natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Antibodies to BTV present in the test serum block the reactivity of the monoclonal antibody (Mab) and result in a reduction in the expected colour development after the addition of enzyme labelled anti-mouse antibody, and chromogen/ substrate.
Protilátky na BTV, ktoré sú v testovom sére prítomné, blokujú reaktívnosť monoklonnej protilátky (Mab), v dôsledku čoho sa obmedzí predpokladaná zmena farby po pridaní enzýmom označenej protilátky proti myšiam a chromogénu/substrátu.
Sera can be tested at a single dilution of 1:5 (spot test – Appendix 1) or may be titrated (serum titration – Appendix 2) to give dilution end-point.
Séra možno testovať pri jednoduchom zriedení 1:5 (škvrnový test – dodatok 1) alebo ich možno titrovať (sérová titrácia – dodatok 2), až kým sa nedosiahne koncový bod zriedenia.
Material and Reagents:
Materiál a činidlá:
Appropriate ELISA microtitre plates.
Príslušné mikrotitračné platničky na test ELISA.
Antigen: supplied as a cell extracted concentrate, prepared as described below, and stored at either –20 °C or –70 °C.
Antigén: dodaný vo forme koncentrátu získaného z buniek pripraveného podľa opisu uvedeného ďalej a skladovaného pri teplote buď –20 °C alebo –70 °C.
Blocking buffer: phosphate buffered saline (PBS) containing 0,3 % BTV negative adult bovine serum, 0,1 % (v/v) Tween-20 (supplied as polyoxyethylene sorbiton monolaurate syrup) in PBS.
Blokujúci pufrovaný roztok: fosfátom pufrovaný fyziologický roztok (PBS) obsahujúci 0,3 % BTV negatívneho séra z dospelých jedincov hovädzieho dobytka, 0,1 % (v/v) Tween-20 (dodaného vo forme polyoxyetylénsorbitonmonolauranového sirupu) v PBS.
Monoclonal antibody: 3-17-A3 (supplied as hybridoma tissue-culture supernatant) directed against the group-specific polypeptide VP7, stored at -20 °C or freeze-dried and diluted 1/100 with blocking buffer before use.
Monoklonná protilátka: 3-17-A3 (dodaná vo forme hybridomového supernatantu tkanivovej kultúry) nasmerovaná proti skupinovo špecifickému polypeptidu VP7, skladovaná pri teplote –20 °C alebo zmrazením vysušená a pred použitím zrieďovaná v pomere 1:100 blokujúcim pufrovaným roztokom.
Conjugate: rabbit anti-mouse globulin (adsorbed and eluted) conjugated to horseradish peroxidase and kept in the dark at 4 °C.
Konjugát: králičí globulín proti myšiam (adsorbovaný a vyluhovaný) konjugovaný s peroxidázou chrenu a uchovávaný na tmavom mieste pri teplote 4 °C.
Chromogen and substrate: Orthophenylene diamine (OPD-chromogen) at a final concentration of 0,4 mg/ml in sterile distilled water.
Chromogén a substrát: ortofenyléndiamín (OPD-chromogén) s konečnou koncentráciou 0,44 mg/ml v sterilnej destilovanej vode.
Hydrogen peroxide (30 %w/v-substrate) 0,05 % v/v added immediately before use (5μl H2 O2 per 10 ml OPD).
Peroxid vodíka (30 % w/v-substrát) 0,05 % v/v pridaný bezprostredne pred použitím (5μl H2O2 na 10 ml OPD).
(Handle OPD with care - wear rubber gloves - suspected mutagen).
(S OPD manipulujte opatrne – s gumovými rukavicami na rukách – môže ísť o mutagén).
1 Molar sulphuric acid: 26,6 ml of acid added to 473,4 ml of distilled water.
1 molárna kyselina sírová: 26,6 ml kyseliny sa pridá do 473,4 ml destilovanej vody.
(Remember Acid must be added to water, never water to acid.)
(nezabudnite – vždy pridávajte kyselinu do vody, nikdy nie vodu do kyseliny.)
Orbital shaker.
Kruhová trepačka.
ELISA plate reader (the test may be read visually).
Vyhodnocovač platničky ELISA (test možno vyhodnotiť vizuálne).
Test format
Formát testu
Cc: conjugate control (no serum/ no monoclonal antibody); C++: strong positive serum control; C+: weak positive serum control; C-: negative serum control; Cm: monoclonal antibody control (no serum).
Cc: kontrola konjugátu (bez séra/bez monoklonnej protilátky); C++: silne pozitívna kontrola séra; C++: slabo pozitívna kontrola séra; C-: negatívna kontrola séra; Cm: kontrolna monoklonnej protilátky (bez séra).
APPENDIX 1:
DODATOK 1
Spot dilution (1:5) format (40 sera/plate)
Zriedenie na škvrnový test (1:5) formát (40 sér/platnička)
Test Sera
Testové séra
APPENDIX 2:
DODATOK 2
Serum titration format (10 sera/plate)
Formát sérovej titrácie (10 sér/platnička)
Test protocol:
Protokol o teste:
Conjugate control (Cc) Wells 1A and 1B are a blank control consisting of BTV antigen and conjugate.
Kontrola konjugátu (Cc) Jamky 1A a 1B sú slepá kontrola pozostávajúca z antigénu BTV a konjugátu.
This may be used to blank the ELISA reader.
To možno použiť na kalibráciu vyhodnocovača testu ELISA.
Mab control (Cm) Columns 1 and 2, rows G and H are the monoclonal antibody control and contain BTV antigen, monoclonal antibody and conjugate.
Kontrola Mab (Cm) Stĺpce 1 a 2, rady G a H sú kontrola monoklonnej protilátky a obsahujú antigén BTV, monoklonnú protilátku a konjugát.
These wells represent maximum colour.
Tieto jamky predstavujú maximálne zafarbenie.
The mean of the optical density readings from this control represents the 0 % inhibition value.
Stredná hodnota optickej hustoty hodnôt zistených z tejto kontroly predstavuje 0 %-nú hodnotu inhibície.
Positive control (C++, C+) Columns 1 and 2, rows C-D-E-F.
Pozitívna kontrola (C++, C+) Stĺpce 1 a 2, riadky C-D-E-F.
These wells contain BTV antigen, BTV strong and weak positive antiserum respectively, Mab and conjugate.
Tieto jamky obsahujú antigén BTV, silné a slabé pozitívne sérum BTV v uvedenom poradí, Mab a konjugát.
Negative control (C-) Wells 2A and 2B are the negative controls, which contain BTV antigen, BTV negative antiserum, Mab and conjugate.
Negatívna kontrola (C–) Jamky 2A a 2B sú negatívne kontroly, ktoré obsahujú antigén BTV, negatívne antisérum BTV, Mab a konjugát.
Test sera For large-scale serological surveys and rapid screening, sera may be tested at a single dilution of 1:5 (Appendix 1).
Testové séra V prípade rozsiahlych sérologických prieskumov a rýchleho skríningu sa séra môžu testovať pri jednoduchom zriedení 1:5 (Dodatok 1).
Alternatively, 10 sera may be tested over a dilution range from 1:5 to 1:640 (Appendix 2).
Alebo možno testovať 10 sér pri zriedení v rozsahu od 1:5 ku 1:640 (Dodatok 2).
This will give some indication of the titre of antibody in the test sera.
Takto sa získajú určité údaje o titre protilátky v testovom sére.
Dilute BTV antigen to pre-titrated concentration in PBS, sonicate briefly to disperse aggregated virus (if sonicator is not available, pipette vigorously) and add 50 μl to all wells of the ELISA plate.
V PBS zrieďte antigén BTV na predtitrovanú koncentráciu, krátko previbrujte ultrazvukom, aby sa rozptýlil zhluk vírusu (pokiaľ nie je k dispozícii ultrazvukový prístroj, silne pipetujte) a pridajte 50 μl do všetkých jamiek platničky na test ELISA.
Tap sides of plate to disperse antigen.
Poklopte boky platničky, aby sa rozptýlil antigén.
Incubate at 37 °C for 60 minutes on an orbital shaker.
Inkubujte 60 minút pri teplote 37 °C na kruhovej trepačke.
Wash plates three times by flooding and emptying the wells with non-sterile PBS and blot dry on absorbent paper.
Platničky umyte trikrát vypláchnutím jamiek nesterilným PBS a usušte na absorpčnom papieri.
Control wells: Add 100 μl of blocking buffer to Cc wells.
Jamky s kontrolou: do jamiek Cc pridajte 100 μl blokujúceho pufrovaného roztoku.
Add 50 ul of positive and negative control sera, at a dilution of 1:5 (10 μ l sera + 40 μl blocking buffer), to respective wells C-, C+ and C++.
Do príslušných jamiek C–, C+ a C++ pridajte 50 μl pozitívneho a negatívneho kontrolného séra pri zriedení 1:5 (10 μl séra +40 μl blokujúceho pufrovaného roztoku).
Add 50μl blocking buffer to Mab control wells.
Do jamiek s kontrolou Mab pridajte 50 μl blokujúceho pufrovaného roztoku.
Spot titration method: Add a 1:5 dilution of each test serum in blocking buffer to duplicate wells of columns 3 to 12 (10 μl sera +40 μl blocking buffer),
Metóda titrácie pri škvrnovom teste: Do blokujúceho pufrovaného roztoku pridajte každé z testových sér zriedené v pomere 1:5, aby sa zdvojili jamky v stĺpcoch 3 až 12 (10 μl séra +40 μl blokujúceho pufrovaného roztoku)
Serum titration method: Prepare a two-fold dilution series of each test sample (1:5 to 1:640) in blocking buffer across eight wells of single columns 3 to 12.
metóda sérovej titrácie: V blokujúcom pufrovanom roztoku pripravte dve série zriedení každej z testových vzoriek (1:5 až 1:640) cez osem jamiek jednotlivých stĺpcov 3 až 12.
Immediately after the addition of the test sera, dilute Mab 1:100 in blocking buffer and add 50 μl to all wells of the plate except for the blank control.
Bezprostredne po pridaní testového séra zrieďte Mab 1:100 v blokujúcom pufrovanom roztoku a pridajte 50 μl do všetkých jamiek platničky okrem tých, ktoré obsahujú slepú kontrolu.
Wash three times with PBS and blot dry.
Trikrát umyte s použitím PBS a vysušte.
Dilute rabbit anti-mouse concentrate to 1/5000 in blocking buffer and add 50 μl to all wells of the plate.
Králičí koncentrát proti myšiam zrieďte na 1/5000 v blokujúcom pufrovanom roztoku a pridajte 50 μl do všetkých jamiek platničky.
Thaw the O-Phenylenediamine dihydrochloride (OPD) and immediately before use add 5 μl of 30 % hydrogen peroxide to each 10 ml of OPD.
Nechajte roztopiť O-fenyléndiamín dihydrochorid (OPD) a bezprostredne pred použitím pridajte 5 μl 30 %-ného peroxidu vodíka do každých 10 ml OPD.
Add 50 μl to all wells of the plate.
Pridajte 50 μl do všetkých jamiek platničky.
Allow colour to develop for approximately 10 minutes and stop the reaction with 1 Molar sulphuric acid (50 μl per well).
Nechajte meniť farbu približne 10 minút a reakciu zastavte 1 molárnou kyselinou sírovou (50 μl na jednu jamku).
Colour should develop in the Mab control wells and in those wells containing sera with no antibody to BTV.
Farba by sa mala meniť v jamkách obsahujúcich kontroly Mab, ako aj v tých, ktoré obsahujú séra bez protilátky na BTV.
Examine and record the plates either visually or using a spectrophotometric reader.
Platničky preskúmajte a výsledok zaznamenajte buď vizuálne alebo pomocou spektrofotometra.
Analysis of results:
Analýza výsledkov:
Using the software package print out the optical density (OD) values, and the percentage inhibition (PI) for test and control sera based on the mean value recorded in the antigen control wells.
S použitím softvéru vytlačte hodnoty optickej hustoty (OD) a percentuálnu inhibíciu (PI) v prípade testových a kontrolných sér založené na strednej hodnote, ktorá sa zaznamenala v jamkách obsahujúcich kontrolu antigénu.
The date expressed as OD and PI values are used to determine whether the test has performed within acceptable limits.
Údaje vyjadrené ako hodnoty OD a PI sa používajú na to, aby sa určilo, či sa výsledky testu pohybujú v prijateľných medziach.
If a computer software package is not available print out the OD values using the ELISA printer.
Pokiaľ počítačový softvér nie je k dispozícii, vytlačte hodnoty OD na tlačiarni ELISA.
Calculate the mean OD value for the antigen control wells, which is equivalent to the 100 % value.
Stanovte strednú hodnotu OD pre jamky obsahujúce kontrolu antigénu, ktorá sa rovná 100 %-nej hodnote.
Determine the 50 % OD value and manually calculate the positivity and negativity of each sample.
Stanovte 50 %-nú hodnotu OD a manuálne vypočítajte pozitívnosť a negatívnosť každej vzorky.
Percentage inhibition (PI) value = 100 – (OD of each test control/Mean OD of Cm) × 100.
Percentuálna hodnota inhibície = 100 – (OD každej testovej kontroly/stredná hodnota OD Cm) × 100.
The duplicate negative control serum wells and the duplicate blank wells must record PI values between +25 % and –25 %, and between +95 % and +105 %, respectively.
Zdvojené jamky s negatívnym kontrolným sérom a zdvojené jamky so slepou vzorkou musia dosiahnuť hodnoty PI v rozmedzí +25 % až –25 % v prípade negatívneho kontrolného séra a +95 % až +105 % v prípade slepej vzorky.
Failure to be within these limits does not invalidate the plate but does suggest that background colour is developing.
Ak sa hodnoty pohybujú mimo týchto hraníc, neznamená to, že je výsledok nesprávny, ale vyjadruje, že sa podkladová farba vyvíja.
The strong and weak positive control sera must record PI values between +81 % and +100 %, and between +51 % and +80 %, respectively.
V prípade silných a slabých pozitívnych sér sa zaznamenané hodnoty PI musia pohybovať v rozmedzí +81 % až +100 % v prípade silných pozitívnych sér, resp. v rozmedzí +51 % až +80 % v prípade slabých pozitívnych sér.
The diagnostic threshold for test sera is 50 % (PI 50 % or OD 50 %).
Diagnostická prahová hodnota pre testové séra je 50 % (PI 50 % alebo OD 50 %).
Samples recording PI values >50 % are recorded negative.
Vzorky so zaznamenanými hodnotami PI >50 % sa zaznamenajú ako negatívne.
Samples that record PI values above and below the threshold for the duplicate wells are considered doubtful; such samples may be re-tested in the spot test and/or titration.
Vzorky, v prípade ktorých sa zaznamenali hodnoty PI vyššie alebo nižšie ako je prahová hodnota pre zdvojené jamky, sa považujú za vzorky vyvolávajúce pochybnosti; takého vzorky je možné opätovne podrobiť škvrnovému testu a/alebo titrácii.
Visual reading: Positive and negative samples are easily discernible by eye; weakly positive or strong negative samples may be more difficult to interpret by eye.
Vizuálne vyhodnotenie: Pozitívne a negatívne vzorky ľahko rozoznať voľným okom; slabo pozitívne alebo silne negatívne vzorky možno voľným okom posúdiť ťažšie.
Preparation of BTV ELISA antigen:
Titrácia antigénu BTV ELISA:
Wash 40-60 roux of confluent BHK-21 cells three times with serum-free Eagle's medium and infect with bluetongue virus serotype 1 in serum-free Eagle's medium.
Trikrát umyte 40 – 60 radov súbežných buniek BKH-21 Eaglovým médiom bez obsahu séra a infikujte vírusom katarálnej horúčky oviec sérotypu 1 Eaglovo médium bez obsahu séra.
Incubate at 37 °C and examine daily for cytopathic effect (CPE).
Inkubujte pri teplote 37 °C a každý deň skúmajte cytopatický účinok (CPE).
When CPE are complete in 90 % to 100 % of the cell sheet of each roux, harvest the virus by shaking any still-attached cells from the glass.
Keď je CPE zavŕšený na 90 % až 100 % bunkovej vrstvy každého radu, zozbierajte vírus strasením buniek, ktoré ešte môžu byť prilepené, zo skla.
Centrifuge at 2000 to 3000 rpm to pellet the cells.
Odstreďte pri 2000 až 3000 ot/min. s cieľom peletovať bunky.
Discard the supernatant and re-suspend the cells in approximately 30 ml of PBS containing 1 % ‘Sarkosyl’ and 2 ml phenylmethylsulphonyl fluoride (lysis buffer).
Supernatant odstráňte a bunky znovu rozptýľte v približne 30 ml PBS obsahujúcom 1 % sarkosylu a 2 ml fenylmetylsulfonylfluoridu (pufrovaný roztok na rozpúšťanie).
This may cause the cells to form a gel and more lysis buffer may be added to reduce this effect.
Toto môže spôsobiť, že bunky začnú vytvárať gél a kvôli potlačeniu tohto účinku možno pridať viac pufrovaného roztoku na rozpúšťanie.
(NB: phenylmethylsulphonyl fluoride is harmful - handle with extreme caution.)
(NB: fenylmetylsulfonylfluorid je škodlivý – manipulujte s ním mimoriadne opatrne.)
Disrupt the cells for 60 seconds using an ultrasonic probe at an amplitude of 30 microns.
Bunky na 60 sekúnd narušte ultrazvukovou sondou pri amplitúde 30 mikrónov.
Centrifuge at 10000 rpm for 10 minutes.
Odstreďujte pri 10000 ot./min. 10 minút.
Store the supernatant at +4 °C and re-suspend the remaining cell pellet in 10 to 20 ml of lysis buffer.
Supernatant uskladnite pri teplote +4 °C a zvyšnú peletu buniek znovu rozptýľte v 10 až 20 ml pufrovaného roztoku na rozpúšťanie.
Sonicate and clarify, storing the supernatant at each stage, a total of three times.
Previbrujte ultrazvukom a vyčírte, pričom supernatant skladujte v každej fáze, spolu trikrát.
Pool the supernatants and centrifuge at 24000 rpm (100,000 g) for 120 minutes at +4 °C over a 5 ml cushion of 40 % sucrose (w/v in PBS) using 30 ml Beckmann centrifuge tubes and an SW 28 rotor.
Zhromaždite supernatanty a odstreďujte pri 24000 ot./min. (100,000 g) 120 minút pri teplote +4 °C nad 5 ml vrstvou 40 %-nej sacharózy (w/v v PBS) s použitím 30 ml Beckmannovych odstreďovacích rúrok a rotora SW 28.
Discard the supernatant, drain the tubes thoroughly and re-suspend the pellet in PBS by sonication.
Supernatant odstráňte, dôkladne vypustite rúrky a peletu znova rozptýľte v PBS ultrazvukom.
Store the antigen in aliquots at –20 °C.
Antigén skladujte v alikvotných čiastkach pri teplote –20 °C.
Titration of BTV ELISA antigen:
Titrácia antigénu BTV ELISA:
Bluetongue ELISA antigen is titrated by the indirect ELISA.
Antigén katarálnej horúčky oviec ELISA sa titruje nepriamym testom ELISA.
Twofold dilutions of antigen are titrated against a constant dilution (1/100) monoclonal antibody 3-17-A3.
Dvojnásobné zriedenia antigénu sa titrujú podľa konštantne zriedenej (1/100) monoklonnej protilátky 3-17-A3.
The protocol is as follows:
Protokol je takýto:
Titrate a 1:20 dilution of BTV antigen in PBS across the microtitre plate in a twofold dilution series (50 μl/well) using a multichannel pipette.
Natitrujte 1:20 zriedenie antigénu BTV v PBS cez mikrotitračnú platničku v zdvojenej sérii zriedení (50 μl/jamka) s použitím viackanálikovej pipety.
Incubate for one hour at 37 °C on an orbital shaker.
Inkubujte jednu hodinu pri teplote 37 °C na kruhovej trepačke.
Wash plates three times with PBS.
Platničky trikrát umyte s použitím PBS.
Add 50 μl of monoclonal antibody 3-17-A3 (diluted 1/100) to each well of the microtitre plate.
Do každej jamky mikrotitračnej platničky pridajte 50 μl monoklonnej protilátky 3-17-A3 (zriedenej 1/100).
Add 50 μl of rabbit anti-mouse globulin conjugated to horseradish peroxidase, diluted to a pre-titrated optimal concentration, to each well of the microtitre plate.
Do každej jamky mikrotitračnej platničky pridajte 50 μl králičieho globulínu proti myšiam, konjugovaného s peroxidázou chrenu, zriedeného na predtitrovanú optimálnu koncentráciu.
Add substrate and chromogen as described previously.
Pridajte skôr opísaný substrát a chromogén.
Stop the reaction after 10 minutes by the addition of 1 Molar sulphuric acid (50 μl/well).
Po 10 minútach zastavte reakciu pridaním 1 molárnej kyseliny sírovej (50 μl/jamka).
In the competitive assay, the monoclonal antibody must be in excess, therefore a dilution of antigen is chosen which falls on the titration curve (not on the plateau region) which gives approximately 0,8 OD after 10 minutes.
V kompetitívnom pokuse musí prevyšovať monoklonná protilátka, preto sa zvolí zriedenie antigénu, ktoré leží na titračnej krivke (a nie v oblasti základne), pričom sa po 10 minútach dosiahne hodnota približne 0,8 OD.
The agar gel immuno-diffusion test shall be carried out according to the following protocol:
Agarový imuno-difúzny test sa vykonáva podľa tohto protokolu:
Precipitating antigen is prepared in any cell culture system that supports the rapid multiplication of a reference strain of bluetongue virus.
Precipitačný antigén sa pripraví v akomkoľvek systéme bunkových kultúr, ktorý podporuje rýchle množenie referenčného kmeňa vírusu katarálnej horúčky oviec.
BHK or Vero cells are recommended.
Odporúčajú sa bunky BHK alebo Vero.
Antigen is present in the supernatant fluid at the end of virus growth but requires 50 to 100-fold concentration to be effective.
Antigén je prítomný v supernatantnej tekutine na konci rastu vírusu, ale ak má byť účinný, vyžaduje si 50 až 100-násobnú koncentráciu.
This may be achieved by any standard protein concentration procedure; virus in the antigen may be inactivated by the addition of 0,3 % (v/v) beta-propiolactone.
Dá sa to dosiahnuť štandardným postupom proteínovej koncentrácie; vírus v antigéne možno inaktivovať pridaním 0,3 % (v/v) beta-propiolaktónu.
Known positive control serum:
Známe pozitívne kontrolné sérum:
Using the international reference serum and antigen a national standard serum is produced, standardised for optimal proportion against the international reference serum, freeze-dried and used as the known control serum in each test.
S použitím medzinárodného referenčného séra a antigénu sa vyrobí národné štandardné sérum, ktoré sa, pokiaľ ide o optimalizáciu pomeru, štandardizuje podľa medzinárodného referenčného séra, vysuší zmrazením a používa sa ako známe kontrolné sérum v každom teste.
Test serum
Testové sérum:
Procedure 1 % agarose prepared in borate or sodium barbitol buffer, pH 8,5 to 9,0, is poured into a petri dish to a minimum depth of 3,0 mm. A test pattern of seven moisture-free wells, each 5,0 mm in diameter, is cut in the agar.
Postup 1 % agaróza pripravená v pufrovanom roztoku boritanu alebo barbitalu sodného, pH 8,5 až 9,0, sa naleje do Petriho misky aspoň do hĺbky 3,0 mm. Do agaru sa vyreže testový vzor pozostávajúci zo siedmich jamiek zbavených vlhkosti, každá s priemerom 5,0 mm.
The pattern consists of one centre well and six wells arranged round it in a circle of radius 3 cm.
Vzor pozostáva z jednej strednej jamky a šiestich jamiek, ktoré sú okolo nej usporiadané v kruhu s polomerom 3 cm.
The central well is filled with the standard antigen.
Stredná jamka sa naplní štandardným antigénom.
Peripheral wells 2, 4 and 6 are filled with known positive serum, wells 1, 3 and 5 are filled with test sera.
Okrajové jamky 2, 4 a 6 sa naplnia známym pozitívnym sérom, jamky 1, 3 a 5 sa naplnia testovými sérami.
The system is incubated for up to 72 hours at room temperature in a closed humid chamber.
Systém sa inkubuje až do 72 hodín pri izbovej teplote v uzavretej vlhkej miestnosti.
Interpretation A test serum is positive if it forms a specific precipitin line with the antigen and forms a complete line of identity with the control serum.
Výklad Testové sérum je pozitívne, ak s antigénom vytvorí špecifickú precipitačnú čiaru a ak sa táto čiara úplne zhoduje s kontrolným sérom.
Epizootic haemorrhagic disease (EHD)
Epizootická hemoragická choroba (EHD)
Precipitating antigen is prepared in any cell culture system that supports the rapid multiplication of the appropriate serotype(s) of epizootic haemorrhagic disease virus.
Precipitačný antigén sa pripraví v akomkoľvek systéme bunkových kultúr, ktorý podporuje rýchle množenie príslušného(-ych) sérotypu(-ov) vírusu epizootickej hemoragickej choroby.
Infectious bovine rhinotracheitis (IBR) / infectious pustular vulvo-vaginitis (IPV)
Infekčná bovinná rinotracheitída (IBR)/infekčná vredovitá vulvo-vaginitída (IPV)
The serum neutralisation test shall be carried out according to the following protocol:
Sérový neutralizačný test sa vykonáva podľa tohto protokolu:
Serum All sera are heat-inactivated at 56 °C for 30 minutes before use.
Sérum Všetky séra sa pred použitím 30 minút tepelne inaktivujú pri teplote 56 °C.
Procedure The constant virus-varying serum neutralisation test on microtitre plates employs MDBK or other susceptible cells.
Postup V sérovom neutralizačnom teste na mikrotitračných platničkách, pri ktorom sa používa konštantné množstvo vírusu a rôzne zriedenia séra, sa používajú MDBK alebo iné vnímavé bunky.
The Colorado, Oxford or any other reference strain of the virus is used at 100 TCID50 per 0,025 ml; inactivated undiluted serum samples are mixed with an equal volume (0,025 ml) of virus suspension.
Colorado, Oxford alebo akýkoľvek iný referenčný kmeň vírusu sa používa pri 100 TCID50 na 0,025 ml; inaktivované nezriedené vzorky séra sa zmiešajú s rovnakým objemom (0,025 ml) vírusovej suspenzie.
The virus/serum mixtures are incubated for 24 hours at 37 °C in the microtitre plates before the MDBK cells are added.
Vírusovo-sérové zmesi sa inkubujú 24 hodín pri teplote 37 °C v mikrotitračných platničkách pred pridaním buniek MDBK.
Cells are used at a concentration which forms a complete monolayer after 24 hours.
Bunky sa používajú v koncentrácii, ktorá po 24 hodinách vytvorí úplnú monovrstvu.
Controls (i) virus infectivity assay, (ii) serum toxicity controls, (iii) uninoculated cell culture controls, (iv) reference antisera.
Kontroly i) pokus na neúčinnosť vírusu, ii) kontroly toxicity séra, iii) kontroly nenaočkovanej bunkovej kultúry, iv) referenčné antiséra.
Interpretation The results of the neutralisation test and the titre of the virus used in the test are recorded after three to six days incubation at 37 °C.
Výklad Výsledky neutralizačného testu a titer vírusu použitý v teste sa zaznamenajú po trojdňovej až šesťdňovej inkubácii pri teplote 37 °C.