Manuel volvió a casar con otra hija de los Reyes Católicos, María de Aragón, pero su hermana mayor Juana, que estaba casada con Felipe I de Castilla, era la heredera directa al trono y no María; sólo una improbable serie de muertes podría permitir que un hijo suyo fuera heredero legítimo de los reinos de Castilla y Aragón.