natgillin/translations-raw huggingface dataset:
all glass instrument dish, for example 22 × 15 × 5,5 cm (l × w × d), covered with a removable stainless steel wire lattice (mesh width 2 mm).
Förekommer hos kontrollhanar och androgenexponerade honor.
The lattice should cover the opening of the instrument dish at a level below the brim.
Tuberkelmall
On the lattice, spawning substrate should be fixed.
Klassificering
The plastic material should be leached out in sufficient volume of warm water for sufficient time to ensure that no chemicals may be disposed to the test water.
örstorad
When using glass materials it should be ensured that the fish are neither injured nor cramped during their vigorous actions.
Poäng totalt
The distance between the tray and the glass panes should be at least 3 cm to ensure that the spawning is not performed outside the tray.
ramträdande
The eggs spawned onto the tray fall through the lattice and can be sampled 45-60 min after the start of illumination.
Tillägg 5B
The transparent eggs are non-adhesive and can easily be counted by using transversal light.
Bedömning av sekundära könskaraktärer hos risfisk för påvisande av vissa endokrint aktiva kemikalier
When using five females per vessel, egg numbers up to 20 at a day can be regarded as low, up to 100 as medium and more than 100 as high numbers.
Nedan följer en redogörelse av mätningen av de papillära utväxter som utgör de sekundära könskaraktärerna hos risfiskar (Oryzias latipes).
The spawning tray should be removed, the eggs collected and the spawning tray re-introduced in the test vessel, either as late as possible in the evening or very early in the morning.
Efter avlägsnandet av levern (tillägg 6) ska kroppen placeras i en konisk tub innehållande ca 10 ml 10 % neutral buffrad formalin (huvudet uppåt, stjärten nedåt).
The time until re-introduction should not exceed one hour since otherwise the cue of the spawning substrate may induce individual mating and spawning at an unusual time.
Om könskörteln fixeras i en annan lösning än 10 % neutral buffrad formalin lägger man ett transversellt snitt över kroppen mellan den främre delen av analfenan och anus med ett rakblad, samtidigt som man undviker att skada gonoporen och könskörteln i sig (figur 3).
If a situation needs a later introduction of the spawning tray, this should be done at least 9 hours after start of the illumination.
Placera den kraniala delen av fiskkroppen i fixeringslösningen för att bevara könskörteln, och stjärtdelen av fiskkroppen i 10 % neutral buffrad formalin enligt beskrivning ovan.
At this late time of the day, spawning is not induced any longer.
Efter att fiskkroppen placerats i 10 % neutral buffrad formalin fattar man tag i analfenans främre del med en pincett och viker den i ca 30 sekunder så att analfenan hålls utspänd.
Appendix 4B
När man lyfter upp analfenan med pincetten bör man försiktigt fatta tag i den främre delen så att man inte skadar de papillära utväxterna.
Spawning substrate for fathead minnow
Efter att analfenan hållits utspänd i ca 30 sekunder bevaras fiskkroppen i 10 % neutral buffrad formalin vid rumstemperatur fram till mätningen av de papillära utväxterna (mätningen ska utföras efter fixering i minst 24 timmar).
Two or three combined plastic/ceramic/glass or stainless steel spawning tiles and trays are placed in each of the test chamber (e.g., 80 mm length of grey semi-circular guttering sitting on a lipped tray of 130mm length) (see picture).
Mätning
Properly seasoned PVC or ceramic tiles have demonstrated to be appropriate for a spawning substrate (Thorpe et al, 2007).
Fiskkroppen fixeras i 10 % neutral buffrad formalin i minst 24 timmar.
It is recommended that the tiles are abraded to improve adhesion.
Ta därefter upp fiskkroppen ur den koniska tuben och torka av formalinet på filterpapper (eller en pappersservett).
The tray should also be screened to prevent fish from access to the fallen eggs unless the egg adhesion efficiency has been demonstrated for the spawning substrate used.
Lägg fisken med buksidan upp.
The base is designed to contain any eggs that do not adhere to the tile surface and would therefore fall to the bottom of the tank (or those eggs laid directly onto the flat plastic base).
Klipp sedan försiktigt av analfenan med en liten dissektionssax (det är lämpligt att klippa av analfenan tillsammans med en liten bit vävnad från fenfästet (pterygiofor)).
All spawning substrates should be leached for a minimum of 12 hours, in dilution water, before use.
Fatta tag i den främre delen av den avskurna analfenan med en pincett och lägg den på ett objektglas med flera droppar vatten.
Appendix 5A
Täck därefter analfenan med ett täckglas.
Assessment of secondary sex characteristics in fathead minnow for the detection of certain endocrine active chemicals
Var noga med att inte skada de papillära utväxterna när analfenan hålls fast med pincetten.
Overview
Räkna antalet ledplattor med papillära utväxter med hjälp av räknaren under ett biologiskt mikroskop (upprätt eller inverterat mikroskop).
Potentially important characteristics of physical appearance in adult fathead minnows in endocrine disrupter testing include body colour (i.e. light/dark), coloration patterns (i.e. presence or absence of vertical bands), body shape (i.e. shape of head and pectoral region, distension of abdomen), and specialized secondary sex characteristics (i.e. number and size of nuptial tubercles, size of dorsal pad and ovipositor).
De papillära utväxterna kan kännas igen på en liten bildning av utväxter som är synbar på den bakre kanten av fenstrålen.
Nuptial tubercles are located on the head (dorsal pad) of reproductively-active male fathead minnows, and are usually arranged in a bilaterally-symmetric pattern (Jensen et al.
Skriv in antalet ledplattor med papillära utväxter på varje fenstråle i tabellen (t.ex. första fenstrålen: 0, andra fenstrålen: 10, tredje fenstrålen: 12 osv.), och skriv in summan av dessa antal i Excel-tabellen per enskild fisk.
2001).
Vid behov kan man fotografera analfenan och räkna antalet ledplattor med papillära utväxter på fotot.
Control females and juvenile males and females exhibit no tubercle development (Jensen et al.
Efter mätningen läggs analfenan i den koniska tuben som beskrivs i (1) och bevaras.
2001).
Diagram som visar könsskillnaden i analfenans storlek och form.
There can be up to eight individual tubercles around the eyes and between the nares of the males.
Fig.2.
The greatest numbers and largest tubercles are located in two parallel lines immediately below the nares and above the mouth.
A, Utväxter på fenstrålarnas ledplattor i analfenan.
In many fish there are groups of tubercles below the lower jaw;
J.P.
those closest to the mouth generally occur as a single pair, while the more ventral set can be comprised of up to four tubercles.
= ledplatta, A.S.
The actual numbers of tubercles is seldom more than 30 (range, 18-28; Jensen et al.
B, Fenstrålens distala ände.
2001).
Aktinotrikierna (Act.) sitter på spetsen.
Most reproductively-active males also have, at least some, tubercles which are enlarged and pronounced such that they are indistinguishable as individual structures.
I detta fall ska den övriga kroppen skäras av mellan analfenans främre kant och analöppningen med ett rakblad (röd linje), och fiskkroppens huvudsida läggs sedan i samma fixeringslösning som könskörteln och stjärtsidan läggs i 10 % neutral buffrad formalin.
2001; 2003), while oestrogen receptor agonists may decrease number or size of nuptial tubercles in males (Miles-Richardson et al.
Detta standardförfarande omfattar mätning av utväxter på den första fenstrålen (fenstrålarna räknas i ordningsföljd från analfenans bakre kant i detta standardförfarande).
1999; Harries et al.
Rekommenderade förfaranden för provtagning för vitellogeninanalys
2000).
Man bör vara noga med att undvika korskontaminering mellan VTG-prover från hanar och honor.
Viewing is best accomplished using an illuminated magnifying glass or 3X illuminated dissection scope.
Efter bedövning skärs stjärtspolen delvis av med en skalpell och blod insamlas från den kaudala venen/artären med ett hepariniserat mikrohematokrit-centrifugerat kapillärrör.
View fish dorsally and anterior forward (head toward viewer).
Efter att blodet har samlats in isoleras plasman snabbt genom centrifugering vid 15000 g i 3 minuter (eller vid 15000 g i 10 minuter vid 4 °C).
Focus viewfinder to allow identification of tubercles.
Plasmadelen avlägsnas sedan från mikrohematokritröret och lagras i ett centrifugrör med 0,13 enheter aprotinin (en proteashämmare) vid – 80 °C tills bestämningen av vitellogenin kan göras.
Gently and slowly roll fish from side to side to identify tubercle areas.
Beroende på knölskallelöjans storlek (som är könsbestämd) uppgår mängden blod som kan samlas in till 5–60 μl per fisk (Jensen m.fl., 2001).
Count and score tubercles.
Förfarande 1B:
Repeat the observation on the ventral head surface by placing the fish dorsal anterior forward in the Petri dish.
Knölskallelöja, insamling av blod från hjärtat
Observations should be completed within 2 min for each fish.
Alternativt kan blod också samlas in genom hjärtpunktering med en hepariniserad spruta (1000 enheter heparin per ml).
Tubercle Counting and Rating
Blodet överförs till eppendorfrör (på is) och centrifugeras sedan (5 minuter, 7000 g, rumstemperatur).
Six specific areas have been identified for assessment of tubercle presence and development in adult fathead minnows.
Plasman bör överföras till rena eppendorfrör (i alikvoter om volymen plasma är tillräckligt stor) och omedelbart frysas vid – 80 °C tills den kan analyseras (Panter m.fl., 1998).
A template was developed to map the location and quantity of tubercles present (see end of this Appendix).
Förfarande 2A:
The number of tubercles is recorded and their size can be quantitatively ranked as:
Japansk risfisk, utskärning av levern hos risfisk
0- absence, 1-present, 2-enlarged and 3-pronounced for each organism (Fig.
Avlägsna testfisken från testbehållaren
1).
Testfisken bör avlägsnas ur testbehållaren med hjälp av en liten rund håv.
Rate 0- absence of any tubercle.
Var noga med att inte tappa ner testfisken i de andra testbehållarna.
Rating 1-present, is identified as any tubercle having a single point whose height is nearly equivalent to its radius (diameter).
I princip ska testfiskarna avlägsnas i följande ordning:
Rating 2- enlarged, is identified by tissue resembling an asterisk in appearance, usually having a large radial base with grooves or furrows emerging from the centre.
kontroll, lösningsmedelskontroll (i förekommande fall), lägsta koncentrationen, mittersta koncentrationen, högsta koncentrationen och positiv kontroll.
Tubercle height is often more jagged but can be somewhat rounded at times.
Dessutom bör alla hanar avlägsnas från en testbehållare innan de återstående honorna avlägsnas.
Rating 3- pronounced, is usually quite large and rounded with less definition in structure.
Könet på varje testfisk fastställs på grundval av externa sekundära könskaraktärer (t.ex. formen på analfenan).
At times these tubercles will run together forming a single mass along an individual or combination of areas (B, C and D, described below).
Placera testfisken i en behållare för transport och för den till arbetsstationen där levern skärs ut.
Coloration and design are similar to rating 2 but at times are fairly indiscriminate.
Kontrollera att etiketterna på testbehållaren och transportbehållaren stämmer och bekräfta att det antal fiskar som har avlägsnats från testbehållaren och den antal fiskar som återstår i behållaren stämmer överens med vad som förväntas.
Using this rating system generally will result in overall tubercle scores of < 50 in a normal control male possessing a tubercle count of 18 to 20 (Jensen et al.
Om könet inte kan fastställas genom fiskens externa utseende avlägsnas alla fiskarna från testbehållaren.
2001).
I detta fall bör könet identifieras genom granskning av könskörteln eller de sekundära könskaraktärerna under ett stereomikroskop.
The actual number of tubercles in some fish may be greater than the template boxes (Appendix A) for a particular rating area.
Utskärning av levern
If this happens, additional rating numbers may be marked within, to the right or to the left of the box.
Överför testfisken från transportbehållaren till bedövningslösningen med den lilla runda håven.
The template therefore does not need to display symmetry.
Efter bedövning av testfisken överförs den till ett filterpapper (eller en pappersservett) med hjälp av en anatomisk pincett.
An additional technique for mapping tubercles which are paired or joined vertically along the horizontal plane of the mouth could be done by double-marking two tubercle rating points in a single box.
När man lyfter upp testfisken bör man fatta tag med pincetten på sidorna av huvudet för att undvika att stjärten bryts av.
Mapping regions:
Torka av vattnet på ytan av testfisken på filterpappret (eller pappersservetten).
A Tubercles located around eye.
Lägg därefter ett mindre tvärgående snitt halvvägs mellan den ventrala halsregionen och den mellersta abdominala regionen med hjälp av en dissektionssax.
Mapped dorsal to ventral around anterior rim of eye.
För in dissektionssaxen i det lilla snittet och öppna buken från en punkt som är belägen kaudalt från gälmanteln till den kraniala sidan av anus längs bukens mittlinje.
Commonly multiple in mature control males, not present in control females, generally paired (one near each eye) or single in females exposed to androgens.
Var noga med att inte föra in dissektionssaxen för djupt så att levern och könskörteln skadas.
B Tubercles located between nares, (sensory canal pores).
Utför följande steg under ett stereomikroskop.
Normally in pairs for control males at more elevated levels (2- enlarged or 3- pronounced) of development.
Placera testfisken med buksidan upp på pappersservetten (en petriskål av glas eller ett objektglas går också bra).
Not present in control females with some occurrence and development in females exposed to androgens.
Vik ut bukhålans väggar med en precisionspincett och blottlägg de inre organen.
C Tubercles located immediately anterior to nares, parallel to mouth.
Det är även godtagbart att blottlägga de inre organen genom att vid behov avlägsna den ena sidan av bukhålans vägg.
Generally enlarged or pronounced in mature control males.
Blotta den del som förbinder levern med gallblåsan med hjälp av en annan precisionspincett.
Present or enlarged in less developed males or androgen-treated females.
Tag därefter fatt i gallgången och skär av gallblåsan.
D Tubercles located parallel along mouth line.
Var noga med att inte skada gallblåsan.
Generally rated developed in control males.
Tag fatt i matstrupen och skär loss mag-tarmkanalen från levern på samma sätt.
Absent in control females but present in androgen-exposed females.
Var försiktig så att inte tarminnehållet läcker ut.
E Tubercles located on lower jaw, close to mouth, usually small and commonly in pairs.
Skär loss den kaudala mag-tarmkanalen från anus och avlägsna den från bukhålan.
Varying in control or treated males, and treated females.
Skär bort fettmassan och andra vävnader från leverns utsida.
F Tubercles located ventral to E. Commonly small and paired.
Var noga med att inte skada levern.
Present in control males and androgen-exposed females.
Tag fatt i portasystemet med hjälp av en precisionspincett och avlägsna levern från bukhålan.
Tubercle Template
Placera levern på objektglaset.
Numerical Rating
Avlägsna om så behövs allt övrigt fett och all främmande vävnad (t.ex. bukhinna) från leverns yta med hjälp av precisionspincetten.
resent
Väg levern med ett 1,5 ml mikrorör som emballagevikt med en elektronisk analysvåg.
Date
Registrera värdet i en tabell (läs: 0,1 mg).
nlarged
Bekräfta identifieringsinformationen på mikroröret som innehåller levern.
Total Score
Stäng mikrorörets lock.
ronounced
Förvara det i ett kylställ (eller ett isställ).
Appendix 5B
När levern har avlägsnats diskas dissektionsinstrumenten eller ersätts med rena.
Assessment of secondary sex characteristics in medaka for the detection of certain endocrine active chemicals
Avlägsna levrarna från alla fiskar i transportbehållaren enligt beskrivning ovan.
Below is a description of the measurement of papillary processes, which are the secondary sex characteristics in medaka (Oryzias latipes).
När levrarna har skurits ut från alla fiskarna i transportbehållaren (dvs. alla hanar och honor i en testbehållare) placeras alla leverprover i ett provrörsställ med en etikett för identifiering och förvaras i en frys.
After the excision of the liver (Appendix 6), the carcass is placed into a conical tube containing about 10 ml of 10 % neutral buffered formalin (upside: head, downside: tail).
När levrarna förs vidare till förbehandlingen strax efter utskärningen bärs proverna till nästa arbetsstation i ett kylställ (eller isställ).
If the gonad is fixed in a solution other than 10 % neutral buffered formalin, make a transverse cut across the carcass between anterior region of anal fin and anus using razor, taking care not to harm the gonopore and gonad itself (Fig.
Efter utskärningen av levern kan fiskkroppens sekundära könskaraktärer mätas.
3).
Prov
Place the cranial side of the fish body into the fixative solution to preserve the gonad, and the tail side of the fish body into the 10 % neutral buffered formalin as described above.
Lagra leverproverna från testfiskarna vid ≤ – 70 °C om de inte ska användas i förbehandlingen kort efter utskärningen.
After placing the fish body into 10 % neutral buffered formalin, grasp the anterior region of the anal fin with tweezers and fold it for about 30 seconds to keep the anal fin open.
Ett snitt läggs precis framför bröstfenorna med en sax.
When grasping the anal fin with tweezers, grasp a few fin rays in the anterior region with care not to scratch the papillary processes.
Figur 2
After keeping the anal fin open for about 30 seconds, store the fish body in 10 % neutral buffered formalin at room temperature until the measurement of the papillary processes (measurement should be conducted after fixing for at least 24 hours).
Buken öppnas längs mittlinjen med en sax till en punkt ungefär 2 mm kranialt från anus.
Measurement
Figur 3.
After fixing the fish body in the 10 % neutral buffered formalin for at least 24 hours, pick up the fish carcass from the conical tube and wipe the formalin on the filter paper (or paper towel).
Bukväggarna öppnas med en pincett för blottläggning av levern och andra interna organ.
Place the fish abdomen side up.
(Alternativt kan bukväggarna fästas lateralt).
Then cut the anal fin using small dissection scissors carefully (it is preferable to cut the anal fin with small amount of pterygiophore).
Figur 4.
Grasp the anterior region of the severed anal fin with tweezers and put it on a glass slide with a several drops of water.
Levern friläggs och avlägsnas utan att skära med hjälp av en peang.
Then cover the anal fin with a cover glass.
Fig-5
Be careful not to scratch the papillary processes when grasping the anal fin with tweezers.
Tarmarna dras försiktigt ut med hjälp av peangen.
Count the number of the joint plate with papillary processes using the counter under a biological microscope (upright microscope or inverted microscope).
Fig-6
The papillary processes are recognized when a small formation of processes is visible on the posterior margin of joint plate.
Båda ändarna av tarmarna och eventuellt vidhängande tarmkäx klipps av med en sax.
Write the number of joint plate with papillary processes in each fin ray to the worksheet (e.g. first fin ray: 0, second fin ray: 10, third fin ray: 12, etc.) and enter the sum of this number on the Excel spreadsheet by individual fish.
Fig-7 (hona)
If necessary, take a photograph of the anal fin and count the number of joint plate with papillary processes on the photograph.
Förfarandet är exakt detsamma för honor.
After the measurement, put the anal fin into the conical tube described in (1) and store it.
Fig-8
Fig.1.
Det avslutade förfarandet.
Diagram showing sexual difference in shape and size of the anal fin.
Förfarande 2B:
A, male;
Japansk risfisk (Oryzias latipes), förbehandling av levern för analys av vitellogenin
B, female.
Ta fram flaskan med homogenatbuffertlösning från ELISA-utrustningen och kyl den med krossad is (lösningens temperatur: ≤ 4 °C).
Fig.2.A.
Om man använder homogenatbuffertlösningen från EnBio:s ELISA-system ska lösningen tinas vid rumstemperatur.
Processes on joint plates of anal fin-ray.
Kyl sedan ner flaskan med krossad is.
J.P., joint plate;
Beräkna volymen av homogenatbuffertlösningen för levern på grundval av dess vikt (tillsätt 50 μl av homogenatbuffertlösningen per mg av levervikten för homogenatet).
A.S., axial space;
Om levern till exempel väger 4,5 mg är homogenatbuffertlösningens volym för levern 225 μl.
P., process.
Gör upp en förteckning över homogenatbuffertlösningens volym för alla levrarna.
B, Distal extremity of fin-ray.
Förberedelse av levern för förbehandling
Actinotrichia (Act.) are on the tip.
Ta ut det 1,5 ml mikrorör som innehåller levern ur frysen strax före förbehandlingen.
Fig.3.
Förbehandlingen av levrar från hanar bör genomföras före förbehandlingen av honornas levrar för att undvika kontaminering av vitellogenin.
Photograph of fish body showing the cut site when the gonad is fixed in the fixing solution other than 10 % neutral buffered formalin.
Förbehandlingen för testgrupperna bör dessutom utföras i följande ordning:
In that case, the remaining body will be cut off between anterior region of anal fin and anal using razor (red bar), and the head side of fish body will be put into the fixing solution for gonad and the tail side of the fish body will be put into the 10 % neutral buffered formalin.
Antalet 1,5 ml mikrorör som innehåller leverprover som tagits ut ur frysen vid en viss tidpunkt bör inte överstiga det antal som kan centrifugeras vid den tidpunkten.
Papillary processes normally appear only in adult males and are found on fin rays from the second to the seventh or eighth counting from the posterior end of the anal fin (Fig.1 and 2).
Ordna 1,5 ml mikrorören som innehåller leverprover efter de nummer proven har i isstället (levern behöver inte tinas).
However, processes rarely appear on the first fin ray from the posterior end of the anal fin.
Utförandet av förbehandlingen
This SOP covers the measurement of processes on the first fin ray (the fin ray number refers to the order from the posterior end of the anal fin in this SOP).
Tillsats av homogeniseringsbuffertlösningen
Recommended procedures for sample collection for vitellogenin analysis
Kontrollera på förteckningen vilken volym av homogenatbuffertlösningen som ska användas för ett visst leverprov och ställ in mikropipetten (volym: 100–1000 μl) på den lämpliga volymen.
Care should be taken to avoid cross-contamination between VTG samples of males and females.
Fäst en ren spets på mikropipetten.
Procedure 1A:
Pipettera upp homogenatbuffertlösningen från reagensflaskan och tillsätt 1,5 ml buffertlösning i det 1,5 ml mikrorör som innehåller levern.
Fathead Minnow, Blood Collection from the Caudal Vein/Artery
Tillsätt homogenatbuffertlösningen i alla 1,5 ml mikrorör som innehåller levrar enligt det förfarande som beskrivs ovan.
After anaesthetisation, the caudal peduncle is partially severed with a scalpel blade and blood is collected from the caudal vein/artery with a heparinised microhematocrit capillary tube.
Det finns ingen anledning att byta ut mikropipettspetsen med en ny.
After the blood has been collected, the plasma is quickly isolated by centrifugation for 3 min at 15000 g (or alternatively for 10 min. at 15000 g at 4 °C).
Om spetsen har blivit kontaminerad eller misstänks vara kontaminerad bör den dock bytas ut.
If desired, percent hematocrit can be determined following centrifugation.
Homogenisering av levern
The plasma portion is then removed from the microhematocrit tube and stored in a centrifuge tube with 0,13 units of aprotinin (a protease inhibitor) at – 80 °C until determination of vitellogenin can be made.
Fäst en ny mortelstöt för homogenisering på mikrorörshomogenisatorn.