natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Identity (name/CAS No as appropriate), source, lot/batch number, purity, supplier, and characterisation of test chemical, reagents, and controls;
Dessa in vivo-genmutationstest på gnagare är särskilt relevanta för att fastställa mutagena risker, eftersom testernas responser är beroende av in vivo-metabolism, farmakokinetik, DNA-reparationsprocesser och DNA-translesionssyntes, även om dessa kan variera mellan olika arter, olika vävnader och olika typer av DNA-skador.
Physical nature and relevant physicochemical properties of test chemical;
Ett in vivo-test för genmutationer är användbart för fortsatta undersökningar av en mutagen effekt detekterat av ett in vitro-system, och för att följa upp resultaten från tester med andra in vivo-endpoints (se hänvisning 24).
Storage conditions and the method and frequency of preparation of test chemicals, reagents and controls;
Förutom att vara kausalt förknippad med framkallandet av cancer, är genmutation en relevant endpoint för förutsägelsen av mutationsbaserade icke-cancerogena sjukdomar i somatiska vävnader (se hänvisning 12, 13) samt sjukdomar som överförs via könsceller.
Stability of test chemical;
Om det finns bevis för att testkemikalien eller en relevant metabolit inte kommer att nå några av de aktuella vävnaderna, är det inte lämpligt att utföra ett TGR-genmutationstest.
Cells
I de tester som beskrivs i punkt 8 är målgenen av bakteriellt eller bakteriofagt ursprung, och metoden för återvinning av genomiskt DNA från gnagare är via införlivande av transgenen in i en λ bakteriofag- eller plasmid-skyttelvektor.
Source and type of cells;
Proceduren involverar extraktion av genomiskt DNA från gnagarvävnaden, in vitro-bearbetning av det genomiska DNA:t (dvs. packning av λ-vektorer eller ligering och elektroporering av plasmider för att återvinna skyttelvektorn) och efterföljande detektion av mutationer i bakterievärdar under lämpliga förhållanden.
Number of cell passages (cell passage identifier) of cells used in test;
Testerna använder neutrala transgener som lätt kan återvinnas ur de flesta vävnader.
Description of procedures for maintenance of cell cultures;
Det grundläggande TGR-genmutationsexperimentet innebär behandling av gnagare med en kemikalie under en tidsperiod.
Pre-test requirements (if applicable)
Den totala tiden under vilken ett djur doseras kallas administreringsperioden.
Description and results of chemical hormone-assay interference test;
Administration följs vanligen av en period före avlivning då kemikalien inte administreras och då oreparerade DNA-skador fixeras till stabila mutationer.
Description and results of hormone extraction efficiency measurements;
I litteraturen har denna period omväxlande kallats för manifestationstid, fixeringstid eller uttryckstid, och slutet av denna period är provtagningstiden (se hänvisning 15, 29).
Standard and calibration curves for all analytical assays to be conducted;
Då djuret har avlivats, isoleras genomiskt DNA från de berörda vävnaderna och renas.
Detection limits for the selected analytical assays;
Data för en enstaka vävnad per djur från flera packningar/ligeringar är vanligtvis aggregerade och mutantfrekvensen utvärderas generellt med hjälp av sammanlagt mellan 105 och 107 plackbildande eller kolonibildande enheter.
Test conditions
Vid användning av positiva selektionsmetoder bestäms de totala plackbildande enheterna med en separat uppsättning icke-selektiva plattor.
Composition of media;
Positiva selektionsmetoder används också för att påvisa punktmutationer som uppstår i cII-genen hos λ-bakteriofagskyttelvektorn (Big Blue®-mus eller -råtta, och Muta™Mouse [se hänvisning 17]) och deletionsmutationer i λ red- och gam-generna (Spi–-val i gpt-deltamus och -råtta [se hänvisning 21, 22, 28]).
Concentration of test chemical;
Mutantfrekvens beräknas genom att antalet plack/plasmider som innehåller mutationer i transgenen divideras med det totala antalet utvunna plack/plasmider från samma DNA-prov.
Cell density (estimated or measured cell concentrations at 24 hours and 48 hours)
I TGR-genmutationsstudier är mutantfrekvensen den rapporterade parametern.
Solubility of test chemical (limit of solubility, if determined);
Dessutom kan en mutationsfrekvens bestämmas som den fraktion av celler som bär oberoende mutationer.
Incubation time and conditions;
Denna beräkning kräver korrigering för klonal expansion genom sekvensering av de utvunna mutanterna (se hänvisning 24).
Test results
De mutationer som bedöms i lacI-, lacZ-, cII- och gpt-punktmutationstesterna består främst av basparssubstitutioner, frameshift-mutationer och små insertioner/deletioner.
Raw data for each well for controls and test chemicals--each replicate measure in form of the original data provided by the instrument utilised to measure hormone production (e.g. OD, fluorescence units, DPM, etc.);
Den relativa andelen av dessa mutationstyper bland spontana mutationer liknar den som ses i den endogena HPRT-genen.
Validation of normality or explanation of data transformation;
Stora deletioner påvisas endast med Spi–-selektionsanalys och lacZ-plasmidtester (se hänvisning 24).
Mean responses ± 1 SD for each well measured;
Mutationer av intresse är in vivo-mutationer som uppstår hos mus eller råtta.
Cytotoxicity data (test concentrations that caused cytotoxicity);
In vitro- och ex vivo-mutationer, som kan uppstå under fag-/plasmidåtervinning, replikation eller reparation, är relativt sällsynta och kan i vissa system identifieras specifikt, eller uteslutas av systemet med bakterievärd/positiv selektion.
Confirmation that QC requirements were met;
Förberedelser
Relative change compared with solvent control corrected for cytotoxicity;
En mängd olika transgena genmutationsdetektionsmodeller för möss är tillgängliga och dessa system har i större utsträckning än transgena råttmodeller.
A bar graph showing relative (fold change) at each concentration, SD and statistical significance as stated in paragraph 49-54;
Om råttan är en mer lämplig modell än musen (t.ex. när man undersöker mekanismen för carcinogenes för en tumör som endast ses hos råttor, för att korrelera med en toxicitetsstudie för råtta eller om råttmetabolism är känd för att vara mer representativ för människans ämnesomsättning) bör man överväga att använda transgena råttmodeller.
Data interpretation
Den ideala temperaturen i djurutrymmet är 22 °C (± 3 °C).
Apply the data interpretation procedure to the results and discuss findings;
Den relativa fuktigheten bör vara minst 30 % och ska helst inte överstiga 70 % utom när rummet rengörs, målet är att upprätthålla en relativ luftfuktighet på 50–60 %.
Discussion
Belysningen bör vara artificiell, med en daglig sekvens på 12 timmars ljus, följt av 12 timmars mörker.
Are there any indications from the study regarding the possibility that the T/E2 data could be influenced by indirect effects on the gluco-, and mineral-corticoid pathways?
Valet av foder kan påverkas av behovet av att säkerställa en lämplig blandning av en testkemikalie när den administreras via fodret.
Conclusions
Djur bör hållas i små grupper (högst fem) av samma kön, om inget aggressivt beteende kan förväntas.
OECD (2002), OECD Conceptual Framework for the Testing and Assessment of Endocrine Disrupting Chemicals, in Appendix 2 to Chapter B.54 of this Annex
Djuren får hållas individuellt om det är vetenskapligt motiverat.
Res., 14, 23-30.
Friska, unga, sexuellt mogna vuxna djur (8–12 veckor gamla vid behandlingsstarten) väljs slumpvis ut till kontroll- och behandlingsgrupperna.
OECD (2010), Multi-Laboratory Validation of the H295R Steroidogenesis Assay to Identify Modulators of Testosterone and Estradiol Production, OECD Series of Testing and Assessment No 132, ENV/JM/MONO(2010)31, Paris.
Djuren ska ha en unik identifiering.
OECD (2010), Peer Review Report of the H295R Cell-Based Assay for Steroidogenesis, OECD Series of Testing and Assessment No 133, ENV/JM/MONO(2010)32, Paris.
De bör vänjas vid förhållandena i laboratoriet under minst fem dagar.
Chapter B.55 of this Annex:
Vid studiens början bör viktskillnaderna mellan försöksdjuren vara minimal och inte överskrida ± 20 % av medelvikten för varje kön.
Hershberger Bioassay in Rats:
Beredning av doser
A short-term Screening Assay for (Anti)Androgenic Properties.
Fasta testkemikalier bör lösas upp eller suspenderas i lämpliga lösningsmedel eller vehiklar eller blandas i foder eller dricksvatten innan dosen administreras till djuren.
Appendix
Testkemikalier i flytande form kan doseras direkt eller spädas ut före doseringen.
Confluency refers to the coverage or proliferation that the cells are allowed over or throughout the culture medium.
Vid inhalationsexponering kan testkemikalier administreras som gas, ånga eller en fast/flytande aerosol, beroende på deras fysikalisk-kemiska egenskaper.
CV refers to the coefficient of variation, and is defined as the ratio of the standard deviation of a distribution to its arithmetic mean.
Nygjorda beredningar av testkemikalien bör användas om inte stabilitetsdata visar att lagringen är acceptabel.
CYP stands for cytochrome P450 mono-oxygenases, a family of genes and the enzymes produced from them that are involved in catalysing a wide variety of biochemical reactions including the synthesis and metabolism of steroid hormones.
Testbetingelser
DPM are disintegration per minute.
Lösningsmedel/vehikel
It is the number of atoms in a given quantity of radioactive material that is detected to have decayed in one minute.
Lösningsmedlet/vehikeln bör inte ge upphov till toxiska effekter vid de dosnivåer som används och bör inte kunna misstänkas för att reagera kemiskt med testkemikalien.
E2 is 17β-oestradiol, the most important oestrogen in mammalian systems.
Om annat än välkända lösningsmedel/vehiklar används bör detta stödjas med referensdata som visar deras kompatibilitet.
H295R cells are human adreno-carcinoma cells which have the physiological characteristics of zonally undifferentiated human foetal adrenal cells and which express all of the enzymes of the steroidogenesis pathway.
Det rekommenderas att i första hand använda vattenbaserade lösningsmedel/vehiklar, om det är möjligt.
They are available from the ATCC.
Positiva kontroller
Freeze medium is used to freeze and to store frozen cells.
Jämsides behandlade positiva kontrolldjur bör normalt användas.
It consists of stock medium plus BD NuSerum and dimethyl sulfoxide.
För laboratorier som har visat kompetens (se punkt 23) och rutinmässigt använder dessa analyser kan dock DNA från djur som i tidigare experiment behandlats som positiv kontroll ingå i varje studie för att bekräfta metodens framgång.
Linear Range is the range within the standard curve for a hormone measurement system where the results are proportional to the concentration of the analyte present in the sample.
Sådant DNA från tidigare experiment bör erhållas från samma art och vävnader av intresse, och bör förvaras på rätt sätt (se punkt 36).
LOQ stands for “Limit of Quantification”, and is the lowest quantity of a chemical that can be distinguished from the absence of that chemical (a blank value) within a stated confidence limit.
Doserna med de positiva kontrollkemikalierna bör väljas så att de ger svaga eller måttliga effekter som kritiskt bedömer resultaten och testets känslighet.
For the purpose of this method, the LOQ is typically defined by the manufacturer of the test systems if not specified differently.
Exempel på positiva kontrollkemikalier och vissa av deras målvävnader finns i tabell 1.
LOEC is the Lowest Observed Effect Concentration, the lowest concentration level at which the assay response is statistically different from that of the solvent control.
Exempel på positiva kontrollkemikalier och vissa av deras målvävnader
NOEC is the No Observed Effect Concentration, which is the highest concentration tested if the assay does not provide a positive response.
Positiv kontrollkemikalie och CAS-nr
Passage is the number of times that cells are split after initiation of a culture from frozen stock.
Einecs-namn och Einecs-nr
The initial passage that was started from the frozen stock is assigned the number one (1).
Egenskaper
Cells that were split 1 time are labelled passage 2, etc.
Mutationsmålvävnaden
Quality control plate is a 24 well plate containing two concentrations of the positive and negative controls to monitor the performance of a new batch of cells or to provide the positive controls for the assay when testing chemicals.
[CAS-nr 759-73-9]
Run is an independent experiment characterised by a new set of solutions and controls.
Direktverkande mutagen
Stock medium is the base for the preparation of other reagents.
Lever, lunga
It consists of a 1:1 mixture of Dulbecco's Modified Eagle's Medium and Ham's F-12 Nutrient mixture (DMEM/F12) in 15 mM HEPES buffer without phenol red or sodium bicarbonate.
Benmärg, kolon, kolonepitel, tarm, lever, lunga, mjälte, njure, ovariala granulosa celler, hanliga könsceller
Sodium bicarbonate is added as the buffer, see Appendix II to the validation report (4).
Etylkarbamat (uretan)
Supplemented medium consist of stock medium plus BD Nu-Serum and ITS+ premium mix, see Appendix II to the validation report (4).
[CAS-nr 51-79-6]
Steroidogenesis is the synthetic pathway leading from cholesterol to the various steroid hormones.
Uretan
Several intermediates in the steroid synthesis pathway such as progesterone and testosterone are important hormones in their own right but also serve as precursors to hormones farther down the synthetic pathway.
Mutagen, kräver metabolism men producerar bara svaga effekter
T stands for testosterone, one of the two most important androgens in mammalian systems.
Benmärg, förmage, tunntarm, lever, lunga, mjälte
Test chemical is any substance or mixture tested using this test method.
2,4-diaminotoluen
Test plate is the plate on which H295R cells are exposed to test chemicals.
[CAS-nr 95-80-7]
Test plates contain the solvent control and the test chemical at seven concentration levels in triplicate.
etyl-m-fenylendiamin
Trypsin 1X is a dilute solution of the enzyme trypsin, a pancreatic serine protease, used to loosen cells from a cell cultivation plate, see Appendix III to the validation report (4).
Mutagen, kräver metabolism, även positiv i Spi--testet
B.58 TRANSGENIC RODENT SOMATIC AND GERM CELL GENE MUTATION ASSAYS
Lever
This test method is equivalent to OECD Test Guideline (TG) 488 (2013).
Benso[a]pyren
EU test methods are available for a wide range of in vitro mutation assays that are able to detect chromosomal and/or gene mutations.
[CAS-nr 50-32-8]
Mutations arising in a rodent are scored by recovering the transgene and analysing the phenotype of the reporter gene in a bacterial host deficient for the reporter gene.
I avsaknad av historiska eller publicerade kontrolldata som visar att inga skadliga eller mutagena effekter induceras av det valda lösningsmedlet/vehikeln, bör obehandlade kontroller också inkluderas för varje provtagningstillfälle, för att fastställa acceptansen för vehikelkontrollen.
TGR gene mutation assays measure mutations induced in genetically neutral genes recovered from virtually any tissue of the rodent.
Kvalifikationsprövning av laboratorium
These assays, therefore, circumvent many of the existing limitations associated with the study of in vivo gene mutation in endogenous genes (e.g. limited tissues suitable for analysis, negative/positive selection against mutations).
För regleringstillämpningar är DNA-sekvensering av mutanter inte nödvändigt, i synnerhet där ett tydligt positivt eller negativt resultat erhålls.
The weight of evidence suggests that transgenes respond to mutagens in a similar manner to endogenous genes, especially with regard to the detection of base pair substitutions, frameshift mutations, and small deletions and insertions(24).
Dock kan sekvensdata vara användbara när hög interindividuell variation observeras.
The International Workshops on Genotoxicity Testing (IWGT) have endorsed the inclusion of TGR gene mutation assays for in vivo detection of gene mutations, and have recommended a protocol for their implementation (15) (29).
I dessa fall kan sekvensering användas för att utesluta möjligheten av jackpot eller klonala händelser, genom att identifiera andelen unika mutanter från en viss vävnad.
This test method is based on these recommendations.
Sekvensering av mutanter kan också övervägas när små ökningar i mutantfrekvens (dvs. som precis överskrider de obehandlade kontrollvärdena) upptäcks.
Further analysis supporting the use of this protocol can be found in (16).
Skillnader i mutantspektrum mellan de mutanta kolonierna från behandlade och obehandlade djur kan ge stöd för en mutagen effekt (se hänvisning 29).
It is anticipated that in the future it may be possible to combine a TGR gene mutation assay with a repeat dose toxicity study (Chapter B.7 of this Annex).
Dessutom kan mutationsspektrum vara användbara för att utveckla hypoteser om mekanism.
However, data are required to ensure that the sensitivity of TGR gene mutation assays is unaffected by the shorter one day period of time between the end of the administration period and the sampling time, as used in the repeat dose toxicology study, compared to 3 days used in TGR gene mutation assays.
När sekvensering ska ingå som en del av studieprotokollet bör särskild försiktighet iakttas vid utformningen av sådana studier, särskilt med avseende på antal mutanter som sekvenseras per prov, för att uppnå tillräcklig effekt enligt den statistiska modell som används (se punkt 43).
Definitions of key terms are set out in the Appendix.
Handjur bör normalt användas.
TGR gene mutation assays for which sufficient data are available to support their use in this test method are:
Om det finns betydande skillnader mellan könen i fråga om toxicitet eller ämnesomsättning måste både hanar och honor användas.
lacZ bacteriophage mouse (Muta™Mouse); lacZ plasmid mouse;
Administreringsperiod
gpt delta (gpt and Spi–) mouse and rat;
Baserat på observationer att mutationer ackumuleras för varje behandling krävs upprepad dosering med dagliga behandlingar under en period av 28 dagar.
lacI mouse and rat (Big Blue®), as performed under standard conditions.
Detta anses allmänt acceptabelt, både för att producera en tillräcklig ansamling av mutationer av svaga mutagener och för att ge en tillräcklig exponeringstid för att upptäcka mutationer i långsamt tillväxande organ.
In addition, the cII positiveselection assay can be used for evaluating mutations in the Big Blue® and Muta™Mouse models.
Alternativa behandlingsregimer kan vara lämpliga för vissa utvärderingar, och dessa alternativa doseringsscheman bör vara vetenskapligt motiverade i protokollet.
These rodent in vivo gene mutation tests are especially relevant to assessing mutagenic hazard in that the assays' responses are dependent upon in vivo metabolism, pharmacokinetics, DNA repair processes, and translesion DNA synthesis, although these may vary among species, among tissues and among the types of DNA damage.
Även om det kan öka känsligheten bör behandlingstider längre än 8 veckor förklaras tydligt och motiveras, eftersom långa behandlingstider kan ge en påtaglig ökning i mutationsfrekvensen genom klonal expansion (se hänvisning 29).
An in vivo assay for gene mutations is useful for further investigation of a mutagenic effect detected by an in vitro system, and for following up results of tests using other in vivo endpoints (24).
Dosnivåer
In addition to being causally associated with the induction of cancer, gene mutation is a relevant endpoint for the prediction of mutation-based non-cancer diseases in somatic tissues (12) (13) as well as diseases transmitted through the germline.
Dosnivåerna bör baseras på resultaten från en dosfinnande studie som mäter allmän toxicitet och som genomförts med samma exponeringsväg, eller på resultaten från befintliga subakuta toxicitetsstudier.
If there is evidence that the test chemical, or a relevant metabolite, will not reach any of the tissues of interest, it is not appropriate to perform a TGR gene mutation assay.
Icke-transgena djur av samma gnagarstam kan användas för bestämning av dosintervall.
In the assays described in paragraph 8, the target gene is bacterial or bacteriophage in origin, and the means of recovery from the rodent genomic DNA is by incorporation of the transgene into a λ bacteriophage or plasmid shuttle vector.
I huvudtestet, för att få dosresponsinformation, bör en fullständig undersökning inkludera en negativ kontrollgrupp (se punkt 22) och minst tre, lämpligt fördelade dosnivåer, utom när gränsdosen har använts (se punkt 28).
The procedure involves the extraction of genomic DNA from the rodent tissue of interest, in vitro processing of the genomic DNA (i.e. packaging of λ vectors, or ligation and electroporation of plasmids to recover the shuttle vector), and subsequent detection of mutations in bacterial hosts under suitable conditions.
Den högsta dosen bör vara maximal tolererbar dos (MTD).
The assays employ neutral transgenes that are readily recoverable from most tissues.
Den högsta dosen definieras som den dos som framkallar tecken på toxicitet på ett sådant sätt att högre dosnivåer, baserade på en likadan doseringsregim, förväntas leda till dödsfall.
The basic TGR gene mutation experiment involves treatment of the rodent with a chemical over a period of time.
Kemikalier med specifika biologiska verkningar vid låga icke-toxiska doser (såsom hormoner och mitogena substanser) och kemikalier som uppvisar mättnad av toxikokinetiska egenskaper kan vara undantag från kriterierna för dosbestämning och bör utvärderas från fall till fall.
Chemicals may be administered by any appropriate route, including implantation (e.g. medical device testing).
Dessa dosnivåer bör täcka in ett intervall som sträcker sig från maximal till låg eller ingen toxicitet.
The total period during which an animal is dosed is referred to as the administration period.
Gräns för högsta dos vid testning
Administration is usually followed by a period of time, prior to sacrifice, during which the chemical is not administered and during which unrepaired DNA lesions are fixed into stable mutations.
Om dosfinnande experiment eller befintliga data från besläktade gnagarstammar tyder på att en behandlingsregim med minst gränsdosen (se nedan) inte ger några observerbara toxiska effekter, och om ingen genotoxicitet förväntas baserat på data från strukturellt besläktade kemikalier, anses det inte nödvändigt med ett fullständigt test med tre dosnivåer.
In the literature, this period has been variously referred to as the manifestation time, fixation time or expression time;
För en administreringsperiod på 28 dagar (dvs. 28 dagliga behandlingar), ligger gränsdosen på 1000 mg/kg kroppsvikt/dag.
the end of this period is the sampling time (15) (29).
För administreringsperioder på 14 dagar eller mindre, ligger gränsdosen på 2000 mg/kg/kroppsvikt/dag (doseringsscheman som skiljer sig från 28 dagliga behandlingar bör vara vetenskapligt motiverade i protokollet, se punkt 26).
After the animal is sacrificed, genomic DNA is isolated from the tissue(s) of interest and purified.
Administrering av doser
Data for a single tissue per animal from multiple packaging/ligations are usually aggregated, and mutant frequency is generally evaluated using a total of between 105 and 107 plaque-forming or colony-forming units.
Testkemikalien administreras vanligtvis via sondmatning genom en magsond eller en lämplig intubationskanyl.
When using positive selection methods, total plaque-forming units are determined with a separate set of non-selective plates.
I allmänhet bör den förväntade exponeringsvägen för människor beaktas vid utformningen av ett test.
Positive selection methods have been developed to facilitate the detection of mutations in both the gpt gene [gpt delta mouse and rat, gpt– phenotype (20) (22) (28)] and the lacZ gene [Muta™Mouse or lacZ plasmid mouse (3) (10) (11) (30)];
Därför kan andra exponeringsvägar (t.ex. dricksvatten, subkutant, intravenöst, topiskt, inhalation, intratrakealt, foder eller implantation) vara acceptabla där de kan motiveras.