AGRIS - 

2015

Dilekova, O.V., Stavropol State Agrarian Univ.

При иммуногистохимическом исследовании поджелудочной железы 1-суточных телят было выявлено, что экспрессия трансмембранного рецептора белка тирозинкиназы C-kit/SCF-R в эндокринных островках является маркером коммитированых клеток-предшественников бета-эндокриноцитов. Кроме островков в железе были обнаружены клеточные кластеры, которые имеют инсулин и C-kit позитивное окрашивание. Исходя из этого, экспрессию C-kit можно рассматривать как критерий процессов развития, роста и дифференцировки клеток предшественников в указанный момент времени, так как данный маркер необходим для миграции клеток и формирования островков. При анализе морфометрических показателей было установлено, что площадь C-kit позитивных клеток в кластерах больше островковых на 69% при сохранении ядерно-цитоплазматического отношения (ЯЦО) в обеих структурах 0,3 мкм. При сравнении с инсулин позитивными клетками было выявлено, что в кластерах по сравнению с островковыми клетками увеличение площади происходит на 94,8%, при этом ЯЦО в кластерах составляет 0,4 мкм и 0,2 мкм в островках. Площадь инсулин позитивных клеток в островках по сравнению с площадью с C-kit позитивными клетками увеличена на 55,8%, а в кластерах на 76,8%. Повышенный показатель площади и ЯЦО в клетках кластеров может быть связан с фазой гиперактивности ядер в результате функционального сдвига связанного с процессами активации и синтеза белков. Это приводит к быстрому включению аминокислот, увеличению гидратации цитоплазмы, увеличению цитоплазматических белков. Вместе с этим происходит и увеличение объема ядра, что необходимо клеткам для процессов синтеза, пролиферации, миграции дифференцировки. Таким образом, установлена дифференцировка и функциональное значение C-kit позитивных клеток для поджелудочной железы, что может быть использовано в дальнейшем для изучения региональных стволовых клеток бета-эндокриноцитов, их выделения и культивирования. | Immunohistochemical investigation of the pancreas one day old calves we found that expression of the transmembrane receptor protein tyrosine kinase C-kit / SCF-R in the islets endocrine lineage commitment of the cells is a marker for progenitor beta-endocrine cells. Besides cell clusters were discovered which have insulin and C-kit positive staining. Accordingly, the C-kit expression can be regarded as a criterion for process development, growth and differentiation of progenitor cells to the specified point of time as is needed for this marker cell migration and formation of islands. In the analysis of morphometric parameters we have found that the area of C-kit positive cells in the islet clusters larger by 69% while maintaining in both structures nucleus-cytoplasm ratio (NCR) of 0.3 microns. Comparing the data with insulin positive cells, it has been found that clusters compared with islet cells a 94.8% increase in area occurs while NCR in clusters is 0.4 microns and 0.2 microns in the islets. The area of insulin positive cells in the islets compared with the area with the C-kit positive cells was increased by 55.8% and 76.8% in clusters. The increased area indicator and NCR in cluster cells may be associated with the phase of hyperactivity of nuclei resulting from functional changes associated with the processes of activation and protein synthesis. This leads to rapid incorporation of amino acids, increase the hydration of the cytoplasm, increased cytoplasmic proteins. Along with this, there is an increase in the nucleus volume which is necessary for cell fusion, the proliferation, migration and differentiation. Thus, differentiation and the functional values of C-kit positive cells for pancreas, which can be used further to study regional stem cells of beta-endocrine cells, their separation and cultivation.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2015

Zavodnik,I.B.

The aim of the realized research is to determine the biochemical regularities of the oxidative processes induced by tBHP in mammalian cells. We used tBHP (Sigma-Aldrich GmbH, Germany), fluorescent probe 2 &#039 | Цель настоящей работы – определение биохимических закономерностей окислительных процессов, индуцируемых tBHP, в клетках млекопитающих. В работе использовали tBHP (Sigma-Aldrich GmbH, Германия), флуоресцентный зонд 2′,7′-дихлородигидрофлуоресцеин диацетат (DCFH-DA) (Molecular Probes, Inc., США), а также другие реактивы аналитической степени чистоты (POCH, Польша). Окислительный стресс, индуцируемый в клетках линии В14 органическим терт-бутил гидропероксидом (tBHP), приводит к генерации в клетке свободных радикалов в реакциях гидропероксида с гемсодержащими белками. Рассчитана эффективная полумаксимальная концентрация tBHP в реакции активации окислителя клетками: EC50 = 37 +/- 12 мкМ. Определяемые метаболической активностью клетки окислительные процессы приводят к выраженному нарушению морфологии клеток: потере ими способности сорбироваться на субстрате и формировать ассоциаты, а затем к набуханию клеток и лизису, что отражает некротический механизм гибели клеток при окислительном воздействии. Деполяризация и набухание клеток отражают формирование ион-неселективных пор в мембране и некротический механизм гибели клеток при окислительном воздействии. | , 7&#039 | -dichlorohydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) (Molecular Probes, Inc., USA), as well as other reagents of analytical purity (POCH, Poland). Oxidative stress induced in B14 cells by organic tert-butyl hydroperoxide (tBHP) results in intracellular free radical generation in hydroperoxide reactions with haem–containing proteins. The half maximal effective concentration of tBHP in reaction with cellular components EC50 is equal to 37 +/- 12 mkM. Oxidative processes depends on cell metabolic activity and induces cell morphological impairments: cell detachment from the substrate, cell dissociations and swelling, which reflects necrotic mechanism of oxidative cell death. Depolarization and swelling of cells reflect the formation of ion-nonselective pores in the membrane and the necrotic mechanism of cell death during oxidative exposure.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Maletskij, S.I. | Yudanova, S.S. | Maletskaya, E.I., Russian Academy of Sciences. Siberian Branch, Novosibirsk (Russian Federation). Institute of Cytology and Genetics

Исследование проводилась в 2009-2012 гг. в г. Новосибирске. В качестве материала использовались семена диплоидных мужско-стерильных гибридов сахарной свеклы Роксана, Ленора, Ирис (контроль, поколение А0), а также их дигаплоидные и гаплоидные апозиготические семенные потомства (поколение А1). Дигаплоиды и гаплоиды получали при партеногенетическом воспроизводстве семян (беспыльцевой режим). Корни высаживали на изолированном участке, и в период цветения у каждого растения определяли фенотипы пыльников и пыльцевых зерен. Рассмотрена изменчивость числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц и интегральные показатели ткани, которые сравниваются с гармоническими пропорциями (числа Фибоначчи, золотые пропорции). Оценивали число хлоропластов в замыкающих клетках устьиц и число пластотипов в эпидермальной ткани. Определяли среднее значение числа хлоропластов и пластотипов в замыкающих клетках устьиц у гаплоидных, дигаплоидных и диплоидных (контроль) растений. На основании полученных данных определяли коэффициенты эпигеномной стабильности (показатель D). D представляет собой логарифмическое отношение числа хлоропластов к числу пластотипов и характеризует физиологическую и эпипластомную стабильность клеточных популяций. У дигаплоидов показатель D всегда был выше, чем у гаплоидов (1,24-1,51 против 1,16-1,17). Впервые показано, что интегральные показатели ткани соответствуют т.н. гармоническим пропорциям - числам, известным в математике как числа Фибоначчи. У диплоидов и дигаплоидов этот показатель соответствовал первым членам гармонической последовательности (с 1-го до 5-го), у гаплоидов — членам гармонической последовательности от 8-го и более. | The research was realized in 2009-2012 in Novosibirsk. The diploid (control, generation A0), dihaploid and haploid (generation A1) seed progeny of sugar beet (male sterile hybrids Roksana, Lenora, Iris) were used. Dihaploids and haploids were obtained by the parthenogenetic reproduction mode (pollen less condition). Roots were planted in separated plots; phenotypes of pollen and anthers of each individual plants were estimated during flowering period. A variability of chloroplast number in stomata guard cells and integral tissue characteristic was considered. Data obtained are compared with harmonious proportions (Fibonacci number, golden ratio). It was studied following parameters: a) a chloroplast number in stomata the guard cells; b) a plastotype number in the epidermal tissue. It was determined the average value of chloroplasts and plastotypes number in stomatal guard cells of haploid, diploid and dihaploid plants. On the base of obtained data the ratios of epigenetic stability (D-ratio) in haploid, diploid and dihaploid (control) sugar beet plants were estimated. D is logarithmic ratio of the chloroplast number to plastotypes and indicates the physiological and epiplastome stability of cell populations. D-ratio in dihaploids is always above than one in the haploids (1.24-1.51 versus 1.16-1.17). It was established for the first time that integral tissue characteristic (D-ratio) corresponds to harmonious proportions (bio-logical invariants), i.e. Fibonacci numbers. In diploids and dihaploids this ratio corresponds to the first terms of the harmonious series (from first to fifth), in haploids D-ratio corresponds to eighth and higher terms of the harmonious sequence.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2015

Volkova, N.A. | Fomin, I.K. | Tomgorova, E.K. | Vetokh, A.N. | Mennibaeva, Eh.R., All-Russia Research and Development Inst. of Livestock Husbandry, Moscow Region

Получали лентивирусный вектор (ЛВ) и определяли оптимальные условия использования ЛВдля трансгенеза эмбрионов кур (ЭК). В состав векторной системы входили 3 плазмиды: psPAX2, содержащая гены gag-pol; pLPG, кодирующая поверхностный гликопротеин G вируса везикулярного стоматита (VVS-G), и pWPXL - самоинактивирующийся ЛВ, несущий ген eGFP под контролем промотора гена фактора элонгации 1 РНК-полимеразы II человека (hEF1альфа). Для получения рекомбинантного вируса и определения титров использовали линию клеток человека 293T. Введение вирусного препарата (ВП) в ЭК проводили через 20-24 ч (I гр.) и через 50-55 ч (II гр.) после начала инкубации. Эффективность трансформации и число интегрированных копий трансгена оценивали методом RT-PCR анализа ДНК, выделенной из ЭК на 7-е сут инкубации, на наличие eGFP. Максимальные титры ВП были получены при соотношении плазмид psPAX2, pLPG и pWCAG 1:1:3 и составили 2,4*107 КОЕ/мл до ультрацентрифугирования и 6,2*108 КОЕ/мл - после него. Изменение соотношения между компонентами векторной системы позволяет значительно увеличить титр получаемого ВП. Биологические титры ВП порядка 10E8 КОЕ/мл достаточны для инфицирования до 78% клеток на ранних этапах развития ЭК. Доля трансформированных клеток в I и II гр. составила 78,0 и 31,0% соответственно. Вероятно, на более ранних стадиях клетки ЭК инфицировались большим количеством вирусных частиц, чем объясняется разница в числе копий вектора в составе клеточного генома в I и II гр. Средняя эффективность переноса генов с помощью ЛВ составляла 30,0-34,3% и слабо варьировала при изменении времени введения после начала инкубации ЭК. Значит, только часть клеток ЭК доступна для инфицирования вирусом. Инфицирование ЭК ВП с одинаковыми титрами в разные сроки позволяет получать популяции эмбриональных клеток с разным числом копий вектора в составе генома клетки. Итак, эффективность переноса генов в ЭК с использованием ЛВ не зависит от стадии развития ЭК в течение первых 55 ч инкубации. | Lentiviral vector (LV) was obtained and optimal LV using condition for chicken embryos (CE) transgenesis were determined. Vector system consisted of 3 plasmids: psPAX2, containing gag-pol genes; pLPG, coding surface glycoprotein G of vesicular stomatitis virus (VVC-G) and pWPXL, self-inactivated LV, carrying eGFP gene under control of promoter of human elongation factor 1 RNA-polymerase (hEF1alpha) gene. To produce recombinant virus and to determine virus titers human cell line 293T was used. Virus preparations (VP) injections into CE were performed after 20-24 hours (group 1) and after 50-55 hours (group 2) from starting incubation. Transgenesis efficiency and transgene integrated copies number was estimated by DNA analysis RT-PCR that was isolated from CE on day 7 of incubation for specific eGFP presence. VP maximal titers were produced in psPAX2, pLPG and pWCAG plasmids ratio equal to 1:1:3 and were 2.4*107 CFU/ml before ultracentrifugation and 6.2*108 CFU/ml after it. Changing ratios between vector system components allows significantly increasing produced VP titers. The biological titers of the VP of 108 CFU/ml are sufficient to infect up to 78% of cells at the earlier stages of CE development. Probably, at earlier embryogenesis the CE cells were infected with a more number of viral particles than the differenceof a number of the transgenevector copies integrated into cell genome in groups 1 and 2 is explained. The average efficiency of transgenesis by means of the LV was 30.0-34.3% and varied slightly with changing the introduction time after the CE incubation began. It means that only a part of CE cells is available for viral infection. Injection of CE with VP havinf identical titers at different terms allows producing the populations of embryonic cells with different number of vector copies within the cell genome. So the efficiency of CE thransgenesis using LV does not depend on the stage of its development for first 55 h of incubnation.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation