Tras la Conquista del Perú, realizada por las tropas de Francisco Pizarro, y como consecuencia de la guerra civil, el rey Carlos V, mediante una Real cédula firmada en Barcelona el 20 de noviembre de 1542, creó el Virreinato del Perú sobre la base de los territorios de las gobernaciones de Nueva Castilla y de Nueva Toledo, poniendo fin a la existencia jurídica de ambas.