natgillin/translations-raw huggingface dataset:
whereas, lacI gene mutations in Big Blue® animals are detected through a non-selective method that identifies mutants through the generation of coloured (blue) plaques.
Intraperitoneal injektion rekommenderas inte eftersom den inte är en fysiologiskt relevant exponeringsväg för människor.
Positive selection methodology is also in place to detect point mutations arising in the cII gene of the λ bacteriophage shuttle vector [Big Blue® mouse or rat, and Muta™Mouse (17)] and deletion mutations in the λ red and gam genes [Spi– selection in gpt delta mouse and rat (21) (22) (28)].
Den maximala vätskevolymen som kan administreras genom sondmatning eller injektion vid ett tillfälle beror på försöksdjurets storlek.
Mutant frequencyis calculated by dividing the number of plaques/plasmids containing mutations in the transgene by the total number of plaques/plasmids recovered from the same DNA sample.
Volymen bör inte överskrida 2 ml/100 g kroppsvikt.
In TGR gene mutation studies, the mutant frequency is the reported parameter.
Användning av större volymer än så bör motiveras.
In addition, a mutation frequency can be determined as the fraction of cells carrying independent mutations;
Med undantag för irriterande eller frätande kemikalier, som normalt kommer att visa stegrade verkningar vid högre koncentrationer, bör variationer av testvolymen minimeras genom justering av koncentrationen för att säkerställa en konstant volym vid alla dosnivåer.
this calculation requires correction for clonal expansionby sequencing the recovered mutants (24).
Provtagningstid
The mutations scored in the lacI, lacZ, cII and gpt point mutation assays consist primarily of base pair substitution mutations, frameshift mutations and small insertions/deletions.
Somatiska celler
The relative proportion of these mutation types among spontaneous mutations is similar to that seen in the endogenous Hprt gene.
Provtagningstiden är en viktig variabel eftersom den bestäms av den period som krävs för att mutationer ska fixeras.
Large deletions are detected only with the Spi– selectionand the lacZ plasmid assays (24).
Denna period är vävnadsspecifik och förefaller vara relaterad till cellpopulationens omsättningstid, där benmärg och tarm ger en snabb respons och levern en mycket långsammare.
Mutations of interest are in vivo mutations that arise in the mouse or rat.
Om långsamt växande vävnader är av särskild betydelse, kan en senare provtagningstid på 28 dagar efter 28 dagars administreringsperiod vara lämpligare (se hänvisning 16, 29).
In vitro and ex vivo mutations, which may arise during phage/plasmid recovery, replication or repair, are relatively rare, and in some systems can be specifically identified, or excluded by the bacterial host/positive selection system.
I sådana fall kan den senare provtagningstiden ersätta 3-dagarsprovtagningstiden och kräver vetenskaplig motivering.
Preparations
Könsceller
A variety of transgenic mouse gene mutation detection models are currently available, and these systems have been more widely used than transgenic rat models.
TGR-tester är väl lämpade för studier av genmutationsinduktion i hanliga könsceller (se hänvisning 7, 8, 27), där tidpunkten och kinetiken för spermatogenes är väldefinierade (se hänvisning 27).
If the rat is clearly a more appropriate model than the mouse (e.g. when investigating the mechanism of carcinogenesis for a tumour seen only in rats, to correlate with a rat toxicity study, or if rat metabolism is known to be more representative of human metabolism) the use of transgenic rat models should be considered.
De låga antalet ägg tillgängliga för analys, även efter superovulation, och det faktum att det inte finns någon DNA-syntes i oocyten, utesluter bestämning av mutationer i honliga könsceller genom transgentester (se hänvisning 31).
The temperature in the experimental animal room ideally should be 22 °C (± 3 °C).
Provtagningstiderna för hanliga könsceller bör väljas så att alla exponerade celltyper under könscellsbildningen provtas och så att det stadium som provtagningen är inriktad på har fått tillräcklig exponering.
Although the relative humidity should be at least 30 % and preferably not exceed 70 % other than during room cleaning, the goal should be to maintain a relative humidity of 50-60 %.
Den tid det tar för könsceller att utvecklas från spermatogoniestamceller till mogna spermier som når sädesledare/cauda epididymis är ca 49 dagar för mus (se hänvisning 36) och ca 70 dagar för råtta (se hänvisning 34, 35).
Lighting should be artificial, with a daily sequence of 12 hours light, followed by 12 hours dark.
Efter en 28-dagars exponering med en efterföljande tredagars provtagningsperiod kommer de ackumulerade spermier som samlats in från sädesledaren/cauda epididymis (se hänvisning 7, 8) att utgöra en population av celler som exponerats under ungefär den senare hälften av spermatogenesen, vilket inkluderar den meiotiska och postmeiotiska perioden men inte den spermatogonieperioden eller stamcellsperioden.
The choice of diet may be influenced by the need to ensure a suitable admixture of a test chemical when administered by this route.
För att adekvat ta prov på celler i sädesledaren/cauda epididymis som var spermatogoniestamceller under exponeringsperioden krävs ytterligare en provtagningstid på minst 7 veckor (möss) eller 10 veckor (råtta), efter avslutad behandling.
Animals should be housed in small groups (no more than five) of the same sex if no aggressive behaviour is expected.
Celler extruderade från sädeskanalerna efter en period på 28 + 3 dagar utgör en blandad population rik på alla utvecklingsstadier av könsceller (se hänvisning 7, 8).
Animals may be housed individually if scientifically justified.
Provtagning av dessa celler för påvisande av genmutationer ger inte en lika exakt bedömning av de stadier där könscellsmutationer induceras som den som kan erhållas genom provtagning av spermier från sädesledaren/cauda epididymis (eftersom det finns flera olika könscellstyper i prov från sädeskanalerna och dessutom somatiska celler som kontaminerar denna cellpopulation).
The animals are acclimated to the laboratory conditions for at least five days.
Djurens hälsotillstånd bör registreras.
At the commencement of the study, the weight variation of animals should be minimal and not exceed ± 20 % of the mean weight of each sex.
Minst två gånger dagligen bör djuren observeras med avseende på morbiditet och mortalitet.
Preparation of doses
Alla djur bör vägas minst en gång i veckan.
Solid test chemicals should be dissolved or suspended in appropriate solvents or vehicles or admixed in diet or drinking water prior to dosing of the animals.
Mätning av foderkonsumtion bör göras minst en gång i veckan.
Liquid test chemicals may be dosed directly or diluted prior to dosing.
Om testkemikalien tillförs via dricksvattnet bör även vattenkonsumtionen mätas vid varje byte av vatten och minst en gång i veckan.
For inhalation exposures, test chemicals can be administered as gas, vapour or a solid/liquid aerosol, depending on their physicochemical properties.
Djur som uppvisar icke-dödliga indikatorer på överskottstoxicitet bör avlivas innan slutförandet av testperioden (se hänvisning 23).
Fresh preparations of the test chemical should be employed unless stability data demonstrate the acceptability of storage.
Vävnadsinsamling
Test Conditions
Den logiska grunden för vävnadsinsamlingen bör definieras tydligt.
Solvent/vehicle
Eftersom det är möjligt att studera mutationsinduktion i praktiskt taget alla vävnader, bör valet av vävnader som ska samlas in baseras på skälet för att genomföra studien och befintliga mutagenitets-, cancerogenitets- eller toxicitetsdata för den undersökta kemikalien.
The solvent/vehicle should not produce toxic effects at the dose volumes used, and should not be suspected of chemical reaction with the test chemical.
Viktiga faktorer för övervägande bör omfatta administreringsväg (baserat på sannolika mänskliga exponeringsvägar), den förutsagda vävnadsdistributionen och möjlig verkningsmekanism.
If other than well-known solvents/vehicles are used, their inclusion should be supported with reference data indicating their compatibility.
I avsaknad av bakgrundsinformation, bör flera somatiska vävnader som kan vara av intresse samlas in.
It is recommended that wherever possible, the use of an aqueous solvent/vehicle should be considered first.
Dessa bör representera snabbväxande och långsamt växande vävnader och vävnader på kontaktstället.
Positive Controls
Dessutom bör spermier från sädesledare/cauda epididymis och växande könsceller från sädeskanalerna (som beskrivs i punkterna 32 och 33) samlas in och lagras om framtida analyser av mutagenitet i könsceller krävs.
Concurrent positive control animals should normally be used.
Organvikter bör inhämtas, och för större organ, bör samma område samlas in på alla djur.
However, for laboratories that have demonstrated competency (see paragraph 23) and routinely use these assays, DNA from previous positive control treated animals may be included with each study to confirm the success of the method.
Lagring av vävnader och DNA
Such DNA from previous experiments should be obtained from the same species and tissues of interest, and properly stored (see paragraph 36).
Vävnader (eller vävnadshomogenat) bör förvaras vid eller under – 70 °C och ska användas för DNA-isolering inom 5 år.
When concurrent positive controls are used, it is not necessary to administer them by the same route as the test chemical;
Isolerat DNA, förvarat i kylskåp vid 4 °C i lämplig buffert, bör optimalt användas för mutationstest inom 1 år.
however, the positive controls should be known to induce mutations in one or more tissues of interest for the test chemical.
Val av vävnader för mutantanalys
The doses of the positive control chemicals should be selected so as to produce weak or moderate effects that critically assess the performance and sensitivity of the assay.
Valet av vävnader för analys bör maximera detekteringen av kemikalier som är direktverkande in vitro-mutagena, metaboliseras snabbt, mycket reaktiva eller absorberas dåligt, eller de för vilka målvävnaden bestäms genom administreringsvägen (se hänvisning 6).
Examples of positive control chemicals and some of their target tissues are included in Table 1.
I brist på bakgrundsinformation och med beaktande av kontaktstället på grund av administreringsvägen, bör levern och minst en snabbt delande vävnad (t.ex. glandulär magsäck, benmärg) utvärderas för mutagenitet.
Examples of positive control chemicals and some of their target tissues
I de flesta fall kan de ovan angivna kraven uppnås genom analyser av två noggrant utvalda vävnader, men i vissa fall skulle tre eller fler behövas.
Positive control chemical and CAS No
Om det finns särskilda skäl att misstänka könscellseffekter, inklusive positiva effekter på somatiska celler, bör könscellsvävnaderna utvärderas avseende mutationer.
EINECS name and EINECS No
Mätmetoder
Characteristics
Standardlaboratoriemetoder eller publicerade metoder för detektion av mutanter finns tillgängliga för de rekommenderade transgena modellerna:
Mutation Target Tissue
lacZ-lambdabakteriofag och -plasmid (se hänvisning 30);
Mouse
lacI-mus (se hänvisning 2, 18);
N-Ethyl-N-nitrosourea
gpt-deltamus (se hänvisning 22);
[CAS No 759-73-9]
gpt-deltaråtta (se hänvisning 28);
Direct acting mutagen
Ändringar bör motiveras och dokumenteras noga.
Liver, lung
Data från flera packningar kan läggas samman och användas för att uppnå ett tillräckligt antal plack eller kolonier.
Bone marrow, colon, colonic epithelium, intestine, liver, lung, spleen, kidney, ovarian granulosa cells, male germ cells
Emellertid kan behovet av ett stort antal packningsreaktioner för att uppnå det lämpliga antalet plack vara en indikation på dålig DNA-kvalitet.
Ethyl carbamate (urethane)
I sådana fall ska data beaktas med försiktighet eftersom den kan vara opålitlig.
[CAS No 51-79-6]
Det optimala antalet plack eller kolonier per DNA-prov styrs av den statistiska sannolikheten för att upptäcka tillräckligt många mutanter vid en viss spontan mutationsfrekvens.
[CAS No 95-80-7]
Individuella djurdata bör presenteras i tabellform.
ethyl-m-phenylenediamine
Den experimentella enheten utgörs av djuret.
Mutagen, requires metabolism, also positive in the Spi– assay
Rapporten bör omfatta det totala antalet plackbildande enheter (pfu) eller kolonibildande enheter (cfu), antal mutanter samt mutantfrekvensen för varje vävnad från varje djur.
[CAS No 50-32-8]
Uppgifter om toxicitet och kliniska tecken enligt punkt 34 ska redovisas.
Benzo[def]chrysene
Eventuella sekvenseringsresultat ska presenteras för varje mutant som analyseras, och resulterande mutationsfrekvensberäkningar för varje djur och vävnad ska visas.
Mutagen, requires metabolism
Statistisk utvärdering och tolkning av resultaten
Liver, omenta,
Det finns flera kriterier för att fastställa att ett resultat är positivt, t.ex. en dosrelaterad ökning av mutationsfrekvensen, eller en tydlig ökning av mutationsfrekvensen i enkeldosgruppen jämfört med lösningsmedels-/vehikelkontrollgruppen.
Bone marrow, breast, colon, forestomach, glandular stomach, heart, liver, lung, male germ cells
Minst tre behandlade dosgrupper bör analyseras för att ge tillräckligt med uppgifter för dos-responsanalysen.
Negative controls
Medan den biologiska relevansen för resultaten ska komma i främsta rummet kan lämpliga statistiska metoder användas som en hjälp vid utvärderingen av testresultateten (se hänvisning 4, 14, 15, 25, 26).
Verification of laboratory proficiency
För den biologiska betydelsen av ett negativt resultat ska vävnadsexponeringen bekräftas.
and 2) transgene recovery from genomic DNA (e.g. packaging efficiency).
Identifieringsuppgifter och CAS-nr, om det är känt.
Sequencing of mutants
Ursprung, partinummer om sådant finns.
For regulatory applications, DNA sequencing of mutants is not required, particularly where a clear positive or negative result is obtained.
Fysikalisk form och renhetsgrad.
However, sequencing data may be useful when high inter-individual variation is observed.
Fysikalisk-kemiska egenskaper som är relevanta för genomförandet av studien.
In these cases, sequencing can be used to rule out the possibility of jackpots or clonal events by identifying the proportion of unique mutants from a particular tissue.
Testkemikaliens stabilitet, om den är känd.
Sequencing approximately 10 mutants per tissue per animal should be sufficient for simply determining if clonal mutants contribute to the mutant frequency;
Lösningsmedel/vehikel:
sequencing as many as 25 mutants may be necessary to correct mutant frequency mathematically for clonality.
Motivering för val av vehikel.
Sequencing of mutants also may be considered when small increases in mutant frequency (i.e. just exceeding the untreated control values) are found.
Löslighet och stabilitet av testkemikalien i lösningsmedlet/vehikeln, om detta är känt.
Differences in the mutant spectrum between the mutant colonies from treated and untreated animals may lend support to a mutagenic effect (29).
Sammansättning av foder-, dricksvatten- eller inandningsberedningar.
Also, mutation spectra may be useful for developing mechanistic hypotheses.
Analytiska bestämningar av beredningar (t.ex. stabilitet, homogenitet, nominella koncentrationer).
When sequencing is to be included as part of the study protocol, special care should be taken in the design of such studies, in particular with respect to the number of mutants sequenced per sample, to achieve adequate power according to the statistical model used (see paragraph 43).
Art/stam som används och motivering av valet.
Number and Sex of Animals
Djurens antal, ålder och kön.
The number of animals per group should be predetermined to be sufficient to provide statistical power necessary to detect at least a doubling in mutant frequency.
Ursprung, inhysning, foder etc.
Group sizes will consist of a minimum of five animals;
Individuell vikt hos försöksdjuren vid försökets början, inklusive kroppsviktsintervall, medelvärde och standardavvikelse för varje grupp.
however, if the statistical power is insufficient, the number of animals should be increased as required.
Positiva och negativa kontrolldata (vehikel/lösningsmedel).
Male animals should normally be used.
Data från dosfinnande studie.
There may be cases where testing females alone would be justified;
Uppgifter om testkemikalieberedningen.
for example, when testing human female-specific drugs, or when investigating female-specific metabolism.
Motivering för administrationssätt.
If there are significant differences between the sexes in terms of toxicity or metabolism, then both males and females will be required.
Metoder för mätning av djurtoxicitet, inklusive, i förekommande fall, histopatologiska eller hematologiska analyser och frekvensen av djurobservationer och mätningar av djurens kroppsvikt.
Administration Period
Metoder för att verifiera att testkemikalien nått målvävnaden eller den allmänna cirkulationen, om negativa resultat erhålls.
Based on observations that mutations accumulate with each treatment, a repeated-dose regimen is necessary, with daily treatments for a period of 28 days.
Faktisk dos (mg/kg kroppsvikt/dag) beräknad genom testkemikaliens koncentration (ppm) i foder/dricksvatten samt konsumtionen, i tillämpliga fall.
This is generally considered acceptable both for producing a sufficient accumulation of mutations by weak mutagens, and for providing an exposure time adequate for detecting mutations in slowly proliferating organs.
Uppgifter om foder- och vattenkvalitet.
Alternative treatment regimens may be appropriate for some evaluations, and these alternative dosing schedules should be scientifically justified in the protocol.
Detaljerad beskrivning av behandlings- och provtagningsscheman samt motivering av valen.
Treatments should not be shorter than the time required for the complete induction of all the relevant metabolising enzymes, and shorter treatments may necessitate the use of multiple sampling times that are suitable for organs with different proliferation rates.
Metod för avlivning.
In any case, all available information (e.g. on general toxicity or metabolism and pharmacokinetics) should be used when justifying a protocol, especially when deviating from the above standard recommendations.
Förfaranden för att isolera och bevara vävnader.
While it may increase sensitivity, treatment times longer than 8 weeks should be explained clearly and justified, since long treatment times may produce an apparent increase in mutant frequency through clonal expansion (29).
Metoder för isolering av gnagares genomiska DNA, räddning av transgenen från genomiskt DNA och överföring av transgent DNA till en bakterievärd.
Dose Levels
Ursprungs- och partinummer för alla celler, satser och reagenser (i förekommande fall).
Dose levels should be based on the results of a dose range-finding study measuring general toxicity that was conducted by the same route of exposure, or on the results of pre-existing sub-acute toxicity studies.
Metoder för räkning av mutanter.
Non-transgenic animals of the same rodent strain may be used for determining dose ranges.
Metoder för molekylär analys av mutanter och användning för att korrigera klonalitet och/eller beräkna mutationsfrekvenser, i tillämpliga fall.
In the main test, in order to obtain dose response information, a complete study should include a negative control group (see paragraph 22) and a minimum of three, appropriately-spaced dose levels, except where the limit dose has been used (see paragraph 28).
Resultat:
The top dose should be the Maximum Tolerated Dose (MTD).
Djurens skick före och under hela testperioden, inklusive tecken på toxicitet.
The MTD is defined as the dose producing signs of toxicity such that higher dose levels, based on the same dosing regimen, would be expected to produce lethality.
Kropps- och organvikter vid avlivning.
Chemicals with specific biological activities at low non-toxic doses (such as hormones and mitogens), and chemicals which exhibit saturation of toxicokinetic properties may be exceptions to the dose-setting criteria and should be evaluated on a case-by-case basis.
För varje vävnad/djur utvärderas antalet mutanter, antalet plack eller kolonier samt mutantfrekvensen.
If dose range-finding experiments, or existing data from related rodent strains, indicate that a treatment regime of at least the limit dose (see below) produces no observable toxic effects,and if genotoxicity would not be expected based upon data from structurally related chemicals, then a full study using three dose levels may not be considered necessary.
För varje vävnad/djur, antalet oberoende mutanter och genomsnittmutationsfrekvensen där molekylär analys av mutationer utfördes.
For an administration period of 28 days (i.e. 28 daily treatments), the limit dose is 1000 mg/kg body weight/day.
Data från jämsides behandlad och tidigare negativ kontroll med omfång, medelvärden och standardavvikelser.
For administration periods of 14 days or less, the limit dose is 2000 mg/kg/body weight/day (dosing schedules differing from 28 daily treatments should be scientifically justified in the protocol; see paragraph 26).
Data från jämsides behandlad positiv kontroll (eller data om DNA från tidigare positiv kontroll).
Administration of Doses
Analytiska bestämningar, om det finns tillgängligt (t.ex.
The test chemical is usually administered by gavage using a stomach tube or a suitable intubation cannula.
DNA-koncentrationer som används i packning, DNA-sekvenseringsdata);
In general, the anticipated route of human exposure should be considered when designing an assay.
De statistiska analyser och metoder som använts.
Therefore, other routes of exposure (such as drinking water, subcutaneous, intravenous, topical, inhalation, intratracheal, dietary, or implantation) may be acceptable where they can be justified.
Slutsats
Intraperitoneal injection is not recommended since it is not a physiologically relevant route of human exposure.
OECD (2000), Guidance Document on the Recognition, Assessment and Use of Clinical Signs as Humane Endpoints for Experimental Animals Used in Safety Evaluation, Series on Testing and Assessment, N°19, ENV/JM/MONO(2000)7, OECD, Paris.
The maximum volume of liquid that can be administered by gavage or injection at one time depends on the size of the test animal.
OECD (2009), Detailed Review Paper on Transgenic Rodent Mutation Assays, Series on Testing and Assessment, No 103, ENV/JM/MONO(2009)7, OECD, Paris.
The volume should not exceed 2 ml/100 g body weight.
Martus, V. Thybaud (2011), ’Compilation and Use of Genetic Toxicity Historical Control Data’, Mutation Res., doi:10.1016/j.mrgentox.2010.09.007.
The use of volumes greater than this should be justified.
OECD (2011), Retrospective Performance Assessment of OECD Test Guideline on Transgenic Rodent Somatic and Germ Cell Gene Mutation Assays, Series on Testing and Assessment, No 145, ENV/JM/MONO(2011)20, OECD, Paris.
Except for irritating or corrosive chemicals, which will normally reveal exacerbated effects at higher concentrations, variability in test volume should be minimised by adjusting the concentration to ensure a constant volume at all dose levels.
, ’The Epididymis’, in Neil, J.D., Pfaff, D.W., Chalis, J.R.G., de Kretser, D.M., Richards, J.S., och P. M, Wassarman (eds.), Physiology of Reproduction, Elsevier, Nederländerna, s. 1071–1148.
Sampling Time
Administreringsperiod
Somatic Cells
Den totala perioden under vilken ett djur doseras.
The sampling time is a critical variable because it is determined by the period needed for mutations to be fixed.
Basparssubstitution
This period is tissue-specific and appears to be related to the turnover time of the cell population, with bone marrow and intestine being rapid responders and the liver being much slower.
En typ av mutation som orsakar ersättning av en enda DNA-nukleotidbas med en annan DNA-nukleotidbas.
A suitable compromise for the measurement of mutant frequencies in both rapidly and slowly proliferating tissues is 28 consecutive daily treatments (as indicated in paragraph 26) and sampling three days after the final treatment;
Kapsid