natgillin/translations-raw huggingface dataset:
any of the results are outside the distribution of the historical negative control data (e.g. Poisson-based 95 % control limits; see paragraph 52).
Netretirana kontrola
When all of these criteria are met, the test chemical is then considered able to induce chromosome breaks and/or gain or loss in this test system.
Ko se doda citohalazin B, ocena citotoksičnosti temelji na proliferacijskem indeksu citokinetskega bloka (CBPI) ali indeksu pomnoževanja (RI) (17) (69).
Recommendations for the most appropriate statistical methods can also be found in the literature (90) (91) (92).
CBPI označuje srednje število jeder na celico in se lahko uporabi za izračun celične proliferacije.
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered clearly negative if, in all experimental conditions examined (see paragraphs 36-39):
RI označuje relativno število celičnih ciklov na celico med obdobjem izpostavljenosti citohalazinu B v tretiranih kulturah v primerjavi s kontrolnimi kulturami in se lahko uporabi za izračun % citostaze:
all results are inside the distribution of the historical negative control data (e.g. Poisson-based 95 % control limits; see paragraph 52).
% citostaze = 100 – 100(CBPIT – 1) ÷ (CBPIC – 1)
The test chemical is then considered unable to induce chromosome breaks and/or gain or loss in this test system.
T kultura, tretirana s preskusno kemikalijo
There is no requirement for verification of a clear positive or negative response.
C kontrolna kultura
In case the response is neither clearly negative nor clearly positive as described above and/or in order to assist in establishing the biological relevance of a result, the data should be evaluated by expert judgement and/or further investigations.
št.celic z enim jedrom
Scoring additional cells (where appropriate) or performing a repeat experiment possibly using modified experimental conditions (e.g. concentration spacing, other metabolic activation conditions [i.e. S9 concentration or S9 origin]) could be useful.
št.celic z dvema jedroma
In rare cases, even after further investigations, the data set will not allow a conclusion of positive or negative, and will therefore be concluded as equivocal.
št.celic z več jedri
Test chemicals that induce micronuclei in the MNvit test may do so because they induce chromosome breakage, chromosome loss, or a combination of the two.
skupno število celic
Further analysis using anti-kinetochore antibodies, centromere specific in situ probes, or other methods may be used to determine whether the mechanism of micronucleus induction is due to clastogenic and/or aneugenic activity.
Tako je CPBI z vrednostjo 1 (vse celice imajo eno jedro) enak 100-odstotni citostazi.
reactivity of the test chemicals with the solvent/vehicle or cell culture media;
Citostaza = 100 – RI
solubility and stability of the test chemical in solvent, if known;
T tretirane kulture
measurement of pH, osmolality, and precipitate in the culture medium to which the test chemical was added, as appropriate.
C kontrolne kulture
justification for choice of solvent;
RI v višini 53 % torej pomeni, da se je v primerjavi s številom celic, ki so se delile v kontrolni kulturi in oblikovale celice z dvema jedroma in več jedri, v tretirani kulturi delilo le 53 % tega števila celic, kar pomeni, da je citostaza 47-odstotna.
percentage of solvent in the final culture medium
Ko se citohalazin B ne doda, se priporoča ocena citotoksičnosti na podlagi relativnega povečanja števila celic (RICC) ali relativne podvojitve populacije (RPD) (69), saj se pri obeh metodah upošteva delež celične populacije, ki se je delil.
type and source of cells used;
RICC ali RPD v višini 53 % torej pomeni, da je citotoksičnost/citostaza 47-odstotna.
suitability of the cell type used;
S proliferacijskim indeksom (PI) se lahko citotoksičnost oceni s štetjem števila klonov, ki imajo eno celico (cl1), dve celici (cl2), tri do štiri celice (cl4) ter pet do osem celic (cl8).
absence of mycoplasma, in case of cell lines;
PI se uporablja kot dragocen in zanesljiv parameter citotoksičnosti tudi za celične linije, gojene in vitro v odsotnosti citohalazina B (35) (36) (37) (38), ter se lahko šteje za uporaben dodaten parameter.
for cell lines, information on cell cycle length or proliferation index;
V vsakem primeru mora biti število celic pred tretiranjem v tretiranih in negativnih kontrolnih kulturah enako.
where lymphocytes are used, sex of blood donors, age and any relevant information on the donor, whole blood or separated lymphocytes, mitogen used;
Čeprav se je v preteklosti kot parameter citotoksičnosti uporabljalo relativno število celic (RCC) (tj. število celic v tretiranih kulturah/število celic v kontrolnih kulturah), to ni več priporočljivo, saj lahko podceni vrednost citotoksičnosti.
normal (negative control) cell cycle time;
Če se uporablja avtomatiziran sistem štetja, na primer pretočna citometrija, laserska vrstična citometrija ali analiza slike, se lahko število celic v formuli zamenja s številom jeder.
methods for the maintenance of cell cultures, for cell lines;
V negativnih kontrolnih kulturah mora biti podvojitev populacije ali indeks pomnoževanja združljiv z zahtevo po vzorčenju celic po tretiranju v času, ki ustreza približno 1,5 do 2,0 dolžine normalnega celičnega cikla.
modal number of chromosomes, for cell lines;
V delu B se dodajo naslednja poglavja:
Test Conditions:
Preobčutljivost kože in chemico: neposredni preskus reaktivnosti peptidov (DPRA)
identity of the cytokinesis blocking substance (e.g. cytoB), if used, and its concentration and duration of cell exposure;
Ta preskusna metoda je enakovredna Smernici za preskušanje OECD (TG) 442C (2015).
concentration of the test chemical expressed as a final concentration in the culture medium (e.g. μg or mg/mL, or mM of culture medium);
Povzročitelj preobčutljivosti kože je snov, ki povzroči alergijski odziv po stiku s kožo, kot je opredeljeno v globalno usklajenem sistemu Združenih narodov za razvrščanje in označevanje kemikalij (GHS ZN) (1) ter Uredbi (ES) št. 1272/2008 o razvrščanju, označevanju in pakiranju snovi ter zmesi (uredba CLP) [12].
rationale for the selection of concentrations and the number of cultures, including cytotoxicity data and solubility limitations;
Pri tej preskusni metodi se izvede postopek in chemico (Direct Peptide Reactivity Assay (DPRA) – neposredni preskus reaktivnosti peptidov), ki ga je treba uporabiti v podporo razlikovanju med povzročitelji preobčutljivosti kože in snovmi, ki niso povzročitelji preobčutljivosti kože, v skladu z GHS ZN in uredbo CLP.
composition of media, CO2 concentration, if applicable, humidity level;
Obstaja splošno soglasje glede ključnih bioloških dogodkov, ki so osnova za preobčutljivost kože.
concentration (and/or volume) of the solvent and test chemical added in the culture medium;
Obstoječe znanje o kemijskih in bioloških mehanizmih, povezanih s preobčutljivostjo kože, je povzeto v obliki poteka neželenega izida (Adverse Outcome Pathway – AOP) (2) od začetnega dogodka na molekulski ravni prek vmesnih dogodkov do škodljivega učinka, tj. alergijskega kontaktnega dermatitisa pri ljudeh ali kontaktne preobčutljivosti pri glodalcih.
incubation temperature and time;
Pri poteka neželenega izida preobčutljivosti kože je začetni dogodek na molekulski ravni kovalentna vezava elektrofilnih snovi na nukleofilne centre v beljakovinah kože.
positive and negative control chemicals, final concentrations, conditions and durations of treatment and recovery periods;
Lokalna analiza bezgavk pri miših (Local Lymph Node Assay – LLNA, PM B.42 (4)) in njeni dve neradioaktivni prilagoditvi, tj. LLNA: DA (PM B.50 (5)) in LLNA: BrdU-ELISA (PM B.51 (6)), ki vse ocenjujejo le indukcijski odziv, so bile prav tako sprejete, saj je njihova prednost v primerjavi s preskusi pa morskih prašičkih v tem, da upoštevajo dobrobit živali in zagotavljajo objektivne meritve v fazi indukcije preobčutljivosti kože.
methods of slide preparation and the staining technique used;
Pred kratkim pa sta se kot znanstveno veljavni za ocenjevanje nevarnosti kemikalij za preobčutljivost kože začeli šteti preskusni metodi in chemico ter in vitro, ki temeljita na mehanističnih merilih.
numbers of cells analysed;
Predlagano je, da bi DPRA kot začetni dogodek poteka neželenega izida preobčutljivosti kože na molekulski ravni, tj. reaktivnost beljakovin, obravnaval tako, da bi se reaktivnost preskusnih kemikalij količinsko opredelila glede na vzorčne sintetične peptide, ki vsebujejo lizin ali cistein (8).
methods, such as use of anti-kinetochore antibody or pan-centromeric specific probes, to characterise whether micronuclei contain whole or fragmented chromosomes, if applicable;
V virih poročajo o primerih uporabe podatkov iz preskusa DPRA v kombinaciji z drugimi informacijami (11) (12) (13) (14).
definition of acceptable cells for analysis;
Opredelitve pojmov so navedene v Dodatku 1.
in the absence of cyto B, the number of cells treated and the number of cells harvested for each culture in case of cell lines;
ZAČETNI PREUDARKI, UPORABNOST IN OMEJITVE
measurement of cytotoxicity used, e.g. CBPI or RI in the case of cytokinesis-block method; RICC or RPD when cytokinesis-block methods are not used; other observations if any (e.g. cell confluency, apoptosis, necrosis, metaphase counting, frequency of binucleated cells);
Korelacija med reaktivnostjo beljakovin in potencialom za povzročanje preobčutljivosti kože je dobro dokazana (15) (16) (17).
data on pH and osmolality of the treatment medium, if determined;
Vendar ker je vezava na beljakovine le en ključni dogodek, čeprav je začetni dogodek poteka neželenega izida preobčutljivosti kože na molekulski ravni, informacije o reaktivnosti beljakovin, pridobljene s preskusnimi in nepreskusnimi metodami, kot take morda ne zadostujejo za ugotovitev, da kemikalija nima potenciala za povzročanje preobčutljivosti kože.
distribution of mono-, bi-, and multi-nucleate cells if a cytokinesis block method is used;
Zato je treba podatke, pridobljene s to preskusno metodo, obravnavati v okviru celostnih pristopov, kot je IATA, in jih združiti z drugimi dopolnilnimi informacijami, ki izhajajo na primer iz poskusov in vitro, s katerimi se obravnavajo drugi ključni dogodki poteka neželenega izida preobčutljivosti kože, ter nepreskusnimi metodami, vključno z navzkrižnim branjem pri podobnih kemijskih snoveh.
number of cells with micronuclei given separately for each treated and control culture, and defining whether from binucleate or mononucleate cells, where appropriate;
Ta preskusna metoda se lahko v kombinaciji z drugimi dopolnilnimi informacijami uporabi v podporo razlikovanju med povzročitelji preobčutljivosti kože (tj. kategorija 1 po GHS ZN/uredbi CLP) in snovmi, ki niso povzročitelji preobčutljivosti kože, v okviru IATA.
historical negative (solvent) and positive control data, with ranges, means and standard deviation and 95 % control limits for the distribution, as well as the number of data;
Te preskusne metode ni mogoče uporabiti samostojno niti za razvrstitev povzročiteljev preobčutljivosti kože v podkategoriji 1A in 1B, kot sta opredeljeni v GHS ZN/uredbi CLP, niti za napoved stopnje povzročanja preobčutljivosti v okviru odločanja o oceni varnosti.
statistical analysis; p-values if any.
Vendar pa je, odvisno od regulativnega okvira, pozitiven rezultat pri preskusu DPRA kot tak mogoče uporabiti za razvrstitev kemikalije v kategorijo 1 po GHS ZN/uredbi CLP.
Chapter B.10 of this Annex: In Vitro Mammalian Chromosome Aberration Test,.
Izkazalo se je, da se preskus DPRA lahko prenese v laboratorije, ki imajo izkušnje z analizo tekočinske kromatografije visoke ločljivosti (high-performance liquid chromatography – HPLC).
In vitro micronucleus assay with Chinese hamster V79 cells — results of a collaborative study with in situ exposure to 26 chemical substances.
Pri preskusu DPRA je bolj verjetno, da se podceni vrednost kemikalij z nizko do zmerno stopnjo povzročanja preobčutljivosti kože (tj. podkategorija 1B po GHS ZN/uredbi CLP) kot pa kemikalij z visoko stopnjo povzročanja preobčutljivosti kože (tj. podkategorija 1A po GHS ZN/uredbi CLP) (18) (19).
A protocol for the in vitro micronucleus test, I. Contributions to the development of a protocol suitable for regulatory submissions from an examination of 16 chemicals with different mechanisms of action and different levels of activity.
Za zdaj so na voljo omejene informacije o uporabnosti preskusa DPRA za zmesi z znano sestavo (18) (19).
Evaluation of different cytotoxic and cytostatic measures for the in vitro micronucleus test (MNVit): Introduction to the collaborative trial.
Preskus DPRA se kljub temu šteje kot tehnično uporaben za preskušanje snovi z več sestavinami in zmesi z znano sestavo (glej odstavek 18).
Comparison of four different treatment conditions of extended exposure in the in vitro micronucleus assay using TK6 lymphoblastoid cells.
Preden se ta preskusna metoda uporabi na zmesi, da bi se pridobili podatki za predvideni regulativni namen, je treba proučiti, ali in zakaj lahko zagotovi ustrezne rezultate za navedeni namen.
Statement by the European Centre for the Validation of Alternative Methods (ECVAM) Scientific Advisory Committee (ESAC) on the scientific validity of the in vitro micronucleus test as an alternative to the in vitro chromosome aberration assay for genotoxicity testing.
Kadar obstaja regulativna zahteva za preskušanje zmesi, taki premisleki niso potrebni.
ESAC 25th meeting, 16-17 November 2006, Available at: http://ecvam.jrc.it/index.htm.
Sedanjega modela za napovedovanje zaradi določenega molskega razmerja preskusne kemikalije in peptida ni mogoče uporabiti za kompleksne zmesi z neznano sestavo ali snovi z neznano ali spremenljivo sestavo, kompleksne reakcijske produkte ali biološke materiale (npr. snovi UVCB).
Available at: http://ecvam.jrc.it/index.htm.
Za to bo treba razviti nov model za napovedovanje, ki temelji na gravimetričnem pristopu.
“A safe substitute for Polychlorinated Biphenyls as an Inducer of Metabolic Activation Systems”, in In Vitro Metabolic Activation in Mutagenesis Testing. de Serres, F.J. et al.
Kadar se lahko dokaže, da preskusne metode ni mogoče uporabljati za druge posebne kategorije kemikalij, se ta preskusna metoda zanje ne sme uporabiti.
(eds), Elsevier, North-Holland, pp. 85-88.
Ta preskusna metoda je metoda in chemico, ki ne zajema metabolnega sistema.
Available at: http://www.pops.int/
Z njo ni mogoče zaznati kemikalij, pri katerih je za prikaz njihovega potenciala za povzročanje preobčutljivosti kože potrebna encimska bioaktivacija (tj. pro-haptenov).
“CHO/HGPRT Mutation Assay: Evaluation of Gases and Volatile Liquids”, in Genotoxic Effects of Airborne Agents.
Poroča se, da se s preskusno metodo v nekaterih primerih pravilno zaznajo kemikalije, ki postanejo povzročiteljice preobčutljivosti kože po abiotski pretvorbi (tj. pre-hapteni) (18).
Tice, R.R., D.L.
Glede na navedeno je treba negativne rezultate, pridobljene s preskusno metodo, razlagati v okviru navedenih omejitev in v povezavi z drugimi viri informacij v okviru IATA.
Corrigendum to “Report from the in vitro micronucleus assay working group”.
Pri preskusnih kemikalijah, ki se na peptid ne vežejo kovalentno, temveč spodbujajo njegovo oksidacijo (tj. dimerizacija cisteina), se lahko preceni vrednost izgubljanja peptidov, zaradi česar so možni lažni pozitivni rezultati in/ali razvrstitev v višji razred reaktivnosti (glej odstavka 29 in 30).
OECD Environment, Health and Safety Publications (EHS), Series on testing and assessment, No. 198, OECD Publishing, Paris.
Kot je navedeno, preskus DPRA podpira razlikovanje med povzročitelji preobčutljivosti kože in snovmi, ki niso povzročitelji preobčutljivosti kože.
“In vitro micronucleus test”, in Encyclopedia of Biopharmaceutical Statistics, 2nd ed.
Kadar se uporablja v celostnih pristopih, kot je IATA, pa lahko prispeva tudi k oceni stopnje povzročanja preobčutljivosti kože (11).
Chow, S. (ed.), Marcel Dekker, Inc.
Vendar je potrebno nadaljnje delo, ki po možnosti temelji na podatkih za ljudi, da se določi, kako bi se lahko na podlagi rezultatov preskusa DPRA ocenila stopnja povzročanja preobčutljivosti.
New York, pp. 463-467.
Preskus DPRA je metoda in chemico, s katero se količinsko opredeli preostala koncentracija peptida, sestavljenega iz cisteina ali lizina, po 24-urni inkubaciji s preskusno kemikalijo pri 25 ± 2,5 °C.
Analysis of Data from in vitro Cytogenetic Assays. in Statistical Evaluation of Mutagenicity Test Data, Kirkland, D.J.
Sintetični peptidi vsebujejo fenilalanin, ki pomaga pri odkrivanju.
(ed), Cambridge University Press, Cambridge, pp. 141-154.
Relativna koncentracija peptidov se meri s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti (HPLC) z gradientno elucijo in UV-detekcijo pri 220 nm.
Aneugen
Nato se izračunajo odstotne vrednosti izgube peptidov, sestavljenih iz cisteina in lizina, ter uporabijo v napovednem modelu (glej odstavek 29), kar omogoča razvrstitev preskusne kemikalije v enega izmed štirih razredov reaktivnosti, s katerimi se podpira razlikovanje med povzročitelji preobčutljivosti in snovmi, ki niso povzročitelji preobčutljivosti.
any chemical or process that, by interacting with the components of the mitotic and meiotic cell division cycle apparatus, leads to aneuploidy in cells or organisms.
Pred redno uporabo metode, opisane pri tej preskusni metodi, morajo laboratoriji dokazati tehnično usposobljenost, tako da uporabijo deset snovi za preverjanje usposobljenosti, navedenih v Dodatku 2.
programmed cell death characterised by a series of steps leading to the disintegration of cells into membrane-bound particles that are then eliminated by phagocytosis or by shedding.
Ta preskusna metoda temelji na protokolu DPRA DB-ALM št. 154 (20), tj. protokolu, ki se uporablja v validacijski študiji, ki jo usklajuje EURL ECVAM.
the increase in cell number as a result of mitotic cell division.
Priporočljivo je, da se ta protokol uporablja pri izvajanju in uporabi te metode v laboratoriju.
the DNA region of a chromosome where both chromatids are held together and on which both kinetochores are attached side-to-side.
V nadaljevanju so opisani glavni elementi in postopki v preskusu DPRA.
refers to final concentrations of the test chemical in the culture medium.
V primeru uporabe alternativnega sistema HPLC je treba prikazati, da je enakovreden validiranemu sistemu v protokolu DB-ALM (npr. s preskušanjem snovi za preverjanje usposobljenosti iz Dodatka 2).
any chemical or event which causes structural chromosomal aberrations in populations of cells or eukaryotic organisms.
Priprava peptidov, sestavljenih iz cisteina ali lizina
Cytokinesis
Tik pred inkubacijo s preskusno kemikalijo je treba sveže pripraviti osnovne raztopine cisteina (Ac-RFAACAA-COOH) in lizina (Ac-RFAAKAA-COOH), ki vsebujejo sintetične peptide, katerih stopnja čistosti je višja od 85 % in po možnosti v razponu od 90 do 95 %.
the process of cell division immediately following mitosis to form two daughter cells, each containing a single nucleus.
Končna koncentracija peptida, sestavljenega iz cisteina, mora biti 0,667 mM v fosfatnem pufru z vrednostjo pH 7,5, končna koncentracija peptida, sestavljenega iz lizina, pa 0,667 mM v pufru amonijevega acetata z vrednostjo pH 10,2.
Cytokinesis-Block Proliferation index (CBPI)
Pri vseh ponovljenih vzorcih, analiziranih v isti ponovitvi, je treba uporabiti enake osnovne raztopine peptidov, sestavljenih iz cisteina in lizina.
the proportion of second-division cells in the treated population relative to the untreated control (see Appendix 2 for formula).
Priporočljivo je, da se pred uporabo dokaže ustrezna topnost posameznih serij peptidov.
Cytostasis
Priprava preskusne kemikalije
inhibition of cell growth (see Appendix 2 for formula).
Pred izvedbo preskusa je treba oceniti topnost preskusne kemikalije v ustreznem topilu po postopku solubilizacije, opisanem v protokolu DPRA DB-ALM (20).
For the assays covered in this test method performed in the presence of cytochalasin B, cytotoxicity is identified as a reduction in cytokinesis-block proliferation index (CBPI) or Replication Index (RI) of the treated cells as compared to the negative control (see paragraph 26 and Appendix 2)
Ustrezno topilo povsem raztopi preskusno kemikalijo.
For the assays covered in this test method performed in the absence of cytochalasin B, cytotoxicity is identified as a reduction in relative population doubling (RPD) or relative increase in cell count (RICC) of the treated cells as compared to the negative control (see paragraph 27 and Appendix 2).
Ker je pri preskusu DPRA preskusna kemikalija inkubirana v velikem presežku s peptidi, sestavljenimi iz cisteina ali lizina, vizualni pregled nastajanja jasne raztopine zadostuje, da se ugotovi, ali je preskusna kemikalija (in vse njene sestavine v primeru preskušanja snovi z več sestavinami ali zmesi) raztopljena.
Interphase cells
Ustrezna topila so acetonitril, voda, zmes vode in acetonitrila v razmerju 1: 1, izopropanol, aceton ali zmes acetona in acetonitrila v razmerju 1: 1.
cells not in the mitotic stage.
Uporabijo se lahko tudi druga topila, če ne vplivajo na stabilnost peptidov, kar se nadzoruje z referenčnimi kontrolnimi vzorci C (tj. vzorci, sestavljenimi iz zgolj peptidov, raztopljenih v ustreznem topilu; glej Dodatek 3).
a protein-containing structure that assembles at the centromere of a chromosome to which spindle fibres associate during cell division, allowing orderly movement of daughter chromosomes to the poles of the daughter cells.
Če preskusna kemikalija ni topna v nobenem od teh topil, jo je treba kot zadnjo možnost poskusiti raztopiti v 300 μL dimetil sulfoksida (DMSO) in nastalo raztopino razredčiti z 2700 μL acetonitrila; če preskusna kemikalija ni topna v tej zmesi, je treba poskusiti enako količino preskusne kemikalije raztopiti v 1500 μL DMSO in nastalo raztopino razredčiti z 1500 μL acetonitrila.
small nuclei, separate from and additional to the main nuclei of cells, produced during telophase of mitosis or meiosis by lagging chromosome fragments or whole chromosomes.
Preskusno kemikalijo je treba vnaprej stehtati v steklenih vialah in tik pred preskušanjem raztopiti z ustreznimi topili, da se pripravi 100 mM raztopina.
the ratio of cells in metaphase divided by the total number of cells observed in a population of cells; an indication of the degree of cell proliferation of that population.
Za zmesi in snovi z več sestavinami z znano sestavo je treba določiti enotno čistost, tako da se seštejejo deleži njihovih sestavin (razen vode), enotno navidezno molekulsko maso pa je treba določiti tako, da se upoštevajo posamezne molekulske mase vsake sestavine v zmesi (razen vode) in njihova posamezna razmerja.
Non-disjunctio
Dobljena čistost in navidezna molekulska masa se nato uporabita pri izračunu teže preskusne kemikalije, ki je potrebna za pripravo 100 mM raztopine.
failure of paired chromatids to disjoin and properly segregate to the developing daughter cells, resulting in daughter cells with abnormal numbers of chromosomes.
Za polimere, pri katerih prevladujoče molekulske mase ni mogoče določiti, se lahko za pripravo 100 mM raztopine uporabi molekulska masa monomera (ali navidezna molekulska masa različnih monomerov, ki sestavljajo polimer).
numerical chromosome aberrations in cells or organisms involving entire set(s) of chromosomes, as opposed to an individual chromosome or chromosomes (aneuploidy).
Pri preskušanju zmesi, snovi z več sestavinami ali polimerov z znano sestavo pa je treba razmisliti tudi o preskušanju čiste kemikalije.
Proliferation Index (PI)
Pri tekočinah je treba preskusiti čisto kemikalijo kot tako brez predhodnega razredčenja, tako da se s peptidi, sestavljenimi iz cisteina, inkubira v molskem razmerju 1: 10, s peptidi, sestavljenimi iz lizina, pa v molskem razmerju 1: 50.
method for cytotoxicity measurement when cytoB is not used (see Appendix 2 for formula).
Pri trdnih snoveh je treba preskusno kemikalijo raztopiti do največje možne topne koncentracije v istem topilu, kot je bilo uporabljeno za pripravo navidezne 100 mM raztopine.
Relative Increase in Cell Count (RICC)
Nato jo je treba preskusiti kot tako brez dodatnega razredčenja, tako da se s peptidi, sestavljenimi iz cisteina, inkubira v razmerju 1: 10, s peptidi, sestavljenimi iz lizina, pa v razmerju 1: 50.