Влияние комплекса стауроспорина с аполипопротеином а-1 на клеточную пролиферацию

68

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

товленной фосфорилирующей смесью при атмосферном давлении, температуре 20—60 °С, в течение 1—14 сут. Структуру, состав и размеры полученных образцов исследовали методами потенциометрического титрования, инфракрасной спектроскопии и 31Р-спектроскопии ядерного магнитного резонанса, элементного анализа, рентгенофазового анализа, сканирующей электронной микроскопии и атом-но-силовой микроскопии.

Результаты. При фосфорилирования в вышеописанных системах были получены фосфаты целлюлозы с содержанием фосфорнокислых групп в интервале 0,2—4,9 ммоль/г, степенью набухания 2,4—119 г/г, относящиеся к классу малотоксичных веществ, способные к гелеобразованию. Результаты исследований показали, что содержание фосфора и степень набухания в значительной степени зависят от продолжительности реакции и температуры процесса. При этом следует отметить, что увеличение температуры и времени реакции способствует накоплению фосфора, в то время как степень набухания проходит через максимум. Так, максимум набухания (112 г/г) фосфатов целлюлозы, полученных при 30 °С, достигается при фосфорили-ровании в течение 6 сут, а при 40 °С (119 г/г) — за 4 сут.

Заключение. На основании проведенных исследований предложен способ получения биодеструктируемых полимеров на основе высокозамещенных фосфатов целлюлозы, которые могут быть использованы в качестве носителей противоопухолевых веществ в силу их физико-химических свойств.

С.М. Мирошниченко. А.Н. Дударев, Т.А. Ткаченко,

А.Ю. Городецкая, С.И. Давыденко, И.Ф. Усынин

ВЛИЯНИЕ КОМПЛЕКСА СТАУРОСПОРИНА

С АПОЛИПОПРОТЕИНОМ А-1 НА КЛЕТОЧНУЮ

ПРОЛИФЕРАЦИЮ

ФГБНУ «НИИбиохимии», Новосибирск

Введение. Стауроспорин (СТ) является противоопухолевым препаратом, способным вызывать апоптоз опухолевых клеток с фенотипом лекарственной устойчивости. Однако его использование затруднено в связи с цитоток-сичностью по отношению к здоровым клеткам и плохой фармакокинетикой. Создание липосом с более низкими концентрациями СТ позволило снизить его токсичность. Аполипопротеин А-1 (АпоА-1), основной белок липопро-теинов высокой плотности (природные переносчики), имеет амфипатические а-спирали, способные связывать плохо растворимые в воде молекулы. Показана его роль в транспорте холестерина, гормонов, жирорастворимых витаминов, ксенобиотиков.

Цель исследования — изучить влияние комплекса СТ с АпоА-1 на удвоение ДНК высокопролиферирующих клеток.

Материалы и методы. Липопротеины выделяли из плазмы крови человека методом изоплотностного ультрацентрифугирования в растворе КВг. АпоА-1 экстрагировали смесью бутанола с диизопропиловым эфиром с последующим высаливанием сульфатом аммония. Чистоту АпоА-1 оценивали с помощью электрофореза в полиакриламид-ном геле. Пролиферацию клеток оценивали по включению [3Н] -тимидина («Изотоп», Россия) в ДНК. Для этого за 2 ч до окончания эксперимента в культуральную среду вноси-

ли 2,0 мкКю/мл. Радиоактивность проб измеряли на жидкостном сцинтилляционном счетчике Mark-III (США). Скорость биосинтеза ДНК рассчитывали в импульсах в 1 мин на 106 клеток. Клетки линии THP-1 и мышиной меланомы B16-F10 культивировали в среде RPMI-1640 («ПанЭко», Россия) в присутствии СТ или комплекса СТ с АпоА-1 в течение 4 ч, концентрация СТ (Sigma) изменялась от 0,5 до 0,005 мкМ.

Результаты. Анализ тушения флуоресценции триптофана в АпоА-1 под влиянием СТ указывает на связывание данного индуктора апоптоза с белком. Полученный комплекс был стабилен в течение исследуемого периода (1 мес) и сохранял способность ингибировать включение [3Н] -ти-мидина в ДНК клеток линии THP-1 при меньшей концентрации антибиотика в комплексе с АпоА-1. Комплекс усиливал СТ-индуцированный апоптоз клеток линии THP-1. Для исследования включения [3Н] -тимидина в ДНК (S-фаза) клеток меланомы B16-F10 использовали СТ в концентрации от не влияющей на данный показатель (0,05 мкМ) до ин-гибирующей на 70 % (0,5 мкМ). В комплексе с АпоА-1 в первом случае ингибирование составило 41 % от контрольного уровня. Повышение концентрации СТ до 0,1 мкМ в среде культивирования снижало включение [3Н]-тими-дина на 38 %, комплекс усиливал ингибирующий эффект до 56 %. В дальнейшем СТ в комплексе с АпоА-1 снижал включение [3Н]-тимидина в ДНК клеток в большей степени, чем СТ сам по себе.

Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности использования АпоА-1 для доставки СТ в высокопролиферирующие клетки.

В.А. Мисюрин1, А.В. Мисюрин1, Н.А. Лыжко1, Т.В. Ахлынина1, Ю.П. Финашутина1, Л.А. Кесаева1, А. В. Пономарёв1, А.Е. Мисюрина2, А.А. Крутов2, Е.Н. Пушкова1, О. С. Бурова1, А. С. Уварова1, М.А. Барышникова1 БЕЛОК PRAME СПОСОБЕН ВЛИЯТЬ НА ЭКСПРЕССИЮ СОБСТВЕННОГО ГЕНА 1ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва;

2ФГБУ ГНЦМинздрава России, Москва

Введение. Экспрессия гена PRAME при онкологических заболеваниях наблюдается очень часто. Активность белка PRAME оказывает негативное влияние на прогноз. Известно, что PRAME способен связываться с бактериальными липополисахаридами и пептидогликанами (PAMPs). Данный белок состоит из лейцин-богатых повторов и имеет структуру, сходную с TLR2 (толл-подобный рецептор 2) и белком RI (ингибитор рибонуклеаз). Известно, что TLR2 через NF-kB активирует экспрессию гена TLR2. Согласно современным представлениям, экспрессия гена PRAME запускается при связывании неизвестного поверхностного рецептора с PAMPs. Мы располагаем данными, доказывающими наличие белка PRAME на поверхности клетки. Мы предполагаем, что мембраносвязанный белок PRAME связывается с PAMPs и передает сигнал внутрь клетки, что приводит к активации экспрессии многих генов, в том числе и гена PRAME. Кроме того, PRAME, подобно белку RI, может обладать способностью защищать РНК от тепловой деградации.

№1 / том 15 / 2016

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ