ГЕМОСТАТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ

1. Стерильная готовая к применению текучая гемостатическая композиция, содержащая
растворимый гемостатический агент, содержащий совокупность носителей и совокупность фибриноген-связывающих пептидов, иммобилизованных на каждом носителе;
биосовместимую жидкость; и
частицы биосовместимого поперечно-сшитого полисахарида, подходящего для применения для остановки кровотечения, которые являются не растворимыми в биосовместимой жидкости.
2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что указанную гемостатическую композицию стерилизуют паром или сухим жаром.
3. Композиция по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанная биосовместимая жидкость обеспечивает непрерывную жидкую фазу, и частицы полимера по существу однородно распределены по жидкой фазе.
4. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что каждый носитель в составе гемостатического агента содержит разветвленное ядро, и фибриноген-связывающие пептиды по отдельности ковалентно присоединены к разветвленному ядру.
5. Композиция по п. 4, отличающаяся тем, что указанное разветвленное ядро содержит
от двух до десяти полифункциональных аминокислотных остатков, где каждый фибриноген-связывающий пептид отдельно ковалентно присоединен к полифункциональному аминокислотному остатку разветвленного ядра;
совокупность полифункциональных аминокислотных остатков, где один или более фибриноген-связывающих пептидов по отдельности ковалентно присоединены к каждому из по меньшей мере двух соседних полифункциональных аминокислотных остатков разветвленного ядра;
совокупность полифункциональных аминокислотных остатков, где два или более фибриноген-связывающих пептидов по отдельности ковалентно присоединены по меньшей мере к одному полифункциональному аминокислотному остатку разветвленного ядра;
совокупность полифункциональных аминокислотных остатков, где два или более полифункциональных аминокислотных остатков ковалентно присоединены через боковую цепь соседнего полифункционального аминокислотного остатка; или
один полифункциональный аминокислотный остаток, где фибриноген-связывающий пептид отдельно ковалентно присоединен к каждой функциональной группе полифункционального аминокислотного остатка;
причем полифункциональные аминокислотные остатки включают три- или тетрафункциональные аминокислотные остатки или три- и тетрафункциональные аминокислотные остатки, или один полифункциональный аминокислотный остаток представляет собой три- или тетрафункциональный аминокислотный остаток.
6. Композиция по п.5, отличающаяся тем, что указанное разветвленное ядро содержит совокупность последовательных полифункциональных аминокислотных остатков.
7. Композиция по п. 5 или 6, отличающаяся тем, что указанное разветвленное ядро содержит до десяти полифункциональных аминокислотных остатков.
8. Композиция по любому из пп. 5-7, отличающаяся тем, что указанный полифункциональный аминокислотный остаток или совокупность полифункциональных аминокислотных остатков содержат остаток лизина, орнитина, аргинина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, аспарагина, глутамина или цистеина.
9. Композиция по любому из пп. 5-8, отличающаяся тем, что указанный гемостатический агент имеет общую формулу (I):
,
где FBP представляет собой фибриноген-связывающий пептид;
(линкер) представляет собой необязательный линкер, предпочтительно непептидный линкер;
X представляет собой трифункциональный аминокислотный остаток, предпочтительно остаток лизина, орнитина, аргинина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, аспарагина, глутамина или цистеина;
2
Y представляет собой –FBP или -NH;
n
a
Z представляет собой – (линкер)-FBP или -[-X-(линкер)-FBP]-(линкер)-FBP, если Y представляет собой -FBP, или
n
a
2
Z представляет собой -[-X-(линкер)-FBP]-(линкер)-FBP, если Y представляет собой -NH;
n
где X представляет собой трифункциональный аминокислотный остаток, предпочтительно остаток лизина, орнитина, аргинина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, аспарагина, глутамина или цистеина; и
a равен 1-10, предпочтительно 1-3.
10. Композиция по любому из пп. 5-9, отличающаяся тем, что указанный гемостатический агент имеет следующую общую формулу (II):
где:
FBP представляет собой фибриноген-связывающий пептид;
2
5
-(линкер)- представляет собой необязательный линкер, предпочтительно содержащий -NH(CH)CO-;
2
Y представляет собой -FBP или -NH;
Z представляет собой:
-R-(линкер)-FBP, если Y представляет собой -FBP, или
Y представляет собой -FBP, и а равен 1-10, предпочтительно 1-3,
2
4
2
3
2
3
где R представляет собой -(CH)NH-, -(CH)NH- или -(CH)NHCNHNH.
11. Композиция по любому из пп. 5-10, отличающаяся тем, что указанный гемостатический агент имеет следующую общую формулу (III):
гемостатический агент имеет следующую общую формулу (III):
где FBP представляет собой фибриноген-связывающий пептид;
2
5
–(линкер)- представляет собой необязательный линкер, предпочтительно содержащий –NH(CH)CO–;
2
Y представляет собой –FBP или -NH;
Z представляет собой:
2
4
-(CH)NH-(линкер)-FBP, если Y представляет собой -FBP; или
2
4
-(CH)NHCOCHNH-(линкер)-FBP
|
2
4
2
(CH)NH-(линкер)-FBP, если Y представляет собой -NH; или
2
4
-(CH)NHCOCHNH-(линкер)-FBP
|
2
4
(CH)NHCOCHNH-(линкер)-FBP
|
2
4
2
(CH)NH-(линкер)-FBP, если Y представляет собой -NH; или
2
4
-(CH)NHCOCHNH-(линкер)-FBP
|
2
4
(CH)NHCOCHNH-(линкер)-FBP
|
2
4
(CH)NHCOCHNH-(линкер)-FBP
|
2
4
2
(CH)NH-(линкер)-FBP, если Y представляет собой -NH; или
2
4
a
-[-(CH)NHCOCHNH-(линкер)-FBP]
|
2
4
(CH)NH-(линкер)-FBP, если Y представляет собой –FBP, и a равен 1-10, предпочтительно 1-3.
12. Композиция по любому из пп. 4-11, отличающаяся тем, что каждый фибриноген-связывающий пептид присоединен к разветвленному ядру посредством непептидного линкера.
13.  Композиция по п.12, отличающаяся тем, что указанный линкер содержит линейный линкер, предпочтительно линейную алкильную группу.
14. Композиция по п. 13, отличающаяся тем, что указанный линкер содержит:
2
n
–NH(CH)CO–,
где n равен 1-10.
15. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что фибриноген-связывающие пептиды предпочтительно связываются с впадиной "a" фибриногена по сравнению с впадиной "b" фибриногена.
16.Композиция по любому из пп. 1-14, отличающаяся тем, что фибриноген-связывающие пептиды предпочтительно связываются с впадиной "b" фибриногена по сравнению с впадиной "a" фибриногена.
17.Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанный гемостатический агент содержит фибриноген-связывающие пептиды с различными последовательностями.
18.Композиция по п. 17, отличающаяся тем, что совокупность носителей содержит первую совокупность носителей и вторую совокупность носителей, где фибриноген-связывающие пептиды, присоединенные к первой совокупности носителей, имеют последовательность, отличную от последовательности фибриноген-связывающих пептидов, присоединенных ко второй совокупности носителей.
19. Композиция по п. 17, отличающаяся тем, что каждый носитель содержит присоединенные к нему фибриноген-связывающие пептиды с различными последовательностями.
20. Композиция по любому из пп. 17-19, отличающаяся тем, что фибриноген-связывающие пептиды с различными последовательностями имеют различную селективность связывания с впадиной "a" по сравнению с впадиной "b" фибриногена.
21. Композиция по любому из пп. 17-20, отличающаяся тем, что фибриноген-связывающие пептиды с различными последовательностями содержат первый фибриноген-связывающий пептид, который предпочтительно связывается с впадиной "a" по сравнению с впадиной "b" фибриногена, и второй фибриноген-связывающий пептид, который связывается с впадиной "a" фибриногена по сравнению с впадиной "b" фибриногена с большей селективностью, чем первый фибриноген-связывающий пептид.
22. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что указанный первый фибриноген-связывающий пептид содержит аминокислотную последовательность GPRP- (SEQ ID NO: 1) на аминоконце.
23. Композиция по п. 21 или 22, отличающаяся тем, что указанный второй фибриноген-связывающий пептид содержит аминокислотную последовательность - APFPRPG (SEQ ID NO: 14) на карбоксильном конце.
24. Композиция по любому из пп. 17-20, отличающаяся тем, что фибриноген-связывающие пептиды с различными последовательностями содержат первый фибриноген-связывающий пептид, который предпочтительно связывается с впадиной "a" фибриногена по сравнению с впадиной "b" фибриногена, и второй фибриноген-связывающий пептид, который предпочтительно связывается с впадиной "b" фибриногена по сравнению с впадиной "a" фибриногена.
25. Композиция по п. 24, отличающаяся тем, что указанный первый фибриноген-связывающий пептид содержит аминокислотную последовательность GPRP- (SEQ ID NO: 1) на амино-конце.
26. Композиция по п. 24 или 25, отличающаяся тем, что указанный второй фибриноген-связывающий пептид содержит на аминоконце аминокислотную последовательность GHRP- (SEQ ID NO: 10), предпочтительно аминокислотную последовательность GHRPY- (SEQ ID NO: 11).
27. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная биосовместимая жидкость представляет собой водный раствор.
28. Композиция по п. 27, отличающаяся тем, что указанный водный раствор представляет собой солевой раствор.
29. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанный полисахарид содержит гликозаминогликан, окисленную целлюлозу, хитозан, хитин, альгинат, окисленный альгинат или окисленный крахмал.
30. Композиция по п. 29, отличающаяся тем, что указанный гликозаминогликан содержит гиалуроновую кислоту.
31. Композиция по любому из предшествующих пунктов отличающаяся тем, что указанные частицы содержат гранулы поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты, где основная часть гранул имеет диаметр в диапазоне 100-1500 мкм в частично или полностью гидратированной форме.
32. Композиция по любому из предшествующих пунктов, имеющая содержание твердых веществ 1-70% или 5-20% по массе от массы композиции.
33. Композиция по любому из пп. 1-31, отличающаяся тем, что массовое отношение частиц к жидкости составляет от 1:1 до 1:12 или от 1:3 до 1:8.
34. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная композиция является прозрачной.
35. Композиция по любому из пп. 1-34 для применения в качестве лекарственного средства.
36. Композиция по любому из пп. 1-34 для применения для лечения кровотечения или для лечения раны.
37. Композиция по любому из пп. 1-34 для получения лекарственного средства для применения для лечения кровотечения или для лечения раны.
38. Способ лечения кровотечения, включающий введение эффективного количества композиции по любому из пп. 1-34 в кровоточащую рану.
39. Способ лечения раны, включающий введение эффективного количества композиции по любому из пп. 1-34 в рану.
40. Способ получения стерильной готовой к применению текучей гемостатической композиции, включающий:
смешение биосовместимой жидкости, растворимого гемостатического агента и частиц биосовместимого поперечно-сшитого полисахарида, подходящего для применения для остановки кровотечения, которые не растворимы в биосовместимой жидкости, где растворимый гемостатический агент содержит совокупность носителей и совокупность фибриноген-связывающих пептидов, иммобилизованных на каждом носителе; и
стерилизацию композиции.
41. Способ по п. 40, отличающийся тем, что указанную композицию стерилизуют паром или сухим жаром.
42. Способ по любому из пп. 40-41, отличающийся тем, что указанную жидкость, агент и частицы смешивают в условиях, которые являются эффективными для получения непрерывной жидкой фазы, содержащей частицы, по существу однородно распределенные по жидкой фазе, за счет чего образуется по существу гомогенная гемостатическая композиция.
43. Способ по любому из пп. 40-42, дополнительно включающий центрифугирование смеси для удаления пузырьков воздуха из смеси.
44. Способ по любому из пп. 40-42, отличающийся тем, что указанную биосовместимую жидкость и частицы смешивают друг с другом перед добавлением растворимого гемостатического агента.
45. Способ по п. 44, дополнительно включающий центрифугирование смеси биосовместимой жидкости и частиц для удаления пузырьков воздуха из смеси перед добавлением растворимого гемостатического агента.