Особенности системного иммунного статуса у пациенток после самопроизвольного прерывания беременности

УДК 618.39-021.3-078.33

ОСОБЕННОСТИ СИСТЕМНОГО ИММУННОГО СТАТУСА У ПАЦИЕНТОК ПОСЛЕ САМОПРОИЗВОЛЬНОГО ПРЕРЫВАНИЯ

БЕрЕМЕННОСТИ

Е. Е. Воропаева, Л. В. Рябова

Челябинская государственная медицинская академия, г. Челябинск

Изучены особенности системного иммунного статуса у пациенток после самопроизвольного прерывания беременности. Проведено иммунологическое обследование 60 пациенток, страдающих невынашиванием беременности, через 3—4 месяца после самопроизвольного выкидыша. Все пациентки находились в репродуктивном периоде жизни, имели хронический эндометрит вирусно-бактериаль-ной этиологии, преимущественно низкой или умеренной степени активности. Группу сравнения составили 20 гинекологически здоровых женщин, имевших в анамнезе одну или несколько беременностей, закончившихся родами с благоприятным исходом, обратившихся по вопросам планирования семьи. Установлены иммунологические сдвиги в виде активации клеточных и гуморальных факторов защиты наряду с несостоятельностью функциональной активности нейтрофилов у пациенток с невынашиванием беременности, что подтверждает существенную роль инфекционно-воспалительного фактора в генезе самопроизвольного аборта независимо от наличия или отсутствия других причин.

Ключевые слова: системный иммунный статус, самопроизвольное прерывание беременности.

Введение

Проблема невынашивания беременности продолжает сохранять свою актуальность и приоритетность в современном акушерстве. Каждый эпизод самопроизвольного прерывания беременности усугубляет нарушения репродуктивного здоровья женщины, приводя к расстройствам менструальной функции, нарушению структуры и функций эндометрия, к дисбалансу иммунной системы, к хронической стрессовой ситуации, снижению адаптационных возможностей организма [1, 2, 4—6].

При проведении восстановительного лечения после самопроизвольного выкидыша целесообразно учитывать состояние системного иммунного статуса.

Цель исследования — изучение особенностей системного иммунного статуса у па-

циенток после самопроизвольного прерывания беременности.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

исследования

Проведено иммунологическое обследование 60 пациенток, страдающих невынашиванием беременности, через 3—4 месяца после самопроизвольного выкидыша. Все пациентки находились в репродуктивном периоде жизни, имели хронический эндометрит вирусно-бактериальной этиологии, преимущественно низкой или умеренной степени активности. Критериями исключения из исследования явились наличие тяжелой экстрагенитальной патологии и использование больными иммунопрепаратов в течение последних 6 месяцев. Группу сравнения составили 20 гинекологически здоровых жен-

103

щин, имевших в анамнезе одну или несколько беременностей, закончившихся родами с благоприятным исходом, обратившихся по вопросам планирования семьи. У всех женщин получено информированное согласие на участие в исследовании.

Для оценки иммунологических показателей исследовали периферическую кровь. Определяли общее число лейкоцитов периферической крови и лейкоцитарную формулу, популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов, фагоцитарную функцию нейтрофилов, активность компонентов комплемента в сыворотке крови, уровень иммуноглобулинов классов А, М, G в сыворотке крови.

Для определения субпопуляций лимфоцитов проводили иммунофенотипирование методом проточной цитофлуометрии с использованием моноклональных антител серии: CD3+CD19-, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD4+/CD8+, CD3-CD19+, CD3+CD16+CD56+, CD3-CD16+CD56+,CD3+CD25+,CD5+CD19+, CD3+HLA DR, CD16+CD56+CD11b+ (FASCcan Becton Dickinson, USA).

Концентрацию иммуноглобулинов классов А, М, G в плазме крови определяли методом радиальной иммунодиффузии по Ман-чини с точностью до 0,003 г/л (МедБио-Спектр, Россия).

Исследование фагоцитарной функции нейтрофилов проводили на модели поглощения неопсонизированных частиц поли-стирольного латекса (диаметр 1,45 мкм). Кислородозависимый метаболизм определяли с помощью спонтанного и индуцированного НСТ-теста.

Для выявления взаимосвязей между изучаемыми факторами применялись методы вариационного анализа (определение средней арифметической, ее стандартной ошибки, среднего квадратического отклонения, оценка распределения величин), корреля-

ционного анализа (определение коэффициента линейной и нелинейной корреляции, тетрахорического и полихорического показателей связи), регрессионного анализа. Пороговая величина вероятности ошибки устанавливалась традиционно на уровне, равном 0,05. Достоверность различий величин в группах по изучаемым факторам оценивали по критериям Стьюдента (различие средних) и Фишера (различие дисперсий), критерию согласия Пирсона, с использованием точного метода Фишера и линейного дискриминантного анализа [3]. Расчеты выполнены с помощью персонального компьютера с использованием программы «Биостатистика» и статистического пакета Microsoft Excel-97 для операционной системы Win-dows-98.

Результаты и их обсуждение

Проведенные иммунологические исследования позволили выделить особенности системного иммунитета у женщин после самопроизвольного прерывания беременности.

У пациенток с невынашиванием беременности оказалось достоверно повышенным процентное содержание лимфоцитов в циркуляции: 39±1,75% против 31,0±1,1% в сравнении со здоровыми женщинами (р=0,045). Такую же тенденцию наблюдали при изучении количества зрелых Т-лим-фоцитов в периферической крови: 74,91± ±1,87% против 68,6±1,3% у здоровых лиц (р=0,048).

Как следует из таблицы 1, абсолютное и относительное содержание иммунорегу-ляторных субпопуляций Т-лимфоцитов (CD3+CD4+-лимфоцитов, CD3+CD8+-лим-фоцитов) у женщин с невынашиванием беременности достоверно выше, чем у здоровых женщин, что и обусловило статистически до-

Таблица 1

Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у пациенток с самопроизвольными абортами, %

Кластер дифференцировки лимфоцитов Пациентки с невынашиванием беременности

CD3+CD19- 74,91 + 1,87 68,6+1,3

CD3+CD4+ 44,44+1,72 Р1_2=0,039 35,0+1,37 Р1_2=0,039

CD3+CD8+ 26,17+1,82 Р1—2=0,045 19,02+0,73 Р1—2=0,045

CD4+/CD8+ 1,88+0,12 1,95+0,02

CD3-CD19+ 9,62+0,60 11,02+0,80

CD3+CD16+CD56+ 4,46+0,58 Р1—2=0,027 1,92+0,30 Р1—2=0,027

CD3-CD16+CD56+ 11,44+1,05 11,20+0,50

CD3+CD25+ 11,90+0,94 Р1—2=0,001 2,74+0,42 Р1—2=0,001

CD3+HLA DR+ 4,07+0,28 Р1—2=0,031 2,34+0,14 Р1—2=0,031

CD16+CD56+CD11b+ 13,25+1,21 Р1—2=0,001 4,91+0,90 Р1—2=0,001

CD5+CD19+ 2,80+0,07 Р1—2=0,045 2,0+0,02 Р1—2=0,045

стоверное повышение относительного числа лимфоцитов у лиц с самопроизвольными абортами. Характерным для пациенток с невынашиванием беременности явилось некоторое снижение иммунорегуляторного индекса в сравнении со здоровыми лицами в пользу цитотоксических Т-лимфоцитов, что, вероятно, отражает необходимость кил-линга инфицированных клеток. При определении уровней лимфоцитов с киллерной ци-толитической активностью отмечено, что у пациенток с невынашиванием беременности NK-лимфоциты, участвующие в первичной воспалительной реакции, достоверно в несколько раз превышали аналогичные данные у здоровых женщин.

При сравнительном анализе экспрессии активационных маркеров лимфоцитов периферической крови мы выявили, что у пациенток с самопроизвольными абортами экспрессия маркера ранней позитивной активации лимфоцитов ^25+) и маркера поздней активации (молекул антигенной презентации МНС II класса HLA DR+) достоверно превышала показатели здоровых женщин, что являлось отражением активности воспалительного процесса. Обращало на себя внимание значительное повышение адгезионных свойств естественных киллеров CDl6+CD56+CD11b+: количество активированных Ж-лимфоцитов, несущих CD11b+, у женщин с невынашиванием беременности

оказалось в 2,5 раза больше, чем у лиц с ненарушенной репродуктивной функцией. Вероятно, это происходит в ответ на инфицирование вирусами простого герпеса I, II серотипов и цитомегаловирусом подавляющего большинства женщин с невынашиванием беременности.

Процентное содержание В-клеток было несколько ниже по сравнению с фертильны-ми женщинами, в то время как содержание В1-лимфоцитов (CD5+CD19+) достоверно выше у пациенток с невынашиванием беременности. В1-лимфоциты являются основным источником нормальных антител, обладающих полиреактивностью, а также ауто-антител к гормонам, рецепторам гормонов и нейротрансмиттерам, то есть увеличение их количества у пациенток с невынашиванием беременности может свидетельствовать о повышенном антителообразовании.

Показатели гуморального иммунитета представлены в таблице 2. Известно, что иммуноглобулины играют важную роль в кас-

кадном развитии иммунного ответа и частично могут обусловливать эффективность эффекторных реакций по инактивации и элиминации бактериальных и вирусных антигенов. Обращает на себя внимание достоверно многократное превышение уровней иммуноглобулинов периферической крови женщин с невынашиванием беременности в сравнении со здоровыми женщинами. Такая усиленная продукция иммуноглобулинов В-лимфоцитами является адекватным ответом на персистирующую антигенную стимуляцию у пациенток с самопроизвольными абортами.

Превышение уровня IgM более чем в три раза у данной категории больных (табл. 2) свидетельствует о запуске антителозависи-мой клеточной цитотоксичности, что, вероятно, связано с наличием хронической бактериально-вирусной инфекции у пациенток с невынашиванием беременности. Уровень

превышающий норму в два раза, также может свидетельствовать о наличии активно-

Таблица 2

Сравнительная характеристика уровней иммуноглобулинов и компонентов комплемента периферической крови женщин с невынашиванием беременности и ненарушенной репродуктивной функцией

Показатель Пациентки с невынашиванием беременности

IgА общий, г/л 3,22±0,33 Р1—2=0,015 1,73±0,19 Р1—2=0,015

^М общий, г/л 3,60±0,49 Р1—2=0,000 1,02±0,15 Р1—2=0,000

IgG общий, г/л 12,34±1,63 Р1—2=0,028 8,99±0,91 Р1—2=0,028

С1-ингибитор, мкг/мл 428,2±31,63 Р1—2=0,000 210,4±10,2 Р1—2=0,000

С3а-фрагмент комплемента, нг/мл 487,48±40,17 Р1—2=0,000 101,6±25,3 Р1—2=0,000

С5а-фрагмент комплемента, нг/мл 27,25±1,91 Р1—2=0,002 17,4±0,98 Р1—2=0,002

го инфекционно-воспалительного микст-поражения слизистых оболочек генитального тракта у этих женщин.

Вышеизложенное указывает на активное участие гуморального звена иммунной системы в патогенезе потери беременности.

Проведено исследование параметров, характеризующих фагоцитарную и бактерицидную функции нейтрофилов (табл. 3).

Как видно из таблицы 3, для женщин с самопроизвольными абортами характерна несостоятельность неспецифической резистентности в виде угнетения фагоцитарной активности нейтрофилов. Активность фагоцитоза, фагоцитарное число и индуцированная кислородзависимая метаболическая активность нейтрофилов, определяемая в стимулированном НСТ-тесте, оказались достоверно ниже по сравнению с аналогичными показателями в группе с ненарушенной репродуктивной функцией.

Вышеизложенное может свидетельствовать о низкой способности нейтрофилов от-

вечать на дополнительную стимуляцию выработкой бактерицидных факторов и, возможно, формирует условия для персистен-ции инфекционных агентов в организме женщин с невынашиванием беременности. Дискордантность между активированным ре-цепторным аппаратом лейкоцитов и их сниженной фагоцитарной активностью, по-видимому, отражает реакцию клеток на персис-тенцию антигена в слизистых оболочках полового тракта.

Изучение особенностей корреляции параметров иммунограмм больных невынашиванием беременности позволило установить некоторые линейные зависимости между различными показателями клеточного и гуморального иммунитета. Так, прямая линейная умеренная статистически значимая (р<0,05) корреляционная связь имеется между уровнем CD3+CD4+-лимфоцитов и CD3-CD19+-лимфоцитов (г=0,477), между CD3+CD8+-лимфоцитами и СD3+l6+56+-лимфоцитами (г=0,670), между CD3-CD19+-

Таблица 3

Сравнительная характеристика показателей функциональной активности нейтрофилов периферической крови женщин с невынашиванием беременности и ненарушенной

генеративной функцией

Показатель Пациентки с невынашиванием беременности

Активность фагоцитоза, % 53,90±2,09 Р1—2=0,015 86,1±0,9 Р1—2=0,015

Интенсивность фагоцитоза, у. е. 2,15±0,13 Р1—2=0,028 1,13±0,02 Р1—2=0,028

Фагоцитарное число, у. е. 3,96±0,16 Р1—2=0,028 6,45±0,46 Р1—2=0,028

НСТ-спонтанная активность, % 21,81±2,99 22,6±1,34

НСТ-спонтанный индекс, у. е. 0,26±0,04 0,37±0,04

НСТ-индуцированная активность, % 48,43±3,68 48,0±3,91

НСТ-индуцированный индекс, у. е. 0,61±0,05 Р1—2=0,035 0,99±0,09 Р1—2=0,035

лимфоцитами и С3А-компонентом комплемента (г=0,546), между CD3+25+-активи-рованными лимфоцитами и С1А-компонен-том комплемента (г=0,446), между ИФН и уровнем ^ (г=0,479), между спонтанной активностью лимфоцитов в НСТ-тесте и уровнем ^ (г=0,505).

Вышеизложенное свидетельствует в пользу активации всех звеньев гуморального и клеточного иммунитета в ответ на персис-тенцию инфекционных агентов в организме пациенток с невынашиванием беременности. Обратная умеренная статистически значимая (р<0,05) корреляционная связь имеется между уровнем CD3+25+-акти-вированных лимфоцитов и активированными NK-лимфоцитами (г=-0,5б0), между уровнем CD8-лимфоцитов и спонтанной активностью нейтрофилов в НСТ-тесте (г=—0,478), а также уровнем Т-лимфоцитов в стадии ранней активации (г=-0,591), между уровнем активированных NK-лимфоцитов и показателем С1А-компонента комплемента (г=—0,518), между уровнем В-лимфоцитов и С5А-компонентом комплемента (г=—0,523), между индуцированной активностью ней-трофилов в НСТ-тесте и С5А-компонентом комплемента (г=-0,602). Наиболее активным участником корреляционных пар оказался СD25+-маркер, имеющий отрицательную корреляционную связь со многими параметрами иммунограммы.

Вывод

Подобная динамика иммунологических сдвигов в виде активации клеточных и гуморальных факторов защиты наряду с несостоятельностью функциональной активности нейтрофилов у пациенток с невынашиванием беременности подтверждает наше представление о роли инфекционно-воспали-тельного фактора в генезе самопроизвольного аборта независимо от наличия или отсутствия других причин.

Библиографический список

1. Доброхотова Ю. Э. Реабилитация репродуктивной функции у женщин с неразвивающейся беременностью в анамнезе/ Ю. Э. Доброхотова, Т. А Чернышенко, А. А. Аушева^//Журн. акуш. и жен. болезней.- 2006.- Т. LV— № 1.- С. 91-94.

2. Овчинникова В. В. Оптимизация преграви-дарной подготовки женщин с невынашиванием беременности на фоне хронического эндометрита: автореф. дис. ... канд. мед. наук/В. В. Овчинникова.— М., 2006.— 20 с.

3. Платонов А. Е. Статистический анализ в медицине и биологии: задачи, терминология, логика, компьютерные методы/ А. Е. Платонов.- М.: Изд-во РАМН, 2000.— 52 с.

4. Радзинский В. Е. Ранние сроки беременности/В. Е. Радзинский, А. А. Оразмура-дов.- М.: Status Praesens, 2009.- 480 с.

5. Сидельникова В. М. Привычная потеря беременности/В. М. Сидельникова.— М.: Триада-Х, 2005.- 304 с.

6. Тетруашвили Н К. Клинико-патогенети-ческое обоснование использования различных методов иммунотерапии при привычном выкидыше/Н. К. Тетруашвили// Акушерство и гинекология.- 2008.-№ 5.- С. 7-12.

E. E. Voropaeva, L. V. Ryabova

PECULIARITIES OF SYSTEMIC IMMUNE STATUS IN PATIENTS AFTER SPONTANEOUS ABORTION

Peculiar features of the systemic immune status in patients after spontaneous abortion were investigated. Immunological examination of 60 patients suffering from miscarriage was

carried out in 3—4 months after the spontaneous abortion. All the patients were in reproductive period of life, had chronic viral-bacterial endometritis of the low and medium degree of activity. The group of comparison included 20 gynecologically healthy women having in anamnesis one or some pregnancies with favorable delivery, who had addressed for family planning. Immunological shifts in the form of activation of cellular and humoral defense factors along with failure of neutrophile functional activity were determined. It confirms the essential role of infectious-inflammatory

factor in the genesis of spontaneous abortion irrespective of other reasons.

Keywords: systemic immune status, spontaneous abortion.

Контактная информация: Воропаева Екатерина Евгеньевна, канд. мед. наук, ассистент кафедры акушерства и гинекологии № 1 Челябинской государственной медицинской академии, 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64, тел. 8 (351) 721-94-59

Материал поступил в редакцию 24.01.2011