Gene targeting

[miniatura | Un rato [quimera (xenética)|quimera que foi sometido ao *gene targeting* para a o xene da cor *agouti*, coa súa descendencia.]]

A técnica do ***gene targeting*** (tamén chamada estratexia de substitución baseada na recombinación homóloga) é unha técnica xenética que utiliza a recombinación homóloga para cambiar un xene endóxeno. O método pode utilizarse para eliminar un xene (deleción dun xene), eliminar exóns, engadir un xene, e introducir mutacións puntuais. Este termo utilízase maioritariamente na literatura así tal como se di en inglés e significa **modificación xenética dirixida** a un xene determinado (*targeting* é seleccionar ou apuntar a un obxectivo).

O *gene targeting* pode ser permanente ou condicional. As condicións poden ser específicas dun determinada momento do desenvolvemento ou vida do organismo ou limitadas a un tecido específico do corpo, por exemplo. A técnica require a creación dun vector específico para cada xene que interese, pero pode ser utilizada para calquera xene, sen importar a súa actividade transcricional ou tamaño.

Mario R. Capecchi, Martin J. Evans e Oliver Smithies foron galardoados co Premio Nobel de Medicina de 2007 polos seus traballos sobre os "principios para introducir modificacións en xenes específicos en ratos utilizando células nai embrionais", ou *gene targeting*.

## Métodos 
Os métodos desta técnica foron establecidos para varios organismos modelo e poden variar dependendo da especie utilizada. En xeral, xérase en bacterias un construto de *targeting* feito de ADN, que contén xeralmente parte do xene ao que vai ir dirixido, xunto cun xene reporteiro, e un marcador seleccionable (dominante).

Para aplicar o *gene targeting* a xenes do rato, este construto insírese despois en células nai embrionarias de rato en cultivo. Despois, selecciónanse as células que teñen a inserción correcta, que poden ser utilizadas para contribuír a formar un tecido do rato por medio dunha inxección no embrión. Finalmente, selecciónanse os ratos quimera nos que as células modificadas orixinaron os órganos reprodutores por medio de cruzamentos entre os animais. Unha vez conseguido iso, todo o corpo do rato está baseado no xenoma das células nai embrionarias previamente seleccionadas.

Para aplicar o *gene targeting* a xenes do musgo *Physcomitrella patens*, este construto incúbase xunto con protoplastos acabados de illar e
con polietilenglicol. Todos os gametófitos de musgos son organismos haploides, e a formación dos filamentos da planta chamados protonemas pode ser estudada directamente por medio do *gene targeting*, aplicando un tratamento con antibióticos ou por PCR. Esta é a única planta en que se aplicou este procedemento de xenética inversa, que é tan eficiente coma en lévedos.
Utilizando modificacións destes procedementos, o *gene targeting* foi tamén aplicado con éxito en vacas, ovellas, porcos e moitos fungos.

A frecuencia do *gene targeting* pode ser aumentada significativamente utilizando endonucleases obtidas por enxeñaría como nucleases dedos de cinc, endonucleases *homing*, e nucleases baseadas en efectores TAL obtidos por enxeñaría. Ata agora, este método con nucleases foi aplicado a varias especies, como a mosca *Drosophila melanogaster*,
, millo, células humanas, ratos, e ratas.

## Notas
## Véxase tamén
### Outros artigos
* Gene trapping (técnica de knockout de xenes aleatoria)
* Recombinación xenética
* Recombinación homóloga
* Receptor de tipo Toll (exemplo de xene ao que se lle aplicou o gene targeting para a análise)
* Knockout de xenes

### Ligazóns externas
* guide to gene targeting da University of California, San Diego
* outline of gene targeting  da University of Michigan
* gene targeting diagram & summary do Heydari lab, Wayne State University 
* gene targeting vectors do inGenious Targeting Laboratory 
* research highlights on reporter genes usados en gene targeting **Negra**
* gene replacement in barley