תרגום ניק

תרגום ניק (או תרגום ראש), פותח ב-1977 על ידי ריגבי ופול ברג, הוא טכניקת תיוג בביולוגיה מולקולרית בה DNA פולימראז 1 משמש להחלפת כמה נוקלאוטידים ברצף DNA, באנלוגים מתויגים, ויוצר רצף DNA מתוייג שיכול לשמש כבדיקה בפלואורסצנט באתר הכלאה של טכניקת ספיגה. זה יכול גם לשמש לתיוג-רדיו.

התהליך הזה נקרא תרגום ניק כיוון שה-DNA שיעובד מטופל ב-DNase (-אנזים שמקטלז הידרוליזה של DNA לאוליגונוקלאוטידים ומולקולות קטנות יותר) כדי ליצור גדילי "ניק" בודדים. זה מלווה בהחלפה באתרי ניק על ידי DNA פולימראז 1, שמאריך את קצה 3' הידרוקסיל, מסיר נוקלאוטידים בפעילות 3'-5' אקסונוקלאז, מחליף אותם ב-dNTP (נוקלאוטיד טריפוספאט עם דאוקסיריבוז). כדי לתייג באופן רדיואקטיבי קטע DNA לשימוש כבדיקה בתהליך הספיגה, אחד הנוקלאוטידים המשולבים המסופקים בתגובה רדיו-מתוייג בעמדת פוספאט אלפא. באופן דומה, פלואורופור יכול להיות מחובר במקום תיוג-פלואורסצנטי, או אנטיגן לזיהוי חיסוני.
כאשר DNA פולימראז 1 בסופו של דבר מתנתק מה-DNA, הוא משאיר עוד ניק בשלד הפוספאט. הניק "תרגם" מרחק-מה, כתלות בפרוססיביות של הפולימראז. הניק יכול להיאטם על ידי DNA ליגאז, או קבוצת ההידרוקסיל 3' שלו יכולה לשרת כתבנית לפעילות DNA פולימראז עתידית. תערובות אנזים קנייניות זמינות באופן מסחרי לביצוע כל השלבים בתהליך בהדגרה בודדת.

תרגום ניק יכול לגרום לשבירת DNA דו-גדילית, אם DNA פולימראז 1 נתקל בעוד ניק בגדיל הנגדי, וכתוצאה מכך יש שני קטעים קצרים יותר. זה לא משפיע על הביצועים של הבדיקה המתויגת בהיברידיזציה באתר.

קטגוריה:ביולוגיה מולקולרית