natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The mean quantity of vitellogenin in the two unfortified control male plasma samples will be added to the calculated quantity of VTG added to fortification the samples to determine an expected concentration.
Dodatna navodila o uporabi disperzijskih sredstev so na voljo v (5).
The ratio of this expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
Preskusne in kontrolne skupine
DECISION FLOWCHART FOR THE STATISTICAL ANALYSIS
Pri izbiri primernih preskusnih koncentracij je v pomoč predhodno poznavanje toksičnosti preskusne kemikalije za klasasti rmanec (Myriophyllum spicatum) na podlagi podatkov iz preskusa za določanje območja delovanja.
Rep means normally distributed
Pri končnem preskusu toksičnosti mora običajno biti od pet (kot v preskusu zaviranja rasti pri vrsti Lemna, glej poglavje C.26 te priloge) do sedem preskusnih koncentracij, urejenih v geometrijske serije, izbrati pa jih je treba tako, da so vrednosti NOEC in EC50 v območju koncentracije (glej v nadaljevanju).
Stept-down Jonckheere or Williams' test
Faktor separacije med preskusnimi koncentracijami po možnosti ne sme biti večji od 3,2, vendar se lahko uporabi večja vrednost, če je krivulja koncentracija–odziv ravna.
Normalising transform?
Če se uporabi manj kot pet koncentracij, je treba to utemeljiti.
variance stabilising transform?
Za vsako preskusno koncentracijo je treba uporabiti najmanj pet ponovljenih vzorcev.
Tamhane-Dunnett test on nested ANOVA
Pri določevanju območja preskusnih koncentracij (pri preskusu za določanje območja delovanja in/ali pri dokončnem preskusu toksičnosti) je treba proučiti naslednje možnosti:
Dunnett test on nested ANOVA No
Za določitev ECx z ustrezno ravnijo zaupanja morajo preskusne koncentracije oklepati vrednost ECx.
Yes Yes
Če se na primer ocenjuje EC50, mora biti najvišja preskusna koncentracija višja od vrednosti EC50.
No >=4 reps per conc
Če je vrednost EC50 zunaj območja preskusnih koncentracij, bodo povezani intervali zaupanja veliki in pravilna ocena statističnega ujemanja modela morda ne bo mogoča.
<=3 reps per conc
Če je cilj ocena vrednosti LOEC/NOEC, mora biti najnižja preskusna koncentracija dovolj nizka, da rast ni bistveno manjša od rasti v kontroli.
Dunn or Mann-Whitney test on rep means
Poleg tega mora biti najvišja preskusna koncentracija dovolj visoka, da je rast bistveno manjša od rasti v kontroli.
Dunn test on rep means Dunn or Mann-Whitney test
V nasprotnem primeru bo treba preskus ponoviti z drugačnim območjem koncentracije (razen če je najvišja koncentracija na meji topnosti ali najvišji zahtevani mejni koncentraciji, npr. 100 mg/l).
Dunn test <=3 reps per conc
Vsak preskus mora vključevati kontrole, ki jih sestavljajo isto hranilno gojišče, preskusni organizem (izbrati je treba čim bolj homogen rastlinski material, sveže stranske veje iz predkultur, skrajšane na 2,5 cm od dna), okoljske razmere in postopki kot pri preskusnih posodah, vendar ne vsebujejo preskusne kemikalije.
>=4 reps per conc Tamhane-Dunnett test
Če se uporablja pomožno topilo ali disperzijsko sredstvo, je treba vključiti dodatno tretiranje kontrole s topilom/disperzijskim sredstvom, ki je prisotno v enaki koncentraciji kot v posodah s preskusno kemikalijo.
Nested ANOVA normal
Zagotoviti je treba vsaj deset kontrolnih posod s ponovljenimi vzorci (in posod s topilom, kjer je ustrezno).
Nested ANOVA not normal
Če ni treba določiti vrednosti NOEC, se načrt preskusa lahko spremeni tako, da se poveča število koncentracij in zmanjša število ponovljenih vzorcev na koncentracijo.
variance stabilising transformation
Kljub temu je treba v vsakem primeru zagotoviti najmanj deset kontrolnih ponovljenih vzorcev.
Variances unequal Dunnett test
Izpostavljenost
Variances equal
Sveže stranske veje iz predkulture, skrajšane na 2,5 cm od dna, se naključno porazdelijo v preskusne posode v aseptičnih pogojih, v vsaki preskusni posodi pa mora biti ena stranska veja, dolga 2,5 cm, z rastnim vršičkom na enem koncu.
Step-down Jonckheere test
V vseh preskusnih posodah mora biti izbrani rastlinski material enake kakovosti.
Rep means normal or not homogenous
Za inkubator je treba uporabiti načrt naključne porazdelitve preskusnih posod, da se čim bolj zmanjša vpliv prostorskih razlik v temperaturi in obsevanosti.
Rep means normal & homogenous
Pri beleženju opažanj je potreben tudi načrt preskusa z bloki ali naključna prerazporeditev posod (ali pogostejše prerazporejanje).
Step-down trendtest on replicate means
Če predhodni preskus obstojnosti pokaže, da koncentracije preskusne kemikalije med trajanjem preskusa (14 dni) ni mogoče ohranjati (tj. izmerjena koncentracija pade pod 80 % na začetku izmerjene koncentracij), se priporoča uporaba polstatičnega preskusnega režima.
Not monotone
V tem primeru je treba rastline vsaj enkrat med preskusom (npr. 7. dan) izpostaviti sveže pripravljenim testnim in kontrolnim raztopinam.
Monotone
Pogostost izpostavitve svežemu gojišču je odvisna od obstojnosti preskusne kemikalije, kar pomeni, da bo za ohranjanje približno nespremenljivih koncentracij zelo neobstojnih ali hlapnih kemikalij potrebna večja pogostost.
Determine whether Dose-Response is monotone
Izpostavitev s foliarnim nanosom (pršenjem) ni obravnavana v tej preskusni metodi.
C.49 Fish Embryo Acute Toxicity (FET) Test
Uporabiti je treba toplo in/ali hladno belo fluorescenčno osvetlitev, da se zagotovi obsevanost s svetlobo v območju približno 100–150 μE m-2 s-1, ko se meri kot fotosintetsko aktivno sevanje (400–700 nm) na točkah, ki so enako oddaljene od svetlobnega vira kot od dna preskusnih posod (enakovredno približno 6000–9000 luksom), ter cikel svetlobe in teme v razmerju 16: 8 ur.
This test method (TM) is equivalent to OECD test guideline (TG) 236 (2013).
Metoda zaznavanja in merjenja svetlobe, zlasti vrsta tipala, vpliva na izmerjeno vrednost.
It describes a Fish Embryo Acute Toxicity (FET) test with the zebrafish (Danio rerio).
Sferična tipala (ki se odzivajo na svetlobo iz vseh kotov nad in pod ravnino merjenja) in „kosinusna“ tipala (ki se odzivajo na svetlobo iz vseh kotov nad ravnino merjenja) so primernejša od enosmernih tipal in omogočajo višje odčitke v primeru večtočkovnih svetlobnih virov vrste, ki je opisana tu.
This test is designed to determine acute toxicity of chemicals on embryonic stages of fish.
Temperatura preskusnih posod mora biti 23 oC ± 2 oC.
The FET-test is based on studies and validation activities performed on zebrafish (1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)(9)(10)(11)(12)(13)(14).
Posebno pozornost je treba nameniti spreminjanju vrednosti pH v posebnih primerih, na primer pri preskušanju nestabilnih kemikalij ali kovin, vrednost pH pa mora ostati v območju od 6 do 9.
The FET-test has been successfully applied to a wide range of chemicals exhibiting diverse modes of action, solubilities, volatilities, and hydrophobicities (reviewed in 15 and 16).
Za dodatna navodila glej (5).
Newly fertilised zebrafish eggs are exposed to the test chemical for a period of 96 hrs.
Preskus se prekine 14 dni po prenosu rastlin v preskusne posode.
Every 24 hrs, up to four apical observations are recorded as indicators of lethality (6): (i) coagulation of fertilised eggs, (ii) lack of somite formation, (iii) lack of detachment of the tail-bud from the yolk sac, and (iv) lack of heartbeat.
Meritve in analitske določitve
At the end of the exposure period, acute toxicity is determined based on a positive outcome in any of the four apical observations recorded, and the LC50 is calculated.
Ob začetku preskusa je glavni poganjek preskusnega organizma dolg 2,5 cm (glej odstavek 29), izmeri se z ravnilom (glej Dodatek 4) ali s fotografijo in analizo slik.
Useful information about substance-specific properties include the structural formula, molecular weight, purity, stability in water and light, pKa and Kow, water solubility and vapour pressure as well as results of a test for ready biodegradability (TM C.4 (17) or TM C.29 (18)).
Dolžino glavnega poganjka preskusnega organizma, ki se zdi običajna ali neobičajna, je treba določiti na začetku preskusa, vsaj enkrat med štirinajstdnevnim obdobjem izpostavljenosti in na koncu preskusa.
Solubility and vapour pressure can be used to calculate Henry's law constant, which will indicate whether losses due to evaporation of the test chemical may occur.
Opomba: če se delovna miza sterilizira, preden se v preskusne posode dodajo rastline, se lahko za merjenje dolžine glavnega poganja na začetku preskusa in med preskusom kot nadomestna možnost analizi slik uporabi sterilno ravnilo.
A reliable analytical method for the quantification of the substance in the test solutions with known and reported accuracy and limit of detection should be available.
Zabeležiti je treba spremembe pri razvoju rastline, npr. spremembe v deformaciji poganjkov in videzu, znakih nekroze in kloroze, razpadanju ali izgubi plovnosti ter dolžini in videzu korenin.
If the test method is used for the testing of a mixture, its composition should, as far as possible, be characterised, e.g. by the chemical identity of its constituents, their quantitative occurrence and their substance-specific properties (see paragraph 4).
Zabeležiti je treba tudi bistvene značilnosti preskusnega gojišča (npr. prisotnost neraztopljenega materiala ter rast alg, gliv in bakterij v preskusni posodi).
Concerning substances that may be activated via metabolism, there is evidence that zebrafish embryos do have biotransformation capacities (19)(20)(21)(22).
Poleg določitev dolžine glavnega poganjka med preskusom je treba oceniti tudi učinke preskusne kemikalije na tri naslednje merjene spremenljivke (ali več):
However, the metabolic capacity of embryonic fish is not always similar to that of juvenile or adult fish.
Skupna dolžina stranskih vej
For instance, the protoxicant allyl alcohol (9) has been missed in the FET.
Skupna dolžina poganjka
Therefore, if there are any indications that metabolites or other transformation products of relevance may be more toxic than the parent compound, it is also recommended to perform the test with these metabolites/transformation products and to also use these results when concluding on the toxicity of the test chemical, or alternatively perform another test which takes metabolism into further account.
Skupna dolžina korenin
For substances with a molecular weight ≥ 3kDa, a very bulky molecular structure, and substances causing delayed hatch which might preclude or reduce the post-hatch exposure, embryos are not expected to be sensitive because of limited bioavailability of the substance, and other toxicity tests might be more appropriate.
Sveža teža
For the test results to be valid, the following criteria apply:
Suha teža
The overall fertilisation rate of all eggs collected should be ≥ 70 % in the batch tested.
Število spiralasto razvrščenih listov
The water temperature should be maintained at 26 ± 1 °C in test chambers at any time during the test.
Opomba 1:
Overall survival of embryos in the negative (dilution-water) control, and, where relevant, in the solvent control should be ≥ 90 % until the end of the 96 hrs exposure.
Opažanja med preskusom za določanje območja delovanja so lahko v pomoč pri izbiranju ustreznih dodatnih meritev med zgoraj navedenimi šestimi spremenljivkami.
Exposure to the positive control (e.g. 4,0 mg/l 3,4-dichloroaniline for zebrafish) should result in a minimum mortality of 30 % at the end of the 96 hrs exposure.
Opomba 2:
Hatching rate in the negative control (and solvent control if appropriate) should be ≥ 80 % at the end of 96 hrs exposure.
Zelo je zaželena določitev sveže in suhe teže (parametra iv in v).
At the end of the 96 hrs exposure, the dissolved oxygen concentration in the negative control and highest test concentration should be ≥ 80 % of saturation.
Opomba 3:
An overview of recommended maintenance and test conditions is available in Appendix 2.
Ker lahko saharoza in svetloba (izpostavljenost korenin svetlobi med preskusom) vplivata na prenašalce avksina (rastlinskega rastnega hormona) in ker lahko nekatere kemikalije delujejo na podoben način kot avksin, je vključitev končnih točk korenin (parameter iii) vprašljiva.
The following equipment is needed:
Opomba 4:
Fish tanks made of chemically inert material (e.g. glass) and of a suitable capacity in relation to the recommended loading (see “Maintenance of brood fish”, paragraph 14);
Rezultati krožnega testa izkazujejo visoke koeficiente variacije (> 60 %) za skupno dolžino stranskih vej (parameter i).
Inverted microscope and/or binocular with a capacity of at least 80-fold magnification.
Skupna dolžina stranskih vej je v vsakem primeru zajeta v meritev skupne dolžine poganjka (parameter ii), ki prikazuje bolj sprejemljive koeficiente variacije, ki so manjši od 30 %.
If the room used for recording observations cannot be adjusted to 26 ± 1 °C, a temperature-controlled cross movement stage or other methods to maintain temperature are necessary;
Opomba 5:
Test chambers; e.g., standard 24-well plates with a depth of approx.
Na podlagi zgoraj navedenih preudarkov so priporočljive končne točke meritev skupna dolžina poganjka, sveža teža in suha teža (parametri ii, iv in v), parameter vi (število spiralasto razvrščenih listov) pa je prepuščen presoji eksperimentatorja.
20 mm. (see “Test chambers”, paragraph 11);
Prednost dolžine glavnega poganjka in števila spiralasto razvrščenih listov je, da se lahko s fotografijo in analizo slik določita za vsako preskusno in kontrolno posodo na začetku preskusa, med njim in na koncu preskusa, čeprav se lahko uporabi tudi (sterilno) ravnilo.
e.g., self-adhesive foil to cover the 24-well plates;
Skupna dolžina stranskih vej, skupna dolžina korenin (kot vsota dolžine vseh stranskih vej ali korenin) in skupna dolžina poganjka (kot vsota dolžine glavnega poganjka in skupne dolžine stranskih vej) se lahko izmerijo z ravnilom na koncu izpostavljenosti.
Incubator or air-conditioned room with controlled temperature, allowing to maintain 26 ± 1 °C in wells (or test chambers);
Svežo in/ali suho težo je treba določiti na začetku preskusa iz vzorca predkulture, ki je reprezentativen za material, s katerim se preskus začne, in na koncu preskusa z rastlinskim materialom iz vsake preskusne in kontrolne posode.
Oxygen meter;
Skupna dolžina stranskih vej, skupna dolžina poganjka, skupna dolžina korenin, sveža teža, suha teža in število spiralasto razvrščenih listov se lahko določijo po naslednjih postopkih:
Equipment for determination of hardness of water and conductivity;
dolžina stranskih vej se lahko določi tako, da se na koncu izpostavljenosti z ravnilom izmerijo vse stranske veje.
Spawn trap: instrument trays of glass, stainless steel or other inert materials; wire mesh (grid size 2 ± 0,5 mm) of stainless steel or other inert material to protect the eggs once laid; spawning substrate (e.g. plant imitates of inert material) (TM C.48, Appendix 4a (23));
Skupna dolžina stranskih vej je vsota vseh stranskih vej v vsaki preskusni in kontrolni posodi.
Pipettes with widened openings to collect eggs;
dolžina glavnega poganjka se lahko določi z analizo slik ali ravnilom.
Glass vessels to prepare different test concentrations and dilution water (beakers, graduated flasks, graduated cylinders and graduated pipettes) or to collect zebrafish eggs (e.g. beakers, crystallisation dishes);
Skupna dolžina poganjka je vsota skupne dolžine stranskih vej in dolžine glavnega poganjka v vsaki preskusni in kontrolni posodi na koncu izpostavljenosti.
If alternative exposure systems, such as flow-through (24) or passive dosing (25) are used for the conduct of the test, appropriate facilities and equipment are needed.
dolžina korenin se lahko določi tako, da se na koncu izpostavljenosti z merilom izmerijo vse korenine.
Glass or polystyrene test chambers should be used (e.g. 24-well plates with a 2,5-5 ml filling capacity per well).
Skupna dolžina korenin je vsota dolžine vseh korenin v vsaki preskusni in kontrolni posodi.
In case adsorption to polystyrene is suspected (e.g., for non-polar, planar substances with high KOW), inert materials (glass) should be used to reduce losses due to adsorption (26).
sveža teža se lahko določi s tehtanjem preskusnih organizmov na koncu izpostavljenosti.
Test chambers should be randomly positioned in the incubator.
Ves rastlinski material iz vsake preskusne in kontrolne posode se spere z destilirano vodo in do suhega popivna s celuloznim papirjem.
Water and test conditions
Po tej pripravi se sveža teža določi s tehtanjem.
Dilution of the maintenance water is recommended to achieve hardness levels typical of a wide variety of surface waters.
Začetna biomasa (sveža teža) se določi na podlagi vzorca preskusnih organizmov, ki se vzame iz serije, ki se uporablja za inokulacijo preskusnih posod.
Dilution water should be prepared from reconstituted water (27).
po pripravah za določanje sveže teže se preskusni organizmi pri 60 °C posušijo na konstantno težo.
The resulting degree of hardness should be equivalent to 100-300 mg/l CaCO3 in order to prevent excessive precipitation of calcium carbonate.
Ta masa je suha teža.
Other well-characterised surface or well water may be used.
Začetna biomasa (suha teža) se določi na podlagi vzorca preskusnih organizmov, ki se vzame iz serije, ki se uporablja za inokulacijo preskusnih posod.
The reconstituted water may be adapted to maintenance water of low hardness by dilution with deionised water up to a ratio of 1:5 to a minimum hardness of 30-35 mg/l CaCO3.
preštejejo se vsi spiralasto razvrščeni listi vzdolž glavnega poganjka.
The water is aerated to oxygen saturation prior to addition of the test chemical.
Pogostost meritev in analitskih določitev
Temperature should be kept at 26 ± 1 °C, in the wells, throughout the test.
Če se uporabi načrt statičnega preskusa, je treba na začetku in na koncu preskusa izmeriti vrednost pH pri vsakem tretiranju.
The pH should be in a range between pH 6,5 and 8,5, and not vary within this range by more than 1,5 units during the course of the test.
Če se uporabi načrt polstatičnega preskusa, je treba vrednost pH izmeriti za vsako serijo „sveže“ testne raztopine pred vsako zamenjavo in za ustrezno „izrabljeno“ raztopino.
If the pH is not expected to remain in this range, then pH adjustment should be done prior to initiating the test.
Obsevanost je treba meriti v rastni komori, inkubatorju ali prostoru na točkah, ki so enako oddaljene od svetlobnega vira kot preskusni organizmi.
The pH adjustment should be made in such a way that the stock solution concentration is not changed to any significant extent and that no chemical reaction or precipitation of the test chemical is caused.
Izmeriti jo je treba vsaj enkrat med preskusom.
Use of hydrogen chloride (HCl) and sodium hydroxide (NaOH) to correct pH in the solutions containing the test chemical is recommended.
Najmanj dnevno (ali stalno z zapisovalnikom podatkov) je treba beležiti temperaturo gojišča v nadomestni posodi, ki je v enakih pogojih, v rastni komori, inkubatorju ali prostoru.
Test solutions of the selected concentrations can be prepared, e.g. by dilution of a stock solution.
Med preskusom se v primernih intervalih določajo koncentracije preskusne kemikalije.
The stock solutions should preferably be prepared by simply mixing or agitating the test chemical in the dilution water by mechanical means (e.g. stirring and/or ultra-sonification).
Pri statičnih preskusih je treba koncentracije določiti vsaj na začetku in na koncu preskusa.
If the test chemical is difficult to dissolve in water, procedures described in the OECD Guidance Document No. 23 for handling difficult substances and mixtures should be followed (28).
Pri polstatičnih preskusih, pri katerih se ne pričakuje, da bodo koncentracije preskusnih kemikalij ostale v območju ± 20 % nominalne koncentracije, je treba analizirati vse sveže pripravljene testne raztopine in enake raztopine pri vsaki zamenjavi.
Where a solvent is used to assist in stock solution preparation, its final concentration should not exceed 100 μl/l and should be the same in all test vessels.
V vseh primerih je treba določitev preskusnih koncentracij pred zamenjavo opraviti le pri eni posodi s ponovljenimi vzorci za vsako preskusno koncentracijo (ali združene vsebine posod posameznih ponovljenih vzorcev).
When a solvent is used, an additional solvent control is required.
Če so na voljo dokazi, da se je preskusna koncentracija med celotnim preskusom zadovoljivo ohranjala v območju ± 20 % nominalne ali izmerjene začetne koncentracije, lahko analiza rezultatov temelji na nominalnih ali izmerjenih začetnih vrednostih.
Maintenance of brood fish
Če odklon od nominalne ali izmerjene začetne koncentracije ni v območju ± 20 %, mora analiza rezultatov temeljiti na geometrijski srednji koncentraciji med izpostavljenostjo ali modelih, ki opisujejo zmanjševanje koncentracije preskusne kemikalije (5).
A breeding stock of unexposed, wild-type zebrafish with well-documented fertilisation rate of eggs is used for egg production.
V nekaterih okoliščinah, npr. kadar predhodni preskus pokaže, da preskusna kemikalija nima toksičnih učinkov pri koncentracijah do 100 mg/l ali do svoje meje topnosti v preskusnem gojišču ali v primeru pripravka do meje razpršljivosti, se lahko izvede mejni preskus, ki vključuje primerjavo odzivov v kontrolni skupini in eni tretirani skupini (100 mg/l ali koncentracija, ki je enaka meji topnosti).
Fish should be free of macroscopically discernible symptoms of infection and disease and should not have undergone any pharmaceutical (acute or prophylactic) treatment for 2 months before spawning.
Zelo se priporoča, da se ta preskus podpre z analizo koncentracije izpostavljenosti.
Optimal filtering rates should be adjusted; excess filtering rates causing heavy perturbation of the water should be avoided.
Rast v kontrolni in tretirani skupini se lahko analizira s statičnim preskusom za primerjavo povprečij, na primer s Studentovim t-testom.
For feeding conditions, see Appendix 2.
Spremenljivke odziva
Surplus feeding should be avoided, and water quality and cleanness of the aquaria should be monitored regularly and be reset to the initial state, if necessary.
Namen preskusa je določiti učinke preskusne kemikalije na vegetativno rast klasastega rmanca (Myriophyllum spicatum).
Proficiency Testing
Ta preskusna metoda opisuje dve spremenljivki odziva.
As a reference chemical, 3,4-dichloroaniline (used in the validation studies (1)(2)), should be tested in a full concentration-response range to check the sensitivity of the fish strain used, preferably twice a year.
Povprečna specifična hitrost rasti
For any laboratory initially establishing this assay, the reference chemical should be used.
ta spremenljivka odziva se izračuna na osnovi sprememb logaritmov dolžine glavnega poganjka in logaritmov drugih merjenih parametrov, in sicer skupne dolžine poganjka, sveže teže, suhe teže ali števila spiralasto razvrščenih listov v časovnem obdobju (izraženo v dnevih) v kontrolah in vsaki tretirani skupini.
A laboratory can use this chemical to demonstrate their technical competence in performing the assay prior to submitting data for regulatory purposes.
Opomba: povprečne specifične hitrosti rasti ni mogoče izračunati za merjena parametra skupne dolžine stranskih vej in skupne dolžine korenin.
Egg production
Na začetku preskusa preskusni organizem nima stranskih vej in korenin (na podlagi pripravka iz predkulture), kar pomeni, da je začetna vrednost nič, izračun povprečne specifične hitrosti rasti pa ni določen.
Zebrafish eggs may be produced via spawning groups (in individual spawning tanks) or via mass spawning (in the maintenance tanks).
Prirast
In the case of spawning groups, males and females (e.g., at a ratio of 2:1) in a breeding group are placed in spawning tanks a few hours before the onset of darkness on the day prior to the test.
ta spremenljivka odziva se izračuna na osnovi sprememb dolžine glavnega poganjka in sprememb drugih merjenih parametrov, in sicer po možnosti skupne dolžine poganjka, sveže teže, suhe teže ali števila spiralasto razvrščenih listov in drugih parametrov, če se to zdi koristno, v kontrolah in vsaki tretirani skupini do konca preskusa.