natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Some chemical characteristics of acceptable dilution water are listed in Appendix 3.
Det är viktigt att se till att det inte uppstår mikrobtillväxt eller att vattnet blir grumligt.
Test solutions of the chosen concentrations are prepared by dilution of a stock solution.
Som en allmän vägledning kan sägas att den dagliga fodergivan kan delas upp i två eller tre lika stora delar för flera utfodringstillfällen per dag, med minst tre timmar mellan varje utfodring.
The stock solution should preferably be prepared by simply mixing or agitating the test chemical in dilution water by using mechanical means (e.g. stirring or ultrasonication).
Det kan vara godtagbart med en enda större giva, särskilt under veckosluten.
Saturation columns (solubility columns) can be used for achieving a suitable concentrated stock solution.
Fiskarna ska inte ges något foder under de tolv timmar som föregår provtagningen/obduktionen.
The use of a solvent carrier is not recommended.
Fiskfodret bör utvärderas med avseende på förekomst av föroreningar såsom bekämpningsmedel som innehåller organiska klorföreningar, polycykliska aromatiska kolväten (PAH) och polyklorerade bifenyler (PCB).
However, in case a solvent is necessary, a solvent control should be run in parallel, at the same solvent concentration as the chemical treatments.
Man bör undvika att ge foder som har en hög nivå av fytoöstrogener som kan äventyra testresponsen för kända östrogenagonister (t.ex.
For difficult test chemicals, a solvent may be technically the best solution;
17-beta-östradiol).
the OECD Guidance Document on aquatic toxicity testing of difficult substances and mixtures should be consulted (22).
Oätet foder och fekalt material ska avlägsnas från testkärlen minst två gånger i veckan, t.ex. genom omsorgsfull rengöring av akvariets botten med hjälp av en hävert.
The choice of solvent will be determined by the chemical properties of the chemical.
Fotoperioden och vattentemperaturen bör vara anpassade efter den art som testas (se tillägg 2).
The OECD Guidance Document recommends a maximum of 100 μl/l, which should be observed.
Frekvens för analytiska bestämningar och mätningar
However a recent review (23) highlighted additional concerns when using solvents for endocrine activity testing.
Innan exponeringstiden inleds bör man se till att det kemiska tillsatssystemet fungerar på lämpligt sätt.
Therefore it is recommended that the solvent concentration, if necessary, is minimised wherever technically feasible (dependent on the physical-chemical properties of the test chemical).
Alla nödvändiga analysmetoder bör fastställas, och man bör ha tillräckliga kunskaper om den kemiska stabiliteten i testsystemet.
A flow-through test system will be used.
Under testets gång bestäms testkemikaliens koncentrationer med jämna mellanrum, enligt följande:
Such a system continually dispenses and dilutes a stock solution of the test chemical (e.g. metering pump, proportional diluter, saturator system) in order to deliver a series of concentrations to the test chambers.
flödeshastigheten för stamlösningarna med utspädnings- och testämne bör helst kontrolleras dagligen men minst två gånger per vecka, och bör inte variera med mer än 10 % genom hela testet.
The flow rates of stock solutions and dilution water should be checked at intervals, preferably daily, during the test and should not vary by more than 10 % throughout the test.
Det rekommenderas att de faktiska testkoncentrationerna mäts i samtliga kärl vid testets början och därefter varje vecka.
Care should be taken to avoid the use of low-grade plastic tubing or other materials that may contain biologically active chemicals.
Det rekommenderas att resultaten baseras på de uppmätta koncentrationerna.
When selecting the material for the flow-through system, possible adsorption of the test chemical to this material should be considered.
Om koncentrationen av testkemikalien i lösningen på ett tillfredsställande sätt har hållits inom ± 20 % av den nominella koncentrationen under hela testperioden kan resultaten baseras antingen på nominella eller på uppmätta värden.
Holding of fish
Proverna kan behöva filtreras (t.ex. genom porstorlek 0,45 μm) eller centrifugeras.
Test fish should be selected from a laboratory population, preferably from a single stock, which has been acclimated for at least two weeks prior to the test under conditions of water quality and illumination similar to those used in the test.
I sådana fall rekommenderas centrifugering.
mortalities of greater than 10 % of population in seven days:
Den totala hårdheten och alkaliniteten bör mätas i kontrollerna och i ett kärl med den högsta koncentrationen minst en gång per vecka.
reject the entire batch;
Temperaturen ska helst övervakas kontinuerligt i minst ett testkärl.
mortalities of between 5 % and 10 % of population:
Ett antal allmänna (t.ex. överlevnad) och grundläggande biologiska responser (t.ex. vitellogeninnivåer) bedöms under testets gång eller vid testets slut.
acclimation for seven additional days;
Mätningen och utvärderingen av dessa endpoints och deras användbarhet beskrivs nedan.
if more than 5 % mortality during second seven days, reject the entire batch;
Överlevnad
mortalities of less than 5 % of population in seven days:
Fiskarna bör undersökas en gång per dag under testperioden.
accept the batch
All mortalitet bör registreras, och döda fiskar bör avlägsnas så snart som möjligt.
Fish should not receive treatment for disease during the acclimation period, in the pre-exposure period, or during the exposure period.
Döda fiskar ska inte ersättas, vare sig i kontrollerna eller behandlingskärlen.
Pre-exposure and selection of fish
Könet på de fiskar som dött under testet bör fastställas genom makroskopisk utvärdering av könskörtlarna.
A one-week pre-exposure period is recommended, with animals placed in vessels similar to the actual test.
Beteende och utseende
Fish should be fed ad libitum throughout the holding period and during the exposure phase.
Allt onormalt beteende (i jämförelse med kontrollerna) ska registreras.
The exposure phase is started with sexually dimorphic adult fish from a laboratory supply of reproductively mature animals (e.g. with clear secondary sexual characteristics visible as far as fathead minnow and medaka are concerned), and actively spawning.
Detta kan omfatta tecken på allmän toxicitet, inklusive hyperventilering, okoordinerat simbeteende, förlust av balansen och atypisk passivitet eller atypiskt ätbeteende.
For general guidance only (and not to be considered in isolation from observing the actual reproductive status of a given batch of fish), fathead minnows should be approximately 20 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 25 ± 2 °C throughout their lifespan.
Dessutom bör yttre abnormiteter (t.ex. blödningar eller missfärgning) noteras.
Japanese medaka should be approximately 16 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 25 ± 2 °C throughout their lifespan.
Sådana tecken på toxicitet bör övervägas noga vid tolkningen av data eftersom de kan vara tecken på koncentrationer vid vilka biomarkörerna för endokrin aktivitet inte är tillförlitliga.
TEST DESIGN
Eftersom vissa aspekter av utseendet (huvudsakligen färgen) snabbt kan ändras vid hantering är det viktigt att kvalitativa iakttagelser görs innan djuren avlägsnas från testsystemet.
Three concentrations of the test chemical, one control (water) and, if needed, one solvent control are used.
Erfarenheterna hittills med knölskallelöja tyder på att vissa endokrint aktiva kemikalier kan till en början åstadkomma förändringar av följande yttre egenskaper:
The data may be analysed in order to determine statistically significant differences between treatment and control responses.
kroppsfärg (ljus eller mörk), färgmönster (förekomst av vertikala strimmor) och kroppsform (huvudet och bröstpartiet).
These analyses will inform whether further longer term testing for adverse effects (namely, survival, development, growth and reproduction) is required for the chemical, rather than for use in risk assessment (24).
Därför bör observationer av fiskarnas fysiska utseende göras under testets gång och vid studiens slut.
For zebrafish and medaka, on day 21 of the experiment, males and females from each treatment level (5 males and 5 females in each of the two replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics, where applicable.
Human avlivning av fisk
For fathead minnow, on day 21 of exposure, males and females (2 males and 4 females in each of the four replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics.
På dag 21, dvs. vid slutet av exponeringen, bör fiskarna avlivas med lämpliga mängder trikain (trikainmetansulfonat, metakain, MS-222 (CAS-nr 886-86-2), 100–500 mg/l buffrat med 300 mg/l NaHCO3 (natriumvätekarbonat, CAS-nr 144-55-8) för att minska irritationen på slemhinnorna.
For the purposes of this test, the highest test concentration should be set by the maximum tolerated concentration (MTC) determined from a range finder or from other toxicity data, or 10 mg/l, or the maximum solubility in water, whichever is lowest.
Prov tas sedan på blod eller vävnad för bestämning av vitellogenin, så som förklarades i avsnittet om vitellogenin.
The MTC is defined as the highest test concentration of the chemical which results in less than 10 % mortality.
Observation av sekundära könskaraktärer
Using this approach assumes that there are existing empirical acute toxicity data or other toxicity data from which the MTC can be estimated.
Vissa endokrint aktiva kemikalier kan medföra förändringar i särskilda sekundära könskaraktärer (antal parningstuberkler hos knölskallelöjhanar, papillära utväxter hos risfiskhanar).
Estimating the MTC can be inexact and typically requires some professional judgment.
Framför allt kan kemikalier med vissa verkningsmekanismer ge upphov till en onormal förekomst av sekundära könskaraktärer hos djur av det motsatta könet.
Three test concentrations, spaced by a constant factor not exceeding 10, and a dilution-water control (and solvent control if necessary) are required.
Till exempel kan agonister som påverkar androgenreceptorer, såsom trenbolon, metyltestosteron och dihydrotestosteron, göra så att honor av knölskallelöja utvecklar tydliga parningstuberkler och att risfiskhonor utvecklar papillära utväxter (11, 20, 21).
A range of spacing factors between 3,2 and 10 is recommended.
Det har också rapporterats att agonister som påverkar östrogenreceptorer kan minska antalet parningstuberkler och storleken på den dorsala nackvalken hos vuxna hanar (25, 26).
Selection and weighing of test fish
Sådana makromorfologiska iakttagelser kan ge användbar kvalitativ och kvantitativ information som kan påverka eventuella framtida krav för test på fisk.
It is important to minimise variation in weight of the fish at the beginning of the assay.
Antalet och storleken på parningstuberklerna hos knölskallelöja och de papillära utväxterna hos risfiskar kan mätas direkt eller mer praktiskt på konserverade exemplar.
Suitable size ranges for the different species recommended for use in this test are given in Appendix 2.
Rekommenderade förfaranden för utvärdering av sekundära könskaraktärer hos knölskallelöja och risfisk finns i bilaga 5A respektive 5B.
For the whole batch of fish used in the test, the range in individual weights for male and female fish at the start of the test should be kept, if possible, within ± 20 % of the arithmetic mean weight of the same sex.
Blod samlas in från den kaudala artären/venen med ett hepariniserat mikrohematokrit-centrifugerat kapillärrör, eller alternativt genom hjärtpunktering med en spruta.
It is recommended to weigh a subsample of the fish stock before the test in order to estimate the mean weight.
Beroende på fiskens storlek kan man i allmänhet samla in mellan 5–60 μl blod per individ för knölskallelöja, och 5–15 μl per individ för sebrafisk.
Conditions of exposure
Plasman avskiljs från blodet genom centrifugering och lagras med proteashämmare vid – 80 °C tills de analyseras med avseende på vitellogenin.
The test duration is 21 days, following a pre-exposure period.
Alternativt använder man levern hos risfiskar, och för sebrafiskar kan huvud/stjärthomogenatet användas som vävnadskälla för bestämning av vitellogenin (tillägg 6).
The recommended pre-exposure period is one week.
Mätningen av VTG bör baseras på en validerad homolog ELISA-metod med användning av en homolog VTG-standard och homologa antikroppar.
Fish should be fed ad libitum with an appropriate food (Appendix 2) at a sufficient rate to maintain body condition.
Det rekommenderas att man använder en metod som kan påvisa VTG-nivåer som är så låga som ett fåtal ng/ml plasma (eller ng/mg vävnad), vilket är bakgrundsnivån hos oexponerade hanfiskar.
Care should be taken to avoid microbial growth and water turbidity.
Kvalitetskontrollen av vitellogeninanalysen genomförs med hjälp av standarder, blankprov och analys av minst två replikat.
As a general guidance, the daily ration may be divided into two or three equal portions for multiple feeds per day, separated by at least three hours between each feed.
För varje ELISA-metod bör ett test för matriseffekt (effekten av provutspädning) genomföras för att bestämma den minsta utspädningsfaktorn för proven.
A single larger ration is acceptable particularly for weekends.
Varje ELISA-platta som används för VTG-tester bör omfatta följande kvalitetskontrollprov:
Food should be withheld from the fish for 12 hours prior to sampling/necropsy.
minst sex kalibreringsstandarder som täcker intervallet för de väntade vitellogeninkoncentrationerna, och minst ett icke-specifikt blankprov för bindningsbestämning (som analyseras i två exemplar).
Fish food should be evaluated for the presence of contaminants such as organochlorine pesticides, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), polychlorinated biphenyls (PCBs).
Absorbansen i dessa blankprov bör vara mindre än 5 % av den högsta absorbansen i kalibreringsstandarderna.
Food with an elevated level of phytoestrogens that would compromise the response of the assay to known oestrogen agonist (e.g. 17-beta estradiol) should be avoided.
Minst två alikvoter (brunnsduplikat) av varje provutspädning analyseras.
Uneaten food and faecal material should be removed from the test vessels at least twice weekly, e.g. by carefully cleaning the bottom of each tank using a siphon.
Brunnsduplikat som avviker med mer än 20 % bör analyseras på nytt.
The photoperiod and water temperature should be appropriate for the test species (see Appendix 2).
Korrelationskoefficienten (R2) för kalibreringskurvor ska vara högre än 0,99.
Frequency of analytical determinations and measurements
En hög korrelation är dock inte tillräckligt för att garantera en adekvat prediktion av koncentrationerna inom alla intervaller.
Prior to initiation of the exposure period, proper function of the chemical delivery system should be ensured.
Förutom att kalibreringskurvan har en tillräckligt hög korrelationsgrad bör koncentrationen för varje standard, som beräknats utifrån kalibreringskurvan, ligga på mellan 70 och 120 % av dess nominella koncentration.
All analytical methods needed should be established, including sufficient knowledge on the chemical stability in the test system.
Om de nominella koncentrationerna tenderar att avvika från kalibreringens regressionslinje (t.ex. vid lägre koncentrationer) kan det vara nödvändigt att dela upp kalibreringskurvan i låga respektive höga intervaller eller att använda en icke-linjär modell som gör att absorbansdata kan passas in på ett lämpligt sätt.
During the test, the concentrations of the test chemical are determined at regular intervals, as follows:
Om kurvan delas upp bör R2 > 0,99 gälla för båda linjesegmenten.
the flow rates of diluent and toxicant stock solution should be checked preferably daily but as a minimum twice per week, and should not vary by more than 10 % throughout the test.
Detektionsgränsen (LOD) definieras som koncentrationen i den lägsta analytiska standarden, och kvantifieringsgränsen (LOQ) definieras som koncentrationen i den lägsta analytiska standarden multiplicerad med den lägsta utspädningsfaktorn.
It is recommended that the actual test chemical concentrations be measured in all vessels at the start of the test and at weekly intervals thereafter.
Varje dag som vitellogenintester utförs ska ett berikningsprov analyseras som beretts med en referensstandard för tester (inter-assay) (tillägg 7).
It is recommended that results be based on measured concentrations.
Förhållandet mellan den förväntade koncentrationen och den uppmätta koncentrationen rapporteras tillsammans med resultaten från varje försöksomgång som utförs på samma dag.
However, if concentration of the test chemical in solution has been satisfactorily maintained within ± 20 % of the nominal concentration throughout the test, then the results can either be based on nominal or measured values.
Utvärdering av biomarkörresponser med variansanalys (ANOVA)
Samples may need to be filtered (e.g., using a 0,45 μm pore size) or centrifuged.
För att identifiera en kemikalies potentiella endokrina aktivitet jämförs responser mellan behandlings- och kontrollgrupperna med hjälp av variansanalys (ANOVA).
If needed, then centrifugation is the recommended procedure.
Om en lösningsmedelskontroll används bör ett lämpligt statistiskt test utföras mellan utspädningsvatten- och lösningsmedelskontrollerna för varje endpoint.
However, if the test material does not adsorb to filters, filtration may also be acceptable.
Vägledning om hur man ska hantera data rörande utspädningsvatten- och lösningsmedelskontrollerna i den efterföljande statistiska analysen finns i OECD, 2006c (27).
During the test, dissolved oxygen, temperature, and pH should be measured in all test vessels at least once per week.
Alla biologiska responsdata bör analyseras och rapporteras separat per kön.
Total hardness and alkalinity should be measured in the controls and one vessel at the highest concentration at least once per week.
Om de antaganden som krävs för parametriska metoder inte uppfylls – onormal fördelning (t.ex.
Temperature should preferably be monitored continuously in at least one test vessel.
Shapiro-Wilks test) eller heterogen varians (Bartletts test eller Levenes test) – bör man överväga att homogenisera varianserna genom transformering av data före ANOVA utförs.
A number of general (e.g. survival) and core biological responses (e.g. vitellogenin levels) are assessed over the course of the assay or at termination of the assay.
Alternativt kan en viktad ANOVA övervägas.
Measurement and evaluation of these endpoints and their utility are described below.
Dunnetts test (parametriserade) på en eller flera parvisa jämförelser eller Mann-Whitneys test med parametrisk justering (Bonferroni) kan användas för icke-monotona dos-responser.
Survival
Andra statistiska tester kan användas (t.ex.
Fish should be examined daily during the test period and any mortality should be recorded and the dead fish removed as soon as possible.
Jonckheere-Terpstras test eller Williams test) om dos-responsen är approximativt monoton.
Dead fish should not be replaced in either the control or treatment vessels.
Det statistiska flödesschemat i bilaga 8 kan vara till hjälp när man beslutar vilket statistiskt test som är det mest ändamålsenliga att använda.
Sex of fish that die during the test should be determined by macroscopic evaluation of the gonads.
Ytterligare information kan också erhållas från OECD:s dokument Current Approaches to Statistical Analysis of Ecotoxicity Data (27).
Behaviour and appearance
Rapportering av testresultat
Any abnormal behaviour (relative to controls) should be noted;
Studiedata bör omfatta följande:
this might include signs of general toxicity including hyperventilation, uncoordinated swimming, loss of equilibrium, and atypical quiescence or feeding.
Testanläggning:
Additionally external abnormalities (such as haemorrhage, discoloration) should be noted.
ansvarig personal och deras studieansvar,
Such signs of toxicity should be considered carefully during data interpretation since they may indicate concentrations at which biomarkers of endocrine activity are not reliable.
varje laboratorium ska ha demonstrerat sina kunskaper i användningen av ett antal representativa kemikalier.
Such behavioural observations may also provide useful qualitative information to inform potential future fish testing requirements.
karakterisering av testkemikalien,
Because some aspects of appearance (primarily colour) can change quickly with handling, it is important that qualitative observations be made prior to removal of animals from the test system.
information om stabilitet och biologisk nedbrytbarhet.
Experience to date with fathead minnows suggests that some endocrine active chemicals may initially induce changes in the following external characteristics:
Lösningsmedel:
body colour (light or dark), coloration patterns (presence of vertical bands), and body shape (head and pectoral region).
karakterisering av lösningsmedlet (beskaffenhet, använd koncentration),
Therefore observations of physical appearance of the fish should be made over the course of the test, and at conclusion of the study
motivering av valet av lösningsmedel (om annat än vatten).
Humane killing of fish
Försöksdjur:
At day 21, i.e. at termination of the exposure, the fish should be euthanized with appropriate amounts of Tricaine (Tricaine methane sulfonate, Metacain, MS-222 (CAS 886-86-2), 100-500 mg/l buffered with 300 mg/l NaHCO3 (sodium bicarbonate, CAS 144-55-8) to reduce mucous membrane irritation; blood or tissue is then sampled for vitellogenin determination, as explained in the Vitellogenin section.
art och stam,
Observation of secondary sex characteristics
leverantör och specifik leverantörsanläggning,
Some endocrine active chemicals may induce changes in specialised secondary sex characteristics (number of nuptial tubercles in male fathead minnow, papillary processes in male medaka).
fiskens ålder vid testets början och dess reproduktiva status samt lekstatus,
Notably, chemicals with certain modes of action may cause abnormal occurrence of secondary sex characteristic in animals of the opposite sex;
uppgifter om förfarandet för acklimatisering av djuren,
for example, androgen receptor agonists, such as trenbolone, methyltestosterone and dihydrotestosterone, can cause female fathead minnows to develop pronounced nuptial tubercles or female medaka to develop papillary processes (11, 20, 21).
fiskens kroppsvikt vid början av exponeringen (från ett delprov av fiskbeståndet).
It also has been reported that oestrogen receptor agonists can decrease nuptial tubercle numbers and size of the dorsal nape pad in adult males (25, 26).
Testbetingelser:
Such gross morphological observations may provide useful qualitative and quantitative information to inform potential future fish testing requirements.
testförfarande som har använts (typ av test, fisktäthet, antalstäthet, osv.),
The number and size of nuptial tubercles in fathead minnow and papillary processes in medaka can be quantified directly or more practically in preserved specimens.
metod för beredning av stamlösningar och flödeshastighet,
Recommended procedures for the evaluation of secondary sex characteristics in fathead minnow and medaka are available from Appendix 5A and Appendix 5B, respectively.
nominella testkoncentrationer, uppmätta koncentrationer av testlösningarna varje vecka och den använda analysmetoden, medelvärden av de uppmätta värdena och standardavvikelserna i testkärlen samt bevis för att mätningarna hänför sig till testkemikaliens koncentrationer i en äkta lösning,
Vitellogenin (VTG)
utspädningsvattnets egenskaper (t.ex. pH, hårdhet, alkalinitet, temperatur, halten löst syre, restklornivåer, halten organiskt kol, suspenderade fasta ämnen och eventuella andra gjorda mätningar), vattenkvaliteten i testkärlen:
Blood is collected from the caudal artery/vein with a heparinised microhematocrit capillary tubule, or alternatively by cardiac puncture with a syringe.
pH, hårdhet, temperatur och halten löst syre,