natgillin/translations-raw huggingface dataset:
They are cultured at 20 ± 1 °C at a light-dark cycle of 12-12 hours (400-800 Lux).
Torvens, kaolinlerans och sandens ursprung ska vara känt.
Containers are kept moist at all times ensuring that the relative humidity of the air within the containers is 100 %.
Sedimentkomponenterna ska kontrolleras med avseende på avsaknaden av kemiska föroreningar (t.ex. tungmetaller, organiska klorföreningar, organiska fosforföreningar).
This can be guaranteed by presence of free water within the porous plaster, but avoiding generating a water film on the plaster surface.
Ett exempel på hur syntetiskt sediment kan tillredas beskrivs i tillägg 3.
Water loss can be prevented by providing a humid ambient air.
Det är också godtagbart att blanda torra beståndsdelar om det går att visa att tillsats av överliggande vatten inte leder till att sedimentets beståndsdelar separerar (t.ex. flytande torvpartiklar) och att torven eller sedimentet konditionerats tillräckligt.
Any dead individuals should be removed from the containers, as should any mouldy food.
Allt vatten som uppfyller de kemiska kriterierna för godtagbart utspädningsvatten (se tilläggen 2 och 4) är lämpligt som testvatten.
To stimulate production of eggs it is necessary to transfer the adult animals to Petri dishes with newly prepared plaster of Paris/charcoal substrate.
Allt lämpligt vatten, naturligt vatten (ytvatten eller grundvatten), rekonstituerat vatten (se tillägg 2) och avklorerat kranvatten är godtagbart som odlings- och testvatten om chironomiderna överlever i det under odlingen och under testet utan att uppvisa tecken på stress.
Granulated dried baker's yeast is used as the sole food supply for both F. candida and F. fimetaria.
Vid teststart ska testvattnets pH vara mellan 6 och 9 och totalhårdheten får inte vara högre än 400 mg/l uttryckt som CaCO3.
Fresh food is provided once or twice a week, to avoid moulding.
Om man misstänker växelverkan mellan hårdhetsjoner och testkemikalien bör dock vatten med lägre hårdhet användas (och därmed bör Elendt Medium M4 inte användas i detta läge).
It is placed directly on the plaster of Paris in a small heap.
Samma typ av vatten bör användas under hela undersökningen.
The mass of baker's yeast added should be adjusted to the size of the collembolan population, but as a general rule 2-15 mg is sufficient.
De vattenkvalitetsegenskaper som förtecknas i tillägg 4 bör mätas minst två gånger om året eller om man misstänker att egenskaperna har ändrats betydligt.
Synchronisation
Stamlösningar – spikat vatten
The test should be performed with synchronised animals to obtain homogeneous test animals of the same instar and size.
a.
Furthermore, the synchronisation enables discrimination of F. fimetaria males and females from the age of 3 weeks and onwards based on sexual dimorphism, i.e. size differences.
Testkoncentrationerna beräknas på grundval av koncentrationerna i det överliggande vattnet, dvs. vattnet ovanför sedimentet.
The procedure below is a suggestion on how to obtain synchronised animals (the practical steps are optional).
Testlösningar av de valda koncentrationerna bereds i regel genom utspädning av en stamlösning.
Synchronisation.
Stamlösningarna bör helst beredas genom upplösning av testkemikalien i testvattnet.
Prepare containers with a 0,5 cm layer of plaster of Paris/charcoal substrate.
I vissa fall kan det krävas lösningsmedel eller dispergeringsmedel för att få en stamlösning med lämplig koncentration.
For egg laying transfer 150-200 adult F. fimetaria and 50-100 F. candida from the best 15-20 containers of the stock culture with 4-8 weeks old substrate to the containers and feed them 15 mg baker's yeast.
Lämpliga lösningsmedel är t.ex. aceton, etylenglykolmonoetyleter, etylenglykoldimetyleter, dimetylformamid och trietylenglykol.
Avoid bringing juveniles together with adults as presence of juveniles may inhibit egg production.
Dispergeringsmedel som kan användas är Cremophor RH40, Tween 80, metylcellulosa 0,01 % och HCO-40.
Keep the culture at 20 ± 1 °C (the mean should be 20 °C) and a light-dark cycle of 12-12 hours (400-800 Lux).
b.
Ensure that fresh food is available and the air is water saturated.
Spikat sediment med vald koncentration bereds i regel genom tillsättning av en lösning av testkemikalien direkt i sedimentet.
Lack of food may lead the animals to defecate on the eggs resulting in fungal growth on the eggs or F. candida may cannibalise its own eggs.
En stamlösning av testkemikalien upplöst i avjonat vatten blandas med det syntetiska sedimentet i en rullkvarn, matningsblandare eller manuellt.
After 10 days the eggs are carefully collected with a needle and spatula and moved to “egg-paper” (small pieces of filter paper dipped in plaster of Paris/charcoal slurry) which is placed in a container with fresh plaster/charcoal substrate.
Om testkemikalien är svårlöslig i vatten kan den lösas upp i minsta möjliga volym lämpligt organiskt lösningsmedel (t.ex. hexan, aceton eller kloroform).
A few grains of yeast are added to the substrate to attract the juveniles and make them leave the egg-paper.
Denna lösning blandas sedan med 10 g fin kvartssand för varje testkärl.
It is important that the egg-paper and substrate are humid, or the eggs will dehydrate.
Endast ämnen som avdunstar lätt får användas för att upplösa, dispergera eller emulgera testkemikalien.
As an alternative, adult animals may be removed from the synchronisation culture boxes after producing eggs for 2 or 3 days.
Man bör hålla i åtanke att den sand som följer med blandningen av testkemikalie och sand måste beaktas när sedimentet förbereds (dvs. sedimentet bör beredas med en mindre mängd sand).
After three days most of the eggs on the egg-paper will have hatched, and some juveniles may be found under the egg-paper.
Vid behov kan delprover analyseras för att bestämma homogeniteten.
To have evenly aged juveniles, the egg-paper with un-hatched eggs is removed from the Petri dish with forceps.
Testets utformning avser antalet koncentrationer och intervallen mellan dem, antalet kärl per koncentration och antalet larver per kärl, antalet kristalliseringsskålar och odlingsbehållare.
The juveniles, now 0-3 days, stay in the dish and are fed baker's yeast.
Utformning för ECx, NOEC och för toleranstest beskrivs nedan.
Un-hatched eggs are discharged.
Utformning för regressionsanalys
Eggs and hatched juveniles are cultured in the same manner as the adults.
Den effektkoncentration (ECx) och det koncentrationsintervall inom vilket effekterna av testkemikalien är av intresse bör omfattas av testet, så att endpointen inte extrapoleras utom ramarna för de data som genereras.
In particular for F. fimetaria the following measures should be taken:
Extrapolering långt under lägsta eller över högsta koncentration bör undvikas.
ensuring sufficient fresh food, old moulding food is removed, after 1 week the juveniles are divided into new Petri dishes provided that the density is above 200.
Ett preliminärt (range-finding) test enligt testmetod C.27 eller C.28 kan vara till hjälp vid valet av lämpliga testkoncentrationsintervall.
Handling collembolans at test initiation
För bestämning av ECx krävs minst fem koncentrationer och åtta replikat för varje koncentration.
9-12 days old F. candida or the 23-26 days old F. fimetaria are collected, e.g. by suction, and released into a small container with moist plaster/charcoal substrate and their physical condition is checked under the binocular (injured and damaged animals are disposed).
För varje koncentration bör två odlingsbehållare användas (A och B).
Static electricity should be neutralised, otherwise the animals may just fly into the air, or stick to the side of the test container and dry out.
Den andra generationen har dock återigen åtta replikat, som påbörjas utifrån de exponerade populationerna i odlingsbehållarna.
An ioniser or a moist cloth below the container may be used for neutralisation.
Faktorn mellan koncentrationerna bör inte vara större än två (undantag kan göras i fall där dos-respons-kurvan har liten lutning).
The food should be spread all over the soil surface and not just in one lump.
Antalet replikat per testkärl kan minskas till sex (tre för varje odlingsbehållare) om antalet testkoncentrationer med olika responser ökas.
During transportation and during the testing period it should be avoided to knock or otherwise physically disturb the test containers, as this may increase the compaction of the soil, and hamper the interaction between the collembolans.
En ökning av antalet replikat eller en minskning av testkoncentrationsintervallerna tenderar att leda till smalare konfidensintervall kring ECx.
A number of prerequisites should be fulfilled in advance before using alternative species:
Antalet replikat bör vara tillräckligt för att säkerställa tillräcklig statistisk giltighet för att upptäcka en skillnad på 20 % jämfört med kontrollen vid en signifikansnivå på 5 % (α = 0,05).
They should be unequivocally identified;
För utvecklingshastighet, fruktsamhet och fertilitet är det vanligen lämpligt att använda variansanalys (ANOVA), följd av Dunnetts eller Williams test (22–25).
The rationale for the selection of the species should be given;
För andelen kläckta djur och könsfördelningen kan Cochran-Armitages test, Fishers exakta test (med Bonferronikorrigering) eller Mantel-Haentzals test vara lämpliga.
It should be ensured that the reproductive biology is included in the testing phase so it will be a potential target during the exposure;
Ett toleranstest kan utföras (en testkoncentration och kontroll(er)) om inga effekter observeras i det frivilliga preliminära testet upp till en högsta koncentration.
The life-history should be known:
Syftet med toleranstestet är att få en indikation om att testkemikaliens toxiska effekter förekommer vid nivåer som är högre än den testade gränskoncentrationen.
age at maturation, duration of egg development, and instars subject to exposure;
För vatten föreslås 100 mg/l och 1000 mg/kg för sediment (torrvikt).
Optimal conditions for growth and reproduction should be provided by the test substrate and food supply;
Normalt behövs minst åtta replikat både för testkärl och kontroll.
Two methods of extraction can be performed.
Om dessa krav inte uppfylls kan man använda t-testet med olika varians eller ett icke-parametriskt test, såsom Wilcoxon-Mann-Whitneys test.
First method:
För andelen kläckta djur är Fishers exakta test lämpligt att använda.
A controlled temperature gradient extractor based on principles by MacFadyen can be used (1).
Beredning av vatten/sediment-systemet (spikat vatten)
The heat coming from a heating element at the top of the extraction box (regulated through a thermistor placed on the surface of the soil sample).
a.
The temperature in the cooled liquid surrounding the collecting vessel is regulated through a thermistor situated at the surface of the collection box (placed below the soil core).
Syntetiskt sediment (se punkterna 13 och 14 samt tillägg 3) placeras i varje testkärl och kristalliseringsskål så att det bildar ett skikt på minst 1,5 cm (det kan vara något lägre i kristalliseringsskålen) men högst 3 cm.
The thermistors are connected to a programmable controlling unit which raises the temperature according to a pre-programmed schedule.
Vatten (se punkt 15) tillsätts så att förhållandet mellan sedimentskiktets djup och vattnets djup inte överskrider 1:4.
Animals are collected in the cooled collecting box (2 °C) with a bottom layer of plaster of Paris/charcoal.
Efter beredning av testkärlen bör sediment/vatten-systemet luftas skonsamt i ca sju dagar före tillsats av första stadiets larver i första eller andra generationen (se punkt 14 och tillägg 3).
Extraction is started at 25 °C and the temperature is increased automatically every 12 h by 5 °C and has a total duration of 48 hours.
Sediment/vatten-systemet i kristalliseringsskålarna luftas inte under testets gång, eftersom det inte behöver stödja larvernas överlevnad (äggbanden samlas in redan före kläckningen).
After 12 h at 40 °C the extraction is finished.
För att undvika separation av sedimentets beståndsdelar och återsuspension av finfördelat material medan testvatten tillsätts i vattenkolumnen kan sedimentet täckas med en plastplatta medan vattnet tillsätts.
Second method:
Plattan avlägsnas sedan omedelbart.
After the experimental incubation period the number of juvenile Collembola present is assessed by flotation.
Även andra metoder kan vara lämpliga.
For that purpose the test is performed in the vessels of approximately 250 ml volume.
Beredning av vatten/sediment-systemet (spikat sediment)
200 ml of distilled water are added.
Spikade sediment som beretts enligt punkt 16b placeras i kärlen och i kristalliseringsskålen, och det överliggande vattnet tillsätts så att förhållandet mellan sediment- och vattenvolymen är 1:4.
0,5 ml, of black Kentmere photographic dye may be added to the water to aid counting by increasing the contrast between the water and the white Collembola.
Efter beredningen av spikat sediment och överliggande vatten rekommenderas att testkemikalien får fördela sig från sedimentet till vattenfasen (4) (5) (7) (18).
The dye is not toxic to Collembola.
Den lämpliga stabiliseringstiden beror på sedimentet och kemikalien, och kan variera mellan några timmar och flera dagar, i sällsynta fall upp till fem veckor.
Counting:
Eftersom en lång stabiliseringstid kan leda till att många kemikalier sönderfaller eftersträvas här inte jämvikt, utan i stället rekommenderas en stabiliseringstid på 48 timmar.
Counts of numbers may be carried out by eye or under a light microscope using a grid placed over the floatation vessel or by photographing the surface of each vessel and later counting the Collembola on enlarged prints or projected slides.
När halveringstiden för nedbrytning i sedimentet är känd för att vara lång (se punkt 8) kan stabiliseringstiden dock förlängas.
Counts may also be performed using digital image processing techniques (12).
I slutet av denna stabiliseringsperiod bör koncentrationen av testkemikalien mätas i det överliggande vattnet, porvattnet och sedimentet, åtminstone vid den högsta koncentrationen och en lägre koncentration (se punkt 38).
All techniques should be validated.
Dessa analytiska bestämningar av testkemikalien gör det möjligt att beräkna massbalansen och uttrycka resultaten på grundval av uppmätta koncentrationer.
Determination of the maximum WHC of the soil
Testkärlen bör vara täckta (t.ex. med glasplattor).
The following method for determining the maximum water holding capacity (WHC) of the soil has been found to be appropriate.
Vid behov kan vattennivåerna fyllas på under testets gång till deras ursprungliga volym för att kompensera för avdunstning.
It is described in Annex C of ISO DIS 11268-2 (Soil Quality — Effects of pollutants on earthworms (Eisenia fetida).
Detta bör göras med destillerat eller avjonat vatten för att förebygga ackumulering av salter.
Part 2: Determination of effects on reproduction).
Kristalliseringsskålarna i odlingsbehållarna ska inte täckas och kan, men behöver inte nödvändigtvis, justeras för att kompensera för vattenförluster under testperioden, eftersom äggbanden endast kommer i kontakt med vattnet under ca en dag och skålarna endast används under en kort fas i testet.
Cover the bottom of the tube with a wet piece of filter paper and then place it on a rack in a water bath.
Tillförsel av testorganismer
The water holding capacity (WHC) should be calculated as follows:
Fyra till fem dagar innan det första stadiets larver från den första generationen tillsätts bör äggmassorna avlägsnas från odlingen och placeras i små kärl i ett odlingsmedium.
Soil Quality — Determination of pH.
Mognat medium från stamodlingen eller ett nyberett medium kan användas.
C.40.
Under alla omständigheter bör en liten mängd foder, t.ex. några droppar filtrat från en finmald suspension av fiskfoder i flingform, tillsättas odlingsmediet (se tillägg 2).
SEDIMENT-WATER CHIRONOMID LIFE-CYCLE TOXICITY TEST USING SPIKED WATER OR SPIKED SEDIMENT
Endast nylagda äggmassor får användas.
This test method is equivalent to OECD Testing Guideline (TG) 233 (2010).
I regel börjar larverna kläckas några dagar efter att äggen har lagts (2–3 dagar för C. riparius vid 20 °C och 1–4 dagar för C. dilutus vid 23 °C och C. yoshimatsui vid 25 °C), och larvernas tillväxt sker i fyra stadier på 4–8 dagar per stadium.
It is designed to assess the effects of life-long exposure of chemicals on the freshwater dipteran Chironomus sp., fully covering the 1st generation (P generation) and the early part of the 2nd generation (F1 generation).
Första stadiets larver (högst 48 timmar efter kläckningen) bör användas i testet.
It is an extension of the existing test methods C.28 (1) or C.27 (15) using a spiked-water exposure scenario or a spiked sediment scenario, respectively.
Bestämningen av larvstadium kan eventuellt göras genom mätning av huvudkapseldiameter (7).
It takes into account existing toxicity test protocols for Chironomus riparius and Chironomus dilutus (previously named C. tentans (2)) that have been developed in Europe and North America (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) and subsequently ring-tested (1) (7) (10) (11) (12).
Tjugo första stadiets larver från den första generationen fördelas slumpvis i varje testkärl som innehåller sediment/vatten-systemet med hjälp av en trubbig pipett.
Other well documented chironomid species may also be used, e.g. Chironomus yoshimatsui (13) (14).
Luftningen av vattnet stängs av medan larverna tillsätts i testkärlen och bör förbli avstängd under 24 timmar efter tillsättningen av larver (se punkt 32).
The complete exposure duration is ca.
Enligt det testupplägg som används (se punkterna 19 och 20) är antalet larver per testkoncentration minst 120 (6 replikat per koncentration) för bestämningen av ECx och 160 för bestämningen av NOEC (8 replikat per koncentration).
44 days for C. riparius and C. yoshimatsui, and –ca.
I scenariot med spikat sediment inleds exponeringen i och med tillsättningen av larverna.
100 days for C. dilutus.
Spikning av det överliggande vattnet
The water exposure scenario, spiking of the water column, is intended to simulate a pesticide spray drift event and covers the initial peak concentration in surface waters.
Därefter görs en försiktig omrörning av det överliggande vattnet utan att störa sedimentet.
Water spiking is also useful for other types of exposure (including chemical spills), but not for accumulation processes within the sediment lasting longer than the test period.
I scenariot med spikat vatten inleds exponeringen med spikningen av vattnet (dvs. en dag efter tillsättningen av larverna).
In that case, and also when run-off is the main entry route of pesticides into water bodies, a spiked sediment design may be more appropriate.
Insamling av nykläckta vuxna exemplar
If other exposure scenarios are of interest, the test design may be readily adapted.
Nykläckta myggor från den första generationen samlas in minst en gång, men helst två gånger per dag (se punkt 36) från testkärlen med hjälp av en aspirator, exhauster eller liknande anordning (se tillägg 5).
Sediment-dwelling organisms may be exposed via a number of routes.
På dagen då (hanarna) börjar kläckas spikas kristalliseringsskålarna genom att en liten mängd stamlösning med testkemikalien pipetteras ner under vattenytan (utformning med spikat vatten).
The relative importance of each exposure route, and the time taken for each to contribute to the overall toxic effect, is dependent on the physical-chemical properties of the chemical.
Testkemikaliens koncentration i kristalliseringsskålen är praktiskt taget densamma som i det behandlingskärl som har avsatts för odlingsbehållaren i fråga.
For strongly adsorbing chemicals or for chemicals covalently binding to sediment, ingestion of contaminated food may be a significant exposure route.
För utformningen med spikat sediment förbereds kristalliseringsskålarna ungefär på dag 11 efter exponeringens början (dvs. tillsatsen av den första generationens larver) så att de kan stabiliseras i cirka 48 timmar före de första äggbanden produceras.
In order not to underestimate the toxicity of highly lipophilic chemicals, the use of food added to the sediment before application of the test chemical may be considered (see paragraph 31).
Äggbanden samlas in från kristalliseringsskålarna i odlingsbehållarna med hjälp av en pincett eller en trubbig pipett.
Therefore, it is possible to include all routes of exposure and all life stages.
Varje äggband placeras i en behållare som innehåller odlingsmedium från den kristalliseringsskål som det insamlats ifrån (t.ex. ett hål i en 12-brunnars mikrotiterplatta tillsammans med minst 2,5 ml medium).
Measured endpoints are the total number of adults emerged (for both 1st and 2nd generations), development rate (for both 1st and 2nd generations), sex ratio of fully emerged and alive adults (for both 1st and 2nd generations), number of egg ropes per female (1st generation only) and fertility of the egg ropes (1st generation only).
Kärlen med äggbanden täcks med lock för att förhindra betydande avdunstning.
Formulated sediment is strongly recommended.
Äggbanden hålls under observation under minst sex dagar efter att de har lagts så att de kan klassificeras som befruktade eller obefruktade.
Formulated sediment has several advantages over natural sediments:
För att initiera den andra generationen väljs minst tre, men helst sex, befruktade band ut från varje odlingsbehållare och tillåts att kläckas tillsammans med lite foder.
experimental variability is reduced because it forms a reproducible “standardised matrix” and the need to source uncontaminated clean sediment is eliminated;
Dessa äggband ska ha lagts när äggläggningen nådde sitt maximum, vilket normalt inträffar omkring testdag 19 i kontrollerna.
tests can be initiated at any time without encountering seasonal variability in the test sediment and there is no need to pre-treat the sediment to remove indigenous fauna;
Helst ska andra generationen i alla testkärl initieras på samma dag, men på grund av kemikaliens effekter på larvernas utveckling är detta emellertid inte alltid möjligt.
reduced cost compared to field collection of sufficient quantities required for routine testing;
I sådana fall kan de högre koncentrationerna initieras senare än de lägre behandlingarna och (lösningsmedels-)kontrollen.
formulated sediment allows for comparisons of toxicity across studies and ranking chemicals accordingly (3).
a.
First instar chironomid larvae are exposed to a concentration range of the test chemical in a sediment-water system.
I scenariot med spikat vatten bereds sediment/vatten-systemet för den andra generationen genom att den överliggande vattenkolumnen spikas med testämnet ca en timme före larverna i det första stadiet tillsätts i testkärlen.
The test starts by placing first instar larvae (1st generation) into test beakers containing spiked sediment or alternately the test chemical is spiked into the water after addition of the larvae.
Små volymer av testkemikalielösningar tillsätts under vattenytan med hjälp av en pipett.
Chironomid emergence, time to emergence and sex ratio of the fully emerged and alive midges are assessed.
Efter spikningen görs en lätt luftning.
Emerged adults are transferred to breeding cages, to facilitate swarming, mating and oviposition.
b.
The number of egg ropes produced and their fertility are assessed.
I scenariot med spikat sediment bereds exponeringskärlen som innehåller sediment/vatten-systemet för den andra generationen på samma sätt som för den första generationen.
From these egg ropes, first instar larvae of the 2nd generation are obtained.
Tjugo larver i första stadiet (högst 48 timmar efter kläckningen) från den andra generationen fördelas slumpvis i varje testkärl som innehåller det spikade sediment/vatten-systemet med hjälp av en trubbig pipett.