AGRIS - 

2022

Nikonenko, T.B. | Baryshnikov, P.I. | Fedorova, G.A. | Tkachenko, L.V.

The studies were carried out on 11 dogs at the age from 6 months to 1 year during the outbreak of a respiratory infection; the owners of these dogs sought veterinary medical care in a veterinary clinic in the town of Cheremkhovo, the Irkutsk Region. The materials for the study included blood samples, rectal swabs, feces, and swabs from the conjunctiva, nasal epithelium, posterior pharyngeal wall and near the pharyngeal glands. The materials were examined by immunochromatographic analysis (ICA) using VetExpert CRV/CCV Ag test cassettes with simultaneous detection and differentiation of adenovirus types 1 and 2 antigens and canine parainfluenza virus. Bacteriological studies were carried out according to generally accepted methods. Virological and bacteriological studies were carried out in the Irkutsk Interregional Veterinary Laboratory. It was found that all sick dogs had one or two types of pathogenic viruses. Adenovirus-2 was found in 9 (81.8%), and parainfluenza virus - in 7 (63.6%) animals. Bordetella bronchiseptica species bacteria were isolated from the materials from 9 dogs (81.8%), Staphylococcus aureus - from 7 dogs (63.6%), Staphylococcus epidermidis and Enterococcus faecalis - from 3 dogs (27.3% each), Streptococcus pneumonia and Citrobacter diversus - from 4 dogs (36.4% each), and Enterobacter cloacae - from 2 dogs (18.2%). The analysis of the etiological structure of microorganisms made it possible to reveal that in all 11 dogs (100%), the pathology was determined by the association of 3 to 5 types of viruses and bacteria. At the same time, either both viruses or one of them participate in all associations. The associations represented by 3 types of microorganisms were found only in 1 dog (9.1%). The associations represented by 4 types of microorganisms were found in 5 dogs (45.4%); the associations represented by 5 types of microorganisms were found in 5 dogs (45.4%). | Исследования проведены на 11 собаках в возрасте от 6 мес. до 1 года в период вспышки респираторной инфекции, владельцы которых обращались за помощью в ветеринарную клинику г. Черемхово Иркутской области. Материалом для исследований являлись кровь, ректальные мазки, фекалии, смывы с конъюнктивы, назального эпителия, задней стенки глотки и около фаренгиальных желёз. Материал исследовали методом иммунохроматографического анализа (ИХА) с использованием тест-кассет VetExpert CRV/CCV Ag с одновременным обнаружением и дифференциацией антигенов аденовирусов 1-го и 2-го типов и вируса парагриппа собак. Бактериологические исследования проводились по общепринятым методикам. Вирусологические и бактериологические исследования осуществлялись в Иркутской межобластной ветеринарной лаборатории. В результате проведённых исследований установлено, что у всех больных собак обнаружено наличие одного или двух видов патогенных вирусов. При этом аденовирус-2 обнаружен у 9 (81,8%), а вирус парагриппа – у 7 (63,6%) животных. Бактерии вида Bordetella bronchiseptica выделены из материала от 9 (81,8%), Staphylococcus аureus – от 7 (63,6%), Staphylococcus еpidermidis и Enterococcus faecalis – от 3 (по 27,3%), Streptococcus рneumonia и Citrobacter diversus – от 4 (по 36,4%), а Enterobacter cloacae – от 2 (18,2%) собак. Анализ этиологической структуры микроорганизмов позволил установить, что у всех 11 (100%) животных патология обусловлена их ассоциацией с участием от 3 до 5 видов вирусов и бактерий. При этом во всех ассоциациях участвуют оба вируса или один из них. Ассоциации, представленные 3 видами микроорганизмов, установлены только у 1 (9,1%) собаки, 4 видами микроорганизмов – у 5 (45,4%) собак, 5 видами микроорганизмов – у 5 (45,4%) собак.

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2015

Vasilyeva Yuliya B. | Vasilyev Dmitry А. | Bogdanov Ilgizar I.

The goal of this work was the development of new schemes of bacteriological detection of the Bordetella bronchiseptica species bacteria. In the improved scheme, authors used created differential-diagnostic environment, selective supplement and biological product containing the phages of Bordetella bronchiseptica bacteria. Improved scheme of bacteriological detection of bacteria B. bronchiseptica species with a use of «dripping drop» method included biomaterial sampling for the developed differential-diagnostic environment with and without selective supplement with cultivation for 24 hours at 36-37ºС, the selection of not less than 3 characteristic colonies of turquoise colour, microscopy Gram stained smears, confirmation by the «dripping drop» method with specific bacteriophages. In doubt cases, the scheme was supplemented with biochemical tests. Hemolysis was performed by express-method for 15-30 min on the glass. As a result of their studies, the authors found out that the duration of analysis with the «dripping drop» method inclusion into the scheme is reduced to 60 hours, while using less of nutrient environment, reagents, laboratory glassware. The scheme test on the closely related test-strains showed a negative result in all experiments. It was established that the analytical sensitivity of the developed bacteriological scheme was 103 m.k./ml with a use of bacteriophages. | Bordetella bronchiseptica, Experimentation, phages, identification, bacterioses. Целью работы являлась разработка новых бактериологических схем детекции бактерий вида Bordetella bronchiseptica. Использовали в усовершенствованной схеме разработанную дифференциально-диагностическую среду, селективную добавку и биопрепарат, содержащий фаги бактерий Bordetella bronchiseptica. Усовершенствованная схема бактериологической детекции бактерий вида B.bronchiseptica с использованием метода «стекающая капля» включала взятие биоматериала на разработанную дифференциально-диагностическую среду с селективной добавкой и без неё с культивированием 24 ч при 36-37ºС, отбор не менее 3-х характерных колоний бирюзового цвета, микроскопию мазков, окрашенных по Граму, подтверждение методом «стекающей капли» со специфическими бактериофагами. В сомнительных случаях схему дополняли биохимическими тестами. Гемолиз проводили экспресс-методом на стекле в течение 15-30 мин. В результате проведенных исследований авторы установили, что продолжительность анализа при включении в схему «метода стекающей капли» сокращается до 60 ч, при меньшем расходе питательных сред, реактивов, лабораторной посуды. Испытание схем на близкородственных тест-штаммах во всех экспериментах показало отрицательный результат. Установили, что аналитическая чувствительность разработанной бактериологической схемы с использованием бактериофагов составила 103 м.к./мл.

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Ulyanovsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin - Russian Federation

2015

Vasilyeva Yuliya B. | Vasilyev Dmitry А. | Bogdanov Ilgizar I.

The goal of this work was the development of new schemes of bacteriological detection of the Bordetella bronchiseptica species bacteria. In the improved scheme, authors used created differential-diagnostic environment, selective supplement and biological product containing the phages of Bordetella bronchiseptica bacteria. Improved scheme of bacteriological detection of bacteria B. bronchiseptica species with a use of «dripping drop» method included biomaterial sampling for the developed differential-diagnostic environment with and without selective supplement with cultivation for 24 hours at 36-37ºС, the selection of not less than 3 characteristic colonies of turquoise colour, microscopy Gram stained smears, confirmation by the «dripping drop» method with specific bacteriophages. In doubt cases, the scheme was supplemented with biochemical tests. Hemolysis was performed by express-method for 15-30 min on the glass. As a result of their studies, the authors found out that the duration of analysis with the «dripping drop» method inclusion into the scheme is reduced to 60 hours, while using less of nutrient environment, reagents, laboratory glassware. The scheme test on the closely related test-strains showed a negative result in all experiments. It was established that the analytical sensitivity of the developed bacteriological scheme was 103 m.k./ml with a use of bacteriophages. | Bordetella bronchiseptica, Experimentation, phages, identification, bacterioses. Целью работы являлась разработка новых бактериологических схем детекции бактерий вида Bordetella bronchiseptica. Использовали в усовершенствованной схеме разработанную дифференциально-диагностическую среду, селективную добавку и биопрепарат, содержащий фаги бактерий Bordetella bronchiseptica. Усовершенствованная схема бактериологической детекции бактерий вида B.bronchiseptica с использованием метода «стекающая капля» включала взятие биоматериала на разработанную дифференциально-диагностическую среду с селективной добавкой и без неё с культивированием 24 ч при 36-37ºС, отбор не менее 3-х характерных колоний бирюзового цвета, микроскопию мазков, окрашенных по Граму, подтверждение методом «стекающей капли» со специфическими бактериофагами. В сомнительных случаях схему дополняли биохимическими тестами. Гемолиз проводили экспресс-методом на стекле в течение 15-30 мин. В результате проведенных исследований авторы установили, что продолжительность анализа при включении в схему «метода стекающей капли» сокращается до 60 ч, при меньшем расходе питательных сред, реактивов, лабораторной посуды. Испытание схем на близкородственных тест-штаммах во всех экспериментах показало отрицательный результат. Установили, что аналитическая чувствительность разработанной бактериологической схемы с использованием бактериофагов составила 103 м.к./мл.

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Ulyanovsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin - Russian Federation

2014

Vasilyeva Yuliya B. | Vasilyev Dmitry А. | Маstilenko Аndrey V. | Sverkalova Darya G. | Semanin Аnton G.

differentiating biochemical markers - elective features that reduce the total number of identification and selective tests of components oppressive of nasopharyngeal-associated microflora and do not affect reproduction and species properties of B.bronchiseptica. As a result of scientific research components for culturing bacteria B.bronchiseptica, the optimal concentration of nutrition (fermentative peptone 20-30 g/l), salts (sulphates iron - 0.02-0.03 g/l, sulfate of magnesium - 0.4-0.5 g/l sodium chloride 4,5-6,5 g/l), neutralizers of metabolic products (starch 2.5-5.0 g/l), elective components (urea 5.0 g/l, lactose 0.7 g/l, bromthymol blue 0.2 g/l) was established. As selective additives possible use of antimicrobial agents (Cefazolin - 0,004 g/l, ampicillin - 0,0025 g/l), antimycotic preparations (fluconazole, miconazole - 0,002 g/l) and inhibitors associants (barium chloride – 5,0 g/l). Optimal pH factor for the growth of bacteria B.bronchiseptica is 7,0+0,2. | дифференцирующих биохимических маркеров – элективных компонентов, позволяющих сократить общее количество идентификационных тестов и селективных компонентов, угнетающих сопутствующую носоглоточную микрофлору и не влияющих на размножение и видовые свойства B.bronchiseptica. В результате проведенного научного поиска компонентов для культивирования бактерий B.bronchiseptica установили наиболее оптимальные концентрации питательной основы (ферментативный пептон 20-30 г/л), солей (сернокислого железа - 0,02-0,03 г/л, сернокислого магния - 0,4-0,5 г/л, хлорида натрия 4,5-6,5 г/л), нейтрализаторов продуктов обмена (крахмал 2,5-5,0 г/л), элективных компонентов (мочевина 5,0 г/л, лактоза 0,7 г/л, бромтимоловый синий 0,2 г/л). В качестве селективных добавок возможно применение антимикробных средств (цефазолин - 0,004 г/л, ампициллин - 0,0025 г/л), антимикотических препаратов (флуконазол, миконазол - 0,002 г/л) и ингибиторов ассоциантов (хлорид бария – 5,0 г/л). Оптимальный показатель рН среды для роста бактерий B.bronchiseptica 7,0+0,2. | В статье приводится обзор применяемых в настоящее время питательных сред для культивирования бактерий Bordetella bronchiseptica и освещаются результаты собственных исследований по разработке селективно-диагностических питательных сред для первичного выделения клинических штаммов возбудителя бордетеллёза животных. Авторами проведен научно обоснованный подбор питательной основы и компонентов, обеспечивающих максимальный ростостимулирующий эффект, даже при наличии единичных клеток в пробе | The article provides an overview of the currently applied nutrient milieu for cultivation of bacteria Bordetella bronchiseptica, and highlights the results of their research on the development of selective diagnostic nutrient milieu for the initial allocation of clinical isolates of bordetelesis of animals. The authors have carried out a scientifically substantiated selection of nutrition and components ensuring maximum growth-stimulating effect, even in the presence of single cells in the sample

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Ulyanovsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin - Russian Federation

2014

Vasilyeva Yuliya B. | Vasilyev Dmitry А. | Маstilenko Аndrey V. | Sverkalova Darya G. | Semanin Аnton G.

differentiating biochemical markers - elective features that reduce the total number of identification and selective tests of components oppressive of nasopharyngeal-associated microflora and do not affect reproduction and species properties of B.bronchiseptica. As a result of scientific research components for culturing bacteria B.bronchiseptica, the optimal concentration of nutrition (fermentative peptone 20-30 g/l), salts (sulphates iron - 0.02-0.03 g/l, sulfate of magnesium - 0.4-0.5 g/l sodium chloride 4,5-6,5 g/l), neutralizers of metabolic products (starch 2.5-5.0 g/l), elective components (urea 5.0 g/l, lactose 0.7 g/l, bromthymol blue 0.2 g/l) was established. As selective additives possible use of antimicrobial agents (Cefazolin - 0,004 g/l, ampicillin - 0,0025 g/l), antimycotic preparations (fluconazole, miconazole - 0,002 g/l) and inhibitors associants (barium chloride – 5,0 g/l). Optimal pH factor for the growth of bacteria B.bronchiseptica is 7,0+0,2. | дифференцирующих биохимических маркеров – элективных компонентов, позволяющих сократить общее количество идентификационных тестов и селективных компонентов, угнетающих сопутствующую носоглоточную микрофлору и не влияющих на размножение и видовые свойства B.bronchiseptica. В результате проведенного научного поиска компонентов для культивирования бактерий B.bronchiseptica установили наиболее оптимальные концентрации питательной основы (ферментативный пептон 20-30 г/л), солей (сернокислого железа - 0,02-0,03 г/л, сернокислого магния - 0,4-0,5 г/л, хлорида натрия 4,5-6,5 г/л), нейтрализаторов продуктов обмена (крахмал 2,5-5,0 г/л), элективных компонентов (мочевина 5,0 г/л, лактоза 0,7 г/л, бромтимоловый синий 0,2 г/л). В качестве селективных добавок возможно применение антимикробных средств (цефазолин - 0,004 г/л, ампициллин - 0,0025 г/л), антимикотических препаратов (флуконазол, миконазол - 0,002 г/л) и ингибиторов ассоциантов (хлорид бария – 5,0 г/л). Оптимальный показатель рН среды для роста бактерий B.bronchiseptica 7,0+0,2. | В статье приводится обзор применяемых в настоящее время питательных сред для культивирования бактерий Bordetella bronchiseptica и освещаются результаты собственных исследований по разработке селективно-диагностических питательных сред для первичного выделения клинических штаммов возбудителя бордетеллёза животных. Авторами проведен научно обоснованный подбор питательной основы и компонентов, обеспечивающих максимальный ростостимулирующий эффект, даже при наличии единичных клеток в пробе | The article provides an overview of the currently applied nutrient milieu for cultivation of bacteria Bordetella bronchiseptica, and highlights the results of their research on the development of selective diagnostic nutrient milieu for the initial allocation of clinical isolates of bordetelesis of animals. The authors have carried out a scientifically substantiated selection of nutrition and components ensuring maximum growth-stimulating effect, even in the presence of single cells in the sample

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Ulyanovsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin - Russian Federation

2013

Vasil'eva, Yu.B., Ulyanovsk State Agricultural Academy

Developed were bio-preparations for improvement of laboratory methods for the identification of Bordetella bronchiseptica. Selectively diagnostic medium containing peptone enzyme in the amount of 20.0 g/dm3; methionine - 0.3 g/dm3; cysteine - 0.3 g/dm3; nicotinic acid - 0.1 g/dm3; cefazolin sodium salt - 0,004 g/dm3; barium chloride - 0.4 g/dm3; glucose - 0.7 g/dm3; lactose - 0.7 g/dm3; sucrose - 0.7 g/dm3; maltose - 0.7 g/dm3; mannitol - 0.7 g/dm3; bromthymol blue - 0.2 g/dm3. On the medium in 48 hours only strains B. bronchiseptica grow characterized with typecal appearance of colonies: blue, the color of a changed milieu, with long-cultivation with dark center. Antigenic preparation and hyperimmune serum for immunological diagnosis of bordetelesis have been developped. An antigen is produced by effecting ultrasound: 5 micron – for 1 min - 1 ml of bacterial suspension. Hyperimmune serum is got by immunizing rabbits according to the schedule: in the thigh intramuscularly is administered 0.5 cm3 of antigenic preparation of different titres of antigens with the addition of 0.5 cm3 of complete adjuvant Freud. Then go intramuscular injections every 3 days by 0,25; 0,5; 0,75; 1,0; 1.25 and 1.5 ml of antigenic preparation. After 10, 15, 20 days after the start of injection, blood is taken on 5 ml and the serum is prepared. A versatile program for PCR amplification surveys with electrophoretic detection of amplification of products and registration in the real-time mode. The proposed method of PCR in the multiplexable format identifies 3 specific DNA fragment of B. bronchiseptica. A biological preparation is developed on the basis of bacteriophages with high catalytic activity: the ratio of the number of phage particles and bacterial cells - 1:2, the time of incubation at 37 degrees С - 7 h, processing by chloroform in the ratio of 1:10 for 15 minutes. A developed are recommended for indication and identification of В. bronchiseptica in biological material and external environment. | Разрабатывали биопрепараты для усовершенствования лабораторных методов идентификации Bordetella bronchiseptica. Разработана селективно-диагностическая среда, включающая пептон ферментативный в количестве 20,0 г/л; метионин - 0,3 г/л; цистеин - 0,3 г/л; никотиновую кислоту - 0,1 г/л; цефазолина натриевую соль - 0,004 г/л; хлорид бария - 0,4 г/л; глюкозу, лактозу, сахарозу мальтозу и маннит – по 0,7 г/л; бромтимоловый синий - 0,2 г/л. На среде через 48 ч вырастают только штаммы B. Bronchiseptica, отличающиеся характерным внешним видом колоний: синие, цвета измененной среды, при длительным культивировании - с темным центром. Разработаны антигенный препарат и гипериммунная сыворотка для иммунологической диагностики бордетеллёза. Антиген получают воздействуя ультразвуком в режиме: 5 микрон в течение 1 мин. на 1 мл бактериальной взвеси. Гипериммунную сыворотку получают, иммунизируя кроликов по схеме: в область бедра вводят внутримышечно 0,5 мл антигенного препарата с разными титрами антигенов с добавлением 0,5 мл полного адъюванта Фрейда. Затем проводят внутримышечные инъекции через каждые 3 дн. по 0,25; 0,5; 0,75; 1,0; 1,25 и 1,5 мл антигенного препарата. Спустя 10, 15, 20 дн. после начала инъекций берут кровь по 5 мл и готовят сыворотку. Создана универсальная программа амплификации для проведения ПЦР-исследования с электрофоретической детекцией продуктов амплификации и регистрацией в режиме реального времени. Предложенная методика проведения ПЦР в мультиплексном формате, выявляет 3 специфических фрагмента ДНК B. bronchiseptica. Разработан биопрепарат на основе бактериофагов с высокой литической активностью: соотношение количества фаговых корпускул и бактериальных клеток - 1:2, время инкубации при температуре 37 град. С - 7 ч, обработка хлороформом в соотношении 1:10 в течение 15 мин. Разработанные биопрепараты рекомендуются для индикации и идентификации В. bronchiseptica в биологическом материале и во внешней среде.

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2013

Vasil'eva, Yu.B., Ulyanovsk State Agricultural Academy

There were developed test systems of indication and identification of Bordetella bronchiseptica. Bacteriological examination includes taking deep smear from throat of animals for a selective diagnostic milieu BBR-7 USSA with the cultivation of 24-48 hours, the selection of 3 characteristic colonies of turquoise color, perhaps with a dark center in meat-and-peptone broth and cultivation within 24 hours under 37 degrees С, microscopy of smears, stained according to Gram, planting on milieu Simmons, tests on oxidase and catalase, express method of hemolytic activity. Immunological indication and identification B. bronchiseptica includes obtaining antigens by ultrasonic disintegration; immune serum by hyperimmunization of laboratory animals and carrying out immunological reactions (AR, RID, RDP). Molecular genetic indication and identification B. bronchiseptica includes the use of prime systems; sorbent method of extraction of DNA; holding PCR in mono - and multiplex format. Indication and identification of B. bronchiseptica using specific bacteriophages includes isolation of bacteriophages B. bronchiseptica by three-day ultraviolet rays; phage-indication by SPOT test or reaction of growth of phage titer.For effective indication and identification of bacteria B. bronchiseptica it is possible to use both individual components of the test-systems, and their combined usage. The system may be used to confirm a clinical diagnosis, to reveal atypical forms of disease, to detect bacilli carriers, to identify a post evaluation. | Разрабатывали тест-системы индикации и идентификации Bordetella bronchiseptica. Бактериологическое исследование включало взятие глубоких мазков из глотки животных на селективно-диагностическую среду ББР-7 УГСХА с культивированием 24-48 ч, отбор не менее 3-х характерных колоний бирюзового цвета, возможно с темным центром в мясопептонный бульон и культивирование в течение 24 ч при 37 град. С, микроскопию мазков, окрашенных по Граму, посев на среду Симмонса, тесты на оксидазу и каталазу, экспресс-метод оценки гемолитической активности. Иммунологическая индикация и идентификация B. bronchiseptica включает получение антигенов ультразвуковой дезинтеграцией; иммунной сыворотки гипериммунизацией лабораторных животных и проведение иммунологических реакций (РА, РИД, РДП). Молекулярно-генетическая индикация и идентификация B. bronchiseptica включает использование праймерных систем; сорбентный способ экстракции ДНК; проведение ПЦР в моно- и мультиплексном формате. Индикация и идентификация B. bronchiseptica с использованием специфичных бактериофагов включает выделение бактериофагов B. bronchiseptica трехдневным воздействием ультрафиолетовых лучей; фагоиндикацию СПОТ-тестом или реакцией нарастания титра фага. Для эффективной индикации и идентификации бактерий B. bronchiseptica возможно использование как отдельных компонентов тест-системы, так и их сочетанное применение. Система может применяться для подтверждения клинического диагноза, выявления атипичных форм заболевания, обнаружения бактерионосителей, установления ретроспективного анализа.

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation