natgillin/translations-raw huggingface dataset:
This test method is equivalent to OECD Test Guideline (TG) 221 (2006).
Če se uporabi topilo ali disperzijsko sredstvo, je treba končno koncentracijo te snovi navesti v poročilu in jo ohranjati na najnižji ravni (≤ 100 μl/l), in vse tretirane in kontrolne skupine morajo vsebovati enako koncentracijo topila ali disperzijskega sredstva.
It is designed to assess the toxicity of chemicals to freshwater aquatic plants of the genus Lemna (duckweed).
Več smernic o uporabi disperzijskih sredstev je na voljo v (8).
It is based on existing methods (1)(2)(3)(4)(5)(6) but includes modifications of those methods to reflect recent research and consultation on a number of key issues.
Preskusne in kontrolne skupine
This Test Method has been validated by an international ring-test (7).
Pri izbiri primernih preskusnih koncentracij pripomore predhodno poznavanje strupenosti preskusne kemikalije za vodno lečo, npr. podatki iz preskusa za določanje območja delovanja.
This test method describes toxicity testing using Lemna gibba and Lemna minor, both of which have been extensively studied and are the subject of the standards referred to above.
V dokončnem preskusu strupenosti naj bi bilo običajno najmanj pet preskusnih koncentracij, ki so urejene v geometrijski vrsti.
The taxonomy of Lemna spp. is difficult, being complicated by the existence of a wide range of phenotypes.
Geometrijsko razmerje med preskusnimi koncentracijami naj po možnosti ne presega 3,2, vendar je mogoče uporabiti večje vrednosti, če je krivulja koncentracija-odziv ravna.
Although genetic variability in the response to toxicants can occur with Lemna, there are currently insufficient data on this source of variability to recommend a specific clone for use with this test method.
Če se uporabi manj kot pet koncentracij, je treba to utemeljiti.
It should be noted that the test is not conducted axenically but steps are taken at stages during the test procedure to keep contamination by other organisms to a minimum.
Za vsako preskusno koncentracijo je treba uporabiti najmanj tri ponovitve.
Details of testing with renewal (semi-static and flow-through) and without renewal (static) of the test solution are described.
Pri določevanju območja preskusnih koncentracij (pri ugotavljanju območja in/ali v dokončnem preskusu strupenosti) je treba proučiti naslednje možnosti:
Depending on the objectives of the test and the regulatory requirements, it is recommended to consider the application of semi-static and flow through methods, e.g. for chemicals that are rapidly lost from solution as a result of volatilisation, photodegradation, precipitation or biodegradation.
Za določitev ECx z ustrezno ravnijo zaupanja morajo preskusne koncentracije oklepati vrednost ECx.
Further guidance is given in (8).
Če, na primer, ocenjujemo EC50, mora biti najvišja preskusna koncentracija višja od vrednosti EC50.
Exponentially growing plant cultures of the genus Lemna are allowed to grow as monocultures in different concentrations of the test chemical over a period of seven days.
Če vrednost EC50 leži zunaj območja preskusnih koncentracij, bodo povezani intervali zaupanja veliki in pravilna ocena statističnega ujemanja modela morda ne bo možna.
The objective of the test is to quantify chemical-related effects on vegetative growth over this period based on assessments of selected measurement variables.
Če je cilj določitev vrednosti LOEC/NOEC, mora biti najnižja preskusna koncentracija dovolj nizka, da rast ni bistveno manjša od rasti v kontrolni skupini.
Frond number is the primary measurement variable.
Poleg tega mora biti najvišja preskusna koncentracija dovolj visoka, da je rast bistveno manjša od rasti v kontrolni skupini.
At least one other measurement variable (total frond area, dry weight or fresh weight) is also measured, since some chemicals may affect other measurement variables much more than frond numbers.
V nasprotnem primeru bo treba preskus ponoviti z drugačnim razponom koncentracij (razen če je najvišja koncentracija na meji topnosti ali najvišji zahtevani mejni koncentraciji, npr. 100 mg/l).
To quantify chemical-related effects, growth in the test solutions is compared with that of the controls and the concentration bringing about a specified x % inhibition of growth (e.g. 50 %) is determined and expressed as the ECx (e.g. EC50)
Vsak preskus mora vključevati kontrolne skupine, ki so sestavljene iz enakega hranilnega gojišča, števila listov in kolonij, okoljskih pogojev in postopkov, kot se uporabljajo za preskusne posode, vendar brez preskusne kemikalije.
The test endpoint is inhibition of growth, expressed as logarithmic increase in measurement variable (average specific growth rate) during the exposure period.
Če se uporablja pomožno topilo ali disperzijsko sredstvo, je treba vključiti dodatno tretiranje kontrolne skupine s topilom/disperzijskim sredstvom, ki je prisotno v enaki koncentraciji kot v posodah s preskusno kemikalijo.
An additional response variable used in this Test Method is yield, which may be needed to fulfil specific regulatory requirements in some countries.
Število ponovitvenih kontrolnih posod (in posod s topilom, če je smiselno) mora biti najmanj enako številu posod za vsako preskusno koncentracijo, idealno pa je, če je dvakrat večje.
It is defined as measurement variables at the end of the exposure period minus the measurement variables at the start of the exposure period.
Če določevanje vrednosti NOEC ni zahtevano, se načrt preskusa lahko spremeni tako, da se poveča število koncentracij in zmanjša število ponovitev na koncentracijo.
An analytical method, with adequate sensitivity for quantification of the chemical in the test medium, should be available.
Kljub temu morajo imeti kontrolne skupine najmanj tri ponovitve.
Information on the test chemical which may be useful in establishing the test conditions includes the structural formula, purity, water solubility, stability in water and light, pKa, Kow, vapour pressure and biodegradability.
Izpostavljenost
Water solubility and vapour pressure can be used to calculate Henry's Law constant, which will indicate if significant losses of the test chemical during the test period are likely.
Iz inokulacijske kulture se prenesejo kolonije, ki obsegajo od 2 do 4 vidne liste, in naključno določijo preskusnim posodam v aseptičnih pogojih.
This will help indicate whether particular steps to control such losses should be taken.
Vsaka preskusna posoda mora vsebovati skupno od 9 do 12 listov.
Where information on the solubility and stability of the test chemical is uncertain, it is recommended that these be assessed under the conditions of the test, i.e. growth medium, temperature, lighting regime to be used in the test.
Število listov in kolonij mora biti v vsaki preskusni posodi enako.
When pH control of the test medium is particularly important, e.g. when testing metals or chemicals which are hydrolytically unstable, the addition of a buffer to the growth medium is recommended (see paragraph 21).
Izkušnje, pridobljene s to metodo, in podatki iz krožnih preskusov kažejo, da tri ponovitve na tretiranje, pri čemer vsaka ponovitev na začetku vsebuje od 9 do 12 listov, zadostujejo za odkritje razlike v rasti med tretiranji, ki znaša približno 4–7 % zaviranja, izračunano na podlagi hitrosti rasti (10–15 % zaviranja, izračunano na podlagi prirasti) (7).
Further guidance for testing chemicals with physical-chemical properties that make them difficult to test is provided in (8).
Za inkubator je treba pripraviti naključno porazdelitev položajev preskusnih posod, da se čim bolj zmanjša vpliv prostorskih razlik v temperaturi in obsevanosti.
For the test to be valid, the doubling time of frond number in the control must be less than 2,5 days (60 h), corresponding to approximately a seven-fold increase in seven days and an average specific growth rate of 0,275 d– 1.
Pri beleženju opažanj se zahteva tudi blokovska zasnova oz. naključna prerazporeditev (ali pogostejše premeščanje) posod.
Using the media and test conditions described in this Test Method, this criterion can be attained using a static test regime (5).
Če predhodni preskus obstojnosti kaže, da koncentracije preskusne kemikalije ni možno ohranjati (tj. izmerjena koncentracija pade pod 80 % začetno izmerjene koncentracije) v obdobju trajanja preskusa (7 dni), je priporočljiv polstatični režim preskusa.
It is also anticipated that this criterion will be achievable under semi-static and flow-through test conditions.
V tem primeru je treba kolonije najmanj dvakrat med preskusom (npr. 3. in 5. dan) izpostaviti sveže pripravljenim preskusnim in kontrolnim raztopinam.
Calculation of the doubling time is shown in paragraph 49.
Pogostost izpostavitve svežemu mediju je odvisna od obstojnosti preskusne kemikalije:
Reference chemical(s), such as 3,5-dichlorophenol used in the international ring test (7), may be tested as a means of checking the test procedure.
za ohranjanje približno konstantnih koncentracij zelo neobstojnih ali hlapnih kemikalij bo potrebna večja pogostnost.
It is advisable to test a reference chemical at least twice a year or, where testing is carried out at a lower frequency, in parallel to the determination of the toxicity of a test chemical.
V določenih okoliščinah bo morda treba uporabiti pretočni postopek (8)(10).
All equipment in contact with the test media should be made of glass or other chemically inert material.
Izpostavitev s foliarnim nanosom (pršenjem) ni obravnavana v tej preskusni metodi;
Glassware used for culturing and testing purposes should be cleaned of chemical contaminants that might leach into the test medium and should be sterile.
namesto tega glej (11).
The test vessels should be wide enough for the fronds of different colonies in the control vessels to grow without overlapping at the end of the test.
Pogoji inkubacije
It does not matter if the roots touch the bottoms of the test vessels, but a minimum depth of 20 mm and minimum volume of 100 ml in each test vessel is advised.
Uporabiti je treba neprekinjeno toplo ali hladno belo fluorescentno osvetlitev, da je obsevanost v območju 85–135 μE · m– 2s– 1, če se meri v fotosintetsko aktivnem sevanju (400–700 nm) v točkah, ki so enako oddaljene od vira svetlobe kot listi vodne leče (enakovredno 6500 – 10000 luksom).
The choice of test vessels is not critical as long as these requirements are met.
Razlike v izbrani obsevanosti prek preskusnega območja ne smejo preseči ± 15 %.
Glass beakers, crystallising dishes or glass petri dishes of appropriate dimensions have all proved suitable.
Metoda zaznavanja in merjenja svetlobe, zlasti vrsta tipala, vpliva na izmerjeno vrednost.
Test vessels must be covered to minimise evaporation and accidental contamination, while allowing necessary air exchange.
Sferična tipala (ki se odzivajo na svetlobo iz vseh kotov nad in pod ravnino merjenja) in ‚kosinusnih‘ tipal (ki se odzivajo na svetlobo iz vseh kotov nad ravnino merjenja) so bolj primerna od enosmernih tipal in dajejo višje odčitke v primeru več točkovnih virov svetlobe, ki so takšne vrste, kot je opisano tu.
Suitable test vessels, and particularly covers, must avoid shadowing or changes in the spectral characteristics of light.
Temperatura v preskusnih posodah mora biti 24 °C ± 2 °C.
The cultures and test vessels should not be kept together.
Vendar odstopanje za več kot 1,5 enote ne razveljavi preskusa, če se dokaže, da preskus ustreza merilom za veljavnost.
This is best achieved using separate environmental growth chambers, incubators, or rooms.
Posebno pozornost je treba posvetiti premiku vrednosti pH v posebnih primerih, ko se preskušajo neobstojne kemikalije ali kovine.
Illumination and temperature must be controllable and maintained at a constant level (see paragraphs 35-36).
Glej (8) za dodatne smernice.
Test organism
Trajanje
The organism used for this test is either Lemna gibba or Lemna minor.
Preskus se prekine 7 dni po prenosu rastlin v preskusne posode.
Short descriptions of duckweed species that have been used for toxicity testing are given in Appendix 2.
Ob začetku preskusa se prešteje in zabeleži število listov v preskusnih posodah, pri čemer je treba zajeti štrleče, razločno vidne liste.
Plant material may be obtained from a culture collection, another laboratory or from the field.
Število listov, ki so videti normalni ali nenormalni, je treba določiti na začetku preskusa, najmanj vsake 3 dni v obdobju izpostavljanja (tj. najmanj dvakrat v 7-dnevnem obdobju) in ob prekinitvi preskusa.
If collected from the field, plants should be maintained in culture in the same medium as used for testing for a minimum of eight weeks prior to use.
Zabeležiti je treba spremembe v razvoju rastline, npr. v velikosti in videzu listov, indikacije nekroze, kloroze ali grbavosti, razpadanje kolonij ali izgubo zmožnosti plavanja na gladini ter spremembe dolžine korenin in videza.
Field sites used for collecting starting cultures must be free of obvious sources of contamination.
Zabeležiti je treba tudi bistvene značilnosti preskusnega medija (npr. prisotnost neraztopljenih snovi, rast alg v preskusni posodi).
If obtained from another laboratory or a culture collection they should be similarly maintained for a minimum of three weeks.
Poleg določitev števila listov med preskusom je treba določiti tudi učinke preskusne kemikalije na eno (ali več) od naslednjih merjenih spremenljivk:
The source of plant material and the species and clone (if known) used for testing should always be reported.
skupno površino listov,
Monocultures, that are visibly free from contamination by other organisms such as algae and protozoa, should be used.
suho težo,
Healthy plants of L. minor will consist of colonies comprising between two and five fronds whilst healthy colonies of L. gibba may contain up to seven fronds.
svežo težo.
The quality and uniformity of the plants used for the test will have a significant influence on the outcome of the test and should therefore be selected with care.
Skupna površina listov ima prednost v tem, da jo je mogoče določiti za vsako preskusno in kontrolno posodo na začetku preskusa, med preskusom in na koncu preskusa.
Young, rapidly growing plants without visible lesions or discoloration (chlorosis) should be used.
Suho ali svežo težo je treba določiti na začetku preskusa iz vzorca inokulacijske kulture, ki je reprezentativen za material, s katerim se preskus začne, in na koncu preskusa z rastlinskim materialom iz vsake preskusne in kontrolne posode.
Good quality cultures are indicated by a high incidence of colonies comprising at least two fronds.
Če se površina listov ne izmeri, ima suha teža prednost pred svežo težo.
A large number of single fronds are indicative of environmental stress, e.g. nutrient limitation, and plant material from such cultures should not be used for testing.
Skupna površina listov, suha teža in sveža teža se lahko izračunajo po naslednjih postopkih:
Cultivation
Skupna površina listov:
To reduce the frequency of culture maintenance (e.g. when no Lemna tests are planned for a period), cultures can be held under reduced illumination and temperature (4 — 10 °C).
skupna površina listov vseh kolonij se lahko določi s slikovno analizo.
Details of culturing are given in Appenxix 3.
Obris preskusne posode in rastlin je mogoče zajeti z videokamero (npr. z osvetlitvijo posode od spodaj) in nastalo sliko nato digitalizirati.
Obvious signs of contamination by algae or other organisms may require surface sterilisation of a sub-sample of Lemna fronds, followed by transfer to fresh medium (see Appendix 3).
S kalibracijo s ploskimi oblikami znane površine je mogoče določiti skupno površino listov v preskusni posodi.
In this eventuality the remaining contaminated culture should be discarded.
Paziti je treba, da se izključijo motnje, ki jih povzroča rob preskusne posode.
At least seven days before testing, sufficient colonies are transferred aseptically into fresh sterile medium and cultured for 7 - 10 days under the conditions of the test.
Druga možnost, ki je delovno zahtevnejša, pa je fotografiranje preskusnih posod in rastlin, izrezovanje nastalih obrisov kolonij in določevanje njihove površine z analizatorjem površine listov ali milimetrskim papirjem.
Test medium
Druge tehnike (npr. razmerje teže papirja s površino obrisa kolonij in površine merske enote) so lahko tudi primerne.
Different media are recommended for Lemna minor and Lemna gibba, as described below.
Suha teža:
Careful consideration should be given to the inclusion of a pH buffer in the test medium (MOPS (4-morpholinepropane sulphonic acid, CAS No: 1132-61-2) in L. minor medium and NaHCO3 in L. gibba medium) when it is suspected that it might react with the test chemical and influence the expression of its toxicity.
zberejo se vse kolonije iz vsake preskusne posode in se sperejo z destilirano ali deionizirano vodo.
Steinberg Medium (9) is also acceptable as long as the validity criteria are met.
Kolonije se popivnajo, da se odstrani odvečna voda.
A modification of the Swedish standard (SIS) Lemna growth medium is recommended for culturing and testing with L. minor.
Nato se posušijo pri 60 °C do konstantne teže.
The composition of this medium is given in Appendix 4.
Vključiti je treba vse fragmente korenin.
The growth medium, 20X — AAP, as described in Appendix 4, is recommended for culturing and testing with L. gibba.
Suho težo je treba izraziti z natančnostjo najmanj 0,1 mg.
Steinberg medium, as described in Appendix 4, is also suitable for L. minor, but may also be used for L. gibba as long as the validity criteria are met.
Sveža teža:
Test solutions
vse kolonije se prenesejo v zatehtane epruvete iz polistirena (ali iz drugega inertnega materiala) z majhnimi (1 mm) odprtinami v zaobljenem dnu.
Test solutions are usually prepared by dilution of a stock solution.
Epruvete se nato pri sobni temperaturi 10 minut centrifugirajo pri 3000 vrtljajih/minuto.
Stock solutions of the test chemical are normally prepared by dissolving the chemical in growth medium.
Epruvete, ki vsebujejo sedaj posušene kolonije, se ponovno stehtajo, sveža teža pa se izračuna z odštevanjem mase prazne epruvete.
The highest tested concentration of the test chemical should not normally exceed the water solubility of the chemical under the test conditions.
Pogostost meritev in analitskih določitev
It should be noted however that Lemna spp. float on the surface and may be exposed to chemicals that collects at the water-air interface (e.g. poorly water-soluble or hydrophobic chemicals or surface-active chemicals).
Če se uporabi statična zasnova preskusa, je treba na začetku in na koncu preskusa izmeriti vrednost pH vsake obdelave.
Under such circumstances exposure will result from material other than in solution and test concentrations may, depending on the characteristics of the test chemical, exceed water solubility.
Če se uporabi polstatična zasnova preskusa, je treba vrednost pH izmeriti za vsako serijo ‚sveže‘ preskusne raztopine pred obnovitvijo in za ustrezno ‚iztrošeno‘ raztopino.
For test chemicals of low water solubility it may be necessary to prepare a concentrated stock solution or dispersion of the chemical using an organic solvent or dispersant in order to facilitate the addition of accurate quantities of the test chemical to the test medium and aid in its dispersion and dissolution.
Obsevanost je treba meriti v rastni komori, inkubatorju ali prostoru v točkah, ki so enako oddaljene od vira svetlobe kot listi vodne leče.
Every effort should be made to avoid the use of such materials.
Obsevanost je treba izmeriti najmanj enkrat med preskusom.
There should be no phytotoxicity resulting from the use of auxiliary solvents or dispersants.
Najmanj dnevno je treba beležiti temperaturo medija v nadomestni posodi, ki je v enakih pogojih v rastni komori, inkubatorju ali sobi.
For example, commonly used solvents which do not cause phytotoxicity at concentrations up to 100 μl/l include acetone and dimethylformamide.
Med preskusom se v primernih časovnih razmikih določajo koncentracije preskusne kemikalije.
If a solvent or dispersant is used, its final concentration should be reported and kept to a minimum (≤ 100 μl/l), and all treatments and controls should contain the same concentration of solvent or dispersant.
V statičnih preskusih je treba določiti koncentracije najmanj na začetku in na koncu preskusa.
Further guidance on the use of dispersants is given in (8).
V polstatičnih preskusih se ne pričakuje, da bo koncentracija preskusne kemikalije ostala v območju ± 20 % nominalne koncentracije, zato je treba analizirati vse sveže pripravljene preskusne raztopine in enake raztopine pri vsaki obnovitvi (glej odstavek 33).
Test and control groups
Pri tistih preskusih, v katerih izmerjena začetna koncentracija preskusne kemikalije ni v območju ± 20 % nominalne koncentracije, vendar obstajajo zadostni dokazi, da so začetne koncentracije ponovljive in obstojne (tj. v območju 80–120 % začetne koncentracije), se lahko kemijske določitve opravijo le na najvišji in najnižji koncentraciji.
Prior knowledge of the toxicity of the test chemical to Lemna, e.g. from a range-finding test, will help in selecting suitable test concentrations.
V vseh primerih je treba določitev koncentracije preskusne kemikalije pred obnovitvijo opraviti le za eno ponovitev vsake preskusne koncentracije (ali združene vsebine posod posameznih ponovitev).
In the definitive toxicity test, there should normally be at least five test concentrations arranged in a geometric series.
Če se uporabi pretočni preskus, je treba izvajati podoben režim vzorčenja, kakor je opisan za polstatične preskuse, vključno za analizo na začetku, na sredini in na koncu preskusa, če je smiselno.
Preferably the separation factor between test concentrations should not exceed 3.2, but a larger value may be used where the concentration-response curve is flat.
Vendar meritve ‚iztrošenih‘ raztopin v tem primeru niso primerne.
Justification should be provided if fewer than five concentrations are used.
V preskusu te vrste je treba pretok redčila in preskusne kemikalije ali založne raztopine preskusne kemikalije preverjati dnevno.
At least three replicates should be used at each test concentration.
Če odklon od nominalne ali izmerjene začetne koncentracije ni v območju ± 20 %, mora analiza rezultatov temeljiti na geometrijskem povprečju koncentracije med izpostavljanjem ali modelih, ki opisujejo zmanjševanje koncentracije preskusne kemikalije (8).
In setting the range of test concentrations (for range-finding and/or for the definitive toxicity test), the following should be considered:
Vsi predhodni pogoji preskusa in merila za veljavnost veljajo tudi za mejni preskus, le število ponovitev v tretirani skupini je treba podvojiti.
To determine an ECx, test concentrations should bracket the ECx value to ensure an appropriate level of confidence.
Rast v kontrolni in tretirani skupini je mogoče analizirati s statističnim preskusom za primerjavo sredin, npr. s t-preskusom.
For example, if estimating the EC50, the highest test concentration should be greater than the EC50 value.
Podvojitveni čas
If the EC50 value lies outside of the range of test concentrations, associated confidence intervals will be large and a proper assessment of the statistical fit of the model may not be possible.
Podvojitveni čas (Td) števila listov in izpolnjevanje tega merila za veljavnost študije (odstavek 12) se določi po naslednji enačbi skupaj s podatki iz kontrolnih posod:
If the aim is to estimate the LOEC/NOEC, the lowest test concentration should be low enough so that growth is not significantly less than that of the control.
pri čemer je μ povprečna specifična hitrost, določena, kot je opisano v odstavkih 54 in 55.
In addition, the highest test concentration should be high enough so that growth is significantly lower than that in the control.
Namen tega preskusa je določiti učinke preskusne kemikalije na vegetativno rast vrst rodu Lemna.
If this is not the case, the test will have to be repeated using a different concentration range (unless the highest concentration is at the limit of solubility or the maximum required limit concentration, e.g. 100 mg/l).
Ta preskusna metoda opisuje dve spremenljivki odziva, saj imajo države članice različne preference in zakonske zahteve.