natgillin/translations-raw huggingface dataset:
PREPARATION
För genomflödestester rekommenderas en fisktäthet som inte överskrider 0,5 g/l per 24 timmar och som inte vid någon tidpunkt överskrider 5 g/l lösning.
The suspension is conditioned for at least two days with gentle stirring at 20 ± 2 °C, to stabilise pH and establish a stable microbial component. pH is measured again and should be 6,0 ± 0,5.
Senast 28 dagar efter befruktningen bör antalet fiskar per replikat omfördelas, så att varje replikat innehåller ett så lika antal fiskar som möjligt.
STORAGE
Foder och utfodring är av avgörande betydelse, och det är viktigt att man vid lämpliga tidsintervaller ger rätt foder för varje stadium och i en tillräckligt stor mängd för att stödja normal tillväxt.
The dry constituents for preparation of the artificial sediment may be stored in a dry and cool place at room temperature.
Fiskarna bör ha fri tillgång till foder (ad libitum), men överutfodring bör undvikas i möjligaste mån.
The formulated (wet) sediment should not be stored prior to its use in the test.
För att få en tillräcklig tillväxttakt bör fiskarna utfodras minst två gånger per dag (under veckosluten kan en gång per dag vara godtagbart), med minst tre timmars mellanrum mellan varje utfodring.
It should be used immediately after the 7 days conditioning period that ends its preparation.
Överbliven mat och avföring bör avlägsnas, om så behövs, för att undvika ackumulering av avfallsprodukter.
OECD (1984), Earthworm, Acute Toxicity Test, Test Guideline No. 207, Guidelines for the Testing of Chemicals, OECD, Paris.
Allteftersom erfarenheterna tilltar förfinas kontinuerligt utfodringsprogrammen för att förbättra överlevnaden och optimera tillväxten.
Meller, M., Egeler, P., Roembke, J., Schallnass, H., Nagel, R. and B. Streit (1998), Short-term toxicity of lindane, hexachlorobenzene and copper sulfate on tubificid sludgeworms (Oligochaeta) in artificial media, Ecotox.
Man måste därför försöka bekräfta det föreslagna systemet hos erkända experter.
Environ.
Inget foder bör ges 24 timmar innan testet avslutas.
Safety, 39:
Exempel på lämpligt foder finns i tillägg 2 (se även OECD:s Fish Testing Framework (39).
10-20.
Testkemikalierna bör ha den spridning som beskrivs i tillägg 4.
Chemical Characteristics of an Acceptable Dilution water
Minst tre testkoncentrationer med minst fyra replikat bör användas.
CONSTITUENT
När man väljer koncentrationsintervall är det viktigt att beakta kurvan som visar sambandet mellan LC50 och exponeringsperioden i befintliga undersökningar av akut toxicitet.
CONCENTRATIONS
Fem testkoncentrationer rekommenderas om erhållna data ska användas för riskbedömning.
Hardness as CaCO3
Koncentrationer av kemikalien som är högre än 10 % av det akuta LC50-värdet för vuxna djur eller 10 mg/l, beroende på vilket som är lägre, behöver inte testas.
However, it should be noted that if there is an interaction suspected between hardness ions and the test chemical, lower hardness water should be used (and thus, Elendt Medium M4 should not be used in this situation).
Den maximala testkoncentrationen bör vara 10 % av LC50 för larvstadiet/ungfiskstadiet.
Guidance for test performance
Kontroller
Example of a breeding cage:
En kontroll med utspädningsvatten (≥ 4 replikat) och, i förekommande fall, en lösningsmedelskontroll (≥ 4 replikat) bör inrättas utöver testkoncentrationerna.
A gauze on the top and at least one side of the cage (mesh size ca.
Endast lösningsmedel som har befunnits inte ha en statistiskt signifikant effekt på testets statistiska endpoints bör användas i testet.
1 mm)
Om ett lösningsmedel används får dess slutkoncentration inte överskrida 0,1 ml/l (36), och koncentrationen bör vara densamma i alla testbehållare, utom i kontrollen med utspädningsvatten.
B aperture for placing the emerged adults inside the breeding cage and to remove the laid egg ropes from the crystallisation dishes (not shown in this graphic)
Man bör dock sträva efter att undvika sådana lösningsmedel eller att hålla lösningsmedlets koncentrationer till ett minimum.
C breeding cage size minimum 30 cm length, 30 cm height and 30 cm width
Frekvens för analytiska bestämningar och mätningar
Example of a test vessel:
En kemisk bestämning av testkemikaliens koncentration bör genomföras före testets början för att kontrollera att godtagbarhetskriterierna uppfylls.
A pasteur pipette for air supply of the overlying water
Alla replikat bör analyseras var för sig i början och slutet av testet.
B glass lid to prevent emerged midges from escaping
Ett replikat per testkoncentration analyseras minst en gång per vecka under testets gång, och man bör då växla systematiskt mellan replikaten (1,2,3,4,1,2…).
C water surface layer
Om proverna lagras för att analyseras vid en senare tidpunkt bör förvaringsmetoden för proverna ha validerats i förväg.
D test vessel (glass beaker minimum 600 ml)
Proverna bör filtreras (t.ex. med porstorlek 0,45 μm) eller centrifugeras för att se till att de analytiska bestämningarna görs på kemikalien i äkta lösning.
E sediment layer
Under testets gång ska löst syre, pH, total hårdhet, konduktivitet, salthalt (om relevant) och temperatur mätas i alla testbehållare.
Example of an exhauster for capturing adult midges (arrows indicate air flow direction):
Som ett minimum bör löst syre, salthalt (om relevant) och temperatur mätas varje vecka, och pH, konduktivitet och hårdhet i början och i slutet av testet.
A glass tube (inner diameter ca.
Temperaturen ska helst övervakas kontinuerligt i minst en testbehållare.
5 mm) connected to a self-priming pump B cork of vulcanised rubber, perforated with glass tube (A).
Resultaten bör baseras på de uppmätta koncentrationerna.
On the inside, the opening of glass tube (A) is covered with some cotton and a gauze (mesh size ca.
Om testkemikaliens koncentration i lösningen på ett tillfredsställande sätt har hållits inom ± 20 % av den nominella koncentrationen under hela testperioden kan dock resultaten antingen grunda sig på nominella eller på uppmätta värden.
1 mm) to prevent damaging the midges when they are sucked into the exhauster
Observationer och mätningar
C transparent container (plastic or glass, length ca.
Det embryonala utvecklingsstadiet
15 cm) for captured midges
Exponeringen ska inledas så snart som möjligt efter befruktningen, innan groddskivans klyvning påbörjas och senast 12 timmar efter befruktningen för att garantera exponering under den tidiga embryonala utvecklingen.
D cork of vulcanised rubber, perforated with tube (E).
Kläckning och överlevnad
To release midges into the breeding cage, cork D is released from container C
Observationer av kläckning och överlevnad bör göras minst en gång per dag.
E tube (plastic or glass, inner diameter ca.
Alla antal bör registreras.
8 mm) to collect adult midges from vessel
Döda embryon, yngel och ungfisk bör avlägsnas så snart de observeras, eftersom nedbrytningen går snabbt och de kan sönderdelas av de andra fiskarna.
Schematic presentation of a life-cycle test:
Man bör iaktta stor försiktighet när döda individer avlägsnas så att man inte stöter till eller orsakar fysiska skador på närliggande ägg eller yngel, eftersom de är extremt ömtåliga och känsliga.
A 1st generation — test vessels containing a sediment-water system, eight replicates, 20 first instar larvae per vessel
Dödskriterierna varierar beroende på levnadsstadiet:
B four test vessels for each breeding cage, A and B
för ägg:
C breeding cages (A and B) for swarming, mating and oviposition
i synnerhet i tidiga stadier, en tydligt förlust av genomskinlighet och färgförändringar orsakade av koagulering och/eller utfällning av protein, vilket leder till ett vitt ogenomskinligt utseende,
D crystallising dishes for deposition of egg ropes
för yngel och ungfisk:
E micro plates, one well for each egg rope
orörlighet och/eller avsaknad av andningsrörelse och/eller avsaknad av hjärtslag och/eller en vit ogenomskinlig färgning av centrala nervsystemet och/eller avsaknad av reaktion på mekanisk retning.
F 2nd generation — test vessels containing a sediment-water system, eight replicates, 20 first instar larvae per vessel
Onormalt utseende
C.41.
Antalet yngel eller fisk som har onormal kroppsform bör registreras, och missbildningens utseende och beskaffenhet beskrivas.
FISH SEXUAL DEVELOPMENT TEST
Det bör noteras att onormala embryon och yngel även förekommer av naturliga skäl, och kan för vissa arter uppgå till flera procent i kontrollgruppen (kontrollgrupperna).
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 234 (2011).
Onormala djur bör inte avlägsnas från testbehållarna förrän de avlider.
It is based on a decision from 1998 to develop new or update existing test methods for the screening and testing of potential endocrine disrupters.
Enligt Europaparlamentets och rådets direktiv 2010/63/EU av den 22 september 2010 om skydd av djur som används för vetenskapliga ändamål ska djuren sövas och avlivas i enlighet med beskrivningen i punkt 44 om missbildningar leder till smärta, lidande och ångest eller bestående skador, och deras död tillförlitligt kan förutsägas.
The Fish Sexual Development Test (FSDT) was identified as a promising test method covering a sensitive fish life stage responsive to both oestrogen and androgen-like chemicals.
De avlivade djuren registreras under ’dödlighet’ för dataanalys.
The test method went through an inter-laboratory validation exercise from 2006 to 2010, where Japanese medaka (Oryzias latipes), zebrafish (Danio rerio) and three spined stickleback (Gasterosteus aculeatus) were validated and fathead minnow (Pimephales promelas) was partially validated (41) (42) (43).
Onormalt beteende
This protocol includes Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish.
Abnormiteter, t.ex. hyperventilering, okoordinerat simbeteende, atypisk passivitet och avvikande ätbeteende, bör registreras när de först uppträder.
The protocol is in principle an enhancement of OECD TG 210 Fish, Early Life Stage Toxicity Test (1), where the exposure is continued until the fish are sexually differentiated, i.e. about 60 days post-hatch (dph) for Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish (the exposure period can be shorter or longer for other species that are validated in the future), and endocrine-sensitive endpoints are added.
Vikt
The combination of the two core endocrine endpoints, vitellogenin (VTG) concentration and phenotypic sex ratio enable the test to indicate the mode of action of the test chemical.
Längd
Due to the population-relevant change in phenotypic sex ratio, the FSDT can be used for hazard and risk assessment.
Vid testets slut mäts individernas längd (normallängd).
However, if the test is used for hazard or risk assessment, the stickleback should not be used because the validation data available so far showed that in this species the alterations of phenotypic sex ratio by the test chemicals were uncommon.
Dessa observationer leder till att några eller alla av följande uppgifter är tillgängliga för rapportering:
The protocol is based on fish exposed via water to chemicals during the sex labile period in which the fish is expected to be most sensitive to the effects of endocrine disrupting chemicals that interfere with sexual development.
kumulativ dödlighet,
Two core endpoints are measured as indicators of endocrine-associated developmental aberrations, the VTG concentrations and sex ratios (proportions of sex) determined via gonad histology.
antal friska exemplar vid testets avslutning,
Gonadal histopathology (evaluation and staging of oocytes and spermatogenetic cells) is optional.
tidpunkten för kläckningens början och slut,
Additionally, the genetic sex is determined whenever possible (e.g. in Japanese medaka and the three spined stickleback).
de överlevande djurens längd och vikt,
The presence of a genetic sex marker is a considerable advantage as it increases the power of the sex ratio statistics and enables the detection of individual phenotypic sex reversal.
antal deformerade yngel,
Other apical endpoints that should be measured include hatching rate, survival, length and body weight.
antal fiskar som beter sig onormalt.
The test method might be adaptable to other species than those mentioned above provided that the other species undergo a validation equal to the one accomplished for Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish, that the control fish are sexually differentiated at the end of the test, that VTG levels are sufficiently high to detect significant chemical-related variations, and that sensitivity of the test system is established using endocrine active reference chemicals ((anti)-oestrogens, (anti)-androgens, aromatase inhibitors etc).
Provtagning på fisk
In addition, any validation report(s) referring to FSDT data using other species should be reviewed by the OECD, and the validation outcome should be considered as satisfactory.
Provtagning på fiskarna utförs vid slutet av testet.
Initial considerations and limitations
Provtagningsfiskarna avlivas med t.ex.
VTG is normally produced by the liver of female oviparous vertebrates in response to circulating endogenous oestrogen (2).
MS-222 (100–500 mg per liter buffrad med 200 mg NaHCO3 per liter) eller FA-100 (4-allyl-2-metoxifenol: eugenol) och mäts och vägs var för sig som våtvikt (avtorkade) eller bedövade om ett blodprov ska tas (se punkt 49).
The VTG synthesis is very limited, though detectable, in immature fish and adult male fish because they lack sufficient circulating oestrogen.
Provtagning för analys av VTG och könsbestämning genom histologisk utvärdering
However, the liver is capable of synthesising and secreting VTG in response to exogenous oestrogen stimulation (3) (4) (5).
Prover bör tas på alla fiskar och de bör sedan beredas för analys av kön och VTG.
The measurement of VTG serves for the detection of chemicals with oestrogenic, anti-oestrogenic, androgenic modes of action and chemicals that interfere with steroidogenesis as for example aromatase inhibitors.
Alla fiskar bör undersökas histologiskt för att bestämma könet.
The detection of oestrogenic chemicals is possible via the measurement of VTG induction in male fish, and it has been abundantly documented in the scientific peer-reviewed literature.
För att mäta VTG godtas ett delprov från minst 16 fiskar från varje replikat.
VTG induction has also been demonstrated following exposure to aromatisable androgens (6) (7).
Fler fiskar bör analyseras rörande VTG om resultaten i delprovet visar sig vara oklara.
A reduction in the circulating level of oestrogen in females, for instance through the inhibition of the aromatase converting the endogenous androgen to the natural oestrogen 17β-oestradiol, causes a decrease in the VTG concentration, which is used to detect chemicals having aromatase inhibiting properties or steroidogenesis inhibitors more broadly (33).
Provtagningsmetoderna för VTG och könsbestämningen är beroende av analysmetoden för VTG:
The biological relevance of the VTG response following oestrogenic/aromatase inhibition is established and has been broadly documented (8) (9).
Huvud/stjärthomogenatmetoden för analys av VTG
However, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action.
Fisken avlivas.
Several measurement methods have been successfully developed and standardised for routine use to quantify VTG in blood, liver, whole body or head/tail homogenate samples collected from individual fish.
Huvudet och stjärten på varje fisk skiljs från kroppen genom snitt som görs rakt bakom bröstfenorna och rakt bakom ryggfenan med en skalpell (se figur 1).
This is the case for zebrafish, three-spined stickleback and Japanese medaka and also the partially validated species fathead minnow;
Huvud- och stjärtdelarna från varje fisk läggs samman, vägs och numreras individuellt, fryses i flytande kväve och lagras vid – 70 °C eller kallare för analys av VTG.
species-specific Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) methods using immunochemistry for the quantification of VTG are available (5) (10) (11) (12) (13) (14) (15) (16).
Fiskarnas kropp numreras och fixeras i ett lämpligt fixativ för histologisk utvärdering (22).
In Japanese medaka and zebrafish, there is a good correlation between VTG measured from blood plasma, liver and homogenate samples although homogenates tend to show slightly lower values than plasma (17) (18) (19).
Med hjälp av denna metod utvärderas VTG och histopatologin för varje individ, och en eventuell ändring av VTG-nivån kan sålunda sättas i samband med fiskens fenotypiska eller genetiska kön (japansk risfisk och storspigg).
Appendix 5 provides the recommended procedures for sample collection for VTG analysis.
För ytterligare information, se riktlinjerna för homogenisering (tillägg 5) och för kvantifiering av VTG (tillägg 6).
Change in the phenotypic sex ratio (proportions of sex) is an endpoint reflecting sex reversal.
Leverhomogenatmetoden för analys av VTG
In principle, oestrogens, anti-oestrogens, androgens, anti-androgens and steroidogenesis inhibiting chemicals can affect the sex ratio of developing fish (20).
Levern dissekeras ut och lagras vid – 70 °C eller kallare.
It has been shown that this sex reversal is partly reversible in zebrafish (21) following oestrogen-like chemical exposure, whereas sex reversal following androgen-like chemical exposure is permanent (30).
Rekommenderade förfaranden för excision och förbehandling av levern finns i OECD TG 229 (37) eller kapitel C.37 i denna bilaga (38).
The sex is defined as female, male, intersex (both oocytes and spermatogenetic cells in one gonad) or undifferentiated, determined in individual fish via histological examination of the gonads.
Levrarna homogeniseras sedan var för sig på det sätt som beskrivs i OECD TG 229 eller kapitel C.37 i denna bilaga.
Guidance is given in Appendix 7 and in the OECD Guidance Document on the Diagnosis of Endocrine-Related Histopathology of Fish Gonads (22).
Supernatanten samlas upp och används för mätning av VTG med en motsvarande ELISA-teknik (se bilaga 6 som innehåller ett exempel på kvantifiering för sebrafisk eller OECD TG 229 (37) för japansk risfisk).
Genetic sex is examined via genetic markers when they exist in a given fish species.
Enligt detta tillvägagångssätt är det också möjligt att få uppgifter om enskilda fiskar, både rörande VTG och könskörtlarnas histologi.
In Japanese medaka the female XX or male XY genes can be detected by Polymerase Chain-Reaction (PCR), or the Y-linked DM domain gene (DMY) can be analysed (DMY negative or positive) as described in (23) (24).
Blodplasmametoden för analys av VTG
In three-spined stickleback, there is an equivalent PCR method for genetic sex determination described in Appendix 10.
Blod samlas in från de bedövade fiskarna genom hjärtpunktering eller snitt i den kaudala venen eller i stjärten och centrifugeras vid 4 °C för insamling av plasma.
Where the genetic sex can be individually linked to the phenotypic sex, the power of the test is improved and therefore genetic sex should be determined in species with documented genetic sex markers.
Plasman lagras vid – 70 °C eller kallare fram till användningen.
The two core endocrine endpoints, VTG and sex ratio, can in combination demonstrate the endocrine mode of action (MOA) of the chemical (Table 1).
Hela fisken avlivas och fixeras för histologi.
The sex ratio is a population relevant biomarker (25) (26) and for some well defined modes of action, the FSDT results may be used for hazard and risk assessment purposes when deemed appropriate by the regulatory agency.
Både plasmaproven och fiskarna numreras individuellt för att man ska kunna relatera VTG-nivåerna till fiskens kön.
These modes of action are at present oestrogens, androgens and steroidogenesis inhibitors.
Hur man skär upp en fisk för mätning av VTG i huvud/stjärthomogenatet och histologisk utvärdering av den mellersta delen
Reaction of the endocrine endpoints to different modes of action of chemicals
Bestämning av genetiskt kön
↑ = increasing, ↓ = decreasing, — = not investigated
Ett biologiskt prov för bestämning av genetiskt kön tas från enskilda fiskar som tillhör arter som har lämpliga markörer.
References
För japansk risfisk insamlas analfenan eller ryggfenan.
Weak oestrogen agonist
En detaljerad beskrivning finns i tillägg 9, inklusive vävnadsprovtagning och könsbestämning genom en PCR-metod.
↑♀ or ↑Undiff
Även för storspigg finns en beskrivning av vävnadsprovtagning och PCR-metod för könsbestämning i tillägg 10.
Strong oestrogen agonist
Mätning av VTG
↑♀ or ↑Undiff, No ♂
Mätning av VTG bör baseras på en kvantitativt och analytiskt validerad metod.
Oestrogen antagonist
Information bör finnas tillgänglig om variabiliteten rörande tester inom och mellan laboratorier för den metod som används i ett visst laboratorium.
↓♀, ↑Undiff.
Källan till variabiliteten mellan och inom laboratorierna är (sannolikt) de olika utvecklingsstadierna i fiskpopulationen.
Androgen agonist
Med tanke på variationen i VTG-mätningarna bör NOEC-värden som uteslutande bygger på denna endpoint behandlas med stor försiktighet.
↑♂, No ♀
Det finns olika metoder för att bedöma produktionen av VTG i fiskarterna i detta test.
Androgen antagonist
En mätteknik som både är förhållandevis känslig och specifik är bestämningen av proteinkoncentrationer genom ELISA-metoden (enzyme-linked immunosorbent assay).
↑Intersex
Homologa antikroppar (som bildats mot VTG i samma art) och de viktigaste homologa standarderna bör användas.
Aromatase inhibitor
Könsbestämning
The FSDT does not cover the reproductive life stage of the fish and therefore chemicals that are suspected to affect reproduction at lower concentrations than sexual development should be examined in a test that covers reproduction.
Beroende på provtagningsmetoden för VTG placeras hela fisken eller den återstående mellersta delen av varje fisk i en behandlingskassett som märkts i förväg och fixeras i ett lämpligt fixativ för histologisk könsbestämning (eventuellt också för utvärdering av det stadium könskörtlarna befinner sig i).
Definitions for the purpose of this Test Method are given in Appendix 1.
Riktlinjer för fixering och inbäddning finns i tillägg 7 samt i OECD:s vägledning, Diagnosis of Endocrine-Related Histopathology of Fish Gonads (22).
The in vivo FSDT is intended to detect chemicals with androgenic and oestrogenic properties as well as anti-androgenic, anti-oestrogenic and steroidogenesis inhibiting properties.
Efter bearbetningen bäddas fiskarna in i paraffinblock.
The FSDT validation phases (1 and 2) did cover oestrogenic, androgenic and steroidogenesis inhibiting chemicals.
Enskilda individer bör placeras på längden i paraffinblocken.
The effects in the FSDT of oestrogen- and androgen antagonists can be seen in Table 1 but these MOA are less documented at present time.
Minst sex längsgående preparat (3-5 μm tjocka) i frontalplanet inklusive vävnad från båda könskörtlarna tas från varje individ.
In the test, fish are exposed, from newly fertilised egg until the completion of sexual differentiation, to at least three concentrations of the test chemical dissolved in water.
Intervallet mellan dessa preparat bör vara ungefär 50 μm för hanar och 250 μm för honor.
The test conditions should be flow-through unless not possible due to the availability or nature (e.g. limited solubility) of the test chemical.
Eftersom varje block ofta innehåller både hanar och honor (om mer än en individ inbäddats i varje block), bör dock intervallet mellan preparaten från dessa block vara ungefär 50 μm tills man erhåller minst sex preparat från könskörtlarna från varje hane.
The test starts with the placing of newly fertilised eggs (before cleavage of the blastodisc) in the test chambers.
Därefter kan intervallet mellan preparaten ökas till cirka 250 μm för honorna.
The loading of the chambers is described for each species in paragraph 27.
Preparaten färgas med hematoxylin och eosin och granskas i ett ljusmikroskop med avseende på kön (hankön, honkön, intersexuellt eller odifferentierat).
For the validated fish species, Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish, the test is terminated at 60 dph.
Intersexualitet definieras som närvaron av mer än en oocyt i testikeln per sex analyserade preparat eller spermatogena celler (ja/nej) i äggstockarna.