СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ КАЛИЦИВИРОЗА КОШЕК
METHOD OF TREATING FELINE CALICIVIRUS

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способам лечения калицивироза кошек.
Известен способ лечения калицивироза кошек, включающий применение противовирусного препарата рибавирин (Povey R.C. Effect of orally administered ribavirin on experimental feline calicivirus infection in cats / R.C.Povey // Am. J. Vet. Res. - 1978. - Vol.39. - P.1337-1341). Способ лечения калицивироза кошек предполагает пероральное введение рибавирина в дозе 75 мг/кг массы животного, в 3 приема в сутки, в течение 10 дней.
Рибавирин - противовирусный препарат, синтетический аналог нуклеозидов, механизм действия которых заключается в ингибировании дегидрогеназы аденозинмонофосфата, что приводит к торможению синтеза вирусных РНК и ДНК. При этом рибавирин селективно ингибирует синтез вирусной РНК, не подавляя синтез РНК в нормально функционирующих клетках. Рибавирин легко проникает в пораженные клетки и быстро фосфорилируется внутриклеточной аденозинкиназой в рибавирин моно-, ди- и трифосфат. Эти метаболиты, особенно рибавирина трифосфат, обладают выраженной противовирусной активностью. Рибавирин ингибирует репликацию новых вирионов, что обеспечивает снижение вирусной нагрузки. Установлено, что препараты рибавирина эффективны в отношении многих ДНК и РНК вирусов, не чувствительных к другим антивирусным препаратам, в том числе и в отношении вируса калицивироза кошек.
Однако исследования по противовирусной активности рибавирина в отношении калицивироза кошек были проведены на незначительном количестве экспериментально инфицированных животных, что не дает достоверных данных о дозе и сроках его применения, способствующих выздоровлению кошек, естественно инфицированных этим вирусом. Доза в предлагаемом способе достаточно высокая, вызывает явления токсикоза, сопровождающиеся снижением количества эритроцитов и лейкоцитов, повышением активности аланинаминотрансфераз (АЛТ), появлением желтухи, снижением массы тела.
Несмотря на высокую активность рибавирина против многих вирусов, препарат не нашел применения в ветеринарной практике из-за выраженной токсичности.
Наиболее приемлемым, с точки зрения описанных недостатков, и принятым за прототип является способ лечения гепатита С человека при помощи препарата рибавирин-Липинт.
Рибавирин-Липинт - новый препарат липосомального рибавирина, использующий механизм адресной доставки вещества. Рибавирин-Липинт обладает меньшей токсичностью и более высокой терапевтической эффективностью, чем существующие препараты рибавирина.
Этот препарат прошел клинические испытания и рекомендован для лечения гепатита С у людей. Доза препарата рибавирин-Липинт в данном способе лечения составляет 1000 мг в сутки (1 флакон утром и 1 флакон вечером).
Данных о применении препарата рибавирин-Липинт при калицивирозе кошек нет.
Задача - расширение арсенала способов лечения калицивироза кошек.
Поставленная техническая задача решается тем, что в известном способе лечения калицивироза кошек, включающем пероральное введение рибавирина-Липинт, согласно изобретению кошкам выпаивают рибавирин-Липинт в дозе 20-25 мг/кг массы тела 1 раз в день, перед приемом корма, в течение 10 дней.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
Определение противовирусной активности препарата рибавирин-Липинт в отношении вируса калицивироза кошек в условиях in vitro
2
В опытах использовали вирус калицивироза кошек (штамм «Ларс-30ДЕП). Инфекционную активность вируса определяли в чувствительной перевиваемой линии культур клеток почки котенка (F-81). Культивирование и заражение клеток вирусом калицивироза кошек проводили на перевиваемой линии культуры клеток F-81 (почка котенка) во флаконах для клеточных культур (Nunc, Дания) до появления 100% цитопатогенного действия. Клетки выращивали в среде Игла MEM с двойным набором аминокислот и витаминов (производство ФГУП «Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов НИИ полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН») с добавлением 5-10% эмбриональной сыворотки крови теленка (HyClone, lot №ASA28574), 0,06% L-глутамина и 100 мкг/мл канамицина. Клетки культивировали при 37°C и 5% CO. В качестве поддерживающей среды использовали ту же среду без сыворотки.
Определение токсичности и противовирусной активности препарата проводили в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Р.У.Хабриев, ОАО «Издательство Медицина», 2005. - 832 с.).
ЦД50/0,1 мл
Определение инфекционной активности вируса калицивироза кошек проводили микрометодом в 96-луночных культуральных планшетах (Costar) с культурой клеток F-81 с использованием не менее четырех параллельных рядов. Инфекционный титр вируса выражали в Т (50%-ная тканевая цитопатическая доза).
Определение противовирусной активности препарата in vitro. Монослой используемой культуры клеток заражали вирусом калицивироза кошек в дозе не менее 1 ТЦД/кл, через 1,5 часа после этого его отмывали питательной средой без сыворотки и вносили препарат в 50%-ной ингибирующей дозе (опыт) или разводящую среду (контроль). Через 72 часа культивирования вируса в такой биосистеме культуральную жидкость титровали. Противовирусный эффект препарата рассчитывали по соотношениям инфекционных активностей вируса в опытных и контрольных образцах. В каждом опыте проводили дополнительный контроль на токсичность испытуемой дозы препарата (табл.1).
Таблица 1
Название препарата
Использованная доза препарата
Концентрация вируса калицивироза кошек (M±m), lg ТЦД<sub>50/0,1 мл</sub>
Опыт
Контроль
«Рибавирин-Липинт»
50 мкг/мл
3,17±0,14
7,5±0,24
50/0,1 мл.
В результате проведенных исследований установили, что исследованный препарат оказывает противовирусное действие на вирус калицивироза кошек. Снижение инфекционной активности вируса составило 4,33 lg ТЦД
Пример 2.
Определение эффективной дозы препарата рибавирин-Липинт для лечения калицивироза кошек.
Для определения эффективной дозы препарата рибавирин-Липинт в очаге калицивироза были сформированы опытные (3) группы кошек по принципу аналогов по 6 животных в каждой. У них отмечали: повышение температуры тела от 39,5 до 41,5°C, чихание, кашель, серозно-катаральные истечения из глаз и носа, отказ от еды, наличие эрозий на слизистой носа, ротовой полости и языка. У всех животных клинически и по результатам вирусологических исследований установлена острая респираторная форма калицивироза, обусловленная наличием вируса (Feline calicivirus virus) FCV.
В работе использовали коммерческий препарат рибавирин-Липинт, разработанный ГНЦ ВБ «Вектор». Препарат выпаивали животным перед кормлением в соответствующих дозах: 1-я группа - 20-25 мг/кг, 2-я - 30-35 и 3-я - 40-45 мг/кг массы тела животного, один раза в день в течение 10 дней.
За животными вели клинические наблюдения, биохимические исследования крови, ежедневный отбор проб биоматериала для проведения вирусологических исследований.
Клинические симптомы калицивироза регистрировали ежедневно перед проведением лечения и прослеживали в течение всего периода наблюдения.
Критерием эффективности терапии являлась длительность проявления клинических признаков и сроки выявления вируса в носовых, конъюнктивальных секретах и выделениях со слизистой ротовой полости. Одним из основных показателей клинического выздоровления являлось снижение температуры тела, восстановление аппетита, отсутствие истечений из носа и глаз, кашля и чихания, эрозий в ротовой полости. Вирусологическое выздоровление определяли на основании результатов вирусологических исследований проб биоматериала, отобранных от животных.
Результаты изучения лечебной эффективности рибавирина-Липинт представлены в табл.2.
В опытной группе 1 у животных длительность проявления клинических признаков составила 7-9 (7,83±0,78) дней, а сроки выявления вируса в пробах биоматериала - 5-8 (6,83±0,39) дней.
Оптимальные результаты лечения калицивироза кошек получали при использовании рибавирина-Липинт в дозе 20-25 мг/кг (опытная группа 1).
Таблица 2
Группа животных(n=6)
Доза препарата (мг/кг массы тела)
Длительность проявления клинических признаков, дней (М±m)
Сроки выявления вируса в пробах биоматериала, дней (М±m)
Опытная 1
20-25
7,83±0,78
6,83±0,39
Опытная 2
30-35
7,67±0,81
6,67±0,45
Опытная 3
40-45
9,33±0,81
6,33±0,38
Увеличение дозы препарата до 30-35 мг/кг и 40-45 мг/кг не привело к значительным сокращениям длительности проявления клинических признаков у животных и сроков выявления вируса в пробах биоматериала у животных опытных групп 2 и 3 в сравнении с животными опытной группы 1.
Ценную информацию о функциональном состоянии печени дает определение в сыворотке крови активности ферментов печеночного происхождения - трансаминаз и щелочной фосфатазы. Трансаминазы - аланинаминотрансфераза (Алт) и аспартат аминотрансфераза (АсТ) - ферменты, катализирующие перенос аминогруппы с аминокислот на кетокислоты. Выход трансфераз из гепатоцитов и повышение их активности в крови является маркером начальных стадий цитолитического синдрома. Рост активности щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови свидетельствует о синдроме холестаза при поражениях гепатобилиарной системы.
Результаты изучения влияния рибавирина-Липинт на активность ферментов сыворотки крови опытных животных представлены в табл.3.
Контроль динамики изменений биохимических показателей функционального состояния печени позволил заключить, что в выбранной дозировке (20-25 мг/кг) рибавирин-Липинт не оказывает токсического действия на гепатобилиарную систему животных (табл.3), дает оптимальные результаты лечения калицивироза кошек.
Таблица 3
Показатели
Через 10 дней после применения препарата рибавирин-Липинт
Перед применениям препарата рибавирин-Липинт
20-25 мг/кг
30-35 мг/кг
40-45 мг/кг
(n=6)
(n=6)
(n=6)
(n=6)
Алт, Ед/л
40,2±0,6
50,9±2,1
63,8±0,9
39,1±0,3
АсТ, Ед/л
41,2±0,3
55,0±0,5
63,6±0,8
40,9±0,7
ЩФ, Ед/л
108,8±0,9
115,9±1,2
122,3±1,1
109,6±0,8
Увеличение дозы препарата до 30-35 мг/кг и 40-45 мг/кг сопровождалось увеличением показателей Алт, АсТ и ЩФ.
Пример 3.
Для подтверждения оптимальных сроков лечения калицивироза кошек препаратом рибавирин-Липинт в дозе 20-25 мг/кг проведен производственный опыт на 32 кошках. Результаты представлены в табл.4.
Результаты вирусологических исследований были отрицательными у 84,4% животных на 5-й день лечения. Эффективность лечения к 14-му дню составила 100%.
Таблица 4
Критерии эффективности лечения
Срок наблюдения, дней
5
7
14
Количество животных без проявления клинических
28
30
32
признаков калицивироза, голов
% к общему количеству животных
87,5
93,75
100
Количество животных с отрицательными результатами вирусологических исследований носовых секретов
27
29
32
% к общему количеству животных
84,4
90,6
100
Таким образом, предложенный способ лечения калицивироза кошек значительно сокращает сроки выздоровления животных и позволяет применять оптимальную дозу препарата, которая не ухудшает общего состояния организма и имеет перспективу в терапии калицивироза кошек.