natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The water is aerated to oxygen saturation prior to addition of the test chemical.
Om detta inte är möjligt i ett statiskt system bör ett hanterbart halvstatiskt förnyelseintervall tillämpas (t.ex. förnyelse var 24:e timme).
Temperature should be kept at 26 ± 1 °C, in the wells, throughout the test.
I dessa fall måste exponeringskoncentrationerna minst kontrolleras i de högsta och lägsta testkoncentrationerna i början och slutet av varje exponeringsintervall (se punkt 36).
The pH should be in a range between pH 6,5 and 8,5, and not vary within this range by more than 1,5 units during the course of the test.
Om en exponeringskoncentration på ± 20 % av de nominella koncentrationerna inte kan upprätthållas måste alla koncentrationer mätas i början och slutet av varje exponeringsintervall (se punkt 36).
If the pH is not expected to remain in this range, then pH adjustment should be done prior to initiating the test.
Vid förnyelse är det viktigt att se till att embryona täcks av en liten mängd av den gamla testlösningen så att de inte torkar ut.
The pH adjustment should be made in such a way that the stock solution concentration is not changed to any significant extent and that no chemical reaction or precipitation of the test chemical is caused.
Testet kan anpassas för att uppfylla testkraven för specifika ämnen (t.ex. genomflöde (24), passiva doseringssystem (25) för enkelt nedbrytbara eller starkt adsorberande ämnen (29) eller andra för flyktiga ämnen (36) (37)).
Use of hydrogen chloride (HCl) and sodium hydroxide (NaOH) to correct pH in the solutions containing the test chemical is recommended.
Det är viktigt att undvika eventuell stress för embryona.
Test solutions of the selected concentrations can be prepared, e.g. by dilution of a stock solution.
Testkärlen bör konditioneras med provlösningarna under minst 24 timmar innan testet inleds.
The stock solutions should preferably be prepared by simply mixing or agitating the test chemical in the dilution water by mechanical means (e.g. stirring and/or ultra-sonification).
Testförhållandena sammanfattas i tillägg 2.
If the test chemical is difficult to dissolve in water, procedures described in the OECD Guidance Document No. 23 for handling difficult substances and mixtures should be followed (28).
I regel krävs minst fem koncentrationer av testkemikalien med ett fast koncentrationsförhållande som inte överstiger 2,2 för att uppfylla de statistiska kraven.
Where a solvent is used to assist in stock solution preparation, its final concentration should not exceed 100 μl/l and should be the same in all test vessels.
Den högsta testkoncentrationen ska helst ge 100-procentig dödlighet, och den lägsta testkoncentrationen ska helst inte ge någon observerbar effekt alls enligt punkt 28.
Maintenance of brood fish
Det preliminära testet görs vanligtvis med tio embryon per koncentration.
A breeding stock of unexposed, wild-type zebrafish with well-documented fertilisation rate of eggs is used for egg production.
Anvisningarna nedan avser ett test med 24-hålsplattor.
Fish should be free of macroscopically discernible symptoms of infection and disease and should not have undergone any pharmaceutical (acute or prophylactic) treatment for 2 months before spawning.
Om olika testkärl (t.ex. små petriskålar) används eller fler koncentrationer testas måste anvisningarna anpassas därefter.
Optimal filtering rates should be adjusted; excess filtering rates causing heavy perturbation of the water should be avoided.
Kontroller med utspädningsvatten krävs både som negativ kontroll och som intern kontroll av plattorna.
For feeding conditions, see Appendix 2.
Om fler än ett dött embryo observeras i den interna kontrollen av plattorna förkastas plattan, vilket minskar antalet koncentrationer som används för att härleda LC50.
Surplus feeding should be avoided, and water quality and cleanness of the aquaria should be monitored regularly and be reset to the initial state, if necessary.
Om en hel platta förkastas kan det bli svårare att utvärdera och särskilja observerade effekter, särskilt om den förkastade plattan är en platta för lösningsmedelskontroll eller en platta som innehåller behandlade embryon.
Proficiency Testing
I det första fallet måste testet upprepas.
As a reference chemical, 3,4-dichloroaniline (used in the validation studies (1)(2)), should be tested in a full concentration-response range to check the sensitivity of the fish strain used, preferably twice a year.
I det andra fallet förloras en eller flera hela behandlingsgrupper på grund av dödligheten i den interna kontrollen, vilket i sin tur kan påverka möjligheterna att utvärdera effekter och bestämma LC50 värden.
For any laboratory initially establishing this assay, the reference chemical should be used.
En positiv kontroll vid en fast koncentration på 4 mg/l 3,4-dikloranilin utförs med varje äggsats som används för testningen.
A laboratory can use this chemical to demonstrate their technical competence in performing the assay prior to submitting data for regulatory purposes.
Om lösningsmedel används exponeras en ytterligare grupp på 20 embryon för lösningsmedlet i en separat 24-hålsplatta, vilken tjänar som lösningsmedelskontroll.
Egg production
För att testet ska anses acceptabelt bör det påvisas att lösningsmedlet inte har några signifikanta effekter på kläckningstid eller överlevnad, och inte heller framkallar några andra negativa effekter på embryona (jfr punkt 8c).
Zebrafish eggs may be produced via spawning groups (in individual spawning tanks) or via mass spawning (in the maintenance tanks).
Inledning av exponering och testets varaktighet
Since spawning groups of zebrafish may occasionally fail to spawn, the parallel use of at least three spawning tanks is recommended.
Embryona bör nedsänkas i testlösningarna innan klyvningen av blastodisken inleds eller senast vid det 16:e cellstadiet.
To avoid genetic bias, eggs are collected from a minimum of three breeding groups, mixed and randomly selected.
För att exponeringen ska kunna inledas med minsta möjliga försening väljer man slumpvis ut minst dubbelt så många ägg som behövs per behandlingsgrupp.
To prevent predation of eggs by adult zebrafish, the spawn traps are covered with inert wire mesh of appropriate mesh size (approx.
Livskraftiga befruktade ägg bör skiljas från obefruktade ägg och överföras till 24-hålsplattor som har förkonditionerats i 24 timmar och återfyllts med nyberedda testlösningar, 2 ml/hål, inom 180 minuter efter befruktning.
2 ± 0,5 mm).
Med hjälp av stereomikroskop (helst ≥ 30 gångers förstoring) väljer man sedan ut befruktade ägg som genomgår klyvning och inte uppvisar några uppenbara oregelbundenheter under klyvning (asymmetri, vesikelbildning) eller skador på den yttre fosterhinnan.
If considered necessary, artificial plants made of inert material (e.g., plastic or glass) can be fixed to the mesh as spawning stimulus (3)(4)(5)(23)(35).
För insamling av ägg och separation, se tillägg 3, figurerna 1 och 3, och tillägg 4, figur 2.
Weathered plastic materials which do not leach (e.g., phthalates) should be used.
Fördelning av ägg mellan 24-hålsplattorna
Mating, spawning and fertilisation take place within 30 min after the onset of light and the spawn traps with the collected eggs can be carefully removed.
Äggen fördelas mellan plattornas hål i följande antal (se även tillägg 4, figur 1):
Rinsing eggs with reconstituted water after collection from spawning traps is recommended.
20 ägg på en platta för varje testkoncentration.
Egg differentiation
20 ägg som lösningsmedelskontroll på en platta (om nödvändigt).
At 26 °C, fertilised eggs undergo the first cleavage after about 15 min and the consecutive synchronous cleavages form 4, 8, 16 and 32 cell blastomers (see Appendix 3)(35).
20 ägg som positiv kontroll på en platta.
At these stages, fertilised eggs can be clearly identified by the development of a blastula.
4 ägg i utspädningsvatten som intern kontroll av plattan på var och en av ovanstående plattor.
Twenty embryos per concentration (one embryo per well) are exposed to the test chemical.
24 ägg i utspädningsvatten som negativ kontroll på en platta.
Exposure should be such that ± 20 % of the nominal chemical concentration are maintained throughout the test.
De apikala observationer som utförs av varje testat embryo omfattar följande: embryonas koagulering, avsaknad av somitbildning, ej lossad svans och avsaknad av hjärtslag (tabell 1).
If this is not possible in a static system, a manageable semi-static renewal interval should be applied (e.g. renewal every 24 hrs).
Dessa observationer används för att bestämma dödligheten enligt följande: Ett positivt resultat i en av observationerna innebär att sebrafiskembryot är dött.
In these cases exposure concentrations need to be verified as a minimum in the highest and lowest test concentrations at the beginning and the end of each exposure interval (see paragraph 36).
Dessutom registreras kläckning i behandlings- och kontrollgrupperna dagligen, med början efter 48 timmar.
If an exposure concentration of ± 20 % of the nominal concentrations cannot be maintained, all concentrations need to be measured at the beginning and the end of each exposure interval (see paragraph 36).
Observationerna registreras var 24:e timme fram till slutet av testet.
Upon renewal, care should be taken that embryos remain covered by a small amount of old test solutions to avoid drying.
Apikala observationer av akut toxicitet hos sebrafiskembryon 24–96 timmar efter befruktning.
The test design can be adapted to meet the testing requirements of specific substances (e.g,. flow-through (24) or passive dosing systems (25) for easily degradable or highly adsorptive substances (29), or others for volatile substances (36)(37)).
Exponeringstider
In any case, care should be taken to minimise any stress to the embryos.
24 tim
Test chambers should be conditioned at least for 24 hrs with the test solutions prior to test initiation.
48 tim
Test conditions are summarised in Appendix 2.
72 tim
Normally, five concentrations of the test chemical spaced by a constant factor not exceeding 2,2 are required to meet statistical requirements.
96 tim
Justification should be provided, if fewer than five concentrations are used.
Koagulerade embryon
The highest concentration tested should preferably result in 100 % lethality, and the lowest concentration tested should preferably give no observable effect, as defined in paragraph 28.
Avsaknad av somitbildning
A range-finding test before the definitive test allows selection of the appropriate concentration range.
Ej avlossad svansknopp i sidovy
The range-finding is typically performed using ten embryos per concentration.
Avsaknad av hjärtslag
The following instructions refer to performing the test in 24-well plates.
Koagulering av embryot: Koagulerade embryon är mjölkvita och ser mörka ut i mikroskopet (se tillägg 5, figur 1).
If different test chambers (e.g. small Petri dishes) are used or more concentrations are tested, instructions have to be adjusted accordingly.
Antalet koagulerade embryon bestäms efter 24, 48, 72 och 96 timmar.
Details and visual instructions for allocation of concentrations across 24-well plates are available in paragraph 27 and Appendix 4, Figure 1.
Avsaknad av somitbildning: Vid 26 ± 1 °C har cirka 20 somiter bildats efter 24 timmar (se tillägg 5, figur 2) hos ett sebrafiskembryo med normal utveckling.
Dilution water controls are required both as negative control and as internal plate controls.
Ett normalt utvecklat embryo visar spontana rörelser (sammandragningar från sida till sida).
If more than 1 dead embryo is observed in the internal plate control, the plate is rejected, thus reducing the number of concentrations used to derive the LC50.
Spontana rörelser visar att somiter bildas.
If an entire plate is rejected the ability to evaluate and discern observed effects may become more difficult, especially if the rejected plate is the solvent control plate or a plate in which treated embryos are also affected.
Avsaknad av somiter registreras efter 24, 48, 72 och 96 timmar.
In the first case the test must be repeated.
Avsaknad av somitbildning efter 24 timmar kan bero på en allmän försening i utvecklingen.
In the second one the loss of an entire treatment group(s) due to internal control mortality may limit the ability to evaluate effects and determine LC50 values.
Somiter bör bildas senast efter 48 timmar.
A positive control at a fixed concentration of 4 mg/l 3,4-dichloroaniline is performed with each egg batch used for testing.
Om så inte sker anses embryona vara döda.
In case a solvent is used, an additional group of 20 embryos is exposed to the solvent on a separate 24-well plate, thus serving as a solvent control.
Ej lossad svans: Hos ett normalt utvecklat sebrafiskembryo observeras avlossning av svansen (se tillägg 5, figur 3) från äggulan efter bakre töjning av embryokroppen.
To consider the test acceptable, the solvent should be demonstrated to have no significant effects on time to hatch, survival, nor produce any other adverse effects on the embryos (cf. paragraph 8c).
Ej lossad svans registreras efter 24, 48, 72 och 96 timmar.
Start of exposure and duration of test
Avsaknad av hjärtslag: Hos normalt utvecklade sebrafiskembryon vid 26 ± 1 °C syns hjärtslagen efter 48 timmar (se tillägg 5, figur 4).
The test is initiated as soon as possible after fertilisation of the eggs and terminated after 96 hrs of exposure.
Särskild försiktighet bör iakttas vid registreringen av denna endpoint eftersom oregelbundna (onormala) hjärtslag inte bör registreras som en dödlig effekt.
The embryos should be immersed in the test solutions before cleavage of the blastodisc commences, or, at latest, by the 16 cell-stage.
Synliga hjärtslag utan cirkulation i aorta abdominalis anses inte vara dödligt.
To start exposure with minimum delay, at least twice the number of eggs needed per treatment group are randomly selected and transferred into the respective concentrations and controls (e.g. in 100 ml crystallisation dishes; eggs should be fully covered) not later than 90 minutes post fertilisation.
För att registrera denna endpoint bör embryon som inte uppvisar hjärtslag observeras med minst 80x förstoring i minst en minut.
Viable fertilised eggs should be separated from unfertilised eggs and be transferred to 24-well plates pre-conditioned for 24 hrs and refilled with 2 ml/well freshly prepared test solutions within 180 minutes post fertilisation.
Avsaknad av hjärtslag registreras efter 48, 72 och 96 timmar.
By means of stereomicroscopy (preferably ≥30-fold magnification), fertilised eggs undergoing cleavage and showing no obvious irregularities during cleavage (e.g. asymmetry, vesicle formation) or injuries of the chorion are selected.
Kläckningsgraden för alla behandlings- och kontrollgrupper bör registreras från 48 timmar och framåt och rapporteras.
For egg collection and separation, see Appendix 3, Fig. 1 and 3 and Appendix 4, Fig.
Även om kläckning inte är en endpoint som används för beräkning av LC50 säkerställer kläckningen att embryot exponeras utan att eventuellt hindras av den yttre fosterhinnan, och kan därför vara till hjälp i tolkningen av data.
2.
Detaljerade beskrivningar av normal utveckling (35) och exempel på onormal utveckling av sebrafiskembryon ges i tilläggen 3 och 5.
Distribution of eggs over the 24-well plates
Analysmätningar
Eggs are distributed to well plates in the following numbers (see also Appendix 4, Fig.
I början och i slutet av testet mäts pH, total hårdhet och ledningsförmåga i kontrollgruppen (kontrollgrupperna) och i den högsta koncentrationen av testkemikalien.
1)
I semistatiska förnyelsesystem bör pH mätas före och efter förnyelse.
20 eggs on one plate for each test concentration;
Koncentrationen av upplöst syrgas mäts i slutet av testet i negativa kontroller och i den högsta testkoncentrationen med livskraftiga embryon, där den ska överensstämma med testets giltighetskriterierna (se punkt 8f).
20 eggs as solvent control on one plate (if necessary);
Om det finns risk för temperaturvariationer mellan 24-hålsplattorna mäts temperaturen i tre slumpmässigt utvalda kärl.
20 eggs as positive control on one plate;
Temperaturen bör helst registreras kontinuerligt under testet eller åtminstone dagligen.
4 eggs in dilution water as internal plate control on each of the above plates;
I ett statiskt system bör koncentrationen av testkemikalien mätas åtminstone i de högsta och lägsta testkoncentrationerna, men helst i alla behandlingar, i början och slutet av testet.
24 eggs in dilution water as negative control on one plate.
Vid semistatiska test (förnyelsetest) där det förväntas att testkemikaliekoncentrationen kommer att hållas inom ± 20 % av de nominella värdena är det tillrådligt att analysera de högsta och lägsta testkoncentrationerna åtminstone när de är nyberedda och strax före förnyelsen.
Apical observations performed on each tested embryo include: coagulation of embryos, lack of somite formation, non-detachment of the tail, and lack of heartbeat (Table 1).
Vid test där testkemikaliens koncentration inte förväntas hållas inom ± 20 % av den nominella koncentrationen måste alla testkoncentrationer analyseras, när de är nyberedda och omedelbart före förnyelse.
These observations are used for the determination of lethality: Any positive outcome in one of these observations means that the zebrafish embryo is dead.
Om det inte finns en tillräcklig volym för analysen kan det vara lämpligt att använda ersättningsbehållare av samma material och med samma förhållande mellan volym och ytarea som 24-hålsplattor.
Additionally, hatching is recorded in treatment and control groups on a daily basis starting from 48 hrs.
Det rekommenderas starkt att resultaten baseras på de uppmätta koncentrationerna.
Observations are recorded every 24 hrs, until the end of the test.
När koncentrationerna inte håller sig inom 80–120 % av den nominella koncentrationen bör effektkoncentrationerna uttryckas i förhållande till de uppmätta koncentrationernas geometriska medelvärde (se kapitel 5 i OECD:s vägledningsdokument nr 23 om akvatisk toxicitetstestning av svåra ämnen och blandningar för närmare uppgifter (28).
Apical observations of acute toxicity in zebrafish embryos 24-96 hrs post fertilisation
LIMIT-TEST
Exposure times
Genom användning av de förfaranden som beskrivs i denna testmetod kan ett så kallat limit-test göras upp till 100 mg/l testkemikalie eller upp till kemikaliens löslighetsgräns i testmediet (den av dessa koncentrationer som är lägst) för att visa att LC50 är högre än denna koncentration.
24 hrs
Limit-test bör utföras med 20 embryon i behandlingen, i den positiva kontrollen och om nödvändigt i lösningsmedelskontrollen.
48 hrs
I den negativa kontrollen bör 24 embryon användas.
72 hrs
Om procentandelen dödlighet i den testade koncentrationen överstiger dödligheten i den negativa kontrollen (eller lösningsmedelskontrollen) med 10 % bör en fullständig undersökning göras.
96 hrs
Eventuella observerade effekter bör registreras.
Coagulated embryos
Om dödligheten överstiger 10 % i den negativa kontrollen (eller lösningsmedelskontrollen) blir testet ogiltigt och bör göras om.
Lack of somite formation
I detta test anses de individuella hålen vara oberoende replikat för statistisk analys.
Non-detachment of the tail
Procentandelen embryon för vilka minst en av de apikala observationerna är positiv vid 48 och/eller 96 timmar plottas mot testkoncentrationerna.
Lack of heartbeat
Lämpliga statistiska metoder (38) bör användas för att beräkna kurvornas lutningar, LC50-värden och konfidensgränser (95 %) och OECD:s vägledningsdokumentet Current Approaches to Statistical Analysis of Ecotoxicity Data bör konsulteras (39).
Coagulation of the embryo: Coagulated embryos are milky white and appear dark under the microscope (see Appendix 5, Fig.
kemiska beteckningar, såsom IUPAC- eller CAS-beteckning, CAS-nummer, SMILES- eller InChI-kod, strukturformel, renhet, kemisk beteckning på föroreningar i förekommande fall och om möjligt, osv. (inklusive organisk kolhalt i förekommande fall),
1).
Testorganismer:
The number of coagulated embryos is determined after 24, 48, 72 and 96 hrs.
använt testförfarande (t.ex. semistatisk förnyelse),
Lack of somite formation: At 26 ± 1 °C, about 20 somites have formed after 24 hrs (see Appendix 5, Figure 2) in a normally developing zebrafish embryo.
fotoperiod,
A normally developed embryo shows spontaneous movements (side-to-side contractions).
testets utformning (t.ex. antal testbehållare, typer av kontroller),
Spontaneous movements indicate the formation of somites.
kvaliteten på det vatten som fisken hålls i (t.ex. pH, hårdhet, temperatur, ledningsförmåga, upplöst syre),
Non-formation of somites after 24 hrs might be due to a general retardation of development.
metod för beredning av stamlösningar och testlösningar samt förnyelsefrekvens,
At latest after 48 hrs, the formation of somites should be developed.
motivering för användning av lösningsmedel och valet av lösningsmedel, om annat än vatten,
If not, the embryos are considered dead.
nominella testkoncentrationer och resultatet av alla analyser för att bestämma koncentrationen av testkemikalien i testkärlen, metodens återhämtningskapacitet och kvantifieringsgräns (LoQ) bör också rapporteras,
Non-detachment of the tail: In a normally developing zebrafish embryo, detachment of the tail (seeAppendix 5, Figure 3) from the yolk is observed following posterior elongation of the embryonic body.
bevis för att kontrollerna uppfyller de allmänna giltighetskriterierna för överlevnad,
Absence of tail detachment is recorded after 24, 48, 72 and 96 hrs.
äggens befruktningsgrad,
Lack of heartbeat: In a normally developing zebrafish embryo at 26 ± 1 °C, the heartbeat is visible after 48 hrs (see Appendix 5, Figure 4).
kläckningsgrad i behandlings- och kontrollgrupperna.
Particular care should be taken when recording this endpoint, since irregular (erratic) heartbeat should not be recorded as lethal.
högsta koncentration som inte orsakar dödlighet under testets varaktighet,
Moreover, visible heartbeat without circulation in aorta abdominalis is considered non-lethal.
minsta koncentration orsakar 100 % dödlighet under testets varaktighet,
To record this endpoint, embryos showing no heartbeat should be observed under a minimum magnification of 80x for at least one minute.
kumulativ dödlighet för varje koncentration vid de rekommenderade observationstiderna,
Absence of heartbeat is recorded after 48, 72 and 96 hrs.
värden efter 96 timmar (och eventuellt efter 48 timmar) för dödlighet med 95 % konfidensintervall, om möjligt,
Hatching rates of all treatment and control groups should be recorded from 48 hrs onwards and reported.
diagram över koncentrations-dödlighetskurvan i slutet av testet,
Although hatching is not an endpoint used for the calculation of the LC50, hatching ensures exposure of the embryo without a potential barrier function of the chorion, and as such may help data interpretation.
dödlighet i kontrollerna (negativa kontroller, interna kontroller av plattan samt positiv kontroll och eventuella lösningsmedelskontroller,
Detailed descriptions of the normal (35) and examples of abnormal development of zebrafish embryos are illustrated in Appendixes 3 and 5.
data om resultatet av var och en av de fyra apikala iakttagelserna,
Analytical measurements
förekomst och beskrivning av morfologiska och fysiologiska abnormiteter, om några (se exempel i tillägg 5, figur 2),
At the beginning and at the end of the test, pH, total hardness and conductivity in the control(s) and in the highest test chemical concentration are measured.
händelser under testet som kan påverka resultatet,
In semi-static renewal systems the pH should be measured prior to and after water renewal.
statistisk analys och behandling av data (probitanalys, logistisk regressionsmodell och geometriskt medelvärde för LC50),
The dissolved oxygen concentration is measured at the end of the test in the negative controls and highest test concentration with viable embryos, where it should be in compliance with the test validity criteria (see paragraph 8f).
lutning och konfidensintervall för regressionen av den (transformerade) koncentrations-responskurvan,