natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Hence, when testing chemicals with such properties, the amount of food necessary to ensure survival and natural growth of the larvae may be added to the formulated sediment before the stabilisation period, depending on the regulatory demand.
Ako ukazovatele vývinových odchýlok súvisiacich s endokrinnou činnosťou sa merajú dva hlavné sledované parametre: koncentrácie VTG a pomery pohlaví (podiely jednotlivých pohlaví), ktoré sa stanovujú histologickým vyšetrením gonád.
To prevent deterioration of the water quality, plant material should be used instead of fish food, e.g. addition of 0,5 % (dry weight) finely ground leaves of stinging nettle (Urtica dioica), mulberry (Morus alba), white clover (Trifolium repens), spinach (Spinacia oleracea) or other plant material (Cerophyl or α-cellulose).
Histopatologické vyšetrenie gonád (hodnotenie oocytov a spermatogénnych buniek a stanovenie ich štádia) je voliteľné.
Addition of the complete ration of an organic food source to the sediment before spiking is not trivial with respect to water quality and biological performance (21), nor a standardised method, but recent studies provide indications that this method works (19) (26).
Ak to je možné, stanoví sa aj genetické pohlavie (napr. pri medake japonskej a pichľavke sivej).
Adult midges in the breeding cage need no feeding normally, but fecundity and fertility are enhanced when a cotton wool pad soaked in a saturated sucrose solution is offered as a food source for emerged adults (34).
Prítomnosť genetického markera pohlavia je značnou výhodou, lebo zvyšuje spoľahlivosť štatistiky pomeru pohlaví a umožňuje zistiť jednotlivé prípady fenotypovej zmeny pohlavia.
Gentle aeration of the overlying water in the test vessels is supplied 24 hours after addition of the first instar larvae of both generations and is continued throughout the test (care should be taken that the dissolved oxygen concentration does not fall below 60 % of ASV).
Medzi ďalšie vrcholové sledované parametre, ktoré by sa mali merať, patrí miera liahnutia, prežívanie, dĺžka a telesná hmotnosť.
Aeration is provided through a glass Pasteur pipette of which the outlet is fixed 2-3 cm above the sediment layer giving a few bubbles/sec.
Testovaciu metódu možno prispôsobiť aj iným druhom ako tie, ktoré sú uvedené vyššie, za predpokladu, že tieto druhy prejdú validáciou rovnocennou validácii vykonanej pre medaku japonskú, pichľavku sivú a dánio pruhované, že kontrolné ryby sú na konci testu pohlavne diferencované, že hladiny VTG sú dostatočne vysoké na to, aby sa odhalili výrazné odchýlky súvisiace s chemikáliami a že citlivosť testovacieho systému sa stanoví pomocou referenčných chemikálií s endokrinným pôsobením [(anti)-estrogény, (anti)-androgény, inhibítory aromatázy atď.].
When testing volatile chemicals, consideration should be given not to aerate the sediment-water system, while at the same time the validity criterion of minimal 60 % ASV (paragraph 10) should be fulfilled.
Všetky validačné správy obsahujúce údaje z testu FSDT s použitím iných druhov by navyše mala preskúmať organizácia OECD, pričom výsledok validácie by sa mal považovať za uspokojivý.
Further guidance is provided in (16).
Úvodné úvahy a obmedzenia
The test with C. riparius is conducted at a constant temperature of 20 °C (± 2 °C).
VTG sa normálne tvorí v pečeni samičiek oviparných stavovcov v reakcii na endogénny estrogén v krvnom obehu (2).
For C. dilutus and C. yoshimatsui, recommended temperatures are 23 °C and 25 °C (± 2 °C), respectively.
Pri nedospelých rybách a dospelých samčekoch rýb je syntéza VTG veľmi obmedzená, ale zistiteľná, lebo nemajú dostatok estrogénu v krvnom obehu.
A 16 hours photoperiod is used and the light intensity should be 500 to 1000 lux.
Pečeň je však schopná syntetizovať a vylučovať VTG v reakcii na exogénnu estrogénovú stimuláciu (3) (4) (5).
For the breeding cages an additional one hour dawn and dusk phase may be included.
Meranie VTG slúži na zistenie chemikálií s estrogénnym anti-estrogénnym a androgénnym spôsobom účinku a chemikálií, ktoré narúšajú steroidogenézu ako sú napríklad inhibítory aromatázy.
Exposure duration
Estrogénne chemikálie možno zistiť meraním indukcie tvorby VTG pri samčekoch rýb, čo je v partnersky preskúmanej vedeckej literatúre dostatočne zdokumentované.
Spiked water design:
Indukcia tvorby VTG sa preukázala aj po expozícii aromatizovateľným androgénom (6) (7).
The exposure period of the 1st generation starts when the test chemical is spiked into the overlying water of the test vessels (which is one day after insertion of the larvae — for possible amendments of the exposure design, see paragraph 7).
Zníženie hladiny estrogénu v krvnom obehu pri samičkách, napríklad prostredníctvom inhibície aromatázy, ktorá konvertuje endogénny androgén na prirodzený estrogén 17β-estradiol, spôsobuje pokles koncentrácie VTG, čo sa používa na zisťovanie chemikálií s vlastnosťami inhibujúcimi aromatázu alebo inhibítorov steroidogenézy vo všeobecnosti (33).
Exposure of the 2nd larval generation starts immediately, since they are inserted into a sediment-water system that has been already spiked.
Biologický význam reakcie VTG po estrogénnej inhibícii aromatázy je známy a dobre zdokumentovaný (8) (9).
For C. dilutus, maximum exposure durations are 64 and 65 days, for the 1st and 2nd generation, respectively.
Týka sa to dánia pruhovaného, pichľavky sivej a medaky japonskej ako aj čiastočne validovaného druhu čerebľa potočná.
The total duration is approximately 100 days.
Sú dostupné metódy enzýmového imunosorbentového stanovenia (ELISA) špecifické pre jednotlivé druhy využívajúce imunochémiu na kvantifikáciu VTG (5) (10) (11) (12) (13) (14) (15) (16).
Spiked sediment design:
V prípade medaky japonskej a dánia pruhovaného existuje dobrá korelácia medzi nameranou hodnotou VTG vo vzorkách krvnej plazmy, pečene a homogenátu, hoci homogenáty mávajú mierne nižšie hodnoty ako plazma (17) (18) (19).
exposure starts with the addition of the larvae and is maximum 28 days for both generations for C. riparius and C. yoshimatsui and maximum 65 days for both generations for C. dilutus.
Dodatok 5 obsahuje odporúčané postupy na odber vzoriek na analýzu VTG.
Emergence
Zmena vo fenotypovom pomere pohlaví (podiely pohlaví) je sledovaný parameter, ktorý odzrkadľuje zmenu pohlavia.
Test vessels of both generations should be observed at least three times per week to make visual assessment of any abnormal behaviour of the larvae (e.g. leaving sediment, unusual swimming), compared to the control.
Pohlavie je definované ako samičie, samčie, intersexuálne (oocyty ako aj spermatogénne bunky v jednej gonáde) alebo nediferencované, pričom pri jednotlivých rybách sa stanovuje histologickým vyšetrením gonád.
During the period of emergence, which starts about 12 days after insertion of the larvae for C. riparius and C. yoshimatsui (after 20 days for C. dilutus), emerged midges are counted and sexed at least once, but preferably twice a day (early morning and late afternoon).
Usmernenie je uvedené v dodatku 7 a v usmerňovacom dokumente OECD na diagnózu endokrinnej histopatológie gonád rýb (22).
After identification, the midges of the 1st generation are carefully removed from the vessels and transferred to a breeding cage.
Genetické pohlavie sa skúma prostredníctvom genetických markerov ak v danom druhu rýb existujú.
Midges of the 2nd generation are removed and killed after identification.
V prípade medaky japonskej možno samičie gény XX alebo samčie gény XY zistiť polymerázovou reťazovou reakciou (PCR), prípadne možno analyzovať gén domény DM spojený s chromozómom Y (DMY, negatívny alebo pozitívny) podľa opisu v odkazoch (23) (24).
Any egg ropes deposited in the test vessels of the 1st generation should be collected individually and transferred with at least 2,5 ml native water to 12-well microplates (or other suitable vessels) which are covered with a lid to prevent significant evaporation.
V prípade pichľavky sivej existuje rovnocenná metóda PCR na stanovenie genetického pohlavia, ktorá je opísaná v dodatku 10.
The number of dead larvae and visible pupae that have failed to emerge should also be recorded.
Spoľahlivosť tohto testu sa zlepší ak genetické pohlavie možno individuálne spojiť s fenotypovým pohlavím, takže pri druhoch so zdokumentovanými genetickými pohlavnými markermi by sa malo určiť genetické pohlavie.
Examples of a breeding cage, test vessel and exhauster are provided in Appendix 5.
Dva hlavné endokrinné sledované parametre, teda VTG a pomer pohlaví, môžu v kombinácii preukázať endokrinný spôsob pôsobenia (MOA) chemikálie (tabuľka 1).
Reproduction
Pomer pohlaví je biomarker významný pre celú populáciu (25) (26) a pri niektorých dobre vymedzených spôsoboch pôsobenia možno výsledky testu FSDT použiť na účely posúdenia nebezpečenstva a rizika ak to regulačná agentúra považuje za vhodné.
Effects on reproduction are assessed via the number of egg ropes produced by the 1st generation of midges and the fertility of these egg ropes.
Tieto spôsoby pôsobenia sú v súčasnosti estrogény androgény a inhibítory steroidogenézy.
Once per day the egg ropes are collected from the crystallising dish that is placed in each breeding container.
Reakcia endokrinných sledovaných parametrov na rôzne spôsoby pôsobenia chemikálií:
The egg ropes should be collected and transferred with at least 2,5 ml native water to a 12-wells microplate (one egg rope in each well) or other suitable vessels, which are covered with a lid to prevent significant evaporation.
↑ = zvyšovanie, ↓ = znižovanie, — = neskúmalo sa
The following characteristics are documented for each egg rope:
ODKAZY
day of production, size (normal, i.e. 1,0 ± 0,3 cm or small; typically ≤ 0,5 cm), and structure (normal = banana-form with spiralled egg string or abnormal, e.g. unspiralled egg string) and fertility (fertile or infertile).
Slabý agonista estrogénu
Over the course of six days after it was produced the fertility of an egg rope is assessed.
↑♀ alebo ↑ nedif.
An egg rope is considered fertile when at least one third of the eggs hatch.
Silný agonista estrogénu
The total number of females added to the breeding cage is used to calculate the number of egg ropes per female and the number of fertile egg ropes per female.
↑♀ alebo ↑ nedif., žiadne ♂
If required, the number of eggs in an egg rope can be estimated non-destructively by using the ring count method (detailed in 32 and 33).
Antagonista estrogénu
Analytical measurements
↓♀, ↑ nedif.
Concentration of the test chemical
Agonista androgénu
As a minimum, samples of the overlying water, pore water and the sediment should be analysed at the start of exposure (in case of water spiking preferably one hour after application) and at the end of the test, at the highest concentration and a lower one.
↑ ♂, žiadne ♀
This applies to vessels from both generations.
Antagonista androgénu
From the crystallising dishes in the breeding cage only the overlying water is analysed, since this is what the egg ropes come into contact with (for the spiked sediment design an analytical confirmation of the sediment concentration may be considered).
↑ intersex.
Further measurements of sediment, pore water or overlying water during the test may be conducted if deemed necessary.
Inhibítor aromatázy
These determinations of test chemical concentration inform on the behaviour/partitioning of the test chemical in the water-sediment system.
Test FSDT sa nevzťahuje na reprodukčné štádium života rýb, takže chemikálie, ktoré môžu ovplyvniť rozmnožovanie pri nižšej koncentrácii ako pohlavný vývin, by sa mali preskúmať v teste, ktorý sa týka rozmnožovania.
Sampling of sediment and pore water at the start and during the test (see paragraph 39) requires additional test vessels to perform analytical determinations.
Vymedzenie pojmov na účely tejto testovacej metódy je uvedené v dodatku 1.
Measurements in sediment in the spiked water design might not be necessary if the partitioning of the test chemical between water and sediment has been clearly determined in a water/sediment study under comparable conditions (e.g. sediment to water ratio, type of application, organic carbon content of sediment), or if measured concentrations in the overlying water are shown to remain within 80 to 120 % of the nominal or measured initial concentrations..
Test FSDT in vivo je určený na zistenie chemikálií s androgénnymi a estrogénnymi vlastnosťami ako aj s anti-androgénnymi anti-estrogénnymi vlastnosťami a vlastnosťami inhibujúcimi steroidogenézu.
When intermediate measurements are made (e.g. at day 7 and/or 14) and if the analysis needs large samples which cannot be taken from test vessels without influencing the test system, analytical determinations should be performed on samples from additional test vessels treated in the same way (including the presence of test organisms) but not used for biological observations.
Fázy validácie testu FSDT (1 a 2) zahŕňali estrogénne a androgénne chemikálie a chemikálie inhibujúce steroidogenézu.
Centrifugation at e.g. 10000 g at 4 °C for 30 min is the recommended procedure to isolate interstitial (= pore) water.
Účinky antagonistov estrogénu a androgénu v teste FSDT sú uvedené v tabuľke 1, ale tieto endokrinné spôsoby pôsobenia (MOA) sú v súčasnosti menej zdokumentované.
In some cases it might not be possible to analyse concentrations in the pore water as the sample volume may be too small.
Podmienky testu by mali byť prietokové, pokiaľ to nie je nemožné vzhľadom na dostupnosť alebo povahu (napr. obmedzenú rozpustnosť) testovanej chemikálie.
Physical-chemical parameters
Test sa začína umiestnením čerstvo oplodnených vajíčok (pred ryhovaním blastodisku) do skúšobných komôr.
pH, dissolved oxygen in the test water and temperature of the water in the test vessels and crystallising dishes should be measured in an appropriate manner (see paragraph 10).
Plnenie komôr je pre jednotlivé druhy opísané v bode 27.
Hardness and ammonia should be measured in the controls and in one test vessel and crystallising dish at the highest concentration at the start and the end of the test.
V prípade validovaných druhov rýb, teda medaky japonskej, pichľavky sivej a dánia pruhovaného, sa test ukončí pri 60 dph.
The purpose of this life-cycle test is to determine the effect of the test chemical on the reproduction and, for two generations, the development rate and the total number of fully emerged and alive male and female midges.
Po ukončení testu sa všetky ryby humánnym spôsobom usmrtia.
For the emergence ratio data of males and females should be pooled.
Z každej ryby sa odoberie biologická vzorka (krvná plazma, pečeň alebo homogenát hlavy/chvosta) na analýzu VTG a zvyšná časť sa zafixuje na účely histologického vyšetrenia gonád na určenie fenotypového pohlavia.
If there are no statistically significant differences between the sensitivities in the development rate of the separate sexes, male and female results may be pooled for statistical analysis.
Voliteľne možno vykonať histopatologické vyšetrenie (napr. stanovenie štádia gonád, závažnosti intersexuálnej formy).
Effect concentrations expressed as concentrations in the overlaying water (for spiked water) or in the sediment (for spiked sediment), are usually calculated based on measured concentrations at the beginning of the exposure (see paragraph 38).
V prípade druhov s príslušnými markermi sa odoberie biologická vzorka (z análnej alebo chrbtovej plutvy) na stanovenie genetického pohlavia (dodatky 9 a 10).
Therefore, for spiked water, the concentrations typically measured at the beginning of the exposure in the overlying water of the vessels for both generations and those of the crystallising dishes are averaged for each treatment.
Mali by byť k dispozícii výsledky testu akútnej toxicity alebo inej skúšky krátkodobej toxicity [napr. testovacej metódy C.14 (34) a OECD TG 210 (1)], vykonanej podľa možnosti s druhmi zvolenými na tento test.
For spiked sediment, the concentrations typically measured at the beginning of the exposure in the vessels for both generations (and optionally those of the crystallising dishes) are averaged for each treatment.
To znamená, že má byť známa rozpustnosť vo vode a tlak pary testovanej chemikálie a že je dostupná spoľahlivá analytická metóda na kvantifikáciu chemikálie v skúšobných komorách so známou a zdokumentovanou presnosťou a detekčným limitom.
To compute a point estimate, i.e. an ECx, the per-vessel and per-breeding cage statistics may be used as true replicates.
Medzi ďalšie užitočné informácie patrí štruktúrny vzorec, čistota chemikálie, stabilita vo vode a na svetle, pKa, Pow a výsledky testu na ľahkú biodegradovateľnosť (testovacia metóda C.4) (35).
In calculating a confidence interval for any ECx the variability among vessels should be taken into account, or it should be shown that this variability is so small that it can be ignored.
Kritériá prijateľnosti testu
When the model is fitted by Least Squares, a transformation should be applied to the per-vessel statistics in order to improve the homogeneity of variance.
koncentrácia rozpusteného kyslíka musí byť počas testu aspoň 60 % z rozpustnosti vzdušného kyslíka (ASV),
However, ECx values should be calculated after the response is transformed back to the original value (31).
teplota vody by sa v danom čase počas obdobia expozície nemala medzi skúšobnými komorami líšiť o viac ako ± 1,5 °C a musí sa udržiavať v teplotných rozsahoch vymedzených pre testovací druh (dodatok 2),
When the statistical analysis aims at determining the NOEC by hypothesis testing, the variability among vessels needs to be taken into account, which is guaranteed by using ANOVA methods (e.g. Williams' and Dunnett's test procedures).
mala by byť k dispozícii validovaná metóda na analýzu expozície chemikálii s detekčným limitom podstatne nižším ako najnižšia nominálna koncentrácia a mali by sa zhromaždiť dôkazy preukazujúce, že koncentrácie testovanej chemikálie v roztoku sa uspokojivo udržiavali v rozsahu ± 20 % priemerných nameraných hodnôt,
Williams' test would be appropriate when a monotonic dose-response is expected in theory and Dunnett's test would be appropriate where the monotonicity hypothesis does not hold.
počet všetkých oplodnených vajíčok, ktoré prežili v kontrolných skupinách, prípadne v kontrolných skupinách s rozpúšťadlom, musí byť väčší alebo rovnaký ako limity stanovené v dodatku 2,
Alternatively, more robust tests (27) can be appropriate in situations where there are violations of the usual ANOVA assumptions (31).
kritériá prijateľnosti týkajúce sa rastu a podielov pohlaví na konci testu sú založené na údajoch z kontrolných skupín (zo spojenej kontrolnej skupiny s rozpúšťadlom a vodou, pokiaľ sa výrazne nelíšia, tak len zo skupiny s rozpúšťadlom):
Emergence ratio
Medaka japonská
Emergence ratios are quantal data, and can be analysed by the Cochran-Armitage test applied in a step-down manner where a monotonic dose-response is expected and these data are consistent with this expectation.
Pichľavka sivá
If not, a Fisher's exact or Mantel-Haentzal test with Bonferroni-Holm adjusted p-values can be used.
Rast
If there is evidence of greater variability between replicates within the same concentration than a binomial distribution would indicate (often referenced to as “extra-binomial” variation), then a robust Cochran-Armitage or Fisher exact test such as proposed in (27), should be used.
Mokrá hmotnosť ryby vytretej do sucha
The sum of live midges (males plus females) emerged per vessel, ne, is determined and divided by the number of larvae introduced, na:
> 75 mg
ER emergence ratio
Dĺžka (štandardná dĺžka)
number of live midges emerged per vessel
> 20 mm
number of larvae introduced per vessel (normally 20)
> 14 mm
When ne is larger than na (i.e. when unintentionally more than the foreseen number of larvae where introduced) na should be made equal to ne.
Pomer pohlaví (% samčekov alebo samičiek)
An alternative approach that is most appropriate for large sample sizes, when there is extra binomial variance, is to treat the emergence ratio as a continuous response and use procedures consistent with these ER data.
ak sa použije rozpúšťadlo, nemalo by mať žiadny štatisticky významný účinok na prežívanie a nemalo by mať žiadne účinky narušujúce endokrinný systém ani iné nepriaznivé účinky na skoré štádiá života zistené analýzou kontrolnej skupiny pre rozpúšťadlo.
A large sample size is defined here as the number emerged and the number not emerging both exceeding five, on a per replicate (vessel) basis.
Ak sa zistí odchýlka od kritérií prijateľnosti testu, dôsledky by sa mali posudzovať s ohľadom na spoľahlivosť testovacích údajov a tieto úvahy by mali byť zahrnuté do správy.
To apply ANOVA methods, values of ER should first be transformed by the arcsin-sqrt transformation or Tukey-Freeman transformation to obtain an approximate normal distribution and to equalise variances.
Skúšobné komory
The Cochran-Armitage, Fisher's exact (Bonferroni), or Mantel-Haentzal tests can be applied when using the absolute frequencies.
Možno použiť akékoľvek komory zo skla, nehrdzavejúcej ocele alebo iné chemicky inertné komory.
The arcsin-sqrt transformation is applied by taking the inverse sine (sine– 1) of the square root of ER.
Rozmery komôr by mali byť dostatočne veľké, aby zodpovedali kritériám pre stupeň zaťaženia uvedeným ďalej.
For emergence ratios, ECx-values are calculated using regression analysis (e.g. probit, logit or Weibull models (28)).
Je potrebné umiestniť skúšobné komory náhodne na testovacej ploche.
If regression analysis fails (e.g. when there are less than two partial responses), other non-parametric methods such as moving average or simple interpolation can be used.
Náhodný blokový dizajn, v ktorom sa každá koncentrácia nachádza v každom bloku, sa uprednostňuje pred úplne náhodným dizajnom.
Development rate
Skúšobné komory by sa mali chrániť pred nežiaducimi narušeniami.
Mean development time represents the mean time span between the introduction of larvae (day 0 of the test) and the emergence of the experimental cohort of midges (for calculation of the true development time, the age of larvae at the time of introduction should be considered).
Odporúčané druhy rýb sú uvedené v dodatku 2.
The development rate (unit: 1/day) is the reciprocal of the development time and represents that portion of larval development which takes place per day.
Postupy na zahrnutie nových druhov sú uvedené v bode 2.
Development rate is preferred for the evaluation of these sediment toxicity studies as its variance is lower, and it is more homogeneous and closer to a normal distribution compared to the development time.
Chov rodičovských rýb
Hence, more powerful parametric test procedures may be used with development rate unlike development time.
Podrobnosti o chove rodičovských rýb za uspokojujúcich podmienok nájdete v usmernení OECD TG 210 (1).
For development rate as a continuous response, ECx-values can be estimated by regression analysis (e.g. (29) (30)).
Rodičovské ryby sa majú kŕmiť vhodnou potravou raz alebo dvakrát denne.
A NOEC for the mean development rate can be determined via ANOVA methods, e.g. Williams or Dunnett's test.
Manipulácia s embryami a larvami
Since males emerge earlier than females, i.e. have a higher development rate, it makes sense to calculate the development rate for each gender separately in addition to that for the total midges.
Embryá a larvy sa môžu najskôr exponovať v hlavnej komore umiestnené v menších komorách zo skla alebo nehrdzavejúcej ocele so sieťovanými bočnými alebo čelnými stenami, ktoré umožňujú tok testovanej chemikálie cez komoru.
For statistical testing, the number of midges observed on inspection day x are assumed to be emerged at the mean of the time interval between day x and day x – l (l = length of the inspection interval, usually 1 day).
Neturbulentný tok cez tieto malé komory možno zabezpečiť ich zavesením na ramene upravenom na pohyb komory nadol a nahor tak, aby organizmy zostali vždy ponorené.
The mean development rate per vessel ( x
Ak sa v hlavnej testovacej komore použili nádoby, mriežky alebo sieťky na zadržiavanie vajíčok, tieto obmedzenia by sa po vyliahnutí lariev mali odstrániť okrem sieťok, ktoré by sa mali zachovať, aby sa zabránilo úniku rýb.