natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Negative control (C-) Wells 2A and 2B are the negative controls, which contain BTV antigen, BTV negative antiserum, Mab and conjugate.
Negativ kontroll (C-) Brunnarna 2A och 2B är de negativa kontrollerna som innehåller BTV-antigen, BTV-negativt antiserum, monoklonal antikropp och konjugat.
Test sera For large-scale serological surveys and rapid screening, sera may be tested at a single dilution of 1:5 (Appendix 1).
Testserum För storskaliga serologiska undersökningar och snabb screening kan serum testas i en enda spädning på 1:5 (tillägg 1).
Alternatively, 10 sera may be tested over a dilution range from 1:5 to 1:640 (Appendix 2).
Alternativt kan tio serum testas i spädningar mellan 1:5 och 1:640 (tillägg 2).
This will give some indication of the titre of antibody in the test sera.
Detta ger en viss indikation om antikroppstitern i testserumen.
Dilute BTV antigen to pre-titrated concentration in PBS, sonicate briefly to disperse aggregated virus (if sonicator is not available, pipette vigorously) and add 50 μl to all wells of the ELISA plate.
Späd BTV-antigen till förtitrerad koncentration i PBS, och sonikera ett ögonblick för att sprida ackumulerat virus (pipettera kraftigt om det inte finns någon sonikator) och tillsätt 50 μl till alla brunnar i ELISA-plattan.
Tap sides of plate to disperse antigen.
Knacka på plattans sidor så att antigenet sprids.
Incubate at 37 °C for 60 minutes on an orbital shaker.
Inkubera vid 37 °C i 60 minuter i orbitalskak.
Wash plates three times by flooding and emptying the wells with non-sterile PBS and blot dry on absorbent paper.
Tvätta plattorna tre gånger genom att fylla brunnarna med osteril PBS och tömma dem, och torka sedan med absorberande papper.
Control wells: Add 100 μl of blocking buffer to Cc wells.
Kontrollbrunnar: Tillsätt 100 µl blockerande buffert till Cc-brunnarna.
Add 50 ul of positive and negative control sera, at a dilution of 1:5 (10 μ l sera + 40 μl blocking buffer), to respective wells C-, C+ and C++.
Tillsätt 50 µl positivt och negativt kontrollserum i spädningen 1:5 (10 µl serum +40 µl blockerande buffert) till brunnarna C-, C+ respektive C++.
Add 50μl blocking buffer to Mab control wells.
Tillsätt 50 µl blockerande buffert till Mab-kontrollbrunnarna.
Spot titration method: Add a 1:5 dilution of each test serum in blocking buffer to duplicate wells of columns 3 to 12 (10 μl sera +40 μl blocking buffer),
Spottitrering: Tillsätt vart och ett av testserumen i spädningen 1:5 till dubbla brunnar i kolumnerna 3–12 (10 µl serum +40 µl blockerande buffert).
Serum titration method: Prepare a two-fold dilution series of each test sample (1:5 to 1:640) in blocking buffer across eight wells of single columns 3 to 12.
Serumtitrering: Bered en spädningsserie i 1:2-steg av varje prov (från 1:5 till 1:640) i blockerande buffert i åtta brunnar i vardera av kolumnerna 3–12.
Immediately after the addition of the test sera, dilute Mab 1:100 in blocking buffer and add 50 μl to all wells of the plate except for the blank control.
Späd monoklonal antikropp 1:100 i blockerande buffert omedelbart efter det att testserumen tillsatts och tillsätt 50 µl till alla brunnar i plattan utom blankprovet.
Wash three times with PBS and blot dry.
Tvätta tre gånger med PBS och torka med absorberande papper.
Dilute rabbit anti-mouse concentrate to 1/5000 in blocking buffer and add 50 μl to all wells of the plate.
Späd kanin-antimuskoncentrat 1:5000 i blockerande buffert och tillsätt 50 µl till alla brunnar i plattan.
Thaw the O-Phenylenediamine dihydrochloride (OPD) and immediately before use add 5 μl of 30 % hydrogen peroxide to each 10 ml of OPD.
Tina o-fenylendiamindihydroklorid (OPD) och tillsätt omedelbart före användning 5 μl av 30 % väteperoxid för varje 10 ml OPD.
Add 50 μl to all wells of the plate.
Tillsätt 50 µl till alla plattans brunnar.
Allow colour to develop for approximately 10 minutes and stop the reaction with 1 Molar sulphuric acid (50 μl per well).
Låt färg utvecklas i ungefär 10 minuter och avsluta reaktionen med 1 M svavelsyra (50 μl per brunn).
Colour should develop in the Mab control wells and in those wells containing sera with no antibody to BTV.
Färg bör utvecklas i Mab-kontrollbrunnarna och i de brunnar som innehåller serum utan BTV-antikroppar.
Examine and record the plates either visually or using a spectrophotometric reader.
Undersök och registrera plattorna, antingen visuellt eller med hjälp av en spektrofotometer.
Analysis of results:
Analys av resultat:
Using the software package print out the optical density (OD) values, and the percentage inhibition (PI) for test and control sera based on the mean value recorded in the antigen control wells.
Använd programvaran för att skriva ut OD-värdena (optisk densitet) och procentuell inhibering (PI) för test- och kontrollserum på grundval av medelvärdet för antigenkontrollbrunnarna.
The date expressed as OD and PI values are used to determine whether the test has performed within acceptable limits.
OD- och PI-värden används för att bedöma testets tillförlitlighet.
If a computer software package is not available print out the OD values using the ELISA printer.
Om programvara inte finns tillgängligt skrivs OD-värdena ut med hjälp av ELISA-skrivaren.
Calculate the mean OD value for the antigen control wells, which is equivalent to the 100 % value.
Beräkna medelvärdet av OD för antigenkontrollbrunnarna, och låt detta motsvara 100 %.
Determine the 50 % OD value and manually calculate the positivity and negativity of each sample.
Bestäm det OD-värde som motsvarar 50 % och beräkna manuellt hur positivt eller negativt varje prov är.
Percentage inhibition (PI) value = 100 – (OD of each test control/Mean OD of Cm) × 100.
Procentuell inhibering (PI) = 100 - (OD-värdet för varje testkontroll/medelvärdet för OD i Cm) × 100.
The duplicate negative control serum wells and the duplicate blank wells must record PI values between +25 % and –25 %, and between +95 % and +105 %, respectively.
De dubbla brunnarna för negativt kontrollserum och de dubbla blankproven måste ha PI-värden mellan +25 % och –25 % respektive mellan +95 % och +105 %.
Failure to be within these limits does not invalidate the plate but does suggest that background colour is developing.
Om resultaten ligger utanför dessa värden betyder detta inte att plattan inte kan användas, utan att bakgrundsfärg håller på att utvecklas.
The strong and weak positive control sera must record PI values between +81 % and +100 %, and between +51 % and +80 %, respectively.
De starka och svaga positiva kontrollserumen måste ha PI-värden mellan +81 % och +100 % respektive mellan +51 % och +80 %.
The diagnostic threshold for test sera is 50 % (PI 50 % or OD 50 %).
Det diagnostiska tröskelvärdet för testserum är 50 % (PI 50 % eller OD 50 %).
Samples recording PI values >50 % are recorded negative.
Prov med PI-värden > 50 % registreras som negativa.
Samples that record PI values above and below the threshold for the duplicate wells are considered doubtful; such samples may be re-tested in the spot test and/or titration.
Prov med PI-värden över eller under tröskelvärdena för dubbelkontrollerna ska betraktas som tveksamma. Sådana prov kan testas om med spot test och/eller titrering.
Positive samples may also be titrated to provide an indication of the degree of positivity.
Positiva prov kan också titreras för att man ska få en uppfattning om hur positiva de är.
Visual reading: Positive and negative samples are easily discernible by eye; weakly positive or strong negative samples may be more difficult to interpret by eye.
Visuell avläsning: Positiva och negativa prov kan lätt urskiljas med blotta ögat. Svagt positiva eller starkt negativa prov kan dock vara svårare att bedöma med blotta ögat.
Preparation of BTV ELISA antigen:
Beredning av BTV-ELISA-antigen:
Wash 40-60 roux of confluent BHK-21 cells three times with serum-free Eagle's medium and infect with bluetongue virus serotype 1 in serum-free Eagle's medium.
Skölj ur 40–60 odlingsflaskor med konfluenta BHK-21-celler tre gånger med serumfritt Eagles-medium och infektera med blåtungevirus serotyp 1 i serumfritt Eagles-medium.
Incubate at 37 °C and examine daily for cytopathic effect (CPE).
Inkubera vid 37 °C och undersök dagligen för cytopatisk effekt (CPE).
When CPE are complete in 90 % to 100 % of the cell sheet of each roux, harvest the virus by shaking any still-attached cells from the glass.
Samla in viruset när CPE är fullständig i 90 % till 100 % av cellagret i varje odlingsflaska genom att skaka av alla celler som fortfarande sitter kvar på glaset.
Centrifuge at 2000 to 3000 rpm to pellet the cells.
Centrifugera vid 2000-3000 rpm för att pressa samman cellerna.
Discard the supernatant and re-suspend the cells in approximately 30 ml of PBS containing 1 % ‘Sarkosyl’ and 2 ml phenylmethylsulphonyl fluoride (lysis buffer).
Avlägsna supernatanten och slamma upp cellerna på nytt i cirka 30 ml PBS med 1 % ”Sarkosyl” och 2 ml fenylmetylsulfonylfluorid (lyseringsbuffert).
This may cause the cells to form a gel and more lysis buffer may be added to reduce this effect.
Detta kan få cellerna att bilda en gel, vilket kan motverkas genom att mer lyseringsbuffert tillsätts.
(NB: phenylmethylsulphonyl fluoride is harmful - handle with extreme caution.)
(OBS: Fenylmetylsulfonylfluorid är skadligt – hanteras med yttersta försiktighet.)
Disrupt the cells for 60 seconds using an ultrasonic probe at an amplitude of 30 microns.
Slå sönder cellerna i 60 sekunder med en ultraljudssond med en amplitud på 30 µm.
Centrifuge at 10000 rpm for 10 minutes.
Centrifugera vid 10000 rpm i 10 minuter.
Store the supernatant at +4 °C and re-suspend the remaining cell pellet in 10 to 20 ml of lysis buffer.
Lagra supernatanten vid +4 °C och slamma på nytt upp den återstående cellpelleten i 10–20 ml lyseringsbuffert.
Sonicate and clarify, storing the supernatant at each stage, a total of three times.
Sonikera, låt klarna och ta vara på supernatanten. Detta upprepas sammanlagt tre gånger.
Pool the supernatants and centrifuge at 24000 rpm (100,000 g) for 120 minutes at +4 °C over a 5 ml cushion of 40 % sucrose (w/v in PBS) using 30 ml Beckmann centrifuge tubes and an SW 28 rotor.
Slå samman supernatanterna och centrifugera vid 24000 rpm (100,000 g) i 120 minuter vid +4 °C på en 5 ml kudde bestående av 40 % sackaros (w/v i PBS) med 30 ml Beckmann centrifugrör och en SW 28-rotor.
Discard the supernatant, drain the tubes thoroughly and re-suspend the pellet in PBS by sonication.
Ta bort supernatanten, töm rören helt och lös de centrifugerade cellerna igen i PBS genom att sonikera.
Store the antigen in aliquots at –20 °C.
Lagra antigenen i alikvoter vid –20 °C.
Titration of BTV ELISA antigen:
Titrering av BTV-ELISA-antigen:
Bluetongue ELISA antigen is titrated by the indirect ELISA.
Blåtunge-ELISA-antigen titreras med indirekt ELISA.
Twofold dilutions of antigen are titrated against a constant dilution (1/100) monoclonal antibody 3-17-A3.
Spädningar i 1:2-steg av antigen titreras mot en konstant spädning (1:100) av monoklonal antikropp 3-17-A3.
The protocol is as follows:
Titreringen utförs enligt följande:
Titrate a 1:20 dilution of BTV antigen in PBS across the microtitre plate in a twofold dilution series (50 μl/well) using a multichannel pipette.
BTV-antigen som spätts 1:20 i PBS titreras på mikrotiterplattan i en spädningsserie i 1:2-steg (50 µl per brunn) med hjälp av en flerkanalspipett.
Incubate for one hour at 37 °C on an orbital shaker.
Inkubera vid 37 °C i en timme i orbitalskak.
Wash plates three times with PBS.
Tvätta plattorna tre gånger med PBS.
Add 50 μl of monoclonal antibody 3-17-A3 (diluted 1/100) to each well of the microtitre plate.
Tillsätt 50 µl monoklonal antikropp 3-17-A3 (spädning 1:100) till varje brunn på mikrotiterplattan.
Add 50 μl of rabbit anti-mouse globulin conjugated to horseradish peroxidase, diluted to a pre-titrated optimal concentration, to each well of the microtitre plate.
Tillsätt 50 μl kanin-antimusglobulin konjugerat med pepparrotsperoxidas, utspätt till en optimal förtitrerad koncentration, till varje brunn på mikrotiterplattan.
Add substrate and chromogen as described previously.
Tillsätt substrat och kromogen enligt den tidigare beskrivningen.
Stop the reaction after 10 minutes by the addition of 1 Molar sulphuric acid (50 μl/well).
Avsluta reaktionen efter 10 minuter genom att tillsätta 1 M svavelsyra (50 μl per brunn). Vid det kompetitiva testet måste det finnas ett överskott av monoklonal antikropp. Välj därför en antigenspädning som ligger på titreringskurvan (inte på den plana delen).
In the competitive assay, the monoclonal antibody must be in excess, therefore a dilution of antigen is chosen which falls on the titration curve (not on the plateau region) which gives approximately 0,8 OD after 10 minutes.
Efter 10 minuter erhålls då ett OD-värde på ca 0,8.
The agar gel immuno-diffusion test shall be carried out according to the following protocol:
AGID-test ska utföras i enlighet med följande protokoll:
Precipitating antigen is prepared in any cell culture system that supports the rapid multiplication of a reference strain of bluetongue virus.
De antigener som fälls ut bereds i ett cellkultursystem som tål en snabb tillväxt av en referensstam av blåtungevirus.
BHK or Vero cells are recommended.
Vid avslutad virusförökning finns antigen i supernatanten, men det måste koncentreras 50–100 gånger för att bli effektivt.
The pattern consists of one centre well and six wells arranged round it in a circle of radius 3 cm.
Mönstret ska utgöras av en mittbrunn och sex brunnar runt den i en cirkel med radien 3 cm.
The central well is filled with the standard antigen.
Mittbrunnen fylls med standardantigen.
Peripheral wells 2, 4 and 6 are filled with known positive serum, wells 1, 3 and 5 are filled with test sera.
De yttre brunnarna 2, 4 och 6 fylls med känt positivt serum och brunnarna 1, 3 och 5 med testserum.
The system is incubated for up to 72 hours at room temperature in a closed humid chamber.
Systemet inkuberas i upp till 72 timmar vid rumstemperatur i en sluten fuktkammare.
Interpretation A test serum is positive if it forms a specific precipitin line with the antigen and forms a complete line of identity with the control serum.
Tolkning Ett testserum är positivt om det bildar en specifik fällningslinje med antigenet och en obruten identitetslinje med kontrollserumet.
Epizootic haemorrhagic disease (EHD)
Epizootisk hemorragisk sjukdom (EHD)
Precipitating antigen is prepared in any cell culture system that supports the rapid multiplication of the appropriate serotype(s) of epizootic haemorrhagic disease virus.
De antigener som fälls ut bereds i ett cellkultursystem som tål en snabb tillväxt av den eller de aktuella serotyperna av EHD-virus. BHK- eller Vero-celler rekommenderas.
Infectious bovine rhinotracheitis (IBR) / infectious pustular vulvo-vaginitis (IPV)
Infektiös bovin rinotrakeit (IBR)/infektiös pustulär vulvovaginit (IPV)
The serum neutralisation test shall be carried out according to the following protocol:
Serumneutralisationstestet ska utföras i enlighet med följande protokoll:
Serum All sera are heat-inactivated at 56 °C for 30 minutes before use.
Serum Alla serum inaktiveras genom uppvärmning till 56 °C i 30 minuter före användning.
Procedure The constant virus-varying serum neutralisation test on microtitre plates employs MDBK or other susceptible cells.
Metod Vid det konstanta virusvarierande serumneutralisationstestet i mikrotiterplattor används MDB-cellerK eller andra mottagliga celler.
The Colorado, Oxford or any other reference strain of the virus is used at 100 TCID50 per 0,025 ml; inactivated undiluted serum samples are mixed with an equal volume (0,025 ml) of virus suspension.
Colorado, Oxford eller någon annan referensstam av viruset används vid 100 TCID50 per 0,025 ml. Inaktiverade outspädda serumprov blandas med motsvarande mängd (0,025 ml) virussuspension.
The virus/serum mixtures are incubated for 24 hours at 37 °C in the microtitre plates before the MDBK cells are added.
Virus-/serumblandningarna inkuberas i 24 timmar vid 37 °C på mikrotiterplattorna innan MDBK-cellerna tillsätts.
Cells are used at a concentration which forms a complete monolayer after 24 hours.
Cellerna används i en sådan koncentration att de bildar ett fullständigt enskiktslager efter 24 timmar.
Controls (i) virus infectivity assay, (ii) serum toxicity controls, (iii) uninoculated cell culture controls, (iv) reference antisera.
Kontroller i) Virusinfektivitetstest, ii) serumtoxicitetskontroller, iii) kontroller av oympad cellkultur, iv) referensantiserum.
Interpretation The results of the neutralisation test and the titre of the virus used in the test are recorded after three to six days incubation at 37 °C.
Tolkning Resultaten av neutralisationstestet och titern för det virus som används i testet registreras efter tre till sex dagars inkubation vid 37 °C.
Serum titres are considered negative if there is no neutralisation at a dilution of 1/2 (undiluted serum).
Serumtitrar betraktas som negativa om det inte sker någon neutralisation vid en spädning på 1:2 (outspätt serum).
Any other test recognised in the framework of Decision 2004/558/EC [10].Foot-and-mouth disease (FMD)
Andra tester som erkänts inom ramen för beslut 2004/558/EG [10].Mul- och klövsjuka (FMD)
Collecting oesophageal/pharyngeal samples and testing shall be carried out according to the following protocol:
Insamlingen av matstrupe-/svalgprov och testningen ska utföras i enlighet med följande protokoll:
Reagents Prior to sampling, transport medium is prepared.
Reagens Före provtagningen förbereds transportmediet.
Two ml volumes are dispensed in as many containers as there are animals to be sampled.
Volymer om 2 ml fördelas i så många behållare som det finns djur att provta.
The containers used must withstand freezing over solid CO2 or liquid nitrogen.
De behållare som används måste tåla frysning över fast koldioxid eller flytande kväve.
Samples are obtained by the use of a specially-designed sputum collector or ’probang’.
Provet tas med en särskilt utformad spottsamlare eller probang.
To obtain a sample the probang cup is passed through the mouth, over the dorsum of the tongue and down into the upper part of the oesophagus.
För probangskålen genom munnen, över tungryggen och ner i övre delen av matstrupen.
Attempts are made to scrape the surface epithelium of the upper oesophagus and pharynx by movements directed laterally and dorsally.
Försök att skrapa av ytepitelet i övre matstrupen och svalget genom laterala och dorsala rörelser.
The probang is then withdrawn, if possible after the animal has swallowed.
Ta sedan ut probangen, om möjligt efter det att djuret har svalt.
The cup must be full and contain a mixture of mucus, saliva, oesophageal fluid and cellular debris.
Skålen måste vara full och innehålla en blandning av slem, saliv, vätska från matstrupen och cellmaterial.
Care must be taken to ensure that each specimen contains some visible cellular material.
Var noga med att se till att varje prov innehåller synligt cellmaterial.
Very rough handling which causes bleeding must be avoided.
Undvik onödigt hårdhänt behandling som orsakar blödning.
Samples from some animals may be heavily contaminated with ruminal contents.
Prov från vissa djur kan vara kraftigt förorenade av våminnehåll.
Such samples must be discarded and the mouth of the animal flushed with water, or preferably physiological saline, before repeat sampling.
Sådana prov måste kasseras och djurets mun sköljas med vatten, eller ännu hellre med fysiologisk koksaltlösning, innan ett nytt prov tas.
Treatmentof samples: Each sample collected in the probang cup is examined for quality and 2 ml added to an equal volume of transport medium in a container which can withstand freezing.
Behandling av prov Varje prov som tagits med probangskålen ska genomgå en kvalitativ undersökning och 2 ml tillsätts till en lika stor mängd transportmedium i en behållare som tål frysning.
The containers are tightly closed, sealed, disinfected and labelled.
Behållarna tillsluts noga, förseglas, desinficeras och märks.
The samples are kept cool (+4 °C) and examined within three to four hours or placed over dry ice (-69 °C) or liquid nitrogen and kept frozen until examined.
Proven förvaras svalt (+4 °C) och undersöks inom tre till fyra timmar eller ställs över kolsyreis (–69 °C) eller flytande kväve och hålls frysta tills de ska undersökas.
Between animals the probang is disinfected and washed in three changes of clean water.
Probangen desinficeras mellan varje djur och sköljs tre gånger i rent vatten.
Testing for FMD virus: Samples are inoculated into cultures of primary bovine thyroid cell cultures using at least three tubes per sample.
Test för FMD-virus Proven ympas in i primära bovina sköldkörtelcellkulturer i minst tre rör per prov.
Other susceptible cells such as primary bovine or porcine kidney cells can be used but it must be kept in mind that for some strains of FMD virus they are less sensitive.
Andra mottagliga celler, t.ex. primära njurceller från nötkreatur eller svin, kan användas men det måste beaktas att de är mindre mottagliga för vissa stammar av FMD-virus.
The tubes are incubated at 37 °C on a roller apparatus and examined daily for 48 hours for the presence of a cytopathic effect (CPE).
Rören inkuberas vid 37 °C i en rollerapparat och undersöks dagligen i 48 timmar för förekomst av cytopatisk effekt (CPE).
If negative, cultures are blind passaged onto new cultures and re-examined for 48 hours.
Om resultatet är negativt överförs kulturerna blint till nya kulturer och undersöks igen i 48 timmar.
The specificity of any CPE must be confirmed.
Eventuell CPE:s specificitet ska fastställas.
Recommended transport media:
Rekommenderade transportmedier:
0,08M phosphate buffer pH 7,2 containing 0,01 % bovine serum albumin, 0,002 % phenol red and antibiotics.
0,08 M fosfatbuffert, pH 7,2, med 0,01 % bovint serumalbumin, 0,002 % fenolrött och antibiotika.
Tissue culture medium (such as Eagle's MEM) containing 0,04 M Hepes buffer, 0,01 % bovine serum albumin and antibiotics, pH 7,2.
Vävnadsodlingsmedium (t.ex. Eagles MEM) med 0,04 M Hepesbuffert, 0,01 % bovint serumalbumin och antibiotika, pH 7,2.
Antibiotics (per ml final) must be added to the transport medium such as penicillin1000 IU, neomycin sulphate100 IU, polymyxin B sulphate50 IU, mycostatin100 IU.
Antibiotika (per ml slutprodukt) ska tillsättas till transportmediet, t.ex. penicillin 1000 IE, neomycinsulfat 100 IE, polymyxin B-sulfat 50 IE, mycostatin 100 IE.
The virus neutralisation test shall be carried out according to the following protocol:
Virusneutralisationstestet ska utföras i enlighet med följande protokoll:
Reagents Stock FMDV antigen is prepared in cell cultures or on cattle tongues and stored at -70 °C or less or at -20 C after the addition of 50 % glycerol.
Reagens Stam-FMDV-antigener bereds i cellkulturer eller på nötkreaturstungor och lagras vid –70 °C eller mindre eller vid –20 °C efter det att 50 % glycerol tillsatts.
This is the stock antigen.
Detta är stamantigenet.
FMDV is stable under these conditions and titres vary little over a period of months.
FMDV är stabilt under dessa förhållanden och titern varierar mycket lite under en period på flera månader.
Procedure The test is carried out in flat-bottomed tissue culture grade microtitre plates using susceptible cells such as IB-RS-2, BHK-21 or calf kidney cells.
Metod Testet utförs i en flatbottnad mikrotiterplatta av vävnadskulturgrad med hjälp av mottagliga celler som t. ex. IB-RS-2, BHK-21 eller kalvnjureceller.
Sera for the test are diluted 1/4 in serum-free cell culture medium with the addition of 100 IU/ml neomycin or other suitable antibiotics.
Serum för testet späds 1:4 i serumfritt cellkulturmedium med tillsats av 100 IU/ml neomycin eller annan lämplig antibiotika.
Sera are inactivated at 56 °C for 30 minutes and 0.05 ml amounts are used to prepare a twofold series on microtitre plates using 0,05 ml diluting loops.
Serum inaktiveras vid 56 °C i 30 minuter och volymer om 0,05 ml används för att bereda en spädningsserie i 1:2-steg på mikrotiterplattor med spädningssteg på 0,05 ml.