Собственный иммунный ответ на термическое разрушение опухоли почки методом радиочастотной абляции

IgG, IgA and IgM antibodies against FSH: Serological markers of pathogenic autoimmunity or of normal immunoregulation? Am. J. Reprod. Immunol. 2005; 54: 364-70.

21. Valenta R., Mittermann I., Werfel T., Gam H., Renz H. Linking allergy to autoimmune disease. Trends in Immunol. 2008; 30(3): 109-16.

22. Bartunkova J., Kayserova J., Shoenfeld Y. Allergy and autoimmunity: parallels and dissimilarity the Yin and Yang of immu-nopathology. Autoimmun. Rev. 2009; 8: 302-8.

23. Cucnik S., Kveder T., Artenjak A., Ulkova Gallova Z., Swadzba J., Musial J. et al. Avidity of anti-B2-glycoprotein I antibodies in patients with antiphospholipid syndrome. Lupus. 2012; 21: 764-5.

24. Aalberse R. C., Stapel S. O., Schuurman J., Rispens T. Immunoglobulin G4: an odd antibody. Exp. Allergy. 2009; 39: 469-77.

25. Deshmukh U. S., Talwar G. P., Gupta S. K. IgG subclass distribu-

tion of anti-hCG and antidiphtheria toxoid antibodies in women immunized with a B-hCG based immunocontraceptive vaccine. J. Reprod. Immunol. 1994; 26: 65-72.

26. Iyer K. S., Upadhye S., Kadam L. R., Mahale S. D., Dhanasekha-ran S., Natraj U. et al. Search for peptide immunogens of beta-subunit of human chorionic gonadotropin (hCG) capable of eliciting hormone specific and neutralizing antisera. Identification of an undecapeptide eliciting hCG-specific antisera. Int. J. Pept. Protein Res. 1992; 39(2): 137-44.

27. Identification of cross-reactive and restricted epitopes localized on human chorionic gonadotropin beta-subunit by monoclonal antibodies. Hybrid. Hybrydomics. 2004; 23(2): 101-7.

28. Stevens V. C. Use of synthetic peptides as immunogens for developing a vaccine against human chorionic gonadotropin. Ciba Found Symp. 1986; 119: 200-25.

Received 08.10.14

© коллектив авторов, 2015

удк 616.61-006.04-089.87:615.832.74]-078.33

Носов А. К., Балдуева И. А., Самарцева Е. Е., Петров С. Б.

собственный иммунный ответ на термическое разрушение опухоли почки методом радиочастотной абляции

ФГБУ «НИИ онкологии им. Н. Н. Петрова» Минздрава России, г Санкт-Петербург

Дана количественная оценка состава иммунокомпетентных клеток в процессе лечения и наблюдения у 29 пациентов с почечно-клеточной карциномой, из них 20 проводили лапароскопическую радиочастотную абляцию (РЧА), 9 - лапароскопическую резекцию почки. У больных, которым выполняли РЧА, выявили повышение содержания отдельных субпопуляций иммунокомпетентных клеток, в то время как у пациентов, которым произвели резекцию почки, подобные изменения отсутствовали, что может свидетельствовать о формировании протективного иммунного ответа при РЧА.

Ключевые слова: рак почки; радиочастотная абляция; опухолевые антигены; активация лимфоцитов; иммунотерапия.

Для цитирования: Иммунология. 2015; 36(1): 35-38.

Nosov A. K., Baldueva I. A., Samartseva E. E., Petrov S. B.

«N. N. Petrov Research Institute of Oncology» Ministry of Health of Russia, St. Petersburg

Quantify the composition of immune cells in the process of treatment and follow-up of 29 patients with renal cell carcinoma (RCC), while 20 patients underwent laparoscopic radiofrequency ablation (RFA), 9 - laparoscopic resection of the kidney. It wav determined that patients who had RFA identified the improvement of individual subpopulations immunocompetent cells, whereas in patients who had resection of the kidney such changes are absent, which may indicate the formation of a protective immune response in RFA.

Keywords: kidney cance; radiofrequency ablation; tumor antigens; activation of lymphocytes; immunotherapy.

citation: Immunologiya. 2015: 36(1): 35-38.

Проблема рака почки в нашей стране остается одной из важнейших как в науке, так и в практическом здравоохранении. Почечно-клеточный рак (ПКР) составляет примерно 3% всех онкологических заболеваний у взрослых. Совершенствование диагностических методик (УЗИ, компьютерная томография - КТ, магнитно-резонансная томография - МРТ) привели к тому, что все чаще диагностируют опухоли почек на стадии T1a (менее 4 см в диаметре). При этом резекция почки стала наиболее частым оперативным вмешательством. В то же время выявление случаев ПКР на ранних стадиях

Для корреспонденции: носов Александр Константинович, Nakuro@yandex.ru

For correspondence: Nosov Aleksandr Konstantinovich,

Nakuro@yandex.ru

привело к значительному повышению интереса к малоин-вазивным методикам, таким как радиочастотная абляция (РЧА), криоабляция, микроволновая абляции. Среди последних одной из наиболее эффективных и перспективных считают РЧА, которая может быть использована как альтернатива резекции почки при опухолях, не превышающих в диаметре 4 см, особенно у пациентов с единственной почкой, билатеральными опухолями или серьезными противопоказаниями к выполнению оперативных вмешательств. Важно отметить, что РЧА относится к относительно безопасным методикам с редкими, обычно нетяжелыми осложнениями [1-5].

В основе методики лежит введение игольчатого или зонтичного электрода в опухолевую ткань с последующим формированием зоны термического некроза за счет электрического тока частотой 400-500 кГц. Точное расположение электрода достигают путем использования навигационных систем (УЗИ или КТ) и/или лапароскопически. Температура вокруг зонда

превышает 100оС. При температуре 42-440С происходит тромбоз сосудов микроциркуляторного русла, при 50оС разрушаются клеточные мембраны, начинается денатурация белка, и индуцируется коагуляционный некроз [2, 5, 6].

Большинство публикаций по эффективности РЧА ограничивается оценкой зоны некроза по данным КТ или МРТ. Однако следует отметить, что в последнее время стали появляться данные, согласно которым РЧА помимо непосредственного термического воздействия на опухолевые клетки может служить триггером формирования протективного иммунного ответа. Так, например, М. Matuszewski и соавт. продемонстрировали значительные изменения в соотношении содержания периферических иммунных клеток у пациентов с ПКР после РЧА [7]. Кроме того, в биоптатах печени, полученных после термоабляции, обнаружены скопления макрофагов, дендритных клеток (ДК) и Т-лимфоцитов [16]. Таким образом, локальное разрушение опухолевой ткани, вероятно, приводит к существенному выбросу антигенов, которые становятся доступными для клеток иммунной системы (макрофаги, ДК). Кроме того, презентация антигенов, в ходе которой макрофаги и ДК стимулируют иммунный ответ путем представления захваченного ими антигена Т-лимфоцитам, под действием высокой температуры может усиливаться и приводить к активации Т-лимфоцитов периферической крови, что вызывает специфическую противоопухолевую активность, напоминающую эффект адъювантной иммунотерапии [9-12, 6, 13, 8, 14, 15].

Хорошо известна роль клеточного иммунитета в ответ на деструкцию опухолевой ткани. Интерлейкин-2 и фактор некроза опухоли а активируют иммунную систему и вызывают противоопухолевый ответ. В настоящее время это имеет место у пациентов с метастатическим раком почки [16]. Однако поиск новых механизмов, вызывающих иммунный ответ, продолжается. Участие РЧА в индукции специфического противоопухолевого ответа у пациентов с опухолью печени в настоящее время далеко от полного понимания, а какие-либо данные о пациентах с ПКР в литературе вообще практически отсутствуют на этот счет. Изучение противоопухолевого ответа у пациентов с ПКР после РЧА может привести к лучшему пониманию эффектов термоабляции и улучшить ее эффективность. Кроме того, обнаружение новых механизмов активации иммунной системы может дать возможность использовать РЧА вместе с иммунотерапией в качестве нового комбинированного лечения при ПКР.

Цель нашего исследования оценить влияние лапароскопической РЧА на субпопуляционный состав иммунокомпетент-ных клеток периферической крови у пациентов с ПКР в процессе лечения и наблюдения (до операции, в 1-е сутки после операции, на 7-е сутки и через 1 мес после операции) и сравнить данные с результатами, полученными при выполнении лапароскопической резекции почки. Оценивали следующие показатели периферической крови: содержание Т-лимфоцитов ^3^19-), В-лимфоцитов ^3^19+), Т-хелперов ^3^4+), активированных Т-хелперов ^3^4+НЪА-ВГ), цитотоксических Т-лимфоцитов (CD3+CD8+), активированных цитотоксических Т-лимфоцитов (CD3+CD8+HLA-натуральных киллеров (ПК-клетки) (CD3-CD16+56+), Т-регуляторных лимфоцитов (CD4+CD25bгightCD127l0w) и им-мунорегуляторный индекс (ИРИ; CD4+/CD8+), снижение которого свидетельствует об иммунодефицитном состоянии.

Материалы и методы

1. Пациенты. В настоящем исследовании на базе отделения урологии «ФГУ онкологии им. Н. Н. Петрова» провели оценку изменений иммунного статуса у пациентов с ПКР после РЧА и резекции почки, выполненной лапароскопическим доступом. Обследованы 29 больных (16 мужчин и 13 женщин), средний возраст которых 60,4 ± 8,5 года. Критериями исключения стали анамнестические сведения и данные лабораторных исследований, свидетельствующие об имеющейся гематологической патологии. Все пациенты имели опухоль стадии Т1аМЗМ0 со средним размером 2 ± 0,9 см. Диагно-

стику во всех случаях осуществляли методом КТ с внутривенным контрастированием и УЗИ. В 1-ю группу вошли 20 пациентов, которым выполнили лапароскопическую РЧА. Из них у 5 опухоль имела полностью интраренальное расположение, что требовало интраопрационного УЗИ-наведения. У 4 пациентов образование располагалось в единственной почке. Во 2-ю группу включили 9 пациентов, которым произвели лапароскопическую резекцию почки. При подсчете иммунокомпетентных клеток ни у одного из пациентов 2-й группы не выявили каких-либо достоверно значимых изменений как по сравнению с исходными значениями, так и с нормой за весь период исследования. В связи с этим набор пациентов во 2-ю группу был прекращен. Средний размер опухоли у пациентов 2-й группы составил 3 ± 0,7 см. Всем больным за 1 сут до операции, а также на 1, 7 и 30-е сутки после оперативного вмешательства выполняли подсчет имму-нокомпетентных клеток методом многоцветной проточной цитофлюорометрии на приборе BD FACS Calibur (США). Оценивали изменения как T-, так и B-клеточного иммунитета; полученные параметры сравнивали с нормой и исходным значением.

2. РЧА и резекция почки. Операцию проводили лапа-роскопически чрезбрюшинным доступом под общей анестезией в положении больного на здоровом боку. После мобилизации почки и визуализации опухоли производили трепан-биопсию опухоли, у пациентов с интраренальным расположением образования биопсию выполняли под контролем УЗИ. Непосредственно после биопсии осуществляли процедуру РЧА. В своей работе мы использовали аппарат RITA 1500х (AngioDynamics, U. S.) зонтичным зондом серии «star burst», который раскрывается внутри опухоли после позиционирования электрода. Можно регулировать степень раскрытия «зонтика» внутри ткани от 1 до 5 см. Температурный контроль обеспечивается термодатчиками, встроенными в иглы зонда. В ходе нашей работы средняя температура во время абляции составляла 105 ± 47 oC. Стоит учитывать, что в ходе РЧА происходят внутритканевые изменения, которые отражаются на визуализации опухоли под УЗИ при интра-ренальном ее расположении. Среднее время процедуры РЧА составило 25 ± 6 мин (каждый сеанс РЧА по 10 мин, в среднем проводили по 2-3 сеанса в зависимости от размера опухоли). Среднее время операции составило 105 ± 14 мин. Длительность госпитализации 6 ± 1 дней. В послеоперационном периоде пациентам проводили УЗИ и КТ-диагностику с целью оценки зоны абляции и для выявления послеоперационных осложнений. Следует отметить, что ни у одного из пациентов не выявили осложнений, превышающих grade I по шкале осложнений Clavien-Dindo. Все пациенты в настоящее время подлежат тщательному наблюдению с целью выявления рецидивов.

Резекцию почки производили также лапароскопическим чрезбрюшинным доступом, данная операция не отличалась от стандартной техники выполнения.

3. Оценка иммунного статуса. Всем пациентам проводился забор крови 4 раза: до операции, в 1-е сутки после операции, на 7-е сутки после операции и через 1 мес. Подсчет иммунокомпетентных клеток проводился методом многоцветной проточной цитофлюорометрии на приборе FACS Calibur (США). Оценивали изменения как T-, так и B-клеточного иммунитета, полученные параметры сравнивали с нормой и исходным значением.

Результаты

При исследовании показателей иммунного статуса, проведенном за 1 сут до РЧА, не выявили значимых отклонений от референсных значений (p < 0,05). В послеоперационном периоде значение ряда показателей за весь период наблюдения достоверно (p > 0,05) не изменилось (CD3-CD19+ (B-лимфоциты), CD3 CD16+56+1 (NK-клетки), CD4+CD25brightCD127low (T-регуляторные лимфоциты)). В то же самое время наблюдали статистически значимое (p < 0,05) увеличение количества CD3+CD19- (T-лимфоциты), которое в

Изменения субпопуляционного состава (в •Ю'/л) иммунокомпетентных клеток у пациентов, которым выполнялась РЧА

Иммунокомпетентные клетки До операции 1-е сутки 7-е сутки 1 мес Норма

CD3+CD19- (T-лимфоциты) 1,18 ± 0,3 1,03 ± 0,01 1,9 ± 0,3* 1-1,6

CD3-CD19+ (B-лимфоциты) 0,22 ± 0,2 0,15 ± 0,03 0,19 ± 0,02 0,2 ± 0,05 0,04-0,4

CD3+CD4+ (T-хелперы) 0,8 ± 0,3 0,65 ± 0,2 0,88 ± 0,3 1,5 ± 0,2* 0,6-1,2

CD3+CD4+HLA-DR+ (активированные T-хелперы) 0,4 ± 0,1 0,4 ± 0,1 0,5 ± 0,08 0,7 ± 0,06* -

CD3+CD8+ (цитотоксические T-лимфоциты) 0,46 ± 0,05 0,38 ± 0,04 0,43 ± 0,1 0,6 ± 0,1 0,3-1,0

cD3+cD8+HLA-DR+ (активированные цитотоксические 0,08 ± 0,02 0,04 ± 0,01 0,06 ± 0,02 0,16 ± 0,02* -

T-лимфоциты)

CD3-CD16+56+ (NK-клетки) 0,344 ± 0,09 0,19 ± 0,04 0,29 ± 0,1 0,33 ± 0,09 0,03-0,5

CD4+CD25brightCD127low (T-регуляторные лимфоциты) 0,06 ± 0,02 0,04 ± 0,01 0,07 ± 0,02 0,06 ± 0,01 0,009-0,078

CD4+/CD8+ (ИРИ) 1,66 ± 0,6 2,31 ± 0,5 2,42 ± 0,8 2,95 ± 0,15* 1,5-2,0

Примечание. * - p < 0,05.

периферической крови к 30-м суткам наблюдения возросло от 1,18 ± 0,3 • 109/л до 1,9 ± 0,3 • 109/л главным образом за счет CD3+CD4+ (T-хелперы), CD3+CD4+HLA-DR+ (активированные T-хелперы) и CD3+CD8+HLA-DR+ (активированные цитотоксические T-лимфоциты), что в итоге привело к достоверному (p < 0,05) увеличению ИРИ с 1,66 ± 0,6 • 109/л до 2,95 ± 0,15 • 109/л на 30-е сутки после РЧА (см. таблицу). При анализе параметров иммунного статуса, зарегистрированных у пациентов 2-й группы, не выявили каких-либо достоверно значимых изменении как по сравнению с исходными значениями, так и с нормой за весь период исследования.

Обсуждение

В последние годы РЧА стала популярным методом лечения опухолей, который чаще всего используют при лечении неоперабельных первичных и метастатических опухолей печени. Однако РЧА стали также широко применять в онкоурологии для лечения локализованных форм рака почки небольшого размера. Большинство исследований по изучению термоабляции в онкологии сфокусировано на оценке деструкции тканей и оптимизации физических механизмов процесса, в то время как потенциальные механизмы иммунного ответа при РЧА еще далеки от понимания [11, 1-3, 6, 16, 4].

Первые шаги к пониманию этого механизма были предприняты A. Zerbini и соавт. в 2006 г, которые протестировали пациентов с неоперабельной первичной опухолью печени после РЧА. Они наблюдали повышенную активацию T-лимфоцитов периферической крови у пациентов после РЧА после контакта с аутологичным лизатом опухолевых клеток (у 7 из 20 до РЧА и у 16 из 20 через 4 нед после РЧА). Кроме того, было показано, что иммунный ответ в большей степени обусловлен активацией клеток CD4+ (T-хелперов) и CD8+ (цитотоксические T-лимфоциты) у отдельных пациентов. В то же время единственным достоверно значимым было увеличение количества NK-клеток, содержание же других субпопуляций лимфоцитов осталось неизменным. Т. е. у некоторых пациентов РЧА, возможно, служит триггером формирования специфической иммунной памяти, которая в свою очередь имитирует эффект адъювантной иммунотерапии. Авторы не выявили корреляцию между повышенной иммунной реакцией и отсутствием рецидивов [15].

J. Hansler и соавт. в 2006 г представили аналогичное исследование, в которое наряду с пациентами с первичной ге-патоцеллюлярной карциномой были включены пациенты с метастазами в печень колоректального рака. В обеих группах выявлено увеличение в 5 раз CD4+ и CD8+ T-лимфоцитов [11].

M. Matuszewski и соавт. в 2011 г опубликовали работу, в которой оценивали состав иммунокомпетентных клеток у 6 пациентов с ПКР до РЧА и в разные периоды времени после ее проведения [5]. Согласно представленным данным наиболее выраженные изменения имели место через 2 нед после РЧА. У 1 пациента наблюдалось увеличение количества как CD4+, так и CD8+ T-лимфоцитов. У 5 из 6 пациентов в течение всего периода наблюдения повышалась концентра-

ция активированных (DR+) клеток, причем их максимальная концентрация зафиксирована на 2-й неделе. Популяция CD56+CD16+-клеток была снижена в большинстве случаев.

В ходе нашей работы исследованы различные показатели иммунного статуса, отражающие изменения как T-клеточного так и B-клеточного звена иммунитета до операции и в разумные сроки наблюдения после операции. Установлено, что среднее содержание T-лимфоцитов к 1-му месяцу после РЧА повысилось практически вдвое, главным образом за счет увеличения количества T-хелперов (CD3+CD4+), активированных T-хелперов (CD3+CD4+HLA-DR+) и активированных цитотоксических T-лимфоцитов (CD3+CD8+HLA-DR+), что в конечном итоге привело к увеличению ИРИ через 1 мес после операции.

Факт индукции иммунного ответа интересен сам по себе, однако механизмы, ведущие к возникновению этого ответа, выглядят еще более интригующими. В целом результаты анализа литературных данных дают основание полагать, что во время термоабляции происходит значительное высвобождение опухолевых антигенов. Термически поврежденные и денатурированные антигены захватываются макрофагами и ДК и презентируются CD4+ T-лимфоцитам. Это, возможно, приводит к преодолению ускользания опухолевых клеток от надзора иммунной системы, активации CD4+-лимфоцитов и формированию специфического противоопухолевого ответа [8, 15, 11, 13, 14]. Кроме того, вероятно, белки теплового шока (англ. HSP, Heat shock proteins) играют важную роль в индукции иммунного ответа у пациентов после РЧА. Физиологически HSP участвуют в регуляции трансмембранного транспорта различных белков и их хранении внутри клеток. Некоторые авторы [17, 18] продемонстрировали повышение концентрации HSP70 и HSP90 в тех областях печени, которые были подвергнуты РЧА. Также было показано, что HSP активируют ДК, цитоксические T-лимфоциты и NK-клетки [19].

Цель нашего исследования заключалась в оценке воздействия РЧА на субпопуляцию лимфоцитов крови. Мы обнаружили, что помимо непосредственного термического воздействия на опухолевые клетки РЧА может служить триггером формирования протективного иммунного ответа. Очевидно, необходимы дальнейшие исследования роли и значения РЧА в формировании специфического противоопухолевого иммунитета.

ЛИТЕРАТУРА

1. Mahnken А. Н., Rohde D., Brkovic D. et ai. Percutaneous radiofrequency ablation of renal cell carcinoma: Preliminary results. Acta Radiol. 2005; 46: 208-14.

2. McGovern F. J., Wood B. J., Goldberg S. N. et al. Radio frequency ablation of renal cell carcinoma via image guided needle electrodes. J. Urol. 1999; 161: 599-600.

3. Mouraviev V., Joniau S., Van Poppel H. et al. Current status of minimally invasive ablative techniques in the treatment of small renal tumours. Eur. Urol. 2007; 51: 328-36.

4. Veltri A., Calvo A., Tosetti I. et al. Experiences in US-guided

percutaneous radiofrequency ablation of 44 renal tumors in 31 patients: Analysis of predictors for complications and technical success. Cardiovasc. Intervent. Radiol. 2006; 29: 811-8.

5. Zlotta A. R., Wildschutz T., Raviv G. et al. Radiofrequency interstitial tumor ablation (RITA) is a possible new modality for treatment of renal cancer: Ex vivo and in vivo experience. J. En-dourol. 1997; 11: 251-8.

6. Nikfaijam M., Muralidharan V., Christophi C. Mechanisms of focal heat destruction of liver tumors J. Surg. Res. 2005; 127: 208-23.

7. Matuszewski M., Michajlowski J., Michajlowski I. et al. Impact of radiofrequency ablation on PBMC subpopulation in patients with renal cell carcinoma. Urol. Oncol. 2011; 29: 724-30.

8. Wissniowski T. T., Hansler J., Neureiter D. et al. Activation of tumorspecific T lymphocytes by radio-frequency ablation of the VX2 hepatoma in rabbits. Cancer Res. 2003; 63: 496-500.

9. Ali M. Y., Grimm C. F., Ritter M. et al. Activation of dendritic cells by local ablation of hepatocellular carcinoma. J. Hepatol. 2005; 43: 817-22.

10. den Brok M. H., Sutmuller R. P., van der Voort R. et al. In situ tumor ablation creates an antigen source for the generation of antitumor immunity. Cancer Res. 2004; 64: 4024-9.

11. Hansler J., Wissniowski T. T., Schuppan D. et al. Activation and dramatically increased cytolytic activity of tumor specific T lymphocytes after radio-frequency ablation in patients with he-patocellular carcinoma and colorectal liver metastases. World J. Gastroenterol. 2006; 12: 3716-21.

12. Napoletano С., Taurino F., Biffoni M. et al. RFA strongly modulates the immune system and antitumor immune response in metastatic liver patients. Int. J. Oncol. 2008; 32: 481-90.

13. Rughetti A., Rahimi H., Rossi P. et al. Modulation of blood circulating immune cells by radiofrequency tumor ablation. J. Exp. Clin. Cancer Res. 2003; 22: 247-50.

14. Yu H. C., Moon J. I., Jin Z. W. et al. Effect of radiofrequency ablation of the liver on cell mediated immunity in rats. World J. Surg. 2005; 29: 739-43.

15. Zerbini A., Pilli М., Penna A. et al. Radioffequency thermal ablation of hepatocellular carcinoma liver nodules can activate and enhance tumor-specific T-cell responses. Cancer Res. 2006; 66: 1139-46.

16. de Reijke T. M., Bellmunt J., van Poppel H. et al. EORTC-GU group expert opinion on metastatic renal cancer. Eur. J. Cancer. 2009; 45: 765-73.

17. Schueller G., Kettenbach J., Sedivy R. et al. Heat shock protein expression induced by percutaneous radiofrequency ablation of hepatocellular carcinoma in vivo. Int. J. Oncol. 2004; 24: 609-13.

18. Rai R., Richardson C., Flecknell P. et al. Study of apoptosis and heat shock protein (HSP) expression in hepatocytes following radiofrequency ablation (RFA). J. Surg. Res. 2005; 129: 147-51.

19. Pilla L., Squarcina P., Coppa J. et al. Natural killer and NK-Like T-cell activation in colorectal carcinoma patients treated with au-tologous tumor-derived heat shock protein 96. Cancer Res. 2005; 65: 3942-9.

Поступила 05.09.14 Received 05.09.14

© коллектив авторов, 2015 удк 616.133-004.6-07:616.155.32-078.33

Пылаева Е. А., Потехина А. В., Балахонова Т. В., Рулева Н. Ю., Масенко В. П., Ноева Е. А., Красникова Т. Л., Арефьеа Т. И.

эффекторные и регуляторные субпопуляции лимфоцитов крови у пациентов с атеросклерозом сонных артерий

ФГБУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс» Минздрава России, 121552, Москва, Россия

Введение. Хроническое воспаление артериальной стенки при атеросклерозе модулируется лимфоцитарными субпопуляциями. Эффекторные лимфоциты, включая Т-хелперы 1 типа (Tx1) и Т-хелперы 17 (Tx17), обладают провоспали-тельными свойствами, регуляторные Т-лимфоциты - противовоспалительными. Цель работы - исследование баланса циркулирующих Трег, Tx1 и Tx17 у больных с различной выраженностью атеросклероза сонных артерий. Материал и методы: из 66 пациентов по данным УЗДС сонных артерий сформировали 3 группы: I - пациенты со стенозом менее 30% (n = 15), II - стеноз 30-50% (n = 29), III - стеноз более 50% (n = 22). У 22 пациентов выявлены нестабильные ате-росклеротические бляшки в сонных артериях. Лимфоциты типировали методом прямой иммуноцитофлюориметрии: Treg определяли как CD4+CD25highCD127low и как CD4+FoxP3+ лимфоциты, активированные Т-лимфоциты (Такт) - как CD4+CD25lowCD127high. Для анализа CD4+IL17a+Th17 и CD4+INFgamma+Th1 мононуклеарные клетки предварительно активировали в культуре. Уровни СРБ, IL-10, sCD25 и IL-17a в сыворотке определяли методами нефелометрии, хемилюминесценции (Immulite) и ИФА. Результаты: Содержание Tрег(CD4+CD25hi9hCD127low) ниже, а соотношение Тх1/Трег^4^25Ыд^1271™') выше в группе III по сравнению с группой I. Индекс Такт (cD4+CD25lowCD127hi9h)/ Трег^4^25М9^1271™') был выше, а соотношение Трег^4^25М9^127|™')Ях17 - ниже в группах II и III по сравнению с группой I. У пациентов с нестабильными АСБ соотношение Tрег(CD4+CD25hi9hCD127low)/Tx17 было ниже по сравнению с пациентами со стабильными АСБ. Содержание sCD25 (Ед/мл) было выше у пациентов II и III групп по сравнению с группой I. Корреляционный анализ показал наличие прямой связи между уровнем sCD25 и содержанием Tx17 и обратной связи между уровнем sCD25 и количеством Tрег(CD4+CD25hi9hCD127low) , соотношениями Tрег(CD4+CD25hi9hCD127low)/Tx17 и Трег^4Тс>хР3+уТх17. Заключение: При прогрессии и дестабилизации атеросклероза сонных артерий происходит нарушение баланса про- и противовоспалительных лимфоцитарных субпопуляций, отражением которого является изменение уровня sCD25.

Ключевые слова: атеросклероз; воспаление; регуляторные T-лимфоциты; T-хелперы 1 типа; T-хелперы 17; sCD25.

_Для цитирования: Иммунология. 2015; 36(1): 38-44.

Для корреспонденции: Пылаева Екатерина Алексеевна, iamfrommsu@yandex.ru;

For correspondence: Pylaeva Ekaterina Alekseevna, iamfrommsu@yandex,ru