Влияние мет-энкефалина на морфометрические и гистохимические параметры слизистой оболочки пищевода

эпителиальные и недифференцированные. Все эти типы клеток, хотя и имеют некоторые отличия от аналогичных клеток нормального органа, все-таки сохраняют ультраструктурные черты исходной ткани, т. е. своих нормальных аналогов.

Эпителиальные клетки характеризуются различной степенью дифференцировки, начиная от низкодифференцированных темных клеток, и кончая высокодифференцированными, которым свойственна типичная полярность, определенный набор органелл, прежде всего наличие значительного количества специфических секреторных гранул, филаментозных структур, контактов типа десмосом. Эти клетки образуют многослойный пролиферат, нередко заполняющий просвет протоков.

Полученные ультраструктурные данные свидетельствуют о нарушении характера дифференцировки эпителиальных клеток внутридольковых протоков, однако, без признаков, характерных для ультраструктуры типичных злокачественных клеток.

Оценивая ультраструктуру эпителиального и стромального компонентов молочной железы, в частности, эпителия протоков и фибробластов, стоит отметить, что в единичных клетках отмечаются электронно-микроскопические признаки апоптоза: в ядрах эпителиоцитов и фибробластов отмечаются участки гиперкон-денсированного хроматина, часто удается обнаружить клетки с пикнотическими ядрами. Разрушающиеся эпителиоциты и фиб-робласты можно обнаружить в пучках коллагеновых волокон.

Данная, вышеописанная гистологическая и ультраструктурная картина в молочной железе экспериментальных животных рассматривается как типичную картину, характерную для такого заболевания, как кистозная мастопатия.

Выводы. На основе обобщения различных классификационных подходов, описанных в литературе, исследования морфологии и ультраструктуры молочной железы, были выделены гистологические и ультраструктурные критерии оценки пролиферативной активности эпителия при развитии фиброкистозных изменений молочной железы. Морфологические проявления фиброкистозных изменений в молочной железе разноообразны; в одних участках железы преобладают явления гиперплазии, в других - явления регрессии. Пролиферативные процессы в эпителии часто сочетаются с явлениями регрессии, что может быть обусловлено как различной чувствительностью клеток к гормонам и факторам роста, так и механическими причинами. Механическим воздействием на эпителиальную ткань может являться, например, накопление секрета при обтурации просвета протоков или сдавлении их окружающей фиброзированной стромой с последующим кистозным превращением, что влечет за собой атрофические изменения эпителиоцитов.

Анализ морфологических проявлений кистозной болезни молочной железы у человека и в эксперименте на крысах показал, что заболевание имеет на ранних стадиях изменения структурной организации ткани проявляются, преимущественно, в стромаль-ном компоненте; они характеризуются повышением кровенаполнения сосудов, развитием отека, фибропластическими изменениями.

Литература

1. Бурдина, Л.М. Диагностика и лечение доброкачественных изменений молочных желез: лекция / Л.М. Бурдина // Терапевт. арх.- 1998.- №10.- С.37-41.

2. Сидорова И. С., Саранцев А.Н:, Пиддубный М.И., Леваков Матвиенко Н.А. Состояние молочных желез у А., с больных гиперпластическими процессами и раком эндометрия в постменопаузе Акуш. и гинекол. 2000. 1. 53-56.

3. Пиддубный М.И. Сочетание миомы матки с дисгормо-нальной патологией молочных желез: Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. - М., 1994. - 23 с.

4. Радзинский В.Е., Ордиянц И.М. Комплексный подход к диагностике и лечению гинекологических и маммологических заболеваний и нарушений Гинекология. 2003. Т. 5, 4. С 1-8.

5. Lowe, S.W. Apoptosis in cancer / S.W. Lowe, A.W. Lin // Carcinogenesis. - 2000. - V. 21. - 3. P. 485-495.

6. Семиглазов В. Ф. Карцинома in situ молочной железы -морфологические и клинические проблемы / В. Ф. Семиглазов // Практическая онкология. - 2002. - Т. 3. - №1. - 60-68.

7. Сидорова И. С. Ультразвуковая характеристика состояния молочных желез у гинекологических больных / И.С. Сидорова, М.И. Поддубный, И.О. Макаров // Акушерство и гинекология. -1995. -№ 2. - С.46-48.

8. Журавлева Т.Б. Дисгормональные гиперплазии и опухоли, их видовая специфичность: Автореф. дис. д-ра мед. наук. Л., 19бб. 31 с.

9. Dabrosin C. Variability of vascular endothelial growth factor in normal human breast tissue in vivo during the menstrual cycle J. Clin. Endocrinol. Metab. 2003. Vol. 88, б. P. 2б9З 2б98.

10. Журавлева Т. Б. Мастопатия у человека и в эксперименте: Автореф. дис канд. мед. наук. Л., 19З4. 20 с.

11. Khan S.A., Bhandare D., Chaterton R.T. The local hormonal environment and related biomarkers in the normal breast End-Related Cancer. 200З. Vol. 12, 3. P.497 З10.

12. Shoker B.S., Jarvis С Clarke R.B., Anderson E. et. al. Abnormal regulation of the oestrogen receptor in benign breast lesions J Clin Pathol. 2000. Vol. З3. P. 778 783.

13. Hilakivi-Clarke L., Cabanes A., Olivo S., et al. Do estrogens always increase breast cancer risk? J Steroid Biochem Mol Biol. 2002. Vol. 80. P.^3- 174.

MORPHOGENESIS, ULTRASTRUCTURAL PECULIARITIES OF FIBRO-CYSTIC DISEASE OF MAMMARY GLAND

M.V. MNKHOVICH Central Pathologoanatomic Laboratory, Moscow

The article presents studying cystic disease of mammary gland on operating, biopsy material. The research was carried out from the point of stromal and parenchimatous interrelations. Were isolated Histological and ultra-structural evaluation criteria of proliferative epithelium activity in the development of fibro-cystic changes of mammary gland were marked out. Analysis of morphological manifestations of cystic disease mammary gland in human beings showed that in early periods the disease has changes in tissue structure, which are manifested mainly in the stromal component; they are characterized by increased blood vessels supply, the development of edema, and fibro-plastic changes.

Key words: diffuse cystic disease of the breast, morphogenesis, ultrastructure.

УДК. 611.329-092.9:611.018.25

ВЛИЯНИЕ МЕТ-ЭНКЕФАЛИНА НА МОРФОМЕТРИЧЕСКИЕ И ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПИЩЕВОДА

Г.М. МОГИЛЬНАЯ, А.А. ЕВГЛЕВСКИЙ, З.Н. КАЛАКУТОК,

Э.Г. ПЕЙЛИВАНЬЯН*

Проведено комплексное морфогистохимическое изучение слизистой оболочки пищевода в ответ на введение мет-энкефалина в различные сроки эксперимента и при различных дозах. Полученные данные свидетельствуют, что мет-энкефалин влияет на пролиферативную активность эпителиоцитов пищевода, что находит отражение в динамике толщины эпителиального пласта, а также влияет на защитный барьер пищевода в аспекте регуляции степени распределения катионного белка и основных аминокислотных остатков. Ключевые слова: мет-энкефалин, пищевод, эпителиальный пласт.

Опиоидные пептиды оказывают активное влияние на деятельность органов желудочно-кишечного тракта, формируя при этом единую регуляторную систему [1,2,3].

Из большого числа нейропептидов наиболее известен нейропептид даларгин, который обладает мощным протективным действием на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта, а также оказывает стимулирующее влияние на процессы регенерации в ней [4,5,6,7,8]. Воздействие других опиоидов изучено фрагментарно, при этом влияние их на пищевод видится прежде сего в аспекте регуляции процессов сокращения и расслабления его сфинктера [ 9]. Совершенно не исследован вопрос о влиянии нейропептидов на эпителиальную выстилку пищевода, формирующую его защитный барьер.

Цель исследования - комплексное морфогистохимическое изучение слизистой оболочки пищевода в ответ на введение мет-энкефалина в различные сроки эксперимента и при различных дозах.

Материалы и методы исследования. Материалом для исследований послужил пищевод мышей, которым вводили мет-

* Кубанский государственный медицинский университет (ГОУ ВПО КГМУ Росздрава), Кафедра гистологии с эмбриологией, 350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4

энкефалин в дозах: 40 мкг/кг, 200 мкг/кг и 1 мг/кг, каждые 12 часов. Животных забивали на 1, 3 и 7 сутки эксперимента. Контрольным животным вводили подкожно аликвоту физиологического раствора.

Проводка и заделка материала в парафин. Срезы окрашивали методами, принятыми для обнаружения катионного белка БФС при рН 8,2 [10], а также для выявления основных аминокислотных остатков в окраске проционом 2 БС при рН З,б [11]. Для изучения морфометрических параметров ядер в дифференцированных слоях эпителия пищевода использовали окраску на ДНК по Фельгену [12].

Компьютерную морфометрию изображения проводили с помощью средств пакета программ фирмы Sdon Corporation. Все данные обрабатывали методами вариационной статистики с использованием пакета программ MicroStat фирмы Borland Corporation.

Результаты и их обсуждение. Морфометрия толщины эпителиального пласта слизистой оболочки пищевода показала, что мет-энкефалин в дозе 40 мкг/кг не влияет на пролиферативную активность эпителиоцитов. Однако при дозе 200 мкг/кг происходит умеренное увеличение толщины эпителиального пласта спустя 1 сут после введения нейропептида. Однотипное увеличение имеет место и при дозе мет-энкефалина 1 мг/кг, но лишь на 3 и 7 сутки эксперимента, причем этому увеличению предшествует регистрируемое в первые сутки введения нейропептида снижение толщины эпителиального пласта.

Уровень содержания катионного белка в эпителиоцитах пищевода колеблется в зависимости от длительности введения нейропептида. Так, при дозе 40 мкг/кг на 3 сутки введения мет-энкефалина содержание катионного белка в эпителиоцитах базального слоя увеличивается относительно исходного уровня почти в 2 раза и удерживается на этом уровне до 7 сут эксперимента. В этот период выявляется и достаточно высокий уровень содержания катионного белка и в эпителиоцитах поверхностного слоя.

При дозе 200 мкг/кг в течение первых суток удерживается высокий уровень содержания катионного белка в клетках базального слоя, однако в последующие сроки наблюдения (3 и 7 сутки) происходит снижение содержания катионного белка. Мет-энкефалин в дозе 1 мг/кг в первые сутки не влияеь на содержания катионного белка в эпителиоцитах базального слоя, но в последующие сроки эксперимента происходит выраженное снижение уровня его содержания.

Дозозависимый эффект в случае распределения катионного белка в первые сутки введения мет-энкефалина проявляется при дозе 200 мкг/кг. В этот период имеет место самый высокий уровень его содержания, причем во всех дифференцированных слоях. На третьи сутки введения мет-энкефалина дозозависимый эффект прослеживается при дозе 40 мкг/кг, когда его содержание максимально высокое, с последующим снижением при дозе 200 мкг/кг и минимальным уровнем при дозе 1 мк/кг. Однотипная динамика имеет место и на 7 сутки эксперимента.

Основные аминокислотные остатки в эпителиоцитах пищевода распределяются сообразно дифференцированным слоям, формируя градиент, при котором наиболее высокий уровень содержания этих веществ - это клетки зернистого слоя, а наиболее низкий - это базальный слой. При введении мет-энкефалина в дозе 40 мкг/кг наиболее высокое содержание аминокислотных остатков регистрируется в базальном слое 4,13+0,17 (при норме 2,01+0,1) на 3 сутки эксперимента. Интересно, что этот уровень сохраняется и на 7 сутки введения мет-энкефалина.

При дозе мет-энкефалина 200 мкг/кг максимальное увеличение уровня содержания основных аминокислотных остатков регистрируется на 1 сутки эксперимента. С увеличением дозы мет-энкефалина до 1 мг/кг этот эффект нивелируется. Дозозависимые изменения прослеживаются в первые сутки введения нейропептида при дозе 200 мкг/кг, при этом все дифференцированные слои отличаются высоким уровнем содержания основных аминокислотных остатков, а наиболее низкий уровень их содержания регистрируется при дозе 1 мг/кг на 7 сутки эксперимента. Интересно отметить, что увеличение дозы мет-энкефалина до 1 мг/кг приводит к снижению уровня содержания основных аминокислотных остатков и этот эффект сохраняется с удлиннением срока введения нейропептида от 1 до 7 суток.

Таким образом, полученные данные показывают, что дозозависимые изменения в случае введения мет-энкефалина прослеживаются уже в первые сутки и характеризуются увеличением

толщины эпителиального пласта при дозе 200 мкг/кг и снижением пролиферативной активности при дозе 1 мг/кг. Временная зависимость установлена лишь при дозе 1 мкг/кг: снижение толщины эпителиального пласта в 1 сутки и увеличение его на 7 сутки эксперимента. Уровень содержания катионного белка, определяющего протективные свойства защитного барьера пищевода в условиях введения мет-энкефалина, разнонаправленный. Так, дозозависимый эффект оказался характерным для дозы 200 мкг/кг, когда происходит выраженное увеличение его содержания в эпителиоцитах базального слоя. И эти изменения наблюдаются в первые три дня введения нейропептида. При дозе 40 мкг/кг - однотипные изменения сдвинуты во времени и наблюдаются в срок от 3 до 7 суток.

Основные аминокислотные остатки увеличиваются при дозе мет-энкефалина 40 мкг/кг лишь в клетках базального слоя на 3-тьи сутки эксперимента. С увеличением дозы нейропептида до 200 мкг/кг увеличение уровня содержания основных аминокислот нарастает в течение первых суток, а при дозе 1 мг/кг - этот эффект нивеоируется.

Итак, полученные данные свидетельствуют, что мет-энкефалин влияет на пролиферативную активность эпителиоци-тов пищевода, что находит отражение в динамике толщины эпителиального пласта, а также влияет на защитный барьер пищевода в аспекте регуляции катионного заряда белков эпителиоцитов поверхностного слоя.

Литература

1.Климов П.К. Физиологическое значение пептидов мозга для деятельности пищеварительной системы. - Л., 1986. - 234 с.

2.Konturek SJ. // Gut Hormones / Ed. S.R. Bloom, J.M. Polak.

- Edinburgh, 1981. - P. 432-440.

3.Zagon J.S. The opioid growth factor met-enkephalin and zeta opioid receptor are present in human and mouse skin and tonucally act to inhibit DNA synthesis in the epidermis / J.S. Zagon, Y.Wu, P.J. McLauglin // J.Invest. Dermatology.- 1996.- V. 106.- P. 490^97.

4Могильная ГМ. Динамика цитохимических свойств защитного барьера желудка при введении доларгина / Г. М. Могильная, Г. Ф. Коротько, А.Н. Курзанов // Морфология .-1986.-№3.-С.72-75.

5Могильная ГМ. Защитный барьер желудка при введении нейропептидов/ Г.М. Могильная, А.Н. Курзанов, Э.Г. Пейливань-ян, В.Н. Яременко // Кубанский научный мед. вестник .-1994.-№2-3-4-5.-С.132-134.

6Mogilnaya GM. Neuropeptides and factors of defensive barrier of gastratestinal tract/ G. M. Mogilnaya, A.N. Kurzanov// Digestion. Abstracts of Word Congress of Gastroenterology.- Vienna.-1998.-P.236.

IMogUnaya GM. Affect of opioid peptides on morphofunctional status of glandulocytes of gastrointestinal tract/ G.M. Mogilnaya, A.N. Kurzanov// Abstract for the IX International conferention « New Technology in Medicine and ecology». Gurzuf.- 2001.-P.186-188.

8.Спевак С.Е. Даларгин - регулятор репаративной регенерации тканей/ С.Е. Спевак, А.И. Соловьева, А.Б. Шехтер// Бюлл. ВНКЦ.-1986.-№2.-С.78-81.

9.Howard JM. Enkephalin inhibits relaxation in the lower esophageal sphincter /Howard J.M. Belcheim, S.N. Sullivan // Br. Med. J.

- 1982. - V. 258. - P. 1605 - 1606.

10.Ringhertz R.R. Cytochemical demonstration of histones and protamines (mechanism and specificity of alkaline bromphenol blue binging reaction) / R.R. Ringhertz, A. Zetterberg // Exper. cell. res. -1966. - V. 42. - P. 243 - 259.

11.Иванов В.Б. Применение проционовых красителей в гистохимии // Доклады АН СССР. - 1961. - V. 137, № 2. - С. 419421.

12. Пирс Э. Гистохимия прикладная и теоретическая - М.,

1962.

MET-ENKEPHALINE INFLUENCE ON MORPHOMETRIC AND HISTOCHEMICALN PARAMETRS OF THE ESOPHAGUS MUCOUS MEMBRANE

G.M. MOGILNAYA, A.A. YEVGLEVSKY, Z.N. KALAKUTOK,

E.G. PEYLIVANIAN

Kuban State Medical University, Chair of Histology and Embryology

The article presents complex morpho-histo-chemical studying the gullet mucous membrane changes in response to introduced met-

enkephalin in different terms of the experiment and at various doses. The obtained data show, that met-enkephalin influences on proliferation activity of gullet epitheliocytes, which results in the dynamics of epithelium layer thickness, as well as protective barrier in the aspect of regulation degree of cationic protein and basic amino acid distribution.

Key words: met-enkephalin, gullet, epithelium layer.

УДК 611. 813.1 - 001.28/.29

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ СЕНСОМОТОРНОЙ ЗОНЫ КОРЫ ПРИ у-ОБЛУЧЕНИИ В НЕДЕТЕРМИНИРОВАННОЙ ДОЗЕ

Н.В. СГИБНЕВА*

В эксперименте на белых крысах прослежены изменения структурно-функциональной организации сенсомоторной зоны коры в пострадиационном периоде. В частности изучены тинкториальные свойства нейроцитов с последующим измерением их размеров, а также определением в них содержания нуклеиновых кислот. Ключевые слова: недетерминированные дозы, ионизирующее излучение, нейроциты, сенсомоторная кора.

Под недетерминированными понимают дозы ионизирующего излучения, не приводящие к развитию клинически очерченных нестохастических эффектов [4]. Однако, в отдаленном периоде у ликвидаторов на ЧАЭС, получивших малые дозы облучения развивается целый ряд психоневрологических и соматических заболеваний [1], причем заболеваемость ЦНС составляет 10,5%. У ликвидаторов отмечены астеноневротические реакции, мнестические нарушения, ухудшение внимания, а также различная соматическая патология. По данным Никифорова А.М. с соавторами (2002) из 4804 обследованных ликвидаторов 84,3% имеет отклонения в нервно-психической сфере и признаки психической дезадаптации. Однако единого мнения о росте заболеваемости у ликвидаторов в отдаленный пострадиационный период у исследователей нет. Одни связывают это явление с непосредственным влиянием радиационного фактора, другие склоняются к ведущей роли психо-эмоционального стресса. Есть и вполне обоснованное мнение А.К. Гуськовой (2001), что инвалидность у лиц работоспособного возраста отнюдь не говорит об истинной прогрессирующей инвалидизации. Это лишь удовлетворение их социальных притязаний, обоснованных только принадлежностью к участию в ликвидации аварии на ЧАЭС и развитием после этого различных заболеваний. Таким образом, остается неясным, какой вклад в рост заболеваемости вносят психогенный и радиационные факторы в отдельности. В связи с этим существует необходимость в получении экспериментальных данных о влиянии малых доз радиации на организм и в частности на головной мозг для выявления роли радиационного фактора в возникновении заболеваний, а также для обоснования радиационно-гигиенического нормирования, отдеференцировав влияние факторов нерадиационной природы.

Эксперимент спланирован и проведен в ГНИИИ Военной медицины г. Москва. Белых крыс самцов массой 200±10 г облучали однократно у-квантами Co60 в дозе 0,5 Гр с мощностью дозы 50 сГр/ч. Материал забирали через 100 мин, 5 ч, 1, 3, 14 и 30 суток, 6, 12 и 18 месяцев после начала эксперимента. После стандартной заливки получали парафиновые срезы толщиной 6 мкм, которые окрашивали толлуидиновым синим по Нисслю, а также азуром А по Shea S.K. В III, IV и V слоях коры производили подсчет нейро-цитов с различными тинкториальными свойствами: нормохромные, гипо- и гиперхромные, пикноморфные и клеточные тени, затем подсчитывали количество нервных и глиальных клеток на поле зрения. Морфометрически определяли площадь поперечного сечения цитоплазмы ядра и ядрышка в микрометрах квадратных. С помощью компьютерной программы «Image J» измеряли содержание ДНК в ядрах, РНК в цитоплазме и ядрышке. Весь цифровой материал обработан статистически с использованием пакета прикладных компьютерных программ «Statistica 6.0». На Рис. 1 представлена изучаемая область сенсомоторной коры.

Рис. 1. Фронтальный срез больших полушарий головного мозга крысы, скобками обозначена зона исследования поле ЕР3, (Ниссль, об. х 5, ок. х 10).

В ходе исследования было установлено, что изменения, наблюдаемые в сенсомоторной коре происходили в основном в пределах физиологической нормы, т.е. на всем протяжении пострадиационного периода отмечались колебания соотношений нормо-, гипер- и гипохромных клеток (рис. 2). Увеличение деструктивных клеток в III и IV слоях было отмечено только после года пострадиационного периода. В V слое количество нейроци-тов с деструктивными изменениями также увеличилось лишь только к окончанию срока исследования.

II I!

Гипохромм

I Гиперхром

I Мормохро

100 5ч 1cvt3cyt7cyt 14 30 б 12 18

мин сут сут мсс мес мс<

б

Рис. 2. Соотношение различных типов нейроцитов а) в III и IV слоях, б) в V слое сенсомоторной зоны коры белых крыс в пострадиационном периоде; по оси абсцисс - сроки пострадиационного периода, по оси ординат -количество нейроцитов в процентах на единицу площади; звездочками обозначены показатели, достоверно отличающиеся от контроля.

Проведенные морфометрические исследования показали, что размеры цитоплазмы, ядра и ядрышка на протяжении пострадиационного периода имели фазные изменения (рис. 3).

Значимое отличие от показателей контрольной группы наблюдалось через 5 ч после облучения, когда площадь цитоплазмы уменьшается, а площадь ядра и ядрышка намного превышают уровень контрольных величин. Через 1 сутки показатели нормализуются, а в период от 3 до 14 суток оказываются снижены. К окончанию срока исследования только размеры цитоплазмы остаются, относительно, увеличены, тогда, как площадь ядра и ядрышка достоверно не отличается, от показателей у интактных животных.

* ГОУ ВПО ВГМА им. Н.Н. Бурденко кафедра нормальной анатомии человека, 394000 Воронеж, Студенческая 10, тел. 8 473 2530253.