Фармацевтическая композиция для лечения гинекологических заболеваний у коров и свиней
PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATING GYNAECOLOGICAL DISEASES IN COWS AND PIGS

Изобретение относится к области ветеринарии и химико-фармацевтической промышленности, может быть использовано в производстве ветеринарных лекарственных средств и касается создания новой фармацевтической композиции для лечения острых и хронических эндометритов у коров, вагинитов, вульвитов, вестибулитов и других гинекологических заболеваний у свиней бактериальной этиологии.
Послеродовой эндометрит наблюдается у 20-38% отелившихся коров, занимая ведущее место в структуре послеродовых осложнений. Заболевают преимущественно животные с высоким уровнем молочной продуктивности. Эндометрит и метрит — это воспалительные заболевания матки, в большинстве случаев возникающие у коров в период между отелом и инволюцией.
Особенно тяжело протекает послеотёльный эндометрит в токсической или септической форме, при этом чаще всего наиболее серьезные случаи отмечаются в первые 10–14 дней после отёла.  В группу риска также попадают животные, имеющие в анамнезе задержание последа, рождение двоен или мертворождённых телят, выпадение матки, кетоз [1-2].
Послеродовые заболевания половых органов свиноматок вызываются травмами, введением в родовые пути и в полость матки веществ, раздражающих слизистую оболочку, и внесением инфекции с руками и инструментами [3]. К ним относятся воспаление вульвы – вульвит, воспаление преддверия влагалища – вестибулит, воспаление влагалища – вагинит. У молодых самок случного возраста массовое заболевание влагалища отмечается при вольной случке с нарушением ветеринарно-санитарных правил. Больные животные беспокоятся, имеют частое мочеиспускание и дефекацию со стонами. Наружные половые органы отёчны и очень болезненны при прощупывании. Из половых органов выделяется жидкий мутный экссудат с неприятным запахом. Животное часто машет хвостом.
Как правило, бактериальные вульвиты, вагиниты и вестибулиты при отсутствии лечения осложняются эндометритами. При всех гинекологических заболеваниях у свиней снижается вероятность оплодотворения, наблюдается гибель эмбрионов, мумификация плодов, рождение мёртвых и слабых поросят. Ущерб обусловлен снижением продуктивности свиноматок. Для лечения проводят антибактериальную терапию в виде инъекций, а также обязательный обмыв половых органов растворами дезинфицирующих и вяжущих средств: марганцовокислого калия, фурацилина, 3-5%-ного ихтиола и др. Орошение чередуют введением антимикробных эмульсий и мазей (линимент синтомицина, 5%-ная суспензия фуразолидона и т.п). Растворы вводят во влагалище с помощью катетера или резиновой груши. Курс лечения составляет 10-12 дней [3].
При эндометрите у коров, как и при болезнях половых органов у свиней, наиболее эффективна комплексная терапия, которая включает этиотропную, патогенетическую и симптоматическую. Однако, при своевременном лечении весьма эффективным является применение внутриматочных и интравагинальных препаратов, содержащих антибактериальные компоненты, направленная на подавление микрофлоры, стимуляцию сократительной функции матки и повышение резистентности организма и регенеративных процессов в эндометрии [1-3].
Известен способ профилактики и лечения эндометритов у коров, включающий введение в организм животного лекарственного средства на основе глюкозы и аскорбиновой кислоты, отличающийся тем, что средство дополнительно содержит камфору, спирт этиловый и физиологический раствор (RU  2065 743 С1) [4]. Недостатком такой композиции является отсутствие антибактериального компонента широкого спектра действия, обеспечивающего подавление патогенных микроорганизмов.
Известна композиция «АЗОКАПТРИН», содержащая морфолиний 3-метил-1,2,4-триазолил-5-тиоацетат и 2-меркаптобензтиазол и в качестве основы гидрогенизированное подсолнечное масло и дополнительно эмульгатор T-1 (RU 2 102 065 C1) [5]. Композиция обладает заживляющим и противовирусным действием. Недостатком композиции является гидрофобная основа, ограничивающая биодоступность компонентов, а также длительные сроки лечения (до 21 дня).
Известен способ лечения эндометритов у высокопродуктивных коров, включающий внутриматочное введение пробиотика, содержащего штаммы Bacillus subtilis, отличающийся тем, что в качестве пробиотика используют препарат Моноспорин, который вводят в дозе 5 мл разведенным физиологическим раствором в соотношении 1:3 1 раз в день на 9-й, 10-й, 11-й,12-й и 13-й дни лечения после курса общестимулирующей и этиотропной терапии (RU2012147670A) [6]. Недостатком данного способа является длительность лечения и отсутствие компонентов антибактериального действия, необходимых для быстрого достижения эффекта. Препарат используют в комплексе с антибактериальным раствором (тилозина тартрата).
препарат
Известен препаратдля лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров, включающий диоксидин, норфлоксацин и воду для инъекций, отличающийся тем, что он дополнительно содержит глицерин, 1,2-пропиленгликоль, масло подсолнечное рафинированное, воск эмульсионный и кислоту стеариновую (RU 2455992 С1) [7], а также  для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров и метрит-мастит-агалактии у свиноматок, который включает норфлоксацин и диоксидин, диметилсульфоксид и дистиллированную воду (RU 2333759С1) [8]. К недостаткам данных препаратов можно отнести отсутствие компонента с репаративным действием. К существенным недостаткам антимикробных препаратов, содержащих диоксидин, относятся мутагенная активность, эмбриотоксичность и повреждение коркового слоя надпочечников. Такие токсикологические особенности, требуют рассматривать диоксидин и препараты с ним, как препараты резерва.
Известна фармацевтическая композиция для наружного применения "ОФЛОМЕЛИД" при гнойно-воспалительных заболеваниях (RU 2349302 С1) [9], содержащая в качестве активных компонентов фторхиноловый антибиотик - офлоксацин, стимулятор репарации ткани - метилурацил и местное анестезирующее средство - лидокаина гидрохлорид. В качестве основы композиция содержит водорастворимые полиэтиленоксиды мол. м. 400 и 1500. Композиция также содержит консерванты нипагин и нипазол в соотношении 4:1, и пластификатор – пропиленгликоль. Недостатком данной композиции является только наружное применение, использование в качестве активного компонента офлоксацин (рацемическая смесь двух оптически активных изомеров) со сниженной антимикробной активностью по сравнению с левовращающим изомером [10-12].
Наиболее близким аналогом для представленной фармацевтической композиции является средство, которое содержит антибиотик - аминогликозид, выбранный из группы нетилмицин, амикацин и сизомицин, диоксидин и/или синтетическое антибактериальное средство, снижающее резистентность микроорганизмов, фермент или комплекс ферментов с протеолитической и/или бактериолитической активностью, синтетический иммуномодулятор или их физиологически приемлемую смесь при следующем соотношении компонентов, мас.%: антибиотик из класса фторхинолонов- 0,05-5,00; анестетик - 0,5-6,0; антибиотик - аминогликозид, выбранный из группы нетилмицин, амикацин и сизомицин 0,5-5,5; диоксидин и/или синтетическое антибактериальное средство, снижающее резистентность микроорганизмов 0,01-5,0; фермент или комплекс ферментов с протеолитической и/или бактериолитической активностью 0,05-16,00; синтетический иммуномодулятор 0,05-12,50; основа – остальное; при этом антибиотик из класса фторхинолонов ограничивается одним веществом, выбранным из ряда: ципрофлоксацин, левофлоксацин, спарфлоксацин, моксифлоксацин, или комбинацией из двух этих веществ (RU 2682171).
Основное направление изобретения RU 2682171- создание фармацевтических комбинированных композиций (варианты) для лечении гнойных ран и ожогов, гнойно-воспалительных заболеваний кожи и др. на основе антибиотиков, ингибирующих рост микрофлоры, резистентной к подавляющему числу антибактериальных препаратов. В примерах реализации данного изобретения в виде жидких лекарственных форм отсутствует комбинация левофлоксацина с компонентом, обладающим репаративными свойствами, а использование мягких и твердых лекарственных форм предназначается для наружного и местного применения и не позволяет добиться равномерного распределения. Метилурацил малорастворим в воде, что значительно снижает его биодоступность, а также он может вызвать аллергические реакции и кратковременное жжение [14, 15]. Наличие таких недостатков приводит к невозможности использования фармацевтической композиции RU 2682171 в акушерско-гинекологической практике.
Таким образом, к настоящему времени не известны комбинации левофлоксацина гемигидрата или его фармацевтически приемлимых солей со стимуляторами репаративного процесса для лечения острых и хронических эндометритов у коров, вагинитов, вульвитов, вестибулитов и других гинекологических заболеваний у свиней бактериальной этиологии.
Задачей настоящего изобретения является создание новой фармацевтической композиции на основе левофлоксацина и стимулятора репаративного процесса, пригодной для внутриматочного введения у коров и интравагинального применения у свиней. Реализация этой композиции именно в виде жидкой лекарственной формы обеспечивает высокую биодоступность и проникновение через слизистые оболочки действующих веществ, повышение терапевтической эффективности в сравнении с известным препаратом, обеспечение репаративного действия, сокращение времени реконвалесценции.
Поставленная задача решается созданием фармацевтической композиции в виде жидкой лекарственной формы для лечения острых и хронических эндометритов у коров, вагинитов, вульвитов, вестибулитов и других гинекологических заболеваний у свиней бактериальной этиологии, содержащей левофлоксацина гемигидрат или другие фармацевтически приемлемые соли левофлоксацина, стимулятор репаративного процесса, растворитель, консервант, солюбилизатор, и воду, в качестве стимулятора репаративного процесса содержит декспантенол и/или растительные эфирные масла, дополнительно содержит регулятор рН, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Левофлоксацина гемигидрат
0,1-55
Декспантенол
0,05-20,0
Эфирное маслорастительного компонентаРастворитель
0-10,05-35
Солюбилизатор
0-50
Регулятор рН
2,0-5,0
Консервант
1,0
Вода очищенная
до 100
Новизна и технический уровень достигаются жидкой лекарственной формой, обеспечивающей возможность внутриматочного и интравагинального введения, а также уникальным сочетанием действующих веществ композиции, позволяющим обеспечить высокую эффективность антибактериального и репаративного действия, сократить сроки лечения гинекологических заболеваний животных за счёт совместного действия.
Так, использование в заявленной композиции сочетания левофлоксацина и декспантенола в качестве соответственно антибактериального и репаративного средства даёт большое преимущество, поскольку декспантенол хорошо растворим в воде, легко проникает через слизистую и в тканях полностью переходит в пантотеновую кислоту, являющуюся частью коэнзима А, что приводит к естественному восполнению пантотеновой кислоты как на поверхности слизистых оболочек, так и в тканях. Добавление в композицию компонента с репаративными свойствами (декспантенола) привело к неожиданному эффекту – сокращению сроков реконвалесценции, обеспечивающему новый уровень техники. Аналогичный эффект оказывает наличие одного из натуральных эфирных масел - облепихи, душицы, алоэ, коланхоэ.
Благодаря хорошему проникновению и высоким местным концентрациям декспантанол используется во многих лекарственных препаратах для местного применения, таких как мази и лосьоны для лечения дерматологических заболеваний, для облегчения зуда и заживления ран. По результатам изучения меченого тритием декспантенола установлено его проникновение (адсорбция) через кожные покровы. Дерматологические эффекты его местного применения включают усиление пролиферации фибробластов и ускоренную реэпителизацию при заживлении ран. Кроме того, он действует как местное защитное средство, увлажняющее и смягчающее [16-18] обладает противовоспалительными свойствами [19], а также усиливает проникновения через кожу и слизистые других компонентов [20].
Декспантенол при всасывании переходит в пантотеновую кислоту (витамин В5), которая катализирует ацилирование, участвует практически во всех метаболических процессах (цикл трикарбоновых кислот, обмен углеводов, жиров и жирных кислот, фосфолипидов, белков и др.), обеспечивает образование кортикостероидов, ацетилирование холина с образованием ацетилхолина [21]. Участвует в синтезе стеролов, стероидных гормонов и порфиринов. Коэнзим А также участвует в модификации белков, таких как N-концевое ацетилирование, ацетилирование внутренних аминокислот и ацилирование жирных кислот, тем самым влияя на локализацию, стабильность или активность белков. Коэнзим А не переносится через клеточные мембраны, в отличие от пантотеновой кислоты [22]. Многочисленные данные свидетельствуют, что пантотеновая кислота необходима для нормального функционирования эпителия посредством участия в метаболических процессах [23-25]. Некоторые авторы отмечают хорошую противовоспалительную активность декспантенола [26].
Имеются сведения о рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании (in vivo) влияния декспантенола для местного применения на функцию эпидермального барьера [27, 28]. В ходе исследований было установлено, что местное применение декспантенола в течение 7 дней улучшило гидратацию рогового слоя и уменьшило трансэпидермальную потерю воды.
Механизмы, с помощью которых декспантенол восстанавливает и защищает барьерную функцию кожи, полностью не выяснены. Поскольку различные слои кожи и слизистых оболочек постоянно обновляются, применение декспантенола создает среду, которая способствует активизации физиологических процессов, например, функционирование ферментов, необходимое для поддержания или восстановления функции кожи и слизистых. Некоторыми авторами было высказано предположение, что декспантенол способствует регенерации за счёт усиления дифференцировки клеток и синтеза липидов [29].
2
Marquardt и его коллеги [30] изучали влияние декспантенола на заживление ран и регуляцию генов, используя трехмерную модель кожи. Культивирование облученных лазером эквивалентов кожи в среде, содержащей пантотенат кальция, приводило к различным молекулярным эффектам. Среди них была повышена экспрессия генов интерлейкина (IL) -1α, провоспалительного цитокина, который действует на трех этапах заживления ран, и матриксной металлопротеиназы 3 (MMP3), регулятора заживления ран [31]. Более того, через три дня после повреждения кожи иммунофлуоресцентные исследования показали повышенную экспрессию белка Ki67 в облученной лазером трехмерной коже, культивированной с пантотенатом кальция, по сравнению с контролем. Результаты заслуживают внимания, потому что без лечения экспрессия IL-1α и MMP3 фактически подавляется после фракционного ультраимпульсного излучения CO-лазера [32]. Повышенная регуляция белка Ki67, маркера пролиферации, соответствует более раннему исследованию, в котором использовалась in vitro модель искусственно поврежденных монослоев (царапаных ран) [33]. В том же исследовании дермальные фибробласты, инкубированные с пантотенатом кальция (20 мкг/мл), показали усиленную пролиферацию по сравнению с необработанными клетками, что свидетельствует о стимулирующем эффекте пантотената на пролиферацию дермальных фибробластов. Среди прочего, гены, кодирующие IL-6 и IL-8, активируются пантотенатом кальция. Оба цитокина важны для заживления кожных ран [21].
В другом исследовании Schmitt и соавторы [32] изучали молекулярные эффекты декспантенола на заживление ран слизистой оболочки после введения стандартизированных повреждений с помощью непоследовательного фракционного ультраимпульсного CO2-лазера. Для этого была использована новая модель in vitro неороговевшей слизистой оболочки человека во всю толщину в 3D. Сразу после лазерной травмы модели местно обрабатывали мазью, содержащей 5% декспантенол (в контроле наносили плацебо), в течение 5 дней. Культуральная среда не содержала декспантенола или других ингредиентов, которые, как известно, увеличивают пролиферацию. Гистологические исследования позволили сделать вывод, что лечение мазью с декспантенолом улучшает закрытие ран по сравнению с плацебо. Анализ экспрессии генов показал, что местное применение декспантенола было связано с>1,5-кратной активацией различных генов, участвующих в заживлении ран, таких как ген CXCL10, гены семейства белков муцина и рецептор ретиноевой кислоты в регенерации белка 1, отвечающего за ретиноевую кислоту.
Препараты на основе растительных масел и экстрактов, в том числе алоэ, являются эффективными при заживлении ран за счет улучшения миграции клеток фибробластов и регулирования экспрессии генов Tgfβ1 и Vegf-A в клетках фибробластов, обработанных экстрактами [34].
В работе [35] показана эффективность геля алое вера при лечении язвенной болезни желудка у людей. Исследовали репаративное действие алоэ вера на 12 пациентах с клинически доказанной язвенной болезнью желудка. Все пациенты полностью выздоровели, и рецидивов заболевания не наблюдали в течение года. Имеются рентгенографические доказательства, свидетельствующие о полном заживлении слизистой. Эффективная доза геля - 7-9,2 мл на один приём. Также приведены данные об успешном излечении дуоденита (язвенной болезни двенадцатиперстной кишки) гелем алое-вера.
Имеются литературные данные о репаративном действии каланхоэ [36]. В статье описано исследование морфологических изменений, вызываемых Bryophyllum pinnatum (относится к роду Каланхое (Kalanchoe)) при повреждении желудка алкоголем. Применяли низкую дозу водного экстракта растения (150 мг / кг массы тела), среднюю дозу (300 мг / кг массы тела) и высокую дозу (600 мг / кг массы тела). Тридцать здоровых взрослых крыс линии Вистар обоего пола были разделены на шесть групп (от A до F) по пять крыс в каждой. Группа А получала только корм и воду. Повреждение слизистой оболочки желудка индуцировали в группах от B до F с использованием 80% этанола после 24 часов голодания при свободном доступе к воде. Группы C, D и E получали водные экстракты Bryophyllum pinnatum (150, 300, 600 мг / кг массы тела соответственно). Группа F получала 20 мг омепразола. Группа В не получала лечения. Лечение длилось двадцать восемь дней. Крыс умерщвляли через час после приёма последней дозы каланхоэ, желудок извлекали и обрабатывали для гистологического анализа. Исследование установило противоязвенные свойства Bryophyllum pinnatum (Kalanchoe) и продемонстрировало, что водные экстракты Bryophyllum pinnatum восстанавливают гистологическую целостность слизистой оболочки желудка во всех группах, получавших экстракт. В группе, получавшей экстракт в дозе 600 мг/кг массы тела, достигался наилучший восстанавливающий эффект.
В работе [37, 38] показано, что листья растения каланхоэ обладают ранозаживляющими, противовоспалительными, антиоксидантными, антимикробными свойствами. В работе исследовали гастропротекторные эффекты гидроэтанольного экстракта и этилацетатной фракции из листьев Kalanchoe pinnata против модели язвы, вызванной этанолом/HCl, у крыс. Поражение желудка излечивалось примерно на 47% гидроэтанольным экстрактом 400 мг/кг. 50% подавление поражений желудка наблюдалось после предварительной обработки этилацетатной фракцией в дозе 200 мг/кг.
В работе [39] установили влияние душицы (Origanum vulgare L.) на активность фекальных бактериальных ферментов в экспериментальном канцерогенезе толстой кишки у крыс, индуцированном 1,2-диметилгидразином (ДМГ). Самцы крыс-альбиносов были разделены на 6 групп, и все животные получали корм с высоким содержанием жиров (20% жира в рационе). Группа 1 служила необработанным отрицательным контролем (без воздействия канцерогена), а животные группы 2 получали орегано (душица) в дозе 60 мг/кг ежедневно в течение 15 недель. Чтобы вызвать рак толстой кишки, ДМГ вводили подкожно один раз в неделю в течение первых 4 недель (группы 3–6) в дозе 20 мг/кг м.т. Животные группы 3 не получали лечения. Орегано вводили в дозе 20, 40 или 60 мг/кг массы тела. ежедневно перорально в течение всех 15 недель (группы 4–6). Установлено, что добавка орегано во всех трех дозах значительно подавляла активность бактериальных ферментов и значительно модулировала окислительный стресс по сравнению с группой 3, получавшей ДМГ без добавок. Таким образом, результаты настоящего исследования показали, что орегано заметно ингибирует индуцированный ДМГ канцерогенез толстой кишки и что оптимальная доза орегано – 40 мг/ кг м.т. была более эффективной, чем более высокие или более низкие дозы.
В работе [40] изучены репаративные свойства эфирного масла облепихи. Исследование проводили на 20 взрослых здоровых беспородных собаках среднего размера. Для создания язв и эрозий желудка применяли инъекции дексаметазона в дозе 1 мг/кг, внутривенно, два раза в день. После этого все животные были случайным образом разделены на экспериментальные группы. Животных одной их групп лечили маслом семян облепихи в дозе 5 мл/животное два раза в день. Гастроэндоскопически показано полное и быстрое заживление поражений. Таким образом, доказано, что масло облепихи активно заживляет эрозию.
В обзоре [41] также рассматриваются терапевтические и восстанавливающие свойства масла облепихи. Наблюдали быстрое восстановление кроветворной системы после химиотерапии в высоких дозах у мышей, получавших облепиховое масло. Обнаружено, что масло семян улучшает неспецифический иммунитет и оказывает противоопухолевое действие в лабораторных исследованиях. Описано прямое влияние облепихи на онкогенез, помимо косвенных, вызванных общим иммунитетом, включая ингибирующее действие на рак клетки и блокирование канцерогенных факторов. Экспериментально показана на мышах с пересаженными опухолями, включая саркому (S180), лимфолейкоз (P388), что и внутрибрюшинное и пероральное применение масла облепихи ингибировали развивающуюся опухоль. Облепиховый сок может убить раковые клетки S180 и P388 и подавляет рост клеточных штаммов рака желудка человека.
Таким образом, создание уникальной композиции, сочетающей гемигидрат левофлоксацина, декспантенол и эфирные масла алоэ, каланхоэ, душицы и облепихи в качестве репаративных средств, позволило повысить технический уровень за счет неожиданно полученного эффекта – сокращения сроков реконвалесценции при лечении гинекологических заболеваний у животных, в частности, эндометритов у коров и вульвитов и вагинитов у свиней.
4. Осуществление изобретения
Возможность достижения цели изобретения доказывается следующими вариантами рецептур композиции для внутриматочного и интравагинального введения (таблица 1).
Таблица 1. Примеры реализации фармацевтической композиции.
Наименование компонентов
Содержание компонентов в препарате, масс. %
<b>Состав 1</b>
1
2
3
Левофлоксацина гемигидрат
0,1
25,0
55,0
Уксусная кислота
2,3
0,3
0,1
Гидроксид натрия
0,2
4,0
6,0
Бензиловый спирт
1,0
2,0
0,5
Пропиленгликоль
40
10,0
1,0
Декспантенол
0,05
1,0
0,5
Кремофор А 25 (ПАВ)
15,0
0
0
Эфирное масло душицы
10,0
0
5,0
Вода очищенная
остальное
остальное
остальное
<b>Состав 2</b>
4
5
6
Левофлоксацина гемигидрат
0,1
40,0
2,5
Уксусная кислота
2,5
3,0
0,2
Гидроксид натрия
0,4
0,5
4,0
Бензиловый спирт
3,0
1,0
2,0
Пропиленгликоль
25,0
15,0
30,0
Декспантенол
15,0
0,1
1,0
Эфирное масло алоэ
0,2
10,0
0
Вода очищенная
остальное
остальное
остальное
Наименование компонентов
Содержание компонентов в препарате, масс. %
<b>Состав 3</b>
7
8
9
Левофлоксацина гемигидрат
0,5
7,5
15,0
Лимонная кислота
1,5
3,0
5,0
Гидроксид натрия
0,20
0,36
0,5
Бензиловый спирт
4,0
1,0
1,0
Глицерин
30,0
10,0
4,0
Декспантенол
2,5
20,0
1,5
Эфирное масло облепихи
1,0
0
0,5
Эфирное масло каланхоэ
0
1,0
0
Твин 80
20,0
0
10,0
Кремофор EL
0
30,0
0
Вода очищенная
остальное
остальное
остальное
Наименование компонентов
Содержание компонентов в препарате, масс. %
<b>Состав 4</b>
10
11
12
Левофлоксацина гемигидрат
20,0
2,0
13,0
Лимонная кислота
1,5
3,0
5,0
Гидроксид натрия
0,20
0,36
0,5
Бензиловый спирт
4,0
1,0
1,0
Глицерин
30,0
10,0
4,0
Декспантенол
8,0
20,0
3,0
Эфирное масло облепихи
5,0
0
10,0
Эфирное масло душицы
0
10,0
0
Твин 80
20,0
0
10,0
Кремофор EL
0
30,0
0
Вода очищенная
остальное
остальное
остальное
Наименование компонентов
Содержание компонентов в препарате, масс. %
<b>Состав 5</b>
13
14
15
Левофлоксацина гемигидрат
35,0
5,0
2,0
Соляная кислота
3,0
3,2
4,1
Бензиловый спирт
1,0
0,5
1,5
Пропиленгликоль
25,0
30,0
40,0
Декспантенол
15,0
10,0
8,0
Эфирное масло душицы
0
5,0
10,0
ПЭГ 400
15,0
8,0
13,0
Вода очищенная
остальное
остальное
остальное
Технология приготовления
В воде растворяют регуляторы кислотности (уксусную, лимонную или соляную кислоту, при необходимости, гидроксид натрия), соль левофлоксацина, затем добавляют консервант и органический растворитель (пропиленгликоль, глицерин), далее заживляющий компонент (декспантенол и эфирное масло), при необходимости вводят солюбилизатор.
Испытания эффективности на коровах
Препарат вводят внутриматочно в дозе 50–150 мл с помощью шприца Жанэ.
Перед введением препарата проводят санитарную обработку наружных половых органов. При необходимости освобождают полость матки от воспалительного экссудата. При лечении хронического и субклинического эндометритов до введения лекарственного препарата необходимо провести ректальный массаж матки в течение 1,5–2,0 минут.
Ожидаемый курс лечения - 4–5 введений с интервалом 24 часа, при необходимости продолжить до полного выздоровления.
С целью определения эффективности препарата по принципу аналогов с учетом диагноза, породы, возраста, живого веса, условий кормления и содержания сформировали 8 групп целевых животных (1- контрольная, 7 опытных) с диагнозом острых гнойных эндометритов. Диагностика осуществлялась на основании анамнеза, клинических признаков и результатах лабораторных микробиологических исследований. По результатам микробиологических исследований выделяли изоляты: Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Proteus vulgaris и Proteus mirabilis, Staphilococcus aureus.
Контрольную группу животных лечили средством по рецептуре наиболее близкого аналога (пример N 30 патента RU2682171C2) в дозе 100 мл/корову. Пример № 30 патента RU2682171C2 выбран на основании наиболее близкой рецептуры – содержит левофлоксацин, антисептик диоксидин и ксимедон в качестве репаративного агента, имеет форму водного геля, наиболее удобную из приведённых примеров для внутриматочного введения. Рецептура лекарственной формы для лечения контрольной группы приведена в Таблице 2.
Рецептура № 30 из патента RU2682171C2 (контрольная группа).
Таблица 2.
Наименование компонентов
Содержание компонентов, масс. %
Левофлоксацин
0,2
Диоксидин
1,0
Трилон Б
0,5
Ксимедон
10,0
Твин 80
0,5
Этоний
0,5
Натрия альгинат
0,3
Натрий карбоксиметилцеллюлоза
2,5
Глицерин
25,0
Вода очищенная
остальное
Лечение 7-ми опытных групп проводили с использование составов фармацевтических композиций по настоящему изобретению.
Результаты лечения с использование составов фармацевтической композиции по настоящему изобретению представлены в Таблице 3.
Таблица 3. Эффективность лечения острых эндометритов у коров (n=6).
Показатели
Группа животных (номер рецептуры)
Контроль
1 (1)
2 (6)
3 (7)
4 (8)
5 (9)
6 (10)
7 (13)
Кратность введения, раз
2*
3
2
3
2
3
2
2
Выздоровление, голов
-
5
6
6
6
6
6
5
Эффективность, %
-
83,3
100
100
100
100
100
83,3
Оплодотворение при первом осеменении, голов
-
5
6
6
6
6
6
5
* недостаточная терапевтическая эффективность, животные выведены из эксперимента и пролечены по схеме хозяйства.
Как видно из таблицы 3, формы на основе левофлоксацина в различных сочетаниях с заживляющими компонентами при одно- или двукратном введении показали эффективность 83,3–100 % при лечении острых гнойных эндометритов у коров, вызванных Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Proteus vulgaris и Proteus mirabilis, Staphilococcus aureus. У большинства коров контрольной группы после второго применения улучшения состояния не наблюдали. После второго введения аналога (гель для ран) обнаружены гнойные выделения из половых органов, повышение температуры тела, беспокойство и снижение аппетита. Кроме того, слизистая наружных половых органов и влагалища имела гиперемированную окраску, заметные поверхностные эрозии и трещины. Животные выведены из эксперимента и пролечены по схеме хозяйства
У большинства коров опытных групп (83,3–100%), которым применяли заявленный препарат, при первом осеменении произошло оплодотворение.
Установлено, что курс лечения острого эндометрита при внутриматочном применении различных составов заявленной фармацевтической композиции оказался существенно меньше ожидаемого: выздоровление достигнуто после второго и третьего введения.
После завершения применения препарата у всех коров отбирали образцы крови для определения биохимических показателей.
Гематологические показатели коров через 5 суток после завершения лечения
Таблица 4.
Показатель
Группа животных (номер рецептуры)
До лечения
Контроль
1 (1)
2 (6)
3 (7)
4 (8)
5 (9)
6 (10)
7 (13)
Гемоглобин, г/л
95,2±0,7
96,3±0,8
108,6±1,0
112,2±1,5
109,3±0,8
104,1±0,8
102,5±1,0
103,4±0,8
100,7±1,2
Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л
4,35±0,33
4,68±0,37
5,62±0,61
6,33±0,68
5,67±0,72
5,88±0,61
6,02±0,70
5,95±0,62
4,42±0,58
Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л
13,4±3,3
13,0±2,3
5,8±1,5
4,8±1,2
4,6±1,1
5,2±1,3
6,8±1,5
4,7±1,2
4,4±1,1
Лимфоциты, %
72,1±1,0
70,1±1,0
63,2±0,8
55,3±0,3
59,5±0,5
60,4±0,5
61,7±0,6
56,1±0,5
57,4±0,5
Моноциты, %
11,2±0,3
10,8±0,3
6,5±0,2
4,7±0,1
4,2±0,1
6,3±0,2
6,7±0,3
4,0±0,2
4,5±0,1
Эозинофилы, %
11,0±0,8
10,7±0,7
7,9±0,6
8,0±0,6
6,5±0,6
7,8±0,5
7,5±0,7
7,3±0,3
8,0±0,5
Гематокрит, %
28,3±1,2
33,1±0,9
35,2±1,0
39,1±1,0
34,8±0,8
36,4±0,7
35,7±1,1
35,5±1,0
30,8±1,2
Палочкоядерные, %
4,6±0,3
4,1±0,2
3,0±0,2
3,0±0,2
2,8±0,1
3,2±0,2
3,1±0,2
2,7±0,1
2,5±0,1
Тромбоци-ты, тыс.
152±3,8
176,3±4,2
270,2±4,0
275,6±5,0
262,2±4,7
258,3±4,3
286,4±4,8
263,3±4,0
150,2±3,5
Общий белок, г/л
82,3±2,0
82,13±2,0
83,1±2,2
83,7±1,8
83,5±2,1
83,0±1,9
83,2±2,0
83,0±2,0
83,6±1,9
АЛТ, ед/мл
43±2
40±3
38±3
32±2
39±4
35±4
30±1
33±3
42±2
АСТ, ед/мл
53±4
55±6
48±3
38±3
64±4
45±3
40±2
42±2
48±5
Креатинин, ммоль/л
72,4±3,3
74,5±6,2
70,3±5,1
70,5±4,3
78,6±4,5
72,6±2,7
68,2±3,5
75,3±3,6
75,4±2,8
Мочевина, ммоль/л
4,5±0,3
4,2±0,3
4,5±0,2
3,9±0,3
4,8±0,1
4,0±0,2
4,0±0,1
3,8±0,2
5,0±0,3
Глюкоза, ммоль/л
2,4±0,3
2,6±0,3
3,0±0,3
2,5±0,2
2,1±0,2
2,8±0,3
2,9±0,2
2,3±0,2
2,1±0,3
Общий кальций, мг/100 мл
9,2±0,3
9,3±0,3
9,8±0,3
10,7±0,5
9,5±0,3
10,2±0,2
10,5±0,3
9,8±0,4
9,3±0,5
Неорганический фосфор, мг/100 мл
4,2±0,2
4,4±0,2
4,8±0,2
5,8±0,2
4,5±0,2
5,3±0,2
5,7±0,3
5,4±0,2
4,7±0,3
Как видно из таблицы 4, после применения рецептур заявленного препарата гематологические показатели крови коров улучшились по сравнению с коровами, не получавшими лечения, а также с животными, которых лечили препаратом-аналогом. Число лейкоцитов в среднем снизилось на 38,7% по сравнению с контрольной группой. Гемоглобин увеличился на 11,3%, число эритроцитов выросло на 36,3%. Уровень глюкозы, кальция и неорганического фосфора в крови практически не изменился, что очень важно при терапии дойных коров [44]. У животных группы 1 параметры крови показали недостаточную эффективность лечения. Фиксировали значения уровня лейкоцитов, тромбоцитов, эритроцитов, моноцитов, сопоставимые с параметрами контрольной группы.
При применении рецептуры 13 с высоким содержанием левофлоксацина наблюдали снижение числа элементов крови, в особенности эритроцитов (на 23%), тромбоцитов и лейкоцитов (на 16%), а также повышение креатинина на 20%, АЛТ и АСТ на 17-20% по сравнению с нормой. Эффективность препарата при такой концентрации левофлоксацина тем не менее была высокой (83,3%).
Эффективность рецептур заявленного препарата по сравнению с аналогом (гель для ран) объясняется высокой чувствительностью возбудителей к левофлоксацину в комплексе с заживляющим действием декспантенола. Заживляющее и восстанавливающее действие декспантенола или эфирных масел позволяет повысить терапевтический эффект, восстановить физиологическую гематологическую картину.
Испытания эффективности на свиноматках
Для лечения гинекологических заболеваний у свиней препарат вводили во влагалище шприцом Жане в дозе 50 мл/гол один раз в день. Ожидаемый курс лечения - 4-5 введений с интервалом 24 часа, при необходимости продолжить до полного выздоровления.
С целью определения эффективности препарата по принципу аналогов с учетом диагноза, породы, возраста, живого веса, условий кормления и содержания сформировали 8 групп целевых животных (1- контрольная, 7 опытных) с диагнозом вульвиты и вагиниты. Диагностика осуществлялась на основании анамнеза, клинических признаков и результатах лабораторных микробиологических исследований. По результатам микробиологических исследований выделяли изоляты: Streptococcus spp., Staphilococcus spp. и E.coli.
Контрольную группу животных лечили средством по рецептуре наиболее близкого аналога (пример N 30 патента RU2682171C2) в дозе 100 мл/корову. Пример № 30 патента RU2682171C2 выбран на основании наиболее близкой рецептуры – содержит левофлоксацин, антисептик диоксидин и ксимедон в качестве репаративного агента, имеет форму водного геля, наиболее удобную из приведённых примеров для внутриматочного введения. Рецептура лекарственной формы для лечения контрольной группы приведена в Таблице 2.
Лечение 7-ми опытных групп проводили с использование составов фармацевтических композиций по настоящему изобретению.
Результаты лечения с использование составов фармацевтической композиции по настоящему изобретению представлены в Таблице 5.
Таблица 5. Эффективность лечения вульвитов и вагинитов у свиноматок (n=15)
Показатели
Группа животных (номер рецептуры)
Контроль
1 (1)
2 (6)
3 (7)
4 (8)
5 (9)
6 (10)
7 (13)
Кратность введения
2*
3
2
3
2
2
2
3
Выздоровление, число голов
-
12
15
13
15
13
15
15
Эффективность, %
-
80
100
87
100
87
100
100
Оплодотворение при первом осеменении
-
10
15
11
15
12
11
15
* недостаточная терапевтическая эффективность, животные выведены из эксперимента и пролечены по схеме хозяйства.
Испытанные рецептуры показали высокую эффективность при лечении вагинальных заболеваний у свиней в сравнении с аналогом. После первого применения исчезали покраснения и отёчность половых органов, снижалось количество экссудата, после третьего применения всех рецептур наблюдалось полное выздоровление свиней.
У большинства свиноматок оплодотворение произошло при первом осеменении (83-100%).
У свиноматок контрольной группы после двукратного применения аналога в форме геля признаки заболевания сохранялись: отёчность, болезненность половых органов, болезненная дефекация, гиперемия и гнойные выделения из влагалища. Кроме того, наблюдали раздражающее действие геля на слизистую оболочку половых органов – эрозии и трещины. Животные выведены из эксперимента и пролечены по схеме хозяйства.
Сроки выздоровления свиней при интравагинальном введении различных составов значительно сократились по сравнению с ожидаемыми, вследствие уникального сочетания антибактериального и заживляющего компонентов заявленной фармацевтической композиции.
Через 5 суток после окончания лечения у свиней взяли кровь для определения биохимических показателей (Таблица 6).
Гематологические показатели свиноматок через 5 суток после завершения лечения.
Таблица 6.
Показатель
Группа животных (номер рецептуры)
До лечения
Контроль
1 (1)
2 (6)
3 (7)
4 (8)
5 (9)
6 (10)
7 (13)
Гемоглобин, г/л
93,7±0,5
92,4
105,3±0,3
118,8±0,6
117,3±0,8
108,7±0,3
108,4±0,5
109,4±0,5
100,4±0,5
Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л
4,55±0,35
4,85±0,28
5,23±0,25
6,04±0,42
6,08±0,38
5,27±0,27
5,94±0,45
5,65±0,36
4,80±0,32
Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л
17,8±2,7
18,2±2,5
14,3±1,0
12,4±0,7
12,1±1,0
12,9±0,8
13,8±0,5
12,5±0,5
13,8±0,7
Лимфоциты, %
67,1±0,3
66,8±0,3
37,6±0,5
36,4±0,3
38,2±0,5
39,4±0,4
45,7±0,6
50,3±0,3
38,7±0,5
Моноциты, %
10,2±0,3
9,95±0,3
6,1±0,2
4,3±0,2
5,6±0,3
4,2±0,4
4,8±0,4
3,8±0,2
3,7±0,3
Эозинофилы, %
3,5±0,2
4,2±0,2
2,8±0,3
2,7±0,2
2,6±0,3
3,3±0,3
2,7±0,2
3,3±0,3
2,1±0,3
Базофилы, %
1
1
0
0
0
0
0
0
0
Тромбоциты, тыс.
175±5
182±5
205±6
218±6
220±6
184±5
187±5
206±7
178±5
Гематокрит, %
33,2±1,0
35,5±1,1
38,2±1,2
40,6±1,2
40,4±1,1
41,2±0,8
39,7±1,0
39,1±0,7
38,8±0,9
Палочко-ядерные, %
4,5±0,2
4,3±0,2
3,0±0,2
2,9±0,2
3,3±0,1
3,7±0,2
3,8±0,2
2,4±0,1
2,8±0,1
Общий белок, г/л
85,2±1,2
84,7±1,2
80,4±1,3
72,3±0,9
75,3±0,9
78,5±0,8
80,2±1,0
77,0±0,6
73,1±1,1
АЛТ, ед/мл
33±2
35±3
37±2
30±2
31±2
36±3
34±3
35±3
40±3
АСТ, ед/мл
37±2
35±3
33±2
39±2
37±2
38±3
40±3
43±3
42±2
Креатинин, ммоль/л
74,5±5,0
78,6±3,3
72,5±4,2
72,0±3,8
76,3±3,8
75,4±4,2
74,7±4,5
73,5±4,2
83,6±5,0
Мочевина, ммоль/л
33,6±1,3
35,2±1,8
36,5±2,0
31,5±1,5
32,7±2,3
34,8±2,2
33,3±2,0
34,6±2,5
38,9±2,6
Глюкоза, ммоль/л
4,5±0,2
4,3±0,2
4,1±0,3
4,0±0,2
4,2±0,2
4,2±0,2
4,2±0,1
4,6±0,2
4,5±0,2
Общий кальций, мг/100 мл
10,2±0,3
9,3±0,3
11,4±0,1
11,0±0,2
10,5±0,3
10,7±0,2
10,8±0,1
10,7±0,1
9,5±0,3
Неорганический фосфор, мг/100 мл
5,0±0,2
5,2±0,2
5,8±0,2
5,8±0,2
5,2±0,3
5,3±0,2
5,7±0,3
5,7±0,1
5,5±0,2
Биохимические показатели крови улучшились после лечения рецептурами заявленного препаратом по сравнению с контрольной группой. Количество лейкоцитов снизилось у свиней, получавших лечение заявленной композицией в среднем на 28,4% по сравнению с контрольной группой 1, получавшей референсный препарат на основе левофлоксацина и диоксидина, и контрольной группой 0 без лечения: гемоглобин повысился на 17,4%, число эритроцитов увеличилось на 23%. Снизилось общее количество нейтрофилов на 28,3%, лимфоцитов – в среднем на 39,0%. Такие показатели свидетельствуют о восстановлении здоровой клинической картины крови уже через 5 суток после окончания лечения рецептурами заявленной композиции [45, 46].
После применения рецептуры 13 с высоким содержанием левофлоксацина отмечали некоторое снижение показателей лейкоцитарной формулы – эритроциов на 15%, моноцитов – на 13%, тромбоцитов – на 12%, АЛТ и АСТ немного повысились по сравнению со средними для здоровых животных – на 9%, при этом все показатели оставались в пределах нормы. Применение данной рецептуры не повлияло на данные гематокрита, глюкозы, кальция, неорганического фосфора. Таким образом, действие левофлоксацина в высоких концентрациях на гематологическую картину объяснимо и не снижает эффективности препарата.
Действие остальных рецептур не нарушило биохимические показатели крови у свиноматок, что свидетельствует о сочетании эффективности и безопасности патентуемой композиции при всех заявленных концентрациях левофлоксацина.
Другие составы фармацевтической композиции также были испытаны на коровах и свиньях и проявили высокую терапевтическую эффективность в пределах от 80 до 100 %, что сравнимо с терапевтической эффективностью рецептур (таблицы 3 и 5), и значительно выше показателей терапевтической эффективности в группах с рецептурой № 30 из патента RU2682171C2.
Морфологическое исследование тканей для оценки эффективности репаративного действия декспантенола при лечении гинекологических заболеваний
Эндометрий является важнейшим функциональным слоем матки, отвечающим за обеспечение нормального течения беременности. Основной функцией эндометрия является формирование оптимальных условий и среды для крепления внутри матки оплодотворенной яйцеклетки. При истончении или утолщении стенок эндометрия не происходит полноценного прикрепления оплодотворенной яйцеклетки, что зачастую приводит к абортам у продуктивных животных. При десквамации эпителиального слоя есть вероятность образования спаечных процессов внутри матки, что впоследствии может привести к бесплодию.
Гистологию матки коров проводили для групп животных с острым эндометритом – группы 1, 2, 3, 4, получавшие лечение композициями, составленными по рецептурам 1, 3, 6, 8, соответственно (Таблица 7), и содержащие левофлоксацина гемигидрата и декспантенола в различных концентрациях, и четыре опытные группы животных (5, 6, 7, 8), больных острым эндометритом, получавшие лечение композициями по рецептурам, аналогичным 1а, 3а, 6а, 8а, но без декспантенола и эфирных масел. Декспантенол для данных композиций был заменён на воду (Таблица 8). В каждой группе было по 5 животных. Гистологический материал отбирали методом биопсии.
Рецептуры композиции, использующиеся для лечения опытных групп 1-4
(коров, свиноматок).
Таблица 7.
Наименование компонентов
Содержание компонентов в препарате, масс. %
1
3
6
8
Левофлоксацина гемигидрат
0,1
55,0
2,5
7,5
Уксусная кислота
2,3
0,1
0,2
3,0
Гидроксид натрия
0,2
6,0
4,0
0,36
Бензиловый спирт
1,0
0,5
2,0
1,0
Пропиленгликоль
40
1,0
30,0
0
Декспантенол
0,05
0,5
1,0
20,0
Кремофор А 25 (ПАВ)
15,0
0
0
0
Кремофор EL
0
0
0
30,0
Глицерин
0
0
0
10,0
Эфирное масло душицы
10,0
5,0
0
0
Эфирное масло каланхоэ
1,0
Вода очищенная
остальное
остальное
остальное
остальное
Таблица 8. Рецептуры композиции, использующиеся для лечения опытных групп 5-8
(коров, свиноматок).
Наименование компонентов
Содержание компонентов в препарате, масс. %
1а
3а
6а
8а
Левофлоксацина гемигидрат
0,1
55,0
2,5
7,5
Уксусная кислота
2,3
0,1
0,2
3,0
Гидроксид натрия
0,2
6,0
4,0
0,36
Бензиловый спирт
1,0
0,5
2,0
1,0
Пропиленгликоль
40
1,0
30,0
0
Кремофор А 25 (ПАВ)
15,0
0
0
0
Кремофор EL
0
0
0
30,0
Глицерин
0
0
0
10,0
Вода очищенная
остальное
остальное
остальное
остальное
Гистологическое исследование показало, что слизистая оболочка матки коров с симптомами острого эндометрита до лечения характеризовалась десквамацией покровного эпителия слизистой оболочки матки, а также участками, лишёнными эпителиальной выстилки. Подслизистая основа слизистой оболочки матки была отёчной и обильно инфильтрирована гистиоцитарными и лимфоидными клетками. Течение воспалительного процесса также отражалось на морфологии маточных желёз. Просвет маточных желёз расширялся, строма была отёчной, отмечался некробиоз и десквамация клеток железистого эпителия, а также скопление гнойных телец в просвете маточных желёз. Кроме этого, при гнойно-катаральном эндометрите маточные железы были расположены неравномерно, их просвет несколько был увеличен, железистый эпителий был однорядный, эпителиальные клетки имели призматическую форму.
Между маточными железами и кровеносными сосудами выявлен склероз плотной соединительной ткани. Вокруг кровеносных сосудов и устья маточных желез отмечали очаговую пролиферацию фиброцитов и фибробластов, а также процессы коллагеногенеза, наличие нейтрофилов и большого количества лимфоцитов.
При исследовании биопсийного материала опытных групп 1, 2, 3, 4 после трёхкратного введения препарата установлено, что гистоструктура эндометрия характеризовалась наличием выраженной эпителиальной выстилки из высоких призматических клеток на слизистой оболочке, наличием стромальных, макрофагальных, фибробластических и лимфоидных клеток в функциональном слое эндометрия. Такая картина свидетельствует о восстановлении морфофункциональной структуры эндометрия и восстановлении воспроизводительной способности животных.
В группах коров 5-8, получавших в течение трёх суток препарат без декспантенола, структура эндометрия находилась в стадии восстановления, хотя покровный эпителий и не был полностью восстановлен.
С целью исследования эффективности декспантенола в составе заявленной композиции у свиноматок проводили лечение вульвитов и вагинитов в четырёх группах животных - 1, 2, 3, 4, которых лечили композициями, составленными по рецептурам 1, 3, 6, 8, соответственно (таблица 7), на основе смеси левофлоксацина гемигидрата и декспантенола в различных концентрациях. В опытных группах животных 5-8 лечение проводили композициями по рецептурам 1а, 3а, 6а, 8а, но без репаративных компонентов (декспантенол и эфирные масла были заменены на воду). В каждую группу набирали по 5 животных. При первичном осмотре свиней, больных вагинитом и вульвитом, наблюдали гиперемию и отёчность слизистой оболочки преддверия влагалища и влагалища, наличие ссадин, точечных и полосчатых кровоизлияний, эрозии, разрывы тканей. В просвете влагалища обнаруживали гнойно-слизистый экссудат.
При биопсии тканей влагалища обнаруживали десквамацию эпителиального слоя. В субэпителиальных участках стенок были выражены признаки отёчности, что подтверждается дилятацией сосудов и паравазальным отеком соединительной ткани.
Биопсия тканей в группах 1-4, получавших однократно в течение 3 суток композиции с декспантенолом (Таблица 7), показала отсутствие отёка слизистой и дилятации сосудов, заживление эрозий, отсутствие кровоизлияний. В группах свиней 5-8, получавших лечение препаратом без репаративных компонентов (Таблица 8), восстановление тканей влагалища не было завершено – на фоне восстановления тканей наблюдали участки повреждений, остаточные области эррозий и кровоизлияний при отсутствии отёка.
Приведённые физиологические, гематологические и гистологические параметры для коров и свиноматок, гинекологические инфекционные заболевания которых лечили введением заявленной композиции, свидетельствуют о высокой эффективности сочетания левофлоксацина и декспантенола. Восстановление здоровых гематологических показателей всего за 5 суток после прекращения применения свидетельствует об отсутствии побочных эффектов у животных. Восстановление здорового эндометрия у коров и влагалищного эпителия у свиней также происходит всего за 5 суток вследствие репаративного действия декспантенола, что позволило существенно сократить сроки лечения данных заболеваний.
Список литературных источников:
1. Батраков А.Я. Библиотека практика. Акушерско-гинекологические болезни коров. СПб.: Петролазер, - 2003. – 236 с.
2. Малыгина Н.А. Лечение острого послеродового эндометрита у коров. // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. – 2016. - № 3 (137). – с. 141-143.
3. В. А. Сидоркин, В. Г. Гавриш, А. В. Егунова, С. П. Убираев. Болезни свиней. / Аквариум-принт, 2011. – 548 с.
4. RU2065743C1 Гавриш В.Г., Нахов Ю.А. СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭНДОМЕТРИТОВ У КОРОВ. Приоритет от 21.10.1993 https://yandex.ru/patents/doc/RU2065743C1_19960827
5. RU2102065C1 Мазур И. А., Кныш Е.Г., Грошевой Т.А. ВЕТЕРИНАРНАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ПОСЛЕРОДОВЫХ ЭНДОМЕТРИТОВ У КОРОВ "АЗОКАПТРИН" Приоритет от 28.04.1994 https://patenton.ru/patent/RU2102065C1
6. RU2012147670A Ряпосова М.В., Шкуратова И.А., Шилова Е.Н., Калашников А.И. и др. Способ лечения эндометритов у высокопродуктивных коров Приоритет от 08.11.2012  https://patents.google.com/patent/RU2012147670A/ru
7. RU2455992C1 Шабунин С.В., Шапошников И.Т., Востроилова Г.А., Рогачева Т.Е. ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ПОСЛЕРОДОВОГО ЭНДОМЕТРИТА У КОРОВ. Приоритет от 13.07.2011 https://yandex.ru/patents/doc/RU2455992C1_20120720
8. RU 2333759С1 Мисайлов В.Д., Востроилова Г.А., Шабунин С.В., Шахов А.Г. и др. Препарат для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров и метрит-мастит-агалактии у свиноматок. Приоритет от 10.07.2007. https://yandex.ru/patents/doc/RU2333759C1_20080920
9. RU2349302C1 Пшеничников В.Г. Фармацевтическая композиция для наружного применения "ОФЛОМЕЛИД" при гнойно-воспалительных заболеваниях. Приоритет от 21.09.2007.  https://yandex.ru/patents/doc/RU2349302C1_20090320
10. Hayakawa, I., Atarshi, S., Yokohama, S. et al. Synthesis and antibacterial activities of optically active ofloxacin // Antimicrob. Agents Chemother. – 1986. – № 29. – P. 163–164.
11. New H. C., Chin N. X. In vitro activity of S-ofloxacin // Antimicrob. Agents Chemother. – 1989. – V. 33, № 7. – P. 1005–1007.
12. Une T., Fujimoto T., Sato K. et al. In vitro activity of DR-3355, an optically active ofloxacin // Antimicrob. Agents Chemother. – 1988. – № 32. – P. 1336–1340.
13. RU2682171C2 Межбурд Е.В., Аринбасаров М.У., Коган В.И. Фармацевтическая комбинированная композиция для лечения гнойных ран на основе фторхинолонов (варианты)https://yandex.ru/patents/doc/RU2682171C2_20190315
14. Белоусова Т.А. Фармакологические свойства метилурацила. Фармацевтическое научно-производственное предприятие. ЗАО «Ретиноиды», Москва Фармакологические свойства метилурацила (retinoids.ru)
15. Большая Медицинская Энциклопедия (БМЭ) /под редакцией Петровского Б.В., 3-е издание. Т. 15. МЕТИЛУРАЦИЛ — Большая Медицинская Энциклопедия (xn--90aw5c.xn--c1avg)
16. Gloor M., Senger B., Gehring W. Do Dexpanthenol/Clycerin Combinations Achieve Better SkinHydration than Either Component Alone? // Akt Dermatol. 2002. - V. 28 p. 402-5.
17. Proksch E., Jensen J.M., Dexpanthenol. In Barel AO, Paye M,Maibach HI, ed. Handbook of Cosmetic Science and Technology. 2nd ed. New York, London: Taylor & FrancisGroup. 2006. - p. 399-406.
18. Wollina U. Zur klinischen wirksamkeit von dexpanthenol.Kosm Med. 2001. V.4 p.180–184.
19. Biro K., Thaci D., Ochsendorf F.R., Kaufmann R., Boehncke W.H. Эффективность декспантенола в защите кожи от раздражения: двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. Контактный Дерматит. 2003 .- 49(2) с. 80-84. [PubMed:14641355]
20. Biro K., Thaci D., Ochsendorf F.R., Kaufmann R., Boehncke W.H. Эффективность декспантенола в защите кожи от раздражения: двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. Контактный Дерматит. 2003 .- 49(2) с. 80-84. [PubMed:14641355]
21. Proksch E. de Bony, Trapp R.S., Boudon S. Topical use of dexpanthenol: A 70th anniversary article // J. Dermatol. Treat. 2017. –V. 28. p. 766–773.
22. Pugliese P.T., Farina J.C., Chautems Y. Efficacy of dexpanthenol in wound healing:double-blind assessment of excised wound tissue by ultrasound and histologic examination [French] // Nouv Dermatol 1995.- V. 14. p. 130-138.
23. Abiko Y., Tomikawa M., Shimizu M. Enzymatic conversion of pantothenyl alcohol to pantothenic acid // J Vitaminol (Kyoto). – 1969 – 15. р. 59–69.
24. Stuttgen G., Krause H. Die percutane absorption von Tritiummarkiertem panthenol bei mensch und tier. // Arch Klin ExpDerm. 1960. – V. 209. p. 578–582.
25. Schmitt L.; Marquardt Y.; Heise R.; von Felbert V.; Amann P.M.; Huth L.; Steiner T.; Hölzle F., Huth S., Baron J.M. Novel human full-thickness three-dimensional nonkeratinized mucous membrane model forpharmacological studies in wound healing. // Skin Pharmacol. Physiol. 2019. – V. 32. p. 265-274.
26. Slyshenkov V.S., Rakowska M., Moiseenok A.G., Wojtczak L. Pantothenic acid and its derivatives protect Ehrlich ascitestumor cells against lipid peroxidation. // Free Radic Biol Med. – 1995. –V. 19. p. 767–772.
27. Proksch E., Holleran W.M., Menon G.K., et al. Barrier functionregulates epidermal lipid and DNA synthesis. // Br J Dermatol. V. -1993. V. 128. p. 473–482.
28. Wollina U, Kubicki J  Multiaktive Eigenschaften von Dexpanthenol-haltigen Externa. Kosmetische Medizin. 2007. - V 3. p. 122-128.
29. Gimenez-Arnau A. Standards for the protection of skin barrier function. Curr Probl Dermatol. 2016;49:123–34)
2
30. Marquardt Y.; Amann P.M.; Heise R.; Czaja K.; Steiner T.; Merk H.F., Skazik-Voogt C.; Baron J.M. Characterization of a novel standardized human three-dimensional skin wound healing model usingnon-sequential fractional ultrapulsed CO laser treatments. // Lasers Surg. Med. 2015. – V. 47, p. 257–265.
31. Gill S.E.; Parks W.C. Metalloproteinases and their inhibitors: Regulators of wound healing. Int. // J. Biochem. Cell Biol. – 2008. –V. 40. p. 1334–1347.
2
32. Schmitt L., Huth S., Amann P.M., Marquardt Y., Heise R., Fietkau K., Huth L., Steiner T., Hölzle F., Baron J.M. Direct biological effects of fractional ultrapulsed CO-laser irradiation on keratinocytes andfibroblasts in human organotypic full-thickness 3D skin models. // Lasers Med. Sci. 2018. – 33. p. 765–772.
33. Wiederholt T.; Heise R.; Skazik C.; Marquardt Y.; Joussen S.; Erdmann K.; Schröder H.; Merk H.F., Baron J.M. Calcium pantothenate modulates gene expression in proliferating human dermal fibroblasts. //Exp. Dermatol. 2009. –V. 18. p .969–978.
Aloe vera
Adiantum capillus-veneris
34. Samira Negahdari, Hamid Galehdari,Mahnaz Kesmati,1Anahita Rezaie,2 and Gholamreza Shariati. Wound Healing Activity of Extracts and Formulations of , Henna, , and Myrrh on Mouse Dermal Fibroblast Cells // Int J Prev Med. 2017; 8: 18. doi: 10.4103/ijpvm.IJPVM_338_16
35. Julian J. Blitz, D.O.; James W. Smith, D.O. & Jack R. Gerard, D.O. Aloe Vera Gel In Peptic Ulcer Therapy: Preliminary Report // Journal A.O.A., Vol 62, April 1963
.
36. G.I. Eze, E. AideyanMorphological presentation of the ameliorative effects of Bryophyllum pinnatum on alcohol-induced gastric injury in adult Wistar rats // Journal of Medicine and Biomedical Research. - 2020. -V. 19. N. 1. Р. 50-62. Morphological presentation of the ameliorative effects of Bryophyllum pinnatum on alcohol-induced gastric injury in adult Wistar rats | Journal of Medicine and Biomedical Research (ajol.info)
37. Mule V. S. *, Manjarekar T. N., Mohite M. S., Gawade C. S., Kakade S. V., Sawant S. S., Jagtap V. A MEDICINAL PLANTS WITH GASTROPROTECTIVE ACTIVITY FOR TREATMENT OF PEPTIC ULCER DISEASE // Indian Journal of Pharmaceutical Science & Research. V. 10. Is. 2. – 2020. P. 40-46. ijpsrjournal 40-46 review.pdf (sybespharmacy.com)
38. Sobreira F, Santoro Hernandes L., Vetore-Neto A. Gastroprotective activity of the hydroethanolic extract and ethyl acetate fraction from Kalanchoe pinnata (Lam.). Pers. J. Pharm. Sci. 2017: 53. https://doi.org/10.1590/s2175-97902017000116027
39. Srihari, T., Balasubramaniyan, V., & Nalini, N. (2008). Role of oregano on bacterial enzymes in 1,2-dimethylhydrazine-induced experimental colon carcinogenesis. Canadian Journal of Physiology and Pharmacology, 86(10), 667–674. doi:10.1139/y08-071
Hippophae rhamnoides
vis-a-vis
40. Richa Dogra,1 S. P. Tyagi,1 and Amit Kumar Efficacy of Seabuckthorn () Oil  Other Standard Drugs for Management of Gastric Ulceration and Erosions in Dogs //Veterinary Medicine International Volume2013  https://doi.org/10.1155/2013/176848
41. Milindmitra K. Lonare SEABUCKTHORN-A PANACEA FOR ANIMAL HEALTH AND PRODUCTION. Department of Pharmacology and Toxicology College of Veterinary and Animal Science, India Seabuckthorn- a panacea for animal health and production (hillagric.ac.in)
42. Громыко Е.В. Оценка состояния организма коров методами биохимии // Экологический вестник Северного Кавказа, 2005, № 2, 80-94 с. ОЦЕНКА СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА КОРОВ МЕТОДАМИ БИОХИМИИ (my1.ru)
43. Красочко П.А., Якубовский М.В., Ятусевич А.И. Болезни сельскохозяйственных животных. / Минск: Бизнесофсет, 2005. – 1388 с.
44. Оробец В.А., Беляев В.А., Киреев И.В. Болезни системы крови животных. / Ставрополь, 2012. - 31 с.