СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПЕРЕХОДА МИОПИИ В ПРОГРЕССИРУЮЩУЮ ФОРМУ
METHOD FOR PREDICTION OF MYOPIA TRANSITION TO PROGRESSIVE FORM

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано в медицинской практике для прогнозирования перехода приобретенной в школьные годы миопии в прогрессирующую форму.
Способы прогноза перехода миопии в прогрессирующую форму основаны на изучении при этом заболевании нарушений в системе обмена соединительной ткани, а также в системе антиоксидантной защиты как на уровне общего, так и глазного метаболизма (М.И.Винецкая, З.К.Болтаева с соавт. Офтальмологический журнал, 1988, №3, С.155-158; Винецкая М.И., Иомдина Е.Н. с соавт. Вестник офтальмологии, 2000, №5, С.54-55).
Способ прогноза прогрессирования близорукости путем определения концентрации антител класса G и М в сыворотке крови (Патент РФ №2079136, 1997 г.) взят за прототип.
Техническим результатом изобретения является повышение точности прогноза прогрессирования.
Указанный технический результат достигается за счет того, что в способе прогнозирования течения миопии у детей школьного возраста, включающем определение содержания маркера в сыворотке крови, согласно изобретению в качестве маркера определяют содержание карбоксипропептидпроколлагена I типа, при его содержании в пределах 316,8-456 нг/мл у детей 10-14 лет и 388,8-579,6 нг/мл у детей 15-17 лет прогнозируют стационарное течение близорукости, а при его содержании 458,4-595,2 нг/мл в 10-14 лет и 285,6-309,6 нг/мл в 15-17 лет - прогрессирующее.
Карбоксипропептидпроколлаген I типа в сыворотке крови отщепляется от синтезированной остеобластами молекулы проколлагена специфическими протеазами перед встраиванием коллагена в растущую коллагеновую фибриллу. Выход этого пептида в циркуляцию позволяет по его уровню оценивать интенсивность биогенеза коллагена I типа.
Подтверждением достоверности предлагаемого способа прогноза является совпадение показателей концентрации исследуемого пептида в сыворотке крови с прогрессирующим течением близорукости в среднем в 100% случаев.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.
Взятие крови без антикоагулянта для получения сыворотки осуществляют в утренние часы натощак из локтевой вены обследуемых в строго стерильных условиях.
Определение уровня карбоксиконцевого пропептида проколлагена I типа (КТППКI) в сыворотке крови больных проводят методом «сэндвич» иммуноферментного анализа с применением щелочной фосфатазы в качестве индикаторного фермента с использованием тест-систем Metra CICP EIA («Quidel Metra», США).
В соответствующие лунки микропланшета с иммобилизованными антителами вносят по 100 мкл CICP стандартов, контролей и исследуемых образцов сыворотки крови, разведенных рабочим буфером в соотношении 1:12. Планшет инкубируют 2 часа при комнатной температуре (18-25°С) при непрерывном встряхивании, затем жидкость из лунок удаляют и планшет 3 раза промывают буфером. Планшет сушат путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.
В каждую ячейку микропланшета вносят по 100 мкл кроличьих анти-CICP антител. Планшет инкубируют в течение 45-50 минут при комнатной температуре при непрерывном встряхивании. Затем жидкость из ячеек удаляют и стрипы 3 раза промывают буфером. Планшет сушат путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.
В каждую лунку микропланшета вносят по 100 мкл конъюгата козьих антикроличьих антител с щелочной фосфатазой, разведенного буфером. Планшет инкубируют в течение 45-50 мин при комнатной температуре. Жидкость из лунок удаляют и 3 раза промывают буфером. Планшет сушат путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.
Во все лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора субстрата. Микропланшет инкубируют в течение 30-35 минут при комнатной температуре. Реакцию останавливают добавлением 50 мкл стоп-реагента в каждую лунку. Общее время постановки исследования - 5 часов.
Учет результатов проводят с использованием автоматического фотометра «Multiscan» при длине волны 405 нм, устанавливают нулевое поглощение по лунке со стандартом 0. Результаты выражают в нг/мл. При содержании карбоксипропептидпроколлагена I типа в пределах 316,8-456 нг/мл у детей 10-14 лет и 388,8-579,6 нг/мл у детей 15-17 лет прогнозируют стационарное течение близорукости. При содержании карбоксипропептидпроколлагена I типа 458,4-595,2 нг/мл в 10-14 лет и 285,6-309,6 нг/мл в 15-17 лет прогнозируют прогрессирующее течение заболевания.
У 50 больных с приобретенной в школьные годы близорукостью было изучено содержание карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови. При этом детей 10-14 лет было 25 человек и 15-17 лет - 25 человек. Взятие крови без антикоагулянта для получения сыворотки осуществляли натощак из локтевой вены обследуемых в строго стерильных условиях.
Определение уровня карбоксиконцевого пропептида проколлагена I типа (КТППКI) в сыворотке крови больных проводили методом «сэндвич» иммуноферментного анализа с применением щелочной фосфатазы в качестве индикаторного фермента.
В соответствующие лунки микропланшета с иммобилизованными антителами вносили по 100 мкл CICP стандартов, контролей и исследуемых образцов сыворотки крови, разведенных рабочим буфером в соотношении 1:12. Планшет инкубировали 2 часа при комнатной температуре (18-25°С) при непрерывном встряхивании, затем жидкость из лунок удаляли и планшет 3 раза промывали буфером. Планшет сушили путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.
В каждую ячейку микропланшета вносили по 100 мкл кроличьих анти-CICP антител. Планшет инкубировали в течение 45-50 минут при комнатной температуре при непрерывном встряхивании. Затем жидкость из ячеек удаляли и стрипы 3 раза промывали буфером. Планшет сушили путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.
В каждую лунку микропланшета вносили по 100 мкл конъюгата козьих антикроличьих антител с щелочной фосфатазой, разведенного буфером. Планшет инкубировали в течение 45-50 мин при комнатной температуре. Жидкость из лунок удаляли и 3 раза промывали буфером. Планшет сушили путем постукивания по поверхности лабораторного стола, покрытого фильтровальной бумагой.
Во все лунки планшета вносили по 100 мкл рабочего раствора субстрата. Микропланшет инкубировали в течение 30-35 минут при комнатной температуре. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-реагента в каждую лунку. Общее время постановки исследования - 5-5,5 часов.
Учет результатов проводили с использованием автоматического фотометра «Multiscan» при длине волны 405 нм, устанавливая нулевое поглощение по лунке со стандартом 0. Результаты выражали в нг/мл. Нормальный уровень карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови у практически здоровых лиц (контрольная группа) был равен 349,0±30,92 нг/мл у детей 10-14 лет и 527,2±11,26 у детей 15-17 лет.
У 10 (40%) из 25 больных миопией 10-14 лет наблюдалось прогрессирующее течение заболевания. При этом содержание карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови было выявлено в пределах 458,4-595,2 нг/мл у 10 (100%) пациентов. У 15 (60%) из 25 больных миопия имела стационарный характер течения. При этом содержание карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови было выявлено в пределах 316,8-456 нг/мл у 13 (86,7%) пациентов.
У 10 (40%) из 25 больных миопией 15-17 лет наблюдалось прогрессирующее течение заболевания. При этом содержание карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови было выявлено в пределах 285,6-309,6 нг/мл у 10 (100%) пациентов. У 15 (60%) из 25 больных миопия имела стационарный характер течения. При этом содержание карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови было выявлено в пределах 388,8-579,6 нг/мл у 14 (93,3%) пациентов.
Таким образом, предлагаемый способ прогноза прогрессирующего течения приобретенной близорукости являлся правильным у 10 из 10 больных в обеих возрастных группах, что было достоверно в 100% случаев.
Предлагаемый способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.
Пример 1. Больная М., 11 лет. Близорукость возникла в возрасте 7,5 лет. В течение последних 3-х лет наблюдалось прогрессирование миопии на 1,0 Дптр в год. Определение карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови проводилось по вышеописанной методике. Содержание карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови было равно 516 нг/мл. Следовательно, содержание карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови совпало с прогрессирующим течением близорукости.
Пример 2. Больная П., 13 лет. Близорукость возникла в возрасте 8 лет. За последние 3 года наблюдения не отмечалось прогрессирования заболевания. Определение карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови проводилось по вышеописанной методике. Содержание карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови было равно 362,4 нг/мл. Это свидетельствует о подтверждении стационарного течения близорукости.
Пример 3. Больной Н., 15 лет. Близорукость возникла в возрасте 9 лет. За последние 3 года наблюдения отмечается прогрессирование заболевания на 1 Дптр в год. Определение карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови проводилось по вышеописанной методике. Содержание карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови было равно 295,2 нг/мл. Это свидетельствует о подтверждении прогрессирующего характера течения миопии.
Пример 4. Больной Б., 16 лет. Близорукость возникла в возрасте 9 лет. За последние 3 года наблюдения не отмечалось прогрессирования заболевания. Определение карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови проводилось по вышеописанной методике. Содержание карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови было равно 523,2 нг/мл. Это свидетельствует о подтверждении стационарного течения близорукости.
Таким образом, предлагаемый способ прогноза перехода приобретенной в школьные годы близорукости в прогрессирующую форму позволяет оценить характер течения этого заболевания по содержанию карбоксипропептидпроколлагена I типа в сыворотке крови пациентов.
При выявлении содержания карбоксипропептидпроколлагена I типа 458,4-595,2 нг/мл в 10-14 лет и 285,6-309,6 - в 15-17 лет прогнозируют прогрессирование заболевания.