СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗИГОТНОСТИ ГЕНА FAD-2 КАНОЛЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПЦР С ДЕТЕКЦИЕЙ ПО КОНЕЧНОЙ ТОЧКЕ

1. Способ определения зиготности растения канолы, включающего ген fad-2, причем вышеупомянутый способ включает:
получение образца геномной ДНК из вышеупомянутого растения канолы;
получение приведенного в контакт образца посредством контакта вышеупомянутого образца геномной ДНК с первым праймером и вторым праймером, причем вышеупомянутый первый праймер предпочтительно связывает область вышеупомянутого гена fad-2 выше положения рассматриваемого однонуклеотидного полиморфизма, вышеупомянутый второй праймер предпочтительно связывает область вышеупомянутого гена fad-2 ниже рассматриваемого однонуклеотидного полиморфизма, где вышеупомянутый первый праймер и вышеупомянутый второй праймер продуцируют ампликон когда подвергается условиям полимеразной цепной реакции (ПЦР);
подвергание вышеупомянутого приведенного в контакт образца условиям ПЦР, при которых образуется вышеупомянутый ампликон;
предоставление возможности каждого из первого флуоресцентного зонда и второго флуоресцентного зонда гибридизоваться с ампликоном в течение заданного периода времени при температуре от 50 до 70°C, причем вышеупомянутый первый флуоресцентный зонд предпочтительно гибридизуется с вышеупомянутым ампликоном, когда вышеупомянутый рассматриваемый однонуклеотидный полиморфизм не присутствует в вышеупомянутом ампликоне, вышеупомянутый второй флуоресцентный зонд предпочтительно гибридизуется с вышеупомянутым ампликоном, когда вышеупомянутый рассматриваемый однонуклеотидный полиморфизм присутствует в вышеупомянутом ампликоне;
увеличение вышеупомянутой температуры после периода времени, определенного на стадии выдерживания;
регистрацию вышеупомянутой флуоресценции, производимой каждым из вышеупомянутых первого и второго зондов в течение стадии увеличения; и
определение зиготности вышеупомянутого растения канолы, причем стадия определения включает сравнение флуоресценции, производимой каждым из первого и второго зондов, где флуоресценция первого и второго зондов преимущественно отражает флуоресценцию, производимую в гомозиготном SNP-положительном контрольном образце, показывая присутствие вышеупомянутого рассматриваемого однонуклеотидного полиморфизма, флуоресценция первого и второго зондов преимущественно отражает флуоресценцию, производимую в гомозиготном SNP-отрицательном контрольном образце, показывая отсутствие вышеупомянутого рассматриваемого однонуклеотидного полиморфизма, и флуоресценция первого и второго зондов преимущественно отражает флуоресценцию, производимую в гетерозиготном SNP-положительном контрольном образце, показывая, что вышеупомянутое растение канолы включает первый аллель, в котором присутствует вышеупомянутый рассматриваемый однонуклеотидный полиморфизм, и второй аллель, в котором отсутствует вышеупомянутый рассматриваемый однонуклеотидный полиморфизм.
2. Способ по п. 1, в котором вышеупомянутые ампликоны состоят из 91 пары оснований.
3. Способ по п. 1, в котором вышеупомянутый однонуклеотидный полиморфизм состоит из полиморфизма C→T.
4. Способ по п. 3, в котором вышеупомянутая последовательность дикого типа включает цитозин в вышеупомянутом положении.
5. Способ по п. 1, причем вышеупомянутый способ используют для проверки интрогрессии скрещивания кроссбредных растений канолы.
6. Способ по п. 1, в котором вышеупомянутые праймеры включают SEQ ID NO:2 и SEQ ID NO:3, и вышеупомянутые первый и второй зонды включают SEQ ID NO:5 и NO:4.
7. Способ по п. 1, в котором вышеупомянутые первый и второй зонды метят одновременно флуоресцентным красителем и гасителем.
8. Способ по п. 7, в котором вышеупомянутый первый зонд включает FAM в качестве вышеупомянутого флуоресцентного красителя на конце 5′ вышеупомянутого первого зонда и гаситель MGB на конце 3′ вышеупомянутого первого зонда.
9. Способ по п. 7, в котором вышеупомянутый второй зонд метят VIC на конце 5′ вышеупомянутого второго зонда и гасителем MGB на конце 3′ вышеупомянутого второго зонда.
10. Способ по п. 1, в котором вышеупомянутый второй зонд включает SEQ ID NO:4.
11. Способ по п. 1, причем результаты флуоресценции в вышеупомянутом способе считывают непосредственно в планшет-ридере.
12. Способ по п. 1, в котором вышеупомянутый образец ДНК получают из растения канолы в поле.
13. Способ по п. 1, в котором стадия увеличения включает повышение вышеупомянутой температуры при практически равномерном приращении температуры в течение периода времени.
14. Способ по п. 1, в котором вышеупомянутая флуоресценция, производимая каждым из вышеупомянутых первого и второго зондов в течение стадии увеличения, обнаруживается на стадии обнаружения в течение каждого приращения стадии увеличения.
15. Набор для осуществления способа по п. 1, причем вышеупомянутый набор включает вышеупомянутый первый праймер, вышеупомянутый второй праймер, вышеупомянутый первый зонд и вышеупомянутый второй зонд.
16. Набор по п. 15, в котором вышеупомянутый первый праймер состоит из SEQ ID NO:2, вышеупомянутый второй праймер состоит из SEQ ID NO:3, вышеупомянутый первый зонд состоит из SEQ ID NO:5, и вышеупомянутый второй зонд состоит из SEQ ID NO:4.