Липосомы в направленной доставке противоопухолевых препаратов

УДК 577.352.2:615.277.3.015.44

O.I. Sakvina, A.Yu. Baryshnikov

THE POTENTIAL OF DRUG-CARRYING IMMUNOLIPOSOMES AS ANTICANCER AGENTS

N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow

ABSTRACT

In this revieu we attempt to show how optimize delivery of chemotherapeutic agents to solid tumor. It is nidely accepted that the accumulation of liposomes in tumors is a result of «leaky» microvascularization. Recent data suggest the window for optimal drug delivery should be 70 — 180 nm. The drug delivery increases about 6-fold when liposomes are conjugated with monoclonal antibody in compare to sterically stabilized liposomes. These immunoliposomes were shown to endocytose by tumor cells. The data accumulates that immunoliposomes prepared by conjugated with single strand antibody are highly specific and less immunogenic toward antigen producing tumor cells.

Key words: liposome, immunoliposome, targeted anticancer drug delivery.

О.И. Саквина, А.Ю. Барышников

ЛИПОСОМЫ В НАПРАВЛЕННОЙ ДОСТАВКЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ

ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН, Москва

РЕЗЮМЕ

Обзор современного состояния проблемы направленной доставки лекарственных препаратов в опухоль. Особенности неоваскуляризации опухолевой ткани позволяют селективно накапливаться в ней наночастицам размером 70 — 180 нм. Моноклональные антитела в 6 раз увеличивают проникновение иммунолипосом в опухолевые клетки по сравнению с обычными стерически стабилизированными липосомами. Терапевтический эффект достигается не за счет преимущественного попадания иммунолипосом в опухоль, а за счет эндоцитоза липосом, конъюгированных с моноклональными антителами. Перспективы разработки иммунолипосом заключаются в использовании одноцепочных антител, которые не иммуногенны для организма человека..

Ключевые слова: липосомы, иммунолипосомы, направленная доставка, антитела.

ВВЕДЕНИЕ

Низкая избирательность противоопухолевого действия цитотоксических препаратов приводит к дозозависимому эффекту, ограничивающему их применение в клинике. Чем больше доза препарата, тем выше терапевтический эффект и тем больше токсических проявлений [4]. Противоопухолевые препараты отличаются от других лекарств высокой агрессивностью, химической нестабильностью во внешней среде и сильным местнораздражающим действием. В связи с этим большинство препаратов выпускаются в виде жидких или лиофилизированных растворов и применяются в виде внутривенных инфузий. Эти свойства могут меняться с изменением лекарственной формы препарата и путей его введения. Терапевтические подходы к совершенствованию химиотерапии рака сфокусированы на разработке новых систем доставки лекарств непосредственно к злокачественной клетке без повреждения нормальной ткани.

ЛИПОСОМЫ

Более 30 лет изучаются липосомы как средство доставки противоопухолевых препаратов [3; 4; 8]. Липосомы представляют собой шарообразную фосфолипидную мембрану, содержащую внутри воду. Они делятся на 3 основных типа на основе их размера и количества слоев. Многослойные везикулы содержат несколько липидных бислоев, отделенных друг от друга водным пространством, и отличаются гетерогенностью в размере, который часто колеблется от нескольких сотен до тысяч нанометров в диаметре. С другой стороны, как малые, так и большие однослойные липосомы содержат 1 липидный бислой, окружающий водную фазу. Малые однослойные липосомы имеют размер менее 100 нм, а большие — больше 100 нм в диаметре. Гидрофильное лекарство можно включить в водную фазу, а гидрофобное — в липидный бислой [4; 11].

Включение лекарства в липосомы может изменить фар-

макокинетику и биораспределение препарата, приводящее к повышению эффективности противоопухолевой терапии и снижению токсичности [4; 51; 73]. Кроме того, липосомы преодолевают множественную лекарственную устойчивость (MDR) [66].

Введенный внутривенно свободный лекарственный препарат быстро разводится в большом объеме крови, его содержание в плазме снижается, и с опухолевыми клетками контактирует лекарство на низком уровне. Напротив, липосомы способны доставить в опухоль большое количество лекарства, достаточное для эффективного противоопухолевого действия.

Первым липосомальным препаратом, хорошо исследованным в эксперименте, стал доксорубицин. Рядом авторов проведено исследование токсичности доксорубицина, введенного в свободной и липосомальных формах, изучено его накопление в сыворотке крови, печени, сердечной мышце, костном мозге, костях, почках. Была обнаружена более благоприятная фармакокинетика липосомального доксорубици-на по сравнению со свободным доксорубицином. Показано, что содержание липосомальной формы доксорубицина в крови спустя 5 ч после его введения превышает содержание свободного в 1,5 - 2 раза. Площадь под кривой после введения 50 мг/м2 доксорубицина, инкапсулированного в липосомы, была в 100 раз больше, чем свободного доксорубицина. Клиренс преапарата был снижен в 50 раз [21].

Первым липосомальным препаратом, нашедшим применение в клинике, также является липосомальный доксо-рубицин, который в различных странах, включая Россию, применяется при саркоме Капоши, раке молочной железы, яичников, эндометрия [21; 26; 45; 56; 65; 66; 81].

Введенные в кровоток липосомы быстро захватываются фагоцитирующими клетками ретикулоэндотелиальной системы. В печени они попадают в клетки Купфера, в селезенке фагоцитируются макрофагами. Для преодоления быстрого захвата фагоцитами липосом был предложен метод пегилирования, т.е. присоединения к поверхности липосом полиэтиленгликоля, который создает повышенное осмотическое давление и тем самым препятствует контакту липосом с фагоцитирующими клетками. Период полувыведения таких липосом у грызунов увеличился с 15 ч до 24 ч и больше 45 ч у человека.

НЕОАНГИОГЕНЕЗ КАК ОСНОВА ДЛЯ СЕЛЕКТИВНОЙ ДОСТАВКИ В ОПУХОЛЬ НАНОПРЕПАРАТОВ

Накопление липосом в опухолевой ткани зависит от проницаемости ее кровеносных сосудов [9; 52; 66]. Неоангиогенез в опухоли имеет ряд особенностей [2; 7; 33]. Эндотелиальные клетки опухолевых сосудов пролиферируют в 30 - 40 раз быстрее, чем эндотелиальные клетки сосудов нормальных тканей. Из-за высоких потребностей в кислороде, питательных веществах, газовом обмене и удалении продуктов метаболизма растущие опухоли создают хаотически расположенные капилляры с очень высокой проницаемостью. Для капилляров солидных опухолей характерны большие поры между эндотелиальными клетками (380 - 780 нм, до 1,2 мкм в зависимости от типа опухоли), что приводит к повышенной проницаемости опухолевых капилляров по сравнению с капиллярами в нормальных

тканях (последние обнаруживают функциональную проницаемость наночастиц размером около 7 нм). Эта очевидная разница в проницаемости кровеносных сосудов нормальных тканей и опухолей является положительным фактором, создающим возможность нацеливания на опухоли липосом, которые не проникают через эндотелиальный барьер в здоровых тканях, но эффективно проникают в опухоль. Разные участки одной и той же опухоли могут отличаться по скорости и степени проникновения липосом, что создает барьер для эффективной химиотерапии. Хаотично расположенные опухолевые капилляры в областях низкого кровоснабжения создают другой барьер на пути однородной доставки лекарственных препаратов в опухолевые клетки.

Периферия опухоли — самая васкуляризованная область, тогда как центр опухоли обычно плохо васкуляризован и потому некротизирован. Опухолевые клетки выживают на расстоянии примерно 110 мкм от кровеносного сосуда. Для того, чтобы все опухолевые клетки получили достаточное количество препарата, молекулы препарата или загруженные препаратом липосомы должны пройти через интерстициальное пространство опухоли к отдаленным клеткам. Другими словами, липосомы способны преодолевать вышеуказанные барьеры и избирательно накапливаться в опухоли. Обычный препарат одинаково попадает в нормальную и опухолевую ткани, и нет избирательного накопления лекарства в опухоли. Следует учесть, что противоопухолевые препараты — яды, они разрушают как опухолевые, так и нормальные ткани. Уровень накопления липосом в опухоли зависит от их размера: частицы диаметром более 300 нм в опухоль не попадают [1].

МИШЕНИ ДЛЯ НАПРАВЛЕННОЙ ДОСТАВКИ ПРЕПАРАТОВ

Поры в сосудах обеспечивают пассивную доставку препарата в опухоль. Активную доставку в опухолевую клетку обеспечивают прикрепленные к ним моноклональные антитела или лиганды, которые связываются с опухолевыми клетками и не взаимодействуют с нормальным [5; 38; 51].

Новым этапом в развитии липосомальной технологии стал метод присоединения специфических лиганд к концу ПЭГ. Благодаря этому методу стало возможным селективно доставлять препарат непосредственно к опухолевой клетке, т.е. сделать любой препарат таргентным [51]. В качестве лиганд используют моноклональные антитела, одноцепочные антитела, пенетрирующие в клетку пептиды [12; 13; 30; 34; 43; 69]. Стерически стабилизированные иммунолипосомы оказывали большее цитотоксическое действие на специфические клетки-мишени, чем обычные липосомы [10; 11; 51; 76]. Иммунолипосомы несут больше молекул лекарства, чем моноклональные антитела, конъюгированные с препаратом. Так, например, к одной молекуле антитела можно присоединить 10 молекул лекарства, тогда как в иммунолипосомы можно включить несколько сотен таких молекул [10; 18; 22; 46]. Это повышает терапевтическую эффективность, снижает побочные эффекты, ассоциированные с антителами, и уменьшает стоимость лечения.

Мишенью действия иммунолипосом могут быть различные поверхностные мембранные антигены, хорошо представленные на опухолевых клетках вновь образующихся сосудов в опухоли и отсутствующие на нормальных

клетках. В настоящее время в мире в клинических протоколах испытываются около 150 моноклональных антител против различных опухолеассоциированных антигенов [61]. Некоторые иммуноконъюгаты моноклональных антител, ковалентно связанных с молекулами лекарства, токсинов или радиоизотопов, уже являются коммерческими препаратами и используются в клинике [35; 71; 80]. Это — Zevalin (ibritu-momab), Bexxar (131I-tositumomab, Mylotarg (gemtuzumab ozo-gamicin). Разрабатываемые иммунолипосомы направлены против антигенов Her2/neu, CD5, CD19, CD20, CD25, CD33, CD105, HLA-DR, Muc-1, VGFR, EGFR, VCAM и др.[6; 14; 24; 28; 47; 62; 72].

Кроме вышеперечисленных антигенов, мишенью для иммунолипосом может быть матриксная металлопротеаза матриксного 1 типа, которая является важным белком, имеющим отношение к опухолевому росту и образованию новых сосудов [14]. Эта матриксная протеаза относится к семейству цинк-зависимых матриксных протеаз. Они требуются для деградации экстрацеллюлярного матрикса, инвазии и миграции эндотелия, образования капиллярных трубочек и рекруции поддерживающих клеток. Экспрессия этой металлопротеазы коррелировала с повышенной злокачественностью различных опухолей, включая рак легкого, желудка, толстой кишки, молочной железы, шейки матки и меланому. Она играет большую роль в ангиогенезе и метастазировании опухолей [25; 68]. Эта металлопротеаза интернализуется в опухолевых клетках, что делает ее предпочтительной мишенью для направленной доставки противоопухолевых препаратов.

Многообещающей мишенью для таргентной терапии опухолей является фолатный рецептор, который сверхэкс-прессирован на опухолевых клетках и способен связывать и интернализовывать конъюгированную фолиевую кислоту [27; 79]. Среди 3 изоформ рецептора бета рецептор экспрессирован на бластных клетках больных острым миелобластным лейкозом и отсутствует на гранулоцитах. Конъюгированные с фолатом липосомы, несущие доксо-рубицин, эффективно убивают рецептор-положительные линии клеток KG1 и L1210JF, но не оказывают действия на рецептор-отрицательные клетки KG1a и L1210.

Эффект действия липосом повышается, если они направлены против 2 мишеней [59; 74]. Это может быть достигнуто при использовании или одновременно 2 моноклональных антител, или антитела, которое реагирует с опухолевыми и эндотелиальными клетками. Эндотелиальные клетки вновь образованных сосудов в опухоли являются хорошей мишенью для действия иммунолипосом. Исследованиями последних лет установлено, что вновь образованные сосуды имеют антигены, которые отсутствуют или присутствуют на неопределяемом уровне в нормальных сосудах [29]. К ним относятся альфа интегрины, рецепторы для ангиогенных факторов роста, аминопептидаза N (CD13) и A [31; 48; 58]. Матриксная металлопротеиназа 1 типа является одним из представителей этих мишеней. Моноклональные антитела против матриксной металлопротеиназы 1 типа реагировали с опухолевыми клетками и эндотелием вновь образующихся сосудов. Иммунолипосомы, основанные на этих антителах, показали хорошие результаты в экспериментах in vitro [14].

Другой подход к усилению терапевтического действия иммунолипосом заключается в использовании смеси из 2 типов иммунолипосом, направленных против опухолеассо-

циированных антигенов и антигенов кровеносных сосудов [59]. Иммунолипосомы, направленные против дисиалоган-глиозидного рецептора GD2 и нагруженные доксорубицином, вводили голым мышам с ксенотрансплантатом человеческой нейробластомы в сочетании с липосомами, связанными с NGR-пептидом (опухоль-специфическая изоформа антигена CD13), который является маркером аминопептидазы N на ангиогенных эндотелиальных клетках. Авторы получили хороший терапевтический эффект, проявившийся в регрессии опухоли, деструкции опухолевых сосудов и увеличении продолжительности жизни мышей с ортотопическими трансплантатами человеческой нейробластомы.

МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА

На 1-м этапе разработки иммунолипосом использовали мышиные цельные моноклональные антитела. Однако позже было установлено, что цельные моноклональные антитела мышиной природы вызывают индукцию иммунного ответа, который приводит к нейтрализации введенных антител [16]. Он индуцируется Fc-фрагментом антител [40]. Кроме того, в организме происходит более интенсивное удаление липосом путем захвата клетками ретикулоэндотелиальной системы через Fc-рецептор на макрофагах [40]. Частично эта проблема снимается использованием F(sab’)2- и Fab’-фрагментов, так как Fc-фрагмент можно протеолитически отщепить. Кроме того, появилась методическая возможность получать рекомбинантные формы антител, содержащие только F(sab’)2- и Fab’-фрагменты или даже одноцепечные Fv’-фрагменты [41, 50]. Удаление Fc-фрагмента угнетает иммуногенность и улучшает терапевтическую эффективность иммунолипосом [67]. Fab’-фрагменты (мол. масса 55 кДа) и одноцепочные Fv’-антитела (мол.масса 35 кД) вообще не иммуногенны [29].

Кардинальным образом проблема решается использованием гуманизированных моноклональных или человеческих антител. Прогресс в инженерной технологии привел к появлению различных методов получения человеческих антител. Эти подходы позволили изолировать молекулы человеческих антител с угнетенной иммуногенностью или полным ее отсутствием [37]. Технологией фагового дисплея может быть получено большое количество антител против различных антигенов, пригодных для таргентной терапии [20; 24; 32; 37; 50; 55; 63]. Как правило, эти антитела являются одноцепочными Fv (scFv) фрагментами. Этот формат представляет собой наименьшую часть антитела с полной антиген-связывающей способностью и поэтому достаточен для генерации таргентных препаратов. В связи с этим одноцепочные антитела подходят для генерации иммунолипосом [17; 24; 32; 41; 50; 54; 63].

Для создания иммунолипосом требуется модификация молекулы антител. Модифицировать моноклональные антитела довольно трудно. Одноцепочные антитела позволяют легко включать новые аминокислотные последовательности. Наиболее часто включают 2 - 3 цестеиновых остатка в С-терминальный конец, который позволяет конъюгировать с сульфгидрильными реагентами [42; 49; 53; 57; 70; 77].

Малые молекулы попадают в клетки по специфическим транспортным механизмам или в процессе пассивной диффузии. В противоположность этому макромолекулы попадают в клетки, вовлекая в процесс опосредованный ре-

цептором эндоцитоз или пиноцитоз [15; 60]. Этот процесс вовлекает взаимодействие между лигандом и рецептором [64; 78]. Преимущество имеют те антитела, которые индуцируют пиноцитоз комплекса антиген-иммунолипосомы. Идеальным условием для создания иммунолипосом является способность к пиноцитозу комплекса антиген-антитело, так как не все антигены способны попадать вовнутрь клетки после контакта с антителом. Во многих исследованиях показано, что связывание иммунолипосом, несущих препарат, с эпитопом, способным к интернализации, приводит к эффективному попаданию лекарства в клетку и обеспечивает хороший терапевтический эффект [19; 2З; З6; З9; 44]. Более того, в исследованиях, проведенных Kirpotin D.B. et al. [З8], было показано, что накопление иммунолипосом в опухоли не отличается от накопления обычных липосом, поскольку они накапливаются в строме. Однако интернализация имму-нолипосом была в 6 раз выше, чем обычных липосом или иммунолипосом, направленных к отсутствующим на опухоли антигенам.

Высвобождение лекарства из наноносителей является центральной проблемой химиотерапии рака [З; 51]. Оказалось, что далеко не все наночастицы способны освободить препарат при попадании в опухолевую ткань. Наиболее подходящи для этой цели липосомы и полимерные носители, но последние имеют низкую степень включения препарата [4; 51]. Липосомы способны доставить большое количество лекарственного вещества в опухоль, однако только небольшая фракция освобожденного вещества может проникнуть внутрь опухолевой клетки. Это зависит от времени освобождения лекарства в опухоли и скорости диффузии освобожденного вещества через поверхностную мембрану клетки. Использование иммунолипосом, направленных против интернализирующихся антигенов, решает эту проблему [26; 75]. Однако не все антигены интернализируются после связывания с антителом и не всегда можно создать имму-нолипосому. Другим оригинальным подходом для быстрого освобождения препарата из липосомы в опухолевую ткань является разработка Ph-зависимых и термозависимых липосом [18]. Последние стабильны при З7 ос, но разрушаются при 42,5 ОС [4].

ЗАKЛЮЧEHИE

Иммунолипосомы активно изучаются в течение последних 10 лет. Однако до сих пор эти работы ограничивались интенсивными доклиническими исследованиями, и ни один иммунолипосомальный препарат не включался в клинические испытания. Это можно объяснить боязнью получить осложнения при использовании мышиных моноклональных антител как векторов доставки. В последние годы ситуация резко изменилась. Неиммуногенные одноцепочные антитела стали доступным инструментом в руках исследователей. Кроме того, их легко модифицировать и присоединять к ли-посомам. Можно ожидать бурного прорыва в этой области и появления нового поколения иммунолипосомальных препаратов в практике онкологических клиник.

ЛИTEPATУPA

1. Гypeвuч Д.Г, Meepoвuч И.Г., Meepoвuч RA. и dp.

Влияние размеров липосом на уровень и селектив-

ность накопления тиосенса в опухоли // РБЖ. - 2007.

- 6(2). - С. 45-49.

2. Степанова Е.В., Барышников А.Ю., Личиницер М.Р. Оценка ангиогенеза опухолей человека // Успехи современной биологии. - 2000. - 120(6). - С. 599-604.

3. Оборотова Н.А. Противоопухолевые субстанции и их лекарственные формы, созданные в РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН.- В кн.: Экспериментальная онкология на рубеже веков / .Под ред. М.И. Давыдова и А.Ю. Барышникова. - М.: Издательская группа РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, 2003. - С. 5-58.

4. Оборотова Н.А. Липосомальные лекарственные формы противоопухолевых препаратов (обзор) // Хим.-фарм. журнал. - 2001 - 35(4). - С. 32-38.

5. Толчева Е.В., Оборотова Н.А. Липосомы как транспортное средство для доставки биологически активных молекул // РБЖ. - 2006. - 5(1). - С. 54-61.

6. Толчева Е.В., Барышников А.Ю., Оборотова Н.А. и др. Анти-CD5-иммунолипосомы как транспортная система для направленной доставки лекрственных препаратов к CD5-положительным клеткам // РБЖ. -2005. - 4(4). С. 38-43.

7. Черноглазова Е.В., Дбар Ж.Н., Степанова Е.В. Молекулярные механизмы опухолевого неоангио-генеза // Успехи современной биологии. - 2004. -124(5). - С. 480-488.

8. Шалимов С.А., Литвиненко А.С., Дудниченко А.С., Литвиненко А.А. Использование липосомальной формы антибиотиков антрациклинового ряда в лечении экспериментальных форм опухолевых процессов // Украинский химиотерапевтический журнал. - 2004.

- 1. - С. 65-68.

9. Adams M.L., Lavasanifar A., Kwon G.S. Amphiphilic block copolymers for drug delivery // J. Pharm. Sci. -

2003. - 92. - P. 1343-1355.

10. Allen T.M. Ligand-targeted therapeutics in anticancer therapy // Nat. Rev. Cancer. - 2002. - 2. - P. 750-763

11. Allen T.M., CullisP.R. Drug delivery systems: entering the mainstream // Science. - 2004. - 303. - P. 1818-1822

12. Allen T.M., Sapra P., Moase E. Use of the post-insertion method for the formation of ligand-coupled liposomes // Cell. Mol. Biol. Lett. - 2002. - 7. - P. 889-894.

13. Allen T.M. Ligand-targeted therapeutics in anticancer therapy // Nat. Rev. Cancer. - 2002. - 2. - P.750-763.

14. Atobe K., Ishida T., Ishida E. et al. In Vitro Efficacy of a Sterically Stabilized Immunoliposomes Targeted to Membrane Type 1 Matrix Metalloprotease (MT1-MMP) // Biol. Pharm. Bull. - 2007. - 30. - P. 972-978.

15. Bao G., Bao X.R. Shedding light on the dynamics of en-docytosis and viral budding // Proc Natl Acad Sci USA.

- 2005. - 102. - P. 9997-9998.

16. Bendas G., Rothe U., Scherphof G.L., Kamps J.A.A.M. The influence of repeated injections on pharmacokinetics and biodistribution of different types of sterically stablized immunoliposomes // Biochim. Biophys. Acta.

- 2003. - 1609. - P. 63-70.

17. Demirovic R.A., Marty C., Console M.S. et al. Targeting human cancer with VEGF receptor-2-directed liposomes // Oncol. Rep. - 2005. - 13. - P. 319-324.

18. DrummondD.C., HongH., Park J.B. et al. Liposome targeting to tumors using vitamin and growth factor receptors // Vitam. Horm. - 2000. - 60. - P. 285-332.

19. Drummond D.C., Zignani M., Leroux J. Current status of pH-sensitive liposomes in drug delivery // Prog. Lipid Res. - 2000. - 39. - P. 409-460.

20. Backmann N., Zahnd C., Huber F. et al. A label-free im-munosensor array using single-chain antibody fragments // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2005. - 102. - P. 1458714592.

21. Gabizon A., Shmeeda H., Barenholz Y. Pharmacokinetics of pegylated liposomal doxorubicin - review of animal and human studies // Clin. Pharmacokinetics. - 2003. -

42. - P. 419-436.

22. Carter P. Improving the efficacy of antibody-based cancer therapies // Nat. Rev. Cancer. - 2001. - 1. - P. 18-129.

23. Gao H., Shi W., Freund L.B. Mechanics of receptor-mediated endocytosis // Proc Natl Acad Sci USA. - 2005.

- 102.

24. Cheng W.W.K., Das D., Suresh M., Allen T.M. Expression and purification of two anti-CD19 single chain Fv fragments for targeting of liposomes to CD19-expressing cells // Biochim. Biophys. Acta. - 2007. - 1768. - P. 21-29.

25. Genis L., Galvez B.G., Gonzalo P., Arooyo A.G. // Cancer Metastasis Rev. - 2005. - 25. - P. 77-86.

26. Gordon A.N., Granai C.O., Rose P.G. et al. // J. Clin. Oncol. - 2000. - 18. - P. 3093-3100.

27. Goren D., Horwitz A.T., Tzemach D. et al. Nuclear delivery of doxorubicin via folate-targeted liposomes with bypass of multidrug-resistance efflux pump // Clin. Cancer Res. - 2000. - 6. - P. 1949-1957.

28. Gosk S., Gottstein C., Bendas G. Targeting of immunoliposomes to endothelial cells expressing VCAM: a future strategy in cancer therapy // Int. J. Clin. Pharmacol. Ther.

- 2005. - 43. - P. 581-582.

29. Hicklin D.J., Ellis L.M. Role of the vascular endothelial u growth factor pathway in tumor growth and angiogenesis // J Clin Onco. - 2005. - 23. - P. 1011-1027.

30. HollingerP., Hudson P.J. Engineered antibody fragments and the rise of single domains // Nat Biotechnol. - 2005.

- 23. - P. 1126-1136.

31. Hood J.D., Bednarski M., Frausto R. et al. Tumor V regression by targeted gene delivery to the neovascula-ture // Science. - 2002. - 296. - P. 2404-2407.

32. Hu H., Chen D., Liu Y., Deng Y. et al. Target ability and therapy efficacy of immunoliposomes using a humanized antihepatoma disulfide-stabilized Fv fragment on tumor cells // J. Pharm. Sci. - 2006. - 95. - P. 192-199.

33. Jain R.K. Delivery of molecular medicine to solid tumors: lessons from in vivo imaging of gene expression and function // Control Release. - 2001. - 74. - P 7-25.

34. Jarver P., Langel U. Cell-penetrating peptides - A brief introduction // Biochimica et Biophysica Acta. - 2006. -1758. - P. 260-263.

35. Kaminski M.S., Zelenetz A.D., Press O.W. et al. Pivotal study of iodine 1131 tositumomab for chemotherapy-refractory low-grade or transformed low-grade B-cell non-Hodgkin's lymphomas // J. Clin. Oncol. - 2001. -19. - P. 3908-3911.

36. Karanes C., Theobald M., Bennett J.M. et al. Efficacy and safety of gemtuzumab ozogamicin in patients with CD33-positive acute myeloid leukemia in first relapse // J. Clin. Oncol. - 2001. - 19. - P 3244-3254.

37. Kim S.J., Park Y., Hong H.J. Antibody engineering for the development of therapeutic antibodies // Mol. Cells. -2005. - 20. - P. 17-29.

38. Kirpotin D.B., DrummondD.C., Shao Y.I. et al. Antibody targeting of long-circulating lipidic nanoparticles does not increase tumor localization but does increase internalization in animal models // Cancer Res. - 2006. - 66.

- P. 6732-6740.

39. Kobayashi T., Ishida T., Okada Y. et al. // Int.J. Pharm. -2007. - 329. - P. 94-102.

40. Koning G.A., Morselt H.W.M., Gorter A. et al. Interaction of differently designed immunoliposomes with colon cancer cells and Kupffer cells. An in vitro comparison // Pharm. Res. - 2003. - 20. - P. 1249-1257.

41. Kontermann R.E. Immunoliposomes for cancer therapy // Curr. Opin. Mol. Ther. - 2006. - 8. - P. 39-45.

42. Krimner E.M., Hepp J., Hoffmann P. et al. A highly stable polyenth-ylene glycol-conjugated human single-chain antibody neutralizing granulocyte-macrophage colony stimulating factor at low nano-molar concentration // Protein Eng. Des. Set. - 2006. - 19. - P. 461-470.

43. Laakkonen P., Porkka K., Jason A. et al. A tumor-homing peptide with a targeting specifi city related to lymphatic vessels // Nature Medicine. - 2002. - 8. - P. 751-755.

44. Lopes de Menezes D.E., Pilarski L.M., Belch A.R., Allen T.M. Selective targeting of immunoliposomal doxorubicin against human multiple myeloma in vitro and ex vivo // Biochim. Biophys. Acta. - 2000. - 1466. - P. 205-220.

45. Lyass O., Uziely B., Ben-Yosef R. et al. // Cancer. - 2000.

- 89. - P. 1037-1047.

46. Maeda H.J., Wu T., Sawa Y. et al. Tumor vascular permeability and the EPR effect in macromolecular therapeutics: a review // J. Controlled Release. - 2000. - 2000. - P. 271-284.

47. Mamot C., DrummondD.C., Greiser U. et al. Epidermal growth factor receptor (EGFR)-targeted immunoliposomes mediate specific and efficient drug delivery to EGFR- and EGFRvIII-overexpressing tumor cells // Cancer Res. - 2003. - 63. - P. 3154-3161.

48. Marchio S., Lahdenranta J., Schlingemann R.O. et al. Aminopeptidase A is a functional target in angiogenic blood vessels // Cancer Cell. - 2004. - 5. - P. 151-162.

49. Marty C., Scheidegger P., Ballmer-Hofer K. et al. Production of functionalized single-chain Fv antibody fragments to the ED-B domain of the B-isoform of fi-bronectin in Pichia pastoris // Protein Expression Purif.

- 2001. - 21. - P. 156-164.

50. Messerschmidt S.K., Kolbe A., Muller D. et al. Novel single-chain Fv’ formats for the generation of immunoli-posomes by site-directed coupling // Bioconjugate Chem.

- 2008. - 19. - P. 362-369.

51. Moghimi S.M., Hunter A.C., Murray J.C. Long-circulating and target-specific nanoparticles: theory topractice // Pharmacol. Rev. - 2001. - 53. - P. 283-318.

52. Morgan M.T., Carnahan M.A., Immoos C.E. et al. Dendritic molecular capsules for hydrophobic compounds. // Am. Chem. Soc. - 2003. - 125. - P. 1548515489.

53. Nataranja A., Xiong C.-Y., Albrecht H. et al. Characterization of site-specific scFv PEGylation for tumor-targeting Pharmaceuticals // Bioconjugate Chem.

- 2005. - 16. - P. 113-121.

54. Nellis A. Preclinical manufacture of an anti-HER2 scFv-G-DSPE liposome-inserting conjugate. 1. Gram-scale production and purification // Biotechnol. Prog. - 2005.

- 21. - P. 205-220.

55. Nielsen U.B., Kirpotin D.B., Pickering E.M. et al. Therapeutic efficacy of anti-ErbB2 immunoliposomes targeted by a phage antibody selected for cellular endo-cytosis // Biochim. Biophys. Acta. - 2002. - 1591. - P. 109-108.

56. O’Brien M.F., Wigler N., Inbar M. et al. // Ann. Oncol. -

2004. - 15. - P. 440-449.

57. Park J.W., Kirpotin D.B., Hong K. et al. Tumor targeting using anti-HER2 immunoliposomes // J. Controlled Release. - 2001. - 74. - P. 95-113.

58. Pasqualini R., Koivunen E., Kain R. et al. Aminopepti-dase N is a receptor for tumor-homing peptides and a target for inhibiting angiogenesis // Cancer Res. - 2000.

- 60. - P. 722-727.

59. Pastorino F., Brignole C., Di Paolo O. et al. Targeting liposomal chemotherapy via both tumor cell-specific and tumor vasculature-specific ligands potentiates therapeutic efficacy // Cancer Res. - 2006. - 66. - P. 10073-10082.

60. Ramakrishanan B., Boeggeman E., Qasba P.K. Applications of glycosyltransferase in the site-specific conjugation of biomolecules and development of a targeted drug delivery system and contrast agents for MRI // Expert Opion Drug Deliv. - 2008. - 5(2). - P. 149-153.

61. Reichert M., Rosensweig C.J., Faden L.B., Dewitz M.C. Monoclonal antibody successes in the clinic // Nat. Biotechnol. - 2005. - 23. - P. 1073-1078.

62. Rubio Demirovic A., Marty C., Console S. et al. Targeting human cancer cells with VEGF receptor-2-directed liposomes // Oncol. Rep. - 2005. - 13. - P. 319-324.

63. Ruger R., Muller D., Fahr A., Kontermann R.E. Generation of immunoliposomes using recombinant single-chain Fv fragment bound to Ni-NTA-liposomes // J. Drug Target.

- 2005. - 15. - P. 399-406.

64. Russell-Jones G.J. The potential use of receptor-mediated endocytosis for oral drug delivery // Adv Drug Deliv Rev. - 2001. - 46. - P. 59-73.

65. Safra T., Muggia F., Jeffers S. et al. Pegylated liposomal doxorubicin (Doxil): reduced clinical cardio-toxicity in patients reaching or exceeding cumulative doses of 500 mg/m2 // Ann Oncol. - 2000. - 11. - P.1029-1033.

66. Sahoo S.K., Labhasetwar V Nanotech approaches to drug delivery and imaging // Drug Discov. Today S. - 2003. -P. 1112-1120.

67. Sapra P., Moase E.H., Ma J., Allen T.M. Improved therapeutic responses in a xenograft model of human B Imyphoma (Namalwa) for liposomal vincristine versus lipo-somal doxorubicin targeted via anti-CD 19 IgG2a or Fab' fragments // Clin. Cancer Res. - 2004. - 10. - P. 1100-1111.

68. Sato H., Takino T., Miyamori H. // Cancer Sci. - 2005. -96. - P. 209-217.

69. Schrama D., Reisfeld R.A., Becker J.C. Antibody targeted drugs as cancer therapeutics // Nature Reviews Drug Discovery. - 2006. - 5. - P. 147-159.

70. Shen Z., Stryker G.A., Mernaugh R.L. et al. Single-chain fragment variable antibody piezoimmunosensors // Anal. Chem. - 2005. - 77. - P. 797-805.

71. Sievers E.L., Larson R.A., Stadtmauer E.A. et al. // Cancer Res. - 2006. - 66. - P. 6732-6740.

72. Sievers E.L., Larson R.A., Stadtmauer E.A. et al. Efficacy and safety of gemtuzumab ozogamicin in patients with CD33-positive acute myeloid leukemia in first relapse // J. Clin. Oncol. - 2001. - 19. - P. 3244-3254.

73. Sofou S., Thomas J.L., Hung-yin Lin et al. Engineered liposomes for potential a-particle therapy of metastatic cancer // J.Nucl.Med. - 2004. - 45. - P. 253-260.

74. Straubinger R.M., ArnoldR.D., Zhou R. et al// Anticancer Res. - 2006. - 24. - P. 397-404.

75. Sudimack J., Lee R.J. Targeted drug delivery via the folate receptor // Adv. DrugDeliv. Rev. - 2000. - 41. - P. 147-162.

76. Torchillin V.P., Lukyanov A.N., Gao Z.G. et al. B. Immunomicelles: targeted pharmaceutical carriers for poorly soluble drugs // Proc. NatL Acad. Sci. USA. -2003. - 100. - P. 6039-6044.

77. Volkel T., Holig P., Merdan T. et al. Targeting of immu-noliposomes to endothelial cells using a single-chain Fv fragment directed agaisnt human endoglin (CD 105) // Biochim. Biophys. Acta. - 2004. - 1663. - P. 158-166.

78. Vyas S.P., Singh A., Sihorkar V Ligand-receptor-mediated drug delivery: an emerging paradigm in cellular drug targeting // Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. - 2001. - 18.

- P. 1-76.

7 9. Wang H., Zheng X., Behm F.G., Ratnam M. Differentiationindependent retinoid induction of folate receptor type p, a potential tumor target in myeloid leukemia // Blood. -2000. - 96. - P. 3529-3536.

80. Witzig T.E., Gordon L.I., Cabanillas F. et al. Randomized controlled trial of yttrium-90-labeled ibritumomab tiux-etan radioimmunotherapy versus rituximab immunotherapy for patients with relapsed or refractory low-grade, follicular, or transformed B-cell non-Hodgkin's lymphoma // J. Clin. Oncol. - 2002. - 20. - P. 2453-2463.

81. Yana I., Seiki M. // Clin. Exp. Metastasis. - 2002. - 19.

- P. 209-215.

Поступила 05.09.2008.