Патоморфологические изменения и тучноклеточная реакция в иммуннокомпетентных органах цыплят после вакцинации

Ветеринария

ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ И ТУЧНОКЛЕТОЧНАЯ РЕАКЦИЯ В ИММУННОКОМПЕТЕНТНЫХ ОРГАНАХ ЦЫПЛЯТ ПОСЛЕ ВАКЦИНАЦИИ

Н.В. САДОВНИКОВ,

НИ. ЖЕНИХОВА,

М.В. СТОЛБИКОВА,

Уральская ГСХА, г. Екатеринбург

Ключевые слова: цыплята, тучные клетки, вакцинация, фабрициева сумка.

Для защиты людей от антропозоо-нозных заболеваний сейчас практикуется вакцинация птицы от таких болезней, как нью-кастла, марека, инфекционный бронхит. Но при вакцинации происходит не только образование иммунитета к данной болезни, но и нагрузка на иммунные органы, которая может вызвать выраженные деструктивные изменения в них, что в последующем спровоцирует развитие острых или хронических заболеваний, снижение яйценоскости и привесов, поэтому очень важно оценить влияние вакцин на организм.

Для исследования состояния органов брались здоровые цыплята: 6 голов суточного возраста, 5-дневного, 11- и 24-дневного возраста. Исследовалось общее морфологическое состояние органа при окраске гематоксилин-эозином и степень воспаления, регенерации и неоангиогенеза по реакции тучных клеток.

Задачи исследования

1. Оценить морфофункциональное состояние органов здоровых цыплят разных возрастных групп.

2. Оценить функциональную активность тучных клеток в различных органах, ее изменение с возрастом.

Исключительную роль в формировании иммунитета играет Фабрициева сумка птиц. В середине 60-х годов утвердилось мнение, что она выполняет роль центрального органа иммунитета, являясь поставщиком В-кле-токдля периферии. Были предприняты

Рис. 1. Кистозные процессы в тканях

даже попытки найти аналогичный орган у млекопитающих, исключая костный мозг. Действительно, фабрициева сумка является местом активного образования антителопродуцентов и имеет важное значение в иммунологической реактивности птиц.

В суточном возрасте Фабрициева сумка еще полностью не сформирована и в ней отмечается отечность тканей и гиперемия микроциркуляторного русла.

В пятидневном возрасте эпителий высокий, с четко выраженным рисунком, ровный. В Фабрициевой бурсе цыплят наблюдаются очаговые разрастания межфолликулярной соединительной ткани, которая инфильтрирована лейкоцитами, эозинофилами, макрофагами, лимфобластами и плазматическими клетками. У половины исследуемых цыплят этого возраста обнаружено скопление экссудата в полости сумки, катаральное воспаление и разреженное расположение лимфоцитов в некоторых фолликулах.

У цыплят в возрасте 11 дней мы наблюдали патологические изменения в Фабрициевой бурсе в виде очагового просветления центров фолликулов, не смотря на то, что фолликулы плотно прилегают друг к другу.

Также обнаружены очаговые кровоизлияния в фолликулах, кистозные процессы и разрыхление соединительной ткани. Соединительная ткань в фолликуле четко выражена виде - в узких полосок.

Рис. 2 Периваскулярные кровоизлияния, гиперемия сосудов

К 14-дневному возрасту, кроме появления кистозных полостей, происходит отек тканей и гиперплазия эпителия бурсы.

А к 27 дню отек тканей спадает, кровоизлияния рассасываются и гистологические изменения приближаются к норме.

Селезенка является биофильтром крови, имеет округлую или овальную форму и располагается на правой стороне желудка. Паренхима селезенки состоит из белой и красной пульпы. Красная пульпа у птиц, в отличие от млекопитающих, не участвует в кроветворении, а только депонирует форменные элементы крови. Что касается белой пульпы, то при антигенной стимуляции в ней происходит образование лимфоидных узелков и центров размножения в них.

Таким образом, селезенка у птиц выполняет иммунопоэтическую функцию. Селезенка является основным органом защиты организма от токсинов. Фильтруя кровь, она задерживает, фагоцитирует и иммобилизирует микробы, токсины и чужеродные для организма частицы, а также вырабатывает иммуноглобулины и вещества, стимулирующие клеточный фагоцитоз. Эти функции селезенка у птиц выполняет в 10-28 раз эффективнее печени.

В суточном возрасте в строении селезенки не обнаружено патологических изменений, оно соответствует полу и возрасту цыплят.

К возрасту 5 суток в подавляющем большинстве гистологических срезов структура селезенки начинает изменяться, появляется некоторая отечность тканей, периваскулярные кровоизлияния, застойная гиперемия сосудов.

В 11 суток периваскулярные отеки не пропадают, кровоизлияния частично рассасываются.

В возрасте 24 суток состояние органа нормализуется, у 80% цыплят из опытной группы следов патологических изменений в пульпе селезенки не остается, но в 96% появляется расширение подкапсулярного пространства.

При гистологическом исследовании двенадцатиперстной кишки у цыплят в суточном возрасте на слизистой обо-

Chickens, corpulent cells, vaccination, bursa Fabricius.

Таблица 1

Возраст\ кол-во ТК Фабрициева бурса Селезенка Кишечник Печень Поджелудочная

1 сут 15,03 ±3,03 8,02 ±1,02 12,8 ± 2,56 6,02 ±1,23 4,03 ± 0,65

5 сут 35,68 ± 7,9 12,1 ± 2,68 15,65 ±3,02 9,04 ± 1,86 6,5 ±1,23

11 сут 38,46 ± 7,73 15,56 ±3,25 14,85 ±2,85 9,06 ±1,87 6,4 ± 1,22

24 сут 20,4 ± 3,73 9,85 ± 1,85 12,05 ±2,65 7,26 ± 1,35 3,85 ± 0,56

\ЛОД -’-Ч,. '

Рис. 3. Увеличение количества тучных клеток на фоне обширного кистозного процесса в Фабрициевой бурсе

лочке регистрировали воспалительный процесс, который начинался катаром, затем переходил в гнойно-катаральный к 5- и 11-суточному возрасту. Также отмечается гиперплазия бокаловидных клеток, десквамация эпителия. Отмечалось углубление стромы ворсинок и активное разрастание соединительной ткани в слизистой и серозных оболочках, что свидетельствует о хрониза-ции процесса к 24-дневному возрасту, хотя серьезных дегенеративных изменений, как в более раннем возрасте, и тенденции к дальнейшему развитию воспалительных процессов уже не отмечается.

В печени птицы наблюдается кро-венаполненность сосудов, которая к 11-дневному возрасту переходит в ярко выраженную лейкоцитарную реакцию (в просвете крупных кровеносных сосудов и капиллярном русле). Прослеживается активация лимфоидных фолликулов. Выявляется полиморфноклеточная инфильтрация в системе триады печени.

При исследовании поджелудочной железы пик дегенеративных изменений также пришелся на 5 - 11 сутки развития цыплят. Отмечалась гиперемия микроциркуляторного русла, разрастание периваскулярной соединительной ткани, и были обнаружены тромбы в крупных сосудах.

К 24-дневному возрасту исчезала гиперемия, но разрастание соединительной ткани сохранялось.

Для наилучшего показателя воспаления в тканях, изучалась реакция тучных клеток. Тучные клетки - один из основных источников клеточных медиаторов воспаления. Если лизосомы клеток сравнивают со стартовыми площадками воспаления, то гранулы тучных клеток называют двигателями этого процесса.

Схема 1

По своим свойствам тучные клетки мультифункциональны, и их основными свойствами являются: дегрануляция с последующим выделением медиаторов и цитокинов, фагоцитоз, цитотоксичность, регуляция ангиогенеза, презентация антигена, участие в развитии и дифференцировке нервных клеток, ремоделирование тканей.

Тучные клетки рассматриваются как регуляторы тканевого гомеостаза малого радиуса действия. Эти функции реализуются благодаря продукции ими ряда биологически активных веществ, которые можно подразделить на две группы:

- биологически активные вещества, постоянно присутствующие в клетке;

- образующиеся вновь в период сенсибилизации.

К первой группе относят гепарин, серотонин, гистамин, эозинофильный хемотаксический фактор анафилаксии.

Ко второй группе веществ, которые накапливаются в период сенсибилизации и выделяются при взаимодействии тучных клеток с антигеном, относятся: медленно реагирующая

субстанция анафилаксии, простаглан-дины, фактор, активирующий тромбоциты, нейтрофильный хемотаксический фактор анафилаксии.

Из тучных клеток при дегрануляции выделяются также лизосомальные протеолитические ферменты, стимулирующие коллагеназную активность, способствующие образованию и разрушению брадикинина. Если эти вещества выделяются локально, развивается аллергическое воспаление. При системном характере дегрануляции тучных клеток и базофильных грану-лоцитов крови развивается анафилактический шок.

В нормальных тканях тучные клет-

Ветеринария

ки располагаются преимущественно вокруг мелких артериальных, лимфатических сосудов, нервных волокон, а также в коже, серозных полостях и других тканях. Эти клетки выявляются в соединительной ткани, в том числе в строме органов, в слизистых оболочках, коже синовиальной ткани.

Тучные клетки гетерогенны и по признакам:

1. Локализация;

2. Содержимое гранул;

3. Ответ на различные стимулы и фармакологические агенты, например, тучные клетки кожи более чувствительны к действию различных нейропептидов и содержат большее количество химазы в гранулах, чем тучные клетки легких;

4. Продукция цитокинов (различия определяются локализацией и характером стимула);

5. Цитотоксичность, которая также зависит от локализации. Например, тучные клетки соединительной ткани проявляют максимальную цитотоксичность в отношении кожной фибросар-комы, рака почки. Уровень цитотоксичности зависит от соотношения клетка

- мишень;

6. Размер гранул, форма клеток, число рецепторов для !дЕ и других лигандов;

5. Морфологический и ультраструк-турный признаки.

Фенотип тучных клеток может изменяться в ответ на изменение микроокружения, что позволяет говорить о фенотипической пластичности тучных клеток, которая обеспечивает им возможность реагирования на особенности микроокружения при различных заболеваниях, а также при различных формах иммунологического ответа. Это делает понятным, почему конечный фенотип тучных клеток определяется комплексом взаимодействующих систем между сигналами, индуцируемыми 8СР и цитокинами, продуцируемыми локально. Вполне вероятно предположение, что указанные системы взаимодействуют с компонентами соединительной ткани.

Эта гетерогенность структуры гранул зависит от степени дифференци-ровки лаброцитов, их функционального состояния и цикла секреции.

Большая часть цитоплазмы зрелых ТК занята гранулами разной величины от 0,1-0,3 до 0,9-1,2 мкм2. Гранулы, в зависимости от степени зрелости, электронно-плотные или более светлые и гомогенные, окружены мембраной. Плазмолемма образует небольшие пальцевидные выросты, часто контактирующие с близлежащими клетками.

В процессе дегрануляции вначале вытесняются более крупные и зрелые гранулы, лежащие на периферии, затем мелкие, малодифференцированные, расположенные в глубине клетки. Диаметр наиболее крупных гранул ТК может колебаться от 1,2 до 1,4 мкм2.

Ветеринария

Только в активно дегранулирующих клетках наблюдается более выраженный полиморфизм секреторных гранул. В них встречаются гранулы диаметром 0,9-0,5 мкм2 и даже 0,3-0,1 мкм2.

Процессу дегрануляции ТК предшествуют ультраструктурные перестройки внутри клетки и особенности их зависят от вида экскреции и органной дислокации ТК.

Для исследования изменения реакции органа с возрастом на введение вакцины мы подсчитали количество тучных клеток, количеств недеграну-лированных и дегранулированных тучных клеток в 10 полях зрения в пересчете на 1 мм2. Рассчитывали сред-

среднее квадратичное отклонение, доверительный интервал, коэффициент достоверности студента и доверительную вероятность.

Как видно из приведенной схемы (Схема 1), увеличение количества тучных клеток между 5 и 11 сутками развития происходит во всех исследуемых органах, но наибольшее увеличение происходит в Фабрициевой бурсе (Рис.З).

Патологические изменения в структуре органов пищеварения в современных условиях промышленного выращивания птицы отмечены многими исследователями (А.Г Маннопалова, 2002 г.; Л И. Дроздова, 2003 г.). Это связано с неполноценностью рацио-

нов, качественных характеристик кормов, воздействием лекарственных препаратов, поэтому не может оцениваться как самостоятельный показатель, но в совокупности с изменениями в других органах, особенно таких как фабрициева бурса, указывает на общую воспалительно-дегенератив-ную реакцию органов. Как показывают проведенные исследования, несмотря на то, что состояние органов уже к 27-дневному возрасту восстанавливается и приближается к норме. В более раннем возрасте деструктивные процессы, происходящие в ней значительны, что не может не отразиться на становлении иммунитета и резистентности цыплят.

нее значение счетного признака, его

Литература

Автандилов ГГ. Медицинская морфометрия: руководство. - М. : Медицина, 1990. - 384 с.

Акаевский А.И., Юдичев Ю.Ф., Селезнев С.Б. Анатомия домашних животных. - М.: Аквариум, 2005. - 640 с. Бережная Н.М., Сепиашвилли Р.И. Тучные клетки и гистамин: физиологическая роль // Аллергология и иммунология,

- №3. - С. 29-35.

Берсенева Е.В. Влияние препарата «Биоспорин ВЕ» на прирост и сохранность молодняка птицы // Молодежь и наука, -С. 124- 126.

Садовников Н.В., Байматов В.Н., Юшков Б.Г. Иммунопатофизиология животных. - Екатеринбург: Уральское изд-во,

- 253 с. ----

1.

2.

3.

2003.

4.

2002.

5.

2007.

КАРИОПАТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ БЕЛКОВЫХ ПРОДУКТОВ НУОАТЮЕ13А ТАЕМАРОШУПБ НА СОМАТИЧЕСКИЕ И ПОЛОВЫЕ КЛЕТКИ ЛАБОРАТОРНЫХ

ЖИВОТНЫХ

Т.Н. СИВКОВА,

аспирант, Пермская ГСХА им. Д.Н. Прянишникова, г. Пермь

Ключевые слова: гельминтоз, половые клетки, соматические клетки, лабораторные животные, белок гидатигеры.

В последние годы активно идет изучение патологии при гельминтозах и способов ее коррекции. Известно, что паразит оказывает на организм хозяина не только механическое, трофическое, но и аллергическое и токсическое воздействие. Токсины гельминтов угнетают деятельность центральной нервной системы, сердечно-сосудистой и пищеварительной систем.

Немногочисленными исследованиями было установлено, что гельминты, кроме того, вызывают патологические изменения ядерных структур клеток человека и животных [4, 5, 8, 9]. Выяснилось, что кариопатические изменения происходят не только в результате экспериментального или спонтанного заражения, но и при иммунизации метаболитами паразитов [3, 10],

Повреждение ядер соматических и половых клеток может быть связано с непосредственным воздействием продуктов паразитов на геном клеток, активацией свободно-радикальных процессов в организме хозяина и неспецифическим ответом его на внедрение

чужеродных субстанций [1].

По данным многих исследователей, наиболее распространенным цестодо-зом среди городской популяции кошек является гидатигероз, вызываемый паразитированием Нус)айдега (аеп1а(Ъггшз [2, 6, 7], В связи с этим, представляет интерес изучение воздействия белковых продуктов на деление клеток организма хозяина и в первую очередь -красного костного мозга и семенников.

Материалы и методы. Стробилу ЬИвеггёафгти от спонтанно инвазиро-ванной кошки тщательно многократно промывали проточной водой, обрабатывали растворами антибиотиков, стерильным физиологическим раствором. После многократного замораживания и оттаивания стробилу измельчали ножницами, гомогенизировали, заливали стерильным забуференным физиологическим раствором (pH 7,2) и экстрагировали при температуре + 40°С в течение 24 часов. В полученном экстракте измеряли содержание белка, ферментов и хранили в замороженном состоянии при температуре -100°С.

Для изучения кариопатического действия белковых продуктов проводили однократную внутрибрюшинную иммунизацию нелинейных белых мышей - самцов массой 18-22 г, которым вводили приготовленный экстракт в дозе 100 мкг. Контрольной группе животных внутрибрюшинно вводили 0,1мл забуференного физиологического раствора. Убой мышей проводили через 4, 12, 24, 48 и 72 часа после иммунизации методом цервикальной дислокации.

Из красного костного мозга грудины и семенников готовили мазки-отпе-чатки, которые окрашивали азур-эози-ном по Романовскому. При микроскопи-ровании подсчитывали количество делящихся клеток, учитывали форму, размеры и окраску ядер. Отмечали количество нарушений митоза в опытных и контрольных группах животных.

Результаты, В результате экстрагирования стробилы Н.іаепіаґогтіз был получен раствор PH 7,0, с содержанием белка - 14,7 мг/мл и щелочной фос-фатазы - 540,4 Ед/л.

Общее состояние контрольных и

Helminthosis, sexual cells, somatic cells, laboratory animals, fiber Hydatigera.