## Pravilnik o izmjeni i dopuni Pravilnika o načinu obavljanja pretrage na prisutnost Trichinella u mesu

### NN 78/2012 (13.7.2012.), Pravilnik o izmjeni i dopuni Pravilnika o načinu obavljanja pretrage na prisutnost Trichinella u mesu

MINISTARSTVO POLJOPRIVREDE

1851

Na temelju članka 85. stavka 4. Zakona o veterinarstvu (»Narodne novine«, broj 41/07 i 55/11) i članka 56. stavka 2. podstavaka 4. i 5. Zakona o hrani (»Narodne novine«, br. 46/07 i 55/11), ministar poljoprivrede, donosi

PRAVILNIK

O IZMJENI I DOPUNI PRAVILNIKA O NAČINU OBAVLJANJA PRETRAGE NA PRISUTNOST TRICHINELLA U MESU

Članak 1.

(1) U Pravilniku o načinu obavljanja pretrage na prisutnost Trichinella u mesu (»Narodne novine«, br. 62/08, 74/08 i 102/08)[[1]](#footnote-29081-1) Prilogu I., Poglavlje II. izmjenjuje se i dopunjuje na način kako je određeno u Dodatku ovoga Pravilnika.

(2) Ovaj Pravilnik sadrži odredbe koje su u skladu sa sljedećim aktom Europske unije:

– Uredba Komisije kojom se provodi Uredba (EU) br. 1109/2011 od 3. studenog 2011. kojom se mijenja Prilog I. Uredbe (EZ) br. 2075/2005 u pogledu ekvivalentnih metoda za obavljanje pretrage na prisutnost Trichinella (SL L 287, 4. 11. 2011.).

Članak 2.

Dodatak je tiskan u prilogu ovoga Pravilnika i čini njegov sastavni dio.

Članak 3.

Ovaj Pravilnik stupa na snagu osmoga dana od dana objave u »Narodnim novinama».

Klasa: 011-02/12-01/71

Urbroj: 525-10/0260-12-3

Zagreb, 13. lipnja 2012.

Ministar

Tihomir Jakovina, v. r.

DODATAK

1. U Prilogu I. Poglavlju II. u Dijelu C. točka 1. podtočka (f) mijenja se i glasi:

»(f) Pepsin aktivnosti 1:10 000 NF (US National Formulary), što odgovara 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) i 2 000 FIP (Fédération internatiomnale de pharmacie), ili stabilizirani tekući pepsin sa najmanje 660 European Pharmacopoeia jedinica/ml.«

2. U Prilogu I. Poglavlju II. iza Dijela C. dodaje se Dio D koji glasi:

»D. METODA UMJETNE PROBAVE NA MAGNETSKOJ MIJEŠALICI ZA SKUPNE UZORKE/S IZDVAJANJEM NA FILTRU I OTKRIVANJE LIČINKI POMOĆU LATEKS AGLUTINACIJSKOG TESTA

Ova metoda se smatra ekvivalentnom samo za pretraživanje mesa domaćih svinja.

1. Oprema, pribor i kemikalije za obavljanje pretraga

1.1. Nož ili škare i pinceta za rezanje uzoraka;

1.2. Podlošci razdijeljeni na 50 odvojenih prostora od kojih svaki sadrži približno 2 g mesa ili druga oprema koja u potpunosti osigurava sljedivost uzoraka;

1.3. Sjeckalica za meso s prikladnim oštricama. Ako je uzorak veći od 3 g, koristi se uređaj za mljevenje mesa s otvorima veličine 2 do 4 mm ili škare. Zamrznuto meso ili jezik (nakon uklanjanja površinskog vezivno–tkivnog sloja koji se ne može probaviti) usitnjava se u uređaju za mljevenje mesa. Od zamrznutog mesa ili jezika uzima se znatno veći uzorak;

1.4. Magnetske miješalice s termostatski kontroliranom pločom za zagrijavanje i štapićima za miješanje presvučenim teflonom, dužine približno 5 cm;

1.5. Staklene posude zapremine 3 litre;

1.6. Sito vanjskog promjera 11 cm, s mrežicom od nehrđajućeg čelika čiji su otvori promjera 180 µm;

1.7. Uređaj za filtraciju s metalnim filtrom pora 20 µm i metalnim lijevkom;

1.8. Vakuum pumpa;

1.9. Metalne ili plastične posude, zapremnine 10 – 15 l, za prikupljanje probavnog soka;

1.10. 3D klackalica;

1.11. Aluminijska folija;

1.12. 25% klorovodična kiselina;

1.13. Pepsin aktivnosti 1:10000 NF (US National Formulary) što odgovara 1:12 500 BP (British Pharmacopeia) i 2000 FIP (International Pharmaceutical Federation) ili stabilizirani tekući pepsin s najmanje 660 European Pharmacopoeia jedinica/ml;

1.14. Voda za piće zagrijana na 46 – 48 °C;

1.15. Vaga s najvećim dozvoljenim odstupanjem od 0,1 g;

1.16. Pipete različite zapremine/veličine (1, 10 i 25 ml) mikropipete u skladu s uputama proizvođača lateks aglutinacije i pipetori;

1.17. Najlonski filtri pora 20 µm s promjerom koji odgovara filtracijskom sustavu;

1.18. Plastične ili metalne pincete od 10 – 15 cm;

1.19. Konične posudice od 15 ml;

1.20. Tučak s teflonskim ili metalnim vrhom koji odgovara koničnoj posudici;

1.21. Termometar s mjernim rasponom od 1 – 100 °C, s točnošću od 0,5 °C;

1.22. Lateks aglutinacijska karta u sklopu Trichin-L antigen test kita validirane pod kodom Broj EURLP \_D \_ 001/2011;

1.23. Pufer s konzervansom (razrjeđivač za uzorak) u sklopu Trichin-L antigen test kita validirane pod kodom Broj EURLP \_D \_ 001/2011;

1.24. Pufer s konzervansom (negativna kontrola) u sklopu Trichin-L antigen test kita validirane pod kodom Broj EURLP \_D \_ 001/2011;

1.25. Pufer s Trichinella spiralis antigenom i konzervansom (pozitivna kontrola) u sklopu Trichin-L antigen test kita validirane pod kodom Broj EURLP \_D \_ 001/2011;

1.26. Pufer s polistirenskim kuglicama obloženim protutijelima s konzervansom (lateks kuglice) u sklopu Trichin-L antigen test kita validirane pod kodom Broj EURLP \_D \_ 001/2011;

1.27. Štapići za jednokratnu upotrebu.

2. Prikupljanje uzoraka

Kako je propisano u Poglavlju I. točki 2. ovoga Priloga.

3. Postupak izvođenja

I. Za skupni uzorak (u ukupnoj količini od 100 g uzorka) postupak je propisan u Poglavlju I. točki 3. I. podtočkama (a) do (i), a dodatno se primjenjuje sljedeći postupak.

1. Najlonski filtar, pora 20 µm, postavlja se na držač filtra. Konični filtracijski lijevak se pričvršćuje na držač filtra, a metalni filtar promjera pora 180 µm se postavlja na lijevak. Vakuum pumpa je povezana preko držača filtra sa metalnom ili plastičnom posudom koja služi za sakupljanje probavnog soka.

2. Miješanje se zaustavlja i probavni sok se filtrira kroz filtar u lijevak. Posuda se ispire sa 250 ml tople vode. Tekućina za ispiranje mora se uliti u sustav za filtraciju nakon što je probavni sok filtriran.

3. S pincetom uzeti filtracijsku membranu držeći je za rub. Presavinuti filtracijsku membranu na četiri dijela i staviti u koničnu posudu od 15 ml.

4. Filtracijska membrana se potisne do dna pomoću tučka i snažno pritisne te pomiče dok ne pristane uz koničnu posudu u skladu s uputama proizvođača.

5. Razrjeđivač se dodaje pipetom u koničnu posudu i filtracijska membrana se homogenizira tučkom, izbjegavajući nagle pokrete kako bi se spriječilo prskanje tekućine, a u skladu s uputama proizvođača.

6. Svaki uzorak, negativna kontrola i pozitivna kontrola se stavljaju u različita polja aglutinacijske karte, pipetom, u skladu s uputama proizvođača.

7. Lateks kuglice dodaju se pipetom u svako polje aglutinacijske karte, oprezno, da se ne dotiču s uzorkom i kontrolama, a u skladu s uputama proizvođača. U svakom polju lateks kuglice se nježno miješaju štapićima za jednokratnu upotrebu, dok homogenizirana tekućina ne prekrije cijelo polje.

8. Aglutinacijska karta stavlja se na 3D klackalicu, i klacka se, u skladu s uputama proizvođača.

9. Nakon isteka vremena, u skladu s uputama proizvođača, klackanje se prekida i aglutinacijska karta stavlja se na ravnu površinu kako bi se očitali rezultati reakcije. U slučaju pozitivnog nalaza lateks čestice aglutiniraju. U slučaju negativnog nalaza otopina ostaje homogena i ne dolazi do aglutinacije.

10. Sav pribor i oprema koja je bila u kontaktu s uzorcima mora se dekontaminirati vrućom vodom (60 – 90 °C) kroz nekoliko sekundi, između svake pretrage. Površine na kojima je moglo zaostati meso ili ličinke, moraju se očistiti spužvom i pitkom vodom. Jednom, kada je procedura završena, dodaje se nekoliko kapi deterdženta. Potom svaki dio treba temeljito isprati nekoliko puta kako bi se isprali svi tragovi deterdženta.

11. Tučak se mora pažljivo dekontaminirati uranjanjem u najmanje 250 ml vruće vode (60 – 90 °C) kroz nekoliko sekundi. Ostaci mesa ili inaktiviranih ličinki koje bi se mogle zadržati na površini moraju se ukloniti spužvom i pitkom vodom. Nakon završenog postupka tučak treba odmastiti s nekoliko kapi deterdženta, a potom ga temeljito isprati nekoliko puta, kako bi se uklonili tragovi deterdženta.

II. Skupni uzorci ukupne težine manje od 100 g kako je propisano u Poglavlju I. točki 3.II. ovoga Priloga.

Za skupne uzorke manje od 100 g, postupak je opisan u Poglavlju I. točki 3.II. ovoga Priloga.

III. Pozitivni li sumnjivi rezultati

Kada pretraga skupnog uzorka daje pozitivan ili sumnjiv rezultat lateks aglutinacije, postupak se ponavlja s 20 g uzorka od svake svinje u skladu s Poglavljem I. točkom 2. podtočkom (a) ovoga Priloga. Skupni uzorak od pet svinja po 20 g uzorka, pretražuje se u skladu s metodom koja je opisana u točki I. ovoga Dijela. Ovim postupkom treba pretražiti 20 skupina od po pet svinja.

Kada se utvrdi pozitivan rezultat lateks aglutinacije, unutar uzorka od 5 svinja, uzima se po 20 g uzorka od svake pojedine svinje i svaki se pretražuje zasebno, koristeći jednu od metoda opisanih u Poglavlju I. ovoga Priloga.

Uzorci parazita pohranjuju se u 90% etilni alkohol radi čuvanja i identifikacije na razini vrste u EU referentnom laboratoriju ili nacionalnom referentnom laboratoriju.

Nakon sakupljanja parazita, preostala tekućina mora se dekontaminirati zagrijavanjem na najmanje 60 °C.«

[[1](#footnote-29081-1-backlink)]Pravilnikom su preuzete odredbe Uredbe Komisije (EZ) br. 2075/2005 od 5. prosinca 2005. kojom se utvrđuju posebna pravila za obavljanje službenih kontrola Trichinella u mesu.

78 13.07.2012 Pravilnik o izmjeni i dopuni Pravilnika o načinu obavljanja pretrage na prisutnost Trichinella u mesu

Pravilnik, NN 78/2012-1851