natgillin/translations-raw huggingface dataset:
If neither system is capable of accommodating the test chemical, then the default is to not test it using this protocol.
Även om de inte utgör det rekommenderade förfarandet kan metoder med statisk förnyelse användas om genomflödestestmetoder visar sig vara otillräckliga för att uppnå MTC-koncentrationen.
Exposure System
Om statisk förnyelse används ska stabiliteten hos testkemikaliens koncentration dokumenteras och förbli inom gränsvärdena för utförandekriterierna.
A flow-through diluter system is preferred, when possible, over a static renewal system.
Förnyelseperioder på 24 timmar rekommenderas.
If physical and/or chemical properties of any of the test chemicals are not amenable to a flow-through diluter system, then an alternative exposure system (e.g., static-renewal) can be employed.
Förnyelseperioder som överskrider 72 timmar kan inte godtas.
The system components should have water-contact components of glass, stainless steel, and/or Polytetrafluoroethylene.
Dessutom bör parametrar för vattenkvalitet (t.ex. halten löst syre, temperatur, pH osv.) mätas vid utgången av varje förnyelseperiod, omedelbart före förnyelsen.
However, suitable plastics can be utilised if they do not compromise the study.
Testkoncentrationsintervall
Exposure tanks should be glass or stainless steel aquaria, equipped with standpipes that result in an approximate tank volume between 4,0 and 10,0 l and minimum water depth of 10 to 15 cm.
Minst tre testkoncentrationer och en kontroll med rent vatten (och vid behov en vehikelkontroll) ska användas.
The system should be capable of supporting all exposure concentrations and a control, with four replicates per treatment.
Minsta möjliga skillnad mellan den högsta och lägsta testkoncentrationen ska vara ungefär en storleksordning.
Iodide Concentration in Test Water
Tabellen nedan kan användas för att förenkla och standardisera bestämningen av utvecklingsstadier under hela studien eftersom den fastställer de framträdande morfologiska kännetecken som är förbundna med olika stadier, under förutsättning att utvecklingen är normal.
In order for the thyroid gland to synthesise TH, sufficient iodide needs to be available to the larvae through a combination of aqueous and dietary sources.
Framträdande morfologiska kännetecken för bestämning av utvecklingsstadier baserat på Nieuwkoop och Fabers vägledning.
Currently, there are no empirically derived guidelines for minimal iodide concentrations.
Framträdande morfologiska kännetecken
However, iodide availability may affect the responsiveness of the thyroid system to thyroid active agents and is known to modulate the basal activity of the thyroid gland, an aspect that deserves attention when interpreting the results from thyroid histopathology.
Utvecklings-stadium
Therefore, measured aqueous iodide concentrations from the test water should be reported.
Bakben
Based on the available data from the validation studies, the protocol has been demonstrated to work well when test water iodide (I-) concentrations ranged between 0,5 and 10 μg/l.
Framben
Ideally, the minimum iodide concentration in the test water should be 0,5 μg/l.
Kraniofacial struktur
If the test water is reconstituted from deionised water, iodine should be added at a minimum concentration of 0,5 μg/l.
Luktnervens morfologi
Any additional supplementation of the test water with iodine or other salts should be noted in the report.
Svanslängd
Holding of animals
För att testet ska kunna inledas bör alla grodyngel befinna sig i stadium 51.
Adult Care and Breeding
Den mest framträdande morfologiska kännetecknet för detta stadium är bakbenets morfologi, som visas i figur 1.
Adult care and breeding is conducted in accordance with standard guidelines and the reader is directed to the standard guide for performing the Frog Embryo Teratogenesis Assay (FETAX) (6) for more detailed information.
Bakbenets morfologi i stadium 51 för yngel av arten X. laevis.
Such standard guidelines provide an example of appropriate care and breeding methods, but strict adherence is not required.
Utöver val av utvecklingsstadium kan man även välja storlek på försöksdjuren (valfritt).
To induce breeding, pairs (3-5) of adult females and males are injected with human chorionic gonadotropin (hCG).
För detta ändamål ska hela kroppslängden (inte längden från nos till kloak) mätas på dag 0 i ett delprov på ungefär 20 grodyngel i stadium 51 enligt Nieuwkoop och Faber.
Female and male specimens are injected with approximately 800 IU-1000 IU and 600 IU-800 IU, respectively, of hCG dissolved in 0,6-0,9 % saline solution.
Efter beräkningen av den genomsnittliga kroppslängden för denna grupp av djur kan övre och nedre gränser för försöksdjurens hela kroppslängd bestämmas genom att man tillåter längder inom ett intervall på medelvärdet ± 3 mm (genomsnittliga värden för hela kroppslängdsintervallet varierar mellan 24,0 och 28,1 mm för grodyngel i stadium 51).
Breeding pairs are held in large tanks, undisturbed and under static conditions in order to promote amplexus.
Fastställandet av utvecklingsstadiet är dock den primära parametern vid bedömningen av huruvida varje försöksdjur är redo att delta i testet.
The bottom of each breeding tank should have a false bottom of stainless steel or plastic mesh which permits the egg masses to fall to the bottom of the tank.
Grodyngel som uppvisar kraftiga synliga missbildningar eller skador används inte i testet.
Frogs injected in the late afternoon will usually deposit most of their eggs by mid morning of the next day.
Grodyngel som uppfyller de kriterier som beskrivs ovan hålls i ett akvarium med rent odlingsvatten till dess att bestämningen av utvecklingsstadium är färdig.
After a sufficient quantity of eggs are released and fertilised, adults should be removed from the breeding tanks.
När bestämningen av utvecklingsstadium är färdig fördelas ynglen slumpmässigt i akvarier för exponeringsbehandling tills varje akvarium innehåller 20 yngel.
Larval Care and Selection
Varje akvarium ska därefter kontrolleras med avseende på djur med onormalt utseende (t.ex. skador, onormalt simbeteende, etc.).
After the adults are removed from the breeding tanks, the eggs are collected and evaluated for viability using a representative sub-set of the embryos from all breeding tanks.
Grodyngel som uppenbart verkar sjuka eller skadade bör avlägsnas från behandlingsakvarierna och ersättas med nyutvalda yngel från samlingsakvariet.
The best individual spawn(s) (2-3 recommended to evaluate the quality of the spawns) should be retained based upon embryo viability and the presence of an adequate number (minimum of 1500) of embryos.
För mer ingående information om förfaranden vid testets slut och bearbetningen av grodynglen, se OECD:s vägledningsdokument om groddjurs sköldkörtelhistologi (Guidance Document on Amphibian Thyroid Histology) (9).
All the organisms used in a study should originate from a single spawning event (i.e., the spawns should not be co-mixed).
Mätningar, dag 7
The embryos are transferred into a large flat pan or dish and all obvious dead or abnormal eggs (see definition in (5)) are removed using a pipette or eyedropper.
På dag 7 avlägsnas fem slumpmässigt utvalda grodyngel per replikat från varje testakvarium.
The sound embryos from each of the three spawns are transferred into three separate hatching tanks.
Detta slumpmässiga förfarande gör att det är lika sannolikt att varje enskild organism väljs ut.
Four days after being placed in the hatching tanks, the best spawn, based on viability and hatching success, is selected and the larvae are transferred into an appropriate number of rearing tanks at 22° ± 1 °C.
Detta kan uppnås genom att man använder en randomiseringsmetod men kräver att varje grodyngel fångas i ett nät.
In addition, some additional larvae are moved into extra tanks for use as replacements in the event that mortalities occur in the rearing tanks during the first week.
Grodyngel som inte valts ut återbördas till sitt ursprungliga akvarium och de utvalda grodynglen avlivas på ett humant sätt, t.ex. i 150 till 200 mg/l MS-222, tillräckligt buffrad med natriumbikarbonat för att uppnå pH 7,0.
This procedure maintains consistent organism density and thereby reduces developmental divergence within the cohort of a single spawn.
De avlivade grodynglen sköljs med vatten och torkas av, varefter kroppsvikten fastställs till närmaste hela milligram.
All rearing tanks should be siphoned clean daily.
Bakbenslängd, längden från nos till kloak, och utvecklingsstadium fastställs (med hjälp av ett binokulärt dissektionsmikroskop) för varje grodyngel.
As a precaution, vinyl or nitrile gloves are preferred to latex gloves.
Mätningar, dag 21 (testavslutning)
Mortalities should be removed daily and replacement larvae should be added back to maintain the organism density during the first week.
Vid testets slut (dag 21) avlägsnas de återstående grodynglen från testakvarierna och avlivas humant, t.ex. i 150 till 200 mg/l MS-222, tillräckligt buffrad med natriumbikarbonat enligt ovan.
Feeding should occur at least twice per day.
Grodynglen sköljs med vatten och torkas av, varefter kroppsvikten fastställs till närmaste hela milligram.
During the pre-exposure phase, tadpoles are acclimated to the conditions of the actual exposure phase, including the type of food, temperature, light-dark cycle and the culture medium.
Utvecklingsstadium, längd från nos till kloak och bakbenslängd mäts för varje grodyngel.
Therefore, it is recommended that the same culture/dilution water be used during the pre-exposure phase and the exposure phase.
Alla yngel placeras i Davidsons fixativ i 48–72 timmar antingen som helkroppsprover eller som putsade huvudvävnadsprover innehållande underkäken för histologiska bedömningar.
If a static culture system is used for maintaining tadpoles during the pre-exposure phase, the culture medium should be replaced completely at least twice per week.
För histopatologiska undersökningar väljs sammanlagt fem grodyngel ut från varje replikatakvarium.
Crowding, caused by high larval densities during the pre-exposure period, should be avoided because such effects could markedly affect tadpole development during the subsequent testing phase.
Eftersom höjden på de follikulära cellerna är beroende av det stadium ynglen befinner sig i (10) är den lämpligaste urvalsmetoden för histologiska analyser att använda stadium-matchade individer när så är möjligt.
Therefore, the rearing density should not exceed approximately four tadpoles/l culture medium (static exposure system) or 10 tadpoles/l culture medium (with e.g. 50 ml/min flow rate in the pre-exposure or culturing system).
För att välja ut stadium-matchade individer måste alla yngels utvecklingsstadium först fastställas innan urvalet och den därpå följande bearbetningen för datainsamling och konservering.
Under these conditions, tadpoles should develop from stages 45/46 to stage 51 within twelve days.
Detta är nödvändigt eftersom de normala utvecklingsskillnaderna kommer att leda till olika fördelningar av stadier inom varje replikatakvarium.
Representative tadpoles of this stock population should be inspected daily for developmental stage in order to estimate the appropriate time point for initiation of exposure.
Djur som valts ut för histopatologisk undersökning (n = 5 från varje replikat) bör matchas till medianstadiet i kontrollerna (samlade replikat) där så är möjligt.
Care should be used to minimise stress and trauma to the tadpoles, especially during movement, cleaning of aquaria, and manipulation of larvae.
Om det finns replikatakvarier med fler än fem yngel i ett lämpligt stadium väljs fem yngel ut slumpmässigt.
Stressful conditions/activities should be avoided such as loud and/or incessant noise, tapping on aquaria, vibrations in the aquaria, excessive activity in the laboratory, and rapid changes in environmental media (light availability, temperature, pH, DO, water flow rates, etc.)
Om det finns replikatakvarier med färre än fem yngel i ett lämpligt stadium ska individer från det föregående eller efterföljande utvecklingsstadiet väljas ut slumpmässigt tills man har fem yngel totalt per replikat.
If tadpoles do not develop to stage 51 within 17 days after fertilisation, excessive stress should be considered as a potential culprit.
Beslutet att välja ut ytterligare yngel från det föregående eller efterföljande utvecklingsstadiet bör baseras på en övergripande utvärdering av fördelningen av stadier i kontrollen och i de akvarier som utsatts för behandling med kemikalier.
Larval Culture and Feeding
Detta betyder att ytterligare yngel bör tas från det föregående stadiet om den kemiska behandlingen är förbunden med en fördröjning av ynglens utveckling.
Tadpoles are fed with e.g. the commercial tadpole feed used in the validation studies (see also appendix 1) throughout the pre-exposure period (after Nieuwkoop and Faber (NF) stage 45/46 (8)) and during the entire test period of 21 days, or other diet that has demonstrated to allow equal performance of the Amphibian Metamorphosis Assay.
Om den kemiska behandlingen är förbunden med en snabbare utveckling ska ytterligare yngel tas från det efterföljande utvecklingsstadiet.
The feeding regime during the pre-exposure period should be carefully adjusted to meet the demands of the developing tadpoles.
Om det förekommer allvarliga förändringar av grodynglens utveckling på grund av behandling med en testkemikalie kan det eventuellt inte finnas någon överlappning i fördelningen av stadier mellan de akvarier som utsatts för kemiska behandlingar och det beräknade medianutvecklingsstadiet i kontrollen.
That is, small portions of food should be provided to the newly hatched tadpoles several times per day (at least twice).
Endast i dessa fall bör urvalsprocessen modifieras genom att man använder ett stadium som skiljer sig från kontrollens medianstadium för att uppnå ett stadium-matchat urval av yngel för histopatologiska undersökningar av sköldkörteln.
Excess food should be avoided in order i) to maintain water quality and ii) to prevent the clogging of gill filters with food particles and detritus.
Om stadierna är obestämbara (dvs. asynkrona) bör fem grodyngel från varje replikat väljas ut slumpmässigt för histologisk undersökning.
For the tadpole feed used in the validation studies, the daily food rations should be increased along with tadpole growth to approximately 30 mg/animal/day shortly before test initiation.
Den logiska grunden för urval av de yngel som inte befinner sig i ett stadium som motsvarar kontrollens medianutvecklingsstadium bör anges.
This commercially available feed has been shown in the validation studies to support proper growth and development of X. laevis tadpoles, and is a fine particulate that stays suspended in the water column for a long period of time and is subject to washing out with the flow.
Bestämning av biologiska endpoints
Therefore, the total daily amount of food should be divided into smaller portions and fed at least twice daily.
Under den 21 dagar långa exponeringsfasen mäts primära endpoints på dag 7 och dag 21, men det är nödvändigt att observera djuren dagligen.
For this feed the feeding regime is outlined in Table 1.
I tabell 3 ges en översikt över de endpoints som ska mätas och motsvarande observationstidpunkter.
Feeding rates should be recorded.
Mer detaljerad information om de tekniska förfarandena för mätning av apikala endpoints och histologiska bedömningar finns i OECD:s vägledningsdokument (9).
It can be fed dry or as a stock solution prepared in dilution water.
Observationstidpunkter för primära endpoints i testet på groddjursmetamorfos.
Such a stock solution should be freshly prepared every other day and stored at 4 °C when not in use.
Apikala endpoints
Feeding regime with commercial tadpole feed used in the validation studies for X. laevis tadpolesduring the in-life portion of the AMA in flow-through conditions
Dagligen
Study Day
Dödlighet
Food ration (mg feed/animal/day)
Bakbens-längd
Analytical Chemistry
Längd från nos till kloak
Prior to conducting a study, the stability of the test chemical should be evaluated using existing information on its solubility, degradability and volatility.
Våt kroppsvikt
Test solutions from each replicate tank at each concentration should be sampled for analytical chemistry analyses at test initiation (day 0), and weekly during the test for a minimum of four samples.
Sköldkörtelns histologi
It is also recommended that each test concentration be analysed during system preparation, prior to test initiation, to verify system performance.
Utvecklingsstadium, bakbenslängd, längd från nos till kloak och våtvikt är apikala endpoints för testet på groddjursmetamorfos, och varje endpoint diskuteras nedan i korthet.
In addition, it is recommended that stock solutions be analysed when they are changed, especially if the volume of the stock solution does not provide adequate amounts of chemical to span the duration of routine sampling periods.
Ytterligare teknisk information för insamling av dessa uppgifter finns i de vägledande dokument som det hänvisas till, inbegripet de rekommenderade förfarandena för datorstödd analys.
In the case of chemicals which cannot be detected at some or all of the concentrations used in a test, stock solutions should be measured and system flow rates recorded in order to calculate nominal concentrations.
Utvecklingsstadiet för grodyngel av arten X. laevis bestäms med hjälp av Nieuwkoop och Fabers kriterier för bestämning av utvecklingsstadier (8).
Chemical Delivery
Uppgifter om utvecklingsstadier används för att fastställa om utvecklingen är accelererad, asynkron, försenad eller opåverkad.
The method used to introduce the test chemical to the system can vary depending on its physicochemical properties.
Accelererad eller försenad utveckling bestäms genom en jämförelse mellan de medianstadier som uppnåtts i kontroll- och behandlingsgrupperna.
Water soluble chemicals can be dissolved in aliquots of test water at a concentration which allows delivery at the target test concentration in a flow-through system.
Asynkron utveckling rapporteras när de undersökta vävnaderna inte är deformerade eller onormala men de relativa tidpunkterna för morfogenesen eller utvecklingen av olika vävnader är rubbade hos ett enda grodyngel.
Chemicals which are liquid at room temperature and sparingly soluble in water can be introduced using liquid:liquid saturator methods.
Differentieringen och tillväxten av bakbenen styrs av sköldkörtelhormoner och utgör viktiga utvecklingsmässiga kännetecken som redan använts vid fastställandet av utvecklingsstadierna.
Chemicals which are solid at room temperature and are sparingly soluble in water can be introduced using glass wool column saturators (7).
Bakbenens utveckling används kvalitativt vid fastställandet av utvecklingsstadier, men bedöms här som en kvantitativ endpoint.
The preference is to use a carrier-free test system, however different test chemicals will possess varied physicochemical properties that will likely require different approaches for preparation of chemical exposure water.
Bakbenslängden mäts därför som endpoint för att upptäcka påverkan på sköldkörtelaxeln (figur 2).
It is preferred that effort be made to avoid solvents or carriers because:
För konsekvensens skull mäts bakbenslängden på vänster bakben.
certain solvents themselves may result in toxicity and/or undesirable or unexpected endocrinological responses, ii) testing chemicals above their water solubility (as can frequently occur through the use of solvents) can result in inaccurate determinations of effective concentrations, and iii) the use of solvents in longer-term tests can result in a significant degree of “biofilming” associated with microbial activity.
Bakbenslängden utvärderas både på testets dag 7 och dag 21.
For difficult to test chemicals, a solvent may be employed as a last resort, and the OECD Guidance Document on aquatic toxicity testing of difficult substances and mixtures should be consulted (4) to determine the best method.
På dag 7 är det enkelt att mäta bakbenens längd, enligt illustration i figur 2.
Solvents which have been found to be effective for aquatic toxicity testing include acetone, ethanol, methanol, dimethyl formamide and triethylene glycol.
Det är dock svårare att mäta bakbenens längd på dag 21 på grund av att benet då är böjt.
In case a solvent carrier is used, solvent concentrations should be below the chronic No Observed Effect Concentration (NOEC);
Därför ska bakbenslängden på dag 21 mätas från kroppsväggen och följa mittlinjen på benet genom alla kantiga avvikelser.
the OECD Guidance Document recommends a maximum of 100 μl/l;
Förändringar i bakbenslängden på dag 7, även om de inte är uppenbara på dag 21, anses ändå vara viktiga för den potentiella sköldkörtelaktiviteten.
a recent review recommends that solvent concentrations as low as 20 μl/l of dilution water be used (12).
Längdmätningar tas från digitala fotografier med hjälp av bildanalysprogram i enlighet med beskrivningen i OECD:s vägledningsdokument om sköldkörtelns histopatologi hos groddjur (Guidance Document on Amphibian Thyroid Histology) (9).
If solvent carriers are used, appropriate solvent controls should be evaluated in addition to non-solvent controls (clean water).
Kroppslängd och våtvikt
If it is not possible to administer a chemical via the water, either because of physicochemical characteristics (low solubility) or limited chemical availability, introducing it via the diet may be considered.
Bestämningar av längd från nos till kloak (figur 2) och våtvikt ingår i testprotokollet för att bedöma eventuella effekter av testkemikalier på tillväxttakten hos grodyngel jämfört med tillväxttakten i kontrollgruppen och är mycket värdefulla för att spåra testkemikaliens allmänna toxicitet.
Preliminary work has been conducted on dietary exposures;
Eftersom avlägsnandet av vatten på kroppen för viktkontroller kan orsaka stress och hudskador hos grodynglen, utförs dessa mätningar på grodynglen i delprovet på dag 7 och på alla återstående grodyngel i slutet av testet (dag 21).
however, this route of exposure is not commonly used.
För konsekvensens skull anses den kraniala kanten av kloaken utgöra svansens gräns vid mätningen.
The choice of method should be documented and analytically verified.
Längden från nos till kloak används för att utvärdera grodynglens tillväxt såsom visas i figur 2.
Establishing the High Test Concentration
Olika typer av mätningar av kroppslängden och (B) mätningar av bakbenslängden för grodyngel av arten X. laevis (1).
For the purposes of this test, the high test concentration should be set by the solubility limit of the test chemical;
Utvecklingsstadium och bakbenslängd är viktiga endpoints för att bedöma exponeringsrelaterade förändringar i den metamorfa utvecklingen, men förseningar i utvecklingen kan i sig inte anses vara en diagnostisk indikator på sköldkörtelhämmande aktivitet.
the maximum tolerated concentration (MTC) for acutely toxic chemicals;
Vissa ändringar är endast iakttagbara vid en rutinmässig histopatologisk analys.
or 100 mg/l, whichever is lowest.
Allvarlighetsgrad (4 grader) bör rapporteras.
The MTC is defined as the highest test concentration of the chemical which results in less than 10 % acute mortality.
Information om hur man erhåller och hanterar prover för histologisk undersökning och hur man utför histologiska analyser av vävnadsprover finns i Amphibian Metamorphosis Assay:
Using this approach assumes that there are existing empirical acute mortality data from which the MTC can be estimated.
Part 1 – Technical guidance for morphologic sampling and histological preparation och Amphibian Metamorphosis Assay: Part 2 – Approach to reading studies, diagnostic criteria, severity grading and atlas (9).
Although the use of regression models may be the most technically sound approach to estimating the MTC, a useful approximation of the MTC can be derived from existing acute data by using 1/3 of the acute LC50 value.
Laboratorier som utför detta test för första gången bör söka råd från erfarna patologer i utbildningssyfte innan den histologiska analysen och utvärderingen av sköldkörteln påbörjas.