natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Excision of the liver
AMA temelji na protokolu vodne izpostavljenosti, pri katerem se preskusna kemikalija uvaja v preskusne komore prek pretočnega sistema.
Transfer the test fish from the container for transport to the anaesthetic solution using the small spoon-net.
Vendar pretočne metode omejujejo vrste kemikalij, ki se lahko preskusijo, kot določajo fizikalno-kemijske lastnosti kemikalije.
After the test fish is anaesthetised, transfer the test fish on the filter paper (or a paper towel) using tweezers (commodity type).
Zato je treba pred uporabo tega protokola pridobiti osnovne informacije o kemikaliji, ki so pomembne za določitev preverljivosti, pri čemer je treba upoštevati Smernico OECD za preskušanje strupenosti zahtevnih snovi in zmesi v vodnem okolju (4).
When grasping the test fish, apply the tweezers to the sides of the head to prevent breaking the tail.
Značilnosti, ki kažejo, da bi lahko bilo kemikalijo težko preskusiti v vodnih sistemih, vključujejo:
Wipe the water on the surface of the test fish on the filter paper (or the paper towel).
visok porazdelitveni koeficient oktanol/voda (log Kow), visoko hlapnost, občutljivost za hidrolizo in občutljivost za fotolizo v laboratorijskih svetlobnih pogojih.
Then make a small transverse incision partway between the ventral neck region and the mid-abdominal region using dissection scissors.
Za določanje preverljivosti so lahko pomembni tudi drugi dejavniki, ki jih je treba določiti na podlagi posameznega primera.
Insert the dissection scissors into the small incision, and incise the abdomen from a point caudal to the branchial mantle to the cranial side of the anus along the midline of the abdomen.
Če ni mogoč uspešen preskus kemikalije z uporabo pretočnega preskusnega sistema, se lahko uporabi sistem s statičnim obnavljanjem.
Be careful not to insert the dissection scissors too deeply so as to avoid damaging the liver and gonad.
Če noben sistem ne more sprejeti preskusne kemikalije, se ne preskuša z uporabo tega protokola.
Conduct the following operations under the stereoscopic microscope.
Sistem izpostavljenosti
Place the test fish abdomen side up on the paper towel (glass Petri dish or slide glass are also available).
Kadar je mogoče, ima pretočni sistem za redčenje prednost pred sistemom s statičnim obnavljanjem.
Extend the walls of the abdominal cavity with precision tweezers and exteriorise the internal organs.
Če fizikalnih in/ali kemijskih lastnosti katere koli preskusne kemikalije ni mogoče podrediti pretočnemu sistemu za redčenje, se lahko uporabi nadomestni sistem izpostavljenosti (npr. s statičnim obnavljanjem).
It is also acceptable to exteriorise the internal organs by removing one side of the wall of the abdominal cavity if necessary.
Sestavni deli sistema, ki pridejo v stik z vodo, morajo biti iz stekla, nerjavnega jekla in/ali politetrafluoroetilena.
Expose the connected portion of the liver and gallbladder using another pair of precision tweezers.
Vendar se lahko uporabi tudi ustrezna plastika, če ne vpliva na študijo.
Then grasp the bile duct and cut off the gallbladder.
Posode za izpostavljanje morajo biti akvariji iz stekla ali nerjavnega jekla, opremljeni z dvižnimi cevmi, pri čemer mora biti približna prostornina posode med 4,0 in 10,0 l, najmanjša globina vode pa med 10 do 15 cm.
Be careful not to break the gallbladder.
Sistem mora podpirati vse koncentracije izpostavljenosti in kontrolo s štirimi ponovitvami na tretiranje.
Grasp the oesophagus and excise the gastrointestinal tract from the liver in the same way.
Pretok v posamezni posodi mora biti konstanten zaradi vzdrževanja bioloških pogojev in izpostavljenosti kemikaliji (npr. 25 ml/min).
Be careful not to leak the contents of the gastrointestinal tract.
Tretirane posode je treba naključno dodeliti na položaj v sistemu izpostavljenosti, da se zmanjšajo potencialni učinki zaradi položaja, vključno z majhnimi razlikami v temperaturi, jakosti svetlobe itd. Fluorescenčno osvetlitev je treba uporabiti za zagotovitev obdobja osvetljenosti 12 ur svetlobe:
Excise the caudal gastrointestinal tract from the anus and remove the tract from the abdominal cavity.
12 ur teme pri jakosti od 600 do 2000 luksov (lumnov/m2) na vodni gladini.
Trim the mass of fat and other tissues from the periphery of the liver.
Temperaturo vode je treba vzdrževati pri 22 °C ± 1 °C, pH med 6,5 in 8,5, koncentracijo raztopljenega kisika (DO) pa > 3,5 mg/l (> 40 % nasičenosti z zrakom) v posamezni preskusni posodi.
Be careful not to scratch the liver.
Najnižjo temperaturo vode, pH in koncentracijo raztopljenega kisika je treba meriti vsak teden;
Grasp the hepatic portal area using the precision tweezers and remove the liver from the abdominal cavity.
temperaturo je po možnosti treba stalno meriti v vsaj eni preskusni posodi.
Place the liver on the slide glass.
V Dodatku 1 so opisani poskusni pogoji, v katerih je treba izvesti protokol.
Using the precision tweezers, remove any additional fat and extraneous tissue (e.g., abdominal lining), if needed, from the surface of the liver.
Za več informacij o vzpostavitvi pretočnega sistema izpostavljenosti in/ali sistemov s statičnim obnavljanjem glej Standardne smernice ASTM za izvajanje preskusov akutne strupenosti na preskusnih materialih z ribami, velikimi vretenčarji in dvoživkami (5) ter splošne preskuse vodne toksikologije.
Measure the liver weight with 1.5 ml microtube as a tare using an electronic analytical balance.
Kakovost vode
Record the value on the worksheet (read: 0,1 mg).
Uporabi se lahko vsaka lokalno razpoložljiva voda (npr. izvirska voda ali vodovodna voda, prečiščena z ogljem), ki omogoča normalno rast in razvoj paglavcev X. laevis.
Confirm the identification information on the microtube label.
Ker se lahko kakovost lokalne vode med posameznimi območji bistveno razlikuje, je treba izvesti analizo kakovosti vode, zlasti če niso na voljo historični podatki o uporabi vode za gojenje Xenopus.
Close the cap of the microtube containing the liver.
Posebno pozornost je treba nameniti zlasti zagotavljanju, da v vodi ni bakra, klora in kloraminov, ki so strupeni za žabe in paglavce.
Store it in a cooling rack (or ice rack).
Priporoča se tudi analiza ravni naravnega ozadja fluorida, perklorata in klorata (stranski produkti dezinfekcije pitne vode) v vodi, ker so vsi ti anioni substrati prenašalca joda v ščitnični žlezi, pri čemer lahko višje ravni posameznega aniona kot moteči dejavniki vplivajo na rezultat študije.
Following the excision of one liver, clean the dissection instruments or replace them with clean ones.
Analizo je treba izvesti pred začetkom preskušanja, v preskusni vodi pa običajno ne sme biti teh anionov.
Remove livers from all of the fish in the transport container as described above.
Koncentracija jodida v preskusni vodi
After the livers have been excised from all of the fish in the transport container (i.e., all males or females in a test chamber), place all liver specimens in a tube rack with a label for identification and store it in a freezer.
Da lahko ščitnična žleza sintetizira ščitnični hormon, mora imeti ličinka na voljo dovolj jodida v vodi in hrani.
When the livers are donated for pre-treatment shortly after the excision, the specimens are carried to the next workstation in a cooling rack (or ice rack).
Zdaj ni empiričnih smernic za najmanjše koncentracije jodida.
Following liver excision, the fish carcass is available for measurement of secondary sex characteristics.
Vendar lahko razpoložljivost jodida vpliva na odzivnost ščitničnega sistema na snovi, ki vplivajo na ščitnico, in spremeni bazalno aktivnost ščitnične žleze, tj. vidik, ki ga je treba upoštevati pri razlagi rezultatov histopatologije ščitnice.
Specimen
Zato je treba sporočiti izmerjene koncentracije jodida v preskusni vodi.
Store the liver specimens taken from the test fish at ≤ – 70 °C if they are not used for the pre-treatment shortly after the excision.
Na podlagi razpoložljivih podatkov iz validacijskih študij je bilo dokazano, da je protokol uspešen, če so koncentracije jodida (I–) v preskusni vodi med 0,5 in 10 μg/l.
A cut is made just anterior to pectoral fins with scissors.
Najprimernejša najmanjša koncentracija jodida v preskusni vodi mora biti 0,5 μg/l.
Figure 2
Če je preskusna voda modelna razredčevalna voda iz deionizirane vode, je treba dodati najmanjšo koncentracija joda, tj. 0,5 μg/l.
The midline of abdomen is incised with scissors to a point approximately 2 mm cranial to the anus.
Vsako dodajanje jodovih ali drugih soli v vodo je treba navesti v poročilu.
Figure 3
Vzdrževanje živali
The abdominal walls are spread with forceps for exposure of the liver and other internal organs.
Oskrba odraslih osebkov in razmnoževanje
(Alternatively, the abdominal walls may be pinned laterally).
Oskrba odraslih osebkov in razmnoževanje potekata v skladu s standardnimi smernicami, podrobnejše informacije pa so navedene v standardnih smernicah za izvajanje preskusa teratogeneze embriov žab (FETAX) (6).
Figure 4
Take standardne smernice zagotavljajo primer ustreznih metod oskrbe in parjenja, vendar jih ni treba strogo upoštevati.
The liver is bluntly dissected and excised using forceps.
Za začetek razmnoževanja se v pare (3–5) odraslih samic in samcev injicira humani horionski gonadotropin (HCG).
Figure 5
V samice in samce se injicira približno 800 IU – 1000 IU oz. 600 IU–800 IU HCG, raztopljenega v 0,6–0,9-odstotni solni raztopini.
The intestines are gently retracted using forceps.
Pari, ki se razmnožujejo, so v velikih posodah, v okolju, ki jih ne ovira, in v statičnih pogojih, da se spodbuja ampleksus.
Testis 6
Dno vsake posode za razmnoževanje mora imeti navidezno dno iz mreže iz nerjavnega jekla ali plastike, ki omogoča prehajanje jajčnih legel na dno posode.
Both ends of the intestines and any mesenteric attachments are severed using scissors.
Žabe, ki so injicirane pozno popoldne, običajno odložijo večino jajčec do sredine naslednjega jutra.
Testis 8
Ko so odrasli osebki odstranjeni iz posod za razmnoževanje, se jajčeca zberejo, pri čemer se njihova sposobnost preživetja oceni z reprezentativno podskupino embriov iz vseh posod za razmnoževanje.
The completed procedure.
Najboljše posamezne mreste (za oceno kakovosti mrestov se priporočajo 2–3) je treba ohraniti na podlagi sposobnosti preživetja embriov in prisotnosti ustreznega števila (najmanj 1500) embriov.
Procedure 2 B:
Vsi organizmi, ki se uporabijo v študiji, morajo izhajati iz enega mresta (tj. mresti se ne smejo mešati).
Japanese Medaka (Oryzias latipes), Liver Pre-treatment for Vitellogenin Analysis
Embrii se prenesejo v veliko ploščato skodelico ali posodo, vsa očitno mrtva ali nenormalna jajčeca (glej opredelitev iz točke (5)) pa se odstranijo s pipeto ali kapalko.
Take the bottle of homogenate buffer from the ELISA kit and cool it with crushed ice (temperature of the solution: ≤ 4 °C).
Zdravi embrii iz vsakega od treh mrestov se prenesejo v tri ločene posode za izvalitev.
If homogenate buffer from EnBio ELISA system is used, thaw the solution at room temperature, and then cool the bottle with crushed ice.
Štiri dni po namestitvi v posode za izvalitev se na podlagi sposobnosti preživetja in uspešne izvalitve izbere najboljši mrest, ličinke pa se prenesejo v ustrezno število posod za gojenje pri temperaturi 22 °C ± 1 °C.
Calculate the volume of homogenate buffer for the liver on the basis of its weight (add 50 μl of homogenate buffer per mg liver weight for homogenate).
Poleg tega se v dodatne posode prenese nekaj dodatnih ličink, ki se bodo uporabile kot zamenjava v primeru smrti v posodah za gojenje v prvem tednu.
For example, if the weight of the liver is 4,5 mg, the volume of homogenate buffer for the liver is 225 μl.
S tem postopkom se ohranja stalna gostota organizmov, s čimer se zmanjša razvojna divergenca v kohorti enega mresta.
Prepare a list of the volume of homogenate buffer for all livers.
Vse posode za gojenje je treba vsak dan očistiti z izčrpanjem.
Preparation of the liver for pre-treatment
Kot previdnostni ukrep se namesto rokavic iz lateksa priporoča uporaba rokavic iz vinila ali nitrila.
Take the 1,5 ml microtube containing the liver from the freezer just before the pre-treatment.
Poginule ličinke je treba vsakodnevno odstranjevati in dodajati nadomestne, da se ohranja gostota organizmov v prvem tednu.
In addition, the pre-treatment for test groups should be conducted in the following order:
V fazi pred izpostavljenostjo se paglavci prilagodijo pogojem iz faze dejanske izpostavljenosti, vključno z vrsto hrane, temperaturo, ciklom svetlobe in teme ter gojiščem.
The number of 1,5 ml microtubes containing liver samples taken from the freezer at a given time should not exceed the number that can be centrifuged at that time.
Zato se priporoča, da se v fazi pred izpostavljenostjo in v fazi izpostavljenosti uporabi enaka voda za gojenje/redčenje.
Arrange the 1,5 ml microtubes containing liver samples in the order of specimen number on the ice rack (no need to thaw the liver).
Če se za vzdrževanje paglavcev v fazi pred izpostavljenostjo uporablja statični gojitveni sistem, je treba gojišče zamenjati v celoti vsaj dvakrat na teden.
Operation of the pre-treatment
Natrpanost, ki je posledica velike gostote ličink v obdobju pred izpostavljenostjo, je treba preprečiti, ker bi lahko pomembno vplivala na razvoj paglavcev v naslednji fazi preskušanja.
Addition of the homogenization buffer
Zato gostota gojenja ne sme presegati približno štirih paglavcev/l gojišča (statični sistem izpostavljenosti) oz. 10 paglavcev/l gojišča (npr. pri pretoku 50 ml/min v sistemu pred izpostavljenostjo ali gojitvenem sistemu).
Check the list for the volume of the homogenate buffer to be used for a particular sample of liver and adjust the micropipette (volume range: 100-1000 μl) to the appropriate volume.
V teh pogojih se morajo paglavci v 12 dneh razviti od 45./46. faze do 51. faze.
Attach a clean tip to the micropipette.
Pri reprezentativnih paglavcih iz populacije tega staleža je treba vsak dan pregledati razvojno fazo, da se oceni ustrezno časovno obdobje za začetek izpostavljenosti.
Take the homogenate buffer from the reagent bottle and add the buffer to the 1,5 ml microtube containing the liver.
Skrbno je treba čim bolj zmanjšati stres in travmo za paglavce, zlasti med seljenjem, čiščenjem akvarija in ravnanjem z ličinkami.
Add the homogenate buffer to all of 1,5 ml microtubes containing the liver according to the procedure described above.
Preprečiti je treba stresne razmere/dejavnosti, kot so glasen in nenehen hrup, trkanje po akvariju, tresljaji v akvariju, čezmerna dejavnost v laboratoriju in hitre spremembe v okolju (razpoložljivost svetlobe, temperatura, pH, raztopljeni kisik, pretok vode itd.).
There is no need to change the micropipette tip to a new one.
Če se paglavci v 17 dneh po oploditvi ne razvijejo do 51. faze, je treba kot potencialnega krivca obravnavati čezmeren stres.
However, if the tip is contaminated or suspected to be contaminated, the tip should be changed.
Gojenje in hranjenje ličink
Homogenisation of the liver
Paglavce se v celotnem obdobju pred izpostavljenostjo (po Nieuwkoopovi in Faberjevi (NF) 45./46. fazi (8)) in v celotnem 21-dnevnem preskusnem obdobju hrani s t. i. komercialno krmo za paglavce, uporabljeno v validacijskih študijah (glej tudi Dodatek 1), ali z drugo hrano, ki dokazano omogoča enako uspešnost preskusa preobrazbe dvoživk.
Attach a new pestle for homogenisation to the microtube homogeniser.
Način hranjenja v obdobju pred izpostavljenostjo je treba skrbno prilagoditi, da se izpolnijo potrebe razvijajočih se paglavcev.
Insert the pestle into the 1,5 ml microtube.
To pomeni, da je treba novo izvaljenim paglavcem večkrat na dan (vsaj dvakrat) dati manjši obrok hrane.
Hold the microtube homogeniser to press the liver between the surface of the pestle and the inner wall of the 1,5 ml microtube.
Dovajanje čezmernih količin hrane je treba preprečiti, da i) se ohrani kakovost vode in ii) prepreči zamašitev filtrirnega aparata z delci in ostanki hrane.
Operate the microtube homogeniser for 10 to 20 seconds.
Pri krmi za paglavce, uporabljeni v validacijskih študijah, je treba dnevne obroke hrane malo pred začetkom preskusa povečati glede na rast paglavcev na približno 30 mg/žival/dan.
Cool the 1,5 ml microtube with crushed ice during the operation.
V validacijskih študijah je bilo dokazano, da ta komercialno dostopna krma podpira ustrezno rast in razvoj paglavcev X. laevis in je v drobnih delcih, ki se v vodnem stolpcu dlje časa ne raztopijo in jih odplakne tok.
Lift up the pestle from the 1,5 ml microtube and leave it at rest for about 10 seconds.
Zato je treba skupno dnevno količino hrane razdeliti na manjše obroke in jo dovajati vsaj dvakrat na dan.
Then conduct a visual check of the state of the suspension.
Način hranjenja s to krmo je naveden v tabeli 1.
If pieces of liver are observed in the suspension, repeat the operations (3) and (4) to prepare satisfactory liver homogenate.
Stopnje hranjenja je treba zabeležiti.
Cool the suspended liver homogenate on the ice rack until centrifugation.
Dovaja se lahko suha ali kot založna raztopina, pripravljena v vodi za redčenje.
Change the pestle to the new one for each homogenate.
Tako založno raztopino je treba sveže pripraviti vsak drugi dan in jo hraniti pri 4 °C, kadar se ne uporablja.
Homogenise all livers with homogenate buffer according to the procedure described above.
Način hranjenja s komercialno krmo za paglavce, uporabljeno v validacijskih študijah za paglavce X. laevis, v delu preskusa preobrazbe dvoživk z živimi živalmi v pretočnih pogojih
Centrifugation of the suspended liver homogenate
Dan študije
Confirm the temperature of the refrigerated centrifuge chamber at ≤ 5 °C.
Obrok hrane (mg krme/žival/dan)
Insert the 1,5 ml microtubes containing the suspended liver homogenate in refrigerated centrifuge (adjust the balance if necessary).
Analitična kemija
Centrifuge the suspended liver homogenate at 13000 g for 10 min at ≤ 5 °C.
Pred izvedbo študije je treba oceniti stabilnost preskusne kemikalije na podlagi informacij o njeni topnosti, razgradljivosti in hlapnosti.
However, if the supernatants are adequately separated, centrifugal force and time may be adjusted as needed.
Preskusne raztopine iz vsake ponovitvene posode pri posamezni koncentraciji je treba vzorčiti za analize analitične kemije na začetku preskusa (dan 0) in vsak teden med preskusom za najmanj štiri vzorce.
Following centrifugation, check that the supernatants are adequately separated (surface: lipid, intermediate: supernatant, bottom layer: liver tissue).
Priporočeno je tudi, da se vsaka preskusna koncentracija analizira med pripravo sistema, pred začetkom preskusa, da se preveri učinkovitost sistema.
If the separation is not adequate, centrifuge the suspension again under the same conditions.
Poleg tega se priporoča, da se založne raztopine analizirajo, ko se zamenjajo, zlasti če prostornina založne raztopine ne zagotavlja zadostnih količin kemikalije, ki bi pokrivale trajanje rutinskih obdobij vzorčenja.
Collection of the supernatant
Metoda, ki se uporablja za uvajanje preskusne kemikalije v sistem, se lahko razlikuje glede na njene fizikalno-kemijske lastnosti.
Collect 30 μl of each supernatant (separated as the intermediate layer) with the micropipette and dispense it to one 0,5 ml microtube.
Kemikalije, ki so pri sobni temperaturi tekoče in težko topne v vodi, se lahko uvajajo z metodami saturacijske kolone za izmenjavo med tekočinama.
Collect the supernatant and dispense it to other two 0,5 ml microtubes in the same manner as described above.
Priporoča se uporaba preskusnega sistema brez nosilca, vendar imajo različne preskusne kemikalije različne fizikalno-kemijske lastnosti, zaradi katerih bodo verjetno potrebni različni pristopi za pripravo vode za izpostavljenost kemikalijam.
Collect the rest of the supernatant with the micropipette (if feasible: ≥ 100 μl).
Če je mogoče, se ne uporabijo topila ali nosilci, ker:
Then dispense the supernatant to the remaining 0,5 ml microtube.
lahko nekatera topila povzročijo strupenost in/ali neželene ali nepričakovane endokrinološke odzive, ii) lahko preskušanje kemikalij nad njihovo vodotopnostjo (kar se lahko pogosto zgodi pri uporabi topil) privede do netočnih določitev učinkovitih koncentracij in iii) lahko uporaba topil v dolgotrajnejših preskusih privede do znatne stopnje razvoja biofilma, povezanega z mikrobno dejavnostjo.
Close the cap of the 0,5 ml microtube and write the volume of the supernatant on the label.
Za kemikalije, ki jih je težko preskusiti, se lahko kot zadnja rešitev uporabi topilo, pri čemer je treba za določitev najboljše metode upoštevati Smernico OECD za preskušanje strupenosti zahtevnih snovi in zmesi v vodnem okolju (4).
Then immediately cool the microtubes on the ice rack.
Topila, za katera je bilo ugotovljeno, da so učinkovita za preskušanje strupenosti v vodnem okolju, vključujejo aceton, etanol, metanol, dimetil formamid in trietilen glikol.
Change the tip of the micropipette to the new one for each supernatant.
Če se uporabi topilo kot nosilec, morajo biti koncentracije topila nižje od kronične koncentracije brez opaznega učinka (NOEC);
If a large amount of lipid becomes attached to the tip, change it to the new one immediately to avoid contamination of the liver extract with fat.
v skladu s Smernico OECD se priporoča največ 100 μl/l;
Dispense all of the centrifuged supernatant to four 0,5 ml microtubes according to the procedure described above.
v skladu z nedavnim pregledom se priporoča uporaba tako nizkih koncentracij topil, kot je 20 μl/l vode za redčenje (12).
After dispensing the supernatant to the 0,5 ml microtubes, place all of them in the tube rack with the identification label, and then freeze them in the freezer immediately.
Če se uporabijo topila kot nosilci, je treba poleg kontrol brez topila (čista voda) oceniti ustrezne kontrole s topilom.
If the VTG concentrations are measured immediately after the pre-treatment, keep one 0,5 ml microtube (containing 30 μl of supernatant) cool in the tube rack and transfer it to the workstation where the ELISA assay is conducted.
Če kemikalije ni mogoče dodati prek vode zaradi fizikalno-kemijskih lastnosti (slaba topnost) ali omejene razpoložljivosti kemikalije, se lahko prouči uvajanje s prehrano.
In such case, place the remaining microtubes in the tube racks and freeze them in the freezer.
Izbiro metode je treba dokumentirati in analitsko preveriti.
Storage of the specimen
MTC je opredeljena kot najvišja preskusna koncentracija kemikalije, ki povzroči manj kot 10-odstotno akutno smrtnost.
Store the 0,5 ml microtubes containing the supernatant of the liver homogenate at ≤ – 70 °C until they are used for the ELISA.
Pri uporabi tega pristopa se domneva, da obstajajo empirični podatki o akutni smrtnosti, na podlagi katerih je mogoče oceniti MTC.
Immediately following anaesthesia, the caudal peduncle is severed transversely, and the blood is removed from the caudal artery/vein with a heparinised microhematocrit capillary tube.
Če podatki o akutni strupenosti, specifični za vrsto, niso na voljo, se lahko pri paglavcih, ki so reprezentativni (tj. so enake faze) za paglavce v preskusu AMA, opravi 96-urni preskus LC50.
Blood volumes range from 5 to 15 μl depending on fish size.
Če so na voljo podatki za druge vodne vrste (npr. študije LC50 pri ribah ali drugih dvoživkah), se lahko verjetna MTC oceni s strokovno presojo na podlagi ekstrapolacije med vrstami.
An equal volume of aprotinin buffer (6 μgml in PBS) is added to the microcapillary tube, and plasma is separated from the blood via centrifugation (5 minutes at 600 g).
Če kemikalija ni akutno strupena in je topna pri koncentraciji, višji od 100 mg/l, pa je treba šteti za najvišjo preskusno koncentracijo (HTC) 100 mg/l, ker se ta koncentracija običajno šteje za ‚praktično nestrupeno‘.
Plasma is collected in the test tubes and stored at – 20 °C until analyzed for vitellogenin or other proteins of interest.
Čeprav metode statičnega obnavljanja niso priporočeni postopek, se lahko uporabljajo, kadar pretočne metode niso ustrezne za doseganje MTC.
Procedure 3B:
Če se uporabijo metode statičnega obnavljanja, je treba dokumentirati stabilnost koncentracije preskusne kemikalije, pri čemer mora stabilnost ostati v mejah izvedbenih meril.