ПРОИЗВОДНОЕ ХРОМОНА В КАЧЕСТВЕ АНТАГОНИСТА ДОФАМИНОВОГО РЕЦЕПТОРА D3 ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ ПРИ ЛЕЧЕНИИ РАССТРОЙСТВА АУТИСТИЧЕСКОГО СПЕКТРА
CHROMINE DERIVATIVE AS DOPAMINE D3 RECEPTOR ANTAGONIST FOR APPLICATION IN TREATING AUTISM SPECTRUM DISORDER

Изобретение относится к N-(3-{4-[4-(8-оксо-8Н-[1,3]диоксоло[4,5-g]хромен-7-ил)-бутил]-пиперазин-1-ил}-фенил)-метансульфонамиду или к его фармацевтически приемлемой соли и к его применению в качестве медикамента для лечения расстройства аутистического спектра.
В патентной заявке WO 2011/027289 рассмотрены производные хромона, способ их получения и их терапевтическое применение при лечении неврологических или психиатрических заболеваний. Согласно WO 2011/027289, производные хромона представляют собой частичные агонисты или антагонисты дофаминового рецептора D3.
Следует отметить, что в документе WO 2011/027289 рассмотрен N-(3-{4-[4-(8-оксо-8Н-[1,3]диоксоло[4,5-g]хромен-7-ил)-бутил]-пиперазин-1-ил}-фенил)-метансульфонамид (Пример №21 в заявке WO 2011/027289), соответствующий формуле 1:
Среди заболеваний, которые лечат с помощью производных хромона, в документе WO 2011/027289 указаны: болезнь Паркинсона, психоз, шизофрения, двигательные расстройства, связанные с болезнью Паркинсона, когнитивная недостаточность, необязательно связанная с возрастом или болезнью Альцгеймера, расстройство настроения, эссенциальное дрожание, беспокойство, депрессия, биполярное расстройство, половое бессилие, преждевременная эякуляция, алкоголизм и никотиновая зависимость. Следует отметить, что в документе WO 2011/027289 не рассмотрены и не упомянуты нарушения, связанные с нервно-психическим развитием.
Нарушения, связанные с нервно-психическим развитием, представляют собой группу состояний, начало развития которых приходится на период индивидуального развития. Эти нарушения обычно проявляются в детстве и характеризуются нарушениями развития, которые вызывают ухудшение персональной, социальной, учебной или профессиональной деятельности. Диапазон ограничений (инвалидизации, англ. disabilities) варьируется от весьма специфичных ограничений в обучении или регулировании исполнительных функций до всеобъемлющих нарушений социальных навыков или интеллекта.
Аутизм, являющийся нарушением, связанным с нервно-психическим развитием, характеризуют как нарушение, развивающееся в детском возрасте, которое следует отличать от психозов, и его признаки и симптомы, описанные Каннером в 1943 году (L. Kanner "Autistic Disturbances of Affective Contact (Аутистические нарушения эмоционального контакта)", Nervous Child 2:217-50, 1943), включают различные поведенческие проблемы и нарушения навыков. Ранее в аутизм включали классический инфантильный аутизм или аутизм Каннера, синдром Аспергера, при котором сохраняется владение языком и когнитивные функции, и неуточненное глубокое (первазивное) нарушение развития (англ. pervasive developmental disorder, not otherwise specified, сокращенно PDD-NOS), которое диагностируют, если наблюдается неполный набор критериев для постановки диагноза "аутизм" или "синдром Аспергера". В соответствии с другими классификациями, например, Международной статистической классификацией болезней и проблем, связанных со здоровьем (англ. International Statistical Classification of Diseases and Related Health Problems) 10-ая редакция (ICD-10), установленной Всемирной Организацией Здравоохранения, аутизм включает еще большее количество разновидностей. Изменчивость симптомов и проявлений аутизма, наблюдаемая среди этих разнообразных диагностических категорий, затрудняет понимание того, на какой конкретный симптом направлено терапевтическое лечение.
Однако, совсем недавно диагноз "аутизм" заметно изменился; это привело к отделению концепций аутизма и связанных с ним нарушений от других нарушений, связанных с нервно-психическим развитием (Rapin I., Tuchman R.F. Autism: definition, neurobiology, screening, diagnosis (Аутизм: определение, нейробиология, массовое обследование, диагноз). Pediatr. Clin. North. Am. 2008; 55(5):1129-46), и к объединению диагнозов под одним наименованием: "расстройства аутистического спектра (сокращенно "РАС") (англ. Autism Spectrum Disorder, сокращенно ASD)". Согласно данным Руководства по диагностике и статистическому учету психических расстройств (англ. Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, DSM-5, American Psychiatric Association, American Psychiatric Publishing, Washington D.C., 2013), РАС характеризуются постоянной недостаточностью социального общения и социального взаимодействия в нескольких аспектах, включая недостаточность социальных реакций, невербального общения, используемого при социальном взаимодействии, и навыков создания, поддержания и понимания взаимоотношений. Кроме недостаточности социального общения, диагноз расстройства аутистического спектра характеризуется наличием ограниченных и повторяющихся схем поведения, интересов или действий.
В диагнозе РАС различают индивидуальные клинические характеристики, которые определяют, используя спецификаторы, описывающие аутистические симптомы и степень их проявления. Таким образом, согласно DSM-5, расстройство диагностируют в соответствии со следующими диагностическими критериями:
А: Социальное общение и взаимодействие в нескольких аспектах (должны наблюдаться все 3 признака):
- дефицит социально-эмоциональных ответных реакций;
- дефицит невербального общения, используемого при социальном взаимодействии;
- дефицит в установлении и поддержании отношений.
В: Ограниченное и повторяющееся поведение (должны наблюдаться любые 2 признака):
- стереотипная или повторяющаяся речь, механические движения или механическое использование предметов;
- чрезмерная приверженность к однообразным действиям, ритуалам в вербальном или невербальном поведении, или избыточное сопротивление переменам;
- чрезвычайно ограниченные, фиксированные интересы, характеризующиеся аномальной интенсивностью концентрации;
- гипер- или гипореакции на внешние раздражители или необычный интерес к органолептическому аспекту окружающей среды.
С: Симптомы должны наблюдаться в течение периода раннего развития.
D: Симптомы вызывают клинически значимые нарушения в социальном, профессиональном или других важных аспектах жизнедеятельности.
Е: Умственная недостаточность или общая задержка развития не являются более приемлемым объяснением выявленных нарушений.
РАС является связанным с наследственностью нейропсихиатрическим расстройством: у монозиготных близнецов показатель соответствия достигает 90%, а у дизиготных близнецов - 10% (обзор имеется в публикации Won с соавт., Front. Mol. Neurosci. 2013, т. 6, статья 19). Однако, РАС является этиологически гетерогенным расстройством, поскольку ни одна генная мутация не отвечает более чем за 1-2% случаев его появления (Abrahams с соавт., Nat. Rev. Genet. 2008, т. 9, стр. 341-355). К настоящему времени, анализ выявления генетической связи и исследования генов-кандидатов, общегеномное исследование ассоциаций (англ. genomewide association study, сокращенно GWAS) и оценки хромосомных вариантов позволили определить широкий спектр генов, предрасположенных к мутациям и полиморфизму, связанным с РАС (Persico с соавт., Behav. Brain Res. 2013, т. 251, стр. 95-112). Ни в одном из этих исследований не было показано, что геном предрасположенности к РАС является DRD3.
В 2009 году de Krom с сотрудниками провели исследование генетической связи 1536 однонуклеотидных полиморфизмов (англ. Single Nucleotide Polymorphisms, сокращенно SNPs), содержащихся в 132 генах-кандидатах выборки из 144 пациентов, страдающих РАС, и выборки из 404 лиц контрольной группы (de Krom с соавт., Biol. Psychiatr., 2009, т.65, стр. 625-630). Они обнаружили 31 однонуклеотидный полиморфизм, положительно связанный со значением Р, составляющим менее 0,01, которые были исследованы во второй выборке из 128 пациентов с РАС и 124 лиц контрольной группы. Было обнаружено, что только однонуклеотидный полиморфизм rs167771 положительно связан в двух выборках РАС и в объединенном статистическом анализе. Связь, не подтвержденная при последующем вычислении статистической поправки для множественных сравнений, также была обнаружена между аллелем риска rs167771 и пониженным риском развития повторяющегося поведения у пациентов с РАС, но не в других РАС симптоматических доменах (Staal с соавт., J. Autism Dev. Disord. 2012, т. 42, стр. 885-888).
Однонуклеотидный полиморфизм rs167771 присутствует во втором интроне гена дофаминового рецептора D3. Дофаминовый рецептор D3 экспрессируется практически исключительно в центральной нервной системе, в частности, в вентральной области стриатума, т.е. в части мозга, играющей важную роль в управлении эмоциями и когнитивными способностями (Sokoloff с соавт., Nature 1990, т. 347, стр. 146-151). Дофаминовый рецептор D3 существует в двух аллельных формах, обусловленных однонуклеотидным полиморфизмом, называемым rs6280 (также известным как полиморфизм СМ033372 или Ball), в кодирующей последовательности, что приводит к образованию двух аминокислотных последовательностей, содержащих либо остаток серина (Ser), либо остаток глицина (Gly) в положении 9 (Lannfelt с соавт., Psychiatric Genetics 1992, т. 2, стр. 249-256). Аллель Gly/Gly представляет собой аллель, который может приобретать функции, поскольку его сродство к дофамину в четыре раза выше, чем у аллеля Ser/Ser, и он более восприимчив к дофамину, чем аллель Ser/Ser (Jeanneteau с соавт., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2006, т. 103, стр. 10753-10758). Если подвергаемое лечению расстройство связано либо с приобретением функции (Gly/Gly аллель), либо с потерей функции (Ser/Ser аллель), то может быть предложено терапевтическое лечение, основанное на воздействии на дофаминовый рецептор D3. Например, для лечения расстройства, связанного с Gly/Gly аллелем, приобретающим новые функции, могут быть применены антагонисты дофаминового рецептора D3.
В генной базе данных e!Ensembl человеческого генома (доступна на сайте http://www.ensembl.org) указано, что два однонуклеотидных полиморфизма rs167771 и rs6280 принадлежат к одному контигу NT_005612.16 сборки GRCh37.p10 и разделяются 14540 парами оснований. Данные таблиц неравновесного сцепления (неслучайного распределения) (также доступные на сайте http://www.ensembl.org) указывают на частичное неравновесное сцепление между rs167771 и rs6280, причем величины средних квадратов r (Pritchard с соавт., Am. J. Hum. Genet., 2001, т. 69, стр. 1-14) составляют в различных популяциях от 0,245 до 0,610. Это указывает на то, что генетическая связь rs167771 при РАС формально не предусматривает связи РАС с функциональным однонуклеотидным полиморфизмом rs6280 в дофаминовом рецепторе D3. Соответственно, результаты другого исследования небольшой выборки из 50 пациентов не показали, что rs6280 связан с возникновением РАС (Martineau с соавт., Dev. Med. Child Neurol., 1994, 36:688-697).
На настоящий момент РАС неизлечимы. Для лечения раздражительности, связанной с аутистическим расстройством, которая включает такие симптомы, как агрессия по отношению к другим, нанесение самому себе телесных повреждений, вспышки гнева и быстрые смены настроения, которые не являются ключевыми симптомами, определяющими РАС, Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США были рекомендованы атипичные антипсихолитические (нейролептические) средства, такие как рисперидон или арипипразол. Подростки и молодые люди, страдающие РАС, также склонны к развитию состояний беспокойства и депрессии, которые можно лечить с помощью антидепрессантов, таких как селективные ингибиторы обратного захвата серотонина. Однако, не существует одобренного лечения, направленного на устранение ключевых симптомов РАС, т.е. дефицита социальных взаимодействий и общения и ограниченных интересов.
Кроме того, генетические исследования пока не завершены и не позволяют создать способ лечения РАС, в частности, дефицита социальных взаимодействий.
Неожиданно авторами изобретения было обнаружено, что N-(3-{4-[4-(8-оксо-8Н-[1,3]диоксоло[4,5-g]хромен-7-ил)-бутил]-пиперазин-1-ил}-фенил)-метансульфонамид, рассмотренный в документе WO 2011/027289, оказывает значительный полезный эффект в опытах с животными, у которых воспроизводят ключевые симптомы РАС, полученные в результате пренатального воздействия вальпроата.
Вальпроевая кислота или ее соли вальпроаты представляют собой спазмолитические препараты, например, Депакот (Depakote), которые применяют для лечения эпилепсии, обычных и разнообразных хронических неврологических расстройств, характеризующихся внезапными припадками. Вальпроат также применяют для лечения биполярного расстройства, т.е. психиатрического расстройства настроения, проявляющегося в эпизодах повышенного настроения или возбужденного состояния, известных как мания (или гипомания, в зависимости от тяжести симптомов), чередующихся с эпизодами депрессии. Тератогенное действие (аномалии, связанные с закрытием медуллярной трубки) вальпроата известно и является предметом ретроспективных исследований уже 30 лет. Случаи развития РАС также были обнаружены у детей, рожденных матерями, которые во время беременности принимали вальпроат, и в настоящее время беременных женщин предупреждают о нежелательности потребления вальпроата из-за риска развития РАС у детей. Недавно связанный с приемом вальпроата риск был подтвержден перспективными исследованиями, которые указывают на десятикратное повышение риска развития РАС (Tomson с соавт., Lancet Neurol. 2012, т.11, стр. 803-813; Bromley с соавт., J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 2013, т. 84, стр. 637-643). Полагают, что вальпроат вызывает РАС за счет вмешательства в эпигенетический механизм закрытия медуллярной трубки в период внутриутробного развития (Kataoka с соавт., Int. J. Neuropsychopharmacol. 2013, т. 16, стр. 91-103).
При исследовании РАС у крыс, вальпроат вводили беременным крысам в определенные сутки эмбрионального развития, обычно на 12 сутки, в течение которых у этого вида животных наблюдается закрытие медуллярной трубки, и наблюдение за родившимися после этого детенышами в период младенчества и подросткового возраста показало, что они отличаются выраженными и специфичными аномалиями поведения, сопровождаемыми некоторыми физическими признаками (обзор в публикации Roullet с соавт., Neurotoxicol. Teratol. 2013, т. 36, стр. 47-56). Вызываемые вальпроатом аномалии поведения сильно напоминают симптомы РАС и включают:
- нарушение социального поведения
- стереотипное/повторяющееся поведение
- нарушение чувствительности и коммуникационных навыков
Кроме того, фенотип также включает морфологические перестановки, типичные для РАС, такие как пониженное количество или плотность дендритных шипиков нейронов в префронтальной коре (Bringas с соавт., Neuroscience 2013, т. 241, стр. 170-187), которые придают подопытным крысам, на которых воздействовали вальпроатом, структуру тела и внешний вид, соответствующий патофизиологической модели РАС у животных.
Для оценки потенциального применения гидрохлорида N-(3-{4-[4-(8-оксо-8H-[1,3]диоксоло[4,5-g]хромен-7-ил)-бутил]-пиперазин-1-ил}-фенил)-метансульфонамида, мощного антагониста дофаминового рецептора D3 (см. Пример 1), для лечения РАС, авторами изобретения было исследовано его действие на подопытных животных с РАС (Пример 2). Как показано в Примере 2, N-(3-{4-[4-(8-оксо-8Н-[1,3]диоксоло[4,5-g]хромен-7-ил)-бутил]-пиперазин-1-ил}-фенил)-метансульфонамид гидрохлорид, вводимый в виде единичной дозы, может снижать дефицит социального поведения у молодых крыс, подвергшихся действию вальпроата в период внутриутробного развития. Таким образом, авторами изобретения показано, что названное соединение может быть применено для лечения РАС.
Используемый в настоящем описании термин "дофаминовый рецептор D3", "рецептор D3" или "DRD3" означает подтип дофаминового рецептора, главным образом экспрессируемый в лимбической системе (Sokoloff Р с соавт., Nature 1990, т. 347, стр. 146-151). Дофаминовый рецептор D3 рассмотрен в Международной патентной заявке WO 91/15513. Используемый в настоящем описании термин "частичный агонист рецептора D3" означает соединение, которое образует комплекс с дофаминовым рецептором D3 и действует как комбинированный агонист-антагонист, то есть вызывает физиологическую ответную реакцию с интенсивностью, которая ниже интенсивности естественного медиатора, дофамина. In vitro, в клетке, экспрессирующей дофаминовый рецептор D3, частичный агонист дофаминового рецептора D3 вызывает активную ответную реакцию, максимальная интенсивность которой ниже интенсивности, вызываемой дофамином или полным агонистом, например, квинпиролом (англ. quinpirole, транс(-)-4aR-4,4a,5,6,7,8,8а,9-октагидро-5-пропил-1Н(или 2Н)пиразоло[3,4g]хинолином). Частичный агонист дофаминового рецептора D3 может также частично предотвращать ответную реакцию, вызываемую дофамином или другими полными агонистами. Используемый в настоящем описании термин "антагонист дофаминового рецептора D3" означает молекулу, которая образует комплекс с дофаминовым рецептором D3 и может предотвращать ответную реакцию, вызываемую дофамином или агонистом рецептора в клетке, экспрессирующей дофаминовый рецептор D3.
Используемый в настоящем описании термин "соли" означает соли присоединения соединения согласно настоящему изобретению и неорганической кислоты, органической кислоты, неорганического основания или органического основания. В качестве примера можно упомянуть соли, образуемые неорганическими кислотами, такими как соляная, бромоводородная, фосфорная, серная кислоты, и соли, полученные из органических кислот, таких как уксусная, трифторуксусная, пропионовая, янтарная, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, малеиновая, глютаминовая, бензойная, салициловая, толуолсульфоновая, метансульфоновая, стеариновая, молочная кислоты. Предпочтительно, соли являются фармацевтически приемлемыми, то есть они нетоксичны для организма пациента, которому их вводят. Выражение "фармацевтически приемлемый" относится к молекулярным единицам и композициям, которые не вызывают негативных аллергических реакций или других нежелательных реакций при их введении животному или человеку. Используемое в настоящем описании выражение "фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество" включает любой разбавитель, вспомогательное лекарственное вещество или вспомогательное вещество, такое как консервант, наполнитель, разрыхлитель, смачивающий агент, эмульгатор, диспергирующее вещество, антибактериальный или противогрибковый агент, а также агенты, способствующие замедлению абсорбции и всасывания в желудочно-кишечном тракте. Применение таких сред или носителей хорошо известно в данной области техники. За исключением тех случаев, когда агент химически несовместим с соединением согласно изобретению, изобретение включает его добавление в фармацевтические композиции, содержащие соединение согласно изобретению.
Используемый в настоящем описании термин "лечение" означает предотвращение или замедление возникновения или прогрессирования состояния, к которому относится термин, или одного или более симптомов этого состояния. "Терапевтически эффективное количество" означает количество соединения согласно изобретению, достаточное для достижения требуемого терапевтического эффекта согласно изобретению. Согласно изобретению, термин "пациент" означает человека с РАС или чрезвычайно предрасположенного к развитию РАС.
Согласно настоящему изобретению, соединение (N-(3-{4-[4-(8-оксо-8H-[1,3]диоксоло[4,5-g]хромен-7-ил)-бутил]-пиперазин-1-ил}-фенил)-метансульфонамид) или его фармацевтически приемлемую соль, предпочтительно гидрохлорид, применяют в качестве медикамента для лечения РАС и, в частности, дефицита социальных взаимодействий.
Изобретение также относится к лечению РАС, которое включает введение соединения (N-(3-{4-[4-(8-оксо-8Н-[1,3]диоксоло[4,5-g]хромен-7-ил)-бутил]-пиперазин-1-ил}-фенил)-метансульфонамид) или его фармацевтически приемлемой соли в терапевтически эффективном количестве пациенту, нуждающемуся в лечении.
Кроме того, изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение (N-(3-{4-[4-(8-оксо-8Н-[1,3]диоксоло[4,5-g]хромен-7-ил)-бутил]-пиперазин-1-ил}-фенил)-метансульфонамид) или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которые применяют в качестве медикамента для лечения РАС, в частности, дефицита социальных взаимодействий.
В другом примере осуществления изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим комбинации соединения (N-(3-{4-[4-(8-оксо-8Н-[1,3]диоксоло[4,5-g]хромен-7-ил)-бутил]-пиперазин-1-ил}-фенил)-метансульфонамид) или его фармацевтически приемлемой соли с другими известными медикаментами, применяемыми при лечении пациентов с РАС, и фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, для применения в качестве медикаментов для лечения расстройства аутистического спектра, в частности, дефицита социальных взаимодействий.
Предпочтительно, соединение согласно изобретению применяют в комбинации с соединением, выбранным из группы, состоящей из мемантина, амантадина, баклофена, R-баклофена, фенобама (англ. phenobam), акампросата, буметамида, карпипрамина, окситоцина, вазопрессина и их смесей, и фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом.
Композиции согласно изобретению могут быть введены пероральным, трансдермальным, парентеральным, назальным или перректальным способами. В частности, композиции могут быть введены перорально в виде подходящего препарата. Дозировки соединения N-(3-{4-[4-(8-оксо-8Н-[1,3]диоксоло[4,5-g]хромен-7-ил)-бутил]-пиперазин-1-ил}-фенил)-метансульфонамид) в композициях согласно изобретению можно регулировать для достижения такого количества активного вещества, которое достаточно для создания требуемой терапевтической ответной реакции на композицию, подходящую для конкретного способа введения. Таким образом, выбранная величина дозировки зависит от требуемого терапевтического эффекта, пути введения, требуемой длительности лечения и других факторов, например, массы тела пациента. Дозировки могут составлять от 0,001 до 10 мг на кг массы тела. Предпочтительные дозировки составляют от 0,05 до 2 мг на кг массы тела.
Приведенные ниже примеры предназначены для иллюстрации изобретения и не ограничивают его объем.
Пример 1
-1
Гидрохлорид N-(3-{4-[4-(8-оксо-8Н-[1,3]диоксоло[4,5-g]хромен-7-ил)-бутил]-пиперазин-1-ил}-фенил)-метансульфонамида исследовали in vitro в качестве лиганда дофаминового рецептора D3 и модулятора активности этого рецептора в соответствии с изобретением в клетках, экспрессирующих рекомбинантный дофаминовый рецептор D3 человека или рекомбинантный дофаминовый рецептор D2 человека. Константу ингибирования (Ki) определяли по ингибированию связывания [3Н] спиперона, как описано Cussac с соавт.в публикации Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 2000, т.361, стр. 569-572. Авторами изобретения было показано, что соединение согласно изобретению ведет себя как мощный лиганд дофаминового рецептора D3, величины Ki которого составляют от 0,17 наномоль⋅литр. Это же соединение демонстрирует заметное сродство к дофаминовому рецептору D2, но оно в 71 раз слабее.
Активность соединения согласно изобретению в качестве агониста, частичного агониста или антагониста дофаминового рецептора D3 была оценена с помощью испытания воздействия МАР-киназы (митоген-активируемой протеинкиназы) на рекомбинантный дофаминовый рецептор D3 человека (Cussac с соавт., Mol. Pharmacol. 1999, т. 56, стр. 1025-1030). Собственная активность этого соединения была нулевой, что указывает на то, что соединение является полным антагонистом.
Пример 2
Действие гидрохлорида N-(3-{4-[4-(8-оксо-8H-[1,3]диоксоло[4,5-g]хромен-7-ил)-бутил]-пиперазин-1-ил}-фенил)-метансульфонамида анализировали в опытах по социальному взаимодействию детенышей самок крыс, которым вводили вальпроевую кислоту в виде натриевой соли. Условия проведения эксперимента по исследованию аутизма на примере крыс, которым вводили вальпроевую кислоту, были взяты из опубликованной литературы (Dendrinos с соавт., Front. Integr. Neurosci. 2011, т. 5, статья 68; Markram с соавт., Neuropsychopharm. 2007, т. 33, стр. 901-912; Schneider с соавт., Neuropsychopharm. 2005, т. 30, стр. 80-89).
Способ
2
Беременных (не более 8 суток) самок крыс породы Sprague-Dawley [OFA (SD) Charles River Lyon, Франция] выдерживали на карантине в течение 4 суток. Животных размещали группами (2 в одну клетку) в клетки с полными обводами днища (клетка ML-H, 370×235×180 мм, L×W×H; поверхность пола 870 см) в помещении с регулируемыми характеристиками окружающей среды (температура 21 плюс/минус 1°С; относительная влажность 55 плюс/минус 5%) при 12-часовом световом дне цикла чередования света и темноты (свет включали в 07:00 утра) и снабжали неограниченным доступом к пище (А04, Safe, Augy, Франция) и фильтрованной воде (диаметр пор фильтра 0,2 мкм). До отнятия детенышей животных меняли только один раз в неделю для того, чтобы свести беспокойство к минимуму. Животным также обеспечивали обогащение среды (материал для гнезда).
На 12 и 13 (Е12-Е13) сутки беременности самок взвешивали и с помощью трех внутрибрюшинных инъекций вводили 2,4 мл/кг вальпроата натрия (NaVPA, 200 мг/кг). Вальпроат натрия растворяли в 0,9% солевом растворе до достижения концентрации 83,3 мг/мл, рН 7,3. Самкам контрольной группы вводили три внутрибрюшинные инъекции солевого раствора (2,4 мл/кг). После третьей инъекции самок размещали индивидуально в клетки ML-H типа и оставляли растить детенышей. Детенышей отнимали в возрасте от 21 до 23 суток от рождения.
Одну из крыс, подвергшихся действию вальпроата натрия или солевого раствора, и незнакомую, не подвергавшуюся воздействию крысу помешали в противоположные углы арены (черная арена размерами 70 см × 70 см × 30 см, L × I × Н). В течение 10 минут фиксировали индивидуальное поведение, относящееся к социальному взаимодействию, такое как последующий груминг, обнюхивание или укусы другой крысы, а также перелезание через другую крысу, инициируемое испытуемой крысой в отношении незнакомой крысы.
Результаты
Действие однократного введения соединения согласно изобретению на социальное взаимодействие детенышей крыс, которым вводили солевой раствор или вальпроат натрия, представлено на Фиг. 1.
Приведенные данные представляют собой средние значения «плюс/минус» стандартная погрешность среднего для n равно 10 крыс (5 самок и 5 самцов).
Соединение согласно изобретению не оказывает существенного влияния на социальное взаимодействие детенышей самок, которые получили солевой раствор.
Дозировка 0,63 мг/кг соединения согласно изобретению значительно снижает дефицит социальных взаимодействий, вызываемый пренатальным воздействием вальпроата натрия. Дозировка 2,5 мг/кг соединения согласно изобретению полностью устраняет этот дефицит.
Соединение согласно изобретению представляет собой потенциально интересный препарат для лечения расстройств аутистического спектра и, в частности, для лечения дефицита социальных взаимодействий.