Laboratoriya ishi Organ, to‘qima va hujayralarni in vitro o‘stirish texnikasi

|
Laboratoriya ishi Organ, to‘qima va hujayralarni in vitro o‘stirish texnikasi
|
Sana | 22.05.2024 | Hajmi | 17,94 Kb. | | #249508 |
Bog'liq 8-laboratoriya in vitro
Laboratoriya ishi 8.
Organ, to‘qima va hujayralarni in vitro o‘stirish texnikasi
Kerakli jihoz, reaktiv va asbob uskunalar: 1 litrli kimyoviy stakanlar 4 ta , boshlang‘ich eritmalarni saqlash uchun og‘zi yopiladigan shisha idishlar, penitsillin idishlari 10 dona, 1-100 ml pipetkalar, texnik va analitik tarozilar, elektroisitgich, turli xil kimyoviy moddalar.
Oʻsimlikdan ajratilgan hujayra va toʻqimalar oʻstiriladigan ozuqa muhitida oʻsimliklarga kerakli hamma makroelementlar: azot, fosfor, kaliy, kaltsiy, oltingugur, magniy, temir va mikroelementla: bor, rux, mis, kobalt, marganes, yod, molibden, shuningdek vitaminlar, uglevodlar, fitogarmonlar EDTA (etilen–diamin-tetrasirka kislotasi ) yoki uning natriyli tuzi kiritilishi kerak. Ajratilgan hujayra va toʻqimalar oʻstiriladigan ozuqa muhitining asosiy tarkibiy qismini uglevodlar tashkil qiladi, uglevod manbai sifatida saxaroza yoki glyukozaning 20-40 g/l miqdori qoʻllaniladi. Kallusli toʻqimalar olishda ozuqa muhitlari tarkibiga auksin (hujayra dedifferensirovkasini yuzaga keltiruvchilar) va sitokinin (dedifferensiyalangan hujayralarning boʻlinishini induksiyalovchi) kiritilishi kerak. Auksin manbai sifatida ozuqa muhitlarda 2,4 dixlorfinoksisirka kislotasi (2,4 –D) 1-10 mg /ml; indolilsirka kislotasi (ISK ) 1-30 mg/l, naftilsirka kislotasi (NSK) 0,1-2 mg/ l kabilar ishlatiladi. Sun’iy ozuqa muhitlarida sitokinin manbai sifatida kinetin, 6-benzilaminopurin (6- BAP) va zeatin (0,001–10 mg/l) qoʻllaniladi. Qattiq ozuqa muhitini tayyorlashda 5-7% agardan foydalaniladi. Makro va mikrotuzlar hamda vitaminlarning eritmalari yuqori miqdordagi boshlangʻich eritma holida tayyorlanib, ularni koʻp marta suy oʻltirib ishlatilish mumkin. Har xil turlarga mansub oʻsimliklar hujayralari, toʻqimalari va organlarini oʻstirishda turli tarkibdagi ozuqa muhitlaridan foydalaniladi. Koʻpincha Murasige-Skuga, Uayt, Gamborgat (V -5) ozuqa muhitlari ishlatiladi. Murasige–Skuga ozuqa muhitlaridan turlicha modifikatsiyalar bilan apikal meristemalar oʻstirishida va oʻsimliklarni mikrokoʻpaytirishda foydalanilishi mumkin.
Ishning borishi. Kartoshka apikal meristemalarini oʻstirish uchun modifikatsiyalangan Murasige-Skuga ozuqa muhitlarini tayyorlash. Ozuqa muhitlari tarkibi 4-jadvalda berilgan. Avvalo makro–mikrotuzlar va vitaminlarning boshlangʻich eritmalarini tayyorlash kerak. Odatda Murasiga-Skuga ozuqa muhitlari quyidagi birikmalardan tayyorlanadi:
1. NH4NO3, KNO3, KH2PO4, MgSO4 7H2O (MgSO4 choʻkmaga tushishini oldini olish uchun, qizdirmasdan oxirida solinadi).
2. CaCl2 eritmasi.
3. Temir xelati eritmasi (FeSO4 va Na2 EDTA eritmasi birgalikda qaynagunga qadar qizdirilganda temir xelati xosil boʻladi). 4. Mikroelementlar eritmasi.
Boshlangʻich eritmalar uchun kerakli tuzlar miqdori va boshlangʻich eritmalarning ozuqa muhiti uchun kerakli miqdorlari 4–jadvalda keltirilgan.
1–jadval
Ozuqa muhitining tarkibiy qismlari, mg/l
|
Mineral elementlar ................MS
Saxaroza………………20000
Glyukoza ……………………20000
Kazein gidrolizati ………..…1000
Mezo-inozit ……………...…….100
Tiamin………….......……………1
Piridoksin …………….......…...1
Adenin …………….....………40
Vitamin B12 ………….……0,015
MS*-Murasige–Skugada berilishi boʻyicha
|
GK……………
Nikotin kislotasi…………..2
Folin kislotasi…..……….0,5
Kenitin …………….....…0,5
Ca pantotenat …………….10
Riboflavin……………….0,5
Biotin……………………….1
Aktivlangan ko‘m…….10000
Agar –ag…………….....7000
pH–5,7-5,8
|
2-jadval.
Murasige-Skuga boʻyicha boshlangʻich eritmalar tayyorlash.
Ozuqa muhitining tarkibiy qismlari
|
Qoʻshimchalar
|
Makrotuzlar, boshlangʻich eritma uchun g/lKNO3 33
NH4NO3 33
CaCl2 (suvsiz 8,8
Yoki SaCl2 2H2O 13,8
MgSO4 (7 H2 O)7,4
Yoki suvsiz
KH2PO4 3,6
|
litr ozuqa muhiti uchun 50 ml boshlangʻich eritma olinadi.
1 litr ozuqa muhiti uchun 50 ml boshlangʻich eritma olinadi
|
Mikrotuzlar mg/l 100 ml
Boshlangʻich eritma uchun
HBO3 620
MnSO4 . 4H2O2230
ZnSO4 860
KI 83
Na2M0O4 .2 H2O 25
CuSO4 .5 H2O 2,5
CaCl2 . 6H2O2,5
|
100 ml boshlangʻich eritma uchun, mg
Fe–xelat557Na2 EDTA745
|
|
| |