В ВЫСОКОЙ СТЕПЕНИ СЖАТОЕ СИНТЕТИЧЕСКОЕ ФИБРОИНОВОЕ ВОЛОКНО, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ СЖАТИЯ СИНТЕТИЧЕСКОГО ФИБРОИНОВОГО ВОЛОКНА
HIGHLY COMPRESSED SYNTHETIC FIBROIN FIBER, METHOD FOR ITS PRODUCTION AND METHOD FOR COMPRESSING SYNTHETIC FIBROIN FIBER

Область техники
[0001] Настоящее изобретение относится к искусственному фиброиновому волокну с высокой степенью сжатия, к способу его получения и к способу сжатия искусственного фиброинового волокна.
Уровень техники
[0002] Вообще говоря, необходимо, чтобы волокно, используемое для пошива одежды, постельных принадлежностей и т.п., обладало очень хорошими тактильными свойствами. Волокном, обладающим достаточно удовлетворительными тактильными и улучшенными свойствами, является шелк, который известен как один из видов натурального фиброинового волокна.
[0003] Кроме того, мягкость, способность сохранять тепло и т.п. также необходимы для волокна, используемого для пошива одежды, постельных принадлежностей и т.п. В соответствии с этим, например, шелк, используемый для пошива одежды, постельных принадлежностей и т.п., может представлять собой шелк, подвергаемый сжатию для увеличения объемности, и тем самым, сообщения ему эластичности и способности удерживать тепло.
[0004] Тем не менее, синтетическое волокно, такое полиэфирное волокно, полиамидное волокно и акриловое волокно, обычно используется для пошива одежды, постельных принадлежностей и т.п., и это синтетическое волокно имеет процент сжатия 40% или более при его контактировании с кипящей водой (Патентный документ 1).
Список цитируемых документов
Патентная литература
[0005] [Патентный документ 1] Публикация нерассмотренной заявки на патент Японии No. 2009-121003.
Сущность изобретения
Проблемы, которые могут быть решены в соответствии с настоящим изобретением
[0006] Тем не менее, шелк имеет лишь небольшой процент сжимаемости при контактировании только с водой.
[0007] Кроме того, способ сжатия, раскрываемый в патентном документе 1, представляет большую опасность, связанную с обработкой кипящей водой при высокой температуре.
[0008] Целью настоящего изобретения является получение в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна, которое имеет высокий процент сжимаемости, обладает превосходными тактильными свойствами и эластичнойтью и может быть получено безопасным способом, а также разработка способа его получения. Другой целью настоящего изобретения является разработка способа сжатия искусственного фиброинового волокна, который явлется безопасным и позволяет получить имеет достаточно высокий процент сжатия.
Способ решения проблем
[0009] Так, например, настоящее изобретение относится к каждому из следующих предметов изобретения:
[1] Искусственное фиброиновое волокно с высокой степенью сжатия, включающее:
модифицированный фиброин,
где процент сжатия, определяемый по нижеследующему уравнению, превышает 7%.
Процент сжатия = {1-(длина сжатого искусственного фиброинового волокна/длина искусственного фиброинового волокна до контактирования с водой после прядения)} × 100 (%).
[2] Искусственное фиброиновое волокно с высокой степенью сжатия в соответствии с [1], где модифицированным фиброином является модифицированный фиброин шелка паука.
[3] Искусственное фиброиновое волокно с высокой степенью сжатия в соответствии с [1] или [2], которое подвергают сжатию путем контактирования с водой ниже точки кипения.
[4] Искусственное фиброиновое волокно с высокой степенью сжатия в соответствии с [3], где температура воды составляет от 10°C до 90°C.
[5]  искусственное фиброиновое волокно с высокой степенью сжатия в соответствии с [3] или [4], которое также подвергают сжатию путем сушки после контактирования с водой.
[6] Способ получения искусственного фиброинового волокна с высокой степенью сжатия, включающий:
стадию сжатия искусственного фиброинового волокна, содержащего модифицированный фиброин, посредством контактирования искусственного фиброинового волокна с водой ниже точки кипения,
где процент сжатия, определяемый по нижеследующему уравнению, превышает 7%.
Процент сжатия = {1-(длина сжатого искусственного фиброинового волокна/длина искусственного фиброинового волокна до контактирования с водой после прядения)} × 100 (%).
[7] Способ получения искусственного фиброинового волокна с высокой степенью сжатия в соответствии с [6], где модифицированным фиброином является модифицированный фиброин шелка паука.
[8] Способ получения искусственного фиброинового волокна с высокой степенью сжатия в соответствии с [6] или [7], где температура воды составляет от 10°C до 90°C.
[9] Способ получения искусственного фиброинового волокна с высокой степенью сжатия в соответствии с любым из [6]–[8], где стадия сжатия искусственного фиброинового волокна также включает сушку искусственного фиброинового волокна после его контактирования с водой.
[10] Способ сжатия искусственного фиброинового волокна, включающий:
стадию сжатия искусственного фиброинового волокна, содержащего модифицированный фиброин, посредством контактирования искусственного фиброинового волокна с водой ниже точки кипения,
где процент сжатия, определяемый по нижеследующему уравнению, превышает 7%.
Процент сжатия = {1–(длина сжатого искусственного фиброинового волокна/длина искусственного фиброинового волокна до контактирования с водой после прядения)} × 100 (%).
[11] Способ сжатия искусственного фиброинового волокна в соответствии с [10], где модифицированным фиброином является модифицированный фиброин шелка паука.
[12] Способ сжатия искусственного фиброинового волокна в соответствии с [10] или [11], где температура воды составляет от 10°C до 90°C.
[13] Способ сжатия искусственного фиброинового волокна в соответствии с любым из [10]-[12], где стадия сжатия искусственного фиброинового волокна также включает сушку искусственного фиброинового волокна после его контактирования с водой.
Эффекты изобретения
[0010] В соответствии с настоящим изобретением может быть получено в высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно, которое имеет высокий процент сжатия, обладает превосходными тактильными свойствами и эластичностью и может быть получено безопасным способом, а также разработан способ его получения. В соответствии с настоящим изобретением может быть также разработан способ сжатия искусственного фиброинового волокна, которое может быть получено безопасным способом и имеет достаточной высокий процент сжатия.
Краткое описание чертежей
[0011] На фиг. 1 представлена диаграмма, схематически иллюстрирующая последовательность домена модифицированного фиброина.
На фиг. 2 представлен график, иллюстрирующий распределение величин z/w (%) природного фиброина.
На фиг. 3 представлен график, иллюстрирующий распределение величин x/y (%) природного фиброина.
На фиг. 4 представлено пояснительное изображение, схематически иллюстрирующее пример прядильного устройства для получения искусственного фиброинового волокна.
На фиг. 5 представлено пояснительное изображение, схематически иллюстрирующее пример устройства для получения в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна.
FIG. 6 представлено пояснительное изображение, схематически иллюстрирующее пример устройства для получения в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна.
Варианты осуществления настоящего изобретения
[0012] Ниже подробно описаны варианты осуществления настоящего изобретения. Однако, настоящее изобретение не ограничивается этими вариантами.
[0013] [В высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно]
В высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно согласно изобретению представляет собой сжатое искусственное фиброиновое волокно, включающее модифицированный фиброин. В искусственном фиброиновом волокне с высокой степенью сжатия согласно варианту осуществления изобретения, процент сжатия, определяемый по нижеследующему уравнению, превышает 7%.
Процент сжатия = {1-(длина сжатого искусственного фиброинового волокна/длина искусственного фиброинового волокна до контактирования с водой после прядения)} × 100 (%).
[0014] <Модифицированный фиброин>
n
m
Модифицированный фиброин согласно варианту осуществления изобретения представляет собой белок, включающий последовательность домена, представленную формулой 1: [мотив (A)–REP]. Модифицированный фиброин может также иметь аминокислотную последовательность (N-концевую последовательность и С-концевую последовательность), присоединенную к N–концевой стороне или к С-концевой стороне последовательности домена или к обеим сторонам. N-концевая последовательность и С–концевая последовательность обычно представляют собой, хотя и не ограничиваются ими, области, которые не имеют повторяющихся аминокислотных мотивов, характерных для фиброина, и состоят приблизительно из 100 аминокислотных остатков.
n
m
[0015] Термин «модифицированный фиброин», используемый в настоящем описании, означает синтетически полученный фиброин (искусственный фиброин). Модифицированным фиброином может быть фиброин, в котором последовательность домена отличается от аминокислотной последовательности природного фиброина, либо фиброин, аминокислотная последовательность которого является такой же, как и аминокислотная последовательность природного фиброина. Используемый здесь термин «природный фиброин» также означает белок, включающий последовательность домена, представленную формулой 1: [мотив (A)–REP].
[0016] «Модифицированный фиброин» может представлять собой фиброин, аминокислотная последовательность которого используется как таковая; фиброин, аминокислотная последовательность которого была модифицирована на основе аминокислотной последовательности природного фиброина (например, фиброин, аминокислотная последовательность которого была изменена путем модификации генной последовательности клонированного природного фиброина), или фиброин, сконструированный искусственно и синтезированный независимо от природного фиброина (например, фиброин, имеющий нужную аминокислотную последовательность и полученный путем химического синтеза нуклеиновой кислоты, кодирующей сконструированную аминокислотную последовательность), при условии, что такой фиброин будет иметь аминокислотную последовательность, входящую в объем настоящего изобретения.
n
n
m
n
n
n
n
[0017] Используемый здесь термин «последовательность домена» означает аминокислотную последовательность, продуцирующую кристаллическую область (которая обычно соответствует мотиву (A) аминокислотной последовательности) и аморфную область (которая обычно соответствует REP аминокислотной последовательности), характерные для фиброина, и означает аминокислотную последовательность, представленную формулой 1: [мотив (A)–REP]. Мотив (A) представляет собой аминокислотную последовательность, включающую, главным образом, аланиновый остаток, где n равно целому числу 2–20, предпочтительно, 4–20, более предпочтительно, 8–20, еще более предпочтительно, 10–20, еще более предпочтительно, 4–16, еще более предпочтительно, 8–16, а особенно предпочтительно, 10–16. Кроме того, такое число является достаточным при условии, что процент аланиновых остатков будет составлять 40% или более от общего числа аминокислотных остатков в мотиве (A), а предпочтительно, 60% или более, более предпочтительно, 70% или более, более предпочтительно, 80% или более еще более предпочтительно, 90%, но может составлять и 100% (что означает, что мотив (A) состоит только из аланиновых остатков). REP представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из 2–200 аминокислотных остатков. m равно целому числу от 2 до 300. Множество мотивов (A) может представлять собой одну и ту же аминокислотную последовательность или различные аминокислотные последовательности. Множество REP может представлять собой одну и ту же аминокислотную последовательность или различные аминокислотные последовательности. Конкретными примерами белков, происходящих от крупных назогастральных шелковичных червей, является белок, содержащий аминокислотную последовательность (PRT410), представленную в SEQ ID NO: 9.
[0018] Модифицированный фиброин согласно варианту осуществления изобретения может быть получен, например, путем модификации аминокислотной последовательности, такой как замена, делеция, инсерция и/или добавление одного или множества аминокислотных остатков в соответствии с генной последовательностью клонированного природного фиброина. Замена, делеция, инсерция и/или добавление аминокислотных остатков могут быть осуществлены методами, хорошо известными специалистам, такими как сайт–направленный мутагенез. В частности, это может быть осуществлено методом, описанным в литературе, например, Nucleic Acid Res. 10, 6487 (1982), и Methods in Enzymology, 100, 448 (1983).
n
m
[0019] Природный фиброин представляет собой белок, включающий последовательность домена, представленную формулой 1: [мотив (A)–REP], а в частности, например, фиброин, продуцируемый насекомыми или пауками.
Bombyx mori, Bombyx mandarina, Antheraea yamamai, Anteraea pernyi, Eriogyna pyretorum, Pilosamia Cynthia ricini, Samia cynthia, Caligura japonica, Antheraea mylitta
Antheraea assama
Vespa simillima xanthoptera
[0020] Примерами фиброина, продуцируемого насекомыми, являются белки шелка, продуцируемые шелковичными червями, такими как и; и белки шелка шершня, продуцируемые личинками .
[0021] Более конкретным примером фиброина, продуцируемого насекомыми, может быть L–цепь фиброина шелковичных червей (GenBank рег. № M76430 (последовательность оснований), AAA27840.1 (аминокислотная последовательность)).
Araneus,
Araneus ventricosus,
Araneus diadematus, Araneus pinguis, Araneus pentagrammicus
Araneus nojimai;
Neoscona,
Neoscona scylla, Neoscona nautica, Neoscona adianta
Neoscona scylloides;
Pronus
Pronous minutes;
Cyrtarachne,
Cyrtarachne bufo и Cyrtarachne inaequalis;
Gasteracantha,
Gasteracantha kuhli
Gasteracantha mammosa
Ordgarius
Ordgarius hobsoni
Ordgarius sexspinosus
Argiope
Argiope amoena,
Argiope minuta
Argiope bruennich;
Arachnura
Arachnura logio
Acusilas
Acusilas cocciens
Cytophora
Cyrtophora moluccensis
Cyrtophora exanthematica
Cyrtophora unicolor
Poltys
Poltys illepidus
Cyclosa
Cyclosa octotuberculata
Cyclosa sedeculata, Cyclosa vallata и Cyclosa atrata
Chorizopes
Chorizopes nipponicus
Tetragnatha
Tetragnatha praedonia
Tetragnatha maxillosa
Tetragnatha extensa и Tetragnatha squamata
Leucauge
Leucauge magnifica, Leucauge blanda
Leucauge subblanda
Nephila
Nephila clavata
Nephila pilipes
Menosira
Menosira ornata
Dyschiriognatha
Dyschiriognatha tenera
Latrodectus
Latrodectus mactans
Latrodectus hasseltii, Latrodectus geometricus
Latrodectus tradecimguttatus
Tetragnathidae
Euprosthenops
[0022] Примерами фиброина, продуцируемого пауками, являются белки шелка паука, продуцируемые пауками, принадлежащими к роду  такими как  и  пауками, принадлежащими к роду  такими как ипауками, принадлежащими к роду , такими как  пауками, принадлежащими к роду такими как пауками, принадлежащими к роду такими как  и ; пауками, принадлежащими к роду , такими как  и ; пауками, принадлежащими к роду , такими как  и пауками, принадлежащими к роду , такими как ; пауками, принадлежащими к роду , такими как ; пауками, принадлежащими к роду , такими как ,  и ; пауками, принадлежащими к роду , такими как ; пауками, принадлежащими к роду , такими как , ; и пауками, принадлежащими к роду , такими как ; и белки шелка паука, продуцируемые пауками, принадлежащими к роду , такими как , , ; пауками, принадлежащими к роду , такими как  и ; пауками, принадлежащими к роду , такими как  и ; пауками, принадлежащими к роду , такими как ; пауками, принадлежащими к роду , такими как ; пауками, принадлежащими к роду , такими как , и, и пауками, принадлежащими к семейству , такими как пауки, принадлежащие к роду . Примерами белков шелка паука являются белки волокна, используемого пауком для перемещения, такие как MaSp (MaSpI и MaSp2), ADF (ADF и ADF 4) и MiSp (MiSp1 и MiSp2)3.
Araneus diadematus
Araneus diadematus
Nephila clavipes
Latrodectus hesperus
Nephila clavata
Euprosthenops australis
Euprosthenops australis
Nephila clavipes
Nephila clavipes
Nephilengys cruentata
[0023] Более конкретными примерами фиброина, продуцируемого пауками, являются фиброин-3 (adf–3) [происходящий от ] (GenBank рег. № AAC47010 (аминокислотная последовательность), U47855 (последовательность оснований), фиброин–4 (adf–4) [происходящий от ] (GenBank рег. № AAC47011 (аминокислотная последовательность), U47856 (последовательность оснований), белок спидроин шелка для перемещения 1 [происходящий от ] (GenBank рег. № AAC04504 (аминокислотная последовательность), U37520 (нуклеотидная последовательность), мажорный углообразный спидроин 1 [происходящий от ] (GenBank рег. № ABR68856 (аминокислотная последовательность)), EF595246 (последовательность оснований)), белок спидроин шелка для перемещения 2 [происходящий от  (GenBank рег. № AAL32472 (аминокислотная последовательность), AF441245 (последовательность оснований)), мажорный бутылочнообразный спидроин 1 [происходящий от ] (GenBank рег. № CAJ00428 (аминокислотная последовательность), AJ973155 (последовательность оснований)) и мажорный бутылочнообразный спидроин 2 [] (GenBank рег. № CAM32249.1 (аминокислотная последовательность), AM490169 (последовательность оснований)), минорный бутылочнообразный белок шелка 1 [] (GenBank рег. № AAC14589.1 (аминокислотная последовательность)), минорный бутылочнообразный белок шелка 2 [] (GenBank рег. № AAC14591.1 (аминокислотная последовательность)) и белок, подобный минорному бутылочнообразному спидроину [] (GenBank рег. № ABR37278.1 (аминокислотная последовательность)).
[0024] В качестве более конкретного примера природного фиброина может быть также упомянут фиброин, имеющий последовательность, информация о которой имеется в NCBI GenBank. Так, например, эта информация может быть подтверждена путем извлечения последовательности, в которой спидроин, бутылочнообразный белок, фиброин, «шелк и полипептид» или «шелк и белок» определены как ключевое слово в файле DEFINITION для последовательностей, содержащих INV, как категория DIVISION, для получения информации о последовательности, зарегистрированной в NCBI GenBank, то есть, о последовательностях, в которых конкретная строка символов для продуктов взята из CDS, или о последовательностях, в которых конкретная строка символов взята из SOURCE для TISSUE TYPE.
[0025] Модифицированный фиброин согласно варианту осуществления изобретения может представлять собой модифицированный фиброин шелка (в котором аминокислотная последовательность белка шелка, продуцированного шелковичными червями, является модифицированной), или модифицированный фиброин шелка паука (в котором аминокислотная последовательность белка шелка паука, продуцированного пауками, является модифицированной).
n
n
[0026] Конкретными примерами модифицированного фиброина согласно варианту осуществления изобретения являются модифицированный фиброин, происходящий от крупного белка, используемого пауком для перемещения в назогастральную область и продуцируемый у пауков основных видов (модифицированный фиброин согласно первому варианту осуществления изобретения), модифицированный фиброин, имеющий пониженное содержание глициновых остатков (модифицированный фиброин согласно второму варианту осуществления изобретения), модифицированный фиброин, в котором содержание мотивов (A) является сниженным (модифицированный фиброин согласно третьему варианту осуществления изобретения), и модифицированный фиброин, в котором содержание глициновых остатков и мотивов (A) является сниженным (модифицированный фиброин согласно четвертому варианту осуществления изобретения).
n
m
n
m
[0027] Примерами модифицированного фиброина согласно первому варианту осуществления изобретения являются белок, включающий последовательность домена, представленную формулой 1: [мотив (A)–REP]. В модифицированном фиброине согласно первому варианту осуществления изобретения, в формуле 1, n предпочтительно равно целому числу 3–20, более предпочтительно, целому числу 4–20, еще более предпочтительно, целому числу 8–20,а еще более предпочтительно, целому числу 10–20, еще более предпочтительно, целому числу 4–16, особенно предпочтительно, целому числу 8–16, а наиболее предпочтительно, целому числу 10–16. В модифицированном фиброине согласно первому варианту осуществления изобретения, в формуле 1, число аминокислотных остатков, входящих в состав REP, предпочтительно, составляет 10–200 остатков, более предпочтительно, 10–150 остатков, еще более предпочтительно, 20–100 остатков, а особенно предпочтительно, 20–75 остатков. В модифицированном фиброине согласно первому варианту осуществления изобретения, общее число глициновых остатков, сериновых остатков и аланиновых остатков, содержащихся в аминокислотной последовательности, представленной формулой 1: [мотив (A)–REP], составляет, предпочтительно, 40% или более, более предпочтительно, 60% или более, а еще более предпочтительно, 70% или более от общего числа аминокислотных остатков.
n
m
[0028] Модифицированный фиброин согласно первому варианту осуществления изобретения включает звено аминокислотной последовательности, представленное формулой 1: [мотив (A)–REP], и может представлять собой полипептид, аминокислотная последовательность которого на 90% или более гомологична аминокислотной последовательности, С–концевая последовательность которой представлена в любой из SEQ ID NN: 12–14, или аминокислотной последовательности, представленной в любой из SEQ ID NN: 12–14.
[0029] Аминокислотная последовательность, представленная в SEQ ID NO: 12, идентична аминокислотной последовательности, состоящей из 50 аминокислотных остатков у C–конца аминокислотной последовательности ADF3 (GI: 1263287, NCBI); аминокислотная последовательность, представленная в SEQ ID NO: 13, идентична аминокислотной последовательности, полученной путем удаления 20 остатков у C–конца аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 12, а аминокислотная последовательность, представленная в SEQ ID NO: 14, идентична аминокислотной последовательности, полученной путем удаления 29 остатков у C–конца аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 12.
[0030] Более конкретным примером модифицированного фиброина согласно первому варианту осуществления изобретения может быть модифицированный фиброин, включающий: (1–i) аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15 или (1–ii) аминокислотную последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 15. Идентичность последовательностей составляет, предпочтительно, 95% или более.
[0031] Аминокислотная последовательность, представленная в SEQ ID NO: 15, представляет собой аминокислотную последовательность, в которой 1–13 повторяющиеся области были увеличены приблизительно в два раза, и которая была мутирована так, чтобы ее трансляция завершалась в 1154–ом аминокислотном остатке в аминокислотной последовательности ADF3, где указанная аминокислотная последовательность, состоящая из инициирующего кодона, метки His10 и сайта распознавания протеазы HRV3C (протеазы человеческого риновируса 3C) (SEQ ID NO: 16), была присоединена к N–концу. Аминокислотная последовательность у C–конца аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 15, идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3.
[0032] Модифицированный фиброин (1–i) может состоять из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 15.
[0033] Модифицированный фиброин согласно второму варианту осуществления изобретения имеет аминокислотную последовательность, в которой последовательность домена имеет пониженное число глициновых остатков по сравнению с природным фиброином. Можно сказать, что модифицированный фиброин имеет по меньшей мере аминокислотную последовательность с соответствующей заменой одного или множества глициновых остатков в REP другим аминокислотным остатком по сравнению с природным фиброином.
[0034] Модифицированный фиброин согласно второму варианту осуществления изобретения может представлять собой модифицированный фиброин, в котором последовательность домена имеет, по меньшей мере в одной последовательности мотива, выбранной из GGX и GPGXX (где X означает аминокислотный остаток, не являющийся глицином) в REP, по меньшей мере аминокислотную последовательность с соответствующей заменой одного глицинового остатка в одной или во множестве последовательностей мотивов другим аминокислотным остатком по сравнению с природным фиброином.
[0035] Модифицированный фиброин согласно второму варианту осуществления изобретения может представлять собой модифицированный фиброин, в котором отношение последовательности мотива, где глициновый остаток заменен другим аминокислотным остатком, составляет 10% или более от всей последовательности мотива.
n
m
n
n
n
n
[0036] Модифицированный фиброин согласно второму варианту осуществления изобретения может представлять собой модифицированный фиброин, который включает последовательность домена, представленную формулой 1: [мотив (A)–REP], и имеет аминокислотную последовательность, где z/w составляет 30% или более, или аминокислотную последовательность, где z/w составляет 50,9% или более, в случае, когда общее число аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности, состоящей из мотива XGX (где X представляет собой аминокислотный остаток, не являющийся глицином), содержащегося во всех REP в последовательности, за исключением последовательности, происходящей от мотива (A), локализованного в самой крайней С–концевой области по отношению к С–концу последовательности домена, определено как z, а общее число аминокислотных остатков в последовательности, за исключением последовательности, происходящей от мотива (A), локализованного в самой крайней С–концевой области по отношению к С–концу последовательности домена, определено как w. Это является достаточным при условии, что число аланиновых остатков будет составлять 83% или более от общего числа аминокислотных остатков в мотиве (A), а предпочтительно, 86% или более, более предпочтительно, 90% или более, еще более предпочтительно, 95% или более, а наиболее предпочтительно, 100% (это означает, что мотив (A) состоит только из аланиновых остатков).
[0037] Модифицированный фиброин согласно второму варианту осуществления изобретения предпочтительно, представляет собой модифицированный фиброин, в котором отношение содержания аминокислотных последовательностей, состоящих из XGX, было увеличено путем замены одного глицинового остатка мотива GGX другим аминокислотным остатком. В модифицированном фиброине согласно второму варианту осуществления изобретения, отношение содержания аминокислотной последовательности, состоящей из GGX в последовательности домена, составляет предпочтительно 30% или менее, более предпочтительно, 20% или менее, еще более предпочтительно, 10% или менее, еще более предпочтительно, 6% или менее, еще более предпочтительно, 4% или менее, а особенно предпочтительно, 2% или менее. Отношение содержания аминокислотной последовательности, состоящей из GGX в последовательности домена, может быть вычислено таким же методом, как и метод вычисления отношения содержания (z/w) аминокислотной последовательности, состоящей из XGX как описано ниже.
n
n
n
[0038] Метод вычислени z/w будет описан более подробно. Сначала, из последовательности домена, аминокислотную последовательность, состоящую из XGX, вычитают из всех REP, содержащихся в последовательности, за исключением последовательности, происходящей от мотива (A), локализованного в самой крайней С–концевой области по отношению к С–концу последовательности домена. Общее число аминокислотных остатков, составляющих XGX, равно z. Так, например, в случае, когда 50 аминокислотных последовательностей, состоящих из XGX, были удалены (то есть, не перекрывались), z равно 50 × 3=150. Кроме того, например, в случае, когда присутствует X (центральный X), содержащийся в двух XGX, как и в случае аминокислотной последовательности, состоящей из XGXGX, вычисления проводят путем вычитания перекрывающейся части (в случае XGXGX, эта часть представляет собой 5 аминокислотных остатков), w означает общее число аминокислотных остатков, содержащихся в последовательности, за исключением последовательности, происходящей от мотива (A), локализованного в самой крайней С–концевой области по отношению к С–концу последовательности домена. Так, например, в случае последовательности домена, представленной на фиг. 1, w равно 4+50+4+100+4+10+4+20+4+30=230 (за исключением мотива (A), локализованного в самой крайней С–концевой области). Затем, z/w (%) может быть вычислен путем деления z на w.
n
m
[0039] В данном случае будет описано z/w в природном фиброине. Сначала, как описано выше, 663 типа фиброинов (415 типов фиброинов, происходящих от пауков) удаляли после подтверждения информации о аминокислотной последовательности фиброинов, зарегистрированной в NCBI GenBank, репрезентативным методом. z/w вычисляли вышеупомянутым методом вычисления исходя из аминокислотных последовательностей природных фиброинов, которые включают последовательность домена, представленную формулой 1: [мотив (A)–REP], и в которых отношение содержания аминокислотной последовательности, состоящей из GGX в фиброине, составляет 6% или менее от всех удаленных фиброинов. Результаты представлены на фиг. 2. На фиг. 2, на горизонтальной оси отложено z/w (%), а на вертикальной оси отложена частота. Как видно на фиг. 2, z/w в природном фиброине составляет менее, чем 50,9% (максимум, 50,86%).
[0040] В модифицированном фиброине согласно второму варианту осуществления изобретения, z/w предпочтительно, составляет 50,9% или более, более предпочтительно, 56,1% или более, еще более предпочтительно, 58,7% или более, еще более предпочтительно, 70% или более, а особенно предпочтительно, 80% или более. Верхний предел z/w не имеет конкретнх ограничений, но он может составлять, например, 95% или менее.
[0041] Модифицированный фиброин согласно второму варианту осуществления изобретения может быть получен, например, путем замены и модификации по меньшей мере части последовательности оснований, кодирующей глициновый остаток из генной последовательности клонированного природного фиброина так, чтобы эта последовательность кодировала другой аминокислотный остаток. На этом этапе, один глициновый остаток в мотиве GGX и в мотиве GPGXX может быть отобран как модифицированный глициновый остаток, а замена может быть осуществлена так, чтобы z/w составляло 50,9% или более. Альтернативно, модифицированный фиброин согласно варианту осуществления изобретения может быть также получен, например, путем конструирования аминокислотной последовательности, удовлетворяющей каждому из вышеуказанных вариантов, из аминокислотной последовательности природного фиброина, и химического синтеза нуклеиновой кислоты, кодирующей сконструированную аминокислотную последовательность. В любом случае, помимо модификации с заменой глицинового остатка в REP другим аминокислотным остатком, происходящим от аминокислотной последовательности природного фиброина, может быть осуществлена модификация аминокислотной последовательности, а именно, замена, делеция, инсерция и/или добавление одного или множества аминокислотных остатков.
[0042] Вышеупомянутый другой аминокислотный остаток не имеет конкретных ограничений, при условии, что он представляет собой аминокислотный остаток, не являющийся глициновым остатком, а предпочтительно, он представляет собой гидрофобный аминокислотный остаток, такой как валиновый (V) остаток, лейциновый (L) остаток, изолейциновый (I) остаток, метиониновый (M) остаток, пролиновый (P) остаток, фенилаланиновый (F) остаток или триптофановый (W) остаток, или гидрофильный аминокислотный остаток, такой как глутаминовый (Q) остаток, аспарагиновый (N) остаток, сериновый (S) остаток, лизиновый (K) остаток или остаток глутаминовой кислоты (E), из которых предпочтительными являются валиновый (V) остаток, лейциновый (L) остаток, изолейциновый (I) остаток или глутаминовый (Q) остаток, а еще более предпочтительным является глутаминовый (Q) остаток.
[0043] Более конкретным примером модифицированного фиброина согласно второму варианту осуществления изобретения может быть модифицированный фиброин, включающий (2–i) аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 10, or SEQ ID NO: 17; или (2–ii) аминокислотную последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 17.
n
n
n
[0044] Далее будет описан модифицированный фиброин (2–i). Аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3, получают путем замены всех GGX на GQX в REP аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1, соответствующей природному фиброину. Аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4, получают путем делеции мотива (A) через каждые два положения от N–конца до C–конца аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3, а также инсерции одного [мотива(A)–REP] до C–концевой последовательности. Аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10, получают путем инсерции двух аланиновых остатков у С–конца кажного мотива (A) аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4, и дополнительной замены части глутаминовых (Q) остатков на сериновый (S) остаток для делеции части аминокислот у N–конца так, чтобы все они имели молекулярную массу SEQ ID NO: 4. Аминокислотная последовательность, представленная в SEQ ID NO: 17, представляет собой аминокислотную последовательность, в которой His–метка была присоединена к C–концу последовательности, полученной путем введения 4 повторов в область из 20 последовательностей домена, присутствующих в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 10 (однако, несколько аминокислотных остатков у С–концевой области были заменены).
[0045] Величина z/w в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1 (соответствующей природному фиброину), составляет 46,8%. Величины z/w в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3, в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4, в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 10, и в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 17, составляют, соответственно, 58,7%, 70,1%, 66,1% и 70,0%. Кроме того, величины x/y в отношении Гизы (будет описано позже) 1:1,8–1:11,3 в аминокислотных последовательностях, представленных в SEQ ID NN: 1, 3, 4, 10 и 17, составляют, соответственно, 15,0%, 15,0%, 93,4%, 92,7% и 89,3%.
[0046] Модифицированный фиброин (2–i) может состоять из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 17.
n
m
[0047] Модифицированный фиброин (2–ii) включает аминокислотную последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 17. Модифицированный фиброин (2–ii) также представляет собой белок, включающий последовательность домена, представленную формулой 1: [мотив (A)–REP]. Идентичность последовательностей, предпочтительно, составляет 95% или более.
[0048] Предпочтительно, чтобы модифицированный фиброин (2–ii) имел последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 17, а z/w составляло 50,9% или более в случае, если общее число аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности, состоящей из мотива XGX (где X представляет собой аминокислотный остаток, не являющийся глицином), содержащегося в REP, было определено как z, а общее число аминокислотных остатков REP в последовательности домена было определено как w.
[0049] Вышеупомянутый модифицированный фиброин может включать последовательность метки у N–конца или у С–конца или у обоих концов. Это может быть осуществлено в целях выделения, иммобилизации, детектирования и визуализации модифицированного фиброина.
[0050] Последовательностью метки может быть, например, аффинная метка со специфической аффинностью (способностью к аффинному связыванию) к другой молекуле. В качестве конкретного примера аффинной метки можно упомянуть гистидиновую метку (His–метку). His–метка представляет собой короткий пептид, в котором присутствует приблизительно 4–10 гистидиновых остатков в соответствующем порядке, и который специфически связывается с ионом металла, такого как никель, а поэтому, эта метка может быть использована для выделения модифицированного фиброина с помощью хроматографии посредством хелатного связывания с металлом. Конкретным примером последовательности метки может быть аминокислотная последовательность, представленная в SEQ ID NO: 5 (аминокислотная последовательность, включающая His–метку).
[0051] Кроме того, может быть также использована последовательность метки, такая как глутатион–S–трансфераза (GST), которая специфически связывается с глутатионом, или белок, связывающийся с мальтозой (MBP), который специфически связывается с мальтозой.
[0052] Кроме того, может быть также использована «эпитопная метка», участвующая в реакции «антиген–антитело». При добавлении пептида (эпитопа) в качестве последовательности метки, обладающей антигенными свойствами, антитело может связываться с эпитопом. Примерами эпитопных меток являются метка HA (пептидная последовательность гемаглютинина вируса гриппа), метка myc и метка FLAG. Модифицированный фиброин может быть легко очищен с использованием эпитопной метки с высокой специфичностью.
[0053] Может быть также использована последовательность метки, которая может быть расщеплена под действием специфической протеазы. Для выделения модифицированного фиброина, отщепленного от последовательности метки, может быть также проведена обработка белка, адсорбированного на последовательности метки, протеазой.
[0054] Более конкретным примером модифицированного фиброина, включающего последовательность метки, может быть модифицированный фиброин, включающий (2–iii) аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 18; или (2–iv) аминокислотную последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 18.
[0055] Аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 6, 7, 8, 9, 11 и 18, представляют собой аминокислотные последовательности, в которых аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5 (включая His–метку), присоединяют к N–концу аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID NN: 1, 2, 3, 4, 10 и 17, соответственно.
[0056] Модифицированный фиброин (2–iii) может состоять из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 18.
n
m
[0057] Модифицированный фиброин (2–iv) включает аминокислотную последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 18. Модифицированный фиброин (2–iv) также представляет собой белок, включающий последовательность домена, представленную формулой 1: [мотив (A)–REP]. Идентичность последовательностей, предпочтительно, составляет 95% или более.
[0058] Предпочтительно, чтобы модифицированный фиброин (2–iv) имел последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 18, а z/w составляло 50,9% или более в случае, если общее число аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности, состоящей из мотива XGX (где X представляет собой аминокислотный остаток, не являющийся глицином), содержащегося в REP, было определено как z, а общее число аминокислотных остатков REP в последовательности домена было определено как w.
[0059] Вышеупомянутый модифицированный фиброин может включать секреторный сигнал для высвобождения белка, продуцируемого в рекомбинантной системе получения белка, во внешнюю среду хозяина. Последовательность секреторного сигнала может быть соответствующим образом выбрана в зависимости от типа хозяина.
n
n
[0060] Модифицированный фиброин согласно третьему варианту осуществления изобретения имеет аминокислотную последовательность, в которой последовательность домена имеет пониженное число мотивов (A) по сравнению с природным фиброином. Можно сказать, что последовательность домена модифицированного фиброина имеет по меньшей мере аминокислотную последовательность с соответствующей делецией одного или множества мотивов (A) по сравнению с природным фиброином.
n
[0061] Модифицированный фиброин согласно третьему варианту осуществления изобретения может иметь аминокислотную последовательность с 10–40% делеций мотивов (A) по сравнению с природным фиброином.
n
n
[0062] Модифицированный фиброин согласно третьему варианту осуществления изобретения может представлять собой модифицированный фиброин, где последовательность домена имеет по меньшей мере аминокислотную последовательность с делецией одного мотива (A) на 1–3 мотива (A) от N–конца до С–конца по сравнению с природным фиброином.
n
n
[0063] Модифицированный фиброин согласно третьему варианту осуществления изобретения может представлять собой модифицированный фиброин, где последовательность домена имеет по меньшей мере аминокислотную последовательность с повторяющимися делециями двух последовательно расположенных мотивов (A) и одну делецию мотива (A) в указанном порядке от N–конца до С–конца по сравнению с природным фиброином.
n
[0064] Модифицированный фиброин согласно третьему варианту осуществления изобретения может представлять собой модифицированный фиброин, где последовательность домена имеет по меньшей мере аминокислотную последовательность с делецией мотивов (A) через каждые два положения от N–конца до С–конца.
n
m
n
m
n
m
n
n
[0065] Модифицированный фиброин согласно третьему варианту осуществления изобретения может представлять собой модифицированный фиброин, который имеет последовательность домена, представленную формулой 1: [мотив (A)–REP], и имеет аминокислотную последовательность, где x/y составляет 20% или более, или аминокислотную последовательность, где x/y составляет 50% или более, в случае, когда общее число аминокислотных остатков в REP из двух смежных звеньев [мотив (A)–REP] расположены последовательно от N –конца до С–конца, а число аминокислотных остатков в REP, имеющем меньшее число аминокислотных остатков, определено как 1, максимальная величина от общего числа аминокислотных остатков из двух смежных звеньев [мотив (A)–REP], где отношение числа аминокислотных остатков в другом REP составляет 1,8–11,3, определена как х, а общее число аминокислотных остатков последовательности домена определено как y. Это является достаточным при условии, что число аланиновых остатков будет составлять 83% или более от общего числа аминокислотных остатков в мотиве (A), а предпочтительно, 86% или более, более предпочтительно, 90% или более, еще более предпочтительно, 95% или более, а наиболее предпочтительно, 100% (это означает, что мотив (A) состоит только из аланиновых остатков).
n
n
n
n
n
n
[0066] Способ вычисления x/y будет более подробно описан со ссылкой на фиг. 1. На фиг. 1 показана последовательность домена, за исключением N–концевой последовательности и С–концевой последовательности, происходящих от модифицированного фиброина. Эта последовательность домена имеет последовательность: мотив (A) –первый REP (50 аминокислотных остатков)– мотив (A)–второй REP (100 аминокислотных остатков)–мотив (A)–третий REP (10 аминокислотных остатков)–мотив (A)–четвертый REP (20 аминокислотных остатков)– мотив (A)–пятый REP (50 аминокислотных остатков)–мотив (A) с N–концевой стороны (с левой стороны).
n
n
[0067] Два смежных звена [мотив (A)–REP] последовательно отбирают с N–концевой стороны до С–концевой стороны так, чтобы они не перекрывались. На этой стадии может присутствовать неотобранное звено [мотив (A)–REP]. На фиг. 1 представлен паттерн 1 (сравнение первого REP и второго REP и сравнение третьего REP и четвертого REP), паттерн 2 (сравнение первого REP и второго REP и сравнение четвертого REP и пятого REP), паттерн 3 (сравнение второго REP и третьего REP и сравнение четвертного REP и пятого REP), и паттерн 4 (сравнение первого REP и второго REP). После этого проводят другие методы отбора.
n
[0068] Затем, для каждого паттерна сравнивают число аминокислотных остатков каждого REP в двух отобранных смежных звеньях [мотив (A)–REP]. Сравнение осуществляют путем вычисления отношения числа аминокислотных остатков другого REP с случае, если один REP, имеющий меньшее число аминокислотных остатков, составляет 1. Так, например, при сравнении первого REP (50 аминокислотных остатков) и второго REP (100 аминокислотных остатков), отношение числа аминокислотных остатков второго REP составляет 100/50=2 в случае, если первый REP, имеющий меньшее число аминокислотных остатков, составляет 1. Аналогичным образом, при сравнении четвертого REP (20 аминокислотных остатков) и пятого REP (30 аминокислотных остатков), отношение числа аминокислотных остатков пятого REP составляет 30/20=1,5 в случае, если четвертый REP, имеющий меньшее число аминокислотных остатков, составляет 1.
n
n
[0069] In фиг. 1, серия звеньев [мотив (A)–REP], где отношение числа аминокислотных остатков другого REP составляет 1,8–11,3 в случае, если один REP, имеющий меньшее число аминокислотных остатков, составляет 1, показана сплошной линией. В описании настоящего изобретения, такое отношение называется отношением Гизы. Серия звеньев [мотив (A)–REP], где отношение числа аминокислотных остатков другого REP составляет менее, чем 1,8, или более, чем 11,3 в случае, если один REP, имеющий меньшее число аминокислотных остатков, составляет 1, показана прерывистой линией.
n
n
[0070] Для каждого паттерна, число всех аминокислотных остатков в двух смежных звеньях [мотив (A)–REP], показанных сплошными линиями (включая не только число аминокислотных остатков REP, но также и число аминокислотных остатков мотива (A)), объединяют. Затем сравнивают объединенные таким образом все величины, а общую величину для паттерна, в котором общая величина является максимальной (максимальное значение целой величины), определяют как х. В примере, показанном на фиг. 1, общая величина паттерна 1 является максимальной.
[0071] Затем x/y (%) может быть вычислено путем деления х на общее число аминокислотных остатков последовательности домена.
[0072] В модифицированном фиброине согласно третьему варианту осуществления изобретения, x/y предпочтительно, составляет 50% или более, более предпочтительно, 60% или более, еще более предпочтительно, 65% или более, еще более предпочтительно, 70% или более, еще более предпочтительно,75% или более, а особенно предпочтительно, 80% или более. Верхний предел x/y не имеет конкретных ограничений, и он может составлять, например, 100% или менее. В случае, если отношение Гизы составляет 1:1,9–1:11,3, то x/y предпочтительно, составляет 89,6% или более; в случае, если отношение Гизы составляет 1:1,8–1:3,4, то x/y предпочтительно, составляет 77,1% или более; в случае, если отношение Гизы составляет 1:1,9–1:8,4, то x/y предпочтительно, составляет 75,9% или более; а в случае, если отношение Гизы составляет 1:1,9–1:4,1, то x/y предпочтительно, составляет 64,2% или более.
n
[0073] В случае, если модифицированный фиброин согласно третьему варианту осуществления изобретения представляет собой модифицированный фиброин, в котором по меньшей мере семь мотивов (A), которые присутствуют в больших количествах в последовательности домена, состоят только из аланиновых остатков, то x/y предпочтительно, составляет 46,4% или более, более предпочтительно, 50% или более, еще более предпочтительно, 55% или более, еще более предпочтительно, 60% или более, еще более предпочтительно, 70% или более, а особенно предпочтительно, 80% или более. Верхний предел x/y не имеет конкретных ограничений, и он может составлять, например, 100% или менее.
n
m
[0074] В данном случае будет описано x/y в природном фиброине. Сначала, как описано выше, 663 типа фиброинов (415 типов фиброинов, происходящих от пауков) удаляли после подтверждения информации об аминокислотной последовательности фиброинов, зарегистрированной в NCBI GenBank, репрезентативным методом. x/y вычисляли вышеупомянутым методом вычисления исходя из аминокислотных последовательностей природных фиброинов, которые включают последовательность домена, представленную формулой 1: [мотив (A)–REP], из которых были удалены все фиброины. На фиг. 3 представлены результаты, где отношение Гизы составляет 1:1,9–1:4,1.
[0075] На фиг. 3, на горизонтальной оси отложено x/y (%), а на вертикальной оси отложена частота. Как видно на фиг. 3, x/y в природном фиброине составляет менее, чем 64,2% (максимум 64,14%).
n
n
n
n
[0076] Модифицированный фиброин согласно третьему варианту осуществления изобретения может быть получен, например, из генной последовательности клонированного природного фиброина путем делеции одной или множества последовательностей, кодирующих мотив (A) так, чтобы x/y составляло 64,2% или более. Кроме того, модифицированный фиброин, включающий последовательность домена с пониженным содержанием мотивов (A), может быть также получен, например, путем конструирования аминокислотной последовательности с делецией одного или множества мотивов (A), так, чтобы x/y составляло 64,2% или более, из аминокислотной последовательности природного фиброина, и химического синтеза нуклеиновой кислоты, кодирующей сконструированную аминокислотную последовательность. В любом случае, помимо модификации с делецией мотива (A) из аминокислотной последовательности природного фиброина, может быть осуществлена модификация аминокислотной последовательности, а именно, замена, делеция, инсерция и/или добавление одного или множества аминокислотных остатков.
[0077] Более конкретным примером модифицированного фиброина согласно третьему варианту осуществления изобретения может быть модифицированный фиброин, включающий (3–i) аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 10, или SEQ ID NO: 17; или (3–ii) аминокислотную последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 10, или SEQ ID NO: 17.
n
n
n
[0078] Далее будет описан модифицированный фиброин (3–i). Аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, получают путем делеции мотива (A) через каждые два положения с N–концевой стороны до C–концевой стороны аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1 природного фиброина, а также инсерции одного [мотива(A)–REP] до C–концевой последовательности. Аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4, получают путем замены всех GGX на GQX в REP аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2. Аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10, получают путем инсерции двух аланиновых остатков с С–концевой стороны каждого мотива (A) аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4, и дополнительной замены части глутаминовых (Q) остатков на сериновый (S) остаток для делеции части аминокислот с N–концевой стороны так, чтобы все опи имели молекулярную массу SEQ ID NO: 4. Аминокислотная последовательность, представленная в SEQ ID NO: 17, представляет собой аминокислотную последовательность, в которой His–метка была присоединена к C–концу последовательности, полученной путем введения 4 повторов в область из 20 последовательностей домена, присутствующих в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 10 (однако, несколько аминокислотных остатков с С–концевой стороны были заменены).
[0079] Величина x/y в отношении Гизы 1:1,8–1:11,3 аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1 (соответствующей природному фиброину) составляет 15,0%. Величины x/y для аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2 и для аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4, составляют 93,4%. Величина x/y для аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 10, составляет 92,7%. Величина x/y для аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 17, составляет 89,3%. Величины z/w в аминокислотных последовательностях, представленных в SEQ ID NN: 1, 2, 4, 10 и 17, составляют 46,8%, 56,2%, 70,1%, 66,1% и 70,0%, соответственно.
[0080] Модифицированный фиброин (3–i) может состоять из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 17.
n
m
[0081] Модифицированный фиброин (3–ii) включает аминокислотную последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 17. Модифицированный фиброин (3–ii) также представляет собой белок, включающий последовательность домена, представленную формулой 1: [мотив (A)–REP]. Идентичность последовательностей составляет, предпочтительно, 95% или более.
n
n
[0082] Модифицированный фиброин (3–ii) предпочтительно, имеет последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 17, и имеет аминокислотную последовательность, где x/y составляет 64,2% или более, в случае, когда число аминокислотных остатков в REP из двух смежных звеньев [мотив (A)–REP] расположены последовательно от N–концевой стороны до С–концевой стороны, а число аминокислотных остатков в REP, имеющем меньшее число аминокислотных остатков, определено как 1, максимальная величина от общего числа аминокислотных остатков из двух смежных звеньев [мотив (A)–REP], где отношение числа аминокислотных остатков в другом REP составляет 1,8–11,3 (отношение Гизы 1:1,8–1:11,3), определена как х, а общее число аминокислотных остатков последовательности домена определено как y.
[0083] Вышеупомянутый модифицированный фиброин может включать вышеупомянутую последовательность метки у N–конца или у С–конца или у обоих концов.
[0084] Более конкретным примером модифицированного фиброина, включающего последовательность метки, может быть модифицированный фиброин, включающий (3–iii) аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 18; или (3–iv) аминокислотную последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 18.
[0085] Аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 6, 7, 8, 9, 11 и 18, представляют собой аминокислотные последовательности, в которых аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5 (включая His–метку), присоединяют к N–концу аминокислотных последовательностей, представленных в SEQ ID NN: 1, 2, 3, 4, 10 и 17, соответственно.
[0086] Модифицированный фиброин (3–iii) может состоять из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 18.
n
m
[0087] Модифицированный фиброин (3–iv) включает аминокислотную последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 18. Модифицированный фиброин (3–iv) также представляет собой белок, включающий последовательность домена, представленную формулой 1: [мотив (A)–REP]. Идентичность последовательностей, предпочтительно, составляет 95% или более.
n
n
[0088] Предпочтительно, чтобы модифицированный фиброин (3–iv) имел последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 18, и аминокислотную последовательность, где x/y составляет 64,2% или более, в случае, когда число аминокислотных остатков в REP из двух смежных звеньев [мотив (A)–REP] расположены последовательно от N–концевой стороны до С–концевой стороны, а число аминокислотных остатков в REP, имеющем меньшее число аминокислотных остатков, определено как 1, максимальная величина от общего числа аминокислотных остатков из двух смежных звеньев [мотив (A)–REP], где отношение числа аминокислотных остатков в другом REP составляет 1,8–11,3, определена как х, а общее число аминокислотных остатков последовательности домена определено как y.
[0089] Вышеупомянутый модифицированный фиброин может включать секреторный сигнал для высвобождения белка, продуцируемого в рекомбинантной системе получения белка, во внешнюю среду хозяина. Последовательность секреторного сигнала может быть соответствующим образом выбрана в зависимости от типа хозяина.
n
n
[0090] Модифицированный фиброин согласно четвертому варианту осуществления изобретения представляет собой модифицированный фиброин, где последовательность домена имеет аминокислотную последовательность с пониженным числом глициновых остатков и пониженным числом мотивов (A) по сравнению с природным фиброином. Можно сказать, что последовательность домена модифицированного фиброина также имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере с соответствующей заменой одного или множества глициновых остатков в REP другим аминокислотным остатком и с делецией одного или множества мотивов (A) по сравнению с природным фиброином. То есть, модифицированный фиброин представляет собой модифицированный фиброин, имеющий признаки вышеописанного модифицированного фиброина согласно второму варианту осуществления изобретения и вышеописанного модифицированного фиброина согласно третьему варианту осуществления изобретения. Конкретные аспекты и т.п. описаны для модифицированного фиброина согласно второму и третьему вариантам осуществления изобретения.
[0091] Более конкретным примером модифицированного фиброина согласно четвертому варианту осуществления изобретения может быть модифицированный фиброин, включающий (4–i) аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 10, или SEQ ID NO: 17; или (4–ii) аминокислотную последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 17. Конкретные аспекты модифицированного фиброина, включающего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 17, описаны выше.
[0092] <Способ получения модифицированного фиброина>
Модифицированный фиброин согласно варианту осуществления изобретения может быть получен, например, посредством экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей модифицированный фиброин, и в хозяине, трансформированном экспрессионным вектором, имеющим одну или множество регуляторных последовательностей, функционально присоединенных к последовательности нуклеиновой кислоты.
[0093] Способ получения нуклеиновой кислоты, кодирующей модифицированный фиброин, не имеет конкретных ограничений. Нуклеиновая кислота может быть получена, например, методом, где ген, кодирующий природный фиброин, амплифицируют и клонируют с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) или т.п. и модифицируют методом генной инженерии; или методом химического синтеза нуклеиновой кислоты. Метод химического синтеза нуклеиновой кислоты не имеет конкретных ограничений, и, например, гены могут быть химически синтезированы методом, в котором присоединение посредством ПЦР или т.п. олигонуклеотидов, автоматически синтезированных на AKTA oligopilot plus 10/100 (GE Healthcare Japan Ltd.) или т.п., осуществляют на основе информации об аминокислотной последовательности фиброина, полученной из базы данных NCBI web и т.п. На этой стадии, для облегчения очистки и/или для подтверждения модифицированного фиброина может быть синтерзирована нуклеиновая кислота, кодирующая модифицированный фиброин, состоящий из аминокислотной последовательности, полученной путем присоединения аминокислотной последовательности, состоящей из старт–кодона и метки His10, к N–концу вышеупомянутой аминокислотной последовательности.
[0094] Регуляторная последовательность представляет собой последовательность (например, промотор, энхансер, последовательность связывания с рибосомой или последовательность терминаиции транскрипции), которая регулирует экспрессию модифицированного фиброина у хозяина, и которая может быть соответствующим образом выбрана в зависимости от типа хозяина. В качестве промотора может быть использован индуцибельный промотор, который функционирует в клетках хозяина и способен индуцировать экспрессию модифицированного фиброина. Индуцибельным промотором является промотор, который может регулировать транскрипцию благодаря присутствию индуктора (индуктора экспрессии), отсутствию молекулы репрессора или наличию физических факторов, таких как повышение или снижение температуры, осмотического давления или величины рН.
[0095] Тип экспрессионного вектора, такого как плазмидный вектор, вирусный вектор, космидный вектор, фосмидный вектор или искусственный хромосомный вектор, может быть соответствующим образом выбран в зависимости от типа хозяина. В качестве экспрессионного вектора может быть использован экспрессионный вектор, который может автономно реплицироваться в клетке–хозяине или может быть включен в хромосому хозяина, и который содержит промотор в положении, способном транскрибировать нуклеиновую кислоту, кодирующую модифицированный фиброин.
[0096] В качестве хозяев могут быть использованы прокариоты и эукариоты, такие как дрожжи, нитчатые грибы, клетки насекомых, клетки животных и клетки растений.
Escherichia
Brevibacillus
Serratia
Bacillus
Microbacterium
Brevibacterium
Corynebacterium
Pseudomonas
Escherichia
Escherichia coli
Brevibacillus
Brevibacillus agri
Serratia,
Serratia liquefaciens
Bacillus,
Bacillus subtilis
Microbacterium,
Microbacterium ammoniaphilum
Brevibacterium,
Brevibacterium divaricatum
Corynebacterium,
Corynebacterium ammoniagenes
Pseudomonas.
Pseudomonas putida
[0097] Примерами хозяев–прокариотов являются бактерии, принадлежащие к роду , , , , , ,  и . Примерами микроорганизмов, принадлежащих к роду , являются  и т.п. Примерами микроорганизмов, принадлежащих к роду , являются и т.п. Примерами микроорганизмов, принадлежащих к роду  являются  и т.п. Примерами микроорганизмов, принадлежащих к родуявляются и т.п. Примерами микроорганизмов, принадлежащих к роду являются . Примерами микроорганизмов, принадлежащих к роду являются  и т.п. Примерами микроорганизмов, принадлежащих к роду  являются  и т.п. Примерами микроорганизмов, принадлежащих к роду являются и т.п.
[0098] В случае, если в качестве хозяина используются прокариоты, то примерами векторов, в которые вводят нуклеиновую кислоту, кодирующую модифицированный фиброин, являются pBTrp2 (полученный Boehringer Mannheim), pGEX (полученный Pharmacia), pUC18, pBluescriptII, pSupex, pET22b, pCold, pUB110 и pNCO2 (Публикация нерассмотренной Японской патентной заявки No. 2002–238569) и т.п.
Saccharomyces
Pichia
Schizosaccharomyces
Aspergillus
Penicillium
Trichoderma
[0099] Примерами хозяев–эукариотов являются дрожжи и нитчатые грибы (плесень и т.п.). Примерами дрожжей являются дрожжи, принадлежащие к роду , ,  и т.п. Примерами нитчатых грибов являются нитчатые грибы, принадлежащие к роду , ,  и т.п.
[0100] В случае, если в качестве хозяина используются эукариоты, то примерами векторов, в которые вводят нуклеиновую кислоту, кодирующую модифицированный фиброин, являются YEP13 (ATCC37115), YEp24 (ATCC37051) и т.п. Методом введения экспрессионного вектора в вышеуказанную клетку–хозяина может быть любой метод, при условии, что он позволяет вводить ДНК в клетку–хозяина. Примерами являются метод с использованием ионов кальция [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69, 2110 (1972)], метод электропорации, метод сферопластов, метод протопластов, метод с использованием ацетата лития, метод, удовлетворяющий нужным требованиям и т.п.
[0101] Экспрессия нуклеиновой кислоты хозяином, трансформированным экспрессионным вектором; продуцирование секреторного сигнала; экспрессия гибридного белка или т.п., помимо прямой экспрессии, могут быть осуществлены методом, описанным в публикации Molecular Cloning, 2–е издание.
[0102] Модифицированный фиброин может быть получен, например, путем культивирования хозяина, трансформированного экспрессионным вектором в культуральной среде, с последующим продуцированием и аккумуляцией модифицированного фиброина в культуральной среде и сбором модифицированного фиброина из культуральной среды. Культивирование хозяина в культуральной среде может быть осуществлено методом, обычно применяемым для культивирования хозяина.
Escherichia coli
[0103] В случае, когда хозяином является прокариот, такой как , или эукариот, такой как дрожжи, то в качестве культуральной среды может быть использована любая природная среда и синтетическая среда, при условии, что такая среда будет содержать источник углерода, источник азота, неорганические соли и т.п., которые могут усваиваться хозяином, а поэтому являются эффективными для культивирования хозяина.
[0122] В качестве источника углерода может быть использован любой источник углерода, который может усваиваться трансформированным микроорганизом. Примерами источников углерода, которые могут быть использованы, являются углеводы, такие как глюкоза, фруктоза, сахароза и мелассы, а также крахмал и гидролизаты крахмала, содержащие такие углеводы; органические кислоты, такие как уксусная кислота и пропионовая кислота, и спирты, такие как этанол и пропанол. Примерами источников азота, которые могут быть использованы, являются аммониевые соли неорганических или органических кислот, таких как аммиак, хлорид аммония, сульфат аммония, ацетат аммония и фосфат аммония; другие азот–содержащие соединения, пептон, мясной экстракт, дрожжевой экстракт, жидкий кукурузный сироп, гидролизат казеина, соевые лепешки и их гидролизат; различные ферментированные микробные клетки и продукты их гидролиза. Примерами неорганических солей, которые могут быть использованы, являются дигидрофосфат калия, бифосфат калия, фосфат магния, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат железа (3), сульфат марганца, сульфат меди и карбонат кальция.
Escherichia coli,
[0105] Культивирование прокариота, такого как  или эукариота, такого как дрожжи, может быть осуществлено в аэробных условиях, таких как культивирование в шейкерной культуре или культивирование при перемешивании и при глубокой аэрации. Температура культивирования составляет, например, от 15°C до 40°C. Время культивирования обычно составляет от 16 часов до 7 дней. При этом предпочтительно, чтобы pH культуральной среды во время культивирования составлял от 3,0 до 9,0. pH культуральной среды может быть скорректирован с использованием неорганической кислоты, органической кислоты, щелочного раствора, мочевины, карбоната кальция, аммиака или т.п.
[0126] Кроме того, во время культивирования, в культуральную среду могут быть добавлены, если это необходимо, антибиотики, такие как ампициллин и тетрациклин. В случае культивирования микроорганизма, трансформированного экспрессионным вектором с использованием в качестве промотора индуцибельного промотора, в среду, если необходимо, может быть добавлен индуктор. Так, например, в случае культивирования микроорганизма, трансформированного экспрессионным вектором с использованием промотора lac, в среду вводят изопропил–β–D–тиогалактопиранозид или т.п., а в случае культивирования микроорганизма, трансформированного экспрессионным вектором с использованием промотора trp, в культуральную среду может быть добавлена индолакриловая кислота или т.п.
[0107] Выделение и очистка экспрессированного модифицированного фиброина могут быть осуществлены методом, обычно применяемым для этой цели. Так, например, в случае, когда модифицированный фиброин экспрессируется в клетках в растворенном виде, клетки–хозяева выделяют путем центрифугирования после завершения культивирования, путем суспендирования в водном буферном растворе и путем дизрупции с применением ультразвука, на Френч–прессе, на гомогенизаторе Мэнтона–Голина, на мельнице Dyno–Mill или т.п. с получением бесклеточного экстракта. Очищенный препарат может быть получен из супернатанта, выделенного путем центрифугирования бесклеточного экстракта, методом, обычно применяемым для выделения и очистки модифицированного фиброина, то есть, методом экстракции растворителем, методом высаливания с использованием сульфата аммония или т.п., методом обессоливания, методом преципитации с использованием органического растворителя, методом анионообменной хроматографии с использованием смолы, такой как диэтиламиноэтил (DEAE)–сефароза или DIAION HPA–75 (изготавливаемые компанией Mitsubishi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha), методом катионообменной хроматографии с использованием смолы, такой как S–сефароза FF (Pharmacia Corporation), методом гидрофобной хроматографии с использованием смолы, такой как бутилсефароза или фенилсефароза, методом гель–фильтрации на молекулярных ситах, методом аффинной хроматографии, методом хроматофокусирования, методом электрофореза, таким как изоэлектрическое фокусирование или т.п., отдельно или в комбинации.
[0108] Кроме того, в случае, если модифицированный фиброин экспрессируется посредством образования нерастворимого вещества в клетке, то клетки–хозяева аналогичным образом выделяют, разрушают и центрифугируют для выделения нерастворимого вещества модифицированного фиброина в виде осажденной фракции. Выделенное нерастворимое вещество модифицированного фиброина может быть солюбилизировано под действием агента, денатурирующего белок. После этой процедуры, очищенный препарат модифицированного фиброина может быть получен методом выделения и очистки, описанным выше. В случае, если модифицированный фиброин секретируется вне клеток, то он может быть выделен из супернатанта культуры. То есть, супернатант культуры получают путем обработки культуры методом, таким как центрифугирование, а очищенный препарат может быть получен из супернатанта культуры методом выделения и очистки, описанным выше.
[0109] <Искусственное фиброиновое волокно>
Искусственное фиброиновое волокно согласно варианту осуществления изобретения представляет собой волокно, полученное путем прядения вышеописанного модифицированного фиброина и содержащее вышеописанный модифицированный фиброин в качестве главного компонента.
[0110] <Способ получения искусственного фиброинового волокна>
Искусственное фиброиновое волокно согласно варианту осуществления изобретения может быть получено известным методом прядения. То есть, например, в случае получения искусственного фиброинового волокна, содержащего модифицированный фиброин в качестве главного компонента, сначала получают прядильный раствор путем добавления и растворения модифицированного фиброина, полученного описанным выше методом, в растворителе, таком как диметилсульфоксид (ДМСО), N,N–диметилформамид (ДМФ) или гексафторизопропанол (HFIP), вместе с неорганической солью, используемой в качестве стимулятора растворения. Затем, с использованием этого прядильного раствора осуществляют прядение известным методом, таким как прядение мокрого типа, прядение сухого типа, прядение сухого– мокрого типа или прядение в расплавленном виде, в результате чего может быть получено целевое искусственное фиброиновое волокно. Предпочтительными методами прядения являются прядение мокрого типа или прядение сухого–мокрого типа.
[0111] На фиг. 4 представлено пояснительное изображение, схематически иллюстрирующее пример прядильного устройства для получения искусственного фиброинового волокна. Прядильное устройство 10, проиллюстрированное на фиг. 4, представляет собой пример прядильного устройства для прядения сухого–мокрого типа и включает устройство для экструзии 1, устройство для получения невытянутой пряжи 2, устройство для мокрого вытягивания при нагревании 3 и устройство для сушки 4.
[0112] Далее описан метод прядения на устройстве для прядения 10. Сначала, прядильный раствор 6, хранящийся в резервуаре для хранения 7, выталкивают из фильеры 9 насосом шестеренного типа 8. В лаборатории, прядильный раствор может быть залит в цилиндр с последующим его выталкиванием из сопла с использованием шприцевого насова. Затем, экструдированный прядильный раствор 6 подают через воздушный зазор 19 в коагулирующую жидкость 11 резервуара с коагулирующей жидкостью 20, растворитель удаляют, модифицированный фиброин коагулируют и получают волокнистое коагулированное тело. Затем волокнистое коагулированное тело подают в теплую воду 12 в бане для вытягивания 21 и подвергают вытягиванию. Отношение вытягивания определяют по отношению скорости зажимного подающего барабана 13 и собирающего зажимного барабана 14. Затем, вытянутое волокнистое коагулированное тело подают в устройство для сушки 4 и сушат в нитеводителе 22, в результате чего получают искусственное фиброиновое волокно в виде округлого тела 5. 18a – 18g обозначают нитеводители пряжи.
[0113] Коагулирующей жидкостью 11 может быть раствор, способный к десольватации, и его примерами являются низшие спирты, имеющие 1–5 атомов углерода, такие как метанол, этанол и 2–пропанол и ацетон. Коагулирующая жидкость 11 может соответственно содержать воду. Температура коагулирующей жидкости 11, предпочтительно, составляет от 0°C до 30°C. В случае, если шприцевой насос, имеющий сопло с диаметром 0,1–0,6 мм, используется в качестве фильеры 9, то скорость экструзии, предпочтительно, составляет 0,2–6,0 мл/час, а более предпочтительно, 1,4–4,0 мл/час на отверствие. Расстояние, которое проходит коагулированный белок в коагулирующей жидкости 11 (в основном, расстояние от нитеводителя пряжи 18а до нитеводителя пряжи 18b), может иметь любую длину, подходящую для эффективной десольватации, и такая длина, например, составляет 200–500 мм. Скорость снятия невытянутой пряжи может составлять, например, 1–20 мл/мин, а предпочтительно 1–3 мл/мин. Время пребывания в коагулирующей жидкости 11 может составлять, например, от 0,01 до 3 минут, а предпочтительно от 0,05 до 0,15 минут. Кроме того, вытягивание (предварительное вытягивание) может быть осуществлено в коагулирующей жидкости 11. Резервуар с коагулирующей жидкостью 20 может быть многофункциональным, а вытягивание может быть осуществлено, если это необходимо, в каждой стадии или в какой–либо конкретной стадии.
[0114] Для вытягивания, осуществляемого при получения искусственного фиброинового волокна, например, помимо вышеописанного предварительного вытягивания в резервуаре с коагулирующей жидкостью 20, также проводят сухое вытягивание с нагреванием и мокрое вытягивание с нагреванием в бане для вытягивания 21.
[0115] Мокрое вытягивание с нагреванием может быть осуществлено в теплой воде в растворе, полученном путем добавления органического растворителя или т.п. в теплую воду или во время нагервания на пару. Температура может составлять, например, 50°C – 90°C, а предпочтительно, 75°C – 85°C. При мокром вытягивании с нагреванием, невытянутая пряжа (или предварительно вытянутая пряжа) может быть вытянута, например, 1–10 раз, а предпочтительно, 2–8 раз.
[0116] Сухое вытягивание с нагреванием может быть осуществлено в трубчатой электропечи, на сухих пластинах с нагреванием или т.п. Температура может составлять, например, 140°C–270°C, а предпочтительно, 160°C – 230°C. При сухом вытягивании с нагреванием, невытянутая пряжа (или предварительно вытянутая пряжа) может быть вытянута, например, 0,5–8 раз, а предпочтительно, 1–4 раза.
[0117] Мокрое вытягивание с нагреванием и сухое вытягивание с нагреванием могут быть осуществлены по отдельности, либо они могут быть осуществлены в несколько стадий или в комбинации. То есть, мокрое вытягивание с нагреванием и сухое вытягивание с нагреванием могут быть осуществлены в соответствующей комбинации так, чтобы вытягивание в первой стадии проводилось посредством мокрого вытягивания с нагреванием, а вытягивание во второй стадии проводилось посредством сухого вытягивания с нагреванием, либо вытягивание в первой стадии проводилось посредством мокрого вытягивания с нагреванием; вытягивание во второй стадии проводилось посредством мокрого вытягивания с нагреванием; а вытягивание в третьей стадии проводилось посредством сухого вытягивания с нагреванием.
[0118] Нижний предел конечной степени вытягивания невытянутой пряжи (или предварительно вытянутой пряжи), предпочтительно, более, чем в 1 раз, 2 раза или более, 3 раза или более, 4 раза или более, 5 раз или более, 6 раз или более, 7 раз или более, 8 раз или более или в 9 раз или более превышает степень вытягивания невытянутой пряжи (или предварительно вытянутой пряжи). Верхний предел, предпочтительно, превышает в 40 раз или менее, 30 раз или менее, 20 раз или менее, 15 раз или менее, 14 раз или менее, 13 раз или менее, 12 раз или менее, 11 раз или менее или 10 раз или менее.
[0119] <В высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно>
В высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно согласно варианту осуществления изобретения получают посредством сжатия вышеупомянутого искусственного фиброинового волокна. Вышеупомянутое искусственное фиброиновое волокно может быть подвергнуто сжатию с более высоким процентом по сравнению с известным белковым волокном, описанным в литературе, и с более высоким процентом сжатия в менее жестких условиях, чем известное синтетическое волокно, описанное в литературе.
[0120] В соответствии с этим, в искусственном фиброиновом волокне с высоким процентом сжатия согласно варианту осуществления изобретения, процент сжатия, определяемый по нижеследующему уравнению, превышает 7%.
Процент сжатия = {1–(длина сжатого искусственного фиброинового волокна/длина искусственного фиброинового волокна до контактирования с водой после прядения)} × 100 (%).
[0121] Процент сжатия искусственного фиброинового волокна с высоким процентом сжатия согласно варианту осуществления изобретения составялет предпочтительно, 15% или более, более предпочтительно, более, чем 25%, еще более предпочтительно, 32% или более, еще более предпочтительно, 40% или более, еще более предпочтительно, 48% или более, особенно предпочтительно, 56% или более, еще более предпочтительно,64% или более, а наиболее предпочтительно, 72% или более. Верхний предел процента сжатия обычно составляет 80% или менее.
[0122] <Способ получения в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна>
Способ получения в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна включает стадию сжатия искусственного фиброинового волокна, содержащего модифицированный фиброин, посредством контактирования искусственного фиброинового волокна с водой ниже точки кипения (далее называемую «стадией сжатия»).
[0123] В стадии сжатия, искусственное фиброиновое волокно подвергают контактированию с водой ниже точки кипения (далее эта стадия будет также называться «стадией контактирования»). Затем, искусственное фиброиновое волокно может быть подвергнуто сжатию независимо от внешних сил. Сжатие без сообщения искусственному фиброиновому волокну внешних сил на стадии контактирования рассматривается как подходящие, например, по нижеследующим причинам. Другими словами, по одной причине, такое сжатие происходит под действием вторичной структуры и третичной структуры искусственного фиброина. Так, например, по другой причине, считается, что в искусственном фиброиновом волокне, имеющем остаточную нагрузку из–за вытягивания или т.п. в способе его получения, остаточная нагрузка снимается под действием воды, инфильтрирующей волокно или проникающей в волокно. В соответствии с этим, считается, что процент сжатия искусственного фиброинового волокна в стадии сжатия может, но необязательно, регулироваться, например, в соответствии с размером отношения вытягивания в способе получения искусственного фиброинового волокна, описанном выше.
[0124] Температура воды, с которой контактирует искусственное фиброиновое волокно в стадии контактирования, может быть меньше, чем точка кипения. В соответствии с этим, параметры способа сжатия, такие как способность к обработке и рабочие характеристики, улучшаются. Кроме того, с точки зрения достаточного сокращения времени сжатия, нижняя предельная величина температуры воды составляет, предпочтительно, 10°C или более, более предпочтительно, 40°C или более, а еще более предпочтительно, 70°C или более. Верхнее предельное значение температуры воды, предпочтительно, составляет 90°C или менее.
[0125] Способ контактирования искусственного фиброинового волокна с водой на стадии контактирования не имеет конкретных ограничений. Примерами таких способов являются способ погружения искусственного фиброинового волокна в воду; способ распыления воды на искусственное фиброиновое волокно при нормальной температуре или на стадии нагревания на пару и т.п.; способ помещения искусственного фиброинового волокна в условия высокой влажности с водяным паром и т.п. Из этих способов, применяемых в стадии контактирования, способ погружения искусственного фиброинового волокна в воду является предпочтительным, поскольку в этом случае может эффективно достигаться сокращение времени сжатия и упрощается подготовка оборудования для такой обработки.
[0126] В стадии контактирования, если искусственное фиброиновое волокно подвергают контактированию с водой в рыхлом состоянии, то искусственное фиброиновое волокно может быть не только подвергнуто сжатию, но также и подвергнуто опрессовке волнообразными движениями. Для предотвращения такой опрессовки, например, стадию контактирования осуществляют на том уровне, когда искусственное фиброиновое волокно еще не является рыхлым, посредством контактирования искусственного фиброинового волокна с водой ниже точки кипения при вытягивании (растягивании) в аксиальном направлении волокна.
[0127] Стадия сжатия может также включать, помимо стадии контактирования, стадию сушки искусственного фиброинового волокна после его контактирования с водой (далее эта стадия будет называться «стадией сушки»).
[0128] Стадией сушки является стадия сушки искусственного фиброинового волокна, которое было подвергнуто стадии контактирования. Сушкой может быть, например, натуральная сушка или принудительная сушка на устройстве для сушки. В качестве оборудования для сушки может применяться любое известное оборудование для сушки контактного типа или неконтактного типа. Кроме того, температура не имеет конкретных ограничений, при условии, что она будет ниже температуры, при которой, например, белки, содержащиеся в искусственном фиброиновом волокне, будут разлагаться, или искусственное фиброиновое волокно будет разрушаться под действием тепла. В целом, температура составляет в пределах от 20°С до 150°С, а предпочтительно, в пределах от 50°С до 100°С. Если температура находится в этих пределах, то искусственное фиброиновое волокно высушивается быстрее и эффективнее без его терморазрушения или без разложения белков, содержащихся в искусственном фиброиновом волокне. Время сушки соответственно зависит от температуры сушки и т.п., например, от периода времени, за которое влияние избыточной сушки на качество и физические свойства искусственного фиброинового волокна может быть, по возможности, устранено.
[0129] В способе продуцирования в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна согласно варианту осуществления изобретения, в высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокн, имеющее процент сжатия, превышающий 7%, может быть получено в стадии сжатия (стадии контактирования и, если это необходимо, в стадии сушки). Процент сжатия полученного в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна согласно варианту осуществления изобретения составляет, предпочтительно, 15% или более, более предпочтительно, более, чем 25%, еще более предпочтительно, 32% или более, еще более предпочтительно, 40% или более, еще более предпочтительно, 48% или более, особенно предпочтительно, 56% или более, еще более предпочтительно, 64% или более, а наиболее предпочтительно, 72% или более. Верхний предел процента сжатия обычно составляет 80% или менее.
[0130] На фиг. 5 представлено пояснительное изображение, схематически иллюстрирующее пример устройства для получения в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна. Устройство для получения 40, представленное на фиг. 5, сконструировано так, что оно включает подающий барабан 42 для доставки искусственного фиброинового волокна, мотальное устройство 44 для наматыаания в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна 38, водяную баню 46 для проведения стадии контактирования и сушилку 48 для проведения стадии сушки.
[0131] Более конкретно, в подающий барабан 42 может быть загружен продукт наматывания искусственного фиброинового волокна 36, и искусственное фиброиновое волокно 36 затем непрерывно автоматически подают из продукта наматывания искусственного фиброинового волокна 36 посредством вращения электродвигателя или т.п. (не показано). Мотальное устройство 44 может непрерывно и автоматически наматывать в высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно 38, полученное в стадии контактирования и в стадии сушки, после подачи из подающего барабана 42 посредством вращения электродвигателя (не показано). Скорость подачи искусственного фиброинового волокна 36 подающим барабаном 42 и скорость наматывания в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна 38 мотальным устройством 44 могут регулироваться независимо друг от друга.
[0132] Водяная баня 46 и сушилка 48 расположены между подающим барабаном 42 и мотальным устройством 44, соответственно, на верхней стороне и на нижней стороне в направлении подачи искусственного фиброинового волокна 36. Устройство для получения 40, представленное на фиг. 5, имеет переключающие барабаны 50 и 52, переключающие движение искусственного фиброинового волокна 36 с подающего барабана 42 на мотальное устройство 44.
[0133] Водяная баня 46 имеет нагреватель 54, и горячую воду 47, нагретую в нагревателе 54, заливают в водяную баню 46. Кроме того, в водяную баню 46 помещают барабан для создания нагрузки 56, который погружен в горячую воду 47. В соответствии с этим, искусственное фиброиновое волокно 36, поступаемое с подающего барабана 42, направляется на мотальное устройство 44, которое погружается в горячую воду в движущемся состоянии рядом с барабаном для создания нагрузки 56 в водяной бане 46. Время погружения искусственного фиброинового волокна 36 в горячую воду 47 соответствующим образом регулируется в зависимости от скорости перемещения искусственного фиброинового волокна 36.
[0134] Сушилка 48 имеет пару нагретых барабанов 58. Пара нагретых барабанов 58 может вращаться вместе с искусственным фиброиновым волокном 36, которое вынимают из водяной бани 46 и направляют в сторону мотального устройства 44. В соответствии с этим, искусственное фиброиновое волокно 36, погруженное в горячую воду 47, находящуюся в водяной бане 46, нагревают на паре горячих барабанов 58 в сушилке 48 и сушат, а затем снова подают на мотальное устройство 44.
[0135] При получении в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна 38 с использованием устройства для получения 40, имеющего такую структуру, сначала, например, продукт наматывания искусственного фиброинового волокна 36 на прядильном устройстве 10, представленном на фиг. 4, помещают на подающий барабан 42. Затем, искусственное фиброиновое волокно 36 непрерывно вынимают из подающего барабана 42 и погружают в горячую воду 47 в водяной бане 46. На этом этапе, например, скорость наматывания мотального устройства 44 становится ниже, чем скорость подачи подающего барабана 42. В соответствии с этим, образование извитости ткани может быть предотвращено, поскольку искусственное фиброиновое волокно 36 подвергают сжатию посредством контактирования с горячей водой 47 в напряженном состоянии, а поэтому волокно, находящееся между подающим барабаном 42 и мотальным устройством 44, не разрыхляется.
[0136] Затем, искусственное фиброиновое волокно 36, подвергнутое сжатию в горячей воде 47 в водяной бане 46, нагревают на паре нагретых барабанов 58 сушилки 48. После этого, сжатое искусственное фиброиновое волокно 36 сушат с образованием в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна 38. На этом этапе, путем регуляции отношения скорости подачи подающего барабана 42 и скорости наматывания мотальным устройством 44 можно дополнительно сжимать искусственное фиброиновое волокно 36 или не изменять его длину. Затем, полученное в высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно 38 наматывают на мотальное устройство 44 и тем самым получают продукт наматывания в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна 38.
[0137] Вместо пары нагретых барабанов 58, искусственное фиброиновое волокно 36 может быть высушено с помощью устройства для сушки, такого как сухая нагретая пластина 64, показанная на фиг. 6. Кроме того, в этом случае, путем коррекции относительной скорости между скоростью подачи подающего барабана 42 и скоростью наматывания мотального устройства 44, как и в случае использования пары нагретых барабанов 58 в качестве сушилки, можно дополнительно сжимать искусственное фиброиновое волокно 36 или не изменять его длину. Устройство для сушки состоит из сухих горячих пластин 64.
[0138] Как описано выше, с использованием устройства для получения 40, целевое в высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно 38 может быть получено автоматическим, непрерывным и очень легким способом.
[0139] На фиг. 6 представлено пояснительное изображение, схематически иллюстрирующее другой пример устройства для получения в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна. На фиг. 6(a) проиллюстрировано устройство для обработки, которое включено в устройство для получения, и которое применяется для проведения стадии контактирования. На фиг. 6(b) проиллюстрировано устройство для сушки, которое включено в устройство для получения, и которое применяется для проведения стадии сушки. Устройство для получения, представленное на фиг. 6, имеет устройство для обработки 60, используемое для проведения стадии контактирования искусственного фиброинового волокна 36 и устройство для сушки 62, в котором осуществляют сушку искусственного фиброинового волокна 36, и где стадию контактирования осуществляют в устройстве для обработки 60; и имеет структуру, благодаря которой эти устройства могут функционировать независимо друг от друга.
[0140] Более конкретно, устройство для обработки 60, представленное на фиг. 6(a), имеет структуру, где сушилка 48 была удалена из устройства для продуцирования 40, представленного на фиг. 5, а подающий барабан 42, водяная баня 46 и мотальное устройство 44 расположены в указанном порядке сверху вниз в направлении движения искусственного фиброинового волокна 36. Такое устройство для обработки 60 было сконструировано так, чтобы искусственное фиброиновое волокно 36, поступаемое из подающего барабана 42, погружалось в горячую воду 47 в водяной бане 46 и сжималось до его наматывания на мотальное устройство 44. Кроме того, эта структура имеет такую конфигурацию, при которой искусственное фиброиновое волокно 36, сжимаемое в горячей воде 47, наматывалось на мотальное устройство 44.
[0141] Устройство для сушки 62, представленное на фиг. 6(b), имеет подающий барабан 42, мотальное устройство 44 и сухую горячую пластину 64. Сухая горячая пластина 64 расположена между подающим барабаном 42 и мотальным устройством 44, что позволяет сухой горячей поверхности 66 контактировать с искусственным фиброиновым волокном 36 и простираться вдоль направления движения волокна. В этом устройстве для сушки 62, как описано выше, путем регуляции отношения скорости подачи подающего барабана 42 и скорости наматывания мотальным устройством 44 можно дополнительно сжимать искусственное фиброиновое волокно 36 или не изменять его длину.
[0142] В случае использования устройства для продуцирования, имеющего такую структуру, например, целевое в высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно 38 может быть получено сначала путем сжатия искусственного фиброинового волокна 36 в устройстве для обработки 60 с последующей сушкой искусственного фиброинового волокна 36 в устройстве для сушки 62.
[0143] Подающий барабан 42 и мотальное устройство 44 могут быть удалены из устройства для обработки 60, показанного на фиг. 6(a), а устройство для обработки может иметь такую конфигурацию, при которой оно имеет только водяную баню 46. В случае использования устройства для получения, содержащего такое устройство для обработки, например, в высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно получают в так называемой системе периодического действия.
[0144] <Применение в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна>
В высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно согласно изобретению имеет превосходные тактильные свойства и превосходную эластичность, поскольку оно имеет высокий процент сжатия. Поэтому это волокно может быть использовано, например, для пошива одежды и постельных принадлежностей.
[0145] [Способ сжатия искусственного фиброинового волокна]
Способ получения в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна согласно изобретению, описанный выше, может рассматриваться как способ сжатия искусственного фиброинового волокна, включающий стадию сжатия искусственного фиброинового волокна, содержащего модифицированный фиброин, посредством контактирования искусственного фиброинового волокна с водой ниже точки кипения, где процент сжатия, определяемый по нижеследующему уравнению, превышает 7%.
Процент сжатия = {1–(длина сжатого искусственного фиброинового волокна/длина искусственного фиброинового волокна до контактирования с водой после прядения)} × 100 (%).
Примеры
[0146] Настоящее изобретение более подробно описано ниже со ссылкой на конкретные примеры и т.п. Однако, настоящее изобретение не ограничивается этими примерами.
[0147] [(1) Получение модифицированного фиброина (искусственного фиброина)]
(Синтез нуклеиновой кислоты, кодирующей модифицированный фиброин, и конструирование экспрессионного вектора)
Был сконструирован модифицированный фиброин (PRT399), имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7; модифицированный фиброин (PRT380), имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, модифицированный фиброин (PRT410), имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO 9, и модифицированный фиброин (PRT799), имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18.
n
n
[0148] Аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7, получают путем присоединения аминокислотной последовательности (включая His–метку), представленную в SEQ ID NO: 5 у N–конца аминокислотной последовательности, где мотив (A) был делетирован через каждые два положения c N–концевой стороны до C–концевой стороны аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1 природного фиброина, а также инсерции одного [мотива(A)–REP] до C–концевой последовательности.
[0149] Аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, получают путем присоединения аминокислотной последовательности (включая His–метку), представленной в SEQ ID NO: 5 у N–конца аминокислотной последовательности, где все GGX в REP аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1 природного фиброина, были заменены на GQX.
[0150] Аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9, получают путем присоединения аминокислотной последовательности (включая His–метку), представленной в SEQ ID NO: 5 у N–конца аминокислотной последовательности, где все GGX в REP аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, были заменены на GQX.
[0151] Аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18, получают путем присоединения аминокислотной последовательности (включая His–метку), представленной в SEQ ID NO: 5 у N–конца аминокислотной последовательности, где His–метка была присоединена к C–концу последовательности, полученной путем введения 4 повторов в область из 20 последовательностей домена, присутствующих в аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 9 (однако, несколько аминокислотных остатков с С–концевой стороны этой области были заменены).
Nde
EcoR
Nde
EcoR
[0152] Были синтезированы, соответственно, нуклеиновые кислоты, кодирующие сконструированный модифицированный фиброин четырех типов. В нуклеиновой кислоте, I–сайт был присоединен к 5’–концу, а I–сайт был присоединен ниже стоп–кодона. Эти нуклеиновые кислоты четырех типов были клонированы в клонирующий вектор (pUC118). Затем, ту же самую нуклеиновую кислоту расщепляли путем обработки рестриктирующими ферментами I и I, после чего их снова объединяли в векторе для экспрессии белка pET–22b(+) с получением экспрессионного вектора.
[0153] (Экспрессия модифицированного фиброина)
Escherichia coli
Escherichia coli
600
600
BLR (DE3) трансформировали экспрессионным вектором pET–22b(+). Трансформированную  культивировали в 2 мл среды LB, содержащей ампициллин, в течение 15 часов. Культуральный раствор добавляли к 100 мл среды для посевной культуры (Таблица 1), содержащей ампициллин, так, чтобы OD составляла 0,005. Температуру культурального раствора поддерживали при 30°C, и осуществляли культивирование в колбе (приблизительно в течение 15 часов) до OD=5 с получением раствора посевной культуры.
[0154] [Таблица 1]
Среда для посевной культуры
Реагенты
Концентрация (г/л)
Глюкоза
5,0
KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>
4,0
K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>
9,3
Дрожжевой экстракт
6,0
Ампициллин
0,1
600
[0155] Раствор посевной культуры добавляли в резервуарный ферментер, в который добавляли 500 мл среды для получения (Таблица 2) так, чтобы OD была равна 0,05. Культивирование осуществляли при температуре культурального раствора, поддерживаемой при 37°C, и при постоянном рН 6,9. Кроме того, концентрацию растворенного кислорода в культуральном растворе поддерживали на уровне 20% от концентрации растворенного кислорода для насыщения.
[0156] [Таблица 2]
Среда для получения
Реагенты
Концентрация (г/л)
Глюкоза
12,0
KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>
9,0
MgSO<sub>4</sub>⋅7H<sub>2</sub>O
2,4
Дрожжевой экстракт
15
FeSO<sub>4</sub>⋅7H<sub>2</sub>O
0,04
MnSO<sub>4</sub>⋅5H<sub>2</sub>O
0,04
CaCl<sub>2</sub>⋅2H<sub>2</sub>O
0,04
ADEKANOL (LG–295S, Adeka Corporation)
0,1(мл/л)
[0157] Сразу после полного израсходования глюкозы в среде для получения добавляли питающий раствор (455 г/л глюкозы и 120 г/л дрожжевого экстракта) со скоростью 1 мл/мин. Культивирование осуществляли при температуре культурального раствора, поддерживаемой при 37°C, и при постоянном рН 6,9. Культивирование проводили в течение 20 часов при поддержании концентрации растворенного кислорода в культуральном растворе на уровне 20% от концентрации растворенного кислорода для насыщения. Затем, к культуральному раствору добавляли 1 M изопропил–β–тиогалактопиранозид (IPTG) до конечной концентрации 1 мМ для индуцирования экспрессии модифицированного фиброина–мишени. Через двадцать часов после добавления IPTG, культуральный раствор центрифугировали для выделения бактериальных клеток. Электрофорез в ДСН–ПААГ осуществляли с использованием бактериальных клеток, полученных из культурального раствора перед добавлением и после добавления IPTG, и экспрессию модифицированного фиброина–мишени подтверждали по появлению полосы модифицированного фиброина–мишени, размер которой зависел от добавления IPTG.
[0158] (Очистка модифицированного фиброина)
Бактериальные клетки, выделенные через 2 часа после добавления IPTG, промывали 20 мМ буферного раствора Трис–HCl (pH 7,4). После промывки, бактериальные клетки суспендировали в 20 мМ буферного раствора Трис–HCl (pH 7,4), содержащего приблизительно 1 мМ PMSF, и клетки подвергали дизрупции на гомогенизаторе высокого давления (поставляемого от GEA Niro Soavi SpA). Подвергнутые дизрупции клетки центрифугировали с получением осадка. Полученный осадок промывали 20 мМ буферного раствора Трис–HCl (pH 7,4) до достижения высокой степени чистоты. После промывки, осадок суспендировали в 8 M буферного раствора гуанидина (8 M гидрохлорида гуанидина, 10 мМ дигидрофосфата натрия, 20 мМ NaCl, 1 мМ Трис–HCl, pH 7,0) до концентрации 100 мг/мл и растворяли путем перемешивания с помощью мешалки при 60°C в течение 30 минут. После растворения проводили диализ в воде с использованием диализной трубки (целлюлозной трубки 36/32, изготовленной Sanko Junyaku Co., Ltd.). Белый агрегированный белок, полученный после диализа, выделяли путем центрифугирования. Воду удаляли из выделенного агрегированного белка с помощью лиофилизатора и получали лиофилизованный порошок модифицированного фиброина.
[0159] Степень очистки модифицированного фиброина–мишени в полученном таким образом лиофилизованном порошке подтверждали с помощью визуализирующего анализа, а именно, электрофореза в полиакриламидном геле для порошка с использованием TotalLab (Nonlinear Dynamics Ltd.). В результате, чистота каждого модифицированного фиброина составляла приблизительно 85%.
[0160] [(2) Получение искусственного фиброинового волокна]
(Получение прядильного раствора)
Диметилсульфоксид (ДМСО), в котором был растворен LiCl так, чтобы концентрация составляла 4,0 масс.%, получали в виде растворителя и к нему добавляли лиофилизованный порошок модифицированного фиброина до концентрации 18 масс.% или 24 масс.% (как показано в Таблице 3), и смесь растворяли в течение 3 часов в шейкере. Затем удаляли нерастворившиеся вещества и пузырьки, и получали раствор модифицированного фиброина.
[0161] (Прядение)
Полученный раствор модифицированного фиброина использовали в качестве прядильного раствора (прядильного неразбавленного раствора) и пряденое и вытянутое искусственное фиброиновое волокно получали путем прядения сухого–мокрого типа на прядильном устройстве, которое может рассматриваться как прядильный аппарат 10, представленный на фиг. 4. Прядильное устройство представляет собой устройство, в котором второе устройство для получения невытянутой пряжи (вторая баня) также расположено между устройством для получения невытянутой пряжи 2 (первая баня) и устройством для мокрого вытягивания при нагревании 3 (третья баня) в прядильном устройстве 10, представленном на фиг. 1. Условия прядения сухого–мокрого типа представлены ниже.
Диаметр экструзионного сопла: 0,2 мм
Скорость экструзии (количество выгружаемого продукта): см. Таблицу 3
Жидкость т температура в первой бане–третьей бане: см. Таблицу 3.
Скорость наматывания: см. Таблицу 3.
Общее отношение вытягивания: см. Таблицу 3.
Температура сушки: 60°C
Длина воздушного зазора: см. Таблицу 3.
[0162][Таблица 3]
Прядильный раствор
Выгрузка
Первая баня
Вторая баня
Третья баня
Скорость наматывания(м/мин)
Общее отношение вытягивания(кратность)
Модифицированный фиброин
Концентрация(% по массе)
Количество выгрузки(мг/мин)
Длина воздушного зазора (мм)
Жидкость
Температура(°C)
Жидкость
Температура(°C)
Жидкость
Температура(°C)
Пример получения 1
PRT799
24
53,8
1–2
100% метанол
–5
100% метанол
16
Вода
17
1,45
1
Пример получения 2
2,9
2
Пример получения 3
4,35
3
Пример получения 4
5,8
4
Пример получения 5
18
55,1
1,49
1
Пример получения 6
2,98
2
Пример получения 7
4,47
3
Пример получения 8
5,96
4
Пример получения 9
PRT410
24
51,9
0
–11
14
1,4
1
Пример получения 10
2,8
2
Пример получения 11
4,2
3
Пример получения 12
5,6
4
Пример получения 13
PRT399
51,1
1,38
1
Пример получения 14
2,76
2
Пример получения 15
4,14
3
Пример получения 16
PRT380
47,2
11
1,27
1
Пример получения 17
2,54
2
Пример получения 18
3,81
3
Пример получения 19
5,08
4
[0163][(3) Получение и оценка в высокой степени сжатого искусственного фиброинового волокна]
(Способ сжатия)
В высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно получали путем проведения, для каждого искусственного фиброинового волокна, полученного в Примере получения 1–19, стадии контактирования волокна с водой ниже точки кипения (далее называемой «первичным сжатием») или стадии сушки при комнатной температуре после проведения стадии контактирования (далее называемой «вторичным сжатием»).
[0164] <Первичное сжатие>
Множество искусственных фиброиновых волокон, каждое из которых имеет длину размером 30 см, вырезали из продукта наматывания искусственного фиброинового волокна, полученного в Примерах получения 1–19. Множество искусственных фиброиновых волокон объединяли в пучки с получением пучка искусственных фиброиновых волокон размером 150 денье. Каждый пучок искусственного фиброинового волокна объединяли с 0,8 г общей массы, и в этом состоянии, каждый пучок искусственного фиброинового волокна погружали в воду при температуре, представленной в Таблицах 4–7, на 10 минут (стадия контактирования). Затем, длину каждого пучка искусственного фиброинового волокна измеряли в воде. Измерение длины пучка искусственного фиброинового волокна в воде осуществляли с использованием пучка искусственного фиброинового волокна, объединенного с 0,8 г общей массы для устранения извитости пучка искусственного фиброинового волокна. Затем, процент сжатия (%) каждого искусственного фиброинового волокна вычисляли по уравнению I. В уравнении I, L0 означает длину пучка искусственного фиброинового волокна (в данном случае 30 см) до его контактирования с водой после прядения, а Lw означает длину пучка искусственного фиброинового волокна, которое было подвергнуто первичному сжатию.
Уравнение I: процент сжатия (процент первичного сжатия) = {1– (Lw/L0)} × 100 (%)
[0165] <Вторичное сжатие>
После погружения в воду при первичном сжатии (стадии контактирования), пучки искусственного фиброинового волокна вынимали из воды. Извлеченные пучки искусственного фиброинового волокна сушили при комнатной температуре в течение 2 часов и объединали с 0,8 г общей массы (стадия сушки). После сушки измеряли длину каждого пучка искусственного фиброинового волокна. Затем, процент сжатия (%) каждого искусственного фиброинового волокна вычисляли по уравнению II. В уравнении II, L0 означает длину пучка искусственного фиброинового волокна (в данном случае 30 см) до его контактирования с водой после прядения, а Lwd означает длину пучка искусственного фиброинового волокна, которое было подвергнуто первичному сжатию.
Уравнение II: процент сжатия (процент вторичного сжатия) = {1– (Lwd/L0)} × 100 (%)
[0166] Результаты представлены в Таблицах 4–7.
[Таблица 4]
Искусственное фиброиновое волокно
Температура воды ниже точки кипения (°C)
Первичное сжатие (%)
Вторичное сжатие (%)
Пример получения 1
24 масс.% PRT799 ×1
20
0,0
7,8
Пример получения 2
24 масс.% PRT799 ×2
–1,2
10,3
Пример получения 3
24 масс.% PRT799 ×3
7,2
21,2
Пример получения 4
24 масс.% PRT799 ×4
13,5
26,3
Пример получения 6
18 масс.% PRT799 ×2
–2,3
9,5
Пример получения 7
18 масс.% PRT799 ×3
6,0
19,7
Пример получения 8
18 масс.% PRT799 ×4
14,3
27,5
Пример получения 2
24 масс.% PRT799 ×2
40
–5,3
7,2
Пример получения 3
24 масс.% PRT799 ×3
8,7
21,3
Пример получения 4
24масс.% PRT799 ×4
14,5
26,0
Пример получения 6
18 масс.% PRT799 ×2
–4,3
7,3
Пример получения 7
18 масс.% PRT799 ×3
6,2
18,3
Пример получения 8
18масс.% PRT799 ×4
16,0
28,7
Пример получения 3
24 масс.% PRT799 ×3
60
6,8
21,0
Пример получения 4
24 масс.% PRT799 ×4
15,0
27,5
Пример получения 6
18 масс.% PRT799 ×2
–1,5
10,7
Пример получения 7
18 масс.% PRT799 ×3
3,3
18,2
Пример получения 8
18 масс.% PRT799 ×4
16,2
29,0
[0167][Таблица 5]
Искусственное фиброиновое волокно
Температура воды ниже точки кипения (°C)
Первичное сжатие(%)
Вторичное сжатие(%)
Пример получения 10
24 масс.% PRT410 ×2
20
–2,3
8,7
Пример получения 11
24 масс.% PRT410 ×3
4,7
16,7
Пример получения 12
24 масс.% PRT410 ×4
10,3
22,3
Пример получения 11
24 масс.% PRT410 ×3
40
4,7
17,5
Пример получения 12
24 масс.% PRT410 ×4
11,5
24,0
Пример получения 11
24 масс.% PRT410 ×3
60
2,0
16,5
Пример получения 12
24 масс.% PRT410 ×4
10,8
25,0
[0168] [Таблица 6]
Искусственное фиброиновое волокно
Температура воды ниже точки кипения (°C)
Первичное сжатие(%)
Вторичное сжатие(%)
Пример получения 13
24 масс.% PRT399 ×1
20
–3,5
7,6
Пример получения 14
24 масс.% PRT399 ×2
3,7
12,5
Пример получения 15
24 масс.% PRT399 ×3
7,0
16,8
Пример получения 14
24 масс.% PRT399 ×2
40
3,0
12,7
Пример получения 15
24 масс.% PRT399 ×3
7,3
16,7
Пример получения 14
24 масс.% PRT399 ×2
60
3,3
9,3
Пример получения 15
24 масс.% PRT399 ×3
6,8
14,2
[0169] [Таблица 7]
Искусственное фиброиновое волокно
Температура воды ниже точки кипения (°C)
Первичное сжатие(%)
Вторичное сжатие(%)
Пример получения 16
24 масс.% PRT380 ×1
20
–1,1
9,4
Пример получения 17
24 масс.% PRT380 ×2
2,7
13,3
Пример получения 18
24 масс.% PRT380 ×3
7,0
17,7
Пример получения 19
24 масс.% PRT380 ×4
10,0
20,2
Пример получения 17
24 масс.% PRT380 ×2
40
3,3
14,2
Пример получения 18
24 масс.% PRT380 ×3
7,7
19,0
Пример получения 19
24 масс.% PRT380 ×4
12,0
22,0
Пример получения 17
24 масс.% PRT380 ×2
60
2,7
14,3
Пример получения 18
24 масс.% PRT380 ×3
8,2
20,3
Пример получения 19
24 масс.% PRT380 ×4
12,0
23,2
[0170] В высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно согласно изобретению имеет достаточно высокий процент сжатия и обладает превосходными тактильными свойствами и эластичностью. Кроме того, в высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно может быть получено безопасным способом, поскольку оно может быть изготовлено путем проведения стадии контактирования с водой ниже точки кипения, и если это необходимо, стадии сушки искусственного фиброинового волокна после стадии контактирования.
Список условных обозначений
[0171] 1: устройство для экструзии, 2: устройство для получения невытянутой пряжи, 3: устройство для мокрого вытягивания при нагревании, 4: устройство для сушки, 6: прядильный раствор, 10: устройство для прядения, 20: резервуар с коагулирующей жидкостью, 21: баня для вытягивания, 36: искусственное фиброиновое волокно, 38: в высокой степени сжатое искусственное фиброиновое волокно, 40: устройство для получения, 42: подающий барабан, 44: мотальное устройство, 46: водяная баня, 48: сушилка, 54: нагреватель, 56: барабан для создания нагрузки, 58: нагретый барабан, 60: устройство для обработки, 62: устройство для сушки, 64: сухая нагретая пластина.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>  Spiber Inc.
KOJIMA INDUSTRIES CORPORATION
<120>  В высокой степени сжатое пряденое волокно искусственного фиброина
и способ его получения
<130>  FP18-0188-00
<150>  JP2017-046524
<151>  2017-03-10
<160>  18
<170>  PatentIn version 3.5
<210>  1
<211>  597
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Met-PRT313
<400>  1
Met Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
1               5                   10                  15
Ala Ala Ala Gly Gly Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly
20                  25                  30
Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly
35                  40                  45
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
50                  55                  60
Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala
65                  70                  75                  80
Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
85                  90                  95
Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Gly Gln Gln
100                 105                 110
Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Ser Gly
115                 120                 125
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala
145                 150                 155                 160
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro
165                 170                 175
Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly
180                 185                 190
Gly Tyr Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly
195                 200                 205
Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ala
210                 215                 220
Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr
225                 230                 235                 240
Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly
245                 250                 255
Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Tyr Gly Pro
260                 265                 270
Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala
275                 280                 285
Gly Gly Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly
290                 295                 300
Pro Gly Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro
305                 310                 315                 320
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro
325                 330                 335
Gly Gly Gln Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala
340                 345                 350
Ala Ala Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala
355                 360                 365
Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly
370                 375                 380
Pro Gly Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gln Gln Gly Pro
385                 390                 395                 400
Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala
405                 410                 415
Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala
420                 425                 430
Ala Ala Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Ser Ala
435                 440                 445
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gly Tyr
450                 455                 460
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
465                 470                 475                 480
Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
485                 490                 495
Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro
500                 505                 510
Gly Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gly Tyr Gly
515                 520                 525
Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Asn Gly Pro Gly Ser
530                 535                 540
Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ala Ala
545                 550                 555                 560
Ala Ala Gly Gly Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly
565                 570                 575
Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln
580                 585                 590
Gly Pro Gly Ala Ser
595
<210>  2
<211>  590
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Met-PRT399
<400>  2
Met Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
1               5                   10                  15
Ala Ala Ala Gly Gly Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly
20                  25                  30
Gly Ser Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
35                  40                  45
Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro
50                  55                  60
Gly Gly Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
65                  70                  75                  80
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly
85                  90                  95
Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala
100                 105                 110
Gly Gly Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala
115                 120                 125
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gly Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr
130                 135                 140
Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly
145                 150                 155                 160
Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro
165                 170                 175
Gly Gly Tyr Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr
180                 185                 190
Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gly Ser Gly
195                 200                 205
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala
210                 215                 220
Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser
225                 230                 235                 240
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly
245                 250                 255
Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gly Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gly
260                 265                 270
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala
275                 280                 285
Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala
290                 295                 300
Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Gly Gly Tyr Gly
305                 310                 315                 320
Pro Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser
325                 330                 335
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
340                 345                 350
Tyr Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gln Gln
355                 360                 365
Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly
370                 375                 380
Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
385                 390                 395                 400
Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala
405                 410                 415
Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Tyr
420                 425                 430
Gly Pro Gly Gly Ser Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro
435                 440                 445
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro
450                 455                 460
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala
465                 470                 475                 480
Gly Pro Gly Ser Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gly Asn Gly
485                 490                 495
Pro Gly Ser Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Ser
500                 505                 510
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly
515                 520                 525
Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly
530                 535                 540
Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gly Ser Gly Ser
545                 550                 555                 560
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala
565                 570                 575
Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser
580                 585                 590
<210>  3
<211>  597
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Met-PRT380
<400>  3
Met Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
1               5                   10                  15
Ala Ala Ala Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly
20                  25                  30
Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly
35                  40                  45
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
50                  55                  60
Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala
65                  70                  75                  80
Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
85                  90                  95
Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln
100                 105                 110
Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly
115                 120                 125
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
130                 135                 140
Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala
145                 150                 155                 160
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
165                 170                 175
Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly
180                 185                 190
Gln Tyr Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly
195                 200                 205
Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala
210                 215                 220
Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr
225                 230                 235                 240
Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly
245                 250                 255
Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Tyr Gly Pro
260                 265                 270
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala
275                 280                 285
Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly
290                 295                 300
Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
305                 310                 315                 320
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro
325                 330                 335
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala
340                 345                 350
Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala
355                 360                 365
Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly
370                 375                 380
Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro
385                 390                 395                 400
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala
405                 410                 415
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala
420                 425                 430
Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala
435                 440                 445
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Tyr
450                 455                 460
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
465                 470                 475                 480
Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
485                 490                 495
Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro
500                 505                 510
Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly
515                 520                 525
Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser
530                 535                 540
Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala
545                 550                 555                 560
Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly
565                 570                 575
Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln
580                 585                 590
Gly Pro Gly Ala Ser
595
<210>  4
<211>  590
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Met-PRT410
<400>  4
Met Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
1               5                   10                  15
Ala Ala Ala Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly
20                  25                  30
Gln Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
35                  40                  45
Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro
50                  55                  60
Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
65                  70                  75                  80
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln
85                  90                  95
Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala
100                 105                 110
Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala
115                 120                 125
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr
130                 135                 140
Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly
145                 150                 155                 160
Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro
165                 170                 175
Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr
180                 185                 190
Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly
195                 200                 205
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala
210                 215                 220
Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser
225                 230                 235                 240
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly
245                 250                 255
Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln
260                 265                 270
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala
275                 280                 285
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala
290                 295                 300
Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly
305                 310                 315                 320
Pro Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser
325                 330                 335
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
340                 345                 350
Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln
355                 360                 365
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly
370                 375                 380
Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
385                 390                 395                 400
Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala
405                 410                 415
Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr
420                 425                 430
Gly Pro Gly Gln Ser Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro
435                 440                 445
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro
450                 455                 460
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala
465                 470                 475                 480
Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly
485                 490                 495
Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser
500                 505                 510
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
515                 520                 525
Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly
530                 535                 540
Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser
545                 550                 555                 560
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala
565                 570                 575
Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser
580                 585                 590
<210>  5
<211>  12
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  His-метка
<400>  5
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser
1               5                   10
<210>  6
<211>  608
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  PRT313
<400>  6
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly
20                  25                  30
Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ala Ala
35                  40                  45
Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
50                  55                  60
Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro
65                  70                  75                  80
Gly Gly Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
85                  90                  95
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly
100                 105                 110
Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser
115                 120                 125
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly
130                 135                 140
Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gly Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
165                 170                 175
Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala
180                 185                 190
Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Tyr
195                 200                 205
Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln
210                 215                 220
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser
225                 230                 235                 240
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala
245                 250                 255
Ala Ala Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala
260                 265                 270
Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro
275                 280                 285
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Asn Gly Pro
290                 295                 300
Gly Ser Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Ser Ala
305                 310                 315                 320
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala
325                 330                 335
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro
340                 345                 350
Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
355                 360                 365
Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
370                 375                 380
Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gly Ser Ala
385                 390                 395                 400
Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro
405                 410                 415
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gly Gln
420                 425                 430
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
435                 440                 445
Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala
450                 455                 460
Ala Gly Gly Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro
465                 470                 475                 480
Gly Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly
485                 490                 495
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly
500                 505                 510
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ala
515                 520                 525
Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala
530                 535                 540
Ala Ala Ala Ala Gly Gly Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gly Tyr Gly Pro
545                 550                 555                 560
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr
565                 570                 575
Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala
580                 585                 590
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser
595                 600                 605
<210>  7
<211>  601
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  PRT399
<400>  7
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly
20                  25                  30
Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Ser Gly Gly Tyr
35                  40                  45
Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala
50                  55                  60
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro
65                  70                  75                  80
Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly
85                  90                  95
Pro Gly Ala Ser Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Gly Gln
100                 105                 110
Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Ser
115                 120                 125
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
130                 135                 140
Pro Gly Ser Gly Gly Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser
145                 150                 155                 160
Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala
165                 170                 175
Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro
180                 185                 190
Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Ser Gly Pro Gly
195                 200                 205
Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly
210                 215                 220
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
225                 230                 235                 240
Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala
245                 250                 255
Gly Gly Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
260                 265                 270
Ala Ser Gly Gly Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gln
275                 280                 285
Gln Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gly Gln
290                 295                 300
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr
305                 310                 315                 320
Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Gly
325                 330                 335
Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala
340                 345                 350
Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gly
355                 360                 365
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln
370                 375                 380
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr
385                 390                 395                 400
Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gly Tyr Gly
405                 410                 415
Pro Gly Gly Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly
420                 425                 430
Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gly Ser
435                 440                 445
Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala
450                 455                 460
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
465                 470                 475                 480
Tyr Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly
485                 490                 495
Gly Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gly Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gly
500                 505                 510
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala
515                 520                 525
Gly Gly Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
530                 535                 540
Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln
545                 550                 555                 560
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro
565                 570                 575
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
580                 585                 590
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser
595                 600
<210>  8
<211>  608
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  PRT380
<400>  8
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln
20                  25                  30
Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala
35                  40                  45
Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
50                  55                  60
Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro
65                  70                  75                  80
Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
85                  90                  95
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln
100                 105                 110
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser
115                 120                 125
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly
130                 135                 140
Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
165                 170                 175
Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala
180                 185                 190
Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr
195                 200                 205
Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln
210                 215                 220
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser
225                 230                 235                 240
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala
245                 250                 255
Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala
260                 265                 270
Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
275                 280                 285
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Asn Gly Pro
290                 295                 300
Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala
305                 310                 315                 320
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala
325                 330                 335
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
340                 345                 350
Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
355                 360                 365
Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
370                 375                 380
Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala
385                 390                 395                 400
Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
405                 410                 415
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln
420                 425                 430
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
435                 440                 445
Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala
450                 455                 460
Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro
465                 470                 475                 480
Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly
485                 490                 495
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln
500                 505                 510
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala
515                 520                 525
Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala
530                 535                 540
Ala Ala Ala Ala Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro
545                 550                 555                 560
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr
565                 570                 575
Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala
580                 585                 590
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser
595                 600                 605
<210>  9
<211>  601
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  PRT410
<400>  9
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln
20                  25                  30
Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Gly Gln Tyr
35                  40                  45
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala
50                  55                  60
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
65                  70                  75                  80
Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly
85                  90                  95
Pro Gly Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln
100                 105                 110
Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser
115                 120                 125
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
130                 135                 140
Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser
145                 150                 155                 160
Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala
165                 170                 175
Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro
180                 185                 190
Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly
195                 200                 205
Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly
210                 215                 220
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
225                 230                 235                 240
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala
245                 250                 255
Gly Gln Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
260                 265                 270
Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln
275                 280                 285
Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln
290                 295                 300
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr
305                 310                 315                 320
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Gly
325                 330                 335
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala
340                 345                 350
Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln
355                 360                 365
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln
370                 375                 380
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr
385                 390                 395                 400
Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly
405                 410                 415
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln
420                 425                 430
Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser
435                 440                 445
Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala
450                 455                 460
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
465                 470                 475                 480
Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly
485                 490                 495
Gln Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln
500                 505                 510
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala
515                 520                 525
Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
530                 535                 540
Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln
545                 550                 555                 560
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro
565                 570                 575
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
580                 585                 590
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser
595                 600
<210>  10
<211>  565
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Met-PRT468
<400>  10
Met Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
1               5                   10                  15
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly
20                  25                  30
Pro Gly Gln Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln
35                  40                  45
Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
50                  55                  60
Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala
65                  70                  75                  80
Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly
85                  90                  95
Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser
100                 105                 110
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Pro Gly
115                 120                 125
Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
130                 135                 140
Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly
145                 150                 155                 160
Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala
165                 170                 175
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly
180                 185                 190
Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Tyr Gly Ser
195                 200                 205
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly
210                 215                 220
Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala
225                 230                 235                 240
Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser
245                 250                 255
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gln
260                 265                 270
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser
275                 280                 285
Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Pro Ser Ala Ala Ala
290                 295                 300
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala
305                 310                 315                 320
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Tyr Gly Pro Gly Gln Gln
325                 330                 335
Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly
340                 345                 350
Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser
355                 360                 365
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Pro Ser Ala Ala
370                 375                 380
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
385                 390                 395                 400
Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly
405                 410                 415
Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr
420                 425                 430
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala
435                 440                 445
Ala Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro
450                 455                 460
Gly Gln Ser Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro Tyr Gly
465                 470                 475                 480
Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Tyr Gly Pro
485                 490                 495
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Pro Ser Ala Ala Ala Ala Ala
500                 505                 510
Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln
515                 520                 525
Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly
530                 535                 540
Pro Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln
545                 550                 555                 560
Gly Pro Gly Ala Ser
565
<210>  11
<211>  576
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  PRT468
<400>  11
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
20                  25                  30
Gly Ser Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Gly
35                  40                  45
Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser
50                  55                  60
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly
65                  70                  75                  80
Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
85                  90                  95
Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly
100                 105                 110
Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala
115                 120                 125
Ala Ala Ala Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr
130                 135                 140
Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Tyr Gly
165                 170                 175
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
180                 185                 190
Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Ala Ser Ala
195                 200                 205
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln
210                 215                 220
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly
225                 230                 235                 240
Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
245                 250                 255
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala
260                 265                 270
Ala Ala Gly Ser Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly
275                 280                 285
Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro
290                 295                 300
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Pro Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly
305                 310                 315                 320
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala
325                 330                 335
Ala Ala Ala Gly Ser Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr
340                 345                 350
Gly Pro Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
355                 360                 365
Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Tyr Gly Pro Gly Gln
370                 375                 380
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Pro Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
385                 390                 395                 400
Gly Ser Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
405                 410                 415
Ala Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala
420                 425                 430
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln
435                 440                 445
Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Tyr Gly
450                 455                 460
Ser Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Pro
465                 470                 475                 480
Gly Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala
485                 490                 495
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
500                 505                 510
Tyr Gly Pro Gly Pro Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
515                 520                 525
Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser
530                 535                 540
Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Pro Ser Ala Ala Ala
545                 550                 555                 560
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser
565                 570                 575
<210>  12
<211>  50
<212>  PRT
<213>  Araneus diadematus
<400>  12
Ser Gly Cys Asp Val Leu Val Gln Ala Leu Leu Glu Val Val Ser Ala
1               5                   10                  15
Leu Val Ser Ile Leu Gly Ser Ser Ser Ile Gly Gln Ile Asn Tyr Gly
20                  25                  30
Ala Ser Ala Gln Tyr Thr Gln Met Val Gly Gln Ser Val Ala Gln Ala
35                  40                  45
Leu Ala
50
<210>  13
<211>  30
<212>  PRT
<213>  Araneus diadematus
<400>  13
Ser Gly Cys Asp Val Leu Val Gln Ala Leu Leu Glu Val Val Ser Ala
1               5                   10                  15
Leu Val Ser Ile Leu Gly Ser Ser Ser Ile Gly Gln Ile Asn
20                  25                  30
<210>  14
<211>  21
<212>  PRT
<213>  Araneus diadematus
<400>  14
Ser Gly Cys Asp Val Leu Val Gln Ala Leu Leu Glu Val Val Ser Ala
1               5                   10                  15
Leu Val Ser Ile Leu
20
<210>  15
<211>  1154
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  рекомбинантный белок шелка паука ADF3KaiLargeNRSH1
<400>  15
Met His His His His His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser
1               5                   10                  15
Leu Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro Ala Arg Ala Gly Ser Gly Gln Gln
20                  25                  30
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
35                  40                  45
Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr
50                  55                  60
Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Ser Gln Gln Gly Pro Gly Gln
65                  70                  75                  80
Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
85                  90                  95
Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro
100                 105                 110
Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala
115                 120                 125
Ala Gly Gly Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Ala Gly Gln Gln
130                 135                 140
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala
145                 150                 155                 160
Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
165                 170                 175
Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala
180                 185                 190
Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gly Pro Gly Gln Gln
195                 200                 205
Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala
210                 215                 220
Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly
225                 230                 235                 240
Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly
245                 250                 255
Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly
260                 265                 270
Tyr Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro
275                 280                 285
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ser Ala Ala Ser Gly Gly Tyr Gly
290                 295                 300
Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln
305                 310                 315                 320
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly
325                 330                 335
Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly
340                 345                 350
Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly
355                 360                 365
Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly
370                 375                 380
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
385                 390                 395                 400
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly
405                 410                 415
Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly
420                 425                 430
Gln Gly Ala Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Gly Ala Ala Gly
435                 440                 445
Gly Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
450                 455                 460
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly
465                 470                 475                 480
Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly
485                 490                 495
Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly
500                 505                 510
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
515                 520                 525
Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ala Ser Ala Ala Val Ser
530                 535                 540
Val Ser Arg Ala Arg Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln
545                 550                 555                 560
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
565                 570                 575
Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Ser Gly
580                 585                 590
Gln Gln Gly Pro Ser Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly
595                 600                 605
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly
610                 615                 620
Gly Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro
625                 630                 635                 640
Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Asn Gly
645                 650                 655
Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Ala Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln
660                 665                 670
Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro
675                 680                 685
Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly
690                 695                 700
Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr
705                 710                 715                 720
Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln
725                 730                 735
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly
740                 745                 750
Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly
755                 760                 765
Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala
770                 775                 780
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Tyr Gly Gln Gln Gly
785                 790                 795                 800
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala
805                 810                 815
Ser Ala Ala Ser Ala Ala Ser Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Gln
820                 825                 830
Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro
835                 840                 845
Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Ser
850                 855                 860
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly
865                 870                 875                 880
Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala
885                 890                 895
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly
900                 905                 910
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
915                 920                 925
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly
930                 935                 940
Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gly Gln Gly Ala Tyr Gly
945                 950                 955                 960
Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Gly Ala Ala Gly Gly Tyr Gly Pro Gly
965                 970                 975
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
980                 985                 990
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Gly
995                 1000                 1005
Gln Gln  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Tyr Gly Pro  Gly Ala Ser
1010                 1015                 1020
Ala Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Gly Tyr Gly Pro Gly  Ser Gly Gln
1025                 1030                 1035
Gln Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Gly Gly
1040                 1045                 1050
Gln Gly  Pro Tyr Gly Pro Gly  Ala Ala Ser Ala Ala  Val Ser Val
1055                 1060                 1065
Gly Gly  Tyr Gly Pro Gln Ser  Ser Ser Val Pro Val  Ala Ser Ala
1070                 1075                 1080
Val Ala  Ser Arg Leu Ser Ser  Pro Ala Ala Ser Ser  Arg Val Ser
1085                 1090                 1095
Ser Ala  Val Ser Ser Leu Val  Ser Ser Gly Pro Thr  Lys His Ala
1100                 1105                 1110
Ala Leu  Ser Asn Thr Ile Ser  Ser Val Val Ser Gln  Val Ser Ala
1115                 1120                 1125
Ser Asn  Pro Gly Leu Ser Gly  Cys Asp Val Leu Val  Gln Ala Leu
1130                 1135                 1140
Leu Glu  Val Val Ser Ala Leu  Val Ser Ile Leu
1145                 1150
<210>  16
<211>  24
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  His-метка и старт-кодон
<400>  16
Met His His His His His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser
1               5                   10                  15
Leu Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro
20
<210>  17
<211>  2364
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Met-PRT799
<400>  17
Met Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala
1               5                   10                  15
Ala Ala Ala Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly
20                  25                  30
Gln Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
35                  40                  45
Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro
50                  55                  60
Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
65                  70                  75                  80
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln
85                  90                  95
Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala
100                 105                 110
Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala
115                 120                 125
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr
130                 135                 140
Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly
145                 150                 155                 160
Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro
165                 170                 175
Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr
180                 185                 190
Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly
195                 200                 205
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala
210                 215                 220
Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser
225                 230                 235                 240
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly
245                 250                 255
Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln
260                 265                 270
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala
275                 280                 285
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala
290                 295                 300
Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly
305                 310                 315                 320
Pro Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser
325                 330                 335
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
340                 345                 350
Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln
355                 360                 365
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly
370                 375                 380
Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
385                 390                 395                 400
Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala
405                 410                 415
Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr
420                 425                 430
Gly Pro Gly Gln Ser Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro
435                 440                 445
Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro
450                 455                 460
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala
465                 470                 475                 480
Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly
485                 490                 495
Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser
500                 505                 510
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
515                 520                 525
Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly
530                 535                 540
Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser
545                 550                 555                 560
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala
565                 570                 575
Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln
580                 585                 590
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln
595                 600                 605
Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Gly Gln Tyr
610                 615                 620
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala
625                 630                 635                 640
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
645                 650                 655
Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly
660                 665                 670
Pro Gly Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln
675                 680                 685
Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser
690                 695                 700
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
705                 710                 715                 720
Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser
725                 730                 735
Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala
740                 745                 750
Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro
755                 760                 765
Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly
770                 775                 780
Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly
785                 790                 795                 800
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
805                 810                 815
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala
820                 825                 830
Gly Gln Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
835                 840                 845
Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln
850                 855                 860
Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln
865                 870                 875                 880
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr
885                 890                 895
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Gly
900                 905                 910
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala
915                 920                 925
Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln
930                 935                 940
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln
945                 950                 955                 960
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr
965                 970                 975
Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly
980                 985                 990
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala  Ser Ala Ala Ala Ala  Ala Gly Gln
995                 1000                 1005
Tyr Gly  Ser Gly Pro Gly Gln  Tyr Gly Pro Tyr Gly  Pro Gly Gln
1010                 1015                 1020
Ser Gly  Pro Gly Ser Gly Gln  Gln Gly Gln Gly Pro  Tyr Gly Pro
1025                 1030                 1035
Gly Ala  Ser Ala Ala Ala Ala  Ala Gly Gln Tyr Gly  Pro Gly Gln
1040                 1045                 1050
Gln Gly  Pro Tyr Gly Pro Gly  Gln Ser Ala Ala Ala  Ala Ala Gly
1055                 1060                 1065
Pro Gly  Ser Gly Gln Tyr Gly  Pro Gly Ala Ser Gly  Gln Asn Gly
1070                 1075                 1080
Pro Gly  Ser Gly Gln Tyr Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Gly Gln
1085                 1090                 1095
Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Gln Tyr Gln Gln Gly  Pro Gly Gln
1100                 1105                 1110
Gln Gly  Pro Tyr Gly Pro Gly  Ala Ser Ala Ala Ala  Ala Ala Gly
1115                 1120                 1125
Gln Tyr  Gly Ser Gly Pro Gly  Gln Gln Gly Pro Tyr  Gly Pro Gly
1130                 1135                 1140
Gln Ser  Gly Ser Gly Gln Gln  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Tyr
1145                 1150                 1155
Ala Ser  Ala Ala Ala Ala Ala  Gly Pro Gly Ser Gly  Gln Gln Gly
1160                 1165                 1170
Pro Gly  Ala Ser Gly Gln Gln  Gly Pro Tyr Gly Pro  Gly Ala Ser
1175                 1180                 1185
Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Gln  Asn Gly Pro Gly Ser  Gly Gln Gln
1190                 1195                 1200
Gly Pro  Gly Gln Ser Gly Gln  Tyr Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro
1205                 1210                 1215
Gly Gln  Gln Gly Pro Gly Ser  Ser Ala Ala Ala Ala  Ala Gly Pro
1220                 1225                 1230
Gly Gln  Tyr Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro Ser Ala  Ser Ala Ala
1235                 1240                 1245
Ala Ala  Ala Gly Pro Gly Ser  Gly Gln Gln Gly Pro  Gly Ala Ser
1250                 1255                 1260
Gly Gln  Tyr Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro
1265                 1270                 1275
Gly Ser  Ser Ala Ala Ala Ala  Ala Gly Gln Tyr Gly  Ser Gly Pro
1280                 1285                 1290
Gly Gln  Gln Gly Pro Tyr Gly  Ser Ala Ala Ala Ala  Ala Gly Pro
1295                 1300                 1305
Gly Ser  Gly Gln Tyr Gly Gln  Gly Pro Tyr Gly Pro  Gly Ala Ser
1310                 1315                 1320
Gly Pro  Gly Gln Tyr Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Ser Ala Ser
1325                 1330                 1335
Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Ser  Gly Gln Gln Gly Pro  Gly Gln Tyr
1340                 1345                 1350
Gly Pro  Tyr Ala Ser Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Gln  Tyr Gly Ser
1355                 1360                 1365
Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Tyr Gly Pro Gly Gln  Ser Gly Ser
1370                 1375                 1380
Gly Gln  Gln Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro Tyr Ala  Ser Ala Ala
1385                 1390                 1395
Ala Ala  Ala Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro Tyr Gly  Pro Gly Ser
1400                 1405                 1410
Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Gln Tyr Gly Tyr Gly  Pro Gly Gln
1415                 1420                 1425
Gln Gly  Pro Tyr Gly Pro Gly  Ala Ser Gly Gln Asn  Gly Pro Gly
1430                 1435                 1440
Ser Gly  Gln Tyr Gly Pro Gly  Gln Gln Gly Pro Gly  Gln Ser Ala
1445                 1450                 1455
Ala Ala  Ala Ala Gly Pro Gly  Gln Gln Gly Pro Tyr  Gly Pro Gly
1460                 1465                 1470
Ala Ser  Ala Ala Ala Ala Ala  Gly Gln Tyr Gly Pro  Gly Gln Gln
1475                 1480                 1485
Gly Pro  Gly Gln Tyr Gly Pro  Gly Ser Ser Gly Pro  Gly Gln Gln
1490                 1495                 1500
Gly Pro  Tyr Gly Pro Gly Ser  Ser Ala Ala Ala Ala  Ala Gly Gln
1505                 1510                 1515
Tyr Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Tyr Gly Pro Gly  Gln Ser Ala
1520                 1525                 1530
Ala Ala  Ala Ala Gly Gln Tyr  Gln Gln Gly Pro Gly  Gln Gln Gly
1535                 1540                 1545
Pro Tyr  Gly Pro Gly Ala Ser  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Tyr
1550                 1555                 1560
Gly Pro  Gly Ala Ser Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Pro  Gly Gln Tyr
1565                 1570                 1575
Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Ser Ala Ser Ala Ala  Ala Ala Ala
1580                 1585                 1590
Gly Gln  Tyr Gly Ser Gly Pro  Gly Gln Tyr Gly Pro  Tyr Gly Pro
1595                 1600                 1605
Gly Gln  Ser Gly Pro Gly Ser  Gly Gln Gln Gly Gln  Gly Pro Tyr
1610                 1615                 1620
Gly Pro  Gly Ala Ser Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Gln  Tyr Gly Pro
1625                 1630                 1635
Gly Gln  Gln Gly Pro Tyr Gly  Pro Gly Gln Ser Ala  Ala Ala Ala
1640                 1645                 1650
Ala Gly  Pro Gly Ser Gly Gln  Tyr Gly Pro Gly Ala  Ser Gly Gln
1655                 1660                 1665
Asn Gly  Pro Gly Ser Gly Gln  Tyr Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro
1670                 1675                 1680
Gly Gln  Ser Ala Ala Ala Ala  Ala Gly Gln Tyr Gln  Gln Gly Pro
1685                 1690                 1695
Gly Gln  Gln Gly Pro Tyr Gly  Pro Gly Ala Ser Ala  Ala Ala Ala
1700                 1705                 1710
Ala Gly  Gln Tyr Gly Ser Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Tyr Gly
1715                 1720                 1725
Pro Gly  Gln Ser Gly Ser Gly  Gln Gln Gly Pro Gly  Gln Gln Gly
1730                 1735                 1740
Pro Tyr  Ala Ser Ala Ala Ala  Ala Ala Gly Pro Gly  Ser Gly Gln
1745                 1750                 1755
Gln Gly  Pro Gly Ala Ser Gly  Gln Gln Gly Pro Tyr  Gly Pro Gly
1760                 1765                 1770
Ala Ser  Ala Ala Ala Ala Ala  Gly Gln Asn Gly Pro  Gly Ser Gly
1775                 1780                 1785
Gln Gln  Gly Pro Gly Gln Ser  Gly Gln Tyr Gly Pro  Gly Gln Gln
1790                 1795                 1800
Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Gly Ser Ser Ala Ala  Ala Ala Ala
1805                 1810                 1815
Gly Pro  Gly Gln Tyr Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Ser Ala Ser
1820                 1825                 1830
Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Pro  Gly Ser Gly Gln Gln  Gly Pro Gly
1835                 1840                 1845
Ala Ser  Gly Gln Tyr Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Gly Gln Gln
1850                 1855                 1860
Gly Pro  Gly Ser Ser Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Gln  Tyr Gly Ser
1865                 1870                 1875
Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Tyr Gly Ser Ala Ala  Ala Ala Ala
1880                 1885                 1890
Gly Pro  Gly Ser Gly Gln Tyr  Gly Gln Gly Pro Tyr  Gly Pro Gly
1895                 1900                 1905
Ala Ser  Gly Pro Gly Gln Tyr  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Ser
1910                 1915                 1920
Ala Ser  Ala Ala Ala Ala Ala  Gly Ser Gly Gln Gln  Gly Pro Gly
1925                 1930                 1935
Gln Tyr  Gly Pro Tyr Ala Ser  Ala Ala Ala Ala Ala  Gly Gln Tyr
1940                 1945                 1950
Gly Ser  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Tyr Gly Pro  Gly Gln Ser
1955                 1960                 1965
Gly Ser  Gly Gln Gln Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Tyr Ala Ser
1970                 1975                 1980
Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Tyr Gly Pro
1985                 1990                 1995
Gly Ser  Ser Ala Ala Ala Ala  Ala Gly Gln Tyr Gly  Tyr Gly Pro
2000                 2005                 2010
Gly Gln  Gln Gly Pro Tyr Gly  Pro Gly Ala Ser Gly  Gln Asn Gly
2015                 2020                 2025
Pro Gly  Ser Gly Gln Tyr Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Gly Gln
2030                 2035                 2040
Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Tyr Gly
2045                 2050                 2055
Pro Gly  Ala Ser Ala Ala Ala  Ala Ala Gly Gln Tyr  Gly Pro Gly
2060                 2065                 2070
Gln Gln  Gly Pro Gly Gln Tyr  Gly Pro Gly Ser Ser  Gly Pro Gly
2075                 2080                 2085
Gln Gln  Gly Pro Tyr Gly Pro  Gly Ser Ser Ala Ala  Ala Ala Ala
2090                 2095                 2100
Gly Gln  Tyr Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro Tyr Gly  Pro Gly Gln
2105                 2110                 2115
Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Gln Tyr Gln Gln Gly  Pro Gly Gln
2120                 2125                 2130
Gln Gly  Pro Tyr Gly Pro Gly  Ala Ser Gly Pro Gly  Gln Gln Gly
2135                 2140                 2145
Pro Tyr  Gly Pro Gly Ala Ser  Ala Ala Ala Ala Ala  Gly Pro Gly
2150                 2155                 2160
Gln Tyr  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Ser Ala Ser  Ala Ala Ala
2165                 2170                 2175
Ala Ala  Gly Gln Tyr Gly Ser  Gly Pro Gly Gln Tyr  Gly Pro Tyr
2180                 2185                 2190
Gly Pro  Gly Gln Ser Gly Pro  Gly Ser Gly Gln Gln  Gly Gln Gly
2195                 2200                 2205
Pro Tyr  Gly Pro Gly Ala Ser  Ala Ala Ala Ala Ala  Gly Gln Tyr
2210                 2215                 2220
Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Tyr Gly Pro Gly Gln  Ser Ala Ala
2225                 2230                 2235
Ala Ala  Ala Gly Pro Gly Ser  Gly Gln Tyr Gly Pro  Gly Ala Ser
2240                 2245                 2250
Gly Gln  Asn Gly Pro Gly Ser  Gly Gln Tyr Gly Pro  Gly Gln Gln
2255                 2260                 2265
Gly Pro  Gly Gln Ser Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Gln  Tyr Gln Gln
2270                 2275                 2280
Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Tyr Gly Pro Gly Ala  Ser Ala Ala
2285                 2290                 2295
Ala Ala  Ala Gly Gln Tyr Gly  Ser Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro
2300                 2305                 2310
Tyr Gly  Pro Gly Gln Ser Gly  Ser Gly Gln Gln Gly  Pro Gly Gln
2315                 2320                 2325
Gln Gly  Pro Tyr Ala Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Pro Gly Ser
2330                 2335                 2340
Gly Gln  Gln Gly Ser Ser Val  Asp Lys Leu Ala Ala  Ala Leu Glu
2345                 2350                 2355
His His  His His His His
2360
<210>  18
<211>  2375
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  PRT799
<400>  18
Met His His His His His His Ser Ser Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln
20                  25                  30
Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Gly Gln Tyr
35                  40                  45
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala
50                  55                  60
Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
65                  70                  75                  80
Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly
85                  90                  95
Pro Gly Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln
100                 105                 110
Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser
115                 120                 125
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
130                 135                 140
Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser
145                 150                 155                 160
Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala
165                 170                 175
Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro
180                 185                 190
Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly
195                 200                 205
Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly
210                 215                 220
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro
225                 230                 235                 240
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala
245                 250                 255
Gly Gln Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
260                 265                 270
Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln
275                 280                 285
Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln
290                 295                 300
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr
305                 310                 315                 320
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Gly
325                 330                 335
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala
340                 345                 350
Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln
355                 360                 365
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln
370                 375                 380
Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr
385                 390                 395                 400
Gly Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Tyr Gly
405                 410                 415
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln
420                 425                 430
Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser
435                 440                 445
Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala
450                 455                 460
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
465                 470                 475                 480
Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly
485                 490                 495
Gln Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser Gly Gln
500                 505                 510
Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala Ala
515                 520                 525
Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly
530                 535                 540
Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln
545                 550                 555                 560
Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro
565                 570                 575
Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly
580                 585                 590
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly
595                 600                 605
Pro Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Asn Gly Pro Gly Ser
610                 615                 620
Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln
625                 630                 635                 640
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
645                 650                 655
Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala
660                 665                 670
Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ala Ser Gly
675                 680                 685
Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Ser
690                 695                 700
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln
705                 710                 715                 720
Gly Pro Tyr Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Ser Gly Gln
725                 730                 735
Tyr Gly Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Tyr
740                 745                 750
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly
755                 760                 765
Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Tyr Ala Ser Ala Ala
770                 775                 780
Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr
785                 790                 795                 800
Gly Pro Gly Gln Ser Gly Ser Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly
805                 810                 815
Pro Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro
820                 825                 830
Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Tyr
835                 840                 845
Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser Gly Gln Asn
850                 855                 860
Gly Pro Gly Ser Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Gly Gln
865                 870                 875                 880
Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro
885                 890                 895
Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Gln Gln
900                 905                 910
Gly Pro Gly Gln Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly
915                 920                 925
Pro Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gln Tyr Gly
930                 935                 940
Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Gln Ser Ala Ala Ala Ala
945                 950                 955                 960
Ala Gly Gln Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro
965                 970                 975
Gly Ala Ser Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Tyr Gly Pro Gly Ala Ser
980                 985                 990
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Pro Gly  Gln Tyr Gly Pro Gly  Gln Gln Gly
995                 1000                 1005
Pro Ser  Ala Ser Ala Ala Ala  Ala Ala Gly Gln Tyr  Gly Ser Gly
1010                 1015                 1020
Pro Gly  Gln Tyr Gly Pro Tyr  Gly Pro Gly Gln Ser  Gly Pro Gly
1025                 1030                 1035
Ser Gly  Gln Gln Gly Gln Gly  Pro Tyr Gly Pro Gly  Ala Ser Ala
1040                 1045                 1050
Ala Ala  Ala Ala Gly Gln Tyr  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Tyr
1055                 1060                 1065
Gly Pro  Gly Gln Ser Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Pro  Gly Ser Gly
1070                 1075                 1080
Gln Tyr  Gly Pro Gly Ala Ser  Gly Gln Asn Gly Pro  Gly Ser Gly
1085                 1090                 1095
Gln Tyr  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Gly Gln Ser  Ala Ala Ala
1100                 1105                 1110
Ala Ala  Gly Gln Tyr Gln Gln  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Tyr
1115                 1120                 1125
Gly Pro  Gly Ala Ser Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Gln  Tyr Gly Ser
1130                 1135                 1140
Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Tyr Gly Pro Gly Gln  Ser Gly Ser
1145                 1150                 1155
Gly Gln  Gln Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro Tyr Ala  Ser Ala Ala
1160                 1165                 1170
Ala Ala  Ala Gly Pro Gly Ser  Gly Gln Gln Gly Pro  Gly Ala Ser
1175                 1180                 1185
Gly Gln  Gln Gly Pro Tyr Gly  Pro Gly Ala Ser Ala  Ala Ala Ala
1190                 1195                 1200
Ala Gly  Gln Asn Gly Pro Gly  Ser Gly Gln Gln Gly  Pro Gly Gln
1205                 1210                 1215
Ser Gly  Gln Tyr Gly Pro Gly  Gln Gln Gly Pro Gly  Gln Gln Gly
1220                 1225                 1230
Pro Gly  Ser Ser Ala Ala Ala  Ala Ala Gly Pro Gly  Gln Tyr Gly
1235                 1240                 1245
Pro Gly  Gln Gln Gly Pro Ser  Ala Ser Ala Ala Ala  Ala Ala Gly
1250                 1255                 1260
Pro Gly  Ser Gly Gln Gln Gly  Pro Gly Ala Ser Gly  Gln Tyr Gly
1265                 1270                 1275
Pro Gly  Gln Gln Gly Pro Gly  Gln Gln Gly Pro Gly  Ser Ser Ala
1280                 1285                 1290
Ala Ala  Ala Ala Gly Gln Tyr  Gly Ser Gly Pro Gly  Gln Gln Gly
1295                 1300                 1305
Pro Tyr  Gly Ser Ala Ala Ala  Ala Ala Gly Pro Gly  Ser Gly Gln
1310                 1315                 1320
Tyr Gly  Gln Gly Pro Tyr Gly  Pro Gly Ala Ser Gly  Pro Gly Gln
1325                 1330                 1335
Tyr Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Ser Ala Ser Ala  Ala Ala Ala
1340                 1345                 1350
Ala Gly  Ser Gly Gln Gln Gly  Pro Gly Gln Tyr Gly  Pro Tyr Ala
1355                 1360                 1365
Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Gln Tyr Gly Ser Gly  Pro Gly Gln
1370                 1375                 1380
Gln Gly  Pro Tyr Gly Pro Gly  Gln Ser Gly Ser Gly  Gln Gln Gly
1385                 1390                 1395
Pro Gly  Gln Gln Gly Pro Tyr  Ala Ser Ala Ala Ala  Ala Ala Gly
1400                 1405                 1410
Pro Gly  Gln Gln Gly Pro Tyr  Gly Pro Gly Ser Ser  Ala Ala Ala
1415                 1420                 1425
Ala Ala  Gly Gln Tyr Gly Tyr  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Tyr
1430                 1435                 1440
Gly Pro  Gly Ala Ser Gly Gln  Asn Gly Pro Gly Ser  Gly Gln Tyr
1445                 1450                 1455
Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Gly Gln Ser Ala Ala  Ala Ala Ala
1460                 1465                 1470
Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Tyr Gly Pro Gly Ala  Ser Ala Ala
1475                 1480                 1485
Ala Ala  Ala Gly Gln Tyr Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Gly Gln
1490                 1495                 1500
Tyr Gly  Pro Gly Ser Ser Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Tyr Gly
1505                 1510                 1515
Pro Gly  Ser Ser Ala Ala Ala  Ala Ala Gly Gln Tyr  Gly Pro Gly
1520                 1525                 1530
Gln Gln  Gly Pro Tyr Gly Pro  Gly Gln Ser Ala Ala  Ala Ala Ala
1535                 1540                 1545
Gly Gln  Tyr Gln Gln Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Tyr Gly Pro
1550                 1555                 1560
Gly Ala  Ser Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro Tyr Gly  Pro Gly Ala
1565                 1570                 1575
Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Pro Gly Gln Tyr Gly  Pro Gly Gln
1580                 1585                 1590
Gln Gly  Pro Ser Ala Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Gln Tyr Gly
1595                 1600                 1605
Ser Gly  Pro Gly Gln Tyr Gly  Pro Tyr Gly Pro Gly  Gln Ser Gly
1610                 1615                 1620
Pro Gly  Ser Gly Gln Gln Gly  Gln Gly Pro Tyr Gly  Pro Gly Ala
1625                 1630                 1635
Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Gln Tyr Gly Pro Gly  Gln Gln Gly
1640                 1645                 1650
Pro Tyr  Gly Pro Gly Gln Ser  Ala Ala Ala Ala Ala  Gly Pro Gly
1655                 1660                 1665
Ser Gly  Gln Tyr Gly Pro Gly  Ala Ser Gly Gln Asn  Gly Pro Gly
1670                 1675                 1680
Ser Gly  Gln Tyr Gly Pro Gly  Gln Gln Gly Pro Gly  Gln Ser Ala
1685                 1690                 1695
Ala Ala  Ala Ala Gly Gln Tyr  Gln Gln Gly Pro Gly  Gln Gln Gly
1700                 1705                 1710
Pro Tyr  Gly Pro Gly Ala Ser  Ala Ala Ala Ala Ala  Gly Gln Tyr
1715                 1720                 1725
Gly Ser  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Tyr Gly Pro  Gly Gln Ser
1730                 1735                 1740
Gly Ser  Gly Gln Gln Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Tyr Ala Ser
1745                 1750                 1755
Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Pro  Gly Ser Gly Gln Gln  Gly Pro Gly
1760                 1765                 1770
Ala Ser  Gly Gln Gln Gly Pro  Tyr Gly Pro Gly Ala  Ser Ala Ala
1775                 1780                 1785
Ala Ala  Ala Gly Gln Asn Gly  Pro Gly Ser Gly Gln  Gln Gly Pro
1790                 1795                 1800
Gly Gln  Ser Gly Gln Tyr Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Gly Gln
1805                 1810                 1815
Gln Gly  Pro Gly Ser Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Pro Gly Gln
1820                 1825                 1830
Tyr Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Ser Ala Ser Ala  Ala Ala Ala
1835                 1840                 1845
Ala Gly  Pro Gly Ser Gly Gln  Gln Gly Pro Gly Ala  Ser Gly Gln
1850                 1855                 1860
Tyr Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Gly Ser
1865                 1870                 1875
Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Gln Tyr Gly Ser Gly  Pro Gly Gln
1880                 1885                 1890
Gln Gly  Pro Tyr Gly Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Pro Gly Ser
1895                 1900                 1905
Gly Gln  Tyr Gly Gln Gly Pro  Tyr Gly Pro Gly Ala  Ser Gly Pro
1910                 1915                 1920
Gly Gln  Tyr Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro Ser Ala  Ser Ala Ala
1925                 1930                 1935
Ala Ala  Ala Gly Ser Gly Gln  Gln Gly Pro Gly Gln  Tyr Gly Pro
1940                 1945                 1950
Tyr Ala  Ser Ala Ala Ala Ala  Ala Gly Gln Tyr Gly  Ser Gly Pro
1955                 1960                 1965
Gly Gln  Gln Gly Pro Tyr Gly  Pro Gly Gln Ser Gly  Ser Gly Gln
1970                 1975                 1980
Gln Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Tyr Ala Ser Ala  Ala Ala Ala
1985                 1990                 1995
Ala Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Tyr Gly Pro Gly  Ser Ser Ala
2000                 2005                 2010
Ala Ala  Ala Ala Gly Gln Tyr  Gly Tyr Gly Pro Gly  Gln Gln Gly
2015                 2020                 2025
Pro Tyr  Gly Pro Gly Ala Ser  Gly Gln Asn Gly Pro  Gly Ser Gly
2030                 2035                 2040
Gln Tyr  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Gly Gln Ser  Ala Ala Ala
2045                 2050                 2055
Ala Ala  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Tyr Gly Pro  Gly Ala Ser
2060                 2065                 2070
Ala Ala  Ala Ala Ala Gly Gln  Tyr Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro
2075                 2080                 2085
Gly Gln  Tyr Gly Pro Gly Ser  Ser Gly Pro Gly Gln  Gln Gly Pro
2090                 2095                 2100
Tyr Gly  Pro Gly Ser Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Gln Tyr Gly
2105                 2110                 2115
Pro Gly  Gln Gln Gly Pro Tyr  Gly Pro Gly Gln Ser  Ala Ala Ala
2120                 2125                 2130
Ala Ala  Gly Gln Tyr Gln Gln  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Tyr
2135                 2140                 2145
Gly Pro  Gly Ala Ser Gly Pro  Gly Gln Gln Gly Pro  Tyr Gly Pro
2150                 2155                 2160
Gly Ala  Ser Ala Ala Ala Ala  Ala Gly Pro Gly Gln  Tyr Gly Pro
2165                 2170                 2175
Gly Gln  Gln Gly Pro Ser Ala  Ser Ala Ala Ala Ala  Ala Gly Gln
2180                 2185                 2190
Tyr Gly  Ser Gly Pro Gly Gln  Tyr Gly Pro Tyr Gly  Pro Gly Gln
2195                 2200                 2205
Ser Gly  Pro Gly Ser Gly Gln  Gln Gly Gln Gly Pro  Tyr Gly Pro
2210                 2215                 2220
Gly Ala  Ser Ala Ala Ala Ala  Ala Gly Gln Tyr Gly  Pro Gly Gln
2225                 2230                 2235
Gln Gly  Pro Tyr Gly Pro Gly  Gln Ser Ala Ala Ala  Ala Ala Gly
2240                 2245                 2250
Pro Gly  Ser Gly Gln Tyr Gly  Pro Gly Ala Ser Gly  Gln Asn Gly
2255                 2260                 2265
Pro Gly  Ser Gly Gln Tyr Gly  Pro Gly Gln Gln Gly  Pro Gly Gln
2270                 2275                 2280
Ser Ala  Ala Ala Ala Ala Gly  Gln Tyr Gln Gln Gly  Pro Gly Gln
2285                 2290                 2295
Gln Gly  Pro Tyr Gly Pro Gly  Ala Ser Ala Ala Ala  Ala Ala Gly
2300                 2305                 2310
Gln Tyr  Gly Ser Gly Pro Gly  Gln Gln Gly Pro Tyr  Gly Pro Gly
2315                 2320                 2325
Gln Ser  Gly Ser Gly Gln Gln  Gly Pro Gly Gln Gln  Gly Pro Tyr
2330                 2335                 2340
Ala Ser  Ala Ala Ala Ala Ala  Gly Pro Gly Ser Gly  Gln Gln Gly
2345                 2350                 2355
Ser Ser  Val Asp Lys Leu Ala  Ala Ala Leu Glu His  His His His
2360                 2365                 2370
His His
2375
<---