ПОЛУЧЕНИЕ КОМПОЗИЦИИ КЛЮКВЕННЫХ ГРАНУЛ С УСТОЙЧИВЫМ СОДЕРЖАНИЕМ ПРОАНТОЦИАНИДИНОВ
PRODUCING CRANBERRY GRANULE COMPOSITION WITH SUSTAINABLE CONTENT OF PROANTHOCYANIDINS

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к области получения и стабилизации натуральных экстрактов.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Клюква традиционно используется для профилактики инфекций мочевыводящих путей (ИМП), и в последние годы быстро распространилось употребление клюквы в качестве пищевой добавки в различных формах, в экстрактах или соках.
Vaccinium macrocarpon Aiton
E.coli
Возникло предположение, что клюква () может играть роль в ингибировании адгезии  к эпителиальным клеткам мочевыводящих путей, и, таким образом, применяться в качестве вспомогательного лечения при антибиотикотерапии или в качестве профилактического средства при ИМП.
in vitro
exvivo
E.coli
P. fimbriae
Агентство Франции по продовольствию, окружающей среде и охране труда и производственной безопасности 15 сентября 2010 г. опубликовало внутреннюю заявку на оценку потенциального действия клюквы на внебольничную инфекцию мочевыводящих путей. Эта оценка, проведенная совместно с Агентством Франции по безопасности продуктов для здоровья (AFSSAPS), в конечном итоге привела к следующему выводу: «Относительно данных, полученных в исследованиях  и , ANSES считает, что было продемонстрировано действие содержащихся в клюкве проантоцианидинов (ПАЦ) на адгезию  к эпителиальным клеткам мочевыводящих путей посредством ».
Вместе с тем, данные были сочтены недостаточными для вывода о наличии у клюквы профилактического эффекта в отношении ИМП.
На самом деле, несмотря на то, что EFSA не удалось подтвердить «причинно-следственную» связь между профилактическим действием в отношении инфекций мочевыводящих путей (EFSA Journal 2014; 12 (5): 3657) и регулярным употреблением клюквенного продукта (CranMax)), в ряде публикаций сообщается, что различные полученные из клюквы продукты сокращают рецидивирование ИМП и прием антибиотиков у пожилых женщин, и облегчают симптомы мочевыводящих путей во время лучевой терапии рака предстательной железы.
Представлены опубликованные результаты двух европейских исследований, в которых изучались полученные из различных натуральных экстрактов продукты. Выводы обоих исследований указывают на наиболее важную проблему в определении биологического действия клюквы: отсутствие стандартизированного измерения содержания ПАЦ в различных доступных на рынке клюквенных продуктах.
Положительным фактом, согласно французскому отчету, является отсутствие каких-либо проблем безопасности, связанных с употреблением клюквы среди населения в целом, за исключением людей, склонных к образованию в почках оксалатных камней.
E.coli
В любом случае, несмотря на продолжающееся обсуждение свойств клюквенного сока и клюквенных экстрактов, стало очевидным, что проантоцианидины ингибируют адгезию  к эпителиальным клеткам мочевыводящих путей, что, в свою очередь, оказывает профилактическое действие на ИМП.
Вместе с тем, еще необходимо преодолеть технические проблемы, указанные в ссылках выше, и, в более общем плане, отмеченные в данной области, путем принятия:
- правильной дозировки исходного содержания ПАЦ, что является ключевым и предварительным условием для любой оценки биологической активности или клинического требования, как четко указывает French Agency and European Opinion,
- способа производства, который предохраняет (от окисления) и сохраняет исходное содержание ПАЦ.
В WO 2012/123491 и US 2005/0158381 раскрыты ПАЦ в гастрорезистентных и шипучих формах, соответственно, но не рассмотрены указанные проблемы. К тому же, в этих патентах не раскрыты ни способ производства, ни стабильность содержания ПАЦ после получения и/или во время хранения.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к двухстадийному способу гранулирования в псевдоожиженном слое для получения клюквенных гранул с покрытием, и в указанном способе дозированные клюквенные экстракты, предпочтительно в комбинации с дополнительными ингредиентами и/или эксципиентами (а именно, с пребиотиками, такими как арабиногалактан, и/или с веществами, предотвращающими слеживание, такими как диоксид кремния), сначала гранулируют с натуральным соком, а затем наносят вещество для покрытия, при этом вещество для покрытия предпочтительно представляет собой ксантановую камедь.
Дополнительные ингредиенты и/или эксципиенты предпочтительно выбраны из следующего: пребиотики, такие как углеводы с короткой цепьюиз молекул фруктозы, то есть фруктоолигосахариды (ФОС), такие как арабиногалактан, предотвращающие слеживание вещества, выбранные из группы, состоящей из диоксида кремния, силиката кальция, силиката магния, талька и фосфата кальция. Кроме того, перед гранулированием в псевдоожиженном слое можно добавлять подсластители и регуляторы кислотности.
В гранулах с покрытием содержание ПАЦ должно превышать 2% (вес/вес) и предпочтительно составляет от 2 до 5%, более предпочтительно около 2,77%, при этом содержание ПАЦ является довольно стабильным с течением времени.
Гранулы с покрытием можно дополнительно смешивать с кислотонеустойчивыми веществами, такими как пробиотики.
Предпочтительная конечная композиция включает следующее: арабиногалактан (пребиотическое вещество в количестве от 50 до 90%, более предпочтительно от 60 до 85%, наиболее предпочтительно от 70 до 80%), диоксид кремния (противоадгезивное вещество в количестве от 2 до 10%, более предпочтительно от 3 до 8%, наиболее предпочтительно от 4 до 6%), клюквенные экстракты, клюквенный сок и ксантановую камедь.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
Фигура 1. Химическая структура клюквенных проантоцианидинов типа А2 и В2.
Фигура 2. Покрытые оболочкой клюквенные экстракты по изобретению (А) или коммерчески доступные (В).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Vaccinium macrocarpon Aiton
Настоящее изобретение относится к получению путем гранулирования в псевдоожиженном слое покрытых оболочкой клюквенных гранул со стабильным содержанием ПАЦ (проантоцианидинов) из натуральных экстрактов клюквы (), которые предпочтительно находятся в комбинации с другими ингредиентами и/или эксципиентами, выбранными из группы, состоящей из следующего: пребиотик, такой как углеводы с короткой цепью из молекул фруктозы, то есть фруктоолигосахариды (ФОС) или арабиногалактан, и предотвращающие слеживание вещества, такие как диоксид кремния, силикат кальция, силикат магния, тальк и фосфат кальция, и на упомянутые гранулы затем наносят вещество для покрытия.
Дополнительно, перед гранулированием в псевдоожиженном слое можно добавлять подсластители и/или регуляторы кислотности.
Этот способ осуществляется в грануляторе с псевдоожиженным слоем и включает первую стадию гранулирования, в ходе которого подходящим образом дозированный порошок клюквенного экстракта, предпочтительно в комбинации с другими ингредиентами (таким какарабиногалактан, предотвращающее слеживание вещество, например, диоксид кремния), подвергают гранулированию способом распылительной сушки с водным раствором, и последующую вторую стадию нанесения покрывающего вещества.
Такая технология позволяет получать покрытые оболочкой гранулы клюквенных экстрактов, которые могут существовать совместно с кислотонеустойчивыми продуктами, то есть, с пробиотическими веществами, проявляя повышенную стабильность и повышенную жизнеспособность пробиотического вещества в течение довольно длительного времени.
Дополнительно, следует отметить, что способ с псевдоожиженным слоем, который обычно считается неподходящим для склонных к окислению соединений, удивительным образом позволяет сохранять содержание ПАЦ неизменным после завершения манипуляций, и стабильным в течение по меньшей мере 18 месяцев, более предпочтительно, в течение по меньшей мере 24 месяцев.
Проантоцианидин представляет собой олигомеры или полимеры катехинов и эпикатехинов (наиболее распространенные виды) и галлатехелина и эпигаллокатехинагаллата (менее распространенные виды), и относится к широкой категории антиоксидантных соединений.
Структура основных мономеров, представленных в проантоцианидинах клюквы, показана на фигуре 1. Эти мономеры, связанные, соответственно, посредством связей 4β -> 6 (или 4β -> 8) или 2β -> O -> 7 (или 2β -> O -> 5), образуют проантоцианидины типа B или типа A. Наиболее часто в клюкве встречаются проантоцианидины типа А (51-65% от общего содержания ПАЦ), которые, по-видимому, в основном отвечают за свойства ингибирования адгезии бактерий (Howell AB et.al. Phytochemistry 66: 2281-2291 (2005)).
Vaccinium macrocarpon Aiton
Таким образом, первым фактором, который необходимо оценить при получении экстрактов с заявляемым биологическим действием, является достоверность источника экстракта клюквы. Необходимо использовать экстракты, полученные из 100% североамериканской клюквы (); вторым решающим фактором является подтверждение содержания ПАЦ в исходном материале, которое необходимо соответствующим образом дозировать для обеспечения в конечной форме суточной дозы ПАЦ, соответствующей по меньшей мере 36 мг/на дозу. Наконец, третий решающий фактор заключается в применении способа производства для получения конечного дозированного препарата, при котором остается неизменным исходное содержание ПАЦ в натуральных экстрактах клюквы.
Ribes
Vitis
Конечно, чрезвычайно важно удостоверенное происхождение, наряду со способом, сохраняющим исходное содержание ПАЦ, поскольку в большинстве обычно применяемых для дозировки ПАЦ способов отсутствует возможность различать типы ПАЦ и идентифицировать ПАЦ, полученные из растений других видов, таких как смородина (), виноград () и т. д., которые не наделены такими же защитными свойствами и потенциально могут быть использованы.
Как сказано выше, способ получения этих экстрактов имеет решающее значение; проантоцианидины (ПАЦ) являются мощными антиоксидантными молекулами, которые становятся субстратами для окисления и тем самым выполняют свою функцию. Следовательно, для получения хорошего конечного продукта недостаточно удостоверить происхождение исходного материала, если сам способ не оптимизирован для поддержания исходного содержания ПАЦ в природной неокисленной форме.
Согласно способу по изобретению, подходящую смесь сертифицированных и отобранных клюквенных экстрактов (отобранных и дозированных каждый раз перед каждым серийным производством с целью достижения предполагаемого содержания ПАЦ и требуемых органолептических свойств после приготовления и аликвотирования в суточной дозе), предпочтительно объединяют с другими эксципиентами и/или ингредиентами, такими как пребиотические вещества, предпочтительно арабиногалактан, предотвращающие слеживание вещества, предпочтительно диоксид кремния, и затем гранулируют с водным раствором, предпочтительно, с натуральным соком или, более предпочтительно, с разбавленным клюквенным соком.
Такой сок обычно поставляется в виде концентрата, который разводят водой до плотности, подходящей для распыления устройством с псевдоожиженным слоем. Обычно эта плотность составляет от 15 до 25 °Bx.
Было обнаружено, что добавление натурального клюквенного сока придает экстрактам чрезвычайно приятный вкус и аромат. Кроме того, при этом смесь получает не только дополнительное содержание ПАЦ, но также и другие вещества, которые, как предполагается, синергетически усиливают их действие, например, органические кислоты, типичные для клюквенного сока, включающие хинную кислоту, а также яблочную и лимонную кислоты.
Содержащаяся в ягодах и соке фракция органических кислот, которая, напротив, отсутствует в очищенных клюквенных экстрактах, особенно важна для действия ингибирования адгезии к эпителию этиологических агентов, отвечающих за инфекции мочевыводящих путей.
После гранулирования с натуральным соком на гранулы распыляют вещество для покрытия.
Вещества для покрытия известны в данной области и выбраны из группы, состоящей из ксантановой камеди, аравийской камеди, карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ) и производных целлюлозы, шеллака, пектинов, поливинилпирролидона (ПВП) и гидроксипропилметилцеллюлозы (ГПМЦ). Ксантановая камедь является особенно предпочтительной: ее добавляют для покрытия в предпочтительной концентрации от 0,001 до 1% вес/вес.
Альтернативные вещества для покрытия представляют собой растительные смолы и/или растительные желатины. Растительная камедь и/или растительный желатин предпочтительно выбраны из группы, включающей таннат или желатина таннат, альгинат, ксилоглюкан или ксилогель, гуаровую камедь, камедь тары, акацию, рожковое дерево, овес, бамбуковое волокно, волокна цитрусовых и глюкоманнаны.
Lactobacillus
После нанесения покрытия гранулированный продукт сушат в течение нескольких минут при определенной температуре, при этом температура продукта никогда не должна превышать 45 °С. Для этого устанавливают температуру на входе гранулятора с псевдоожиженным слоем в диапазоне от 50 до 65 °C, более предпочтительно от 55 до 63 °C. Вместе с тем, специалист в данной области может регулировать установочные показатели в устройстве для достижения подходящей температуры продукта и для получения гранулированного продукта в течение нескольких минут. После остывания продукта при необходимости добавляется пробиотик. Пробиотические вещества предпочтительно имеют документально подтвержденную эффективность при ИМП, известны специалистам в данной области и предпочтительно относятся к видам .
Lactobacillus plantarum, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus Rhamnosus, Lactobacillus Reuteri, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus Fermentum, Bifidobacterium lactis
Streptococcus Thermophilus
Lactobacillus Paracasei
В качестве примера, пробиотические вещества представляют собой следующие штаммы: и . Наиболее предпочтительным является , еще более предпочтительным является штамм Lpc37.
8
12
9
9
11
Пробиотик смешивают для обеспечения бактериальной нагрузки, составляющей от 1 × 10 до 1 × 10 КОЕ/г смеси, и для обеспечения суточной дозы 5 × 10. Бактериальная нагрузка композиции по настоящему изобретению, содержащей указанную смесь, может составлять приблизительно от 1 × 10до 1 ×10КОЕ/в композиции.
Lactobacillus paracasei Lpc37
Наиболее предпочтительным является .
Следует отметить, что кислотность натуральных экстрактов является одной из проблем, которую необходимо решать, в частности, это относится к полученным из клюквы экстрактов, и проблема становится более актуальной, если такие экстракты необходимо смешивать с кислотонеустойчивыми веществами, например, пробиотиками. Экстракты клюквы по своей природе богаты органическими кислотами, и в соответствии со способом изобретения, их сначала гранулируют с натуральным соком, который также является очень кислым.
Таким образом, покрытие по изобретению позволяет соединять эти экстракты с пробиотиками, которые часто являются неустойчивыми в кислой среде, без изменения жизнеспособности пробиотиков и без определяемой потери пробиотической нагрузки.
Фактически такое покрытие действует как защитный барьер на внешней поверхности гранулы, предотвращая прямой контакт между кислотами и пробиотиками. Дополнительно, это покрытие также действует как защитный барьер для ПАЦ в грануле, при этом содержание ПАЦ может оставаться стабильным в течение по меньшей мере 18 месяцев, более предпочтительно 24 месяцев, и обеспечивает более длительный срок хранения конечного продукта, даже при добавлении пробиотического компонента. Другими словами, покрытие сохраняет и внутренний ПАЦ, содержащийся в природном экстракте, и внешний пробиотический компонент.
Фактически этот барьер также позволяет избежать обычных явлений окисления ПАЦ, вызванных содержащимся в фармацевтической форме (с оболочкой) воздухом, и, таким образом, увеличивается срок годности продукта, как ясно показано в разделе «Эксперименты», при измерении через 18 месяцев и в условиях стресса (40 °C) (см. раздел «Эксперименты»).
Помимо вышеупомянутых биохимических свойств, способ нанесения покрытия, осуществляемый после первого гранулирования с натуральным соком, улучшает реологические свойства гранул, такие как сыпучесть, значительно снижает гигроскопичность и, таким образом, сводит к минимуму любые проблемы, связанные с этапом упаковки, которые могут в значительной степени негативно влиять на дозировку и аликвотирование. Эти хорошо известные при получении обычных клюквенных экстрактов проблемы, которые влияют на растворимость конечного продукта, в частности, через некоторое время при хранении. Пример представлен на фиг.2, где показана разница между коммерческим экстрактом и экстрактом, который можно получить согласно настоящему изобретению.
Таким образом, экстракты клюквы, гранулированные и покрытые оболочкой в соответствии со способом настоящего изобретения, имеют следующие свойства:
- повышенную стабильность
- повышенную текучесть
- повышенную совместимость при смешивании с кислотонеустойчивыми компонентами (т.е. с пробиотиками),
w
и обычно имеют содержание свободной воды (A) не выше 0,45, предпочтительно от 0,01 до 0,4 и более предпочтительно от 0,05 до 0,3.
Дозировка ПАЦ
В дополнение к рутинным проверкам, необходимым для соблюдения требований к пищевым продуктам (таким как анализы на пестициды, тяжелые металлы, афлатоксины и аллергены), обычно проводится анализ контроля качества сухих клюквенных экстрактов, которые используются в качестве сырья. Целью такого анализа является определение количества экстракта (двух экстрактов), необходимого для обеспечения конечного содержания ПАЦ не ниже 2% (вес/вес), при более предпочтительном содержании от 2,1 до 4% или еще более предпочтительном содержании от 2,5% до 3% (то есть как можно ближе к 2,77%), которое измеряют по методике BL-DMAC в готовом гранулированном продукте (обычно в дозе 5,5 г), и для проверки органолептических свойств. Этот анализ проводится для каждой партии клюквенного экстракта, приобретенной для приготовления готового продукта.
Для определения содержания ПАЦ применяется ряд способов: ВЭЖХ с обращенной фазой (RP-HPLC), способ, основанный на УФ-излучении, и т.д. В соответствии с Европейской фармакопеей, эталонным способом является спектрофотомерия (EU Pharm. 6.0; 01/2008: 1220); вместе с тем, в последнее время наиболее широко применяемым способом определения ПАЦ стал колориметрический способ BL-DMAC благодаря признанию AFSSA (Французского агентства по безопасности пищевых продуктов) и своей простоте и воспроизводимости.
Была установлена рекомендуемая суточная доза для ПАЦ на уровне 36 мг, что определено способом BL-DMAC.
Гранулирование в кипящем слое
Этот способ производства выполняют в грануляторе с псевдоожиженным слоем. Для этого способа подходят грануляторы с псевдоожиженным слоем, такие как IMA GHIBLI 50 и ICF STAR-3. Онимогут точно взвешивать клюквенный экстракт и смешивать его предпочтительно с арабиногалактаном и диоксидом кремния (сырьем), смешивать в барабане и затем распылять как водный гранулирующий раствор, предпочтительно состоящий из разбавленного клюквенного сока.
После гранулирования для нанесения покрытия предпочтительно используется раствор ксантановой камеди.
Способ обычно выполняют, соблюдая следующие стадии:
а) Предварительный нагрев продукта
Сырье вводят в барабанный аппарат. Эта стадия занимает несколько минут, приблизительно 5 минут, что позволяет продукту в барабане достичь идеальной температуры для гранулирования, которая не должна превышать 45 °C.
b) Гранулирование и получение растительного комплекса
На этой стадии порошок внутри машины гранулируют путем распыления водного раствора. Предпочтительно водный раствор представляет собой клюквенный сок 65 °Bx, разбавленный водой приблизительно до 20 °Bx. Обычно для распыления устанавливают температуру воздуха на входе устройства от 75 °С до 85 °С, более предпочтительно от 77 °С до 83 °С, и наиболее предпочтительно приблизительно 80 °С, и скорость потока насоса составляет 220 мл/мин.
Во время первого гранулирования смеси регидратированный сок гомогенно гранулирует порошок. На любой стадии этого способа получения гранул температуру продукта подходящим образом регулируют и контролируют таким образом, чтобы она составляла ≤45 °С.
c) Сушка
Эта стадия длится несколько минут и выполняется с целью гарантированной сушки продукта в конце первой фазы гранулирования. На этой стадии максимальная температура воздуха на входе устанавливается не выше 55 °C. Температура продукта никогда не должна превышать 45 °C.
d) Нанесение покрытия
Эта стадия необходима для нанесения покрытия и финишной обработки гранул. На этой стадии обработки псевдогранулы покрывают путем распыления водного раствора ксантановой камеди (содержание ксантановой камеди 0,06%), используемого в качестве вещества для покрытия, которое устойчиво к кислому рН. Даже на этой стадии температура продукта никогда не превышает температуру 45°C.
e) Сушка
Эта стадия продолжается несколько минут и выполняется с целью окончательной сушки продукта. Максимальная температура воздуха на входе на этой стадии составляет 60 °C. Температура продукта не превышает 45 °С.
f) Охлаждение
Эта стадия обработки необходима для охлаждения и стабилизации продукта, для достижения разгрузки при температуре, максимально приближенной к комнатной температуре. Стадия завершается при достижении внутренней температуры продукта от 25 до 30 °C, которую измеряют с помощью внутреннего датчика. Это позволяет избежать поглощения влаги самим продуктом.
W
Чтобы получить сухие и стабильные гранулы согласно способу по изобретению, в конце этой стадии контролируют содержание свободной воды (A) и потери при сушке конечного продукта. Анализы конечного продукта показывают, что для оптимизации стабильности продукта и увеличения срока его годности Aw в любом случае должно быть ниже 0,45, предпочтительно от 0,1 до 0,4, и более предпочтительно составлять от 0,05 до 0,3.
В соответствии с дополнительным вариантом осуществления, изобретение относится к гранулированным и покрытым оболочкой клюквенным экстрактам, которые можно получить в виде порошка с высокой текучестью с помощью способа по изобретению, и которые содержат другие ингредиенты и/или эксципиенты, предпочтительно пребиотик и предотвращающее слеживание вещество, и необязательно, пробиотический компонент, и такие экстракты, по сравнению с коммерчески доступными экстрактами, имеют следующие свойства:
- повышенную стабильность
- повышенную текучесть
- повышенную совместимость при смешивании с кислотонеустойчивыми компонентами (т.е. пробиотиками). Следует отметить, что улучшение текучести можно определить также по изображению продукта, представленного на фигуре 2А.
Следующие примеры осуществления настоящего изобретения являются иллюстративными и никоим образом не ограничивают объем изобретения.
ЭКСПЕРИМЕНТЫ
Пример 1. Получение клюквенного порошка с покрытием
Два сертифицированных клюквенных экстракта были тщательно отобраны, титрованы по методике BL-DMAC, как описано в Примере 3, и смешаны для получения содержания ПАЦ 2,77% вес/вес: а) сухой клюквенный экстракт 27-33% по BL-DMAC (2,05% вес/вес; экстракт от Indena; b) сухие клюквенные экстракты 40% по УФ-методике (23,59% вес/вес) (клюквенные экстракты от компании Medtrue Enterprises).
2
Около 250 кг отобранных порошков клюквенного экстракта объединяли с арабиногалактаном и диоксидом кремния и затем гранулировали с помощью гранулятора с псевдоожиженным слоем, такого как грануляторы IMA GHIBLI 50 или ICF STAR-3, следующим образом: с точностью взвешивали сырье, смешивали в барабане, и затем распыляли гранулирующий раствор, состоящий из разбавленного клюквенного сока (разведение до 20 °Bx из концентрата 65°Bx) в количестве около 12,8 литров водного раствора в HO, 5,11% об/об., температура на входе 80 °C, до образования гранул (т.е. в течение примерно 2 часов при количестве смеси 250 кг). Затем на гранулы наносили покрытие раствором ксантановой камеди 0,06% (0,15 л).
Эта методика более подробно описана следующим образом:
Стадия 1: Предварительный нагрев продукта
Эта стадия продолжается приблизительно 5 минут и служит для доведения находящегося в барабане продукта до идеальной температуры для гранулирования (45 °C).
Стадия 2: Гранулирование и изготовление растительного комплекса.
На этой стадии клюквенный порошок внутри машины гранулируют путем распыления клюквенного сока 65 °Bx, подходящим образом разведенного водой до 20 °Bx (при этом раствор при 25 °Bx содержит 25 граммов твердого вещества в 100 граммах общего количества жидкости).
В ходе этой стадии происходит первое гранулирование: в условиях заранее установленных и стандартизированных параметров (температура воздуха на входе 80 °C и скорость потока насоса 220 мл/мин) обезвоженный сок поступает для гомогенного покрытия порошка, образующего гранулу. На любой стадии этого способа получения гранул температуру продукта подходящим образом регулируют и контролируют так, чтобы она никогда не превышала 45 °С.
Стадия 3: Сушка
Эта стадия продолжается в течение нескольких минут и выполняется с целью обеспечения сушки продукта в конце первой фазы гранулирования. Максимальная температура воздуха на входе на этой стадии составляет 55 °C, чтобы температура продукта поддерживалась ниже 45 °C.
Стадия 4: Нанесение покрытия
В ходе этой стадии обработки на гранулу наносят покрытие путем распыления 0,06% водного раствора ксантановой камеди, который используют в качестве устойчивого к кислотному рН вещества для покрытия.
При этом на протяжении этой стадии температура продукта никогда не превышает температуру 45 °C. Нанесение покрытия обычно занимает несколько минут.
Стадия 5: Сушка
Эта стадия продолжается несколько минут и выполняется с целью окончательной сушки продукта. Максимальная температура воздуха на входе на этой стадии составляет 60 °C. Температура продукта составляет <45 °C.
Стадия 6: Охлаждение
Это заключительная стадия способа. Необходимо охладить и стабилизировать продукт. Разгрузка производится при температуре, максимально приближенной к комнатной. Стадия завершается при достижении внутренней температуры продукта 25-30 °C, что измеряется температурным датчиком. Этот способ служит для предотвращения поглощения влаги самим продуктом.
W
W
Чтобы получить сухие и стабильные гранулы, в конце этапа охлаждения этого способа измеряют содержание свободной воды (A) и потери при сушке конечного продукта. Содержание свободной воды (A) составляет 0,12.
Пример 2. Смешивание покрытых оболочкой клюквенных гранул с другими ингредиентами.
После получения, покрытые оболочкой клюквенныегранулы смешивают с кислотонеустойчивыми компонентами, такими как пробиотик, с помощью промышленного смесителя.
Для измерения содержания ПАЦ в исходном материале и в конечном продукте применяют колориметрический способ BL-DMAC, описанный в Примере 3.
Пример 3. Определение содержания ПАЦ
Колориметрический способ BL-DMAC был раскрыт в публикации Prioretal. «Multi-laboratory validation of a standard method for quantifying proanthocyanidins in cranberry powdersʺ; J. Sci Food Agric 2010 (DOI 10.1002/jsfa.3966). Коротко, сначала ПАЦ экстрагируют из образцов раствором органического растворителя, включающим ацетон (75%), уксусную кислоту (0,5%) и деионизированную воду. Затем добавляют реагент DMAC и инкубируют от 20 до 30 минут, и показатели OD считывают при 640 нм.
В качестве аналитического стандарта для получения калибровочной кривой используют коммерчески доступный процианидин А2 (от Sigma Aldrich).
Содержание ПАЦ измеряют в покрытых оболочкой гранулах по изобретению, в коммерческом продукте 2 и в коммерчески доступном сырье (коммерческий экстракт 1).
Результаты показаны в таблице ниже.
Таблица 1. Содержание ПАЦ при разных способах измерения
<b>Продукт/экстракты</b>
<b>ТИТР ВЭЖХ</b>
<b>ТИТРСПЕКТРОФОТОМ. UV-VIS</b>
<b>ТИТР BL-DMAC</b>
Сухой экстракт клюквы (40% УФ, Medtrue Ent, Ltd)
7,30%
40,32%
15,00%
Сухой экстракт клюквы (20% ВЭЖХ, Orocyan)
21,9%
75,26%
10,5%
Сухой экстракт клюквы 27-33%BL-DMAC (Indena)
7,63%
н.о.
27,98%
Сухой экстракт клюквы 7%, УФ (коммерческий экстракт клюквы 1)
0,72%
8,33%
Н.Д.
Смесь по изобретению, содержание ПАЦ 2,77% по BL-DMAC
Н.Д.
н.о.
2,69 +/- 0,164%
Коммерческий продукт 2
0,51%
н.о.
н.о.
н.д.: не определяли
Данные показывают высокую вариабельность содержания ПАЦ, значение которого сильно зависит от используемого способа измерения. Кроме того, выявлена невозможность найти соответствие и определить коэффициент перевода между разными измерениями.
Дополнительно, измеренное для ПАЦ фактическое содержание только в нескольких случаях соответствует коммерческой маркировке конечного продукта, и это может отражать важные проблемы стабильности, существующие для этих продуктов.
Пример 4. Исследования стабильности
Содержание ПАЦ в конечном препарате по изобретению и в одном коммерческом продукте (см. коммерческий продукт 2), измеряли по методике BL-DMAC после стандартных условий хранения при температуре 25 °C, влажности 65% в течение 18 месяцев. Содержание ПАЦ при таких условиях хранения оставалось достаточно стабильным в течение 18 месяцев.
Дополнительно, содержание ПАЦ измеряли также после хранения в стрессовых условиях, как показано в таблице ниже, и сравнивали с содержанием, измеренным в момент времени 0 (соответственно, для композиции по изобретению, в момент времени 0, то есть сразу после нанесения покрытия на гранулы) или в точке времени 15 дней (т.е. после инкубирования при 40 °C в течение 15 дней после нанесения покрытия), применяя методику BL-DMAC или УФ-спектрофотометрический анализ.
Результаты показаны в таблице 2 ниже.
Таблица 2. Исследования стабильности (содержание ПАЦ по BL-DMAC и УФ)
<b>Время T0</b><b>Конц.ПАЦ %</b>
<b>Время T15 40°C</b><b>Конц. ПАЦ%</b>
<b>Способ измерения ПАЦ</b>
Гранулы с покрытием, полученные согласно примеру 1 (по изобретению)
2,78%
2,20%
BL-DMAC
«
16,10
14,48
UV
Коммерческий продукт 2
<0,1
<0,1
BL-DMAC
«
12,06
10,36
UV
Содержание, измеренное после ускоренного распада при 40 °C, показывает, что процент потерь в содержании ПАЦ ниже для продукта, полученного в соответствии с настоящим изобретением; другими словами, в препарате по изобретению содержание ПАЦ остается практически неизменным даже в стрессовых условиях.
Следует отметить, что в одном из коммерческих экстрактов проведенный анализ BL-DMAC не выявил какого-либо содержания ПАЦ.
Пример 5. Растворимость в кислых или основных растворах
Проводили анализы на биодоступность в растворах с кислым и нейтральным уровнем рН образцов каждого продукта,весом3 грамма: коммерческий клюквенный продукт (коммерческий продукт 2) и продукт, изготовленный согласно настоящему изобретению. Содержание ПАЦ после взбалтывания в течение 2 часов измеряли с помощью УФ-методики.
Оба продукта показали растворимость приблизительно 90% при кислом уровне pH, и 80% при нейтральном уровне pH.