natgillin/translations-raw huggingface dataset:
A 16 hours photoperiod is used and the light intensity should be 500 to 1000 lux.
Vattnet måste luftas före användningen.
For the breeding cages an additional one hour dawn and dusk phase may be included.
Vid behov kan odlingsvattnet förnyas genom att man försiktigt häller eller med en hävert tappar av använt vatten från odlingskärlen utan att förstöra larvrören.
Exposure duration
Utfodring av larver
Spiked water design:
Chironomus-larverna ges fiskfoder i flingform (Tetra Min ®, Tetra Phyll ® eller motsvarande patenterat märke), cirka 250 mg per kärl och dag.
The exposure period of the 1st generation starts when the test chemical is spiked into the overlying water of the test vessels (which is one day after insertion of the larvae — for possible amendments of the exposure design, see paragraph 7).
Detta kan ges som torrt malet pulver eller som en suspension i vatten:
Exposure of the 2nd larval generation starts immediately, since they are inserted into a sediment-water system that has been already spiked.
tillsätt 1,0 g flingfoder i 20 ml utspädningsvatten och blanda till en homogen blandning.
The maximum exposure duration for the 1st generation is 27 days and for the 2nd generation 28 days (the 1st generation larvae spend one day in the vessels without exposure) for C. riparius and C. yoshimatsui.
Beredningen kan ges med en dosering på cirka 5ml per kärl och dag (skaka om före användning).
Considering the overlap, the complete test duration is approximately 44 days.
Äldre larver kan få en större dos.
For C. dilutus, maximum exposure durations are 64 and 65 days, for the 1st and 2nd generation, respectively.
Utfodringen justeras i enlighet med vattenkvaliteten.
The total duration is approximately 100 days.
Om odlingsmediet blir grumligt bör dosen sänkas.
Spiked sediment design:
Foderdoseringen måste övervakas noggrant.
exposure starts with the addition of the larvae and is maximum 28 days for both generations for C. riparius and C. yoshimatsui and maximum 65 days for both generations for C. dilutus.
För liten mängd leder till att larverna emigrerar mot vattenkolumnen och för stor mängd leder till ökad mikrobiell aktivitet och lägre syrekoncentrationer.
Emergence
Båda omständigheterna kan leda till minskad tillväxt.
Test vessels of both generations should be observed at least three times per week to make visual assessment of any abnormal behaviour of the larvae (e.g. leaving sediment, unusual swimming), compared to the control.
Utfodring av vuxna exemplar
During the period of emergence, which starts about 12 days after insertion of the larvae for C. riparius and C. yoshimatsui (after 20 days for C. dilutus), emerged midges are counted and sexed at least once, but preferably twice a day (early morning and late afternoon).
Vissa testutövare har föreslagit att bomullskompresser indränkta i mättad sackaroslösning kan användas som foder för vuxna exemplar.
After identification, the midges of the 1st generation are carefully removed from the vessels and transferred to a breeding cage.
Vid 20 ± 2 °C börjar de vuxna exemplaren kläckas i odlingskärlen efter cirka 13–15 dagar.
Midges of the 2nd generation are removed and killed after identification.
Hanarna är lätta att känna igen på sina fjäderantenner och smala kroppar.
Any egg ropes deposited in the test vessels of the 1st generation should be collected individually and transferred with at least 2,5 ml native water to 12-well microplates (or other suitable vessels) which are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Äggmassor
The number of dead larvae and visible pupae that have failed to emerge should also be recorded.
När vuxna exemplar finns i odlingsbehållaren bör alla odlingskärl kontrolleras tre gånger per vecka för att se om geléartade äggmassor har lagts.
Examples of a breeding cage, test vessel and exhauster are provided in Appendix 5.
Om sådana upptäcks, bör de försiktigt avlägsnas.
Reproduction
Äggmassorna överförs till ett litet kärl som innehåller ett prov av odlingsvattnet.
Effects on reproduction are assessed via the number of egg ropes produced by the 1st generation of midges and the fertility of these egg ropes.
De används sedan för att starta nya odlingskärl (t.ex.
Once per day the egg ropes are collected from the crystallising dish that is placed in each breeding container.
2–4 äggmassor per kärl) eller för toxicitetstest.
The egg ropes should be collected and transferred with at least 2,5 ml native water to a 12-wells microplate (one egg rope in each well) or other suitable vessels, which are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Första stadiets larver bör kläckas efter 2–3 dagar.
The following characteristics are documented for each egg rope:
Inrättning av nya odlingskärl
day of production, size (normal, i.e. 1,0 ± 0,3 cm or small; typically ≤ 0,5 cm), and structure (normal = banana-form with spiralled egg string or abnormal, e.g. unspiralled egg string) and fertility (fertile or infertile).
När odlingarna är etablerade bör det vara möjligt att inrätta ett nytt odlingskärl för larver varje vecka eller med längre intervall beroende på testningskraven.
Over the course of six days after it was produced the fertility of an egg rope is assessed.
Äldre kärl avlägsnas efter att de vuxna myggorna har kläckts.
An egg rope is considered fertile when at least one third of the eggs hatch.
På detta sätt får man en regelbunden tillgång till vuxna exemplar med minimalt behov av skötsel.
The total number of females added to the breeding cage is used to calculate the number of egg ropes per female and the number of fertile egg ropes per female.
Beredning av testlösningarna M4 och M7
If required, the number of eggs in an egg rope can be estimated non-destructively by using the ring count method (detailed in 32 and 33).
M4-mediet har beskrivits i Elendt (1990).
Analytical measurements
M7-mediet bereds på samma sätt som M4-mediet med undantag för de ämnen som anges i tabell 1, för vilka koncentrationerna är fyra gånger lägre i M7 jämfört med M4.
Concentration of the test chemical
Testlösningen ska inte beredas enligt Elendt och Bias (1990) eftersom de koncentrationer av NaSiO3 · 5H2O, NaNO3, KH2PO4 och K2HPO4 som anges för beredning av stamlösningar inte är lämpliga.
As a minimum, samples of the overlying water, pore water and the sediment should be analysed at the start of exposure (in case of water spiking preferably one hour after application) and at the end of the test, at the highest concentration and a lower one.
Beredning av M7-medium
This applies to vessels from both generations.
Varje stamlösning (I) bereds för sig och en kombinerad stamlösning (II) bereds av dessa stamlösningar (I) (se tabell 1).
From the crystallising dishes in the breeding cage only the overlying water is analysed, since this is what the egg ropes come into contact with (for the spiked sediment design an analytical confirmation of the sediment concentration may be considered).
Femtio ml av den kombinerade stamlösningen (II) och de mängder av varje stamlösning med makronäring som anges i tabell 2 samt avjonat vatten tillsätts upp till 1 liter för att bereda M7-mediet.
Further measurements of sediment, pore water or overlying water during the test may be conducted if deemed necessary.
En stamlösning med vitaminer bereds genom att man tillsätter tre vitaminer till avjonat vatten enligt tabell 3, och 0,1 ml av den kombinerade vitaminstamlösningen tillsätts till det slutliga M7-mediet strax före användningen.
These determinations of test chemical concentration inform on the behaviour/partitioning of the test chemical in the water-sediment system.
Vitaminstamlösningen förvaras djupfryst i små alikvoter.
Sampling of sediment and pore water at the start and during the test (see paragraph 39) requires additional test vessels to perform analytical determinations.
Mediet luftas och stabiliseras.
Measurements in sediment in the spiked water design might not be necessary if the partitioning of the test chemical between water and sediment has been clearly determined in a water/sediment study under comparable conditions (e.g. sediment to water ratio, type of application, organic carbon content of sediment), or if measured concentrations in the overlying water are shown to remain within 80 to 120 % of the nominal or measured initial concentrations..
Stamlösningar av spårelement för M4- och M7-medium
When intermediate measurements are made (e.g. at day 7 and/or 14) and if the analysis needs large samples which cannot be taken from test vessels without influencing the test system, analytical determinations should be performed on samples from additional test vessels treated in the same way (including the presence of test organisms) but not used for biological observations.
Stamlösningar (I)
Centrifugation at e.g. 10000 g at 4 °C for 30 min is the recommended procedure to isolate interstitial (= pore) water.
Mängd (mg) som fylls upp till 1 liter med avjonat vatten
However, if the test chemical is demonstrated not to adsorb to filters, filtration may also be acceptable.
För den kombinerade stamlösningen (II):
Physical-chemical parameters
Slutliga koncentrationer i testlösningarna (mg/l)
pH, dissolved oxygen in the test water and temperature of the water in the test vessels and crystallising dishes should be measured in an appropriate manner (see paragraph 10).
MnCl2 · 4H2O [1]
Hardness and ammonia should be measured in the controls and in one test vessel and crystallising dish at the highest concentration at the start and the end of the test.
SrCl2 · 6H2O [1]
The purpose of this life-cycle test is to determine the effect of the test chemical on the reproduction and, for two generations, the development rate and the total number of fully emerged and alive male and female midges.
MoO4 · 2H2O [1]
For the emergence ratio data of males and females should be pooled.
CuCl2 · 2H2O [1]
If there are no statistically significant differences between the sensitivities in the development rate of the separate sexes, male and female results may be pooled for statistical analysis.
CaCl2 · 6H2O
Effect concentrations expressed as concentrations in the overlaying water (for spiked water) or in the sediment (for spiked sediment), are usually calculated based on measured concentrations at the beginning of the exposure (see paragraph 38).
EDTA · 2H2O [1] [2]
Therefore, for spiked water, the concentrations typically measured at the beginning of the exposure in the overlying water of the vessels for both generations and those of the crystallising dishes are averaged for each treatment.
FeSO4 · 7H2O [1] [2]
For spiked sediment, the concentrations typically measured at the beginning of the exposure in the vessels for both generations (and optionally those of the crystallising dishes) are averaged for each treatment.
Stamlösningar med makronäringsämnen för medium M4 och M7
To compute a point estimate, i.e. an ECx, the per-vessel and per-breeding cage statistics may be used as true replicates.
Mängd som fylls upp till 1 liter med avjonat vatten
In calculating a confidence interval for any ECx the variability among vessels should be taken into account, or it should be shown that this variability is so small that it can be ignored.
Mängd stamlösning med makronäringsämnen som tillsätts för att bereda medium M4 och M7
When the model is fitted by Least Squares, a transformation should be applied to the per-vessel statistics in order to improve the homogeneity of variance.
Slutliga koncentrationer i testlösningarna M4 och M7
However, ECx values should be calculated after the response is transformed back to the original value (31).
Stamlösningar med vitaminer för medium M4 och M7
When the statistical analysis aims at determining the NOEC by hypothesis testing, the variability among vessels needs to be taken into account, which is guaranteed by using ANOVA methods (e.g. Williams' and Dunnett's test procedures).
Alla tre vitaminlösningarna kombineras till en enda vitaminstamlösning.
Williams' test would be appropriate when a monotonic dose-response is expected in theory and Dunnett's test would be appropriate where the monotonicity hypothesis does not hold.
Mängd stamlösning med vitaminer som tillsätts för att bereda medium M4 och M7
Alternatively, more robust tests (27) can be appropriate in situations where there are violations of the usual ANOVA assumptions (31).
Tiaminhydroklorid
Emergence ratio
Cyanokobalamin (B12)
Emergence ratios are quantal data, and can be analysed by the Cochran-Armitage test applied in a step-down manner where a monotonic dose-response is expected and these data are consistent with this expectation.
Biotin
If not, a Fisher's exact or Mantel-Haentzal test with Bonferroni-Holm adjusted p-values can be used.
Dessa ämnen skiljer sig åt i M4 och M7, såsom anges ovan.
If there is evidence of greater variability between replicates within the same concentration than a binomial distribution would indicate (often referenced to as “extra-binomial” variation), then a robust Cochran-Armitage or Fisher exact test such as proposed in (27), should be used.
Dessa lösningar bereds separat, blandas därefter och autoklaveras omedelbart.
The sum of live midges (males plus females) emerged per vessel, ne, is determined and divided by the number of larvae introduced, na:
Beredning av syntetiskt sediment
ER emergence ratio
SEDIMENTSAMMANSÄTTNING
number of live midges emerged per vessel
Syntetiskt sediment ska ha följande sammansättning:
number of larvae introduced per vessel (normally 20)
Vitmosstorv (Sphagnum), så nära pH 5,5–6,0 som möjligt, utan synliga växtrester, finfördelad (partikelstorlek ≤ 1 mm) och lufttorkad
When ne is larger than na (i.e. when unintentionally more than the foreseen number of larvae where introduced) na should be made equal to ne.
4–5
An alternative approach that is most appropriate for large sample sizes, when there is extra binomial variance, is to treat the emergence ratio as a continuous response and use procedures consistent with these ER data.
> 50 % av partiklarna bör vara av storleken 50–200 μm
A large sample size is defined here as the number emerged and the number not emerging both exceeding five, on a per replicate (vessel) basis.
CaCO3, i pulverform, kemiskt rent
To apply ANOVA methods, values of ER should first be transformed by the arcsin-sqrt transformation or Tukey-Freeman transformation to obtain an approximate normal distribution and to equalise variances.
0,05–0,1
The Cochran-Armitage, Fisher's exact (Bonferroni), or Mantel-Haentzal tests can be applied when using the absolute frequencies.
Konduktivitet ≤ 10 μS/cm
The arcsin-sqrt transformation is applied by taking the inverse sine (sine– 1) of the square root of ER.
BEREDNING
For emergence ratios, ECx-values are calculated using regression analysis (e.g. probit, logit or Weibull models (28)).
Suspensionen konditioneras i minst två dagar med skonsam omrörning vid 20 ± 2 °C för att stabilisera pH-värdet och etablera en stabil mikrobiell komponent, varefter pH mäts på nytt och då bör vara 6,0 ± 0,5.
If regression analysis fails (e.g. when there are less than two partial responses), other non-parametric methods such as moving average or simple interpolation can be used.
Därefter mäts den slutliga blandningens pH på nytt och justeras vid behov till 6,5–7,5 med CaCO3.
Development rate
Likaså rekommenderas att det syntetiska sediment som ska användas i ett chironomidtoxicitetstest konditioneras före användningen i sju dagar under samma betingelser som råder i det efterföljande testet.
Mean development time represents the mean time span between the introduction of larvae (day 0 of the test) and the emergence of the experimental cohort of midges (for calculation of the true development time, the age of larvae at the time of introduction should be considered).
FÖRVARING
The development rate (unit: 1/day) is the reciprocal of the development time and represents that portion of larval development which takes place per day.
Det syntetiska sedimentets torra beståndsdelar kan lagras i ett torrt och svalt utrymme vid rumstemperatur.
Development rate is preferred for the evaluation of these sediment toxicity studies as its variance is lower, and it is more homogeneous and closer to a normal distribution compared to the development time.
Berett (vått) sediment ska inte lagras innan det används i ett test.
Hence, more powerful parametric test procedures may be used with development rate unlike development time.
Det bör användas omedelbart efter den sju dagar långa konditioneringsperioden, som är sista steget i beredningen.
For development rate as a continuous response, ECx-values can be estimated by regression analysis (e.g. (29) (30)).
10–20.
A NOEC for the mean development rate can be determined via ANOVA methods, e.g. Williams or Dunnett's test.
Ett godtagbart utspädningsvattens kemiska egenskaper
Since males emerge earlier than females, i.e. have a higher development rate, it makes sense to calculate the development rate for each gender separately in addition to that for the total midges.
BESTÅNDSDEL
For statistical testing, the number of midges observed on inspection day x are assumed to be emerged at the mean of the time interval between day x and day x – l (l = length of the inspection interval, usually 1 day).
KONCENTRATIONER
The mean development rate per vessel ( x
Hårdhet som CaCO3
) is calculated according to:
Om man misstänker växelverkan mellan hårdhetsjoner och testkemikalien bör dock vatten med lägre hårdhet användas (och därmed bör Elendt Medium M4 inte användas i detta läge).
mean development rate per vessel
Riktlinjer för testets genomförande
i index of inspection interval
Exempel på en odlingsbehållare:
m maximum number of inspection intervals
A gasväv på ovansidan och åtminstone den ena sidan av behållaren (maskstorlek ca 1 mm)
number of midges emerged in the inspection interval i
B öppning för placering av kläckta adulta exemplar i odlingsbehållaren och för avlägsnande av de äggband som lagts i kristalliseringsskålen (visas ej i denna figur)
total number of midges emerged at the end of experiment (= Σfi)
C odlingsbehållarens storlek minst 30 cm längd, 30 cm höjd och 30 cm bredd
development rate of the midges emerged in interval i
Exempel på ett testkärl:
day i
A pasteurpipett för lufttillförsel i det överliggande vattnet
inspection day (days since introduction of the larvae)
B glaslock som förhindrar de kläckta myggorna från att rymma
length of inspection interval i (days, usually 1 day)
C vattnets ytskikt
Sex ratio
D testkärl (glasbägare, minst 600 ml)
Sex ratios are quantal data and should therefore be evaluated by means of a Fisher's exact test or other appropriate methods.
E sedimentskikt
The natural sex ratio of C. riparius is one, i.e. males and females are equally abundant.
Exempel på en exhauster som används för att insamla vuxna myggor (pilarna anger flödesriktningen):
For both generations the sex ratio data should be treated identically.
På insidan täcks öppningen av glasröret (A) med lite bomull och gasväv (maskstorlek ca 1 mm) för att förhindra att myggorna skadas när man suger upp dem i exhaustern
Since the maximum number of midges per vessel (i.e. 20) is too low for a meaningful statistical analysis, the total number of fully emerged and alive midges for each gender is summed over all vessels of one treatment.
C genomskinlig behållare (plast eller glas, längd ca 15 cm) för de infångade myggorna
These untransformed data are tested against the (solvent) control or pooled control data in a 2 × 2 contingency table.
D kork av mjukgummi, perforerad med rör (E).
Reproduction, as fecundity, is calculated as the number of egg ropes per female.
För att släppa ut myggorna i odlingsbehållaren avlägsnas kork D från behållare C
More specific, the total number of egg ropes produced in a breeding cage is divided by the total number of alive and undamaged females added to that cage.
E rör (plast eller glas, innerdiameter ca 8 mm) för insamling av vuxna myggor från kärlet
A NOEC for fecundity can be determined via ANOVA methods, e.g. Williams or Dunnett's test.
Schematisk presentation av ett livscykeltest:
Fertility of the egg ropes is used to quantify the number of fertile egg ropes per female.
A första generationen – testkärl som innehåller ett sediment/vatten-system, åtta replikat och tjugo första stadiets larver per kärl
The total number of fertile egg ropes produced in a breeding cage is divided by the total number of alive and undamaged females added to that cage.
B fyra testkärl för varje odlingsbehållare, A och B
A NOEC for fertility can be determined via ANOVA methods, e.g. Williams or Dunnett's test.
C odlingsbehållare (A och B) för svärmning, parning och äggläggning
The test report should provide the following information:
D kristalliseringsskålar i vilka äggbanden läggs
physical nature and physical-chemical properties (water solubility, vapour pressure, log Kow, partition coefficient in soil (or in sediment if available), stability in water and sediment etc.);
E mikrotiterplattor, en brunn för varje äggband
chemical identification data (common name, chemical name, structural formula, CAS number, etc.) including purity and analytical method for the quantification of the test chemical.
F andra generationen – testkärl som innehåller ett sediment/vatten-system, åtta replikat och tjugo första stadiets larver per kärl
test organisms used:
TEST PÅ FISKARS KÖNSUTVECKLING
information on how the egg masses and larvae were handled;
Denna testmetod motsvarar OECD:s testriktlinje (TG) 234 (2011).
information on handling of the emerged adults of the 1st generation with the help of an exhauster etc (see Appendix 5)
Den bygger på ett beslut från 1998 att utveckla nya eller uppdatera befintliga testmetoder för screening och testning av potentiellt hormonstörande ämnen.
age of the test organisms at the time of insertion into the test vessels of the 1st and 2nd generation.
Testet på fiskars könsutveckling (Fish Sexual Development Test, FSDT) konstaterades vara en lovande metod som täcker ett känsligt livsstadium som kan påverkas av både östrogen- och androgenliknande kemikalier.
sediment used, i.e. natural or formulated (artificial) sediment;
Testmetoden genomgick ett valideringstest mellan laboratorier från 2006 till 2010, där japanska risfiskar (Oryzias latipes), sebrafisk (Danio rerio) och storspigg (Gasterosteus aculeatus) validerades, och knölskallelöja (Pimephales promelas) delvis validerades (41) (42) (43).
location and description of sediment sampling site, including, if possible, contamination history;
Protokollet är i princip en förbättring av OECD TG 210: Fish, Early Life Stage Toxicity Test (1) som föreskriver att exponeringen fortsätter till dess att fiskarna är könsdifferentierade, dvs. cirka 60 dagar efter kläckningen för japansk risfisk, storspigg och sebrafisk (exponeringstiden kan vara kortare eller längre för andra arter som godkänns i framtiden) och endokrinkänsliga endpoints läggs till.
sediment characteristics:
Testet på fiskars könsutveckling bedömer effekterna på tidiga utvecklingsstadier och de eventuella negativa konsekvenserna av förmodat hormonstörande kemikalier (t.ex. östrogener, androgener och hämmare av steroidogenes) på könsutvecklingen.
pH, organic carbon content, C/N ratio and granulometry (if appropriate).
Kombinationen av två centrala endokrina endpoints, koncentrationen av vitellogenin (VTG) och den fenotypiska könsfördelningen, gör att testet kan indikera testkemikaliens verkningssätt.
formulated sediment:
På grund av den populationsrelevanta förändringen av den fenotypiska könsfördelningen kan testet på fiskars könsutveckling användas för faro- och riskbedömning.
preparation, ingredients and characteristics (organic carbon content, pH, moisture, etc. measured at the start of the test);
Om testet används för faro- och riskbedömning bör man dock inte använda storspigg, eftersom de valideringsdata som hittills finns att tillgå visar att i denna art är ändringar av den fenotypiska könsfördelningen på grund av testkemikalier ovanliga.