AGRIS - 

2022

Tarlavin, N.V. | Veretennikov, V.V. | Dzhavadov, Eh.D. | Kraskov, D.A.

The immune response to vaccination is formed through the activation of gene expression processes in cells and tissues of various immunocompetent organs. Morphology of fabricii bursa, thymus and expression of immunity genes IRF7, PTGS2, IL8L2 were studied in commercial laying hens on the background of vaccination with live vaccines against infectious bursal disease and infectious anemia of chickens. In each experiment, an experimental (vaccinated) and a control (intact) group of chickens of 30 individuals each were formed. An immunocomplex vaccine from the strain "VNIVIP" was used against bursal disease, against infectious anemia of chickens - Nobilis CAVP4 vaccine produced by MSDAnimalHealth. In chickens vaccinated against bursal disease, changes were noted on the part of the fabricii bursa: its shape is oval, with folds protruding through the peritoneal cover, the cover itself is flabby, and the mucous membrane is hyperemic, spot hemorrhages are on the surface. The IL8L2 gene increased its expression 21.6 times, the PTGS2 gene by 26.6 times, and the IRF7 gene practically did not increase its expression. The thymus was examined in chickens vaccinated against infectious anemia. Spot hemorrhages were noted on its surface, the structure of the cortical layer was changed (replacement of thymus cells with adipocytes, fibroblasts, and other lymphoid cells). The IL8L2 gene increased expression 8.75 times, the gene PTGS2 - 22.94 times, and the IRF7 gene did not exceed expression compared to the control level. According to the results of the research, it has been concluded that the IL8L2 and PTGS2 genes responsible for the synthesis of inflammatory components are actively expressed when exposed to the cells of viruses of chicken infectious anemia and infectious bursal disease. The level of expression of the IRF7 gene in the immune organs of the experimental groups of chickens practically did not differ from those in the target organs of control birds due to the immunosuppressive effect of viruses. | Иммунный ответ на вакцинацию формируется посредством активации процессов экспрессии генов в клетках и тканях различных иммунокомпетентных органов. Исследовали морфологию фабрициевой сумки, тимуса и экспрессию генов иммунитета IRF7, PTGS2, IL8L2 у промышленных кур-несушек на фоне вакцинации живыми вакцинами против инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии цыплят. В каждом эксперименте формировали опытную (вакцинируемую) и контрольную (интактную) группу цыплят по 30 особей в каждой. Против бурсальной болезни применяли иммунокомплексную вакцину из штамма "ВНИВИП", против инфекционной анемии цыплят - вакцину Нобилис CAVP4 производства MSDAnimalHealth. У цыплят, вакцинированных от бурсальной болезни, отмечены изменения со стороны фабрициевой сумки: её форма овальная, с проступающими через перитонеальный покров складками, сам покров дряблый, слизистая оболочка гиперемирована, на поверхности точечные кровоизлияния. Ген IL8L2 увеличил свою экспрессию в 21,6 раз, ген PTGS2 - в 26,6 раз, ген IRF7 экспрессию практически не увеличил. У цыплят, вакцинированных от инфекционной анемии, исследовали тимус. На его поверхности отмечены точечные кровоизлияния, изменена структура коркового слоя (замена клеток тимуса на адипоциты, фибробласты и др. лимфоидные клетки). Ген IL8L2 увеличил экспрессию в 8,75 раз, ген PTGS2 - в 22,94 раза, а ген IRF7 не превысил экспрессию по сравнению с уровнем контроля. По результатам исследований были сделаны выводы, что гены IL8L2 и PTGS2, отвечающие за синтез воспалительных компонентов, активно экспрессируются при воздействии на клетки вирусов инфекционной анемии цыплят и инфекционной бурсальной болезни. Уровень экспрессии гена IRF7 в иммунных органах опытных групп цыплят практически не отличался от такового в органах-мишенях контрольных птиц по причине иммунодепрессивного действия вирусов.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2022

Afonyushkin, V.N. | Fudi, Ya. | Mironova, T.E. | Nefedova, E.V. | Kil'p, A.S. | Koptev, V.Yu. | Donchenko, N.A.

Из-за прогрессирующего роста бактерий, вызванного широким применением антибиотиков, лечение стрептококкоза становится все более сложной задачей. Необходима надежная вакцинация против Streptococcus suis. Современные возможности молекулярной диагностики и генной инженерии создают перспективы для прямого клонирования протективных эпитопов гена Lmb местного штамма S. suisв предложенную систему доставки антигена иммунной системы свиней. Среди носителей оральных вакцин Bacillus subtilis признана относительно экологически чистым носителем с эффективной системой секреции белка и адаптивным метаболизмом, способная продуцировать споры в относительно жестких условиях. Это свойство спор может использоваться для повышения стабильности и возможности повторного использования вакцин. Изучена возможность использования протективных эпитопов LmbS. suisв составе B. subtilisв качестве носителя оральной рекомбинантной вакцины против Streptococcus suis. Нуклеотидные последовательности S. suisполучены в базе данных GenBank после предварительного анализа литературных данных об известных протективных антигенах S. suis различных серотипов. Анализ нуклеотидных последовательностей проводили с использованием программного обеспечения Unipro UGENE v. 43.0. Для поиска T (CTL и Th) и B зависимых эпитопов гена Lmb использовали The ImmuneEpitope Database (IEDB). Приведено описание сконструированной на основе компьютерного дизайна вакцины, в которой спрогнозирована локализация CTL, B и Th эпитопов. Описаны результаты клонирования последовательности антигенно-активного эпитопа белка S. suisLmb в B. subtilis для последующего перорального введения и изучения изменений иммунологических реакций и побочных реакций у животных. Выявлена возможность клонировать эпитопы рекомбинантного белка LmbS. suisв полилинкер вектора pBE-S. В перспективе представляется возможным создать новую недорогую и удобную в эксплуатации вакцину против S. suis, не требующую инъекционного введения. | Due to the progressive growth of the bacteria caused by the widespread use of antibiotics, treatment of streptococcosis is becoming increasingly difficult. Reliable vaccination against Streptococcus suis is necessary. Modern molecular diagnostic and genetic engineering capabilities create prospects for direct cloning of the protective epitopes of the Lmb gene of the local S. suis strain into the proposed delivery system of the pig immune system antigen. Among oral vaccine carriers, Bacillus subtilis is recognized as a relatively environmentally friendly carrier with an efficient protein secretion system and adaptive metabolism capable of spore production under relatively harsh conditions. This spore property can be used to increase the stability and reusability of vaccines. The possibility of using the protective Lmb epitopes of S. suis in B. subtilis as a carrier of an oral recombinant vaccine against Streptococcus suis was studied. The nucleotide sequences of S. suis were obtained from the GenBank database after a preliminary analysis of literature data on the known protective antigens of S. suis of various serotypes. Nucleotide sequence analysis was performed using Unipro UGENE v. 43.0. The Immune Epitope Database (IEDB) was used to search for T (CTL and Th) and B dependent epitopes of the Lmb gene. A computer-designed vaccine in which localization of CTL, B, and Th epitopes is predicted is described. The results of cloning the sequence of the antigenically active epitope of the S. suis Lmb protein in B. subtilis for subsequent oral administration and study of changes in immunological reactions and adverse reactions in animals are described. The possibility to clone the epitopes of recombinant S. suis Lmb protein into the pBE-S polylinker vector was revealed. In the long term, it seems possible to create a new inexpensive and easy-to-use vaccine against S. suis that does not require injection.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2021

Arakelyan, P.K., Stavropol Regional Station for Combating Animal Diseases

Из 2942 проб сывороток крови мелкого рогатого скота 10 отар с естественным течением бруцеллеза, вызванного Brucella melitensis, в реакции иммунодиффузии (РИД) с обоими антигенами реагировало 322 пробы, из них только с О-цепь полисахаридов (О-ПС) М- антигеном (из B. melitensis) – 90 проб, только с О-ПС А- антигеном (из B. abortus) реагирующих не выявлено. У здоровых овец, иммунизированных против бруцеллеза вакциной из штамма 19 по разным схемам, только с О-ПС М- антигеном реагирующих не выявлено. Реагирование с О-ПС А- и М- антигенами отмечено у животных, двукратно иммунизированных подкожно в дозе 40 млрд. м.к. – через 2 мес. после ревакцинации (60%), а также у реиммунизированных конъюнктивально в дозе 4 млрд. м.к. по фону первичной иммунизации подкожно в дозе 40 млрд м.к. (10%). У животных, однократно и двукратно иммунизированных конъюнктивально, реагирующих в РИД с обоими антигенами не выявлено. Из 2432 проб сывороток крови мелкого рогатого скота 10 неблагополучных по бруцеллезу отар, иммунизированных против бруцеллеза вакциной из штамма B. abortus 19 по разным схемам, в РИД с обоими О-ПС антигенами реагировала положительно 151 проба (6,2%), из них только с О-ПС М- антигеном реагировало 86 проб (56,9%). Превалирование показаний РИД с О-ПС М- антигеном над РИД с О-ПС А-антигеном (О-ПС антигеном, изготовленным из бруцелл вида abortus) у мелкого рогатого скота в той или иной отаре является характерным для инфекции, вызванной бруцеллами вида melitensis, хоть при отсутствии, хоть при наличии факта иммунизации вакциной из штамма B. abortus 19. РИД с О-ПС М- антигеном является объективным индикатором эпизоотической опасности и способна дифференцировать у мелкого рогатого скота бруцеллез (B. melitensis) от реакций, вызванных вакцинацией (B. abortus 19). | Of 2942 blood serum samples from small ruminants of 10 flocks with a natural course of brucellosis caused by Brucella melitensis, 322 samples reacted with both antigens in the immunodiffusion test (IDT), of them 90 samples only with the O-polysaccharide chain (O-PC), M antigen (from B. melitensis), only with O-PC, A-antigen (from B. abortus) reactive samples were not revealed. In healthy sheep immunized against brucellosis with the vaccine from strain 19 according to different schemes, only the O-PC, M antigen was not found to react. Reaction with O-PC A- and M-antigens was observed in animals that were immunized twice subcutaneously at a dose of 40 billion m.c. - after 2 months. After revaccination (60%), as well as in those reimmunized conjunctivally at a dose of 4 billion mc according to the background of primary immunization subcutaneously at a dose of 40 billion mc (10%) In animals immunized once or twice conjunctivally, reacting in IDT with both antigens was not detected. Of 2432 blood serum samples of small ruminants, 10 flocks with a brucellosis problem immunized against brucellosis with a vaccine from B. abortus strain 19 according to different schemes, 151 samples (6.2%) reacted positively with both O-PC antigens in IDT with both O-PC antigens, of which only 86 samples (56.9%) reacted with O-PC M-antigen. The prevalence of indications of IDT with O-PC M-antigen over IDT with O-PC A-antigen (O-PC antigen made from Brucellae abortus) in small ruminants in one or another flock is characteristic of infection caused by brucellae melitensis at least in the absence, at least in the presence of the fact of immunization with a vaccine from the B. abortus 19 strain. IDT with O-PC M-antigen is an objective indicator of epizootic danger and is able to differentiate brucellosis (B. melitensis) in small ruminants from vaccination-induced reactions (B. abortus 19).

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2020

Markova, E.V.

Summarized are the results of a study of the cultural properties of the swine reproductive and respiratory syndrome virus isolate in transferable cultures of MA-104, PK-15, MARC-145 and Vero cells. The purpose of our research is to determine the sensitivity of cell culture lines to the swine reproductive and respiratory syndrome virus isolate, which is necessary for obtaining a highly active antigen as the main component of diagnostic and vaccine biologics. An isolate of the virus was isolated from a piglet in a little private farm situated in the Moscow region. The isolated isolate of an infectious disease of pigs is characterized by the method of molecular biological analysis in the order established for this pathogen. The possibility of virus reproduction in MARC-145 cell culture has been demonstrated. It was shown that during reproduction of the virus isolate in cell culture for 96 ± 6 hours at the infection dose of 0.1 TCD 50/cell, antigen with high biological activity was obtained. Infectious activity of the virus on the MARC-145 culture averaged 5.51 ± 0.45 lg TCD 50/cm3 after the first three passages (after adaptation). Real-time PCR confirmed the presence of the virus genome in the test samples. Detection of the virus antigen in an infected cell culture was determined by the manifestation of a specific glow in the indirect immunofluorescence reaction in the cell culture monolayer fixed with acetone. It was found that FITZ-conjugate of rabbit polyclonal antibodies to pig immunoglobulins detected antigen-containing cells due to intense light-green illumination./Обобщены результаты исследования культуральных свойств изолята вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней в перевиваемых культурах клеток МА-104, РК-15, MARC-145 и Vero. Цель исследований - определение чувствительности к изоляту вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней линий культур клеток, что необходимо для получения высокоактивного антигена как главного компонента диагностических и вакцинных биопрепаратов. Изолят вируса был выделен от поросенка в одном из личных хозяйств Московской области. Выделенный изолят инфекционного заболевания свиней методом молекулярно-биологического анализа охарактеризован в установленном для данного возбудителя порядке. Продемонстрирована возможность репродукции вируса в культуре клеток MARC-145. Показано, что при репродукции изолята вируса в культуре клеток в течение 96 ± 6 ч при дозе заражения 0,1 ТЦД 50/кл получали антиген с высокой биологической активностью. Инфекционная активность вируса на культуре MARC-145 составляла в среднем после трех первых пассажей (после адаптации) 5,51 ± 0,45 lg ТЦД 50/см3. Методом ПЦР в реальном времени подтверждено присутствие генома вируса в исследуемых пробах. Обнаружение антигена в инфицированной вирусом культуре клеток определяли по проявлению специфического свечения в реакции непрямой иммунофлуоресценции в монослое культуры клеток, фиксированной ацетоном. Установлено, что ФИТЦ-конъюгат кроличьих поликлональных антител к иммуноглобулинам свиньи выявлял антигенсодержащие клетки зеленоватым интенсивным свечением.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2020

Pulotov, F.Kh. | Devrishov, D.A., The K.I. Skryabin Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Biotechnology

Polyvalent vaccines are widely used in the fight against clostridiosis, for the manufacture of which a sufficient amount of bacterial mass and toxins of clostridia are necessary. To obtain the latter, it is advisable to use nutrient media adapted for deep cultivation in an industrial environment. The aim of the work was to develop a prescription composition of nutrient media and improve the industrial technology for the production of polyvalent vaccine against animal clostridiosis. The study included the manufacture of an experimental vaccine series, the selection of the optimal ratio of components and the effective dose of the strains. Conducted chain cultivation of vaccine strains of clostridia in flasks, bottles and bioreactors on a newly developed nutrient medium (the formulation (g/l): liver extract – 10; casein peptone – 22.5; K2NРO4 – 2.3; KH2РO4 – 1.7; MgSO4 – 0.6. This allowed achieving a high yield of bacterial mass and toxin formation with a concentration of microbial cultures of an average of 9.8-11.0 x 10000000000 cells/cm3. In experiments on laboratory animals, it was found that the experimental series of a multivalent vaccine against animal clostridiоsis is harmless, areactogenic, provides the production of humoral immunity with a pronounced antitoxic effect against all strains of clostridia that are part of the drug. The proposed improvement is included in the regulation for the production of a multivalent vaccine against animal clostridiosis at Agrovet LLC. | Summaries (En, Ru) | Широкое применение в борьбе с клостридиозами нашли поливалентные вакцины, для изготовления которых необходимы достаточное количество бактериальной массы и токсина клостридий. Для получения последних целесообразно использовать питательные среды, адаптированные для глубинного культивирования в промышленных условиях. Целью работы было разработать рецептурный состав питательных сред и усовершенствовать промышленную технологию производства поливалентной вакцины против клостридиозов животных. Исследование включало в себя изготовление экспериментальной серии вакцины, подбор оптимального соотношения компонентов и эффективной дозы штаммов. Проводили цепочечное культивирование вакцинных штаммов клостридий во флаконах, бутылях и биореакторах на вновь разработанной питательной среде (состав (г/л): ливерный экстракт – 10; казеин-пептон – 22,5; К2НРО4 – 2,3; КН2РО4 – 1,7; MgSO4 – 0,6). Это позволило достичь высокого выхода бактериальной массы и токсинообразования с концентрацией микробных культур в среднем 9,8-11,0x10E9 кл./см3. В опытах на лабораторных животных установлено, что экспериментальная серия поливалентной вакцины против клостридизов животных является безвредной, ареактогенной, обеспечивает выработку гуморального иммунитета с выраженным антитоксическим действием против всех штаммов клостридий, входящих в состав препарата. Предложенное усовершенствование внесено в регламент производства поливалентной вакцины против клостридиозов животных в ООО "Агровет". | 3 tables | 18 ref.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2020

Lajshev, K.A. | Zabrodin, V.A. | Yuzhakov, A.A., North-Western Center for Interdisciplinary Research on Food Problems, Saint Petersburg

По данным ФГБУ "Центр ветеринарии" бруцеллез по прежнему регистрируется в оленеводческих стадах северных оленей Азиатского Севера РФ. В целом по РФ в 2019 г. было зарегистрировано 48 неблагополучных по бруцеллезу северных оленей пунктов, в том числе 35 пунктов в Республике Саха Якутия, 7 - в Ямало-Ненецком автономном округе, по 1 в Таймырском муниципальном районе и 1 Чукотском автономном округе. Без применения средств специфической профилактики противобруцеллезные мероприятия в оленеводческих хозяйствах не эффективны. В настоящее время для иммунизации северных оленей используют вакцину из слабоагглютиногенного штамма B. abortus 82. Цель работы - уточнить оптимальную дозу вакцины из штамма B. abortus 82 на основании полученных экспериментальных данных по приживаемости, реактогенности, агглютиногенности и длительности напряженного иммунитета при введении разных доз иммунопрепарата. На основании проведенных 2 контролируемых экспериментов на 110 северных оленях установлено, что оптимальной дозой вакцины из штамма B. abortus 82 можно считать 10 млрд. м. к. В указанной дозе у оленей отсутствуют поствакцинальные осложнения, вакцинный штамм хорошо расселяется в организме вакцинированного животного и элиминирует через 30-45 дней после введения. Титр агглютининов и комплемент связывающих антител достигает своего максимума к 28 дню после иммунизации и в дальнейшем постепенно снижается; через 180 дней после вакцинации агглютинины регистрируются в минимальных титрах. Напряженность иммунитета у привитых животных проверяли методом прямого заражения вирулентным штаммом, наибольшее число иммунных оленей регистрировали через 3 и 6 месяцев после вакцинации (65,4-86,7 в зависимости от возрастной группы). У инфицированных оленей регистрировали только регионарную форму инфекции, а индекс инфицированности не превышал 12,8-15,4%. | According to the data of the FSBI "The Center of Veterinary Medicine", brucellosis is still registered in reindeer herds of the Asian North of the Russian Federation. As a whole in Russia in 2019 48 sites of brucellosis-affected reindeer herds were registered, including 35 in the Sakha Yakutia Republic, 7 in the Yamalo-Nenets Autonomous Region, one in the Taimyr Municipal District and 1 in the Chukchi Autonomous Region. Without the use of specific preventive interventions anti-brucellisis measures in reindeer farms are not effective. Currently, a vaccine from the low agglutinogenic strain "B. abortus 82 "is used to immunize reindeer. The purpose of еру work is to clarify the optimal dose of the vaccine from the "B. abortus 82"strain based on experimental data on survival, reactogenicity, agglutinogenicity and duration of intense immunity, when administering different doses of immune drug. Based on 2 controlled experiments per 110 reindeer, it has been established that the optimal dose of the vaccine from the strain "B. abortus 82" can be considered 10 billion m. c. In this dose, the deer do not have post-vaccination complications; the vaccine strain is well settled in the body of the vaccinated animal and eliminates 30-45 days after administration. The titer of agglutinins and complement-binding antibodies reaches its maximum by 28 days after immunization and further is gradually reduced; 180 days after vaccination agglutinins are registered in minimum titers. The immunity stress in vaccinated animals was tested by direct infection with virulent strain, the largest number of immune deer were recorded in 3 and 6 months after vaccination (65.4 -86.7% depending on the age group). Only regional infection was reported in infected deer, and the infection index did not exceed 12.8-15.4%.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2019

Gugushvili, N.N. | Koshchaev, A.G. | Serdyuchenko, I.V. | Inyukina, T.A., Kuban State Agrarian Univ., Krasnodar

There has been identified the causative agent of Leptospira interogans leptospirosis, a pathogenic strain of serovar Hardjo. A significant decrease in the number of red blood cells by 28%, hemoglobin level – by 18% and, on the contrary, an increase in the number of white blood cells by 1.7 times was observed in sick animals. There was a decrease in the percentage of active neutrophils by 17%, the digesting ability of neutrophils – by 14% and, conversely, a 2 times increase in the absorption capacity of neutrophils. The number of T-lymphocytes decreased significantly by 12%, B-lymphocytes – by 8% and, on the contrary, NK-lymphocytes (natural killers) increased 2.3 times, a decrease was revealed in carotene, total protein, calcium and phosphorus. The timely use of drugs according to the scheme developed by us had a positive effect on the immunity of leptospirosis animals, contributed 1.6 times increase in segmental neutrophils, the digesting ability of neutrophils by 14%, Tlymphocytes and B-lymphocytes by 15% and 16%, respectively, and, on the contrary, 2.3 times decrease in NK-lymphocytes when introducing a pathogenic agent into the body, which indicates adaptive-compensatory mechanisms in the critical period for the body. The timely implementation of therapeutic and preventive measures contributed to the gradual restoration of the physiological state of the body, especially in the second experimental group, where we have developed a highly effective treatment regimen. The use of complex drugs: complex antibacterial penbex drug caused the death of the pathogen, hepatoprotective hepatojectant contributed to the restoration of liver function, the absorbent of detox toxins – neutralizing toxins, as well as the use of vitamin and amino acid complex gamavit contributed to the restoration of metabolic processes. Subsequent use of polyvalent vaccine against leptospirosis of animals contributed to the development of specific immunity. It is economically feasible to use a comprehensive treatment to prevent the death of animals and the spread of the disease. The payback of the therapeutic and preventive measures in leptospirosis was 11.9 rub per rub of costs. | Выделен возбудитель лептоспироза Leptospira interogans, патогенный штамм серовар Hardjo. У больных животных отмечено достоверное снижение количества эритроцитов на 28%, уровня гемоглобина – на 18% и, напротив, повышение количества лейкоцитов в 1,7 раза. Происходило снижение процента активных нейтрофилов на 17%, переваривающей способности нейтрофильных гранулоцитов – на 14% и, напротив, повышение поглотительной способности нейтрофильных гранулоцитов в 2 раза. Снижалось количество Т-лимфоцитов на 12%, В-лимфоцитов – на 8% и, напротив, повышалось в 2,3 раза NK-лимфоцитов (натуральных киллеров), выявлено снижение каротина, общего белка, кальция и фосфора. Своевременное применение препаратов по разработанной схеме оказало позитивное влияние на иммунитет больных лептоспирозом животных, способствовало повышению сегментоядерных нейтрофилов в 1,6 раза, переваривающей способности нейтрофильных гранулоцитов на 14%, Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов на 15% и на 16% соответственно и, напротив, снижение в 2,3 раза NK-лимфоцитов при внедрении в организм животного патогенного агента, что свидетельствует о приспособительно-компенсаторных механизмах в критический для организма период. Проведение лечебно-профилактических мероприятий способствовало постепенному восстановлению физиологического состояния организма, особенно во второй опытной группе, где применяли разработанную высокоэффективную схему лечения. Применение комплексного антибактериального препарата пенбекса, вызвало гибель возбудителя, гепатопротекторного средства гепатоджекта способствовало восстановлению функции печени, абсорбента токсинов детоксанейтрализации токсинов, а применение витаминно-аминокислотного комплекса гамавита способствовало восстановлению обменных процессов. Последующее применение поливалентной вакцины способствовало выработке специфического иммунитета. Экономическая эффективность применения комплексного лечения при лептоспирозе составила 11,90 руб. на 1 руб. затрат.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2019

Grudinin, M.P. | Komissarov, A.B. | Gusejnova, A.Z. | Shaldzhyan, A.A. | Zabrodskaya, Ya.A., Research and Development Inst. of Influenza, St. Petersburg (Russian Federation) | Zhuk, D.L., Vitebsk State Academy of Veterinary Medicine (Belarus) | Aliev, A.S.

The aim of this study is to obtain a VP1 recombinant protein of the chicken anemia virus (CAV), capable of specifically detecting antibodies in the blood sera of sick chickens. Cloning of a fragment of the VP1 gene of an infectious anemia virus of chickens was performed in the expression plasmids pET15b and pGEX-3T in the context of reading the polyhistidine sequence and glutathione-S-transferase, respectively. The recombinant proteins 6HIS-deltaVP1 and GST-deltaVP1 expressed in E. coli Rosetta (DE3) strains were purified by metal affinity chromatography. Amino acid sequence of recombinant proteins was confirmed by mass spectrometry. The specificity of the interaction of recombinant proteins with polyclonal antibodies was determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The ability of the recombinant 6HIS-deltaVP1 protein to detect antibodies in field and blood sera of SPF chickens was evaluated by indirect ELISA. To control the specificity of the antigen, the immune sera of birds for viruses of infectious bronchitis, Newcastle disease, infectious laryngotracheitis, adenoviral infection, Mycoplasma gallisepticum, and negative serum of chickens were used. The recombinant VP1 protein of chicken anemia virus containing a polyhistidine tag (6HIS-deltaVP1) was obtained. It was shown that this recombinant protein is able to specifically detect antibodies in the blood sera of sick chickens. It can be used to detect antibodies to the chicken anemia virus in the serum of sick chickens, and can also be considered as a potential component of vaccines against this virus. | Цель исследования: получить рекомбинантный белок VP1 вируса инфекционной анемии цыплят (ИАЦ), способный специфически выявлять антитела к вирусу ИАЦ в сыворотках крови больных кур. Клонирование фрагмента гена VP1 вируса инфекционной анемии цыплят проводили в экспрессионные плазмиды pET15b и pGEX-3T в рамках считывания полигистидиновой последовательности и глутатион-S-трансферазы, соответственно. Экспрессированные в штаммах E. coli Rosetta (DE3) рекомбинантные белки 6HIS-дельтаVP1 и GST-дельтаVP1 были очищены методом металл-аффинной хроматографии. Аминокислотную последовательность рекомбинантных белков подтверждали методом масс-спектрометрии. Специфичность взаимодействия рекомбинантных белков с поликлональными антителами определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА). Способность рекомбинантного белка 6HIS-дельтаVP1 к выявлению антител в полевых и сыворотках крови SPF-цыплят оценивали методом непрямого ИФА. Для контроля специфичности антигена использовали иммунные сыворотки птиц к вирусам инфекционного бронхита, ньюкаслской болезни, инфекционного ларинготрахеита, аденовирусной инфекции, Mycoplasma gallisepticum, а также отрицательную сыворотку крови кур. Был получен рекомбинантный белок VP1 вируса ИАЦ, содержащий полигистииновый тэг (6HIS-дельтаVP1). Было показано, что данный рекомбинантный белок способен специфически выявлять антитела к вирусу ИАЦ в сыворотках крови кур. Он может быть использован для выявления антител к вирусу ИАЦ в сыворотке крови больных кур, а также может быть рассмотрен как потенциальный компонент вакцин против данного вируса.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2018

Laishevtsev, A.I. | Yakimova, Eh.A. | Kapustin, A.V., The Ya.R. Kovalenko All-Russia Research and Development Inst. of Experimental Veterinary, Moscow

There are given the results of Riemerella anatipestifer production strains' selection for the development of the first Russian riemerellosis vaccine in agricultural poultry. The properties of 3 Riemerella anatipestifer strains were studied – "Ufa", "Kazan" and "Rostov" – they were isolated in the territory of the Russian Federation during 2016 – 2017. It is found that the LD50 values for the strains "Ufa", "Kazan" and "Rostov" are 5.31*10E7, 1.74*10E8 and 8.25*10E7 accordingly. Through serological reactions it was proved that the strains "Ufa" and "Rostov" refer to the same serotype, and the strain "Kazan" to another. These data are confirmed by the results of determining the immunogenic activity of mono-vaccines. Mono-vaccine of "Ufa" strain after double vaccination of ducklings provides protection against infection of 5LD50 homologous strain and "Rostov" strain, but not against "Kazan" strain. Determination of the antigenic activity showed that the average antibody titres after a double vaccination of ducklings (n=10) in the agglutination reaction averaged as 1:133 for the "Ufa" strain, 1:93 for "Kazan" strain, and 1:20 for "Rostov" strain. The findings confirm the need for further study of the prevalence of riemerellosis in Russia, as well as the identification of infection's serotypes diversity. The development and production of a single serotype vaccine is not appropriate, so the antigenic composition of the drug should be expanded to several serotypes that are most widely circulating in the country. | Приведены результаты селекционирования производственных штаммов Riemerella anatipestifer для разработки первой отечественной вакцины против риемереллёза сельскохозяйственной птицы. Изучены свойства 3 культур Riemerella anatipestifer "Уфа", "Казань" и "Ростов", выделенных на территории Российской Федерации в 2016–2017 гг. LD50 для штаммов "Уфа", "Казань" и "Ростов" соответственно составляют 5,31*10E7 мкр. кл., 1,74*10E8 и 8,25*10E7 мкр. кл. В серологических реакциях установлено, что штаммы "Уфа" и "Ростов" относятся к одному серотипу, а штамм "Казань" - к другому. Эти данные подтверждены результатами определения иммуногенной активности моновакцин из них. Так, моновакцина из штамма "Уфа" после двукратной вакцинации утят обеспечивает их защиту от заражения 5LD50 гомологичного штамма и штамма "Ростов", но не "Казань". Определение антигенной активности штаммов риемерелл "Уфа", "Казань" и "Ростов" показало, что средние титры антител после двукратной вакцинации утят (n=10) в реакции агглютинации составляют в среднем 1:133; 1:93 и 1:120 соответственно. В связи с этим необходимо дальнейшее изучение распространенности риемереллёза в России, а также определение серотипового разнообразия возбудителя инфекции. Разработка и изготовление вакцины против данной инфекции из одного серотипа не целесообразна, поэтому антигенный состав этого препарата должен быть расширен до нескольких наиболее широко циркулирующих в стране серотипов.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2017

Kondakova, O.A. | Trifonova, E.A. | Arkhipenko, M.V. | Nikitin, N.A. | Karpova, O.V. | Atabekov, I.G., Lomonosov Moscow State Univ.

Vaccination is a key strategy in the prevention of epizootics and epidemics of influenza. To increase of low immunogenicity of recombinant antigens plant viruses and virus-like particles can be applied. The candidate vaccine against the influenza was designed by means of assembling of in vitro complexes including immunogene epitopes of proteins HA and M2 of influenza A virus on a surface of the spherical particles (SP) on the basis of a virion of a tobacco mosaic virus. The complexes containing the antigenic determinants of the influenza - hemagglutinin (HA) and the extracellular domain of the M2 matrix protein (M2e) presented on the surface of SP, were developed. The SP-HA-M2e (SP-HA62/284-М2е) complexes were highly immunogenic. The candidate vaccine induced a strong humoral immune response to both antigenic determinants of influenza A virus. HA and M2e adsorption on the SP allowed a 10-fold increase in the production of blood antibodies to antigens in immunized animals. The advantage of this approach for the vaccine development is high efficiency based on the stability and adjuvant activity of SP, safety and low cost of using plant viruses. The proposed vaccine can be considered as a candidate recombinant vaccine against influenza virus. | Вакцинация остается ключевой стратегией в предотвращении эпизоотий и эпидемий птичьего гриппа. Одно из решений проблемы низкой иммуногенности вакцинных белков - использование вирусов растений и вирусоподобных частиц в качестве платформы для презентации антигенов и усиления иммунного ответа. Цель представляемой работы заключалась в разработке рекомбинантной кандидатной вакцины нового поколения против вируса птичьего гриппа, полученной посредством сборки in vitro комплексов, включающих иммуногенные эпитопы белков НА и М2 вируса гриппа А на поверхности сферических частиц (СЧ) на основе вириона вируса табачной мозаики. Методом непрямой иммуннофлуоресцентной микроскопии показана антигенная активность рекомбинантных вирусных белков - гемагглютинина НА и внеклеточного домена матриксного белка М2 (М2е), адсорбированных СЧ. Полученные комплексы СЧ-HA-М2е (СЧ-HA62/284-М2е) оказались высокоиммуногенными. При иммунизации лабораторных животных подтверждено образование специфических антител к обеим антигенным детерминантам вируса гриппа А птиц. Адсорбция НА и М2е на СЧ позволила в 10 раз увеличить выработку антител к антигенам в крови иммунизированных животных. Преимущество использованного подхода при создании вакцинных препаратов - высокая эффективность, основанная на стабильности и адъювантной активности сферических частиц, безопасность и низкая себестоимость использования вирусов растений. Полученная вакцина может рассматриваться в качестве кандидатной рекомбинантной вакцины против вируса гриппа птиц.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation