Современные подходы к экспертной оценке результатов доклинических и клинических исследований препаратов иммуноглобулинов человека нормального для подкожного введения

«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017

Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya

в концентрациях от 128 до 0,03 мкг/мл. За МИК принимали наименьшую концентрацию антибиотика, подавляющую видимый рост микроорганизма. Использовали следующие контрольные штаммы бактерий: Pseudomonas aeruginosa ATCC № 27853 F-51, Staphylococcus aureus ATCC № 25923 F-49, Escherichia coli ATCC № 25922 F-50. Статистическая обработка данных проводилась с использованием программы Statistica 7.0 (StatSoft, USA).

Результаты и обсуждение. В результате механохими-ческой обработки смеси антибиотиков и декстрана ее частицы уменьшались до размеров наночастиц (40-100 нм) и формировали рыхлые агрегаты размером 5-50 мкм. Доля частиц антибиотиков наноразмерного диапазона после механохимической модификации составляла 25%.

Нативный и механически модифицированный дек-стран 40 кД не обладал ни антибактериальной, ни имму-номодулирующей активностью. Оценка пролиферации МНК выявила увеличение спонтанной пролиферации МНК под действием модифицированного цефоперазо-на с 291(244; 337) до 1302(1192; 1401) имп/мин, p < 0,05, (Ме (25%; 75%), тогда как цефуроксим и цефотаксим не изменяли данного параметра. Механическая модификация цефоперазона и цефотаксима приводила также к повышению их антибактериальной активности, о чем свидетельствовало уменьшение МИК с 32,0 мкг/мл до 8,0 мкг/мл у цефотаксима и с 64,0 до 4,0 мкг/мл у цефо-перазона в отношении изученных штаммов микроорганизмов in vitro. Предполагаемым механизмом повышения эффективности модифицированных антибиотиков является увеличение их биодоступности за счет большей растворимости, стабильности во внешней среде и более равномерного распределения внутри клетки.

Заключение. Механохимическая модификация цефоперазона с сорбцией на декстране 40кД приводит к увеличению его иммуномодулирующих свойств и антибактериальной активности in vitro, на основании изменения параметров спонтанной пролиферации иммунокомпе-тентных клеток и минимальной ингибирующей концентрации антибиотика, подавляющей рост контрольных штаммов микроорганизмов.

ВЛИЯНИЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ СУБСТАНЦИИ ИЗ СЫРЬЯ COLURIA GEOIDES (ROSACEAE) НА ПРОЛИФЕРАЦИЮ ИММУННЫХ КЛЕТОК

Дутова С.В., Карпова М.Р.

Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова, Абакан, Россия

Сибирский государственный медицинский университет, Томск, Россия

В качестве одного из основных направлений иммуно-стимуляции и иммуномодуляции рассматривается влияние на экспансию иммунокомпетентных клеток (Караулов А.В., Калюжин О.В., 2013). Описана корреляция между их пролиферацией и эффективностью иммунного ответа (Добродеева Л.К. и соавт., 2014).

В процессе доклинического изучения иммунотроп-ных свойств эфирномасличных растений сибирской флоры была разработана фармацевтическая субстанция (субстанция Cg) из сырья C. geoides, обладающая иммуностимулирующим и иммунокорригирующим эффектом.

Исследуемую субстанцию (Cg) получали методом перколяции 40% этанолом, стандартизовали по выхо-

ду экстрактивных веществ (2,83±0,052%) и содержанию т-кумаровой кислоты (не менее 8,5%). В качестве препарата сравнения использовали настойку эхинацеи пурпурной (Е). Экспериментальную модель иммуно-депрессии у мышей создавали однократным введением (вн/бр.) циклофосфана в максимально переносимой дозе (250 мг/кг).

Курсовое введение (5 дней) мышам-самкам линии CBA/CaLac субстанции Cg в дозе 50 мг/кг приводило к достоверному увеличению абсолютного числа лейкоцитов в образцах периферической крови в 1,2 раза (7,20 (6,80^7,95) х 109/л) в сравнении с контролем (6,10 (4,25^6,70) х 109/л). В группе животных, получавших препарат сравнения, — в 1,8 раза (10,83 (8,73^13,65) х 109/л). Число спленоцитов селезенки не изменялось.

В условиях экспериментального иммунодефицита под влиянием субстанции Cg отмечали достоверное увеличение массы селезенки в 1,3 раза (до 0,097 (0,091^0,120) г) в сравнении с контролем (0,074 (0,066^0,097) г); а также числа спленоцитов селезенки в 1,7 раза (до 117,63 (100,56^119,50) х 106 /орган) в сравнении с контролем (69,25 (66,50^85,00) х 106 /орган). Причем число спленоцитов селезенки под влиянием субстанции Cg достоверно не отличалось от показателя животных контрольной группы без иммунодефицита (126,15 (101,30^180,15) х 106/орган). То есть, субстанция Cg оказывала иммуно-корригирующее действие при иммунодефиците, направленное на пролиферацию иммунных клеток. Введение животным настойки эхинацеи не оказало достоверного влияния на оцениваемые показатели.

Подобный эффект описан для водно-спиртового экстракта Эхиносол, который в гораздо большей дозе (300 мг/кг) способствует достоверному увеличению в пе-ритонеальном экссудате животных количества моноцитов (на 32%) и лимфоцитов (на 83%) (Исайкина Н.В. и др., 2008). Выявленные эффекты исследуемой субстанции Cg проявляются в гораздо меньшей дозе.

СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ЭКСПЕРТНОЙ ОЦЕНКЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ДОКЛИНИЧЕСКИХ И КЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ПРЕПАРАТОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ЧЕЛОВЕКА НОРМАЛЬНОГО ДЛЯ ПОДКОЖНОГО ВВЕДЕНИЯ

Иванов В.Б., Кудашева Э.Ю., Мосягин В.Д., Олефир Ю.В., Бондарев В.П., Борисевич И.В.

ФГБУ«Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия

Потребность в препаратах иммуноглобулинов человека нормального (ИГЧН) в нашей стране и за рубежом остается высокой и постоянно возрастает. Препараты ИГЧН входят в перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов, применяются в различных областях практической медицины при первичных и вторичных иммунодефицитах, аутоиммунных и инфекционных заболеваниях.

В Российской Федерации зарегистрированы 14 препаратов ИГЧН для внутривенного введения (из них 9 зарубежного производства), в том числе 1 зарубежный препарат ИГЧН (Гамунекс-С) в лекарственной форме «раствор для инфузий», предназначенный для внутривенного и подкожного введения. Подкожный путь введения лекарственного

2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue

Иммуномодуляторы эндогенной и экзогенной природы Immunomodulators of endogenous and exogenous nature

препарата используется только при лечении первичного гуморального иммунодефицита у взрослых и детей (до 2 лет) на основании проведенных доклинических и клинических исследований. Подкожные инфузии обычно выполняются еженедельно, тогда как внутривенные — каждые 3-4 недели. Переход к подкожным инфузиям осуществляется после предшествующих внутривенных инфузий, исходя из которых рассчитывается стартовая доза. Препараты ИГЧН для подкожного введения имеют ряд преимуществ по сравнению с препаратами ИГЧН для внутривенного введения: возможность самостоятельного введения на дому, при затрудненном венозном доступе, при развитии системных нежелательных явлений (головная боль, повышение температуры, озноб, миалгии), большая независимость, лучший контроль и улучшение качества жизни за счет терапии на дому, методика подкожного введения легко осваивается пациентами.

Имеющиеся в настоящее время в России документы, содержащие требования к проведению доклинических и клинических исследований препаратов ИГЧН, в значительной степени устарели и не соответствуют современным руководствам Европейского агентства по лекарственным средствам (ЕМА), которые берутся за основу при разработке нормативных правовых актов в сфере обращения лекарственных средств в рамках Евразийского экономического союза (ЕАЭС). Разработка программ доклинических и клинических исследований ИГЧН для подкожного введения входит в компетенцию заявителей, которые могут использовать требования руководств ЕМА, в части, не противоречащей требованиям Федерального закона от 12.04.2010 № 61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств»: необходимо представлять отчеты о собственных доклинических и клинических исследованиях, проведению клинических исследований на детях должно предшествовать законченное поэтапное исследование I и III фаз на взрослых пациентах. Качество препарата должно соответствовать требованиям ФС.3.3.2.0008.15 «Иммуноглобулин человека нормальный для внутривенного введения».

В доклинические исследования рекомендуется включить изучение острой и субхронической токсичности, местно-раздражающего действия и аллергенности. В качестве препарата сравнения может быть использован препарат ИГЧН, зарегистрированный в Российской Федерации.

При регистрации новых отечественных препаратов ИГЧН для подкожного введения рекомендуется проведение клинического исследования I фазы на здоровых добровольцах в целях установления безопасности и переносимости. В программу предрегистрационного клинического изучения препарата рекомендуется также включить открытое клиническое исследование III фазы у взрослых пациентов с первичным иммунодефицитом в течение 12 месяцев с оценкой эффективности, безопасности, фар-макокинетических параметров и открытое клиническое исследование III фазы у детей с первичным иммунодефицитом. При разработке дизайна исследования, выборе первичных и вторичных конечных точек эффективности рекомендуется использовать подходы, изложенные в руководстве ЕМА «Guideline on the clinical investigation of human normal immunoglobulin for subcutaneous and/or intramuscular administration (SCIg/IMIg):EMA/CHMP/ BPWP/410415/2011 rev 1».

При государственной регистрации препаратов ИГЧН заявитель обязан также представить план управления рисками, содержащий подробное описание мероприятий по фармаконадзору, направленных на выявление, оценку и предотвращение или минимизацию рисков, связанных

с лекарственными препаратами, включая оценку эффективности данных мероприятий.

ПЕРСПЕКТИВЫ ТЕРАПИИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РЕЦЕПТОРНОГО АНТАГОНИСТА ИНТЕРЛЕЙКИНА-1

Ищенко А.М.1, Шевцов М.А.2, Щекина Е.Г.3

1ФГУП«Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА России, Санкт-Петербург, Россия

2 Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия

3 Национальный фармацевтический факультет, Харьков, Украина

Введение. Нерегулируемое развитие воспаления является причиной возникновения большого числа серьезных патологий. Решающую роль в регуляции процессов воспаления играют цитокины, в частности интерлейкины-1, которые, как установлено экспериментально, являются ключевыми медиаторами воспаления, приводящего к тяжелым заболеваниям иммунной и центральной нервной систем организма. Положительные терапевтические эффекты при лечении воспалительных заболеваний могут быть достигнуты блокированием интерлейкина-1 с использованием рекомбинантного рецепторного антагониста интерлейкина-1 (IL-1ra).

Цель и задачи. Цель работы заключалась в изучении терапевтического действия IL-1ra на моделях ряда заболеваний, индуцированных у грызунов.

Материалы и методы. 1. Модель гиперурикемии вызывали внутрибрюшинным введением оксоната калия в дозе 250 мг/кг. IL-1ra вводили в дозе 3 мг/кг и через 2 ч отбирали пробы крови из сосудов кончика хвоста. Ги-поурикемическую активность оценивали по уровню мочевой кислоты (МК) в крови и моче.

2. Модель гиперлипидемии вызывали внутрибрюшин-ным введением холестерина в дозе 0,3 мг/кг и 5000 МЕ витамина D с кормом в течение 3 недель. Уровень гиперлипидемии оценивали по показателям: масса тела, массовые коэффциенты сердца (МКС) и печени (МКП), уровень общих липидов (ОЛ), холестерина (ХС), три-глицеридов (ТГ), ЛПНП и ЛНВП, уровень АсАТ и АлАТ в крови; антиоксидантную активность — по содержанию ТБК-Р и ВГ в гомогенате печени.

3. Анксиолитическую активность IL-1ra изучали в тестах приподнятого крестообразного лабиринта и открытого поля, а также на модели резерпиновой депрессии. IL-RA вводили подкожно в дозах 5 мг/кг и 15 мг/кг. В качестве препаратов сравнения использовали анксиолитик диазепам и имипрамим соответственно. Регистрировали уровень тревожности, локомоторную и исследовательскую активности, гипотермию и блефароптоз.

4. Влияние IL-1ra на память изучали в сопоставлении с таковым пирацетама в тесте условной реакции пасивно-го избегания (УРПИ) на модели амнезии, вызванной вну-трибрюшинным введением скополамина в дозе 1,5 мг/кг.

5. Модель церебральной эдемы выполнена на крысах Вистар (200-300 г), которым стереотактически под наркозом вводили клетки глиомы С6. IL-1ra вводили в/в в дозе 50 мг/кг.

6. Противосудорожную активность IL-1ra изучали на модели каразоловых судорог.

Результаты и заключение. 1. Показано, что противо-подагрическое действие IL-1ra складывается из гипоу-рикемического, урикозурического, противовоспалитель-