КОМБИНИРОВАННЫЕ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ СВИНЕЙ

1. Вакцинная композиция, содержащая вакцину против вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRSV) и вторую вакцину против вируса свиней, где вакцина против PRRSV и вторая вакцина, по существу, не оказывают иммуноингибирования в отношении друг друга.
2. Вакцинная композиция по п. 1, дополнительно содержащая третью вакцину против вируса свиней, где вакцина против PRRSV, вторая вакцина и третья вакцина, по существу, не оказывают иммуноингибирования в отношении друг друга.
3. Вакцинная композиция по п. 1 или 2, где вторая вакцина против вируса свиней выбрана из вакцины против вируса классической чумы свиней (CSFV) и вакцины против вируса псевдобешенства (PRV).
4. Вакцинная композиция по п. 2, где третья вакцина против вируса свиней выбрана из вакцины против вируса классической чумы свиней (CSFV) и вакцины против вируса псевдобешенства (PRV), и где третья вакцина отличается от второй вакцины.
5. Вакцинная композиция по п. 1, где вакцина против PRRSV содержит аттенуированный PRRSV.
6. Вакцинная композиция по п. 5, где аттенуированный PRRSV содержит нуклеотидную последовательность Nsp2, кодируемую последовательностью ДНК, в которой по сравнению с SEQ ID NO:4 отсутствует фрагмент ДНК, содержащий по меньшей мере 50 смежных нуклеотидов, где фрагмент ДНК является по меньшей мере приблизительно на 80% гомологичным части SEQ ID NO:8 той же длины.
7. Вакцинная композиция по п. 6, где фрагмент ДНК содержит по меньшей мере 100, по меньшей мере 120, по меньшей мере 150, по меньшей мере 180, по меньшей мере 200, по меньшей мере 210, по меньшей мере 220, по меньшей мере 230, по меньшей мере 240, по меньшей мере 250, по меньшей мере 260, по меньшей мере 270, по меньшей мере 280, по меньшей мере 290, по меньшей мере 300, по меньшей мере 310, по меньшей мере 320, по меньшей мере 330, по меньшей мере 340, по меньшей мере 350 или по меньшей мере 360 смежных нуклеотидов.
8. Вакцинная композиция по п. 7, где фрагмент ДНК является по меньшей мере приблизительно на 81%, приблизительно на 82%, приблизительно на 83%, приблизительно на 84%, приблизительно на 85%, приблизительно на 86%, приблизительно на 87%, приблизительно на 88%, приблизительно на 89%, приблизительно на 90%, приблизительно на 91%, приблизительно на 92%, приблизительно на 93%, приблизительно на 94%, приблизительно на 95%, приблизительно на 96%, приблизительно на 97%, приблизительно на 98%, приблизительно на 99% или на 100% гомологичным части SEQ ID NO:8 той же длины.
9. Вакцинная композиция по п. 6, где фрагмент ДНК содержит SEQ ID NO:8.
10. Вакцинная композиция по п. 5, где аттенуированный PRRSV содержит нуклеотидную последовательность Nsp2, кодирующую последовательность белка Nsp2, в котором по сравнению с SEQ ID NO:11 отсутствует пептидный фрагмент, содержащий по меньшей мере 20 смежных аминокислот, где фрагмент является по меньшей мере приблизительно на 80% гомологичным части SEQ ID NO:9 той же длины.
11. Вакцинная композиция по п. 10, где пептидный фрагмент содержит по меньшей мере 30, по меньшей мере 40, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 75, по меньшей мере 80, по меньшей мере 85, по меньшей мере 90, по меньшей мере 95, по меньшей мере 100, по меньшей мере 105, по меньшей мере 110, по меньшей мере 115 или по меньшей мере 120 смежных аминокислот.
12. Вакцинная композиция по п. 11, где пептидный фрагмент является по меньшей мере приблизительно на 81%, приблизительно на 82%, приблизительно на 83%, приблизительно на 84%, приблизительно на 85%, приблизительно на 86%, приблизительно на 87%, приблизительно на 88%, приблизительно на 89%, приблизительно на 90%, приблизительно на 91%, приблизительно на 92%, приблизительно на 93%, приблизительно на 94%, приблизительно на 95%, приблизительно на 96%, приблизительно на 97%, приблизительно на 98%, приблизительно на 99% или на 100% гомологичным части SEQ ID NO:9 той же длины.
13. Вакцинная композиция по п. 10, где пептидный фрагмент содержит SEQ ID NO:9.
14. Вакцинная композиция по п. 5, где аттенуированный PRRSV является аттенуированным относительно высокопатогенного PRRSV.
15. Вакцинная композиция по п. 14, где аттенуированный PRRSV содержит нуклеотидную последовательность Nsp2, кодируемую последовательностью ДНК, в которой по сравнению с SEQ ID NO:5 отсутствуют 90 несмежных нуклеотидов из SEQ ID NO:6.
16. Вакцинная композиция по п. 15, где нуклеотидную последовательность Nsp2 кодирует последовательность, имеющая по меньшей мере 90% гомологии с SEQ ID NO:2.
17. Вакцинная композиция по п. 16, где нуклеотидную последовательность Nsp2 кодирует последовательность, содержащая SEQ ID NO:2.
18. Вакцинная композиция по п. 5, где аттенуированный PRRSV дополнительно содержит нуклеотидную последовательность Nspl, кодируемую последовательностью, имеющей по меньшей мере 90% гомологии с SEQ ID NO:1.
19. Вакцинная композиция по п. 1, где аттенуированный PRRSV содержит нуклеотидную последовательность Nsp1, кодируемую SEQ ID NO:1, и нуклеотидную последовательность Nsp2, кодируемую SEQ ID NO:2.
20. Вакцинная композиция по п. 1, где аттенуированный PRRSV содержит нуклеотидную последовательность PRRSV, кодируемую последовательностью, имеющей по меньшей мере 90% гомологии с SEQ ID NO:3.
21. Вакцинная композиция по п. 20, где аттенуированный PRRSV содержит нуклеотидную последовательность PRRSV, кодируемую SEQ ID NO:3.
22. Вакцинная композиция по п. 20, где аттенуированный PRRSV имеет регистрационный номер в CGMCC 3121.
23. Вакцинная композиция по п. 3, где вакцина против CSFV содержит аттенуированный CSFV.
24. Вакцинная композиция по п. 23, где аттенуированный CSFV кодирует последовательность, имеющая по меньшей мере 80% гомологии с SEQ ID NO:10.
25. Вакцинная композиция по п. 24, где аттенуированный CSFV кодирует SEQ ID NO:10.
26. Вакцинная композиция по п. 24, где аттенуированный CSFV имеет регистрационный номер в CGMCC.:3891.
27. Вакцинная композиция по п. 3, где вакцина против PRV содержит аттенуированный PRV.
28. Вакцинная композиция по п. 27, где аттенуированный PRV содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 80% гомологии с последовательностью, имеющей идентификационный номер NCBI NC_006151.
29. Вакцинная композиция по п. 28, где аттенуированный PRV имеет один или несколько инактивированных генов, выбранных из группы, состоящей из TK, PK, RR, дУТФазы, gG, gC, gE, gD и gI.
30. Вакцинная композиция по п. 29, где аттенуированный PRV имеет инактивированный ген gE.
31. Вакцинная композиция по п. 27, где аттенуированный PRV имеет регистрационный номер в CGMCC.:5076.
32. Вакцинная композиция по п. 1, где вакцинная композиция, представленная в настоящем описании, содержит иммунологически эффективное количество вакцины против PRRSV, вакцины против CSFV и/или вакцины против PRV.
33. Вакцинная композиция по п. 32, где
4,5
5,0
5,5
50
50
50
иммунологически эффективное количество вакцины против PRRSV составляет по меньшей мере 10 TCID, 10 TCID или 10 TCID,
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
4,0
4,5
5,0
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
иммунологически эффективное количество вакцины против CSFV составляет по меньшей мере 10 FA-TCID (TCID, определяемая с помощью флуоресцентно-меченых антител), 10 FA-TCIDso, 10 FA-TCID, 10 FA-TCID, 10 FA-TCID, 10 TCID, 10 FA-TCID, 10 FA-TCID, 10 FA-TCID или 10 FA-TCID или составляет по меньшей мере 2,5 RID, 3 RID, 5 RID, 10 RID, 30 RID, 100 RID, 150 RID, 300 RID, 750 RID, 1000 RID, 3000 RID или 7500 RID, и/или
3,0
3,5
4,0
4,5
5,0
5,5
6
0
50
50
50
50
50
50
50
иммунологически эффективное количество вакцины против PRV составляет по меньшей мере 10 TCID, 10 TCID, 10 TCID, 10 TCID, 10 TCID, 10 TCID или 10' TCID.
50
34. Вакцинная композиция по п. 33, где соотношение TCID вакцины против PRRSV и вакцины против CSFV находится в диапазоне от 10000:1 до 1:1.
50
35. Вакцинная композиция по п. 33, где соотношение TCID вакцины против PRRSV и вакцины против PRV находится в диапазоне от 1:1 до 1:30.
50
4
5
36. Вакцинная композиция по п. 33, где соотношение TCID вакцины против PRRSV: вакцины против CSFV: вакцины против PRV находится в диапазоне от приблизительно 10:1:10 до приблизительно 5:1:6.
37. Вакцинная композиция по п. 1, дополнительно содержащая адъювант.
38. Вакцинная композиция по п. 1, дополнительно содержащая криопротектор.
39. Вакцинная композиция по п. 38, где криопротектор содержит сахарозу, L-глутамат натрия и/или гидролизат лактальбумина.
40. Способ получения вакцинной композиции по любому из пп. 1-39, включающий:
(a) сбор вакцинного штамма PRRSV, вакцинного штамма CSFV и/или вакцинного штамма PRV, культивируемых в соответствующих восприимчивых клетках, и
50
(b) смешивание двух или более штаммов вирусов при подходящем соотношении TCID.
41. Способ по п. 40, где восприимчивыми клетками для вакцинного штамма PRRSV является клеточная линия, выбранная из группы, состоящей из Marc-145, MA-104, Vero и CL-2621, или первичная культура клеток, являющаяся культурой клеток РАМ.
42. Способ по п. 40, где восприимчивыми клетками для вакцинного штамма CSFV является клеточная линия, выбранная из группы, состоящей из ВТ, Vero, МРК, SK6, РК2а, СРК, RKC, MDBK, MDCK, CRFK, ST, и РТ, или первичная культура клеток, являющаяся первичной культурой клеток ВТ.
43. Способ по п. 40, где восприимчивыми клетками для вакцинного штамма PRV является клеточная линия, выбранная из группы, состоящей из ST, PK-15, Marc-145, MDBK, ВТ, Vero, BHK-21, линии клеток почки свиньи (IBRS-2), линии клеток почки кролика (RK) и линии эмбриональных фибробластов курицы, или первичная культура клеток, являющаяся первичной культурой клеток почки свиньи.
6
6
6
7
44. Способ по п. 40, где культивирование включает инокуляцию каждым вакцинным штаммом восприимчивых клеток при плотности клеток в диапазоне от 1×10/мл - 5×10/мл при культивировании в роллерном флаконе, или при плотности клеток в диапазоне от 5×10/мл - 1×10/мл в суспензионной культуре с встроенным адгезионным носителем в биореакторе.
45. Способ по п. 44, где осуществляют инокуляцию вакцинным штаммом PRRSV при множественности заражения (MOI) 0,01-0,5, осуществляют инокуляцию вакцинным штаммом CSFV при MOI 0,1-0,5 и/или осуществляют инокуляцию вакцинным штаммом PRV при MOI 0,005-0,5.
50
46. Способ по п. 40, где этап (b) включает смешивание собранного вакцинного штамма вируса PRRSV с вакцинным штаммом вируса CSFV при соотношении TCID от 10000:1 до 1:1.
50
47. Способ по п. 40, где этап (b) включает смешивание собранного вакцинного штамма вируса PRRSV с вакцинным штаммом вируса PRV при соотношении TCID от 1:1 до 1:30.
50
4
5
48. Способ по п. 40, где этап (b) включает смешивание собранного вакцинного штамма вируса PRRSV, вакцинного штамма вируса CSFV и вакцинного штамма вируса PRV при соотношении TCID от 10:1:10 до приблизительно 5:1:6.
49. Способ по п. 40, где этап (b) дополнительно включает смешивание смеси собранных вируссодержащих растворов с криопротектором.
50. Способ по п. 49, где смесь собранных вируссодержащих растворов смешивают с криопротектором в объемном соотношении 75-80:25-20.
51. Вакцинная композиция, получаемая с использованием способа по п. 40.
52. Применение вакцинной композиции по любому из пп. 1-39 и 51 в производстве лекарственного средства для профилактики или лечения репродуктивного и респираторного синдрома свиней, классической чумы свиней и/или псевдобешенства.
53. Способ иммунизации свиней, включающий введение свинье вакцинной композиции по любому из пп. 1-39 и 51.
54. Вакцинный штамм CSFV, культивируемый в клеточной линии, выбранной из группы, состоящей из ST, PK-15, Marc-145, MDBK, ВТ, РТ, Vero, BHK-21, линии клеток почки свиньи (IBRS-2), линии клеток почки кролика (RK) и линии эмбриональных фибробластов курицы, или первичной культуре клеток, являющейся первичной культурой клеток почки свиньи.
55. Применение клетки в культивировании вакцинного штамма CSFV, где клетка является клеточной линией, выбранной из группы, состоящей из ST, PK-15, Marc-145, MDBK, ВТ, РТ, Vero, BHK-21, линии клеток почки свиньи (IBRS-2), линии клеток почки кролика (RK) и линии эмбриональных фибробластов курицы, или первичной культурой клеток, являющейся первичной культурой клеток почки свиньи.