natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Further guidance of the humane treatment of animals is given by the OECD (25).
Alla förfaranden bör överensstämma med lokala normer för laboratoriedjurvård.
As with all assays using live animals, it is essential to ensure that the data are truly necessary prior to the start of the assay.
Dessa beskrivningar av vård och behandling är minimikrav och ersätts av lokala föreskrifter som t.ex.
For example, two conditions where the data may be required are:
Europaparlamentets och rådets direktiv 2010/63/EU av den 22 september 2010 om skydd av djur som används för vetenskapliga ändamål (se hänvisning 38).
high exposure potential (Level 1 of the Conceptual Framework, Appendix 2) or indications for oestrogenicity (Level 2) to investigate whether such effects may occur in vivo;
Temperaturen i djurutrymmet bör vara 22 °C (med ett ungefärligt intervall på ± 3 °C).
effects indicating oestrogenicity in Level 4 or 5 in vivo tests to substantiate that the effects were related to an oestrogenic mechanism that cannot be elucidated using an in vitro test.
Den relativa fuktigheten bör vara minst 30 % och bör helst inte överstiga 70 %, utom när rummet rengörs.
Definitions used in this test method are given in Appendix 1.
Målet bör vara relativ luftfuktighet på 50–60 %.
The Uterotrophic Bioassay relies for its sensitivity on an animal test system in which the hypothalamic-pituitary-ovarian axis is not functional, leading to low endogenous levels of circulating oestrogen.
Artificiell belysning bör användas.
This will ensure a low baseline uterine weight and a maximum range of response to administered oestrogens.
Den dagliga belysningssekvensen bör vara 12 timmar ljus, 12 timmar mörker.
Two oestrogen sensitive states in the female rodent meet this requirement:
Djuren ska ha fri tillgång till laboratoriefoder och dricksvatten.
immature females after weaning and prior to puberty; and
Unga vuxna djur kan inhysas individuellt eller i burar om grupper på upp till tre djur.
young adult females after ovariectomy with adequate time for uterine tissues to regress.
På grund av de omogna djurens låga ålder rekommenderas social gruppinhysning.
The test chemical is administered daily by oral gavage or subcutaneous injection.
Höga nivåer av fytoöstrogener i laboratoriefoder har varit kända för att öka livmodervikterna tillräckligt mycket hos gnagare för att störa den uterotrofa bioassayen (se hänvisning 13, 14, 15).
Graduated test chemical doses are administered to a minimum of two treatment groups (see paragraph 33 for guidance) of experimental animals using one dose level per group and an administration period of three consecutive days for immature method and a minimum administration period of three consecutive days for ovx-adult method.
Höga nivåer av fytoöstrogener och omsättbar energi i laboratoriefoder kan också leda till tidig pubertet om omogna djur används.
The animals are necropsied approximately 24 hours after the last dose.
Förekomsten av fytoöstrogener kommer främst från soja och alfalfaprodukter som tillförts laboratoriefodret, och koncentrationer av fytoöstrogener har visat sig variera mellan olika partier av standardlaboratoriefoder (se hänvisning 23).
For oestrogen agonists, the mean uterine weight of the treated animal groups relative to the vehicle group is assessed for a statistically significant increase.
Kroppsvikt är en viktig variabel, eftersom den mängd livsmedel som konsumeras är relaterad till kroppsvikten.
A statistically significant increase in the mean uterine weight of a test group indicates a positive response in this bioassay.
Därför kan den faktiska fytoöstrogendosen som konsumeras genom samma foder variera mellan arter och åldrar (se hänvisning 9).
DESCRIPTION OF THE METHOD
För omogna honråttor kan foderkonsumtionen på grundval av kroppsvikten vara ungefär dubbelt så stor som hos ovariektomerade unga vuxna honor.
Commonly used laboratory rodent strains may be used.
För unga vuxna möss kan foderkonsumtionen på grundval av kroppsvikten vara ungefär fyrdubblad som den för ovariektomerade unga vuxna honråttor.
As an example, Sprague-Dawley and Wistar strains of rats were used during the validation.
Resultat från den uterotrofa bioassayen (se hänvisning 9, 17, 18, 19) visar dock att begränsade mängder fytoöstrogener i fodret är acceptabla och minskar inte bioassayens känslighet.
Strains with uteri known or suspected to be less responsive should not be used.
Som en vägledning bör nivåerna av fytoöstrogener i fodret inte överstiga 350 μg genisteinekvivalenter/gram laboratoriefoder för omogna Sprague Dawley- och Wistar-honråttor (se hänvisning 6, 9).
The laboratory should demonstrate the sensitivity of the strain used as described in paragraphs 26 and 27.
Sådant foder bör också vara lämplig vid testning av unga vuxna ovariektomerade råttor, eftersom foderkonsumtionen på basis av kroppsvikten är mindre hos unga vuxna jämfört med omogna djur.
The rat and mouse have been routinely used in the Uterotrophic Bioassay since the 1930s.
Om vuxna ovariektomerade möss eller mer fytoöstrogenkänsliga råttor används, måste en proportionell minskning av fytoöstrogennivåerna i fodret övervägas (se hänvisning 20).
The OECD validation studies were only performed with rats based on an understanding that both species are expected to be equivalent and therefore one species should be enough for the world-wide validation in order to save resources and animals.
Dessutom kan skillnader i tillgänglig metabolisk energi för olika typer av föda leda till tidsförskjutning av pubertetsdebuten (se hänvisning 21, 22).
The rat is the species of choice in most reproductive and developmental toxicity studies.
Ett noggrant val av foder utan förhöjda nivåer av fytoöstrogener (för vägledning, se hänvisning 6, 9) eller omsättbar energi, som kan påverka resultaten (se hänvisning 15, 17, 19, 22, 36), krävs före studien.
Taking into consideration that a vast historical database exists for mice and thus to broaden the scope of the Uterotrophic Bioassay test method in rodents to the use of mice as test species, a limited follow-up validation study was carried out in mice (16).
Att säkerställa ett korrekt utförande av det testsystem som används på laboratoriet enligt punkterna 26 och 27 är en viktig kontroll av båda dessa faktorer.
A bridging approach with a limited number of test chemicals, participating laboratories and without coded sample testing has been selected in keeping with the original intent to save resources and animals.
Som en säkerhetsåtgärd enligt god laboratoriesed (GLP) bör representativ provtagning av varje parti av foder som tillförs under studien utföras för eventuell analys av fytoöstrogeninnehållet (t.ex. vid hög livmoderkontrollvikt i förhållande till historiska kontroller, eller en otillräcklig respons på referensöstrogen, 17-alfa-etinylestradiol).
This bridging validation study shows for the Uterotrophic Bioassay in young adult ovariectomised mice that, qualitatively and quantitatively, the data obtained in rats and mice correspond well with each other.
Alikvoter ska analyseras som en del av studien eller frysas vid – 20 °C eller på sådant sätt att provet inte bryts ned i väntan på analys.
Where the Uterotrophic Bioassay result may be preliminary to a long-term study, this allows animals from the same strain and source to be used in both studies.
Vissa strömaterial kan innehålla naturligt förekommande östrogena eller antiöstrogena kemikalier (t.ex. är majskolvar kända för att påverka cykliciteten hos råttor och förefaller vara antiöstrogena).
The bridging approach was limited to the OVX mice and the report does not provide a robust data set to validate the immature model, thus the immature model for mice is not considered under the scope of the current test method.
Det valda ströet bör ha en minimal halt av fytoöstrogener.
Thus, in some cases mice may be used instead of rats.
Förberedelse av djuren
A rationale should be given for this species, based on toxicological, pharmacokinetic, and/or other criteria.
Försöksdjur utan tecken på sjukdom eller fysiska abnormiteter väljs slumpmässigt ut för placering i kontroll- och behandlingsgrupperna.
Modifications of the protocol may be necessary for mice.
Djuren bör identifieras unikt.
For example, the food consumption of mice on a body weight basis is higher than that of rats and therefore the phyto-oestrogen content in food should be lower for mice than for rats (9)(20)(22).
Helst bör omogna djur placeras i bur tillsammans med moderdjur eller fostermoderdjur fram till avvänjningen under acklimatiseringen.
All procedures should conform with local standards of laboratory animal care.
Acklimatiseringsperioden före studiens start bör vara ca 5 dagar för unga vuxna djur och omogna djur som levererats tillsammans med moderdjur eller fostermoderdjur.
These descriptions of care and treatment are minimum standards and will be superseded by local regulations such as Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes (38).
Om omogna djur erhålls som avvanda utan moderdjur kan det vara nödvändigt att förkorta acklimatiseringsperioden eftersom doseringen bör inledas omedelbart efter avvänjningen (se punkt 29).
The temperature in the experimental animal room should be 22 °C (with an approximate range ± 3 °C).
Kvalifikationsprövning av laboratorium
The relative humidity should be a minimum of 30 % and preferably should not exceed a maximum 70 %, other than during room cleaning.
Två olika alternativ kan användas för att kvalitetspröva laboratorier:
The aim should be relative humidity of 50-60 %.
Återkommande kontroller eller förlita sig på en inledande positiv grundkontrollstudie (se punkt 27).
Lighting should be artificial.
Minst var 6:e månad och varje gång det sker en förändring som kan påverka utförandet av testet (t.ex. en ny beredning av foder, byte av personal som utför dissektioner, förändringar av djurstam eller leverantör, etc.), bör känsligheten hos testsystemet (djurmodell) verifieras med en lämplig dos (baserat på den inledande positiva grundkontrollstudien beskriven i punkt 27) av ett referensöstrogen:
The daily lighting sequence should be 12 hours light, 12 hours dark.
etinylestradiol (CAS-nr 57-63-6) (EE).
Laboratory diet and drinking water should be provided ad libitum.
Användning av jämsides behandlade kontroller genom att inkludera en grupp som tillförs en lämplig dos av referensöstrogen i varje test.
Young adult animals may be housed individually or be caged in groups of up to three animals.
Om systemet inte svarar som förväntat bör försöksbetingelserna granskas och ändras i enlighet därmed.
Due to the young age of the immature animals, social group housing is recommended.
Det rekommenderas att dosen av referensöstrogen som används i båda fallen bör vara ungefär ED 70 till 80.
High levels of phyto-oestrogens in laboratory diets have been known to increase uterine weights in rodents to a degree enough as to interfere with the Uterotrophic Bioassay (13)(14)(15).
Positiv grundkontrollstudie – Innan ett laboratorium genomför en undersökning enligt denna testmetod för första gången bör laboratoriets kompetens visas i ett test av djurmodellens respons genom fastställande av dosresponsen för ett referensöstrogen:
High levels of phyto-oestrogens and of metabolisable energy in laboratory diets may also result in early puberty, if immature animals are used.
etinylestradiol (CAS-nr 57-63-6) (EE) med minst fyra doser.
The presence of phyto-oestrogens results primarily from the inclusion of soy and alfalfa products in the laboratory diets and concentrations of phyto-oestrogens have been shown to vary from batch-to-batch of standard laboratory diets (23).
Djurens antal och tillstånd
Body weight is an important variable, as the quantity of food consumed is related to body weight.
Varje behandlad grupp och kontrollgrupp bör innehålla minst 6 djur (protokoll för både immatur- och OVX-adultmetod).
Therefore, the actual phyto-oestrogen dose consumed from the same diet may vary among species and by age (9).
Ålder på omogna djur
For immature female rats, food consumption on a body weight basis may be approximately double that of ovariectomised young adult females.
För den uterotrofa bioassayen med omogna djur måste födelsedatum anges.
For young adult mice, food consumption on a body weight basis may be approximately quadruple that of ovariectomised young adult female rats.
Doseringen bör starta tillräckligt tidigt för att säkerställa, i slutet av tillförseln av testkemikalien, att den fysiologiska ökningen av endogena östrogener som sammanhänger med puberteten ännu inte har ägt rum.
Uterotrophic Bioassay results (9)(17)(18)(19), however, show that limited quantities of dietary phyto-oestrogens are acceptable and do not reduce the sensitivity of the bioassay.
Å andra sidan finns det belägg för att mycket unga djur kan vara mindre känsliga.
As a guide, dietary levels of phyto-oestrogens should not exceed 350 μg of genistein equivalents/gram of laboratory diet for immature female Sprague Dawley and Wistar rats (6)(9).
För att definiera optimal ålder bör varje laboratorium ta sina egna bakgrundsdata om mognad i beaktande.
Such diets should also be appropriate when testing in young adult ovariectomised rats because food consumption on a body weight basis is less in young adult as compared to immature animals.
Som en allmän vägledning kan doseringen av råttor påbörjas omedelbart efter tidig avvänjning på postnatal dag 18 (postnatal dag 0 är födelsedatum).
If adult ovariectomised mice or more phyto-oestrogen-sensitive rats are to be used, proportional reduction in dietary phyto-oestrogen levels must be considered (20).
Doseringen av råttor bör helst vara avslutad på postnatal dag 21 men i alla händelser före postnatal dag 25, eftersom hypotalamus-hypofys-ovarie-axeln blir funktionell efter den åldern och endogena östrogennivåer kan börja stiga vilket leder till en ökning av referensmedelvärden för livmodervikt och gruppens standardavvikelser (se hänvisning 2, 3, 10, 11, 12).
In addition, the differences in available metabolic energy from different diets may lead to time shifts for the onset of puberty (21)(22).
Förfarande för ovariektomi
Prior to the study, careful selection is required of a diet without an elevated level of phyto-oestrogens (for guidance see (6)(9)) or metabolisable energy, that can confound the results (15)(17)(19)(22)(36).
För ovariektomerad honråtta och honmus (behandlings- och kontrollgrupper) bör ovariektomin ske mellan 6 och 8 veckors ålder.
Ensuring the proper performance of the test system used by the laboratory as specified in paragraphs 26 and 27 is an important check on both of these factors.
För råttor bör minst 14 dagar förflyta mellan ovariektomin och den första dagen för tillförseln så att livmodern går i regress till en minimal, stabil referensnivå.
As a safeguard consistent with good laboratory practice (GLP) representative sampling of each batch of diet administered during the study should be conducted for possible analysis of phyto-oestrogen content (e.g. in the case of high uterine control weight relative to historic controls or an inadequate response to the reference oestrogen, 17 alpha ethinyl estradiol).
För möss bör åtminstone 7 dagar förflyta mellan ovariektomin och tillförselns första dag.
Aliquots should be analysed as part of the study or frozen at – 20 °C or in such a way as to prevent the sample from decomposing prior to analysis.
Eftersom små mängder av äggstocksvävnad är tillräckliga för att ge betydande cirkulerande nivåer av östrogen (se hänvisning 3), bör djuren testas före användningen genom att prov av epitelceller från vagina observeras minst fem dagar i följd (t.ex. dag 10–14 efter ovariektomin för råttor).
Some bedding materials may contain naturally occurring oestrogenic or antioestrogenic chemicals (e.g. corn cob is known to affects the cyclicity of rats and appears to be antioestrogenic).
Om djuren visar tecken på brunst bör de inte användas.
The selected bedding material should contain a minimum level of phyto-oestrogens.
Vid obduktionen bör äggstocksresterna undersökas avseende eventuella tecken på äggstocksvävnad.
Preparation of animals
Om så är fallet bör djuret inte tas med i beräkningarna (se hänvisning 3).
Experimental animals without evidence of any disease or physical abnormalities are randomly assigned to the control and treatment groups.
Ovariektomiproceduren inleds med djuret placerat i ventral halvliggande ställning, efter att djuret har blivit ordentligt bedövat.
The animals should be identified uniquely.
Snittet som öppnar den dorsolaterala bukväggen bör vara ca 1 cm på längden vid mittpunkten mellan revbensbroskets undre kant och höftbenskammen, och några millimeter i sidled fram till den laterala kanten på ryggmuskeln.
Preferably, immature animals should be caged with dams or foster dams until weaning during acclimatisation.
Äggstockarna bör tas ut ur bukhålan till ett aseptiskt underlag.
The acclimatisation period prior to the start of the study should be about 5 days for young adult animals and for the immature animals delivered with dams or foster dams.
Äggstockarna bör lossas vid förbindelsen mellan äggledaren och livmodern.
If immature animals are obtained as weanlings without dams a shorter duration of the acclimatisation period may become necessary as dosing should start immediately after weaning (see paragraph 29).
Efter att ha bekräftat att ingen massiv blödning sker, bör bukväggen tillslutas med en sutur och huden tillslutas med autoclips eller lämplig sutur.
Verification of Laboratory Proficiency
Ligaturpunkterna visas schematiskt i figur 1.
Two different options can be used to verify laboratory proficiency:
Lämplig postoperativ smärtlindring bör användas i enlighet med rekommendationer från en veterinär med erfarenhet av gnagarvård.
Periodic verification, relying on an initial baseline positive control study (see paragraph 27).
Kroppsvikt
ethinyl estradiol (CAS No 57-63-6) (EE).
Däremot är kroppsvikten relaterad till livmoderns vikt i immaturmodellen, samtidigt som den mognar (se hänvisning 34).
Use of concurrent controls, by including a group administered with an appropriate dose of reference oestrogen in each assay.
Således bör, vid början av studien, viktskillnaden mellan djuren som används i immaturmodellen vara minimal och inte överstiga ± 20 % av medelvikten.
If the system does not respond as expected, the experimental conditions should be examined and modified accordingly.
Detta innebär att uppfödaren bör standardisera kullstorleken, för att säkerställa att avkomman från olika moderdjur kommer att matas ungefär likadant.
It is recommended that the dose of reference oestrogen to be used in either approach be approximately the ED70 to 80.
Djuren bör anvisas till grupper (både kontroll- och behandlingsgrupper) genom slumpmässig viktfördelning, så att medelvärdet för kroppsvikten i varje grupp inte statistiskt skiljer sig åt från andra grupper.
Baseline Positive Control Study — Before a laboratory conducts a study under this test method for the first time, laboratory proficiency should be demonstrated by testing the responsiveness of the animal model, by establishing the dose response of a reference oestrogen:
Man bör överväga att undvika anvisning av kullsyskon till samma behandlingsgrupp, så vitt det är möjligt, utan att öka antalet kullar som ska användas för undersökningen.
ethinyl estradiol (CAS No 57-63-6) (EE) with a minimum of four doses.
För att fastställa huruvida en testkemikalie kan ha östrogen aktivitet in vivo är normalt två dosgrupper och en kontrollgrupp tillräckliga, och denna utformning är därför att föredra av djurskyddsskäl.
The uterine weight response will be compared to established historical data (see reference (5)).
Om syftet är att antingen erhålla en dos-responskurva eller att extrapolera till lägre doser, behövs minst 3 dosgrupper.
If this baseline positive control study does not yield the anticipated results the experimental conditions should be examined and modified.
Om information utöver identifiering av östrogen aktivitet (t.ex. en uppskattning av potens) krävs, bör ett annat doseringsschema övervägas.
Number and condition of animals
Med undantag av behandlingen med testkemikalien bör djuren i kontrollgruppen hanteras på exakt samma sätt som testgruppen.
Each treated and control group should include at least 6 animals (for both immature and ovx-adult method protocols).
Om en vehikel används för tillförsel av testkemikalien bör kontrollgruppen tillföras samma mängd vehikel som används i de behandlade grupperna (eller den största volym som används i testgrupperna om detta skiljer sig åt mellan grupperna).
Age of immature animals
Målet för den uterotrofa bioassayen är att välja doser som garanterar djurens överlevnad och som inte orsakar signifikant toxicitet eller lidande hos djuren, efter tre dagar i följd med tillförsel av kemikalien upp till en maximal dos på 1000 mg/kg/dag.
For the Uterotrophic Bioassay with immature animals the day of birth must be specified.
Alla dosnivåer bör väljas med hänsyn till eventuella toxicitetsdata och (toxiko-)kinetiska data som finns tillgängliga om testkemikalien eller närbesläktade ämnen.
Dosing should begin early enough to ensure that, at the end of test chemical administration, the physiological rise of endogenous oestrogens associated with puberty has not yet taken place.
Den högsta dosen bör ta hänsyn till LD 50 och/eller information om akut toxicitet för att undvika dödsfall, svår smärta och lidande hos djuren (se hänvisning 24, 25, 26).
On the other hand, there is evidence that very young animals may be less sensitive.
Den högsta dosen bör motsvara maximal tolererbar dos (MTD).
For defining the optimal age each laboratory should take its own background data on maturation into consideration.
En studie som genomförs vid en dosnivå som framkallar en positiv uterotrof respons accepteras också.
As a general guide, dosing in rats may begin immediately after early weaning on postnatal day 18 (with the day of birth being postnatal day 0).
Som en screening är breda intervall (t.ex. halva logenheter som motsvarar en dosprogression på 3,2 eller till och med upp till en logenhet) mellan doseringarna i allmänhet godtagbara.
Dosing in rats preferably should be completed on postnatal day 21 but in any case prior to postnatal day 25, because, after this age, the hypothalamic-pituitary-ovarian axis becomes functional and endogenous oestrogen levels may begin to rise with a concomitant increase in baseline uterine weight means and an increase in the group standard deviations (2)(3)(10)(11)(12).
Om det inte finns några lämpliga data tillgängliga kan en dosfinnande studie genomföras som hjälp för att bestämma vilka doser som ska användas.
Procedure for ovariectomy
Alternativt, om den östrogena potensen hos en agonist kan uppskattas genom in vitro-data (eller datormodeller) kan dessa beaktas vid valet av dos.
For the ovariectomised female rat and mouse (treatment and control groups), ovariectomy should occur between 6 and 8 weeks of age.
Exempelvis kan mängden testkemikalie som skulle framkalla en uterotrof respons som är likvärdig med referensagonisten (etinylestradiol) uppskattas genom dess relativa in vitro-potens jämfört med etinylestradiol.
For rats, a minimum of 14 days should elapse between ovariectomy and the first day of administration in order to allow the uterus to regress to a minimum, stable baseline.
Den högsta testdosen ges genom att multiplicera denna ekvivalentdos med en lämplig faktor, t.ex.
For mice, at least 7 days should elapse between ovariectomy and the first day of administration.
10 eller 100.
As small amounts of ovarian tissue are sufficient to produce significant circulating levels of oestrogens (3), the animals should be tested prior to use by observing epithelial cells swabbed from the vagina on at least five consecutive days (e.g. days 10-14 after ovariectomy for rats).
Överväganden för dosfinnande studie
If the animals indicate any evidence entering oestrous, the animals should not be used.
Vid behov kan en preliminär dosfinnande studie genomföras med några få djur.