natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Microwell plates shall be coated with 50 μl/well (0,9 pg) of proven quality protein-A purified immunoglobulins(Ig) from rabbit antisera against IHNV or VSHV diluted in carbonate buffer (pH 9,6) containing 15 mM sodium azide and incubated from 18 hours to 2 weeks at 4 °C.
Pogoji pomnoževanja (po stopnji RT): 2 minuti pri 50 °C, 10 minut pri 95 °C, čemur sledi 40 ciklov po 15 sekund pri 95 °C in 1 minuto pri 60 °C; po potrebi se prilagodi.
On a dilution plate, each sample containing 1 % Triton X-100 and the positive controls shall be diluted with buffer solution (namely, phosphate buffered saline (PBS)-T-BSA, 1 % BSA) in a 4-fold dilution: undiluted, 1:4, 1:16, 1:64.
Natančne diagnostične metode in postopki za potrditev ali izključitev suma na VHS in IHN ali obe bolezni pri sumih izbruhov
ELISA plates shall then be incubated for 30 minutes at 37 °C.
konvencionalna izolacija virusa z naknadno seronevtralizacijo, imunokemijskim ali molekularnim določanjem virusa;
Subsequently plates shall be washed and incubated for 30 minutes at 37 °C with specific monoclonal antibodies (namely for VHSV identification MAb IP5B11 and for IHNV Hyb 136-3, respectively).
dokazovanje virusa z RT-PCR ali RT-qPCR;
50 μl of horseradish-peroxidase (HRP) conjugated rabbit anti mouse antibodies diluted 1:1000 in PBS-T-BSA shall be transferred to the ELISA plate.
drugi diagnostični postopki, kot so IFAT, ELISA, RT-PCR, IHC.
Finally, after renewed washing the reactions shall be developed adding 50 μl/well of ortho-phenylenediamine (OPD).
1 Konvencionalna izolacija virusa z naknadnim določanjem virusa
The ELISA plates shall be incubated for 20 minutes at room temperature in the dark and the reaction shall be stopped by adding 100 μl/well 0,5 M H2SO4.
Izbira vzorcev
The absorbance shall be monitored at a wavelength of 492 and 620 nm in an ELISA reader.
Za preiskavo se izbere vsaj 10 rib, ki kažejo tipične znake IHN ali VHS.
Samples shall be designated positive or negative after comparing the test results to the absorbance values for the positive and negative controls.
Priprava in pošiljanje za namene konvencionalne izolacije virusa se izvajata v skladu z metodami in postopki iz točke I.2.
In general, samples with combined absorbance (A) < 0,5 for undiluted material shall be considered negative, samples with A values between 0,5 and 1,0 shall be considered suspicious and samples with A values > 1,0 shall be considered positive.
Dodatni material za namene konvencionalne izolacije virusa se zbira v skladu z metodami in postopki iz točke I.3.
Other ELISA versions with a proven similar efficacy may be used instead of those referred to in this point.
Priprava vzorcev za preiskavo celične kulture
Immunofluorescence- IF
Vzorci za preiskavo celične kulture za namene konvencionalne izolacije virusa se pripravijo v skladu z metodami in postopki iz točke I.4.
The identification of listed pathogens VHSV and IHNV shall be performed by infecting cells in ‘Black’ 96-well plates, conventional 24-well plates or cover slips into 24-well plates.
Virološka preiskava za namene konvencionalne izolacije virusa se izvaja v skladu z metodami in postopki iz točke I.5.
When IHNV or VHSV or both are identified by infecting cells on cover slips, the following protocol shall apply:
Za namene konvencionalne izolacije virusa se virus določa v skladu z metodami in postopki iz točke I.6.
cover slips shall be seeded with cells at a density leading to between 60 % and 90 % confluence after 24 hours of cultivation.
2 Dokazovanje virusa z RT-qPCR
EPC cells shall be used where possible for this purpose because of their strong adherence to glass surfaces, but other cell lines such as BF-2, RTG-2 or FHM may be used as well.
Vzorci za namene dokazovanja virusa z RT-qPCR se izberejo v skladu z metodami in postopki iz točke I.1.2.
subsequently, cell culture medium shall be removed, and the infected cell monolayers fixed with 0,5 ml ice-cold, aqueous acetone solution (80 % vol:vol).
Dodatni diagnostični material za namene dokazovanja virusa z RT-qPCR se zbira v skladu z metodami in postopki iz točke I.3.
Fixation shall take place in fume hood for 15 minutes at room temperature, then the acetone solution shall be removed and the cover glasses shall be air dried for at least 30 minutes.
Priprava vzorcev za RT-qPCR
At this stage, the plates shall either be processed immediately or stored at – 20 °C for further use;
Vzorci za namene dokazovanja virusa z RT-qPCR se pripravijo v skladu z metodami in postopki iz točke I.6.4.1.
specific monoclonal antibodies (namely for VHSV identification, MAb IP5B11 and for IHNV, Hyb 136-3 respectively) shall be diluted in 0,01 M PBST, pH 7,2 in the dilution recommended by the provider of the MAbs; 50 to 100 μl/well shall be added to the fixed monolayer and plates shall be incubated for one hour at 37 °C in a humid chamber;
Dokazovanje virusa z RT-qPCR poteka v skladu z metodami in postopki iz točk I.6.4.1, I.6.4.3 in I.6.4.4.
cover glasses shall be washed gently three times with PBS containing 0,05 % Tween-20 (PBS-T), and the buffer shall be removed completely after the last rinse.
3 Drugi diagnostični postopki
The cells shall subsequently be incubated for one hour at 37 °C with fluorescein isothiocyanate (FITC) — or tetramethylrhodamine-5-(and-6-) isothiocyanate (TRITC)-conjugated antibodies against mouse immunoglobulin used as the primary antibody, diluted according to the supplier instructions, washed again in PBS-T, and dried.
Supernatant, pripravljen v skladu s točko I.4.3, se lahko testira s postopkom ELISA, indirektnim fluorescenčnim testom za dokazovanje protiteles (IFAT) ali postopkom RT-PCR v skladu s točko I.6.1, I.6.2 oz. I.6.4.
Stained cultures shall be mounted onto glass slides using glycerol saline and examined under incident ultraviolet (UV) light.
Tkivni material se lahko pregleda z drugimi diagnostičnimi postopki, kot sta IFAT na zamrznjenih rezinah in imunohistokemija na tkivnem materialu, fiksiranem v formalinu.
Use 10 × or 12 × eyepieces and a × 25 or × 40 objective lens with numerical apertures > 0,7 and > 1,3 respectively.
Navedeni hitri postopki se v 48 urah po vzorčenju dopolnijo z virološko preiskavo v skladu s točko II(a) ali točko II(b), če:
Other IF techniques, with regard to cell cultures, fixation and antibodies of reference quality, of proven similar efficacy may be used instead.
je rezultat negativen ali
Neutralisation
je pozitivni rezultat pridobljen z materialom, ki predstavlja prvi primer IHN ali VHS.
serum containing group specific antibody against VHSV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
Uporabijo se vsaj dva izolata VHSV in en izolat IHNV.
serum containing group specific antibody against IHNV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
Izolati naj predstavljajo večjo skupino virusov v Evropski uniji, in sicer en izolat patogena šarenke v sladki vodi in en morski izolat patogena romba za VHSV ter en sev patogena šarenke iz Evropske unije za IHNV.
pool of antisera against the indigenous serotypes of IPNV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
Uporabijo se dobro opredeljeni izolati iz držav članic.
medium alone (positive control).
Šarže virusa, namnoženega na celični liniji z nizkim številom pasaž, se razmnožujejo v stekleničkah s celično kulturo na celicah BF-2 ali RTG-2 za VHSV in na celicah EPC ali FHM za IHNV.
The development of CPE shall be checked as described in point I.5.4.
Pri inokulaciji se uporabi nizka multipliciteta okužbe (MOI) (< 1).
VHSV strains and isolates that do not react in neutralisation tests shall be identified by IF or ELISA.
Pri skupnem CPE se virus pridobiva s 15-minutnim centrifugiranjem supernatanta celične kulture pri 2000 × g, filtersko sterilizira skozi 0,45 μm membranski filter in porazdeli v označene krioepruvete.
Other neutralisation tests of proven similar efficacy may be used instead.
Virus se hrani pri – 80 °C. En teden po zamrznitvi se tri fiole z reproducirano vsebino vsakega virusa odmrznejo pod mrzlo vodo in titrirajo na svojih ustreznih celičnih linijah.
RT-PCR/RT-qPCR
Vsak izolat virusa se odmrzne in titrira vsaj vsakih šest mesecev ali če obstaja sum, da se je dovzetnost celične linije zmanjšala.
RNA shall be extracted using the phenol-chloroform method or by RNA affinity spin columns, according to the manufacturer's instructions.
Titri se primerjajo s predhodno pridobljenimi titri.
Commercially available RNA extraction kits that will produce high quality RNA suitable for use with the RT-PCR protocols detailed in the points below may be used.
DEL 2 NATANČNE DIAGNOSTIČNE METODE IN POSTOPKI ZA NADZOR IN POTRDITEV BOLEZNI KHV (KHVD)
RNA shall be re-suspended in distilled RNAse-free water, (namely water treated with 0,1 % diethyl pyrocarbonate) or an appropriate elution buffer.
Ko se zahteva laboratorijska preiskava za namene potrditve prisotnosti ali za izključitev suma na KHVD v skladu s členom 57(b) Direktive 2006/88/ES z uporabo diagnostičnih metod iz oddelka III dela 2 Priloge I, se uporabijo natančne diagnostične metode in postopki iz točk I.1–I.2 tega dela.
The following primers shall be used for detection of IHNV:
1 Priprava vzorcev iz rib
Forward Primer 5′-AGA-GAT-CCC-TAC-ACC-AGA-GAC-3′;
Za diagnostične namene se ribe (poslane žive ali usmrčene in pakirane ločeno v zaprtih aseptičnih posodah) ali alternativno zamrznjeni organi ali kosi organov, konzervirani v 80-odstotnem do absolutnem etanolu ali transportnem gojišču za viruse (ki jih je treba obdelati v 48 urah po zbiranju), lahko uporabijo za testiranje s konvencionalnimi metodami na podlagi PCR ali qPCR.
Reverse Primer 5′-GGT-GGT-GTT-GTT-TCC-GTG-CAA-3′.
Za dokazovanje KHV se zberejo škrge in ledvice, poleg tega pa se v dodatnem ločenem vzorcu lahko vključijo tudi vranica, možgani in črevesje.
The following cycles shall be used (one-step RT-PCR): 1 cycle: 50 °C for 30 minutes; 1 cycle: 95 °C for 2 minutes; 30 cycles: 95 °C for 30 seconds, 50 °C for 30 seconds, 72 °C for 60 seconds; 1 cycle: 72 °C for 7 minutes and soak at 4 °C.
V resnejših primerih se tkivni material največ petih rib lahko združi.
The following primers shall be used for detection of VHSV:
Poleg tega se v nekaterih primerih lahko uporabijo vzorci, pri katerih ne žrtvujemo ribe, kot so kri, bris škrg, biopsija škrg in bris sluzi (v primeru suma prisotnosti KHV se lahko uporabljajo zelo dragocene ribe).
VN For 5′-ATG-GAA-GGA-GGA-ATT-CGT-GAA-GCG-3′;
Ekstrakcija DNK
VN Rev 5′-GCG-GTG-AAG-TGC-TGC-AGT-TCC-C-3′.
DNK se ekstrahira v skladu s standardnimi postopki.
Subsequently, the reaction shall be held at 68 °C for 7 minutes.
I.2.1 Test qPCR za dokazovanje KHV
Quantity and specificity of the RT-PCR reactions shall be evaluated by gel electrophoresis in 1,5 % agarose gel with ethidium bromide and observed using UV transillumination.
Za dokazovanje KHV s qPCR se uporabljajo naslednji testi qPCR:
A 693 bp PCR amplicon may be observed for IHNV.
smiselni začetni oligonukleotid (KHV-86f): 5′- GACGCCGGAGACCTTGTG -3′;
For VHSV, the size shall be 505 bp.
protismiselni začetni oligonukleotid (KHV-163r): 5′- CGGGTTCTTATTTTTGTCCTTGTT -3′
The results of the PCR may vary depending on the conditions under which it is performed, namely the thermal protocols might need optimisation, depending on the thermal cycler in use.
in sonda (KHV-109p): 5′-FAM- CTTCCTCTGCTCGGCGAGCACG -3′.
Furthermore, false-positive results may occur because of false primer annealing or laboratory contamination.
Pogoji pomnoževanja: en cikel po 15 minut pri 95 °C, čemur sledi 40 ciklov po 15 sekund pri 94 °C in 60 sekund pri 60 °C.
Adequate positive and negative controls and sequence amplicons shall therefore be included to avoid any doubts.
Lahko se uporabijo druge različice testov qPCR z dokazano podobno učinkovitostjo.
For the VHSV primers, special care shall be taken when using BF-2 cells, as the primers may react with the cell line DNA/RNA producing false-positive results of similar size.
Test, opisan v tej točki, se ciljno uporabi za gen za timidin kinazo virusa KHV.
RT-qPCR for VHSV
Smiselni začetni oligonukleotid (KHV-TKf): 5′-GGGTTACCTGTAC GAG-3′
For VHSV, amplification shall be performed using the following primers and probe:
Protismiselni začetni oligonukleotid (KHV-TKr): 5′-CACCCAGTAGATTA TGC-3′
Forward primer: 5′-AAA-CTC-GCA-GGA-TGT-GTG-CGT-CC-3′;
Pogoji pomnoževanja: en cikel po 5 minut pri 95 °C, čemur sledi 35 ciklov po 30 sekund pri 95 °C, 30 sekund pri 52 °C, eno minuto pri 72 °C in en cikel po 10 minut pri 72 °C.
Reverse primer: 5′-TCT-GCG-ATC-TCA-GTC-AGG-ATG-AA-3′;
Velikost produkta mora biti 409 bp.
and probe: 5′-FAM-TAG-AGG-GCC-TTG-GTG-ATC-TTC-TG-BHQ1.
Poleg tega lahko pride do lažno pozitivnih rezultatov zaradi lažnega prileganja začetnega oligonukleotida ali kontaminacije.
One-step RT-qPCR:
Lahko se uporabijo druge različice testa PCR z dokazano podobno učinkovitostjo.
Negative template controls and positive controls shall be included on each plate run.
Prvo dokazovanje na območju se potrdi s sekvenciranjem ali pošlje nacionalnemu referenčnemu laboratoriju ali referenčnemu laboratoriju EU za bolezni rib iz Priloge VI k Direktivi 2006/88/ES za takojšnjo določitev.
Cycling conditions: 50 °C for 30 minutes, 95 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 15 seconds, 60 °C for 40 seconds, 72 °C for 20 seconds; adjust if necessary.
Natančne diagnostične metode in postopki za nadzor KHVD
Other RT-PCR or RT-qPCR versions of proven similar efficacy may be used instead.
Pri vzorčenju in laboratorijskih preiskavah za pridobitev ali ohranitev nekaterih zdravstvenih statusov glede KHVD, kot je določeno v oddelku I dela 2 Priloge I, z uporabo diagnostičnih metod iz oddelkov II ali III dela 2 navedene priloge se uporabljajo natančne diagnostične metode in postopki iz naslednjih točk II.1 in II.2. tega dela.
RT-qPCR for IHNV
Če je to mogoče, se vzorčijo ribe, ki so bile dlje časa izpostavljene temperaturam, ki omogočajo razvoj virusa, in sicer dva do tri tedne pri 15 °C do 26 °C.
For IHNV, amplification shall be performed using the following primers and probe:
Če je to možno, se vzorci zberejo 24 ur, vendar ne več kot 72 ur po ravnanju z njimi, na primer po lovljenju z mrežo ali transportu, ki lahko ponovno aktivirajo virus v ribah s statusom nosilca, tako da se poveča možnost dokaza KHV.
Forward primer: 5′- AGA-GCC-AAG-GCA-CTG-TGC-G-3′;
Za namene nadzora KHVD se ribe lahko pošljejo žive ali usmrčene in pakirane ločeno v zaprtih aseptičnih posodah, alternativno pa se za testiranje z metodami na podlagi PCR lahko uporabijo zamrznjeni organi ali kosi organov, konzervirani v 80- do 100-odstotnem alkoholu ali transportnem gojišču virusov (ki jih je treba obdelati v 48 urah po zbiranju).
Reverse primer: 5′- TTCTTTGCGGCTTGGTTGA - 3′;
Za nadzor KHVD se lahko zberejo tkiva škrg in ledvic.
and probe: 5′ 6FAM-TGAGACTGAGCGGGACA-NFQ/MGB.
Za namene nadzora KHVD se je treba izogibati združevanju vzorcev, kadar je mogoče.
Two-step RT-qPCR:
Če je združevanje potrebno, se lahko združi tkivni material največ dveh rib.
As the following assay depends on a two-step amplification, extra care shall be taken when handling the tubes from one reaction to the other in order to prevent contamination.
Večji vzorci se homogenizirajo s pestilom v terilnici ali stomaherjem, podvzorci pa se pridobijo za ekstrakcijo DNK pred zbistritvijo.
Cycling conditions (after RT-step): 50 °C for 2 minutes, 95 °C for 10 minutes, followed by 40 cycles of 95 °C for 15 seconds and 60 °C for 1 minutes; adjustments shall be made if necessary.
Namesto tega se podvzorci lahko zberejo iz vsakega tkiva, vključenega v vzorec, in dajo v „epruvete za razgradnjo“.
Detailed diagnostic methods and procedures for the confirmation of or to rule out the suspicion of VHS or IHN or both in suspected outbreaks
Lahko se uporabijo komercialno dostopni kompleti za ekstrakcijo DNK, ki zagotavljajo visoko kakovostno DNK, primerno za uporabo s protokoli PCR iz točke II.2.
When a laboratory examination is required to confirm or rule out the presence of IHN or VHS or both in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC using the diagnostic methods set out in point II.3 of Part 1 of Annex I, the following detailed diagnostic methods and procedures shall apply:
Sprejemljivo razmerje med tkivom in gojiščem je 1:9 w/v.
conventional virus isolation with subsequent seroneutralisation, immune-chemical or molecular virus identification;
V teste se vključi 20 mg– 25 mg tkivnega materiala.
virus detection by RT-PCR or RT-qPCR;
2 Nadzor KHVD z metodami na podlagi PCR
other diagnostic techniques such as IFAT, ELISA, RT-PCR, IHC.
Za nadzor KHV se uporablja qPCR.
Conventional virus isolation with subsequent virus identification
Če se na območju, ki predhodno ni bilo potrjeno kot pozitivno, pojavijo pozitivni vzorci, se rezultati testa potrdijo bodisi:
Selection of samples
s sekvenciranjem produkta PCR ali produkta ugnezdene PCR iz vzorcev.
At least 10 fish showing typical signs of IHN or VHS shall be selected for examination.
Pridobljena sekvenca s čistim konsenzusom se ujema s temi referenčnimi sekvencami (vsaj 98 %);
The preparation and shipment for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.2.
bodisi se vzorci pošljejo v nacionalni referenčni laboratorij za potrditev.
The collection of supplementary material for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.3.
Test qPCR za dokazovanje KHV
Preparation of samples for cell culture examination
Uporablja se test qPCR, opisan v nadaljevanju:
The preparation of samples for cell culture examination for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.4.
Pogoji pomnoževanja: en cikel po 15 minut pri 95 °C, čemur sledi 50 ciklov po 15 sekund pri 94 °C in 60 sekund pri 60 °C.
The virological examination for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.5.
Rezultati qPCR se lahko razlikujejo glede na pogoje, pod katerimi se ta test izvaja, in sicer je morda potrebna optimizacija temperaturnih pogojev reakcije pomnoževanja, odvisno od cikličnega termostata v uporabi.
The virus identification for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.6.
Konvencionalni test PCR za potrditev dokazovanja KHV
Virus detection by RT-qPCR
Za potrditev prisotnosti okužbe s KHV se uporabi generična ugnezdena PCR, opisana v spodnji tabeli 2.1, ki ji sledi sekvenciranje amplificiranega pridelka.
The selection of samples for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.1.2.
Tabela 2.1
The preparation and shipment for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.2.
Začetni oligonukleotidi in pogoji za ugnezdeno PCR za testiranje vseh herpes virusov ciprinidov (CyHV-1, CyHV-2 in CyHV-3)
The collection of supplementary diagnostic material for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.3.
Ime začetnega oligonukleotida
Sample preparation for RT-qPCR
Sekvenca
The sample preparation for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.6.4.1.
Pogoji pomnoževanja
The virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in points I.6.4.1, I.6.4.3 and I.6.4.4.
Velikost produkta
Other diagnostic techniques
Prvi krog PCR
Supernatant prepared as described in point I.4.3 may be submitted to ELISA, Indirect fluorescent antibody test (IFAT), or RT-PCR in accordance with point I.6.1, point I.6.2 or point I.6.4 respectively.
1 cikel:
Tissue material may be subjected to other diagnostic techniques, such as IFAT on frozen sections, immunohistochemistry on formalin fixed tissue material.
2 minuti pri 95 °C
Those rapid techniques shall be supplemented with a virological examination in accordance with either point II(a) or point II(b) within 48 hours after sampling, if:
40 ciklov:
a negative result is obtained; or
30 sekund pri 95 °C
a positive result is obtained with material representing the first case of IHN or VHS.
30 sekund pri 55 °C
Low MOI for inoculation (< 1) shall be used.
Pridobljena sekvenca s čistim konsenzusom se mora ujemati z navedenimi referenčnimi sekvencami (vsaj 98 %).
1 week after freezing, three replicate vials with each virus shall be thawed under cold water and titrated on their respective cell lines.
Pri vzorčenju in laboratorijski preiskavi za namene programov nadzora ali izkoreninjenja iz dela 3 Priloge I ali za potrditev ali izključitev prisotnosti ISA v skladu s členom 57(b) Direktive 2006/88/ES se uporabljajo natančne metode in postopki iz točk I.1, I.2 in I.3 tega oddelka.
At least every 6 months, or if it is suspected that the susceptibility of a cell line has decreased, each virus isolate shall be thawed and titrated.
Za namene laboratorijskih preiskav na prisotnost ISA se vzorci rib ne združujejo, kadar je to mogoče.
Titration procedures must be described in detail and the same procedure followed each time.
Vendar je za namene nadzora za ISA sprejemljiva združitev 2 do 5 rib.
Titration by end point dilution shall include at least six replicates at each dilution step.
Vzorci za verižno reakcijo s polimerazo z reverzno transkripcijo (RT-PCR) se odvzamejo iz vseh vzorčenih rib.
The titres shall be compared with previously obtained titres.
S sterilnim instrumentom se odvzame košček tkiva iz praledvic in prenese v mikrocentrifugirko, ki vsebuje 1 ml raztopine za ohranjanje RNK z dokazano učinkovitostjo.
If the titre of any of the three virus isolates drops by a factor of 2 logs or more, compared with the initial titre, the cell line shall no longer be used for surveillance purposes.
Tkivo največ 5 rib se lahko zbere v eno epruveto, ki vsebuje transportno raztopino, to pa predstavlja en združen vzorec.
If different cell lines are kept in the laboratory each line shall be examined separately.
Teža tkiva v enem vzorcu je 0,5 g.
Records shall be kept for a period of at least 10 years.
Ko so ribe premajhne za pridobitev vzorca zahtevane teže, se lahko odvzamejo koščki ledvic, srca, vranice, jeter ali piloričnih cekumov (v tem prednostnem vrstnem redu), da dobimo 0,5 g.
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES FOR THE SURVEILLANCE AND CONFIRMATION OF KHV DISEASE (KHVD)
Tkivo za histološko preiskavo odvzamemo le iz sveže usmrčenih rib z normalnim videzom, ki kažejo klinične znake bolezni ali za katere so ugotovitve post mortem pregledov v skladu s prisotnostjo ISA.
When a laboratory examination is required for the purpose of confirmation of the presence of or to rule out the suspicion of KHVD in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC, using the diagnostic methods set out in Section III of Part 2 of Annex I, the detailed diagnostic methods and procedures set out in points I.1 – I.2 of this Part shall apply.
Razmerje med fiksirno raztopino in tkivom je vsaj 20: 1 za zagotovitev zadovoljive ohranitve tkiv.
Preparation of samples from fish
Za imunohistokemijo (IHC) se odvzamejo vzorci praledvic in srca.
For diagnostic purposes the fish (sent alive or killed and packed separately in sealed aseptic containers) or alternatively frozen organs or organ pieces preserved in 80 % to absolute ethanol or viral transport medium (to be processed within 48 hours after collection) may be used for testing with conventional PCR or qPCR based methods.
Tkiva za virološko preiskavo na celični kulturi se odvzamejo iz vseh vzorčenih rib.
For the detection of KHV, gill and kidney shall be collected; in addition spleen, encephalon and intestine may be included in an additional separated sample.
Koščki jeter, predledvic ali praledvic, srca in vranice se odstranijo s sterilnim instrumentom in prenesejo v plastične epruvete, ki vsebujejo 9 ml transportnega gojišča.
In acute cases, tissue material of up to five fish may be pooled.
Tkivo največ petih rib se lahko zbere v eno epruveto, ki vsebuje transportno raztopino, to pa predstavlja en združen vzorec.
Furthermore, non-lethal samples such as blood, gill swabs, gill biopsy, mucus scrape may be used in certain cases (namely very valuable fish may be used in the case of the suspicion of the presence of KHV).
Teža tkiva v enem vzorcu je 1,0 g ± 0,5 g.