natgillin/translations-raw huggingface dataset:
preparation of the test water (if reconstituted water is used) and characteristics (oxygen concentration, pH, hardness, etc. measured at the start of the test);
Protokollet bygger på fiskar som exponeras via vattnet för kemikalier under deras könslabila period, under vilken fisken förväntas vara mest känslig för effekterna av hormonstörande kemikalier som kan störa könsutvecklingen.
depth of sediment and overlaying water for the test vessels and crystallising dishes;
Två centrala endpoints mäts som indikatorer på dessa hormonrelaterade avvikelser: VTG-koncentrationerna och könsfördelningen (förhållandet mellan könen), som fastställs via histologisk analys av könskörtlarna.
volume of overlying and pore water;
Histopatologisk analys av könskörtlarna (utvärdering och stadieindelning av oocyter och spermatogena celler) är frivillig.
weight of wet sediment with and without pore water for the test vessels and the crystallising dishes;
Dessutom bestäms det genetiska könet närhelst det är möjligt (t.ex. i japanska risfiskar och storspigg).
test vessels (material and size);
Förekomsten av en genetisk könsmarkör är en avsevärd fördel, eftersom den ökar giltigheten av statistiken över könsfördelningen och möjliggör upptäckter av individuella fenotypiska könsbyten.
crystallising dishes (material and size);
Andra apikala endpoints som ska mätas inbegriper andelen kläckta djur, överlevnad, längd och kroppsvikt.
breeding cages (material and size)
Testmetoden kan anpassas till andra arter än de som anges ovan under förutsättning att de övriga arterna genomgår en validering som motsvarar den som genomförts för japanska risfiskar, storspigg och sebrafisk, att fiskarna i kontrollerna är könsdifferentierade vid testets slut, att VTG-nivåerna är tillräckligt höga för att man ska kunna upptäcka betydande kemikalierelaterade variationer, och att testsystemets känslighet fastställs med hjälp av endokrint aktiva referenskemikalier ((anti-)östrogener, (anti-)androgener, aromatashämmare, etc.).
method of preparation of stock solutions and test concentrations for the test vessels and crystallising dishes;
Dessutom ska alla valideringsrapporter som hänvisar till data från testet på fiskars könsutveckling i vilket andra arter har testats granskas av OECD, och resultatet av valideringen bör anses vara tillfredsställande.
application of the test chemical into the test vessels and crystallising dishes:
Inledande överväganden och begränsningar
test concentrations, number of replicates and solvents if needed;
VTG produceras vanligen i levern hos honor av äggläggande ryggradsdjur som respons på cirkulerande endogent östrogen (2).
incubation conditions for the test vessels:
VTG-syntesen är mycket begränsad, men är påvisbar i ungfisk och vuxna hanfiskar eftersom de saknar tillräcklig mängd cirkulerande östrogen.
temperature, light cycle and intensity, aeration (bubbles per second);
Levern kan dock producera och utsöndra VTG som respons på exogen stimulans av östrogen (3) (4) (5).
incubation conditions for the breeding cages and the crystallising dishes:
Mätning av VTG gör det möjligt att påvisa kemikalier med östrogena, antiöstrogena och androgena verkningssätt samt kemikalier som stör steroidogenesen, som till exempel aromatashämmare.
temperature, light cycle and intensity;
Man kan påvisa ämnen med östrogena kemikalier genom mätning av VTG-induktionen hos hanfiskar, och detta har dokumenterats många gånger i den fackgranskade vetenskapliga litteraturen.
incubation conditions for the egg ropes in the micro plates (or other vessels):
VTG-induktion har också påvisats efter exponering för aromatiserbara androgener (6) (7).
temperature, light cycle and intensity:
En minskning av nivåerna av cirkulerande östrogen hos honor, till exempel genom hämning av aromatas som omvandlar det endogena androgenet till det naturliga östrogenet 17-beta-östradiol, orsakar en minskning av VTG-koncentrationen som används för att påvisa kemikalier med aromatashämmande egenskaper eller mer allmänna steroidogeneshämmare (33).
detailed information on feeding including type of food, preparation, amount and feeding regime.
Den biologiska relevansen av den VTG-respons som följer östrogen- och aromatashämning har fastställts och har dokumenterats i stora drag (8) (9).
nominal test concentrations, measured test concentrations and the results of all analyses to determine the concentration of the test chemical in the test vessels and crystallising dishes;
Det är dock möjligt att produktionen av VTG hos honor även kan påverkas av allmän toxicitet och icke-endokrina toxiska verkningssätt.
water quality within the test vessels and crystallising dishes, i.e. pH, temperature, dissolved oxygen, hardness and ammonia;
Flera mätmetoder har framgångsrikt utvecklats och standardiserats för rutinmässig användning för att kvantifiera VTG i blodprov, leverprov, helkroppsprov eller huvud/stjärthomogenatprov som samlats in från enskilda fiskar.
replacement of evaporated test water for the test vessels, if any;
Detta är fallet för sebrafiskar, storspigg och japanska risfiskar, och även för den delvis validerade arten knölskallelöja.
number of emerged male and female midges per vessel and per day for the 1st and 2nd generation;
Artspecifika metoder för ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) som använder immunokemi för kvantifiering av VTG finns att tillgå (5) (10) (11) (12) (13) (14) (15) (16).
mean development rate of fully emerged and alive midges per replicate and treatment rate (male and female midges separate and also pooled) for the 1st and 2nd generation;
I princip kan östrogener, antiöstrogener, androgener, antiandrogener och steroidogeneshämmande kemikalier påverka könsfördelningen hos ungfiskar som håller på att utvecklas (20).
number of egg ropes deposited in the crystallising dishes per breeding cage and day;
Det har visat sig att dessa könsbyten delvis är reversibla hos sebrafiskar (21) efter exponering för östrogenliknande kemikalier, medan könsbyten efter exponering för androgenliknande kemikalier är permanenta (30).
characteristics of each egg rope (size, shape and fertility);
Könet definieras som honkön, hankön, intersexuellt (såväl oocyter och spermatogena celler förekommer i samma könskörtel) eller odifferentierat, fastställt i enskilda fiskar genom histologisk undersökning av könskörtlarna.
fecundity — total number of egg ropes per total number of females added to the breeding cage;
Vägledning ges i tillägg 7 och i OECD:s vägledningsdokument Diagnosis of Endocrine-Related Histopathology of Fish Gonads (22).
fertility — total number of fertile egg ropes per total number of females added to the breeding cage;
Genetiskt kön analyseras via genetiska markörer när dessa förekommer hos en viss fiskart.
estimates of toxic endpoints e.g. ECx (and associated confidence intervals), NOEC and the statistical methods used for its determination;
Hos japanska risfiskar kan de honliga XX- eller hanliga XY-generna påvisas genom polymeraskedjereaktion (PCR), eller så kan den Y-länkade DM-domängenen (DMY) analyseras (DMY-negativ eller -positiv) på det sätt som beskrivs i (23) (24).
Chapter C.28 of this Annex, Sediment-water chironomid toxicity test using spiked water.
Hos storspigg finns en motsvarande PCR-metod för bestämning av genetiskt kön som beskrivs i tillägg 10.
Chapter C.27 of this Annex, Sediment-water chironomid toxicity test using spiked sediment.
När det genetiska könet kan länkas individuellt till det fenotypiska könet förbättras testets tillförlitlighet och därför bör det genetiska könet bestämmas för arter med dokumenterade genetiska könsmarkörer.
J. Amer.
Kombinationen av två viktiga endokrina endpoints, VTG och könsfördelning, kan påvisa kemikaliens endokrina verkningssätt (tabell 1).
OECD (2006), Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data:
Könsfördelningen är en populationsrelevant biomarkör (25) (26), och för vissa väldefinierade verkningssätt kan resultaten från testet på fiskars könsutveckling användas för faro- och riskbedömning när så anses lämpligt av den reglerande myndigheten.
a Guidance to Application, OECD Series on Testing and Assessment No. 54, 146 pp., ENV/JM/MONO(2006)18, OECD, Paris.
Dessa verkningssätt är för närvarande östrogener, androgener och steroidogeneshämmare.
Formulated sediment or reconstituted, artificial or synthetic sediment is a mixture of materials used to mimic the physical components of natural sediment.
De endokrina endpoints reaktion på de olika verkningssätten hos kemikalier:
Overlying water is the water placed over sediment in the test vessel.
↑ = ökning, ↓ = minskning, — = ej undersökt
Interstitial water or pore water is the water occupying space between sediment and soil particles.
Hänvisningar
Spiked water is the test water to which test chemical has been added.
Svag östrogenagonist
Recommendations for culture of Chironomus riparius
↑♀ eller ↑odiff.
Chironomus larvae may be reared in crystallising dishes or larger containers.
Stark östrogenagonist
Fine quartz sand is spread in a thin layer of about 5 to 10 mm deep over the bottom of the container.
↑♀ eller ↑odiff., inga ♂
Suitable water is then added to a depth of several cm.
↓♀, ↑odiff.
Water levels should be topped up as necessary to replace evaporative loss, and prevent desiccation.
Androgenagonist
Water can be replaced if necessary.
↑ ♂, inga ♀
Gentle aeration should be provided.
Androgenantagonist
The larval rearing vessels should be held in a suitable cage which will prevent escape of the emerging adults.
↑intersexuellt
The cage should be sufficiently large to allow swarming of emerged adults, otherwise copulation may not occur (minimum is ca.
Aromatashämmare
30 × 30 × 30 cm).
Testet på fiskars könsutveckling omfattar inte fiskens reproduktiva livsstadium och därför bör kemikalier som misstänks påverka fortplantningen vid lägre halter än könsutvecklingen undersökas i ett test som omfattar reproduktionen.
Cages should be held at room temperature or in a constant environment room at 20 ± 2 °C with a photo period of 16 hour light (intensity ca.
Definitioner som används i denna testmetod finns i tillägg 1.
1000 lux), 8 hours dark.
In vivo-testet på fiskars könsutveckling är avsett att påvisa kemikalier med androgena och östrogena egenskaper såväl som antiandrogena, antiöstrogena och steroidogeneshämmande egenskaper.
It has been reported that air humidity of less than 60 % RH can impede reproduction.
Valideringsfaserna i testet på fiskars könsutveckling (1 och 2) omfattade östrogena, androgena och steroidogeneshämmande kemikalier.
Any suitable natural or synthetic water may be used.
Effekterna i testet på fiskars könsutveckling av östrogen- och androgenantagonister framgår av tabell 1, men dessa verkningssätt är för närvarande mindre dokumenterade.
Well water, dechlorinated tap water and artificial media (e.g. Elendt “M4” or “M7” medium, see below) are commonly used.
I testet exponeras fisken, från nyligen befruktat ägg till och med genomgången könsdifferentiering, för minst tre koncentrationer av testkemikalien upplöst i vatten.
If necessary, the culture water may be renewed by pouring or siphoning the used water from culture vessels carefully without destroying the tubes of larvae.
Testet inleds med att de nyligen befruktade äggen (före groddskivans klyvning) placeras i testbehållarna.
Feeding larvae
Fyllandet av behållarna beskrivs för varje art i punkt 27.
Chironomus larvae should be fed with a fish flake food (Tetra Min®, Tetra Phyll® or other similar brand of proprietary fish food), at approximately 250 mg per vessel per day.
För de validerade fiskarterna, japansk risfisk, storspigg och sebrafisk, avslutas testet på dag 60 efter kläckningen.
This can be given as a dry ground powder or as a suspension in water:
Vid slutet av testet avlivas alla fiskar på ett humant sätt.
1,0 g of flake food is added to 20 ml of dilution water and blended to give a homogenous mix.
Ett biologiskt prov (blodplasma, lever eller huvud/stjärthomogenat) samlas in för analys av VTG från varje fisk, och den återstående delen fixeras för en histologisk utvärdering av könskörtlarna för att fastställa det fenotypiska könet.
This preparation may be fed at a rate of about 5 ml per vessel per day.
Alternativt kan en histopatologisk analys utföras (t.ex. stadiebestämning av könskörtlarna och graden av intersexualitet).
(shake before use.)
Ett biologiskt prov (anal- eller ryggfenan) för bestämning av genetiskt kön tas för arter med lämpliga markörer (tillägg 9 och 10).
Older larvae may receive more.
Resultat från ett akut toxicitetstest eller annat korttidstest av toxicitet (t.ex. testmetod C.14 (34) och OECD TG 210 (1)), som helst ska ha utförts med samma art som används för detta test, bör finnas tillgängliga.
Feeding is adjusted according to the water quality.
Detta innebär att testkemikaliens vattenlöslighet och ångtryck är kända och att en tillförlitlig analysmetod för kvantifiering av kemikalien i testbehållarna, med känd och rapporterad noggrannhet och detektionsgräns, finns att tillgå.
If the culture medium becomes “cloudy”, the feeding should be reduced.
Annan användbar information inbegriper strukturformel, kemikaliens renhet, stabilitet i vatten och ljus, pKa, Pow samt resultaten från ett test avseende lätt bionedbrytbarhet (testmetod C.4) (35).
Food additions should be carefully monitored.
Kriterier för godkännande av testet
Too little food will cause emigration of the larvae towards the water column, and too much food will cause increased microbial activity and reduced oxygen concentrations.
Halten löst syre bör vara minst 60 procent av luftmättnadsvärdet (ASV) under hela testet.
Both conditions can result in reduced growth rates.
Vattentemperaturen bör inte variera med mer än ± 1,5 °C mellan olika testbehållare vid någon tidpunkt under exponeringsperioden och bör hållas inom de temperaturgränser som specificerats för den art som används (se tillägg 2).
Some green algae (e.g. Scenedesmus subspicatus, Chlorella vulgaris) cells may also be added when new culture vessels are set up.
En validerad metod för analys av exponeringskemikalien med en detektionsgräns som ligger långt under den lägsta nominella koncentrationen bör finnas tillgänglig och belägg bör samlas in för att visa att testkemikaliens koncentrationen i lösningen har på ett tillfredsställande sätt hållits inom ± 20 % av de genomsnittliga uppmätta värdena.
Feeding emerged adults
Den totala överlevnaden för de befruktade äggen i kontrollgrupperna, och i tillämpliga fall i kontrollerna med lösningsmedel, måste vara större än eller lika med de gränsnivåer som definieras i tillägg 2.
Some experimenters have suggested that a cotton wool pad soaked in a saturated sucrose solution may serve as a food for emerged adults.
Godkännandekriterierna rörande tillväxt och könsförhållanden vid slutet av testet bygger på data från kontrollgruppen (de sammanlagda kontrollerna för lösningsmedel och vatten, såvida de inte är betydligt olika – då enbart lösningsmedlet):
At 20 ± 2 °C adults will begin to emerge from the larval rearing vessels after approximately 13 - 15 days.
Japansk risfisk
Males are easily distinguished by having plumose antennae and thin body.
Storspigg
Egg masses
Tillväxt
Once adults are present within the breeding cage, all larval rearing vessels should be checked three times weekly for deposition of the gelatinous egg masses.
Den avtorkade fiskens våtvikt
If present, the egg masses should be carefully removed.
>75 mg
They should be transferred to a small dish containing a sample of the breeding water.
Längd (normallängd)
Egg masses are used to start a new culture vessel (e.g. 2 - 4 egg masses/vessel) or are used for toxicity tests.
>20 mm
First instar larvae should hatch after 2 - 3 days.
>14 mm
Set-up of new culture vessels
Könsfördelning (% hanar och honor)
Once cultures are established it should be possible to set up a fresh larval culture vessel weekly or less frequently depending on testing requirements, removing the older vessels after adult midges have emerged.
Om ett lösningsmedel används bör det inte ha en statistiskt signifikant effekt på överlevnaden och bör inte ha några hormonstörande eller andra skadliga verkningar på tidiga levnadsstadier enligt vad som framkommit av en lösningsmedelskontroll.
Using this system a regular supply of adults will be produced with a minimum of management.
Om en avvikelse från kriterierna för godkännande av testet observeras, bör konsekvenserna av detta betraktas i förhållande till testuppgifternas tillförlitlighet.
Preparation of test solutions “M4” and “M7”
Dessa överväganden bör ingå i rapporteringen.
Elendt (1990) has described the “M4” medium.
Testbehållare
The “M7” medium is prepared as the “M4” medium except for the substances indicated in Table 1, for which concentrations are four times lower in “M7” than in “M4”.
Alla typer av behållare av glas, rostfritt stål eller annat kemiskt inert material kan användas.
The test solution should not be prepared according to Elendt and Bias (1990) for the concentrations of NaSiO3 · 5H2O, NaNO3, KH2PO4 and K2HPO4 given for the preparation of the stock solutions are not adequate.
Måtten på behållarna bör vara tillräckligt stora för att uppfylla fisktäthetskriterierna som anges nedan.
Preparation of the “M7”-medium
Testbehållarna ska helst placeras slumpvis i testutrymmet.
Each stock solution (I) is prepared individually and a combined stock solution (II) is prepared from these stock solutions (I) (see Table 1).
En randomiserad blockutformning med en koncentration per block är att föredra framför en fullständigt randomiserad utformning.
Fifty ml from the combined stock solution (II) and the amounts of each macro nutrient stock solution which are given in Table 2 are made up to 1 litre of deionised water to prepare the “M7” medium.
Testbehållarna bör avskärmas från oönskade störningar.
A vitamin stock solution is prepared by adding three vitamins to deionised water as indicated in Table 3, and 0,1 ml of the combined vitamin stock solution are added to the final “M7” medium shortly before use.
Rekommenderade fiskarter anges i tillägg 2.
The vitamin stock solution is stored frozen in small aliquots.
Förfarandena för att införa nya arter anges i punkt 2.
The medium is aerated and stabilised.
Skötsel av föräldragenerationen
Stock solutions of trace elements for medium M4 and M7
Närmare uppgifter om lämplig skötsel av föräldragenerationen under tillfredsställande betingelser finns i OECD TG 210 (1).
Stock solutions (I)
Föräldragenerationen bör utfodras en eller två gånger per dag med lämpligt foder.
Amount (mg) made up to 1 litre of deionised water
Hantering av embryon och yngel
To prepare the combined stock solution (II):
Till att börja med kan embryon och yngel exponeras inom huvudbehållaren i mindre kammare av stål eller glas försedda med sidor eller ändar av nät som möjliggör ett flöde av testkemikalien genom kammaren.
mix the following amounts (ml) of stock solutions (I) and make up to 1 litre of deionised water
För att få ett icke-turbulent flöde genom dessa små kammare kan de hängas på en arm som sänker och höjer kamrarna (de får dock inte höjas över ytan).
Final concentrations in test solutions (mg/l)
Om äggbehållare, galler eller nät har använts för att hålla äggen inom huvudbehållaren tas dessa tillbehör bort efter att ynglen har kläckts, med undantag av nät som behövs för att hålla fiskarna på plats.
MnCl2·4H2O [1]
Om ynglen måste flyttas får de inte utsättas för luft, och håvar får inte användas för att släppa ut fiskarna från äggbehållarna.
SrCl2·6H2O [1]
Överföringstidpunkten varierar beroende på art och det är inte alltid nödvändigt med en överföring.
MoO4·2H2O [1]
Allt vatten i vilket testarternas kontrollgrupper har minst lika hög överlevnadsgrad som i sådant vatten som beskrivs i tillägg 3 är lämpligt som testvatten.
CuCl2·2H2O [1]
För att säkerställa att utspädningsvattnet inte påverkar testresultaten på oönskat sätt (t.ex. genom att reagera med testkemikalien) eller negativt påverkar avelsbeståndets förutsättningar, ska vattenprover regelbundet tas för analys.
CaCl2·6H2O
Den totala halten organiskt kol, konduktiviteten, pH-värdet och mängden uppslammade partiklar bör mätas exempelvis var tredje månad när utspädningsvattnets kvalitet är känd för att vara relativt jämn.
EDTA·2H2O [1] [2]
Mätningar av tungmetaller (t.ex.
FeSO4·7H2O [1] [2]
Cu, Pb, Zn, Hg, Cd och Ni), viktiga anjoner och katjoner (t.ex. ca Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl–, SO42–) samt bekämpningsmedel bör göras om vattenkvaliteten kan ifrågasättas.
Macro nutrient stock solutions for medium M4 and M7
Uppgifter om kemisk analys och insamling av vatten återfinns i punkt 34.
Amount made up to 1 litre of deionised water
Genomflödessystem bör användas om det är praktiskt möjligt.
Amount of macro nutrient stock solutions added to prepare medium M4 and M7
För genomflödestest behövs ett system som kontinuerligt släpper ut och späder ut en stamlösning av testkemikalien (t. ex. med mätpump, proportionalitetslösningssystem och mättnadskärlsystem) för att tillföra en serie koncentrationer till testbehållarna.
(ml/l)
Stamlösningens och utspädningsvattnets flödeshastighet bör kontrolleras regelbundet under testets gång och får inte variera med mer än 10 % under hela testet.
Final concentrations in test solutions M4 and M7
En flödeshastighet som motsvarar minst fem testbehållarvolymer per 24 timmar har konstaterats vara lämplig (1).
Vitamin stock solution for medium M4 and M7
Man bör vara noga med att undvika att använda plaströr eller andra material som kan innehålla biologiskt aktiva kemikalier eller som kan adsorbera testkemikalien.
All three vitamin solutions are combined to make a single vitamin stock solution.
Stamlösningen bör helst beredas utan användning av lösningsmedel genom att helt enkelt blanda eller skaka testkemikalien i utspädningsvattnet på mekanisk väg (t.ex. omrörning eller ultraljud).
Amount of vitamin stock solution added to prepare medium M4 and M7
Om testkemikalien är svårlöslig i vatten bör man följa de förfaranden som beskrivs i OECD:s vägledningsdokument om akvatisk toxicitetstestning av svåra ämnen och blandningar (36).
Thiamine hydrochloride
Man bör undvika att använda lösningsmedel, men det kan i vissa fall vara nödvändigt för att framställa en stamlösning med lämplig koncentration.
Cyanocobalamin (B12)
Exempel på lämpliga lösningsmedel ges i (36).
Biotine
Semistatiska testbetingelser bör undvikas om de inte kan motiveras med tvingande skäl som är förbundna med testkemikalien (t.ex. stabilitet, begränsad tillgänglighet, höga kostnader eller risker).
These substances differ in M4 and M7, as indicated above.
Exponeringsförhållanden
These solutions are prepared individually, then poured together and autoclaved immediately.
Insamling av ägg och varaktighet
Preparation of formulated sediment
För att undvika systematiska genetiska avvikelser samlas ägg in från minst tre avelspar eller avelsgrupper, blandas och väljs slumpvis ut för att inleda testet.
SEDIMENT COMPOSITION
För storspigg, se beskrivningen av konstgjord befruktning i tillägg 11.
The composition of the formulated sediment should be as follows:
Testet bör inledas så snart som möjligt efter befruktningen av äggen.
Sphagnum moss peat, as close to pH 5,5-6,0 as possible, no visible plant remains, finely ground (particle size ≤ 1 mm) and air dried
Embryona ska helst befinna sig i testlösningarna innan groddskivornas klyvning inleds, eller så snart som möjligt efter denna tidpunkt och senast tolv timmar efter befruktningen.
4 - 5
Testet bör fortsätta tills könsdifferentieringen i kontrollgruppen är avslutad (60 dagar efter kläckningen för japansk risfisk, storspigg och sebrafisk).
> 50 % of the particles should be in the range of 50-200 μm
Djurtäthet
CaCO3, pulverised, chemically pure
Antalet befruktade ägg vid testperiodens början bör vara minst 120 per koncentration uppdelade mellan minst fyra replikat (det är godtagbart att använda kvadratrotsfördelning till kontrollen).
0,05 - 0,1
Äggen ska fördelas slumpmässigt (med hjälp av statistiska tabeller för randomisering) mellan testkärlen.
Conductivity ≤ 10 μS/cm
Fisktätheten (för definition, se tillägg 1) får inte vara högre än att halten löst syre kan hållas vid minst 60 % av luftmättnadsvärdet utan direkt luftning av behållarna.