Este museo de 28 salas, que atraviesa los apartamentos reales, contiene obras de Botticelli, Fra Bartolomeo, Rafael ("Madona de la silla", "La Dona Velata", "Madonna del granduca"...), Andrea del Sarto ("Anunciación Della Scala", "San Juan Bautista"), Tiziano, Correggio, Jacopo Pontormo, Domenico Beccafumi, Caravaggio, Rubens ("Los cuatro filósofos"), Artemisia Gentileschi y Pietro da Cortona, entre otros.