КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДИН N-АЦЕТИЛИРОВАННЫЙ И ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДИН ФУКОЗИЛИРОВАННЫЙ ОЛИГОСАХАРИД, ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В АКТИВАЦИИ ПЕРЕВАРИВАЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ У МЛАДЕНЦЕВ И ДЕТЕЙ МЛАДШЕГО ВОЗРАСТА
COMPOSITIONS CONTAINING AT LEAST ONE N-ACETYLATED AND AT LEAST ONE FUCOSYLATED OLIGOSACCHARIDE FOR USE IN ACTIVATION OF DIGESTING ABILITY IN INFANTS AND YOUNG CHILDREN

Область применения изобретения
Настоящее изобретение относится к композициям для применения в активации развития и/или увеличения площади поверхности тонкого кишечника и соответствующего улучшения переваривающей способности у младенца или ребенка младшего возраста.
Предпосылки создания изобретения
Развитие кишечника у младенцев и детей младшего возраста имеет ключевое значение для развития младенца и ребенка, в частности для младенца или ребенка младшего возраста очень важна оптимальная переваривающая способность. Таким образом, желательно разработать композиции, активирующие развитие переваривающей способности у младенцев и детей младшего возраста.
До усвоения организмом белки и углеводы сначала расщепляются в просвете кишечника на более мелкие фрагменты, после чего они дополнительно расщепляются на аминокислоты, ди- и трипептиды и моносахариды под действием различных ферментов, находящихся на апикальной части энтероцитов тонкого кишечника.
Подобно белкам и углеводам, пищевые липиды и жирорастворимые витамины в просвете кишечника подвергаются гидролизу различными типами липаз. После первого этапа расщепления в желудке под действием липазы желудочного сока большие капли нерасщепленного жира и продуктов расщепления жира поступают в кишечник, где перемешиваются с солями желчных кислот для формирования тонкодисперсной эмульсии, легко поддающейся воздействию панкреатических липаз.
Далее продукты расщепления липидов внедряются в мицеллы солей желчных кислот в просвете кишечника и формируют так называемые смешанные мицеллы. Этот процесс значительно повышает растворимость продуктов расщепления липидов, что, в свою очередь, сильно облегчает их всасывание энтероцитами. Для формирования мицелл солей желчных кислот в просвете кишечника требуется минимальная концентрация солей желчных кислот, именуемая критической мицеллярной концентрацией. У здоровых взрослых людей концентрация солей желчных кислот в просвете кишечника в постпрандиальном состоянии превышает критическую мицеллярную концентрацию, что обеспечивает высокоэффективное расщепление и всасывание липидов. У младенцев, в частности у недоношенных младенцев (см. Lindqvist et al., Lipid digestion and absorption in early life: an update, Current Opinion in Clinical Nutrition and Metabolic Care; 13(2010): 314–320), и при некоторых патологических состояниях (например, муковисцидозе) концентрация солей желчных кислот в просвете кишечника является низкой, ниже критической мицеллярной концентрации, что приводит к неэффективному расщеплению и всасыванию липидов.
Основным следствием такого неэффективного расщепления липидов является потеря питательных веществ с фекалиями, а именно потеря жирорастворимых витаминов и жира, такого как незаменимые жирные кислоты и длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты (ДЦПНЖК), а также потеря связанной энергии. В результате эти питательные вещества и энергия не могут использоваться для роста и развития младенца. Дополнительно такое неэффективное расщепление связано, например, с диареей, пищевой непереносимостью и изменениями в кишечной микробиоте. Следовательно, особенно желательно найти решения для улучшения пищеварения у младенцев и детей младшего возраста, и, в частности, у недоношенных младенцев или младенцев с низким весом при рождении.
У здоровых взрослых соли желчных кислот в просвете кишечника перемещаются вдоль тонкого кишечника и эффективно всасываются (до 95%) в подвздошной кишке. Свободные соли желчных кислот возвращаются по воротной вене в печень, где накапливаются для повторной секреции в просвет кишечника. Таким образом, основная часть пула солей желчных кислот в просвете кишечника зависит от этой кишечно-печеночной циркуляции, и лишь небольшая часть образуется в результате синтеза de novo. Однако у младенцев в первые месяцы жизни процесс кишечно-печеночной циркуляции неполноценен (см. Belle et al.; Intestinal absorption of bile salts: immature development in the neonate; J Pediatr 94 (1979): 472–476), особенно у недоношенных младенцев и при определенных патологических состояниях, подобных синдрому короткого кишечника. В частности, увеличение всасывающей поверхности подвздошной кишки позволяет улучшить кишечно-печеночную циркуляцию солей желчных солей, их повторное использование в печени и увеличить пул солей желчных кислот в просвете кишечника, что обеспечит лучшее расщепление жиров и жирорастворимых витаминов.
Тонкий кишечник играет ведущую роль в этом процессе расщепления. Одним из важных параметров, влияющих на переваривающую способность, является морфология тонкого кишечника. Ключевым параметром является площадь поверхности эпителия тонкого кишечника (см. Helander et al.; Surface area of the digestive tract – revisited; Scandinavian Journal of Gastroenterology; 49 (2014): 681–689). Чем больше площадь поверхности эпителия, тем больше пул солей желчных кислот и пищеварительных ферментов, доступных для окончательного расщепления питательных веществ, таких как липиды, жирорастворимые витамины, углеводы и белки. Увеличение длины ворсинок в тонком кишечнике обеспечивает благоприятное увеличение площади поверхности и соответствующее улучшенное расщепление макронутриентов, таких как липиды, жирорастворимые витамины, белки и углеводы. Такое влияние длины ворсинок и соответствующего увеличения площади поверхности тонкого кишечника на переваривающую способность хорошо описано в литературе. Например, в обзоре L. Montagne et al., A review of interactions between dietary fibre and the intestinal mucosa, and their consequences on digestive health in young non-ruminant animals, Animal Feed Science and Technology 108 (2003) p.95–117, и, в частности, в пункте 4.3 на странице 105, перечислено несколько исследований, где описано положительное влияние увеличения длины ворсинок на переваривающую способность животных.
Улучшение переваривающей способности желательно для всех младенцев и детей младшего возраста. Однако некоторые конкретные группы младенцев и детей младшего возраста особенно нуждаются в композициях, способных активировать их развитие в целом и в частности их переваривающую и/или всасывающую способность. Такими младенцами и детьми младшего возраста являются, например, недоношенные младенцы, младенцы с низким весом при рождении, младенцы и дети младшего возраста, страдающие синдромом короткого кишечника, и/или младенцы или дети младшего возраста с замедленным ростом, и, в частности, младенцы с задержкой внутриутробного развития (ЗВУР).
Было предпринято множество попыток улучшить переваривающую способность у младенцев и детей младшего возраста, а также у молодых животных. В частности, в нескольких исследованиях оценивали воздействие различных типов волокон на морфологию кишечника и на переваривающую способность молодых животных, младенцев или детей младшего возраста. В вышеупомянутом обзоре L. Montagne et al. описаны разнообразные исследования, демонстрирующие вариабельный эффект различных типов пищевых волокон, одни из которых были связаны с положительным воздействием на переваривающую способность, тогда как другие производили впечатление вредных.
Одним примером исследования, в котором пищевое волокно продемонстрировало положительное воздействие, является работа P. Liu and al, Effects of chito-oligosaccharide supplementation on the growth performance, nutrient digestibility, intestinal morphology, and fecal shedding of Escherichia coli and Lactobacillus in weaning pigs, J. Anim. Sci. 86 (2008), p. 2609–2618. В этом исследовании увеличение высоты ворсинки и соотношения ворсинка : крипта в подвздошной и тощей кишках было связано с улучшением усвояемости у поросят-отъемышей при добавлении в рацион питания поросят хитоолигосахаридов по сравнению с контрольным рационом питания. Напротив, в исследовании van Meer et al.; Prebiotic oligosaccharides and the enterohepatic circulation of bile salts in rats; Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 294 (2008): G540 G547 показано, что добавление галактоолигосахаридов в рацион питания детенышей крыс не способствовало увеличению пула солей желчных кислот или изменению кинетики пула солей желчных кислот и, следовательно, не обеспечивало активации расщепления жира.
Другие ингредиенты оценивали по их способности активировать расщепление. Например, в WO 2011/65552 описана композиция, содержащая гидролизат белка из кисломолочного продукта (например, из творога), липиды и изомальтулозу, которая эффективно увеличивала длину ворсинок в тонком кишечнике. Однако такие композиции не подходят для младенцев и детей младшего возраста, поскольку изомальтулоза нежелательна для применения в таких композициях.
Особое преимущество обеспечила бы идентификация ингредиентов, специально подобранных для человеческих младенцев и/или детей младшего возраста и способных улучшать переваривающую способность таких младенцев и/или детей младшего возраста.
Материнское молоко рекомендовано всем младенцам. Однако в некоторых случаях грудное вскармливание является недостаточным или неэффективным по медицинским причинам либо мать решает не кормить грудью. Для этих ситуаций были разработаны детские смеси. Были разработаны также обогатители для витаминизации материнского молока или детской смеси определенными ингредиентами.
Существует очевидная потребность в разработке приемлемых способов повышения способности к расщеплению макронутриентов, таких как липиды, жирорастворимые витамины, белки и/или углеводы, у младенцев и детей младшего возраста.
Также существует потребность в обеспечении таких полезных для здоровья эффектов способом, который особенно приемлем для субъектов младшего возраста (младенцев и детей младшего возраста), при этом способ не должен включать в себя классическое фармацевтическое вмешательство, поскольку эти младенцы или дети младшего возраста особенно уязвимы.
Существует потребность в обеспечении у этих младенцев или детей младшего возраста таких полезных для здоровья эффектов способом, который не вызывает побочных эффектов и/или который можно легко предоставлять и который приемлем для родителей или медицинских работников.
Также существует потребность в обеспечении таких полезных эффектов способом, который позволит сохранять разумную и доступную для большинства стоимость такого обеспечения.
Таким образом, существует очевидная потребность в разработке альтернативных способов, отличных от классического фармацевтического вмешательства, такого как применение антибиотиков, по меньшей мере из-за связанного риска развития устойчивости к антибиотикам.
Изложение сущности изобретения
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что композицию, содержащую по меньшей мере один фукозилированный олигосахарид и по меньшей мере один N-ацетилированный олигосахарид, можно преимущественно применять для активации переваривающей способности, предпочтительно способности расщеплять жир, жирорастворимые витамины, белки и углеводы, у младенца или ребенка младшего возраста. Хотя авторы не желают ограничиваться какой-либо теорией, считается, что такие олигосахариды оказывают синергическое воздействие при этих специфических состояниях здоровья.
Соответственно, в настоящем изобретении предложена питательная композиция, содержащая по меньшей мере один фукозилированный олигосахарид и по меньшей мере один N-ацетилированный олигосахарид, для применения в способе активации переваривающей способности у младенца или ребенка младшего возраста.
В настоящем изобретении также предложена молочная смесь для детей от 1 до 3 лет, содержащая по меньшей мере один фукозилированный олигосахарид и по меньшей мере один N-ацетилированный олигосахарид, для применения в способе активации переваривающей способности у ребенка.
Питательная композиция, соответственно молочная смесь для детей от 1 до 3 лет, в частности, эффективна для применения в способе
- улучшения кишечно-печеночной циркуляции, в частности кишечно-печеночной циркуляции солей желчных кислот, и
- стимуляции увеличения площади поверхности в тонком кишечнике; и
- стимуляции увеличения длины ворсинок в тонком кишечнике
младенца или ребенка младшего возраста, соответственно ребенка.
В обладающем особыми преимуществами варианте осуществления питательная композиция, соответственно молочная смесь для детей от 1 до 3 лет, содержит 2’-фукозиллактозу (2-FL) и лакто-N-неотетраозу (LNnT).
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 представлена длина ворсинок в следующих группах крысят:
- у животных с нормальным внутриутробным ростом (нормальная группа; положительный контроль);
- у животных, которые перенесли задержку внутриутробного роста и получали нормальный рацион питания (группа ЗВУР; отрицательный контроль);
- у животных с задержкой внутриутробного роста, которых содержали на рационе питания с добавлением 2-FL (экспериментальная группа ЗВУР/2FL);
- у животных с задержкой внутриутробного роста, которых содержали на рационе питания с добавлением LNnT (экспериментальная группа ЗВУР/LNnT);
- у животных с задержкой внутриутробного роста, которых содержали на рационе питания с добавлением комбинации 2-FL и LNnT (экспериментальная группа ЗВУР/смесь олигосахаридов грудного молока (ОГМ)).
Средняя длина ворсинок в каждой группе крыс представлена горизонтальной линией. Группы 2-FL и LNnT демонстрировали отсутствие существенных отличий от группы ЗВУР. Группа 2-FL и LNnT, напротив, демонстрировала наличие значительно более длинных ворсинок, чем другие группы. Таким образом, можно наблюдать синергию между 2-FL и LNnT.
Подробное описание изобретения
В настоящем документе следующие термины имеют приведенные ниже определения.
Термин «младенец» означает ребенка в возрасте до 12 месяцев. Выражение «ребенок младшего возраста» означает ребенка в возрасте от одного до менее трех лет (его также называют ребенком, начинающим ходить). Выражение «ребенок» означает возраст от трех до семи лет.
«Младенец или ребенок младшего возраста, рожденный посредством кесарева сечения» означает младенца или ребенка младшего возраста, рожденного посредством кесарева сечения. Это означает, что младенец или ребенок младшего возраста не был рожден посредством вагинальных родов.
«Младенец или ребенок младшего возраста, рожденный посредством вагинальных родов» означает младенца или ребенка младшего возраста, который был рожден посредством вагинальных родов, а не посредством кесарева сечения.
«Недоношенный» или «преждевременно родившийся» означает младенца или ребенка младшего возраста, который родился раньше срока. По существу, этот термин относится к младенцу или ребенку младшего возраста, рожденному до 37-й недели беременности.
«Младенец с низким весом при рождении» означает новорожденного, имеющего массу тела менее 2500 г (5,5 фунта) по причине либо преждевременных родов, либо ограниченного роста плода. Таким образом, этот термин включает:
- младенца или ребенка младшего возраста, который имеет/имел вес при рождении от 1500 до 2500 г (обычно называемый «низким весом при рождении», или НВР);
- младенца или ребенка младшего возраста, который имеет/имел вес при рождении от 1000 до 1500 г (обычно называемый «очень низким весом при рождении», или ОНВР);
- младенца или ребенка младшего возраста, который имеет/имел вес при рождении менее 1000 г (называемый «крайне низким весом при рождении», или КНВР).
«Младенец, родившийся маленьким для своего гестационного возраста (SGA)» означает ребенка с весом при рождении менее 10-го процентиля для детей того же гестационного возраста.
Выражение «питательная композиция» означает композицию, которой питается субъект. Данная питательная композиция обычно предназначена для перорального или внутривенного применения и обычно включает в себя источник липидов или жира и источник белка.
В конкретном варианте осуществления композиция настоящего изобретения представляет собой гипоаллергенную питательную композицию. Выражение «гипоаллергенная питательная композиция» означает питательную композицию, которая с низкой вероятностью вызовет аллергические реакции.
В конкретном варианте осуществления композиция настоящего изобретения представляет собой «искусственную питательную композицию». Выражение «искусственная питательная композиция» означает смесь, полученную с помощью химических и/или биологических средств, которые могут быть химически идентичны смеси природного происхождения, присутствующей в молоке млекопитающих (т.е. искусственная композиция не является грудным молоком).
Выражение «детская смесь» при использовании в настоящем документе относится к продукту питания, который специально предназначен для употребления в пищу младенцами в течение первых месяцев жизни и сам по себе удовлетворяет потребности в питании этой категории лиц (статья 2(c) Директивы Европейской комиссии 91/321/EEC 2006/141/EC от 22 декабря 2006 г. о детских смесях и смесях для прикармливаемых детей). Оно также относится к питательной композиции, предназначенной для младенцев, как определено в Codex Alimentarius (Codex STAN 72-1981) и Infant Specialities (включая статью Food for Special Medical Purpose). Выражение «детская смесь» охватывает как «начальную детскую смесь», так и «смесь последующего уровня» или «смесь для прикармливаемых детей».
«Смесь последующего уровня» или «смесь для прикармливаемых детей» дают, начиная с 6-го месяца. Она составляет главный жидкий элемент в постепенно увеличивающемся разнообразии рациона питания для данной категории лиц.
Выражение «детское питание» означает продукт питания, специально предназначенный для употребления в пищу младенцами или детьми младшего возраста в течение первых лет жизни.
Выражение «детская композиция на зерновой основе» означает продукт питания, специально предназначенный для употребления в пищу младенцами или детьми младшего возраста в течение первых лет жизни.
Выражение «молочная смесь для детей от 1 до 3 лет» (или GUM) относится к напитку на основе молока, как правило, с добавлением витаминов и минеральных веществ, который предназначен для детей младшего возраста или детей.
Термин «обогатитель» относится к жидким или твердым питательным композициям, подходящим для смешивания с грудным молоком или детской смесью.
Выражение «период отлучения от груди» означает период, в течение которого в рационе младенца или ребенка младшего возраста материнское молоко заменяют другой пищей.
Выражения «в возрасте дней/недель/месяцев/лет» и «дней/недель/месяцев/лет после рождения» могут использоваться как взаимозаменяемые.
Выражение «активация переваривающей способности» включает в себя одно или несколько из следующего:
- увеличение площади поверхности тонкого кишечника, и, в частности, подвздошной кишки;
- увеличение длины ворсинок в тонком кишечнике, в частности в подвздошной кишке; и
- улучшение кишечно-печеночной циркуляции, в частности кишечно-печеночной циркуляции солей желчных кислот.
Под «материнским молоком» следует понимать грудное молоко или молозиво матери.
«Олигосахарид» представляет собой сахаридный полимер, содержащий небольшое число (как правило, от трех до десяти) простых сахаров (моносахаридов).
Термин «ОГМ» относится к олигосахариду (-ам) грудного молока. Эти углеводы обладают высокой устойчивостью к ферментативному гидролизу, что указывает на то, что они могут проявлять существенные функции, непосредственно не относящиеся к их калорийности. В первую очередь было показано, что они играют жизненно важную роль в раннем развитии младенцев и детей младшего возраста, например в развитии иммунной системы. В грудном молоке обнаружено много различных видов ОГМ. Каждый отдельный олигосахарид основан на комбинации глюкозы, галактозы, сиаловой кислоты (N-ацетилнейраминовой кислоты), фукозы и/или N-ацетилглюкозамина с образованием многочисленных и разнообразных связей между ними, что обусловливает присутствие огромного числа различных олигосахаридов в грудном молоке — на данный момент было выявлено более 130 таких структур. Почти все они на своем восстанавливающем конце имеют лактозный фрагмент, в то время как сиаловая кислота и/или фукоза (при наличии) занимают концевые положения на невосстанавливающих концах. ОГМ могут быть кислыми (например, содержащий заряженную сиаловую кислоту олигосахарид) или нейтральными (например, фукозилированный олигосахарид).
«Фукозилированный олигосахарид» представляет собой олигосахарид, имеющий остаток фукозы. Он имеет нейтральный характер. Некоторыми примерами являются 2-FL (2’-фукозиллактоза), 3-FL (3-фукозиллактоза), дифукозиллактоза, лакто-N-фукопентаоза (например, лакто-N-фукопентаоза I, лакто-N-фукопентаоза II, лакто-N-фукопентаоза III, лакто-N-фукопентаоза V), лакто-N-фукогексаоза, лакто-N-дифукогексаоза I, фукозиллакто-N-гексаоза, фукозиллакто-N-неогексаоза, дифукозиллакто-N-гексаоза I, дифукозиллакто-N-неогексаоза II и любая их комбинация. Хотя авторы не желают ограничиваться какой-либо теорией, считается, что фукозил-эпитоп фукозилированных олигосахаридов может выступать в качестве «ловушки» на поверхности слизистой оболочки. Посредством конкурентного эффекта он может предотвращать и/или ограничивать действие патогенов, вызывающих инфекции (вирусного или бактериального происхождения), или секретируемых ими компонентов (например, токсинов), в первую очередь исключая их связывание с природными лигандами, и, безотносительно к какой-либо теории, считается, что за счет этого будет снижаться риск возникновения инфекций/воспалений, и в частности риск возникновения инфекций и/или воспалений нижних дыхательных путей (НДП)/уха. Дополнительно принято считать, что фукозилированные олигосахариды стимулируют рост и метаболическую активность специфических симбиотических микробов, снижающих воспалительную реакцию и создающих неблагоприятную среду для патогенов, тем самым обеспечивая колонизационную резистентность.
Выражения «фукозилированные олигосахариды, содержащие 2’-фукозил-эпитоп» и «2-фукозилированные олигосахариды» охватывают фукозилированные олигосахариды с определенной гомологией формы, поскольку они содержат 2’-фукозил-эпитоп, следовательно, можно ожидать определенную гомологию функции. Хотя авторы не желают ограничиваться какой-либо теорией, считается, что 2’-фукозил-эпитоп этих фукозилированных олигосахаридов особо характерен для патогенов (или секретируемых ими компонентов), вызывающих инфекции НДП и/или уха.
Выражение «N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы)» охватывает как «N-ацетиллактозамин», так и «олигосахарид (-ы), содержащий (-ие) N-ацетиллактозамин». Они являются нейтральными олигосахаридами, имеющими остаток N-ацетиллактозамина. Подходящими примерами являются лакто-N-неотетраоза (LNnT), лакто-N-тетраоза (LNT), пара-лакто-N-неогексаоза (пара-LNnH), дисиалиллакто-N-неотетраоза (DSLNT) или любые их комбинации. Другими примерами являются лакто-N-гексаоза, лакто-N-неогексаоза, пара-лакто-N-гексаоза, пара-лакто-N-неогексаоза, лакто-N-октаоза, лакто-N-неооктаоза, изо-лакто-N-октаоза, пара-лакто-N-октаоза и лакто-N-декаоза.
Выражения «по меньшей мере один фукозилированный олигосахарид» и «по меньшей мере один N-ацетилированный олигосахарид» означают «по меньшей мере один тип фукозилированного олигосахарида» и «по меньшей мере один тип N-ацетилированного олигосахарида».
«Предшественник ОГМ» представляет собой ключевое соединение, которое включается в выработку ОГМ, такое как сиаловая кислота и/или фукоза.
«Сиалилированный олигосахарид» представляет собой олигосахарид, содержащий заряженную сиаловую кислоту, т.е. олигосахарид, имеющий остаток сиаловой кислоты. Он имеет кислотный характер. Некоторыми примерами являются 3-SL (3’-сиалиллактоза) и 6-SL (6’-сиалиллактоза).
Питательная композиция настоящего изобретения может находиться в твердой форме (например, порошок) или в жидком виде. Количество различных ингредиентов (например, олигосахаридов) может выражаться в г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества, если она представлена в твердой форме, например в порошке, или как концентрация в г/л композиции, если она относится к жидкой форме (последний случай также включает жидкую композицию, которую можно получать из порошка после растворения в жидкости, например в молоке, воде и т.п., например растворенную детскую смесь, или смесь для прикармливаемых детей / смесь последующего уровня, или молочную смесь для детей от 1 до 3 лет, или зерновой продукт для детского питания, или любую другую смесь, предназначенную для детского питания).
Термин «пребиотик» означает неперевариваемые углеводы, которые благоприятно влияют на организм-хозяина, избирательно стимулируя рост и/или активность полезных для здоровья бактерий, например бифидобактерий, в толстом кишечнике человека (Gibson GR, Roberfroid MB. Dietary modulation of the human colonic microbiota: introducing the concept of prebiotics. J Nutr. 1995;125:1401–12).
Термин «пробиотик» означает препараты клеток микроорганизмов или компонентов клеток микроорганизмов, которые оказывают благоприятное воздействие на здоровье или самочувствие организма-хозяина. (Salminen S, Ouwehand A. Benno Y. et al. «Probiotics: how should they be defined» Trends Food Sci. Technol. 1999:10 107–10.) Клетки микроорганизмов, по существу, представляют собой бактерии или дрожжи.
Под термином «КОЕ» следует понимать колониеобразующую единицу.
Если не указано иное, все процентные содержания даны по массе.
Дополнительно в контексте изобретения термины «содержащий» или «содержит» не исключают других возможных элементов. Композиция настоящего изобретения, включая многие варианты осуществления, описанные в настоящем документе, может содержать существенные элементы и ограничения изобретения, описанные в настоящем документе, а также любые дополнительные или необязательные ингредиенты, компоненты или ограничения, описанные в настоящем документе или иным образом, в зависимости от потребностей, состоять или по существу состоять из них.
Любую ссылку на документы предшествующего уровня техники в данном описании не следует рассматривать как признание того, что такой предшествующий уровень техники является широко известным или составляет часть общеизвестных знаний в данной области.
Более подробное описание изобретения будет представлено ниже. Следует отметить, что различные аспекты, признаки, примеры и варианты осуществления, описанные в настоящей заявке, могут быть совместимыми и/или скомбинированными друг с другом.
Таким образом, первым объектом настоящего изобретения является питательная композиция, содержащая по меньшей мере один фукозилированный олигосахарид и по меньшей мере один N-ацетилированный олигосахарид, для применения в активации переваривающей способности у младенца или ребенка младшего возраста.
Вторым объектом настоящего изобретения является молочная смесь для детей от 1 до 3 лет, содержащая по меньшей мере один фукозилированный олигосахарид и по меньшей мере один N-ацетилированный олигосахарид, для применения в активации переваривающей способности у ребенка.
Предпочтительно питательная композиция, соответственно молочная смесь для детей от 1 до 3 лет, настоящего изобретения предназначена для применения в активации способности переваривать жир, жирорастворимые витамины, белки и углеводы у младенца или ребенка младшего возраста, соответственно у ребенка.
Для достижения таких преимуществ питательная композиция, соответственно молочная смесь для детей от 1 до 3 лет, изобретения предназначена предпочтительно для применения в способе
- увеличения площади поверхности тонкого кишечника, предпочтительно подвздошной кишки;
- увеличения длины ворсинок в тонком кишечнике, предпочтительно в подвздошной кишке; и
- улучшения кишечно-печеночной циркуляции, в частности кишечно-печеночной циркуляции солей желчных кислот;
у младенца или ребенка младшего возраста, соответственно у ребенка.
Питательная композиция, соответственно молочная смесь для детей от 1 до 3 лет, настоящего изобретения содержит по меньшей мере один фукозилированный олигосахарид. В ней может присутствовать один или несколько типов фукозилированного (-ых) олигосахарида (-ов). Фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) можно фактически выбирать из перечня, включающего в себя 2’-фукозиллактозу, 3’-фукозиллактозу, дифукозиллактозу, лакто-N-фукопентаозу (например, лакто-N-фукопентаозу I, лакто-N-фукопентаозу II, лакто-N-фукопентаозу III, лакто-N-фукопентаозу V), лакто-N-фукогексаозу, лакто-N-дифукогексаозу I, фукозиллакто-N-гексаозу, фукозиллакто-N-неогексаозу (например, фукозиллакто-N-неогексаозу I, фукозиллакто-N-неогексаозу II), дифукозиллакто-N-гексаозу I, дифуко-лакто-N-неогексаозу, дифукозиллакто-N-неогексаозу I, дифукозиллакто-N-неогексаозу II, фукозил-пара-лакто-N-гексаозу, три-фуко-пара-лакто-N-гексаозу I и любую их комбинацию.
В некоторых конкретных вариантах осуществления фукозилированный олигосахарид включает 2’-фукозил-эпитоп. Он может быть, например, выбран из перечня, включающего 2’-фукозиллактозу, дифукозиллактозу, лакто-N-фукопентаозу, лакто-N-фукогексаозу, лакто-N-дифукогексаозу, фукозиллакто-N-гексаозу, фукозиллакто-N-неогексаозу, дифукозиллакто-N-гексаозу дифуко-лакто-N-неогексаозу, дифукозиллакто-N-неогексаозу, фукозил-пара-лакто-N-гексаозу и любую их комбинацию.
В предпочтительном варианте осуществления питательная композиция, соответственно молочная смесь для детей от 1 до 3 лет, в соответствии с изобретением содержит 2’-фукозиллактозу (или 2FL, или 2’FL, или 2-FL, или 2’-FL). В конкретном варианте осуществления не используется никакой другой тип фукозилированного олигосахарида, кроме 2’-фукозиллактозы, т.е. питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет изобретения в качестве фукозилированного олигосахарида содержит только 2’-фукозиллактозу.
Фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) может (могут) быть выделен (-ы) из природного источника, такого как молоко животных, методами хроматографии или фильтрации. В альтернативном варианте осуществления его (их) можно получать с помощью биотехнологических средств с использованием специфических фукозилтрансфераз и/или фукозидаз, либо посредством применения метода ферментации на основе ферментов (рекомбинантных или природных ферментов), либо методом микробиологической ферментации. В последнем случае или микроорганизмы могут экспрессировать свои природные ферменты и субстраты, или возможно создание микроорганизмов, вырабатывающих соответствующие субстраты и ферменты. Можно применять культуры из микроорганизмов одного вида и/или смешанные культуры. Образование фукозилированного олигосахарида может быть инициировано акцепторными субстратами, начиная с любой степени полимеризации (DP) от DP = 1 и далее. В альтернативном варианте осуществления фукозилированные олигосахариды можно получать из лактозы и свободной фукозы с помощью химического синтеза. Фукозилированные олигосахариды также доступны, например, от компании Kyowa, Hakko, Kogyo, Япония.
Питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет настоящего изобретения также содержит по меньшей мере один N-ацетилированный олигосахарид. В ней может присутствовать один или несколько типов N-ацетилированных олигосахаридов. N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) может (могут) представлять собой, например, лакто-N-тетраозу (LNT), лакто-N-неотетраозу (LNnT) или любую их комбинацию. В некоторых конкретных вариантах осуществления N-ацетилированный олигосахарид представляет собой лакто-N-неотетраозу (LNnT), лакто-N-тетраозу (LNT), пара-лакто-N-неогексаозу (пара-LNnH), дисиалиллакто-N-неотетраозу (DSLNT) или любую их комбинацию. В некоторых конкретных вариантах осуществления N-ацетилированный олигосахарид представляет собой LNnT. В некоторых конкретных вариантах осуществления N-ацетилированный олигосахарид представляет собой LNT. В некоторых других конкретных вариантах осуществления N-ацетилированный олигосахарид представляет собой смесь LNT и LNnT. В некоторых конкретных вариантах осуществления питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет содержит как LNT, так и LNnT в соотношении LNT : LNnT от 5 : 1 до 1 : 2, или от 2 : 1 до 1 : 1, или от 2 : 1,2 до 2 : 1,6.
В предпочтительном варианте осуществления питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет в соответствии с изобретением содержит лакто-N-неотетраозу (LNnT). В конкретном варианте осуществления не используется никакой другой тип N-ацетилированного олигосахарида, кроме лакто-N-неотетраозы (LNnT), т.е. питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет изобретения в качестве N-ацетилированного олигосахарида содержит только лакто-N-неотетраозу (LNnT).
N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) можно синтезировать химическим путем с помощью ферментативного переноса сахаридных звеньев с донорных фрагментов на акцепторные фрагменты с использованием гликозилтрансфераз, как описано, например, в патенте США № 5,288,637 и в WO 96/10086. В альтернативном варианте осуществления LNT и LNnT можно получать путем химического превращения кетогексоз (например, фруктозы), либо свободных, либо связанных с олигосахаридом (например, лактулозой), в N-ацетилгексозамин или N-ацетилгексозамин-содержащий олигосахарид, как описано в Wrodnigg, T.M.; Stutz, A.E. (1999) Angew. Chem. Int. Ed. 38:827–828. Полученный таким образом N-ацетиллактозамин можно затем переносить на лактозу в качестве акцепторного фрагмента.
В особенно преимущественном варианте осуществления настоящего изобретения питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет содержит 2’-фукозиллактозу (2FL) и лакто-N-неотетраозу (LNnT).
В другом конкретном варианте осуществления питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет настоящего изобретения содержит смесь олигосахаридов, состоящую из 2’-фукозиллактозы (2-FL) и лакто-N-неотетраозы (LNnT). Иными словами, питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет изобретения в качестве фукозилированного олигосахарида содержит только 2’-фукозиллактозу (2-FL) и в качестве N-ацетилированного олигосахарида — только лакто-N-неотетраозу (LNnT).
В особенно преимущественном варианте осуществления настоящего изобретения фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) и N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствуют в питательной композиции или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет в некоторых конкретных количествах. Термин «количество», если не указано иное, относится к общему количеству каждого из таких двух компонентов в питательной композиции или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет. Поэтому он не относится к индивидуальному количеству, кроме случаев, когда речь идет о единственном типе таких компонентов (в этом случае как общее, так и индивидуальное количество будут одинаковыми). В качестве иллюстрирующего примера, если в композиции используется только один фукозилированный олигосахарид (то есть только один его тип) (например, 2FL), его индивидуальное количество (и, следовательно, суммарное количество фукозилированных олигосахаридов) будет находиться в диапазоне 0,75–1,65 г/л. В случае нескольких фукозилированных олигосахаридов (то есть нескольких типов) их индивидуальное количество будет меньше (например, в случае 2 различных типов фукозилированного олигосахарида, например 2FL + 3FL, каждый из них может, например, присутствовать в индивидуальном количестве 0,5 г/л), но суммарное количество фукозилированных олигосахаридов будет находиться в диапазоне 0,75–1,65 г/л.
Фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) может (могут) присутствовать в питательной композиции или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет в соответствии с настоящим изобретением в общем количестве 0,75–1,65 г/л композиции. В некоторых вариантах осуществления фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) может (могут) присутствовать в общем количестве 0,005–5 г/л композиции, например 0,01–3 г/л, или 0,02–2 г/л, или 0,1–2,5 г/л, или 0,15–2 г/л, или 0,25–1,9 г/л композиции. В конкретном варианте осуществления фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 1 г/л композиции. В другом варианте осуществления фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,26 г/л композиции.
Фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) может (могут) присутствовать в питательной композиции или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет в общем количестве 0,004–3,8 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества. Фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) может (могут) присутствовать в общем количестве 0,008–2,3 г/100 г композиции, например 0,015–1,5 г/100 г, или 0,08–1,9 г/100 г, или 0,12–1,5 г/100 г, или 0,15–1,5 г/100 г, или 0,19–1,5 г/100 г композиции. В конкретном варианте осуществления фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в суммарном количестве 0,78 г/100 г композиции. В другом конкретном варианте осуществления фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,2 г/100 г композиции.
N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) может (могут) присутствовать в питательной композиции или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет в соответствии с настоящим изобретением в общем количестве 0,1–3 г/л композиции. В некоторых вариантах осуществления N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) может (могут) присутствовать в общем количестве 0,01–2,5 г/л композиции, например 0,05–1,5 г/л, или 0,05–1 г/л, или 0,05–0,8 г/л, или 0,08–0,8 г/л, или 0,09–0,8 г/л композиции. В конкретном варианте осуществления N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в суммарном количестве 0,5 г/л композиции. В другом конкретном варианте осуществления N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,13 г/л композиции.
N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) может (могут) присутствовать в питательной композиции или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет в общем количестве 0,008–2,3 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества. N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) может (могут) присутствовать в общем количестве 0,008–1,9 г/100 г композиции, например 0,04–1,2 г/100 г, или 0,04–0,8 г/100 г, или 0,04–0,6 г/100 г, или 0,06–0,6 г/100 г, или 0,07–0,6 г/100 г композиции. В конкретном варианте осуществления N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в суммарном количестве 0,38 г/100 г композиции. В другом конкретном варианте осуществления N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,1 г/100 г композиции.
Следовательно, в одном варианте осуществления настоящего изобретения питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет содержит по меньшей мере один фукозилированный олигосахарид и по меньшей мере один N-ацетилированный олигосахарид, причем:
- фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,005–5 г/л композиции и/или в общем количестве 0,004–3,8 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества; и/или
- N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,1–2,5 г/л композиции и/или в общем количестве 0,08–1,9 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества.
В другом конкретном варианте осуществления питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет настоящего изобретения содержит по меньшей мере один фукозилированный олигосахарид и по меньшей мере один N-ацетилированный олигосахарид, причем:
- фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,005–5 г/л композиции и/или в общем количестве 0,004–3,8 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества; и/или
- N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,05–1,5 г/л композиции и/или в общем количестве 0,04–1,2 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества.
В другом конкретном варианте осуществления питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет настоящего изобретения содержит по меньшей мере один фукозилированный олигосахарид и по меньшей мере один N-ацетилированный олигосахарид, причем:
- фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,02–2 г/л композиции и/или в общем количестве 0,015–1,5 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества; и/или
- N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,5–1 г/л композиции и/или в общем количестве 0,4–0,8 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества.
В другом конкретном варианте осуществления питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет настоящего изобретения содержит по меньшей мере один фукозилированный олигосахарид и по меньшей мере один N-ацетилированный олигосахарид, причем:
- фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,1–2,5 г/л композиции и/или в общем количестве 0,08–1,9 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества; и/или
- N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,5–0,8 г/л композиции и/или в общем количестве 0,4–0,6 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества.
В конкретном варианте осуществления питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет в соответствии с настоящим изобретением содержит по меньшей мере один фукозилированный олигосахарид и по меньшей мере один N-ацетилированный олигосахарид, причем:
- фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 1 г/л композиции и/или в общем количестве 0,77 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества; и/или
- N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,5 г/л композиции и/или в общем количестве 0,38 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества.
В другом конкретном варианте осуществления питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет в соответствии с изобретением содержит по меньшей мере один фукозилированный олигосахарид и по меньшей мере один N-ацетилированный олигосахарид, причем:
- фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,26 г/л композиции и/или в общем количестве 0,2 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества; и/или
- N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) присутствует (-ют) в общем количестве 0,13 г/л композиции и/или в общем количестве 0,1 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества.
Фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) и N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы), содержащийся (-иеся) в питательной композиции или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет в соответствии с изобретением, как правило, присутствуют в соотношении N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) : фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) от 1 : 20 до 2 : 1, предпочтительно от 1 : 15 до 1 : 1, наиболее предпочтительно от 1 : 10 до 1 : 2. В особенно преимущественном варианте осуществления такое соотношение составляет 1 : 2 или примерно 1 : 2.
В конкретном варианте осуществления фукозилированный олигосахарид содержится в питательной композиции или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет настоящего изобретения в таком количестве, что нормальное потребление питательной композиции или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет будет обеспечено для младенца или ребенка младшего возраста, соответственно ребенка, при потреблении суммарной суточной дозы 0,003–6,5, предпочтительно 0,006–3,9 г, например 0,012–2,6 г, в сутки.
Для недоношенных, с низким весом при рождении и маленьких для своего гестационного возраста младенцев суточная доза фукозилированных олигосахаридов предпочтительно составляет от 0,05 до 1 г/кг массы тела в сутки, предпочтительно 0,06–0,9 г, или 0,07–0,8 г, или 0,08–0,7 г, или 0,09–0,6 г, или 0,1–0,5 г, или 0,2–0,4 г, наиболее предпочтительно 0,34 г на кг массы тела в сутки.
В конкретном варианте осуществления N-ацетилированный олигосахарид содержится в питательной композиции или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет настоящего изобретения в таком количестве, что нормальное потребление питательной композиции или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет будет обеспечено для младенца или ребенка младшего возраста, соответственно ребенка, при потреблении суммарной суточной дозы 0,003–3,9 г, предпочтительно 0,006–3,25 г, или 0,03–1,95 г, или 0,03–1,3 г, или 0,03–1 г, например 0,05–1 г, в сутки.
Для недоношенных, с низким весом при рождении и маленьких для своего гестационного возраста младенцев суточная доза составляет предпочтительно от 0,005 до 0,1 г/кг массы тела в сутки, предпочтительно 0,006–0,09 г, или 0,007–0,08 г, или 0,008–0,07 г, или 0,009–0,06 г, или 0,01–0,05 г, или 0,02–0,04 г, наиболее предпочтительно 0,034 г на кг массы тела в сутки.
Питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет в соответствии с настоящим изобретением может также содержать по меньшей мере другой (-ие) олигосахарид (-ы) (т.е. отличающийся (-иеся) от фукозилированного (-ых) олигосахарида (-ов) и N-ацетилированного (-ых) олигосахарида (-ов), обязательно присутствующего (-их) в композиции), и/или по меньшей мере волокно (-а), и/или по меньшей мере их предшественник (-и). Другой олигосахарид, и/или волокно, и/или их предшественник могут быть выбраны из перечня, включающего галактоолигосахариды (GOS), фруктоолигосахариды (FOS), инулин, ксилоолигосахариды (XOS), полидекстрозу, сиалилированные олигосахариды, сиаловую кислоту, фукозу и любую их комбинацию. Они могут присутствовать в количестве от 0 до 10 мас.% композиции. В конкретном варианте осуществления питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет может также включать по меньшей мере один олигосахарид коровьего молока (BMO).
Подходящие доступные в продаже продукты, которые можно применять дополнительно к олигосахаридам, содержащимся в смеси олигосахаридов, для получения питательных композиций или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет в соответствии с изобретением, включают в себя комбинации FOS с инулином, такие как продукт, продаваемый компанией BENEO под торговым названием Orafti, или полидекстрозу, продаваемую компанией Tate & Lyle под торговым названием STA-LITE.
В конкретном варианте осуществления питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет в соответствии с изобретением может содержать сиалилированный (-ые) олигосахарид (-ы). В ней может присутствовать один или несколько сиалилированных олигосахаридов. Сиалилированный (-ые) олигосахарид (-ы) может (могут) быть выбран (-ы) из группы, включающей 3’-сиалиллактозу (3-SL), 6’-сиалиллактозу (6-SL) и любую их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция содержит 3-SL и 6-SL. В некоторых конкретных вариантах осуществления соотношение 3’-сиалиллактозы (3-SL) и 6’-сиалиллактозы (6-SL) может находиться в диапазоне от 5 : 1 до 1 : 10, или от 3 : 1 до 1 : 1, или от 1 : 1 до 1 : 10. В некоторых конкретных вариантах осуществления сиалилированный олигосахарид композиции представляет собой 6'-сиалиллактозу (6-SL).
Сиалилированный (-ые) олигосахарид (-ы) может (могут) быть выделен (-ы) из природного источника, такого как молоко животных, методами хроматографии или фильтрации. В альтернативном варианте осуществления их можно получать с помощью биотехнологических средств с использованием специфических сиалилтрансфераз или сиалидаз, нейраминидаз либо методом ферментации на основе ферментов (рекомбинантных или природных ферментов), путем химического синтеза, либо методом микробиологической ферментации. В последнем случае микроорганизмы могут экспрессировать свои природные ферменты и субстраты, или возможно создание микроорганизмов, вырабатывающих соответствующие субстраты и ферменты. Можно применять культуры из микроорганизмов одного вида или смешанные культуры. Образование сиалилолигосахаридов можно инициировать акцепторными субстратами, начиная с любой степени полимеризации (DP) от DP = 1 и далее. В альтернативном варианте осуществления сиалиллактозы можно получать путем химического синтеза из лактозы и свободной N’-ацетилнейраминовой кислоты (сиаловой кислоты). Сиалиллактозы также доступны в продаже, например от компании Kyowa Hakko Kogyo, Япония.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет может включать 0,005–5 г/л сиалилированных олигосахаридов, или 0,008–2,5 г/л, или 0,01–1 г/л, или 0,02–0,7 г/л, например 0,03–0,5 г/л.
Питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет в соответствии с изобретением может включать 0,004–3,8 г сиалилированных олигосахаридов на 100 г композиции в расчете на массу сухого вещества, например 0,006–1,9 г, или 0,008–0,8 г, или 0,015–0,5 г, например 0,023–0,4 сиалилированных олигосахаридов на 100 г композиции в расчете на массу сухого вещества.
В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет содержит сиалилированный (-ые) олигосахарид (-ы) в количестве менее 0,1 г/100 г композиции в расчете на массу сухого вещества.
В конкретном варианте осуществления сиалилированный олигосахарид содержится в питательной композиции или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет настоящего изобретения в таком количестве, что нормальное потребление питательной композиции или молочной смеси для детей от 1 до 3 лет будет обеспечено для младенца или ребенка младшего возраста, соответственно ребенка, при потреблении суммарной суточной дозы 0,003–6,5 г, предпочтительно 0,005–3,3 г, или 0,006–1,3 г, или 0,01–0,9 г, например 0,018–0,65 г, в сутки.
В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет не содержит никакого (-их) сиалилированного (-ых) олигосахарида (-ов).
Питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет в соответствии с настоящим изобретением может также необязательно включать по меньшей мере один предшественник олигосахарида. В ней может присутствовать один или несколько предшественников олигосахарида. Например, предшественником олигосахарида грудного молока является сиаловая кислота, фукоза или их смесь. В некоторых конкретных вариантах осуществления композиция содержит сиаловую кислоту.
В конкретных примерах питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет содержит от 0 до 3 г/л предшественника (-ов) олигосахарида, или от 0 до 2 г/л, или от 0 до 1 г/л, или от 0 до 0,7 г/л, или от 0 до 0,5 г/л, или от 0 до 0,3 г/л, или от 0 до 0,2 г/л предшественника (-ов) олигосахарида. Композиция в соответствии с изобретением может включать от 0 до 2,1 г предшественника (-ов) олигосахарида на 100 г композиции в расчете на массу сухого вещества, например от 0 до 1,5 г, или от 0 до 0,8 г, или от 0 до 0,15 г предшественника (-ов) олигосахарида на 100 г композиции в расчете на массу сухого вещества.
Питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет настоящего изобретения может дополнительно включать по меньшей мере один пробиотик (или пробиотический штамм), такой как пробиотический бактериальный штамм.
Чаще всего применяют пробиотические микроорганизмы, которые главным образом представляют собой бактерии и дрожжи следующих родов: Lactobacillus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Bifidobacterium spp. и Saccharomyces spp.
В некоторых конкретных вариантах осуществления пробиотик представляет собой пробиотический бактериальный штамм. В некоторых конкретных вариантах осуществления он представляет собой, в частности, штаммы Bifidobacteria и/или Lactobacilli.
Подходящие пробиотические бактериальные штаммы включают в себя Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103, от компании Valio Oy, Финляндия, под товарным знаком LGG; Lactobacillus rhamnosus CGMCC 1.3724, Lactobacillus paracasei CNCM I-2116, Lactobacillus johnsonii CNCM I-1225, Streptococcus salivarius DSM 13084, продаваемые компанией BLIS Technologies Limited, Новая Зеландия, под названием KI2; Bifidobacterium lactis CNCM 1-3446, продаваемый в числе прочих компанией Christian Hansen, Дания, под товарным знаком Bb 12; Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, продаваемый компанией Morinaga Milk Industry Co. Ltd., Япония, под товарным знаком BB536; Bifidobacterium breve, продаваемый компанией Danisco под товарным знаком Bb-03; Bifidobacterium breve, продаваемый компанией Morinaga под товарным знаком M-16V; Bifidobacterium infantis, продаваемый компанией Procter & GambIe Co. под товарным знаком Bifantis; и Bifidobacterium breve, продаваемый компанией Institut Rosell (Lallemand) под товарным знаком R0070.
Питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет в соответствии с изобретением может включать от 10e3 до 10e12 КОЕ пробиотического штамма, более предпочтительно от 10e7 до 10e12 КОЕ, например от 10e8 до 10e10 КОЕ, пробиотического штамма на грамм композиции в расчете на массу сухого вещества.
В одном варианте осуществления пробиотики являются жизнеспособными. В другом варианте осуществления пробиотики являются неразмножающимися или инактивированными. В некоторых других вариантах осуществления можно использовать как жизнеспособные пробиотики, так и инактивированные пробиотики. Также можно добавлять пробиотические компоненты и метаболиты.
Питательная композиция в соответствии с изобретением может, например, представлять собой детскую смесь, начальную детскую смесь, смесь для прикармливаемых детей или смесь последующего уровня, молочную смесь для детей от 1 до 3 лет, детское питание, детскую композицию на зерновой основе, обогатитель, такой как обогатитель человеческого грудного молока, или добавку. В некоторых конкретных вариантах осуществления композиция изобретения представляет собой детскую смесь, обогатитель или добавку, которые могут предназначаться для первых 4 или 6 месяцев жизни. В предпочтительном варианте осуществления питательная композиция изобретения представляет собой детскую смесь.
В некоторых других вариантах осуществления питательная композиция настоящего изобретения представляет собой обогатитель. Обогатитель может представлять собой обогатитель грудного молока (например, обогатитель человеческого грудного молока) или обогатитель смеси, такой как обогатитель детской смеси или обогатитель смеси для прикармливаемых детей / смеси последующего уровня.
Если питательная композиция представляет собой добавку, она может быть обеспечена в форме стандартных доз. В таких случаях особенно полезно определить количество N-ацетилированных олигосахаридов и необязательно других олигосахаридов в отношении суточной дозы для введения младенцу или ребенку младшего возраста, как описано выше.
Питательная композиция настоящего изобретения может находиться в твердой (например, порошок), жидкой или клейстеризованной форме.
В конкретном варианте осуществления питательная композиция представляет собой добавку в форме порошка и поставляется в пакете-саше или в форме сиропа. Если добавка находится в форме порошка, она может включать в себя носитель. Однако предпочтительно, чтобы носитель в добавке отсутствовал. Если добавка находится в форме сиропа, ОГМ предпочтительно растворяют или суспендируют в воде, подкисленной цитратом.
Питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет в соответствии с изобретением обычно содержит источник белка. Белок может содержаться в количестве от 1,6 до 3 г на 100 ккал. В некоторых вариантах осуществления, в частности когда композиция предназначена для преждевременно родившихся младенцев, количество белка может составлять от 2,4 до 4 г/100 ккал или более 3,6 г/100 ккал. В некоторых других вариантах осуществления количество белка может быть ниже 2,0 г на 100 ккал, например от 1,8 до 2 г/100 ккал, или белок может содержаться в количестве ниже 1,8 г на 100 ккал.
Тип белка не считается критическим для настоящего изобретения при условии, что соблюдены минимальные требования по содержанию незаменимых аминокислот и обеспечен удовлетворительный рост. Таким образом, можно применять источники белка на основе молочной сыворотки, казеина и их смесей, а также источники белка на основе сои. Что касается сывороточных белков, источник белка может быть основан на кислой сыворотке или сладкой молочной сыворотке или их смесях и может включать в себя альфа-лактальбумин и бета-лактоглобулин в любых желаемых пропорциях.
В некоторых преимущественных вариантах осуществления в источнике белка преобладает молочная сыворотка (т.е. более 50% белков происходят из сывороточных белков, например 60% или 70%).
Белки могут быть нативными или гидролизованными, либо они могут представлять собой смесь нативных и гидролизованных белков. Под термином «нативный» подразумевают, что основная часть белков является нативной, т.е. их молекулярная структура не изменена, например не изменено по меньшей мере 80% белков, например не изменено по меньшей мере 85% белков, предпочтительно не изменено по меньшей мере 90% белков, еще более предпочтительно не изменено по меньшей мере 95% белков, например не изменено по меньшей мере 98% белков. В конкретном варианте осуществления не изменено 100% белков.
Термин «гидролизованный» в контексте настоящего изобретения означает белок, который был гидролизован или расщеплен на составляющие его аминокислоты. Белки могут быть полностью или частично гидролизованными. Может быть желательным вводить частично гидролизованные белки (степень гидролиза от 2 до 20%), например младенцам или детям младшего возраста, предположительно подверженным риску развития аллергии на коровье молоко. При необходимости использования гидролизованных белков процесс гидролиза можно проводить по желанию и способом, известным в данной области. Например, гидролизаты сывороточного белка можно получать ферментативным гидролизом фракции молочной сыворотки в одну или более стадий. Если фракция молочной сыворотки, применяемая в качестве исходного материала, по существу, не содержит лактозы, то установлено, что в процессе гидролиза блокировка лизина белка проявляется в гораздо меньшей степени. Это позволяет снизить степень блокировки лизина с около 15 мас.% общего лизина до менее около 10 мас.% лизина; например, до около 7 мас.% лизина, что значительно улучшает питательное качество источника белка.
В одном варианте осуществления изобретения гидролизовано по меньшей мере 70% белков, предпочтительно гидролизовано по меньшей мере 80% белков, например гидролизовано по меньшей мере 85% белков, еще более предпочтительно гидролизовано по меньшей мере 90% белков, например гидролизовано по меньшей мере 95% белков, в частности гидролизовано по меньшей мере 98% белков. В конкретном варианте осуществления гидролизовано 100% белков.
В одном конкретном варианте осуществления белки питательной композиции гидролизованы, полностью гидролизованы или частично гидролизованы. Степень гидролиза (DH) белка может составлять от 8 до 40, или от 20 до 60, или от 20 до 80, или более 10, 20, 40, 60, 80 или 90.
В альтернативном варианте осуществления белковый компонент может быть заменен смесью или искусственной аминокислотой, например для недоношенных младенцев или младенцев с низким весом при рождении.
В конкретном варианте осуществления питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет в соответствии с изобретением представляет собой гипоаллергенную композицию. В другом конкретном варианте осуществления композиция в соответствии с изобретением представляет собой гипоаллергенную питательную композицию или молочную смесь для детей от 1 до 3 лет.
Питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет в соответствии с настоящим изобретением обычно содержит источник углеводов. Это особенно предпочтительно в том случае, когда питательная композиция изобретения представляет собой детскую смесь. В этом случае можно применять любой источник углеводов, обычно находящийся в детских смесях, такой как лактоза, сукроза, сахароза, мальтодекстрин, крахмал и их смеси, хотя одним из предпочтительных источников углеводов является лактоза.
Питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет в соответствии с настоящим изобретением обычно содержит источник липидов. Это особенно важно, если питательная композиция настоящего изобретения представляет собой детскую смесь. В этом случае источником липидов может быть любой липид или жир, который подходит для применения в детских смесях. Некоторые подходящие источники жира включают в себя пальмовое масло, структурированное триглицеридное масло, подсолнечное масло с высоким содержанием олеиновой кислоты и сафлоровое масло с высоким содержанием олеиновой кислоты, масло триглицерида средней цепи. Можно также добавлять незаменимые жирные кислоты — линолевую кислоту и α-линоленовую кислоту, а также небольшие количества масел, содержащих большие количества арахидоновой кислоты и докозагексаеновой кислоты в готовом виде, например рыбьи жиры или микробные масла. Соотношение n-6 и n-3 жирных кислот в источнике жира может составлять от около 5 : 1 до около 15 : 1; например, от около 8 : 1 до около 10 : 1.
Питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет изобретения может также содержать все витамины и минеральные вещества, считающиеся обязательными в повседневном рационе питания, в значимых с точки зрения питания количествах. Для некоторых витаминов и минеральных веществ установлены минимальные требования. Примеры минеральных веществ, витаминов и других питательных веществ, которые необязательно присутствуют в композиции изобретения, включают в себя витамин А, витамин В1, витамин В2, витамин В6, витамин В12, витамин Е, витамин К, витамин С, витамин D, фолиевую кислоту, инозит, ниацин, биотин, пантотеновую кислоту, холин, кальций, фосфор, йод, железо, магний, медь, цинк, марганец, хлор, калий, натрий, селен, хром, молибден, таурин и L-карнитин. Минеральные вещества обычно добавляют в форме солей. Присутствие и количества конкретных минеральных веществ и других витаминов могут варьироваться в зависимости от предполагаемой популяции.
Если это необходимо, питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет изобретения может содержать эмульгаторы и стабилизаторы, такие как соя, лецитин, моно- и диглицериловые сложные эфиры лимонной кислоты и т.п.
Питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет изобретения может также содержать другие вещества, которые могут оказывать благоприятное воздействие, такие как лактоферрин, нуклеотиды, нуклеозиды и т.п.
Питательная композиция или молочная смесь для детей от 1 до 3 лет изобретения может также содержать каротиноид (-ы). В некоторых конкретных вариантах осуществления изобретения питательная композиция изобретения не содержит каротиноидов.
Питательную композицию или молочную смесь для детей от 1 до 3 лет в соответствии с изобретением можно получать любым подходящим способом. Далее композиция будет описана на конкретном примере.
Например, смесь, такую как детская смесь, можно получать путем смешивания источника белка, источника углеводов и источника жира в соответствующих пропорциях. На данном этапе можно включать эмульгаторы в случае их применения. На данном этапе можно добавлять витамины и минеральные вещества, но обычно их добавляют позднее для предотвращения термического разложения. Перед смешиванием в источнике жира можно растворять любые липофильные витамины, эмульгаторы и т.п. Затем можно примешивать воду, предпочтительно очищенную обратным осмосом, с образованием жидкой смеси. Температура воды для удобства находится в диапазоне от около 50°С до около 80°С для облегчения диспергирования ингредиентов. Для образования жидкой смеси можно использовать доступные в продаже разжижители.
На данном этапе можно добавлять фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) и N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы), особенно если конечный продукт должен иметь жидкую форму. Если конечный продукт должен представлять собой порошок, эти компоненты при желании также можно добавлять на данной стадии.
Затем жидкую смесь гомогенизируют, например, в две стадии.
Затем жидкую смесь можно термически обрабатывать для снижения бактериальной нагрузки путем быстрого нагрева жидкой смеси, например до температуры в диапазоне от около 80°C до около 150°C, в течение периода времени от около 5 секунд до около 5 минут. Нагревание можно осуществлять путем нагнетания пара с помощью автоклава или теплообменника, например пластинчатого теплообменника.
Затем жидкую смесь можно охлаждать до температуры от около 60°C до около 85°C, например путем мгновенного охлаждения. Затем жидкую смесь можно снова гомогенизировать, например в две стадии: под давлением в диапазоне от около 10 МПа до около 30 МПа на первой стадии и от около 2 МПа до около 10 МПа на второй стадии. Затем гомогенизированную смесь можно дополнительно охлаждать для добавления любых термочувствительных компонентов, таких как витамины и минеральные вещества. На данном этапе для удобства регулируют рН и содержание твердых веществ в гомогенизированной смеси.
Если конечный продукт должен представлять собой порошок, гомогенизированную смесь переносят в подходящий сушильный аппарат, например в распылительную сушилку или сублимационную сушилку, и превращают в порошок. Влагосодержание порошка должно составлять менее около 5 мас.%. На данном этапе можно также или в качестве альтернативы добавлять фукозилированный (-ые) олигосахарид (-ы) и N-ацетилированный (-ые) олигосахарид (-ы) путем сухого смешивания или путем перемешивания их в форме сиропа из кристаллов вместе с пробиотическим (-ими) штаммом (-ами) (при использовании), и смесь подвергают распылительной сушке или сублимационной сушке.
Если предпочтительна жидкая композиция, гомогенизированную смесь можно стерилизовать, а затем асептически разливать в подходящие контейнеры, либо можно сначала разливать в контейнеры, а затем стерилизовать в автоклаве.
В другом варианте осуществления композиция изобретения может представлять собой добавку. Добавка может быть представлена, например, в форме таблеток, капсул, пастилок или жидкости. Добавка может дополнительно содержать защитные гидроколлоиды (такие как камеди, белки, модифицированные крахмалы), связующие вещества, пленкообразующие агенты, инкапсулирующие агенты/материалы, материалы стенок/оболочек, соединения матриц, покрытия, эмульгаторы, поверхностно-активные вещества, солюбилизирующие агенты (масла, жиры, воски, лецитины и т.п.), адсорбенты, носители, наполнители, вспомогательные соединения, диспергирующие агенты, увлажняющие агенты, технологические добавки (растворители), антислеживающие агенты, маскирующие вкус агенты, утяжеляющие агенты, желирующие агенты и гелеобразующие агенты. Добавка также может содержать традиционные фармацевтические добавки и вспомогательные вещества, эксципиенты и разбавители, включая, без ограничений, воду, желатин любого происхождения, растительные камеди, лигнинсульфонат, тальк, сахара, крахмал, гуммиарабик, растительные масла, полиалкиленгликоли, ароматизирующие агенты, консерванты, стабилизаторы, эмульгирующие агенты, буферы, смазывающие вещества, красители, увлажняющие агенты, наполнители и т.п.
Дополнительно добавка может содержать органический или неорганический материал-носитель, подходящий для перорального или парентерального введения, а также витамины, минеральные микроэлементы и другие микроэлементы в соответствии с рекомендациями государственных органов, такими как рекомендуемые нормы потребления (RDA) США.
Питательная композиция в соответствии с изобретением предназначена для применения у младенцев или детей младшего возраста. Младенцы или дети младшего возраста могут быть рожденными в срок или недоношенными. В конкретном варианте осуществления питательная композиция изобретения предназначена для применения у младенцев или детей младшего возраста, родившихся недоношенными, имеющих низкий вес при рождении и/или родившихся маленькими для своего гестационного возраста (SGA). В конкретном варианте осуществления питательная композиция изобретения предназначена для применения у недоношенных младенцев, младенцев, имеющих низкий вес при рождении и/или младенцев, родившихся маленькими для своего гестационного возраста (SGA).
Питательную композицию настоящего изобретения можно также применять у младенцев или детей младшего возраста, рожденных посредством кесарева сечения или посредством вагинальных родов.
В некоторых вариантах осуществления композиция в соответствии с изобретением может быть предназначена для применения до и/или во время периода отлучения от груди.
Возраст для введения (или применения) питательной композиции или вскармливания ей, а также продолжительность такого введения зависят от потребностей.
Питательную композицию можно, например, давать младенцам сразу же после рождения. Композицию изобретения также можно давать в течение первой недели жизни младенца, или в течение первых 2 недель жизни, или в течение первых 3 недель жизни, или в течение первого месяца жизни, или в течение первых 2 месяцев жизни, или в течение первых 3 месяцев жизни, или в течение первых 4 месяцев жизни, или в течение первых 6 месяцев жизни, или в течение первых 8 месяцев жизни, или в течение первых 10 месяцев жизни, или в течение первого года жизни, или в течение первых двух лет жизни, или даже дольше. В некоторых особенно преимущественных вариантах осуществления изобретения питательную композицию дают (или вводят) младенцу в течение первых 4, 6 или 12 месяцев после рождения указанного младенца. В некоторых других вариантах осуществления питательную композицию изобретения дают в течение нескольких дней (например, 1, 2, 3, 5, 10, 15, 20 и т.д.), или нескольких недель (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и т.д.), или нескольких месяцев (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и т.д.) после рождения. В первую очередь это может быть актуально, но не обязательно, в том случае, когда младенец родился преждевременно.
В одном варианте осуществления композицию изобретения дают младенцу или ребенку младшего возраста в качестве композиции, добавочной по отношению к материнскому молоку. В некоторых вариантах осуществления изобретения младенец или ребенок младшего возраста получает материнское молоко в течение по меньшей мере первых 2 недель, первых 1, 2, 4 или 6 месяцев. В одном варианте осуществления питательную композицию изобретения дают младенцу или ребенку младшего возраста после такого периода питания материнским молоком или дают во время такого периода питания материнским молоком. В другом варианте осуществления изобретения композицию дают младенцу или ребенку младшего возраста в качестве единственной или основной питательной композиции в течение по меньшей мере одного периода времени, например после 1, 2 или 4-го месяца жизни, в течение по меньшей мере 1, 2, 4 или 6 месяцев.
В одном варианте осуществления питательная композиция изобретения является полной питательной композицией (удовлетворяющей все или большинство потребностей субъекта в питании). В другом варианте осуществления питательная композиция представляет собой добавку или обогатитель, предназначенные, например, для дополнения человеческого грудного молока или для дополнения детской смеси или смеси для прикармливаемых детей / смеси последующего уровня.
Примеры
Следующие примеры демонстрируют некоторые конкретные варианты осуществления композиции для применения в соответствии с настоящим изобретением. Примеры приводятся исключительно в целях иллюстрации и не должны рассматриваться в качестве ограничений настоящего изобретения.
Пример 1
Ниже в таблице 1 приведен пример состава питательной композиции (например, детской смеси) в соответствии с настоящим изобретением. Эта композиция приведена исключительно в качестве иллюстрации.
Таблица 1. Состав детской смеси согласно примеру 1
Питательные вещества
На 100 ккал
На литр
Энергетическая ценность (ккал)
100
670
Белок (г)
1,83
12,3
Жиры (г)
5,3
35,7
Линолевая кислота (г)
0,79
5,3
α-Линоленовая кислота (мг)
101
675
Лактоза (г)
11,2
74,7
Минеральные вещества (г)
0,37
2,5
Na (мг)
23
150
K (мг)
89
590
Cl (мг)
64
430
Ca (мг)
62
410
P (мг)
31
210
Mg (мг)
7
50
Mn (мкг)
8
50
Se (мкг)
2
13
Витамин A (мкг РЭ)
105
700
Витамин D (мкг)
1,5
10
Витамин E (мг ТЭ)
0,8
5,4
Витамин K1 (мкг)
8
54
Витамин С (мг)
10
67
Витамин В1 (мг)
0,07
0,47
Витамин В2 (мг)
0,15
1,0
Ниацин (мг)
1
6,7
Витамин В6 (мг)
0,075
0,50
Фолиевая кислота (мкг)
9
60
Пантотеновая кислота (мг)
0,45
3
Витамин B12 (мкг)
0,3
2
Биотин (мкг)
2,2
15
Холин (мг)
10
67
Fe (мг)
1,2
8
I (мкг)
15
100
Cu (мг)
0,06
0,4
Zn (мг)
0,75
5
Олигосахариды(ОГМ)
2FL (г)
0,15
1
LNnT (г)
0,075
0,5
Таблица 1. Пример состава питательной композиции (например, детской смеси) в соответствии с настоящим изобретением
Пример 2
Описание исследования
Три группы одновременно оплодотворенных самок крыс линии Спрег-Доули были приобретены в лабораториях Charles River. В течение последних 10 дней беременности у одной группы имелись ограничения на питание на уровне 60%, а их потомство подвергалось перекрестному выкармливанию у крыс, получавших нормальное питание. Вторая группа беременных самок получала нормальное питание, а их потомство подвергалось перекрестному выкармливанию среди той же группы матерей. Непосредственно после рождения (d = 2) рожденные детеныши крыс — участники эксперимента — были распределены в одну из следующих групп:
• нормальная группа (положительный контроль): потомство с нормальной массой тела, рожденное у матерей, не имевших ограничений, и вскармливаемое нормальным рационом питания без добавок;
• группа ЗВУР (отрицательный контроль; n = 20): крысы с ЗВУР, получавшие нормальный рацион питания после рождения;
• крысы с ЗВУР + ОГМ (тестовые группы): в ходе эксперимента они вскармливались своими матерями в течение 21 суток и получали добавку ОГМ (2FL, LNnT или смесь 2FL и LNnT). После отъема их вскармливали рационом, дополненным теми же ОГМ, см. подробности ниже. Были три различные группы:
- группа ЗВУР/2FL (n = 10): с добавлением только 2-FL;
- группа ЗВУР/LNnT (n = 10): с добавлением только LNnT; и
- группа ЗВУР/смесь ОГМ (n = 10): с добавлением LNnT и 2FL в массовом соотношении 1 : 2.
Всех детенышей крыс кормили с рождения (d = 1) до 57 дней (d = 57) на основании следующего протокола:
• d1–d6: все группы крыс вскармливались материнской особью (только материнским молоком);
• d7–d21: все крысы вскармливались материнской особью (только материнским молоком), но в тестовых группах также вводили через желудочный зонд 3 г/кг массы тела ОГМ:
- 3 г/кг массы тела 2FL для группы ЗВУР/2FL;
- 3 г/кг массы тела LNnT для группы ЗВУР/LNnT;
- 3 г/кг массы тела смеси LNnT и 2FL в массовом соотношении 1 : 2 для группы ЗВУР/смесь ОГМ;
• d22–d57: все крысы получали рацион питания, как подробно описано в таблице 2 ниже.
Таблица 2. Композиция рационов питания, получаемых различными группами от d22 до d57
Количество в рационе питания контрольной группы [%]
Количество в рационе питания группы 2FL [%]
Количество в рационе питания группы LNnT [%]
Количество в рационе питания группы 2FL и LNnT [%]
Кукурузный крахмал
53,4
53,4
53,4
53,4
Казеин
20
20
20
20
Сахароза
10
10
10
10
Соевое масло
7
7
7
7
Смесь минеральных веществ AIN-93-G*
3,5
3,5
3,5
3,5
Битартрат холина
0,25
0,25
0,25
0,25
L-цистин
0,3
0,3
0,3
0,3
Трет-бутилгидрохинон
0,0014
0,0014
0,0014
0,0014
Смесь витаминов AIN-93-VX*
1
1
1
1
Мальтодекстрин
4,5
0
0
0
2FL
0
4,5
0
3
LNnT
0
0
4,5
1,5
* от Research Diets, Inc
Крыс умерщвляли на 57-й день после 6-часового периода натощак и собирали образцы тонкого кишечника. Длину ворсинок измеряли в образце подвздошной кишки.
Из подвздошной кишки брали один образец размером 1 см (1 см в краниальном направлении от слепой кишки) и промывали PBS (Sigma D8537). Этот срез фиксировали и соответствующим образом обрабатывали для гистологического и морфометрического анализа.
Два последовательных среза фиксированной ткани толщиной 4 мкм вручную окрашивали гематоксилином и эозином для определения высоты ворсинок. Высота ворсинок была отснята методом световой микроскопии с помощью сухого объектива с увеличением 10x с использованием компьютеризированной системы анализа изображений Axion Vision (версия 4.8.2.0, Zeiss). Для определения средней длины ворсинок в двух разных сегментах измеряли по десять случайно выбранных ворсинок.
Выводы
Длина ворсинок, измеренная у каждой крысы, представлена на фиг. 1. Для каждой группы средняя длина ворсинок представлена горизонтальной линией. Как можно видеть, средняя длина ворсинок всех групп была сходной, за исключением группы, получавшей комбинацию 2FL и LNnT, у животных которой в подвздошной кишке были значительно более длинные ворсинки. Такое увеличение длины ворсинок связано с увеличением площади поверхности подвздошной кишки, которое обеспечивает детенышам крыс улучшенную переваривающую способность, в частности для расщепления жиров, белков и углеводов. Такому улучшенному перевариванию, в частности расщеплению жиров, способствует улучшенная кишечно-печеночная циркуляция, в частности кишечно-печеночная циркуляция солей желчных кислот, которая связана с увеличением площади поверхности тонкого кишечника, в частности подвздошной кишки.
Эти результаты свидетельствуют, что смесь 2FL и LNnT обеспечивала успешное увеличение длины ворсинок в подвздошной кишке крыс с задержкой роста (из-за недостаточного питания матерей). Ворсинки детенышей с задержкой роста, получавших рацион питания с 2FL и LNnT, были даже значительно длиннее, чем ворсинки детенышей, которые не сталкивались с задержкой внутриутробного роста и получали нормальный рацион питания.
Эти результаты также свидетельствуют о синергии между 2FL и LNnT, если принять во внимание, что ни 2FL, ни LNnT не обеспечивали статистически значимого эффекта при использовании по отдельности, тогда как статистически значимый эффект наблюдался при использовании комбинации обоих соединений.
Пример 3
Добавку для недоношенных младенцев готовят так, чтобы получить следующую суточную дозу:
- 0,034 г/кг массы тела в сутки LNnT; и
- 0,34 г/кг массы тела в сутки 2-FL.