natgillin/translations-raw huggingface dataset:
the amount of fluorescein which passes through the cell layer, measured spectrofluorometrically.
Preto pozitívne výsledky v celej pohlavnej žľaze (semenníku) nemusia nevyhnutne vyplývať z poškodenia zárodočných buniek, hoci dokazujú, že testovaná chemikália, resp. chemikálie a/alebo ich metabolity sa dostali do pohlavnej žľazy.
GHS (Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals by the United Nation (UN))
Pri štandardných experimentálnych podmienkach kométového testu nie je možné spoľahlivo zistiť medzireťazcové krížne väzby.
A system proposing the classification of chemicals (substances and mixtures) according to standardised types and levels of physical, health and environmental hazards, and addressing corresponding communication elements, such as pictograms, signal words, hazard statements, precautionary statements and safety data sheets, so that to convey information on their adverse effects with a view to protect people (including employers, workers, transporters, consumers and emergency responders) and the environment.
Ak sa však experimentálne podmienky určitým spôsobom upravia, umožní to zistiť medzireťazcové krížne väzby DNA-DNA a DNA-proteín, ako aj iné bázické zmeny napr. oxidované bázy (23) (36) (37) (38) (39).
GHS Category 1
Adekvátna charakterizácia nevyhnutných zmien v protokole si však ešte vyžaduje ďalšie úsilie.
Used in the context of the UN GHS as a mixture or solution composed of two or more substances in which they do not react.
Preto detekcia agensov spôsobujúcich medzireťazcové krížne väzby nie je primárnym účelom testu tak, ako je tu opísaný.
Not-classified
Tento test nie je ani po úpravách vhodný na detekciu aneugénov.
Chemicals that are not classified as UN GHS Categories 1, 2A, or 2B; EU CLP Categories 1 or 2; or U.S. EPA Categories I, II, or III ocular irritants.
Podľa súčasných poznatkov je v súvislosti s kométovým testom in vivo známych niekoľko ďalších obmedzení (pozri dodatok 3).
A chemical that causes irreversible tissue damage to the eye. (b) Chemicals that are classified as UN GHS Category 1; EU CLP Category 1; or U.S.
Očakáva sa, že v budúcnosti dôjde k revízii tejto testovacej metódy, pri ktorej budú prípadne zohľadnené aj získané skúsenosti.
EPA Category I ocular irritants.
PRINCÍP METÓDY
Ocular irritant
Podrobný opis dávkovania a odberu vzoriek je uvedený v bodoch 36 až 40.
A chemical that produces a reversible change in the eye following application to the anterior surface of the eye; (b) Chemicals that are classified as UN GHS Categories 2A, or 2B; EU CLP Category 2; or U.S. EPA Categories II or III ocular irritants.
Vo vybranom čase, resp. časoch odberu vzoriek sa skúmané tkanivá rezom oddelia a pripravia jednobunkové/jadrové suspenzie (v prípade potreby, napr. ak ide o pečeň, je možné vykonať perfúziu in situ), ktoré sa vsadia do mäkkého agaru, aby sa na preparátoch znehybnili.
Ocular severe irritant
Bunky/jadrá sa upravia lyzačným tlmivým roztokom, aby sa odstránila bunková a/alebo jadrová membrána a vystavia sa pôsobeniu silnej zásady napr. s pH ≥ 13 s cieľom rozpliesť DNA a uvoľniť voľné slučky a fragmenty DNA.
A chemical that causes tissue damage in the eye following application to the anterior surface of the eye that is not reversible within 21 days of application or causes serious physical decay of vision. (b) Chemicals that are classified as UN GHS Category 1; EU CLP Category 1; or U.S.
DNA jadra v agare sa potom podrobí elektroforéze.
EPA Category I ocular irritants.
Normálne nefragmentované molekuly DNA zostanú na mieste, v ktorom bola DNA jadra v agare, pričom všetky fragmenty DNA a voľné slučky DNA migrujú k anóde.
Positive control A replicate containing all components of a test system and treated with a chemical known to induce a positive response.
Po elektroforéze sa DNA zobrazí použitím vhodného fluorescenčného zafarbenia.
To ensure that variability in the positive control response across time can be assessed, the magnitude of the positive response should not be extreme.
Prípravky by sa mali analyzovať mikroskopom a plnoautomatizovanými alebo poloautomatizovanými systémami analýzy obrazu.
Proficiency Chemicals
Rozsah migrácie DNA počas elektroforézy, ako aj jej dĺžka odrážajú množstvo a veľkosť fragmentov DNA.
A sub-set of the list of Reference Chemicals that can be used by a naïve laboratory to demonstrate proficiency with the validated reference test method.
V kométovom teste je niekoľko sledovaných parametrov.
Relevance incorporates consideration of the accuracy (concordance) of a test method (8).
Na posúdenie poškodenia DNA sa odporúča obsah DNA na chvoste (% chvostovej DNA alebo % hustoty na chvoste)(12) (40) (41) (42).
Replacement test
Po analýze dostatočného počtu jadier sa údaje analyzujú vhodnými metódami, aby sa posúdili výsledky testu.
A test which is designed to substitute for a test that is in routine use and accepted for hazard identification and/or risk assessment, and which has been determined to provide equivalent or improved protection of human or animal health or the environment, as applicable, compared to the accepted test, for all possible testing situations and chemicals.
Treba poznamenať, že možnosti zmeny jednotlivých aspektov metodiky vrátane prípravy vzoriek, podmienok elektroforézy, parametrov vizuálnej analýzy (napr. intenzita zafarbenia, svetelná intenzita žiarovky mikroskopu a použitie mikroskopických filtrov a rozlišovacích schopností kamery) a podmienok okolia (napr. osvetlenie pozadia) boli predmetom skúmania a môžu ovplyvňovať migráciu DNA (43) (44) (45) (46).
The proportion of all positive/active chemicals that are correctly classified by the test.
Každé laboratórium by malo svoje experimentálne schopnosti na vykonanie kométového testu preukázať tým, že z každého cieľového tkaniva, resp. tkanív každého z použitých druhov dokáže získať jednobunkové alebo jadrové suspenzie dostatočnej kvality.
It is a measure of accuracy for a test method that produces categorical results, and is an important consideration in assessing the relevance of a test method (8).
Kvalita prípravkov sa najskôr hodnotí % chvostovej DNA na zvieratách ovplyvnených nosičom, ktoré patria do nižšieho rozsahu reprodukovateľnosti.
Is the production of tissue damage in the eye, or serious physical decay of vision, following application of a test chemical to the anterior surface of the eye, which is not fully reversible within 21 days of application.
Súčasné údaje naznačujú, že priemer skupiny, pokiaľ ide o % chvostovej DNA (na základe priemeru mediánov – pozri bod 57, v ktorom sú tieto pojmy vysvetlené) v pečeni potkanov, by nemal podľa možnosti prekročiť 6 %, čo by bolo v súlade s hodnotami z validačnej skúšky JaCVAM (12), ako aj z iných uverejnených a interných údajov.
An untreated sample containing all components of a test system, including the solvent or vehicle that is processed with the test chemical-treated and other control samples to establish the baseline response for the samples treated with the test chemical dissolved in the same solvent or vehicle.
V súčasnosti neexistuje dostatočné množstvo údajov na to, aby bolo možné odporúčať optimálne alebo prijateľné rozpätia aj pre ďalšie tkanivá.
The proportion of all negative/inactive chemicals that are correctly classified by the test.
To však nevylučuje použitie iných tkanív, ak je toto použitie opodstatnené.
It is a measure of accuracy for a test method that produces categorical results and is an important consideration in assessing the relevance of a test method.
V skúšobnom protokole by malo byť uvedené hodnotenie výkonnosti kométového testu v týchto tkanivách v porovnaní s publikovanou odbornou literatúrou alebo na základe interných údajov.
Used in the context of the UN GHS as chemical elements and their compounds in the natural state or obtained by any production process, including any additive necessary to preserve the stability of the product and any impurities deriving from the process used, but excluding any solvent which may be separated without affecting the stability of the substance or changing its composition.
Po prvé, je vhodné, aby bolo % chvostovej DNA v kontrolách nízke, aby sa dosiahlo dostatočne dynamické rozpätie na detekciu pozitívneho účinku.
It is important to note that a validated test method may not have sufficient performance in terms of accuracy and reliability to be found acceptable for the proposed purpose (8).
Po druhé, každé laboratórium by malo byť schopné reprodukovať očakávané odpovede na priame mutagény a promutagény, a to s rôznymi spôsobmi účinku uvedenými v tabuľke 1 (bod 29).
PROFICIENCY CHEMICALS FOR THE FL TEST METHOD
Ak je to vhodné, môžu sa po odôvodnení a preukázaní jednoznačne pozitívnych odoziev v skúmaných tkanivách zvoliť pozitívne látky napr. z validačnej skúšky JaCVAM (12) alebo z iných uverejnených údajov (pozri bod 9).
Prior to routine use of this test method, laboratories should demonstrate technical proficiency by correctly identifying the ocular corrosivity classification of the 8 chemicals recommended in Table 1.
Preukázať by sa mala aj schopnosť detekcie slabých účinkov známych mutagénov, napr. EMS pri malých dávkach, napríklad dosiahnutím vzťahov medzi dávkou a odozvou s príslušnými číslami a intervalmi medzi dávkami.
These chemicals were selected to represent the range of responses for local eye irritation/corrosion, which is based on results in the in vivo rabbit eye test (TG 405, TM B.5(5)) (i.e., Categories 1, 2A, 2B, or no classification according to the UN GHS).
Počiatočné úsilie by malo byť zamerané na získanie odbornej spôsobilosti v prípade najčastejšie používaných tkanív, napr. pečene hlodavcov, kde možno porovnávať s existujúcimi údajmi a očakávanými výsledkami (12).
However, considering the validated usefulness of the FL assay (i.e., to identify ocular corrosives/severe irritants only), there are only two test outcomes for classification purposes (corrosive/severe irritant or non-corrosive/non-severe irritant) to demonstrate proficiency.
Zároveň je možné získať údaje aj z iných tkanív, napr. žalúdka/dvanástnika/lačníka, krvi atď.
Other selection criteria were that chemicals are commercially available, there are high quality in vivo reference data available, and there are high quality data from the FL test method.
Laboratórium musí preukázať odbornú spôsobilosť pri každom individuálnom tkanive a každom druhu, ktorý plánuje skúmať a bude musieť preukázať, že v danom tkanive dokáže získať prijateľnú pozitívnu reakciu so známym mutagénom (napr. EMS).
For this reason, the proficiency chemicals were selected from the “Fluorescein Leakage Assay Background Review Document as an Alternative Method for Eye Irritation Testing” (8), which was used for the retrospective validation of the FL test method.
Údaje z nosiča/negatívnej kontroly by sa mali zozbierať preto, aby sa preukázala reprodukovateľnosť odoziev s negatívnymi údajmi a zaručila riadna kontrola technických aspektov, prípadne aby sa navrhla potreba nanovo stanoviť rozsahy historických kontrol (pozri bod 22).
Recommended chemicals for demonstrating technical proficiency with FL
Treba poznamenať, že napriek možnosti pitevného odberu viacerých tkanív a ich spracovania na účely kométovej analýzy musí byť laboratórium schopné získať viacero tkanív z jedného zvieraťa, a tým zaručiť, že sa nestratí žiadna z možných lézií DNA, a teda nedôjde k spochybneniu výsledkov kométovej analýzy.
Abbreviations: CAS NR = Chemical Abstracts Service Registry Number
Čas medzi usmrtením a odobratím tkanív na spracovanie môže byť rozhodujúci (pozri bod 44).
CAS NR
Pri získavaní odbornej spôsobilosti na výkon tohto testu treba dbať na dobré životné podmienky zvierat, a preto je po nadobudnutí zručností vo viacerých aspektoch testu možné používať aj tkanivá zo zvierat použitých na iné testy.
Corrosive/Severe Irritant
V jednotlivých fázach zavádzania novej testovacej metódy v laboratóriu navyše nemusí byť potrebné vykonávať kompletnú štúdiu, preto na nadobudnutie potrebných zručností bude stačiť menej zvierat alebo testovaných koncentrácií.
Promethazine hydrochloride
Počas skúmania odbornej spôsobilosti by si laboratórium malo vybudovať historickú databázu, aby mohlo stanoviť rozsahy pozitívnych a negatívnych kontrol a distribúciu príslušných tkanív a druhov.
Amine/Amidine, Heterocyclic, Organic sulphur compound
Odporúčania na ukladanie a využívanie historických údajov (t. j. kritériá zaradenia a vylúčenia údajov do/z historických údajov a kritériá prijateľnosti pri danom pokuse) možno nájsť v literatúre (47).
Sodium hydroxide (10 %)
Rôzne tkanivá a rôzne druhy, ako aj rôzne nosiče a spôsoby podania môžu poskytovať iné hodnoty % chvostovej DNA získanej z negatívnej kontroly.
Alkali
Preto je dôležité stanoviť rozpätia negatívnych kontrol pre každé tkanivo a každý druh.
Sodium lauryl sulfate (15 %)
Laboratóriá by mali používať metódy kontroly kvality, ako sú regulačné diagramy [napr. C-diagramy alebo diagramy Xbar (48)], aby zistili, do akej miery sú ich údaje variabilné a preukázali, že vo svojom laboratóriu majú danú metodiku „pod kontrolou“.
Carboxylic acid (salt)
Na účely detekcie slabých účinkov (pozri bod 17) môže byť potrebné optimalizovať výber látok vhodných na pozitívne kontroly, rozsahy dávok a experimentálne podmienky (napr. podmienky elektroforézy).
arboxy-benzaldehyde
Bežne sa používajú známe laboratórne rody mladých zdravých dospelých hlodavcov (vo veku 6 až 10 týždňov na začiatku testovania, hoci prijateľné sú aj o niečo staršie zvieratá).
Carboxylic acid, Aldehyde
Výber druhu hlodavcov by mal byť založený na i) druhoch používaných pri iných štúdiách toxicity (aby bolo možné údaje prepojiť a vykonávať integrované štúdie), ii) druhoch, u ktorých sa počas štúdie karcinogenity objavil nádor (pri skúmaní mechanizmu karcinogenézy) alebo iii) druhoch s metabolizmom najviac podobným metabolizmu ľudí, ak sú známe.
Category 2(A)
Najčastejšie sa pri tomto teste používajú potkany.
Non-corrosive/Non-severe irritant
Môžu sa však použiť aj iné druhy, ak je ich použitie eticky a vedecky opodstatnené.
Noncorrosive/Non-severe irritant
V prípade hlodavcov by ideálna teplota miestnosti pre pokusné zvieratá mala byť 22 °C (± 3 °C).
Category 2(B)
Relatívna vlhkosť by mala byť v ideálnom prípade 50 – 60 %, minimálne 30 % a najlepšie nie viac ako 70 %, s výnimkou času čistenia miestnosti.
Based on results from the in vivo rabbit eye test (OECD TG 405, TM B.5) and using the UN GHS and EU CLP.
Hlodavce by mali byť umiestnené v malých skupinách (zvyčajne najviac po päť) rovnakého pohlavia, pokiaľ sa nepredpokladá agresívne správanie.
Based on results obtained with FL (INVITTOX Protocol No. 71(6))
Pokiaľ je to možné, mali by sa používať pevné podlahy, pretože podlahy z drôteného pletiva môžu spôsobiť vážne poranenia (49).
B.62 In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay
Zvieratá musia mať zabezpečené vhodne stimulujúce prostredie.
This test method (TM) is equivalent to OECD test guideline (TG) 489 (2016).
Zvieratá sa náhodne rozdelia do kontrolných a testovaných skupín.
The in vivo alkaline comet (single cell gel electrophoresis) assay (hereafter called simply the comet assay) is used for the detection of DNA strand breaks in cells or nuclei isolated from multiple tissues of animals, usually rodents, that have been exposed to potentially genotoxic material(s).
Označia sa jedinečným identifikátorom a najmenej päť dní pred začiatkom testu sa nechajú aklimatizovať na laboratórne podmienky.
The comet assay has been reviewed and recommendations have been published by various expert groups (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) (10).
Na označenie zvierat jedinečným identifikátorom treba použiť tú najmenej invazívnu metódu.
This test method is part of a series of test methods on genetic toxicology.
Medzi vhodné metódy označenia patria krúžky, visačky, mikročipy a biometrická identifikácia.
An OECD document that provides succinct information on genetic toxicology testing and an overview of the recent changes that were made to these Test Guidelines has been developed (11).
Odsekávanie prstov a prepichovanie uší sa v týchto testoch nepovažuje za vedecky opodstatnené.
The purpose of the comet assay is to identify chemicals that cause DNA damage.
Klietky sa usporiadajú tak, aby sa minimalizovali prípadné následky vyplývajúce z umiestnenia klietok.
Under alkaline conditions (> pH 13), the comet assay can detect single and double stranded breaks, resulting, for example, from direct interactions with DNA, alkali labile sites or as a consequence of transient DNA strand breaks resulting from DNA excision repair.
Na začiatku štúdie by mala hmotnosť zvierat kolísať len minimálne a nemala by presiahnuť ± 20 %.
These strand breaks may be repaired, resulting in no persistent effect, may be lethal to the cell, or may be fixed into a mutation resulting in a permanent viable change.
Testované chemikálie v tuhej forme by sa pred podaním zvieratám mali rozpustiť alebo rozptýliť vo vhodných nosičoch alebo primiešať do krmiva či pitnej vody.
They may also lead to chromosomal damage which is also associated with many human diseases including cancer.
V prípade inhalačných expozícií sa testované chemikálie môžu v závislosti od svojich fyzikálnochemických vlastností podávať ako plyn, výpary alebo tuhé/kvapalné aerosóly (50) (51).
A formal validation trial of the in vivo rodent comet assay was performed in 2006-2012, coordinated by the Japanese Center for the Validation of Alternative Methods (JaCVAM), in conjunction with the European Centre for the Validation of Alternative Methods (ECVAM), the Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods (ICCVAM) and the NTP Interagency Center for the Evaluation of Alternative Toxicological Methods (NICEATM) (12).
Nosič
This test method includes the recommended use and limitations of the comet assay, and is based on the final protocol (12) used in the validation trial, and on additional relevant published and unpublished (laboratories proprietary) data.
Nosič by nemal vyvolávať toxické účinky v používaných objemoch dávok a nemali by chemicky reagovať s testovanými chemikáliami.
Definitions of key terms are set out in Appendix 1.
Ak sa používajú iné ako dobre známe nosiče, ich použitie by malo byť podporené referenčnými údajmi, ktoré poukazujú na ich kompatibilitu, pokiaľ ide o testované zvieratá, spôsoby podania dávky a sledovaný parameter.
It is noted that many different platforms can be used for this assay (microscope slides, gel spots, 96-well plates etc.).
Treba poznamenať, že niektoré nosiče (najmä tie viskózne) môžu vyvolať zápal a zvýšiť tak pozaďové úrovne zlomov v reťazcoch DNA v mieste kontaktu, najmä pri viacnásobnom podaní.
For convenience the term “slide” is used throughout the remainder of this document but encompasses all of the other platforms.
V tejto chvíli by sa obyčajne mala do testu zahrnúť skupina minimálne 3 analyzovateľných zvierat jedného pohlavia alebo v prípade použitia oboch pohlaví aj druhého pohlavia (pozri bod 32), ovplyvnených látkou na pozitívnu kontrolu.
The comet assay is a method for measuring DNA strand breaks in eukaryotic cells.
V budúcnosti možno bude reálne preukázať primeranú odbornú spôsobilosť na zníženie potreby pozitívnych kontrol.
Single cells/nuclei embedded in agarose on a slide are lysed with detergent and high salt concentration.
V prípade viacerých časov odberu vzoriek (napr. s jediným administratívnym protokolom) stačí pozitívne kontroly zahrnúť iba do jedného z časov odberu, treba však zabezpečiť vyváženosť (pozri bod 48).
This lysis step digests the cellular and nuclear membranes and allows the release of coiled DNA loops generally called nucleoids and DNA fragments.
Súbežne podávané látky na pozitívnu kontrolu nemusia byť podané rovnakou cestou ako testovaná chemikália, je však dôležité, aby sa pri meraní účinkov v mieste kontaktu použila rovnaká cesta.
Electrophoresis at high pH results in structures resembling comets, which, by using appropriate fluorescent stains, can be observed by fluorescence microscopy; DNA fragments migrate away from the “head” into the “tail” based on their size, and the intensity of the comet tail relative to the total intensity (head plus tail) reflects the amount of DNA breakage (13) (14) (15).
Látky na pozitívnu kontrolu by mali vyvolať zlomy v reťazcoch DNA všetkých skúmaných tkanív v prípade testovanej chemikálie, pričom je pravdepodobné, že zvolenou pozitívnou kontrolou bude mutagén EMS, ktorý spôsobil zlomy v reťazcoch DNA všetkých tkanív, ktoré boli predmetom výskumu.
The in vivo alkaline comet assay is especially relevant to assess genotoxic hazard in that the assay's responses are dependent upon in vivo ADME (absorption, distribution, metabolism and excretion), and also on DNA repair processes.
Dávky látok na pozitívnu kontrolu by sa mali zvoliť tak, aby spôsobovali mierne účinky, ktoré umožnia kriticky zhodnotiť výkonnosť a citlivosť testu, a mohli by vychádzať z kriviek závislosti odozvy od dávky stanovených laboratóriom na účely preukázania odbornej spôsobilosti.
These may vary among species, among tissues and among the types of DNA damage.
% chvostovej DNA u súbežných zvierat určených na pozitívnu kontrolu by mali byť v súlade s rozpätím vopred stanoveným laboratórnom pre každé jedno tkanivo a čas odberu vzoriek pri daných druhoch (pozri bod 16).
To fulfil animal welfare requirements, in particular the reduction in animal usage (3Rs — Replacement, Reduction, Refinement-- principles), this assay can also be integrated with other toxicological studies, e.g. repeated dose toxicity studies (10) (16) (17), or the endpoint can be combined with other genotoxicity endpoints such as the in vivo mammalian erythrocyte micronucleus assay (18) (19) (20).
Príklady látok na pozitívnu kontrolu a niektorých ich cieľových tkanív ( u hlodavcov) sú uvedené v tabuľke 1.
The comet assay is most often performed in rodents, although it has been applied to other mammalian and non-mammalian species.
Vo vedecky opodstatnenom prípade sa môžu zvoliť (aj) iné látky ako tie, ktoré sú uvedené v tabuľke 1.
The use of non-rodent species should be scientifically and ethically justified on a case-by-case basis and it is strongly recommended that the comet assay only be performed on species other than rodents as part of another toxicity study and not as a standalone test.
Príklady látok na pozitívnu kontrolu a niektorých ich cieľových tkanív
The selection of route of exposure and tissue(s) to be studied should be determined based on all available/existing knowledge of the test chemicals e.g. intended/expected route of human exposure, metabolism and distribution, potential for site-of-contact effects, structural alerts, other genotoxicity or toxicity data, and the purpose of the study.
Látky a čísla v registri CAS
Thus, where appropriate, the genotoxic potential of the test chemicals can be assayed in the target tissue(s) of carcinogenic and/or other toxic effects.
etyl-metánsulfonát (CAS č. 62-50-0) pre všetky tkanivá
The assay is also considered useful for further investigation of genotoxicity detected by an in vitro system.
etyl-nitrózomočovina (CAS č. 759-73-9) v prípade pečene a žalúdka, dvanástnika alebo lačníka
It is appropriate to perform an in vivo comet assay in a tissue of interest when it can be reasonably expected that the tissue of interest will be adequately exposed.
metyl-metánsulfonát (CAS č. 66-27-3) v prípade pečene, žalúdka, dvanástnika alebo lačníka, buniek pľúcnej a bronchoalveolárnej laváže (BAL), obličiek, močového mechúra, pľúc, semenníkov a kostnej drene/krvi
The assay has been most extensively validated in somatic tissues of male rats in collaborative studies such as the JaCVAM trial (12) and in Rothfuss et al., 2010 (10).
N-metyl-N′-nitro-N-nitrózoguanidín (CAS č. 70-25-7) v prípade žalúdka, dvanástnika alebo lačníka
The liver and stomach were used in the JaCVAM international validation trial.
1,2-dimetylhydrazín, dihydrochlorid (CAS č. 306-37-6) v prípade pečene a čriev
The liver, because it is the most active organ in metabolism of chemicals and also frequently a target organ for carcinogenicity.
N-metyl-N-nitrózomočovina (CAS č. 684-93-5) v prípade pečene, kostnej drene, krvi, obličiek, žalúdka, lačníka a mozgu.