natgillin/translations-raw huggingface dataset:
A single larger ration is acceptable particularly for weekends.
Na mriežku by sa mal upevniť substrát na neresenie.
Food should be withheld from the fish for 12 hours prior to sampling/necropsy.
Rybám by mal poskytovať štruktúru, do ktorej môžu preniknúť.
Fish food should be evaluated for the presence of contaminants such as organochlorine pesticides, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), polychlorinated biphenyls (PCBs).
Vhodné sú napríklad umelé akváriové rastliny vyrobené zo zeleného plastového materiálu (poznámka: je potrebné zobrať do úvahy možnú adsorpciu testovanej chemikálie na plastový materiál).
Food with an elevated level of phytoestrogens that would compromise the response of the assay to known oestrogen agonist (e.g. 17-beta estradiol) should be avoided.
Plastový materiál by sa mal dostatočne dlho lúhovať v dostatočnom objeme teplej vody, aby sa zabezpečilo, že do vody použitej na testovanie sa neprenesú žiadne chemikálie.
Uneaten food and faecal material should be removed from the test vessels at least twice weekly, e.g. by carefully cleaning the bottom of each tank using a siphon.
V prípade použitia sklených materiálov by sa malo zabezpečiť, aby sa ryby pri intenzívnom pohybe nezranili ani neochromili.
The photoperiod and water temperature should be appropriate for the test species (see Appendix 2).
Vzdialenosť medzi nádobou a sklenými stenami by mala byť najmenej 3 cm, aby sa zabezpečilo, že neresenie sa nevykonáva mimo nádoby.
Frequency of analytical determinations and measurements
Vajíčka vzniknuté neresením v nádobe prepadávajú cez mriežku a môžu byť odobraté ako vzorky 45 – 60 minút po začiatku osvetlenia.
Prior to initiation of the exposure period, proper function of the chemical delivery system should be ensured.
Priesvitné vajíčka sú nepriľnavé a ľahko sa počítajú pomocou transverzálneho svetla.
All analytical methods needed should be established, including sufficient knowledge on the chemical stability in the test system.
Pri použití piatich samičiek na nádobu sa denný počet vajíčok do 20 môže považovať za nízky, od 20 do 100 za stredný a nad 100 za vysoký.
During the test, the concentrations of the test chemical are determined at regular intervals, as follows:
Nádoba na neresenie by sa mala vybrať, vajíčka zozbierať a nádobu na neresenie vložiť späť do testovacej nádoby, buď čo najneskôr večer, alebo veľmi skoro ráno.
the flow rates of diluent and toxicant stock solution should be checked preferably daily but as a minimum twice per week, and should not vary by more than 10 % throughout the test.
Čas, ktorý uplynie do opätovného vloženia, by nemal presiahnuť jednu hodinu, lebo inak stopa substrátu na neresenie môže vyvolať individuálne párenie a neresenie v nezvyčajnom čase.
It is recommended that the actual test chemical concentrations be measured in all vessels at the start of the test and at weekly intervals thereafter.
Ak si situácia vyžaduje neskoršie vloženie nádoby na neresenie, malo by sa to urobiť najmenej 9 hodín po začiatku osvetlenia.
It is recommended that results be based on measured concentrations.
V tomto pokročilom dennom čase sa už neresenie nevyvoláva.
However, if concentration of the test chemical in solution has been satisfactorily maintained within ± 20 % of the nominal concentration throughout the test, then the results can either be based on nominal or measured values.
Dodatok 4B
Samples may need to be filtered (e.g., using a 0,45 μm pore size) or centrifuged.
Substrát na neresenie pre čerebľu potočnú
If needed, then centrifugation is the recommended procedure.
Do každej skúšobnej komory sa umiestnia dva alebo tri kombinované plastové/keramické/sklené alebo nerezové oblúkové kryty s podložkami na neresenie (napr. 80 mm dlhý sivý polkruhový žľab uložený na podložke so zvýšeným okrajom a s dĺžkou 130 mm) (pozri obrázok).
However, if the test material does not adsorb to filters, filtration may also be acceptable.
Riadne vyzreté kryty z PVC alebo keramiky sa ukázali ako vhodné miesto pre substrát na neresenie (Thorpe et al, 2007).
During the test, dissolved oxygen, temperature, and pH should be measured in all test vessels at least once per week.
Odporúča sa kryty obrúsiť, aby sa zvýšila ich adhézia.
Total hardness and alkalinity should be measured in the controls and one vessel at the highest concentration at least once per week.
Podložka by mala byť prekrytá sieťkou tak, aby sa zabránilo rybám v prístupe k padajúcim vajíčkam, pokiaľ nebola preukázaná účinná priľnavosť k substrátu na neresenie.
Temperature should preferably be monitored continuously in at least one test vessel.
Dno je konštruované tak, aby obsahovalo všetky vajíčka, ktoré nepriľnú k povrchu krytu a spadnú na dno nádoby (alebo vajíčka, ktoré sa uložia priamo na plochú plastovú spodnú časť).
A number of general (e.g. survival) and core biological responses (e.g. vitellogenin levels) are assessed over the course of the assay or at termination of the assay.
Všetky substráty na neresenie by sa mali pred použitím minimálne 12 hodín lúhovať v riediacej vode.
Measurement and evaluation of these endpoints and their utility are described below.
Dodatok 5A
Survival
Posúdenie sekundárnych pohlavných znakov čereble potočnej na zistenie určitých chemikálií s účinkom na endokrinný systém
Fish should be examined daily during the test period and any mortality should be recorded and the dead fish removed as soon as possible.
Prehľad
Dead fish should not be replaced in either the control or treatment vessels.
Medzi potenciálne dôležité znaky fyzického vzhľadu dospelých jedincov čereble potočnej pri testovaní endokrinných disruptorov patrí farba tela (t. j. svetlá/tmavá), vzorované sfarbenie (t. j. prítomnosť alebo neprítomnosť zvislých pruhov), tvar tela (t. j. tvar hlavovej a prsnej oblasti, brušná distenzia) a špecializované sekundárne pohlavné znaky (t. j. počet a veľkosť tuberkulov, veľkosť záhlavnej časti chrbta a kladielka).
Sex of fish that die during the test should be determined by macroscopic evaluation of the gonads.
Tuberkuly sa nachádzajú na hlave (záhlavná časť chrbta) reprodukčne aktívnych samčekov čereble potočnej a ich usporiadanie je obvykle dvojstranne symetrické (Jensen et al., 2001).
Behaviour and appearance
Až osem jednotlivých tuberkulov sa môže nachádzať okolo očí a medzi nozdrami samčekov.
Any abnormal behaviour (relative to controls) should be noted;
Celkový počet tuberkulov je zriedkavo vyšší ako 30 (rozsah 18 – 28; Jensen et al. 2001).
this might include signs of general toxicity including hyperventilation, uncoordinated swimming, loss of equilibrium, and atypical quiescence or feeding.
Prevládajú (z hľadiska počtu) tuberkuly, ktoré tvoria samostatnú, relatívne okrúhlu štruktúru s výškou približne rovnou polomeru.
Additionally external abnormalities (such as haemorrhage, discoloration) should be noted.
Väčšina reprodukčne aktívnych samčekov má tiež prinajmenšom niekoľko tuberkulov, ktoré sú zväčšené a výrazné natoľko, že sú nerozoznateľné ako jednotlivé štruktúry.
Such signs of toxicity should be considered carefully during data interpretation since they may indicate concentrations at which biomarkers of endocrine activity are not reliable.
Niektoré druhy chemikálií narušujúcich endokrinný systém môžu vyvolávať abnormálny výskyt určitých sekundárnych pohlavných znakov pri živočíchoch opačného pohlavia.
Such behavioural observations may also provide useful qualitative information to inform potential future fish testing requirements.
Napríklad agonisty androgénových receptorov, ako sú 17β-metyltestosterón alebo 17β-trenbolón, môžu spôsobovať vyvinutie tuberkulov pri samičkách čereble potočnej (Smith, 1974; Ankley et al. 2001; 2003), zatiaľ čo agonisty estrogénových receptorov môžu znížiť počet alebo veľkosť tuberkulov pri samčekoch (Miles – Richardson et al., 1999; Harries et al. 2000).
For example, territorial aggressiveness in normal males or masculinised females has been observed in fathead minnows under androgenic exposure;
V ďalšej časti sa uvádza opis charakteristiky tuberkulov čereble potočnej na základe postupov používaných Agentúrou na ochranu životného prostredia Spojených štátov amerických v meste Duluth v štáte Minnesota.
in zebrafish, the characteristic mating and spawning behaviour after the dawn onset of light is reduced or hindered by oestrogenic or anti-androgenic exposure.
Špecifické produkty a/alebo zariadenia sa môžu nahradiť porovnateľnými materiálmi, ktoré sú k dispozícii.
Because some aspects of appearance (primarily colour) can change quickly with handling, it is important that qualitative observations be made prior to removal of animals from the test system.
Prehliadanie sa najlepšie vykonáva pomocou osvetlenej lupy alebo trikrát osvetleného stereoskopického mikroskopu.
Experience to date with fathead minnows suggests that some endocrine active chemicals may initially induce changes in the following external characteristics:
Ryba sa prehliada zo strany chrbta, natočená prednou časťou dopredu (hlavou k prehliadačovi).
body colour (light or dark), coloration patterns (presence of vertical bands), and body shape (head and pectoral region).
Ryba sa uloží do malej Petriho misky (napr. s priemerom 100 mm), prednou časť dopredu a brušnou nadol.
Therefore observations of physical appearance of the fish should be made over the course of the test, and at conclusion of the study
Hľadáčik sa zameria tak, aby bola možná identifikácia tuberkulov.
Humane killing of fish
Ryba sa jemne a pomaly otáča zo strany na stranu a identifikujú sa oblasti tuberkulov.
At day 21, i.e. at termination of the exposure, the fish should be euthanized with appropriate amounts of Tricaine (Tricaine methane sulfonate, Metacain, MS-222 (CAS 886-86-2), 100-500 mg/l buffered with 300 mg/l NaHCO3 (sodium bicarbonate, CAS 144-55-8) to reduce mucous membrane irritation; blood or tissue is then sampled for vitellogenin determination, as explained in the Vitellogenin section.
Tuberkuly sa spočítajú a zaznamenajú.
Observation of secondary sex characteristics
Ryba sa v Petriho miske uloží chrbtovou časťou nadol, prednou dopredu, a vykoná sa prehliadka povrchu brušnej časti hlavy.
Some endocrine active chemicals may induce changes in specialised secondary sex characteristics (number of nuptial tubercles in male fathead minnow, papillary processes in male medaka).
Pozorovania každej ryby by sa mali ukončiť do dvoch minút.
Notably, chemicals with certain modes of action may cause abnormal occurrence of secondary sex characteristic in animals of the opposite sex;
Počítanie a klasifikácia tuberkulov
for example, androgen receptor agonists, such as trenbolone, methyltestosterone and dihydrotestosterone, can cause female fathead minnows to develop pronounced nuptial tubercles or female medaka to develop papillary processes (11, 20, 21).
Určených bolo šesť osobitných oblastí hodnotenia prítomnosti a vývoja tuberkulov pri dospelých jedincoch čereble potočnej.
It also has been reported that oestrogen receptor agonists can decrease nuptial tubercle numbers and size of the dorsal nape pad in adult males (25, 26).
Vypracoval sa vzor, ako mapovať umiestnenie a množstvo prítomných tuberkulov (pozri koniec tohto dodatku).
Such gross morphological observations may provide useful qualitative and quantitative information to inform potential future fish testing requirements.
Počet tuberkulov sa zaznamenáva a ich veľkosť môže byť pre každý organizmus kvantitatívne klasifikovaná ako:
The number and size of nuptial tubercles in fathead minnow and papillary processes in medaka can be quantified directly or more practically in preserved specimens.
0 – neprítomný, 1 – prítomný, 2 – zväčšený a 3 – výrazný (obrázok 1).
Recommended procedures for the evaluation of secondary sex characteristics in fathead minnow and medaka are available from Appendix 5A and Appendix 5B, respectively.
Kategória 0 – neprítomný nijaký tuberkul.
Vitellogenin (VTG)
Vrchná časť tuberkula je často viac vrúbkovaná, ale niekedy môže byť čiastočne zaoblená.
Blood is collected from the caudal artery/vein with a heparinised microhematocrit capillary tubule, or alternatively by cardiac puncture with a syringe.
Kategória 3 – výrazný, zvyčajne pomerne veľký a zaoblený, s menej rozlíšenou štruktúrou.
Depending upon the size of the fish, collectable blood volumes generally range from 5 to 60 μl per individual for fathead minnows and 5-15 μl per individual for zebrafish.
Tieto tuberkuly niekedy spoločne vytvárajú jednotnú masu v jednej oblasti alebo v kombinácii oblastí (B, C a D, ako je opísané v ďalšej časti).
Plasma is separated from the blood via centrifugation, and stored with protease inhibitors at – 80 °C, until analysed for vitellogenin.
Sfarbenie a tvar sú podobné ako v rámci klasifikácie 2, ale niekedy sú dosť málo rozlíšiteľné.
Alternatively, in medaka the liver will be used, and in zebrafish the head/tail homogenate can be used as tissue-source for vitellogenin determination (Appendix 6).
Použitie tohto systému klasifikácie vo všeobecnosti povedie k celkovej hodnote < 50 pri bežnom samčekovi z kontrolnej vzorky, s počtom tuberkulov 18 – 20 (Jensen et al., 2001).
The measurement of VTG should be based upon a validated homologous ELISA method, using homologous VTG standard and homologous antibodies.
Skutočný počet tuberkulov na tele niektorých rýb môže byť väčší ako počet políčok v šablóne (dodatok A) pre určitú klasifikovanú oblasť.
It is recommended to use a method capable to detect VTG levels as low as few ng/ml plasma (or ng/mg tissue), which is the background level in unexposed male fish.
V takom prípade je možné vyznačiť ďalšie čísla klasifikácie vpravo alebo vľavo od príslušného políčka.
Quality control of vitellogenin analysis will be accomplished through the use of standards, blanks and at least duplicate analyses.
Zobrazenie šablóny preto nemusí byť symetrické.
For each ELISA method, a test for matrix effect (effect of sample dilution) should be run to determine the minimum sample dilution factor.
Ďalšou technikou mapovania tuberkulov, ktoré sú spojené v pároch alebo vertikálne pozdĺž horizontálnej roviny úst, by mohlo byť dvojité značenie dvoch bodov klasifikácie tuberkulov v jednom políčku.
Each ELISA plate used for VTG assays should include the following quality control samples:
Mapovacie oblasti:
at least 6 calibration standards covering the range of expected vitellogenin concentrations, and at least one non-specific binding assay blank (analysed in duplicate).
A tuberkuly nachádzajúce sa okolo očí.
Absorbance of these blanks should be less than 5 % of the maximum calibration standard absorbance.
Mapujú sa od chrbtovej časti po brušnú časť okolo predného okraja očí.
At least two aliquots (well-duplicates) of each sample dilution will be analysed.
Na telách zrelých samčekov v kontrolných vzorkách ich je spravidla väčší počet, na telách samičiek v kontrolných vzorkách nie sú prítomné, na telách samičiek vystavených pôsobeniu androgénov sa vo všeobecnosti nachádzajú dva (jeden pri každom oku) alebo jeden osamotený.
Well-duplicates that differ by more than 20 % should be re-analysed.
B tuberkuly nachádzajúce sa medzi nozdrami (otvormi zmyslových kanálov).
The correlation coefficient (R2) for calibration curves should be greater than 0,99.
Na telách zrelých samčekov v kontrolných vzorkách sa spravidla vyskytujú v pároch, na vyšších úrovniach vývoja (2 – zväčšené alebo 3 – výrazné).
If the nominal concentrations trend away from the calibration regression line (e.g. at lower concentrations), it may be necessary to split the calibration curve into low and high ranges or to use a nonlinear model to adequately fit the absorbance data.
Na telách zrelých samčekov v kontrolných vzorkách sú vo všeobecnosti zväčšené alebo výrazné.
The limit of detection (LOD) is defined as the concentration of the lowest analytical standard, and limit of quantitation (LOQ) is defined as the concentration of the lowest analytical standard multiplied by the lowest dilution factor.
D tuberkuly nachádzajúce sa rovnobežne pozdĺž línie úst.
The ratio of the expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
Na telách samičiek v kontrolných vzorkách nie sú prítomné, ale na telách samičiek vystavených pôsobeniu androgénov sú prítomné.
Evaluation of Biomarker Responses by Analysis of Variance (ANOVA)
E tuberkuly nachádzajúce sa na dolnej čeľusti, v blízkosti úst, zvyčajne malé a spravidla v pároch.
To identify potential endocrine activity of a chemical, responses are compared between treatments and control groups using analysis of variance (ANOVA).
Výskyt je rôzny v prípade samčekov v kontrolných vzorkách alebo vo vzorkách s aplikovanou chemikáliou a v prípade samičiek vo vzorkách s aplikovanou chemikáliou.
Where a solvent control is used, an appropriate statistical test should be performed between the dilution water and solvent controls for each endpoint.
F tuberkuly nachádzajúce sa v brušnej časti priľahlej k oblasti E. Spravidla sú malé a vyskytujú sa v pároch.
Guidance on how to handle dilution water and solvent control data in the subsequent statistical analysis can be found in OECD, 2006c (27).
Prítomné sú na telách samčekov v kontrolných vzorkách a na telách samičiek vystavených pôsobeniu androgénov.
All biological response data should be analysed and reported separately by sex.
Šablóna pre tuberkuly
If the required assumptions for parametric methods are not met — non-normal distribution (e.g. Shapiro-Wilk's test) or heterogeneous variance (Bartlett's test or Levene's test), consideration should be given to transforming the data to homogenise variances prior to performing the ANOVA, or to carrying out a weighted ANOVA.
Číselná klasifikácia
Dunnett's test (parametric) on multiple pair-wise comparisons or a Mann-Whitney with Bonferroni adjustment (non-parametric) may be used for non-monotonous dose-response.
1 – prítomný
Other statistical tests may be used (e.g. Jonckheere-Terpstra test or Williams test) if the dose-response is approximately monotone.
Dátum
A statistical flowchart is provided in Appendix 8 to help in the decision on the most appropriate statistical test to be used.
2 – zväčšený
Additional information can also be obtained from the OECD Document on Current Approaches to Statistical Analysis of Ecotoxicity Data (27).
Celková hodnota
Reporting of test results
3 – výrazný
Study data should include:
Dodatok 5B
Testing facility:
Posúdenie sekundárnych pohlavných znakov medaky pri zisťovaní určitých chemikálií s účinkom na endokrinný systém
Responsible personnel and their study responsibilities
Nasleduje opis merania papilárnych procesov, ktoré sú sekundárnymi pohlavnými znakmi medaky (Oryzias latipes).
Each laboratory should have demonstrated proficiency using a range of representative chemicals
Po vyrezaní pečene (dodatok 6) sa mŕtve telo vloží do kužeľovej banky, ktorá obsahuje približne 10 ml 10 % neutrálneho tlmeného formalínu (smerom hore: hlava, smerom dolu: chvost).
Characterisation of test chemical
Ak sa gonáda fixuje inak než v 10 % neutrálnym tlmeným formalínom, je potrebné mŕtve telo rozrezať priečnym rezom medzi prednou časťou análnej plutvy a análnym otvorom pomocou žiletky, pričom treba dbať, aby sa nenarušil gonopór ani samotná gonáda (obrázok 3).
Physical nature and relevant physicochemical properties
Kraniálna strana tela ryby sa vloží do fixačného roztoku na konzervovanie gonád a chvostová strana tela ryby do 10 % neutrálneho tlmeného formalínu, ako už bolo opísané.
Solvent:
Po roztiahnutí análnej plutvy približne na 30 sekúnd sa telo ryby uloží do 10 % neutrálneho tlmeného formalínu pri izbovej teplote, až do začiatku merania papilárnych procesov (meranie by sa malo vykonať po fixovaní v dĺžke najmenej 24 hodín).
Characterization of solvent (nature, concentration used)
Meranie
Justification of choice of solvent (if other than water)
Po fixovaní tela ryby v 10 % neutrálnom tlmenom formalíne najmenej 24 hodín sa mŕtve telo ryby vyberie z kužeľovej banky a formalín sa otrie filtračným papierom (alebo papierovou utierkou).
Test animals:
Ryba sa položí brušnou stranou nahor.
Species and strain
Potom sa pomocou malých pitevných nožníc opatrne odreže análna plutva (odporúča sa odrezať análnu plutvu aj s malou časťou opornej kosti pterygiophore).
Supplier and specific supplier facility
Oddelená análna plutva sa pinzetou uchopí za prednú časť a položí sa na podložné sklíčko s niekoľkými kvapkami vody.
Details of animal acclimation procedure
Pri uchopení análnej plutvy pomocou pinzety je potrebné dávať pozor, aby sa nepoškodili papilárne procesy.
Body weight of the fish at the start of the exposure (from a sub-sample of the fish stock)
Pomocou počítadla pod biologickým mikroskopom (stojanovým alebo inverzným) sa určí počet spojených platničiek s papilárnymi procesmi.
Test Conditions:
Papilárne procesy sa vykazujú, keď je na zadnom okraji spojenej platničky viditeľné malé zoskupenie výrastkov.
Test procedure used (test-type, loading rate, stocking density, etc.);
Do pracovného hárku sa zapíše počet spojených platničiek s papilárnymi procesmi na každom lúči plutvy (napr. prvý lúč plutvy: 0, druhý lúč plutvy: 10, tretí lúč plutvy: 12 atď.) a v tabuľke programu Excel sa uvedie súčet týchto počtov pre jednotlivé ryby.
Method of preparation of stock solutions and flow-rate;
V prípade potreby sa urobí fotografia análnej plutvy a počet spojených platničiek s papilárnymi procesmi sa určí z tejto fotografie.
The nominal test concentrations, weekly measured concentrations of the test solutions and analytical method used, means of the measured values and standard deviations in the test vessels and evidence that the measurements refer to the concentrations of the test chemical in true solution;
Po meraní sa análna plutva vloží do kužeľovej banky opísanej v bode 1 a odloží sa.
Dilution water characteristics (including pH, hardness, alkalinity, temperature, dissolved oxygen concentration, residual chlorine levels, total organic carbon, suspended solids and any other measurements made)
Obr. 1.
Water quality within test vessels:
Obrázok znázorňujúci rozdiely medzi pohlaviami, pokiaľ ide o tvar a veľkosť análnej plutvy.
pH, hardness, temperature and dissolved oxygen concentration;
samček, B:samička.
Detailed information on feeding (e.g. type of food(s), source, amount given and frequency and analyses for relevant contaminants if available (e.g. PCBs, PAHs and organochlorine pesticides).
Obr. 2.
Evidence that the controls met the acceptance criteria of the test;
A, Procesy na spojených platničkách lúča análnej plutvy.
Data on mortalities occurring in any of the test concentrations and control;
J.P.:
Statistical analytical techniques used, treatment of data and justification of techniques used;
spojená platnička, A.S.:
Data on biological observations of gross morphology, including secondary sex characteristics and vitellogenin;
axiálny priestor, P.:
Results of the data analyses preferably in tabular and graphical form;
proces B, Distálny koniec lúča plutvy.
Incidence of any unusual reactions by the fish and any visible effects produced by the test chemical
Na úplnom konci sú lúče plutvy actinotrichia (Act.).
This section contains a few considerations to be taken into account in the interpretation of test results for the various endpoints measured.
Fotografia tela ryby, ktorá znázorňuje miesto rezu v prípade, že sa gonáda fixuje v inom fixačnom roztoku, než je 10 % neutrálny tlmený formalín.
It is important to have at least one treatment where there are no signs of toxic effects.
Procesy sa však len zriedka vyskytujú na prvom lúči od zadného konca análnej plutvy.
For example, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action, e.g. hepatotoxicity.
Odporúčané postupy odberu vzoriek na analýzu vitelogenínu
Examples of the range of values encountered in control and treatment groups are available in the validation reports (1, 2, 3, 4).
Po anestetizovaní sa čepeľou skalpela nareže chvostový pedunkulus a pomocou heparinizovanej mikrohematokritovej kapilárnej kanyly sa odoberie krv z chvostovej tepny/žily.