סיווג לנספילד

[שמאל|ממוזער|250px|החיידק ''[Streptococcus pyogenes*, המסווג בקבוצה A, יוצר המוליזה מלאה וחזקה של [[אגר]] דם]]
*'סיווג לנספילד** (ב[[אנגלית]]: **Lancefield grouping**, או **Lancefield classification**) היא שיטה [[סרולוגיה|סרולוגית]] שמיושמת ב[[מיקרוביולוגיה]] קלינית על מנת למיין [[חיידקים]] ב[[משפחה (טקסונומיה)|משפחת]] Streptococcaceae על סמך השוני בהרכב ה[[אנטיגן|אנטיגנים]] ה[[פחמימה|סוכריים]] על גבי ה[[דופן התא|דופן]] ה[[פפטידוגליקן|פפטידוגליקנית]] של ה[[מין (טקסונומיה)|מינים]] השונים במשפחה.

==היסטוריה==
השיטה פותחה ב[[שנה|שנת]] [[1933]] על ידי המיקרוביולוגית ה[[ארצות הברית|אמריקאית]] [[רבקה לנספילד]] (Rebecca Lancefield) אשר עסקה רבות, במהלך ה[[קריירה]] שלה, ב[[מחקר]] אודות חיידקים ממשפחת ה-Streptococcaceae - [[חיידקים גראם-חיוביים]] שמצויים ב[[אדם|בני אדם]] וב[[בעלי חיים]] כחלק מ[[הפלורה הטבעית]], אולם שעלולים במקרים מסוימים לגרום ל[[זיהום (רפואה)|זיהומים]] ול[[מחלה|מחלות]]. שיטה זאת, אשר אינה לוקחת בחשבון את המאפיינים ה[[ביוכימיה|ביוכימיים]] הייחודיים ואת סוג ועוצמת ההמוליזה של כל מין חיידק במשפחה, הייתה לאחד ההישגים הידועים ביותר של לנספילד.

פיתוח שיטת לנספילד לסיווג כללה את [[זריקה|הזרקתם]] של מיני חיידקים שונים במשפחת ה-Streptococcaceae, שעברו אינאקטיבציה (נטרול) ב[[פורמלין]] לתוך [[ארנבת|ארנבות]]. בתגובה לכך החלה [[מערכת החיסון]] שלהן לייצר [[נוגדן|נוגדנים]] ייחודיים כנגד המרכיב הסוכרי שהתבטא על גבי הדופן הפפטידוגליקנית של כל מין של חיידק בו השתמשו להזרקה. בשלב הבא הפיקה לנספילד את ה[[נסיוב]] מתוך הארנבות (שהכיל את אותם הנוגדנים הייחודיים) והגיבה אותו ישירות עם חיידקים מהמשפחה המדוברת שגדלו על מצעי [[אגר]]. ערבוב ב[[מבחנה]] של החיידקים עם נסיוב ארנבות, הוביל לייצור תצמידי אנטיגן-נוגדן ול[[אגרגציה]] שנראתה ל[[עין אנושית|עין]], אשר העידה על תגובה חיובית. באופן זה סווגו חיידקי משפחת ה-Streptococcaceae ל-20 קבוצות המסומנות באותיות הלועזיות A-H, ו-K-V.

כאשר מתבוננים כיום בסיווג זה ניתן מיד להבחין כי חיידקים אשר משויכים לקבוצות D ו-Q אינם נמנים כלל במשפחה הטקסונומית Streptococcaceae. זאת משום שבשנת [[1984]] הועברו חיידקי ה[[סוג (טקסונומיה)|סוג]] ''[[Streptococcus#Enterococcus|Enterococcus]]'' למשפחה נפרדת בשם Enterococcaceae. ברם מטעמים היסטוריים הוחלט להשאירם תחת סיווג לנספילד.

==שימוש במעבדה המיקרוביולוגית==
השימוש בסיווג לנספילד נהוג כיום בהרבה [[מעבדה|מעבדות]] מיקרוביולוגיות בעולם על מנת לזהות את חיידקי ה-Streptococcaceae, שצמחו על גבי מצעי האגר מתוך דגימות קליניות, באמצעות ערכות אגלוטינציה מסחריות. בערכות מסוג זה מצופים [[חרוז (חפץ)|חרוזי]] [[לטקס]] בנוגדנים ייחודיים כנגד הקבוצות ה[[פתוגניות]] השכיחות בקליניקה (לרוב קבוצות A, B, C, D, F, G), שהופקו מתוך [[אורגניזם מודל|חיות מעבדה]], ואלה מעורבבים עם חיידקים חשודים בתרבית עד להופעת אגרגציה שמעידה על זיהוי חיובי. 

===אופן ביצוע המבחן בשיטת חרוזי הלטקס באמצעות אנזים הפקה===
[[קובץ:Streptococcal grouping kit.jpg|שמאל|ממוזער|250px|ערכה לסיווג [[חיידקים|חיידקי]] ''Streptococcaceae'' [[פתוגניות|פתוגניים]] בשיטת לנספילד]]
להלן השיטה הנפוצה לביצוע סיווג לנספילד בשיטת חרוזי הלטקס ובאמצעות אנזים הפקה:
# באמצעות כלי מתאים ([[פיפטה]], טפי וכדומה) יש למקם מספר [[טיפה|טיפות]] של [[אנזים]] הפקה בתוך מבחנה נקייה.
# באמצעות מחט בקטריולוגית יש להרים מספר מושבות של חיידקים חשודים, מבודדים, נקיים וטריים מעל [[צלחת פטרי]] (24 שעות לאחר זריעה על מצע אגר) ולערבב אותם בעדינות בתוך אנזים ההפקה עד ליצירת [[תערובת]] [[הומוגניות (כימיה)|הומוגנית]].
# את המבחנה יש להדגיר במשך 10–15 דקות ב[[אינקובטור (רפואה)|אינקובטור]] 37 [[מעלות צלזיוס]] (בפרק זמן זה מזרז אנזים ההפקה את חשיפתם של האנטיגנים הסוכריים על פני הדופן הפפטידוגליקנית, על מנת שיהיו זמינים יותר לחרוזי הלטקס).
# באמצעות כלי מתאים (פיפטה, טפי וכדומה) יש לערבב בעדינות את התערובת מבלי להקציפהּ ולמקם טיפה אחת על גבי [[זכוכית נושאת]], או מכסה צלחת פטרי.
# יש למקם טיפה מתוך כל בקבוקון שמסופק בערכה המסחרית, ושמכיל את חרוזי הלטקס המצופים באנטיגנים ייחודיים, ובאמצעות מחט בקטריולוגית, או קיסם עץ נקי, יש לערבב בעדינות את שתי הטיפות.
* אם כעבור מספר [[שנייה|שניות]] ניתן להבחין בהיווצרות אגלוטינציה כנגד קבוצת לנספילד **אחת** ספציפית, אזי התרחש זיהוי מדויק של אותה הקבוצה.
* אם כעבור למעלה מדקה לא ניתן להבחין בהיווצרות אגלוטינציה כנגד קבוצת לנספילד ספציפית, אזי לא מדובר בחיידק אשר שייך לאחת הקבוצות שנבדקו. 
יש לציין כי קיימות ערכות מסחריות בהן מחליפים [[ריאגנט]]ים [[כימיה|כימיים]] את אנזים ההפקה. שימוש בריאגנטים אלה חוסך את זמן ההדגרה של התערובת באינקובטור.

===הערות לביצוע המבחן===
להלן ההערות לביצוע סיווג לנספילד בשיטת חרוזי הלטקס:
* הופעת אגלוטינציה כנגד קבוצת לנספילד **אחת** ספציפית מעידה על זיהוי מדויק, אולם קבלת אגלוטינציה כנגד מספר קבוצות לנספילד במקביל **אינה** מעידה על זיהוי מדויק, אלא על תגובה בלתי ספציפית אשר יכולה לנבוע מגורמים שונים, כאשר השכיחים ביותר הם: [[גיל]] המושבות הנבדקות ו/או איסוף של מספר מיני חיידקים למבחן באמצעות המחט הבקטריולוגית. לפיכך לא מומלץ להשתמש במושבות חיידקים מעבר ל-24 שעות אחרי הזריעה על מצעי האגר, שכן תהליכי ה[[הזדקנות]] במושבה עלולים להוביל לקבלת תוצאות שגויות חיוביות (False positive). שימוש במושבות מעבר ל-24 שעות מעלה גם את הסבירות לקבלת תוצאות שגויות שליליות (False negative).
* אין לחכות להתייבשות הטיפות בעת ביצוע המבחן, שכן התייבשות הטיפות תגרום להופעת משקעים שעלולים להוביל לפענוח שגוי של המבחן כחיובי.
* ייתכן מצב שבו לא ניתן יהיה לראות בבירור את תוצאות האגלוטינציה. הסיבה לכך נובעת, על פי רוב, מלקיחה דלה מדי של המושבות החשודות מהאגר. במצב זה יש להיעזר ב[[זכוכית מגדלת]].
* מינים שונים של חיידקים, שאינם שייכים למשפחת ה-Streptococcaceae, עלולים לתת תוצאת אגלוטינציה בלתי ספציפית שתתפרש כחיובית שגויה במידה ויבדקו בשיטת לנספילד. מבין חיידקים אלה ניתן למנות את הבאים: ''[[Escherichia coli]]'', מיני ''[[Klebsiella]]'' ו-''[[Pseudomonas]]'' וכן החיידק ''Listeria monocytogenes'' (שעלול לתת תגובה חיובית עם נוגדנים כנגד קבוצה B ו/או G). לפיכך **אין** להשתמש בסיווג זה מחוץ למשפחת Streptococcaceae (למעט חיידקי Enterococcaceae) ובמידת הצורך יש לשלול חיידקים אשר דומים ל-Streptococcaceae בתרבית, טרם ביצוע מבחן הסיווג, באמצעות שיטות ביוכימיות (דוגמת [[מבחן קטלאז]]), ו/או [[צביעת גראם]].

==חסרונות הסיווג==
לסיווג לנספילד מספר חסרונות בולטים.
* **העדר רזולוציה מספקת** - את מרבית החיידקים ששייכים למשפחת ה-Streptococcaceae **לא** ניתן לאפיין לרמת המין על ידי ביצוע סיווג לנספילד, היות שקיימים מספר מינים שחולקים אנטיגנים סוכריים זהים. כך למשל החיידק ''Streptococcus dysgalactiae'' עלול להכיל אנטיגנים סוכריים מקבוצה A, C, G ו-L ואילו החיידק ''Streptococcus anginosus'' עלול להכיל אנטיגנים סוכריים מקבוצה A, C, G ו-F. 
* **סטרפטוקוקים מחוץ לסיווג לנספילד*' - החיידקים *Streptococcus pneumoniae*, *Streptococcus mitis* ו-*Streptococcus mutans* אינם מכילים אנטיגנים סוכריים ייחודיים על גבי הדופן שלהם ולפיכך אינם ניתנים לסיווג בשיטת לנספילד כלל.
על מנת להתגבר על החסרונות הללו יש צורך לבצע מבחנים ביוכימיים נוספים, או [[ביולוגיה מולקולרית|מולקולריים]] על מנת לזהות את המין הספציפי של החיידק.

==חיידקים לפי סיווג לנספילד==
להלן הסיווג של חיידקי משפחת Streptococcaceae ו-Enterococcaceae לפי שיטת לנספילד:


==ראו גם==
* *Streptococcus''
* מבחן CAMP

## קישורים חיצוניים
* 

## הערות שוליים

קטגוריה:ערכים שבהם תבנית בריטניקה אינה מתאימה
קטגוריה:ביולוגיה: שיטות ומכשור
קטגוריה:בקטריולוגיה