Designing of biological preparations for the laboratory diagnosis of Bordetella infection | Конструирование биопрепаратов для лабораторной диагностики бордетелёзной инфекции

Designing of biological preparations for the laboratory diagnosis of Bordetella infection | Конструирование биопрепаратов для лабораторной диагностики бордетелёзной инфекции

2013

Vasil'eva, Yu.B., Ulyanovsk State Agricultural Academy

English. Developed were bio-preparations for improvement of laboratory methods for the identification of Bordetella bronchiseptica. Selectively diagnostic medium containing peptone enzyme in the amount of 20.0 g/dm3; methionine - 0.3 g/dm3; cysteine - 0.3 g/dm3; nicotinic acid - 0.1 g/dm3; cefazolin sodium salt - 0,004 g/dm3; barium chloride - 0.4 g/dm3; glucose - 0.7 g/dm3; lactose - 0.7 g/dm3; sucrose - 0.7 g/dm3; maltose - 0.7 g/dm3; mannitol - 0.7 g/dm3; bromthymol blue - 0.2 g/dm3. On the medium in 48 hours only strains B. bronchiseptica grow characterized with typecal appearance of colonies: blue, the color of a changed milieu, with long-cultivation with dark center. Antigenic preparation and hyperimmune serum for immunological diagnosis of bordetelesis have been developped. An antigen is produced by effecting ultrasound: 5 micron – for 1 min - 1 ml of bacterial suspension. Hyperimmune serum is got by immunizing rabbits according to the schedule: in the thigh intramuscularly is administered 0.5 cm3 of antigenic preparation of different titres of antigens with the addition of 0.5 cm3 of complete adjuvant Freud. Then go intramuscular injections every 3 days by 0,25; 0,5; 0,75; 1,0; 1.25 and 1.5 ml of antigenic preparation. After 10, 15, 20 days after the start of injection, blood is taken on 5 ml and the serum is prepared. A versatile program for PCR amplification surveys with electrophoretic detection of amplification of products and registration in the real-time mode. The proposed method of PCR in the multiplexable format identifies 3 specific DNA fragment of B. bronchiseptica. A biological preparation is developed on the basis of bacteriophages with high catalytic activity: the ratio of the number of phage particles and bacterial cells - 1:2, the time of incubation at 37 degrees С - 7 h, processing by chloroform in the ratio of 1:10 for 15 minutes. A developed are recommended for indication and identification of В. bronchiseptica in biological material and external environment.

Show more [+]

Less [-]

Russian. Разрабатывали биопрепараты для усовершенствования лабораторных методов идентификации Bordetella bronchiseptica. Разработана селективно-диагностическая среда, включающая пептон ферментативный в количестве 20,0 г/л; метионин - 0,3 г/л; цистеин - 0,3 г/л; никотиновую кислоту - 0,1 г/л; цефазолина натриевую соль - 0,004 г/л; хлорид бария - 0,4 г/л; глюкозу, лактозу, сахарозу мальтозу и маннит – по 0,7 г/л; бромтимоловый синий - 0,2 г/л. На среде через 48 ч вырастают только штаммы B. Bronchiseptica, отличающиеся характерным внешним видом колоний: синие, цвета измененной среды, при длительным культивировании - с темным центром. Разработаны антигенный препарат и гипериммунная сыворотка для иммунологической диагностики бордетеллёза. Антиген получают воздействуя ультразвуком в режиме: 5 микрон в течение 1 мин. на 1 мл бактериальной взвеси. Гипериммунную сыворотку получают, иммунизируя кроликов по схеме: в область бедра вводят внутримышечно 0,5 мл антигенного препарата с разными титрами антигенов с добавлением 0,5 мл полного адъюванта Фрейда. Затем проводят внутримышечные инъекции через каждые 3 дн. по 0,25; 0,5; 0,75; 1,0; 1,25 и 1,5 мл антигенного препарата. Спустя 10, 15, 20 дн. после начала инъекций берут кровь по 5 мл и готовят сыворотку. Создана универсальная программа амплификации для проведения ПЦР-исследования с электрофоретической детекцией продуктов амплификации и регистрацией в режиме реального времени. Предложенная методика проведения ПЦР в мультиплексном формате, выявляет 3 специфических фрагмента ДНК B. bronchiseptica. Разработан биопрепарат на основе бактериофагов с высокой литической активностью: соотношение количества фаговых корпускул и бактериальных клеток - 1:2, время инкубации при температуре 37 град. С - 7 ч, обработка хлороформом в соотношении 1:10 в течение 15 мин. Разработанные биопрепараты рекомендуются для индикации и идентификации В. bronchiseptica в биологическом материале и во внешней среде.

Show more [+]

Less [-]

Bibliographic information

Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии | Bulletin of Ulyanovsk State Agrarian Academy

Issue

222

ISSN

1816-4501

Other Subjects

Tecnicas de laboratorio; Tecnicas de diagnosis; Federacion de rusia; Federation de russie; Tecnicas inmunologicas