СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ ПРЕПАРАТОМ "ЭТОКСИДОЛ" ПРИ L-NAME ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА
METHOD OF CORRECTING ENDOTHELIAL DYSFUNCTION BY MEDICATION "ETOXYDOL" IN CASE OF L-NAME INDUCED NITROGEN OXIDE DEFICIENCY

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.
Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции с использованием препарата «Мексидол», описанный Покровским М.В. и соавторами в статье «Изучение эндотелиопротективного и коронарного действия производных 3-оксипиридина», опубликованной в журнале Кубанский научный медицинский вестник №4 (109), стр.104-109. В указанной статье описаны эндотелиопротективные эффекты производного 3-оксипиридина - мексидола при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота.
Однако данный способ не охватывает оценку эндотелиопротективных эффектов нового производного 3-оксипиридина - препарата «Этоксидол» (ВНЦ БАВ, Московская обл., Старая Купавна).
Задачей изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота, включающий внутрибрюшинное введение субстанции нового производного оксипиридина этоксидола в дозе 25 мг/кг.
Поставленная задача достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции внутрибрюшинным введением лабораторному животному блокатора NO-синтазы N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно, в течение 7 суток, проводится ее коррекция путем внутрибрюшинного введения препарата «Этоксидол» в дозе 25 мг/кг в течение 7 суток.
Способ осуществляется следующим образом.
Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 180-200 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно ежедневно в дозе 25 мг/кг/сут в течение 7 суток. «Этоксидол» (ВНЦ БАВ Московская обл., Старая Купавна, Россия) вводили внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг в течение 7 суток в утренние часы. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Biopac". Функциональные пробы: эндотелий зависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелий независимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.
При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.
Пример конкретного выполнения
Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 сек после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7 суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.
Одновременное введение L-NAME и этоксидола привело к оптимальному снижению показателей исходных значений АД, так как исходные цифры АД были ниже: САД - 156,5±8,6, ДАД - 114,7±12,2 мм рт.ст. Также отмечалось потенциирование снижения показателей артериального давления в ответ на введение АХ (таблица 1).
Таблица 1
Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции этоксидолом.
Группы животных
Функциональные пробы
САД, мм рт.ст.
ДАД, мм рт.ст.
ЧСС, уд. в мин
Интактные
Исходные
137,7±3,7
101,9±4,3
420,0±9,0
ЭЗВ с АХ
84,3±4,5
38,7±2,8
416,0±14,0
ЭНЗВ с НП
83,0±3,7
42,1±4,4
415,0±10,0
Получавшие L-NAME (25 мг/кг)
Исходные
190,3±6,7*
145,0±3,9*
428,0±11
ЭЗВ с АХ
110,6±5,2*
82,8±6,6*
426,0±14,0
ЭНЗВ с НП
88,7±4,7
50,8±4,2
426,0±13,0
L-NAME (25 мг/кг) + этоксидол (25 мг/кг)
Исходные
156,5±8,6**
114,7±12,2**
350,0±16,2
ЭЗВ с АХ
94,0±6,4* *
55,0±4,9**
322,0±12,8
ЭНЗВ с НП
103,8±6,7
51,8±4,8
355,9±14,9
* - р<0,05 в сравнении с группой интактных животных
** - р<0,05 в сравнении с группой животных, получавших L-NAME
Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.
Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.
Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение, как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился этоксидол, это отношение соответствовало значению - 2,3±0,2 (таблица 2).
Таблица 2
Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME этоксидолом.
Группы животных
Функциональные пробы
Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.)
Время сосудистой реакции (сек)
Площадь сосудистой реакции (усл.ед.)
Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП
Интактные
АХ
59,9±2,9
42,2±0,8
1268,0±74,8
НП
61,0±3,0
45,1±1,0
1375,3±93,7
1,1±0,1
L-NAME
АХ
68,0±4,1
20,0±1,4
695,3±87,6*
НП
98,0±2,0
67,4±1,4
3322,7±116,7*
5,4±0,6*
L-NAME+этоксидол 25 мг/кг
АХ
68,0±4,9
49,2±4,3**
1560,8±330,1**
2,3±0,2**
НП
69,2±4,1
93,5±8,1**
3363,9±454,1**
* - р<0,05 в сравнении с группой интактных животных
** - р<0,05 в сравнении с группой животных, получавших L-NAME
Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию эндотелиальной дисфункции препаратом «Этоксидол» на фоне введения L-NAME.