Т-КЛЕТОЧНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ

1. Т-клеточный рецептор (TCR), обладающий свойством связываться с комплексом HLA-A*02 с раковым антигеном MAGE А4 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1) и содержащий гетеродимер альфа- и бета-цепей, где указанный гетеродимер включает альфа-цепь, содержащую вариабельный домен альфа-цепи TCR и бета-цепь, содержащую вариабельный домен бета-цепи TCR, причем в указанном вариабельном домене альфа-цепи TCR последовательности в пределах аминокислотных остатков 27-32, 50-56 и 91-103 выбраны из следующих:
и причем в указанном вариабельном домене бета-цепи TCR последовательности в пределах аминокислотных остатков 27-31, 49-54 и 92-107 выбраны из следующих:
2. TCR по п. 1, отличающийся тем, что указанная последовательность вариабельного домена альфа-цепи в пределах аминокислотных остатков 27-32, 50-56 и 91-103 и указанная последовательность вариабельного домена бета-цепи в пределах аминокислотных остатков 27-31, 49-54 и 92-107 выбрана из следующих:
3. TCR по п. 1 или 2, который представляет собой альфа-бета-гетеродимер, имеющий последовательность константного домена альфа-цепи TRAC и последовательность константного домена бета-цепи TRBC1 или TRBC2.
4. TCR по п. 3, отличающийся тем, что последовательности константного домена альфа- и бета-цепи модифицированы путем усечения или замены для удаления нативной дисульфидной связи между Cys4 экзона 2 TRAC и Cys2 экзона 2 TRBC1 или TRBC2.
5. TCR по п. 3 или 4, отличающийся тем, что последовательность(-ти) константного домена альфа- и/или бета-цепи модифицирована(-ы) путем замены остатков Thr 48 TRAC и Ser 57 TRBC1 или TRBC2 на остатки цистеина, причем указанные остатки цистеина образуют ненативную дисульфидную связь между константными доменами альфа- и бета-цепи TCR.
6. TCR по любому из пп. 1-5, который представлен в одноцепочеченом формате типа Vα-L-Vβ, Vβ-L-Vα, Vα-Cα-L-Vβ, Vα-L-Vβ-Cβ, где Vα и Vβ представляют собой вариабельные области TCR аир, соответственно, Сα и Сβ представляют собой константные области TCR α и β, соответственно, и L представляет собой линкерную последовательность.
7. Гибридная молекула TCR для направленной доставки агента к клеткам, которые презентируют антиген MAGE А4, или к ткани, которая содержит клетки, которые презентируют антиген MAGE А4, включающая TCR по любому из предыдущих пунктов, который ковалентным образом связан с указанным агентом.
8. Гибридная молекула TCR по п. 7, отличающаяся тем, что указанный агент представляет собой детектируемую метку, терапевтический агент или группу, модифицирующую фармакокинетику (ФК).
9. Гибридная молекула TCR по п. 8, отличающаяся тем, что указанная детектируемая метка выбрана из флуоресцентной метки, радиоактивной метки, фермента, зонда на основе нуклеиновой кислоты или контрастного реагента.
10. Гибридная молекула TCR по п. 8, отличающаяся тем, что указанная группа, модифицирующая ФК, выбрана из ПЭГ, ПАС или альбумина.
11. Гибридная молекула TCR по п. 8, отличающаяся тем, что указанный терапевтический агент выбран из низкомолекулярного цитотоксического агента, пептидного цитотоксина, радионуклида, цитокина, суперантигена или его мутантной формы, комплекса пептид-HLA, хемокина, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, белкового каркаса, активатора комплемента или вирусного или бактериального белкового домена или пептида.
12. Гибридная молекула TCR по п. 11, отличающаяся тем, что указанный агент представляет собой анти-CD3 антитело, ковалентно связанное с С- или N-концом альфа- или бета-цепи TCR.
13. Гибридная молекула TCR по п. 12, отличающаяся тем, что указанный агент представляет собой анти-CD3 антитело, ковалентно связанное с С- или N-концом бета-цепи TCR через линкерную последовательность.
14. Гибридная молекула TCR по п. 13, отличающаяся тем, что указанная линкерная последовательность выбрана из группы, состоящей из: GGGGS (SEQ ID N0: 30), GGGSG (SEQ ID NO: 31), GGSGG (SEQ ID NO: 32), GSGGG (SEQ ID NO: 33), GSGGGP (SEQ ID NO: 34), GGEPS (SEQ ID NO: 35), GGEGGGP (SEQ ID NO: 36) и GGEGGGSEGGGS (SEQ ID NO: 37).
15. Гибридная молекула TCR по любому из пп. 11-14, отличающаяся тем, что указанное анти-CD3 антитело представляет собой антитело в формате одноцепочеченого вариабельного фрагмента (scFv).
16. Гибридная молекула TCR-анти-CD3, содержащая TCR, обладающий свойством связывания с комплексом HLA-A*02 с раковым антигеном MAGE-A4 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1), и антитело против CD3 для перенаправления Т-клеток на клетки, презентирующие антиген MAGE-A4, или ткань, которая содержит клетки, которые презентируют антиген MAGE А4, где указанный TCR содержит гетеродимер альфа- и бета-цепей, включающий альфа-цепь, которая содержит вариабельный домен альфа-цепи TCR, и бета-цепь, которая содержит вариабельный домен бета-цепи TCR, при этом указанное антитело против CD3 ковалентным образом связано с N-концом или С-концом бета-цепи TCR посредством линкерной последовательности, которая выбрана из SEQ ID NO: 30-37, причем в указанном вариабельном домене альфа-цепи TCR последовательности в пределах аминокислотных остатков 27-32, 50-56 и 91-103 выбраны из следующих:
и причем в указанном вариабельном домене бета-цепи TCR последовательности в пределах аминокислотных остатков 27-31, 49-54 и 92-107 выбраны из следующих:
17. Гибридная молекула TCR-анти-CD3 по п. 16, отличающаяся тем, что указанная последовательность вариабельного домена альфа-цепи в пределах аминокислотных остатков 27-32, 50-56 и 91-103 и указанная последовательность вариабельного домена бета-цепи в пределах аминокислотных остатков 27-31, 49-54 и 92-107 выбраны из следующих:
18. Нуклеиновая кислота, кодирующая TCR, который обладает свойством связываться с комплексом HLA-A*02 с раковым антигеном MAGE А4 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1) и содержит гетеродимер альфа- и бета-цепей, где указанная нуклеиновая кислота кодирует альфа-цепь TCR и бета-цепь TCR по любому из пп. 1-6.
19. Нуклеиновая кислота, кодирующая гибридную молекулу TCR, для доставки агента к клеткам, которые презентируют раковый антиген MAGE А4, или к ткани, которая содержит клетки, которые презентируют антиген MAGE А4, где указанная нуклеиновая кислота кодирует гибридную молекулу TCR, как заявлено в любом из пп. 7-15, при этом указанный агент представляет собой пептид или полипептид.
20. Нуклеиновая кислота, кодирующая гибридную молекулу TCR-анти-CD3, содержащую TCR, обладающий свойством связывания с комплексом HLA-A*02 с раковым антигеном MAGE-A4 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1)), и антитело против CD3, где указанная нуклеиновая кислота кодирует альфа-цепь и бета-цепь гибридной молекулы TCR-анти-CD3, как заявлено в любом из пп. 16-17, и при этом указанная нуклеиновая кислота дополнительно кодирует антитело против CD3, ковалентным образом соединенное с N-концом или С-концом бета-цепи TCR, через линкерную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 30-37.
21. Вектор экспрессии, кодирующий TCR, обладающий свойством связываться с комплексом HLA-A*02 с раковым антигеном MAGE А4 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1) и содержащий гетеродимер альфа-и бета-цепей, где указанный вектор экспрессии содержит нуклеиновую кислоту по п. 18.
22. Вектор экспрессии по п. 21, отличающийся тем, что указанный вектор содержит первую открытую рамку считывания, кодирующую альфа-цепь TCR, и вторую открытую рамку считывания, кодирующую бета-цепь TCR.
23. Вектор экспрессии, кодирующий гибридную молекулу TCR для доставки агента к клеткам, которые презентируют раковый антиген MAGE А4, или к ткани, которая содержит клетки, которые презентируют раковый антиген MAGE А4, причем указанный вектор экспрессии содержит нуклеиновую кислоту по п. 19.
24. Вектор экспрессии по п. 23, где указанный вектор содержит первую открытую рамку считывания, кодирующую альфа-цепь TCR, и вторую открытую рамку считывания, кодирующую бета-цепь TCR.
25. Вектор экспрессии, кодирующий гибридную молекулу TCR-анти-CD3, содержащую TCR, обладающий свойством связываться с комплексом HLA-A*02 с раковым антигеном MAGE-A4 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1), и антитело против CD3, где указанный вектор экспрессии содержит нуклеиновую кислоту по п. 20.
26. Вектор экспрессии по п. 25, где указанный вектор содержит первую открытую рамку считывания, кодирующую альфа-цепь TCR, и вторую открытую рамку считывания, кодирующую бета-цепь TCR.
27. Клетка для экспрессии TCR, обладающего свойством связываться с комплексом HLA-A*02 с раковым антигеном MAGE А4 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1) и содержащего гетеродимер альфа и бета цепей, несущая:
(a) вектор экспрессии по п. 21, содержащий одну открытую рамку считывания или вектор экспрессии по п. 22, содержащий две различных открытых рамки считывания; или
(b) первый вектор экспрессии, который содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую альфа-цепь TCR по любому из пп. 1-6, и второй вектор экспрессии, который содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую бета-цепь TCR по любому из пп. 1-6.
28. Клетка для экспрессии гибридной молекулы TCR для доставки агента к клеткам, которые презентируют антиген MAGE А4, или к ткани, которая содержит клетки, которые презентируют антиген MAGE А4, несущая
(a) вектор экспрессии по п. 23, содержащий одну открытую рамку считывания или вектор экспрессии по п. 24, содержащий две различных открытых рамки считывания; или
(b) первый вектор экспрессии, который содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую альфа-цепь гибридной молекулы TCR, как заявлено в любом из пп. 7-15, и второй вектор экспрессии, который содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую бета-цепь гибридной молекулы TCR, как заявлено в любом из пп. 7-15.
29. Клетка для экспрессии гибридной молекулы TCR-анти-CD3, содержащей TCR, обладающий свойством связываться с комплексом Н1_А-А*02 с раковым антигеном MAGE-А4 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1), и антитело против CD3, несущая
(a) вектор экспрессии по п. 25, содержащий одну открытую рамку считывания или вектор экспрессии по п. 26, содержащий две различных открытых рамки считывания; или
(b) первый вектор экспрессии, который содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую альфа-цепь гибридной молекулы TCR-анти-CD3, как заявлено в любом из пп. 16-17, и второй вектор экспрессии, который содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую бета-цепь гибридной молекулы TCR-анти-CD3, как заявлено в любом из пп. 16-17.
30. Фармацевтическая композиция для диагностирования или лечения рака или опухоли, экспрессирующих комплекс HLA-A*02 с раковым антигеном MAGE А4 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1), содержащая в эффективном количестве TCR по любому из пп. 1-6, гибридную молекулу TCR по любому из пп. 7-15 или гибридную молекулу TCR-анти-CD3 по любому из пп. 16-17 вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми носителем или вспомогательным веществом.
31. TCR по любому из пп. 1-6 или фармацевтическая композиция по п. 30, которая содержит TCR, для применения в медицине, предпочтительно у субъекта, представляющего собой человека.
32. Гибридная молекула TCR по любому из пп. 7-15 или фармацевтическая композиция по п. 30, которая содержит гибридную молекулу TCR, для применения в медицине, предпочтительно у субъекта, представляющего собой человека.
33. Гибридная молекула TCR-анти-CD3 по любому из пп. 16, 17 или фармацевтическая композиция по п. 30, которая содержит гибридную молекулу TCR-анти-CD3, для применения в медицине, предпочтительно у субъекта, представляющего собой человека.
34. TCR по любому из пп. 1-6 или фармацевтическая композиция по п. 30, которая содержит TCR, для применения в способе лечения рака или опухоли, предпочтительно у субъекта, представляющего собой человека.
35. Гибридная молекула TCR по любому из пп. 7-15 или фармацевтическая композиция по п. 30, которая содержит гибридную молекулу TCR, для применения в способе лечения рака или опухоли, предпочтительно у субъекта, представляющего собой человека 36. Гибридная молекула TCR-анти-CD3 по любому из пп. 16-17 или фармацевтическая композиция по п. 30, которая содержит гибридную молекулу TCR-анти-CD3, для применения в способе лечения рака или опухоли, предпочтительно у субъекта, представляющего собой человека.
37. Гибридная молекула TCR-анти-CD3 или фармацевтическая композиция для применения по п. 36, при этом указанный субъект, представляющий собой человека, имеет опухоль, экспрессирующую MAGE А4.
38. Гибридная молекула TCR-анти-CD3 или фармацевтическая композиция для применения по п. 36, 37, причем указанная опухоль представляет собой солидную опухоль.
39. Гибридная молекула TCR-анти-CD3 или фармацевтическая композиция для применения по любому из пп. 36-38, причем указанный субъект, представляющий собой человека, принадлежит к подтипу HLA-A*02.
40. Гибридная молекула TCR-анти-CD3 или фармацевтическая композиция для применения по любому из пп. 36-39, которые вводят путем инъекции, такой как внутривенная инъекция или инъекция напрямую в опухоль.
41. Способ лечения нуждающегося в этом субъекта, представляющего собой человека, включающий введение указанному субъекту фармацевтически эффективной дозы фармацевтической композиции по п. 30, где у указанного субъекта, представляющего собой человека, присутствует опухоль, которая экспрессирует MAGE А4.
42. Способ лечения нуждающегося в этом субъекта, представляющего собой человека, включающий введение указанному субъекту фармацевтически эффективной дозы фармацевтической композиции по п. 30, и антинеопластического средства, где у указанного субъекта, представляющего собой человека, присутствует опухоль, которая экспрессирует MAGE А4, причем указанную композицию и средство вводят по отдельности, в комбинации или последовательно.
43. Композиция для диагностирования или лечения рака или опухоли, экспрессирующих комплекс HLA-A*02 с раковым антигеном MAGE А4 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1) для введения путем инъекции субъекту, представляющему собой человека, содержащая в эффективном количестве TCR по любому из пп. 1-6, гибридную молекулу TCR по любому из пп. 7-15 или гибридную молекулу TCR-анти-CD3 по любому из пп. 16, 17.
44. Способ получения TCR, обладающего свойством связываться с комплексом HLA-А*02 с раковым антигеном MAGE А4 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1) и содержащего гетеродимер альфа- и бета-цепей, включающий: а) поддержание клетки по п. 27 в оптимальных условиях для экспрессии цепей TCR, и b) выделение указанных цепей TCR.
45. Способ получения гибридной молекулы TCR для доставки агента к клеткам, которые презентируют антиген MAGE А4, или к ткани, которая содержит клетки, которые презентируют антиген MAGE А4, включающий: а) поддержание клетки по п. 28 в оптимальных условиях для экспрессии указанной гибридной молекулы TCR, и b) выделение указанной гибридной молекулы TCR.
46. Способ получения гибридной молекулы TCR-анти-CD3, содержащей TCR, обладающий свойством связывания с комплексом HLA-A*02 с раковым антигеном MAGE-А4 GVYDGREHTV (SEQ ID NO: 1), и антитело против CD3, включающий: а) поддержание клетки по п. 29 в оптимальных условиях для экспрессии указанной гибридной молекулы TCR-анти-CD3, и b) выделение указанной гибридной молекулы TCR-анти-CD3.