СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
METHOD FOR PROPHYLACTICS OF CATTLE BRUCELLOSIS

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно к профилактике бруцеллезной инфекции.
Бруцеллез - зоонозная инфекция с высокой потенциальной возможностью перехода в хроническую форму.
Известно применение антибиотиков для лечения острой и хронической формы бруцеллеза. В частности, известен способ профилактики бруцеллеза, включающий пероральное введение животному противомикробного препарата совместно с иммуностимулятором и/или низкомолекулярными нуклеиновыми кислотами (патент РФ №2238759,  МПК А61К 39/10, опуб. 27.10.2004). В качестве противомикробного препарата используют различные антибиотики (рифампицин, тетрациклин, левомицетин, стрептомицин и другие), а в качестве иммуностимулятора - препарат иммунофор, который обладает способностью стимулировать различные системы иммунитета (В-систему и фагоциты), повышать и активизировать рост и развитие животных.
Однако курсы антибиотикотерапии даже в сочетании с иммуностимулятором не всегда приводят к положительному результату, так как возбудитель бруцеллеза, находясь внутриклеточно, надежно защищен клеточной мембраной от циркулирующего в организме антибиотика. Кроме того, длительное применение антибиотиков в лечебных дозах вызывает ряд побочных явлений. Применение препарата иммунофор приводит к увеличению фагоцитарного звена иммунитета, что приводит к неполной инактивации бруцелл, сохранению возбудителя в жизнеспособном состоянии, его персистенции в организме.
Для профилактики бруцеллеза широко используют различные вакцины - живые и инактивированные. В частности, известен способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота антигеном на основе белково-полисахаридного комплекса бруцелл (см. патент РФ №2037319, МПК А61К 39/10, опуб. 19.06.1995), представляющего собой суспензию клеток вакцинного штамма бруцелл Br.abortus 19-BA в S-форме, обработанную ацетоном. Белково-полисахаридный комплекс вводят телятам в возрасте 3-5 месяцев однократно в дозе 5-35 мг в 5 мл 0,9% раствора хлористого натрия.
Однако применение вакцины вызывает нежелательные побочные симптомы, такие как реактогенность, сенсибилизация, агглютиногенность, низкая протективная активность.
Наиболее близким к заявляемому является способ профилактики бруцеллеза, заключающийся в иммунизации животных стандартной вакциной из штамма Br. Abortus 82 и введении через 14-21 день иммуномодуляторов, в качестве которых используют растворы Т- и В-активина, которые вводят однократно в течение 3-х дней (см. патент РФ №2065749, МПК А61К 39/10, опуб. 27.08.1996). Через 12 месяцев осуществляют ревакцинацию серологически отрицательно реагирующих животных той же вакциной в той же дозе. Способ позволяет усилить иммуногенные свойства вакцины из штамма 82.
Однако способ длителен во времени, требует тщательности исполнения, что на практике трудно реализуемо. Кроме этого, иммунитет, создаваемый у животных, не стабилен, составляет всего 12 месяцев.
Изобретение направлено на решение задачи создания экономичного, простого в исполнении, эффективного способа профилактики бруцеллеза, обеспечивающего в значительно короткие сроки высокий уровень иммунной защиты животных от заражения.
Для решения поставленной задачи в способе профилактики бруцеллеза, заключающемся во внутримышечном введении профилактического препарата и иммуномодулятора, согласно изобретению в качестве профилактического препарата используют бруцеллин, а в качестве иммуномодулятора - препарат, содержащий, мас.%: формальдегид - 0,07-0,12 и хлорид натрия - 0,9-0,95, дистиллированная вода - остальное, при этом вначале вводят бруцеллин однократно молодняку молозивного возраста в дозе 2,5-3 мл на голову, а через 30-40 минут осуществляют введение иммуномодулятора в дозе 4-6 мл на голову.
В известных источниках патентной и научно-технической информации не описано способа профилактики бруцеллеза, позволяющего осуществлять эффективную защиту в значительно короткие сроки и обеспечивающего высокий уровень напряженности иммунитета за счет использования в качестве профилактического средства бруцеллина, в качестве иммуномодулятора препарата на основе формальдегида.
В отличие от известных аналогов в заявляемом способе вместо вакцины из штамма Br.Abortus 82 используется бруцеллин.
По своей природе бруцеллин - это стерильный биологический препарат, используемый для аллергической диагностики бруцеллеза, представляет собой фильтрат 30-дневной культуры трех типов бруцелл.
Обычно животным бруцеллин вводят либо под кожу века (пальпебральная проба), либо внутрикожно в центре одной из подхвостовых складок (внутрикожная проба).
В заявляемом способе бруцеллин вводят внутримышечно.
Иммуномодулятор (препарат на основе формальдегида) относится к новому классу препаратов, способствующих активации антигенспецифического иммунного ответа, при развитии которого достигается элиминация инфекционного агента. Препарат вызывает продукцию альфа- и бета-интерферонов, мобилизует и активирует макрофаги, ограничивает выработку цитокинов воспаления, стимулирует продукцию антител к различным антигенам инфекционной природы, повышает резистентность организма.
Авторами впервые выявлено, что внутримышечное введение бруцеллина с последующим (через 30-40 минут) введением иммуномодулятора способствует активизации в организме животных завершенного фагоцитоза, что является неочевидным.
Все известные на сегодняшний день вакцины основаны на активизации лимфоцитарного звена иммунитета, а фагоцитоз рассматривается как неспецифическая реакция макроорганизма на внедрение возбудителя.
В заявляемом изобретении решена задача формирования высокого уровня напряженности иммунитета организма животных на основе активизации завершенного фагоцитоза, повышения функциональной активности нейтрофилов, а также изменения соотношения аэробного и анаэробного процессов окисления в сторону аэробного.
Введение данных препаратов приводит к отсутствию аллергических и серологических реакций.
Сказанное позволяет сделать вывод о наличии в заявляемом изобретении критерия «изобретательский уровень».
Способ осуществляется следующим образом.
Телятам молозивного возраста (от 2 до 9 дней) вводят внутримышечно в область крупа по 2,5-3 мл бруцеллина в концентрации, применяемой для аллергической диагностики бруцеллеза (Наставление по применению бруцеллина ВИЭВ для аллергической диагностики бруцеллеза животных, утвержденная Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 26.02.96 г.).
Через 30-40 минут телятам вводят внутримышечно по 4-5 мл иммуномодулятора, содержащего формальдегид, хлорид натрия и дистиллированную воду.
Оба препарата вводят животным однократно.
Рабочий раствор бруцеллина представляет собой прозрачную жидкость коричневато-желтого цвета без опалесценции, содержащую продукты метаболизма и специфические вещества.
Иммуномодулятор представляет собой бесцветную прозрачную жидкость со слабым запахом формалина, готовят его согласно ТУ 9336-001-00670551-2005.
Все последующие мероприятия по профилактике бруцеллеза проводят в соответствии с Ветеринарными правилами ВП 13.3.1302-96, утвержденными Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 18.06.96 г. (В сб. санитарных и ветеринарных правил «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных», изд-во Госкомсанэпиднадзор России и Минсельхозпрод России, Москва, 1996. - С.20).
Эффективность способа оценивали по результатам фагоцитоза, функциональной активности нейтрофилов, биохимическим показателям, результатам серологических реакций (реакции агглютинации (РА), реакции связывания комплемента (РСК) и реакции иммунодиффузии (РИД)), предусмотренных вышеперечисленными правилами и путем прямого заражения животных вирулентной культурой В.abortus.
Ниже приведены примеры, подтверждающие активизацию процесса фагоцитоза, увеличение функциональной активности нейтрофилов, усиление аэробных процессов окисления в организме телят.
Пример 1, доказывающий активизацию процесса фагоцитоза в организме животных.
Исследования проводились на 15 крысах и 12 телятах.
Животным вначале вводили бруцеллин, а затем через 30-40 минут - иммуномодулятор. Препараты вводили внутримышечно, однократно.
При этом крысам бруцеллин вводили в дозе 0,1 мл, а иммуномодулятор - в дозе 0,5 мл на голову. Телятам в возрасте 2-9 дней бруцеллин вводили в дозе 3 мл, а иммуномодулятор - в дозе 5 мл на голову.
Контрольным животным вводили физиологический раствор: крысам в дозе 0,6 мл, телятам - 8 мл.
Эффективность процесса фагоцитоза бактерий в нейтрофилах оценивали по показателям: фагоцитарной активности (% ФАГ), фагоцитарного индекса (ФИ), фагоцитарного числа (ФЧ) и индекса завершенности фагоцитоза (ИЗФ).
Результаты изучения фагоцитоза представлены в таблице 1.
Таблица 1Показатели фагоцитоза бруцелл у крыс через 28 дней после введения бруцеллина с иммуномодулятором
Характеристика групп животных
Показатели фагоцитоза
ФЧ (абс. знач.)
% ФАГ
ФИ (абс. знач.)
КОНТРОЛЬНАЯ
21,0±2,0
79,5±3,2
26,2±2,0
ОПЫТНАЯ (вводили бруцеллин с иммуномод.)
6,2±1,9
80,6±5,7
7,4±2,0
Установлено, что через 28 дней после введения белым крысам бруцеллина с имуномодулятором у иммунизированных животных по сравнению с контрольными достоверно снижались ФЧ (с 21,0±2,0 до 6,2±1,9) и ФИ (с 26,2±2,0 до 7,4±2,0). При этом процент участвующих нейтрофилов в фагоцитозе бруцелл (ФА) был аналогичен контрольному (80,6±5,7% - в опыте и 79,5±3,2 - в контроле).
Одновременно в опытных группах регистрировалась завершенность фагоцитоза бруцелл.
Результаты проведенных микроскопических исследований крови крыс показали, что количество бруцелл у обработанной данными препаратами крысы по сравнению с контрольной в поле зрения минимально.
Аналогичные результаты по активизации процесса фагоцитоза были получены на телятах. У животных в те же сроки, как и у крыс (через 28 дней), после введения препаратов (бруцеллина с иммуномодулятором) наблюдалась тенденция снижения ФЧ и ФИ в процессе фагоцитоза бруцелл нейтрофилами при постоянном значении ФА.
Микроскопические исследования крови телят, обработанных данными препаратами, также показали отсутствие возбудителя бруцеллеза.
Пример 2, подтверждающий увеличение функциональной активности нейтрофилов в крови телят.
Проводили исследования крови телят, которым в возрасте 2-9 дней вводили внутримышечно однократно: бруцеллин в дозе 3 мл и через 30 минут - иммуномодулятор. Исследования крови проводили на 7, 15 и 35 сутки после введения препаратов.
Результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2Функциональная активность нейтрофилов крови телят
Показатели
7 сутки
15 сутки
35 сутки
Контр.
Опыт
Контр.
Опыт
Контр.
Опыт
Функциональн. активность нейтрофилов: Индекс стимуляции
0,32±0,04
0,34±0,01
3,09±0,44
5,36±0,32
0,13±0,11
0,57±0,16
Из таблицы 2 видно, что после введения препаратов на 15 и 35 сутки происходит достоверное увеличение функциональной активности нейтрофилов в крови опытной группы телят по сравнению с контрольными, что свидетельствует о возможности полного уничтожения возбудителя в периферической крови животных.
Пример 3, подтверждающий усиление аэробных процессов окисления в организме телят.
Спустя 28 дней после введения препаратов проводили исследования биохимических показателей крови телят опытной и контрольной групп, описанных в примере 1. Результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3
Биохимические показатели крови телят
Характеристика групп животных
Биохимические показатели
АЛТ
ACT
КК
ЛДГ
Белок
Контрольная
1,92±0,5
16,92±1,0
174,8±10,1
1717,95±114,4
71,85±1,4
Опытная (обработанные: бруцеллин + иммуномодулятор)
7,43±0,5
7,43±0,5
263,80±46,5
1890,52±331,9
40,83±3,0
Резюмируя результаты биохимических исследований (абсолютные показатели и корреляционные связи их друг с другом), можно считать, что введение бруцеллина с иммуномодулятором усиливает аэробные процессы окисления в организме иммунизированных телят.
Для подтверждения специфичности формируемой резистентности организма к возбудителю бруцеллеза проводили серологические бактериологические и биологические исследования экспериментальных и контрольных животных по общепринятым методикам.
В сыворотках крови иммунизированных телят не отмечалось повышения уровня специфических антител в реакциях агглютинации, связывания комплемента и иммунодиффузии. Эти результаты свидетельствовали об отсутствии активизации лимфоцитарного звена иммунитета.
Проводили заражение вирулентной культурой В.abortus лабораторных животных, контрольных и обработанных данными препаратами по заявленной нами схеме.
В опытах было использовано 10 крыс. Ни одно из обработанных данными препаратами животных не заразилось.
Бактериологические исследования подтвердили отсутствие во внутренних органах у обработанных животных возбудителя бруцеллеза.
Все контрольные животные заболели, от них выделена вирулентная культура В.abortus.
Таким образом, заявляемый способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота позволил создать высокий уровень иммунной защиты животных к возбудителю бруцеллеза путем активизации завершенного фагоцитоза, увеличения функциональной активности нейтрофилов и усиления аэробных процессов окисления.