СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНОРЕКСИЧЕСКИМ, ГИПОГЛИКЕМИЧЕСКИМ И ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ
ANORECTIC, HYPOGLYCEMIC AND HYPOLIPIDEMIC AGENT

Изобретение относится к области фармации, а именно к созданию средства на основе растительного компонента, обладающего анорексическим, гипогликемическим и гиполипидемическим действием.
Для лечения нарушений углеводного и липидного обмена чаще всего используют синтетические лекарственные препараты. Так, гипогликемической и гиполипидемической активностью обладают производные тиазолидина и тиазолидиндиона (патенты EP 013942, опубл. 05.02.1985; EP 0177353, опубл. 09.04.1986; EP 0306228, опубл. 08.03.1989). Для снижения в крови содержания холестерина и липопротеидов используются такие препараты, как пармидин, клофибрат, полиспонин и др. (Соколов С.Л., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям (Фитотерапия). 2-е изд. - М.: Медицина, 1988. - 464 с.).
В качестве анорексигенных средств используют синтетические соединения негормональной природы, например 3,4-дифенилхроманы (патент RU 97113700, опубл. 20.07.99), производные 1,5-бензодиазепина (патент RU 2135486, опубл. 27.08.99).
Однако при использовании вышеперечисленных препаратов часто наблюдается появление побочных эффектов. Длительное применение полиспонина может вызывать потерю аппетита, потливость, кожный зуд. Прием препаратов клофибрат и пармидин вызывает расстройства пищеварения: тошнота, рвота, поносы, кожная сыпь (Машковский М.Д. Лекарственные средства, 12-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1998. Ч.2).
Бадан толстолистый (Bergenia crassifolia L.) обладает широким спектром биологической активности. В листьях бадана выявлено высокое содержание дубильных веществ, значительное количество арбутина, витамина C, фитонциды, а также значительное количество марганца, железа и меди. Бадан обладает церебропротекторным действием, антигипоксической и антирадикальной активностью (патент RU 214330, опубл. 20.11.1999; патент RU 214331, опубл. 20.11.1999), стимулирует образование интерферона (патент UA 7600, опубл. 15.06.2006), обладает адаптогенной активностью (патент RU 2076727, опубл. 10.04.1997). Листья бадана входят в рецептуру бальзама «Панта» с тонизирующим эффектом (патент RU 2111236, опубл. 20.05.1998) и «Витаген» (патент RU 2085579, опубл. 27.07.1997) с лечебно-профилактическим действием. Черные листья бадана В. crassifolia в сочетании с цветками Matricaria chamomilia L., травой Achillea millefolum L. и листьями Mentha piperita L. используются для получения экстракта с противовоспалительной активностью (Лубсанджоржиева П.Б., Ажунова Т.А., Цыбанов К.Ц. Получение экстракта сухого из 4-компонентного сбора и содержание в нем биологически активных веществ // Химия растительного сырья. - 2008, №1. С.107-110). Кроме индивидуального использования черные перезимовавшие листья В. crassifolia входят в состав фиточая для получения профилактического напитка с гинекологическим профилем (патент RU 2169481, опубл. 27.06.2001), средства, обладающего радиозащитной активностью и применяющегося при лечении и профилактике лучевой болезни (патент RU 203558, опубл. 10.05.1995).
Задачей настоящего изобретения является создание растительного средства, обладающего гипогликемическим, гиполипидемическим действием и способностью подавлять аппетит при отсутствии побочных эффектов.
Поставленная задача решается созданием средства, обладающего анорексическим, гипогликемическим, гиполипидемическим действием, которое представляет собой водный экстракт черных и бурых листьев бадана Bergenia crassifolia, собранных после 1-2-х зимовок, которые перед экстрагированием сушат при температуре 35-45°C до постоянной массы с последующим измельчением листьев.
Способ приготовления экстракта.
Черные и бурые листья собраны после 1-2-х зимовок, их сушили при температуре 35-45°C до постоянной массы в течение 24 часов. После сушки образец дополнительно измельчали. Затем получали водные экстракты в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XI (вып.2).
Содержание основных идентифицированных биологически активных веществ (БАВ) в экстракте бадана определяли методом ВЭТСХ в системе растворителей толуол/этил ацетат/муравьиная кислота/метанол (3:3:0.8:0.2, по объему) методом прямой денситометрии при 280 нм (Pozharitskaya O.N., Ivanova S.A., Shikov A.N. et al. Separation and evaluation of free radical-scavenging activity of phenol components of green, brown and black leaves of Bergenia crassifolia by using HPTLC-DPPH method // J Sep Sci. - 2007. - Vol.30, N 15. - P.2447-2451).
Содержание основных биологически активных веществ, идентифицированных в водном сухом экстракте листьев бадана, представлено в таблице 1.
Таблица 1
БАВ
Содержание, %
Выход (с учетом механических потерь)
17,6
Арбутин
0,3
Бергенин
2,0
Эллаговая кислота
0,15
Галловая кислота
1,6
Протокатеховая кислота
0,2
Гидрохинон
0,2
Влияние экстракта бадана на аппетит.
Эксперименты проведены на крысах-самках линии Wistar, вес к началу исследования 320-370 г, возраст 6-8 месяцев.
1. Животных размещали в клетках по 3 особи. Кормушки наполняли стандартным кормом. Обеспечивали достаточное количество жидкости.
2. Спустя две недели животных взвешивали и наполняли кормушки стандартным кормом и «диетой кафетерия». Регистрировали потребление пищи и вес на протяжении 23 дней.
3. Через 14 дней от начала «диеты кафетерия» начали введение исследуемого образца экстракта бадана. Экстракт вводили ежедневно однократно в одно и то же время суток в течение 8-ми дней. Разовая доза составляла 50 мг/кг.
4. На 9-й день после начала введения экстракта бадана животных лишали пищи на период 18 часов.
5. Через 18 часов еще раз вводили исследуемый экстракт и плацебо. Сразу после этого предварительно взвешенный корм помещали в клетку. Оставшуюся пищу взвешивали через 30, 90 минут, 3, 6 часов после помещения кормушки в клетку.
Рацион вивария представлял собой сухой гранулированный корм по 33,2 г на 1 животное с общей калорийностью на 1 животное 102,8 ккал. «Диета кафетерия» содержала 25-35% жиров и 25-30% легкоусвояемых углеводов в дополнение к стандартному рациону грызунов.
Калорийность питания групп, получавших «диету кафетерия», по сравнению с интактной группой была выше на 23%.
Динамика потребления пищи на фоне «диеты кафетерия» и применения исследуемого препарата в граммах представлена в таблице 2.
Таблица 2
День эксперимента
Интактные
Контроль
Экстракт бадана
1
22,6±0,2
23,0±1,8
20,9±1,2
2
26,4±1,2
26,2±1,2
17,8±2,1
3
27,3±0,6
21,2±1,1
27,3±0,4
4
19,3±0,6
26,0±0,6
22,8±1,0
5
23,0±0,6
24,6±1,3
21,9±1,3
6
26,9±0,1
24,0±0,8
22,2±1,3
7
27,1±0,7
28,3±1,0
24,6±1,4
8
21,0±0,8
29,2±0,6
27,3±1,5
9
23,4±1,1
29,9±0,5
28,4±0,7
10
23,7±0,8
31,2±0,6
28,6±1,1
11
28,0±1,2
31,5±0,8
31,6±1,5
12
19,7±0,3
30,1±0,9
27,2±1,5
13
23,6±0,3
28,2±1,2
20,6±1,2
14
24,8±1,1
26,5±1,9
17,5±0,7
15
22,5±0,8
25,4±1,5
16,5±0,9
16
19,4±0,8
27,0±0,8
13,9±1,2
17
27,8±0,7
24,5±1,5
15,3±0,6
18
28,1±1,4
25,7±1,5
13,7±0,4
19
21,9±0,7
29,9±1,8
17,4±0,3
20
27,8±1,5
27,3±1,5
16,2±0,5
21
31,6±1,1
27,8±1,9
21,4±0,6
22
27,8±1,5
27,3±1,5
16,2±0,5
23
31,6±1,1
27,8±1,9
21,4±0,6
Среднее потребление с 8 по 14 дни
23,2
30,0
27,3
Среднее потребление с 16 по 23 дни
25,5
26,8
16,5
Δ между средними
-2,3
+3,2
+10,8
Из представленных данных следует, что на фоне применения «диеты кафетерия» отмечалось увеличение потребления пищи животными, которое носило устойчивый характер: начиная с 8-х суток потребления «диеты кафетерия» во всех группах по сравнению с животными, находящимися на стандартной диете (интактная группа), в 1,2-1,4 раза.
Введение экстракта приводило к снижению аппетита у животных: экстракт способствовал уменьшению потребления пищи через 23 дня на 38%.
Следующим этапом исследования было изучение влияния экстракта бадана на аппетит после голодания.
После 18-часового голодания животным был возвращен корм, массу потребленного корма регистрировали через 30, 90 минут, 3 и 6 часов.
Динамика потребления пищи на фоне «диеты кафетерия» после 18-часового голодания и применения исследуемых препаратов в граммах (М±м) представлена в таблице 3.
Таблица 3
Группы
30 мин
90 мин
3 часа
6 часов
Интактные
2,6±0,1
2,3±0,2
2,1±0,0
3,0±0,3
Контроль
4,8±0,9
3,5±0,3
3,1±0,5
2,5±0,5
Экстракт бадана
5,1±1,1
3,9±0,1
2,9±0,4
2,1±0,2
Между интактной и контрольной группами животных была установлена существенная разница в потреблении корма (таблица 3). Контрольные животные через полчаса после возвращения корма в кормовое углубление клетки потребляли корма на 85% больше, чем интактные животные. Через 90 минут разрыв между контрольной и интактной группами сократился до 52%, через 3 часа - до 48%, через 6 часов обе группы потребляли уже практически одинаковое количество пищи.
На фоне применения экстракта бадана в течение первых 90 минут наблюдалось увеличение аппетита по сравнению с контрольной и интактной группами, тенденция к снижению этого показателя наблюдалась через 3 часа (7%), а через 6 часов аппетит у животных был ниже, чем у интактной группы на 16%.
Таким образом, экстракт бадана обладает способностью снижать аппетит, эффект наступает через 3-6 часов после его введения.
Влияние экстракта на углеводный обмен.
Кровь для определения уровня глюкозы забирали пять раз: до начала «диеты кафетерия», на 9 и 15 день «диеты кафетерия» (до начала введения препарата), до и после голодания. Каждый забор крови включал в себя построение сахарной кривой (кровь забиралась натощак, после этого внутрижелудочно вводили раствор глюкозы из расчета 1 г/кг, после чего кровь отбирали через 1 и 2 часа).
Был исследован уровень глюкозы «натощак» и после сахарной нагрузки глюкозо-толерантный тест. Данные по концентрации глюкозы в крови животных, ммоль/л, на фоне «диеты кафетерия» и применения экстракта бадана представлены в таблице 4.
Таблица 4
Дни эксперимента
Часы
Интактные
Контроль
Экстракт
1 день
0
2,7±0,2
3,4±0,3
2,5±0,4
1
2,8±0,4
2,8±0,4
5,2±0,9
2
2,9±0,2
3,8±0,4
5,2±0,8
9 день
0
1,9±0,2
2,6±0,2
3,0±0,4
1
2,4±0,3
2,8±0,1
3,0±0,2
2
0,2±0,1<sub>**</sub> <sup>*</sup>
0,7±0,3<sub>**</sub> <sup>*</sup>
1,2±0,4<sub>**</sub> <sup>*</sup>
15 день
0
3,2±0,3
2,9±0,3
3,3±0,1
1
4,3±0,3
6,0±0,9
3,4±0,1
2
3,1±0,8
8,1±1,0
4,6±1,3
23 день
0
2,2±0,3
2,4±0,3
3,5±0,3
1
3,5±0,3
6,6±0,6
3,9±0,3
2
3,1±0,2
10,3±1,4<sub>**</sub> <sup>*</sup>
8,7±1,1<sub>**</sub> <sup>*</sup>
24 день
0
1,7±0,2
2,1±0,6
0,8±0,1
1
3,5±0,2
6,8±0,5
4,2±0,1
2
3,0±0,4
12,1±0,8<sub>**</sub> <sup>*</sup>
6,4±0,9*
Примечание: * - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с 0 часом регистрации глюкозы (натощак); ** - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с 1 часом регистрации глюкозы (натощак).
Изменение уровня глюкозы у группы интактных животных, ммоль/л, приведено на фиг.1. У интактных животных уровень глюкозы изменялся в пределах физиологической нормы: в ответ на сахарную нагрузку почечный порог (10 ммоль/л) не был превышен.
Изменение уровня глюкозы у группы контрольных животных, ммоль/л, приведено на фиг.2. К 15 дню пребывания на «диете кафетерия» у животных было отмечено повышение уровня глюкозы в плазме крови через 1 и 2 часа после сахарной нагрузки, что характеризует нарушенную толерантность к глюкозе и является фактором риска для развития сахарного диабета II типа. К концу исследования у животных контрольной группы наблюдалось устойчивое нарушение толерантности к глюкозе с повышением уровня глюкозы через 2 часа после сахарной нагрузки выше почечного порога.
Изменение уровня глюкозы у животных, получавших экстракт бадана, ммоль/л, приведено на фиг.3. В группах животных, получавших сухой экстракт бадана на фоне «диеты кафетерия», в первые пятнадцать дней пребывания на диете сахарная кривая практически не отличалась от уровня интактных животных. При проведении сахарной нагрузки на вторые сутки наблюдали снижение содержания глюкозы в крови через 1 час - 41%, через 2 часа - 16%.
К 15 дню пребывания на «диете кафетерия» у животных этой группы было отмечено незначительное повышение уровня глюкозы в плазме крови через 2 часа после сахарной нагрузки в группе. К концу эксперимента у животных, получавших экстракт листьев бадана, уровень глюкозы через 2 часа после сахарной нагрузки не превышал почечного порога.
Влияние экстракта на липидный обмен.
Результаты исследования состояния липидного обмена у животных на фоне «диеты кафетерия» и применения исследуемых препаратов представлены в таблице 5.
Таблица 5
Группы
Триглицериды, ммоль/л
Холестерин, ммоль/л
Интактные
0,63±0,11
1,87±0,08
Контроль
2,84±0,57*
2,80±0,17*
Экстракт бадана
1,28±0,20<sub>**</sub> <sup>*</sup>
2,45±0,24*
Нормальные значения
0-1,70 (до 2,26)
0-5,7 (до 6,70)
Примечание: * - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с группой интактных животных; ** - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с группой контрольных животных, при p<0,05 (по критерию Стьюдента).
Уровень триглицеридов у животных на фоне применения «диеты кафетерия» увеличивался в 4,5 раза и превышал физиологический уровень, тогда как уровень холестерина оставался в пределах нормы (таблица 5). На фоне применения экстракта наблюдалось достоверное снижение (на 55%) уровня триглицеридов. На уровень холестерина животных экстракт не оказал существенного влияния.
Таким образом, сухой экстракт бадана обладает выраженным гипогликемическим, гиполидимическим действием и способен подавлять аппетит.