AGRIS - 

Data provenance by Country

2023

Elizaveta Anisimova | Ekaterina Dodonova | Dinis Mirgazov | Nail Fakhrutdinov | Inna Elizarova | Ekaterina Pankova | Konstantin Osyanin

Бруцеллез собак – зоонозное заболевание, оказывающее негативное влияние на репродуктивную систему данных животных и, как следствие, приводящее к значительным экономическим потерям питомников. Заболевание представляет опасность и для здоровья человека, особенно для ветеринарных работников и заводчиков. Диагностические исследования при бруцеллезе в большинстве своем основаны на серологических и фенотипических методах, являющихся достаточно трудоемкими и обладающих низкой специфичностью. Наиболее совершенными являются молекулярно-генетические подходы, в частности, разновидности метода ПЦР, основу которого составляет биоинформационный анализ. В рамках данной работы проанализированы полногеномные последовательности геномов бруцелл, представленных в базе данных GenBank. По результатам проведенного анализа подобраны локусы, одни из которых имеются лишь у представителей видов B. canis, другие – у В. abortus, третьи – у B. melitensis. На основе выбранных ДНК-маркеров сконструированы праймеры и TagMan-зонды, позволяющие выявлять и проводить дифференциацию видов возбудителя бруцеллеза. Также подобран оптимальный состав реакционной смеси и определены единые условия амплификации, позволяющие проводить ПЦР в условиях одной реакции. При постановке мультиплексной ПЦР c ДНК штаммов различных видов установлено, что олигонуклеотидные затравки, разработанные для амплификации представителей видов B. abortus и B. Melitensis, обладают 100%-ной специфичностью. В свою очередь, сконструированные для детекции основного возбудителя бруцеллеза собак (B. canis) праймеры также пригодны для выявления бактерий B. suis. Таким образом, разработанные праймеры и TagMan-зонды могут быть включены в состав ПЦР-РВ диагностикума, пригодного не только для индикации основного вида возбудителя бруцеллеза собак – B. canis, но и «нетипичных» для данных животных видов B. suis, B. abortus и B. melitensis. | Canine brucellosis is a zoonotic disease that has a negative impact on the reproductive system of dogs and leads to significant economic losses of breeding kennels. The disease also poses a threat to human health, especially for veterinarians and breeders. Diagnostic tests for brucellosis are mostly based on serological and phenotypic methods which are quite laborious and have low specificity. The most advanced methods include molecular genetic approaches, in particular, PCR varieties based on bioinformatics assay. In this study, we have carried out assay of whole genome sequences of Brucella genomes presented in the GenBank database. Based on the results of the assay, loci were selected, some of which were present only in representatives of the species B. canis, others in B. abortus, and others in B. melitensis. Based on the selected DNA markers, primers and TagMan probes to allow detection and differentiation of brucellosis pathogen species were designed. Also, the optimal composition of the reaction mixture was selected and uniform amplification conditions were determined allowing PCR to be carried out under the conditions of one reaction. When performing multiplex PCR with DNA of strains of various species, it was found that oligonucleotide primers designed for amplification of representatives of the species B. abortus and B. melitensis had 100% specificity. In turn, primers designed to detect the main causative agent of canine brucellosis (B. canis) are also successful for amplification of B. suis bacteria. Thus, the developed primers and TagMan probes may be included in the real-time PCR diagnostic kit, suitable not only for indicating the main type of the causative agent of canine brucellosis - B. canis, but also “atypical” for these animals species B. suis, B. abortus and B. melitensis.

Show more [+]

Less [-]

Altai State Agricultural University - Russian Federation