АНТИТЕЛА К АМИЛОИДУ БЕТА 4, ИМЕЮЩИЕ ГЛИКОЗИЛИРОВАННУЮ ВАРИАБЕЛЬНУЮ ОБЛАСТЬ

H
1. Очищенная молекула антитела, отличающаяся тем, что по меньшей мере один антигенсвязывающий центр молекулы антитела содержит гликозилированный остаток аспарагина (Asn) в вариабельной области тяжелой цепи (V).
H
2. Очищенная молекула антитела по п.1, в которой гликозилированный остаток аспарагина (Asn) в вариабельной области тяжелой цепи (V) находится в CDR2-участке.
H
3. Очищенная молекула антитела по п.1, в которой гликозилированный остаток аспарагина (Asn) в вариабельной области тяжелой цепи (V) находится в положении 52 SEQ ID NO:2 или положении 52 SEQ ID NO:6.
4. Очищенная молекула антитела по п.1, где молекула антитела обладает способностью специфически распознавать β-А4-пептид/Аβ4.
5. Очищенная молекула антитела по п.4, где β-А4-пептид/Аβ4 имеет следующую последовательность:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA (SEQ ID NO:3)
или фрагмент указанной последовательности, состоящий по меньшей мере из 15 аминокислот.
H
H
6. Молекула антитела по п.1, отличающаяся тем, что по меньшей мере один антигенсвязывающий центр молекулы антитела содержит гликозилированный остаток аспарагина (Asn) в вариабельной области тяжелой цепи (V) и указанная V кодируется:
(а) молекулой нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO:1
CAGGTGGAATTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAACCGGGCGGC
AGCCTGCGTCTGAGCTGCGCGGCCTCCGGATTTACCTTTAGCAGCTATGCGA
TGAGCTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGGTGAGCGCTA
TTAATGCTTCTGGTACTCGTACTTATTATGCTGATTCTGTTAAGGGTCGTTTT
ACCATTTCACGTGATAATTCGAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCC
TGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGGTAAGGGTAATAC
TCATAAGCCTTATGGTTATGTTCGTTATTTTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCC
TGGTGACGGTTAGCTCA;
(б) молекулой нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2
QVELVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVS
AINASGTRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGKGN
THKPYGYVRYFDVWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO. 2);
(в) молекулой нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты, указанной в подпункте (а) или (б), и которая кодирует полипептид, обладающий способностью связываться с β-А4-пептидом/Аβ4, который имеет следующую аминокислотную последовательность
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA (SEQ ID NO:3)
или обладает способностью связываться с его фрагментом, состоящим по меньшей мере из 15 аминокислот;
(г) молекулой нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты, указанной в подпункте (а) или (б) и которая кодирует полипептид, обладающий способностью связываться по меньшей мере с двумя областями β-А4-пептида/Аβ4, имеющего следующую аминокислотную последовательность
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA (SEQ ID NO:3)
или по меньшей мере с двумя областями фрагмента SEQ ID NO. 3, который содержит по меньшей мере 15 аминокислот, причем указанные две области β-А4-пептида/Аβ4 или его фрагмента содержат аминокислоты в положениях 3-6 и в положениях 18-26; или
(д) нуклеотидной последовательностью, которая в результате вырожденности генетического кода соответствует нуклеотидной последовательности, указанной в одном из подпунктов (а)-(г).
7. Молекула антитела по п.1, в которой вариабельная область, содержащая гликозилированный остаток аспарагина (Asn), присутствует в тяжелой цепи, выбранной из группы, включающей:
(а) полипептид тяжелой цепи, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты, которая представлена в SEQ ID NO:5, 23 или 25;
(б) полипептид тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:6 или 26;
(в) полипептид тяжелой цепи, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты, указанной в подпункте (а), и которая кодирует полипептид, обладающий способностью связываться с β-А4-пептидом/Аβ4, имеющий следующую аминокислотную последовательность
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA (SEQ ID NO:3)
или ее фрагмент, который состоит по меньшей мере из 15 аминокислот; или
(г) полипептид тяжелой цепи, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты, указанной в подпункте (а), и которая кодирует полипептид, обладающий способностью связываться по меньшей мере с двумя областями β-А4-пептида/Аβ4, имеющего следующую аминокислотную последовательность
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA (SEQ ID NO:3)
или по меньшей мере с двумя областями фрагмента SEQ ID NO. 3, который состоит по меньшей мере из 15 аминокислот,
где указанные две области β-А4-пептида/Аβ4 или его фрагмента содержат аминокислоты в положениях 3-6 и в положениях 18-26.
H
8. Молекула антитела по одному из пп.1-7, в которой два антигенсвязывающих центра содержат гликозилированный остаток Asn в вариабельной области тяжелой цепи (V).
H
9. Молекула антитела по п.8, в которой CDR2-участки тяжелых цепей (V) содержат гликозилированный остаток Asn.
10. Молекула антитела по п.1, в которой указанный остаток Asn представляет собой остаток Asn в положении 52 SEQ ID NO:2 или представляет собой остаток Asn в положении 52 SEQ ID NO:6.
H
11. Молекула антитела по п.1, в которой гликозилирование на остатке Asn в V-области осуществлено с помощью структуры, выбранной из группы, включающей
(а) сахарную структуру биантенного комплексного типа;
(б) сахарную структуру биантенного гибридного типа;
(в) сахарную структуру биантенного олигоманнозного типа; и
(г) сахарную биантенную структуру, представляющую собой любую из структур, указанных на фиг.5 или фиг.27.
12. Молекула антитела по п.11, в которой сахарная структура не содержит корового фукозилирования.
13. Молекула антитела по п.2, в которой CDR2-участок имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:12.
14. Молекула антитела по п.1, которая получена методом рекомбинации.
15. Молекула антитела по п.1, которая получена в СНО-клетке.
16. Молекула антитела по п.15, где СНО-клетка представляет собой клетку линии СНО K1 или СНО K1 SV.
17. Способ получения молекулы антитела по одному из пп.1-16, заключающийся в том, что
(а) рекомбинантно экспрессируют гетерологичную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу антитела по одному из пп.1-13, в культивируемой клетке млекопитающего;
(б) очищают полученную путем рекомбинантной экспрессии молекулу антитела с помощью метода, заключающегося в том, что
(б1) проводят очистку на протеин А-колонке;
(б2) проводят очистку на ионообменной колонке; и
(б3) проводят очистку на колонке для гель-фильтрации.
18. Способ по п.17, в котором очистка на ионообменной колонке представляет собой катионообменную хроматографию.
19. Способ по п.17, включающий дополнительную стадию (в), представляющую собой аналитическую хроматографию и/или дополнительную стадию концентрирования.
H
H
H
20. Композиция, содержащая молекулу антитела, которая отличается тем, что один антигенсвязывающий центр молекулы антитела содержит гликозилированный остаток аспарагина (Asn) в вариабельной области тяжелой цепи (V), и содержащая молекулу антитела, которая отличается тем, что два антигенсвязывающих центра молекулы антитела содержат гликозилированный остаток аспарагина (Asn) в вариабельной области тяжелой цепи (V), и содержащая в количестве менее 5% молекулу антитела, которая отличается тем, что ни один из антигенсвязывающих центров молекулы антитела не содержит гликозилированный остаток аспарагина (Asn) в вариабельной области тяжелой цепи (V).
21. Композиция, содержащая молекулу антитела по п.1.
22. Композиция, содержащая молекулу антитела, полученную с помощью способа по п.17.
23. Композиция по любому из пп.20-22, представляющая собой диагностическую или фармацевтическую композицию.
24. Применение молекулы антитела по одному из пп.1-16 или композиции по одному из пп.20-22 для приготовления лекарственного средства, предназначенного
(i) для предупреждения и/или лечения заболевания, ассоциированного с амилоидогенезом и/или образованием амилоидных бляшек, или
(ii) для профилактического лечения заболевания, ассоциированного с амилоидогенезом и/или образованием амилоидных бляшек
25. Применение молекулы антитела по одному из пп.1-16 или композиции по одному из пп.20-22 для приготовления диагностического набора, предназначенного
(i) для выявления заболевания, ассоциированного с амилоидогенезом и/или образованием амилоидных бляшек, или
(ii) для выявления заболевания, ассоциированного с амилоидогенезом и/или образованием амилоидных бляшек, или для диагностики чувствительности пациента к развитию заболевания, ассоциированного с амилоидогенезом и/или образованием амилоидных бляшек.
26. Применение молекулы антитела по одному из пп.1-16 или композиции по одному из пп.20-22 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для разрушения β-амилоидных бляшек.
27. Применение молекулы антитела по одному из пп.1-16 или композиции по одному из пп.20-22 для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для пассивной иммунизации против образования β-амилоидных бляшек.
28. Применение по п.24, которое направлено на снижение количества уже существующих бляшек или агрегации промежуточных β-амилоидных образований.
29. Набор, содержащий молекулу антитела по одному из пп.1-16 или полученную способом по одному из пп.17-19 или композицию по любому из пп.20-22.
30. Способ предупреждения, лечения или ослабления заболевания, ассоциированного с амилоидогенезом и/или образованием амилоидных бляшек, заключающийся в том, что млекопитающему, нуждающемуся в таком предупреждении или лечении, вводят молекулу антитела по одному из пп.1-16 или композицию по одному из пп.20-22.
31. Способ по п.30, в котором заболевание представляет собой деменцию, болезнь Альцгеймера, двигательную нейропатию, синдром Дауна, болезнь Крейцфельда-Якоба, наследственное внутримозговое кровоизлияние, сопровождающееся амилоидозом Дутча-типа, деменцию, ассоциированную с образованием телец Леви, болезнь Паркинсона, связанную с ВИЧ деменцию, ALS или нервные нарушения, связанные со старением.
32. Способ по п.30, в котором млекопитающее представляет собой человека.
33. Применение по п.24, в котором заболевание представляет собой деменцию, болезнь Альцгеймера, двигательную нейропатию, синдром Дауна, болезнь Крейцфельда-Якоба, наследственное внутримозговое кровоизлияние, сопровождающееся амилоидозом Дутча-типа, деменцию, ассоциированную с образованием телец Леви, болезнь Паркинсона, связанную с ВИЧ деменцию, ALS или нервные нарушения, связанные со старением.
34. Применение по п.25, в котором заболевание представляет собой деменцию, болезнь Альцгеймера, двигательную нейропатию, синдром Дауна, болезнь Крейцфельда-Якоба, наследственное внутримозговое кровоизлияние, сопровождающееся амилоидозом Дутча-типа, деменцию, ассоциированную с образованием телец Леви, болезнь Паркинсона, связанную с ВИЧ деменцию, ALS или нервные нарушения, связанные со старением.
35. Применение по п.28, в котором заболевание представляет собой деменцию, болезнь Альцгеймера, двигательную нейропатию, синдром Дауна, болезнь Крейцфельда-Якоба, наследственное внутримозговое кровоизлияние, сопровождающееся амилоидозом Дутча-типа, деменцию, ассоциированную с образованием телец Леви, болезнь Паркинсона, связанную с ВИЧ деменцию, ALS или нервные нарушения, связанные со старением.