AGRIS - 

2022

Tikhonov, S.L. | Tikhonova, N.V. | Danilova, I.G. | Tikhonova, M.S. | Popovskikh, A.D.

Peptides are biologically active substances with different spectrum of action. Studies of the physicochemical properties of pepsin hydrolyzate of cow colostrum have been carried out. The enzymatic hydrolyzate of bovine colostrum has a high protein content of 9.16% and a low fat content of 0.25%. A precipitate of the hydrolyzate was obtained by centrifugation at 3900 rpm for 10 min. Two fractions R (1) and R (2) were isolated from the sediment from the pepsin hydrolyzate of cow colostrum on a MALDI-TOF mass spectrometer. It has been established that the peptide chain R (1), consisting of 6 amino acid residues in different sequences, forms a polypeptide of 11 amino acids. Peptide R (2) refers to polypeptides: its chain includes 7 repeating amino acid residues. The molecular weight of the peptide R (1) is 1.7 kDa, the peptide R (2) – 7 kDa. According to the scientific database NCBI, peptide R (1) refers to the little-studied peptide "Nuclear receptor 2C2-associated protein, Bos taurus", peptide R (2) refers to peptides "14 kDa phosphohistidine phosphatase, Pongo abelii" whose biological functions have not been studied. When studying the cytotoxicity of the isolated peptides in the composition of the bovine colostrum hydrolyzate on HEG 293 cells using the Neutral Red Assay method with a 24-hour incubation, it was found that the cytotoxicity of the studied hydrolyzate at concentrations from 0.1 to 0.5 mg/ml ranges from 0.9 to –6.30, which indicates its absence. The antimicrobial and antimicrobial activity of cow colostrum hydrolyzate against Escherichia coli, Bacillus subtilis and Candida albicans has been proven. Probably, the isolated peptides can be used as part of pharmaceuticals or functional products. | Пептиды относятся к биологически активным веществам различного спектра действия. Проведены исследования физико-химических свойств пепсинового гидролизата молозива коров. Ферментативный гидролизат молозива коров отличается высоким содержанием белка 9,16% и низким содержанием жира 0,25%. Получен осадок гидролизата с помощью центрифугирования при 3900 об/мин в течение 10 минут. Из осадка из пепсинового гидролизата молозива коров на МАЛДИ-ТОФ масс-спектрометре выделено две фракции R (1) и R (2). Установлено, что пептидная цепь R (1) состоит из 6 аминокислотных остатков в разной последовательности и образует полипептид из 11 аминокислот. Пептид R (2) относится к полипептидам, так как в его цепь входят 7 повторяющихся аминокислотных остатков. Молекулярная масса пептида R (1) составляет 1,7 кДа, пептида R (2) – 7 кДа. Согласно научной базе данных NCBI пептид R (1) относится к малоизученному пептиду "Nuclear receptor 2C2-associated protein, Bos taurus", пептид R (2) относится к пептидам "14 kDa phosphohistidine phosphatase, Pongo abelii", биологические функции которого не исследованы. При изучении цитотоксичности выделенных пептидов в составе гидролизата молозива коров на клетках линии HEG 293 методом Neutral Red Assay при 24 часовой инкубации установлено, что цитотоксичность исследуемого гидролизата в концентрациях от 0,1 до 0,5 мг/мл составляет от 0,9 до – 6,30, что свидетельствует об ее отсутствии. Доказана антимикробная и противомикробная активность гидролизата молозива коров по отношению к Escherichia coli, Bacillus subtilis и Candida albicans. Вероятно, выделенные пептиды могут быть использованы в составе фармпрепратов или функциональных продуктов.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2020

Kolodina, E.N., The L.K. Ehrnst All-Russia Research and Development Inst. of Animal Husbandry, Moscow Region

The Rhodotorula family is able to produce rhodotorulic acid, yellow pigments-P-carotene, torulene, torularodin, b vitamins, as well as a large number of lipids, which is used in biotechnology as a source of biologically active substances. Currently а strain of yeast, Rhodotorula spp., isolated from the gastrointestinal tract of a pig was selected for the study. The purpose of the work was to study the biological safety of the yeast isolate of the genus Rhodotorula spp. There were studied such indicators as the resistance of yeast culture to antimycotic drugs, cytotoxicity, and sensitivity to disinfectants to achieve this goal. The interpretation of the results of sensitivity to the main antifungal drugs was carried out according to the recommendations of the L.K. Ernst Federal Science Center for Animal Husbandry. The yeast strain as isolated is Rhodotorula spp. showed resistance only to fluconazole (DZR was 14.40±0.40 mm). Intermediate resistance was observed against ketoconazole (DZR 23.20±0.35 mm) and intraconazole (DZR 15.30±0.37 mm). The amphotericin B was the most active agent in the studies, so the DZR was 22.00±0.4 mm. By the method of bioassay on Tetrachymena pyriformis infusoria, it was found the genus Rhodotorula spp. yeast does not have a pronounced cytotoxic effect. Thus, based on the results of calculations, it was found that the percentage of survival of infusoria was higher than 90%. The titer of viable bacteria was determined in a suspension treated with various concentrations of hydrogen peroxide solution. The results indicate that in 6% of the concentration of hydrogen peroxide solution after 30 minutes of cultivation, the titer of the culture decreased 100 times and amounted to 1.0x10E4 CFU/ml, with the titer of the initial culture of 1.0x10E6 CFU/ml. Complete inactivation of yeast cells is observed after 120 min. incubation with a disinfectant in concentrations from 6 to 0.18%. | Семейство Rhodotorula способно продуцировать родоторулевую кислоту, пигменты желтого цвета – Р-каротин, торулен, торулародин, витамины группы В, и большое количество липидов, что в настоящее время используется в биотехнологии как источник биологически-активных веществ. Для исследования был отобран штамм дрожжей Rhodotorula spp., выделенный из желудочно-кишечного тракта свиньи. Цель работы - изучение биологической безопасности изолята дрожжей рода Rhodotorula spp. Изучены такие показатели, как устойчивость культуры дрожжей к антимикотическим препаратам, цитотоксичность, а также чувствительность к дезинфектантам. Интерпретацию результатов чувствительности к основным противогрибковым препаратам проводили согласно рекомендациям ФБУН НИИЭМ им. Пастера. Выделенный штамм дрожжей Rhodotorula spp. проявлял резистентность только к флуконазолу (ДЗЗР составил 14,40±0,40 мм). Промежуточная устойчивость отмечалась в отношении кетоконазола (ДЗЗР 23,20±0,35 мм) и интроконазола (ДЗЗР 15,30±0,37 мм). Амфотерицин В в исследованиях являлся наиболее активным агентом, так ДЗЗР составил 22,00±0,4 мм. Методом биотестирования на инфузориях Tetrachymena pyriformis было установлено, что дрожи рода Rhodotorula spp. не обладают выраженным цитотоксическим действием. По результатам расчетов выявлено, что процент выживаемости инфузорий был выше 90%. Был определен титр жизнеспособных бактерий в суспензии, обработанной различными концентрациями раствора перекиси водорода. Результаты свидетельствуют о том, что в 6% концентрации раствора перекиси водорода после 30 мин культивирования титр культуры снижался в 100 раз и составил 1,0х10E4 КОЕ/мл, при титре исходной культуры 1,0х10E6 КОЕ/мл. Полная инактивация клеток дрожжей наблюдается после 120 мин инкубации с дезинфицирующим средством в концентрациях от 6 до 0,18%.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2015

Malan'eva, A.G. | Malan'ev, A.V. | Egorov, I.G. | Plotnikova, E.M. | Ivanov, A.V., Federal Centre of Toxicologic and Irradiation Safety of Animals, Kazan

Изучали влияние синтетического пиретроида дельтаметрина (ДМ) на перевиваемые культуры клеток животных. ДМ растворяли в 10%-ном растворе диметилсульфоксида, использовали концентрации 0,38; 0,038; 0,0038 мг/мл. В контроле к культурам добавляли солевой раствор Хенкса. Клетки инкубировали в присутствии токсина в течение 72 ч. ДМ в дозе 0,38 мг/мл вызывал гибель 83,9% клеток перевиваемой культуры НГУК-1; 0,038 мг/мл - 50,4%; 0,0038 мг/мл - 23,5%. Для перевиваемой почечной линии культуры клеток МDВК ДМ в дозе 0,38 мг/мл вызывал гибель 71,2% клеток; 0,038 мг/мл - 45,8% клеток, 0,0038 мг/мл - 15,7%. При внесении в культуральную среду ДМ в дозе 0,038 мг/мл цитотоксический эффект проявлялся снижением индекса пролиферации в 2 раза, поэтому данную дозу можно рассматривать как LC50. Предложенная модель может быть использована для решения разнообразных задач в области токсикологии и клеточной биологии, в частности для изучения физического и биологического действия ряда токсинов, представляющих практический интерес, на клеточные культуры. | The study investigated the effect of a synthetic pyrethroid deltamethrin (DM) on continued animal cell cultures. DM was dissolved in 10% DMSO at the rates of 0.38, 0.038, 0.0038 mg/ml. In control the cultures were added with Hank's salt solution. The cells were incubated in the presence of the toxin for 72 h. DM at the rate of 0.38 mg/ml caused the death of 83.9% cells of the continued NGUK-1 culture; at the rate of 0.038 mg/ml – of 50.4%; and at the rate of 0.0038 mg/ml – of 23.5% cells. In case of continued renal MDBK cell culture DM at the rate of 0.38 mg/ ml caused the death of 71.2% cells, the rate of 0.038 and 0.0038 mg/ml resulted in a death of 45.8% and 15.7% of cells, respectively. The cytotoxic effect from the introduction of DM in the cell culture at the rate of 0.038 mg/ml manifested in the decrease of the proliferation index in 2 times and the dose was considered as LC50. The proposed model can be used to solve various tasks in the field of toxicology and cell biology, specifically for investigation of physical and biological effect of a number of toxins of practical interest on cell cultures.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2015

Terekhov, V.I.

Изучена возможность использования инфузорий с целью биотестирования токсигенных Escheriсhia coli, вызывающих диарею у молодняка крупного рогатого скота и свиней. Было испытано 4 вида инфузорий - Paramecium caudatum, Stylonychia mytilus, Colpoda steinii и Tetrahymena pyriformis. Инфузорий выращивали на среде Лозина-Лозинского. Эшерихии инкубировали в бульоне Хоттингера. На предметное стекло наносили 3 капли суточной среды культивирования инфузорий, после чего проводили подсчет их количества под увеличением 2х8, после чего добавляли 1 каплю бульонной тест-культуры E.coli. Спустя 5 минут производили предварительный, а через 2 ч окончательный просмотр и подсчет количества живых инфузорий. Установлено, что инфузории видов Paramecium caudatum, Colpoda steinii и Tetrahymena pyriformis не пригодны для тестирования токсигенных свойств эшерихий так как первые 2 не погибают при добавлении культуры патогенной E.coli, а 3-й вид напротив весьма чувствителен и погибает даже при добавлении стерильного бульона Хоттингера. Специфически чувствительным к экзотоксинам эшерихий оказался только вид Stylonychia mytilus. В наибольшей степени на стилонихии оказывают губительное влияние цито-токсины (STX, СNF) эшерихий, обуславливая гибель данных инфузорий при 2-часовой экспозиции с суточной культурой в количестве 22-47%. Под действием цитотонинов (TL, TS, GEM) эшерихий стилонихии погибали в меньшем количестве - 7-21%. Использование метода биотестирования на стилонихиях позволило установить, что накопление экзотоксинов в среде культивирования происходит в течение 6-7 дней. Однако культивирование энтеротоксигенных эшерихий более 6 дней приводит к инактивации TL-, TS-токсинов. Таким образом, индикацию токсигенных E.coli среди клинических изолятов можно осуществлять методом биотестирования с использованием инфузорий Stylonychia mytilus, которые высоко чувствительны не только к цитотоксинам, но и цитотонинам возбудителя эшерихиоза. | There has been studied a usability of infusoria for the purpose of biotesting toxigenic Escheriсhia coli causing diarrhea in young cattle and pigs. Infusoria of 4 types - Paramecium caudatum, Stylonychia mytilus, Colpoda steinii and Tetrahymena pyriformis were tested. Infusoria were cultivated on a Lozina-Lozinsky medium. Escherichia were incubated in a Hottinger's broth. Onto a glass slide 3 drops of a daily cultivation medium were applied 3 drops of a day infusorian cultivation medium following by counting their number under amplification of 2 x 8, after which 1 drop of a broth test culture was added. A preliminary examination and accounting were carried out after 5 minutes, the final examination and accounting of alive infusoria was after 2 h. it has been established the infusoria of Paramecium caudatum, Colpoda steinii and Tetrahymena pyriformis are not suitable for testing toxigenic properties of Escherichia, as the first 2 do not die when added with a culture of pathogenic E. coli, but the 3-d type, on contrary, is rather sensitive and dies even when adding a sterile Hottinger's broth. Only Stylonychia mytilus appeared to be specifically sensitive to Escherichia exotoxins. (STX, SNF) Escherichia cytotoxins have the most toxic effect on Stylonychia causing the death of these infusoria under 2-hour exposition with a day culture in an amount of 22-47%. Under effect of cytotonins of Escherichia (TL, TS, GEM) died in a less amount – 7-21%. The use opf the biotesting method for Stylonychia allowed finding out that the accumulation of exotoxins in a cultivation medium happens for 6-7 days. However, cultivating enterotoxigenic Escherichia for more than 6 days results in inactivation of TL-, TS-toxins. Thus, indication of toxigenic E. coli among clinical isolates can be carried out by biotesting using infusoria Stylonychia mytilus that are high sensitive not only to cytotoxins, but also to cytotonins causing colibacillosis.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation