Миелопероксидаза и лактоферрин у больных муковисцидозом

Медицинская Иммунология 2004, Т. 6, № 1-2, стр 67-74 © 2004, СПбРОРААКИ

Оригинальные статьи

МИЕЛ0ПЕР0КСИДАЗА И ЛАКТОФЕРРИН у БОЛЬНЫХ МУКОВИСЦИДОЗОМ

Суркова Е.А., Булгакова Т.В., Сологуб Т.С., Сесь Т.П., Алешина Г.М.*, Желенина Л.А., Орлов А.В., Гембицкая Т.Е.

НИИ пульмонологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П.Павлова;

* НИИ экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петрбург, Россия

Резюме. Ведущая роль в защите организма при взаимоотношении бактерии - хозяин принадлежит полиморфноядерным лейкоцитам, что обусловлено продукцией ими высоко реактивных метаболитов молекулярного кислорода, а также секрецией белков, обладающих антимикробным действием - миелопе-роксидазы (МПО) и лактоферрина (ЛФ). Целью исследования явилось определение содержания МПО и ЛФ в сыворотке, мокроте и жидкости бронхоальвеолярного лаважа (ЖБАЛ) больных муковисцидо-зом (MB) в зависимости от тяжести заболевания, активности воспалительного процесса и наличия синегнойной инфекции Ps. aeruginosa. Увеличение содержания МПО и ЛФ в сыворотке, мокроте и ЖБАЛ отмечалось уже при минимальной активности воспалительного процесса. Обострение заболевания не приводило к увеличению содержания этих белков в сыворотке, однако концентрации этих белков в очаге воспаления коррелировали с активностью воспалительного процесса. Наличие Ps. aeruginosa приводило к снижению содержания МПО в сыворотке, в то время как уровень МПО и ЛФ в мокроте достоверно (р<0,005) повышался. Полученные данные свидетельствуют, что у больных муковисцидозом в очаге воспаления МПО и ЛФ могут быть использованы как маркеры тяжести течеиия заболевания и активности воспалительного процесса.

Ключевые слова: миелопероксидаза, лактоферрин, нейтрофилы, инфекция, Ps. aemginosa, мукоеисцидоз.

Surkova E.V., Sologub Т.S., Ses T.P., Alechina G.M.,Jelenina L.A., Orlov A.V., Gembitskaya T.E.

MYELOPEROXIDASE AND LACTOFERRIN FROM CYTIC FIBROSIS PATIETNS.

Abstract. It’s well known that neutrophils being fundamental effectors of the host - protective from bacteria infection can generate various oxidants and proteins with antibacterial functions such as myeloperoxidase

Адрес для переписки:

197089, С-Петербург, ул.Рентгена, д.12.

Тел.: (812) 234-19- 24, факс (812) 234-90-46. E-mail: esurkova@hotmail.ru Суркова Е.А.

Муковисцидоз (МВ) - генетически детерминированное заболевание, обусловленное мутацией гена трансмембранного регулятора МВ (МВТР), следствием которой является нарушение структуры и функции белка МВТР, и характеризующееся пора-

жением экзокринных желез жизненно важных органов и систем [6].

Течение и прогноз заболевания, в первую очередь, зависят от тяжести поражения органов дыхания, в патогенезе которого лежат два основных фактора: высокая вязкость бронхиального секрета и воспалительная реакция на хроническую инфекцию [3]. Существенное повышение вязкости бронхиального секрета приводит к нарушению мукоцилиарного клиренса, что облегчает адгезию бактерий и создает условия для развития инфекционного процесса, характеризующегося полиэти-ологичностью. Тем не менее, во всех возрастных группах больных MB ведущее положение занимает Ps. aeruginosa и S. aureus [19, 27]. Наиболее тяжелое течение заболевания и неблагоприятный прогноз связан с развитием у больного синегнойной инфекции, что определяется особенностями этого микроорганизма: выраженный «тропизм» к клеткам слизистой оболочки дыхательных путей, наличие богатого арсенала различных протеаз, экзотоксинов, алгината и др., а также присущая синегнойной палочке природная антибиотикорези-стентность [10, 18]. Главная причина персистен-циии Ps. aeruginosa в дыхательных путях заключается в ее способности продуцировать алгигат- эк-зомукополисахарид, являющийся важнейшим фактором вирулентности этих бактерий и основной составной частью «биопленки» [17, 34 ]. Вегетация синегнойной палочки в форме «биопленки» предохраняет ее от действия защитных механизмов макроорганизма и антибактериальных препаратов. Ведущая роль в I линии защиты организ-

ма при взаимоотношении бактерии - хозяин принадлежит полиморфноядерным лейкоцитам и обусловлена продукцией высоко реактивных метаболитов молекулярного кислорода, а также секрецией в околоклеточное пространство физиологически активных веществ, обладающих антимикробным действием. К последним относятся маркерный белок нейтрофилов - миелопероксидаза (МПО), синтезируемый в азурофильных гранулах и белок специфических гранул лейкоцитов - лак-тоферрин (ЛФ). Оба белка обладают антибактериальной активностью, кроме того, установлено взаимоусиливающее действие МПО-системы и лактоферрина, приводящее к формированию более мощной бактерицидной системы [5]. Концентрация МПО в биологических жидкостях является маркером функциональной активности нейтрофилов [20, 30].

Целью данного исследования явилось определение концентрации МПО и ЛФ в сыворотке, мокроте и ЖБАЛ у больных муковисцидозом в зависимости от тяжести заболевания, активности воспалительного процесса иаличия синегнойной инфекции.

Материалы и методы

Обследовано 16 детей в возрасте от 4 до 12 лет и 13 подростов и взрослых в возрасте от 14 до 37 лет с верифицированным диагнозом МВ. У всех обследованных больных отмечалась смешанная форма МВ с тяжелым и среднетяжелым течением заболевания. Контрольную группу составляли 10 здоровых волонтеров в возрасте 18 лет.

Табл.1. УРОВНИ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ (МПО) И ЛАКТОФЕРРИНА (ЛФ) (М±т) В КРОВИ У БОЛЬНЫХ МУКОВИСЦИДОЗОМ

Группы больных МПО нг/мл ЛФ нг/мл

п Обострение М/а п Обострение М/а

Дети, средне-тяж. течение 10 311,00±60,33 ***Т 283,80±41,84 ***т 12 4841,001550,90 ***Т 3525,001452,10 ***т

Дети, тяжелое течение 14 363,00±59,89 ***т 236,50144,43 ***т 14 4880,001455,40 • ***т 3600,001315,40 ***Т

Взрослые, средне- тяж. течение 12 370,70±38,07 • • ***т 263,80121,82 ***т 12 5046,001633,40 ***Т 3609,001241,80 ***т

Взрослые, тяжелое течение 12 414,30168,37 **‘Т 295,60132,92 ***т 12 5766,001445,10 м« ***Т 3788,001320,10 ***Т

Здоровые 15 146,20112,53 319,50121,26

Примечание:

п - количество исследований; * - р<0,05; ** - р<0,005; *** - р<0,001 достоверность различий (Т - повышение, 4- - понижение) по сравнению с показателями здоровых лиц; • - р<0,05; •• - р<0,01; ••• - р<0,005 достоверность различий по сравнению с периодом минимальной активности.

У 20 больных МВ (10 детей и 10 взрослых) и 10 здоровых волонтеров был взят бронхоальвеолярный лаваж.

Больные обследовались как в период обострения, так и в период минимальной активности заболевания. Оценка активности заболевания основывалась на клинико-лабораторных критериях. Обострение муковисцидоза характеризовалось максимальной выраженностью клинических проявлений: усилением кашля, увеличением и изменением характера мокроты, затруднением дыхания, повышением температуры тела, сопровождающимися повышением острофазовых показателей крови, ухудшением функции внешнего дыхания и усилением воспалительных изменений бронхиальной слизистой. Для периода минимальной активности воспалительного процесса было характерно наименьшее проявление респираторных симптомов, когда большинство больных не предъявляли жалоб и вели активный образ жизни.

У всех обследованных больных в динамике выполнялось микробиологическое исследование мокроты методом посева на стандартные питательные среды серии 10-кратных разведений исследуемых проб с количественной характеристикой выделенных респираторных патогенов. При оценке результатов исследования диагностически значимой считали концентрацию потенциального возбудителя 106 КОЕ/мл и более [2].

Содержание МПО и ЛФ в биологических жидкостях определяли ИФА методом [4]. С этой целью мокроту собирали в стерильные флаконы, измеряли ее объем и разводили 0,9% физиологическим раствором в соотношении 1:3, гомогенизировали, затем центрифугировали 30 мин при 20 000 g и V +4°С. Образцы супернатанта хранили при -20°С. Жидкость бронхоальвеолярного лаважа (ЖБАЛ) получали центрифугированием лаважной жидкости при 800й. Супернатант разливали на аликвоты и хранили при -20°С.

Результаты

По результатам микробиологического обследования у 17 больных МВ (58,6±5,4%) установ-

лена хроническая синегнойная инфекция, причем более чем у половины из них (58,8±4,1%) выделен мукоидный вариант ft. aeruginosa. У 64,7% обследованных больных синегнойный инфекционный процесс сочетался с хроническим течением стафилококковой инфекции. Средняя геометрическая концентрация Ps. aeruginosa, обнаруженная в мокроте больных МВ, значительно превышала установленный диагностический титр и составила 8,1 lg/ мл.

Содержание МПО и ЛФ в сыворотке крови больных МВ представлено в таблице 1. Минимальная активность воспалительного процесса характеризовалась высокими уровнями МПО и ЛФ в сыворотке, которые значительно (р < 0,001) превышали концентрацию данных белков в сыворотке здоровых лиц. Увеличение содержания МПО в сыворотке крови детей практически не зависело от тяжести течения заболевания и активности воспалительного процесса, и только у взрослых при среднетяжелом течении заболевания обострение сопровождалось некоторым повышением концентрации МПО в сыворотке (р<0,05; табл.1). При обострении заболевания отмечалось достоверное (р<0,05) увеличение концентрации ЛФ в сыворотке крови относительно минимальной активности воспалительного процесса. Коэффициент корреляции между содержанием МПО и ЛФ в сыворотке крови не зависел от возраста больных и составлял г=0,65. Высвобождение МПО и ЛФ связано не только со степенью тяжести заболевания и активностью воспалительного процесса, но и с наличием бактериальной инфекции, прежде всего вызванной Ps. aeruginosa. В таблице 2 представлены данные о содержании нейтрофильных белков МПО и ЛФ в сыворотке в зависимости от наличия Ps. aeruginosa. Бактериальная инфекция приводила к снижению уровня МПО, в то время как содержание ЛФ в сыворотке крови достоверно не изменялось.

Характерной особенностью воспалительного процесса при МВ является приток нейтрофилов в очаг воспаления, доля которых составляет 80-90% от общего числа клеток в мокроте и ЖБАЛ, и превышает в 20- 40 раз соответствующие контрольные

Табл. 2. УРОВНИ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ (МПО) И ЛАКТОФЕРРИНА (ЛФ) (М±т) В СЫВОРОТКЕ КРОВИ У БОЛЬНЫХ МУКОВИСЦИДОЗОМ С Ps. Aeruginosa и без Ps. Aeruginosa

Группы МПО нг/мл ЛФ нг/мл

больных п + Ps.aerug. п - Ps.aerug. п + Ps.aerug. - Ps.aerug.

дети 21 248,50145,18 • 26 477,30185,71 21 3507,001533,50 3231,001727,70

Взрослые 15 251,30138,46 • 15 441,30179,21 12 3438,001837,30 4244,001949,40

Примечание: п - количество исследований.

значения [11,13]. Столь выраженная миграция нейтрофилов в очаг воспаления при МВ связана, прежде всего, с наличием бактериальной инфекции [26]. Повреждение эпителия нижних отделов респираторного тракта, вызванное бактериальной инфекцией, способствует синтезу эпителиальными клетками основного хемоаттрактанта нейтрофилов 1Ь-8 [24], что приводит к дальнейшему привлечению нейтрофилов в очаг воспаления и хро-низации воспалительного процесса. Определение содержания МПО и Л Ф в мокроте и ЖБАЛ у больных МВ показало, что увеличение активности воспаления сопровождается повышением концентрации этих белков в мокроте при среднетяжелом и тяжелом течении заболевания (табл. 3). Как у де-

тей, так и у взрослых уровень Л Ф повышался с нарастанием тяжести заболевания, что проявлялось, прежде всего, при минимальной активиости заболевания. Установлена прямая корреляционная зависимость между концентрациями МПО и ЛФ в мокроте, как в период минимальной активности (г- 0,61, р< 0,005), так и в период обострения (г=

0,89; р< 0,001) воспалительного процесса. Аналогичная зависимость проявлялась и в ЖБАЛ (рис. 1): увеличение активности воспаления приводило к значительному (р< 0,005) росту уровня как МПО, так и ЛФ у всех обследованных больных, при этом коэффициент корреляции между уровнем МПО и ЛФ составлял г=0,70 (р<0,001). Высокая корреляционная зависимость между концентрация-

нг/мл

140 і------

О норма

ЕЭмин. активность И обострение

МПО нг/мл

600 -

500 -

400 -

300

200

100

0 - -

V

*

Двти

взрослые

А

дети

["+" Ps.aerug. "-"Ps.aerug.

Риа 2. Уровни миелопероксидаэы (А) и лактоферрина (Б) в мокроте больных муковисцидозом в зависимости от наличия инфекции Ps. aeruginosa

ми МПО и ЛФ в мокроте и ЖБ АЛ указывает на преимущественно нейтрофильный генез ЛФ и свидетельствует о высокой активации нейтрофилов в очаге воспаления у пациентов с MB.

Анализ содержания МПО и ЛФ в мокроте больных в зависимости от наличия синегнойной инфекции свидетельствует о достоверном (р<0,005) повышении уровня этих белков в очаге воспаления во всех возрастных группах (рис.2) Таким образом, исследование уровня МПО и ЛФ в сыворотке, мокроте и ЖБАЛ у больных MB показало, что независимо от возраста и периода заболевания содержание данных белков было повышено по отношению к этим показателям у здоровых лиц, что свидетельствует об активации нейтрофилов у больных MB. Наличие синегнойной инфекции приводило к снижению уровня МПО в сыворотке и увеличению содержания МПО и ЛФ в мокроте по сравнению с соответствующими показателями больных MB, не инфицированных Ps. aeruginosa.

Обсуждение

В очаге воспаления нейтрофилы являются доминирующим типом клеток при MB. Они характеризуются увеличением числа вакуолей, повышением фагоцитарной активности, выделением в межклеточное пространство высоко реактивных метаболитов кислорода и протеолитических ферментов^, 8, 32], действие которых направлено не только на повреждение бактериальных клеток, но и на компоненты тканевого матрикса (эластин, коллаген), что приводит к деструктивным изменениям в легочной ткани [1, 25]. Активация азуро-фильных (МПО - содержащих) и специфических (ЛФ - содержащих) гранул нейтрофилов обеспе-

чивает структурную и функциональную трансформацию нейтрофилов из состояния покоя в состояние максимальной функциональной активности, характеризующее нейтрофилы в очаге воспаления, в результате которой происходит выделение ряда белков нейтрофилов в околоклеточное пространство. В этой работе определяли концентрацию МПО и ЛФ в трех биологических жидкостях - сыворотке крови, мокроте и ЖБАЛ у больных МВ в зависимости от тяжести заболевания, активности воспалительного процесса и наличия синегнойной инфекции.

Значительное возрастание содержания МПО и ЛФ в сыворотке, мокроте и ЖБАЛ установлено у всех обследуемых больных МВ. Увеличение концентрации МПО в 2-3 раза и 10-15 -кратное увеличение ЛФ в сыворотке крови свидетельствует о значительной активации нейтрофилов уже при минимальной активности заболевания, а обострение воспалительного процесса приводит лишь к незначительному возрастанию уровня МПО и ЛФ. Вместе с тем, содержание ЛФ достоверно отличалось между обострением и минимальной активностью заболевания. Наши результаты подтверждают данные ряда авторов, которые установили достоверное различие как в концентрации МПО, так и ЛФ в сыворотке пациентов с МВ в зависимости от тяжести заболевания [9] и активности воспалительного процесса, причем эти различия были выражены в большей степени для лактоферрина [16]. Установлена прямая корреляционная зависимость между концентрациями МПО, ЛФ в мокроте и ЖБАЛ и активностью воспалительного процесса. Продукция этих белков нейтрофилами, как и перекиси водорода, связывают с активацией, а не деградацией полиморфноядерных лейкоцитов [32], а концентрация

Табл.З. УРОВНИ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ (МПО) И ЛАКТОФЕРРИНА (ЛФ) (М±ш) В МОКРОТЕ БОЛЬНЫХ МУКОВИСЦИДОЗОМ

Группы МПО нг/мл ЛФ нг/мл

больных п Обострение М/а п Обострение п М/а

Дети (средне- тяжелое течение) 10 488,20 ±46,01 237,60126,63 12 3447,001480,70 • • 9 1645,001253,80

Дети (тяжелое течение) 10 510,10167,87 • 320,90130,26 10 4482,001639,50 • 10 2929,001349,70

Взрослые (тяжелое течение) 10 492,30±68,96 Ф« 267,40122,86 10 4735,001595,00 • •• 10 2293,001316,70

Взрослые (среднетяжелое течение) 10 573,30165,09 • • 335,40125,55 10 4918,001518,20 « 10 3426,001412,90

Примечание: п - количество исследований; • - р<0,05; •• - р<0,01; ••• - р<0,005 достоверность различий по сравнению с периодом минимальной активности.

МПО и ЛФ коррелирует со степенью обструкции дыхательных путей при MB [21, 23]. Участие МПО в воспалительном процессе разнообразно. Так, она инактивирует о^-ингибитор протеиназ -основной ингибитор сериновых протеаз, окисляя метиониновые остатки активного центра ингибитора [14], активирует коллагеназу и желатиназу нейтрофилов [29], что способствует нарушению равновесия системы протеолиза. С другой стороны, МПО инактивирует такие медиаторы воспаления, как лейкотриен С,.акомпонент комплемента [12], что свидетельствует о противовоспалительном эффекте МПО. По мнению многих авторов, сам по себе ЛФ обладает слабой микроби-цидной активностью. Вероятно, ЛФ вступает в различные кооперативные взаимодействия с другими антимикробиыми белками, в том числе с МПО, и является компонентом, создающим условия для пролонгированного действия МПО-сис-темы в обеспечении полноценной микробицидной функции нейтрофилов [5].

Уровень нейтрофильных белков МПО и ЛФ в сыворотке и мокроте больных MB зависит не только от активности воспалительного процесса, но и от наличия бактериальной инфекции, прежде всего синегнойной этиологии. Ранее было показано [31], что содержание нейтрофильных белков (МПО, ЛФ) коррелирует с наличием синегнойной инфекции. Однако известно, что Ps. aeruginosa оказывает на нейтрофилы разнонаправленное воздействие: бактериальная инфекция является основным фактором, провоцирующим воспалительный процесс [26] и приводящим к значительному усилению респираторного взрыва и синтезу нейтрофилами белков МПО и ЛФ, липокаина [16], а с другой стороны, гемолитическая фосфолипаза С и алгинат Ps. aeruginosa суп-рессирует бактериоиндуцированный дыхательный взрыв нейтрофилов и снижает уровень МПО и ЛФ [ 19,28]. Этим, вероятно, и объясняется неоднозначность результатов, полученных нами и рядом авторов о влиянии Ps. aeruginosa на уровень МПО и ЛФ в сыворотке и мокроте. В наших исследованиях инфицирование Ps. aeruginosa приводило к снижению содержания МПО в сыворотке, в то время как содержание МПО и ЛФ в мокроте достоверно увеличивалось. По данным Eicher и соавт. [15], инфицирование Ps. aeruginosa приводило к увеличению содержания МПО и ЛФ как в сыворотке, так и в мокроте. В то же время Worlitzsch и соавторы [33] не выявили достоверных различий в концентрации МПО в мокроте пациентов с MB, инфицированных и не инфицированных Ps. aeruginosa.

Бактериальная инфекция и, прежде всего, Ps. aeruginosa является триггером воспалительного процесса при MB [18, 26]. Хроническая колони-

зация Ps. aeruginosa характеризует тяжесть заболевания и свидетельствует о недостаточной эффективности бактериального клиренса. Наличие Ps. aeruginosa у больных MB несмотря на увеличение содержания МПО и ЛФ в очаге воспаления, может быть связано с изменением фенотипа мукоида Ps. aeruginosa, обеспечивающим его большую устойчивость [22] и со способностью Ps. aeruginosa супрессировать дыхательный взрыв нейтрофилов [28, 15]. Современная этиопатоге-нетическая концепция поражения легких при MB предполагает, что в разрушении легочной ткани большую роль играет выраженный иммунный ответ макроорганизма, а не прямое повреждающее действие патогена [7,19]. Иммунные комплексы, присутствующие в периферической крови и мокроте больных с хронической синегнойной инфекцией, порождают непрерывный воспалительный ответ с интенсивной нейтрофильной инфильтрацией и освобождением значительного количества свободных радикалов и протеолитических ферментов. Оксидативный взрыв этих клеток способен активировать у Ps. aeruginosa гены, кодирующие продукцию алгината, который обеспечивает вегетацию патогена в форме «биофильма» при хроническом течении инфекции [22]. Наличие у больных MB Ps. aeruginosa, несмотря на высокое содержание МПО и ЛФ в очаге воспаления, вероятно, связано со способностью алгината ингибировать фагоцитоз, супрессировать «респираторный» взрыв, что приводит к нарушению мик-робицидности нейтрофилов и в сочетании с труд-нодоступностью действия антисинегнойных препаратов ухудшает прогноз заболевания.

На основании полученных результатов можно заключить, что МПО и ЛФ, как высоко специфичные маркеры активности нейтрофилов, могут служить в качестве биомаркеров синегнойной инфекции и по их уровню, прежде всего в очаге воспаления, можно оценить активность воспалительного процесса при MB и тяжесть течения заболевания.

Список литературы

1. Булгакова Т.В., Сесь Т.П. Суркова Е.А., Доцен-ко Е.К., Желенина Л.А., Гембицкая Т.Е. Особенности воспалительного процесса у больных муковисци-дозом // Мед. иммунология. - 2000. - № 4. - С.421-424.

2. Вигилис Д., Угертен А., Шинтерг А., Яав Я. Новый подход к лечению поражения легких // Международ. мед. журн. -1998. - № 1.-С. 56-58.

3. Вишнякова Л.А., Фаустова М.Е., Сологуб Т.С., Шкирмантова И.В. Микробиологические и иммунологические методы диагностики инфекци-

онного процесса при неспецифических заболеваниях легких // Методические рекомендации. - Л. 1990. -27с.

4. Готерашвили Н.М., Алешина Г.М., Сорокина МН., Иванова В.В. Миелопероксидаза и лактофер-рин в сыворотке крови и ликворе детей, больных менингитом // Мед. иммунология .-2002 -т.4.-№4-5,- С. 565-572.

5. Кокряков В. Н. Биология антибиотиков животного происхождения. СПб.:Наука,1999. -160 с.

6. Консенсус по МВ,- Мед газета . - 1995.-№41.

7. Пухальский А.Л., Шмарина С.В., Капранов Н.И. Маркеры воспаления у больных муовисцидозом // Пульмонолия.-2002.-№ 5.-С.39-42.

8. Babior В. J. The respiratory burst of phagocytes // Clin. Invest. -1984. - Vol. 73. - P. 599-601.

9. Barthe C, Galabert C, Guy-Crotte O, Figarel-la. Plasma and serum lactoferrin levels in cystic fibrosis. Relationship with the presence of cystic fibrosis protein // Clin Chim Acta. -1989.-Vol.182,-P.183-188.

10. Bentzmann S., Roger P.,. Puchelle E. Pseudomonas aeruginosa adherence to remodelling resriratory epithelium // Eur.Resp.J.- 1996. - V.9. -P.2145-506.

11. Brown R., Kelley F. Role of free radicals in pathogenesis of cystic fibrosis // Thorax. - 1994. -Vol.49.- P. 738-742.

12. Clark R.A., Szot S. Chemotactic factor inactivation by stimulated human neutrophils mediated by myeloperoxidase - catalyzed methionine oxidation //J. Immunology - 1982,- Vol.128. - P.1507-1513.

13. Connet G. Bronchoalveolar lavage // Pediatric Respiratory Reviews. - 2000. - V.l. - P.52-56.

14. Dallegri F., Ottonello L. Tissue injury in neutrophilic inflammation // Inflamm. Res. - 1997. - V.46. -P.382-391.

15. Eichler I., Joris L., HsuY.P. et.al. Nonopsonic antibodies in cystic fibrosis. Ps. Aeruginosa li-popolysaccharide-specific immunoglobuline G antibodies from infection patient sera inhibit neutrophil oxidative response //J. Clin. Invest. -1989. - Vol.84.

- P. 1794-1804.

16. Eichler. М., Nilsson М., Rath R., Enander I., Venge P., Roller D. Human neutrophil lipocalin, a highly specific marker for acute exacerbation in cystic fibrosis // Eur. Resp. J. - 1999. - Vol.14. - P. 1145-1149.

17. Hoiby N., Doring G., Schiots P.O. Antibiot. Chemother. -1987. - Vol. 39. -P. 69-76.

18. Hoiby N., Frederiksen B. Microbiology of Cystic Fibrosis // Cystic Fibrosis. Second ed. / Ed. Hod-son M.E., Geddes D.London, Arnold. - 2000. - P. 83-107.

19. Hoiby N., Koch C. Pseudomonas aeruginosa infection in cystic fibrosis and managements // Thorax.

- 1990. - Vol. 45. - P.881-884.

20. Keatings V., Barnos P. Granulocyte activation markers in induced sputum: comparison between chronic obstructive pulmonary disease, asthma and normal subjects // Am. J. Resp. Crit care Med. -1997,- Vol. 155.-P. 449-453.

21. Koller D.J. Gotz M„ Eichler L„ UrbanckR. Eosinophilic activation in cystic fibrosis // Thorax. - 1994.

- Vol. 49. - P. 496-499.

22. Mathee K„ Ciofu O., Strenbrg C. Mucoid conversion of Ps. aeruginosa by hydrogen peroxide: a mechanism for virulence activation in cystic fibrosis lung. Microbiol. - 1999. - Vol.145. - P. 1349 -1357.

23. Olsson I., Venge P. The role of the human neutrophils in the inflammatory reaction // Allergy. - 1988. -Vol. 35.-P. 1-13.

24. Osika E., Cavaitllon J-M., Chadelat K., Boule M„ Fitting C., Tournier G., Clement A. Distinct sputum cytokine prophiles in cystic fibrosis and other chronic inflammatory airway disease // Eur. Resp. J. - 1999. -Vol.14. - P. 339-346.

25. Range S.P., Dunster C„ Knox A.J., Kelly F. Treatment of pulmonology exacerbations of cystic fibrosis leads to improved antioxidant status // J. Eur. Resp. J.

- 1999.-Vol.13.-P. 560-564.

26. Scheid P., Kempster L., Griesenbach U., Davies J., Dewara., Weber P., Colledge W., Evans M., Geddes D., Alton E. Inflammation in cystic fibrosis airways: relationship to increased bacterial adherence // Eur. Resp. J. - 2001. -Vol.17. - P. 27-35.

27. Smith A. Pathogenesis of bacterial bronchitic in cystic fibrosis//Pediatr. Infec. Dis.J. - 1997. -Vol.16. -P. 91-96.

28. Terada L.S., Johansen K., Nowbar S., Vasil A., Vasil M. Pseudamonus aeruginosa Hemolytic Phospho-lipase C suppresses neutrophil respiratory burst activity // Infection and Immunology. - 1999. -Vol.67,-P. 2371-2376.

29. Weiss J., Muell K., Victor M., ELsbach P. Oxygen-independent intracellular and oxygen-depen-dent extracellular killing E. colli S15 by human leukocytes // J. Clin. Invest. - 1985. - Vol.76. - P. 206-212.

30. Weiss S. Engl.. Tissue destruction by neutrophils // N. Engl. J Med. - 1989. - Vol. 320. - P. 365-375.

31. Winnie G.B., Cowan R. Respiratory tract colonization with Ps. aeruginosa in cystic fibrosis // Pediatr. Pul-monol. - 1991. - Vol.10. - P. 92-100.

32. Witko-Sarsat V,, Delacourt C., Rabier D„ Bar-det J., Nguyen A., Latscha-Deschamps B. Neutrophil derived long-lived oxidant in cystic fibrosis sputum // Am. J. Resp. Crit care Med. - 1995. - Vol.152.- P. 1910-1916.

33. Worlitzsch D., Herberth G., Hlrich М., DoringG. Catalase, myeloperoxidase and hydrogenperoxidase in cystic fibrosis // Eur. Resp. J.- 1988.-Vol.ll.- P. 377-383.

34. Yu H., Head N.E. Persistent infections and immunity in cystic fibrosis // Biosci. - 2002. - Vol.7. -P.442-57.

поступила в редакцию 18.01.2004 отправлена на доработку 05.02.2004 принята к печати 26.02.2004