Se inició un conflicto abierto entre los hermanos cuando el 4 de octubre de 1562 Juan se casó en Vilna, Lituania, con la princesa polaca Catalina Jagellón, hija del rey de Polonia Segismundo I Jagellón el Viejo (Gustavo había intentado desposar a la hermana mayor de catalina, Eduviges Jagellón en 1526, pero las diferencias religiosas resultaron un impedimento ante los ojos del rey Segismundo).