natgillin/translations-raw huggingface dataset:
These larvae are placed into freshly prepared test beakers (spiking procedure as for the 1st generation) to determine the viability of the 2nd generation through an assessment of their emergence, time to emergence and the sex ratio of the fully emerged and alive midges (a schematic presentation of the life-cycle test is provided in Appendix 5).
Luftningen av vattnet bör stängas av medan larverna i det första stadiet tillsätts i testkärlen och hållas avstängd i ytterligare 24 timmar efter tillsättning av larverna.
All data are analysed either by a regression model to estimate the concentration that would cause X % reduction in the relevant endpoint, or by using hypothesis testing to determine a No Observed Effect Concentration (NOEC).
Enligt det testupplägg som används (se punkterna 19 och 20) är antalet larver per testkoncentration minst 120 (6 replikat per koncentration) för bestämningen av ECx och 160 för bestämningen av NOEC (8 replikat per koncentration).
The latter requires a comparison of treatment responses with the appropriate control responses using statistical tests.
Man måste utfodra larverna i testkärlen, helst dagligen eller minst tre gånger per vecka.
It should be noted that in the spiked water scenario, in case of fast degrading chemicals, the later life stages of each generation (e.g. pupal phase) might be exposed to a considerably lower concentration level in the overlying water than the 1st instar larvae.
En lagom mängd foder för unga larver under de första tio dagarna av deras utveckling är 0,25–0,5 mg fiskfoder (eller en suspension i vatten av finmalt foder, t.ex.
If this is a concern, and a comparable exposure level for each life stage is needed, the following amendments of the test method might be considered:
Tetra-Min eller Tetra-Phyll, se uppgifter i tillägg 2) per larv och dag (0,35–0,5 mg för C. yoshimatsui).
parallel runs with spiking at different life stages, or
Något större mängder foder kan krävas för äldre larver:
repeated spiking (or overlying water renewal) of the test system during both test phases (1st and 2nd generation), whereby the spiking (renewal) intervals should be adjusted to the fate characteristics of the test chemical.
0,5–1,0 mg per larv och dag bör vara tillräckligt för återstoden av testet.
Such amendments are only feasible in the spiked water scenario, but not in the sediment spiked scenario.
Fodergivan bör minskas i alla testkärl och kontroller om det uppstår svamptillväxt eller om mortalitet observeras i kontrollerna.
The water solubility of the test chemical, its vapour pressure and log Kow, measured or calculated partitioning into sediment and stability in water and sediment should be known.
Om svamptillväxten inte kan stoppas måste testet upprepas.
A reliable analytical method for the quantification of the test chemical in overlying water, pore water and sediment with known and reported accuracy and limit of detection should be available.
Den toxikologiska betydelsen av exponering via foderintag är i allmänhet högre för kemikalier med en hög affinitet för organiskt kol eller kemikalier som är kovalent bundna till sedimentet.
Useful information includes the structural formula and purity of the test chemical.
När man testar kemikalier med sådana egenskaper kan dock den mängd foder som krävs för att säkerställa larvernas överlevnad och naturliga tillväxt tillsättas i det syntetiska sedimentet före stabiliseringsperioden, beroende på de föreskrivna kraven.
Chemical fate of the test chemical (e.g. dissipation, abiotic and biotic degradation, etc.) is also useful.
För att förhindra försämring av vattenkvaliteten bör växtmaterial användas i stället för fiskfoder, t.ex.
Further guidance for testing chemicals with physical-chemical properties that make them difficult to perform the test is provided in (16).
0,5 % (torrvikt) finmalda blad från brännässla (Urtica dioica), mullbär (Morus alba), vitklöver (Trifolium repens), spenat (Spinacia oleracea) eller annat växtmaterial (Cerophyl eller alfacellulosa).
Reference chemicals may be tested periodically as a means of assuring that the sensitivity of the laboratory population has not changed.
Att tillsätta hela ransonen av en ekologisk foderkälla till sedimentet innan spikningen är inte försumbart när det gäller vattenkvaliteten och det biologiska resultatet (21), och är inte heller en standardmetod, men färska studier tyder på att denna metod fungerar (19) (26).
As with daphnids it would be sufficient to perform a 48-h acute test (following 17).
De vuxna myggorna i odlingsbehållarna behöver normalt inget foder, men fruktsamheten och produktiviteten förbättras när bomullskompresser indränkta i mättad sackaroslösning erbjuds som en födokälla för vuxna exemplar (34).
However, until a validated acute guideline is available a chronic test according to Chapter C.28 of this Annex may be considered.
Skonsam luftning av det överliggande vattnet i testkärlen införs 24 timmar efter tillsättning av första stadiets larver i båda generationerna och får pågå under hela testet (se till att halten löst syre inte faller under 60 % av luftmättnadsvärdet (ASV)).
Examples of reference toxicants used successfully in ring-tests and validation studies are:
Luftningen tillhandahålls genom en pasteurpipett av glas vars öppning fästs 2–3 cm ovanför sedimentlagret och släpper ut några bubblor per sekund.
lindane, trifluralin, pentachlorophenol, cadmium chloride and potassium chloride.
Vid testning av flyktiga kemikalier kan man överväga att utesluta luftningen av sediment/vattensystemet samtidigt som giltighetskriteriet rörande ett luftmättnadsvärde på minst 60 % (punkt 10) ska uppfyllas.
(1) (3) (6) (7) (18).
Ytterligare vägledning finns i (16).
For the test to be valid the following conditions apply:
Testet med C. riparius genomförs vid en konstant temperatur på 20 °C (± 2 °C).
the mean emergence in the control treatment should be at least 70 % at the end of the exposure period for both generations (1) (7);
För C. dilutus och C. yoshimatsui rekommenderas temperaturer på 23 °C respektive 25 °C (± 2 °C).
for C. riparius and C. yoshimatsui, 85 % of the total emerged adult midges from the control treatment in both generations should occur between 12 and 23 days after the insertion of the first instar larvae into the vessels;
En ljusperiod på 16 timmar används och ljusintensiteten ska vara 500–1000 lux.
for C. dilutus, a period of 20 to 65 days is acceptable;
För odlingsbehållarna kan ytterligare en timmes grynings- och skymningsfas ingå.
the mean sex ratio of fully emerged and alive adults (as female or male fraction) in the control treatment of both generations should be at least 0,4, but not exceed 0,6; for each breeding cage the number of egg ropes in the controls of the 1st generation should be at least 0,6 per female added to the breeding cage;
Exponeringstid
the fraction of fertile egg ropes in each breeding cage of the controls of the 1st generation should be at least 0,6; at the end of the exposure period for both generations, pH and the dissolved oxygen concentration should be measured in each vessel.
Utformning med spikat sediment:
The oxygen concentration should be at least 60 % of the air saturation value (ASV [9]), and the pH of overlying water should be between 6 and 9 in all test vessels;
Exponeringsperioden för den första generationen inleds när testkemikalien spikas i det överliggande vattnet i testkärlen (dvs. en dag efter införandet av larver – för eventuella ändringar av exponeringsutformningen, se punkt 7).
the water temperature should not differ by more than ± 1,0 °C.
Exponeringen av den andra generationens larver inleds omedelbart, eftersom de har införts i ett sediment/vatten-system som redan är spikat.
Test vessels and breeding cages
Den maximala exponeringstiden för den första generationen är 27 dagar och för den andra generationen 28 dagar (den första generationens larver tillbringar en dag i kärlen utan exponering) för C. riparius och C. yoshimatsui.
The larvae are exposed in 600 ml glass beakers measuring ca.
Med tanke på överlappningen är testperioden ungefär 44 dagar totalt.
8,5 cm in diameter (see Appendix 5).
För C. dilutus är de maximala exponeringstiderna 64 respektive 65 dagar för första och andra generationens larver.
Other vessels are suitable, but they should guarantee a suitable depth of overlying water and sediment.
Den totala testperioden är ungefär 100 dagar.
The sediment surface should be sufficient to provide 2 to 3 cm2 per larvae.
Utformning med spikat sediment:
The ratio of the depth of the sediment layer to the depth of the overlying water should be ca.
exponeringen inleds i och med tillsättningen av larverna, och exponeringstiden är högst 28 dagar för båda generationerna för C. riparius och C. yoshimatsui och högst 65 dagar för båda generationerna för C. dilutus.
1:4.
Kläckning
Breeding cages (minimum 30 cm in all three dimensions) with a gauze (mesh size ca.
Utvecklingstiden och det totala antalet fullständigt kläckta levande han- och honmyggor bestäms för båda generationerna.
1 mm) on the top and one side of the cage as a minimum should be used (see Appendix 5).
Hanarna är lätta att känna igen på sina fjäderantenner och smala kroppsställning.
In each cage a 2 l crystallising dish, containing test water and sediment, is placed for oviposition.
Testkärlen med båda generationerna bör granskas minst tre gånger i veckan för att visuellt bedöma förekomsten av onormalt beteende hos larverna (t.ex. exemplar som lämnar sedimentet, ovanligt simbeteende) jämfört med kontrollen.
Also for the crystallising dish, the ratio of the depth of the sediment layer to the depth of the overlying water should be around 1:4.
Under kläckningstiden, som inleds ca tolv dagar efter att larver för C. riparius och C. yoshimatsui införts (efter tjugo dagar för C. dilutus), räknas och könsbestäms de kläckta myggorna minst en gång, men helst två gånger om dagen (tidig morgon och sen eftermiddag).
After egg ropes are collected from the crystallising dish they are placed into a 12-well microtiter plate (one rope per well containing at least 2,5 ml water from the spiked crystallising dish) after which the plates are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Efter identifieringen avlägsnas den första generationens myggor försiktigt från kärlen och överförs till en odlingsbehållare.
Other vessels suitable for keeping the egg ropes may also be used.
Den andra generationens myggor avlägsnas och dödas efter identifiering.
With the exception of the microtiter plates, all test vessels and other apparatus that will come into contact with the test system should be made entirely of glass or other chemically inert material (e.g. Polytetrafluoroethylene).
Alla äggband som lagts i den första generationens testkärl ska samlas in ett och ett och överföras tillsammans med minst 2,5 ml av testkärlens vatten till 12-brunnars mikrotiterplattor (eller annat lämpligt kärl) som täcks med lock för att förhindra betydande avdunstning.
The species to be used in the test is preferably Chironomus riparius.
Antalet döda larver och synliga puppor som inte har kläckts bör också registreras.
C. yoshimatsui may also be used.
Exempel på odlingsbehållare, testkärl och exhauster finns i tillägg 5.
C. dilutus is also suitable but more difficult to handle and requires a longer test period.
Reproduktion
Details of culturing methods are given in Appendix 2 for C. riparius.
Effekter på reproduktionen bedöms genom antalet äggband som produceras av den första generationens myggor och fertiliteten för dessa äggband.
Information on culture conditions are also available for C. dilutus (5) and C. yoshimatsui (14).
En gång per dag samlas äggbanden in från kristalliseringsskålen som placerats i varje odlingsbehållare.
Identification of the species should be confirmed before testing but is not required prior to every test if the organisms come from an in-house culture.
Äggbanden bör samlas in och överföras tillsammans med minst 2,5 ml av testkärlens vatten till 12-brunnars mikrotiterplattor (ett äggband i varje brunn) eller andra lämpliga kärl som täcks med lock för att förhindra betydande avdunstning.
Formulated sediment (also called reconstituted, artificial or synthetic sediment) should preferably be used.
Följande egenskaper registreras för varje äggband:
However, if natural sediment is used, it should be characterised (at least pH, organic carbon content, determination of other parameters such as C/N ratio and granulometry are also recommended) and should be free from any contamination and other organisms that may compete with, or consume chironomid larvae.
läggningsdag, storlek (normal, dvs. 1,0 ± 0,3 cm, eller liten, vanligtvis ≤ 0,5 cm) och struktur (normal = bananformad med spiralformad äggsnodd, eller onormal, t.ex. med rak äggsnodd) samt fertiliteten (fertilt eller sterilt).
It is also recommended, before testing, that sediments are conditioned for seven days under test conditions.
Under sex dagar efter läggningen bedöms fertiliteten hos varje äggband.
The following formulated sediment, as described in (1), is recommended (1) (20) (21):
Ett äggband anses vara fertilt när minst en tredjedel av äggen kläcks.
4-5 % (dry weight) peat:
Det totala antalet honor som tillsatts i odlingsbehållaren används för att beräkna antalet äggband per hona och antalet fertila äggband per hona.
as close to pH 5,5 to 6,0 as possible;
Om så krävs kan antalet ägg i ett äggband uppskattas utan att förstöra dem med hjälp av ringräkningsmetoden (se 32 och 33).
it is important to use peat in powder form, finely ground (particle size ≤ 1 mm) and only air dried;
Analysmätningar
20 % (dry weight) kaolin clay (kaolinite content preferably above 30 %);
Testkemikaliens koncentration
75-76 % (dry weight) quartz sand (fine sand should predominate with more than 50 per cent of the particles between 50 and 200 μm);
Som ett minimum bör prover av det överliggande vattnet, porvattnet och sedimentet analyseras i början av exponeringen (helst en timme efter tillsatsen när det gäller spikat vatten) och i slutet av testet, vid den högsta koncentrationen och en lägre koncentration.
Deionised water is added to obtain moisture of the final mixture in the range of 30–50 %;
Detta gäller för båda generationernas kärl.
Calcium carbonate of chemically pure quality (CaCO3) is added adjust the pH of the final mixture of the sediment to 7,0 ± 0,5;
När det gäller kristalliseringsskålarna i odlingsbehållaren analyseras endast det överliggande vattnet, eftersom det är vad äggbanden kommer i kontakt med (i upplägget med spikat sediment kan man överväga att göra en analytisk bekräftelse av koncentrationen i sedimentet).
Organic carbon content of the final mixture should be 2 % (± 0,5 %) and is to be adjusted by the use of appropriate amounts of peat and sand, according to (a) and (c).
Ytterligare mätningar av sedimentet, porvattnet eller det överliggande vattnet får utföras under testets gång om det anses nödvändigt.
The source of peat, kaolin clay and sand should be known.
Dessa bestämningar av testkemikaliens koncentration ger information om testkemikaliens sätt att reagera/fördelning i vatten/sediment-systemet.
The sediment components should be checked for the absence of chemical contamination (e.g. heavy metals, organochlorine compounds, organophosphorous compounds).
Provtagningen av sedimentet och porvattnet vid testets inledning samt under testets gång (se punkt 39) kräver ytterligare testkärl för att utföra analytiska bestämningar.
An example for the preparation of the formulated sediment is described in Appendix 3.
I upplägget med spikat vatten är det eventuellt inte nödvändigt att utföra mätningar i sedimentet om fördelningen av testkemikalien mellan vatten och sediment har fastställts tydligt under motsvarande betingelser (t.ex. förhållandet mellan sediment och vatten, appliceringstyp, sedimentets halt av organiskt kol), eller om de uppmätta koncentrationerna i det överliggande vattnet visar sig stadigt ligga inom 80–120 % av de nominella eller uppmätta startkoncentrationerna.
Mixing of dry constituents is also acceptable if it is demonstrated that after addition of overlying water a separation of sediment constituents (e.g. floating of peat particles) does not occur, and that the peat or the sediment is sufficiently conditioned.
Om mellanliggande mätningar görs (t.ex. dag 7 och/eller 14) och om analysen kräver stora prover som inte kan tas från testkärlen utan att testsystemet påverkas, bör de analytiska bestämningarna göras på prover från ytterligare testkärl som behandlas på samma sätt (inklusive förekomsten av testorganismer) men som inte används för biologiska observationer.
Any water which conforms to the chemical characteristics of acceptable dilution water as listed in Appendices 2 and 4 is suitable as test water.
I vissa fall är det eventuellt inte möjligt att analysera koncentrationerna i porvattnet därför att provvolymen är för liten.
Any suitable water, natural water (surface or ground water), reconstituted water (see Appendix 2) or dechlorinated tap water are acceptable as culturing water and test water, if chironomids will survive in it for the duration of the culturing and testing without showing signs of stress.
Fysikalisk-kemiska parametrar
At the start of the test, the pH of the test water should be between 6 and 9 and the total hardness not higher than 400 mg/l as CaCO3.
Mätning av pH, löst syre i testvattnet och temperatur i testkärlen och kristalliseringsskålarna bör utföras på lämpligt sätt (se punkt 10).
However, if there is an interaction suspected between hardness ions and the test chemical, lower hardness water should be used (and thus, Elendt Medium M4 should not be used in this situation).
Hårdhet och ammoniak bör mätas i kontrollerna samt i ett testkärl och en kristalliseringsskål vid den högsta koncentrationen i början och slutet av testet.
The same type of water should be used throughout the entire study.
Syftet med detta livscykeltest är att bestämma hur testkemikalien påverkar reproduktionen och, i två generationer, utvecklingshastigheten och det totala antalet fullständigt kläckta levande han- och honmyggor.
The water quality characteristics listed in Appendix 4 should be measured at least twice a year or when it is suspected that these characteristics may have changed significantly.
För andelen kläckta djur bör data rörande hanar och honor läggas samman.
Stock solutions — Spiked water
Om det inte finns några statistiskt signifikanta skillnader mellan känsligheten när det gäller utvecklingshastigheten för de båda könen var för sig kan resultaten för hanar och honor läggas samman för statistiska analyser.
a.
Effektkoncentrationerna uttryckta som koncentrationer i det överliggande vattnet (för spikat vatten) eller i sedimentet (för spikat sediment) beräknas vanligen på grundval av uppmätta koncentrationer vid exponeringens början (se punkt 38).
Test concentrations are calculated on the basis of water column concentrations, i.e. the water overlying the sediment.
För spikat vatten beräknas medelvärdet för varje behandling av de koncentrationer som normalt sett uppmäts i början av exponeringen i det överliggande vattnet i kärlen för båda generationerna och i kristalliseringsskålarna.
Test solutions of the chosen concentrations are usually prepared by dilution of a stock solution.
För spikat sediment beräknas medelvärdet av de koncentrationer som normalt sett uppmäts i början av exponeringen i kärlen för båda generationerna (och valfritt även i kristalliseringsskålarna) för varje behandling.
Stock solutions should preferably be prepared by dissolving the test chemical in test water.
För att beräkna en punktvis uppskattning, dvs. ett ECx-värde, kan statistiken per kärl och per odlingsbehållare användas som äkta replikat.
The use of solvents or dispersants may be required in some cases in order to produce a suitably concentrated stock solution.
Vid beräkning av konfidensintervallet för ett ECx-värde bör variabiliteten mellan kärlen beaktas, eller så bör man påvisa att variabiliteten är så liten att den kan försummas.
Examples of suitable solvents are acetone, ethylene glycol monoethyl ether, ethylene glycol dimethylether, dimethylformamide and triethylene glycol.
Om modellen anpassas med minsta kvadratmetoden bör transformation tillämpas på den kärlvisa statistiken i syfte att förbättra variansens homogenitet.
Dispersants which may be used are Cremophor RH40, Tween 80, methylcellulose 0,01 % and HCO-40.
ECx-värdena bör dock beräknas när responsen har transformerats tillbaka till det ursprungliga värdet (31).
The solubilising agent concentration in the final test medium should be minimal (i.e. ≤ 0,1 ml/l) and should be the same in all treatments.
När syftet med den statistiska analysen är att bestämma NOEC genom hypotestestning måste variabiliteten mellan kärlen beaktas, vilket garanteras om man använder ANOVA-metoder (t.ex.
When a solubilising agent is used, it should have no significant effects on survival as revealed by a solvent control in comparison with a negative (water) control.
Williams och Dunnetts testförfaranden).
However, every effort should be made to avoid the use of such materials.
Williams test kan vara lämpligt att använda när en monoton dos-respons förväntas i teorin, och Dunnetts test kan vara lämpligt om monotonitetshypotesen inte håller.
Stock solutions — Spiked sediment
Alternativt kan mer robusta tester (27) vara lämpliga i situationer där de vanliga ANOVA-antagandena inte gäller (31).
b.
Andelen kläckta djur
Spiked sediments of the chosen concentration are usually prepared by addition of a solution of the test chemical directly to the sediment.
Data rörande andelen kläckta djur är dikotoma (tvåpunktsfördelade) och kan analyseras genom Cochran-Armitages test som tillämpas på step-down-grund där en monoton dos-respons förväntas och dessa data stämmer överens med denna förväntning.
A stock solution of the test chemical dissolved in deionised water is mixed with the formulated sediment by rolling mill, feed mixer or hand mixing.
Om inte, kan Fishers exakta test eller Mantel-Haentzals med Bonferroni-Holm-korrigerade p-värden användas.
If poorly soluble in water, the test chemical can be dissolved in as small a volume as possible of a suitable organic solvent (e.g. hexane, acetone or chloroform).
Om det finns bevis på större variabilitet mellan replikaten inom samma koncentration än en binomial fördelning skulle utvisa (ofta kallad ’extra-binomial’ fördelning), bör man använda ett robust Cochran-Armitages test eller Fischers exakta test, såsom föreslås i (27).
This solution is then mixed with 10 g of fine quartz sand for each test vessel.
Summan av levande myggor (hanar plus honor) som kläckts per kärl, ne, bestäms och divideras med antalet tillsatta larver, na enligt följande:
The solvent is allowed to evaporate and it should be totally removed from sand;
ER andelen kläckta djur
the sand is then mixed with the suitable amount of sediment.
antalet levande myggor som kläckts per kärl
Only agents which volatilise readily can be used to solubilise, disperse or emulsify the test chemical.
antalet larver som tillsatts per kärl (normalt 20)
It should be born in mind that the sand provided by the test chemical and sand mixture, should be taken into account when preparing the sediment (i.e. the sediment should thus be prepared with less sand).
När ne är större än na (dvs. när mer än det planerade antalet larver oavsiktligt infördes) bör na göras lika med ne.
If necessary, subsamples can be analysed to determine degree of homogeneity.
Ett alternativt tillvägagångssätt, som bäst lämpar sig för stora prov när det finns extra-binomial varians, är att behandla antalet kläckta djur som en kontinuerlig respons och använda förfaranden som är förenliga med dessa data för antalet kläckta djur.
The test design relates to the selection of the number and spacing of the test concentrations, the number of vessels at each concentration, the number of larvae per vessel, the number of crystallising dishes and breeding cages.
I detta sammanhang definieras begreppet ’stort prov’ som ett prov där både antalet kläckta och antalet okläckta överstiger fem per replikatkärl.