Оптимизация алгоритма лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила на территории России

Выводы. 1. Морфология, размер и количество колоний большинства энтеробактерий, вырастающих на среде Эндо производства Merck, Pronadisa, HiMedia и ФБУН ГНЦПМБ, имеют незначительные отличия и соответствуют заявленным производителями характеристикам. Лактозоположительные энтеробактерии вырастали на среде в виде колоний розового или малинового цвета, лактозоотрицательные бактерии образовывали бесцветные или бледно-розовые колонии. На среде Эндо производства HiMedia отсутствовал рост S. dysenteriae I 1362.

2. Показатель выявляемости патогенных энтеробактерий из клинического материала больных ОКИ на среде Эндо производства ФБУН ГНЦПМБ, Merck и Pronadisa составил 8%; на среде Эндо производства HiMedia - 6,5%.

3. Для повышения стандартности бактериологических исследований при внутрилабораторном контроле качества питательных сред Эндо целесообразно биологические свойства среды дополнительно контролировать, используя штамм S. dysen-teriae I 1362.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бактериологическая диагностика брюшного тифа и паратифов А, В и С. Методические рекомендации. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора; 2008: 14.

2. Диагностические препараты. Каталог продукции. Оболенск: ФБУН ГНЦПМБ 2010: 8-15.

3. Методические указания по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями. МУ 04-723/3. М.: МЗ СССР; 1984: 11.

4. Методы контроля бактериологических питательных сред. МУК 4.2.2316-08. М.: Роспотребнадзор; 2008: 1-67.

5. Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории. МУ 4.2.2039-05. М.: Роспотребнадзор; 2005: 1-5.

6. HiMedia Laboratories Pvt Limited. А-406. Bhaveshwar Plaza, LBS Marg, Mumbai 400 086, India; 1993.

7. Microbiology Manual. MERCK, LPRO UBA-V; 1996.

8. Pronadisa. Laboratorios Conda, S.A. 2008-2009.

REFERENCES

1. Bacterial diagnostics of typhoid and paratyphoid forms A, B and C. Methodical recommendations, M., Federal Center for Hygiene & Epidemiology, Rospotrebnadzor. 2008. P.14.

2. Diagnostic formulations. Product Catalogue. SRCAM&B. Obolensk, 2010. P. 8-15.

3. Methodical regulations on microbiological diagnostics of enterobacterial infections. MU 04-723/3. M., MH USSR, 1984. P. 11.

4. Methods of quality control of biological nutrient media, MUK 4.2.2316-08. M.,Rospotrebnadzor, 2008. P. 1-67.

5. Procedure of collection and transportation of biomaterials to microbiological laboratories, MU 4.2.2039-05. M., Rospotrebnadzor, 2005. P. 1-5

6. HiMedia Laboratories Pvt Limited. A-406/ Bhaveshwar Plaza, LBS Marg, Mumbai 400 086, India, 1993.

7. Microbiology Manual, MERCK, LPRO UBA-V. 1996.

8. Pronadisa. Laboratorios Conda, S.A. 2008-2009.

nocTymna 28.11.12

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 616.98:578.833.28]-078

Н.м. Дрефс1,2, В.А. Антонов12, И.А. Баркова1, Е.А. Снатенков1, Т.В. Булатова1, В.П. Смелянский1

оптимизация алгоритма лабораторной диагностики лихорадки западного нила на территории россии

1ФКУз Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт, 2ГБОУ ВПО Волгоградский государственный медицинский университет минздравсоцразвития России

Цель настоящей работы - изучение явления антигенных перекрестов между вирусами лихорадки Западного Нила (ВЛЗН) и клещевого энцефалита (ВКЭ) с помощью твердофазного иммуноферментного метода (ТИФМ) в сыворотке крови лиц, проживающих в различных регионах России.

Для получения точного лабораторного диагноза целесообразно использовать предложенный алгоритм исследования, в котором наряду с ТИФМ мы рекомендуем применять такой дифференциальный критерий, как коэффициент позитивности, ускоряющий и упрощающий лабораторную диагностику инфекций, вызываемых ВЛЗН и ВКЭ.

Ключевые слова: лихорадка Западного Нила, IgG, IgM, ТИФМ, коэффициент позитивности

N.M. Drefs, V.A. Antonov, I.A. Barkova, YeA. Snatenkov, T.V. Bulatova, V.P. Smeliyanskiy

THE OPTIMIZATION OF ALGORITHM OF LABORATORY DIAGNOSTIC OF WESTERN NILE FEVER IN

TERRITORY OF RUSSIA

The article deals with results of study of antigenic chiasms between viruses of Western Nile fever and tick-borne encephalitis using binding immunoassay applied to blood serum from patients residing in various regions of Russia. It is established that to get accurate laboratory diagnostic it is reasonable to apply the proposed algorithm of analysis in which alongside with binding immunoassay such differential criterion as positivity rate is to be implemented to speed up and simplify laboratory diagnostic of infections brought on by viruses of Western Nile fever and tick-borne encephalitis.

Key words: Western Nile fever, IgG, IgM, binding immunoassay, positivity rate

микробиология

Вирус лихорадки Западного Нила (ВЛЗН) относится к роду Flavivirus семейства Flaviviridae. ВЛЗН принадлежит к антигенному комплексу японского энцефалита, включающему также возбудителей энцефалита Сент-Луис (ЭСЛ), желтой лихорадки, денге и др. (более 15 нозоформ) [6]. На сегодняшний день лихорадка Западного Нила (ЛЗН) получает все большее распространение на территории нашей страны. Отмечены случаи этого тяжелого заболевания не только на юге европейской части, но и в средней полосе России. В Сибирском регионе, экзотичном для данной инфекции, выявлены как антиген, так и РНК ВЛЗН в различных видах комаров, клещей и птиц [1].

Важнейшей особенностью семейства Flaviviridae является наличие выраженных антигенных связей между его представителями, в том числе между вирусами клещевого энцефалита (КЭ) и ЛЗН. Проблема диагностики ЛЗН на неэндемичных территориях может усугубляться из-за возможности перекрестных положительных реакций между возбудителями фла-вивирусных инфекций комплекса японского энцефалита. Так, ранее сезонные трансмиссивные заболевания людей из Сибирского региона, сопровождающиеся симптомами лихорадки и менингита, традиционно связывали с вирусами КЭ (ВКЭ) или омской геморрагической лихорадки. Однако сегодня причиной возникновения заболевания в этом регионе могут быть также и другие представители семейства Flaviviridae, в частности ВЛЗН. Проникновение этого возбудителя в Сибирь и возможность его появления на Дальнем Востоке делают проблему дифференциальной диагностики флавивирусных инфекций весьма актуальной.

С проблемой дифференциации представителей семейства Flaviviridae сталкиваются и зарубежные исследователи. Так, по данным американских ученых зарегистрированы перекрестные реакции между антигенами вирусов ЛЗН, ЭСЛ и желтой лихорадки [8]. Сотрудниками Focus Technologies исследованы на наличие антител классов G и М к возбудителю ЛЗН 1432 пробы сыворотки крови, полученные от лиц из различных штатов Америки, инфицированных другими флавивирусами и вакцинированных против них. В 35% случаев обнаружены IgG к возбудителю ЛЗН. Общая перекрестная реакция при определении IgM к возбудителю ЛЗН составила 12%. В 31% случаев это были сыворотки крови от больных лихорадкой Сент-Луиса и от лиц, вакцинированных против желтой лихорадки. С трудностями идентификации ВЛЗН среди других флавивирусов сталкиваются и ученые из Мексики [7], Испании [12].

Целью настоящей работы являлось изучение антигенной общности между ВЛЗН и ВКЭ при исследовании с помощью твердофазного иммуноферментного метода (ТИФМ) образцов сывороток крови от лиц, проживающих в различных регионах России.

Для корреспонденции:

Дрефс Наталья Михайловна, ст. науч. сотр. лаб. иммунодиагностики и биотехнологии

Адрес: 400131, Волгоград, ул. Голубинская, 7 Телефон: (8442) 37-37-74 E-mail: vari2@sprint-v.com.ru

Материалы и методы. Объектом исследования являлись парные сыворотки крови от больных с подозрением на инфицирование ВЛЗН или ВКЭ, поступившие в Волгоградский референс-центр по мониторингу за возбудителем ЛЗН. Обследуемые были инфицированы в летне-осенний сезон 2011 г.

Образцы сывороток крови разделили на группы: 3 образца из Челябинска - I группа, 4 из Горно-Алтайска - II, 1 из Архангельска - III, 2 из Ульяновска - IV, 5 из Волгограда - V и 6 из Воронежа - VI группа.

ПЦР-анализ проводили с использованием набора реагентов для выявления РНК ВЗН "Амплисенс WNV-F1" (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора) в соответствии с МУ [3].

Для исследования сывороток крови с помощью ТИФМ применяли тест-системы "ВектоНИЛ-IgG", "ВектоНИЛ-^О-авидность", "Векто ВКЭ-IgG", (ЗАО "Вектор-Бест", Новосибирск), "Anti-West Nile Virus ELISA (IgM)", "Anti-West Nile Virus ELISA (IgG)", "Avidity Anti-West Nile Virus (IgG) ELISA", "Anti-TBE Virus ELISA (IgM)", "Anti-TBE Virus ELISA (IgG)" ("Euroimmun AG", Германия), руководствуясь МУ [4].

Результаты и обсуждение. По данным, представленным Центром гигиены и эпидемиологии Челябинской области, прослеживается следующая картина (см. рисунок). Из 214 здоровых, являющихся донорами крови, 100% имели положительные результаты в ТИФМ на наличие IgG к ВКЭ. Антитела IgG к ВЛЗН обнаружены у 46 (22%) из них, что, возможно, объясняется перекрестными антигенными связями между ВЛЗН и ВКЭ. Все доноры были вакцинированы против КЭ. В другой группе, состоявшей из 45 человек, имевших симптомы лихорадки или менингита, положительные результаты на наличие IgG к КЭ с помощью ТИФМ зарегистрированы у 12 (26,6%). У 3 (6,6%) из них одновременно обнаружены IgG к ВЛЗН. Данные 3 образца сыворотки крови из этой группы больных были исследованы нами повторно (см. таблицу). Как следует из анамнеза, эти лица не вакцинировались против КЭ. При параллельном проведении ТИФМ с целью выявления возбудителей ЛЗН и КЭ обнаружены антитела класса G к обеим инфекциям. Результат исследования с помощью ТИФМ на наличие IgM к ВЛЗН и ВКЭ был отрицательным. При этом индекс авидности (ИА) IgG к ВЛЗН в двух случаях был менее 50%, что, вероятно, свидетельствовало о начальной стадии заболевания. При постановке ПЦР специфическая РНК ВЛЗН не обнаружена в пробах сывороток крови. Диагнозы ставились с учетом эпидемиологического анамнеза, клинической картины и результатов лабораторной диагностики. Лабораторные диагнозы ЛЗН и КЭ подтверждались на основании четырехкратного нарастания титра IgG в парных сыворотках. Окончательный лабораторный диагноз ЛЗН был поставлен двум обследуемым. В отношении третьего больного из данной группы сделано такое заключение: инфицированный возбудителем КЭ, перенесший заболевание или находящийся в завершении инфекционного процесса (ИА IgG к ВЗН > 70%). Одновременное выявление антител класса G к ВКЭ и ВЛЗН, по нашему мнению, может свидетельствовать об антигенной общности возбудителей КЭ и ЛЗН.

интерпретация результатов, полученных с помощью ТиФм, для исследуемых сывороток крови

Группа № образца IgM IgG ИА IgG к КП Лабораторный диагноз

сыворотки к ВЛЗН к ВКЭ к ВЛЗН к ВКЭ ВЛЗН, %

I 1 - - + + < 50 КПЛЗН > КПКЭ (в 1,5 раза) ЛЗН, ранняя стадия

2 - - + + < 50 КПЛЗН > КПКЭ (в 2 раза) То же

3 - - + + > 70 КПкэ > КПлзн (в 5 раз) КЭ, перенесенная инфекция

II 1 - + + + < 50 КПКЭ > КПЛЗН (в 1,7 раза) КЭ, ранняя стадия

2 - + + + < 50 КПКЭ > КПЛЗН (в 1,5 раза) То же

3 4 1 - + + + < 50 КПкэ= 1,5 " "

III - - - - - - Иерсиниоз

IV 1 - - + - > 70 кплзн = 1,6 ЛЗН, перенесенная инфекция

2 - + + + < 50 КПКЭ > КПЛЗН (в 1,6 раза) КЭ, ранняя стадия

V 1 + - + - < 50 кплзн = 1,5 ЛЗН, ранняя стадия

2 + - + + < 50 КПЛЗН > КПКЭ (в 2 раза) ЛЗН, перенесенная инфекция

3 + - + + < 50 КПЛЗН > КПКЭ (в 2 раза) То же

4 + - + + < 50 КПЛЗН > КПКЭ (в 2 раза) " "

5 + - + + < 50 КПЛЗН > КПКЭ (в 4 раза) " "

VI 1 + - + - < 50 кплзн = 2 ЛЗН, ранняя стадия

2 + - + - < 50 кплзн = 1,8 То же

3 + - + - < 50 кплзн = 2,0 " "

4 + - + - < 50 кплзн = 2,3 " "

5 + - + - < 50 кплзн = 2,5 " "

6 + - + - < 50 кплзн = 1,7 " "

Примечание. - антитела не обнаружены, + антитела обнаружены.

В 3 из 4 образцов парных сывороток крови (II группа) наряду с антителами IgG к ВКЭ обнаружены и IgG к ВЛЗН (см. таблицу). Во всех образцах сывороток крови отсутствовали ранние антитела IgM к ВЗН. Однако в 3 пробах присутствовали специфические IgM к ВКЭ, при этом выявлены низкоавидные антитела класса G к ВЛЗН, что, вероятно, свидетельствовало об острой фазе заболевания. Против ВКЭ данные лица также не вакцинировались. Исследование образцов сывороток крови с помощью ПЦР не выявило специфической РНК ВЛЗН. Таким образом, диагноз ЛЗН не подтвержден. Но, учитывая, что в 3 пробах сыворотки крови обнаружены антитела класса M к ВКЭ, поставили лабораторный диагноз КЭ. Наличие же IgG к ВЛЗН в данных образцах сывороток крови нами объяснено перекрестной реакцией между антигенами ВКЭ и ВЛЗН.

Результаты исследования образцов сывороток крови из III группы с помощью ТИФМ свидетельствовали об отсутствии антител к данным возбудителям (см. таблицу). РНК ВЛЗН не обнаружена и при проведении ПЦР-анализа. При дальнейшем обследовании сотрудниками Центра гигиены и эпидемиологии Архангельской области установлена истинная причина заболевания у данного больного - иерсиниоз.

В обеих пробах сыворотки крови, принадлежащих IV группе, IgM к ВЛЗН не обнаружены, но присутствовали IgG к ВЛЗН, при этом 4-кратного нарастания их титра в парных сыворотках не наблюдали (см. таблицу). В одной из проб сыворотки крови зарегистрирован

высокий ИА ^О к ВЛЗН, что может свидетельствовать о наличии анамнестических антител к этому возбудителю. В другой пробе одновременно выявлены и ^О и ^М к ВКЭ на фоне низкоавидных антител класса О к ВЛЗН, вероятно, указывающих на начальную стадию КЭ. С помощью ПЦР-диагностики не выявлено РНК ВЛЗН. Диагноз ЛЗН не подтвержден, но у одного из больных на основании клинической картины, эпидемиологического анамнеза и результатов лабораторной диагностики поставлен диагноз КЭ.

В ходе иммуноферментного тестирования 5 образцов сыворотки крови из V группы

а б

Сравнение результатов исследования с помощью ТИФМ образцов сыворотки крови доноров (а) и лиц с подозрением на инфицирование ВЛЗН (б).

микробиология

показано, что ^О и ^М к ВЛЗН присутствовали во всех пробах сыворотки крови, а ^О к КЭ - в 4 из них, что, скорее всего, свидетельствовало о наличии антигенной общности между ВКЭ и ВЛЗН. Во всех образцах сыворотки крови ИА ^О к ВЛЗН был низким, что можно интерпретировать как начальную стадию заболевания. Посредством ПЦР-диагностики РНК ВЛЗН в образцах сыворотки крови не обнаружена. На основании анализа результатов лабораторной диагностики, эпидемиологического анамнеза и клинических данных всем обследованным больным поставлен лабораторный диагноз ЛЗН.

Во всех пробах сыворотки крови VI группы отсутствовали ^О и ^М к ВКЭ (см. таблицу). При этом все образцы сывороток крови содержали и ^О, и ^М к ВЛЗН, чтоо является несомненным аргументом в пользу постановки всем больным диагноза ЛЗН, а наличие низкоавидных антител указывало на острый период инфекции. Однако исследование образцов сыворотки крови с помощью ПЦР-анализа не дало положительных результатов.

Альтернативным подходом к дифференциальной диагностике флавивирусных инфекций является использование коэффициента позитивности (КП). КП - это отношение величины оптической плотности (ОП) исследуемой сыворотки к значению ОП отрицательного контрольного образца. КП в исследовании ТИФМ с гомологичным антигеном должен превышать КП в исследовании ТИФМ с гетерологичным антигеном в 2-8 раз [9, 10]. Оценка показателя КП для проб сыворотки крови, при тестировании которых наблюдались перекрестные реакции в исследовании ТИФМ, позволило, на наш взгляд, дифференцировать инфекции ЛЗН и КЭ.

Анализируя результаты исследования ТИФМ и значения КП в группах лиц из сибирского региона, мы выяснили, что при определении ^О наблюдалась перекрестная реаакция между антигенами ВЛЗН и ВКЭ в 50% случаев, из них 40% составляли лица, инфицированные ВЛЗН. С явлением антигенной общности в сыворотках крови лиц, проживающих в средней полосе России, мы столкнулись в 38,4% случаев, все эти лица без исключения имели лабораторный диагноз ЛЗН. Величина КП для всех парных сывороток крови, определенная в исследовании ТИФМ с гомологичными антигенами, была в 1,5-5 раз выше показателя, полученного в тесте с гетерологичными антигенами. Положительные результаты анализа, полученные с помощью ТИФМ (наличие ^М в одной сыворотке в титре, равном или выше 1:800, при 4-кратном увеличении титра ^О в парных сыворотках крови), подтверждались значениями КП. Превышение КП в исследовании ТИФМ с гомологичным антигеном в 1,5 раза уже может свидетельствовать об инфицировании ВЗН или ВКЭ.

Сыворотки крови больных в острой стадии заболевания ЛЗН и КЭ имели низкий ИА ^О к ВЗН как в гомологичной, так и в гетерологичной по антигену тест-системе. Возможно, это объясняется способностью антител, продуцируемых при первичном иммунном ответе на данные инфекции, проявлять перекрестную активность к другим флавивирусам. Высокий ИА специфических ^О к ВЗН в гетероло-

гичных по антигену тест-системах зарегистрирован в сыворотках крови больных, ранее перенесших КЭ. Лабораторные диагнозы, установленные с помощью ТИФМ, подтверждаются значениями КП сывороток крови обследуемых, полученными в тестах с гомологичным и гетерологичным антигенами. Подобный алгоритм использован и зарубежными учеными для дифференциации ЛЗН и ЭСЛ [11]. Исследователи протестировали 1418 образцов сыворотки крови от инфицированных ЛЗН и ЭСЛ во время эпидемии ЛЗН в США в 2002 г. на тест-системах, предназначенных для выявления ^М к ВЗН. Используя для обработки данных КП, выяснили, что позитивные результаты для ЛЗН составили 97,8%, из которых 95% действительно принадлежали лицам, инфицированным возбудителем данного заболевания.

Заключение. Угроза распространения ЛЗН на неэндемичных территориях, возможно, связана с изменениями путей миграции перелетных птиц [5]. Кроме того, климатические условия претерпевают значительные изменения, что влечет за собой и изменение состояния фауны. В связи с этим актуальным является изучение вопроса об участии в циркуляции ВЛЗН иксодовых клещей. По данным новосибирских исследователей, значительный процент клещей инфицирован не только ВКЭ, но и ВЛЗН [2].

На эндемичных по ЛЗН территориях при отсутствии циркуляции ВКЭ или других флавивирусов достаточно проведения исследований на выявление антител лишь для ВЛЗН.

На эндемичных территориях по КЭ или другим флавивирусным инфекциям (при подозрении на ЛЗН) для подтверждения острой формы инфекций необходимо проведение сравнительных исследований на выявление антител класса ^М к другим фла-вивирусам, причем в парных сыворотках. Тестирование на ^О является косвенно подтверждающим диагноз исследованием, так как положительные результаты часто регистрируются при других флавиви-русных инфекциях, являясь отражением перекрестных реакций.

Измерение авидности специфичных к ВЛЗН ^О позволяет определить период времени, прошедший после первичного инфицирования. При ИА менее 50% сыворотка содержит низкоавидные антитела, что указывает на текущую либо недавно перенесенную инфекцию (2-3 мес назад). Если ИА более 70%, то сыворотка содержит высокоавидные антителал, что указывает на перенесенную ранее инфекцию.

Наличие ^М свидетельствует об острой либо недавно перенесенной инфекции, обусловленной ВЛЗН. Выявление антител класса ^О необходимо использовать в парных сыворотках в качестве подтверждающего теста и при проведении сероэпидемиологиче-ских исследований.

Проблема дифференциальной диагностики инфекций, вызываемых различными представителями семейства Р^т1Мае, остается актуальной. В связи с этим целесообразно использование приведенного выше алгоритма исследования, в котором наряду с ТИФМ и ПЦР мы рекомендуем применять дифференциальный критерий - коэффициент позитивности, ускоряющий и упрощающий лабораторную диагно-

стику инфекций, вызываемых BЛЗH и BКЭ.

ЛИТЕРАТУРА

1. Антонов В.А., Смоленский В.Ю., Путинцева Е.В. и др. Проблемы особо опасных инфекций. 2012; 1: 17-21.

2. МосквитинаН.С., Романенко В.Н., Терновой В.А. и др. Паразитология. 2008; 3(42): 210-25.

3. МУ 1.3.2569-09. Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патоген-ности. М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; 2009.

4. МУ 3.1.3.2600-106. Мероприятия по борьбе с лихорадкой Западного Нила на территории Российской Федерации. М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; 2010.

5. Путинцева Е.В., Липницкий А.В., Алексеев В.В. и др. Проблемы

особо опасных инфекций. 2011; 1: 38-42.

6. Онищенко Г.Г., ред. Сборник материалов по вспышке лихорадки Западного Нила в Российской Федерации в 2010 г. Волгоград: Волга-Паблишер; 2011.

7. Guerrero-Sánchez S., Cuevas-Romero S., Nemeth N.M. et al. J. Emerg. Infect. Dis. 2011; 12(17): 2245-52.

8. Hogrefe W.R., Moore R., Lape-Nixon M. et al. J. Clin. Microbiol. 2004; 10(42): 4641-8.

9. HolbrookM.R., Shope R.E., Barret A.D.T. J. Clin. Microbiol. 2004; 9(42): 4106-10.

10. MartinD.A., BiggerstafB.J., AllenB. et al. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2002; 3(9): 544-9.

11. Martin D.A., Noga A., Kosoy O. et al. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2004; 6(11): 1130-3.

12. Larsen J., Sch0nheyderH.C., SinghK.V. et al. J. Emerg. Infect. Dis. 2011; 12(17): 2397-9.

Поступила 04.07.12

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 616.157-078:543.544.45.08

Д.А. Попов, С.Т. Овсеенко, Г.А. Осипов, Т.Ю. Вострикова

ускоренный способ идентификации возбудителей бактериемий с применением метода газовой хромато-масс-спектрометрии

НЦ ССХ им. А.Н. Бакулева РАМН, Москва, Россия

Проведена сравнительная оценка эффективности родовой идентификации гемокультур методом газовой хромато-масс-спектрометрии (ГХ-МС) путем сопоставления с данными традиционного культурального метода. Содержимое флаконов с положительной гемокультурой анализировали традиционными микробиологическими методами и методом ГХ-МС с детекцией маркеров наиболее распространенных возбудителей нозокомиальных бактериемий: микроорганизмов родов Staphylococcus, Enterococcus, Klebsiella, Escherichia, Serratia, Pseudomonas, Acinetobacter, Stenotrophomonas, Candida. Определена возможность применения метода ГХ-МС для родовой экспресс-идентификации возбудителей бактериемий. Выявлено полное совпадение результатов, полученных методом ГХ-МС, с данными классического бактериологического метода. Показано сокращение времени анализа при родовой идентификации гемокультур методом ГХ-МС до 3 и менее против 1,5-2 сут при традиционном подходе, что может способствовать более раннему началу этиотропной терапии при тяжелых инфекциях.

Ключевые слова: бактериемия, нозокомиальные инфекции, газовая хромато-масс-спектрометрия D.A. Popov, S.T. Ovseyenko, G.A. Osipov, T.Yu. Vostrikova

THE EXPRESS MODE OF IDENTIFICATION OF AGENTS OF BACTERIEMIAS USING THE TECHNIQUE OF GAS CHROMATOGRAPHY-MASS SPECTROMETRY

The A.N. Bakulev National center of cardio-vascular surgery of the Russian academy of medical sciences, Moscow, Russia

The comparative evaluation was carried out concerning the effectiveness of generic identification of hemocultures using the technique of gas chromatography-mass .spectrometry by comparison with data of common cultural method. The content of vials with positive hemoculture was analyzed using both the common microbiologic methods and the technique of gas chromatography-mass spectrometry with detection of markers of the most widespread agents of nosocomial bacteriemias: microorganisms ofgenus Staphylococcus, Enterococcus, Klebsiella, Escherichia, Serratia, Pseudomonas, Acinetobacter, Stenotrophomonas, Candida. The possibility of applying the technique of gas chromatography-mass spectrometry for generic express-identification of agents of bacteriemias was established. The full concurrence of results obtained by gas chromatography-mass spectrometry with the results of common bacteriologic method was revealed. The time saving of analysis during generic identification of hemocultures using gas chromatography-mass spectrometry up to three and less hours against 1.5-2 days in case of common approach. The established information can input into earlier start of etiotropic therapy under severe infections.

Key words: bactriemia, nosocomial infection, gas chromatography-mass spectrometry

Для корреспонденции:

Попов Дмитрий Александрович, канд. мед. наук, рук. лаб. клин. микробиологии и антимикробной терапии Адрес: 121552, Москва, Рублевское ш., 135 Телефон: (495) 414-79-14 E-mail: DAPopov@heart-house.ru

Введение. Несмотря на использование современных методов лечения, проблема инфекционных осложнений у больных, находящихся в отделениях интенсивной терапии, остается актуальной. Задержка с назначением антимикробных препаратов при тяжелых инфекциях неизбежно приводит к прогрессиро-