Изучение фенольных соединений гомеопатической матричной настойки Asarum еигораеит

6. Биологически активные вещества растительного происхождения / Б.Н. Головкин, Р.Н. Руденская, И.А. Трофимова, А.И. Шретер. - М., 2001. -Т.1. - 350 с.

7. Соколов М.Я., Замотаев М.В. Справочник по лекарственным растениям (фитотерапия). - М., 1988. - 464 с.

8. Суслила З.А., Варакин Ю.Я., Верещагин Н.В. Сосудистые заболевания головного мозга: эпидемиология. Основы профилактики. - М., 2006. - 256 с.

9. Шурыгин А.Я., Асеева Т.А., Скороход Н.С. Влияние на нейритный рост спинальных ганглиев эмбрионов цыплят этанольного экстракта вздутоплодника сибирского Plojodicarpus sibiricus II Успехи современного естествознания. 2005. -№10. - С.90.

10. Hoult J.R.S., Рауа М. Pharmacological and biochemical actions of simple coumarins: Natural products with therapeutical potential // General Pharmacology: the Vascular System. 1996. - V.27. - P.713-722.

11. Chronic cerebral hypoperfusion by permanent internal carotid ligation produces learning impairment without brain damage in rats/H. Ohtaatal. //Neuroscience. - 1997. - Vol. 79. -№4. - P. 1039-1050.

12. Ingibition of human platelet aggregation by digidropyrano- and digidrofuranocoumarins, a new class of lamp-phosphodiesterase ingibitors / O. Thastrup, J. B. Knudsen, J. Temmich, K. Winther // Biochemiid.- 1985,- Vol. 34, № 12. - P. 2137-2140.

13. Chronic cerebral hypoperfusion induced by right unilateral common carotid artery occlusion causes delayed white matter lesions and cognitive impairment in adult mice / K. Yoshizaki, K. Adachi, S. Kataoka, A. Watanabe // Experimental Neurology. -2010.-№210.-P.585-591.

Гуляев Сергей Миронович, старший научный сотрудник лаборатории экспериментальной фармакологии ИОЭБ СО РАН. Тел. (3012) 433713. E-mail: s-gulvaev@inbox.ru

Николаев Сергей Матвеевич, доктор медицинских наук, профессор, заведующий отделом биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН. Тел. (3012) 433713.

Урбанова Екатерина Зориктуевна, аспирант Института общей и экспериментальной фармакологии СО РАН, г. Улан-Удэ. Тел. (3012)433713.

Тараскин Василий Владимирович, инженер-хроматографист лаборатории химии природных систем. Бурятский государственный университет. Тел. (3012)433713.

Туртуева Татьяна Владимировна, аспирант Института общей и экспериментальной фармакологии СО РАН, г. Улан-Удэ. Тел. (3012)433713.

Gulyaev Sergey Mironovich, senior researcher, laboratory of experimental pharmacology, Institute of General and Experiman-tal Biology SB RAS, ph.: (3012)43-37-13, e-mail: s-gulvaev@inbox.ru

Nikolaev Sergey Matveevich, doctor of medical sciences, professor, head of the department of biologically active substances, Institute of General and Experimental Biology SB RAS, ph.: (3012)43-37-13.

Urbanova Ekaterina Zoriktuevna, postgraduate student, Institute of General and Experimantal Biology SB RAS.

Taraskin Vasily Vladimirovich, engineer-chromatographer, laboratory of chemistry of natural systems, Buryate State University.

Turtueva Tatyana Vladimirovna, postgraduate student, Institute of General and Experimantal Biology SB RAS.

УДК 615.322:547.56

)H.H. Щурееич, Т.Д. Даргаева, A.A. Маркарян, Н.С. Терёшина,

Т.А. Сокольская, Я.Ф.Копытъко

Изучение фенольных соединений гомеопатической матричной настойки Лзягит еигораеит

Методом ВЭЖХ проведен качественный и количественный анализ фенольных соединений гомеопатической матричной настойки Авагит еигораеит. Найдено 21 вещество, 14 веществ идентифицировано. Среди них: фенолкарбоновые кислоты (хлорогеновая, кофейная, галловая, феруловая, цикориевая, коричная), флавоноиды (лютеолин-7-гликозид, лютеолин, кемпферол, кверцетин, рутин), дубильные вещества (танин, эпигаллокатехингаллат, эпикатехин).

Ключевые слова: Авагит еигораеит, матричная настойка, фенольные соединения, ВЭЖХ, спектрофотометрия.

N.N. Shchurevich, T.D. Dargaeva, A.A. Markaryan, NS. Teryoshina, T.A. Sokolskaya, Ya.F. Kopytko

A study of phenolic compounds of Asarum europaeum homoeopathic matrix tincture

A qualitative and quantitative analysis of phenolic compounds of Asarum europaeum homoeopathic mother tincture has been made by HPLC method. 21 compounds are determined, 14 compounds are identified. Among them there are phenolcarbonic acids (chlorogenic, caffeic, gallic, ferulic, chicory, cinnamic acids), flavonoids (luteolin-7-glycoside, luteolin, kaempferol, quercetin, rutin), tanning substances (tannin, epigallocatechingallat, epicatechin).

Keywords: Asarum europaeum, matrix tincture, phenolic compounds HPLC, spectrophotometry.

Поиск эффективных лекарственных средств из растительного сырья и совершенствование методов стандартизации является актуальной задачей фармацевтической науки. В последние годы большое внимание уделяется физикохимическим и фармакологическим исследованиям тех лекарственных растений, которые применяются как в официнальной, так и в народной медицине. Одним из таких растений является копытень европейский (Аяагит еигораеит Ь.) семейства Кирказоновые (АпяЫосЫасеае), который в настоящее время используется в гомеопатии и народной медицине [1; 2]. По научным данным, в сырье копытня содержатся биологически активные вещества различных классов: эфирное масло, фенольные соединения, органические кислоты, витамины и др. [3-6].

Цель исследования: изучение фенольных соединений настойки гомеопатической матричной (НГМ) А ваги т еигораеит.

Материалы и методы

Сырьем для получения НГМ служило свежесобранное и высушенное сырье копытня европейского (Аяагит еигораеит Ь ), заготовленное в 2009-2010 гг. в ботаническом саду ГНУ ВИ-ЛАР.

Изготовление настоек из свежего и высушенного лекарственного растительного сырья (ЛРС) (корневища с корнями и листья) копытня европейского производят в соответствии с методами 3 и 4 ОФС 42-0027-05 «Настойки гомеопатические матричные».

Свежее сырье измельчают и прибавляют половинное количество по массе 86%-ного спирта. Количество спирта в килограммах, необходимое для приготовления настойки вычисляют по формуле:

^ _ 2-М-Б 100

где М - масса растительного материала, кг;

Б - потеря в массе при высушивании,%.

Рассчитанное количество спирта прибавляют к смеси и мацерируют не менее 8-ми суток при

ежедневном перемешивании. Затем массу отжимают, жидкость помещают в плотно закрывающийся сосуд для отстаивания в течение 8-ми суток, после чего фильтруют.

Настойки из высушенного лекарственного растительного сырья изготовляют методом мацерации. Одну часть измельченного и высушенного сырья копытня европейского заливают 10 частями 62%-ным по массе (70%-ным по объему) спиртом и мацерируют не менее 8-ми суток при ежедневном перемешивании. Затем жидкость сливают, массу отжимают под прессом, обе жидкости сливают вместе и оставляют в плотно закрытой таре для отстаивания не менее чем на 8 суток, затем фильтруют.

Анализ фенольных соединений проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе (ВЭЖХ) фирмы «GILSON» (Франция) с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы «Мульти-Хром» для «Windows». Для разделения компонентов была использована колонка размером 4,6 х 250 мм Kromasil С 18, размер частиц 5 мкм. В качестве подвижной фазы - система растворителей метанол-вода-фосфорная кислота концентрированная, в соотношении 400:600:5. Скорость подачи элюента 0,8 мл/мин. Объем вводимой пробы 50 мкл. Продолжительность анализа 60 мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора “GILSON” UV/VIS модель 151, при длине волны 254 нм.

В качестве свидетелей использовали 0,1% растворы рутина, гиперозида, лютеолина, люте-олин-7-гликозида, галловой, хлорогеновой, кофейной кислот в спирте метиловом.

Результаты исследования и обсуждение

Оценка хроматограммы проводилась по времени удерживания и площади пика в автоматическом режиме.

Проведено изучение состава фенольных соединений НГМ из свежего и высушенного сырья (рис. 1, 2). В сырье копытня европейского определено 21 вещество, из них идентифицировано 14. Методом внутренней нормализации опреде-

лено содержание веществ, при этом превалирующим соединением является хлорогеновая кислота (около 19,25%) (табл. 1). Найдены также галловая кислота, эпикатехин, эпигаллокатехин-галлат, флавоноиды и фенолкарбоновые кисло-

ты. Состав фенольных веществ НГМ близок к таковому ЛРС. Различий в составе НГМ в зависимости от состояния используемого ЛРС (свежее или высушенное) не выявлено.

Рис. 1. Хроматограмма ВЭЖХ НГМ

Рис. 2. Хроматограмма ВЭЖХ НГМ

Таблица 1

Результаты исследования фенольных соединений в корневищах копытня европейского методом ВЭЖХ

№ Соединение РСО Время удерживания, мин Содержание в пересчете на абс. сух. сырье % в ЛРС копытня европейского

Свежее Высушенное

1 Неидентифицированное 3,056 1,62 1,70

2 Неидентифицированное 3,398 3,62 3,59

3 Танин медицинский 3,745 10,62 10,64

4 Г алловая кислота 3,852 15,14 15,11

5 Хлорогеновая кислота 3,987 19,17 19,20

6 Эпигаллокатехингаллат 4,781 18,36 18,38

7 Цикориевая кислота 6,615 13,22 13,25

8 Неидентифицированное 7,51 3,77 3,75

9 Кофейная кислота 8,006 0,45 0,42

10 Неидентифицированное 9,165 0,21 0,21

11 Неидентифицированное 10,72 1,39 1.39

12 Феруловая кислота 11,78 0,09 0,09

13 Эпикатехин 12,69 0,05 0,04

14 Рутин 16,86 0,11 0,09

15 Лютеолин 19,42 0,11 0,10

16 Лютеолин-7-гликозид 22,38 0,92 0,90

17 Коричная кислота 26,66 0,23 0,21

18 Неидентифицированное 28,11 1,91 1,92

19 Кверцетин 32,73 4,20 4,21

20 Кемпферол 55,85 2,41 2.40

21 Неидентифицированное 58,23 2,40 2.41

60 100,00 100,00

Количественное определение суммы флаво-ноидов проводили спектрофотометрическим методом с использованием реакции комплексо-образования с алюминием хлорида. Установлено, что УФ-спектры комплексов флавоноидов НГМ и стандартного образца ГСО рутина с А1С1з имеют совпадающие максимумы при длине волны 415 нм.

Методика. Содержание суммы флавоноидов определяют в пересчете на рутин, используя ГСО рутина в 95%-ном спирте. Для этого около

0,05 г (точная навеска) ГСО рутина (ФС 42-2508-87) растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в 50 мл спирта и доводят тем же спиртом до метки, перемешивают (стандартный раствор).

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл испытуемого раствора, прибавляют 2 мл 2%-ного раствора алюминия хлорида в 95%-ном спирте и доводят объем тем же спиртом до метки, перемешивают и через 40 мин измеряют оптическую плотность раствора на саморегистрирующем спектрофотометре «Гелиос» при длине волны 415 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют следующий раствор: в

мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл испытуемого раствора, 0,1 мл разведенной уксусной кислоты и доводят 95%-ным спиртом до метки (раствор должен быть свежеприготовленным).

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора ГСО рутина, приготовленного следующим образом: 1 мл

стандартного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 2%-ного раствора алюминия хлорида в 95%-ном спирте и доводят объем тем же спиртом до метки.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в процентах (X) вычисляют по формуле: х_Б-то-1-25-100 Б0 -1-100-25

где Б - оптическая плотность испытуемого раствора;

т0 - навеска РСО рутина;

Ц - оптическая плотность стандартного раствора рутина.

Содержание флавоноидов в пересчете на рутин в исследуемых НГМ из копытня составляет около 0,09% (свежее сырье) и 0,08% (высушенное сырье).

Методика. 1 мл НГМ помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, доводят до метки 70%-ным спиртом (испытуемый раствор) и измеряют оптическую плотность в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 269 нм. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора РСО хлорогеновой кислоты.

Содержание суммы фенолкарбоновых кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту рассчитывают по формуле:

_ £>-от-2-250-100 ' ^со -100 -100-1

где Б - оптическая плотность испытуемого раствора;

БрСо - оптическая плотность раствора РСО хлорогеновой кислоты;

т - навеска РСО хлорогеновой кислоты, г.

Содержание суммы фенолкарбоновых кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту в НГМ копытня европейского составляет около 0,62% (свежее сырье) и 0,54% (высушенное сырье).

Выводы

1. Изучен качественный состав веществ фенольного характера методом ВЭЖХ, при этом установлено присутствие 21 вещества, из которых идентифицировано 14. Доминирующим компонентом является хлорогеновая кислота.

2. Оценено содержание флавоноидов НГМ из высушенного (0,085%) и свежего (0,09%) сырья методом спектрофотометрии в пересчете на рутин.

3. Установлено содержание суммы веществ фенольного характера в пересчете на хлорогеновую кислоту в НГМ из высушенного и свежего сырья составляют соответственно 0,54% и 0,62% методом спектрофотометрии.

Литература

1. Берике В. Materia medica гомеопатических препаратов. - М.: Гомеопатическая медицина, 1998. - 677 с.

2. Палов М. Энциклопедия лекарственных растений: пер. с нем.; под ред. И.А. Губанова. - М.: Мир, 1998. - С. 157-158.

3. Jork Н., Schixtt P. Influence of nutrition supply on the morphology and composition of the volatile oil in Asarum europaeum. // Planta Med. - 1972. - Vol. 21. - N. 1. - P.72-80.

4. Rz^dkowska-Bodalska H., Bieganowska M. L., Cisowski W. Analiza chromatograficzna frakcji flawonoidowej z ziela і kor-zeni kopytnika (Asarum europaeum L.) // Herba Polonica. - 1987. - T 33, №3. - C. 167-173.

5. Saiki Y., Akahori Y., Noro T. Gas-chromatographical studies on natural volatile oils. II. The gas-chromatography on the volatile oils ofthe plants belonging to Asiasarum and Asarum genera //YakugakuZasshi. - 1967. - Vol. 87,N.12. - P.1529-1534.

6. Wierzchowska-Renke K., Tokarz H., Skorkowska M. Studies of Asarum europaeum L. II. Preliminary studies of the content of volatile oil and L-ascorbic acid in Herba Asari cum radicibus obtained at the Gdansk coastal region. // Acta Pol Pharm. - 1970. -Vol.27,N.I. -P.63-69.

Щуревич Наталья Николаевна, аспирант. Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова. Тел. 8 (499) 7442350. E-mail: nata-li.nnn@rnail.ru

Даргаева Тамара Дарижаповна, доктор фармацевтических наук, профессор, главный научный сотрудник. Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова. Тел. 8 (495) 1285800. E-mail: dvnslava@rambler.ru Маркарян Артем Александрович, доктор фармацевтических наук, профессор, зав. кафедрой. Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова. Тел. 8 (495) 6562585. E-mail: markarvan@mmascience.ru

Терёшина Наталья Сергеевна, доктор фармацевтических наук, зав. лабораторией. Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова. Тел. 8 (499) 128-58-00. E-mail: tervoshinan@mail.ru

Сокольская Татьяна Александровна, доктор фармацевтических наук, профессор, зам. директора Всероссийского на-учно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН. Тел. 8 (495) 3888133. E-mail: vilamii@mail.ru

Копытько Янина Федоровна, кандидат фармацевтических наук, ведущий научный сотрудник Всероссийского научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН. Тел.: 8 (495) 7120981.

E-mail: vanina@kopvtko ,ru

Shchurevich Natalya Nikolaevna, postgraduate student, I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, ph. 8 (499) 7442350, E-mail: nata-li.nnn@mail.ru

Dargaeva Tamara Darizhapovna, doctor of pharmaceutical sciences, professor, chief researcher, I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, ph. 8 (499) 1285800. E-mail: dvnslava@rambler.ru

Markaryan Artyom Alexandrovich, doctor of pharmaceutical sciences, professor, head of the department, I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, ph. 8 (495) 6562585. E-mail: markarvan@mmascience.ru

Teryoshina Natalya Sergeevna, doctor of pharmaceutical sciences, head of laboratory, I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, ph. 8 (499) 1285800. E-mail: teryoshinan@mail.ru

Sokolskaya Tatyana Aleksandrovna, doctor of pharmaceutical sciences, professor, deputy of director of the All-Russian Scientific Research Institute of Medicinal and Aromatic Plants RAAS. ph. 8 (495) 3888133, E-mail: vilamii@mail.ru

Kopytko Yanina Fyodorovna, candidate of pharmaceutical sciences, leading researcher, the All-Russian Scientific Research Institute of Medicinal and Aromatic Plants RAAS. ph. 8 (495) 7120981. E-mail: vanina@kopytko,m