natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Peptide depletion is monitored by HPLC coupled with an UV detector (photodiode array detector or fixed wavelength absorbance detector with 220 nm signal).
Koelúciu možno vyriešiť miernou úpravou nastavenia HPLC, aby sa viac oddelil elučný čas testovanej chemikálie a peptidu.
The appropriate column is installed in the HPLC system.
Ak sa použije alternatívne nastavenie HPLC v snahe vyriešiť koelúciu, mala by sa preukázať jeho rovnocennosť s validovaným nastavením (napr. testovaním látok na preukázanie spôsobilosti uvedených v dodatku 2).
The HPLC set-up described in the validated protocol uses a Zorbax SB-C-18 2,1 mm × 100 mm × 3,5 micron as preferred column.
Ak nastane koelúcia, pík peptidu nemožno integrovať a výpočet percentuálneho úbytku peptidu nie je možný.
With this reversed-phase HPLC column, the entire system should be equilibrated at 30 °C with 50 % phase A (0,1 % (v/v) trifluoroacetic acid in water) and 50 % phase B (0,085 % (v/v) trifluoroacetic acid in acetonitrile) for at least 2 hours before running.
Ak dôjde ku koelúcii takýchto testovaných chemikálií s cysteínovými, ako aj lyzínovými peptidmi, mala by sa analýza označiť za analýzu „bez výsledku“.
The HPLC analysis should be performed using a flow rate of 0,35 ml/min and a linear gradient from 10 % to 25 % acetonitrile over 10 minutes, followed by a rapid increase to 90 % acetonitrile to remove other materials.
V prípadoch, kedy dochádza ku koelúcii len s lyzínovým peptidom, možno použiť prognostický model cysteín 1:10 uvedený v tabuľke 2.
Equal volumes of each standard, sample and control should be injected.
Prognostický model cysteín 1:10 [16]
The column should be re-equilibrated under initial conditions for 7 minutes between injections.
Percentuálny úbytok cysteínu (Cys) %
If a different reversed-phase HPLC column is used, the set-up parameters described above may need to be adjusted to guarantee an appropriate elution and integration of the cysteine and lysine peptides, including the injection volume, which may vary according to the system used (typically in the range from 3-10 μl).
Trieda reaktivity
Importantly, if an alternative HPLC set-up is used, its equivalence to the validated set-up described above should be demonstrated (e.g. by testing the proficiency substances in Appendix 2).
Predpoklad DPRA [17]
Absorbance is monitored at 220 nm.
0 % ≤ percentuálny úbytok Cys ≤ 13,89 %
If a photodiode array detector is used, absorbance at 258 nm should also be recorded.
13,89 % < percentuálny úbytok Cys ≤ 23,09 %
It should be noted that some supplies of acetonitrile could have a negative impact on peptide stability and this has to be assessed when a new batch of acetonitrile is used.
23,09 % < percentuálny úbytok Cys ≤ 98,24 %
The ratio of the 220 peak area and the 258 peak area can be used as an indicator of co-elution.
98,24 % < percentuálny úbytok Cys ≤ 100 %
For each sample a ratio in the range of 90 % < mean [13] area ratio of control samples < 100 % would give a good indication that co-elution has not occurred.
Mohlo by dôjsť k iným prípadom, v ktorých prekrývanie retenčného času medzi testovanou chemikáliou a niektorým z peptidov nie je úplné.
There may be test chemicals which could promote the oxidation of the cysteine peptide.
V takýchto prípadoch možno percentuálne hodnoty úbytku peptidov odhadnúť a použiť ich v prognostickom modeli cysteín 1:10/lyzín 1:50, no zaradenie testovanej chemikálie do triedy reaktivity nemožno vykonať presne.
The peak of the dimerised cysteine peptide may be visually monitored.
Jediná analýza HPLC pre cysteínové aj lyzínové peptidy by mala byť pre testovanú chemikáliu postačujúca, ak výsledok nie je jednoznačný.
If dimerisation appears to have occurred, this should be noted as percent peptide depletion may be over-estimated leading to false positive predictions and/or assignment to a higher reactivity class (see paragraphs 29 and 30).
Avšak v prípadoch, keď sa výsledky približujú prahovej hodnote používanej na rozlíšenie medzi pozitívnymi a negatívnymi výsledkami (t. j. hraničné výsledky), môže byť potrebné ďalšie testovanie.
HPLC analysis for the cysteine and lysine peptides can be performed concurrently (if two HPLC systems are available) or on separate days.
Ak sa priemerná hodnota percentuálneho úbytku nachádza v rozpätí od 3 % do 10 % v prípade prognostického modelu pre cysteín 1:10/lyzín 1:50, alebo ak sa percentuálny úbytok cysteínu nachádza v rozmedzí od 9 % do 17 % v prípade prognostického modelu pre cysteín 1:10, malo by sa zvážiť vykonanie druhej analýzy a v prípade nesúhlasných výsledkov medzi prvými dvomi analýzami aj vykonanie tretej analýzy.
If analysis is conducted on separate days then all test chemical solutions should be freshly prepared for both assays on each day.
Skúšobný protokol by mal obsahovať tieto informácie:
The analysis should be timed to assure that the injection of the first sample starts 22 to 26 hours after the test chemical was mixed with the peptide solution.
Jednozložkové látky
For the HPLC set up used in the validation study and described in this test method, up to 26 analysis samples can be accommodated in a single HPLC run (see also paragraph 17).
Chemická identifikácia, ako napríklad názov, resp. názvy podľa IUPAC alebo CAS, číslo(-a) CAS, kód SMILES alebo InChI, štrukturálny vzorec a/alebo iné identifikátory;
An example of HPLC analysis sequence is provided in Appendix 3.
fyzický vzhľad, rozpustnosť vo vode, molekulová hmotnosť a ďalšie relevantné fyzikálno-chemické vlastnosti v dostupnom rozsahu;
Data evaluation
čistota, chemická identita nečistôt, ak je potrebná a prakticky realizovateľná atď.;
The concentration of cysteine or lysine peptide is photometrically determined at 220 nm in each sample by measuring the peak area (area under the curve, AUC) of the appropriate peaks and by calculating the concentration of peptide using the linear calibration curve derived from the standards.
v uplatniteľnom prípade úprava pred testovaním (napr. zahriatie, rozomletie);
The percent peptide depletion is determined in each sample by measuring the peak area and dividing it by the mean peak area of the relevant reference controls C (see Appendix 3) according to the formula described below.
testovaná koncentrácia, resp. koncentrácie;
Percent peptide depletion
podmienky skladovania a stability v dostupnom rozsahu.
Peptide peak area in replicate injection
Mnohozložková látka, UVCB a zmes:
ean peptide peak area in reference controls C
pokiaľ možno čo najpodrobnejšia charakterizácia, napr. prostredníctvom chemickej identity (pozri vyššie), čistoty, kvantitatívneho výskytu a relevantných fyzikálno-chemických vlastností (pozri vyššie) zložiek v dostupnom rozsahu;
Acceptance criteria
fyzický vzhľad, rozpustnosť vo vode a ďalšie relevantné fyzikálno-chemické vlastnosti v dostupnom rozsahu,
The following criteria should be met for a run to be considered valid:
molekulová hmotnosť alebo zjavná molekulová hmotnosť v prípade zmesí/polymérov známeho zloženia alebo iné informácie potrebné na vykonanie štúdie;
the standard calibration curve should have an r2 > 0,99,
podmienky skladovania a stability v dostupnom rozsahu;
the mean percent peptide depletion value of the three replicates for the positive control cinnamic aldehyde should be between 60,8 % and 100 % for the cysteine peptide and between 40,2 % and 69,0 % for the lysine peptide and the maximum standard deviation (SD) for the positive control replicates should be < 14,9 % for the percent cysteine depletion and < 11,6 % for the percent lysine depletion, and
v uplatniteľnom prípade odkaz na predchádzajúce výsledky s pozitívnymi kontrolami dokazujúce vhodné kritériá prijateľnosti vykonania testu.
the mean peptide concentration of reference controls A should be 0,50 ± 0,05 mM and the coefficient of variation (CV) of peptide peak areas for the nine reference controls B and C in acetonitrile should be < 15,0 %.
použité rozpúšťadlo/použitý nosič a prípadne pomer ich zložiek,
If one or more of these criteria is not met the run should be repeated.
identifikácia(-e) chemikálie, ako je názov(-vy) IUPAC alebo CAS, CAS číslo(-a) a/alebo iné identifikátory,
The following criteria should be met for a test chemical's results to be considered valid:
fyzický vzhľad, molekulová hmotnosť a ďalšie relevantné fyzikálno-chemické vlastnosti v prípade iných rozpúšťadiel/nosičov, než sú použité rozpúšťadlá/nosiče uvedené v testovacej metóde, v dostupnom rozsahu;
the maximum standard deviation for the test chemical replicates should be < 14,9 % for the percent cysteine depletion and < 11,6 % for the percent lysine depletion,
zdôvodnenie výberu rozpúšťadla pre každú chemikáliu,
the mean peptide concentration of the three reference controls C in the appropriate solvent should be 0,50 ± 0,05 mM.
v prípade acetonitrilu výsledky testu dosahu na stabilitu peptidov.
If these criteria are not met the data should be rejected and the run should be repeated for that specific test chemical.
Príprava peptidov, pozitívnej kontroly a testovanej chemikálie
Prediction model
charakteristika roztokov peptidov (dodávateľ, šarža, presná hmotnosť peptidu, objem pridaný pre zásobný roztok),
The mean percent cysteine and percent lysine depletion value is calculated for each test chemical.
charakteristika roztoku pozitívnej kontroly (presná hmotnosť látky na pozitívnu kontrolu, objem pridaný pre testovací roztok),
Negative depletion is considered as “0” when calculating the mean.
charakteristika roztokov testovanej chemikálie (presná hmotnosť testovanej chemikálie, objem pridaný do testovacieho roztoku).
By using the cysteine 1:10/lysine 1:50 prediction model shown in Table 1, the threshold of 6,38 % average peptide depletion should be used to support the discrimination between skin sensitisers and non-sensitisers in the framework of an IATA.
Nastavenie prístroja HPLC a analýza HPLC
Application of the prediction model for assigning a test chemical to a reactivity class (i.e. low, moderate and high reactivity) may perhaps prove useful to inform potency assessment within the framework of an IATA.
typ prístroja HPLC, HPLC a predkolóny, detektor, automatický dávkovač vzoriek,
Cysteine 1:10/lysine 1:50 prediction model [14]
parametre relevantné pre analýzu HPLC, ako je teplota kolóny, vstrekovacie/vstreknuté objemy, prietok a gradient.
Mean of cysteine and lysine % depletion
Vhodnosť systému
Reactivity Class
plocha píku peptidov pri 220 nm každého štandardu a replikátu na referenčnú kontrolu A,
DPRA Prediction [15]
lineárna kalibračná krivka vyjadrená graficky a uvedená hodnota r2,
0 % ≤ mean % depletion ≤ 6,38 %
koncentrácia peptidu každého replikátu na referenčnú kontrolu A,
No or minimal reactivity
priemerná hodnota koncentrácie peptidov (mM) troch referenčných kontrol A, SD a CV,
Negative
koncentrácia peptidov referenčných kontrol A a C.
6,38 % < mean % depletion ≤ 22,62 %
Postup analýzy
Low reactivity
Pri referenčných kontrolách:
Positive
plocha píku peptidov pri 220 nm každého replikátu B a C,
22,62 % < mean % depletion ≤ 42,47 %
priemerná hodnota plochy píku pri 220 nm deviatich referenčných kontrol B a C v acetonitrile, SD a CV (pre stabilitu referenčných kontrol počas analýzy),
Moderate reactivity
v prípade každého použitého rozpúšťadla priemerná hodnota plochy píku peptidov pri 220 nm troch vhodných referenčných kontrol C (na výpočet percentuálneho úbytku peptidov),
42,47 % < mean % depletion ≤ 100 %
v prípade každého použitého rozpúšťadla hodnota koncentrácie peptidov (mM) troch vhodných referenčných kontrol C,
High reactivity
v prípade každého použitého rozpúšťadla priemerná hodnota koncentrácie peptidov (mM) troch vhodných referenčných kontrol C, SD a CV.
There might be cases where the test chemical (the substance or one or several of the components of a multi-constituent substance or a mixture) absorbs significantly at 220 nm and has the same retention time of the peptide (co-elution).
Pri pozitívnej kontrole:
Co-elution may be resolved by slightly adjusting the HPLC set-up in order to further separate the elution time of the test chemical and the peptide.
plocha píku peptidov pri 220 nm každého replikátu,
If an alternative HPLC set-up is used to try to resolve co-elution, its equivalence to the validated set-up should be demonstrated (e.g. by testing the proficiency substances in Appendix 2).
percentuálny úbytok peptidov každého replikátu,
When co-elution occurs the peak of the peptide cannot be integrated and the calculation of the percent peptide depletion is not possible.
priemerná hodnota percentuálneho úbytku peptidov troch replikátov, SD a CV.
If co-elution of such test chemicals occurs with both the cysteine and the lysine peptides then the analysis should be reported as “inconclusive”.
Pri každej chemikálii:
In cases where co-elution occurs only with the lysine peptide, then the cysteine 1:10 prediction model reported in Table 2 can be used.
prítomnosť koelúcie,
Cysteine 1:10 prediction model [16]
prípadne opis akýchkoľvek relevantných zistení,
Cysteine (Cys) % depletion
priemerná hodnota percentuálneho úbytku peptidov troch replikátov, SD a CV,
Reactivity class
priemerná hodnota percentuálnych úbytkov lyzínu a cysteínu,
DPRA prediction [17]
použitý prognostický model a predpoklad DPRA.
0 % ≤ Cys % depletion ≤ 13,89 %
Testovanie spôsobilosti
13,89 % < Cys % depletion ≤ 23,09 %
V uplatniteľnom prípade použitý postup na preukázanie spôsobilosti laboratória vykonávať testovaciu metódu (napr. testovaním látok na preukázanie spôsobilosti) alebo na preukázanie opakovateľného vykonávania testovacej metódy v priebehu času.
23,09 % < Cys % depletion ≤ 98,24 %
Rozbor výsledkov
98,24 % < Cys % depletion ≤ 100 %
Diskusia o výsledkoch získaných testovacou metódou DPRA,
There might be other cases where the overlap in retention time between the test chemical and either of the peptides is incomplete.
diskusia o výsledkoch testovacej metódy v kontexte IATA, ak sú k dispozície iné relevantné informácie.
In such cases percent peptide depletion values can be estimated and used in the cysteine 1:10/lysine 1:50 prediction model, however assignment of the test chemical to a reactivity class cannot be made with accuracy.
Dostupné na: http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev05/05files_e.html
A single HPLC analysis for both the cysteine and the lysine peptide should be sufficient for a test chemical when the result is unequivocal.
Part 1: Scientific Evidence.
However, in cases of results close to the threshold used to discriminate between positive and negative results (i.e. borderline results), additional testing may be necessary.
Series on Testing and Assessment No.
If situations where the mean percent depletion falls in the range of 3 % to 10 % for the cysteine 1:10/lysine 1:50 prediction model or the cysteine percent depletion falls in the range of 9 % to 17 % for the cysteine 1:10 prediction model, a second run should be considered, as well as a third one in case of discordant results between the first two runs.
168, OECD, Paris.
The test report should include the following information
Kapitola B.6 tejto prílohy: Kožná senzibilizácia.
Mono-constituent substance
Chapter B.42 of this Annex: The Local Lymph Node Assay
Chemical identification, such as IUPAC or CAS name(s), CAS number(s), SMILES or InChI code, structural formula, and/or other identifiers;
Chapter B.50 of this Annex: Skin Sensitisation: Local Lymph Node Assay: DA.
Physical appearance, water solubility, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties, to the extent available;
Chaper B.51 of this Annex: Skin Sensitisation: Local Lymph Node Assay BrdU-ELISA
Purity, chemical identity of impurities as appropriate and practically feasible, etc;
Dostupné na: https://eurl-ecvam.jrc.ec.europa.eu/eurl-ecvam-recommendations/eurl-ecvam-recommendation-on-the-direct-peptide-reactivity-assay-dpra
Storage conditions and stability to the extent available.
OECD Series on Testing and Assessment, No.
Multi-constituent substance, UVCB and mixture:
Organisation for Economic Cooperation and Development, Paris, France.
Characterisation as far as possible by e.g. chemical identity (see above), purity, quantitative occurrence and relevant physicochemical properties (see above) of the constituents, to the extent available;
Dostupné na: www.fda.gov/downloads/drugs/guidancecomplianceregulatoryinformation/guidance/ucm070107.pdf – 138
Physical appearance, water solubility and additional relevant physicochemical properties, to the extent available;
Tento pojem sa často používa zameniteľne s pojmom „zhoda“ a označuje podiel správnych výsledkov testovacej metódy (21).
Molecular weight or apparent molecular weight in case of mixtures/polymers of known compositions or other information relevant for the conduct of the study;
AOP (dráha nepriaznivého účinku)
Storage conditions and stability to the extent available;
sled udalostí počnúc chemickou štruktúrou cieľovej chemikálie alebo skupiny podobných chemikálií vyvolaných molekulárnou iniciáciou až po výsledok in vivo, ktorý je predmetom záujmu (2).
Reference to historical positive control results demonstrating suitable run acceptance criteria, if applicable.
Kalibračná krivka
Solvent/vehicle used and ratio of its constituents, if applicable;
vzťah medzi experimentálnou hodnotou reakcie a analytickou koncentráciou (nazývaný aj ako štandardná krivka) známej látky.
Chemical identification(s), such as IUPAC or CAS name(s), CAS number(s), and/or other identifiers;
Variačný koeficient
Physical appearance, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties in the case other solvents / vehicles than those mentioned in the test method are used and to the extent available;
týka sa variability, ktorá sa v prípade skupiny opakovaných údajov vypočítava vydelením štandardnej odchýlky od priemeru.
Justification for choice of solvent for each test chemical;
Môže sa vynásobiť faktorom 100 a vyjadriť v percentách.
For acetonitrile, results of test of impact on peptide stability.
IATA (integrovaný prístup k testovaniu a hodnoteniu)
Preparation of peptides, positive control and test chemical
štruktúrovaný prístup používaný na identifikáciu (potenciálneho) nebezpečenstva, charakterizáciu nebezpečenstva (z hľadiska potencie) a/alebo hodnotenie bezpečnosti (potenciál/potencia a expozícia) chemikálie alebo skupiny chemikálií, ktorý strategicky integruje a porovnáva všetky relevantné údaje v záujme prijatia právneho rozhodnutia o potenciálnom nebezpečenstve a/alebo riziku a/alebo potrebe vykonania ďalších cielených, t. j. minimálnych testov.
Characterisation of peptide solutions (supplier, lot, exact weight of peptide, volume added for the stock solution);
Molekulárna iniciácia
Characterisation of positive control solution (exact weight of positive control substance, volume added for the test solution);
chemicky vyvolané narušenie biologického systému na úrovni molekúl, ktoré sa považuje za začiatok AOP.
Characterisation of test chemical solutions (exact weight of test chemical, volume added for the test solution).
zmes alebo roztok zložený z dvoch alebo viacerých látok, ktoré spolu nereagujú (1).
HPLC instrument setting and analysis
látka definovaná svojím kvantitatívnym zložením, v ktorej je hlavná zložka zastúpená v koncentrácii najmenej do 80 hm.
Type of HPLC instrument, HPLC and guard columns, detector, autosampler;
%.
Parameters relevant for the HPLC analysis such as column temperature, injection volumes, flow rate and gradient.
Viaczložková látka
System suitability
látka definovaná svojím kvantitatívnym zložením, v ktorej je viac ako jedna hlavná zložka zastúpená v koncentrácii ≥ 10 hm. % a < 80 hm. %.
Peptide peak area at 220 nm of each standard and reference control A replicate;
Viaczložková látka je výsledkom výrobného procesu.
Linear calibration curve graphically represented and the r2 reported;
Rozdiel medzi zmesou a viaczložkovou látkou spočíva v tom, že zmes sa získava zmiešaním dvoch alebo viacerých látok bez toho, aby došlo k chemickej reakcii.
Peptide concentration of each reference control A replicate;
Viaczložková látka je výsledkom chemickej reakcie.
Mean peptide concentration (mM) of the three reference controls A, SD and CV;
replikát obsahujúci všetky zložky testovacieho systému, ktorý je ovplyvnený látkou, o ktorej je známe, že vyvoláva pozitívnu reakciu.
Peptide concentration of reference controls A and C.
Referenčná kontrola
Analysis sequence
neovplyvnená vzorka, ktorá obsahuje všetky zložky testovacieho systému, vrátane rozpúšťadla alebo nosiča, ktorá sa spracuje použitím ovplyvnenej testovanej chemikálie a inými kontrolami, aby sa zistila základná reakcia vzoriek upravených testovanou chemikáliou rozpustenou v tom istom rozpúšťadle alebo nosiči.
For reference controls:
Relevantnosť
Peptide peak area at 220 nm of each B and C replicate;
opis vzťahu testu k účinku, ktorý je predmetom záujmu, a toho, či je tento účinok zmysluplný a užitočný na konkrétny účel.
Mean peptide peak area at 220 nm of the nine reference controls B and C in acetonitrile, SD an CV (for stability of reference controls over analysis time);
Ide o mieru, do akej test správne meria alebo predpovedá biologický účinok, ktorý je predmetom záujmu.
For each solvent used, the mean peptide peak area at 220 nm of the three appropriate reference controls C (for the calculation of percent peptide depletion);
Relevantnosť zohľadňuje presnosť (zhodu) testovacej metódy (21).
For each solvent used, the peptide concentration (mM) of the three appropriate reference controls C;
Hodnotí sa vypočítaním vnútrolaboratórnej a medzilaboratórnej reprodukovateľnosti a vnútrolaboratórnej opakovateľnosti (21).
For each solvent used, the mean peptide concentration (mM) of the three appropriate reference controls C, SD and CV.
Reprodukovateľnosť
For positive control:
zhoda výsledkov získaných testovaním tej istej chemikálie s použitím toho istého skúšobného protokolu (pozri spoľahlivosť) (21).
Peptide peak area at 220 nm of each replicate;
podiel všetkých pozitívnych/aktívnych chemikálií správne klasifikovaných testovacou metódou.
Percent peptide depletion of each replicate;
Ide o presnosť testovacej metódy, ktorá poskytuje kategorizačné výsledky a musí sa zohľadniť pri hodnotení relevantnosti testovacej metódy (21).
Mean percent peptide depletion of the three replicates, SD and CV.
podiel všetkých negatívnych/neaktívnych chemikálií správne klasifikovaných testovacou metódou.
For each test chemical:
Ide o presnosť testovacej metódy, ktorá poskytuje kategorizačné výsledky a musí sa zohľadniť pri hodnotení relevantnosti testovacej metódy (21).
Appearance of precipitate in the reaction mixture at the end of the incubation time, if observed.
chemické prvky a ich zlúčeniny v prírodnom stave alebo získané pomocou akéhokoľvek výrobného procesu vrátane všetkých prísad potrebných na uchovanie stability výrobku a všetkých nečistôt pochádzajúcich z použitého postupu, no s vylúčením všetkých rozpúšťadiel, ktoré je možné oddeliť bez toho, aby ovplyvnili stabilitu látky alebo zmenili jej zloženie (1).
If precipitate was re-solubilised or centrifuged;
stanovenie prístrojových parametrov (napr. citlivosti) analýzou referenčného štandardu pred spustením analytickej dávky (22).
Presence of co-elution;
pojem „testovaná chemikália“ sa používa ako odkaz na to, čo sa testuje.
Description of any other relevant observations, if applicable;
systém, ktorým sa navrhuje klasifikácia chemikálií (látok a zmesí) podľa štandardizovaných typov a miery fyzického, zdravotného a environmentálneho nebezpečenstva a označovania pomocou príslušných komunikačných prvkov, ako sú piktogramy, signalizačné výrazy, výstražné upozornenia, bezpečnostné upozornenia a karty bezpečnostných údajov, ktoré obsahujú informácie o ich škodlivých účinkoch z hľadiska ochrany ľudí (vrátane zamestnávateľov, pracovníkov, prepravcov, spotrebiteľov a záchranných zložiek) a životného prostredia (1).
Mean of percent peptide depletion of the three replicate, SD and CV;
látky neznámeho alebo variabilného zloženia, produkty komplexných reakcií alebo biologické materiály.
Mean of percent cysteine and percent lysine depletion values;
Validná testovacia metóda
Prediction model used and DPRA prediction.
testovacia metóda, ktorá sa na daný účel považuje za dostatočne relevantnú a spoľahlivú a ktorá je založená na vedecky podložených zásadách.