natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The shelf life of the stock solution is a maximum of 10 days; if its conductivity is more than 5 μS, de-ionize by stirring with 2 g Amberlite MB-3 for 30 minutes, then filter through a 0,45 μm membrane.
Fotogen eller flytande paraffin.
Gel solution
Anodlösning
Prepare a gel solution by mixing additives and ampholytes (*) with the stock gel solution (see 4.1.1).
Lös 5,77 g fosforsyra (85 viktprocent) i vatten och späd med vatten till 100 ml.
9,0 ml stock solution
Katodlösning
24 mg β-alanine
Lös 2,00 g natriumhydroxid i vatten och späd med vatten till 100 ml.
500 μl ampholyte pH 3,5-9,5
Provberedning
250 μl ampholyte pH 5-7
Reagenser för proteinisolering
250 μl ampholyte pH 6-8
Späd ättiksyra (25,0 ml isättika späds med vatten till 100 ml).
Mix the gel solution and de-gas for two to three minutes in an ultrasonic bath or in vacuum.
Diklormetan
Note: Prepare the gel solution immediately prior to pouring it (see 6.2).
Aceton
Catalyst solutions
Proteinupplösande buffert
N, N, N′ N′ — tetramethylethylenediamine (Temed)
Lös
40 % w/v ammonium persulphate (PER):
5,75 g glycerol (87 viktprocent),
Dissolve 800 mg PER in water and make up to 2 ml.
24,03 g urea,
Note: Always use freshly prepared PER solution.
250 mg ditiotreitol
Contact fluid
i vatten och späd till 50 ml.
Kerosene or liquid paraffin
Anm.: Förvaras i kylskåp, hållbar i högst en vecka.
Anode solution
Reagenser till plasminspjälkning av kaseiner
Dissolve 5,77 g phosphoric acid (85 % w/w) in water and dilute to 100 ml.
Ammoniumkarbonatbuffert
Cathode solution
Titrera en 0,2 mol/l ammoniumvätekarbonatlösning (1,58 g/100 ml vatten) som innehåller 0,05 mol/l etylendiamintetraättiksyra (EDTA, 1,46 g/100 ml) med en 0,2 mol/l ammoniumkarbonatlösning (1,92 g/100 ml vatten) som innehåller 0,05 mol/l EDTA till pH 8.
Dissolve 2,00 g sodium hydroxide in water and dilute to 100 ml with water.
Bovin plasmin (EC.
Sample preparation
3.4.21.7), aktivitet minst 5 IE/ml
Reagents for protein isolation
ε-Aminokapronsyralösning för enzyminhibition
Dilute acetic acid (25,0 ml of glacial acetic acid made up to 100 ml with water)
Lös 2,624 g ε-aminokapronsyra (6-amino-n-hexanonsyra) i 100 ml 40 % (v/v) etanol.
Dichloromethane
Standarder
Acetone
Certifierade referensstandarder av en blandning av skummjölk från tackor och getter vilken behandlats med löpe och som innehåller 0 % och 1 % komjölk är tillgängliga från kommissionens institut för referensmaterial och mätningar, B-2440 Geel, Belgien.
Protein dissolving buffer
Beredning av interimstandarder för laboratoriebruk av buffelmjölk som behandlats med löpe och som innehåller 0 % och 1 % komjölk
Dissolve
Skummjölken bereds genom att obehandlad och opaketerad mjölk från antingen bufflar eller kor centrifugeras vid 37 °C, 2500 g i 20 minuter.
5,75 g glycerol (87 % w/w)
Röret med innehåll kyls snabbt till 6–8 °C och det översta fettlagret avlägsnas fullständigt.
24,03 g urea
1 %-standardlösning bereds genom att 5,00 ml skummjölk från ko tillsätts till 495 ml skummjölk från buffel i 1-litersbägare och pH-värdet justeras till 6,4 genom tillsats av utspädd mjölksyra (10 % w/v).
250 mg dithiothreitol,
Ställ in temperaturen på 35 °C och tillsätt 100 μl kalvlöpe (löpeaktivitet 1: 10000, ca 3000 U/ml). och rör om i 1 minut.
in water and make up to 50 ml
Täck sedan bägaren med aluminiumfolie och låt den stå i 35 °C under 1 timme, så att ostmassan bildas.
Note: Store in a refrigerator, maximum shelf-life one week.
När ostmassan har bildats, frystorkas all den löpebehandlade mjölken utan föregående homogenisering eller avrinning av vasslen.
Reagents for plasmin cleavage of caseins
Efter frystorkningen mals produkten fint till ett homogent pulver.
Ammonium carbonate buffer
Använd samma förfarande för att bereda 0 %-standardlösningen av ren skummad buffelmjölk.
Titrate a 0,2 mol/l ammonium hydrogencarbonate solution (1,58 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA, 1,46 g/100 ml with a 0,2 mol/l ammonium carbonate solution (1,92 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l EDTA to pH 8.
Standardlösningarna ska förvaras vid – 20 °C.
Bovine plasmin (EC.
Anm.: Kontrollera buffelmjölkens renhet genom isoelektrisk fokusering av plasminbehandlade kaseiner innan standardlösningarna bereds.
3.4.21.7), activity at least 5 U/ml
Reagenser för proteinfärgning
ε-Aminocaproic acid solution for enzyme inhibition
Fixeringsvätska
Dissolve 2,624 g ε-aminocaproic acid (6 amino-n-hexanoic acid) in 100 ml of 40 % (v/v) ethanol.
Lös 150 g triklorättiksyra i vatten och späd till 1000 ml.
Standards
Avfärgningslösning
Certified reference standards of a mixture of renneted ewe's and goat's skimmed milk containing 0 % and 1 % of cow's milk are available from the Commission's Institute for Reference Materials and Measurements, B-2440 Geel, Belgium
Späd 500 ml metanol och 200 ml isättika med destillerat vatten till 2000 ml.
Preparation of laboratory interim-standards of buffalo's renneted milk containing 0 % and 1 % of cow's milk
Anm.: Blanda till ny avfärgningslösning varje dag.
Skimmed milk is prepared by centrifuging of either buffalo or bovine raw bulk milk at 37 °C at 2500 g for 20 minutes.
Utgå gärna från stamlösningar av 50 % (v/v) metanol och 20 % (v/v) isättika som blandas i lika stora mängder.
After cooling the tube and contents rapidly to 6 to 8 °C, the upper fat layer is removed completely.
Färgningslösningar
For the preparation of the 1 % standard add 5,00 ml of bovine skimmed milk to a 495 ml of buffalo's skimmed milk in a 1 l beaker, adjust the pH to 6,4 by the addition of dilute lactic acid (10 % w/v).
Färgningslösning (stamlösning 1)
Adjust the temperature to 35 °C and add 100 μl of calf rennet (rennet activity 1: 10000, c.
Lös 3,0 g Coomassie Brilliant Blue G-250 (C.I. 42655) i 1000 ml 90 % (v/v) metanol med hjälp av en magnetisk omrörare (ca 45 minuter) och filtrera därefter lösningen genom två vikta filter för medelsnabb filtrering.
3000 U/ml), stir for 1 minute and then leave the beaker covered with an aluminium foil at 35 °C for one hour to allow formation of the curd.
Färgningslösning (stamlösning 2)
After the curd has formed, the whole renneted milk is freeze-dried without prior homogenization or draining of the whey.
Lös 5,0 g kopparsulfatpentahydrat i 1000 ml 20 % (v/v) ättiksyra.
After freeze-drying it is finely ground to produce a homogeneous powder.
Färgningslösning (arbetslösning)
For the preparation of the 0 % standard, carry out the same procedure using genuine buffalo skimmed milk.
Blanda 125 ml av vardera stamlösningen (4.11.1, 4.11.2) med varandra omedelbart före färgningen.
The standards shall be stored at – 20 °C.
Anm.: Färgningslösningen bör beredas samma dag som den ska användas.
Note: It is advisable to check the purity of the buffalo milk by isoelectric focusing of the plasmin-treated caseins before preparation of the standards.
UTRUSTNING
Reagents for protein staining
Glasplattor (265 × 125 × 4 mm) gummirulle (15 cm bred) vågrätt underlag
Fixative
Gelbärarfolie (265 × 125 mm)
Dissolve 150 g trichloroacetic acid in water and make up to 1000 ml.
Elektrofokuseringskammare med kylplatta (t.ex.
Destaining solution
265 × 125 mm) med lämplig spänningskälla (≥ 2,5 kV) eller automatisk elektroforesapparat
Staining solutions
Elektrodremsor (≥ 265 mm långa)
Staining solution (stock solution 1)
Droppflaskor av plast till anod- och katodlösningarna
Dissolve 3,0 g Coomassie Brilliant Blue G-250 (C.I. 42655) in 1000 ml 90 % (v/v) methanol using a magnetic stirrer (approximately 45 minutes), filter through two medium-speed folded filters.
Provapplikatorer (10 × 5 mm, viskosfilterpapper eller filterpapper för låg proteinabsorption)
Staining solution (stock solution 2)
Färgningsskålar och avfärgningsskålar av rostfritt stål eller glas (t.ex.
Dissolve 5,0 g copper sulphate pentahydrate in 1000 ml 20 % (v/v) acetic acid.
280 × 150 mm instrumentbrickor)
Staining solution (working solution)
Justerbar homogenisator med stång (10 mm diameter), varvtalsintervall 8000–20000.
Mix together 125 ml of each of the stock solutions (4.11.1, 4.11.2) immediately prior to staining.
Foliesvets
Note: The staining solution should be prepared on the day that it is used.
25 μl mikropipetter
EQUIPMENT
Vakuumindunstare eller frystork
Glass plates (265 × 125 × 4 mm); rubber roller (width 15 cm); levelling table
Termostatstyrt vattenbad inställt på 35 och 40 ± 1 °C med skakare
Gel carrier sheet (265 × 125 mm)
Densitometerutrustning med avläsning vid λ = 634 nm
Covering sheet (280 × 125 mm).
Isolering av kaseiner
Stick on strip of adhesive tape (280 × 6 × 0,25 mm) to each long edge (see Figure 1)
Väg upp en mängd som motsvarar 5 g torr ost eller referensstandarderna i ett 100 ml centrifugrör, tillsätt 60 ml destillerat vatten och homogenisera med en homogenisator med stång (8000–10000 varv/minut).
Electrofocusing chamber with cooling plate (e.g. 265 × 125 mm) and suitable power supply (≥ 2,5 kV) or automatic electrophoresis device
Justera pH-värdet till 4,6 med utspädd ättiksyra (4.5.1) och centrifugera (5 minuter, 3000 g).
Circulation cryostat, thermostatically controlled at 12 ± 0,5 °C
Avlägsna fettet och vasslen och homogenisera återstoden vid 20000 varv/min i 40 ml destillerat vatten som justerats till pH 4,5 med utspädd ättiksyra (4.5.1), tillsätt 20 ml diklormetan (4.5.2) och homogenisera och centrifugera igen (5 minuter, 3000 g).
Centrifuge, adjustable to 3000 g
Avlägsna det kaseinlager som finns mellan vattenfasen och den organiska fasen (se figur 2) med en spatel och dekantera av båda faserna.
Electrode strips (≥ 265 mm long)
Homogenisera kaseinet igen i 40 ml destillerat vatten (se ovan) och 20 ml diklormetan (4.5.2) och centrifugera.
Plastic dropping bottles for the anode and cathode solutions
Upprepa detta förfarande tills båda extraktionsfaserna är färglösa (två eller tre gånger).
Sample applicators (10 × 5 mm, viscose or low protein-adsorption filter paper)
Homogenisera proteinresterna med 50 ml aceton (4.5.3) och filtrera dem genom ett vikt filter för medelsnabb filtrering.
Stainless steel or glass staining and destaining dishes (e.g. 280 × 150 mm instrument trays)
Tvätta resterna på filtret med två olika omgångar av 25 ml aceton, låt torka i luft eller i en kväveström och pulverisera dem sedan fint i mortel.
Adjustable rod homogenizer (10 mm shaft diameter), rpm range 8000 to 20000
Anm.: Torra kaseinisolat ska förvaras vid – 20 °C.
Film welder
Plasminspjälkning av β-kaseiner för att intensifiera γ-kaseiner
25 μl micropipettes
Slamma upp 25 mg isolerade kaseiner (6.1.1) i 0,5 ml ammoniumkarbonatbuffert (4.7.1) och homogenisera under 20 minuter, exempelvis genom ultraljudsbehandling.
Vacuum concentrator or freeze-dryer
Värm till 40 °C och tillsätt 10 μl plasmin (4.7.2), blanda och inkubera under en timme vid 40 °C under ständig skakning.
Thermostatically controlled water bath adjustable to 35 and 40 ± 1 °C with shaker
Inhibera enzymet genom att tillsätta 20 μl ε-aminokapronsyra (4.7.3), och tillsätt sedan 200 mg fast urea och 2 mg ditiotreitol.
Densitometer equipment reading at λ = 634 nm
Anm.: För att få de fokuserade kaseinbanden mer symmetriska rekommenderas att lösningen frystorkas efter tillsättning av ε-aminokapronsyran och att resterna löses i 0,5 ml proteinupplösande buffert (4.6).
Isolation of caseins
Beredning av akrylamidgeler som innehåller urea
Weigh the amount equivalent to 5 g dry mass of cheese or the reference standards into a 100 ml centrifuge tube, add 60 ml distilled water and homogenize with a rod homogenizer (8000 to 10000 rpm).
Rulla ut gelbärarfolien (5.2) med hjälp av ett par droppar vatten på en glasplatta (5.1) och avlägsna eventuellt överflödigt vatten med pappershandduk eller hushållspapper.
Adjust to pH 4,6 with dil. acetic acid (4.5.1) and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
Rulla på samma sätt ut täckfolien (5.3) med avståndsmärken med 0,25 mm mellanrum på en annan glasplatta.
Decant the fat and whey, homogenize the residue at 20000 rpm in 40 ml distilled water adjusted to pH 4,5 with dil. acetic acid (4.5.1), add 20 ml dichloromethane (4.5.2), homogenize again and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
Placera plattan plant på ett vågrätt underlag.
Remove the casein layer that lies between the aqueous and organic phases (see Figure 2) with a spatula and decant off both phases.
Tillsätt 10 μl Temed (4.1.3.1) till den förbehandlade och avgasade gellösningen (4.1.2), rör om och tillsätt 10 μl Per-lösning (4.1.3.2), blanda noggrant och häll omedelbart ut ett jämnt lager på mitten av täckfolien.
Rehomogenise the casein in 40 ml distilled water (see above) and 20 ml dichloromethane (4.5.2) and centrifuge.
Placera ena sidan av gelbärarplattan (med folien nedåt) på täckfolieplattan och sänk ned den långsamt så att en gelfilm bildas mellan folierna och sprids ut jämnt utan bubblor (figur 3).
Repeat this procedure until both extraction phases are colourless (two to three times).
Sänk försiktigt ned hela gelbärarplattan med hjälp av en tunn spatel och placera ytterligare tre glasplattor ovanpå den som vikter.
Homogenize the protein residue with 50 ml acetone (4.5.3) and filter through a medium-speed folded filter paper.
När polymeriseringen är avslutad (efter ca 60 minuter) överför den polymeriserade gelen till gelbärarfolien tillsammans med täckfolien genom att vicka på glasplattorna.
Wash the residue on the filter with two separate 25 ml portions of acetone each time and allow to dry in the air or a stream of nitrogen, then pulverize finely in a mortar.
Rengör baksidan av gelbärarfolien försiktigt från gelrester och urea.
Note: Dry casein isolates should be kept at –20 °C.
Svetsa ”gelsandwichen” till ett folierör, som förvaras i kylskåp (högst 6 veckor).
Plasmin cleavage of β-caseins to intensify γ-caseins
Anm.: Täckfolien med avståndsmärken kan återanvändas.
Disperse 25 mg of isolated caseins (6.1.1) in 0,5 ml ammonium carbonate buffer (4.7.1) and homogenize for 20 minutes by e.g. using ultrasonic treatment.
Polyakrylamidgelen kan skäras i mindre bitar, vilket är lämpligt då antalet prover är få eller då en automatisk elektroforesapparat används (2 geler, storlek 4,5 × 5 cm).
Heat to 40 °C and add 10 μl plasmin (4.7.2), mix and incubate for one hour at 40 °C with continuous shaking.
Isoelektrisk fokusering
To inhibit the enzyme add 20 μl ε-aminoproic acid solution (4.7.3), then add 200 mg of solid urea and 2 mg of dithiothreitol.
Ställ in kyltermostaten på 12 °C.
Note: To obtain more symmetry in the focused casein bands it is advisable to freeze-dry the solution after adding the ε-aminocaproic acid and then dissolving the residues in 0,5 ml protein dissolving buffer (4.6).
Torka av baksidan på gelbärarfolien med fotogen och droppa sedan några droppar fotogen (4.2) på mitten av kylblocket.
Preparation of the urea containing polyacrylamide gels
Rulla därefter ut gelsandwichen på den (med bärarsidan nedåt) och se till att det inte bildas några bubblor.
With the aid of a few drops of water roll the gel carrier sheet (5.2) onto a glass plate (5.1), removing any extraneous water with paper towel or tissue.
Torka av eventuellt överflödigt fotogen och ta bort täckfolien.
Roll the cover sheet (5.3) with spacers (0,25 mm) onto another glass plate in the same way.
Dränk in elektrodremsorna med elektrodlösningarna (4.3 och 4.4), skär till dem till samma längd som gelen och placera dem på de givna platserna (elektrodavstånd 9,5 cm).
Lay the plate horizontally on a levelling table.
Fokuseringen sker under följande betingelser:
Add 10 μl Temed (4.1.3.1) to the prepared and de-aerated gel solution (4.1.2), stir and add 10 μl PER-solution (4.1.3.2), mix thoroughly and immediately pour out evenly onto the centre of the cover sheet.
Gelstorlek 265 × 125 × 0,25 mm
Place one edge of the gel carrier plate (sheet side down) on the cover sheet plate and lower it slowly so that a gel film forms between the sheets and spreads out regularly and free of bubbles (Figure 3).
Steg
Carefully lower the gel carrier plate completely using a thin spatula and place three more glass plates on top of it to act as weights.
Spänning
After polymerization is complete (about 60 minutes) remove the gel polymerized onto the gel carrier sheet along with the cover sheet by tipping the glass plates.
Strömstyrka
Clean the reverse of the carrier sheet carefully to remove gel residues and urea.
Effekt
Weld the gel sandwich into a film tube and store in a refrigerator (maximum six weeks).
Volttimmar
Note: The cover sheet with the spacers can be re-used.
Förfokusering
The polyacrylamide gel can be cut to smaller sizes, recommended when there are few samples or if an automatic electrophoresis device is used (two gels, size 4,5 × 5 cm).
högst
lsoelectric focusing
konstant 4
Set the cooling thermostat to 12 °C.
Provfokusering
Wipe off the reverse of the gel carrier sheet with kerosene, then drip a few drops of kerosene (4.2) onto the centre of the cooling block.
Slutfokusering
Then roll the gel sandwich, carrier side down, onto it, taking care to avoid bubbles.
Anm.: Om gelernas tjocklek eller bredd ändras måste strömstyrkan och effekten justeras därefter (dubblera t.ex. strömstyrkan och effekten om en gel med måtten 265 × 125 × 0,5 mm används).
Wipe off any excess kerosene and remove the cover sheet.
Exempel på spänningsprogram för en automatisk elektroforesapparat (2 geler på 5,0 × 4,5 cm); elektroderna placeras utan remsor direkt på gelen
Soak the electrode strips with the electrode solutions (4.3, 4.4), cut to gel length and place in the positions provided (distance of electrodes 9,5 cm).
Fokusering
Conditions for isoelectric focusing:
Placera provapplikatorn i steg 2 vid 0 Vh.
Step
Proteinfärgning
Voltage
Proteinfixering
Current
Ta bort elektrodremsorna omedelbart efter det att strömmen slagits av och placera gelen i en färgningsskål eller avfärgningsskål fylld med 200 ml fixeringsvätska (4.9).
Power
Låt den stå i 15 minuter och skaka om då och då.
Volt-hours
Tvättning och färgning av gelplattan
Pre-focusing
Låt fixeringsvätskan rinna av ordentligt och tvätta gelplattan två gånger under 30 sekunder med 100 ml avfärgningslösning (4.10) per gång.
maximum
Häll av avfärgningslösningen och fyll skålen med 250 ml färgningslösning (4.11.3).
constant 4
Låt färgen verka under 45 minuter under försiktig skakning.
Sample focusing
Avfärgning av gelplattan
Final focusing
Häll bort färgningslösningen och tvätta gelplattan två gånger med 100 ml avfärgningslösning (4.10) per gång, skaka sedan under 15 minuter med 200 ml avfärgningslösning.
Note: If thickness or width of the gels are changed, the values for current and power have to be suitably adjusted (e.g. double the values for electric current and power if a 265 × 125 × 0,5 mm gel is used).
Upprepa avfärgningen två eller tre gånger tills bakgrunden är klar och färglös.
Example of a voltage programme for an automatic electrophoresis device (2 gels of 5,0 × 4,5 cm), electrodes without strips applied directly to the gel
Tvätta sedan gelplattan med destillerat vatten (2 × 2 minuter) och låt lufttorka (2–3 timmar) eller torka med en hårtork (10–15 minuter).
Temp.
Anm.
Focusing
1: Utför fixering, tvättning, färgning och avfärgning vid 20 °C.
Place sample applicator in step 2 at 0 Vh.
Högre temperatur får inte användas.
Remove sample applicator in step 2 at 30 Vh.
Anm.
Protein staining
2: Om en mer känslig silverfärgning önskas (t.ex.
Protein fixation
Silver Staining Kit, Protein, Pharmacia Biotech, Code No 17–1150–01) måste plasminbehandlade kaseinprov spädas till 5 mg/ml.
Remove the electrode strips immediately after turning off the power and put the gel immediately into a staining/destaining dish filled with 200 ml fixative (4.9); leave for 15 minutes, shaking continuously.
BEDÖMNING
Washing and staining the gel plate
Bedömningen görs genom att proteinmönstret för det okända provet jämförs med referensstandarder på samma gel.
Thoroughly drain off the fixative and wash the gel plate twice for 30 seconds each time with 100 ml destaining solution (4.10).
Påvisande av komjölk i ost som tillverkats av mjölk från tackor, getter och bufflar och blandningar av mjölk från dessa djur sker via de γ3- och γ2-kaseiner, vars isoelektriska punkter ligger mellan pH 6,5 och pH 7,5 (figurerna 4 a, 4 b och 5).
Pour off the destaining solution and fill the dish with 250 ml staining solution (4.11.3); allow to stain for 45 minutes with gentle shaking.
Detektionsgränsen ligger under 0,5 %.
Destaining the gel plate
Visuell bedömning
Pour off the staining solution, wash the gel plate twice using a 100 ml destaining solution (4.10) each time, then shake with 200 ml destaining solution for 15 minutes and repeat the destaining step at least two or three times until the background is clear and uncoloured.
För visuell bedömning av mängden komjölk rekommenderas att provernas och standardernas koncentration justeras till samma intensitetsnivå för γ2- och γ3-kaseinerna från mjölk från får, getter och bufflar (jfr ”γ2 E, G, B” och ”γ3 E, G, B” i figurerna 4 a, 4 b och 5).
Then rinse the gel plate with distilled water (2 × 2 minutes) and dry in the air (2 to 3 hours) or with a hairdryer (10 to 15 minutes).
Därefter kan innehållet av komjölk (lägre, lika med eller högre än 1 %) i det okända provet bedömas direkt genom jämförelse med intensiteten hos γ3- och γ2-kaseinerna från komjölk (jfr ”γ3 C” och ”γ2 C” i figurerna 4 a, 4 b och 5) med referensstandarder på 0 % och 1 % (tacka, get) eller med laboratoriets interimstandarder (buffel).
Note 1: Carry out fixing, washing, staining and destaining at 20 °C.
Densitometrisk bedömning
Do not use elevated temperatures.
Om möjligt används densitometri (5.19) för att bestämma förhållandet mellan toppareorna för γ2- och γ3-kasein för kor och får, getter och/eller bufflar (jfr figur 5).
Note 2: If more sensitive silver staining (e.g. Silver Staining Kit, Protein, Pharmacia Biotech, Code No 17-1150-01) is preferred, plasmin-treated casein samples have to be diluted to 5 mg/ml.
Jämför detta värde med förhållandet mellan toppareorna för γ2- och γ3-kaseiner i 1 %-referensstandarden (tacka, get) eller i laboratoriets interimstandard (buffel) som analyseras på samma gel.
Evaluation is performed by comparing the protein patterns of the unknown sample with reference standards on the same gel.
Om så inte är fallet, bör förfarandet förbättras genom att metoden följs noga i alla detaljer.
The detection limit is less than 0,5 %.
Milchwissenschaft 45, 708–711 (1990).
Visual estimation
Milchwissenschaft 50, 83–85 (1995).
Densitometric estimation
Electrophoresis 1, 43–56 (1980).
If available, apply densitometry (5.19) for the determination of the peak area ratio of bovine to ovine, caprine and/or buffalo γ2- and γ3-caseins (see Figure 5).
Schematisk bild av täckfolien
Compare this value to γ2- and γ3-casein peak area ratio of the 1 % reference standard (ewe, goat) or laboratory interim-standard (buffalo) analysed on the same gel.
Polyesterfolie
Note: The method is operating satisfactorily, if there is a clear positive signal for both bovine γ2- and γ3-caseins in the 1 % reference standard but not in the 0 % reference standard.
Avståndsband
If not, optimize the procedure following the details of the method precisely.
Figur 2
A sample is judged as being positive, if both bovine γ2- and γ3-caseins or the corresponding peak area ratios are equal to or greater than the level of the 1 % reference standard.
Kaseinlager som flyter mellan vattenfasen och den organiska fasen efter centrifugeringen
Addeo F., Moio L., Chianese L., Stingo C., Resmini P., Berner I, Krause I., Di Luccia A., Bocca A.: Use of plasmin to increase the sensitivity of the detection of bovine milk in ovine and/or caprine cheese by gel isoelectric focusing of γ2-caseins.
H2O-fas
Milchwissenschaft 45, 708-711 (1990).
Kasein
Addeo F., Nicolai M.A., Chianese L., Moio L., Spagna Musso S., Bocca A., Del Giovine L.: A control method to detect bovine milk in ewe and water buffalo cheese using immunoblotting.
CH2Cl2-fas
Milchwissenschaft 50, 83-85 (1995).
Figur 3
Krause I., Berner I, Klostermeyer H.: Sensitive detection of cow milk in ewe and goat milk and cheese by carrier ampholyte — and carrier ampholyte/immobilized pH gradient — isoelectric focusing of γ-caseins using plasmin as signal amplifier. in: Electrophoresis-Forum 89 (B. J. Radola, ed.) pp 389-393, Bode-Verlag, München (1989).
Vickningsteknik vid gjutning av ultratunna polyakrylamidgeler