Genlar ifodasini tartibga solish uchun ishlab chiqilgan SDN-larning qo'llanilishi

Genlar ifodasini tartibga solish uchun ishlab chiqilgan SDN-larning qo'llanilishi
dCas9 deb ataladigan nukleaz etishmovchiligi bo'lgan Cas9 ishlab chiqilgan, bu
NHEJ faoliyatining etishmasligi tufayli. SDN2 va 3 mumkin, lekin odatda "rekombinatsiya"
bilan birlashtiriladi. Rekombinatsiya uchun ishlab chiqilgan
hidoyat RNK va maqsadli DNK ham bog'lash qobiliyatini saqlab qoladi, lekin u
maqsadli mutagenez E.coli da shablon ssDNK yordamida va foydalanishni qo'llaydi
induksiyalangan Cas9 faolligi (Nunez, Xarrington va Doudna, 2016). Yaqinda,
DNKni parchalamaydi. Shunday qilib, dCas9 ketma-ketlikka xos sifatida ishlatilgan
Genomni yaratish uchun yangi vositalarni ishlab chiqish va uning epigenetik holatini
qayta yozish uchun RNK tomonidan boshqariladigan DNKni bog'laydigan platforma.
fag l yoki boshqa fag uchun RecT dan ssDNK bog'lovchi oqsilning, lekin
genomni tahrirlash ingibitorlari sifatida ishlatilishi mumkin (Maksvell, 2016; Puchta,
Cas9 faolligi uchun genetik jihatdan kodlanadigan "o'chirgichlar" aniqlandi
LAB uchun ham ishlab chiqilgan (Van Pijkeren & Britton, 2012).
2016).
Umuman olganda, boshqa genlarning ifodalanishiga kutilmagan ta'sir qilish ehtimoli,
shuningdek, genomni tahrirlash tufayli pleiotropik ta'sirlar.
ketma-ketlikka xos usul. dCas9 transkripsiyaga birlashtirilgan
Machine Translated by Google
2017 yil aprel
67
SAM Oliy darajadagi ilmiy maslahatchilar guruhi
Qishloq xo'jaligi biotexnologiyasida yangi texnikalar
Tushuntirish eslatmasi
repressiya yoki faollashuvga olib keladigan modifikatsiyalar kiritilgan
3.3.2. Bir xil yoki jinsiy mos keladigan turlardan genetik materialni kiritish usullari: sisgenez
va intragenez
genlar transgenezda qo‘llanganidek, marker genlardan foydalanmasdan (3.2-bo‘limga qarang),
asosan Agrobakterium vositachiligida amalga oshiriladi.
Har qanday genni kiritish uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan transgenezdan farqli o'laroq
maqsadli genlar.
Garchi Cas9 ning aksariyat ilovalari uning ketma-ketligidan foydalansa-da
o'ziga xos DNKni tahrirlash va nishonga olish qobiliyati, ba'zi mualliflar (Collonnier et
organizm, sisgenez va intragenezda, kiritiladigan genetik konstruksiya uchun manba sifatida faqat
retsipient turlarining va/yoki jinsiy mos turlarning genofondidan foydalaniladi. Jinsiy jihatdan mos
turlar a bo'lishi mumkin
yaqindan bog'liq madaniy turlar yoki ularga bog'liq yovvoyi turlar. Bo'lgan holatda
al., 2015; Liu, Yuan va Styuart Jr., 2013; Podevin va boshqalar, 2013) bor
cisgenesis, o'z tartibga soluvchi elementlarga ega bo'lgan butun gen kiritilgan. Intragenez holatida
kiritilgan DNK yangi birikma bo'lishi mumkin
RNK ketma-ketligini nishonga olish va gen ekspressiyasini o'zgartirish uchun SDN lardan foydalanishni taklif qildi
bir vaqtning o'zida turli yo'llar bilan tartibga solinishi mumkin (masalan, ba'zilari repressiya qilingan,
turning o'zidan yoki o'zaro faoliyatdan olingan DNK parchalarini tartibga soluvchi yoki kodlovchi
mos keladigan turlar.
ba'zilari faollashtirilgan).
Ishlab chiqilgan nukleaza yetishmaydigan SDNlar (oqsilga yo'naltirilgan va RNKga yo'naltirilgan)
genomga aralashmasdan post-transkripsiya darajasida. RNKni maqsadli qilish uchun ishlab
chiqilgan SDN-lardan foydalanish salohiyati Cas9-ga asoslangan vositalarning yangi ilovalarini
yanada rivojlantirish uchun kuchli ilhom hisoblanadi.
turli xil RNK modifikatsiyalari, masalan, barqarorlikni, lokalizatsiyani tartibga solish,
bo'lganlar) epigenetik modifikatsiyalarni, shu jumladan DNK metilatsiyasini va giston
modifikatsiyalarini (metilatsiya va atsetilatsiya) kiritish yoki olib tashlash uchun ham ishlatilishi
mumkin. Epigenetik modifikatsiya qiluvchi fermentlarni dCas9 ga birlashtirish orqali epigenetik
va maqsadli RNKlarni birlashtirish (Dominguez, Lim, & Qi, 2015; H. Vang va boshq., 2016).
Cisgenik va intragenik o'simliklar o'xshash usullar bilan hosil qilinadi
Machine Translated by Google
|