Sekuensing DNA

**Sequencing DNA**
## Pangèrtosan DNA Séquencing 
Secara molékulèr, pangèrtosan saking molékul DNA asalipun saking penentuan sèkuèn nukèotida. Mupangatipun saking gèn asring saged dipuntemtuaken adédasar sekuen nukeotida, tuladhanipun ginaakén cara bandingakén sékuens nukeotida kaliyan gèn ingkang sampun dipunmangèrtosi mupangatipun. sekuen nukleotoda DNA saged dipuntemtuaken adédasar mètode saking *Alan Maxam* saha *Walter Gilbert* utawi dipunsébat ugi sekuens ingkang adédasar prosedur kimia. Mètodé punika bétahakén labèl radioaktif ing satunggal ujung saha pemurnian fragmèn DNA ingkang badhé dipunsekuens. Perlakuan kimia ngasilaken kaputusan ing proporsi alit sétunggal utawi kalih saking sékawan basa nukleotida ing sabén-sabén rèaksi G, A+G,C,C+T. Saéngga sèri saking fragmèn dipunhasilakén saking ujung ing radiolabèl. Fragmèn kaping sékawan rèaksi dipunatur ing sisih gel Èlèktroforèsis kanggé misahaken adédasar ukuran.(dipununduh Tanggal 13 Oktober 2012)
Teknik sekuensing DNA dipunrembaaken ing taun 1970an saha sampun dados hal rutin ing panalitèn biologi molekular ing dekade salajengipun kalih metode ingkang dipunrembaaken kanti cara independen nanging miturut Walter Gilbert ing Amérikah Sarékat saha tim Frederick Sanger ing Inggris saéngga sadaya ilmuan kemau ngasilaken Penghargaan Nobel Kimia ing taun 1980.(dipununduh Tanggal 14 Oktober 2012)

Cycle Sequencing inggih punika mètodé ingkang prasaja ing pundi pengulangan denaturasi, annealing saha ekstensi kanthi runtut ing salébéting *Thermal cycler* ngasilaken amplifikasi linear produk-produk Èkstènsi. Produk punika dipunload ing gel utawi dipuninjeksiaken ing salébéting kapiler. *Applied Biosystems* ngginakaken protokol *cycle sequencing* ing kit DNA *sequencing*.(dipununduh Tanggal 13 Oktober 2012)
## Kagunaan Cycle Sequencing 
1.	Protokolipun saé lan gampil kanggé ngélampahi
2.	Cycle Sequencing bétahakén DNA tèmplatè ingkang langkung kédik dipunbandingaken mètodé ekstensi temperatur tunggal. 
3.	Cycle Sequencing langkung jumbuh dipunbandingaken metode pelabelan temperatur tunggal tradhisional ingkang butuhaken langkah denaturasi kimiawi kanggé template utus ganda.
4.	Temperatur inggil ngurangi *annealing* sekunder promer ing *template*. 
5.	Protokol ingkang samidipunginaaken kanggé DNA utus ganda utawi utus tunggal.
6.	Protokol punika merdamel kanti saé kanggé sequencing PCR produk. 
7.	Temlate-template ingkang boten gampil, kados ta  *bacterial artificial chromosomes *BACs saged dipunsekuen.(dipununduh Tanggal 13 Oktober 2012)
## Sekuensing DNA 
Sedaya usaha sekuensing DNA dipunlampahi kaliyan ngginakaken metode terminasi rantai ingkang dipunrembag déning Frederick Sanger saha kanca-kanca. Teknik mau ngelibataken terminasi utawi dipunhentiaken reaksi sintesis DNA *in vitro* ingkang spesifik kanggé sekuens katamtu ngginakaken substrat nukleotida ingkang sampun dipunmodifikasiaken. Metode sanger gel sekuensing metode sanger ingkang sampun dipunlabel radio aktif. Ing metode terminasi rantai metode sanger, ekstensi rantai DNA dipunwiwiti ing situs spesifik DNA cinetak kaliyan ngginakaken oligonukleotida alit ingkang dipunsebat primer ingkang komplementer kaliyan DNA  ing daerah situs mau. Primer mau dipundawaaken  ngginakaken DNA polimerase, enzim dipundereaken sekawan jinis basa deoksinukleotida, ugi nukleotida dipunhentiaken terminor rantai ing konsèntrasi cendhèk. Gabungan nukleotida mau, kanthi kabates ing rantai DNA déning polimerase DNA ngasilaken fragmen-fragmen DNA mau, lajeng dipunpisahaken miturut ukuranipun kaliyan elektroforesis gel poliakrilamida utawi ing jaman saiki elektroforesis ngginakaken tabung gelas jari-jari alit.lajenh dipunparingi isi kaliyan polimer kentel.(dipununduh Tanggal 13 Oktober 2012)

## Cathetan suku