natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Solubility of the chemical at 250 mg/ml in HBSS should be assessed prior to testing.
Mängden natriumfluoresceinfärg som passerar genom monolagret och insatsmembranet till en fast volym av lösning i hålet (som natriumfluoresceinfärgen läcker in i) bestäms genom en spektrofluorometrisk mätning av fluoresceinkoncentrationen i hålet.
If at this concentration the chemical forms a stable suspension or emulsion (i.e. maintains uniformity and does not settle or separate into more than one phase) over 30 minutes, HBSS can still be used as solvent.
Mängden flouresceinläckage (FL) beräknas med hänsyn till avläsningar av fluorescensintensiteten (FI) från två kontroller: en blankkontroll och en kontroll av maximalt läckage.
All chemicals to be tested are prepared in sterile calcium-containing (at a concentration of 1,0-1,8 mM), phenol red-free, HBSS from the stock solution, at five fixed concentrations diluted on a weight per volume basis: 1, 25, 100, 250 mg/ml and a neat or a saturated solution.
värdet (mg/ml) används i prediktionsmodellen för att identifiera frätande och kraftigt irriterande kemikalier (se punkt 35).
When testing a solid chemical, a very high concentration of 750 mg/ml should be included.
Återhämtning är en viktig del av testkemikaliens toxicitetsprofil, vilket också bedöms genom ögonirritationstest in vivo.
This concentration of chemical may have to be applied on the cells using a positive displacement pipette.
Preliminära analyser har visat att återhämtningsdata (upp till 72 timmar efter kemisk exponering) eventuellt kan öka prediktionsförmåganför INVITTOX protokoll 71.
If the toxicity is found to be between 25 and 100 mg/ml, the following additional concentrations should be tested twice: 1, 25, 50, 75, 100 mg/ml.
Ytterligare utvärderingar är dock nödvändiga och det skulle därför behövas kompletterande data, företrädesvis från ytterligare testning (6).
The FL20 value should be derived from these concentrations provided the acceptance criteria were met.
Beredning av cellmonolager
The test chemicals are applied to the confluent cell monolayers after removal of the cell culture medium and washing twice with sterile, warm (37 °C), calcium-containing (at a concentration of 1,0-1,8 mM), phenol red-free, HBSS.
Monolagret för MDCK CB997-cellerna bereds med nästan konfluenta celler som odlas i cellodlingskolvar i DMEM/näringsmix F12 (1 × koncentrat med L-glutamin, 15 mM HEPES, kalcium (vid en koncentration på 1,0–1,8 mM) och 10 % värmeinaktiverat FCS/FBS).
At least three replicates should be used for each concentration of the test chemical and for the controls in each run.
Cellpassageantalet bör kontrolleras för att se till att täta fogar bildas på ett enhetligt och reproducerbart sätt.
After 1 min of exposure at room temperature, the test chemical should be carefully removed by aspiration, the monolayer should be washed twice with sterile, warm (37 °C), calcium-containing (at a concentration of 1,0-1,8 mM), phenol red-free, HBSS, and the fluorescein leakage should be immediately measured.
Cellerna bör företrädesvis hålla sig inom passageintervallet 3–30 från upptining eftersom celler inom detta passageintervall har liknande funktionalitet, vilket gör det lättare att reproducera försöksresultaten.
Concurrent negative (NC) and positive controls (PC) should be used in each run to demonstrate that monolayer integrity (NC) and sensitivity of the cells (PC) are within a defined historical acceptance range.
Innan FL-testmetoden utförs lösgör man cellerna från kolven med trypsinering och centrifugering.
The suggested PC chemical is Brij 35 (CAS No. 9002-92-0) at 100 mg/ml.
Därefter sås en lämplig mängd celler i insatser som är placerade i 24-hålsplattor (se tillägg 1).
This concentration should give approximately 30 % fluorescein leakage (acceptable range 20-40 % fluorescein leakage, i.e. damage to cell layer).
Insatser med 12 mm diameter och ett membran av blandade cellulosaestrar med en tjocklek på 80–150 μm och en porstorlek på 0,45 μm bör användas för att så cellerna.
The suggested NC chemical is calcium-containing (at a concentration of 1,0-1,8 mM), phenol red-free, HBSS (untreated, blank control).
I valideringsstudien användes insatser av typen Millicell-HA 12 mm.
A maximum leakage control should also be included in each run to allow for the calculation of FL20 values.
Insatsens och membrantypens egenskaper är viktiga eftersom de kan påverka celltillväxten och den kemiska bindningen.
Maximum leakage is determined using a control insert without cells.
Vissa typer av kemikalier kan binda sig till insatsmembranet Millicell-HA, vilket kan påverka tolkningen av resultaten.
Determination of fluorescein permeability
Kvalifikationskemikalier (se tillägg 3) bör användas för att påvisa motsvarighet om andra membran används.
Immediately after removal of the test and control chemicals, 400 μl of 0,1 mg/ml sodium-fluorescein solution (0,01 % (w/v) in calcium-containing [at a concentration of 1,0-1,8 mM], phenol red-free, HBSS) is added to the inserts (e.g. Millicell-HA).
Kemisk bindning till insatsmembranet är vanligare för katjoniska kemikalier, t.ex. bensalkoniumklorid, som dras till det laddade membranet (7).
The cultures are kept for 30 minutes at room temperature.
Den kemiska bindningen till insatsmembranet kan öka kemikaliens exponeringsperiod, vilket leder till en överskattning av dess toxiska potential, men kan även fysiskt minska fluoresceinläckaget genom insatsen eftersom färgen binds till den katjoniska kemiska bindningen till insatsmembranet, vilket leder till en underskattning av kemikaliens toxiska potential.
At the end of the incubation with fluorescein, the inserts are carefully removed from each well.
Detta kan enkelt övervakas genom att man endast exponerar membranet för den testade kemikaliens toppkoncentration och sedan tillsätter natriumfluoresceinfärg vid normal koncentration under standardtiden (ingen cellkontroll).
Visual check is performed on each filter and any damage which may have occurred during handling is recorded.
Om natriumfluoresceinfärgen binds är insatsmembranet gult efter det att testmaterialet har tvättats av.
The amount of fluorescein that leaked through the monolayer and the insert is quantified in the solution which remained in the wells after removal of the inserts.
Cellsådden på insatserna bör skapa ett konfluent monolager vid tidpunkten för den kemiska exponeringen: 1,6 × 105 celler bör tillsättas per insats (400 μl av en cellsuspension med en densitet på 4 × 105 celler/ml).
Measurements are done in a spectrofluorometer at excitation and emission wavelengths of 485 nm and 530 nm, respectively.
Under dessa förhållanden erhålls ett konfluent monolager vanligen efter 96 timmars odling.
The sensitivity of the spectrofluorometer should be set so that there is the highest numerical difference between the maximum FL (insert with no cells) and the minimum FL (insert with confluent monolayer treated with NC).
Insatserna bör undersökas visuellt före sådd för att säkerställa att eventuella skador som registrerats vid den visuella kontroll som beskrivs i punkt 30 beror på hanteringen.
Because of the differences in the used spectrofluorometer, it is suggested that a sensitivity is used which will give fluorescence intensity > 4000 at the maximum fluorescein leakage control.
MDCK-cellodlingarna bör förvaras i inkubatorer i en fuktig atmosfär, vid 5 % ± 1 % CO2 och 37 ± 1 °C.
The maximum FL value should not be greater than 9999.
Cellerna får inte vara förorenade med bakterier, virus, mykoplasma eller svamp.
The maximum fluorescence leakage intensity should fall within the linear range of the spectrofluorometer used.
Applicering av test- och kontrollkemikalier
Interpretation of results and Prediction model
En ny stamlösning av testkemikalien bör beredas för varje försök och användas inom 30 minuter från beredningen.
The amount of FL is proportional to the chemical-induced damage to the tight junctions.
Testkemikalierna bör beredas i en kalciumhaltig HBSS (vid en koncentration på 1,0–1,8 mM) utan fenolrött för att undvika bindning av serumproteiner.
The percentage of FL for each tested concentration of chemical is calculated from the FL values obtained for the test chemical with reference to FL values from the NC (reading from the confluent monolayer of cells treated with the NC) and a maximum leakage control (reading for the amount of FL through an insert without cells).
Testkemikaliens löslighet vid 250 mg/ml i HBSS bör bedömas före testning.
The mean maximum leakage fluorescence intensity = x
Om kemikalien bildar en stabil suspension eller emulsion vid denna koncentration (dvs. att kemikalien förblir enhetlig och varken stabiliseras eller separeras i fler än en fas) under 30 minuter kan HBBS fortfarande användas som lösningsmedel.
The mean 0 % leakage fluorescence intensity (NC) = y
Om kemikalien är olöslig i HBSS vid denna koncentration bör dock andra testmetoder än FL övervägas.
The mean 100 % leakage is obtained by subtracting the mean 0 % leakage from the mean maximum leakage,
Användning av lätt mineralolja som lösningsmedel om kemikalien är olöslig i HBSS bör övervägas med försiktighet eftersom det inte finns tillräckliga uppgifter tillgängliga för att dra en slutsats om hur FL-testet fungerar under sådana betingelser.
i.e. x – y = z
Alla kemikalier som ska testas bereds i steril kalciumhaltig HBBS (vid en koncentration på 1,0–1,8 mM), utan fenolrött, från stamlösningen, vid fem fasta koncentrationer som späds ut på grundval av vikt per volym: 1, 25, 100, 250 mg/ml och en outspädd eller mättad lösning.
The percentage leakage for each fixed dose is obtained by subtracting the 0 % leakage to the mean fluorescence intensity of the three replicate readings (m), and dividing this value by the 100 % leakage, i.e. %FL = [(m-y) / z] × 100 %, where:
Vid testning av fasta kemikalier bör dessutom en mycket hög koncentration på 750 mg/ml användas.
m the mean fluorescence intensity of the three replicate measurements for the concentration involved
Denna koncentration av kemikalien kan behöva appliceras på cellerna med hjälp av en positiv deplacementpipett.
% FL the percent of the fluorescein which leaks through the cell layer
Om toxiciteten visar sig vara mellan 25 och 100 mg/ml bör följande kompletterande koncentrationer testas två gånger: 1, 25, 50, 75, 100 mg/ml.
The following equation for the calculation of the chemical concentration causing 20 % FL should be applied:
värdet bör härledas från dessa koncentrationer under förutsättning att acceptanskriterierna har uppfyllts.
FLD = [(A-B) / (C-B)] × (MC – MB) + MB
Testkemikalierna appliceras på de konfluenta cellmonolagren när cellodlingsmediet har avlägsnats och cellmonolagren har tvättats två gånger med steril, varm (37 °C) kalciumhaltig HBBS (vid en koncentration på 1,0–1,8 mM) utan fenolrött.
Where:
Före detta har filtren kontrollerats visuellt för att se om det finns tidigare skador som felaktigt kan tillskrivas eventuell inkompatibilitet med testkemikalierna.
D % of inhibition
Minst tre replikat ska användas för varje koncentration av testkemikalien och för kontrollerna i varje omgång.
A % damage (20 % fluorescein leakage)
Efter en minuts exponering i rumstemperatur avlägsnas testkemikalien försiktigt genom aspiration, monolagret tvättas två gånger med steril, varm (37 °C) kalciumhaltig HBBS (vid en koncentration på 1,0–1,8 mM) utan fenolrött, och fluoresceinläckaget mäts omedelbart.
B % fluorescein leakage < A
Parallella negativa (NC) och positiva kontroller (PC) bör användas i varje körning för att visa att monolagrets integritet (NC) och cellernas sensitivitet (PC) håller sig inom ett fastställt historiskt acceptansintervall.
C % fluorescein leakage > A
Den föreslagna kemikalien för positiva kontroller är Brij 35 (CAS-nr 9002-92-0) vid 100 mg/ml.
Concentration (mg/ml) of C
Denna koncentration bör ge omkring 30 % fluoresceinläckage (det godtagbara intervallet är 20–40 % fluoresceinläckage, dvs. skador på cellagret).
Concentration (mg/ml) of B
Den föreslagna kemikalien för negativa kontroller är kalciumhaltig HBBS (vid en koncentration på 1,0–1,8 mM) utan fenolrött (obehandlad, blankkontroll).
The cut-off value of FL20 for predicting chemicals as ocular corrosives/severe irritants is given below:
En maximal läckagekontroll bör också ingå i varje körning för att möjliggöra beräkning av FL20-värdena.
C&L: classification and labelling.
Maximalt läckage fastställs genom användning av en kontrollinsats utan celler.
UN GHS C&L
Bestämning av fluoresceinets permeabilitet
EU CLP C&L U.S.
Mätningarna görs i en spektrofluorometer vid excitations- och sändningsvåglängder på 485 nm respektive 530 nm.
EPA C&L
Spektrofluorometerns känslighet bör ställas in för högsta numeriska skillnad mellan maximal FL (insats utan celler) och minimal FL (insats med konfluent monolager behandlat med negativ kontroll).
Category I
På grund av skillnaderna hos den använda spektrofluorometern bör man tillämpa en känslighetsgrad som ger en fluorescensintensitet > 4000 vid den högsta fluoresceinläckagekontrollen.
The FL test method is recommended only for the identification of water soluble ocular corrosives and severe irritants (UN GHS Category 1, EU CLP Category 1, U.S. EPA Category I) (see paragraphs 1 and 10).
Det maximala FL-värdet bör inte vara större än 9999.
In order to identify water soluble chemicals (substances and mixtures) (3) (6) (7) as “inducing serious eye damage” (UN GHS/EU CLP Category 1) or as an “ocular corrosive or severe irritant” (U.S. EPA Category I), the test chemical should induce an FL20 value of ≤ 100 mg/ml.
Maximal fluorescensintensitet för läckage bör hålla sig inom det linjära intervallet för den använda spektrofluorometern.
Acceptance of results
Tolkning av resultaten och förutsägbarhetsmodell
The mean maximum fluorescein leakage value (x) should be higher than 4000 (see paragraph 31), the mean 0 % leakage (y) should be equal or lower than 300, and the mean 100 % leakage (z) should fall between 3700 and 6000.
Mängden FL är proportionerlig till den kemiskt inducerade skadan på de täta fogarna.
A test is considered acceptable if the positive control produced 20 % to 40 % damage to the cell layer (measure as % fluorescein leakage).
Procentandelen FL för varje testad koncentration av kemikalier beräknas från de FL-värden som erhållits för testkemikalien med hänvisning till FL-värdena från den negativa kontrollen (avläsning från det konfluenta cellmonolager som behandlats med negativ kontroll) och den maximala läckagekontrollen (avläsning av mängden FL genom en insats utan celler).
Data
Medelvärde för maximal läckagefluorescensintensitet = x
For each run, data from individual replicate wells (e.g. fluorescence intensity values and calculated percentage FL data for each test chemical, including classification) should be reported in tabular form.
Medelvärde för 0 % läckagefluorescensintensitet (NC) = y
In addition, means ± SD of individual replicate measurements in each run should be reported.
Medelvärdet för 100 % läckage erhålls genom att medelvärdet för 0 % läckage subtraheras från medelvärdet för maximalt läckage.
Chemical CAS number, if known;
dvs. x – y = z
Purity and composition of the substance or mixture (in percentage(s) by weight), to the extent this information is available;
Procentandelen läckage för varje fast dos erhålls genom att 0 % läckage subtraheras från medelvärdet för fluorescensintensitet i de tre replikatavläsningarna (m).
Physical-chemical properties relevant to the conduct of the study (e.g. physical state, volatility, pH, stability, water solubility, chemical class);
Detta värde divideras sedan med 100 % läckage, dvs. % FL = [(m-y) / z] × 100 %, där
Treatment of the test/control chemical prior to testing, if applicable (e.g. warming, grinding);
m medelvärde för fluorescensintensitet i de tre replikatmätningarna för den berörda koncentrationen
Storage conditions;
% FL procentandel fluorescein som läcker igenom cellagret
Justification of the test method and Protocol Used
Följande ekvation bör tillämpas för beräkningen av den kemiska koncentration som orsakar 20 % FL:
Should include considerations regarding applicability domain and limitations of the test method;
FLD = [(A-B) / (C-B)] × (MC –MB) + MB
Description of cell system used, including certificate of authenticity and the mycoplasma status of the cell line;
där
Details of test procedure used;
D % hämning
Test chemical concentration(s) used;
A % skada (20 % fluoresceinläckage)
Duration of exposure to the test chemical;
B % fluoresceinläckage < A
Duration of incubation with fluorescein;
C % fluoresceinläckage > A
Description of evaluation criteria used;
koncentration (mg/ml) av C
Reference to historical data of the model (e.g. negative and positive controls, benchmark chemicals, if applicable);
koncentration (mg/ml) of B
Information on the technical proficiency demonstrated by the laboratory;
Gränsvärdet för FL20 för förutsägelser om huruvida kemikalier är frätande/kraftigt irriterande för ögonen anges nedan:
Tabulation of data from individual test chemicals and controls for each run and each replicate measurement (including individual results, means and SDs);
K&M: klassificering och märkning
The derived classification(s) with reference to the prediction model and/or decision criteria used;
FN GHS K&M
Should include considerations regarding a non-conclusive outcome (paragraph 35: FL20 > 100 mg/ml) and further testing;
Kategori I
Conclusions
FL-testmetoden rekommenderas endast för identifiering av vattenlösliga kemikalier som är frätande och kraftigt irriterande för ögonen (GHS-kategori 1, CLP-kategori 1, EPA-kategori I) (se punkterna 1 och 10).
Available at: [http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev03/03files_e.html]
För att identifiera vattenlösliga kemikalier (ämnen och blandningar) (3) (6) (7) som kemikalier som ”inducerar allvarlig ögonskada” (GHS-/CLP-kategori 1) eller som frätande eller kraftigt irriterande för ögonen EPA-kategori I) ska testkemikalien inducera ett FL20-värde på ≤ 100 mg/ml.
Chapter B.5 of this Annex, Acute Eye Irritation/Corrosion
Godkännande av resultat
Available at: [http://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu
Medelvärdet för maximalt fluoresceinläckage (x) ska vara högre än 4000 (se punkt 31), medelvärdet för 0 % läckage (y) ska vara lika med eller lägre än 300, och medelvärdet för 100 % läckage (z) ska hålla sig mellan 3700 och 6000.
OECD (2005), Guidance Document on the Validation and International Acceptance of New or Updated Test Methods for Hazard Assessment, OECD Series on Testing and Assessment No. 34.
Testet anses godtagbart om den positiva kontrollen producerade 20–40 % skada på cellagret (mätt som % fluoresceinläckage).
DIAGRAM OF MDCK CELLS GROWN ON AN INSERT MEMBRANE FOR THE FL TEST METHOD
För varje omgång ska data från enskilda replikathål (t.ex. värden för fluorescensintensitivet och beräknade FL-procentandelar för varje testkemikalie, inklusive klassificering) rapporteras i tabellform.
The inserts are placed into the wells of 24 well plates.
Kemikaliens CAS-nummer, om det är känt.
Figure taken from: Wilkinson, P.J.
Ämnets eller blandningens renhet och sammansättning (viktprocent) i den mån uppgifterna finns att tillgå.
EPA Category I
Fysikaliska/kemiska egenskaper som är relevanta för utförandet av undersökningen (t.ex. fysiskt tillstånd, flyktighet, pH-värde, stabilitet, vattenlöslighet och kemisk klass).
Chemicals that produce corrosive (irreversible destruction of ocular tissue) or corneal involvement or irritation persisting for more than 21 days (2).
Behandling av test-/kontrollkemikalier före testning, om detta är tillämpligt (t.ex. uppvärmning, finfördelning).
EU CLP (Regulation (EC) No1272/2008 on Classification, Labelling and Packaging of Substances and Mixtures)
Lagringsförhållanden.
Implements in the European Union (EU) the UN GHS system for the classification of chemicals (substances and mixtures).
Motivering för den testmetod och det protokoll som använts
Can be estimated by the determination of the concentration at which the tested chemical causes 20 % of the fluorescein leakage through the cell layer.
Bör inbegripa överväganden när det gäller tillämpningsområde samt testmetodens begränsningar.
Fluorescein leakage
Beskrivning av använt cellsystem, inklusive äkthetsintyg samt mykoplasmastatus för cellinjen.
the amount of fluorescein which passes through the cell layer, measured spectrofluorometrically.
Detaljerade uppgifter om försöksförfarandet.
GHS (Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals by the United Nation (UN))
Testkemikaliekoncentration(er).
A system proposing the classification of chemicals (substances and mixtures) according to standardised types and levels of physical, health and environmental hazards, and addressing corresponding communication elements, such as pictograms, signal words, hazard statements, precautionary statements and safety data sheets, so that to convey information on their adverse effects with a view to protect people (including employers, workers, transporters, consumers and emergency responders) and the environment.
Exponeringstiden för testkemikalien.
GHS Category 1
Inkubationstid med fluorescein.
Used in the context of the UN GHS as a mixture or solution composed of two or more substances in which they do not react.
Beskrivning av utvärderingskriterierna.
Not-classified
Hänvisningar till modellens historiska data (t.ex. negativa och positiva kontroller, referenskemikalier, i förekommande fall).
Chemicals that are not classified as UN GHS Categories 1, 2A, or 2B; EU CLP Categories 1 or 2; or U.S. EPA Categories I, II, or III ocular irritants.
Information om den tekniska kompetens som påvisats av laboratoriet.
A chemical that causes irreversible tissue damage to the eye. (b) Chemicals that are classified as UN GHS Category 1; EU CLP Category 1; or U.S.
Uppställning i tabellform av data från individuella testkemikalier och kontroller för varje körning och varje replikatmätning (inklusive individuella resultat, medelvärden och SD).
EPA Category I ocular irritants.
Härledda klassificeringar med hänvisning till prediktionsmodell och/eller beslutskriterier.
Ocular irritant
Bör inbegripa överväganden av tvetydiga resultat (punkt 35: FL20 > 100 mg/ml) och ytterligare tester.
A chemical that produces a reversible change in the eye following application to the anterior surface of the eye; (b) Chemicals that are classified as UN GHS Categories 2A, or 2B; EU CLP Category 2; or U.S. EPA Categories II or III ocular irritants.
Slutsatser
Ocular severe irritant
Finns på [http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev03/03files_e.html]
A chemical that causes tissue damage in the eye following application to the anterior surface of the eye that is not reversible within 21 days of application or causes serious physical decay of vision. (b) Chemicals that are classified as UN GHS Category 1; EU CLP Category 1; or U.S.
Kapitel B.5 i denna bilaga, Akut ögonirritation/korrosion.
EPA Category I ocular irritants.
Finns på [http://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu
Positive control A replicate containing all components of a test system and treated with a chemical known to induce a positive response.
OECD (2005), Guidance Document on the Validation and International Acceptance of New or Updated Test Methods for Hazard Assessment, OECD Series on Testing and Assessment No.
To ensure that variability in the positive control response across time can be assessed, the magnitude of the positive response should not be extreme.
DIAGRAM ÖVER MDCK-CELLER OM ODLATS PÅ ETT INSATSMEMBRAN FÖR FL-TESTMETODEN
Proficiency Chemicals
Ett konfluent lager av MDCK-celler odlas på semipermeabla membran i en insats.
A sub-set of the list of Reference Chemicals that can be used by a naïve laboratory to demonstrate proficiency with the validated reference test method.
Insatserna placeras i hålen på 24-hålsplattor.
Relevance incorporates consideration of the accuracy (concordance) of a test method (8).
Figuren hämtad från: Wilkinson, P.J.
Replacement test
EPA-kategori I