融解曲線解析

融解曲線解析（ゆうかいきょくせんかいせき、英: Melting curve analysis）とは、PCR産物の融解温度（）の違いを利用してDNA断片の特性や増幅産物の特異性を評価する解析手法であり、主にリアルタイムPCRにおいて増幅産物の特異性確認などに用いられる。

 原理 
二本鎖DNAは加熱により一本鎖へと解離（融解）するが、その温度（融解温度、Tm）は塩基配列、GC含量、断片長などに依存する。融解曲線解析では、二本鎖DNAに結合する蛍光色素（SYBR Green など）を用い、温度を徐々に上昇させながら蛍光強度の変化を測定することで、PCR産物の融解挙動を解析する。

特定の温度で急激に蛍光が減少する点が融解温度として検出され、これにより増幅産物の特異性の確認や、配列差異の検出が可能となる。

 応用 

 特異性確認 
リアルタイムPCRにおいて、融解曲線解析は増幅産物の特異性確認に広く用いられる。特異的なPCR産物は一定の融解温度（Tm）に対応する単一のピークを示すのに対し、非特異的増幅産物やプライマーダイマーが存在する場合には複数のピークが観察されることがある。このため、電気泳動を行わずに増幅産物の品質を評価する手法として利用されている。

 SNP検出 
単一塩基多型（SNP）などの塩基配列の差異は、DNA断片の融解温度にわずかな変化を生じさせる。この性質を利用して、融解曲線解析により遺伝子型の判別や変異の検出が行われることがある。特に短いPCR産物を用いることで、塩基置換による融解温度の差を検出しやすくなる。

 高分解能融解曲線解析（HRM）との関係 
融解曲線解析を高精度に行う手法として、高分解能融解曲線解析（High Resolution Melting, HRM）が開発されている。HRMでは温度制御および蛍光測定の分解能を高めることにより、塩基配列のわずかな差異による融解挙動の違いを検出することが可能であり、変異検出、遺伝子型判定、メチル化解析などに応用されている。

 関連項目 
 リアルタイムPCR
 高分解能融解曲線解析
 ポリメラーゼ連鎖反応

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