СПОСОБ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ИЗОЛИРОВАНИЯ ИСКОМОЙ БИОЧАСТИЦЫ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО ОБРАЗЦА

1. Способ изолирования искомой биочастицы из биологического образца, включающий стадии:
(a) введение в контакт указанного биологического образца с магнитно-меченым лигандом, обладающим селективным сродством к связыванию искомой биочастицы или детерминанты на искомой биочастице, с образованием комплекса искомая биочастица/меченый лиганд в указанном биологическом образце;
(b) размещение модуля разделения, в котором имеется канал для течения жидкости, в магнитном поле магнитного модуля, при этом указанный магнитный модуль содержит комплект, по меньшей мере, из двух магнитов, в котором соседние магниты в комплекте выровнены по линии и установлены с противоположной полярностью;
(c) пропускание указанного биологического образца через модуль разделения для того, чтобы подвергнуть биологический образец воздействию магнитного поля, пока образец протекает через канал для течения жидкости, с целью захватить с помощью магнитного поля комплекс искомая биочастица/меченый лиганд, остановив или задержав передвижение указанного комплекса внутри канала для течения жидкости;
(d) необязательно, и предпочтительно, пропускание промывочного раствора через канал для течения жидкости, когда указанный комплекс захвачен под действием магнитного поля внутри канала для течения жидкости;
(e) удаление модуля разделения из магнитного поля; и
(f) извлечение указанного комплекса искомая биочастица/меченый лиганд из канала для течения жидкости.
2. Способ изолирования искомой биочастицы из биологического образца, включающий стадии:
(a) введение в контакт указанного биологического образца с магнитно-меченым лигандом, обладающим селективным сродством к связыванию искомой биочастицы или детерминанты на искомой биочастице, с образованием комплекса искомая биочастица/меченый лиганд в указанном биологическом образце;
(b) размещение модуля разделения, в котором имеется канал для течения жидкости, в магнитном поле магнитного модуля, при этом указанный канал для течения жидкости содержит множество трубчатых элементов, имеющих общий вход и общий выход, и при этом указанный магнитный модуль содержит комплект по меньшей мере из двух магнитов, в котором соседние магниты в комплекте выровнены по линии и установлены с противоположной полярностью;
(c) пропускание указанного биологического образца через модуль разделения для того, чтобы подвергнуть биологический образец воздействию магнитного поля, пока образец протекает через канал для течения жидкости, с целью захватить с помощью магнитного поля комплекс искомая биочастица/меченый лиганд, остановив или задержав передвижение указанного комплекса внутри канала для течения жидкости;
(d) необязательно, и предпочтительно, пропускание промывочного раствора через канал для течения жидкости, когда указанный комплекс захвачен под действием магнитного поля внутри канала для течения жидкости;
(e) удаление модуля разделения из магнитного поля; и
(f) извлечение указанного комплекса искомая биочастица/меченый лиганд из канала для течения жидкости.
3. Способ по п.1 или 2, в котором биологический образец является образцом крови, плазмы или сыворотки.
4. Способ по п.3, в котором искомая биочастица представляет собой нуклеиновую кислоту, белок или углевод.
5. Способ по п.3, в котором искомая биочастица является редкой или очень редкой циркулирующей опухолевой клеткой или ее субклеточным компонентом.
6. Способ по п.1 или 2, в котором биологический образец является образцом крови матери, а искомая биочастица является циркулирующей фетальной клеткой.
7. Способ по п.1 или 2, в котором магнитно-меченый лиганд включает лиганд, обладающий селективным сродством к связыванию искомой биочастицы или детерминанты на искомой биочастице, соединенный с магнитными частицами или гранулами.
8. Способ по п.7, в котором лиганд представляет собой антитело, аптамер или нуклеиновую кислоту.
9. Способ по п.1 или 2, в котором на стадии (a) указанный биологический образец вводится в контакт более чем с одним магнитно-меченым лигандом.
10. Способ по п.1 или 2, в котором на стадии (a) одну или более аликвот промывочного раствора пропускают через канал для течения жидкости после указанного биологического образца, а воздушные пузырьки пропускают через канал для течения жидкости между биологическим образцом и промывочным раствором и необязательно между аликвотами промывочного раствора.
11. Способ по п.1 или 2, в котором извлечение комплекса искомая биочастица/меченый лиганд включает стадию вымывания указанного комплекса из канала для течения жидкости, посредством пропускания одной или более аликвот промывочного раствора через канал для течения, необязательно, с воздушными пузырьками между аликвотами промывочного раствора.
12. Способ по п.11, в котором указанная стадия вымывания включает обратную промывку через канал для течения жидкости.
13. Способ по п.1 или 2, в котором извлечение комплекса искомая биочастица/меченый лиганд включает дополнительную стадию отделения указанного комплекса от несвязанного магнитномеченого лиганда.
14. Способ по п.13, в котором указанная стадия отделения является стадией физического отделения.
15. Способ по п.13, в котором на указанной стадии отделения используют второй связывающий агент для захвата комплекса искомая биочастица/меченый лиганд и иммобилизация его на твердой подложке.
16. Способ по п.1 или 2, в котором комплекс искомая биочастица/меченый лиганд, извлеченный из канала для течения жидкости на стадии (f), дополнительно подвергают очистке путем пропускания извлеченного комплекса через второй модуль разделения, расположенный в магнитном поле магнитного модуля, необязательно, промывки захваченного комплекса и извлечения комплекса искомая биочастица/меченый лиганд из второго модуля разделения после того, как модуль удален из магнитного поля.
17. Способ по п.1 или 2, в котором циркулирующие опухолевые клетки (СТС) изолируют из образца крови в первом модуле разделения; захваченные и промытые СТС лизируют в первом модуле разделения, а лизированный материал от СТС извлекают из первого модуля разделения; извлеченный лизированный материал вводят в контакт с магнитно-меченым лигандом искомой молекулы и пропускают через второй модуль разделения, расположенный в магнитном поле магнитного модуля, чтобы захватить с помощью магнитного поля магнитные частицы и связанные искомые молекулы; а затем магнитные частицы и связанные искомые молекулы извлекают из второго модуля разделения после того, как модуль удален из магнитного поля.
18. Способ по п.17, в котором искомая молекула представляет собой нуклеиновую кислоту, белок или углевод.
19. Способ по п.1 или 2, в котором неспецифически захваченные клетки, такие как лимфоциты, отделяют от СТС, изолированных из образца крови в первом модуле разделения, путем введения в контакт захваченных и промытых магнитно-связанных СТС, извлеченных из первого модуля разделения, с антилимфоцитарными антителами, связанными на больших немагнитных бусинах с мечеными лимфоцитами, пропускания смеси через второй модуль разделения, расположенный в магнитном поле магнитного модуля, для захвата магнитно-связанных СТС и отделения их от магнитно-несвязанных лимфоцитов, а затем магнитно-связанные СТС извлекают из второго модуля разделения после того, как модуль удален из магнитного поля.
20. Способ по п.1 или 2, в котором на стадии (а) контакт между указанным биологическим образцом и указанным магнитно-меченым лигандом усиливают с помощью (i) контактирования биологического образца с магнитно-меченым лигандом в точке сбора образца, так что комплекс искомая биочастица/меченый лиганд образуется в процессе перемещения между местом сбора и местом проведения анализа, или (ii) увеличения концентрации магнитно-меченого лиганда при помощи магнита, помещенного ниже дна сосуда, содержащего биологический образец и лиганд, и повторного пропускания образца и лиганда в сосуд, или (iii) образования «облака» из суспендированных частиц магнитномеченого лиганда в канале для течения биологического образца посредством перемещения магнитов вокруг или вдоль пути потока.
21. Устройство для изолирования искомой биочастицы из биологического образца, содержащее:
(i) модуль разделения, содержащий канал для течения жидкости;
(ii) магнитный модуль с магнитным полем, причем указанный магнитный модуль содержит комплект по меньшей мере из двух магнитов, причем соседние магниты в комплекте выровнены по линии и расположены с противоположной полярностью,
при этом модуль разделения имеет первое положение, при котором канал для течения жидкости расположен в магнитном поле магнитного модуля, и второе положение, при котором канал для течения жидкости удален из указанного магнитного поля; и
(iii) устройство управления, содержащее средство для пропускания биологического образца и, необязательно, промывочного раствора через канал для течения жидкости, в модуле для разделения, при этом биологический образец подвергается воздействию магнитного поля магнитного модуля, пока образец протекает через канал для течения жидкости.
22. Устройство для изолирования искомой биочастицы из биологического образца, содержащее:
(i) модуль разделения, содержащий канал для течения жидкости; при этом указанный канал для течения жидкости содержит множество трубчатых элементов, имеющих общий вход и общий выход;
(ii) магнитный модуль с магнитным полем, причем указанный магнитный модуль, содержит комплект, по меньшей мере, из двух магнитов, причем соседние магниты в комплекте выровнены по линии и расположены с противоположной полярностью,
при этом модуль разделения имеет первое положение, при котором канал для течения жидкости расположен в магнитном поле магнитного модуля, и второе положение, при котором канал для течения жидкости удален из указанного магнитного поля; и
(iii) устройство управления, содержащее средство для пропускания биологического образца и, необязательно, промывочного раствора через канал для течения жидкости, в модуле для разделения, при этом биологический образец подвергается воздействию магнитного поля магнитного модуля, пока образец протекает через канал для течения жидкости.
23. Устройство по п.21 или 22, в котором канал для течения жидкости образован из инертной, гибкой пластиковой трубки.
24. Устройство по п.23, в котором трубка имеет внутренний диаметр (ID) от 0,5 до 5 мм, предпочтительно от 0,8 до 1,6 мм, и длину от 50 до 200 мм, предпочтительно от 100 до 125 мм.
25. Устройство по п.21 или 22, в котором магнитный модуль содержит комплект по меньшей мере из двух магнитов из редкоземельных металлов, которые выровнены по линии и бок о бок с соседними магнитами, имеющими противоположную полярность.
26. Устройство по п.21 или 22, в котором модуль разделения является подвижным относительно магнитного модуля, который является неподвижным или стационарным.
27. Устройство по п.21 или 22, в котором магнитный модуль является подвижным относительно модуля разделения, который является неподвижным или стационарным.
28. Способ по п.1 или 2, включающий стадии:
(i) сбора указанного биологического образца в первой точке или точке сбора;
(ii) добавления указанного образца в указанной первой точке к среде для сбора, содержащей указанный магнитно-меченый лиганд;
(iii) последующего направления указанной среды для сбора, содержащей указанный образец и указанный магнитно-меченый лиганд, ко второй точке или точке анализа; и
(iv) завершение указанного способа в указанной второй точке.
29. Способ по п.28, в котором первая и вторая точки отделены, например отдалены или удалены друг от друга.
30. Способ по п.28 или 29, в котором стадии сбора образца и добавления образца к среде для сбора, с одной стороны, и стадию завершения способа, с другой стороны, отделяют друг от друга по времени, в частности отделяют периодом времени перемещения, достаточным не только для перемещения среды для сбора из первой точки до второй точки, но также для формирования комплекса искомая биочастица/меченый лиганд за то время, пока образец перемещается.