natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The data may be analysed in order to determine statistically significant differences between treatment and control responses.
Om mortaliteten under sju dagar är lägre än 5 % av beståndet kan beståndet godtas.
These analyses will inform whether further longer term testing for adverse effects (namely, survival, development, growth and reproduction) is required for the chemical, rather than for use in risk assessment (25).
Fiskarna bör inte ges någon behandling mot sjukdomar under acklimatiseringsperioden, under förexponeringen, eller under exponeringsperioden.
For zebrafish, on day 21 of the experiment, males and females from each treatment level (5 males and 5 females in each of the two replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin.
Förexponering och urval av fisk
For medaka, on day 21 of the experiment, males and females from each treatment level (3 males and 3 females in each of the four replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics.
En förexponeringsperiod på en till två veckor rekommenderas då djuren placeras i kärl som liknar de som används i det verkliga testet.
For fathead minnow, on day 21 of exposure, males and females (2 males and 4 females in each of the four replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics.
Fiskarna bör utfodras ad libitum under hela djurhållningsperioden och under exponeringsfasen.
Quantitative assessment of fecundity is required, and gonadal tissues should be fixed in whole or dissected for potential histopathological evaluation, if required.
Exponeringen inleds med sexuellt dimorf vuxen fisk från en laboratoriesamling med könsmogna djur (t.ex. med tydligt synbara sekundära könskaraktärer när det gäller knölskallelöja och medaka) som aktivt leker.
Selection of test concentrations
För allmän vägledning (detta bör inte betraktas isolerat från observationer av ett fiskbestånds faktiska reproduktiva status), bör knölskallelöjorna vara ungefär 20 (± 2) veckor gamla, förutsatt att de har odlats vid en temperatur på 25 ± 2 °C under hela sin livstid.
For the purposes of this test, the highest test concentration should be set by the maximum tolerated concentration (MTC) determined from a range finder or from other toxicity data, or 10 mg/l, or the maximum solubility in water, whichever is lowest.
Medaka bör vara ungefär 16 (± 2) veckor, förutsatt att de har odlats vid en temperatur på 25 ±2 °C under hela sin livstid.
The MTC is defined as the highest test concentration of the chemical which results in less than 10 % mortality.
Sebrafiskar bör vara ungefär 16 (± 2) veckor, förutsatt att de har odlats vid en temperatur på 26 ± 2 °C under hela sin livstid.
Using this approach assumes that there are existing empirical acute toxicity data or other toxicity data from which the MTC can be estimated.
Äggproduktionen bör utvärderas dagligen under förexponeringsfasen.
Estimating the MTC can be inexact and typically requires some professional judgment.
Det rekommenderas att lek observeras i alla replikatkärl innan de tas med i testets exponeringsfas.
Three test concentrations, spaced by a constant factor not exceeding 10, and a dilution-water control (and solvent control if necessary) are required.
Det är inte möjligt att ge kvantitativ vägledning om önskvärd daglig äggproduktion i detta skede, men det är relativt vanligt att observera genomsnittlig lek på > 10 ägg/hona/dag för varje art.
A range of spacing factors between 3,2 and 10 is recommended.
En randomiserad blockutformning baserad på äggproduktionen bör användas för att fördela replikaten till de olika testnivåerna.
Selection and weighing of test fish
Syftet är att säkerställa en balanserad fördelning av replikaten.
It is important to minimise variation in weight of the fish at the beginning of the assay.
TESTETS UTFORMNING
Suitable size ranges for the different species recommended for use in this test are given in Appendix 2.
Tre koncentrationer av testkemikalien, en kontroll (vatten) och, vid behov, en lösningsmedelskontroll används.
For the whole batch of fish used in the test, the range in individual weights for male and female fish at the start of the test should be kept, if possible, within ± 20 % of the arithmetic mean weight of the same sex.
Uppgifterna kan analyseras för att fastställa statistiskt signifikanta skillnader mellan responsen i behandlingarna och i kontrollen.
It is recommended to weigh a subsample of the fish stock before the test in order to estimate the mean weight.
Dessa analyser kommer att klargöra huruvida ytterligare testning av mer långsiktiga negativa effekter (dvs. överlevnad, utveckling, tillväxt och reproduktion) krävs för kemikalien, snarare än att de används för riskbedömning (25).
The test duration is 21 days, following a pre-exposure period.
För sebrafisk undersöks på dag 21 av försöket hanar och honor från varje behandlingsnivå (fem hanar och fem honor i vart och ett av de två replikaten) och från kontrollen eller kontrollerna för mätning av vitellogenin.
The recommended pre-exposure period is one to two weeks.
För medaka undersöks på dag 21 av försöket hanar och honor från varje behandlingsnivå (tre hanar och tre honor i var och en av de fyra replikaten) och från kontrollen eller kontrollerna för mätning av vitellogenin och sekundära könskaraktärer.
Fish should be fed ad libitum with an appropriate food (Appendix 2) at a sufficient rate to maintain body condition.
För knölskallelöja undersöks på dag 21 av exponeringen hanar och honor (två hanar och fyra honor i vart och ett av de fyra replikaten) och från kontrollen eller kontrollerna för mätning av vitellogenin och sekundära könskaraktärer.
Care should be taken to avoid microbial growth and water turbidity.
En kvantitativ bedömning av fruktsamheten krävs, och könskörtelvävnaderna bör fixeras hela eller dissekerade för eventuell histopatologisk utvärdering, om så är nödvändigt.
As a general guidance, the daily ration may be divided into two or three equal portions for multiple feeds per day, separated by at least three hours between each feed.
Val av testkoncentrationer
A single larger ration is acceptable particularly for weekends.
Vid utförandet av detta prov bör den högsta testkoncentrationen fastställas utifrån den högsta tolererade koncentrationen (MTC), vilken bestäms på grundval av ett preliminärt test eller andra uppgifter om toxicitet, eller 10 mg/l, eller högsta löslighet i vatten, beroende på vilket som är lägst.
Food should be withheld from the fish for 12 hours prior to sampling/necropsy.
MTC definieras som den högsta testade koncentrationen av testkemikalien som leder till mindre än 10 % dödlighet.
Fish food should be evaluated for the presence of contaminants such as organochlorine pesticides, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), polychlorinated biphenyls (PCBs).
Denna metod förutsätter att det finns empiriska uppgifter om akut toxicitet eller toxikologiska uppgifter utifrån vilka MTC kan uppskattas.
Food with an elevated level of phytoestrogens that would compromise the response of the assay to known oestrogen agonist (e.g. 17β- estradiol) should be avoided.
Uppskattningar av MTC-koncentrationen kan vara otillförlitliga och kräver vanligen ett visst mått av fackmässigt omdöme.
Uneaten food and faecal material should be removed from the test vessels at least twice weekly, e.g. by carefully cleaning the bottom of each tank using a siphon.
För detta krävs tre testkoncentrationer som skiljer sig åt med en konstant faktor som inte överstiger 10 och en kontroll med utspädningsvatten (och en lösningsmedelskontroll vid behov).
Prior to initiation of the exposure period, proper function of the chemical delivery system should be ensured.
Ett intervall för spridningsfaktorer på mellan 3,2 och 10 rekommenderas.
All analytical methods needed should be established, including sufficient knowledge on the chemical stability in the test system.
Val och vägning av testfiskarna
During the test, the concentrations of the test chemical are determined at regular intervals, as follows: the flow rates of diluent and toxicant stock solution should be checked preferably daily but as a minimum twice per week, and should not vary by more than 10 % throughout the test.
Det är viktigt att minimera fiskarnas variationer i vikt vid början av testet.
It is recommended that the actual test chemical concentrations be measured in all vessels at the start of the test and at weekly intervals thereafter.
I tillägg 2 anges lämpliga storleksintervaller för de arter som rekommenderas för användning i detta test.
It is recommended that results be based on measured concentrations.
För hela det fiskbestånd som används i testet bör variationen mellan individernas vikt för hanar och honor vid testets början om möjligt hållas inom ± 20 % av den aritmetiska medelvikten för samma kön.
However, if concentration of the test chemical in solution has been satisfactorily maintained within ±20 % of the nominal concentration throughout the test, then the results can either be based on nominal or measured values.
Det rekommenderas att ett delprov av fiskbeståndet vägs före testet i syfte att uppskatta medelvikten.
Samples may need to be filtered (e.g. using a 0,45 μm pore size) or centrifuged.
Testperiodens längd är 21 dagar efter en förexponeringsperiod.
If needed, then centrifugation is the recommended procedure.
Den rekommenderade förexponeringsperioden är en till två veckor.
However, if the test material does not adsorb to filters, filtration may also be acceptable.
Fiskarna bör utfodras ad libitum med lämpligt foder (tillägg 2) i tillräcklig mängd för att upprätthålla kroppskonditionen.
A number of general (e.g. survival) and biological responses (e.g. VTG levels) are assessed over the course of the assay or at termination of the assay.
En enda större giva kan godtas, särskilt under veckosluten.
The daily quantitative monitoring of fecundity is required.
Fiskarna ska inte ges något foder under de tolv timmar som föregår provtagningen/obduktionen.
Survival
Man bör undvika att ge foder som har en hög nivå av fytoöstrogener som kan äventyra testresponsen för kända östrogenagonister (t.ex.
Fish should be examined daily during the test period and any mortality should be recorded and the dead fish removed as soon as possible.
17b-östradiol).
Dead fish should not be replaced in either the control or treatment vessels.
Oätet foder och fekalt material ska avlägsnas från testkärlen minst två gånger i veckan, t.ex. genom omsorgsfull rengöring av akvariets botten med hjälp av en hävert.
Sex of fish that die during the test should be determined by macroscopic evaluation of the gonads.
Innan exponeringstiden inleds bör man se till att det kemiska tillsatssystemet fungerar på lämpligt sätt.
Behaviour and appearance
Alla nödvändiga analysmetoder bör fastställas, och man bör ha tillräckliga kunskaper om den kemiska stabiliteten i testsystemet.
Any abnormal behaviour (relative to controls) should be noted; this might include signs of general toxicity including hyperventilation, uncoordinated swimming, loss of equilibrium, and atypical quiescence or feeding.
Under testets gång bestäms testkemikaliens koncentrationer med jämna mellanrum, enligt följande: flödeshastigheten för stamlösningarna med utspädnings- och testämne bör helst kontrolleras dagligen men minst två gånger per vecka, och bör inte variera med mer än 10 % genom hela testet.
Additionally external abnormalities (such as haemorrhage, discoloration) should be noted.
Det rekommenderas att de faktiska testkoncentrationerna mäts i samtliga kärl vid testets början och därefter varje vecka.
Such behavioural observations may also provide useful qualitative information to inform potential future fish testing requirements.
Om koncentrationen av testkemikalien i lösningen på ett tillfredsställande sätt har hållits inom ± 20 % av den nominella koncentrationen under hela testperioden kan resultaten baseras antingen på nominella eller uppmätta värden.
Because some aspects of appearance (primarily colour) can change quickly with handling, it is important that qualitative observations be made prior to removal of animals from the test system.
I sådana fall rekommenderas centrifugering.
Experience to date with fathead minnows suggests that some endocrine active chemicals may initially induce changes in the following external characteristics: body colour (light or dark), coloration patterns (presence of vertical bands), and body shape (head and pectoral region).
Om testmaterialet inte adsorberas på filter kan dock även filtrering godtas.
Daily quantitative observations of spawning should be recorded on a replicate basis.
Ett antal allmänna (t.ex. överlevnad) och biologiska responser (t.ex.
Egg production should be recorded as the number of eggs/surviving female/day on a replicate basis.
VTG-nivåer) bedöms under testets gång eller vid testets slut.
Eggs will be removed daily from the test chambers.
Daglig kvantitativ övervakning av fruktsamheten krävs.
Appendix 4 gives further details of recommended spawning substrates for zebrafish (Appendix 4A) and fathead minnow (Appendix 4B).
Överlevnad
It is not considered necessary to provide spawning substrate for medaka.
Fiskarna bör undersökas en gång per dag under testperioden.
Observation of secondary sex characteristics
Könet på de fiskar som dött under testet bör fastställas genom makroskopisk utvärdering av könskörtlarna.
Notably, chemicals with certain modes of action may cause abnormal occurrence of secondary sex characteristic in animals of the opposite sex; for example, androgen receptor agonists, such as trenbolone, methyltestosterone and dihydrotestosterone, can cause female fathead minnows to develop pronounced nuptial tubercles or female medaka to develop papillary processes (11, 20, 21).
Allt onormalt beteende (i jämförelse med kontrollerna) ska registreras.
Recommended procedures for the evaluation of secondary sex characteristics in fathead minnow and medaka are available from Appendix 5A and Appendix 5B, respectively.
Sådana observationer rörande beteendet kan också tillhandahålla kvalitativ information som påverkar framtida krav för tester på fisk.
Blood is collected from the caudal artery/vein with a heparinised microhematocrit capillary tubule, or alternatively by cardiac puncture with a syringe.
Eftersom vissa aspekter av utseendet (huvudsakligen färgen) snabbt kan ändras vid hantering är det viktigt att kvalitativa iakttagelser görs innan djuren avlägsnas från testsystemet.
Depending upon the size of the fish, collectable blood volumes generally range from 5 to 60 μl per individual for fathead minnows and 5-15 μl per individual for zebrafish.
Erfarenheterna hittills med knölskallelöja tyder på att vissa endokrint aktiva kemikalier kan till en början åstadkomma förändringar av följande yttre egenskaper: kroppsfärg (ljus eller mörk), färgmönster (förekomst av vertikala strimmor) och kroppsform (huvudet och det pektorala området).
Plasma is separated from the blood via centrifugation, and stored with protease inhibitors at – 80 °C, until analysed for VTG.
Därför bör observationer av fiskarnas fysiska utseende göras under testets gång och vid studiens slut.
The measurement of VTG should be based upon a validated homologous ELISA method, using homologous VTG standard and homologous antibodies.
Dagliga kvantitativa observationer av lek bör registreras per replikat.
It is recommended to use a method capable to detect VTG levels as low as few ng/ml plasma (or ng/mg tissue), which is the background level in unexposed male fish.
Äggproduktion bör registreras som antalet ägg/överlevande honor/dag per replikat.
For each ELISA method, a test for matrix effect (effect of sample dilution) should be run to determine the minimum sample dilution factor.
Leksubstrat bör placeras i testkärlet för knölskallelöja och sebrafisk så att fisken kan leka under normala förhållanden.
Each ELISA plate used for VTG assays should include the following quality control samples: at least 6 calibration standards covering the range of expected VTG concentrations, and at least one non-specific binding assay blank (analysed in duplicate).
Tillägg 4 innehåller närmare information om rekommenderade leksubstrat för sebrafisk (tillägg 4A) och knölskallelöja (tillägg 4B).
At least two aliquots (well-duplicates) of each sample dilution will be analysed.
Human avlivning av fisk
The correlation coefficient (R2) for calibration curves should be greater than 0,99.
Prov tas sedan på blod eller vävnad för bestämning av VTG, så som förklarades i avsnittet om vitellogenin.
However, a high correlation is not sufficient to guarantee adequate prediction of concentration in all ranges.
Observation av sekundära könskaraktärer
In addition to having a sufficiently high correlation for the calibration curve, the concentration of each standard, as calculated from the calibration curve, should all fall between 70 and 120 % of its nominal concentration.
Vissa endokrint aktiva kemikalier kan medföra förändringar i särskilda sekundära könskaraktärer (antal parningstuberkler hos knölskallelöjhanar, papillära utväxter hos medakahanar).
If the nominal concentrations trend away from the calibration regression line (e.g. at lower concentrations), it may be necessary to split the calibration curve into low and high ranges or to use a nonlinear model to adequately fit the absorbance data.
Framför allt kan kemikalier med vissa verkningsmekanismer ge upphov till en onormal förekomst av sekundära könskaraktärer hos djur av det motsatta könet.
If the curve is split, both line segments should have R2 > 0,99.
Till exempel kan agonister som påverkar androgenreceptorer, såsom trenbolon, metyltestosteron och dihydrotestosteron, göra så att honor av knölskallelöja utvecklar tydliga parningstuberkler och att medakahonor utvecklar papillära utväxter (11, 20, 21).
The limit of detection (LOD) is defined as the concentration of the lowest analytical standard, and limit of quantitation (LOQ) is defined as the concentration of the lowest analytical standard multiplied by the lowest dilution factor.
Det har också rapporterats att agonister som påverkar östrogenreceptorer kan minska antalet parningstuberkler och storleken på den dorsala nackvalken hos vuxna hanar av knölskallelöja (26, 27).
On each day that VTG assays are performed, a fortification sample made using an inter-assay reference standard will be analysed (Appendix 7).
Sådana makromorfologiska iakttagelser kan tillhandahålla användbar kvalitativ och kvantitativ information som kan påverka eventuella framtida krav för test på fisk.
The ratio of the expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
Antalet och storleken på parningstuberklerna hos knölskallelöja och de papillära utväxterna hos medaka kan mätas direkt eller mer praktiskt på konserverade exemplar.
Evaluation of gonadal histopathology
Rekommenderade förfaranden för utvärdering av sekundära könskaraktärer hos knölskallelöja och medaka finns i bilaga 5A respektive 5B.
In this respect, gonads are fixed either whole body or dissected.
Beroende på fiskens storlek kan man i allmänhet samla in mellan 5–60 μl blod per individ för knölskallelöja, och 5–15 μl per individ för sebrafisk.
When histopathology is required, specific endocrine-related responses on the gonads will be looked for in the assessment of the endocrine activity of the test chemical.
Plasman avskiljs från blodet genom centrifugering och lagras med proteashämmare vid –80 °C tills de analyseras med avseende på VTG.
These diagnostic responses essentially include the presence of testicular oocytes, Leydig cell hyperplasia, decreased yolk formation, increased spermatogonia and perifollicular hyperplasia.
Alternativt använder man levern hos medaka, och för sebrafiskar kan huvud/stjärthomogenatet användas som vävnadskälla för bestämning av VTG (tillägg 6).
Other gonadal lesions like oocyte atresia, testicular degeneration, and stage changes, may have various causes.
Mätningen av VTG bör baseras på en validerad homolog ELISA-metod med användning av en homolog VTG-standard och homologa antikroppar.
The Guidance document on fish gonadal histopathology specifies procedures that will be used in the dissection, fixation, sectioning and histopathological evaluation of the gonads (22).
Det rekommenderas att man använder en metod som kan påvisa VTG-nivåer som är så låga som ett fåtal ng/ml plasma (eller ng/mg vävnad), vilket är bakgrundsnivån hos oexponerade hanfiskar.
Where a solvent control is used, an appropriate statistical test should be performed between the dilution water and solvent controls for each endpoint.
Minst två alikvoter (brunnsduplikat) av varje provutspädning analyseras.
Guidance on how to handle dilution water and solvent control data in the subsequent statistical analysis can be found in OECD, 2006c (28).
Brunnsduplikat som avviker med mer än 20 % bör analyseras på nytt.
All biological response data should be analysed and reported separately by sex.
Korrelationskoefficienten (R2) för kalibreringskurvor ska vara högre än 0,99.
If the required assumptions for parametric methods are not met — non-normal distribution (e.g. Shapiro-Wilk's test) or heterogeneous variance (Bartlett's test or Levene's test), consideration should be given to transforming the data to homogenise variances prior to performing the ANOVA, or to carrying out a weighted ANOVA.
En hög korrelation är dock inte tillräcklig för att garantera en adekvat prediktion av koncentrationerna inom alla intervaller.
Dunnett's test (parametric) on multiple pair-wise comparisons or a Mann-Whitney with Bonferroni adjustment (non-parametric) may be used for non-monotonous dose-response.
Förutom att kalibreringskurvan har en tillräckligt hög korrelationsgrad bör koncentrationen för varje standard, som beräknats utifrån kalibreringskurvan, ligga på mellan 70 och 120 % av dess nominella koncentration.
Other statistical tests may be used (e.g. Jonckheere-Terpstra test or Williams test) if the dose-response is approximately monotone.
Om de nominella koncentrationerna tenderar att avvika från kalibreringens regressionslinje (t.ex. vid lägre koncentrationer) kan det vara nödvändigt att dela upp kalibreringskurvan i låga respektive höga intervaller eller att använda en icke-linjär modell som gör att absorbansdata kan passas in på ett lämpligt sätt.
A statistical flowchart is provided in Appendix 8 to help in the decision on the most appropriate statistical test to be used.
Om kurvan delas upp bör R2 > 0,99 gälla för båda linjesegmenten.
Reporting of test results
Varje dag som VTG-tester utförs ska ett berikningsprov analyseras som beretts med en referensstandard för tester mellan laboratorier (tillägg 7).
Study data should include:
Förhållandet mellan den förväntade koncentrationen och den uppmätta koncentrationen rapporteras tillsammans med resultaten från varje försöksomgång som utförs på samma dag.
Testing facility:
Utvärdering av histopatologiska undersökningar av könskörtlar
Responsible personnel and their study responsibilities
Tillsynsmyndigheterna kan kräva histopatologiska undersökningar av könskörtlarna för att studera målorganet på HPG-axeln efter kemisk exponering.
Each laboratory should have demonstrated proficiency using a range of representative chemicals
Könskörtlarna fixeras antingen hela eller dissekeras.
Characterisation of test chemical
När en histopatologisk undersökning krävs tittar man på särskilda hormonrelaterade responser i könskörtlarna inom ramen för bedömningen av testkemikaliens endokrina aktivitet.
Physical nature and relevant physicochemical properties
Dessa diagnostiska responser omfattar huvudsakligen förekomsten av oocyter i testiklarna, Leydig-cellhyperplasi, minskad äggulebildning, ökade spermatogonier och perifollikulär hyperplasi.
Method and frequency of preparation of test concentrations
Andra skador på könskörtlarna, t.ex. oocyter i atresi, degenerering av testiklarna och stadieförändringar, kan ha olika orsaker.
Information on stability and biodegradability
Vägledningsdokumentet om histopatologiska undersökningar av könskörtlar hos fiskar innehåller förfaranden för dissekering, fixering, uppdelning och histopatologisk utvärdering av könskörtlar (22).