natgillin/translations-raw huggingface dataset:
If evidence of CPE has been observed in a cell culture, medium (supernatant) shall be collected and examined by one or more of the following techniques: Enzyme-linked immunosorbent essay (ELISA), Immunofluorescence (IF), neutralisation, RT-PCR or RT-qPCR.
Följande cykler ska användas (ettstegs-RT-PCR): 50 °C i 30 minuter, 95 °C i 15 minuter, 35 cykler vid 94 °C i 30 sekunder, 55 °C i 30 sekunder och 68 °C i 60 sekunder.
If these tests have not allowed definitive identification of the virus within 1 week, the supernatant shall be forwarded to the national reference laboratory or to the EU reference laboratory for fish diseases referred to in Annex VI to Directive 2006/88/EC for immediate identification.
Reaktionen ska därefter hållas vid 68 °C i 7 minuter.
A double antibody sandwich ELISA shall be performed in order to identify the virus isolate.
RT-PCR-reaktionernas kvantitet och specificitet ska utvärderas med elektrofores i 1,5 % agarosgel med etidiumbromid och observeras med UV-genomlysning.
Microwell plates shall be coated with 50 μl/well (0,9 pg) of proven quality protein-A purified immunoglobulins(Ig) from rabbit antisera against IHNV or VSHV diluted in carbonate buffer (pH 9,6) containing 15 mM sodium azide and incubated from 18 hours to 2 weeks at 4 °C.
Ett PCR-amplikon på 693 baspar kan iakttas för IHN-virus.
On a dilution plate, each sample containing 1 % Triton X-100 and the positive controls shall be diluted with buffer solution (namely, phosphate buffered saline (PBS)-T-BSA, 1 % BSA) in a 4-fold dilution: undiluted, 1:4, 1:16, 1:64.
För VHS-virus ska storleken vara 505 baspar.
ELISA plates shall then be incubated for 30 minutes at 37 °C.
Falskt positiva resultat kan dessutom uppkomma på grund av felaktig hybridisering av primrar eller kontaminering i laboratoriet.
Subsequently plates shall be washed and incubated for 30 minutes at 37 °C with specific monoclonal antibodies (namely for VHSV identification MAb IP5B11 and for IHNV Hyb 136-3, respectively).
Lämpliga positiva och negativa kontroller samt sekvenserade amplikon ska därför användas för att undvika eventuella oklarheter.
50 μl of horseradish-peroxidase (HRP) conjugated rabbit anti mouse antibodies diluted 1:1000 in PBS-T-BSA shall be transferred to the ELISA plate.
När det gäller primrar för VHS-virus ska man vara särskilt försiktig vid användning av BF-2-celler, eftersom primrarna kan reagera med cellinjens DNA/RNA och ge falskt positiva resultat av liknande storlek.
Finally, after renewed washing the reactions shall be developed adding 50 μl/well of ortho-phenylenediamine (OPD).
När supernatanten från BF-2-celler testas ska alla amplifierade PCR-fragment sekvenseras.
The ELISA plates shall be incubated for 20 minutes at room temperature in the dark and the reaction shall be stopped by adding 100 μl/well 0,5 M H2SO4.
När det gäller VHS-virus ska amplifieringen utföras med följande primrar och prob:
The absorbance shall be monitored at a wavelength of 492 and 620 nm in an ELISA reader.
Framåtriktad primer: 5′-AAA-CTC-GCA-GGA-TGT-GTG-CGT-CC-3′.
Samples shall be designated positive or negative after comparing the test results to the absorbance values for the positive and negative controls.
Bakåtriktad primer: 5′-TCT-GCG-ATC-TCA-GTC-AGG-ATG-AA-3′.
In general, samples with combined absorbance (A) < 0,5 for undiluted material shall be considered negative, samples with A values between 0,5 and 1,0 shall be considered suspicious and samples with A values > 1,0 shall be considered positive.
Prob: 5′-FAM-TAG-AGG-GCC-TTG-GTG-ATC-TTC-TG-BHQ1.
Other ELISA versions with a proven similar efficacy may be used instead of those referred to in this point.
Ettstegs-RT-qPCR:
Immunofluorescence- IF
Negativa reagenskontroller utan templat och positiva reagenskontroller ska ingå i varje PCR-körning.
The identification of listed pathogens VHSV and IHNV shall be performed by infecting cells in ‘Black’ 96-well plates, conventional 24-well plates or cover slips into 24-well plates.
Cykelförhållanden: 50 °C i 30 minuter, 95 °C i 15 minuter, 40 cykler vid 94 °C i 15 sekunder, 60 °C i 40 sekunder och 72 °C i 20 sekunder (justera vid behov).
When IHNV or VHSV or both are identified by infecting cells on cover slips, the following protocol shall apply:
Även andra varianter av RT-PCR eller RT-qPCR med liknande dokumenterad effektivitet får användas.
cover slips shall be seeded with cells at a density leading to between 60 % and 90 % confluence after 24 hours of cultivation.
När det gäller IHN-virus ska amplifieringen utföras med följande primrar och prob:
EPC cells shall be used where possible for this purpose because of their strong adherence to glass surfaces, but other cell lines such as BF-2, RTG-2 or FHM may be used as well.
Framåtriktad primer: 5′-AGA-GCC-AAG-GCA-CTG-TGC-G-3′.
subsequently, cell culture medium shall be removed, and the infected cell monolayers fixed with 0,5 ml ice-cold, aqueous acetone solution (80 % vol:vol).
Prob: 5′-6FAM-TGAGACTGAGCGGGACA-NFQ/MGB.
Fixation shall take place in fume hood for 15 minutes at room temperature, then the acetone solution shall be removed and the cover glasses shall be air dried for at least 30 minutes.
Tvåstegs-RT-qPCR:
At this stage, the plates shall either be processed immediately or stored at – 20 °C for further use;
Eftersom följande test bygger på en tvåstegsamplifiering ska man vara extra försiktig vid hanteringen av rören mellan det första och andra steget för att förhindra kontaminering.
specific monoclonal antibodies (namely for VHSV identification, MAb IP5B11 and for IHNV, Hyb 136-3 respectively) shall be diluted in 0,01 M PBST, pH 7,2 in the dilution recommended by the provider of the MAbs; 50 to 100 μl/well shall be added to the fixed monolayer and plates shall be incubated for one hour at 37 °C in a humid chamber;
Cykelförhållanden (efter RT-steget): 50 °C i 2 minuter, 95 °C i 10 minuter, följt av 40 cykler vid 95 °C i 15 sekunder och 60 °C i 1 minut (justera vid behov).
cover glasses shall be washed gently three times with PBS containing 0,05 % Tween-20 (PBS-T), and the buffer shall be removed completely after the last rinse.
Detaljerade diagnostiska metoder och förfaranden för att utesluta misstanke om eller bekräfta förekomst av VHS eller IHN, eller båda, vid misstänkta sjukdomsutbrott
The cells shall subsequently be incubated for one hour at 37 °C with fluorescein isothiocyanate (FITC) — or tetramethylrhodamine-5-(and-6-) isothiocyanate (TRITC)-conjugated antibodies against mouse immunoglobulin used as the primary antibody, diluted according to the supplier instructions, washed again in PBS-T, and dried.
När det i enlighet med artikel 57 b i direktiv 2006/88/EG krävs en laboratorieanalys för att bekräfta eller utesluta förekomst av VHS eller IHN, eller båda, med de diagnostiska metoderna i del 1 punkt II.3 i bilaga I ska följande detaljerade diagnostiska metoder och förfaranden tillämpas:
Stained cultures shall be mounted onto glass slides using glycerol saline and examined under incident ultraviolet (UV) light.
Konventionell virusisolering med efterföljande serumneutralisationstest, immunokemisk eller molekylär identifiering av virus.
Use 10 × or 12 × eyepieces and a × 25 or × 40 objective lens with numerical apertures > 0,7 and > 1,3 respectively.
Påvisande av virus med RT-PCR eller RT-qPCR.
Other IF techniques, with regard to cell cultures, fixation and antibodies of reference quality, of proven similar efficacy may be used instead.
Andra diagnostiska metoder, t.ex.
Neutralisation
IFAT, ELISA, RT-PCR eller IHK.
serum containing group specific antibody against VHSV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
Minst tio fiskar med typiska tecken på VHS eller IHN ska väljas ut för undersökning.
serum containing group specific antibody against IHNV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
Beredningen och transporten för konventionell virusisolering ska följa metoderna och förfarandena i punkt I.2.
pool of antisera against the indigenous serotypes of IPNV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
Insamlingen av kompletterande material för konventionell virusisolering ska följa metoderna och förfarandena i punkt I.3.
medium alone (positive control).
Provberedning för undersökning med cellkultur
From each virus supernatant-serum mixture, at least two cell cultures shall be inoculated with 50 μl each and then incubated at 15 °C.
Provberedningen för undersökning med cellkultur för konventionell virusisolering ska följa metoderna och förfarandena i punkt I.4.
The development of CPE shall be checked as described in point I.5.4.
Den virologiska undersökningen för konventionell virusisolering ska följa metoderna och förfarandena i punkt I.5.
VHSV strains and isolates that do not react in neutralisation tests shall be identified by IF or ELISA.
Identifieringen av virus för konventionell virusisolering ska följa metoderna och förfarandena i punkt I.6.
Other neutralisation tests of proven similar efficacy may be used instead.
2 Påvisande av virus med RT-qPCR
RT-PCR/RT-qPCR
Urvalet av prover för påvisande av virus med RT-qPCR ska följa metoderna och förfarandena i punkt I.1.2.
Preparation of viral RNA
Beredningen och transporten för påvisande av virus med RT-qPCR ska följa metoderna och förfarandena i punkt I.2.
RNA shall be extracted using the phenol-chloroform method or by RNA affinity spin columns, according to the manufacturer's instructions.
Provberedning för RT-qPCR
Commercially available RNA extraction kits that will produce high quality RNA suitable for use with the RT-PCR protocols detailed in the points below may be used.
Provberedningen för påvisande av virus med RT-qPCR ska följa metoderna och förfarandena i punkt I.6.4.1.
RNA shall be re-suspended in distilled RNAse-free water, (namely water treated with 0,1 % diethyl pyrocarbonate) or an appropriate elution buffer.
Påvisandet av virus med RT-qPCR ska följa metoderna och förfarandena i punkterna I.6.4.1, I.6.4.3 och I.6.4.4.
The following primers shall be used for detection of IHNV:
3 Andra diagnostiska metoder
Forward Primer 5′-AGA-GAT-CCC-TAC-ACC-AGA-GAC-3′;
Supernatant som beretts enligt punkt I.4.3 får analyseras med ELISA, indirekt fluorescerande antikroppstest (IFAT) eller RT-PCR i enlighet med punkt I.6.1, I.6.2 respektive I.6.4.
Reverse Primer 5′-GGT-GGT-GTT-GTT-TCC-GTG-CAA-3′.
Vävnadsmaterial får undersökas med andra diagnostiska metoder, t.ex.
The following cycles shall be used (one-step RT-PCR): 1 cycle: 50 °C for 30 minutes; 1 cycle: 95 °C for 2 minutes; 30 cycles: 95 °C for 30 seconds, 50 °C for 30 seconds, 72 °C for 60 seconds; 1 cycle: 72 °C for 7 minutes and soak at 4 °C.
IFAT för fryssnitt eller immunhistokemi för formalinfixerat vävnadsmaterial.
The following primers shall be used for detection of VHSV:
Dessa snabba metoder ska senast 48 timmar efter provtagningen kompletteras med en virologisk undersökning i enlighet med antingen punkt II a eller II b
VN For 5′-ATG-GAA-GGA-GGA-ATT-CGT-GAA-GCG-3′;
om resultatet är negativt, eller
VN Rev 5′-GCG-GTG-AAG-TGC-TGC-AGT-TCC-C-3′.
om resultatet är positivt med material som utgör första fallet av VHS eller IHN.
Subsequently, the reaction shall be held at 68 °C for 7 minutes.
När den titrering för att kontrollera cellkulturernas mottaglighet för infektion som avses i punkt I.5.3 utförs ska förfarandena i följande stycken följas:
Quantity and specificity of the RT-PCR reactions shall be evaluated by gel electrophoresis in 1,5 % agarose gel with ethidium bromide and observed using UV transillumination.
Minst två VHS-virusisolat och ett IHN-virusisolat ska användas.
A 693 bp PCR amplicon may be observed for IHNV.
Isolaten ska representera huvudgruppen av virus inom Europeiska unionen, dvs. ett patogent isolat från regnbåge i sötvatten och ett marint isolat som är patogent hos piggvar för VHS-virus och en EU-stam som är patogen hos regnbåge för IHN-virus.
For VHSV, the size shall be 505 bp.
Väldefinierade isolat från medlemsstaterna ska användas.
The results of the PCR may vary depending on the conditions under which it is performed, namely the thermal protocols might need optimisation, depending on the thermal cycler in use.
Batcher av virus i cellkulturer med lågt passagenummer ska odlas i cellodlingsflaskor på BF-2- eller RTG-2-celler för VHS-virus och på EPC- eller FHM-celler för IHN-virus.
Furthermore, false-positive results may occur because of false primer annealing or laboratory contamination.
Cellodlingsmedium med minst 10 % serum ska användas.
Adequate positive and negative controls and sequence amplicons shall therefore be included to avoid any doubts.
Vid inokulering ska en låg MOI (< 1) användas.
For the VHSV primers, special care shall be taken when using BF-2 cells, as the primers may react with the cell line DNA/RNA producing false-positive results of similar size.
Vid full CPE ska viruset skördas genom centrifugering av cellkulturens supernatant vid 2000 × g i 15 minuter, sterilfiltreras genom 0,45 μm membranfilter och fördelas i märkta kryorör.
RT-qPCR for VHSV
Minst var sjätte månad eller så snart man misstänker att en cellinjes mottaglighet har minskat ska varje virusisolat tinas upp och titreras.
For VHSV, amplification shall be performed using the following primers and probe:
Titreringsförfarandet ska beskrivas i detalj och utföras på samma sätt varje gång.
Forward primer: 5′-AAA-CTC-GCA-GGA-TGT-GTG-CGT-CC-3′;
Om titern för något av de tre virusisolaten har sjunkit med en faktor av minst 2 logaritmer jämfört med den ursprungliga titern, ska cellinjen inte längre användas för övervakningsändamål.
Reverse primer: 5′-TCT-GCG-ATC-TCA-GTC-AGG-ATG-AA-3′;
Om olika cellinjer förvaras på laboratoriet ska varje linje undersökas för sig.
and probe: 5′-FAM-TAG-AGG-GCC-TTG-GTG-ATC-TTC-TG-BHQ1.
Dokumentationen ska sparas i minst tio år.
One-step RT-qPCR:
DETALJERADE DIAGNOSTISKA METODER OCH FÖRFARANDEN FÖR ÖVERVAKNING OCH BEKRÄFTELSE AV FÖREKOMST AV KHV
Negative template controls and positive controls shall be included on each plate run.
I. Detaljerade diagnostiska metoder och förfaranden för att utesluta misstanke om eller bekräfta förekomst av KHV
Cycling conditions: 50 °C for 30 minutes, 95 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 15 seconds, 60 °C for 40 seconds, 72 °C for 20 seconds; adjust if necessary.
När det i enlighet med artikel 57 b i direktiv 2006/88/EG krävs en laboratorieanalys för att utesluta misstanke om eller bekräfta förekomst av KHV med de diagnostiska metoderna i del 2 avsnitt III i bilaga I ska de detaljerade diagnostiska metoderna och förfarandena i punkterna I.1–I.2 tillämpas.
Other RT-PCR or RT-qPCR versions of proven similar efficacy may be used instead.
1 Beredning av fiskprover
RT-qPCR for IHNV
För diagnostiska ändamål får fisk (skickad levande eller död och förpackad separat i förseglade aseptiska behållare) eller alternativt frysta organ eller organdelar bevarade i 80–100 % alkohol eller i transportmedium för virus (för bearbetning inom 48 timmar efter insamling) användas vid testning med konventionell PCR eller qPCR-baserade metoder.
For IHNV, amplification shall be performed using the following primers and probe:
För påvisande av KHV ska gäle och njure samlas in.
Forward primer: 5′- AGA-GCC-AAG-GCA-CTG-TGC-G-3′;
Dessutom får mjälte, encephalon och tarm ingå i ett ytterligare separat prov.
Reverse primer: 5′- TTCTTTGCGGCTTGGTTGA - 3′;
I akuta fall får vävnadsmaterial från upp till fem fiskar slås samman.
and probe: 5′ 6FAM-TGAGACTGAGCGGGACA-NFQ/MGB.
Vid misstanke om förekomst av KHV hos mycket värdefull fisk får dessutom icke-letal provtagning användas, t.ex. blodprover, svabbprover från gälar, biopsi från gälar och skrapprover från slemskikt.
Two-step RT-qPCR:
DNA-extraktion
As the following assay depends on a two-step amplification, extra care shall be taken when handling the tubes from one reaction to the other in order to prevent contamination.
DNA ska extraheras i enlighet med standardförfaranden.
Cycling conditions (after RT-step): 50 °C for 2 minutes, 95 °C for 10 minutes, followed by 40 cycles of 95 °C for 15 seconds and 60 °C for 1 minutes; adjustments shall be made if necessary.
Kommersiellt tillgängliga DNA-extraktionskit som ger högkvalitativt DNA som lämpar sig för användning med de protokoll för PCR som anges i punkt I.2 får användas.
Detailed diagnostic methods and procedures for the confirmation of or to rule out the suspicion of VHS or IHN or both in suspected outbreaks
I.2.1 qPCR för påvisande av KHV
When a laboratory examination is required to confirm or rule out the presence of IHN or VHS or both in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC using the diagnostic methods set out in point II.3 of Part 1 of Annex I, the following detailed diagnostic methods and procedures shall apply:
För påvisande av KHV med qPCR ska följande metod användas:
conventional virus isolation with subsequent seroneutralisation, immune-chemical or molecular virus identification;
Framåtriktad primer (KHV-86f): 5′-GACGCCGGAGACCTTGTG-3′.
virus detection by RT-PCR or RT-qPCR;
Bakåtriktad primer (KHV-163r): 5′-CGGGTTCTTATTTTTGTCCTTGTT-3′.
other diagnostic techniques such as IFAT, ELISA, RT-PCR, IHC.
Prob (KHV-109p): 5′-FAM-CTTCCTCTGCTCGGCGAGCACG-3′.
Conventional virus isolation with subsequent virus identification
Cykelförhållanden: 1 cykel vid 95 °C i 15 minuter, följt av 40 cykler vid 94 °C i 15 sekunder och 60 °C i 60 sekunder.
Selection of samples
Även andra varianter av qPCR med liknande dokumenterad effektivitet får användas.
At least 10 fish showing typical signs of IHN or VHS shall be selected for examination.
Den metod som beskrivs i denna punkt och som riktar in sig på genen för tymidinkinas (TK) hos KHV ska användas.
The preparation and shipment for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.2.
Även andra PCR-metoder som visat liknande sensitivitet och specificitet som den beskrivna metoden får användas.
The collection of supplementary material for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.3.
Framåtriktad primer (KHV-TKf): 5′-GGGTTACCTGTAC GAG-3′.
Preparation of samples for cell culture examination
Bakåtriktad primer (KHV-TKr): 5′-CACCCAGTAGATTA TGC-3′.
The preparation of samples for cell culture examination for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.4.
Cykelförhållanden: 1 cykel vid 95 °C i 5 minuter, följt av 35 cykler vid 95 °C i 30 sekunder, 52 °C i 30 sekunder och 72 °C i 1 minut samt 1 cykel vid 72 °C i 10 minuter.
The virological examination for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.5.
Produktstorleken bör vara 409 baspar.
The virus identification for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.6.
Falskt positiva resultat kan dessutom uppkomma på grund av felaktig hybridisering av primrar eller kontaminering.
Virus detection by RT-qPCR
Även andra varianter av PCR med liknande dokumenterad effektivitet får användas.
The selection of samples for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.1.2.
Det första påvisandet i ett område ska bekräftas genom sekvensering eller skickas för omedelbar identifiering till ett nationellt referenslaboratorium eller till EU:s referenslaboratorium för fisksjukdomar som avses i bilaga VI till direktiv 2006/88/EG.
The preparation and shipment for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.2.
Detaljerade diagnostiska metoder och förfaranden för övervakning av KHV
The collection of supplementary diagnostic material for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.3.
När provtagning och laboratorieanalys för att erhålla eller få behålla en viss hälsostatus med avseende på KHV i enlighet med del 2 avsnitt I i bilaga I genomförs med de diagnostiska metoderna i del 2 avsnitt II eller III i den bilagan, ska de detaljerade diagnostiska metoderna och förfarandena i de följande punkterna II.1 och II.2 tillämpas.
Sample preparation for RT-qPCR
Om möjligt ska fisk som har hållits under en längre period i temperaturer där viruset förökar sig (dvs. vid 15–26 °C i 2–3 veckor) provtas.
The sample preparation for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.6.4.1.
Prover ska om möjligt samlas in 24 timmar, men senast 72 timmar, efter hantering som kan reaktivera virus hos fisk med bärarstatus, t.ex. håvning eller transport, för att förbättra chanserna att påvisa KHV.
The virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in points I.6.4.1, I.6.4.3 and I.6.4.4.
För övervakning av KHV får fisk (skickad levande eller död och förpackad separat i förseglade aseptiska behållare) eller alternativt frysta organ eller organdelar bevarade i 80–100 % alkohol eller i transportmedium för virus (för bearbetning inom 48 timmar efter insamling) användas vid testning med PCR-baserade metoder.
Other diagnostic techniques
För övervakning av KHV ska gäle och njurvävnad samlas in.
Supernatant prepared as described in point I.4.3 may be submitted to ELISA, Indirect fluorescent antibody test (IFAT), or RT-PCR in accordance with point I.6.1, point I.6.2 or point I.6.4 respectively.
För övervakning av KHV ska sammanslagning av material om möjligt förhindras.
Tissue material may be subjected to other diagnostic techniques, such as IFAT on frozen sections, immunohistochemistry on formalin fixed tissue material.
Om det är nödvändigt att slå samman material får vävnadsmaterial från högst två fiskar slås samman.
Those rapid techniques shall be supplemented with a virological examination in accordance with either point II(a) or point II(b) within 48 hours after sampling, if:
Större prover ska homogeniseras med mortel och stöt eller med stomacher homogenisator och delprover ska tas för DNA-extraktion före klarifiering.
a negative result is obtained; or
Alternativt får delprover samlas in från varje vävnad som ingår i provet och läggas i lyseringsrör.
a positive result is obtained with material representing the first case of IHN or VHS.
Kommersiellt tillgängliga DNA-extraktionskit som ger högkvalitativt DNA som lämpar sig för användning med de protokoll för PCR som anges i punkt II.2 får användas.
Procedure for titration to verify the susceptibility of the cell cultures to infection
Det godtagbara förhållandet mellan vävnad och medium ska vara 1:9 (w/v).
Batches of virus in low cell culture passage numbers shall be propagated in cell culture flasks on BF-2 or RTG-2 cells for VHSV and on EPC or FHM cells for IHNV.
bekräftas med sekvensering av en PCR- eller nästad PCR-produkt från proverna;
Cell culture medium with at least 10 % serum shall be used.
den erhållna rena konsensus-sekvensen ska överensstämma med referenssekvenserna till minst 98 %,
Low MOI for inoculation (< 1) shall be used.
eller alternativt får prover skickas till ett nationellt referenslaboratorium för bekräftelse.
At total CPE, the virus shall be harvested by centrifugation of cell culture supernatant at 2000 × g for 15 minutes, filter sterilised through 0,45 μm membrane filter and distributed in labelled cryotubes.
qPCR för påvisande av KHV
The virus shall be kept at – 80 °C.
Följande qPCR-metod ska användas:
1 week after freezing, three replicate vials with each virus shall be thawed under cold water and titrated on their respective cell lines.
Cykelförhållanden: 1 cykel vid 95 °C i 15 minuter, följt av 50 cykler vid 94 °C i 15 sekunder och 60 °C i 60 sekunder.
At least every 6 months, or if it is suspected that the susceptibility of a cell line has decreased, each virus isolate shall be thawed and titrated.
Resultaten från qPCR kan variera beroende på under vilka förhållanden den genomförs, dvs. temperaturprotokollen kan behöva optimeras beroende på den termocykler som används.
Titration procedures must be described in detail and the same procedure followed each time.
Konventionell PCR för bekräftelse av påvisande av KHV