natgillin/translations-raw huggingface dataset:
In some cases, examination of a site of direct contact (for example, for orally-administered chemicals the glandular stomach or duodenum/jejunum, or for inhaled chemicals the lungs) may be most relevant.
najmenej jedna z testovaných dávok vykazuje štatisticky významný nárast v porovnaní so súbežnou negatívnou kontrolou,
Additional or alternative tissues should be selected based on the specific reasons for the test is being conducted but it may be useful to examine multiple tissues in the same animals providing the laboratory has demonstrated proficiency with those tissues and competency in handling multiple tissues at the same time.
ktorýkoľvek z výsledkov je mimo distribúcie historických údajov o negatívnych kontrolách pre daný druh, nosič, spôsob (cestu), tkanivo a počet podaní.
Preparation of specimens
Keď sú všetky tieto kritériá splnené, testovaná chemikália sa považuje za schopnú spôsobovať zlomy v reťazcoch DNA tkanív skúmaných týmto testovacím systémom.
For the processes described in the following paragraphs (44-49) it is important that all solutions or stable suspensions should be used within their expiration date, or should be freshly prepared if needed.
Ak je splnené iba jedno či dve z týchto kritérií, pozri bod 62.
Also in the following paragraphs, the times taken to (i) remove each tissue after necropsy, (ii) process each tissue into cell/nuclei suspensions, and (iii) process the suspension and prepare the slides are all considered critical variables (see Definitions, Appendix 1), and acceptable lengths of time for each of these steps should have been determined during establishment of the method and demonstration of proficiency.
Za predpokladu, že boli splnené všetky kritériá prijateľnosti sa testovaná chemikália považuje za jednoznačne negatívnu, ak:
Animals will be euthanised, consistent with effective animal welfare legislation and 3Rs principles, at the appropriate time(s) after the last treatment with a test chemical.
ide o nárast, ktorý pri hodnotení vhodnou analýzou trendu nepotvrdí súvislosť s koncentráciou,
Selected tissue(s) is removed, dissected, and a portion is collected for the comet assay, whilst at the same time a section from the same part of the tissue should be cut and placed in formaldehyde solution or appropriate fixative for possible histopathology analysis (see paragraph 55) according to standard methods (12).
všetky výsledky sú v rámci distribúcie historických údajov o negatívnych kontrolách pre daný druh, nosič, spôsob (cestu), tkanivo a počet podaní,
The tissue for the comet assay is placed into mincing buffer, rinsed sufficiently with cold mincing buffer to remove residual blood, and stored in ice-cold mincing buffer until processed.
boli preukázané priame alebo nepriame dôkazy podporujúce expozíciu cieľového tkaniva, resp. tkanív, alebo ich toxicitu.
In situ perfusion may also be performed, e.g. for liver, kidney.
V tom prípade sa testovaná chemikália považuje za neschopnú spôsobovať zlomy v reťazcoch DNA tkanív skúmaných týmto testovacím systémom.
Many published methods exist for cell/nuclei isolation.
Ak odozva nie je ani jednoznačne negatívna, ani jednoznačne pozitívna (t. j. neboli splnené všetky kritériá uvedené v bodoch 59 a 60), v snahe napomôcť dosiahnutiu biologickej relevantnosti výsledku by sa mali údaje vyhodnocovať na základe odborného posudku a/alebo, ak je to vedecky opodstatnené, uskutočniť ďalšie skúmania.
These include mincing of tissues such as liver and kidney, scraping mucosal surfaces in the case of the gastro-intestinal tract, homogenization and enzymic digestion.
Užitočné môže byť aj hodnotenie dodatočných buniek (ak je to vhodné) alebo zopakovanie pokusu najlepšie po optimalizácii experimentálnych podmienok (napr. intervalov dávok, iných spôsobov podania, iných časov odberu vzoriek alebo iných tkanív).
The JaCVAM validation trial only studied isolated cells, and therefore in terms of establishing the method and being able to refer to the JaCVAM trial data for demonstration of proficiency, isolated cells are preferred.
V zriedkavých prípadoch, dokonca aj po ďalších skúmaniach, nemusí byť na základe daného súboru údajov možné dospieť k záveru o pozitívnych alebo negatívnych výsledkoch, a preto sa takéto údaje považujú za nejednoznačné.
However, it has been shown that there was no essential difference in the assay result whether isolated cells or nuclei were used (8).
Posúdenie biologickej relevantnosti pozitívneho alebo nejednoznačného výsledku, ako aj informácie o cytotoxicite v cieľovom tkanive, sú povinné (pozri body 54 – 55).
Also different methods to isolate cells/nuclei (e.g. homogenizing, mincing, enzymic digestion and mesh filtration) gave comparable results (55).
Ak sú pozitívne alebo nejednoznačné nálezy pozorované iba za prítomnosti jasných dôkazov cytotoxicity, štúdia by sa mala uzavrieť ako genotoxicky nejednoznačná, pokiaľ neexistuje dostatok informácií, ktoré podporujú konečný záver.
Consequently, either isolated cells or isolated nuclei can be used.
V prípadoch negatívneho výsledku štúdie, ktoré svedčia o znakoch toxicity pri všetkých testovaných dávkach, môže byť vhodné vykonať ďalšiu štúdiu s netoxickými dávkami.
A laboratory should thoroughly evaluate and validate tissue-specific methods of single cell/nuclei isolation.
zdroj, číslo dávky, ak je k dispozícii,
As discussed in paragraph 40, the persistence of some of the lesions that lead to the DNA strand breaks detected by the comet assay may be very short (52) (53).
stabilita testovanej chemikálie, konečný dátum použitia alebo dátum opätovnej analýzy, ak sú známe.
Therefore, whatever method is used to prepare the single cell/nuclei suspensions, it is important that tissues are processed as soon as possible after the animals have been euthanised and placed in conditions that reduce the removal of lesions (e.g. by maintaining the tissue at low temperature).
Rozpúšťadlo/nosič:
The cell suspensions should be kept ice-cold until ready for use, so that minimal inter-sample variation and appropriate positive and negative control responses can be demonstrated.
zdôvodnenie výberu rozpúšťadla/nosiča,
PREPARATION OF SLIDES
opis prípravy zloženia dávok,
Slide preparation should be done as soon as possible (ideally within one hour) after single cell/nuclei preparation, but the temperature and time between animal death and slide preparation should be tightly controlled and validated under the laboratory's conditions.
analytické určenie zložení (napr. stabilita, homogénnosť, nominálne koncentrácie).
The volume of the cell suspension added to low melting point agarose (usually 0,5-1,0 %) to make the slides should not reduce the percentage of low melting point agarose to less than 0,45 %.
použitý druh/kmeň a vedecké a etické odôvodnenie ich výberu,
The optimum cell density will be determined by the image analysis system used for scoring comets.
zdroj, podmienky umiestnenia, potrava, stimulujúce prostredie atď.,
Lysis
hmotnosť jednotlivých zvierat na začiatku a konci testu vrátane rozpätia telesnej hmotnosti, priemeru a štandardnej odchýlky pre každú skupinu.
Lysis conditions are also a critical variable and may interfere with the strand breaks resulting from specific types of DNA modifications (certain DNA alkylations and base adducts).
výsledky štúdie na zistenie rozsahu (ak bola uskutočnená),
It is therefore recommended that the lysis conditions be kept as constant as possible for all slides within an experiment.
odôvodnenie spôsobu (cesty) podania,
Once prepared, the slides should be immersed in chilled lysing solution for at least one hour (or overnight) at around 2-8 °C under subdued lighting conditions e.g. yellow light (or light proof) that avoid exposure to white light that may contain UV components.
miesto vpichu (v prípade podkožných alebo intravenóznych štúdií),
After this incubation period, the slides should be rinsed to remove residual detergent and salts prior to the alkali unwinding step.
metódy prípravy vzoriek, ak sú k dispozícii, histopatologických analýz, najmä v prípade chemikálie, ktorá vyvolá pozitívnu kométovú odozvu,
This can be done using purified water, neutralization buffer or phosphate buffer.
odôvodnenie výberu tkaniva,
Electrophoresis buffer can also be used.
metódy overovania, či sa testovaná chemikália dostala do cieľového tkaniva alebo hlavného obehu v prípade negatívnych výsledkov,
This would maintain the alkaline conditions in the electrophoresis chamber.
podrobné údaje o kvalite potravy a vody,
Unwinding and electrophoresis
podrobný opis harmonogramov ovplyvňovania a odoberania vzoriek a odôvodnenie ich výberu (napr. toxikokinetické údaje, ak existujú),
Slides should be randomly placed onto the platform of a submarine-type electrophoresis unit containing sufficient electrophoresis solution such that the surfaces of the slides are completely covered (the depth of covering should also be consistent from run to run).
metóda zmierňovania bolesti, analgézia,
In another type of comet assay electrophoresis units i.e. with active cooling, circulation and high capacity power supply a higher solution covering will result in higher electric current while the voltage is kept constant.
postupy izolácie a uchovávania tkanív;
A balanced design should be used to place slides in the electrophoresis tank to mitigate the effects of any trends or edge effect within the tank and to minimize batch-to-batch variability, i.e., in each electrophoresis run, there should be the same number of slides from each animal in the study and samples from the different dosage groups, negative and positive controls, should be included.
metódy prípravy jednobunkových/jadrových suspenzií,
The slides should be left for at least 20 minutes for the DNA to unwind, and then subjected to electrophoresis under controlled conditions that will maximize the sensitivity and dynamic range of the assay (i.e. lead to acceptable levels of % tail DNA for negative and positive controls that maximize sensitivity).
zdroj a čísla dávok všetkých činidiel (ak je to možné),
The level of DNA migration is linearly associated with the duration of electrophoresis, and also with the potential (V/cm).
metódy hodnotenia cytotoxicity,
Based on the JaCVAM trial this could be 0,7 V/cm for at least 20 minutes.
podmienky elektroforézy,
The duration of electrophoresis is considered a critical variable and the electrophoresis time should be set to optimize the dynamic range.
všeobecné klinické pozorovania každého zvieraťa pred a počas obdobia testovania, ak sa vykonávalo,
Longer electrophoresis times (e.g. 30 or 40 minutes to maximize sensitivity) usually lead to stronger positive responses with known mutagens.
dôkazy o cytotoxicite, ak bola vyvolaná,
However longer electrophoresis times may also lead to excessive migration in control samples.
v prípade štúdií trvajúcich viac ako jeden týždeň: hmotnosť jednotlivých zvierat v priebehu štúdie vrátane rozpätia telesnej hmotnosti, priemeru a štandardnej odchýlky pre každú skupinu, spotreba potravy,
In each experiment the voltage should be kept constant, and the variability in the other parameters should be within a narrow and specified range, for example in the JaCVAM trial 0,7 V/cm delivered a starting current of 300 mA.
vzťah medzi dávkou a odozvou, ak evidentne existuje,
The depth of buffer should be adjusted to achieve the required conditions and maintained throughout the experiment.
pre každé tkanivo/zviera: % chvostovej DNA (alebo iné merania, ak sa zvolili) a stredné hodnoty za preparát, priemerné hodnoty za zviera a priemerné hodnoty za skupinu,
The current at the start and end of the electrophoresis period should be recorded.
súbežné a historické údaje o negatívnych kontrolách s rozsahmi, priemermi/strednými hodnotami a štandardnými odchýlkami pri každom posudzovanom tkanive,
The optimum conditions should therefore be determined during the initial demonstration of proficiency in the laboratory concerned with each tissue studied.
súbežné a historické údaje o pozitívnych kontrolách,
The temperature of the electrophoresis solution through unwinding and electrophoresis should be maintained at a low temperature, usually 2-10 °C (10).
pre tkanivá iné ako pečeň: krivka závislosti odozvy od dávky pri pozitívnej kontrole.
The temperature of the electrophoresis solution at the start of unwinding, the start of electrophoresis, and the end of electrophoresis should be recorded.
Môže ísť o údaje zozbierané počas preukazovania spôsobilosti (pozri body 16 a 17) doplnené príslušným odôvodnením, odkazmi na súčasnú odbornú literatúru a primerané sile a rozptylu odoziev na kontroly v danom tkanive;
After completion of electrophoresis, the slides should be immersed/rinsed in the neutralization buffer for at least 5 minutes.
použité štatistické analýzy a metódy, kritériá hodnotenia odoziev ako pozitívnych, negatívnych alebo nejednoznačných,
Gels can be stained and scored “fresh” (e.g. within 1-2 days) or can be dehydrated for later scoring (e.g. within 1-2 weeks after staining) (56).
frekvencia výskytu „ježov“ v každej skupine a za zviera.
However, the conditions should be validated during the demonstration of proficiency and historical data should be obtained and retained separately for each of these conditions.
Kapitola B.8 tejto prílohy: Subakútna inhalačná toxicita: 28-dňová štúdia.
In case of the latter, slides should be dehydrated by immersion into absolute ethanol for at least 5 minutes, allowed to air dry, and then stored, either at room temperature or in a container in a refrigerator until scored.
Kapitola B.29 tejto prílohy: Subchronická inhalačná toxicita: 90-dňová štúdia.
Methods of Measurement
OECD (2002), “Guidance Document on the Recognition, Assessment and Use of Clinical Signs as Humane Endpoints for Experimental Animals Used in Safety Evaluation”, OECD Environment, Health and Safety Publications (EHS), Series on Testing and Assessment, No.
Comets should be scored quantitatively using an automated or semi-automated image-analysis system.
19, OECD Publishing, Paris.
The slides will be stained with an appropriate fluorescent stain e.g. SYBR Gold, Green I, propidium iodide or ethidium bromide and measured at a suitable magnification (e.g. 200x) on a microscope equipped with epi-fluorescence and appropriate detectors or a digital (e.g. CCD) camera.
Alkalická jednobunková gélová elektroforéza
Cells may be classified into three categories as described in the atlas of comet images (57), namely scorable, non-scorable and “hedgehog” (see paragraph 56 for further discussion).
senzitívna technika detekcie primárneho poškodenia DNA na úrovni jednotlivých buniek/jadier.
Only scorable cells (clearly defined head and tail with no interference with neighbouring cells) should be scored for % tail DNA to avoid artefacts.
Kométa
There is no need to report the frequency of non-scorable cells.
tvar podobný kométam, ktorý nadobudnú nukleoidy po tom, ako sa vložia do elektroforézneho poľa: hlavu tvorí jadro a chvost vznikne migráciou DNA z jadra pod vplyvom elektrického poľa.
The frequency of hedgehogs should be determined based on the visual scoring (since the absence of a clearly-defined head will mean they are not readily detected by image analysis) of at least 150 cells per sample (see paragraph 56 for further discussion) and separately documented.
Kritická premenná/kritický parameter
All slides for analysis, including those of positive and negative controls, should be independently coded and scored “blinded” so the scorer is unaware of the treatment condition.
ide o protokolovú premennú, v prípade ktorej môže aj nepatrná zmena výrazne ovplyvniť záver skúšky.
For each sample (per tissue per animal), at least 150 cells (excluding hedgehogs — see paragraph 56) should be analysed.
Kritické premenné môžu byť viazané na konkrétne tkanivo.
Scoring 150 cells per animal in at least 5 animals per dose (less in the concurrent positive control — see paragraph 29) provides adequate statistical power according to the analysis of Smith et al., 2008 (5).
Kritické premenné by sa nemali meniť, najmä v rámci testu bez toho, aby sa zvážilo, do akej miery ich zmena ovplyvní odozvu na test napr. na základe sily a variability pozitívnych a negatívnych kontrol.
If slides are used, this could be from 2 or 3 slides scored per sample when five animals per group are used.
V skúšobnom protokole by mal byť uvedený zoznam zmien kritických premenných vykonaných počas testu alebo v porovnaní so štandardným laboratórnym protokolom spolu s odôvodneniami každej zmeny.
Several areas of the slide should be observed at a density that ensures there is no overlapping of tails.
Hustota na chvoste alebo % chvostovej DNA
Scoring at the edge of slides should be avoided.
Ide o hustotu na chvoste kométy v porovnaní s celkovou hustotou (hlava plus chvost).
DNA strand breaks in the comet assay can be measured by independent endpoints such as % tail DNA, tail length and tail moment.
Vyjadruje percentuálne množstvo zlomov DNA.
All three measurements can be made if the appropriate image software analyser system is used.
FAKTORIÁLNY EXPERIMENT IDENTIFIKÁCIE ROZDIELOV MEDZI POHLAVIAMI V KOMÉTOVOM TESTE IN VIVO
However, the % tail DNA (also known as % tail intensity) is recommended for the evaluation and interpretation of results (12) (40) (41) (42), and is determined by the DNA fragment intensity in the tail expressed as a percentage of the cell's total intensity (13).
Pri tomto experimente sa testuje minimálne 5 samcov a 5 samíc pri každej úrovni koncentrácie, čo znamená model s použitím minimálne 40 zvierat (20 samcov a 20 samičiek, plus príslušné pozitívne kontroly).
Tissue damage and cytotoxicity
Touto analýzou sa variabilita súboru údajov rozdelí na variabilitu medzi pohlaviami, medzi koncentráciami a na variabilitu súvisiacu s interakciou medzi pohlaviami a koncentráciami.
Positive findings in the comet assay may not be solely due to genotoxicity, target tissue toxicity may also result in increases in DNA migration (12) (41).
Podrobné informácie o príslušnej metodike sú dostupné v mnohých bežných štatistických publikáciách (pozri odkazy) a v príručkách ku štatistickým programom.
Conversely, low or moderate cytotoxicity is often seen with known genotoxins (12), showing that it is not possible to distinguish DNA migration induced by genotoxicity versus that induced by cytotoxicity in the comet assay alone.
EXISTUJÚCE OBMEDZENIA SKÚŠKY
However, where increases in DNA migration are observed, it is recommended that an examination of one or more indicators of cytotoxicity is performed as this can aid in interpretation of the findings.
Na základe súčasných poznatkov je v súvislosti s kométovým testom in vivo známych niekoľko obmedzení.
Increases in DNA migration in the presence of clear evidence of cytotoxicity should be interpreted with caution.
Očakáva sa, že ich počet sa bude znižovať, príp. sa s pribúdajúcimi skúsenosťami s používaním testu presnejšie zadefinujú tak, aby bolo možné zodpovedať bezpečnostné otázky z hľadiska predpisov.
Many measures of cytotoxicty have been proposed and of these histopathological changes are considered a relevant measure of tissue toxicity.
Niektoré typy poškodenia DNA môžu byť krátkodobé, t. j. môžu sa opraviť príliš rýchlo na to, aby sa po 24 hodinách či viac od poslednej dávky dali pozorovať.
Observations such as inflammation, cell infiltration, apoptotic or necrotic changes have been associated with increases in DNA migration, however, as demonstrated by the JaCVAM validation trial (12) no definitive list of histopathological changes that are always associated with increased DNA migration is available.
Neexistuje konkrétny zoznam s typmi krátkodobých poškodení ani s chemikáliami, ktoré môžu tento typ poškodenia spôsobovať, ba dokonca nie je ani známe, za aký čas možno tento druh poškodení zistiť.
Changes in clinical chemistry measures (e.g. AST, ALT), can also provide useful information on tissue damage and additional indicators such as caspase activation, TUNEL stain, Annexin V stain, etc. may also be considered.
Optimálny čas, resp. časy odberu vzoriek môžu byť takisto závislé od chemikálie alebo spôsobu jej podania, pričom časy odberu vzoriek by sa mali určovať na základe kinetických údajov (napríklad čas Tmax, za ktorý sa dosiahne hodnota najintenzívnejšej koncentrácie v plazme alebo tkanive), ak sú takéto údaje dostupné.
However, there are limited published data where the latter have been used for in vivo studies and some may be less reliable than others.
Vo väčšine validačných štúdií podporujúcich túto testovaciu metódu sa uvádza vykonanie pitvy 2 alebo 3 hodiny po podaní konečnej dávky.
Hedgehogs (or clouds, ghost cells) are cells that exhibit a microscopic image consisting of a small or non-existent head, and large diffuse tails and are considered to be heavily damaged cells, although the etiology of the hedgehogs is uncertain (see Appendix 3).
Väčšina štúdií publikovaných v odbornej literatúre opisuje podanie konečnej dávky medzi 2 až 6 hodinami pred utratením.
Due to their appearance, % tail DNA measurements by image analysis are unreliable and therefore hedgehogs should be evaluated separately.
Preto boli tieto poznatky použité ako základ pre odporúčanie v rámci tejto testovacej metódy, na základe ktorého by sa pri absencii údajov nenaznačujúcich pravý opak, mala konečná dávka podať v určenom časovom intervale medzi 2 a 6 hodinami pred pitvou.
The occurrence of hedgehogs should be noted and reported and any relevant increase thought to be due to the test chemical should be investigated and interpreted with care.
Neexistuje žiadna štúdia s identifikovateľnými údajmi, ktorá by skúmala citlivosť testu na zistenie krátkodobých poškodení DNA po podaní chemikálie potravou alebo pitnou vodou v porovnaní s jej podaním cez sondu.
Knowledge of the potential mode of action of the test chemicals may help with such considerations.
Bolo zistené poškodenie DNA po podaní v krmivách a pitnej vode, ale v porovnaní s ďaleko väčšími skúsenosťami s podávaním cez sondu a intraperitoneálnou injekciou ide len o relatívne malý počet týchto správ.
The animal is the experimental unit and therefore both individual animal data and summarized results should be presented in tabular form.
Preto môže byť citlivosť tohto testu v prípade chemikálií spôsobujúcich krátkodobé poškodenia, ktoré sú podávané v krmivách alebo pitnej vode, znížená.
All of these values should be included in the report.
Napriek tomu, že existuje niekoľko publikácií dokazujúcich nejednoznačný účinok cytotoxicity in vitro, bolo uverejnených len veľmi málo údajov in vivo, a preto nie je možné odporučiť jediné meranie cytotoxicity.
Alternative approaches (see paragraph 53) may be used if scientifically and statistically justified.
Hoci sú so zvýšením migrácie DNA spájané histopatologické zmeny ako zápal, bunková infiltrácia, apoptózové alebo nekrotické zmeny, nemusia vždy vyústiť do pozitívnych nálezov komét, čo potvrdila aj validačná skúška JaCVAM (OECD, 2014), a preto neexistuje žiadny konečný zoznam histopatologických zmien, ktoré by súviseli iba so zvýšenou migráciou DNA.
Statistical analysis can be done using a variety of approaches (58) (59) (60) (61).
„Ježe“ (hedgehogs, clouds, ghost cells) boli pôvodne navrhnuté ako ukazovatele cytotoxicity, ich etiológia je však nejasná.
When selecting the statistical methods to be used, the need for transformation (e.g. log or square root) of the data and/or addition of a small number (e.g. 0,001) to all (even non-zero) values to mitigate the effects of zero cell values, should be considered as discussed in the above references.
Existujú údaje, ktoré naznačujú, že ich môže spôsobovať cytotoxicita súvisiaca s chemikáliou, mechanicky/enzymaticky indukované poškodenia, ktoré vznikajú vo fáze prípravy vzorky (Guerard et al., 2014), a/alebo extrémnejší účinok genotoxicity testovanej chemikálie.
Details of analysis of treatment/sex interactions when both sexes are used, and subsequent analysis of data where either differences or no differences are found is given in Appendix 2.
Z iných údajov vyplýva, že vznikajú z dôvodu rozsiahleho, no pravdepodobne opraviteľného poškodenia DNA (Lorenzo et al., 2013).
Data on toxicity and clinical signs should also be reported.
Tkanivá alebo bunkové jadrá možno úspešne zmraziť na účely ďalšej analýzy.