natgillin/translations-raw huggingface dataset:
If there is evidence that the test chemical, or a relevant metabolite, will not reach any of the tissues of interest, it is not appropriate to perform a TGR gene mutation assay.
Mutagen, potrebna je presnova
In the assays described in paragraph 8, the target gene is bacterial or bacteriophage in origin, and the means of recovery from the rodent genomic DNA is by incorporation of the transgene into a λ bacteriophage or plasmid shuttle vector.
Jetra, omentum
The procedure involves the extraction of genomic DNA from the rodent tissue of interest, in vitro processing of the genomic DNA (i.e. packaging of λ vectors, or ligation and electroporation of plasmids to recover the shuttle vector), and subsequent detection of mutations in bacterial hosts under suitable conditions.
Kostni mozeg, prsi, debelo črevo, predželodec, žlezni želodec, srce, jetra, pljuča, moške klične celice
The assays employ neutral transgenes that are readily recoverable from most tissues.
Negativni kontrolni vzorci
The basic TGR gene mutation experiment involves treatment of the rodent with a chemical over a period of time.
Negativne kontrolne vzorce, tretirane samo s topilom ali nosilcem, drugače pa tretirane enako kot tretirane skupine, je treba vključiti v vsako vzorčenje.
Chemicals may be administered by any appropriate route, including implantation (e.g. medical device testing).
Če pretekli ali objavljeni podatki ne dokazujejo, da izbrano topilo/nosilec ne povzroča nobenih škodljivih ali mutagenih učinkov, se v vsako vzorčenje vključijo neobdelani kontrolni vzorci, da se dokaže sprejemljivost kontrole nosilca.
The total period during which an animal is dosed is referred to as the administration period.
Preverjanje strokovnosti laboratorija
Administration is usually followed by a period of time, prior to sacrifice, during which the chemical is not administered and during which unrepaired DNA lesions are fixed into stable mutations.
Usposobljenost za izvajanje teh preskusov se dokaže s prikazom zmožnosti ponovitve pričakovanih rezultatov iz objavljenih podatkov (24) za:
In the literature, this period has been variously referred to as the manifestation time, fixation time or expression time;
Določanje zaporedja mutantov
the end of this period is the sampling time (15) (29).
Za regulativno uporabo določanje zaporedja DNA mutantov ni potrebno, zlasti če je dobljen jasen pozitiven ali negativen rezultat.
After the animal is sacrificed, genomic DNA is isolated from the tissue(s) of interest and purified.
Podatki o določanju zaporedja pa so lahko koristni pri pojavu visoke interindividualne variacije.
Data for a single tissue per animal from multiple packaging/ligations are usually aggregated, and mutant frequency is generally evaluated using a total of between 105 and 107 plaque-forming or colony-forming units.
V teh primerih se lahko določanje zaporedja uporabi za izključitev pojava velikega števila mutantov (t. i. jackpots) ali klonov z opredelitvijo edinstvenih mutantov v določenem tkivu.
When using positive selection methods, total plaque-forming units are determined with a separate set of non-selective plates.
Določanje zaporedja približno 10 mutantov na tkivo na žival bi moralo zadoščati za preprosto ugotavljanje, ali klonski mutanti prispevajo k pogostnosti mutantov;
Positive selection methods have been developed to facilitate the detection of mutations in both the gpt gene [gpt delta mouse and rat, gpt– phenotype (20) (22) (28)] and the lacZ gene [Muta™Mouse or lacZ plasmid mouse (3) (10) (11) (30)];
za matematično popravo pogostnosti mutantov za klonskost bo morda potrebnih tudi do 25 mutantov.
whereas, lacI gene mutations in Big Blue® animals are detected through a non-selective method that identifies mutants through the generation of coloured (blue) plaques.
Določanje zaporedja mutantov bo morda potrebno tudi pri manjšem povečanju pogostnosti mutantov (tj. ki komaj presežejo vrednosti v neobdelanih kontrolnih vzorcih).
Positive selection methodology is also in place to detect point mutations arising in the cII gene of the λ bacteriophage shuttle vector [Big Blue® mouse or rat, and Muta™Mouse (17)] and deletion mutations in the λ red and gam genes [Spi– selection in gpt delta mouse and rat (21) (22) (28)].
Razlike v spektru mutantov med kolonijami mutantov v tretiranih in netretiranih živalih bodo morda podprle mutageni učinek (29).
Mutant frequencyis calculated by dividing the number of plaques/plasmids containing mutations in the transgene by the total number of plaques/plasmids recovered from the same DNA sample.
Spektri mutantov so lahko koristni tudi za razvoj mehanističnih hipotez.
In TGR gene mutation studies, the mutant frequency is the reported parameter.
Ko naj bi bilo določanje zaporedja vključeno v protokol študije, je treba biti posebej pazljiv pri načrtovanju takšnih študij, zlasti glede števila mutantov z določenim zaporedjem na vzorec, da se doseže ustrezna moč glede na uporabljen statistični model (glej odstavek 43).
In addition, a mutation frequency can be determined as the fraction of cells carrying independent mutations;
Število in spol živali
this calculation requires correction for clonal expansionby sequencing the recovered mutants (24).
Vnaprej določeno število živali na skupino mora biti tolikšno, da se zagotovi statistična moč, potrebna za odkrivanje vsaj podvajanja pogostnosti mutantov.
The mutations scored in the lacI, lacZ, cII and gpt point mutation assays consist primarily of base pair substitution mutations, frameshift mutations and small insertions/deletions.
Skupine naj bodo sestavljene iz vsaj pet živali;
The relative proportion of these mutation types among spontaneous mutations is similar to that seen in the endogenous Hprt gene.
če je statistična moč premajhna, je treba povečati število živali po potrebi.
Large deletions are detected only with the Spi– selectionand the lacZ plasmid assays (24).
Običajno se uporabijo živali moškega spola.
Mutations of interest are in vivo mutations that arise in the mouse or rat.
V nekaterih primerih bi bilo morda preskušanje samo samic upravičeno;
In vitro and ex vivo mutations, which may arise during phage/plasmid recovery, replication or repair, are relatively rare, and in some systems can be specifically identified, or excluded by the bacterial host/positive selection system.
na primer pri preskušanju zdravil, ki jih tipično uporabljajo ženske, ali raziskovanju presnove, značilne za ženske.
Preparations
Če so med spoloma glede strupenosti ali presnove velike razlike, bo potrebno preskušanje na samcih in samicah.
A variety of transgenic mouse gene mutation detection models are currently available, and these systems have been more widely used than transgenic rat models.
Obdobje odmerjanja
If the rat is clearly a more appropriate model than the mouse (e.g. when investigating the mechanism of carcinogenesis for a tumour seen only in rats, to correlate with a rat toxicity study, or if rat metabolism is known to be more representative of human metabolism) the use of transgenic rat models should be considered.
Na podlagi ugotovitev, da se mutacije kopičijo z vsakim tretiranjem, je potreben režim s ponavljajočimi se odmerki, in sicer dnevnim tretiranjem prek 28 dni.
The temperature in the experimental animal room ideally should be 22 °C (± 3 °C).
Na splošno naj bi bilo to dovolj časa, da šibki mutageni nakopičijo dovolj mutacij, izpostavljenost pa dovolj dolga, da je mogoče odkriti mutacije v počasi množečih se organih.
Although the relative humidity should be at least 30 % and preferably not exceed 70 % other than during room cleaning, the goal should be to maintain a relative humidity of 50-60 %.
Za nekatera vrednotenja so morda primerni tudi drugi režimi tretiranja, te druge razporede dajanja odmerkov pa je treba znanstveno upravičiti v protokolu.
Lighting should be artificial, with a daily sequence of 12 hours light, followed by 12 hours dark.
Tretiranje mora trajati vsaj toliko časa, kolikor je potrebnega za popolno indukcijo vseh zadevnih presnovnih encimov, pri krajših tretiranjih pa bo morda potrebno večkratno vzorčenje, ki je primerno za organe z različnimi stopnjami namnoževanja.
The choice of diet may be influenced by the need to ensure a suitable admixture of a test chemical when administered by this route.
V vsakem primeru je treba pri utemeljitvi protokola uporabiti vse razpoložljive informacije (npr. o splošni strupenosti ali presnovi in farmakokinetiki), zlasti pri odstopanju od navedenih standardnih priporočil.
Animals should be housed in small groups (no more than five) of the same sex if no aggressive behaviour is expected.
Sicer lahko tretiranje, daljše od 8 tednov poveča občutljivost, vendar ga je treba jasno razložiti in utemeljiti, saj lahko dolgo tretiranje povzroči navidezno povečanje pogostnosti mutantov zaradi klonalne ekspanzije (29).
Animals may be housed individually if scientifically justified.
Velikost odmerkov
The animals are acclimated to the laboratory conditions for at least five days.
Da bi se dobile informacije o odzivu na odmerek, je treba v glavnem preskusu v celotno študijo vključiti negativno kontrolno skupino (glej odstavek 22) in najmanj tri ustrezno razporejene velikosti odmerka, razen če se uporabi mejni odmerek (glej odstavek 28).
At the commencement of the study, the weight variation of animals should be minimal and not exceed ± 20 % of the mean weight of each sex.
Največji odmerek bi moral biti največji tolerančni odmerek (MTD).
Preparation of doses
Največji tolerančni odmerek je odmerek, ki povzroči takšne znake strupenosti, da se pričakuje, da bi večji odmerki pri istem režimu odmerjanja povzročili smrt.
Solid test chemicals should be dissolved or suspended in appropriate solvents or vehicles or admixed in diet or drinking water prior to dosing of the animals.
Snovi s specifičnim biološkim delovanjem pri majhnih, nestrupenih odmerkih (kakor so hormoni in mitogeni) in kemikalije, ki kažejo nasičenost toksokinetičnih lastnosti, so lahko izjeme pri merilih za določanje odmerka in naj se ovrednotijo za vsak primer posebej.
Liquid test chemicals may be dosed directly or diluted prior to dosing.
Uporabljene velikosti odmerkov naj zajemajo območje od največje strupenosti do majhne strupenosti ali nestrupenosti.
For inhalation exposures, test chemicals can be administered as gas, vapour or a solid/liquid aerosol, depending on their physicochemical properties.
Mejni preskus
Fresh preparations of the test chemical should be employed unless stability data demonstrate the acceptability of storage.
Pri največ 14-dnevnem obdobju odmerjanja je mejni odmerek 2000 mg/kg telesne teže/dan (razporede odmerjanja, ki se razlikujejo od 28 dnevnih tretiranj, je treba znanstveno utemeljiti v protokolu; glej odstavek 26).
Solvent/vehicle
Navadno se preskusna kemikalija daje z gavažo po želodčni cevki ali ustrezni intubacijski kanili.
The solvent/vehicle should not produce toxic effects at the dose volumes used, and should not be suspected of chemical reaction with the test chemical.
Na splošno je treba pri načrtovanju študije upoštevati predviden način izpostavljenosti pri ljudeh.
If other than well-known solvents/vehicles are used, their inclusion should be supported with reference data indicating their compatibility.
Zato so sprejemljivi tudi drugi načini izpostavljanja (pitna voda, podkožno, intravenozno, lokalno, vdihavanje, intratrahealno, s prehrano ali vsadkom), kadar se lahko utemeljijo.
It is recommended that wherever possible, the use of an aqueous solvent/vehicle should be considered first.
Dajanje z intraperitonealno injekcijo ni priporočeno, saj ni fiziološko pomemben način izpostavljenosti pri ljudeh.
Positive Controls
Največja količina tekočine, ki se lahko naenkrat da z gavažo ali injekcijo, je odvisna od velikosti preskusne živali.
Concurrent positive control animals should normally be used.
Količina ne sme presegati 2 ml/100 g telesne teže.
However, for laboratories that have demonstrated competency (see paragraph 23) and routinely use these assays, DNA from previous positive control treated animals may be included with each study to confirm the success of the method.
Uporabo večjih količin je treba utemeljiti.
Such DNA from previous experiments should be obtained from the same species and tissues of interest, and properly stored (see paragraph 36).
Razen pri dražečih ali jedkih kemikalijah, ki pri višjih koncentracijah navadno povzročajo močnejše učinke, je treba variabilnost preskusne količine s prilagajanjem koncentracije obdržati na kar najnižji ravni, da bi zagotovili konstantno količino pri vseh odmerkih.
When concurrent positive controls are used, it is not necessary to administer them by the same route as the test chemical;
Vzorčenje
however, the positive controls should be known to induce mutations in one or more tissues of interest for the test chemical.
Somatske celice
The doses of the positive control chemicals should be selected so as to produce weak or moderate effects that critically assess the performance and sensitivity of the assay.
Vzorčenje je pomembna spremenljivka, ker je določeno z obdobjem, potrebnim za ustalitev mutacije.
Examples of positive control chemicals and some of their target tissues are included in Table 1.
To obdobje je odvisno od tkiva in je očitno povezano z obnavljanjem populacije celic, pri čemer se kostni mozeg in črevesje hitro odzivata, jetra pa precej počasneje.
Examples of positive control chemicals and some of their target tissues
Ustrezen kompromis za merjenje pogostnosti mutantov v hitro in počasi se množečih tkivih je 28 zaporednih dni tretiranja (kot je navedeno v odstavku 26) in vzorčenje tri dni po zadnjem tretiranju;
Positive control chemical and CAS No
mogoče pa je, da v takih pogojih v počasi se množečih tkivih ne bo prišlo do največje pogostnosti mutantov.
EINECS name and EINECS No
Če so počasi množeča se tkiva še posebej pomembna, bo morda primernejše poznejše obdobje vzorčenja 28 dni po 28 dneh dajanja odmerkov (16) (29).
Characteristics
V takih primerih bi poznejše vzorčenje zamenjalo tridnevno vzorčenje, za kar bi bila potrebna znanstvena utemeljitev.
Mutation Target Tissue
Klične celice
Mouse
Preskusi pri gensko spremenjenih glodavcih so primerni za študijo povzročanja mutacije genov v moških kličnih celicah (7) (8) (27), pri kateri sta čas in kinetika spermatogeneze dobro opredeljeni (27).
N-Ethyl-N-nitrosourea
Ker je število jajčnih celic, ki so na voljo za analizo, nizko celo po superovulaciji in zaradi dejstva, da v oocitih sinteza DNA ne poteka, za določanje mutacij v ženskih kličnih celicah ni mogoče uporabiti transgenskih preskusov (31).
[CAS No 759-73-9]
Časi vzorčenja moških kličnih celic morajo biti izbrani tako, da so vzorčene različne vrste izpostavljenih celic v različnih fazah razvoja klične celice in da je bila tarčna faza vzorčenja dovolj izpostavljena.
Direct acting mutagen
Obdobje, v katerem klične celice napredujejo od zarodnih celic iz spermatogonijev do zrele sperme, ki doseže semenovode/repe obmodkov, traja ~ 49 dni pri miši (36) in ~ 70 dni pri podgani (34) (35).
Liver, lung
Po 28-dnevnem izpostavljanju, ki mu sledi tridnevno vzorčenje, bo seme, odvzeto iz semenovodov/repov obmodkov (7) (8), predstavljalo populacijo celic, izpostavljenih med približno zadnjo polovico spermatogeneze, ki obsega mejotično in postmejotično obdobje, ne pa tudi obdobja spermatogonijev ali zarodnih celic.
Bone marrow, colon, colonic epithelium, intestine, liver, lung, spleen, kidney, ovarian granulosa cells, male germ cells
Da bi bile celice v semenovodih/repih obmodkov, ki so bile zarodne celice spermatogonijev v obdobju izpostavljenosti, ustrezno vzorčene, je po končanem tretiranju potrebno dodatno vzorčenje vsaj 7 tednov (pri miši) ali 10 tednov (pri podgani).
Ethyl carbamate (urethane)
Celice, pridobljene iz semenskih cevk po režimu 28 dni + 3 dnevi, predstavljajo mešano populacijo, obogateno za vse faze kličnih celic v razvoju (7) (8).
[CAS No 51-79-6]
Ocena faz, v katerih so povzročene mutacije klične celice, z vzorčenjem teh celic za odkrivanje genske mutacije ni tako natančna kot z vzorčenjem semenčic iz semenovodov/repov obmodkov (ker se iz cevk odvzamejo vzorci številnih različnih celic in bo nekaj somatskih celic to populacijo celic kontaminiralo).
Urethane
Vendar pa so z vzorčenjem iz semenskih cevk in semenčic iz semenovodov/repov obmodkov po režimu vzorčenja samo 28 dni + 3 dnevi v določeni meri zajete celice, izpostavljene v večini razvojnih faz klične celice, kar je lahko koristno za odkrivanje nekaterih mutagenov kličnih celic.
2,4-Diaminotoluene
Živali je treba vsaj dvakrat na dan opazovati za določitev obolevnosti in smrtnosti.
[CAS No 95-80-7]
Vse živali je treba stehtati vsaj enkrat tedensko in ob usmrtitvi.
ethyl-m-phenylenediamine
Meritve porabe hrane je treba opraviti vsaj tedensko.
Mutagen, requires metabolism, also positive in the Spi– assay
Če se preskusna kemikalija daje s pitno vodo, je treba izmeriti porabo vode pri vsaki menjavi vode in vsaj tedensko.
Liver
Živali, ki kažejo nesmrtonosne znake čezmerne strupenosti, je treba usmrtiti pred koncem preskusnega obdobja (23).
Benzo[a]pyrene
Odvzem tkiv
[CAS No 50-32-8]
Odvzem tkiv je treba jasno utemeljiti.
Benzo[def]chrysene
Ker je povzročanje mutacij mogoče proučevati v skoraj vsakem tkivu, je treba tkiva, ki bodo odvzeta, izbrati na podlagi razlogov za izvajanje študije in obstoječih podatkih o mutagenosti, rakotvornosti ali strupenosti za preskuševano kemikalijo.
Mutagen, requires metabolism
Pomembni dejavniki, ki jih je treba upoštevati, so način dajanja (na podlagi verjetnih načinov izpostavljenosti pri ljudeh), predvidena razporeditev tkiv in možni mehanizem delovanja.
Liver, omenta,
Če ni nobenih osnovnih informacij, je treba odvzeti več morebitnih interesnih somatskih tkiv.
Bone marrow, breast, colon, forestomach, glandular stomach, heart, liver, lung, male germ cells
Ta tkiva naj bi predstavljala hitro množeča se in počasi množeča se tkiva ter tkiva, ki so mesto kontakta.
Negative controls
Poleg tega je treba odvzeti semenčice iz semenovodov/repov obmodkov in klične celice v razvoju iz semenskih cevk (kakor je opisano v odstavkih 32 in 33) ter jih shraniti za primer, če bo v prihodnosti potrebna analiza mutagenosti kličnih celic.
Negative controls, treated with solvent or vehicle alone, and otherwise treated in the same way as the treatment groups, should be included for every sampling time.
Pridobiti je treba podatke o teži organov, pri večjih organih pa je treba odvzeti isto območje pri vseh živalih.
In the absence of historical or published control data showing that no deleterious or mutagenic effects are induced by the chosen solvent/vehicle, untreated controls should also be included for every sampling time in order to establish acceptability of the vehicle control.
Shranjevanje tkiv in DNA
Verification of laboratory proficiency
Tkiva (ali homogenate tkiv) je treba shraniti pri najmanj – 70 °C, za izolacijo DNA pa jih je treba uporabiti v 5 letih.
Competency in these assays should be established by demonstrating the ability to reproduce expected results from published data (24) for:
Izolirano DNA, shranjeno v hladilniku v primernem pufru pri 4 °C, je treba za analizo mutacij uporabiti v 1 letu.
mutant frequencies with positive control chemicals (including weak responses) such as those listed in Table 1, non-mutagens, and vehicle controls;
Izbor tkiv za analizo mutantov
and 2) transgene recovery from genomic DNA (e.g. packaging efficiency).
Izbira tkiva mora temeljiti na preudarkih, kot so:
Sequencing of mutants
način dajanja ali mesto prvega kontakta (npr. žlezni želodec pri dajanju oralno, pljuča pri dajanju z vdihavanjem ali koža pri lokalnem nanašanju);
For regulatory applications, DNA sequencing of mutants is not required, particularly where a clear positive or negative result is obtained.
in 2) farmakokinetični parametri iz študij splošne strupenosti, ki kažejo na razporeditev, zadrževanje ali kopičenje v tkivih, ali tarčnih organih za strupenost.
However, sequencing data may be useful when high inter-individual variation is observed.
Če se izvajajo študije za nadaljnje spremljanje študij rakotvornosti, je treba upoštevati tarčna tkiva rakotvornosti.
In these cases, sequencing can be used to rule out the possibility of jackpots or clonal events by identifying the proportion of unique mutants from a particular tissue.
Izbira tkiv za analizo naj bi kar najbolj pripomogla k odkrivanju kemikalij, ki so neposredno delujoči mutageni in vitro, hitro metabolizirane, zelo reaktivne ali pa se slabo absorbirajo, ali pa kemikalij, pri katerih se tarčno tkivo določi z načinom dajanja (6).
Sequencing approximately 10 mutants per tissue per animal should be sufficient for simply determining if clonal mutants contribute to the mutant frequency;
Če ni nobenih osnovnih informacij, je treba ob upoštevanju mesta kontakta zaradi načina dajanja za mutagenost ovrednotiti jetra in vsaj eno hitro se množeče tkivo (npr. žlezni želodec, kostni mozeg).
sequencing as many as 25 mutants may be necessary to correct mutant frequency mathematically for clonality.
V večini primerov je mogoče navedene zahteve izpolniti z analizo dveh skrbno izbranih tkiv, v nekaterih primerih pa bodo potrebna vsaj tri tkiva.
Sequencing of mutants also may be considered when small increases in mutant frequency (i.e. just exceeding the untreated control values) are found.
Če obstajajo razlogi za posebno zaskrbljenost glede učinkov kličnih celic, vključno s pozitivnimi odzivi v somatskih celicah, je treba tkiva kličnih celic ovrednotiti za mutacije.
Differences in the mutant spectrum between the mutant colonies from treated and untreated animals may lend support to a mutagenic effect (29).
Merilne metode
Also, mutation spectra may be useful for developing mechanistic hypotheses.
Za priporočene gensko spremenjene modele so na voljo standardne laboratorijske ali objavljene metode za odkrivanje mutantov:
When sequencing is to be included as part of the study protocol, special care should be taken in the design of such studies, in particular with respect to the number of mutants sequenced per sample, to achieve adequate power according to the statistical model used (see paragraph 43).
lambda bakteriofag in plazmid lacZ (30);
Number and Sex of Animals
miš lacI (2) (18);
The number of animals per group should be predetermined to be sufficient to provide statistical power necessary to detect at least a doubling in mutant frequency.
miš delta gpt (22);
Group sizes will consist of a minimum of five animals;
podgana delta gpt (28);
however, if the statistical power is insufficient, the number of animals should be increased as required.
Prilagoditve je treba utemeljiti in ustrezno dokumentirati.
Male animals should normally be used.
Podatki iz več poskusov pakiranja se lahko združijo in uporabijo za doseganje zadostnega števila plakov ali kolonij.
There may be cases where testing females alone would be justified;
Če je za dosego ustreznega števila plakov potrebnih veliko reakcij pakiranja, to lahko kaže na slabo kakovost DNA.
Administration Period
Na splošno je potrebnih najmanj 125000 do 300000 plakov, če je spontana pogostnost mutantov v višini 3 × 10-5 (15).
Based on observations that mutations accumulate with each treatment, a repeated-dose regimen is necessary, with daily treatments for a period of 28 days.
Pri preskusu Big Blue® lacI je treba dokazati, da je mogoče z vključitvijo ustreznih barvnih kontrol hkrati z vsakim nanosom odkriti celotno območje barvnih fenotipov mutantov.
This is generally considered acceptable both for producing a sufficient accumulation of mutations by weak mutagens, and for providing an exposure time adequate for detecting mutations in slowly proliferating organs.
Tkiva in vzorce (elemente) slednjih je treba obdelati in analizirati z razdelitvijo v bloke, pri čemer se elementi iz kontrolne skupine z nosilcem/topilom, pozitivne kontrolne skupine (če se uporablja) ali DNA pozitivnega kontrolnega vzorca (če je primerno) in vsake tretirane skupine obdelajo skupaj.
Alternative treatment regimens may be appropriate for some evaluations, and these alternative dosing schedules should be scientifically justified in the protocol.
Obdelava rezultatov