TCEP

TCEP(트리스(2-카복시에틸)포스핀)은 생화학 및 분자생물학 응용 분야에서 자주 사용되는 환원제이다. 종종 분자량이 286.65g/mol인 염산염 (염)(TCEP-HCl) 형태로 제조 및 사용된다. 물에 용해되며 중성 pH에서 안정화된 용액으로 제공되고, 환원제 제거를 용이하게 하기 위해 아가로스 지지체에 고정화된다.

합성
TCEP는 트리스(시아노에틸)포스핀의 산 가수분해에 의해 제조될 수 있다.

응용
TCEP는 겔 전기영동의 전처리 단계로 단백질 내외부의 다이설파이드 결합을 끊는 환원제로 자주 사용된다.

이 목적으로 사용되는 다른 두 가지 가장 일반적인 시약(다이티오트레이톨 및 β-머캅토에탄올)과 비교할 때, TCEP는 무취, 더 강력한 환원제, 비가역적인 환원제(TCEP는 재생되지 않으며, TCEP 매개 다이설파이드 분열의 최종 산물은 실제로 두 개의 유리 티올/시스테인이다), 더 친수성, 그리고 공기 중 산화에 더 강한 이점이 있다.TCEP technical information, from Interchim 또한 고정화 금속 친화성 크로마토그래피에 사용되는 금속을 환원시키지 않는다.

TCEP는 말레이미드로 시스테인 잔기를 표지할 때 특히 유용하다. TCEP는 시스테인이 다이설파이드 결합을 형성하는 것을 막을 수 있으며, 다이티오트레이톨 및 β-머캅토에탄올과는 달리 말레이미드와 쉽게 반응하지 않는다. 그러나 특정 조건에서 TCEP가 말레이미드와 반응한다는 보고가 있다.

TCEP는 RNA 분리를 위한 조직 균질화 과정에서도 사용된다.

자외선 가시광선 분광법 응용 분야에서 TCEP는 다이티오트레이톨에서 발생할 수 있는 250~285나노미터 범위의 간섭 흡수를 피하는 것이 중요할 때 유용하다. 다이티오트레이톨은 다양한 산화 환원 반응이 일어나면서 시간이 지남에 따라 이 스펙트럼에서 점점 더 많은 빛을 흡수한다.

역사
트라이알킬포스핀을 이용한 생체 분자의 환원은 수십 년 동안 거의 주목받지 못했는데, 그 이유는 역사적으로 사용 가능했던 포스핀이 극도로 악취가 나거나 물에 녹지 않았기 때문이다. 1969년에 TCEP는 생화학적 사용에 적합한 무취의 수용성 트라이알킬포스핀으로 보고되었지만, TCEP의 생화학적 응용 가능성은 수십 년 동안 거의 무시되었다. 1991년에 번스(Burns)는 TCEP에 대한 새롭고 편리한 합성 절차를 보고했으며, 이는 TCEP가 더욱 널리 이용 가능해지고 생화학적 용도의 "새로운" 환원제로 판매되도록 하여 1990년대 전반에 걸쳐 TCEP가 더 널리 사용되게 했다.

반응
TCEP는 물 존재하에 이황화물을 티올로 환원시킨다.
TCEP 반응은 이황화 결합을 환원시키는 것을 보여준다

유사한 과정을 통해 설폭사이드 및 N-산화물도 환원시킬 수 있다. 일부 다른 부작용도 보고되었다.
 TCEP와 열(90°C) 존재 하에 시스테인 잔기가 알라닌으로 전환된다.
 온화한 조건에서 시스테인 잔기에서 단백질 골격이 느리게(그러나 유의미하게, 4°C에서 2주 보관 시 40% 분열 보고됨) 절단된다.

생물학 연구에서의 사용
TCEP는 염산염 형태로 다양한 화학 물질 공급업체에서 구할 수 있다. 물에 용해될 때 TCEP-HCl은 산성이다. 보고된 제조법은 0.5 M TCEP-HCl 수용액으로, 중성 pH에 가깝게 pH를 조절하고 -20°C에서 동결 보관한다. TCEP는 인산염 완충액에서 안정성이 떨어진다고 보고되었다.

 같이 보기 
 2-머캅토에탄올 (BME)
 다이티오트레이톨 (DTT)
 다이티오부틸아민 (DTBA)

 각주 

분류:카복실산
분류:환원제