natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Characterisation of solvent (nature, concentration used)
Utvärdering av biomarkörresponser med variansanalys (ANOVA)
Justification of choice of solvent (if other than water)
För att identifiera en kemikalies potentiella aktivitet jämförs responser mellan behandlings- och kontrollgrupperna med hjälp av variansanalys (ANOVA).
Species and strain
Om en lösningsmedelskontroll används bör ett lämpligt statistiskt test utföras mellan utspädningsvatten- och lösningsmedelskontrollerna för varje endpoint.
Supplier and specific supplier facility
Vägledning om hur man ska hantera data rörande utspädningsvatten- och lösningsmedelskontrollerna i den efterföljande statistiska analysen finns i OECD, 2006c (28).
Age of the fish at the start of the test and reproductive/spawning status
Alla biologiska responsdata bör analyseras och rapporteras separat per kön.
Details of animal acclimation procedure
Om de antaganden som krävs för parametriska metoder inte uppfylls – onormal fördelning (t.ex.
Body weight of the fish at the start of the exposure (from a sub-sample of the fish stock)
Shapiro-Wilks test) eller heterogen varians (Bartletts test eller Levenes test) – bör man överväga att homogenisera varianserna genom transformering av data före ANOVA utförs.
Test procedure used (test-type, loading rate, stocking density, etc.);
Alternativt kan en viktad ANOVA övervägas.
Method of preparation of stock solutions and flow-rate;
Dunnetts test (parametriserade) på en eller flera parvisa jämförelser eller Mann-Whitneys test med parametrisk justering (Bonferroni) kan användas för icke-monotona dos-responser.
The nominal test concentrations, weekly measured concentrations of the test solutions and analytical method used, means of the measured values and standard deviations in the test vessels and evidence that the measurements refer to the concentrations of the test chemical in true solution;
Andra statistiska tester kan användas (t.ex.
Dilution water characteristics (including pH, hardness, alkalinity, temperature, dissolved oxygen concentration, residual chlorine levels, total organic carbon, suspended solids and any other measurements made)
Jonckheere-Terpstras test eller Williams test) om dos-responsen är ungefärligen monoton.
Water quality within test vessels: pH, hardness, temperature and dissolved oxygen concentration;
Det statistiska flödesschemat i bilaga 8 kan vara till hjälp när man beslutar vilket statistiskt test som är det mest ändamålsenliga att använda.
Detailed information on feeding (e.g. type of food(s), source, amount given and frequency and analyses for relevant contaminants if available (e.g. PCBs, PAHs and organochlorine pesticides).
Ytterligare information kan också erhållas från OECD:s dokument Current Approaches to Statistical Analysis of Ecotoxicity Data (28).
Evidence that the controls met the acceptance criteria of the test;
Rapportering av testresultat
Data on mortalities occurring in any of the test concentrations and control;
Studiedata bör inbegripa följande:
Statistical analytical techniques used, treatment of data and justification of techniques used;
Testanläggning:
Data on biological observations of gross morphology, including secondary sex characteristics, egg production and VTG;
ansvarig personal och deras studieansvar,
Results of the data analyses preferably in tabular and graphical form;
varje laboratorium ska ha demonstrerat sina kunskaper i användningen av ett antal representativa kemikalier.
Incidence of any unusual reactions by the fish and any visible effects produced by the test chemical
karakterisering av testkemikalien,
GUIDANCE FOR THE INTERPRETATION AND ACCEPTANCE OF THE TEST RESULTS
fysikalisk form och relevanta fysikalisk-kemiska egenskaper,
This section contains a few considerations to be taken into account in the interpretation of test results for the various endpoints measured.
metod för beredning av testkoncentrationerna och hur ofta detta sker,
The results should be interpreted with caution where the test chemical appears to cause overt toxicity or to impact on the general condition of the test animal.
information om stabilitet och biologisk nedbrytbarhet.
In setting the range of test concentrations, care should be taken not to exceed the maximum tolerated concentration to allow a meaningful interpretation of the data.
karakterisering av lösningsmedlet (beskaffenhet, använd koncentration),
It is important to have at least one treatment where there are no signs of toxic effects.
motivering av valet av lösningsmedel (om annat än vatten).
Signs of disease and signs of toxic effects should be thoroughly assessed and reported.
art och stam,
For example, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action, e.g. hepatotoxicity.
leverantör och specifik leverantörsanläggning,
However, interpretation of effects may be strengthened by other treatment levels that are not confounded by systemic toxicity.
fiskens ålder vid testets början och dess reproduktiva status samt lekstatus,
There are a few aspects to consider for the acceptance of test results.
uppgifter om förfarandet för acklimatisering av djuren,
As a guide, the VTG levels in control groups of males and females should be distinct and separated by about three orders of magnitude in fathead minnow and zebrafish, and about one order of magnitude for medaka.
fiskens kroppsvikt vid början av exponeringen (från ett delprov av fiskbeståndet).
Examples of the range of values encountered in control and treatment groups are available in the validation reports (1, 2, 3, 4).
testförfarande som har använts (typ av test, fisktäthet, antalstäthet, osv.),
High VTG values in control males could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect weak oestrogen agonists.
metod för beredning av stamlösningar och flödeshastighet,
Low VTG values in control females could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect aromatase inhibitors and oestrogen antagonists.
nominella testkoncentrationer, uppmätta koncentrationer av testlösningarna varje vecka och den använda analysmetoden, medelvärden av de uppmätta värdena och standardavvikelserna i testkärlen samt bevis för att mätningarna hänför sig till testkemikaliens koncentrationer i en äkta lösning,
The validation studies were used to build that guidance.
utspädningsvattnets egenskaper (t.ex. pH, hårdhet, alkalinitet, temperatur, halten löst syre, restklornivåer, halten organiskt kol, uppslammade partiklar och eventuella andra gjorda mätningar),
Concerning the quantification of egg production, this is subject to important variations [the coefficient of variation (CV) may range from 20 to 60 %] that impinge the ability of the assay to detect a significant decrease in egg production smaller than 70 % as the CV approaches 50 % or more.
vattenkvaliteten i testkärlen: pH, hårdhet, temperatur och halten löst syre,
When the CV is confined to lower values (around 20-30 %), then the assay will have acceptable power (80 %) to detect 40-50 % decrease in egg production.
detaljerade uppgifter om utfodringen (t.ex. typ av foder, källa, hur mycket fiskarna har fått och hur ofta samt, om möjligt, en analys av relevanta förorenande ämnen (t.ex.
The test design used for the fathead minnow, including four replicates per treatment level, should allow more power to the fecundity endpoint, compared to a test design with 2 replicates only.
PCB, polycykliska aromatiska kolväten och bekämpningsmedel som innehåller organiska klorföreningar).
If a laboratory has not performed the assay before or substantial changes (e.g. change of fish strain or supplier) have been made it is advisable that a technical proficiency study is conducted.
bevis för att kontrollerna uppfyller testets godkännandekriterier,
It is recommended that chemicals covering a range of modes of action or impacts on a number of the test endpoints are used.
uppgifter om dödlighet i alla koncentrationer och i kontrollen,
In practice, each laboratory is encouraged to build its own historical control data for males and females and to perform a positive control chemical for estrogenic activity (e.g. 17β-estradiol at 100 ng/l, or a known weak agonist) resulting in increased VTG in male fish, a positive control chemical for aromatase inhibition (e.g. fadrozole or prochloraz at 300 μg/l) resulting in decreased VTG in female fish, and a positive control chemical for androgenic activity (e.g. 17β-trenbolone at 5 μg/l) resulting in induction of secondary sex characteristics in female fathead minnow and medaka.
de statistiska analystekniker som har använts, behandlingen av data och motivering av de tekniker som har använts,
All these data can be compared to available data from the validation studies (1, 2, 3) to ensure laboratory proficiency.
uppgifter om biologiska observationer av makromorfologi, inklusive sekundära könskaraktärer, äggproduktion och VTG,
In general, VTG measurements should be considered positive if there is a statistically significant increase in VTG in males (p < 0,05), or a statistically significant decrease in females (p < 0,05) at least at the highest dose tested compared to the control group, and in the absence of signs of general toxicity.
resultaten av dataanalyserna, helst i tabellform och grafisk form,
A positive result is further supported by the demonstration of a biologically plausible relationship between the dose and the response curve.
förekomsten av eventuella ovanliga reaktioner hos fiskarna och eventuella synliga effekter som har orsakats av testkemikalien.
As mentioned earlier, the VTG decrease may not entirely be of endocrine origin; however a positive result should generally be interpreted as evidence of endocrine activity in vivo, and should normally initiate actions for further clarification.
RIKTLINJER FÖR TOLKNING OCH GODKÄNNANDE AV TESTRESULTATEN
Gonadal histopathology evaluation may be required by regulatory authorities to determine the reproductive fitness of the test animals and to allow a weight of evidence assessment of the test results.
Detta avsnitt innehåller några överväganden som ska beaktas vid tolkningen av testresultaten för de olika endpoints som uppmätts.
Performance of gonadal histopathology may not be necessary in cases where either, VTG or secondary sex characteristics is positive (i.e. VTG increase or decrease, or induction of secondary sex characteristics).
Resultaten bör tolkas med försiktighet när testkemikalien förefaller orsaka uppenbar toxicitet eller inverka på försöksdjurens allmäntillstånd.
OECD (2006b).
När man fastställer intervallet för testkoncentrationerna bör man vara noga med att inte överskrida den högsta tolererade koncentrationen för att möjliggöra en meningsfull tolkning av data.
OECD (2007).
Det är viktigt att ha minst en behandling där det inte finns några tecken på toxiska effekter.
Owens JW (2007).
Tecken på sjukdom och tecken på toxiska effekter bör utvärderas noggrant och rapporteras.
Sumpter J.P. and S. Jobling (1995).
Det finns en del aspekter som ska beaktas vid godkännandet av testresultaten.
Ankley G.T., et al.
Höga VTG-värden hos hanar i kontrollen skulle kunna äventyra testresponsen och testets förmåga att påvisa svaga östrogenagonister.
Part C Pharmacology, toxicology and endocrinology; 123(2):113-25.
När det gäller kvantifieringen av äggproduktionen kan den uppvisa stora variationer [variationskoefficienten (CV) kan sträcka sig från 20 % till 60 %].
Application of an ELISA to quantify vitellogenin concentrations in fathead minnows (Pimephales promelas) exposed to endocrine disrupting chemicals.
Detta påverkar möjligheterna att genom analysen detektera en signifikant minskning i äggproduktionen som är mindre än 70 %, allteftersom CV närmar 50 % eller mer.
CEFIC-EMSG research report reference AQ001.
När CV begränsas till lägre värden (cirka 20–30 %) ger analysen en godtagbar effekt (80 %) för att detektera en minskning på 40–50 % i äggproduktionen.
CEFIC, Brussels, Belgium.
Den testmetod som används för knölskallelöja, inklusive fyra replikat per behandlingsnivå, bör ge större styrka för endpointen fruktsamhet, jämfört med en testmetod med endast två replikat.
Fenske M., et al.
Om ett laboratorium inte har utfört testet tidigare eller väsentliga förändringar (t.ex. förändringar av fiskstammen eller leverantören) har gjorts är det lämpligt att en teknisk kompetensstudie utförs.
Development and validation of a homologous zebrafish (Danio rerio Hamilton- Buchanan) vitellogenin enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and its application for studies on estrogenic chemicals.
Det rekommenderas att man använder kemikalier som omfattar en rad olika verkningsmekanismer eller som påverkar ett antal olika endpoints.
Phys.
17-beta-trenbolon vid 5 μg/l), som leder till induktion av sekundära könskaraktärer hos honor av knölskallelöja och medaka.
C 129 (3): 217-232.
Alla dessa data kan jämföras med tillgängliga data från valideringsstudierna (1, 2, 3) för att säkerställa laboratoriekompetensen.
Holbech H., et al.
I allmänhet bör VTG-mätningar anses vara positiva om det finns en statistiskt signifikant ökning av VTG hos hanar (p < 0,05), eller en statistiskt signifikant minskning hos honor (p < 0,05), åtminstone vid den högsta testdosen jämfört med kontrollgruppen och i avsaknad av tecken på allmän toxicitet.
Development of an ELISA for vitellogenin in whole body homogenate of zebrafish (Danio rerio).
Ett positivt resultat bekräftas ytterligare om man kan påvisa ett biologiskt sannolikt samband mellan dosen och responskurvan.
Comparative Biochemistry and Physiology.
Som nämndes tidigare behöver inte minskningen av VTG uteslutande bero på endokrina orsaker.
Part C Pharmacology, toxicology and endocrinology; 130: 119-131 (16) Rose J., et al.
I allmänhet bör ett positivt resultat dock tolkas som bevis för endokrin aktivitet in vivo, och normalt bör man då vidta åtgärder för ytterligare klargöranden.
Vitellogenin induction by 17β-estradiol and 17α-ethinylestradiol in male zebrafish (Danio rerio).
Tillsynsmyndigheterna kan kräva utvärdering av histopatologiska undersökningar av könskörtlarna för att fastställa försöksdjurens reproduktiva lämplighet och möjliggöra en sammanvägd bedömning av testresultaten.
C 131: 531-539.
Histopatologisk undersökning av könskörtlarna kanske inte är nödvändig i fall där antingen VTG eller de sekundära könskaraktärerna är positiva (dvs. en ökning eller minskning av VTG eller induktion av sekundära könskaraktärer).
Brion F., et al.
Owens, J. W.
Development and validation of an enzyme-linked immunosorbent assay to measure vitellogenin in the zebrafish (Danio rerio).
U.S. EPA (2007).
Environmental Toxicology and Chemistry; vol 21: 1699-1708.
Sumpter JP och S. Jobling (1995).
Yokota H., et al.
Pawlowski S., m.fl.
Development of an ELISA for determination of the hepatic vitellogenin in Medaka (Oryzias latipes).
Andersen L., m.fl.
Jpn J Environ Toxicol 4:87–98.
Ankley G.T., m.fl.
(19) Tatarazako N., et al.
Panter G.H., m.fl.
Journal of Health Science 50:301-308.
Parker L.G., m.fl.
Effects of the androgenic growth promoter 17-beta-trenbolone on fecundity and reproductive endocrinology of the fathead minnow.
Part C Pharmacology, toxicology and endocrinology, 123(2):113–125.
Environmental Toxicology and Chemistry; 22(6): 1350-60.
Fenske M., m.fl.
Seki M, et al (2004).
C 129 (3): 217–232.
Fish full life-cycle testing for androgen methyltestosterone on medaka (Oryzias latipes).
Holbech H., m.fl.
OECD (2010).
Vitellogenin induction by 17b-estradiol and 17a-ethinylestradiol in male zebrafish (Danio rerio).
Guidance Document on Fish Gonadal Histopathology.
C 131: 531–539.
OECD Environmental Health and Safety Publications Series on Testing and Assessment No. 123, Paris.
Brion F., m.fl.
OECD (2000) Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures.
Environmental Toxicology and Chemistry, vol.
Paris
21: 1699–1708.
Hutchinson T.H., et al.
Yokota H., m.fl.
Aquatic Toxicology, 76; pp.69–92.
Journal of Health Science 50:301–308.
(2006b).
Environmental Toxicology and Chemistry, 22(6): 1350–60.
Screening and testing for endocrine disruption in fish-biomarkers as “signposts”, not “traffic lights,” in risk assessment.
OECD Environmental Health and Safety Publications Series on Testing and Assessment nr 123, Paris.
Environmental Health Perspectives; 114 Suppl 1:106-14.
Paris.
Miles-Richardson S.R., et al.
Hutchinson T.H., m.fl.
Effects of waterborne exposure to 17β-estradiol on secondary sex characteristics and gonads of the fathead minnow (Pimephales promelas).
Aquatic Toxicology, 76, s .69–92.
Aquat.
Screening and testing for endocrine disruption in fish-biomarkers as ”signposts”, not ”traffic lights”, in risk assessment.
Toxicol.
Environmental Health Perspectives 114 Suppl 1,106–14.
47, 129-145.
Miles-Richardson S.R., m.fl.
Martinovic D., et al.
47, 129–145.
Characterization of reproductive toxicity of vinclozolin in the fathead minnow and co-treatment with an androgen to confirm an anti-androgenic mode of action.
Martinovic D., m.fl.
Environ.
27, 478–488.
Toxicol.
OECD (2012), OECD Conceptual Framework for Testing and Assessment of Endocrine Disrupters, OECD Environmental Health and Safety Publications, Series on Testing and Assessment nr 150, OECD, Paris.
Chem.
FÖRKORTNINGAR OCH DEFINITIONER
27, 478-488.
ett ämne eller en blandning.
OECD (2006c), Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data: A Guidance to Application, OECD Environmental Health and Safety Publications, Series on Testing and Assessment No.54, OECD, Paris.
variationskoefficient
(29) US EPA (2008), Peer-Review Results for the Fish Short-Term Reproduction Assay, dated 30 January 2008, US Environmental Protection Agency, Washington DC.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay.
OECD (2012), OECD Conceptual Framework for Testing and Assessment of Endocrine Disrupters, OECD Environmental Health and Safety Publications, Series on Testing and Assessment No. 150, OECD, Paris.
HPG-axel
ABBREVIATIONS & DEFINITIONS:
stressaxeln, bestående av hypotalamus, hypofysen och binjurebarken.
a substance or a mixture
Fisktäthet
coefficient of variation
våtvikten fisk per vattenvolym.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
den högsta tolererade koncentrationen, dvs. ungefär 10 % av LC50.
HPG axis
Antalstäthet
hypothalamic-pituitary-gonadal axis
antalet exemplar per vattenvolym.
Loading rate
vitellogenin är ett fosfolipoglykoprotein, en prekursor till ägguleprotein som normalt förekommer i alla sexuellt aktiva äggläggande honor.
the wet weight of fish per volume of water.
FÖRSÖKSBETINGELSER FÖR ENDOKRINT SCREENINGTEST PÅ FISK
MTC
Testtyp
Maximum Tolerated Concentration, representing about 10 % of the LC50
Genomflödestest
Stocking density
Vattentemperatur
is the number of fish per volume of water.
Belysningstyp
vitellogenin is a phospholipoglycoprotein precursor to egg yolk protein that normally occurs in sexually active females of all oviparous species.
Fluorescerande lampor (brett spektrum)
EXPERIMENTAL CONDITIONS FOR THE FISH ENDOCRINE SCREENING ASSAY
Ljusintensitet
(Pimephales promelas)
10–20 μE/m2/s, 540–1000 lux, eller 50–100 ft-c (omgivande ljusnivåer i laboratoriet)
Medaka (Oryzias latipes)
12–16 timmar ljus, 12–8 timmar mörker
Test type
< 5 g/l
Flow-through
Testbehållarens storlek
Water temperature
Minst 10 l
Illumination quality
Minst 2 l
Fluorescent bulbs (wide spectrum)
Minst 5 l
Light intensity
Testlösningens volym
10-20 μE/m2/s, 540-1000 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)
Minst 8 l
Photoperiod (dawn / dusk transitions are optional, however not considered necessary) 16 h light, 8 h dark
Minst 1,5 l
12-16 h light, 12-8 h dark
Minst 4 l
< 5 g per l
Volymutbyte av testlösningar
Test chamber size
Minst 6 per dag
10 l (minimum)
Minst 5 per dag
2 l (minimum)
Testorganismernas ålder
5 l (minimum)
Se punkt 21
8 l (minimum)
Honor: 1,5 ± 20 %
1,5 l (minimum)
Hanar: 2,5 ± 20 %
4 l (minimum)
Honor: 0,35 ± 20 %
Volume exchanges of test solutions
Hanar: 0,35 ± 20 %
Minimum of 6 daily
Honor: 0,65 ± 20 %
Females: 0,35 ± 20 %
= 3 (plus lämpliga kontroller)
Males: 0,35 ± 20 %
Antal kärl per behandling
Females: 0,65 ± 20 %
Minst 4
6 (3 males and 3 females)
12 vuxna honor och 12 hanar (3 honor och 3 hanar i varje replikatkärl)
4 minimum
Artemia-nauplier två eller tre gånger dagligen (ad libitum), kommersiellt tillgängligt foder eller en blandning av dessa
2 minimum
Ingen såvida inte koncentrationen löst syre sjunker under 60 % luftmättnad
No. of fish per test concentration
Utspädningsvatten
16 adult females and 8 males (4 females and 2 males in each replicate vessel)
Rent yt- eller brunnsvatten, rekonstituerat vatten eller avklorerat kranvatten
12 adult females and 12 males (3 females and 3 males in each replicate vessel)
Förexponeringstid
Feeding regime
Den kemiska exponeringens varaktighet
Live or frozen adult or nauplii brine shrimp two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Biologiska endpoints
Brine shrimp nauplii two or three times daily (ad libitum),commercially available food or a combination of the above
beteende
None unless DO concentration falls below 60 % air saturation
fruktsamhet
Dilution water
sekundära könskaraktärer
Clean surface, well or reconstituted water or dechlorinated tap water
eventuellt histopatologi av könskörtlarna
7-14 days recommended
Löst syre ≥ 60 % av luftmättnadsvärdet, medeltemperatur 25 ± 2 °C, 90 % överlevnad i kontrollerna, uppmätta testkoncentrationer inom 20 % av medelvärdet för de uppmätta värdena per behandlingsnivå.
Chemical exposure duration
Löst syre ≥ 60 % av luftmättnadsvärdet, medeltemperatur 26 ± 2 °C, 90 % överlevnad i kontrollerna, uppmätta testkoncentrationer inom 20 % av medelvärdet för de uppmätta värdena per behandlingsnivå.
Biological endpoints
NÅGRA KEMISKA EGENSKAPER FÖR GODTAGBART UTSPÄDNINGSVATTEN
survival
KOMPONENT
behaviour
KONCENTRATIONER
fecundity
Icke-joniserad ammoniak
sex characteristics
Total mängd bekämpningsmedel som innehåller organiska fosforföreningar
optionally gonadal histopathology
Tillägg 4A
Test acceptability
LEKSUBSTRAT FÖR SEBRAFISK
Dissolved oxygen ≥ 60 % of saturation; mean temperature of 25 ± 2 °C; 90 % survival of fish in the controls; measured test concentrations within 20 % of mean measured values per treatment level.
Lekskål
Dissolved oxygen ≥ 60 % of saturation; mean temperature of 26 ± 2 °C; 90 % survival of fish in the controls; measured test concentrations within 20 % of mean measured values per treatment level.
en instrumentskål av glas, t.ex.
SOME CHEMICAL CHARACTERISTICS OF ACCEPTABLE DILUTION WATER
22 × 15 × 5,5 cm (längd × bredd × djup), täckt med ett avtagbart trådgaller av rostfritt stål (maskstorlek 2 mm).
COMPONENT
Gallret bör täcka instrumentskålens öppning på en nivå som ligger under kanten.
CONCENTRATIONS
På gallret bör man fästa ett leksubstrat.
< 20 mg/l
Plastmaterialet bör lakas ut i en tillräcklig volym med varmt vatten under tillräckligt lång tid för att säkerställa att inga kemikalier läcker ut i testvattnet.
< 2 mg/l
Vid användning av material av glas bör man se till att fiskarna varken skadas eller trängs under sina energiska aktiviteter.
Unionised ammonia
Avståndet mellan skålen och glasrutorna bör vara minst 3 cm för att säkerställa att fiskarna inte leker utanför skålen.
< 1 μg/l
Den rom som läggs på uppsamlingsbrickan faller ner genom gallret och kan samlas in 45–60 minuter efter att belysningen tänts.
< 10 μg/l
De genomskinliga äggen är inte vidhäftande och kan lätt räknas i transversellt ljus.
Total organophosphorus pesticides
Om man använder fem honor per kärl kan äggantal på under 20 per dag räknas som ett lågt, upp till 100 som ett genomsnittligt och mer än 100 som ett högt antal.
< 50 ng/l
Lekskålen bör tas bort, äggen samlas in och lekskålen återinföras i testkärlet antingen så sent som möjligt på kvällen eller mycket tidigt på morgonen.
< 25 ng/l
Tiden fram till återinförandet bör inte överstiga en timme.
Appendix 4A
I annat fall kan leksubstratet som trigger framkalla individuell parning och lek på ovanliga tider.
SPAWNING SUBSTRATE FOR ZEBRAFISH
Om situationen kräver ett senare införande av lekskålen bör detta göras tidigast nio timmar efter att belysningen har tänts.
Spawning tray
Vid denna sena tidpunkt på dagen framkallas inte lekbeteendet längre.