СПОСОБ СНИЖЕНИЯ ГЕТЕРОГЕННОСТИ АНТИТЕЛ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СООТВЕТСТВУЮЩИХ АНТИТЕЛ

1. Способ снижения гетерогенности в антителах, полученных путем культивирования клеток, за счет уменьшения доли лизинового остатка на С-концах антител, включающий добавление двухвалентных ионов переходных металлов в культуральную среду, продуцирующую антитела, или изменение осмотического давления культуральной среды или их комбинацию для получения указанных антител с пониженной гетерогенностью.
2. Способ по п.1, при этом гетерогенность имеет место из-за доли заряженного варианта антител.
3. Способ по п.1, при этом путем осуществления указанного способа снижают гетерогенность для доли антител, колеблющейся от примерно 75% до примерно 100%.
4. Способ по п.1, при этом антитела являются антителами, встречающимися в природе, или рекомбинантными антителами, выбранными из группы, включающей моноклональные антитела, модифицированные антитела, производные антител и фрагменты антител или их любую комбинацию.
5. Способ по п.2, при этом снижение в гетерогенности доли основных вариантов антител составляет от 3% до 30%, и возрастание соотношения основной пик/О лизин антител составляет от 5% до 25%.
+2
6. Способ по п.1, при этом ион металла представляет собой Zn в концентрации, колеблющейся от примерно 0,05 мМ до примерно 1,5 мМ.
7. Способ по п.1, при этом осмотическое давление культуральной среды снижают для обеспечения осмотического давления, колеблющегося от примерно 240 мОсм/кг до примерно 260 мОсм/кг.
8. Способ по п.1, при этом культивирование представляет собой периодическое культивирование с подпиткой и включает культивирование клеток млекопитающих, предпочтительно, культивирование линии клеток яичника китайского хомячка (СНО).
9. Способ по п.1, при этом добавление двухвалентных ионов переходных металлов осуществляют во время культивирования клеток, первый раз во время фазы клеточного роста и второй раз во время фазы продуцирования полипептидов; или добавление иона металла осуществляют на начальной фазе перед указанным культивированием клеток.
10. Способ получения антител с пониженной гетерогенностью путем уменьшения доли лизинового остатка на С-конце антитела, включающий следующие действия
a) культивирования клеток в культуральной среде для получения антител и добавления в культуральную среду двухвалентных ионов переходных металлов или изменения осмотического давления культуральной среды или их комбинацию; и
b) извлечения из культуральной среды антител с пониженной гетерогенностью.
6
6
11. Способ по п.10(a), при этом клетки культивируют в концентрации, колеблющейся от примерно 0,5×10 клеток/мл до примерно 0,6×10 клеток/мл.
12. Способ по п.10(a), при этом культивирование осуществляют при температурах, колеблющейся от примерно 36°С до примерно 38°С.
13. Способ по п.10, при этом антитела являются антителами, встречающимися в природе, или рекомбинантными антителами, выбранными из группы, включающей моноклональные антитела, модифицированные антитела, производные антител и фрагменты антител или их любую комбинацию.
14. Способ по п.10, при этом гетерогенность имеет место из-за доли заряженного варианта антител.
15. Способ по п.10, при этом путем осуществления указанного способа снижают гетерогенность для доли антител, колеблющейся от примерно 75% до примерно 100%.
16. Способ по п.14, при этом снижение в гетерогенности доли основных вариантов антител составляет от 3% до 30%, и возрастание соотношения основной пик/0 лизин антител составляет от 5% до 25%.
17. Способ по п.10, при этом культивирование представляет собой периодическое культивирование с подпиткой и включает культивирование клеток млекопитающих, предпочтительно, культивирование линии клеток яичника китайского хомячка (СНО).
+2
18. Способ по п.10, при этом ион металла представляет собой Zn в концентрации, колеблющейся от примерно 0,05 мМ до примерно 1,5 мМ.
19. Способ по п.10, при этом осмотическое давление культуральной среды снижают для обеспечения осмотического давления, колеблющегося от примерно 240 мОсм/кг до примерно 260 мОсм/кг.
20. Способ по п.10(b), при этом добавление двухвалентных ионов переходных металлов осуществляют во время культивирования, первый раз во время фазы клеточного роста и второй раз во время фазы продуцирования полипептидов при температурах, колеблющихся от примерно 30°С до примерно 32°С; или добавление двухвалентных ионов переходных металлов осуществляют на начальной фазе перед указанным культивированием клеток.
6
6
6
6
21. Способ по п.20, при этом в фазе клеточного роста концентрация клеток колеблется от примерно 12×10 клеток/мл до примерно 13×10 клеток/мл, и при этом в фазе продуцирования полипептида концентрация клеток колеблется от примерно 13×10 клеток/мл до примерно 15×10 клеток/мл.
22. Способ снижения гетерогенности в антителах, полученных путем культивирования клеток, включающий изменение осмотического давления культуральной среды для получения указанных антител с пониженной гетерогенностью.
23. Способ по п.22, при этом осмотическое давление культуральной среды колеблется от примерно 240 мОсм/кг до примерно 260 мОсм/кг.