natgillin/translations-raw huggingface dataset:
While a lag phase can be minimised and practically eliminated in control cultures by proper propagation of the pre-culture, a lag phase in exposed cultures may indicate recovery after initial toxic stress or reduced exposure due to loss of test chemical (including sorption onto the algal biomass) after initial exposure.
Beräkna ett medelvärde av den producerade mängden biomassa för varje testkoncentration och kontrollgrupp tillsammans med variansskattningar.
Hence the section-by-section growth rate may be assessed in order to evaluate effects of the test chemical occurring during the exposure period.
Den procentuella minskningen av den producerade mängden biomassa (%Iy) beräknas för varje replikat med testlösning med hjälp av formeln
Substantial differences between the section-by-section growth rate and the average growth rate indicate deviation from constant exponential growth and that close examination of the growth curves is warranted.
är den procentuella minskningen av den producerade mängden biomassa,
Calculate the percent inhibition of growth rate for each treatment replicate from equation [2]:
är medelvärdet för den producerade mängden biomassa i kontrollgruppen, och
%I r
är den producerade mängden biomassa i replikatet med testlösning.
percent inhibition in average specific growth rate;
Plottning av dos-respons-kurvan
mean value for average specific growth rate (μ) in the control group;
Plotta den procentuella tillväxthämningen mot logaritmen för testkemikaliens koncentration och undersök plotten noggrant.
When solvents are used to prepare the test solutions, the solvent controls rather than the controls without solvents should be used in calculation of percent inhibition.
För att man ska få en preliminär uppfattning om förhållandet mellan koncentration och respons sammanbinds datapunkterna med en jämn linje, antingen på fri hand eller med hjälp av datorbaserad interpolation.
Yield is calculated as the biomass at the end of the test minus the starting biomass for each single vessel of controls and treatments.
Använd därefter en mer ingående metod, helst en datorbaserad statistisk sådan.
For each test concentration and control, calculate a mean value for yield along with variance estimates.
Det finns flera giltiga skäl för att inte använda en statistisk metod, bland annat följande:
The percent inhibition in yield ( %Iy) may be calculated for each treatment replicate as follows:
Det är inte troligt att man utifrån befintliga data får fram mer tillförlitliga resultat med hjälp av datorbaserade metoder än genom expertbedömningar.
%I y
I sådana situationer kan det t.o.m. hända att vissa datorprogram ger ett helt otillförlitligt resultat (iterationer kanske inte konvergerar osv.).
percent inhibition of yield;
Stimulerande tillväxtresponser kan inte hanteras på lämpligt sätt av programvaran (se nedan).
Plotting concentration response curve
Man kan använda viktad linjär regression efter att ha gjort en linjär transformation av responsdata, t.ex. till probit-, logit- eller Weibullvärden (8).
Plot the percentage of inhibition against the logarithm of the test chemical concentration and examine the plot closely, disregarding any such data point that was singled out as an outlier in the first phase.
Icke-linjära regressionsmetoder är dock att föredra, eftersom de är bättre anpassade för att hantera oundvikliga oregelbundenheter i data och avvikelser från jämna fördelningskurvor.
Fit a smooth line through the data points by eye or by computerised interpolation to get a first impression of the concentration-response relationship, and then proceed with a more detailed method, preferably a computerised statistical method.
I närheten av nollpunkten (ingen tillväxthämning) och fullständig tillväxthämning kan sådana oregelbundenheter bli felaktigt uppförstorade genom linjäriseringen och därigenom störa analysen (8).
Depending on the intended usage of data;
Observera att standardmetoder för analys med probit-, logit- eller Weibulltransformationer är avsedda för dikotoma data (dvs. tvåpunktsfördelade data, t.ex. dödlighet–överlevnad) och därför måste modifieras för att kunna användas för data om tillväxt eller producerad mängd biomassa.
the quality (precision) and amount of data as well as the availability of data analysis tools, it may be decided (and sometimes well justified) to stop the data analysis at this stage and simply read the key figures EC50 and EC10 (and/or EC20) from the eye fitted curve (see also section below on stimulatory effects).
Speciella metoder för bestämning av ECx-värden ur kontinuerliga data återfinns i (9), (10) och (11).
Valid reasons for not using a statistical method may include:
Tillämpningen av icke-linjär regressionsanalys beskrivs utförligare i tillägg 5.
Data are not appropriate for computerised methods to produce any more reliable results than can be obtained by expert judgement — in such situations some computer programs may even fail to produce a reliable solution (iterations may not converge etc.)
För varje analyserad responsvariabel används förhållandet mellan koncentration och respons för att göra punktskattningar av ECx-värden.
Stimulatory growth responses cannot be handled adequately using available computer programs (see below).
Om möjligt ska 95-procentiga konfidensgränser bestämmas för varje skattning.
Statistical procedures
Anpassningsgraden (’goodness of fit’) mellan responsdata och regressionsmodellen ska bestämmas antingen grafiskt eller statistiskt.
The aim is to obtain a quantitative concentration-response relationship by regression analysis.
Regressionsanalysen ska göras på responsvärden från enskilda replikat, inte på medelvärden från testgrupper.
It is possible to use a weighted linear regression after having performed a linearising transformation of the response data — for instance into probit or logit or Weibull units (8), but non-linear regression procedures are preferred techniques that better handle unavoidable data irregularities and deviations from smooth distributions.
Om det är svårt eller omöjligt att göra en icke-linjär kurvanpassning på grund av alltför stor spridning av data kan man i stället göra regressionen utifrån gruppmedelvärdena.
Approaching either zero or total inhibition, such irregularities may be magnified by the transformation, interfering with the analysis (8).
Detta är en praktisk metod för att minska påverkan från misstänkta avvikande värden.
It should be noted that standard methods of analysis using probit, logit, or Weibull transforms are intended for use on quantal (e.g. mortality or survival) data, and must be modified to accommodate growth or biomass data.
Om man använder sig av denna möjlighet ska det tas med i testrapporten som en avvikelse från det normala förförandet, och motiveras med att kurvanpassningar med enskilda replikat inte gav tillfredsställande resultat.
Specific procedures for determination of ECx values from continuous data can be found in (9) (10) and (11).
När tillgängliga regressionsmodeller eller regressionsmetoder inte lämpar sig för de aktuella dataserierna kan skattningar av EC50-värden och konfidensgränser också bestämmas genom linjär interpolation och bootstrapping (13).
The use of non-linear regression analysis is further detailed in Appendix 5.
Medelvärdet för varje koncentration jämförs sedan med medelvärdet för kontrollerna med hjälp av en lämplig metod för multipeljämförelse eller trendtest, t.ex.
For each response variable to be analysed, use the concentration-response relationship to calculate point estimates of ECx values.
Dunnetts eller Williams test (12) (14) (15) (16) och (17).
When possible, the 95 % confidence limits for each estimate should be determined.
Man måste avgöra om antagandet för ANOVA om varianshomogenitet är uppfyllt.
If, however nonlinear curve fitting is difficult or fails because of too great scatter in the data, the problem may be circumvented by performing the regression on group means as a practical way of reducing the influence of suspected outliers.
Mer information om bestämning av NOEC finns i (11).
Use of this option should be identified in the test report as a deviation from normal procedure because curve fits with individual replicates did not produce a good result.
Nya forskningsrön har lett till att man avråder från användning av NOEC-värden.
It is necessary to assess whether the ANOVA assumption of homogeneity of variance holds.
Tillväxtstimulering
This assessment may be performed graphically or by a formal test (17).
Ibland förekommer tillväxtstimulering (negativ hämning) vid låga koncentrationer.
Suitable tests are Levene's or Bartlett's.
Detta kan antingen bero på hormesis (’toxisk stimulering’) eller på att stimulerande tillväxtfaktorer överförts från testmaterialet till det minimalmedium som används.
Failure to meet the assumption of homogeneity of variances can sometimes be corrected by logarithmic transformation of the data.
Observera att tillsats av oorganiska näringsämnen inte bör ha någon direkt effekt, eftersom testmediet bör innehålla ett överskott av näringsämnen i förhållande till algernas behov under hela testperioden.
If heterogeneity of variance is extreme and cannot be corrected by transformation, analysis by methods such as step-down Jonkheere trend tests should be considered.
Vid beräkningen av EC50 kan man vanligen bortse från stimulering vid låga koncentrationer, såvida inte stimuleringen är extremt stor.
Additional guidance on determining the NOEC can be found in (11).
I det senare fallet – samt då man beräknar ECx för låga värden på x – kan det dock krävas särskilda åtgärder.
Recent scientific developments have led to a recommendation of abandoning the concept of NOEC and replacing it with regression based point estimates ECx.
Man ska så långt det är möjligt ta med stimulerande responser vid analysen av data, och om befintliga dataprogram för kurvanpassning inte kan hantera låggradig stimulering kan man i stället använda sig av linjär interpolation med bootstrapping.
An appropriate value for x has not been established for this algal test.
Om stimuleringen är extremt stor kan man överväga att använda en hormesis-modell (18).
A range of 10 to 20 % appears to be appropriate (depending on the response variable chosen), and preferably both the EC10 and EC20 should be reported.
Icke-toxisk tillväxthämning
Growth stimulation
Ljusabsorberande testmaterial kan påverka tillväxthastigheten negativt eftersom de minskar mängden tillgängligt ljus.
Growth stimulation (negative inhibition) at low concentrations is sometimes observed.
Sådana fysikaliska effekter måste kunna särskiljas från toxiska effekter genom att man ändrar testförhållandena, och fysikaliska effekter ska rapporteras separat.
This can result from either hormesis (“toxic stimulation”) or from addition of stimulating growth factors with the test material to the minimal medium used.
Riktlinjer återfinns i (2) och (3).
Note that the addition of inorganic nutrients should not have any direct effect because the test medium should maintain a surplus of nutrients throughout the test.
TESTRAPPORT
Low dose stimulation can usually be ignored in EC50 calculations unless it is extreme.
Testrapporten ska innehålla följande uppgifter:
However, if it is extreme, or an ECx value for low x is to be calculated, special procedures may be needed.
Testkemikalie:
Deletion of stimulatory responses from the data analysis should be avoided if possible, and if available curve fitting software cannot accept minor stimulation, linear interpolation with bootstrapping can be used.
fysikalisk form samt relevanta fysikalisk-kemiska egenskaper, inbegripet löslighetsgräns i vatten,
If stimulation is extreme, use of a hormesis model may be considered (18).
kemiska beteckningsuppgifter (t.ex.
Non toxic growth inhibition
CAS-nummer), inklusive renhetsgrad (föroreningar).
Light absorbing test materials may give rise to a growth rate reduction because shading reduces the amount of available light.
Testade arter:
Such physical types of effects should be separated from toxic effects by modifying the test conditions and the former should be reported separately.
stam, leverantör eller ursprung, samt odlingsförhållanden.
Guidance may be found in (2) and (3).
Testbetingelser:
TEST REPORT
startdatum och varaktighet för testet,
The test report must include the following:
testupplägg:
Test chemical:
testkärl, kulturernas volym, biomassans koncentration i början av testet,
physical nature and relevant physical-chemical properties, including water solubility limit;
mediets sammansättning,
chemical identification data (e.g., CAS Number), including purity (impurities).
testkoncentrationer och replikat (t.ex. antal replikat, antal testkoncentrationer samt geometrisk serie),
Test species:
metod för beredning av testlösningar, inbegripet användning av lösningsmedel m.m.,
the strain, supplier or source and the culture conditions used.
odlingsutrustning,
Test conditions:
ljusets intensitet och kvalitet (ljuskälla, homogenitet),
date of start of the test and its duration;
temperatur,
description of test design:
de koncentrationer som testats:
test vessels, culture volumes, biomass density at the beginning of the test;
de nominella testkoncentrationerna och resultaten av alla analyser för att fastställa koncentrationen av testkemikalien i testkärlen.
composition of the medium;
Metodens utbyte och bestämningsgräns i matrisen, alla avvikelser från denna testmetod,
test concentrations and replicates (e.g., number of replicates, number of test concentrations and geometric progression used);
Resultat:
description of the preparation of test solutions, including use of solvents etc.
pH-värde vid testets början och slut i alla testlösningar,
culturing apparatus;
biomassa för varje kolv och varje mätpunkt, samt metod för att mäta biomassa,
concentrations tested:
grafisk framställning av förhållandet mellan koncentration och effekt,
the nominal test concentrations and any results of analyses to determine the concentration of the test chemical in the test vessels.
toxicitetsbestämningar för responsvariablerna, t.ex.
The recovery efficiency of the method and the limit of quantification in the test matrix should be reported;
EC50, EC10 och EC20 samt dithörande konfidensintervall.
all deviations from this test method;
Om man räknat fram LOEC- och NOEC-värden ska dessa anges, liksom de statistiska metoder som använts vid beräkningen,
method for determination of biomass and evidence of correlation between the measured parameter and dry weight;
om ANOVA-metoder har använts: storleken på observerad effekt (t.ex. minsta signifikanta skillnad),
Results:
eventuell tillväxtstimulans som har konstaterats i testlösningarna,
pH values at the beginning and at the end of the test at all treatments;
övriga observerade effekter, t.ex. morfologiska förändringar hos algerna,
biomass for each flask at each measuring point and method for measuring biomass;
diskussion av resultaten, inbegripet eventuell inverkan på testresultatet som kan tillskrivas avvikelser från denna testmetod.
growth curves (plot of biomass versus time);
Tillägg 1
calculated response variables for each treatment replicate, with mean values and coefficient of variation for replicates;
Definitioner
graphical presentation of the concentration/effect relationship;
Följande definitioner och förkortningar används i denna testmetod: Biomassa
estimates of toxicity for response variables e.g., EC50, EC10, EC20 and associated confidence intervals.
Biomassa definieras vanligen som en vikt, men i det här testet används alltså i stället vikt per volymenhet.
any stimulation of growth found in any treatment;
Variationskoefficient dimensionslöst mått på en parameters variabilitet, definierat som förhållandet mellan standardavvikelsen och medelvärdet.
any other observed effects, e.g. morphological changes of the algae;
Detta kan också uttryckas i procent.
discussion of the results, including any influence on the outcome of the test resulting from deviations from this test method.
Variationskoefficientens medelvärde för den genomsnittliga specifika tillväxthastigheten i kontrollreplikaten beräknas enligt följande:
Appendix 1
ECx
Definitions
den koncentration av testkemikalien, löst i testmediet, som minskar testorganismens tillväxt med x % (t.ex.
The following definitions and abbreviations are used for the purposes of this test method:
50 %) efter en given exponeringstid (som tydligt måste anges om man avviker från den fulla eller normala testperioden).
Biomass is the dry weight of living matter present in a population expressed in terms of a given volume;
För att entydigt ange om EC-värdet bygger på tillväxthastighet eller producerad mängd biomassa används beteckningen ErC för tillväxthastighet och EyC för producerad mängd biomassa.
e.g., mg algae/litre test solution.
Odlingsmedium
Usually “biomass” is defined as a mass, but in this test this word is used to refer to mass per volume.
det kompletta syntetiska medium som algerna växer i när de exponeras för testkemikalien.
Also in this test, surrogates for biomass, such as cell counts, fluorescence, etc. are typically measured and the use of the term “biomass” thus refers to these surrogate measures as well.
Testkemikalien är vanligen löst i testmediet.
Chemical means a substance or mixture
Testkemikalien är vanligen löst i testmediet.
Coefficient of variation is a dimensionless measure of the variability of a parameter, defined as the ratio of the standard deviation to the mean.
logaritmisk ökning av mängden biomassa under exponeringstiden.
This can also be expressed as a percent value.
Lägsta koncentration med observerad effekt (LOEC – ’Lowest Observed Effect Concentration’)
Mean coefficient of variation of average specific growth rate in replicate control cultures should be calculated as follows:
den lägsta testade koncentration vid vilken man kan fastställa att testkemikalien har en statistiskt signifikant hämmande effekt på tillväxten (vid p < 0,05) efter en given exponeringstid, jämfört med kontrollen.
Calculate % CV of average specific growth rate out of the daily/section by section growth rates for the respective replicate;
Alla testkoncentrationer ovanför LOEC måste ha skadliga verkningar som är lika stora som eller större än de verkningar som observeras vid LOEC.
Calculate the mean value out of all values calculated under point 1 to get the mean coefficient of variation of the daily/section by section specific growth rate in replicate control cultures.
Om dessa två villkor inte är uppfyllda måste en fullständig förklaring ges till hur man har valt LOEC (och därmed NOEC).
ECx is the concentration of the test chemical dissolved in test medium that results in an x % (e.g. 50 %) reduction in growth of the test organism within a stated exposure period (to be mentioned explicitly if deviating from full or normal test duration).
Nolleffektkoncentration (NOEC – ’No Observed Effect Concentration’) testkoncentrationen omedelbart under LOEC.
To unambiguously denote an EC value deriving from growth rate or yield the symbol “ErC” is used for growth rate and “EyC” is used for yield.
Fenotyp
Growth medium is the complete synthetic culture medium in which test algae grow when exposed to the test chemical.
variabel för bestämning av toxicitet.
The test chemical will normally be dissolved in the test medium.
Variabeln fås fram genom att olika beräkningsmetoder tillämpas på uppmätta parametrar för biomassa.
Growth rate (average specific growth rate) is the logarithmic increase in biomass during the exposure period.
För den här testmetoden är tillväxthastighet och producerad mängd biomassa responsvariabler som erhålls genom att biomassan mäts antingen direkt eller med någon av de angivna alternativa mätmetoderna.
Lowest Observed Effect Concentration (LOEC) is the lowest tested concentration at which the chemical is observed to have a statistically significant reducing effect on growth (at p < 0,05) when compared with the control, within a given exposure time.
Specifik tillväxthastighet responsvariabel som definieras som kvoten av skillnaden mellan de naturliga logaritmerna för en observerad parameter (i den här testmetoden: biomassa) och motsvarande tidsperiod.
However, all test concentrations above the LOEC must have a harmful effect equal to or greater than those observed at the LOEC.
alla ämnen eller blandningar som testas med denna testmetod.
When these two conditions cannot be satisfied, a full explanation must be given for how the LOEC (and hence the NOEC) has been selected.
Producerad mängd biomassa värdet på en mätvariabel i slutet av exponeringstiden minus motsvarande värde i början av exponeringstiden, använt som ett mått på ökningen av biomassa under testet.
No Observed Effect Concentration (NOEC) is the test concentration immediately below the LOEC.
Tillägg 2
Response variable is a variable for the estimation of toxicity derived from any measured parameters describing biomass by different methods of calculation.
Rekommenderade stammar
For this test method growth rates and yield are response variables derived from measuring biomass directly or any of the surrogates mentioned.
Grönalger
Specific growth rate is a response variable defined as quotient of the difference of the natural logarithms of a parameter of observation (in this test method, biomass) and the respective time period
Pseudokirchneriella subcapitata (äldre namn: Selenastrum capricornutum), ATCC 22662, CCAP 278/4, 61.81 SAG
Test chemical means any substance or mixture tested using this test method.
Desmodesmus subspicatus (äldre namn: Scenedesmus subspicatus) 86.81 SAG
Yield is the value of a measurement variable at the end of the exposure period minus the measurement variable's value at the start of the exposure period to express biomass increase during the test.
Kiselalger
Appendix 2
Cyanobakterier
Strains Shown to be Suitable for the Test
Stammarnas ursprung
Green algae
De rekommenderade stammarna finns att tillgå som monokulturer från följande samlingar (alfabetisk ordning):
Pseudokirchneriella subcapitata (formerly known as Selenastrum capricornutum), ATCC 22662, CCAP 278/4, 61.81 SAG
Form och övriga egenskaper hos rekommenderade arter
Diatoms
Böjda och vridna enskilda celler
Cyanobacteria
Ovala, vanligen enskilda celler
Sources of Strains
Stavar
The strains recommended are available in unialgal cultures from the following collections (in alphabetical order):
Kedjor av ovala celler
37073 Göttingen
Storlek (längd × bredd) (μm)
Appearance and characteristics of recommended species
Volym (μm3/cell)
Appearance
Torrvikt (mg/cell)
Curved, twisted single cells
2–3 × 10– 8
Oval, mostly single cells
3–4 × 10– 8
Rods
1–2 × 10– 8
Chains of oval cells
2–3 × 10– 9
Size (L × W) μm
Tillväxthastighet [3] (dygn– 1)
Cell volume (μm3/cell)
1,5 –1,7
Cell dry weight (mg/cell)
Särskilda rekommendationer om odling och hantering av rekommenderade testarter
2-3 × 10- 8
Pseudokirchneriella subcapitata och Desmodesmus subspicatus
3-4 × 10- 8
Dessa grönalger brukar vara lätta att hålla i olika odlingsmedier.
1-2 × 10- 8
Råd om lämpliga medier kan fås från de institutioner som ansvarar för algsamlingarna.
2-3 × 10- 9
Cellerna är vanligen enskilda, och celltätheten kan enkelt bestämmas med hjälp av elektronisk partikelräknare eller mikroskop.
Growth rate [3] (day- 1)
Olika odlingsmedier kan användas för stamkulturen.
1,5 -1,7
Det är mycket viktigt att batchkulturen fortfarande befinner sig i logfas då den förnyas, eftersom den annars har svårt att återhämta sig.
Specific Recommendations on Culturing and Handling of Recommended Test Species
Anabaena flos-aquae bildar aggregat bestående av hopnystade kedjor av celler.
Pseudokirchneriella subcapitata and Desmodesmus subspicatus
Aggregatens storlek kan variera beroende på odlingsförhållandena.
These green algae are generally easy to maintain in various culture media.
Om biomassan bestäms genom räkning i mikroskop eller med hjälp av en elektronisk partikelräknare kan det vara nödvändigt att först bryta sönder aggregaten.
Information on suitable media is available from the culture collections.
Sonikering av prov kan användas för att bryta sönder kedjor av celler och därigenom minska variabiliteten vid räkning.