Биохимические показатели крови человека при сальмонеллезной интоксикации

1
























































Реферат.



Дипломная работа на тему: «Биохимические показатели крови человека при сальмонеллезной интоксикации» содержит 46 страниц печатного текста,     таблиц, 8 рисунков, 59 использованных источников литературы, из них 10 иностранных.



Перечень ключевых слов: сальмонеллез, перекисное окисление липидов, циркулирующие иммунные комплексы, каталаза, молекулы средней массы, сывороточный альбумин, эндогенная интоксикация.



Объект исследования: сыворотка крови практически здоровых людей и больных сальмонеллезом г. Пензы.



Практическое применение: в здравоохранении.




























Список сокращений.



ПОЛ – перекисное окисление липидов;

ЦИК – циркулирующие иммунные комплексы;

ЧСА – человеческий сывороточный альбумин;

МДА – малоновый диальдегид;

ПЭГ – полиэтиленгликоль;

АОС – антиокислительная способность;

АТ – антитело;

АГ – антиген;

ИК – иммунный комплекс;

ЛПС – липополисахаридный комплекс;

МСМ – молекулы средней массы;

ТБК – тиобарбитуровая кислота;

ЭКА – эффективная концентрация альбумина;

ОКА – общая концентрация альбумина;

ТХУ – трихлоруксусная кислота;

ЦНС – центральная нервная система;

ц-АМФ – циклический аденозинмонофосфат;

АФК – активные формы кислорода;

LOOH, HOOH – гидроперекиси;

СОД – супероксиддисмутаза.

























Содержание.



Введение………………………………………………………………..



Обзор литературы ………………………………………………...

Биохимическая характеристика интоксикации при сальмонеллезной инфекции…………………………..……..

Молекулярные механизмы развития эндогенной 

        интоксикации при сальмонеллезе……………………..…..

Показатели уровня эндогенной интоксикации 

        организма при сальмонеллезе……………………………….



Материалы и методы исследования………………………….

Материалы исследования…………………………………….

Методы исследования…………………………………………



Результаты и обсуждение………………………………….……

Определение показателей уровня интоксикации в 

         сыворотке крови практически здоровых людей……..

Определение показателей уровня интоксикации в 

        сыворотке крови больных сальмонеллезом………….…..



Список использованных источников……………………….…..



Выводы………………………………………………………………….



Приложения…………………………………………………………….

5-6



7-19



7-11



11-14



14-19



20-25

20

20-25



26-34



26-27



28-34



35-40



41



42-46






Введение



Успехи в борьбе с инфекционными заболеваниями в нашей стране общепризнанны. Вместе с тем в инфектологии еще остаются проблемы, имеющие серьезное социально-экономическое значение для всех стран мира. К их числу относятся острые кишечные инфекционные заболевания [1].

Сальмонеллез – группа острых кишечных инфекционных болезней, вызываемых бактериями рода Salmonella, характеризующихся значительным полиморфизмом клинического течения, частым наличием интоксикации, лихорадки, признаков поражения желудочно-кишечного тракта [2].

Крупные достижения отечественных и зарубежных исследователей, установивших патогенетическое значение нарушения биологической регуляции при острых кишечных инфекциях, дали новый импульс в изучении патогенеза сальмонеллеза [3].

Иммунная система представляет собой сложную многокомпонентную систему из быстроделящихся и покоящихся клеток. Она является высокочувствительной к воздействию токсинов бактерий. Это приводит к нарушению иммунорегуляторных процессов.

Наиболее информативными являются показатели состояний прооксидантно-антиоксидантного равновесия, которое при усилении действия на организм токсинов смещается в сторону активизации ПОЛ, уровня холестерина, ЦИК, Ит, МСМ.

ПОЛ – это фундаментальный универсальный молекулярный механизм, лежащий в основе устойчивости и адаптационных возможностей организма. В норме ПОЛ обеспечивает условие для жизненно важных функций клетки, в случае же интоксикации становится пусковым механизмом патобиохимических изменений в организме человека.

Целью моей дипломной работы является изучение биохимических показателей эндотоксикоза в динамике патологического процесса. В задачи исследования входило:

		 Определение содержания МДА, уровня холестерина, ЦИК, Ит, МСМ и активности каталазы в группе контроля, которую составили практически здоровые люди.

		 Определение содержания МДА, уровня холестерина, ЦИК, Ит, МСМ и активности каталазы у больных сальмонеллезом.

		 Исследование изменения изучаемых показателей у больных в зависимости от степени тяжести заболевания.



































		
Обзор литературы



		Биохимическая характеристика интоксикации при сальмонеллезной инфекции



Сальмонеллезы принадлежат к числу инфекционных заболеваний, весьма широко распространенных на всех континентах мира. Возбудителем сальмонеллезов являются микроорганизмы, принадлежащие к роду Salmonella, семейства кишечных Enterobacteriaceae.

Сальмонеллы – это  мелкие  бактерии  вытянутой  формы  с закругленными  концами  длиной  от  1  до  3  и  диаметром 0,5-0,8 нм [4].

Сальмонеллез встречается чаще у жителей городов, чем сел, что связывается с лучшей регистрацией заболеваемости, наличием множественных детских учреждений, широким употреблением пищевых полуфабрикатов. Заболевание отмечается круглый год, но максимальное число регистрируется в теплое время года, что объясняется благоприятными условиями размножения сальмонелл в пищевых продуктах и реализации инфекции [5].



Таблица 1.1.1.

Статистические данные больных сальмонеллезом г. Пензы.

Год

Количество больных

г. Пензы

На 100 тыс. населения, %

Кол-во больных Пензенской 

области

На 100 тыс. населения, %

1996

187

34,9

362

23,1

1997

140

26,1

316

20,3

1998

230

43,0

448

28,8



В возникновении сальмонеллеза ведущую роль играют живые бактерии, гибель которых в организме больного сопровождается развитием эндотоксинемии. Принято выделять два вида токсичных продуктов жизнедеятельности микробов-экзотоксии и эндотоксии. К экзотоксинам отнесены токсичные продукты жизнедеятельности бактерий, активно (при жизни) секретируемые в окружающую среду, а к эндотоксинам – те ядовитые для макроорганизма продукты жизнедеятельности, которые освобождаются только при лизисе микробной клетки [6].

Кроме токсина палочка имеет ряд антигенов клеточной стенки. О-антиген расположен на поверхности микробной клетки и представляет собой фосфолипидно-полисахаридный комплекс, включающий 60 % полисахарида, 20-30 % липида и 3-4,5 % гексозамина. Н-антиген определяется жгутиками. Поверхностные антигены клеточной стенки провоцируют типоспецифический антительный ответ, а глубинные – видоспецифический [6,7].

При сальмонеллезе развитие и тяжесть симптомов обусловлены интоксикацией и обезвоживанием. По мнению А.Ф. Билибина интоксикация – явление сложное, сводящееся к изменению нервнорефлекторной деятельности и гуморальной регуляции с обменными сдвигами. К.В. Бунин в основу синдрома интоксикации ставит воздействие токсина на : 

падение артериального давления, снижение сократительной способности миокарда; 

		 гормональную регуляцию водно-солевого обмена с изменениями биосинтеза гормонов в коре надпочечников с угнетением процесса их метаболизма;

		 функцию почек (снижение клубочковой фильтрации, повышение канальцевой реабсорбции воды, снижение концентрации очищения мочевины) [8].

Сальмонеллезная интоксикация возникает как результат патологии первичного ответа на инфекционный агент вследствие значительных потерь воды и электролитов с рвотой и жидким стулом. По мере увеличения дефицита воды и электролитов на первый план выступают симптомы обезвоживания и поражения ЦНС. Если процесс прогрессирует, обезвоживание нарастает, появляются признаки недостаточности кровообращения, которые при интоксикации имеют клинику шока. Частая рвота и понос – первые признаки интоксикации [9].

Обязательным условием развития заболевания являются наличие большого количества возбудителей и их токсинов, массовое проникновение антигенов в кровь. Наибольшей токсичностью отличается липид А, вызывающий следующие основные реакции: активацию лейкоцитов и макрофагов, стимуляцию выброса эндогенного пирогена, антогониста глюкокортикоидов, интерферона, интерлейкинов, подавление тканевого дыхания, активацию системы комплемента, тромбоцитов, факторов свертывания крови другие [10,11], [рис. 1.1.1].

Главной причиной развития шока при сальмонеллезе считается не повреждающее действие самих микробов или их токсинов, а своеобразный ответ организма на них. Под токсико-инфекционным шоком следует понимать экстремальное состояние организма, наступающее в результате действия токсичных субстанций возбудителей, патогенных иммунных комплексов на органы и ткани организма, сопровождающееся острым нарушением метаболизма в них [12].


Схематическое изображение липополисахаридов 

стенок микробов.

















































Рис. 1.1.1.



С.А. Степанов с помощью аспирационной биопсии обнаружил в тонкой кишке больных сальмонеллезом изменение эпителия, острое воспаление слизистой оболочки, нарушение микроциркуляции и сосудистой проницаемости. К.Х. Ходжаев в эксперименте на крысах показал, что сальмонеллезная инфекция вызывает нарушение процесов тканевого дыхания и фосфорилирования. Состояние поджелудочной железы изучено Белянской Т.А. В острый период болезни отмечено снижение ферментативной активности панкреатического сока – уровень трипсина был снижен в 71 % случаев, липазы в 55 %, амилазы – в 66 %.

Таким образом эндотоксин вызывает активацию синтеза, преимущественно протеолитических ферментов, задержку экструзии секретируемых проэнзимов, что приводит к секреции и поступлению ферментов в лимфатическое и кровеносное русло [13,14].

При сальмонеллезе развивается обезвоживание, обусловленное потерей внеклеточной жидкости, а при тяжелом течении заболевания и части клеточной. Дегидратация в большинстве случаев имеет изотонический характер, сочетаясь с развитием сгущения крови, дефицитом электролитов, метаболическим ацидозом в капиллярной и венозной крови [15], [рис. 1.1.2].



Молекулярные механизмы развития эндогенной 

интоксикации при сальмонеллезе



Явления интоксикации вызывают заболевания, сопровождающиеся повышенным распадом тканей, усиленными процессами катаболизма, недостаточностью функции печени и почек, снижением процессов микроциркуляции [16].

В ответ на действие первичного патогена, которым являются эндотоксины, сальмонелл, в организме развиваются типовые каскадные реакции, что лежит в основе современной концепции СЭИ.

На Международном симпозиуме в Санкт-Петербурге (1994 г) было дано определение этого синдрома как клинического синдрома с проявлением симптомов интоксикации при патологических состояниях неоднородных по этиологии и обуславливающих накопление в тканях и биологических жидкостях организма продуктов патологического обмена     веществ,     метаболитов,     деструкции клеточных и тканевых структур, разрушения белковых молекул [17,18].



Шано В.П. с соавторами подчеркивает, что токсическое влияние липополисахаридной субстанции эндотоксина проявляется комплексом нарушений, обусловленных повреждением как циркулирующих клеток в кровотоке, так и эндотелиоцитов, эозинофилов, нейтрофилов, макрофагов, следствием чего является выброс в кровоток ряда биологически активных веществ – цитокинов, интерлейкинов. Главной точкой приложения эндотоксина являются эндотелиальные клетки, активация их приводит к высвобождению простациклина, выделению эластазы, токсических метаболитов кислорода, факторов активации тромбоцитов и комплемента с высвобождением терминального комплекса комплемента, брадикинина с последующим формированием синдрома повышенной проницаемости капилляров. Это приводит к тому, что в очаг воспаления начинают входить компоненты крови, прежде всего фибриноген и тромбоциты. Фибрин способствует агрегации тромбоцитов, полимеризации фибрина и – возникновению тромбов. Следствием тромбоза являются нарушения микроциркуляции с последующей гипоксией, что приводит к дальнейшим повреждениям клеток в очаге воспаления. Метаболическим результатом этого является изменение аэробного метаболизма клеток на анаэробный, повышенное продуцирование лактата и протонов, снижение показателей рН [19].

Среди тканевых (клеточных) медиаторов воспаления важное место занимают простагландины. Исходными продуктами для биосинтеза простагландинов являются ненасыщенные жирные кислоты: линолевая, арахидоновая, пентаноевая. Наибольшее значение имеет в организме арахидоновая кислота, которая содержится в фосфолипидах клеточных мембран.

Простагландины вызывают сильное диуретическое и натрийуретическое действие, оказывают разнообразное действие на желудочно-кишечный тракт. Они могут стимулировать и тормозить сокращение и секреторную активность тонкой кишки, тормозят секрецию соляной кислоты слизистой оболочки желудка. Простагландины вызывают секрецию воды и электролитов в просвет кишки, вызывая диарею, повышают концентрацию ц-АМФ в слизистой оболочке тонкой кишки, влияют на прочность и упругость эритроцитарной мембраны [20, 21, 22, 49].



Показатели уровня эндогенной интоксикации 

организма при сальмонеллезе



Анализируя данные литературы за последние десятилетия, можно сказать, что основными показателями интоксикации при сальмонеллезе являются ПОЛ, уровня холестерина, ЦИК, ИТ, МСМ и активность каталазы. При развитии интоксикации на фоне сальмонеллеза происходит активный хемотаксис нейтрофиллов в очаг воспаления, где они поглощая и переваривая чужеродный агент, изменяют свою метаболическую  активность, характеризующуюся усилением поглощения кислорода, повышенной утилизацией глюкозы и гиперпродукцией АФК () [23, 24].

Перекисное окисление является универсальным механизмом взаимодействия кислорода со многими органическими субстратами, в том числе с липидами. Внедрение кислорода в молекулы окисленного субстрата приводит к образованию реакционно-способных промежуточных продуктов – свободных радикалов, гидроперекисей, которые в дальнейшем вызывают повреждение других классов соединений – белков, нуклеиновых кислот, углеводов (рис. 1.3.1).




Метаболизм супероксидного радикала в норме 

и при патологии (Владимиров Ю.Я., 1998)







OONO (пероксинитрит)

пероксидаза

каталаза

Токсическое действие

детоксикация 

антимикробное действие

расслабление стенок 

кровеносных сосудов

токсическое действие 

 





 



 



 





+

                  

























Рис. 1.3.1.



Накопленные к настоящему времени данные литературы позволяют сделать вывод о том, что свободнорадикальное окисление липидов при сальмонеллезной инфекции играет определенную патогенетическую роль [25, 50].

Установлено, что при развитии ПОЛ в биомембранах понижается содержание легкоокисляемых полиненасыщенных жирных кислот и изменяются физико-химические свойства: микровязкость, текучесть, мембранный потенциал, полярность внутренних областей мембран.  Таким образом, изменяются транспортные свойства мембраны и активность ферментов [26].

Регуляция свободнорадикального окисления обеспечивается в клетке системой антиоксидантной защиты. Так, накапливающаяся в процессе ПОЛ перекись водорода обезвреживается с помощью каталазы, присутствующей во всех тканях организма. Каталаза (КФ 1.11.1.6.) представляет собой гемсодержащий фермент с молекулярной массой около 250000 Д, локализованный в пероксисомах клеток [27].

Митохондриальная каталаза участвует в оксидазном пути окисления, сопровождающемся запасанием энергии в виде АТФ. Блокирование транспорта электронов в дыхательной цепи приводит к стимуляции пероксисомального окисления. При потологиях, связанных с нарушением энергетических процессов, каталаза пероксисом может выходить из них и участвовать в окислении на мембранах эндоплазматического ретикулума [28, 53].

В работе Л.Б. Оконенко с соавторами о состоянии антиоксидантной системы судили по активности СОД, глутатионпероксидазы и каталазы, анализ данных выявил дефицит антиоксидантов [29, 30].

При инфекционном токсикозе в мембранах эритроцитов резко снижается содержание общих фосфолипидов, но увеличивается количество НЭЖК и лизофосфотидилхолина, что косвенно указывает на повышение активности фосфолилаз, которые избирательно разрушают липиды мембран. Холестерин подвергается как активному, так и пассивному обмену в мембранах эритроцитов [29]. Фермент лецитинхолестеролацил трансфераза превращает эфиры холестерина в свободный холестерин и тем самым регулирует уровень свободного холестерина в плазме, что способствует проникновению его в мембраны. Следовательно, инактивация этого фермента в результате гипоксии при эндотоксикозе ведет к повышению уровня эфиров холестерина в мембранах эритроцитов [31,32].

Наряду с уровнем МДА, активности каталазы и уровня холестерина для диагностики заболевания и его прогноза имеют значение и другие неспецифические показатели – ЦИК, Ит, МСМ.

Синтезирующиеся при формировании иммунитета специфические антитела обладают способностью взаимодействовать с антигенами возбудителей и тем самым вызывать нейтрализацию патогенных микробов и их токсинов. Эта реакция сопровождается образованием иммунных комплексов антиген – антитело [33, 34, 54, 55]. При патологических состояниях образование ИК выходит из под контроля, в результате чего развивается та или иная болезнь ИК [рис. 1.3.2.]. 



Патогенетические механизмы болезней иммунных 

комплексов (Сура В.В., 1987)



Свойства антигенов

Удаление иммунных комплексов

Нормальный 

катаболизм ИК

Соотношение Аг/Ат

Свойства иммунного комплекса

Свойства антител

Нарушение 

катаболизма ИК

Отложение ИК 

в тканях

Развитие болезней ИК

Нарушение 

иммунорегуляции



Рис. 1.3.2.



В результате развития эндотоксемии при сальмонеллезе организм длительное время контактирует с избытком АГ как экзогенного (компоненты микробных клеток), так и эндогенного (компоненты разрушенных клеток самого организма) происхождения. Вместе с тем наблюдается угнетение системы комплемента, ответственного за лизис микробных клеток. В этих условиях значительного избытка АГ и недостаточности выработки АТ может привести к образованию ИК, которые способны откладываться в определенных тканях и вызывать острые воспалительные реакции. При значительных отложениях наблюдаются функциональные и морфологические повреждения органов и тканей [35].

Связываясь с клеточной мембраной ЦИК вызывают выделение в окружающую среду протеолитических ферментов и основных пептидов. Эти вещества повреждают протеогликановые компоненты тканей, действуют на базальную мембрану и вызывают некроз эндотелиальных клеток [36].

ЦИК наряду с продуктами ПОЛ вызывают нарушение проницаемости мембран, вплоть до их разрыва, что в конечном итоге может привести к гибели клетки. В результате появляются различные вещества пентидной природы. Из них наибольший интерес представляют молекулы средней массы.

Являясь олигопептидами с молекулярной массой 300-5000 Дальтон, они расцениваются как универсальный критерий эндогенной интоксикации и влияют на ее уровень и прогноз [37, 38].

МСМ образуются в организме под воздействием повреждающих эндогенных или экзогенных факторов различного генеза, являются промежуточными продуктами протеолиза. [39, 57].

Пристальное внимание исследователей к  МСМ объясняется высокой биологической активностью их отдельных фракций, которые ингибируют гликолиз, глюконеогенез, пентозный цикл, синтез гемоглабина, нуклеиновых кислот, мембранный транспорт, дагоцитов, эритропоэз, микроциркуляцию, обладают иммунодепрессивным, цитотоксическим, нейро- и психотропным свойствами. Сейчас, квалификационная оценка степени тяжести состояния больных при сальмонеллезе немыслима без определения МСМ [40]. 

Установлено, что значительная часть циркулирующих в крови СМ не только растворена в  плазме крови, но и  связана с альбумином.

Человеческий сывороточный альбулин (ЧСА) – важнейший транспортный белок, осуществляющий перенос эндогенных метаболитов и ксенобиотиков в плазме крови, межклеточной жидкости, в лимфе.

Универсальность транспортной функции ЧСА обеспечивается его уникальной способностью связывать лиганды различной химической природы. Интенсивная лигандная нагрузка молекул альбулина приводит к изменению их структуры и связывающей способности. Такие модификационные формы ЧСА обнаруживаются при патологии [41].

О величине токсического действия вредных веществ можно судить по ЭКА, которая  снижается после того, как токсические вещества займут центры связывания в молекуле альбулина, что приводит к снижению детоксикационных свойств организма. Изучение свойств альбулина является важным с точки зрения как диагностики, так и лечения [42].







		
Материалы и методы исследований



		Материал исследований



Уровень интоксикации оценивался по изменениям в крови больных эффективной и общей концентраций сывороточного альбулина, малонового диальдегида, как одного из продуктов ПОЛ, уровня холестерина, ЦИК, МСМ и активности каталазы.

Для всех исследований бралась сыворотка крови. Исследовано 30 больных сальмонеллезом в возрасте от 17 до 46 лет. Для контроля набиралась группа 51 человека разного пола в возрасте от 20 до 46 лет.

Кровь бралась из локтевой вены, преимущественно натощак в количестве не менее 5 мл. Центрифугируем 1500 об/мин 10 минут. Для выполнения анализов сыворотки необходимо использовать сразу или заморозить и хранить при t=-20С.



Методы исследований



2.2.1. Определение МДА с тиобарбитуровой кислотой 

 (Конюхова В.С., 1989)



Об изменении интенсивности ПОЛ судим по изменению уровня вторичного продукта ПОЛ – малонового диальдегида.

Метод основан на том, что при высокой температуре в кислой среде МДА реагирует с 2-ТБК, образуя окрашенный розовый триметиновый комплекс с максимумом поглощения при 535 им.

Ход работы: К 0,2 мл сыворотки крови добавить 0,2 мл дистиллированной воды,  1 мл 0,6 % ТБК в ледяной уксусной кислоте. Кипятить 30 минут, охладить и добавить 1 мл 5№ КОН и 2 мл изопропанола. Центрифугируют при 6000 об/мин 20 минут. Колориметрируют при 535 нм и 580 нм против контроля, содержащего вместо плазмы воду.

Расчет:  (мкМоль/л), где Е – оптическое поглащение изопропилового экстракта; 106 – коэффициент пересчета оптической плотности.

Пример расчета: больной Максимов С., 19 лет



концентрация МДА =  (мкМоль/л).



2.2.2. Определение активности каталазы

(Королюк М.А., 1988)



Метод основан на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс.

Ход определения: Реакция запускается добавлением 0,1 мл сыворотки крови к 2 мл 0,03 % раствора перекиси водорода. В холостую пробу вместо сыворотки вносят 0,1 мл дистиллированной воды. Реакцию останавливают через 10 минут добавлением 1 мл 4% молибдата аммония. Интенсивность окраски измеряют на спектрофотометре при длине волны 410 нм против контрольной пробы, в которой вместо перекиси водорода вносят 2 мл воды.

Расчет:  (мкат/л), где 

Е – активность каталазы в мкат/л;

А – оптическая плотность холостой и опытной проб;

V – объем вносимой пробы, 0,1 мл;

t – время инкубации, 600 сек;

К – коэффициент миллимолярной экстинкции перекиси водорода, равный .

За единицу активности каталазы принимают то количество фермента, которое участвует в превращении 1 мкат перекиси водорода за 1 секунду при заданных условиях. Расчет активности каталазы ведут на 1 л сыворотки крови.

Пример расчета: больной Крайнов Т.В., 31 год.





 (мкат/л)



2.2.3. Определение общего холестерина в сыворотке крови ферментативным методом «Фотокол»

(Творогова М.Г., 1995)



Определение основано на сопряженных реакциях, которые катализирует  холестеринэстераза, холесериноксидаза и пероксидаза:

Эфиры холестерина  холестерин + Ж.К.;

Холестерин + О2  холестинон + Н2О2;

Н2О2 + хромогены  Н2О + окрашенный продукт.



Концентрация образующегося в ходе реакции окрашенного продукта пропорциональна концентрации холестерина в пробе.

Ход определения: Рабочий реагент обязательно вносить в пробирки после проб, содержащих холестерин. Пробирки встряхнуть и инкубировать при t = 37oС. Через 10 минут после начала инкубации пробирки повторно встряхнуть и инкубировать 20 минут при t = 37oС. Окрашенные пробы фотометрировать при 500 нм в кювете с длиной оптического пути 5 мм или 10 мм относительно холостой пробы. Окраска стабильна в течении двух часов при комнатной температуре.

Концентрацию холестерина в исследуемых пробах рассчитать по формуле:

 ммоль/л, где

ЕОП и ЕК – оптические плотности исследуемой пробы и пробы с калибратором.

Норма: 3,62 – 5,2 ммоль/л.




2.2.4. Определение циркулирующих иммунных комплексов 

в крови методом ПЭГ-теста (Гриневич Ю.А., 1988)



Метод основан на селективной преципитации комплексов АТ-АГ в 3,75 % ПЭГ (полиэтиленгликоля) с последующим определением плотности преципитата.

Реактивы: 

0,1 м боратный буфер (3,410 г борной кислоты, 4,275 г буры растворить в 1 л дистиллированной воды)

10 г полиэтиленгликоль – 6000 ед. растворить в 240 мл буфера.

Ход определения: К 0,3 мл сыворотки крови добавить 0,6 мл реактива №1, перемешать и перенести по 0,3 мл в 2 пробирки. В I добавить 2,7 мл раствора №1 (контроль). Во II добавить 2,7 мл раствора №2 (опыт).  Перемешать, инкубировать в течение 60 минут при комнатной температуре. На спектрофотометре (КФК-3) определяют оптическую плотность в кюветах  при 450 нм.

Расчет: Высчитывают разность показателей оптической плотности, результат умножают на 1000 и получают количество ИК в 100 мл сыворотки. Ответ выражают в единицах оптической плотности.  - количество ЦИК в 100 мл сыворотки.

Норма: 54,24 + 2,03 усл. ед.

Пример расчета: больной Максимов С.И., 19 лет.





Количество ЦИК в 100 мл сыворотки:

 усл. ед.



2.2.5. Определение уровня МСМ в крови (Габриэлен Н.И., 1984)



Метод основан на осаждении белков из исследуемой жидкости 10 % раствором ТХУ с последующем центрифугированием и определением абсорбции света супернатантом в 10 раз разведенным дистиллированной водой.

Ход работы: Сыворотку крови обрабатывают 10 % раствором ТХУ. В качестве контроля лучше использовать сам раствор ТХУ в 30 раз разведенный дистиллированной водой. Оптическая плотность его против воды составляет 0,1230,012 усл. ед. на волне 254 нм при 23-25С. Центрифигируем 3000 об/мин в течение 30 минут. К 0,5 мл надосадочной жидкости +4,5 мл дистиллированной воды. Измерение проводим на спектрофотометре в УФ свете при 280 нм для определения ароматических аминокислот и при длине волны 254 нм для определения нуклеотидов. Уровень МСМ выражают в единицах, количественно равных показателям экстинции.



2.2.6. Определение показателей «эффективная концентрация 

альбумина» и «общая концентрация альбумина» в сыворотке крови человека флуоресцентным методом 

(Миллер Ю.И., 1994).



Принцип метода: 

Метод основан на специфическом взаимодействии флуоресцентных органических соединений с альбумином в сыворотке крови. В зависимости от условий этого взаимодействия интенсивность флуоресценции красителя из альбумина отражает различные свойства белка. Индекс ЭКА/ОКА не зависит от числа молекул альбумина в пробе и характеризует физико-химические свойства молекулы альбумина.

Состав набора: 

Реактив I (4 ампулы по 5 мл). Предназначен для приготовления раствора используемого при разбавлении сыворотки крови. Он содержит антикоагулянт ЭДТА. 

Реактив II (4 ампулы по 0,7 мл). Основным компонентом является специальное флуоресцирующее соединение, интенсивность флуоресценции которого в сыворотке крови пропорциональна концентрации сывороточного альбумина.

Реактив III (4 ампулы по 0,7 мл). Взаимодействие реактивов №2 и №3 с сывороткой позволяет определить ОКА. 

Определение показателя ЭКА:

К 2,0 мл надосадочной жидкости добавить 0,025 мл реактива 2. Перемешать. Измерить интенсивность флуоресценции при длине волны возбуждения 420 нм и длине волны испускания 515 нм.

Определение показателя ОКА:

В ту же пробу добавить 0,025 мл реактива 3. Перемешать. Измерить интенсивность флуоресценции. Нормальные величины показателя ЭКА лежат в интервале нормальных значений ОКА от 40 г/л – 55 г/л. 

Подготовка образцов крови к измерениям:

Буферный раствор: Содержимое ампулы с реактивом 1 перенести в 100 мл дистиллированной воды. Перемешать. 0,025 мл сыворотки крови добавить в пробирку, содержащую 5 мл раствора для разбавления крови. Для анализа берут жидкость 2,0 мл полученного образца.

Используют специализированный анализатор АКЛ-0,1.















		
Результаты исследования и их обсуждение



		Определение показателей уровня интоксикации 

в сыворотке крови практически здоровых людей



Нами было произведено исследование биохимических показателей – МДА, активность каталазы, уровень холестерина, ЦИК, МСМ, Ит в сыворотке крови 51 донора в возрасте от 20 до 46 лет. Сыворотка крови доноров была получена на ОСПК (областная станция переливания крови) г. Пензы.

Полученные результаты биохимических анализов были подвергнуты статистической обработке, согласно методам и приемам статистического анализа.

По данным комитета экспертов Международной федерации клинической химии по референтным величинам рекомендуется верхняя и нижняя границы нормы на уровне М1,96σ, состояние предболезни М2σ, состояние острой формы М3σ.

Об уровне процессов ПОЛ судили по концентрации вторичного продукта МДА. Содержание количества МДА составляет 3,610,07 мкМоль/л. Это значение близко к данным, найденным в литературе (табл. 3.1.1). У 48 человек значение содержания МДА входит в границы М1,96σ. У 3 человек (5 %) содержание МДА соответствует значению М2σ, что соответствует состоянию предболезни.

Активность каталазы у практически здоровых людей составила 16,70,15 мкат/л (табл. 3.1.1). При исследовании активности каталазы в группе доноров отклонений за пределы М1,96σ мы не наблюдали. 

Уровень холестерина, определяемый нами у практически здоровых людей составил 4,450,68 ммоль/л (табл. 3.3.1.), показатели уложились в границу референтной величины М1,96σ.

Содержание ЦИК, определяемое нами в сыворотке крови практически здоровых людей составило 52,623,52 усл. ед. (табл. 3.1.1). 94 % людей по показателям ЦИК входит в границы нормы, а 6% находятся в состоянии предболезни.

Уровень МСМ у обследованных доноров в среднем составил 0,2800,01 усл. ед. Это значение близко к данным, найденным в литературе (табл. 3.1.1). При исследовании МСМ отклонений за пределы М1,96σ мы не наблюдаем.

У практически здоровых людей определена детоксикационная нагрузка сывороточного альбумина, т.е. определение общей и эффективной концентрации альбумина. Токсичность по альбумину составляет 0,130,01 усл. ед. (табл. 3.1.1). Все значения токсичности по альбумину вошли в границы М1,96σ.

Полученные нами данные не имели существенных отличий от значений этих показателей, имеющихся в литературе в сравнении с приложением 2.



Таблица 3.1.1.



Содержание биохимических показателей в сыворотке крови практически здоровых людей



Группа

обследованных

n

	МДА

	мкМоль/л

Активность 

каталазы

мкат/л

ЦИК

усл. ед.

МСМ

усл. ед.

Ит

усл. ед.

Холестерин

ммоль/л

Практически 

здоровые

51

	3,610,07

16,70,15

52,623,52

0,280,01

0,130,01

4,450,68



Определение показателей уровня интоксикации 

в сыворотке крови больных сальмонеллезом



Сыворотка крови больных исследовалась на базе центра госсанэпиднадзора г. Пензы. Исследования биохимических показателей велись в острую фазу заболевания и в период ранней реконвалесценции. Обследовано нами 30 больных сальмонеллезом в возрасте от 17 до 46 лет, с целью установления показателей, характеризующих эндотоксикоз: перекисное окисление липидов, уровень холестерина, Ит по сывороточному альбумину, циркулирующих иммунных комплексов, молекул средней массы и активности каталазы. Причем биохимические показатели крови в разгар заболевания отличались от показателей в период ранней реконвалесценции.



Таблица 3.2.1.

Биохимические показатели сыворотки крови

у больных сальмонеллезом



Группа

обследованных

МДА

мкМоль/л

Активность 

каталазы

мКат/л

Ит

усл. ед.

	ЦИК

	усл. ед.

	МСМ

	усл. ед.

Холестерин ммоль/л

Контроль, n=51 (практически 

здоровые)

3,610,07

16,70,15

0,130,01

	52,623,52

	0.2800,01

4,450,68

Больные (острый период) n=30

7,190,2

13,090.16

0,290,01

	100,634,04

	0,5500,02

6,540,07

Больные (ранняя 

реконвалесценция) n=30

3,870,15

15,840,19

0,150,01

	68,92,8

	0,3100,02

4,650,7



р≤0,001

р≤0,01

р≤0,001

	р≤0,001

	р≤0,05

р≤0,01



Так, в ходе исследования выявлено достоверное увеличение количества МДА в сыворотке крови больных сальмонеллезом на   99 % по отношению к контролю, т.е. возрастает в 2 раза. Данные наших исследований подтверждаются сведениями Л.Б. Оконенко, Л.Д. Мартыненко и другими. По данным этих авторов концентрация МДА при сальмонеллезе возрастает в 2-2,5 раза.

Как видно из таблицы (табл. 3.2.1), у больных наблюдается интенсификация ПОЛ.

Под воздействием сальмонеллезного токсина происходит нарушение липидных бислоев клеточных и субклеточных мембран. Накопление в крови первичных и вторичных продуктов ПОЛ идет не в силу количественных изменений в содержании фосфолипидов плазмы крови, а вследствие интенсификации их свободнорадикального окисления. Результатом инициации ПОЛ становится образование критических концентраций продуктов ПОЛ, которые токсичны для организма. Известно, что повышение ПОЛ может приводить к нарушению проницаемости мембран с последующей инактивацией мембранно-ассоциированных ферментных систем, выходом лизосомальных гидролаз в цитозоль, что вызывает повреждение ДНК т другие существенные изменения в структуре и функциональном состоянии клетки [29, 43, 51, 52].

Установлено, что при ряде инфекционных заболеваний развивается антиоксидантная недостаточность. Одновременно снижается актиность ферментов антиоксидантной защиты, в частности каталазы [44].

По нашим наблюдениям, активность каталазы снизилась на 22 % в острый период заболевания по отношению к контролю. В период ранней реконвалесценции показатель активности каталазы приближается к контролю (табл. 3.2.1).

Л.Б. Оконенко, Л.И. Волкова в своих работах отмечает угнетение каталазной активности. В острый период заболевания происходит резкое сокращение антиоксидантной обеспеченности организма [26, 29].

А.С. Волков указывает на то, что в процессе эндотоксикации метаболические расстройства приводят к гиперлипидемии. Это подтверждается данными наших наблюдений. Так, уровень холестерина в сыворотке крови больных сальмонеллезом в среднем составил 6,540,07 ммоль/л, что на 46,9% больше контроля (табл. 3.2.1).

Таким образом, гиперхолестеринемия характеризует патологию обмена липидов и липопротеидов [32,45].

В период ранней реконвалесуценции  уровень холестерина приближается к контролю [рис. 3.2.1].



Процентное соотношение показателей липидного обмена при эндотоксикозе, вызванном сальмонеллезной инфекцией 





Рис. 3.2.1.



Анализируя результаты проведенных исследований, мы установили, что содержание ЦИК в плазме крови больных сальмонеллезом на 91 % больше, чем в контроле [рис. 3.2.2]. Полученные данные согласуются с выводами исследования И.А. Ильинского, Т.В. Лукинской и других. Повышенное содержание ЦИК говорит о снижении антителообразования в присутствии избытка антигенов. В подобной ситуации ЦИК индуцирует острое иммунное воспаление, сопровождающееся повреждением эндотелия сосудов и почечных клубочков, активацией кининовой системы, что ведет к более серьезным метаболическим нарушениям [46, 47, 48].

Как правило, повышение уровня ЦИК обнаруживается уже в начальный период болезни, на этом же уровне содержание их остается и в острую фазу. Только в стадии реконвалесценции наблюдается понижение показателей [табл. 3.2.1].



Процентное соотношение показателей эндотоксикоза (ЦИК, МСМ) в сыворотке больных относительно контроля

	

	Рис. 3.2.2.



При воспалении воздействие протеиназ на протеогликановые комплексы тканей приводит к образованию пула токсических веществ со среднемолекулярной массой (МСМ).

У обследованных нами больных сальмонеллезом уровень МСМ на 96 % выше по сравнению с контролем (рис. 3.2.2). По нашим данным содержание МСМ при сальмонеллезе повысилось в 1,9 раза, что согласуется с данными исследований Б.С. Нагаева и М.И. Габриловича. В наших исследованиях уровень МСМ повышается в разгар заболевания [табл. 3.2.1]. 

Как указывают многие авторы повышение уровня МСМ является неблагоприятным признаком. Объясняется это тем, что отдельные фракции МСМ обладают  различной биологической активностью: ингибируют эритропоэз, угнетают синтез гемоглобина, ДНК, глюконеогенез, изменяют проницаемость мембран, нарушают тканевое дыхание и микроциркуляцию. Поэтому, среди широкого круга метаболитов, оказывающих токсическое действие, интегральным показателем эндотоксикоза считают уровень МСМ [39, 40, 48, 56].

Важное звено в системе детоксикации организама представляет альбулин, поскольку  он переносит к гепатоцитам эндогенные метаболиты.

Эффективная концентрация альбулина при сальмонеллезе снижается, т.к. токсические вещества занимают центры связания в молекуле альбулина. Следовательно, связывающая способность альбулина может служить критерием общей интоксикации организма. Загруженность альбулина метаболитами дает информацию об эффективности функционирования печени и почек – основных детоксирующих органов человека [41, 42].

В результате наших исследований ЭКА в острый период заболевания составила 42,32,87 (г/л), в период ранней реконвалесценции 432,16 (г/л). Содержание ОКА в острую фазу заболевания составляет 54,53,52 (г/л), в период ранней реконвалесценции 503,8 (г/л) [прилож. 6,7].

Снижение ЭКА ведет к повышению коэффициента токсичности. Было установлено, что индекс токсичности у больных сальмонеллезом возрастает на 123 % по  сравнению с контролем [рис. 3.2.3]. По нашим данным уровень Ит в острую фазу заболевания повысился в 2,3 раза [табл. 3.2.1].

На основании проведенных исследований можно сделать следующее заключение: у больных сальмонеллезом происходят интенсификация ПОЛ и угнетение иммунитета, снижение антиоксидантной защиты и детоксикационной способности организма.




Определение индекса токсичности по сывороточному  

альбулину в сыворотке крови больных 

сальмонеллезом

Рис. 3.2.3.



Таким образом, в наших исследованиях мы установили, что при  сальмонеллезе уровень показателей ПОЛ, уровень холестерина, Ит, ЦИК, МСМ повышается, что согласуется с данными, имеющимися в литературе [рис. 3.2.4]. В исследуемой нами группе больных наиболее информативными показателями являются МДА, Ит, МСМ.






























































Выводы 
Список литературы



Покровский В.И., Килессо А.В., Ющук Н.Д. Сальмонеллезы, результаты и перспективы их научных исследований // Советская медицина. – 1994. - №5. – С. 3-8.

Будагян Ф.Е. Пищевые токсикозы, токсиноинфекции, их профилактика. – М.: Медицина, 1989. – 207 с.

Покровский В.И. Острые кишечные инфекции // Советская медицина, 1989. - №5. – С. 6-13.

Тимаков В.Д., Петровская В.Г. Биологические и генетические характеристики рода salmonella. – М.: Медицина, 1990. – 293с.

Бунин К.В. Пищевые токсикоинфекции. – М.: Медицина, 1989. – 302 с.

Бойченко М.Н. Сальмонеллез: Распространение возбудителя в организме // Журнал микробиологии и эпидемиологии, 1991. - №5. – С. 9-13.

Мельников В.И., Гимранов М.Г. Ферменты патогенности и токсины бактерий. – М.: Медицина, 1995. – 252с.

Бунин К.В., Бродов Л.Е. О возможности возникновения инфекционно-токсического шока при сальмонеллезе // Терапевтический архив, 1995. - №8. – С. 27-32.

Пак С.Г., Гурьянов М.Х., Пальцев М.А. Сальмонеллез. – М.: Медицина, 1990. – 304с.

Кац Л.Н., Зигангирова Н.А. Жирнокислотный состав ЛПС бактерий рода salmonella // Журнал микробиологии и эпидемиологии. – 1990. - №7. – С. 35-38.

Вертиев Ю.В. Бактериальные токсины: Биологическая сущность и происхождение // Журнал микробиологии и эпидемиологии. – 1996. - №3. – С. 43-46.

Mannel D.N., More R.N. Endotoxinin – duced tumor cytotoxic factor //Jn. Microbiology. – 1990. – Р. 141.

Ющук Н.Д., Тендетник Ю.М. Патогенез сальмонеллезов// Советская медицина. - 1991. - №8. - С. 77-82.

Бунин К.В. Основы патогенетической иммунологии инфекционных болезней// Клиническая медицина. - 1990. - №3. - С.9-13.

Малов В.А., Пак С.Г. Медико-биологические аспекты проблемы интоксикации в инфекционной патологии // Терапевтический архив. - №1. - 1992. - С. 7-12.

Аркамов В.А., Межирова И.М., Ткачук З. А. Патофизиологические аспекты эндогенной интоксикации при кишечной инфекции // Анестезиология и реаниматология. - 1990. - №5.        - С. 28-32.

Кузнецов Н.Н., Девайкин Е.В., Егоров В.М. Синдром эндогенной интоксикации при критических состояниях организма, новые диагностические и прогностические возможности //Анестезиология и реаниматология. - 1996. - №6. - С. 21-27.

Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник Российской академии медицинских наук. - 1998. - №7. - С. 43-57.

Шано В.П., Гюльмамедов Ф.И., Нестеренко А.Н. Варианты лечения критических состояний с учетом патогенеза SIRS-синдрома системного воспалительного ответа //Анестезиология и реаниматология. - 1997. - №6. - С. 48-52.

Юркив В.А. Эндогенные простагландины и их роль в механизме развития диареи //Простагландины в эксперименте и клинике. – 1990. - №5. - С. 176-177.

Марков Х.М. Современное учение о простагландинах //Патофизиология. - 1990. - №5 - С. 13-15.

Шубич М.Г., Авдеева М.Г. Медиаторные аспекты воспалительного процесса //Архив патологии. - 1997. - №2 - С. 3-8.

Ерин А.И. Механизмы ПОЛ. Запуск и регуляция //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1994. - Т.118. -№10. - С. 343-348.

Мамонтова Н.С. Инициирование ПОЛ в сыворотке крови //Клиническая медицина. - 1992. - №6. – С. 37-40.

Бурлакова Е.Б., Храпова И.Г. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты // Успехи химии. – 1990. - №9. – С. 1540-1557.

Волкова Л.И., Бондаренко М.И. Перекисное окисление липидов и механизм антиоксидантного действия // Врачебное дело. – 1991. - №12. – С. 35-38.

Бенина Н.Ф., Чеганова М.И. Активность окислительно-восстановительных ферментов у больных с хроническими воспалительными заболеваниями // Клиническая медицина. – 1989. - №1. – С.17-22.

Ахмедов Д.Р. Клинико-патогенетическое значение антиоксидантной системы при инфекционных заболеваниях // Иммунология. – 1994. - №2. – С. 25-27.

Оконенко Л.Б. Перекисное окисление липидов при сальмонеллезе // Журнал микробиологии и эпидемиологии. – 1994. - №6. – С. 55-58.

Махмудов О.С., Исматуллаев О.Ш. Клиническая эффективность применения витамина Е в лечении сальмонеллеза // Клиническая диагностика. – 1990. - №6. – С.93-95.

Титов В.Н., Творогова М.Г., Никитин С.В. Холестерин сыворотки крови: методические аспекты и диагностическое значение // Клиническая диагностика. – 1992. - №3. – С.45-51.

Курашвили Л.В., Волков А.С. Прогностическая значимость определения холестерина во фракции липопротеидов высокой плотности // Клиническая диагностика. – 1993. - №3. – С.5-8.

Лященко Ю.И., Трихлеб В.И. Циркулирующие иммунные комплексы при инфекционных заболеваниях // Советская медицина. – 1991. - №1. – С. 27-29.

Вельбри А.Л. Одновременная оценка уровня иммунных комплексов и иммуноглобулинов для характеристики патологического процесса // Лабораторное дело. – 1990. - №5. – С. 7-18.

Виноградова Т.В., Капелько М.А. Взаимосвязь между уровнем ЦИК и функциональным состоянием фагоцитирующей системы // Иммунология. – 1991. - №5. - С. 63-66.

Сура В.В., Масонов Е.Л., Борисов Н.А. Клинико-патогенетические закономерности развития болезней иммунных комплексов // Терапевтический архив. – 1987. - №12. –    С. 3-10.

Владыка А.С., Левицкий Э.Р., Поддубная Л.П. Средние молекулы и проблема эндогенной интоксикации при критических состояниях различной этиологии // Анестезиология и реаниматология. – 1990. - №1. – С. 37-41.

Николайчик В.В., Кирковский В.В., Лобачева Г.А. «Средние молекулы» - образование и способы определения // Лабораторное дело. – 1989. - №8. – С. 31-33.

Киреев С.С., Багмут Т.А., Курочкин М.Ю. Определение тяжести эндотоскикоза при критических состояниях организма // Педиатрия. – 1990. - №6. – С.107-109.

Владыка А.С., Беляков И.А. Диагностическое значение уровня МСМ в крови при оценке тяжести эндотоксинемии // Вестник хирургии. – 1989. – №8. – С. 126-129.

Иванов А.И., Сарнацкая В.В., Короленко Е.А. Модификация лигандной нагрузки и структуры сывороточного альбулина человека при различных методах выделения // Биохимия. – 1996. – т. 61. – вып.№5. – С. 903-912.

Миллер Ю.И., Добрецов Г.Е. Молекулярные основы флюоресцентного метода определения связывающей емкости альбулина сыворотки крови // Биохимия. – 1994. - №5. – С.20-28.

Мартыненко Л.Д., Шепелев А.П. Перекисное окисление липидов при экспериментальной сальмонеллезной инфекции // Журнал Микробиологии и эпидемиологии. – 1990. - №4.– С.7-10.

Чудинова В.В., Алексеев С.М. Перекисное окисление липидов и механизм антиоксидантного действия // Биоорганическая химия. – 1994. - №10. – т. 20. – С. 1029-1047.

Творогова М.Г. Степень достоверности однократного определения холестерина (обзор литературы) // Клиническая диагностика. – 1997. - №1. – С. 4-5.

Ильинский И.А., Лукинская Т.В. Циркулирующие иммунные комплексы при сальмонеллезе // Иммунология. -–1994. - №4. – С. 105-108.

Фролов В.М., Ющук И.Д. Иммунный статус больных сальмонеллезом // Иммунология. – 1992. - №10. – С. 108-112.

Нагаев Б.С., Габрилович М.И., Кимова И.А. Содержание среднемолекулярных пептидов в плазме крови больных сальмонеллезом // Инфекционные болезни. – 1996. - №6. – С. 12-17.

Field M., Musch M.W. Role of prostaglandins in regulation of instestional elektrolyte transport // Prostaglandins. – 1991. – vol.21. – P. 73-80.

Jaya P.S., Agstine J., Menon V.P. Roll of lipid peroxides, glutathione and antiperoxidative erzymes in alcohd and drus toxicity // Exp. Biol. Jndian J. – 1993. - №5. – P. 453-459.

Praper H.H., Sgvires E.J., Agarwal S., Hadley M. A comporative evalution of thiobarbituric acid methods for the determination of malondialdehyde in biological materials // Free. Radic. Biol. Med. – 1993. - №4. – P. 353-363.

Anderson D., Phillips B.T. Schemere P. The effect of variovus antioxidants and other modifying agents on oxygen radical generated DNA famage in human lymphucytes in the comet assay // Environ. and Mol. Mutagenes. – 1994. – 23. Suppl n.23. – P. 2-8.

Desharer David, Wood Gwendolyn E., Friedman Richard L. Mollecular characterirution of catalase from Bortetella pertussis: Jdentification of the Kat A promot er in an upstream insertion seguence // Mol. Microbiol. – 1994. – №1. – P. 123-130.

Cheigton W.D., Zambent P.H., Mischer P.A. Circulationg immune complexes in infections diseases // Jmmunol. – 1993. – v.111. – P. 1219-1227.

Webster David M., Rees Anthohy R. Antibody – antigen interactions // Curr. Opinion struct. Biol. – 1994. - №1. – P. 123-129.

Schimuzu T., Kondo R. A method for the detection of Medium – sized molecules //Anch. Biochem. – 1991. – vol. 206. – P. 271-276.

Bannet E.V. Chia D., Restivo C. et al. – peptides of the “middle molecules” group // Analyt. Biochem. – 1994. – vol. 86. – P.271-278.



















ПРИЛОЖЕНИЕ


















 Приложение 1.

Биохимические показатели крови 

практически здоровых людей, n=51.



№ п/п

Ф. И. О.

Возраст

Пол

Дата анализа

МДА (мкМоль/л)

ЦИК

(усл. ед.)

Уровень холестерина

ммоль/л

Активность каталазы

МСМ

(усл. ед.)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

1

К. В. И.

35

Ж

5.02.98.

3,59

30

3,47

19,4

0,358

2

К. Б. А.

39

М

5.02.98.

3,62

30

4,95

17,2

0,225

3

У. С. Б.

29

М

15.02.98.

2,18

45

3,54

16,1

0,352

4

И. И. И. 

31

Ж

17.02.98.

3,6

60

5,188

16,8

0,214

5

К. В. Л. 

34

М

17.02.98.

3,48

100

4,90

17,1

0,287

6

М. В. В.

40

М

17.02.98.

4,6

69

3,915

15,8

0,254

7

С. П. Б.

40

М

25.02.98.

3,59

40

4,056

16,6

0,269

8

Л. Е. В.

32

М

25.02.98.

3,47

30

5,047

15,7

0,362

9

Г. Т. Ю.

28

Ж

15.03.98.

4,65

76

5,141

16,2

0,261

10

А. И. А. 

28

Ж

16.03.98.

3,53

34

5,188

16,9

0,253

11

Л. Л. Я.

40

Ж

16.03.98.

4,00

99

3,77

17,4

0,357

12

С. Б. И.

46

Ж

19.03.98.

3,45

70

3,33

18,2

0,167

13

С. И. В.

28

Ж

16.04.98.

3,48

35

3,49

16,3

0,253

14

М. А. И.

31

М

16.04.98.

3,54

61

3,40

14,5

0,256

15

Х. А. И.

37

М

22.04.98.

4,47

30

4,24

16,1

0,268

16

К. И. П.

30

М

22.04.98.

3,59

34

3,91

16,4

0,377

17

Р. И. И.

33

М

22.04.98.

4,35

110

5,14

17,3

0,245

18

И. И. А.

29

Ж

27.04.98.

3,48

31

5,33

17,8

0,280

19

И. В. А.

40

М

27.04.98.

3,60

60

4,24

18,1

0,218

20

М. И. В.

36

Ж

10.05.98.

3,54

54

5,09

17,6

0,382

21

С. В. Г.

32

М

10.05.98.

4,0

33

4,86

16,7

0,355

22

З. О. А.

32

М

12.05.98.

3,77

45

3,77

16,3

0,232

23

Я. В. В.

30

М

12.05.98

3,61

120

3,33

15,8

0,274

24

П. И. В.

31

М

17.05.98.

3,44

100

3,96

14,9

0,286

25

А. С. Б.

36

М

17.05.98.

2,93

69

5,14

16,8

0,253

26

С. А. И.

20

Ж

3.02.99.

3,61

70

5,19

16,6

0,268

27

М. И. В.

34

М

9.02.99.

3,53

43

5,05

17,3

0,351

28

Д. О. В.

37

Ж

9.02.99.

3,61

27

4,9

17,8

0,194

29

Т. С. Д.

22

М

16.02.99.

3,75

30

4,95

14,5

0,309

30

К. В. А.

28

М

9.04.99.

3,48

60

3,77

16,2

0,214

31

Ш. А. Л.

30

М

17.02.99

3,59

58

4,48

17,2

0,232

32

Г. А. К.

41

Ж

17.02.99

4,21

41

3,91

16,8

0,305

33

Ч. И. В.

24

М

16.02.99

3,99

30

5,05

16,3

0,265

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

34

С. О. Ю.

30

М

16.02.99.

3,57

35

3,58

16,9

0,239

35

С. С. М.

27

М

16.02.99.

3,02

46

3,39

15,7

0,248

36

М. С. В.

29

Ж

9.02.99.

2,50

38

5,14

14,3

0,372

37

Р. Т. А.

28

Ж

9.02.99.

3,88

33

3,77

16,2

0,245

38

С. С. В. 

28

Ж

16.04.98.

2,61

54

4,24

16,8

0,261

39

С. В. В.

32

М

16.04.98.

3,14

37

5,38

17,1

0,379

40

Р. Т. В.

23

М

15.05.98.

3,99

19

4,95

18,3

0,358

41

О. А. Е.

25

М

15.05.98.

3,24

75

5,05

16,9

0,251

42

А. В. Е.

33

М

18.05.98.

3,88

28

4,56

17,5

0,275

43

Б. В. С.

44

М

18.05.98.

4,26

110

3,33

15,6

0,213

44

С. В. И.

30

Ж

19.02.99.

4,09

46

4,81

14,8

0,307

45

К. Ю. И.

46

М

19.02.99.

3,77

48

5,03

16,3

0,264

46

В. Ю. И.

37

М

27.03.98.

3,81

43

4,95

16,7

0,280

47

К. Е. И.

32

М

27.03.98.

3,54

44

5,33

16,9

0,232

48

Ж. Ю. С.

30

М

5.04.98.

4,04

85

3,77

17,3

0,218

49

П. В. А.

31

Ж

5.04.98.

3,15

23

4,24

18,8

0,381

50

Б. А. И.

31

М

13.04.98

3,45

37

5,05

16,8

0,239

51

Л. Т. Ю.

42

М

9.02.99.

3,04

59

5,33













Μ

3,61

52,62

4,45

16,7

0,280









m

0,07

3,52

0,68

0,15

0,01









σ

0,48

25,17

0,09

1,04

0,06












































Приложение 2



Содержание биохимических показателей в сыворотке крови практически здоровых людей по данным литературы



Группа

обследованных

n

	МДА

	мкМоль/л

Активность 

каталазы

мкат/л

ЦИК

усл. ед.

МСМ

усл. ед.

Холестерин

ммоль/л

Мартыненко Л.Д., 1990

31



4,360,27









Оконенко Л.Б., 1994

34

	

16,30,3







Куликов И.Н., 1996

40

	



54,23,2





Нагаев Б.С., 1996

70

	





0,310,02



Творогова М.Г. 1995

40

	







4,620,31




Приложение 3

Биохимические показатели крови практически здоровых людей, n=51

№ п/п

Ф. И. О.

Возраст

Пол

Дата анализа

ЭКА (г/л)

ОКА

(г/л)

ОКА

(%)

Ит

(усл. ед.)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

1

К. В. И.

35

Ж

5.02.98.

43

49

88

0,13

2

К. Б. А.

39

М

5.02.98.

46

53

87

0,15

3

У. С. Б.

29

М

15.02.98.

34

41

84

0,16

4

И. И. И. 

31

Ж

17.02.98.

38

44

86

0,15

5

К. В. Л. 

34

М

17.02.98.

48

56

86

0,16

6

М. В. В.

40

М

17.02.98.

47

52

90

0,10

7

С. П. Б.

40

М

25.02.98.

46

53

87

0,15

8

Л. Е. В.

32

М

25.02.98.

48

57

84

0,18

9

Г. Т. Ю.

28

Ж

15.03.98.

44

49

90

0,11

10

А. И. А. 

28

Ж

16.03.98.

42

49

86

0,17

11

Л. Л. Я.

40

Ж

16.03.98.

46

51

90

0,11

12

С. Б. И.

46

Ж

19.03.98.

36

50

89

0,11

13

С. И. В.

28

Ж

16.04.98.

47

54

87

0,14

14

М. А. И.

31

М

16.04.98.

47

52

90

0,10

15

Х. А. И.

37

М

22.04.98.

45

50

90

0,11

16

К. И. П.

30

М

22.04.98.

35

41

85

0,17

17

Р. И. И.

33

М

22.04.98.

42

46

91

0,09

18

И. И. А.

29

Ж

27.04.98.

38

44

86

0,15

19

И. В. А.

40

М

27.04.98.

47

52

90

0,10

20

М. И. В.

36

Ж

10.05.98.

47

54

87

0,14

21

С. В. Г.

32

М

10.05.98.

34

41

84

0,16

22

З. О. А.

32

М

12.05.98.

46

53

87

0,15

23

Я. В. В.

30

М

12.05.98

39

44

88

0,12

24

П. И. В.

31

М

17.05.98.

51

55

93

0,07

25

А. С. Б.

36

М

17.05.98.

43

48

89

0,11

26

С. А. И.

20

Ж

3.02.99.

47

54

87

0,14

27

М. И. В.

34

М

9.02.99.

38

44

86

0,15

28

Д. О. В.

37

Ж

9.02.99.

49

55

89

0,12

29

Т. С. Д.

22

М

16.02.99.

36

40

89

0,11

30

К. В. А.

28

М

9.04.99.

38

44

86

0,15

31

Ш. А. Л.

30

М

17.02.99

40

43

93

0,08

32

Г. А. К.

41

Ж

17.02.99

42

46

91

0,09

33

Ч. И. В.

24

М

16.02.99

48

56

86

0,16



1

2

3

4

5

6

7

8

9

34

С. О. Ю.

30

М

16.02.99.

49

55

89

0,12

35

С. С. М.

27

М

16.02.99.

47

52

90

0,10

36

М. С. В.

29

Ж

9.02.99.

45

50

90

0,11

37

Р. Т. А.

28

Ж

9.02.99.

39

44

88

0,13

38

С. С. В. 

28

Ж

16.04.98.

43

48

89

0,11

39

С. В. В.

32

М

16.04.98.

36

40

90

0,11

40

Р. Т. В.

23

М

15.05.98.

38

44

86

0,15

41

О. А. Е.

25

М

15.05.98.

35

41

85

0,17

42

А. В. Е.

33

М

18.05.98.

48

53

91

0,10

43

Б. В. С.

44

М

18.05.98.

37

44

84

0,18

44

С. В. И.

30

Ж

19.02.99.

45

50

90

0,11

45

К. Ю. И.

46

М

19.02.99.

47

54

87

0,14

46

В. Ю. И.

37

М

27.03.98.

44

51

86

0,16

47

К. Е. И.

32

М

27.03.98.

42

46

91

0,09

48

Ж. Ю. С.

30

М

5.04.98.

48

56

86

0,16

49

П. В. А.

31

Ж

5.04.98.

47

53

89

0,13

50

Б. А. И.

31

М

13.04.98

36

40

89

0,11

51

Л. Т. Ю.

42

М

9.02.99.

43

48

89

0,11









Μ

43

48,8

88

0,13









m







0,01









σ







0,03


Приложение 4

Биохимические показатели крови 

больных сальмонеллезом в острый период, n=30.



№ п/п

Ф. И. О.

Возраст

Пол

Дата анализа

№ истории болезни

МДА (мкМоль/л)

ЦИК

(усл. ед.)

Уровень

холестерина

ммоль/л

Активность каталазы

МСМ

(усл. ед.)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

1

М. А. М.

32

М

14.02.98.

160А02.8

5,84

74

5,37

13,6

0,611

2

Л. В. И.

37

М

14.02.98.

230А02.08

6,02

133

8,91

12,7

0,537

3

С. О. Е.

29

М

9.02.99.

410А02.1

7,18

96

5,74

13,8

0,683

4

Б. В. И.

46

Ж

9.02.99.

182А02.1

5,93

111

5,68

13,1

0,700

5

Х. В. В.

28

Ж

11.07.99.

523А02.0

8,13

120

4,75

14,4

0,570

6

С. Н. Е.

19

Ж

12.10.98.

728А02.8

9,34

82

7,03

11,8

0,700

7

М. О. И.

24

Ж

11.10.98.

615А02.8

6,59

140

9,85

10,9

0,782

8

К. Г. А.

32

М

3.03.98.

363А02.8

7,77

68

7,3

13,5

0,604

9

Д. И. Е.

39

М

3.03.98.

290А02.8

5,96

97

5,72

13,0

0,543

10

Е. Т. А.

17

Ж

10.02.98.

490А02.1

8,93

88

4,12

12,7

0,529

11

Р. О. А.

37

Ж

10.02.98.

517А02.1

7,13

105

8,91

13,5

0,690

12

К. С. И.

39

М

27.02.98.

560А02.8

6,60

92

5,7

13,1

0,581

13

Ш. Г. В.

25

Ж

13.03.98.

393А02.8

7,25

148

4,82

13,6

0,742

14

Б. И. Р.

41

М

13.03.98.

102А02.8

8,18

105

6,84

12,8

0,458

15

П. О. К.

33

Ж

4.07.98.

280А02.8

9,05

76

4,72

12,4

0,617

16

К. И. И.

29

Ж

4.07.98.

432А02.1

5,94

115

9,67

13,7

0,610

17

Т. С. И. 

31

Ж

4.07.98.

630А02.0

6,64

73

5,9

13,2

0,623

18

С. И. В.

47

М

28.09.98.

216А02.0

7,81

108

5,06

13,6

0,542

19

К. И. Б.

42

Ж

28.09.98.

390А02.8

8,20

139

4,84

11,7

0,413

20

П. О. А.

53

М

15.02.99.

575А02.8

6,95

132

6,45

10,9

0,562

21

С. И. П.

25

М

15.02.99.

721А02.8

7,17

99

5,6

12,8

0,717

22

Е. Т. С.

24

Ж

17.02.99.

470А02.8

5,27

114

8,48

13,6

0,657

23

З. О. Ю.

36

М

17.02.99.

370А02.0

7,53

83

5,52

14,2

0,614

24

М. Л. А.

41

М

6.10.98.

182А02.0

8,41

92

7,73

13,3

0,534

25

Д. С. К.

22

Ж

6.10.98.

652А02.8

6,12

100

7,73

13,8

0,586

26

К. С. Д.

18

Ж

11.10.98.

713А02.8

7,03

86

10,15

12,9

0,570

27

Е. А. В.

43

М

28.08.98.

760А02.8

5,90

77

6,8

13,7

0,681

28

М. О. Р.

33

М

28.08.98.

535А02.8

7,77

69

6,24

13,6

0,649

29

П. З. Л.

30

Ж

7.12.98.

862А02.0

6,78

102

5,72

13,7

0,740

30

Е. В. В.

31

Ж

7.12.98.

718А02.8

8,27

95

3,89

12,9

0,531











Μ

7,19

100,63

6,54

13,09

0,550











m

0,196

4,04

0,07

0,16

0,02











σ

1,07

22,138

0,01

0,85

0,11


Приложение 5

Биохимические показатели крови 

больных сальмонеллезом в стадии ремиссии, n=30.



№ п/п

Ф. И. О.

Возраст

Пол

Дата анализа

№ истории болезни

МДА (мкМоль/л)

ЦИК

(усл. ед.)

Уровень

холестерина

ммоль/л

Активность каталазы

МСМ

(усл. ед.)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

1

М. А. М.

32

М

14.02.98.

160А02.8

3,84

54

3,77

15,8

0,225

2

Л. В. И.

37

М

14.02.98.

230А02.8

4,02

48

4,95

15,6

0,287

3

С. О. Е.

29

М

9.02.99

410А02.1

5,18

35

5,14

14,5

0,354

4

Б. В. И.

46

Ж

9.02.99.

182А02.1

3,03

96

4,24

16,1

0,268

5

Х. В. В.

28

Ж

11.07.98.

523А02.0

4,15

77

5,19

16,4

0,256

6

С. И. Е.

19

Ж

12.10.98.

728А02.8

5,96

68

3,96

15,7

0,358

7

М. О. И.

24

Ж

11.10.98.

615А02.8

3,19

58

3,39

14,9

0,280

8

К. Г. А.

32

М

3.03.98.

363А02.8

4,17

60

5,05

14,5

0,332

9

Д. И. Е.

39

М

3.03.98.

290А02.8

2,98

56

5,14

16,2

0,253

10

Е. Т. А.

17

Ж

3.03.98.

490А02.1

5,63

73

4,95

17,3

0,209

11

Р. О. А.

37

Ж

10.02.98

517А02.1

3,65

100

5,24

15,8

0,209

12

К. С. И.

39

М

10.02.98.

560А02.8

3,53

83

5,09

14,3

0,214

13

Ш. Г. В.

25

Ж

27.02.98.

393А02.8

4,12

69

3,77

17,6

0,272

14

Б. И. Р.

41

М

13.03.98.

102А02.8

3,68

75

4,24

17,1

0,353

15

П. О. К.

33

Ж

13.03.98.

280А02.8

4,16

81

3,77

15,3

0,386

16

К. И. И.

29

Ж

4.07.98.

432А02.1

2,93

63

5,05

17,7

0,232

17

Г. С. И.

31

Ж

4.07.98.

630А02.0

3,57

77

3,75

16,8

0,305

18

С. И. В.

47

М

4.07.98.

216А02.8

3,69

68

4,24

16,4

0,265

19

К. И. Б.

42

Ж

28.09.98.

390А02.8

4,12

100

3,92

15,9

0,413

20

П. О. А.

53

М

28.90.98.

575А02.8

3,95

64

4,16

16,8

0,294

21

С. И. П.

25

М

15.02.99.

721А02.8

3,17

73

5,33

14,3

0,562

22

Е. Т. С.

24

Ж

15.02.99.

470А02.8

2,50

72

4,81

14,9

0,531

23

З. О. Ю.

36

М

17.02.99

370А02.0

4,53

59

4,24

15,6

0,309

24

М. Л. А.

41

М

17.02.99.

182А02.0

4,41

43

5,02

16,3

0,265

25

Д. С. К.

22

Ж

6.10.98.

652А02.8

3,12

48

3,33

16,9

0,272

26

К. С. Д.

18

Ж

6.10.98.

713А02.8

3,03

66

5,91

15,7

0,239

27

Е. А. В.

43

М

11.10.98.

760А02.8

2,90

72

3,89

15,9

0,245

28

М. О. Р.

33

М

28.08.98.

535А02.8

4,77

73

4,74

16,2

0,179

29

П. З. Л.

30

Ж

7.12.98.

862А02.0

3,78

80

5,58

14,7

0,524

30

Е. В. В.

31

Ж

7.12.98.

718А02.8

4,27

77

3,68

13,9

0,355











Μ

3,87

68,9

4,65

15,84

0,31











m

0,15

2,8

0,7

0,19

0,02











σ

0,81

15,41

0,09

1,02

0,1

Приложение 6

Биохимические показатели крови больных сальмонеллезом в острый период, n=30

№ п/п

Ф. И. О.

Возраст

Пол

Дата анализа

ЭКА (г/л)

ОКА

(г/л)

ОКА

(%)

Ит

(усл. ед.)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

1

К. В. И.

35

Ж

5.02.98.

42

54

78

0,28

2

К. Б. А.

39

М

5.02.98.

42

56

75

0,33

3

У. С. Б.

29

М

15.02.98.

44

59

74

0,35

4

И. И. И. 

31

Ж

17.02.98.

38

49

77

0,29

5

К. В. Л. 

34

М

17.02.98.

47

59

79

0,25

6

М. В. В.

40

М

17.02.98.

42

57

74

0,37

7

С. П. Б.

40

М

25.02.98.

42

55

76

0,31

8

Л. Е. В.

32

М

25.02.98.

43

54

80

0,26

9

Г. Т. Ю.

28

Ж

15.03.98.

44

59

75

0,35

10

А. И. А. 

28

Ж

16.03.98.

45

55

82

0,22

11

Л. Л. Я.

40

Ж

16.03.98.

44

59

75

0,34

12

С. Б. И.

46

Ж

19.03.98.

40

51

78

0,27

13

С. И. В.

28

Ж

16.04.98.

42

58

72

0,38

14

М. А. И.

31

М

16.04.98.

42

56

75

0,34

15

Х. А. И.

37

М

22.04.98.

45

54

83

0,21

16

К. И. П.

30

М

22.04.98.

38

55

69

0,43

17

Р. И. И.

33

М

22.04.98.

38

49

78

0,29

18

И. И. А.

29

Ж

27.04.98.

44

55

80

0,25

19

И. В. А.

40

М

27.04.98.

42

57

74

0,36

20

М. И. В.

36

Ж

10.05.98.

43

57

75

0,32

21

С. В. Г.

32

М

10.05.98.

35

41

85

0,17

22

З. О. А.

32

М

12.05.98.

47

58

81

0,24

23

Я. В. В.

30

М

12.05.98

40

51

78

0,27

24

П. И. В.

31

М

17.05.98.

43

50

86

0,16

25

А. С. Б.

36

М

17.05.98.

42

56

75

0,33

26

С. А. И.

20

Ж

3.02.99.

43

54

80

0,26

27

М. И. В.

34

М

9.02.99.

42

58

72

0,38

28

Д. О. В.

37

Ж

9.02.99.

48

57

84

0,19

29

Т. С. Д.

22

М

16.02.99.

45

54

83

0,21

30

К. В. А.

28

М

9.04.99.

38

49

78

0,29









Μ

42,3

54,5

77,7

0,29









m

2,87

3,52



0,01









σ

17,6

24,12



0,07



Приложение 7

Биохимические показатели крови больных сальмонеллезом в стадии ремиссии, n=30

№ п/п

Ф. И. О.

Возраст

Пол

Дата анализа

ЭКА (г/л)

ОКА

(г/л)

ОКА

(%)

Ит

(усл. ед.)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

1

К. В. И.

35

Ж

5.02.98.

46

53

86

0,15

2

К. Б. А.

39

М

5.02.98.

34

41

84

0,16

3

У. С. Б.

29

М

15.02.98.

38

44

86

0,15

4

И. И. И. 

31

Ж

17.02.98.

47

51

84

0,18

5

К. В. Л. 

34

М

17.02.98.

42

51

86

0,16

6

М. В. В.

40

М

17.02.98.

36

40

89

0,11

7

С. П. Б.

40

М

25.02.98.

47

51

84

0,18

8

Л. Е. В.

32

М

25.02.98.

35

41

85

0,17

9

Г. Т. Ю.

28

Ж

15.03.98.

36

40

85

0,11

10

А. И. А. 

28

Ж

16.03.98.

46

53

86

0,15

11

Л. Л. Я.

40

Ж

16.03.98.

39

44

88

0,12

12

С. Б. И.

46

Ж

19.03.98.

54

63

86

0,16

13

С. И. В.

28

Ж

16.04.98.

36

50

89

0,11

14

М. А. И.

31

М

16.04.98.

36

42

86

0,17

15

Х. А. И.

37

М

22.04.98.

44

52

85

0,18

16

К. И. П.

30

М

22.04.98.

48

56

86

0,16

17

Р. И. И.

33

М

22.04.98.

43

48

90

0,12

18

И. И. А.

29

Ж

27.04.98.

42

47

89

0,12

19

И. В. А.

40

М

27.04.98.

49

56

88

0,14

20

М. И. В.

36

Ж

10.05.98.

35

41

85

0,17

21

С. В. Г.

32

М

10.05.98.

47

52

90

0,10

22

З. О. А.

32

М

12.05.98.

43

49

88

0,13

23

Я. В. В.

30

М

12.05.98

44

49

90

0,11

24

П. И. В.

31

М

17.05.98.

46

51

90

0,11

25

А. С. Б.

36

М

17.05.98.

51

55

92

0,07

26

С. А. И.

20

Ж

3.02.99.

44

51

86

0,15

27

М. И. В.

34

М

9.02.99.

48

54

89

0,13

28

Д. О. В.

37

Ж

9.02.99.

42

49

86

0,17

29

Т. С. Д.

22

М

16.02.99.

48

57

84

0,18

30

К. В. А.

28

М

9.04.99.

45

54

83

0,20









Μ

43

50

84,3

0,15









m

2,16

3,8



0,01









σ

14,9

15,41



0,03