natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Definitions of key terms are set out in the Appendix.
V súčasnosti sú dostupné rôzne modely zisťovania génovej mutácie transgénnych myší a tieto systémy sa používajú viac ako modely využívajúce transgénne potkany.
TGR gene mutation assays for which sufficient data are available to support their use in this test method are:
Ak je potkan jednoznačne vhodnejším modelom ako myš (napr. pri skúmaní mechanizmu karcinogenézy tumoru zisteného len u potkanov, na koreláciu so štúdiou toxicity na potkanoch, alebo keď je známe, že metabolizmus potkanov lepšie znázorňuje ľudský metabolizmus), malo by sa zvážiť použitie modelov využívajúcich transgénne potkany.
lacZ bacteriophage mouse (Muta™Mouse); lacZ plasmid mouse;
Teplota v miestnosti pre pokusné zvieratá by ideálne mala byť 22 °C (± 3 °C).
gpt delta (gpt and Spi–) mouse and rat;
Aj keď relatívna vlhkosť by mala byť aspoň 30 % a pokiaľ možno nemala by prevyšovať 70 % okrem času čistenia miestnosti, cieľom je udržať relatívnu vlhkosť v rozmedzí 50 – 60 %.
lacI mouse and rat (Big Blue®), as performed under standard conditions.
Osvetlenie by malo byť umelé, denne by sa malo striedať 12 hodín svetla s 12 hodinami tmy.
In addition, the cII positiveselection assay can be used for evaluating mutations in the Big Blue® and Muta™Mouse models.
Výber krmiva môže byť ovplyvnený potrebou zabezpečiť vhodnú prímes testovanej chemikálie, keď sa podáva týmto spôsobom.
Mutagenesis in the TGR models is normally assessed as mutant frequency;
Zvieratá by mali byť umiestnené v malých skupinách (najviac päť) rovnakého pohlavia, pokiaľ sa nepredpokladá agresívne správanie.
if required, however, molecular analysis of the mutations can provide additional information (see paragraph 24).
Ak to je vedecky opodstatnené, zvieratá môžu byť umiestnené samostatne.
These rodent in vivo gene mutation tests are especially relevant to assessing mutagenic hazard in that the assays' responses are dependent upon in vivo metabolism, pharmacokinetics, DNA repair processes, and translesion DNA synthesis, although these may vary among species, among tissues and among the types of DNA damage.
Zdravé mladé, pohlavne dospelé zvieratá (staré 8 až 12 týždňov na začiatku pokusu) sa náhodne rozdelia do kontrolných a pokusných skupín.
An in vivo assay for gene mutations is useful for further investigation of a mutagenic effect detected by an in vitro system, and for following up results of tests using other in vivo endpoints (24).
Zvieratá sa jedinečneoznačia.
In addition to being causally associated with the induction of cancer, gene mutation is a relevant endpoint for the prediction of mutation-based non-cancer diseases in somatic tissues (12) (13) as well as diseases transmitted through the germline.
Zvieratá sa aklimatizujú na laboratórne podmienky najmenej päť dní.
If there is evidence that the test chemical, or a relevant metabolite, will not reach any of the tissues of interest, it is not appropriate to perform a TGR gene mutation assay.
Na začiatku štúdie by mala byť hmotnostná variácia zvierat minimálna a nemala by presiahnuť ± 20 % strednej hmotnosti každého pohlavia.
In the assays described in paragraph 8, the target gene is bacterial or bacteriophage in origin, and the means of recovery from the rodent genomic DNA is by incorporation of the transgene into a λ bacteriophage or plasmid shuttle vector.
Príprava dávok
The procedure involves the extraction of genomic DNA from the rodent tissue of interest, in vitro processing of the genomic DNA (i.e. packaging of λ vectors, or ligation and electroporation of plasmids to recover the shuttle vector), and subsequent detection of mutations in bacterial hosts under suitable conditions.
Pevné testované chemikálie by sa pred podávaním dávok zvieratám mali rozpustiť alebo suspendovať vo vhodných rozpúšťadlách alebo nosičoch alebo primiešať do krmiva alebo pitnej vody.
The assays employ neutral transgenes that are readily recoverable from most tissues.
Kvapalné testované chemikálie sa podávajú priamo alebo rozriedené pred podávaním.
The basic TGR gene mutation experiment involves treatment of the rodent with a chemical over a period of time.
V prípade inhalačných expozícií sa testované chemikálie môžu v závislosti od svojich fyzikálnochemických vlastností podávať ako plyn, výpary alebo tuhé/kvapalné aerosóly.
Chemicals may be administered by any appropriate route, including implantation (e.g. medical device testing).
Používajú sa čerstvé prípravky testovanej chemikálie, pokiaľ údaje o stabilite nepoukazujú na vhodnosť uskladnenia.
The total period during which an animal is dosed is referred to as the administration period.
Podmienky skúšky
Administration is usually followed by a period of time, prior to sacrifice, during which the chemical is not administered and during which unrepaired DNA lesions are fixed into stable mutations.
Rozpúšťadlo/nosič
In the literature, this period has been variously referred to as the manifestation time, fixation time or expression time;
Rozpúšťadlo/nosič by nemali vyvolávať toxické účinky v používaných objemoch dávok a nemali by chemicky reagovať s testovanou chemikáliou.
the end of this period is the sampling time (15) (29).
Ak sa používajú iné ako dobre známe rozpúšťadlá/nosiče, ich použitie by malo byť podporené referenčnými údajmi, ktoré poukazujú na ich kompatibilitu.
After the animal is sacrificed, genomic DNA is isolated from the tissue(s) of interest and purified.
Vždy, keď to je možné, odporúča sa zvážiť použitie najprv vodného rozpúšťadla/nosiča.
Data for a single tissue per animal from multiple packaging/ligations are usually aggregated, and mutant frequency is generally evaluated using a total of between 105 and 107 plaque-forming or colony-forming units.
Pozitívne kontrolné vzorky
When using positive selection methods, total plaque-forming units are determined with a separate set of non-selective plates.
Obyčajne by sa mali používať zvieratá na paralelnú pozitívnu kontrolu.
Positive selection methods have been developed to facilitate the detection of mutations in both the gpt gene [gpt delta mouse and rat, gpt– phenotype (20) (22) (28)] and the lacZ gene [Muta™Mouse or lacZ plasmid mouse (3) (10) (11) (30)];
V prípade laboratórií, ktoré preukázali spôsobilosť (pozri odsek 23) a bežne používajú tieto skúšky, sa však na potvrdenie úspechu metódy môžu do každej štúdie začleniť DNA z pokusných zvierat z predchádzajúcich pozitívnych kontrol.
whereas, lacI gene mutations in Big Blue® animals are detected through a non-selective method that identifies mutants through the generation of coloured (blue) plaques.
Tieto DNA z predchádzajúcich pokusov by mali byť získané z rovnakých druhov a príslušných tkanív a mali by byť vhodne uskladnené (pozri odsek 36).
Positive selection methodology is also in place to detect point mutations arising in the cII gene of the λ bacteriophage shuttle vector [Big Blue® mouse or rat, and Muta™Mouse (17)] and deletion mutations in the λ red and gam genes [Spi– selection in gpt delta mouse and rat (21) (22) (28)].
Keď sa používajú paralelné pozitívne kontrolné vzorky, nie je potrebné podávať ich rovnakým spôsobom ako testovanú chemikáliu;
Mutant frequencyis calculated by dividing the number of plaques/plasmids containing mutations in the transgene by the total number of plaques/plasmids recovered from the same DNA sample.
o pozitívnych kontrolných vzorkách by však malo byť známe, že spôsobujú mutácie v jednom tkanive alebo vo viacerých tkanivách, ktoré sú relevantné pre testovanú chemikáliu.
In TGR gene mutation studies, the mutant frequency is the reported parameter.
Dávky pozitívnych kontrolných chemikálií by sa mali zvoliť tak, aby spôsobovali slabé alebo mierne účinky, ktoré kriticky stanovujú výsledky a citlivosť skúšky.
In addition, a mutation frequency can be determined as the fraction of cells carrying independent mutations;
Príklad pozitívnych kontrolných chemikálií a niektorých ich cieľových tkanív sa uvádzajú v tabuľke 1.
this calculation requires correction for clonal expansionby sequencing the recovered mutants (24).
Príklady pozitívnych kontrolných chemikálií a niektorých ich cieľových tkanív
The mutations scored in the lacI, lacZ, cII and gpt point mutation assays consist primarily of base pair substitution mutations, frameshift mutations and small insertions/deletions.
Pozitívna kontrolná chemikália a č. CAS
The relative proportion of these mutation types among spontaneous mutations is similar to that seen in the endogenous Hprt gene.
Názov Einecs a č. Einecs
Large deletions are detected only with the Spi– selectionand the lacZ plasmid assays (24).
Charakteristika
Mutations of interest are in vivo mutations that arise in the mouse or rat.
Cieľové tkanivo mutácie
In vitro and ex vivo mutations, which may arise during phage/plasmid recovery, replication or repair, are relatively rare, and in some systems can be specifically identified, or excluded by the bacterial host/positive selection system.
myš
Preparations
N-etyl-N-nitrozmočovina
A variety of transgenic mouse gene mutation detection models are currently available, and these systems have been more widely used than transgenic rat models.
CAS 759-73-9)
If the rat is clearly a more appropriate model than the mouse (e.g. when investigating the mechanism of carcinogenesis for a tumour seen only in rats, to correlate with a rat toxicity study, or if rat metabolism is known to be more representative of human metabolism) the use of transgenic rat models should be considered.
priamo pôsobiaci mutagén
The temperature in the experimental animal room ideally should be 22 °C (± 3 °C).
pečeň, pľúca
Although the relative humidity should be at least 30 % and preferably not exceed 70 % other than during room cleaning, the goal should be to maintain a relative humidity of 50-60 %.
kostná dreň, hrubé črevo, epitel hrubého čreva, tenké črevo, pečeň, pľúca, slezina, obličky, vaječníkové folikulárne bunky, samčie zárodočné bunky
Lighting should be artificial, with a daily sequence of 12 hours light, followed by 12 hours dark.
etylkarbamát (uretán)
The choice of diet may be influenced by the need to ensure a suitable admixture of a test chemical when administered by this route.
CAS 51-79-6)
Animals should be housed in small groups (no more than five) of the same sex if no aggressive behaviour is expected.
uretán
Animals may be housed individually if scientifically justified.
mutagén, vyžaduje metabolizmus alebo spôsobuje len slabé účinky.
Healthy young sexually mature adult animals (8-12 weeks old at start of treatment) are randomly assigned to the control and treatment groups.
kostná dreň, predžalúdok, tenké črevo, pečeň, pľúca, slezina
The animals are identified uniquely.
2,4-diaminotoluén
The animals are acclimated to the laboratory conditions for at least five days.
CAS 95-80-7)
At the commencement of the study, the weight variation of animals should be minimal and not exceed ± 20 % of the mean weight of each sex.
etyl-m-fenyléndiamín
Preparation of doses
mutagén, vyžaduje metabolizmus, pozitívny aj v skúške Spi-
Solid test chemicals should be dissolved or suspended in appropriate solvents or vehicles or admixed in diet or drinking water prior to dosing of the animals.
pečeň
Liquid test chemicals may be dosed directly or diluted prior to dosing.
benzo[a]pyrén
For inhalation exposures, test chemicals can be administered as gas, vapour or a solid/liquid aerosol, depending on their physicochemical properties.
CAS 50-32-8)
Fresh preparations of the test chemical should be employed unless stability data demonstrate the acceptability of storage.
benzo[def]chryzén
Test Conditions
mutagén, vyžaduje metabolizmus
Solvent/vehicle
pečeň, omentum
The solvent/vehicle should not produce toxic effects at the dose volumes used, and should not be suspected of chemical reaction with the test chemical.
kostná dreň, prsia, hrubé črevo, predžalúdok, žľaznatý žalúdok, srdce, pečeň, pľúca, samčie zárodočné bunky
If other than well-known solvents/vehicles are used, their inclusion should be supported with reference data indicating their compatibility.
Negatívne kontrolné vzorky
It is recommended that wherever possible, the use of an aqueous solvent/vehicle should be considered first.
Pre každý čas odberu vzoriek by sa mali začleniť negatívne kontrolné vzorky ošetrované len s rozpúšťadlom alebo nosičom, s ktorými sa inak zaobchádza rovnako ako s pokusnými skupinami.
Positive Controls
Ak neexistujú historické alebo zverejnené kontrolné údaje, ktoré by preukazovali, že zvolené rozpúšťadlo/nosič nespôsobujú žiadne zhubné ani mutagénne účinky, neošetrované kontrolné vzorky by sa mali zaradiť aj pre každý čas odberu vzoriek na stanovenie prijateľnosti kontrolnej skupiny, ktorej bol podaný nosič.
Concurrent positive control animals should normally be used.
Overenie spôsobilosti laboratória
However, for laboratories that have demonstrated competency (see paragraph 23) and routinely use these assays, DNA from previous positive control treated animals may be included with each study to confirm the success of the method.
Spôsobilosť v týchto skúškach by sa mala určiť preukázaním schopnosti reprodukovať predpokladané výsledky zo zverejnených údajov (24) pre:
Such DNA from previous experiments should be obtained from the same species and tissues of interest, and properly stored (see paragraph 36).
frekvencie mutácií s pozitívnymi kontrolnými chemikáliami (vrátane slabých reakcií), ako sa napríklad uvádzajú v tabuľke 1, s nemutagénnymi kontrolami a kontrolami s podávaním nosiča;
When concurrent positive controls are used, it is not necessary to administer them by the same route as the test chemical;
a 2) získanie preneseného génu z genómovej DNA (napr. účinnosť spájania).
however, the positive controls should be known to induce mutations in one or more tissues of interest for the test chemical.
Sekvenovanie mutácií
The doses of the positive control chemicals should be selected so as to produce weak or moderate effects that critically assess the performance and sensitivity of the assay.
Pokiaľ ide o uplatňovanie noriem, sekvenovanie DNA mutácií sa nevyžaduje, najmä v prípadoch, keď sa získa jasný pozitívny alebo negatívny výsledok.
Examples of positive control chemicals and some of their target tissues are included in Table 1.
Údaje o sekvenovaní však môžu byť užitočné v prípade spozorovania vysokej variácie medzi jednotlivcami.
Examples of positive control chemicals and some of their target tissues
V takýchto prípadoch sa sekvenovanie môže použiť na vylúčenie možnosti výnimočných (jackpots) alebo klonových udalostí identifikáciou podielu jedinečných mutácií z konkrétneho tkaniva.
Positive control chemical and CAS No
Sekvenovanie približne 10 mutácií na jedno tkanivo na jedno zviera by malo postačovať na jednoduché určenie, či klonové mutácie zvyšujú frekvenciu mutácií;
EINECS name and EINECS No
sekvenovanie až 25 mutácií môže byť potrebné na matematickú korekciu frekvencie mutácií o klonalitu.
Characteristics
Sekvenovanie mutácií sa môže zvážiť aj v prípade zistenia malých zvýšení frekvencie mutácií (t. j. ktoré len presahujú hodnoty neošetrovanej kontrolnej skupiny).
Mutation Target Tissue
Rozdiely v spektre mutácií medzi kolóniami mutácií a pokusnými a kontrolnými zvieratami môžu potvrdiť mutagénny účinok (29).
Mouse
Mutačné spektrá môžu byť užitočné aj na vývoj mechanistických hypotéz.
N-Ethyl-N-nitrosourea
Keď sa má sekvenovanie začleniť ako súčasť protokolu z testu, musí sa osobitne dbať na plán týchto štúdií, najmä pokiaľ ide o počet sekvenovaných mutácií na vzorku, aby sa dosiahla dostatočná výpovedná hodnota podľa použitého štatistického modelu (pozri odsek 43).
[CAS No 759-73-9]
Počet zvierat a ich pohlavie
Direct acting mutagen
Počet zvierat v skupine by sa mal vopred určiť tak, aby bol dostatočne štatisticky významný na zistenie aspoň zdvojenia vo frekvencii mutácií.
Liver, lung
Bežne by sa mali používať samce.
Bone marrow, colon, colonic epithelium, intestine, liver, lung, spleen, kidney, ovarian granulosa cells, male germ cells
Ak existujú medzi pohlaviami významné rozdiely, pokiaľ ide o toxicitu alebo metabolizmus, potrebné sú samce a aj samice.
Ethyl carbamate (urethane)
Obdobie podávania
[CAS No 51-79-6]
Na základe pozorovaní, že mutácie pribúdajú s každým ošetrením, je potrebný režim s opakovanou dávkou s dennými ošetreniami počas obdobia 28 dní.
Urethane
Všeobecne sa to považuje za prijateľné na produkciu dostatočnej akumulácie mutácií slabými mutagénmi a aj na zabezpečenie času vystavenia dostačujúceho na zistenie mutácií v orgánoch s pomalou proliferáciou.
Mutagen, requires metabolism but produces only weak effects
Pre niektoré hodnotenia môžu byť vhodné alternatívne režimy podávania a tieto iné rozvrhy podávania by mali byť v protokole vedecky odôvodnené.
Bone marrow, forestomach, small intestine, liver, lung, spleen
Ošetrovania by nemali byť kratšie ako čas potrebný na úplnú indukciu všetkých relevantných metabolizujúcich enzýmov a kratšie ošetrovania si môžu vyžadovať použitie viacerých rôznych časov odberu vzoriek, ktoré sú vhodné pre orgány s rôznymi mierami proliferácie.
2,4-Diaminotoluene
V každom prípade by sa pri odôvodňovaní protokolu mali použiť všetky dostupné informácie (napr. o všeobecnej toxicite alebo o metabolizme a farmakokinetike), najmä v prípade odchýlenia sa od uvedených odporúčaní.
[CAS No 95-80-7]
Hoci to môže zvýšiť citlivosť, čas ošetrovania dlhší ako 8 týždňov by sa mal jasne vysvetliť a odôvodniť, pretože dlhý čas ošetrovania môže klonovou expanziou spôsobiť zrejmé zvýšenie frekvencie mutácií (29).
ethyl-m-phenylenediamine
Veľkosti dávok
Mutagen, requires metabolism, also positive in the Spi– assay
Veľkosti dávok by mali vychádzať z výsledkov štúdie na zistenie rozsahu dávok s meraním všeobecnej toxicity, ktorá sa vykonala rovnakým spôsobom expozície, alebo z výsledkov vopred existujúcich štúdii subakútnej toxicity.
Liver
Na určenie rozsahov dávok sa môžu použiť netransgénne zvieratá rovnakého kmeňa hlodavcov.
Benzo[a]pyrene
V hlavnom teste by kompletná štúdia na získanie informácií o vzťahu medzi dávkou a reakciou mala zahŕňať negatívnu kontrolnú skupinu (pozri odsek 22) a minimálne tri veľkosti dávok s vhodnými rozostupmi okrem prípadov, keď bola použitá limitujúca dávka (pozri odsek 28).
[CAS No 50-32-8]
Najvyššia dávka by mala byť maximálna tolerovaná dávka (MTD).
Benzo[def]chrysene
Maximálna tolerovaná dávka sa vymedzuje ako dávka produkujúca známky toxicity na takej úrovni, že vyššie úrovne dávok založené na rovnakom dávkovacom režime by pravdepodobne spôsobili letalitu.
Mutagen, requires metabolism
Chemikálie s osobitnými biologickými aktivitami pri nízkych netoxických dávkach (ako napríklad hormóny a mitogény) a chemikálie, ktoré vykazujú saturáciu toxikokinetických vlastností, môžu byť vyňaté z kritérií na stanovenie dávok a mali by sa hodnotiť prípad od prípadu.
Liver, omenta,
Veľkosti dávok by mali pokrývať rozsah od maximálnej po malú, resp. žiadnu toxicitu.
Bone marrow, breast, colon, forestomach, glandular stomach, heart, liver, lung, male germ cells
Limitný test
Negative controls
Ak z pokusov na zistenie rozsahu alebo z existujúcich údajov týkajúcich sa súvisiacich kmeňov hlodavcov vyplýva, že režim podávania aspoň limitujúcej dávky (pozri nižšie) nespôsobuje žiadne pozorovateľné toxické účinky, a ak sa genotoxicita neočakáva ani na základe údajov zo štrukturálne príbuzných chemikálií, nepovažuje sa za nevyhnutné uskutočniť celú štúdiu s použitím troch veľkostí dávok.
Verification of laboratory proficiency
V prípade obdobia podávania kratšieho ako 14 dní je limitujúca dávka 2000 mg/kg telesnej váhy/deň (rozvrhy dávok iné než 28 denných podaní by mali byť v protokole vedecky odôvodnené, pozri odsek 26).
and 2) transgene recovery from genomic DNA (e.g. packaging efficiency).
Pri plánovaní skúšky by sa všeobecne mal zvážiť predpokladaný spôsob expozície ľudí.
Sequencing of mutants
Preto môžu byť prijateľné iné spôsoby expozície (ako napríklad pitná voda, subkutánne, intravenózne, lokálne, inhalácia, intratracheálne, strava alebo implantácia), keď ich možno odôvodniť.
For regulatory applications, DNA sequencing of mutants is not required, particularly where a clear positive or negative result is obtained.
Intraperitoneálna injekcia sa neodporúča, keďže to nie je fyziologicky relevantný spôsob expozície ľudí.
However, sequencing data may be useful when high inter-individual variation is observed.
Maximálny objem kvapaliny, ktorá sa môže naraz podávať sondou alebo injekciou závisí od veľkosti pokusného zvieraťa.
In these cases, sequencing can be used to rule out the possibility of jackpots or clonal events by identifying the proportion of unique mutants from a particular tissue.
Objem by nemal byť väčší ako 2 ml/100 g telesnej hmotnosti.
Sequencing approximately 10 mutants per tissue per animal should be sufficient for simply determining if clonal mutants contribute to the mutant frequency;
Požitie objemov väčších ako uvedený by malo byť opodstatnené.
sequencing as many as 25 mutants may be necessary to correct mutant frequency mathematically for clonality.
Okrem dráždivých alebo žieravých chemikálií, ktoré bežne odhalia zhoršené účinky pri vyšších koncentráciách, by sa variabilita testovacieho objemu mala minimalizovať upravením koncentrácie na zabezpečenie stáleho objemu pri všetkých veľkostiach dávok.
Sequencing of mutants also may be considered when small increases in mutant frequency (i.e. just exceeding the untreated control values) are found.
Čas odberu vzoriek
Differences in the mutant spectrum between the mutant colonies from treated and untreated animals may lend support to a mutagenic effect (29).
Somatické bunky
Also, mutation spectra may be useful for developing mechanistic hypotheses.
Čas odberu vzoriek je kritickou premennou, keďže ho určuje doba potrebná na fixáciu mutácií.
When sequencing is to be included as part of the study protocol, special care should be taken in the design of such studies, in particular with respect to the number of mutants sequenced per sample, to achieve adequate power according to the statistical model used (see paragraph 43).
Táto doba závisí od tkaniva a zrejme súvisí s dobou zmeny bunkovej populácie, pričom kostná dreň a tenké črevo reagujú rýchlo a pečeň reaguje omnoho pomalšie.
Number and Sex of Animals
Ak sú tkanivá s pomalou proliferáciou osobitne významné, môže byť vhodnejší neskorší čas odberu vzoriek v trvaní 28 dní nasledujúci po období podávania v trvaní 28 dní (16) (29).
The number of animals per group should be predetermined to be sufficient to provide statistical power necessary to detect at least a doubling in mutant frequency.
V takýchto prípadoch by neskorší čas odberu vzoriek nahradil čas odberu vzoriek 3 dni a vyžadoval by si vedecké odôvodnenie.
Group sizes will consist of a minimum of five animals;
Zárodočné bunky
however, if the statistical power is insufficient, the number of animals should be increased as required.
Skúšky TGR sú vhodné na skúmanie indukcie génovej mutácie v mužských zárodočných bunkách (7) (8) (27), v ktorých sú dobre vymedzené časové rozvrhnutie a kinetika spermatogenézy (27).
Male animals should normally be used.
Nízky počet vajíčok dostupných na analýzu, dokonca aj po superovulácii, a skutočnosť, že v oocyte nie je syntéza DNA, vylučujú určenie mutácie v ženských zárodočných bunkách s použitím transgénnych skúšok (31).
There may be cases where testing females alone would be justified;
Časy odberu vzoriek mužských zárodočných buniek by mali byť zvolené tak, aby sa odobrala vzorka z celého rozsahu exponovaných typov buniek v celom vývoji zárodočných buniek a aby stupeň, na ktorý je odber vzoriek zameraný, bol vystavený dostatočnej expozícii.
for example, when testing human female-specific drugs, or when investigating female-specific metabolism.
Čas prechodu vyvíjajúcich sa zárodočných buniek zo spermatogoniálnych kmeňových buniek na dospelé spermie, ktoré sa dostanú do semenovodu/chvosta semenníka, je ~49 dní u myší (36) a ~70 dní u potkanov (34) (35).