СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ДОЖДЕВЫХ ЧЕРВЕЙ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ЗАРАЖЕНИЯ ИХ ЯЙЦАМИ ГЕЛЬМИНТОВ
METHOD OF PREPARING EARTHWORMS FOR INVESTIGATION OF INFECTION OF HELMINTH EGGS THEREOF

Изобретение относится к биологии, микробиологии, в частности к паразитологии, и может быть применено для фундаментальных исследований возможности взаимодействия тестируемых веществ, биологических объектов, прочих испытуемых субстанций с организмом дождевых червей (Lumbricina).
Известен способ подготовки дождевых червей для исследования заражения их яйцами гельминтов, включающий скармливание им яиц гельминтов через рот при помощи пастеровской пипетки (диаметр носика = 1 мм) (Боровкова A.M. Цикл развития возбудителя томинксоза серебристо-черных лисиц, эпизоотология и профилактика этого заболевания. Дисс.… канд.биол.наук. М., 1947 г. - С. 31-33). Недостатком данного способа является его трудновыполнимость, т.к. диаметр носика значительно больше ротового отверстия дождевого червя. При таком контакте рвется глотка и пищевод экспериментальных дождевых червей. Кроме этого недостатка в данном способе не упоминается использование наркоза для обездвиживания дождевых червей. Рот дождевых червей постоянно сокращается, это способствует попаданию пипеткой в пищевод, вследствие чего происходит разрыв ротовой полости. В дальнейшем это приводит в гибели червей.
Техническим результатом предлагаемого изобретения является сохранение тестируемого материала живым.
Технический результат достигается тем, что в способе подготовки дождевых червей для исследования заражения их яйцами гельминтов, включающем пероральное введение исследуемого вещества дождевым червям, производят обездвижение червей в 1% растворе хлоралгидрата, после чего в ротовую полость вводят с помощью хроматографического микрошприца с тупым концом предварительно приготовленную смесь крахмального геля с яйцами гельминтов.
При использовании концентрации хлоралгидрата для наркоза, меньшей чем 1%, эффект был значительно меньше. При длительном нахождении в растворе концентрацией 0,1% хлоралгидрата, в течение 2-х часов, для достижения наркотического состояния, черви в дальнейшем погибали. При использовании концентрации хлоралгидрата для наркоза, большей чем 1,5-2%, не все исследуемые дождевые черви выходили из наркотического состояния и в дальнейшем погибали.
Способ осуществляется следующим образом.
Способ предусматривает подготовку крахмального геля (с концентрацией 1% крахмала). 1,0 г крахмала растворяют в 100 мл воды, смесь, периодически помешивая, нагревают на водяной бане, пока она не станет прозрачной. Для приготовления дозированной порции яиц для заражения берут нужный объем крахмального геля и добавляют необходимое количество яиц гельминтов для достижения их расчетной концентрации. Полученную смесь перемешивают до образования равномерной взвеси. Использование крахмального геля позволяет точно дозировать количество яиц для заражения благодаря тому, что обеспечивается равномерность суспензии. Кроме того, в геле устраняется эффект адгезии яиц, существенно затрудняющий манипуляции с ними, например в случае использования воды или физиологического раствора в качестве дисперсионной среды.
Способ предусматривает наркотизацию червей. В качестве наркотизирующего средства используется раствор хлоралгидрата в концентрации 1%. Червей помещают в наркотизирующий раствор и наблюдают за их двигательной активностью. Время экспозиции определяется по прекращению движений червя и расслаблению его мускулатуры, оно составляет около 10 минут. Обездвиживание червей обеспечивает удобное проведение манипуляций и существенно уменьшает их инвазивность. После манипуляций червей отмывают в течение 10 минут в чистой отстоянной водопроводной воде. В результате удается добиться более точного и аккуратного выполнения эксперимента, при этом подопытные черви остаются живыми.
В предлагаемом способе заражение производится при помощи хроматографического микрошприца с тупым концом. Из крахмального геля, содержащего яйца гельминтов, в шприц набирают от 5 до 8 микролитров (мкл) и вводят эту смесь через ротовое отверстие предварительно наркотизированному дождевому червю. Использование микрошприца позволяет точно отмерить дозу введения, используя при этом малые объемы, сопоставимые с вместимостью начальных отделов пищеварительной трубки червя. Благодаря малому диаметру (менее 0,5 мм) иглы шприца инъекция проходит атравматично, органы дождевого червя не повреждаются.
Предлагаемый способ позволяет аккуратно и нетравматично вводить в пищеварительную систему дождевых червей испытуемые вещества или объекты, соблюдая их точную дозировку. При этом подопытные черви остаются живыми и могут быть использованы для дальнейших наблюдений.