Основные итоги генотипирования боррелий в России

Основные итоги генотипирования боррелий в России Коренберг Э.И., Нефедова В.В., Фадеева И.А., Горелова Н.Б. Principal results of Borrelia genotyping in Russia Korenberg E.I., Nefedova V. V., Fadeyeva I.A., Gorelova N.B.

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи РАМН, г. Москва

© Коренберг Э.И., Нефедова В.В., Фадеева И.А., Горелова Н.Б.

В России и сопредельных странах циркулируют Borrelia garinii, B. afzelii (которые наиболее широко распространены и эпидемиологически значимы), B. burgdorferi s.s., B. valaisiana, B. lusitania, B. spilmani. Секвенированием rrf (5S)-rrl (23S) региона 139 первичных изолятов B. afzelii показано, что внутри этого геновида имеется семь генетических вариантов, принадлежащих к подгруппе VS461, и три — к подгруппе NT28. Семь аллельных вариантов обнаружено секвенированием 246—337 пар нуклеотидов гена p66 у 45 изолятов B. afzelii.

Ключевые слова: музей боррелий, геновиды, генетические и аллельные варианты.

Borrelia garinii, B. afzelii (which are widespread and epidemiologically significant), B. burgdorferi s.s., B. valaisiana, B. lusitania, B. spilmani circulate in Russia and neighboring countries. By sequences of the rrf (5S)-rrl (23S) regions of 139 primary isolates B. afzelii were determined seven genetic variants belonged to the subgroup VS461, and three — to the subgroup NT28. Seven alleles variants was find by sequences 246—337 pb ofp66 gen from 45 isolates B. afzelii.

Key words: borrelia museum, genospecies, genetic and alleles variants.

УДК 616.98:579.834.114

Введение

Заболевания, вызванные Borrelia burgdorferi sensu lato, впервые серологически верифицированы в России в 1985 г. [12]. Вскоре было показано, что природные очаги инфекций этой группы широко распространены в лесной зоне страны от Прибалтики на западе до Южного Сахалина - на востоке. Стало ясно, что в пределах России находится значительная или даже большая часть мирового ареала боррелий, связанных с иксодовыми клещами [14, 34, 35], а их разнообразие на этой обширной и экологически очень разнородной территории должно быть значительным. Это стимулировало существенное пополнение музея боррелий, который был создан в лаборатории переносчиков инфекций НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи (г. Москва) еще в 1983 г. в связи с изучением клещевых возвратных ти-фов в Средней Азии [32].

Идентификация первых российских изолятов B. burgdorferi sensu lato, полученных в 1987—1989 гг., была проведена с использованием моноклональных

антител [15, 16]. Исследование методом ПЦР-ПДРФ около 400 первичных изолятов из разных регионов России и сопредельных стран, полученных к 1995— 1996 гг., выявило геновиды B. garinii (подгруппы 20047 и NT29), B. afzelii, B. lusitaniae, B. valaisiana и B. burgdorferi sensu stricto [3, 10, 44]. Было показано, что повсеместное распространение и преимущественное эпидемическое значение в России имеют B. garinii и B. afzelii, установлены их основные переносчики и резервуарные хозяева [2, 4, 13, 36, 44]. Эти данные не только подтвердили высказанное авторами в 1993 г. [33] положение о возможности одновременной циркуляции в биоценозе разных геновидов или иных категорий боррелий, которое теперь представляется само собой разумеющейся истиной, но и впервые продемонстрировали широкое распространение в природных очагах микст-инфицированных переносчиков и резервуарных хозяев [44]. Кроме того, они стимулировали представление, что термины «болезнь Лайма» («Lyme disease») и «Лайм-боррелиоз» («Lyme borreliosis») относятся к целой группе этиологически самостоятельных заболеваний. Данную группу инфек-

ций было предложено называть иксодовыми клещевыми боррелиозами (ИКБ) в отличие от аргасовых клещевых боррелиозов (АКБ), передающихся аргасовыми клещами [11, 35].

Изучение ПЦР, ПЦР-ПДРФ и в ряде случаев последующее секвенирование некоторых участков генома изолятов боррелий или ампликонов, проведенные преимущественно в последние годы другими исследователями на северо-западе [1, 6, 22, 28—30] и в центре [17, 27] европейской части России, в Западной [20, 21, 31, 38, 42] и Восточной [5, 7, 26] Сибири, на Дальнем Востоке [37, 39, 41], полностью подтвердили изложенные выше данные о геновидовом составе борре-лий в России и общие представления об их циркуляции в природных очагах.

Музей боррелий как базис для их изучения

К настоящему времени упомянутый выше музей боррелий содержит в общей сложности почти 1 200 изо-лятов, принадлежащих к восьми геновидам B. burgdorferi sensu lato и пяти формам возбудителей АКБ, имеющим сейчас бинарные латинские названия. Большая часть этих изолятов (97%) получена непосредственно в лаборатории переносчиков инфекций НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН (г. Москва) от различных источников, включая иксодовых клещей трех видов, аргасовых клещей одного вида, мелких млекопитающих восьми видов и больных людей из 12 административных территорий России (от Калининградской области на западе страны до Приморского края и Сахалинской области на Дальнем Востоке) и 8 соседних стран.

Результаты анализа большого количества изоля-тов впервые позволили еще в 1997 г. обратить внимание на различия в распространении двух подгрупп (или типов) B. garinii: 20047 и NT29. Первый из них распространен в природных очагах Евразии с основными переносчиками Ixodes persulcatus и I. ricinus, а второй (NT29) - практически только в паразитарных системах с основным переносчиком I. persulcatus [36, 44]. Теперь эти подгруппы называют соответственно евразийской и азиатской. Было также показано, что наиболее часто встречающимся в Евразии геновидам B. burgdorferi sensu lato не свойственна строгая связь с определенным видом резервуарного хозяина [9, 36, 44]. Это не подтвердило мнения некоторых зарубежных ис-

следователей, в соответствии с которым мелкие млекопитающие не являются резервуарными хозяевами B. garinii и передают клещам только спирохет B. afzeШ. Путем секвенирования определенных участков генома в последние годы генотипированы более 160 музейных изолятов [19, 25], среди которых обнаружены бор-

релии группы A14S spielmani) [18] и B. bissettii. В EMBL/GenBank/DDBJ авторами настоящей статьи уже депонировано 120 нуклеотидных последовательностей разных участков генома оригинальных изоля-тов боррелий и их генетических или аллельных вариантов.

Некоторые из изолятов нашей коллекции (например, ф-3, ф-21, ^-89, ^-90, ^-210 и др.) использованы многими исследователями ряда стран при изучении серотипов, плазмидного профиля, генетической гетерогенности, таксономии и филогении боррелий, включая первоописание новых геновидов, генетических групп и подгрупп. В этой связи важно иметь в виду, что хорошо известное значение музеев живых культур для изучения микроорганизмов, и в частности спирохет, не только не ослабевает в связи с появлением виртуальных баз данных, но даже увеличивается. Они дают возможность различным лабораториям обмениваться оригинальными изолятами и возвращаться к их повторному анализу или более детальному изучению по мере совершенствования молекулярно-генетических методов. Ясно, что эти методы открывают исследователям большие возможности, но сами по себе не избавляют их от риска лабораторной контаминации, технических погрешностей при работе с конкретным материалом и проявления некоторого субъективизма при оценке ее результатов. Это может произойти при некорректно подобранных условиях амплификации или рестрикции, при нечетких результатах секвенирования, возможных погрешностях хро-матограммы, ее автоматической расшифровки и дальнейшего анализа, при недостаточно корректном использовании пакета программного обеспечения, при построении дендрограммы с использованием для сравнения разных по длине участков генома. Кроме того, так называемые специфические праймеры подбирают исходя из различий в последовательности нуклеотидов тех или иных участков генома уже известных геновидов. Однако в природе может существовать некоторое количество пока неизвестных видов

спирохет со сходной или очень близкой последовательностью нуклеотидов в данном участке генома. Совокупность всех этих причин заставляет с большой осторожностью относиться к выводам, сделанным при отсутствии изолята только на основании результатов секвенирования ампликона, в особенности, когда речь идет об обнаружении новых или редких геновидов боррелий. В этом смысле изолят, по мнению авторов, был и остается своеобразным золотым стандартом микробиологии, а его выделение и дальнейшее сохранение - основным доказательством реального существования микроорганизма.

Генетические и аллельные варианты Borrelia afzelii

Коллекция изолятов музея боррелий позволила начать изучение генетической гетерогенности борре-лий на примере B. afzelii - одного из трех основных эпидемически значимых геновидов на большей части лесной зоны Евразии. Поскольку B. afzelii широко распространена, циркулирует в различных экосистемах, имеет разнообразный круг резервуарных хозяев и переносчиков, было предположено, что этому генови-ду может быть свойственна большая генетическая гетерогенность.

С этой целью исследованы 139 первичных изолятов из музея боррелий [25]. Они были получены в 1987—2002 гг. от различных фаз развития иксодовых клещей I. persulcatus, I. ricinus, I. trianguliceps, а также от нескольких видов мелких млекопитающих - резер-вуарных хозяев боррелий, отловленных в природных очагах России, Чехии, Литвы, Эстонии, Белоруссии, Украины, Молдовы. О гетерогенности B. afzelii судили по результатам амплифиации и секвенирования (245—247 п.н.) вариабельного спейсерного региона rrf (5S)-rrl (23S) и участка генар66 (246—337 п.н.) у изученных изолятов. Для сравнения использована соответствующая информация из базы данных EMBL/GenBank/DDBJ о 25 изолятах или ампликонах из Центральной Европы, средней полосы России, Турции, Китая и Кореи.

Анализ сходства нуклеотидных последовательностей этого спейсера показал, что исследованные изо-ляты представляют две описанные ранее [40, 43] геномные подгруппы B. afzelii: VS461 и NT28. Внутри этих геномных подгрупп выявлено 10 генетических вариантов боррелий, причем степень сходства нуклеотид-

ных последовательностей у изолятов большинства генетических вариантов достигает 100%. К геномной подгруппе VS461 относятся семь, а к подгруппе NT28 — три варианта.

Таким образом, на основании анализа нуклеотидных последовательностей участка rrf (5S)—rrl (23S) геномов репрезентативного числа изолятов была выявлена значительная внутривидовая гетерогенность B. afzelii. Установлено, что этот широко распространенный на территории Евразии геновид имеет внутри двух генетических подгрупп (VS461 и NT28) не менее 10 генетических вариантов. Три из семи генетических вариантов подгруппы B. afzelii VS461, по всей видимости, широко распространены в природных очагах Евразии среди различных видов переносчиков и ре-зервуарных хозяев. Не исключено, что один из них циркулирует преимущественно в «персулькатусных» природных очагах иксодового клещевого боррелиоза (ИКБ). Имеющиеся данные позволяют предположить, что остальные четыре генетических варианта борре-лий этой подгруппы распространены преимущественно в Европе и связаны с клещом I. ricinus, а также, вероятно, с его хозяевами-прокормителями. Распространение трех генетических вариантов подгруппы B. afzelii NT28 нуждается в дальнейшем уточнении.

Нуклеотидные последовательности участка хромосомного гена р66 исследованы у 45 первичных изолятов B. afzelii от различных фаз развития трех видов иксодовых клещей и семи видов мелких млекопитающих - резервуарных хозяев боррелий из природных очагов России, Литвы, Эстонии, Белоруссии, Украины, Молдовы. Анализ этих нуклеотидных последовательностей показал, что среди исследованных изоля-тов B. afzelii имеется семь аллельных вариантов. Степень сходства нуклеотидных последовательностей между изолятами внутри большинства аллельных вариантов составляет 99,9—100%. Таким образом, данные исследования показали, что различия в структуре хромосомного гена p66 имеются не только у разных видов B. burgdorferi sensu lato, как это было установлено ранее, но и внутри одного геновида. Большинство аллельных вариантов B. afzelii широко распространены в природных очагах Евразии среди различных видов клещей и мелких млекопитающих, причем не прослеживается связь конкретного аллельного варианта с определенным видом переносчиков или резер-вуарных хозяев [23].

Большинство геновариантов B. afzelii (по 5 S—23S) включают несколько разных аллельных вариантов по гену р66, причем все аллельные варианты встречаются в обеих известных геногруппах (VS461 и NT28) этого возбудителя. В целом не прослеживается связь между определенным переносчиком или резервуарным хозяином и тем или иным генетическим и алллельным вариантом боррелий: разные виды клещей и мелких млекопитающих могут быть хозяевами нескольких внутривидовых вариантов спирохет.

Анализ нуклеотидных последовательностей спей-сера 5S—23S показал, что в природном очаге, расположенном на востоке европейской части России (Чу-совской район Пермской области), циркулируют две геномные подгруппы B. afzelii. Большая часть изоля-тов (90,3% от числа исследованных) по этому признаку была сходна с наиболее распространенной геномной подгруппой VS461. Меньшая их часть (9,7%) имела значительное сходство с геномной подгруппой NT28. Внутри каждой из геномных подгрупп четко различаются генетические варианты боррелий. В целом в природном очаге циркулируют, как минимум, пять геновариантов B. afzelii, причем три из них относятся к подгруппе VS461 и два — к подгруппе NT28. Все возможные хозяева (разные фазы развития основного переносчика - клеща I. persulcatus, дополнительного переносчика - клеща I. trianguliceps, а также фоновые виды мелких млекопитающих - резервуарных хозяев) оказались зараженными боррелиями нескольких геновариантов.

Кроме того, среди изолятов из этого природного очага было пять аллельных вариантов B. afzelii, отличающихся последовательностью нуклеотидов гена р66. Большинство из них обнаруживались у хозяев того или иного вида ежегодно, причем не прослеживается их связь с определенным видом клещей или мелких млекопитающих [24].

Данные свидетельствуют о том, что в конкретном природном очаге среди различных переносчиков и резервуарных хозяев могут одновременно циркулировать две подгруппы B. afzelii (VS461 и NT28). Они включают не менее 5 геновариантов, отличающихся по нуклеотидным последовательностям спейсера 5S-23S, и не менее 5 аллельных вариантов по структуре гена р66. Каждый из них не связан с определенным хозяином. Вместе с тем переносчик или носитель определенного вида может быть хозяином нескольких

различных вариантов B. afzelii, как по спейсеру, так и по гену, кодирующему белок Р66, что способствует поддержанию генетической гетерогенности популяции возбудителя в природном очаге.

Заключение

Ранее было показано, что на общей территории могут существовать сопряженные паразитарные системы, образованные разными геновидами боррелий [33]. Это явление представляет собой важнейшую биоценотическую предпосылку эпидемического проявления боррелиозных микст-инфекций [8]. Затем метод ПЦР-ПДРФ позволил выявить одновременную циркуляцию спирохет B. afzelii и двух подгрупп B. garinii: 20047Т и NT29 среди общих переносчиков и резервуарных хозяев [9, 36, 44]. Секвенирование спейсера 5S—23S и участка гена р66 изолятов B. afzelii, полученных в разные годы на этой территории, показало, что паразитарная система данного геновида включает 5 геновариантов, а также 5 аллельных вариантов, которые относятся к подгруппам VS461 и NT28. Геновид B. garinii, по всей видимости, также представлен в описываемой сопряженной паразитарной системе различными геновариантами. Как и гетерогенность популяций возбудителей ИКБ по ряду других генотипических признаков, это будет предметом дальнейшего изучения. Однако приведенные данные уже сейчас свидетельствуют о значительном ге-нотипическом разнообразии различных видов борре-лий, о чем также говорят наблюдения других исследователей. В его основе, по всей видимости, лежит клональная изменчивость боррелий и последующая судьба клонов при их циркуляции в природном очаге. Экологический смысл этого явления очевиден: гетерогенность микроорганизмов обеспечивает устойчивость образованной ими паразитарной системы и, в частности, их выживание при взаимодействии с разнообразными резервуарными хозяевами и переносчиками. Его значение в инфекционной патологии может оказаться различным и требует дальнейшего изучения.

Работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (проект № 0404-48066).

Литература

1. Алексеев А.Н., Дубинина И.В., Семенов А.В. Смешанные ты, 2006. Приложение 1

инфекции в клещах-переносчиках рода Ixodes (Acarina: Ixodidae) — правило, а не исключение // Материалы «круглого стола» в рамках Всерос. науч. конф. «Клинические перспективы в инфектологии». СПб., 2001. C. 9— 16.

2. Горелова Н.Б., Коренберг Э.И., Ковалевский Ю.В. и др. Изоляция боррелий от клещей Ixodes trianguliceps (Ixodidae) и возможное значение этого вида в эпизоотологии иксодовых клещевых боррелиозов // Паразитология.

1996. Т. 30. № 1. С. 13—18.

3. Горелова Н.Б., Коренберг Э.И., Постик Д. и др. Первая изоляция Borrelia burgdorferi sensu stricto в России // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. № 4. С. 10—12.

4. Горелова Н.Б., Коренберг Э.И., Филиппова Н.А., По-стик Д. Первая изоляция патогенных для человека бор-релий от клещей Ixodes pavlovskyi Pom. // Докл. Академии наук. 2001. Т. 378. № 4. С. 1—2.

5. Горин О.З., Зубаков Д.Ю., Злобин В.И. и др. Borrelia garinii - один из этиологических агентов клещевого борре-лиоза в пригородной зоне Иркутска // Журн. инфекц. патологии. 1998. № 5. С. 62—63.

6. Дубинина И.В., Алексеев А.Н. Динамика биоразнообразия возбудителей болезней, переносимых клещами рода Ixodes: анализ многолетних данных // Мед. паразитология и паразитар. болезни. 1999. № 2. С. 13—19.

7. Злобин В.И., Беликов С.И., Малов И.В. и др. Молекулярная эпидемиология, молекулярная диагностика и профилактика природно-очаговых трансмиссивных клещевых инфекций Восточной Сибири // Природно-очаговые болезни человека. Омск, 2001. С. 96—101.

8. Коренберг Э.И. Микст-инфекции, передающиеся иксо-довыми клещами: современное состояние проблемы // Успехи соврем. биологии. 2003. Т. 123. № 5. С. 475— 486.

9. Коренберг Э.И., Горелова Н.Б., Постик Д. и др. Резерву-арные хозяева и переносчики боррелий - возбудителей иксодовых клещевых боррелиозов в России // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.

1997. № 6. С. 36—38.

10. Коренберг Э.И., Горелова Н.Б., Постик Д., Котти Б.К. Новые для России виды боррелий - возможные возбудители иксодовых клещевых боррелиозов в России // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1999. № 2. С. 3—5.

11. Коренберг Э.И., Крючечников В.Н. Иксодовые клещевые боррелиозы - новая группа заболеваний человека // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1996. № 4. С. 104—108.

12. Коренберг Э.И., Крючечников В.Н., Деконенко Е.П. и др. Серологическое выявление болезни Лайма в СССР // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1986. № 6. С. 111—113.

13. Коренберг Э.И., Крючечников В.Н., Ковалевский Ю.В. и др. Клещ Ixodes persulcatus (Ixodidae) - новый переносчик Borrelia burgdorferi // Докл. Академии наук СССР. 1987. Т. 297. № 5. С. 1268—1270.

14. Коренберг Э.И., Щербаков С.В., Крючечников В.Н. Материалы по распространению болезни Лайма в СССР // Мед. паразитология и паразитар. болезни. 1987. № 2. С. 71—73.

15. КрючечниковВ.Н., Коренберг Э.И., Щербаков С.В. и др. Идентификация боррелий, изолированных в СССР от клещей Ixodes persulcatus Shulze // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1988. № 12. С. 41—44.

16. Крючечников В.Н., Коренберг Э.И., Щербаков С.В. и др. Идентификация боррелий, изолированных в Советском Союзе и Чехословакии от клещей Ixodes ricinus (L) // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1990. № 6. С. 10—13.

17.Масузава Т., Наумов Р.Л., Кудекен М., Харитоненков И.Г. Обнаружение Borrelia burgdorferi sensu stricto в Московской области, Россия // Мед. паразитология и паразитар. болезни. 2001. № 2. С. 52.

18. Нефедова В.В., Коренберг Э.И., Андрейчук Ю.В. и др. Генетическая характеристика патогенных боррелий группы A14S, изолированных на Украине // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2005. № 4. С. 23—27.

19. Нефедова В.В., Коренберг Э.И., Фадеева И.А., Горелова Н.Б. Генетическая характеристика патогенных для человека боррелий, изолированных от клещей Ixodes trian-guliceps Bir. и Ixodes pavlovskyi Pom. // Мед. паразитология и паразитар. болезни. 2005. № 2. С. 9—12.

20. Рудакова С.А., Рудаков Н.В., Токаревич Н.К. и др. Новые данные об иксодовых клещевых боррелиозах в азиатской части России и Казахстане // Природно-очаговые болезни человека. Омск. 2001. С. 111—116.

21. Стронин О.В., Шутова Н.А., Петров Е.Ю. и др. Изоляция и типирование возбудителей иксодовых клещевых боррелиозов на территории Томской области // Материалы «круглого стола» в рамках Всерос. науч. конф. «Клинические перспективы в инфектологии». СПб., 2001. С. 49—51.

22. Токаревич Н.К., Стоянова Н.А., Вершинский Б.В. и др. Иксодовые клещевые боррелиозы (болезнь Лайма) на Европейском Севере и в Северо-Западном регионе России // Проблемы клещевых и паразитар. заболеваний. Материалы «круглого стола» в рамках IV рос.-итал. науч. конф. «Инфекционные болезни: диагностика, лечение, профилактика». СПб., 2000. С. 46—61.

23. Фадеева И.А., Коренберг Э.И., Андрейчук Ю.В. и др. Аллельные варианты Borrelia afzelii, выявленные на основании секвенирования гена р66 // Молекуляр. генетика, микробиология и вирусология. 2006. № 2 (в печати).

24. Фадеева И.А., Коренберг Э.И., Нефедова В.В. и др. Генетическая гетерогенность Borrelia afzelii, циркулирующих в природном очаге среднего Урала // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2006. № 4 (в печати).

25. Фадеева И.А., Нефедова В.В., Коренберг Э.И., Горелова Н.Б. Генетичекие варианты Borrelia afzelii - одного из возбудителей иксодовых клещевых боррелизов // Моле-куляр. генетика, микробиология и вирусология. 2005. № 3. С. 18—22.

26. Хаснатинов М.А., Беликов С.И., Злобин В.И. Генотипи-рование возбудителя клещевого боррелиоза в Прибайкалье с помощью полимеразной цепной реакции // Тихоокеанский мед. журн. 2001. № 7. С. 134—135.

27. Штанников А.В., Баранова Е.В., Евсегнеев С.И. и др.

Выделение и изучение некоторых свойств изолятов Borrelia burgdorferi sensu lato из клинических образцов и векторо-переносчиков // Материалы «круглого стола» в рамках Всерос. науч. конф. «Клинические перспективы в инфектологии». СПб., 2001. С. 35—48.

28.AlekseevA.N., DubininaH.V., AntykovaL.P. et al. Tick-bome borrelioses pathogen identification in Isodes ticks (Acarina, Ixodidae) collected in St. Petersburg and Kaliningrad Baltic regions of Russia // J. Med. Entomol. 1998. V. 35. № 2. Р. 136—142.

29. Alekseev A.N., Dubinina H.V., Rijpkema S. Some peculiarities of borrelioses foci functioning in the Baltic regions of Russia: disease nosoforms, pathogen genospecies and vectors behavior // Bull. Scand. Soc. Parasitol. 1997. № 7. Р. 46.

30. Alekseev A.N., Dubinina H.V., Van De Pol I., Schouls L.M. Identification of Ehrlichia ssp. and Borrelia burgdorferi in Ixodes ticks in the Baltic Regions of Russia // J. Clin. Micro-biol. 2001. V. 39. № 6. P. 2237—2242.

31. BeklemishevA.B., DobrotvorskyA.K., PiterinaA.V. et al. Detection and typing of Borrelia burgdorferi sensu lato genos-pecies in Ixodes persulcatus ticks in Western Siberia, Russia // FEMS Microbiol. Let. V. 2003. V. 227. P. 157—161.

32. Gorelova N.B. Museum of borrelia of the Russian center for Borrelioses // Problems of Tick-Borne Borrelioses. Moscow. 1993. P. 38—44.

33. Korenberg E.I. The problem of Lyme disease in Russia // Problems of Tick-Borne Borrelioses. Moscow. 1993. P. 22— 30.

34. Korenberg E.I. Comparative ecology and epidemiology of Lyme disease and tick-borne encephalitis in former Soviet Union // Parasitology Today. 1994. V. 10. № 4. P. 157— 160.

35. Korenberg E.I. Ixodid tick-borne borrelioses (ITBBs), Infections of the Lyme borreliosis group, in Russia: country report // Report of WHO Workshop on Lyme Borreliosis Diagnosis and Surveillance, WHO/CDC/VPH/95.141-1. Warsaw. 1995. P. 128—136.

36. Korenberg E.I., Gorelova N.B., Kovalevsky Yu.V. Ecology of Borrelia burgdorferi sensu lato in Russia // Lyme Borreliosis Epidemiology and Control. Oxford. 2002. P. 175—200.

37. Li M., Masuzawa T., Takada N. et al. Lyme disease Borrelia species in northeastern China resemble those isolated from Far Eastern Russia and Japan // Appl. Environ. Microbiol. 1998. V. 64. P. 2705—2709.

38. Livanova N.N., Morozova O.V., Morozov I.V. et al. Characterization of Borrelia burgdorferi sensu lato from Novosibirsk region (West Siberia, Russia) based on direct PCR // J. Med. Epidemiol. 2003. V. 18. P. 1155—1158.

39. Masuzawa T., Iwaki A., Sato Y. et al. Genetic diversity of Borrelia burgdorferi sensu lato isolated in Far Eastern Russia // Microbiol, Immuno. 1997. V. 41. P. 595—600.

40.Masuzawa T., Kamikado T., Iwaki A. et al. Characterization of Borrelia sp. isolated from Ixodes tanuki, I. turdus, and I. co-lumnae in Japan by restriction fragment length polymophism of rrf(5S)-rrl(23S) intergenic spacer amplicons // FEMS Microbiol. Letters. 1996. V. 142. P. 77—83.

41.Mediannikov O.Y., Ivanov L., Zdanovskaya N. et al. Diversity of Borrelia burgdorferi sensu lato in Russian Far East // Microbiol. Immunol. 2005. V. 49. № 3. P. 191—197.

42.Morozova O.V., Dobrotvorsky A.K., Livanova N.N. et al. PCR detection of Borrelia burgdorferi sensu lato, tick-borne encephalitis virus, and the human granulocytic ehrlichiosis agent in Ixodes persulcatus ticks from Western Siberia, Russia // J. Clin. Microbiol. 2002. V. 40. P. 3802—3804.

43. PosticD., AssousM.V., GrimontP.A.D., Baranton G. Diversity of Borrelia burgdorferi sensu lato evidenced by restriction fragment length polymorphism of rrf(5S)-rrl(23S) intergenic spaser amlicons // Inern. J. Syst. Bacteriol. 1994. V. 44. P. 743—752.

44. Postic D, Korenberg E., Gorelova N. et al. Borrelia burgdor-feri sensu lato in Russia and neighbouring countries: high incedence of mixed isolates // Res. Microbiol. 1997. V. 148. P. 691—702.

Поступила в редакцию 06.01.2006 г.