СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СЕКОИЗОЛАРИЦИРЕЗИНОЛА И ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА ИЗ ДРЕВЕСИНЫ (ВАРИАНТЫ)
METHOD OF ALLOCATION OF SECOISOLARICIRESINOL AND DIHYDROQUERTICIN FROM WOOD (VERSIONS)

Область техники.
Настоящее изобретение относится к области высокотехнологичной лесохимической переработки древесины.
В изобретении предложен способ выделения ценных физиологически активных соединений, лигнанов и флавоноидов, из древесины деревьев.
Уровень техники.
Лигнаны и флавоноиды относятся к классу фенольных соединений, содержащихся в различных частях растений, например в древесине хвойных пород деревьев. Содержащие производные лигнанов и флавоноидов химические экстракты и изготавливаемые на их основе препараты находят широкое применение в медицине и косметике, пищевой промышленности, в качестве агрохимических препаратов при производстве растениеводческой продукции, а также в других областях.
Одним из представляющих интерес соединений, относящихся к лигнанам, является секоизоларицирезинол (СЕКО). В качестве представителя класса флавоноидов в способе по данному изобретению получают дигидрокверцетин (ДГК), для обозначения которого в литературе часто используют синоним - таксифолин.
ДГК достаточно широко изучался в исследовательских лабораториях для выяснения областей его практического использования. В России ДГК наиболее широко применяется в составе целого ряда биологически активных препаратов (например, препараты «Капилар», «Флукол» и др.) и некоторых продуктов питания, что связано с высокими антиоксидантными, гепатопротекторными, иммуностимулирующими и другими практически полезными свойствами этого соединения. Так, на основе ДГК, выделяемого из опилок лиственницы сибирской и даурской, создан регулятор роста и развитии сельскохозяйственных культур, коммерциализация которого проводится под коммерческим обозначением «Лариксин» (патент РФ №2229213; патент РФ №2256328).
СЕКО также представляет собой весьма перспективный препарат для практического использования, особенно для производства лекарственных и биологически активных препаратов, а также функциональных продуктов питания благодаря антиоксидантным, противовоспалительным, фитоэстрагенным и другим полезным свойствам этого соединения. Так, известна фармацевтическая композиция (WO 03/020254) на основе СЕКО (выделен из растения Stereospermum personatum), а также функциональные продукты питания (WO 02/080702), гепатопротекторные, противораковые препараты (US 2006/0035964) и другие препараты, включающие СЕКО.
Известно, что сучковые зоны и ветки хвойных пород деревьев содержат значительные количества фенольных соединений [В.Holmbom, С.Eckerman, P.Ekiund, J.Hemming, L.Nisula, M.Reunanen, R.Sjöholm, A.Sundberg, K.Sundberg, S.Willför, «Knots in trees - A new rich source of lignans», Phytochemistry Reviews 2: 331-340, 2003.). Авторами настоящего изобретения, однако, было экспериментально установлено, что предпочтительным сырьем для выделения представляющих интерес соединений в промышленном производстве являются только так называемые «белые» сучки, то есть сучки, несущие живые ветки (см. Пример 1 ниже).
Получение фенольных соединений из сучковых зон древесины известно [см. патентную публикацию US 2004/0199032 от 07.10.2004]. В указанной публикации раскрыт способ выделения фенольных соединений из содержащей сучковые зоны древесины, в котором выполняют экстракцию измельченной древесины сучковой зоны полярным растворителем с последующим выделением веществ из экстракта.
К недостаткам описанного способа можно отнести следующие технические ограничения. Предложенные условия разработаны для выделения одного целевого продукта, представителя класса лигнанов 7-гидроксиматаирезинола («HMR»). Однако древесина хвойных деревьев содержит обычно не один компонент, относящийся к фенольным соединениям, причем такие компоненты относятся не только к классу лигнанов. Кроме них в древесине содержатся и представители класса флавоноидов, также как и производные лигнанов, имеющие большую практическую ценность. Экономическая целесообразность переработки указанного типа древесного сырья требует разработки способов одновременного извлечения соединений разных классов, например лигнанов и флавоноидов, для их дальнейшего использования. Однако оказалось, что указанный известный способ [US 2004/0199032 от 07.10.2004] является весьма мало эффективным для одновременного выделения лигнанов в смеси с флавоноидами, которые имеют отличный от лигнанов профиль растворимости в органических растворителях. Другим недостатком известного способа является необходимость подготовки древесины для экстракции, включающей стадии промывки алканом для удаления летучих компонентов, а также последующую сушку, в том числе для удаления содержащейся в древесине воды, присутствие которой, видимо, снижает экстрагирующую способность растворителя.
Применяемый в указанном способе полярный растворитель определен обобщенно, посредством указания на константу диэлектрической проницаемости (которая должна быть больше 3 при 25°С). Указанным величинам диэлектрической проницаемости, например, отвечают такие технологически важные растворители, как диэтиловый эфир, хлороформ и хлористый метилен (их диэлектрические проницаемости 4.34, 4.70 и 8.9 соответственно), в которых ДГК очень мало растворим, что не позволяет использовать указанные растворители для экстракции ДГК.
В известном способе (US 2004/0199032 от 07.10.2004) также отмечено, что в качестве полярного растворителя можно применять смесь ацетон : вода, однако выбранное соотношение (95:5 об.%) компонентов смеси не позволяет получить представляющий интерес ДГК с достаточным выходом (см. Пример 2 ниже).
Задачей настоящего изобретения является разработка способа выделения фенольных соединений из древесины, лишенного указанных недостатков.
Поставленная задача решается настоящим изобретением. В способе по изобретению измельченную древесину сучковой зоны экстрагируют нерасслаивающейся смесью органического растворителя с водой при содержании органического растворителя 50-75% с получением экстракта, содержащего СЕКО и ДГК, обрабатывают экстракт для удаления растворителя с получением конечной смеси, содержащей СЕКО и ДГК.
В другом варианте выполнения изобретения полученную смесь, содержащую СЕКО и ДГК, дополнительно подвергают избирательной экстракции и кристаллизации с выделением очищенных целевых соединений.
В другом варианте выполнения изобретения экстракт, содержащий секоизоларицирезинол и дигидрокверцетин, дополнительно обрабатывают для удаления неполярных компонентов, удаляют надосадочную жидкость, а полученный остаток хроматографируют на слое силикагеля с последующим удалением элюата, получая сухую смесь секоизоларицирезинола и дигидрокверцетина.
При этом в способах по данному изобретению в качестве древесины можно использовать древесину хвойных пород деревьев, предпочтительно лиственницы сибирской (Larix sibirica) и пихты сибирской (Abies sibiricd), а в качестве сучковой зоны древесины используют «белые сучки».
Как следует из данных, приведенных в Примерах 2 и 3, наибольшая эффективность извлечения СЕКО и ДГК достигается при использовании смесей органического растворителя и воды, а в чистом органическом растворителе она ниже. Также растворимость ниже и в чистой воде (не показано на Фиг.3-8), в которой целевые соединения имеют весьма ограниченную растворимость (растворение в воде требует нагревания). Поэтому важнейшим свойством используемого органического растворителя по данному изобретению являются его способность смешиваться с водой в диапазоне указанных соотношений, давая гомогенную смесь с требуемой растворяющей активностью. Анализ растворителей по данному изобретению показывает, что их полярность характеризуется величиной константы диэлектрической проницаемости от 10 до 40 при 25-30°С.
В качестве органического растворителя могут использовать ацетон, при этом его содержание в смеси с водой составляет от 50 до 75%, предпочтительно от 60 до 70%.
В другом варианте выполнения в качестве органического растворителя могут использовать изопропиловый спирт, при этом его содержание в смеси с водой составляет от 50 до 75%, предпочтительно от 60 до 70%.
В других вариантах выполнения в качестве органического растворителя могут использовать и другие растворители, например этиловый спирт, удовлетворяющие указанным выше характеристикам, при этом содержание растворителя в смеси с водой составляет от 50 до 75%, предпочтительно от 60 до 70%.
Ключевым преимуществом настоящего изобретения является обеспечение эффективного одновременного извлечения из древесной массы как соединения ряда лигнанов, так и флавоноидного соединения, представляющих практический интерес для использования их в виде смеси или после разделения. Преимуществом перед известным способом является также и простота выделения целевых соединений по настоящему изобретению, не требующая специальной отсушки экстрагируемой древесины (в известном способе применяют лиофильную сушку), измельчения замороженной древесной массы и промывания алканом перед экстракцией водно-органической смесью.
Выходы ДГК в условиях данного изобретения соответствуют лучшим известным способам получения данного соединения из природных объектов (например, способам, описанным в следующих источниках: Нифантьев Э.Е., Коротеев М.П., Казиев Г.З., Уминский А.А. «Способ выделения дигидрокверцетина» // Патент РФ №2180566, 2001 г.; Нифантьев Э.Е., Коротеев М.П., Казиев Г.З., Волков Г.А., Гатаулин Р.Ш. «Способ комплексной переработки древесины лиственницы» // Патент РФ №2233858, 2003 г.). Выход СЕКО в условиях данного изобретения существенно превышает таковой при экстракции из других известных природных источников, например из растений Stereospermum personatum - 0.03% (WO 03/020254), Carissa edulis - 0.0004% [Phytochemistry, 22 (1983) 749], Uniperus chinensis - 0.00245% [Phytochemistry, 31 (1992) 3659].
Ниже приведены примеры, не ограничивающие рамки изобретения, снабженные сопроводительными чертежами.
На Фиг.1 показана хроматограмма экстракта из опилок «белых» сучков лиственницы,
на Фиг.2 приведена хроматограмма экстракта из опилок «черных» сучков,
на Фиг.3 приведены результаты экстракции сучковой массы («белые сучки») лиственницы ацетоном и водно-ацетоновыми смесями, показаны весовые количества ДГК и СЕКО в экстрактах,
на Фиг.4 приведены результаты экстракции сучковой массы («белые сучки») лиственницы ацетоном и водно-ацетоновыми смесями, показан общий вес экстрактов после упаривания растворителя,
на Фиг.5 приведены результаты экстракции сучковой массы («белые сучки») лиственницы ацетоном и водно-ацетоновыми смесями, показано содержание ДГК и СЕКО в упаренных ацетоновом и водно-ацетоновых экстрактах,
на Фиг.6 приведены результаты экстракции сучковой массы («белые сучки») лиственницы изопропанолом и водно-изопропанольными смесями, показаны весовые количества ДГК и СЕКО в экстрактах,
на Фиг.7 приведены результаты экстракции сучковой массы («белые сучки») лиственницы изопропанолом и водно-изопропанольными смесями, показан общий вес экстрактов после упаривания растворителя,
на Фиг.8 приведены результаты экстракции сучковой массы («белые сучки») лиственницы изопропанолом и водно-изопропанольными смесями, показано содержание ДГК и СЕКО в упаренных изопропаноловом и водно-изопропаноловых экстрактах.
Пример 1.
Хроматографический анализ компонентов экстрактов массы «белых сучков» и «черных сучков» и хроматографический анализ компонентов экстрактов.
Экстракцию образцов измельченной массы (для корректного сопоставления экспериментальных данных в этом и последующих примерах приведены результаты экстракции частиц толщиной до 1 мм, проходящих через сито с размером каналов диаметром 3 мм) «белых» и «черных» сучков лиственницы сибирской {Larix sibirica, далее лиственницы), несущих живые и мертвые ветки, проводили 70%-водным ацетоном при комнатной температуре в течение 24 часов (соотношение образец - растворитель 1:10). Аликвоты растворов (10 мкл) анализировали посредством ВЭЖХ [Э.Е.Нифантьев, М.П.Коротеев, Г.З.Казиев, В.К.Бельский, А.И.Сташ, А.А.Грачев, В.М.Меньшов, Ю.Е.Цветков, Н.Э.Нифантьев, "К вопросу об идентификации флавоноида дигидрокверцетина.", ЖОХ, 76 (2006) 161-163] на колонке Ultrasphere ODS (5 мкм, 4.6 мм × 25 см; Beckman) в системе ацетонитрил (20%) - вода, содержащей 1 мл/л трифторуксусной кислоты при скорости потока 0.8 мл/мин с использованием УФ-детектора (254 нм). Количественная характеристика содержания ДГК и СЕКО в экстрактах проводилась по калибровочным кривым, полученным при хроматографическом анализе аналитически чистых образцов ДГК и СЕКО.
Анализ хроматограмм экстрактов (Фиг.1, 2) свидетельствует о содержании ДГК и СЕКО в «белых» сучках в количестве 1,2 и 1,7% от общего веса соответственно, а в «черных» сучках присутствуют только следы СЕКО, а содержание ДГК составляет лишь около 0,5% от общего веса. Эти данные указывают на то, что масса «белых» сучков является предпочтительным сырьем для выделения ДГК и СЕКО.
Пример 2
Экстракция сучковой массы лиственницы ацетоном и водно-ацетоновыми смесями и хроматографический анализ компонентов экстрактов.
Стандартные порции (10 г) измельченной массы «белых» сучков лиственницы подвергали экстракции в 100 мл ацетона или водно-ацетоновых смесях разного состава при комнатной температуре в течение 24 часов. Экстракты отделяли фильтрованием через стеклянный фильтр (№3) и упаривали досуха. Навеску сухого остатка (25 мг) растворяли в 10 мл ацетонитрила и анализировали посредством ВЭЖХ, как описано выше в Примере 1 для определения содержание ДГК и СЕКО в исходном образце сучковой массы с использованием хроматографических характеристик заведомо чистых образцов ДГК и СЕКО.
Результаты экспериментов суммированы на Фиг.3-5, на которых показаны весовые количества ДГК и СЕКО в экстрактах (Фиг.3), общий вес экстрактов после упаривания растворителя (Фиг.4), а также содержание ДГК и СЕКО в упаренных ацетоновом и водно-ацетоновых экстрактах (Фиг.5). Анализ хроматограмм свидетельствует о том, что при экстракции смесями при содержании ацетона в интервале от 50 до 75%, в особенности от 60 до 70%, достигается наиболее эффективное экстрагирование ДГК и СЕКО. При увеличении содержания ацетона в экстрагенте свыше 75% либо при снижении ниже 50% содержание ДГК и СЕКО в экстракте снижается. Кроме этого, при экстрагировании смесями с содержанием воды свыше 50% наблюдается увеличение общей массы экстракта за счет извлечения из сучковой массы нецелевых компонентов, в особенности хорошо растворимых в водных средах производных углеводов и других соединений, что в дальнейшем усложняет очистку ДГК и СЕКО.
Пример 3.
Экстракция сучковой массы лиственницы изопропиловым спиртом и водно-изопропанольными смесями и хроматографический анализ компонентов экстрактов.
Экстракцию стандартных порций (10 г) измельченной массы «белых» сучков лиственницы проводили в 100 мл изопропилового спирта или водно-изопропанольными смесями разного состава при комнатной температуре в течение 24 часов. Экстракты сначала обрабатывали, а затем анализировали с помощью ВЭЖХ, как описано в Примере 2.
Результаты экспериментов суммированы на Фиг.6-8, на которых показаны весовые количества ДГК и СЕКО в экстрактах (Фиг.6), общий вес экстрактов после упаривания растворителя (Фиг.7), а также содержание ДГК и СЕКО в упаренных изопропиловом и водно-изопропанольных экстрактах (Фиг.8). Анализ хроматограмм и данных по общему весу экстрактов свидетельствует о том, что при экстракции смесями при содержании изопропанола в интервале от 50 до 75%, в особенности от 60 до 70%, достигается наиболее эффективное экстрагирование ДГК и СЕКО. При увеличении содержания изопропанола в экстрагенте свыше 75% либо при снижении ниже 50% содержание ДГК и СЕКО в экстракте снижается. Кроме этого, при экстрагировании смесями с содержанием воды свыше 50% наблюдается увеличение общей массы экстракта за счет извлечения из сучковой массы нецелевых компонентов, в особенности производных углеводов, что в дальнейшем усложняет очистку ДГК и СЕКО.
Пример 4
Исследование кавитационной дезинтеграции сучковой массы в воде с последующей экстракцией органическими растворителями.
300 г измельченных сучков лиственницы подвергали кавитационной обработке в 10 л воды при 95°С по способу, описанному в патенте РФ №2180566, опубликованном 20.03.2002, и патенте РФ №2233858, опубликованном 10.08.2004. Образующуюся смесь охлаждали до комнатной температуры, нерастворимые компоненты отделяли фильтрованием или центрифугированием (2 часа при 2000 об/мин). Попытки проэкстрагировать фильтрат, представляющий собой устойчивую эмульсию, с помощью несмешивающихся с водой растворителей различной полярности (алканы, ароматические соединения, эфиры, хлорированные растворители) не привели к успеху, так как не достигалось образование слоев органической и водной фаз, даже при добавке в смеси растворов NaCl и алифатических спиртов, что обычно способствует разделению слоев при экстракции водных растворов. Таким образом, способ выделения ДГК и СЕКО из сучковой массы, включающий на первом этапе кавитационную дезинтеграцию в воде, на практике не является эффективным.
Пример 5.
Экстракция сучковой массы лиственницы 70%-ным водным ацетоном.
1 кг измельченных сучков лиственницы подвергали экстракции 5 л 70%-ного водного ацетона при комнатной температуре в течение 24 часов. Раствор отделяли фильтрованием и упаривали досуха, получая 87 г порошкообразного сырца смеси ДГК и СЕКО. По данным ВЭЖХ (анализ проводился в условиях, описанных в Примере 1), в полученном продукте содержится 9,8 г ДГК и 14,3 г СЕКО.
Пример 6.
Экстракция сучковой массы лиственницы.
Экстракцию измельченных сучков лиственницы проводили 70%-ным водным ацетоном, как описано в Примере 5. К образцу полученного продукта весом 5 г прибавляли 50 мл воды и кипятили 1 час при перемешивании, горячий раствор отделяли от маслообразного остатка, упаривали досуха и получали 1,8 г обогащенного ДГК и СЕКО продукта-сырца, содержащего 23% ДГК (414 мг) и 32% СЕКО (576 мг) (по данным ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1).
Пример 7.
Экстракция сучковой массы лиственницы 70%-ным водным изопропанолом.
1 кг измельченных сучков лиственницы подвергали экстракции 5 л 70%-ного водного изопропанола при комнатной температуре в течение 24 часов. Раствор отделяли фильтрованием и упаривали досуха, получая 83 г порошкообразного продукта-сырца, содержащего 7,4 г ДГК и 12,2 г СЕКО (по данным ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1).
Пример 8.
Экстракция сучковой массы лиственницы 70%-ным водным этанолом.
0.1 кг измельченных сучков лиственницы подвергали экстракции 720 мл 70%-ного водного этилового спирта при комнатной температуре в течение 24 часов. Раствор отделяли фильтрованием и упаривали досуха, получая 7,12 г порошкообразного продукта-сырца, содержащего 655 мг ДГК и 810 мг СЕКО (по данным ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1).
Пример 9.
Получение смеси СЕКО и ДГК в соотношении примерно 1:1 чистотой, равной 75% и более.
Экстракцию измельченных сучков лиственницы проводили 70%-ным водным ацетоном, как описано в Примере 5. К образцу полученного продукта весом 5 г прибавляли смесь этилацетат-петролейный эфир (1:2, 10 мл) и перемешивали при 50°С, температуру доводили до комнатной и надосадочную жидкость отделяли декантацией (или фильтрованием через бумажный или стеклянный фильтр). Полученный остаток хроматографировали на слое силикагеля, элюируя смесь ДГК и СЕКО метил-трет-бутиловым эфиром (100 мл). Элюат упаривали досуха, получая 1,45 г порошка, представляющего по данным ВЭЖХ (в условиях, описанных в Примере 1) смесь ДГК и СЕКО в соотношении примерно 1:1 чистотой, равной 75% или более. Аналогично проводили и выделения смесей СЕКО и ДГК указанной чистоты при обработке органических экстрактов сучковой массы другими водно-органическими смесями по данному изобретению, например, образующимися из продуктов, полученных в Примерах 2, 7, 8 и 15-17. При этом соотношения СЕКО и ДГК в выделяемом продукте определяется их содержанием в исходном сырье.
Пример 10.
Получение смеси СЕКО и ДГК в соотношении примерно 1:1 чистотой, равной 75% и более.
f
Экстракцию измельченных сучков лиственницы проводили 70%-ным водным ацетоном, как описано в Примере 5. Образец полученного продукта весом 5 г перемешивали 10-120 минут при нагревании не выше 50°С с 10-30 мл смеси углеводородного растворителя и более полярного растворителя, взятых в таком соотношении, что при проведении тонкослойной хроматографии на стандартных пластинках с силикагелем величины хроматографической подвижности (R) СЕКО и ДГК находятся в интервале 0-0.05. После окончания перемешивания температуру смеси доводили до комнатной и надосадочную жидкость отделяли декантацией (или фильтрованием через бумажный или стеклянный фильтр). Полученный остаток хроматографировали на слое силикагеля, элюируя смесь ДГК и СЕКО метил-трет-бутиловым эфиром (100 мл). Элюат упаривали досуха, получая 1,45 г порошка, представляющего по данным ВЭЖХ (в условиях, описанных в Примере 1) смесь ДГК и СЕКО в соотношении примерно 1:1 чистотой, равной 75% или более.
В качестве углеводородного растворителя могут использовать технологически доступные алифатические или ароматические соединения, например индивидуальные алканы, петролейный эфир, толуол и другие. В качестве полярного растворителя могут использовать органические соединения, характеризующиеся величиной константы диэлектрической проницаемости от 4 до 25 при 25-30°С. Например, можно использовать смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 1:2.
Аналогично проводили и выделения смесей СЕКО и ДГК указанной чистоты при обработке органических экстрактов сучковой массы другими водно-органическими смесями по данному изобретению, например, образующимися из продуктов, полученных в Примерах 2, 7, 8 и 15-17. При этом соотношения СЕКО и ДГК в выделяемом продукте определяются их содержанием в исходном сырье.
Пример 11.
Получение смеси СЕКО и ДГК в соотношении примерно 1:1 чистотой, равной 75% и более.
Экстракцию измельченных сучков лиственницы проводили 70%-ным водным ацетоном, как описано в Примере 5. Образец полученного продукта весом 5 г перемешивали 10-60 минут при нагревании не выше 50°С с 10-30 мл смеси углеводородного растворителя и более полярного растворителя с величиной константы диэлектрической проницаемости от 4 до 25 при 25-30°С. В качестве углеводородного растворителя могут использовать технологически доступные алифатические или ароматические соединения, например индивидуальные алканы, петролейный эфир, толуол и другие. Количество взятого полярного компонента зависит от величины его диэлектрической проницаемости. Так, при диэлектрической проницаемости от 20 до 25 берется 10 об.%, при диэлектрической проницаемости от 15 до 20 берется 20 об.%, при диэлектрической проницаемости от 10 до 15 берется 30 об.%, а при диэлектрической проницаемости от 4 до 10 берется 40 об.%. Например, в соответствии с указанными характеристиками растворителей можно использовать смесь этилацетата и петролейного эфира в соотношении 1:2.
После окончания перемешивания температуру смеси доводили до комнатной и надосадочную жидкость отделяли декантацией (или фильтрованием через бумажный или стеклянный фильтр). Полученный остаток хроматографировали на слое силикагеля, элюируя смесь ДГК и СЕКО метил-трет-бутиловым эфиром (100 мл). Элюат упаривали досуха, получая 1,45 г порошка, представляющего по данным ВЭЖХ (в условиях, описанных в Примере 1) смесь ДГК и СЕКО в соотношении примерно 1:1 чистотой, равной или более 75%.
Аналогично проводили и выделения смесей СЕКО и ДГК указанной чистоты при обработке органических экстрактов сучковой массы другими водно-органическими смесями по данному изобретению, например, образующимися из продуктов, полученных в Примерах 2, 7, 8 и 15-17. При этом соотношения СЕКО и ДГК в выделяемом продукте определяются их содержанием в исходном сырье.
Пример 12.
Получение образцов СЕКО и ДГК чистотой, равной 75% и более.
Экстракцию измельченных сучков лиственницы проводили 70%-ным водным ацетоном, как описано в Примере 5. К образцу полученного продукта весом 5 г прибавляли 50 мл воды и кипятили 1 час при перемешивании, горячий раствор отделяли от маслообразного остатка, температуру раствора доводили до комнатной и экстрагировали хлороформом (8×30 мл). Органическую фазу отделяли, сушили и упаривали досуха, получая 670 мг сырца СЕКО с чистотой, равной 75% или более (определено ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1). Оставшуюся после экстракции водную фазу экстрагировали этилацетатом (3×30 мл), экстракты объединяли, высушивали и упаривали досуха, получая 481 мг сырца ДГК с чистотой, равной 75% или более (определено ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1). Аналогично проводили и выделения смесей СЕКО и ДГК указанной чистоты при обработке органических экстрактов сучковой массы другими водно-органическими смесями по данному изобретению, например, образующимися из продуктов Примеров 2, 7, 8 и 15-17. При этом соотношения СЕКО и ДГК в выделяемом продукте определяются их содержанием в исходном сырье.
Пример 13.
Получение ДГК чистотой 95-97% и более.
13
6
ДГК чистотой 95-97% и более получали перекристаллизацией сырца (Пример 12). Например, образец ДГК (0.48 г), полученный в условиях Примера 12, растворяли в 5 мл деаэрированной воды при 70-80°С, охлаждали образующийся раствор до 4°С и выдерживали смесь до окончания кристаллизации. Выпавшие кристаллы отфильтровали и высушили в вакууме, получив 0.31 г ДГК указанной чистоты, контролируемой по данным ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1. Данные спектра С ЯМР (δ, м.д.; DMSO-d; Bruker WM-250, 62,9 МГц): 71.6 (С3), 83.1 (С2), 95.0 (С8), 96.0 (С6), 100.5 (С 10), 115.2 (С5'), 115.4 (С2'), 119.5 (С1'), 145.0 (С4'), 145.8 (С3'), 162.6 (С9), 163.4 (С5), 166.8 (С7), 197.9 (С4).
Пример 14.
Получение СЕКО чистотой 95-97% и более.
13
СЕКО чистотой 95-97% и более получали перекристаллизацией сырца (Пример 12). Например, образец СЕКО (660 мг), полученный в условиях Примера 12, растворяли в 7 мл диэтилового эфира при 30°С, раствор охлаждали до 4°С и выдерживали смесь до окончания кристаллизации. Выпавшие кристаллы отфильтровали и высушили в вакууме, получив 405 мг СЕКО указанной чистоты, контролируемой по данным ВЭЖХ в условиях, описанных в Примере 1. Данные спектра С ЯМР (δ, м.д.;
6
DMSO-d; Bruker WM-250, 62,9 МГц): 34.0 (С3,3'), 42.5 (С2,2'), 55.5 (ОМе), 60.3 (С1,1'), 113.0 (С6,6'), 115.0 (С9,9'), 121.1 (С5,5'), 132.2 (С4,4'), 144.3 (С7,7'), 147.2 (С8,8').
Пример 15.
Экстракция сучковой массы пихты сибирской (Abies sibirica).
100 г измельченных сучков пихты подвергали экстракции 0.5 л 70%-ного водного ацетона при комнатной температуре в течение 24 часов. Раствор отделяли фильтрованием и упаривали досуха, получая 733 мг порошкообразного сырца смеси ДГК и СЕКО. По данным ВЭЖХ (анализ проводили в условиях, описанных в Примере 1), в полученном продукте содержится 7 мг ДГК и 91 мг СЕКО.
Пример 16.
Экстракция сучковой массы пихты сибирской (Abies sibirica}.
100 г измельченных сучков пихты подвергали экстракции 0.5 л 70%-ного водного изопропанола при комнатной температуре в течение 24 часов. Раствор отделяли фильтрованием и упаривали досуха, получая 655 мг порошкообразного сырца смеси ДГК и СЕКО. По данным ВЭЖХ (анализ проводили в условиях, описанных в Примере 1), в полученном продукте содержится 6 мг ДГК и 77 мг СЕКО.
Пример 17.
Экстракция сучковой массы пихты сибирской (Abies sibirica).
100 г измельченных сучков пихты подвергали экстракции 0.5 л 70%-ного водного этилового спирта при комнатной температуре в течение 24 часов. Раствор отделяли фильтрованием и упаривали досуха, получая 725 мг порошкообразного сырца смеси ДГК и СЕКО. По данным ВЭЖХ (анализ проводили в условиях, описанных в Примере 1), в полученном продукте содержится 6 мг ДГК и 71 мг СЕКО.
Показанные примеры приведены лишь с целью иллюстрации и не ограничивают рамки настоящего изобретения.