Экспериментальная оценка фармакологических свойств лантана сульфата

больных ревматоидным артритом в процессе лечения реальдироном и циклофероном // Иммунопатология и клиническая иммунология. - 1999. - №3. -С.51 -55.

10. Arend W.P.; Dayer J.-M. Cytokines and cytokin inhibitors or antogonists in rheumatoid artritis // Arthr. Rheum. - 1990. -Vol.33, N.3. - P.305-315.

1 1. Calin A., Taurog J.D. The spondyloarthritides. - Oxford New York Tokyo, Oxford University Press: 1998. -560p.

12. Cratocos J., Collado A., Filella X. and all. Serum cytokines (IL-6, TNF-&, IL-I, IFN-gamma) in Ankylosing Spondylitis // Br. J. Rheumatol. - 1994. - Vol.33, N. 10. - P.927-931.

13. Day S.М., Yan X.H., Liu Y. and all. Serum level of cytokines in Rheumatoid Arthritis and Ankylosing Spondylitis // Abstracts of 9th Asia Pasific leaque of Associations for Rheumatology congress - China 21-26 May, 2000. - P.33 (PT 061 A).

14. Sieper J. Role of cytokines in pathogenesis of different form of arthritides // Abstracts of 9th Asia Pasific leaque of associations for Rheumatology congress. -China, 21 -26 May 2000. - P. 107 (WS 48).

15. Toussirot E., Lafforque P., Boucraut J. and all. Serum levels IL-lbeta, TNF-alfa, IL-2 soluble receptors in Ankylosing Spondylitis // Rheumatol. Int. - 1994. -Vol. 13, N.5. - P. 175-180.

16. Veroz R., Munoz-Villanueva M.C., Munoz E. and all. Clinical features of activity and their relationship with acute phase proteins and cytokin levels in patients with spondyloarthropathy // Материалы XIV конгресса Европейской лиги борьбы с ревматизмом — Scothland, 6-11 June 1999. - Р.268 (1 137).

17. Westacott C.I., Whicher J.T. Barnes I.C. and all. Synovial fluid concentration of five different cyto-kynes in rheumatic disease // Ann. Rheum. Dis. -1990. - Vol.49, N.6. - P.676-681.

© АЛЕКСАНДРОВА T.E., MAKCAPOB B.C., УБАШЕЕВ И.О., КОЖЕВНИКОВА H.M. -УДК 615.03

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЛАНТАНА СУЛЬФАТА

Т.Е. Александрова, B.C. Максаров, И.О. Убашеев, Я.М Кожевникова.

Резюме. В экспериментах на белых крысах установлены мембраностабилизирующее и противовоспалительное действия лантана сульфата. Предположено, что в основе выявленных эффектов лежит ингибирующее влияние исследуемого сред&тва на процессы перекисного окисления липидов клеточных мембран, способность ионов лантана изоморфно замещать ионы кальция в биологических средах.

Редкоземельные элементы Ьа-Ьи, У (РЗЭ) являются сильнейшими акцепторами электронов, что проявляется в их высокой склонности к ком-плексообразованию со многими лигандами, в том числе и органическими [2,7,10]. Анализ данных литературы показывает, что РЗЭ образуют устойчивые комплексы с аминокислотами, амидами, аминами, оксикислотами, нуклеотидами, фосфатными группами [2,4,7]. Изучение состава и строения комплексов свидетельствуют о том, что координация указанных лигандов осуществляется как через азот аминогрупп, так. и кислород карбоксильной и фосфатной групп.

Сходство химических свойств редкоземельных элементов и кальция позволяют ионам РЗЭ изоморфно заменять ионы Са2+ во многих макромо-лекулярных системах, в том числе в ферментах, в состав которых входит кальций, и к целым функциональным системам [2,4,5].

Показано, что лантан обладает большим сродством к митохондриям, накапливается на их внешней поверхности, блокируя транспорт кальция, проникает внутрь и стимулирует их дыхание [12].

Из фармакологических свойств РЗЭ изучены только антикоагулирующее и противоопухолевое

их действия [2,3,9,10]. При добавках к крови РЗЭ проявляют себя как типичные антипротромбины. При этом полагают, что соединения РЗЭ влияют на различные стадии процесса свёртывания крови, например, ингибируют синтез протромбина, тормозят переход фибриногена в фибрин [2,3,5]. Противоопухолевая активность обусловлена тем, что РЗЭ накапливаются в опухолях в больших количествах, нарушают в них обмен ионов кальция и магния. В то же время ионы лантанидов способны включаться в ядерную фракцию опухолевых клеток, образовывать комплексы с нуклеиновыми кислотами и нуклеотидами, нарушая их обмен [9,10].

Имеются сведения о том, что ионы лантанидов стимулируют регенерацию печени после частичной ее резекции у крыс [2], снижают уровень сахара в крови за счет стимуляции секреции инсулина поджелудочной железой [11], ингибируют процессы перекисного окисления липидов клеточных мембран [2].

Таким образом можно отметить, что несмотря на большое разнообразие биологических эффектов фармакологические свойства лантанидов изучены недостаточно, хотя они представляют большой интерес для биологов и медиков.

Целью настоящей работы явилось изучение фармакологических свойств лантана сульфата, а именно, оценка его мембраностабилизирующего и противовоспалительного действия на различных экспериментальных моделях.

Материалы и методы

Мембраностабилизирующая активность лантана сульфата изучалась in vitro по степени торможения осмотического и перекисного гемолиза, вызванного реагентом Фентона. Активность лантана сульфата исследовали в широком диапазоне концентраций от 1 х 10'2 до 1х10'9М. Степень гемолиза измеряли на 1% суспензии отмытых человеческих эритроцитов по поглощению надосадоч-ной жидкости фотоколориметрическим методом при длине волны 420 нм. Гемолиз учитывали через 24 часа. Исследования проводились в 3-х кратной повторности. Действие лантана сульфата на гемолиз оценивали по сравнению с контролем (без его добавления в инкубационную среду) [6].

В опытах in vivo моделировали различные стадии воспалительного процесса по общепринятым методикам [7]. Эксперименты проведены на белых беспородных крысах обоего пола массой тела 180-200г, в стандартных условиях вивария. Во всех опытах применяли экспериментальнотерапевтическую дозу лантана сульфата 5 мг/кг массы крысы.

При оценке противовоспалительной активности в качестве препарата сравнения использовали бутадион в экспериментально-терапевтической дозе 5 мг/кг массы крысы. Экссудативную стадию воспаления вызывали субплантарным введением в правую заднюю конечность крысы 0,1 мл 3%-го раствора формалина. Лантана сульфат и бутадион вводили внутрижелудочно за 2 часа до инъекции формалина, а затем через 5 и 18 часов после нее. Оценку ангиэкссудативного действия проводили весовым методом, вычисляя процент угнетения отека по отношению к контролю. Пролиферативную фазу воспаления моделировали подкожной имплантацией в области спинки крыс стерильных на I пых шариков по рекомендации [7]. Испытуемое средство и препарат сравнения вводили крысам внутрижелудочно с 1-го дня опыта в течение 7 дней. О влиянии средств на процессы пролиферации судили по разности масс гранулем у крыс опытных и контрольной групп. Альтеративную стадию воспаления вызывали подкожным введением крысам в области спинки 0,5 мл 9%-го раствора уксусной кислоты. Лантана сульфат и бутадион вводили внутрижелудочно с 1-го дня эксперимента в течение 21 дня. Площадь альтерации измеряли на 7-, 14- и 21-е сутки.

В качестве второй модели асептического воспаления был выбран перитонит, развивающийся при внугрибрюшинном введении крысам 1 мл

0,2%-го раствора нитрата серебра. Лантана сульфат и бутадион вводили за 30 мин до вызывающего воспаление агента. Через 3 часа животных де-капитировали. Брыжейку фиксировали раствором Карнуа, окрашивали 0,05%-го раствором толуи-

динового синего. Критериями развития и выраженности перитонита являлись количество жидкости в брюшной полости и процент дегранули-рованных тучных клеток в брыжейке [1].

Во всех сериях опытов крысы контрольной группы получали дистиллированную воду в соответствующем объеме по аналогичным схемам.

Результаты обработаны с использованием критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Полученные нами данные по оценке влияния лантана сульфата на перекисный и осмотический гемолиз эритроцитов указывают на его мембраностабилизирующее действие при низких концентрациях. При перекисном гемолизе эффективными оказались концентрации лантана сульфата 10'5 и 10'6, о чем свидетельствует снижение перекисного гемолиза на 33,3 и 29,4% соответственно. Влияние его на осмотический гемолиз было более умеренным, при концентрациях 10'5 и 10'6 он уменьшал степень гемолиза на 19,6 и 21,1% соответственно. В основе мембраностабилизирующего действия исследуемого средства, по-видимому, лежит его способность ингибировать процессы свободнорадикального окисления липидов мембран, что находит подтверждение в литературных источниках [2]. В то же время не исключается и его непосредственное сорбционное действие на мембраны клеток, опосредованное способностью лантанидов к комплексообразованию с нуклеиновыми кислотами и фосфатными группами фосфолипидов мембран. Об этом в наших исследованиях свидетельствует, хотя и незначительное, угнетение лантана сульфатом осмотического гемолиза.

Мембраностабилизирующее действие исследуемого средства, вероятно, лежит в основе противовоспалительного действия, выявленного нами в проведенных экспериментах. Введение лантана сульфата крысам опытной группы достоверно угнетало отек лапки на 33%, причем лантан проявлял одинаковую активность по сравнению с бута-дионом (таблЛ).

Таблица 1.

Влияние лантана сульфата на экссудативную стадию воспаления у белых крыс

Условие опыта Степень отека, мл Процент угнетения отека по сравнению с контролем

1. Контроль 0,8±0,02

2. Лантана сульфат 0,5±0,03* 38,0

3. Бутадион 0,5±0,05* 38,0

Примечание: * - различия достоверны по сравнению с контролем (Р<0,05).

Установлено антиальтеративное действие лантана сульфата. Как видно из таблицы 2, его введение уменьшало площадь альтерации с первых дней эксперимента, наиболее выраженный эффект

наблюдался на 7-е сутки опыта и превосходил таковом бутадиона. В ходе экспериментов выявлено, что исследуемое средство не обладает пролиферативным эффектом. Его введение не вызывало достоверною уменьшения разности масс сухих гранулем.

Таблица 2.

Влияние лаптопа сульфата на течение алыперативиой стадии воспаления у белых крыс

Условие опыта 2 Площадь некроза, мм

7 сутки 14 сутки 21 сутки

1. Контроль 258,9± 18,4 194,5±24,6 85,3± 14,2

2. Лантана сульфат 123,5±11,5* 88,2±14,2* 62,8±17,6

3. Бутадион 198,6± 12,8 125,7± 11,2 82,4±11,4

Примечание: * - различия достоверны по сравнению с контролем (Р<0,05).

В то же время установлено, что бутадион, напротив, обладает выраженным пролиферативным действием. Его введение стимулировало рост гранулем на 35,4% мо сравнению с контролем (габл.З).

Таблица 3.

Влияние лантана сульфата и бутадиона на течение пролиферативной стадии воспаления у белых крыс

Условие опыта Масса сухих гранулем, г Разность в массе по сравнению с контролем

% мг

1. Контроль 5 1,6±5,1

2. Лантана сульфат 49,5±3,2 95,9 2,1

3. Бутадион 89,6±6,5* 73,6 38,0

Примечание: * - различия достоверны по сравнению с контролем (Р<0,05).

Данные опытов по моделированию перитонита на фоне предварительного введения лантана сульфата и бутадиона представлены в таблице 4. Через 3 часа после введения нитрата серебра у животных в брюшной полости появлялась жидкость красновато-бурого цвета. В брыжейке про-

исходила тотальная дегрануляция тучных клеток. Наблюдалась лейкоцитарная инфильтрация ткани, окружающей кровеносные сосуды брыжейки. На фоне предварительного введения лантана сульфата жидкость имела лишь опалесцирующий оттенок, что свидетельствовало о значительном снижении в ней числа эритроцитов. Снижался процент дегранулированных тучных клеток. В условиях предварительного введения бутадиона перитонеальная жидкость также имела лишь опалесцирующий оттенок, но ее количество в брюшной полости и процент дегранулированных тучных клеток был существенно ниже, чем в опытах с лантана сульфатом и в контроле.

Таблица 4.

Влияние лантана сульфата и бутадиона на количество внутрибрюшинной жидкости и дегрануляцию тучных клеток в брыжейке крыс при асептическом перитоните

Условие опыта Количество внутрибрюшинной жидкости, мл Дегрануляция тучных клеток, %

1. Контроль 0,5±0,20* 2,4±0,14*

2. Нитрат серебра 2,9±0,15 85,4±0,12

3. Лантана сульфат 1,7±0,18* 58,6±0,10*

4. Бутадион 0,9±0,12* 33,2±0,13*

Примечание: * - различия достоверны по сравнению с контролем (Р<0,05).

Следовательно, исследования показали, что лантана сульфат оказывает противовоспалительное действие при асептическом перитоните, вызванном нитратом серебра. Ионы лантана блокируя транспорт Са2+ во внутриклеточное пространство препятствуют выходу из тучных клеток биологически активных веществ, снижают проницаемость кровеносных сосудов и стабилизируют клеточные мембраны.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что лантана сульфат в концентрациях КГ-10'М проявляет мемраностабилизирующую активность. В экспериментально-терапевтической дозе 5 мг/кг лантана сульфат оказывает противовоспалительный эффект при асептическом воспалении у крыс за счет антиэкссудативного и анти-альтеративного действий. Установленная противовоспалительная активность лантана сульфата не уступает таковой бутадиона.

EXPERIMENTAL ESTIMATION OF PHARMACOLOGICAL PROPERTIES OF

LANTHANUlVf SULFATE

T.E. Alexandrova, V.S. Maksarov, I.O. Ubasheev, N.M. Khozevnikova

In the experiments on white rats there were established membrane stabilising and anti-inflammatory actions of lanthanum sulfate. It has been supposed that in the base of the effects revealed there is inhibiting influence of investigating agent upon the processes of lipid peroxidation of cellular membranes, ability of lanthanum iones to substitute isomorphically calcium iones in biological media.

Литература

1. Александров П.Н., Сперанская Т.В., Бобков Ю.Г. и др. Влияние рутина и эскуламина на некоторые модели асептического воспаления // Фармакология п токсикология. - 1986. - № 1. - С.84-86.

2. Верхова О.Л., Сорока В.Р. Биологическая роль лантанидов // Успехи современной биологии. -1980.-Т.90, №3.-С.365-381.

3. Волошин В.Ф., Сорока В.Р., Шварцбуд П.М. О роли люминесцентных состояний ионов редких земель в реакции коагуляции крови // Биофизика. -

1974. - Т. 19, №2.-С. 358-359.

4. Давиденко Н.К. Изучение биосистем с помощью металлов-зондов // Биологические аспекты координационной химии. - Киев, 1977. - С.45-57.

5. Золин В.Ф., Коренева Л.Г. Редкоземельный зонд в химических и биологических системах. - М.: Наука, 1980.- 349с.

6. Ковалев И.Е., Данилова Н.П., Андронати С.А., Же-ребин Ю.Л. Влияние эномеланина на гемолиз эритроцитов, вызываемый свободнорадикальными

реакциями и другими факторами // Фармакология и токсикология. - 1986. - №4. - С.89-91.

7. Москалёв Ю.П. Минеральный обмен. - М.: Медицина, 1985. - 288с.

8. Тринус Ф.П., Мохорт Н.А., Клебанов В.Н. Нестероидные противовоспалительные средства. - Киев,

1975. -239с.

9. Anghileri L.J. On the antitumor activity of gallium and lanthanides // Arzneimittel-Forsch. - 1975. -Vol.25, N.5. - P.793-795.

10. Anghileri L.J. The effects of lanthanum on the metabolism of calcium in tumors // Int. J. Clin. Pharmacol. Ther. And Toxicol. - 1973. - Vol.8, N.2. - P. Мб-153.

ll.Oberdisse E., Rohling G., Losert W., Schurig R., Oberdisse U. Influence of rare earths on insulin secretion in rats // Naunyn-Schmiedebergs Arch. Pharm. - 1973. - Vol.280, N.2. - P.217-221.

12. Reed Ken C., Bygrave Fyfe L. Accumulation of lanthanum by rat liver mitochondria // Biochem. J. -1974. - Vol. 138, N.2. - P.239-252.

© НЕБЕРА С.А., ГУТНИК И.Н., МАЛЬЦЕВА Т.В. -УДК 617.751.6-053.2 Н 39

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЫЗВАННЫХ ЗРИТЕЛЬНЫХ ПОТЕНЦИАЛОВ НА ШАХМАТНЫЙ ПАТТЕРН У ДЕТЕЙ С АМБЛИОПИЕЙ

С.А. Небера, И.Н. Гутник, Т.В. Мальцева.

Резюме. На основании результатов комплексного анализа зрительных вызванных потенциалов (ЗВП) на шахматный паттерн установлено, что у детей с амблиопией изменения их зависят не только от степени, но и от вида амблиопии (более выраженные при дисбинокулярной). Чем выше степень амблиопии, тем больше увеличиваются пиковые латентности, тогда как амплитуда пиков может мало отличаться от нормы. Выявлены особенности проведения аффе-рентации при дисбинокулярной амблиопии (ДА) с “задержкой” в проекции моторных центров зрительного анализатора при стимуляции косящего глаза. Выявлена функциональная межпо-лушарная асимметрия компенсаторных механизмов при амблиопии в зависимости от поражения левого или правого глаза, что говорит о дисфункции мозга в целом и необходимости использования нейротропных препаратов в комплексном лечении больных с системными нарушениями зрения.

Существенное место в общей структуре детской глазной патологии занимает амблиопия [1]. В изучении ее нейрофизиологических механизмов все чаще используются элскгрофизиологические методы, наиболее информативным из которых является регистрация зрительных вызванных потенциалов (ЗВП). Согласно одной из наиболее разработанных гипотез, зрительная система рассматривается как совокупность каналов, или фильтров, пространственных частот [5,10]. Уже на уровне сетчатки и наружного коленчатого тела (НКТ) выделяются 2 основных канала, свойства которых во многом совпадают со свойствами центрального и периферического зрения человека. В зрительной коре происходит дальнейшая дифференциация и образуются более “узкие” каналы (цвета, восприятия движения и др.), распадающиеся, в свою очередь, на множество еще более специализированных каналов. Работами многих авторов пока-

зано, что амблиопию можно рассматривать как остановку созревания каналов форменного зрения, наиболее рано происходящую при обскура-ционной и относительно позже при рефракционной и дисбинокулярной амблиопии [6,8]. По данным других авторов [3] рефракционную амблиопию можно рассматривать как преимущественное нарушение зрительного компонента, а дисбиноку-лярную - как преимущественное нарушение зрительного и моторного компонентов. Считается, что фиксирующий глаз при амблиопии гак же “нездоров”, как и амблиопичный. Происходит подавление фовеального пути фиксирующего глаза со стороны амблиопичного, что свидетельствует об остаточных бинокулярных связях и дисфункции в структурах головного мозга [4]. Существенным отличием дисбинокулярной амблиопии от других видов амблиопий является мало различающаяся контрастная чувствительность ведуще-