natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Chapter C.3 is replaced by the following:
Známa by mala byť rozpustnosť vo vode, rozdeľovacia konštanta oktanol/voda (Pow) a tlak pary testovanej chemikálie a k dispozícii by mala byť overená metóda kvantifikácie chemikálie v testovacích roztokoch so zaznamenanou výťažnosťou a detekčným limitom.
FRESHWATER ALGA AND CYANOBACTERIA, GROWTH INHIBITION TEST
VALIDITA TESTU
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 201 (2006, annex corrected in 2011).
Test je platný, ak sú splnené tieto kritériá:
The need to extend the test method to include additional species and update it to meet the requirements for hazard assessment and classification of chemicals has been identified.
Množstvo biomasy v kontrolných kultúrach by sa malo exponenciálne zvýšiť minimálne o faktor 16 počas 72 hodinového testu.
This revision has been completed on the basis of extensive practical experience, scientific progress in the field of algal toxicity studies, and extensive regulatory use, which has occurred since the original adoption.
To zodpovedá špecifickej rýchlosti rastu 0,92 deň– 1.
Definitions used are given in Appendix 1.
V prípade najčastejšie používaných druhov je rýchlosť rastu zvyčajne podstatne vyššia (pozri dodatok 2).
PRINCIPLE OF THE TEST
Toto kritérium sa nemusí splniť, ak sa používajú druhy, ktoré rastú pomalšie než druhy uvedené v dodatku 2.
The purpose of this test is to determine the effects of a chemical on the growth of freshwater microalgae and/or cyanobacteria.
V tomto prípade by sa trvanie testu malo predĺžiť, aby sa dosiahol minimálne 16-násobný rast v kontrolných kultúrach, pričom počas trvania testu musí byť rast exponenciálny.
Exponentially growing test organisms are exposed to the test chemical in batch cultures over a period of normally 72 hours.
Trvanie testu sa môže skrátiť najmenej na 48 hodín, aby sa zachoval neobmedzený exponenciálny rast počas testu, pokiaľ sa dosiahne minimálny multiplikačný faktor 16.
In spite of the relatively brief test duration, effects over several generations can be assessed.
Toto kritérium platí pre strednú hodnotu variačných koeficientov vypočítanú pre replikáty kontrolných kultúr.
The system response is the reduction of growth in a series of algal cultures (test units) exposed to various concentrations of a test chemical.
Koeficient odchýlky priemerných špecifických rýchlostí rastu počas celého testu v paralelných kontrolných kultúrach nesmie byť väčší ako 7 % v testoch s druhmi Pseudokirchneriella subcapitata a Desmodesmus subspicatus.
The response is evaluated as a function of the exposure concentration in comparison with the average growth of replicate, unexposed control cultures.
Pre iné druhy, zriedkavejšie používané na testovanie, nesmie hodnota presiahnuť 10 %.
For full expression of the system response to toxic effects (optimal sensitivity), the cultures are allowed unrestricted exponential growth under nutrient sufficient conditions and continuous light for a sufficient period of time to measure reduction of the specific growth rate.
REFERENČNÁ CHEMIKÁLIA
Growth and growth inhibition are quantified from measurements of the algal biomass as a function of time.
Referenčné chemikálie, ako napríklad 3,5-dichlórfenol, používané v medzinárodnej porovnávacej skúške (1) sa môžu testovať ako prostriedok kontroly postupu testu.
Algal biomass is defined as the dry weight per volume, e.g. mg algae/litre test solution.
Pre zelené riasy sa môže použiť ako referenčná chemikália aj dichróman draselný.
However, dry weight is difficult to measure and therefore surrogate parameters are used.
Referenčnú chemikáliu je potrebné testovať najmenej dvakrát do roka.
Of these surrogates, cell counts are most often used.
POUŽITEĽNOSŤ TESTU
Other surrogate parameters include cell volume, fluorescence, optical density, etc.
Táto testovacia metóda sa najľahšie používa pre chemikálie rozpustné vo vode, pri ktorých je pravdepodobné, že v podmienkach testu zostanú vo vode.
A conversion factor between the measured surrogate parameter and biomass should be known.
V prípade testovania chemikálií, ktoré sú prchavé, silne sa adsorbujú, sú sfarbené, s nízkou rozpustnosťou vo vode, alebo chemikálií, ktoré môžu ovplyvniť dostupnosť živín alebo minerálnych látok v testovacom médiu, môžu byť potrebné určité modifikácie uvedeného postupu (napr. uzatvorený systém, úprava testovacích nádob).
The test endpoint is inhibition of growth, expressed as the logarithmic increase in biomass (average specific growth rate) during the exposure period.
Usmernenia k niektorým vhodným úpravám sú uvedené v literatúre pod číslami (2) (3) a (4).
From the average specific growth rates recorded in a series of test solutions, the concentration bringing about a specified x % inhibition of growth rate (e.g. 50 %) is determined and expressed as the ErCx (e.g. ErC50).
OPIS TESTOVACEJ METÓDY
An additional response variable used in this test method is yield, which may be needed to fulfil specific regulatory requirements in some countries.
Testovacie nádoby a ostatné zariadenia, ktoré prichádzajú do styku s testovacími roztokmi, by mali byť celé vyrobené zo skla alebo z iného chemicky inertného materiálu.
It is defined as the biomass at the end of the exposure period minus the biomass at the start of the exposure period.
Predmety by sa mali dôkladne umyť, aby sa zabezpečilo, že žiadne organické ani anorganické kontaminanty neovplyvnia rast rias ani zloženie testovacích roztokov.
From the yield recorded in a series of test solutions, the concentration bringing about a specified x % inhibition of yield (e.g., 50 %) is calculated and expressed as the EyCx (e.g. EyC50).
Testovacími nádobami sú spravidla sklené banky s rozmermi, ktoré umožňujú dostačujúci objem kultúry pre merania počas testu a prenos dostatočného množstva CO2 z atmosféry (pozri bod 30).
In addition, the lowest observed effect concentration (LOEC) and the no observed effect concentration (NOEC) may be statistically determined.
Treba si uvedomiť, že objem kvapaliny musí byť postačujúci pre analytické stanovenia (pozri bod 37).
INFORMATION ON THE TEST CHEMICAL
Okrem toho môžu byť potrebné niektoré z týchto zariadení alebo všetky tieto zariadenia:
Information on the test chemical which may be useful in establishing the test conditions includes structural formula, purity, stability in light, stability under the conditions of the test, light absorption properties, pKa, and results of studies of transformation including biodegradability in water.
zariadenie na kultiváciu:
The water solubility, octanol water partition coefficient (Pow) and vapour pressure of the test chemical should be known and a validated method for the quantification of the chemical in the test solutions with reported recovery efficiency and limit of detection should be available.
odporúča sa nádoba alebo komora, v ktorej sa môže udržiavať zvolená inkubačná teplota s presnosťou ± 2 °C,
VALIDITY OF THE TEST
prístroje na meranie svetla:
For the test to be valid, the following performance criteria should be met:
je dôležité si uvedomiť, že metóda merania svietivosti a najmä typ receptora (kolektora) môže ovplyvniť nameranú hodnotu.
The biomass in the control cultures should have increased exponentially by a factor of at least 16 within the 72-hour test period.
Merania by sa mali prednostne vykonávať s použitím guľového (4 π) receptora (ktorý reaguje na priame a odrazené svetlo zo všetkých uhlov nad a pod rovinou merania) alebo 2 π receptora (ktorý reaguje na svetlo zo všetkých uhlov nad rovinou merania).
This corresponds to a specific growth rate of 0,92 day– 1.
Zariadenie na stanovenie množstva biomasy rias.
In this case, the test period should be extended to obtain at least a 16-fold growth in control cultures, while the growth has to be exponential throughout the test period.
Na výpočet je potrebný prepočítavací faktor vzťahujúci sa na počet buniek na sušinu.
The test period may be shortened to at least 48 hours to maintain unlimited, exponential growth during the test as long as the minimum multiplication factor of 16 is reached.
Na zabezpečenie potrebných meraní pri nízkych koncentráciách biomasy s použitím spektrofotometra môže byť potrebné použiť kyvety s dráhou svetla minimálne 4 cm.
The mean coefficient of variation for section-by-section specific growth rates (days 0-1, 1-2 and 2-3, for 72-hour tests) in the control cultures (See Appendix 1 under “coefficient of variation”) must not exceed 35 %.
Testovacie organizmy
See paragraph 49 for the calculation of section-by-section specific growth rate.
Môžu sa použiť viaceré druhy voľne rastúcich mikrorias a siníc.
This criterion applies to the mean value of coefficients of variation calculated for replicate control cultures.
Ukázalo sa, že kmene uvedené v dodatku 2 sú vhodné pre postup testovania uvedený v tejto testovacej metóde.
The coefficient of variation of average specific growth rates during the whole test period in replicate control cultures must not exceed 7 % in tests with Pseudokirchneriella subcapitata and Desmodesmus subspicatus.
V prípade použitia iných druhov je potrebné uviesť v skúšobnom protokole kmeň a/alebo pôvod.
For other less frequently tested species, the value should not exceed 10 %.
Treba potvrdiť, že exponenciálny rast zvolenej testovanej riasy sa môže zachovať počas testu za obvyklých podmienok.
REFERENCE CHEMICAL
Rastové médium
Reference chemical(s), such as 3,5-dichlorophenol used in the international ring test (1), may be tested as a means of checking the test procedure.
Odporúčajú sa dve alternatívne rastové médiá – médium OECD a AAP.
Potassium dichromate can also be used as a reference chemical for green algae.
Zloženie týchto médií je uvedené v dodatku 3.
It is desirable to test a reference chemical at least twice a year.
Treba si uvedomiť, že počiatočná hodnota pH a tlmivá kapacita (ktorá reguluje zvyšovanie pH) dvoch médií je odlišná.
APPLICABILITY OF THE TEST
Preto môžu byť výsledky testov rozdielne v závislosti od použitého média, najmä ak sa testujú ionizujúce chemikálie.
This test method is most easily applied to water-soluble chemicals which, under the conditions of the test, are likely to remain in the water.
Na určité účely môže byť potrebné modifikovať rastové médium, napríklad ak sa testujú kovy a chelatačné činidlá, alebo v prípade testovania pri rôznych hodnotách pH.
For testing of chemicals that are volatile, strongly adsorbing, coloured, having a low solubility in water or chemicals that may affect the availability of nutrients or minerals in the test medium, certain modifications of the described procedure may be required (e.g., closed system, conditioning of the test vessels).
Použitie modifikovaného média by sa malo podrobne opísať a odôvodniť (3) (4).
Guidance on some appropriate modifications is given in (2) (3) and (4).
Počiatočná koncentrácia biomasy
DESCRIPTION OF THE TEST METHOD
Počiatočné množstvo biomasy v testovacích kultúrach musí byť rovnaké vo všetkých testovacích kultúrach a dostatočne nízke, aby umožnilo exponenciálny rast počas inkubácie bez rizika vyčerpania živín.
Test vessels and other apparatus which will come into contact with the test solutions should be made entirely of glass or other chemically inert material.
Počiatočné množstvo biomasy by nemalo byť vyššie ako 0,5 mg/l, vyjadrené ako sušina.
The items should be thoroughly washed to ensure that no organic or inorganic contaminants may interfere with the algal growth or composition of the test solutions.
Odporúčajú sa tieto počiatočné koncentrácie buniek:
The test vessels will normally be glass flasks of dimensions that allow a sufficient volume of culture for measurements during the test and a sufficient mass transfer of CO2 from the atmosphere (see paragraph 30).
5 × 103 – 104 buniek/ml
Note that the liquid volume must be sufficient for analytical determinations (see paragraph 37).
2-5 × 103 buniek/ml
In addition some or all of the following equipment may be required:
104 buniek/ml
Culturing apparatus:
5 × 104 – 105 buniek/ml
a cabinet or chamber is recommended, in which the chosen incubation temperature can be maintained at ± 2 °C.
Koncentrácie testovanej chemikálie
Light measurement instruments:
Rozsah koncentrácií, v ktorých sa môžu účinky prejaviť, je možné stanoviť na základe výsledkov testov na vyhľadávanie rozsahu.
it is important to note that the method of measurement of light intensity, and in particular the type of receptor (collector), may affect the measured value.
Pre konečný definitívny test by sa malo zvoliť minimálne päť koncentrácií usporiadaných v geometrickom rade s faktorom maximálne 3,2.
Measurements should preferably be made using a spherical (4 π) receptor (which responds to direct and reflected light from all angles above and below the plane of measurement), or a 2 π receptor (which responds to light from all angles above the measurement plane).
Pre testované chemikálie vykazujúce plochú krivku závislosti veličiny od koncentrácie sa môže zvoliť vyšší faktor.
Apparatus to determine algal biomass.
Séria koncentrácií by mala prednostne pokrývať rozsah 5 – 75 % inhibície rýchlosti rastu rias.
Cell count, which is the most frequently used surrogate parameter for algal biomass, may be made using an electronic particle counter, a microscope with counting chamber, or a flow cytometer.
Replikáty a kontrolné kultúry
Other biomass surrogates can be measured using a flow cytometer, fluorimeter, spectrophotometer or colorimeter.
Test by sa mal vykonať s tromi replikátmi pri každej testovacej koncentrácii.
A conversion factor relating cell count to dry weight is useful to calculate.
Ak sa nevyžaduje stanovenie koncentrácie NOEC, môže sa test pozmeniť zvýšením počtu koncentrácií a znížením počtu replikátov na koncentráciu.
In order to provide useful measurements at low biomass concentrations when using a spectrophotometer, it may be necessary to use cuvettes with a light path of at least 4 cm.
Musia existovať minimálne tri kontrolné replikáty a teoreticky by sa mal použiť dvojnásobný počet replikátov pre každú testovaciu koncentráciu.
Test organisms
Pripraviť sa môže osobitný súbor testovacích roztokov na analytické stanovenie koncentrácie testovaných chemikálií (pozri body 36 a 38).
Several species of non-attached microalgae and cyanobacteria may be used.
Ak sa na rozpustenie testovanej chemikálie používa rozpúšťadlo, musia sa do koncepcie testu zahrnúť ďalšie kontrolné kultúry obsahujúce rozpúšťadlo v rovnakej koncentrácii, aká sa používa v testovacích kultúrach.
The strains listed in Appendix 2 have been shown to be suitable using the test procedure specified in this test method.
Príprava inokula
If other species are used, the strain and/or origin should be reported.
Na prispôsobenie testovacích rias podmienkam skúšky, ako aj na zabezpečenie toho, aby sa riasy nachádzali v exponenciálnej fáze rastu v čase ich použitia na inokuláciu testovacích roztokov, sa pripraví inokulum v testovacom médiu 2 až 4 dni pred začiatkom skúšky.
Confirm that exponential growth of the selected test alga can be maintained throughout the test period under the prevailing conditions.
Biomasa rias by sa mala upraviť tak, aby sa v inokule umožnil exponenciálny rast do začiatku skúšky.
Growth medium
Inokulum sa inkubuje za rovnakých podmienok ako testovacie kultúry.
Two alternative growth media, the OECD and the AAP medium, are recommended.
V inokule sa meria nárast množstva biomasy, aby sa zabezpečilo, že rast je v obvyklom rozsahu ako v prípade testovacieho kmeňa za podmienok kultivácie.
The compositions of these media are shown in Appendix 3.
Príklad postupu kultivácie rias je opísaný v dodatku 4.
Note that the initial pH value and the buffering capacity (regulating pH increase) of the two media are different.
S cieľom zabrániť synchrónnemu deleniu buniek počas skúšky môže byť potrebný druhý stupeň množenia inokula.
Therefore the results of the tests may be different depending on the medium used, particularly when testing ionising chemicals.
Príprava testovacích roztokov
Modification of the growth media may be necessary for certain purposes, e.g. when testing metals and chelating agents or testing at different pH values.
Všetky testovacie roztoky musia obsahovať rovnaké koncentrácie rastového média a počiatočného množstva biomasy testovanej riasy.
Use of a modified medium should be described in detail and justified (3) (4).
Testovacie roztoky zvolených koncentrácií sa zvyčajne pripravujú zmiešaním zásobného roztoku testovanej chemikálie s rastovým médiom a inokulom.
Initial biomass concentration
Zásobné roztoky sa spravidla pripravujú rozpustením chemikálie v testovacom médiu.
The initial biomass in the test cultures must be the same in all test cultures and sufficiently low to allow exponential growth throughout the incubation period without risk of nutrient depletion.
Rozpúšťadlá, napríklad acetón, t-butyl, alkohol a dimetylformamid, sa môžu použiť ako nosiče na pridávanie chemikálií s nízkou rozpustnosťou vo vode do testovacieho média (2) (3).
The initial biomass should not exceed 0,5 mg/l as dry weight.
Koncentrácia rozpúšťadla by nemala byť vyššia ako 100 μl/l a rovnaká koncentrácia rozpúšťadla by sa mala pridať do všetkých kultúr (vrátane kontrolných) v testovacej sérii.
The following initial cell concentrations are recommended:
Inkubácia
5 × 103 – 104 cells/ml
Testovacie nádoby sa uzavrú zátkami prepúšťajúcimi vzduch.
2-5 × 103 cells/ml
Nádoby sa pretrepú a umiestnia do zariadenia na kultiváciu.
104 cells/ml
Počas testu je potrebné ponechať riasy v suspenzii a umožniť prenos CO2.
5 × 104 – 105 cells/ml
Preto je potrebné nepretržité trepanie alebo miešanie.
Concentrations of test chemical
Kultúry by sa mali udržiavať pri teplote v rozsahu od 21 do 24 °C, s kontrolovanou presnosťou ± 2 °C.
The concentration range in which effects are likely to occur may be determined on the basis of results from range-finding tests.
Pre iné druhy ako tie, ktoré sú uvedené v dodatku 2, napríklad tropické druhy, môžu byť vhodné vyššie teploty za predpokladu, že je možné splniť kritériá platnosti.
For the final definitive test at least five concentrations, arranged in a geometric series with a factor not exceeding 3.2, should be selected.
Odporúča sa umiestniť banky náhodne a denne ich v inkubátore premiestňovať.
For test chemicals showing a flat concentration response curve a higher factor may be justified.
Hodnota pH kontrolného média by sa nemala zvýšiť počas testu o viac ako 1,5 jednotky.
The concentration series should preferably cover the range causing 5-75 % inhibition of algal growth rate.
Pre kovy a chemikálie, ktoré sa čiastočne ionizujú pri pH blízkom testovacej hodnote pH, môže byť potrebné limitovať kolísanie pH, aby sa získali reprodukovateľné a jednoznačné výsledky.
Replicates and controls
Odchýlka < 0,5 pH je technicky možná a je možné ju dosiahnuť zabezpečením prísunu dostatočného množstva CO2 z okolitého vzduchu do testovacieho roztoku napr. zvýšením rýchlosti trepania.
The test design should include three replicates at each test concentration.
Ďalšou možnosťou je znížiť spotrebu CO2 znížením počiatočného množstva biomasy alebo skrátením dĺžky testu.
If determination of the NOEC is not required, the test design may be altered to increase the number of concentrations and reduce the number of replicates per concentration.
Priestor, kde sa kultúry inkubujú, by mal byť sústavne osvetlený rovnomerným fluorescenčným osvetlením napr. studeným bielym svetlom alebo denným svetlom.
The number of control replicates must be at least three, and ideally should be twice the number of replicates used for each test concentration.
Kmene rias a siníc majú odlišné požiadavky na svetlo.
A separate set of test solutions may be prepared for analytical determinations of test chemical concentrations (see paragraphs 36 and 38).
Je potrebné zvoliť takú svietivosť, ktorá vyhovuje použitému testovaciemu organizmu.
When a solvent is used to solubilise the test chemical, additional controls containing the solvent at the same concentration as used in the test cultures must be included in the test design.
Pre odporúčané druhy zelených rias sa svietivosť zvolí na úrovni testovacích roztokov z rozsahu 60 – 120 · μE m– 2 s– 1 pri meraní vo fotosynteticky účinnom rozsahu vlnovej dĺžky 400 – 700 nm s použitím vhodného receptora.
Preparation of inoculum culture
Niektoré druhy, najmä druh Anabaena flos-aquae, rastú dobre pri nižšej svietivosti a pri vysokej sa môžu poškodiť.
In order to adapt the test alga to the test conditions and ensure that the algae are in the exponential growth phase when used to inoculate the test solutions, an inoculum culture in the test medium is prepared 2-4 days before start of the test.
Pre takéto druhy by sa mala zvoliť priemerná svietivosť v rozsahu od 40 do 60 μE m– 2 s– 1.
The algal biomass should be adjusted in order to allow exponential growth to prevail in the inoculum culture until the test starts.
Dĺžka trvania testu
Incubate the inoculum culture under the same conditions as the test cultures.
Test trvá spravidla 72 hodín.
Measure the increase in biomass in the inoculum culture to ensure that growth is within the normal range for the test strain under the culturing conditions.
Môže sa však skrátiť alebo predĺžiť za predpokladu, že budú splnené všetky kritériá platnosti uvedené v bode 11.
An example of the procedure for algal culturing is described in Appendix 4.
Merania a analytické stanovenia
To avoid synchronous cell divisions during the test a second propagation step of the inoculum culture may be required.
Počas trvania testu sa v každej banke minimálne jedenkrát za deň stanoví množstvo biomasy rias.
Preparation of test solutions
Ak sa merania vykonávajú s malými objemami odobratými z testovacieho roztoku pipetou, netreba ich nahradiť.
All test solutions must contain the same concentrations of growth medium and initial biomass of test alga.
Meranie množstva biomasy sa vykonáva manuálne počítaním buniek pomocou mikroskopu alebo elektronickým počítadlom častíc (ako počet buniek a/alebo biologický objem).
Test solutions of the chosen concentrations are usually prepared by mixing a stock solution of the test chemical with growth medium and inoculum culture.
Môžu sa použiť alternatívne techniky napr. prietoková cytometria, chlorofylová fluorescencia in vitro alebo in vivo (5) (6), alebo optická hustota, ak je možné na množstve biomasy vyskytujúcom sa v teste preukázať uspokojivú koreláciu s biomasou.
Stock solutions are normally prepared by dissolving the chemical in test medium.
Meranie pH roztokov sa vykonáva na začiatku a na konci testu.
Solvents, e.g. acetone, t-butyl alcohol and dimethyl formamide, may be used as carriers to add chemicals of low water solubility to the test medium (2)(3).
Ak je k dispozícii analytický postup na stanovenie testovanej chemikálie v použitom rozsahu koncentrácie, testovacie roztoky by sa mali analyzovať, aby sa overili počiatočné koncentrácie a zachovávanie expozičných koncentrácií počas testu.
The concentration of solvent should not exceed 100 μl/l, and the same concentration of solvent should be added to all cultures (including controls) in the test series.
Analýza koncentrácie testovanej chemikálie na začiatku a na konci testu nízkej a vysokej testovacej koncentrácie a koncentrácie okolo očakávanej hodnoty EC50 môže byť dostatočná, ak je pravdepodobné, že expozičné koncentrácie sa budú odlišovať o menej ako 20 % nominálnych hodnôt počas testu.
Incubation
Analýza všetkých testovacích koncentrácií na začiatku a na konci testu sa odporúča vtedy, al nie je pravdepodobné, že sa koncentrácie udržia v rozsahu od 80 do 120 % nominálnej koncentrácie.
Cap the test vessels with air-permeable stoppers.
Pre prchavé, nestabilné alebo silne adsorbujúce testované chemikálie sa odporúča ďalší odber vzoriek na analýzu v 24 hodinových intervaloch počas expozície, aby sa lepšie stanovil úbytok testovanej chemikálie.
The vessels are shaken and placed in the culturing apparatus.
Pre tieto chemické látky môžu byť potrebné ďalšie replikáty.
During the test it is necessary to keep the algae in suspension and to facilitate transfer of CO2.
Vo všetkých prípadoch je potrebné stanoviť koncentrácie testovanej chemikálie iba v jednej replikovanej nádobe na každú testovaciu koncentráciu (alebo na obsahy nádob rozdelené podľa replikátu).