natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Stock solutions — Spiked water
Kŕmenie lariev
a.
Larvy rodu Chironomus sa kŕmia vločkovým krmivom pre ryby (TetraMin®, TetraPhyll® alebo inou podobnou chránenou značkou krmiva pre ryby) v približnom množstve 250 mg na nádobu na deň.
Test concentrations are calculated on the basis of water column concentrations, i.e. the water overlying the sediment.
Krmivo sa môže podávať ako suchý rozomletý prášok alebo ako suspenzia vo vode:
Test solutions of the chosen concentrations are usually prepared by dilution of a stock solution.
1,0 g vločkového krmiva sa pridá do 20 ml riediacej vody a premieša sa, aby sa získala homogénna zmes.
Stock solutions should preferably be prepared by dissolving the test chemical in test water.
Tento prípravok sa môže podávať v množstve približne 5 ml na nádobu na deň (pred použitím pretrepať).
The use of solvents or dispersants may be required in some cases in order to produce a suitably concentrated stock solution.
Staršie larvy môžu dostávať viac.
Examples of suitable solvents are acetone, ethylene glycol monoethyl ether, ethylene glycol dimethylether, dimethylformamide and triethylene glycol.
Kŕmenie sa upraví podľa kvality vody.
Dispersants which may be used are Cremophor RH40, Tween 80, methylcellulose 0,01 % and HCO-40.
Ak sa kultivačné médium zakalí, kŕmenie je potrebné obmedziť.
The solubilising agent concentration in the final test medium should be minimal (i.e. ≤ 0,1 ml/l) and should be the same in all treatments.
Prídavky do krmiva je potrebné starostlivo monitorovať.
When a solubilising agent is used, it should have no significant effects on survival as revealed by a solvent control in comparison with a negative (water) control.
Nedostatok potravy spôsobí, že larvy sa budú presúvať k vodnému stĺpcu a prebytok potravy spôsobí zvýšenie činnosti mikróbov a zníženie koncentrácie kyslíka.
However, every effort should be made to avoid the use of such materials.
V obidvoch prípadoch môže dôjsť k zníženiu rýchlosti rastu.
Stock solutions — Spiked sediment
Pri založení nových kultivačných nádob sa môžu pridať aj bunky niektorých zelených rias (napr. Scenedesmus subspicatus, Chlorella vulgaris).
b.
Kŕmenie vykuklených dospelých jedincov
Spiked sediments of the chosen concentration are usually prepared by addition of a solution of the test chemical directly to the sediment.
Z niektorých pokusov vyplýva, že ako potrava pre vykuklené dospelé jedince môže slúžiť vatový tampón napustený nasýteným sacharózovým roztokom.
A stock solution of the test chemical dissolved in deionised water is mixed with the formulated sediment by rolling mill, feed mixer or hand mixing.
Pri teplote 20 ± 2 °C sa dospelé jedince začnú vykuklovať z nádob na chov lariev po približne 13 – 15 dňoch.
If poorly soluble in water, the test chemical can be dissolved in as small a volume as possible of a suitable organic solvent (e.g. hexane, acetone or chloroform).
Samčekovia sa ľahko rozpoznajú podľa obrvených tykadiel a tenkého tela.
This solution is then mixed with 10 g of fine quartz sand for each test vessel.
Vaječné hmoty
The solvent is allowed to evaporate and it should be totally removed from sand;
Keď sú v chovnej klietke prítomné dospelé jedince, vo všetkých nádobách na chov lariev je potrebné trikrát do týždňa kontrolovať kladenie želatínových vaječných hmôt.
the sand is then mixed with the suitable amount of sediment.
Ak sú vaječné hmoty prítomné, opatrne sa odoberú.
Only agents which volatilise readily can be used to solubilise, disperse or emulsify the test chemical.
Mali by sa preniesť na malú misku so vzorkou kultivačnej vody.
It should be born in mind that the sand provided by the test chemical and sand mixture, should be taken into account when preparing the sediment (i.e. the sediment should thus be prepared with less sand).
Vaječné hmoty sa použijú na založenie nových kultivačných nádob (napr. dve až štyri vaječné hmoty na nádobu) alebo sa použijú v testoch toxicity.
If necessary, subsamples can be analysed to determine degree of homogeneity.
Larvy prvého instaru by sa mali vyliahnuť po dvoch až troch dňoch.
The test design relates to the selection of the number and spacing of the test concentrations, the number of vessels at each concentration, the number of larvae per vessel, the number of crystallising dishes and breeding cages.
Založenie nových kultivačných nádob
Designs for ECx, NOEC and a limit test are described below.
Po vytvorení kultúr by malo byť možné založiť novú nádobu na kultiváciu lariev každý týždeň alebo menej často v závislosti od testovacích požiadaviek, pričom staršie nádoby sa po vykuklení dospelých pakomárov odstránia.
Design for analysis by regression
Týmto spôsobom sa pri minimálnom riadení zabezpečí pravidelné dopĺňanie dospelých jedincov.
The effect concentration (ECx) and the concentration range over which the effect of the test chemical is of interest, should be spanned by the test, such that the endpoint is not extrapolated outside the bounds of the data generated.
Príprava testovacích roztokov ‚M4‘ a ‚M7‘
Extrapolation much below the lowest or above the highest concentration should be avoided.
Elendt (1990) opísal médium ‚M4‘.
A preliminary range-finding test according to Test Methods C.27 or C.28 may be helpful for selecting a suitable range of test concentrations.
Médium ‚M7‘ sa pripravuje ako médium ‚M4‘ s výnimkou látok uvedených v tabuľke 1, ktorých koncentrácie v médiu ‚M7‘ sú štyrikrát nižšie ako v médiu ‚M4‘.
For an ECx approach, at least five concentrations and eight replicates for each concentration are required.
Testovací roztok by sa nemal pripraviť podľa Elendta a Biasa (1990), lebo uvedené koncentrácie NaSiO3, 5H2O, NaNO3, KH2PO4 a K2HPO4 na prípravu zásobných roztokov nie sú vhodné.
For each concentration two breeding cages should be used (A and B).
Príprava média ‚M7‘
The eight replicates are divided into two groups of four replicates to serve each breeding cage.
Každý zásobný roztok (I) sa pripraví jednotlivo a kombinovaný zásobný roztok (II) sa pripraví z týchto zásobných roztokov (I) (pozri tabuľku 1).
This merger of replicates is necessary due to the number of midges needed in the cage for sound reproduction assessments.
Na prípravu média ‚M7‘ sa 50 ml z kombinovaného zásobného roztoku (II) a množstvá každého makronutričného zásobného roztoku uvedené v tabuľke 2 doplnia do 1 litra deionizovanej vody.
However, the 2nd generation has eight replicates again, which are initiated from the exposed populations in the breeding cages.
Vitamínový zásobný roztok sa pripraví pridaním troch vitamínov do deionizovanej vody, ako je uvedené v tabuľke 3 a krátko pred použitím sa do konečného média ‚M7‘ pridá 0,1 ml kombinovaného vitamínového zásobného roztoku.
The factor between concentrations should not be greater than two (an exception could be made in cases when the dose response curve has a shallow slope).
Vitamínový zásobný roztok sa skladuje zmrazený v malých alikvotných častiach.
The number of replicates at each treatment can be reduced to six (three for each breeding case) if the number of test concentrations with different responses is increased.
Médium sa prevzdušňuje a stabilizuje.
Increasing the number of replicates or reducing the size of the test concentration intervals tends to lead to narrower confidence intervals around the ECX.
Zásobné roztoky stopových prvkov pre médiá M4 a M7
Design for estimation of a NOEC
Zásobné roztoky (I)
For a NOEC approach, five test concentrations with at least eight replicates (4 for each breeding cage, A and B) should be used and the factor between concentrations should not be greater than two.
Množstvo (mg) doplnené do 1 litra deionizovanej vody
The number of replicates should be sufficient to ensure adequate statistical power to detect a 20 % difference from the control at the 5 % level of significance (α = 0,05).
Príprava kombinovaného zásobného roztoku (II):
For the development rate, fecundity and fertility an analysis of variance (ANOVA) is usually appropriate, followed by Dunnett's test or Williams' test (22-25).
zmiešajte tieto množstvá (ml) zásobných roztokov (I) a doplňte do 1 litra deionizovanej vody
For the emergence ratio and sex ratio the Cochran-Armitage, Fisher's exact (with Bonferroni correction), or Mantel-Haentzal tests may be appropriate.
Konečné koncentrácie v testovacích roztokoch (mg/l)
A limit test may be performed (one test concentration and control(s)) if no effects are observed in the optional preliminary range-finding test up to a maximum concentration.
MnCl2 · 4H2O [1]
The purpose of the limit test is to indicate that any toxic effects of the test chemical are found at levels greater than the limit concentration tested.
SrCl2 · 6H2O [1]
For water, 100 mg/l and for sediment 1000 mg/kg (dry weight) are suggested.
MoO4 · 2H2O [1]
Usually, at least eight replicates for both the treatment and control are necessary.
CuCl2 · 2H2O [1]
Adequate statistical power to detect a 20 % difference from the control at the 5 % level of significance (α = 0,05) should be demonstrated.
CaCl2 · 6H2O
With metric responses (e.g. development rate), the t-test is a suitable statistical method if data meet the requirements of this test (normality, homogeneous variances).
EDTA · 2H2O [1] [2]
An unequal-variance t-test or a non-parametric test, such as the Wilcoxon-Mann-Whitney test may be used, if these requirements are not fulfilled.
FeSO4 · 7H2O [1] [2]
With the emergence ratio, Fisher's exact test is appropriate.
Makronutričné zásobné roztoky pre médiá M4 a M7
Preparation of the water-sediment system (water spiking)
Množstvo doplnené do 1 litra deionizovanej vody
a.
Množstvo pridaných makronutričných zásobných roztokov pri príprave médií M4 a M7
Formulated sediment (see paragraphs 13-14 and Appendix 3) is added to each test vessel and crystallising dish to form a layer of at least 1,5 cm (for the crystallising dish it may be somewhat lower) but maximally 3 cm.
Konečné koncentrácie v testovacích roztokoch M4 a M7
Water (see paragraph 15) is added so that the ratio of the depth of the sediment layer and the depth of the water does not exceed 1:4.
Vitamínový zásobný roztok pre médiá M4 a M7
After preparation of the test vessels the sediment-water system should be left under gentle aeration for approximately seven days prior to addition of the first instar larvae of the 1st or 2nd generation (see paragraph 14 and Appendix 3).
Všetky tri vitamínové roztoky sa skombinujú, aby sa vytvoril jeden vitamínový zásobný roztok.
The sediment-water system of the crystallising dishes is not aerated during the test, since they do not need to support larval survival (before hatching the egg ropes are already collected).
Množstvo pridaného vitamínového zásobného roztoku pri príprave médií M4 a M7
To avoid separation of sediment ingredients and re-suspension of fine material during addition of test water in the water column, the sediment can be covered with a plastic disc while water is poured onto it.
Tiamín hydrochlorid
The disc is removed immediately afterwards.
Kyanokobalamín (B12)
Other devices may also be appropriate.
Biotín
Preparation of the water-sediment system (spiked sediment)
Tieto látky sa líšia medzi médiami M4 a M7, ako je uvedené vyššie.
b.
Tieto roztoky sa pripravia jednotlivo, potom sa zlejú dokopy a okamžite sa autoklávujú.
The spiked sediments prepared according to paragraph 16b are placed in the vessels and crystallising dish and overlying water is added to produce a sediment-water volume ratio of 1:4.
Príprava umelo pripraveného sedimentu
The depth of the sediment layer should be in the range of 1,5 to 3 cm (it may be somewhat lower for the crystallising dish).
ZLOŽENIE SEDIMENTU
To avoid separation of sediment ingredients and re-suspension of fine material during addition of test water in the water column, the sediment can be covered with a plastic disc while water is poured onto it, and the disc removed immediately afterwards.
Zloženie umelo pripraveného sedimentu by malo byť takéto:
Appropriate equilibration time is sediment and chemical specific, and can be in the order of hours to days and in rare cases up to five weeks.
4 – 5
As this would leave time for degradation of many chemicals, equilibrium is not awaited but an equilibration period of 48 hours is recommended.
> 50 % častíc by malo mať veľkosť v rozsahu 50 – 200 μm
However, when the degradation half-life of the chemical in sediment is known to be long (see paragraph 8), the equilibration time may be extended.
CaCO3, rozomletý na prach, chemicky čistý
At the end of this further equilibration period, the concentration of the test chemical should be measured in the overlying water, the pore water and the sediment, at least at the highest concentration and a lower one (see paragraph 38).
0,05 – 0,1
These analytical determinations of the test chemical allow for calculation of a mass balance and expression of results based on measured concentrations.
Vodivosť ≤ 10 μS/cm
Test vessels should be covered (e.g. by glass plates).
PRÍPRAVA
If necessary, during the study the water levels may be topped up to the original volume in order to compensate for evaporation.
Suspenzia sa aspoň na dva dni uvedie do podmienok jemným premiešavaním pri teplote 20 ± 2 °C, aby sa stabilizovala hodnota pH a vytvorila stabilná mikrobiálna zložka.
This should be performed using distilled or deionised water to prevent any build-up of salts.
Opäť sa zmeria pH, ktoré by malo byť na úrovni 6,0 ± 0,5.
Crystallising dishes in the breeding cages are not covered and may, but do not need to be adjusted to compensate for water loss during the test period, since the egg ropes are only in contact with the water for about one day and the dishes are only used during a short phase of the test.
Znova sa zmeria pH konečnej zmesi a podľa potreby sa pomocou CaCO3 upraví na 6,5 – 7,5.
Addition of test organisms
Potom sa odporúča, aby sa pred použitím v teste toxicity pri pakomároch umelo pripravený sediment uviedol na sedem dní do rovnakých podmienok aké budú prevládať v nasledujúcom teste.
Four to five days before adding the first instar larvae for the 1st generation, egg masses should be taken from the culture and placed in small vessels in culture medium.
SKLADOVANIE
Aged medium from the stock culture or freshly prepared medium may be used.
Suché zložky na prípravu umelého sedimentu sa môžu skladovať na suchom a chladnom mieste pri izbovej teplote.
In any case, a small amount of food, e.g. a few droplets of filtrate from a finely ground suspension of flaked fish food, should be added to the culture medium (see Appendix 2).
Umelo pripravený (mokrý) sediment by sa pred použitím v teste nemal skladovať.
Only freshly laid egg masses should be used.
Mal by sa použiť ihneď po sedemdňovom období uvádzania do podmienok, ktorým sa končí jeho príprava.
Normally, the larvae begin to hatch a couple of days after the eggs are laid (2 to 3 days for C. riparius at 20 °C and 1 to 4 days for C. dilutus at 23 °C and C. yoshimatsui at 25 °C) and larval growth occurs in four instars, each of 4-8 days duration.
OECD (1984), Earthworm acute Toxicity Test, Test Guideline No.
First instar larvae (maximum 48 h post hatching) should be used in the test.
207, Guidelines for the Testing of Chemicals, OECD, Paríž.
The instar stage of larvae can potentially be checked using head capsule width (7).
10 – 20.
Twenty first instar larvae for the 1st generation are allocated randomly to each test vessel containing the sediment-water system, using a blunt pipette.
Chemické charakteristiky prijateľnej riediacej vody
In the spiked sediment design, exposure starts with the addition of the larvae.
Tvrdosť ako CaCO3
Spiking the overlying water
Treba však poznamenať, že ak existuje podozrenie na interakciu medzi iónmi tvrdosti a testovanou chemikáliou, mala by sa použiť voda s nižšou tvrdosťou (a v takom prípade sa teda nemá použiť Elendtovo médium M4).
Twenty-four hours after adding the first instar larvae for the 1st generation, the test chemical is spiked into the overlying water column, and slight aeration is again supplied (for possible amendments of the test design, see paragraph 7).
Usmernenia na vykonanie testu
Small volumes of the test chemical stock solutions are applied below the surface of the water using a pipette.
Príklad chovnej klietky:
The overlying water should then be mixed with care not to disturb the sediment.
A gáza na vrchu a aspoň na jednej strane klietky (veľkosť ôk približne 1 mm)
In the spiked water design, exposure starts with the spiking of the water (i.e. one day after addition of the larvae).
B otvor na umiestnenie vykuklených dospelých jedincov do chovnej klietky a na odstránenie nakladených šnúr vajíčok z kryštalizačných misiek (nie sú zobrazené na tomto obrázku)
Collecting emerged adults
C minimálna veľkosť chovnej klietky – dĺžka 30 cm, výška 30 cm, šírka 30 cm
Emerged midges of the 1st generation are collected at least once, but preferably twice a day (see point 36) from the test vessels using an aspirator, exhauster or similar device (see Appendix 5).
Príklad testovacej nádoby:
Special care should be taken not to damage the adults.
A Pasteurova pipeta na prívod vzduchu do nadložnej vody
The collected midges from four test vessels within one treatment are released into a breeding cage to which they had been previously assigned.
B sklenené veko na zabránenie úniku vykuklených pakomárov
At the day of first (male) emergence, crystallising dishes are spiked by pipetting a small volume of the test chemical stock solution below the water surface (spiked water design).
C úroveň hladiny vody
The concentration of test chemical in the crystallising dish is nominally the same as in the treatment vessels which are assigned to that specific breeding cage.
D testovacia nádoba (sklenená kadička s objemom minimálne 600 ml)
For the spiked sediment design, the crystallising dishes are prepared at around day 11 after the start of the exposure (i.e. addition of the 1st generation larvae) so that they can equilibrate for about 48 hours before the first egg ropes are produced.
E vrstva sedimentu
Egg ropes are collected from the crystallising dish in the breeding cage using tweezers or a blunt pipette.
Príklad exhaustora na zachytenie dospelých pakomárov (šípky označujú smer prúdenia vzduchu):
Each egg rope is placed into a vessel containing culture medium from the crystallising dish it was collected from (e.g. a well of a 12-well micro-plate together with at least 2,5 ml of medium).
Na vnútornej strane je otvor sklenenej trubičky (A) pokrytý bavlnou a gázou (veľkosť ôk približne 1 mm), aby sa pakomáre nasávané do exhaustora nepoškodili.
The vessels with the egg ropes are covered with a lid to prevent significant evaporation.
C priehľadná nádoba (plastová alebo sklenená, dĺžka približne 15 cm) na chytené pakomáre
Egg ropes are kept for observation for at least six days after they have been produced so that they can be classified as fertile or infertile.
D zátka z vulkanizovaného kaučuku perforovaná trubičkou (E).
For starting the 2nd generation, at least three but preferably six fertile egg ropes are selected from each breeding cage and together with some food allowed to hatch.
Na účely vypustenia pakomárov do chovnej klietky sa zátka D uvoľní z nádoby C.
These egg ropes should have been produced at the peak of oviposition, which normally occurs around test day 19 in the controls.
E trubička (plastová alebo sklenená, vnútorný priemer približne 8 mm) na zbieranie dospelých pakomárov z nádoby
Ideally, the 2nd generation of all treatments is initiated on the same day, but due to chemical related effects on larval development, this may not always be possible.
Schematické zobrazenie testu životného cyklu:
In such a case, the higher concentrations may be initiated later than the lower treatments and the (solvent) control.
A 1. generácia – testovacie nádoby obsahujúce systém sediment – voda, osem replikátov, 20 lariev v prvom instare na nádobu
a.
B štyri testovacie nádoby na každú chovnú klietku a a B
In the spiked water design, the sediment-water system for the 2nd generation is prepared by spiking the test chemical into the overlying water column ca.
C chovné klietky (A a B) na rojenie, párenie a kladenie vajíčok
1 hour before adding the first instar larvae to the test vessels.
D kryštalizačné misky na kladenie šnúr vajíčok
In the spiked sediment design, the exposure vessels containing the sediment-water system for the 2nd generation are prepared in the same way as for the 1st generation.
Táto testovacia metóda je rovnocenná s usmernením OECD na vykonávanie testov (TG) 234 (2011).
Twenty first instar larvae (maximum 48 h post hatching) of the 2nd generation are allocated randomly to each test vessel containing the spiked sediment-water system, using a blunt pipette.
Je založená na rozhodnutí z roku 1998 vypracovať nové alebo aktualizovať existujúce testovacie metódy na skríning a testovanie potenciálnych endokrinných disruptorov.
Aeration of the water should be stopped while adding the first instar larvae to the test vessels and remain so for another 24 hours after addition of the larvae.
Test pohlavného vývinu rýb (FSDT) bol identifikovaný ako sľubná testovacia metóda zahŕňajúca citlivé vývinové štádium rýb reagujúce na chemikálie podobné estrogénu a androgénu.
According to the test design used (see paragraphs 19 and 20), the number of larvae used per concentration is at least 120 (6 replicates per concentration) for the ECX approach and 160 for the NOEC approach (8 replicates per concentration).
Testovacia metóda prešla medzilaboratórnou validáciou od roku 2006 do roku 2010, v ktorej medaka japonská (Oryzias latipes), dánio pruhované (Danio rerio) a pichľavka sivá (Gasterosteus aculeatus) boli validované a čerebľa potočná (Pimephales promelas) bola validovaná čiastočne (41) (42) (43).
It is necessary to feed the larvae in the test vessels, preferably daily or at least three times per week.
Tento protokol zahŕňa medaku japonskú, pichľavku sivú a dánio pruhované.
Fish-food (a suspension in water or finely ground food, e.g. Tetra-Min or Tetra-Phyll; see details in Appendix 2) of 0,25 - 0,5 mg (0,35 - 0,5 mg for C. yoshimatsui) per larvae per day is an adequate amount of food for young larvae during the first 10 days of their development.
Protokol je v zásade rozšírením usmernenia OECD TG 210 na test toxicity v ranom štádiu života rýb (1), v ktorom expozícia pokračuje, kým ryby nedosiahnu pohlavnú diferenciáciu, t. j. približne 60 dní po vyliahnutí (dph) pre medaku japonskú, pichľavku sivú a dánio pruhované (v prípade iných druhov, ktoré budú validované v budúcnosti, sa obdobie expozície môže skrátiť alebo predĺžiť) a boli pridané sledované parametre endokrinnej citlivosti.
Slightly more food may be necessary for older larvae:
Testom FSDT sa vyhodnocujú účinky a potenciálne nepriaznivé dôsledky údajných endokrinných disruptorov (napr. estrogénov androgénov a inhibítorov steroidogenézy) na pohlavný vývin v skorých štádiách života.
0,5 - 1,0 mg per larvae per day should be sufficient for the rest of the test.
Kombinácia dvoch hlavných endokrinných sledovaných parametrov, teda koncentrácie vitellogenínu (VTG) a fenotypového pomeru pohlaví, umožňuje na základe testu stanoviť spôsob pôsobenia testovanej chemikálie.
The food ration should be reduced in all treatments and control if fungal growth is seen or if mortality is observed in controls.
Vzhľadom na zmenu fenotypového pomeru pohlaví významného pre celú populáciu možno test FSDT použiť na posúdenie nebezpečenstva a rizika.
If fungal development cannot be stopped the test should be repeated.
Ak sa však test použije na posúdenie nebezpečenstva alebo rizika, pichľavka sivá by sa nemala používať, lebo z doteraz získaných validačných údajov vyplýva, že pri tomto druhu nie sú zmeny fenotypového pomeru pohlaví v dôsledku testovanej chemikálie časté.
The toxicological relevance of exposure via ingestion is generally higher in chemicals with a high affinity for organic carbon or chemicals covalently binding to the sediment.
Protokol je založený na expozícii rýb chemikáliám vo vode počas obdobia citlivého na pohlavný vývin, v ktorom sa očakáva, že ryby budú najcitlivejšie na účinky endokrinných disruptorov, ktoré majú vplyv na pohlavný vývin.