Исследование серологических реакций на Альтернариол, вторичный метаболит Alternaria alternata, у лиц, сенсибилизированных аллергенами плесневого гриба

«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017

Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya

Цель и задачи. Выяснить частоту инфицированности вирусами группы герпес и наличия аллергического заболевания в группе часто болеющих детей. Обосновать необходимость противовирусного и иммуномодулирующе-го лечения данной группы пациентов.

Материалы и методы. 44 детям в возрасте 1,5-10 лет с частыми респираторными инфекциями проведено физикальное, лабораторное обследование, в том числе определение антител к раннему, капсидному и ядерному антигенам вируса Эпштейна—Барр (ВЭБ) и ^М, IgG к цитомегаловирусу (ЦМВ), аллерготестирование. Всем пациентам проведено противовоспалительное лечение топическими глюкокортикостероидами (тГКС), противовирусная и иммуномодулирующая терапия. Повторное обследование проводилось спустя 3 месяца после первичного обращения.

Результаты. Ведущей жалобой при обращении был сухой надсадный кашель, особенно в вечернее и ночное время при нахождении в горизонтальном положении. При физикальном обследовании затруднение носового дыхания отмечено в 79,5% случаев, увеличение шейных лимфоузлов — в 90,1%, стекание слизи по задней стенке глотки — в 45%. Диагноз хронического аденоидита 2-3 степени был выставлен ЛОР-врачом 22 пациентам (50%). В 54,5% случаев выявлено инфицирование вирусами герпес-группы, при этом IgG к ядерному и/или капсидному антигенам ВЭБ выявлено в 18%, IgG к ЦМВ в 15,9%, сочетанное инфицирование ЭБВ и ЦМВ в 15,9%, сочетание последних с другими вирусами герпес-группы (зостер и простой) — у 2 (4,5%) пациентов. Анемия выявлена в 15,9%, паразитарная инвазия в 11% случаев. Диагноз аллергического ринита или аллергического риноконъюнктивита и/или бронхиальной астмы выставлен 11 пациентам (25%). Большинство из них было сенсибилизировано к бытовым аллергенам, часть — к бытовым и эпидермальным или пыльцевым аллергенам. У 1 пациентки ранее проведенная адено-томия без сопутствующего лечения привела к рецидиву спустя 4 месяца после вмешательства. 100% пациентов-атопиков имело одну или несколько герпес-вирусных инфекций.

Проведение комплексного лечения, включающего противовоспалительную терапию (тГКС), противовирусные препараты и лизаты бактерий, оказалось клинически эффективным: сухой надсадный кашель вследствие рефлекторного раздражения рецепторов носоглотки исчез, резко снизилось число случаев респираторных инфекций у детей, отмечена положительная динамика состояния ЛОР-органов.

Заключение. Обследование часто болеющих детей выявляет их инфицированность ВЭБ и ЦМВ. Сочетание инфицирования с аллергопатологией у четвери обследованных пациентов создает предпосылки к хронизации воспаления — с одной стороны и расширению спектра сенсибилизации — с другой. Своевременно проведенное лечение уменьшает вирусную нагрузку и воспаление, улучшает состояние естественных барьеров, что предотвращает проникновение аллергенов в организм через поврежденные слизистые. Применение бактериальных лизатов активирует механизмы врожденного иммунитета, повышая резистентность организма к рекуррентным респираторным инфекциям.

ИССЛЕДОВАНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ НА АЛЬТЕРНАРИОЛ, ВТОРИЧНЫЙ МЕТАБОЛИТ ALTERNARIA ALTERNATA, У ЛИЦ, СЕНСИБИЛИЗИРОВАННЫХ АЛЛЕРГЕНАМИ ПЛЕСНЕВОГО ГРИБА

Гальвидис И.А.

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова», Москва, Россия

Первое описание симптомов аллергии, вызываемой плесневым грибом Alternaría alternate (АА), относится к 1698 году. И только в середине прошлого века наличие спор и мицелия этого гриба в окружающей среде стали связывать со случаями аллергической астмы. В настоящее время сенсибилизация аллергенами AA чрезвычайно распространена, а обострения бронхиальной астмы и аллергического ринита связывают с ростом гриба в сырых помещениях, благоприятствующих развитию плесени. Зарубежными исследователями обнаружено 16 аллергенов альтернарии, в основном представленных ферментами, на некоторые получены рекомби-нантные аналоги, функции других еще неизвестны (I. Kustrzeba-Wójcicka, 2014). Стандартов для иммуно-химической диагностики аллергических реакций на АА пока не существует. В тоже время появляются спорные публикации об обнаружении микотоксинов плесневых грибов в моче пациентов с хроническими заболеваниями, живущих в домах с повышенной влажностью (Hooper D., 2013). Альтернариол (АОЛ) — микотоксин, вторичный метаболит АА, может накапливаться в субстратах пораженных плесневым грибом и при низких температурах, при транспортировке и хранении урожая зерна, овощей и фруктов. АОЛ обладает высоким гено-и цитотоксическим действием, однако его содержание в продуктах питания не регламентировано и соответственно не контролируется (Solhaug A., 2016). Это низкомолекулярное соединение [272 Da] при попадании в организм не может индуцировать выработку антител. Тем не менее, нельзя исключать, что под действием экзогенных или эндогенных ферментов возможна конъюгация АОЛ с белками организма, что может вызвать иммунную реакцию. Участие АОЛ в развитии аллергических заболеваний спорно (S. Grover, 2015) и требует дальнейших исследований.

Цель. Исследовать серологические реакции на альтер-нариол у лиц с аллергологическим анамнезом при помощи прямого иммуноферментного анализа (ИФА).

Материалы и методы. Сыворотки пациентов (n = 15) IgE-позитивных к аллергенам AA по результатам тестирования в иммуноблотинге RIDA AllergyScreen и имму-нофлюоресцентном методе ImmunoCAP были получены из КПО при ФГБНУ «НИИВС им. И.И. Мечникова». Взаимодействие сывороток оценивали в ИФА, используя иммобилизованные конъюгаты альтернариола с БСА, овальбумином и желатиной (Буркин А.А., 2011) и перок-сидазные конъюгаты антител к IgG и IgE человека.

Результаты. Выявленное взаимодействие IgG и IgE антител в сыворотках пациентов с конъюгатами АОЛ было обусловлено реакциями с белками-носителями — БСА, овальбумином и в меньшей степени желатиной. При параллельном тестировании сывороток крови людей, на выявление специфического иммуноглобулина G, в трех образцах сывороток обнаружено двукратное увеличение оптической плотности при связывании с конъюгатом

2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue

Аллергические заболевания Allergic diseases

желатина-АОЛ адсорбированным на планшете по сравнению с контролем — не конъюгированной желатиной. IgE-антител к альтернариолу обнаружено не было.

Заключение. Выявление позитивных сывороток к АОЛ может свидетельствовать о факте «встречи» человека с микотоксином, возможно в результате употребления контаминированных альтернариолом продуктов питания, содержание которого не вызывает выраженный токсический эффект, но стимулирует выработку IgG антител. Однако данный факт требует подтверждения проведением дальнейших исследований на расширенном контингенте лиц.

ПОДХОДЫ СИСТЕМНОЙ БИОЛОГИИ И БИОИНФОРМАТИКИ В МЕТОДОЛОГИИ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Гурьянова С.В.

Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва, Россия

Распространенность аллергических заболеваний (АЗ), несмотря на значительные успехи современной медицины, продолжает год от года увеличиваться. С целью повышения эффективности и качества специализированной медицинской помощи создаются регламентирующие документы по диагностике и терапии АЗ, основанные на принципах доказательной медицины, в том числе и «Федеральные клинические рекомендации» по клинической иммунологии и аллергологии, разработанные Российской ассоциацией аллергологов и клинических иммунологов. Доказательной базой для их формирования служили публикации, вошедшие в базы данных EMBASE и PubMed/MEDLINE, данные международных согласительных документов. «Федеральные клинические рекомендации» являются важным и необходимым руководством в ежедневной практике врача, содержат разработки интегрированного алгоритма диагностики и лечения АЗ, но, тем не менее, не решают многих проблем, стоящих перед клиницистами: сложности дифференциальной диагностики, ложно положительные и ложно отрицательные результаты клинико-лабораторных исследований, генетические особенности пациентов, гендерные отличия, болезненность, а иногда и опасность в провокационных тестов, не учитывают географические особенности. Для формирования документов, дающих исчерпывающие ответы на поставленные вопросы необходим анализ большого массива данных: только в базе данных PubMed насчитывается более 400 тысяч публикаций по аллергии, при этом в нее не входит значительная часть исследований национальных профессиональных сообществ, в том числе и российских. Очевидно, что столь необходимый инструмент в повседневной практике врача, как «Федеральные клинические рекомендации» должны постоянно обновляться, учитывать и представлять медицинскому сообществу новые научные данные для формирования адекватных стратегий диагностики и терапии аллергических заболеваний. Для решения этой сложной задачи необходима консолидация врачей и ученых различных направлений на базе современных технологий: биоинформатики и системной биологии.

Создаваемые ресурсы посвящены решению различных задач: постоянное обновление базы данных номен-

клатуры аллергенов, распределение аллергенов по молекулярному весу, структуре, сезонности и географии, наличие их в продуктах питания, в том числе природного и биотехнологического происхождения, перечень эпито-пов аллергенности, генотипирование. Эти данные позволяют определять, прогнозировать и предотвращать воздействие аллергенов, находящихся в пищевых продуктах, лекарственных средствах, окружающей среде.

Интегрировать данные научных исследований в понимание функционирования живых систем с учетом многочисленных взаимодействий на молекулярном, клеточном уровне, на уровне тканей, органов и организмов, позволяет системная биология. Разрабатываются многочисленные модели, учитывающие взаимовлияние факторов разных уровней в попытке связать их с соответствующими заболеваниями, в том числе и аллергическими. Используются стратегии для визуализации причинно-следственных связей: например, анализ корреляции уровней экспрессии генов, белков, пептидов у перенесших заболевание и здоровых людей. Для отображения более сложных связей между компонентами описываемой системы создаются программные продукты. Самым современным является язык OpenBEL (open-access biological expression language). В выражении BEL могут быть отображены взаимосвязи между молекулами (их наименование регламентируется соответствующими базами данных), модификациями, процессами, трансформациями и т.д. с установлением прямых и корреляционных взаимосвязей. Язык BEL разработан как семантическая тройка (подлежащиее, сказуемое, дополнение) для представления конкретных научных результаты в виде причинно-следственных связей. Например, p (HGNC: CCND1) = > kin (p (HGNC: CDK4) является выражением, эквивалентным следующему «Увеличенное количество белка, обозначенного «CCND» в базе данных HGNC, непосредственно увеличивает активность киназы «CDK4» обозначенной таким образом в базе данных HGNC». Наиболее широкий охват множественных вариантов биологических процессов в клетках представляет ресурс SBV Improver, охвативший более 100 сетей. Удобство данного ресурса заключается в возможности выделить любой ци-токин или биологический процесс и определить его взаимосвязь с объектами в клеточных сетях системы.

Систематизация знаний об аллергических процессах на основе подходов системной биологии и биоинформатики является важным инструментом в поиске новых лекарственных средств, в том числе для АСИТ, биомаркеров, а также разработки интегрированного алгоритма диагностики и лечения аллергических заболеваний.

СОДЕРЖАНИЕ IL-17 И IL-22 В «КОЖНОМ ОКНЕ» ПРИ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЕ

Климов В.В., Исаев П.Ю.

Сибирский государственный медицинский университет, Томск, Россия

Среди атопических аллергических болезней на основе гиперпродукции IgE особое место занимает бронхиальная астма, корректная диагностика которой возможна только при аллергологическом обследовании. IgE является единственным цитофильным иммуноглобулином, который через высоко-аффинный FcgRI соединяется с клетками-мишенями в коже, носу, бронхах и других органах. Кожа является универсальным орга-