают производство простациклина и оксида азота (II) [13].
Есть данные о том, что докозагексаеновая кислота улучшает нитрозо-окислительно-восстановительный баланс и уменьшает VEGF-1 опосредованную ангиогенную передачу сигналов в эндотелиальных клетках микрососудов [17].
Известны работы, в которых показано, что ω-3 полиненасыщенные жирные кислоты в условиях гипоксии, активирует VEGF-1, способствующий ангиогенезу, путем активации мембранного рецептора GRP120 и ядерного рецептора PPARγ, и, таким образом, улучшает локальное индуцированное гипоксией воспаление жировой ткани и резистентность к инсулину [15].
Перечисленные выше факторы как изолировано, так и в сочетании друг с другом, могут свидетельствовать о нарушении процессов формирования фетоплацентарного комплекса.
Наибольшую прогностическую ценность имеют способы, позволяющие проводить оценку угрожающих состояний беременности, связанных с невынашиванием, в том числе инфекционного генеза.
Известны способы прогнозирования невынашивания беременности, основанные на определении в сыворотке крови содержания β-субъединицы хорионического гонадотропина и растворимого рецептора васкуло-эндотелиального фактора роста [1], трансформирующего фактора роста [4]. Основными недостатками методов являются:
- методы позволяют прогнозировать невынашивание беременности только в том триместре, в котором проводится исследование;
- отсутствует интеграция показателей сосудистого васкуло-эндотелиального фактора роста с инфекционной патологией.
За прототип мы взяли способ, предложенный нами ранее [5], который позволяет диагностировать невынашивание беременности по определению в гомогенате ворсинчатого хориона содержание VEGF-1 при цитомегаловирусной инфекции.
Основным недостатком данного метода является то, что он позволяет диагностировать задержку формирования плаценты и развитие эмбриона только после совершившегося самопроизвольного выкидыша.
Указанные факторы могут быть устранены в заявленном способе.
Техническим результатом
, достигаемым при осуществлении предлагаемого изобретения, является повышение точности прогнозирования невынашивания беременности при обострении цитомегаловирусной инфекции ранних сроков.
Заявляемый технический результат достигается тем, что у беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией, определяют (нг/мл) VEGF-1 методом иммуноферментного анализа с использованием наборов ЗАО «БиоХимМак» (Москва) и содержание докозагексаеновой кислоты (ДГК) в (%) методом газожидкостной хроматографии в сыворотке крови.
Полученные значения используют для вычисления прогностического индекса (ПИ), по формуле, разработанной с использованием метода дискриминантного анализа:
ПИ= -62,735-0,809×VEGF-1+9,845×ДГК,
где ПИ - дискриминантная функция, граничное значение которой (-15,781).
При ПИ равном или больше граничного значения, прогнозируют риск угрозы прерывания беременности при обострении цитомегаловирусной инфекции в ранние сроки. При ПИ меньше граничного значения прогнозируют отсутствие риска угрозы прерывания беременности при обострении цитомегаловирусной инфекции в ранние сроки.
Новизна заявляемого способа
заключается в определении с учетом значений VEGF-1 и докозагексаеновой кислоты в сыворотке крови у беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией, прогностического индекса ПИ, по отношению которого к граничному значению дискриминантной функции прогнозируют угрозу прерывания беременности ранних сроков при обострении цитомегаловирусной инфекции.
Ранее совокупность указанных признаков в прогнозировании угрозы прерывания беременности ранних сроков при обострении цитомегаловирусной инфекции не использовалась.
Способ содержит следующие приемы:
- у беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией в сыворотке крови, взятой из локтевой вены утром натощак, определяют (нг/мл) VEGF-1 методом иммуноферментного анализа с использованием наборов ЗАО «БиоХимМак» (Москва);
- измеряют в (%) содержание докозагексаеновой кислоты методом газожидкостной хроматографии с помощью программно-аппаратного комплекса Хроматэк Аналитик 2,5 (Россия) по времени удерживания с использованием стандартов жирных кислот фирмы «Supelco» (США) в сыворотке крови;
- с помощью дискриминантного уравнения определяют прогностический индекс ПИ= -62,735-0,809×VEGF-1+9,845×ДГК,
где ПИ - прогностический индекс дискриминантной функции, граничное значение которого (- 15,781);
- определяют прогноз развития угрозы прерывания беременности ранних сроков при обострении цитомегаловирусной инфекции: при ПИ равной или больше граничного значения, прогнозируют риск угрозы прерывания беременности ранних сроков, при ПИ меньше граничного значения - прогнозируют отсутствие риска угрозы прерывания беременности ранних сроков.
Вероятность правильного прогноза составляет 87%.
Пример 1. Беременная С., 23 г., находилась на стационарном лечении в гинекологическом отделении Городской клинической больницы (г. Благовещенск). Поступила с болями внизу живота и кровянистыми выделениями из половых путей. Гинекологический анамнез осложнен: 1 медицинский аборт без осложнений. Проведен анализ крови на TORCH-инфекции, содержание VEGF-1, докозогексаеновой кислоты, УЗИ органов малого таза. По ИФА выявлены антитела IgM к цитомегаловирусу, титр антител IgG составил 1600, индекс авидности - 92%.
По УЗИ: в полости матки плодное яйцо с эмбрионом 7 недель 2 дня. Сердцебиение определяется. Гипертонус по задней стенке матки. Внутренний зев сомкнут. Ниже плодного яйца гематома небольших размеров (отслойка ворсинчатого хориона).
Диагноз: беременность 7-8 недель. Угрожающий самопроизвольный выкидыш. Хроническая цитомегаловирусная инфекция, стадия обострения.
По заявленному способу при лабораторном исследовании сыворотки крови получены следующие показатели: содержание VEGF-1 - 9,92 нг/мл, докозогексаеновой кислоты - 5,86%. Прогностический индекс, рассчитанный по формуле, составил (-13,068), что свидетельствовало о высоком риске прерывания беременности, в связи с чем пациентка отнесена в группу риска по реализации невынашивания в ранние сроки.
На третий день стационарного лечения усилились боли внизу живота и кровянистые выделения из половых путей. Выставлен диагноз самопроизвольный выкидыш в ходу при сроке 8 недель беременности.
Прогноз по заявленному способу подтвердился.
Пример 2. Беременная В., 24 л., находилась на стационарном лечении в гинекологическом отделении Городской клинической больницы (г. Благовещенск). Гинекологический анамнез осложнен: 1 медицинский аборт без осложнений. Проведен анализ сыворотки крови на TORCH-инфекции, содержание VEGF-1, докозагексаеновой кислоты, УЗИ органов малого таза.
По ИФА титр антител IgG - 800, индекс авидности - 96%. Диагноз: Беременность 7 недель. Хроническая цитомегаловирусная инфекция, латентная стадия.
По УЗИ: в полости матки плодное яйцо с эмбрионом 7 недель 3 дня. Сердцебиение определяется. Внутренний зев сомкнут.
Диагноз: Беременность 7-8 недель. Хроническая цитомегаловирусная инфекция, латентная стадия.
По заявленному способу при лабораторном исследовании сыворотки крови получены следующие показатели: содержание VEGF-1 - 16,40 нг/мл, докозогексаеновой кислоты - 3,80%. Прогностический индекс, рассчитанный по формуле, составил (-38,411). Отсутствие риска угрозы прерывания беременности ранних сроков.
Прогноз по заявленному способу подтвердился.
Приведенные примеры наглядно показывают точность прогнозирования угрозы прерывания беременности ранних сроков у женщин с обострением цитомегаловирусной инфекцией.
Способ прошел клиническую апробацию. С его помощью проведено прогнозирование угрозы прерывания беременности у 55 беременных женщин с обострением цитомегаловирусной инфекции. Правильный прогноз определялся в 87% случаев, что подтверждает высокую эффективность заявляемого способа.
Используемые источники
1. Способ прогнозирования прерывания беременности в первом триместре: пат. № 2522244 С1 RU / авторы и заявители И.А. Газиева, Г.Н. Чистякова, И.И. Ремизова, М.Н. Тарасова; патентообладатель Федеральное государственное бюджетное учреждение «Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества» Министерства здравоохранения и социального развития РФ; заяв. 28.11.2012; опубл. 10.07.2014 Бюл. №19.
2. Демченко Н.С., Башмакова Н.В., Третьякова Т.Б. Патогенез невынашивания беременности: роль сосудисто-эндотелиального фактора роста (VEGF-A) // Уральский медицинский журнал. 2012. Т.11, №103. С. 6.
3. Лебедева О.П., Иванова О.Н., Пахомов С.П., Калуцкий П.В., Сухих Н.В. Невынашивание беременности как проблема иммунного конфликта // Проблемы репродукции. 2014. №6. С. 88-91.
4. Способ прогнозирования невынашивания беременности во втором триместре: пат. № 2340899 С1 RU / авторы и заявители М.В. Левченко, В.И. Орлов; патентообладатель ФГУ Ростовский НИИ акушерства и педиатрии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию; заяв.26.07.2007; опубл. 10.12.2008 Бюл. №34.
5. Способ прогнозирования задержки формирования плаценты и развития эмбриона при обострении цитомегаловирусной инфекции, подавляющей активность сосудисто-эндотелиального фактора и развития эмбриона: пат. № 2657429 С2 RU / авторы и заявители М.Т. Луценко, И.А. Андриевская; патентообладатель Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания»; заяв. 03.10.2016; опубл. 13.06.2016 Бюл. №17.
6. Надеев А.П., Дробинская А.Н., Жукова В.И., Карпов М.А., Травин М.А., Черданцева Л.А. Патоморфологические изменения и экспрессия сосудистого эндотелиального фактора роста в плаценте при наследственной тромбофилии // Бюллетень СО РАМН, 2014. Т.34, №2. С. 66-71.
7. Таболова В.К., Корнеева И.Е., Донников А.Е., Бурменская О.В., Маслова М.А., Смольникова В.Ю. Профиль локальной экспрессии генов ростовых факторов и цитокинов в эндометрии «имплантационного окна» при хроническом эндометрите // Акушерство и гинекология. 2014. № 12. С. 74-78.
8. Телеуова Ж.К. Невынашивание беременности и инфекция // Медицинский журнал Западного Казахстана. 2001. №1(29). С. 72-73.
9. Ульянина Е.В., Фаткуллин И.Ф. Роль сосудистого эндотелиального фактора роста в прогнозе сосудистых нарушений у беременных с синдромом задержки развития плода // Казанский медицинский журнал. 2015. Т. 96, №2. С. 220-223.
10. Чешик С.Г., Кистенева Л.Б. Цитомегаловирусная инфекция и спонтанные аборты у женщин в I и II триместрах беременности // Вопросы вирусологии. 2016. №61(2). С. 74-78.
11. Banerjee P., Ghosh S., Dutta M. et al. identification of key contributory factors responsible for vascular dysfunction in idiopathic recurrent spontaneoua miscarriage// PLos. Jne. 2013. Vol.8, №11. e80940.
12. Burton G.J., Charnock-Jones D.S., Jauniaux E. Regulation of vascular growth and function in the human placenta // Reproduction. 2009. №138. P. 895-902.
13. Das U.N. Cytokines, angiogenic and antiangiogenic factors and bioactive lipids in preeclampsia // Nutrition. 2015; 31(9): 1083-1095.
14. Gonsalez-Pacheco F.R., Deudero J.J., Castellanos M.C. et al. Mechanisms of endothelial response to oxidative aggression: protective role of autologous VEGF and induction of VEGFR2 by H2O2 // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 2006. № 291. P. H1395-H1401.
15. Hasan A.U., Ohmori K., Konishi K. et al. Eicosapentaenoic acid upregulates VEGF-A through both GPR120 and PPARγ mediated pathways in 3T3-L1 adipocytes // Mol. Cell. Endocrinol. 2015; 406: 10-18.
16. Pandya A.D., Das M.K., Sarkar A., Vilasagaram S., Basak S., Duttaroy A.K. Tube formation in the first trimester placental trophoblast cells: Differential effects of angiogenic growth factors and fatty acid // Cell. Biol. Int. 2016; 40(6): 652-661.
17. Rezende F.A., Lapalime E., Qian C.X. et al. Omega-3 Supplementation Combined With Anti-Vascular Endothelial Growth Factor Lowers Vitreal Levels of Vascular Endothelial Growth Factor in Wet Age-Related Macular Degeneration // Am. J. Ophthalmol. 2014; 158(5): 1071-1078.