КРИСТАЛЛИЗАЦИЯ АНТИ-CD20-АНТИТЕЛ

1. Способ очистки CD20-антитела из смеси, включающий кристаллизацию CD20-антитела и выделение CD20-антитела из указанной смеси.
2. Способ по п.1, в котором указанная смесь не была подвергнута предварительной лиофилизации.
3. Способ по п.1, в котором указанная смесь представляет собой концентрированную собранную из культуры клеток жидкость (HCCF) из культуры рекомбинантных клеток, продуцирующих CD20-антитело.
4. Способ по п.3, в котором культура клеток является культурой клеток млекопитающих.
5. Способ по п.4, в котором клетки млекопитающих представляют собой клетки яичника китайского хомячка (CHO).
6. Способ по п.4, в котором очистку осуществляют в отсутствие стадии очистки на белке A.
7. Способ по п.6, в котором очистку осуществляют в отсутствие стадии катионо-обменной хроматографии.
8. Способ по п.4, в котором очистка дополнительно включает стадию вирусной фильтрации и стадию анионообменной хроматографии.
9. Способ по п.8, включающий стадии (a) кристаллизации CD20-антитела, (b) растворения кристаллов CD20-антитела в буфере, (c) осуществления анионообменной хроматографии раствора, полученного на стадии (b), и (d) концентрирования элюата, полученного в результате анионообменной хроматографии.
10. Способ очистки CD20-антитела из концентрированной жидкости, собранной из культуры из клеток (HCCF) млекопитающих, включающий стадии (a) концентрирования HCCF, (b) кристаллизации CD20-антитела, (c) растворения кристаллов CD20 с получением раствора CD20, (d) осуществления очистки раствора CD20 на анионообменной колонке и (e) выделения CD20-антитела.
11. Способ по п.10, в котором CD20-антителом является антитело 2H7.
12. Способ по п.11, в котором CD20-антитело выбрано из группы, состоящей из вариантов CD20-антитела 2H7 A-I, перечисленных в таблице 1.
13. Способ по п.12, в котором CD20-антитело выбрано из группы, состоящей из вариантов CD20-антитела 2H7 A, C и H, перечисленных в таблице 1, имеющих пары VL и VH с последовательностями SEQ ID NO:1 и 2, SEQ ID NO:3 и 4 и SEQ ID NO:3 и 5, соответственно.
14. Способ по п.11, в котором HCCF концентрируют до концентрации CD20-антитела около или выше 1,5 мг/мл.
15. Способ по п.10, в котором кристаллизацию осуществляют при pH примерно от 6,0 до примерно 8,0.
16. Способ по п.15, в котором кристаллизацию осуществляют при pH 7,8±0,2.
17. Способ по п.10, в котором кристаллизацию осуществляют при температуре от примерно 4°C до примерно 40°C.
18. Способ по п.17, в котором кристаллизацию осуществляют при температуре примерно 37°C.
2
4
2
4
2
4
2
4
19. Способ по п.10, в котором кристаллизацию индуцируют одним или несколькими преципитирующими веществами, выбранными из группы, состоящей из PBS, NaCl, NaSO, KCl, KSO, NaHPO и KHPO.
2
4
20. Способ по п.19, в котором преципитирующим веществом является KHPO.
21. Способ очистки CD20-антитела из концентрированной жидкости, собранной из культуры клеток (HCCF) млекопитающих, включающий стадии (a) концентрирования HCCF, (b) диафильтрации HCCF с использованием высокой концентрации соли при pH, которая ингибирует кристаллизацию, (c) кристаллизации CD20-антитела посредством повышения pH, (d) растворения кристаллов CD20-антитела с получение раствора CD20-антитела, (e) осуществления очистки раствора CD20-антитела на анионообменной колонке и (f) выделения полученного очищенного CD20-антитела.
22. Способ по п.21, в котором CD20-антитело выбрано из группы, состоящей из вариантов CD20-антитела 2H7 A-I, перечисленных в таблице 1.
23. Способ по п.22, в котором CD20-антитело выбрано из группы, состоящей из вариантов CD20-антитела 2H7 A, C и H, перечисленных в таблице 1, имеющих пары VL и VH с последовательностями SEQ ID NO:1 и 2, SEQ ID NO:3 и 4 и SEQ ID NO:3 и 5 соответственно.
24. Кристалл CD20-антитела.
25. Кристалл по п.24, который имеет морфологию микроиглы, иглы, глобулы или округлую форму арахиса.
26. Композиция, содержащая кристалл по п.24.
27. Композиция по п.26. которая представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов.
28. Способ лечения CD20-связанного состояния или заболевания, включающий введение млекопитающему эффективного количества CD20-антитела, очищенного способом по п.1 или 21.