natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Plates shall be incubated at 14 ± 2 °C and examined microscopically for up to 7 days.
Dessa återfinns främst i matstrupens och magsäckens epitel och ibland i labiala palperna.
When early CPE is observed, or if no CPE is observed within 7 days, the next step shall be fixation.
Sporbildning omfattar celldelning inom celler och äger rum i digestionskörtels tubuli och kanaler.
Wells shall be washed with Phosphate buffered saline (PBS) and fixed by incubation with 80 % acetone for 20 minutes at room temperature.
Refraktila granula syns vid sporbildningen men inte i de tidiga stadierna.
Plates shall be air-dried and stained immediately or stored at 0 to 6 °C for no more than 24 hours prior to staining.
I de sena infektionsstadierna observeras fria sporangier i lumen i mag-tarmkanalen.
Replicate wells shall be stained with a mix of monoclonal antibodies (MAb) 3H6F8 and 1OC9F5 against ISAV, or other MAb of proven efficacy and specificity, diluted in PBS and incubated at 37 ± 4 °C for 30 minutes.
Granula kan variera från intensivt orange till intensivt röd.
MAb shall be removed and plates washed three times with 0,05 % Tween 20 in PBS.
Kommersiellt tillgängliga DNA-extraktionskit som ger högkvalitativt DNA som lämpar sig för användning med de protokoll för PCR som anges i punkt I.3.2 får användas.
Anti-mouse IgG Fluorescein isothiocyanate (FITC) conjugate diluted in PBS shall be added to each well and incubated at 37 ± 4 °C for 30 minutes.
Flera PCR-protokoll har utarbetats och publicerats.
The dilutions of different batches of MAb and FITC conjugate shall be optimised in each laboratory.
PCR-primrar som riktar in sig på ITS1-regionen (internal transcribed spacer) ska användas eftersom de kan amplifiera endast Marteilia refringens.
Antibody shall be removed and plates shall be washed three times with 0,05 % Tween 20 in PBS.
PCR ska utföras i volymen 50 μl.
Wells shall be examined immediately using an inverted microscope set up for fluorescence microscopy with a suitable filter for excitation of FITC.
PCR-blandningar ska innehålla buffert (500 mM KCl, 100 mM Tris/HCl [pH 9,0 vid 25 °C] och 1 % Triton® X-100), 2,5 mM MgCl2, 0,2 mM dNTP-mix, 1 μM framåtriktade och bakåtriktade primrar, 0,02 enheter/μl Taq DNA-polymeras och 10–100 ng extraherat DNA.
A test shall be considered positive if fluorescent cells are observed.
Efter att DNA har denaturerats vid 94 °C i 5 minuter ska 30 cykler köras enligt följande: denaturering vid 94 °C i 1 minut, hybridisering vid 55 °C i 1 minut och elongering vid 72 °C i 1 minut per kilobaspar.
For a test to be valid, the positive controls shall score positive and the negative controls shall score negative.
En slutlig elongering vid 72 °C i 10 minuter ska utföras.
Examination of other tissues
För påvisande av Marteilia refringens ska PCR genomföras med primrar som riktar in sig på ITS1-regionen (5′-CCG-CAC-ACG-TTC-TTC-ACT-CC-3′ och 5′-CTC-GCG-AGT-TTC-GAC-AGA-CG-3′).
The technique referred to in point II.2.6 may be applied to other fish tissues such as liver, spleen and heart providing a reasonable quantity of endothelial cells, leucocytes or lymphocytes can be deposited on the slide.
Positiva kontroller ska bestå av genomiskt DNA från ett ytterst smittat värd-DNA eller plasmid-DNA, inklusive målregionen.
The staining procedure shall remain the same for each tissue, although for some tissues it may be preferable to omit the propidium iodide staining and rely on the phase illumination to identify the cell types present in the imprint.
Negativa kontroller ska bestå av genomiskt DNA från icke-smittade värdar och PCR-reagens utan mål-DNA.
Histology
Ett positivt resultat ska vara positiv PCR-amplifiering vid den förväntade storleken (412 baspar) och alla negativa kontroller ska vara negativa och alla positiva kontroller positiva.
Paraffin-embedded sections shall be cut at 5 μm and stained using haematoxylin and eosin.
Flera ISH-protokoll har utarbetats och publicerats.
Histological changes in clinically diseased Atlantic salmon are variable, but may include the following:
Den prob som riktar in sig på SSU rRNA ska användas eftersom den har validerats mot histologi.
numerous erythrocytes in the central venous sinus and lamellar capillaries of the gills, where erythrocyte thrombi also may be formed;
Vävnadspreparat som omfattar gälar och digestionskörtel ska fixeras i minst 24 timmar i Davidsons fixeringsmedel, följt av normal bearbetning för histologi med paraffininbäddning.
multifocal to confluent petechiae or hepatocyte necrosis or both at some distance from larger vessels in the liver; multifocal accumulation of erythrocytes in dilated hepatic sinusoids;
Preparatet ska snittas i 5 μm tunna skivor som placeras på aminoalkylsilanbelagda objektglas som sedan ska värmas vid 40 °C över natten.
accumulation of erythrocytes in blood vessels of the intestinal lamina propria and eventually haemorrhage into the lamina propria;
Paraffinet ska avlägsnas ur preparaten genom nedsänkning i xylen i 10 minuter.
spleen stroma distended by erythrocyte accumulation;
Detta steg ska upprepas en gång och sedan ska lösningsmedlet avlägsnas genom nedsänkning i två successiva bad med absolut etanol på 10 minuter vardera.
slight multifocal to extensive diffuse interstitial haemorrhage with tubular necrosis in the haemorrhagic areas, erythrocyte accumulation in the glomeruli in the kidney;
Preparaten ska därefter dehydreras genom nedsänkning i etanol i stigande koncentration.
erythrophagocytosis in the spleen and secondary haemorrhages in liver and kidney.
Preparaten ska behandlas med proteinas K (100 μg/ml) i TE-buffert (50 mM Tris, 10 mM EDTA) vid 37 °C i 30 minuter.
Immunohistochemistry (IHC)
Objektglasen ska dehydreras genom nedsänkning i etanol i stigande koncentration och sedan lufttorkas.
Polyclonal antibody against ISAV nucleoprotein shall be used on paraffin sections from formalin-fixed tissue.
Preparaten ska inkuberas med 100 μl hybridiseringsbuffert (4 × SSC [Standard Saline Citrate], 50 % formamid, 1 × Denhardts lösning, 250 μg/ml jäst tRNA, 10 % dextransulfat) innehållande 10 ng (1 μl av de PCR-reaktanter som bereds enligt punkt I.3.2 med primrarna CCG-GTG-CCA-GGT-ATA-TCT-CG och TTC-GGG-TGG-TCT-TGA-AAG-GC) av den digoxigeninmärkta proben.
The organs to be examined shall be mid-kidney and heart (transitional area including all three chambers and valves).
Preparaten ska täckas med in situ-täckglas i plast och placeras på ett värmeblock vid 95 °C i 5 minuter.
Suspected cases due to pathological signs shall be verified with a positive IHC.
Objektglasen ska därefter kylas på is i 1 minut innan de hybridiseras vid 42 °C över natten i en fuktkammare.
Histological sections shall be prepared in accordance with standard methods.
Preparaten ska tvättas 2 × 5 minuter med 2 × SSC vid rumstemperatur och 1 × 10 minuter med 0,4 × SSC vid 42 °C.
Preparation of tissue sections
Påvisandet ska utföras enligt tillverkarens anvisningar.
The tissues shall be fixed in neutral phosphate-buffered 10 % formalin for at least 1 day, dehydrated in a graded ethanol series, cleared in xylene and embedded in paraffin, according to standard protocols.
Objektglasen ska sedan sköljas med sterilt destillerat vatten (dH2O).
Approximately 5 μm thick sections (for IHC placed on poly-L-lysine-coated slides) shall be heated at 56 °C to 58 °C (maximum 60 °C) for 20 minutes, dewaxed in xylene, rehydrated through a graded ethanol series, and stained with haematoxylin and eosin for pathomorphology and IHC in accordance with point (2).
Preparaten ska motfärgas med Bismarck Brown Yellow, sköljas i dH2O och monteras med täckglas och med ett vattenbaserat monteringsmedel.
Staining procedure for IHC
Positiva och negativa kontroller ska vara preparat från kända smittade respektive icke-smittade värdar.
All incubations shall be carried out at room temperature on a rocking platform, unless otherwise provided for in this decision:
Ett positivt resultat ska visas genom lila-svart märkning av Marteilia refringens-celler i kända målvävnader och alla negativa kontroller ska vara negativa och alla positiva kontroller positiva.
antigen retrieval shall be done by boiling sections in 0,1 M citrate buffer pH 6,0 for 2 × 6 minutes followed by blocking with 5 % non-fat dry milk and 2 % goat serum in 50 mM TBS (TBS; Tris/HCl 50 mM, NaCl 150 mM, pH 7,6) for 20 minutes;
Sekvensering
sections shall then be incubated overnight with primary antibody (monospecific rabbit antibody against ISAV nucleoprotein) diluted in TBS with 1 % non-fat dry milk, followed by three washes in TBS with 0,1 % Tween 20;
Sekvensering ska genomföras som ett av de sista stegen för bekräftande diagnos.
for detection of bound antibodies, sections shall be incubated with Alkaline phosphatase-conjugated antibodies to rabbit IgG for 60 minutes.
Målregioner är SSU rDNA och ITS1.
Following a final wash, Fast Red (1 mg ml– 1) and Naphthol AS-MX phosphate (0,2 mg ml– 1) with 1 mM Levamisole in 0,1 M TBS (pH 8,2) shall be added to develop for 20 minutes.
Detaljerade diagnostiska metoder och förfaranden för övervakning och bekräftelse av förekomst av infektion orsakad av Marteilia refringens
Sections shall then be washed in tap water before counterstaining with Harris haematoxylin and mounted in aqueous mounting medium.
För övervakningsprogram och för att bekräfta förekomst av infektion orsakad av Marteilia refringens eller för att utesluta misstanke om förekomst av den förtecknade sjukdomen i enlighet med kraven i del 4 avsnitt II i bilaga I, ska de diagnostiska metoder och motsvarande förfaranden som används följa riktlinjerna i tabell 4.1.
Interpretation of the result of IHC
Riktlinjer för användning av diagnostiska metoder för övervakningsprogram och för att bekräfta eller utesluta förekomst av infektion orsakad av Marteilia refringens
The interpretation of the result of the IHC test shall be as set out in points (a) and (b):
Metod
control sections shall be considered as positive, when it is observed that the control sections have clearly visible red-coloured (reddish) cytoplasmic and intranuclear staining of endothelia cells in blood vessels of endocardium.
Riktad övervakning
A test sample section shall only be regarded as positive if such clear, intranuclear red staining of endothelial cells is found;
Presumtiv diagnos
control sections shall be considered as negative if they don't have any significant colour reaction.
Bekräftande diagnos
Endothelial staining reactions within very extensive haemorrhagic lesions may be slight or absent, possibly because of lysis of infected endothelial cells.
Histopatologi
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES FOR THE SURVEILLANCE AND CONFIRMATION OF INFECTION WITH MARTEILIA REFRINGENS
In situ-hybridisering
I. Detailed diagnostic methods and procedures for the diagnosis of infection with Marteilia refringens
X, och
When sampling and laboratory examination are carried out for the purpose of obtaining or maintaining a health status with regard to infection with Marteilia refringens as set out in Section I of Part 4 of Annex I or to confirm or rule out the presence of that listed disease in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC, using the diagnostic methods set out in Section II of Part 4 of Annex I, the detailed diagnostic methods and procedures set out in points I.1, I.2 and I.3 of this Part shall apply.
DETALJERADE DIAGNOSTISKA METODER OCH FÖRFARANDEN FÖR ÖVERVAKNING OCH BEKRÄFTELSE AV FÖREKOMST AV INFEKTION ORSAKAD AV BONAMIA OSTREAE
Sampling procedure
I. Förfaranden för diagnos av infektion orsakad av Bonamia ostreae
Gaping or freshly dead individual molluscs shall be sampled by priority, to increase the chances of finding infected animals.
När provtagning och laboratorieanalys för att erhålla eller få behålla en viss hälsostatus med avseende på Bonamia ostreae i enlighet med del 5 avsnitt I i bilaga I eller för att bekräfta eller utesluta förekomst av den förtecknade sjukdomen i enlighet med artikel 57 b i direktiv 2006/88/EG med de diagnostiska metoderna i del 5 avsnitt II i bilaga I, ska de detaljerade diagnostiska metoderna och förfarandena i de följande punkterna I.1, I.2 och I.3 tillämpas.
Once sampled, oysters or mussels shall be maintained at 4 °C or on refrigerated ice for no more than 24 hours if samples include gaping molluscs and no more than 72 hours if not, in a plastic bag including a label with details related to the nature and the origin of the oysters or mussels.
Provbearbetning
Gaping or freshly dead molluscs shall be maintained separately from other molluscs.
Provtagna ostron ska förvaras vid 4 °C eller på kyld is i högst 24 timmar om proverna innehåller blötdjur med öppna skal och i högst 72 timmar om de inte innehåller sådana; de ska förvaras i en plastpåse med en etikett med uppgifter om ostronens typ och ursprung.
A 3 to 5 mm thick section of tissues including gills and heart tissue shall be used for the diagnostic of Marteilia refringens by histology.
Ett 3–5 mm tunt vävnadspreparat, inklusive gälar och hjärtvävnad, ska användas för diagnostik av Bonamia ostreae genom histologi.
A piece of digestive gland shall be used for some tests, including imprints and polymerase chain reaction (PCR).
Efter det att gälarna eller hjärtvävnaden torkats med absorberande papper ska flera imprint göras på ett objektglas.
Microscopic techniques
Objektglasen ska lufttorkas, fixeras i metanol eller absolut etanol och färgas med ett kommersiellt tillgängligt kit för infärgning av blod (dvs. Diff-Quick® eller Hemacolor®) enligt tillverkarens anvisningar.
Cytology (imprint cytology)
Objektglasen ska först undersökas vid 200 × förstoring och därefter med immersionsolja vid 1000 × förstoring.
After drying digestive gland tissues on absorbent paper, several imprints shall be made on a glass slide.
Ett positivt resultat ska vara förekomst av små sfäriska eller äggformade organismer (diameter 2–5 μm) i hemocyter.
Slides shall be air-dried, fixed in methanol or in absolute ethanol and stained using a commercially available blood-staining kit such as Diff-Quik®/Hemacolor®, in accordance with the manufacturer's instructions.
Parasiten kan dock även förekomma extracellulärt.
After rinsing in tap water and drying, the slides shall be mounted with a cover-slip using an appropriate synthetic resin.
Dessa organismer har en basofil cytoplasma och en eosinofil cellkärna (färgerna kan variera beroende på vilken färg som används) och eftersom de sprids på objektglas kan de verka bredare på imprint än vid histologisk undersökning.
The slides shall be observed first at × 200 magnification and then under oil immersion at × 1000 magnification.
Multinukleära celler kan observeras.
A positive result shall be the observation of cells ranging in size up to between 30 to 40 μm.
Vävnadspreparat som omfattar gälar, digestionskörtel, mantel och gonad ska fixeras i minst 24 timmar i Davidsons fixeringsmedel, följt av normal bearbetning för histologi med paraffininbäddning och färgning, t.ex. med hematoxylin och eosin.
Pale halos around large, strongly stained (refringent) granules and, in larger cells, cell within cell arrangements are observed.
För att undvika eventuella oklarheter ska parasiten observeras inne i hemocyten för en positiv diagnos.
Sections of tissue that include gills, digestive gland, mantle, and gonad shall be fixed for at least 24 hours in Davidson's fixative followed by normal processing for paraffin histology and staining, for example with haematoxylin and eosin.
Två PCR-protokoll som riktar in sig på SSU rDNA får användas:
Observations shall be made at increasing magnifications up to × 1000.
PCR-blandningar innehåller buffert (500 mM KCl, 100 mM Tris/HCl [pH 9,0 vid 25 °C] och 1 % Triton® X-100), 2,5 mM MgCl2, 0,2 mM dNTP-mix, 1 μM framåtriktade och bakåtriktade primrar, 0,02 enheter/μl Taq DNA-polymeras och 0,2 ng/μl av DNA-templatet och har en total volym på 50 μl.
A positive result shall be the observation of cells ranging in size from 4 up to 40 μm.
Proverna ska denatureras i en termocykler vid 94 °C i 5 minuter, följt av 35 cykler (94 °C i 1 minut, 55 °C i 1 minut och 72 °C i 1 minut) och en slutlig elongering vid 72 °C i 10 minuter.
Early stages consist of multinucleate, spheric to elongated cells.
Ett positivt resultat ska vara positiv PCR-amplifiering vid den förväntade storleken (300 baspar) och alla negativa kontroller ska vara negativa och alla positiva kontroller positiva.
These are mainly found in the epithelium of oesophagus and stomach and sometimes of labial palps.
Det andra PCR-protokollet är en SYBR® Green realtids-PCR-metod.
Sporulation involves divisions of cells within cells and takes place in the digestive gland tubules and ducts.
Protokollet gör det möjligt att specifikt påvisa B. ostreae och kan kombineras med en SYBR® Green realtids-PCR-metod som möjliggör att specifikt påvisa B. exitiosa (Ramilo et al., 2013).
Refringent granules appear in the course of sporulation, but are not observed in early stages.
Primrarna BOSTRE-F (5′-TTACGTCCCTGCCCTTTGTA-3′) och BOSTRE-R (5′-TCGCGGTTGAATTTTATCGT-3′) amplifierar en produkt på 208 baspar.
In late phases of infection, sporangia are observed free in the lumen of the digestive tract.
PCR-blandningar innehåller SYBR® Green Master Mix (1 ×), 0,3 μM framåtriktade och bakåtriktade primrar och 200 ng extraherat DNA.
The granules can range from deep orange to deep red.
Proverna ska denatureras i ett PCR-instrument med realtidsdetektion vid 95 °C i 10 minuter, följt av 35 cykler (95 °C i 30 sekunder, 55 °C i 45 sekunder och 72 °C i 1 minut).
Molecular techniques
Smältkurvan ska analyseras med temperaturökningar på 0,5 °C/s från 55 °C till 95 °C och fluorescens ska registreras vid varje temperaturändring.
Polymerase chain reaction (PCR)
Negativa kontroller ska bestå av genomiskt DNA från icke-smittade värdar och PCR-reagens utan mål-DNA.
Several PCR protocols have been developed and published.
Ett positivt resultat ska vara positiv PCR-amplifiering med en unik smälttemperaturtopp (78,25 ± 0,25 °C vid de förhållanden som publicerats av Ramilo et al., 2013) och alla negativa kontroller ska vara negativa och alla positiva kontroller positiva.
PCR primers that target the internal transcribed spacer (ITS1) region shall be used as they are able to amplify only M. refringens.
En prob som riktar in sig på SSU rDNA ska användas, även om det har visats att den korsreagerar med vissa andra medlemmar i familjen Haplosporidia.
PCR shall be carried out in a 50 μl volume.
Vävnadspreparat som omfattar gälar och digestionskörtel ska fixeras i minst 24 timmar i Davidsons fixeringsmedel, följt av normal bearbetning för histologi med paraffininbäddning.
PCR mixtures shall contain buffer (500 mM KCl, 100 mM Tris/HCl [pH 9,0 at 25 °C] and 1 % Triton® X-100), 2,5 mM MgCl2, 0,2 mM dNTP mix, 1 μM forward and reverse primers, 0,02 units μl– 1 Taq DNA polymerase, and 10 to100 ng of extracted DNA.
Preparaten ska inkuberas med 100 μl hybridiseringsbuffert (4 × SSC [Standard Saline Citrate], 50 % formamid, 1 × Denhardts lösning, 250 μg/ml jäst tRNA, 10 % dextransulfat) innehållande 20 ng (2 μl av den PCR-reaktion som bereds enligt punkt I.3.2 med primrarna Bo och Boas) av den digoxigeninmärkta proben.
After denaturation of DNA at 94 °C for five minutes, 30 cycles shall be run as follows: denaturation at 94 °C for one minute, annealing at 55 °C for one minute, and elongation at 72 °C for one minute per kilo-base pair.
Preparaten ska tvättas 2 × 5 minuter med 2 × SSC vid rumstemperatur och 1 × 10 minuter med 0,4 × SSC vid 42 °C.
A final elongation step of 10 minutes at 72 °C shall be performed.
Ett positivt resultat ska motsvara de märkta parasiterna inne i hemocyterna och alla negativa kontroller ska vara negativa och alla positiva kontroller positiva.
For the detection of M. refringens, PCR shall be performed with primers that target the ITS1 region (5′-CCG-CAC-ACG-TTC-TTC-ACT-CC-3′ and 5′-CTC-GCG-AGT-TTC-GAC-AGA-CG-3′).
Målregioner ska vara SSU rDNA och ITS1.
Positive controls shall consist of genomic DNA from a highly infected host or plasmidic DNA including the target region.
Förfaranden för övervakning och bekräftelse av förekomst av infektion orsakad av Bonamia ostreae
Negative controls shall consist of genomic DNA from non-infected hosts and PCR reactives without target DNA.
För övervakning och för att utesluta misstanke om eller bekräfta förekomst av infektion orsakad av Bonamia ostreae i enlighet med kraven i i del 5 avsnitt II i bilaga I, ska de diagnostiska metoder och motsvarande förfaranden som används följa riktlinjerna i tabell 5.1.
A positive result shall be positive PCR amplification at the expected size (412 bp), with all negative controls being negative and all positive controls being positive.
Tabell 5.1.
In-situ hybridisation (ISH)
Riktlinjer för användning av diagnostiska metoder för övervakningsprogram och för att utesluta eller bekräfta förekomst av infektion orsakad av Bonamia ostreae
Several ISH protocols have been developed and published.
Imprint av hjärta eller gäl
Probe that targets the SSU of the rRNA gene complex shall be used because it has been validated against histology.
DETALJERADE DIAGNOSTISKA METODER OCH FÖRFARANDEN FÖR ÖVERVAKNING OCH BEKRÄFTELSE AV FÖREKOMST AV VITPRICKIG KRÄFTDJURSSJUKA (WSD)
Sections of tissue that include gills, digestive gland, shall be fixed for at least 24 hours in Davidson's fixative followed by normal processing for paraffin histology.
Diagnostiska förfaranden för påvisande av White spot syndrome virus (WSSV)
Sections of 5 μm shall be cut and placed on aminoalkylsilane-coated slides, which shall then be baked overnight in an oven at 40 °C.
När provtagning och laboratorieanalys genomförs för de övervaknings- och utrotningsprogram som anges i del 6 avsnitt I i bilaga I och för att utesluta misstanke om eller bekräfta förekomst av infektion orsakad av WSSV i enlighet med artikel 57 b i direktiv 2006/88/EG med de diagnostiska metoderna i del 6 avsnitt II i bilaga I, ska de detaljerade diagnostiska metoderna och förfarandena i punkterna 2–7 tillämpas.
The sections shall be dewaxed by immersing in xylene for 10 minutes.
De metoder och förfaranden som beskrivs i denna del av bilaga II har anpassats efter det ISO 17025-ackrediterade test som tillämpas vid EU:s referenslaboratorium för kräftdjurssjukdomar.
This step shall be repeated once and then the solvent shall be eliminated by immersion in two successive absolute ethanol baths for 10 minutes each.
Även alternativa tillvägagångssätt, metoder med likvärdiga förhållanden eller kit framställda av olika tillverkare, som ger likvärdig sensitivitet och specificitet som de metoder som beskrivs i denna del får tillämpas.
The sections shall then be dehydrated by immersion in a graded ethanol series.
PCR-amplifierade produkter ska under alla omständigheter sekvenseras för att bekräfta WSSV.
The sections shall be treated with proteinase K (100 μg ml– 1) in TE buffer (Tris [50 mM], EDTA [10 mM]), at 37 °C for 30 minutes.
Kräftdjursvävnad (bakkroppsben och gälar) innehållande WSSV får förvaras i etanol eller RNAlater, eller snabbfrysas vid – 80 °C.
Slides shall be dehydrated by immersion in a graded ethanol series and then air dried.
De steg som krävs för att identifiera WSSV från vävnadsprover är följande: homogenisering av vävnad, DNA-extraktion, specifik amplifiering av DNA från WSSV med PCR, visualisering av den amplifierade produkten på en gel, DNA-rening och sekvensering för att bekräfta patogenens identitet.
Sections shall be incubated with 100 μl of hybridisation buffer (4 × SSC [standard saline citrate], 50 % formamide, 1 × Denhardt's solution, 250 μg ml– 1 yeast tRNA, 10 % dextran sulphate) containing 10 ng (1 μl of the PCR reactants prepared as described in point I.3.2 using primers CCG-GTG-CCA-GGT-ATA-TCT-CG and TTC-GGG-TGG-TCT-TGA-AAG-GC) of the digoxigenin-labelled probe.
Homogenisering av vävnad
Sections shall be covered with in-situ plastic cover-slips and placed on a heating block at 95 °C for five minutes.
Sönderdelningen av vävnad och beredningen av ett homogenat i en lämplig buffert ska utföras med FastPrep homogenisator och Lysing Matrix A-rör (MP Biomedicals).