natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Interpretation of the results of the study should take into account all available information on the chemical, including physico-chemical, TK and toxicodynamic properties, available relevant information on structural analogues, and results of previously-conducted toxicity studies with the test chemical (e.g. acute toxicity, toxicity after repeated application, mechanistic studies and studies assessing if there are substantial qualitative and quantitative species differences in in vivo/in vitro metabolic properties).
Pupillstorlek
Gross necropsy and organ weight results should be assessed in context with observations made in other repeat-dose studies, when feasible.
Salivavsöndring
Decreases in offspring growth might be considered in relationship to an influence of the test chemical on milk composition (29).
Respons på beröring
Cohort 2 (Developmental neurotoxicity)
Tårbildning
Neurobehavioral and neuropathology results should be interpreted in the context of all findings, using a weight-of-evidence approach with expert judgment.
Auditiv respons
The evaluation of developmental neurotoxicity, including human epidemiological studies or case reports, and experimental animal studies (e.g. toxicokinetic data, structure-activity information, data from other toxicity studies) should be included in this characterisation.
Läten
For guidance on the interpretation of developmental neurotoxicity results, refer to test method B.53 (35) and Tyl et al., 2008 (31).
Respons på nyp i svans
Effects established by TDAR may be less meaningful in case of other toxicities observed at lower exposure concentrations.
Fotspridning vid landning
OECD Guidance Document 43 should be consulted for aid in the interpretation of reproduction and neurotoxicity results (26).
Upphetsning
Whitby (2006), “A Tiered Approach to Life Stages Testing for Agricultural Chemical Safety Assessment”, Critical Reviews in Toxicology, 36, 69-98.
Frambensgreppstyrka
Forsythe (1999), “Phytoestrogen Content of Purified Open and Closed Formula Laboratory Animal Diets”, Lab.
Stereotypi
Sci., 49, 530- 536.
Bakbensgreppstyrka
Palmer (1995), “Detection of Effects on Male Reproduction — a Literature Survey”, Journal of the American College of Toxicologists, 14, 293-327.
Respiratoriska avvikelser
Mangelsdorf, I., J. Buschmann and B. Orthen (2003), “Some Aspects Relating to the Evaluation of the Effects of Chemicals on Male Fertility”, Regulatory Toxicology and Pharmacology, 37, 356-369.
Kemikalie
“Collaborative work to evaluate toxicity on male reproductive organs by repeated dose studies in rats — overview of the studies”, Journal of Toxicological Sciences, 25, 1-21.
Ett ämne eller en blandning.
, “Evaluation of Testicular Toxicology: A Synopsis and Discussion of the Recommendations Proposed by the Society of Toxicologic Pathology”, Birth Defects Research, Part B, 68, 408-415.
Testkemikalie
Cooper (2007), “The Rodent Estrous Cycle: Characterization of Vaginal Cytology and its Utility in Toxicological Studies”, Birth Defects Research, Part B, 80 (2), 84-97.
Alla ämnen eller blandningar som testas med denna testmetod.
, “Cycles and Seasons”, in C.R.
B.57 H295R STEROIDOGENESTEST
I. Germ Cells and Fertilization, Cambridge, New York.
Denna testmetod motsvarar OECD:s testriktlinje (TG) 456 (2011).
Reynolds (1999), “Interpreting the Toxicologic Significance of Alterations in Anogenital Distance: Potential for Confounding Effects of Progeny Body Weights”, Reproductive Toxicology, 13:
OECD inledde en högprioriterad verksamhet under 1998 för att se över befintliga, och ta fram nya, testriktlinjer för screening och testning av potentiellt hormonstörande kemikalier.
Weiner (1977), “Preputial Separation as an External Sign of Pubertal Development in the Male Rat”, Biological Reproduction, 17, 298-303.
OECD:s konceptuella ram för testning och bedömning av endokrinstörande kemikalier från 2002 består av fem nivåer, varje nivå motsvarar en annan nivå av biologisk komplexitet (se hänvisning 1).
, “Use of SRBC Antibody Responses for Immunotoxicity Testing”, Methods, 41, 9-19.
H295R steroidogenestestet in vitro (H295R) som beskrivs i denna testmetod använder en mänsklig adreno-karcinomcellinje (NCI-H295R-celler) och utgör ett in vitro-test på nivå 2 som ger mekanistiska data och som ska användas för screenings- och prioriteringsändamål.
Herzyk (2004), “Primary Antibody Response to Keyhole Limpet Hemocyanin in Rat as a Model for Immunotoxicity Evaluation”, Toxicology, 197, 23-35.
Utvecklingen och standardiseringen av testet som en screening av kemiska effekter på steroidogenes, särskilt produktionen av 17β-östradiol (E2) och testosteron (T), genomfördes i en flerstegsprocess.
Gray, L.E., J. Ostby, J. Ferrell, G. Rehnberg, R. Linder, R. Cooper, J. Goldman, V. Slott and J. Laskey (1989), “A Dose-Response Analysis of Methoxychlor-Induced Alterations of Reproductive Development and Function in the Rat”, Fundamental and Applied Toxicology, 12, 92-108.
H295R- testet har optimerats och validerats (se hänvisning 2, 3, 4, 5).
Killian (1978), “Daily Sperm Production and Epididymal Sperm Reserves of Pubertal and Adult Rats”, Journal of Reproduction and Fertility,54, 103-107.
Målet med testet är att ge svaret JA eller NEJ när det gäller en kemikalies potential att inducera eller hämma produktionen av T och E2, dock kan kvantitativa resultat erhållas i vissa fall (se punkterna 53 och 54).
Suarez (1991), “The Method of Sperm Collection Significantly Influences Sperm Motion Parameters Following Ethane Dimethanesulfonate Administration in the Rat”.
Testresultaten uttrycks som relativa förändringar i hormonproduktionen jämfört med kontroller med lösningsmedel.
Reproductive Toxicology, 5, 39-44.
Testet syftar inte till att tillhandahålla specifik mekanistisk information om interaktionen av testkemikalien med det endokrina systemet.
Wise (1996), “Methods for Assessing Sperm Motility, Morphology, and Counts in the Rat, Rabbit, and Dog: a Consensus Report”, Reproductive Toxicology, 10, 237- 244.
Forskning har bedrivits med användning av cellinjen för att identifiera effekter på specifika enzymer och intermediära hormoner såsom progesteron (se hänvisning 2).
Russell and S. Schrader (1992), “Methods for Assessing Rat Sperm Motility”, Reproductive Toxicology, 6, 267-273.
Definitioner och förkortningar som används i denna testmetod beskrivs i tillägget.
Suarez (1992), “Direct Effects of Ethane Dimethanesulphonate on Epididymal Function in Adult Rats: an In Vitro Demonstration”, Journal of Andrology, 13, 409-421.
Ett detaljerat protokoll, inklusive anvisningar om hur man bereder lösningar, odlar celler och utför olika aspekter av testet finns som tillägg I–III till OECD:s dokument Multi-Laboratory Validation of the H295R Steroidogenesis Assay to Identify Modulators of Testosterone and Estradiol Production (se hänvisning 4).
Perreault (1991), “Rat Sperm Motility Analysis: Methodologic Considerations”, Reproductive Toxicology, 5, 449-458.
Fem olika enzymer som katalyserar sex olika reaktioner är involverade i biosyntesen för könssteroidhormon.
Perreault (1993), “Computer-Assisted Sperm Analysis of Rodent Epididymal Sperm Motility Using the Hamilton-Thorn Motility Analyzer”, Methods in Toxicology, Part A, Academic, Orlando, Florida. pp. 319-333.
Enzymatisk omvandling av kolesterol till pregnenolon med cytokrom P450 (CYP)-kolesterol-sidokedjeklyvningsenzym (CYP11A) utgör det första steget i en serie av biokemiska reaktioner som kulminerar i syntesen av steroidslutprodukter.
Smith (1989), "The Automated Analysis of Rat Sperm Motility Following Subchronic Epichlorhydrin Administration: Methodologic and Statistical Considerations", Journal of Andrology, 10, 401-415.
Beroende på ordningsföljden för de följande två reaktionerna klyvs den steroidogena syntesvägen i två banor, Δ5-hydroxisteroidvägen och Δ4-ketosteroidvägen, som konvergerar i produktionen av androstendion (figur 1).
Suarez (1992), “Endpoints of Spermatoxicity in the Rat After Short Duration Exposures to Fourteen Reproductive Toxicants”, Reproductive Toxicology, 6, 491-505.
Androstendion omvandlas till testosteron (T) av 17β-hydroxisteroid-dehydrogenas (17β-HSD).
OECD (2008), Guidance Document on Mammalian Reproductive Toxicity Testing and Assessment, Series on Testing and Assessment, No 43, ENV/JM/MONO(2008)16, OECD, Paris.
Testosteron är både en intermediär och en hormonslutprodukt.
Working, P.K., M. Hurtt (1987), “Computerized Videomicrographic Analysis of Rat Sperm Motility”, Journal of Andrology, 8, 330-337.
Hos hanar kan T omvandlas till dihydrotestosteron (DHT) av 5α-reduktas som finns i cellmembran, kärnhölje och endoplasmatiskt retikulum hos målvävnaderna för androgen verkan, såsom prostata och sädesblåsor.
Bolin, B., R. Garman, K. Jensen, G. Krinke, B. Stuart, and an ad Hoc Working Group of the STP Scientific and Regulatory Policy Committee (2006), “A “Best Practices” Approach to Neuropathologic Assessment in Developmental Neurotoxicity Testing — for Today”, Toxicological Pathology, 34, 296-313.
DHT är signifikant mer potent som en androgen än T och anses också vara en homonslutprodukt.
Stütz, N., B. Bongiovanni, M. Rassetto, A. Ferri, A.M. Evangelista de Duffard, and R. Duffard (2006), “Detection of 2,4-dichlorophenoxyacetic Acid in Rat Milk of Dams Exposed During Lactation and Milk Analysis of their Major Components”, Food Chemicals Toxicology, 44, 8-16.
H295R-testet mäter inte DHT (se punkt 10).
Forsythe (2007), “Variations in Phytoestrogen Content between Different Mill Dates of the Same Diet Produces Significant Differences in the Time of Vaginal Opening in CD-1 Mice and F344 Rats but not in CD Sprague Dawley Rats”, Environmental health perspectives, 115(12), 1717-1726.
Enzymet i den steroidogena vägen som omvandlar androgenkemikalier till östrogena kemikalier är aromatashämmare (CYP19).
Sobotka (2008), “Identification and Interpretation of Developmental Neurotoxicity Effects: a Report from the ILSI Research Foundation/Risk Science Institute Expert Working Group on Neurodevelopmental Endpoints”, Neurotoxicology and Teratology, 30:
CYP19 konverterar T till 17β-östradiol (E2) och androstendion till östron.
OECD (1996), Combined Repeated Dose Toxicity Study with the Reproduction/Developmental Toxicity Screening Test, OECD Guideline for Testing of Chemicals, No 422, OECD, Paris.
E2 och T anses vara hormonslutprodukter för den steroidogena vägen.
Chapter B.43 of this Annex, Neurotoxicity Study in Rodents
Specificiteten hos CYP17:s lyasaktivitet skiljer sig för de intermediära substraten bland arterna.
OECD (2000), Guidance Document on the recognition, assessment, and use of clinical signs as humane endpoints for experimental animals used in safety evaluations, Series on Testing and Assessment, No 19, ENV/JM/MONO(2000)7, OECD, Paris.
Hos människor gynnar enzymet substraten enligt Δ5-hydroxisteroid-reaktionsvägen (pregnenolon), medan substraten i Δ4-ketosteroidvägen (progesteron) gynnas hos råttor (se hänvisning 19).
Chapter B.53 of this Annex, Developmental Neurotoxicity Study
Sådana skillnader i CYP17:s lyasaktivitet kan förklara vissa artberoende skillnader i reaktioner på kemikalier som förändrar steroidogenes in vivo (se hänvisning 6).
Chapter B.54 of this Annex, Uterotrophic Bioassay in Rodents:
H295-celler har visat sig bäst reflektera mänskliga vuxna adrenalenzymuttryck och hormonproduktionsmönster (se hänvisning 20) men är kända för att uttrycka enzymer för både Δ5-hydroxisteroid- och Δ4-ketosteroidvägarna för androgensyntesen (se hänvisning 7, 11, 13, 15).
A short-term Screening Test for Oestrogenic Properties
Steroidogen väg i H295R-celler
Chapter B.55 of this Annex, Hershberger Bioassay in Rats:
Enzymer är kursiverade, hormoner i fetstil och pilar anger riktningen för syntesen.
A Short-term Screening Assay for (Anti)Androgenic Properties
Grå bakgrund indikerar kortikosteroidvägar/-produkter.
OECD (2009), Guidance Document for Histologic Evaluation of Endocrine and Reproductive Test in Rodents, Series on Testing and Assessment, No 106, OECD, Paris.
Den mänskliga H295R-adreno-karcinom-cellinjen är en användbar in vitro-modell för undersökning av effekter på steroidhormonsyntesen (se hänvisning 2, 7, 8, 9, 10).
OECD (2011), Guidance Document on the Current Implementation of Internal Triggers in the Extended One Generation Reproductive Toxicity Study in the United States and Canada, Series on Testing and Assessment, No 117, ENV/JM/MONO(2011)21, OECD, Paris.
H295R-cellinjen uttrycker gener som kodar för alla viktiga enzymer för steroidogenes som nämns ovan (se hänvisning 11, 15) (figur 1).
Extended One Generation Reproductive Toxicity Study, Series on Testing and Assessment, No 151, OECD, Paris.
Detta är en unik egenskap, eftersom in vivo-uttryck hos dessa gener är vävnads- och utvecklingsstadiespecifika, och det är normalt ingen enskild vävnad eller enskilt utvecklingsstadium som uttrycker alla gener som är inblandade i steroidogenes (se hänvisning 2).
Measures and observations included in the functional observational battery (Cohort 2A)
H295R-celler har fysiologiska egenskaper som zonala odifferentierade humana fetala adrenala celler (se hänvisning 11).
Home Cage & Open Field
Cellerna representerar ett unikt in vitro-system genom att de har förmågan att producera alla de steroidhormoner som finns i den vuxna binjurebarken och könskörtlarna, vilket medger testning av effekter på såväl kortikosteroidsyntesen och produktionen av könssteroidhormoner såsom androgener och östrogener.
Manipulative
Testet validerades dock endast för att detektera T och E2.
Physiologic
Förändringar som registrerats av testsystemet i form av förändringar i produktionen av T och E2 kan vara resultatet av en mängd olika interaktioner av testkemikalier med steroidogena funktioner som uttrycks genom H295R-celler.
Posture
Dessa inkluderar uttrycksmodulering, syntes eller funktion hos enzymer som är involverade i produktion, omvandling eller eliminering av steroidhormoner (se hänvisning 12, 13, 14).
Ease of removal
Hämning av hormonproduktion kan bero på direkt konkurrerande bindning till ett enzym i syntesvägen, påverkan av samfaktorer som NADPH (nikotinamidadenindinukleotidfosfat) och cAMP (cykliskt adenosinmonofosfat), och/eller ökning av steroidmetabolism eller undertryckande av genuttrycket hos vissa enzymer i steroidogenesens syntesväg.
Temperature
Även om inhibition kan vara en funktion av både direkta och indirekta processer involverade i hormonproduktionen, är induktion typiskt av en indirekt karaktär, genom att till exempel påverka samfaktorer såsom NADPH och cAMP (som i fallet med forskolin), minskande steroidmetabolism (se hänvisning 13) och eller uppreglering av ett steroidogent genuttryck.
Involuntary Clonic & Tonic
H295R-testet har flera fördelar:
Ease of handling
Den möjliggör detektion av både ökningar och minskningar i produktionen av både T och E2.
Palpebral Closure
Den gör det möjligt att direkt bedöma de potentiella effekterna av en kemikalie på cellviabilitet/cytotoxicitet.
Muscle Tone
Detta är en viktig egenskap eftersom den gör det möjligt att skilja mellan effekter som beror på cytotoxicitet och effekter som beror på direkt interaktion av kemikalier via steroidogena syntesvägar, vilket inte är möjligt i vävnadsexplantatsystem som består av flera celltyper med olika känslighet och funktioner.
Pupil response
Den kräver inte användning av djur.
Piloerection
H295R-cellinjen finns kommersiellt tillgänglig.
Approach Response
De principiella begränsningarna för testet är följande:
Pupil size
Dess metaboliska kapacitet är okänd men förmodligen ganska begränsad.
Salivation
Därför kommer kemikalier som metaboliskt måste aktiveras troligen att saknas i detta test.
Touch Response
Den mäter inte DHT och förväntas därför inte detektera kemikalier som hämmar 5α-reduktas, i de fallen kan Hershbergers bioassay (se hänvisning 16) användas.
Lacrimation
H295R-testet detekterar inte kemikalier som stör steroidogenes genom att påverka hypotalamus-hypofys-gonad-axeln (HPG) eftersom detta endast kan studeras hos intakta djur.
Auditory Response
Syftet med testet är att upptäcka kemikalier som påverkar T- och E2-produktionen.
Vocalisations
T är också en mellanprodukt i syntesvägen för E2.
Tail Pinch Response
Testet kan detektera kemikalier som normalt hämmar eller inducerar enzymerna i steroidogenesens reaktionsväg.
Rearing
Testet utförs vanligtvis under standardcellodlingsbetingelser i odlingsplattor med 24 hål.
Righting Response
Efter en acklimatiseringsperiod på 24 timmar på flerhålsplattor exponeras cellerna under 48 timmar för sju koncentrationer av testkemikalien i minst tre replikat.
Gait Abnormalities
Lösningsmedel och en känd inhibitor och inducerare av hormonproduktion körs vid en bestämd koncentration som negativ och positiv kontroll.
Landing Foot Splay
Vid slutet av exponeringsperioden avlägsnas mediet från varje hål.
Arousal
Cellviabiliteten i varje hål analyseras omedelbart efter att mediet tagits bort.
Forelimb Grip Strength
Koncentrationer av hormoner i mediet kan mätas med många olika metoder inklusive kommersiellt tillgängliga hormonmätningsutrustningar och/eller instrumentella metoder, som till exempel vätskekromatografi-masspektrometri (LC-MS).
Stereotypy
Data uttrycks som X-faldig förändring i förhållande till lösningsmedelskontrollen och den lägsta koncentrationen med observerad effekt (LOEC).
Stains
Den första testomgången kan användas för att bestämma dos med efterföljande justering av koncentrationer för omgång 2 och 3, i tillämpliga fall, om löslighets- eller cytotoxicitetsproblem påträffas eller kemikaliens aktivitet verkar vara i slutet av det testade koncentrationsintervallet.
Respiratory Abnormalities
ODLINGSFÖRFARANDE
Chemical
Cellinje
A substance or a mixture.
NCI-H295R-celler finns kommersiellt tillgängliga från American Type Culture Collections (ATCC) efter ett undertecknande av ett avtal om materialöverföring (Material Transfer Agreement, MTA) [14].
Test Chemical
Inledning
Any substance or mixture tested using this test method.
På grund av förändringar i den E2-producerande förmågan hos cellerna med ökande ålder/passager (se hänvisning 2) bör cellerna odlas efter ett särskilt protokoll innan de används och antalet passager sedan cellerna tinades såväl som passagenumret då cellerna frystes och placerades i förvaring i flytande kväve ska noteras.
B.57 H295R STEROIDOGENESIS ASSAY
Den första siffran anger det faktiska cellpassagenumret och den andra siffran beskriver passagenumret då cellerna frystes och placerades i lager.
This test method is equivalent to OECD Test Guideline (TG) 456 (2011).
Till exempel ska celler som frysts efter passage fem och tinats och sedan delats tre gånger (4 passager om man räknar de nyligen upptinade cellerna som passage 1) efter att de odlats igen märkas passage 4.5.
The OECD initiated a high-priority activity in 1998 to revise existing, and to develop new, test guidelines for the screening and testing of potential endocrine disrupting chemicals.
Ett exempel på ett numreringsschema återfinns i tillägg I till valideringsrapporten (se hänvisning 4).
The 2002 OECD Conceptual Framework for Testing and Assessment of Endocrine Disrupting Chemicals comprises five levels, each level corresponding to a different level of biological complexity (1).
Lagringsmediet används som bas för det berikade mediet och frysmediet.
The in vitro H295R Steroidogenesis Assay (H295R) described in this test method utilises a human adreno-carcinoma cell line (NCI-H295R cells) and constitutes a level 2 “in vitro assay, providing mechanistic data”, to be used for screening and prioritisation purposes.
Berikat medium är en nödvändig komponent för odling av celler.
Development and standardisation of the assay as a screen for chemical effects on steroidogenesis, specifically the production of 17β-oestradiol (E2) and testosterone (T), was carried out in a multi–step process.
Frysmediet är särskilt utformat för att medge opåverkad frysning av celler för långtidsförvaring.
The H295R assay has been optimised and validated (2) (3) (4) (5).
Före användning bör Nu-serum (eller ett jämförbart serum med samma egenskaper som har visat sig ge data som uppfyller testprestanda- och kvalitetskontrollkraven (QC)), som är en beståndsdel i berikade medier, analyseras för bakgrundskoncentrationer av T och E2.
The objective of the H295R Steroidogenesis Assay is to detect chemicals that affect production of E2 and T. The H295R assay is intended to identify xenobiotics that have as their target site(s) the endogenous components that comprise the intracellular biochemical pathway beginning with the sequence of reactions from cholesterol to the production of E2 and/or T. The H295R assay is not intended to identify chemicals that affect steroidogenesis due to effects on the hypothalamic-pituitary-gonadal (HPG) axis.
Beredningen av dessa lösningar beskrivs i tillägg II till valideringsrapporten (se hänvisning 4).
The goal of the assay is to provide a YES/NO answer with regard to the potential of a chemical to induce or inhibit the production of T and E2;
Efter inledandet av en H295R-cellodling från en ursprunglig ATCC-sats, bör celler odlas i fem passager (dvs. cellerna delas 4 gånger).
however, quantitative results may be obtained in some cases (see paragraphs 53 and 54).
Passagefem-celler fryses sedan ner i flytande kväve för lagring.
The results of the assay are expressed as relative changes in hormone production compared with the solvent controls (SCs).
Innan cellerna fryses ner, körs ett urval av tidigare passagefyra-celler på en QC-platta (se punkt 36 och 37) för att kontrollera om den basala produktionen av hormoner och responsen på positiva kontrollkemikalier uppfyller kvalitetskontrollkriterierna för testet enligt definitionen i tabell 5.
The assay does not aim to provide specific mechanistic information concerning the interaction of the test chemical with the endocrine system.
H295R-celler måste odlas, frysas och lagras i flytande kväve för att säkerställa att det alltid finns celler för lämplig passage/ålder för odling och användning.
Research has been conducted using the cell line to identify effects on specific enzymes and intermediate hormones such as progesterone (2).
Det maximala antalet passager efter att ha tagit en ny [15] eller fryst [16] sats av celler till odling som är godtagbart för användning i H295R-testet bör ej överstiga 10.
Definitions and abbreviations used in this test method are described in the Appendix.
Till exempel skulle godtagbara passager för odlingar av celler från ett parti fryst vid passage 5 vara 4.5 till 10.5.
A detailed protocol including instructions on how to prepare solutions, cultivate cells and perform various aspects of the test is available as Appendix I-III to the OECD document “Multi-Laboratory Validation of the H295R Steroidogenesis Assay to Identify Modulators of Testosterone and Estradiol Production” (4).
För celler som startades från dessa frysta partier bör det förfarande som beskrivs i punkt 19 följas.
Five different enzymes catalysing six different reactions are involved in sex steroid hormone biosynthesis.
Dessa celler ska odlas i minst fyra (4) ytterligare passager (passage 4.5) innan de används för testning.Utgångsceller från fryst lager
Enzymatic conversion of cholesterol to pregnenolone by the cytochrome P450 (CYP) cholesterol side-chain cleavage enzyme (CYP11A) constitutes the initial step in a series of biochemical reactions that culminate in synthesis of steroid end-products.
Förfarandet för att starta celler från fryst lager ska användas när en ny sats av celler avlägsnas från lagringen i flytande kväve för odling och testning.
Depending upon the order of the next two reactions, the steroidogenic pathway splits into two paths, the Δ5-hydroxysteroid pathway and Δ4-ketosteroid pathway, which converge in the production of androstenedione (Figure 1).
Detaljer för detta förfarande framgår av tillägg III till valideringsrapporten (se hänvisning 4).
The H295R assay does not measure DHT (see paragraph 10).
Uppdelning av cellerna är nödvändig för att säkerställa cellernas hälsa och tillväxt och för att bibehålla celler till bioassayer.