Определение lgE-антител к различным аллергенам в крови детей от родителей, болеющих поллинозом

Медицинская Иммунология 2003, Т. 5, № 1-2, стр 113-116 © 2003, СПб РО РААКИ

Краткие сообщения

ОПРВДЕЛЕНИЕ 1дЕ-АНТИТЕЛ К РАЗЛИЧНЫМ АЛЛЕРГЕНАМ В КРОВИ ДЕТЕЙ ОТ РОДИТЕЛЕЙ, БОЛЕЮЩИХ П0ЛЛИН030М

Мокроносова М.А., Сергеев А.В., Кочетова Ю.И.

Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, г. Москва

Резюме. Формирование и развитие сенсибилизации у детей к различным аллергенам является результатом воздействия генетических и экологических факторов. Целью данного исследования являлось выявление IgE-антител (IgE-Ат) к ингаляционным и пищевым аллергенам у детей с аллергическими заболеваниями от родителей, болеющих поллинозом. Было обследовано 20 детей в возрасте от 1 до 4 лет. Проводилось анкетирование родителей и определение IgE-Ат к аллергенам с применением педиатрической панели набора Poly Check (Milenia Biotec, Германия). У 18 из 20 обследованных были выявлены IgE-Ат к одному или нескольким аллергенам. Было выявлено, что индукция IgE-Ат в обследованной группе детей наиболее выражена к аллергенам березы, арахиса, эпидермиса домашних животных и пироглифидных клещей. У детей, рожденных от родителей, страдающих поллинозом, выявлено раннее формирование сенсибилизации как к аллергенам пыльцы, так и к аллергенам фруктов и овощей. Метод определения IgE-Ат с использованием тест-системы PolyCheck является высокочувствительным, легко воспроизводимым, и не требует большого количества крови, что особенно важно в педиатрической практике.

Ключевые слова: поллиноз, синдром оральной аллергии, IgE-антитела.

Mokronosova М.A., Sergeev A.V., Kotchetova Yu.I.

DETERMINATION OF IGE-ANTIBODIES AGAINST VARIOUS ANTIGENS IN BLOOD OF CHILDREN BORN TO PARENTS WITH HAY FEVER

Abstract. Genetic and environmental factors influence the sensitization to various allergens in children. The aim of the present study was the determination of IgE- antibodies to inhalant and food allergens in children with allergic diseases, whose parents suffer from hay fever. 20 children 1-4 years of age were observed. The interrogation of parents and determination of IgE- antibodies to allergens were carried out using the pediatric panel PolyCheck

Введение

На формирование и развитие сенсибилизации у детей к различным аллергенам влияют генетические и экологические факторы [1]. Одним из наиболее значимых факторов риска по развитию заболевания

Адрес для переписки:

117420, г. Москва, Профсоюзная ул., д. 43, к.1, кв. 100, Мокроносовой М.А.

Тел.:(095)917-08-91.

Факс: (095) 917-20-26.

E-mail: mmokronosova @mccinet.ru

ИЗ

атопического генеза считается наличие хотя бы у одного из родителей клинических проявлений атопии [5,7]. Кроме того, на возникновение ранних симптомов заболевания влияет экспозиция аллергенов окружающей среды в первые полгода жизни ребенка [2,4]. Существует закономерная зависимость между месяцем рождения ребенка и развитием полли-ноза: дети, рожденные в месяцы палинации растений, заболевают поллинозом значительно раньше [3]. Известно, что в раннем детском возрасте наиболее часто наблюдают сенсибилизацию к пищевым аллергенам [9]. В клинической картине доминируют

симптомы с поражением кожного покрова. Появление же симптомов поллиноза типично для детей старшего возраста или взрослых. Для больных, страдающих поллинозом, характерен синдром оральной аллергии (СОА) - острая реакция на продукты растительного происхождения, обусловленная зудом слизистой оболочки полости рта. Считается, что первично развивается сенсибилизация организма к аэроаллергенам, а явления СОА - это результат перекрестной реактивности растительных пищевых и пыльцевых аллергенов. Влияют ли пищевые аллергены растительного происхождения на формирование сенсибилизации к пыльце в раннем возрасте -это до сих пор неясный вопрос. Будут ли реагировать дети, родившиеся от атопических родителей, на тот же спектр аллергенов - регулярно дискутируемый аспект периодической литературы [6, 8].

Целью данного исследования являлось выявление ^Е-антител (^Е-Ат) к основному спектру ингаляционных и пищевых аллергенов в сыворотке крови детей от родителей, болеющих поллинозом.

Материалы и методы

Пациенты. Было обследовано 20 детей в возрасте от 1 до 4 лет, (средний возраст составил 3 года) - 8 (40%) девочек и 12 (60%) мальчиков. Критериями отбора пациентов служили наличие клиники поллиноза у одного из родителей, а также различные проявления аллергических заболеваний у детей (рино-рея, приступы чихания, кожные высыпания, зуд кожи, зуд слизистых оболочек верхних дыхательных путей и конъюнктив). Исследование проводили при обязательном согласии родителей пациентов.

Анкетирование. Для сбора анамнеза проводили анкетирование родителей по специально разработанной анкете. Основное внимание уделяли клиническим симптомам, как у детей, так и у их родителей. Критериями для отбора детей в группу исследования являлись наличие симптомов заболевания атопического генеза (диагностические критерии атопического дерматита по НапШп, уртикарные высыпания, появляющиеся непосредственно после употребления в пищу фруктов и овощей, ринорея, слезотечение, зуд слизистых оболочек верхних дыхательных путей и полости рта, приступы чихания, эпизоды удушья) и наличие сенсибилизации к пыльцевым аллергенам у одного из родителей, подтвержденной выраженными клиническими симптомами поллиноза, положительными кожными пробами и наличием ^Е-Ат к пыльцевым аллергенам.

Определение ^Е-Ат. У всех обследованных детей определяли специфические ^Е-Ат к ингаляционным и пищевым аллергенам арахиса, белка молока, яичного белка, яичного желтка, картофеля, моркови, трески, яблока, сои, пшеницы, пыльцы березы, пыльцы тимофеевки, пыльцы амброзии,

Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, эпителия собаки, эпителия кошки, эпителия лошади, Aspergillus fumigatus и Cladosporiun herbarum. Для этого использовали модификацию иммунофер-ментного анализа с применением педиатрической панели набора Poly Check (Milenia Biotec, Германия).

Каждую мембрану с аллергенами смачивали четырехкратно 1 мл фосфатного буферного раствором с pH 7,4. Остатки буферного раствора через несколько секунд тщательно удаляли, на мембрану наносили 400 мкл сыворотки крови и инкубировали в течение 45 минут на горизонтальном шейкере при скорости 120 оборотов в минуту. Затем отмывали мембрану дважды буферным раствором, добавляли 400 мкл меченных лигандом моноклональных анта-IgE-AT и инкубировали 45 минут на шейкере. После чего проводили отмывку мембраны, затем наносили на мембрану 400 мкл меченных ферментом антилигандов и инкубировали на шейкере 20 минут, вновь проводили отмывку, добавляли 400 мкл раствора субстрата и инкубировали в течение 20 минут на шейкере в темноте. После этого вновь отмывали мембрану, давали ей высохнуть, и подсчитывали содержание IgE-Ат в сыворотке крови (в кЕ/л) на персональном компьютере, с использованием сканера и программного обеспечения, разработанного производителем. Интерпретацию полученных результатов проводили в соответствии с полуколичественной системой в классах реактивности, соответствующих диапазонам содержания IgE в сыворотке (в кЕ/л).

Результаты и обсуждение

Проведенное анкетирование 20 наблюдаемых детей выявило начало симптомов заболевания атопического генеза. У 7 (35%) опрошенных пациентов наблюдали проявления поллиноза, характеризующиеся ринореей, пароксизмальными приступами чихания и слезотечением в весенне-летний период. На ощущение зуда в полости рта и губ при употреблении арахиса жаловались 3 пациента, яблок и моркови - 2, лесных орехов - 3, меда - 2, цитрусовых -3 пациента. 8 детей (40%) предъявляли жалобы на круглогодично присутствующие заложенность носа, зуд крыльев носа, приступы чихания и ринорею в утренние часы. Диагностические критерии атопического дерматита по Hanifin были определены у 10% детей. Родители 3-х (15%) пациентов описывали эпизоды острых аллергических реакций на пищевые продукты, проявляющиеся по типу уртикарных высыпаний на коже лица и туловища.

На основании анкетирования, осмотра и подтверждения предполагаемой сенсибилизации методом выявления IgE-Ат у обследуемых детей были диагностированы аллергический круглогодичный ринит, атопический дерматит, острая крапивница и полли-ноз. У 7 (35 %) детей наблюдали сочетание двух или трех нозологических форм.

У 18 из 20 обследованных детей в сыворотке крови были выявлены ^Е-Ат к одному или нескольким аллергенам, причем только у 7 больных выявляли ^Е-Ат к одному из тестируемых аллергенов, у остальных, как правило, наблюдали наличие сенсибилизации сразу к нескольким аллергенам. Результаты тестирования представлены в таблице 1. Наиболее часто (у 14 из 18) обнаруживали ^Е-Ат к клещам домашней пыли и, преимущественно, к Б. [Легопу.шпш. Высокий уровень сенсибилизации был подтвержден наличием ^Е-Ат к эпидермису кошки и собаки у 7 (35%) детей.

Аллергию к пыльцевым аллергенам подтвердили у 7 (35 %) детей. Причем наиболее часто у 6 из 18

(33%)высокий уровень ^Е-Ат определяли к пыльце березы, у2 из 18(11%) случаев к пыльце тимофеевки, и только у 1 больного к пыльце амброзии. Высокий уровень ^Е-Ат выявили к 3 пищевым аллергенам (арахис, треска, яблоко). Остальные пищевые аллергены не вызывали выраженной индукции ^Е-Ат, и их выявляли редко.

Как правило, клинические симптомы сопровождали положительные тесты на наличие ^Е-Ат к предполагаемым аллергенам. Однако проявления СОА к овощам и фруктам часто не подтверждалось выявлением ^Е-Ат к соответствующим аллергенам. Симптомам поллиноза сопутствовали положитель-

Табл. 1. ВЫЯВЛЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ІдЕ-АНТИТЕЛ

Аллерген Реакции 1 -2 классов

Арахис 15 10 25

Белок молока 15 0 15

Яйцо (белок) 15 0 15

Яйцо (желток) 5 0 5

Картофель 5 0 5

Морковь 5 0 5

Треска 0 10 10

Яблоко 15 5 20

Соя 5 0 5

Пшеница 0 0 0

Пыльца березы 15 15 30

Пыльца тимофеевки 5 5 10

Пыльца амброзии 5 0 0

D. pteronyssinus 65 0 65

D. farinae 10 0 10

Эпителий собаки 25 10 35

Эпителий кошки 0 25 25

Эпителий лошади 0 5 5

Aspergillus fumigatus 0 0 0

Cladosporiun herbarum 5 0 5

Табл.2. СЕНСИБИЛИЗАЦИЯ К АЛЛЕРГЕНАМ ИЗ АРАХИСА

Пациент Возраст

С. М. 4 нет береза (5) тимофеевка (1) амброзия (4) 4

К. К. 2 нет береза (5) 1

с. Д. 2 Да береза (3) 1

Б. А. 5 да береза(1) 1

К. И. 4 да береза (2) 4

ные реакции с пыльцевыми аллергенами во всех 7 случаях.

У трех детей с отягощенной наследственностью по поллинозу выявляли ^Е-Ат к яблоку, но не к пыльце березы. При этом родители этих детей не предполагали, что употребление яблок их детьми вызывает проявления аллергии. Этот факт, в какой-то степени может опровергнуть утверждение о том, что первична аллергия к пыльце и реакции на яблоки связаны с перекрестной реактивностью пыльцевых и фруктовых аллергенов.

В таблице 2 представлены результаты обследования детей на предмет аллергии к арахису. Как видно, у 5 из 18 детей выявлен достаточно высокий уровень ^Е-Ат к аллергену арахиса. Все эти дети наблюдались с клиническими проявлениями поллино-за и были сенсибилизированы преимущественно к березе. Только трое родителей отметили аллергическую реакцию на употребление арахиса. У одного ребенка с высоким уровнем ^Е-Ат реакций при употреблении арахиса не отмечали.

Выводы

1. В обследованной группе детей, рожденных от родителей, страдающих поллинозом, выявлены ^Е-Ат к широкому спектру аллергенов как растительного, так и животного происхождения

2. В обследованной группе детей, рожденных от родителей, страдающих поллинозом, выявлено раннее формирование сенсибилизации как к аллергенам пыльцы, так и к аллергенам фруктов и овощей.

3. Выявлено, что индукция ^Е-Ат в обследованной группе детей наиболее выражена к аллергенам березы, арахиса, эпидермиса домашних животных и пироглифидных клещей.

4. Метод определения ^Е-Ат с использованием тест-системы Ро1уСкеск отличает высокая чувствительность, легкая воспроизводимость, затрата не-

болыпого количества крови, что особенно важно в педиатрической практике.

Список литературы

1. Bonini S., Magrini L., Rotiroli G. Genetic and environmental factors in the changing incidence of allergy // Allergy. - 1994. - Vol.49. - P.6-14.

2. Borres M.P., Odelram H., Irander К et al. Peripheral blood eosinophilia in infants at 3 months of age is associated with subsequent development of atopic disease in early childhood // J Allergy and Clin. Immunol. - 1995. - Vol.95. - №3. - P.694-698.

3. March D.G., Huang S.K. Molecular genetics of human immune responsiveness to pollen allergens // Clin. Exp. Allergy. - 1991. - Vol.21 (Suppl.). - P.1469-1473.

4. Patino S.M., Martinez F.D. Interactions between genes and environment in the development of asthma / / Allergy - 2001. - Vol. 56. - №4. - P.279 - 286.

5. Ronmark E., Lundback B., Jonsson E. Different pattern of risk factors for atopic and nonatopic asthma among children - report from the Obstructive Lung Disease in Northern Sweden Study // Allergy. - 1999. - Vol. 54. - №9. - P.926 - 935.

6. Sicherer S., Furlong Т., Maes H. et al. Genetics of peanut allergy: A twin study // J Allergy and Clin. Immunol. - 2000. - Vol.106. - №1. - P. 53-56.

7. Tariq S.М., Matthews S.М., Hakim E.A. The prevalence of and risk factors for atopy in early childhood: A whole population birth cohort study //J Allergy and Clin. Immunol. - 1998. - Vol.105. - №2. -P. 587-593.

8. Wjst M„ Dold S. Genes, factor X, and allergens: what causes allergic diseases? // Allergy. - 1999. -Vol.54, №7. - P.757-759.

9. Zeiger R.S. Prevention of food allergy in infants and children // Immunol, and Allergy Clinics N Am. -1999. - Vol.19, №3. - P.619-646.

поступила в редакцию 22.04.2002 принята к печати 14.10.2002