Избирательная цитотоксичность катионных пептидов in vitro

XXI РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС

ТЕЗИСЫ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ

нием ионов Са++ также увеличивалось концу культивирования количество клеток со 100±5,4 до 340,5±6,8. Культивация в среде с добавлением физиологического раствора выявляла аналогичные результаты. Проведенный по завершению культивирования на 8 сутки автоматический подсчет клеток и оценка их жизнеспособности показали, что существенных различий между анализируемыми опытами нет. Анализ серии экспериментов по культивированию злокачественных клеток А549 показал статистически значимые различия по показателям при культивировании в среде с добавлением ионов Са++, Fe3, наночастиц трехвалентного железа и диметилбигуанида. Изменение количества клеток в поле зрения в контрольной среде № 2 (без добавок) происходило от 30,0±3,4 до 112,5±3,6 в конце культивирования. В среде с добавлением изучаемых блокаторов хемосинтети-ческих реакций к концу культивирования количество клеток было в 2,3 раза меньше (48,0±2,7), чем в контрольной среде № 2 (112,5±3,6). Абсолютное количество клеток в конце культивирования в среде с добавлением блокаторов составило 2,21±1,6 х 105, а в контрольной среде № 2 — 3,54±1,3 х 105. Жизнеспособность культуры А549 в опытной среде достоверно снижалась в процессе культивирования и на 8-ой день составила 43,7%, против 86,2% в контрольной среде № 2. Культивация в среде с физиологическоготраствора не выявляла торможения роста клеток и снижения их жизнеспособности. Проведенные in vitro поэтапные исследования с примене-нем блокаторов хемосинтеза выявили различные реакции изучаемых клеток. Культура МСК достоверно не реагирует на блокаторы хемосинтеза в культуральной среде, а культура злокачественных клеток А549 резко останавливает свой рост. Эти данные могут указывать на наличие хемосинтетических реакций у раковых клеток А549 и отсутствие их у клеток МСК. Таким образом, у злокачественных клеток А549 возможны хемосинтетические реакции связанные с окислением железа, что указывает на смену способа получения энергии злокачественной клеткой в процессе онкогенеза.

Избирательная цитотоксичность катионных пептидов in vitro

А. А. Лушникова, Д. А. Понкратова, Л. Ф. Морозова, А. А. Рудакова, С. М. Андреев, Н. И. Моисеева, Е. Ю. Рыбалкина Место работы: 'ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава РФ; ФГБУ Институт иммунологии ФМБА России e-mail: LAN21@yandex.ru

Для молекулярно направленной терапии злокачественных опухолей представляют интерес низкомолекулярные катионные пептиды (КП) со специфической структурой, взаимодействующие как с поверхностными, так и внутриклеточными мишенями в опухолевых клетках. В качестве мишеней рассматриваются гиперэкспрессированные в опухолях, но не в норме многофункциональные шаперонные белки нуклеолин/С23 и нуклеофозмин/В23.

Цель. Изучение цитотоксичности КП на перевиваемых клеточных линиях солидных опухолей.человека. Материалы и методы. Цитотоксичность пяти КП с дендритной структурой молекулы изучали на полученных в РОНЦ перевиваемых клеточных линиях меланомы кожи (МК) — mellS и melH, глиобоастомы (Гл) — Glb-Sh и Glb-17, рака яичника (РЯ) — CrovCel., линии рака молочной железы (РМЖ) с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) — HBL-100 и линии РМЖ — HBL, контроль — фибробласты кожи перевиваемой линии Н1036. Клеточную суспензию в полной питательной среде RPMI-1640 + 10% эмбриональ-

ная телячья сыворотка культивировали в 96-луночных планшетах, по 180 мкл среды и 7—10 тыс. клеток в лунке. После 24-часовой инкубации в лунки, за исключением контрольных, вносили по 20 мкл водного раствора каждого из тестируемых катионных пептидов в конечной концентрации от 0,25 мкг/мл до 4 мкг/мл, в 3-кратных повторах.

Цитотоксичность КП анализировали в стандартных МТТ-те-стах через 2—3 суток инкубации клеток с КП, а также после 1—4-часовой инкубации суточной культуры клеток Мк, Гл, РЯ и РМЖ с КП, флуоресцентно меченным Су-5 (1 мкг/мл) в мини-ячейках на предметном стекле. После инкубации с КП клетки окрашивали красителем Хекст 33342 или трипановым синим и иодистым пропидием Для вестерн-блотинга и ИГХ спользо-вали коммерческие моноклональные тела к С23, В23 и р53 Результаты. МТТ-тесты выявили высокую цитотоксичность 5 КП в отношении всех изученных линий, включая линию РМЖ с МЛУ. Количество выживших клеток варьировало от 8% до 25% по сравнению с клетками в контрольных лунках без добавления КП. (100%). В. культуре фибробластов после инкубации с КП цитотоксичность не обнаружена. По результататм вестерн-блотинга, механизм избирательной токсичности связан с гиперэкспрессией в опухолевых клетках шаперонных белков С23/В23, регулирующих ключевые функции клетки и апоптоз. После инкубации клеток МК, РЯ и Гл и РМЖ в присутствии Cy-5-КП также наблюдался апоптоз, подтвержденный путем микроскопического анализа клеток, и дополнительно окрашенных Хекст 33342. ИГХ-окрашивание выявило совместную локализацию КП, С23 и В23 и р53 в клеточном ядре/ядрышках с последующим экспортом С23/В23 в цитоплазму. Заключение. На перевиваемых клеточных линиях МК, РЯ, Гл, РМЖ с МЛУ и РМЖ показана специфичная цитотоксич-ность пяти КП, нетоксичных для морфологически нормальных фибробластов кожи. Механизм цитотоксичности связан с р53-зависимым апоптозом.

Влияние различных режимов системной фотодинамической терапии на процессы метастазирования в эксперименте

Т. М. Литвинова', И. А. Косенко', Д. А. Церковский', М. В. Хорошун', И. М. Пранович'

Место работы: 'БГМУ, РНПЦ ОМР им. Н. Н. Александрова e-mail: doctor.litvinova@gmail.com

Системная фотодинамическая терапия (СФДТ) — новый адъювантный метод лечения злокачественных опухолей, разработанный сотрудниками РНПЦ ОМР им. Н. Н. Александрова, который был использован как этап химиолучевой терапии нерезектабельного рака шейки матки. До клинического применения метода в эксперименте на животных было установлено, что СФДТ статистически значимо индуцирует исчезновение опухоли, уменьшает площадь под кривой опухолевого роста, увеличивает среднюю продолжительность жизни животных и снижает индекс роста новообразований. Однако остался не изученным вопрос о влиянии СФДТ на процессы метастазирования экспериментальных опухолей. Цель. Оценить влияние различных режимов системной фотодинамической терапии на процессы метастазирования экспериментальных опухолей in vivo.

Материалы и методы. В исследовании использовано 50 линейных мышей C57Black в возрасте 2,0—2,5 месяца, массой тела 20,0±3,0 грамм, полученных из вивария РНПЦ ОМР им. Н. Н. Александрова. Эксперимент проведен в соответствии с техническим кодексом «Надлежащая лабораторная прак-

Злокачественные опухоли

www.malignanttumours.org

Том / Vol. 7 № 3 S 1 /2017

Malignant Tumours

www.malignanttumours.org