natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Total RNA shall be extracted using the phenol-chloroform method or RNA affinity spin columns, according to the manufacturer's instructions.
För varje organ ska en suspension av 40 μl inokulat tillsättas en brunn med 2 ml odlingsmedium.
Purified RNA shall be re-suspended in distilled RNase-free water (namely water treated with 0,1 % diethyl pyrocarbonate).
För att minimera risken för korskontaminering ska separata 12- eller 24-hålsplattor används för prover från olika platser på fiskodlingsanläggningen.
The concentration and purity of the extracted RNA shall be estimated by measuring the optical density at 260 nm and at 280 nm.
En platta ska användas som negativ kontroll och lämnas oinokulerad.
An alternative approach may be to include internal controls targeted against the virus genome as referred to in point II.1.3.
En separat platta ska användas som positiv kontroll och inokuleras med ett referensisolat av ISA-virus enligt följande.
RT-PCR for ISAV detection
Prover ska inkuberas vid 15 ± 2 °C i upp till 15 dagar.
Several RT-PCR methods may be used for ISAV genome amplification.
Cellkulturerna ska undersökas med mikroskop avseende CPE dag 5–7 och 12–14 efter inokulering.
A two-step RT-PCR may be performed whereby the RT and the PCR reactions steps are run in two separate tubes.
Om ett sammanslaget prov uppvisar CPE ska förfaranden för identifiering av virus enligt punkt II.2.4 påbörjas omedelbart.
However, a one-step reaction, where the two reactions are run in one tube, may also be performed.
Om ingen CPE iakttas senast dag 14 ska ett indirekt fluorescerande antikroppstest (IFAT), ett hemadsorptionstest eller en RT-PCR utföras.
The one-step method shall be used where possible, as the one tube assay minimises the risk of cross-contamination as no transfer of content have to be made and it is regarded to be as sensitive as the two-step method.
Subkultivering ska göras dag 13–15.
The primers and assay described in this point, namely the ILA1 or ILA2 primer pair that target segment 8 and which have been found suitable for detection of ISAV in outbreaks and in carrier fish, shall be used.
Cellkulturernas supernatant ska tillsättas brunnar med färska aktivt växande celler i lämplig spädning (1:10) i mikrotiterplattor och inkuberas vid 14 ± 2 °C i upp till 18 dagar.
The ILA2 reverse primer does not match isolates from North America and an alternative primer set shall be used in those cases.
Cellkulturerna ska undersökas med mikroskop avseende CPE dag 5–7 och 14–18 efter inokulering.
Forward primer (ILA1): 5′-GGCTATCTACCATGAACGAATC-3′;
Om ingen CPE iakttas senast dag 14–18 ska ett hemadsorptionstest eller en RT-PCR utföras.
Reverse primer (ILA2): 5′-GCCAAGTGTAAGTAGCACTCC-3′.
Om cytotoxicitet förekommer under inkuberingens 7 första dagar ska subkultivering göras i detta skede och cellerna ska inkuberas i 14–18 dagar och därefter återigen subkultiveras med ytterligare 14–18 dagars inkubering.
Cycling conditions: one cycle of 50 °C for 30 minutes, 1 cycle of 94 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 30 seconds, 55 °C for 30 seconds, 72 °C for 60 seconds; one cycle of 72 °C for 5 min.
Om cytotoxicitet förekommer efter 7 dagar ska cellerna subkultiveras en gång och inkuberas så att de inkuberas i totalt 28–36 dagar från primärinokuleringen.
Product size 155 bp.
Om bakteriell kontaminering förekommer i primärkulturen ska testet genomföras på nytt med det vävnadshomogenat som förvarats vid – 80 °C.
However, other RT-PCR versions of proven similar efficacy may be used instead.
Före inokulering ska vävnadshomogenatet centrifugeras vid 4000 × g vid 0–6 °C i 15–30 minuter och supernatanten ska filtreras genom 0,22 μm.
RT-qPCR for ISAV detection
Om bakteriell kontaminering förekommer vid subkultiveringen ska supernatanten filtreras genom 0,22 μm, inokuleras i färska celler och inkuberas i ytterligare 14–18 dagar.
The use of RT-qPCR may increase specificity and probably also sensitivity.
Tester för identifiering av virus
The method can be performed more rapidly as no gel electrophoresis step is required and it reduces the risk of cross contamination as it is possible to estimate the amount of viral genomic RNA within the sample tube.
Om tecken på CPE iakttas i något skede eller om ett hemadsorptionstest är positivt ska identifiering av virus genomföras.
A drawback of the RT-qPCR assay is that it is often not possible to sequence amplified products.
Den rekommenderade metoden för identifiering av ISA-virus ska vara RT-PCR enligt punkt II.1 eller immunofluorescens (IF) enligt punkt II.2.6.
However, if there is doubt on the specificity of the amplified product, another ISAV specific assay must be run to verify the result.
Om det bedöms att andra virus kan förekomma ska kompletterande tester för identifiering av virus genomföras.
The assay described in this point, which is an assay that target segment 8, shall be used.
Om dessa tester inte leder till en säker identifiering av viruset inom en vecka ska supernatanten skickas för omedelbar identifiering till
This assay shall cover isolates from the European Union, the European Free Trade Association and North America.
OIE:s (Världsorganisationen för djurhälsa) referenslaboratorium för ILA/ISA, eller
The one-step method shall be used where possible, because the one tube assay minimises the risk of cross-contamination.
ett nationellt referenslaboratorium eller EU:s referenslaboratorium för fisksjukdomar som avses i bilaga VI till direktiv 2006/88/EG.
Forward primer: 5′- CTACACAGCAGGATGCAGATGT -3′;
Hemadsorptionstest
Reverse primer: 5′- CAGGATGCCGGAAGTCGAT -3′;
Eftersom replikation av ISA-virus i cellkulturer inte alltid resulterar i CPE ska varje brunn genomgå en RT-PCR, ett hemadsorptionstest enligt denna punkt eller ett IF-test enligt punkt II.2.6.
and probe: 5′-FAM- CATCGTCGCTGCAGTTC – MGBNFQ-3′.
Cellodlingsmediet ska avlägsnas från varje brunn, även från brunnarna för de positiva och negativa kontrollerna, och placeras i märkta sterila rör.
Cycling conditions: one cycle of 50 °C for 30 minutes, one cycle of 95 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 15 seconds, 60 °C for 60 seconds; it shall be adjusted if necessary.
500 μl av en 0,2 % (v/v) suspension av tvättade röda blodkroppar från kanin eller häst eller en 0,05 % (v/v) suspension av tvättade röda blodkroppar från regnbåge eller atlantlax ska tillsättas varje brunn och inkuberas i rumstemperatur i 45 minuter.
Sequencing of amplified PCR products
De röda blodkropparna ska avlägsnas och varje brunn ska tvättas två gånger med L-15-medium.
Forward primer (ILAs6-3F): 5′-ATGAGGGAGGTAGCATTGCA -3′;
Varje brunn ska undersökas med mikroskop.
Reverse primer (ILAs6-2R): 5′-CATGCTTTCCAACCTGCTAGGA -3′.
Förekomsten av kluster med röda blodkroppar som är fästa vid ASK-cellernas yta visar på trolig infektion orsakad av ortomyxovirus.
Cycling conditions (One-step RT-PCR): one cycle of 50 °C for 30 minutes, one cycle of 94 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 30 seconds, 55 °C for 30 seconds, 72 °C for 60 seconds, one cycle of 72 °C for 5 minutes; it shall be adjusted if necessary.
Om ett hemadsorptionstest är positivt ska ett test för identifiering av virus enligt punkt II.2.4 genomföras omedelbart.
Alternatively, the following method for sequencing HPR in segment 6 may be used:
Immunofluorescens (IF)
Forward primer: 5′-GAC-CAG-ACA-AGC-TTA-GGT-AAC-ACA-GA-3′;
ASK-celler (passage 65 eller lägre) ska odlas i L-15-medium med 10 % fetalt bovinserum, 2 % (v/v) 200 mM L-glutamin och 0,08 % (v/v) 50 mM 2-merkaptoetanol i mikrotiterplattor och användas vid konfluens över 50 %.
Reverse primer: 5′-GAT-GGT-GGA-ATT-CTA-CCT-CTA-GAC-TTG-TA-3′;
Även andra cellinjer eller odlingsmedier med dokumenterad effektivitet får användas.
Product size: 304 nt if HPR0.
225 μl supernatant från odling som är smittad med det förmodade viruset ska tillsättas två brunnar, blandas och därefter ska 225 μl överföras till två ytterligare brunnar, dvs. en spädning på 1:5.
RT-PCR assays with similar sensitivities and specificities to the assays described in this point may also be used.
Två ytterligare brunnar ska används som kontroller och lämnas oinokulerade.
The purity of the amplified RT-PCR product shall be checked by gel electrophoresis before sequencing.
Prover från varje plats på fiskodlingsanläggningen ska hanteras på separata plattor, liksom viruskontrollen.
If only one pure fragment appears, it shall be purified directly from the PCR reaction.
Som viruskontroll ska ett referensisolat av ISA-virus användas.
If multiple amplified fragments are present, the fragment of interest shall be purified by gel electrophoresis.
Plattorna ska inkuberas vid 14 ± 2 °C och undersökas med mikroskop i upp till 7 dagar.
The purification of PCR fragments from solutions or agarose gels shall be made using PCR fragment affinity spin columns, according to the manufacturer's instructions.
När en tidig CPE iakttas, eller om ingen CPE iakttas inom 7 dagar, ska plattorna fixeras.
Sequencing shall be performed using amplification primers at external specialised sequencing companies.
Brunnarna ska tvättas med PBS och fixeras genom inkubering med 80 % aceton vid rumstemperatur i 20 minuter.
The results shall be analysed with the search tool BLAST and the sequences shall be compared with other known sequences in the US National Centre for Biotechnical Information (NCBI) nucleotide database.
Plattorna ska lufttorkas och färgas omedelbart eller förvaras vid 0–6 °C i högst 24 timmar före färgning.
Sequencing must eliminate any doubt on the specificity of an amplified RT-PCR product.
Replikatbrunnar ska färgas med en blandning av de monoklonala antikropparna (MAb) 3H6F8 och 1OC9F5 mot ISA-virus, eller med andra MAb med dokumenterad effektivitet och specificitet, utspädda i PBS och inkuberas vid 37 ± 4 °C i 30 minuter.
ISAV isolation on cell cultures
MAb ska avlägsnas och plattorna ska tvättas tre gånger med PBS med 0,05 % Tween 20.
Preparation of samples
FITC-konjugerade antikroppar mot mus IgG utspädda i PBS ska tillsättas varje brunn och inkuberas vid 37 ± 4 °C i 30 minuter.
The tissue may be kept at – 80 °C.
Varje laboratorium ska optimera spädningen av olika batcher av MAb och FITC-konjugat.
The tissue shall only be frozen and thawed once before examination.
Antikropparna ska avlägsnas och plattorna ska tvättas tre gånger med PBS med 0,05 % Tween 20.
For surveillance and control purposes, the examination shall be undertaken as fast as possible.
Brunnarna ska omedelbart undersökas med ett inverterat fluorescensmikroskop med lämpligt filter för excitation av FITC.
Each sample (tissue pool in transport solution) shall be completely homogenised using a validated homogeniser, centrifuged at 2000 to 4000 × g for 15 minutes at 0 to 6 °C, and the supernatant shall be filtered (0,45 μm) and incubated with an equal volume of a suitably diluted pool of antisera to the indigenous serotypes of IPNV.
Ett test ska anses positivt om fluorescerande celler kan iakttas.
The titre of the antiserum must be at least 1:2000 in a 50 % plaque neutralisation test.
För att ett test ska vara giltigt ska de positiva kontrollerna ge positiva resultat och de negativa kontrollerna ge negativa resultat.
The mixture shall be incubated for one hour at 15 °C.
3 Undersökning av andra vävnader
This shall represent the inoculum.
Den metod som avses i punkt II.2.6 får användas på andra fiskvävnader, t.ex. lever, mjälte och hjärta, förutsatt att en rimlig mängd endotelceller, leukocyter eller lymfocyter kan placeras på objektglaset.
Treatment of all inocula with antiserum to Infectious pancreatic necrosis virus (a virus which in some parts of the Europe occurs in 50 % of fish samples) aims at preventing cytopatic effect (CPE) due to IPN virus from developing in inoculated cell cultures.
Färgningsförfarandet ska vara detsamma för varje vävnad, även om det för vissa vävnader kan vara lämpligare att utelämna färgningen med propidiumjodid och i stället använda faskontrastbelysning för att identifiera de celltyper som förekommer i imprintet.
To reduce the duration of the virological examinations as well as the number of cases in which occurrence of CPE would have to be considered potentially indicative of ISAV, such treatment may be carried out.
4 Histologi
Antiserum-treated organ suspension shall be inoculated into young actively growing cell cultures to give a final dilution of tissue material to culture medium of 1:1000.
Lindrig multifokal till utbredd interstitiell blödning med tubulär nekros i de blödande områden samt ackumulering av erytrocyter i glomeruli i njuren.
For each organ, suspension 40 μl of inoculum shall be added to one well containing 2 ml of culture medium.
Erytrofagocytos i mjälten och sekundära blödningar i lever och njure.
To minimise the risk of cross-contamination, separate 12- or 24-well plates shall be used for samples from different fish farm sites.
5 Immunhistokemi (IHK)
One plate shall be left uninoculated to serve as a negative control.
Polyklonala antikroppar mot ISA-virusets nukleoprotein ska användas på paraffinpreparat av formalinfixerad vävnad.
A separate plate shall be inoculated with a reference isolate of ISAV as a positive control, as follows.
De organ som ska undersökas ska vara njurens mellersta del, hjärta (övergångsområden inklusive alla tre kamrarna och klaffar).
One hundred μl of a stock preparation of ISAV (minimum titre 107 Tissue culture infective dose at the 50 % end point (TCID50 ml– 1)) shall be inoculated into the first well and mixed.
Misstänkta fall baserade på patologiska tecken ska bekräftas med en positiv IHK.
A volume of this material shall be transferred from the first well to the second well to make a 1:10 dilution and mixed.
Histologiska preparat ska beredas i enlighet med standardmetoder.
This shall be repeated across the plate to make six 10-fold dilutions.
Beredning av vävnadspreparat
Stock ISAV may be stored at – 80 °C for at least 2 years but once thawed must be used within 3 days.
Vävnaderna ska fixeras i neutral fosfatbuffrad 10 % formalinlösning i minst 1 dag och dehydreras med etanol i stigande koncentration, därefter ska etanolen avlägsnas i xylen och vävnaderna ska inbäddas i paraffin enligt standardprotokoll.
Care shall be taken to prevent cross-contamination of test plates with positive control material.
Cirka 5 μm tunna preparat (för IHK placerade på poly-L-lysinbelagda objektglas) ska upphettas vid 56–58 °C (högst 60 °C) i 20 minuter och paraffinet ska avlägsnas med xylen, därefter rehydreras preparaten med etanol i sjunkande koncentration och färgas med hematoxylin och eosin för patomorfologi och IHK i enlighet med punkt 2.
To avoid that risk, positive controls shall be set up and handled separately from test plates.
Färgningsförfarande för IHK
A sensitivity test every 6 months of ASK cells towards ISAV isolates may replace the use of including a positive control at each inoculation.
Alla inkuberingar ska utföras vid rumstemperatur på vippbord, såvida inte annat föreskrivs i detta beslut.
Samples shall be incubated at 15 ± 2 °C for up to 15 days.
Antigen retrieval ska utföras genom att preparaten kokas i 0,1 M citratbuffert (pH 6,0) i 2 × 6 minuter, följt av blockering med 5 % fettfri torrmjölk och 2 % getserum i 50 mM TBS (Tris Buffered Saline: 50 mM Tris/HCl, 150 mM NaCl, pH 7,6) i 20 minuter.
Using a microscope, cell cultures shall be examined for CPE twice, between 5 to 7 and 12 to 14 days following inoculation.
Preparaten ska sedan inkuberas över natten med primära antikroppar (monoklonala kanin-antikroppar mot ISA-virusets nukleoprotein) utspädda i TBS med 1 % fettfri torrmjölk, följt av tre tvättar med TBS med 0,1 % Tween 20.
If any pool shows CPE, virus identification procedures shall be initiated immediately in accordance with point II.2.4.
För påvisande av bundna antikroppar ska preparaten inkuberas med alkaliska fosfatas-konjugerade antikroppar mot kanin IgG i 60 minuter.
If no CPE is observed by day 14, an Indirect fluorescent antibody test (IFAT), haemadsorption or RT-PCR shall be performed.
Efter en slutlig tvätt ska Fast Red (1 mg/ml) och naftol-AS-MX fosfat (0,2 mg/ml) med 1 mM levamisol i 0,1 M TBS (pH 8,2) tillsättas för infärgning i 20 minuter.
Subcultivation shall be carried out between days 13 to 15.
Preparaten ska därefter tvättas i kranvatten före motfärgning med Harris hematoxylin och monteras med vattenbaserat monteringsmedel.
Culture supernatant shall be added to wells containing fresh actively growing cells in appropriate dilution (1/10) in multi-well plates and incubated at 14 ± 2 °C for up to 18 days.
Vävnadspreparat som är positiva och negativa för ISA-virus ska ingå som kontroller i varje provomgång.
Using a microscope, cell cultures shall be examined for CPE twice, between days five to seven and days 14 to 18 following inoculation.
Tolkning av resultatet av IHK
If no CPE is observed by days 14 to 18, a haemadsorption or an RT-PCR test shall be performed.
Resultatet av IHK-testet ska tolkas enligt de följande leden a och b:
If cytotoxicity occurs within the first 7 days of incubation, subcultivation shall be performed at that stage, and the cells shall be incubated for 14 to 18 days and sub cultivated again with a further period of 14 to 18 days incubation.
Kontrollpreparat ska anses vara positiva när det konstateras att i kontrollpreparaten har blodkärlens endotelceller i endokardium en klart synlig röd/rödaktig cytoplasmatisk och intranukleär infärgning.
If cytotoxicity occurs after 7 days, subcultivation shall be performed once and the cells shall be incubated to achieve the total period of 28 to 36 days incubation from the primary inoculation.
Ett provpreparat ska endast anses som positivt om endotelcellerna har en sådan tydlig intranukleär röd infärgning.
If bacterial contamination occurs in the primary culture, the test shall be set up again using the tissue homogenate stored at – 80 °C.
Kontrollpreparaten ska anses vara negativa om de inte har någon betydande infärgning.
Prior to inoculation, the tissue homogenate shall be centrifuged at 4000 × g for 15 to 30 minutes at 0 to 6 °C and the supernatant shall be filtered at 0,22 μm.
Eftersom den intranukleära placeringen av ortomyxovirusets nukleoprotein är specifik för ett visst skede av virusreplikationen och den samtidiga cytoplasmatiska infärgningen oftast är dominerande, ska cytoplasmatisk infärgning och andra infärgningsmönster som inte är intranukleära anses vara icke-specifika eller ofullständiga.
If bacterial contamination occurs during the subcultivation step the supernatant shall be filtered at 0,22 μm, inoculated onto fresh cells and incubated for a further 14 to 18 days.
De starkaste positiva infärgningarna observeras oftast i endotelceller från hjärta och njure.
Virus identification tests
Infärgningen av endotelceller med mycket omfattande hemorragiska lesioner kan vara liten eller obefintlig, eventuellt på grund av att smittade endotelceller har lyserat.
If evidence of CPE is observed at any stage, or if a haemadsorption test is positive, virus identification shall be carried out.
DETALJERADE DIAGNOSTISKA METODER OCH FÖRFARANDEN FÖR ÖVERVAKNING OCH BEKRÄFTELSE AV FÖREKOMST AV INFEKTION ORSAKAD AV MARTEILIA REFRINGENS
The methods of choice for the identification of ISAV shall be RT-PCR in accordance with point II.1 and Immunofluorescence (IF) in accordance with point II.2.6.
I. Detaljerade diagnostiska metoder och förfaranden för diagnos av infektion orsakad av Marteilia refringens
If it is considered that other viruses may be present, supplementary virus identification tests shall be carried out.
När provtagning och laboratorieanalys för att erhålla eller få behålla en hälsostatus med avseende på infektion orsakad av Marteilia refringens i enlighet med del 4 avsnitt I i bilaga I eller för att bekräfta eller utesluta förekomst av den förtecknade sjukdomen i enlighet med artikel 57 b i direktiv 2006/88/EG med de diagnostiska metoderna i del 4 avsnitt II i bilaga I, ska de detaljerade diagnostiska metoderna och förfarandena i punkterna I.1, I.2 och I.3 tillämpas.
If those tests have not resulted in a definitive identification of the virus within 1 week, the supernatant shall be forwarded for immediate identification to:
Provtagning av enskilda blötdjur med öppna skal eller nydöda blötdjur ska prioriteras för att förbättra chanserna att hitta smittade djur.
the World Organisation for Animal Health (OIE) reference laboratory for ISA, or;
Provtagna ostron eller musslor ska förvaras vid 4 °C eller på kyld is i högst 24 timmar om proverna innehåller blötdjur med öppna skal och i högst 72 timmar om de inte innehåller sådana; de ska förvaras i en plastpåse med en etikett med uppgifter om ostronens eller musslornas typ och ursprung.
a national reference laboratory or the EU reference laboratory for fish diseases as referred to in Annex VI to Directive 2006/88/EC.
Blötdjur med öppna skal eller nydöda blötdjur ska förvaras separat från andra blötdjur.
Haemadsorption
Ett 3–5 mm tunt vävnadspreparat, inklusive gälar och hjärtvävnad, ska användas för diagnos av Marteilia refringens genom histologi.
As replication of ISAV in cell cultures does not always result in a CPE, every well shall be subject to an RT-PCR test or a haemadsorption test in accordance with this point, or an IF test in accordance with point II.2.6.
En bit av digestionskörteln ska användas för vissa tester, bl.a. imprint och PCR.
Cell culture medium shall be removed from each well, including those of positive and negative controls, and placed in labelled sterile tubes.
Efter det att digestionskörtelvävnader torkats med absorberande papper ska flera imprint göras på ett objektglas.
500 μl of a 0,2 % (vol:vol) suspension of washed rabbit or horse red blood cells, or a 0,05 % (vol:vol) suspension of washed rainbow trout or Atlantic salmon red blood cells, shall be added to each well and incubated at room temperature for 45 minutes.
Objektglasen ska lufttorkas, fixeras i metanol eller absolut etanol och färgas med ett kommersiellt tillgängligt kit för infärgning av blod (t.ex.
The red blood cells shall be removed and each well shall be washed twice with L-15 medium.
Diff-Quick® eller Hemacolor®) enligt tillverkarens anvisningar.
Each well shall be examined using a microscope.
Efter sköljning med kranvatten och torkning ska objektglasen monteras med täckglas och med ett lämpligt syntetiskt monteringsmedel.
The presence of clusters of red blood cells attaching to the surface of ASK cells shall be indicative of presumptive infection with an orthomyxovirus.
Objektglasen ska först undersökas vid 200 × förstoring och därefter med immersionsolja vid 1000 × förstoring.
If a haemadsorption test is positive, a virus identification test shall be performed immediately in accordance with point II.2.4.
Ett positivt resultat ska vara observation av celler i storlekar upp till 30–40 μm.
Immunofluorescence (IF)
Cytoplasman färgas basofilt, medan cellkärnan färgas eosinofilt.
ASK (pass 65 or lower) shall be grown in a L-15 medium containing 10 % foetal bovine serum, 2 % (vol:vol) 200 mM L-glutamine, and 0,08 % (vol:vol) 50 mM 2-mercaptoethanol in multi-well plates and used at greater than 50 % confluence.
Ljusa halor runt stora, starkt färgade (refraktila) granula och i större celler kan primär-, sekundär- och tertiärstadier observeras.
Other cell lines or growth medium of proven efficacy may also be used.
Metoden är inte artspecifik för parasiter.
225 μl of putative virus-infected culture supernatant shall be added to each of two wells, mixed and 225 μl transferred to two further wells, namely a 1:5 dilution.
Vävnadspreparat som omfattar gälar, digestionskörtel, mantel och gonad ska fixeras i minst 24 timmar i Davidsons fixeringsmedel, följt av normal bearbetning för histologi med paraffininbäddning och färgning, t.ex. med hematoxylin och eosin.
Two additional wells shall be left uninoculated to act as controls.
Undersökningar ska göras i allt större förstoring upp till 1000 ×.
Samples from each fish farm site shall be handled on separate plates, as shall the virus control.
Ett positivt resultat ska vara observation av celler i storlekarna 4–40 μm.
A virus control shall be established using a reference isolate of ISAV.
De tidiga stadierna består av multinukleära celler som är sfäriska till avlånga.