Transgènisi

La **transgènisi** è nu prucessu di ntruducimentu di DNA esòginu n un urganismu òspiti, cu mudalitati ca fàcinu se ca l'esuginoti fussi trasmissu â progenî. La transgènisi si poti vìriri comu na forma particulari di mutagènisi. 

## Storia dâ transgènisi

Ntê anni '60, prugressi nê mètudi di cultura e di manipulazzioni dê mbriuni di surciu, e macari li scuverti nô campu dê bioticnuluggìi, cunsintiru la criazzioni dê primi linî di cèlluli e surci transgènichi. La scuperta di l'arricuminazzioni omòluga comu miccanismu autònumu e a *[[feedback]]* pusitivu dê cèlluli di mammìfiru purtau â ticnoluggìa dô *[[gene targeting]]* ca, nzemula ô *[[gene trap]]*, eni usati ppi studi macari a liveddu "omicu" (*[[screening high-throughput|screening high throughput]]*). La transgènisi è oj veru usata pô studiu dâ bioluggìa muliculari e dâ patuluggìa, e pâ pruduzzioni di urganismi ùtuli.

### Cronuluggìa dâ transgènisi

* 1963, Brinster: cultura *in vitru* di ova di surciu, n micrugutti di menzu cu piruvatu cuverti cu paraffina;
* 1966, Lin: manipulazzioni di ova di surciu (njizzioni di γ-tubulina);
* anni '70: abbentu dâ ticnoluggìa dô DNA arricumminanti;
* 1974, Jaenisch e Mintz: primu casu di transgènisi ppi micronjizzioni nô blastuceli di blastuli murini cu DNA di SV40;
* 1977, Wingler e Axel: cèlluli di surci dificienti dâ timidina chinasi si ponnu ricupirari cupricipitannu *HHV4gp124* e fusfatu di calciu;
* 1980, Jähner e Jaenisch: primu tintativu di pruduzzioni di surci UGM attraversu ntruducimentu nfittivu di ginomi dô virus dâ liucimìa murina di Moloney;
* 1980, Capecchi: primu casu di transgènisi veru efficienti ppi micronjizzioni n nucliu di cèllula sumàtica (ntruducimentu di *HHV4gp124* n fibrublasti di surciu dificienti dâ timidina chinasi);
* 1980, Gordon: primu casu di transgènisi pi micronjizzioni n prunucliu fimminili (pBR322-''like'' - Timidina chinasi di HSV e SV40), transgeni arricumminatu;
* 1981, Brinster: primu casu di transgènisi pi micronjizzioni n prunucliu maschili cu transgeni funziunanti (pUC - Timidina chinasi);
* 1981, Costantini e Lacy: primu tintativu di pruduzzioni di linî UGM (ntruducimentu di β-glubina di cunigghiu nô ginoma murinu pi micronjizzioni;
*1982, Palmiter e Brinster: primu mudellu murinu (cu GH di rattu sutta lu cuntrollu dô prumuturi dâ mitallutiuniìna-I) pâ currizzioni di malatìi ginètichi (nanismu) e pô migghiuramentu dê armali dumèstichi;
*1982, Capecchi: li cèlluli di mammìfiru hàvinu apparati nzimàtichi pâ ginirazzioni di cuncatàmiri dû transgeni urientati testa-cuda, ca sunnu ntigrati, n picca copî e n siti casuali, ppi arricuminazzioni omòluga;
*1983, Palmiter *et al.*: l'ambienti tissutali e lu situ di ntigrazzioni ginòmica nfluènzanu l'espressioni dô transgeni (mudellu murinu transgenicu cu GH umanu);
*1983, Costantini e Lacy: studiu su siti di ntigrazzioni, arripituzzioni n tandem, riditati e espressiuni di β-glubina di cunigghiu nô ginoma murinu pi micronjizzioni.
*1984, Hammer, Palmiter e Brinster: prima currizziuni parziali di malatìa ginètica murina (nanismu);
*1985, Chada *et al.*: uttinuta gghiusta espressiuni d'un transgeni n surciu (β-glubina arricuminanti omu-surci n linia eritròidi), li siquenzi n cis ponnu garantiri na curretta espressioni puru siddu lu custruttu s'attruva n pusizzioni ectòpica;
*1986, Costantini: secondu casu di currizzioni di malatìi ginètichi (β-talassimìa) nô surciu;
*1986, Capecchi: primu casu di *gene targeting*, cu cumplimintazzioni spicìfica di alleli mutati di niumicina fosfutransfirasi nzirita n manera casuali nô ginoma di cèlluli ES di surci;
*1987, Smithies: primu *[[knock out]]* ppi arricuminazzioni omòluga dô geni ndòginu n cèlluli di mammìfiru (*targeting* dâ β-glubina umana);
*1988, Capecchi: silizzioni di mutanti di geni nun finutipicamenti silizziunabbili cu l'usu cruciatu di *[[geni reporter|reporters]]* pusitivi (niumicina fosfutransfirasi) e nigativi (timidina chinasi), n manera ndipindenti di l'espressiuni dû geni nê cèlluli trasfittati (*targeting* dô protuoncugeni *Int-2* n cèlluli ES murini);
*1992, Palmiter: primu casu di mudìfica ginètica nducìbbili ppi arricuminazzioni *in vivo* (sistema Cre-''LoxP'' n surci);
*1998, Zambrowicz: usu dô *gene trap* n manera *high-throughput*, supra circa 2.000 geni murini;
*2004, Austin: prupusta di *knock out* sistimàticu dô cchiossài dê geni murini (*The knock out mouse project*).

## Mètudi

Li mètudi cchìu usati ppi nsirìri lu DNA ntrâ cèllula sunnu l'usu di vittori virali, plasmìdichi, o puramenti di crumusomi artificiali, cusmidi, fagimidi; si poti usari macari la micronjizzioni n pronùcliu, la lipufizzioni, la fusiuni di protuplasti, lu *[[gene gun]]*. Li mèduti sunnu addijuti macari n rilazzioni a l'urganismu.

### Transgènisi n surci

La transgènisi n surci è cunnutta principarmenti ppi micronjizzioni di transgeni n prunucliu maschili di pre-zigoti e ppi micrunjizzioni di cèlluli mudificati (spissu ppi elettrupurazzioni) n blastuceli (dunca n blàstula).

### Transgènisi nâ musca dâ frutta

La transgènisi nâ musca dâ frutta abbeni principarmenti grazzi ô elementu P. Si mircunjietta, n manera extranucliari e ô curtu dô polu pustiriuri dô blastuderma sincizziali (dunni s'attruvanu li cèlluli pulari prisuntivi), DNA circulari ppi traspusasi (o puramenti lu sò mRNA cô ''cap'' ô 5' o la prutiìna) nzèmula a l'elementu P difittivu cuntenenti lu transgèni.

## Applicazzioni

La transgènisi poti èssiri addupirata ppi risòrviri varî prubbremi di bioluggìa, di chìmica e di midicìna, p'asempiu:

*Scuperta di novi prumuturi, siquenzi rigulatorî, geni (*[[gene/enhancer trap]]*); nu pussìbbili custruttu sarìa:
::5'-Situ accitturi di *[[splicing]]*-Geni *reporter*-Situ di poliadinilazzioni-3';
*Marcari cèlluli e tissuti; nu pussìbbili custruttu sarìa:
::5'-Prumuturi justu-Geni *reporter*-Situ di poliadililazzioni-3';
*Fàciri lu *[[fate mapping]]*; nu pussìbbili custruttu sarìa:
::5'-Prumuturi forti-Geni *reporter*-Situ di poliadinilazzioni-3';
*Studiu dô duminiu d'espressiuni, ntô tempu e ntô spazziu, d'un geni di ntiressi; nu pussìbbili custruttu sarìa:
::5'-Prumuturi dô geni di ntiressi-Geni *reporter*-Situ di poliadinilazzioni-3';
*Fàciri *[[knock in|knock in]]* o l'espressiuni ectòpica d'un geni ppi studiàrini la funziuni; nu pussìbbili custruttu sarìa:
::5'-Prumuturi justu (macari nducìbbili)-Geni di ntiressi fusiunatu c'un geni *reporter*-Situ di poliadinilazzioni-3';
Cô *knock in* si ponnu virè fàciri:
::: a) spirimenti di *resque*, zoè di ricùpiru finutìpicu, nzirennu na siquenza esòggina (si abbisogna di sapiri quali geni ricùpira lu finutipu) n siti casuali o ppi menzu di l'arricuminazzioni situ-spicìfica. Vasinnò, si potinu fari macari cumplimintazzioni funzionali di mutanti (cun finutipu palesi ma *[[locus]]* mutatu scanusciutu) ndividuannu na regioni ginòmica candidata e facennu surci transgènichi p'ogni siquenza di 100 Kb nterna â regioni candidata;
::: b) modelli (spissu murini) pô studiu di malatìi;
::: c) bioriatturi (n gèniri s'addòperanu urganismi supiriuri quannu sèrvunu mudìfichi post-traduzzionali ê prutiìni, o puramenti siddu sèrvunu granni quantitati di pruduttu);
::: d) n ginirali, migghiuramenti di urganismi.
*Fàciri *knock out*, p'asempiu cu *gene trap*, *gene targeting* o *[[RNA]] [[RNA interference|interference]]*.

## Lijami di fora

**[http://www.knockoutmouse.org/ International mouse knockout consortium]* (n ngrisi)

catigurìa:bioluggìa