Энергетический и интерквантильный методы анализа электрокардиоинтервалов

Статья

ет усреднению по множеству реализаций. Чаще лабораторные параметры не являются константными, а имеют отклонения от основного значения, удерживая их в определенных пределах при непрерывном колебательном изменении величин. Судить о значении индивидуальных изменений при мониторинге лабораторных показателей можно при условии, что они есть у индивидуумов при действии стандартного повреждающего фактора.

Попытки определить роль физиологической индивидуальности в проявлении устойчивости к воздействию ионизирующего излучения предпринимались. Итогом был вывод о том, что радиорезистентность (устойчивость организма к действию ионизирующего излучения) бывает возрастной, половой и индивидуальной. Если колебания радиочувствительности за счет других аспектов составляет 2-3 Гр, то различия, обусловленные индивидуальной радиочувствительностью, могут достигать 5-6 Гр.

Проведенные опыты показали, что смертность крыс при одной и той же дозе 6 Гр (ЛД 50/30) и соблюдении одинаковых условий облучения колеблется в отдельных группах от 20 до 90%. При этом длительность жизни облученных животных составила от 1 до 52 суток, причем 7% из них выжили. Межиндивиду-альная вариабельность даже при гомогенизации опытных групп особей одного вида достаточно велика. Т.к. в основе диагностики острой лучевой болезни (ОЛБ) лежат значения гематологических показателей, то в эксперименте они исследовались до, во время и после воздействия. Исследовали также значения комплексного показателя радиоустойчивости, предложенного И. В.Лисовским (1978), который был выведен в результате анализа 39 биохимических, гематологических и физиологических тестов и имеет высокую прогностическую ценность. В качестве основы лабораторной диагностики индивидуальной резистентности опытных животных может служить последовательное определение числа лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови. Критерием индивидуальной резистентности надо считать незначительную индивидуальную вариабельность количества лейкоцитов и лимфоцитов, значения которых находятся в области нижних граничных значений. На рис. 1 приведено распределение показателей, характеризующих индивидуальную радиорезистентность у 105 экспериментальных животных в координатах: ось абсцисс - среднее число лейкоцитов, ось ординат - среднее число лимфоцитов за два измерения, проведенные с интервалом в 5 суток до начала кого-либо воздействия (фоновые измерения).

(109/а) -

белок, глюкоза, липиды), выполненных до и после автономного похода, а также через 45 дней отдыха (рис. 4).

-Н109/л)

8 10 12 14 16 18 20 22

А І-ая группа

ІІ-ая группа

Рис. 1 Распределение показателей, характеризующих индивидуальную резистентность (лейкоциты и лимфоциты), у опытных животных

При помощи этих критериев выявлены высокоустойчивые особи, составляющих около 10% от всех облученных особей. Именно они выжили при последующем тестирующем облучении. Исследования показали, что при динамическом наблюдении лабораторных показателей, характеризующих индивидуальную радиорезистентность, наиболее радиоустойчивые животные сохраняют свою резистентность и при пролонгированном облучении малыми дозами ионизирующего излучения (рис. 2 и 3).

Такой подход, предполагающий многократное исследование одних и тех же лабораторных показателей, выявил группу наиболее резистентных людей. Их оказалось около 10% из числа группы мужчин-подводников в возрасте 18—45 лет, которые длительно находились в одинаковых условиях профессиональной деятельности. Ретроспективный анализ лабораторных показателей показал их стабильность на протяжении ряда лет. Отличала эту группу и динамика биохимических показателей (общий

Рис. 2. Вариабельность показателей лейкоцитов при многократных измерениях

7.5 Липиды

г/л 7

6.5

6

5.5 5

4.5 4

До похода После похода После отдыха

Наиболее радиорезистентные Средняя группа ^“Наименее радиорезистентные

Рис. 3. Вариабельность показателей лимфоцитов при восьми последовательных измерениях с интервалом 5 суток у 6 индивидуумов

1 5 10 15 20 25 30 35

Рис. 4. Средний уровень концентрации общих липидов в сыворотке крови людей

На примере изучения динамики простых лабораторных тестов показано, что при определении понятия «норма» в отношении лабораторных показателей значение имеет не только статистическое значение в границах диапазона того или иного параметра, но и характеристика индивидуальной вариабельности. Эффективность традиционной лабораторной диагностики может быть существенно увеличена при помощи метода оценки индивидуальной вариабельности лабораторных показателей.

УДК 612.172.4

ЭНЕРГЕТИЧЕСКИЙ И ИНТЕРКВАНТИЛЬНЫЙ МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЭЛЕКТРОКАРДИОИНТЕРВАЛОВ

Р.А. КАВАСМА, А.А. КУЗНЕЦОВ, Л.Т. СУШКОВА*

Введение. Динамика поведения сердечного ритма (СР) чрезвычайно сложна и не поддаётся формальному описанию. Ритм сердечных сокращений наиболее доступен для регистрации физиологических параметров процессов вегетативной регуляции в сердечно-сосудистой системе. Динамические характеристики

600000, г. Владимир, ул. Горького, 87. Владимирский государственный университет

2

3

4

5

Р.А. Кавасма, А.А. Кузнецов, Л.Т. Сушкова

сердечного ритма определяют выраженность сдвигов симпатической и парасимпатической активности вегетативной нервной системы при изменении состояния пациента. Нарушение ритма сердца - это динамический процесс непрерывного возникновения, существования и угасания элементарных источников, инициаторов аритмии сердца [1—3]. Классический подход в кардиологии основан на пространственно-временных, статистических, пространственно-спектральных методах получения диагностических показателей функционального состояния сердца [4]. В кардиологии результаты анализа СР используются как основной прогностический показатель при оценке рисков при ишемической болезни, аритмиях, остром инфаркте миокарда, недостаточности кровообращения и т. д. Традиционно электрокардиограмма (ЭКГ) анализируется по форме, длительности, взаиморасположению зубцов и сегментов. При переходе к анализу ЯЯ-интервалограммы получаем достоверную информацию о процессах, протекающих в самом сердце и кровеносной системе, о функциональном состоянии организма. При этом управляющим параметром является интервал времени между Я-зубцами. Развитие новых подходов определяет поиски закономерностей в сердечных аритмиях на основе методов теории хаоса, нелинейной динамики и математического моделирования.

Цель работы - анализ состояния ритма сердца энергетическим [5] и интерквантильным [6] методами, систематизация сердечных аритмий по схеме перехода от нерегулярных ритмов к хаосу, существующей в математической теории динамических систем; поиск закономерностей, связывающих результаты с прогнозом устойчивости динамики сердечного ритма.

Определение оптимальной выборки. Объем минимальной выборки - 50...250 значений ЯЯ-интервалов. При выборке объемом менее 100 кардиоинтервалов падает статистическая достоверность результатов оценки [7]. На практике объем выборки ограничен диапазоном частотного измерения прибора, применяемого для исследования (датчик Холтера). Желательно получение результатов на базе минимального объема информации. Предлагается минимальный объем информации оценивать вкладом по энергии элементарного колебательного процесса с максимальным полупериодом в динамике ЯЯ-интервалов. Значимость энергетического вклада оцениваем по наличию пика на спектре ЯЯ-интервалограммы, отвечающего за плотность энергии составляющего колебательного процесса с максимальным полуперио-дом. Тогда самый левый на частотной оси пик в спектре определит объем выборки по формуле Найквиста: _ 1 в но-

2 /шт

мерном ряду с единицей отсчета один кардиоинтервал; получаем одну информационную точку, несущую информацию об одном полупериоде; используем функцию ЛОБ ЯЯ-интервалограммы и спектр ЛОБ [8].

Уменьшение объема выборки ведет к пропуску периода основного низкочастотного процесса. Провели спектральный анализ ЯЯ-интервалограмм 50 условно здоровых лиц. Низкие часто-

3 1

ты у всех находятся в диапазоне (2-10)* 10 , — (рис. 1), что

2п

соответствует объему выборки 50-250 кардиоинтервалов и совпадает с рекомендуемым объемом.

,мс2

Рис. 1. Спектр ЛОБ ЯЯ-интервалограммы:/тш=8.10~3, 1/2п

Энергетический метод. Энергетический метод анализа сердечного ритма основан на оценке площадей, ограниченных ЯЯ-интервалами по временной оси и изоэлектрической и нулевой линиями по оси амплитуды. При этом условно-нулевая линия не должна пересекать графическую реализацию ЭКГ [5]. Предполагается, что при изменении свободной энергии системного процесса кардиоцикла должна меняться и его топологическая струк-

тура. При этом сердце, как система регуляции, стремится ее удержать в норме за счет изменений частоты сокращения, ширины отдельных зубцов, коррекции амплитуд и положения изолинии. Например, рост амплитуды пика Я или поднятие комплекса 8Т отражает компенсацию уменьшения энергии. В таком представлении общая площадь под кривой ЭКГ отражает полную свободную энергию работы сердца, характеризующую внутреннюю структуру каждого кардиоцикла и всей ЭКГ. Анализ ритма сердца энергетическим методом проводился по ЭКГ разных групп людей. ЭКГ регистрировались у 50 условно здоровых молодых людей (студенты 1-1У курса ВлГУ, 18-20 лет) в цифровом коде с помощью накопителя Холтера. У 30 студентов регистрировались ЭКГ во время лекции (положение «сидя»), а у остальных 20 - в состоянии покоя (положение «лежа»). Наряду с этим исследовались также 50 больных с различными патологиями. ЭКГ снималась по второму отведению Эйнтховена, т.к. при этом на ЭКГ зубец Я наиболее выражен [9]. После первичной обработки ЭКГ полученные данные в цифровом виде вводились в базу данных компьютера. С помощью программы «Системный анализ динамики ритма сердца» (САДР) каждый массив из базы данных анализировался на предмет идентификации и фиксации значений пиков Я. На этом этапе шумы и артефакты сводятся к минимуму. Далее определялись площади плоских фигур между ЯЯ-интервалами, и создавалась новая выборка данных, состоящая из последовательно считываемых площадей плоских фигур -8яя-интервалограмма [10] (рис. 2, 3).

Оказалось, что 8яя- и ЯЯ-интервалограммы всех условно здоровых людей качественно совпадают в областях больших и средних выбросов амплитуд. Несовпадения определяются областями малых выбросов. Для каждой ЭКГ по программе «САДР» строились ЯЯ- и 8яя-интервалограммы и оценивалась их корреляция. Анализ показал, что у всех исследуемых условно здоровых молодых людей значения коэффициентов корреляции гистограмм ЯЯ- и 8яя-интервалограмм (рис. 4, а, б) находились в интервале

0,7^1. По корреляционной оценке гистограмм ЯЯ- и 8яя-интервалограмм наблюдается высокое значение коэффициента корреляции при записи ЭКГ в состоянии покоя, и наоборот -уменьшение значения коэффициента в напряженном состоянии. Для здоровых людей в состоянии покоя регистрируется симметричная гистограмма. Ассиметрия указывает на отклонение ритма сердца от нормы [11]. Исследования в случае больных людей показывают, что коэффициент корреляции резко падает.

с

Рис. 2. Компьютерная версия ЭКГ. Определение значений максимальных пиков Я.

N

Рис. 3. 8ЯЯ-интервалограмма ЭКГ

Исследование ЭКГ параллельным анализом ЯЯ- и 8яя-интервалограмм выявляет наличие сердечной патологии.

Интерквантильный метод. Пространственно-временные методы недостаточны для описания всех особенностей сигнала ЯЯ-интервалограммы. В связи с этим предлагается применить интерквантильный метод обработки [6]. Вне зависимости от типа распределения плотности вероятности величин ЯЯ-интервалов, ЯЯ-интервалограмма разбивается по вертикали на интеркван-тильные промежутки (энергетические уровни), число которых рассчитывается по формуле Старджеса [12]. Каждый энергетический уровень приобретает собственную вероятностную оценку и

Р.А. Кавасма, А.А. Кузнецов, Л.Т. Сушкова

представляется собственной выборкой значений. Спектральный анализ проводится для всего диапазона значений ЯЯ-интервалов и для каждого интерквантильного промежутка. Интерквантиль-ный подход для каждого уровня используется для анализа интер-квантильных промежутков, их фазовых портретов (ФП), автокорреляционных функций и спектров ДОР. На рис. 5 и 6 показаны результаты интерквантильного метода в графическом виде: на рис. 5 - для здорового человека (студент ІІ курса ВлГУ); на рис. 6 - для больного человека с острым перитонитом (ОКБ г. Владимира). Исследуемый уровень отмечен на гистограммах.

0 0,1 0,2 0,3 Ü 20 40

t, с S,mB*c

Рис. 4. Гистограммы RR-

Рис. 5. Графики анализа интерквантильных промежутков по данным фрагмента ЯЯ-интервалограммы для здорового человека.

Рис. 6. Графики анализа интерквантильных промежутков по данным фрагмента ЯЯ-интервалограммы для случая больного человека

Результаты и выводы. Минимальный объем выборки устанавливается по минимальной информационной частоте в диапазоне 50...250 кардиоинтервалов. ЯЯ- и 8яя-интервалограммы, с точки зрения информативности оценки функционального состояния организма, идентичны. Коэффициент корреляции гистограмм ЯЯ- и З^-интервалограмм является количественным показателем ритма сердца в норме. Любое расхождение по коэффициенту корреляции рассматриваемых кардиоинтервалограмм свидетельствует о наличии патологии в работе сердца. При профилактических обследованиях можно переходить от исследования ЭКГ к анализу ЯЯ- и Зт-интервалограмм. Предложенный энергетический подход и программу анализа «САДР» можно использовать как экспресс-профилактику отклонений сердечного ритма от нормы. Интерквантильный метод анализа ЯЯ-интервалограмм дает достоверную информацию при оценке регуляторных процессов и устойчивости динамики сердечного ритма.

Таблица

Сравнительные результаты анализа графиков рис. 5 и 6

Для здорового человека Для больного человека

Огибающая кривая гистограммы Огибающая приближается по форме к нормальному распределению Гаусса. Коэффициент эксцесса равен 1,828 Наблюдается сильная асимметрия. Коэффициент асимметрии равен -0,039

Вариационный ряд (ВР) Кривая ВР имеет З-образную гладкую форму Кривая ВР имеет ступенчатую форму

Фазовый портрет ФП представляет собой аттрактор в виде «ёжика» или клубка с однородным наполнением траекторий движения изображающей точки В увеличенном масштабе аттрактор вырождается в точечную область, около которой формируются простые геометрические фигуры

Функция (АСБ) ДОР затухает медленно со значительным периодом. Хорошо поддаётся визуальной интерпретации как источник информации о максимальной периодичности временного ряда ДОР имеет меньшую тенденцию к затуханию и устойчива на малых значениях около нуля. Имеет трудно интерпретируемую форму и требует наличия спектрального анализа

Спектр Фурье Широкополосный спектр с выраженным максимумом на около нулевых частотах Максимум на около нулевых частотах падает. На хвосте спектра, в некоторых случаях, появляются «всплески»

Спектр ЛОБ На спектре выделяется одна характерная максимальная по энергии частота На спектре выделяется несколько максимальных по энергии частот

Литература

1. Бокерия Л А. Тахиаритмии: диагностика и хирургическое лечение.- Л.: Медицина, 1989.- С. 296.

2. Баевский Р.М. и др. Математический анализ сердечного ритма при стрессе.- М., Наука, 1984.- С. 219.

3. Ардашев А.В., Новосельский ПА. // Кардиостим.- 2004.-№ 252.

4. Яблучанский Н.И. и др. // Progress in Biomedical Researches.- 1998.- Т.3.- С. 95-99.

5. Кавасма РА и др.// Науч. труды V междун. научно-практ. конф. «Здоровье и образование в XXI веке».- М., 2004.- С. 157.

6. Кавасма РА. и др. // VI Межд. научно-техн. конф. «Перспективные технологии в средствах передачи информации».-Владимир, 2005.- С. 209-211.

7. Баевский Р.М., Иванов Г.Г. // Вариабельность сердечного ритма: теоретические аспекты и возможности клинического применения.- М., 2000.- http://www.ecg.ru

8. PriestlyM.B. // Academic Press.- 1981.- Vol. 2.- P. 869.

9. Физиология человека / Под ред. Р. Шмидта, Г. Тевса / Пер. с англ. - Т.2.- М.: Мир, 1996.- 313 с.

10. Кавасма РА.. и др. // Мат-лы XI межд. конф. «Новые мед. технологии и квантовая медицина».- М., 2005.- С. 89-90.

11. Калакутский Л.И., Манелис Э.С. Аппаратура и методы клинического мониторинга.- М.: Высш. шк., 2004.- С. 156.

12. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математ. статистика в клинических исследованиях.- М., ГЭОТАР-МЕД, 2001.- С. 256.

ENERGETIC AND INTERQUANTILE METHODS OF THE ELECTROCARDIOINTERVAL ANALYSIS

R.A.KAVASMA, A.A.KUZNETSOV, L.T. SUSHKOVA

Summary

The interquantile method of RR-intervalogram analysis provides reliable information when estimating regulatory processes and dynamics stability of the cardiac rhythm.

Key words: interquantile method, RR-intervalogram

Статья

УДК 611-018.1

СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АПОПТОЗА А.Б. ЛЕВИЦКАЯ, Д.Б. НИКИТЮК*

Апоптоз - один из вариантов программируемой клеточной гибели, основное предназначение которого, как физиологического процесса - поддержание постоянного количества клеточных элементов в органах и тканях организма и удаление клеток, прошедших свой жизненный цикл. В отличие от гибели клеток, вызываемой патологией, процессы апоптоза происходят в ядре и цитоплазме при сохранении целостности клеточной оболочки [1]. Основными критериями, характерными для апоптоза, являются: функционально - необратимое прекращение жизнедеятельности клетки; морфологически - потеря микроворсинок и межклеточных контактов, конденсация хроматина, уменьшение объема клетки, ее фрагментация и образование апоптозных телец [2]; биохимически - гидролиз белков цитоплазмы и межнуклеосом-ный распад ДНК [1]; генетически - структурно-функциональная перестройка генетического аппарата клетки [3]. В мире приняты следующие основные методы определения апоптоза.

I. Морфологические: световая микроскопия гистологиче-

ских препаратов и полутонких срезов; электронная, фазовоконтрастная, поляризационная, флюорисцентная, электронно-

трансмиссионная микроскопия; сканирующая, световая и электронно-микроскопическая радиоавтография, с использованием радиоактивной метки; TUNEL- и ISEL-методы, используемые для оценки апоптоза в тканевых срезах с помощью встроенных в концевые фрагменты ДНК меченых нуклеотидов.

II. Биохимические: электорофорез в агарозном геле с компьютерной денситометрией электрофореграмм для количественного определения степени фрагментации ДНК; метод ДНК-комет, или метод электрофореза единичных клеток со сканированием комет; определение активности каспаз.

III. Иммунологические: использование поли- и монональ-ных антител для выявления рецепторов на поверхности клеток, продуктов онкогенов и антионкогенов, цитотоксинов, ростовых факторов и других структур, антител против каспаз, а также против белков, регулирующих процесс апоптоза.

IY. Иммуноцитохимические: детекция апоптоза по идентификации экспрессии фосфатидилсерина на наружной стороне мембраны клетки с помощью ФИТЦ-меченного аннексина и последующей люминесцентной микроскопией.

Y. Иммуногистохимические: использование специфических маркеров клеточного цикла Кь67 PCNA с обработкой срезов в СВЧ-печи. Оценку результатов проводят стрептовидин-биотинпероксидазным методом.

YI. Проточная цитофлюориметрия позволяет выявить число апоптотических клеток в популяциях лимфоцитов, тимоцитов, макрофагах, клеток культуры. Апоптотические ядра обнаруживаются как широкий пик гиподиплоидной ДНК, который легко отличим от узкого диплоидного пика ДНК нормальных клеток.

YII. Вестерн-блот анализ применяется для идентификации электрофоретически разделенных полипептидных цепей. В качестве зондов используются меченые антитела.

YIII. Биотехнологические: трансфекция клонируемого гена в соматические клетки животных и человека; создание трансгенных мышей для выяснения роли введенного гена в клеточном развитии и гибели клеток.

Изучен уровень апоптоза гепатоцитов при подостром токсическом гепатите, вызванном четыреххлористым углеродом. Для создания модели токсического гепатита крысам-самцам Вистар опытной группы в течение 9 дней вводили внутримышечно 50% раствор четыреххлористого углерода в оливковом масле в дозе 0,3 мл на 100 г. массы тела. Контрольные и опытные животные содержались на общевиварном рационе и получали воду ad libitum. Показано статистически малозначимое увеличение активности каспазы -3 - на 9,3% в печени крыс опытной группы по сравнению с аналогичным показателем контрольной группы. Межнуклеосомной фрагментации ДНК гепатоцитов у животных как опытной, так и контрольной группы при этом не наблюдалось.

Поражение печени при действии 4-хлористого углерода сопровождается активацией каспазы-3 и не приводит к межнуклео-сомной фрагментации ДНК. По-видимому, при подостром токсическом гепатите, вызванном четыреххлористым углеродом, вклад процессов каспаза-зависимого апоптоза незначителен и гибель гепатоцитов развивается по другим механизмам [4].

С помощью проточной цитофлюориметрии изучено влияние пребиотиков инулина и олигофруктозы на спонтанный апоп-тоз в клетках иммунной системы. Крысы самцы Вистар двух опытных групп в течение 28 дней содержались на изокалорийном полусинтетическом казеиновом рационе, в котором кукурузный крахмал заменяли на инулин или олигофруктозу (10 % по массе).

Контрольные животные получали стандартный полусинте-тический казеиновый рацион. Исследовались суспензии клеток тимуса, селезенки, брызжеечных лимфатических узлов и перитонеальных макрофагов. Установлено, что обогащение рационов крыс инулином и олигофруктозой не оказывало влияния на процессы апоптоза в клетках иммунной системы [5, 6].

Ныне наметилась тенденция к использованию количественных методов оценки апоптоза, таких как проточная цитоф-люориметрия, определение активности каспаз, ТУННЕЛЬ-метод, электронная микроскопия и др. Учитывая неоднозначность признаков апоптоза, необходимо комплексное использование разных методов для определения и оценки апоптотической гибели.

Литература

1. Kerr J.F.R. et al. // Brit. J. Cancer.- 1972.- Vol. 26.- P. 239257.

2. Wyllie AH. et al. // Int. Rev.Cytol.- 1980.- Vol. 68.- P. 251306.

3. Лушников Е. Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз).- М, Медицина, 2001.- 192 с.

4. Левицкая А.Б., Москалева Е.Ю. // Мат-лы VIII Всерос. конгр. «Оптимальное питание - здоровье нации».- М., 2005.-С. 75.

5. Трушина Э.Н. и др. // Мат-лы 3-й Межд. науч.-иссл. конф. «Питание здорового и больного человека».- СПб.- 2005.- С.197.

6. Трушина Э.Н. и др. // Вопр. пит.- 2005.- №3.- С. 35^0.

УДК 539.16.047:574

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОГЛОЩЕННОЙ ЭНЕРГИИ ЭЛЕКТРИЧЕСКОГО ПОЛЯ ПРИ УВЧ-ТЕРАПИИ

С.Ю. ПЕРОВ*

Воздействие в лечебных целях на организм человека электрическим или магнитным полем ультравысокой частоты (УВЧ) является одним из наиболее распространенных методов в физиотерапии [1]. На практике зарекомендовал себя способ УВЧ-терапии с применением конденсаторного варианта, когда объект помещается с воздушным зазором между пластинами вторичного (терапевтического) контура генератора. Количество поглощенной энергии и терапевтический эффект находится в зависимости от напряженности электрического поля (ЭП) между конденсаторными пластинами, их величины, формы и расположения относительно тела пациента. В связи с этим важной задачей является корректное определение (дозиметрия) энергии ЭП УВЧ, поглощенной в тканях и органах пациента в процессе воздействия.

Наиболее распространенным методом является дозиметрия по индивидуальным ощущениям пациентом чувства тепла в области воздействия ЭП УВЧ. Однако если даже и оставить в стороне неизбежный субъективизм этого метода дозиметрии, общность в критериях оценки поглощенной энергии ЭП УВЧ отсутствует. В отечественной физиотерапии различают три дозы: I - без ощущения тепла, II - с ощущением слабого тепла и III - с ощущением отчетливого тепла, тогда как в зарубежной практике используется принцип 4-х доз: I - отсутствие ощущения тепла, II

* ГУ НИИ питания РАМН

* Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, 119899, Москва, Воробьевы горы, МГУ, Биологический факультет, e-mail: per-off@front.ru