СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ СТАФИЛОКОККОВ
METHOD FOR RECOVERING PURE STAPHYLOCOCCUS CULTURE

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам выделения чистой культуры микроорганизмов из патологического материала.
Известен способ выделения чистой культуры стафилококков путем высева содержимого патологического биоматериала (гной, кровь и т.п.) на чашку Петри с мясопептонным молочно-солевым агаром с 7,5% раствором поваренной соли и 10% молочной сыворотки (Матвеев К.И. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней. М.: Медицина, 1973. - С.354-355.).
В упомянутом способе отсутствует предварительная обработка патологического материала для уничтожения посторонней микрофлоры (протея, синегнойной и кишечной палочек, стрептококков и т.п.), которая в определенных условиях может подавлять рост и развитие стафилококков и загрязнять культуру.
Известен способ выделения чистой культуры стафилококков на скошенный в пробирках или в чашках Петри мясопептонный или молочно-солевой агар с добавлением 5% кроличьей крови, обеспечивающий прорастание стафилококков на поверхности агара (Коротяев А.И., Бабичев С.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. Учебник для вузов. - СПб, 1998. - с.334-335).
Недостатком способа является отсутствие средств подавления посторонней микрофлоры, необходимость трудоемкого и затратного приготовления и использования мясопептонного или молочно-солевого агара с добавлением 5% кроличьей крови, неравномерный и слабый рост стафилококков и прорастание на поверхности агара посторонней микрофлоры.
Целью предлагаемого изобретения является ускоренное выделение чистой культуры стафилококков.
Предлагается способ выделения чистой культуры стафилококков путем обработки суспензии патологического биоматериала, обсемененного стафилококками и другими микроорганизмами, сначала 3-5%-ной лимонной кислотой в течение 20-30 минут при 10-20°C, затем 3%-ной янтарной кислотой для подавления посторонней микрофлоры в течение 20-30 минут при 10-20°C с последующей нейтрализацией суспензии 5-10%-ным раствором аммиака до pH 7,5-7,6, отстаиванием в течение 20-30 минут, декантацией надосадочной жидкости и высевом содержимого осадка в жидкую питательную среду или на агаровую среду с pH 7,5-7,6.
Технический результат способа - обильный рост чистой культуры стафилококков через 24-36 часов в жидкой питательной среде или на всей поверхности агаровой среды и отсутствие роста посторонней микрофлоры.
Пример осуществления способа
Суспензию из гомогенизированного патологического биоматериала (измельченных кусочков пораженных органов, гноя, крови), полученного от больных животных, инфицированных стафилококками, в объеме 100 мл помещают в стеклянную емкость, вносят лимонную кислоту из расчета 3-5% ее содержания в суспензии, выдерживают в течение 20-30 минут при 10-20°C, затем добавляют 3-4% янтарной кислоты и выдерживают в течение 20-30 минут при температуре 10-20°C. После обработки суспензии кислотами ее нейтрализуют 5-10%-ным раствором аммиака, доводят pH до 7,5-7,6, отстаивают суспензию в течение 20-30 минут, декантируют надосадочную жидкость. Содержимое осадка высевают в жидкую питательную среду, содержащую в 1 л дистиллированной воды 8,0 г лимонной кислоты, 2,0 г цитрата аммония, 3,0 г янтарной кислоты, 2,0 г аспарагина или глицина, 5,0 г фосфорнокислого калия двухзамещенного, 0,5 г сернокислого магния, 0,3 г сернокислого цинка, 3,0 г фосфорнокислого натрия двухзамещенного, 5,0-6,0 г хлористого натрия, 0,1 г сернокислого железа и 40-50 мл глицерина. Реакция среды доводится 5-10%-ным раствором аммиака до pH 7,5-7,6. Питательная среда после приготовления подвергается автоклавированию. Содержимое осадка также можно высевать на поверхность агаровой питательной среды, приготовленной на основе приведенного состава жидкой среды. В жидкую питательную среду упомянутого состава, разведенную в соотношении 1:1 дистиллированной водой, добавляют 2,5 г агара на 100 мл жидкой питательной среды и доводят содержание хлористого натрия до 5-6%. Перед высевом питательную среду подвергают автоклавированию. Присутствие в питательной среде наряду с янтарной кислотой хлористого натрия создает условия, благоприятные для культуры стафилококков, и подавляет рост посторонней микрофлоры. Обильный рост стафилококков проявляется через 24-36 часов в толще жидкой питательной среды и на всей поверхности агаровой среды.
В научно-технической и патентной литературе не обнаружено технических решений, аналогичных заявляемому способу, поэтому способ удовлетворяет условию патентоспособности «новизна».
Технический результат получен благодаря разработанному режиму предварительной обработки патологического биоматериала, а также составу питательной среды для высева стафилококков, полученной как в жидком виде, так и с добавлением агара, сочетание заявляемых признаков удовлетворяет условию патентоспособности «изобретательский уровень».
Предлагаемый способ выделения чистой культуры стафилококков может применяться в ветеринарной медицине и животноводстве в целях диагностики инфекционных болезней животных, вызываемых стафилококками, а также для получения вакцин для профилактики и лечения этих болезней, то есть способ удовлетворяет условию патентоспособности «промышленная применимость».
Таблица
Результаты исследования способа выделения чистой культуры стафилококков
№ п/п
Способ и средства подавления посторонней микрофлоры в суспензии патологического материала
Рост микроорганизмов при высеве на агаровую питательную среду с глицерином и 5-6% хлористого натрия
Сальмонеллы, 100 тыс. в 1 мл суспензии
Кишечная палочка, 100 тыс. в 1 мл суспензии
Стафилококки, 100 тыс. в 1 мл суспензии
1
2
3
4
5
1.
3%-ная лимонная кислота в течение 20-30 минут, а затем 3%-ная янтарная кислота 20-30 минут
Рост отсутствует
Рост отсутствует
Обильный рост на поверхности агара через 24-36 часов
2.
5%-ная лимонная кислота в течение 20-30 минут, а затем 4%-ная янтарная кислота
Рост отсутствует
Рост отсутствует
Обильный рост на поверхности агара через 24-36 часов