Mps1

Mps1 (ka TTK, ESK või PYT) on konserveerunud valgukinaas, mis fosforüürib seriini-, treoniini- ja türosiinijääke. Mps1 osaleb tsentrosoomi/SPB duplikatsioonis, kinetohooride biorientatsioonis ja käävi kontrollpunkti regulatsioonis (SAC). Mps1 talitluse häirumine põhjustab defekte kromosoomide lahknemises ja aneuploidsust.

MPS1 geen esineb enamikus eukarüootides – pärmirakkudest inimeseni. Identifitseeritud on ka ortolooge seentes, selgrootutes (nt Drosophila) ja taimedes.

 Avastamine 
MPS1 geen (inglise monopolar spindle ehk monopolaarne kääv) avastati esmalt pagaripärmis, Saccharomyces cerevisiae'''s. Selle geeni temperatuuritundlik alleel ilmutas sarnast fenotüüpi juba eelnevalt kirjeldatud monopolaarse käävi mutantidega cdc31 ja kar1. Piiraval temperatuuril inkubeerides ning seejärel mikrotuubuleid immunofluorestsentsiga visualiseerides leiti, et mps1-1 alleeliga mutantides esines ebanormaalne käävivalkude organiseerumine ja tulemuseks oli monopolaarse käävi moodustumine. Elektronmikroskoopia paljastas, et mutant põhjustab pärmi tsentrosoomi ehk mikrotuubulite organisatsioonikeskuse kokkupaneku ebaõnnestumist.

Pärast aminohappelise järjestuse kindlakstegemist määratleti eelnevalt identifitseeritud hiire Esk kinaas ja inimese TTK/PYT kinaasid Mps1 ortoloogideks selgroogsetes ning nüüdseks nimetatakse neid vastavalt hiire Mps1 (mMps1) ja inimese Mps1 (hMps1).

TTK avastati inimese kasvajarakkude liinides.

 Struktuur 
Mps1 valguperekonda kuuluvad valgud on 85–95 kDA ning kõigile on omane kõrgelt konserveerunud C-terminaalne kinaasi domeen. N-terminaalsed domeenid on perekonnas vähekonserveerunud ja neil puuduvad ühised motiivid.

 Funktsioonid  

 SAC kontrollpunkt  
Käävi kontrollpunkt (SAC) on signalisatsioonimehhanism, mis teostab mitoosis järelevalvet kromosoomide lahknemise üle. Kui kinetohooridele pole kinnitunud kääviniidid, on SAC aktiveeritud ning rakutsükkel seiskunud. Mikrotuubulite seondumine vaigistab mehhanismi.

Mps1 osaleb käävi kontrollpunkti aktivatsioonis, olles seondunud kinetohooril Ndc80 kompleksiga ning fosforüülides allavoolu jäävad sihtmärkvalgud. Juhul, kui kinetohooridele pole kinnitunud mikrotuubulid, on Ndc80-ga seotud Mps1 optimaalses positsioonis, et fosforüülida Spc105 (Mps1 substraat pagaripärmis; inimeses vastab sellele KNL-1). Spc105 konserveerunud MELT (konsensusjärjestus Met-Glu-Leu-Thr) motiivide fosforüülimine Mps1 poolt vallandab SAC kaskaadi, mille eesmärk on anafaasi edasilükkava signaali indutseerimine ja rakutsükli peatamine.

Kui mikrotuubulid kinnituvad kinetohooridele nii, et tekib bipolaarne orientatsioon, atenueeritakse anafaasi inhibeeriv signaal ja rakutsükkel jätkub.

 Tütarkromatiidide biorientatsioon 
Selleks, et tagada korrektne tütarkromatiidide lahknemine, peavad kääviniidid kinnituma tütarkromatiidide kinetohooridele, tekitades biorientatsiooni bipolaarse pinge kaudu. Mps1 reguleerib biorientatsiooni, tunnetades bipolaarset pinget. Kui mikrotuubulite kinnitumine kinetohooridele ei genereeri pinget, siis see ühendus eemaldatakse.  
 Pärmi tsentrosoomi duplikatsioon 
Pärmi tsentrosoom ehk käävi polaarsuse keha (ingl spindle pole body'', SPB) duplitseerub rakutsükli jooksul ühe korra. Tegemist on rakutsükli reguleeritava protsessiga, mis algab G2-faasis SPB alamstruktuuri (poolsild) pikenemisega. Järgmiseks moodustub tuumamembraani tsütoplasmaatilisel poolel silla distaalses otsas satelliit, mis pärast rakutsükli algust suureneb ja siseneb tuumamembraani. Jätkub SPB tuumapoolse osa moodustumine.

SPB duplikatsioon on reguleeritud fosforüülimise kaudu. Pärmi tsentrosoomi valkudest on Mps1 substraadiks näiteks "spacer"-valk Spc110, satelliidi moodustamises osalevad Spc42 ja Scp29 ning poolsilla komponent, tsentriin Cdc31.
 Mps1 regulatsioon 

 Autofosforüülimine 
Mps1 kinaasile on omane kõrgelt konserveerunud aktivatsioonilingu jääkide autofosforüülimine, mis on vajalik kinaasi täielikuks aktiivsuseks ja talitluseks. Valdavalt fosforüülitakse Ser/Thr saidid, kuigi on ka observeeritud türosiini fosforüülimist.

Mitoosis on Mps1 hüperfosforüülitud, kuid anafaasi sisenemisel Mps1 defosforüülitakse.

 Transkriptsioon 
MPS1 transkriptsiooni viiakse aktiivselt läbi, kui rakud sisenevad rakutsüklisse. TTK ehk hMps1 mRNA, valgu hulk ja kinaasi aktiivsus tõuseb G1/S-faasis ja saavutab haripunkti G2/M-faasis. TTK mRNA tase ning ka kinaasi aktiivsus langeb järsult varajases G1 faasis.

Paljud imetajate valgud, mis osalevad mitoosis ja käävi kontrollpunkti signaliseerimises, on E2F transkriptsioonifaktorite perekonna valkude kontrolli all. Kui MPS1 mRNA hulk saavutab mitoosis haripunkti, seonduvad transkriptsioonifaktorid E2F4 ning E2F1 MPS1 promooter-alale, mis represseerib MPS1 transkriptsiooni interfaasis.

 Lokalisatsioon 
Imetajate rakus paikneb Mps1 G1-faasis peamiselt tsütosoolis. Hilises G2-faasis koguneb Mps1 tsentrosoomidele ja tuumamembraanile. G2/M-faasi üleminekul, enne tuumamembraani lagunemist, siseneb Mps1 tuuma.

Tuuma lokaliseerumiseks on olulised Mps1 kinaasi mittekatalüütilises N-terminaalses osas asuvad kaks LXXLL (Leu-X-X-Leu-Leu) motiivi.

Interfaasis liigub Mps1 tõenäoliselt tuuma ja tsütosooli vahel, kuni profaasi alguses assotsieerub kinetohooridega, millega jääb seotuks kuni anafaasini, mil ta dissotsieerub.

Mps1 lokaliseerumist kinetohooridele mõjutab MAPK poolt fosforüülimine. Peale MAPK on ka kirjeldatud PRP4 ja Aurora B kinaaside osalust. Mainitud kinaaside inhibeerimine vähendab Mps1 lokalisatsiooni mikrotuubulite poolt mitteseotud kinetohooridele.

 Degradatsioon 
Ajastatud Mps1 inaktivatsioon on oluline rakutsükli korrektse kulgemise tagamiseks ja SAC signalisatsiooni terminatsiooniks.

Mps1 inaktiveeritakse degradatsiooni abil anafaasis. Selles reaktsioonis osaleb ubikvitiin-E3-ligaas APCCdc20. Mitoosi alguses, kui käävi kontrollpunkt on aktiivne, on APCCdc20 proteolüütiline aktiivsus inhibeeritud. Kui kromosoomid biorienteeruvad, siis APC muutub aktiivseks ning rakud sisenevad anafaasi ja Mps1 degradatsioon inaktiveerib lõplikult käävi kontrollpunkti.

Pärmi Mps1 N-terminaalses osas on kolm regiooni (D-box, motiiv RXXL ehk Arg-X-X-Leu), mis on olulised äratundmiseks ja proteolüüsiks APCCdc20 poolt.

 Meditsiiniline tähtsus 
On näidatud, et kasvajarakkudes on hMps1 ehk TTK üleekspresseeritud ja hMps1 taseme alandamine vähendab kasvajarakkude proliferatsiooni ja eluvõimet. Üleekspresseeritud Mps1 kinaasi on leitud erinevates rinnavähi rakuliinides kui ka teistes kasvajarakkude liinides – U937, HeLa, HEY, OCC1, Bewo, T987.

Seega on Mps1 muutunud ka potentsiaalseks sihtmärgiks vähiteraapias ning tänaseks on kirjeldatud mitmed erinevad väikese-molekulised inhibiitorid, mis takistavad kasvajate rakkude prolifeerumist, inhibeerides spetsiifiliselt Mps1 kinaasi aktiivsuse. Paraku on komistuskiviks ravimiresistentsuse tekkimine, mille põhjuseks sageli on mutatsioonide tekkimine sihtmärk-kinaasis, mis vähendavad valgu äratundmist inhibiitorite poolt.      

 Viited 

Kategooria:Molekulaarbioloogia