Isolasi RNA

Isolasi RNA Adalah proses yang dilakukan untuk memperoleh molekul RNA murni dari jaringan atau sel, sehingga dapat digunakan untuk analisis lanjut. Tahapan isolasi RNA dimulai dengan lisis sel (penghancuran sel) untuk mengeluarkan isi di dalamnya, selanjutnya dilakukan pemisahan RNA dari komponen lain seperti DNA dan protein. Tahapan berikutnya yaitu pemurnian agar didapatkan RNA yang benar-benar bersih dan berkualitas baik untuk keperluan penelitian. Proses isolasi RNA berperan penting dalam bidang biologi molekuler karena membantu peneliti memahami mekanisme kerja gen, aktivitas sel, serta berbagai faktor yang berkaitan dengan penyakit.

 Prinsip isolasi RNA 
Prinsip dasar isolasi RNA yaitu memisahkan dan memurnikan molekul RNA dari komponen biomolekul lain seperti DNA dan protein. Proses ini diawali dengan penghancuran sel (lisis) untuk melepaskan seluruh isi sel, kemudian dilanjutkan dengan pemanfaatan perbedaan tingkat kelarutan antara RNA dan molekul lain menggunakan larutan kimia, misalnya TRIzol, Trizol adalah larutan asam yang mengandung guanidinium tiosianat (GITC), fenol, dan kloroform. GITC akan mendenaturasi protein dan RNase secara ireversibel. Proses ini disertai dengan sentrifugasi. Dalam kondisi asam, total RNA tetap berada di fase air atas, sementara sebagian besar DNA dan protein tetap berada di interfase atau fase organik bawah. Selanjutnya total RNA dimurnikan dengan presipitasi menggunakan isopropanol. Enzim RNase dapat diinaktivasi dengan penambahan dietil pirokarbonat (DEPC). Pada kondisi asam, RNA cenderung larut dalam fase air, sedangkan DNA dan protein akan berada pada fase organik atau di lapisan antarmuka setelah proses sentrifugasi. Tahapan ini sekaligus berfungsi menonaktifkan enzim RNase yang dapat merusak RNA, sehingga RNA yang diperoleh tetap stabil dan berkualitas baik untuk analisis lebih lanjut. Struktir RNA mirip dengan DNA secara kimiawi, sehingga diperlukan pemanfaatan perbedaan kecil dalam kimia dalam isolasi RNA. Metode nuklease dapat menghilangkan DNA tetapi biayanya sangat tinggi.

Setelah sampel RNA diisolasi, perlu dilakukan pemeriksaan terhadap kualitas RNA, dua cara yang dapat dilakukan untuk mengetahui kualitasnya yaitu spektrofotometri (mesin nanodrop), dan elektroforesis gel. Idealnya kedua metode ini digunakan. Keberhasilan isolasi RNA dipengaruhi oleh beberapa faktor berikut:

 Penonaktifan RNase: Penggunaan reagen denaturan yang kuat dan menjaga kondisi bebas RNase sangat diperlukan.
 Integritas Sampel: Kualitas dan stabilitas sampel biologis sangat memengaruhi hasil akhir.
 Kemurnian dan Kuantifikasi: Kemurnian dan konsentrasi RNA biasanya dinilai menggunakan spektrofotometer UV dengan rasio A260/A280 antara 1,8–2,1 menunjukkan RNA yang sangat murni.

 Pentingnya isolasi RNA 
Hasil isolasi RNA digunakan untuk analisis lanjutan, tujuan utamanya adalah mengetahui secara real-time kondisi genetik dalam suatu sampel. Beberapa kepentingan isolasi RNA diantaranya:

 Deteksi penyakit: apabila terjadi perubahan pada ekspresi gen, maka hal ini dapat menjadi indikator penyakit. isolasi RNA memungkinkan studi tentang bagaimana perubahan tersebut terjadi pada tingkat molekuler.
 Analisis ekspresi gen: mRNA untuk sintesis protein dapat digunakan untuk analisis aktivitas gen.
 Aplikasi hilir: RNA murni digunakan untuk teknik lanjutan seperti RT-qPCR (Reverse Transcription Quantitative Polymerase Chain Reaction) untuk mengukur jumlah RNA, dan transkripsi balik untuk mengubah RNA menjadi cDNA (DNA komplementer) untuk analisis lebih lanjut.

 Referensi