natgillin/translations-raw huggingface dataset:
However, acute toxicity data may be lacking for the species on test.
Tydliga och viktiga ändringar i apikala endpoints som pekar på accelererad utveckling eller utvecklingsmässig asynkroni kan leda till att behovet av histopatologisk analys av sköldkörteln försvinner.
If species specific acute toxicity data are not available, then a 96-hour LC50 test can be completed with tadpoles that are representative (i.e., same stage) of those on test in the AMA.
En avsaknad av tydliga morfologiska förändringar eller tecken på försenad utveckling motiverar dock utförandet av histologiska analyser.
Optionally, if data from other aquatic species are available (e.g. LC50 studies in fish or other amphibian species), then professional judgment may be used to estimate a likely MTC based on inter-species extrapolation.
I alla testakvarier bör man dagligen kontrollera förekomsten av döda grodyngel, och antalet bör registreras för varje akvarium.
Alternatively, if the chemical is not acutely toxic and is soluble above 100 mg/l, then 100 mg/l should be considered the highest test concentration (HTC), as this concentration is typically considered “practically non-toxic.”
Datum, koncentration och akvarienummer anges vid alla observationer av dödlighet.
Although not the recommended procedure, static renewal methods may be used where flow-through methods are inadequate to achieve the MTC.
Döda djur tas bort från testakvariet så snart de har upptäckts.
If static renewal methods are used, then the stability of the test chemical concentration should be documented and remain within the performance criteria limits.
En dödlighet som överstiger 10 % kan vara tecken på olämpliga testbetingelser eller på testkemikaliens toxiska effekter.
Twenty-four hour renewal periods are recommended.
Övriga anmärkningar
Renewal periods exceeding 72 hours are not acceptable.
Exempel på onormalt beteende och tydligt synliga missbildningar och skador registreras.
Additionally, water quality parameters (e.g. DO, temperature, pH, etc.) should be measured at the end of each renewal period, immediately prior to renewal.
Datum, koncentration och akvarienummer anges vid alla observationer av onormala beteenden, grova missbildningar eller skador.
Test Concentration Range
Normalt beteende kännetecknas av att grodynglen simmar fritt i vattenpelaren med svansen något högre än huvudet och med regelbundna rytmiska slag med svansen, att de periodvis stiger till ytan, rör på gällocken när de andas och reagerar på stimulus.
There is a required minimum of three test concentrations and a clean water control (and vehicle control if necessary).
Onormalt beteende kan till exempel omfatta att ynglen flyter på ytan eller ligger på botten av akvariet, simmar upp och nedvända eller med ojämna rörelser, inte går upp till ytan, och inte reagerar på stimulus.
The minimum test concentration differential between the highest and lowest should be about one order of magnitude.
Dessutom bör stora skillnader i foderintaget mellan de olika behandlingarna registreras.
The maximum dose separation is 0,1 and the minimum is 0,33.
Grova missbildningar och skador kan omfatta morfologiska abnormiteter (t.ex. missbildningar av armar och ben), blödande sår, bakteriella infektioner eller svampinfektioner, för att bara nämna några få.
Test Initiation and Conduct
Dessa bestämningar är kvalitativa och bör betraktas som motsvarigheter till kliniska tecken på sjukdom eller stress, och ska göras i jämförelse med kontrolldjuren.
The exposure should be initiated when a sufficient number of tadpoles in the pre-exposure stock population have reached developmental stage 51, according to Nieuwkoop and Faber (8), and which are less than or equal to 17 days of age post fertilisation.
Om förekomsten eller frekvensen är större i exponerade akvarier än i kontrollerna bör detta betraktas som bevis på uppenbar toxicitet.
For selection of test animals, healthy and normal looking tadpoles of the stock population should be pooled in a single vessel containing an appropriate volume of dilution water.
Datainsamling
For developmental stage determination, tadpoles should be individually removed from the pooling tank using a small net or strainer and transferred to a transparent measurement chamber (e.g. 100 mm Petri dish) containing dilution water.
Alla uppgifter bör samlas in med hjälp av elektroniska eller manuella system som överensstämmer med god laboratoriesed.
For stage determination, it is preferred not to use anaesthesia, however one may individually anaesthetise the tadpoles using 100 mg/l tricaine methanesulfonate (e.g. MS-222), appropriately buffered with sodium bicarbonate (pH 7,0), before handling.
beskrivning av testkemikalien:
If used, methodology for appropriately using e.g. MS-222 for anaesthesia should be obtained from experienced laboratories and reported with the test results.
kemisk information och kemiska uppgifter:
Animals should be carefully handled during this transfer in order to minimise handling stress and to avoid any injury.
Mätningar av testkemikalien kan krävas för stamlösningar och testlösningar,
The developmental stage of the animals is determined using a binocular dissection microscope.
lösningsmedel (annat än vatten):
To reduce the ultimate variability in developmental stage, it is important that this staging be conducted as accurately as possible.
motivering av valet av lösningsmedel, och beskrivning av lösningsmedlet (beskaffenhet, den använda koncentrationen).
According to Nieuwkoop and Faber (8), the primary developmental landmark for selecting stage 51 organisms is hind limb morphology.
operativa uppgifter:
The morphological characteristics of the hind limbs should be examined under the microscope.
observationer som rör hur väl testsystemet, laboratoriemiljön och infrastrukturen fungerar.
Prominent morphological staging landmarks based on Neuwkoop and Faber guidance
biologiska observationer och uppgifter:
Prominent Morphological Landmarks
dessa inkluderar dagliga observationer av dödlighet, foderintag, onormalt simbeteende, letargi, förlust av balansen, missbildningar, skador osv. Observationer och uppgifter som samlas in vid förutbestämda intervall omfattar följande:
Developmental Stage
utvecklingsstadium, bakbenslängd, längd från nos till kloak samt våtvikt,
Hindlimb
histologiska uppgifter:
Forelimb
dessa innehåller förklarande beskrivningar samt allvarlighetsgrad och frekvens för särskilda observationer, enligt beskrivningen i vägledningsdokumentet för histopatologi,
Craniofacial structure
särskilda observationer:
Olfactory nerve morphology
dessa observationer bör inbegripa förklarande beskrivningar av undersökningen som inte passar in i de tidigare angivna kategorierna.
Tail length
Rapportering av uppgifter
For test initiation, all tadpoles should be at stage 51.
Tillägg 2 innehåller kalkylblad för daglig datainsamling som kan användas som vägledning för notering av rådata och för beräkning av sammanfattande statistik.
The most prominent morphological staging landmark for that stage is hind limb morphology, which is demonstrated in Figure 1.
Dessutom tillhandahålls rapporteringstabeller som är lämpliga för inrapportering av sammanfattningar av endpointdata.
Hind limb morphology of a stage 51 X. laevis tadpole
Rapporteringstabeller för histologiska bedömningar finns i tillägg 2.
In addition to the developmental stage selection, an optional size selection of the experimental animals may be used.
Utförandekriterier och testets godtagbarhet och giltighet
For this purpose, the whole body length (not SVL) should be measured at day 0 for a sub-sample of approximately 20 NF stage 51 tadpoles.
I allmänhet kommer stora avvikelser från testmetoden att resultera i uppgifter som inte går att använda för tolkning och rapportering.
After calculation of the mean whole body length for this group of animals, minimum and maximum limits for the whole body length of experimental animals can be set by allowing a range of the mean value ± 3 mm (mean values of whole body length range between 24,0 and 28,1 mm for stage 51 tadpoles).
Därför har följande kriterier i tabell 4 utarbetats som vägledning för att fastställa kvaliteten på det utförda testet och hur väl bruket av kontrollorganismerna har fungerat i allmänhet.
However, developmental staging is the primary parameter in determining the readiness of each test animal.
Tabell 4
Tadpoles exhibiting grossly visible malformations or injuries should be excluded from the assay.
Utförandekriterier för testet på groddjursmetamorfos.
Tadpoles that meet the stage criteria described above are held in a tank of clean culture water until the staging process is completed.
Kriterium
Once the staging is completed, the larvae are randomly distributed to exposure treatment tanks until each tank contains 20 larvae.
Godtagbara gränser
Each treatment tank is then inspected for animals with abnormal appearance (e.g., injuries, abnormal swimming behaviour, etc.).
Testkoncentrationer
Overtly unhealthy looking tadpoles should be removed from the treatment tanks and replaced with larvae newly selected from the pooling tank.
Bibehålls vid ≤ 20 % CV (variationer av den uppmätta testkoncentrationen) under testets 21 dagar
For more in-depth information on test termination procedures and processing of tadpoles, refer to the OECD Guidance Document on Amphibian Thyroid Histology (9).
Dödlighet i kontrollerna
The random procedure used should give each organism on test equal probability of being selected.
Fördelning av utvecklingsstadierna i kontrollgruppen
Tadpoles not selected are returned to the tank of origin and the selected tadpoles are humanely euthanised in 150 to 200 mg/l e.g. MS-222, appropriately buffered with sodium bicarbonate to achieve pH 7,0.
Löst syre
The euthanised tadpoles are rinsed in water and blotted dry, followed by body weight determination to the nearest milligram.
≥ 40 % luftmättnad [8]
Hind limb length, snout to vent length, and developmental stage (using a binocular dissection microscope) are determined for each tadpole.
pH-värdet bör hållas mellan 6,5 och 8,5.
Day 21 Measurements (Test Termination)
Skillnaderna mellan olika replikat och mellan olika testkärl bör inte överstiga 0,5.
At test termination (day 21), the remaining tadpoles are removed from the test tanks and humanely euthanised in 150 to 200 mg/l e.g. MS-222, appropriately buffered with sodium bicarbonate, as above.
22 ± 1 °C – skillnaderna mellan olika replikat och mellan olika testkärl bör inte överstiga 0,5 °C.
Since follicular cell height is stage dependent (10), the most appropriate sampling approach for histological analyses is to use stage-matched individuals, whenever possible.
Om ett lösningsmedel används som bärämne bör både en lösningsmedelskontroll och en kontroll med rent vatten användas och resultaten rapporteras
In order to select stage-matched individuals, all larvae should first be staged prior to selection and subsequent processing for data collection and preservation.
Statistiskt signifikanta skillnader mellan lösningsmedels- och vattenkontrollgrupper behandlas för sig.
This is necessary because normal divergence in development will result in differential stage distributions within each replicate tank.
Se nedan för mer information
Animals selected for histopathology (n = 5 from each replicate) should be matched to the median stage of the controls (pooled replicates) whenever possible.
Särskilda villkor för statiska förnyelsesystem
If there are replicate tanks with more than five larvae at the appropriate stage, then five larvae are randomly selected.
Representativa kemiska analyser som utförs före och efter förnyelsen bör rapporteras
That is, if the chemical treatment is associated with a retardation of development, then additional larvae should be sampled from the next lower stage.
Förnyelseperioden bör inte överstiga 72 timmar
In turn, if the chemical treatment is associated with an acceleration of development, then additional larvae should be sampled from the next upper stage.
Lämpligt utfodringsschema (50 % av den dagliga fodergivan av kommersiellt tillgängligt grodyngelfoder)
In cases of severe alterations of tadpole development due to treatment with a test chemical, there might be no overlap of the stage distribution in the chemical treatments with the calculated control median developmental stage.
Testets giltighet
In only these cases, the selection process should be modified by using a stage different from the control median stage to achieve a stage-matched sampling of larvae for thyroid histopathology.
Följande krav måste vara uppfyllda för att ett test ska anses vara godtagbart/giltigt:
Furthermore, if stages are indeterminate (i.e., asynchrony), then 5 tadpoles from each replicate should be randomly chosen for histological analysis.
Giltigt försök i ett test som fastställs vara negativt med avseende på sköldkörtelaktiviteten:
The rationale underlying sampling of any larvae that are not at a stage equivalent to the control median developmental stage should be reported.
Dödligheten får inte överstiga 10 % för ett givet testkärl (inklusive kontroller).
Determination of Biological Endpoints
Dödligheten får inte överstiga tre grodyngel för ett givet replikat, annars anses replikatet ha gått förlorat.
During the 21 day exposure phase, measurement of primary endpoints is performed on days 7 and 21, however daily observation of test animals is necessary.
Minst två behandlingsnivåer med alla fyra giltiga replikat bör finnas tillgängliga för analys.
Table 3 provides an overview of the measurement endpoints and the corresponding observation time points.
Minst två behandlingsnivåer utan uppenbar toxicitet bör finnas tillgängliga för analys.
More detailed information for technical procedures for measurement of apical endpoints and histological assessments is available in the OECD guidance documents (9).
Giltigt försök i ett test som fastställs vara positivt med avseende på sköldkörtelaktiviteten:
Observation time points for primary endpoints in the AMA
En dödlighet på högst två grodyngel/replikat i kontrollgruppen får förekomma.
Apical Endpoints
Beslutsgången för testet på groddjursmetamorfos.
Daily
Beslutsgången utarbetades för testet på groddjursmetamorfos för att tillhandahålla logisk hjälp med genomförandet och tolkningen av resultaten från biotestet (se flödesdiagram i figur 3).
Mortality
Beslutsgången väger i huvudsak endpoints mot varandra i det att accelererad utveckling, asynkron utveckling och sköldkörtelns histopatologi är av stor vikt, medan fördröjd utveckling, längd från nos till kloak och våt kroppsvikt, parametrar som potentiellt kan påverkas av den allmänna toxiciteten, är av mindre vikt.
Hind Limb Length
Accelererad utveckling (bestäms på basis av utvecklingsstadium, längd från nos till kloak och bakbenslängd)
Snout-Vent Length
Accelererad utveckling inträffar endast genom effekter som är sköldkörtelhormonrelaterade.
Wet Body Weight
Dessa kan utgöras av perifera vävnadseffekter såsom direkt interaktion med sköldkörtelhormonreceptorn (t.ex.
Thyroid Gland Histology
T4) eller effekter som förändrar nivåerna av cirkulerande sköldkörtelhormon.
Developmental stage, hind limb length, SVL and wet weight are the apical endpoints of the AMA, and each is briefly discussed below.
I vilket fall som helst kan detta betraktas som tillräckliga bevis för att kemikalien framkallar sköldkörtelaktivitet.
Further technical information for collecting these data is available in the guidance documents referenced including procedures for computer-assisted analysis which are recommended for use.
Accelererad utveckling utvärderas på ett av två möjliga sätt.
The developmental stage of X. laevis tadpoles is determined using the staging criteria of Nieuwkoop and Faber (8).
Det ena är att det allmänna utvecklingsstadiet kan bedömas med hjälp av standardmetoden som beskrivits i Nieuwkoop och Faber (8).
Developmental stage data are used to determine if development is accelerated, asynchronous, delayed or unaffected.
Det andra är att särskilda morfologiska egenskaper kan kvantifieras, t.ex. bakbenslängden, både på dag 7 och 21, vilket är förenat med agonistiska effekter på sköldkörtelhormonreceptorn.
Acceleration or delay of development is determined by making a comparison between the median stage achieved by the control and treated groups.
Om statistiskt signifikanta accelerationer av utvecklingen eller bakbenslängden inträffar visar testet att kemikalien är sköldkörtelaktiv.
Asynchronous development is reported when the tissues examined are not malformed or abnormal, but the relative timing of the morphogenesis or development of different tissues is disrupted within a single tadpole.
Utvärderingen av försöksdjur med avseende på accelererad utveckling i förhållande till kontrollpopulationen bygger på resultaten av statistiska analyser som utförs med inriktning på följande fyra endpoints:
Differentiation and growth of the hind limbs are under control of thyroid hormones and are major developmental landmarks already used in the determination of developmental stage.
bakbenslängden (normaliserad genom längden från nos till kloak) på testdag 7,
Hind limb development is used qualitatively in the determination of developmental stage, but is considered here as a quantitative endpoint.
bakbenslängden (normaliserad genom längden från nos till kloak) på testdag 21,
Therefore, hind limb length is measured as an endpoint to detect effects on the thyroid axis (Figure 2).
utvecklingsstadiet på testdag 7,
For consistency, hind limb length is measured on the left hind limb.
utvecklingsstadiet på testdag 21.
Hind limb length is evaluated both at day 7 and at day 21 of the test.
Statistiska analyser av bakbenslängden bör utföras på grundval av mätningar av det vänstra bakbenets längd.
On day 7, measuring hind limb length is straightforward, as illustrated in Figure 2.
Bakbenslängden normaliseras genom att fastställa förhållandet mellan bakbenslängden och längden från nos till kloak för varje individ.
However, measuring hind limb length on day 21 is more complicated due to bends in the limb.
Medelvärdet av de normaliserade värdena för varje behandlingsnivå jämförs därefter.
Therefore, measurements of hind limb length at day 21 should originate at the body wall and follow the midline of the limb through any angular deviations.
En accelererad utveckling utvisas då av en betydande ökning av den genomsnittliga bakbenslängden (normaliserad) i en kemikaliebehandlingsgrupp jämfört med kontrollgruppen på testdag 7 och/eller testdag 21 (se tillägg 3).
Changes in hind limb length at day 7, even if not evident at day 21, are still considered significant for potential thyroid activity.
Statistiska analyser av utvecklingsstadier bör utföras på grundval av fastställandet av utvecklingsstadier enligt de morfologiska kriterier som beskrivits av Nieuwkoop och Faber (8).
Length measurements are acquired from digital photographs using image analysis software as described in the OECD Guidance Document on Amphibian Thyroid Histology (9).
En accelererad utveckling anges när en ’multikvantal’ analys påvisar en avsevärd ökning av värdena för utvecklingsstadier i en kemikaliebehandlingsgrupp jämfört med kontrollgruppen på testdag 7 och/eller 21.
Body Length and Wet Weight
I metoden för testet på groddjursmetamorfos anses en betydande effekt på någon av de fyra ovannämnda endpoints vara tillräckligt för att man ska kunna fastställa förekomsten av accelererad utveckling.
Determinations of snout to vent length (SVL) (Figure 2) and wet weight are included in the test protocol to assess possible effects of test chemicals on the growth rate of tadpoles in comparison to the control group and are useful in detecting generalised toxicity to the test chemical.
Betydande effekter på bakbenslängden vid en viss tidpunkt behöver alltså inte bekräftas av betydande effekter på bakbenslängden vid den alternativa tidpunkten eller av betydande effekter på utvecklingsstadierna vid denna särskilda tidpunkt.
Because the removal of adherent water for weight determinations can cause stressful conditions for tadpoles and may cause skin damage, these measurements are performed on the day 7 sub-sampled tadpoles and all remaining tadpoles at test termination (day 21).
Betydande effekter på utvecklingsstadiet vid en viss tidpunkt behöver i sin tur inte bekräftas av betydande effekter på utvecklingsstadiet på den alternativa tidpunkten eller av betydande effekter på bakbenslängden vid denna särskilda tidpunkt.
For consistency, use the cranial aspect of the vent as the caudal limit of the measurement.
Beviskraften för accelererad utveckling ökar dock om betydande effekter påvisas för mer än en endpoint.
Snout to vent length (SVL) is used to assess tadpole growth as illustrated in Figure 2.
Asynkron utveckling (fastställs med hjälp av kriterier för utvecklingsstadier)
Types of body length measurements and (B) Hind limb length measurements for X. laevis tadpoles (1)
Asynkron utveckling kännetecknas av störningar i de relativa tidpunkterna för morfogenesen eller utvecklingen av olika vävnader hos ett enda grodyngel.
While developmental stage and hind limb length are important endpoints to evaluate exposure-related changes in metamorphic development, developmental delay cannot, by itself, be considered a diagnostic indicator of anti-thyroidal activity.
Oförmåga att tydligt fastställa utvecklingsstadiet hos en organism med hjälp av den uppsättning morfologiska endpoints som anses typiska för ett visst stadium antyder att vävnaderna utvecklas asynkront genom metamorfosen.
Some changes may only be observable by routine histopathological analysis.
Asynkron utveckling är en indikator för sköldkörtelaktivitet.
Diagnostic criteria include thyroid gland hypertrophy/atrophy, follicular cell hypertrophy, follicular cell hyperplasia, and as additional qualitative criteria:
De enda kända verkningssätt som orsakar asynkron utveckling är effekterna av kemikalier på den perifera sköldkörtelhormonaktiviteten och/eller på metabolismen av sköldkörtelhormon i vävnader under utveckling, såsom kan observeras med deiodinashämmare.
follicular lumen area, colloid quality and follicular cell height/shape.
Utvärderingen av försöksdjuren med avseende på förekomsten av asynkron utveckling i förhållande till kontrollpopulationen ska grundas på en makromorfologisk bedömning av försöksdjuren på testdag 7 och testdag 21.
Severity grading (4 grades) should be reported.
Nieuwkoop och Fabers (8) beskrivning av den normala utvecklingen hos Xenopus laevis utgör en ram för fastställande av ordningsföljden för den normala ombildningen av vävnader.
Information on obtaining and processing samples for histological analysis and for performing histologic analyses on tissue samples is available in “Amphibian Metamorphosis Assay: Part 1 — Technical guidance for morphologic sampling and histological preparation” and “Amphibian Metamorphosis Assay: Part 2 — Approach to reading studies, diagnostic criteria, severity grading and atlas” (9).
Termen ’asynkron utveckling’ refererar särskilt till avvikelser i grodynglens makromorfologiska utveckling som gör det omöjligt att fastställa ett utvecklingsstadium enligt kriterierna i Nieuwkoop och Faber (8), eftersom viktiga morfologiska kännetecken har särdrag som är typiska för olika stadier.
Laboratories performing the assay for the first time(s) should seek advice from experienced pathologists for training purpose prior to undertaking histological analysis and evaluation of the thyroid gland.
De viktigaste morfologiska kännetecknen som i detta sammanhang bör utvärderas med avseende på deras samordnade metamorfa utveckling omfattar bakbenens morfogenes, utvecklingen av frambenen, stadiet under vilket svansen resorberas (särskilt resorptionen av svansfenan) och huvudets morfologi (t.ex. gälstorleken och resorptionen av gälarna, underkäkens morfologi, protrusionen av Meckels brosk).
Overt and significant changes in apical endpoints indicating developmental acceleration or asynchrony may preclude the necessity to perform histopathological analysis of the thyroid glands.
Olika makromorfologiska fenotyper kan förekomma beroende på typen av kemiskt verkningssätt.