Результаты диагностики пола и стадий зрелости гонад осетровых УЗИ-сканированием и методом биопсии

УДК 639.37

РЕЗУЛЬТАТЫ ДИАГНОСТИКИ ПОЛА И СТАДИЙ ЗРЕЛОСТИ ГОНАД ОСЕТРОВЫХ УЗИ-СКАНИРОВАНИЕМ И МЕТОДОМ БИОПСИИ

THE DIAGNOSTIC RESULTS SEX AND MATURITY STAGES OF THE GONADS OF STURGEON ULTRASOUND SCANNING AND BIOPSY

А.И. Новокщёнова, кандидат сельскохозяйственных наук В.Г. Дикусаров, доктор сельскохозяйственных наук О.С. Коротаева, кандидат сельскохозяйственных наук В.Г. Калмыков, кандидат сельскохозяйственных наук

A.I. Novokshenovа, V.G. Dikusarov, O.S. Korotaeva, V.G. Kalmykov

Волгоградский государственный аграрный университет Volgograd State Agrarian University

В статье представлен сравнительный анализ результатов диагностики пола и стадий зрелости гонад, проведенный двумя общепринятыми методами при выращивании маточного стада осетровых в условиях установки замкнутого водоснабжения ПНИЛ «Разведение ценных пород осетровых» ФГБОУ ВО Волгоградский ГАУ. Описаны собственные нормативы, обеспечивающие первое и последующее созревание маток, выявляемые с целью повышения эффективности созревания особей. Предложены характеристики поляризации яйцеклеток и собственная база эхограмм гонад, полученных при исследовании рыб, выращенных в определенных рыбоводно-биологических и гидрохимических условиях. Описаны особенности гонадогенеза и гаметогенеза осетровых в условиях проблемной научно-исследовательской лаборатории, выявлено значительное сокращение межнерестовых интервалов. Охарактеризована периодичность сроков созревания ремонтно-маточного стада.

The article offers a comparative analysis of diagnostic results sex and maturity stages of the gonads, carried out by two conventional methods for growing brood stock of sturgeons in the conditions of installation of closed water research laboratory "Breeding of valuable species of sturgeons" CHAIR IN the Volgograd state agricultural UNIVERSITY. Own standards providing the first and subsequent maturation of ducks revealed for the purpose of increase of efficiency of maturation of individuals are described. The characteristics of polarization of eggs and own base of echograms of gon-ads obtained in the study of fish grown in certain fish-breeding biological and hydrochemical conditions are proposed. Features of gonadogenesis and gametogenesis of sturgeon in the conditions of problem research laboratory are described, significant reduction of interstitial intervals is revealed. Characterized the frequency of ripening broodstock.

Ключевые слова: УЗИ-сканирование рыб, метод биопсии гонад, коэффициент поляризации яйцеклеток, гонады осетровых, маточное стадо, рыбоводно-биологические нормативы, гидрохимические нормативы

Key words: Ultrasound scanning for fish, and biopsy of the gonads, the polarization coefficient of the oocytes, gonads sturgeon brood stock, the fish-biological standards, chemical regulations.

Введение. Проблемная научно-исследовательская лаборатория «Разведение ценных пород осетровых» была основана на базе кафедры «Водные биоресурсы и аквакульту-ра» в сентябре 2014 г. Объект создан для проведения научно-исследовательских работ и в числе основных целей имеет улучшение качества половых продуктов осетровых рыб.

Целью исследования был анализ методов изучения функциональных изменений развития половых клеток (гаметогенеза), формирования и развития половых желез (го-надогенеза), прохождения годичных половых циклов, характера икрометания осетровых рыб в условиях УЗВ лаборатории «Разведение ценных пород осетровых» с приме-

нением биопсийного метода и метода УЗИ-сканирования. Выявление воздействия гидрологических факторов и особенностей кормовой базы на нерест, гаметогенез, половые циклы и проявившиеся при этом адаптивные способности.

Материалы и методы. С 2015 года в ПНИЛ «Разведение ценных пород осетровых» проводилась УЗИ-диагностика производителей. При этом отбирались особи 3-4 стадии зрелости гонад - самки стадии F4, самцы стадии М5-нерест. Оборудование -стационарный УЗИ-сканер MINDRAY БР-50 с ультразвуковыми линейными датчиками частотой 2-5 Мгц, используемыми для рыб массой 20-50 кг [9, 10, 7]. Биопсия проводилась по методике Б.Н. Казанского, Ю.А. Феклова и др. После сканирования методом УЗИ у самок щупом через боковые мышцы изымали ооциты и подвергали оценке зрелости. Тестировали только 3-4 стадию, выявляемую по УЗИ. Для этого несколько извлеченных у самок ооцитов фиксировали путем кипячения в физиологическом растворе, разрезали и изучали под электронным ^В микроскопом с подключением к РС. На разрезах определялся показатель - коэффициент их поляризации (Кп) [2, 8, 10]. Обследование проводилось на 10 икринках, полученных щупом от каждой особи.

Кп = 1^,

где L - наибольшее расстояние от анимального до вегетативного полюса; 1 - расстояние от ани-мального полюса до верхнего края зародышевого пузырька.

Для обработки результатов ультразвуковой диагностики пола и стадий зрелости гонад применялась классификация стадии и подстадий гонадогенеза Трусова [10]. Глубина сканирования устанавливалась - 5-6 см. При осмотре в поперечном направлении выявлялось положение генеративной ткани в гонаде на уровне 3-4 жучек. Первичный осмотр рыб проходил в апреле 2015 года в расчетное время созревания первых самок. Исследование на половую принадлежность проводили после выдерживания рыбы на диете для уменьшения скопления жира, усложняющего исследование (рисунок 1).

Рисунок 1 - А - Проведение УЗИ-диагностики аппаратом MINDRAY БР-50 в период осенней бонитировки. Б, В - Оценка зрелости яйцеклеток извлеченных от 5 самок -фиксация кипячением в физиологическом растворе, продольный разрез ооцитов и изучение под электронным ^В-микроскопом [10]

Результаты и обсуждение. С целью повышения изучения эффективности созревания особей в УЗВ в ПНИЛ «Разведение ценных пород осетровых» велись наблюдения и выявлены собственные нормативы, обеспечивающие первое и последующее созревание РМС (таблица 1). Гидрохимические показатели определялись еженедельно индикаторами Tetra. Кормление маточного поголовья осуществлялось гранулированными кормами Aller Aqua и Coppens.

Таблица 1 - Рыбоводно-биологические и гидрохимические нормативы,

полученные в УЗВ ПНИЛ «Разведение ценных пород осетровых» _для выращивания производителей ленского осетра_

Показатели Данные измерений ПДК

рН 7,8 7,0-8,0

Кислород растворенный, мг/л 9-10 4,0

Азот аммиака, мг/л 0,5 0,5

Азот нитритов, мг/л 0,01 0,1

Азот нитратов, мг/л 0,59 1,0

Температура воздуха, °С 23 21

Температура воды, °С 20-22 14

Основные рыбоводные характеристики

Объем бассейнов 14 м3

Плотность посадки 30 кг/м2

Кормовой коэффициент 1,4 кг/кг ж.м.

Таким образом, в исследованиях по определению особенностей созревания гонад осетровых и выяснения характеристик их годичных изменений в условиях УЗВ мы учитывали не только макро- и микроскопические данные, но и физиологическое состояние организма рыб, кормление и абиотические факторы прохождения жизненных циклов [1, 3, 4].

По результатам УЗИ-диагностики сибирского (ленской популяции) и русского осетров в УЗВ замечено, что обычно гонада хорошо видна, ее минимальный линейный размер на срезе превышает длину ультразвуковой волны [10]. Таким образом, в условиях лаборатории сформирована собственная база эхограмм (рисунок 2, таблица 2).

Таблица 2 - Результаты УЗИ-диагностики гонад сибирского осетра _ПНИЛ «Разведение ценных пород осетровых»_

Возраст особей Результаты УЗИ-диагностики

Год Бонитировка Бонитировка

март-апрель октябрь-ноябрь

4$ F2-3 6$ F2-3

2015 $7-7+ S6-6+ 3$ F3 1$ F4i 1S M5 нерест 2$ F3 1$ F4i 5S M5 нерест

3$ F2-3 1 $ F2-3

2016 $8-8+ S7-7+ 4$ F3 1$ F4i 1S M5 нерест 1$ F3 2$ F4i 2S M5 нерест

2017 $9-9+ S8-8+ 3$ F2-3 2$ F3 3$ F4i 6S M5 нерест 4$ F2-3 3$ F3 1$ F4i 4S M5 нерест

Биопсийным методом определения стадий зрелости яйцеклеток осетровых были получены результаты (таблицы 3, 4), где расчетом коэффициента поляризации маток разделили на группы. Ш-ГУ стадии зрелости гонад достигла одна самка русского осетра, которая направлена на выдерживание при нерестовых температурах в течение 10 суток и с постепенным выходом, т.е. с ежедневным повышением t на 2 градуса.

Таблица 3 - Расчеты коэффициента поляризации ооцитов осетровых _ПНИЛ «Разведение ценных пород осетровых»_

№ п/п Ленский осетр Русский осетр

1. L=0,58; 1=0,16, 0,58/0,16 = 0,27 Ь=1,4; 1=0,19, КП = 0,13

2. Ь=1,73; 1=0,48, КП = 0,48/1,73 = 0,28 L=0,99; 1=0,18, КП = 0,18

3. Ь=1,68; 1=0,34, КП = 0,34/1,68 = 0,22 Ь=1,01; 1=0,19, КП = 0,18

4. Ь=1,73; 1=0,39, КП = 0,39/1,73 = 0,22 Ь=1,03; 1=0,23, КП = 0,22

5. Ь=1,78; 1=0,77, =0,77/1,78 = 0,43 Ь=1,04; 1=0,21, КП = 0,20

Рисунок 2 - Фронтальный срез. Ткани и органы в порядке от сканирующей поверхности:

1. Кожа - тонкая гиперэхогенная зона. 2. Подкожная жировая клетчатка, зона средней эхогенности. 3. Мышечная ткань - широкая зона смешанной эхогенности, на которой собственно мышечная ткань (средней яркости) чередуется с миомерами из соединительной ткани (наклонные, почти вертикальные более яркие, чем мышцы узкие полосы).

4. Серозная оболочка брюшной полости - яркая ровная четкая граница.

5. Собственно гонада (2 стадия зрелости) имеет структуру различной эхогенности.

6. Кишечник - обычно полая трубка [9, 10, 7]

Еще одна самка отправлена на выдерживание с более длительным периодом 3035 суток до начала иньецирования. Ее Кп относится к категории - способные к созреванию, - и стадия зрелости гонад определяется как ГГГ. Все особи ленского осетра и еще две самки русского имеют коэффициент поляризации в пределах 0,2-0,4, относятся к категории незрелые и отправляются в нагул, стадия зрелости ГГ начало ГГГ.

224

ИЗВЕСТИЯ"

№ 2 (50), 2018

Таблица 4 - Группы самок по показателю коэффициента поляризации Кп и рекомендации по их использованию [10]

Вид Кп Кп Категория Рекомендации по использованию

- - Кп<0,05 Перезревшие Отправляются в нагул

- - 0,05<Кп<0,10 Зрелые 1 При достижении нерестовых температур инъецируются любым гормональным препаратом

- - 0,10<Кп<0,12 Зрелые 2 При достижении нерестовых температур инъецируются «сурфагоном»

Русский осетр 0,13 0,12<Кп<0,15 Близкие к созреванию Инъекции проводятся после выдерживания при нерестовых температурах 7-14 суток

Русский осетр 0,18 0,15<Кп<0,18 Способные к созреванию Выдерживаются при нерестовых температурах 20-40 суток перед инъекцией

Ленский осетр Русский осетр 5 шт. 0,22-0,43 2 шт. 0,2-0,22 0,18<Кп Незрелые Отсаживаются на нагул

Самки из второй и третьей групп (зрелые и близкие к созреванию) могут в дальнейшем использоваться без повторной биопсии, коэффициент поляризации ооцитов маток из 4-5 групп (близкие к созреванию и способные к созреванию) исследуют повторно, в зависимости от расчетного времени их готовности [6]. Рыбы 5-й группы, у которых показатель поляризации ооцитов не изменился, после выдерживания при нерестовых температурах в течение 14-21 суток относятся к категории незрелых. Преднерестовое выдерживание должно осуществляться при нерестовых температурах, без повышения температуры воды выше оптимальной даже на непродолжительное время. В условиях ПНИЛ созревание ооцитов и овуляция контролируется воздействием синтетического гормонального препарата «Сурфагон».

Заключение. В целом диагностикой пола и стадий зрелости гонад осетровых УЗИ-сканированием и методом биопсии, в течение 3-х лет выявлено:

1. Сроки межнерестовых интервалов осетровых сокращены в 3 раза, по сравнению с аналогичными данными [8]. Вероятно, на созревание производителей наиболее активно влияет сумма эффективных температур (более 20 °С круглогодично) и использование комбинированных кормов с содержанием жира около 12 %.

2. Замечено, что самцы созревают ежегодно, доля самок, созревающих каждый год, составляет около 30 %. В период каждой бонитировки выявляется часть самок с задержкой развития гонад на 2 стадии зрелости. Замечено снижение созревания самок в осенний период. Какой-либо зависимости в динамике сроков созревания особей по годам исследования не выявлено.

3. В процессе исследований ни разу не определялся максимальный коэффициент зрелости, который характеризует период наибольшего развития гонад, у рыб с порционным икрометанием (осетровых).

4. Количество жира на гонадах осетров из УЗВ значительно выше, чем у особей, выращиваемых при естественных температурах в садковых хозяйствах, что связано также и с индивидуальным рационом для всех возрастных групп производителей.

Библиографический список

1. Дикусаров, В.Г. Использование витаминно-минерального премикса при кормлении осетровых пастообразными кормами [Текст]/ В.Г. Дикусаров, Д.А. Ранделин // Инновационные технологии и ветеринарная защита при интенсивном производстве продукции животноводства: Материалы национальной конф. - Волгоград: ВолГАУ, 2016. - С. 305-310.

2. Калмыков, В.Г. Применение метода морфофизиологических индикаторов в исследовании самок стерляди, выращенной в условиях установки замкнутого водоснабжения [Текст]/ Калмыков В.Г., Дикусаров В.Г., Блинков Б.В. // Стратегические ориентиры инновационного развития АПК в современных экономических условиях: материалы Международной научно-практич. конф. - Волгоград: ВолГАУ, 2016. - С. 399-402.

3.Коротаева, О.С. Рост и развитие русского осетра при использовании интенсивной технологии выращивания [Текст]/ О.С. Коротаева, А.И. Густова // Стратегические ориентиры инновационного развития АПК в современных экономических условиях: материалы Международной научно-практич. конф. - Волгоград: ВолГАУ, 2016. - С. 322-325.

4. Кравченко, Ю.В. Оценка условий выращивания рыб в УЗВ на примере лаборатории «Разведение ценных пород осетровых» [Текст] / Ю.В. Кравченко, А.Р. Амирханян, В.Г. Дикусаров // Стратегические ориентиры инновационного развития АПК в современных экономических условиях: материалы Международной научно-практич. конф. - Волгоград: ВолГАУ, 2016. - С. 356-360.

5. Матишов, Г.Г. Опыт выращивания осетровых рыб в условиях замкнутой системы водо-обеспечения для фермерских хозяйств [Текст] / Г.Г. Матишов [и др.]. - Ростов на Дону: Изд.-во ЮНЦ РАН, 2006. - 72 с.

6. Мильштейн, В.В. Осетроводство [Текст] / В.В. Мильштейн. - М.: Пищ. пром-ть, 1982. -

150 с.

7. Осетровая УЗВ [Электронный ресурс]// Системные требования: http://belorybitsa.com/index.php/we_offer/ultrasound_diagnosis/

8. ^шмарёв, C.B. Осетpовoдствo на интенсивной основе [Текст] / C.B. ^вдмарёв, Д.И. Иванов. - М.: ^лсс, 2009. - 312 c.

9. Руководство по ультразвуковой диагностике [Текст] / ВОЗ. - Женева, 2000. - 334 с.

10. Чебанов, М.С. Руководство по разведению и выращиванию осетровых рыб [Текст] / М.С. Чебанов, Е В. Галич, Ю.Н. Чмырь. - М.: ФГНУ Росинформагротех, 2004. - 148 с.

Reference

1. Dikusarov, V. G. Ispol'zovanie vitaminno-mineral'nogo premiksa pri kormlenii osetrovyh pastoobraznymi kormami [Tekst]/ V. G. Dikusarov, D. A. Randelin // Innovacionnye tehnologii i vet-erinarnaya zaschita pri intensivnom proizvodstve produkcii zhivotnovodstva: Materialy nacional'noj konf. - Volgograd: VolGAU, 2016. - S. 305-310.

2. Kalmykov, V. G. Primenenie metoda morfofiziologicheskih indikatorov v issledovanii samok sterlyadi, vyraschennoj v usloviyah ustanovki zamknutogo vodosnabzheniya [Tekst]/ Kalmykov V. G., Dikusarov V. G., Blinkov B. V. // Strategicheskie orientiry innovacionnogo razvitiya APK v sovremen-nyh jekonomicheskih usloviyah: materialy Mezhdunarodnoj nauchno-praktich. konf. - Volgograd: VolGAU, 2016. - S. 399-402.

3. Korotaeva, O. S. Rost i razvitie russkogo osetra pri ispol'zovanii intensivnoj tehnologii vy-raschivaniya [Tekst]/ O. S. Korotaeva, A. I. Gustova // Strategicheskie orientiry innovacionnogo razvitiya APK v sovremennyh jekonomicheskih usloviyah: materialy Mezhdunarodnoj nauchno-praktich. konf. - Volgograd: VolGAU, 2016. - S. 322-325.

4. Kravchenko, Yu. V. Ocenka uslovij vyraschivaniya ryb v UZV na primere laboratorii "Razvedenie cennyh porod osetrovyh" [Tekst] / Yu. V. Kravchenko, A. R. Amirhanyan, V. G. Dikusarov // Strategicheskie orientiry innovacionnogo razvitiya APK v sovremennyh ]konomicheskih uslovi-yah: materialy Mezhdunarodnoj nauchno-praktich. konf. - Volgograd: VolGAU, 2016. - S. 356-360.

5. Matishov, G. G. Opyt vyraschivaniya osetrovyh ryb v usloviyah zamknutoj sistemy vo-doobespecheniya dlya fermerskih hozyajstv [Tekst] / G. G. Matishov [i dr.]. - Rostov na Donu: Izd.-vo YuNC RAN, 2006. - 72 s.

6. Mil'shtejn, V. V. Osetrovodstvo [Tekst] I V. V. Mil'shtejn. - M.: Pisch. prom-t', 1982. - 150 s.

7. Osetrovaya UZV [Jelektronnyj resurs]II Sistemnye trebovaniya: http:IIbelorybitsa.com7index.phpIwe_offerIultrasound_diagnosisI

8. Ponomapjov, C.B. Osetpovodstvo na intensivnoj osnove [Tekst] I C.B. Ponomapjov, D. I. Ivanov. - M.: Kolos, 2009. - 312 c.

9. Rukovodstvo po ul'trazvukovoj diagnostike [Tekst] I VOZ. - Zheneva, 2000. - 334 s.

10. Chebanov, M. S. Rukovodstvo po razvedeniyu i vyraschivaniyu osetrovyh ryb [Tekst] I M. S. Chebanov, E. V. Galich, Yu. N. Chmyr'. - M.: FGNU Rosinformagroteh, 2004. - 148 s.

Е-mail: korotaevaolgasemenovna@mail.ru УДК: 619:618.111:636.22I.28.082

ОСОБЕННОСТИ ФОЛЛИКУЛОГЕНЕЗА У КОРОВ МЯСНЫХ ПОРОД (КАЗАХСКАЯ БЕЛОГОЛОВАЯ, ШЕВРОЛЕ И ГЕРЕФОРД) В КОНТЕКСТЕ ВОССТАНОВЛЕНИЯ ПЛОДОВИТОСТИ

PECULIARITIES OF FOLLICULOGENESIS IN COWS OF MEAT ROCKS (KAZAKH WHITE-HOSE, CHEVROLET AND GER-FORD) IN THE CONTEXT

OF RESTORATION OF FERTILITY

С.П. Перерядкина1, кандидат ветеринарных наук, доцент В.С. Авдеенко2, доктор ветеринарных наук, профессор В.Д. Кочарян1, кандидат биологических наук, доцент Ж.О. Кемешев3, кандидат ветеринарных наук, доцент

S.P. Pereradkina1, V.S. Avdeenko1, V.D. Kocharyan1, J.O. Kemeshev1

'Волгоградский государственный аграрный университет 2ФГБОУ ВО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» 3УВО «Восточно-Казахстанский агротехнический университет им. Сейфулина», г. Астана,

Республика Казахстан

' Volgograd State Agrarian University, Volgograd 2Saratov State Agricultural University named after N.I. Vavilov, Saratov 3East Kazakhstan Agrotechnical University named after Seifullin, Astana, Republic of Kazakhstan

Установлено, что продолжительность полового цикла y коров мясных пород (казахская белоголовая, шевроле и герефорд) с волновым ростом одного фолликула составляет 19 дней, y коров с двумя волнами роста фолликулов — 21 день, тремя — 24 дня и четырьмя волнами роста - 28 дней. При низких концентрациях в крови ФСГ и высоких прогестерона субдоминантные фолликулы подвергаются атрезии между 6-10 днями полового цикла. У коров казахской белоголовой породы и герефорд доминантный фолликул достигает максимального диаметра 13-19 мм на б-7 день полового цикла, а y коров породы шевроле - на 8-9 день. Перед осеменением коров применение препарата сурфагон вне зависимости от породы, повышает оплодотворяемость на 20,0 %, а в сочетании с прогестероном - на 34,0 %. Оплодотворяемость мясных коров и телок повышается до 66,0 % после применения препарата сурфагон в сочетании с ГСЖК, а простагландинов (клатра-прастин, эстуфалан и эстрофан) - на б и 18 день полового цикла. Эффективность составляет б9,4 %-71,4 %. Введение суперфана с ГСЖК дает эффект в 71,9 %, а с фоллитропином - 72,9 %. Полученные данные свидетельствуют о том, что при определении способа стимуляции яичников при гипофункциональном состоянии следует учитывать уровень концентрации прогестерона. Использование препаратов фоллимаг и магэстрофан в ветеринарной практике будет эффективно при значениях прогестерона не выше 0,5 нг!мл. При более высоких концентрациях прогестерона в схему синхронизации полового цикла и индуцирования охоты целесообразно включать сурфагон в дозе 10,0 мл. Таким образом, предлагаемые схемы восстановления плодовитости позволяют преодолеть сезонное анэстральное состояние y коров мясных пород (казахская белоголовая, шевроле и гере-форд) и процессы постфизиологической ациклии.