natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Details of culturing are given in Appenxix 3.
Man bör noggrant överväga om man ska tillsätta en pH-buffert i testmediet (MOPS (4-morfolinopropansulfonsyra, CAS-nr 1132-61-2) i mediet för L. minor och NaHCO3 i mediet för L. gibba) när man misstänker att mediet kan reagera med testkemikalien och påverka dess toxicitetseffekt.
Obvious signs of contamination by algae or other organisms may require surface sterilisation of a sub-sample of Lemna fronds, followed by transfer to fresh medium (see Appendix 3).
Steinbergs medium (9) kan också användas förutsatt att kriterierna för testresultatens giltighet är uppfyllda.
In this eventuality the remaining contaminated culture should be discarded.
En modifierad form av det odlingsmedium för Lemna som är standardiserat av det svenska standardiseringsorganet SIS rekommenderas för odling av och test med L. minor.
At least seven days before testing, sufficient colonies are transferred aseptically into fresh sterile medium and cultured for 7 - 10 days under the conditions of the test.
Sammansättningen av detta medium återfinns i tillägg 4.
Test medium
Odlingsmediet 20X-AAP, som beskrivs i tillägg 4, rekommenderas för odling av och test med L. gibba.
Different media are recommended for Lemna minor and Lemna gibba, as described below.
Steinbergs medium, som beskrivs i tillägg 4, passar också för L. minor men kan också användas för L. gibba så länge kriterierna för testresultatens giltighet är uppfyllda.
Careful consideration should be given to the inclusion of a pH buffer in the test medium (MOPS (4-morpholinepropane sulphonic acid, CAS No: 1132-61-2) in L. minor medium and NaHCO3 in L. gibba medium) when it is suspected that it might react with the test chemical and influence the expression of its toxicity.
Testlösningar
Steinberg Medium (9) is also acceptable as long as the validity criteria are met.
Testlösningarna bereds vanligtvis genom utspädning av en stamlösning.
A modification of the Swedish standard (SIS) Lemna growth medium is recommended for culturing and testing with L. minor.
Stamlösningar av testkemikalien bereds normalt genom att kemikalien löses upp i ett odlingsmedium.
The composition of this medium is given in Appendix 4.
Den högsta koncentrationen av testkemikalien bör normalt inte överskrida dess vattenlöslighet under testbetingelserna.
The growth medium, 20X — AAP, as described in Appendix 4, is recommended for culturing and testing with L. gibba.
Observera dock att Lemna spp. flyter på vätskeytan och kan exponeras för kemikalier som samlas i gränsytan mellan vatten och luft, t.ex. hydrofoba eller ytaktiva kemikalier eller kemikalier med låg vattenlöslighet.
Steinberg medium, as described in Appendix 4, is also suitable for L. minor, but may also be used for L. gibba as long as the validity criteria are met.
Under sådana omständigheter kommer plantan att exponeras för andra koncentrationer av kemikalien än de som förekommer i lösningen.
Test solutions
Koncentrationerna kan därför – beroende på testkemikaliens egenskaper – överskrida vattenlösligheten.
Test solutions are usually prepared by dilution of a stock solution.
För testkemikalier med låg vattenlöslighet kan det bli nödvändigt att bereda en koncentrerad stamlösning eller en dispersion med hjälp av ett organiskt lösningsmedel eller dispergeringsmedel för att underlätta tillsatsen av exakta mängder testkemikalie i testmediet och bidra till dispergeringen och upplösningen av kemikalien.
Stock solutions of the test chemical are normally prepared by dissolving the chemical in growth medium.
Man bör därför så långt som möjligt undvika att använda sådana ämnen.
The highest tested concentration of the test chemical should not normally exceed the water solubility of the chemical under the test conditions.
Det får inte uppstå fytotoxicictet på grund av att man tvingas använda lösnings- eller dispergeringsmedel för att bereda testlösningen.
It should be noted however that Lemna spp. float on the surface and may be exposed to chemicals that collects at the water-air interface (e.g. poorly water-soluble or hydrophobic chemicals or surface-active chemicals).
Exempel på vanliga lösningsmedel som inte förorsakar fytotoxicitet vid koncentrationer upp till 100 μl/l är aceton och dimetylformamid.
Under such circumstances exposure will result from material other than in solution and test concentrations may, depending on the characteristics of the test chemical, exceed water solubility.
Om ett lösnings- eller dispergeringsmedel används bör dess slutkoncentration redovisas och hållas så låg som möjligt (≤ 100 μl/l).
For test chemicals of low water solubility it may be necessary to prepare a concentrated stock solution or dispersion of the chemical using an organic solvent or dispersant in order to facilitate the addition of accurate quantities of the test chemical to the test medium and aid in its dispersion and dissolution.
Alla test- och kontrollösningar bör ha samma koncentration av lösnings- eller dispergeringsmedel.
Every effort should be made to avoid the use of such materials.
Mer information om användningen av dispergeringsmedel finns i (8).
There should be no phytotoxicity resulting from the use of auxiliary solvents or dispersants.
Test- och kontrollgrupper
For example, commonly used solvents which do not cause phytotoxicity at concentrations up to 100 μl/l include acetone and dimethylformamide.
Förkunskap om testkemikaliens toxicitet för Lemna, t.ex. erhållen genom ett preliminärt test av koncentrationsintervallet för toxiciteten, underlättar valet av lämpliga testkoncentrationer.
If a solvent or dispersant is used, its final concentration should be reported and kept to a minimum (≤ 100 μl/l), and all treatments and controls should contain the same concentration of solvent or dispersant.
I det slutliga toxicitetstestet ska det normalt finnas minst fem koncentrationer ordnade i geometrisk serie.
Further guidance on the use of dispersants is given in (8).
Separationsfaktorn mellan testkoncentrationerna bör inte överskrida 3,2, men om dos-respons-kurvan är flack kan en större separationsfaktor användas.
Test and control groups
Om färre än fem koncentrationer används måste detta motiveras.
Prior knowledge of the toxicity of the test chemical to Lemna, e.g. from a range-finding test, will help in selecting suitable test concentrations.
Minst tre replikat ska användas för respektive testkoncentration.
In the definitive toxicity test, there should normally be at least five test concentrations arranged in a geometric series.
När man fastställer intervallet av testkoncentrationer (för det preliminära testet eller för det slutliga toxicitetstestet), ska man beakta följande:
Preferably the separation factor between test concentrations should not exceed 3.2, but a larger value may be used where the concentration-response curve is flat.
För att bestämma en ECx-koncentration ska värdet på ECx ligga innanför intervallet för testkoncentrationerna för att man ska uppnå en lämplig konfidensgrad.
Justification should be provided if fewer than five concentrations are used.
Om man t.ex. ska bestämma EC50 ska den högsta testkoncentrationen vara högre än värdet på EC50.
At least three replicates should be used at each test concentration.
Om värdet på EC50 ligger utanför intervallet för testkoncentrationerna blir motsvarande konfidensintervall stora, och det kan då bli omöjligt att korrekt bedöma modellens statistiska lämplighet.
In setting the range of test concentrations (for range-finding and/or for the definitive toxicity test), the following should be considered:
Om syftet är att bestämma LOEC eller NOEC ska den lägsta testkoncentrationen vara så låg att tillväxten inte är märkbart mindre än tillväxten i kontrollen.
To determine an ECx, test concentrations should bracket the ECx value to ensure an appropriate level of confidence.
Den högsta testkoncentrationen ska vara så hög att tillväxten är märkbart lägre än i kontrollen.
For example, if estimating the EC50, the highest test concentration should be greater than the EC50 value.
Om dessa villkor inte är uppfyllda måste testet göras om med ett annat koncentrationsintervall (såvida inte den högsta koncentrationen ligger på löslighetsgränsen eller är lika med den högsta erforderliga gränskoncentrationen, t.ex.
If the EC50 value lies outside of the range of test concentrations, associated confidence intervals will be large and a proper assessment of the statistical fit of the model may not be possible.
100 mg/l).
If the aim is to estimate the LOEC/NOEC, the lowest test concentration should be low enough so that growth is not significantly less than that of the control.
I varje test ska ingå kontroller med samma näringsmedium, frondantal, antal kolonier, miljöbetingelser och förfaranden som för provkärlen, men utan testkemikalien.
In addition, the highest test concentration should be high enough so that growth is significantly lower than that in the control.
Om ett lösnings- eller dispergeringsmedel används som hjälpmedel i testet krävs ytterligare ett kontrollprov, nu med samma koncentration av lösnings- eller dispergeringsmedlet som i provkärlen med testkemikalien.
If this is not the case, the test will have to be repeated using a different concentration range (unless the highest concentration is at the limit of solubility or the maximum required limit concentration, e.g. 100 mg/l).
Antalet replikatkärl med kontroller – och i tillämpliga fall kärl med lösnings- eller dispergeringsmedel – ska vara minst lika med, eller helst dubbelt så många som, antalet kärl som används för respektive testkoncentration.
Every test should include controls consisting of the same nutrient medium, number of fronds and colonies, environmental conditions and procedures as the test vessels but without the test chemical.
Om NOEC inte behöver bestämmas kan man ändra testupplägget så att antalet koncentrationer ökas medan antalet replikat per koncentration minskas.
If an auxiliary solvent or dispersant is used, an additional control treatment with the solvent/dispersant present at the same concentration as that in the vessels with the test chemical should be included.
Antalet kontrollreplikat måste dock vara minst tre.
The number of replicate control vessels (and solvent vessels, if applicable) should be at least equal to, and ideally twice, the number of vessels used for each test concentration.
Exponering
If determination of NOEC is not required, the test design may be altered to increase the number of concentrations and reduce the number of replicates per concentration.
Kolonier med 2–4 synliga fronder förs över från ympkulturen och fördelas slumpmässigt i provkärlen under aseptiska förhållanden.
However, the number of control replicates must be at least three.
Alla provkärl ska innehålla sammanlagt 9–12 fronder vardera.
Exposure
Antalet fronder och kolonier ska vara detsamma i alla provkärl.
Colonies consisting of 2 to 4 visible fronds are transferred from the inoculum culture and randomly assigned to the test vessels under aseptic conditions.
Erfarenheter från användning av denna metod och resultat från ringtest har visat att tre replikat per testlösning (testkoncentration), där alla replikat från början innehåller 9–12 fronder, är tillräckligt för att man ska upptäcka skillnader i tillväxt mellan testlösningarna på cirka 4–7 procents tillväxthämning (beräknad enligt tillväxthastighet) och 10–15 procents tillväxthämning (beräknad enligt producerad mängd biomassa) (7).
Each test vessel should contain a total of 9 to 12 fronds.
Provkärlen måste placeras slumpmässigt i inkubatorn för att minimera inflytandet av rumsbetingade skillnader i ljusintensitet och temperatur.
Experience gained with this method and ring-test data have indicated that using three replicates per treatment, with each replicate containing 9 to 12 fronds initially, is sufficient to detect differences in growth of approximately 4 to 7 % of inhibition calculated by growth rate (10 to 15 % calculated by yield) between treatments (7).
Om ett preliminärt stabilitetstest visar att koncentrationen av testkemikalien inte kan upprätthållas (dvs. den uppmätta koncentrationen sjunker under 80 % av den uppmätta startkoncentrationen) under tiden för testets genomförande (7 dagar), bör ett semistatiskt testförfarande användas.
A randomised design for location of the test vessels in the incubator is required to minimise the influence of spatial differences in light intensity or temperature.
I det fallet exponeras kolonierna för nyberedda test- och kontrollösningar vid minst två tillfällen under testet, t.ex. på dag tre och dag fem.
A blocked design or random repositioning of the vessels when observations are made (or repositioning more frequently) is also required.
Intervallen för byte till färskt medium beror på stabiliteten hos testkemikalien.
If a preliminary stability test shows that the test chemical concentration cannot be maintained (i.e. the measured concentration falls below 80 % of the measured initial concentration) over the test duration (7 days), a semi-static test regime is recommended.
Det kan krävas kortare intervall för att upprätthålla nära nog konstanta koncentrationer av mycket instabila eller flyktiga kemikalier.
In this case, the colonies should be exposed to freshly prepared test and control solutions on at least two occasions during the test (e.g. days 3 and 5).
I visa fall måste man använda genomflödestest (8)(10).
The frequency of exposure to fresh medium will depend on the stability of the test chemical;
Exponering genom besprutning av fronderna ingår inte i denna testmetod;
a higher frequency may be needed to maintain near-constant concentrations of highly unstable or volatile chemicals.
se istället (11).
In some circumstances, a flow-through procedure may be required (8)(10).
Inkuberingsförhållanden
The exposure scenario through a foliar application (spray) is not covered in this test method;
Kontinuerlig belysning med varmt eller kallt vitt ljus från lysrör används för att åstadkomma en ljusintensitet i intervallet 85–135 μE · m– 2s– 1, varvid intensiteten ska mätas inom ett fotosyntetiskt aktivt våglängdsområde (400–700 nm) i punkter på samma avstånd från ljuskällan som Lemna-fronderna (denna intensitet motsvarar en belysningsstyrka på 6500–10000 lux).
instead, see (11).
Ljusintensiteten över testytan får inte variera med mer än ± 15 %.
Incubation conditions
Metoden för detektering och mätning av ljuset, framför allt typen av ljussensor, påverkar mätvärdet.
Spherical sensors (which respond to light from all angles above and below the plane of measurement) and “cosine” sensors (which respond to light from all angles above the plane of measurement) are preferred to unidirectional sensors, and will give higher readings for a multi-point light source of the type described here.
En avvikelse på mer än 1,5 gör dock inte testresultaten ogiltiga om det kan visas att kriterierna för testresultatens giltighet är uppfyllda.
The temperature in the test vessels should be 24 ± 2 °C.
I speciella fall, t.ex. vid test av instabila kemikalier eller metaller, måste förskjutningen av pH kontrolleras extra noggrant.
However, deviation of more than 1,5 units would not invalidate the test when it can be shown that validity criteria are met.
Se vidare (8).
Additional care is needed on pH drift in special cases such as when testing unstable chemicals or metals.
Varaktighet
See (8) for further guidance.
Testet ska avslutas sju dagar efter det att plantorna har placerats i provkärlen.
Duration
Räkna och registrera frondantalet i provkärlen vid testets början.
The test is terminated 7 days after the plants are transferred into the test vessels.
Se noga till att ta med alla uppstickande, väl synliga fronder.
At the start of the test, frond number in the test vessels is counted and recorded, taking care to ensure that protruding, distinctly visible fronds are accounted for.
Bestäm antalet fronder – både sådana som framstår som normala och sådana som framstår som onormala – vid början av testet och därefter minst var tredje dag under exponeringstiden (dvs. vid minst två tillfällen under sjudagarsperioden), samt när testet avslutas.
Frond numbers appearing normal or abnormal, need to be determined at the beginning of the test, at least once every 3 days during the exposure period (i.e. on at least 2 occasions during the 7 day period), and at test termination.
Registrera förändringar i plantutvecklingen.
Changes in plant development, e.g. in frond size, appearance, indication of necrosis, chlorosis or gibbosity, colony break-up or loss of buoyancy, and in root length and appearance, should be noted.
Det kan t.ex. gälla frondstorlek, utseende, tecken på nekros, kloros eller svullna fronder, kollaps av kolonier eller försämrad flytförmåga samt rötternas längd och utseende.
Significant features of the test medium (e.g. presence of undissolved material, growth of algae in the test vessel) should also be noted.
Registrera också betydelsefulla iakttagelser från testmediet, t.ex. förekomst av oupplöst material och algtillväxt i provkärlet.
In addition to determinations of frond number during the test, effects of the test chemical on one (or more) of the following measurement variables are also assessed:
Utöver bestämningar av frondantalet under testet ska de effekter testkemikalien har på en eller flera av följande mätvariabler bestämmas:
total frond area,
Total frondarea.
dry weight,
Torrvikt.
Total frond area has an advantage, in that it can be determined for each test and control vessel at the start, during, and at the end of the test.
Total frondarea, torrvikt och färskvikt kan bestämmas på följande sätt:
Dry or fresh weight should be determined at the start of the test from a sample of the inoculum culture representative of what is used to begin the test, and at the end of the test with the plant material from each test and control vessel.
Total frondarea:
If frond area is not measured, dry weight is preferred over fresh weight.
Den sammanlagda frondarean hos alla kolonier bestäms genom bildanalys.
Total frond area, dry weight and fresh weight may be determined as follows:
Med en videokamera registrerar man en silhuett av provkärlet och plantorna (kärlet kan t.ex. placeras på en ljuslåda).
Total frond area:
Därefter digitaliseras bilderna.
The total frond area of all colonies may be determined by image analysis.
Genom kalibrering med plana former med känd area kan man sedan bestämma den totala frondarean i kärlet.
A silhouette of the test vessel and plants can be captured using a video camera (i.e. by placing the vessel on a light box) and the resulting image digitised.
Fel orsakade av inverkan av provkärlets överkant måste undvikas.
By calibration with flat shapes of known area, the total frond area in a test vessel may then be determined.
En annan, mer arbetskrävande metod är att ta en fotokopia av provkärlet och plantorna, klippa ut den silhuett som kolonierna bildar och sedan bestämma deras area med hjälp av en bladytemätare eller ett millimeterpapper.
Care should be taken to exclude interference caused by the rim of the test vessel.
Andra metoder – t.ex. bestämning av viktförhållandet mellan koloniernas silhuettyta och en ytenhet – kan också vara ändamålsenliga.
An alternative but more laborious approach is to photocopy test vessels and plants, cut out the resulting silhouette of colonies and determine their area using a leaf area analyser or graph paper.
Torrvikt:
Other techniques (e.g. paper weight ratio between silhouette area of colonies and unit area) may also be appropriate.
Alla kolonier samlas in från respektive provkärl och sköljs med destillerat eller avjonat vatten.
Dry weight:
Överskottsvattnet avlägsnas från kolonierna, t.ex. genom uppsugning med filterpapper, och de torkas sedan vid 60 °C tills vikten inte längre minskar.
All colonies are collected from each of the test vessels and rinsed with distilled or deionised water.
Även rotfragment måste tas med.
They are blotted to remove excess water and then dried at 60 °C to a constant weight.
Torrvikten bestäms med en noggrannhet på minst 0,1 mg.
Any root fragments should be included.
Färskvikt:
The dry weight should be expressed to an accuracy of at least 0,1 mg.
Alla kolonier förs över till förvägda provrör av polystyren (eller annat inert material) med små (1 mm) hål i de rundade bottnarna.
Fresh weight:
Provrören centrifugeras vid 3000 varv/minut under 10 minuter vid rumstemperatur.
All colonies are transferred to pre-weighed polystyrene (or other inert material) tubes with small (1 mm) holes in the rounded bottoms.
Provrören, som nu innehåller torra kolonier, vägs på nytt.
The tubes are then centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes at room temperature.
Färskvikten fås fram genom att subtrahera det tomma provrörets vikt.
Tubes, containing the now dried colonies, are re-weighed and the fresh weight is calculated by subtracting the weight of the empty tube.
Mätfrekvens och analytiska bestämningar
Frequency of measurements and analytical determinations
Vid statiskt testförfarande ska pH-värdet i alla testlösningar (testkoncentrationer) mätas vid början och slutet av testet.
If a static test design is used, the pH of each treatment should be measured at the beginning and at the end of the test.
Vid semistatiskt testförfarande mäts pH-värdet i varje färsk testlösning innan byte till ny lösning och i motsvarande förbrukade lösning.
If a semi-static test design is used, the pH should be measured in each batch of “fresh” test solution prior to each renewal and also in the corresponding “spent” solutions.
Ljusintensiteten ska mätas i odlingskammaren, inkubatorn eller klimatrummet i punkter på samma avstånd från ljuskällan som Lemna-fronderna.
Light intensity should be measured in the growth chamber, incubator or room at points the same distance from the light source as the Lemna fronds.
Mätningar ska göras minst en gång under testets genomförande.
Measurements should be made at least once during the test.
Temperaturen hos mediet i ett ersättningskärl med enbart testmedium som hålls under samma betingelser i odlingskammaren, inkubatorn eller klimatrummet ska registreras minst en gång per dag.
The temperature of the medium in a surrogate vessel held under the same conditions in the growth chamber, incubator or room should be recorded at least daily.
Under testets gång ska testkemikaliens koncentrationer bestämmas med lämpliga intervaller.
During the test, the concentrations of the test chemical are determined at appropriate intervals.
Vid ett statiskt testförfarande är minimikravet att koncentrationerna ska bestämmas vid början och slutet av testet.
In static tests, the minimum requirement is to determine the concentrations at the beginning and at the end of the test.
Om man vid ett semistatiskt testförfarande bedömer att koncentrationen av testkemikalien inte kommer att ligga kvar inom ± 20 % av den nominella koncentrationen, måste man analysera alla nyberedda testlösningar liksom alla förbrukade lösningar vid byte till ny färsk lösning (se punkt 33).
In semi-static tests where the concentration of the test chemical is not expected to remain within ± 20 % of the nominal concentration, it is necessary to analyse all freshly prepared test solutions and the same solutions at each renewal (see paragraph 33).
För test i vilka den uppmätta startkoncentrationen av testkemikalien inte ligger inom ± 20 % av den nominella koncentrationen men tillräckliga bevis kan framläggas för att visa att startkoncentrationerna är repeterbara och stabila (dvs. inom intervallet 80–120 % av startkoncentrationen), räcker det om kemiska bestämningar utförs enbart för de högsta och lägsta testkoncentrationerna.
However, for those tests where the measured initial concentration of the test chemical is not within ± 20 % of nominal but where sufficient evidence can be provided to show that the initial concentrations are repeatable and stable (i.e. within the range 80 - 120 % of the initial concentration), chemical determinations may be carried out on only the highest and lowest test concentrations.
I samtliga fall behöver bestämning av testkemikaliens koncentrationer före byte till färsk testlösning bara utföras på ett enda replikatkärl för varje testkoncentration (eller på det samlade innehållet från samtliga replikat för respektive testkoncentration).