ПРИМЕНЕНИЕ МЕДИ И ГЛУТАМАТА В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ПОЛИПЕПТИДОВ

1. Способ получения полипептида в культуре клеток, включающий стадии:
культивирование клеток млекопитающего, содержащих ген кодирующий интересующий полипептид в среде культуры клеток, включающей приблизительно от 0,5 до 5 мкМ меди и приблизительно от 1,7 до 33 мМ глутамата, при условиях и на протяжении времени, достаточного для обеспечения экспрессии полипептида, где фракция неправильно свернутого и/или агрегатированного полипептида относительно общего количества продуцированного полипептида уменьшается по сравнению с фракцией неправильно свернутого и/или агрегатированного полипептида, что будет наблюдаться при других идентичных условиях в другой идентичной среде, не содержащей медь и глутамат.
2. Способ по п.1, где начальная концентрация глутамина среды культуры клеток меньше чем или эквивалентна приблизительно 4 мМ.
3. Способ по п.1, где культуру клеток в дальнейшем дополняют приблизительно 2 г на литр глюкозы.
4. Способ по п.1, где культуру клеток в дальнейшем дополняют дополнительными компонентами.
5. Способ по п.4, где дополнительные компоненты вводят в питательной среде.
6. Способ по п.5, где дополнительные компоненты вводят неоднократно.
7. Способ по одному или большему количеству предшествующих пунктов, где среда культуры клеток является определенной.
8. Способ по п.7, где определенная среда культуры клеток не содержит прибавленных сыворотки или гидролизатов.
9. Способ по п.7, где определенная среда культуры клеток не содержит белок.
10. Способ по п.1, где среда культуры клеток содержит приблизительно от 0,7 до 1,5 мкМ меди.
11. Способ по п.10, где среда культуры клеток содержит приблизительно 1 мкМ меди.
12. Способ по п.1, где среда культуры клеток содержит приблизительно от 3 до 7 мМ глутамата.
13. Способ по п.12, где среда культуры клеток содержит приблизительно 5 мМ глутамата.
14. Способ по п.1, где полипептидом является TNFR-Ig.
15. Способ по п.1, где полипептидом является TNFR-Fc.
16. Способ по п.1, где полипептидом является полипептид, выбираемый из группы включающей: фермент, коагулирующий фактор, рецептор, антитело, гормон, регуляторный фактор, антиген и связывающий агент.
17. Способ по п.16, где полипептидом является анти-Абета антитело.
18. Способ по п.1, где стадия культивирования включает культивирование клеток млекопитающего в замкнутом объеме.
19. Способ по п.1, где полипептид или белок выделяют и/или очищают.
20. Способ получения полипептида в культуре клеток, включающий стадии:
культивирование клеток млекопитающего, содержащих ген кодирующий интересующий полипептид в среде культуры клеток, включающей приблизительно от 0,5 до 5 мкМ меди и приблизительно от 1,7 до 33 мМ глутамата;
выдерживание культуры при первом интервале температур на протяжении первого промежутка времени, достаточного для обеспечения размножения клеток, до жизнеспособной плотности клеток в рамках интервала приблизительно 20-80% максимально возможной жизнеспособной плотности клеток, если культура выдерживалась при первом интервале температур;
сдвиг температуры культивирования ко второму интервалу температур, где, по крайней мере, одна температура второго интервала температур ниже, чем наименьшая температура первого интервала температур;
выдерживание культуры на протяжении второго промежутка времени при условиях и на протяжении времени, достаточного для обеспечения экспрессии полипептида, где фракция неправильно свернутого и/или агрегатированного полипептида относительно общего количества продуцированного полипептида уменьшается по сравнению с фракцией неправильно свернутого и/или агрегатированного полипептида, что будет наблюдаться при других идентичных условиях в другой идентичной среде, не содержащей медь и глутамат.
21. Способ по п.20, где первый интервал температур включает интервал температур приблизительно 30-42°C.
22. Способ по п.20, где второй интервал температур включает интервал температур приблизительно 25-41°C.
23. Способ по п.20, включающий вторую стадию сдвига, следующую за упомянутой первой стадией сдвига, включает сдвиг упомянутой температуры культивирования к третьей температуре или интервалу температур, где, по крайней мере, одна температура третьего интервала температур ниже, чем наименьшая температура второго интервала температур.
24. Способ по п.23, где третий интервал температур включает интервал температур приблизительно 25-40°C.
25. Способ по п.20, где начальная концентрация глутамина среды культуры клеток меньше чем или эквивалентна приблизительно 4 мМ.
26. Способ по п.20, где культуру клеток в дальнейшем дополняют приблизительно 2 г на литр глюкозы.
27. Способ по п.20, где культуру клеток в дальнейшем дополняют дополнительными компонентами.
28. Способ по п.27, где дополнительные компоненты вводят в питательной среде.
29. Способ по п.28, где дополнительные компоненты вводят неоднократно.
30. Способ по одному из пп.20-29, где среда культуры клеток является определенной.
31. Способ по п.30, где определенная среда культуры клеток не содержит прибавленных сыворотки или гидролизатов.
32. Способ по п.30, где определенная среда культуры клеток не содержит белок.
33. Способ по п.20, где среда культуры клеток содержит приблизительно от 0,7 до 1,5 мкМ меди.
34. Способ по п.33, где среда культуры клеток содержит приблизительно 1 мкМ меди.
35. Способ по п.20, где среда культуры клеток содержит приблизительно от 3 до 7 мМ глутамата.
36. Способ по п.35, где среда культуры клеток содержит приблизительно 5 мМ глутамата.
37. Способ по п.20, где полипептидом является TNFR-Ig.
38. Способ по п.20, где полипептидом является TNFR-Fc.
39. Способ по п.20, где полипептидом является полипептид, выбираемый из группы, включающей: фермент, коагулирующий фактор, рецептор, антитело, гормон, регуляторный фактор, антиген и связывающий агент.
40. Способ по п.39, где полипептидом является анти-Абета антитело.
41. Способ по п.20, где стадия культивирования включает культивирование клеток млекопитающего в замкнутом объеме.
42. Способ по п.20, где полипептид или белок выделяют и/или очищают.
43. Среда культуры клеток содержит приблизительно от 0,5 до 5 мкМ меди и приблизительно от 1,7 до 33 мМ глутамата.
44. Среда культуры клеток по п.43, где начальная концентрация глутамина среды культуры клеток меньше чем или эквивалентна приблизительно 4 мМ.
45. Среда культуры клеток по п.43 или 44, которая дополнительно содержит приблизительно 2 г на литр глюкозы.
46. Среда культуры клеток по п.43, где среда культуры клеток является определенной.
47. Среда культуры клеток по п.46, где определенная среда культуры клеток не содержит прибавленных сыворотки или гидролизатов.
48. Среда культуры клеток по п.46, где определенная среда культуры клеток не содержит белок.
49. Среда культуры клеток по п.43, где среда культуры клеток содержит приблизительно от 0,7 до 1,5 мкМ меди.
50. Среда культуры клеток по п.49, где среда культуры клеток содержит приблизительно 1 мкМ меди.
51. Среда культуры клеток по п.43, где среда культуры клеток содержит приблизительно от 3 до 7 мМ глутамата.
52. Среда культуры клеток по п.51, где среда культуры клеток содержит приблизительно 5 мМ глутамата.
53. Способ получения полипептида в культуре клеток, включающий стадии:
культивирование клеток млекопитающего, содержащих ген кодирующий интересующий полипептид в среде культуры клеток, включающей приблизительно от 0,5 до 5 мкМ меди и приблизительно от 1,7 до 33 мМ глутамата, при условиях и на протяжении времени, достаточного для обеспечения экспрессии полипептида, где гликозилирование структуры экспрессированного полипептида увеличивается относительно гликозилирования структуры, что будет наблюдаться у экспрессированного полипептида при других идентичных условиях в другой идентичной среде, не содержащей медь и глутамат.
54. Способ по п.53, где увеличенно гликозилированная структура экспрессированного полипептида включает увеличение общего сиалирования.
55. Способ по п.53, где среда культуры клеток является определенной.
56. Способ по п.55, где определенная среда культуры клеток не содержит прибавленных сыворотки или гидролизатов.
57. Способ по п.55, где определенная среда культуры клеток не содержит белок.
58. Способ по любому из пп.53-57, где среда культуры клеток содержит приблизительно от 0,7 до 1,5 мкМ меди.
59. Способ по п.58, где среда культуры клеток содержит приблизительно 1 мкМ меди.
60. Способ по п.53, где среда культуры клеток содержит приблизительно от 3 до 7 мМ глутамата.
61. Способ по п.60, где среда культуры клеток содержит приблизительно 5 мМ глутамата.
62. Способ по п.53, где полипептидом является TNFR-Ig.
63. Способ по п.53, где полипептидом является TNFR-Fc.
64. Способ по п.53, где полипептидом является полипептид, выбираемый из группы, включающей: фермент, коагулирующий фактор, рецептор, антитело, гормон, регуляторный фактор, антиген и связывающий агент.
65. Способ по п.64, где полипептидом является анти-Абета антитело.
66. Способ по п.53, где стадия культивирования включает культивирование клеток млекопитающего в замкнутом объеме.
67. Способ по п.53, где полипептид или белок выделяют и/или очищают.
68. Способ получения полипептида в культуре клеток, включающий стадии:
культивирование клеток млекопитающего, содержащих ген кодирующий интересующий полипептид в среде культуры клеток, включающей приблизительно от 0,5 до 5 мкМ меди и приблизительно от 1,7 до 33 мМ глутамата;
выдерживание культуры при первом интервале температур на протяжении первого промежутка времени, достаточного для обеспечения размножения клеток до жизнеспособной плотности клеток в рамках интервала приблизительно 20-80% максимально возможной жизнеспособной плотности клеток, если культура выдерживалась при первом интервале температур;
сдвиг температуры культивирования ко второму интервалу температур, где, по крайней мере, одна температура второго интервала температур ниже, чем наименьшая температура первого интервала температур;
выдерживание культуры на протяжении второго промежутка времени при условиях и на протяжении времени, достаточного для обеспечения экспрессии полипептида, где гликозилирование структуры экспрессированного полипептида увеличивается относительно гликозилирования структуры, что будет наблюдаться у экспрессированного полипептида при других идентичных условиях в другой идентичной среде, не содержащей медь и глутамат.
69. Способ по п.68, где увеличенно гликозилированная структура экспрессированного полипептида включает увеличение общего сиалирования.
70. Способ по п.68, где среда культуры клеток является определенной.
71. Способ по п.70, где определенная среда культуры клеток не содержит прибавленных сыворотки или гидролизатов.
72. Способ по п.70, где определенная среда культуры клеток не содержит белок.
73. Способ по любому из пп.68-72, где среда культуры клеток содержит приблизительно от 0,7 до 1,5 мкМ меди.
74. Способ по п.73, где среда культуры клеток содержит приблизительно 1 мкМ меди.
75. Способ по п.68, где среда культуры клеток содержит приблизительно от 3 до 7 мМ глутамата.
76. Способ по п.75, где среда культуры клеток содержит приблизительно 5 мМ глутамата.
77. Способ по п.68, где полипептидом является TNFR-Ig.
78. Способ по п.68, где полипептидом является TNFR-Fc.
79. Способ по п.68, где полипептидом является полипептид, выбираемый из группы, включающей: фермент, коагулирующий фактор, рецептор, антитело, гормон, регуляторный фактор, антиген и связывающий агент.
80. Способ по п.79, где полипептидом является анти-Абета антитело.
81. Способ по п.68, где стадия культивирования включает культивирование клеток млекопитающего в замкнутом объеме.
82. Способ по п.68, где полипептид или белок выделяют и/или очищают.