Методики анализа витаминов

Методики анализа витаминов






Витамин А





(Мол. вес 299,22)



Являясь сильно ненасыщенным соединением, витамин А легко реагирует с кислородом воздуха и окисляющими агентами.

Наличие в молекуле спиртовой группы обусловливает реакции с хлорангидридами кислот с образованием производных — бензоат, ацетат и др. в-нафтойнокислый эфир представляет кристаллическое вещество, также обладающее витаминным действием.

Качественные реакции

Максимум абсорбции при 328 нм.

В хлороформном растворе с треххлористой сурьмой появляется синее окрашивание.

Количественное определение

Реакция с треххлористой сурьмой используется и для количественного определения. Синюю окраску сравнивают со стандартной шкалой так называемых синих единиц.

5—10 г драже экстрагируют хлороформом для извлечения витамина А, хлороформ отгоняют. Остаток омыляют 0,5 н. раствором спиртового раствора едкого кали в продолжение ½ часа. После этого из смеси извлекают неомыляемую фракцию серным эфиром 3—4 порциями (по 50—100 мл), соединенные эфирные вытяжки промывают водой, высушивают безводным сульфатом натрия, растворитель нацело удаляют выпариванием в токе углекислоты, остаток растворяют в хлороформе, чтобы в 1 мл раствора содержалось от 10 до 40 ИЕ витамина А.

К 0,2 мл хлороформного раствора добавляют 1 каплю уксусного ангидрида и 2 мл хлороформного раствора треххлористой сурьмы. Появляющуюся синюю окраску немедленно сравнивают с подходящей по цветности пробиркой стандартной шкалы или в ступенчатом фотометре, фотоколориметре и т. д.

При визуальном способе определения наиболее точные результаты получаются, если окраска по интенсивности укладывается в пределах 4—10-й пробирок.

Для приготовления шкалы пробирок-эталонов 75 г химически чистого сульфата меди и 3,5 г химически чистого нитрата кобальта растворяют в 500 мл воды. Полученный раствор разбавляют водой, как указано ниже.

Реакция витамина А с треххлористой сурьмой протекает быстро, достигая максимума приблизительно через 10 секунд; при низких температурах (0—1°) окраска более устойчива; яркий (дневной или искусственный) свет заметно влияет на быстроту выцветаемости.



Витамин В1 (Тиамин-бромид бромистоводородный)





(Мол. вес 435,2)



Качественные реакции. При прибавлении к подкисленному разведенной азотной кислотой 1%-ному раствору нескольких капель раствора нитрата серебра выпадает творожистый осадок, не растворимый в азотной кислоте.

Тиохромная проба основана на переводе тиамина красной кровяной солью в щелочной среде в тиохром, растворимый в бутиловом или изоамиловом спирте с синей флуоресценцией:

К 5 мл раствора тиамина (с содержанием 0,01 мг) в делительной воронке добавляют 5 мл 1%-ного раствора красной кровяной соли, перемешивают и оставляют стоять в течение 2 минут. Затем добавляют 20 мл изобутилового спирта и сильно перемешивают, встряхивая в течение 1 минуты, отделяют спиртовый слой и фильтруют. Тиохром, полученный в результате окисления тиамина, обусловливает синюю флуоресценцию.

Тиамин дает осадки с некоторыми общими алкалоидными реактивами, например с реактивом Драгендорфа (пикриновая кислота не дает осадка).

Количественное определение

После нейтрализации (по бромтимоловому синему) тиамин-бромид определяется аргентометрически.

Другой метод основан на свойстве витамина В1 образовывать с диазотированным пара-амино-ацетофеноном соединение фиолетово-красного цвета, которое нерастворимо в воде, со многими органическими растворителями образует цветные растворы, допускающие сравнение с эталонными растворами. Из органических растворителей применяют обычно ксилол или толуол.

Для определения тиамина, растворенного в однородном бесцветном растворителе, нет необходимости извлекать цветное соединение из раствора. В этих случаях прибавляют изопропанол в количестве, достаточном для растворения цветного соединения, и проводят определение по стандартному раствору.

Для анализа берут такое количество препарата, в котором содержится 100 микрограммов (0,0001 г) тиамина. Эталон готовят растворением 50 мг витамина Вх (точная навеска) в 500 мл 50% по объему) этанола, содержащего 1 каплю 4 н. соляной кислоты. Хотя этот эталонный раствор можно сохранять при комнатной температуре в течение нескольких месяцев, предпочитают все же готовить его на срок не более 1 месяца. Кроме эталонного раствора заготовляют: 1) 0,03%-ного раствора пара-амино-ацетофенона в 0,2 н. соляной кислоте; 2) 0,1%-ный раствор нитрита натрия; 3) 1 н. и 2,5 н. растворы едкого натра; 4) 50%-ный этанол (по объему); 5) толуол; 6) изопропанол и 7) 4 н. соляную кислоту.

Для приготовления реактива под названием диазораствор А в небольшой склянке смешивают 10 мл раствора пара-амино-ацетофенона и 2 мл раствора нитрита натрия и охлаждают не менее 2 минут в ледяной воде. Перед пользованием к смеси прибавляют 3 мл 1 н. раствора едкого натра и взбалтывают. Реактив под названием диазораствор Б готовят так же, как и раствор А, с той лишь разницей, что вместо 1 н. раствора едкого натра к раствору Б прибавляют 2,5 н. раствора едкого натра.

Испытуемый ампульный раствор смешивают с таким количеством перегнанной воды, чтобы каждый миллилитр смеси содержал около 100 микрограммов тиамина. В калиброванную пробирку на 10 мл вливают 1 мл смеси, прибавляют 2 мл 50%-ного этанола и помещают в водяную баню при температуре 60°. Через 1 минуту приливают 1 мл диазораствора А, сильно взбалтывают и снова оставляют в бане на 2—-3 минуты. Затем смесь охлаждают, прибавляют 1 каплю 4 н. соляной кислоты и изопропанол до метки, взбалтывают и сравнивают в колориметре с контрольным раствором, изготовляемым смешением 1 мл воды с 1 мл эталонного раствора тиамина, 1 мл 50% этанола и 1 мл диазораствора А по методу, описанному выше.

Для определения витамин В1 по другому методу растворяют 0,4—1,5 мг его в 10 мл воды, прибавляют 0,5 мл реактива с фосфорно-вольфраматом и 0,4—0,6 мл 10%-ного раствора едкого натра. Появляется синее окрашивание. Титруют 0,002 н. раствором красной кровяной соли, 1,82 мл которого соответствует 1 мг витамина В^ до исчезновения синего окрашивания.

Реактив готовят следующим образом: 10 г вольфрамата натрия растворяют в 75 мл воды, прибавляют 8 мл 85%-ной фосфорной кислоты и слабо нагревают в течение 2 часов. Если раствор зеленеет, прибавляют немного бромной воды после нагревания в течение указанного времени и избыток брома удаляют кипячением. По охлаждении доводят до 100 мл.



Витамин В2 (Рибофлавин. Лактофлавин)



(Мол. вес 376,2)



Качественные реакции

0,001%-ный раствор (1 мг: 100) рибофлавина — бледного зеленовато-желтого цвета в проходящем свете с интенсивной желтовато-зеленой флуоресценцией, исчезающей от прибавления минеральных кислот или щелочей.

При восстановлении цинком в уксуснокислом или солянокислом растворе рибофлавин переходит в лейкофлавин, присоединяя 2 атома водорода.

Количественное определение

Непосредственно колориметрированием желтых растворов рибофлавина.

По азоту. К 0,3 г рибофлавина (точная навеска), предварительно высушенного в течение 18 часов в вакуум-эксикаторе над серной кислотой, в кьельдалевской колбе прибавляют 1 г бензойной кислоты и определяют содержание азота, разрушая смесь не менее 5 часов. Содержание азота должно быть не менее 14,5% и не более 15,2%.


Витамин В6 (Пиридоксин. Адермин)





(Мол. вес 205,6)



Качественные реакции

С фосфорно-вольфрамовой кислотой адермин образует нерастворимое соединение (осадок).

С хлорным железом адермин дает красное окрашивание.

Смешивают 1 мл 0,01%-ного раствора с 1 мл 0,04%-ного раствора 2,6-дихлорхинонхлоримида в абсолютном алкоголе и затем прибавляют 1 каплю раствора аммиака — появляется синее окрашивание.

Количественное определение

Колориметрическое определение основано на превращении четвертичного основания в фиолетового цвета соединение типа кар-бопиридинцианина, которое колориметрируют, сравнивая со стандартом.

Солянокислую соль адермина можно определять титрованием раствором щелочи при индикаторе бромтимоловом синем; для проверки оттитрованную жидкость вновь титруют 0,1 н. раствором нитрата серебра.



Фолиевая кислота (Птероилглутаминовая кислота)



(Мол. вес 441,21)


Качественные реакции

Получение азокрасителя.

Спектр поглощения в ультрафиолете (при рН 11) имеет максимум при 255, 282 и 365 нм.

Количественное определение

При восстановлении фолиевой кислоты в солянокислом растворе цинковой пылью в числе других продуктов отщепляется пара-амино-бензойная кислота, которую диазотируют нитритом натрия. Полученная соль диазония сочетается с N-(1-нафтил)-этилендиаминди-гидрохлоридом в присутствии сульфамата аммония NH2SO2 ONH4

При этом наблюдается фиолетовая окраска раствора, интенсивность которой пропорциональна концентрации и измеряется в фотоколориметре или в спектрофотометре.

Требуются реактивы: 1) раствор желатины (1,5 г желатины и 0,1 г бензойной кислоты растворяют в 100 мл воды), 2) 10%-ный раствор соляной кислоты, 3) 0,1%-ный раствор нитрита натрия, 4) 8%-ный раствор мочевины и 5) 0,1%-ный раствор N-(1-нафтил)-этилендиаминдигидрохлорида.

Точно 0,05 г пара-аминобензойной кислоты с температурой плавления 186—187° отвешивают в стаканчике емкостью 15—20 мл, растворяют в 96%-ном этиловом спирте, переливают в мерную колбу емкостью 50 мл, стаканчик промывают 3—4 раза спиртом (общее количество спирта 25 мл), раствор доводят водой до метки и перемешивают. Из этого раствора отбирают 1 мл в колбу емкостью 250 мл, прибавляют 175 мл воды, 45 мл 10%-ного раствора соляной кислоты, 2,5 мл раствора желатины, доводят до метки водой и перемешивают. В 1 мл раствора содержится 0,004 мг пара-аминобензойной кислоты.

В четыре колбы емкостью 15—20 мл вливают пипеткой 1, 2, 3 и 4 мл приготовленного раствора и доводят объем раствора в каждой колбе водой до 5 мл и прибавляют по 0,7 мл 10%-ного раствора соляной кислоты, по 1 мл 0,1%-ного раствора нитрита натрия, хорошо перемешивают и оставляют на 5 минут. Затем в каждую колбу прибавляют по 1 мл 8%-ного раствора мочевины, перемешивают и вновь оставляют на 5 минут. После этого в каждую колбу прибавляют по 1 мл 0,1%-ного раствора N-(1-нафтил)-этилендиаминдигидрохлорида, по 1,3 мл воды, перемешивают, оставляют на 10 минут и затем определяют окраски раствора" электрофотоколориметром со светофильтром 550 нм. Для получения стандартной кривой на оси ординат наносят показания гальванометра, а на оси абсцисс — количество миллиграммов и соединяют прямой линией точки пересечения перпендикуляров, восстановленных из соответствующих точек осей графика.

Определение общего количества (связанной и свободной) р-аминобензоилглутаминовой кислоты в препаратах

Точную навеску препарата (0,049—0,050 г) в стаканчике емкостью 15—20 мл смачивают несколькими каплями воды и растворяют в 0,1 н. растворе едкого натра. Раствор переливают в мерную колбу емкостью 50 мл, стаканчик промывают несколько раз 0,1 н. раствором едкого натра, сливая промывную жидкость в ту же колбу. Объем раствора доводят 0,1 н. раствором едкого натра до метки и хорошо перемешивают. Из полученного раствора отбирают 1 мл в мерную колбу емкостью 100 мл, добавляют 75 мл воды, 18 мл 10%-ного раствора соляной кислоты, 1 мл раствора желатины, доводят до метки водой и перемешивают (раствор А).

К 75 мл раствора в конической колбе емкостью 150 мл прибавляют 0,5 г цинковой пыли и оставляют на 15 минут при частом перемешивании. Раствор фильтруют через сухой фильтр в сухую колбу, отбрасывая первые 15—20 мл фильтрата. К 2 мл фильтрата в колбе емкостью 15—20 мл прибавляют 3 мл воды, 0,7 мл 10%-ного раствора соляной кислоты и далее поступают, как указано при получении стандартной кривой.

Определение свободной п-аминобензоилглутаминовой кислоты

К 2 мл раствора А в колбе емкостью 15—20 мл добавляют 8 мл воды и далее поступают, как описано при определении общего количества пара-аминобензоилглутаминовой кислоты. Содержание фолиевой кислоты в граммах (х) вычисляют по формуле







где а — общее количество свободной и связанной пара-аминобензоилглутаминовой кислоты, найденной по калибровочной кривой, в миллиграммах; b — количество свободной пара-аминобензоилглутаминовой кислоты, найденной по калибровочной кривой, в миллиграммах; 25 и 10 — постоянные коэффициенты; 3,22 — фактор пересчета пара-аминобензоилглутаминовой кислоты на фолиевую кислоту.



Витамин В12 (Цианкобаламин)



Качественные реакции

Раствор витамина В12 имеет характерный спектр поглощения в ультрафиолете с максимумами при 278, 361 и 548 нм и коэффициентами поглощения в указанных точках соответственно 115, 207 и 64, причем коэффициент поглощения при 361 нм для препаратов обычной очистки превышает в 2,8—3,4 раза коэффициент поглощения при 548 нм.

Количественное определение

І.Спектрофотометрический метод. В растворах ампулированных препаратов в кювете спектрофотометра (в 1 см толщины) определяют коэффициент поглощения при 548 нм. Содержание витамина В12 в 1 мл испытуемого раствора вычисляют по формуле. Количество витамина В12 в микрограммах где Е — наблюдаемый коэффициент поглощения; 64 — коэффициент поглощения для 1%-ного раствора витамина В12, т. е. при содержании 1000 микрограммов в 1 мл; 104 — коэффициент пересчета концентрации витамина В12 с 1% в микрограммы на 1 мл.

2. Колориметрический метод. При отсутствии спектрофотометра пользуются фотоэлектроколориметром с зеленым светофильтром. Содержание витамина В12 в испытуемом образце определяют путем измерения коэффициента поглощения. По найденному коэффициенту, пользуясь калибровочной кривой, устанавливают какое количество витамина В12 ему соответствует. Для составления калибровочной кривой для колориметра ФЭК берут растворы чистого витамина В12 с содержанием 10, 15, 20, 25 и 30 мкг в 1 мл и определяют коэффициенты поглощения, пользуясь кюветами в 1 см толщиной.

Откладывая по оси абсцисс содержание витамина В12, а по оси ординат коэффициенты поглощения, строят калибровочную кривую, по которой и отсчитывают, какому количеству витамина В12 соответствует коэффициент поглощения испытуемого образца.



Витамин С (Аскорбиновая кислота)





(Мол. вес 176,12)



Качественные реакции

Растворяют 0,1 г аскорбиновой кислоты в 2 мл воды и приливают 0,5 мл раствора нитрата серебра. Выпадает осадок металлического серебра.

Раствор аскорбиновой кислоты (0,1 г в 2 мл) в воде остается бесцветным от прибавления 1 капли раствора йода или хлорида железа.

Количественное определение

Йодометрический метод основан на окислении аскорбиновой кислоты йодом с превращением ее в окисленную дегидроформу:

Растворяют 0,3 г препарата (точная навеска) в 25 мл воды и титруют до появления неисчезающей желтой окраски 0,1 н. раствором йода, 1 мл которого соответствует 0,0088 г аскорбиновой кислоты.

Вместо йода можно применять йодат калия. Навеску препарата с содержанием 0,01 г аскорбиновой кислоты растворяют в 100 мл воды. К 10 мл раствора прибавляют 5 мл 5%-ного раствора йодида калия, 5 мл 2%-ной соляной кислоты, 50 мл воды и 10 мл 0,004 н. раствора йодата калия и оставляют в темном месте в течение 30 минут. Не вошедший в реакцию свободный йод оттитровывают 0,004 н. раствором тиосульфата натрия (индикатор раствор крахмала). 1 мл 0,004 н. раствора йодата калия соответствует 0,000352 г аскорбиновой кислоты. Рассчитывают по формуле (а—b) · 0,000 352, где а — количество раствора йодата калия в миллилитрах, b — количество раствора тиосульфата натрия в миллилитрах. Аскорбиновую кислоту можно определять по реакции восстановления 2,6-дихлорфенол-индофенола, но этот метод мало применим при контроле рецептуры.



Витамин D2 (Кальциферол)







Качественные реакции

К 2 мл раствора препарата в сухой пробирке добавляют 5 капель раствора пирогаллола. Растворитель отгоняют, нагревая пробирку на водяной бане, и оставляют лишь несколько десятых миллилитра раствора. Затем прибавляют 3 капли раствора хлорида алюминия и снова нагревают на водяной бане. Несколько выше дна пробирки начинает появляться красно-фиолетовая корочка, окраска которой достигает наибольшей интенсивности примерно через 4 минуты. Окрашенное вещество можно растворить в 5 мл спирта. Такой раствор, налитый в пробирку, закрытую резиновой пробкой, сохраняет интенсивность окраски в течение часа. Реакция удается лишь при условии применения совершенно безводных реактивов, тщательно высушенной посуды и при строгом соблюдении порядка прибавления реактивов. Необходимы реактивы: 1) 0,1%-ный раствор пирогаллола в абсолютном спирте и 2) 10%-ный раствор сублимированного хлорида алюминия.

К 1—2 мг препарата добавляют равное количество сахарозы и растворяют смесь в 1—2 мл абсолютного спирта. После добавления 2 капель концентрированной серной кислоты появляется красная окраска, переходящая в синюю от добавления 6 капель разбавленной серной кислоты.

К 0,2 мл раствора препарата D (2 мг кристаллического витамина D в 1 мл хлороформа) добавляют 4 мл раствора хлорида сурьмы. Появляется оранжево-красная окраска, быстро достигающая максимальной интенсивности и дающая резкую полосу поглощения при 500 ммк одинаковой силы для витаминов D2 и D3.



Витамин Е (б-токоферол)








Качественные реакции

При действии азотной кислоты токоферол образует соединение, окрашенное в яркий красный цвет (реакция характерна).

Количественное определение

Токоферол количественно окисляют раствором хлорида золота в 80%-ном спирте; титруют потенциометрически.



Витамин РР (Никотиновая кислота и никотинамид)





(Мол. вес 123,11)



Качественные реакции

Растворяют 0,01—0,02 г препарата при нагревании в 3 мл воды. К теплому раствору приливают 3 капли уксусной кислоты и 1 мл 5%-ного раствора ацетата меди. Выпадает осадок синего цвета.

В растворе никотиновой кислоты от реактива Зонненшейна (фосфорно-молибденовая кислота) выпадает желтый осадок, а от реактива Драгендорфа красный осадок.

Никотиновая кислота и ее амид дают с 2,4-динитрохлор-бензолом соли пиридиния, которые при действии щелочей расщепляются с образованием производных глутаконового альдегида, окрашенных в желто-красный цвет.

В 100 мл воды растворяют 10 мг никотиновой кислоты; 5 мл раствора выпаривают досуха на водяной бане в стаканчике емкостью 30 мл, затем добавляют 1 мл 10%-ного спиртового раствора 2,4-ди-нитрохлорбензола и после 2-часового стояния при комнатной температуре выпаривают снова досуха на водяной бане и держат еще в течение 10 минут при той же температуре. После охлаждения до 25° к остатку приливают 10 мл охлажденного до 10° 0,1%-ного спиртового раствора едкого натра. Раствор окрашивается в интенсивный желто-красный цвет.

Количественное определение

Сульфат меди осаждает в нейтральной среде осадок (C6H4O2N)Cu2; избыток меди определяется йодометрически.

Несколько порошков с содержанием 0,3—0,4 г (точная навеска) никотиновой кислоты растворяют в 25 мл свежепрокипяченной горячей воды и по охлаждении нейтрализуют (индикатор — фенолфталеин) сначала 0,5 н., а под конец 0,1 н. раствором едкого натра, переливают в мерную 100 мл колбу, прибавляют 10 мл раствора медного купороса, доводят до метки, перемешивают, дают стоять 10—15 минут и отфильтровывают через сухой фильтр в сухую колбу. К 50 мл фильтрата в конической колбе с притертой пробкой прибавляют 10 мл разведенной соляной кислоты, 2 г йодида калия, закрывают пробкой и дают стоять в темном месте 10 минут. Выделившийся йод титруют 0,1 н. раствором тиосульфата натрия (индикатор — крахмал), 1 мл которого соответствует 0,02462 г никотиновой кислоты.

Проводится контрольный опыт. Разность между вторым и первым титрованиями перечисляют на никотиновую кислоту.

В отсутствии мешающих веществ кислого или щелочного характера никотиновая кислота в спиртовом растворе может быть оттитрована 0,1 н. раствором едкого натра (индикатор—фенолфталеин).

Количественное определение никотиновой кислоты по циано-генбромидному методу основано на образовании никотиновой кислотой при взаимодействии с бромцианом бромцианпроизводного, которое в присутствии ароматических аминов (анилина и др.) распадается с образованием интенсивно окрашенного продукта — производного

Растирают в ступке 10—20 штук драже, взвесив для установления среднего веса, отбирают навеску в количестве 1—3 г на техно-химических весах и растворяют при нагревании в 10—15 мл перегнанной воды. По охлаждении раствор переливают в мерный цилиндр, разбавляют водой с таким расчетом, чтобы в 5 мл разведения содержалось 0,5—1 мг никотиновой кислоты, хорошо перемешивают содержимое цилиндра и фильтруют через складчатый фильтр.

К 5 мл фильтрата в стаканчике добавляют 1 каплю 2%-ного раствора щелочи, 2 мл роданбромидного раствора, 11 мл спиртового раствора анилина, хорошо перемешивают и оставляют на 1—2 часа. После этого смесь отфильтровывают от выпавшего осадка и появившуюся желтую окраску раствора сравнивают со стандартным раствором никотиновой кислоты в колориметре Дюбоска, устанавливая стандартный раствор всегда на 10 мм.

Для приготовления стандартного раствора навеску кристаллического никотин-амида или никотиновой кислоты растворяют в горячей воде с таким расчетом, чтобы в 1 мл раствора содержался точно 1 мг никотиновой кислоты. К 1 мл раствора в стаканчике добавляют 4 мл воды и 1 каплю 2 н. раствора щелочи. В дальнейшем стандартный раствор обрабатывают так же, как описано выше, и одновременно с испытуемым раствором.

Для приготовления роданбромидного раствора в коническую колбочку с 10 мл н. раствора химически чистого роданида калия добавляют 1 г бромида калия и после полного растворения — 1 мл соляной кислоты (разведенной водой 1 : !), а далее из бюретки прибавляют по каплям 2,5 мл брома (уд вес 3,2) при постоянном помешивании содержимого колбочки.



Рутин



(Мол. вес 610,35, безводный)


Качественные реакции

Спиртовый раствор рутина при добавлении магниевых стружек и 2—3 капель ледяной уксусной или соляной кислоты окрашивается в пурпурно-красный цвет; образуется антоцианидин:

При добавлении к спиртовому раствору рутина ацетата свинца выделяются желтые игольчатые кристаллы.

Спиртовые и водные растворы рутина при действии хлорида железа окрашиваются в зеленый цвет (реакция на фенольный гидрок-сил).

Рутин легко восстанавливает аммиачный раствор серебра.

К 1 мл раствора, содержащего 0,005 г рутина, прибавляют 2 мл 10%-ного водного раствора нитрита натрия, 0,5 мл 50%-ной серной кислоты, 25 мл 1 н. раствора карбоната калия и 100 мл воды, Появляется красно-коричневое окрашивание.

К 5 мл раствора рутина прибавляют 2 мл 10%-ного раствора молибдата аммония и воды до 100 мл. Появляется лимонно-желтое окрашивание.

При действии кислот рутин разлагается на кверцетин (I), глюкозу (II) и рамнозу (III):

Количественное определение

Основано на выделении и взвешивании выделенного кверцетина. 1. К 1 г препарата (точная навеска) в конической колбе емкостью в 200 мл приливают 100 мл 0,5%-ного раствора соляной кислоты и кипятят с обратным холодильником на сетке или электрической плитке в течение 30 минут. По охлаждении собирают образовавшийся осадок на взвешенный стеклянный фильтр (№ 3 или 4), промывают 3—4 раза по 10 мл перегнанной воды (до отсутствия реакции на хлор-ион), высушивают при температуре 110° до постоянного веса. Полученный вес умножают на 2,019.

Для количественного определения в таблетках таблетки растирают, извлекают спиртом, к раствору прибавляют раствора хлорида аммония и ацетата калия (для усиления окраски) и через 40 минут определяют спектрофотометром поглощение при 445 нм; результат сравнивают с калибровочной кривой. Метод применяли к исследованию смесей рутина с аминофиллином, люминалом и аскорбиновой кислотой.






Литература



		Девятнин В.А.Методы химического анализа в производстве витаминов// М.: Медицина – 1964. – 182 с.

		Державна фармакопея України// Харків – 2001. – 527 с.

		Перельман Я.М.Анализ лекарственных форм//Ленинград: Медгиз – 1961. – 618 с.