Способ получения биологически активного комплексного йодметаболического препарата для стимуляции эритропоэза, энергетического обмена, профилактики анемического синдрома, гипоксии, гипомикроэлементозов
METHOD FOR PRODUCING A BIOLOGICALLY ACTIVE COMPLEX IODINE-METABOLIC PREPARATION FOR STIMULATING ERYTHROPOIESIS, ENERGY METABOLISM, PREVENTING AN ANEMIC SYNDROME, HYPOXIA, HYPOMICROELEMENTOSES

Изобретение относится к фармакологии и касается способов получения биологически активных препаратов для использования в ветеринарии для стимуляции энергетического обмена, эритропоэза, профилактики анемии, гипоксии и гипомикроэлементозов у животных.
Одной из наиболее распространенных клинических форм нарушения обменных процессов в организме человека и животных является анемия. По данным ВОЗ анемия (анемический синдром, малокровие) наблюдается у каждого четвертого человека, т.е. соизмерима с эпидемией.
Проблема анемии экономически значима и в животноводстве. Так, у подсосных поросят анемический синдром развивается настолько быстро, что без применения противоанемических препаратов к 14-дневному возрасту достигает критических значений. В этой связи применение противоанемических препаратов является непременным условием выращивания поросят в промышленном свиноводстве.
Согласно многочисленным клиническим наблюдениям анемический синдром, в той или иной степени выраженности, является атрибутом практически всех патофизиологических состояний и инфекционных заболеваний. При низком уровне гемоглобина защитные силы ослабевают настолько, что организм становится чувствительным к инфекционным патогенам, которые самостоятельно редко вызывают заболевание. Самой опасной считается анемия, при которой уровень гемоглобина опускается ниже 70 г/л. В таком состоянии перестают нормально работать все органы и системы организма, что ведет к развитию полиорганной недостаточности.
Для профилактики анемии в гуманной и ветеринарной медицине используются разные подходы, но все они основаны на применении средств, стимулирующих эритропоэз.
В гуманной медицине для профилактики анемического синдрома наибольшее значение получили препараты, созданные на основе неорганических и органических солей железа, в частности, на основе сульфата железа (феоспан, конферон, тардиферрон, актиферрин, ферроградумед и др.), сульфитов закиси железа (феррокаль, ферроплекс), а также хлорида и лактата железа [Чернов В.М., Тарасова И.С. Эффективность и безопасность препаратов трехвалентного железа в лечении железодефицитной анемии // Лечащий врач, 2013, №8. - С. 40-44].
Для усиления антианемичного действия известны препараты, сочетающие в единой лекарственной форме соли железа с аскорбиновой кислотой (ферроплекс, железоаскорбат, фитином (фитоферолактол), медью (гемостимулин), алоэ и лимонной кислотой (ферралоэ), с фосфором (глицерофосфат), аминокислотами D,L- серином (актиферрин).
Все эти препараты предназначены для применения внутрь (per os).
Основным недостатком существующих лекарственных противоанемических препаратов медицинского назначения на основе железа является низкая эффективность при пероральном методе применения. Кроме того, при длительном приеме или при применении возрастающих доз возникают побочные эффекты, такие как изжога (ацидоз), тошнота, рвота, боли в области желудка, диарея. Это связано с тем, что при окислении солей металлов в организме образуются свободные радикалы, которые повреждают слизистую желудочно-кишечного тракта. Именно из-за такого побочного действия продолжительный прием препаратов с железом невозможен. Отсутствие позитивного эффекта орального применения противоанемических препаратов во многом обусловлено низкой биодоступностью железа. В этой связи в клинике лечения анемического синдрома практикуют сочетание противоанемических препаратов с подкисляющими средствами, такими как аскорбиновая кислота, желудочный сок, 1%-ная хлористоводородная кислота, и ферментами (пепсин, панкреатин), обеспечивающими окисление солей железа, что облегчает их всасывание.
В последние годы появилось много новых противоанемических препаратов двух- и трехвалентного железа в жидкой, капсульной, таблетированной формах. На сегодняшний имеются современные препараты трехвалентного железа на основе различных полисахаридных комплексов: пероральные препараты - Мальтофер, Мальтофер Фол, Феррум Лек; препараты железа - Феррум Лек для внутримышечного введения; препараты железа на основе гидроксид сахарозного комплекса - Венофер для внутривенного введения; препараты железа на основе карбоксимальтозата (Феринжект) и другие [Чернов В.М., Тарасова И.С. Эффективность и безопасность препаратов трехвалентного железа в лечении железодефицитной анемии// Лечащий врач, 2013, №8. - С. 40-44].
Для инъекционного применения для лечения анемии используют раствор цианокобаламина (витамин В 12), коллоидные соединения сахарата железа (феррум-лек), железодекстраны (астрофен, имферон), фербитол (с сорбитолом).
В целом, традиционный подход к лечению анемичного синдрома ориентирован на стимуляцию эритропоэза. И это вполне оправдано, так как эритроциты крови ответственны за доставку кислорода во все ткани и клетки. Однако для усвоения кислорода нужна энергия. К сожалению, вплоть до последнего времени этому фактору не уделялось какого-либо внимания, что может являться ведущей причиной низкой эффективности применения известных противоанемических средств.
3
6
3
В ветеринарной медицине для профилактики и лечения анемии предпочтение отдают железосодержащим инъекционным препаратам. На основе этих компонентов разработаны и широко применяются в ветеринарии препараты Ферроглюкин, Седимин, Цианокобаламин и др. В своем составе они содержат микроэлементы, обеспечивающие усиление синтеза эритроцитов. Общим недостатком данных препаратов является отсутствие эффекта стимуляции энергетического обмена. В этой связи позитивный эффект при анемии носит запоздалый характер. И вот почему. Следствием анемии (малокровия) является сопутствующая ей тканевая кислородная недостаточность (гипоксия). Дело в том, что при гипоксии неизбежно происходит сбой аэробного пути выработки АТФ (энергии) в клетке. При дефиците клеточной энергии клетка погибает. Вплоть до последнего времени этому аспекту не уделялось должного внимания. В этой связи традиционный подход к профилактике и лечению анемии, как в гуманной, так и в ветеринарной медицине, основывался лишь на применении препаратов, активизирующих синтез эритроцитов - клеток крови, ответственных за доставку кислорода во все ткани и органы. При этом в стороне оставался вопрос, что для усвоения кислорода на уровне дыхательной цепи митохондрий нужна энергия. Без кислорода невозможна выработка энергии, как и без энергии не усвоится кислород. При развитии тяжелых клинических состояний дефицит клеточной энергии крайне высок и в организме нет резервов для его компенсации. В результате кислородной недостаточности выключается из функционирования основная энергетическая система клетки, резко снижается продукция АТФ. Еще один аспект связан с тем, что если в клетке не хватает кислорода, то образуется молочная кислота (CHO). При высоком накоплении молочной кислоты в организме развивается метаболический ацидоз (закисление всего организма). Принимая во внимание, что гемоглобиновая буферная система составляет порядка 50% буферной емкости здорового организма, то в условиях анемии кислотная нагрузка будет превышать компенсаторные механизмы гемоглобиновой буферной системы. В этой связи сдвиг кислотно-щелочного баланса в кислую сторону - это непременный атрибут не только анемии, но и практически всех нарушений обмена веществ.
Одним из подходов к активации процессов выработки энергии в клетке на привычном аэробном пути может являться применение сукцинатов - солей янтарной кислоты [Маевский Е.И., Гришина Б.В., Розенфельд А.С. Обоснование использования биологически активных добавок янтавит и митомин на основе янтарной кислоты //Научно-популярный медицинский журнал, 2000. - Т. 1. - С. 25-31]. Именно дефицит сукцината проявляется при любой кислородной недостаточности. Отсюда необычайно высокий терапевтический эффект при включении солей янтарной кислоты в базовую схему лечения практически всех патофизиологических состояний. Таким образом, коррекция метаболизма, возникающего в результате гипоксии, возможна путем дополнительного ввода сукцинатов, реализующих свое энергетическое действие на уровне митохондрий. И вот почему. Все дело в том, что только янтарная кислота или ее соли - сукцинаты имеют возможность быстро обеспечить синтез АТФ (энергии), необходимой для усвоения кислорода клетками [Маевский Е.И., Гришина Б.В., Розенфельд А.С. Обоснование использования биологически активных добавок янтавит и митомин на основе янтарной кислоты //Научно-популярный медицинский журнал, 2000. - Т.1. - С. 25-31]. Из всех субстратов цикла Кребса ни ацетат, ни малат, ни фумарат не заменяют сукцинат в цикле окисления трикарбоновых кислот. Кроме того, мощность системы энергопродукции, замыкающейся на янтарной кислоте и ее солях (сукцинаты), в сотни раз превосходит все другие системы энергообразования организма [Розенфельд, А.С. Поддержание физической работоспособности путем метаболической коррекции ацидоза: автореф. дис. … д.б.н../A.C. Розенфельд. - Пущино-2001. - 40 с.]. Эти доводы свидетельствуют о том, что традиционный подход к профилактике анемии и лечению анемического синдрома, включающий применение средств стимуляции эритропоэза, без активации аэробного пути энергетического обмена является малоэффективным. Отсюда низкая эффективность противоанемических средств, особенно при оральном методе применения. Не случайно, в настоящее время в гуманной медицине широкое применение получают препараты энерго-метаболитного действия, в состав которых входит янтарная кислота или ее соли-сукцинаты [Коваленко А.Л., Белякова Н.В. Янтарная кислота: фармакологическая активность и лекарственные формы // Фармация, 2000, №5-6]. Их применение ориентировано на восстановление биохимических реакций обмена веществ, регуляцию энергетического обмена нарушенных патологическими процессами [Оковитый С.В., Радько С.В. Применение сукцинатов в спорте. Научный обзор// Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физической культуры, 2015, №6. - С. 59-65.]. Таким образом, стимуляция энергетического обмена с применением сукцинатов вполне может являться новым подходом к профилактике и лечению анемического синдрома
Из подобного рода препаратов в ветеринарии известен комплексный препарат для инъекций Хелавит. В качестве действующих веществ препарат Хелавит содержит комплекс этилендиаминдиянтарной кислоты и лизина с железом, марганцем, медью, цинком, кобальтом, селеном и йодом, а также вспомогательные компоненты: консервант - бензиловый спирт и воду для инъекций. Препарат показан к применению для профилактики и лечения нарушений обмена веществ кошкам, собакам, пушным зверям при микроэлементозах и анемии различной этиологии, заболеваниях печени, кожных заболеваниях, для улучшения состояния шерстного покрова и укрепления здоровья животных. Наличие в составе препарата Хелавит этилендиаминоянтарной кислоты обеспечивает активацию энергетического обмена, а йода - общий обмен. Наряду с микроэлементами, влияющими на синтез эритроцитов, дополнительная стимуляция энергетического и общего обмена обеспечивает ускорение клинического эффекта при анемии. Недостатком препарата является отсутствие пролонгированного действия, в связи с чем он применяется учащенным курсом. Кроме того, спектр применения препарата ограничивается непродуктивными животными.
Из наиболее близких к заявляемому изобретению является способ получения комплексного иммунометаболического препарата для профилактики и лечения нарушений обмена веществ, микроэлементозов, повышения резистентности организма животных [Патент РФ №2351323, 04.10.2009], включающего в свой состав жизненно важные металлы железа, кобальта, меди, цинка в комбинации с иммуностимулятором АСД второй фракции. Применение препарата эффективно при гипомикроэлементозах, анемии, иммунодефицитных состояниях, для стимуляции эритропоэза и энергетического обмена. Недостатком препарата является низкая клиническая эффективность при йодной недостаточности. Дело в том, что в условиях тотального дефицита йода нарушается нормальная выработка гормонов щитовидной железы, которые контролируют все виды обмена веществ: белковый, жировой, углеводный, макро- и микроэлементный, энергетический. Принимая во внимание нынешние реалии повсеместного дефицита йода, включение йодного компонента в состав тех или иных средств метаболитного действия, в том числе железосодеращих противоанемических препаратов, может иметь исключительно важное значение.
В качестве положительного примера активации энергетического обмена при патобиохимических процессах является способ профилактики йодной недостаточности и коррекции метаболизма у коров, включающий инъекционное применение йодсодержащего препарата, полученного при добавлении янтарной кислоты в готовый раствор йодинола [Патент РФ №2664438 от 17.08.2018 г.]. Включение янтарной кислоты позволило качественно улучшить метаболическую активность йодинола и обозначило новые перспективы применения йодсодержащего препарата в инфекционной и незаразной патологии [Евглевский А.А., Скира В.Н., Рыжкова Г.Ф., Михайлова И.И. Обоснование нового подхода к профилактике йодной недостаточности и коррекции метаболизма /А.А. Евглевский, В.Н. Скира, Г.Ф. Рыжкова, И.И. Михайлова// Вестник Российской с. -х. науки, 2019, №2. С. 67-70.]. Аналогичный подход стимуляции метаболизма в условиях йодной недостаточности вполне может быть реализован и в предлагаемой разработке.
Еще одним примером препарата энергометаболитного действия, применительно к предполагаемому изобретению, может быть способ получения биологически активного комплексного препарата на основе цианокобаламина, янтарной кислоты и поливинилового спирта [Патент РФ №2720307 от 28.04.2020]. Наличие в препарате поливинилового спирта обеспечивает увеличение продолжительности метаболического действия цианокобаламина, активацию энергетического обмена, при одновременном снижении риска развития побочного действия в случае передозировки.
Задачей изобретения является способ получения биологически активного комплексного препарата для стимуляции энергетического обмена, эритропоэза, профилактики анемии, гипоксии, микроэлементозов.
Поставленная задача решается включением в фармацевтическую композицию в качестве активного компонента энергетического обмена янтарной кислоты, микроэлементов-стимуляторов эритропоэза - железа, меди, цинка, витамина В-12 (цианокобаламина), стимуляторов общего обмена йода и калия (натрия) йода. В качестве активных компонентов энергетического обмена, стимуляторов эритропоэза и общего обмена используют сукцинаты, получаемые при растворении в деминерализованной воде янтарной кислоты, сульфата железа, сульфата меди, сульфата цинка, цианокобаламина, йода, калия йода, а для стабилизации конечного продукта используют поливиниловый спирт при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Янтарная кислота - 1,0;
Железа сульфат - 0,2;
Цианокобаламин - 0,1;
Меди сульфат - 0,15;
Цинка сульфат - 0,15;
Калия йод - 0,3;
Йод - 0,1
Поливиниловый спирт - 1,0
Деминерализованная вода - остальное.
Подбор компонентов для заявленной лекарственной формы осуществлялся с учетом ранее полученных результатов клинических исследований, отраженных в описании вышеуказанных патентов (Патент РФ №2351323, 04.10.2009; патент РФ №2664438, 17.08.2018; патент РФ №2720307, 28.04.2020 и рекомендаций по дозировке микроэлементов для животных в книге Мозгова И.Е. Фармакология, 1979.).
Новым является то, что для профилактики анемического синдрома и сопутствующей ему гипоксии наряду с традиционным подходом стимуляции эритропоэза, является акцент на активацию аэробного пути энергетического обмена за счет применения водных растворов сукцинатов железа, меди, цинка, цианокобаламина и активацию общего обмена за счет йодирования препарата. Что касается вопроса йодирования, то клинические наблюдения свидетельствуют о том, что при йодной недостаточности эффективность лечения анемии препаратами железа весьма низкая. Кроме того, к новизне можно отнести стабилизацию препарата поливиниловым спиртом, что позволяет обеспечить пролонгированность действия основных компонентов. В ходе патентного поиска нами не выявлено сведений по использованию поливинилового спирта для повышения эффективности сукцинатов, используемых в единой лекарственной форме. Следует отметить, что применение поливинилового спирта в качестве пролонгатора лекарственных средств давно практикуется в фармакологии. Поливиниловый спирт не имеет запаха и вкуса, не является токсичным. Отличаясь полной физиологической безвредностью, он используется в пищевой промышленности для получения желе, в качестве пролонгатора в фармации и медицине. Единственным его растворителем служит вода. Поливиниловый спирт не без успеха реализован в вышеуказанном хорошо известном и популярном препарате йодинол.
Способ получения заявляемого препарата осуществляется следующим образом.
В отдельную колбу вносят навески компонентов, включающие янтарную кислоту - 10,0 г; железа сульфат - 2,0 г; цианокобаламина - 1,0 г; меди сульфат - 1,5 г; цинка сульфат - 1,5 г. Добавляют 500 мл деминерализованной воды. При нагревании до 70 градусов все компоненты растворяются, образуя соли с янтарной кислотой - сукцинаты.
В другую колбу вносят навеску из 10 г поливинилового спирта и доливают 500 мл деминерализованной воды. Нагревают при постоянном помешивании до полного растворения поливинилового спирта. По охлаждению раствора до 25 градусов вносят навески из 1 г кристаллического йода и 3 г калия йодида. Колбу герметизируют и при постоянном помешивании добиваются полного растворения компонентов. Содержимое всех обеих колб смешивают. При смешивании образовался интенсивно синего цвета раствор. Наличие в препарате йода и поливинилового спирта обеспечивает длительность хранения без какого-либо изменения физико-химических свойств (срок наблюдения 12 месяцев). При необходимости повышения рН, вплоть до слабокислой, возможно при дробном добавлении 10% гидроксида натрия. Для удобства применения полученный продукт расфасовывают во флаконы емкостью 50-100 мл из темного стекла и герметизируют резиновыми пробками и пенициллиновыми колпачками.
Острую и субхроническую токсичность препарата провели на белых мышах согласно «Методическим указаниям по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве». При определении безвредности препарата установлено, что белые мыши массой 18-20 г без каких-либо осложнений перенесли 5-кратный курс ежедневного внутрибрюшинного введения препарата в объеме 0,25 мл.
По результатам экспериментальных опытов, ЛД50 колебалась в пределах 21000-23000 мг/кг живой массы, что по ГОСТ 12.1.007.76 позволяет отнести препарат к 4 классу опасности (неопасный).
При внутримышечном введении препарата в дозе 5,0 мл клинически здоровым бычкам массой тела 45-50 кг каких-либо побочных реакций выявлено не было. Это давало основание для проведения клинических испытаний препарата на продуктивных животных. Принимая во внимание фармакологическую направленность препарата, первые клинические испытания были проведены на телятах с клинически выраженными симптомами анемии, гипоксии, гипомикроэлементозов. При таких патологиях анемический синдром и нарушения энергетического обмена наиболее выражены.
В клинических опытах испытуемый препарат, полученный по способу, описанному выше, сравнивали с аналогичной композицией водных растворов вышеуказанных солей без йодного компонента. Дозировка препаратов зависела от возраста и массы тела животных и была в пределах обычно принятых объемов введения инъекционных препаратов. Гематологические показатели определяли на автоматическом гематологическом анализаторе Medonic СА-620. Биохимические исследования - на автоматическом биохимическом анализаторе BioChem модель FC-200.
Определение содержания тиреоидных гормонов трийодтиронина (Т3), тироксина (Т4) и тиреотропного (ТТГ) проводили радиоиммунологическим методом.
Примеры клинических испытаний.
Пример 1. Клинический опыт провели на 8 телятах 2-2,5 месячного возраста, имеющих признаки клинически выраженной гипотрофии. Масса тела в пределах 37-40 кг. В клинических опытах использовали заявляемый препарат. В качестве сравнения использовали аналогичную композицию водного раствора солей, что и в заявляемом препарате, но без йодного компонента. Препараты применялись внутримышечно с интервалом в 7 дней. Принимая во внимание массу тела телят, дозировка препаратов при первом введении составила 3 мл, а при каждом последующем введении увеличивалась на 0,5 мл. В таких дозировках применяется большинство инъекционных препаратов в ветеринарии. В качестве контроля были три теленка с аналогичными признаками гипотрофии. Курс стимулирующей терапии этим телятам проводился витаминным препаратом тетравит в сочетании с ферроглюкином. Эффективность применения контролировалась клинически. Параллельно проводились биохимические и гематологические исследования.
Клинически выраженные изменения у подопытных телят первой и второй опытных групп начали проявляться спустя сутки. На третьи-четвертые сутки у них заметно вырос аппетит. С каждым днем он улучшался. Это позитивно отражалось и на общем состоянии телят этих групп. На 7-е сутки заметно улучшилось состояние волосяного покрова. Напротив, у телят контрольной группы на это период каких-либо позитивных клинически выраженных изменений не обнаружено.
Результаты биохимических исследований сыворотки крови на 7-е, 14-е и 21-е сутки были сопоставлены с исходными показателями и для наглядности представлены в таблице 1.
Исходные биохимические показатели свидетельствовали о нарушении белкового обмена (низкие показатели белка) и углеводного обмена (низкий уровень глюкозы). Низкий уровень резервной щелочности свидетельствовал о глубоких нарушениях всех вида обмена веществ.
При проведении биохимических исследований на 7-е сутки были выявлены позитивные изменения в уровне белка, глюкозы, резервной щелочности как у телят первой группы (заявляемый препарат), так и у особей из второй группы (металлосукцинат без йодного компонента). Выраженной разницы в этот период не выявлено.
В ходе дальнейших исследований (14-е сутки), показатели уровня белка, глюкозы у телят первой группы (йодированный металлосукцинат) приобрели более выраженную тенденцию роста и превышали аналогичные показатели у телят второй группы. Такая же опережающая тенденция наблюдалась и во все последующие периоды контрольных исследований (21-е и 28-е сутки). Следует отметить, что на 14-е сутки у телят первой и второй групп уровень резервной щелочности достиг нижнего показателя физиологических значений. В данном случае позитивный эффект может быть обусловлен тем, что при гидролизе сукцинатов освобождается гидроксид натрия, который расходуется на нейтрализацию кислых продуктов метаболизма. С этой точки зрения применение сукцинатов является перспективным подходом к коррекции кислотно-щелочного баланса, неизбежно развивающегося при анемическом синдроме. Принимая во внимание, что показатель резервной щелочности, по сути, является индикатором обмена веществ, то это косвенно указывало на нормализацию всех обменных процессов в организме животных. Подтверждением этого служили показатели содержания общего белка и глюкозы.
В ходе дальнейших биохимических исследований (21-е и 28-е сутки) выявлено, что у телят первой группы показатель резервной щелочности приобрел более выраженный рост по отношению к животным второй группы (металлосукцинат без йодного компонента). В данном случае это является результатом не только действия сукцинатов, но и тем, что у телят первой группы (йодированный металлосукцинат) синтез эритроцитов и насыщенность их гемоглобином были значительно выше, чем у животных второй опытной группы (таблица 2). Соответственно, буферная роль гемоглобина у телят первой группы была гораздо выше. Результаты гематологических исследований представлены в таблице 2.
Принимая во внимание исходные гематологические показатели, они указывали на хорошо выраженный анемический синдром (крайне низкие фоновые показатели эритроцитов и гемоглобина). Уровень гемоглобина у телят колебался в пределах 67-72 г/л, что значительно ниже физиологической нормы и указывало на состояние общей гипоксии.
На 7-е сутки у телят первой и второй опытных групп сравниваемые показатели уровня эритроцитов не имели выраженной разницы. При исследовании на 14-е сутки (спустя 7 дней после повторного применения препаратов) уровень содержания эритроцитов в крови телят первой группы был на 8% выше по отношению ко второй группы (металлосукцинат без йодного компонента) и на 44% по отношению к контрольной группе телят. Такая же опережающая тенденция наблюдалась на 21-е и 28-е сутки. Схожая картина была и в отношении насыщенности эритроцитов гемоглобином.
Таким образом, включение йодного компонента в состав заявляемого препарата оказалось оправданным, что подтвердилось в ходе оценки эффективности устранения анемичного синдрома при низком фоне энергетического и белкового обмена.
Пример 2. Объектом для тестирования являлись телята 2-2,5 месячного возраста с клинически выраженными симптомами гипомикроэлементоза и йодной недостаточности. В настоящее время есть много сведений о том, что гипомикроэлементозы особо тяжело протекают на фоне йодной недостаточности. Собственно этот аспект был принят во внимание и послужил основанием целенаправленного поиска животноводческого хозяйства, в котором клинически выраженные гипомикроэлементозы проявляются в условиях йоддефицитного состояния. Место проведения клинических опытов - опытно-селекционная станция Льговского района Курской области. Исходный клинический статус подопытных телят: по телу обширные участки алопеций (отсутствие волосяного покрова), в области дистального отдела конечностей локальные экзематозные очаги. Аппетит слабый. Телята малоподвижные. У отдельных телят отек в области подчелюстного пространства (микседема).
При проведении биохимических исследований (таблица 3) были выявлено, что у клинически больных телят фоновые показатели содержания в крови железа на 28%, меди в 2 раза, цинка в 3 раза, кобальта в 3-4 раза ниже по отношению к клинически здоровым сверстникам. Уровень гормонов щитовидной железы тироксина (Т-4) был в два раза, а трийодтирозина (Т-3) в три раза меньше, чем у клинически здоровых особей. Фоновое количество эритроцитов на 25-30%, а насыщенность эритроцитов гемоглобином более чем на 40% были ниже физиологических значений.
В клинических опытах использовали заявляемый препарат. В качестве сравнения использовали аналогичную композицию водного раствора солей, что и в заявляемом препарате, но без йодного компонента. Препараты применялись внутримышечно с интервалом в 7 дней. Принимая во внимание массу телят и их клинический статус, дозировка препаратов при первом введении составила 3 мл, а при каждом последующем увеличивалась на 0,5 мл. В качестве контроля были 5 телят с аналогичными признаками гипомикроэлементоза и йодной недостаточности.
Эффективность применения контролировалась клинически и на основании оценки биохимических и гематологических исследований сыворотки крови подопытных животных.
В ходе наблюдений установлено, что выраженное улучшение клинического состояния телят первой и второй подопытных групп обозначилось уже на вторые сутки. Вначале это проявилось лучшей подвижностью и интересом к корму. С каждым последующим днем улучшение клинического состояния становилось все более выраженным. Различия в клиническом состоянии телят первой и второй групп начали проявляться на 17-20-е сутки. Так, у телят первой группы (йодированный металлосукцинат) полностью редуцировались признаки микседемы, в то время как у особей второй группы они лишь приобрели тенденцию к редуцированию. У телят первой группы, по отношению к животным второй группы (металлосукцинат без йодного компонента), куда более выраженно стали проявляться признаки редуцирования экзематозных поражений кожи и роста волос на участках с алопециями. На 30-е сутки у телят первой группы фактически полностью редуцировались экзематозные поражения кожи, в то время как у их сверстников из второй группы экзематозные поражения редуцировались на 20-30%. Что касается телят контрольной группы, то признаки улучшения клинического состояния первые две недели и вовсе никак не проявились. По хозяйственным соображениям, ввиду низкой эффективности, рекомендованный курс применения тетравита с ферроглюкином пришлось преждевременно прекратить.
При проведении биохимических исследований (таблица 3) хорошо обозначенная тенденция роста показателей в крови железа, меди, цинка, кобальта проявилась у телят первой и второй подопытных групп уже при первом контрольном исследовании (7-е сутки). На 14-е сутки стала проявляться разница в показателях у телят первой группы (йодированный металлосукцинат) по отношению к их сверстникам из второй группы (металлосукцинат без йодного компонента). У телят первой группы показатели содержания железа, меди, кобальта и цинка были выше, чем у животных второй группы. Такая же тенденция проявилась и в последующие контрольные исследования на 21 и 28-е сутки.
Практически схожая картина проявилась и по отношению влияния тестируемых средств и в отношении гемопоэза (таблица 5). Фоновые показатели количества эритроцитов и насыщенности их гемоглобином были на 30-50% ниже физиологической нормы. На 7-е сутки уровень эритроцитов у телят обеих опытных групп достиг нижней границы физиологических значений. Тем не менее, насыщенность эритроцитов гемоглобином в среднем на 25% была ниже физиологических значений.
Начиная с 14 дня, у телят первой группы обозначилась тенденция увеличения синтеза эритроцитов и насыщенности их гемоглобином по отношению к животным, на которых тестировался металлосукцинат без йодного компонента. Низкая клиническая эффективность традиционного подхода стимуляции гемопоэза с применением ферроглюкина объясняется отсутствием эффекта активации энергетического обмена. На это указывает низкий показатель глюкозы у телят контрольной группы. Как известно от гормонов щитовидной железы зависят все обменные процессы в организме. В этой связи качественное улучшение обменных процессов стало возможным на фоне устранения йодной недостаточности и нормализации синтеза гормонов щитовидной железы (таблица 4).
Таким образом, результаты клинических наблюдений, биохимических и гематологических исследований подтвердили правомерность нового подхода к профилактике и лечению анемичного синдрома, в котором ведущую роль призвана играть активация гемопоэза и энергетического обмена с помощью сукцинатов и йодсодержащего компонента. При этом значимую позитивную роль имеет пролонгирование фармакологического действия основных компонентов препарата.
Пример 3. Эффективность применения йодированного металлосукцината при выращивании телят в условиях Льговской опытно-селекционной станции.
Полученные результаты клинических исследований, отраженные в примерах 1 и 2, послужили основанием для проведения научно-производственного опыта по оценке эффективности заявляемого препарата -йодированного металлосукцината - в системе мер выращивания телят в условиях высокого риска развития патобиохимических процессов, протекающих на фоне йодной недостаточности и гипомикроэементозов. Место проведения клинических опытов - опытно-селекционная станция Льговского района Курской области. В подопытные группы включали телят с 7-дневного возраста. Курс применения заявляемого препарата четырехкратный с интервалом раз в 7 дней. Начальная доза, в зависимости от массы тела, варьировала от 2,5 до 3мл. С каждым последующим введением дозировку повышали на 0,5 мл. В качестве сравнения служила группа телят, на которой применялись принятые в хозяйстве средства, стимулирующие рост и развитие телят, а именно: тетравит и железосодержащий седимин. Оценка клинической эффективности проводилась по результатам регистрации основных клинических форм заболевания и проявлению патофизиологических состояний. Продолжительность наблюдений до достижения 45-дневного возраста.
Клиническая эффективность отражена в таблице 6.