natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Detection of cows’ milk and caseinate in cheeses made from ewes’ milk, goats’ milk, buffalos’ milk or mixtures of ewes’, goats’ and buffalos’ milk by isoelectric focusing of γ-caseins after plasminolysis.
Påvisande av komjölk och kaseinat i ost som är tillverkad av mjölk från tackor, getter eller bufflar eller av blandningar av mjölk från dessa djur, genom isoelektrisk fokusering av γ-kaseiner efter plasminolys.
The method is suitable for sensitive and specific detection of native and heat-treated cows’ milk and caseinate in fresh and ripened cheeses made from ewes’ milk, goats’ milk, buffalos’ milk or mixtures of ewes’, goats’ and buffalos’ milk.
Metoden är lämplig för känsligt och specifikt påvisande av rå och värmebehandlad komjölk och kaseinat i färsk och mogen ost som tillverkats av mjölk från tackor, getter och bufflar eller blandningar av mjölk från dessa djur.
It is not suitable for the detection of milk and cheese adulteration by heat-treated bovine whey protein concentrates.
Den är inte lämplig för att påvisa tillsatser av värmebehandlat koncentrat av protein från kolöpe i mjölk och ost.
PRINCIPLE OF THE METHOD
PRINCIP
Isolation of caseins from cheese and the reference standards
Isolering av kaseiner från ost och standardlösning.
Dissolving of the isolated caseins and submitting to plasmin (EC.3.4.21.7) cleavage
Upplösning av isolerade kaseiner som därefter underkastas plasminspjälkning (E.C.3.4.21.7).
Isoelectric focusing of plasmin-treated caseins in the presence of urea and staining of proteins
Isoelektrisk fokusering av de plasminbehandlade kaseinerna i närvaro av urea och färgning av proteinerna.
Evaluation of stained γ3 and γ2-casein patterns (evidence of cows’ milk) by comparison of the pattern obtained from the sample with those obtained in the same gel from the reference standards containing 0 % and 1 % cows’ milk.
Bedömning av de färgade γ3- och γ2-kaseinmönstren (tecken på komjölk) genom jämförelse av provets mönster med mönster i samma gel från standardlösningar som innehåller 0 % och 1 % komjölk.
Unless otherwise indicated, analytical grade chemicals must be used.
Om inte annat anges ska kemikalier av analyskvalitet användas.
Water must be double-distilled or of equivalent purity.
Vattnet måste vara dubbeldestillerat eller av motsvarande renhetsgrad.
Note: The following details apply to laboratory prepared polyacrylamide gels containing urea, of dimensions 265 × 125 × 0,25 mm. Where other sizes and types of gel are used, the separation conditions may have to be adjusted.
Anmärkning: Följande uppgifter gäller för laboratorietillverkade polyakrylamidgeler med måtten 265 × 125 × 0,25 mm som innehåller urea. Om gel av annan storlek eller typ används kan separationsbetingelserna behöva anpassas.
Isoelectric focusing
Isoelektrisk fokusering
Reagents for production of the urea containing polyacrylamide gels
Reagenser för framställning av polyakrylamidgeler som innehåller urea.
Stock gel solution
Stamgellösning
Dissolve:
Lös
4,85 g acrylamide
4,85 g akrylamid
0,15 g N, N'-methylene-bis-acrylamide (BIS)
0,15 g N, N'-metylen-bis-akrylamid (BIS)
15,00 g glycerol (87 % w/w),
15,00 g glycerol (87 viktprocent)
in water and make up to 100 ml and store in a brown glass bottle in the refrigerator.
i vatten och späd till 100 ml.
Note: A commercially available preblended acrylamide/BIS solution can be used in preference to the quoted fixed weights of the neurotoxic acrylamides.
Förvara lösningen i brun glasflaska i kylskåp.
Where such a solution contains 30 % w/v acrylamide and 0,8 % w/v BIS, a volume of 16,2 ml must be used for the formulation instead of the fixed weights.
Anmärkning: Använd gärna en färdigblandad akrylamid/BIS-lösning, som kan fås i handeln, i stället för de angivna bestämda vikterna av de neurotoxiska akrylamiderna.
The shelf life of the stock solution is a maximum of 10 days; if its conductivity is more than 5 μS, de-ionize by stirring with 2 g Amberlite MB-3 for 30 minutes, then filter through a 0,45 μm membrane.
Om en sådan lösning innehåller 30 % w/v akrylamid och 0,8 % w/v BIS ska en volym på 16,2 ml användas i formuleringen i stället för de angivna vikterna. Stamlösningen är hållbar i högst 10 dagar. Om dess ledningsförmåga överstiger 5 μS, avjoniseras den genom omrörning med 2 g Amberlite MB-3 i 30 minuter och filtreras därefter genom ett 0,45 μm membranfilter.
Gel solution
Gellösning
Prepare a gel solution by mixing additives and ampholytes with the stock gel solution (see 4.1.1).
Bered en gellösning genom att blanda tillsatser och amfolyter med stamlösningen (se 4.1.1).
9,0 ml stock solution
9,0 ml stamlösning
500 μl ampholyte pH 3,5-9,5 [1]
500 μl amfolyt pH 3,5–9,5 [1]
250 μl ampholyte pH 5-7 [1] The produce Ampholine® pH 3,5-9,5 (Pharmacia) and Resolyte® pH 5-7 and pH 6-8 (BDH, Merck) have proved particularly suitable for obtaining the required separation of γ-caseins.
250 μl amfolyt pH 5–7 [1] Produkterna Ampholine® pH 3,5–9,5 (Pharmacia) och Resolyte® pH 5–7 och pH 6–8 (BDH, Merck) har visat sig särskilt lämpliga för att uppnå den önskade γ-kaseinseparationen.
Mix the gel solution and de-gas for two to three minutes in an ultrasonic bath or in vacuum.
Blanda gellösningen och avgasa den i 2–3 minuter i ett ultraljudsbad eller i vakuum.
Note: Prepare the gel solution immediately prior to pouring it (see 6.2).
Anmärkning: Bered gellösningen omedelbart före upphällningen (se 6.2).
Catalyst solutions
Katalysatorlösningar
N, N, N' N' — tetramethylethylenediamine (Temed)
N, N, N' N' – tetrametyletylen-diamin (TEMED).
40 % w/v ammonium persulphate (PER):
40 % w/v ammoniumpersulfat (PER):
Dissolve 800 mg PER in water and make up to 2 ml.
Lös 800 mg PER i vatten och späd med vatten till 2 ml.
Note: Always use freshly prepared PER solution.
Anmärkning: Använd alltid nyblandad PER-lösning.
Contact fluid
Kontaktvätska
Kerosene or liquid paraffin
Fotogen eller flytande paraffin.
Anode solution
Anodlösning
Dissolve 5,77 g phosphoric acid (85 % w/w) in water and dilute to 100 ml.
Lös 5,77 g fosforsyra (85 viktprocent) i vatten och späd till 100 ml.
Cathode solution
Katodlösning
Dissolve 2,00 g sodium hydroxide in water and dilute to 100 ml with water.
Lös 2,00 g natriumhydroxid i vatten och späd med vatten till 100 ml.
Reagents for protein isolation
Reagenser för proteinisolering
Dilute acetic acid (25,0 ml of glacial acetic acid made up to 100 ml with water)
Späd ättiksyra (25,0 ml isättika späds med vatten till 100 ml).
Dichloromethane
Diklormetan.
Protein dissolving buffer
Proteinupplösande buffert
Dissolve
Lös
5,75 g glycerol (87 % w/w)
5,75 g glycerol (87 viktprocent)
250 mg dithiothreitol,
250 mg ditiotreitol
in water and make up to 50 ml
i destillerat vatten och späd till 50 ml.
Note: Store in a refrigerator, maximum shelf-life one week.
Anmärkning: Förvaras i kylskåp, hållbar i högst en vecka.
Reagents for plasmin cleavage of caseins
Reagenser till plasminspjälkning av kaseiner
Ammonium carbonate buffer
Ammoniumkarbonatbuffert
Titrate a 0,2 mol/l ammonium hydrogencarbonate solution (1,58 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA, 1,46 g/100 ml with a 0,2 mol/l ammonium carbonate solution (1,92 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l EDTA to ph 8.
Titrera en 0,2 mol/l ammoniumvätekarbonatlösning (1,58 g/100 ml vatten) som innehåller 0,05 mol/l etylendiamintetraättiksyra (EDTA, 1,46 g/100 ml) med en 0,2 mol/l ammoniumkarbonatlösning (1,92 g/100 ml vatten) som innehåller 0,05 mol/l EDTA till pH 8.
ε-Aminocaproic acid solution for enzyme inhibition
ε-Aminokapronsyralösning för enzyminhibition
Dissolve 2,624 g ε-aminocaproic acid (6 amino-n-hexanoic acid) in 100 ml of 40 % (v/v) ethanol.
Lös 2,624 g ε-aminokapronsyra (6-amino-n-hexanonsyra) i 100 ml 40 % (v/v) etanol.
Certified reference standards of a mixture of renneted ewes’ and goats’ skimmed milk containing 0 % and 1 % of cows’ milk are available from the Commission’s Institute for Reference Materials and Measurements, B-2440 Geel, Belgium
Certifierade referensstandarder av en blandning av skummjölk från tackor och getter vilken behandlats med löpe och som innehåller 0 % och 1 % komjölk är tillgängliga från kommissionens institut för referensmaterial och mätningar, B-2440 Geel, Belgien.
Preparation of laboratory interim-standards of buffalos’ renneted milk containing 0 % and 1 % of cows’ milk
Beredning av interimstandarder för laboratoriebruk av buffelmjölk som behandlats med löpe och som innehåller 0 % och 1 % komjölk.
For the preparation of the 0 % standard, carry out the same procedure using genuine buffalo skimmed milk.
1 %-standardlösningen bereds genom att 5,00 ml skummjölk från ko tillsätts till 495 ml skummjölk från buffel i en 1-litersbägare och pH-värdet justeras till 6,4 genom att utspädd mjölksyra tillsätts (10 % w/v). Ställ in temperaturen på 35 °C, tillsätt 100 μl kalvlöpe (löpeaktivitet 1:10000, ca 3000 IE/ml) och rör om i 1 minut.
The standards must be stored at –20 °C.
Täck sedan bägaren med aluminiumfolie och låt den stå i 35 °C under 1 timme, så att ostmassan bildas. När ostmassan har bildats, frystorkas all den löpebehandlade mjölken utan föregående homogenisering eller avrinning av vasslen.
Note: It is advisable to check the purity of the buffalos’ milk by isoelectric focusing of the plasmin-treated caseins before preparation of the standards.
Efter frystorkningen mals produkten fint till ett homogent pulver. Använd samma förfarande för att bereda 0 %-standardlösningen av ren skummjölk från buffel.
Reagents for protein staining
Standarden måste lagras vid –20 °C. Anmärkning: Det är lämpligt att kontrollera buffelmjölkens renhet genom isoelektrisk fokusering av de plasminbehandlade kaseinerna före framställningen av standardlösningarna. Reagenser för proteinfärgning
Fixative
Fixeringsvätska
Dissolve 150 g trichloroacetic acid in water and make up to 1000 ml.
Lös 150 g triklorättiksyra i vatten och späd till 1000 ml.
Destaining solution
Avfärgningslösning
Dilute 500 ml methanol and 200 ml glacial acetic acid to 2000 ml with distilled water.
Späd 500 ml metanol och 200 ml isättika till 2000 ml med destillerat vatten. Anmärkning: Blanda till ny avfärgningslösning varje dag.
Note: Prepare the destaining solution fresh every day; it can be prepared by mixing equal volumes of stock solutions of 50 % (v/v) methanol and 20 % (v/v) glacial acetic acid.
Utgå gärna från stamlösningar av 50 % (v/v) metanol och 20 % (v/v) isättika som blandas i lika stora mängder.
Staining solutions
Färgningslösningar
Staining solution (stock solution 1)
Färgningslösning (stamlösning 1)
Staining solution (stock solution 2)
Färgningslösning (stamlösning 2)
Dissolve 5,0 g copper sulphate pentahydrate in 1000 ml 20 % (v/v) acetic acid.
Lös 5,0 g kopparsulfatpentahydrat i 1000 ml 20 % (v/v) ättiksyra.
Staining solution (working solution)
Färgningslösning (arbetslösning)
Mix together 125 ml of each of the stock solutions (4.11.1, 4.11.2) immediately prior to staining.
Blanda 125 ml av vardera stamlösningen (4.11.1, 4.11.2) med varandra omedelbart före färgningen.
Note: The staining solution should be prepared on the day that it is used.
Anmärkning: Färgningslösningen bör endast användas samma dag som den beretts.
Glass plates (265 × 125 × 4 mm); rubber roller (width 15 cm); levelling table
Glasplattor (265 × 125 × 4 mm), gummirulle (15 cm bred) och vågrätt underlag.
Gel carrier sheet (265 × 125 mm)
Gelbärarfolie (265 × 125 mm).
Covering sheet (280 × 125 mm).
Täckfolie (280 × 125 mm).
Stick on strip of adhesive tape (280 × 6 × 0,25 mm) to each long edge (see Figure 1)
Fäst en tejpremsa (280 × 6 × 0,25 mm) efter vardera långsidan (se figur 1).
Electrofocusing chamber with cooling plate (e.g. 265 × 125 mm) and suitable power supply (≥ 2,5 kV) or automatic electrophoresis device
Elektrofokuseringskammare med kylplatta (t.ex. 265 × 125 mm) med lämplig spänningskälla (≥ 2,5 kV) eller automatisk elektroforesapparat.
Circulation cryostat, thermostatically controlled at 12 ± 0,5 °C
Cirkulationskryostat, termostatstyrd vid 12 ± 0,5 °C.
Centrifuge, adjustable to 3000 g
Centrifug, justerbar till 3000 g.
Electrode strips (≥ 265 mm long)
Elektrodremsor (≥ 265 mm långa).
Plastic dropping bottles for the anode and cathode solutions
Droppflaskor av plast till anod- och katodlösningarna.
Sample applicators (10 × 5 mm, viscose or low protein-adsorption filter paper)
Provapplikatorer (10 × 5 mm, viskosfilterpapper eller filterpapper för låg proteinabsorption).
Stainless steel scissors, scalpels and tweezers
Sax, skalpell och pincetter av rostfritt stål.
Stainless steel or glass staining and destaining dishes (e.g. 280 × 150 mm instrument trays)
Färgningsskålar och avfärgningsskålar av rostfritt stål eller glas (t.ex. 280 × 150 mm instrumentbrickor).
Adjustable rod homogenizer (10 mm shaft diameter), rpm range 8000 to 20000
Justerbar homogenisator med stång (10 mm diameter), varvtalsintervall 8000–20000.
Ultrasonic bath
Ultraljudsbad.
Film welder
Foliesvets.
25 μl micropipettes
25 μl mikropipetter.
Vacuum concentrator or freeze-dryer
Vakuumindunstare eller frystork.
Thermostatically controlled water bath adjustable to 35 and 40 ± 1 °C with shaker
Termostatstyrt vattenbad inställt på 35 och 40 ± 1 °C med skakare.
Densitometer equipment reading at λ = 634 nm
Densitometerutrustning med avläsning vid λ = 634 nm.
Isolation of caseins
Isolering av kaseiner
Weigh the amount equivalent to 5 g dry mass of cheese or the reference standards into a 100 ml centrifuge tube, add 60 ml distilled water and homogenize with a rod homogenizer (8000 to 10000 rpm).
Väg upp en mängd som motsvarar 5 g torr ost eller referensstandarder i ett 100 ml centrifugrör, tillsätt 60 ml destillerat vatten och homogenisera med en homogenisator med stång (8000–10000 varv/minut).
Adjust to pH 4,6 with dil. acetic acid (4.5.1) and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
Justera pH-värdet till 4,6 med utspädd ättiksyra (4.5.1) och centrifugera (5 minuter, 3000 g). Avlägsna fettet och vasslen.
Decant the fat and whey, homogenize the residue at 20000 rpm in 40 ml distilled water adjusted to pH 4,5 with dil. acetic acid (4.5.1), add 20 ml dichloromethane (4.5.2), homogenize again and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
Homogenisera återstoden vid 20000 varv/min i 40 ml destillerat vatten som justerats till pH 4–5 med utspädd ättiksyra (4.5.1), tillsätt 20 ml diklormetan (4.5.2) samt homogenisera och centrifugera igen (5 minuter, 3000 g).
Remove the casein layer that lies between the aqueous and organic phases (see Figure 2) with a spatula and decant off both phases.
Avlägsna det kaseinlager som finns mellan vattenfasen och den organiska fasen (se figur 2) med en spatel och dekantera av båda faserna.
Rehomogenize the casein in 40 ml distilled water (see above) and 20 ml dichloromethane (4.5.2) and centrifuge.
Homogenisera kaseinet igen i 40 ml destillerat vatten (se ovan) och 20 ml diklormetan (4.5.2) samt centrifugera.
Repeat this procedure until both extraction phases are colourless (two to three times).
Upprepa detta förfarande tills båda extraktionsfaserna är färglösa (två eller tre gånger).
Homogenize the protein residue with 50 ml acetone (4.5.3) and filter through a medium-speed folded filter paper.
Homogenisera proteinresterna med 50 ml aceton (4.5.3) och filtrera dem genom ett vikt filter för medelsnabb filtrering.
Wash the residue on the filter with two separate 25 ml portions of acetone each time and allow to dry in the air or a stream of nitrogen, then pulverize finely in a mortar.
Tvätta resterna på filtret med två olika omgångar av 25 ml aceton, låt torka i luft eller i en kväveström och pulverisera dem sedan fint i mortel.
Note: Dry casein isolates should be kept at –20 °C.
Anmärkning: Torra kaseinisolat ska förvaras vid –20 °C.
Plasmin cleavage of β-caseins to intensify γ-caseins
Plasminspjälkning av β-kaseiner för att intensifiera γ-kaseiner
Disperse 25 mg of isolated caseins (6.1.1) in 0,5 ml ammonium carbonate buffer (4.7.1) and homogenize for 20 minutes by e.g. using ultrasonic treatment.
Slamma upp 25 mg isolerade kaseiner (6.1.1) i 0,5 ml ammoniumkarbonatbuffert (4.7.1) och homogenisera under 20 minuter genom exempelvis ultraljudsbehandling.
Heat to 40 °C and add 10 μl plasmin (4.7.2), mix and incubate for one hour at 40 °C with continuous shaking.
Värm till 40 °C och tillsätt 10 μl plasmin (4.7.2), blanda och inkubera under en timme vid 40 °C under ständig skakning.
To inhibit the enzyme add 20 μl ε-aminoproic acid solution (4.7.3), then add 200 mg of solid urea and 2 mg of dithiothreitol.
Inhibera enzymet genom att tillsätta 20 μl ε-aminokapronsyra (4.7.3), tillsätt sedan 200 mg fast urea och 2 mg ditiotreitol.
Note: To obtain more symmetry in the focused casein bands it is advisable to freeze-dry the solution after adding the ε-aminocaproic acid and then dissolving the residues in 0,5 ml protein dissolving buffer (4.6).
Anmärkning: För att få de fokuserade kaseinbanden mer symmetriska rekommenderas att lösningen frystorkas efter tillsättning av ε-aminokapronsyran och att resterna löses i 0,5 ml proteinupplösande buffert (4.6).
Preparation of the urea containing polyacrylamide gels
Beredning av akrylamidgeler som innehåller urea
With the aid of a few drops of water roll the gel carrier sheet (5.2) onto a glass plate (5.1), removing any extraneous water with paper towel or tissue.
Rulla ut gelbärarfolien (5.2) med hjälp av ett par droppar vatten på en glasplatta (5.1) och avlägsna eventuellt överflödigt vatten med pappershandduk eller hushållspapper.
Roll the cover sheet (5.3) with spacers (0,25 mm) onto another glass plate in the same way.
Rulla på samma sätt ut täckfolien (5.3) med avståndsmärken med 0,25 mm mellanrum på en annan glasplatta.
Lay the plate horizontally on a levelling table.
Placera plattan plant på ett vågrätt underlag.
Add 10 μl Temed (4.1.3.1) to the prepared and de-aerated gel solution (4.1.2), stir and add 10 μl PER-solution (4.1.3.2), mix thoroughly and immediately pour out evenly onto the centre of the cover sheet.
Tillsätt 10 μl TEMED (4.1.3.1) till den förbehandlade och avgasade gellösningen (4.1.2), rör om och tillsätt 10 µl PER-lösning (4.1.3.2), blanda noggrant och häll omedelbart ut ett jämt lager på mitten av täckfolien.
Place one edge of the gel carrier plate (sheet side down) on the cover sheet plate and lower it slowly so that a gel film forms between the sheets and spreads out regularly and free of bubbles (Figure 3).
Placera ena sidan av gelbärarplattan (med folien nedåt) på täckfolieplattan och sänk ned den långsamt så att en gelfilm bildas mellan folierna och sprids ut jämt utan bubblor (figur 3).
Carefully lower the gel carrier plate completely using a thin spatula and place three more glass plates on top of it to act as weights.
Sänk försiktigt ned hela gelbärarplattan med hjälp av en tunn spatel och placera ytterligare tre glasplattor ovanpå den som vikter.
After polymerization is complete (about 60 minutes) remove the gel polymerized onto the gel carrier sheet along with the cover sheet by tipping the glass plates.
När polymeriseringen är avslutad (efter ca 60 minuter), överför den polymeriserade gelen till gelbärarfolien tillsammans med täckfolien genom att vicka på glasplattorna.
Clean the reverse of the carrier sheet carefully to remove gel residues and urea.
Rengör baksidan av gelbärarfolien försiktigt från gelrester och urea.
Weld the gel sandwich into a film tube and store in a refrigerator (maximum six weeks).
Svetsa ”gelsandwichen” till ett folierör, som förvaras i kylskåp (högst 6 veckor).
Note: The cover sheet with the spacers can be re-used.
Anmärkning: Täckfolien med avståndsmärken kan återanvändas.
The polyacrylamide gel can be cut to smaller sizes, recommended when there are few samples or if an automatic electrophoresis device is used (two gels, size 4,5 × 5 cm).
Polyakrylamidgelen kan skäras i mindre bitar, vilket är lämpligt då antalet prover är få eller då en automatisk elektroforesapparat används (2 geler, storlek 4,5 × 5 cm).
lsoelectric focusing
Isoelektrisk fokusering
Set the cooling thermostat to 12 °C.
Ställ in kyltermostaten på 12 °C.
Wipe off the reverse of the gel carrier sheet with kerosene, then drip a few drops of kerosene (4.2) onto the centre of the cooling block.
Torka av baksidan på gelbärarfolien med fotogen och droppa sedan några droppar fotogen (4.2) på mitten av kylblocket.
Then roll the gel sandwich, carrier side down, onto it, taking care to avoid bubbles.
Rulla därefter ut gelsandwichen (med bärarsidan nedåt) på den och se till att det inte bildas några bubblor.
Wipe off any excess kerosene and remove the cover sheet.
Torka av eventuellt överflödigt fotogen och ta bort täckfolien.
Soak the electrode strips with the electrode solutions (4.3, 4.4), cut to gel length and place in the positions provided (distance of electrodes 9,5 cm).
Dränk in elektrodremsorna med elektrodlösningarna (4.3 och 4.4), skär till dem till samma längd som gelen och placera dem på de givna platserna (elektrodavstånd 9,5 cm).
Conditions for isoelectric focusing:
Fokuseringen sker under följande betingelser:
Gel size 265 × 125 × 0,25 mm
Gelstorlek 265 × 125 × 0,25 mm
(min.)
(minuter)
Voltage
Spänning
Current
Strömstyrka
Volt-hours
Volttimmar
Pre-focusing
Förfokusering
maximum 15
max. 15 konst.
Sample focusing [2]
Provfokusering [2]
Final focusing
Slutfokusering
Note: If thickness or width of the gels are changed, the values for current and power have to be suitably adjusted (e.g. double the values for electric current and power if a 265 × 125 × 0,5 mm gel is used).
Anmärkning: Om gelernas tjocklek eller bredd ändras måste strömstyrkan och effekten justeras därefter (dubblera t.ex. strömstyrkan och effekten om en gel med måtten 265 × 125 × 0,5 mm används).
Example of a voltage programme for an automatic electrophoresis device (2 gels of 5,0 × 4,5 cm), electrodes without strips applied directly to the gel
Exempel på spänningsprogram för en automatisk elektroforesapparat (2 geler på 5,0 × 4,5 cm); elektroderna placeras utan remsor direkt på gelen.
Sample focusing
Provfokusering
Focusing
Fokusering
Place sample applicator in step 2 at 0 Vh.
Placera provapplikatorn i steg 2 vid 0 Vh.
Remove sample applicator in step 2 at 30 Vh.
Ta bort provapplikatorn i steg 2 vid 30 Vh.
Protein staining
Proteinfärgning
Protein fixation
Proteinfixering
Remove the electrode strips immediately after turning off the power and put the gel immediately into a staining/destaining dish filled with 200 ml fixative (4.9); leave for 15 minutes, shaking continuously.
Ta bort elektrodremsorna omedelbart efter det att strömmen slagits av och placera gelen i en färgningsskål eller avfärgningsskål fylld med 200 ml fixeringsvätska (4.9). Låt den stå i 15 minuter och skaka om då och då.
Washing and staining the gel plate
Tvättning och färgning av gelplattan
Thoroughly drain off the fixative and wash the gel plate twice for 30 seconds each time with 100 ml destaining solution (4.10).
Låt fixeringsvätskan rinna av ordentligt och tvätta gelplattan två gånger under 30 sekunder med 100 ml avfärgningslösning (4.10) per gång.
Pour off the destaining solution and fill the dish with 250 ml staining solution (4.11.3); allow to stain for 45 minutes with gentle shaking.
Häll av avfärgningslösningen och fyll skålen med 250 ml färgningslösning (4.11.3). Låt färgen verka under 45 minuter under försiktig skakning.
Destaining the gel plate
Avfärgning av gelplattan
Pour off the staining solution, wash the gel plate twice using a 100 ml destaining solution (4.10) each time, then shake with 200 ml destaining solution for 15 minutes and repeat the destaining step at least two or three times until the background is clear and uncoloured.
Häll bort färgningslösningen och tvätta gelplattan två gånger med 100 ml avfärgningslösning (4.10) per gång, skaka sedan under minst 15 minuter med 200 ml avfärgningslösning tills bakgrunden är klar och färglös.
Then rinse the gel plate with distilled water (2 × 2 minutes) and dry in the air (2 to 3 hours) or with a hairdryer (10 to 15 minutes).
Tvätta sedan gelplattan med destillerat vatten (2 × 2 minuter) och låt lufttorka (2–3 timmar) eller torka med en hårtork (10–15 minuter).
Note 1: Carry out fixing, washing, staining and destaining at 20 °C.
Anmärkning 1: Utför fixering, tvättning, färgning och avfärgning vid 20 °C.
Do not use elevated temperatures.
Högre temperatur får inte användas.