En primer lugar, para saber el sexo de la pitón real, hay algunas diferencias como el tamaño, la hembra suele ser de mayor tamaño que el macho; la cola, el macho tiene un mayor número de escamas por debajo de la cloaca que la hembra y por último la diferencia más fiable reside en los espolones preanales, situados a los lados de la cloaca, en el macho estos espolones están más desarrollados que en las hembras.