Биологическая экспресс-оценка мышечной ткани гидробионтов с использованием Tetrahymena pyriformis

Известия ТИНРО

2004 Том 136

ТЕХНОЛОГИЯ ОБРАБОТКИ ГИДРОБИОНТОВ

УДК 577:574.5

Ю.П.Шульгин; Ю.Г.Блинов, Л.В.Шульгина

БИОЛОГИЧЕСКАЯ ЭКСПРЕСС-ОЦЕНКА МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ ГИДРОБИОНТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

TETRAHYMENA PYRIFORMIS

Методом биотестирования с использованием инфузорий Tetrahymena pyrifor-mis установлено, что биологическая активность, атакуемость пищеварительными ферментами и относительная биологическая ценность изолированных из мышечной ткани гидробионтов белков значительно выше, чем неизолированных. Наименьшие значения показателей биологической ценности мышечной ткани обусловлены "антипитательным" влиянием содержащихся небелковых компонентов в гидробионтах. Биотестирование при оценке качества мышечной ткани гидроби-онтов с использованием инфузорий Tetrahymena pyriformis показывает суммарный показатель (интегральный) в виде генеративной и поведенческой реакций на использование организмом всех органических и неорганических компонентов.

Shulgin Yu.P., Blinov Yu.G., Shulgina L.V. Biological express-evaluation of hydrobionts muscle tissue by means of Tetrahymena pyriformis // Izv. TINRO. — 2004. — Vol. 136. — P. 294-303.

The study by biotesting method with using the infusoria Tetrahymena pyriformis determined the heightened biological activity, better attacking by digestive enzymes, and higher biological value of isolated proteins from muscle tissue of marine animals in compare with unisolated ones. The lesser biological value of the latter is conditioned by "antinutritious" effect of nonprotein components. The biotesting of the muscle tissue quality by means of infusoria allowed to get the integral index of generative and behavioral reactions of an organism to application of all organic and inorganic components.

В последние десятилетия отечественными и иностранными исследователями уделяется особое внимание использованию биологических методов для оценки качества пищевых сырья и продуктов. Это обусловлено тем, что степень соответствия продукта физиологическим потребностям организма может оценить лишь сам живой организм (Долгов, 1992). Известно, что в основе биологических методов лежит ответный сигнал организма (рост, размножение и функционирование) на изменение строго определенного состава питания — исключение какого-либо компонента или введение дополнительного (Пашенко и др., 1999). При этом аналитическими тест-объектами являются различные живые организмы, их органы и ткани, физиологические функции, биохимические реакции и т.д. (Королев и др., 1995; Рахманин и др., 1995; Суханов и др., 1995; Здольник и др., 1997). Для каждого биологического метода характерны своя методика эксперимента, аппаратура и способ регистрации ответного сигнала индикаторного организма. В качестве индикаторного организма могут выступать позвоночные, беспозвоночные, простейшие, микроорганизмы, а в последние годы внимание уче-

ных привлекают и некоторые растительные индикаторы (Игнатьев и др., 1980; Долгов, 1992; Павленко, 1995; Зулькарнаев и др., 1999; Ш еховцова, 2000).

Выбор тест-организма зависит от характера определяемого вещества. Ответный сигнал индикаторного объекта на изменение химического состава твердой, жидкой или воздушной сред может быть самым разнообразным: изменение характера поведения (поведенческие реакции); стимуляция или подавление роста, накопление биомассы; изменение пигментации, состава крови, биоэлектрической активности органов и тканей; нарушение функций органов пищеварения, дыхания, размножения; патологоанатомические изменения организма (Шеховцо-ва, 2000). Комплексным показателем эффективности действия определяемого соединения на индикаторный организм является либо выживаемость, либо летальный исход. Все перечисленные или какие-либо другие изменения тест-организма в отдельности или в совокупности могут быть использованы в качестве аналитического сигнала, который можно измерить физико-химическим методом или оценить визуально. На заключительной стадии выполнения анализа выбор способа регистрации ответного сигнала зависит как от целей анализа, так и от механизма и степени взаимодействия определяемого вещества и индикаторного тест-объекта. Информативность биологического метода анализа будет выше в том случае, когда большее число жизненных функций организма используется в качестве аналитических индикаторов. Ответный сигнал индикаторного организма на одно и то же вещество зависит от концентрации последнего: малые концентрации обычно стимулируют процессы жизнедеятельности организма, высокие — угнетают. Значительное повышение концентрации любого биологически активного соединения может привести к гибели тест-организма.

При определении биологической ценности пищевого сырья или продукта с использованием высших животных отмечается влияние на организм (физиологию, метаболизм) целого комплекса питательных и минеральных веществ, а также других соединений. Даже в случае полноценности белка изучаемого объекта (соответствия аминокислотного скора шкале ВОЗ/ФАО) при проведении длительного биологического эксперимента (до 28 сут и более) кормление животных одним продуктом приводит к погрешностям полученных результатов, а в некоторых случаях — к значительным (Шеховцова, 2000). Это обусловлено тем, что при наличии полноценных белков в пищевых объектах могут отсутствовать небелковые жизненно важные компоненты (незаменимые жирные кислоты, витамины и другие вещества) и наблюдаться непитательные факторы, прямо или косвенно влияющие на метаболические процессы организма. Поэтому при проведении длительного биологического эксперимента, связанного с использованием в пищу опытным животным одного продукта, не может быть достигнуто достоверного результата, так как в рационе возможен дефицит необходимых для жизнедеятельности организма небелковых компонентов.

Исследования Е.М.Мамаевой с соавторами (1991) по сравнительной оценке биологической ценности и усвояемости концентратов саркоплазматических белков некоторых промысловых рыб с использованием крыс продемонстрировали, что эти показатели изолированных белков значительно отличаются от таковых мышечной ткани объектов. Учитывая сказанное, следует, что для получения достоверной информации о биологической ценности белков или других питательных веществ биотестирование следует проводить с изолированными из пищевого субстрата компонентами. Вместе с тем авторы указывают, что проведение исследований на высших животных с использованием изолированных компонентов также затруднено из-за сложности выделения достаточно большого количества веществ в чистом виде, отсутствия в пищевом рационе небелковых жизненноважных веществ, длительности эксперимента и многих других причин. Кроме того, для достоверной оценки правильности и прецизионности результатов измерений в пределах одной лаборатории в соответствии с ГОСТом Р ИСО 5725-2002 рекомендуется серия из 15 измерений и более.

Указанных недостатков лишен биологический метод с использованием простейших, так как в эксперименте можно изучать одновременно токсическое и физиологическое воздействие как многокомпонентного субстрата, так и отдельного соединения. Наиболее удачной и перспективной моделью для проведения биологической оценки сельскохозяйственного сырья принято считать инфузории Tetrahymena pyriformis (Evans, Carruthers, 1978; Игнатьев, 1980), обменные процессы которых приближены к таковым высших животных (Бур-ковский, 1984).

Экспресс-метод биологической оценки с использованием инфузории Tetrahymena pyriformis имеет ряд преимуществ перед методами биологической оценки на высших животных (Беленький, 1977; Долгов, 1992). При анализе на простейших учитывается результат воздействия на организм только изучаемого продукта, который им потреблен. Инфузории характеризуются высокой интенсивностью обмена веществ, в результате чего более быстро проявляют свою анаболическую реакцию на продукт. Применение тетрахимен при биотестировании позволяет определить действие продукта на генетический аппарат клетки, так как смена поколений происходит 4-6 раз в сутки. Экспресс-метод с использованием инфузории дает возможность одновременно проводить большое количество анализов, характеризующихся простотой, низкой стоимостью, компактностью, профессиональной безвредностью. Е го можно использовать там, где нет условий для проведения эксперимента на высших животных, он позволяет одновременно провести сравнительную оценку качества как отдельных компонентов, так и целого пищевого объекта.

Достоверность полученных результатов биологического экспресс-метода обеспечивается возможностью единовременно проводить любое число наблюдений (от 30 и более). Кроме того, выделение белка или иного компонента в чистом виде из 100-200 г сырья или продукта в зависимости от его содержания в объекте (1-20 %) даст возможность провести от 260 до 1300 анализов, что также обеспечит высокую достоверность результатов проведенных исследований.

В этой связи нами были проведены исследования по возможности использования ускоренного биологического метода для оценки качества сырья и продуктов из высокобелковых морских объектов.

Для этого были отобраны гидробионты, мышечная ткань которых значительно различается по химическому составу (табл. 1). Минтай и треска, краб камчатский и кальмар командорский явились объектами, содержание жира у которых не превышало 1 %. Сельдь тихоокеанская и сайра характеризовались высоким содержанием жира (соответственно 16,3 и 12,6 %). Однако содержание белка во всех выбранных для проведения эксперимента гидробионтах было достаточно высоким — 14,6-20,1 %. Используемые образцы гидробионтов представляли собой мороженую продукцию сроком хранения не более 2 мес.

Принято считать, что по содержанию незаменимых аминокислот белки мышечной ткани используемых объектов относятся к полноценным (Кизеветтер, 1973).

Для определения наиболее приемлемого белка в качестве контрольного были проведены исследования по сравнительной оценке биологической ценности сухих стандартных препаратов казеина и альбумина, а также их

Таблица 1 Химический состав мышечной ткани опытных гидробионтов, %

Table 1

Chemical composition of tested hydrobionts' muscle tissue, %

Наименование объекта Вода Белок Жир Зола

Минтай 82,9 16,1 0,4 1,2

Треска 80,4 17,6 0,6 1,4

Сельдь тихоокеанская 65,0 17,5 16,3 1,2

Сайра 66,3 20,1 12,6 1,2

Краб камчатский 81,6 16,0 0,5 1,9

Кальмар командорский 83,3 14,6 0,5 1,6

сохранности в процессе хранения, срок которого рекомендован в прилагаемых к препаратам инструкциям.

Выбор казеина и альбумина продиктован тем, что эти белки характеризуются максимальной атакуемостью пищеварительными протеазами, содержат все необходимые аминокислоты в оптимальном соотношении и относятся к белкам высокого качества (Черников и др., 1974; Николаевская, Волкова, 1990).

Согласно Методическим рекомендациям для использования экспресс-метода биологической оценки продуктов и кормов (1990) определяли кинетику развития простейших Tetrahymena pyriformis на специальных средах с исследуемыми белками (рис. 1).

Рис. 1. Динамика роста инфузорий Tetrahymena pyri-formis на средах с казеином и альбумином различного срока хранения

Fig. 1. Dynamics of Infusoria Tetrahymena pyriform-is growth in medium with casein and albumin of different storage term

18 24

Срок хранения, мес

Результаты исследования, приведенные в табл. 2, показывают, что в процессе хранения стандартных белков их биологическая ценность изменяется. Атакуемость ферментами инфузорий Tetrahymena pyriformis стандартных белков и их утилизация по мере хранения снижались, что выражалось в уменьшении количества выросших клеток в 2 мл среды, содержащей 0,6 мг азота каждого белка. Наибольшее снижение интенсивности роста клеток простейших отмечалось на средах с альбумином.

Параллельно

Таблица 2

Сравнительная характеристика биологической ценности стандартных белков в процессе хранения

Table 2

Comparative characteristics of biological value of standard proteins during their storage

Срок хранения, мес

Казеин БЦ, %

Стандартные белки Альбумин

БЦ по отношению ОБЦ по отношению

к исходному значению, %

к казеину, %

были установлены изменения показателей биологической ценности (БЦ) каждого белка в процессе хранения относительно исходных значений, а также изменения показателя относительной биологической ценности (ОБЦ) альбумина относительно казеина, значения которого при одновременном определении принимали за 100 % (табл. 2).

По сравнению с исходным показатель БЦ альбумина через 12 мес хранения уменьшился на 9,7 %, в то время как значение БЦ казеина — только на 5,8 %. Дальнейшее хранение стандартных белков в одинаковых условиях показало ускорение темпа потери биологической ценности: у казеина показатель БЦ через 18 мес хранения снизился на 11,5 %, через 24 мес — на 17,4%, у альбумина — соответственно на 17,5 и 23,4 %.

3 100 100 120,0 ± 8,9

6 97,6 ± 2,8 96,1 ± 3,5 117,8 ± 8,4

12 94,2 ± 4,3 90,3 ± 5,4 114,8 ± 7,5

18 89,5 ± 5,6 82,5 ± 6,9 110,4 ± 6,2

24 82,6 ± 6,9 76,6 ± 7,7 111,2 ± 6,4

Результаты проведенных исследований показали, что наиболее стабильным в процессе хранения является казеин. Он был рекомендован в качестве контрольного для проведения дальнейших исследований. Срок хранения стандартного казеина для биотестирования с использованием инфузорий Tetrahymena ру-riformis не должен превышать 1 год.

Для проведения биологической оценки белков исследования проводили на средах, содержащих как изолированные белки гидробионтов, так и мышечную ткань. Изолированные белки из мышечной ткани гидробионтов получали путем осаждения спиртом (Практикум по биохимии, 1989), содержание белков в готовом осадке определяли по методу Кьельдаля (Лазаревский, 1955). Белки вводили в состав специальных для эксперимента сред и изучали кинетику развития инфузорий Tetrahymena pyriformis, скорость их роста и продолжительность времени инкубации до стационарной фазы роста.

Ежедневно из каждой опытной пробирки с ростом Tetrahymena pyriformis отбирали по 1 мл, обездвиживали инфузории каплей 2,5 %-ного спиртового раствора йода и производили подсчет клеток в 10 квадратах счетной камеры Фук-са-Розенталя. Значение О БЦ определяли отношением количества клеток, выросших на исследуемом продукте, к количеству инфузорий на среде с казеином, выраженному в процентах (Игнатьев и др., 1980). С целью выявления возможной токсичности ежедневно из контрольных и опытных проб под микроскопом в "раздавленной капле" оценивали движение, размеры, морфологические характеристики клеток инфузорий.

Результаты развития инфузорий Tetrahymena pyriformis на средах, содержащих изолированные белки гидробионтов, приведены на рис. 2 (А). Установлено, что время перехода роста инфузорий Tetrahymena pyriformis в стационарную фазу на среде с казеином составляло 72 ч. Продолжительность перехода инфузорий в стационарную фазу на средах с изолированными белками рыб — 96 ч, с белками краба камчатского и кальмара командорского — 72 ч, т.е. процесс утилизации белков мышечной ткани краба и кальмара происходит более интенсивно, чем белков рыб, и приближен по скорости к таковому казеина. По-нашему мнению, результаты исследований указывают на то, что на развитие инфузорий Tetrahymena pyriformis, скорость их роста и продолжительность полной утилизации опытных белков оказывают влияние их структура, молекулярная масса и другие свойства.

Продолжительность перехода инфузорий в стационарную фазу на средах, содержащих мышечную ткань рыб и беспозвоночных (рис. 2, Б), соответствовала таковой в эксперименте с их изолированными белками: в средах с добавлением мяса рыб — 96 ч, краба и кальмара — 72 ч.

Для оценки физиологического воздействия на организм простейших белков мышечной ткани, в том числе изолированных, исследуемых гидробионтов изучена их биологическая активность как показатель скорости протекания процессов жизнедеятельности индикаторного организма под действием белкового компонента. Для этого нами рассчитан коэффициент биологической активности (КБА), который представляет собой отношение числа клеток простейших Tetrahy-тепа pyriformis при переходе роста в стационарную фазу к продолжительности инкубации (табл. 3). Для казеина показатель КБА составил 1,91-1,23 кл./ч.

Наибольшей биологической активностью характеризовались белки беспозвоночных — краба и кальмара, значения их КБА превышали таковой чистого казеина. Показатели биологической активности изолированных белков рыб уступали таковым беспозвоночных и были значительно ниже, чем у казеина. Между собой они располагались следующим образом: треска ^ минтай ^ сельдь ^ сайра.

Самая высокая биологическая активность изолированных белков рыб установлена у трески, которая характеризуется наибольшей сбалансированностью аминокислотного состава (Кизеветтер, 1973).

•казеин

- -ш- - минтай

—♦— тр еска

—•— сельдь

—— сайра

краб

— » - кальмар

24 48

72

96 120

144

Время инкубации, ч

100

казеин  " минтай

• ^треска

• сельдь £—сайра

краб

•-кальмар

144

Время инкубации, ч

Рис. 2. Динамика роста инфузорий Tetrahymena pyriformis на средах, содержащих изолированные белки (А) и мышечную ткань (Б) гидробионтов

Fig. 2. Dynamics of Infusoria Tetrahymena pyriformis growth in medium with isolated proteins (A) and muscle tissue (Б) of hydrobionts

Таблица 3

Сравнительная биологическая активность изолированных белков и мышечной ткани гидробионтов

Table 3

Comparative biological activity of isolated proteins of hydrobionts'

et muscle tissue

И КБА,кл./ч КБА-КБА,

Изолированные Мышечная и% н

белки ткань %

Мышечная ткань

Казеин (контроль) 1,19- -1,23 1 19 1 23

Минтая 0,93- 0,98 0 86 0 89 10 4

Трески 0,99 -1,0 0 ,85- 0 86 14 0

Сельди тихоокеанской 0,92- -0,97 0 82 0 85 11 6

Сайры 0,91- 0,93 0 81 0 83 14 1

Краба камчатского 1,38- -1,46 0 96 1 05 29 6

Кальмара командорского 1,3- 1,38 0 90 0 96 30 5

Все значения КБА белков гидробионтов в экспериментах с мышечной тканью были ниже, чем у казеина. Кроме того, биологическая активность изолированных белков и мышечной ткани у одного объекта значительно различалась.

Наибольшая разность в значениях (КБАи-КБАн) изолированных (1,3-1,38) и неизолированных (0,90-0,96) из мышечной ткани белков отмечена у командорского кальмара и составила 30,5 %. У камчатского краба разность показателей биологической активности белков (соответственно 1,38-1,46 и 0,96-1,05) составила 29,6 %.

Значительные различия показателей биологической активности белков изолированных и в составе мышечной ткани беспозвоночных, по-нашему мнению, обусловлены наличием факторов, снижающих атакуемость белкового компонента пищеварительными ферментами (редуцирующих аминосахаров, экстрактивных веществ и др.).

Наименьшие различия в значениях КБА изолированных белков (0,93-0,98) и мышечной ткани (0,85-0,86) отмечены у минтая, разность коэффициентов активности составила всего 10,5 %. Разность КБА неизолированных белков по сравнению с изолированными у трески (14,0 %), сельди тихоокеанской (11,65) и сайры (14,1 %) оказалась выше, чем у минтая, но значительно меньше, чем у беспозвоночных. Скорее всего, это также связано с наличием различных "непитательных" факторов в мышечной ткани объектов, снижающих скорость протекания процессов жизнедеятельности индикаторного организма.

Известно, что биологическая ценность пищевых белков зависит от ряда факторов, среди которых одним из наиболее важных является атакуемость их протеазами желудочно-кишечного тракта. В этой связи нами проведены исследования по определению in vitro атакуемости белков, изолированных из мышечной ткани гидробионтов, протеазами желудочно-кишечного тракта (Химические основы процессов жизнедеятельности, 1962). В качестве последних были использованы пепсин и трипсин. Изучение их влияния на белки проводили при оптимальном значении рН для каждого фермента (пепсин — 1,0-1,5, трипсин — 7,0).

Результаты проведенных исследований показывают, что атакуемость казеина и изолированных белков из мышечной ткани гидробионтов различается в зависимости от используемых протеаз (рис. 3). Наибольшая атакуемость контрольного и опытных белков гидробионтов наблюдалась при использовании пепсина. Протеолиз белков под действием трипсина происходил менее интенсивно.

Вместе с тем закономерность атакуемости белков мышечной ткани гидро-бионтов разными пищеварительными протеазами сохранена. По атакуемости пепсином белков мышечной ткани рыбы располагаются в следующем порядке: минтай ^ треска ^ сельдь ^ сайра; трипсином: треска ^ минтай ^ сельдь ^ ^ сайра. Однако различия в степени гидролиза белков минтая и трески недостоверны (tp = 0,36, tT = 2,05 при Р = 0,95).

Результаты исследований также показывают, что закономерности протео-лиза белков мышечной ткани гидробионтов под действием опытных протеаз совпадают и приближены к установленным для казеина.

Сопоставляя глубину протеолиза белков разных объектов под действием опытных протеаз, видим, что атакуемость белков рыб ниже, чем казеина, и значительно ниже, чем белков мышечной ткани ракообразных. Это, по-нашему мнению, обусловлено различием в макроструктурной организации белков мышечной ткани рыб.

Известно, что белки мышечной ткани рыб и беспозвоночных, а также казеина значительно различаются по фракционному составу (Кизеветтер, 1973; Кола-ковский, 1991) и пространственной структуре полипептидных цепей, что, вероятно, играет основную роль в доступности протеолитическим ферментам. Напри-

А Е280нм 1

0,8 0,6 0,4 0,2 0

А Е280нм

0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0

•Казеин

- Минтай

—Л- Треска

Сельдь

—ф— Сайра

—•— Краб

- Кальмар

15

30

45

60

Время, мин

Казеин

- -л - Минтай

—А— Треска

-м- Сельдь

♦ Сайра

—•— Краб

---Кальмар^

15

30

45

60

Время, мин

Рис. 3. Атакуемость изолированных белков мышечной ткани гидробионтов пепсином

Fig. 3. Attacking of isolated proteins of hydrobionts muscle tissue by pepsin

мер, казеин по пространственному расположению своих полипептидных цепей относится к глобулярным белкам (Горбатова, 1997). Вместе с тем он отличается от обычных глобулярных белков тем, что не содержит а-спиралей и занимает промежуточное положение между компактной структурой глобулы и структурой беспорядочного клубка. Считается, что подобная структура обеспечивает очень хорошую доступность и атакуемость казеина пищеварительными ферментами.

Белки мышечной ткани рыбы состоят из многих фракций, самая многочисленная группа (60-70 %) представлена миофибриллярными белками (Колаков-ский, 1991). Их основными фракциями являются миозин, актин, тропомиозин и тропонин, особенностью которых является способность сокращаться. Они содержат большое количество спирализованных участков, что обусловливает их меньшую расщепляемость протеолитическими ферментами по сравнению с казеином.

Изучение ОБЦ с использованием инфузорий Tetrahymena pyriformis мышечной ткани исследуемых гидробионтов и их изолированных белков (соответствующих друг другу по содержанию азота в среде — 0,6 мг) показало, что у беспозвоночных значения биологической ценности выше, чем у рыб (рис. 4). Среди рыб наибольшими значениями показателей ОБЦ характеризовались минтай и треска.

ОБЦ, %

140 120 100 80 60 40 20 0

Мин т ай Треска Сельдь Сайра Краб кальмар Объекты

^|Мыш.ткань  Изол.белок

Рис. 4. Сравнительная характеристика ОБЦ (% по отношению к казеину) мышечной ткани и изолированных белков гидробионтов

Fig. 4. Comparable characteristics of biological value (% to casein) of hydrobionts' muscle tissue and isolated proteins

Сравнительная оценка ОБЦ мышечной ткани исследуемых гидробионтов и изолированных белков свидетельствует, что все показатели ОБЦ изолированных белков значительно выше таковых самой мышечной ткани.

Вместе с тем между значениями ОБЦ изолированных белков и мышечной ткани не прослеживается определенной зависимости. Для каждого объекта они разные. Наибольшие различия в значениях ОБЦ отмечены у беспозвоночных (краба — 12,1 %, кальмара — 12,2 %), наименьшие — у минтая (7,9 %), т.е. разность показателей ОБЦ мышечной ткани и изолированных из неё белков зависит от вида гидробионтов.

При сопоставлении величины КБАи-КБАн (табл. 3) и разности показателей ОБЦ мышечной ткани и изолированных белков каждого объекта отмечена их корреляция. Наибольшая разность биологической активности изолированных белков и мышечной ткани краба и кальмара коррелирует с наибольшими значениями разности в показателях ОБЦ. Закономерности атакуемости белков мышечной ткани гидробионтов пищеварительными ферментами совпадают с таковыми биологической активности белков и их значениями ОБЦ.

Таким образом, значения КБА, атакуемости пищеварительными ферментами и ОБЦ изолированных белков из мышечной ткани гидробионтов значительно выше, чем не изолированных. Снижение показателей биологической активности белков, не изолированных из мышечной ткани, их относительной биологической ценности и атакуемости пищеварительными ферментами обусловлено "антипитательным" влиянием содержащихся небелковых компонентов в мышечной ткани гидробионтов. Все показатели качества белков (КБА, О БЦ и атакуемости проте-азами) коррелируют между собой.

Биологическая оценка качества мышечной ткани гидробионтов с использованием инфузорий Tetrahymena pyriformis дает суммарный показатель (интегральный) в виде генеративной и поведенческой реакций на использование организмом всех органических и неорганических компонентов. В этой связи полученный показатель (%), характеризующий комплексное воздействие всех ком-

96 103,9 95 IO5,5 102,3 1012 110

понентов исследуемого субстрата, наиболее правильно называть "относительной питательной ценностью" (ОПЦ).

Литература

Беленький М.Б. Биологическая оценка продуктов животноводства и кормов с использованием тест-организма Tetrahymena pyriformis. — М.: ВАСХНИЛ, 1977. — 16 с.

Бурковский И.В. Экология свободноживущих инфузорий. — М.: Изд-во МГУ, 1984. — 208 с.

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Ч. 1. — М.: Изд-во стандартов, 2002. — 23 с.

Горбатова К.К. Биохимия молока и молочных продуктов. — М.: Колос, 1997. — 288 с.

Долгов В.А. Методические аспекты и практическое применение ускоренной биологической оценки кормов, продуктов животноводства и других объектов ветеринарно-санитарного и экологического контроля: Автореф. дис. ... д-ра биол. наук. — М.: ВНИ-ИВСГЭ, 1992. — 41 с.

Здольник Т.Д., Строев Е.А., Горбич В.Ф. Оценка функции пищеварения у белых крыс при воздействии соединений цинка // Гигиена и санитария. — 1997. — № 5. — С. 33-36.

Зулькарнаев Т.Р., Мустаев Р.З., Мурысева Е.Н. Новые сведения о токсичности и опасности химических и биологических веществ // Токсикол. вестн. — 1999. — № 1. — С. 34-35.

Игнатьев А.Д., Исаев М.К., Долгов В.А. и др. Модификация метода биологической оценки пищевых продуктов с помощью реснитчатой инфузории тетрахимена пириформис // Вопр. питания. — 1980. — № 1. — С. 70-71.

Кизеветтер И.В. Биохимия сырья водного происхождения. — М.: Пищ. пром-сть, 1973. — 424 с.

Колаковский Э. Технология рыбного фарша / Пер. с польс. — М.: Агропромиз-дат, 1991. — 220 с.

Королев А.А., Суханов Б.П., Коренков И.П. и др. Влияние минерального состава рациона питания на показатели радиорезистентности организма // Гигиена и санитария. — 1995. — № 3. — С. 19-22.

Лазаревский А.А. Технохимический контроль в рыбообрабатывающей промышленности. — М.: Пищепромиздат, 1955. — 509 с.

Мамаева Е.М., Бикбов Т.М., Гын Е.Е. и др. Биологическая ценность и усвояемость концентратов саркоплазматических белков промысловых рыб и влияние их потребления на организм крыс // Вопр. питания. — 1991. — № 2. — С. 52-54.

Методические рекомендации для использования экспресс-метода биологической оценки продуктов и кормов. — М.: ВАХСНИЛ, 1990. — 10 с.

Николаевская В.Р., Волкова Л.Д. Влияние стимуляторов роста на ассимиляцию белка в эксперименте // Вопр. питания. — 1990. — № 2. — С. 57.

Павленко С.М., Корнеева Н.А., Браун Д.Д. Экспресс-экспериментальная оценка биологического действия полимерных материалов, предназначенных для контакта с пищевыми продуктами // Гигиена и санитария. — 1995. — № 3. — С. 26-28.

Пашенко Л.П., Аргунов М.Н., Тареева И.М. Токсикологическая оценка нового продукта из кориандрового жмыха // Вопр. питания. — 1999. — № 4. — С. 45-48.

Практикум по биохимии / Под ред. С.Е.Северина и Г.А.Соловьевой. 2-е изд., перераб. и доп. — М.: Изд-во МГУ, 1989. — 509 с.

Рахманин Ю.А., Фоменко С.Е., Кушнерева Н.Ф. Гепато- и мембранопротек-торные свойства чайных катехинов при алкогольной интоксикации // Гигиена и санитария. — 1995. — № 3. — С. 39-42.

Суханов Б.П., Горшков А.И., Королев А.А. и др. Влияние рационов питания с различным содержанием кальция на показатели клеточного иммунитета сенсибилизированных крыс // Гигиена и санитария. — 1995. — № 3. — С. 22-23.

Химические основы процессов жизнедеятельности / Под ред. В.Н.Орехо-вича. — М., 1962.

Черников М.П., Никольская Г.В., Стан Е.Я. и др. К вопросу о биологической роли казеинового гликомакропептида // Вопр. питания. — 1974. — № 2. — С. 21-25.

Шеховцова Т.Н. Биологические методы анализа. — М.: Биология, 2000. — 380 с.

Evans E., Carruthers S. Comparisons of methods used for estimating the growth of Tetrahymena pyriformis // J. Sci. Food and Agr. — 1978. — Vol. 29, № 8. — P. 703-707.