Genomni tahrirlash texnikasi

Genomni tahrirlash texnikasi
Genomlar tabiiy ravishda o'zgarishlarga moyil bo'lib, har safar hujayra o'z DNKsini nusxalashda xatolar yuzaga keladi.Agar bu xatolar hujayra tomonidan tuzatilmasa, saraton yoki boshqa patologiya paydo bo'lishi mumkin yoki ular tabiiy tanlanish uchun asos bo'lib, raqobatdosh ustunlik berishi mumkin. Qo'shimcha, genomlar infektsiya (masalan, retroviruslar) va ionlashtiruvchi nurlanish (uchun) ta'sirida o'zgarishi mumkin.masalan, radiatsiya terapiyasi, rentgen nurlari va ultrabinafsha nurlar), bu joylarda DNKni buzadi. Buni bashorat qilish qiyin yoki imkonsiz bo'lishi mumkin. Biroq, bu mexanizmlar maqsadli emas va shuning uchun genomni tahrirlash deb hisoblanmaydi.
AQSh Milliy Biotexnologiya Axborot Markazi. 1988 yilda Bethesdada molekulyar biologiya ma'lumotlarini qayta ishlash va saqlash bo'yicha markaziy institut sifatida tashkil etilgan. U AQSh Milliy Tibbiyot Kutubxonasining bir qismi, Milliy Sog'liqni saqlash institutining kichik bo'limidir. BLAST biologik ketma-ketliklar orasidagi o'xshashlik hududlarini topadi. Dastur nukleotid yoki oqsil ketma-ketligini ketma-ketlik ma'lumotlar bazalari bilan taqqoslaydi va statistik ahamiyatini hisoblab chiqadi.
GenBank ma'lumotlar bazasi DNK ketma-ketligi haqidagi eng so'nggi va keng qamrovli ma'lumotlarga ilmiy hamjamiyat ichida kirishni ta'minlash va rag'batlantirish uchun mo'ljallangan. Shu sababli, NCBI GenBank ma'lumotlaridan foydalanish yoki tarqatishda hech qanday cheklovlar qo'ymaydi. Biroq, ba'zi topshiruvchilar o'zlari taqdim etgan ma'lumotlarning barchasi yoki bir qismi bo'yicha patent, mualliflik huquqi yoki boshqa intellektual mulk huquqlariga da'vo qilishlari mumkin. NCBI bunday da'volarning to'g'riligini baholash imkoniyatiga ega emas va shuning uchun GenBankdagi ma'lumotlardan foydalanish, nusxalash yoki tarqatish bo'yicha izoh yoki cheklovsiz ruxsat bera olmaydi.
Ba'zi mualliflar nashrdan oldin GenBankda o'z ma'lumotlarining paydo bo'lishi ularning ishlariga putur etkazishidan xavotirda. GenBank, so'rov bo'yicha, ma'lum vaqt davomida yangi taqdimotlarni chiqarishni to'xtatadi. Biroq, agar kirish raqami yoki ketma-ketlik ma'lumotlari belgilangan sanadan oldin bosma yoki onlaynda paydo bo'lsa, sizning ketma-ketligingiz chiqariladi. Nashr etilgan ketma-ketlik ma'lumotlarining paydo bo'lishida kechikishning oldini olish uchun biz mualliflarni nashr etilgan ma'lumotlarning paydo bo'lishi haqida bizga xabar berishga chaqiramiz. Mavjud bo'lishi bilan, iltimos, to'liq nashr ma'lumotlarini - barcha mualliflar, nom, jurnal, jild, sahifalar va sanani - quyidagi manzilga yuboring.
Inson genomi loyihasi (HGP) xalqaro ilmiy tadqiqot loyihasi boʻlib, inson DNKsini tashkil etuvchi tayanch juftliklarni aniqlash, inson genomining barcha genlarini jismoniy va funksional jihatdan tavsiflash hamda gen xaritasini tuzishga qaratilgan. Bu turli mamlakatlar va muassasalar bilan hamkorlikda amalga oshirilgan eng yirik biologiya loyihasidir. Loyihani rejalashtirish 1984 yilda AQSh hukumati tomonidan qabul qilinganidan keyin boshlangan. Loyiha rasman 1990 yilda boshlangan va 2003 yil 14 aprelda yakunlanishi e'lon qilingan. "To'liq genom" darajasi faqat 2021 yil may oyida GCA_00991475 tuzilmasining uchinchi versiyasida arxivlangan. Loyiha inson genomining 175 000 ta asosiy juftini sunʼiy bakterial xromosomalarga aylantirish va ularni bakteriyalarda koʻpaytirish orqali amalga oshirildi. Ketma-ketlik tahlilidan so'ng, qismlarning bir-biriga yopishgan ketma-ketliklari aniqlandi va har bir qismning bo'linish profili maxsus fermentlar tomonidan qayd etildi va uning genomdagi o'rni aniqlandi. Avtomatik DNK sekvensiyasi texnikasi va kompyuter texnologiyalaridagi tez o'zgarishlar ushbu tadqiqotlarga katta hissa qo'shdi. Loyihaning natijasi axloqiy munozaralarga sabab bo'ldi. Chunki bu loyiha yevgenik tadqiqotlarga yo‘l ochishi va bu maqsadda amalga oshiriladigan eksperimental urinishlarni tezlashtirishi aytilgan. Loyiha muxoliflarining ta'kidlashicha, u tabiatning tabiiy tartibini xavf ostiga qo'yadi va inson kundalik hayotining barcha jabhalarida, bandlikdan sug'urtagacha "Genetik kamsitish" ga olib keladi. Muxoliflar yevgenika omilini ta'kidlab, ushbu loyiha boshqa tirik turlarning genlari bilan o'tkaziladigan eksperimental tadqiqotlar chegaralarini sezilarli darajada kengaytiradi va shuning uchun cheksiz biologik va ekologik halokatga olib keladi, deb ta'kidlaydilar. Inson genomi loyihasi doirasida axloqiy, huquqiy va ijtimoiy masalalarga ajratilgan byudjet umumiy byudjetning besh foizini (taxminan 60 million dollar) qoplagan. Bu masalaga ahamiyat berishning sababi, genetik tadqiqotlar hajmining rivojlanishi va genetik tekshiruv narxining kamayishi bilan genetik ma'lumotlarga asoslangan kamsitish va suiiste'mollik kuchayishidan xavotirda. ELSIda amalga oshirilayotgan ko'plab loyihalar ELSIning mumkin bo'lgan ta'sirini qamrab olgan bo'lsa-da, ba'zilari adabiyot, konferentsiyalar, seminarlar va matbuot orqali ta'lim olishga qaratilgan. Shu nuqtai nazardan, shifokorlar, o'qituvchilar, talabalar, ruhoniylar va huquqshunoslarning maqsadli auditoriyasi uchun turli xil o'quv materiallari ham taqdim etiladi. Bu sa'y-harakatlarning barchasi Inson genomi loyihasini odamlar va mutaxassislarga eng to'g'ri o'tkazish va uni qo'llash sohalarida xatolarni minimallashtirish yoki oldini olish uchundir. 2007 yil 4 sentyabrda Kreyg Venter o'zining butun DNK ketma-ketligini e'lon qildi. Bu insonning 6 milliard harfdan iborat genomi birinchi marta nashr etilgan. Xitoy “Uch million genom” loyihasini ishga tushirdi. Loyiha bir million odamning genomini, inson tanasining hayoti uchun zarur bo'lgan bir million bakteriya genomini (mikrobiota), shuningdek, million o'simlik va hayvon genomini to'playdi va shifrlaydi: AQShda hukumat 2016-yilda shaxsiy tibbiyot deb ataladigan sohani rivojlantirishga 215 million dollar sarflashni taklif qilmoqda, uni ishlab chiqish uchun bir million ko‘ngillining DNKsini ochish rejalashtirilgan. Ko'ngillilarning genlari, turmush tarzi va atrof-muhit ularning sog'lig'iga qanday ta'sir qilishini aniqlash uchun Milliy Sog'liqni saqlash institutlari loyihasiga 130 million dollar sarmoya kiritiladi va 70 million dollar saraton shakllanishi bo'yicha tadqiqotlarga kiritiladi. Germaniya GHC (German National Cohort) loyihasini ishga tushirdi, unga ko'ra 100 000 dan ortiq erkaklar va 100 000 ayollar har besh yilda bir marta ixtiyoriy so'rovnomalar, biomateriallar va sog'liqni saqlash ma'lumotlaridan o'tadilar. Angliyada 2006 yildan 2010 yilgacha bo'lgan davrda 500 000 kishidan ma'lumotlarni to'plagan xususiy va davlat sektorlari ko'magida tashkil etilgan "UK Biobank" notijorat mustaqil tashkiloti mavjud. 2011-2016-yillardagi ishlarning asosiy yo‘nalishi olimlarga fuqarolarning genetik ma’lumotlari bilan samarali ishlash imkonini beruvchi onlayn platforma yaratishdan iborat.
Niderlandiyada allaqachon 200 ga yaqin biobanklar yaratilgan bo'lib, ular 900 ming aholi, ya'ni mamlakat umumiy aholisining 5 foizini qamrab oladi. Dasturni ishlab chiqishning navbatdagi bosqichi mavjud banklar o‘rtasida o‘zaro hamkorlik va ma’lumotlar almashinuvini ta’minlashdan iborat. Genomik kutubxonani yaratish bir nechta rekombinant DNK molekulalarini yaratishni o'z ichiga oladi. Organizmning genomik DNKsi ajratib olinadi va keyin cheklovchi ferment bilan hazm qilinadi. Juda kichik genomlarga ega bo'lgan organizmlar uchun (~ 10 kb) hazm qilingan bo'laklarni gel elektroforez bilan ajratish mumkin. Ajratilgan bo'laklar keyin kesilishi va alohida vektorga klonlanishi mumkin. Biroq, katta genom cheklash fermenti bilan hazm qilinganida, alohida-alohida kesish uchun juda ko'p bo'laklar qoladi. Fragmentlarning butun to'plami vektor bilan birga klonlanishi kerak, shundan so'ng klonlarni ajratish mumkin. Ikkala holatda ham fragmentlar bir xil cheklovchi ferment bilan hazm qilingan vektorga bog'lanadi. Kiritilgan genomik DNK fragmentlarini o'z ichiga olgan vektor keyinchalik mezbon organizmga kiritilishi mumkin.
Quyida genomik kutubxonalar uchun keng tarqalgan ishlatiladigan bir necha turdagi vektorlar va har biri odatda qo'llab-quvvatlaydigan qo'shimcha nukleotidlar o'lchamiga ega jadval.
Vektor turi
|
Hajmi minglab nukleotid
|
Plazmida
|
10 ming
|
Lyamda fag
|
25 000
|
kosmida
|
45 000
|
Bakteriofag
|
70 100 ming
|
P1 suniy xromosomalari
|
130 150 ming
|
Bakterial suniy xromosomalar BAC
|
120 300 ming
|
Zmburug’larning sun’iy xromosomalari YAC
|
250 2000 ming
|
Streptomyces shtammlari turli xil bioaktivlikka ega bo'lgan juda ko'p turli xil birikmalarni ishlab chiqarish qobiliyati bilan mashhur. Turli sharoitlarda etishtirish ko'pincha yangi birikmalar ishlab chiqarishga olib keladi. Shuning uchun, shtammlarning ishlab chiqarish madaniyati etil asetat bilan ekstraktsiya qilinadi va xom ekstraktlar HPLC tomonidan tahlil qilinadi. Bundan tashqari, ekstraktlar turli xil tahlillar bilan bioaktivligi uchun sinovdan o'tkaziladi. Tuzilishni aniqlash uchun qiziqarli birikma turli xil xromatografiya usullarining kombinatsiyasi bilan tozalanadi. Genomlarni sekvensiyalash genom qazib olish bilan birgalikda turli xil kompyuter dasturlari yordamida tabiiy mahsulot biosintetik genlar klasterini aniqlash imkonini beradi. To'g'ri gen klasteri aniqlanganligini tasdiqlash uchun gen inaktivatsiyasi tajribalarini o'tkazish kerak. Olingan mutantlar muayyan tabiiy mahsulotni ishlab chiqarish uchun tahlil qilinadi. To'g'ri gen klasteri faollashtirilmagandan so'ng, shtamm birikma hosil qilmasligi kerak. Streptomyces diastatochromogenes Tü6028 tomonidan ishlab chiqarilgan antibakterial birikma poliketomisin uchun ish jarayoni ko'rsatilgan. Taxminan o'n yil oldin, genomlarni ketma-ketlashtirish hali juda qimmat bo'lganida, gen klasterini klonlash va identifikatsiya qilish juda ko'p vaqt talab qiladigan jarayon edi. Genom qazib olish bilan birgalikda tezkor genom ketma-ketligi klaster identifikatsiyasini sinovdan o'tkazishni tezlashtiradi va biosintezni o'rganish va genetik usullar bilan yangi tabiiy mahsulotlarni yaratishning yangi usullarini ochadi. Ushbu maqolada tasvirlangan protokol Streptomyces shtammi yoki boshqa mikroorganizmdan olingan har qanday boshqa birikmaga tayinlanishi mumkin.
9-Mavzu:Hemerali oqsillar
Reja
Hemerali oqsillar haqida tushuncha.
Hemer genlar va hemer oqsillarni yaratish.
Hemerik oqsillar keltirib chiqaradigan zararli fenotipar.
Gen muhandisligi texnologiyasi yordamida yaratiladigan rekombinant oqsillar.
Ximerik oqsillar in vitro usullari orqali ishlab chiqariladi. Oddiy qilib aytganda, bu ximerik oqsillar strukturaviy mexanizmlar (RNK, rRNK, tRNK) orqali ximerik genlarning birlashishi natijasida hosil bo’ladi. Ushbu ximerik genlarning tarjimasi bitta polipeptid zanjirini hosil qiladi va u olingan asl oqsillardan farqli funktsiyalarni ifodalaydi.Xemirik oqsillarni ishlab chiqarishda E.coli bakteriyalaridan foydalaniladi.
Belgilangan himerik oqsillar, sun'iy ravishda ishlab chiqarilgan bo'lsa, asosan terapevtik vositalar sifatida ishlatiladi. Bu oqsillar odatda 50 ta aminokislotadan iborat peptid zanjiridan iborat. Ular qisqa muddatli effektor domenidan va peptid zanjirining funktsional motivlariga hissa qo'shadigan tashuvchidan iborat. Ushbu ikki xil protein domenlari birlashgan va funktsional ximerik oqsilni hosil qilish uchun birgalikda ishlaydi.
Ximerik oqsillarni kodlash uchun birinchi navbatda Ximerik genlarni yaratish kerak. Keyinchalik genlar DNKdan transkripsiya qilinadi, natijada yetuk mRNK hosil bo'ladi, keyinchalik u birikuvchi polipeptid zanjiriga aylanadi va ximerik oqsilni hosil qiladi.Ximerik genlar ko'pincha plazmid yoki virus shaklini oladi, genlarni manipulyatsiya qilish uchun samarali hisoblanadi. Ushbu Ximerik genlar ikki xil yo'l bilan paydo bo'lishi mumkin. Ulardan biri ikki yoki undan ortiq oldindan belgilangan kodlash ketma-ketligi orqali sun'iy ravishda hosil bo’ladi. Bundan farqli o'laroq, ba'zi ximerik genlar DNK replikatsiyasi yoki o’zgarishidagi xatolardan kelib chiqishi mumkin.
Bitta peptid zanjiri bog'lanish, tanib olish yoki hatto toksiklikka hissa qo'shishi mumkin bo'lgan turli xususiyatlarga ega bo'lishi mumkin, uning birlashtirilgan ikkinchi peptid zanjir esa ximerik polipeptidni nishonga olish va barqarorlashtirishda yordam berishi mumkin.
Dastlabki alohida oqsillarni kodlash uchun ikki yoki undan ortiq genlarning qo'shilishi natijasida paydo bo'lgan ximerik genga misol Drosophilada topilgan Jingwei genlaridir. Ushbu genlar natijasida paydo bo'lgan ximerik oqsil spirtli degidrogenazni kodlaydigan gen hisoblanadi.
Ximerik oqsil, IC7Fc dizaynini ko'rsatadigan soddalashtirilgan diagrammasi.
Bu yangi paydo bo'lgan gen feromonlar va gormonlar kabi uzun zanjirli spirtlar va diollarga ta'sir qiladi, natijada drozofilaning jismoniy holati to'g'ridan-to'g'ri o'zgaradi.
Muayyan ekspression vektorlari bilan amalga oshiriladigan saytga yo'naltirilgan mutagenez bu genlarning sinteziga imkon beradi. Ximerik oqsillarni yaratish uchun ushbu genetik manipulyatsiya yordamida biz ko'plab ko'rsatilgan oqsillarning faolligini nazorat qila olamiz, bu esa terapevtik sohaga yangi tushunchalar beradi.
P55 yoki p75 TNF eruvchan retseptorlari bilan bog'langan inson IgG1 ning Fc qismidan tashkil topgan ximerik oqsil molekulalari hozirda revmatodid artrit va og'ir o'tkir yallig'lanish yoki yuqumli kasalliklar kabi surunkali yallig'lanishli otoimmün kasalliklarni davolash uchun klinik sinovlarda baholanmoqda.
termoyadroviy oqsil - bu alohida oqsillar tomonidan kodlangan ikki yoki undan ortiq genlarning birlashishi natijasida hosil bo'lgan oqsil. Gibrid genning tarjimasi oqsil sinteziga olib keladi, bu asl mahsulotlarning ba'zi funktsional xususiyatlarini birlashtira oladi. 1989-yilda Fendeisn va boshqalar tomonidan taqdim etilgan funktsional yaxlitligi va uzoq muddatli barqarorligi bilan ximerik oqsilning nisbatan qulay ishlab chiqarish samaradorligi oshirildi shuning uchun biotibbiyot fanlarining turli sohalarida muvaffaqiyatli qo'llanilla boshlandi.
Ximerik oqsil texnologiyasi uzoq vaqt davomida yuqori mahsuldorlik, yaxshi barqarorlik va ommaviy miqyosda maqsadli oqsilni samarali tozalash kabi ko'plab muammolarni yengish uchun potentsial metodlardan biri hisoblanadi.
Ko'pgina Ximerik genlar va oqsillarning funktsiyasi noma'lum, hatto ular saraton, shizofreniya, sepsis, va sil kasalligi kabi kasalliklarni qo'zg'atishi mumkin.
Geterotrimerik HEMERA -oqsilning uch o'lchovli tuzilishi
Ximerik genlar retrotranspozitsiya orqali ham hosil bo'lishi mumkin, bu yerda RNK cDNKga qaytarilishi mumkin, bu tasodifan transkriptlarning noan'anaviy joylarda genomga kirishiga olib keladi. Bu vositalar yordamida ximerik genlar ba'zan rang ko'rligi yoki boshqa kasalliklarga olib kelishi mumkin bo'lgan g'ayritabiiy ximerik oqsillarni hosil qilishi mumkin.
Ximerik oqsillarni tuzilishi
Ximerik genlar evolyutsiyaga qanday ta’sir ko’rsatadi.
Ximerik genlar va ularning oqsillari tabiatda ham bo'lishi mumkin. Ular tabiiy tanlanishning tarafdori bo'lib, vaqt o'tishi bilan avlodlarning genetik tarkibini o'zgartirib, afzal irsiy xususiyatlarning uzatilishi bilan amalga oshadi.
Ximerik oqsillar ota-ona genlaridan ajralib turadi, buning natijasida tabiiy irsiyat sharoitida mumkin bo'lmagan mutlaqo yangi fenotiplar paydo bo'ladi. Ba'zi ximerik oqsillar ma'lum shaxslarning tugatilishiga olib kelishi mumkin bo'lsa-da, boshqalari yangi populyatsiyalar orasida keng tarqalib, finotipni sezilarli darajada oshirishi mumkin.
Tibbiyotda ximerik oqsillar: Ximerik antigen retseptorlari T hujayrali terapiya
Tibbiyotda qo'llaniladigan ximerik oqsillarning bir misoli ximerik antigen retseptorlari; B-hujayra membranalariga biriktirilgan antikor oqsillari hisoblanadi. CAR-T hujayralari sifatida ham tanilgan bu hujayralar T hujayra retseptorlarini ishlab chiqarish uchun genetik jihatdan o'zgartirilgan. Ular immunoterapiya, immunologiya va virusologiya sohalarida qo'llaniladi. Ushbu ximerik retseptorli oqsillarning maqsadi o'zgartirilgan hamda T hujayralariga belgilangan oqsillarni nishonga olish imkoniyatini beradi.
Ximerik antikorlar juda oddiy genetik muhandislik yo'li bilan, tanlangan sichqon gibridomasining immunoglobulin (Ig) o'zgaruvchan hududlarini inson Ig doimiy hududlariga qo'shish orqali yaratilishi mumkin va ular sifatida yoki keyingi insoniylashtirishning birinchi bosqichi sifatida ishlatilishi mumkin.
Ushbu antigen retseptorlari tabiatda ximerikdir, chunki ular antigenni bog'lash va T hujayralarini faollashtiruvchi xususiyatlarning birikmasidir. Ushbu antigenni tanib olish sohalari bog'langan monoklonal antikorlardan kelib chiqadi, ximerik oqsilning o'zi esa immunoglobinlar zanjirlaridan iborat. Qisqa bog'lovchi peptidlar orqali bog'langan ushbu immunoglobinlar CD19 va CD20 kabi maqsadli antigenler bilan bog'lanish qobiliyatiga ega.
Saratonga qarshi terapiyada bu ximerik oqsillar Hodgkin bo'lmagan lenfoma va o'tkir limfoblastik leykemiyani davolash uchun ishlatilgan. Inson kaspaza 9 fermentining dimerizatsiyasini qo'zg'atish orqali bu oqsillar saraton hujayrasidan ham, T hujayradan ham apoptoz signalini ishga tushirishi mumkin.
T-hujayralarni o'ziga xos oqsillarni tanib olish imkoniyati orqali tadqiqotchilar bemorning o'z immunitet tizimini saraton hujayralarini aniqlash va yo'q qilishga o'rgatishdi. Ushbu ximerik oqsillar katta foyda va katta kamchiliklarga ega bo'lsa-da, ularning tabiati va boshqa terapevtik maqsadlarda qo'llanilishi bo'yicha keyingi tadqiqotlar o'tkazilishi kerak degan fikrga kelishdi.
Ximerizatsiya va gumanizatsiya - bu sichqonning monoklonal antikorlarini odamlarda qo'llanilishi mumkin bo'lgan terapevtik antikorga aylantiradigan ikkita jarayon.
Ximerik RNK, ba'zan sintez transkripti deb ataladi, yangi oqsillarni kodlash potentsialiga ega bo'lgan ikki yoki undan ortiq turli genlarning ekzonlaridan iborat. Ushbu mRNKlar an'anaviy qo'shilish natijasida hosil bo'lganlardan farq qiladi, chunki ular ikki yoki undan ortiq gen lokuslari tomonidan ishlab chiqariladi.
Gen muhandisligi yo’li bilan ishlab chiqariladigan rekombinant oqsillar.
Insulin
Somatotropin
Interferon
Insulin olish usullari
Genetik jihatdan yaratilgan inson insulinini olishning ikkita asosiy usuli mavjud
Rekombinant insulinning afzalliklari va kamchiliklari
Uning ikkita zanjirining aminokislotalar ketma-ketligi inson genlari tomonidan kodlangan.
Aslida, u inson to'qimalaridan olingan insulin bilan bir xil. To'g'ri, uni izolyatsiya qilish va tozalash alohida e'tibor talab qiladi.
Tarkibi inson insulini bilan bir xil → allergik reaksiyalar yo’q.
Hayvon insuliniga nisbatan ancha tejamkor (1 kg insulin E. coli yordamida 25 kubometrli fermentatorda olinishi mumkin
Dunyo tomonidan ishlab chiqarilgan barcha insulin preparatlari asosiy xususiyatlarining 3 tasi farqlanadi:
kelib chiqishi bo'yicha;
2) ta'sirlarning paydo bo'lish tezligi va ularning davomiyligi bo'yicha;
3) tozalash usuli va preparatlarning tozalik darajasiga ko'ra
O'sish gormoni (somatotropin).
Mikrobiologik sintez natijasida olingan yana bir rekombinant oqsil - gipofiz bezidan ajralib chiqadigan va 19 ta ta aminokislota qoldig'ini o'z ichiga olgan inson o'sish gormoni sinovdan o'tkazildi. Inson tanasida bu gormon suyak o'sishi uchun zarurdir. Uning yetishmovchiligi kech bolalik davrida keskin namoyon bo'ladi va mittilikka olib keladi. Insonning o'sish gormoni geni E. coli da klonlangan. Biologik ajratilgan oqsilning faolligi gipofiz bezidan olingan namuna bilan bir xil edi.
Olinish usuliga ko'ra ular quyidagilarga bo'linadi:
gomologik, so’yilgan hayvonlarning gipofiz bezidan olingan;
sintetik, ularning tarkibida inson o'sish gormonidan ko'proq bitta aminokislota (metionin) mavjud;
Rekombinant oqsil, gen muhandisligi orqali olingan.
Butun texnologik sikl beshta funksional jihatdan turli bosqichlardan iborat:
1.Fermentatsiya
2.oqsilni birlamchi tozalash
3.xromatografik tozalash
4.dozalash shaklini ishlab chiqarish
5. moddaning sifatini va somatogenning dozalash shaklini tahlil qilish
Somatotropinning terapevtik ta'siri
*anabolik ta'sir ko'rsatadi (aminokislotalarni hujayra ichiga tashishni rag'batlantiradi va oqsil sintezini rag'batlantiradi),
katabolizmga qarshi turadi;*
skelet, suyaklarning o'sishini rag'batlantiradi;
* mushak hujayralari soni va hajmining oshishiga olib keladi;
*tana vaznini oshiradi;
* organizmda azot, mineral tuzlar (kalsiy, fosfor, natriy) va suyuqlikning kechikishiga olib keladi;
* Oshqozon-ichak traktidan kalsiyning so'rilishini rag'batlantiradi;
* lipolizni rag'batlantiradi, yog' to'planishining kamayishiga olib keladi, yog' omborlariga triglitseridlar oqimini kamaytiradi (visseral yog 'to'qimalari somatropinga ayniqsa sezgir);
* plazmadagi yog 'kislotalari kontsentratsiyasining oshishiga olib keladi;
*qon shakarini oshiradi (dastlab insulin sezuvchanligini pasaytiradi, keyinchalik o'sish gormonining tananing sitoarxitektonikasiga ijobiy ta'siri tufayli tiklanishi yoki hatto yaxshilanishi mumkin).
Tug'ma immunitetning rekombinant oqsil omillari.
Dori sifatida ishlatiladigan turga xos oqsillar orasida interferonlar - tug'ma immunitet omillari hisoblanadi.
Yaqin vaqtgacha inson hujayralaridan interferonlar faqat oz miqdorda mavjud edi. Tibbiy preparat sifatida leykotsit interferon ishlatilgan. Uning manbai tug'ruqxonalardan olingan qon edi.
Hozirgi vaqtda leykotsitlardan interferon geni kimyoviy sintez yo'li bilan olingan. Keyin u plazmidlarga kiritildi, ular o'z navbatida E. coli hujayralari va achitqi hujayralariga kiritildi va shu bilan inson leykotsitlari interferon ishlab chiqaruvchilariga aylandi.
Interferonlarning tasnifi
Leykotsitlar interferonlari, ular hosil bo'lgan hujayralar turiga qarab, quyidagilarga bo'linadi:
1.L-guruh (leykotsitlar interferon)
2.B-guruhi (fibroblast interferonlari)
3.G-guruhi (immun interferon T-limfotsitlar)
Yoki boshqa yo'l bilan:alfa (alfa) - leykotsitlar tomonidan ishlab chiqariladi,
Interferon ishlab chiqarish texnologiyasi
1.Rekombinant E. coli shtammini yetishtirish,
2.Hosil bo‘lgan biomassani -70°C dan yuqori bo‘lmagan haroratda muzlatish,
3.Muzdan tushirish,
4. Mikroorganizm hujayralarini lizozim ta'sirida yo'q qilish,
5. DNK va RNKni olib tashlash, interferonning ajratilgan erimaydigan shaklini tozalash, yuvish vositalari bilan bufer eritmasi bilan yuvish,
6. Interferon cho’kmasining guanidin gidroxlorid eritmasida erishi,
7.Renaturatsiya va ion almashinadigan xromatografiya yordamida bir bosqichli tozalash.
8.Ishlab chiqaruvchi sifatida uchta promotorni o'z ichiga olgan pSS5 rekombinant plazmidi yordamida olingan E. coli SS5 shtammi ishlatiladi:
|