natgillin/translations-raw huggingface dataset:
pC positive control (3,4-DCA 4 mg/l);
Både genomsnittlig specifik tillväxtgrad (uppskattas genom bedömningar av huvudskottets längd och ytterligare tre mätvariabler) och producerad mängd biomassa (uppskattas genom en beräkning av ökningen av huvudskottets längd och ytterligare tre mätvariabler) hos obehandlade och behandlade plantor bör bestämmas.
sC solvent control.
Specifik/a tillväxtgrad/er (r) och utbyte (y) används sedan för att bestämma ErCx (t.ex.
Scheme of the zebrafish embryo acute toxicity test procedure (from left to right): production of eggs, collection of the eggs, pre-exposure immediately after fertilisation in glass vessels, selection of fertilised eggs with an inverted microscope or binocular and distribution of fertilised eggs into 24-well plates prepared with the respective test concentrations/controls, n = number of eggs required per test concentration/control (here 20), hpf = hours post-fertilisation.
ErC10, ErC20, ErC50) respektive EyCx (t.ex.
Waste
EyC10, EyC20, EyC50).
24 h pre-conditioning n fertilised eggs per test concentration/ control Selection of fertilised eggs & fertilisation rate determination Glass vessel with respective test concentrations/ controls at volumes to fully cover eggs
Den lägsta koncentrationen med observerad effekt (LOEC) och den högsta koncentrationen utan observerad effekt (NOEC) kan också bestämmas statistiskt.
eggs per conc./ control
Man bör ha tillgång till en analysmetod som är tillräckligt känslig för kvantitetsbestämning av testkemikalien i testmediet.
Spawning unit
Bland annat följande uppgifter om testkemikalien kan vara av värde när man fastställer testbetingelserna: strukturformel, renhetsgrad och föroreningsgrad, vattenlöslighet, stabilitet i vatten och ljus, syradissociationskonstant (pKa), fördelningskoefficient oktanol/vatten (Kow), ångtryck och biologisk nedbrytbarhet.
ATLAS OF LETHAL ENDPOINTS FOR THE ZEBRAFISH EMBRYO ACUTE TOXICITY TEST
Löslighet i vatten och ångtryck kan användas för att beräkna Henrys konstant, som visar om det är sannolikt att förlusterna av testkemikalien under tiden för testets genomförande kommer att vara betydande.
The following apical endpoints indicate acute toxicity and, consequently, death of the embryos: coagulation of the embryo, non-detachment of the tail, lack of somite formation and lack of heartbeat.
Detta ger en indikation på om man behöver vidta åtgärder för att kontrollera dessa förluster.
The following micrographs have been selected to illustrate these endpoints.
Om uppgifterna om testkemikaliens löslighet och stabilitet är osäkra, bör man bedöma dessa egenskaper under testbetingelserna, dvs. i det odlingsmedium, vid den temperatur och under de belysningsförhållanden som används i testet.
Coagulation of the embryo:
pH-kontrollen av testmediet är särskilt viktig, t.ex. när man testar metaller eller ämnen som är hydrolytiskt instabila.
Under bright field illumination, coagulated zebrafish embryos show a variety of intransparent inclusions.
Närmare vägledning för testning av kemikalier vars fysikalisk-kemiska egenskaper gör dem svåra att testa finns i OECD:s vägledningsdokument (5).
Figure 2
För att testet ska vara giltigt måste fördubblingstiden för huvudskottets längd i kontrollen vara mindre än 14 dagar.
Lack of somite formation:
Med testmedier och testbetingelser som beskrivs för den aktuella testmetoden kan detta kriterium uppfyllas med ett statiskt eller semistatiskt testförfarande.
Although retarded in development by approx.
Den genomsnittliga variationskoefficienten för utbyte baserat på mätningar av skottens färskvikt (dvs. från början till slutet av testet) och ytterligare mätvariabler (se punkt 37) i kontrollkulturerna får inte överskrida 35 % mellan replikaten.
10 hrs, the 24 hrs old zebrafish embryo in (a) shows well-developed somites (→), whereas the embryo in (b) does not show any sign of somite formation (→).
Mer än 50 % av replikaten i kontrollgruppen hålls sterila under den 14 dagar långa exponeringstiden, vilket innebär att de är fria från synliga föroreningar av andra organismer såsom alger, svampar och bakterier (klar lösning).
Although showing a pronounced yolk sac oedema (*), the 48 hrs old zebrafish embryo in (c) shows distinct formation of somites (→), whereas the 96 hrs old zebrafish embryo depicted in (d) does not show any sign of somite formation (→).
Anmärkning: Vägledning om sterilitetsbedömning ges i rapporten från provningsjämförelsen (4).
Note also the spinal curvature (scoliosis) and the pericardial oedema (*) in the embryo shown in (d).
REFERENSKEMIKALIE
Bud in lateral view (a: →; 96 hrs old zebrafish embryo).
Referenskemikalier, t.ex.
Note also the lack of the eye bud (*).
3,5-diklorfenol som används i provningsjämförelsen (4), kan testas som ett sätt att kontrollera testförfarandet.
Figure 4
Enligt data från provningsjämförelsen ligger de genomsnittliga EG50-värdena av 3,5-DCP för olika responsvariabler (se punkterna 37–41 i denna testmetod) mellan 3,2 mg/l och 6,9 mg/l (se rapporten om provningsjämförelsen för information om konfidensintervall för dessa värden).
Lack of heartbeat is, by definition, difficult to illustrate in a micrograph.
Det är lämpligt att testa en referenskemikalie minst två gånger per år eller, om testen utförs mer sällan, parallellt med fastställandet av en testkemikalies toxicitet.
Lack of heartbeat is indicated by non-convulsion of the heart (double arrow).
All utrustning som befinner sig i kontakt med testmedier ska vara av glas eller annat kemiskt inert material.
Immobility of blood cells in, e.g. the aorta abdominalis (→ in insert) is not an indicator for lack of heartbeat.
Glasutrustning som används för odling och test ska vara rengjord från kemiska föroreningar som kan läcka in i testmediet, och glaset ska vara sterilt.
Note also the lack of somite formation in this embryo (*, homogenous rather than segmental appearance of muscular tissues).
Testkärlen bör vara tillräckligt långa för att skotten i kontrollkärlen under vattenfasen ska kunna växa utan att nå testmediets yta i slutet av testet.
The observation time to record an absence of heartbeat should be at least of one minute with a minimum magnification of 80×.
Glasprovrör med tjocka väggar av borosilikatglas utan pip med en innerdiameter på cirka 20 mm, en längd på cirka 250 mm och aluminiumlock rekommenderas.
C.50 Sediment-free Myriophyllum spicatum toxicity test
Eftersom det modifierade Andrewsmediet innehåller sackaros (som stimulerar tillväxten av svampar och bakterier) måste testlösningarna framställas under sterila förhållanden.
This test method is equivalent to OECD test guideline 238 (2014).
Alla vätskor samt utrustning steriliseras före användning.
It is designed to assess the toxicity of chemicals to Myriophyllum spicatum, a submersed aquatic dicotyledon, a species of the water milfoils family.
Sterilisering sker genom varmluftsbehandling (210 °C) i fyra timmar eller autoklavering i 20 minuter vid 121 °C.
It is based on an ASTM existing test method (1) modified as a sediment-free test system (2) to estimate the intrinsic ecotoxicity of test chemicals (independent of the distribution-behaviour of the test chemical between water and sediment).
Dessutom ska alla kolvar, tallrikar, skålar osv. och annan utrustning genomgå flambehandling på en steril arbetsbänk strax före användning.
A test system without sediment has a low analytical complexity (only in the water phase) and the results can be analysed in parallel and/or comparison with those obtained in Lemna sp. test (3); in addition, the required sterile conditions allow to keep the effects of microorganisms and algae (chemical uptake/ degradation, etc.) as low as possible.
Kulturer och provkärl får inte förvaras tillsammans.
This test does not replace other aquatic toxicity tests; it should rather complement them so that a more complete aquatic plant hazard and risk assessment is possible.
Bäst är att använda separata klimatodlingskammare, inkubatorer eller klimatrum.
The test method has been validated by a ring-test (4).
Belysning och temperatur bör kunna regleras och hållas på konstant nivå.
Details of testing with renewal (semi-static) and without renewal (static) of the test solution are described.
Testorganism
Depending on the objectives of the test and the regulatory requirements, the use of semi-static method is recommended, e.g. for substances that are rapidly lost from solution as a result of volatilisation, adsorption, photodegradation, hydrolysis, precipitation or biodegradation.
Myriophyllum spicatum (axslinga) – en submers tvåhjärtbladig växt – hör till slingesläktet.
Further guidance is given in (5).
Mellan juni och augusti sticker nästan omärkliga rosa-vita blommor upp ovanför vattenytan.
This test method applies to substances, for which the test method has been validated, (see details in the ring-test report (4)) or to formulations, or known mixtures; if a mixture is tested, its constituents should be as far as possible identified and quantified.
Växterna är rotade i botten genom ett system av robusta jordstammar och förekommer på hela norra halvklotet i näringsrika, ej förorenade och kalkrika stillastående vatten med lerigt substrat.
The sediment-free Myriophyllum spicatum test method complements the water-sediment Myriophyllum spicatum Toxicity Test (6).
Axslinga föredrar sötvatten, men förekommer även i bräckt vatten.
Before use of the test method for the testing of a mixture intended for a regulatory purpose, it should be considered whether, and if so why, it may provide adequate results for that purpose.
För toxicitetstest utan sediment krävs sterila växter.
Continuously growing plant cultures of Myriophyllum spicatum (only in modified Andrews' medium, see Appendix 2) are allowed to grow as monocultures in different concentrations of the test chemical over a period of 14 days in a sediment-free test system.
Om testlaboratoriet inte har regelbundna axslingekulturer kan sterilt växtmaterial erhållas från ett annat laboratorium.
The objective of the test is to quantify chemical-related effects on vegetative growth over this period based on assessments of selected measurement variables.
Icke-sterilt växtmaterial kan också samlas in från naturen eller tillhandahållas av en kommersiell leverantör.
Growth of shoot length, of lateral branches and roots as well as development of fresh and dry weight and increase of whorls are the measurement variables.
Om plantorna tas från naturen bör man göra en taxonomisk kontroll av arten.
In addition, account is taken of distinctive qualitative changes in test organisms, such as disfigurement or chlorosis and necrosis indicated by yellowing or white and brown colouring.
Om plantorna samlas in från naturen eller tillhandahålls av en kommersiell leverantör bör de steriliseras (1) och hållas i samma medium som används för testet under minst åtta veckor.
To quantify chemical-related effects, growth in the test solutions is compared with that of the controls and the concentration bringing about a specified x % inhibition of growth is determined and expressed as the ECx; “x” can be any value depending on the regulatory requirements, e.g. EC10, EC20, EC50.
Det får inte finnas några uppenbara kontaminationskällor på platser som används för insamling i naturen.
It should be noted that estimates of EC10 and EC20 values are only reliable and appropriate in tests where coefficients of variation in control plants fall below the effect level being estimated, i.e. coefficients of variation should be < 20 % for robust estimation of an EC20.
Om axslinga samlas in från naturen är det viktigt att mycket noggrant fastställa att rätt art samlas in, särskilt i regioner där den kan hybridisera med andra arter från slingesläktet.
Both average specific growth rate (estimated from assessments of main shoot length and three additional measurement variables) and yield (estimated from the increase in main shoot length and three additional measurement variables) of untreated and treated plants should be determined.
Växtmaterial som införskaffas från andra laboratorier ska förvaras under minst tre veckor på samma sätt som plantor från naturen.
Specific growth rate (r) and yield (y) are subsequently used to determine the ErCx (e.g. ErC10, ErC20, ErC50) and EyCx (e.g. EyC10, EyC20, EyC50), respectively.
Om ursprunget är känt ska detta alltid redovisas för växtmaterialet och de arter som används för testet.
In addition, the lowest observed effect concentration (LOEC) and the no observed effect concentration (NOEC) may be statistically determined.
Kvaliteten och enhetligheten hos plantorna som används för testet har stor betydelse för testresultatet, och de bör därför väljas ut med omsorg.
An analytical method, with adequate sensitivity for quantification of the test chemical in the test medium, should be available.
Man bör använda unga, snabbväxande plantor utan synliga skador eller missfärgningar (p.g.a. kloros).
Information on the test chemical which may be useful in establishing the test conditions includes the structural formula, purity and impurities, water solubility, stability in water and light, acid dissociation constant (pKa), partition coefficient octanol-water (Kow), vapour pressure and biodegradability.
Uppgifter om beredningen av testorganismen ges i tillägg 4.
Water solubility and vapour pressure can be used to calculate Henry's Law constant, which will indicate if significant losses of the test chemical during the test period are likely.
Odling
This will help indicate whether particular steps to control such losses should be taken.
För att göra odlingen mindre arbetskrävande – t.ex. när inga tester av axslinga är inplanerade under en längre tid – kan kulturerna förvaras i reducerad belysning och temperatur (50 μE m– 2 s– 1, 20 ± 2 °C).
Where information on the solubility and stability of the test chemical are uncertain, it is recommended that these be assessed under the conditions of the test, i.e. growth medium, temperature, lighting regime to be used in the test.
Uppgifter om odling finns i tillägg 3.
The pH control of the test medium is particularly important, e.g. when testing metals or substances which are hydrolytically unstable.
Minst 14–21 dagar före testet förs en tillräcklig mängd testorganismer aseptiskt över till färskt medium och odlas under 14–21 dagar under testbetingelser som en förkultur.
Further guidance for testing chemicals with physical-chemical properties that make them difficult to test is provided in a OECD Guidance Document (5).
Uppgifter om beredning av en förkultur ges i tillägg 4.
For the test to be valid, the doubling time of main shoot length in the control must be less than 14 days.
Endast ett näringsmedium rekommenderas för Myriophyllum spicatum i ett testsystem utan sediment, enligt beskrivningen i tillägg 2.
Using the media and test conditions described in this test method, this criterion can be attained using a static or semi-static test regime.
En modifiering av Andrews medium rekommenderas för odling och testning med Myriophyllum spicatum, enligt beskrivningen i (1).
The mean coefficient of variation for yield based on measurements of shoot fresh weight (i.e. from test initiation to test termination) and the additional measurement variables (see paragraph 37) in the control cultures do not exceed 35 % between replicates.
Det modifierade Andrewsmediet fås fram med fem separat beredda näringsstamlösningar med 3 % sackaros.
More than 50 % of the replicates of the control group are kept sterile over the exposure period of 14 days, which means visibly free of contamination by other organisms such as algae, fungi and bacteria (clear solution).
Uppgifter om beredning av mediet ges i tillägg 2.
Note: Guidance on how to assess sterility is provided in the ring-test report (4).
Testlösningarna bereds vanligtvis genom utspädning av en stamlösning.
REFERENCE CHEMICAL
Stamlösningar av testkemikalien bereds normalt genom att kemikalien löses upp i demineraliserat (dvs. destillerat eller avjonat) vatten.
Reference chemical(s), such as 3,5-dichlorophenol used in the ring test (4), may be tested as a mean of checking the test procedure; from the ring test data, the mean EC50-values of 3,5-DCP for the different response variables (see paragraphs 37-41 of this test method) are between 3,2 mg/l and 6,9 mg/l (see ring test report for details about confidence interval for these values).
Tillsats av näringsämnen sker med hjälp av det tiofaldigt koncentrerade modifierade Andrewsmediet.
It is advisable to test a reference chemical at least twice a year or, where testing is carried out at a lower frequency, in parallel to the determination of the toxicity of a test chemical.
Testkemikaliens stamlösningar kan steriliseras genom autoklav vid 121 °C i 20 minuter eller genom steril filtrering, förutsatt att den använda steriliseringstekniken inte denaturerar testkemikalien.
All equipment in contact with the test media should be made of glass or other chemically inert material.
Testlösningarna kan också beredas i sterilt demineraliserat vatten eller medier, under sterila förhållanden.
Glassware used for culturing and testing purposes should be cleaned of chemical contaminants that might leach into the test medium and should be sterile.
Termostabilitet och adsorption på olika ytor bör beaktas i valet av förfarandet för att sterilisera testkemikaliens stamlösningar.
The test vessels should be long enough for the shoot in the control vessels to grow in the water phase without reaching the surface of the test medium at the end of the test.
Stamlösningarna bör därför beredas under sterila förhållanden, dvs. med användning av sterila material för upplösning av testkemikalien (t.ex. flamsterilisering, draghuvar med laminärt flöde osv.) i sterilt vatten.
Thick-walled borosilicate glass test tubes without lip, inner diameter approximately 20 mm, length approximately 250 mm, with aluminium caps are recommended.
Denna teknik för beredning av sterila stamlösningar gäller både ämnen och blandningar.
Since the modified Andrews' medium contains sucrose (which stimulates the growth of fungi and bacteria), the test solutions have to be prepared under sterile conditions.
Den högsta koncentrationen av testkemikalien bör normalt inte överskrida dess vattenlöslighet under testbetingelserna.
All liquids as well as equipment are sterilised before use.
För testkemikalier med låg vattenlöslighet kan det vara nödvändigt att bereda en koncentrerad stamlösning eller en dispersion med hjälp av ett organiskt lösningsmedel eller dispergeringsmedel för att underlätta tillsatsen av exakta mängder testkemikalie i testmediet och bidra till dispergeringen och upplösningen av kemikalien.
Sterilisation is carried out via heated air treatment (210 °C) for 4 hours or autoclaving for 20 minutes at 121 °C.
Man bör därför så långt som möjligt undvika att använda sådana ämnen.
In addition, all flasks, dishes, bowls etc. and other equipment undergo flame treatment at a sterile workbench just prior to use.
Det får inte uppstå fytotoxicictet på grund av att man tvingas använda lösnings- eller dispergeringsmedel för att bereda testlösningen.
The cultures and test vessels should not be kept together.
Exempel på vanliga lösningsmedel som inte förorsakar fytotoxicitet vid koncentrationer upp till 100 μl/l är aceton och dimetylformamid.
This is best achieved using separate environmental growth chambers, incubators, or rooms.
Om ett lösnings- eller dispergeringsmedel används bör dess slutkoncentration redovisas och hållas så låg som möjligt (≤ 100 μl/l).
Illumination and temperature should be controllable and maintained at a constant level.
Alla test- och kontrollösningar bör ha samma koncentration av lösnings- eller dispergeringsmedel.
Myriophyllum spicatum — a submersed aquatic dicotyledon — is a species of the water milfoils family.
Test- och kontrollgrupper
Between June and August, inconspicuous pink-white flowers protrude above the water surface.
Förkunskap om testkemikaliens toxicitet för Myriophyllum spicatum, erhållen genom ett preliminärt test av koncentrationsintervallet för toxiciteten, underlättar valet av lämpliga testkoncentrationer.
The plants are rooted in the ground by a system of robust rhizomes and can be found in the entire northern hemisphere in eutrophic, however non-polluted and more calciferous still waters with muddy substrate.
I det slutliga toxicitetstestet bör det i regel finnas fem (precis som i testet av tillväxthämning hos Lemna sp., se kapitel C.26 i denna bilaga) till sju testkoncentrationer som är arrangerade i geometriska serier.
Myriophyllum spicatum prefers fresh water, but is found in brackish water as well.
De bör väljas så att NOEC och EC50-värdena ligger innanför koncentrationsintervallet (se nedan).
For the sediment-free toxicity test, sterile plants are required.
Separationsfaktorn mellan testkoncentrationerna bör inte överskrida 3,2, men om dos-respons-kurvan är flack kan en större separationsfaktor användas.
If the testing laboratory does not have regular cultures of Myriophyllum spicatum, sterile plant material may be obtained from another laboratory or (unsterile) plant material might be taken from the field or provided by a commercial supplier; if plants come from the field a taxonomic verification of the species should be envisaged.
Om färre än fem koncentrationer används måste detta motiveras.
If collected from the field or provided by a commercial supplier, plants should be sterilised (1) and maintained in culture in the same medium as used for testing for a minimum of eight weeks prior to use.
Minst fem replikat ska användas för respektive testkoncentration.
Field sites used for collecting starting cultures have to be free of obvious sources of contamination.
När man fastställer intervallet av testkoncentrationer (för det preliminära testet eller för det slutliga toxicitetstestet), ska man beakta följande:
Great care should be taken to ensure that the correct species is obtained when collecting Myriophyllum spicatum from the field, especially in regions where it can hybridise with other Myriophyllum species.
För att bestämma en ECx-koncentration ska värdet på ECx ligga innanför intervallet för testkoncentrationerna för att man ska uppnå en lämplig konfidensgrad.
If obtained from another laboratory they should be similarly maintained for a minimum of three weeks.
Om man t.ex. ska bestämma EC50 ska den högsta testkoncentrationen vara högre än värdet på EC50.
The source of plant material and the species used for testing should always be reported.
Om värdet på EC50 ligger utanför intervallet för testkoncentrationerna blir motsvarande konfidensintervall stora, och det kan då bli omöjligt att korrekt bedöma modellens statistiska lämplighet.
The quality and uniformity of the plants used for the test will have a significant influence on the outcome of the test and should therefore be selected with care.
Om syftet är att bestämma LOEC eller NOEC ska den lägsta testkoncentrationen vara så låg att tillväxten inte är märkbart mindre än tillväxten i kontrollen.
Young, rapidly growing plants without visible lesions or discoloration (chlorosis) should be used.
Den högsta testkoncentrationen ska vara så hög att tillväxten är märkbart lägre än i kontrollen.
Details about preparation of the test organism are given in Appendix 4.
Om dessa villkor inte är uppfyllda måste testet göras om med ett annat koncentrationsintervall (såvida inte den högsta koncentrationen ligger på löslighetsgränsen eller är lika med den högsta erforderliga gränskoncentrationen, t.ex.
Cultivation
100 mg/l).
To reduce the frequency of culture maintenance (e.g. when no Myriophyllum tests are planned for a period), cultures can be held under reduced illumination and temperature (50 μE m–2 s–1, 20 ± 2 °C).
Varje test bör inkludera kontroller som består av samma näringsämnesmedium, testorganismer (välj växtmaterial som är så enhetligt som möjligt, färska sidogrenar från förkulturer som kortas till 2,5 cm från basen), miljöförhållanden och förfaranden som testkärlen, men utan testkemikalien.
Details of culturing are given in Appendix 3.
Om ett lösnings- eller dispergeringsmedel används som hjälpmedel i testet krävs ytterligare en kontrollbehandling, nu med samma koncentration av lösnings- eller dispergeringsmedlet som i provkärlen med testkemikalien.