Факторы кислородзависимой бактерицидности вагинальной жидкости при неспецифическом вагините и вагинозе

МАТЕРИАЛЫ.

1,69±0,03 х109/л в контроле, р<0,05) количества лимфоцитов. При этом регистрировалось снижение относительного содержания Т-лимфоцитов (61,26±1,92% против 69,8±1,7% в контроле, р<0,01) с преобладанием среди данной популяции CD8 клеток, содержание которых достоверно превышало контрольные значения (652,48±52,04 х106/л против 505,3±44,82 х106/л в контроле, р<0,05). Нарушения в системе клеточного иммунитета сопровождались изменениями факторов естественной резистентности -фагоцитоза. У больных хроническим бруцеллезом способность нейтрофилов разрушать захваченные микробы была снижена: индекс завершенности фагоцитоза составлял 0,77±0,02 против 1,0±0,04 в контроле, р<0,001). Об этом же косвенно свидетельствуют низкие значения индекса Кальф-Калифа (0,44±0,05 против 1,0±0,03 в контроле, р<0,001), отражающие угнетение нейтрофильного гранулоцитарного ростка.

Заключение. Таким образом, у больных хроническим бруцеллезом нарушения клеточного реагирования на присутствие в организме факультативных внутриклеточных бактерии, принадлежащих к роду Brucella, выявляются как на уровне факторов неспецифической защиты, так и Т-системы иммунитета. Закономерности изменений системы иммунитета имеют специфические особенности применительно к данному патологическому процессу: снижение способности фагоцитов к разрушению захваченных микроорганизмов, иммуно-регуляторные расстройства с преобладанием среди уменьшенной популяции Т-лимфоцитов цитотоксических клеток.

Т.Ю. Теровская

колонизационная резистентность репродуктивного тракта женщин при оппортунистических вагинальных инфекциях

ГОу ВпО сибирский государственный медицинский университет росздрава, г Томск; клиническая больница № 81, г северск

Цель исследования: определение состояния местной противо-инфекционной защиты при оппортунистических вагинальных инфекциях у жительниц г. Северска.

Материал и методы. На базе КБ № 81 г. Северска обследовано 90 женщин 18-40 лет, не имеющих на момент осмотра микст-инфекций. Контроль 1: 10 клинически здоровых пациенток, не работающих на Сибирском химическом комбинате (СХК). Контроль 2: 10 здоровых работниц СХК. Группа 3: 35 пациенток с аномальными влагалищными выделениями, не работающих на СХК. Группа 4: 35 работниц СХК с аномальными вагинальными выделениями. В зависимости от клинических, бактериологических и бактериоскопи-ческих данных 3 и 4 группы были поделены на больных с неспецифическим вагинитом (НВ): НВ 3 - 21 и НВ 4 - 6 человек, с вагинальным кандидозом (ВК): ВК 3 - 9 и ВК 4 - 15 человек, с бактериальным вагинозом (БВ): БВ 3 - 5 и БВ 4 - 14 человек соответственно. Исследуемый материал: вагинальная жидкость (ВЖ). Бактериоскопи-ческое и бактериологическое исследования проводили традиционными методами диагностики, регламентированными Приказами МЗ СССР и методическими рекомендациями. Фагоцитарную активность нейтрофилов изучали с использованием НСТ-теста, активность мие-лопероксидазы - методом Грэхема-Кнолля, определяли количество и степень жизнеспособности лейкоцитов (СЖЛ). Активность лизо-цима исследовали нефелометрическим методом по В.Г. Дорофейчу-ку (1968), концентрацию Ig А - методом радиальной иммунодиффу-зии в геле по Г. Манчини (1963), определяли активность каталазы ВЖ (Уайт А., 1981).

Результаты. При изучении микробиоценоза влагалища в контрольных группах лактобактерии присутствовали более 106 КОЕ/мл, Staphylococcus spp. в количестве 1,2-1,3 lg; во 2-м контроле в 20% случаев обнаруживались C.albicans (1,2 lg±0,2, р<0,05). При изучении местной противоинфекционной защиты влагалища между контролями достоверные различия отсутствовали за исключением активности миелопероксидазы, которая на 41,8% меньше во 2-й группе. Миело-пероксидаза нейтрофилов - показатель кислородзависимой бакте-рицидности ВЖ, многие авторы отмечали ее низкие значения при некоторых хронических заболеваниях и воздействии неблагоприятных факторов.

При НВ в 3-й и 4-й группах количество лактобактерий было в 2-3 раза меньше, чем в контроле; аэробная условно-патогенная микрофлора (УПМ) выявлялась в 104-105 КОЕ/мл; число лейкоцитов в 4 раза больше контроля, в 2 раза выше их фагоцитарная способность, в 8-9 раз больше степень жизнеспособности лейкоцитов (СЖЛ). Высокие показатели СЖЛ могут быть обусловлены постоянным притоком «свежих» клеток вследствие лейкоцитоза. Уровень IgA ВЖ в 2 ра-

за, а активность каталазы - в 3 раза превышали контрольные значения. Аэробные микроорганизмы синтезируют каталазу в целях анти-оксидантной защиты от аутоповреждения. Активность лизоцима при НВ (в 3-й и 4-й группах) меньше в 2 раза. Активность миелоперок-сидазы на 35% ниже в 3-й группе; в 4-й группе достоверных различий с контролем нет.

При ВК количество лактобактерий примерно на 30% ниже, чем к контроле; С.а1Ыса^ выявлялись более 105 КОЕ/мл, в незначительном количестве определялась аэробная УПМ. Число лейкоцитов при ВК в 3-4 раза, СЖЛ - в 4-6 раз больше контроля, но в 3-й группе эти показатели значительно выше, чем в 4-й. Уменьшение СЖЛ связывают с цитотоксичностью ВЖ. Активность миелопероксидазы нейтрофилов у пациенток с ВК не имеет достоверных различий с контролем, но в 4-й группе этот показатель в 1,8 раз ниже, чем в 3-й. Уровень лизоцима у больных ВК примерно вдвое меньше контроля, но достоверно более низкие его значения наблюдались в 4-й группе. НСТ-тест и уровень ^ А при ВК в 2 раза превышали контрольные значения.

При БВ лактобактерии и аэробная УПМ отсутствовали, выявлялись анаэробы и гарднереллы. число лейкоцитов, СЖЛ, фагоцитарная способность лейкоцитов, уровень ^ А, активность миелопероксидазы и лизоцима ВЖ имели более низкие значения при этой патологии, чем при НВ и ВК. Активность каталазы в 1,6-1,8 раз ниже, чем в контроле. Активность миелопероксидазы при БВ в 1,7-2 раза меньше контрольных значений; достоверно ниже этот показатель в 4-й группе, чем в 3-й.

Заключение. Таким образом, у клинически здоровых работниц СХК наблюдалось бессимптомное кандидоносительство (в 20 %); активность миелопероксидазы была меньше, чем в 1-м контроле. При НВ и ВК в высоком титре присутствовала аэробная УПМ; уровень ^А, число лейкоцитов и СЖЛ значительно выше соответствующих конт-рольных значений; отмечалась также активация фагоцитарной способности нейтрофилов; активность лизоцима имела низкие значения. При БВ выявлены более значительные нарушения микробиоценоза влагалища и местной противоинфекционной защиты, чем при НВ и ВК. У работниц СХК с оппортунистическими вагинальными инфекциями нарушения колонизационной резистентности влагалища проявлялись в большей степени, чем у пациенток 3-й группы.

Т.Ю. Теровская**, Е.П. Красноженов*

факторы кислородзависимой бактерицидности вагинальной жидкости при неспецифическом ВАГИНИТЕ И бактериальном ВАГИНоЗЕ

* ГОу ВпО сибирский государственный медицинский университет росздрава, г Томск; ** клиническая больница № 81, г северск

Цель исследования: изучение некоторых факторов, характеризующих местную противоинфекционную защиту репродуктивного тракта у жительниц г. Северска.

Материал и методы. На базе КБ № 81 г. Северска обследовано 66 женщин 18-40 лет, не имеющих на момент осмотра микст-инфекций. 1-я группа (контроль): 20 клинически здоровых женщин. Пациентки 2-й и 3-й групп имели аномальные вагинальные выделения.

2-я группа: женщины, у которых в ходе дальнейших исследований диагностировали неспецифический вагинит (НВ) - 27 человек.

3-я группа: 19 пациенток с бактериальным вагинозом (БВ). Исследуемый материал: вагинальная жидкость (ВЖ). Бактериоскопическое и бактериологическое исследования проводили традиционными методами диагностики, регламентированными Приказами МЗ СССР и методическими рекомендациями. Активность миелопероксидазы лейкоцитов исследовали методом Грэхема-Кнолля; определяли активность каталазы ВЖ (Уайт А., 1981); фагоцитарную способность нейтрофилов изучали с использованием НСТ-теста; оценивали степень деструкции клеток вагинального эпителия.

Результаты. В контрольной группе при бактериологическом исследовании лактобактерии присутствовали более 106 КОЕ/мл, в низком титре (1,2-1,3 обнаруживались коагулазонегативные стафилококки (в 50% случаев) и С.а1Ыса^ (в 10% случаев). Активность миелопероксидазы лейкоцитов в этой группе составила 1,78±0,05 (р<0,05); активность каталазы ВЖ - 43,67±1,9 мкат/л (р<0,05); НСТ-тест - 1,25±0,16; степень деструкции эпителиальных клеток - 0,16±0,3 (р<0,05).

У больных НВ количество лактобактерий было в 2,5 раза меньше, чем в контроле; аэробная условно-патогенная микрофлора (УПМ) выявлялась в 104-106 КОЕ/мл. Активность миелопероксидазы лейкоцитов при НВ на 19,7% меньше контроля; активность каталазы

СИБИРСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ № 32008

ВЖ больше в 2,8 раз; фагоцитарная способность нейтрофилов в 1,8 раз больше; степень деструкции вагинального эпителия в 4,8 раз больше контроля.

У пациенток с БВ лактобактерии и аэробная УПМ отсутствовали, выявлялись анаэробы и гарднереллы. Активность миелопероксидазы лейкоцитов при БВ на 49,5% ниже контроля и на 37,1% меньше этого показателя при НВ. Активность каталазы ВЖ при БВ в 1,7 раз ниже контроля и в 4,9 раз меньше, чем при НВ. Показатели НСТ-теста при БВ в 1,7 раз меньше контроля и в 3 раза меньше, чем при НВ. Степень деструкции эпителиальных клеток в 9,6 раз выше контроля и в 2 раза больше, чем при НВ.

Пероксидазы (миелопероксидаза нейтрофилов, каталаза ВЖ) и перекись водорода лактобактерий - компоненты, определяющие кислородзависимую бактерицидность ВЖ. Генерированные лактоба-циллами активные формы кислорода препятствуют росту анаэробных микроорганизмов. В результате жизнедеятельности аэробных микроорганизмов образуется гидроксильный анионрадикал, который инициирует процессы пероксидации макромолекул, в том числе и липопротеинов клеточных мембран эпителия. В целях антиокси-дантной защиты от аутоповреждения аэробные микроорганизмы синтезируют каталазу, которая разрушает супероксиданионрадикал и перекись водорода. Многие авторы указывают, что при БВ увеличивается активность протеолитических ферментов и происходит деградация белковых макромолекул. В результате происходит активация процессов клеточной дезинтеграции и, как следствие, избыточная десквамация эпителиальных клеток.

Заключение. Таким образом, при НВ индигенная микрофлора влагалища (лактобактерии) обнаруживалась в меньшем количестве, а аэробная УПМ - в значительно большем титре, чем у здоровых женщин. При этом заболевании отмечалась активация фагоцитоза (выражающаяся в показателях НСТ-теста), активность миелопе-роксидазы нейтрофилов была меньше, чем в контроле. Более низкие значения миелопероксидазы могли быть обусловлены некоторым «истощением» ее активности в результате стимуляции фагоцитоза. Активность каталазы ВЖ была при НВ больше контроля. Это может быть обусловлено синтезом этого фермента аэробной УПМ для защиты от аутоповреждения и высвобождением каталазы из поврежденных эпителиоцитов слизистой оболочки влагалища.

При БВ отмечались более выраженные (в сравнении с контролем и НВ) нарушения микробиоценоза влагалища с полным исчезновением индигенной микрофлоры, отсутствием аэробной УПМ, наличие только анаэробов. При этом заболевании обнаружены наиболее низкие показатели активности миелопероксидазы нейтрофилов и каталазы ВЖ, характеризующие кислородзависимую бактерицидность ВЖ. Также при этой патологии значительно угнетен фагоцитоз; степень деструкции вагинального эпителия имеет максимальные значения.

В.О. Ткачев, Н.Н. Вольский, О.Т. Кудаева, О.П. Колесникова МЕТАБОЛИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ МАКРОФАГОВ ОПРЕДЕЛЯЕТ ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ РТПХ

ГУ нии клинической иммунологии сО рАМн, г новосибирск

Цель исследования: исследовать метаболическое состояние макрофагов в динамике развития хронической реакции трансплантат против хозяина (РТПХ) с учетом ее клинических вариантов (Th1- и ^2-зависимого).

Материал и методы. Хроническая РТПХ индуцировалась переносом лимфоидных клеток в полуаллогенной системе DBA/2 ^ (C57B16 x DBA/2)F1 (BDF1) в дозе 65х106 клеток двукратно с интервалом 6 дней. О частоте развития ^2-зависимого варианта хронической РТПХ судили по развитию аутоиммунного иммуноком-плексного гломерулонефрита, характеризующегося стойкой проте-инурией (> 3,5 мг/мл).

Для изучения влияния дегидроэпиандростерона сульфата (DHEA-S) на пути метаболизма аргинина в опытах in vivo гормон вводили подкожно в дозе 37,5 мкг/кг веса интактным мышам BDF1, а в опытах in vitro добавляли к клеточным культурам в конечной концентрации 0,2 мг/мл.

Исследование продукции оксида азота и активности макрофа-гальной аргиназы проводилось в культурах резидентных перитоне-альных макрофагов, полученных стандартным способом.

Продукция оксида азота оценивалась с помощью реактива Грис-са по содержанию нитритов в супернатантах клеточных культур макрофагов, спустя 48 часов культивирования. Для активации NO-синтазы использовали LPS (E. Coli B5:055 10 мкг/мл) и супернатант смешанной культуры лимфоцитов, содержащий IFN-y.

Активность аргиназы в макрофагах оценивали по скорости образования мочевины, количественно определяемой при помощи

альфа-изонитрозопропиофенона, при инкубации лизата клеток с аргинином.

Результаты. Установлено, что на ранних сроках после индукции хронической РТПХ (первые две недели после индукции) не происходит значимого изменения активности макрофагальной аргиназы. Продукция оксида азота имеет тенденцию к увеличению на третьи сутки после первого переноса. На девятые сутки (третьи сутки после второго переноса) достоверно увеличивается спонтанная и LPS/IFN-у-стимулированная продукция NO.

На поздних сроках особенности метаболизма аргинина зависят от варианта течения хронической РТПХ. При ^2-зависимом варианте преобладают макрофаги, отличающиеся более высокой активностью аргиназы (на 83%), а при Thl-зависимом варианте - более высоким уровнем продукции NO, стимулированной LPS или LPS в сочетании с IFN-y (на 46%) в сравнении с клетками мышей с оппозитным вариантом течения РТПХ.

В опытах in vitro показано, что DHEA-S существенно угнетает активность аргиназы (на 63%) и одновременно несколько снижает LPS/IFN-у-стимулированную продукцию NO (на 19%), что приводит к сдвигу баланса в сторону преобладания NO-синтазы.

Вводимый интактным мышам BDF1 DHEA-S существенно увеличивает LPS-стимулированную продукцию оксида азота (в 5,6 раза через 12 часов и в 7,2 раза - через 24 часа после введения гормона), при этом не оказывая влияния на LPS/IFN-у-стимулированную продукцию и не меняя активность аргиназы в клетках.

Введение DHEA-S четырехкратно в той же дозе на этапе индукции РТПХ приводит к преимущественному развитию Thl-зависи-мого варианта хронической РТПХ, уменьшая долю мышей с аутоиммунным поражением почек более чем в два раза.

Заключение. Полученные данные позволяют сделать вывод о важной роли метаболического состояния макрофагов в патогенезе иммунопатологических состояний при Thl- и ^2-зависимых вариантах хронической РТПХ. Влияние DHEA-S на NO-синтаза/ар-гиназный баланс in vivo и in vitro, по всей видимости, тесно связано с его способностью направлять иммунные реакции в Thl-сторону. Таким образом, пути метаболизма аргинина макрофагов могут являться важной точкой приложения терапевтического воздействия при коррекции нарушений иммунитета, связанных с изменением Thl/ ^2-баланса.

Е.Г. Учасова, А.А. Лигачева, М.Г. Данилец, Н.В. Бельская, Ю.П. Бельский, Е.С. Трофимова, А.М. Гурьев*, М.В. Белоусов*, Р.Р. Ахмеджанов*, М.С. Юсубов*, В.И. Агафонов ВЛИЯНИЕ ВОДОРАСТВОРИМЫХ ПОЛИСАХАРИДОВ ДЕВЯСИЛА НА ПРОДУКЦИЮ N0 И ЭКСПРЕССИЮ АРГИНАЗЫ МАКРОФАГАМИ МЫШИ нии фармакологии сО рАМн, Томск; *ГОу ВпО сибирский государственный медицинский университет росздрава, г Томск

Известно, что Thl и Th2 цитокины активируют макрофаги (Мф) классическим или альтернативным путем, поляризуя их в М1 или М2 клетки [Goerdt S., 1999; Mills C.D., 2000; Mantovani A., 2002; Mosser D.M., 2003; Kreider T., 2007]. Ml (провоспалительные Мф) интегрированы в Thl иммунный ответ (секретируют TNF-a, IL-12, IL-lß, IL-6, IL-23, участвуют в деструкции экстрацеллюлярного ма-трикса, стимулируют апоптоз) [Goerdt S., 1999; Mantovani A., 2004; Mantovani A., 2006]. M2 противодействуют воспалению и поддерживают Th2 тип ответа (вырабатывают IL-10, IL-1ra, TGF-ß, участвуют в ангиогенезе и восстановлении поврежденной ткани, ремоделировании, поддерживают пролиферацию клеток) [Gratchev A., 2001; Gordon S., 2003; Mosser D.M., 2003; Mantovani A., 2004; Kreider T., 2007]. Поляризованные Мф обладают особым состоянием метаболизма аргинина: у М1 он является субстратом для iNOS и преобразовывается в оксид азота, а у М2 - для аргиназы (Arg) с выходом полиаминов и орнитина [Munder M., 1998; Kreider T., 2007]. В свою очередь, клетки моноцитарно-макрофагального ряда (в том числе и Мф) в значительной степени определяют направление поляризации Т-хелперов, продуцируя соответствующие цитокины (ИЛ-12 или ИЛ-10) в раннюю фазу взаимодействия организма с антигеном [Macatonia S.E., 1995]. Учитывая роль Мф в определении качества иммунного ответа, представляется актуальным выявить вещества, способные регулировать функциональное состояние Мф. Свое внимание мы сосредоточили на полисахаридах (ПС), поскольку показано, что они могут взаимодействовать с различными рецепторами Мф, вызывая при этом появление у клеток воспалительных или противовоспалительных свойств [Schepetkin I.A., 2006].