AGRIS - 

2016

Kuzmitskaya,P.V. | Urbanovich,O.Yu.

Genetic polymorphism and apple mosaic virus prevalence in the gardens of BelarusApple trees of different cultivars growing in Belarus were tested using RT-PCR for Apple mosaic virus, an important economically and common pathogens in commercial orchards. Viral infected apple trees (1.5 %) were detected in the modern horticultural plantations and were not found among the old trees aged more than 50 years. The fragments of ApMV coat protein gene were cloned and sequenced. The analysis of their nucleotide sequences showed that the identity between them ranged from 98.9 to 99.6 %. The analysis of evolutionary relationships of nucleotide sequences obtained in this study and their homologs from the GenBank database revealed that the similarity between the viral genotypes was observed both between the isolates from various plants growing in the same geographical region, as well as between the isolates obtained from the same plant species, growing in different geographic regions. This picture was probably formed as a result of two methods of apple mosaic virus propagation: vegetative and mechanical. | С помощью метода ОТ-ПЦР обнаружено, что среди деревьев из действующих промышленных и маточно-черенковых садов 1,5 % заражены вирусом мозаики яблони. У деревьев старше 50 лет инфекция не выявлена. Степень идентичности вирусов мозаики яблони, распространенных на территории Беларуси, определенная с помощью сиквенирования фрагментов гена, кодирующего белок оболочки, колебалась в пределах от 98,9 до 99,6 %. Анализ эволюционных взаимоотношений полученных нами нуклеотидных последовательностей и их гомологов из базы данных GenBank показал, что сходство между генотипами вируса наблюдается как у изолятов, выделенных из разных растений, растущих в одном географическом регионе, так и у изолятов, выделенных из одного вида растений, растущих в различных географических регионах. Это может быть следствием двух способов распространения вируса мозаики яблони – вегетативного и механического.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Hashenko,O.A. | Volosevich,N.N. | Kolbanova,E.V. | Kastrytskaya,M.S. | Kukharchik,N.V.

Apple mosaic virus (ApMV) appears one of the main pathogens of hop (Humulus Lupulus). In the system of monitoring of phytosanitary status of the plants enzyme-linked-immuno-sorbent assay (Elisa) represents one of the most effective methods of virus identification. The article deals with determination of antigenic activity of Apple mosaic virus with the method of DAS-Elisa-test during storage of hop samples (Humulus Lupulus). The results of ApMV diagnostics efficiency with using of frozen leaves as the tested material has been presented in the article. It has been determined that after leaves storage at -20 deg C optical density does not differ significantly from using of fresh material. Conservation of antigenic activity does not depend on host plant cultivar. The estimation of ELISA-test susceptibility using the range of cell sap dilution has shown that using the plant sample with high concentration of virus make it possible to detect ApMV in highly diluted solution (up to 1:1000). Storage of plant extracts from frozen leaves after homogenization influenced negatively on viral capacity to react with cover antibodies. | Представлены результаты эффективности диагностики вируса мозаики яблони (ApMV) при использовании замороженных листьев хмеля в качестве материала для тестирования. Установлено, что после хранения листьев при температуре -20 градусов С значения оптической плотности значимо не отличались от данных, полученных при тестировании свежих листьев. Сохранение антигенной активности ApMV в процессе хранения не зависело от сорта растения-хозяина. Оценка чувствительности ELISA-теста с помощью серии разведений клеточного сока показала, что в случае, если для тестирования использовали растительную ткань с высоким содержанием вируса, сохранялась возможность определить наличие ApMV даже в очень разведенных (до 1:1000) образцах. Установлено, что хранение растительных экстрактов из замороженных листьев после гомогенизации отрицательно сказывается на способности вируса взаимодействовать с покровными антителами.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Kolbanova,E.V. | Volosevich,N.N.

через 3 года после ее эксплуатации в открытом грунте использовали метод молекулярного анализа. В результате проведенных исследований было установлено, что симптомы поражения вирусом реверсии растений смородины черной в условиях Беларуси сходны с симптомами вируса, описанными в литературе. Показано, что отсутствие визуальных симптомов не является доказательством отсутствия вируса в растительной ткани. Установлено, что метод IC-RT-PCR с использованием праймеров BRAV5/BRAV6 может с успехом применяться для диагностики белорусских изолятов вируса BRV. Показано, что уровень латентной BRV инфекции растений смородины черной был низким и составил 4,4 %. Установлено, что частота встречаемости вируса варьируется в зависимости от сорта смородины черной. | Blackcurrant reversion virus (BRV) refering to Nepovirus appears one of the most injurious viruses of black currant plants transferring by Cecidophyopsis ribis. For declining of industrial losses of crop yield, introduction of revitalized planting material, anti-tick treatment and development of disease-resistant varieties of black currant plants is necessary. The results of phytosanitary monitoring of Blackcurrant reversion virus on the three years old plants of black currant mother plantations (super-super elite, A class) grown in the field of the Department of Biotechnology of the Institute for fruit Growing are presented in the paper. The main symptoms caused by BRV of black currant plants are presented. The result of amplification of fragment of genom of Belarusian isolates of Blackcurrant reversion virus is displayed. It has been determined that IC-RT-PCR technique with primers BRAV5/BRAV6 can be successfully used for detection of Belarusian isolates of BRV. The estimated low level of latent BRV infection is 4.4%. Occurrence of the virus varied in the cultivar of black currant. | Вирус реверсии смородины черной (Blackcurrant reversion virus, BRV) относится к роду Nepovirus и является самым вредоносным вирусом смородины черной. Для установления уровня латентной инфекции вируса BRV в маточном насаждении ССЭ класса А смородины черной РУП &#039 | Институт плодоводства&#039

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Rodkina,I.A. | Radkovich,E.V.

infector + accumulator&#039 | The research results of the selection of Belarusian isolates of potato (Solanum tuberosum) virus M (PVM) for receiving viral preparation are given in the article. This preparation can be used for immunization of animals at the production of diagnostic ELISA test-systems. According to the data of dynamic counts of 2013-2014 (ELISA results) the maximum accumulation of M-potato virus for infected by Belarusian isolates tomato plants of different varieties there was observed on the 28th day after two-time inoculation. There was marked the dependence of the amount of an isolated virus preparation on a combination of &#039 | . Notably, the highest level of virus accumulation, according to ELISA data, does not always mean the highest amount of virus produced by the drug. As a result of the subsequent artificial infection with a dynamic accounting of the level of accumulation of the virus, the output of the final product (purified viral preparation) revealed: the most effective among the Belarusian PMV isolates was the isolate allocated on clone of potato of varieties Neptune. As the most effective store was a tomato of varieties Nevsky. | В статье приведены результаты исследований по отбору белорусских изолятов М-вируса картофеля для получения очищенного вирусного препарата и дальнейшей иммунизации животных при производстве наборов для проведения ИФА. Согласно данным динамических учетов 2013-2014 гг. (результаты ИФА), максимальное накопление М-вируса картофеля для инфицированных белорусскими изолятами растений томата различных сортов отмечено на 28-е сутки после двукратной инокуляции. Установлена зависимость количества выделенного вирусного препарата от сочетания ‘инфектор + накопитель’, причем самый высокий уровень накопления вируса, согласно данным ИФА, не всегда означает самое высокое количество произведенного вирусного препарата. По результатам искусственного инфицирования с последующим динамическим учетом уровня накопления вируса, выходу конечного продукта (очищенного вирусного препарата) выявлены: эффективный инфектор МВК, выделенный на клоне белорусского сорта картофеля Нептун. Эффективный накопитель МВК - растения томата сорта Невский.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Bozhiday,T.N. | Volosevich,N.N. | Kukharchik,N.V.

Разработка мультиплексной RT-PCR (mRT-PCR) для одновременного выявления нескольких вирусов голубики является актуальной задачей, направленной на своевременную дифференциальную диагностику вирусов с целью оптимизации и удешевления мероприятий по контролю над распространением данных патогенов. В результате проведенных исследований установлено, что метод mRT-PCR с использованием двух комбинаций праймеров (1F/1R, MF05-22-F/MF05-21-R, AtropaNad2.1a/2.2b и RDP-1/RDP-2, MF05-22-F/MF05-21-R, AtropaNad2.1a/2.2b) может быть применен для одновременной и дифференциальной диагностики таких патогенов голубики, как вирус ожога голубики (BiScV) и вирус кольцевой пятнистости табака (TRSV). Использование mRT-PCR для выявления вирусных патогенов голубики позволяет, в сравнении с RT-PCR, снизить затраты на проведение тестирования на 49,5 %. | Vaccinium plants are susceptible to viral diseases causeing a great crop yield losses. One of the most effective methods of virus infection determination appears molecular analysis, such as ELISA and RT-PCR. Multiplex RT-PCR (mRT-PCR) represents a perspective, quick and economically efficient method of diagnostics of virus infections. Due to this factor,development of mRT-PCR for simultaneous detection of some viruses of Vaccinium appears an important scientific challenge aimed on well-timed virus diagnostics for cheapening of disease control methods. In the article it has been found that multiplex RT-PCR (mRT-PCR) method with two combinations of primers (1F/1R, MF05-22-F/MF05-21-R, AtropaNad2.1a/2.2b and RDP-1/RDP-2, MF05-22-F/MF05-21-R, AtropaNad2.1a/2.2b) can be used for the simulatenous and differential detection of blueberry pathogens (Blueberry scorch carlavirus, Tobacco ringspot nepovirus). Application of mRT-PCR for detection of virus diseases of blueberry plants allows to reduce testing costs on 49.5% in comparison with simplex RT-PCR.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Kuzmitskaya,P.V. | Urbanovich,O.Yu.

Apple tree appears one of the most important commercial fruit cultivars sensitive to different infections, especially to the plant viruses. Propagation of plants with the help of vegetative method can infect all the plant population. PCR testing of apple stem grooving virus appears one of the most effective for evaluation of virus evaluation. Apple trees of different cultivars growing in Belarus have been tested using RT-PCR for apple stem grooving virus, an important economically and common pathogen in commercial orchards. 115 apple trees and 64 rows of clonal rootstocks have been tested. 9.6% of apple trees have been infected with ASGV. In 6.2% of clonal rootstock infected plants have been found. Specificity of molecular markers has been confirmed by sequencing the RT-PCR product. The nucleotide and deduced amino acid sequences have been compared with sequences published in GenBank. Alignment of this nucleotide and amino acid sequences of hypothetical protein sequence with other similar sequence from GenBank has shown up to 99 and 100% identity, respectively. | С помощью метода ОТ-ПЦР проведена оценка распространенности вируса бороздчатости древесины яблони (ASGV) среди 115 деревьев разных сортов и 64 рядов подвоев яблони, выращиваемых на территории Брестской, Минской и Гродненской областей Беларуси. Обнаружено, что вирусом ASGV заражено 9,6 % деревьев яблони, относящихся к разным сортам. Зараженные вирусом подвои обнаружены среди 6,2% рядов. Степень распространения вирусной инфекции среди хозяйств была неоднородной. Сиквенирование фрагмента генома вируса белорусского изолята ASGV показало, что степень его идентичности с гомологами из базы данных GenBank со 100 %-ным покрытием исследуемой нуклеотидной последовательности находилась в пределах 91—99 %. Полученный при помощи компьютерной трансляции гипотетический белок имел степень идентичности до 100 % со своими гомологами. Наиболее близкими белорусскому изоляту по нуклеотидному составу оказались последовательности фрагментов генома вируса ASGV, выделенные в Латвии и Украине.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Voluevitch,E.A.

Картофель (Solanum tuberosum L.) является четвертой по значимости продовольственной культурой в мире после пшеницы, кукурузы и риса. В статье рассматриваются биологические особенности M- и S-вирусов картофеля, штаммовый состав их популяций и вредоносность. Охарактеризованы типы устойчивости и известные гены крайней и сверхчувствительной резистентности к этим патогенам. Указаны молекулярные маркеры к генам устойчивости, приемлемые для направленного отбора желаемых генотипов с использованием полимеразной цепной реакции. Приведены сорта картофеля с генами устойчивости к PVM и PVS, в том числе белорусской селекции. PMV и PVS – широко распространенные и вредоносные патогены, в популяциях которых выделяют штаммы. Вирусы распространяются механическим способом, насекомыми и с инфицированными клубнями. Известны гены крайней и сверхчувствительной устойчивости к M- и S-вирусам. Разработаны молекулярные маркеры к этим генам, эффективные для использования в селекции. Выведены сорта картофеля с генами сверхчувствительной устойчивости к PMV и PVS. Ряд белорусских сортов характеризуется наличием гена Rm, контролирующего сверхчувствительную реакцию к M-вирусу. Ген Gm, обусловливающий крайнюю устойчивость к PMV, пока представлен только в гибридном материале. | Potato (Solanum tuberosum L.) is the fourth most important food crop in the world after wheat, corn and rice. The biological features of potato M- and S-viruses, the strain composition of their populations and the harmfulness are considered in the article. Types of resistance and known genes of extreme and hypersensitive resistance to these pathogens are characterized. Molecular markers to resistance genes that are acceptable for targeting the desired genotypes using a polymerase chain reaction are indicated. Potato varieties with resistance genes for PVM and PVS are listed, including Belarusian selection. PVM and PVS are widespread and harmful pathogens, in their populations isolated strains. Viruses spread mechanically, infected tubers and insects. There are genes, which control the extreme and hypersensitive resistance to these viruses. Effective molecular markers developed to these genes for use in breeding. Varieties created with genes of hypersensitivity to M and S-viruses and breeding material with extreme resistance gene to PVM. A number of Belarusian varieties are characterized by the presence of the Rm gene, which controls the hypersensitive reaction to the M-virus. The Gm gene, which causes extreme resistance to PMV, is so far only presented in a hybrid material.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Rusetskiy,N.V. | Kozlov,V.A. | Chashinskiy,A.V.

В статье приведены результаты мониторинга распространения раттл-вируса, вируса моп-топ и вируса мозаики люцерны в посадках картофеля (Solanum tuberosum) различных субъектов хозяйствования пяти районов Витебской области Республики Беларусь. Установлено, что наибольшее распространение из трех изучаемых вирусов имеет раттл-вирус (5,5-17,3 %), который обнаружен в каждом из исследуемых районов. Наибольшее количество положительных проб выявлено в Лепельском районе - 17,3 %. Пораженность посадок картофеля Витебской области вирусом моп-топ и вирусом мозаики люцерны является менее значительной. Методом клубневого анализа выявлены некрозы мякоти клубней на сортах: Ред Скарлет, Скарб Верхнедвинского района (1,7-2,5 %), Скарб, Рагнеда Полоцкого района (3,3-7,5 %). | The monitoring results to identify tobacco rattle virus, potato mop-top virus and alfalfa mosaic virus in the planting of potato (Solanum tuberosum) at various management agriculture of five districts of Vitebsk region are present in the article. It is established that the greatest distribution from three studied viruses has Rattle-virus (5.5-17.3 %) which is found out in each of investigated areas. The greatest quantity of positive tests is revealed in Lepel (17.3) area. The incidence potato plantings of mop-top and alfalfa mosaic viruses has the less significance.Tuberous analysis method has revealed the necrosis of the pulp in tubers of the following varieties: Red Scarlet, Skarb of Verkhnedvinsk area (1.7-2.5 %), Skarb, Ragneda of Polatsk area (3.3-7.5 %).

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Yakovleva,G.A. | Dubinich,V.L. | Rodkina,I.A. | Semanyuk,T.V. | Bedunko,E.A.

Метод соматической гибридизации - надежный способ интрогрессии в геном А культурного картофеля (S. Tuberosum) признака устойчивости к ВСЛК из диких видов Solanum генома E: S. etuberosum, S. brevidens. Устойчивые к вирусу L межвидовые гибриды получены в четырех комбинациях соматической гибридизации картофеля с неклубненосными вирусоустойчивыми видами S. etuberosum, S. brevidens: 2D-86-6 (S. tuberosum x S. chacoense) + S. etuberosum, 4D-86-6 + (S. etuberosum x S. brevidens), 10D-S. polyadenium + (S. etuberosum x S. brevidens), P - ЛДГ + 10D-1. Использование в качестве неклубненосного родителя-партнера комбинации первичной соматической гибридизации 2D образца Е55-1 вида S. etuberosum обеспечило возможность создания преимущественно устойчивых к ВСЛК межвидовых соматических гибридов картофеля. Восемнадцать соматических гибридов из 19 (94,7 %), проанализированных в тесте с прививкой на растения-инфекторы L-вируса, были устойчивы к заражению. Признак устойчивости к вирусу сохранялся после генетической рекомбинации в процессе мейоза вплоть до 5-го полового поколения соматического гибрида. При анализе 81 представителя в половых поколениях двух соматических гибридов комбинации 2D устойчивость к ВСЛК выявлена у 64 межвидовых гибридов (79 %). | Somatic hybridization method is a reliable way of introgression in the cultural potato (S. tuberosum) of the genome resistance to PLVR from wildlife Solanum varieties of genome E: S. etuberosum, S. brevidens. Resistant L virus interspecific hybrids were obtained in four combinations of somatic hybridization of potato with virus-resistant forms of S. etuberosum, S. brevidens: 2D-86-6 (S. tuberosum x S. chacoense) + S. etuberosum, 4D-86-6 + (S. etuberosum x S. brevidens), 10D-S. polyadenium + (S. etuberosum x S. brevidens), P - LDH + 10D-1. Use of 2D sample of E55-1 species S. etuberosum as a parent partner combination of initial somatic hybridization has provided the possibility of creating largely resistant to PLRV interspecific somatic hybrids of potato. Eighteen somatic hybrids out of 19 (94.7%) analyzed in test plants grafted on L-infector virus were resistant to infection. Resistance to virus retained after genetic recombination during meiosis until 5th generation of somatic hybrid. During the analysis of 81 representatives in sexual generations of two of somatic hybrids of 2D combinations there was marked the resistance to PLRV in 64 interspecific hybrids (79%).

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Voronkova,E.V. | Pavlyuchuk,N.V. | Polyukhovich,Y.V. | Gukasyan,O.N. | Zharich,V.M. | Luksha,V.I. | Yermishin,A.P.

С помощью иммуноферментного анализа после искусственного заражения Y-вирусом картофеля (Solanum tuberosum) была оценена коллекция из 240 межвидовых диплоидных гибридов картофеля, полученных на основе мексиканского аллотетраплоидного вида Solanum stoloniferum. Было показано, что среди них может быть отобран селекционный материал с высокой устойчивостью к вирусной инфекции, которая стабильно передается потомству при беккроссировании дигаплоидами культурного картофеля. При этом изучение исходных генотипов дикого вида с помощью ДНК-маркеров позволяет предположить наличие в них и в гибридах, полученных на их основе, нового, ранее немаркированного и некартированного фактора, обеспечивающего высокую устойчивость к патогену. Экспериментально подтвержден моногенный характер наследования признака экстремальная резистентность к обычному и некротическому штаммам PVY, передающихся межвидовым гибридам от S. stoloniferum. Такой характер наследования признака позволит в дальнейшем, использовать полученные расщепляющиеся популяции гибридов на основе S. stoloniferum для маркирования нового фактора экстремальной устойчивости к PVY от этого вида картофеля. | With the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) help after artificial infection with Y-virus of potato (Solanum tuberosum) the collection from 240 interspecific diploidic hybrids of potato received on the basis of the Mexican allotetraploid type of Solanum stoloniferum was estimated. It was shown that among them selection material with high resistance to viral infection which is steadily transferred to posterity at a backcrossing of digaploidama of cultural potato can be selected. At the same time the study of initial genotypes of wild-type by DNA markers makes it possible to assume that they, as well the hybrids derived from them, contain new and previously unmapped unmarked factor providing high resistance to the pathogen. Monogenic nature of inheritance of sign extreme resistance to usual and necrotic strains of PVY, transferred to interspecific hybrids from S. stoloniferum is experimentally confirmed. Such nature of sign inheritance will allow using the received split populations of hybrids on the basis of S. stoloniferum for marking of a new factor of extreme resistance to PVY from this type of potato.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus