En esta gran expedición viajaron el licenciado Gaspar de Espinosa con el cargo de alcalde mayor, el mismo bachiller Fernández de Enciso ahora como alguacil mayor, el cronista Gonzalo Fernández de Oviedo que iba en calidad de oficial real; el piloto Juan Vespucio; varios capitanes, entre ellos Juan de Ayora como lugarteniente de Pedrarias; varios clérigos entre los que resaltaba el fraile franciscano Juan de Quevedo asignado como obispo de Santa María, y finalmente venían mujeres entre las cuales estaba Isabel de Bobadilla, esposa de Pedrarias.