Изучение антибиотикочувствительности бактерий, изолированных от птиц

2012, Т. 2, № 1-2

Современное лабораторное обеспечение.

свойства, относились к серотипу Oranienburg. У всех штаммов отмечен одинаковый плазмидный спектр и положительный амплификационный ответ на ген inv А. Рестрикционные профили 12 изолятов были абсолютно идентичны; один штамм имел минимальные отличия (коэффициент подобия = 0,98), что позволило отнести все штаммы к одной клональной группе. Комплексный подход с использованием современных технологий идентификации и типи-рования дал возможность установить клональный характер заболеваний и подтвердить эпидемиологическую связь штаммов, выделенных от больных и фактора передачи.

ИЗУЧЕНИЕАНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ, ИЗОЛИРОВАННЫХ ОТ ПТИЦ

Е.В. Афанасьевская, С.В. Поспелова, А.В. Перова

ГБОУ ВПО ПГМА им. акад. Е.А. Вагнера Минздравсоцразвития РФ, г. Пермь

Современное птицеводство не может быть успешным без проведения превентивных профилактических мероприятий с использованием различного рода антибактериальных средств. Одно из основных негативных последствий их применения — развитие устойчивости возбудителей, в результате чего снижается их эффективность и возникает необходимость повторных курсов.

Целью работы явилось изучение видового состава и динамическая оценка антибиотикочувствительно-сти культур, выделенных в условиях птицефабрики в период с 2009 по 2012 годы. Исследовано 825 проб патологического материала, взятого при вынужденном забое птицы. Бактериологическое исследование проводили по стандартной методике. Чувствительность изолированных штаммов к антибактериальным препаратам определяли диско-диффузионным методом в отношении ципрофлоксацина, энрофлоксацина, ванкомицина, оксациллина, ампициллина, фураз-ролидона, триметоприма, гентамицина.

Всего было выделено и идентифицировано 1672 культуры различных видов микроорганизмов, среди которых преобладали бактерии семейства Enterobacteriaceae (58,1%), которые чаще всего (46,3%) изолировали из ассоциаций со стафило- и энтерококками. Особый интерес представляло изучение чувствительности микроорганизмов к фторхино-лонам, которые входят в состав многих кормовых антибиотиков и широко применяются в птицеводстве. Изучение антибиотикограмм позволило выявить формирование и распространение устойчивых к фторхинолонам клонов эшерихий и золотистых стафилококков. Динамическое наблюдение показало, что с 2009 по 2011 гг. количество резистентных штаммов E. coli возросло с 5,3 до 29,1%. S. aureus в 2009 г. встречался в единичных случаях и был чувствителен ко всему выбранному спектру антибиотиков. К 2011 г. доля культур S. aureus, рост которых фторхинолоны не подавляли, составила 33,5%. Важно подчеркнуть, что ванкомицин проявлял активность в отношении всех грамположительных кокков. MRSA среди «птичьих» штаммов обнаружены не были.

Таким образом, сформировавшаяся и распространившаяся среди бактерий, циркулирующих на птицефабрике, устойчивость к ципрофлоксацину является одним из факторов риска развития генерализованных инфекций у птиц. Для предотвращения

формирования резистентности необходима правильная и своевременная ротация препаратов с разным механизмом действия.

ОЦЕНКА АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТОВ ИЗ ДРОЖЖЕЙ CANDIDA И MALASSEZIA МЕТОДОМ ДОТ-БЛОТ АНАЛИЗА

О.А. Баева, В.Г. Арзуманян, О.А. Сердюк

ФГБУ НИИ вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова РАМН, Москва

Многие виды дрожжевых грибов являются возбудителями фунгемийиаллергомикозов. Качественная диагностика этих заболеваний предполагает наличие панели высокоспецифичных и стандартизованных дрожжевых антигенов. Антигенные препараты из дрожжей производятся за рубежом, причем первой стадией их выделения является дезинтеграция дрожжевых клеток. В то же время известно, что наиболее важными в антигенном отношении являются поверхностные компоненты клеток дрожжей, поскольку именно поверхность микробной клетки является той материей, которая непосредственно взаимодействует с клетками и антителами иммунной системы хозяина (Mochon A.B. et al, 2010). Нами разрабатывается и постоянно совершенствуется способ выделения антигенных компонентов поверхностных слоев дрожжей. Целью настоящего исследования явилось сравнение иммунологических свойств двух препаратов — из дрожжей родов Candida и Malassezia.

В экспериментах использованы штаммы дрожжей из институтской коллекции — Candida albicans № 927, Malassezia furfur № 1451. Выращивание культур дрожжей Сandida проводили в чашках Петри на плотной синтетической питательной среде, содержащей соли, витамины и глюкозу в качестве единственного источника углерода и энергии (Yarrow, 1998). Дрожжи Malassezia культивировали в чашках Петри на синтетической среде, содержащей соли, Tween 40 и желчные соли (Арзуманян В.Г., 2000). Инкубацию чашек проводили в термостате при температуре 32°С.

Выделение антигенного комплекса поверхностных компонентов клеток проводили путем экстракции раствором додецилсульфата натрия. Концентрация детергента подбиралась таким образом, чтобы клетки оставались целыми. Бесклеточный экстракт использовали в качестве антигенного препарата.

Два кролика породы шиншилла были иммунизированы по следующей схеме: препараты из дрожжей вводили внутривенно в краевую вену уха в дозе 0,25 мл, причем по 6 иммунизаций без адьюванта с интервалом 3 суток, после чего еще по 5 иммуни-заций в нарастающей дозе от 0,25 мл до 1 мл с адью-вантом Фрейнда с интервалом 2 недели. Сыворотки кроликов были использованы в опытах по изучению перекрестной реактивности препаратов из упомянутых дрожжей. Кролик А — иммунизирован препаратом из C. albicans, кролик Б — из M. furfur.

Дот-блот анализ полученных препаратов с кроличьими сыворотками проводили методом, описанным ранее (Towbin H. et al., 1979). На мембрану наносили по 1 мкл дрожжевых препаратов, концентрация белка примерно 2,3 мг/мл; в качестве отрицательного контроля использовали раствор бычьего сывороточного альбумина 2 мг/мл в фосфатном бу-