natgillin/translations-raw huggingface dataset:
However, other media (e.g. (7) (8)) are acceptable provided the performance of the Daphnia culture is shown to meet the validity criteria for the test.
Om annat än normalt odlingsmedium för Daphnia används vid testet är det tillrådligt med en acklimatiseringsperiod på i regel cirka tre veckor (dvs. en generation) innan testets inleds, för att undvika stress på föräldragenerationen.
If media are used which include undefined additives, these additives should be specified clearly and information should be provided in the test report on composition, particularly with regard to carbon content as this may contribute to the diet provided.
Testmedium
It is recommended that the total organic carbon (TOC) and/or chemical oxygen demand (COD) of the stock preparation of the organic additive be determined and an estimate of the resulting contribution to the TOC/COD in the test medium made.
För testet rekommenderas ett fullständigt definierat medium.
It is further recommended that TOC levels in the medium (i.e. before addition of the algae) be below 2 mg/l (9).
Avsaknaden av tillsatser (t.ex. alger, jordextrakt) som är svåra att karakterisera möjliggör bättre standardisering mellan laboratorier.
When testing chemicals containing metals, it is important to recognise that the properties of the test medium (e.g. hardness, chelating capacity) may have a bearing on the toxicity of the test chemical.
Elendt M4- (6) och M7-medier (se tillägg 2) har konstaterats vara lämpliga för ändamålet.
For this reason, a fully defined medium is desirable.
Andra medier (t.ex.
However, at present, the only fully defined media which are known to be suitable for long-term culture of Daphnia magna are Elendt M4 and M7.
(7) och (8)) kan godtas förutsatt att det kan visas att utförandet av Daphnia-odlingen uppfyller giltighetskriterierna för testet.
Both media contain the chelating agent EDTA.
Vid användning av medier som innehåller icke definierade tillsatser ska dessa tillsatser klart specificeras och uppgifter om deras sammansättning lämnas i testrapporten.
Work has shown (2) that the ‘apparent toxicity’ of cadmium is generally lower when the reproduction test is performed in M4 and M7 media than in media containing no EDTA.
Det är särskilt viktigt att ange kolhalten, eftersom kol kan utgöra ett fodertillskott.
M4 and M7 are not, therefore, recommended for testing chemicals containing metals, and other media containing known chelating agents should also be avoided.
Det rekommenderas att totalt organiskt kol (TOC) och/eller kemisk syreförbrukning (COD) bestäms i en stamberedning av den organiska tillsatsen och att en uppskattning görs av hur denna påverkar TOC/COD i testmediet.
For metal-containing chemicals it may be advisable to use an alternative medium such as, for example, ASTM reconstituted hard fresh water (9), which contains no EDTA.
TOC-nivån i mediet (dvs. före tillsats av algerna) bör dessutom vara lägre än 2 mg/l (9).
This combination of ASTM reconstituted hard fresh water and seaweed extract (10) is suitable for long-term culturing of Daphnia magna (2).
Vid testning av kemikalier som innehåller metaller är det viktigt att beakta det faktum att testmediets egenskaper (t.ex. hårdhet och kelateringsförmåga) kan ha inverkan på testkemikaliens toxicitet.
The dissolved oxygen concentration should be above 3 mg/l at the beginning and during the test.
Därför rekommenderas ett fullständigt definierat medium.
The pH should be within the range 6 - 9, and normally it should not vary by more than 1,5 units in any one test.
För närvarande är Elendt M4 och M7 de enda medier som veterligen är lämpliga för långtidsodling av Daphnia magna.
Hardness above 140 mg/l (as CaCO3) is recommended.
Båda medierna innehåller kelatbildaren EDTA.
Tests at this level and above have demonstrated reproductive performance in compliance with the validity criteria (11) (12).
Det finns resultat (2) som tyder på att toxiciteten hos kadmium i regel förefaller vara lägre när reproduktionstestet genomförs i M4- och M7-medier än i när det genomförs i medier som inte innehåller EDTA.
Test solutions of the chosen concentrations are usually prepared by dilution of a stock solution.
M4 och M7 rekommenderas därför inte för testning av kemikalier som innehåller metaller.
Stock solutions should preferably be prepared, without using any solvents or dispersants if possible, by mixing or agitating the test chemical in test medium using mechanical means such as agitating, stirring or ultrasonication, or other appropriate methods.
Likaså bör andra medier som innehåller kända kelatbildare undvikas.
It is preferable to expose test systems to concentrations of the test chemical to be used in the study for as long as is required to demonstrate the maintenance of stable exposure concentrations prior to the introduction of test organisms.
I fråga om metallhaltiga kemikalier kan det vara tillrådligt att använda ett alternativt medium såsom ASTM-rekonstruerat hårt sötvatten (9) som inte innehåller EDTA.
If the test chemical is difficult to dissolve in water, procedures described in the OECD Guidance for handling difficult substances should be followed (13).
Denna kombination av ASTM-rekonstruerat hårt sötvatten och algextrakt (10) är lämplig för långvarig odling av Daphnia magna (2).
The use of solvents or dispersants should be avoided, but may be necessary in some cases in order to produce a suitably concentrated stock solution for dosing.
En vattenhårdhet över 140 mg/l (som CaCO3) rekommenderas.
A dilution water control with adequate replicates and, if unavoidable, a solvent control with adequate replicates should be run in addition to the test concentrations.
Test på denna nivå och över har kunnat visa en reproduktionskapacitet som uppfyller giltighetskriterierna (11) (12).
Only solvents or dispersants that have been investigated to have no significant or only minimal effects on the response variable should be used in the test.
Testlösningar av de valda koncentrationerna bereds i regel genom utspädning av en stamlösning.
Examples of suitable solvents (e.g. acetone, ethanol, methanol, dimethylformamide and triethylene glycol) and dispersants (e.g. Cremophor RH40, methylcellulose 0,01 % and HCO-40) are given in (13).
Om möjligt bör stamlösningarna helst beredas utan användning av lösningsmedel eller dispergeringsmedel.
Where a solvent or dispersant is used, its final concentration should not be greater than 0,1 ml/l (13) and it should be the same concentration in all test vessels, except the dilution water control.
Testkemikalien blandas eller rörs i testmediet med mekaniska hjälpmedel såsom omrörning, sonikering eller andra lämpliga metoder.
However, every effort should be made to keep the solvent concentration to a minimum.
Testsystemen bör exponeras för koncentrationer av den testkemikalie som ska användas i undersökningen under så lång tid som krävs för att visa att stabila exponeringskoncentrationer kan upprätthållas innan testorganismerna inbegrips.
For semi-static tests, at least 10 animals individually held at each test concentration and at least 10 animals individually held in the control series.
Om lösningsmedel eller dispergeringsmedel används bör deras slutkoncentrationer vara högst 0,1 ml/l (13) och koncentrationen bör vara densamma i alla testkärl, förutom utspädningsvattenkontrollen.
For flow-through tests, 40 animals divided into four groups of 10 animals at each test concentration has been shown to be suitable (1).
Användningen av lösningsmedel bör dock begränsas till ett minimum.
A smaller number of test organisms may be used and a minimum of 20 animals per concentration divided into two or more replicates with an equal number of animals (e.g. four replicates each with five daphnids) is recommended.
Löptid
Note that for tests where animals are held in groups, it will not be possible to exclude any offspring from the statistical analysis if inadvertent/ accidental parental mortality occurs when the reproduction has begun, and hence in these cases the reproductive output should be expressed as total number of living offspring produced per parent present at the beginning of the test.
Föräldradjuren hålls individuellt, ett per testkärl, vanligen med 50–100 ml i varje kärl, om inte ett genomflödessystem är nödvändigt för testningen (för Daphnia magna kan mindre volymer av mediet vara möjliga, särskilt för mindre daphnider, t.ex.
Treatments should be allocated to the test vessels and all subsequent handling of the test vessels should be done in a random fashion.
Ceriodaphnia dubia).
Failure to do this may result in bias that could be construed as being a concentration effect.
I vissa fall behövs större volymer med tanke på de krav som gäller för den analytiska procedur som används för bestämning av testkemikaliens koncentration, även om det för den kemiska analysen är tillåtet med pooling av replikat.
In particular, if experimental units are handled in treatment or concentration order, then some time-related effect, such as operator fatigue or other error, could lead to greater effects at the higher concentrations.
Om volymer över 100 ml används måste eventuellt den dos som ges till Daphnia ökas för att garantera tillräcklig tillgång på foder och förenlighet med giltighetskriterierna.
Furthermore, if the test results are likely to be affected by an initial or environmental condition of the test, such as position in the laboratory, then consideration should be given to blocking the test.
Försöksdjur:
For semi-static tests, feeding should preferably be done daily, but at least three times per week (i.e. corresponding to media changes).
För ett semistatiskt test behövs minst 10 djur per testkoncentration och minst 10 individuellt hållna djur i kontrollserierna.
The possible dilution of the exposure concentrations by food addition should be taken into account and avoided as much as possible with well concentrated algae suspensions.
För genomflödestest har en uppdelning med 40 djur i fyra grupper om 10 djur per testkoncentration visat sig vara lämplig (1).
Deviations from this (e.g. for flow-through tests) should be reported.
Ett mindre antal testorganismer kan användas och man rekommenderar ett minimum på 20 djur per koncentration uppdelade i två eller flera replikat med samma antal djur (t.ex. fyra replikat med fem Daphnia per replikat).
During the test, the diet of the parent animals should preferably be living algal cells of one or more of the following: Chlorella sp., Pseudokirchneriella subcapitata (formerly Selenastrum capricornutum) and Desmodesmus subspicatus (formerly Scenedesmus subspicatus).
För test där djuren hålls i grupper är det inte möjligt att undanta eventuell avkomma från den statistiska analysen om oavsiktlig dödlighet bland föräldradjuren förekommer när reproduktionen har börjat.
The supplied diet should be based on the amount of organic carbon (C) provided to each parent animal.
I dessa fall kan reproduktionsresultatet uttryckas som totalt antal levande avkommor per föräldradjur i början av testet.
Research (14) has shown that, for Daphnia magna, ration levels of between 0,1 and 0,2 mg C/Daphnia/day are sufficient for achieving the required number of living offspring to meet the test validity criteria.
Fördelningen av behandlingar och den efterföljande hanteringen av testkärlen bör vara slumpmässig.
The ration can be supplied either at a constant rate throughout the period of the test, or, if desired, a lower rate can be used at the beginning and then increased during the test to take account of growth of the parent animals.
I annat fall kan man få missvisande resultat som kan tolkas som en koncentrationsrelaterad verkan.
In this case, the ration should still remain within the recommended range of 0,1 - 0,2 mg C/Daphnia/day at all times.
Särskilt om testenheterna hanteras i koncentrationsordning kan vissa tidsrelaterade faktorer, såsom trötthet hos personalen eller andra felfaktorer, leda till större verkningar vid de högre koncentrationerna.
If surrogate measures, such as algal cell number or light absorbance, are to be used to feed the required ration level (i.e. for convenience since measurement of carbon content is time consuming), each laboratory should produce its own nomograph relating the surrogate measure to carbon content of the algal culture (see Appendix 3 for advice on nomograph production).
Om testresultaten sannolikt kommer att påverkas av omständigheter i början av testet eller av miljöbetingelser, såsom placering i laboratoriet, bör man överväga blockuppdelning.
Nomographs should be checked at least annually and more frequently if algal culture conditions have changed.
Vid semistatiskt test ges foder helst dagligen men minst tre gånger per vecka (vid byte av medium).
Light absorbance has been found to be a better surrogate for carbon content than cell number (15).
Eventuell utspädning av exponeringskoncentrationerna genom tillsats av foder bör beaktas och undvikas så långt det är möjligt med hjälp av väl koncentrerade algsuspensioner.
A concentrated algal suspension should be fed to the Daphnia to minimise the volume of algal culture medium transferred to the test vessels.
Avvikelser från detta (t.ex. vid genomflödestest) måste rapporteras.
Concentration of the algae can be achieved by centrifugation followed by re-suspension in Daphnia culture medium.
Under testet bör föräldradjuren helst utfodras med levande algceller.
Light
En eller flera av följande arter kan användas: Chlorella sp., Pseudokirchneriella subcapitata (tidigare Selenastrum capricornutum) och Desmodesmus subspicatus (tidigare Scenedesmus subspicatus).
For light-measuring instruments calibrated in lux, an equivalent range of 1000-1500 lux for cool white light corresponds close to the recommended light intensity 15-20 μE · m-2 · s-1.
Forskningsresultat (14) för Daphnia magna har visat att det är tillräckligt med dosnivåer mellan 0,1 och 0,2 mg organiskt kol per Daphnia och dag för att nå upp till den mängd levande avkomma som behövs med tanke på giltighetskriterierna för testet.
The temperature of the test media should be within the range 18-22 °C.
Dosen kan ges med konstant dosering under hela testet eller, om så önskas, med lägre dosering i början och därefter ökande dosering i takt med föräldradjurens tillväxt.
However, for any one test, the temperature should not, if possible, vary by more than 2 °C within these limits (e.g. 18-20, 19-21 or 20-22 °C) as daily range.
I det senare fallet bör dosen ändå alltid hållas inom det rekommenderade området 0,1–0,2 mg organiskt kol per Daphnia och dag.
It may be appropriate to use an additional test vessel for the purposes of temperature monitoring.
Om andra matningssätt (t.ex. antalet algceller eller ljusabsorbans) används för att kontrollera utfodringens dosnivå (av bekvämlighetsskäl, eftersom mätning av kolhalten är tidskrävande) bör varje laboratorium upprätta egna nomogram för mätningarna av algodlingens kolhalt (i tillägg 3 finns anvisningar för hur man upprättar nomogram).
Aeration
Nomogrammen måste ses över minst årligen, och oftare om algodlingsbetingelserna har förändrats.
The test vessels should not be aerated during the test.
Ljusabsorbans har konstaterats vara en bättre metod än cellräkning när det gäller bestämning av kolhalten (15).
Test design
Algsuspensionen som används för utfodring av Daphnia bör vara koncentrerad, så att minimal volym algodlingsmedium överförs till testkärlen.
Range finding test
För att höja algkoncentrationen kan man använda centrifugering med påföljande återuppslamning i Daphnia-odlingsmedium.
When necessary, a range-finding test is conducted with, for example five test chemical concentrations and two replicates for each treatment and control.
Ljus
Additional information, from tests with similar chemicals or from literature, on acute toxicity to Daphnia and/or other aquatic organisms may also be useful in deciding on the range of concentrations to be used in the range-finding test.
16 timmar ljus med en intensitet som inte överskrider 15–20 μE · m– 2· s– 1 mätt vid vattenytan av kärlet.
The duration of the range-finding test is 21 days or of a sufficient duration to reliably predict effect levels.
För mätinstrument som kalibrerats i lux motsvarar den rekommenderade ljusintensiteten 15–20 μE · m– 2 · s– 1 för kallt vitt ljus ungefär 1000–1500 lux.
At the end of the test, reproduction of the Daphnia is assessed.
Temperaturen i testmediet bör hållas inom området 18–22 °C.
The number of parents and the occurrence of offspring should be recorded.
Inom ett och samma försök får temperaturen om möjligt inte variera med mer än 2 °C inom de angivna gränserna (t.ex.
Definitive test
18-20, 19–21 eller 20–22 °C) som ett dagligt intervall.
Normally there should be at least five test concentrations, bracketing effective concentration (e.g. ECx), and arranged in a geometric series with a separation factor preferably not exceeding 3,2 An appropriate number of replicates for each test concentration should be used (see paragraphs 24-25).
Temperaturövervakningen kan gärna ordnas med hjälp av ett extra testkärl.
Justification should be provided if fewer than five concentrations are used.
Luftning
Chemicals should not be tested above their solubility limit in test medium.
Testkärlen bör inte luftas under testet.
Before conducting the experiment it is advisable to consider the statistical power of the tests design and using appropriate statistical methods (4).
Testets utformning
In setting the range of concentrations, the following should be borne in mind:
Förtest
When ECx for effects on reproduction is estimated, it is advisable that sufficient concentrations are used to define the ECx with an appropriate level of confidence.
Vid behov utförs ett preliminärt test med t.ex. fem koncentrationer av testkemikalien och två replikat för varje testkärl och kontroll.
Test concentrations used should preferably bracket the estimated ECx such that ECx is found by interpolation rather than extrapolation.
Ytterligare information, från tester med likartade kemikalier eller från litteraturen, om akut toxicitet för Daphnia och/eller andra vattenorganismer kan också vara användbar för att avgöra vilka koncentrationsintervall som ska användas i det preliminära testet.
It is an advantage for the following statistical analysis to have more test concentrations (e.g. 10) and fewer replicates of each concentration (e.g. 5 thus holding the total number of vessels constant) and with 10 controls.
Det preliminära testet pågår i 21 dagar eller tillräckligt länge för att möjliggöra tillförlitliga förutsägelser av effektnivåerna.
When estimating the LOEC and/or NOEC, the lowest test concentration should be low enough so that the reproductive output at that concentration is not significantly lower than that in the control.
Reproduktionen bedöms i slutet av testet.
If this is not the case, the test should be repeated with a reduced lowest concentration.
Antalet föräldradjur och förekomsten av avkomma bör registreras.
When estimating the LOEC and/or NOEC, the highest test concentration should be high enough so that the reproductive output at that concentration is significantly lower than that in the control.
Definitivt test
If this is not the case, the test should be repeated with an increased highest concentration unless the maximum required test concentration for chronic effects testing (i.e., 10 mg/l) was used as the highest test concentration in the initial test.
Koncentrationerna bör ligga i en geometrisk serie med en separationsfaktor som helst inte bör överskrida 3,2.
If no effects are observed at the highest concentration in the range-finding test (e.g. at 10 mg/l), or when the test chemical is highly likely to be of low/ no toxicity based on lack of toxicity to other organisms and/or low/no uptake, the reproduction test may be performed as a limit test, using a test concentration of e.g.10 mg/l and the control.
Dessutom bör ett lämpligt antal replikat användas för varje testkoncentration (se punkterna 24–25).
Ten replicates should be used for both the treatment and the control groups.
Om färre än fem koncentrationer används måste detta motiveras.
When a limit test might need to be done in a flow-through system less replicates would be adequate.
Innan försöket genomförs bör man överväga testets statistiska kraft.
A limit test will provide the opportunity to demonstrate that there is no statistically significant effect at the limit concentration, but if effects are recorded a full test will normally be required.
Lämpliga statistiska metoder bör användas (4).
One test-medium control series and also, if relevant, one control series containing the solvent or dispersant should be run in addition to the test series.
Vid valet av koncentrationsintervall bör man beakta följande:
When used, the solvent or dispersant concentration should be the same as that used in the vessels containing the test chemical.
Om man bestämmer ECX för verkningar på reproduktionskapaciteten är det tillrådligt att använda tillräckligt antal koncentrationer för att möjliggöra bestämning av ECx med tillräcklig konfidensnivå.
The appropriate number of replicates should be used (see paragraphs 23-24).
De testkoncentrationer som används bör helst ligga innanför uppskattad ECx, så att ECx påvisas genom interpolering i stället för extrapolering.
Generally in a well-run test, the coefficient of variation around the mean number of living offspring produced per parent animal in the control(s) should be ≤ 25 %, and this should be reported for test designs using individually held animals.
För den efterföljande statistiska analysen är det en fördel att använda fler testkoncentrationer (t.ex. tio) och färre replikat av varje koncentration (t.ex. fem, så att antalet testkärl hålls konstant) med tio kontroller.
Test medium renewal
Vid beräkning av LOEC och/eller NOEC ska den lägsta testkoncentrationen vara tillräckligt låg så att reproduktionskapaciteten vid denna koncentration inte signifikant lägre än i kontrollgruppen.
The frequency of medium renewal will depend on the stability of the test chemical, but should be at least three times per week.
I annat fall bör testet upprepas med en lägre lägsta koncentration.
If, from preliminary stability tests (see paragraph 7), the test chemical concentration is not stable (i.e. outside the range 80 - 120 % of nominal or falling below 80 % of the measured initial concentration) over the maximum renewal period (i.e. 3 days), consideration should be given to more frequent medium renewal, or to the use of a flow-through test.
Vid beräkning av LOEC och/eller NOEC ska den högsta testkoncentrationen vara tillräckligt hög så att reproduktionskapaciteten vid denna koncentration är signifikant lägre än i kontrollgruppen.
When the medium is renewed in semi-static tests, a second series of test vessels are prepared and the parent animals transferred to them by, for example, a glass pipette of suitable diameter.
Om så inte är fallet bör testet upprepas med en ökad högsta koncentration, om inte den högsta erforderliga testkoncentrationen för testning av kroniska effekter (dvs. 10 mg/l) användes som högsta testkoncentration i det första testet.
The volume of medium transferred with the Daphnia should be minimised.
Om inga effekter observeras vid den högsta koncentrationen i det preliminära testet (t.ex. vid 10 mg/l) eller om testkemikalien högst sannolikt har en låg eller ingen toxicitet eftersom den inte är toxisk för andra organismer och/eller har ett lågt eller inget upptag, kan reproduktionstestet utföras som ett toleranstest med en testkoncentration på t.ex.10 mg/l och kontrollen.
The results of the observations made during the test should be recorded on data sheets (see examples in Appendixes 4 and 5).
Tio replikat bör användas för både behandlings- och kontrollgrupperna.
If other measurements are required (see paragraph 44), additional observations may be required.
Om ett toleranstest behöver göras i ett genomflödessystem räcker det med färre replikat.
Offspring
Ett toleranstest gör det möjligt att visa att det inte förekommer någon statistiskt signifikant effekt vid gränskoncentrationen, men om effekter registreras krävs i regel ett fullständigt test.