Изучение воздействия факторов культуральной среды и механического микроокружения на рост фолликулов яичника и созревание ооцитов мыши in vitro

Изучение воздействия факторов культуральной среды и механического микроокружения на рост фолликулов яичника и созревание ооцитов мыши in vitro

Ключевые слова: овариальная ткань, рост фолликулов, культивирование

Keywords:

cultivation,

human ovarian tissue,

growth of ovarian follicles

Филатов М.А., Семёнова М.Л.

МГУ им. М.В.Ломоносова

119991, Российская Федерация, г. Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 12 Биологический факультет

Study of culture medium factors and mechanical microenvironment influence on growth of mice ovarian follicles and oocytes maturation in vitro

Filatov M.A., Semenova M.L.

Lomonosov Moscow State University

1-12, Leninskie Gory, Moscow, Russian Federation, 119991

Faculty of Biology

E-mail: maxfilat@yandex.ru

Разработка систем культивирования фолликулов яичника in vitro — одна из первоочередных целей вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ). Создание такой системы позволит сохранить фертильность женщинам, нуждающимся в лечении гормон-зависимых злокачественных новообразований (в том числе рака молочной железы) и аутоиммунных заболеваний (например, васкулитов). Для лечения таких заболеваний используют агрессивные методы лечения (в том числе химио- и лучевую терапию), негативно сказывающиеся на состоянии половых клеток. Для разработки подобных систем in vitro культивирования фолликулов в качестве модельного объекта в настоящее время чаще всего используют овариальные фолликулы мыши.

В работе были использованы фолликулы яичников мышей в возрасте 14-16 дней. После выделения фолликулы были помещены в раствор альгината натрия, который затем был полимеризован в среде, содержащей хлорид кальция в концентрации 0,2 М для получения гидрогеля концентрации 1% или 2%. Фолликулы культивировали индивидуально или группами в среде а-МЕМ с добавлением хлорида карнитина, инсулин-селенит-трансферрина, фолликулостимулирующего гормона и гентамицина. Длительность культивирования составляла 8-14 дней. Выбор срока культивирования определяли в зависимости от первоначального размера фолликула и скорости его роста.

Показано, что 1% раствор альгинатного гидрогеля в отличие от 2% раствора достоверно способствует более интенсивному росту фолликулов в случае использо-

вания двухслойных и ранних многослойных фолликулов. Ранние первичные фолликулы в условиях 1% и 2% альгинатного гидрогеля вступают в рост в единичных случаях. Изменение концентрации фетальной телячьей сыворотки в культуральной среде (5% или 10%) не оказывает влияния на рост фолликулов. Добавление в среду хлорида карнитина (1,25mM) достоверно способствует росту крупных многослойных фолликулов, оказывает позитивное влияние на рост двуслойных фолликулов и не влияет на рост фолликулов, находящихся на более ранних стадиях развития. Ооциты, полученные из фолликулов после культивирования в 1% альгинатном гидрогеле, имеют достоверно меньший диаметр по сравнению с ооцитами, созревшими in vivo. Частота выделения первого редукционного тельца у ооцитов, выделенных из культивированных фолликулов, достоверно ниже, чем у ооцитов, полученных в естественном цикле. Выделенные ооциты из фолликулов, культивирование которых осуществляли в альгинатном гидрогеле, были подвергнуты оплодотворению in vitro с помощью процедуры ИКСИ (внутрицитоплазматической инъекции сперматозоида), у данных ооцитов наблюдали формирование пронуклеусов.

Разработанные методики позволяют добиться роста овариальных фолликулов и формирования в них зрелых ооцитов in vitro. Однако, этого удаётся достичь в малом числе случаев. Оптимизация систем культивирования овариальных фолликулов in vitro имеет большое значение для дальнейшего развития вспомогательных репродуктивных технологий.

Международная научно-практическая конференция «РЕПРОДУКТИВНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ОНКОЛОГИИ» 22-23 мая 2015. Обнинск, Калужская область, Россия

~4П