natgillin/translations-raw huggingface dataset:
programmed cell death characterised by a series of steps leading to the disintegration of cells into membrane-bound particles that are then eliminated by phagocytosis or by shedding.
PI sa používa ako hodnotný a spoľahlivý parameter cytotoxicity aj pri bunkových líniách kultivovaných in vitro bez použitia cytoB (35) (36) (37) (38) a môže sa pokladať za užitočný doplnkový parameter..
the increase in cell number as a result of mitotic cell division.
V každom prípade by počet buniek pred ovplyvnením mal byť rovnaký ako počet ovplyvnených kultúr a kultúr na negatívnu kontrolu.
the DNA region of a chromosome where both chromatids are held together and on which both kinetochores are attached side-to-side.
Zatiaľ čo v minulosti sa RCC (t. j. počet buniek v ovplyvnených kultúrach/počet buniek v kontrolných kultúrach) používal ako parameter cytotoxicity, už sa neodporúča, pretože môže podhodnotiť cytotoxicitu.
refers to final concentrations of the test chemical in the culture medium.
Pri použití automatizovaných systémov hodnotenia, napríklad prietokovej cytometrie, laserovej skenovacej cytometrie alebo analýzy obrazu, možno počet buniek vo vzorci nahradiť počtom jadier.
any chemical or event which causes structural chromosomal aberrations in populations of cells or eukaryotic organisms.
V kultúrach na negatívnu kontrolu by zdvojenie populácie alebo index replikácie mali byť zlúčiteľné s požiadavkou na odber vzoriek z buniek po ovplyvnení v čase zodpovedajúcom približne 1,5 – 2-násobku dĺžky bežného bunkového cyklu.
Cytokinesis
V časti B sa dopĺňajú tieto kapitoly:
the process of cell division immediately following mitosis to form two daughter cells, each containing a single nucleus.
Kožná senzibilizácia in Chemico: Skúška priamej peptidovej reaktivity (DPRA)
Cytokinesis-Block Proliferation index (CBPI)
Táto testovacia metóda je rovnocenná s usmernením OECD na vykonávanie testov (TG) 442C (2015).
the proportion of second-division cells in the treated population relative to the untreated control (see Appendix 2 for formula).
Kožný senzibilizátor je látka, ktorá po kontakte s pokožkou vyvoláva alergickú reakciu, ako sa definuje v Globálnom harmonizovanom systéme klasifikácie a označovania chemikálií (GHS) Organizácie spojených národov (OSN) (1) a v nariadení Európskej únie (ES) č. 1272/2008 o klasifikácii, označovaní a balení látok a zmesí (nariadenie CLP) [12].
Cytostasis
Táto testovacia metóda predstavuje postup in chemico (skúška priamej peptidovej reaktivity – DPRA), ktorá sa má použiť na podporu rozlíšenia kožných senzibilizátorov od nesenzibilizujúcich chemikálií v súlade s GHS OSN a CLP.
inhibition of cell growth (see Appendix 2 for formula).
V prípade kľúčových biologických udalostí vedúcich ku kožnej senzibilizácii panuje všeobecná zhoda.
For the assays covered in this test method performed in the presence of cytochalasin B, cytotoxicity is identified as a reduction in cytokinesis-block proliferation index (CBPI) or Replication Index (RI) of the treated cells as compared to the negative control (see paragraph 26 and Appendix 2)
Súčasné poznatky o chemických a biologických mechanizmoch, ktoré súvisia s kožnou senzibilizáciou, boli zhrnuté v podobe dráhy nepriaznivého účinku (AOP) (2), ktorá začína zmenami na molekulárnej úrovni cez následné pochody až po nepriaznivý účinok, a síce alergickú kontaktnú dermatitídu u ľudí alebo kontaktnú hypersenzitivitu u hlodavcov.
For the assays covered in this test method performed in the absence of cytochalasin B, cytotoxicity is identified as a reduction in relative population doubling (RPD) or relative increase in cell count (RICC) of the treated cells as compared to the negative control (see paragraph 27 and Appendix 2).
V rámci AOP kožnej senzibilizácie je začínajúcou zmenou na molekulárnej úrovni kovalentná väzba elektrofilných látok na nukleofilné centrá v kožných proteínoch.
Interphase cells
Posudzovanie kožnej senzibilizácie obyčajne zahŕňalo použitie laboratórnych zvierat.
cells not in the mitotic stage.
Klasické metódy založené na morčatách, maximizačný test na morčatách podľa Magnussona a Klingmana (GPMT) a Buehlerov test [(TM B.6 (3)], sú zamerané na štúdium indukčných a elicitačných fáz kožnej senzibilizácie.
a protein-containing structure that assembles at the centromere of a chromosome to which spindle fibres associate during cell division, allowing orderly movement of daughter chromosomes to the poles of the daughter cells.
Uznaný bol takisto test na myšiach, lokálna skúška lymfatických uzlín [LLNA, TM B.42 (4)] a jej dve nerádioaktívne modifikácie, LLNA: DA [TM B.50 (5)] a LLNA: BrdU-ELISA [TM B.51 (6)], z ktorých všetky slúžia výlučne na posúdenie reakcie na indukciu, keďže sú v porovnaní s testami na morčatách výhodnejšie z hľadiska dobrých podmienok zvierat a objektívneho merania indukčnej fázy kožnej senzibilizácie.
small nuclei, separate from and additional to the main nuclei of cells, produced during telophase of mitosis or meiosis by lagging chromosome fragments or whole chromosomes.
V poslednej dobe sa mechanisticky založené testovacie metódy in chemico a in vitro pokladajú za vedecky platné testovacie metódy na hodnotenie nebezpečnosti chemikálií z hľadiska kožnej senzibilizácie.
the ratio of cells in metaphase divided by the total number of cells observed in a population of cells; an indication of the degree of cell proliferation of that population.
Avšak vzhľadom na to, že AOP mechanicky pokrýva každú zo súčasne dostupných testovacích metód bez použitia zvierat len v obmedzenom rozsahu, budú kombinácie metód bez použitia zvierat (in silico, in chemico, in vitro) v rámci integrovaných prístupov k testovaniu a hodnoteniu (Integrated Approaches to Testing and Assessment, IATA) potrebné na to, aby bolo možné súčasné testovanie na zvieratách úplne nahradiť (2) (7).
Non-disjunctio
Skúška DPRA je navrhnutá tak, aby preskúmala najprv začínajúcu zmenu na molekulárnej úrovni AOP kožnej senzibilizácie, a síce reaktivitu proteínov, pomocou kvantifikácie reaktivity testovaných chemikálií voči modelovým syntetickým peptidom obsahujúcim lyzín alebo cysteín (8).
failure of paired chromatids to disjoin and properly segregate to the developing daughter cells, resulting in daughter cells with abnormal numbers of chromosomes.
Percentuálne hodnoty úbytku cysteínových a lyzínových peptidov sa potom použijú na kategorizáciu látky v jednej zo štyroch tried reaktivity na podporu rozlíšenia kožných senzibilizátorov od nesenzibilizujúcich chemikálií (9).
numerical chromosome aberrations in cells or organisms involving entire set(s) of chromosomes, as opposed to an individual chromosome or chromosomes (aneuploidy).
Skúška DPRA bola validovaná vo validačnej štúdii pod vedením referenčného laboratória Európskej únie pre alternatívy testovania na zvieratách (EURL ECVAM) a následne v nezávislom partnerskom preskúmaní, ktoré vykonal vedecký poradný výbor (ESAC) EURL ECVAM, a uznaná za vedecky platnú (10) na použitie ako súčasť IATA na podporu rozlíšenia kožných senzibilizátorov od nesenzibilizujúcich chemikálií na účely klasifikácie a označovania nebezpečnosti.
Proliferation Index (PI)
Príklady použitia údajov zo skúšky DPRA v kombinácii s inými informáciami sú uvedené v literatúre (11) (12) (13) (14).
method for cytotoxicity measurement when cytoB is not used (see Appendix 2 for formula).
Definície sa uvádzajú v dodatku I.
Relative Increase in Cell Count (RICC)
ÚVODNÉ ÚVAHY, POUŽITEĽNOSŤ A OBMEDZENIA
Replication Index (RI)
Korelácia medzi reaktivitou proteínov a potenciálom kožnej senzibilizácie bola spoľahlivo stanovená (15) (16) (17).
the proportion of cell division cycles completed in a treated culture, relative to the untreated control, during the exposure period and recovery (see Appendix 2 for formula).
Keďže proteínová väzba však predstavuje len jeden kľúčový jav, a to napriek začínajúcim zmenám na molekulárnej úrovni AOP kožnej senzibilizácie, samotné informácie o reaktivite proteínov získané na základe testovacích a netestovacích metód nemusia byť dostatočné na vyvodenie záveru o neprítomnosti potenciálu chemikálií spôsobiť senzibilizáciu kože.
mix of the S9 liver fraction and cofactors necessary for metabolic enzyme activity.
Údaje získané na základe tejto testovacej metódy by sa preto mali zvážiť v kontexte integrovaných prístupov, ako je IATA, v kombinácii s inými doplňujúcimi informáciami, napr. pochádzajúcimi zo skúšok in vitro, ktorými sa skúmajú iné kľúčové prvky AOP kožnej senzibilizácie, ako aj z netestovacích metód vrátane prevzatých údajov odvodených z chemických analógov.
Untreated control
Túto testovaciu metódu možno použiť v kombinácii s inými doplňujúcimi informáciami na podporu rozlíšenia kožných senzibilizátorov (t. j. kategória 1 GHS OSN/CLP) od nesenzibilizujúcich chemikálií v kontexte IATA.
When cytoB is used, evaluation of cytotoxicity should be based on the Cytokinesis-Block Proliferation Index (CBPI) or Replication Index (RI) (17) (69).
Túto testovaciu metódu nemožno používať samostatne, a to ani pri zaraďovaní kožných senzibilizátorov do podkategórií 1A a 1B, ako sa definuje v GHS OSN/CLP, ani pri predpovedaní potenciálu na účely rozhodnutí v súvislosti s posudzovaním bezpečnosti.
The CBPI indicates the average number of nuclei per cell, and may be used to calculate cell proliferation.
V závislosti od regulačného rámca však možno pozitívny výsledok získaný na základe testovacej metódy DRPA sám o sebe použiť pri klasifikácii chemikálií do kategórie 1 GHS OSN.
The RI indicates the relative number of cell cycles per cell during the period of exposure to cytoB in treated cultures compared to control cultures and can be used to calculate the % cytostasis:
V prípade testovacej metódy DPRA sa preukázalo, že ju možno preniesť do laboratórií, ktoré majú skúsenosti s analýzou pomocou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC).
% Cytostasis = 100 – 100(CBPIT – 1) ÷ (CBPIC – 1)
DPRA s väčšou pravdepodobnosťou povedie k podhodnotenému predpokladu v prípade chemikálií, ktoré vykazujú nízky alebo mierny potenciál spôsobiť kožnú senzibilizáciu (t. j. podkategória 1B GHS OSN/CLP), než v prípade chemikálií vykazujúcich vysoký potenciál spôsobiť kožnú senzibilizáciu (t. j. podkategória 1A GHS OSN/CLP) (18) (19).
T test chemical treatment culture
V súčasnosti sú dostupné len obmedzené informácie o použiteľnosti DPRA v prípade zmesí známeho zloženia (18) (19).
C control culture
Napriek tomu sa DPRA považuje za technicky použiteľnú v prípade testovania mnohozložkových látok a zmesí známeho zloženia (pozri bod 10).
No. mononucleate cells
Pred použitím tejto testovacej metódy na zmesi s cieľom získať údaje na zamýšľaný regulačný účel by sa malo zvážiť, či na tento účel dokáže poskytnúť primerané výsledky, a ak dokáže, mali by sa zvážiť dôvody.
No. binucleate cells
Také úvahy nie sú nutné, pokiaľ existuje regulatórna požiadavka na testovanie danej zmesi.
No. multinucleate cells
V dôsledku vymedzeného molárneho pomeru testovanej chemikálie a peptidu nemožno súčasný prognostický model použiť v prípade komplexných zmesí s neznámym zložením alebo látok neznámeho alebo variabilného zloženia, produktov komplexných reakcií alebo biologických materiálov (t. j. látok UVCB).
Total number of cells
Na tento účel bude potrebné vyvinúť nový prognostický model založený na gravimetrii.
Thus, a CBPI of 1 (all cells are mononucleate) is equivalent to 100 % cytostasis.
V prípadoch, v ktorých možno predložiť dôkaz o nepoužiteľnosti testovacej metódy pri iných špecifických kategóriách chemikálií, by sa testovacia metóda nemala používať pri týchto špecifických kategóriách chemikálií.
Cytostasis = 100-RI
Táto testovacia metóda je testovacia metóda in chemico, ktorá nezahŕňa metabolický systém.
T treated cultures
Pomocou tejto testovacej metódy nemožno zistiť chemikálie, ktoré na preukázanie svojho potenciálu vyvolať kožnú senzibilizáciu (pro-haptény) vyžadujú enzymatickú bioaktiváciu.
C control cultures
Uvádza sa, že v niektorých prípadoch sú pomocou tejto testovacej metódy správne zistené chemikálie, ktoré sa stávajú senzibilizátormi po abiotickej transformácii (t. j. pre-haptény) (18).
Thus, an RI of 53 % means that, compared to the numbers of cells that have divided to form binucleate and multinucleate cells in the control culture, only 53 % of this number divided in the treated culture, i.e. 47 % cytostasis.
Vzhľadom na uvedenú skutočnosť by sa mali negatívne výsledky získané touto testovacou metódou interpretovať v kontexte stanovených obmedzení a spolu s ostatnými zdrojmi informácií v rámci IATA.
When cytoB is not used, evaluation of cytotoxicity based on Relative Increase in Cell Counts (RICC) or on Relative Population Doubling (RPD) is recommended (69), as both take into account the proportion of the cell population which has divided.
V prípade testovaných chemikálií, ktoré sa neviažu kovalentne na peptid, ale podporujú jeho oxidáciu (t. j. dimerizácia cysteínu), by potenciálne mohlo dôjsť k príliš vysokému odhadu úbytku peptidov, čo môže viesť k falošným pozitívnym predpovediam a/alebo k zaradeniu do vyššej triedy reaktivity (pozri body 29 a 30).
Thus, a RICC, or a RPD of 53 % indicates 47 % cytotoxicity/cytostasis.
Ako bolo opísané, DPRA pomáha rozlišovať kožné senzibilizátory od nesenzibilizujúcich chemikálií.
By using a Proliferation Index (PI), cytotoxicity may be assessed via counting the number of clones consisting of 1 cell (cl1), 2 cells (cl2), 3 to 4 cells (cl4) and 5 to 8 cells (cl8).
Môže však takisto potenciálne prispieť k posúdeniu potenciálu spôsobiť senzibilizáciu (11), ak sa použije v rámci integrovaných prístupov ako IATA.
The PI has been used as a valuable and reliable cytotoxicity parameter also for cell lines cultured in vitro in the absence of cytoB (35) (36) (37) (38) and can be seen as a useful additional parameter.
Na to, aby bolo možné určiť, ako výsledky DPRA môžu prispieť k posudzovaniu potenciálu, však bude potrebná ďalšia práca, pokiaľ možno založená na údajoch o týkajúcich sa človeka.
In any case, the number of cells before treatment should be the same for treated and negative control cultures.
DPRA je metóda in chemico, ktorá kvantifikuje zvyškovú koncentráciu peptidu obsahujúceho cysteín alebo lyzín po 24-hodinovej inkubácii s testovanou chemikáliou pri teplote 25 ± 2,5 °C.
When using automated scoring systems, for instance, flow cytometry, laser scanning cytometry or image analysis, the number of cells in the formula can be substituted by the number of nuclei.
Relatívna koncentrácia peptidov sa meria pomocou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) s gradientovou elúciou a detekciou UV pri 220 nm.
This test method (TM) is equivalent to the OECD test guideline (TG) 442C (2015).
Tento protokol sa odporúča používať pri vykonávaní a používaní tejto metódy v laboratóriu.
A skin sensitiser refers to a substance that will lead to an allergic response following skin contact as defined by the United Nations Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (UN GHS) (1) and Regulation (EC) No 1272/2008 of the European Parliament and Council on Classification, Labelling and Packaging of Substances and Mixtures (CLP) [12].
Ďalej je uvedený opis hlavných zložiek a postupov DPRA.
This test method provides an in chemico procedure (Direct Peptide Reactivity Assay — DPRA) to be used for supporting the discrimination between skin sensitisers and non-sensitisers in accordance with the UN GHS and CLP.
Ak sa použije alternatívne nastavenie HPLC, mala by sa preukázať jeho rovnocennosť s validovaným nastavením opísaným v protokole DB-ALM (napr. testovaním látok na preukázanie spôsobilosti uvedených v dodatku 2).
There is general agreement regarding the key biological events underlying skin sensitisation.
Príprava peptidov obsahujúcich cysteín alebo lyzín
The existing knowledge of the chemical and biological mechanisms associated with skin sensitisation has been summarised in the form of an Adverse Outcome Pathway (AOP) (2), from the molecular initiating event through the intermediate events to the adverse effect namely allergic contact dermatitis in humans or contact hypersensitivity in rodents.
Zásobné roztoky cysteínu (Ac-RFAACAA-COOH) a lyzínu (Ac-RFAAKAA-COOH) obsahujúce syntetické peptidy s čistotou vyššou než 85 % a pokiaľ možno v rozmedzí 90 – 95 % by sa mali pripravovať čerstvé bezprostredne pred ich inkubáciou s testovanou chemikáliou.
Within the skin sensitisation AOP, the molecular initiating event is the covalent binding of electrophilic substances to nucleophilic centres in skin proteins.
Konečná koncentrácia cysteínových peptidov vo fosfátovom tlmivom roztoku s hodnotou pH 7,5 by mala byť 0,667 mM a konečná koncentrácia lyzínových peptidov v tlmivom roztoku octanu amónneho s hodnotou pH 10,2 by mala byť 0,667 mM.
The assessment of skin sensitisation has typically involved the use of laboratory animals.
Rýchlosť úkonov HPLC by sa mala nastaviť tak, aby trvanie analýzy HPLC bolo kratšie než 30 hodín.
The classical methods based on guinea-pigs, the Magnusson Kligman Guinea Pig Maximisation Test (GMPT) and the Buehler Test (TM B.6 (3)), study both the induction and elicitation phases of skin sensitisation.
Pri nastavení HPLC použitom vo validačnej štúdii a opísanom v tejto testovacej metóde možno pri jednom výkone HPLC spracovať až 26 analytických vzoriek (ktoré zahŕňajú testovanú chemikáliu, pozitívnu kontrolu a príslušný počet kontrol rozpúšťadla na základe počtu jednotlivých rozpúšťadiel použitých v teste, pričom každé z nich sa testuje trikrát).
A murine test, the Local Lymph Node Assay (LLNA, TM B.42 (4)) and its two non-radioactive modifications, LLNA: DA (TM B.50 (5)) and LLNA: BrdU-ELISA (TM B.51 (6)), which all assess the induction response exclusively, have also gained acceptance since they provide an advantage over the guinea pig tests in terms of animal welfare and an objective measurement of the induction phase of skin sensitisation.
Pri všetkých replikátoch analyzovaných v rámci jedného testovania by sa mali použiť identické roztoky cysteínových a lyzínových peptidov.
More recently, mechanistically based in chemico and in vitro test methods have been considered scientifically valid for the evaluation of the skin sensitisation hazard of chemicals.
Odporúča sa, aby sa pri jednotlivých šaržiach peptidov pred ich použitím overila správna rozpustnosť.
However, combinations of non-animal methods (in silico, in chemico, in vitro) within Integrated Approaches to Testing and Assessment (IATA) will be needed to be able to fully substitute for the animal tests currently in use given the restricted AOP mechanistic coverage of each of the currently available non-animal test methods (2) (7).
Príprava testovanej chemikálie
The DPRA is proposed to address the molecular initiating event of the skin sensitisation AOP, namely protein reactivity, by quantifying the reactivity of test chemicals towards model synthetic peptides containing either lysine or cysteine (8).
Pred vykonaním skúšky by sa mala posúdiť rozpustnosť testovanej chemikálie vo vhodnom rozpúšťadle podľa postupu rozpúšťania popísaného v protokole DPRA DB-ALM (20).
Cysteine and lysine percent peptide depletion values are then used to categorise a substance in one of four classes of reactivity for supporting the discrimination between skin sensitisers and non-sensitisers (9).
Vo vhodnom rozpúšťadle sa testovaná chemikália rozpustí úplne.
The DPRA has been evaluated in a European Union Reference Laboratory for Alternatives to Animal Testing (EURL ECVAM)-lead validation study and subsequent independent peer review by the EURL ECVAM Scientific Advisory Committee (ESAC) and was considered scientifically valid (10) to be used as part of an IATA to support the discrimination between skin sensitisers and non-sensitisers for the purpose of hazard classification and labelling.
Keďže pri DPRA sa testovaná chemikália inkubuje vo veľkom prebytku s cysteínovými alebo lyzínovými peptidmi, na potvrdenie toho, že sa testovaná chemikália (a v prípade testovania mnohozložkovej látky alebo zmesi všetky jej zložky) rozpustila, sa pokladá za postačujúce vykonať vizuálnu kontrolu tvorby číreho roztoku.
Examples on the use of DPRA data in combination with other information are reported in the literature (11) (12) (13) (14).
Vhodnými rozpúšťadlami sú acetonitril, voda, zmes vody s acetonitrilom v pomere 1:1, izopropanol, acetón alebo zmes acetónu s acetonitrilom v pomere 1:1.
Definitions are provided in Appendix I.
Iné rozpúšťadlá možno použiť vtedy, ak nemajú vplyv na stabilitu peptidu sledovanú pomocou referenčných kontrol C (t. j. vzorky, ktoré tvorí len peptid rozpustený vo vhodnom rozpúšťadle; pozri dodatok 3).
INITIAL CONSIDERATIONS, APPLICABILITY AND LIMITATIONS
Poslednou možnosťou v prípade, že testovaná chemikália nie je rozpustná v žiadnom z uvedených rozpúšťadiel, je pokúsiť sa ju rozpustiť v 300 μl DMSO a výsledný roztok zriediť s 2700 μl acetonitrilu, a pokiaľ testovaná chemikália nie je rozpustná v tejto zmesi, treba sa pokúsiť rozpúšťať to isté množstvo testovanej chemikálie v 1500 μl DMSO a výsledný roztok zriediť s 1500 μl acetonitrilu.
The correlation of protein reactivity with skin sensitisation potential is well established (15) (16) (17).
Testovaná chemikália by sa mala vopred odvážiť do sklenených nádobiek a bezprostredne pred testovaním by sa mala rozpustiť vo vhodnom rozpúšťadle, aby sa získalo 10 mM roztoku.
Nevertheless, since protein binding represents only one key event, albeit the molecular initiating event of the skin sensitisation AOP, protein reactivity information generated with testing and non-testing methods may not be sufficient on its own to conclude on the absence of skin sensitisation potential of chemicals.
V prípade zmesí a viaczložkových látok známeho zloženia, by sa mala stanoviť jediná čistota ako súčet podielov jej zložiek (okrem vody) a jediná jasná molekulová hmotnosť na základe posúdenia jednotlivých molekulových hmotností každej zložky v zmesi (okrem vody) a ich jednotlivých podielov.
Therefore, data generated with this test method should be considered in the context of integrated approaches such as IATA, combining them with other complementary information e.g. derived from in vitro assays addressing other key events of the skin sensitisation AOP as well as non-testing methods including read-across from chemical analogues.
Výsledná čistota a jasná molekulová hmotnosť by sa potom mali použiť na výpočet hmotnosti testovanej chemikálie, ktorá je potrebná na prípravu 100 mM roztoku.
This test method can be used, in combination with other complementary information, to support the discrimination between skin sensitisers (i.e. UN GHS/CLP Category 1) and non-sensitisers in the context of IATA.
V prípade polymérov, pri ktorých nemožno stanoviť molekulovú hmotnosť hlavnej zložky, možno pri príprave 100 mM roztoku posúdiť molekulovú hmotnosť monoméru (alebo jasnú molekulovú hmotnosť rôznych momomérov tvoriacich polymér).
This test method cannot be used on its own, neither to sub-categorise skin sensitisers into subcategories 1A and 1B as defined by UN GHS/CLP, nor to predict potency for safety assessment decisions.
Pri testovaní zmesí, mnohozložkových látok alebo polymérov známeho zloženia by sa však malo zvážiť aj testovanie chemikálie v čistom stave.
However, depending on the regulatory framework, a positive result with the DPRA may be used on its own to classify a chemical into UN GHS/CLP category 1.
V prípade kvapalín by sa chemikália v čistom stave mala testovať ako taká bez predchádzajúceho riedenia tak, že sa inkubuje s cysteínovými peptidmi v molárnom pomere 1:10 a lyzínovými peptidmi v molárnom pomere 1:50.
The DPRA test method proved to be transferable to laboratories experienced in high-performance liquid chromatography (HPLC) analysis.
V prípade tuhých látok by sa testovaná chemikália mala rozpustiť na svoju maximálnu rozpustnú koncentráciu v tom istom rozpúšťadle, ktoré bolo použité na prípravu roztoku so zdanlivou koncentráciou 100 mM.
The level of reproducibility in predictions that can be expected from the test method is in the order of 85 % within laboratories and 80 % between laboratories (10).
Následne by sa mala testovať bez ďalšieho riedenia tak, že sa inkubuje s cysteínovými peptidmi v molárnom pomere 1:10 a lyzínovými peptidmi v molárnom pomere 1:50.