natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Approximately 0,1 ml of mounting medium is applied near the end of the slide opposite to the frosted end or on the cover slip.
Vägledning för konstgjord befruktning av storspigg
The cover slip is tilted at a shallow angle as it is applied to the slide.
Syftet med detta avsnitt är att beskriva de förfaranden som används för att erhålla befruktade ägg från storspigg i syfte att använda dem i testet på fiskars könsutveckling.
Labelling
Förfaranden
Each slide label should contain the following information.
Insamling av sperma från hanar
Laboratory name
En välfärgad hane från den önskade populationen avlivas.
Specimen No./Slide No.
Testiklarna avlägsnas från båda sidorna av fisken.
Chemical/Treatment group
Testiklarna är i allmänhet starkt pigmenterade, stavformiga strukturer som är lätta att urskilja vid kroppens laterala mittlinje.
Statistical Flow Chart for vitellogenin analysis
Använd någon av följande metoder:
Dunnett test
Med hjälp av en fin sax gör man med början vid kloaken ett 1–1,5 cm långt vinklat snitt (45 grader) med ett enda klipp.
variances stabilising transform?
Använd en skalpell för att göra ett litet snitt i sidan på fisken något framför bäckenet och precis ventralt från de laterala benplattorna.
Variances unequal Variances equal No Yes
Testiklarna avlägsnas med hjälp av en liten pincett och placeras i en petriskål.
Yes Step-down trend test on replicate means
Varje testikel täcks med 100 μl nyberedd Hanks lösning.
<=3 reps per conc
Testiklarna skärs i små tärningar med ett rakblad eller en skalpell.
Normalising transform?
Detta kommer att frigöra sperman och ger Hanks lösning ett mjölkvitt utseende.
Nested ANOVA not normal
Vätskan som innehåller sperman samlas upp i ett provrör.
Nested ANOVA normal Monotone
Försök undvika att få med bitar av testikelvävnad vid pipetteringen.
Drop water control
800 μl Hanks lösning tillsätts i röret och blandas väl.
Dunn test
Om så krävs kan hanen bevaras genom att fixeras i 100 % etanol eller annat utvalt fixativ.
Step-down Jonckheere or Williams' test
Detta är särskilt viktigt om man i undersökningen bestämmer avkommans föräldraursprung.
Rep means not normal or not homogenous
Även om de flesta stamlösningar som behövs kan göras i förväg bör stamlösning 5 och därefter Hanks lösning nyberedas samma dag som de används.
Rep means not normally distributed
Stamlösning 1
Combine controls, retains subgroups
Destillerat vatten
Compare controls using Wilcoxon or T-test.
Stamlösning 2
Do controls differ?
HPO4 (vattenfri)
Both solvent and non-solvent control are present
Stamlösning 3
Statistical Flow Chart for sex ratio analysis
Stamlösning 4
Apply step-down Jonckheere-Terpstra test (+) to determine NOEC
MgSO4 · 7H2O
Dunn or Mann-Whitney U-test w/Bonferroni-Holm adjustment to determine NOEC
Stamlösning 5 (nyberedd)
Use Dunnett test if homogenous variances (*), Tamhane-Dunnett (T3) test otherwise, to determine NOEC
Om man redan har en del av ovanstående salter men med en annan vattenhalt (dvs. 2H2O i stället för vattenfri) kan dessa ändå användas, men vikten måste först justeras på grundval av molekylvikten.
Are data normally distributed?
För Hanks lösning kombineras i följande ordning
Are data consistent with monotone dose-response?
stamlösning 1
(‡) Or other agreed control selection
stamlösning 2
After arcsin square-root transform
stamlösning 3
(+) With fewer than 5 experimental units per treatment exact J-T or M-W test should be used if available
stamlösning 4
Combine controls
stamlösning 5
Is solvent used?
Stora lekmogna honor med ägg väljs ut från den önskade populationen.
Appendix 9
Honorna är färdiga att kramas ur först när man kan se äggen sticka fram i kloaken.
Guidance for tissue sampling for genetic sex determination and for genetic sex determination by PCR-method
Honor som är lekmogna har en karaktäristisk kroppsställning med huvudet uppåt.
Tissue sampling, preparation and storage before determination of genetic sex by PCR-method in medaka (Prepared by the Laboratory for Aquatic Organisms of Bayer CropScience AG)
För försiktigt ett finger eller tummen längs sidan av fisken mot stjärten för att uppmuntra till utstötning av en äggsäck i en ny petriskål.
With fine scissors the anal or the dorsal fin will be cut off in each individual fish and placed into a tube filled with 100 μl of extraction-buffer 1 (details on buffer preparation see below).
Upprepa på andra sidan och släpp tillbaka fisken i dess akvarium.
The scissors will be cleaned after each single fish in a beaker filled up with distilled H2O and dried with a paper tissue.
Äggen kan spridas ut (till ett enskiktslager) med en liten pensel.
Now the fin-tissues will be homogenised by a micro tube teflon pistil for the lysis of cells.
Det är viktigt att försöka exponera så många ägg som möjligt för sperman, så det är till stor hjälp om man maximerar äggskiktets ytareal.
The pistils will be placed overnight in 0,5 M NaOH, rinse for 5 minutes in distilled H2O and stored in ethanol or sterile after autoclave until use.
Antalet ägg som varje hona kan producera varierar kraftigt, men i genomsnitt bör man enkelt kunna erhålla cirka 150 ägg från en enda lekmogen hona.
It is also possible to store the fin tissue without any extraction-buffer 1 on dry-ice and then at – 80 °C refrigerator to prevent any degeneration of the DNA.
sperma i Hanks blandning fördelas jämnt över äggskiktets hela yta med hjälp av penseln.
But the extraction runs better, if you extract the DNA at the same time (handling see above; samples should be thawed on ice after storaging at – 80 °C before the buffer will be filled in the tubes).
Äggen kommer snabbt att hårdna och ändra färg (inom en minut) när befruktningen har inletts.
Then 100 μl of the extraction buffer 2 (details on buffer preparation see below) will be pipetted into each tube.
Likaledes ska man tillsätta lite mer sperma om äggen inte hårdnar inom en minut.
Afterwards all tubes will be placed in the water bath again and boiled for another 15 minutes at 100 °C.
Äggen och spermielösningen bör få stå och ’interagera’ i minst 15 minuter och de befruktade äggen placeras i exponeringsakvarierna inom 1,5 timmar efter befruktningen.
Until further analysis the tubes will be frozen at – 20 °C.
Förfarandet upprepas med en annan hona till dess att det önskade antalet ägg har samlats in.
Buffer preparation
Behåll ett fåtal ägg från den sista omgången och fixera dem i 10 % ättiksyra.
PCR-buffer 1:
Räkning och fördelning av äggen i testakvarier
500 mg N-Lauroylsarcosine (e.g. Merck KGaA, Darmstadt, GE)
Äggen bör fördelas jämnt mellan varje behandlingsnivå för att undvika systematiska genetiska avvikelser.
ad 100 ml dest.
Varje parti befruktade ägg bör delas upp i lika stora grupper (lika många som behandlingsnivåerna) med hjälp av ett trubbigt instrument (t.ex. en insektspincett med bred spets eller med hjälp av en ympögla).
→ autoclave
Om man ämnar ha fyra replikat per testkärl med 20 ägg i varje måste man fördela 80 ägg per exponeringsakvarium.
PCR-buffer 2:
Det rekommenderas att man lägger till ytterligare 20 % (dvs. 96 ägg per behandlingsnivå) till dess att man är säker på att man har 100 % befruktningsfrekvens.
20 g Chelex (e.g. Biorad, Munich, GE)
Spiggägg är mycket känsliga för svampinfektioner utanför boet, som vaktas av fadern.
To swell in 100 ml dest.
I detta hänseende är det av avgörande betydelse att alla ägg behandlas med metylenblått under de fem första dagarna av testet.
Determination of genetic sex (by PCR-method) in medaka (Prepared by the Laboratory for Aquatic Organisms of Bayer CropScience AG and Universität Würzburg Biozentrum)
En stamlösning med metylenblått bereds vid 1 mg/ml och tillsätts i exponeringsakvarierna för att ge en högsta slutlig koncentration på 2,125 mg/l.
The prepared and frozen tubes (described in the above section) will be thawed on ice.
Viktig anmärkning:
After that, they will be centrifuged using an Eppendorf centrifuge (30 sec at max. speed, at room temperature).
Systemet bör vara fritt från metylenblått senast på dag 6.
For the PCR, the clear supernatant separated from the precipitate will be used.
Äggen ska kontrolleras dagligen och eventuella döda eller obefruktade ägg registreras som sådana.
It has absolutely to be avoided that any traces of Chelex (localized in the precipitate) are transferred to the PCR reaction, because this will interfere with the “Taq”-polymerase activity.
Äggen bör aldrig befinna sig utanför vattnet innan kläckningen ens under mycket korta perioder.
The supernatant will be used directly or can be stored frozen (at – 20 °C) and rethawed again in several cycles without negative impact on the DNA for later analyses.
Hanks buffrade saltlösning(HBSS):HBSS behövs för att bevara sperman medan man förbereder befruktningen.
Preparation of the “Reaction Mix” (25 μl per sample):
C.42 BIOLOGISK NEDBRYTBARHET I HAVSVATTEN
Volume
ALLMÄN INLEDNING
Final Concentration
Denna testmetod motsvarar OECD:s testriktlinje (TG) 306 (1992).
Template DNA
När de ursprungliga testmetoderna utarbetades var det inte känt i vilken utsträckning resultaten från ett screeningtest för lätt bionedbrytbarhet där man använder sötvatten, och spillvatten eller aktiverat slam som inokulat, kan tillämpas på den marina miljön.
0,5μl-2μl
Olika resultat på denna punkt har rapporterats (t.ex.
buffer with MgCl2
1)
2,5μl
Många industriella avloppsvatten som innehåller ett stort antal kemikalier når havet antingen genom direkt utsläpp eller genom flodmynningar och floder där retentionstiden är kort jämfört med den tid som krävs för fullständig biologisk nedbrytning av många av de kemikalier som förekommer i avloppsvattnet.
Nucleotides (each of dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
På grund av den ökande medvetenheten om behovet av att skydda den marina miljön mot ökad belastning av kemikalier och behovet av att uppskatta den sannolika koncentrationen av kemikalier i havet har testmetoder för biologisk nedbrytbarhet i havsvatten utarbetats.
Forward Primer (10μM) (see below 3-5)
I de metoder som beskrivs här används naturligt havsvatten både som vattenfas och som källa till mikroorganismer.
0,5μl
I en strävan att använda samma metoder som för lätt bionedbrytbarhet i sötvatten undersökte man möjligheten att använda ultrafiltrerat havsvatten, och även användningen av marina sediment som inokulat.
Reverse Primer (10μM) (see below 3-5)
Dessa undersökningar rönte ingen framgång.
Water (PCR grade)
Testmediet är därför naturligt havsvatten som förbehandlats för att avlägsna grova partiklar.
up to 25μl
För att bedöma den fullständiga biologiska nedbrytbarheten med skakkolvmetoden måste relativt höga koncentrationer av testämnet användas på grund av den dåliga känsligheten hos analysmetoden med löst organiskt kol (DOC).
Taq E- Polymerase
Detta gör i sin tur att man måste tillsätta oorganiska näringsämnen (N och P) till havsvattnet, eftersom mineralnäringsämnenas låga koncentration i annat fall skulle begränsa elimineringen av DOC.
0,3μl
Det är även nödvändigt att lägga till dessa näringsämnen i closed bottle-metoden på grund av det tillagda testämnets koncentration.
buffer with MgCl2:
Metoderna är sålunda inte tester för lätt bionedbrytbarhet eftersom man inte lägger till något inokulat utöver de mikroorganismer som redan finns i havsvatten.
Tris/HCl (pH8,8 at 25 °C), 160mM (NH4)2SO4, 25mM MgCl2, 0,1 %Tween 20
Inte heller simulerar testerna den marina miljön, eftersom näringsämnen läggs till och testämnets koncentration är mycket högre än i havet.
For each PCR (see below 3-5) the special primer as a new combination of “Reaction-Mix” and the adequate needed amount of template DNA for each sample (see above) is needed.
Av dessa skäl föreslås dessa metoder inom ramen för ett nytt underavsnitt, ’Biologisk nedbrytbarhet i havsvatten’.
The respective volumes will be transferred into new tubes using pipettes.
TILLÄMPNING
After that all tubes will be closed, stirred (ca.
Resultaten av testet, som skulle tillämpas om mönstret för det aktuella ämnets användning och omhändertagande tyder på det hamnar i havet, ger en första indikation på den biologiska nedbrytbarheten i havsvatten.
10 sec) and centrifuged (10 sec, at room temperature).
Om resultatet är positivt (> 70 % DOC-eliminering, > 60 % ThOD – teoretisk syreförbrukning) kan man dra slutsatsen att det finns en kapacitet för biologisk nedbrytning i den marina miljön.
Now the respective PCR-programmes can be started.
Ett negativt resultat utesluter dock inte denna kapacitet utan anger att det behövs ytterligare undersökningar, till exempel genom användning av en så låg koncentration av testämnet som möjligt.
Additionally a positive control (exemplary DNA sample with known activity and clear results) and a negative control (1 μl dest.
Om man behöver ett mer definitivt värde på den biologiska nedbrytningens hastighet eller omfattning i havsvatten på en särskild plats, måste man i vilket fall som helst använda andra metoder som är mer komplexa och sofistikerade, och därmed dyrare.
H2O) will be used in each PCR-programme.
Exempelvis kan ett simuleringstest göras med en koncentration av testämnet som ligger närmare den förväntade koncentrationen i miljön.
Preparation of the agarose gel (1 %) — During running PCR-programmes:
Även icke-mättat, icke-förbehandlat havsvatten från det område som undersöks kan användas, och den primära bionedbrytningen kan följas med hjälp av särskilda kemiska analyser.
Solve 3 g agarose in 300 ml 1 × TAE-buffer (1 % agarose gel)
För fullständig biologisk nedbrytbarhet skulle det vara nödvändigt att använda 14C-märkta ämnen så att elimineringshastigheterna för lösligt organiskt 14C och produktionen av 14CO2 vid miljömässigt realistiska koncentrationer kan mätas.
This solution should be boiled using an microwave (ca.
VAL AV METOD
2-3 min)
Valet av den metod som ska användas beror på en mängd olika faktorer.
Transfer the hot solution into a special casting box, which lies on ice
Följande tabell kan användas som hjälp vid metodvalet.
After ca.
Ämnen med vattenlöslighet som ligger under motsvarande cirka 5 mg C/l kan inte testas med skakkolvmetoden, men svårlösliga ämnen kan, åtminstone i princip, testas med closed bottle-metoden.
Actin-PCR-programme:
METOD
Special primer:
NACKDELAR
“Mact1(upper/forward)” → TTC AAC AGC CCT GCC ATG TA
SKAKKOLV-METODEN
Cycle (35-times):
ingen interferens från nitrifikationen
Annealing
använder 5–40 mg DOC/1, skulle kunna verka hämmande
→ 45 sec at 56 °C
DOC-bestämningen är svår vid låga koncentrationer i havsvatten (klorideffekt)
→ 1 min at 68 °C
CLOSED BOTTLE-METODEN
The samples with intact DNA will be used in this PCR-programme to detect the X- and Y-Genes.
mindre risk för hämning p.g.a. låga koncentrationer av testämnet (2 mg/l)
Male DNA should show one double-band and female DNA should show one single band (after staining and gel-electrophoresis).
kan lätt anpassas till flyktiga ämnen
For this programme-run one positive control for males (XY-sample) and one for females (XX-sample) should be included.
lufttätheten i kolvarna kan vara svår att upprätthålla
“PG 17,6” (lower/reverse) → GAT CGT CCC TCC ACA GAG AAG AGA
blankprovets upptagningsvärden för O2 kan vara höga, särskilt efter 28 dagar;
→ 45 sec at 55 °C
möjlig interferens från upptagningen av O2 genom nitrifikation
Y-Gene-PCR-programme as “control” for X- and Y-Gene-PCR-programme:
Denna metod är en havsvattenvariant av det modifierade OECD-screeningtest som beskrivs i kapitel C.4B i denna bilaga (2).
This PCR-programme verifies the results of the “X- and Y-Gene-PCR-programme”.
Det fick slutgiltigt godkännande efter ett ringtest som organiserades för Europeiska kommissionen (EC) av det danska vattenkvalitetsinstitutet (3).
The “male-samples” should show one band and the “female-samples” shouldn't show any band (after staining and gel-electrophoresis).
I likhet med den åtföljande marina closed bottle-metoden ska resultaten från detta test inte anses utgöra indikatorer på lätt bionedbrytbarhet, men ska uttryckligen användas för att skaffa information om bionedbrytbarheten för ämnen i marina miljöer.
“DMTYa (upper/forward)” → GGC CGG GTC CCC GGG TG
En förutbestämd mängd testämne löses upp i testmediet till dess att koncentrationen löst organiskt kol (DOC)/l når 5–40 mg.
“DMTYd (lower/reverse)” → TTT GGG TGA ACT CAC ATG G
Om känslighetsgränserna för analyser av organiskt kol förbättras kan det vara en fördel att använda lägre koncentrationer av testämnet, i synnerhet för ämnen som verkar hämmande.
Staining of the PCR-samples:
Testämneslösningen i testmediet inkuberas under skakning i mörker eller indirekt ljus under aeroba förhållanden vid en konstant temperatur (med en variation på högst ± 2 °C) som normalt ligger inom intervallet 15–20 °C.
Staining solution:
Om syftet med undersökningen är att simulera situationer i miljön kan testerna utföras bortom detta normala temperaturintervall.
50 % Glycerol
Den rekommenderade maximala varaktigheten för testet är cirka 60 dagar.
0,25 % Bromphenolblue
Nedbrytningen följs med hjälp av mätningar av DOC (fullständig nedbrytning) samt, i vissa fall, med hjälp av särskilda analyser (primär nedbrytning).
0,25 % Xylenecyanol
För att veta om testet kan tillämpas på ett visst ämne måste vissa av dess egenskaper vara kända.
Pipette 1 μl of the staining solution into each single tube
Ämnets halt av organiskt kol måste fastställas, dess flyktighet ska vara sådan att betydande förluster inte förekommer under testets gång och dess löslighet i vatten bör vara större än motsvarande 25–40 mg C/l.
Start of the Gel-Electrophoresis:
Testämnet bör dessutom inte adsorberas på glasytor i större mängd.
The prepared 1 % agarose gel will be transferred into a gel-electrophoresis-chamber filled with 1 × TAE-Buffer
Uppgifter om renheten eller de relativa proportionerna av testämnets huvudbeståndsdelar är nödvändiga för att de erhållna resultaten ska kunna tolkas, särskilt om resultatet ligger nära ’godkänd’ nivå.
10 - 15 μl of each stained PCR-sample will be pipetted into an agarose gel slot
Information om testämnets toxicitet för bakterier, t.ex. uppmätt i kortvariga respirationstester (4), kan vara användbar vid valet av lämpliga testkoncentrationer och kan vara väsentlig när det gäller den korrekta tolkningen av låga värden för biologisk nedbrytbarhet.
Also 5 - 15 μl of the 1kb-“Ladder”(Invitrogen) will be pipetted into a separate slot
Sådan information är dock inte alltid tillräcklig för tolkning av resultaten från testet av biologisk nedbrytbarhet, och det förfarande som beskrivs i punkt 18 är lämpligare.
Start the electrophoresis by 200 V
Lämpliga referensämnen måste användas för att kontrollera den mikrobiella aktiviteten i havsvattenproven.
Stop after 30-45 min
Natriumacetat, natriumbensoat och anilin är exempel på ämnen som kan användas för detta ändamål.
Determination of the bands:
Referensämnena måste brytas ned inom en rimligt kort tidsperiod, och om detta inte sker rekommenderas att testet upprepas med ett annat havsvattenprov.
Clean the agarose gel in distilled H2O
I kommissionens ringtest, där havsvattenprover togs på olika platser och vid olika tider på året (3), var lagfasen (tL) och den tid som behövdes för att uppnå en 50-procentig nedbrytning (t50) exklusive lagfasen 1–4 dagar respektive 1–7 dagar för natriumbensoat.
Now transfer the agarose gel into Ethidium bromide for 15 - 30 min
För anilin varierade tL mellan 0 och 10 dagar, medan t50 varierade mellan 1 och 10 dagar.
After that, a picture of the agarose gel should be taken in an UV-light-box
METODENS REPRODUCERBARHET OCH KÄNSLIGHET
Finally the samples are analysed in comparison to the positive control-band (or bands) and the ladder
Metodens reproducerbarhet fastställdes i ringtestet (3).
Appendix 10
Testämnets lägsta koncentration vid vilken denna metod kan användas med DOC-analys beror till största delen på detektionsgränsen för den organiska kolanalysen (för närvarande cirka 0,5 mg C/l) och koncentrationen av löst organiskt kol i det havsvatten som används (vanligen i storleksordningen 3–5 mg/l för vatten från öppna havet).
Guidance on tissue sampling for genetic sex determination by PCR method in the three-spined stickleback
Bakgrundskoncentrationen av DOC bör inte överstiga ca 20 % av den totala DOC-koncentration efter tillförsel av testämnet.
Tissue sampling and DNA extraction
Om detta inte är möjligt kan bakgrundskoncentrationen av DOC ibland minskas genom åldrande av havsvattnet före testet.
DNA can be extracted using a variety of commercially available reagents and both manual and automated extraction systems.
Om metoden endast används tillsammans med särskild kemisk analys (genom vilken den primära nedbrytningen mäts), måste utredaren genom att tillhandahålla ytterligare information ange huruvida man kan förvänta sig fullständig nedbrytbarhet.
The protocol used at the Cefas Weymouth laboratory is outlined below, and the alternative approaches have been added where appropriate.
Denna ytterligare information kan bestå av resultat från andra test för lätt eller inneboende bionedbrytbarhet.
With fine scissors, a small piece of tissue (10-20 mg) from the dorsolateral area (after removing the head and tail for VTG analysis), is removed from each individual fish.
Vanlig laboratorieutrustning och följande:
The tissue is added into a tube and either placed directly in liquid nitrogen (for storage at – 80 °C) or filled with 70 % ethanol (for transport and subsequent storage at 4 °C).
a. skakapparat som rymmer 0,5–2 liter erlenmeyerkolvar, antingen med automatisk temperaturreglering eller placerad i en lokal med konstant temperatur på 15–20 °C med högst ± 2 °C variation,
The scissors are cleaned after each single fish in 70 % ethanol then in distilled water and dried with tissue paper.
b. smalhalsade 0,5–2 ml erlenmeyerkolvar,
The ethanol (if present) is removed by aspiration and the tissue is digested overnight with proteinase K in 400 μl of ATL buffer (Qiagen).
c. utrustning för membranfiltrering eller en centrifug,
An aliquot (200 μl) of the digest is transferred to a 96-well S-block (Qiagen) and the DNA extracted in a 96-well format using the Qiagen Universal BioRobot and the QIamp Investigator BioRobot kit.
d. membranfilter, 0,2–0,45μm,
The DNA is eluted in a 50 μl of DNase and RNase free water.
e. kolanalysator,
If using hard tissues to extract DNA (such as a spine or a pectoral fin) it may be necessary to homogenise the sample in the lysis buffer using a FastPrep® tissue lyser or equivalent tissue disruption system.
f. utrustning för särskild analys (frivilligt).
Alternatively,
Havsvatten
the tissue is digested overnight with proteinase K in 400 μl of G2 lysis buffer (Qiagen) and DNA is extracted from 200 μl of the digest using either the EZ-1 DNA easy tissue kit and the EZ-1 biorobot or the DNA easy tissue mini kit.
Samla in ett prov med havsvatten i en väl rengjord behållare och transportera det till laboratoriet, helst inom en eller två dagar efter insamlingen.
The DNA is eluted in a 50 μl volume.
Under transporten får provets temperatur inte väsentligt överstiga den temperatur som ska användas i testet.
The tissues are processed using the DNAzol reagent.
Ange insamlingsplatsen exakt och beskriv den i fråga om förorenings- och näringsstatus.
Briefly, tissue samples are lysed in 1ml of DNAzol for 10 minutes in a 1,5 ml micro centrifuge tube and then centrifuged at 13000 rpm for 5 minutes to remove any particulate matter.
Särskilt när det gäller kustvatten bör antalet kolonier av heterotrofa mikroorganismer och en bestämning av koncentrationerna av upplöst nitrat, ammonium och fosfat ingå i denna beskrivning.
The lysed sample is then transfered to a new 1,5 ml micro centrifuge tube containing 500 μl of 100 % molecular grade ethanol and then centrifuged at 13000 rpm for 10 minutes to precipitate the DNA.
Ange följande uppgifter för havsvattenprovet i sig:
The ethanol is removed and replaced with 400 μl of 70 % molecular grade ethanol, centrifuged at 13000 rpm for 5 minutes and the DNA pellet is dissolved in 50 μl molecular DNase and RNase free water.
insamlingsdatum,
Again, when using the hard tissues (pectoral fin) it may be necessary to homogenise the sample in the lysis buffer using a FastPrep® tissue lyser or equivalent tissue disruption system prior to extracting the DNA.
provtagningsdjup,
The DNA is stored at – 20 °C until required.
provets utseende – grumligt osv.,
gloves must be worn during the procedures.
temperatur vid provtagningstillfället,