AGRIS - 

Data provenance by Country

2013

Vasil'eva, Yu.B., Ulyanovsk State Agricultural Academy

Developed were bio-preparations for improvement of laboratory methods for the identification of Bordetella bronchiseptica. Selectively diagnostic medium containing peptone enzyme in the amount of 20.0 g/dm3; methionine - 0.3 g/dm3; cysteine - 0.3 g/dm3; nicotinic acid - 0.1 g/dm3; cefazolin sodium salt - 0,004 g/dm3; barium chloride - 0.4 g/dm3; glucose - 0.7 g/dm3; lactose - 0.7 g/dm3; sucrose - 0.7 g/dm3; maltose - 0.7 g/dm3; mannitol - 0.7 g/dm3; bromthymol blue - 0.2 g/dm3. On the medium in 48 hours only strains B. bronchiseptica grow characterized with typecal appearance of colonies: blue, the color of a changed milieu, with long-cultivation with dark center. Antigenic preparation and hyperimmune serum for immunological diagnosis of bordetelesis have been developped. An antigen is produced by effecting ultrasound: 5 micron – for 1 min - 1 ml of bacterial suspension. Hyperimmune serum is got by immunizing rabbits according to the schedule: in the thigh intramuscularly is administered 0.5 cm3 of antigenic preparation of different titres of antigens with the addition of 0.5 cm3 of complete adjuvant Freud. Then go intramuscular injections every 3 days by 0,25; 0,5; 0,75; 1,0; 1.25 and 1.5 ml of antigenic preparation. After 10, 15, 20 days after the start of injection, blood is taken on 5 ml and the serum is prepared. A versatile program for PCR amplification surveys with electrophoretic detection of amplification of products and registration in the real-time mode. The proposed method of PCR in the multiplexable format identifies 3 specific DNA fragment of B. bronchiseptica. A biological preparation is developed on the basis of bacteriophages with high catalytic activity: the ratio of the number of phage particles and bacterial cells - 1:2, the time of incubation at 37 degrees С - 7 h, processing by chloroform in the ratio of 1:10 for 15 minutes. A developed are recommended for indication and identification of В. bronchiseptica in biological material and external environment. | Разрабатывали биопрепараты для усовершенствования лабораторных методов идентификации Bordetella bronchiseptica. Разработана селективно-диагностическая среда, включающая пептон ферментативный в количестве 20,0 г/л; метионин - 0,3 г/л; цистеин - 0,3 г/л; никотиновую кислоту - 0,1 г/л; цефазолина натриевую соль - 0,004 г/л; хлорид бария - 0,4 г/л; глюкозу, лактозу, сахарозу мальтозу и маннит – по 0,7 г/л; бромтимоловый синий - 0,2 г/л. На среде через 48 ч вырастают только штаммы B. Bronchiseptica, отличающиеся характерным внешним видом колоний: синие, цвета измененной среды, при длительным культивировании - с темным центром. Разработаны антигенный препарат и гипериммунная сыворотка для иммунологической диагностики бордетеллёза. Антиген получают воздействуя ультразвуком в режиме: 5 микрон в течение 1 мин. на 1 мл бактериальной взвеси. Гипериммунную сыворотку получают, иммунизируя кроликов по схеме: в область бедра вводят внутримышечно 0,5 мл антигенного препарата с разными титрами антигенов с добавлением 0,5 мл полного адъюванта Фрейда. Затем проводят внутримышечные инъекции через каждые 3 дн. по 0,25; 0,5; 0,75; 1,0; 1,25 и 1,5 мл антигенного препарата. Спустя 10, 15, 20 дн. после начала инъекций берут кровь по 5 мл и готовят сыворотку. Создана универсальная программа амплификации для проведения ПЦР-исследования с электрофоретической детекцией продуктов амплификации и регистрацией в режиме реального времени. Предложенная методика проведения ПЦР в мультиплексном формате, выявляет 3 специфических фрагмента ДНК B. bronchiseptica. Разработан биопрепарат на основе бактериофагов с высокой литической активностью: соотношение количества фаговых корпускул и бактериальных клеток - 1:2, время инкубации при температуре 37 град. С - 7 ч, обработка хлороформом в соотношении 1:10 в течение 15 мин. Разработанные биопрепараты рекомендуются для индикации и идентификации В. bronchiseptica в биологическом материале и во внешней среде.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation

2013

Vasil'eva, Yu.B., Ulyanovsk State Agricultural Academy

There were developed test systems of indication and identification of Bordetella bronchiseptica. Bacteriological examination includes taking deep smear from throat of animals for a selective diagnostic milieu BBR-7 USSA with the cultivation of 24-48 hours, the selection of 3 characteristic colonies of turquoise color, perhaps with a dark center in meat-and-peptone broth and cultivation within 24 hours under 37 degrees С, microscopy of smears, stained according to Gram, planting on milieu Simmons, tests on oxidase and catalase, express method of hemolytic activity. Immunological indication and identification B. bronchiseptica includes obtaining antigens by ultrasonic disintegration; immune serum by hyperimmunization of laboratory animals and carrying out immunological reactions (AR, RID, RDP). Molecular genetic indication and identification B. bronchiseptica includes the use of prime systems; sorbent method of extraction of DNA; holding PCR in mono - and multiplex format. Indication and identification of B. bronchiseptica using specific bacteriophages includes isolation of bacteriophages B. bronchiseptica by three-day ultraviolet rays; phage-indication by SPOT test or reaction of growth of phage titer.For effective indication and identification of bacteria B. bronchiseptica it is possible to use both individual components of the test-systems, and their combined usage. The system may be used to confirm a clinical diagnosis, to reveal atypical forms of disease, to detect bacilli carriers, to identify a post evaluation. | Разрабатывали тест-системы индикации и идентификации Bordetella bronchiseptica. Бактериологическое исследование включало взятие глубоких мазков из глотки животных на селективно-диагностическую среду ББР-7 УГСХА с культивированием 24-48 ч, отбор не менее 3-х характерных колоний бирюзового цвета, возможно с темным центром в мясопептонный бульон и культивирование в течение 24 ч при 37 град. С, микроскопию мазков, окрашенных по Граму, посев на среду Симмонса, тесты на оксидазу и каталазу, экспресс-метод оценки гемолитической активности. Иммунологическая индикация и идентификация B. bronchiseptica включает получение антигенов ультразвуковой дезинтеграцией; иммунной сыворотки гипериммунизацией лабораторных животных и проведение иммунологических реакций (РА, РИД, РДП). Молекулярно-генетическая индикация и идентификация B. bronchiseptica включает использование праймерных систем; сорбентный способ экстракции ДНК; проведение ПЦР в моно- и мультиплексном формате. Индикация и идентификация B. bronchiseptica с использованием специфичных бактериофагов включает выделение бактериофагов B. bronchiseptica трехдневным воздействием ультрафиолетовых лучей; фагоиндикацию СПОТ-тестом или реакцией нарастания титра фага. Для эффективной индикации и идентификации бактерий B. bronchiseptica возможно использование как отдельных компонентов тест-системы, так и их сочетанное применение. Система может применяться для подтверждения клинического диагноза, выявления атипичных форм заболевания, обнаружения бактерионосителей, установления ретроспективного анализа.

Show more [+]

Less [-]

Central Scientific Agricultural Library - Russian Federation