natgillin/translations-raw huggingface dataset:
In the human, the enzyme favours substrates of the Δ5-hydroxysteroid pathway (pregnenolone), whereas substrates in the Δ4-ketosteroid pathway (progesterone) are favoured in the rat (19).
Inhibícia produkcie hormónov môže byť spôsobená priamou konkurenčnou väzbou na enzým v dráhe, vplyvom na spolufaktory, ako sú NADPH (nikotinamid adenin dinukleotid fosfát) a cAMP (cyklický adenozínmonofosfát), a/alebo zvýšením steroidného metabolizmu alebo potlačením génovej expresie určitých enzýmov v steroidogenéze.
Such differences in the CYP17 lyase activity may explain some species-dependent differences in response to chemicals that alter steroidogenesis in vivo (6).
Zatiaľ čo inhibícia môže byť funkciou priamych alebo nepriamych procesov súvisiacich s produkciou hormónov, indukcia je zvyčajne nepriama, napríklad tým, že ovplyvňuje spolufaktory, ako sú NADPH a cAMP (ako v prípade forskolínu), znižuje steroidný metabolizmus (13) alebo zvyšuje steroidogénovú expresiu génov.
The H295 cells have been shown to most closely reflect human adult adrenal enzyme expression and steroid production pattern (20), but are known to express enzymes for both the Δ5-hydroxysteroid and Δ4-ketosteroid pathways for androgen synthesis (7) (11) (13) (15).
Skúška H295R má viaceré výhody:
Steroidogenic pathway in H295R cells.
umožňuje určiť zvýšenie a zníženie produkcie T a E2;
Enzymes are in italics, hormones are bolded and arrows indicate the direction of synthesis.
umožňuje priame posúdenie možného vplyvu chemikálie na životaschopnosť/cytotoxicitu buniek.
Gray background indicates corticosteroid pathways/products.
Je to dôležitý prvok, keďže umožňuje rozlišovať účinky spôsobené cytotoxicitou od účinkov spôsobených priamou interakciou chemikálií so steroidogenézou, čo nie je možné v systémoch tkanivových explantátov, ktoré pozostávajú z rozmanitých typov buniek rôznej citlivosti a rôznych funkčností;
Sex steroid pathways/products are circled.
nevyžaduje si použitie zvierat;
CYP = cytochrome P450;
bunková línia H295R je komerčne dostupná.
HSD = hydroxysteroid dehydrogenase;
Zásadné obmedzenia skúšky sú tieto:
DHEA = dehydroepiandrosterone.
jej metabolická schopnosť je neznáma, pravdepodobne je však pomerne obmedzená;
The human H295R adreno-carcinoma cell line is a useful in vitro model for the investigation of effects on steroid hormone synthesis (2) (7) (8) (9) (10).
preto sa v tejto skúške pravdepodobne prehliadnu chemikálie, ktoré sa musia metabolicky aktivovať;
The H295R cell line expresses genes that encode for all the key enzymes for steroidogenesis noted above (11) (15) (Figure 1).
nemeria DHT, a preto zrejme nezistí chemikálie, ktoré potláčajú 5α-reduktázu, v takomto prípade sa môže použiť Hershbergerov test(16);
This is a unique property because in vivo expression of these genes is tissue and developmental stage-specific with typically no one tissue or one developmental stage expressing all of the genes involved in steroidogenesis (2).
skúškou H295R sa nezistia chemikálie, ktoré narúšajú steroidogenézu ovplyvnením HPG osi (hypotalamus-hypofýza-pohlavné žľazy), keďže to možno skúmať len v prípade neporušených zvierat.
Changes recorded by the test system in the form of alteration in the production of T and E2 can be the result of a multitude of different interactions of test chemicals with steroidogenic functions that are expressed by the H295R cells.
Skúškou možno zistiť chemikálie, ktoré typicky potláčajú alebo indukujú enzýmy steroidogenézy.
These include modulation of the expression, synthesis or function of enzymes involved in the production, transformation, or elimination of steroid hormones (12) (13) (14).
Skúška sa zvyčajne vykonáva v štandardných podmienkach kultivácie buniek na 24-jamkových platničkách pre bunkové kultúry.
Inhibition of hormone production can be due to direct competitive binding to an enzyme in the pathway, impact on co-factors such as NADPH (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate) and cAMP (cyclic Adenosine Monophosphate), and/or increase in steroid metabolism or suppression of gene expression of certain enzymes in the steroidogenesis pathway.
Prípadne možno na vykonanie skúšky použiť platničky iných veľkostí;
While inhibition can be a function of both direct or indirect processes involved with hormone production, induction is typically of an indirect nature, such as by affecting co-factors such as NADPH and cAMP (as in the case of forskolin), decreasing steroid metabolism (13), and or up-regulating steroidogenic gene expression.
nasadenie a podmienky skúšky by sa však mali vhodne upraviť tak, aby boli dodržané kritériá vykonávania.
The H295R assay has several advantages:
Po aklimatizačnom období 24 hodín na viacjamkových platničkách sa bunky po dobu 48 hodín vystavia siedmim koncentráciám testovaných chemikálií, a to minimálne trojmo.
It allows for the detection of both increases and decreases in the production of both T and E2;
Rozpúšťadlo, známy inhibítor a spúšťač produkcie hormónov sa testujú v pevnej koncentrácii ako negatívne a pozitívne kontrolné vzorky.
It permits the direct assessment of the potential impact of a chemical on cell viability/cytotoxicity.
Na konci doby expozície sa z každej jamky odstráni médium.
This is an important feature as it allows for the discrimination between effects that are due to cytotoxicity from those due to the direct interaction of chemicals with steroidogenic pathways, which is not possible in tissue explants systems that consist of multiple cell types of varying sensitivities and functionalities;
Životaschopnosť buniek v každej bunke sa analyzuje hneď po odstránení média.
It does not require the use of animals;
Koncentrácie hormónov v médiu možno merať pomocou rôznych metód, a to aj pomocou komerčne dostupných súprav na meranie hormónov a/alebo inštrumentálnych metód, ako je napríklad metóda kvapalinovej kromatografie – hmotnostnej spektrometrie (LC-MS).
The H295R cell line is commercially available.
Údaje sa vyjadrujú ako násobná zmena v porovnaní s kontrolou rozpúšťadla a najnižšou koncentráciou s pozorovaným účinkom (LOEC).
The principle limitations of the assay are as follows:
Keď je skúška negatívna, najvyššia testovaná koncentrácia sa uvedie ako koncentrácia bez pozorovaného účinku (NOEC).
Its metabolic capability is unknown but probably quite limited;
Závery týkajúce sa schopnosti chemikálie ovplyvniť steroidogenézu by mali byť založené najmenej na dvoch nezávislých pokusoch.
therefore, chemicals that need to be metabolically activated will probably be missed in this assay.
Prvý pokus môže fungovať ako pokus na zistenie rozsahu, v druhom a prípadne treťom pokuse sa rozsahy následne upravujú, ak sa vyskytnú problémy s rozpustnosťou alebo cytotoxicitou alebo ak sa zdá, že chemikália je na konci rozsahu testovaných koncentrácií.
Being derived from adrenal tissue, the H295R possesses the enzymes capable of producing the gluco-, and mineral-corticoids as well as the sex hormones;
PRÍPRAVA KULTÚR
therefore, effects on the production of gluco-, and mineral corticoids could influence the levels of T and E2 observed in the assay.
Bunková línia
It does not measure DHT and, therefore, would not be expected to detect chemicals that inhibit 5α-reductase in which case the Hershberger assay (16) can be used.
Bunky NCI-H295R sú komerčne dostupné z kolekcie kultúr amerického typu (ATCC) po podpísaní dohody o prenose materiálu (MTA) [14].
The H295R assay will not detect chemicals that interfere with steroidogenesis by affecting the hypothalamic-pituitary-gonadal axis (HPG) axis as this can only be studied in intact animals.
Úvod
The purpose of the assay is the detection of chemicals that affect T and E2 production.
Z dôvodu zmien schopnosti buniek produkovať E2 s narastajúcim vekom/zvyšujúcimi sa pasážami (2) by sa bunky pred použitím mali kultivovať na základe osobitného protokolu a počtu pasáží, keďže bunky boli rozmrazené, a mal by sa poznamenať aj počet pasáží, pri ktorom boli bunky zamrazené a umiestnené v tekutom dusíku na uskladnenie.
T is also an intermediate in the pathway to produce E2.
Prvým číslom sa označuje aktuálne číslo pasáže bunky a druhým číslom sa opisuje počet pasáži, pri ktorom sa bunky zamrazili a uskladnili.
The assay can detect chemicals that typically inhibit or induce the enzymes of the steroidogenesis pathway.
Napríklad bunky, ktoré sa zamrazili po piatej pasáži a rozmrazili, a potom sa trikrát delili (4 pasáže, pričom čerstvo rozmrazené bunky sa počítajú ako pasáž 1), by sa po opätovnej kultivácii označili ako pasáž 4.5.
The assay is usually performed under standard cell culture conditions in 24-well culture plates.
Príklad systému číslovania je znázornený v dodatku č. I k validačnej správe (4).
Alternatively, other plate sizes can be used for conducting the assay;
Zásobné médium sa používa ako základ pre obohatené a mraziace médium.
however, seeding and experimental conditions should be adjusted accordingly to maintain adherence to the performance criteria.
Obohatené médium je potrebné na kultiváciu buniek.
After an acclimation period of 24 h in multi-well plates, cells are exposed for 48 h to seven concentrations of the test chemical in at least triplicate.
Mraziace médium je osobitne určené na umožnenie mrazenia buniek na dlhodobé skladovanie bez akýchkoľvek účinkov.
Solvent and a known inhibitor and inducer of hormone production are run at a fixed concentration as negative and positive controls.
Pred použitím by sa malo NuSerum (alebo porovnateľné sérum s rovnakými vlastnosťami, u ktorého sa preukázalo, že produkuje údaje v súlade s požiadavkami na efektívnosť testu a kontrolu kvality), ktoré je zložkou obohateného média, analyzovať na koncentrácie T a E2 v pozadí.
At the end of the exposure period, the medium is removed from each well.
Príprava týchto roztokov sa popisuje v dodatku č. II k validačnej správe (4).
Cell viability in each well is analysed immediately after removal of medium.
Po aktivácii bunkovej kultúry H295R z pôvodnej série ATCC by sa bunky mali namnožiť pre päť pasáží (t. j. bunky sa delia štyri krát).
Concentrations of hormones in the medium can be measured using a variety of methods including commercially available hormone measurement kits and/or instrumental techniques such as liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS).
Bunky z piatej pasáže sa potom zmrazia v tekutom dusíku na uskladnenie.
Data are expressed as fold change relative to the solvent control and the Lowest-Observed-Effect-Concentration (LOEC).
Pred zmrazením buniek sa vzorka buniek z predchádzajúcej štvrtej pasáže otestuje na platničke na kontrolu kvality (pozri odseky 36 a 37) na overenie, či základná produkcia hormónov a reakcia na pozitívne kontrolné chemikálie spĺňajú kritériá kontroly kvality skúšky vymedzené v tabuľke 5.
If the assay is negative, the highest concentration tested is reported as the No-Observed-Effect-Concentration (NOEC).
Bunky H295R sa musia kultivovať, mraziť a uskladňovať v tekutom dusíku, aby boli k dispozícii bunky vhodnej pasáže/veku na kultiváciu a použitie.
Conclusions regarding the ability of a chemical to affect steroidogenesis should be based on at least two independent test runs.
Maximálny počet pasáží po prevzatí novej [15] alebo zmrazenej [16] série buniek na kultiváciu, ktorý je prijateľný na použitie v skúške H295R, by mal byť najviac 10.
The first test run may function as a range finding run with subsequent adjustment of concentrations for runs 2 and 3, if applicable, if solubility or cytotoxicity problems are encountered or the activity of the chemical seems to be at the end of the range of concentrations tested.
Napríklad prijateľné pasáže pre kultúry buniek zo série zmrazenej v pasáži 5 by boli od 4.5 do 10.5.
CULTURE PROCEDURE
V prípade buniek aktivovaných z týchto zmrazených sérií sa dodržuje postup popísaný v odseku 19.
Cell Line
Tieto bunky by sa pred svojím použitím v testovaní mali kultivovať najmenej štyri (4) ďalšie pasáže (pasáž 4.5).Štartovacie bunky zo zmrazených zásob
The NCI-H295R cells are commercially available from the American Type Culture Collections (ATCC) upon signing a Material Transfer Agreement (MTA) [14].
Postup na aktiváciu buniek zo zmrazených zásob sa použije, keď sa na účely kultivácie a testovania vyberie nová séria buniek zo zásob uskladnených v tekutom dusíku.
Introduction
Podrobné informácie o tomto postupe sa uvádzajú v dodatku č. III k validačnej správe (4).
Due to changes in the E2 producing capacity of the cells with increasing age/passages (2), cells should be cultured following a specific protocol before they are used and the number of passages since the cells were defrosted as well as the passage number at which the cells were frozen and placed in liquid nitrogen storage should be noted.
Bunky sa vyberú z tekutého dusíka, rýchlo sa rozmrazia, vložia sa v obohatenom médiu do odstredivkovej skúmavky, odstredia sa pri izbovej teplote, resuspendujú sa v obohatenom médiu a prenesú sa do kultivačnej banky.
The first number indicates the actual cell passage number and the second number describes the passage number at which the cells were frozen and placed in storage.
Médium by sa malo ďalší deň vymeniť.
For example, cells that were frozen after passage five and defrosted and then were split three times (4 passages counting the freshly thawed cells as passage 1) after they were cultured again would be labelled passage 4.5.
Bunky H295R sa kultivujú v inkubátore pri 37 °C vo vzdušnej atmosfére s 5 %CO2 a médium sa mení za nové dva- až trikrát za týždeň.
An example of a numbering scheme is illustrated in Appendix I to the validation report (4).
Keď sú bunky konfluentné na približne 85 až 90 %, mali by sa deliť.
Stock medium is used as the base for the supplemented and freezing mediums.
Delenie buniek je potrebné na zabezpečenie zdravia a rastu buniek a na zachovanie buniek na vykonávanie biologických testov.
Supplemented medium is a necessary component for culturing cells.
Bunky sa trikrát opláchnu s fosfátovo tlmivým fyziologickým roztokom (PBS bez Ca2+ Mg2+) a uvoľnia sa z kultivačnej banky pridaním vhodného oddeľujúceho enzýmu, napr. trypsínu, do fosfátovo tlmivého roztoku (bez Ca2+ Mg2+).
Freezing medium is specifically designed to allow for impact-free freezing of cells for long-term storage.
Ihneď po oddelení buniek od kultivačnej banky by sa enzymatická reakcia mala zastaviť pridaním obohateného média v trojnásobnom pomere k objemu použitému na enzymatickú úpravu.
Prior to use, Nu-serum (or a comparable serum of equal properties that has been demonstrated to produce data that meets the test performance and Quality Control (QC) requirements), which is a constituent of supplemented media, should be analysed for background T and E2 concentrations.
Bunky sa vložia do odstredivkovej skúmavky, odstredia sa pri izbovej teplote, odstráni sa supernatant a peleta buniek sa resuspenduje v obohatenom médiu.
The preparation of these solutions is described in Appendix II to the validation report (4).
Vhodné množstvo bunkového roztoku sa umiestni do novej kultivačnej banky.
After initiation of an H295R cell culture from an original ATCC batch, cells should be grown for five passages (i.e.the cells are split 4 times).
Množstvo bunkového roztoku by sa malo upraviť tak, aby boli bunky konfluentné do 5 až 7 dní.
Passage five cells are then frozen in liquid nitrogen for storage.
Odporúčaný subkultivačný pomer je 1:3 až 1:4.
Prior to freezing the cells, a sample of the previous passage four cells is run in a QC plate (See paragraph 36 and 37) to verify whether the basal production of hormones and the response to positive control chemicals meet the assay quality control criteria as defined in Table 5.
Platnička by sa mala starostlivo označiť.
H295R cells need to be cultured, frozen and stored in liquid nitrogen to make sure that there are always cells of the appropriate passage/age available for culture and use.
Bunky sú teraz pripravené na použitie v skúške a nadbytočné bunky by sa mali zmraziť v tekutom dusíku, ako sa opisuje v odseku 20.
The maximum number of passages after taking a new [15] or frozen [16] batch of cells into culture that is acceptable for use in the H295R assay should not exceed 10.
Mrazenie buniek H295R (príprava buniek na uskladnenie v tekutom dusíku)
For example, acceptable passages for cultures of cells from a batch frozen at passage 5 would be 4.5 through 10.5.
Pri príprave buniek H295R na zmrazenie sa dodržuje postup popísaný vyššie v súvislosti s delením buniek až po krok resuspendácie pelety buniek na dne odstredivkovej skúmavky.
For cells started from these frozen batches, the procedure described in paragraph 19 should be followed.
Tu sa peleta buniek resuspenduje v mraziacom médiu.
These cells should be cultured for at least four (4) additional passages (passage 4.5) prior to their use in testing.Starting Cells from the Frozen Stock
Roztok sa prenesie do kryogenickej nádobky, príslušne sa označí a mrazí sa pri – 80 °C po dobu 24 hodín, potom sa kryogenická nádobka prenesie do tekutého dusíku na uskladnenie.
The procedure for starting the cells from frozen stock is to be used when a new batch of cells is removed from liquid nitrogen storage for the purpose of culture and testing.
Platničky a predinkubácia buniek na testovanie
Details for this procedure are set forth in Appendix III to the validation report (4).
Potrebný počet 24-jamkových platničiek pripravených podľa opisu v odseku 19 závisí od počtu testovaných chemikálií a konfluencie buniek v kultivačných miskách.
Cells are removed from liquid nitrogen storage, thawed rapidly, placed in supplemented medium in a centrifuge tube, centrifuged at room temperature, re-suspended in supplemented medium, and transferred to a culture flask.
Spravidla jedna kultivačná banka (75 cm2) s bunkami konfluentnými na 80 až 90 % poskytne dostatok buniek pre jednu až 1,5 (24-jamkovú) platničku v cieľovej hustote 200000 až 300000 buniek na ml média, z čoho vyplýva približne 50 až 60 % konfluencia v jamkách po 24 hodinách (obrázok č. 2).
The medium should be changed the following day.
To je typicky optimálna hustota buniek na produkciu hormónov v skúške.
The H295R cells are cultivated in an incubator at 37 °C with 5 % CO2 in air atmosphere and the medium is renewed 2-3 times per week.
Pri vyšších hustotách sa mení charakteristika produkcie T a aj E2.
When the cells are approximately 85-90 % confluent, they should be split.
Pred prvým vykonaním skúšky sa odporúča testovanie rôznych hustôt nasadenia od 200000 do 300000 buniek na ml a hustota, ktorá povedie k 50 – 60 % konfluencii v jamke po 24 hodinách, sa vyberie pre ďalšie skúšky.
Splitting of the cells is necessary to ensure the health and growth of the cells and to maintain cells for performing bioassays.
Fotomikrograf buniek H295R pri hustote nasadenia 50 % na 24-jamkovej kultivačnej platničke po 24 hodinách vyhotovený na kraji (A) a v strede (B) jamky
The cells are rinsed three times with phosphate-buffered saline (PBS, without Ca2+ Mg2+.) and freed from the culture flask by the addition of an appropriate detachment enzyme, e.g. trypsin, in PBS (without Ca2+ Mg2+).
Pitva zvierat generácie P
Immediately after the cells detach from the culture flask, the enzyme action should be stopped with the addition of supplemented medium at a ratio of 3× the volume used for the enzyme treatment.
Pred párením
Cells are placed into a centrifuge tube, centrifuged at room temperature, the supernatant is removed and the pellet of cells is re-suspended in supplemented medium.
Po párení
The appropriate amount of cell solution is placed in the new culture flask.
2 týždne
The amount of cell solution should be adjusted so that the cells are confluent within 5-7 days.
6 týždňov
The recommended sub-cultivation ratio is 1:3 to 1:4.
Gravidita
The plate should be carefully labelled.
Laktácia
The cells are now ready to be used in the assay and excess cells should be frozen in liquid nitrogen as described in paragraph 20.
Vývoj v maternici
Freezing H295R Cells (preparing cells for liquid nitrogen storage)
Pred odstavením
To prepare H295R cells for freezing, the procedure described above for splitting cells should be followed until the step for re-suspending the pellet of cells in the bottom of the centrifuge tube.
Po odstavení
Here, the pellet of cells is re-suspended in freezing medium.
Generácia rodičov
The solution is transferred to a cryogenic vial, labelled appropriately, and frozen at – 80 °C for 24 hours after which the cryogenic vial is transferred to liquid nitrogen for storage.
Kohorta
Plating and Pre-incubation of Cells for Testing
Účel určenia
The number of 24-well plates, prepared as outlined in paragraph 19, that will be needed depends on the number of chemicals to be tested and the confluency of the cells in the culture dishes.
Zvieratá/kohorta
As a general rule, one culture flask (75 cm2) of 80-90 % confluent cells will supply sufficient cells for one to 1,5 (24-well) plates at a target density of 200000 to 300000 cells per ml of medium resulting in approximately 50-60 % confluency in the wells at 24 hours (Figure 2).
Približný vek pri pitve (v týždňoch)
This is typically the optimal cell density for hormone production in the assay.
Cieľ je 20 vrhov na skupinu
At higher densities, T as well as E2 production patterns are altered.
Nadbytok
Before conducting the assay the first time, it is recommended that different seeding densities between 200000 and 300000 cells per ml be tested, and the density resulting in 50-60 % confluency in the well at 24 hours be selected for further experiments.
Reprodukcia
Photomicrograph of H295R cells at a seeding density of 50 % in a 24 well culture plate at 24 hours taken at the edge (A) and centre (B) of a well
Neurotoxicita
Necropsy P animals
Imunotoxicita
Pre-mating
Náhradníci
Post-mating
20 M + 20 Ž
2 weeks
10 M + 10Ž @
6 weeks
14 alebo 20-25, v prípade vyvolania účinkov
Pregnancy
@ eden na vrh a zastupujúci celkových 20 vrhov, ak je to možné
Lactation
Médium sa pipetou odoberie z kultivačnej banky a bunky sa trikrát prepláchnu sterilným fosfátovo tlmivým fyziologickým roztokom (bez Ca2+Mg2+).
In-utero development
Na oddelenie buniek od kultivačnej banky sa pridá enzymatický roztok (vo fosfátovo tlmivom fyziologickom roztoku).
Pre-weaning
Hustota buniek sa vypočíta s použitím napr. hemocytometra alebo počítadla buniek.
Post-weaning
Bunkový roztok by sa mal rozriediť na želanú očkovaciu hustotu a poriadne premiešať na zaistenie homogénnej hustoty buniek.
Parental generation
Bunky by sa mali na platničky vkladať s 1 ml bunkového roztoku na jamku a platničky a misky sa označia.
Cohort
Nasadené platničky sa inkubujú pri 37 °C vo vzdušnej atmosfére s obsahom menej ako 5 % CO2 po dobu 24 hodín, aby sa bunky mohli prichytiť k jamkám.
Approximate age at necropsy (weeks)
Pred začatím kultivácie buniek a následným testovaním by každé laboratórium malo preukázať citlivosť svojho systému merania hormónov (odseky 29 až 31).
Target is 20 litters per group
Keď sa majú použiť skúšky na meranie hormónov založené na protilátkach, testované chemikálie by sa pred začatím testovania mali analyzovať na potenciál narušiť systém merania použitý na kvantifikáciu T a E2, ako sa popisuje v odseku 32.
Surplus
DMSO je odporúčané rozpúšťadlo pre skúšku.
Reproductive
Ak sa použije iné rozpúšťadlo, mali by sa určiť tieto faktory:
Neurotoxicity
rozpustnosť testovanej chemikálie, forskolínu a prochlorazu v rozpúšťadle;
Immunotoxicity
cytotoxicita ako funkcia koncentrácie rozpúšťadla.
Spares
Odporúča sa, aby maximálna prípustná koncentrácia rozpúšťadla nepresiahla 10-násobné rozriedenie najmenej cytotoxickej koncentrácie rozpúšťadla.
20 M + 20 F
Pred prvým testovaním by laboratórium malo vykonať kvalifikačný pokus na preukázanie, že laboratórium je schopné udržať a dosiahnuť vhodnú bunkovú kultúru a podmienky skúšky potrebné na testovanie chemikálií, ako sa popisuje v odsekoch 33 až 35.
10 M + 10 F @
Pri začatí testovania novej série buniek by sa pred použitím novej série buniek najprv mala otestovať kontrolná platnička, aby sa posúdilo správanie buniek, ako sa popisuje v odsekoch 36 a 37.
14 or 20-25 if triggered
Systém merania hormónov
@ one per litter and representative of 20 litters in total where possible
Citlivosť metódy, správnosť, presnosť a krížová reaktivita so vzorovou matricou