УРОВНИ БЕЛКА Hsp70 В ОБРАЗЦАХ PBMC КАК БИОМАРКЕР ЗАБОЛЕВАНИЯ

1. Способ обнаружения Hsp70 в образце мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC), при этом указанный способ предусматривает стадии
a) получения образца PBMC,
b) обнаружения Hsp70 в указанном образце PBMC и
c) необязательно количественной оценки или определения уровня Hsp70 в указанном образце PBMC.
2. Способ диагностики заболевания, проявляющегося сниженным уровнем Hsp70, у индивидуума, при этом указанный способ предусматривает стадии:
a) получения образца PBMC от указанного индивидуума,
b) обнаружения Hsp70 в указанном образце PBMC и
c) количественной оценки или определения уровня Hsp70 в указанном образце PBMC.
3. Способ по п. 2, дополнительно предусматривающий стадию
i. классификации или определения того, имеется ли у индивидуума заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70, или имеется ли вероятность его наличия.
4. Способ выбора пациента, имеющего заболевание со сниженным уровнем Hsp70, при этом указанный способ предусматривает стадии
a) получения образца PBMC от указанного пациента,
b) обнаружения Hsp70 в указанном образце PBMC,
c) количественной оценки или определения уровня Hsp70 в указанном образце PBMC и
d) классификации или определения того, имеет или не имеет индивидуум сниженные уровни Hsp70.
in vitro
5. Способ по любому из предыдущих пунктов, который представляет собой способ .
6. Способ по любому из предыдущих пунктов, предусматривающий обнаружение и необязательно количественную оценку или определение Hsp70, выбранного из
i. HspA1A,
ii. HspA1B или
iii. HspA1A и HspA1B.
7. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанный образец РВМС получают или могут получать от индивидуума.
8. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанный индивидуум имеет заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70, имеет подозрение на его наличие, имеет риск его развития или вероятно имеет его.
9. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанный индивидуум имеет одного или более членов семьи, у которых диагностировано заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70; например, одного или более из сибса, родителя, двоюродного сибса, дяди и/или тети, у которых диагностировано заболевание со сниженным уровнем Hsp70.
10. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанный индивидуум имеет одного или более членов семьи с генетической предрасположенностью к заболеванию, проявляющемуся сниженным уровнем Hsp70.
11. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанный индивидуум имеет один или более симптомов, ассоциированных с заболеванием, проявляющимся сниженным уровнем Hsp70, или указывающих на него.
12. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанная стадия d) предусматривает определение уровня Hsp70 в образце PBMC по сравнению с уровнями в образце PBMC от здорового контроля.
13. Способ по любому из предыдущих пунктов, где
i. сниженный или не подлежащий определению уровень Hsp70 в образце PBMC по сравнению с уровнями у здорового контроля указывает на то, что индивидуум имеет, вероятно имеет или имеет риск развития заболевания, проявляющегося сниженным уровнем Hsp70; и/или
ii. сниженный или не подлежащий определению уровень HspA1A в образце PBMC по сравнению с уровнями у здорового контроля указывает на то, что индивидуум имеет, вероятно имеет или имеет риск развития заболевания, проявляющегося сниженным уровнем Hsp70; и/или
iii. сниженный или не подлежащий определению уровень HspA1B в образце PBMC по сравнению с уровнями у здорового контроля указывает на то, что индивидуум имеет, вероятно имеет или имеет риск развития заболевания, проявляющегося сниженным уровнем Hsp70; и/или
iv. уровень Hsp70, HspA1A и/или HspA1B в образце, который сопоставим с уровнем у здорового контроля, равен ему или превышает его, указывает на то, что индивидуум не имеет заболевания, проявляющегося сниженным уровнем Hsp70.
14. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанный индивидуум вероятно имеет заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70, если
i. уровень Hsp70 в образце PBMC в 1-1000 раз ниже, чем уровень, обнаруженный у здоровых контролей, например, в 1-2 раза, 2-3 раза, 3-4 раза, 4-5 раз, 5-6 раз, 6-7 раз, 7-8 раз, 8-9 раз, 9-10 раз, 10-11 раз, 11-12 раз, 12-13 раз, 13-14 раз, 14-15 раз, 15-16 раз, 16-17 раз, 17-18 раз, 18-19 раз, 19-20 раз, 20-25 раз, 25-30 раз, 30-35 раз, 35-40 раз, 40-45 раз, 45-50 раз, 50-75 раз, 75-100 раз, 100-150 раз, 150-200 раз, 200-250 раз, 250-300 раз, 300-400 раз, 400-500 раз, 500-750 раз, 750-1000 раз ниже, чем уровень, обнаруженный у здорового контроля, или не подлежит обнаружению, и/или
ii. уровень HspA1A и/или HspA1B в образце PBMC в 1-1000 раз ниже, чем уровень, обнаруженный у здоровых контролей, например, в 1-2 раза, 2-3 раза, 3-4 раза, 4-5 раз, 5-6 раз, 6-7 раз, 7-8 раз, 8-9 раз, 9-10 раз, 10-11 раз, 11-12 раз, 12-13 раз, 13-14 раз, 14-15 раз, 15-16 раз, 16-17 раз, 17-18 раз, 18-19 раз, 19-20 раз, 20-25 раз, 25-30 раз, 30-35 раз, 35-40 раз, 40-45 раз, 45-50 раз, 50-75 раз, 75-100 раз, 100-150 раз, 150-200 раз, 200-250 раз, 250-300 раз, 300-400 раз, 400-500 раз, 500-750 раз, 750-1000 раз ниже, чем уровень, обнаруженный у здорового контроля, или не подлежит обнаружению.
15. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанная стадия d) классификации или определения индивидуума как имеющего или вероятного имеющего заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70, предусматривает
i. определение того, является ли количество Hsp70 в указанном образце PBMC более низким, чем предварительно определенное пороговое значение, или оно не подлежит обнаружению; и/или
ii. определение того, является ли количество HspA1A и/или HspA1B в указанном образце PBMC более низким, чем предварительно определенное пороговое значение, или оно не подлежит обнаружению.
16. Способ по любому из предыдущих пунктов, где индивидуум имеет или вероятно имеет заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70, если количество Hsp70 в указанном образце PBMC составляет 7500 пг/мл или меньше, например, 7000 пг/мл или меньше, например, 6500 пг/мл или меньше, например, 6000 пг/мл или меньше, например, 5500 пг/мл или меньше, например, 5000 пг/мл или меньше, например, 4500 пг/мл или меньше, например, 4000 пг/мл или меньше, например, 3500 пг/мл или меньше, например, 3000 пг/мл или меньше, например, 2500 пг/мл или меньше, например, 2000 пг/мл или меньше, например, 1500 пг/мл или меньше, например, 1000 пг/мл PBMC или меньше.
17. Способ по любому из пп. 4-12, где стадия классификации или определения того, имеет или не имеет пациент сниженные уровни Hsp70, предусматривает стадию идентификации пациента со сниженными уровнями Hsp70.
18. Способ по любому из пп. 4-12 и 17, где стадия d) классификации или определения того, имеет или не имеет пациент сниженные уровни Hsp70, предусматривает определение уровня Hsp70 в образце PBMC по сравнению с уровнями в образце PBMC, полученном или который может быть получен от пациента, у которого имеется то же самое основное заболевание, но без сопутствующих сниженных уровней Hsp70.
19. Способ по любому из пп. 4-12 и 17-18, где указанная стадия d) классификации или определения того, имеет или не имеет пациент сниженные уровни Hsp70, предусматривает
i. определение того, является ли количество Hsp70 в указанном образце PBMC более низким, чем предварительно определенное пороговое значение, или оно не подлежит обнаружению; и/или
ii. определение того, является ли количество HspA1A и/или HspA1B в указанном образце PBMC более низким, чем предварительно определенное пороговое значение, или оно не подлежит обнаружению.
20. Способ по любому из пп. 4-12 и 17-19, где пациент вероятно или более вероятно будет отвечать на лекарственные препараты, направленные на Hsp70, в том числе биоактивные средства, которые повышают внутриклеточную концентрацию и/или активность белков теплового шока, в том числе Hsp70, если количество Hsp70 является более низким, чем указанное пороговое значение.
21. Способ по любому из пп. 4-12 и 17-20, где пациент, который имеет сниженный уровень Hsp70 вероятно или более вероятно будет отвечать на различные лекарственные препараты, направленные на Hsp70 (такие как HspA1A и/или HspA1B) в указанном образце PBMC составляет 7500 пг/мл или меньше, например, 7000 пг/мл или меньше, например, 6500 пг/мл или меньше, например, 6000 пг/мл или меньше, например, 5500 пг/мл или меньше, например, 5000 пг/мл или меньше, например, 4500 пг/мл или меньше, например, 4000 пг/мл или меньше, например, 3500 пг/мл или меньше, например, 3000 пг/мл или меньше, например, 2500 пг/мл или меньше, например, 2000 пг/мл или меньше, например, 1500 пг/мл или меньше, например, 1000 пг/мл PBMC или меньше.
22. Способ по любому из пп. 4-12 и 17-21, дополнительно предусматривающий стадию определения соответствия указанного пациента критериям введения лекарственного препарата для лечения указанного заболевания, проявляющегося сниженным уровнем Hsp70, пациенту, например, различных лекарственных препаратов, направленных на Hsp70, содержащих биоактивные средства, которые повышают внутриклеточную концентрацию и/или активность белков теплового шока, в том числе Hsp70.
23. Способ по любому из предыдущих пунктов, дополнительно предусматривающий стадию
i. введения лекарственного препарата для лечения заболевания, проявляющегося сниженным уровнем Hsp70.
24. Способ по любому из предыдущих пунктов, где стадия а) получения образца PBMC от индивидуума предусматривает одну или более стадий
i. получения образца цельной крови от индивидуума, и
ii. разделения цельной крови на подкомпоненты для получения образца PBMC.
25. Способ мониторинга прогрессирования заболевания у индивидуума, имеющего заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70, при этом указанный способ предусматривает стадии
i. получения одного или более образцов PBMC от указанного индивидуума в двух или более последовательных временных точках,
ii. обнаружения Hsp70 в каждом из указанных образцов PBMC,
iii. количественной оценки или определения уровня Hsp70 в каждом из указанных образцов PBMC.
26. Способ по п. 25, где первый образец PBMC берут в t = 0, а один или более последующих образцов PBMC берут в один или несколько более поздних временных точек при t > 0.
27. Способ по любому из пп. 25-26, где один или более последующих образцов берут с интервалом в 1 сутки, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 7 суток, 14 суток, 3 недели, 4 недели, 5 недель, 6 недель, 7 недель, 8 недель, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 4 месяца, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев и/или 12 месяцев.
28. Способ по любому из пп. 25-27, при этом указанный способ дополнительно предусматривает стадию d) определения того, прогрессирует или находится в ремиссии заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70.
29. Способ по любому из пп. 25-28, где
a) снижение уровня Hsp70 с течением времени указывает на прогрессирование заболевания; и/или
b) повышение уровня Hsp70 с течением времени указывает на ремиссию заболевания.
30. Способ мониторинга эффективности лекарственного препарата для лечения заболевания, проявляющегося сниженным уровнем Hsp70, у индивидуума, страдающего заболеванием, проявляющимся сниженным уровнем Hsp70, при этом указанный способ предусматривает стадии
a) получения одного или более образцов PBMC от указанного индивидуума до, во время и/или после того, как лекарственный препарат был применен, его доза была поддержана, снижена или повышена,
b) обнаружения Hsp70 в каждом из указанных одном или более образцах PBMC,
c) количественной оценки или определения уровня Hsp70 в каждом из указанных одном или более образцах PBMC.
31. Способ по п. 30, где
i. один или более образцов PBMC получают от индивидуума, имеющего заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70 до того, как лекарственный препарат была применен, его доза была поддержана, снижена или повышена;
ii. один или более образцов PBMC получают от индивидуума, имеющего заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70 во время терапии; и/или
iii. один или более образцов PBMC получают от индивидуума, имеющего заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70 после того, как лекарственный препарат была применен, его доза была поддержана, снижена или повышена; и/или
iv. один или более образцов PBMC получают от индивидуума, имеющего заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70 до, во время и/или после того, как лекарственный препарат был применен, его доза была поддержана, снижена или повышена.
32. Способ по любому из пп. 30, 31, при этом указанный способ дополнительно предусматривает стадию d) мониторинга эффективности лекарственного препарата для лечения заболевания, проявляющегося сниженным уровнем Hsp70.
33. Способ по любому из пп. 30-32, где
a) повышение уровня Hsp70 после того, как лекарственный препарат был применен, его доза была поддержана, снижена или повышена, указывает на то, что лекарственный препарат является эффективным; и/или
b) снижение уровня Hsp70 после того, как лекарственный препарат был применен, его доза была поддержана, снижена или повышена, указывает на то, что лекарственный препарат является неэффективным.
34. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанное обнаружение Hsp70 предусматривает обнаружение белка или РНК Hsp70, например, белка Hsp70.
35. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанный Hsp70 обнаруживают и количественно оценивают с помощью иммуноферментного анализа (ELISA).
36. Способ по любому из предыдущих пунктов, где стадия c) количественной оценки или определения уровня Hsp70 в образце предусматривает одну или более стадий
i. нормализации по отношению к откалиброванному стандарту, и
ii. количественной оценки Hsp70 в указанном образце PBMC.
37. Способ по любому из предыдущих пунктов, где лекарственный препарат для лечения заболевания, проявляющегося сниженным уровнем Hsp70, представляет собой биоактивное средство, которое повышает внутриклеточную концентрацию и/или активность белков теплового шока, в том числе Hsp70.
38. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанное биоактивное средство, которое повышает внутриклеточную концентрацию и/или активность белков теплового шока, в том числе Hsp70, выбирают из белка Hsp70 или его функционального фрагмента или варианта, индуктора белка теплового шока или коиндуктора Hsp70.
39. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанное биоактивное средство, которое повышает внутриклеточную концентрацию и/или активность белков теплового шока, в том числе Hsp70, представляет собой гидроксиламиновое производное на основе малой молекулы, способное повышать внутриклеточную концентрацию (или уровни) Hsp70 путем усиления экспрессии гена Hsp70.
40. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанное биоактивное средство, которое повышает внутриклеточную концентрацию и/или активность белков теплового шока, в том числе Hsp70, выбирают из группы, состоящей из аримокломола, ироксанадина, бимокломола, BGP-15, их стереоизомеров и их солей присоединения кислоты.
41. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанное заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70, представляет собой лизосомную болезнь накопления, нейродегенеративное заболевание, нервно-мышечное нарушение, мышечную дистрофию и воспалительное мышечное нарушение.
42. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанное заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70, представляет собой лизосомную болезнь накопления.
43. Способ по п. 42, где указанную лизосомную болезнь накопления выбирают из группы, состоящей из нарушения накопления липидов, в том числе сфинголипидозов; мукополисахаридозов; нарушений накопления гликогена; нарушений обмена гликопротеинов (гликопротеинозов); и муколипидозов.
44. Способ по п. 43, где указанная лизосомная болезнь накопления представляет собой сфинголипидоз.
45. Способ по п. 42, где указанную лизосомную болезнь накопления выбирают из группы, состоящей из болезни Ниманна-Пика (в том числе типов A, B и C), болезни Фарбера, болезни Краббе, болезни Фабри, болезни Гоше, сиалидоза (муколипидоза I типа), сульфатидоза, в том числе метахроматической лейкодистрофии (поздней детской, подростковой и взрослой форм), недостаточности сапозина, множественной недостаточности сульфатазы (болезнь Остина), болезни Гоше (в том числе I типа, II типа и III типа), церебротендинального холестероза, болезни Вольмана (недостаточность лизосомной кислой липазы), болезни накопления эфиров холестерола, нейронального цероидного липофусциноза (NCL, в том числе болезни Баттена (болезнь Шпильмейера-Фогта), болезни Бильшовского-Янского, болезни Куфса, болезни Сантавуори-Халтиа, мукополисахаридоза (I типа, II типа, III типа, IV типа, VI типа, VII типа, VIII типа и IX типа), муколипидоза (II типа, III типа и IV типа), гликогеноза сердца, болезни Андерсена, болезни Кори (болезнь Форбса), болезни Херса, болезни Мак-Ардля, болезни Помпе, болезни Таури (болезнь Таруи), болезни фон Гирке, болезни Помпе II типа, болезни Данона IIb типа, аспартилглюкозаминурии, фукозидоза, аннозидоза, альфа-маннозидоза, альфа-маннозидоза I типа, альфа-маннозидоза II типа, бета-маннозидоза, сиалидоза II типа (муколипидоз I) и галактосиалидоза.
46. Способ по п. 42, где указанная лизосомная болезнь накопления представляет собой болезнь Ниманна-Пика, такую как болезнь Ниманна-Пика типа C.
47. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанное заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70, представляет собой нейродегенеративное заболевание.
48. Способ по п. 47, где указанное нейродегенеративное заболевание выбирают из группы, состоящей из болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, латерального амиотрофического склероза (ALS), , рассеянного склероза, болезни Хантингтона, полиглутаминовых заболеваний и спиноцеребеллярных атаксий, в том числе спиноцеребеллярной атаксии 1 типа, спиноцеребеллярной атаксии 2 типа, спиноцеребеллярной атаксии 3 типа (также известной как болезнь Мачадо-Джозефа), спиноцеребеллярной атаксии 6 типа, спиноцеребеллярной атаксии 7 типа и спиноцеребеллярной атаксии 17 типа), DRPLA (дентаторубропаллидольюисова атрофия) и SBMA (спинобульбарная мышечная атаксия или болезнь Кеннеди).
49. Способ по любому из предыдущих пунктов, где указанное заболевание, проявляющееся сниженным уровнем Hsp70, выбирают из группы, состоящей из нервно-мышечного нарушения, мышечной дистрофии и воспалительного мышечного нарушения.
50. Способ по п. 49, где указанное нервно-мышечное нарушение выбирают из группы, состоящей из латерального амиотрофического склероза (ALS), рассеянного склероза, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, болезни Крейтцфельдта-Якоба, миастении гравис, спинальной мышечной атрофии (SMA), спинальной мышечной атрофии с респираторным дистресс-синдромом 1 типа (SMARD1; также называемой дистальная спинальная мышечная атрофия 1 типа (DSMA1)), врожденного миастенического синдрома (CMS), врожденной миопатии, синдрома крампи-фасцикуляции, мышечных дистрофий, наследственной спастической параплегии, миозита с тельцами включения, нейромиотонии (NMT, также известной как синдром Исаакса, синдром Исаакса-Мертона), митохондриальной миопатии, миастенического синдрома Ламберта-Итона (LEMS), миотонической дистрофии, периферической невропатии, спинальной и бульбарной мышечной атрофии (SBMA, или болезнь Кеннеди), синдрома скованного человека и синдрома Гийена-Барре.
51. Способ по п. 49, где указанную мышечную дистрофию выбирают из группы, состоящей из мышечной дистрофии Дюшенна (DMD), мышечной дистрофии Беккера, врожденной мышечной дистрофии, дистальной мышечной дистрофии, мышечной дистрофии Эмери-Дрейфуса, плече-лопаточно-лицевой мышечной дистрофии, тазово-плечевой мышечной дистрофии, миотонической мышечной дистрофии и окулофарингеальной мышечной дистрофии.
52. Способ по п. 49, где указанное воспалительное мышечное нарушение выбирают из группы, состоящей из воспалительной миопатии (воспалительное заболевание мышц или миозит), идиопатической воспалительной миопатии, полимиозита (PM), дерматомиозита (DM), миозита с тельцами включения (sIBM и hIBM), ревматической полимиалгии (или «мышечного ревматизма») и рабдомиолиза.
53. Способ регулирования дозы гидроксиламинового производного на основе малой молекулы, способного повышать внутриклеточную концентрацию (или уровни) Hsp70 у индивидуума путем усиления экспрессии гена Hsp70, при этом способ предусматривает стадии:
a) получения образца PBMC от указанного индивидуума,
b) обнаружения Hsp70 в указанном образце PBMC,
c) количественной оценки или определения первого уровня Hsp70 в указанном образце PBMC,
d) введения указанного гидроксиламинового производного на основе малой молекулы в первой дозе,
e) повторения стадий а) - с) для идентификации второго уровня Hsp70 в указанном образце PBMC,
f) сравнение указанного первого уровня со вторым уровнем Hsp70, и
g) необязательно регулирования дозы гидроксиламинового производного на основе малой молекулы на основании указанного сравнения.