Перспектива использования мезенхимальных стволовых клеток у больных с патологией органов пищеварения

о

-о

ПЕРСПЕКТИВА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ С ПАТОЛОГИЕЙ ОРГАНОВ ПИЩЕВАРЕНИЯ

Князев О. В.1, Коноплянников А. Г.2, Румянцев В. Г., ЛазебникЛ. Б.1

1 ЦНИИ гастроэнтерологии, Москва

2 Медицинский радиологический научный центр РАМН, г. Обнинск

Современное развитие биотехнологии, молекулярной и клеточной биологии позволяет рассматривать стволовую клетку как одно из средств лечения многих заболеваний. Открытие в 60-е годы ХХ века И. Чертковым и А. Фриденштейном мультипотент-ных стволовых клеток (СК) положило начало исследованиям роли этих клеток в регенерации поврежденных тканей взрослого организма, в частности трансплантации костного мозга [15]. Последующие многолетние исследования биологии стволовых клеток привели к их широкому клиническому применению в различных областях медицины. При этом перспективными направлениями внедрения достижений клеточной биологии в клиническую практику считается трансплантация стволовых клеток с целью восстановления в организме поврежденных тканей, а также регуляции иммунного ответа при аутоиммунных заболеваниях.

Активно исследуются стволовые клетки трех основных типов: эмбриональные (ЭСК), фетальные (ФСК) и взрослые (соматические) СК. В свою очередь во взрослом организме тоже присутствует несколько видов СК. Во всех органах присутствуют региональные СК — как правило, это уже достаточно дифференцированные клетки, которые могут дать начало только тем разновидностям клеток, из которых состоят ткани данного органа. В костном мозге присутствуют гемопоэтические (кроветворные) СК, из которых образуются все клетки крови. По некоторым данным, гемопоэтические СК также могут дифференцироваться в клетки других тканей, например мышечной. Наиболее универсальными являются мезенхимальные стволовые клетки (МСК) — они также обнаружены в костном мозге, жировой ткани и в незначительных количествах в других тканях.

Мезенхимальные стволовые клетки костного мозга человека привлекают внимание исследователей в плане их клинического применения по ряду причин. Во-первых, их можно размножить в сотни тысяч раз в условиях монослойных куль-

00

О

О

СЧ

тур и получить в достаточном для эффективной трансплантации количестве у пациентов любого возраста. При этом для получения такого количества МСК в культуре требуется всего 0,5-1 мл исходного пунктата костного мозга, то есть такого количества костномозгового пунктата, которое требуется для диагностических целей [3]. Сравнительно недавно появились сообщения о возможности выделения мезенхимальных стволовых клеток из периферической крови как менее инвазивной и болезненной операции, чем пункция костного мозга или биопсия жировой ткани [22].

МСК костного мозга человека являются гипоим-муногенными, не подвергающимися аллогенному отторжению у биологических объектов. В основе этого эффекта лежат следующие основные механизмы. Во-первых, МСК характеризуются отсутствием антигена гистосовместимости 2-го класса и низким уровнем экспрессии антигена гистосовместимости 1-го класса. Во-вторых, эти клетки предотвращают Т-клеточный ответ как непрямым путем через модуляцию дендритных клеток, так и непосредственно, нарушая функцию NК-клеток, а также CD8+ и CD4+ Т-клеток [44]. Следовательно, МСК могут рассматриваться как кандидаты не только для аутологичной, но и для аллогенной клеточной терапии, что может быть более предпочтительным именно при аутоиммунных заболеваниях, так как МСК собственного организма не всегда способны купировать иммунопатологический процесс.

МСК также обладают иммуномодулирующим и противовоспалительным эффектом. В экспериментах по совместному культивированию разных клеток показано, что мезенхимальные стволовые клетки, мигрируя в область воспаления по хемотак-сическому градиенту, выделяют вещества, ингибирующие продукцию провоспалительных цитоки-нов, подавляют пролиферацию Т-клеток, что также приводит к восстановлению иммунного равновесия. Мезенхимальные стволовые клетки индуцируют супрессивное местное микроокружение путем про-

¿

дукции простагландинов и интерлейкина-10, которые и создают иммуносупрессивную среду в ткани, подвергшейся иммунной агрессии [5]. Считается общепринятым, что МСК в стандартных условиях (без воздействия специфического индуктора) не секретируют интерлейкины (ИЛ)-2, — 3, — 4, — 5, но секретируют ИЛ-6, — 7, — 8, — 11, — 12, — 14, — 15, — 27, лейкозингибирующий фактор (ЛИФ), колониестимулирующий фактор макрофагов (КСФ-М), фактор стволовых клеток (ФСК).

МСК (в большей степени МСК селезенки) секретируют также гепатоцитарный фактор роста (ГФР), который индуцирует митогенную и антиапоптоти-ческую активность в различных системах, ускоряет репарацию тканей, что подтверждает активную роль МСК в регенеративной медицине. Эти клетки могут являться предшественниками остеобластов, хондроцитов, адипоцитов, скелетных миоцитов, кардиомиоцитов. Таким образом, они вносят свой вклад в регенерацию поврежденного участка ткани [8], способствуя максимально быстрому заживлению дефектов. Все эти данные расширяют возможности клинического применения МСК костного мозга человека.

Областями медицины, в которых использование стволовых клеток прошло полный путь изучения от экспериментальных работ до широкого эффективного клинического применения, являются онкология и онкогематология. Применение гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) в комплексе с высокодозной химиотерапией позволяет достичь реальных клинических результатов при лечении больных, практически не имеющих шансов на излечение или продление жизни при проведении стандартной цитостатической терапии. Полученные положительные результаты экспериментальных исследований позволили перейти к многоцентровым клиническим испытаниям трансплантации стволовых клеток в различных отраслях медицины.

На сегодняшний день наибольший прогресс достигнут в экспериментальных и клинических исследованиях, связанных с перспективой использования стволовых клеток для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, атеросклероза, восстановления дефектов костной, хрящевой ткани, кожи.

В ряде работ по кардиологии продемонстрированы хорошие результаты в лечении пациентов с ишемической болезнью сердца, ранее перенесших инфаркт миокарда [17]; пациентов с ишемической кардиомиопатией, в лечении которых была применена трансплантация стволовых клеток [41]; у пациентов с эндоваскулярным вмешательством на коронарных артериях, которое было дополнено интрамиокардиальной инъекцией аутологичных миобластов, с последующим (через 3 месяца) увеличением фракции выброса левого желудочка на 20% [26]. Что примечательно, аритмогенной активности в участках трансплантации выявлено не было.

В ряде экспериментов показана способность мезенхимальных стволовых клеток к адгезии и размножению на поверхности специальных композитных материалов, что позволяет рассматривать МСК в качестве потенциального материала для получения искусственных сердечных клапанов [43].

Опубликованы работы по системной трансплантации аутологичных МСК костного мозга человека 27 больным с резистентными формами туберкулеза легких. Время наблюдения при этом составило от 5 месяцев до 2 лет. У 11 больных (40,7%) наступило заживление длительно существующих каверн в легочной ткани, у 15 пациентов отмечалось рассасывание воспалительных изменений, частичное закрытие полостей распада и уменьшение их размеров [1].

Трансплантация стволовых клеток уже прочно вошла в практику онкологии, гематологии, травматологии, все шире становится их клиническое применение в кардиологии, артрологии, иммунологии, неврологии, ревматологии и многих других сферах. Существуют подробные публикации в научных изданиях о применении клеточной терапии в различных отраслях медицины.

Хронические воспалительные заболевания кишечника, прежде всего болезнь Крона (БК) и неспецифический язвенный колит (НЯК), заболевания печени — цирроз, аутоимунный гепатит, долгое время находились в тени использования стволовых клеток при их лечении, хотя эти заболевания ежегодно приводят к инвалидизации сотен тысяч больных во всем мире. Возникая, как правило, в молодом возрасте (средний возраст 20-40 лет), они всегда значительно ухудшают качество жизни больных, что делает их социально значимыми. Данные заболевания требуют постоянной дорогостоящей и не лишенной побочных эффектов терапии. Более того, традиционное лечение, состоящее из сали-цилатов, кортикостероидов, иммунодепрессантов, противовирусных препаратов и антибиотиков, у многих больных оказывается малоэффективным либо эффект от терапии непродолжительный. Только в США этим заболеванием страдает более 500000 человек. Примерно у 20-40% пациентов требуется серьезное хирургическое вмешательство, хотя и после этого симптомы часто возвращаются. В свете этого перед врачом-гастроэнтерологом стоят задачи улучшения качества жизни больных, уменьшения выраженности клинических проявлений заболевания, предотвращения возникновения рецидивов.

Известно, что развитие болезни Крона и неспецифического язвенного колита во многом обусловлено патологией иммунной системы. По современным

обзоры

reviews

(N

Ю

представлениям БК и НЯК считаются многофакторными заболеваниями. Вторичные эффекторные механизмы, возникающие при симбиозе генетических и внешних факторов, приводят к извращению иммунного ответа организма на антигенную стимуляцию. В результате нарушенных взаимодействий между иммунной системой слизистой оболочкой и кишечной микрофлорой отмечается утрата иммунной толерантности к комменсальным бактериям желудочно-кишечного тракта с гиперактивным иммунным ответом и дефектами в регуляторной функции Т-клеток. Это и приводит к развитию неспецифического иммунного воспаления в стенке кишечника. В последние годы появились доказательства наличия гена, ответственного за предрасположенность к БК и получившего название NOD2. В 2001 г. Ни§о1 и соавт. и 0§ига и соавт. независимо друг от друга доказали существование связи БК и гена N002, расположенного на длинном плече 16-й хромосомы в пределах локуса 1В01 [20]. N002 также участвует в регуляции иммунного ответа и проницаемости кишечного барьера для кишечной микрофлоры.

Даже в неосложненных случаях лечение ВЗК представляет большие трудности. Применение иммуносупрессоров, глюкортикостероидов направлено на удаление лимфоцитарных клонов, несущих генетическую поломку, но их применение ограничено широким спектром побочных эффектов, частота которых достигает 20%.

В терапии воспалительных заболеваний кишечника (ВЗК) особого внимания заслуживают мезенхимальные стволовые клетки. Они обладают способностью к мультиорганному хоумингу и большой внутренней степенью пластичности [30], длительно «переживают» в тканях желудочно-кишечного тракта [10], проявляют иммуномодулирующую активность, подавляя функцию лимфоцитов [23]. При этом после инфузии аллогенному реципиенту мезенхимальные стволовые клетки не подвергаются реакции «трансплантат против хозяина», так как их поверхностный клеточный фенотип, как уже было отмечено выше, плохо распознается Т-клет-ками. Как было показано, введение мышам с экспериментальным колитом, вызванным декстраном сульфата натрия, С034-стволовых клеток возбуждало репарацию слизистой, снижало активность заболевания и повышало выживаемость животных. Введение МСК с нормальной программой обеспечивает «замещение» или баланс между толерантностью и иммунностью [7]. Более того, стволовые клетки могут выполнять и другие «периферические» функции, способствуя репаративным процессам в кишечнике. Как и другие органы, кишечник служит «убежищем» для клеток костномозгового происхождения. Гемо-поэтические стволовые клетки в кишечнике ведут себя так же, как в печени. Они сливаются со стволовыми клетками кишечного эпителия, которые затем

дифференцируются в зрелые энтеро- и колоноциты [33]. Их обнаруживают и спустя 6-12 месяцев после трансплантации в lamina propria, но не в кишечном эпителии, так как ядро гемопоэтических стволовых клеток репрограммируется и гибрид уже не экспрессирует гемопоэтические маркеры.

Успех высокодозной иммуносупрессивной терапии с аутологичной трансплантацией мезенхимальных стволовых клеток при системной красной волчанке, рассеянном склерозе, ревматоидном артрите, апластической анемии, аутоиммунной тром-боцитопении и ряде других аутоиммунных заболеваний привел к тому, что в ведущих медицинских центрах Европы и США в конце 90-х годов были начаты исследования эффективности этого метода у больных с болезнью Крона и неспецифическим язвенным колитом. Первое сообщение об аллогенной трансплантации костного мозга больному с болезнью Крона, которая была выполнена по поводу лимфомы, относится к 1993 году [13]. В настоящее время имму-носупрессивная терапия с аутологичной трансплантацией кроветворных стволовых клеток проведена десяткам безнадежных больных болезнью Крона в ведущих медицинских центрах мира. К настоящему времени опубликован опыт уже свыше 20 больных ВЗК, пролеченных трансплантацией костного мозга. Ограниченные клинические испытания, проводившиеся во многих медицинских и научных центрах Европы и Америки, показали, что при лечении этой болезни методом трансплантации стволовых клеток в большинстве случаев удается достичь положительного эффекта, даже если все другие стратегии терапии оказались безуспешными. Процедура лечения хорошо переносится, и у большинства пациентов удается достичь устойчивой, а иногда и полной ремиссии заболевания [Kreisel et al., 2003; Hawkey, 2004; Oyama, 2005, 2006]. В клинических испытаниях оценивается способность МСК уменьшать воспаление и восстанавливать поврежденную ткань. Предварительные исследования показали, что МСК могут направленно двигаться в область воспаления и подавлять воспалительный процесс, одновременно стимулируя регенерацию ткани. Таким образом, особенно для пациентов, которым не помогает стандартная терапия, МСК может стать альтернативным методом лечения болезни Крона, позволяющим обойтись без калечащих хирургических операций. Опубликованные данные свидетельствуют о том, что трансплантация кроветворных стволовых клеток на сегодняшний день стала одним из самых многообещающих подходов к комплексному лечению хронических воспалительных заболеваниях кишечника [24]. Полученные данные свидетельствуют, что после трансплантации стволовых клеток пациенты, как правило, не нуждаются в какой-либо поддерживающей терапии. Большинство пациентов с тяжелейшими формами заболевания полностью избавляются от всех симптомов болезни Крона.

со

Ю

В настоящий момент продолжается сравнение эффективности стандартных методов лечения и высокодозной иммуносупрессивной терапии с трансплантацией стволовых клеток крови при болезни Крона [39]. Наиболее впечатляющий исход был у больного, страдавшего болезнью Крона с 9-летнего возраста и непрерывно нуждавшегося в терапии на протяжении 7 лет. После аутологичной трансплантации костного мозга по поводу не-Ходжкинской лимфомы у него не было клинических и лабораторных признаков активности болезни Крона все последующие годы [21]. Имеются данные и группового анализа. Так, в США в группе из 5 больных с болезнью Крона, получивших лечение аллогенной трансплантацией по поводу лейкоза, у 3 достигнута ремиссия различной продолжительности вплоть до 10 лет [31]. В Германии из 11 больных ВЗК (7 больных с болезнью Крона и 4 с язвенным колитом), которым была проведена аллогенная трансплантация, вышли в ремиссию 10 человек [12]. В каждой из этих серий были и летальные исходы, связанные с оппортунистической инфекцией. Однако неясно, сохранится ли такой же риск инфекций и летальность в том случае, если показанием для трансплантации будет являться уже сама болезнь Крона. Имеется лишь одно описание применения аутологичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток у 12 больных с рефрактерной болезнью Крона как первичного показания [38]. В указанной группе отреагировали на лечение 11 человек с поддержанием ремиссии в течение периода наблюдения от 7 до 37 месяцев.

Таким образом, клинический опыт свидетельствует, что успешной может быть как аллогенная, так и аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток. Проведенные исследования легли в основу новой концепции балансировки иммунной системы вместо иной концепции — полной эрради-кации аутоиммунного пула клеток. А это позволит, в свою очередь, избежать высокодозной иммуносуп-рессивной терапии и ее осложнений. Трансплантация мезенхимальных стволовых клеток, вероятнее всего, показана пациентам с плохим прогнозом и высокой активностью процесса на ранних стадиях заболевания, а не в поздние сроки, когда присутствуют необратимые изменения в тканях и органах.

Получены положительные результаты, свидетельствующие об эффективной местной клеточной терапии болезни Крона. У пяти пациентов была проведена имплантация клеточного препарата в ткани, окружающие фистулы. В 6 случаях (75%) наружное отверстие свища к концу 8-й недели было уже покрыто эпителием и, таким образом, фистула считалась зажившей. В других случаях наблюдали неполное закрытие наружного отверстия с достоверным снижением отделяемого. Ни в одном случае не было отмечено развития каких-либо побочных эффектов при среднем сроке наблюдения 22 месяца [17].

Обнадеживающие результаты были получены при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток в лечении больных с хроническими заболеваниями печени. После того как было получено экспериментальное обоснование применения эмбриональных клеток [2], их трансплантация была осуществлена 32 больным с циррозом печени с хорошими результатами у половины из них в течение

3 лет. Имеется ряд экспериментальных работ, демонстрирующих, что мезенхимальные стволовые клетки костного мозга играют существенную роль в патогенезе цирротическо-го процесса и фиброза. Например, показано, прямое участие гемопоэтических клеток в патогенезе аутоиммунного гепатита с формированием первичного билиарного цирроза [27]. Недавнее клиническое исследование [14] также указывает на возникновение миофиброб-ластов в цирротической печени из клеток костного мозга. Работа китайских исследователей демонстрирует дифференцировку этих клеток в гепатоциты [48], а не в миофибробласты, при развитии экспериментального цирроза. Выяснено, что это может осуществляться как путем клеточного слияния донорских клеток с гепатоцитами, так и посредством прямой дифференцировки. Имеется клинический опыт отечественных ученых. В НИИ иммунопатологии Черных и соавт. [4] было пролечено 28 больных с хроническим гепатитом и циррозом внутрипеченочно или внутривенно аутологичными стволовыми CD34+ клетками. Согласно их данным, существенный позитивный эффект был установлен у 40% больных. К сожалению, отсутствие контроля не позволяет сделать окончательные выводы. Ни в одном из клинических испытаний не было продемонстрирована продолжительность жизни трансплантированных стволовых клеток.

В ряде работ показана способность стволовых клеток под воздействием специфических факторов дифференцироваться в эндокринные клетки поджелудочной железы. При трансплантации культивированных in vitro клеток экспериментальным животным осуществлена их успешная интеграция в паренхиму органа [18]. Трансплантация стволовых клеток, не прошедших in vitro направленную дифференцировку, в эксперименте не приводит к образованию из них инсулинпродуцирующих клеток. Процесс регенерации поджелудочной железы усиливается вследствие ускоренной пролиферации панкреатических клеток реципиента. Такой эффект достигается за счет активирующего влияния донорских стволовых клеток, встраивающихся в протоковый и островковый аппарат поджелудочной железы [29]. Протоковые структуры поджелудочной железы содержат стволовые клетки, которые в условиях in vitro способны к размножению, дифференцировке

обзоры

reviews

ю

и образованию функционально активных участков, подобных островкам Лангерганса. Полученные in vitro клеточные структуры изменяли уровень секреции инсулина в ответ на колебания содержания в среде глюкозы [42]. Их трансплантация мышам с инсулинзависимым диабетом сопровождалась вас-куляризацией имплантатов и обратным развитием заболевания. Сахарный диабет I типа обусловлен аутоиммунной реакцией организма на инсулинп-родуцирующие ^-клетки островков Лангерганса поджелудочной железы. Для лечения этой патологии возможна трансплантация функционирующих островков, полученных in vitro при дифференци-ровке стволовых клеток [11]. Можно предположить, что имплантаты, как и собственные (3-клетки, будут подвержены агрессии со стороны иммунной системы реципиента. Эта проблема была решена в эксперименте путем заключения трансплантируемого клеточного материала в капсулы на основе искусственных мембран, изолирующих имплантанты от иммунной системы организма [9].

Трансплантация мезенхимальных стволовых клеток при лечении тяжелых, рефрактерных форм различных заболеваний в настоящее время не является стандартной терапией и требует дальнейшего проведения клинических исследований, однако уже сейчас эффективность данного метода убеждает в необходимости расширения дальнейших исследований. Мы располагаем небольшим личным опытом лечения клетками пуповинной крови и мезенхимальными стволовыми клетками 4 больных рефрактерным язвенным колитом. В 2 случаях было достигнуто улучшение в течении заболевания, что побуждает к дальнейшей оценке эффективности клеточной терапии. Приводим клиническое наблюдение, демонстрирующее положительный эффект терапии язвенного колита мезенхимальными стволовыми клетками.

БольнаяЖ., 36 лет, обратилась в ЦНИИГв июле 2006 года с жалобами на диарею до 15 раз в сутки с обильной примесью крови при каждой дефекации, ночные позывы до 4 раз в сутки, схваткообразные боли в животе, купирующиеся анальгетиками, выраженную слабость.

Больна в течение 6 лет. В 2000 году впервые отметила примесь слизи и крови в оформленном кале. Наблюдались запоры, корригируемые дополнительным приемом пищевых волокон. Летом 2001 и 2002 годов у больной дважды наблюдались эпизоды диареи до 10раз в сутки, расцениваемые как кишечная инфекция. Однако с октября 2002 года диарея приобрела постоянный характер, и выполненная в г. Обнинске колоноскопия выявила картину распространенного язвенного колита. Лечилась сульфасалазином 4 г/сут с незначительным симптоматическим эффектом. Вскоре, несмотря на проводимое лечение, диарея вновь достигла 15 раз в сутки, появилась лихорадка, нарастающая анемия.

В июле 2003 года была госпитализирована в отделение колопроктологии 24-й ГКБ. Состояние расценивалось как тяжелое. Отмечались анемия (Нв — 68 г/л), ней-трофилез со сдвигом формулы влево, ускоренное СОЭ (58мм/ч). При колоноскопии поражение распространялось от прямой кишки до печеночного изгиба. Слизистая была гиперемирована, отечна, с контактной кровоточивостью, продольными и полигональными язвами, покрытыми фибрином. Больной предпринято интенсивное лечение кортикостероидами па-рентералъно с переходом на преднизолон 60мг/сут и азатиоприн 150мг/сут, корригирующая трансфузи-онная терапия. Улучшение носило кратковременный характер. Из-за развития выраженной лейкопении и инфекционных осложнений (плевропневмония) азатиоприн был отменен через 3 месяца. Повторные курсы гормональной терапии в 2004 году без эффекта. Течение заболевания непрерывное, с периодическими ухудшениями. В течение двух лет постоянно принимает сульфасалазин 3 г/сут.

На момент осмотра в ЦНИИГ тяжесть состояния определяется выраженностью диареи и болевым синдромом. При лабораторном исследовании выраженных отклонений от номы не выявлено (Нв — 11,2 г/д, СРВ — 18,9мг/л). Однако при колоноскопии сохранялась картина язвенного колита с поражением до печеночного изгиба с контактной кровоточивостью и множественными язвами во всех пораженных сегментах кишки. Больная продолжала получать сульфасалазин 3 г/сут, и на этом фоне 15.09.06 предпринято лечение аутологичными мезенхимальными стволовыми клетками в количестве 2 х 1О11, введенными внутривенно. Получение клеточного материала осуществлялось по ранее описанной методике [4]. Эффект проявился спустя месяц, когда частота стула сократилась с 15 до 5 раз в сутки, прекратились боли и выделение крови, а кал приобрел оформленный характер. При контрольной колоноскопии 12.12.06 г констатирована ремиссия процесса в нисходящей кишке и существенное уменьшение активности воспаления в прямой и сигмовидной кишке. При динамическом наблюдении в течение года было установлено, что полученный эффект сохранялся более 5 месяцев.

Таким образом, мезенхимальные стволовые клетки у данной больной хотя и не решили проблемы резистентности и не излечили от язвенного колита, но позволили в течение длительного срока улучшить состояние и качество жизни, способствовали регрессии воспалительного процесса.

Пересадка мезенхимальных стволовых клеток, как уже вытекает из опыта проведенных исследований в области медицинского использования клеток стволового типа, будет способствовать повышению эффективности лечения стандартными терапевтическими методами хронических воспалительных заболеваний кишечника.

ю

-о

ЛИТЕРАТУРА

1. Васильева, И. А. Лечебный эффект системной трансплантации культивируемых аутогенных мезенхимальных стволовых клеток костного мозга у больных с резистентными формами туберкулеза легких/И. А. Васильева, А. Г. Конопляников, В. В. Ерохин и др.//Клеточная трансплантология. — 2007. — Т. 1. — С. 77-80.

2. Манукян, Г. В. Трансплантация фетальных клеток в лечении больных циррозом печени и портальной гипертензией/Г. В. Манукян, А. К. Ерамишанцев, Г. Т. Сухих и др.//Гепатология. — 2004. —

Т. 6. — С. 14-20.

3. Цыб, А. Ф. Получение и использование в медицине клеточных культур из мезенхимальных стволовых клеток костного мозга человека/А. Ф. Цыб, А. Г. Коноплянников, А. И. Колесникова и др.//Вестн. РАМН. — 2004. — Т. 59, № 9. — С. 71-6.

4. Черных, Е. П. Аутологичные клетки костного мозга в комплексном лечении пациентов хроническими гепатитами и циррозом печени/Е. П. Черных, А. И. Пальцев, Н. М. Старостина и др.//Ге-патология. — 2005. — Т. 1. — С. 30-36.

5. Aggarwal, S. Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses/S. Aggarwal, M. F. Pittinger//Blood. — 2005. — Т. 105. — Р. 1815-1822.

6. Arinzeh, T. L. Allogeneic mesenchymal stem cells regenerate bone in a critical-sized canine segmental defect/T. L. Arinzeh, S. J. Peter, M. P. Archambault et al.//J. Bone Joint Surg. Am. — 2003. — Т. 85-A. — Р. 1927 -1935.

7. Barkholt, L. Resetting the immune system in refractory Crohn’s disease: is autologous hematopoietic stem cell transplantation the way forward?/ L. Barkholt, R.Lofberg // Gastroenterology. — 2005. — Vol. 128. — Р. 786-788.

8. Battler, A. Stem cell and gene-based therapy. Frontiers in regenerative medicine/A. Battler, J. Leor. — L, Springer-Verlag, 2006.; Gnecchi, M. Evidence supporting paracrine hypothesis for Akt-modified mesenchymal stem cell-mediated cardiac protection and functional improvement/M. Gnecchi, H. He, N. Nicolas Noiseux et al. // The FASEB J. 2006. — Vol. 20. — Р. 661-669.

9. De Vos, P. Considerations for successful transplantation of encapsulated pancreatic islets/P. De Vos,. A. F. Hamel, K. Tatarkiewicz/ /Diabetologia. — 2002. — Vol. 452. — Р. 159-173.

10. Deng, W. Long-term distribution oa adult stem cells in different tissues after transplantation / W.Deng, Q.Han, L.Liao et al. //Stem. Cell. Ther. — 2003. —№ 1. — Р. 62-65.

11. Chaudhari, M. Pancreatic stem cells: a therapeutic agent that

may offer the best approach for curing type 1 diabetes/M. Chaudhari, J. G. Cornelius,. SchatzD et al.//Pediatr. Diabetes. — 2001. — № 4. — Р. 195 - 202.

12. Ditschkowski, M. Improvement of inflammatory bowel disease after allogenic stem cell transplantation/M. Ditschkowski, H. Einsele, R. Schwerdtfeger et al.//Transplantation. — 2003. — Vol. 75. — Р. 1745 - 1747.

13. Drakos, P. E. Case of Crohn’s disease in bone marrow transplantation / P.E. Drakos, A., Nagler R.Or//Am. J.Hematol. — 1993. — Vol. 43. — Р. 157-158.

14. Forbes, S. A significant proportion of myofibroblasts are of bone marrow origin in human liver fibrosis/ S. Forbesetal. //Gastroenterol. — 2004. — Vol. 126. — Р. 955-963.

15. Frieedenstein, A. J. Hetrotopic of bone marrow. Analysis of precursor cells for osteogenic and hematopoetic tissue/A. J. Frieedenstein, K. V. Petrakova, A. L. Kurolesova et al.//Transplantacion. — 1968. — № 2. — Р. 230-247.

16. Hawkey, C. J. Stem cell transplantation for Crohn’s

disease / C. J. Hawkey//Best Pract. Res. Clin. Haematol. — 2004. — Vol.

17. — Р. 317-325.

17. Herreros, J. Bone marrow-derived stem cells initiate pancreatic regeneration / J. Herreros, F. Prosper, A. Perez et al. //Nat. Biotechnol. —

2003. — Vol. 21. — Р. 763-770.

18. Hisatomi, Y. Flow cytometric isolation of endodermal progenitors from mouse salivary gland differentiate into hepatic and pancreatic lineages/ Y. Hisatomi, K. Okumura, K. Nakamura et al. //Hepatology. —

2004. — Vol. 39. — Р. 667-675.

19. Holgado, N. Autologous intramyocardial injection of cultured skeletal muscle-derived stem cells in patients with non-acute myocardial infarction/N. Holgado, J. M. Gonzalez-Santos, C. Martin-Luengo et al.//Eur. Heart. J. — 2003. — Vol. 24. — Р. 2012-2020.

20. Hugot, J. P. Association of NOD2 lencine-rich repeat variants with susceptibility to Crohn’s disease/J. P. Hugot, M. Chamaillard, H. Zouali at al.//Nature. — 2001. — Vol. 411. — Р. 599-603.

21. Kashyap, A. Autologous bone marrow transplantation for non-Hodgkin’s lymphoma results in long-term remission of coincidental

Crohn’s disease / A. Kashyap, S. J. Forman//Br. J.Haematol. —

1998. — Vol. 103. — P. 651-652.

22. Kassis, I. Isolation of mesenchymal stem cells from G-CSF-mobilized human peripheral blood using fibrin microbeads/I. Kassis et al.//Bone Marrow Transplant. —

2006. — Vol. 37. — P. 967-976.

23. Khali, P. N. Nonmyeloablative stem cell therapy enhances microcirculation and tissue regeneration in murine

inflammatory bowel disease/P. N. Khali, V. Weiler, P. J. Nelson et al.//Gastroenterology. — 2007. — Vol. 132. — P. 944-954.

24. Kisseleva, Т. Bone marrow-derived fibrocytes participate in pathogenesis of liver fibrosis/T. Kisseleva,

H. Uchinami, N. Feirt et al.//J. Hepatol. — 2006. — Vol.

45. — P. 429-438.

25. Krampera, M. Bone marrow mesenchymal stem cells inhibit the response of naive and memory antigen-specific T cells to their cognate peptide/M. Krampera, S. Glennie,

J. Dyson et al.//Blood. — 2003. — Vol. 101. — P. 3722-3729.

26. Krupnick, A. S. Myocardial tissue engineering and regeneration as a therapeutic alternative to transplantation/A. S Krupnick., D. Kreisel, M. Riha et al.//Curr. Top. Microbiol. Immunol. — 2004. — Vol. 280. — P. 139-164.

27. Kyriakou, D. S. Hemopoietic progenitor cells and bone marrow stromal cells in patients with autoimmune hepatitis type 1 and primary biliary cirrhosis/D. S. Kyriakou et al./

/J. Hepatol. — 2003. — Vol. 39. — Vol. 5. — P. 679-685.

28. Le Blanc, K. HLA expression and-nmunologic properties of differentiated and undifferentiated mesenchymal stem zells / K. Le Blanc, C.Tammik, K.Rosendahl et al. //Exp.

Hematol. — 2003. — Vol. 31. — P. 890-896.

29. Li, Y. Evidence for migration of donor bone marrow stromal cells into recipient thymus after bone marrow transplantation plus bon-afts: A role of stromal cells in positive selection / Y. Li, H. Hisha, M. Inaba et al. // Exp.

Hematol. — 2000. — Vol. 28. — P. 550-560.

30. Liechty, K. W. Human mesenchymal stem cells engraft and demonstrate site-specific differentiation after in utero transplantation in sheep/K. W. Liechty, T. C. MacKenzie,

A. F. Shaaban et al.//Nat. Med. — 2000. — Vol. 6. —

P.1282- 1286.

31. Lopez-Cubero, S. O. Course of Crohn’s disease after allogenic marrow transplantation / S. O. Lopez-Cubero,

K. M. Sullivan, G. B. McDonald//Gastroenterology. — 1998. —

Vol. 114. — P. 433-440.

32. Mathews, V. Recruitment of bone marrow-derived endothelial cells to sites of pancreatic beta-cell injury/V. Mathews, P. T. Hanson, E. Ford et al.//Diabetes. — 2004. — Vol. 53. — P. 91 -98.

33. Matsumoto, T. Increase of bone marrow-derived secretory lineage epithelial cells during regeneration in the human intestine/T. Matsumoto, R. Okamoto, et al. Yajima//Gastroenterology. — 2005. — Vol. 128. — P. 1851- 1867.

34. Menasche, P. Myoblast transfer in heart failure/Menasche P./

/Surg. Clin. North. Am. — 2004. — Vol. 84. — P. 125-139, Menasche, P. Myoblast transfer in heart failure / P. Menasche // Surg. Clin. North. Am. — 2004. — Vol. 84. — P. 125-139.

35. Muraglia, A. Clonal mesenchimal progenitors from human bone marrow differentiate in vitro according to a hierarchial

model/A. Muraglia, R. Cancedda, R. Quarto//J. Cell Sci. — 2000. — Vol. 113. — P. 1161-1166.

36. Obradovic, S. Autologous pluripotent progenitor cells in the treatment of ischemic heart disease/S. Obradovic, S. Rusovic, D. Dincic et al.//Vojnosanit Pregl. — 2003. — Vol. 60. — P. 725-731.

37. Ogura, Y. A frameshift mutation in NOD2 associated with susceptibility to Crohn’s disease/Y. Ogura, D. K. Bonen, N. Inohara et al.//Nature. — 2001. — Vol. 411. — P. 603-606.

38. Oyama, Y. Autologous hematopoietic stem cell transplantation in patients with refractory Crohn’s disease/Y. Oyama, R. M. Craig, A. E. Traynor et al.//Gastroenterology. — 2005. — Vol. 128. — P. 552 - 563.

39. Oyama, Y. Division of Immunotherapy, Department of Medicine, Northwestern University Feinberg School of Meidicine/Y. Oyama, R. M. Craig, K. et al. Quigley. — Chicago, IL.: BMT Tandem Meeting, Honolulu, 2006.

40. Oyama, R. Autologous haematopoietic stem cell transplantation in patients with refractory Crohn’s disease/R. Oyama, R. M. Craig, A. E. Traynor et al.//Gastroenterology. — 2005. — Vol. 128. —

P. 552 - 563.

обзоры

reviews

-o

-o

41. Ozbaran, M. Autologous peripheral stem cell transplantation in patients with congestive heart failure due to ischemic heart disease / M. Ozbaran, S. B. Omay, S. Nalbantgil et al. // Eur.

J. Cardiothorac. Surg. — 2004. — Vol. 25. — P. 342-350.

42. Peck, A. B. Generation of islets of Langerhans from adult pancreatic stem cells/A. B. Peck, J. G. Cornelius, D. Schatz et al.//J. Hepatobiliary Pancreat. Surg., 2002. — Vol. 9. — P. 704-709.

43. Perry, T. E. Thoracic Surgery Directors Association Award. Bone marrow as a cell source for tissue engineering heart valves/T. E. Perry,

S. Kaushal, F. W. Sutherland et al.//Ann. Thorac. Surg. — 2003. — Vol. 75. — P. 761-767.

44. Sotiropoulou, P. A. Interactions between human mesenchymal stem cells and natural killer cells/P. A. Sotiropoulou, S. A. Perez, A. D. Gritzapis et al.//Stem. Cells. — 2006. — Vol. 24. — P. 74-85.

45. Suzuki, K. Selective cell dissemination into the heart by retrograde intra-coronary infusion in the rat/K. Suzuki, B. Murtuza, R. T. Smolensk et al. //Transplantation. — 2004. — Vol. 77. —

P. 757 - 759.

46. Taheri, S. Myogenesis after myocardial stem cell transplan

tation / S. Taheri // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. — 2003. — Vol. 126. — P. 2116 - 2117.

47. Tse, W. T. Suppression of allogeneic-cell proliferation by human marrow stromal cells: implications in transplantation,

ansplant/W. T. Tse, J. D. Pendleton, W. M. Beyer et al.//2003. — Vol. 75. — P. 389-397.

48. Zhan, Y. T. Differentiation of bone marrow stem cells in rat hepatic fibrogenesis environment/Y. T. Zhan et al.//Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. — 2003. — Vol. 11. — P. 673-675.