natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Electrophoresis buffer can also be used.
Nekatere vrste poškodb DNK so lahko kratkotrajne, tj. se morda popravijo prehitro, da bi jih bilo mogoče opaziti v 24 urah ali več po zadnjem odmerku.
This would maintain the alkaline conditions in the electrophoresis chamber.
Ne obstaja znan seznam vrst kratkotrajnih poškodb ali kemikalij, ki verjetno povzročajo to vrsto poškodbe, niti ni znano, v kakšnem časovnem obdobju je to vrsto poškodbe mogoče zaznati.
Unwinding and electrophoresis
Optimalni čas vzorčenja je lahko odvisen tudi specifičen za kemikalijo ali način dajanja in ga je treba določiti na podlagi kinetičnih podatkov (na primer čas Tmax, ob katerem je dosežena najvišja koncentracija v plazmi ali tkivu), če so taki podatki na voljo.
Slides should be randomly placed onto the platform of a submarine-type electrophoresis unit containing sufficient electrophoresis solution such that the surfaces of the slides are completely covered (the depth of covering should also be consistent from run to run).
Večina validacijskih študij, ki podpirajo to preskusno metodo, je določilo nekropsijo 2 ali 3 ure po zadnjem odmerku.
In another type of comet assay electrophoresis units i.e. with active cooling, circulation and high capacity power supply a higher solution covering will result in higher electric current while the voltage is kept constant.
Večina študij v objavljenih virih opisuje dajanje zadnjega odmerka od 2 do 6 ur pred žrtvovanjem.
A balanced design should be used to place slides in the electrophoresis tank to mitigate the effects of any trends or edge effect within the tank and to minimize batch-to-batch variability, i.e., in each electrophoresis run, there should be the same number of slides from each animal in the study and samples from the different dosage groups, negative and positive controls, should be included.
Te izkušnje so bile torej uporabljene kot podlaga za priporočilo za preskusno metodo, in sicer da je treba zadnji odmerek dati ob določenem času med 2 in 6 urami pred nekropsijo, če ni podatkov, ki bi priporočali drugačen postopek.
The slides should be left for at least 20 minutes for the DNA to unwind, and then subjected to electrophoresis under controlled conditions that will maximize the sensitivity and dynamic range of the assay (i.e. lead to acceptable levels of % tail DNA for negative and positive controls that maximize sensitivity).
Ni znanih podatkov študij, ki bi proučile občutljivost preskusa za zaznavanje kratkotrajnih poškodb DNK po dajanju odmerka s hrano ali pitno vodo v primerjavi z dajanjem odmerka z gavažo.
The level of DNA migration is linearly associated with the duration of electrophoresis, and also with the potential (V/cm).
Poškodbe DNK so bile ugotovljene po dajanju odmerka s hrano in pitno vodo, je pa sorazmerno malo takih poročil v primerjavi z veliko več izkušnjami z dajanjem odmerka z gavažo in intraperitonealno injekcijo.
Based on the JaCVAM trial this could be 0,7 V/cm for at least 20 minutes.
Zato je občutljivost preskusa morda manjša za kemikalije, ki povzročijo kratkotrajne poškodbe in se dajejo s hrano ali pitno vodo.
The duration of electrophoresis is considered a critical variable and the electrophoresis time should be set to optimize the dynamic range.
Medlaboratorijske študije so bile izvedene samo na jetrih in želodcu, na drugih tkivih pa ne, zato niso opredeljena nobena priporočila o tem, kako doseči občutljiv in ponovljiv odziv na drugih tkivih, ne samo na jetrih, kot so na primer pričakovana območja pozitivne in negativne kontrole.
Longer electrophoresis times (e.g. 30 or 40 minutes to maximize sensitivity) usually lead to stronger positive responses with known mutagens.
Za jetra tudi ni bilo mogoče doseči soglasja o opredelitvi spodnje meje za vrednost negativne kontrole.
However longer electrophoresis times may also lead to excessive migration in control samples.
Čeprav je zavajajoč učinek citotoksičnosti in vitro predstavljen v več publikacijah, je zelo malo objavljenih podatkov in vivo, zato ni bilo mogoče priporočiti nobenega merila za citotoksičnost.
In each experiment the voltage should be kept constant, and the variability in the other parameters should be within a narrow and specified range, for example in the JaCVAM trial 0,7 V/cm delivered a starting current of 300 mA.
S povečano migracijo DNK so povezane histopatološke spremembe, kot so vnetje, infiltracija celic, apoptozne ali nekrotične spremembe, toda, kot je razvidno iz validacijskega preskusa JaCVAM (OECD 2014), te spremembe ne pomenijo vedno pozitivnih ugotovitev pri kometnem preskusu, zato ni na voljo nobenega dokončnega seznama histopatoloških sprememb, ki so vedno povezane s povečano migracijo DNK.
The depth of buffer should be adjusted to achieve the required conditions and maintained throughout the experiment.
Celice „hedgehog“ (ali „ježi“, oblaki, fantomske celice) so že bili predlagani kot kazalnik citotoksičnosti, vendar je etiologija teh celic negotova.
The current at the start and end of the electrophoresis period should be recorded.
Po nekaterih podatkih jih lahko povzroči citotoksičnost, povezana s kemikalijo, poškodbe zaradi mehanskih ali encimskih postopkov, ki so nastale med pripravo vzorca (Guerard idr., 2014), in/ali bolj skrajen učinek genotoksičnosti preskusne kemikalije.
The optimum conditions should therefore be determined during the initial demonstration of proficiency in the laboratory concerned with each tissue studied.
Drugi podatki pa naj bi kazali, da nastanejo zaradi močnih, vendar morda popravljivih, poškodb DNK (Lorenzo idr. 2013).
The temperature of the electrophoresis solution through unwinding and electrophoresis should be maintained at a low temperature, usually 2-10 °C (10).
Tkiva ali jedra celic so bila uspešno zamrznjena za poznejšo analizo.
The temperature of the electrophoresis solution at the start of unwinding, the start of electrophoresis, and the end of electrophoresis should be recorded.
To običajno omogoči merljiv učinek na odziv na vehikel in pozitivno kontrolo (Recio idr., 2010; Recio at al., 2012; Jackson at al., 2013).
After completion of electrophoresis, the slides should be immersed/rinsed in the neutralization buffer for at least 5 minutes.
Pri uporabi zamrznitve mora laboratorij dokazati usposobljenost za metodologije zamrzovanja ter potrditi sprejemljiva nizka območja odstotka DNK v repu v ciljnih tkivih živali, tretiranih z vehiklom, in dokazati, da je pozitivne odzive še vedno mogoče zaznati.
Gels can be stained and scored “fresh” (e.g. within 1-2 days) or can be dehydrated for later scoring (e.g. within 1-2 weeks after staining) (56).
V virih je opisana zamrznitev tkiv z uporabo različnih metod.
However, the conditions should be validated during the demonstration of proficiency and historical data should be obtained and retained separately for each of these conditions.
Vendar trenutno ni soglasja o tem, kako je najbolje zamrzniti in odtaliti tkiva ter kako oceniti, ali lahko morebiten spremenjen odziv vpliva na občutljivost preskusa.
In case of the latter, slides should be dehydrated by immersion into absolute ethanol for at least 5 minutes, allowed to air dry, and then stored, either at room temperature or in a container in a refrigerator until scored.
Nedavna raziskovanja kažejo, da naj bi se seznam ključnih spremenljivk še naprej krajšal, parametri ključnih spremenljivk pa natančneje opredelili (Guerard idr. 2014).
Methods of Measurement
Lorenzo, Y. idr.
Comets should be scored quantitatively using an automated or semi-automated image-analysis system.
V delu C se poglavje C.13 nadomesti z naslednjim:
The slides will be stained with an appropriate fluorescent stain e.g. SYBR Gold, Green I, propidium iodide or ethidium bromide and measured at a suitable magnification (e.g. 200x) on a microscope equipped with epi-fluorescence and appropriate detectors or a digital (e.g. CCD) camera.
Bioakumulacija v ribah: vodna in prehranska izpostavljenost
Cells may be classified into three categories as described in the atlas of comet images (57), namely scorable, non-scorable and “hedgehog” (see paragraph 56 for further discussion).
Ta preskusna metoda ustreza Smernici za preskušanje OECD (TG) 305 (2012).
Only scorable cells (clearly defined head and tail with no interference with neighbouring cells) should be scored for % tail DNA to avoid artefacts.
Glavni cilj te revizije preskusne metode zajema dva vidika.
There is no need to report the frequency of non-scorable cells.
Kot prvo je njen namen zajeti preskus prehranske bioakumulacije [20], ki je primeren za določanje bioakumulacijskega potenciala snovi z zelo nizko topnostjo v vodi.
The frequency of hedgehogs should be determined based on the visual scoring (since the absence of a clearly-defined head will mean they are not readily detected by image analysis) of at least 150 cells per sample (see paragraph 56 for further discussion) and separately documented.
Kot drugo pa je njen namen oblikovati preskusno metodo, ki, kadar je to ustrezno, uporablja manj rib zaradi dobrobiti živali in je bolj stroškovno učinkovita.
All slides for analysis, including those of positive and negative controls, should be independently coded and scored “blinded” so the scorer is unaware of the treatment condition.
V letih po sprejetju enotne preskusne metode C.13 (1) so bile preskušene številne snovi, laboratoriji in regulativni organi pa so pridobili mnoge izkušnje.
For each sample (per tissue per animal), at least 150 cells (excluding hedgehogs — see paragraph 56) should be analysed.
Na podlagi tega se je oblikovalo prepričanje, da se lahko kompleksnost preskusa zmanjša, če so izpolnjena določena merila (prim. odstavek 88), in da je mogoč stopenjski pristop.
Scoring 150 cells per animal in at least 5 animals per dose (less in the concurrent positive control — see paragraph 29) provides adequate statistical power according to the analysis of Smith et al., 2008 (5).
Izkušnje tudi kažejo, da lahko biološki dejavniki, kot sta rast in vsebnost lipidov v ribah, močno vplivajo na rezultate in da jih je morda treba upoštevati.
If slides are used, this could be from 2 or 3 slides scored per sample when five animals per group are used.
Poleg tega je bilo ugotovljeno, da preskušanje zelo slabo topnih snovi v vodi morda ni tehnično izvedljivo.
Several areas of the slide should be observed at a density that ensures there is no overlapping of tails.
Za snovi z zelo nizko topnostjo v vodi v vodnem okolju ima morda izpostavljenost prek vode tudi omejen pomen v primerjavi s prehransko izpostavljenostjo.
Scoring at the edge of slides should be avoided.
Na podlagi tega se je oblikovala preskusna metoda, pri kateri so ribe izpostavljene prek njihove hrane (prim. odstavki 7–14 in od 97 naprej).
DNA strand breaks in the comet assay can be measured by independent endpoints such as % tail DNA, tail length and tail moment.
Validacija (krožni preskus) preskusa prehranske izpostavljenosti je bila izvedena leta 2010 (51).
All three measurements can be made if the appropriate image software analyser system is used.
Glavne spremembe zajemajo:
However, the % tail DNA (also known as % tail intensity) is recommended for the evaluation and interpretation of results (12) (40) (41) (42), and is determined by the DNA fragment intensity in the tail expressed as a percentage of the cell's total intensity (13).
preskušanje samo ene preskusne koncentracije se obravnava kot zadostno, če je biokoncentracijski faktor (BKF) najverjetneje neodvisen od preskusne koncentracije;
Tissue damage and cytotoxicity
minimiziran načrt preskusa vodne izpostavljenosti, pri katerem je mogoče manjše število vzorčnih točk, če so izpolnjena določena merila;
Positive findings in the comet assay may not be solely due to genotoxicity, target tissue toxicity may also result in increases in DNA migration (12) (41).
vsebnost lipidov v ribah bi bilo treba izmeriti tako, da se lahko BKF izrazi na podlagi 5-odstotne vsebnosti lipidov;
Conversely, low or moderate cytotoxicity is often seen with known genotoxins (12), showing that it is not possible to distinguish DNA migration induced by genotoxicity versus that induced by cytotoxicity in the comet assay alone.
večji poudarek na oceni kinetičnega BKF (kadar je to mogoče) poleg ocene stacionarnega BKF;
However, where increases in DNA migration are observed, it is recommended that an examination of one or more indicators of cytotoxicity is performed as this can aid in interpretation of the findings.
kadar se preskus prehranske izpostavljenosti obravnava kot ustreznejši od preskusa vodne izpostavljenosti, se predlaga za določene skupine snovi;
Increases in DNA migration in the presence of clear evidence of cytotoxicity should be interpreted with caution.
izmeriti je treba težo ribe, zato da se lahko BKFk popravi glede na razredčitev zaradi rasti.
Many measures of cytotoxicty have been proposed and of these histopathological changes are considered a relevant measure of tissue toxicity.
Pred izvedbo kakršnih koli bioakumulacijskih preskusov morajo biti znane naslednje informacije o preskusni snovi:
Observations such as inflammation, cell infiltration, apoptotic or necrotic changes have been associated with increases in DNA migration, however, as demonstrated by the JaCVAM validation trial (12) no definitive list of histopathological changes that are always associated with increased DNA migration is available.
občutljivost analitske tehnike za merjenje koncentracij preskusne snovi in morebitnih metabolitov v tkivu, vodi in hrani (prim. odstavek 65);
Changes in clinical chemistry measures (e.g. AST, ALT), can also provide useful information on tissue damage and additional indicators such as caspase activation, TUNEL stain, Annexin V stain, etc. may also be considered.
topnost v vodi [TM A.6; (2)]; topnost v vodi je treba določiti v skladu z metodo, ki je ustrezna za (ocenjeno) območje topnosti, da se pridobi zanesljiva vrednost.
However, there are limited published data where the latter have been used for in vivo studies and some may be less reliable than others.
Za hidrofobne snovi je to običajno metoda z izpiranjem kolone;
Hedgehogs (or clouds, ghost cells) are cells that exhibit a microscopic image consisting of a small or non-existent head, and large diffuse tails and are considered to be heavily damaged cells, although the etiology of the hedgehogs is uncertain (see Appendix 3).
porazdelitveni koeficient n-oktanol/voda, KOW [21] [TM A.8 (4), A.24 (5), A.23 (6)]; ali druge ustrezne informacije o porazdelitvenem vedenju (npr. sorpcija na lipide, KOC); treba jih je določiti v skladu z metodo, ki je ustrezna za (ocenjeno) območje KOW, da se pridobi zanesljiva vrednost.
Due to their appearance, % tail DNA measurements by image analysis are unreliable and therefore hedgehogs should be evaluated separately.
Za hidrofobne snovi je to običajno metoda počasnega mešanja [TM A.23 (6)];
The occurrence of hedgehogs should be noted and reported and any relevant increase thought to be due to the test chemical should be investigated and interpreted with care.
obstojnost snovi v vodi (hidroliza [TM C.7 (7)]);
Knowledge of the potential mode of action of the test chemicals may help with such considerations.
obstojnost snovi v hrani (zlasti, kadar se izbere pristop s preskusom prehranske izpostavljenosti);
The animal is the experimental unit and therefore both individual animal data and summarized results should be presented in tabular form.
informacije o fototransformaciji, ki so pomembne za pogoje obsevanja pri preskusu (8);
All of these values should be included in the report.
kakršne koli informacije o biotski ali abiotski razgradnji v vodi, med drugim na primer o lahki biološki razgradljivosti [TM C.4, deli od II do VII (11), C.29 (12)], kadar je to ustrezno;
Alternative approaches (see paragraph 53) may be used if scientifically and statistically justified.
informacije o metabolitih: struktura, log KOW, nastajanje in razgradljivost, kadar je to ustrezno;
Statistical analysis can be done using a variety of approaches (58) (59) (60) (61).
disociacijska konstanta kisline (pKa) za snovi, ki lahko ionizirajo.
When selecting the statistical methods to be used, the need for transformation (e.g. log or square root) of the data and/or addition of a small number (e.g. 0,001) to all (even non-zero) values to mitigate the effects of zero cell values, should be considered as discussed in the above references.
Po potrebi je treba prilagoditi pH preskusne vode, da se zagotovi, da je snov v preskusu v neionizirani obliki, če je to združljivo z vrsto rib.
Details of analysis of treatment/sex interactions when both sexes are used, and subsequent analysis of data where either differences or no differences are found is given in Appendix 2.
Neodvisno od izbrane metode izpostavljenosti ali sheme vzorčenja ta preskusna metoda opisuje postopek za opredelitev lastnosti bioakumulacijskega potenciala snovi v ribah.
Data on toxicity and clinical signs should also be reported.
Čeprav so najbolj zaželeni režimi pretočnega preskusa, se lahko uporabljajo tudi sistemi polstatičnega preskusa, če so izpolnjena merila za veljavnost (prim. odstavka 24 in 113).
The concurrent negative control is considered acceptable for addition to the laboratory historical negative control database as described in paragraph 16
Pri načinu prehranske izpostavljenosti za ohranjanje koncentracij preskušane snovi v vodi ni potreben pretočni sistem, vendar slednji pomaga ohraniti ustrezne koncentracije raztopljenega kisika ter zagotoviti čisto vodo in odstraniti različne vplive, npr. produktov izločanja.
Concurrent positive controls (see paragraph 29) should induce responses that are compatible with those generated in the historical positive control database and produce a statistically significant increase compared with the concurrent negative control.
Neodvisno od izbrane preskusne metode je za to preskusno metodo zagotovljenih dovolj podrobnosti za izvajanje preskusa, hkrati pa ostaja dovolj svobode pri prilagajanju načrta preskusa pogojem v določenih laboratorijih in različnim lastnostim preskusnih snovi.
Adequate numbers of cells and doses have been analysed (paragraphs 52 and 36-38).
Preskus vodne izpostavljenosti je najustrezneje uporabiti za obstojne organske snovi z vrednostmi log KOW med 1,5 in 6,0 (13), vendar se lahko še vedno uporabi za močno hidrofobne snovi (z vrednostjo log KOW > 6,0), če je mogoče dokazati obstojno in povsem raztopljeno koncentracijo preskusne snovi v vodi.
The criteria for the selection of highest dose are consistent with those described in paragraph 36.
Če ni mogoče dokazati obstojne koncentracije preskusne snovi v vodi, študija vodne izpostavljenosti ni primerna, zato je za preskušanje snovi pri ribah treba uporabiti prehranski pristop (čeprav je razlaga in uporaba rezultatov prehranskega preskusa morda odvisna od regulativnega okvira).
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered to be clearly positive if:
Predhodne ocene biokoncentracijskega faktorja (BKF, ki je včasih označen z KB) za organske snovi z vrednostmi log KOW do približno 9,0 je mogoče dobiti z uporabo enačbe iz Bintein idr.
at least one of the test doses exhibits a statistically significant increase compared with the concurrent negative control,
Predhodna ocena biokoncentracijskega faktorja za tako močno hidrofobne snovi je morda višja od vrednosti stacionarnega biokoncentracijskega faktorja (BKFSS), ki se pričakuje v laboratorijskih preskusih, zlasti ko se za predhodno oceno uporabi preprost linearni model.
any of the results are outside the distribution of the historical negative control data for a given species, vehicle, route, tissue, and number of administrations.
Parametri, ki opredeljujejo bioakumulacijski potencial, zajemajo konstanto hitrosti absorpcije (k1), konstante hitrosti izgube, vključno s konstanto hitrosti očiščenja (k2), stacionarni biokoncentracijski faktor (BKFSS), kinetični biokoncentracijski faktor (BKFK) in prehranski biomagnifikacijski faktor (BMF) [22].
When all of these criteria are met, the test chemical is then considered able to induce DNA strand breakage in the tissues studied in this test system.
Izotopsko označene preskusne snovi lahko pospešijo analizo vodnih, prehranskih in ribjih vzorcev ter se uporabijo pri odločitvi, ali je treba identificirati in količinsko opredeliti metabolite.
If only one or two of these criteria are satisfied, see paragraph 62.
Pri merjenju skupnih radioaktivnih ostankov (npr. s sežigom ali solubilizacijo tkiva) temeljita BKF in BMF na skupni vrednosti matične snovi, morebitnih ohranjenih metabolitov in tudi asimiliranega ogljika.
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered clearly negative if:
Vrednosti BKF in BMF, ki temeljijo na skupnih radioaktivnih ostankih, torej morda niso neposredno primerljive z vrednostmi BKF in BMF, ki so izpeljane z določeno kemijsko analizo zgolj matične snovi.
there is no concentration-related increase when evaluated with an appropriate trend test.
Pred analizo v študijah izotopsko označenih spojin se lahko uporabijo postopki ločevanja, kot so TLC, HPLC ali GC [23], da se določi BKF ali BMF glede na matično snov.
all results are inside the distribution of the historical negative control data for a given species, vehicle, route, tissue, and number of administrations.
Kadar se uporabijo tehnike ločevanja, je treba identificirati ter količinsko opredeliti matično snov in ustrezne metabolite [24] (prim. odstavek 65), če naj bi BKF ali BMF temeljil na koncentraciji matične snovi v ribah, ne pa na skupnih izotopsko označenih ostankih.
direct or indirect evidence supportive of exposure of, or toxicity to, the target tissue(s) has been demonstrated.
Študija bioakumulacije se lahko tudi združi s študijo metabolizma rib ali študijo porazdelitve in vivo z analizo in identifikacijo ostankov v tkivih.
The test chemical is then considered unable to induce DNA strand breakage in the tissues studied in this test system.
Možnost metabolizma se lahko predvidi z ustreznimi orodji (npr. orodje QSAR OECD (15) in lastniški programi QSAR).
In case the response is neither clearly negative nor clearly positive (i.e. not all the criteria listed in paragraphs 59 or 60 are met) and in order to assist in establishing the biological relevance of a result, the data should be evaluated by expert judgement and/or further investigations conducted, if scientifically justified.
Odločitev o tem, ali naj se izvede preskus vodne ali prehranske izpostavljenosti in kakšen naj bo načrt, mora temeljiti na dejavnikih iz odstavka 3 ob upoštevanju ustreznega regulativnega okvira.
Scoring additional cells (where appropriate) or performing a repeat experiment possibly using optimised experimental conditions (e.g. dose spacing, other routes of administration, other sampling times or other tissues) could be useful.
Na primer za snovi, ki imajo visoko vrednost log KOW, ampak še vedno kažejo precejšnjo topnost v vodi glede na občutljivost razpoložljivih analitskih tehnik, je treba najprej obravnavati preskus vodne izpostavljenosti.
In rare cases, even after further investigations, the data set will preclude making a conclusion of positive or negative results, and will therefore be concluded as equivocal.
Vendar je mogoče, da informacije o topnosti v vodi niso dokončne za te hidrofobne vrste snovi, zato je treba proučiti možnost priprave obstojnih, merljivih, raztopljenih koncentracij v vodi (obstojne emulzije niso dovoljene), ki se lahko uporabijo za študijo vodne izpostavljenosti, preden se sprejme odločitev o tem, katero preskusno metodo uporabiti (16).
To assess the biological relevance of a positive or equivocal result, information on cytotoxicity at the target tissue is required (see paragraphs 54-55).
Ni mogoče zagotoviti točnih predpisanih smernic o metodi, ki naj se uporabi glede na topnost v vodi in merila za mejno vrednost porazdelitvenega koeficienta n-oktanol/voda, saj lahko imajo drugi dejavniki (analitske tehnike, razgradnja, adsorpcija itd.) opazen vpliv na uporabnost metode zaradi zgoraj opisanih razlogov.