高分解能融解曲線解析

高分解能融解曲線解析（こうぶんかいのうゆうかいきょくせんかいせき、、HRM）とは、リアルタイムPCRで増幅したDNA断片の融解挙動を高精度に解析し、塩基配列の違いや遺伝子変異を検出する手法である。

 概要 
HRMでは、二本鎖DNAに結合する蛍光色素を用いてPCR増幅を行い、その後温度を徐々に上昇させながら蛍光強度の変化を測定する。DNAは塩基配列、長さ、GC含量などに応じて異なる融解温度（Tm）を示すため、融解曲線の形状を比較することで配列差を検出できる。

HRMはプローブを必要とせず、PCR後に追加操作を行わず解析できるため、遺伝子多型解析、変異スクリーニング、メチル化解析などに利用される。

 原理 
PCR産物の温度上昇に伴い、二本鎖DNAが一本鎖へ解離すると、インターカレーター型蛍光色素の蛍光が減少する。この蛍光変化を高分解能で測定し、得られた融解曲線を比較することで、わずかな配列差も識別可能となる。

高分解能融解解析の成立には、温度制御精度の向上や飽和型蛍光色素の導入などの技術的進歩が寄与しており、変異スクリーニングの迅速化と低コスト化が可能となった。

 利点と制限 
利点
 プローブを必要とせず低コストである
 PCR後のチューブ開封が不要であり、コンタミネーションのリスクが低い
 迅速な変異スクリーニングが可能である

制限
 変異の種類や位置を直接同定することはできず、確定にはシークエンス解析などが必要となる
 断片長やPCR条件に結果が影響される場合がある

 関連項目 
 リアルタイムPCR
 DNA融解曲線
 遺伝子多型
 融解曲線解析

 参考文献 

Category:分子生物学
Category:遺伝学
Category:ポリメラーゼ連鎖反応