natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The fish is wet weighed.
Ikre zeta so zelo nagnjenje h glivičnim okužbam izven gnezdišč, ki jih varujejo samci.
For preparation of tissues for VTG analysis, the fish can be placed on a corkboard on the stage of a dissecting microscope.
Zato je ključnega pomena, da se vse ikre prvih pet dni preskusa tretirajo z metilensko modrim.
For zebrafish the head is cut right behind the pectoral fin and tail is cut right behind the dorsal fin.
zeti se ne smejo izpostaviti metilensko modremu, ko se izvalijo, zato v sistemu za ublažitev do šestega dne ne sme biti več metilensko modrega.
For Japanese medaka the abdomen is opened via a carefully made incision that extends along the ventral midline from the pectoral girdle to a point just cranial to the anus.
Ikre se vsak dan pregledajo, pri čemer je treba dokumentirati vse mrtve ali neoplojene ikre.
Using the small forceps and small scissors, the liver is carefully removed.
dokler se ikre ne izvalijo, ne smejo zapustiti vode niti za krajši čas.
Specimen for VTG analysis are placed in eppendorf tubes and immediately frozen in liquid nitrogen.
Hankova pufrana raztopina soli (HBSS):HBBS je potrebna za konzerviranje semenčic med pripravo za oploditev.
The carcass including the gonads is placed into a pre-labelled plastic tissue cassette, which is transferred into Davidson's or Bouin's fixative.
C.42 BIOLOŠKA RAZGRADLJIVOST V MORSKI VODI
The volume of fixative should be at least 10 times the approximated volume of the tissues.
SPLOŠNI UVOD
The fixative container is gently agitated for five seconds to dislodge air bubbles from the cassette.
Ta preskusna metoda ustreza Smernici za preskušanje OECD (TG) 306 (1992).
All tissues remain in Davidson's fixative overnight, followed by transfer to individual containers of 10 % neutral buffered formalin the next day.
Ko so bile pripravljene izvirne preskusne metode, ni bilo znano, v kakšnem obsegu bi se lahko rezultati presejalnih preskusov lahke biološke razgradljivosti z uporabo sladke vode in komunalne odplake ali aktivnega blata kot inokuluma, uporabili za morsko okolje.
Containers with cassettes are gently agitated for 5 seconds to ensure adequate penetration of formalin into cassettes.
V zvezi s tem so bili sporočeni različni rezultati (npr. (1)).
Tissues remain in Bouins fixative for 24 h, followed by transfer to 70 % ethanol.
Veliko industrijskih odpadnih voda, ki vsebujejo različne kemikalije, doseže morje z neposrednim izpustom ali prek rečnih ustij in rek, v katerih so zadrževalni časi kratki v primerjavi z obdobjem, ki je potrebno za popolno biološko razgradnjo številnih prisotnih kemikalij.
Tissue Processing
Zaradi vedno večje ozaveščenosti o potrebi, da je treba morsko okolje zaščititi pred vedno večjo obremenitvijo s kemikalijami in oceniti verjetno koncentracijo kemikalij v morju, so bile razvite preskusne metode za biološko razgradljivost v morski vodi.
Dehydrate tissue for adequate penetration of paraffin.
Pri metodah, opisanih v tem poglavju, se naravna morska voda uporablja kot vodna faza in vir mikroorganizmov.
Impregnate the tissue with paraffin to maintain tissue integrity and create a firm surface for microtomy.
V okviru prizadevanj za skladnost z metodami za lahko biološko razgradljivost v sladki vodi sta se proučevali uporaba ultrafiltrirane in centrifugirane morske vode ter uporaba morskih usedlin kot inokulumov.
Labelled tissue cassettes are removed from formalin/ethanol storage and the cassettes are placed in the processing basket(s).
Ta proučevanja niso bila uspešna.
The processing basket is loaded in the tissue processor.
Preskusni medij je zato naravna morska voda, predhodno tretirana, da se odstranijo grobi delci.
The processing schedule is selected.
Da bi se lahko končna biološka razgradljivost ocenila z metodo stresanja bučke, je treba zaradi slabe občutljivosti analitske metode za raztopljeni organski ogljik (DOC) uporabiti razmeroma visoke koncentracije preskusne snovi.
After the tissue processor has completed the processing cycle, the basket(s) may be transferred to the embedded station.
Zato je treba dodajati morsko vodo z mineralnimi hranilnimi snovmi (N in P), saj bi njihove nizke koncentracije sicer omejile odstranitev raztopljenega organskega ogljika.
Embedding
Pri metodi stresanja bučke je treba zaradi koncentracije dodane preskusne snovi dodati tudi hranilne snovi.
Objective:
Zato metode niso preskusi za lahko biološko razgradljivost, ker se mikroorganizmom, ki so že prisotni v morski vodi, ne doda inokulum.
Properly orient the specimen in solidified paraffin for microtomy.
Preskusi tudi niso simulacija morskega okolja, saj se dodajo hranilne snovi, koncentracija preskusne snovi pa je veliko višja, kot bi bila prisotna v morju.
The basket(s) of cassettes is/are removed from the processor and immersed in the paraffin-filled front chamber of the embedding station thermal console or the cassettes are moved to a separate paraffin heater.
Zato se metode predlagajo v novem podrazdelku ‚Biološka razgradljivost v morski vodi‘.
The first cassette to be embedded is removed from the front chamber of the thermal console or the paraffin heater.
UPORABA
The cassette lid is removed and discarded, and the cassette label is checked against the animal records to resolve potential discrepancies prior to embedding.
Rezultati preskusa, ki bi se uporabili, ker sta vzorec uporabe in odstranjevanje zadevne snovi pokazala pot do morja, dajejo prvi vtis o biološki razgradljivosti v morski vodi.
An appropriately sized embedding mould is selected.
Če je rezultat pozitiven (> 70 % odstranjenega raztopljenega organskega ogljika; > 60 % teoretične potrebe po kisiku (TPK)), se lahko ugotovi, da je biološka razgradnja v morskem okolju mogoča.
The mould is held under the spout of the dispensing console and filled with molten paraffin.
Vendar negativen rezultat ne izključuje takega potenciala, ampak kaže, da je potrebna nadaljnja študija, na primer z uporabo čim nižje koncentracije preskusne snovi.
The specimen is removed from the cassette and placed in the molten paraffin in the mould.
Če je potrebna bolj končna vrednost hitrosti ali stopnje biološke razgradnje v morski vodi na določenem mestu, je v vsakem primeru treba uporabiti zahtevnejše, bolj prefinjene in zato dražje metode.
This is repeated with 4-8 specimens for each paraffin mould.
Simulacijski preskus bi se na primer lahko uporabil s koncentracijo preskusne snovi, ki je bliže verjetni koncentraciji v okolju.
The position of individual fish is marked by putting fish no 1 in 180 degrees to fish 2-4/8.
Uporabila bi se lahko tudi neobogatena morska voda, ki ni predhodno tretirana, iz aktualne lokacije, primarna biološka razgradnja pa bi se lahko spremljala s specifično kemijsko analizo.
Additional paraffin is added to cover the specimen.
Za končno biološko razgradljivost bi bile potrebne snovi, označene s 14C, da bi se lahko izmerile hitrosti izginjanja topnega organskega 14C in nastajanje 14CO2 pri pogojih, ki so realni za okolje.
The mould with the cassette base is placed on the cooling plate of the cryo console.
IZBIRA METOD
After the paraffin has solidified, the block (i.e., the hardened paraffin containing the tissues and the cassette base) is removed from the mould.
Izbira metode, ki se bo uporabila, je odvisna od številnih dejavnikov.
Microtomy
Naslednja tabela bo pripomogla k izbiri.
Cut and mount histological sections for staining.
Čeprav snovi, ki so topne v vodi pod ekvivalentom približno 5 mg C/l, z metodo stresanja bučke ni mogoče preskusiti, se lahko z njo načeloma preskusijo vsaj slabo topne snovi.
The initial phase of microtomy termed “facing” is conducted as follows:
Tabela
The paraffin block is placed in the chuck of the microtome.
Prednosti in slabosti metode stresanja bučke ter preskusa v zaprti steklenici
The chuck is advanced by rotating the microtome wheel and thick sections are cut from the paraffin surface of the block until the knife reaches the embedded tissues.
METODA
The section thickness on the microtome is set between 3 - 5 microns.
PREDNOSTI
The chuck is advanced and multiple sections are cut from the block to remove any artefacts created on the cut surface of the tissue during rough trimming.
SLABOSTI
The block can be removed from the chuck and placed facedown on ice to soak the tissue.
STRESANJE BUČKE
The next phase of microtomy is final sectioning and mounting of tissue sections on slides.
enostavna oprema, razen analizatorja za C,
These procedures are conducted as follows:
trajanje 60 dni ni težava,
If the block has been placed on ice, the block is removed from the ice and replaced in the chuck of the microtome.
ni motenj zaradi nitrifikacije,
With the section thickness on the microtome set to 3 - 5 microns, the chuck is advanced by rotating the microtome wheel.
lahko se prilagodi hlapnim snovem,
Sections are cut from the block until a “ribbon” containing at least one acceptable section including the gonads has been produced.
potreben je analizator za C,
(As necessary during sectioning, the block may be removed from the chuck, placed on ice to soak the tissue, and replaced in the chuck.)
uporabi se 5–40 mg DOC/l, lahko ima inhibitorni učinek,
The sections are floated flat on the surface of the water in the water bath.
določitev DOC je zahtevna pri nizkih koncentracijah v morski vodi (učinek klora),
An attempt is made to obtain at least one section that contains no wrinkles and has no air bubbles trapped beneath it.
DOC je v morski vodi občasno visoka,
A microscope slide is immersed beneath the best section, which is lifted out of the water using the slide.
ZAPRTA STEKLENICA
This process is referred to as “mounting” the section on the slide.
enostavna oprema,
Three sections are prepared for a set of fish.
enostavna določitev konca,
The second and third sections are taken at 50 micron intervals following the first section.
uporablja se nizka koncentracija preskusne snovi (2 mg/l), zato je manjša verjetnost zaviranja,
If the fish are not embedded with their gonads in the same sectioning level, more sections are to be made to ensure that at least six sections including the gonads are obtained from each fish.
enostavna prilagoditev hlapnim snovem,
With a slide-marking pen, the block number from which the slide was produced is recorded on the slide.
morda je težko ohranjati nepredušnost steklenic,
The slide is placed in a staining rack.
zaradi rasti bakterij po stenah so lahko rezultati napačni,
The block is removed from the chuck and placed facedown for storage.
slepe vrednosti absorpcije O2 so lahko visoke zlasti po 28 dneh;
Staining, Cover slipping, and Slide Labelling
lahko se preprečijo s staranjem morske vode,
Stain the sections for histopathological examination
mogoče motnje absorpcije O2 zaradi nitrifikacije
Permanently seal mounted and stained tissues.
METODA STRESANJA BUČKE
Permanently identify stained sections in a manner that allows complete traceability.
Ta metoda je različica prilagojenega presejalnega preskusa OECD, opisanega v poglavju C.4B te priloge (2).
Staining
Končna različica je bila pripravljena kot rezultat krožnega preskusa, ki ga je za Evropsko komisijo pripravil danski inštitut za kakovost vode (3).
Slides are air-dried overnight before staining.
Tako kot pri spremljajočem preskusu v zaprti steklenici se rezultati tega preskusa ne smejo obravnavati kot kazalniki lahke biološke razgradljivosti, ampak se morajo uporabiti izrecno za pridobivanje informacij o biološki razgradljivosti snovi v morskih okoljih.
The sections are stained by Hematoxylin-Eosin.
Predhodno določena količina preskusne snovi se raztopi v preskusnem mediju, da nastane koncentracija 540 mg raztopljenega organskega ogljika (DOC)/l.
Cover slipping
Če se meje občutljivosti analiz organskega ogljika izboljšajo, lahko ima prednost uporaba nižjih koncentracij preskusne snovi, zlasti za inhibitorne snovi.
Cover slips can be applied manually or automatically.
Raztopina preskusne snovi v preskusnem mediju se inkubira z mešanjem v temi ali difuzni svetlobi v aerobnih pogojih pri stalni temperaturi (vzdrževani v razponu ± 2 °C), ki je običajno v obsegu 15–20 °C.
A slide is dipped in xylene or TissueClear, and the excess xylene/TissueClear is gently knocked off the slide.
Kadar je cilj študije simulacija okoljskih razmer, se lahko preskusi izvedejo izven običajnega temperaturnega razpona.
Approximately 0,1 ml of mounting medium is applied near the end of the slide opposite to the frosted end or on the cover slip.
Priporoča se, da preskus ne traja dlje kot približno 60 dni.
The cover slip is tilted at a shallow angle as it is applied to the slide.
Razgradnja sledi meritvam raztopljenega organskega ogljika (končna razgradnja) in v nekaterih primerih specifični analizi (primarna razgradnja).
Labelling
Da bi vedeli, ali se lahko preskus uporabi za določeno snov, morajo biti znane nekatere njene lastnosti.
Each slide label should contain the following information.
Določiti je treba vsebnost organskega ogljika v snovi, njena hlapnost ne sme povzročati bistvenih izgub med potekom preskusa, njena topnost v vodi pa mora biti večja ali enaka 2540 mg C/l.
Laboratory name
Poleg tega se preskusna snov ne sme znatno adsorbirati na steklene površine.
Specimen No./Slide No.
Za razlago dobljenih rezultatov so potrebne informacije o čistosti ali relativnih deležih glavnih sestavin preskusne snovi, zlasti kadar so rezultati mejni.
Chemical/Treatment group
Informacije o strupenosti preskusne snovi za bakterije, kot se na primer meri v kratkotrajnih preskusih stopnje respiracije (4), so lahko koristne pri izbiri primernih preskusnih koncentracij in so lahko bistvene za pravilno razlago nizkih vrednosti biološke razgradnje.
Statistical Flow Chart for vitellogenin analysis
Vendar take informacije niso vedno zadostne za razlago rezultatov, dobljenih v preskusu biološke razgradnje, pri čemer je ustreznejši postopek, ki je opisan v odstavku 18.
Dunnett test
Da se preveri mikrobna dejavnost vzorca morske vode, je treba uporabiti ustrezne referenčne snovi.
variances stabilising transform?
Primeri snovi, ki se lahko uporabijo v ta namen, so natrijev benzoat, natrijev acetat in anilin.
Variances unequal Variances equal No Yes
Referenčne snovi se morajo razgraditi v razumnem času, sicer se priporoča, da se preskus ponovi z drugim vzorcem morske vode.
Yes Step-down trend test on replicate means
Pri krožnem preskusu za Evropsko komisijo, kjer so bili vzorci morske vode odvzeti na različnih lokacijah in v različnih časovnih obdobjih (3), sta bila lag faza (tL) in čas do 50-odstotne razgradnje (t50), ki ne vključuje lag faze, od 1 do 4 dni oziroma od 1 do 7 dni za natrijev benzoat.
<=3 reps per conc
Za anilin je bil tL od 0 do 10dni, t50 pa od 1 do 10 dni.
Normalising transform?
OBNOVLJIVOST IN OBČUTLJIVOST METODE
Nested ANOVA not normal
Obnovljivost metode je bila določena s krožnim preskusom (3).
Nested ANOVA normal Monotone
Najnižjo koncentracijo preskusne snovi, za katero se lahko ta metoda uporabi z analizo raztopljenega organskega ogljika, v veliki meri določata meja zaznavnosti analize organskega ogljika (približno 0,5 mg C/l) in koncentracija raztopljenega organskega ogljika v uporabljeni morski vodi (običajno 35 mg/l za vodo iz odprtega morja).
Drop water control
Osnovna koncentracija raztopljenega organskega ogljika ne sme preseči približno 20 % skupne koncentracije raztopljenega organskega ogljika po dodajanju preskusne snovi.
Dunn test
Če to ni izvedljivo, se lahko osnovna koncentracija raztopljenega organskega ogljika občasno zniža s staranjem morske vode pred preskušanjem.
Step-down Jonckheere or Williams' test
Če se metoda uporabi le s specifično kemijsko analizo (s katero se meri primarna razgradnja), mora raziskovalec z zagotavljanjem dodatnih informacij dokumentirati, ali se lahko pričakuje končna razgradljivost.
Rep means not normal or not homogenous
Dodatne informacije lahko vključujejo rezultate drugih preskusov za lahko ali inherentno biološko razgradljivost.
Rep means not normally distributed
Običajna laboratorijska oprema in:
Combine controls, retains subgroups
a. stresalnik, primeren za erlenmajerice prostornine 0,52 litra, bodisi z avtomatskim uravnavanjem temperature bodisi v prostoru s konstantno temperaturo 15–20 °C, ki se vzdržuje v razponu ± 2 °C;
Compare controls using Wilcoxon or T-test.
b. erlenmajerice z ozkim grlom, prostornine 0,52 litra;
Do controls differ?
c. naprava za membransko filtracijo ali centrifuga;
Both solvent and non-solvent control are present
d. membranski filtri, 0,2–0,45 μm;
Statistical Flow Chart for sex ratio analysis
e. analizator ogljika;
Apply step-down Jonckheere-Terpstra test (+) to determine NOEC
f. oprema za specifično analizo (neobvezno).
Dunn or Mann-Whitney U-test w/Bonferroni-Holm adjustment to determine NOEC
Morska voda
Use Dunnett test if homogenous variances (*), Tamhane-Dunnett (T3) test otherwise, to determine NOEC
V temeljito očiščeno posodo se odvzem vzorec morske vode in prenese v laboratorij, po možnosti v enem ali dveh dneh po odvzemu.
Are data normally distributed?
Zagotovi se, da temperatura vzorca med prevozom ne bo znatno presegla temperature, ki bo uporabljena v preskusu.
Are data consistent with monotone dose-response?
Natančno se opredeli lokacija vzorčenja in opiše njegovo stanje v zvezi z onesnaženostjo in hranilnimi snovmi.
(‡) Or other agreed control selection
V opredelitev se zlasti pri obalnih vodah vključita število heterotrofnih mikrobnih kolonij ter določitev koncentracij raztopljenega nitrata, amoniaka in fosfata.
After arcsin square-root transform
Za vzorec morske vode se navedejo naslednje informacije:
(+) With fewer than 5 experimental units per treatment exact J-T or M-W test should be used if available
datum odvzema,
Combine controls
globina odvzema,
Drop water control (‡)
videz vzorca – moten itd.,
Compare controls using t-Test.
temperatura v času odvzema,
Is solvent used?
slanost,
Appendix 9
čas od odvzema do uporabe v preskusu.
Guidance for tissue sampling for genetic sex determination and for genetic sex determination by PCR-method
Če se ugotovi, da je vsebnost raztopljenega organskega ogljika v vzorcu morske vode previsoka (odstavek 8), je priporočeno, da se morska voda pred uporabo stara približno en teden.
Tissue sampling, preparation and storage before determination of genetic sex by PCR-method in medaka (Prepared by the Laboratory for Aquatic Organisms of Bayer CropScience AG)
Staranje poteka v aerobnih pogojih pri preskusni temperaturi in v temi ali pri difuzni svetlobi.
With fine scissors the anal or the dorsal fin will be cut off in each individual fish and placed into a tube filled with 100 μl of extraction-buffer 1 (details on buffer preparation see below).
Po potrebi je treba aerobne pogoje vzdrževati z rahlim prezračevanjem.
The scissors will be cleaned after each single fish in a beaker filled up with distilled H2O and dried with a paper tissue.
Med staranjem se vsebnost lahko razgradljive organske snovi zmanjša.
Now the fin-tissues will be homogenised by a micro tube teflon pistil for the lysis of cells.
Krožni preskus (3) ni pokazal razlike med možnostjo razgradnje staranih in sveže odvzetih vzorcev morske vode.
For each tube a new pistil will be used to prevent any contaminations.
Morska voda se pred uporabo tretira tako, da se odstranijo grobi delci, npr. s filtriranjem skozi najlonski filter ali filter papir (ne membranski filter ali filter GF/C) ali s sedimentacijo in odlivanjem.
The pistils will be placed overnight in 0,5 M NaOH, rinse for 5 minutes in distilled H2O and stored in ethanol or sterile after autoclave until use.
Uporabljeni postopek je treba navesti.
It is also possible to store the fin tissue without any extraction-buffer 1 on dry-ice and then at – 80 °C refrigerator to prevent any degeneration of the DNA.
Če se izvede staranje, se po njem izvede predhodno tretiranje.
But the extraction runs better, if you extract the DNA at the same time (handling see above; samples should be thawed on ice after storaging at – 80 °C before the buffer will be filled in the tubes).
Založne raztopine za mineralne hranilne snovi
After homogenizing all tubes will be placed in a water bath and boiled for 15 minutes at 100 °C.
Iz analitsko čistih reagentov se pripravijo naslednje založne raztopine.
Then 100 μl of the extraction buffer 2 (details on buffer preparation see below) will be pipetted into each tube.
Kalijev dihidrogen ortofosfat, KH2PO4
The samples will be stored at room temperature for 15 minutes and in the meantime they will be sometimes gently shaken by hand.
8,50 g
Afterwards all tubes will be placed in the water bath again and boiled for another 15 minutes at 100 °C.
Dikalijev hidrogen ortofosfat, K2HPO4
Until further analysis the tubes will be frozen at – 20 °C.
21,75 g
Buffer preparation
Dinatrijev hidrogen ortofosfat dihidrat, Na2HPO4 · 2H2O
PCR-buffer 1:
33,30 g
500 mg N-Lauroylsarcosine (e.g. Merck KGaA, Darmstadt, GE)
Amonijev klorid, NH4Cl
ad 100 ml dest.
0,50 g
→ autoclave
Raztopiti in dopolniti do 1 litra z destilirano vodo.
PCR-buffer 2:
Kalcijev klorid, CaCl2
20 g Chelex (e.g. Biorad, Munich, GE)
27,50 g
To swell in 100 ml dest.
Magnezijev sulfat heptahidrat, MgSO4 · 7H2O
Determination of genetic sex (by PCR-method) in medaka (Prepared by the Laboratory for Aquatic Organisms of Bayer CropScience AG and Universität Würzburg Biozentrum)
22,50 g
The prepared and frozen tubes (described in the above section) will be thawed on ice.
Železov (III) klorid heksahidrat, FeCl3 · 6H2O
After that, they will be centrifuged using an Eppendorf centrifuge (30 sec at max. speed, at room temperature).
0,25 g
For the PCR, the clear supernatant separated from the precipitate will be used.
Obarjanje v raztopini (d) bi se lahko preprečilo z dodajanjem ene kapljice koncentrirane HCl ali 0,4 g etilendiamintetraocetne kisline (EDTA, dinatrijeva sol) na liter.
It has absolutely to be avoided that any traces of Chelex (localized in the precipitate) are transferred to the PCR reaction, because this will interfere with the “Taq”-polymerase activity.
Če se obarjenje pojavi v založni raztopini, se nadomesti s svežo raztopino.
The supernatant will be used directly or can be stored frozen (at – 20 °C) and rethawed again in several cycles without negative impact on the DNA for later analyses.
Priprava preskusnega medija
Preparation of the “Reaction Mix” (25 μl per sample):
Doda se 1 ml vsake od zgornjih založnih raztopin na liter predhodno tretirane morske vode.
Volume
Mikroorganizmom, ki so že prisotni v morski vodi, se ne doda poseben inokulum.
Final Concentration
Število heterotrofov, ki v preskusnem mediju morske vode tvorijo kolonije (in po možnosti tudi v izvirnih vzorcih morske vode), se (neobvezno) določi npr. s štetjem kolonij na ploščah, za kar se uporabi morski agar.
Template DNA
To je zlasti zaželeno za vzorce iz obalnih ali onesnaženih mest.
0,5μl-2μl
Heterotrofna mikrobna dejavnost v morski vodi se preveri s preskusom z referenčno snovjo.
buffer with MgCl2
Priprava bučk
2,5μl
Zagotovi se, da bo vsa steklena posoda temeljito očiščena, vendar ne nujno sterilna (npr. z alkoholno klorovodikovo kislino), sprana in posušena pred uporabo, da se prepreči onesnaženje z ostanki iz prejšnjih preskusov.
Nucleotides (each of dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
Bučke je treba očistiti tudi pred prvo uporabo.
Forward Primer (10μM) (see below 3-5)
Preskusne snovi v dveh bučkah se ocenijo hkrati, skupaj z bučko za referenčno snov.
0,5μl
V dveh ponovitvah se izvede slepi preskus brez preskusne ali referenčne snovi za določanje analitskih slepih vzorcev.
Reverse Primer (10μM) (see below 3-5)
Preskusne snovi, ki se lahko ustrezno dodajo prek koncentrirane založne raztopine, se raztopijo v preskusnem mediju, da se zagotovijo želene začetne koncentracije, ki so običajno 540 mg DOC/l.
Water (PCR grade)
Referenčna snov se normalno preskusi pri začetni koncentraciji, ki ustreza 20 mg DOC/l.
up to 25μl
Če se uporabijo založne raztopine preskusnih in/ali referenčnih sovi, se zagotovite, da se slanost medija morske vode ne spremeni bistveno.
Taq E- Polymerase
Če se lahko pričakujejo strupeni učinki ali jih ni mogoče izključiti, je v načrt preskusa priporočljivo vključiti dve ponovitvi preskusa zaviranja.
0,3μl
Preskusna in referenčna snov se dodata v isto posodo, pri čemer naj bo zaradi primerjave koncentracija referenčne snovi običajno enaka kot pri kontrolnem preskusu (tj. 20 mg DOC/l).