СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИСОРБАТА

1. Способ определения полисорбата в содержащей белок пробе, включающий следующие стадии:
(a) пробу подвергают щелочному гидролизу;
(b) после щелочного гидролиза пробу нейтрализуют;
(c) из нейтрализованной пробы необязательно удаляют осадок денатурированного белка;
(d) к необязательно профильтрованной пробе добавляют водную смесь тиоцианатного металлокомплекса для образования тиоцианатного металлокомплекса полиоксиэтиленсорбитана;
(e) упомянутый тиоцианатный металлокомплекс полиоксиэтиленсорбитана, образовавшийся на стадии (d), экстрагируют несмешивающимся с водой органическим растворителем;
(f) измеряют поглощение экстракта, полученного на стадии (e), для определения количества упомянутого тиоцианатного металлокомплекса полиоксиэтиленсорбитана, образовавшегося на стадии (d); и
(g) рассчитывают количество содержащегося в пробе полисорбата, исходя из количества упомянутого тиоцианатного металлокомплекса полиоксиэтиленсорбитана, определенного на стадии (f).
2. Способ по п.1, в котором полисорбат представляет собой моноолеат полиоксиэтиленсорбитана (полисорбат 80).
3. Способ по п.2, в котором полисорбат 80 имеет животное происхождение.
4. Способ по п.2, в котором полисорбат 80 имеет растительное происхождение.
3
2
2
4
5. Способ по любому из пп.1-4, в котором тиоцианатный металлокомплекс, добавляемый на стадии (d), представляет собой водную смесь Co(NO)·6HO и NHSCN, а образующийся тиоцианатный металлокомплекс полиоксиэтиленсорбитана представляет собой полиоксиэтиленсорбитановый комплекс тиоцианатокобальтата(II).
3
2
2
4
6. Способ по п.5, в котором упомянутая водная смесь включает около 3% (масс./об.) Co(NO)·6HO и около 20% (масс./об.) NHSCN.
7. Способ по любому из пп.1-4, в котором проба дополнительно содержит полиоксиэтиленовый эфир изооктилфенола (Triton™ X-100).
8. Способ по любому из пп.1-4, в котором проба дополнительно содержит три-н-бутилфосфат (ТНБФ).
2
2
2
9. Способ по любому из пп.1-4, в котором щелочной гидролиз на стадии (a) включает гидролиз с использованием щелочного реагента, выбранного из группы, состоящей из NaOH, KOH, LiOH, Ba(OH), Sr(OH), Ca(OH), гидроксида тетраметиламмония, гидроксида тетраэтиламмония, гидроксида тетрапропиламмония, гидроксида тетрабутиламмония, а также гомологических и гетерологических замещенных четвертичных алкил- и циклоалкиламмоний гидроксидов.
10. Способ по любому из пп.1-4, в котором щелочной гидролиз на стадии (a) осуществляют при температуре в диапазоне от около 80°C до примерно 100°C в течение по меньшей мере 15 минут.
11. Способ по любому из пп.1-4, в котором щелочной гидролиз на стадии (a) включает гидролиз с использованием по меньшей мере 3 N раствора NaOH при температуре от около 95°C до примерно 100°C в течение по меньшей мере 45 минут.
12. Способ по любому из пп.1-4, в котором фильтр, используемый на стадии (c), не связывает полиоксиэтиленсорбитан.
13. Способ по любому из пп.1-4, в котором несмешивающийся с водой органический растворитель, используемый на стадии (e), выбран из группы, состоящей из метиленхлорида, хлороформа, о-дихлорбензола, бромоформа и трихлорэтилена.
14. Способ по любому из пп.1-4, в котором несмешивающийся с водой органический растворитель представляет собой метиленхлорид.
15. Способ по любому из пп.1-4, в котором поглощение экстракта, полученного на стадии (e), измеряют на стадии (f) примерно при 324 нм.
16. Способ по любому из пп.1-4, дополнительно включающий после стадии (a) и перед стадией (b) следующую стадию:
(a2) после щелочного гидролиза пробу охлаждают.
17. Способ по любому из пп.1-4, дополнительно включающий после стадии (b) и перед стадией (c) следующую стадию:
(b2) пробу выдерживают при комнатной температуре в течение по меньшей мере 30 минут для обеспечения возможности образования осадка денатурированного белка.