Приготовление и хранение липосомальных РНК-составов, подходящих для терапии

1. Композиция, содержащая:
РНК-липоплексные частицы, содержащие:
РНК, кодирующую пептид или белок, содержащий по меньшей мере один эпитоп,
по меньшей мере один катионный липид и по меньшей мере один дополнительный липид,
где соотношение положительных зарядов и отрицательных зарядов в РНК-липоплексных частицах составляет от около 1:2 до около 1,9:2 или около 1,3:2,0, хлорид натрия в концентрации от 0 мМ до около 40 мМ и стабилизатор.
2. Композиция по п. 1, которая дополнительно содержит буфер, где буфер представляет собой 2-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]этансульфоновую кислоту (HEPES), где HEPES имеет концентрацию от около 2,5 мМ до около 10 мМ, или около 7,5 мМ.
3. Композиция по п. 1 или 2, где количество РНК в композиции составляет от около 0,01 мг/мл до около 1 мг/мл, от около 0,05 мг/мл до около 0,5 мг/мл или около 0,05 мг/мл, и/или где хлорид натрия имеет концентрацию от около 20 мМ до около 30 мМ, около 20 мМ, или около 30 мМ, и/или где концентрация стабилизатора в композиции выше, чем значение, требуемое для физиологической осмоляльности, и/или где концентрация стабилизатора в композиции составляет от около 5 до около 35 массовых процентов по объему (% мас./об.) или от около 12,5 до около 25 массовых процентов по объему (% мас./об.).
4. Композиция по любому из пп. 1-3, где стабилизатор представляет собой углевод, выбранный из моносахарида, дисахарида, трисахарида, сахарного спирта, олигосахарида или его соответствующего сахарного спирта и полиспирта с линейной цепью, или где стабилизатор представляет собой сахарозу в концентрации от около 5 до около 25 массовых процентов по объему (% мас./об.), предпочтительно где сахароза имеет концентрацию от около 15% (мас./об.) до около 25% (мас./об.), от около 20% (мас./об.) до около 25% (мас./об.), или концентрацию около 22% (мас./об.), или около 20% (мас./об.).
5. Композиция по любому из пп. 1-4, где композиция имеет рН, который ниже, чем обычный рН-оптимум для хранения РНК, и/или где композиция имеет рН от около 5,7 до около 6,7, или около 6,2.
6. Композиция по любому из пп. 1-5, где композиция дополнительно содержит хелатирующий агент, где хелатирующий агент предпочтительно представляет собой этилендиаминтетрауксусную кислоту (EDTA), где EDTA имеет предпочтительно концентрацию от около 0,25 мМ до около 5 мМ, или около 2,5 мМ.
7. Композиция, содержащая:
РНК-липоплексные частицы, содержащие:
РНК, кодирующую пептид или белок, содержащий по меньшей мере один эпитоп, в концентрации около 0,05 мг/мл, и
DOTMA и DOPE в молярном соотношении около 2:1,
где соотношение положительных зарядов и отрицательных зарядов в РНК-липоплексных частицах составляет около 1,3:2,0,
хлорид натрия в концентрации около 20 мМ,
сахарозу в концентрации около 22% (мас./об.),
HEPES в концентрации около 7,5 мМ с рН около 6,2 и
EDTA в концентрации около 2,5 мМ.
8. Композиция по любому из пп. 1-7, где композиция находится в жидком или замороженном состоянии, где замороженная композиция предпочтительно является стабильной при температуре от около -15°C до около -40°C в течение по меньшей мере одного месяца или стабильной при температуре около -15°C в течение по меньшей мере одного месяца, около -15°C в течение по меньшей мере двух месяцев, около -20°C в течение по меньшей мере одного месяца, около -20°C в течение по меньшей мере двух месяцев, около -30°C в течение по меньшей мере одного месяца, или около -30°C в течение по меньшей мере двух месяцев.
9. Водная композиция, содержащая РНК-липоплексные частицы, получаемые путем оттаивания замороженной композиции по п. 8 и при необходимости коректировки осмотического давления и ионной силы путем добавления водной жидкости, где осмоляльность композиции предпочтительно составляет от около 200 мОсмол до около 450 мОсмол, и/или где композиция предпочтительно содержит хлорид натрия в концентрации от около 80 мМ до около 150 мМ.
10. Композиция по любому из пп. 1-9, где РНК-липоплексные частицы могут быть получены путем добавления липосомного коллоида к раствору, содержащему РНК,
где липосомный коллоид получен путем инжекции липидного раствора в этаноле в водную фазу для получения липосомного коллоида, и
-1
-1
где концентрация по меньшей мере одного из липидов в липидном растворе соответствует равновесной растворимости по меньшей мере одного липида в этаноле или превышает равновесную растворимость по меньшей мере одного липида в этаноле, и/или где РНК-липоплексные частицы характеризуются одним брегговским пиком при около 1 нм, причем ширина пика составляет менее чем 0,2 нм, и/или где РНК-липоплексные частицы имеют средний диаметр, который находится в диапазоне от около 200 до около 800 нм, от около 250 до около 700 нм, от около 400 до около 600 нм, от около 300 нм до около 500 нм или от около 350 нм до около 400 нм.
11. Композиция по любому из пп. 1-6 и 8-10, где по меньшей мере один катионный липид содержит 1,2-ди-О-октадеценил-3-триметиламмоний-пропан (DOTMA) и/или 1,2-диолеоил-3-триметиламмоний-пропан (DOTAP), и/или где по меньшей мере один дополнительный липид содержит 1,2-ди-(9Z-октадеценоил)-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DOPE), холестерин (Choi) и/или 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолин (DOPC), и/или где по меньшей мере один катионный липид содержит 1,2-ди-О-октадеценил-3-триметиламмоний-пропан (DOTMA) и по меньшей мере один дополнительный липид содержит 1,2-ди-(9Z-октадеценоил)-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DOPE), и/или где молярное соотношение по меньшей мере одного катионного липида и по меньшей мере одного дополнительного липида составляет от около 10:0 до 1:9, от около 4:1 до около 1:2, от около 3:1 до около 1:1 или около 2:1, и/или где РНК-липоплексные частицы содержат DOTMA и DOPE в молярном соотношении от около 10:0 до 1:9, от около 4:1 до 1:2, от около 3:1 до около 1:1 или около 2:1, причем соотношение зарядов для положительных зарядов в DOTMA и отрицательных зарядов в РНК составляет от около 1:2 до 1,9:2.
12. Композиция по любому из пп. 1-11, дополнительно содержащая адъювант.
13. Композиция по любому из пп. 1-12, которая сформирована для системного введения, где системное введение осуществляется путем внутривенного введения, и/или где композиция представляет собой композицию для терапевтического применения.
14. Способ получения водной композиции, содержащей РНК-липоплексные частицы, включающий оттаивание замороженной композиции по любому из пп. 8-13 и необязательно корректировка осмоляльности и ионной силы путем добавления водной жидкости.
15. Способ по п. 14, где водная жидкость добавляется для получения осмоляльности композиции от около 200 мОсмол до около 450 мОсмол и/или для получения хлорида натрия в концентрации от около 80 мМ до около 150 мМ.