natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Where positive or equivocal findings are observed solely in the presence of clear evidence of cytotoxicity, the study would be concluded as equivocal for genotoxicity unless there is enough information that is supportive of a definitive conclusion.
Vendar vrednosti log KOW nad 5 in topnost v vodi pod ~0,01–0,1 mg/l označujejo območje snovi, pri katerih lahko postane preskušanje prek vodne izpostavljenosti vedno težje.
In cases of a negative study outcome where there are signs of toxicity at all doses tested, further study at non-toxic doses may be advisable.
Upoštevati je treba tudi druge dejavnike, ki lahko vplivajo na izbiro preskusa, vključno s potencialom snovi za adsorbcijo v preskusne posode in opremo ter njeno obstojnostjo v vodni raztopini v primerjavi z njeno obstojnostjo v ribji hrani (17), (18) itd.
source, lot number if available;
Informacije o takih praktičnih vidikih so morda na voljo v drugih zaključenih študijah vodne izpostavljenosti.
analytical determinations on formulations (e.g. stability, homogeneity, nominal concentrations).
Za močno hidrofobne snovi (log KOW > 5 in topnost pod ~0,01–0,1 mg/l) lahko postane preskušanje prek vodne izpostavljenosti vedno težje.
species/strain used and scientific and ethical justifications for the choice;
Razlogi za omejitve lahko zajemajo to, da se koncentracija v vodi ne more ohranjati na ravni, ki se šteje za dovolj konstantno (npr. zaradi sorpcije v steklo posode za izpostavljenost ali hitra absorpcija v ribe), ali da so koncentracije v vodi, ki bodo uporabljene, tako nizke, da so v istem območju ali pod analitsko mejo določljivosti [25].
source, housing conditions, diet, enrichment, etc.;
Za te močno hidrofobne snovi se priporoča prehranski preskus, če je ta preskus skladen z ustreznim regulativnim okvirom in potrebami po oceni tveganja.
individual weight of the animals at the start and at the end of the test, including body weight range, mean and standard deviation for each group.
Pri površinsko aktivnih snoveh je treba obravnavati, ali je preskus vodne biokoncentracije izvedljiv glede na lastnosti snovi, v nasprotnem primeru je verjetno primernejša prehranska študija.
results from the range-finding study (if conducted);
Površinsko aktivne snovi so snovi, aktivne na površini, ki znižujejo medploskovno napetost med dvema tekočinama.
rationale for route of administration;
Zaradi njihove amfifilne narave (tj. imajo hidrofilni in hidrofobni del) se kopičijo na mejnih ploskvah, kot so mejna ploskev med vodo in zrakom, mejna ploskev med vodo in hrano ter steklena stena, kar ovira določanje njihove koncentracije v vodi.
site of injection (for subcutaneous or intravenous studies);
Prehranski preskus lahko zaobide nekatere vidike izpostavljenosti za kompleksne zmesi s sestavinami, ki imajo različne meje topnosti v vodi, saj je primerljiva izpostavljenost vsem sestavinam zmesi verjetnejša kot pri vodni metodi (prim. (20)).
methods for sample preparation, where available, histopathological analyses, especially for a chemical giving a positive comet response;
Opozoriti je treba, da se s prehranskim pristopom dobi prehranski biomagnifikacijski faktor (BMF), ne pa biokoncentracijski faktor (BKF) [26].
rationale for tissue selection;
Na voljo so pristopi za ocenjevanje kinetičnega biokoncentracijskega faktorja (BKFK) na podlagi podatkov, dobljenih v prehranski študiji (kot je opisano v Dodatku 8, ampak te pristope je treba uporabljati previdno).
methods for verifying that the test chemical reached the target tissue, or general circulation, if negative results are obtained;
Na splošno ti pristopi sledijo kinetiki prvega reda in se lahko uporabijo samo za določene skupine spojin.
details of diet and water quality;
Teh pristopov verjetno ni mogoče uporabiti za površinsko aktivne snovi (glej odstavek 12).
detailed description of treatment and sampling schedules and justifications for the choices (e.g. toxicokinetic data, where available);
Minimiziran načrt preskusa vodne izpostavljenosti z manjšim številom vzorčnih točk, da se zmanjša število živali in/ali virov (prim. od odstavka 83 naprej), se lahko uporabi samo za tiste snovi, za katere se lahko upravičeno pričakuje, da bosta absorpcija in očiščenje približno sledili kinetiki prvega reda (tj. na splošno neionizirane organske snovi, prim. odstavek 88).
method of pain relief, analgesia;
C.13 – I: Preskus vodne izpostavljenosti za ugotavljanje biokoncentracije v ribah
procedures for isolating and preserving tissues;
Preskus zajema dve fazi: faza izpostavljenosti (absorpcija) in faza po izpostavljenosti (očiščenje).
methods for preparing single cell/nucleus suspension;
Med fazo absorpcije je skupina rib ene vrste izpostavljena preskusni snovi pri eni ali več izbranih koncentracijah, kar je odvisno od lastnosti preskusne snovi (prim. odstavek 49).
source and lot numbers of all reagents (where possible);
Skupina rib se nato za fazo očiščenja prenese v medij, ki ne vsebuje preskusne snovi.
methods for evaluating cytotoxicity;
Faza očiščenja je vedno potrebna, razen če je absorpcija snovi med fazo absorpcije zanemarljiva.
electrophoresis conditions;
Koncentracija preskusne snovi v/na ribah (ali določenih tkivih rib) se spremlja v obeh fazah preskusa.
staining techniques used; and
Poleg izpostavljene skupine se goji kontrolna skupina rib pod enakimi pogoji, le da ti ne vključujejo preskusne snovi, s čimer se morebitni neželeni učinki, opaženi med biokoncentracijskim preskusom, primerjajo z ustrezno kontrolno skupino, pridobijo pa se tudi koncentracije preskusne snovi v ozadju [27].
methods for scoring and measuring comets.
Pri preskusu vodne izpostavljenosti se faza absorpcije običajno izvaja 28 dni.
General clinical observations, if any, prior to and throughout the test period for each animal;
Trajanje se lahko po potrebi podaljša (prim. odstavek 18) ali skrajša, če se dokaže, da je bilo stacionarno stanje doseženo prej (za opredelitev pojmov in enote glej Dodatek 1).
evidence of cytotoxicity if performed;
Trajanje faze absorpcije in čas, ki je potreben, da se doseže stacionarno stanje, se lahko predvidi z enačbami iz Dodatka 5.
for studies longer than one week: Individual body weights during the study, including body weight range, mean and standard deviation for each group; food consumption;
Faza očiščenja se nato začne, ko ribe niso več izpostavljene preskusni snovi, tako da se jih prenese v isti medij, vendar v čisto posodo brez preskusne snovi.
dose-response relationship, where evident;
Kadar je to mogoče, se biokoncentracijski faktor izračuna po možnosti kot razmerje koncentracije v ribah (Cf) in v vodi (Cw) v stacionarnem stanju (BKFSS; glej Dodatek 1, opredelitev pojmov) in kot kinetični biokoncentracijski faktor (BKFK; za opredelitev pojmov in enote glej Dodatek 1), ki se oceni kot razmerje konstante hitrosti absorpcije (k1) in očiščenja (k2), ki sledita kinetiki prvega reda [28].Če se stacionarno stanje ne doseže v 28 dneh, se izračuna BKF na podlagi kinetičnega pristopa (prim. odstavek 38), lahko pa se podaljša faza absorpcije.
for each tissue/animal, the % tail DNA (or other measures, if chosen) and median values per slide, mean values per animal and mean values per group;
Če bi to pomenilo nepraktično dolgo fazo absorpcije, da se doseže stacionarno stanje (prim. odstavka 37 in 38, Dodatek 5), se priporoča kinetični pristop.
concurrent and historical negative control data with ranges, means/medians and standard deviations for each tissue evaluated;
Za močno hidrofobne snovi pa je treba obravnavati izvedbo prehranske študije [29], če je prehranski preskus skladen z ustreznim regulativnim okvirom.
for tissues other than liver, a dose-response curve using the positive control.
Povečanje mase rib med preskusom povzroči zmanjšanje koncentracije preskusne snovi v rastočih ribah (ki se imenuje razredčitev zaradi rasti), zato je kinetični BKF prenizko ocenjen, če se ga ne popravi na podlagi rasti (prim. odstavka 72 in 73).
This can be from data collected during the demonstration of proficiency (see paragraphs 16-17) and should be accompanied by a justification, with citations to current literature, for the appropriateness of the magnitude and scatter of the responses to the controls in that tissue;
BKF temelji na skupni koncentraciji v ribi (tj. na celotno mokro težo ribe).
statistical analyses and methods applied; and criteria for considering a response as positive, negative or equivocal;
Vendar se za posebne namene lahko uporabijo določena tkiva ali organi (npr. mišice, jetra), če so ribe dovolj velike, ali pa se ribe razdelijo na užitne (fileji) in neužitne (drobovje) dele.
frequency of hedgehogs in each group and per animal.
Ker za mnoge organske snovi velja jasna povezava med potencialom za biokoncentracijo in hidrofobnost, obstaja tudi ustrezno razmerje med vsebnostjo lipidov v preskusnih ribah in ugotovljeno biokoncentracijo takih snovi.
Durand (1990), Heterogeneity in radiation-induced DNA damage and repair in tumor and normal cells using the “Comet” assay, Radiation Research, Vol.
Da bi se zmanjšal ta vir variabilnosti v rezultatih preskusa za te snovi z visoko lipofilnostjo (tj. z vrednostjo log KOW > 3), je treba biokoncentracijo izraziti kot normalizirano na ribo s 5-odstotno vsebnostjo lipidov (glede na celotno mokro težo telesa) poleg te, ki se izpelje neposredno iz študije.
122/1, pp. 86-94.
To je potrebno, da se zagotovi podlaga, na podlagi katere se lahko primerjajo rezultati za različne snovi in/ali preskusne vrste.
Chapter B.8 of this Annex: Subacute Inhalation Toxicity: 28-Day Study.
Pogosto se uporablja 5-odstotna vsebnost lipidov, saj predstavlja povprečno vsebnost lipidov v ribah, ki se običajno uporabljajo pri tej preskusni metodi (21).
Chapter B.29 of this Annex: Subchronic Inhalation Toxicity: 90-day Study.
INFORMACIJE O PRESKUSNI SNOVI
OECD (2002), “Guidance Document on the Recognition, Assessment and Use of Clinical Signs as Humane Endpoints for Experimental Animals Used in Safety Evaluation”, OECD Environment, Health and Safety Publications (EHS), Series on Testing and Assessment, No. 19, OECD Publishing, Paris.
Poleg lastnosti preskusne snovi, navedene v uvodu (odstavek 3), so zahtevane tudi informacije o toksičnosti za vrsto rib, ki bo uporabljena v preskusu, po možnosti asimptotični LC50 (tj. neodvisen od časa) in/ali toksičnost, ki je bila ocenjena v dolgotrajnih preskusih pri ribah (npr. TM C.47 (22), C.15 (23), C.14 (24)).
Alkaline single cell gel electrophoresis
Na voljo mora biti ustrezna analitska metoda z znano točnostjo, natančnostjo in občutljivostjo, saj mora biti na voljo količinska opredelitev snovi v preskusnih raztopinah in biološkem materialu ter podrobnosti o pripravi in shranjevanju vzorca.
Sensitive technique for the detection of primary DNA damage at the level of individual cell/nucleus.
Ravno tako mora biti znana analitska meja določljivosti preskusne snovi v vodi in ribjih tkivih.
Comet
Kadar se uporabi izotopsko označena preskusna snov, mora ta imeti najvišjo čistost (npr. po možnosti > 98 %), in znan mora biti odstotek radioaktivnosti, povezan z nečistočami.
The shape that nucleoids adopt after submitted to one electrophoretic field, due to its similarity to comets: the head is the nucleus and the tail is constituted by the DNA migrating out of the nucleus in the electric field.
VELJAVNOST PRESKUSA
A critical variable/parameter
Za veljavnost preskusa morajo biti izpolnjeni naslednji pogoji:
This is a protocol variable for which a small change can have a large impact on the conclusion of the assay.
sprememba temperature mora znašati manj kot ± 2 °C, saj lahko velika odstopanja vplivajo na biološke parametre, ki so pomembni za absorpcijo in očiščenje, ter povzročajo stres pri živalih;
Critical variables can be tissue-specific.
koncentracija raztopljenega kisika ne sme pasti pod 60 % nasičenosti;
Critical variables should not be altered, especially within a test, without consideration of how the alteration will alter an assay response, for example as indicated by the magnitude and variability in positive and negative controls.
koncentracija preskusne snovi v komorah se ohranja v območju ± 20 % povprečja izmerjenih vrednosti med fazo absorpcije;
The test report should list alterations of critical variables made during the test or compared to the standard protocol for the laboratory and provide a justification for each alteration.
koncentracija preskusne snovi je pod mejo topnosti v vodi, pri čemer se upošteva učinek, ki ga lahko ima preskusna voda na dejansko topnost [30];
Tail intensity or % tail DNA
smrtnost ali drugi neželeni učinki/bolezni pri kontrolnih in tretiranih ribah znašajo ob koncu preskusa manj kot 10 %; kadar preskus traja več tednov ali mesecev, morajo smrtnost ali drugi neželeni učinki v obeh skupinah rib znašati manj kot 5 % na mesec in skupno ne smejo presegati 30 %.
This corresponds to the intensity of the comet tail relative to the total intensity (head plus tail).
Precejšnje razlike v povprečni rasti med preskusnimi in kontrolnimi skupinami vzorčenih rib so lahko pokazatelj toksičnega učinka preskusne snovi.
It reflects the amount of DNA breakage, expressed as a percentage.
REFERENČNE SNOVI
THE FACTORIAL DESIGN FOR IDENTIFYING SEX DIFFERENCES IN THE IN VIVO COMET ASSAY
Uporaba referenčnih snovi z znanim biokoncentracijskim potencialom in nizkim metabolizmom bi bila uporabna za preverjanje preskusnega postopka, kadar je to zahtevano (npr. ko laboratorij nima predhodnih izkušenj s preskusom ali so bili spremenjeni preskusnimi pogoji).
In this design, a minimum of 5 males and 5 females are tested at each concentration level resulting in a design using a minimum of 40 animals (20 males and 20 females, plus relevant positive controls.)
Oprema
The analysis partitions the variability in the dataset into that between the sexes, between the concentrations and that related to the interaction between the sexes and the concentrations.
Za vse dele opreme se je treba izogniti uporabi materialov, ki se lahko raztopijo, sorbirajo ali lužijo in imajo neželen učinek na ribe.
Full details of the underlying methodology are available in many standard statistical textbooks (see references) and in the 'help' facilities provided with statistical packages.
Uporabijo se lahko standardni pravokotni ali valjasti bazeni iz kemično inertnega materiala in ustrezne prostornine, ki je v skladu s stopnjo obremenitve (prim. odstavek 43).
CURRENT LIMITATIONS OF THE ASSAY
Čim manj je treba uporabljati cevni material iz mehke plastike.
Due to the current status of knowledge, several limitations are associated with the in vivo comet assay.
Uporabiti je treba cevni material iz politetrafluoroetilena, nerjavnega jekla in/ali stekla.
It is expected that these limitations will be reduced or more narrowly defined as there is more experience with application of the assay to answer safety issues in a regulatory context.
Na podlagi izkušenj je za preskusne snovi z visokim koeficientom adsorpcije, na primer sintetične piretroide, morda treba uporabiti silanizirano steklo.
Some types of DNA damage may be short-lived, i.e. may be repaired too quickly to be observed 24 hours or more after the last dose.
V takih primerih je treba opremo po uporabi zavreči.
There is no identifiable list of the types of short-lived damages, nor of the chemicals which are likely to cause this type of damage, nor is it known over what time period this type of damage can be detected.
Priporočeno je, da se preskusne sisteme izpostavi koncentracijam preskusne snovi, ki bodo uporabljene v študiji, za tako dolgo, kot je potrebno, da se dokaže ohranjanje obstojnih koncentracij izpostavljenosti, preden se doda preskusne organizme.
The optimum sampling time(s) may also be chemical- or route-specific and sampling times should be determined from kinetic data (for example the time, Tmax, at which the peak plasma or tissue concentration is achieved), when such data are available.
Voda
Most of the validation studies supporting this test method specified necropsy 2 or 3 hours following administration of the final dose.
Za preskus se običajno uporablja naravna voda, ki mora biti pridobljena iz neonesnaženega vira enotne kakovosti.
Most studies in the published literature describe administration of the final dose between 2 and 6 hours prior to sacrifice.
Morda pa je primernejša modelna razredčevalna voda (tj. demineralizirana voda, ki so ji dodana določena hranila v znanih količinah), da se zagotovi enotna kakovost v daljšem časovnem obdobju.
Therefore, these experiences were used as the basis for the recommendation in the test method that, in the absence of data indicating otherwise, the final dose should be administered at a specified time point between 2 and 6 hours prior to necropsy.
Voda za redčenje oziroma voda, ki je zmešana s preskusno snovjo, preden je dodana v preskusno posodo (prim. odstavek 30), mora biti take kakovosti, ki omogoči preživetje izbrane vrste rib ves čas trajanja aklimatizacije in preskušanja, ne da bi pri tem ta vrsta neobičajno spremenila videz ali vedenje.
There are no identifiable study data that examine the sensitivity of the test for the detection of short-lived DNA damage following administration in food or drinking water compared to administration by gavage.
Načeloma je treba dokazati, da lahko preskusne vrste preživijo, rastejo in se razmnožujejo v vodi za redčenje (npr. v laboratorijski kulturi ali preskusu strupenosti življenjskega cikla).
DNA damage has been detected following administration in feed and drinking water, but there are relatively few such reports compared to the much greater experience with gavage and i.p. administration.
Voda za redčenje mora biti opredeljena vsaj s pH, trdoto, vsemi snovmi v trdem stanju in skupnim organskim ogljikom (TOC [31]), če je mogoče, pa tudi z amonijem, nitritom in alkalnostjo ter slanostjo za morske vrste.
Thus the sensitivity of the assay may be reduced for chemicals which induce short-lived damage administered through feed or drinking water.
Parametri, ki so pomembni za optimalno počutje rib, niso povsem znani, vendar so v Dodatku 2 navedene priporočene najvišje koncentracije številnih parametrov za sladko in morsko preskusno vodo.
No inter-laboratory studies have been conducted in tissues other than liver and stomach, therefore no recommendation has been established for how to achieve a sensitive and reproducible response in tissues other than liver, such as expected positive and negative control ranges.
Voda za redčenje mora biti ves čas preskusa enake kakovosti.
For the liver, agreement on setting a lower limit to the negative control value also could not be reached.
Vrednost pH mora biti ob začetku preskusa v območju 6,0 do 8,5, med danim preskusom pa mora biti v območju ± 0,5 pH enot.
Although there are several publications demonstrating the confounding effect of cytotoxicity in vitro, very little data have been published in vivo and therefore no single measure of cytotoxicity could be recommended.
Za zagotovitev, da voda za redčenje ne bi neprimerno vplivala na rezultat preskusa (na primer s kompleksiranjem preskusne snovi) ali imela neželen učinek na vedenje staleža rib, je treba v časovnih intervalih vzeti vzorce za analizo, vsaj na začetku in koncu preskusa.
Histopathological changes such as inflammation, cell infiltration, apoptotic or necrotic changes have been associated with increases in DNA migration however, as demonstrated by the JaCVAM validation trial (OECD, 2014), these changes do not always result in positive comet findings and consequently no definitive list of histopathological changes that are always associated with increased DNA migration is available.
Določiti je treba težke kovine (npr. Cu, Pb, Zn, Hg, Cd in Ni), glavne anione in katione (npr. Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl- in SO42-), pesticide (npr. skupni organofosforni in skupni organoklorni pesticidi), skupni organski ogljik in suspendirane trdne snovi, na primer vsake tri mesece, kadar se ve, da je voda za redčenje razmeroma konstantne kakovosti.
Hedgehogs (or clouds, ghost cells) have previously been suggested as an indicator of cytotoxicity, however, the etiology of the hedgehogs is uncertain.
Če se dokaže, da je bila kakovost vode za redčenje konstantna vsaj eno leto, se lahko analize izvajajo manj pogosto, časovni intervali pa se lahko podaljšajo (npr. vsakih šest mesecev).
Data exist which suggest that they can be caused by chemical-related cytotoxicity, mechanical/enzyme-induced damage initiated during sample preparation (Guerard et al., 2014) and/or a more extreme effect of test chemical genotoxicity.
Vsebnost naravnih delcev in skupni organski ogljik vode za redčenje morata biti čim nižja, da se prepreči adsorpcija preskusne snovi na organsko snov, saj lahko to zmanjša njeno biološko dostopnost, to pa lahko pomeni prenizko oceno BKF.
Other data seem to show they are due to extensive, but perhaps repairable DNA damage (Lorenzo et al., 2013).
Najvišja sprejemljiva vrednost je 5 mg/l za delce (suha snov, ki jo zadrži 0,45 μm filter) in 2 mg/l za skupni organski ogljik (prim. Dodatek 2).
Tissues or cell nuclei have been successfully frozen for later analysis.
Voda za redčenje se mora po potrebi pred uporabi filtrirati.
This usually results in a measurable effect on the response to the vehicle and positive control (Recio et al., 2010; Recio at al., 2012; Jackson at al., 2013).
Preskusne ribe (izločki) in ostanki hrane morajo čim manj prispevati k vsebnosti organskega ogljika v preskusni vodi (prim. odstavek 46).
If used, the laboratory should demonstrate competency in freezing methodologies and confirm acceptable low ranges of % tail DNA in target tissues of vehicle treated animals, and that positive responses can still be detected.
Preskusne raztopine
In the literature, the freezing of tissues has been described using different methods.
Pripravi se osnovna raztopina preskusne snovi z ustrezno koncentracijo.
However, currently there is no agreement on how to best freeze and thaw tissues, and how to assess whether a potentially altered response may affect the sensitivity of the test.
Po možnosti je treba osnovno raztopino pripraviti s preprostim mešanjem ali stresanjem preskusne snovi v vodi za redčenje.
Recent work demonstrates that the list of critical variables is expected to continue to become shorter and the parameters for critical variables more precisely defined (Guerard et al., 2014).
V nekaterih primerih je morda ustrezno uporabiti drugo možnost, in sicer sistem odmerjanja za desorpcijo iz trdne faze.
Lorenzo,Y. et al.
Na splošno se ne priporoča uporaba topil in disperzijskih sredstev (sredstev za raztapljanje) (prim. (25)); uporaba teh materialov pa je morda sprejemljiva, da se pridobi osnovna raztopina z ustrezno koncentracijo, vendar si je treba čim bolj prizadevati, da se taki materiali uporabljajo čim manj in da se ne preseže njihova kritična koncentracija tvorbe micel (kadar je to ustrezno).
, Comparison of Comet assay dose-response for ethyl methanesulfonate using freshly prepared versus cryopreserved tissues, Environmental and Molecular Mutagenesis, Vol.
Topila, ki se lahko uporabijo, so aceton, etanol, metanol, dimetilformamid in trietilen glikol; disperzijska sredstva, ki so se uporabila, so Tween 80, metilceluloza 0,01 % in HCO-40.
53/2, pp. 101-13. ’
Koncentracija topila v končnem preskusnem mediju mora biti enaka v vseh tretiranjih (tj. neodvisno od koncentracije preskusne snovi) in ne sme presegati ustreznih pragov toksičnosti, ki so bili določeni za topilo v preskusnih pogojih.
In Part C, Chapter C.13 is replaced by the following:
Najvišja raven je koncentracija, ki znaša 100 mg/l (ali 0,1 ml/l).
Bioaccumulation in Fish: Aqueous and Dietary Exposure
Koncentracija topila, ki znaša 100 mg/l, verjetno ne bo zelo spremenila najvišje raztopljene koncentracije preskusne snovi, ki jo je mogoče doseči v mediju (25).
This test method (TM) is equivalent to OECD test guideline (TG) 305 (2012).
Znano mora biti, koliko prispeva topilo (skupaj s preskusno snovjo) k skupni vsebnosti organskega ogljika v preskusni vodi.
The major goal of this revision of test method is two-fold.
Koncentracija skupnega organskega ogljika v preskusnih posodah ves čas preskusa ne sme preseči koncentracije organskega ogljika, ki izvira iz preskusne snovi, ter topila ali sredstva za raztapljanje [32], kadar se uporabi, za več kot 10 mg/l (± 20 %).