natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The daily lighting sequence should be 12 hours light, 12 hours dark.
Priporoča se, da je odmerek referenčnega estrogena, ki bo uporabljen v obeh primerih, približno ED70 do 80.
Laboratory diet and drinking water should be provided ad libitum.
Študija osnovne pozitivne kontrole – Preden laboratorij prvič izvede študijo v okviru te preskusne metode, je treba dokazati strokovnost laboratorija s preskusom odzivnosti živalskega modela z določitvijo odziva na odmerek referenčnega estrogena:
Young adult animals may be housed individually or be caged in groups of up to three animals.
etinilestradiola (št.
Due to the young age of the immature animals, social group housing is recommended.
CAS 57-63-6) (EE) z najmanj štirimi odmerki.
High levels of phyto-oestrogens in laboratory diets have been known to increase uterine weights in rodents to a degree enough as to interfere with the Uterotrophic Bioassay (13)(14)(15).
Število in stanje živali
High levels of phyto-oestrogens and of metabolisable energy in laboratory diets may also result in early puberty, if immature animals are used.
Vsaka tretirana in kontrolna skupina mora vključevati vsaj 6 živali (za protokola obeh metod, tj. z nezrelo in sterilizirano odraslo samico).
The presence of phyto-oestrogens results primarily from the inclusion of soy and alfalfa products in the laboratory diets and concentrations of phyto-oestrogens have been shown to vary from batch-to-batch of standard laboratory diets (23).
Starost nezrelih živali
Body weight is an important variable, as the quantity of food consumed is related to body weight.
Pri uterotropnem biološkem preskusu z nezrelimi živalmi je treba opredeliti dan skotitve.
Therefore, the actual phyto-oestrogen dose consumed from the same diet may vary among species and by age (9).
Dajanje odmerkov se mora začeti dovolj zgodaj, da se ob koncu dajanja preskusne kemikalije še ne prične fiziološko naraščanje endogenih estrogenov, povezanih s puberteto.
For immature female rats, food consumption on a body weight basis may be approximately double that of ovariectomised young adult females.
Po drugi strani pa obstajajo dokazi, da so zelo mlade živali morda manj občutljive.
For young adult mice, food consumption on a body weight basis may be approximately quadruple that of ovariectomised young adult female rats.
Pri opredelitvi optimalne starosti mora vsak laboratorij upoštevati lastne osnovne podatke o zorenju.
Uterotrophic Bioassay results (9)(17)(18)(19), however, show that limited quantities of dietary phyto-oestrogens are acceptable and do not reduce the sensitivity of the bioassay.
Na splošno se lahko dajanje odmerkov podganam prične takoj po zgodnji odstavitvi na 18. poporodni dan (dan skotitve je poporodni dan 0).
As a guide, dietary levels of phyto-oestrogens should not exceed 350 μg of genistein equivalents/gram of laboratory diet for immature female Sprague Dawley and Wistar rats (6)(9).
Dajanje odmerkov podganam naj bi bilo končano 21. poporodni dan, vsekakor pa pred 25. poporodnim dnem, saj se po tej starosti začne delovanje osi hipotalamus – hipofiza – jajčniki, ravni endogenih estrogenov pa lahko začnejo naraščati hkrati s povprečji osnovne teže maternice in povečanjem standardnih odklonov v skupini (2) (3) (10) (11) (12).
Such diets should also be appropriate when testing in young adult ovariectomised rats because food consumption on a body weight basis is less in young adult as compared to immature animals.
Postopek sterilizacije
If adult ovariectomised mice or more phyto-oestrogen-sensitive rats are to be used, proportional reduction in dietary phyto-oestrogen levels must be considered (20).
Pri steriliziranih podganah in miših ženskega spola (tretirane in kontrolne skupine) se sterilizacija opravi med 6. in 8. tednom starosti.
In addition, the differences in available metabolic energy from different diets may lead to time shifts for the onset of puberty (21)(22).
Pri podganah naj bi od sterilizacije do prvega odmerka preteklo vsaj 14 dni, da se lahko maternica zmanjša na najmanjšo, stabilno osnovno težo.
Prior to the study, careful selection is required of a diet without an elevated level of phyto-oestrogens (for guidance see (6)(9)) or metabolisable energy, that can confound the results (15)(17)(19)(22)(36).
Pri miših naj bi od sterilizacije do prvega odmerka preteklo vsaj 7 dni.
Ensuring the proper performance of the test system used by the laboratory as specified in paragraphs 26 and 27 is an important check on both of these factors.
Ker za proizvodnjo velike koncentracije cirkulirajočih estrogenov (3) zadošča majhna količina materničnega tkiva, je treba pred uporabo na živalih opraviti preskus z opazovanjem epitelijskih celic, vzetih z brisom nožnice vsaj pet zaporednih dni (npr. pri podganah na 10.–14. dan po sterilizaciji).
As a safeguard consistent with good laboratory practice (GLP) representative sampling of each batch of diet administered during the study should be conducted for possible analysis of phyto-oestrogen content (e.g. in the case of high uterine control weight relative to historic controls or an inadequate response to the reference oestrogen, 17 alpha ethinyl estradiol).
Če živali kažejo morebitne znake pojatvenega cikla, se jih ne sme uporabiti.
Aliquots should be analysed as part of the study or frozen at – 20 °C or in such a way as to prevent the sample from decomposing prior to analysis.
Pri obdukciji je treba ostanke jajčnikov pregledati zaradi morebitne prisotnosti tkiva jajčnikov.
Some bedding materials may contain naturally occurring oestrogenic or antioestrogenic chemicals (e.g. corn cob is known to affects the cyclicity of rats and appears to be antioestrogenic).
Če je tkivo prisotno, se živali ne smejo uporabiti pri izračunih (3).
The selected bedding material should contain a minimum level of phyto-oestrogens.
Postopek sterilizacije se prične tako, da pravilno anestezirana žival leži na trebuhu.
Preparation of animals
Rez, s katerim se odpre dorzolateralno trebušno steno, naj meri približno 1 cm v dolžino na sredini med zunanjim robom reber in črevničnim grebenom ter nekaj milimetrov lateralno od lateralnega roba ledvene mišice.
Experimental animals without evidence of any disease or physical abnormalities are randomly assigned to the control and treatment groups.
Jajčnik je treba iz trebušne votline prestaviti na aseptično polje.
The animals should be identified uniquely.
Jajčnik je treba ločiti pri stiku jajcevoda in maternice.
Preferably, immature animals should be caged with dams or foster dams until weaning during acclimatisation.
Po potrditvi, da ni prišlo do večje krvavitve, je treba trebušno steno zapreti s šivom, kožo pa speti s sponkami ali zapreti z ustreznim šivom.
The acclimatisation period prior to the start of the study should be about 5 days for young adult animals and for the immature animals delivered with dams or foster dams.
Mesto ligacije je prikazano na sliki 1.
If immature animals are obtained as weanlings without dams a shorter duration of the acclimatisation period may become necessary as dosing should start immediately after weaning (see paragraph 29).
Uporabiti je treba primerne pooperativne analgetike v skladu s priporočili veterinarja, ki ima izkušnje z nego glodavcev.
Verification of Laboratory Proficiency
Telesna teža
Two different options can be used to verify laboratory proficiency:
Pri metodi s sterilizirano odraslo samico telesna teža in teža maternice nista povezani, ker na težo maternice vplivajo hormoni, kot je estrogen, ne pa tudi rastni faktorji, ki vplivajo na velikost telesa.
Periodic verification, relying on an initial baseline positive control study (see paragraph 27).
Ravno nasprotno je telesna teža povezana s težo maternice pri modelu z nezrelo samico v času dozorevanja (34).
ethinyl estradiol (CAS No 57-63-6) (EE).
To pomeni, da mora rejec standardizirati velikost zaroda in tako zagotoviti, da so potomci različnih mater približno enako hranjeni.
Use of concurrent controls, by including a group administered with an appropriate dose of reference oestrogen in each assay.
Živali je treba razdeliti v skupine (kontrolne in tretirane) v naključnem razponu teže, tako da se povprečna telesna teža vsake skupine statistično ne razlikuje od drugih skupin.
If the system does not respond as expected, the experimental conditions should be examined and modified accordingly.
Če je mogoče, je treba paziti, da živali iz istega legla niso razporejene v isto tretirano skupino, ne da bi se zaradi tega povečalo število legel, uporabljenih v raziskavi.
It is recommended that the dose of reference oestrogen to be used in either approach be approximately the ED70 to 80.
Za ugotavljanje, ali lahko preskusna kemikalija in vivo deluje estrogeno, običajno zadoščajo dve skupini z odmerki in kontrola, zato je zaradi dobrobiti živali zaželen takšen način preskušanja.
Baseline Positive Control Study — Before a laboratory conducts a study under this test method for the first time, laboratory proficiency should be demonstrated by testing the responsiveness of the animal model, by establishing the dose response of a reference oestrogen:
Če je cilj pridobiti krivuljo odziva na odmerek ali ekstrapolacija na manjše odmerke, so potrebne vsaj 3 skupine odmerkov.
ethinyl estradiol (CAS No 57-63-6) (EE) with a minimum of four doses.
Če ni potrebna samo opredelitev estrogenega delovanja, ampak so potrebne tudi druge informacije (na primer ocena moči delovanja), je treba razmisliti o drugačnem režimu odmerjanja.
The uterine weight response will be compared to established historical data (see reference (5)).
Razen tretiranja s preskusno kemikalijo je treba živali v kontrolni skupini obravnavati enako kot živali v preskusni skupini.
If this baseline positive control study does not yield the anticipated results the experimental conditions should be examined and modified.
Če je pri dajanju preskusne kemikalije uporabljen nosilec, mora kontrolna skupina prejeti enako količino nosilca kot tretirane skupine (ali največjo uporabljeno količino pri preskusnih skupinah, če so količine, ki jih skupine prejmejo, različne).
Number and condition of animals
Cilj pri uterotropnem biološkem preskusu je izbrati odmerke, ki zagotavljajo preživetje živali in zanje niso preveč strupeni oziroma jim ne povzročajo prevelike stiske po treh zaporednih dneh dajanja kemikalije, do največjega odmerka 1000 mg/kg/d.
Each treated and control group should include at least 6 animals (for both immature and ovx-adult method protocols).
Pri predlaganju in izbiri velikosti vseh odmerkov je treba upoštevati vse obstoječe podatke o strupenosti in (toksiko-)kinetiki, ki so na razpolago za preskusno kemikalijo ali sorodne snovi.
Age of immature animals
Pri največjem odmerku je treba najprej upoštevati informacije o LD50 in/ali akutni strupenosti, da bi se izognili smrti, hudemu trpljenju ali stiski živali (24) (25) (26).
For the Uterotrophic Bioassay with immature animals the day of birth must be specified.
Največji odmerek bi moral biti največji tolerančni odmerek (MTD);
Dosing should begin early enough to ensure that, at the end of test chemical administration, the physiological rise of endogenous oestrogens associated with puberty has not yet taken place.
študija, opravljena z velikostjo odmerka, ki je povzročil pozitiven uterotropni odziv, bi bila prav tako sprejeta.
On the other hand, there is evidence that very young animals may be less sensitive.
Kot sito so na splošno sprejemljivi veliki intervali med odmerki (npr. polovica logaritemske enote, kar ustreza večanju odmerka za faktor 3,2, ali celo do ene logaritemske enote).
For defining the optimal age each laboratory should take its own background data on maturation into consideration.
Če ustrezni podatki niso na voljo, se lahko opravi študija ugotavljanja območja, s pomočjo katere se določijo odmerki za uporabo.
As a general guide, dosing in rats may begin immediately after early weaning on postnatal day 18 (with the day of birth being postnatal day 0).
Namesto tega se lahko v primeru, ko je moč estrogenega delovanja agonista mogoče oceniti s podatki in vitro (ali in silico), pri izbiri odmerka upoštevajo ti podatki.
Dosing in rats preferably should be completed on postnatal day 21 but in any case prior to postnatal day 25, because, after this age, the hypothalamic-pituitary-ovarian axis becomes functional and endogenous oestrogen levels may begin to rise with a concomitant increase in baseline uterine weight means and an increase in the group standard deviations (2)(3)(10)(11)(12).
Količina preskusne kemikalije, ki bi povzročila uterotropne odzive, enakovredne referenčnemu agonistu (etinilestradiolu), se na primer oceni z njeno relativno in vitro stopnjo učinkovanja glede na etinilestradiol.
Procedure for ovariectomy
Največji preskusni odmerek se dobi tako, da se ta enakovredni odmerek pomnoži z ustreznim faktorjem, npr. 10 ali 100.
For the ovariectomised female rat and mouse (treatment and control groups), ovariectomy should occur between 6 and 8 weeks of age.
Preudarki glede ugotavljanja območja
For rats, a minimum of 14 days should elapse between ovariectomy and the first day of administration in order to allow the uterus to regress to a minimum, stable baseline.
Po potrebi se lahko z nekaj živalmi izvede predhodna študija za ugotavljanje območja.
For mice, at least 7 days should elapse between ovariectomy and the first day of administration.
S tem v zvezi se lahko uporabi smernica OECD št. 19 (25), ki opredeljuje klinične znake strupenosti ali stiske pri živalih.
As small amounts of ovarian tissue are sufficient to produce significant circulating levels of oestrogens (3), the animals should be tested prior to use by observing epithelial cells swabbed from the vagina on at least five consecutive days (e.g. days 10-14 after ovariectomy for rats).
Če je to v okviru te študije za ugotavljanje območja po treh dneh dajanja odmerkov izvedljivo, se lahko maternice izreže in stehta približno 24 ur po zadnjem odmerku.
If the animals indicate any evidence entering oestrous, the animals should not be used.
Ti podatki so nato lahko v pomoč pri zasnovi glavne študije (izbira sprejemljivih največjih in manjših odmerkov ter priporočilo glede števila skupin z odmerki).
Further, at necropsy, the ovarian stubs should be examined for any evidence that ovarian tissue is present.
Preskusno kemikalijo se daje oralno z gavažo ali s podkožnim injiciranjem.
If so, the animal should not be used in the calculations (3).
Pri izbiri načina dajanja je treba upoštevati vprašanja, povezana z dobrobitjo živali in toksikološke vidike, kot so relevantnost za način izpostavljenosti kemikaliji pri ljudeh (npr. na podlagi dajanja oralno z gavažo se modelira izpostavljenost prek zaužitja, na podlagi podkožnega injiciranja se modelira izpostavljenost prek vdihavanja ali adsorpcije skozi kožo), fizikalne/kemijske lastnosti preskusne kemikalije in zlasti obstoječi toksikološki podatki ter podatki o presnovi in kinetiki (npr. potreba po izogibanju presnovi prvega prehoda, boljša učinkovitost določenega načina izpostavljenosti).
The ovariectomy procedure begins with the animal in ventral recumbency after the animal has been properly anesthetised.
Priporoča se, da se, kadar koli je to mogoče, najprej prouči uporaba vodne raztopine/suspenzije.
The incision opening the dorso-lateral abdominal wall should be approximately 1 cm lengthways at the mid-point between the costal inferior border and the iliac crest, and a few millimetres lateral to the lateral margin of the lumbar muscle.
Ker je večina estrogenih ligandov ali njihovih metaboličnih prekurzorjev hidrofobnih, se običajno uporablja raztopina/suspenzija v olju (npr. koruznem, arašidovem, sezamovem ali oljčnem olju).
The ovary should be removed from the abdominal cavity onto an aseptic field.
Ker imajo ta olja različno vsebnost kalorij in maščob, lahko nosilec vpliva na skupni vnos presnovljive energije, zaradi česar bi morda lahko spremenil izmerjene končne točke, kot je teža maternice, zlasti pri metodi z nezrelo samico (33).
The ovary should be disconnected at the junction of the oviduct and the uterine body.
Zato je treba pred začetkom študije za vsak nosilec, ki bo uporabljen, za primerjavo uporabiti kontrolne vzorce brez nosilcev.
After confirming that no massive bleeding is occurring, the abdominal wall should be closed by a suture and the skin closed by autoclips or appropriate suture.
Preskusne kemikalije se lahko raztopijo v najmanjši količini 95-odstotnega etanola ali drugega primernega topila, na končno delovno koncentracijo pa razredčijo v preskusnem nosilcu.
The ligation points are shown schematically in Figure 1.
Strupene lastnosti topila morajo biti znane in preskušene v ločeni kontrolni skupini, pri kateri je uporabljeno samo topilo.
Appropriate post-operative analgesia should be used as recommended by a veterinarian experienced in rodent care.
Če je preskusna kemikalija stabilna, se lahko raztapljanje preskusne kemikalije pospeši s previdnim segrevanjem in močnim mehanskim delovanjem.
Body weight
Določiti je treba stabilnost preskusne kemikalije v nosilcu.
In the ovx-adult method, body weight and uterine weight are not correlated because uterine weight is affected by hormones like oestrogens but not by the growth factors that regulate body size.
Če je preskusna kemikalija ves čas trajanja študije stabilna, se lahko pripravi samo začetni alikvot preskusne kemikalije, nato pa se dnevno pripravljajo določene razredčine odmerkov.
On the contrary, body weight is related to uterine weight in the immature model, while it is maturing (34).
Čas odmerjanja je odvisen od uporabljenega modela (glej odstavek 29 za model z nezrelo samico in odstavek 30 za sterilizirano odraslo samico).
Thus, at the commencement of the study the weight variation of animals used, in the immature model, should be minimal and not exceed ± 20 % of the mean weight.
Nezrele podgane ženskega spola prejemajo preskusno kemikalijo dnevno tri zaporedne dni.
This means that the litter size should be standardised by the breeder, to ensure that offspring of different mother animals will be fed approximately the same.
Pri steriliziranih podganah ženskega spola se prav tako priporoča tridnevno odmerjanje, vendar je sprejemljiva tudi daljša izpostavljenost, ki lahko izboljša odkrivanje kemikalij s šibko aktivnostjo.
Animals should be assigned to groups (both control and treatment) by randomised weight distribution, so that mean body weight of each group is not statistically different from any other group.
Pri sterilizirani miši ženskega spola bi moralo pri močnih agonistih estrogenov zadoščati tridnevno dajanje odmerka, saj podaljšanje na največ sedem dni ne prinaša nobenih prednosti, vendar pa v validacijski študiji (16) ta povezava za šibke estrogene ni bila preverjena, zato bi bilo treba pri sterilizirani odrasli samici odmerjanje podaljšati na največ 7 zaporednih dni.Odmerek je treba dati vsak dan približno ob istem času.
Consideration should be given to avoid assignment of littermates to the same treatment group as far as practicable without increasing the number of litters to be used for the investigation.
Po potrebi jih je treba prilagoditi, da bi ohranili konstantno velikost odmerka glede na telesno težo živali (npr. mg preskusne kemikalije na kg telesne teže na dan).
In order to establish whether a test chemical can have oestrogenic action in vivo, two dose groups and a control are normally sufficient and this design is therefore preferred for animal welfare reasons.
Variabilnost preskusnega volumna na podlagi telesne teže je treba s prilagajanjem koncentracije raztopine za odmerjanje obdržati na kar najnižji ravni, da bi zagotovili konstantno količino na podlagi telesne teže pri vseh odmerkih in vseh načinih dajanja.
If the purpose is either to obtain a dose-response curve or to extrapolate to lower doses, at least 3 dose groups are needed.
Če se preskusna kemikalija daje z gavažo, jo je treba živali dati v enkratnem dnevnem odmerku z uporabo želodčne sonde ali primerne intubacijske kanile.
If information beyond identification of oestrogenic activity (such as an estimate of potency) is required, a different dosing regimen should be considered.
Največja količina tekočine, ki se jo lahko da naenkrat, je odvisna od velikosti preskusne živali.
Except for treatment with the test chemical, animals in the control group should be handled in an identical manner to the test group subjects.
Upoštevati je treba lokalne standarde za varstvo živali, količina pa ne sme preseči 5 ml/kg telesne teže, razen pri vodnih raztopinah, pri katerih se lahko uporabi 10 ml/kg telesne teže.
If a vehicle is used in administering the test chemical, the control group should receive the same amount of vehicle used with the treated groups (or highest volume used with the test groups if different among groups).
Če se preskusna kemikalija daje s podkožnim injiciranjem, se daje v enkratnem dnevnem odmerku.
The objective in the case of the Uterotrophic Bioassay is to select doses that ensure animal survival and that are without significant toxicity or distress to the animals after three consecutive days of chemical administration up to a maximum dose of 1000 mg/kg/d.
Odmerki se dajejo na dorzoskapularnem in/ali ledvenem delu s sterilno iglo (npr. velikosti 23 ali 25) in brizgo tuberkulinko.
All dose levels should be proposed and selected taking into account any existing toxicity and (toxico-) kinetic data available for the test chemical or related materials.
Mesto injiciranja se lahko obrije.
The highest dose level should first take into consideration the LD50 and/or acute toxicity information in order to avoid death, severe suffering or distress in the animals (24)(25)(26).
Morebitne izgube, uhajanje snovi na mestu injiciranja ali nepopoln vnos odmerka je treba zabeležiti.
The highest dose should represent the maximum tolerated dose (MTD);
Skupna količina odmerka na podgano na dan ne sme preseči 5 ml/kg telesne teže, razdeljenih na dve mesti injiciranja, razen pri vodnih raztopinah, pri katerih se lahko uporabi 10 ml/kg telesne teže.
a study conducted at a dose level that induced a positive uterotrophic response would be accepted too.
Opazovanja
As a screen, large intervals (e.g. one half log units corresponding to a dose progression of 3,2 or even up to one log units) between dosages are generally acceptable.
Splošna in klinična opazovanja
If there are no suitable data available, a range finding study may be performed to aid the determination of the doses to be used.
Splošna klinična opazovanja je treba opraviti vsaj enkrat dnevno in pogosteje, če se kažejo znaki strupenosti.
Alternatively, if the oestrogenic potency of an agonist can be estimated by in vitro (or in silico) data, these may be taken into consideration for dose selection.
Opazovanja je najbolje opraviti vsak dan ob istih časih ob upoštevanju vrhunca pričakovanih učinkov po odmerjanju.
For example, the amount of the test chemical that would produce uterotrophic responses equivalent to the reference agonist (ethinyl estradiol) is estimated by its relative in vitro potencies to ethinyl estradiol.
Vse živali je treba opazovati za določitev smrtnosti, obolevnosti in splošnih kliničnih znakov, kot so spremembe vedenja, spremembe na koži, dlaki, očeh in sluznicah, pojav sekrecije in ekskrecije ter delovanje avtonomnega živčevja (npr. solzenje, piloerekcija, velikost zenic, nenavaden vzorec dihanja).
The highest test dose would be given by multiplying this equivalent dose by an appropriate factor e.g. 10 or 100.
Telesna teža in poraba hrane
Considerations for range finding
Vse živali je treba stehtati dnevno na 0,1 g natančno, in sicer tik pred začetkom tretiranja, tj. ko se živali dodeli v skupine.
If necessary, a preliminary range finding study can be carried out with few animals.
Izmeri se lahko tudi količina hrane, ki jo živali porabijo med obdobjem tretiranja, in sicer za vsako posamezno kletko s tehtanjem hranilnic.
In this respect, OECD Guidance Document No 19(25) may be used defining clinical signs indicative of toxicity or distress to the animals.
Rezultati glede porabe hrane se izrazijo v gramih na podgano na dan.
If feasible within this range finding study after three days of administration, the uteri may be excised and weighed approximately 24-hours after the last dose.
Seciranje in merjenje teže maternice