AGRIS - 

2023

Юлия Николаевна Козлова | Виктория Сергеевна Черепушкина | Анна Сергеевна Кильп | Василий Николаевич Афонюшкин | Ксения Владимировна Ан | Николай Александрович Донченко

Ньюкаслская болезнь птиц остается большой проблемой ветеринарной медицины и птицеводства в целом. Появление новых штаммов вируса болезни Ньюкасла (NDV) создает новые потребности в разработке вакцин, содержащих антигены более гомологичные новым штаммам. Так как вакцинация методом выпаивания или спрей-вакцинация более технологичны, в сравнении с инъекционными методами доставки антигена, мы предложили использовать в качестве средства доставки антигена бактериофаги. Для этого осуществили поиск бактериофагов пригодных для доставки рекомбинантного антигена (в составе белка слияния с капсидным белком бактериофага), через слизистые барьеры. Проведенные эксперименты на лабораторных животных позволили установить наиболее длительную циркуляцию в кровеносной системе бактериофагов М13 и PA136. Для разработки технологии создания рекомбинантных вакцин против болезни Ньюкасла на основе бактериофага М13 мы изучили доменную структуру белка F NDV, провели поиск B зависимых эпитопов и разработали системы праймеров для клонирования фрагмента белка F NDV в составе доменов Н1-1а белка F (33-55 аа) в позиции 4649 по 4715 п.н. и гена VIII бактериофага М13. Клонирование данной конструкции осуществлялось в экспрессирующий вектор pET32b. Наработка рекомбинантного белка одновременно с репликацией бактериофага М13 и упаковкой данного белка в капсид бактериофага возможна в системе кишечной палочки F+, что потенциально позволяет клонировать вариабельные, штаммоспецифичные участки белка F NDV напрямую из патологического материала и использовать такую рекомбинантную вакцину с целью праймирования классических, высокоиммуногенных вакцин. | Newcastle disease of birds remains a major problem in veterinary medicine and the poultry industry in general. The emergence of new strains of Newcastle disease virus (NDV) also creates new needs for the development of vaccines containing more homologous antigens to new strains. Since vaccination through a watering system or by spray vaccination is more technologically advanced than injection vaccination, we proposed to use bacteriophages as a means of antigen delivery. To do this, we have carried out search for bacteriophages suitable for delivering a recombinant antigen (as part of a fusion protein with a bacteriophage capsid protein) through mucous barriers. Experiments on laboratory animals made it possible to determine the longest circulation in the circulatory system of bacteriophages M13 and PA136. To develop a technology for creating recombinant vaccines against Newcastle disease based on bacteriophage M13, we were studied the domain structure of the NDV F protein, searched for B dependent epitopes, and developed primer systems for cloning a fragment of the NDV F protein in the H1 domains - 1a of the F protein (33-55 aa) in position 4649 to 4715 b.p. and gene VIII of bacteriophage M13. This construct was cloned into the pET32b expression vector. The production of recombinant protein simultaneously with the replication of bacteriophage M13 and the packaging of this protein into the bacteriophage capsid is possible in the E. coli F+ system which potentially allows cloning variable, strain-specific regions of the NDV F protein directly from pathological material and using such a recombinant vaccine to priming of classical, highly immunogenic vaccines.

Show more [+]

Less [-]

Altai State Agricultural University - Russian Federation