natgillin/translations-raw huggingface dataset:
multifocal to confluent petechiae or hepatocyte necrosis or both at some distance from larger vessels in the liver; multifocal accumulation of erythrocytes in dilated hepatic sinusoids;
Rez testovanej vzorky sa považuje za pozitívny len vtedy, ak sa zistí takéto jasné červené intranukleárne zafarbenie endotelových buniek;
accumulation of erythrocytes in blood vessels of the intestinal lamina propria and eventually haemorrhage into the lamina propria;
kontrolné rezy sa považujú za negatívne, ak nemajú žiadnu významnú farebnú reakciu.
spleen stroma distended by erythrocyte accumulation;
Keďže intranukleárna lokalizácia jefkonsn príznačná pre nukleoproteín orthomyxovíru počas fázy replikácie vírusu, ale často je dominantné súbežné cytoplazmatické zafarbenie, typy cytoplazmatického a iného sfarbenia bez intranukleárnej lokalizácie sa považujú za nešpecifické alebo nejednoznačné.
slight multifocal to extensive diffuse interstitial haemorrhage with tubular necrosis in the haemorrhagic areas, erythrocyte accumulation in the glomeruli in the kidney;
Farebne najsilnejšie pozitívne reakcie sa zvyčajne získavajú v endotelových bunkách srdca a obličky.
erythrophagocytosis in the spleen and secondary haemorrhages in liver and kidney.
Farebné endotelové reakcie v rámci veľmi rozsiahlych hemoragických lézií môžu byť mierne alebo neprítomné, pravdepodobne v dôsledku rozpadu infikovaných endotelových buniek.
Immunohistochemistry (IHC)
PODROBNÉ DIAGNOSTICKÉ METÓDY A POSTUPY NA ÚČELY DOHĽADU NAD MARTEILIÓZOU (MARTEILIA REFRINGENS) A JEJ POTVRDENIA
Polyclonal antibody against ISAV nucleoprotein shall be used on paraffin sections from formalin-fixed tissue.
I. Podrobné diagnostické metódy a postupy na účely diagnózy marteiliózy (Marteilia refringens)
The organs to be examined shall be mid-kidney and heart (transitional area including all three chambers and valves).
Ak sa vykonáva odber vzoriek a laboratórne vyšetrenie na účely získania alebo udržania zdravotného štatútu, pokiaľ ide o marteiliózu (Marteilia refringens), ako sa uvádza v oddiele I časti 4 prílohy I, alebo na účely potvrdenia alebo vylúčenia prítomnosti danej choroby uvedenej v zozname v súlade s článkom 57 písm. b) smernice 2006/88/ES s použitím diagnostických metód uvedených v oddiele II časti 4 prílohy I, uplatňujú sa podrobné diagnostické metódy a postupy stanovené v bodoch I.1, I.2 a I.3 tejto časti.
Suspected cases due to pathological signs shall be verified with a positive IHC.
Postup pri odbere vzoriek
Histological sections shall be prepared in accordance with standard methods.
Prednostne sa odoberú vzorky otvorených alebo čerstvo uhynutých mäkkýšov, aby sa zvýšila pravdepodobnosť nájdenia nakazených živočíchov.
Preparation of tissue sections
Po odobraní vzoriek sa ustrice alebo mušle udržiavajú pri teplote 4 °C alebo na chladiarenskom ľade nie viac ako 24 hodín, ak vzorky zahŕňajú otvorené mäkkýše, a nie viac ako 72 hodín, ak nezahŕňajú otvorené mäkkýše, v plastovom vrecku s označením, na ktorom sú uvedené podrobné informácie týkajúce sa povahy a pôvodu ustríc alebo mušlí.
The tissues shall be fixed in neutral phosphate-buffered 10 % formalin for at least 1 day, dehydrated in a graded ethanol series, cleared in xylene and embedded in paraffin, according to standard protocols.
Otvorené alebo čerstvo uhynuté mäkkýše sa udržiavajú oddelene od iných mäkkýšov.
Approximately 5 μm thick sections (for IHC placed on poly-L-lysine-coated slides) shall be heated at 56 °C to 58 °C (maximum 60 °C) for 20 minutes, dewaxed in xylene, rehydrated through a graded ethanol series, and stained with haematoxylin and eosin for pathomorphology and IHC in accordance with point (2).
Na diagnostikovanie Marteilia refringens prostredníctvom histológie sa použije 3 až 5 mm hrubý rez tkanív zahŕňajúci žiabre a srdcové tkanivo.
Staining procedure for IHC
Na niektoré testy, medzi ktoré patria odtlačky a polymerázová reťazová reakcia (PCR), sa použije časť tráviacej žľazy.
All incubations shall be carried out at room temperature on a rocking platform, unless otherwise provided for in this decision:
Mikroskopické techniky
antigen retrieval shall be done by boiling sections in 0,1 M citrate buffer pH 6,0 for 2 × 6 minutes followed by blocking with 5 % non-fat dry milk and 2 % goat serum in 50 mM TBS (TBS; Tris/HCl 50 mM, NaCl 150 mM, pH 7,6) for 20 minutes;
Cytológia (odtlačková cytológia)
sections shall then be incubated overnight with primary antibody (monospecific rabbit antibody against ISAV nucleoprotein) diluted in TBS with 1 % non-fat dry milk, followed by three washes in TBS with 0,1 % Tween 20;
Po vysušení tkanív tráviacej žľazy na absorpčnom papieri sa na podložnom sklíčku pripraví niekoľko vzoriek.
for detection of bound antibodies, sections shall be incubated with Alkaline phosphatase-conjugated antibodies to rabbit IgG for 60 minutes.
Sklíčka sa usušia na vzduchu, fixujú v metanole alebo v absolútnom etanole a zafarbia, pričom sa použije komerčne dostupná súprava na farbenie krvi ako Diff-Quik®/Hemacolor® v súlade s pokynmi výrobcu.
Following a final wash, Fast Red (1 mg ml– 1) and Naphthol AS-MX phosphate (0,2 mg ml– 1) with 1 mM Levamisole in 0,1 M TBS (pH 8,2) shall be added to develop for 20 minutes.
Po opláchnutí vo vode z vodovodu a vysušení sa na sklíčka položí krycie sklíčko, pričom sa použije vhodná syntetická živica.
Sections shall then be washed in tap water before counterstaining with Harris haematoxylin and mounted in aqueous mounting medium.
Sklíčka sa pozorujú najprv pri 200-násobnom zväčšení a potom pri ponorení do oleja pri 1000-násobnom zväčšení.
ISAV positive and ISAV negative tissue sections shall be included as controls in every setup.
Pozitívnym výsledkom je pozorovanie buniek v rozmedzí veľkosti od 30 do 40 μm.
Interpretation of the result of IHC
Cytoplazma sa farbí bazofilne, zatiaľ čo jadro sa farbí eozinofilne.
The interpretation of the result of the IHC test shall be as set out in points (a) and (b):
Okolo veľkých, výrazne sfarbených (svetlolomných) granúl sa pozoruje bledé halo, a vo väčších bunkách sa pozoruje bunka v rámci bunkového usporiadania.
control sections shall be considered as positive, when it is observed that the control sections have clearly visible red-coloured (reddish) cytoplasmic and intranuclear staining of endothelia cells in blood vessels of endocardium.
Táto technika nie je špecifická pre parazitné druhy.
A test sample section shall only be regarded as positive if such clear, intranuclear red staining of endothelial cells is found;
Časti tkaniva, ktoré zahŕňajú žiabre, tráviacu žľazu, mozgový plášť a gonádu, sa fixujú aspoň počas 24 hodín v Davidsonovom fixačnom prostriedku, a potom nasleduje normálne spracovanie na účely parafínovej histológie a farbenia, napríklad hematoxylínom a eozínom.
control sections shall be considered as negative if they don't have any significant colour reaction.
Pozorovania sa vykonávajú pri zvyšujúcich sa zväčšeniach až do × 1000.
Since the intranuclear localisation is particular to the orthomyxovirus nucleoprotein during a stage of virus replication but concurrent cytoplasmic staining is often dominant, cytoplasmic and other staining patterns without intranuclear localisation shall be considered as nonspecific or inconclusive.
Pozitívnym výsledkom je pozorovanie buniek v rozmedzí veľkosti od 4 do 40 μm.
The strongest positive staining reactions are usually obtained in endothelial cells of heart and kidney.
Počiatočné štádiá pozostávajú z viacjadrových, sférických až podlhovastých buniek.
Endothelial staining reactions within very extensive haemorrhagic lesions may be slight or absent, possibly because of lysis of infected endothelial cells.
Tieto sa nachádzajú hlavne v epiteli pažeráka a žalúdka, niekedy v labiálnych hmatadlách.
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES FOR THE SURVEILLANCE AND CONFIRMATION OF INFECTION WITH MARTEILIA REFRINGENS
Sporulácia zahŕňa delenie buniek v rámci buniek a prebieha v kanálikoch a duktoch tráviacej žľazy.
I. Detailed diagnostic methods and procedures for the diagnosis of infection with Marteilia refringens
Svetlolomné granuly sa objavia v priebehu sporulácie, ale nie sú pozorované v počiatočných fázach.
When sampling and laboratory examination are carried out for the purpose of obtaining or maintaining a health status with regard to infection with Marteilia refringens as set out in Section I of Part 4 of Annex I or to confirm or rule out the presence of that listed disease in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC, using the diagnostic methods set out in Section II of Part 4 of Annex I, the detailed diagnostic methods and procedures set out in points I.1, I.2 and I.3 of this Part shall apply.
V konečných fázach infekcie sa v lúmene tráviaceho traktu voľne pozorujú výtrusnice.
Sampling procedure
Zafarbenie granúl môže byť v škále od oranžovej až po sýtočervenú farbu.
Gaping or freshly dead individual molluscs shall be sampled by priority, to increase the chances of finding infected animals.
Molekulárne techniky
Once sampled, oysters or mussels shall be maintained at 4 °C or on refrigerated ice for no more than 24 hours if samples include gaping molluscs and no more than 72 hours if not, in a plastic bag including a label with details related to the nature and the origin of the oysters or mussels.
Môžu sa použiť súpravy na extrakciu DNA, ktoré sú komerčne dostupné a ktorými sa zvyčajne získava kvalitná DNA vhodná na použitie s protokolmi PCR opísanými v bode I.3.2.
Gaping or freshly dead molluscs shall be maintained separately from other molluscs.
Polymerázová reťazová reakcia (PCR)
A 3 to 5 mm thick section of tissues including gills and heart tissue shall be used for the diagnostic of Marteilia refringens by histology.
Vyvinulo a uverejnilo sa niekoľko protokolov PCR.
A piece of digestive gland shall be used for some tests, including imprints and polymerase chain reaction (PCR).
Použijú sa primery PCR, ktoré sú zamerané na oblasť vnútorného prepisovaného medzerníka (ITS1), keďže sú schopné amplifikovať len M. refringens.
Microscopic techniques
PCR sa vykoná v objeme 50 μl.
Cytology (imprint cytology)
Zmesi PCR obsahujú tlmivý roztok (500 mM KCl, 100 mM Tris/HCl [pH 9,0 pri 25 °C] a 1 % Triton® X-100), 2,5 mM MgCl2, 0,2 mM dNTP mix, 1 μM priame a reverzné primery, 0,02 jednotiek μl– 1 Taq DNA polymerázy, a 10 až 100 ng extrahovanej DNA.
After drying digestive gland tissues on absorbent paper, several imprints shall be made on a glass slide.
Po denaturácii DNA pri teplote 94 °C počas piatich minút sa vykoná 30 cyklov takto: denaturácia pri 94 °C počas 1 minúty anelácia pri teplote 55 °C počas 1 minúty a elongácia pri 72 °C počas 1 minúty na kilobázový pár.
Slides shall be air-dried, fixed in methanol or in absolute ethanol and stained using a commercially available blood-staining kit such as Diff-Quik®/Hemacolor®, in accordance with the manufacturer's instructions.
Krok záverečnej elongácie sa vykoná počas 10 minút pri 72 °C.
After rinsing in tap water and drying, the slides shall be mounted with a cover-slip using an appropriate synthetic resin.
Na detekciu M. refringens, sa vykoná PCR s primermi cielenými na oblasť ITS1 (5′-CCG-CAC-ACG-TTC-TTC-ACT-CC-3′ a 5′-CTC-GCG-AGT-TTC-GAC-AGA-CG-3′).
The slides shall be observed first at × 200 magnification and then under oil immersion at × 1000 magnification.
Pozitívne kontrolné vzorky sa skladajú z genómovej DNA vysoko infikovanej hostiteľskej alebo plazmidovej DNA obsahujúcej cieľovú oblasť.
A positive result shall be the observation of cells ranging in size up to between 30 to 40 μm.
Negatívne kontrolné vzorky sa skladajú z genómovej DNA neinfikovaných hostiteľov a reakčných činidiel PCR bez cieľovej DNA.
The cytoplasm stains basophilic, whereas the nucleus stains eosinophilic.
Za pozitívny výsledok sa považuje pozitívna amplifikácia PCR s očakávanou veľkosťou (412 bp), pričom všetky negatívne kontrolné vzorky sú negatívne a všetky pozitívne kontrolné vzorky sú pozitívne.
Pale halos around large, strongly stained (refringent) granules and, in larger cells, cell within cell arrangements are observed.
Hybridizácia pre dôkaz in situ (ISH)
The technique is not parasite species specific.
Vyvinulo a uverejnilo sa niekoľko protokolov ISH.
Sections of tissue that include gills, digestive gland, mantle, and gonad shall be fixed for at least 24 hours in Davidson's fixative followed by normal processing for paraffin histology and staining, for example with haematoxylin and eosin.
Použije sa sonda, ktorá je zameraná na génový komplex SSU rRNA, pretože bola validovaná oproti histológii.
Observations shall be made at increasing magnifications up to × 1000.
Rezy tkaniva, ktoré zahŕňajú žiabre a tráviacu žľazu, sa fixujú aspoň počas 24 hodín v Davidsonovom fixačnom prostriedku, a potom nasleduje normálne spracovanie na účely parafínovej histológie.
A positive result shall be the observation of cells ranging in size from 4 up to 40 μm.
Narežú sa rezy s veľkosťou 5 μm a umiestnia sa na sklíčka potiahnuté aminoalkylsilánom, ktoré sa potom cez noc pečú v peci pri 40 °C.
Early stages consist of multinucleate, spheric to elongated cells.
Rezy sa odparafínujú ponorením v xyléne počas 10 minút.
These are mainly found in the epithelium of oesophagus and stomach and sometimes of labial palps.
Tento krok sa jeden raz opakuje a potom sa rozpúšťadlo odstráni ponorením do dvoch po sebe nasledujúcich kúpeľov v absolútnom etanole, pričom každý z nich trvá 10 minút.
Sporulation involves divisions of cells within cells and takes place in the digestive gland tubules and ducts.
Rezy sa následne dehydrujú v sérii koncentrácií etanolu.
Refringent granules appear in the course of sporulation, but are not observed in early stages.
Rezy sa ošetria proteinázou K (100 μg ml–1) v tlmivom roztoku TE (Tris [50 mM], EDTA [10 mM]), pri 37 °C počas 30 minút.
In late phases of infection, sporangia are observed free in the lumen of the digestive tract.
Sklíčka sa dehydrujú v sérii koncentrácií etanolu a potom vysušia na vzduchu.
The granules can range from deep orange to deep red.
Rezy sa inkubujú so 100 μl hybridizačného tlmivého roztoku (4 × SSC [štandarný soľný roztok citrátu sodného], 50 % formamidu, 1 × Denhardtovho roztoku, 250 μg ml–1 kvasinkovej tRNA, 10 % dextran sulfát) s obsahom10 ng (1 μl PCR reagujúcich zložiek pripravených podľa opisu v bode I.3.2 s použitím primerov CCG-GTG-CCA-GGT-ATA-TCT-CG a TTC-GGG-TGG-TCT-TGA-AAG-GC) sondy označenej digoxigeninom.
Molecular techniques
Rezy sa pokryjú plastovými krycími sklíčkami in-situ a umiestnia sa do ohrievacieho bloku s teplotou 95 °C na päť minút.
DNA extraction kits, which are available commercially and usually produce high quality DNA suitable for use with the PCR protocols as described in point I.3.2, may be used.
Sklíčka sa potom počas 1 minúty ochladia na ľade a následne sa cez noc vykoná hybridizácia pri teplote 42 °C vo vlhkej miestnosti.
Polymerase chain reaction (PCR)
Rezy sa opláchnu dvakrát počas piatich minút v 2 × SSC pri izbovej teplote, a raz počas 10 minút v 0,4 × SSC pri 42 °C.
Several PCR protocols have been developed and published.
Kroky detekcie sa vykonávajú podľa pokynov výrobcu.
PCR primers that target the internal transcribed spacer (ITS1) region shall be used as they are able to amplify only M. refringens.
Sklíčka sa potom opláchnu v sterilnej destilovanej vode (dH2O).
PCR shall be carried out in a 50 μl volume.
Rezy sa kontrastne zafarbia s Bismarck Brown Yellow, opláchnu v dH2O a prikryjú sa krycími sklíčkami s použitím vodného montovacieho média.
PCR mixtures shall contain buffer (500 mM KCl, 100 mM Tris/HCl [pH 9,0 at 25 °C] and 1 % Triton® X-100), 2,5 mM MgCl2, 0,2 mM dNTP mix, 1 μM forward and reverse primers, 0,02 units μl– 1 Taq DNA polymerase, and 10 to100 ng of extracted DNA.
Pozitívne a negatívne kontrolné vzorky predstavujú rezy zo známych infikovaných a neinfikovaných hostiteľov (v uvedenom poradí).
After denaturation of DNA at 94 °C for five minutes, 30 cycles shall be run as follows: denaturation at 94 °C for one minute, annealing at 55 °C for one minute, and elongation at 72 °C for one minute per kilo-base pair.
Pozitívny výsledok sa preukáže purpurovo-čiernym označením buniek M. refringens v známych cieľových tkanivách, pričom všetky negatívne kontrolné vzorky sú negatívne a všetky pozitívne kontrolné vzorky sú pozitívne.
A final elongation step of 10 minutes at 72 °C shall be performed.
Sekvenovanie
For the detection of M. refringens, PCR shall be performed with primers that target the ITS1 region (5′-CCG-CAC-ACG-TTC-TTC-ACT-CC-3′ and 5′-CTC-GCG-AGT-TTC-GAC-AGA-CG-3′).
Sekvenovanie sa vykoná ako jeden zo záverečných krokov na potvrdenie diagnózy.
Positive controls shall consist of genomic DNA from a highly infected host or plasmidic DNA including the target region.
Cieľovými oblasťami sú SSU rDNA a ITS1.
Negative controls shall consist of genomic DNA from non-infected hosts and PCR reactives without target DNA.
Podrobné diagnostické metódy a postupy na účely dohľadu nad marteiliózou (Marteilia refringens) a jej potvrdenia
A positive result shall be positive PCR amplification at the expected size (412 bp), with all negative controls being negative and all positive controls being positive.
Na účely programov dohľadu a na potvrdenie výskytu marteiliózy (Marteilia refringens) alebo na vylúčenie podozrenia na výskyt danej choroby uvedenej v zozname, v súlade s požiadavkami stanovenými v oddiele II časti 4 prílohy I, sú diagnostické metódy a zodpovedajúce postupy, ktoré sa majú použiť, v súlade s týmito usmerneniami stanovenými v tabuľke 4.1:
In-situ hybridisation (ISH)
Tabuľka 4.1
Several ISH protocols have been developed and published.
Usmernenia na používanie diagnostických metód, pokiaľ ide o programy dohľadu a na potvrdenie alebo vylúčenie marteiliózy (Marteilia refringens)
Probe that targets the SSU of the rRNA gene complex shall be used because it has been validated against histology.
Metóda
Sections of tissue that include gills, digestive gland, shall be fixed for at least 24 hours in Davidson's fixative followed by normal processing for paraffin histology.
Cielený dohľad
Sections of 5 μm shall be cut and placed on aminoalkylsilane-coated slides, which shall then be baked overnight in an oven at 40 °C.
Predpokladaná diagnóza
The sections shall be dewaxed by immersing in xylene for 10 minutes.
Potvrdzujúca diagnóza
This step shall be repeated once and then the solvent shall be eliminated by immersion in two successive absolute ethanol baths for 10 minutes each.
Odtlačky tráviacej žľazy
The sections shall then be dehydrated by immersion in a graded ethanol series.
X, alebo
The sections shall be treated with proteinase K (100 μg ml– 1) in TE buffer (Tris [50 mM], EDTA [10 mM]), at 37 °C for 30 minutes.
Histopatológia
Slides shall be dehydrated by immersion in a graded ethanol series and then air dried.
Hybridizácia pre dôkaz in situ
Sections shall be incubated with 100 μl of hybridisation buffer (4 × SSC [standard saline citrate], 50 % formamide, 1 × Denhardt's solution, 250 μg ml– 1 yeast tRNA, 10 % dextran sulphate) containing 10 ng (1 μl of the PCR reactants prepared as described in point I.3.2 using primers CCG-GTG-CCA-GGT-ATA-TCT-CG and TTC-GGG-TGG-TCT-TGA-AAG-GC) of the digoxigenin-labelled probe.
X, a
Sections shall be covered with in-situ plastic cover-slips and placed on a heating block at 95 °C for five minutes.
PODROBNÉ DIAGNOSTICKÉ METÓDY A POSTUPY NA ÚČELY DOHĽADU NAD BONAMIÓZOU (BONAMIA OSTREAE) A JEJ POTVRDENIA
Slides shall then be cooled on ice for one minute before overnight hybridisation at 42 °C in a humid chamber.
I. Diagnostické postupy pri bonamióze (Bonamia ostreae)
Sections shall be washed twice for five minutes in 2 × SSC at room temperature, and once for 10 minutes in 0,4 × SSC at 42 °C.
Ak sa vykonáva odber vzoriek a laboratórne vyšetrenie na účely získania alebo udržania určitého zdravotného štatútu, pokiaľ ide o Bonamia ostreae, ako sa uvádza v oddiele I časti 5 prílohy I, alebo na účely potvrdenia alebo vylúčenia prítomnosti danej choroby uvedenej v zozname v súlade s článkom 57 písm. b) smernice 2006/88/ES s použitím diagnostických metód uvedených v oddiele II časti 5 prílohy I, uplatňujú sa podrobné diagnostické metódy a postupy stanovené v týchto bodoch I.1, I.2 a I.3.
The detection steps shall be performed according to the manufacturer's instructions.
Postup odberu vzoriek
The slides shall then be rinsed in sterile distilled water (dH2O).
Po odobraní vzoriek sa ustrice udržiavajú pri teplote 4 °C alebo na chladiarenskom ľade nie viac ako 24 hodín, ak vzorky zahŕňajú otvorené mäkkýše, a 72 hodín, ak nezahŕňajú otvorené mäkkýše, v plastovom vrecku s označením, na ktorom sú uvedené podrobné informácie týkajúce sa povahy a pôvodu ustríc.
The sections shall be counter-stained with Bismarck Brown Yellow, rinsed in dH2O, and cover-slips shall be applied using an aqueous mounting medium.
Na diagnostikovanie Bonamia ostreae prostredníctvom histológie sa použije 3 až 5 mm hrubý rez tkanív zahŕňajúci žiabre a srdcové tkanivo.
Positive and negative controls shall be sections from known infected and non-infected hosts respectively.
Po vysušení žiabrových alebo srdcových tkanív na absorpčnom papieri sa na podložnom sklíčku pripraví niekoľko vzoriek.
A positive result shall be demonstrated by the purple-black labelling of M. refringens cells within known target tissues, with all negative controls being negative and all positive controls being positive.
Sklíčka sa usušia na vzduchu, fixujú v metanole alebo v absolútnom etanole a zafarbia, pričom sa použije komerčne dostupná súprava na farbenie krvi (konkrétne Diff-Quik®/Hemacolor®.) v súlade s pokynmi výrobcu.
Sequencing
Sklíčka sa pozorujú najprv pri 200-násobnom zväčšení a potom pri ponorení do oleja pri 1000-násobnom zväčšení.
Sequencing shall be carried out as one of the final steps for confirmatory diagnostic.
Pozitívnym výsledkom je prítomnosť malého sférického alebo ovoidného organizmu (širokého 2 až 5 μm) v hemocytoch.
Targeted regions are the SSU rDNA and ITS1.
Paraziti sa však môžu vyskytnúť aj extracelulárne.
Detailed diagnostic methods and procedures for surveillance and confirmation of infection with Marteilia refringens
Tieto organizmy majú bazofilnú cytoplazmu a eosinofilné jadro (farby sa môžu líšiť podľa použitého farbenia), a preto, že sa rozotierajú na sklíčku, môžu sa javiť na odtlačkoch širšie ako na histologickom vyšetrení.
For the purpose of surveillance programmes and to confirm the presence of an infection with Marteilia refringens or to rule out a suspicion of that listed disease, in accordance with the requirements laid down in Section II of Part 4 to Annex I, the diagnostic methods and corresponding procedures to be used shall be in accordance with the guidelines laid down in Table 4.1 as follows:
Možno pozorovať mnohojadrové bunky.
Table 4.1
Časti tkaniva, ktoré zahŕňajú žiabre tráviacu žľazu, sa fixujú aspoň počas 24 hodín v Davidsonovom fixačnom prostriedku, a potom nasleduje normálne spracovanie na účely parafínovej histológie a farbenia, napríklad hematoxylínom a eozínom.
Guidelines for the use of diagnostic methods for the surveillance programmes and to confirm or rule out infection with Marteilia refringens
Za pozitívny výsledok sa považuje prítomnosť parazitov v podobe veľmi malých buniek širokých od 2 do 5 μm v hemocytoch alebo voľne v spojivovom tkanive alebo sínusoch epitela žiabrov, čreva a mozgového plášťa, často spojená s intenzívnou zápalovou reakciou.
Method
Aby sa predišlo akýmkoľvek pochybnostiam, parazit sa pozoruje vo vnútri hemocytu na účely pozitívnej diagnózy.
Targeted surveillance
Môžu sa použiť súpravy na extrakciu DNA, ktoré sú komerčne dostupné a ktorými sa zvyčajne získava kvalitná DNA vhodná na použitie s protokolmi PCR podrobne opísanými ďalej.
Presumptive diagnosis
Môžu sa používať dva protokoly PCR zamerané na malé podjednotky (SSU) rDNA:
Confirmatory diagnosis
Zmesi PCR obsahujú tlmivý roztok (500 mM KCl, 100 mM Tris/HCl [pH 9,0 pri 25 °C] a 1 % Triton® X-100), 2,5 mM MgCl2, 0,2 mM dNTP mix, 1 μM priamych a reverzných primerov, 0,02 jednotiek μl–1 Taq DNA polymerázy, a 0,2 ng μl–1 templátovej DNA v celkovom objeme 50 μl.