NOSIP

**Protein u interakciji s dušik-monoksid sintazom** je enzim koji je kod ljudi kodiran genom **NOSIP**.
## Kloniranje i ekspresija
Korištenjem domena oksigenaze ljudskog ENOS (NOS3) kao mamca na 2-hibridnom ekranu kvasca u biblootetici posteljične cDNK, Dedio et al. (2001) klonirali su NOSIP. Izvedeni protein od 301 aminokiseline ima izračunatu molekulskuu masu od 34 kD. NOSIP dijeli 46% i 29% aminokiselinskih identiteta sa ortolozima *C. elegans* i *A. thaliana*. Northern blot analizom otkriven je 1,2 kb NOSIP-ov transkript koji je bio izrazito eksprimiran u ljudskom srcu i mozgu, s nižim nivoima u plućima i skeletnim mišićima. U bubrezima, jetri, gušterači i slezeni nije otkrivena bilo kakva ekspresija. Imunohistokemijska analiza pacovskovg srca otkrila je obilnu ekspresiju Nosipa u endotelnim ćelijama srčane mikrovaskulature. Western blot analiza ljudskih vaskulsdkih endotelnih ćelija pokazala je NOSIP pri prividnoj molekulskoj masi od 34 kD.

## Aminokiselinska sekvenca
;Simboli

**C**:  Cistein 
**D**: Asparaginska kiselina 
**E**: Glutaminska kiselina 
**F**:  Fenilalanin 
**G**:  Glicin 
**H**:  Histidin 
**I**:  Izoleucin 
**K**: Lizin 
**L**: Leucin 
**M**:  Metionin 
**N**:  Asparagin 
**P**:  Prolin 
**Q**:  Glutamin 
**R**:  Arginin 
**S**:  Serin 
**T**:  Treonin 
**V**:  Valin 
**W**:  Triptofan 
**Y**:  Tirozin

1020304050
MTRHGKNCTAGAVYTYHEKKKDTAASGYGTQNIRLSRDAVKDFDCCCLSL
QPCHDPVVTPDGYLYEREAILEYILHQKKEIARQMKAYEKQRGTRREEQK
ELQRAASQDHVRGFLEKESAIVSRPLNPFTAKALSGTSPDDVQPGPSVGP
PSKDKDKVLPSFWIPSLTPEAKATKLEKPSRTVTCPMSGKPLRMSDLTPV
HFTPLDSSVDRVGLITRSERYVCAVTRDSLSNATPCAVLRPSGAVVTLEC
VEKLIRKDMVDPVTGDKLTDRDIIVLQRGGTGFAGSGVKLQAEKSRPVMQ
A

## Funkcija gena
Koristeći uzajamnu koimunoprecipitaciju i Western blot analizu, Dedio i et al.  (2001) potvrdili su interakciju između ENOS i NOSIP u kotransficiranim COS-7 ćelijama. Delecijska analiza pokazala je da je NOSIP vezao C-terminalni dio domena ENOS-oksigenaze u regiji koja se preklapala sa mjestom vezanja za kaveolin plazmamembrane. Prekomerna ekspresija NOSIP-a smanjila je proizvodnju dušik-oksida stimuliranu kalcijem u ćelijama jajnika kineskog hrčka (CHO) koje eksprimiraju ENOS. Prekomerna ekspresija NOSIP-a također je smanjila lokalizaciju ENOS-a u membrani ćelija CHO, uzrokujući prelazak sa frakcija membrane bogatih kaveolinom u unutarćelijske odjeljke. Dedio et al. (2001) zaključili su da NOSIP promovira translokaciju ENOS-a iz plazemamembrane na unutarćelijska mjesta, čime inhibira sintezu dušik-oksida.
Koristeći afinitetnu hromatografiju i masenu spektrometrijsku analizu, Hoffmeister et al. (2014) otkrili su da je Nosip miš stupio u interakciju sa kompleksom proteinske fosfataze-2A (PP2A) koji sadrži katalitske podjedinice Pp2aca (PPP2CA) i Pp2acb (PPP2CB), podjedinicu skele Pr65-alfa (PPP2R1A) i regulatornu podjedinicu Pr55-alfa (PPP2R2B). Eksperimenti s povlačenjem proteina potvrdili su da je Nosip taložio holoenzim PP2A. Analiza ubikvitinacije *in vitro* pokazala je da je Nosip djelovao kao E3 ubikvitin-ligaza u monoubikvitinaciji katalitske podjedinice PP2A. Monoubikvitinacija nije uzrokovala proteasomsku degradaciju PP2A, ali izgleda da je smanjila aktivnost PP2A, putem nerazgradivog mehanizma.

## Životinjski model
Koristeći carski rez, Hoffmeister et al. (2014) dobili su mišje  embrione Day-18,5 Nosip –/–  u mendelovskom omjeru, ali svi su umrli nedugo nakon rođenja, sa znakovima respiratornog distresa i cijanoza, vjerovatno zbog poteškoća s disanjem uzrokovanih ozbiljnim kraniofacijalnim malformacijama. Malformacije u miševa Nosip –/– kretale su se od očnog hipotelorizma, uske njuške, bočnog rascjepa usne i rascjepa sekundarnog nepca, do ciklopije i prisustva proboscisa ili pojedinačne izbočine nalik glavi bez likova lica. Analiza morfologije prednjeg mozga kod miševa Nosip –/–  pokazala je karakteristična obilježja holoprosencefalije. Hoffmeister et al. (2014) otkrili su da je nedostatak Nosipa u tkivima Nosip –/– - nepca i lica, ali ne i u neoštećenom tkivu Nosip –/– pluća, povezan s povećanom aktivnošću PP2A.

## Reference
## Dopunska literatura
*
*
*
*
*
*

Kategorija:Geni
Kategorija:Ljudski proteini
Kategorija:Geni na hromosomu 19