AGRIS - 

2016

Sadrtdinova Guzeliya R. | Vasilyev Dmitry А. | Zolotukhin Sergey N.

Klebsiella oxytoca bacterium are resistant microorganisms which can be the cause of many infectious diseases with severe progress. In the work we used bacterial strains obtained from the museum of the department of microbiology, virology, epizootology and veterinary-sanitary examination of Ulyanovsk state agricultural academy named after P. A. Stolypin. Main techniques were studied and tested for allocation of bacteriophages. Allocation of bacteriophages was associated with the use of inducer, x-irradiation, allowing to аllocate two phage active in a relation to Klebsiella oxytoca 1 and Klebsiella oxytoca 24. Cultures were exposed to radiation in three modes, and in the first series of experiments there was a confluent growth of culture throughout the volume of the cup, in the second series of experiments on some cups (K. oxytoca 1, K. oxytoca 24) there were areas of bacterial growth absence (negative colonies), in the third series of experiments – most of the crops were characterized by intermittent growth of a culture. We studied some biological properties allowing to note the possible differences between negative colonies of allocated phages. In both cases, colonies size ranged within 1,0+0,5 mm and had the form of transparent round-shaped negative colonies. The allocated phages had quite high activity against the studied crops: bacteriophage F-1 against indicator culture K.oxytoca 1 – 10 and 1х10 , bacteriophage F-24 against indicator culture K.oxytoca 24 – 10 and 4х10 по Appelman and Gratsia respectively, | Бактерии вида Klebsiella oxytoca представляют собой устойчивые микроорганизмы, являющиеся причиной многих инфекционных заболеваний с тяжелым течением. В работе были использованы штаммы бактерий, полученные из музея кафедры МВЭиВСЭ Ульяновской ГСХА им.П.А. Столыпина. Для выделения бактериофагов были изучены и апробированы основные методики. Выделение бактериофагов было связано с использованием индуцирующего фактора – рентгеновского облучения, что позволило выделить два фага, активных в отношении Klebsiella oxytoca 1 и Klebsiella oxytoca 24. Культуры были подвержены облучению в трех режимах, причем в первой серии опытов отмечался сплошной рост культуры по всему объему чашки, во второй серии опытов на некоторых чашках (K.oxytoca 1, K.oxytoca 24) отмечались зоны отсутствия бактериального роста (негативные колонии), в третьей серии опытов – большая часть посевов характеризовалась прерывистым ростом культуры. Изучали некоторых биологические свойства, позволяющее отметить возможные отличия негативных колоний выделенных фагов. В обоих случаях размеры колоний варьировались в пределах 1,0+0,5 мм и представляли собой прозрачные негативные колонии округлой формы. Выделенные фаги имели достаточно высокую активность в отношении изучаемых культур: бактериофаг Ф-1 в отношение индикаторной культуры K.oxytoca 1 - 10 и 1х10 , бактериофаг Ф-24 в отношение индикаторной культуры K.oxytoca 24- 10 и 4х10 по Аппельману и Грациа соответственно.

Show more [+]

Less [-]

Ulyanovsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin - Russian Federation

2016

Zolotukhin Sergey N. | Меlеkhin Аndrey S. | Pimenov Nikolay V.

Изучали чувствительность патогенных 235 штаммов энтеробактерий, выделенных в различных хозяйствах из патологического и биоматериала из органов и тканей трупов и от больных диареей поросят-сосунов в период массовых желудочно-кишечных заболеваний к антибиотикам и производственным штаммам бактериофагов, используемым для изготовления поливалентного фагового биопрепарата. Установлено, что большинство изолятов энтеробактерий, выделенных при массовых желудочно-кишечных заболеваниях поросят-сосунов, обладали полирезистентностью к антибиотикам пенициллину, гентамицину, ампициллину, неомицину, тетрациклину, стрептомицину, левомицетину, эритромицину. Наибольшую активность проявили препараты цефалоспоринового ряда, антибиотики цефтриаксон и ципрофлоксацин. К ним были чувствительны 65,6-83,3% изученных микроорганизмов, устойчивы 9,1-16,7% и умеренно устойчивы 3-12% культур. Ни один из проверенных препаратов не ингибировал 100% выделенных изолятов энтеробактерий, вызывающих инфекционную диарею у поросят. Штаммы бактериофагов из серии УГСХА обладали строгой специфичностью и не лизировали представителей энтеробактерий гетерологичных родов. Наибольшим спектром литической активности по отношению к гомологичным бактериям обладал могрганеллезный бактериофаг Phagum M. morganii M-20 УГСХА, он лизировал 90,6% изученных микроорганизмов, остальные штаммы бактериофагов были активны по отношению к гомологичным бактериям в пределах 79,3-89,3%. | We studied the sensitivity of 235 pathogenic strains of enterobacteria, allocated at different farms from pathological biomaterial from organs and tissues of cadavers and from prenursery piglets with diarrhoea in the period of mass gastro-intestinal diseases to antibiotics and master seed strains of bacteriophages that are used for the manufacture of polyvalent phage biopreparation. It was established that the most of enterobacteria isolates, allocated at the time of mass gastrointestinal diseases of prenursery piglets, had polyresistance to antibiotics penicillin, gentamycin, ampicillin, neomycin, tetracycline, streptomycin, chloramphenicol, erythromycin. The maximum activity was shown by the drugs of cephalosporinseries, antibiotics ceftriaxone and ciprofloxacin. 65,6-83,3% of the studied microorganisms were sensitive to them, 9,1-16,7% were resistant and 3-12% of cultures were moderately resistant. None of the tested drugs inhibited 100% of allocated enterobacteria isolates causing the infectious diarrhea in piglets. Strains of bacteriophages from the UGSKHA series had strict specificity and did not lyse the enterobacteria representatives of heterologous genus. Morganella bacteriophage Phagum M. morganii M-20 UGSKHA had the greatest spectrum of lytic activity against the homologous bacteria, it lysed 90,6% of the studied microorganisms, other strains of bacteriophages were active against homologous bacteria within 79,3-89,3%.

Show more [+]

Less [-]

Ulyanovsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin - Russian Federation

2016

Sadrtdinova Guzeliya R. | Vasilyev Dmitry А. | Zolotukhin Sergey N.

Klebsiella oxytoca bacterium are resistant microorganisms which can be the cause of many infectious diseases with severe progress. In the work we used bacterial strains obtained from the museum of the department of microbiology, virology, epizootology and veterinary-sanitary examination of Ulyanovsk state agricultural academy named after P. A. Stolypin. Main techniques were studied and tested for allocation of bacteriophages. Allocation of bacteriophages was associated with the use of inducer, x-irradiation, allowing to аllocate two phage active in a relation to Klebsiella oxytoca 1 and Klebsiella oxytoca 24. Cultures were exposed to radiation in three modes, and in the first series of experiments there was a confluent growth of culture throughout the volume of the cup, in the second series of experiments on some cups (K. oxytoca 1, K. oxytoca 24) there were areas of bacterial growth absence (negative colonies), in the third series of experiments – most of the crops were characterized by intermittent growth of a culture. We studied some biological properties allowing to note the possible differences between negative colonies of allocated phages. In both cases, colonies size ranged within 1,0+0,5 mm and had the form of transparent round-shaped negative colonies. The allocated phages had quite high activity against the studied crops: bacteriophage F-1 against indicator culture K.oxytoca 1 – 10 and 1х10 , bacteriophage F-24 against indicator culture K.oxytoca 24 – 10 and 4х10 по Appelman and Gratsia respectively, | Бактерии вида Klebsiella oxytoca представляют собой устойчивые микроорганизмы, являющиеся причиной многих инфекционных заболеваний с тяжелым течением. В работе были использованы штаммы бактерий, полученные из музея кафедры МВЭиВСЭ Ульяновской ГСХА им.П.А. Столыпина. Для выделения бактериофагов были изучены и апробированы основные методики. Выделение бактериофагов было связано с использованием индуцирующего фактора – рентгеновского облучения, что позволило выделить два фага, активных в отношении Klebsiella oxytoca 1 и Klebsiella oxytoca 24. Культуры были подвержены облучению в трех режимах, причем в первой серии опытов отмечался сплошной рост культуры по всему объему чашки, во второй серии опытов на некоторых чашках (K.oxytoca 1, K.oxytoca 24) отмечались зоны отсутствия бактериального роста (негативные колонии), в третьей серии опытов – большая часть посевов характеризовалась прерывистым ростом культуры. Изучали некоторых биологические свойства, позволяющее отметить возможные отличия негативных колоний выделенных фагов. В обоих случаях размеры колоний варьировались в пределах 1,0+0,5 мм и представляли собой прозрачные негативные колонии округлой формы. Выделенные фаги имели достаточно высокую активность в отношении изучаемых культур: бактериофаг Ф-1 в отношение индикаторной культуры K.oxytoca 1 - 10 и 1х10 , бактериофаг Ф-24 в отношение индикаторной культуры K.oxytoca 24- 10 и 4х10 по Аппельману и Грациа соответственно.

Show more [+]

Less [-]

Ulyanovsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin - Russian Federation

2016

Belova Kseniya V. | Feoktistova Natalya А. | Vasilyev Dmitry А.

Представлены результаты исследований по выделению бактериофагов, специфичных Bacillus coagulans, и подбору оптимальных параметров их культивирования. Метод индукции показал отрицательные результаты эксперимента – профаг у бактерий B. coagulans 566, B. Coagulans 10473, B. Coagulans 10468 не был выявлен. Было выделено 7 бактериофагов Bacillus coagulans из объектов окружающей среды. Селекцию бактериофагов проводили десятикратным пассированием изолированных негативных колоний на МПА с перевиванием на МПБ (питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-бульон), г. Оболенск Московская область Серпуховской район). Оптимальное соотношение бактериофага и индикаторной культуры - 1:1, т.е. 0,2 мл фага на 0,2 мл индикаторной культуры. Время пассажа – 7 часов инкубирования при температуре 35±2 С. Для очистки фагов от бактериальных клеток применяли три метода: обработка хлороформом (трихлорметаном), прогревание и фильтрация с применением мембранных фильтров. Установлено, выделенные и селекционированные авторами бактериофаги устойчивы к воздействию температуры в диапазоне 57-90 С в течение 30 минут, поэтому данный способ невозможно применять для очистки фагов. Фаги B. Сoagulans показали различную чувствительность к воздействию хлороформа: В.с. - 1 УГСХА и В.с. - 2 УГСХА не устойчивы к его воздействию, остальные фаги устойчивы в течение 15 минут. Но применять данный способ очистки не совсем целесообразно, так как он длителен и материалоемок. Эмпирическим путем установлено, что применение фильтров фирмы Millipore с диаметром 0,1 µm GV наиболее предпочтительно. Полученные результаты свидетельствуют, что изучаемые бактериофаги строго специфичны в пределах вида B. Coagulans и в перспективе могут входить в состав биопрепарата для его индикации и идентификации. | There are the results of studies on the isolation of bacteriophages specific for Bacillus coagulans, and the selection of optimal parameters of their cultivation. Induction method showed negative results of the experiment – the prophage in bacteria B. coagulans 566, B. coagulans10473, B. coagulans 10468 was not identified.7 bacteriophages of Bacillus coagulans from environmental objects were isolated. The selection of bacteriophages was performed with tenfoldpassagingof isolated negative colonies on MPA with subinoculation on MPB (nutrient broth for cultivation of microorganisms dry (GRM-broth), Obolensk, Moscow region Serpukhov district). The optimal ratio of bacteriophage and indicator culture - 1:1, i.e. 0,2 ml of phage on 0,2 ml of the indicator culture. The passage time – 7 hours incubation at a temperature of 35±20С. For the purification of phages from bacterial cells, three methods were applied: treatment with chloroform (trichloromethane), heating and filtration with the use of membrane filters. It is established that the allocated and selected by the authors bacteriophages are resistant to temperature in the range of 57-900С for 30 minutes, so this method cannot be applied for purification of phages. B. сoagulans phages showed different sensitivity to the impact of chloroform: V. s. - 1 UGSKhA and V. s. - 2 UGSKhA are not resistant to its impact, the remaining phages are stable for 15 minutes.But the application of this purification method is not really advisable, as it is long and resource-demanding. Empirically established that the use of the Millipore filters with a diameter of 0.1 µm GVis most preferable. The obtained results show that the studied bacteriophages are strictly specific within the species B. coagulans and in the long term can be a part of a biological product for its indication and identification.

Show more [+]

Less [-]

Ulyanovsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin - Russian Federation