natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Ideally, at greater intervals, a spectroradiometer should be used to measure the spectral irradiance of the filtered light source and to check the calibration of the broadband UV-meter.
Helst ska man även då och då använda en spektroradiometer för att mäta den spektrala strålningen från den filtrerade ljuskällan och för att kontrollera bredbands-UV-mätarens kalibrering.
A dose of 5 J/cm2 (as measured in the UVA range) was determined to be non-cytotoxic to Balb/c 3T3 cells and sufficiently potent to excite chemicals to elicit phototoxic reactions, (6) (17) e.g. to achieve 5 J/cm2 within a time period of 50 min, irradiance was adjusted to 1,7 mW/cm2.
En dos på 5 J/cm2 (UVA) fastställdes vara icke-toxisk för Balb/c 3T3-celler men tillräckligt stark för att excitera kemikalier så att de utlöste fototoxiska reaktioner (6)(17).
See Appendix 2 Figure 2.
För att erhålla 5 J/cm2 inom 50 minuter ställdes t.ex. strålningen in på 1,7 mW/cm2 (figur 2, bilaga 2).
If another cell line or a different light source are used, the irradiation dose may have to be calibrated so that a dose regimen can be selected that is not deleterious to the cells but sufficient to excite standard phototoxins.
Om en annan cellinje eller en annan ljuskälla används måste strålningsdosen eventuellt justeras så att en dosregim kan väljas som inte är skadlig för cellerna men som räcker för att excitera vanliga fototoxiska ämnen.
The time of light exposure is calculated in the following way:
Tiden för ljusexponeringen beräknas på följande sätt:
t(min)=irradiation dose (J/cm
t(min)=bestrålningsdos (J/cm
irradiance (mW/cm
bestrålning (mW/cm
Test substance concentrations
Koncentrationer av testämne
The ranges of concentrations of a chemical tested in the presence (+Irr) and in the absence (-Irr) of light should be adequately determined in dose range-finding experiments.
Koncentrationsområdena för en kemikalie som ska testas i närvaro (+ UVA) och i frånvaro (– UVA) av ljus ska först fastställas på lämpligt sätt i förberedande försök.
The highest concentration of the test substance should be within physiological test conditions, e.g. osmotic and pH stress should be avoided.
Den högsta koncentrationen av testämne bör ligga inom fysiologiska testbetingelser, dvs. så att osmotisk stress och pH-stress undviks.
Depending on the test chemical, it may be necessary to consider other physico-chemical properties as factors limiting the highest test concentration.
Beroende på testkemikalien kan det vara nödvändigt att beakta andra fysikalkemiska egenskaper som faktorer som begränsar den högsta testkoncentrationen.
For relatively insoluble substances that are not toxic at concentrations up to the saturation point the highest achievable concentration should be tested.
För relativt svårlösliga ämnen som inte är toxiska vid koncentrationer upp till mättnadspunkten ska den högsta möjliga koncentrationen testas.
In general, precipitation of the test chemical at any of the test concentrations should be avoided.
I regel ska utfällning av testkemikalien vid någon testkoncentration undvikas.
The maximum concentration of a test substance should not exceed 1000 μg/mL; osmolarity should not exceed 10 mmolar.
Den maximala koncentrationen av ett testämne ska inte överstiga 1000 μg/ml och osmolariteten ska inte överstiga 10 mmolar.
A geometric dilution series of eight test substance concentrations with a constant dilution factor should be used (See Section 2.1, second paragraph).
En geometrisk spädningsserie med 8 testämneskoncentrationer och konstant utspädningsfaktor ska användas (se avsnitt 2.1, andra stycket).
If there is information (from a range finding experiment) that the test chemical is not cytotoxic up to the limit concentration in the dark experiment (-Irr), but is highly cytotoxic when irradiated (+Irr), the concentration ranges to be selected for the (+Irr) experiment may differ from those selected for the (-Irr) experiment to fulfill the requirement of adequate data quality.
Om information finns (från ett försök för att fastställa koncentrationsområde) om att testkemikalien inte är cytotoxisk upp till gränskoncentrationen i mörkerförsöket (– UVA) men är starkt cytotoxisk vid bestrålning (+ UVA) kan de koncentrationsområden som ska väljas för ljusförsöket (+ UVA) skilja sig från dem som har valts för mörkerförsöket för att kravet på adekvat datakvalitet ska uppfyllas.
Radiation sensitivity of the cells, establishing of historical data:
Cellernas strålningskänslighet, fastställande av historiska data
Cells should be checked regularly (about every fifth passage) for sensitivity to the light source by assessing their viability following exposure to increasing doses of irradiation.
Cellerna bör rutinmässigt (ungefär vid var femte passage) kontrolleras med avseende på känslighet för ljuskällan genom att deras viabilitet följs efter exponering för ökande stråldoser.
Several doses of irradiation, including levels substantially greater than those used for the 3T3 NRU Phototoxicity test should be used in this assessment.
Flera stråldoser, inbegripet nivåer betydligt över dem som används för 3T3 NRU-fototoxicitetstestet, ska användas för denna bestämning.
These doses are easiest quantitated by measurements of UV parts of the light source.
Doserna kvantifieras lättast genom mätningar av ljuskällans UV-del.
Cells are seeded at the density used in the in vitro 3T3 NRU phototoxicity test and irradiated the next day.
Cellerna sås med den täthet som används för 3T3 NRU-fototoxicitetstestet in vitro och bestrålas påföljande dag.
Cell viability is then determined one day later using Neutral Red uptake.
Cellviabiliteten bestäms en dag senare med neutralröttupptag.
It should be demonstrated that the resulting highest non-cytotoxic dose (e.g. in the validation study: 5 J/cm2 [UVA]) was sufficient to classify the reference chemicals (Table 1) correctly.
Det ska visas att den resulterande högsta icke-cytotoxiska dosen (t.ex. vid 5 J/cm2 (UVA) vid valideringsstudien) räckte för att klassificera referenskemikalierna (tabell 1) korrekt.
Radiation sensitivity, check of current test:
Strålningskänslighet, kontroll av det aktuella testet
The test meets the quality criteria if the irradiated negative/solvent controls show a viability of more than 80 % when compared with non-irradiated negative/solvent.
Testet uppfyller kriterierna om de bestrålade negativkontrollerna med lösningsmedel uppvisar en viabilitet på över 80 % då de jämförs med obestrålade negativkontroller med lösningsmedel.
Viability of solvent controls:
Lösningsmedelskontrollernas viabilitet
The absolute optical density (OD540 NRU) of the Neutral Red extracted from the solvent controls indicates whether the 1×104 cells seeded per well have grown with a normal doubling time during the two days of the assay.
Den absoluta optiska densiteten (OD540 Nru) för neutralrött extraherat från lösningsmedelskontrollerna visar om de 1×104 cellerna som såtts per hål har tillvuxit med normal fördubblingstid under de två dagar bestämningen pågått.
A test meets the acceptance criteria if the mean OD540 NRU of the untreated controls is ≥ 0,4 (i.e. approximately 20 times the background solvent absorbance).
Ett test uppfyller godtagbarhetskriterierna om medelvärdet på OD540 Nru för de obehandlade kontrollerna är ≥ 0,4 (dvs. cirka tjugo gånger bakgrundsabsorbansen för lösningsmedlet).
Positive control:
Positivkontroll
A known phototoxic chemical shall be tested concurrently with each in vitro 3T3 NRU phototoxicity test.
En känd fototoxisk kemikalie ska testas samtidigt med varje 3T3 NRU-fototoxicitetstest in vitro.
Chlorpromazine (CPZ) is recommended.
Klorpromazin (CPZ) rekommenderas.
For CPZ tested with the standard protocol in the in vitro 3T3 NRU phototoxicity test, the following test acceptance criteria were defined: CPZ irradiated (+Irr): IC50 = 0,1 to 2,0 μg/ml, CPZ non-irradiated (-Irr): IC50 = 7,0 to 90,0 μg/mL.
Följande godtagbarhetskriterier definierades för test av CPZ enligt standardprotokollet för 3T3 NRU-fototoxicitetstestet in vitro: bestrålad CPZ (+ UVA): EC50 = 0,1 till 2,0 μg/ml, obestrålad CPZ (– UV): EC50= 7,0 till 90,0 μg/ml.
The Photo Irritation Factor (PIF), should be > 6.
Fotoirritationsfaktorn (PIF) ska vara > 6.
The historical performance of the positive control should be monitored.
Historisk prestanda för positivkontrollen ska följas.
Other phototoxic chemicals, suitable for the chemical class or solubility characteristics of the chemical being evaluated, may be used as the concurrent positive controls in place of chlorpromazine.
Andra fototoxiska kemikalier som är lämpliga med tanke på de testade kemikaliernas kemikalieklass eller löslighetsegenskaper kan användas som parallella positivkontroller i stället för klorpromazin.
Test procedure (6)(7)(8)(16)(17):
Testförfarande (6)(7)(8)(16)(17)
day:
Dag 2
Dispense 100 μL culture medium into the peripheral wells of a 96-well tissue culture microtiter plate (= blanks).
Dosera 100 μl näringslösning i de perifera hålen i en 96-håls mikrotitterplatta för vävnadsodling (= blindprov).
In the remaining wells, dispense 100 μL of a cell suspension of 1×105 cells/mL in culture medium (= 1×104 cells/well).
Dosera 100 μl cellsuspension med 1 x l05 celler/ml i näringslösning (= 1x104 celler/hål) i de återstående hålen.
Two plates should be prepared for each series of individual test substance concentrations, and for the solvent and positive controls.
Två plattor ska beredas för varje serie av enskilda testämneskoncentrationer, för lösningsmedel och för positivkontroller.
Incubate cells for 24 h (See Section 1.4.1.2) until they form a half confluent monolayer.
Inkubera cellerna i 24 timmar (se avsnitt 1.4.1.2) tills de bildar ett halvkonfluent monolayer.
This incubation period allows for cell recovery, adherence, and exponential growth.
Denna inkuberingsperiod är tillräcklig för cellernas återhämtning och vidhäftning samt exponentiell tillväxt.
After incubation, decant culture medium from the cells and wash carefully with 150 μL of the buffered solution used for incubation.
Dekantera näringslösningen från cellerna efter inkuberingen och tvätta två gånger med 150 μl av den buffertlösning som används för inkuberingen.
Add 100 μL of the buffer containing the appropriate concentration of test chemical or solvent (solvent control).
Tillsätt 100 μl av buffertlösningen med lämplig koncentration av testkemikalie eller lösningsmedel (lösningsmedelskontroll).
Apply eight different concentrations of the test chemical.
Använd 8 olika koncentrationer av testkemikalien.
Incubate cells with the test substance in the dark for 60 minutes (See Section 1.4.1.2 and 1.4.1.4 second paragraph).
Inkubera cellerna med testämnet i mörker i 60 minuter (se avsnitt 1.4.1.2 och 1.4.1.4, andra stycket).
From the two plates prepared for each series of test substance concentrations and the controls, one is selected, generally at random, for the determination of cytotoxicity (-Irr) (i.e., the control plate), and one (the treatment plate) for the determination of photocytotoxicity (+Irr).
Från de två plattor som beretts för varje koncentrationsserie av testämne och kontroll väljs en, i regel slumpmässigt, för bestämning av cytotoxicitet (– UVA) (dvs. kontrollplattan), och en (behandlingsplattan) för bestämning av fotocytotoxicitet (+ UVA).
To perform the +Irr exposure, irradiate the cells at room temperature for 50 minutes through the lid of the 96-well plate with the highest dose of radiation that is non-cytotoxic (see also Appendix 2).
Utför bestämningens + UVA-del genom att bestråla cellerna vid rumstemperatur i 50 minuter genom locket på 96-hålsplattan med den högsta icke-cytotoxiska stråldosen (se även bilaga 2).
Keep non-irradiated plates (-Irr) at room temperature in a dark box for 50 min (= light exposure time).
Håll obestrålade plattor (– UVA) i en mörk låda i 50 minuter (= UVA-exponeringstiden).
Decant test solution and carefully wash twice with 150 μL of the buffered solution used for incubation, but not containing the test material.
Dekantera testlösningen och tvätta två gånger med 150 μl av den buffertlösning som används för inkuberingen, men utan testämnet.
Replace the buffer with culture medium and incubate (See Section 1.4.1.2.) overnight (18-22 h).
Ersätt bufferten med näringslösning och inkubera (se avsnitt 1.4.1.2) över natt (18–22 timmar).
Microscopic evaluation
U tvärdering med mikroskop
Cells should be examined for growth, morphology, and integrity of the monolayer using a phase contrast microscope.
Cellerna ska undersökas i faskontrastmikroskop med avseende på tillväxt, morfologi och monolayerintegritet.
Changes in cell morphology and effects on cell growth should be recorded.
Förändringar av cellernas morfologi och effekter på celltillväxten ska noteras.
Neutral Red uptake test
Test med upptagning av neutralrött
Wash the cells with 150 μL of the pre-warmed buffer.
Tvätta cellerna med 150 μl föruppvärmd buffert.
Remove the washing solution by gentle tapping.
Avlägsna tvättlösningen genom att klappa försiktigt.
Add 100 μL of a 50 μg/mL Neutral Red (NR) (3-amino-7-dimethylamino-2-methylphenazine hydrochloride, EINECS number 209-035-8; CAS number 553-24-2; C.I.
Tillsätt 100 μl av 50 μg/ml neutralrött (NR) (3-amino-7-dimetylamino-2-metylfenazinhydroklorid, Einecs-nummer 209-035-8; CAS-nummer 553-24-2; C.I.
in medium without serum (16) and incubate as described in paragraph 1.4.1.2., for 3 h. After incubation, remove the NR medium, and wash cells with 150 μL of the buffer.
i medium utan serum (16) och inkubera enligt beskrivningen i avsnitt 1.4.1.2 i tre timmar. Avlägsna NR-mediet efter inkuberingen och tvätta cellerna med 150 μl buffert.
Decant and remove excess buffer by blotting or centrifugation.
Dekantera och avlägsna överskottet av buffert genom absorption eller centrifugering.
Add exactly 150 μL NR desorb solution (freshly prepared 49 parts water + 50 parts ethanol + 1 part acetic acid).
Tillsätt exakt 150 μl NR-desorptionslösning (färsk lösning av 49 delar vatten + 50 delar etanol + 1 del ättiksyra).
Shake the microtiter plate gently on a microtiter plate shaker for 10 min until NR has been extracted from the cells and has formed a homogeneous solution.
Skaka mikrotiterplattan varsamt på en skakmaskin i 10 minuter tills NR har extraherats ur cellerna och en homogen lösning har bildats.
Measure the optical density of the NR extract at 540 nm in a spectrophotometer, using blanks as a reference.
Mät NR-extraktets optiska densitet vid 540 nm i en spektrofotometer och använd blindproven som referens.
Save data in an appropriate electronic file format for subsequent analysis.
Spara data i lämpligt filformat för efterföljande analys.
QUALITY AND QUANTITY OF DATA
KVALITET OCH KVANTITET AV DATA
The test data should allow a meaningful analysis of the concentration-response obtained in the presence and in the absence of irradiation, and if possible the concentration of test chemical by which cell viability is reduced to 50 % (IC50).
Erhållna testdata bör ge möjlighet till meningsfull analys av den koncentrationsberoende respons som konstaterats i närvaro och i frånvaro av bestrålning och om möjligt den koncentration av testkemikalien som minskar cellviabiliteten till 50 % (EC50).
If cytotoxicity is found, both the concentration range and the intercept of individual concentrations shall be set in a way to allow the fit of a curve to the experimental data.
Om cytotoxicitet detekteras ska både koncentrationsområdet och intervallet för enskilda koncentrationer anpassas så att försöksdata kan sammanställas till en kurva.
For both clearly positive and clearly negative results (See Section 2.3, first paragraph), the primary experiment, supported by one or more preliminary dose range-finding experiment(s), may be sufficient.
För både klart positiva och klart negativa resultat (se avsnitt 2.3, första stycket), kan det räcka med huvudförsöket, underbyggt med ett eller flera preliminära försök för bestämning av område.
Equivocal, borderline, or unclear results should be clarified by further testing (see also section 2.4, second paragraph).
Om man får testresultat som är oklara eller kommer nära förutsägbarhetsmodellens gräns måste resultaten verifieras genom upprepat test (se även avsnitt 2.4, andra stycket).
In such cases, modification of experimental conditions should be considered.
I sådana fall bör man överväga att variera försöksbetingelserna.
Experimental conditions that might be modified include the concentration range or spacing, the pre-incubation time, and the irradiation-exposure time.
Försöksbetingelser som kan varieras inbegriper koncentrationsområdet eller koncentrationsintervallet, förinkuberingstiden och bestrålningstiden.
A shorter exposure time may be appropriate for water-unstable chemicals.
En kortare exponeringstid kan vara lämplig för kemikalier som är instabila i vatten.
To enable evaluation of the data, a Photo-Irritation-Factor (PIF) or Mean Photo Effect (MPE) may be calculated.
En fotoirritationsfaktor (PIF) eller ett MPE-värde (Mean Photo Effect) kan beräknas för utvärderingen av data.
For the calculation of the measures of photocytotoxicity (see below) the set of discrete concentration-response values has to be approximated by an appropriate continuous concentration-response curve (model).
Beräkning av måtten på fototoxicitet (se nedan) kräver att de diskreta värdena för koncentrationsrespons uppskattas med hjälp av en lämplig fullständig koncentrations-responskurva (försöksmodell).
Fitting of the curve to the data is commonly performed by a non-linear regression method (18).
Kurvanpassningen till data görs i regel med icke-linjär regression (18).
To assess the influence of data variability on the fitted curve a bootstrap procedure is recommended.
För att bedöma datavariabilitetens inverkan på den anpassade kurvan rekommenderas bootstrap-metoden.
A Photo-Irritation-Factor (PIF) is calculated using the following formula:
En fotoirritationsfaktor (PIF) beräknas med hjälp av följande formel:
If an IC50 in the presence or absence of light cannot be calculated, a PIF cannot be determined for the test material.
Om inget värde på EC50 i närvaro eller frånvaro av ljus kan beräknas, går det inte att beräkna någon PIF för testämnet.
The mean photo effect (MPE) is based on comparison of the complete concentration-response curves (19).
MPE (Mean Photo Effect) bygger på en jämförelse mellan de fullständiga koncentrations-responskurvorna (19).
The photo effect PEc at any concentration C is defined as the product of the response effect REc and the dose effect DEc i.e. PEc = REc × DEc. The response effect REc is the difference between the responses observed in the absence and presence of light, i.e. REc = Rc (-Irr) - Rc (+Irr).
Fotoeffekten PEc vid koncentrationen C definieras som produkten av responseffekten REc och doseffekten DEc dvs. PEc = REc x DEc. Responseffekten REc är skillnaden mellan observerade respons i frånvaro och i närvaro av ljus, dvs. REc = Rc (– UVA) –Rc (+ UVA).
The dose-effect is given by
Doseffekten ges av
where C* represents the equivalence concentration, i.e. the concentration at which the +Irr response equals the –Irr response at concentration C. If C* cannot be determined because the response values of the +Irr curve are systematically higher or lower than RC(-Irr) the dose effect is set to 1.
där C* representerar ekvivalenskoncentrationen, dvs. den koncentration där + UVA-responsen är lika stor som – UVA-responsen vid koncentrationen C. Om C* inte kan bestämmas därför att svarsvärdena på +UVA-kurvan systematiskt är högre eller lägre än RC (– UVA) sätts doseffekten till 1.
The weighting factors wi are given by the highest response value, i.e. wi = MAX Ri (+Irr), Ri (-Irr) .
Viktningsfaktorerna wi ges av det högsta responsvärdet, dvs. wi = MAX Ri (+ UVA), Ri (– UVA) .
The concentration grid Ci is chosen such that the same number of points falls into each of the concentration intervals defined by the concentration values used in the experiment.
Koncentrationsrastret C väljs så att samma antal punkter faller inom vart och ett av de koncentrationsintervall som definieras av de koncentrationsvärden som användes i försöket.
The calculation of MPE is restricted to the maximum concentration value at which at least one of the two curves still exhibits a response value of at least 10 %.
Beräkningen av MPE begränsas till det maximala koncentrationsvärde vid vilket minst en av de två kurvorna ännu uppvisar ett responsvärde på minst 10 %.
If this maximum concentration is higher than the highest concentration used in the +Irr experiment the residual part of the +Irr curve is set to the response value ‘0’.
Om denna maximala koncentration är högre än den högsta koncentration som användes i + UVA-försöket sätts den återstående delen av + UVA-kurvan till responsvärdet ”0”.
Depending on whether the MPE value is larger than a properly chosen cut-off value (MPEc = 0,15) or not, the chemical is classified as phototoxic.
Beroende på om MPE-värdet är större än ett korrekt valt tröskelvärde (MPEc=0,15) eller inte, klassificeras kemikalien som fototoxisk.
A software package for the calculation of the PIF and MPE is available from (20).
Ett programpaket för beräkning av PIF och MPE finns tillgängligt från (20).
Based on the validation study (8), a test substance with a PIF < 2 or an MPE < 0,1 predicts: ‘no phototoxicity’.
Baserat på valideringsstudien (8) förutsäger PIF < 2 eller MPE < 0,1”ingen fototoxicitet”.
A PIF > 2 and < 5 or an MPE > 0,1 and < 0,15 predicts: ‘probable phototoxicity’; and a PIF > 5 or an MPE > 0,15 predicts: ‘phototoxicity’.
PIF > 2 och <5 eller MPE > 0,1 och < 0,15 förutsäger ”sannolik fototoxicitet”. PIF > 5 eller MPE > 0,15 förutsäger ”fototoxicitet”.
For any laboratory initially establishing this assay, the reference materials listed in Table 1 should be tested prior to the testing of test substances for phototoxic assessment.
Ett laboratorium som ska börja använda denna bestämningsmetod ska testa de referensmaterial som listas i tabell 1 innan man börjar testa ämnen för fototoxisk bestämning.
PIF or MPE values should be close to the values mentioned in Table 1.
PIF- eller MPE-värdena ska ligga nära dem som anges i tabell 1.
Absorption peak
Absorptions-topp
Solvent [9]
Lösningsmedel [9]
Amiodarone HCL
Amiodaron-HCl
(shoulder)
(axel)
Choloropromazine HCL
Kloropromazin-HCl
Protoporphyrin IX, Disodium
Protoporfyrin IX, Dinatrium
Hexacholorophene
Hexaklorofen
no absorption
Ingen absorption
INTERPRETATION OF DATA
TOLKNING AV RESULTAT
If phototoxic effects are observed only at the highest test concentration, (especially for water soluble test chemicals) additional considerations may be necessary for assessment of hazard.
Om fototoxisk verkan observeras endast vid den högsta testkoncentrationen (särskilt för vattenlösliga testkemikalier), kan ytterligare faktorer behöva beaktas för bestämning av skadligheten.
These may include data on skin absorption, and accumulation of the chemical in the skin and/or data from other tests, e.g. testing of the chemical in in vitro animal or human skin, or skin models.
Dessa faktorer kan inbegripa data om hudabsorption och ackumulering av kemikalien i huden och/eller data från andra test, t.ex. test av kemikalien på djur- eller människohud in vitro eller på hudmodeller.
If no toxicity is demonstrated (+Irr and -Irr), and if poor solubility limited the concentrations that could be tested, then the compatibility of the test substance with the assay may be questioned and confirmatory testing should be considered using, e.g. another model.
Om ingen toxicitet påvisas (+ UVA och – UVA) och om dålig löslighet begränsade de koncentrationer som kunde testas bör testämnets lämplighet för bestämningsmetoden ifrågasättas och verifierande testning bör övervägas, t.ex. en annan modell.
The test report must include at least the following information:
Testrapporten ska innehålla åtminstone följande information:
identification data, common generic names and IUPAC and CAS number, if known,
identifieringsdata, vanliga generiska namn och IUPAC- och CAS-nummer (i mån av tillgänglighet),
physical nature and purity,
fysikalisk form och renhetsgrad,
physicochemical properties relevant to conduct of the study,
fysikalisk-kemiska egenskaper av betydelse för studien,
UV/vis absorption spectrum,
absorptionsspektrum för UV/synligt ljus,