AGRIS - 

2023

Pozdeev, O.K. | Nurgaliev, F.M. | Gil'manov, Kh.Kh. | Mannanova, A.R.

Helicobacter, other than Helicobacter pylori, can cause gastritis, stomach ulcers and MALT lymphoma in humans. Among such bacteria, H. suis is most often isolated from the mucous membrane of the human stomach. According to literature data, the prevalence of H. suis among pig populations in various countries varies between 10.8 and 90.0%. Close contacts with infected animals in the course of professional activity can lead to human infections. Consumption of infected and insufficiently heat-treated pork meat is also considered as a possible way of transmitting this microorganism. In the conditions of a slaughter unit, to determine the presence of H. suis and H. pylori DNA from the surface of pig carcasses, 60 samples were taken from the mucous membrane of the oral cavity, along the incision lines of the neck, thoracic section, hock and 15 samples of the gastric mucosa functional section. According to the PCR results, the content of H. suis DNA was found in 26.7% of samples on the mucous membrane of the oral cavity, 13.3% – along the incision lines of the neck, 6.6% – thoracic section and 0% – hock; all tests for H. pylori DNA were negative. In addition, 20 samples of pig meat (pork neck) from various manufacturers purchased on the markets was examined. According to microbiological indicators, all samples examined met the safety requirements for microbiological indicators of TR CU 034/2013 "On the safety of meat and meat products". Examination of these samples for the presence of H. suis and H. pylori DNA revealed the presence of DNA of living H. suis in one sample, while all other tests for the presence of H. pylori DNA were negative. It is recommended to continue the research to determine accurately the ways of meat contamination during the slaughter. | Хеликобактеры, отличные от Helicobacter pylori, способны вызывать гастриты, язвы желудка и MALT-лимфомы у человека. Среди подобных бактерий со слизистой оболочки желудка человека наиболее часто выделяют H. suis. По литературным данным, распространенность H. suis среди поголовья свиней в различных странах варьирует в пределах 10,8-90,0%. Тесные контакты с инфицированными животными в процессе профессиональной деятельности могут привести к заражениям людей. Потребление зараженного и недостаточно термически обработанного свиного мяса также рассматривается как возможный путь передачи этого микроорганизма. В условиях убойного пункта для определения наличия ДНК H. suis и H. pylori с поверхности туш свиней было отобрано 60 образцов со слизистой оболочки ротовой полости, по линиям разреза шеи, грудного отдела, окорока и 15 проб функционального отдела слизистой оболочки желудка. По результатам ПЦР было установлено содержание ДНК H. suis в 26,7% проб на слизистой оболочке ротовой полости, 13,3% – по линиям разреза шеи, 6,6% – грудного отдела и 0% – окорока; все пробы на ДНК H. pylori были отрицательными. Кроме того, было исследовано мясо свиней (свиная шейка) от различных производителей, закупленное на рынках (20 образцов). По микробиологическим показателям все пробы соответствовали требованиям безопасности по микробиологическим показателям ТР ТС 034/2013 "О безопасности мяса и мясной продукции". Исследование этих проб на наличие ДНК H. suis и H. pylori выявило присутствие ДНК живых H. suis в 1 пробе, в то время как все пробы на наличие ДНК H. pylori были отрицательными. Рекомендовано продолжить исследования, чтобы точно определить пути обсеменения мяса в процессе убоя.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2023

Donnik, I.M. | Makutina, V.A. | Krivonogova, A.S. | Isaeva, A.G. | Dejkin, A.V. | Koshchaev, A.G.

The results of research into genetic methods of breeding agricultural animals with improved characteristics are presented. A significant number of animals with an edited genome have been obtained. Methods of genome modification in cattle are constantly improving. The approaches of gene editing of bovine embryos, delivery of edited constructs and improvement of embryo survival after introduction of editing systems have been studied. The studies were performed on cattle embryos. BLG and SD209 gene editing systems were developed and approbated. Delivery variants of the editing system into cattle cells were studied: microinjection into the zygote of plasmid DNA encoded sequence with CRISPR/Cas9 c sgRNA, the method of viral vectors (adeno-associated AAV viruses, serotypes AAV1, AAV2, AAV6, AAV9, AAVDJ), co-injection of plasmid DNA and sperm into the oocyte at the MII stage, and microinjection of Cas9 and guide RNAs. Different techniques for performing micro-injections have been investigated and refined, and different variants of preparation of Cas9 RNA and guide RNA mixtures have been tested. Based on these results, the protocol for performing microinjection of the editing system was optimized and a model experiment was performed on 160 oocytes, with 80 cells per each construct. The findings have shown that the efficiency of editing has generally increased. When injected with guide RNA against BLG gene and spCas9 mRNA, 84% of the surviving cells initiated cleavage, blastulation was 20%, and BLG knockout was 69.2%. When injected against the CD209 gene and spCas9 mRNA, 44.4% of the surviving embryos started cleaving, blastulation was 16.7%, with CD209 knockout at 44.4%. The novelty of the work lies in obtaining data on the development of editing systems with specific target genes, in improving the delivery system and cultivation of bovine embryos. | Представлены результаты исследования генетических методов создания с.-х. животных с улучшенными характеристиками. Получено значительное количество животных с отредактированным геномом. Методы модификации генома у крупного рогатого скота (КРС) постоянно совершенствуются. Изучены подходы генного редактирования эмбрионов крупного рогатого скота, доставки отредактированных конструкций, повышения выживаемости эмбрионов после внесения систем редактирования. Исследования проводили на эмбрионах КРС. Разработаны и апробированы системы редактирования генов BLG и СД209. Изучены варианты доставки системы редактирования в клетки КРС: микроинъекция в зиготу плазмидной ДНК с закодированной последовательностью с CRISPR/Cas9 c sgRNA, способ вирусных векторов (аденоассоциированные вирусы AAV, серотипы AAV1, AAV2, AAV6, AAV9, AAVDJ), совместное введение плазмидной ДНК и сперматозоида в ооцит на стадии MII, а также микроинъекции РНК Cas9 и гидовых РНК. Исследованы и усовершенствованы различные методики выполнения микроинъекций и опробованы различные варианты приготовления смеси РНК Cas9 и гидовых РНК. На основе полученных результатов оптимизирован протокол выполнения микроинъекции системы редактирования и проведен модельный эксперимент на 160 ооцитах, по 80 клеток на каждую конструкцию. В результате установили, что эффективность редактирования в целом повысилась. При инъекции гидовой РНК против гена BLG и мРНК spCas9 дробление начали 84% выживших клеток, бластуляция составила 20%, оказались с нокаутом по BLG – 69,2%. При инъекции против гена CD209 и мРНК spCas9 дробление начали 44,4% выживших эмбрионов, бластуляция составила 16,7%, с нокаутом по CD209 – 44,4%. Новизна работы заключается в получении данных о разработке систем редактирования с определенными генами-мишенями, в усовершенствовании системы доставки и культивирования эмбрионов КРС.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2023

Shilov, I.A. | Velishaeva, N.S. | Aniskina, Yu.V. | Kolobova, O.S. | Shalaeva, T.V. | Borisenko, O.M. | Demurin, Ya.N. | Frolov, S.S.

The multiplex system for genetic identification of lines and hybrids of sunflower Helianthus annuus L. has been developed based on 7 microsatellite loci (ORS815, ORS394, HA140, HA432, ORS546, ORS1144, ORS78). The proposed technique includes onetube PCR of all loci followed by electrophoresis analysis of DNA fragments using the genetic analyzer. Based on experimental studying of nucleotide structure of each locus the primers designed so that amplified regions contained only short tandem repeat regions. The advantage of the proposed approach is the ability to standardize and automate the procedure using 96-well plates, which allows the possibility for high-throughput analyses. The nine hybrids as well as corresponding parent lines of sunflower selected by All-Russia Research Institute of Oilseed Crops named by V.S. Pustovoit - 'Ameli', 'Aris', 'Arneb', 'Clip', 'Surus', 'Taizar', 'Typhoon', 'Fakel', 'Factor' - were analyzed using above multiplex system. The DNA fragment lengths obtained for all loci appeared to be the same for each plant within corresponding line that confirmed the uniformity of all parent lines, while the total allele combinations for each line allowed to reliably distinguish among themselves. All analyzed sunflower hybrids appeared to be uniform. The DNA-profile of each hybrid contained the corresponding maternal and paternal alleles that confirmed the origin of hybrids from declared parent lines. The suggested multiplex system can be used for efficient identification of lines and hybrids of sunflower as well as it seems to be a promising tool for monitoring of seed production. | На основе 7 микросателлитных локусов (ORS815, ORS394, HA140, HA432, ORS546, ORS1144, ORS78) создана мультиплексная система генетической идентификации линий и гибридов подсолнечника Helianthus annuus L. Предлагаемая методика позволяет проводить полимеразную цепную реакцию (ПЦР) по всем локусам в одной пробирке с последующим электрофоретическим анализом фрагментов ДНК на генетическом анализаторе. На основании детального экспериментального исследования первичной структуры каждого локуса праймеры для амплификации спланированы так, что анализируемые фрагменты ДНК содержат только области тандемных повторов. К преимуществам предлагаемого подхода следует отнести возможность стандартизации и автоматизации анализа в формате 96-луночного планшета, что открывает возможность для проведения массовых анализов. Система апробирована на 9 гибридах селекции ВНИИ масличных культур (Амели, Арис, Арнеб, Клип, Сурус, Тайзар, Тайфун, Факел, Фактор), а также родительских линиях, участвовавших в их создании. Данные по размерам фрагментов ДНК по всем локусам оказались одинаковыми для всех индивидуальных растений в пределах линии, что подтверждает их однородность. Совокупные комбинации значений аллельных состояний позволяют различать линии между собой. Все исследованные гибриды продемонстрировали высокий уровень чистоты. Анализ цифровых ДНК-профилей гибридов показал присутствие в каждом из них соответствующих материнских и отцовских аллелей, что подтверждает происхождение гибридов от заявленных родительских форм. Предложенная методика лабораторного сопровождения селекции и семеноводства подсолнечника позволяет в короткие сроки провести генетическую идентификацию линий или гибридов, оценить их однородность, а также качество проведенной гибридизации.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation