وسم مناعي

الوسم المناعي (بالإنجليزية: Immunolabeling)، عملية كيميائية حيوية تمكّن من الكشف عن المستضد وتحديد موقعه بدقة داخل الخلية أو النسيج أو العضو. المستضدات هي جزيئات عضوية، عادةً ما تكون البروتينات، قادرة على الارتباط بالجسم المضاد. يمكن الكشف عن هذه المستضدات باستخدام الأجسام المضادة المميِّزة للمستضد بالإضافة إلى استخدام وسيلة للكشف عنها، تُعرف ب«الوسم»، وهي مرتبطة تساهميًا بالجسم المضاد. تُعرف عملية الوسم المناعي التي تهدف إلى كشف المعلومات حول الخلية أو هياكلها الفرعية ب«الكيمياء المناعية الخلوية»، وتُعرف عملية الوسم المناعي للهياكل الأكبر ب«الكيمياء النسيجية المناعية».

توجد خطوتان معقدتان في تصنيع الأجسام المضادة للوسم المناعي. الأولى، هي إنتاج الجسم المضاد الذي يرتبط تحديدًا بالمستضد الهدف، والثانية هي دمج الوسم مع الجسم المضاد. بما أن دمج الوسم مع كل جسم مضاد مميّز لمستضد يبدو غير عملي، لذا تعتمد معظم عمليات الوسم المناعي على طريقة كشف غير مباشرة. تستخدم الطريقة غير المباشرة جسمًا مضادًا أوليًا مميزًا لمستضد، وجسمًا مضادًا ثانويًا مدمجًا مع وسم يرتبط تحديدًا بالجسم المضاد الأولي. تتيح الطريقة غير المباشرة الإنتاج الواسع للجسم المضاد الثانوي الذي يمكن شراؤه. وفقًا للطريقة غير المباشرة، يُضاف الجسم المضاد الأولي إلى نظام الاختبار. إذ يبحث عن المستضد الهدف ويرتبط به، ثم يُضاف الجسم المضاد الثانوي الموسوم المصمم للارتباط تحديدًا بالجسم المضاد الأولي.

يشمل الوسم النموذجي: مركب فلوري، أو حبيبات ذهبية، أو وسم خاص للحاتمة (المحدد المستضدي)، أو إنزيم يعطي مركب ملون. إن ارتباط الوسوم بالهدف عبر الأجسام المضادة، يوفر التعرف على المستضد وتحديد موقعه الأصلي في النسيج، مثل الغشاء الخلوي أو السيتوبلازم أو الغلاف النووي. تحت ظروف معينة يمكن تعديل الطريقة لتوفير معلومات كمية.

يمكن استخدام الوسم المناعي في الصيدلة وعلم الأحياء الجزيئي والكيمياء الحيوية، وأي مجال آخر، ومن المهم معرفة الموقع الدقيق للجزيء القابل للارتباط بالجسم المضاد.

 الطريقة المباشرة وغير المباشرة 
توجد طريقتان للوسم المناعي وهما: الطريقة المباشرة وغير المباشرة. في الطريقة المباشرة للوسم المناعي يرتبط الجسم المضاد الأولي بالوسم مباشرةً. تعد هذه الطريقة مفيدة في تقليل التفاعل المتصالب، وهو مقياس غير نوعي يندمج في الأجسام المضادة جميعها، ويتضاعف مع كل جسم مضاد إضافي يستخدم للكشف عن المستضد. رغم ذلك فإن الطريقة المباشرة أقل كفاءةً من الطريقة غير المباشرة، ولا تُستخدم عادةً في المختبرات، لأن الأجسام المضادة الأولية يجب أن تكون موسومة تساهميًا وهذا يتطلب الكثير من الأجسام المضادة النقية. بالإضافة إلى أن الطريقة المباشرة أقل حساسيةً من الطريقة غير المباشرة. قد يرتبط الكثير من الأجسام المضادة الثانوية بأجزاء مختلفة من جسم مضاد أولي واحد مرتبط بالمستضد الهدف، لذا يوجد الكثير من الأجسام المضادة الموسومة المرتبطة بكل مستضد. وبالتالي كلما زاد عدد الوسوم الخاصة بمستضد ما، زادت الإشارة الناتجة منه.

يمكن استخدام طرق غير مباشرة للحصول على خصوصية وحساسية أعلى. أولًا، غالبًا ما تكون الإجراءات على مرحلتين لتجنب التفاعل المتصالب بين الوسم المناعي لمزائج متعددة من الأجسام المضادة الأولية والثانوية، حيث تُستخدم الشدفة الرابطة للمستضد (Fab) من الأجسام المضادة الثانوية بنحوٍ متكرر. ثانيًا، يمكن استخدام أجسام مضادة أولية مضاف إليها حابس، وفي هذه الحالة يتعرف الجسم المضاد الثانوي على الحابس. يرتبط الحابس بالجسم المضاد الأولي ارتباطًا قويًا بواسطة إسترات إميد سكسينيل أو الشدفة الرابطة للمستضد الخاصة بمنطقة الشدفة القابلة للتبلور (Fc) من الغلوبولين المناعي ج (IgG). أخيرًا، يمكن الكشف عن الأجسام المضادة وحيدة النسيلة الأولية التي لها أنواع مختلفة من الغلوبولين من طريق أجسام مضادة ثانوية محددة تعارض نوع الغلوبولين المناعي المعني.

 ارتباط الجسم المضاد وخصوصيته 
يجب أن ترتبط الأجسام المضادة بالمستضدات بألفة وخصوصية عالية. تشير الخصوصية إلى قدرة الجسم المضاد على الارتباط بمستضد هدف واحد فقط. يستخدم العلماء عادةً الأجسام المضادة وحيدة النسيلة والأجسام المضادة متعددة النسائل، التي تتكون من ببتيدات اصطناعية. خلال تصنيع الأجسام المضادة تُحجز الأجسام المضادة المميزة للمستضد عبر ربط الببتيد المستضدي بعمود انجذاب والسماح للجسم المضاد غير النوعي بالمرور ببساطة عبر العمود. يقلل هذا من احتمال ارتباط الأجسام المضادة بموقع مستضدي غير مرغوب فيه ينعدم وجوده على الببتيد الأولي. ومن ثم تُحدّد خصوصية الجسم المضاد من خلال التفاعل مع البروتين أو الببتيد المستخدم في التمنيع بواسطة طرق محددة مثل لطخة ويسترن (اللطخة المناعية) أو الترسيب المناعي.

في تحديد خصوصية الأجسام المضادة، العامل الرئيسي هو نوع الببتيدات الاصطناعية أو البروتينات النقية المستخدمة. وكلما كانت خصوصية الجسم المضاد أقل، زادت فرصة رؤية شيء آخر غير المستضد الهدف. في حالة الببتيدات الاصطناعية، فالميّزة هي أن تسلسل الأحماض الأمينية سهل الوصول إليه، لكن الببتيدات لا تشبه دائمًا الهيكل ثلاثي الأبعاد أو التعديلات بعد الترجمة الموجودة في الشكل الأصلي للبروتين. لذلك، فإن الأجسام المضادة التي تُنتَج للعمل ضد ببتيد اصطناعي قد تواجه مشكلات مع البروتين ثلاثي الأبعاد الأصلي. تؤدي هذه الأنواع من الأجسام المضادة إلى نتائج ضعيفة في الترسيب المناعي أو الكيمياء النسيجية المناعية، ومع ذلك قد تكون الأجسام المضادة قادرة على الارتباط بالشكل غير المنتظم في أثناء تحليل لطخة ويسترن. على العكس من ذلك، إذا عمل الجسم المضاد على البروتينات النقية في شكلها الأصلي وليس غير المنتظم فلا يمكن استخدام اختبار لطخة ويسترن بوصفه اختبار معياري لتحديد خصوصية ارتباط الجسم المضاد، ولا سيما في الكيمياء النسيجية المناعية.

 المراجع 

تصنيف:تشخيص طبي
تصنيف:فحوصات مناعية