Генетические маркеры патогенности условно-патогенных энтеробактерий в оценке их этиологической значимости при острых кишечных инфекциях у детей

2012, Т. 2, № 1-2

Современное лабораторное обеспечение.

личения количества больных на поздних стадиях ВИЧ-инфекции, при которых ТБ развивается как вторичное заболевание, быстрое определение резистентности к противотуберкулезным препаратам (ПТП) влияет на положительный исход заболевания. Золотым стандартом среди быстрых тестов является метод прямого секвенирования.

Целью нашей работы явилось сравнение определения чувствительности МБТ к основному ПТП рифампицину с помощью культурального метода и секвенирования.

Материалом для исследования явилось 135 образцов мокроты от 128 больных легочным туберкулезом, у которых традиционными микробиологическими методами было определено бактериовыделение. При исследовании методом секвенирования с помощью набора реагентов «АмплиСенс МТС-Rif-seq» (производства ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) 33 образцов от 32 впервые выявленных больных ТБ без ВИЧ-коинфекции, в 37,5% случаев была выявлена устойчивость к рифампицину. В то время как при тестировании 12 образцов у аналогичной группы из 11 больных ВИЧ/ТБ, она была обнаружена в 45,5% случаев. Исследование 77 образцов мокроты у 72 больных хроническим ТБ, выявило наличие резистентного ТБ у 80,6% больных без ВИЧ-инфекции и у 84,6% из 13 больных на поздних стадиях ВИЧ-инфекции.

Метод секвенирования позволяет не только подтвердить наличие резистентности, но и определяет все возможные виды мутационных изменений в rpoB-гене. Кроме того, он позволяет выявить одновременное присутствие смеси штаммов МБТ в организме одного пациента. Среди всех проанализированных нами образцов в 99 были обнаружены мутации, при этом 8 образцов представляли собой смеси штаммов. Из 13 обнаруженных вариантов мутаций наиболее частой явилась 531 Leu, встретившаяся в нашей выборке в 69,4% случаев.

Время, требуемое для определения чувствительности МБТ методом секвенирования, составило 2— 4 дня, тогда как получение результатов с помощью культурального метода — 58,2+15,6 дней.

Таком образом, метод секвенирования позволяет в кратчайшие сроки получить более информативные, по сравнению с культуральным методом, данные о резистентности МБТ, необходимые для корректного лечения больных ТБ на фоне его распространения, в том числе у больных на поздних стадиях ВИЧ-инфекции.

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ПАТОГЕННОСТИ УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ В ОЦЕНКЕ ИХ ЭТИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗНАЧИМОСТИ ПРИ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ У ДЕТЕЙ

Е.В. Анганова12, Е.Д. Савилов12, А.В. Духанина1, Н.Н. Чемезова1, Л.А. Распопина3

1ФГБУ «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» СО РАМН, г. Иркутск; 2ГБОУДПО «Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования», г. Иркутск; ЮГБУЗ «Иркутская областная инфекционная клиническая больница», г. Иркутск

Факт выделения условно-патогенных энтеро-бактерий (УПЭ) при острых кишечных инфекциях (ОКИ), как и их количественная оценка не всегда

определяют способность изолята вызывать заболевание (Бондаренко В.М., 2011). Для выявления этиологической значимости энтеробактерий при ОКИ необходимо заключение об их патогенном потенциале на молекулярно-генетическом уровне.

Клинические штаммы УПЭ (представители родов Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Kluyvera, Morganella, Pantoea, Serratia и Providencia), выделенные от детей с ОКИ, находящихся на лечении в Иркутской областной инфекционной клинической больнице, протестированы на наличие следующих генетических маркеров патогенности: sfaA, sfaG гены, ответственные за адгезию S типа, fimA ген — адгезия 1 типа, hlyA, hlyB — продукция гемолизинов, irp-2 — синтез железорегулируемо-го белка. Выявлена генотипическая гетерогенность энтеробактерий по оцениваемым признакам. Нуклеотидные последовательности генов, кодирующих указанные факторы патогенности, обнаружены у 23,4% штаммов. Наибольшая частота обнаружения была характерна для hlyA и hlyB генов (9,7% от всех протестированных штаммов и 60,9% от штаммов с наличием нуклеотидных последовательностей искомых генов). Среди генов, ассоциированных с адгезией, чаще обнаруживались маркеры sfaA и sfaG, а частота встречаемости генетических детерминант адгезинов 1 типа (fimA) оказалась значимо ниже (p < 0,05). Наибольшую долю среди штаммов с наличием генетических детерминант патогенности составили Klebsiella spp. и Citrobacter spp. (39,0 и 24,4% соответственно). Самый широкий набор маркеров патогенности отмечен у штаммов Klebsiella spp. (sfaA, sfaG, fimA, hlyB, hlyB, irp-2). Выявлена связь между наличием генетических детерминант патогенности у выделенных от больных детей штаммов энтеробак-терий и клиническими проявлениями вызываемых ими инфекций (продолжительность и уровень лихорадки, а также длительность диареи). Полученные данные свидетельствуют о целесообразности определения генетических маркеров патогенности условно-патогенных энтеробактерий для выявления их этиологической значимости.

РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСА ПЦР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИБИОТИКОУСТОЙЧИВЫХ ШТАММОВ YERSINIA PESTIS И ESCHERICHIA COLI

Л.В. Анисимова, К.А. Никифоров, Г.Н. Одиноков, Г.А. Ерошенко, В.В. Кутырев

ФКУЗ Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», г. Саратов

Штаммы, циркулирующие в природных очагах чумы, как правило, чувствительны к действию различных антибиотиков, однако, в 1995 г. на о. Мадагаскар от больного чумой был выделен штамм Yersinia pestis c множественной лекарственной устойчивостью к стрептомицину, хлорамфениколу, тетрациклину, канамицину, ампициллину, спекти-номицину, сульфониламидам. Изучение резистентного штамма Y. pestis показало, что гены устойчивости к антибиотикам расположены на конъюгативной плазмиде pIP1202, которая могла с высокой частотой передаваться другим штаммам возбудителя чумы. В течение трех последующих лет на этой же территории было изолировано еще несколько антибио-тикоустойчивых штаммов Y. pestis. В 2002—2005 гг. у штаммов салмонелл и у других энтеробактериаль-