natgillin/translations-raw huggingface dataset:
In any case, the route should be chosen to ensure adequate exposure of the target tissue(s).
Undersökningar som syftar till att mer grundligt karakterisera kvantitativ information om dosrespons kan kräva ytterligare dosgrupper.
Intraperitoneal injection is generally not recommended since it is not an intended route of human exposure, and should only be used with specific scientific justification.
Dessa gränser kan variera för vissa typer av testkemikalier (t.ex. humanläkemedel) som omfattas av särskilda krav.
If the test chemical is admixed in diet or drinking water, especially in case of single dosing, care should be taken that the delay between food and water consumption and sampling should be sufficient to allow detection of the effects (see paragraphs 33-34).
Limit-test
The maximum volume of liquid that can be administered by gavage or injection at one time depends on the size of the test animal.
Om försök för att fastställa dosering eller befintliga data från besläktade djurstammar tyder på att ett behandlingssystem med minst gränsdosen (beskrivs nedan) inte ger några observerbara toxiska effekter (ingen minskning av benmärgens proliferation eller andra bevis på cytotoxicitet i målvävnaden), och om ingen gentoxicitet förväntas baserat på in vitro-undersökningar av gentoxicitet eller data från strukturellt besläktade kemikalier, anses det kanske inte nödvändigt med ett fullständigt test med tre dosnivåer, under förutsättning att det har påvisats att testkemikalien når målvävnaden (benmärg).
The volume should not normally exceed 1 ml/100 g body weight except in the case of aqueous solutions where a maximum of 2 ml/100 g may be used.
I sådana fall kan en enda dosnivå, vid gränsdosen, vara tillräcklig.
The use of volumes greater than this should be justified.
För en administrationsperiod på > 14 dagar är gränsdosen 1000 mg/kg kroppsvikt/dag.
Except for irritating or corrosive test chemicals, which will normally produce exacerbated effects at higher concentrations, variability in test volume should be minimised by adjusting the concentration to ensure administration of a constant volume in relation to body weight at all dose levels.
För administrationsperioder på 14 dagar eller mindre är gränsdosen 2000 mg/kg/kroppsvikt/dag.
Treatment schedule
Tillförsel av doser
Test chemicals are normally administered as a single treatment, but may be administered as a split dose (i.e. two or more treatments on the same day separated by no more than 2-3 hours) to facilitate administering a large volume.
Den förväntade exponeringsvägen för människor bör beaktas vid utformningen av en analys.
Under these circumstances, or when administering the test chemical by inhalation, the sampling time should be scheduled based on the time of the last dosing or the end of exposure.
Administrering av doser Den förväntade exponeringsvägen för människor bör beaktas vid utformningen av en analys.
There are little data available on the suitability of a repeated-dose protocol for this test.
Exponeringsvägen bör i alla händelser väljas för att säkerställa lämplig exponering av målvävnaden.
However, in circumstances where it is desirable to integrate this test with a repeated-dose toxicity test, care should be taken to avoid loss of chromosomally damaged mitotic cells as may occur with toxic doses.
Intraperitoneal injektion rekommenderas generellt inte eftersom den inte är en avsedd exponeringsväg för människor, och bör endast användas med specifik vetenskaplig motivering.
Such integration is acceptable when the highest dose is greater or equal to the limit dose (see paragraph 29) and a dose group is administered the limit dose for the duration of the treatment period.
Om testkemikalien blandas i födan eller dricksvattnet bör man, särskilt i fråga om engångsdosering, se till att fördröjningen mellan födo- och vattenintag och provtagning är tillräcklig för att upptäcka effekterna (se punkterna 33–34).
The micronucleus test (test method B.12) should be viewed as the in vivo test of choice for chromosomal aberrations when integration with other studies is desired.
Exponeringsvägen bör i alla händelser väljas för att säkerställa lämplig exponering av målvävnaden.
Bone marrow samples should be taken at two separate times following single treatments.
Volymen bör normalt inte överstiga 1 ml per 100 g kroppsvikt, utom för vattenlösningar där högst 2 ml/100 g får användas.
For rodents, the first sampling interval should be the time necessary to complete 1,5 normal cell cycle lengths (the latter being normally 12-18 hours following the treatment period).
Användning av volymer som är större än den bör motiveras.
Since the time required for uptake and metabolism of the test chemical(s) as well as its effect on cell cycle kinetics can affect the optimum time for chromosomal aberration detection, a later sample collection 24 hours after the first sampling time is recommended.
Med undantag för irriterande eller frätande testkemikalier, som normalt kommer att ge stegrade verkningar vid högre koncentrationer, bör variationer av testvolymen minimeras genom justering av koncentrationen för att säkerställa att en konstant volym ges i förhållande till kroppsvikten vid alla dosnivåer.
At the first sampling time, all dose groups should be treated and samples collected for analysis; however, at the later sampling time(s), only the highest dose needs to be administered.
Behandlingsschema
If dose regimens of more than one day are used based on scientific justification, one sampling time at up to approximately 1,5 normal cell cycle lengths after the final treatment should generally be used.
Testkemikalierna ges normalt som en enstaka behandling, men kan även ges som en delad dos (dvs två eller flera behandlingar samma dag med högst 2–3 timmars mellanrum) för att underlätta tillförsel av stora volymer.
Following treatment and prior to sample collection, animals are injected intraperitoneally with an appropriate dose of a metaphase-arresting agent (e.g. colcemid or colchicine), and samples are collected at an appropriate interval thereafter.
Under dessa omständigheter eller när tillförseln av testkemikalien sker via inhalation bör provtagningstiden planeras baserat på tidpunkten för den sista doseringen eller när exponeringen upphör.
For mice this interval is approximately 3-5 hours prior to collection and for rats it is 2-5 hours.
Det finns få uppgifter om huruvida ett protokoll med upprepade doser är lämpligt för detta test.
Cells are harvested from the bone marrow, swollen, fixed and stained, and analysed for chromosomal aberrations (12).
Under omständigheter där det är önskvärt att integrera detta test med ett toxicitetstest med upprepade doser bör man dock vara noga med att undvika förlust av mitotiska celler med kromosomskador, som kan förekomma vid toxiska doser.
Observations
Integrering är godtagbar när den högsta dosen är större eller motsvarar gränsdosen (se punkt 29) och en dosgrupp ges som gränsdos under behandlingsperiodens varaktighet.
General clinical observations of the test animals should be made and clinical signs recorded at least once a day, preferably at the same time(s) each day and considering the peak period of anticipated effects after dosing.
Mikrokärntest (testmetod B.12) bör vara det in vivo-test som väljs för kromosomavvikelser när integrering med andra undersökningar är önskvärt.
At least twice daily during the dosing period, all animals should be observed for morbidity and mortality.
Benmärgsprov bör tas vid två separata tillfällen efter enstaka behandlingar.
All animals should be weighed at study initiation, at least once a week during repeated-dose studies, and at euthanasia.
För gnagare bör det första provtagningsintervallet vara den tid som krävs för att slutföra 1,5 normala cellcykellängder (normalt 12–18 timmar efter behandlingsperioden).
In studies of at least one-week duration, measurements of food consumption should be made at least weekly.
Eftersom den tid som krävs för upptag och metabolism av testkemikalien och dess effekt på cellcykelns kinetik kan påverka den optimala tiden för detektion av kromosomavvikelser, rekommenderas att provtagningen senareläggs till 24 timmar efter det första provtagningstillfället.
If the test chemical is administered via the drinking water, water consumption should be measured at each change of water and at least weekly.
Vid det första provtagningstillfället bör alla dosgrupper behandlas och prover samlas in för analys.
Animals exhibiting non-lethal indicators of excessive toxicity should be humanely euthanised prior to completion of the test period (11).
Vid senare provtagningstillfälle(n) behöver endast den högsta dosen ges.
Target tissue exposure
Om doseringar på mer än en dag används baserat på en vetenskaplig motivering bör man ha ett provtagningstillfälle vid upp till cirka 1,5 gånger den normala cellcykelns längd efter den slutliga behandlingen.
A blood sample should be taken at appropriate time(s) in order to permit investigation of the plasma levels of the test chemicals for the purposes of demonstrating that exposure of the bone marrow occurred, where warranted and where other exposure data do not exist (see paragraph 44).
Efter behandling och före provtagning injiceras försöksdjuren intraperitonealt med en lämplig dos av ett metafashämmande medel (t.ex. colcemid eller colchicin), och prover samlas in vid ett lämpligt intervall därefter.
Bone marrow and chromosome preparations
För möss är detta intervall ungefär 3–5 timmar före insamlingen och för råttor 2–5 timmar.
Immediately after humane euthanasia, bone marrow cells are obtained from the femurs or tibias of the animals, exposed to hypotonic solution and fixed.
Celler skördas från benmärgen, svullna, fixerade och färgade, och analyseras med avseende på kromosomavvikelser (12).
The metaphase cells are then spread on slides and stained using established methods (see (3) (12)).
Observationer
All slides, including those of positive and negative controls, should be independently coded before analysis and should be randomised so the scorer is unaware of the treatment condition.
Allmänna kliniska observationer av testdjuren bör göras och kliniska tecken registreras minst en gång per dag, helst vid samma tidpunkt med hänsyn till maximalt förväntade effekter efter doseringen.
The mitotic index should be determined as a measure of cytotoxicity in at least 1000 cells per animal for all treated animals (including positive controls), untreated or vehicle/solvent negative control animals.
Djuren bör observeras minst två gånger dagligen under doseringsperioden beträffande morbiditet och mortalitet.
At least 200 metaphases should be analysed for each animal for structural chromosomal aberrations including and excluding gaps (6).
Alla djur bör vägas när undersökningen inleds, åtminstone en gång i veckan under undersökningar med upprepad dosering och vid avlivning.
However, if the historical negative control database indicates the mean background structural chromosomal aberration frequency is < 1 % in the testing laboratory, consideration should be given to scoring additional cells.
För undersökningar som varar minst en vecka bör mätning av foderkonsumtion göras minst en gång i veckan.
Chromatid and chromosome-type aberrations should be recorded separately and classified by sub-types (breaks, exchanges).
Om testkemikalien tillförs via dricksvattnet bör även vattenkonsumtionen mätas vid varje byte av vatten och minst en gång i veckan.
Recognising that slide preparation procedures often result in the breakage of a proportion of metaphases with a resulting loss of chromosomes, the cells scored should, therefore, contain a number of centromeres not less than 2n ± 2, where n is the haploid number of chromosomes for that species.
Djur som uppvisar icke-dödliga indikatorer på överskottstoxicitet bör avlivas på ett humant sätt innan testperiodens slut (11).
Treatment of Results
Exponering av målvävnaden
Individual animal data should be presented in tabular form.
Blodprov tas vid lämpliga tidpunkter för att möjliggöra undersökningar av testkemikaliens plasmanivåer.
The mitotic index, the number of metaphase cells scored, the number of aberrations per metaphase cell and the percentage of cells with structural chromosomal aberration(s) should be evaluated for each animal.
Syftet med detta är att visa att benmärgen har exponerats om så krävs och om det inte finns andra exponeringsdata (se punkt 44).
Different types of structural chromosomal aberrations should be listed with their numbers and frequencies for treated and control groups.
Benmärg och kromosompreparat
Gaps, as well as polyploid cells and cells with endoreduplicated chromosomes are recorded separately.
Omedelbart efter det att djuren avlivats humant tas benmärgsceller från djurens lår- eller skenben, exponeras för hypoton lösning och fixeras.
The frequency of gaps is reported but generally not included in the analysis of the total structural aberration frequency.
Metafascellerna sprids sedan ut på utstryksglas och färgas med användning av etablerade metoder (se (3) (12)).
If there is no evidence for a difference in response between the sexes, the data may be combined for statistical analysis.
Alla utstryksglas, inklusive utstryksglas med positiva och negativa kontroller, bör ges en oberoende kodning före analysen och bör randomiseras så att bedömaren inte känner till behandlingsbetingelserna.
Data on animal toxicity and clinical signs should also be reported.
Det mitotiska indexet bör fastställas som ett mått på cytotoxicitet hos minst 1000 celler per djur för alla behandlade försöksdjur (inklusive positiva kontroller), obehandlade försöksdjur eller djur för negativ kontroll med vehikel/lösningsmedel.
The following criteria determine the acceptability of the test:
Minst 200 metafaser bör analyseras för varje djur med avseende på strukturella kromosomavvikelser, inklusive och exklusive luckor (6).
The concurrent negative control data are considered acceptable for addition to the laboratory historical control database (see paragraphs 11-14);
Om den historiska databasen över negativa kontroller visar att bakgrundsmedelvärdet för frekvensen för strukturella kromosomavvikelser är < 1 % på testlaboratoriet bör man överväga att klassificera ytterligare celler.
The concurrent positive controls or scoring controls should induce responses that are compatible with those generated in the historical positive control database and produce a statistically significant increase compared with the negative control (see paragraphs 20-21);
Avvikelser av kromatid- och kromosomtyp bör registreras separat och klassificeras enligt subtyper (brott, utbyten).
The appropriate number of doses and cells has been analysed;
Eftersom beredningen av utstryksglas ofta resulterar i brott på en del av de celler som är i metafas med förlust av kromosomer som följd, bör de celler som påträffas därför innehålla ett centromererantal på minst 2n ± 2, där n är antalet haploider för kromosomerna hos den arten.
The criteria for the selection of highest dose are consistent with those described in paragraphs 25-28.
Behandling av resultaten
Evaluation and Interpretation of Results
Individuella djurdata bör presenteras i tabellform.
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered clearly positive if:
Mitotiskt index, antalet metafasceller som påträffas, antalet avvikelser per metafascell och procentandelen celler med strukturella kromosomavvikelser utvärderas för varje djur.
At least one of the treatment groups exhibits a statistically significant increase in the frequency of cells with structural chromosomal aberrations (excluding gaps) compared with the concurrent negative control,
Olika typer av strukturella kromosomavvikelser bör listas med antal och frekvenser för behandlade grupper och kontrollgrupper.
This increase is dose-related at least at one sampling time when evaluated with an appropriate trend test, and
Luckor samt polyploida celler och celler med endoreduplicerade kromosomer registreras separat.
Any of these results are outside the distribution of the historical negative control data (e.g. Poisson-based 95 % control limits).
Frekvensen av luckor rapporteras men tas i regel inte med i analysen av den totala strukturella avvikelsefrekvensen.
If only the highest dose is examined at a particular sampling time, a test chemical is considered clearly positive if there is a statistically significant increase compared with the concurrent negative control and the results are outside the distribution of the historical negative control data (e.g. Poisson-based 95 % control limits).
Om det inte finns några bevis för en skillnad i resultaten mellan könen, kan data kombineras för statistisk analys.
Recommendations for appropriate statistical methods can be found in the literature (13).
Uppgifter om toxicitet för djur och kliniska tecken bör också rapporteras.
When conducting a dose-response analysis, at least three treated dose groups should be analysed.
Följande kriterier avgör om testet är godtagbart:
Statistical tests should use the animal as the experimental unit.
Parallella negativa kontrolldata anses godtagbara för registrering i laboratoriets historiska databas (se punkterna 11–14).
Positive results in the chromosomal aberration test indicate that a test chemical induces structural chromosomal aberrations in the bone marrow of the species tested.
Parallella positiva kontroller eller klassificeringskontroller bör framkalla reaktioner som överensstämmer med de kontroller som genereras i den historiska databasen över positiva kontroller och ge en statistiskt signifikant ökning jämfört med den negativa kontrollen (se punkterna 20–21).
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered clearly negative if in all experimental conditions examined:
Ett lämpligt antal doser och celler har analyserats.
None of the treatment groups exhibits a statistically significant increase in the frequency of cells with structural chromosomal aberrations (excluding gaps) compared with the concurrent negative control,
Urvalskriterierna för högsta dos överensstämmer med de kriterier som beskrivs i punkterna 25–28.
There is no dose-related increase at any sampling time when evaluated by an appropriate trend test,
Utvärdering och tolkning av resultaten
All results are inside the distribution of the historical negative control data (e.g. Poisson-based 95 % control limits), and
Under förutsättning att samtliga acceptanskriterier är uppfyllda anses testkemikalien vara klart positiv om följande gäller:
Bone marrow exposure to the test chemical(s) occurred.
Åtminstone en av behandlingsgrupperna uppvisar en statistiskt signifikant ökning av frekvensen av celler med strukturella kromosomavvikelser (exklusive luckor) jämfört med den parallella negativa kontrollen.
Recommendations for the most appropriate statistical methods can be found in the literature (13).
b.
Evidence of exposure of the bone marrow to a test chemical may include a depression of the mitotic index or measurement of the plasma or blood levels of the test chemical(s).
Ökningen är dosrelaterad vid minst ett provtagningstillfälle när den utvärderas med ett lämpligt trendtest.
In the case of intravenous administration, evidence of exposure is not needed.
c.
Alternatively, ADME data, obtained in an independent study using the same route and same species can be used to demonstrate bone marrow exposure.
Något av resultaten ligger utanför fördelningen av historiska negativa kontrolldata (t.ex.
Negative results indicate that, under the test conditions, the test chemical does not induce structural chromosomal aberrations in the bone marrow of the species tested.
Poisson-baserade 95 %-kontrollgränser.
There is no requirement for verification of a clear positive or clear negative response.
Om endast den högsta dosen undersöks vid ett visst provtagningstillfälle anses en testkemikalie vara klart positiv om det finns en statistiskt säkerställd ökning jämfört med den parallella negativa kontrollen och resultaten ligger utanför fördelningen av historiska negativa kontrolldata (t.ex.
In cases where the response is not clearly negative or positive and in order to assist in establishing the biological relevance of a result (e.g. a weak or borderline increase), the data should be evaluated by expert judgement and/or further investigations of the existing experiments completed.
Poisson-baserade 95 %-kontrollgränser).
In some cases, analysing more cells or performing a repeat experiment using modified experimental conditions could be useful.
Rekommendationer om lämpliga statistiska metoder finns i litteraturen (13).
In rare cases, even after further investigations, the data will preclude making a conclusion that the test chemical produces either positive or negative results, and the study will therefore be concluded as equivocal.
Om en dos-responsanalys genomförs bör minst tre behandlade dosgrupper analyseras.
An increase in the number of polyploid/endoreduplicated cells may indicate that the test chemical has the potential to inhibit mitotic processes or cell cycle progression (see paragraph 3).
Positiva resultat i testet av kromosomavvikelser visar att testkemikalien inducerar strukturella kromosomavvikelser i benmärgen hos de arter som testades.
Test Report
Under förutsättning att samtliga acceptanskriterier är uppfyllda anses testkemikalien vara klart negativ om följande gäller för samtliga undersökta försöksbetingelser:
Summary
Ingen av behandlingsgrupperna uppvisar en statistiskt signifikant ökning av frekvensen av celler med strukturella kromosomavvikelser (exklusive luckor) jämfört med den parallella negativa kontrollen.
stability of the test chemical, if known.
Ingen dosrelaterad ökning förekommer vid något provtagningstillfälle vid utvärdering med ett lämpligt trendtest.
justification for choice of vehicle;
Alla resultat ligger inom fördelningen av historiska negativa kontrolldata (t.ex.
solubility and stability of the test chemical in solvent/vehicle, if known;
Poisson-baserade 95 %-kontrollgränser.
preparation of dietary, drinking water or inhalation formulations;
d.
analytical determinations on formulations (e.g. stability, homogeneity, nominal concentrations), when conducted.
Benmärgen exponerades för testkemikalien.
species/strain used and justification for use;
Rekommendationer om de lämpligaste statistiska metoderna finns i litteraturen (13).
number, age and sex of animals;
Bevis för att benmärgen exponerats för en testkemikalie kan vara en minskning av det mitotiska indexet eller mätningar av plasma- och blodnivåerna i förhållande till testkemikalien.
source, housing conditions, diet, etc.;
Vid intravenös tillförsel behövs inga bevis på exponering.
method for uniquely identifying the animals;
Alternativt kan ADME-data, som erhållits i en oberoende undersökning med samma exponeringsväg och samma arter, användas för att visa benmärgsexponering.
for short-term studies: individual weight of the animals at the start and end of the test; for studies longer than one week: individual body weights during the study and food consumption.
Negativa resultat indikerar att testkemikalien, under dessa försöksbetingelser, inte inducerar strukturella kromosomavvikelser i benmärgen hos de arter som testades.
Body weight range, mean and standard deviation for each group should be included.
Det finns inget krav på verifiering av ett tydligt positivt eller negativt svar.
positive and negative (vehicle/solvent) controls;
Om responsen varken är klart negativ eller klart positiv och för att göra det lättare att fastställa resultatets biologiska relevans (t.ex. en svag ökning eller en ökning som ligger på gränsen) bör de försök som slutförts fackgranskas och/eller undersökas ytterligare.
data from range-finding study, if conducted;
I vissa fall kan analys av fler celler eller ett upprepat försök med modifierade försöksbetingelser vara användbart.
rationale for dose level selection;
I sällsynta fall är det inte möjligt att dra en slutsats om huruvida testkemikalien ger positiva eller negativa resultat trots ytterligare undersökningar, och i dessa fall anses undersökningen vara tvetydig.
details of test chemical preparation;
Frekvenserna av polyploida och endoreduplicerade metafaser bland det totala antalet metafaser bör registreras separat.