natgillin/translations-raw huggingface dataset:
which have been subject to containment measures in 2009 due to increased mortalities in Crassostrea gigas oysters in connection with OsHV-1 μvar;
som under 2009 omfattades av åtgärder för att motverka sjukdomsspridning på grund av ökad dödlighet hos Crassostrea gigas i samband med OsHV-1 μvar,
where the absence of OsHV-1 μvar has been demonstrated by a testing carried out in accordance with Parts A and B of Annex I in samples taken in the containment area;
där det genom testning enligt delarna A och B i bilaga I på prover som tagits i kontrollområdet har påvisats att OsHV-1 μvar inte förekommer.
declarations of programmes referred to in Article 5(2), including a description of the geographical boundaries of the relevant area.
Förklaringar av de program som avses i artikel 5.2, inbegripet en geografisk avgränsning av det relevanta området.
The information provided for in paragraph 1 shall be kept up-to-date and made available through the internet-based information pages established in accordance with Article 10 of Decision 2009/177/EC.
Uppgifterna i punkt 1 ska uppdateras och tillhandahållas genom de Internetbaserade informationssidor som inrättats i enlighet med artikel 10 i beslut 2009/177/EG.
By 1 October 2010 at the latest, Member States shall submit a report to the Commission on programmes declared in accordance with Article 5(2).
Senast den 1 oktober 2010 ska medlemsstaterna lämna in en rapport till kommissionen om program som förklarats i enlighet med artikel 5.2.
The report shall be in conformity with the model form set out in Annex VI to Decision 2009/177/EC.
Rapporten ska sammanställas enligt förlagan i bilaga VI till beslut 2009/177/EG.
It shall apply from 15 March 2010 to 31 December 2010.
Den ska tillämpas från och med den 15 mars 2010 till och med den 31 december 2010.
Sampling for the purposes of Article 2
Provtagning enligt artikel 2
Samples as provided for in Article 2 shall consist of at least 12 individuals of Crassostrea gigas oysters.
Prover enligt artikel 2 ska bestå av minst tolv individer av Crassostrea gigas.
When selecting those animals weak, gaping or freshly dead (not decomposed) individuals shall be sampled and they shall be collected from the compartment where the mortality is observed.
Vid urvalet av djuren ska svaga individer, individer med öppna skal eller nydöda (ej sönderfallande/ruttna) individer provtas och de ska samlas in från det delområde där dödligheten konstaterats.
Sampling for the purposes of Article 3(2)(b), 5(1)(b) and 5(2)
Provtagning enligt artiklarna 3.2 b, 5.1 b och 5.2
Sampling for the purposes of Article 3(2)(b) shall consist of:
Provtagningen enligt artikel 3.2 b ska omfatta följande:
in the case of larvae, five pools of at least 50 mg of whole animals collected between 4 and 8 days after fecundation including shell per consignment;
I fråga om larver: fem pooler om minst 50 mg hela djur med skal som samlats in 4–8 dagar efter befruktning per sändning.
in the case of spat smaller than 6 mm, 30 pools of 300 mg of whole animals including shell per consignment;
I fråga om yngel som är mindre än 6 mm: 30 pooler om 300 mg hela djur med skal per sändning.
in the case of oysters bigger than 6 mm, 150 individuals per consignment.
I fråga ostron som är större än 6 mm: 150 individer per sändning.
When selecting those animals, all parts of the consignment must be proportionally represented in the sample.
När djuren väljs ut ska sändningens samtliga delar vara proportionellt representerade i provet.
If weak, gaping or freshly dead (not decomposed) animals are present, primarily such animals shall be selected.
Om det förekommer svaga individer, individer med öppna skal eller nydöda (ej sönderfallande/ruttna) individer ska i första hand dessa väljas ut.
Sampling for the purposes of Article 5(2) shall consist of at least 150 individuals of Crassostrea gigas per sampling points.
Provtagningen enligt artikel 5.2 ska omfatta minst 150 individer av Crassostrea gigas per provtagningsplats.
All farms or mollusc farming areas in the Member State or compartment covered by the programme shall be sampled.
Samtliga anläggningar eller områden för blötdjursodling i den medlemsstat eller det delområde som programmet omfattar ska provtas.
Sampling for the purposes of Article 5(1)(b) shall consist of at least 150 individuals of Crassostrea gigas oysters per compartment.
Provtagningen enligt artikel 5.1 b ska omfatta minst 150 individer av Crassostrea gigas per delområde.
When selecting those animals, the following criteria shall be taken into account:
När djuren väljs ut ska hänsyn tas till följande kriterier:
If such animals are not present, the animals selected shall include healthy molluscs less than 12 months old.
Om det inte förekommer några sådana djur ska friska blötdjur som är yngre än 12 månader väljas ut.
When sampling in farms in which more than one water source is utilised for production, animals representing all water sources must be included for sampling in such a way that all parts of the farm are proportionally represented in the sample.
Vid provtagning på anläggningar där mer än en vattentäkt används för produktion, ska djur från samtliga vattentäkter provtas på så sätt att samtliga delar av anläggningen är proportionellt representerade i provet.
When sampling in mollusc farming areas, animals from a sufficient number of sampling points, at least three sampling points, shall be included in the sample in such a way that all parts of the mollusc farming area are proportionally represented in the sample, including natural beds present in the mollusc farming area.
Vid provtagning i områden för blötdjursodling ska djur från ett tillräckligt antal provtagningsplatser, dock minst tre, provtas på så sätt att samtliga delar av området är proportionellt representerade i provet, inbegripet de naturliga fyndplatser som finns inom detta område.
The main factors to be considered for the selection of these sampling points are: previous detection of OsHV-1 μvar in the area, stocking density, water flows, bathymetry and management practices.
Huvudfaktorer att beakta vid urvalet av dessa provtagningsplatser: tidigare påvisande av OsHV-1 μvar i området, beståndstäthet, vattenflöden, vattendjup och odlingsmetoder.
The sampling provided for in Article 5(2) shall be carried out in the period of the year when prevalence of OsHV-1 μvar in the Member State or compartment is known to be maximal.
Provtagningen enligt artikel 5.2 ska ske under den period av året då man vet att prevalensen av OsHV-1 μvar i medlemsstaten eller delområdet är som högst.
When such data is not available, sampling shall be carried out just after the period when the water temperature exceeds 16 °C or at the time of the year when the temperature normally reaches its yearly maximum.
Om det inte finns några sådana data ska provtagningen ske precis efter den period då vattentemperaturen överskrider 16 °C eller den tid på året då vattentemperaturen normalt sett är som högst.
The sampling provided for in Article 5(1)(b) shall preferably be carried out in the period of the year described in point c. If samples are collected outside that period of the year, the sampled oysters must be maintained under conditions equivalent to those described in point c for a period suitable for the detection of OsHV-1 μvar, before being tested.
Provtagningen enligt artikel 5.1 b ska helst ske under den period av året som anges i c. Om prover samlas in utanför denna period ska de provtagna ostronen innan de testas förvaras under omständigheter som motsvarar dem som beskrivs i c under en period som är lämplig för påvisande av OsHV-1 μvar.
Diagnostic methods of detecting OsHV-1 μvar
Diagnostiska metoder för påvisande av OsHV-1 μvar
This procedure explains a standard diagnostic method to be used for OsHV-1 μvar detection and identification by Polymerase Chain Reaction (hereinafter PCR).
Förfarandet förklarar standardmetoden för diagnos som ska användas för påvisande av OsHV-1 μvar och PCR-identifiering (polymeraskedjereaktion).
It allows distinguishing between OsHV-1 and OsHV-1 μvar.
Den gör det möjligt att skilja mellan OsHV-1 och OsHV-1 μvar.
When appropriate, in order to optimise the reaction conditions and to suit the equipment and conditions in their own laboratory, the laboratories may apply modifications to the methods described in this Annex, provided that an equal sensitivity and specificity can be demonstrated.
För att optimera reaktionsvillkoren får laboratorierna vid behov anpassa de metoder som beskrivs i denna bilaga till utrustningen och villkoren i laboratoriet, förutsatt att det kan visas att känsligheten och specificiteten är lika god.
OsHV-1 μvar is defined in Article 1 of this Regulation.
OsHV-1 μvar definieras i artikel 1 i denna förordning.
Equipment and environmental conditions
Utrustning och miljöförhållanden
The diagnostic test used for OsHV-1 μvar detection and identification by PCR requires the equipment and environmental conditions classically used for PCR assays as follows:
Det diagnostiska test som används för påvisande av OsHV-1 μvar och PCR-identifiering kräver utrustning och miljöförhållanden som traditionellt används för PCR-analys enligt följande:
A closed hood equipped with an UV producing system to eliminate potential contaminations when preparing PCR mix.
Ett dragskåp som är utrustat med steriliserande UV-belysning för att eliminera eventuell förorening när PCR-blandningen bereds.
Two complete sets of pipettes (2 μl; 20 μl; 200 μl and 1000 μl), the first one for DNA extraction, and the second one for PCR mix preparation.
Två kompletta uppsättningar pipetter (2 μl, 20 μl, 200 μl och 1000 μl), en för DNA-extraktion och en för beredning av PCR-blandningen.
Three different pipettes: one pipette (2 μl) to dispense samples in PCR mix, one pipette (20 μl) for EB sampling and another pipette (20 μl) to load PCR products in agarose gels.
Tre olika pipetter: en pipett (2 μl) för att fördela prover i PCR-blandningen, en pipett (20 μl) för prover med etidiumbromid (EtBr) och en pipett (20 μl) för att applicera PCR-produkter i agarosgelen.
Filter pipette tips (2 μl; 20 μl; 200 μl and 1000 μl) for DNA extraction, PCR mix preparation and sample dispensing.
Pipettspetsar med filter (2 μl, 20 μl, 200 μl och 1000 μl) för DNA-extraktion, beredning av PCR-blandning och fördelning av prover.
Pipette tips (20 μl) to collect EB and to load amplification products in agarose gel.
Pipettspetsar (20 μl) för EtBr-prover och för applicering av amplifieringsprodukter i agarosgelen.
A thermal cycler to perform amplifications.
Termocykler för amplifiering.
A horizontal electrophoresis system for PCR products electrophoresis.
Horisontellt elektroforessystem för elektrofores av PCR-produkter.
An UV table to observe PCR products after agarose gel electrophoresis.
UV-bord för observation av PCR-produkter efter elektrofores i agarosgel.
A system to acquire pictures of the gels.
System för att avbilda gelerna.
The manipulator must wear a lab coat and some gloves during all the different steps described bellow.
Utföraren måste använda skyddsrock och handskar vid alla de olika stegen som beskrivs nedan.
Lab coat and gloves must be changed preferably after each main step: DNA extraction, preparation of PCR mix, sample dispensing, amplification and gel loading.
Skyddsrock och handskar ska helst bytas efter varje huvudsteg: DNA-extraktion, beredning av PCR-blandning, fördelning av prover, amplifiering och applicering i gel.
It is recommended to perform these different steps in different rooms.
Det rekommenderas att dessa olika steg utförs i olika rum.
More particularly, amplification and gel loading/electrophoresis should take place in a room separate from DNA extraction, PCR mix preparation and DNA dispensing.
Särskilt amplifiering och applicering i gel/elektrofores bör utföras i separata rum från DNA-extraktion, beredning av PCR-blandning och fördelning av DNA.
Live or freshly dead (not decomposed) oysters, which can be previously frozen, are processed for DNA extraction.
Levande eller nydöda (ej sönderfallande/ruttna) ostron, som tidigare kan ha varit frusna, bereds för DNA-extraktion.
Samples are processed differently according to their size:
Proverna bereds olika beroende på deras storlek:
For larvae, pools of 50 mg of the whole animals (including the shell) completed with 200 μl of distilled water are crushed and centrifuged at 1000 g for 1 minute.
För larver: pooler om 50 mg hela djur (inklusive skal) tillsätts 200 μl destillerat vatten, krossas och centrifugeras vid 1000 g i 1 minut.
For spat smaller than or of 6 mm, pools of 300 mg of the whole animals (including the shell) completed with 1200 μl of distilled water are crushed and centrifuged at 1000 g for 1 minute.
För yngel mindre än eller lika med 6 mm: pooler om 300 mg hela djur (inklusive skal) tillsätts 1200 μl destillerat vatten, krossas och centrifugeras vid 1000 g i 1 minut.
For spat between 6 and 15 mm in size, all the soft tissues of each animal are crushed individually.
För yngel 6–15 mm: all den mjuka vävnaden från varje djur krossas individuellt.
For animals bigger than 15 mm, pieces of gills and mantle are isolated.
För djur större än 15 mm: delar av gälar och mantel isoleras.
DNA extraction is performed using the QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN) and following the instructions for Tissue Test Protocol.
DNA-extraktionen utförs med QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN) och enligt instruktionerna för Tissue Test Protocol.
The further sample preparation is performed in the following order:
Den fortsatta provberedningen utförs i följande ordning:
Place 100 μl of supernatant for samples referred to in (a) and (b) or 10 to 50 mg of tissues for samples referred to point (c) and (d) in a 1,5 ml microcentrifuge tube and add 180 μl of Buffer ATL.
Placera 100 μl supernatant från proverna i a och b eller 10–50 mg vävnad från proverna i c och d i ett 1,5 ml mikrocentrifugrör och tillsätt 180 μl Buffer ATL.
Add 20 μl Proteinase K, mix by vortexing and incubate at 56 °C until the tissue is completely lysed (overnight).
Tillsätt 20 μl Proteinase K, blanda genom att vortexa och inkubera vid 56 °C tills vävnaden är helt lyserad (över natten).
Vortex occasionally during incubation to disperse sample.
Vortexa emellanåt under inkuberingen för att dispergera provet.
Briefly centrifuge the 1,5 ml microcentrifuge tube to remove drops from the lid.
Centrifugera kort 1,5 ml mikrocentrifugröret för att avlägsna droppar från locket.
Add 200 μl Buffer AL to the sample, mix by pulse-vortexing for 15 s and incubate at 70 °C for 10 minutes.
Tillsätt 200 μl Buffer AL till provet, vortexa stötvis i 15 sekunder och inkubera vid 70 °C i 10 minuter.
Add 200 μl ethanol (96-100 %) to the sample, and mix by pulse-vortexing for 15 s. Briefly centrifuge the 1,5 ml microcentrifuge tube to remove drops from the lid.
Tillsätt 200 μl etanol (96–100 %) till provet och vortexa stötvis i 15 sekunder. Centrifugera kort 1,5 ml mikrocentrifugröret för att avlägsna droppar från locket.
Carefully apply the mixture from step 4 to the QIAamp Spin Column (in a 2 ml collection tube) without wetting the rim.
Applicera noggrant blandningen från steg 4 till QIAamp Spin Column (i ett 2 ml uppsamlingsrör) utan att blöta ner kanten.
Close the cap and centrifuge at 10000 rpm for 1 min. Place the QIAamp Spin Column in a clean 2 ml collection tube (provided in the kit) and discard the tube containing the filtrate.
Stäng locket och centrifugera vid 10000 rpm i 1 minut. Placera QIAamp Spin Column i ett rent 2 ml uppsamlingsrör (finns i kitet) och släng röret med filtratet.
Carefully open the QIAamp Spin Column and add 500 μl Buffer AW1 without wetting the rim.
Öppna försiktigt QIAamp Spin Column och tillsätt 500 μl Buffer AW1 utan att blöta ner kanten.
Close the cap and centrifuge at 10000 rpm for 1 min. Place the QIAamp Spin Column in a clean 2 ml collection tube (provided in the kit) and discard the collection tube containing the filtrate.
Stäng locket och centrifugera vid 10000 rpm i 1 minut. Placera QIAamp Spin Column i ett rent 2 ml uppsamlingsrör (finns i kitet) och släng röret med filtratet.
Carefully open the QIAamp Spin Column and add 500 μl Buffer AW2 without wetting the rim.
Öppna försiktigt QIAamp Spin Column och tillsätt 500 μl Buffer AW2 utan att blöta ner kanten.
Close the cap and centrifuge at full speed (14000 rpm) for 3 min.
Stäng locket och centrifugera på högsta hastighet (14000 rpm) i 3 minuter.
(Optional) Place the QIAamp Spin Column in a new 2ml collection tube (not provided in the kit) and discard the collection tube containing the filtrate.
(Valfritt) Placera QIAamp Spin Column i ett nytt 2 ml uppsamlingsrör (finns inte i kitet) och släng röret med filtratet.
Centrifuge at full speed (14000 rpm) for 1 min.
Centrifugera på högsta hastighet (14000 rpm) i 1 minut.
Place the QIAamp Spin Column in a clean 1,5 ml microcentrifuge tube (not provided in the kit) and discard the collection tube containing the filtrate.
Placera QIAamp Spin Column i ett rent 1,5 ml mikrocentrifugrör (finns inte i kitet) och släng uppsamlingsröret med filtratet.
Carefully open the QIAamp Spin Column and add 100 μl of distilled water.
Öppna försiktigt QIAamp Spin Column och tillsätt 100 μl destillerat vatten.
Incubate 5 minutes at room temperature and centrifuge at 10000 rpm for 1 min.
Inkubera i 5 minuter vid rumstemperatur och centrifugera vid 10000 rpm i 1 minut.
Control the quality and efficacy of the extraction (for example by measuring OD (260 nm) under spectrophotometer or after electrophoresis in agarose gel).
Kontrollera kvaliteten och effektiviteten av extraktionen (till exempel genom att mäta OD [260 nm] med spektrofotometer eller genom elektrofores i agarosgel).
Prepare dilution of your samples in order to have a final DNA concentration of 50-100 ng/μl.
Späd ut dina prov så att du har en slutlig DNA-koncentration på 50–100 ng/μl.
DNA solutions are kept at 4 °C until PCR analyses are performed.
DNA-lösningar förvaras vid 4 °C tills PCR-analyserna utförts.
Other commercial kits may be used for the DNA extractions provided they have been demonstrated to give similar results.
Andra kommersiella kit kan användas för DNA-extraktionen förutsatt att de har visat sig ge liknande resultat.
Polymerase Chain Reaction (PCR)
Polymeraskedjereaktion (PCR)
Reactives
Reagenter
10 X Buffer (furnished with the Taq DNA polymerase)
10 X Buffer (levereras med Taq DNA polymeras)
MgCl2 (furnished with the DNA polymerase) (25 mM)
MgCl2 (levereras med DNA polymeras) (25 mM)
Taq DNA Polymerase (Goldstar, Eurogentec) 5 U/μl
Taq DNA Polymeras (Goldstar, Eurogentec) 5 U/μl
dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTT) Master Mix (20mM) must be diluted 10 fold (at 2 mM) before use
dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTT) Master Mix (20 mM) måste spädas 10 gånger (till 2 mM) före användning
d H2O (distilled H2O free of DNA and RNA)
dH2O (destillerat H2O fritt från DNA och RNA)
Primers
Primrar
The following primers [1] must be used:
Följande primrar [1] måste användas:
PCR mix
PCR-blandning
PCR mix for each tube is:
PCR-blandningen för varje rör innehåller:
Volume per tube
Volym per rör
Taq polymérase (5U/μl)
Taq polymeras (5 U/μl)
49 μl of this PCR mix is dispensed in each PCR tube
49 μl av denna PCR-blandning fördelas i varje PCR-rör.
1 μl of extracted DNA (50-100 ng/μl) is added to each tube
1 μl extraherat DNA (50–100 ng/μl) tillsätts varje rör.
Two types of control are used:
Två typer av kontroller används:
Negative controls consist of dH2O (1 μl for 49 μl of PCR mix).
Negativa kontroller består av dH2O (1 μl till 49 μl PCR-blandning).
They aim at detecting potential reactive contamination or working environment.
Deras uppgift är att detektera potentiella reaktiva föroreningar från omgivningen.
One negative control should be included every 10 samples or after each batch of samples.
En negativ kontroll bör inkluderas för vart 10:e prov eller efter varje batch av prover.
Positive controls consist of plasmidic DNA containing the OsHV-1 target genome region CF-CR.
Positiva kontroller består av plasmid DNA innehållande den genomiska målregionen, CF-CR, för OsHV-1.
They aim at checking the efficacy of the PCR reaction.
Deras uppgift är att kontrollera effektiviteten hos PCR-reaktionen.
One positive control should be included for each PCR analysis.
En positiv kontroll bör inkluderas för varje PCR-analys.
Positive controls are available from the Community Reference Laboratory.
Positiva kontroller finns att tillgå från gemenskapens referenslaboratorium.
Amplification
Amplifiering
Amplification cycles are performed in a thermal cycle apparatus.
Amplifieringscyklerna utförs i en termocyklerapparat.
Initial denaturation: 2 min at 94 °C
Initial denaturering: 2 minuter vid 94 °C.
Amplification: 35 cycles (1 min at 94 °C, 1 min at 50 °C and 1 min at 72 °C)
Amplifiering: 35 cykler (1 minut vid 94 °C, 1 minut vid 50 °C och 1 minut vid 72 °C).
Final elongation: 5 min at 72 °C
Slutlig elongering: 5 minuter vid 72 °C.
Electrophoresis
Elektrofores
50 X TAE (can be bought directly ready for use):
50 X TAE (kan köpas klar att använda):
Tris base (40 mM) 242 g
Tris-bas (40 mM) 242 g
Acetic glacial acid (40 mM) 57,1 ml
Isättiksyra (40 mM) 57,1 ml
dH2O for 1 liter
dH2O för 1 liter
Ajust at pH 8
Justera pH till 8.
Agarose gel 2,5 % in 1 X TAE
Agarosgel 2,5 % i 1X TAE
Ethidium bromide (0,5 μg/ml) added after cooling the gel.
Etidiumbromid (0,5 μg/ml) tillsätts efter kylning av gelen.
Loading blue dye:
Blå laddningsbuffert:
Bromophenol blue 0,25 %
Bromfenolblått 0,25 %
Sucrose 40 %
Sackaros 40 %
Keep at 4 °C.
Förvaras vid 4 °C.
Use diluted 6 times (2 μl of loading blue buffer for 10μl of PCR products).
Används efter 6 gångers utspädning (2 μl laddningsbuffert till 10 μl PCR-produkt).
Molecular weight marker:
Molekylviktsmarkör:
SmartLadder SF (Eurogentec): a ready-to-use molecular weight marker including 9 regularly spaced bands from 100 to 1000 bp.
SmartLadder SF (Eurogentec): en molekylviktsmarkör som är klar att använda och inkluderar nio jämt utspridda band från 100 till 1000 bp.
Agarose gel preparation
Beredning av agarosgel
Weight 2,5 g of agarose, add 100 ml of 1 X TAE and heat until the mix is melted.
Väg upp 2,5 g agaros, tillsätt 100 ml 1X TAE och värm tills blandningen har smält.
After cooling the solution, ethidium bromide is added (5 μl for 100 ml of agarose gel) and the solution is disposed in a specific mould equipped with combs (to form slots).
Efter det att lösningen har svalnat tillsätts etidiumbromid (5 μl till 100 ml agarosgel) och blandningen gjuts i en särskild form utrustad med kammar (för att forma brunnar).
When gel is polymerised, combs are removed and gel is placed in a horizontal electrophoresis system containing enough 1 X TAE to the cover agarose gel.
När gelen har polymeriserat, ta bort kammarna och placera gelen i ett horisontellt elektroforeskärl innehållande tillräckligt med 1X TAE för att täcka agarosgelen.
10 μl of PCR products are mixed with 2 μl of blue dye (6 X) and disposed in the slots.
10 μl PCR-produkt blandas med 2 μl laddningsbuffert (6X) och appliceras i brunnarna.
One whole is dedicated to the molecular weight marker (5 μl).
En brunn ska användas för molekylviktsmarkören (5 μl).
A voltage of 50 to 150 volts is applied during 30 min to 1 hour depending on the gel size and thickness.
Sätt spänningen på 50–150 volt och låt elektroforesen gå mellan 30 minuter och 1 timme beroende på gelstorlek och tjocklek.
Gel is observed under UV.
Gelen observeras under UV-ljus.
The presence of OsHV-1 μvar in a sample is indicated by the presence of a band of the appropriate size (157 bp instead of 173 bp for OsHV-1) on a 2,5 % agarose gel with all negative controls negative and all positive controls positive.
Närvaron av OsHV-1 μvar i ett prov indikeras av närvaron av ett band av rätt storlek (157 bp istället för 173 bp för OsHV-1) i en 2,5 % agarosgel där alla negativa kontroller är negativa och alla positiva kontroller positiva.
Definition of the containment area
Fastställande av kontrollområde
The following factors influencing the risks for the spread of the disease shall be taken into account when defining the containment area in accordance with Article 2(2):
Hänsyn ska tas till följande faktorer som påverkar risken för att sjukdomen sprids vid fastställandet av kontrollområdet enligt artikel 2.2: