natgillin/translations-raw huggingface dataset:
the use of a luciferase substrate with sufficient light output to ensure sufficient sensitivity and low variability.
V neinduciranih pogojih je senzorska beljakovina Keap1 ciljno usmerjena v transkripcijski dejavnik Nrf2 za ubikvitinacijo in proteolitsko razgradnjo v proteasomu.
Prior to testing, a control experiment setup as described in Appendix 3 should be carried out to ensure that these three points are met.
Kovalentna modifikacija reaktivnih cisteinskih ostankov beljakovine Keap1 z majhnimi molekulami lahko povzroči disociacijo Nrf2 od beljakovine Keap1 (8) (10) (11).
After the 48 hour exposure time with the test chemical and control substances in the KeratinoSensTM assay, cells are washed with a phosphate buffered saline, and the relevant lysis buffer for luminescence readings added to each well for 20 min at room temperature.
jedrni faktor (izpeljan iz eritroblasta 2)-kot 2 je transkripcijski dejavnik, ki sodeluje pri poteku antioksidativnega odziva.
Plates with the cell lysate are then placed in the luminometer for reading which in the KeratinoSensTM assay is programmed to: (i) add the luciferase substrate to each well (i.e. 50 μl), (ii) wait for 1 second, and (iii) integrate the luciferase activity for 2 seconds.
Ko Nrf2 ni ubikvitiniran, se nakopiči v citoplazmi in premakne v jedro, kjer se združi z ARE v zgornji promotorski regiji mnogih genov za zaščito celic ter s tem začne njihovo transkripcijo (8) (10) (11).
In case alternative settings are used, e.g. depending on the model of luminometer used, these should be justified.
Ustreznost upošteva tudi točnost (skladnost) preskusne metode (29).
Furthermore, a glow substrate may also be used provided that the quality control experiment of Appendix 3 is successfully fulfilled.
Oceni se z izračunom obnovljivosti v enem ali več laboratorijih in interne laboratorijske ponovljivosti (29).
Cytotoxicity Assessment
ujemanje rezultatov, pridobljenih s preskušanjem iste kemikalije in uporabo istega preskusnega protokola (glej zanesljivost) (29).
For the KeratinoSensTM cell viability assay, medium is replaced after the 48 hour exposure time with fresh medium containing MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, Thiazolyl blue tetrazolium bromide; CAS No. 298-93-1) and cells incubated for 4 hours at 37 °C in the presence of 5 % CO2.
delež vseh pozitivnih/aktivnih kemikalij, ki se s preskusno metodo pravilno razvrstijo.
The MTT medium is then removed and cells are lysed (e.g. by adding 10 % SDS solution to each well) overnight.
Je merilo točnosti za preskusno metodo, s katero se pridobijo kategorični rezultati, in pomemben dejavnik pri ocenjevanju ustreznosti preskusne metode (29).
After shaking, the absorption is measured at i.e. 600 nm with a photometer.
ponovljen vzorec, ki vsebuje vse komponente preskusnega sistema razen preskusne kemikalije, vključuje pa topilo, ki se uporabi.
The following parameters are calculated in the KeratinoSensTM assay:
Uporablja se za določanje izhodiščnega odziva za vzorce, tretirane s preskusno kemikalijo, raztopljeno v istem topilu.
the maximal average fold induction of luciferase activity (Imax) value observed at any concentration of the tested chemical and positive control;
delež vseh negativnih/neaktivnih kemikalij, ki se s preskusno metodo pravilno razvrstijo.
the EC1,5 value representing the concentration for which induction of luciferase activity is above the 1,5 fold threshold (i.e. 50 % enhanced luciferase activity) was obtained; and
To je merilo točnosti za preskusno metodo, s katero se pridobijo kategorični rezultati, in je pomemben dejavnik pri ocenjevanju ustreznosti preskusne metode (29).
the IC50 and IC30 concentration values for 50 % and 30 % reduction of cellular viability.
Preskusna metoda ni nikoli veljavna v absolutnem smislu, ampak samo v zvezi z opredeljenim namenom (29).
Fold luciferase activity induction is calculated by Equation 1, and the overall maximal fold induction (Imax) is calculated as the average of the individual repetitions.
Preobčutljivost kože in vitro: luciferazna preskusna metoda z ARE-Nrf2
Equation 1:
Pred redno uporabo te preskusne metode morajo laboratoriji dokazati tehnično usposobljenost tako, da pravilno pridobijo napovedi KeratinoSens™, pričakovane za 10 snovi za preverjanje usposobljenosti, ki so priporočene v preglednici 1, ter vrednosti EC1.5 in IC50, ki so za vsaj 8 od 10 snovi za preverjanje usposobljenosti v ustreznem referenčnem območju.
Fold induction
Te snovi za preverjanje usposobljenosti so bile izbrane, ker predstavljajo celoten razpon odzivov pri nevarnostih v zvezi s povzročanjem preobčutljivosti kože.
Lsample
Druga merila za izbiro so bila dostopnost na trgu, dostopnost visokokakovostne reference in vivo in dostopnost visokokakovostnih podatkov in vitro iz preskusa KeratinoSensTM.
Lblank
Priporočene snovi za dokazovanje tehnične usposobljenosti za preskus KeratinoSensTM
Lsolvent
Snovi za preverjanje tehnične usposobljenosti
where
Napoved in vivo [1]
L sample
Napoved KeratinoSensTM [2]
is the luminescence reading in the test chemical well
Referenčno območje EC1.5 (μM) [3]
L blank
Referenčno območje IC50 (μM) [3]
is the luminescence reading in the blank well containing no cells and no treatment
izopropanol
L solvent
ne povzroča preobčutljivosti
is the average luminescence reading in the wells containing cells and solvent (negative) control
salicilna kislina
,5 is calculated by linear interpolation according to Equation 2, and the overall EC1,5 is calculated as the geometric mean of the individual repetitions.
mlečna kislina
Equation 2:
cinamil alkohol
is the lowest concentration in μM with > 1,5 fold induction
povzročitelj preobčutljivosti (šibek)
is the highest concentration in μM with < 1,5 fold induction
25–175
is the fold induction measured at the lowest concentration with > 1,5 fold induction (mean of three replicate wells)
etilen glikol dimetakrilat
is the fold induction at the highest concentration with < 1,5 fold induction (mean of three replicate wells)
5–125
Viability is calculated by Equation 3:
erkaptobenzotiazol
Equation 3:
povzročitelj preobčutljivosti (zmeren)
Viability
25–250
Vsample
metildibromo glutaronitril
Vblank
povzročitelj preobčutljivosti (močan)
Vsolvent
20–100
V sample
etilaminofenol sulfat
is the MTT-absorbance reading in the test chemical well
20–200
V blank
2,4-dinitro-klorobenzen
is the MTT-absorbance reading in the blank well containing no cells and no treatment
povzročitelj preobčutljivosti (izjemno močan)
V solvent
5–20
is the average MTT-absorbance reading in the wells containing cells and solvent (negative) control
Napovedi nevarnosti (in moči) in vivo temeljijo na podatkih LLNA (13).
and IC30 are calculated by linear interpolation according to Equation 4, and the overall IC50 and IC30 are calculated as the geometric mean of the individual repetitions.
Moč in vivo se izpelje s pomočjo meril, ki jih je predlagal ECETOC (24).
Equation 4:
Napoved KeratinoSensTM je treba obravnavati v okviru IATA ter v skladu z določbami iz odstavkov 9 in 11 te preskusne metode.
X is the % reduction at the concentration to be calculated (50 and 30 for IC50 and IC30)
Na podlagi ugotovljenih vrednostih iz preteklih preskusov (12).
is the lowest concentration in μM with > x % reduction in viability
KONTROLA KAKOVOSTI ZA MERITVE LUMINISCENCE
is the highest concentration in μM with < x % reduction in viability
Osnovni preskus za zagotavljanje optimalnih meritev luminiscence pri preskusu KeratinoSensTM
is the % viability at the lowest concentration with > x % reduction in viability
Naslednji trije parametri so ključni za zagotavljanje zanesljivih rezultatov z luminometrom:
is the % viability at the highest concentration with < x % reduction in viability
zadostna občutljivost, ki omogoča stabilno ozadje v jamicah s kontrolnim vzorcem;
For each concentration showing > 1,5 fold luciferase activity induction, statistical significance is calculated (e.g. by a two-tailed Student's t-test), comparing the luminescence values for the three replicate samples with the luminescence values in the solvent (negative) control wells to determine whether the luciferase activity induction is statistically significant (p < 0,05).
ni razlik preko plošče zaradi dolgega odčitavanja in
The lowest concentration with > 1,5 fold luciferase activity induction is the value determining the EC1,5 value.
ni svetlobnega onesnaženja v jamicah poleg močno aktivnih jamic.
It is checked in each case whether this value is below the IC30 value, indicating that there is less than 30 % reduction in cellular viability at the EC1,5 determining concentration.
Pred preskušanjem je priporočeno, da se zagotovijo ustrezne meritve luminiscence s preskušanjem postavitve kontrolne plošče, kot je opisano spodaj (tri analize).
It is recommended that data are visually checked with the help of graphs.
Postavitev plošče za prvi kontrolni poskus
If no clear dose-response curve is observed, or if the dose-response curve obtained is biphasic (i.e. crossing the threshold of 1,5 twice), the experiment should be repeated to verify whether this is specific to the test chemical or due to an experimental artefact.
slepa kontrola
In case the biphasic response is reproducible in an independent experiment, the lower EC1,5 value (the concentration when the threshold of 1,5 is crossed the first time) should be reported.
EGDMA etilen glikol dimetakrilat (št. CAS: 97-90-5), kemikalija z močnimi učinki
In the rare cases where a statistically non-significant induction above 1,5 fold is observed followed by a higher concentration with a statistically significant induction, results from this repetition are only considered as valid and positive if the statistically significant induction above the threshold of 1,5 was obtained for a non-cytotoxic concentration.
CA cimetov aldehid, pozitivna referenčna kemikalija (št. CAS: 104-55-2)
Finally, for test chemicals generating a 1,5 fold or higher induction already at the lowest test concentration of 0,98 μM, the EC1,5 value of < 0,98 is set based on visual inspection of the dose-response curve.
Analiza kontrole kakovosti bi morala pokazati:
The following acceptance criteria should be met when using the KeratinoSensTM assay.
jasen odziv na odmerek v vrstici D, z vrednostjo Imax > 20-krat večja od ozadja (v večini primerov se dosežejo vrednosti Imax med 100 in 300);
First, the luciferase activity induction obtained with the positive control, cinnamic aldehyde, should be statistically significant above the threshold of 1,5 (e.g. using a T-test) in at least one of the tested concentrations (from 4 to 64 μM).
ni odziva na odmerek v vrsticah C in E (nobena indukcijska vrednost ni višja od 1,5 (v najboljšem primeru ni višja od 1,3) zaradi morebitnega svetlobnega onesnaženja, zlasti poleg močno aktivnih jamic v vrstici EGDMA;
Second, the EC1,5 value should be within two standard deviations of the historical mean of the testing facility (e.g. between 7 μM and 30 μM based on the validation dataset) which should be regularly updated.
ni statistično značilnih razlik med vrsticami A, B, C, E, F in G. (tj. brez razlik preko plošče); in
In addition, the average induction in the three replicates for cinnamic aldehyde at 64 μM should be between 2 and 8.
variabilnost v kateri koli od vrstic A, B, C, E, F in G ter v jamicah z DMSO v vrstici H bi morala biti manjša od 20 % (tj. stabilno ozadje).
If the latter criterion is not fulfilled, the dose-response of cinnamic aldehyde should be carefully checked, and tests may be accepted only if there is a clear dose-response with increasing luciferase activity induction at increasing concentrations for the positive control.
B.61 Preskusna metoda uhajanja fluoresceina za opredeljevanje jedkih in zelo dražilnih snovi za oči
Finally, the average coefficient of variation of the luminescence reading for the negative (solvent) control DMSO should be below 20 % in each repetition which consists of 6 wells tested in triplicate.
Ta preskusna metoda je enakovredna Smernici za preskušanje OECD (TG) 460 (2012).
If the variability is higher, results should be discarded.
Preskusna metoda uhajanja fluoresceina (ang.
Interpretation of results and prediction model
Fluorescein Leakage, FL) je preskusna metoda in vitro, ki se lahko uporabi v določenih okoliščinah in s posebnimi omejitvami za razvrstitev kemikalij (snovi in zmesi) med jedke in zelo dražilne snovi za oči, kakor to opredeljujejo Globalno usklajeni sistem za razvrščanje in označevanje kemikalij (GHS) Združenih narodov (ZN) (kategorija 1), Uredba (ES) št. 1272/2008 o razvrščanju, označevanju in pakiranju snovi ter zmesi) (CLP) [19] (kategorija 1) in Agencija ZDA za varstvo okolja (US EPA) (kategorija I) (1) (2).
A KeratinoSensTM prediction is considered positive if the following 4 conditions are all met in 2 of 2 or in the same 2 of 3 repetitions, otherwise the KeratinoSensTM prediction is considered negative (Figure 1):
Za namen te preskusne metode so zelo dražilne snovi za oči opredeljene kot kemikalije, ki po dajanju preskusne kemikalije povzročijo poškodbo očesnega tkiva, ki ni popravljiva v roku 21 dni, ali povzročijo resno fizično okvaro vida, jedke snovi za oči pa so kemikalije, ki povzročijo nepopravljivo poškodbo očesnega tkiva.
the Imax is higher than (>) 1,5 fold and statistically significantly different as compared to the solvent (negative) control (as determined by a two-tailed, unpaired Student's t-test);
Te kemikalije so razvrščene v kategorijo 1 po GHS ZN, kategorijo 1 po CLP EU ali kategorijo I po US EPA.Čeprav se preskusna metoda FL ne obravnava kot veljaven in celovit nadomestek za očesno študijo in vivo na kuncih, se vseeno priporoča za uporabo kot del večstopenjske strategije preskušanja za regulativno razvrščanje in označevanje.
the cellular viability is higher than (>) 70 % at the lowest concentration with induction of luciferase activity above 1,5 fold (i.e. at the EC1,5 determining concentration);
Priporoča se torej kot prvi korak v okviru pristopa od zgoraj navzdol, da se opredelijo jedke/zelo dražilne snovi za oči, zlasti za omejene vrste kemikalij (tj. vodotopne snovi in zmesi) (3) (4).
the EC1,5 value is less than (<) 1000 μM (or < 200 μg/ml for test chemicals with no defined MW);
Zdaj na splošno velja, da v bližnji prihodnosti noben preskus draženja oči in vitro ne bo mogel nadomestiti očesne študije in vivo (PM B.5 (5)) za napovedi o celotnem razponu dražilnih učinkov za različne kemijske razrede.
there is an apparent overall dose-response for luciferase induction (or a biphasic response as mentioned under paragraph 33).
Strateške kombinacije več alternativnih preskusnih metod v okviru (večstopenjske) strategije preskušanja pa bi morda lahko nadomestile očesno študijo in vivo (4).
If in a given repetition, all of the three first conditions are met but a clear dose-response for the luciferase induction cannot be observed, then the result of that repetition should be considered inconclusive and further testing may be required (Figure 1).
Pristop od zgoraj navzdol (4) je zasnovan za uporabo takrat, ko se na podlagi obstoječih informacij pričakuje, da bo imela kemikalija visok potencial draženja.
In addition, a negative result obtained with concentrations < 1000 μM (or < 200 μg/ml for test chemicals with no defined MW) should also be considered as inconclusive (see paragraph 11).
Na podlagi napovednega modela, podrobno opisanega v odstavku 35, se s preskusno metodo FL lahko opredelijo kemikalije v okviru omejenega področja uporabe kot jedke/zelo dražilne snovi za oči (kategorija 1 po GHS ZN; kategorija 1 po CLP EU; kategorija I po US EPA) brez kakršnega koli nadaljnjega preskušanja.
Figure 1
Enako se domneva za zmesi, čeprav te niso bile uporabljene pri validaciji.
Prediction model used in the KeratinoSensTM assay.
Preskusna metoda FL se torej lahko uporabi za določanje dražilnosti/jedkosti kemikalij za oči v okviru zaporedne strategije preskušanja PM B.5 (5).
A KeratinoSensTM prediction should be considered in the framework of an IATA and in accordance with the provision of paragraphs 9 and 11
Vendar če se s preskusno metodo FL za kemikalijo ne predvidi, da je jedka ali zelo dražilna snov za oči, bi bilo to kemikalijo treba preskusiti z eno ali več dodatnimi preskusnimi metodami (in vitro in/ali in vivo), s katerimi se lahko točno opredelijo i) kemikalije, ki so in vitro lažno negativne jedke/zelo dražilne snovi za oči na podlagi preskusne metode FL (kategorija 1 po GHS ZN; kategorija 1 po CLP EU; kategorija I po US EPA); ii) kemikalije, ki niso razvrščene med jedke/dražilne snovi za oči (brez kategorije po GHS ZN; brez kategorije po CLP EU; kategorija IV po US EPA); in/ali iii) kemikalije, ki so zmerne/blage dražilne snovi za oči (kategoriji 2A in 2B po GHS ZN; kategorija 2 po CLP EU; kategoriji II in III po US EPA).
In rare cases, test chemicals which induce the luciferase activity very close to the cytotoxic levels can be positive in some repetitions at non-cytotoxic levels (i.e. EC1,5 determining concentration below (<) the IC30), and in other repetitions only at cytotoxic levels (i.e. EC1,5 determining concentration above (>) the IC30).
Namen te preskusne metode je opisati postopke za oceno potencialne jedkosti in močne dražilnosti preskusne snovi za oči glede na njeno sposobnost, da poškoduje neprepusten, konfluenten, epitelijski monosloj.
Such test chemicals shall be retested with more narrow dose-response analysis using a lower dilution factor (e.g. 1,33 or √2 (= 1,41) fold dilution between wells), to determine if induction has occurred at cytotoxic levels or not (9).
Celovitost transepitelijske prepustnosti je glavna funkcija epitelija, na primer v veznici in roženici.
Physical appearance, water solubility, DMSO solubility, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties, to the extent available;
Transepitelijsko prepustnost nadzira več tesnih stikov.
Physical appearance, water solubility, DMSO solubility and additional relevant physicochemical properties, to the extent available;
Dokazano je bilo, da je povečanje prepustnosti epitelija roženice in vivo povezano s stopnjo vnetja in površinskih poškodb, opaženih, ko pride do draženja oči.
Physical appearance, water solubility, DMSO solubility, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties, to the extent available and where applicable;
S preskusno metodo FL se po kratkem času izpostavljenosti preskusni kemikaliji toksični učinki merijo na podlagi povečanja prepustnosti natrijevega fluoresceina skozi epitelijski monosloj v celicah pasjih ledvic MDCK (ang.
Negative (vehicle) control
Madin-Darby Canine Kidney), ki se gojijo na prepustnih vstavkih.
Chemical identification, such as IUPAC or CAS name(s), CAS number(s), and/or other identifiers;
Količina uhajanja fluoresceina, ki se pojavi, je sorazmerna s kemijsko induciranimi poškodbami tesnih stikov, dezmosomskih stikov in celičnih membran ter jo lahko uporabi za oceno potenciala toksičnosti preskusne kemikalije za oči.
Physical appearance, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties in the case other negative controls / vehicles than those mentioned in this test method are used and to the extent available;
V Dodatku 1 je diagram celic MDCK, ki se gojijo na membrani vstavka za preskusno metodo FL.
Justification for choice of solvent for each test chemical.
Opredelitve pojmov so navedene v Dodatku 2.
Test method conditions
Ta preskusna metoda temelji na protokolu INVITTOX št. 71 (6), ki je bila ocenjen v mednarodni validacijski študiji Evropskega centra za validacijo alternativnih metod (ECVAM) v sodelovanju z Medagencijskim koordinacijskim odborom ZDA za validacijo alternativnih metod (ICCVAM) in Japonskim centrom za validacijo alternativnih metod (JaCVAM).
Description of test method used;
Preskusna metoda FL se ne priporoča za opredeljevanje kemikalij, ki bi morale biti razvrščene med blage/zmerne dražilne snovi za oči, ali kemikalij, ki ne bi smele biti razvrščene med dražilne za oči (snovi in zmesi) (tj. kategorija 2A/2B, brez kategorije po GHS; kategorija 2, brez kategorije po CLP EU; kategorija II/III/IV po US EPA), kot je bilo dokazano v validacijski študiji (3) (7).
Cell line used, its storage conditions and source (e.g. the facility from which they were obtained);
Ta preskusna metoda je ustrezna samo za vodotopne kemikalije (snovi in zmesi).
Passage number and level of confluence of cells used for testing;
Potencial zelo močne dražilnosti snovi za oči za kemikalije, ki so topne v vodi in/ali pri katerih razredčenje ne vpliva toksični učinek, se na splošno lahko točno napove z uporabo preskusne metode FL (7).
Cell counting method used for seeding prior to testing and measures taken to ensure homogeneous cell number distribution (cf. paragraph 20);
Za razvrstitev kemikalije kot vodotopne v preskusnih pogojih, bi ta morala biti topna v sterilni Hankovi uravnoteženi raztopini soli (ang.
Luminometer used (e.g. model), including instrument settings, luciferase substrate used, and demonstration of appropriate luminescence measurements based on the control test described in Appendix 3;
Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS)) s koncentracijo ≥ 250 mg/ml (ena doza nad mejno vrednostjo 100 mg/ml), ki vsebuje kalcij (s koncentracijo 1,0–1,8 mM) in ne vsebuje fenol rdečega.
The procedure used to demonstrate proficiency of the laboratory in performing the test method (e.g. by testing of proficiency substances) or to demonstrate reproducible performance of the test method over time.
Če pa je preskusna kemikalija topna pri koncentraciji, nižji od 100 mg/ml, vendar že pri tej koncentraciji povzroči 20-odstotno indukcijo FL (torej, FL20 < 100 mg/ml), se še vedno lahko razvrsti v kategorijo 1 po GHS ali kategorijo I po EPA.
Test procedure
Omejitve, opredeljene za to preskusno metodo, s področja uporabe izključujejo močne kisline in baze, fiksirne raztopine za celice in lahko hlapne kemikalije.
Number of repetitions and replicates used;
Za te kemikalije so značilni mehanizmi, ki se ne merijo s preskusno metodo FL, npr. močno strjevanje krvi, umiljenje ali specifične reaktivne kemijske lastnosti.
Test chemical concentrations, application procedure and exposure time used (if different than the one recommended)
Druge opredeljene omejitve za to metodo temeljijo na rezultatih v zvezi z napovedovalno zmogljivostjo za obarvano in viskozno preskusno kemikalijo (7).
Tabulation of Imax, EC1,5 and viability values (i.e. IC50, IC30) obtained for the test chemical and for the positive control for each repetition as well as the mean values (Imax: average; EC1,5 and viability values: geometric mean) and SD calculated using data from all individual repetitions and an indication of the rating of the test chemical according to the prediction model;
Obe vrsti kemikalij naj bi bilo po kratkem obdobju izpostavljenosti težko odstraniti iz monosloja, napovedno zmogljivost preskusne metode pa bi bilo mogoče izboljšati, če bi bilo uporabljenih več korakov spiranja.
Coefficient of variation obtained with the luminescence readings for the negative control for each experiment;
Trdne kemikalije, suspendirane v tekočini, so nagnjene k obarjanju, in včasih je težko določiti končno koncentracijo glede na celice.
A graph depicting dose-response curves for induction of luciferase activity and viability;
Če se kemikalije iz teh kemijskih in fizikalnih razredov izključijo iz zbirke podatkov, se točnost FL v sistemih za razvrščanje EU, EPA in GHS bistveno izboljša (7).
Description of any other relevant observations, if applicable.
Na podlagi namena te preskusne metode (tj. opredeliti samo jedke/zelo dražilne snovi za oči) delež lažno negativnih rezultatov (glej odstavek 13) ni ključen, saj bi bile take kemikalije posledično preskušene z drugimi, ustrezno potrjenimi preskusi in vitro ali na kuncih ob upoštevanju regulativnih zahtev in uporabi večstopenjske strategije preskušanja v okviru pristopa, ki temelji na zanesljivosti dokazov (5) (glej tudi odstavka 3 in 4).
Discussion of the results obtained with the KeratinoSensTM assay;
Druge opredeljene omejitve preskusne metode FL temeljijo na deležih lažno negativnih in lažno pozitivnih rezultatov.