Hemateína ácida de Baker

A **hemateína ácida de Baker** é unha técnica histolóxica para evidenciar a presenza de fosfolípidos. O método foi creado por J.R. Baker en 1946, e baséase na reacción da hemateína co radical fosfato, aínda que non está totalmente demostrado. Resulta útil no estudo histolóxico do cerebro, así como en estudos hematolóxicos.

## Fundamento 
Os tecidos, para obter resultados óptimos, deben fixarse en solución formol-calcio de Baker para prever a disolución dos fosfolípidos. Os tecidos son entón cromados, co cal os fosfolípidos e outras substancias ácidas non lipídicas forman complexos de quelato.

A especificidade tintorial para fosfolípidos foi cuestionada. Se as técnicas de hemateína ácida se empregan en tecido cerebral, pódese apreciar unha diferenza entre a materia gris e a materia branca, aínda que as análises químicas de ambas as dúas amosan unha pequena diferenza na cantidade de fosfolípidos e lípidos non saturados entre a materia gris e branca. Algúns estudos indican que o compoñente de fosfolípidos non é tan importante coma a cantidade real de lípidos. A mielina presente en grandes cantidades na materia branca é unha estrutura multilaminar, e crese que esta configuración pode agarrar aos ións cromo nunha estrutura estable e tridimensional, que é resistente ao paso da tintura.

Os eritrocitos tamén se tinguen con métodos de hemateína ácida, e foi formalmente asumido que este tinguido se atribuía ao contido fosfolípido do eritrocito. O feito de que a coloración de eritrocitos estivese presente mesmo despois de procesos de extracción de lípidos, significa que o fosfolípido presente estaba fortemente suxeito ao tecido da proteína. Análises bioquímicas revelaron que menos do 1% do peso seco é fosfolípido, e traballos posteriores demostraron que a hemoglobina presente é o compoñente responsable para a coloración positiva con métodos de hemateína ácida. Isto, abofé, indica que as probas tales como a hemateína ácida de Baker non son nin sensibles nin específicas para fosfolípidos.

## Tecido control e diana 
O tecido que se debe empregar para esta técnica é o tecido adiposo que é o que ten maior concentración de fosfolípidos.

## Fixador óptimo 
O fixador ideal para este tipo de técnica é unha solución de formol-calcio.
Débese aclarar que a formalina neutra estabilizada tende a remover os fosfolípidos dos tecidos. Porén, o formol-calcio, cando é usado despois da formalina neutra, pode preservar os fosfolípidos. Ás veces, os fosfolípidos poden ser demostrados en seccións de parafina fixadas en formalina neutra.

Para a súa preparación mesturamos (para 100cc):
# 10cc de formaldehido ao 40%
# 10cc cloruro anhídrido de calcio ao 10%
# 80cc de auga destilada

## Grosor do tecido 
O material que se utilice deberá ter un grosor de 6 a 12 microns e realizaranse os cortes sobre tecido conxelado.

## Reactivos 
# Dicromato de Potasio ó 5%
## 5gr. Dicromato potásico
## 1gr. Cloruro de calcio
## 100cc auga destilada

# Hemateína ácida:
## 0,05gr. Hematoxilina
## 1cc Ioduro de Sodio ó 1%
## 1cc Ácido acético glacial
## 48cc auga destilada
Preparación: Conservar a hematoxilina e o ioduro de sodio nun matraz; engadir a auga, quentar ata ebulición; arrefriar; engadir ácido acético. Usar unha única vez, xa que a solución non é estable.

# Solución diferenciadora (é estable, pero debe gardarse na escuridade):
## Borax 0.25gr.
## Ferrocianuro potásico 0.25gr.
## 100cc auga destilada H2OD100ml

## Procedemento 
### Preparación da mostra 
A mostra require preparación previa:
# Fixar as pequenas pezas de tecido en formol-calcio durante 6 horas. Este tempo pode prolongarse.
# Introducir na solución de dicromato e cloruro de calcio durante 18h. a temperatura ambiente.
# Introducir os bloques na solución de dicromato fresca, durante 24h. a 60º.
# Lavar o tecido en auga durante 6 horas.
# Obter seccións por conxelación de 6 a 12 microns.

### Método de tinguidura 
A técnica de tinguidura é como segue:
# Colocar as seccións na solución de dicromato e cloruro de calcio durante 1 hora a 60&nbsp;°C.
# Lavar en auga corrente durante 5 minutos, enxaugar con auga destilada.
# Colorar as seccións coa hematina ácida durante 5 horas a 37&nbsp;°C.
# Enxaugar as seccións con auga destilada, 2 cambios e distinguir coa solución de ferrocianuro de bórax 18 horas a 37&nbsp;°C.
# Lavar en auga corrente durante 10 minutos; enxaugar con auga destilada.
# Montar en xelatina de glicerol.

### Resultados 
# Fosfolípidos: azul-negro
# Fondo: marrón-amarillo
# Nucleoproteínas: azul-negro

## Notas 
## Véxase tamén 
### Outros artigos 
* Hematoxilina eosina
* Técnica de Papanicolaou
* Técnica de Romanowsky

### Bibliografía 
* 
* 
*