natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The concentration of solvent should not exceed 100 μl/l, and the same concentration of solvent should be added to all cultures (including controls) in the test series.
För de rekommenderade grönalgsarterna ska intensiteten mätt vid testlösningarna ligga inom intervallet 60–120 μE · m– 2 · s– 1 när mätningen görs i det fotosyntetiskt verksamma våglängdsområdet 400–700 nm med lämplig sensor.
Incubation
Vissa arter, särskilt Anabaena flos-aquae, tillväxer utan problem vid låga ljusintensiteter och kan även skadas vid höga intensiteter.
Cap the test vessels with air-permeable stoppers.
För sådana arter ska den genomsnittliga ljusintensiteten ligga på 40–60 μE · m– 2 · s– 1.
The vessels are shaken and placed in the culturing apparatus.
Testets varaktighet
During the test it is necessary to keep the algae in suspension and to facilitate transfer of CO2.
Testet ska normalt pågå i 72 timmar.
To this end constant shaking or stirring should be used.
Man kan dock använda kortare eller längre testperioder, förutsatt att samtliga kriterier för testresultatens giltighet i punkt 11 är uppfyllda.
The cultures should be maintained at a temperature in the range of 21 to 24 °C, controlled at ± 2 °C.
Mätningar och analytiska bestämningar
For species other than those listed in Appendix 2, e.g. tropical species, higher temperatures may be appropriate, providing that the validity criteria can be fulfilled.
Algbiomassan i varje kolv bestäms minst en gång per dag under testperioden.
It is recommended to place the flasks randomly and to reposition them daily in the incubator.
Om mätningarna görs på små volymer som pipetterats från testlösningarna ska dessa volymer inte ersättas.
The pH of the control medium should not increase by more than 1,5 units during the test.
Biomassan bestäms genom manuell cellräkning i mikroskop eller med hjälp av en elektronisk partikelräknare (mätning av cellantal och/eller biovolym).
For metals and chemicals that partly ionise at a pH around the test pH, it may be necessary to limit the pH drift to obtain reproducible and well defined results.
Alternativa metoder, t.ex. flödescytometri, klorofyllfluorescens in vitro eller in vivo (5) (6) eller optisk täthet, kan också användas om man kan påvisa en tillfredsställande korrelation med biomassan för de värden på densamma som kan förekomma i testet.
A drift of < 0,5 pH units is technically feasible and can be achieved by ensuring an adequate CO2 mass transfer rate from the surrounding air to the test solution, e.g. by increasing the shaking rate.
Lösningarnas pH mäts i början och slutet av testet.
Another possibility is to reduce the demand for CO2 by reducing the initial biomass or the test duration.
Om det finns en analytisk bestämningsmetod för testkemikalien i det valda koncentrationsintervallet ska testlösningarna analyseras för att kontrollera startkoncentrationerna och för att se till att exponeringskoncentrationerna inte förändras under testet.
The surface where the cultures are incubated should receive continuous, uniform fluorescent illumination e.g. of “cool-white” or “daylight” type.
Om det är troligt att exponeringskoncentrationerna under testet kommer att variera med mindre än 20 % från de nominella värdena kan det räcka med att man i början och slutet av testet bestämmer testkemikaliens koncentration på tre nivåer: en hög koncentration, en låg koncentration och en koncentration runt det förväntade EC50-värdet.
For the recommended species of green algae, select the light intensity at the level of the test solutions from the range of 60-120 μE · m– 2 · s– 1 when measured in the photosynthetically effective wavelength range of 400-700 nm using an appropriate receptor.
På så vis får man ett säkrare mått på hur mycket av testkemikalien som försvinner.
Some species, in particular Anabaena flos-aquae, grow well at lower light intensities and may be damaged at high intensities.
För dessa kemikalier kan extra replikat behövas.
For such species an average light intensity in the range 40-60 μE · m– 2 · s– 1 should be selected.
Under alla omständigheter behöver bestämningar av testkemikaliens koncentration bara göras på ett replikatkärl för varje testkoncentration (eller på det samlade innehållet från samtliga replikat).
(For light-measuring instruments calibrated in lux, an equivalent range of 4440 - 8880 lux for cool white light corresponds approximately to the recommended light intensity 60-120 μE · m– 2 · s– 1).
Testmedier som beretts särskilt för bestämning av exponeringskoncentrationer under testet ska behandlas på samma sätt som dem som används för tester, dvs. de ympas med alger och inkuberas under identiska förhållanden.
Maintain the light intensity within ±15 % from the average light intensity over the incubation area.
Om den lösta testkemikaliens koncentration måste bestämmas kan det vara nödvändigt att isolera algerna från mediet.
Test duration
Isoleringen bör helst göras genom centrifugering vid lågt g-tal (men tillräckligt högt för att algerna ska kunna avskiljas).
Test duration is normally 72 hours.
Om man kan visa att testkemikaliens koncentration har hållits tillfredsställande inom ± 20 % av den nominella eller uppmätta startkoncentrationen genom hela testet kan analysen av resultaten baseras på nominella eller uppmätta startvärden.
However, shorter or longer test durations may be used provided that all validity criteria in paragraph 11 can be met.
Om avvikelsen från den nominella eller uppmätta startkoncentrationen inte ligger inom intervallet ± 20 % ska analysen av resultaten baseras på det geometriska medelvärdet av koncentrationen under exponeringen, eller på modeller som beskriver testkemikaliens avtagande koncentration (3) (7).
Measurements and analytical determinations
Bestämning av tillväxthämning hos alger är en mer dynamisk testmetod än de flesta andra akvatiska toxicitetstester med kort testperiod.
The algal biomass in each flask is determined at least daily during the test period.
De faktiska exponeringskoncentrationerna kan därför vara svåra att bestämma, särskilt för adsorberande kemikalier som testas vid låga koncentrationer.
If measurements are made on small volumes removed from the test solution by pipette, these should not be replaced.
Om kemikalien i sådana fall adsorberas till den ökande algbiomassan och därför inte längre återfinns i lösning innebär det dock inte att den försvinner från testsystemet.
Measurement of biomass is done by manual cell counting by microscope or an electronic particle counter (by cell counts and/or biovolume).
Vid analysen av testresultatet ska man undersöka om en minskad koncentration av testkemikalien under testperioden kan korreleras med en reducerad tillväxthämning.
Alternative techniques, e.g. flow cytometry, in vitro or in vivo chlorophyll fluorescence (5) (6), or optical density can be used if a satisfactory correlation with biomass can be demonstrated over the range of biomass occurring in the test.
Om så är fallet bör man överväga att genom en lämplig modell beskriva testkemikaliens minskande koncentration (7).
Measure the pH of the solutions at the beginning and at the end of the test.
I annat fall kan det vara motiverat att basera resultatanalysen på testkemikaliens nominella eller uppmätta startkoncentration.
Provided an analytical procedure for determination of the test chemical in the concentration range used is available, the test solutions should be analysed to verify the initial concentrations and maintenance of the exposure concentrations during the test.
Övriga iakttagelser
Analysis of the concentration of the test chemical at the start and end of the test of a low and high test concentration and a concentration around the expected EC50 may be sufficient where it is likely that exposure concentrations will vary less than 20 % from nominal values during the test.
Kontrollera i mikroskop att ympkulturen ser normal och frisk ut.
Analysis of all test concentrations at the beginning and at the end of the test is recommended where concentrations are unlikely to remain within 80-120 % of the nominal concentration.
I slutet av testet ska man också notera eventuella avvikelser från algernas normala utseende (som kan ha orsakats av exponeringen för testkemikalien).
For volatile, unstable or strongly adsorbing test chemicals, additional samplings for analysis at 24 hour intervals during the exposure period are recommended in order to better define loss of the test chemical.
Toleranstest
For these chemicals, extra replicates may be needed.
Under vissa omständigheter, t.ex. när ett preliminärt test tyder på att testkemikalien inte har några toxiska effekter vid koncentrationer upp till 100 mg/l eller upp till dess löslighetsgräns i testmediet (om denna är lägre), kan man utföra ett toleranstest.
In all cases, determination of test chemical concentrations need only be performed on one replicate vessel at each test concentration (or the contents of the vessels pooled by replicate).
Man jämför då responsen mellan en kontrollgrupp och en testgrupp (med en koncentration på 100 mg/l eller lika med löslighetsgränsen).
The test media prepared specifically for analysis of exposure concentrations during the test should be treated identically to those used for testing, i.e. they should be inoculated with algae and incubated under identical conditions.
Det rekommenderas starkt att jämförelsen kompletteras med en bestämning av exponeringskoncentrationen.
If analysis of the dissolved test chemical concentration is required, it may be necessary to separate algae from the medium.
Alla testbetingelser samt kriterier för testresultatens giltighet som beskrivits tidigare gäller även för toleranstestet, med undantaget att antalet testreplikat ska vara minst sex.
Separation should preferably be made by centrifugation at a low g-force, sufficient to settle the algae.
Responsvariablerna i kontroll- och testgruppen kan analyseras med hjälp av ett statistiskt test där man jämför medelvärden, t.ex.
If there is evidence that the concentration of the chemical being tested has been satisfactorily maintained within ± 20 % of the nominal or measured initial concentration throughout the test, analysis of the results can be based on nominal or measured initial values.
Students t-test.
If the deviation from the nominal or measured initial concentration is not within the range of ± 20 %, analysis of the results should be based on geometric mean concentration during exposure or on models describing the decline of the concentration of the test chemical (3) (7).
Om de båda grupperna inte har samma varians måste t-testet anpassas efter detta.
The alga growth inhibition test is a more dynamic test system than most other short-term aquatic toxicity tests.
Plottning av tillväxtkurvor
As a consequence, the actual exposure concentrations may be difficult to define, especially for adsorbing chemicals tested at low concentrations.
Mängden biomassa i testkärlen kan uttryckas i enheten för den alternativa parameter som används vid mätningen (t.ex. cellantal, fluorescens).
In such cases, disappearance of the test chemical from solution by adsorption to the increasing algal biomass does not mean that it is lost from the test system.
De framräknade värdena för biomassans koncentration i testkulturerna och kontrollerna förs in i en tabell tillsammans med testmaterialets koncentrationer och mättidpunkterna (noterade med en upplösning på minst hela timmar).
When the result of the test is analysed, it should be checked whether a decrease in concentration of the test chemical in the course of the test is accompanied by a decrease in growth inhibition.
Tabellvärdena används sedan för att ta fram plottade tillväxtkurvor.
If this is the case, application of a suitable model describing the decline of the concentration of the test chemical (7) may be considered.
Både logaritmiska och linjära skalor kan vara användbara på detta inledande stadium, men logaritmiska skalor är obligatoriska, och de ger också i allmänhet en bättre uppfattning om variationer i tillväxtmönstret under testperioden.
If not, it may be appropriate to base the analysis of the results on the initial (nominal or measured) concentrations.
Observera att exponentiell tillväxt motsvaras av en rak linje när den plottas på en logaritmisk skala, och att kurvans lutning anger den specifika tillväxthastigheten.
Other observations
Kontrollera med hjälp av plottarna om kontrollkulturerna har tillväxt exponentiellt och med förväntad hastighet under hela testet.
Microscopic observation should be performed to verify a normal and healthy appearance of the inoculum culture and to observe any abnormal appearance of the algae (as may be caused by the exposure to the test chemical) at the end of the test.
Alla datapunkter och kurvor bör undersökas kritiskt, och rådata samt metoder bör kontrolleras med avseende på eventuella fel.
Limit test
Kontrollera särskilt alla datapunkter som verkar avvika på grund av systematiska fel.
Under some circumstances, e.g. when a preliminary test indicates that the test chemical has no toxic effects at concentrations up to 100 mg/l or up to its limit of solubility in the test medium (whichever is the lower), a limit test involving a comparison of responses in a control group and one treatment group (100 mg/l or a concentration equal to the limit of solubility), may be undertaken.
Om man konstaterar uppenbara eller mycket sannolika fel i testutförandet ska de berörda datapunkterna markeras som avvikande värden (’outliers’) och inte tas med i den efterföljande statistiska analysen.
It is strongly recommended that this be supported by analysis of the exposure concentration.
Det enda giltiga skälet är (enstaka) misstag i utförandet av testet.
All previously described test conditions and validity criteria apply to a limit test, with the exception that the number of treatment replicates should be at least six.
Dålig precision räknas däremot inte som ett giltigt skäl.
The response variables in the control and treatment group may be analysed using a statistical test to compare means, e.g. a Student's t-test.
Statistiska metoder för att identifiera avvikande värden är av begränsat värde när det gäller den här typen av problem, och de kan inte ersätta expertbedömningar.
If variances of the two groups are unequal, a t-test adjusted for unequal variances should be performed
Avvikande värden (som markerats som sådana) bör helst behållas bland de datapunkter som visas i senare presentationer av data i grafisk form eller tabellform.
Plotting growth curves
Responsvariabler
The biomass in the test vessels may be expressed in units of the surrogate parameter used for measurement (e.g. cell number, fluorescence).
Syftet med testet är att bestämma testkemikaliens effekter på tillväxten hos alger.
Tabulate the estimated biomass concentration in test cultures and controls together with the concentrations of test material and the times of measurement, recorded with a resolution of at least whole hours, to produce plots of growth curves.
Eftersom olika jurisdiktioner har olika prioriteringar och lagstiftningsbehov används två responsvariabler i denna testmetod.
Both logarithmic scales and linear scales can be useful at this first stage, but logarithmic scales are mandatory and generally give a better presentation of variations in growth pattern during the test period.
För att testresultaten ska kunna godtas i alla jurisdiktioner ska effekterna bedömas med hjälp av båda de responsvariabler (a och b) som beskrivs nedan. (a) Genomsnittlig specifik tillväxthastighet:
Examine all data points and the appearance of the graphs critically and check raw data and procedures for possible errors.
Producerad mängd biomassa
Check in particular any data point that seems to deviate by a systematic error.
responsvariabel som motsvarar skillnaden mellan den ursprungliga mängden biomassa och biomassan vid testets slut.
If it is obvious that procedural mistakes can be identified and/or considered highly likely, the specific data point is marked as an outlier and not included in subsequent statistical analysis.
Observera att toxicitetsvärden som beräknats utifrån de två responsvariablerna inte är jämförbara, och att denna skillnad måste framgå när man tillämpar testresultaten.
(A zero algal concentration in one out of two or three replicate vessels may indicate the vessel was not inoculated correctly, or was improperly cleaned).
ECx-värden som grundar sig på den genomsnittliga specifika tillväxthastigheten (ErCx) är i allmänhet högre än de som grundar sig på den producerade mängden biomassa (EyCx) om de föreskrivna testbetingelserna i denna metod är uppfyllda, beroende på den matematiska grunden i respektive fall.
State reasons for rejection of a data point as an outlier clearly in the test report.
Detta ska dock inte tolkas som skillnader i känslighet mellan de två responsvariablerna.
Accepted reasons are only (rare) procedural mistakes and not just bad precision.
Avvikelserna beror i stället på att värdena är olika ur matematisk synvinkel.
Statistical procedures for outlier identification are of limited use for this type of problem and cannot replace expert judgement.
Variabeln genomsnittlig specifik tillväxthastighet är baserad på den allmänna exponentiella tillväxten hos alger i obegränsade kulturer, där toxiciteten bestäms utifrån dess effekter på tillväxthastigheten, utan att vara beroende av vare sig det absoluta värdet på kontrollens specifika tillväxthastighet, på dos-respons-kurvans lutning, eller på testets varaktighet.
Outliers (marked as such) should preferably be retained among the data points shown in any subsequent graphical or tabular data presentation.
Resultat som i stället grundar sig på producerad mängd biomassa är däremot beroende av alla dessa övriga variabler.
Response variables
EyCx är beroende av den specifika tillväxthastigheten för den algart som används i varje enskilt test samt av den maximala specifika tillväxthastigheten – som kan variera mellan olika arter och t.o.m. mellan olika stammar.
The purpose of the test is to determine the effects of the test chemical on the growth of algae.
Denna responsvariabel ska därför inte användas för att jämföra känsligheten för toxiska ämnen mellan olika arter, eller ens olika stammar.
This test method describes two response variables, as different jurisdictions have different preferences and regulatory needs.
Ur vetenskaplig synpunkt är värdet på den genomsnittliga specifika tillväxthastigheten att föredra för bestämning av toxiciteten, men toxicitetsbestämning med hjälp av värdet på producerad mängd biomassa har tagits med i testmetoden för att tillgodose vissa länders nuvarande lagstiftningskrav.
In order for the test results to be acceptable in all jurisdictions, the effects should be evaluated using both response variables (a) and (b) described below.
Genomsnittlig tillväxthastighet
Average specific growth rate
Den genomsnittliga specifika tillväxthastigheten under en period beräknas som den logaritmiska ökningen i biomassa för varje enskilt kärl med kontroller och testlösningar, enligt formeln [1]:
this response variable is calculated on the basis of the logarithmic increase of biomass during the test period, expressed per day
dygn
Yield
där
this response variable is the biomass at the end of the test minus the starting biomass.
är den genomsnittliga specifika tillväxthastigheten under tidsperioden i–j,
It should be noted that toxicity values calculated by using these two response variables are not comparable and this difference must be recognised when using the results of the test.
är biomassan vid tidpunkten i, och
ECx values based upon average specific growth rate (ErCx) will generally be higher than results based upon yield (EyCx) if the test conditions of this test method are adhered to, due to the mathematical basis of the respective approaches.
är biomassan vid tidpunkten j.
This should not be interpreted as a difference in sensitivity between the two response variables, simply that the values are different mathematically.
Beräkna ett medelvärde av tillväxthastigheten för varje testgrupp och kontrollgrupp tillsammans med variansskattningar.
The concept of average specific growth rate is based on the general exponential growth pattern of algae in non-limited cultures, where toxicity is estimated on the basis of the effects on the growth rate, without being dependent on the absolute level of the specific growth rate of the control, slope of the concentration-response curve or on test duration.
Beräkna den genomsnittliga specifika tillväxthastigheten för hela testperioden (vanligen dag 0–3).
In contrast, results based upon the yield response variable are dependent upon all these other variables.
Som startvärde används det nominella värdet för ympad biomassa.
EyCx is dependent on the specific growth rate of the algal species used in each test and on the maximum specific growth rate that can vary between species and even different algal strains.
Motsvarande uppmätta värde bör inte användas eftersom det i regel minskar precisionen.
This response variable should not be used for comparing the sensitivity to toxicants among algal species or even different strains.
Om utrustningen för mätning av biomassa (t.ex. flödescytometer) ger ett tillräckligt noggrant värde på den lilla mängd som ympats kan dock biomassans uppmätta startkoncentration användas.
Average growth rate
En påtagligt lägre specifik tillväxthastighet under dag 1 jämfört med totalvärdet för genomsnittlig specifik tillväxthastighet kan tyda på att kulturen befinner sig i lagfas.
The average specific growth rate for a specific period is calculated as the logarithmic increase in the biomass from the equation for each single vessel of controls and treatments [1]:
I kontrollkulturer kan lagfasen praktiskt taget elimineras genom att förkulturen förökas på lämpligt sätt.
day
I exponerade kulturer kan en lagfas däremot tyda på att algerna återhämtar sig efter inledande toxisk stress eller på att exponeringen minskat på grund av förlust av testkemikalien (t.ex. genom adsorption till algbiomassan) efter den inledande exponeringen.
where:
Den sektionsvisa tillväxthastigheten kan därför användas när man bestämmer testkemikaliens effekter under exponeringstiden.
μi-j
Stora skillnader mellan den sektionsvisa tillväxthastigheten och den genomsnittliga tillväxthastigheten tyder på att tillväxten inte varit konstant exponentiell.
is the average specific growth rate from time i to j;
I sådana fall bör tillväxtkurvorna undersökas noggrant.
is the biomass at time i;
Beräkna den procentuella minskningen av tillväxthastigheten för varje replikat med testlösning genom formeln [2]:
is the biomass at time j
är den procentuella minskningen av den genomsnittliga specifika tillväxthastigheten,
For each treatment group and control group, calculate a mean value for growth rate along with variance estimates.
är medelvärdet för den genomsnittliga specifika tillväxthastigheten (μ) i kontrollgruppen, och
Calculate the average specific growth rate over the entire test duration (normally days 0-3), using the nominally inoculated biomass as the starting value rather than a measured starting value, because in this way greater precision is normally obtained.
är den genomsnittliga specifika tillväxthastigheten för replikatet med testlösning.
If the equipment used for biomass measurement allows sufficiently precise determination of the low inoculum biomass (e.g. flow cytometer) then the measured initial biomass concentration can be used.
Om man använder sig av lösningsmedel vid beredning av testlösningarna ska man vid beräkningen av procentuell tillväxthämning använda kontrollerna med lösningsmedel och inte kontrollerna utan lösningsmedel.
Assess also the section-by-section growth rate, calculated as the specific growth rates for each day during the course of the test (days 0-1, 1-2 and 2-3) and examine whether the control growth rate remains constant (see validity criteria, paragraph 11).
Den producerade mängden biomassa motsvarar biomassan i slutet av testet minus den ursprungliga biomassan.