natgillin/translations-raw huggingface dataset:
At least 14 to 21 days before testing, sufficient test organisms are transferred aseptically into fresh sterile medium and cultured for 14 to 21 days under the conditions of the test as a pre culture.
Antalet replikat bör vara minst tio kontrollkärl (och lösningsmedelskärl om tillämpligt).
Details for preparation of a pre-culture are given in Appendix 4.
Om NOEC inte behöver bestämmas kan man ändra testupplägget så att antalet koncentrationer ökas medan antalet replikat per koncentration minskas.
Only one nutrient medium is recommended for Myriophyllum spicatum in a sediment-free test system, as described in Appendix 2.
Antalet kontrollreplikat bör i alla händelser vara minst tio.
A modification of the Andrews' medium is recommended for culturing and testing with Myriophyllum spicatum as described in (1).
Exponering
From five separately prepared nutrient stock solutions with addition of 3 % sucrose the modified Andrews' medium will be arranged.
Färska sidogrenar från förkulturen, avkortade till 2,5 från basen, fördelas slumpmässigt mellan testkärlen under aseptiska förhållanden.
A tenfold concentrated, modified Andrews' medium is needed for obtaining the test solutions (by dilution as appropriate).
Det valda växtmaterialet bör vara av samma kvalitet i varje testkärl.
The composition of this medium is given in Appendix 2.
Provkärlen måste placeras slumpmässigt i inkubatorn för att minimera inflytandet av rumsbetingade skillnader i ljusintensitet och temperatur.
The addition of the nutrients will be achieved by using the tenfold concentrated, modified Andrews' medium.
I det fallet exponeras plantorna för nyberedda test- och kontrollösningar vid minst ett tillfälle under testet, t.ex. på dag 7.
The stock solutions of the test chemical can be sterilised by autoclave at 121 °C for 20 minutes or by sterile filtration, provided that the sterilisation technique used does not denaturise the test chemical.
Intervallen för byte till färskt medium beror på stabiliteten hos testkemikalien.
Test solutions can also be prepared in sterile demineralised water or medium, under sterile conditions.
Det kan krävas kortare intervall för att upprätthålla nära nog konstanta koncentrationer av mycket instabila eller flyktiga kemikalier.
The thermo-stability and the adsorption on different surfaces should the taken into account in the selection of the sterilisation procedure of the stock solutions of the test chemical.
Exponering genom besprutning av bladen ingår inte i denna testmetod.
Because of that, it is recommended that the stock solutions be prepared under sterile conditions, i.e. using sterile material for dissolving the test chemical under sterile conditions (e.g. flame sterilisation, laminar-flow hoods, etc.) into sterile water.
Belysning med varmt eller kallt vitt ljus från lysrör bör användas för att åstadkomma en ljusintensitet i intervallet 100–150 μE m– 2 s– 1, varvid intensiteten mäts inom ett fotosyntetiskt aktivt våglängdsområde (400–700 nm) i punkter på samma avstånd från ljuskällan som testkärlens botten (motsvarande cirka 6000–9000 lux).
This technique of preparation of sterile stock solutions is valid for both substances and mixtures.
Ljus-mörkerperioden ska vara 16:8 timmar.
The highest tested concentration of the test chemical should normally not exceed its water solubility under the test conditions.
Metoden för detektering och mätning av ljuset, framför allt typen av ljussensor, påverkar mätvärdet.
For test chemicals of low water solubility it may be necessary to prepare a concentrated stock solution or dispersion of the chemical using an organic solvent or dispersant in order to facilitate the addition of accurate quantities of the test chemical to the test medium and aid in its dispersion and dissolution.
Sfäriska sensorer – som mäter ljuset från alla vinklar ovanför och under mätplanet – och sensorer av solsensortyp (med cosinuskoefficient för infallsvinkeln) – som mäter ljuset från alla vinklar ovanför mätplanet – är att föredra framför riktade sensorer.
Every effort should be made to avoid the use of such materials.
De förstnämnda sensorerna ger större mätutslag för en diffus ljuskälla av den typ som beskrivits här.
There should be no phytotoxicity resulting from the use of auxiliary solvents or dispersants.
Temperaturen i testkärlen bör vara 23 ± 2 °C.
For example, commonly used solvents which do not cause phytotoxicity at concentrations up to 100 μl/l, include acetone and dimethylformamide.
I speciella fall, t.ex. vid test av instabila kemikalier eller metaller, måste förskjutningen av pH kontrolleras extra noggrant och pH bör hålla sig inom 6–9.
If a solvent or dispersant is used, its final concentration should be reported and kept to a minimum (≤ 100 μl/l), and all treatments and controls should contain the same concentration of solvent or dispersant.
Se (5) för ytterligare vägledning.
Further guidance on the use of dispersants is given in (5).
Testet ska avslutas 14 dagar efter det att plantorna har placerats i provkärlen.
Test and control groups
Mätningar och analytiska bestämningar
Prior knowledge of the toxicity of the test chemical to Myriophyllum spicatum from a range-finding test will help in selecting suitable test concentrations.
I början av testet är längden på testorganismens huvudskott 2,5 cm (se punkt 29).
In the definitive toxicity test, there should normally be five (like in the Lemna growth inhibition test, Chapter C.26 of this Annex) to seven test concentrations arranged in a geometric series; they should be chosen in order that the NOEC and EC50 values are bracketed by the concentration range (see below).
Längden mäts med en linjal (se tillägg 4) eller genom fotografering och bildanalys.
Preferably the separation factor between test concentrations should not exceed 3,2; however, a larger value may be used where the concentration-response curve is flat.
De huvudskott hos testorganismen som framstår som normala respektive onormala bör bestämmas i början av testet och därefter minst en gång under den 14 dagar långa exponeringstiden samt när testet avslutas.
Justification should be provided when fewer than five concentrations are used.
Obs: Om man inte har bildanalys kan även en steril linjal användas för att mäta huvudskottets längd i början av och under testet.
At least five replicates should be used at each test concentration.
Arbetsbänken måste dock vara steriliserad innan växterna placeras i testkärlen.
In setting the range of test concentrations (for range-finding and/or for the definitive toxicity test), the following should be considered:
Registrera förändringar i plantutvecklingen.
To determine an ECx, test concentrations should bracket the ECx value to ensure an appropriate level of confidence.
Det kan t.ex. gälla deformering av skotten, utseende, tecken på nekros, kloros, kollaps eller försämrad flytförmåga samt rötternas längd och utseende.
For example, if estimating the EC50, the highest test concentration should be greater than the EC50 value.
Registrera också betydelsefulla inslag i testmediet, t.ex. förekomst av oupplöst material, algtillväxt, svamp och bakterier i provkärlet.
If the EC50 value lies outside of the range of test concentrations, associated confidence intervals will be large and a proper assessment of the statistical fit of the model may not be possible.
Utöver bestämningar av huvudskottets längd under testet bör de effekter testkemikalien har på tre eller flera av följande mätvariabler också bestämmas:
If the aim is to estimate the LOEC/NOEC, the lowest test concentration should be low enough so that growth is not significantly less than that of the control.
Sidogrenarnas totala längd
In addition, the highest test concentration should be high enough so that growth is significantly lower than that in the control.
Total skottlängd
If this is not the case, the test will have to be repeated using a different concentration range (unless the highest concentration is at the limit of solubility or the maximum required limit concentration, e.g. 100 mg/l).
Total rotlängd
Every test should include controls consisting of the same nutrient medium, test organism (choosing plant material as homogeneous as possible, fresh lateral branches from pre-cultures, shortened to 2,5 cm from base), environmental conditions and procedures as the test vessels but without the test chemical.
Färskvikt
If an auxiliary solvent or dispersant is used, an additional control treatment with the solvent/dispersant present at the same concentration as that in the vessels with the test chemical should be included.
Torrvikt
If determination of NOEC is not required, the test design may be altered to increase the number of concentrations and reduce the number of replicates per concentration.
Anmärkning 1:
However, in any case the number of control replicates should be at least ten.
De iakttagelser som gjorts under det preliminära testet kan vara till hjälp för att välja relevanta ytterligare mätningar bland de sex variabler som anges ovan.
Exposure
Anmärkning 2:
Fresh lateral branches from pre-culture shortened to 2,5 cm from base are assigned randomly to the test vessels under aseptic conditions; each test vessel should contain one 2,5 cm lateral branch that should have an apical meristem on one end.
Bestämning av färsk- och torrvikt (parametrarna iv och v) rekommenderas starkt.
A randomised design for location of the test vessels in the incubator is required to minimise the influence of spatial differences in light intensity or temperature.
På grund av att sackaros och ljus (rötternas exponering för ljus under testet) kan påverka bärare av auxin (tillväxthormon hos växter), och vissa kemikalier kan ha ett verkningssätt som liknar auxinets effekter, kan användningen av endpoints för rötter (parameter iii) ifrågasättas.
A blocked design or random repositioning of the vessels (or repositioning more frequently) when observations are made is also required.
Anmärkning 4:
If a preliminary stability test shows that the test chemical concentration cannot be maintained (i.e. the measured concentration falls below 80 % of the measured initial concentration) over the test duration (14 days), a semi-static test regime is recommended.
Resultat från provningsjämförelsen visar höga variationskoefficienter (> 60 %) för sidogrenars totallängd (parameter i).
In this case, the plants should be exposed to freshly prepared test and control solutions on at least one occasion during the test (e.g. day 7).
Sidogrenarnas totala längd ingår i alla händelser i mätningen av skottets totala längd (parameter ii), som visar mer godtagbara variationskoefficienter (< 30 %).
The frequency of exposure to fresh medium will depend on the stability of the test chemical; a higher frequency may be needed to maintain near-constant concentrations of highly unstable or volatile chemicals.
Anmärkning 5:
The exposure scenario through a foliar application (spray) is not covered in this test method.
På grundval av ovanstående överväganden rekommenderas mätningar av följande huvudsakliga endpoints: skottets totala längd samt färsk- och torrvikt (parametrarna ii, iv och v).
Warm and/or cool white fluorescent lighting should be used to provide light irradiance in the range of about of 100-150 μE m–2 s–1 when measured as a photosynthetically active radiation (400-700 nm) at points the same distance from the light source as the bottom of the test vessels (equivalent ca. 6000 to 9000 lux) and using a light-dark cycle of 16:8 h.
Parameter vi – antal kransar – lämnas åt testarens bedömning.
The method of light detection and measurement, in particular the type of sensor, will affect the measured value.
Fördelen med parametrarna huvudskottets längd och antal kransar är att de kan bestämmas för varje test- och kontrollkärl i början, under och i slutet av testet genom fotografi- och bildanalys, även om en steril linjal också kan användas.
The temperature in the test vessels should be 23 ± 2 °C.
Färsk- och/eller torrvikt måste bestämmas i början av testet med hjälp av ett prov från förkulturen som är representativt för vad som används för att starta testet, och vid slutet av testet med hjälp av växtmaterial från alla prov- och kontrollkärl.
See (5) for further guidance.
Sidogrenarnas totala längd kan bestämmas genom att alla sidogrenar mäts med en linjal i slutet av exponeringen.
The test is terminated 14 days after the plants are transferred into the test vessels.
Sidogrenarnas totala längd är summan av alla sidogrenar i varje test- och kontrollkärl.
Measurements and analytical determinations
Huvudskottets längd kan bestämmas genom bildanalys eller med hjälp av en linjal.
Changes in plant development, e.g. in deformation in the shoots, appearance, indication of necrosis, chlorosis, break-up or loss of buoyancy and in root length and appearance, should be noted.
Färskvikten kan bestämmas genom att testorganismerna vägs i slutet av exponeringen.
Significant features of the test medium (e.g. presence of undissolved material, growth of algae, fungi and bacteria in the test vessel) should also be noted.
Allt växtmaterial i varje test- och kontrollkärl sköljs med destillerat vatten och klappas torrt med cellulosapapper.
In addition to determinations of main shoot length during the test, effects of the test chemical on three (or more) of the following measurement variables should be also assessed:
Efter denna förberedelse bestäms färskvikten genom vägning.
Total lateral branches length
Den initiala biomassan (färskvikt) bestäms med hjälp av ett prov bestående av testorganismer från samma kultur som används för att ympa provkärlen.
Total shoot length
Efter förberedelserna för bestämning av färskvikt torkas testorganismerna vid 60 °C till konstant vikt.
Total root length
Denna massa är torrvikten.
Fresh weight
Den initiala biomassan (torrvikt) bestäms med hjälp av ett prov bestående av testorganismer från samma kultur som används för att ympa provkärlen.
Dry weight
Alla kransar längs huvudskottet räknas.
Number of whorls
Mätfrekvens och analytiska bestämningar
Note 1:
Vid statiskt testförfarande ska pH-värdet i alla testlösningar (testkoncentrationer) mätas i början och slutet av testet.
The observations made during the range-finding test could help in selecting relevant additional measurements among the six variables listed above.
Vid semistatiskt testförfarande mäts pH-värdet i varje färsk testlösning före varje byte till ny lösning och i motsvarande förbrukade lösning.
Note 2:
Ljusintensiteten ska mätas i odlingskammaren, inkubatorn eller klimatrummet i punkter på samma avstånd från ljuskällan som testorganismerna.
The determination of the fresh and dry weights (parameters iv and v) is highly desirable.
Mätningar ska göras minst en gång under testets genomförande.
Note 3:
Temperaturen hos mediet i ett ersättningskärl med enbart testmedium som hålls under samma betingelser i odlingskammaren, inkubatorn eller klimatrummet bör registreras minst en gång per dag (eller kontinuerligt med en datalogg).
Due to the fact that sucrose and light (exposure of roots to light during the test) may have an influence on auxin (plant growth hormone) transport carriers, and that some chemicals may have an auxin-type mode of action, the inclusion of root endpoints (parameter iii) is questionable.
Under testets gång ska testkemikaliens eller testkemikaliernas koncentrationer bestämmas med lämpliga intervaller.
Note 4:
Vid ett statiskt testförfarande är minimikravet att koncentrationerna ska bestämmas i början och slutet av testet.
The ring test results show high coefficients of variation (> 60 %) for the total lateral branch length (parameter i).
Om man vid ett semistatiskt testförfarande bedömer att koncentrationen av testkemikalien eller testkemikalierna inte kommer att ligga kvar inom ± 20 % av den nominella koncentrationen, måste man analysera alla nyberedda testlösningar liksom alla förbrukade lösningar vid byte till ny färsk lösning.
Total lateral branch length is in any case encompassed within the total shoot length measurement (parameter ii) which shows more acceptable coefficients of variation of < 30 %.
För test i vilka den uppmätta startkoncentrationen av testkemikalien inte ligger inom ± 20 % av den nominella koncentrationen men tillräckliga bevis kan framläggas för att visa att startkoncentrationerna är repeterbara och stabila (dvs. inom intervallet 80–120 % av startkoncentrationen), räcker det om kemiska bestämningar utförs enbart för de högsta och lägsta testkoncentrationerna.
Note 5:
I samtliga fall behöver bestämning av testkoncentrationer före byte till färsk testlösning bara utföras på ett enda replikatkärl för varje testkoncentration (eller på det samlade innehållet från samtliga replikat för respektive testkoncentration).
Resulting from the above considerations, the recommended main measurement endpoints are: total shoot length, fresh weight and dry weight (parameters ii, iv and v); parameter vi — number of whorls — is left to the experimenter's judgment.
Om man kan visa att testkoncentrationen har hållits tillfredsställande inom ± 20 % av den nominella eller uppmätta startkoncentrationen genom hela testet kan analysen av resultaten baseras på nominella eller uppmätta startvärden.
Main shoot length and number of whorls have an advantage, in that they can be determined for each test and control vessel at the start, during, and at the end of the test by photography and image analysis, although a (sterile) ruler can also be used.
Om avvikelsen från den nominella eller uppmätta startkoncentrationen inte ligger inom ± 20 %, ska analysen av resultaten baseras på det geometriska medelvärdet av koncentrationen under exponeringen, eller på modeller som beskriver testkemikaliens avtagande koncentration (5).
Total lateral branches length, total root length (as a sum of all lateral branches or roots) and total shoot length (as a sum of main shoot length and total lateral branches length) can be measured with a ruler at the end of exposure.
Under vissa omständigheter, t.ex. när ett preliminärt test tyder på att testkemikalien inte har några toxiska effekter vid koncentrationer upp till 100 mg/l eller upp till dess löslighetsgräns i testmediet (eller om det är en beredning, upp till dispergeringsgränsen), kan man utföra ett limit-test.
The fresh and/or dry weight should be determined at the start of the test from a sample of the pre-culture representative of what is used to begin the test, and at the end of the test with the plant material from each test and control vessel.
Man jämför då responsen mellan en kontrollgrupp och en testgrupp (med en koncentration på 100 mg/l eller lika med löslighetsgränsen).
Total lateral branches length, total shoot length, total root length, fresh weight, dry weight and number of whorls may be determined as follows:
Det rekommenderas starkt att jämförelsen kompletteras med en bestämning av exponeringskoncentrationen.
The lateral branch length may be determined by measuring all lateral branches with a ruler at the end of exposure.
Alla testbetingelser samt kriterier för testresultatens giltighet som beskrivits tidigare gäller även för limit-test, med undantaget att antalet testreplikat ska vara dubbelt så stort.
The total lateral branches length is the sum of all lateral branches of each test and control vessel.
Tillväxten i kontrollgruppen och testgruppen kan analyseras med en statistisk metod för jämförelse av medelvärden, t.ex. t-test (Students t-test).
The main shoot length may be determined by image analysis or using a ruler.
Responsvariabler
The total shoot length is the sum of the total lateral branches length and the main shoot length of each test and control vessel at the end of exposure.
Syftet med testet är att bestämma en testkemikalies effekter på tillväxten av Myriophyllum spicatum.
The root length may be determined by measuring all roots with a ruler at the end of exposure.
Denna testmetod beskriver två responsvariabler.
The total root length is the sum of all roots of each test and control vessel.
Genomsnittlig specifik tillväxthastighet
The fresh weight may be determined by weighing the test organisms at the end of exposure.
Denna responsvariabel beräknas med hjälp av den tidsmässiga förändringen av det logaritmiska värdet av huvudskottets längd, och den tidsmässiga förändringen av det logaritmiska värdet av en andra variabel, dvs. total skottlängd, färskvikt, torrvikt eller antalet kransar över tiden (uttryckt i dagar) i kontrollerna och respektive testgrupp.
All plant material of each test and control vessel will be rinsed with distilled water, dabbed dry with cellulose paper.
Anmärkning: När det gäller mätparametern sidogrenarnas totala längd och total rotlängd är en beräkning av genomsnittlig tillväxthastighet inte möjlig.
After this preparation the fresh weight will be determined by weighing.
I början av testet har testorganismen inga sidogrenar och inga rötter (baserat på beredningen från förkulturen).
The starting biomass (fresh weight) is determined on the basis of a sample of test organisms taken from the same batch used to inoculate the test vessels.
Med utgångspunkt från värdet noll har beräkningen av den genomsnittliga tillväxthastigheten inte definierats.
After the preparations for the determination of the fresh weight the test organisms will be dried at 60 °C to a constant weight.
Producerad mängd biomassa
If a static test design is used, the pH of each treatment should be measured at the beginning and at the end of the test.
Använd nedanstående formel för alla replikat av kontroll- och testlösningar:
The temperature of the medium in a surrogate vessel held under the same conditions in the growth chamber, incubator or room should be recorded at least daily (or continuously with a data logger).
t är tidslängden mellan tidpunkterna i och j.
During the test, the concentrations of the test chemical(s) are determined at appropriate intervals.
Beräkna ett medelvärde av tillväxthastigheten för varje testgrupp och kontrollgrupp tillsammans med variansskattningar.
In static tests, the minimum requirement is to determine the concentrations at the beginning and at the end of the test.
Den genomsnittliga specifika tillväxthastigheten ska beräknas för hela tiden för testets genomförande (”i” i formeln betecknar början av tiden för testets genomförande, och ”j” slutet).
In semi-static tests where the concentrations of the test chemical(s) are not expected to remain within ± 20 % of the nominal concentration, it is necessary to analyse all freshly prepared test solutions and the same solutions at each renewal.
Beräkna ett medelvärde av den genomsnittliga tillväxthastigheten för varje testkoncentration och kontrollgrupp tillsammans med variansskattningar.
Under some circumstances, e.g. when a preliminary test indicates that the test chemical has no toxic effects at concentrations up to 100 mg/l or up to its limit of solubility in the test medium or in case of a formulation up to its limit of dispersibility, a limit test involving a comparison of responses in a control group and one treatment group (100 mg/l or a concentration equal to the limit of solubility), may be undertaken.
μT är medelvärdet av μ i testgruppen.
It is strongly recommended that this is supported by analysis of the exposure concentration.
Effekterna på producerad mängd biomassa bestäms med hjälp av mätvariabeln huvudskottets variabla längd och tre ytterligare mätvariabler (företrädesvis total skottlängd, färskvikt, torrvikt eller antalet kransar).
All previously described test conditions and validity criteria apply to a limit test, with the exception that the number of treatment replicates should be doubled.
Mätningarna görs i början och slutet av testet.
Response variables
Beräkna ett medelvärde av den producerade mängden biomassa för varje testkoncentration och kontrollgrupp tillsammans med variansskattningar.
The purpose of the test is to determine the effects of a test chemical on the vegetative growth of Myriophyllum spicatum.
Den genomsnittliga procentuella minskningen av den producerade mängden biomassa ( % Iy) beräknas för varje testgrupp med formeln
This test method describes two response variables.
är den procentuella minskningen av den producerade mängden biomassa,
Average specific growth rate
bC är den slutliga biomassan minus den initiala biomassan för kontrollgruppen, och