Imunohistohemija

**Imunohistohemija** (**IHC**)   je  istovremeno i nauka o istoimenoj  oblasti i proces otkrivanja  antigena (tj.  proteina) u ćelijama, nakon  disekcije tkiva koja korist princip vezanja antitijela, posebno za antigene u bioloških tkiva e.  IHC je imenovana  po  korijenu "imuno", u odnosu na antitijela se koriste u postupku  i "histo," što znači tkivo (u odnosu na imunocitohemiju. Postupak je koncipirao  i prvi implementirao Albert Coons, 1941.

Imunohistohemijsko  bojenje se naširoko koristi u dijagnostici abnormalnih ćelija, kao što su one koje  se nalaze u kancerogenim  tumorima. Specifični molekulski markeri  su karakteristični za određene ćelijske  aktivnosti,  kao što su proliferacija ili smrt ćelija (apoptoza). Imunohistohemija se naširoko koristi u osnovnim istraživanjima da shvate distribuciju i lokalizaciju biomarkera i različito izraženih proteina u različitim dijelovima bioloških tkiva.

Vizualizacija interakcije antitijelo-antigen se može postići na nekoliko načina. Najčešći primjer je da se antitijela konjugiraju na enzim, kao što je peroksidaza, koji može  katalizirati reakcije koje proizvode boju. Alternativno, antitijela mogu također biti označena  fluoroforama, kao što su florescein ili rodamin.

## Priprema uzorka
Priprema uzorka je ključna  za ispoljavanje  ćelijske  morfologije, arhitekture tkiva i antigenosti ciljnih epitopa. To zahtijeva pravilno prikupljanju tkiva, fiksaciju i sekcioniranje.  Za  fiksiranje  tkiva, često se koristi rastvor  paraformaldehida, ali se mogu  koristiti i druge supstance. Tkivo  se onda može rezati  ili koristiti cijelo, što ovisi o cilju eksperimenta ili samog tkiva. Prije sekcioniranja, uzorak tkiva može biti ugrađen u medij, kao što je parafinski  vosak ili ledeni kriomedij. Sekcije mogu biti odsijecane raznim instrumentima, a najčešće su to  mikrotom ili kriostat, a nareže se niz presjeka debljine 4-40 μm. Te kriške se onda montiraju na slajdovima i dehidriraju i peru, koristeći  seriju rastućih koncentracija alkohola, kao naprimjer:  50%, 75%, 90%, 95%, 100%. Zatim se preparati očiste  pomoću deterdženta kao šti je  ksilen prije nego što je snimaju pod mikroskopom.
Ovisno o načinu fiksiranja i čuvanja tkiva, uzorak može zahtijevati dodatne korake kako bi  epitopi bili  na raspolaganju za vezanje  antitijela, uključujući  otklanjanje parafina  i pronalaženje antigena. Za formalinom fiksiranana parafinizirana tkiva, često je potrebno  tragač  antigenima, što  i uključuje prethodno tretiranje preparata zagrijavanjem  ili proteazama.  Ovi koraci mogu napraviti razliku između  stanja koje pokazuje da li su ciljni  antigeni obojeni ili ne .

Ovisno o prirodi  tkiva i metodu otkrivanja antigena,  može biti  biti potrebno da se, prije bojenja antitijela,  blokiraju ili ugase endogeni  biotin ili enzimi.

Iako antitijela pokazuju preferencijalni afinitet   za specifične epitope, mogu se  djelomično ili slabo vezati  za mjesta na nespecifičnim proteinima (koja se naziva reaktivna mjesta) koji su slična i srodna mJesta vezanja ciljnog antigena. Veliki iznos nespecifičnih vezanja uzroka visokog  obojenja će maskirati stvarno stanje i otežati otkrivanje ciljnog antigena. Da bi se smanjila boja  pozadine IHC, primjenjuju se  ICC i drugi imunobojeći metodi,  tako da se uzorci se inkubiraju sa tamponom koji blokira reaktivne lokacije na koje se primarno ili sekundarno antitijela mogu  drugačije vezati. Zajedničko blokiranja  u Western blot postupku  uključujde normalni serum, nemasno suho mlijeko, BSA ili želatin.  Za postizanje veće efikasnosti,  dostupni su komercijalne vlasničke formulacije.  Metodi za otklanjanje pozadine bojenja uključuju razrjeđivanje primarnog ili sekundarnog antitijela, promjenom vremena ili temperature inkubacije i korištenjem drugačiji sistem za detekciju ili različita primarna antitijela. Kontrola kvaliteta treba,  kao minimum,  uključivati tkiva poznate ekspresije antigena kao pozitivnu kontrolu.Potrebno  je i negativno  kontrolno tkivo za koje je poznato  da  ne ispoljava antigen, kao i test tkivo koje ispitivno na isti način sa propuštanjem  primarnog antitijela (ili bolje apsorpcija primarnog antitijela).

## Također pogledajte
* Citohemija
* Hromogena in situ hibridizacija

## Reference
## Vanjski  linkovi
* 
* Overview of Immunohistochemistry--describes all aspects of IHC including sample prep, staining and troubleshooting 
* IHC Tip 1: Antigen retrieval - should I do PIER or HIER?
* Histochemical Staining Methods - University of Rochester Department of Pathology
* Immunohistochemistry Staining Protocol 
* 
* 
* 

Kategorija:Imunohistohemija
Kategorija:Histologija
Kategorija:Imunološki testovi
Kategorija:Proteinski metodi
Kategorija:Anatomska patologija
Kategorija:Bojenje
Kategorija:Laboratorijske tehnike
Kategorija:Patologija