AGRIS - 

2016

Singina, G.N. | Bagirov, V.A. | Danch, S.S. | Taradajnik, T.E. | Dotsev, A.V. | Zinov'eva, N.A., The L.K. Ehrnst All-Russia Research and Development Inst. of Animal Husbandry, Moscow Region

European bison or wisent (Bison bonasus) is a rare species that is endangered. In this work, we first attempted to obtain the hybrid cow-wisent embryos in vitro using the IVM/IVF/IVC protocol developed for domestic cattle (Bos taurus). Frozen epididymal sperm derived from wisent was thawed and prepared by the swim-up procedure. Matured oocytes were co-incubated during 18 h together with prepared sperm in Fert-Talp medium, which was replaced then by embrional medium where the embryos were cultured until the blastocyst state. Additionally, for positive control, a part of matured bovine oocytes were fertilized with frozen/thawed ejaculated bull sperm. Fertilizing capacity of male cells of both species was assessed according to the nature of spermatozoa-egg interactions, as well as the capacity of fertilized bovine oocytes to subsequent embryonic development. It was found that the rate of oocytes with sing polyspermy was higher for fertilization with wisent sperm comparing to allogenic insemination (21.6 vs. 8.5%). There were no differences between two types of fertilizations nether for the sperm penetration rate (90.0±0.3 vs. 93.3±1.7% for bull and wisent, respectively), nor for the rate of normal fertilization (78.3±1.7% vs. 73.2±2.3%). The similar cleavage and blastocyst formation rates were observed for two fertilization types. Our data indicate the similarity in the mechanisms of oocyte activation and embryonic development in cow and wisent females. In addition, it is obvious that IVM/IVF/IVP protocol, in general, allows in vitro producing cattle-wisent hybrid embryos, however, high levels of polyspermy observed in heterogeneous fertilization, indicates the necessity to adjust the method. | Малочисленный вид европейский бизон (Bison bonasus), или зубр, находится под угрозой исчезновения. Впервые была предпринята попытка оплодотворения яйцеклеток коров спермой зубра и оценка их дальнейшего эмбрионального развития in vitro с использованием протокола IVM (in vitro maturation, созревание in vitro)/IVF (in vitro fertilization, оплодотворение in vitro)/IVC (in vitro culture, культивирование in vitro), применяемого для получения эмбрионов крупного рогатого скота (Bos taurus). Источником половых клеток самок служили яичники коров. Ооцит-кумулюсные комплексы (ОКК) выделяли методом рассечения видимых фолликулов. ОКК культивировали группами по 25-35 ооцитов в 500 мкл модифицированной среды ТС-199 под слоем легкого минерального масла в течение 24 ч. Созревшие яйцеклетки переносили в среду оплодотворения. Замороженную эпидидимальную сперму зубра размораживали и обрабатывали методом "swim-up". Созревшие ооциты коров культивировали совместно cо сперматозоидами в среде Fert-TALP в течение 18 ч, после чего их переносили в эмбриональную среду и культивировали до стадии бластоцисты. Часть яйцеклеток коров культивировали с эякулированным семенем быка. Доля ооцитов с признаками полиспермии была выше после оплодотворения спермой зубра, чем после оплодотворения бычьем семенем: 21,6 и 8,5% соответственно. При этом не выявлено различий между двумя видами спермы в доле яйцеклеток с признаками проникновения сперматозоидов через зону пеллюцида (90,0±0,3 и 93,3±1,7% соответственно для спермы быка и зубра), а также в доле нормально оплодотворенных ооцитов (78,3±1,7 и 73,2±2,3%). В обоих случаях сходными были доля раздробившихся ооцитов и выход бластоцист. Представленные данные свидетельствуют о сходстве механизмов активации ооцитов и их эмбрионального развития у коровы и самок зубра. Также очевидно, что протокол IVM/IVF/IVC для крупного рогатого скота в целом позволяет получать in vitro гибридные эмбрионы коровы и зубра.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2016

Fisinin, V.I., All-Russia Research and Technological Inst. of Poultry Breeding, Sergiev Posad

Microorganisms which inhabit gut play great role in providing with nutrients, antibiotics, hormones and vitamins necessary for poultry health and performance. Using T-RFLP (Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism) analysis to generate a fingerprint of a microbial community we compared gut flora in chick embryos on days 6 and 17 to those in 26-day, 150-day and 300-day old Hisex White layers. Unlike accepted view, a high biodiversity was seen in embryo gut with Enterobacteriaceae (Escherichia coli mainly) predominated. Clostridia, Bacteroides, Negativicutes, Actinomycetales, Bifidocteriales were also found in contrast to earlier reports of their presence only in chicks at hatching and in adult poultry gut. Moreover, in the embryo gut we found the causal agents of dangerous animal disease, Burkholderia sp., Pseudomonas sp., Salmonella sp., Klebsiella sp. and Rickettsiales bacteria. Interestingly, the embryo gut biodiversity on day 6 was higher as compared to day 17 (75±2.75 phylotypes vs 30±1.20 phylotypes). In the layers aged 26, 150 and 300 days the diversity was much higher (over 175±8.12 phylotypes) as compared to embryos due to new members involved into gut bacterial community. Moreover, the poultry aged 300 days was lower both in the total diversity and in the percentage of unidentified microorganisms when compared to 26-day and 150-day old hens. In the adults, the predominating microbial taxa changed, in particular, Clostridia and Negativicutes became more abundant whereas Bacillales and Bifidobacteriales were depressed. Our findings indicate gut colonization by Lactobacilales and pathogenic Listeria sp., Pantoea sp., Enterobacter sp., Mycoplasma sp., Acinetobacter sp., Pasteurellaceae, Campylobacteraceae, Fusobacteria which occurred during ontogenesis. Thus the gut microbiome formation starts in embryo which is important for hatching and growing healthy poultry. | Известно, что микроорганизмы, населяющие желудочно-кишечный тракт (ЖКТ), участвуют в обеспечении сельскохозяйственной птицы питательными веществами, антибиотиками, гормонами, витаминами. С использованием молекулярно-генетического метода T-RFLP мы провели сравнение бактериального сообщества содержимого ЖКТ от 6- и 17-суточных куриных эмбрионов и 26-, 150- и 300-суточных кур-несушек кросса Хайсекс Уайт. Было показано наличие в ЖКТ куриных эмбрионов богатого таксономического разнообразия бактерий, доминирующими среди которых оказались типичные для птиц представители кишечной микрофлоры семейства Enterobacteriaceae. Также были обнаружены представители класса Clostridia, филума Bacteroidetes, порядков Negativicutes, Actinomycetales, Bifidobacteriales. Интересно отметить присутствие возбудителей опасных заболеваний животных - бактерий родов Burkholderia, Pseudomonas, Salmonella, Klebsiella, порядка Rickettsiales. Структура микробиоценоза содержимого ЖКТ эмбрионов кур на 6-е сут инкубации характеризовалась более высоким таксономическим разнообразием, чем на 16-е сут (число филотипов соответственно 75±2,75 и 30±1,20). В ходе онтогенеза в ЖКТ птицы наблюдалось развитие бактериального сообщества, в составе микробиома появлялись новые микроорганизмы. Разнообразие выявляемых у 26-суточных цыплят, а также 150- и 300-суточной птицы бактерий было шире по сравнению с таковым у эмбрионаов - свыше 175±8,12 филотипа. При этом по сравнению с 26- и 150-суточной птицей у 300-суточных кур-несушек общее разнообразие бактерий и содержание неидентифицированных филотипов оказались наименьшими. У взрослой птицы наблюдали изменение доминирующих групп микроорганизмов: большее содержание представителей класса Clostridia, класса Negativicutes и меньшее - классов Bacillales, Bifidobacteriales. Основываясь на полученных результатах, можно говорить о становлении микробиоэкологической системы птиц уже на стадии эмбрионального развития.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2016

Gandzha,A.I. | Kurak,O.P. | Zhurina,N.V. | Koval& | #039 | chuk,M.A. | Letkevich,L.L. | Simonenko,V.P. | Kirillova,I.V.

The article presents results of researches on diagnosis of hereditary mutations in cattle at the stage of early embryos on carrier state of hereditary mutations: immunodeficiency syndrome (BLAD), complex deformation of the spine syndrome (CVM), deficiency of uridinmonophosphatesynthetases (DUMPS). It is established the carrier state of mutations BLAD at 2,5 % and mutation CVM at 5,0 % of the studyed embryos. Mutations DUMPS it is not revealed. The most effective (on the average 89,7%) for allocation of genomic DNA from the early embryos is a method of " | thermal shock» with cyclic heating / cooling in the thermostat. Efficiency PCR at use allocated from embryos DNA as a matrix varied in limits from 42,1 to 92,1 % depending on the method of allocation and the stage of development of the used embryo | В статье представлены результаты исследований проведения диагностики наследственных мутаций крупного рогатого скота на стадии ранних эмбрионов на носительство наследственных мутаций: синдрома иммунодефицита (BLAD), синдрома сложной деформации позвоночника (CVM), дефицита уридинмонофосфатсинтетазы (DUMPS). Установлено носительство мутации BLAD у 2,5 % и мутации CVM у 5,0 % исследованных эмбрионов. Мутации DUMPS не выявлено. Наиболее эффективным (в среднем 89,7 %) для выделения геномной ДНК из ранних эмбрионов является метод «температурного шока» с циклическим нагреванием/охлаждением в термостате. Эффективность ПЦР при использовании в качестве матрицы ДНК, выделенной из эмбрионов, варьировала в пределах от 42,1 до 92,1 % в зависимости от метода выделения и стадии развития используемого эмбриона

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2016

Minina,N.G. | Gorbunov,Yu.A. | Kozel,A.A. | Barieva,Eh.I. | Andalyukevich,V.B.

As a result of the spent complex researches we have improved the cattle embryo transplantation technology by the optimal use of a 2-month regime of an active physical daily exercise for dry cows-donors, that promotes to the additional reception of 39 % of calves after embryos transplantation, by the pretreatment of cows-donors with an aminazin tranquilizer 10-15 minutes before the insemination in a dose of 5 ml of 2,5% solution per 100 kg of animal live weight that allows to raise the viability of embryos on 18% and their acceptability at recipients on 16%, by the postpartal endometritis treatment and prevention with ichthyoglucodicarbonate, which provides recovery after 1 course of treatment from 49 to 60% of animals and their subsequent fertilization for the period till 90 days after calving from 78 to 87% and an additional 25% to obtain viable embryos, increasing their acceptability by 16% and the calves-transplants outputs by 39%. | В результате проведенных комплексных исследований усовершенствована технология трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота, отличающаяся использованием оптимального 2- месячного режима ежедневного активного моциона сухостойных коров-доноров, что способствует дополнительному получению 39% телят после трансплантации эмбрионов, предварительной обработкой коров-доноров транквилизатором аминазином за 10-15 мин до осеменения в дозе 5 мл 2,5%-го раствора на 100 кг живой массы животного, что позволяет повысить жизнеспособность эмбрионов на 18% и их приживляемость у реципиентов на 16%, лечением и профилактикой послеродовых эндометритов препаратом ихтиоглюкобикарбонат, что обеспечивает выздоровление после 1 курса обработки от 49 до 60% животных и их последующую оплодотворяемость за период до 90 дней после отела от 78 до 87%идополнительное получение 25% жизнеспособных эмбрионов, повышение их приживляемости на 16%, увеличение выхода телят-трансплантантов на 39%.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2016

Malenko, G.P. | Kornienko, E.V. | Romanova, A.B. | Kosovskij, G.Yu., Center of Experimental Embriology and Reproductive Biotechnology, Moscow

Use of triacetate cellulose hollow fibers as a vitrification carrier is a perspective cryoconservation method to preserve groups of mammalian oocytes and in vitro produced (IVP) mammal embryos. Hollow fiber vitrification allows significantly simplifying and standardizing the vitrification/warming procedures. The hollow fiber carrier was compared to two open-type vitrificatinion carriers for efficiency in vitrifying IVP-blastocytes (Cryotop and hemi-straw) and seven-day-old bovine expanded blastocysts. After 24 hours warming, the survival level of the embryos vitrified using hollow fibers (84%, P less than0.05) was lower than in other experimental groups (97% using Cryotop and 94.3% using hemi-straw) and in the control group (100%). However, hatching rates in the hollow fiber group were comparable to those from other groups throughout the culture period and the most drastic drop in viability was observed in the hemi-straw group. For the purpose of testing the aptitude of the triacetate cellulosic hollow fibers for vitrification of cloned zona-free embryos, IVP bovine blastocysts and expanded blastocysts without zona pellucida were vitrified in hollow fibers. Viability of vitrified embryos without zona pellucida 24 hours post warming (84.7%) was comparable to those of intact vitrified embryos. However, the average number of cells with damaged membrane was higher in zona-free embryos. | Витрификация с использованием в качестве носителя триацетат-целлюлозных полых волокон является перспективным методом криоконсервации групп ооцитов и полученных in vitro (in vitro production, IVP) эмбрионов млекопитающих, позволяющим существенно упростить и стандартизировать процедуры витрификации/отогревания. Проведено сравнение эффективности данного носителя с носителями открытого типа (Cryotop, полусоломинка) при витрификации IVP-бластоцист и расширенных бластоцист крупного рогатого скота в возрасте 7 сут. Уровень выживаемости эмбрионов, витрифицированных в полых волокнах, через 24 ч после отогревания был ниже (84%, P меньше 0,05), чем на других носителях (97% на Cryotop и 94,3% на полусоломинке) и в контрольной группе (100%). Однако уровень выхода из блестящей оболочки эмбрионов из группы полого волокна в течение всего периода культивирования был сопоставим с аналогичными уровнями в других экспериментальных группах, а наибольшее снижение жизнеспособности наблюдалось у эмбрионов, витрифицированных с использованием полусоломинки. С целью оценки пригодности триацетат-целлюлозных волокон в качестве носителя для витрификации эмбрионов, получаемых при клонировании по методу zona-free, была проведена криоконсервация IVP-бластоцист и расширенных бластоцист крупного рогатого скота без блестящей оболочки. Уровень выживаемости витрифицированных эмбрионов без блестящей оболочки через 24 ч после отогревания (84,7%) был сопоставим с аналогичным показателем у витрифицированных интактных эмбрионов, но при этом наблюдалось увеличение среднего количества клеток с поврежденной мембраной.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2016

Gorbunov,Yu.A. | Minina,N.G. | Kozel,A.A. | Barieva,Eh.I. | Andalyukevich,V.B.

свежеполученные и замороженно-оттаянные эмбрионы | Разработан метод акупунктурно-гормональной индукции полиовуляции фолликулов у коров после нормализации функции яичников, позволяющий увеличить число овуляций в расчёте на одного донора на 2,4, снизить количество ановуляторных фолликулов на 0,5, получить дополнительно 1,6 эмбрионов, пригодных для трансплантации, а также 5 телят-трансплантантов на каждые 100 эмбриопересадок. Объектом исследований были коровы-доноры чёрно-пёстрой породы в возрасте 2-5 лактации, живой массой 580-630 кг, удоем по наивысшей лактации от 10 до 12,5 тыс. кг молока, жирностью 3,8-4,12 % | the freshly prepared and the frozen-thawed embryos | We have worked out the method of acupuncture-hormonal induction of follicle polyovulation among the cows after ovaries function normalization, which leads to the number of per donor ovulations growth by 2,4, to the number of anovulation follicles drop by 0,5, to extra 1,6 embryos suitable for transplantation and extra 5 calves-transplant per 100 embryotransplantation. The object of research were the cows-donors of black-motley breed at the age of 2-5 lactations, body weight 580-630 kg, milk yield at the highest lactation from 10 to 12,5 thousand kg of milk, fat content 3,8-4,12%. | the calves-transplants. The experimental groups of animals were formed taking into account body weight, physiological status, age and breed, which were in the same conditions of feeding and maintenance, according to the technology adopted in the economy. The subject of researches is degree of efficiency of the impact by the laser beam and acupuncture on biologically active points (BAP) of cows-donors organism | телята-трансплантанты. Подопытные группы животных формировали с учётом живой массы, физиологического состояния, возраста и породы, которые находились в одинаковых условиях кормления и содержания, в соответствии с технологиями, принятыми в хозяйстве. Предмет исследований – степень эффективности воздействия лучом лазера и иглоукалыванием на биологически активные точки (БАТ) организма коров-доноров

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

1976 | 2016

Guevara Carrasco, Víctor Rodrigo | Lung Chian, Alberto

Universidad Nacional Agraria La Molina. Facultad de Zootecnia. Departamento Académico de Producción Animal | El presente experimento se realizó en la Unidad Experimental de Avicultura de la Universidad Nacional Agraria, La Molina. Se ilustra las etapas normales en el desarrollo embrionario de los huevos de pata criolla. Se hace una descripción para cada día del período de incubación poniendo énfasis en la primera y última fase. Se encontró semejanza con el desarrollo del pollo y del pavo y se ofrece datos comparativos y una •tabla de etapas correspondientes. A partir del tercer día hasta el octavo se halló que el número promedio de somitos del embrión de pato criollo es 7 - 16 - 25 - 36 - 44 y 47 respectivamente. A los doce días la estructura del pico es típica. A los 21 días se puede considerar que es un patipollo. A los 23 días los ojos están cerrados y a los 30 días el plumaje está completo. El presente trabajo emplea la aparición inicial de las estructuras como indicadores de la edad del embrión. Se incluyen fotografías de vistas generales de embriones de estadios seleccionados para tal fin. | Tesis

Show more [+]

Less [-]

Universidad Nacional Agraria La Molina - Peru

2016

Kirillova,I.V. | Gandzha,A.I. | Letkevich,L.L. | Simonenko,V.P. | Burakova,O.V.

The method for obtaining early embryos of bovine animals outside the body was developed, including the isolation of oocytes from the ovaries of the rejected cows, their maturation to the stage metaphase 2 in the cultural medium on a monolayer of epithelial cells of the oviduct previously obtained for 7 days at an initial concentration of 0,9 × 10,6 cells per milliliter of medium, fertilization by the frozen-thawed sperm of the bull which has undergone capitation procedure, and cultivation of fertilized oocytes on a monolayer of endometrial cells of the uterus, received through 24-30 days after sowing of 2,2-4,0×106 cells per milliliter of medium before reception of preimplantation embryos within 10 days in a nutrient medium under a layer of mineral oil in СО2-incubator at temperature 38,0oC, the maximum humidity of 98 % and the content of 5 % СО2 in air. Use of simulated systems of obtaining preimplantation cattle embryos in vitro allows to increase efficiency of oocytes obtained from culled breeding highly productive cows, and increase the yield of morul-blastocysts by 17,2% compared to the control by using monolayer cultures of somatic cells of reproductive organs (epithelial oviduct and uterus endometria cells), providing saturation of the medium for embryos cultivation by biologically active substances synthesized by somatic cells. | Разработан способ получения ранних эмбрионов крупного рогатого скота вне организма, включающий выделение ооцитов из яичников выбракованных коров, их дозревание до стадии метафаза 2 в культуральной среде на предварительно полученном в течение 7 суток монослое эпителиальных клеток яйцевода при первоначальной концентрации 0,9×106 клеток на миллилитр среды, оплодотворение заморожено-оттаянной спермой быка, прошедшей процедуру капацитации, и культивирование оплодотворенных ооцитов на монослое клеток эндометрия матки, полученном через 24-30 дней после посева 2,2-4,0×106 клеток на миллилитр среды до получения преимплантационных эмбрионов в течение 10 дней в питательной среде под слоем минерального масла в СО2-инкубаторе при температуре 38oС, максимальной влажности 98% и содержании 5% СО2 в воздухе. Использование моделируемых систем получения преимплантационных эмбрионов крупного рогатого скота вне организма позволяет повысить эффективность использования ооцитов, полученных от выбракованных высокопродуктивных племенных коров, и увеличить выход морул-бластоцист на 17,2% по сравнению с контролем за счет использования монослойных культур соматических клеток репродуктивных органов (эпителиальных клеток яйцевода и эндометрия матки), обеспечивающих насыщение питательной среды для культивирования зародышей биологически активными веществами, синтезируемыми соматическими клетками.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus