natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Slides shall then be cooled on ice for one minute before overnight hybridisation at 42 °C in a humid chamber.
Vävnaden ska vägas, placeras i Lysing Matrix A-rör, spädas 1:10 (w/v) eller enligt tillverkarens anvisningar med en lämplig buffert (G2 och 10 μl proteinas K för DNA Tissue kit (Qiagen)) och homogeniseras med FastPrep-24 homogenisator i 2 minuter.
Sections shall be washed twice for five minutes in 2 × SSC at room temperature, and once for 10 minutes in 0,4 × SSC at 42 °C.
Homogeniserade prover ska inkuberas vid 56 °C i minst 4 timmar eller över natten.
The detection steps shall be performed according to the manufacturer's instructions.
Proverna ska vortexas, centrifugeras vid 9000 rpm i 2 minuter och 50 μl supernatant eller en volym som motsvarar 5 mg vävnad (dvs. den vävnadsvikt som är optimal för extraktionskit) ska tillsättas ett provrör för DNA-extraktion och fyllas upp till 200 μl med G2 buffert.
The slides shall then be rinsed in sterile distilled water (dH2O).
Totalt DNA ska extraheras med ett DNA-extraktionskit för vävnader och EZ1 Advanced XL Biorobot (Qiagen) enligt tillverkarens anvisningar.
The sections shall be counter-stained with Bismarck Brown Yellow, rinsed in dH2O, and cover-slips shall be applied using an aqueous mounting medium.
En extraktionskontroll (DNA från kalvthymus) och en negativ kontroll (G2 buffert) ska köras med varje batch prover.
Positive and negative controls shall be sections from known infected and non-infected hosts respectively.
DNA ska elueras i volymen 50 μl.
A positive result shall be demonstrated by the purple-black labelling of M. refringens cells within known target tissues, with all negative controls being negative and all positive controls being positive.
För att säkerställa att extraktionen har lyckats ska DNA-koncentrationen i alla prover och kontroller bestämmas med en NanoDrop-maskin.
Sequencing
Extraherat DNA ska frysas vid – 20 °C om det inte ska användas omedelbart.
Sequencing shall be carried out as one of the final steps for confirmatory diagnostic.
PCR för påvisande av WSSV
Targeted regions are the SSU rDNA and ITS1.
Det protokoll som ska användas för påvisande av WSSV och som beskrivs i följande stycken använder nästad PCR och amplifierar två av 18s rRNA-genens amplikon på 1447 baspar och 848 baspar i den första respektive andra PCR-omgången.
Detailed diagnostic methods and procedures for surveillance and confirmation of infection with Marteilia refringens
Den första PCR-reaktionen ska utföras i volymen 50 μl som innehåller en slutlig koncentration på 1 × GoTaq buffert (Promega), 5 mM MgCl2, 1 pmol/μl WSSV 146 F1 primer, 1 pmol/μl WSSV 146 R1 primer (tabell 1), 0,25 mM dNTPs, 1,25 enheter Taq polymeras och 2,5 μl DNA.
For the purpose of surveillance programmes and to confirm the presence of an infection with Marteilia refringens or to rule out a suspicion of that listed disease, in accordance with the requirements laid down in Section II of Part 4 to Annex I, the diagnostic methods and corresponding procedures to be used shall be in accordance with the guidelines laid down in Table 4.1 as follows:
Varje prov ska köras som duplikat tillsammans med en negativ extraktionskontroll, en negativ PCR-kontroll (2,5 μl H2O tillsätts i stället för DNA) och en positiv kontroll.
Table 4.1
Den positiva kontrollen ska vara utspädd WSSV-plasmid som framställts och validerats internt (tillgänglig från EU:s referenslaboratorium).
Guidelines for the use of diagnostic methods for the surveillance programmes and to confirm or rule out infection with Marteilia refringens
Den andra PCR-reaktionen ska utföras på samma sätt som den första men med primerparet WSSV 146 F2/R2 och med en andra positiv kontroll för att kontrollera att detta PCR-steg har fungerat.
Method
TACGGCAGCTGCTGCACCTTGT
Targeted surveillance
Både den första och andra PCR-omgången ska köras vid följande cykelförhållanden på en DNA Engine Tetrad 2 Peltier Thermal Cycler (eller motsvarande): En första denaturering vid 94 °C i 2 minuter, följt av 30 cykler vid 94 °C i 30 sekunder, 62 °C i 30 sekunder och 72 °C i 30 sekunder, elongering vid 72 °C i 2 minuter och därefter hålls reaktionen vid 4 °C.
Presumptive diagnosis
Gelelektrofores
Confirmatory diagnosis
Amplifierade PCR-produkter från både den första och den andra PCR-omgången ska visualiseras på 2 % agarosgel med TAE buffert.
Digestive gland imprints
15 μl av varje prov ska köras vid 120 volt i cirka 20 minuter och studeras under UV-ljus.
X, or
Positiva prover ska ge ett band på 1447 baspar i den första PCR-omgången och på 848 baspar i den andra PCR-omgången.
Histopathology
Prover av den storleken ska skäras ut och placeras i ett 1,5 ml mikrofugrör.
In situ hybridisation
Det DNA som finns i gelbitarna ska renas med Promega Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System enligt tillverkarens anvisningar.
X, and
DNA-koncentrationen ska uppskattas med en NanoDrop-maskin.
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES FOR THE SURVEILLANCE AND CONFIRMATION OF INFECTION WITH BONAMIA OSTREAE
Renat DNA ska frysas vid – 20 °C om det inte ska användas omedelbart.
I. Procedures for diagnosis of Infection with Bonamia ostreae
Sekvensering av PCR-produkter
When sampling and laboratory examination are carried out for the purpose of obtaining or maintaining a certain health status with regard to Bonamia ostreae as set out in Section I of Part 5 of Annex I or to confirm or rule out the presence of that listed disease in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC, using the diagnostic methods set out in Section II of Part 5 of Annex I, the detailed diagnostic methods and procedures set out in following points I.1, I.2 and I.3 shall apply.
DNA ska sekvenseras med BigDye Terminator v3.1 Kit (Applied Biosystems).
Sample process
Den totala volymen i varje reaktion är 20 μl med de slutliga koncentrationerna 1 × BigDye Terminator, 1 × sekvenseringsbuffert, 10 pmol/μl framåtriktad eller bakåtriktad primer och 10 μl renat DNA (utspätt till cirka 10 ng/μl); följande cykelförhållanden ska användas på en DNA Engine Tetrad 2 Peltier Thermal Cycler (eller motsvarande): 94 °C i 30 sekunder, följt av 30 cykler vid 96 °C i 10 sekunder, 50 °C i 10 sekunder och 60 °C i 4 minuter.
Once sampled, oysters shall be maintained at 4 °C or on refrigerated ice for no more than 24 hours if samples include gaping molluscs and 72 hours if not, in a plastic bag including a label with details related to the nature and the origin of the oysters.
PCR-produkterna ska fällas ut med en natriumacetatmetod enligt följande: 20 μl DNA tillsätts till 10 μl NaAc, 70 μl H2O och 250 μl etanol, allt vortexas och centrifugeras vid 13000 rpm i 20 minuter, supernatanten avlägsnas och pelleten tvättas med 200 μl absolut etanol och centrifugeras vid 13000 rpm i 5 minuter.
A 3 to 5 mm thick section of tissues including gills and heart tissue shall be used for the diagnostic of Bonamia ostreae by histology.
Pelleten ska torkas vid 37 °C i 5 minuter.
Slides shall be air-dried, fixed in methanol or in absolute ethanol and stained using a commercially available blood-staining kit (namely such as Diff- Quik®/Hemacolor®.), in accordance with the manufacturer's instructions.
Proverna ska sekvenseras med 3130xl Avant Genetic Analyzer (Applied Biosystems) enligt tillverkarens anvisningar.
Slides shall be observed first at × 200 magnification and then under oil immersion at × 1000 magnification.
Sekvenseringsresultaten ska analyseras med programvaran Sequencher och sökverktyget BLAST och sekvenserna ska överensstämma med sekvenser i NCBI:s databas.
A positive result shall be the presence of small spherical or ovoid organisms (2 to 5 μm wide) within haemocytes.
ÖVERVAKNINGS- OCH BEKÄMPNINGSMETODER FÖR VIRAL HEMORRAGISK SEPTIKEMI (VHS) OCH INFEKTIÖS HEMATOPOIETISK NEKROS (IHN)
However, the parasite might also occur extracellularly.
I. Krav för övervaknings- och utrotningsprogram för att erhålla och få behålla sjukdomsfri hälsostatus med avseende på VHS och IHN samt åtgärder för att motverka spridning av dessa förtecknade sjukdomar
These organisms show a basophilic cytoplasm and an eosinophilic nucleus (colours may vary with the stain used) and, because they spread on the slide, they can appear wider on imprints than on histological examination.
I.1 Allmänna krav för hälsoinspektioner och provtagning med avseende på VHS och IHN
Multinucleated cells may be observed.
I.2 Särskilda krav för att erhålla sjukdomsfri hälsostatus (kategori I) med avseende på VHS och IHN
Sections of tissue that include gills and digestive gland, shall be fixed for a period of at least 24 hours in Davidson's fixative followed by normal processing for paraffin histology and staining, for example with haematoxylin and eosin.
I.2.1 Övervakningsprogram
A positive result shall be the presence of parasites as very small cells of 2 to 5 μm wide within the haemocytes or free in the connective tissue or sinuses of gill, gut and mantle epithelium, often associated with an intense inflammatory reaction.
I.2.2 Utrotningsprogram
To avoid any doubt, the parasite shall be observed inside the haemocyte for a positive diagnosis.
I.2.2.1 Allmänna krav
DNA extraction kits, which are available commercially and usually produce high quality DNA suitable for use with the PCR protocols as detailed below, may be used.
I.2.2.2 Krav för att återfå sjukdomsfri status för inlandsdelområden som omfattar en enda anläggning och som tidigare har förklarats fri från antingen VHS eller IHN, eller båda
Two PCR protocols targeting the small subunit (SSU) rDNA may be used:
I.3 Särskilda krav för att få behålla sjukdomsfri hälsostatus (kategori I) med avseende på antingen VHS eller IHN, eller båda
the first one is a conventional PCR that amplify several members of the Haplosporidia including Bonamia spp.
I.4 Krav för upphävande av de åtgärder för att motverka sjukdomsspridning som fastställs i artikel 39 i direktiv 2006/88/EG, dvs. övergång från hälsostatus av kategori V till kategori III
Primers designated Bo and Boas are 5′-CAT-TTA-ATT-GGT-CGG-GCC-GC-3′ and 5′-CTG-ATC-GTC-TTC-GAT-CCC-CC-3′ respectively, and amplify a 300 bp product.
Den anläggning där misstanke föreligger ska genomgå minst en hälsoinspektion och en provtagning av 10 fiskar när det iakttas kliniska tecken eller tecken vid inspektion efter slakt som överensstämmer med symtomen på infektion orsakad av antingen VHS eller IHN, eller båda, eller av minst 30 fiskar när inga kliniska tecken eller tecken vid inspektion efter slakt iakttas.
PCR mixtures contain buffer (500 mM KCl, 100 mM Tris/HCl [pH 9,0 at 25 °C] and 1 % Triton® X-100), 2,5 mM MgCl2, 0,2 mM dNTP mix, 1 μM forward and reverse primers, 0,02 units μl– 1 Taq DNA polymerase, and 0,2 ng μl– 1 of the DNA template in a total volume of 50 μl.
Proverna ska testas med en eller flera av de diagnostiska metoderna i leden i och ii i enlighet med de detaljerade diagnostiska metoderna och förfarandena i del 1 avsnitt II i bilaga II:
Samples shall be denatured in a thermocycler for five minutes at 94 °C before being submitted to 30 cycles (94 °C for one minute, 55 °C for one minute, 72 °C for one minute) followed by a final extension of 10 minutes at 72 °C.
I.1 Allmänna krav
A positive result shall be positive PCR amplification at the expected size (namely, 300 bp), with all negative controls being negative and all positive controls being positive;
I.2 Särskilda krav för att uppnå sjukdomsfri hälsostatus (kategori I) med avseende på KHV
the second PCR protocol is a SYBR® Green Real time PCR assay.
I.2.1 Övervakningsprogram
It allows the specific detection of B. ostreae (described below) and may be combined with a SYBR® Green Real time PCR assay allowing the specific detection of B. exitiosa (Ramilo et al.
I.2.2.2 Krav för att återfå sjukdomsfri status för inlandsdelområden som omfattar en enda anläggning och som tidigare har förklarats fria från KHV
2013).
I.3 Särskilda krav för att få behålla hälsostatus av kategori I med avseende på KHV
Primers BOSTRE-F (5′- TTACGTCCCTGCCCTTTGTA-3′) and BOSTRE-R (5′- TCGCGGTTGAATTTTATCGT-3′) amplify a 208 bp product.
I.4 Särskilda krav för upphävande av de åtgärder för att motverka sjukdomsspridning som fastställs i artikel 39 i direktiv 2006/88/EG för att erhålla hälsostatus av kategori III med avseende på KHV i medlemsstater, delområden eller zoner som har hälsostatus av kategori V
PCR mixtures contain SYBR® Green Master Mix (1X), 0,3 μM forward and reverse primers, and 200 ng of extracted DNA.
I.2 Särskilda krav för att uppnå hälsostatus av kategori I med avseende på ILA/ISA
Samples shall be denatured in a Real Time Detection System for 10 minutes at 95 °C before being submitted to 35 cycles (95 °C for 30 seconds, 55 °C for 45 seconds and 72 °C for one minute).
I.2.2.2 Krav för att återfå sjukdomsfri status för inlandsdelområden som omfattar en enda anläggning och som tidigare har förklarats ha hälsostatus av kategori I
Melting temperature curve analysis shall be carried out with temperature increments of 0,5 °C/s starting at 55 °C and ending at 95 °C and recording fluorescence at each change of temperature.
I.3 Minimibekämpningsåtgärder för att få behålla hälsostatus av kategori I med avseende på ILA/ISA
Positive controls shall consist in genomic DNA from a highly infected host or plasmidic DNA including the target region.
I.4 Särskilda krav för att uppnå hälsostatus av kategori III med avseende på HPR-deleted ISA-virus i medlemsstater, zoner eller delområden som tidigare hade hälsostatus av kategori V
Negative controls shall consist in genomic DNA from non-infected hosts and PCR reactives without target DNA.
Om Ostrea spp. och Mytilus spp. förekommer i produktionsenheterna eller produktionsområdet ska lika stor provstorlek tas från båda släktena.
A positive result shall be positive PCR amplification with a unique melting temperature peak (78,25 ± 0,25 °C in the conditions published by Ramilo et al.
Om endast ett av dessa släkten förekommer ska det släktet provtas.
2013), with all negative controls being negative and all positive controls being positive.
Om varken släktena Ostrea eller Mytilus förekommer ska provet vara representativt för alla andra mottagliga arter som förekommer.
A probe that targets the SSU of the rDNA gene complex shall be used although it was shown to cross react with some other members of the family Haplosporidia.
Om det förekommer svaga blötdjur, blötdjur med öppna skal eller nydöda blötdjur (ej sönderfallande/ruttna) i produktionsenheterna ska i första hand dessa väljas.
Sections of tissue that include gills and digestive gland shall be fixed for a period of at least 24 hours in Davidson's fixative followed by normal processing for paraffin histology.
Om sådana blötdjur inte förekommer ska de utvalda blötdjuren omfatta de äldsta friska blötdjuren.
Sections shall be incubated with 100 μl of hybridisation buffer (4 × SSC [standard saline citrate], 50 % formamide, 1 × Denhardt's solution, 250 μg ml– 1 yeast tRNA, 10 % dextran sulphate) containing 20 ng (2 μl of the PCR reaction prepared as described in point I.3.2 using primers Bo and Boas) of the digoxigenin-labelled probe.
Vid provtagning på anläggningar för blötdjur där mer än en vattentäkt används för blötdjursproduktion, ska blötdjur från samtliga vattentäkter ingå i provtagningen på sådant sätt att samtliga delar av anläggningen är proportionellt representerade i provet.
Sections shall be washed twice for five minutes in 2 × SSC at room temperature, and once for 10 minutes in 0,4 × SSC at 42 °C.
Vid provtagning i områden för blötdjursodling ska blötdjur från ett tillräckligt antal provtagningsplatser ingå i provet på sådant sätt att samtliga delar av området för blötdjursodling är proportionellt representerade i provet.
A positive result shall correspond to labelled parasites inside the haemocytes, with all negative controls negative and all positive controls positive.
Huvudfaktorerna som ska beaktas vid urvalet av dessa provtagningsplatser är tidigare provtagningsplatser där Marteilia refringens påvisats, beståndstäthet, vattenflöden, förekomst av mottagliga arter, förekomst av smittbärande arter, vattendjup och hantering.
Targeted regions shall be the SSU rDNA and ITS1.
Naturliga fyndplatser ska provtas.
Procedures for surveillance and confirmation of infection with Bonamia ostreae
I.2 Särskilda krav för att uppnå hälsostatus av kategori I med avseende på Marteilia refringens
For the purpose of surveillance and confirmation of the presence of or to rule out a suspicion of infection with Bonamia ostreae in accordance with the requirements laid down in Section II of Part 5 to Annex I, the diagnostic methods and corresponding procedures to be used shall be in accordance with the guidelines laid down in the following Table 5.1.
I.3 Särskilda krav för att få behålla sjukdomsfri hälsostatus (kategori I) med avseende på infektion orsakad av Marteilia refringens
Table 5.1
I.4 Krav för upphävande av de åtgärder för att motverka sjukdomsspridning som fastställs i artikel 39 i direktiv 2006/88/EG (övergång från hälsostatus av kategori V till kategori III) med avseende på infektion orsakad av Marteilia refringens
Guidelines for the use of diagnostic methods for the surveillance programmes and to rule out or confirm infection with Bonamia ostreae
Om det förekommer Ostrea edulis ska endast ostron av den arten väljas för provtagning.
Heart or gill imprints
Om Ostrea edulis inte förekommer ska provet vara representativt för alla andra mottagliga arter som förekommer.
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES FOR SURVEILLANCE AND CONFIRMATION OF WHITE SPOT DISEASE (WSD)
Om det förekommer svaga blötdjur, blötdjur med öppna skal eller nydöda blötdjur (ej sönderfallande/ruttna) ska i första hand dessa väljas.
Diagnostic procedures for detection of WSSV
Vid provtagning på anläggningar där mer än en vattentäkt används för blötdjursproduktion, ska blötdjur från samtliga vattentäkter ingå i provtagningen på sådant sätt att samtliga delar av anläggningen är proportionellt representerade i provet.
When sampling and laboratory examination for the purpose of the surveillance and eradication programmes set out in Section I of Part 6 of Annex I and for the confirmation of the presence of or to rule out a suspicion of infection with WSSV are carried out in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC, using the diagnostic methods set out in Section II of Part 6 of Annex I, the detailed diagnostic methods and procedures set out in points 2 to 7 of this Part shall apply.
Vid provtagning i områden för blötdjursodling ska blötdjur från ett tillräckligt antal provtagningsplatser ingå i provet.
The methods and procedures described in this Part of Annex II are adapted from the ISO 17025 accredited test applied at the European Union Reference Laboratory for Crustacean Diseases.
Huvudfaktorerna som ska beaktas vid urvalet av dessa provtagningsplatser är tidigare provtagningsplatser där Bonamia ostreae påvisats, beståndstäthet, vattenflöden, förekomst av mottagliga arter, förekomst av smittbärande arter, vattendjup och hantering.
Alternative approaches, using equivalent conditions or kits produced by different manufacturers, but which offer equivalent sensitivity and specificity to those described in this Part may be applied.
Naturliga fyndplatser i eller intill odlingsområden ska provtas.
In all instances, PCR amplified product shall be sequenced to confirm identity as White spot syndrome virus (WSSV).
I.2 Särskilda krav för att uppnå hälsostatus av kategori I med avseende på Bonamia ostreae
Tissue (pleopods and gills) containing WSSV from crustaceans may be stored in ethanol, RNAlater or snap frozen at – 80 °C.
I.3 Särskilda krav för att få behålla sjukdomsfri hälsostatus (kategori I) med avseende på infektion orsakad av Bonamia ostreae
The stages required for the identification of WSSV from tissue samples shall be as follows: Homogenisation of the tissue, extraction of the DNA, specific amplification of WSSV DNA using PCR, visualisation of the amplified product on a gel, purification of the DNA and sequencing to confirm the identity of the pathogen.
I.4 Krav för upphävande av de åtgärder för att motverka sjukdomsspridning som fastställs i artikel 39 i direktiv 2006/88/EG (övergång från hälsostatus av kategori V till kategori III) med avseende på infektion orsakad av Bonamia ostreae
Tissue homogenisation
I.1 Allmänna krav för inspektioner och provtagning
The tissue shall be weighed, placed in Lysing Matrix A tubes, diluted 1 in 10 w/v or according to manufacturer's instructions, in an appropriate buffer (G2 and 10 μl Proteinase K for use with DNA Tissue kit (Qiagen)) and homogenised using the Fast Prep 24 homogeniser for two minutes.
I.2.2.2 Krav för att återfå sjukdomsfri status med avseende på WSD för inlandsdelområden som omfattar en enda anläggning som tidigare har förklarats fri från WSD
Homogenised samples shall be incubated at 56 °C for a minimum period of four hours or overnight.
I.3 Särskilda krav för att få behålla sjukdomsfri hälsostatus (kategori I) med avseende på WSD
Samples shall be vortexed, centrifuged at 9000 rpm for two minutes and 50 μl of supernatant or a volume equivalent to 5 mg of tissue (weight of tissue optimal for extraction kit) shall be added to a sample tube for DNA extraction and volume made up to 200 μl using G2 buffer.
I.4 Krav för upphävande av de åtgärder för att motverka sjukdomsspridning som fastställs i artikel 39 i direktiv 2006/88/EG (övergång från hälsostatus av kategori V till kategori III) med avseende på WSD
Total DNA shall be extracted using a DNA tissue extraction kit and the EZ1 Advanced XL Biorobot (Qiagen) following the manufacturers' instructions.
I.1 Beredning och transport av fiskprover
An extraction control (Calf Thymus DNA) and a negative control (G2 buffer) shall run with each batch of samples.
I.1.1 Vävnader för virologisk undersökning i cellkultur
DNA shall be eluted into 50 μl volume.
I.2 Transport av fiskprover
To ensure that the extraction has completed successfully, the DNA concentration for all samples and controls shall be determined using a Nano Drop machine.
I.3 Insamling av kompletterande diagnostiskt material
Extracted DNA shall be frozen at – 20 °C if not required immediately.
I.4 Provberedning för undersökning i cellkultur och RT-qPCR
WSSV Polymerase Chain Reaction (PCR)
I.4.1 Frysning i undantagsfall
The method to be used for the detection of WSSV shall be the protocol for the detection of WSSV by nested PCR set out in the following paragraphs which amplifies a 1447 bp and an 848 bp amplicon of the 18s rRNA gene in the first and second round PCRs respectively.
I.4.2 Homogenisering av organ
The 1st round PCR reaction shall be set up in a 50 μl volume which contains final concentrations of 1 × GoTaq Buffer (Promega), 5 mM MgCl2, 1 pmol/μl WSSV 146 F1 primer, 1 pmol/μl WSSV 146 R1 primer (Table 1), 0,25 mM dNTPs, 1,25U Taq polymerase and 2,5 μl of DNA.
I.4.3 Centrifugering av homogenat
Each sample shall be run in duplicate alongside a negative extraction control, a negative PCR control, (2,5 μl H2O added instead of DNA) and a positive control.
I.4.4 Provberedning för RT-PCR- och RT-qPCR-baserade övervakningsprogram
The positive control shall be diluted WSSV plasmid made and validated for use in-house (available from the EURL).
I.4.5 Sammanslagning av prover för RT-qPCR
The 2nd round WSSV PCR reaction shall be set up in the same way as the first round but using the WSSV 146 F2/R2 primer set and using a second positive control to check that this stage of the PCR has worked.
I.5.1 Cellkulturer och medier
Primer
Vid odling i öppna kärl kan cellodlingsmediet buffras med Tris-HCl (tris(hydroximetyl)aminometan-HCl) (23 mM) och natriumbikarbonat (6 mM). pH-värdet ska vara 7,6 ± 0,2.
Both 1st and 2nd round PCRs shall be run using the following cycling conditions on a DNA Engine Tetrad 2 Peltier Thermal Cycler (or equivalent).
De cellkulturer som ska användas för inokulering med fiskvävnadsmaterial ska vara unga, om möjligt ska vanligtvis en dag gamla cellkulturer i monolager användas.
An initial denaturation step of 94 °C for two minutes followed by 94 °C for 30 seconds, 62 °C for 30 seconds, 72 °C for 30 seconds repeated for 30 cycles, a 72 °C extension step for two minutes and held at 4 °C.
I.5.2 Inokulering av cellkulturer
Gel electrophoresis
I.5.3 Inkubering av cellkulturer