AGRIS - 

Data provenance by Country

2012

Zajkovskaya, A.V. | Romanovskaya, A.A. | Sharshov, K.A. | Il'inikh, F.A. | Shestopalov, A.M., State Research Center of Virology and Biotechnology Vektor, Novosibirsk Region

The isolation of influenza virus (4) A subtype H5 from pharyngeal and cloacal mucus of geese after experimental infection with 3 4 strains different in the pathogenicity degree for chickens was evaluated. There were taken 3 groups of geese aged at 6 weeks and 4 strains having pathogenicity of 0 to 3: A/Garganey/Altai/1213/2007 (H5N2) – (S1); A/common gull/Chany/2006 (H5N1) – (S2); A/duck/Omsk/1822/2006 (H5N1) S3). The geese were inoculated with IV in the dose of 106 ID50 by applying to mucous membranes of nasal passages of conjunctive and oral cavity. For 14 days of experimental infection smears from cloaca and pharynx were taken daily and the presence of IV was determined by 3 methods: real time PCR, on developing chicken embryos (DCE), in cell culture (CC) MDCK. Clinical signs of influenza are observed only in geese inoculated with SI and SII of IV that were manifested by increasing the mucus in pharynx and feces at days 2-7. The time of isolation of IV by using DCE and CC was 3 days of experimental infection, and in PCR – 12 days. The positive results in PCR are possible with titers of 4 lower the diagnostic ones by using virologic methods or in the absence of virus in material. In the CC 4 was found only smears from pharynx: in 3 (5.56%) from geese inoculated with S2, and in 2 (3.7%) – from ones inoculated S3. By aid of DCE in pharyngeal smears all 4 strains have been isolated, from cloaca – only S2 and S3. In the CC only the samples in which 4 titer determined on DCE was not less than 3 lg TCD50/ml gave positive results saying thereby only about lower sensibility of the CC method than DCE. A greater number of positive samples isolated from pharynx than from cloaca was observed. So, IV was isolated in 100% geese inoculated with S2 having an average pathogenicity degree, in 83.3% geese inoculated high pathogenic S2 and only in 50% geese inoculated with low pathogenic S1. Thus, geese are a good model for reproducing avian influenza for studying the isolation of IV into the environment. Geese are susceptible to 4 of different pathogenicity and can serve a source of infection for healthy fowls if keeping together | Провели оценку выделения вируса гриппа (ВГ) А субтипа H5 из слизи глотки (ГЛ) и клоаки (КЛ) гусей (ГУ) после экспериментального заражения (ПЗ) 3 штаммами (ШТ) ВГ разными по степени патогенности (СП) для кур. Было взято 3 гр. ГУ 6-недельного возраста и 3 ШТ ВГ со СП от 0 до 3: A/Garganey/Altai/1213/2007 (H5N2) - (ШТ 1); A/common gull/Chany/2006 (H5N1) - (ШТ 2); A/duck/Omsk/1822/2006 (H5N1) - (ШТ 3). Заражали ГУ ВГ в дозе 106 ЭИД50 путем нанесения на слизистые носовых ходов конъюнктивы и ротовой полости. В течение 14 дн. ПЗ ежедневно брали мазки из КЛ и ГЛ и определяли наличие ВГ 3 методами: ПЦР в реальном времени, на развивающихся куриных эмбрионах (РКЭ), в культуре клеток (КК) MDCK. Клинические признаки гриппа отмечены только у ГУ зараженных ШТ 1 и 2 ВГ, которые проявлялись увеличением слизи в ГЛ и фекалиях на 2-7-е сут. Срок выделения ВГ с использованием РКЭ и КК составил 3 сут ПЗ, а в ПЦР - 12 сут. Положительные результаты в ПЦР возможны при титрах ВГ ниже диагностических при использовании вирусологических методов или при отсутствии вируса в материале. В КК ВГ установлен только в мазках из ГЛ: в 3 (5,56%) от ГУ, зараженных ШТ 2, и в 2 (3,7%) - от зараженных ШТ 3. При помощи РКЭ в мазках из ГЛ выделили все ШТ ВГ, а из КЛ - только ШТ 2 и 3. В КК положительные результаты дали только те пробы, в которых титр ВГ, определенный на РКЭ, был не менее 3 lg ТЦД50/мл, что говорит о более низкой чувствительности метода КК, чем РКЭ. Отмечено большее число положительных проб, выделенных из ГЛ, чем из КЛ. Итак, ВГ выделили у 100% ГУ, зараженных ШТ 2 со средней СП, у 83,3% ГУ, зараженных высокопатогенным ШТ 3, и только у 50% ГУ, зараженных низкопатогенным ШТ 1. Т.о., ГУ - удобная модель для воспроизведения гриппа птиц при изучении выделения ВГ во внешнюю среду. ГУ восприимчивы к ВГ разной патогенности и могут служить источником инфекции для здоровых птиц при совместном содержании

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2012

Kil', V.I. | Ismailov, V.Ya. | Agas'eva, I.S. | Besedina, E.N. | Fedorenko, V.E., All-Russia Research and Development Inst. of Biological Plant Protection, Krasnodar

Predatory bug Perillus bioculatus F. is one of the natural enemies of Colorado beetle Leptinotarsa decemlineata Say, however, attempts to acclimatize it in Europe did not give a positive result. Some acclimatized populations were found in the territory of the Krasnodar Krai in 2008-2009, on their basis a laboratory population was produced. The observation of the bug lasted in 2010. Its population density was 5-15 individuals/sq. m potatoes, there were 3 generations during the vegetation period. The ratio of the abundance of phenoforms with red-black, white-black and orange-black picture of the corselet was in 2010 80:17:3, in 2009 – 70:15:15. The bug Perillus bioculatus from the acclimatized population ate the Colorado beetle at every phase of its development (eggs, larvae of different age, imago). Some asynchronous behavior of developing the predator and pest was overcome by broadening the feeding base of the bug. At the studied areas no chemical treatments were conducted, however, the abundance of the pest was effectively hindered by the presence of the bug. The genetic similarity of the bug to other representatives of the Pentatomidae family was studied by exemplifying a DNA analysis of 7 bug species by the PCR method using RAPD- and ISSR-markers. As is found, the bug has the most genetic similarity (0.91-0.95) with bugs of Picromerus bidens, Arma custos, Zicrona coerulea species making up with it one subfamily Asopinae | Хищный клоп-периллюс (КП) Perillus bioculatus F. является одним из естественных врагов колорадского жука Leptinotarsa decemlineata Say, однако попытки его акклиматизации в Европе не дали положительного результата. Несколько акклиматизированных популяций было обнаружено на территории Краснодарского края в 2008-2009 гг., на их основе создана лабораторная популяция. Наблюдения за КП продолжались в 2010 г. Плотность его популяции составила 5-15 особей/кв. м картофеля, за вегетационный период прошло 3 генерации. Соотношение численности феноформ с красно-черным, бело-черным и оранжево-черным рисунком щитка в 2010 г. составило 80:17:3, в 2009 г. – 70:15:15. КП из акклиматизированной популяции питались колорадским жуком на всех фазах его развития (яйца, личинки разных возрастов, имаго). Некоторая асинхронность развития хищника и вредителя была преодолена за счет расширения кормовой базы КП. На обследованных участках химические обработки не проводились, однако численность вредителя эффективно сдерживалась за счет присутствия КП. Генетическое сходство КП с др. представителями сем. Pentatomidae было изучено на примере анализа ДНК 7 видов клопов методом ПЦР с использованием RAPD- и ISSR- маркеров. Установлено, что КП имеет наибольшее генетическое сходство (0,91-0,95) с клопами видов Picromerus bidens, Arma custos, Zicrona coerulea, входящими с ним в одно подсемейство Asopinae

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2012

Lomakina, N.F. | Batuev, Yu.M., The Ya.R. Kovalenko All-Russia Research and Development Inst. of Experimental Veterinary, Moscow

The results of studying in IDT and PCR the isolates of the sacbrood disease virus (SDV) isolated in different years from bees Apis mellifera (dead larvae, bee pupas) in the apiaries of the Moscow, Kaluga, Orenbeurg regions, the Krasnodar Krai and the Republic of Adygea. Besides the 3 known genotypes: European, Asian and South African in the bees in the territory of RF 2 genotypes were detected, one of which belonged to the Eurasian group and circulated in the Krasnodar Krai and in the Moscow region (isolates 212/3 and 207/4, homology between them 99%) and the other one formed an independent group 4 (isolates 202/8 and Tr5) earlier described by nobody that took an intermediate position between the viruses of the Asian (group 2) and the South African (group 3) genotypes. They included isolates: 202/8 isolated in the Moscow region in 2006 from bees brought from Uzbekistan in 2000 and derivative variants (Tr5 and 6/AZ) of the laboratory strain from the Kaluga region – in 1986. The homology between them 94.2%, with the representatives of other groups – 80.6-83.5%. Genogroup 4 was characterized by a positive reaction with hyperimmune serum №58 and the absence of amplification in PCR with primer pair S14f and S17 because of incompliance of primer S14f. Primer S14f to a RNA-polymerase region allowed differentiating in PCR SDV genotypes 1 and 4. In IDT hyperimmune serum № 6 was specific to genotypes 1 and 4, and serum №58 only to genotype 4 of SDV. On the basis on the obtained results it is concluded that in the European RF among bees A. mellifera 2 genotypes of SDV circulate – one genotype is European and the other one plylogenetically remote unknown genotype 4 whose original area could be Middle Asia from which bee nurseries in the days of the USSR bees were brought to many regions of the country. | Представлены результаты исследований в РИД и ПЦР изолятов вируса мешотчатого расплода (ВМР), выделенного в разные годы от пчел (ПЧ) Apis mellifera (погибшие личинки, куколки ПЧ) на пасеках Московской, Калужской, Оренбургской обл., Краснодарского края и Республики Адыгея. Помимо известных 3 генотипов (ГТ): европейского, азиатского и южноафриканского, у ПЧ на территории РФ было обнаружено 2 ГТ, один из которых принадлежал к европейской группе и циркулировал в Краснодарском крае и Московской обл. (изоляты 212/3 и 207/4, гомология между ними 99%) и второй, образовавший самостоятельную группу 4 (изоляты 202/8 и Tr5), ранее никем не описанную, которая заняла промежуточное положение между вирусами азиатского (группа 2) и южноафриканского (группа 3) ГТ. К ней относились изоляты: 202/8, выделенный в Московской обл. в 2006 г. от ПЧ, завезенных из Узбекистана в 2000 г. и производные варианты (Tr5 и 6/А3) лабораторного штамма из Калужской обл. - в 1986 г. Гомология между ними составила 94,2%, с представителями др. групп - 80,6-83,5%. Отличительной чертой 4 геногруппы явилась положительная реакция с гипериммунной сывороткой N 58 и отсутствие амплификации в ПЦР с парой праймерогв S14f и S17 из-за несоответствия праймера S14f. Праймер S14f к области РНК-полимеразы позволил дифференцировать в ПЦР ВМР 1 и 4 ГТ. В РИД, гипериммунная сыворотка N 6 была специфична к ГТ1 и 4, а сыворотка N 58 только к ГТ4 ВМР. На основании полученных результатов делается вывод, что в европейской части РФ среды ПЧ A. mellifera циркулируют 2 ГТ ВМР - один европейский и другой, филогенетически отдаленный неизвестный 4ГТ, изначальным ареалом которого могла быть Средняя Азия, из пчелопитомников которой, во времена СССР, ПЧ развозились во многие регионы страны.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2012

Bateneva, N.V. | Smirnov, P.N. | Mikhnovich, I.V., Novosibirsk State Agrarian Univ.

There is given a characteristic of genotype variability in bovine leucosis virus (BLV) according to the gag-gene at 3 farms of the Krasnodar Krai. Over the period of 2006 to 2009 by the PCR method 762 blood samples from cattle of different breeds were studied – Black-and White Holsteinized (BWH), Red Steppe and Ayrshir seropositive in a immunodiffusion test (IDT) with strains gp51 BLV. An analysis of the structure of the most variable regions in order to select restriction endonucleases (selected are HaeIII and Fael) to evaluate polymorphism was carried out by means of the Vector NTJ program. There is given a typical electroforegram of PCR amplification products of the gag gene of provirus DNA of BLV obtained by using DNA samples of the investigated Red Steppe animals. As is shown in all analyzed DNA samples a fragment corresponding to the calculated amplicons length (347 n. p.) was diagnosed. A PCR-analysis of the presence of provirus DNA in all the investigated cattle breeds by using primers specific for the gag-gene region having a size 347 n. p. allowed to establish that the portion of IDT-seropositive animals with a negative result in PCR was 2.6%. In view of the data obtained by analyzing the restriction fragment lengths polymorphism (RFLP-analysis) according to pattern types 11 conventional genotypes were distinguished recorded in these cattle breeds: 8 – in Ayrshir, 6 – in BWH and 3 – in Red Steppe. At the same time in all breeds 3 identical conventional provirus genotypes were recorded: I, II and III. Thus, among BLV-infected animals at all 3 farms of the Krasnodar Krai the most variability of genotypes of BLV provirus was discovered in Ayrshir cattle, the least one – in Red Steppe. An interrelationship between breed belonging and animal susceptibility to a definite BLV genotype by the gag-gene is supposed. Identifyinh the BLV in the animal organism by the gag-gene is possible 5-7 months earlier than by the env gene. | Дана характеристика генотипической вариабельности у вируса лейкоза КРС (ВЛ КРС, BLV) по gag-гену в 3 хозяйствах Краснодарского края. За период с 2006 по 2009 гг. методом ПЦР были исследованы 762 пробы крови от КРС разных пород - черно-пестрой голштинизированной (ЧПГ), красной степной и айрширской, серопозитивных в реакции иммунодиффузии (РИД+) со штаммами gp51 BLV. Анализ структуры наиболее вариабельных участков с целью подбора эндонуклеаз (выбраны HaeIII и FaeI) рестрикции для оценки их полиморфизма проводился с помощью программы Vector NTJ. Приведена типичная электрофореграмма продуктов ПЦР-амплификации области гена gag провирусной ДНК ВЛ КРС, полученных с использованием образцов ДНК обследованных животных красной степной породы. Показано, что во всех анализируемых образцах ДНК диагностировался фрагмент, соответствующий расчетной длине ампликона (347 п.н.). ПЦР-анализ наличия провирусной ДНК у всех исследованных пород КРС с использованием праймеров, специфичных для области gag-гена размером 347 п.н., позволил установить, что доля РИД-серопозитивных животных с отрицательным результатом в ПЦР составила 2,6%. На основании данных, полученных при анализе полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ-анализ), по типам паттернов было выделено 11 условных генотипов, регистрируемых у данных пород КРС: 8 у айрширской, 6- у ЧПГ и 3 у красной степной. При этом у всех пород были зарегистрированы 3 одинаковых условных генотипа провируса: I, II и III. Таким образом, среди инфицированных ВЛ КРС животных во всех 3 хозяйствах Краснодарского края, наибольшее разнообразие генотипов провируса BLV было выявлено у КРС айрширской породы, наименьшее - у красной степной. Делается предположение о взаимосвязи между породной принадлежностью и восприимчивостью животного к определенному генотипу BLV по gag-гену. Идентификация ВЛ КРС в организме животных по gag-гену возможна на 5-7 мес. раньше, чем по гену env.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2012

Karpechenko N.A. | Zemlyanuhina O.A. | Karpechenko I.Yu. | Veprintsev V.N. | Kondrateva A.M.

The technique of early form specificity diagnosis of Quercus robur by using the methods of molecular genetic analysis was developed. As a result of research has been optimized the PCR technique, selected the most informative primers. | Разработана методика ранней диагностики формоспецифичности дуба черешчатого с применением методов молекулярно-генетического анализа. В результате исследований оптимизирована методика проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР), подобраны наиболее информативные праймеры.

Show more [+]

Less [-]

Saint Petersburg Forestry Research Institute - Russian Federation

2012

Karimova, T.V. | Bogumil'chik, E.A. | Voskresenskaya, E.A., Federal Service on Customers' Rights Protection and Human Well-Being Surveillance (Russian Federation). The Paster Research and Development Inst. of Epidemiology and Microbiology, St. Petersburg | Klimov, V.T., Federal Service on Customers' Rights Protection and Human Well-Being Surveillance (Russian Federation). Irkutsk Research and Development Antiplague Inst. of Siberian and Far East | Tseneva, G.Ya., Federal Service on Customers' Rights Protection and Human Well-Being Surveillance (Russian Federation). The Paster Research and Development Inst. of Epidemiology and Microbiology, St. Petersburg | Chesnokova, M.V., Federal Service on Customers' Rights Protection and Human Well-Being Surveillance (Russian Federation). Irkutsk Research and Development Antiplague Inst. of Siberian and Far East | Ivanov, L.I. | Poutonen, T.B. | Vasil'eva, A.V. | Gromova, T.V.

A complex study of a representative group of Yersinia enterocolitica strains of various biotypes by phenotypic and genotypic methods was carried out for the first time. Identified were 447 Y. enterocolitica strains isolated in 15 administrative regions of Siberia, Far East, the Ural and North-Western federative districts from patents, rodents, agricultural animals, birds and the environment. Serotyping of Y. enterocolitica strains of biotype 1A has determined the serotypes O:4,32; O:4,33, O:5; O:6,31: O:7,8: O:12,25:O:12,26; O:13,7: O:19.8: O:41,43; strain of biotype 2-4 – O:3 and O:9. For a part of strains genotyping was carried out. In 11 strains of biotype 1A 2 phagotypes were defined – X_z (3 strains) and X_o (8 strains); in 40 strains of biotype 2-4 – X_z, X_3 and VIII. On the basis of the research results of of Y. enterocolitica strains for the presence of chromosome virulence genes ail, ystA and ystB and determining the virulence plasmid pYV it has been found that all of Y. enterocolitica strains of biotype 2-4 have genes ails and ystA. Most freshly isolated strains contained plasmid pYV, however, in the process of storage its elimination sometimes happened. None of 401 Y. enterocolitica 1A strains had ail and ystA. The only gene of virulence that 326 strains had (81.3%) was gene ystB. In this case a disease was accompanied by pronounced clinical symptoms of enteritis and enterocolitis. Isolation of biotype 1A strain causes a necessity for diagnostic studies for enteric yersiniosis. | Впервые проведено комплексное изучение представительной группы штаммов (ШТ) Yersinia enterocolitica различных биотипов фенотипическими и генотипическими методами. Идентифицировано 447 ШТ Y. enterocolitica, выделенных в 15 административных регионах Сибири, Дальнего Востока, Уральского и Северо-Западного федеративных округов от больных людей, грызунов, с.-х. животных, птиц и из внешней среды. По результатам серотипирования у ШТ Y. enterocolitica биотипа 1A определены серотипы O:4,32; O:4,33; O:5; O:6,30; O:6,31;O:7,8; O:12,25; O:12,26; O:13,7; O:19,8; O:41,43; у ШТ 2-4 биотипа - O:3 и O:9. Для части ШТ проведено генотипирование. У 11 ШТ биотипа 1A, определены 2 фаготипа - X_z (3 ШТ) и X_o (8 ШТ); у 40 ШТ 2-4 биотипа - X_z, X_3 и VIII. На основании результатов исследований ШТ Y. enterocolitica на наличие хромосомных генов вирулентности ail, ystA и ystB и определения плазмиды вирулентности pYV установлено, что все Y. enterocolitica 2-4 биотипов имели гены ail и ystA. Большинство свежевыделенных ШТ содержали плазмиду pYV, однако в процессе хранения иногда происходило ее элиминирование. Ни один из 401 ШТ Y. enterocolitica 1A не имел ail и ystA. Единственным геном вирулентности, которым обладали 326 ШТ (81,3%), являлся ген ystB. При этом заболевание сопровождалось выраженной клинической симптоматикой энтерита и энтероколита. Выделение ШТ биотипа 1A обусловливает необходимость проведения диагностических исследований на кишечный иерсиниоз.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2012

Miroshnichenko, D.N., Russian Academy of Sciences, Moscow

While introducing gene-modified crops in agricultural practice a problem of vertical gene transfer from gene-modified to conventional varieties as a consequence of pollen application, intercross and transgenic hybrid seed production. The investigations by evaluating the frequency of vertical transfer were conducted for 2 years. As pollen donors the transgenic homozygous line of spring wheat variety Andros comprising heterological sequences of gene bar imparting resistance to phosphinotricin-based herbicides and green fluorescent protein gene gfp. The transgenic variety was sown inside a circle having a diameter of 1 m, and the non-transgenic analog – in the distance of 1, 2 and 3 m from the outside perimeter. The relationship of the transgenic transfer frequency and prevailing wind direction has been discovered. In the field sector located in this direction 81 and 84% of the total amount of detected transgenic seeds have been found. When removing non-transgenic plants from transgenic ones 1 m the transfer frequency was 0.134%, 2 m – 0.035%, 3 m – 0.002%. In general, the frequency of a transgenic vertical drift to seeds of non-transgenic plants in the field areas varied from 0.000 to 0.797%. The transgenic status of hybrid seeds was confirmed by the resistance to the applied herbicides, tissue fluorescence, and the presence of transgenic sequences in the plant genome (the data of PCR and reverse transcription PCR, as well as typical inheritance of transgenes in the following seed generation. | При внедрении генно-модифицированных культур в с.-х. практику может возникнуть проблема вертикального переноса генов от генно-модифицированных к обычным сортам вследствие переноса пыльцы, переопыления и образования семян, гибридных по трансгенам. Исследования по оценке частоты вертикального переноса проводились в течение 2 лет. В качестве доноров пыльцы использовали трансгенную гомозиготную линию яровой пшеницы сорта Андрос, которая содержит гетерологичные последовательности гена bar, придающего устойчивость к гербицидам на основе фосфинотрицина, и гена зеленого флуоресцентного белка gfp. Трансгенный сорт высевали внутри круга диаметром 1 м, а нетрансгенный аналог - на расстоянии 1, 2 и 3 м от внешнего периметра. Выявлена зависимость частоты переноса трансгенов от направления господствующих ветров. В секторе поля, расположенному по этому направлению, найдено 81 и 84% от общего количества обнаруженных трансгенных семян. При удалении нетрансгенных растений от трансгенных на 1 м частота переноса составила 0,134%, на 2 м – 0,035%, на 3 м – 0,002%. В целом же частота вертикального дрейфа трансгенов в семена нетрансгенных растений на полевых участках варьировала от 0,000 до 0,797%. Трансгенный статус гибридных семян был подтвержден устойчивостью к примененному гербициду, флуоресценцией тканей, наличием последовательности трансгенов в геноме растений (данные ПЦР и ПЦР с обратной транскрипцией), а также характерным наследованием трансгенов в следующем семенном поколении.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2012

Irza, V.N. | Sprygin, A.V., Federal Centre for Animal Health, Yurievets

For the first time, the viral agent of hepatitis splenomegaly syndrome – hepatitis E virus (avian hepatitis E virus, aHEV) in laying hens from broilers' parental flock at one of broiler plants of the RF, has been identified by the use of RT-PCR (reverse transcription — polymerase chain reaction). During 2009-2010 postmortem examination was done and a PCR-analysis of liver and bile samples from laying hens having signs hepatitis splenomegaly showing a reduction in egg-laying capacity and high mortality. The postmortem picture of liver was typical for viral hepatitis E. When performing a PCR-test only primers of ORF2 capsid protein gene gave a positive result and of aHEV helicase gene – a negative result. The sequence analysis of DNA fragment using a forward primer and reverse primer of ORF2 gene confirmed positive results of amplification. An analysis of the constructed dendrogram that the detected aHEV isolate designated as aHEV16050 falls under none of genetic groups represented in it. The aHEV16050 had genetic homology comparison with analogous sequences from GenBank database (NCBI) for ORF2 aHEV gene of 61.6-78.6 %. Thus, in the RF avian hepatitis E virus was identified for the first time which is urgent for differential diagnostics in the conditions of poultry farms (Marek's disease, leucosis, and adenovirus infections). | Впервые с помощью ОТ-ПЦР идентифицирован возб. синдрома большой печени и селезенки вирус гепатита Е кур (avian hepatitis E virus, aHEV) у кур-несушек родительского стада на одной из бройлерных птицефабрик РФ. В течение 2009-2010 гг. проводились патанатомические исследования и ПЦР-анализ образцов печени и желчи от кур-несушек с признаками гепато- и спленомегалии, у которых отмечалось снижение яйценоскости и повышенная смертность. Патологоанатомическая картина печени была характерна для вирусного гепатита Е. При проведении ПЦР положительный результат дали только праймеры на ген капсидного белка ORF 2 и отрицательный на ген хеликазы aHEV. Положительные результаты амплификации подтвердило секвенирование с использованием прямого и обратного праймеров на ген ORF2. Анализ построенной дендрограммы показал, что обнаруженный изолят aHEV, обозначенный как aHEV16050, не вошел ни в одну из генетических групп, представленных в ней. У aHEV 16050 генетическая гомология по последовательностям из GenBank для гена ORF2 aHEV составила 61,6-78,6%. Таким образом, впервые генетически идентифицирован вирус гепатита E кур, что актуально при проведении дифференциальной диагностики в условиях птицефабрик (болезнь Марека, лейкозы, аденовирусные инфекции).

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2012

Divashuk, M.G. | Krupin, P.Yu. | Bazhenov, M.S. | Klimushina, M.V., Russian State Agrarian Univ., Moscow

The aim of the paper is to study the genes of wheatgrass storage proteins in wheat-wheatgrass hybrids (WWH). The study was carried out using seeds of 26 lines of WWH developed in the Department of Distance Hybridization of Tsitsin Main Botanical (Russian Academy of Sciences) using medium and ponticum wheatgrass. The analysis was performed using polymerase chain reaction (PCR), SDS-PAGE storage protein electrophoresis, PCR-product cloning, sequencing, and BLAST-analysis. 23 WWH with the genes of wheatgrass high-molecular (HMW) glutenins have been detected. The expression of these genes at least in 15 of 23 lines has been shown using protein electrophoresis. It can result from either the "silence" of the genes or the similarity or identity of the expressed wheat and wheatgrass protein subunits in molecular weight, so, they cannot be distinguished with one-dimensional electrophoresis. Wheatgrass storage protein genes of two wheat-wheatgrass lines (1670 and 197/2-1-2trs) were cloned and sequenced. As a result, two different nucleiс sequences have been described: 1152 b.p. for 1670 and 1352 b.p. for 197/2-1-2trs. BLAST-analysis of the sequences showed the relation of them to HMW glutenin genes of Thinopyrum intermedium and Th. elongatum. The gene revealed in 1670 is clasterized with the HMW glutenin gene of Th. intermedium, and that of 197/2-1-2trs with Lophopyrum elongatum (syn. Th. elongatum). The found lines are interesting as an object to study the influence of wheatgrass HMW glutenins on gluten, storage proteins compound and bread-making quality | Цель исследования состояла в изучении генов запасных белков пырейного происхождения у пшенично-пырейных гибридов (ППГ). В работе использовали семена 26 форм ППГ, полученных из коллекции отдела отдаленной гибридизации Главного ботанического сада имени Н.В. Цицина РАН, созданных с участием пырея среднего и пырея понтийского. Анализ проводили с использованием следующих методов: полимеразная цепная реакция (ПЦР), SDS-PAGE электрофорез запасных белков, клонирование ПЦР-продукта, секвенирование, BLAST-анализ. С помощью ПЦР выявлено 23 образца ППГ, несущих гены высокомолекулярных глютенинов (ВМГ) пырейного происхождения. Методом белкового электрофореза показано, что минимум у 15 из 23 образцов эти гены экспрессируются. Это может быть связано как с "молчанием" генов, так и с тем, что экспрессирующиеся субъединицы ВМГ пырейного происхождения близки или идентичны по своему молекулярному весу к субъединицам ВМГ пшеницы, и при проведении одномерного электрофореза запасных белков их невозможно отличить друг от друга. У 2 образцов ППГ (1670 и 197/2-1-2trs) гены высокомолекулярных глютенинов пырейного происхождения были клонированы и секвенированы. В результате были получены 2 отличающиеся нуклеотидные последовательности размером 1152 п.н. у образца 1670 и 1352 п.н. у образца 197/2-1-2trs. BLAST-анализ полученных сиквенсов показал родство к генам ВМГ Thynopyrum intermedium и Th. elongatum. Ген, выявленный у образца 1670, дает наибольшую гомологию и кластеризуется с геном ВМГ Th. intermedium, а ген, выявленный у 197/2-1-2trs, с геном, принадлежащим Lophopyrum elongatum (синоним Th. longatum). Выявленные формы интересны как объект для изучения влияния пырейных ВМГ на клейковину, состав запасных белков и качество хлеба

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation