Ellmanovo činidlo

Ellmanovo činidlo (5,5'-ditiobis-(2-nitrobenzénová kyselina) alebo DTNB) je chemikália, ktorá sa používa na určenie počtu alebo koncentrácie tiolových skupín vo vzorke. Toto činidlo vyvinul George L. Ellman.

Príprava 
V Ellmanovej pôvodnej publikácii bolo toto činidlo pripravené oxidáciou 2-nitro-5-chlórbenzaldehydu na karboxylovú kyselinu, zavedením tiolovej skupiny pomocou sulfidu sodného a následne oxidáciou monomérov pomocou jódu, čím vznikne dimér. Aktuálne je toto činidlo komerčne dostupné.

Ellmanova skúška 
Pri reakcii tiolov s DTNB dochádza k štiepeniu disulfidovej väzby, čím vzniká 2-nitro-5-tiobenzoát (TNB-), ktorý vo vode ionizuje na TNB2- dianión v neutrálnom a alkalickom pH. Tento anión má žltú farbu.

 

Táto reakcia je rýchla a stechiometrická, takže pridanie jedného molu tiolu vytvorí jeden mol TNB.  Anión TNB2- sa stanovuje spektrofotometricky pomocou merania absorbancie viditeľného svetla pri 412 nm. Molárny absorpčný koeficient je 14,150 M−1 cm−1 pre zriedené roztoky pufrov a 13,700 M−1 cm−1 pre roztoky s vysokou koncentráciou solí, napríklad v 6 M guanídiumhydrochloridu alebo 8 M močoviny. V pôvodnej publikácii v roku 1959 bol molárny absorpčný koeficient pre zriedené roztoky podhodnotený na 13,600 M−1 cm−1 a ako je poznamenané v nedávno publikovanom článku, tento omyl zostáva v literatúre i naďalej. Komerčne dostupné DTNB nemusí byť úplne čisté a môže vyžadovať rekryštalizáciu, aby bolo možné získať presné a reprodukovateľné výsledky.

Ellmanovo činidlo je možné použiť na meranie nízkomolekulových tiolov, ako je napríklad glutatión, v čistých roztokoch i biologických vzorkách, napríklad v krvi. Takisto je pomocou neho možné zmerať počet tiolových skupín v bielkovine.

Referencie

Zdroj 

Biochemické metódy
Nitrozlúčeniny
Karboxylové kyseliny