natgillin/translations-raw huggingface dataset:
For example, if the weight of the liver is 4,5 mg, the volume of homogenate buffer for the liver is 225 μl.
Pri močni osvetlitvi polja so v koaguliranih zarodkih cebric vidne številne neprozorne inkluzije.
Prepare a list of the volume of homogenate buffer for all livers.
Slika 2
Preparation of the liver for pre-treatment
Odsotnost oblikovanja somitov:
Take the 1,5 ml microtube containing the liver from the freezer just before the pre-treatment.
Kljub zaostanku pri razvoju za približno 10 ur so na 24 ur starem zarodku cebrice na sliki (a) vidni zelo razviti somiti (→), zarodek na sliki (b) pa ne kaže znakov oblikovanja somitov (→).
Pre-treatment of the liver from males should be performed before females to prevent vitellogenin contamination.
Čeprav je viden izrazit edem vrečice rumenjaka (*), je na 48 ur starem zarodku cebrice na sliki (c) vidno značilno oblikovanje somitov (→), 96 ur star zarodek cebrice na sliki (d) pa ne kaže znakov oblikovanja somitov (→).
In addition, the pre-treatment for test groups should be conducted in the following order: control, solvent control (where appropriate), lowest concentration, middle concentration, highest concentration and positive control.
Upoštevati je treba tudi ukrivljenost hrbtenice (skoliozo) in perikardialni edem (*) pri zarodku na sliki (d).
The number of 1,5 ml microtubes containing liver samples taken from the freezer at a given time should not exceed the number that can be centrifuged at that time.
v stranskem pogledu (a: →; 96 ur star zarodek cebrice).
Arrange the 1,5 ml microtubes containing liver samples in the order of specimen number on the ice rack (no need to thaw the liver).
Upoštevati je treba tudi odsotnost zametka očesa (*).
Operation of the pre-treatment
Slika 4
Addition of the homogenate buffer
Odsotnost srčnega utripa je že po naravi težko prikazati na mikrografu.
Check the list for the volume of the homogenate buffer to be used for a particular sample of liver and adjust the micropipette (volume range: 100-1000 μl) to the appropriate volume.
Za odsotnost srčnega utripa je značilno, da se srce ne krči (dvojna puščica).
Attach a clean tip to the micropipette.
Negibnost krvnih celic, na primer v abdominalni aorti (→ na vstavljeni sličici), ni indikator odsotnosti srčnega utripa.
Take the homogenate buffer from the reagent bottle and add the buffer to the 1,5 ml microtube containing the liver.
Upoštevati je treba tudi odsotnost oblikovanja somitov v tem zarodku (*, homogen videz mišičnega tkiva namesto razčlenjenega).
Add the homogenate buffer to all of 1,5 ml microtubes containing the liver according to the procedure described above.
Čas opazovanja, da se zabeleži odsotnost srčnega utripa, mora trajati vsaj eno minuto pri vsaj 80-kratni povečavi.
There is no need to change the micropipette tip to a new one.
C.50 Preskus toksičnosti za klasasti rmanec (Myriophyllum spicatum) brez usedline
However, if the tip is contaminated or suspected to be contaminated, the tip should be changed.
Ta preskusna metoda je enakovredna Smernici za preskušanje OECD 238 (2014).
Homogenisation of the liver
Namenjena je ocenjevanju toksičnosti kemikalij za klasasti rmanec (Myriophyllum spicatum), vrsto potopljene vodne dvokaličnice iz družine rmanca.
Attach a new pestle for homogenisation to the microtube homogeniser.
Temelji na obstoječi preskusni metodi ASTM (1), ki je spremenjena v preskusni sistem brez usedline (2), da se oceni intrinzična ekotoksičnost preskusnih kemikalij (neodvisno od porazdelitve in obnašanja preskusne kemikalije med vodo in usedlino).
Insert the pestle into the 1,5 ml microtube.
Preskusni sistem brez usedline ni zelo analitsko zapleten (le v vodni fazi), rezultati pa se lahko analizirajo vzporedno in/ali v primerjavi z rezultati, pridobljenimi pri preskusu za Lemna sp.
Hold the microtube homogeniser to press the liver between the surface of the pestle and the inner wall of the 1,5 ml microtube.
(3), poleg tega zahtevani sterilni pogoji zagotavljajo čim manjši učinek mikroorganizmov in alg (sprejemanja kemikalij/razgradnje itd.).
Operate the microtube homogeniser for 10 to 20 seconds.
Ta preskus ne nadomešča drugih preskusov toksičnosti v vodnem okolju, temveč jih dopolnjuje, da se omogoči podrobnejša ocena nevarnosti in tveganj za vodne rastline.
Cool the 1,5 ml microtube with crushed ice during the operation.
Ta preskusna metoda je bila validirana s krožnim testom (4).
Lift up the pestle from the 1,5 ml microtube and leave it at rest for about 10 seconds.
Podrobno je opisano preskušanje z zamenjavo testne raztopine (polstatični preskus) ali brez zamenjave (statični preskus).
Then conduct a visual check of the state of the suspension.
Glede na cilje preskusa in regulativne zahteve se priporoča uporaba polstatične metode, npr. za snovi, ki hitro izginjajo iz raztopine zaradi izhlapevanja, adsorpcije, fotorazgradnje, hidrolize, obarjanja ali biološke razgradnje.
If pieces of liver are observed in the suspension, repeat the operations (3) and (4) to prepare satisfactory liver homogenate.
Več navodil je na voljo v (5).
Cool the suspended liver homogenate on the ice rack until centrifugation.
Ta preskusna metoda se uporablja za snovi, za katere je bila preskusna metoda validirana (glej podrobnosti iz poročila o krožnem testu (4)), ali za pripravke ali znane zmesi, če pa se preskuša zmes, morajo biti njene sestavine čim bolj opredeljene in kvantificirane.
Change the pestle to the new one for each homogenate.
Preskusna metoda za klasasti rmanec (Myriophyllum spicatum) brez usedline dopolnjuje preskus toksičnosti vode in usedline za klasasti rmanec (Myriophyllum spicatum) (6).
Homogenise all livers with homogenate buffer according to the procedure described above.
Pred uporabo preskusne metode za preskušanje zmesi v regulativne namene je treba proučiti, ali bo zagotovila sprejemljive rezultate za navedeni namen in, če jih bo, zakaj.
Centrifugation of the suspended liver homogenate
Stalno rastoče rastlinske kulture klasastega rmanca (Myriophyllum spicatum) (le v spremenjenem gojišču po Andrewsu, glej Dodatek 2) lahko rastejo kot monokulture v različnih koncentracijah preskusne kemikalije v obdobju 14 dni v preskusnem sistemu brez usedline.
Confirm the temperature of the refrigerated centrifuge chamber at ≤ 5 °C.
Cilj preskusa je kvantificirati učinke kemikalije na vegetativno rast v tem obdobju na podlagi izbranih merjenih spremenljivk.
Insert the 1,5 ml microtubes containing the suspended liver homogenate in refrigerated centrifuge (adjust the balance if necessary).
Merjene spremenljivke so večanje dolžine poganjka, stranskih vej in korenin, razvoj sveže in suhe teže ter povečanje števila spiralasto razvrščenih listov.
Centrifuge the suspended liver homogenate at 13000 g for 10 min at ≤ 5 °C.
Poleg tega se upoštevajo značilne kvalitativne spremembe preskusnih organizmov, kot so iznakaženost ali kloroza in nekroza, indikator katerih je rumenenje ali bela in rjava barva.
However, if the supernatants are adequately separated, centrifugal force and time may be adjusted as needed.
Učinki, odvisni od kemikalije, se kvantificirajo tako, da se rast v testnih raztopinah primerja z rastjo v kontrolah, nato pa se določi koncentracija, ki povzroča določeno x-odstotno zaviranje rasti, in izrazi kot ECx, pri čemer je lahko „x“ katera koli vrednost, kar je odvisno od regulativnih zahtev, npr. EC10, EC20 in EC50.
Following centrifugation, check that the supernatants are adequately separated (surface: lipid, intermediate: supernatant, bottom layer: liver tissue).
Upoštevati je treba, da so ocene vrednosti EC10 in EC20 zanesljive in primerne le pri preskusih, pri katerih so koeficienti variacije pri kontrolnih rastlinah nižji od ravni učinka, ki se ocenjuje, kar na primer pomeni, da morajo biti koeficienti variacije pri okvirni oceni vrednosti EC20 manjši od 20 %.
If the separation is not adequate, centrifuge the suspension again under the same conditions.
Določiti je treba tako povprečno specifično hitrost rasti (ocenjeno na podlagi ocen dolžine glavnega poganjka in treh dodatnih merjenih spremenljivk) kot prirast (ocenjen na podlagi povečanja dolžine glavnega poganjka in treh dodatnih merjenih spremenljivk) netretiranih in tretiranih rastlin.
Remove all specimens from the refrigerated centrifuge and arrange them in the order of specimen number on the ice rack.
Specifična hitrost rasti (r) in prirast (y) se nato uporabita za določitev ErCx (npr. ErC10, ErC20, ErC50) oziroma EyCx (npr. EyC10, EyC20, EyC50).
Be careful not to resuspend each separated layer after the centrifugation.
Poleg tega se lahko statistično določita najnižja koncentracija z opaženim učinkom (LOEC) in koncentracija brez opaznega učinka (NOEC).
Collection of the supernatant
Na voljo mora biti analitska metoda, ki je dovolj občutljiva, da se kvantificira preskusna kemikalija v preskusnem gojišču.
Place four 0,5 ml microtubes for storage of the supernatant into the tube rack.
Informacije o preskusni kemikaliji, ki so lahko koristne za določitev preskusnih pogojev, so med drugim strukturna formula, čistost in nečistoče, topnost v vodi, obstojnost v vodi in na svetlobi, disociacijska konstanta kisline (pKa), porazdelitveni koeficient n-oktanol/voda (Kow), parni tlak in biološka razgradljivost.
Collect 30 μl of each supernatant (separated as the intermediate layer) with the micropipette and dispense it to one 0,5 ml microtube.
Topnost v vodi in parni tlak se lahko uporabita za izračun Henryjeve konstante, ki pokaže, ali so med preskusnim obdobjem verjetne znatne izgube preskusne kemikalije.
Be careful not to collect the lipid on the surface or the liver tissue in the bottom layer.
To pripomore k odločitvi o sprejetju ukrepov za nadzorovanje takih izgub.
Collect the supernatant and dispense it to other two 0,5 ml microtubes in the same manner as described above.
Če so informacije o topnosti in obstojnosti preskusne kemikalije nejasne, se priporoča, da se ocenita v pogojih preskusa, tj. v gojišču, pri temperaturi in režimu osvetlitve, ki se bodo uporabili v preskusu.
Collect the rest of the supernatant with the micropipette (if feasible: ≥ 100 μl).
Nadzorovanje vrednosti pH preskusnega gojišča je še posebej pomembno na primer pri preskušanju kovin ali snovi, ki so hidrolitično neobstojne.
Then dispense the supernatant to the remaining 0,5 ml microtube.
Dodatna navodila za preskušanje kemikalij s fizikalno-kemijskimi lastnostmi, ki otežujejo njihovo preskušanje, so na voljo v Smernicah OECD (5).
Close the cap of the 0,5 ml microtube and write the volume of the supernatant on the label.
Da je preskus veljaven, mora biti podvojitveni čas dolžine glavnega poganjka v kontroli krajši od 14 dni.
Then immediately cool the microtubes on the ice rack.
To merilo se lahko izpolni z uporabo statičnega ali polstatičnega preskusnega režima ter gojišč in preskusnih pogojev, opisanih v tej preskusni metodi.
Change the tip of the micropipette to the new one for each supernatant.
Povprečni koeficient variacije za prirast, ki temelji na meritvah sveže teže poganjka (tj. od začetka do konca preskusa), in dodatne merjene spremenljivke (glej odstavek 37) v kontrolnih kulturah med ponovljenimi vzorci niso večji od 35 %.
If a large amount of lipid becomes attached to the tip, change it to the new one immediately to avoid contamination of the liver extract with fat.
Več kot 50 % ponovljenih vzorcev iz kontrolne skupine je med 14-dnevnim obdobjem izpostavljenih v sterilnih pogojih, kar pomeni, da se zanje lahko s prostim očesom oceni, da niso kontaminirani z drugimi organizmi, kot so alge, glive in bakterije (bistra raztopina).
Dispense all of the centrifuged supernatant to four 0,5 ml microtubes according to the procedure described above.
Opomba: navodila za ocenjevanje sterilnosti so na voljo v poročilu o krožnem testu (4).
After dispensing the supernatant to the 0,5 ml microtubes, place all of them in the tube rack with the identification label, and then freeze them in the freezer immediately.
REFERENČNA KEMIKALIJA
If the VTG concentrations are measured immediately after the pre-treatment, keep one 0,5 ml microtube (containing 30 μl of supernatant) cool in the tube rack and transfer it to the workstation where the ELISA assay is conducted.
Referenčne kemikalije, kot je na primer 3,5-diklorofenol, uporabljen pri krožnem testu (4), se lahko preskusijo, da se preveri preskusni postopek, na podlagi podatkov krožnega testa pa je aritmetično povprečje vrednosti EC50 3,5-diklorofenola za različne spremenljivke odziva (glej odstavke od 37 do 41 te preskusne metode) med 3,2 mg/l in 6,9 mg/l (za podrobne podatke o intervalu zaupanja za navedene vrednosti glej poročilo o krožnem testu).
In such case, place the remaining microtubes in the tube racks and freeze them in the freezer.
Priporočljivo je, da se referenčna kemikalija preskusi najmanj dvakrat letno oziroma skupaj z določanjem toksičnosti preskusne kemikalije, kadar se preskušanja izvajajo redkeje.
After the collection of the supernatant, discard the residue adequately.
Vsa oprema v stiku s preskusnimi gojišči mora biti izdelana iz stekla ali drugega kemijsko inertnega materiala.
Storage of the specimen
Steklene posode za gojenje in preskušanje je treba očistiti kemičnih onesnaževalcev, ki bi lahko pronicali v preskusno gojišče, poleg tega pa morajo biti sterilne.
Store the 0,5 ml microtubes containing the supernatant of the liver homogenate at ≤ – 70 °C until they are used for the ELISA.
Preskusne posode morajo biti dovolj dolge, da lahko poganjki v kontrolnih posodah rastejo v vodni fazi, ne da bi na koncu preskusa dosegli gladino preskusnega gojišča.
Procedure 3A:
Priporoča se uporaba epruvet iz debelega borosilikatnega stekla brez roba z notranjim premerom približno 20 mm in dolžine približno 250 mm z aluminijastimi pokrovčki.
Zebrafish, Blood Collection from the Caudal Vein / Artery
Ker spremenjeno gojišče po Andrewsu vsebuje saharozo (ki spodbuja rast gliv in bakterij), je treba testne raztopine pripraviti v sterilnih pogojih.
Immediately following anaesthesia, the caudal peduncle is severed transversely, and the blood is removed from the caudal artery/vein with a heparinised microhematocrit capillary tube.
Vse tekočine in opremo je treba pred uporabo sterilizirati.
Blood volumes range from 5 to 15 microliters depending on fish size.
Sterilizacija se izvede s štiriurno obdelavo z vročim zrakom (210 °C) ali dvajsetminutnim avtoklaviranjem pri 121 °C.
An equal volume of aprotinin buffer (6 micrograms/ml in PBS) is added to the microcapillary tube, and plasma is separated from the blood via centrifugation (5 minutes at 600 g).
Poleg tega je treba vse bučke, posodice, sklede itd. ter drugo opremo tik pred uporabo obdelati z ognjem na sterilni delovni mizi.
Plasma is collected in the test tubes and stored at – 20 °C until analysed for VTG or other proteins of interest.
Kulture in preskusne posode se ne smejo hraniti skupaj.
Procedure 3B:
To se najbolje doseže z ločenimi okoljskimi gojitvenimi komorami, inkubatorji ali prostori.
Zebrafish, Blood Collection by Cardiac Puncture
Omogočeno mora biti nadzorovanje osvetljenosti in temperature ter ohranjanje teh parametrov na konstantni ravni.
To avoid coagulation of blood and degradation of protein the samples are collected within Phosphate-buffered saline (PBS) buffer containing heparin (1000 units/ml) and the protease inhibitor aprotinin (2 TIU/ml).
Preskusni organizem
As ingredients for the buffer, heparin, ammonium-salt and lyophilised aprotinin are recommended.
Klasasti rmanec (Myriophyllum spicatum) je vrsta potopljene vodne dvokaličnice iz družine rmanca.
For blood sampling, a syringe (1ml) with a fixed thin needle (e.g. Braun Omnikan-F) is recommended.
Med julijem in avgustom se nad vodno gladino pojavijo nevpadljivi rožnato-beli cveti.
The syringe should be prefilled with buffer (approximately 100 microliter) to completely elute the small blood volumes from each fish.
Rastline so ukoreninjene s trdnim sistemom korenik in rastejo po celotni severni polobli v evtrofnih, vendar neonesnaženih in bolj apnenčastih stoječih vodah z blatnim substratom.
The blood samples are taken by cardiac puncture.
Klasasti rmanec (Myriophyllum spicatum) ima raje sladko vodo, vendar raste tudi v somornici.
At first the fish should be anesthetized with MS-222 (100 mg/l).
Za preskus toksičnosti brez usedline so potrebne sterilne rastline.
The proper plane of anaesthesia allows the user to distinguish the heartbeat of the zebrafish.
Če preskusni laboratorij nima navadnih kultur klasastega rmanca (Myriophyllum spicatum), se lahko sterilni rastlinski material pridobi iz drugega laboratorija ali pa se (nesterilni) rastlinski material odvzame na terenu oziroma pridobi od komercialnega dobavitelja, pri čemer je treba opraviti taksonomsko preverjanje vrste, če se rastline zberejo na terenu.
While puncturing the heart, keep the syringe piston under weak tension.
Če se rastline zberejo na terenu ali če jih zagotovi komercialni dobavitelj, jih je treba sterilizirati (1) in najmanj osem tednov pred uporabo vzdrževati v kulturi v gojišču, ki se uporabi za preskušanje.
Collectable blood volumes range between 20 - 40 microliters.
Terenska mesta, kjer se odvzamejo začetne kulture, morajo biti brez očitnih virov kontaminacije.
After cardiac puncture, the blood/buffer-mixture should be filled into the test tube.
Pri nabiranju klasastega rmanca (Myriophyllum spicatum) na terenu je treba zelo paziti, da se pridobi pravilna vrsta, zlasti na območjih, na katerih se lahko križa z drugimi vrstami Myriophyllum.
Plasma is separated from the blood via centrifugation (20 min; 5000 g) and should be stored at – 80°C until required for analysis.
Če se pridobi iz drugega laboratorija, ga je treba na podoben način vzdrževati tri tedne.
Procedure 3C:
V poročilu je treba vedno navesti rastlinski material in vrsto, uporabljeno za preskušanje.
SOP: Zebrafish, homogenisation of head & tail
Kakovost in enotnost rastlin, ki se uporabijo v preskusu, pomembno vplivata na rezultat preskusa, zato je treba rastline skrbno izbrati.
The fish are anaesthetised and euthanised in accordance with the test description.
Uporabiti je treba mlade, hitrorastoče rastline, ki nimajo vidnih lezij ali ki niso razbarvane (kloroza).
The head and tail are cut of the fish in accordance with Figure 1.
Podrobna navodila o pripravi preskusnega organizma so na voljo v Dodatku 4.
Important: All dissection instruments, and the cutting board should be rinsed and cleaned properly (e.g. with 96 % ethanol) between handling of each single fish to prevent “vitellogenin pollution” from females or induced males to uninduced males.
Gojenje
For gonad histology
Kulture se lahko hranijo pri manjši osvetlitvi in nižji temperaturi (50 μE m-2 s-1, 20 ± 2 °C), da se zmanjša pogostost vzdrževanja kultur (npr. kadar se za določeno obdobje ne načrtujejo preskusi z vrsto Myriophyllum).
Cut behind
Podrobna navodila o gojenju so na voljo v Dodatku 3.
Cut behind dorsal fin
Vsaj 14 do 21 dni pred preskušanjem je treba zadostno število preskusnih organizmov aseptično prenesti v sveže sterilno gojišče in jih od 14 do 21 dni gojiti v pogojih preskusa kot predkulturo.
For Vtg analysis
Podrobna navodila o pripravi predkulture so na voljo v Dodatku 4.
The weight of the pooled head and tail from each fish is measured to the nearest mg.
Za klasasti rmanec (Myriophyllum spicatum) se v preskusnem sistemu brez usedline priporoča le eno hranilno gojišče, kot je opisano v Dodatku 2.
After being weighed, the parts are placed in appropriate tubes (e.g. 1,5 ml eppendorf) and frozen at – 80 °C until homogenisation or directly homogenised on ice with two plastic pistils.
Za gojenje in preskušanje klasastega rmanca (Myriophyllum spicatum) se priporoča, da se spremeni gojišče po Andrewsu, kot je opisano v (1).
(Other methods can be used if they are performed on ice and the result is a homogenous mass).
Iz petih ločeno pripravljenih hranilnih osnovnih raztopin z dodatkom 3 % saharoze se pripravi spremenjeno gojišče po Andrewsu.
Important: The tubes should be numbered properly so that the head and tail from the fish can be related to their respective body-section used for gonad histology.
Podrobna navodila o pripravi gojiščapredkulture so na voljo v Dodatku 2.
When a homogenous mass is achieved, 4 x the tissue weight of ice-cold homogenisation buffer [1] is added.
Za pridobitev testnih raztopin je potrebno desetkratno koncentrirano gojišče po Andrewsu (po potrebi z razredčitvijo).
Keep working with the pistils until the mixture is homogeneous.
Sestava tega gojišča je opisana v Dodatku 2.
Important note: New pistils are used for each fish.
Testne raztopine se običajno pripravijo z razredčitvijo osnovne raztopine.
The samples are placed on ice until centrifugation at 4 °C at 50000 g for 30 min.
Osnovne raztopine preskusne kemikalije se običajno pripravijo tako, da se kemikalija raztopi v demineralizirani (tj. destilirani ali deionizirani) vodi.
Use a pipette to dispense portions of 20 μl supernatant into at least two tubes by dipping the tip of the pipette below the fat layer on the surface and carefully sucking up the supernatant without fat- or pellet fractions.
Hranilne snovi se dodajo prek desetkratno koncentriranega spremenjenega gojišča po Andrewsu.
The tubes are stored at – 80 °C until use.
Osnovne raztopine preskusne kemikalije se lahko 20 minut sterilizirajo z avtoklavom pri 121 °C ali s filtrsko sterilizacijo, če uporabljen način sterilizacije ne spremeni narave preskusne kemikalije.
Homogenisation buffer:(50 mM Tris-HCl pH 7,4; 1 % Protease inhibitor cocktail (Sigma)): 12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl Protease inhibitor cocktail.TRIS: TRIS-ULTRA PURE (ICN) e.g. from Bie & Berntsen, Denmark.Protease inhibitor cocktail: From Sigma (for mammalian tissue) Product number P 8340.NOTE: The homogenisation buffer should be used the same day as manufactured.
Testne raztopine se lahko pripravijo tudi v sterilni demineralizirani vodi ali gojišču v sterilnih pogojih.
Place on ice during use.
Pri izbiri postopka sterilizacije osnovnih raztopin preskusne kemikalije je treba upoštevati toplotno obstojnost in adsorpcijo na različnih površinah.
VITELLOGENIN FORTIFICATION SAMPLES AND INTER-ASSAY REFERENCE STANDARD
Zato se priporoča, da se osnovne raztopine pripravijo v sterilnih pogojih, tj. z uporabo sterilnega materiala za raztapljanje preskusne kemikalije v sterilnih pogojih (npr. sterilizacija z ognjem, laminarnimi komorami itd.) v sterilni vodi.
On each day that VTG assays are performed, a fortification sample made using an inter-assay reference standard will be analysed.
Ta način priprave sterilnih osnovnih raztopin se uporablja tako za snovi kot za zmesi.
The VTG used to make the inter-assay reference standard will be from a batch different from the one used to prepare calibration standards for the assay being performed.
Najvišja preskušana koncentracija preskusne kemikalije običajno ne sme preseči svoje topnosti v vodi v preskusnih pogojih.
The fortification sample will be made by adding a known quantity of the inter-assay standard to a sample of control male plasma.
Za preskusne kemikalije z majhno topnostjo v vodi bo morda treba pripraviti koncentrirano osnovno raztopino ali dispergirati kemikalijo s pomočjo organskega topila ali disperzijskega sredstva, da se omogoči dodajanje točnih količin preskusne kemikalije v preskusno gojišče ter da se olajšata njeno dispergiranje in raztapljanje.
The sample will be fortified to achieve a VTG concentration between 10 and 100 times the expected vitellogenin concentration of control male fish.
Čim bolj si je treba prizadevati, da se izogne uporabi takšnih snovi.
The sample of control male plasma that is fortified may be from an individual fish or may be a composite from several fish.
Uporaba pomožnih topil ali disperzijskih sredstev ne sme povzročiti fitotoksičnosti.
A subsample of the unfortified control male plasma will be analysed in at least two duplicate wells.
Pogosto uporabljeni topili, ki ne povzročata fitotoksičnosti pri koncentracijah do 100 μl/l, sta na primer aceton in dimetilformamid.
The fortified sample also will be analysed in at least two duplicate wells.
Če se uporabi topilo ali disperzijsko sredstvo, je treba končno koncentracijo navesti v poročilu in jo ohranjati na najnižji ravni (≤ 100 μl/l), vse tretirane in kontrolne skupine morajo vsebovati enako koncentracijo topila ali disperzijskega sredstva.