ИНДОЛИН-СУЛЬФОНАМИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ
INDOLINE-SULPHONAMIDE COMPOUNDS

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
1. Область техники
Данное изобретение относится к индолин-сульфонамидным соединениям и, более конкретно, к индолин-сульфонамидным соединениям для ингибирования полимеризации тубулина.
2. Уровень техники
Микротрубочковая система эукариотических клеток является важной целью при создании противораковых агентов. Если говорить более конкретно, распространенной целью при создании новых химиотерапевтических агентов является полимеризация/деполимеризация тубулина. Ряд клинически используемых агентов (таких как паклитаксел, эпотилон А, винбластин, комбретастатин А-4 (СА-4), доластатин 10 и колхицины), нацеленные на полимеризацию/деполимеризацию тубулина, обладают противораковыми свойствами благодаря тому, что они вызывают разрушение микротрубочковой структуры клетки и благодаря функции, приводящей в результате к митотическому аресту, а также за счет ингибирования роста эпителия вновь образующейся системы сосудов, что приводит к подавлению кровоснабжения опухолей (см. Jordan и соавт. (1998), Med. Res. Rev.18: 259-296).
Поэтому, ориентируясь на микротрубочковую систему (например, полимеризацию/деполимеризацию тубулина) в качестве цели при создании соединений, может быть разработана новая терапия, используемая для лечения или предотвращения рака или связанных с ним симптомов, а также для лечения заболеваний, связанных с ангиогенезом, таких как сердечно-сосудистые заболевания (например, атеросклероз), хронические воспалительные заболевания (например, ревматоидный артрит или болезнь Крона), диабеты (например, диабетическая ретинопатия), псориаз и ретинальная неоваскуляризация или корнеальная неоваскуляризация (см. Griggs и соавт. (2002), Am. J. Pathol. 160(3): 1097-1103).
В качестве ингибиторов полимеризации тубулина описано множество маленьких синтетических молекул, которые конкурируют с тубулином за связывание с колхицинсвязывающим участком. Структурно такие соединения задействуют различные гетероароматические ядра, включая, например, индол, бензотиофен, бензофуран, имидазол, тиазол и оксазолиновые фрагменты. Большая часть индольных систем, например 2-ароилиндолы, 3-ароилиндолы, 3-ароил-2-фенилиндолы, 3-арилтиоиндол-2-карбоксилаты и индолил-3-глиоксамиды, обладают сильной антипролиферативной и антитубулиновой активностью.
Было показано, что соединения, включающие сульфонамид, такие как N-пиридинилсульфонамид АВТ-751 (ранее Е-7010) и стирил-пиридин-N-оксид-сульфонамид HMN-21416, эффективно ингибируют полимеризацию тубулина и являются сильными антимитотическими агентами соответственно. В настоящее время АВТ-751 и HMN-214 проходят клинические испытания на людях в качестве агентов против различных типов опухолей. К настоящему времени сообщения об ингибировании полимеризации тубулина индолин-сульфонамидами отсутствуют.
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Данное изобретение относится к новым 7-ароиламиноиндолин-1-сульфонамидам, применяемым в качестве сильных ингибиторов полимеризации тубулина.
В данном изобретении заявлено индолин-сульфонамидное соединение формулы (I)
;
1
где R является Н или галогеном;
2
2
2
5
20
1
10
1
10
R является Ar, Ar-C(O)-, Ar-CH-, Ar-SO-, Ar-O-C(O),  или R''-C(O)- и Ar является замещенным или незамещенным С-С арилом, циклилом, гетероциклилом или гетероарилом, R' и R'' независимо являются C-С алкилом или C-С алкоксилом и
3
5
15
1
10
R является C-C арилом или С-С алкилом.
Гетероатом гетероциклила или гетероарила не лимитирован. Предпочтительно гетероатом является N, О или S. Предпочтительно гетероарил представляет собой
, , , , , , , ,
1
1
Предпочтительно R является Н или галогеном (например, F, Cl, Br, I). Более предпочтительно R является H или Br.
5
8
3
2
-
Структура Ar не лимитирована. Предпочтительно Ar является незамещенным фенилом, замещенным или незамещенным C-C арилом или гетероарилом, или арилом с заместителем. Предпочтительно заместитель является галогеном, нитро, циано, алкоксилом, оксидом или ацетоксилом (CHCO ). Предпочтительно галоген является F, Cl или Br.
2
6
5
3
6
5
Предпочтительно R является бензоилом, фторбензоилом, нитробензоилом, цианобензоилом, метоксибензоилом, ацетилбензоилом, изоникотиноилом, N-оксид-изоникотиноилом, фуроилом, тиеноилом, бензолсульфонилом, нитробензолсульфонилом, фторбензолсульфонилом, (CO)ОСН, (СО)N(CH)CH, бензилом, ацетилом или пивалоилом.
3
3
1
10
Предпочтительно R является C-C алкилом. Более предпочтительно Rявляется метилом.
Предпочтительные примеры индолин-сульфонамидных соединений по данному изобретению представляют собой
1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил-амин (соединение 19),
1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7ил-амин (соединение 20),
4-фтор-N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-бензамид (соединение 21),
N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-4-нитро-бензамид (соединение 22),
4-циано-N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-бензамид (соединение 23),
4-метокси-N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-бензамид (соединение 24),
метиловый эфир N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-терефталамидной кислоты (соединение 25),
N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-изоникотинамид (соединение 26),
фуран-2-карбоновая кислота[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-амид (соединение 27),
тиофен-2-карбоновая кислота[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-амид (соединение 28),
N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-бензолсульфонамид (соединение 29),
N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-4-нитро-бензолсульфонамид (соединение 30),
4-фтор-N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-бензолсульфонамид (соединение 31),
фениловый эфир [1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-карбаминовой кислоты (соединение 32),
3-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-1-метил-1-фенилмочевина (соединение 33),
Бензил-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-амин (соединение 34),
N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7ил]-ацетамид (соединение 35),
N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-2,2-диметилпропионамид (соединение 36),
N-[5-бром-1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-изоникотинамид (соединение 37),
фуран-2-карбоновая кислота[5-бром-1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-амид (соединение 38) и
N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-N-оксид-изоникотинамид (соединение 39).
Область применения индолин-сульфонамидных соединений по данному изобретению не ограничена. Предпочтительно индолин-сульфонамидные соединения по данному изобретению применяют для ингибирования полимеризации тубулина, лечения раков, связанных с полимеризацией тубулина, или заболеваний, связанных с ангиогенезом.
Кроме того, в данном изобретении также заявлена фармацевтическая композиция, содержащая индолин-сульфонамидное соединение по данному изобретению и фармацевтически приемлемый носитель, предназначенная для ингибирования полимеризации тубулина или лечения раков или заболеваний, связанных с полимеризацией тубулина.
Индолин-сульфонамидные соединения по данному изобретению включают в себя сами соединения, их фармацевтически приемлемые соли, а также пролекарства на их основе. Например, соль можно получить путем реакции положительной группы соединения (например, аминогруппы) с анионом. Подходящие анионы включают (но не ограничены только этими) хлорид, бромид, иодид, сульфат, нитрат, фосфат, цитрат, алкилсульфонат, трифторацетат и ацетат. Соль может быть получена также путем взаимодействия отрицательной группы соединения (например, карбоксильной) с катионом. Подходящие катионы включают (но не ограничены только этими) натрий, калий, магний, кальций и аммоний (например, тетраметиламмоний). Примеры пролекарств включают эфирные производные упомянутых ранее соединений и другие фармацевтически приемлемые производные.
В индолин-сульфонамидных соединениях по данному изобретению может присутствовать неароматическая двойная связь и один или более асимметричных центров. Приведенная здесь химическая структура включает мезо-соединения, рацемические смеси, энантиомеры, диастереоизомеры, смеси диастереомеров, цис-изомеры и транс-изомеры. Данное изобретение включает все изомерные формы, включая Е-форму изомеров и Z-форму изомеров.
Фармацевтическая композиция, содержащая индолин-сульфонамидные соединения по данному изобретению, может быть введена внутривенно, через рот, через нос, ректально, локально или сублингвально (под язык). Введение включает подкожный, внутрибрюшинный, внутривенный, внутримышечный, внутрисуставный, внутриаортный, внутриплевральный, спинномозговой, интратекальный способы введения, локальную инъекцию в больное место или другие подходящие способы введения.
Стерильная композиция для инъекций может представлять собой раствор или суспензию в нетоксичном разбавителе или растворителе для внутривенного введения (таком как 1,3-бутандиол). Приемлемым носителем или растворителем может быть маннит(ол) или вода. Кроме того, в качестве растворителя или среды для суспензии традиционно используют нелетучее масло (такое как синтетические моно- или диглицериды). При приготовлении фармацевтически приемлемых препаратов для инъекций может быть использована жирная кислота, такая как олеиновая, и эфирное производное олеиновой кислоты и глицерина, оливковое масло или касторовое масло, особенно в полиоксиэтилированной форме. Масляный раствор или суспензия может включать длинноцепочечные алифатические спирты в качестве разбавителей или диспергаторов, карбоксиметилцеллюлозу или аналогичные диспергаторы. Примеры обычно используемых материалов включают поверхностно-активные вещества (например, Твин или Спаны), другие эмульгирующие агенты, фармацевтически приемлемые твердые и жидкие соединения, широко используемые в фармацевтической промышленности или другие биодоступные потенцирующие агенты, используемые для создания новых композиций.
Фармацевтическая композиция может быть в форме, подходящей для введения через рот, например в виде капсулы, таблетки, эмульгатора, жидкой суспензии, дисперсии или растворителя. Для введения в форме таблетки в качестве носителя обычно используют лактозу или кукурузный крахмал, флотационный реагент (например, стеарат магния в качестве простой добавки). Для введения через рот в форме капсулы подходящие разбавители включают лактозу и кукурузный крахмал. Для введения через рот в виде жидкой сусупензии или эмульгатора активный материал можно суспендировать или растворить в масле, содержащем эмульгатор или суспензию. При необходимости можно добавить соответствующие подсластители, ароматизаторы или красители.
Композиции, предназначенные для использования в виде аэрозоля в нос или для ингаляции, могут быть получены любыми способами, известными из уровня техники для производства фармацевтических композиций. Например, композиция, полученная в изотоническом растворе хлорида натрия, может дополнительно содержать бензиловый спирт или другой подходящий консервант, соединение, вызывающее абсорбцию, для усиления биодоступности, фторуглерод или другой известный растворимый диспергатор. Композиции, содержащие одно или более активных соединений по данному изобретению, могут также быть использованы в форме суппозиториев для ректального введения лекарства.
Носитель для фармацевтической композиции, содержащей индолин-сульфонамидное соединение, должен быть приемлемым. Термин «приемлемый» означает, что носитель совместим с активным ингредиентом (более предпочтительно, носитель стабилизирует активный ингредиент) и безвреден для пациента. Один или более агентов может составлять фармацевтический эликсир, поставляющий активное соединение по данному изобретению. Примеры других носителей включают оксид кремния, стеарат магния, целлюлозу, лаурилсульфат натрия и D&C Yellow 10.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ВЫПОЛНЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Ниже приведены индолин-сульфонамидные соединения по данному изобретению, способы их анализа и способы их определения.
Температуры плавления (Тпл.) определены на приборе для определения температур плавления Büchi (B-545) и нескорректированы.
1
13
Спектры ядерного магнитного резонанса (ЯМР) (Н ЯМР и С ЯМР) регистрировали с помощью спектрометра Bruker DRX-500 (при 500 МГц и 125 МГц соответственно), спектрометре Varian Mercury-400 (при 400 МГц и 100 МГц соответственно) и спектрометре Varian Mercury-300 (при 300 МГц и 75 МГц соответственно), химические сдвиги выражали в миллионный долях (м.д., δ), используя в качестве внутреннего стандарта ТМС в низких полях.
Масс-спектры высокого разрешения (High-resolution mass spectra, HRMS) получены с помощью масс-спектрометра электронного удара (electron impact, EI) Finnigan (MAT-95XL).
Элементные анализы проведены с помощью экспресс-микроанализатора Heraeus CHN-O.
Жидкостную колоночную хроматографию проводили, используя силикагель (Merck Kieselgel 60, No.9385, поры 230-400 по классификации Американского общества по испытанию материалов (ASTM).
Все реакции проводили в атмосфере сухого азота.
Общий способ синтеза индолин-сульфонамидов 19-38 показан на схеме 1.
Схема 1.
Получение включает прямую последовательность реакций, идущих с высокими выходами (48-56% по трем или четырем стадиям по сумме). Взаимодействие коммерчески доступного 5-бром-7-нитроиндолина (16) с 4-метоксибензолсульфонилхлоридом в пиридине приводит к образованию 5-бром-1-(4-метоксибензолсульфонил)-7-нитроиндолина (17).
4
Восстановление 7-нитрогруппы соединения 17 с помощью Fe/NHCl в изопропаноле приводит к получению соединения 18, а именно 7-амино-5-бром-1-(4-метоксибензолсульфонил)индолина.
3
Соединение 18 превращали в 7-амино-1-(4-метоксибензол-сульфонил)индолин (19) путем свободнорадикального дебромирования в присутствии азоизобутилонитрила (AIBN) и BuSnH (стадия d на схеме 1).
2
3
Дальнейшее взаимодействие соединения 18 или 19 с соответствующими электрофильными агентами в пиридине (стадия d на схеме 1), включая ароилхлорид, гетероароил хлорид, ArSOCl, ArO(СО)Cl, ArN(CH)(CO)Cl, бензилхлорид, ацетилангидрид и пивалоилхлорид, приводит к получению желаемых 7-аминоиндолин-1-сульфонамидов (20-25, 27-36 и 38 соответственно).
2
3
3
7-Изоникотиноилзамещенные индолиновые соединения 26 и 37 были получены соответственно путем обработки соответственно 19 и 18 гидрохлоридом изоникотиноилхлорида в присутствии CsCO в безводном CHCN (стадия е на схеме 1).
Синтез соединений 17-39 и их химические свойства приведены далее в примерах.
Пример 1.
5-Бром-1-(4-метокси-бензолсульфонил)-7-нитро-2,3-дигидро-1H-индол (17).
2
2
4
Раствор 5-бром-7-нитроиндолина (5 г, 0.021 моля), 4-метоксифенил-сульфонилхлорида (6.36 г, 0.030 моля) в пиридине (10 мл) перемешивали при 120°С в течение 16 часов. Реакцию останавливали водой и экстрагировали реакционную смесь CHCl. Объединенный органический слой сушили над безводным MgSO и выпаривали. Полученный остаток подвергали хроматографии через силикагель (EtOAc : н-гексан = 1:2). Выход соединения 17 составил 85%.
1
3
H ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 2.67 (т, J=7.8 Гц, 2Н), 3.87 (с, 3Н), 4.05 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 6.92-6.97 (м, 1Н), 7.50 (д, J=1.5 Гц, 1Н), 7.62-7.66 (м, 2Н), 7.89 (д, J=1.5 Гц, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ 29.0, 51.8, 55.7, 114.4, 118.7, 126.4, 128.6, 129.4, 132.0, 134.7, 141.7, 142.5, 163.8.
+
Масс-спектр (ESI) m/z: 436 (M+23).
Пример 2
5-Бром-1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил-амин (18).
2
2
4
Смесь соединения 17 (9 г, 0.021 моля), железа (3.65 г, 0.065 моля) и хлорида аммония (2.33 г, 0.043 моля) в смеси изопропанола (200 мл) и воды (50 мл) перемешивали при 100°С в течение 4 часов. После охлаждения реакционную смесь фильтровали и экстрагировали CHCl. Объединенный органический слой сушили с помощью MgSO и упаривали. Полученный остаток подвергали жидкостной колоночной хроматографии на силикагеле (EtOAc : н-гексан = 2:3). Соединение 18 получено с выходом 89%.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ: 2.13 (т, J=7.6 Гц, 2Н), 3.84 (с, 3Н), 3.95 (т, J=7.6 Гц, 2Н), 4.80 (с, 2Н), 6.53 (д, J=2.0 Гц, 1Н), 6.74 (д, J=2.0 Гц, 1Н), 6.85-6.89(м, 2Н), 7.54-7.57 (м, 2Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 28.9, 53.2, 55.5, 114.1, 117.0, 118.1, 120.4, 127.1, 128.0, 129.6, 140.4, 141.5, 163.5.
+
+
Масс-спектр (ESI) m/z: 384 (M+1), 385 (M+2).
Пример 3
1-(4-Метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил-амин (19).
3
2
2
4
Перемешанный раствор соединения 18 (2 г, 4.84 ммоль), AIBN (0.08 г, 0.48 ммоль), BuSnH (3.91 мл, 14.50 ммоль) в толуоле (49 мл) кипятили в течение 15 часов. После охлаждения реакционную смесь упаривали и экстрагировали CHCl. Объединенный органический слой сушили MgSO и концентрировали для получения остатка, который затем очищали с помощью жидкостной колоночной хроматографии на силикагеле (EtOAc : н-гексан = 1:2) для получения соединения 19, выход 90%.
1
3
H ЯМР (500 МГц, CDCl) δ: 2.15 (т, J=7.4 Гц, 2Н), 3.82 (с, 3Н), 3.95 (т, J=7.4 Гц, 2Н), 6.42 (д, J=7.4 Гц, 1Н), 6.59 (д, J=7.9 Гц, 1Н), 6.81-6.84 (м, 2Н), 6.90 (т, J=7.6 Гц, 1Н), 7.51-7.54 (м, 2Н).
+
+
15
16
2
3
Масс-спектр (EI) m/z: 304 (М, 6%), 133 (100%). HRMS (EI) для CHNOS (M): рассчитано 304.0881; найдено 304,0880.
Пример 4
N-[1-(4-Метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-бензамид (20).
4
Раствор соединения 19 (0.1 г, 0.26 ммоль) и бензоилхлорида (0.09 мл, 0.78 ммоль) в пиридине (1 мл) перемешивали при 100-110°С в течение 16 часов. Реакцию останавливали добавлением ледяной воды. Реакционную смесь экстрагировали EtOAc. Объединенный органический слой сушили над безводным MgSO и выпаривали для получения остатка, который подвергали хроматографии на силикагеле (EtOAc : н-гексан = 1:2) для получения соединения 20, выход 82%.
Тпл. 205-206°С.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ: 2.25 (т, J=7.6 Гц, 2Н), 3.84 (с, 3Н), 4.03 (т, J=7.6 Гц, 2Н), 6.83-6.87 (м, 3Н), 7.20 (т, J=7.6 Гц, 1Н), 7.48-7.57 (м, 5Н), 8.06-8.09 (м, 2Н), 8.27 (д, J=8.0 Гц, 1Н), 10.23 (с, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 29.0, 53.4, 55.6, 114.2, 120.5, 121.9, 127.4, 127.6, 128.6, 129.7, 130.5, 131.7, 131.8, 132.2, 134.6, 138.2, 163.8, 165.6.
+
+
22
20
2
4
22
20
2
4
Масс-спектр (EI) m/z: 408 (M, 7%), 237 (62%), 105 (100%). HRMS (EI) для CHNOS (М): рассчитано 408.1136; найдено 408.1140. Анал: (CHNOS) С, Н, N, S.
Пример 5
4-Фтор-N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-бензамид (21).
Указанное соединение получено с выходом 78% с использованием 4-фторбензоилхлорида аналогично получению соединения 20.
Тпл. 184-185°С.
1
3
Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 2.25 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 3.83 (с, 3Н), 4.02 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 6.83-6.87 (м, 3Н), 7.14-7.22 (м, 3Н), 7.47-7.52 (м, 2Н), 8.06-8.11 (м, 2Н), 8.24 (д, J=8.1 Гц, 1Н), 10.2 (с, 1Н).
+
+
22
19
2
4
Масс-спектр (EI) m/z: 426 (М, 11%), 255 (95%), 123 (100%). HRMS (EI) для CHNOFS (М): рассчитано 426.1046; найдено 426.1048.
Пример 6
N-[1-(4-Метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-4-нитро-бензамид (22).
Указанное соединение получено с выходом 90% с использованием 4-нитробензоилхлорида аналогично получению соединения 20.
Тпл. 151-152°С.
1
3
Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 2.28 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 3.84 (с, 3Н), 4.04 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 6.84-6.91 (м, 3Н), 7.23 (т, J=7.8 Гц, 1Н), 7.48-7.53 (м, 2Н), 8.21-8.26 (м, 3Н), 8.34-8.38 (м, 2Н), 10.4 (с, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 29.0, 53.5, 55.6, 114.3, 121.2, 121.8, 123.9, 127.4, 127.8, 128.6, 129.6, 130.9, 132.3, 138.4, 140.1, 149.8, 163.4, 163.9.
+
+
22
19
3
6
22
19
3
6
Масс-спектр (EI) m/z: 453 (М, 100%), 282 (100%), 150 (65%). HRMS (EI) для CHNOS (М): рассчитано 453.0993; найдено 453.0994. Анал. (CHNOS) C, H, N, S.
Пример 7
4-Циано-N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-бензамид (23).
Указанное соединение получено с выходом 86% с использованием хлористого 4-цианобензоила аналогично получению соединения 20.
Тпл.=179-180°C.
1
3
Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 2.27 (т, J=7.2 Гц, 2Н), 3.84 (с, 3Н), 4.04 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 6.85-6.90 (м, 3Н), 7.22 (т, J=8.1 Гц, 1Н), 7.49-7.51 (м, 2Н), 7.80-7.82 (м, 2Н), 8.16-8.18 (м, 2Н), 8.24 (д, J=8.1 Гц, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 29.2, 53.7, 55.9, 114.5, 115.7, 118.3, 121.3, 122.1, 127.6, 128.0, 128.3, 129.8, 131.2, 132.5, 132.8, 138.7, 138.8, 163.9, 164.2.
+
+
23
19
3
4
23
19
3
4
Масс-спектр (EI) m/z: 433 (M, 12%), 262 (100%), 130 (73%). HRMS (EI) для CHNOS (M): рассчитано 433.1098; найдено 433.1097. Анал. (CHNOS) C, H, N, S.
Пример 8
4-Метокси-N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-бензамид (24).
Указанное соединение получено с использованием 4-метоксибензоилхлорида с выходом 75% аналогично получению соединения 20.
1
3
H ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 2.24 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 3.83 (с, 3Н), 3.87 (с, 3Н), 4.02 (т, J=7.8 Гц, 2Н), 6.80-6.86 (м, 3Н), 6.98-7.02 (м, 2Н), 7.18 (т, J=8.1 Гц, 1Н), 7.48-7.53 (м, 2Н), 8.02-8.07 (м, 2Н), 8.26 (д, J=8.1 Гц, 1Н), 10.15 (с, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 29.0, 53.4, 55.2, 55.4, 113.7, 113.8, 114.2, 120.2, 121.8, 126.3, 126.8, 129.3, 129.6, 131.8, 131.9, 138.2, 162.4, 163.7, 165.1.
+
+
23
22
2
5
Масс-спектр (EI) m/z: 438 (M, 4%), 267 (28%), 135 (100%). HRMS (EI) для CHNOS (M): рассчитано 438.1237; найдено 438.1243.
Пример 9
Метиловый эфир N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-терефталамидной кислоты (25).
Указанное соединение получено с выходом 81% с использованием метил-4-хлоркарбонилбензоата аналогично получению соединения 20.
Тпл. 166-167°С.
1
3
Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 2.25 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 3.82 (с, 3Н), 3.94 (с, 3Н), 4.02 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 6.82-6.87 (м, 3Н), 7.20 (т, J=7.5 Гц, 1Н), 7.47-7.52 (м, 2Н), 8.11-8.18 (м, 4Н), 8.26 (д, J=7.8 Гц, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 28.9, 52.2, 53.3, 55.5, 114.2, 120.8, 121.7, 127.3, 127.4, 127.6, 129.5, 129.8, 131.1, 132.1, 132.8, 138.3, 138.4, 163.7, 164.4, 166.2.
+
+
24
22
2
6
Масс-спектр (EI) m/z: 466 (M, 14%), 295 (100%), 163 (89%). HRMS (EI) для CHNOS (М): рассчитано 466.1194; найдено 466.1196.
Пример 10
N-[1-(4-Метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-изоникотинамид (26).
2
2
4
3
2
2
Смесь соединения 19 (0.2 г, 0.52 ммоль), гидрохлорида изоникотиноилхлорида (0.18 г, 1.04 ммоль) и карбоната цезия (0.68 г, 2.08 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) перемешивали и кипятили в течение 16 часов. Для остановки реакции в реакционную смесь добавляли ледяную воду и проводили экстракцию CHCl. Объединенный органический слой сушили над MgSO и упаривали. Полученный остаток очищали жидкостной колоночной хроматографии на силикагеле (EtOAc : н-гексан : NH(водный) = 3:2:1%) и перекристаллизовывали (CHCl/EtOAc) для получения соединения 26, выход 82%.
Тпл. 219-220°С (солянокислая соль).
1
3
Н ЯМР (500 МГц, CDCl) δ: 2.23 (т, J=7.3 Гц, 2Н), 3.79 (с, 3Н), 3.99 (т, J=7.4 Гц, 2Н), 6.81-6.85 (м, 3Н), 7.17 (т, J=7.8 Гц, 1Н), 7.46 (д, J=8.8 Гц, 2Н), 7.87 (д, J=5.7 Гц, 2Н), 8.21 (д, J=8.2 Гц, 1Н), 8.77 (д, J=5.6 Гц, 2Н), 10.35 (с, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 28.8, 53.3, 55.5, 114.2, 120.9, 121.1, 121.7, 127.2, 127.6, 129.4, 130.7, 132.1, 138.3, 141.5, 150.6, 163.3, 163.8.
+
+
21
19
3
4
21
19
3
4
Масс-спектр (EI) m/z: 409 (M, 36%), 314 (15%), 238 (100%). HRMS (EI) для CHNOS (M): рассчитано 409.1094; найдено 409.1095. Анал. (CHNOS) C, H, N, S.
Пример 11
Фуран-2-карбоновая кислота[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-амид (27).
Указанное соединение получено с выходом 86% с использованием 2-фуроилхлорида аналогично получению соединения 20.
Тпл. 163-164°С.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ: 2.24 (т, J=7.6 Гц, 2Н), 3.83 (с, 3Н), 4.03 (т, J=7.2 Гц, 2Н), 6.53-6.55 (м, 1Н), 6.83-6.87 (м, 3Н), 7.18 (т, J=7.6 Гц, 1Н), 7.25-7.26 (м, 1Н), 7.48-7.52 (м, 2Н), 7.60 (м, 1Н), 8.22 (д, J=8.4 Гц, 1Н), 10.25 (с, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 29.0, 53.3, 55.6, 112.0, 114.2, 115.0, 120.5, 121.7, 127.6, 127.7, 129.7, 131.0, 132.1, 138.3, 144.9, 148.0, 156.6, 163.7.
+
+
20
18
2
5
20
18
2
5
Масс-спектр (EI) m/z: 398 (М, 13%), 303 (10%), 227 (100%). HRMS (EI) для CHNOS (M): рассчитано 398.0933; найдено 398.0935. Анал. (CHNOS) С, Н, N, S.
Пример 12
Тиофен-2-карбоновая кислота[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-амид (28).
Указанное соединение получено с выходом 78% с использованием 2-теноилхлорида аналогично получению соединения 20.
Тпл. 188-189°С.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ: 2.26 (т, J=7.6 Гц, 2Н), 3.83 (с, 3Н), 4.03 (т, J=7.6 Гц, 2Н), 6.82-6.87 (м, 3Н), 7.12-7.15 (м, 1Н), 7.17 (т, J=7.6 Гц, 1Н), 7.49-7.53 (м, 2Н), 7.55 (дд, J=5.2 Гц, 1.2 Гц, 1Н), 7.82 (дд, J=4.0, 1.2 Гц, 1Н), 8.22 (д, J=8.0 Гц, 1Н), 10.23 (с, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 29.0, 53.5, 55.6, 114.2, 120.4, 121.5, 127.5, 127.6, 127.9, 128.5, 129.6, 130.9, 131.2, 131.8, 138.2, 140.0, 160.1, 163.8.
+
+
20
18
2
4
2
20
18
2
4
2
Масс-спектр (EI) m/z: 414 (M, 13%), 243 (100%), 111 (73%). HRMS (EI) для CHNOS (М): рассчитано 414.0704; найдено 414.0706. Анал. (CHNOS) C, H, N, S.
Пример 13
N-[1-(4-Метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-бензол-сульфонамид (29).
Указанное соединение получено с выходом 80% с использованием бензолсульфонилхлорида аналогично получению соединения 20.
Тпл. 143-145°С.
1
3
Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 2.09 (т, J=7.2 Гц, 2Н), 3.53 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 3.80 (с, 3Н), 6.77 (д, J=8.7 Гц, 2Н), 6.84 (д, J=7.2 Гц, 1Н), 7.11 (т, J=7.5 Гц, 1Н), 7.27-7.32 (м, 2Н), 7.40 (м, 2Н), 7.49-7.54 (м, 2Н), 7.75 (д, J=7.8 Гц, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 28.7, 52.7, 55.6, 114.2, 122.3, 124.2, 127.3, 127.7, 128.5, 129.3, 129.4, 129.6, 132.5, 134.9, 138.3, 139.5, 163.7.
+
+
21
20
2
5
2
Масс-спектр (EI) m/z: 444 (М, 10%), 273 (85%), 132 (100%). HRMS (EI) для CHNOS (M): рассчитано 444.0812; найдено 444.0813.
Пример 14
N-[1-(4-Метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-4-нитро-бензолсульфонамид (30).
Указанное соединение получено с выходом 82% с использованием 4-нитробензолсульфонилхлорида аналогично получению соединения 20.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ: 2.12 (т, J=7.2 Гц, 2Н), 3.53 (т, J=7.2 Гц, 2Н), 3.82 (с, 3Н), 6.79-6.83 (м, 2Н), 6.92 (дд, J=7.6, 1.2 Гц, 1Н), 7.16 (т, J=7.6 Гц, 1Н), 7.30-7.34 (м, 2Н), 7.52 (д, J=8.0 Гц, 1Н), 7.94-7.97 (м, 2Н), 8.24-8.28 (м, 2Н), 9.16 (с, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 28.7, 52.8, 55.6, 114.3, 123.2, 123.7, 124.8, 127.0, 128.0, 128.4, 128.7, 129.4, 135.2, 138.5, 145.5, 149.9, 163.9.
+
+
21
19
3
7
2
Масс-спектр (EI) m/z: 489 (М, 13%), 318 (100%), 132 (72%). HRMS (EI) для CHNOS (М): рассчитано 489.0654; найдено 489.0659.
Пример 15
4-Фтор-N-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-бензол-сульфонамид (31).
Указанное соединение получено с выходом 83% с использованием 4-фторбензолсульфонилхлорида аналогично получению соединения 20.
Тпл. 104-105°С.
1
3
Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 2.11 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 3.58 (т, J=7.8 Гц, 2Н), 3.81 (с, 3Н), 6.77-6.81 (м, 2Н), 6.86 (дд, J=7.8, 1.2 Гц, 1Н), 7.05-7.15 (м, 3Н), 7.30-7.34 (м, 2Н), 7.50 (д, J=8.0 Гц, 1Н), 7.75-7.80 (м, 2Н), 8.97 (с, 1Н).
+
+
21
19
2
5
2
Масс спектр (EI) m/z: 462 (M, 13%), 291 (100%), 132 (59%). HRMS (EI) для CHNOSF (M): рассчитано 462.0729; найдено 462.0724.
Пример 16
Фениловый эфир [1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-карбаминовой кислоты (32).
Указанное соединение получено с выходом 76% с использованием фенилхлорформиата аналогично получению соединения 20.
Тпл. 164-166°С.
1
3
H ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 2.29 (т, J=7.8 Гц, 2Н), 3.75 (с, 3Н), 4.00 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 6.75-6.80 (м, 2Н), 7.07 (дд, J=7.5, 0.6 Гц, 1Н), 7.16-7.25 (м, 4Н), 7.30-7.40 (м, 4Н), 7.57-7.62 (м, 2Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 29.0, 53.1, 55.5, 114.0, 121.5, 121.6, 125.1, 125.9, 127.0, 129.1, 129.2, 129.3, 129.6, 130.6, 138.9, 139.1, 150.7, 163.3.
+
Масс-спектр (ESI) m/z: 425 (M+H).
Пример 17
3-[1-(4-Метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-1-метил-1-фенилмочевина (33).
Указанное соединение получено с выходом 75% с использованием N-метил-N-фенилкарбамоилхлорида аналогично получению соединения 20.
Тпл. 199-201°С.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ: 2.07 (т, J=7.2 Гц, 2Н), 3.38 (с, 3Н), 3.80 (с, 3Н), 3.83 (т, J=7.2 Гц, 2Н), 6.71 (д, J=8.0 Гц. 1Н), 6.75-6.78 (м, 2Н), 7.12 (т, J=7.8 Гц, 1Н), 7.29-7.33 (м, 2Н), 7.35-7.39 (м, 1Н), 7.40-7.43 (м, 2Н), 7.48-7.52 (м, 2Н), 7.93 (д, J=8.0 Гц, 1Н), 8.28 (с, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 28.8, 37.4, 53.0, 55.5, 113.9, 119.0, 122.0, 127.3, 127.6, 127.7, 127.8, 129.6, 130.0, 132.2, 132.9, 137.8, 142.6, 155.1, 163.5.
+
+
23
23
3
4
Масс-спектр (EI) m/z: 437 (M, 9%), 266 (100%), 159 (81%). HRMS (EI) для CHNOS (М): рассчитано 437.1405; найдено 437.1408.
Пример 18
Бензил-[1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-амин (34).
Указанное соединение получено с выходом 85% с использованием бензилхлорида аналогично получению соединения 20.
Тпл. 162-163°С.
1
3
H ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 1.98 (т, J=7.2 Гц, 2Н), 3.75 (т, J=7.2 Гц, 2Н), 3.77 (с, 3Н), 4.72 (с, 3Н), 6.42 (д, J=7.2 Гц, 1Н), 6.70-6.76 (м, 2Н), 6.92 (т, J=7.5 Гц, 1Н), 7.14-7.27 (м, 4Н), 7.35-7.40 (м, 4Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 28.7, 51.9, 55.3, 55.4, 113.7, 115.2, 118.4, 126.5, 127.7, 128.1, 128.9, 129.8, 130.4, 139.3, 139.4, 143.7, 163.2.
+
Масс-спектр (ESI) m/z: 395 (M+H).
Пример 19
N-[1-(4-Метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-ацетамид (35).
Указанное соединение получено с выходом 89% с использованием уксусного ангидрида аналогично получению соединения 20.
Тпл. 154-155°С.
1
3
H ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 2.20 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 2.23 (с, 3Н), 3.83 (с, 3Н), 4.00 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 6.79 (д, J=7.8 Гц, 1Н), 6.82-6.86 (м, 2Н), 7.13 (т, J=7.9 Гц, 1Н), 7.44-7.48 (м, 2Н), 8.10 (д, J=8.4 Гц, 1Н), 8.35 (с, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 24.7, 28.9, 53.4, 55.6, 114.2, 120.2, 121.5, 127.5, 127.6, 129.5, 131.4, 131.5, 138.0, 163.7, 168.8.
+
+
17
18
2
4
17
18
2
4
Масс-спектр (EI) m/z: 346 (M, 18%), 175 (44%), 133 (100%). HRMS (EI) для CHNOS (М): рассчитано, 346.0979; найдено, 346.0983. Анал. (CHNOS) С, Н, N, S.
Пример 20
N-[1-(4-Метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-2,2-диметил-пропионамид (36).
Указанное соединение получено с выходом 87% с использованием хлористого пивалоила аналогично получению соединения 20.
1
3
Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 1.37 (с, 9Н), 2.19 (т, J=7.2 Гц, 2Н), 3.83 (с, 3Н), 3.98 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 6.79 (д, J=7.5 Гц, 1Н), 6.82-6.85 (м, 2Н), 7.13 (т, J=7.8 Гц, 1Н), 7.45-7.48 (м, 2Н), 8.09 (д, J=8.1 Гц, 1Н), 9.53 (с, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 27.6, 28.5, 39.9, 53.3, 55.6, 114.1, 120.1, 122.0, 127.5, 127.7, 129.7, 131.8, 132.1, 138.1, 163.7, 177.6.
+
+
20
24
2
4
Масс-спектр (EI) m/z: 388 (M, 13%), 217 (51%), 167 (100%). HRMS (EI) для CHNOS (M): рассчитано 388.1449; найдено 388.1453.
Пример 21
N-[5-Бром-1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-изоникотинамид (37).
Указанное соединение получено с выходом 80% аналогично получению соединения 26, в качестве исходного использовали соединение 18.
Тпл. 191-192°С.
1
3
Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 2.27 (т, J=7.2 Гц, 2Н), 3.86 (с 3Н), 4.04 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 6.89-6.93 (м, 2Н), 7.02 (д, J=1.8 Гц, 1Н), 7.51-7.56 (м, 2Н), 7.88-7.90 (м, 2Н), 8.51 (л J=1.8 Гц, 1Н), 8.82-8.84 (м, 2Н), 10.3 (с, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 28.8, 53.6, 55.6, 114.5, 120.6, 120.9, 124.1, 124.3, 127.0, 129.5, 131.2, 131.8, 140.1, 141.1, 150.7, 163.4, 164.0.
+
+
+
+
+
21
18
3
4
Масс-спектр (EI) m/z: 490 (M+2, 3%), 489 (M+1, 12%), 488 (M, 3%), 487 (M-1, 11%), 318 (100%), 316 (98%). HRMS (EI) для CHNOSBr (M-1): рассчитано 489.0178; найдено 489.0180.
Пример 22
Фуран-2-карбоноваякислота[5-бром-1-(4-метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-амид (38).
Указанное соединение получено с выходом 80% аналогично получению соединения 20, в качестве исходного использовали соединение 18.
Тпл. 170-171°С.
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ: 2.23 (т, J=7.6 Гц, 2Н), 3.86 (с, 3Н), 4.03 (т, J=7.6 Гц, 2Н), 6.55 (м, 1Н), 6.88-6.91 (м, 2Н), 6.97 (д, J=1.6 Гц, 1Н), 7.26-7.27 (м, 1Н), 7.52-7.56 (м, 2Н), 7.61 (м, 1Н), 8.49 (д, J=1.6 Гц, 1Н), 10.24 (с, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 28.9, 53.5, 55.6, 112.2, 114.4, 115.5, 120.5, 123.5, 124.2, 127.4, 129.7, 131.1, 132.1, 140.0, 145.1, 147.6, 156.5, 163.9.
+
+
+
+
+
20
17
2
5
Масс-спектр (EI) m/z: 479 (M-2, 3%), 478 (M+1, 13%), 477 (M, 3%), 476 (M-1, 12%), 307 (99%), 305 (100%). HRMS (EI) для CHNOSBr (M+1): рассчитано 478.0017; найдено 478.0016.
Пример 23
N-[1-(4-Метокси-бензолсульфонил)-2,3-дигидро-1H-индол-7-ил]-N-оксид-изоникотинамид (39)
3
2
2
4
2
2
К раствору соединения 26 (0.27 г, 0.24 ммоль) в EtOAc (10 мл) добавляли м-хлорпербензойную кислоту (МСРВА) (0.3 г, 0.49 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. Реакцию останавливали NaHCO и экстрагировали реакционную смесь CHCl (трижды). Объединенный органический слой сушили над безводным MgSO и упаривали. Полученный остаток хроматографировали через силикагель (CHCl:МеОН = 15:1). Выход желаемого соединения 39 составил 85%.
1
3
Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ: 2.29 (т, J=7.5 Гц, 2Н), 3.84 (с, 3Н), 4.05 (т, J=7.4 Гц, 2Н), 6.84-6.91 (м, 3Н), 7.22 (т, J=7.8 Гц, 1Н), 7.50 (м, 2Н), 7.97 (м, 2Н), 8.21 (д, J=8.1 Гц, 1Н), 8.29 (м, 2Н), 10.38 (с, 1Н).
13
3
С ЯМР (CDCl) δ: 28.9, 53.5, 55.6, 114.3, 121.2, 121.6, 124.6, 127.2, 127.8, 129.5, 130.6, 130.9, 132.1, 138.4, 139.4, 161.2, 163.9.
+
Масс-спектр (ESI) m/z: 426 (M+1).
Пример 24
Элементный анализ соединений 20, 22, 23, 26, 27, 28 и 35.
Соединение
Формула
Рассчитано
Найдено
%C
%H
%N
%S
%C
%H
%N
%S
20
C<sub>22</sub>H<sub>20</sub>N<sub>2</sub>O<sub>4</sub>S
64.69
4.94
6.86
7.85
64.72
4.81
6.61
7.71
22
C<sub>22</sub>H<sub>19</sub>N<sub>3</sub>O<sub>6</sub>S
58.27
4.22
9.27
7.07
58.49
4.19
9.01
7.08
23
C<sub>23</sub>H<sub>19</sub>N<sub>3</sub>O<sub>4</sub>S
63.73
4.42
9.69
7.40
63.61
4.58
9.72
7.31
26
C<sub>21</sub>H<sub>19</sub>N<sub>3</sub>O<sub>4</sub>S
61.60
4.68
10.26
7.83
61.54
4.71
10.18
7.88
27
C<sub>20</sub>H<sub>18</sub>N<sub>2</sub>O<sub>5</sub>S
60.29
4.55
7.03
8.05
60.40
4.38
7.19
8.21
28
C<sub>20</sub>H<sub>18</sub>N<sub>2</sub>O<sub>4</sub>S<sub>2</sub>
57.95
4.38
6.76
15.47
58.01
4.25
6.78
15.29
35
C<sub>17</sub>H<sub>18</sub>N<sub>2</sub>O<sub>4</sub>S
58.94
5.24
8.09
9.26
58.86
5.28
7.88
9.14
Пример 25
Биологический тест
3
Реагенты для клеточной культуры получены от Gibco-BRL Life Technologies (Гейтербург, Мэриленд). Использовали тубулин, богатый белками, ассоциированными с микротрубочками (microtubule-associated protein (MAP)-rich tubulin), производства Cytoskeleton, Inc. (Денвер, Колорадо) и [H]колхицин (специфическая активность 60-87 кюри/ммоль) производства PerkinElmer Life Sciences (Бостон, Массачусетс).
(а) Оценка эффективности ингибирования роста клеток
Человеческие клетки плоскоклеточного рака полости рта KB, клетки колоректальной карциномы НТ29, клетки немелкоклеточной (поп small cell) карциномы легких Н460, а также клетки двух карцином желудка TSGH, MKN45 хранили в среде RPMI-1640, дополнительно содержащей 5% эмбриональной бычьей сыворотки.
KB-VIN10 клетки содержали в питательной среде, дополненной 10 нМ винкристина, полученного с помощью винкристинуправляемой селекции. Была выявлена повышенная экспрессия P-gp170/MDR.
50
Клетки в логарифмической фазе культурировали при плотности 5000 клеток/мл/лунка в 24-луночном планшете. Перед использованием клетки KB-VIN10 в течение трех дней культурировали в среде, не содержащей лекарства. Затем клетки обрабатывали различными концентрациями тестируемых лекарств в течение 72 часов. Для выявления описанного выше влияния тестируемого соединения на рост клеток использовали анализ с красителем метиленовым голубым. Величину IC, полученную на основании данных по 50% ингибированию клеточного роста, вычисляли графически относительно контроля.
50
50
Результат исследования показывает, что среди соединений 19-39 по данному изобретению, по крайней мере, семнадцать из исследованных соединений обладают IC менее 5 мкМ и IC оставшихся соединений менее 10 нМ.
(b) Исследования по полимеризации тубулина in vitro
Турбидиметрические исследования микротрубочек проводили способом, описанным Bollag и соавт.
2
50
50
Тубулин, богатый белками, ассоциированными с микротрубочками (MAP-rich тубулин) (2 мг/мл), в 100 мл буфера, содержащего 100 мМ PIPES (pH 6.9), 2 мМ MgCl, 1 мМ GTP и 2% (об.) диметилсульфоксида, помещали в 96-луночную пластину микротитратора в присутствии тестируемых соединений. Рост поглощения измеряли при 350 нм с помощью Power Wave X Microplate Reader (BIO-TEK Instruments, Винооски, Вермонт) при 37°С и записывали каждые 30 секунд в течение 30 минут. Площадь под кривой (AUC) использовали для определения концентрации соединений, вызывающей 50% ингибирование полимеризации тубулина (IC). AUC контроля и 10 мкМ колхицин принимали за 100% и 0% полимеризации соответственно. IC вычисляли с помощью нелинейной регрессии по, по крайней мере, трем экспериментам.
Согласно полученным результатам протестированные сульфонамидные соединения (в концентрации в среднем менее 2 мкМ) обладают способностью ингибировать полимеризацию тубулина.
Несмотря на то, что данное изобретение было описано на примерах предпочтительных вариантов его выполнения, очевидно, что можно осуществить множество других модификаций и вариантов, не нарушая сущность и не выходя за рамки изобретения, обозначенные ниже в формуле изобретения.