AGRIS - 

2023

Savchenkova, I.P. | Nadtochej, G.A.

Mammalian mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) produce extracellular vesicles (EVs) associated with the plasma cell membrane, which may contain growth factors, chemokines, cytokines, and microRNAs. The purpose of the work is to obtain EVs from conditioned media (CM) of MSCs of bone marrow (BM), umbilical cord blood (UCB) and adipose tissue (AT) of animals; both of farm (cattle, sheep, horses) and of small domestic (dogs, cats) ones. There were used MSCs that were previously obtained from the bovine and ovine BM, equine UCB, ovine, bovine, equine, canine and feline AT. MSCs were thawed and inoculated into 25 cm2 growth area flasks, after 48 h they were reinoculated into 175 cm2 growth area flasks in a ratio 1:7 and incubated for 10 days until the cells reached a complete monolayer. Then the CM from all MSC samples was poured into 50 mL sterile centrifuge tubes and EVs were isolated. For this purpose, there was used the differential centrifugation method followed by ultracentrifugation. In all samples, electron microscopy revealed round or irregularly shaped microparticles of different sizes. The diameters of individual EVs did not differ statistically between different animal species (p = 0.1). When comparing the number of particles isolated from 50 mL of CM from MSCs of different animal species, no statistically significant differences were detected (p = 0.1). So, on one mesh of MSC (BM) and MSC (AT), 3±0.1 and 6±0.07 particles with a size of 50-100 nm, 7±0.02 and 4±0.03 particles of 100-150 nm, as well as 3±0.4 and 2±0.06 particles larger than 150 nm were detected. EVs from CM of canine MSC (AT) were the most homogeneous in both shape (round) and size, and the main part was found in the range of 50-100 nm (12±0.02 particles). In samples isolated from the CM of ovine, bovine, equine MSC (AT) and equine MSC (UCB), the number of particles with a diameter of 50-100 nm was 7±0.2; 7±0.01; 5±0.7 and 8±0.02. | Мезенхимные стволовые/стромальные клетки (МСК) млекопитающих продуцируют внеклеточные везикулы (ВВ), связанные с плазматической клеточной мембраной, в которых могут присутствовать факторы роста, хемокины, цитокины, микроРНК. Цель работы - получить внеклеточные везикулы из кондиционированных сред мезенхимных стволовых/стромальных клеток костного мозга, пуповинной крови и жировой ткани с.-х. (крупный рогатый скот, овцы, лошади) и мелких домашних (собаки, кошки) животных. В работе использовали МСК, полученные ранее из костного мозга (КМ) крупного рогатого скота (КРС) и овец, пуповинной крови (ПК) лошадей, жировой ткани (ЖТ) овец, КРС, лошадей, собак и кошек. МСК размораживали и засевали в матрасы с площадью роста 25 см2, через 48 ч пересевали в матрасы с площадью роста 175 см2 в соотношении 1:7 и инкубировали в течение 10 сут до достижения клеткам полного монослоя. Затем КС из всех образцов МСК сливали в стерильные центрифужные пробирки объемом 50 мл и выделяли ВВ. Для этого использовали метод дифференциального центрифугирования (ДЦ) с последующим ультрацентрифугированием (УЦ). Во всех образцах с помощью электронной микроскопии были выявлены округлые или не совсем правильной формы микрочастицы разного размера. Диаметры отдельных ВВ у разных видов животных статистически не различались (p = 0,1). При сравнении числа частиц, выделенных из 50 мл КС МСК разных видов животных, статистически значимых различий не выявили (р = 0,1). Так, на одной сетке МСК (КМ) и МСК (ЖТ) КРС обнаружили соответственно 3±0,1 и 6±0,07 частицы размером 50-100 нм, 7±0,02 и 4±0,03 частицы 100-150 нм, а также 3±0,4 и 2±0,06 частицы размером более 150 нм. ВВ из КС МСК (ЖТ) собак были наиболее гомогенными и по форме (округлые), и по размеру (основная часть имела размер 50-100 нм; 12±0,02 частиц). В образцах, выделенных из КС МСК (ЖТ) овец, кошек, лошадей и ПК лошадей, число частиц с диаметром 50-100 нм составляло 7±0,2; 7±0,01; 5±0,7 и 8±0,02.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2021

Bojkova, M.A. | Biketov, O.V. | Naprimerov, V.A.

Признавая, что доминирующая в настоящее время научная парадигма предполагает, что геномные, а не функциональные факторы регулируют (вызывают, контролируют) рост костей черепа и черепных швов, основываясь, прежде всего, на обширном обзоре соответствующей современной литературы и собственном опыте, предлагается ряд уточнений, направленных на устранение некоторых непреднамеренных концептуальных заблуждений. Описывается процесс повышения модуляции механотрансдукции, продуцируемый мышечной активностью скелетных мышц, на которые максимально реагируют костные клетки. Описана фактическая цепь событий, оказывающая влияние на стимуляцию роста костных клеток, что позволяет предложить средство контроля данных процессов, разрабатывать новые методики коррекции, включая подавление фенотипической экспрессии. Представлены результаты исследования влияния механической нагрузки жевательных мышц с непрерывным стимулом растяжения в направлении увеличения ширины/растяжения сагиттального шва экспериментального животного in vivo. Описана методика и представлены данные объективного инструментального контроля, а также результаты, полученные в результате статистической обработки. Представлены экспериментальные доказательства того, что жевательная нагрузка является одним из основных стимулов, который генерирует черепно-лицевые вариации, влияя на структуру черепного шва. Экспериментальная часть исследований проводилась на базе Центра коллективного пользования "Виварий конвенциональных животных" Федерального исследовательского центра Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук. | It is recognized that the currently dominant scientific paradigm assumes that genomic rather than functional factors regulate (cause, control) the growth of cranial bones and cranial sutures. In contrast, offered are some clarifications to address some unintentional conceptual misconceptions, based primarily on an extensive review of the relevant current literature and their own experience. There is described the increased modulation of mechanic transduction produced by skeletal muscle activity, to which bone cells respond maximally. There is described the actual chain of events that influences the stimulation of bone cell growth. This influence makes it possible to propose a means of controlling these processes and developing new correction methods, including suppression of phenotypic expression. Presented are the results of a study of the effect of mechanical loading of the masticatory muscles with a continuous stretching stimulus to increase the width of extension of the sagittal suture of the experimental animal in vivo. The methodology is described, and objective instrumental control data are presented. The results of statistical processing are also presented. There are given empirical data. These experiments prove that chewing load is one of the primary stimuli that generate craniofacial variations, affecting the structure of the cranial suture. The experimental part of the research was conducted at the Vivarium of Conventional Animals Collaborative Center of the Federal Research Center of the Institute of Cytology and Genetics, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2019

Борончук, Г. | Балан, И. | Рошка, H. | Бузан, B. | Букарчук, M. | Казакова, Ю. | Осипчук, Г. | Мереуцэ, И. | Дубаларь, A. | Федоров, H. | Блынду, И.

One of the main issues of modern cryobiologyis the improvement in the effectiveness of biological object cryopreservation. Therefore, the goal of the studies conducted, the results of which are presented in this work, was to study the effectiveness of various antioxidants in the media composition for the conservation of the reproductive cells of farm animals. Experiments proved that the action of certain antioxidants depends on the chemical structure of the substances tested. High antioxidant activity was revealed during the cryiopreservation of semen of bulls, boar and roosters, which is species-specific.

Show more [+]

Less [-]

Technical University of Moldova - Republic of Moldova

2018

Olena Nizhelska | Lolita Marynchenko | Volodymyr Makara | Svitlana Naumenko | Alla Kurylyuk

Background. Development of methods of the targeted delivery of drugs in the nanocarriers with magnetic nanomaterials under the control of the magnetic field, industrial application of magnetically sensitive yeast, study of the viability and preservation of the biological activity of immobilized cells and the influence of various factors on the stabilization of these systems.Objective. The aim of the work was to research the shape of yeast cells attached on the surface of silicon under influence of static magnetic field.Methods. Cell suspension of 1-day’s culture of Saccharomyces cerevisiae in distilled water was inflicted on the surface of monocrystalline silicon plates of different types of conductivity. The cell pictures were observed under a microscope in reflected light after free drying in the air and storage samples in different modes.Results. The results of experiments showed that in control samples irreversible destruction of the attached cells took place after 7 days of storage. If drying of cells occurred under the influence of static magnetic field during 10–97 days, the yeast cells looked intact. Even after stopping of magnetic field action, they saved practically an unchanging shape during more than two years in the ordinary terms of storage.Conclusions. The rational mode of stabilization for shape of yeast cells on the surface of silicon was determined due to the influence of a magnetic field by induction of 0.17 T without introducing additional substances. The possible mechanism of enhancement of adhesion associated with the gettering of positively charged impurities on the surface of silicon and the increase of the electric potential under the action of a magnetic field was considered. The method of stabilization of cells, which are attached to the surface of the silicon in a magnetic field, may be useful in the manufacture of biochips with immobilized cells.

Show more [+]

Less [-]

Directory of Open Access Journals - Sweden

2017

Drozdova, L.I., Ural State Agrarian Univ., Ekaterinburg

The morphological reaction of the liver of piglets was studied after the application of nucleic media "Westin" in the system "мother-fetus". The studies were performed on sows of large white breed and the piglets from the age of 10 days to 7 months. For histological examination samples of the liver of the piglets were put in the 10–12% solution of neutral formalin, poured into the wax, the sections were prepared with thickness of 5–7 um that were stained according to classical methods of morphological research. In sections of liver morphometric studies were carried out. In the liver of piglets of the experimental group the change of immunomorphological reactions in the form of the accumulation of lymphoid cells in the area of the triads like follicle was noted. A pronounced symptom of the liver of pigs of the control group was the growth of connective tissue capsule and area of the triad due to the increase in the number and hypertrophy of cells of reticulohistiocytoma system. Histochemical analysis of hepatocytes of the liver of newborn piglets showed lipid inclusions and presence of the cells of granules of glycogen evenly and densely arranged in the central portions both in the center and in the periphery of the lobules, presence of intense staining for RNA, the intensity of such staining in the cytoplasm of hepatocytes of piglets of the control group was visually somewhat reduced and represented by small granules. A positive effect of test drug on the morphological structure of the liver of piglets and the formation of adaptive reactions of the organism was shown. The drug "Westin" when introduced to the pigs in the later stages of pregnancy has a positive influence on the content of glycogen and RNA in the hepatocytes of piglets which is characterized by a high level of energy and plastic processes. | Цель исследований - изучение морфологической реакции печени поросят после применения препарата нуклеиновой природы "Вестин" в системе "мать-плод". Исследования проведены на свиноматках крупной белой породы и поросятах с 10-ти суточного до 7-месячного возраста. Для гистологического исследования полученные образцы печени поросят фиксировались в 10–12% растворе нейтрального формалина, заливались в парафин, готовились срезы толщиной 5–7 мкм, которые окрашивали согласно классическим методикам морфологических исследований. В срезах печени проводили морфометрические исследования. В печени поросят опытной группы отмечали изменение иммуноморфологической реакции в виде скопления лимфоидных клеток в области триады по типу фолликула. Выраженным признаком печени поросят контрольной группы было разрастание соединительной ткани капсулы и области триады за счет увеличения количества и гипертрофии клеток ретикулогистиоцитарной системы. Гистохимический анализ гепатоцитов новорожденных поросят выявил жировые включения и наличие равномерно и плотно расположенных в центральных участках клеток гранул гликогена как в центре, так и по периферии долек, наличие интенсивной окраски на РНК, интенсивность такой окраски в цитоплазме гепатоцитов поросят контрольной группы визуально была несколько снижена и представлена мелкими гранулами. Сделан вывод о позитивном влиянии испытуемого препарата на морфологические структуры печени поросят и формирование адаптивных реакций организма. Препарат "Вестин" при введении свиноматкам на поздних этапах беременности оказывает положительное влияние на содержание гликогена и РНК в гепатоцитах поросят, что характеризует высокий уровень энергетических и пластических процессов.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2016

Radyuk,M.S. | Budakova,E.A. | Domanskii,V.P. | Kozel,N.V.

При выращивании Spirulina plantensis под светодиодными источниками света выявлено снижение уровня экспрессии гена FeSOD. Предполагается, что активация фотосинтетических процессов, которая приводит к увеличению продуктивности водоросли при светодиодном освещении, может вызвать также усиление окислительных процессов в клетках Spirulina plantensis. При увеличении интенсивности освещения таких источников фотосинтетически активного света степень окислительного воздействия может возрастать, что на фоне уменьшения уровня экспрессии гена FeSOD приведет к снижению устойчивости водоросли к стрессу и, как следствие, к снижению продуктивности или гибели культурыю | When growing Spirulina plantensis under the LED light sources a reduction in the level of FeSOD gene expression has been shown. Photosynthetic activation, which leads to increase of productivity of the algae processes in LED lighting, can also assumes to cause an increase of oxidative process incells of Spirulina plantensis. Oxidative effects can increase whileenhancing of intensity of illumination of these sources of photosynthetically active light. Taking into account reducing of FeSOD gene expression, algae stability to stress will reduce and as consequence it will lead to a decrease of culture productivity or its destruction.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Dilekova, O.V., Stavropol State Agrarian Univ.

При иммуногистохимическом исследовании поджелудочной железы 1-суточных телят было выявлено, что экспрессия трансмембранного рецептора белка тирозинкиназы C-kit/SCF-R в эндокринных островках является маркером коммитированых клеток-предшественников бета-эндокриноцитов. Кроме островков в железе были обнаружены клеточные кластеры, которые имеют инсулин и C-kit позитивное окрашивание. Исходя из этого, экспрессию C-kit можно рассматривать как критерий процессов развития, роста и дифференцировки клеток предшественников в указанный момент времени, так как данный маркер необходим для миграции клеток и формирования островков. При анализе морфометрических показателей было установлено, что площадь C-kit позитивных клеток в кластерах больше островковых на 69% при сохранении ядерно-цитоплазматического отношения (ЯЦО) в обеих структурах 0,3 мкм. При сравнении с инсулин позитивными клетками было выявлено, что в кластерах по сравнению с островковыми клетками увеличение площади происходит на 94,8%, при этом ЯЦО в кластерах составляет 0,4 мкм и 0,2 мкм в островках. Площадь инсулин позитивных клеток в островках по сравнению с площадью с C-kit позитивными клетками увеличена на 55,8%, а в кластерах на 76,8%. Повышенный показатель площади и ЯЦО в клетках кластеров может быть связан с фазой гиперактивности ядер в результате функционального сдвига связанного с процессами активации и синтеза белков. Это приводит к быстрому включению аминокислот, увеличению гидратации цитоплазмы, увеличению цитоплазматических белков. Вместе с этим происходит и увеличение объема ядра, что необходимо клеткам для процессов синтеза, пролиферации, миграции дифференцировки. Таким образом, установлена дифференцировка и функциональное значение C-kit позитивных клеток для поджелудочной железы, что может быть использовано в дальнейшем для изучения региональных стволовых клеток бета-эндокриноцитов, их выделения и культивирования. | Immunohistochemical investigation of the pancreas one day old calves we found that expression of the transmembrane receptor protein tyrosine kinase C-kit / SCF-R in the islets endocrine lineage commitment of the cells is a marker for progenitor beta-endocrine cells. Besides cell clusters were discovered which have insulin and C-kit positive staining. Accordingly, the C-kit expression can be regarded as a criterion for process development, growth and differentiation of progenitor cells to the specified point of time as is needed for this marker cell migration and formation of islands. In the analysis of morphometric parameters we have found that the area of C-kit positive cells in the islet clusters larger by 69% while maintaining in both structures nucleus-cytoplasm ratio (NCR) of 0.3 microns. Comparing the data with insulin positive cells, it has been found that clusters compared with islet cells a 94.8% increase in area occurs while NCR in clusters is 0.4 microns and 0.2 microns in the islets. The area of insulin positive cells in the islets compared with the area with the C-kit positive cells was increased by 55.8% and 76.8% in clusters. The increased area indicator and NCR in cluster cells may be associated with the phase of hyperactivity of nuclei resulting from functional changes associated with the processes of activation and protein synthesis. This leads to rapid incorporation of amino acids, increase the hydration of the cytoplasm, increased cytoplasmic proteins. Along with this, there is an increase in the nucleus volume which is necessary for cell fusion, the proliferation, migration and differentiation. Thus, differentiation and the functional values of C-kit positive cells for pancreas, which can be used further to study regional stem cells of beta-endocrine cells, their separation and cultivation.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2015

Zavodnik,I.B.

The aim of the realized research is to determine the biochemical regularities of the oxidative processes induced by tBHP in mammalian cells. We used tBHP (Sigma-Aldrich GmbH, Germany), fluorescent probe 2 &#039 | Цель настоящей работы – определение биохимических закономерностей окислительных процессов, индуцируемых tBHP, в клетках млекопитающих. В работе использовали tBHP (Sigma-Aldrich GmbH, Германия), флуоресцентный зонд 2′,7′-дихлородигидрофлуоресцеин диацетат (DCFH-DA) (Molecular Probes, Inc., США), а также другие реактивы аналитической степени чистоты (POCH, Польша). Окислительный стресс, индуцируемый в клетках линии В14 органическим терт-бутил гидропероксидом (tBHP), приводит к генерации в клетке свободных радикалов в реакциях гидропероксида с гемсодержащими белками. Рассчитана эффективная полумаксимальная концентрация tBHP в реакции активации окислителя клетками: EC50 = 37 +/- 12 мкМ. Определяемые метаболической активностью клетки окислительные процессы приводят к выраженному нарушению морфологии клеток: потере ими способности сорбироваться на субстрате и формировать ассоциаты, а затем к набуханию клеток и лизису, что отражает некротический механизм гибели клеток при окислительном воздействии. Деполяризация и набухание клеток отражают формирование ион-неселективных пор в мембране и некротический механизм гибели клеток при окислительном воздействии. | , 7&#039 | -dichlorohydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) (Molecular Probes, Inc., USA), as well as other reagents of analytical purity (POCH, Poland). Oxidative stress induced in B14 cells by organic tert-butyl hydroperoxide (tBHP) results in intracellular free radical generation in hydroperoxide reactions with haem–containing proteins. The half maximal effective concentration of tBHP in reaction with cellular components EC50 is equal to 37 +/- 12 mkM. Oxidative processes depends on cell metabolic activity and induces cell morphological impairments: cell detachment from the substrate, cell dissociations and swelling, which reflects necrotic mechanism of oxidative cell death. Depolarization and swelling of cells reflect the formation of ion-nonselective pores in the membrane and the necrotic mechanism of cell death during oxidative exposure.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Maletskij, S.I. | Yudanova, S.S. | Maletskaya, E.I., Russian Academy of Sciences. Siberian Branch, Novosibirsk (Russian Federation). Institute of Cytology and Genetics

Исследование проводилась в 2009-2012 гг. в г. Новосибирске. В качестве материала использовались семена диплоидных мужско-стерильных гибридов сахарной свеклы Роксана, Ленора, Ирис (контроль, поколение А0), а также их дигаплоидные и гаплоидные апозиготические семенные потомства (поколение А1). Дигаплоиды и гаплоиды получали при партеногенетическом воспроизводстве семян (беспыльцевой режим). Корни высаживали на изолированном участке, и в период цветения у каждого растения определяли фенотипы пыльников и пыльцевых зерен. Рассмотрена изменчивость числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц и интегральные показатели ткани, которые сравниваются с гармоническими пропорциями (числа Фибоначчи, золотые пропорции). Оценивали число хлоропластов в замыкающих клетках устьиц и число пластотипов в эпидермальной ткани. Определяли среднее значение числа хлоропластов и пластотипов в замыкающих клетках устьиц у гаплоидных, дигаплоидных и диплоидных (контроль) растений. На основании полученных данных определяли коэффициенты эпигеномной стабильности (показатель D). D представляет собой логарифмическое отношение числа хлоропластов к числу пластотипов и характеризует физиологическую и эпипластомную стабильность клеточных популяций. У дигаплоидов показатель D всегда был выше, чем у гаплоидов (1,24-1,51 против 1,16-1,17). Впервые показано, что интегральные показатели ткани соответствуют т.н. гармоническим пропорциям - числам, известным в математике как числа Фибоначчи. У диплоидов и дигаплоидов этот показатель соответствовал первым членам гармонической последовательности (с 1-го до 5-го), у гаплоидов — членам гармонической последовательности от 8-го и более. | The research was realized in 2009-2012 in Novosibirsk. The diploid (control, generation A0), dihaploid and haploid (generation A1) seed progeny of sugar beet (male sterile hybrids Roksana, Lenora, Iris) were used. Dihaploids and haploids were obtained by the parthenogenetic reproduction mode (pollen less condition). Roots were planted in separated plots; phenotypes of pollen and anthers of each individual plants were estimated during flowering period. A variability of chloroplast number in stomata guard cells and integral tissue characteristic was considered. Data obtained are compared with harmonious proportions (Fibonacci number, golden ratio). It was studied following parameters: a) a chloroplast number in stomata the guard cells; b) a plastotype number in the epidermal tissue. It was determined the average value of chloroplasts and plastotypes number in stomatal guard cells of haploid, diploid and dihaploid plants. On the base of obtained data the ratios of epigenetic stability (D-ratio) in haploid, diploid and dihaploid (control) sugar beet plants were estimated. D is logarithmic ratio of the chloroplast number to plastotypes and indicates the physiological and epiplastome stability of cell populations. D-ratio in dihaploids is always above than one in the haploids (1.24-1.51 versus 1.16-1.17). It was established for the first time that integral tissue characteristic (D-ratio) corresponds to harmonious proportions (bio-logical invariants), i.e. Fibonacci numbers. In diploids and dihaploids this ratio corresponds to the first terms of the harmonious series (from first to fifth), in haploids D-ratio corresponds to eighth and higher terms of the harmonious sequence.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2015

Volkova, N.A. | Fomin, I.K. | Tomgorova, E.K. | Vetokh, A.N. | Mennibaeva, Eh.R., All-Russia Research and Development Inst. of Livestock Husbandry, Moscow Region

Получали лентивирусный вектор (ЛВ) и определяли оптимальные условия использования ЛВдля трансгенеза эмбрионов кур (ЭК). В состав векторной системы входили 3 плазмиды: psPAX2, содержащая гены gag-pol; pLPG, кодирующая поверхностный гликопротеин G вируса везикулярного стоматита (VVS-G), и pWPXL - самоинактивирующийся ЛВ, несущий ген eGFP под контролем промотора гена фактора элонгации 1 РНК-полимеразы II человека (hEF1альфа). Для получения рекомбинантного вируса и определения титров использовали линию клеток человека 293T. Введение вирусного препарата (ВП) в ЭК проводили через 20-24 ч (I гр.) и через 50-55 ч (II гр.) после начала инкубации. Эффективность трансформации и число интегрированных копий трансгена оценивали методом RT-PCR анализа ДНК, выделенной из ЭК на 7-е сут инкубации, на наличие eGFP. Максимальные титры ВП были получены при соотношении плазмид psPAX2, pLPG и pWCAG 1:1:3 и составили 2,4*107 КОЕ/мл до ультрацентрифугирования и 6,2*108 КОЕ/мл - после него. Изменение соотношения между компонентами векторной системы позволяет значительно увеличить титр получаемого ВП. Биологические титры ВП порядка 10E8 КОЕ/мл достаточны для инфицирования до 78% клеток на ранних этапах развития ЭК. Доля трансформированных клеток в I и II гр. составила 78,0 и 31,0% соответственно. Вероятно, на более ранних стадиях клетки ЭК инфицировались большим количеством вирусных частиц, чем объясняется разница в числе копий вектора в составе клеточного генома в I и II гр. Средняя эффективность переноса генов с помощью ЛВ составляла 30,0-34,3% и слабо варьировала при изменении времени введения после начала инкубации ЭК. Значит, только часть клеток ЭК доступна для инфицирования вирусом. Инфицирование ЭК ВП с одинаковыми титрами в разные сроки позволяет получать популяции эмбриональных клеток с разным числом копий вектора в составе генома клетки. Итак, эффективность переноса генов в ЭК с использованием ЛВ не зависит от стадии развития ЭК в течение первых 55 ч инкубации. | Lentiviral vector (LV) was obtained and optimal LV using condition for chicken embryos (CE) transgenesis were determined. Vector system consisted of 3 plasmids: psPAX2, containing gag-pol genes; pLPG, coding surface glycoprotein G of vesicular stomatitis virus (VVC-G) and pWPXL, self-inactivated LV, carrying eGFP gene under control of promoter of human elongation factor 1 RNA-polymerase (hEF1alpha) gene. To produce recombinant virus and to determine virus titers human cell line 293T was used. Virus preparations (VP) injections into CE were performed after 20-24 hours (group 1) and after 50-55 hours (group 2) from starting incubation. Transgenesis efficiency and transgene integrated copies number was estimated by DNA analysis RT-PCR that was isolated from CE on day 7 of incubation for specific eGFP presence. VP maximal titers were produced in psPAX2, pLPG and pWCAG plasmids ratio equal to 1:1:3 and were 2.4*107 CFU/ml before ultracentrifugation and 6.2*108 CFU/ml after it. Changing ratios between vector system components allows significantly increasing produced VP titers. The biological titers of the VP of 108 CFU/ml are sufficient to infect up to 78% of cells at the earlier stages of CE development. Probably, at earlier embryogenesis the CE cells were infected with a more number of viral particles than the differenceof a number of the transgenevector copies integrated into cell genome in groups 1 and 2 is explained. The average efficiency of transgenesis by means of the LV was 30.0-34.3% and varied slightly with changing the introduction time after the CE incubation began. It means that only a part of CE cells is available for viral infection. Injection of CE with VP havinf identical titers at different terms allows producing the populations of embryonic cells with different number of vector copies within the cell genome. So the efficiency of CE thransgenesis using LV does not depend on the stage of its development for first 55 h of incubnation.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation