Tinguidura de Gram

A tinguidura de Gram ou coloración de Gram é un método utilizado para atopar a presenza de bacterias en mostras histolóxicas. A tinguidura diferencia as bacterias grampositivas (GRAM +) das gramnegativas (GRAM -).

 Fundamento 
Nas mostras histolóxicas non permiten identificar especialmente a bacteria específica, pero si poñer de manifesto a súa presenza no tecido e mostrar algunhas das súas características morfolóxicas básicas. Mediante esta técnica é posible identificar se son cocos (corpos esféricos), bacilos (corpos alongados), ou espiroquetas (corpos enrolados en espiral); e incluso unha vez tinguidos diferenciar as GRAM + (azul), GRAM- (vermello) ou as ácido-alcohol resistentes.

As bacterias GRAM+ posúen unha cápsula rica en grumos susceptibles de formar enlaces estables co violeta de metilo previo tratamento con lugol.

 Preparación da mostra histolóxica 
O fixador ideal para este tipo de técnica é unha solución de formol, e o corte óptimo é de 5 micras.

 Reactivos 
 Violeta de metilo
 100cc Metanol ó 25%
 0,5gr. Violeta de metilo (cristais)

 Iodo de GRAM (Lugol):
 1gr. Iodo
 2gr. Ioduro potásico
 300cc Auga destilada

 Alcohol Iodado
 1cc Tintura de Iodo
 99cc Alcohol absoluto

 Procedemento 
 Desparafinar con xilol (2 cubetas, 3 minutos cada unha) 
 Hidratar con alcohol de 95% e 100% (3 minutos cada un).
 Tinguir coa solución de Violeta de metilo (30 seg.).
 Lavar con auga destilada.
 Lavar con Iodo de Gram (2 min).
 Diferenciar con Alcohol iodado ata que o alcohol quede un pouco tinguido co violeta de metilo.
 Lavar ben con auga destilada (varios baños se é preciso).
 Coloración de contraste con vermello neutro (3min).
 Lavar con auga destilada (un único baño).
 Deshidratar con alcohol de 95% e 100% (3 min cada un).
 Aclarar con xileno (3 min)[2cubetas].
 Montar nun medio resinoso.

 Resultados 
 Bacterias Gram +: negro azulado 
 Bacterias Gram -: vermello

 Véxase tamén 
 Outros artigos 
 Taxonomía bacteriana

 Bibliografía 




Categoría:Tinguiduras histolóxicas
Categoría:Bacterias