ХОЛОДОАДАПТИРОВАННАЯ ЖИВАЯ АТТЕНУИРОВАННАЯ ВАКЦИНА С УДАЛЕННЫМ ФАКТОРОМ ВИРУЛЕНТНОСТИ, ПОДХОДЯЩАЯ ДЛЯ ДОСТАВКИ ЧЕРЕЗ СЛИЗИСТЫЕ ОБОЛОЧКИ

1. Мутированный вирус гриппа для производства вакцины, содержащий:
модифицированный геном вируса гриппа H1N1, содержащий делецию активности фактора вирулентности;
первый набор из одной или более мутаций, придающий способность к репликации при 37°С в отсутствие активности фактора вирулентности; и
второй набор из одной или более мутаций, придающих способность к репликации при температуре ниже 35°С.
2. Мутированный вирус гриппа по п. 1, отличающийся тем, что делеция активности фактора вирулентности включает делецию по меньшей мере части гена фактора вирулентности.
3. Мутированный вирус гриппа по п. 2, отличающийся тем, что указанная делеция включает делецию по меньшей мере части гена NS1, распространяющуюся за пределы нуклеотидов 57-528 сегмента NS1 мутированного вируса.
4. Мутированный вирус гриппа по одному из пп. 1-3, отличающийся тем, что указанный первый набор из одной или более мутаций включает первый набор из одной или более точечных мутаций, придающих способность к репликации.
5. Мутированный вирус гриппа по п. 4, отличающийся тем, что указанный первый набор из одной или более точечных мутаций находится за пределами области М мутированного вируса гриппа H1N1.
6. Мутированный вирус гриппа по п. 4, отличающийся тем, что по меньшей мере одна из первого набора из одной или более точечных мутаций представляет собой мутацию G346A в геноме вируса гриппа H1N1.
7. Мутированный вирус гриппа по одному из пп. 1-6, отличающийся тем, что указанный второй набор из одной или более мутаций включает второй набор из одной или более точечных мутаций.
8. Мутированный вирус гриппа по п. 7, отличающийся тем, что по меньшей мере один член второго набора из одной или более точечных мутаций выбран из группы, состоящей из мутаций T261G и A310G в геноме вируса гриппа H1N1.
9. Мутированный вирус гриппа по одному из пп. 1-8, содержащий третий набор из одной или более мутаций, придающих способность к репликации при температуре ниже 35°С.
10. Мутированный вирус гриппа по п. 9, отличающийся тем, что указанный третий набор из одной или более мутаций включает третий набор из одной или более точечных мутаций, отличающийся от указанного второго набора из одной или более точечных мутаций и выбранный из группы, состоящей из мутаций T261G и A310G в геноме вируса гриппа H1N1.
11. Мутированный вирус гриппа по одному из пп. 1-10, отличающийся тем, что указанный мутированный вирус гриппа демонстрирует пониженную способность к репликации при температуре 37° или выше по сравнению с температурой 35°С или ниже.
12. Мутированный вирус гриппа по одному из пп. 1-11, дополнительно содержащий инсерцию гена, кодирующего экзогенный антиген.
13. Мутированный вирус гриппа по п. 12, отличающийся тем, что указанный экзогенный антиген происходит от организма, патогенного для человека.
14. Мутированный вирус гриппа по п. 13, отличающийся тем, что указанный организм, патогенный для человека, выбран из вируса, бактерии, гриба и паразита.
15. Мутированный вирус гриппа по п. 14, отличающийся тем, что вирус выбран из группы, состоящей из вируса гриппа, вируса ТОРС, вируса MERS, вируса Зика, вируса гепатита, папилломавируса и вируса Эбола.
16. Мутированный вирус гриппа по п. 1, дополнительно содержащий инсерцию гена, кодирующего эндогенный антиген, ассоциированный с болезненным состоянием.
17. Мутированный вирус гриппа по п. 16, отличающийся тем, что эндогенный антиген выбран из группы, состоящей из антигена, ассоциированного с раком и тау-белка, ассоциированного с болезнью Альцгеймера.
18. Мутированный вирус гриппа по одному из пп. 1-17, отличающийся тем, что указанный мутированный вирус гриппа подходит для применения в составе живой аттенуированной вакцины.
19. Мутированный вирус гриппа по п. 18, отличающийся тем, что живая аттенуированная вакцина подходит для вакцинации посредством воздействия живой аттенуированной вакцины на слизистую оболочку.
20. Живая аттенуированная вакцина, содержащая:
модифицированный вирус гриппа H1N1, геном которого включает делецию активности фактора вирулентности, первый набор из одной или более мутаций, придающих способность к репликации при 37°С в отсутствии активности фактора вирулентности, и второй набор из одной или более мутаций, придающих способность к репликации при температуре ниже 35°С, причем указанный модифицированный вирус гриппа H1N1 присутствует в достаточных количествах для получения протективного эффекта после иммунизации; и
среду-носитель;
причем указанная живая аттенуированная приготовлена для обеспечения вакцинации посредством контакта слизистой оболочки с живой аттенуированной вакциной.
21. Живая аттенуированная вакцина по п. 20, отличающаяся тем, что делеция активности фактора вирулентности включает делецию по меньшей мере части гена фактора вирулентности.
22. Живая аттенуированная вакцина по п. 21, отличающаяся тем, что указанная делеция включает делецию по меньшей мере части гена NS1, распространяющуюся за пределы нуклеотидов 57-528 сегмента NS1 мутированного вируса.
23. Живая аттенуированная вакцина по одному из пп. 20-22, отличающаяся тем, что указанный первый набор из одной или более мутаций включает первый набор из одной или более точечных мутаций, придающих способность к репликации.
24. Живая аттенуированная вакцина по п. 23, отличающаяся тем, что указанный первый набор из одной или более точечных мутаций находится за пределами области М модифицированного вируса гриппа H1N1.
25. Живая аттенуированная вакцина по п. 24, отличающаяся тем, что по меньшей мере один член из первого набора из одной или более точечных мутаций представляет собой мутацию G346A в геноме вируса гриппа H1N1.
26. Живая аттенуированная вакцина по одному из пп. 20-25, отличающаяся тем, что указанный второй набор из одной или более мутаций включает второй набор из одной или более точечных мутаций.
27. Живая аттенуированная вакцина по п. 26, отличающаяся тем, что по меньшей мере один член второго набора из одной или более точечных мутаций выбран из группы, состоящей из мутаций T261G и A310G в геноме вируса гриппа H1N1.
28. Живая аттенуированная вакцина по одному из пп. 20-27, содержащая третий набор из одной или более мутаций, придающих способность к репликации при температуре ниже 35°С.
29. Живая аттенуированная вакцина по п. 28, отличающаяся тем, что указанный третий набор из одной или более точечных мутаций отличается от указанного второго набора из одной или более точечных мутаций, и по меньшей мере один член указанного третьего набора из одной или более точечных мутаций выбран из группы, состоящей из мутаций T261G и A310G в геноме вируса гриппа H1N1.
30. Живая аттенуированная вакцина по одному из пп. 20-29, отличающаяся тем, что указанный мутированный вирус гриппа демонстрирует пониженную способность к репликации при температуре 37° или выше по сравнению с температурой 35°С или ниже.
31. Живая аттенуированная вакцина по одному из пп. 20-30, дополнительно содержащая инсерцию гена, кодирующего экзогенный антиген.
32. Живая аттенуированная вакцина по п. 31, отличающийся тем, что указанный экзогенный антиген происходит от организма, патогенного для человека.
33. Живая аттенуированная вакцина по п. 32, отличающаяся тем, что указанный организм, патогенный для человека, выбран из вируса, бактерии, гриба и паразита.
34. Живая аттенуированная вакцина по п. 33, отличающаяся тем, что вирус выбран из группы, состоящей из вируса гриппа, вируса ТОРС, вируса MERS, вируса Зика, вируса гепатита, папилломавируса и вируса Эбола.
35. Живая аттенуированная вакцина по п. 20, дополнительно содержащая инсерцию гена, кодирующего эндогенный антиген, ассоциированный с болезненным состоянием.
36. Живая аттенуированная вакцина по п. 35, отличающаяся тем, что эндогенный антиген выбран группы, состоящей из антигена, ассоциированного с раком, и тау-белка.
37. Живая аттенуированная вакцина по одному из пп. 20-36, отличающаяся тем, что среда-носитель содержит адъювант.
38. Живая аттенуированная вакцина по одному из пп. 20-37, отличающаяся тем, что среда-носитель содержит усилитель иммунного ответа.
39. Живая аттенуированная вакцина по п. 38, отличающаяся тем, что указанный усилитель иммунного ответа представляет собой агонист TLR-7.
40. Живая аттенуированная вакцина по п. 39, отличающаяся тем, что указанный агонист TLR-7 представляет собой имиквимод.
41. Живая аттенуированная вакцина по одному из пп. 20-40, отличающаяся тем, что указанная живая аттенуированная вакцина безопасна для применения у человека в возрасте до двух лет.
42. Живая аттенуированная вакцина по одному из пп. 20-41, отличающаяся тем, что указанная живая аттенуированная вакцина безопасна для применения у человека в возрасте более 49 лет.
43. Живая аттенуированная вакцина по одному из пп. 20-42, отличающаяся тем, что указанная живая аттенуированная вакцина эффективно обеспечивает по меньшей мере 20% выживаемость на животной модели после введения высокой летальной дозы патогенного организма, по отношению к которому указанная живая аттенуированная вакцина обеспечивает защиту, причем введение происходит по меньшей мере через две недели после интраназальной вакцинации животной модели живой аттенуированной вакциной.
44. Способ получения модифицированного вируса гриппа, подходящего для применения в составе живой аттенуированной вакцины, включающий:
делецию активности фактора вирулентности из вируса гриппа H1N1 с целью получения первого мутированного вируса;
размножение указанного мутированного вируса, содержащего делецию, в линии клеток млекопитающего при температуре 37° или более с целью получения второго мутированного вируса, способного к репликации, содержащего первый набор из одной или более мутаций;
размножение указанного второго мутированного вируса в системе на основе яйца птицы при температуре менее 35°С с целью получения холодоадаптированного третьего мутированного вируса, содержащего второй набор из одной или более мутаций.
45. Способ по п. 44, отличающийся тем, что делеция активности фактора вирулентности включает делецию по меньшей мере части гена NS1, причем указанная делеция распространяется за пределы нуклеотидов 57-528 сегмента NS1.
46. Способ по одному из пп. 44-45, отличающийся тем, что указанный первый набор из одной или более мутаций представляет собой первый набор из одной или более точечных мутаций, придающих способность к репликации.
47. Способ по п. 46, отличающийся тем, что указанный первый набор из одной или более точечных мутаций находится за пределами области М мутированного вируса гриппа H1N1.
48. Способ по п. 46, отличающийся тем, что по меньшей мере один член из первого набора из одной или более точечных мутаций представляет собой мутацию G346A в геноме вируса гриппа H1N1.
49. Способ по одному из пп. 44-48, отличающийся тем, что указанный второй набор из одной или более мутаций представляет собой второй набор из одной или более точечных мутаций.
50. Способ по п. 49, отличающийся тем, что по меньшей мере один член второго набора из одной или более точечных мутаций выбран из группы, состоящей из мутаций Т261G и A310G в геноме вируса гриппа H1N1.
51. Способ по одному из пп. 44-50, отличающийся тем, что указанный третий мутированный вирус содержит третий набор из одной или более мутаций, придающих способность к репликации при температуре ниже 35°С.
52. Способ по п. 51, отличающийся тем, что указанный третий набор из одной или более мутаций содержит третий набор из одной или более точечных мутаций, и по меньшей мере один член указанного третьего набора из одной или более точечных мутаций отличается от указанного второго набора из одной или более точечных мутаций и выбран из группы, состоящей из мутаций T261G и A310G в геноме вируса гриппа H1N1.
53. Способ по одному из пп. 44-52, отличающийся тем, что указанный третий мутантный вирус демонстрирует пониженную способность к репликации при температуре 37° или выше по сравнению с температурой 35°С или ниже.
54. Способ по одному из пп. 44-53, дополнительно включающий инсерцию гена, кодирующего экзогенный антиген, в вирус гриппа H1N1.
55. Способ по п. 54, отличающийся тем, что указанный экзогенный антиген происходит от организма, патогенного для человека.
56. Способ по п. 55, отличающийся тем, что указанный организм, патогенный для человека, выбран из вируса, бактерии, гриба и паразита.
57. Способ по п. 56, отличающийся тем, что вирус выбран из группы, состоящей из вируса гриппа, вируса ТОРС, вируса MERS, вируса Зика, вируса гепатита, папилломавируса и вируса Эбола.
58. Способ по п. 44, дополнительно включающий инсерцию гена, кодирующего эндогенный антиген, ассоциированный с болезненным состоянием.
59. Способ по п. 58, отличающийся тем, что эндогенный антиген выбран из группы, состоящей из антигена, ассоциированного с раком, и тау-белка.