Comandada por Mendoza y piloteada por Gonzalo de Acosta, la flota alcanza el río Paraná Guazú en la Epifanía de 1536 donde divisan cerca de 2 mil indígenas charrúas en la orilla, por lo que Mendoza decidió desembarcar en la orilla sur donde realizó la primera fundación de lo que Mendoza llamó "Puerto de Nuestra Señora Santa María del Buen Aire", lo cual ocurrió el 2 de febrero de 1536 (o 3 de febrero según otros historiadores) en el borde del río (denominado Riachuelo), y según algunos historiadores su función no era la de convertirse en ciudad, sino que el fuerte fue instalado por motivos estratégicos, para ser utilizado en la defensa de la zona.