AGRIS - 

Data provenance by Country

2015

Radkovich,E.V. | Guscha,G.N.

isolate- accumulator’ made it possible to produce the virus in high concentrations for further immunization of animals in the production of kits for IFA. Due to the higher accumulation ability of plants it will be possible to reduce the cost of growing plant-accumulators, isolation and purification of the virus preparation. | В статье приведены результаты исследований по отбору белорусских изолятов ХВК и YBK, предназначенных для проведения искусственного заражения растений-накопителей при получении препаративного количества вирусов картофеля (Solanum tuberosum). Показано, что для получения максимального количества вирусного препарата важно подобрать такой изолят, при заражении которым растение-накопитель будет эффективно накапливать вирус. Для отбора белорусских изолятов Х- и Y-вируса картофеля нами были проведены комплексные исследования клубневого материала картофеля. По результатам проведенных анализов на этапе иммуноферментного анализа было отобрано 7 образцов, несущих моноинфекцию Х- и Y-вируса картофеля. Исследования по отбору белорусских изолятов Х- и Y-вируса картофеля и поиск эффективных сочетаний ‘изолят-накопитель’, позволяют получать вирус в высоких концентрациях для дальнейшей иммунизации животных при производстве наборов реагентов для проведения ИФА. За счет более высокой накопительной способности растений снизятся затраты на выращивание растений-накопителей, выделение и очистку вирусного препарата. | The research results on the selection of the Belarusian isolates PVX and PVY viruses of potato (Solanum tuberosum) are intended for the artificial infection of plants drives to obtain preparative amounts of potato viruses. It is shown that it is important to maximize the number of viral preparation and to pick the isolates during infection in course of which the plant will effectively accumulate the virus. For the selection of the Belarusian isolates of potato X- and Y-virus there were carried out complex studies of potato tuber material. According to the results of the realized analysis at the stage of immunoenzymatic assay there were selected 7 samples monoinfected with X- and Y- potato virus. Research on the selection of Belarusian isolates of X- and Y-potato virus and the search for effective combinations of &#039

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Bazhydai,T.N. | Volosevich,N.N. | Kukharchik,N.V.

Monitoring of the genetic stability among in vitro-propagated plants is of outmost importance using tissue culture as continuous source of planting material for industrial utilization. The aim of the research was to assess the genetic stability of in vitro-propagated blueberry plants (cv. Northblue). As a result of the research there was evaluated the possibility of using 54 oligonucleotide primers for analysis of the genetic stability of blueberry plants (cv. Northblue) using RAPD-PCR. 6 primers (OPA01, OPA 10, OPE 3, OPN 14, OL 1, OL 8) which produced the maximum number of distinct stripes were selected. It was found that all RAPD profiles of micropropagated blueberry plants generated with those 6 primers were monomorphic and identical to those of the mother plant. | При использовании культуры тканей, как непрерывного источника посадочного материала для промышленного возделывания, особую важность имеет анализ генетической стабильности полученных растений. Целью исследования было оценить генетическую стабильность растений голубики сорта Northblue, полученных в культуре in vitro. В результате проведенных исследований оценена возможность использования 54 олигонуклеотидных праймеров для анализа генетической стабильности растений голубики сорта Northblue с помощью RAPD-PCR и отобраны 6 праймеров (ОРА01, ОРА 10, ОРЕ 3, OPN 14, OL 1, OL 8), дающие максимальное количество хорошо различимых полос. Установлено, что отобранные праймеры при амплификации с анализируемыми ДНК-матрицами генерировали идентичные RAPD-профили, что указывает на отсутствие вариабельности между маточным растением и клонами голубики сорта Northblue.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Bozhiday,T.N. | Volosevich,N.N. | Kukharchik,N.V.

Разработка мультиплексной RT-PCR (mRT-PCR) для одновременного выявления нескольких вирусов голубики является актуальной задачей, направленной на своевременную дифференциальную диагностику вирусов с целью оптимизации и удешевления мероприятий по контролю над распространением данных патогенов. В результате проведенных исследований установлено, что метод mRT-PCR с использованием двух комбинаций праймеров (1F/1R, MF05-22-F/MF05-21-R, AtropaNad2.1a/2.2b и RDP-1/RDP-2, MF05-22-F/MF05-21-R, AtropaNad2.1a/2.2b) может быть применен для одновременной и дифференциальной диагностики таких патогенов голубики, как вирус ожога голубики (BiScV) и вирус кольцевой пятнистости табака (TRSV). Использование mRT-PCR для выявления вирусных патогенов голубики позволяет, в сравнении с RT-PCR, снизить затраты на проведение тестирования на 49,5 %. | Vaccinium plants are susceptible to viral diseases causeing a great crop yield losses. One of the most effective methods of virus infection determination appears molecular analysis, such as ELISA and RT-PCR. Multiplex RT-PCR (mRT-PCR) represents a perspective, quick and economically efficient method of diagnostics of virus infections. Due to this factor,development of mRT-PCR for simultaneous detection of some viruses of Vaccinium appears an important scientific challenge aimed on well-timed virus diagnostics for cheapening of disease control methods. In the article it has been found that multiplex RT-PCR (mRT-PCR) method with two combinations of primers (1F/1R, MF05-22-F/MF05-21-R, AtropaNad2.1a/2.2b and RDP-1/RDP-2, MF05-22-F/MF05-21-R, AtropaNad2.1a/2.2b) can be used for the simulatenous and differential detection of blueberry pathogens (Blueberry scorch carlavirus, Tobacco ringspot nepovirus). Application of mRT-PCR for detection of virus diseases of blueberry plants allows to reduce testing costs on 49.5% in comparison with simplex RT-PCR.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Kuzmitskaya,P.V. | Urbanovich,O.Yu.

Apple tree appears one of the most important commercial fruit cultivars sensitive to different infections, especially to the plant viruses. Propagation of plants with the help of vegetative method can infect all the plant population. PCR testing of apple stem grooving virus appears one of the most effective for evaluation of virus evaluation. Apple trees of different cultivars growing in Belarus have been tested using RT-PCR for apple stem grooving virus, an important economically and common pathogen in commercial orchards. 115 apple trees and 64 rows of clonal rootstocks have been tested. 9.6% of apple trees have been infected with ASGV. In 6.2% of clonal rootstock infected plants have been found. Specificity of molecular markers has been confirmed by sequencing the RT-PCR product. The nucleotide and deduced amino acid sequences have been compared with sequences published in GenBank. Alignment of this nucleotide and amino acid sequences of hypothetical protein sequence with other similar sequence from GenBank has shown up to 99 and 100% identity, respectively. | С помощью метода ОТ-ПЦР проведена оценка распространенности вируса бороздчатости древесины яблони (ASGV) среди 115 деревьев разных сортов и 64 рядов подвоев яблони, выращиваемых на территории Брестской, Минской и Гродненской областей Беларуси. Обнаружено, что вирусом ASGV заражено 9,6 % деревьев яблони, относящихся к разным сортам. Зараженные вирусом подвои обнаружены среди 6,2% рядов. Степень распространения вирусной инфекции среди хозяйств была неоднородной. Сиквенирование фрагмента генома вируса белорусского изолята ASGV показало, что степень его идентичности с гомологами из базы данных GenBank со 100 %-ным покрытием исследуемой нуклеотидной последовательности находилась в пределах 91—99 %. Полученный при помощи компьютерной трансляции гипотетический белок имел степень идентичности до 100 % со своими гомологами. Наиболее близкими белорусскому изоляту по нуклеотидному составу оказались последовательности фрагментов генома вируса ASGV, выделенные в Латвии и Украине.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Rusetskiy,N.V. | Kozlov,V.A. | Chashinskiy,A.V.

В статье приведены результаты мониторинга распространения раттл-вируса, вируса моп-топ и вируса мозаики люцерны в посадках картофеля (Solanum tuberosum) различных субъектов хозяйствования пяти районов Витебской области Республики Беларусь. Установлено, что наибольшее распространение из трех изучаемых вирусов имеет раттл-вирус (5,5-17,3 %), который обнаружен в каждом из исследуемых районов. Наибольшее количество положительных проб выявлено в Лепельском районе - 17,3 %. Пораженность посадок картофеля Витебской области вирусом моп-топ и вирусом мозаики люцерны является менее значительной. Методом клубневого анализа выявлены некрозы мякоти клубней на сортах: Ред Скарлет, Скарб Верхнедвинского района (1,7-2,5 %), Скарб, Рагнеда Полоцкого района (3,3-7,5 %). | The monitoring results to identify tobacco rattle virus, potato mop-top virus and alfalfa mosaic virus in the planting of potato (Solanum tuberosum) at various management agriculture of five districts of Vitebsk region are present in the article. It is established that the greatest distribution from three studied viruses has Rattle-virus (5.5-17.3 %) which is found out in each of investigated areas. The greatest quantity of positive tests is revealed in Lepel (17.3) area. The incidence potato plantings of mop-top and alfalfa mosaic viruses has the less significance.Tuberous analysis method has revealed the necrosis of the pulp in tubers of the following varieties: Red Scarlet, Skarb of Verkhnedvinsk area (1.7-2.5 %), Skarb, Ragneda of Polatsk area (3.3-7.5 %).

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2015

Kukharchik,N.V. | Kolbanova,E.V. | Volosevich,N.N. | Kastritskaya,M.S. | Bozhiday,T.N. | Semenas,S.E.

Methodology of laboratory methods (IFA, PCR) makes it possible to identificate the symptomatic and latent forms of diseases, developed to resolve problems on an increase in production volumes of improved planting material of fruit, berry crops, accurate diagnosis of pathogens, monitoring of viral infections. The presented methodology is required to determine the phytosanitary condition of plants and planting material of fruit and berry plants in vitro culture, mother plantations, nurseries breeding fields, such as national production, and seedlings, imported to Belarus. The methodology contains a list of viruses, a description of the sampling methods for testing the infected plants, and the list and sequence of of laboratory testing methods. Diagnosis is performed using immunological methods of enzyme analysis and PCR analysis. The technique is intended for use for specialized laboratories (breeding, immunology, biotechnology) using ELISA and PCR assays for the diagnosis of infection of viral pathogens of fruit and berry crops. The number of pathogens tested - 26 viral pathogens. The number of valuation techniques - 2: IFA (DAS-ELISA) - 26 viruses, PCR (IC-RT-PCR) - 4 virus. Tested crops: apple, pear, plum, cherry plum, cherry, black currants, red currants, gooseberries, summer raspberries, remontant raspberries, blackberry, strawberry, grapes, cranberries, blueberries, cranberries. | етодика лабораторных методов (ИФА, ПЦР-анализ), позволяющая выявлять симптоматические и латентные формы заболеваний, разработана с целью разрешения задач по увеличению объемов производства оздоровленного посадочного материала плодовых, ягодных сельскохозяйственных растений, достоверной диагностики патогенов, мониторинга вирусных инфекций.Настоящая методика обязательна для определения фитосанитарного состояния насаждений и посадочного материала плодовых и ягодных растений в культуре in vitro, маточных насаждениях, полях размножения питомников, как отечественного производства, так и саженцев, завезенных в Республику Беларусь. Методика содержит перечень вирусов, описание способов отбора образцов для тестирования зараженности растений, перечень и последовательность лабораторных методов тестирования. Диагностика осуществляется с использованием методов иммуно- ферментного анализа и ПЦР-анализа. Методика предназначена к применению для профильных лабораторий (селекционных, иммунологических, биотехнологических), использующих ИФА и ПЦР-анализы для диагностики зараженности вирусными патогенами плодовых и ягодных культур. Количество тестируемых патогенов - 26 вирусных патогенов. Количество методов оценки - 2: ИФА (DAS-ELISA) - 26 вирусов, ПЦР (IC-RT-PCR) - 4 вируса. Тестируемые культуры: яблоня, груша, слива, алыча, вишня, черешня, смородина черная, смородина красная, крыжовник, малина летняя, малина ремонтантная, ежевика, земляника садовая, виноград, брусника, голубика, клюква.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2014

Pundik,A.N. | Gapeeva,T.A. | Tretyakova,T.G. | Semanyuk,T.V. | Yakovleva,G.A. | Volotovski,I.D.

С применением ISSR-праймеров разработаны SCAR-маркеры для межмикросателлитной геномной последовательности диких видов Solatium и культурного картофеля Solarium tuberosum. Показано, что данные маркеры могут быть использованы при проведении сравнительной идентификации генетических детерминант Solarium tuberosum и таких диких видов, как Solarium etuberosum, Solarium palustre, S. pinnatisectum, S. bolie-vense, S. michoacanum. | Increase of potato productivity requires continuous selection work aimed on creation of the new varieties, possessing high biotic and abiotic stress resistance. Use of interspecific hybridization operating with including of wild Solanum varieties in genome of agricultural cultivars of Solanum tuberosum and development of disease and pest resistant varieties appears a perspective direction of modern selection. The main goal of the research presented in the article appears development on the base of ISSR-PCR analysis the SCAR-markers for comparative identification of genetic determinants of Solanum tuberosum and wild varieties of Solanum in genome of somatic hybrids. ISSR primers have been used to develop SCAR markers for genome region between microsatellite loci of wild species of Solanum and agricultural potato (Solanum tuberosum). Sequences of oligonucleotides for fitting of SCAR-primers used for comparative analysis of polymorphic microsatellite DNA zone of cultivated and wild varieties of Solanum have been presented. The markers are shown to be applied for comparative identification of genetic determinants of Solanum tuberosum and such wild species as Solanum etuberosum, Solanum palustre, Solanum pinnatisectum, Solanum boliviense and Solanum michoacanum.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2014

Tyapsha,Y.I.

В статье приводятся данные о способах культивирования и эффективного накопления биомассы Mycoplasma hyopneumoniae с целью получения антигена для разработки диагностических наборов ИФА и ПЦР. Для выделения М. hyopneumoniae из легких сероположительных свиней необходимы многоэтапные пересевы с использованием питательной среды американской коллекции культур микроораганизмов (АТСС) с добавлением антисывороток к малопатогенным видам микоплазм и антибиотиков, нарушающих синтез клеточных стенок бактериальных культур. Наибольшее накопление биомассы М. hyopneumoniae происходит на двухсо-ставной питательной среде (на основе среды АТСС) с твердой фазой из 1,5% агара. Максимальное накопление биомассы М. hyopneumoniae (в 3,6 раза больше в сравнении с базовой жидкой средой) отмечается на среде ДС (1,5%) на 10 день культивирования. | The data on cultivation and effective accumulation of Mycoplasma hyopneumoniae biomass for antigen production for development of ELISA and PCR test kits were provided. Mycoplasma is a kind group of micro-organisms, like viruses that may persist and multiply inside cells, causing cytopathic effect, but as bacteria can grow on nutrient media. They have no cell wall. In taxonomic terms, they belong to the domain bacteria. For Mycoplasma hyopneumoniae isolation from lung of seropositive pigs it was needed the multistage subcultures with using of culture medium ATCC supplemented with antisera for mycoplasma species and antibiotics, the synthesis of the cell walls breaking bacterial cultures. The highest accumulation of biomass of Mycoplasma hyopneumoniae occurred at two-class growth medium (based on ATCC medium) with the solid phase of 1.5% agar. The maximum accumulation Mycoplasma hyopneumoniae biomass (3.6 times greater in comparison with the base liquid medium) observed on DC medium (1.5%) on 10 day of cultivation.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2014

Rymko,A.N. | Kvach,S.V. | Zinchenko,A.I.

С помощью методов генной инженерии созданы штаммы Е. coli - продуценты рекомбинантных дезоксину-клеозидкиназы Drosophila melanogaster, дезоксинуклеозидмонофосфаткиназы бактериофага Т5, гомологичных нуклеозиддифосфаткиназы и ацетаткиназы, содержащих на С-конце молекул полигистидиновый олиго-пептид. С использование выделенных рекомбинантных ферментов проведен препаративный синтез четырех канонических дезоксинуклеозидтрифосфатов, выход реакции составлял 95-97 %. Время достижения максимального выхода реакции - около 4 ч. | PCR represents the method widely used in diagnostic laboratories of the Republic of Belarus. Performance of PCR requires expensive reagents, imported outside the republic. Therefore, development of national technology of PCR-diagnostics and creation of domestic biochemical reagents appears a serious scientific problem. The main goal of the research presented in the article appears development of the schemes of one-pot synthesis of deoxynucleoside triphosphate. Solution of the problem appears construction of the producing strains of recombinant proteins. The research has been based upon genomic DNA of Drosophila melanogaster. Using the methods of genetic engineering, the strains of Escherichia Coli producing deoxynucleoside kinase of Drosophila melanogaster, deoxynucleoside monophosphate kinase of bacteriophage T5, homologous nucleoside-diphosphate kinase and acetate kinase, with additional C-terminal fusion polyhistidine oligopeptide have been constructed. Four canonical deoxynucleoside triphosphates have been synthesized using the recombinant enzymes. The yields of the reactions have presented 95-97%. The conversion has been completed within 4 hours.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus

2014

Radkovich,E.V. | Guscha,G.N. | Galuza,D.I.

В статье приведены результаты исследований за 2012 и 2013 гг., проведенных согласно схеме отбора исходного семенного материала, предназначенного для получения растений картофеля (Solanum tuberosum) в культуре in vitro и микрокланального размножения с применением биотехнологических методов. Показано, что благодаря комплексной поэтапной диагностике методами ИФА и ПЦР можно выявлять широкий спектр вирусных и бактериальных инфекций, что позволяет получать высококачественный, здоровый исходный семенной материал картофеля для оригинального семеноводства. Комплексная поэтапная диагностика методами ИФА и ПЦР позволяет выявлять широкий спектр вирусных инфекций картофеля, таких как: Х-вирус картофеля, Y-вирус картофеля, S-вирус картофеля, M-вирус картофеля, A-вирус картофеля, ВСЛK, а также бактериальную инфекцию (кольцевая гниль, бурая бактериальная гниль) и вироид веретеновидности клубней картофеля. Использование метода ИФА дало возможность протестировать большое количество образцов одновременно и по результатам анализа, в зависимости от зараженности сорта, позволило отобрать от 1 до 90 % образцов, свободных от вирусной инфекции. Отбор на данном этапе значительно снижает издержки последующего ПЦР-анализа, стоимость которого значительно выше, чем стоимость диагностики методом иммуноферментного анализа. Выделенный здоровый исходный материал 12 сортов белорусской селекции является основой для создания исходных партий в культуре in vitro для получения высококачественного оригинального семенного материала картофеля. | The article presents the research results in 2012 and 2013. The seed selection for the introduction of initial seed material of potato (Solanum tuberosum) plants in culture of vitro and and micropropagation for their further propagation is studied. It is shown that the use of complex diagnostics by ELISA and PCR can detect a wide range of viral and bacterial potato infections, that makes it possible to obtain high quality, healthy initial seed material of potato for the further original seed breeding. Integrated gradual diagnostics by ELISA and PCR allows to reveal a wide range of potato viral infections, such as: Potato virus X, Potato virus Y, Potato virus S, Potato virus M, Potato virus A, potato curlytop virus, as well as bacterial infection (ring rot, bacterial brown rot) and viroid potato spindle tuber. Using ELISA made it possible to test a large number of samples simultaneously and according to the analysis, depending on the degree of a variety infection, allowed to select from 1 to 90% of samples free from the viral infection. Selection at this stage significantly reduces the costs of the subsequent PCR analysis, the price of which is significantly higher than the price of diagnostics by enzyme immunoassay. The selected healthy initial material of 12 varieties of Belarusian selection is the basis for the creation of the original parties in vitro culture for the production of high-quality original seed material of potato.

Show more [+]

Less [-]

National Academy of Sciences of Belarus - Belarus