Saytga yo'naltirilgan nukleazlar

Saytga yo'naltirilgan nukleazlar
ketma-ketlik. Agar mutagen oligonukleotid tuzatish shablon sifatida ishlatilsa, uning ketma-ketligi hujayra
DNKsiga ko'chiriladi. Natijada, genomdagi maqsadli ketma-ketlikda kerakli o'zgarish hosil bo'ladi. Mutagen
oligonukleotidlar
Genom modifikatsiyasi DNKni tanlangan joyda kesib tashlaydigan saytga yo'naltirilgan nukleazlarni (SDN)
ishlab chiqish orqali kengroq qo'llanilishi mumkin bo'ldi.
Hujayra yaxlitligi nuqtai nazaridan afzalroqdir, chunki HDR kesilgan joyni tiklaydi va kesimga ulashgan
tayanch juftlarining har qanday degradatsiyasi "yangidek yaxshi"
Machine Translated by Google
SAM Oliy darajadagi ilmiy maslahatchilar guruhi
59
2017 yil aprel
Qishloq xo'jaligi biotexnologiyasida yangi texnikalar
Tushuntirish eslatmasi
NHEJ DSB ning aniq ta'mirlanishiga olib kelishi mumkin, lekin ayni paytda noaniq tuzatishni
keltirib chiqarishi va tasodifiy nukleotidlarni almashtirish va kichik kiritish yoki
maqsadli nukleotidlarni almashtirish, yo'q qilish yoki kiritish yoki murakkabroq o'zgarishlarga olib
keladigan donor DNK shabloniga asoslangan gomologik rekombinatsiya orqali DSB joyida
kerakli ketma-ketlikni almashtirish.
Oxir-oqibat, bu gen funktsiyasining, genning o'zgarishiga olib kelishi mumkin
o'chirishlar. Bu gen nokautiga olib kelishi mumkin (masalan, genlarning o'zgarishiga olib kelishi).
maqsadli genning o'qish ramkasi yoki kodlangan kritik mintaqani mutatsiyalash orqali
protein). Shuning uchun NHEJ mexanizmi "xatoga moyil" deb hisoblanadi va tasodifiy
mutatsiyalarni (SDN1) maqsadli kiritish uchun qo'llaniladi.
inaktivatsiya yoki genni tuzatish (Symington & Gautier, 2011; Wang, La Russa, & Qi, 2016).
Erta, ammo cheklangan muvaffaqiyat (Cong va boshq., 2013; Jinek va boshq., 2012; Schiml &
HDR maqsadli saytga mos keladigan ketma-ketlik(lar)ga ega DNK molekulasidan foydalanadi
Puchta, 2016) oqsilga yo'naltirilgan SDNlar bilan erishildi, masalan, mega-
ta'mirlash uchun shablon sifatida (tabiatdagi singil xromatid) va ta'mirlashga imkon beradi
shablon sifatida bir xil singlisi xromatiddan foydalanish. Biroq, SDN mavjud bo'lganda
nukleazalar, sink barmoq nukleazalari (ZFNs) va transkripsiya faollashtiruvchisiga o'xshash
effektor nukleazalar (TALENs). ZFN va TALENlar oqsillar bo'lib, ular ma'lum DNK ketma-
ketliklarini tanib olish va DNKni bunday ketma-ketliklar hududida kesish uchun ishlab chiqilgan.
ZFN va TALENlar modulli DNKdan iborat
a ga biriktirilgan ma'lum bir DNK ketma-ketligini taniydigan bog'lovchi domen
mavjud, chunki aniq ta'mirlash kesilgan joyning tiklanishiga olib keladi, bu esa
SDN tomonidan yana buziladi, bu buzilish-ta'mirlash jarayoni davom etadi
xatolarsiz. Biroq, HDR apparati hujayra ichiga ataylab kiritilgan ekzogen gomologik
oligonükleotiddan ham foydalanishi mumkin.
genomni tahrirlash maqsadlari (SDN2 yoki SDN3).
aniq bo'lmagan ta'mirlash sodir bo'lmaguncha va DSB maqsadli saytining mutatsiyasiga olib kelguncha.
Shu tarzda, HDR dan SDN2 yoki SDN3 uchun foydalanish mumkin
DNK zanjirlaridan birini bog'lanish joyida kesadigan nukleaza. ZFN va TALEN juftlarida harakat
qilib, oqsilga yo'naltirilgan bu SDNlar maqsadli ketma-ketlikda qo'sh zanjirli uzilishlarni hosil
qiladi. ZFN va TALENlar kamroq mashhur
Machine Translated by Google
60
SAM Oliy darajadagi ilmiy maslahatchilar guruhi
2017 yil aprel
Qishloq xo'jaligi biotexnologiyasida yangi texnikalar
Tushuntirish eslatmasi
CRISPR bilan bog'liq (Cas) nukleazlar (Cong va boshq., 2013; Jinek va boshq., 2012;
soddaligi, samaradorligi va ko'p qirraliligi tufayli ilovalar (Bortesi & Fischer, 2015;
Doudna & Charpentier, 2014; Ma, Zhu, Chen, & Liu, 2016; R. Peng, Lin, & Li, 2016;
Stout, Klaenhammer, & Barrangou. , 2017).
|