AGRIS - 

2012

Yurov, D.S. | Varfolomeev, A.F. | Tukhvatulin, A.I. | Logunov, D.Yu. | Naroditskij, B.S. | Ermolaeva, S.A., Russian Academy of Medical Sciences, Moscow (Russian Federation). The N.F. Gamalej Research and Development Inst. of Epidemiology and Microbiology

Given is an evaluation of the influence of mutations in genes 1638 Listeria monocytogenes encoding murein-tetrapeptide L,D-carboxypeptidases (L,D-CBP) Lmo 0028 and Lmo1638 on the dynamics of infectious process and interaction of purified muropeptides (pathogen-associated molecular patterns – PAMP) with NOD1 receptor. The work involved wild type EGDe strain and recombinant strains GIMins 1638 and GIMins0028 obtained on its basis by site-specific mutagenesis. The dynamics of infectious process was studied on the model of BALB/C white mice experimentally inoculated with listeriosis by intravenous administration of bacterial culture L. monocytogenes to tail vein. The dynamics of accumulating Listeria in animal liver was determined in 6, 24, 72 and 120 h after intravenous infection. As has been found, compared to the wild type strain the number of Listeria of strains GIMins was higher by a factor of 3.3 and 2.7 times in 6 and 24 h after infection, respectively. After 72 h the difference between these strains leveled and was absent all through the experiment. No difference in liver bacterial content between the EGDe strain and GIMins0028 was observed in 6 h after inoculation white mice. On the contrary, after 24 h the Listeria count of mutant strain GIMins0028 reduced by a factor of 8 compared to EGDe and went on reducing all through the experiment reaching a 30-fold reduction. That is, the study of the propagation dynamics during the infectious process has shown that homologous proteins encoded by Lmo 0028 and Lmo1638 genes influence its different stages. The absence of protein Lmo 0028 slowed down propagating bacteria in the liver of infected white mice. On contrary, the absence of protein Lmo1638 resulted in their rapid accumulation in the liver on the first days after inoculation, although at later stages of the infectious process, its absence did not influence the dynamics of listeriosis. It is supposed that the observed differences in the infectious process dynamics were associated with changes in developing the initial stages of immune response recognition of the PAMP agent, and the absence of Lmo1638 could influence the recognition of Listeria with the innate immunity system receptors – NOD1. No differences in activating NOD1 receptor with muropeptides isolated from recombinant and parent (wild) strains were detected which is explained by the compensation of enzymatic functions in strains with mutation in each of the genes owing to the presence of homologous protein. | Дана оценка влиянию мутаций в генах Lmo 0028 и Lmo 1638 Listeria monocytogenes, кодирующих муреин-тетрапептид L,D-карбоксипептидазы (L,D-КБП) на динамику инфекционного процесса и взаимодействие очищенных муропептидов (патоген-ассоциированные молекулярные паттерны-ПАМП) с рецептором врожденного иммунитета NOD1. В работе использовались штамм (ШТ) дикого типа EGDe и рекомбинантные ШТ GIMins 1638 и GIMins0028, полученные на его основе методом сайт-специфического мутагенеза. Динамика инфекционного процесса изучалась на модели белых мышей (БМ) линии BALB/c экспериментально зараженных листериозом путем внутривенного введения бактериальной культуры L. monocytogenes в дозе 10E5 КОЕ/гол. в хвостовую вену. Динамика накопления листерий в печени животных определялась через 6, 24, 72 и 120 ч после внутривенного инфицирования. Установлено, что по сравнению со ШТ дикого типа, количество листерий ШТ GIMins было выше в 3,3 и 2,7 раза через 6 и 24 ч после заражения, соответственно. Через 72 ч разница между этими ШТ нивелировалась и отсутствовала до конца опыта. Различия в микробной обсемененности печени между ШТ EGDe и GIMins0028 через 6 ч после инфицирования БМ не наблюдалось. Наоборот, через 24 ч количество листерий мутантного ШТ GIMins0028 снижалось в 8 раз по сравнению с EGDe и продолжало уменьшаться до конца опыта, достигнув 30-кратного снижения. Т.о., изучение динамики размножения L. monocytogenes в ходе инфекционного процесса показало, что гомологичные белки, кодируемые генами Lmo0028 и Lmo1638 оказывают влияние на разные его этапы. Отсутствие белка Lmo0028 замедляло размножение листерий в печени инфицированных БМ. Напротив, отсутствие белка Lmo1638 приводило к быстрому накоплению их в печени в первые сутки после заражения, хотя на более поздних стадиях инфекционного процесса, его отсутствие не влияло на динамику листериоза. Делается предположение, что наблюдаемые различия в динамике инфекционного процесса были связаны с изменениями в развитии начальных этапов иммунного ответа и распознаванием ПАМП возбудителя, а отсутствие Lmo1638 могло влиять на распознавание листерий рецепторами системы врожденного иммунитета - NOD1. Различий в активации NOD1 рецептора муропептидами, выделенными из рекомбинантных и родительских (диких) ШТ обнаружено не было, что объясняется компенсацией энзиматических функций в ШТ с мутацией в каждом из генов благодаря наличию гомологичного белка.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation