טרנספקציה

טרנספקציה היא תהליך החדרת DNA לתוך תאים אאוקריוטיים. מבדילים בין 2 סוגי טרנספקציה:

טרנספקציה קבועה stable transfection כאשר DNA זר מוחדר לתוך ה-DNA הגנומי של התא ונהיה חלק אינטגרלי ממנו
טרנספקציה חולפת transient transfection כאשר DNA זר לא עובר החדרה לתוך גנום, אלא נמצא מחוצה לו עם מנגנון ביטוי עצמאי. במקרה כזה מקטע DNA יתבטא למשך 24-96 שעות

 שיטות לביצוע טרנספקציה 
ממוזער|220px|החדרת וקטור גנטי לתוך התא תוך שימוש באדנו וירוס כנושא הווקטור במסגרת ריפוי גני.
 באמצעות ליפוזומים (ליפידים קטיוניים)- מולקולות שומניות בעלות מטען חיובי. DNA עובר הדגרה עם ליפוזומים שבמהלכה המטען החיובי שעל גבי הליפוזום נקשר למולקולת DNA שטעונה שלילית. הקומפלקס הנוצר מוסף לתאים ואז החלק ההידרופובי של הליפוזום יוצר אינטראקציה עם ממברנת הפלזמה של התא
 באמצעות Calcium Chloride. הדגרה של DNA עם CaCl יוצר משקע שנבלע על ידי התאים במנגנון של אנדוציטוזה או פאגוציטוזה
 באמצעות פולימרים קטיוניים. פולימרים מסחריים בעלי מטעם חיובי שנקשרים למולקולות DNA ויוצרים קומפלקסים אשר נבלעים על ידי התא במנגנונים של אנדוציטזה או פאגוציטוזה.
 באמצעות מגנט. DNA נקשר לחלקיקי nano אשר תחת תנאים של שדה מגנטי נכנסים לתוך התאים
 באמצעות אלקטרופורציה (הפעלת שדה חשמלי). במהלך הפעלת מתח חשמלי חזק ממברנת הפלזמה של התא מאבדת את היציבות שלה ומולקולות DNA הנמצאות בסביבה חודרות פנימה. לאחר הפסקת המתח הממברנה מתייצבת.
 הזרקה של DNA ישירות לתוך התאים
 הדבקה עם וירוס שלתוכו הושתל DNA

 הבדלים בין טרנספקציה קבועה לבין טרנספקציה חולפת 
 במהלך טרנספקציה קבועה(stable) הDNA הזר עובר אינטגרציה לתוך הגנום של התא באופן אקראי. 
 במהלך טרנספקציה חולפת (transient) ה-DNA הזר מגיע לגרעין אך לא עובר אינטגרציה לתוך הגנום ולא אמור לשבש אותו. במקרה זה הDNA הזר לא עובר לתא בת במהלך החלוקה והתאים נוטים "לזרוק" אותו החוצה.

 לקריאה נוספת 
 http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/10-0826_transfection_tutorial_interactive.pdf
 Tae Kyung Kim & James H. Eberwine, Mammalian cell transfection: the present and the future, Anal Bioanal Chem (2010) 397:3173–3178, DOI 10.1007/s00216-010-3821-6

קישורים חיצוניים


קטגוריה:ביולוגיה מולקולרית