ГЕНЫ Δ-8-ДЕСАТУРАЗЫ, ФЕРМЕНТЫ, КОДИРУЕМЫЕ ИМИ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Выделенная нуклеиновая кислота или ее фрагмент, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, обладающий десатуразной активностью, или комплементарная такой нуклеотидной последовательности, при этом аминокислотная последовательность полипептида по меньшей мере на 55% идентична аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO:29.
2. Выделенная нуклеотидная последовательность или ее фрагмент, содержащая или комплементарная по меньшей мере 55% нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:28 и SEQ ID NO:30.
3. Выделенная нуклеотидная последовательность по п.2, отличающаяся тем, что указанная последовательность кодирует функционально активный Δ8-десатуразный фермент, использующий в качестве субстрата ω6-эйкозадиеновую кислоту или ω3-эйкозатриеновую кислоту.
4. Вектор экспрессии, включающий:
нуклеотидную последовательность, функционально связанную с регуляторной последовательностью, где нуклеотидная последовательность содержит или комплементарна по меньшей мере 55% нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:28 и SEQ ID NO:30.
5. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.4.
6. Клетка-хозяин по п.5, представляющая собой клетку эукариот, выбранную из группы, состоящей из клетки млекопитающего, клетки насекомого, клетки растения или клетки гриба.
7. Растение, содержащее вектор по п.4, причем в результате экспрессии нуклеотидной последовательности вектора в растении образуется по меньшей мере одна полиненасыщенная жирная кислота.
8. Растение по п.7, отличающееся тем, что полиненасыщенная жирная кислота выбрана из группы, состоящей из арахидоновой кислоты (ARA), эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА), докозагексаеновой кислоты (DHA), дихомо-гамма-линоленовой кислоты (DGLA) или ω3-эйкозатетраеновой кислоты (ω3-ЕТА) и любых сочетаний указанных кислот.
9. Очищенный полипептид, кодируемый нуклеотидной последовательностью, содержащей или комплементарной по меньшей мере 55% нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:28 и SEQ ID NO:30.
10. Очищенный полипептид, десатурирующий субстрат в виде полиненасыщенной жирной кислоты с 20 атомами углерода в цепи (C20-PUFA) между 8 и 9 атомами углерода субстрата, причем аминокислотная последовательность полипептида по меньшей мере на 55% идентична аминокислотной последовательности, содержащей SEQ ID NO:29.
11. Очищенный полипептид по п.10, отличающийся тем, что содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:29.
12. Способ получения Δ8-десатуразного фермента, включающий этапы:
a) выделения нуклеотидной последовательности, содержащей или комплементарной по меньшей мере 55% нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:28 и SEQ ID NO:30;
b) конструирования вектора экспрессии, содержащего выделенную нуклеотидную последовательность согласно этапу а), функционально связанную с регуляторной последовательностью; и
c) введения вектора экспрессии в клетку-хозяин на период времени и в условиях, достаточных для образования Δ8-десатуразного фермента.
13. Способ получения полиненасыщенной жирной кислоты, включающий этапы:
а) выделения нуклеотидной последовательности, содержащей или комплементарной по меньшей мере 55% нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID NO:28 и SEQ ID NO:30;
b) конструирования вектора экспрессии, содержащего выделенную нуклеотидную последовательность согласно этапу а), функционально связанную с регуляторной последовательностью;
c) введения вектора экспрессии в клетку-хозяина на период времени и в условиях, достаточных для образования Δ8-десатуразного фермента; и
d) приведения во взаимодействие экспрессированного Δ8-десатуразного фермента с субстратом, выбранным из группы, состоящей из ω6-эйкозадиеновой кислоты, ω3-эйкозатриеновой кислоты и комбинаций указанных кислот, для превращения субстрата в конечную полиненасыщенную жирную кислоту.
14. Способ по п.13, отличающийся тем, что полученная полиненасыщенная жирная кислота представляет собой дихомо-гамма-линоленовую кислоту (DGLA), ω3-эйкозатетраеновую кислоту (ω3-ЕТА) или любую комбинацию указанных кислот.
15. Способ по п.13, дополнительно включающий этап приведения во взаимодействие полученной полиненасыщенной жирной кислоты с по меньшей мере одной дополнительной десатуразой или элонгазой для превращения полученной полиненасыщенной жирной кислоты в другую или дополнительную полиненасыщенную жирную кислоту.
16. Способ получения полиненасыщенной жирной кислоты в клетке-хозяине, включающий этапы:
a) выделения нуклеотидной последовательности, содержащей или комплементарной по меньшей мере 55% нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:28 и SEQ ID NO:30;
b) конструирования вектора экспрессии, содержащего выделенную нуклеотидную последовательность согласно этапу а), функционально связанную с регуляторной последовательностью;
c) введения вектора экспрессии согласно этапу b) и по меньшей мере одной дополнительной рекомбинантной ДНК конструкции, содержащей выделенную нуклеотидную последовательность, функционально связанную с по меньшей мере одной регуляторной последовательностью, кодирующей дельта-9 элонгазу, в клетку-хозяина;
d) приведения во взаимодействие экспрессированного Δ8-десатуразного фермента и дельта-9 элонгазы с субстратами, выбранными из группы, состоящей из линолевой кислоты (LA), альфа-линоленовой кислоты (ALA) и комбинаций указанных кислот, для превращения субстрата в конечную полиненасыщенную жирную кислоту.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что полученная полиненасыщенная жирная кислота представляет собой дихомо-гамма-линоленовую кислоту (DGLA) или ω3-эйкозатетраеновую кислоту (ω3-ЕТА) или любую комбинацию указанных кислот.
18. Способ по п.16, дополнительно включающий этап приведения во взаимодействие полученной полиненасыщенной жирной кислоты с по меньшей мере одной дополнительной десатуразой или элонгазой для превращения полученной полиненасыщенной жирной кислоты в другую или дополнительную полиненасыщенную жирную кислоту.
19. Способ по п.18, отличающийся тем, что полученная полиненасыщенная жирная кислота представляет собой арахидоновую кислоту (ARA), эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА), докозапентаеновую кислоту (DPA), докозагексаеновую кислоту (DHA) или любую комбинацию указанных кислот.