AGRIS - 

2016

Kosachev, P.A. | Ivanova, M.S. | Skaptsov, M.V.

In a short report we presents additional information of the DNA content and ploidy levels of 4 species of the genus Pedicularis L. (Orobanchaceae). Data were collected using flow cytometry. For the 3 types ofP. anthemifolia, P. flava, P. venusta measurements were carried out for the first time. Additional data were obtained P. compacta. It was found that the ploidy level of the three species is one and corresponds to a set of chromosomes 2n = 2x = 16. For species P. anthemifolia second set ploidy level 2n = 4x = 32. | В кратком сообщении дается дополнительная информация по содержанию ДНК и уровням плоидности 4 видов рода Pedicularis L. (Orobanchaceae). Данные были получены при помощи метода проточной цитометрии. Для 3-х видов P. anthemifolia, P. flava, P. venusta измерения были проведены впервые. Дополнительно были получены данные для P. compacta. Выяснено, что уровень плоидности для трех видов равен 1 и соответствует набору хромосом 2n=2х=16. Для вида P. anthemifolia установлен второй уровень плоидности 2n = 4x = 32.

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Altai State University - Russian Federation

2016

Shajdullin, R.R. | Sibagatullin, F.S. | Sharafutdinov, G.S., Kazan State Agrarian Univ.

Analysis and generalization of information on bulls-producers, belonging to breeding enterprises of Tatarstan, was done. For this purpose, materials, tribal certificates of Tatarstan type bulls of Kholmogory breed (TTKB), black-motley and Holstein breeds were used. They were evaluated by DNA productivity markers: kappa-casein (CSN3), O-acyltransferase diacylglycerol (DGAT1), beta-lactoglobulin (LGB), prolactin (PRL), somatropin (GH), thyroglobulin (TG5), leptin (LEP). Among bulls-producers of TTKB and Holstein breed BB genotype of beta-lactoglobulin prevails (48.7% and 40.7%) and AA genotype of LGB locus is rarer, 17.9% and 18.6% respectively. Allele frequency in these breeds was almost the same and varied from 0.35 to 0.39 (allele A) and from 0.61 to 0.65 (allele B). In all groups of dairy breeds prevalence of LL genotype of GH locus was noted in somatotropin gene, with the highest frequency in Holstein cattle (84.2%). Bulls of the TTKB are noted by a high frequency of the allele C of the leptin gene, which varied from 1.0 in the Chiftein line of animals to 0.58 in the producers of the Sovering line. TTKB bulls have the highest frequency of heterozygous genotypes in most genes, thus in CSN3, the genotype AB is 34.2%, in PRL, genotype AB - 30.4%, in TG5, genotype TS - 35.9%, in LEP, genotype TC- 66.7%, and of homozygous genotypes in genes DGAT1, LGB, PRL, GH, LEP, genotypes AA (47.2%), BB (48.7%), BB (2.2%), VV (20.0%), SS (33.3%) respectively. The genetic equilibrium was violated in the diacylglycerol gene of O-acyltransferase in bulls of the TTKB (chi-square = 4.72, P is less than 0.05) and black-motley breed (chi-square = 3.91; P - less than 0.05), and in the somatropin gene only in the producers of the TTKB (chi-square = 5.42, P - less than 0.05). The conclusion is that desirable alleles of genes of milk-yield are more often seen in Chif, Houp and Aivengo branches and also in bulls of TTKB they are more often than among representatives of other breeds. | Проведен анализ и обобщение сведений о быках-производителях, принадлежащих племенным предприятиям Татарстана. Для этого использовались материалы, племенные свидетельства быков татарстанского типа холмогорской породы (ТТХП), черно-пестрой и голштинской породы, которые оценены по ДНК-маркерам продуктивности: каппа-казеину (CSN3), диацилглицерол О-ацилтрансферазы (DGAT1), бета-лактоглобулину (LGB), пролактину (PRL), соматропину (GH), тиреоглобулину (TG5), лептину (LEP). Среди быков-производителей ТТХП и голштинской породы преобладают носители генотипа ВВ бета-лактоглобулина, (48,7 и 40,7%), реже встречается генотип АА локуса LGB, 17,9 и 18,6% соответственно. Частота аллелей у данных пород была примерно одинаковой и колебалась от 0,35 до 0,39 (аллель А) и от 0,61 до 0,65 (аллель В). У всех групп молочных пород по гену соматропина отмечено преобладание генотипа LL локуса GH, с наибольшей частотой (84,2%) у голштинского скота. Быки ТТХП выделяются высокой частотой аллеля С гена лептина, которая варьировала от 1,0 у животных линии Чифтейна до 0,58 у производителей линии Соверинга. Быки ТТХП имеют наивысшую частоту гетерозиготных генотипов по большинству генам, так по CSN3 генотип АВ – 34,2%, по PRL генотипу АВ – 30,4%, по TG5 генотипу ТС – 35,9%, по LEP генотипу ТС – 66,7% и по гомозиготным генотипам по генам DGAT1, LGB, PRL, GH, LEP соответственно по генотипу АА (47,2%), ВВ (48,7%), ВВ (2,2%), VV (20,0%), СС (33,3%). Генетическое равновесие нарушено по гену диацилглицерол О-ацилтрансферазы у быков ТТХП (хи-квадрат= 4,72; Р меньше 0,05) и черно-пестрой породы (хи-квадрат= 3,91; Р меньше 0,05), а по гену соматропина только у производителей ТТХП (хи-квадрат= 5,42; Р меньше 0,05). Сделан вывод, что желательные аллели генов молочной продуктивности чаще встречаются в ветвях Чифа, Хоупа и Айвенго, а также у быков ТТХП чаще, чем среди представителей других пород.

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2015

Saleh Basel

Ulva lactuca (Chlorophyta) green macroalgae has been successfully used as bioindicator for heavy metals pollution in ecosystems. Random amplified microsatellite polymorphism (RAMP) marker was employed to investigate genetic DNA pattern variability in green U. lactuca 5 days after exposure to Cu, Pb, Cd and Zn heavy metals stress. Genomic template stability (GTS%) value was employed as a qualitative DNA changes measurement based on RAMP technique. In this respect, estimated GTS% value was recorded to be 65.215, 64.630, 59.835 and 59.250% for Pb, Cu, Cd and Zn treatment, respectively. Moreover, genetic similarity (GS) induced by the above heavy metals was also evaluated to measure genetic distance between algae treated plants and their respective control. In this respect, estimated GS values generated by RAMP marker ranged between 0.576 (between control and Zn treatment) - 0.969 (for both case | between Pb and Cu and between Cd and Zn treatment) with an average of 0.842. Based upon data presented herein based on variant bands number (VB), GTS% and GS values | the present study could be suggested that Pb and Cu followed similar tendency at genomic DNA changes. Similar finding was also observed with Cd and Zn ions. Thereby, RAMP marker successfully highlighted DNA change patterns induced by heavy metals stress.

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Russian Academy of Sciences - Russian Federation

2015

Kalko G.V.

high - SSR, SNPs and DArT. So, microsatellites and SNPs have an advantage over a number of DNA markers. The positive property of microsatellite analysis is that for every gene locus it could be determined whether the individual is heterozygous or homozygous. It is advantage comparably with RAPD, AFLP and ISSR-PCR markers. Analysis of the range of 12-17 microsatellites is the most suitable for intraspecific population studies for population genetics of pine and spruce, particularly for the analysis of genetic diversity. SNPs are very promising markers with high density through the genome and low level of mutations per generation. This method is also very good for estimation of genetic diversity. It could be easily used for evaluation of functional and neutral variability. The preliminary choice of identifying SNPs or selection of SNPs from the databases and correct statistical estimate of data become a critical points. The markers of mitochondrial DNA, on the other hand, are most useful for phylogeographic and geographical research. The species of Pinaceae have three genomes inherited by different ways: the paternal chloroplast, the maternal mitochondrial and nuclear biparental. To obtain a reliable result in population studies of pine and spruce the various independently evolving markers, for example nuclear and mitochondria or nuclear and chloroplast should be used. It allows to study genetic diversity and genetic differentiation of pine and spruce populations more correctly. | относительно высокий - ISSR | intermediate - AFLP | средний - AFLP | В обзоре обсуждается использование ДНК-маркеров для оценки генетических ресурсов ели и сосны. Представлены некоторые классификации ДНК-маркеров, дан краткий экскурс в историю их появления и использования для популяционно-генетических исследований ели и сосны. Обсуждены положительные свойства и ограничения разных видов генетических маркеров. Рассмотрены тенденции в изменении востребованности различных ДНК-маркеров в последние двадцать лет. Отмечено, что разные виды маркеров выявляют различные уровни внутривидового полиморфизма: низкий показывают RAPD, RFLP и CAPS | The use of DNA markers for exploring the genetic resources of spruce and pine is discussed. Some classifications of DNA markers are considered. A brief historical review of appearance and using of different genetic markers for population genetic studies of spruce and pine is presented. The positive qualities and limitations of different types of these technics as a tools for exploring of population genetics of spruce and pine are discussed. The tendencies in changing of popularity of different DNA markers during last twenty years are noted. Different types of markers discover the differing levels of intraspecific polymorphism: low level show RAPD, RFLP and CAPS | высокий - SSR, SNPs и DArT. То есть, микросателлиты и SNPs имеют преимущество перед целым рядом ДНКмаркеров. Положительным свойством монолокусного анализа микросателлитов является то, что для каждого генного локуса возможно определить, является ли данная особь гетерозиготой или гомозиготой, в чем и заключается преимущество этих маркеров над RAPD, AFLP и ISSR-PCR. ДНК-анализ с помощью линейки из 12-17 микросателлитов наиболее подходит для внутривидовых популяционно-генетических исследований, особенно для анализа генетического разнообразия. SNPs имеют высокую плотность в геноме и низкий уровень мутаций на поколение. Они также перспективны для изучения генетического разнообразия, их легко использовать в оценке функциональной и нейтральной изменчивости. Однако критической становится предварительная стадия выявления SNP или отбора SNP из базы данных, а также статистическая обработка результатов. Маркеры митохондриальной ДНК наиболее информативны для филогеографических и географических исследований. Для получения надежного результата в популяционных исследованиях ели и сосны важно использовать несколько независимо эволюционирующих маркеров, например, ядерных и хлоропластных или ядерных и митохондриальных. Это позволит не только оценить генетическое разнообразие, но и более корректно определить дифференциацию в популяциях хвойных. | relatively high - ISSR

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Saint Petersburg Forestry Research Institute - Russian Federation

2015

Pikunova, AV. | Knyazev, S.D. | Bakhotskaya, A.Yu., All-Russia Research and Development Inst. of Fruit Crop Selection, Orel Region (Russian Federation) | Kochumova, A.A., Russian Academy of Agricultural Sciences, Moscow (Russian Federation). The N.I. Vavilov Inst. of Common Genetics

Genotyping of 27 black currant accessions from the collection of the All-Russian Research Institute of Breeding Fruit Crops on 14 microsatellite loci have been realized. Electrophoresis in 6% denaturing PAAG followed by staining with silver nitrate was used for separation of PCR products. All tested SSR loci, except MS06g03, have been found to be polymorphic. On average 4.9 alleles were amplified per locus. Three fragments have been amplified on DNA of some accessions at one SSR locus that is probably due to the duplication of these microsatellite loci in genome of these accessions. A total of 66% of all amplified fragments were rare alleles with a frequency of occurrence equal to or less than 0.2. Eight unique alleles have been found. The observed heterozygosity ranged from 0.259 (g2-H21) to 1 (e4-D03) and averaged 0.608. Combinations of alleles at one locus allowed to distinguish from 3 (g2-H21, e1-O21) to 15 (g2-G12) genotypes. The minimum set of four loci (e4-D03, g1-M07, g1-E03, g2-B20) allowed to distinguish all the tested accessions, i.e. unique multilocus profile has been found for each sample. Pairwise genetic similarity coefficients ranged from 0.11 (between Odzhebin and Sharovidnaya varieties) to 0.95 (between Govtva and Rtishchevskaya varieties) and averaged 0.346. Cluster analysis of genetic similarity has been done. The dendrogram shows a few clusters with high bootstrap support. Distribution of alleles between related varieties was consistent with the pedigrees in the most cases, but discrepancies between pedigrees and SSR data also were found. SSR markers are promising for evaluation of domestic gene pool of black currant on genetic diversity, and permit to develop methods for the identification and certification of black currant varieties. | Проведено генотипирование 27 сортообразцов черной смородины из коллекции Всероссийского НИИ селекции плодовых культур (ВНИИСПК) по 14 микросателлитным локусам. Использовали электрофоретическое разделение ПЦР-продуктов в 6% денатурирующем полиакриламидном геле (ПААГ) с последующим окрашиванием нитратом серебра. Все локусы, кроме MS06g03, оказались полиморфными (в среднем было амплифицировано 4,9 аллеля на локус). С ДНК некоторых сортообразцов в одном локусе амплифицировалось 3 фрагмента. Из 68 амплифицированных фрагментов 45 (66%) были редкими аллелями с частотой не более 0,2. Обнаружено 8 уникальных фрагментов, амплифицированных только на ДНК 1 из протестированных сортообразцов. Наблюдаемая гетерозиготность варьировала от 0,259 для локуса g2-H21 до 1 для локуса e4-D03 (в среднем составила 0,608). По сочетанию аллелей в локусе можно было различить от 3 (g2-H21, e1-O21) до 15 (g2-G12) генотипов. Минимальный набор из 4 локусов (e4-D03, g1-M07, g1-E03, g2-B20) позволил дифференцировать все протестированные сортообразцы, то есть для каждого образца был получен уникальный мультилокусный профиль. Коэффициенты попарного генетического сходства варьировали от 0,110 (между сортами Оджебин и Шаровидная) до 0,950 (между сортами Говтва и Ртищевская) и в среднем составили 0,346. Проведен кластерный анализ генетического сходства сортообразцов и построена дендрограмма, в которой выделились несколько кластеров с высокой бутстреп-поддержкой. В большинстве случаев распределение аллелей между родственными сортами не противоречило родословным, но были обнаружены и случаи расхождения сведений родословных и SSR-анализа. Протестированные маркеры перспективны для оценки генетического разнообразия отечественного генофонда черной смородины, а также для разработки методов идентификации и паспортизации ее сортов.

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2015

Babij, A.V. | Koval'chuk, S.N. | Glazko, T.T. | Kosovskij, G.Yu. | Glazko, V.I., Center of Experimental Embriology and Reproductive Biotechnology, Moscow

Одной из актуальных задач с.-х. биотехнологий является подбор наиболее информативных ДНК-маркеров для полилокусного генотипирования (геномного сканирования) с.-х. видов. Целью исследования является разработка метода геномного сканирования пород крупного рогатого скота с использованием новых потенциальных ДНК-маркеров (хелитронов) для выявления геномных мишеней естественного отбора. Выполнено геномное сканирование крупного рогатого скота 3 пород (калмыцкой, айрширской и черно-пестрого голштинизированного скота) с использованием в качестве праймера консенсусной последовательности 3'-фланга хелитронов позвоночных. Полученные спектры продуктов амплификации содержали 16 фрагментов ДНК длиной от 300 до 2300 тыс. пар нуклеотидов. Выявлен высокий полиморфизм по наличию или отсутствию отдельных фрагментов ДНК у коров местной калмыцкой породы, следовательно, эта группа животных менее консолидирована и имеет менее "стандартизированный" генофонд по сравнению с заводскими породами (айрширская и черно-пестрая голштинизированная). Различия между заводскими породами выявлялись только по фрагментам ДНК длиной 1150-1200. Этот факт может объясняться высокой интенсивностью селекционной работы с высокомолочными заводскими породами. Подтверждена возможность использования ДНК-транспозона хелитрона в целях выявления генетических различий между породами с.-х. животных и медлу отдельными животными в пределах породы. | One of the urgent tasks of agricultural biotechnology is the selection of the most informative DNA markers for multi-locus genotyping (genome scanning) agricultural species. The purpose of the research is to develop a novel method of genome scanning cattle breeds using the new potential DNA markers (helitrons) to identify genomic targets of natural selection. The genome scanning 3 cattle breeds (Ayrshire, Kalmyk and holsteinized Black-and-White) was conducted by using as a primer the consensus sequence of the 3'-flang of vertebrate helitrons. The obtained spectra of amplification products comprised 16 DNA fragments of 300 to 2300 thousand nucleotide pairs long. The high polymorphism was revealed from the presence or the absence of individual DNA fragments in the native Kalmyk cows, therefore, this group of animals is less consolidated and has a less "standardized" genofond compared to the stud breeds (Ayrshire and holsteinized Black-and-White). The differences between the stud breeds were revealed only by DNA fragments of 1150-1200 long. This fact can be explained by high intensive breeding work with heavy dairy stud breeds. A possibility of using DNA transposon helitron for the purpose of revealing genetic differences between breeds of agricultural animals and between individual animals within a breed is confirmed.

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2015

Kalko G.V.

high - SSR, SNPs and DArT. So, microsatellites and SNPs have an advantage over a number of DNA markers. The positive property of microsatellite analysis is that for every gene locus it could be determined whether the individual is heterozygous or homozygous. It is advantage comparably with RAPD, AFLP and ISSR-PCR markers. Analysis of the range of 12-17 microsatellites is the most suitable for intraspecific population studies for population genetics of pine and spruce, particularly for the analysis of genetic diversity. SNPs are very promising markers with high density through the genome and low level of mutations per generation. This method is also very good for estimation of genetic diversity. It could be easily used for evaluation of functional and neutral variability. The preliminary choice of identifying SNPs or selection of SNPs from the databases and correct statistical estimate of data become a critical points. The markers of mitochondrial DNA, on the other hand, are most useful for phylogeographic and geographical research. The species of Pinaceae have three genomes inherited by different ways: the paternal chloroplast, the maternal mitochondrial and nuclear biparental. To obtain a reliable result in population studies of pine and spruce the various independently evolving markers, for example nuclear and mitochondria or nuclear and chloroplast should be used. It allows to study genetic diversity and genetic differentiation of pine and spruce populations more correctly. | относительно высокий - ISSR | intermediate - AFLP | средний - AFLP | В обзоре обсуждается использование ДНК-маркеров для оценки генетических ресурсов ели и сосны. Представлены некоторые классификации ДНК-маркеров, дан краткий экскурс в историю их появления и использования для популяционно-генетических исследований ели и сосны. Обсуждены положительные свойства и ограничения разных видов генетических маркеров. Рассмотрены тенденции в изменении востребованности различных ДНК-маркеров в последние двадцать лет. Отмечено, что разные виды маркеров выявляют различные уровни внутривидового полиморфизма: низкий показывают RAPD, RFLP и CAPS | The use of DNA markers for exploring the genetic resources of spruce and pine is discussed. Some classifications of DNA markers are considered. A brief historical review of appearance and using of different genetic markers for population genetic studies of spruce and pine is presented. The positive qualities and limitations of different types of these technics as a tools for exploring of population genetics of spruce and pine are discussed. The tendencies in changing of popularity of different DNA markers during last twenty years are noted. Different types of markers discover the differing levels of intraspecific polymorphism: low level show RAPD, RFLP and CAPS | высокий - SSR, SNPs и DArT. То есть, микросателлиты и SNPs имеют преимущество перед целым рядом ДНКмаркеров. Положительным свойством монолокусного анализа микросателлитов является то, что для каждого генного локуса возможно определить, является ли данная особь гетерозиготой или гомозиготой, в чем и заключается преимущество этих маркеров над RAPD, AFLP и ISSR-PCR. ДНК-анализ с помощью линейки из 12-17 микросателлитов наиболее подходит для внутривидовых популяционно-генетических исследований, особенно для анализа генетического разнообразия. SNPs имеют высокую плотность в геноме и низкий уровень мутаций на поколение. Они также перспективны для изучения генетического разнообразия, их легко использовать в оценке функциональной и нейтральной изменчивости. Однако критической становится предварительная стадия выявления SNP или отбора SNP из базы данных, а также статистическая обработка результатов. Маркеры митохондриальной ДНК наиболее информативны для филогеографических и географических исследований. Для получения надежного результата в популяционных исследованиях ели и сосны важно использовать несколько независимо эволюционирующих маркеров, например, ядерных и хлоропластных или ядерных и митохондриальных. Это позволит не только оценить генетическое разнообразие, но и более корректно определить дифференциацию в популяциях хвойных. | relatively high - ISSR

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Saint Petersburg Forestry Research Institute - Russian Federation

2015

Shirokova N. V. | Kolosov Y. A. | Getmantseva L. V. | Raduk A. V. | Bakoev N. F.

Diagnosis by PCR-RFLP (polymerase chain reaction – polymorphism of the lengths of restriction fragments) is the standard analysis of point mutations for the diagnosis of allelic polymorphism of candidate genes related with productive qualities of farm animals. Along the length of the fragments (RFLP) make a conclusion about the absence or presence of the point mutation, and homozygosity or heterozygosity of the individual. The aim of our work was the optimization of protocols for conducting PCR-RFLP analysis for genotyping sheep for genes of the growth hormone gene differential growth factor and gene of calpastatin

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Kuban State Agrarian University - Russian Federation

2014

Golovin, S.E., All-Russia Selection and Technological Inst. of Horticulture and Plant Breeding, Moscow (Russian Federation) | Kopina, M.B.

Soil contamination with homogenized in water mycelium Phytophthora cactorum was carried out to optimize the DNA extraction. After cultivation and homogenization leaves of raspberry were placed on a surface of a mycelium homogenizate and incubated at 15-18 deg. C for 3-5 days. The DNA was extracted from the sphacelous leaves in various ways. The optimal conditions for sample preparation were determined. The DNA extraction according to "Loewe" kits for diagnosis Ph. fragariae and Phytoplasma allows to produce DNA pathogen with acceptable purity (ratio of 260/280 ranged from 1.76 to 1.98; ratio of 260/230 ranged from 1.21 to 1.86). The positive results were obtained despite the fact that the concentration of the extracted DNA is substantially less in comparison with previously described methods (from 33.3 to 104.9 ng/ml) in the creation of "real time" PCR. To determine the optimal weight of infected bait tissue the model experiment was held on artificial infection of baits with Ph. citricola. It was showed that with the bait weight of 1 mg, 10 mg and 15 mg the number of samples without detection of fluorescence began to increase, which indicates a reduction in the specificity of the reaction. To obtain accurate results, it is necessary to select 5 mg of the sample on the boundary between healthy and diseased bait tissue and hold DNA extraction according to "Loewe" kit instruction for diagnosing Ph. fragariae. | Для определения оптимального метода выделения ДНК проводили заражение почвы гомогенизированным в воде мицелием Phytophthora cactorum. После культивирования и гомогенизации на поверхность гомогенизата мицелия помещали листья малины и инкубировали при 15-18 град. С в течение 3-5 дн. Из некротизированных листьев различными способами выделяли ДНК. Установлены оптимальные условия пробоподготовки. Выделение ДНК согласно инструкции к наборам "Loewe" для диагностики Ph. fragariae и Phytoplasma позволяет получать ДНК возбудителя приемлемой чистоты (соотношение 260/280 варьировало от 1,76 до 1,98; соотношение 260/230 составляло от 1,21 до 1,86). Несмотря на то, что концентрация выделенной ДНК значительно меньше по сравнению с ранее описанными методами (от 33,3 до 104,9 нг/мкл), при постановке ПЦР в реальном времени были получены положительные результаты. Для определения оптимальной массы зараженной ткани биоприманки, необходимой для выявления возбудителя фитофтороза, был проведен модельный опыт по искусственному заражению биоприманок видом Ph. citricola. Установлено, что при массе биоприманки 1 мг, 10 мг и 15 мг количество образцов с отсутствием детекции флуоресценции начинает увеличиваться, что свидетельствует о снижении специфичности реакции. Для получения достоверных результатов необходимо отбирать 5 мг образца на границе здоровой и пораженной ткани приманки и проводить выделение ДНК согласно инструкции к набору "Loewe" для диагностики Ph. fragariae.

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2014

Bespomestnykh, K.V., Kemerovo State Agrarian Inst.

Проведены исследования по созданию ПЦР-тест-системы для индикации и идентификации молочнокислых бактерий заквасок, применяемых в производстве кисломолочных продуктов. С целью выявления консервативных участков для закладки родоспецифичных и видоспецифичных праймеров были проанализированы нуклеотидные последовательности ДНК, кодирующей синтез 16S рРНК бактерий рода Lactobacillus, представленных в GenBank. Сконструированы новые родоспецифичные и видоспецифичные праймеры для идентификации бактерий рода Lactobacillus, имеющих значительные отличия от молочнокислых бактерий других родов и видов. Их теоретическая специфичность подтверждена экспериментально на бактериальных заквасках, концентратах и кисломолочных продуктах. Практически созданные праймеры обладают наибольшей степенью гомологии к участкам нуклеотидной последовательности ДНК 16S рРНК микроорганизмов L. delbrieckii subsp. bulgaricus и обладают высокой специфичностью. Они позволяют выявить различие определенного вида микроорганизма по отношению к другим бактериям и определить их количественное содержание в продукте. Оптимальные параметры амплификации гена 16S рРНК молочнокислых бактерий (температура, время инкубации, количество циклов): 95 град. С – 200 с – 1 цикл, [62 град. С – 50 с, 95 град. С – 20 с] – 25 циклов, 72 град. С – 120 с – 1 цикл. Результаты идентификации видов L. bulgaricus и других лактобактерий методом ПЦР сопоставимы с полученными с использованием классического биохимического метода на основе сахаролитической активности различных видов лактобацилл. Исследования, проведенные на широком спектре кисломолочных продуктов, экспериментально подтвердили более высокую специфичность и чувствительность ПЦР-тест-системы для идентификации молочнокислых бактерий, входящих в состав бактериальных заквасок. | This article presents the results of research on the development of a PCR-test-system for indication and identification of lactic acid bacteria containing in starter cultures used in dairy production. To identify conserved regions of nucleic acid sequences and for construction of the genus-specific species-specific primers the nucleotide sequence of DNA encoding synthesis of 16S rRNA of bacteria of the genus Lactobacillus submitted in GenBank were analyzed. New genus-specific and species-specific primers for the identification of bacteria of the genus Lactobacillus, with significant differences from other lactic acid bacteria genera and species were designed. Their theoretical specificity was confirmed experimentally on bacterial starter cultures, concentrates and fermented dairy products. In practice, created primers have the highest degree of homology to the nucleotide sequence of DNA of 16S rRNA for microorganisms L. delbrieckii subsp. bulgaricus and have high specificity. They can detect the difference of a particular species of microorganism with respect to other bacteria and to determine their quantitative content in the product. The optimal values for the 16S rRNA gene amplification of lactic acid bacteria (temperature, incubation time, number of cycles): 95 deg – 200 sec – 1 cycle; [62 deg – 50 sec, 95 deg – 20 sec] – 25 cycles; 72 deg – 120 sec – 1 cycle. The results of identification of L. bulgaricus and other Lactobacillus using polymerase chain reaction are comparable to the classical biochemical identification methods based on different species saccharolytic activity of lactobacilli. The studies carried out on the wide spectrum of fermented dairy products confirmed higher specificity and sensitivity of PCR-test-system for the identification of lactic acid bacteria included in bacterial starter cultures.

显示更多 [+]

显示较少 [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation