УЛУЧШЕННОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ ПРИ ИОНООБМЕННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Способ разделения и очистки белка из смеси белков, с помощью этапов:
а) обеспечение образца, содержащего по меньшей мере два различных белка,
б) нанесение этой смеси на ионообменный материал с общим содержание белка ≥5 мг/мл, в особенности ≥30 мг/мл, в частности ≥60 мг/мл,
в) прогон противоположного градиента рН-соль путем повышения рН и снижения концентрации соли для разделения белков, или наоборот, прогон снижающегося рН и повышающейся концентрации соли, или прогон возрастающего градиента рН, или прогон понижающегося рН градиента,
г) использование данных разделения из в) для определения и прогона профиля стадии элюирования для разделения белков и
д) разделение белков путем ступенчатого элюирования.
2. Способ разделения и очистки белка из смеси белков, с помощью этапов:
а) обеспечение образца, содержащего по меньшей мере два различных белка,
б) нанесение этой смеси на ионообменный материал с общим содержание белка ≥5 мг/мл, в особенности ≥30 мг/мл, в частности ≥60 мг/мл,
в) прогон противоположного градиента рН-соль путем повышения рН и снижения концентрации соли для разделения белков, или наоборот, прогон снижающегося рН и повышающейся концентрации соли, или прогон возрастающего градиента рН, или прогон понижающегося рН градиента,
г) разделение белков путем градиентного элюирования.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором смесь белков адсорбирована или связана с и элюируется из ионообменного материала.
4. Способ по п. 1 или 2, в котором смесь белков адсорбирована и элюируется из катионообменного материала.
5. Способ по п. 1 или 2, в котором смесь белков адсорбирована и элюируется из анионообменного материала.
6. Способ по п. 1, в котором смесь белков адсорбирована или связана и элюируется из хроматографического материала смешанного режима.
7. Способ по пп. 1-6, в котором в
в) противоположный рН-солевой градиент индуцирован буферной системой, использующей MES, MOPS, CHAPS и аналогичные биологические буферы и системы изменения электропроводимости с применением хлорида натрия.
8. Способ по пп. 1-6, в котором в в) рН изменяют в диапазоне от 4-10,5 и концентрацию соли в диапазоне 0-1М соли.
9. Способ по пп. 1-6, в котором градиент рН индуцирован путем применения буферной системы, доведенной до рН 5 и 9,5.
10. Способ по одному или нескольким пп. 1-9, в котором солевой градиент индуцирован в интервале концентрации в диапазоне 0-0,25 М.
11. Способ по одному или нескольким пп. 1-10, в котором градиент рН индуцирован путем применения буферной системы по крайней мере двух буферных растворов, таким образом адсорбция или связывание белков осуществляется в присутствии одного буферного раствора, а элюирование осуществляется в присутствии возрастающих концентраций другого буферного раствора, при этом значение рН возрастает, а концентрация соли снижается одновременно.
12. Способ по одному или нескольким пп. 1-10, в котором градиент рН индуцирован путем применения буферной системы по крайней мере двух буферных растворов, таким образом адсорбция или связывание белков осуществляется в присутствии одного буферного раствора, а элюирование осуществляется в присутствии возрастающих концентраций другого буферного раствора, при этом рН снижается и концентрация соли возрастает одновременно.
13. Способ по одному или нескольким пп. 1-12, где белки, в частности моноклональные антитела (mAB), разделяют и очищают от их ассоциированных заряженных вариантов, вариантов гликозилирования, и/или вариантов растворимых размеров, димеров и агрегатов, мономеров, 2/3 фрагментов,  фрагментов, фрагментов в общем, антигенсвязывающих фрагментов (Fab) и Fc фрагментов.