エルマン試薬

エルマン試薬（イールマン試薬、英：Ellman's reagent、DTNB）とは、試料中のチオール（R-SH）の濃度を測定するための試薬。ジョージ・L・エルマン（George L. Ellman）によって開発された。

合成
エルマンによる論文では、5-クロロ-2-ニトロベンズアルデヒドのアルデヒド基を酸化することでカルボン酸とし、硫化ナトリウムによってクロロ基をチオールへと置換し、ヨウ素での酸化によってチオール同士をカップリングさせて得られた Ellman GL (1959). "Tissue sulfhydryl groups". Arch. Biochem. Biophys. 82 (1): 70–7. doi:10.1016/0003-9861(59)90090-6. 。今日では、化学物質販売店で得ることができる。

エルマン法
チオールはエルマン試薬と反応すると、ジスルフィド結合を分離し2-ニトロ-5-メルカプト安息香酸（TNB）を生成する。1モルのチオール試料から1モルのTNBが即座に生成されるため、TNBの吸光度（λmax=412 nm、ε=14,150 M-1cm-1）からチオールの濃度を測定することができるCollier HB (1973). "Letter: A note on the molar absorptivity of reduced Ellman's reagent, 3-carboxylato-4-nitrothiophenolate". Anal. Biochem. 56 (1): 310–1. doi:10.1016/0003-2697(73)90196-6. Riddles PW, Blakeley RL, Zerner B (1983). "Reassessment of Ellman's reagent". Meth. Enzymol. Methods in Enzymology 91: 49–60. doi:10.1016/S0076-6879(83)91010-8. ISBN 978-0-12-181991-0. 。


エルマン試薬は自由チオール基の共役塩基（R-S-）と反応するため、溶液は弱塩基性であるか、もしくは還元剤を利用する必要がある。その他、チオール基のpKaや立体・電気障害に影響を受ける。TNBのモル吸光係数はpH 7.6からpH 8.6の間では一定だが、高い塩濃度など溶質の組成によって変化することがある。

{| class="wikitable"
|+ 異なる溶質におけるモル吸光率
! 溶質!! モル吸光係数（412 nm）
|-
| 0.1M リン酸緩衝液、pH 8.0、1mM EDTA || 14,150
|-
| 2% SDS || 12,500
|-
| 6M 塩化グアニジニウム || 13,700
|-
| 8M 尿素 || 14,290
|}

利用
エルマン法は、血中グルタチオン濃度Sedlak J, Lindsay RH (1968). "Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellman's reagent". Anal. Biochem. 25 (1): 192–205. doi:10.1016/0003-2697(68)90092-4. などの低分子量のチオール濃度を測定するのに適している。またチオール基を生成する生化学反応の反応速度を測定Gokhale RS, Hunziker D, Cane DE, Khosla C (1999). “Mechanism and specificity of the terminal thioesterase domain from the erythromycin polyketide synthase”. Chem. Biol., Volume 6, Issue 2, Pages 117–125. DOI: 10.1016/S1074-5521(99)80008-8したり、タンパク質上のチオール基の数を測定Riener CK, Kada G, Gruber HJ (2002). "Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4'-dithiodipyridine". Anal. Bioanal. Chem. 373 (4–5): 266–76. doi:10.1007/s00216-002-1347-2. するのに利用されている。

脚注

外部リンク
Ellman's Reagent（DTNB） – Thermo Scientific
DTNB（分析用試薬） - 同仁化学研究所

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