natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The blood samples are taken by cardiac puncture.
temperaturkontrollanordning (t.ex. värmare eller kylare (reglerbara till 22 ± 1 °C)),
At first the fish should be anesthetized with MS-222 (100 mg/l).
termometer,
The proper plane of anaesthesia allows the user to distinguish the heartbeat of the zebrafish.
binokulärt dissektionsmikroskop,
While puncturing the heart, keep the syringe piston under weak tension.
digitalkamera med minst fyra megapixels upplösning och mikrofunktion,
Collectable blood volumes range between 20 - 40 microliters.
bilddigitaliseringsprogram,
After cardiac puncture, the blood/buffer-mixture should be filled into the test tube.
petriskål (t.ex.
Plasma is separated from the blood via centrifugation (20 min; 5000 g) and should be stored at – 80 °C until required for analysis.
100 × 15 mm) eller genomskinlig plastbehållare av jämförbar storlek,
Procedure 3C:
analysvåg som kan mäta värden med tre decimalers noggrannhet (mg),
SOP:
mätare för löst syre,
Zebrafish, homogenisation of head & tail
pH-mätare,
The fish are anaesthetised and euthanised in accordance with the test description.
ljusintensitetsmätare som kan mäta i lux,
The head and tail are cut of the fish in accordance with Figure 1.
diverse laboratorieglas och verktyg,
Important:
justerbara pipetter (10–5000 μl) eller diverse pipetter av motsvarande storlek,
All dissection instruments, and the cutting board should be rinsed and cleaned properly (e.g. with 96 % ethanol) between handling of each single fish to prevent “vitellogenin pollution” from females or induced males to uninduced males.
testkemikalie i tillräckliga mängder för att utföra undersökningen, helst från ett enda parti,
Cut behind
lämpliga analysinstrument för testkemikalien eller upphandlade analystjänster.
Cut behind dorsal fin
Kemisk testbarhet
For Vtg analysis
Testet på groddjursmetamorfos bygger på ett exponeringsprotokoll i vatten enligt vilket testkemikalien tillförs testbehållarna via ett genomflödessystem.
For gonad histology
Genomflödestestmetoder medför dock begränsningar av de typer av kemikalier som kan testas, grundat på kemikaliens fysikalisk-kemiska egenskaper.
The weight of the pooled head and tail from each fish is measured to the nearest mg.
Innan detta protokoll används bör därför grundläggande uppgifter om kemikalien inhämtas som är relevanta för att fastställa testbarheten, och OECD:s vägledningsdokument Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures (4) bör konsulteras.
After being weighed, the parts are placed in appropriate tubes (e.g. 1,5 ml eppendorf) and frozen at – 80 °C until homogenisation or directly homogenised on ice with two plastic pistils.
Även andra faktorer kan vara relevanta för att fastställa testbarheten och bör fastställas från fall till fall.
(Other methods can be used if they are performed on ice and the result is a homogenous mass).
Om det är omöjligt att genomföra ett framgångsrikt test med testkemikalien med hjälp av ett genomflödessystem kan ett statiskt förnyelsesystem användas.
The tubes should be numbered properly so that the head and tail from the fish can be related to their respective body-section used for gonad histology.
Om ingetdera system lämpar sig för testkemikalien är standardförfarandet att inte testa den med detta protokoll.
When a homogenous mass is achieved, 4 x the tissue weight of ice-cold homogenisation buffer is added.
Exponeringssystem
Keep working with the pistils until the mixture is homogeneous.
Ett utspädningssystem med genomströmning är att föredra, när så är möjligt, framför ett statiskt förnyelsesystem.
Important note:
Om någon av testkemikaliernas fysikaliska och/eller kemiska egenskaper inte lämpar sig för ett utspädningssystem med genomströmning kan ett alternativt exponeringssystem (t.ex. statisk förnyelse) användas.
New pistils are used for each fish.
Systemet bör ha komponenter av glas, rostfritt stål och/eller polytetrafluoreten, som klarar kontakt med vatten.
The samples are placed on ice until centrifugation at 4 °C at 50000 × g for 30 min.
Lämpliga plaster kan dock användas om de inte äventyrar undersökningen.
Use a pipette to dispense portions of 20 μl supernatant into at least two tubes by dipping the tip of the pipette below the fat layer on the surface and carefully sucking up the supernatant without fat- or pellet fractions.
Exponeringsakvarierna ska vara av glas eller rostfritt stål och vara utrustade med ståndrör som klarar en ungefärlig tankvolym på mellan 4,0 och 10,0 liter och ett minsta vattendjup på 10–15 cm.
The tubes are stored at – 80 °C until use.
Systemet bör kunna underhålla alla exponeringskoncentrationer och en kontroll, med fyra replikat per testkärl.
Homogenisation buffer:(50 mM Tris-HCl pH 7,4; 1 % Protease inhibitor cocktail (Sigma)):
Flödeshastigheten till varje akvarium ska vara konstant, både med tanke på bibehållandet av de biologiska betingelserna och den kemiska exponeringen (t.ex.
12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl Protease inhibitor cocktail.TRIS:
25 ml/min).
TRIS-ULTRA PURE (ICN) e.g. from Bie & Berntsen, Denmark.Protease inhibitor cocktail:
Behandlingsakvarierna bör slumpmässigt ges en plats i exponeringssystemet för att minska eventuella positionsberoende effekter, inbegripet små variationer i temperatur, ljusintensitet osv.
From Sigma (for mammalian tissue) Product number P 8340.Note:
Vattentemperaturen bör hållas vid 22 ± 1 °C, pH-värdet mellan 6,5–8,5, och halten löst syre > 3,5 mg/l (> 40 % av luftens mättnad) i varje testakvarium.
The homogenisation buffer should be used the same day as manufactured.
Vattentemperaturen, pH-värdet och halten löst syre bör mätas minst en gång i veckan.
Place on ice during use.
Temperaturen bör helst mätas kontinuerligt i minst ett testkärl.
The vitellogenin used to make the inter-assay reference standard will be from a batch different from the one used to prepare calibration standards for the assay being performed.
Vattenkvalitet
The fortification sample will be made by adding a known quantity of the inter-assay standard to a sample of control male plasma.
Allt vatten som är tillgängligt lokalt (t.ex. källvatten eller kolfiltrerat kranvatten) och tillåter normal tillväxt och utveckling av grodyngel av X. laevis kan användas.
The sample will be fortified to achieve a vitellogenin concentration between 10 and 100 times the expected vitellogenin concentration of control male fish.
Eftersom den lokala vattenkvaliteten kan variera avsevärt från ett område till ett annat bör vattenkvaliteten analyseras, särskilt om historiska uppgifter om vattnets användbarhet för odling av Xenopus inte finns att tillgå.
The sample of control male plasma that is fortified may be from an individual fish or may be a composite from several fish.
Man bör vara särskilt noga med att se till att vattnet är fritt från koppar, klor och kloraminer, som alla är giftiga för grodor och grodyngel.
A subsample of the unfortified control male plasma will be analysed in at least two duplicate wells.
Det rekommenderas vidare att man analyserar vattnets bakgrundsnivåer av fluorid, perklorat och klorat (biprodukter från rening av dricksvatten), eftersom alla dessa anjoner är substrat av sköldkörtelns jodtransportör och ökade halter av var och en av dessa anjoner kan påverka undersökningens resultat.
The fortified sample also will be analysed in at least two duplicate wells.
Analysen bör utföras innan testet inleds och testvattnet bör normalt bör vara fritt från dessa anjoner.
The mean quantity of vitellogenin in the two unfortified control male plasma samples will be added to the calculated quantity of vitellogenin added to fortification the samples to determine an expected concentration.
Jodidkoncentrationen i testvattnet
The ratio of this expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
För att sköldkörteln ska kunna bilda sköldkörtelhormoner måste tillräckligt med jodid vara tillgängligt för ynglen via en kombination av vatten- och födokällor.
Decision flowchart for the statistical analysis
För närvarande finns det inga empiriskt härledda riktlinjer för minsta möjliga koncentrationer av jodid.
Dunnett test on nested ANOVA
Tillgången på jodid kan dock påverka sköldkörtelsystemets mottaglighet för sköldkörtelaktiva ämnen, och man vet att ämnet justerar sköldkörtelns grundläggande aktivitet, en aspekt som bör uppmärksammas vid tolkningen av resultaten från sköldkörtelns histopatologi.
No Yes
Uppmätta koncentrationer av vattenbaserat jodid i testvattnet ska därför rapporteras.
>=4 reps per conc
Om testvattnet har rekonstituerats från avjonat vatten bör jod tillsättas med en koncentration på minst 0,5 μg/l.
<=3 reps per conc Dunn test Yes
Alla ytterligare tillsatser av jod eller andra salter till testvattnet bör noteras i rapporten.
No Normalising transform?
Djurhållning
Tamhane-Dunnett test >=4 reps per conc
Skötsel och avel av vuxna djur
<=3 reps per conc Nested ANOVA not normal No Yes No
Skötsel och avel av vuxna djur bedrivs enligt standardiserade riktlinjer, och läsaren hänvisas till standardvägledningen för utförande av test avseende fosterskador hos grodor (FETAX) (6) för mer utförlig information.
Yes variance stabilising transformation
Sådana standardiserade riktlinjer ger exempel på lämplig skötsel och lämpliga avelsmetoder, men behöver inte strikt följas.
Dunnett test Variances unequal
För att framkalla parning injiceras 3–5 par vuxna honor och hanar med humant koriongonadotropin (hCG).
Variances equal
Hon- och hanexemplar injiceras med ca 800 IU–1000 respektive 600 IU–800 IU hCG upplöst i en 0,6–0,9-procentig saltlösning.
Not monotone
Avelspar hålls i stora akvarier, ostört och under statiska förhållanden i syfte att uppmuntra till amplexus.
Stept-down Jonckheere or Williams' test
Varje avelsakvarium bör ha en falsk botten av rostfritt stål eller plastnät som gör att äggen sjunker till akvariets botten.
Step-down trendtest on replicate means
Grodor som injiceras sent på eftermiddagen kommer vanligtvis att lägga sina ägg mitt på förmiddagen dagen därpå.
Monotone
Efter att en tillräcklig mängd ägg har lagts och befruktats bör de vuxna djuren avlägsnas från avelsakvarierna.
Tamhane-Dunnett test on nested ANOVA
Skötsel och urval av yngel
Dunn test on rep means
Efter att de vuxna djuren avlägsnats från avelsakvarierna samlas äggen in och deras livsduglighet utvärderas med hjälp av en representativ delmängd av embryon från alla avelsakvarierna.
Dunn or Mann-Whitney test
De bästa enskilda romkornen (2–3 rekommenderas för att utvärdera kvaliteten på rommen) bör behållas grundat på embryots livskraft och förekomsten av ett tillräckligt antal (minst 1500) embryon.
Nested ANOVA normal
Alla organismer som används i en undersökning ska komma från en enstaka äggläggningshändelse (dvs. rommen ska inte blandas med rom från andra individer).
Rep means normally distributed
Embryona överförs till en stor flat bunke eller skål och alla synliga döda eller onormala ägg (se definitionen i (5)) avlägsnas med hjälp av en pipett eller ett droppglas.
Step-down Jonckheere test
De friska embryona från var och en av de tre äggläggningshändelserna överförs till tre separata kläckningsakvarier.
Rep means normal or not homogenous
Fyra dagar efter att de har placerats i kläckningsakvarierna väljs de bästa ynglen ut, byggt på livskraft och kläckningsframgång, och ynglen överförs till ett lämpligt antal uppfödningsakvarier med en temperatur på 22 ± 1 °C.
Rep means normal & homogenous
Dessutom överförs ett ytterligare antal yngel till extraakvarier för att ha i reserv om yngel dör i uppfödningsakvarierna under den första veckan.
Determine whether Dose-Response is monotone
Detta förfarande bibehåller en konsekvent organismtäthet och minskar därmed de utvecklingsmässiga skillnaderna inom kohorten från samma äggläggningshändelse.
C.38.
Alla uppfödningsakvarier bör dagligen sugas rena.
THE AMPHIBIAN METAMORPHOSIS ASSAY
Som en försiktighetsåtgärd bör vinyl- eller nitrilhandskar användas i stället för latexhandskar.
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 231 (2009).
Döda djur bör avlägsnas dagligen och ersättningsyngel bör tillsättas för att upprätthålla organismtätheten under den första veckan.
The need to develop and validate an assay capable of detecting chemicals active in the thyroid system of vertebrate species originates from concerns that environmental levels of chemicals may cause adverse effects in both humans and wildlife.
Utfodring bör ske minst två gånger per dag.
In 1998, the OECD initiated a high-priority activity to revise existing TGs and to develop new TGs for the screening and testing of potential endocrine disrupters.
Under förexponeringsfasen acklimatiseras grodynglen till betingelserna i den faktiska exponeringsfasen, inklusive fodertyp, temperatur, ljus/mörker-cykel och odlingsmediet.
One element of the activity was to develop a TG for the screening of chemicals active on the thyroid system of vertebrate species.
Det rekommenderas därför att samma odlings-/utspädningsvatten används både under förexponeringsfasen och under exponeringen.
Both an enhancement of the Repeated dose 28-day oral toxicity study in rodents (Chapter B.7 of this Annex) and the Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) were proposed.
Om ett statiskt odlingssystem används för att hålla grodynglen under förexponeringsfasen bör odlingsmediet ersättas helt minst två gånger per vecka.
The enhanced test method B.7 underwent validation and a revised test method has been issued.
Trängsel på grund av hög yngeltäthet under förexponeringsperioden bör undvikas, eftersom sådana effekter avsevärt skulle kunna påverka grodynglens utveckling under den påföljande testfasen.
The Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) underwent an extensive validation programme which included intra- and inter-laboratory studies demonstrating the relevance and reliability of the assay (1, 2).
Djurtätheten under uppfödningen bör därför inte överstiga ca fyra grodyngel/l odlingsmedium (för statiska exponeringssystem) eller tio grodyngel/l odlingsmedium (med t.ex.
Subsequently, the validation of the assay was subject to peer-review by a panel of independent experts (3).
50 ml/min flödeshastighet i förexponerings- eller odlingssystemet).
This test method is the outcome of the experience gained during the validation studies for the detection of thyroid active chemicals, and of work conducted elsewhere in OECD member countries.
Under dessa förhållanden bör grodynglen utvecklas från stadium 45/46 till stadium 51 inom tolv dagar.
The Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) is a screening assay intended to empirically identify chemicals which may interfere with the normal function of the hypothalamic-pituitary-thyroid (HPT) axis.
Representativa grodyngel från detta bestånd bör inspekteras dagligen under utvecklingsstadiet i syfte att uppskatta den lämpliga tidpunkten för exponeringens inledning.
The AMA represents a generalised vertebrate model to the extent that it is based on the conserved structures and functions of the HPT axis.
Man bör vara noga med att inte utsätta grodynglen för stress och trauman, särskilt under förflyttning, rengöring av akvarierna och hanteringen av yngel.
It is an important assay because amphibian metamorphosis provides a well-studied, thyroid-dependent process which responds to chemicals active within the HPT axis, and it is the only existing assay that detects thyroid activity in an animal undergoing morphological development.
Stressande förhållanden/händelser bör undvikas, såsom högt och/eller ständigt buller, knackningar på akvarierna, vibrationer i akvarierna, alltför stor aktivitet i laboratoriet och snabba förändringar av miljöfaktorerna (ljus, temperatur, pH-värde, halten av löst syre, vattenflödeshastighet osv.).
The general experimental design entails exposing stage 51 Xenopus laevis tadpoles to a minimum of three different concentrations of a test chemical and a dilution water control for 21 days.
Om grodynglen inte utvecklas till stadium 51 inom 17 dagar efter befruktningen bör en alltför hög stressnivå betraktas som en möjlig orsak.
There are four replicates of each test treatment.
Odling och utfodring av yngel
Larval density at test initiation is 20 tadpoles per test tank for all treatment groups.
Grodynglen utfodras t.ex. med kommersiellt tillgängligt grodyngelfoder som används i valideringsstudier (se även tillägg 1) under hela förexponeringsperioden (efter stadium 45/46 enligt Nieuwkoop och Faber (NF) (8)) och under hela testperioden på 21 dagar, eller annat foder som har visat sig göra det möjligt att utföra testet på groddjursmetamorfos på ett likvärdigt sätt.
The observational endpoints are hind limb length, snout to vent length (SVL), developmental stage, wet weight, thyroid histology, and daily observations of mortality.
Utfodringsprogrammet under förexponeringsperioden bör vara väl anpassat för att uppfylla de växande grodynglens behov.
Test Species
Detta innebär att små fodergivor bör ges till de nykläckta grodynglen flera gånger per dag (minst två gånger).
Xenopus laevis is routinely cultured in laboratories worldwide and is easily obtainable through commercial suppliers.
Överbliven mat bör undvikas för att i) bevara vattenkvaliteten och ii) förhindra att grodynglens gälar täpps igen av foderpartiklar och slam.
Reproduction can be easily induced in this species throughout the year using human chorionic gonadotropin (hCG) injections and the resultant larvae can be routinely reared to selected developmental stages in large numbers to permit the use of stage-specific test protocols.
För det grodyngelfoder som används i valideringsstudierna bör den dagliga fodergivan ökas allteftersom grodynglen växer till ca 30 mg/djur/dag strax innan testet inleds.
It is preferred that larvae used in the assay are derived from in-house adults.
Detta kommersiellt tillgängliga foder har i valideringsstudierna visat sig stödja god tillväxt och utveckling hos yngel av X. laevis och utgörs av fina partiklar som förblir suspenderat i vattnet under en lång tid och kan sköljas bort med flödet.
As an alternative although this is not the preferred procedure, eggs or embryos may be shipped to the laboratory performing the test and allowed to acclimate;
Den dagliga mängden foder bör därför delas upp i mindre givor och ges minst två gånger per dag.
the shipping of larval stages for use in the test is unacceptable.
En översikt av utfodringsprogrammet för detta foder visas i tabell 1.
Equipment and Supplies
Utfodringstakten bör registreras.
The following equipment and supplies are needed for the conduct of this assay:
Fodret kan ges torrt eller som en stamlösning som bereds i utspädningsvatten.
Exposure system (see description below);
Färsk stamlösning bör beredas varannan dag och lagras vid 4 °C när den inte används.
Glass or stainless steel aquaria (see description below);
Utfodringsprogram med kommersiellt tillgängligt grodyngelfoder som används i valideringsstudier för yngel av X. laevis under livsdelen av testet på groddjursmetamorfos under genomflödesförhållanden
Breeding tanks;
Undersökningsdag
Temperature controlling apparatus (e.g., heaters or coolers (adjustable to 22° ± 1 °C));
Fodergiva (mg foder/djur/dag)
Thermometer;
Analytisk kemi
Binocular dissection microscope;
Innan man utför en studie bör testkemikaliens stabilitet utvärderas med hjälp av befintlig information om dess löslighet, nedbrytbarhet och flyktighet.
Digital camera with at least 4 megapixel resolution and micro function;
Prover ska tas på testlösningarna från varje replikatakvarium vid varje koncentration för kemiska analyser vid testets inledning (dag 0), och varje vecka under testets gång med minst fyra prover.
Image digitising software;
Det rekommenderas också att varje testkoncentration analyseras i samband med systemförberedelser innan testet inleds för att kontrollera systemets prestanda.
Petri dish (e.g. 100 × 15 mm) or transparent plastic chamber of comparable size;
Dessutom rekommenderas att stamlösningarna analyseras när de byts, särskilt om stamlösningens volym inte tillhandahåller tillräckliga mängder av kemikalien för att räcka över hela rutinprovtagningsperioden.
Analytical balance capable of measuring to 3 decimal places (mg);
När det gäller kemikalier som inte kan detekteras vid några av eller alla de koncentrationer som används i ett test bör stamlösningarna mätas och flödeshastigheten i systemet registreras för att beräkna de nominella koncentrationerna.
Dissolved oxygen meter;
Tillsats av kemikalier
pH meter;
Den metod som används för tillsats av testkemikalien i systemet kan variera beroende på kemikaliens fysikalisk-kemiska egenskaper.
Light intensity meter capable of measuring in lux units;
Vattenlösliga kemikalier kan upplösas i alikvoter av testvatten vid koncentrationer som möjliggör tillsats vid den avsedda testkoncentrationen i ett genomflödessystem.
Miscellaneous laboratory glassware and tools;
Kemikalier som är flytande vid rumstemperatur och svårlösliga i vatten kan tillsättas med hjälp av vätska/vätska-mättningsmetoder.
Adjustable pipettes (10 to 5000 μl) or assorted pipettes of equivalent sizes;
Kemikalier som är fasta vid rumstemperatur och svårlösliga i vatten kan tillsättas med hjälp av kolonnmättnadskärl med glasull (7).
Test chemical in sufficient quantities to conduct the study, preferably of one lot;
Helst ska man använda ett bärämnesfritt testsystem, men olika testkemikalier har olika fysikalisk-kemiska egenskaper som sannolikt kräver olika strategier för beredning av exponeringsvattnet med kemikalien.
Analytical instrumentation appropriate for the chemical on test or contracted analytical services.
Lösningsmedel eller bärämnen för om möjligt undvikas av följande skäl:
Chemical Testability
MTC-koncentrationen definieras som den högsta testkoncentration av kemikalien som leder till mindre än 10 % akut dödlighet.
The AMA is based upon an aqueous exposure protocol whereby test chemical is introduced into the test chambers via a flow-through system.
Om man använder denna metod förutsätter man att det finns befintliga empiriska data om den akuta dödligheten på grundval av vilka MTC-koncentrationen kan uppskattas.
Flow-through methods however, introduce constraints on the types of chemicals that can be tested, as determined by the physicochemical properties of the chemical.
Även om användningen av regressionsmodeller kan vara den mest tekniskt välgrundade metoden för uppskattning av MTC-koncentrationen, kan ett användbart närmevärde för MTC-koncentrationen härledas ur befintliga akuta toxicitetsuppgifter genom att använda 1/3 av det akuta LC50-värdet.
Therefore, prior to using this protocol, baseline information about the chemical should be obtained that is relevant to determining the testability, and the OECD Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures (4) should be consulted.
Uppgifter om akut toxicitet kan dock saknas för den art som testas.
Characteristics which indicate that the chemical may be difficult to test in aquatic systems include:
Om artspecifika uppgifter om akut toxicitet inte finns att tillgå, kan ett 96-timmars LC50-test genomföras med grodyngel som är representativa för (dvs. i samma utvecklingsstadium som) ynglen som testas i testet på groddjursmetamorfos.
high octanol water partitioning coefficients (log Kow), high volatility, susceptibility to hydrolysis, and susceptibility to photolysis under ambient laboratory lighting conditions.
Om data från andra vattenlevande arter finns tillgängliga (t.ex.
Other factors may also be relevant to determining testability and should be determined on a case by case basis.
LC50-studier av fiskar eller andra groddjursarter) kan som ett alternativ en professionell bedömning göras för att uppskatta en sannolik MTC-koncentration baserat på extrapolering mellan arter.
If a successful test is not possible for the chemical using a flow-through test system, a static renewal system may be employed.
Om kemikalien inte är akut toxisk och dessutom är löslig vid koncentrationer över 100 mg/l kan, som ett ytterligare alternativ, 100 mg/l betraktas som den högsta testkoncentrationen (HTC), eftersom denna koncentration vanligtvis betraktas som ’praktiskt taget icke-toxisk’.