natgillin/translations-raw huggingface dataset:
2 to – 7
Usedline s primešano preskusno snovjo, pripravljene v skladu z odstavkom 16b, se vnesejo v posode, nad usedlino pa se doda voda, da je razmerje med prostornino usedline in vode 1: 4.
Pre-moist soil
Plast usedline mora biti debela od 1,5 do 3 cm (v kristalizirki je lahko nekoliko tanjša).
Distribute juveniles into batches
Da se prepreči ločevanje sestavin usedline in ponovna suspenzija finega materiala med dodajanjem preskusne vode v vodni stolpec, se lahko usedlina med točenjem vode prekrije s plastičnim pokrovom, ki se takoj nato odstrani.
stock solutions and apply test chemical if solid chemical, water soluble or surface application is required.
Ustrezen čas za uravnoteženje je odvisen od usedline in kemikalije, lahko pa traja od več ur do več dni in v redkih primerih do pet tednov.
Measure soil pH and weigh the containers.
Ker bi bil tako na voljo čas za razgradnjo številnih kemikalij, se na uravnoteženje ne sme čakati, ampak se za to priporoča 48-urno obdobje.
Add food.
Vendar se lahko čas za uravnoteženje podaljša, če je znano, da je razpolovna doba razgradnje kemikalije v usedlini dolga (glej odstavek 8).
Introduce collembolans.
Po koncu tega dodatnega obdobja za uravnoteženje je treba izmeriti koncentracijo preskusne kemikalije v vodi nad usedlino, porni vodi in usedlini vsaj pri najvišji in nižji koncentraciji (glej odstavek 38).
Range-finding test F. fimetaria:
Te analitske določitve preskusne kemikalije omogočajo izračun masne bilance in izražanje rezultatov na podlagi izmerjenih koncentracij.
Terminate test, extract animals, measure soil pH and loss of water (weight)
Preskusne posode je treba pokriti (npr. s steklenimi ploščami).
Measure moisture content and replenish water and add 2-10 mg yeast
Za to je treba uporabiti destilirano ali deionizirano vodo, da se prepreči kopičenje soli.
Definitive F. fimetaria test:
Kristalizirke v kletkah za razmnoževanje niso pokrite in se lahko, vendar ni nujno, prilagodijo, da se nadomesti izguba vode v preskusnem obdobju, saj so nizi jajčec v stiku z vodo samo približno en dan, kristalizirke pa se uporabljajo le v kratki fazi preskusa.
Range-finding F. candida:
Dodajanje preskusnih organizmov
Definitive F. candida test:
Štiri do pet dni pred dodajanjem ličink prvega stadija za prvo generacijo je treba jajčna legla vzeti iz kulture in jih vstaviti v majhne posode v gojišču.
Guidance on rearing and synchronisation of F. fimetaria and F. candida
Uporabi se lahko starejši medij iz založne kulture ali sveže pripravljeni medij.
The time and durations given in this guidance should be checked for each specific collembolan strain to ensure that timing will allow for sufficient synchronised juveniles.
V vsakem primeru je treba v gojišče dodati majhno količino hrane, npr. nekaj kapljic filtrata iz fino mlete suspenzije ribje hrane v kosmičih (glej Dodatek 2).
Basically, the incidence of oviposition after the adults are transferred to fresh substrate and egg hatching determines the appropriate day for egg collection and collection of synchronous juveniles.
Uporabiti je treba samo sveže odložena jajčna legla.
It is recommended to have a permanent stock culture consisting of e.g. 50 containers/Petri dishes.
Ličinke se običajno izvalijo nekaj dni po tem, ko so bila jajčeca odločena (2 do 3 dni za C. riparius pri 20 °C ter 1 do 4 dni za C. dilutus pri 23 °C in C. yoshimatsui pri 25 °C), rast ličink pa poteka v štirih stadijih, od katerih vsak traja 4–8 dni.
The stock culture should be kept in a good feeding condition by weekly feeding, watering and removal of old food and carcasses.
V preskusu je treba uporabiti ličinke prvega stadija (največ 48 ur po tem, ko se izvalijo).
Too few collembolans on the substrate may result in inhibition by more fungal growth.
Stadij ličink bi se morda lahko preveril z merjenjem širine glave (7).
If the stock culture is used for egg production too often, the culture may get fatigue.
Dvajset ličink prvega stadija za prvo generacijo se s topo pipeto naključno vnese v vsako preskusno posodo, ki vsebuje sistem z vodo in usedlino.
Signs of fatigue are dead adults and mould on the substrate.
Med dodajanjem ličink v preskusne posode se ustavi prezračevanje vode, ki se ne sme izvajati še 24 ur potem, ko so bile ličinke dodane (glej odstavek 32).
The remaining eggs from the production of synchronous animals can be used to rejuvenate the culture.
Glede na uporabljeni načrt preskusa (glej odstavka 19 in 20) je število uporabljenih ličink na koncentracijo vsaj 120 (6 ponovitev na koncentracijo) za pristop ECX in 160 za pristop NOEC (8 ponovitev na koncentracijo).
In a synchronous culture of F. fimetaria, males are distinguished from females primarily by size.
Pri načrtu z usedlino s primešano preskusno snovjo se izpostavljenost začne z vnosom ličink.
Males are clearly smaller than females, and the walking speed of the males is faster than for females.
Primešanje preskusne snovi v vodo nad usedlino
Correct selection of the gender requires little practice and can be confirmed by microscopic inspection of the genital area (13).
Štiriindvajset ur po vnosu ličink prvega stadija za prvo generacijo se preskusna kemikalija primeša v vodni stolpec nad usedlino, pri čemer se ponovno zagotovi rahlo prezračevanje (za mogoče spremembe načrta preskusa glej odstavek 7).
The culturing substrate is plaster of Paris (calcium sulphate) with activated charcoal.
Pri načrtu z vodo s primešano preskusno snovjo se izpostavljenost začne s primešanjem preskusne snovi v vodo (tj. en dan po vnosu ličink).
This provides a moist substrate, with the function of the charcoal being to absorb waste gases and excreta (14) (15).
Zbiranje preobraženih odraslih osebkov
Different forms of charcoal may be used to facilitate observations of the Collembola.
Preobražene trzače prve generacije se iz preskusnih posod zberejo vsaj enkrat, bolje pa dvakrat na dan (glej točko 36) z aspiratorjem, sesalnikom ali podobno napravo (glej Dodatek 5).
For example, powdered charcoal is used for F. candida and F. fimetaria (producing a black/grey plaster of Paris):
Paziti je treba, da se odrasli osebki na poškodujejo.
Substrate constituents:
Zbrane trzače iz štirih preskusnih posod v okviru enega tretiranja se vnesejo v kletke za razmnoževanje, ki so jim bile predhodno dodeljene.
20 ml of activated charcoal
Na dan prve preobrazbe (samca) se v kristalizirke pod vodno gladino s pipeto primeša majhna prostornina založne raztopine preskusne kemikalije (načrt z vodo s primešano preskusno snovjo).
200 ml of distilled water
Koncentracija preskusne kemikalije v kristalizirki je običajno enaka kot v posodah za tretiranje, ki so dodeljene določeni kletki za razmnoževanje.
200 ml of plaster of Paris
Pri načrtu z usedlino s primešano preskusno snovjo se kristalizirke pripravijo približno 11. dan po začetku izpostavljenosti (tj. vnosu ličink prve generacije), da se lahko ravnotežje vzpostavi približno 48 ur pred prvim odlaganjem nizov jajčec.
50 g of activated pulverized charcoal
Nizi jajčec se zberejo iz kristalizirke v kletki za razmnoževanje s pinceto ali topo pipeto.
260-300 ml of distilled water
Vsak niz jajčec se vnese v posodo z gojiščem iz kristalizirke, iz katere je bil odvzet (npr. iz vdolbinice 12-mestne mikroplošče skupaj z vsaj 2,5 ml medija).
400 g plaster of Paris.
Posode z nizi jajčec so pokrite s pokrovom, da se prepreči znatno izhlapevanje.
The substrate mixture is allowed to set before use.
Nizi jajčec se opazujejo vsaj šest dni po tem, ko so nastali, da se lahko razvrstijo kot fertilni ali nefertilni.
Breeding
Za začetek druge generacije se iz vsake kletke za razmnoževanje izberejo trije ali bolje šest fertilnih nizov jajčec skupaj z nekaj hrane, ki omogoča izvalitev.
Collembolans are held in containers such as Petri dishes (90 mm × 13 mm), with the bottom covered by a 0,5 cm layer of plaster /charcoal substrate.
Ti nizi jajčec bi morali nastati na vrhuncu obdobja odlaganja jajčec, ki se v kontrolah običajno pojavi okrog 19. dne preskusa.
They are cultured at 20 ± 1 °C at a light-dark cycle of 12-12 hours (400-800 Lux).
V idealnih pogojih se druga generacija vseh tretiranj začne na isti dan, vendar zaradi učinkov na razvoj ličink, povezanih s kemikalijami, to ni vedno mogoče.
Containers are kept moist at all times ensuring that the relative humidity of the air within the containers is 100 %.
V takem primeru se lahko v višjih koncentracijah začne pozneje kot v tretiranjih z nižjimi koncentracijami in v kontroli (s topilom).
This can be guaranteed by presence of free water within the porous plaster, but avoiding generating a water film on the plaster surface.
a.
Water loss can be prevented by providing a humid ambient air.
Pri načrtu z vodo s primešano preskusno snovjo se sistem z vodo in usedlino za drugo generacijo pripravi s primešanjem preskusne kemikalije v vodni stolpec nad usedlino približno 1 uro pred vnosom ličink prvega stadija v preskusne posode.
Any dead individuals should be removed from the containers, as should any mouldy food.
Pod vodno gladino se s pipeto vnesejo majhne prostornine raztopin preskusne kemikalije.
To stimulate production of eggs it is necessary to transfer the adult animals to Petri dishes with newly prepared plaster of Paris/charcoal substrate.
Po primešanju preskusne snovi se zagotovi rahlo prezračevanje.
Granulated dried baker's yeast is used as the sole food supply for both F. candida and F. fimetaria.
b.
Fresh food is provided once or twice a week, to avoid moulding.
Pri načrtu z usedlino s primešano preskusno snovjo se posode za izpostavljanje, ki vsebujejo sistem vode in usedline, za drugo generacijo pripravijo enako kot za prvo generacijo.
It is placed directly on the plaster of Paris in a small heap.
Dvajset ličink prvega stadija (največ 48 ur po tem, ko se izvalijo) druge generacije se s topo pipeto naključno vnese v vsako preskusno posodo, ki vsebuje sistem z vodo in usedlino s primešano preskusno snovjo.
The mass of baker's yeast added should be adjusted to the size of the collembolan population, but as a general rule 2-15 mg is sufficient.
Med dodajanjem ličink prvega stadija v preskuse posode se ustavi prezračevanje vode, ki se ne sme izvajati še 24 ur potem, ko so bile ličinke dodane.
Synchronisation
Glede na uporabljeni načrt preskusa (glej odstavka 19 in 20) je število uporabljenih ličink na koncentracijo vsaj 120 (6 ponovitev na koncentracijo) za pristop ECX in 160 za pristop NOEC (8 ponovitev na koncentracijo).
The test should be performed with synchronised animals to obtain homogeneous test animals of the same instar and size.
Ličinke v preskusnih posodah je treba hraniti po možnosti vsak dan ali vsaj trikrat na teden.
Furthermore, the synchronisation enables discrimination of F. fimetaria males and females from the age of 3 weeks and onwards based on sexual dimorphism, i.e. size differences.
Ustrezna količina hrane za mlade ličinke v prvih 10 dneh njihovega razvoja je 0,25–0,5 mg (0,35–0,5 mg za C. yoshimatsui) ribje hrane (suspenzija v vodi ali fino mleta hrana, npr. Tetra-Min ali Tetra-Phyll; glej podrobnosti v Dodatku 2) na ličinko na dan.
The procedure below is a suggestion on how to obtain synchronised animals (the practical steps are optional).
Starejše ličinke lahko potrebujejo nekoliko več hrane:
Synchronisation.
0,5– 1,0 mg na ličinko na dan mora biti dovolj za preostanek preskusa.
Prepare containers with a 0,5 cm layer of plaster of Paris/charcoal substrate.
Obrok hrane je treba zmanjšati v vseh tretiranih vzorcih in kontrolah, če se opazi rast plesni ali smrtnost v kontrolah.
For egg laying transfer 150-200 adult F. fimetaria and 50-100 F. candida from the best 15-20 containers of the stock culture with 4-8 weeks old substrate to the containers and feed them 15 mg baker's yeast.
Če razvoja plesni ni mogoče ustaviti, je treba preskus ponoviti.
Avoid bringing juveniles together with adults as presence of juveniles may inhibit egg production.
Toksikološki pomen izpostavljenosti z zaužitjem je običajno večji pri kemikalijah z visoko afiniteto do organskega ogljika ali kemikalij, ki se kovalentno vežejo na usedlino.
Keep the culture at 20 ± 1 °C (the mean should be 20 °C) and a light-dark cycle of 12-12 hours (400-800 Lux).
Zato se lahko pri preskušanju kemikalij s takimi lastnostmi količina hrane, potrebna za zagotovitev preživetja in naravno rast ličink, doda formulirani usedlini pred obdobjem stabilizacije, kar je odvisno od regulativnih zahtev.
Ensure that fresh food is available and the air is water saturated.
Da se prepreči poslabšanje kakovosti vode, je treba namesto ribje hrane uporabiti rastlinski material, npr. dodajanje 0,5 % (suhe teže) fino mletega listja velike koprive (Urtica dioica), bele murve (Morus alba), plazeče detelje (Trifolium repens), špinače (Spinacia oleracea) ali drugega rastlinskega materiala (Cerophyl ali α-celuloza).
Lack of food may lead the animals to defecate on the eggs resulting in fungal growth on the eggs or F. candida may cannibalise its own eggs.
Dodajanje celotnega obroka vira organske hrane v usedlino pred primešanjem preskusne snovi ni niti nepomembno glede na kakovost vode in biološko učinkovitost (21) niti standardizirana metoda, vendar so nedavne študije dokazale, da ta metoda deluje (19) (26).
After 10 days the eggs are carefully collected with a needle and spatula and moved to “egg-paper” (small pieces of filter paper dipped in plaster of Paris/charcoal slurry) which is placed in a container with fresh plaster/charcoal substrate.
Odraslih trzač v kletki za razmnoževanje običajno ni treba hraniti, vendar se plodnost in fertilnost povečata, če se jim kot vir hrane za odrasle preobražene osebke zagotovi vatna blazinica, namočena v nasičeno raztopino saharoze (34).
A few grains of yeast are added to the substrate to attract the juveniles and make them leave the egg-paper.
Rahlo prezračevanje vode nad usedlino v preskusnih posodah se zagotavlja 24 ur po vnosu ličink prvega stadija obeh generacij in se izvaja ves čas preskusa (paziti je treba, da koncentracija raztopljenega kisika ne pade pod 60 % ASV).
It is important that the egg-paper and substrate are humid, or the eggs will dehydrate.
Prezračevanje se zagotavlja prek steklene pasteurjeve pipete, katere izhod je pritrjen 2 do 3 cm nad plastjo usedline in ki ustvarja nekaj mehurčkov na sekundo.
As an alternative, adult animals may be removed from the synchronisation culture boxes after producing eggs for 2 or 3 days.
Pri preskušanju hlapnih kemikalij je treba upoštevati, da se sistem z vodo in usedlino ne prezračuje, medtem ko je treba hkrati izpolniti merilo za veljavnost najmanj 60 % ASV (odstavek 10).
After three days most of the eggs on the egg-paper will have hatched, and some juveniles may be found under the egg-paper.
Več smernic je na voljo v (16).
To have evenly aged juveniles, the egg-paper with un-hatched eggs is removed from the Petri dish with forceps.
Preskus s C. riparius se izvaja pri konstantni temperaturi 20 °C (± 2 °C).
The juveniles, now 0-3 days, stay in the dish and are fed baker's yeast.
Za C. dilutus in C. yoshimatsui sta priporočeni temperaturi 23 °C oziroma 25 °C (± 2 °C).
Un-hatched eggs are discharged.
Uporablja se 16-urno obdobje osvetljenosti, jakost svetlobe pa mora biti od 500 do 1000 luksov.
Eggs and hatched juveniles are cultured in the same manner as the adults.
Pri kletkah za razmnoževanje se lahko doda ena ura faze svitanja in mraka.
In particular for F. fimetaria the following measures should be taken:
Trajanje izpostavljenosti
ensuring sufficient fresh food, old moulding food is removed, after 1 week the juveniles are divided into new Petri dishes provided that the density is above 200.
Načrt z vodo s primešano preskusno snovjo:
Handling collembolans at test initiation
obdobje izpostavljenosti se pri prvi generaciji začne, ko se preskusna kemikalija primeša v vodo nad usedlino v preskusni posodi (to je en dan po vnosu ličink; za mogoče spremembe načrta izpostavljenosti glej odstavek 7).
9-12 days old F. candida or the 23-26 days old F. fimetaria are collected, e.g. by suction, and released into a small container with moist plaster/charcoal substrate and their physical condition is checked under the binocular (injured and damaged animals are disposed).
Izpostavljenost druge generacije ličink se začne takoj, ker se vnesejo v sistem z vodo in usedlino, v katerega je bila preskusna snov že primešana.
All steps should be done while keeping the collembolans in a moist atmosphere to avoid drought stress, e.g. by using wetted surfaces etc.
Najdaljše trajanje izpostavljenosti pri C. riparius in C. yoshimatui je za prvo generacijo 27 dni, za drugo generacijo pa 28 dni (ličinke prve generacije preživijo en dan v posodah brez izpostavljenosti).
Turn the container up-side down and knock on it to transfer the collembolans to the soil.
Glede na prekrivanje celoten preskus traja približno 44 dni.
Static electricity should be neutralised, otherwise the animals may just fly into the air, or stick to the side of the test container and dry out.
Pri C. dilutus je najdaljše trajanje izpostavljenosti 64 dni za prvo generacijo oziroma 65 dni za drugo generacijo.
An ioniser or a moist cloth below the container may be used for neutralisation.
Preskus traja skupaj približno 100 dni.
The food should be spread all over the soil surface and not just in one lump.
Načrt z usedlino s primešano preskusno snovjo:
During transportation and during the testing period it should be avoided to knock or otherwise physically disturb the test containers, as this may increase the compaction of the soil, and hamper the interaction between the collembolans.
izpostavljenost se začne z vnosom ličink in traja najdlje 28 dni za obe generaciji pri C. riparius in C. yoshimatsui ter največ 65 dni za obe generaciji pri C. dilutus.
A number of prerequisites should be fulfilled in advance before using alternative species:
Samce je mogoče preprosto prepoznati po pahljačastih tipalkah in drži vitkega telesa.
They should be unequivocally identified;
Preskusne posode obeh generacij je treba opazovati vsaj trikrat na teden, da se vizualno oceni kakršno koli neobičajno obnašanje (npr. zapuščanje usedline, nenavadno plavanje) v primerjavi s kontrolo.
The rationale for the selection of the species should be given;
V obdobju preobrazbe, ki se pri C. riparius in C. yoshimatsui začne približno 12 dni po vnosu ličink (20 dni po vnosu pri C. dilutus) se preobražene trzače preštejejo in opredelijo po spolu vsaj enkrat na dan, priporočljivo pa je dvakrat na dan (zgodaj zjutraj in pozno popoldne).
It should be ensured that the reproductive biology is included in the testing phase so it will be a potential target during the exposure;
Po identifikaciji se trzače prve generacije previdno odstranijo iz posod in prenesejo v kletko za razmnoževanje.
The life-history should be known:
Trzače druge generacije se odstranijo in po identifikaciji usmrtijo.
age at maturation, duration of egg development, and instars subject to exposure;
Vse nize jajčec, odložene v preskusnih posodah prve generacije, je treba zbrati posamezno in jih prenesti z vsaj 2,5 ml naravne vode v 12-mestne mikroplošče (ali druge primerne posode), ki so pokrite s pokrovom, da se prepreči znatno izhlapevanje.
Optimal conditions for growth and reproduction should be provided by the test substrate and food supply;
Zabeležiti je treba tudi število mrtvih ličink in vidnih bub, ki se niso preobrazile.
Variability should be sufficiently low for precise and accurate toxicity estimation.
Primeri kletke za razmnoževanje, preskusne posode in sesalnika so navedeni v Dodatku 5.
Extraction and counting of animals
Razmnoževanje
Two methods of extraction can be performed.
Učinki na razmnoževanje se ocenijo s številom nizov jajčec, ki jih odložijo trzače prve generacije, ter njihovo fertilnostjo.
First method:
Nizi jajčec se enkrat na dan zberejo iz kristalizirke, ki je v vsaki posodi za gojenje.
A controlled temperature gradient extractor based on principles by MacFadyen can be used (1).
Nize jajčec je treba zbrati in prenesti z vsaj 2,5 ml naravne vode v 12-mestne mikroplošče (en niz jajčec v eno vdolbinico) ali druge primerne posode, ki so pokrite s pokrovom, da se prepreči znatno izhlapevanje.
The heat coming from a heating element at the top of the extraction box (regulated through a thermistor placed on the surface of the soil sample).
Za vsak niz jajčec se dokumentirajo naslednje lastnosti:
The temperature in the cooled liquid surrounding the collecting vessel is regulated through a thermistor situated at the surface of the collection box (placed below the soil core).
dan odlaganja, velikost (normalna, tj. 1,0 ± 0,3 cm, ali majhna, običajno ≤ 0,5 cm) in struktura (običajna = oblika banane s spiralnim nizom jajčec ali nenormalna, npr. niz jajčec, ki ni v obliki spirale) ter fertilnost (fertilen ali nefertilen).
The thermistors are connected to a programmable controlling unit which raises the temperature according to a pre-programmed schedule.
Fertilnost niza jajčec se oceni v šestih dneh po tem, ko je bil odložen.
Animals are collected in the cooled collecting box (2 °C) with a bottom layer of plaster of Paris/charcoal.
Niz jajčec se šteje za fertilen, če se izvali vsaj ena tretjina jajčec.
Extraction is started at 25 °C and the temperature is increased automatically every 12 h by 5 °C and has a total duration of 48 hours.
Skupno število samic, dodanih v kletko za razmnoževanje, se uporabi za izračun števila nizov jajčec na samico in število fertilnih nizov jajčec na samico.
After 12 h at 40 °C the extraction is finished.
Po potrebi se lahko število jajčec v nizu jajčec oceni nedestruktivno z uporabo metode krožnega štetja (podrobno opisana v 32 in 33).
Second method:
Analitske meritve
After the experimental incubation period the number of juvenile Collembola present is assessed by flotation.
Koncentracija preskusne kemikalije
For that purpose the test is performed in the vessels of approximately 250 ml volume.
Na začetku (v primeru primešanja preskusne snovi v vodo po možnosti eno uro po vnosu preskusne snovi) in koncu preskusa je treba analizirati vsaj vzorce vode nad usedlino, porne vode in usedline, in sicer pri najvišji in nižji koncentraciji.
At the end of the test approx.
To velja za posode iz obeh generacij.
200 ml of distilled water are added.
Iz kristalizirk v kletki za razmnoževanje se analizira samo voda nad usedlino, ker pridejo v stik z njo nizi jajčec (pri načrtu z usedlino s primešano preskusno snovjo se lahko predvidi analitska potrditev koncentracije usedline).
The soil is gently agitated with a fine paintbrush to allow Collembola to float to the water surface.
Po potrebi se lahko med preskusom izvedejo nadaljnje meritve usedline, porne vode ali vode nad usedlino.
A small amount, approx.
Te določitve koncentracije preskusne snovi pokažejo obnašanje/porazdelitev preskusne kemikalije v sistemu vode in usedline.
0,5 ml, of black Kentmere photographic dye may be added to the water to aid counting by increasing the contrast between the water and the white Collembola.
Za vzorčenje usedline in porne vode na začetku preskusa in med njim (glej odstavek 39) so potrebne dodatne preskusne posode za izvedbo analitskega določanja.
The dye is not toxic to Collembola.
Meritve usedline pri načrtu z vodo s primešano preskusno snovjo morda ne bodo potrebne, če je bila porazdelitev preskusne kemikalije med vodo in usedlino jasno določena v študiji vode/usedline v primerljivih pogojih (npr. razmerje med usedlino in vodo, vrsta vnosa, vsebnost organskega ogljika v usedlini) ali če je bilo dokazano, da izmerjene koncentracije v vodi nas usedlino ostajajo v razponu od 80 do 120 % nominalnih ali izmerjenih začetnih koncentracij.
Counting:
Kadar se izvajajo vmesne meritve (npr. 7. in/ali 14. dan) in če so za analize potrebni veliki vzorci, ki jih ni mogoče odvzeti iz preskusnih posod, ne da bi to vplivalo na preskusni sistem, je treba analitske določitve izvesti na vzorcih iz dodatnih preskusnih posod, ki se tretirajo enako (vključno s prisotnostjo preskusnih organizmov), vendar se za biološka opažanja ne uporabljajo.