natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Stock 2
Relativ förändring = (hormonkoncentration i varje hål) ÷ (medelvärde för hormonkoncentration i alla lösningsmedelskontrollhål).
Stock 6
Om en visuell inspektion av hålet eller det viabilitets-/ cytotoxicitetstest som beskrivs i punkt 42 tyder på en ökning av antalet celler, måste den eventuella ökningen verifieras.
Stock 3
Innan statistiska analyser genomförs, bör antaganden om normalitet och varianshomogenitet utvärderas.
Stock 7
Normalitet bör utvärderas med hjälp av standardsannolikhetsplotter eller annan lämplig statistisk metod (t.ex.Shapiro-Wilks-test).
After 48 hours the exposure plates are removed from the incubator and every well is checked under the microscope for cell condition (attachment, morphology, degree of confluence) and signs of cytotoxicity.
Om data (X-faldig förändring) inte är normalfördelade bör man pröva att transformera data för att approximera en normalfördelning.
The medium from each well is split into two equal amounts (approximately 490 μl each) and transferred to two separate vials appropriately labelled (i.e. one aliquot to provide a spare sample for each well).
Om data är normalfördelade, eller approximerar en normalfördelning, bör skillnaderna mellan kemiska koncentrationsgrupper och SC analyseras med hjälp av ett parametriskt test (t.ex.Dunnetts test) med koncentration som den oberoende och respons (X-faldig förändring) som den beroende variabeln.
To prevent cells from drying out, medium is removed a row or column at a time and replaced with the medium for the cell viability/cytotoxicity assay.
Om data inte är normalfördelade bör ett lämpligt icke-parametriskt test användas (t.ex.Kruskal Wallis, Steel's Many-one rank test).
If cell viability/cytotoxicity is not to be measured immediately, 200 μl PBS with Ca2+ and Mg2+ is added to each well.
Skillnaderna anses signifikanta vid p ≤ 0,05.
The media are frozen at – 80 °C until further processing to analyse hormone concentrations (see paragraphs 44-46).
Statistiska utvärderingar görs baserade på medelvärden för varje hål som representerar oberoende replikata datapunkter.
While T and E2 in medium kept at – 80 °C are generally stable for at least 3 months, hormone stability during storage should be documented within each laboratory.
Det förväntas att, på grund av det stora mellanrummet mellan doserna i den första omgången (log10-skala), det i många fall inte kommer att vara möjligt att beskriva tydliga koncentration-respons-samband där de två största doserna kommer att vara i den linjära delen av sigmoidkurvan.
Immediately after removing the medium, cell viability/cytotoxicity is determined for each exposure plate.
Därför kommer, för den första omgången eller andra datauppsättningar där detta inträffar (t.ex.där ingen maximal effekt kan uppskattas), fast rörlig statistik av typ I enligt ovan att tillämpas.
Cell Viability Determination
Om fler än två datapunkter ligger på den linjära delen av kurvan och där maximal verkningsgrad kan beräknas – som förutses för några av de andra omgångarna som utförs med hjälp av ett semi-log avstånd mellan exponeringskoncentrationer – bör en probit-, logit- eller annan lämplig regressionsmodell användas för att beräkna effektiva koncentrationer (t.ex.EC50 och EC20).
A cell viability/cytotoxicity assay of choice can be used to determine the potential impact of the test chemical on cell viability.
Resultaten bör ges både i grafiskt format (stapeldiagram som representerar medelvärdet ± 1 SD) och i tabellform (LOEC/NOEC, effektriktning och styrka för maximal respons som är en del av dos-responsdelen för data) (se figur 3 för ett exempel).
The assay should be able to provide a true measure of the percentage of viable cells present in a well, or it should be demonstrated that it is directly comparable to (a linear function of) the Live/Dead® Assay (see Appendix III to the validation report (4)).
Databedömning anses endast giltig om den har baserats på minst två oberoende genomförda omgångar.
An alternative assay that has been shown to work equally well is the MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] test (18).
Försök eller omgångar anses vara oberoende om de har genomförts på en annan dag med en ny uppsättning lösningar och kontroller.
The assessment of cell viability using the above methods is a relative measurement that does not necessarily exhibit linear relationships with the absolute number of cells in a well.
Det koncentrationsintervall som används i försök 2 och 3 (om det behövs) kan skräddarsys utifrån resultaten från försök 1 för att bättre definiera dos-responsområdet som innehåller LOEC (se punkt 47).
Therefore, a subjective parallel visual assessment of each well by the analyst should be conducted, and digital pictures of the SCs and the two greatest non-cytotoxic concentrations are to be taken and archived to enable later assessment of true cell density if this should be required.
Figur 3
If by visual inspection or as demonstrated by the viability/cytotoxicity assay there appears to be an increase in cell number, the apparent increase needs to be verified.
Exempel på presentation och utvärdering av data som erhållits under genomförandet av H295R-testet i grafisk form och i tabellform
If an increase in cell numbers is verified, this should be stated in the test report.
OH-pregnenolon
Cell viability will be expressed relative to the average response in the SCs, which is considered 100 % viable cells, and is calculated as appropriate for the cell viability/cytotoxicity assay that is used.
Progesteron
For the MTT assay, the following formula may be used:
OH-progesteron
Wells with viability lower than 80 %, relative to the average viability in the SCs (= 100 % viability), should not be included in the final data analysis.
Testosteron Estron
Inhibition of steroidogenesis occurring in the presence of almost 20 % cytotoxicity should be carefully evaluated to ensure that cytotoxicity is not the cause for the inhibition.
eoxikortikosteron
Hormone Analysis
Deoxikortisol
Each laboratory can use a hormone measurement system of its choice for the analysis of T and E2.
Kortikosteron
Spare aliquots of medium from each treatment group may be used to prepare dilutions to bring the concentration within the linear part of the standard curve.
Kortisol
As noted in paragraph 29, each laboratory should demonstrate the conformance of their hormone measurement system (e.g. ELISA, RIA, LC-MS, LC-MS/MS) with the QC criteria by analysing supplemented medium spiked with an internal hormone control prior to conducting QC runs or testing of chemicals.
Aldosteron
In order to ensure that the components of the test system do not interfere with measurement of hormones, the hormones may need to be extracted from the media prior to their measurement (see paragraph 30 for the conditions under which an extraction is or is not required).
Kemikalie
It is recommended to conduct extraction following the procedures in Appendix III to the validation report (4).
Maxförändring
If a commercial test kit is being used to measure the hormone production, the hormone analysis should be conducted as specified in the manuals provided by the test kit manufacturer.
0,15-faldig
Most manufacturers have a unique procedure by which the hormone analyses are conducted.
Letrozol
Dilutions of samples need to be adjusted such that expected hormone concentrations for the solvent controls fall within the centre of the linear range of the standard curve of the individual assay (Appendix III to the validation report (4)).
aldig
Values outside of the linear portion of the standard curve should be rejected.
Datatolkning
Example:
En testkemikalie bedöms vara negativ efter två oberoende negativa försök, eller i tre försök, som består av två negativa försök och en tvetydig eller ett positiv försök.
Extracted:
Om de data som genereras i tre oberoende försök inte uppfyller de beslutskriterier som anges i tabell 7, är de experimentella resultaten inte tolkningsbara.
450 μl medium
Resultat från koncentrationer som överstiger gränserna för löslighet eller vid cytotoxiska koncentrationer bör inte ingå i tolkningen av resultaten.
Reconstituted in:
Testrapport
250 μl assay buffer
Namn på anläggning och adress.
Dilution in Assay:
Försöksledaren och annan personal samt deras studieansvar.
1:10 (to bring the sample within the linear range of the standard curve)
Datum då studien började och slutade.
Hormone Concentration in Assay:
Testkemikalie, reagens och kontroller
150 pg/ml (already adjusted to concentration per ml sample assayed)
Identitet (namn/CAS-nr i förekommande fall), ursprung, partinummer, renhet, leverantör och karakterisering av testkemikalien, reagens och kontroller.
Recovery:
Testkemikaliens fysikaliska form och relevanta fysikalisk-kemiska egenskaper.
Final hormone concentration =
Förvaringsförhållanden samt metoden och frekvensen för beredningen av testkemikalier, reagenser och kontroller.
(Hormone concentration (per ml) ÷ recovery) (dilution factor)
Testkemikaliens stabilitet.
Selection of test concentrations
Ursprung och celltyper.
A minimum of two independent runs of the assay should be conducted.
Antalet cellpassager (cellpassageidentifikator) för celler som används i testet.
Unless prior information such as information on solubility limits or cytotoxicity provides a basis for selecting test concentrations, it is recommended that the test concentrations for the initial run be spaced at log10 intervals with 10–3 M being the maximum concentration.
Beskrivning av förfarandena för underhåll av cellkulturer.
If the chemical is soluble, and not cytotoxic at any of the tested concentrations, and the first run was negative for all concentrations, then it is to be confirmed in one more run using the same conditions as the first run was conducted (Table 7).
Förundersökningskrav (om tillämpligt)
If the results of the first run are equivocal (i.e. the fold-change is statistically significant from the SC at only one concentration) or positive (i.e. the fold change at two or more adjacent concentrations is statistically significant), the test should be repeated as indicated in Table 7 by refining the selected test concentrations.
Beskrivning av och resultat från den kemiska hormoninterferenstest.
Test concentrations in runs two and three (if applicable) should be adjusted on the basis of the results of the initial run bracketing concentrations that elicited an effect using 1/2-log concentration spacing (e.g. if the original run of 0,001, 0,01, 0,1, 1, 10, 100, 1000 μM resulted in inductions at 1 and 10 μM, the concentrations tested in the second run should be 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30, 100 μM), unless lower concentrations need to be employed to achieve a LOEC.
Beskrivning av och resultat från mätningar av hormonextraktionseffektivitet.
In the latter case, at least five concentrations below the lowest concentration tested in the first run should be used in the second run using a 1/2-log scale.
Standard- och kalibreringskurvor för alla analystester som ska genomföras.
If the second run does not confirm the first run (i.e. statistical significance does not occur at the previously positively tested Live/Deadconcentration ± 1 concentration-increment), a third experiment is to be conducted using the original testing conditions.
Detektionsgränser för de valda analystesterna.
Equivocal results in the first run are considered negative if the observed effect could not be confirmed in any of the two subsequent runs.
Testbetingelser
Equivocal results are considered as positive responses (effect) when the response can be confirmed in at least one more run within a ± 1 concentration increment (see section 55 for the Data Interpretation Procedure).
Mediets sammansättning.
Table 7
Testkemikaliens koncentration.
Decision matrix for possible outcome scenarios
Celldensitet (beräknade eller uppmätta cellkoncentrationer vid 24 timmar och 48 timmar).
Run 1
Testkemikaliens löslighet (löslighetsgräns, om fastställd).
Run 2
Inkubationstid och villkor.
Run 3
Testresultat
Decision
Rådata för varje hål för kontroller och testkemikalier – varje mätresultat från replikat i form av de ursprungliga uppgifterna från det instrument som används för att mäta hormonproduktion (t.ex.OD, fluorescensenheter, DPM, etc.).
Scenario
Validering av normalitet eller beskrivning av datatransformation.
Positive
Responsmedelvärde ± 1 SD för varje hål som mätts.
Confirm [26]
Cytotoxicitetsdata (testkoncentrationer som orsakade cytotoxicitet).
Stop
Bekräftelse på att QC-kraven uppfylldes.
Refine [27]
Relativ förändring jämfört med lösningsmedelskontroll korrigerad för cytotoxicitet.
Equivocal [28]
Ett stapeldiagram som visar relativ (X-faldig förändring) vid varje koncentration, SD och statistisk signifikans som anges i punkt 49–54.
Quality Control of the Test Plate
Tolkning av data
In addition to meeting the criteria for the QC plate, other quality criteria that pertain to acceptable variation between replicate wells, replicate experiments, linearity and sensitivity of hormone measurement systems, variability between replicate hormone measures of the same sample, and percentage recovery of hormone spikes after extraction of medium (if applicable; see Paragraph 30 regarding extraction requirements) should be met and are provided in Table 8.
Tillämpa datatolkningsförfarandet på resultaten och diskutera iakttagelser.
Data should fall within the acceptable ranges defined for each parameter to be considered for further evaluation.
Diskussion
Table 8
Slutsatser
Acceptable ranges and/or variation (%) for H295R assay test plate parameters.
OECD (2002), OECD Conceptual Framework for the Testing and Assessment of Endocrine Disrupting Chemicals, se tillägg 2 till kapitel B.54 i denna bilaga.
(LOQ: Limit of Quantification of the hormone measurement system.
Res., 14, 23–30.
CV: Coefficient of variation; SC: Solvent Control; DPM: Disintegrations per minute)
OECD (2010), Multi-Laboratory Validation of the H295R Steroidogenesis Assay to Identify Modulators of Testosterone and Estradiol Production, OECD Series of Testing and Assessment No.
Comparison Between
132, ENV/JM/MONO(2010)31, Paris.
Basal hormone production in SCs
Finns på:
Fold-greater than LOQ
OECD (2010), Peer Review Report of the H295R Cell-Based Assay for Steroidogenesis, OECD Series of Testing and Assessment No.
≥ 5-fold
133, ENV/JM/MONO(2010)32, Paris.
≥ 2,5-fold
Kapitel B.55 i denna bilaga:
Exposure Experiments — Within Plate CV for SCs (Replicate Wells)
Hershbergers bioassay på råtta:
Absolute Concentrations
Ett korttidsscreeningtest för (anti)androgena egenskaper.
Exposure Experiments — Between Plate CV for SCs (Replicate Experiments)
Tillägg
Fold-Change
Konfluens avser täckningen eller spridningen för att cellerna tillåts över eller under hela odlingsmediet.
Hormone Measurement System — Sensitivity
avser variationskoefficienten, och definieras som kvoten mellan standardavvikelsen för en distribution till sitt aritmetiska medelvärde.
Detectable fold-decrease relative to SC
CYP står för cytokrom P450 monooxygenaser, en familj av gener och enzymer som framställs från de som är involverade i katalysering av ett stort antal biokemiska reaktioner, inklusive syntes och metabolism av steroidhormoner.
Hormone Measurement System — Replicate Measure CV for SCs [29]
DPM sönderfall per minut.
Medium Extraction — Recovery of Internal 3H Standard (If Applicable)
Det är antalet atomer i en given mängd radioaktivt material som upptäcks ha avklingat under en minut.
DPM
E2
≥ 65 % Nominal
östradiol, det viktigaste östrogenet hos däggdjur.
DATA ANALYSIS AND REPORTING
H295R-celler
Data Analysis
humana adreno-karcinomceller som har fysiologiska egenskaper som zonalt odifferentierade humana fetala adrenala celler och som uttrycker alla enzymer i steroidogenesens syntesväg.
To evaluate the relative increase/decrease in chemically altered hormone production, the results should be normalised to the mean SC value of each test plate, and results expressed as changes relative to the SC in each test plate.
De är tillgängliga genom ATCC.
All data are to be expressed as mean ± 1 standard deviation (SD).
Frysmedium används för att frysa och lagra frysta celler.
Only hormone data from wells where cytotoxicity was less than 20 % should be included in the data analysis.
Det består av lagermedium samt BD NuSerum och dimetylsulfoxid.
Relative changes should be calculated as follows:
Linjärt område det område inom den standardkurva för ett hormonmätsystem där resultaten är proportionella mot koncentrationen av analyten i provet.
If data are not normally distributed, an appropriate non-parametric test should be used (e.g. Kruskal Wallis, Steel's Many-one rank test).
Den inledande passagen som startades från det frysta lagret tilldelas nummer ett (1).
Differences are considered significant at p ≤ 0,05.
Celler som delats 1 gång märks passage 2 etc. PBS
Statistical evaluations are done based on average values for each well that represent independent replicate data points.
Dulbeccos fosfatbuffrade saltlösning.
It is anticipated that due to the large spacing of doses in the first run (log10 scale) in many cases it will not be possible to describe clear concentration-response relationships where the two greatest doses will be on the linear portion of the sigmoid curve.
Kvalitetskontroll
Therefore, for the first run or any other data sets where this condition occurs (e.g. where no maximum efficacy can be estimated) type I fixed variable statistics as described above will be applied.
förkortat QC, avser de mått som behövs för att säkerställa giltiga data.
Results should be provided both in graphical (bar graphs representing mean ± 1 SD) and tabular (LOEC/NOEC, direction of effect, and strength of maximum response that is part of the dose-response portion of the data) formats (see Figure 3 for an example).
en 24-hålsplatta innehållande två koncentrationer av de positiva och negativa kontrollerna för att övervaka prestandan hos en ny sats celler, eller för att tillhandahålla positiva kontroller för testet vid testning av kemikalier.
Data assessment is only considered valid if it has been based on at least two independently conducted runs.
Omgång
An experiment or run is considered independent if it has been conducted at a different date using a new set of solutions and controls.
ett oberoende experiment som kännetecknas av en ny uppsättning av lösningar och kontroller.
The concentration range used in runs 2 and 3 (if necessary) may be tailored on the basis of the results of run 1 to better define the dose response range containing the LOEC (see paragraph 47).
Lagermedium basen för beredning av andra reagenser.
Figure 3
Den består av en 1:1-blandning av Dulbecco's Modified Eagle's Medium och Ham's F-12 Nutrient mixture (DMEM/F12) i 15 mM HEPES-buffert utan fenolrött eller natriumbikarbonat.
Example of the presentation and evaluation of data obtained during the conduct of the H295R Assay in graphical and tabular format.
Natriumbikarbonat tillsätts som bufferten, se tillägg II till valideringsrapporten (se hänvisning 4).
Asterisks indicate statistically significant differences from the solvent control (p < 0,05).
Berikat medium
Lowest observed effective concentration;
består av lagermedium samt BD Nu-Serum och ITS+ premiummix, se tillägg II till valideringsrapporten (se hänvisning 4).
Max Change:
Steroidogenes den syntetiska reaktionsvägen som leder från kolesterol till de olika steroidhormonerna.
Maximum strength of the response observed at any concentration relative to the average SC response (= 1).
Flera mellanprodukter i steroidsyntesvägen, såsom progesteron och testosteron, är viktiga hormoner i sig själva, men fungerar också som föregångare till hormoner senare i syntesvägen.
Cholesterol
T
Pregnenolone
står för testosteron, en av de två viktigaste androgenerna hos däggdjur.
OH Pregnenolone
Testkemikalie
Progesterone
varje ämne eller blandning som testas med denna testmetod.
OH Progesterone
Testplatta
Androstenedione
den platta på vilken H295R-cellerna exponeras för testkemikalien.
Testosterone
Testplattor innehåller lösningsmedelskontrollen och testkemikalien vid sju koncentrationer i tre replikat.
estradiol
Trypsin 1X en utspädd lösning av enzymet trypsin, ett pankreatiskt serinproteas, som används för att lossa celler från en cellodlingsplatta, se tillägg III till valideringsrapporten (se hänvisning 4).
eoxycorticosterone
B.58 GENMUTATIONSTESTER I SOMATISKA CELLER OCH KÖNSCELLER HOS TRANSGENA GNAGARE
Cortisol
Denna testmetod motsvarar OECD:s testriktlinje (TG) 488 (2013).
Aldosterone
EU-testmetoder finns tillgängliga för ett brett spektrum av in vitro-mutationstester som kan detektera kromosom- och/eller genmutationer.
Estrone
Mutationstester med transgena gnagare (TGR) uppfyller behovet av praktiska och allmänt tillgängliga in vivo-tester avseende genmutationer.
Deoxycortisol
TGR-mutationstesterna har granskats utförligt (se hänvisning 24, 33).
Corticosterone
De använder transgena råttor och möss som innehåller flera kopior av kromosomalt integrerad plasmid- eller fagskyttelvektorer.
LOEC Max Change
Transgenerna innehåller reportergener för påvisande av olika typer av mutationer inducerade in vivo av testkemikalier.
0,15 fold
Mutationer som uppstår hos en gnagare bedöms genom återvinning av transgenen och analys av reportergenens fenotyp i en värdbakterie som saknar reportergenen.
Letrozole
TGR-genmutationstester mäter mutationer som induceras i genetiskt neutrala gener återvunna från praktiskt taget alla vävnader hos gnagare.
29 fold
Dessa tester kringgår därför många av de befintliga begränsningarna i samband med studier av in vivo-genmutation i endogena gener (t.ex. begränsade vävnader som är lämpliga för analys, negativ/positiv selektion mot mutationer).
Data Interpretation Procedure
Den sammanvägda bedömningen tyder på att transgener svarar på mutagena ämnen på ett liknande sätt som endogena gener, särskilt när det gäller att upptäcka basparssubstitutioner, frameshift-mutationer och små deletioner och insertioner (se hänvisning 24).
A test chemical is judged to be positive if the fold induction is statistically different (p ≤ 0,05) from the solvent control at two adjacent concentrations in at least two independent runs (Table 7).
De internationella seminarierna om genotoxicitetstestning (IWGT) har ställt sig bakom införandet av TGR-genmutationstester för in vivo-detektion av genmutationer, och har rekommenderat ett protokoll för deras genomförande (se hänvisning 15, 29).
A test chemical is judged to be negative following two independent negative runs, or in three runs, comprising two negative runs and one equivocal or positive run.
Denna testmetod baseras på dessa rekommendationer.
If the data generated in three independent experiments does not meet the decision criteria listed in Table 7, the experimental results are not interpretable.
Ytterligare analys som stöder användningen av detta protokoll finns i (se hänvisning 16).
Results at concentrations exceeding the limits of solubility or at cytotoxic concentrations should not be included in the interpretation of results.
I framtiden väntas det bli möjligt att kombinera ett TGR-genmutationstest med en toxikologisk studie med upprepad dosering (kapitel B.7 i denna bilaga).
Test Report
Men data som krävs för att säkerställa att känsligheten i TGR-genmutationstester inte påverkas av den kortare period (en dag) mellan administreringsperiodens slut och provtagningstiden som används i det toxikologiska testet med upprepad dosering, jämfört med de tre dagar som används i TGR-genmutationstester.
Name of facility and location;
Data krävs också för att visa att prestandan hos analysen med upprepad dosering inte påverkas negativt av att använda en transgen gnagarstam snarare än traditionella gnagarstammar.
Study director and other personnel and their study responsibilities;
När dessa uppgifter är tillgängliga kommer denna testmetod att uppdateras.
Dates the study began and ended;
Definitioner av centrala begrepp anges i tillägget.
Test chemical, reagents and controls
Mutagenes i TGR-modellerna bedöms normalt som mutantfrekvens om så krävs, dock kan molekylär analys av mutationer ge ytterligare information (se punkt 24).