파-웨스턴 블롯

파-웨스턴 블롯()은 시험관에서 단백질-단백질 간의 작용을 확인하기 위한 것으로 웨스턴 블롯 기술에 기반을 둔다. 일반적인 웨스턴 블롯이 관심있는 단백질을 검출하는데 항체를 이용하는 반면, 파-웨스턴 블롯은 관심 단백질과 반응할 수 있는 항체가 아닌 단백질을 이용한다. 그러므로 웨스턴 블롯이 특정 단백질의 검출에 이용된다면, 파-웨스턴 블롯은 단백질-단백질 반응을 검출하는데 이용된다.

 방법 
전통적인 웨스턴 블롯에서, 겔 전기 이동법이 샘플로부터 단백질을 분리하기 위해 이용된다. 이 단백질들은 블롯팅 단계에서 막으로 옮겨진다. 웨스턴 블롯에서 특정 단백질들은 항체를 이용해 감지된다.

파-웨스턴 블롯은 블롯에서 관심 단백질을 탐침하기 위해 비-항체 단백질을 이용한다. 이 방법을 통해, 결합하는 단백질이 확인될 수 있다. 탐침 단백질 은 주로 발현 벡터를 이용하는 대장균(E. coli)에서 생성된다. 세포 용해물에 있는 먹이 단백질을 포함한 단백질들은 처음에는 SDS나 native PAGE로 분리되고, 일반적인 웨스턴 블롯과 마찬가지로, 막으로 옮겨진다. 막의 단백질은 변성-재생 과정을 거친다. 막은 그 후 블로킹 이후 미끼 단백질(베이트 단백질, bait protein)로 탐침한다. 먹이 단백질과 미끼 단백질이 반응하여 화합물을 형성하면, 그 먹이 단백질이 있는 막 위치에 미끼 단백질이 검출된다. 

탐침 단백질은 일반적인 방법으로 가시화 할 수 있다. 방사성 동위원소 표지나, His나 FLAG같은 태깅을 가능한 경우에 이용하기도 하며, 탐침 단백질에 대한 특정 항체를 이용할 수도 있다.

세포 추출물은 보통 겔 전기영동 전에 세제 안에서 끓임으로써 완전히 변성되기 때문에, 이러한 접근법은 단백질의 원래의 접힌 구조를 필요로 하지 않는 경우의 반응을 감지하는데 매우 유용하다.

 같이 보기 
 이스턴 블롯
 서던 블롯
 노던 블롯
 웨스턴 블롯
 노스웨스턴 블롯

분류:생명공학
분류:분자생물학 기술
분류:단백질 기법