رحلان كهربائي هلامي ثنائي الأبعاد

الرحلان الكهربائي الهلامي ثنائي الأبعاد  هو نوع من تقنية الرحلان الكهربائي الهلامي يتم فيه فصل ودراسة خلائط البروتين المعقدة باستخدام خاصيتين من خصائص البروتين وقد صُمِّم كتوليفة لتقنيتي البأر متساوي التكهرب (IEF) وسدس-بايج (SDS-PAGE).

في المرحلة الأولى (البعد الأول) تُفصَل البروتينات حسب شحنتها (نقطة تساوي الكهربائية، PI) عبر تقنية البأر متساوي التكهرب، وفي المرحلة الثانية (البعد الثاني) تفصل البروتينات مجددا حسب وزنها الجزيئي. بعد فصل البروتينات في الهلام بالمرحلة الأولى بواسطة البأر متساوي التكهرب تتم بمعالجتها بدوديسيل كبريتات الصوديوم (SDS) لجعلها سالبة الشحنة ثم تخضع للرحلان بإدراج الهلام أفقيا في هلام سدس-بايج. وعليه تنفصل البروتينات المبأَّرة (المتركزة) في نقطة تساوي كهربائيتها وتتحرك تبعا لوزنها الجزيئي.sciencedirect: Two-Dimensional Gel Electrophoresis 

عادة يمكن فصل ما يزيد عن 10 آلاف بروتين باستخدام هلام أبعاده 20X20 سم. إذا كان وزن كمية البروتين حوالي 10 نانوغرام فإن صبغ كوماسي يستخدم للتحديد، أما إن كانت الكمية حوالي 0.5 نانوغرام فيستخدم صبغ الفضة أو الفلورية. استخدام نظام يعرف بـ"ISO-DALT" يسمح بإجراء تقنيتي البأر متساوي التكهرب وسدس-بايج في آن واحد.Chen et al., 2015; Brunelle and Green, 2014; Hanash et al., 1991; Magdeldin et al., 2014

تم تقديم الرحلان الثنائي سنة 1975 بواسطة باتريك أوفاريل  وكلوزه  بشكل منفصل. تحسن تبني وتطبيق هذه التقنية بعد ابتكار شرائط مدروج الأس الهيدروجيني المثبت (IPG) حيث أعطت نتائج جيدة قابلة للإعادة وأصبح التعامل مع التقنية أكثر سهولة. في البداية كانت رؤية البروتينات تتم بواسطة الوسم بالنظيرين فوسفور 32 وكبريت 35، أما الآن فقد استبدلت تلك التقنيات بتقنيات أكثر حساسية مثل SYBRO Ruby. بعد تنفيذ تقنية الرحلان الثنائي تُلتقط صورة ويتم تحليلها بمختلف برامج تحليل الرحلان الثنائي مثل: ImageMaster ،Delta2D...إلخ لإيجاد عدد البروتينات المعبر عنها في نسيج معين.

 مراجع 

تصنيف:بروتيوميات
تصنيف:تقنيات علم الأحياء الجزيئي
تصنيف:تقنيات مخبرية
تصنيف:رحلان كهربائي
تصنيف:علم الأحياء الجزيئي