תספיג RNA

תספיג RNA או הספג צפוני (באנגלית: Northern blot) הוא שיטה בביולוגיה מולקולרית לקביעת גודלה ונוכחותה של מולקולת RNA ייחודית. השלבים דומים מאוד לאלה של תספיג DNA.

 השיטה 
בשלב הראשון, מריצים על גבי ג'ל את מולקולות ה-RNA, וכך מפרידים אותן לפי גודלן. כדי לאפשר את התנועה מופעל שדה חשמלי ומולקולות ה-RNA, אשר טעונות שלילית, נודדות מהקוטב השלילי אל החיובי. מידת התקדמות המקטעים נמצאת ביחס הפוך לאורך המקטע (כלומר, מקטעים קטנים יותר יגיעו רחוק יותר). הסיבה לכך היא הגודל - חתיכה ארוכה יותר תתעכב זמן רב יותר בג'ל ותרוץ פחות.

לאחר סיום ההפרדה החשמלית מניחים את הג'ל על גבי ממברנת ניטרוצלולוזה או ממברנת ניילון ובעזרת לחץ או דיפוזיה של נוזלים מעבירים את מולקולות ה-RNA לממברנה. ה-RNA מקובע לניטרוצלולוזה על ידי חימום או לניילון על ידי קרינת UV.

בשלב השלישי, על מנת לאתר את מולקולות ה-RNA הרצויות, מוכנסת הממברנה עם מולקולות ה-RNA לתמיסה המכילה סמנים (probe), אשר מסומנים רדיואקטיבית. הסמנים הם מולקולות רנ"א משלימות למולקולת ה-RNA אותה מחפשים.

לאחר כמה דקות, נשטפת הממברנה מכל הסמנים שלא נקשרו למולקולות RNA. כעת ניתן לזהות את המולקולות הרצויות לנו, בעזרת חשיפה לסרט צילום: הממברנה נחשפת לסרט צילום, ובמקום שבו נמצאת המולקולה המבוקשת נוצרים פסים (בנדים) על גבי סרט הצילום (אלו בעצם הסמנים הרדיואקטיבים). ניתן לדעת את אורכה של מולקולת ה-RNA בהתאם למיקומה היחסי בג'ל (המולקולה רצה בהתאם לאורכה).

קישורים חיצוניים

 הסבר מפורט על התהליך

קטגוריה:ביולוגיה: שיטות ומכשור