natgillin/translations-raw huggingface dataset:
in the case of infectious anaemia, until the date on which, the infected animals having been slaughtered, the remaining animals have shown a negative reaction to a Coggins test carried out on blood samples collected on two occasions three months apart;
v prípade infekčnej anémie až do dňa, kedy boli infikované zvieratá zabité, zvyšné zvieratá vykázali negatívnu reakciu na Cogginsove testy vykonané dvakrát s trojmesačným časovým odstupom;
in the case of vesicular stomatitis, six months from the last case;
v prípade vezikulárnej stomatitídy šesť mesiacov od posledného prípadu;
in the case of rabies, one month from the last case;
v prípade besnoty jeden mesiac od posledného prípadu;
in the case of anthrax, 15 days from the last case;]
v prípade sneti slezinovej 15 dní od posledného prípadu;]
[following cases of dourine, glanders, equine encephalomyelitis of all types, equine infectious anaemia, vesicular stomatitis, anthrax or rabies all animals on the holding of species susceptible to the disease in question were slaughtered or killed and the prohibition lasted for 30 days, or 15 days in the case of anthrax, beginning on the day on which, following the destruction of the animals, the disinfection of the premises was satisfactorily completed;]
[po výskyte prípadov žrebčej nákazy, malleusu, encefalomyelitídy koní všetkých typov, infekčnej anémie koní, vezikulárnej stomatitídy, sneti slezinovej alebo besnoty boli všetky zvieratá z chovateľského podniku podozrivé na danú chorobu zabité a zákaz trval 30 dní alebo 15 dní v prípade sneti slezinovej, a to počnúc dňom, v ktorý bola po zničení zvierat uspokojivo dokončená dezinfekcia areálu;]
to the best of my knowledge, it/they has/have not been in contact with equidae suffering from an infectious or contagious disease in the 15 days prior to this declaration;
podľa mojich najlepších vedomostí neprišlo/neprišli do kontaktu so zvieraťom koňovitým trpiacim infekčnou alebo nákazlivou chorobou počas 15 dní pred týmto vyhlásením;
at the time of the inspection it/they was/were fit to be transported on the intended journey in accordance with the provisions of Regulation (EC) No 1/2005 (3).
v čase konania kontroly bolo/boli spôsobilé na prepravu po plánovanej ceste v súlade s ustanoveniami nariadenia (ES) č. 1/2005 (3). Poznámky
Notes
Časť 1
Part I
Kolónka.
Box I.6: shall correspond to the CITES permit number in case of equidae listed in the Washington Convention on protected species and products thereof.
I.6: Zodpovedá číslu povolenia CITES v prípade zvierat koňovitých uvedených vo Washingtonskom dohovore o chránených druhoch a z nich pochádzajúcich výrobkoch.
Box I.16: Registration number (railway wagons or container and lorries), flight number (aircraft) or name (ship).
Kolónka I.16: Registračné číslo (železničné vagóny alebo kontajnery a nákladné autá), číslo letu (lietadlo) alebo názov (loď).
Box I.19: Use the appropriate Harmonised System (HS) code of the World Customs Organisation: 01.01.01 or 01.01.06.19
Kolónka I.19: Uveďte príslušný kód harmonizovaného systému (HS) Svetovej colnej organizácie: 01.01.01 alebo 01.01.06.19
Box I.31: Species: horse, ass, mule, hinny, zebra (including their crossings).
Kolónka I.31: Druhy: kôň, somár, mulica, mul, zebra (vrátane ich krížencov).
Identification system: Until 31 December 2009 shall correspond to an identification number as described in Article 2 of Commission Decision 2000/68/EC, and as of 1 January 2010 to the unique life number as described in Article 2(2)(d) of and Section 1(A)(4) of Annex I to Commission Regulation (EC) No 504/2008.
Systém identifikácie: Do 31. decembra 2009 zodpovedá identifikačnému číslu, ktoré sa opisuje v článku 2 rozhodnutia Komisie 2000/68/ES, a od 1. januára 2010 zodpovedá jedinečnému životnému číslu zvieraťa, ktoré sa opisuje v článku 2 písm. d) a v oddiele I časti A ods. 4 prílohy I k nariadeniu Komisie (ES) č. 504/2008.
The information in points II.1. to II.6. is not required where there is a bilateral agreement in accordance with Article 6 of Directive 2009/156/EC.
Údaje v bodoch II.1. až II.6. sa nevyžadujú v prípade, že existuje dvojstranná dohoda v súlade s článkom 6 smernice 2009/156/ES.
Qualification and title
Kvalifikácia a titul:
No of the related LVU
Číslo príslušnej MVJ:
DIAGNOSIS
DIAGNÓZA
Reagents for the enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) described below may be obtained from the European Community Reference Laboratory or the OIE Reference Laboratories for African horse sickness.
Uvedené reagenty na metódu ELISA je možné získať z referenčného laboratória Európskeho spoločenstva alebo z referenčného laboratória OIE pre africký mor koní.
COMPETITIVE ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO AFRICAN HORSE SICKNESS VIRUS (AHSV) (PRESCRIBED TEST)
KONKURENČNÁ ELISA NA ZISŤOVANIE PROTILÁTOK PROTI VÍRUSU AFRICKÉHO MORU KONÍ (AHSV) (PREDPÍSANÁ SKÚŠKA)
Competitive ELISA is used to detect specific AHSV antibodies in sera from any species of equidae.
Konkurenčná ELISA sa používa na zisťovanie špecifických protilátok AHSV v sére z ktoréhokoľvek druhu zvieraťa čeľade koňovité.
The broad spectrum, polyclonal, immune anti-AHSV guinea-pig serum (hereinafter referred to as ‘guinea-pig antiserum’) is serogroup specific and is able to detect all known serotypes of AHS virus.
Širokospektrálne polyklonálne imúnne anti-AHSV morčacie sérum (ďalej len „morčacie antisérum“) je špecifickou séroskupinou a je schopné zistiť všetky známe sérotypy vírusu AHS.
The principle of the test is the interruption of the reaction between AHSV antigen and a guinea-pig antiserum by a test serum sample.
Princípom skúšky je prerušenie reakcie medzi antigénom AHSV a morčacím antisérom vzorkou testovaného séra.
AHSV antibodies in the test serum sample will compete with those in the guinea-pig antiserum resulting in a reduction in the expected colour (following the addition of enzyme labelled anti-guinea-pig antibody and substrate).
Protilátky AHSV vo vzorke séra budú konkurovať tým v morčacom antisére, čoho výsledkom je zníženie očakávaného sfarbenia (po pridaní enzýmom označenej anti-morčacej protilátky a substrátu).
Sera can be tested at a single dilution of 1 in 5 (spot test method) or may be titrated (serum titration method) to give dilution end-points.
Sérum sa môže vyšetriť v jedinom roztoku 1 : 5 (metóda kvapkovej skúšky) alebo sa môže titrovať (metóda titrácie séra) s cieľom stanovenia koncových bodov riedenia.
Inhibition values higher than 50 % may be regarded as positive.
Inhibičné hodnoty vyššie než 50 % je možné považovať za pozitívne.
The test protocol described hereinafter is used in the Regional Reference Laboratory for African horse sickness in Pirbright, United Kingdom.
Nižšie opísaný protokol sa používa v regionálnom referenčnom laboratóriu pre africký mor koní v meste Pirbright v Spojenom kráľovstve.
Preparation of plates
Príprava platničiek
Coat ELISA plates with AHSV antigen extracted from infected cell cultures and diluted in carbonate/bicarbonate buffer, pH 9,6.
Platničky ELISA pokryte antigénom AHSV extrahovaným z infikovaných bunkových kultúr a zriedeným v tlmiacom karbonátovom/bikarbonátovom roztoku, pH 9,6.
Incubate the ELISA plates overnight at 4 °C.
Inkubujte platničky ELISA cez noc pri 4 °C.
Wash plates three times by flooding and emptying the wells with phosphate buffered saline (PBS), pH 7, 2 to 7,4 pH, and blot dry on adsorbent paper.
Platničky trikrát premyte fosfátovým tlmivým soľným roztokom (PBS), pH 7,2 až 7,4 pH a vysušte na savom papieri.
Control wells
Kontrolné jamky
Titrate the positive control sera in a twofold dilution series, from 1 in 5 to 1 in 640, across column 1 in blocking buffer (PBS containing 0,05 % (v/v) Tween-20, 5,0 % (w/v) skimmed-milk powder (Cadbury’s MarvelTM) and 1 % (v/v) adult bovine serum) to give a final volume of 50 μl/well.
V prvom stĺpci titrujte pozitívne kontrolné séra v dvojnásobných riedeniach od 1 : 5 až do 1:640 v blokujúcom tlmivom roztoku [PBS obsahujúce 0,05 % (v/v) Tween-20, 5,0 % (w/v) sušeného odstredeného mlieka (Cadbury’s MarvelTM) a 1 % (v/v) séra dospelého hovädzieho dobytka] na získanie konečného objemu 50 μl/jamka.
Add 50 μl of the negative control serum at a dilution of 1 in 5 (10 μl serum + 40 μl blocking buffer) to wells A and B of column 2.
Pridajte 50 μl na jamku negatívneho kontrolného séra zriedeného na 1: 5 (10 μl sérum + 40μl blokujúceho tlmivého roztoku) do jamiek A a B stĺpca 2.
Add 100 μl/well of blocking buffer to wells C and D of column 2 (blank).
Pridajte 100 μl na jamku blokujúceho tlmivého roztoku do jamiek C a D stĺpca 2 (prázdny).
Add 50 μl of blocking buffer to wells E, F, G and H of column 2 (guinea pig control).
Pridajte 50 μl blokujúceho tlmivého roztoku do jamiek E, F, G a H stĺpca 2 (kontrolné morčacie sérum).
Spot test method
Metóda kvapkovej skúšky
Add a 1 in 5 dilution of each test serum in blocking buffer to duplicate wells of columns 3 to 12 (10 μl sera + 40 μl blocking buffer).
Pridajte z každého testovaného séra riedeného 1: 5 v blokujúcom tlmivom roztoku do dvoch jamiek stĺpcov 3 až 12 (10 μl séra + 40 μl blokujúceho tlmivého roztoku).
Serum titration method
Metóda titrácie séra
Prepare a twofold dilution series of each test sample (1 in 5 to 1 in 640) in blocking buffer across eight wells of single columns (3 to 12).
Pripravte dvojnásobné riedenia z každej vzorky (od 1 : 5 až do 1 : 640) v blokujúcom tlmivom roztoku cez osem jamiek jednotlivých stĺpcov (3 až 12),
then
potom
Add 50 μl of guinea pig antisera, pre-diluted in blocking buffer, to all wells except the blank wells of the ELISA plate (all wells now contain a final volume of 100 μl).
pridajte 50 μl morčacieho antiséra rozpusteného v blokujúcom tlmivom roztoku do všetkých jamiek platničky ELISA okrem prázdnych (všetky jamky teraz obsahujú konečný objem 100 μl).
Incubate for 1 hour at 37 °C on an orbital shaker.
Inkubujte 1 hodinu pri teplote 37 °C na orbitálnej trepačke.
Wash plates three times and blot dry as before.
Platničky trikrát opláchnite a vysušte ako predtým.
Add 50 μl of rabbit anti-guinea-pig horseradish peroxidase (HRP) conjugate pre-diluted in blocking buffer to each well.
Do každej jamky pridajte 50 μl králičieho anti-morčacieho chrenového peroxidázového konjugátu (HRP) riedeného v blokujúcom tlmivom roztoku.
Chromogen
Chromogén
Prepare the chromogen OPD (OPD = ortho-phenyldiamine) solution according to the manufacturers’ instructions (0,4 mg/ml in sterile distilled water) just before use.
Tesne pred použitím pripravte chromogénový roztok OPD (OPD = orto-fenyldiamín) podľa návodu výrobcov (0,4 mg/ml v sterilnej destilovanej vode).
Add substrate (hydrogen peroxide = H2O2) to give a final concentration of 0,05 % (v/v) (1 in 2000 of a 30 % solution of H2O2).
Pridajte substrát (peroxid vodíka = H2O2), aby ste dostali konečnú koncentráciu 0,05 % (v/v) (1 ku 2 000 v 30 % roztoku H2O2).
Add 50 μl of the OPD solution to each well and leave plates on the bench for 10 minutes at ambient temperature.
Pridajte 50μl roztoku OPD do každej jamky a ponechajte platničky na stole asi 10 minút pri izbovej teplote.
Stop the reaction by the addition of 50 μl/well of 1M sulphuric acid (H2SO4).
Zastavte reakciu pridaním 50 μl 1 M kyseliny sírovej (H2SO4) do každej jamky.
Reading
Odčítanie
Read spectrophotometrically at 492 nm.
Odčítajte spektrofotometricky pri 492 nm.
Expression of results
Interpretácia výsledkov
Using a software package print out the optical density (OD) values, and the percentage inhibition (PI) for test and control sera based on the mean value recorded in the four guinea pig control wells.
Pomocou počítačového programu určite hodnoty optickej hustoty (OD) a percentuálnej inhibície problematických sér a kontrolných sér na základe strednej hodnoty, ktorá sa zaznamenala v štyroch kontrolných jamkách obsahujúcich sérum morčaťa.
The data expressed as OD and PI values are used to determine whether the test has performed within acceptable limits.
Údaje vyjadrené ako hodnoty OD a PI sa použijú na stanovenie toho, či sa skúška vykonala v prijateľnom rozmedzí.
The upper control limits (UCL) and lower control limits (LCL) for the guinea pig control are between OD values 1,4 and 0,4 respectively.
Horné kontrolné hodnoty (UCL) a dolné kontrolné hodnoty (LCL) kontrolných sér morčaťa sa pohybujú medzi hodnotami OD 1,4 a 0,4 v uvedenom poradí.
The end-point titre for the positive control based on 50 % PI should be 1 in 240 (within a range from 1 in 120 to 1 in 480).
Koncovým riedením pri pozitívnej skúške založenej na 50 % PI by mal byť 1 : 240 (v rámci intervalu od 1 : 120 do 1 : 480).
Any plate that fails to conform to the above criteria must be rejected.
Každá platnička, pri ktorej sa ukáže, že nevyhovuje horeuvedeným kritériám, sa musí odmietnuť.
However, if the positive control serum titre is greater than 1 in 480 and the test samples are still negative then the negative test samples can be accepted.
Ak je však titer pozitívneho skúšobného séra väčší než 1 : 80 a skúšobné vzorky sú stále negatívne, potom je možné negatívne skúšobné vzorky akceptovať.
The duplicate negative control serum wells and the duplicate blank wells should record PI values between + 25 % and – 25 %, and between + 95 % and + 105 %, respectively.
Dvojice jamiek s negatívnym kontrolným sérom a dvojice prázdnych jamiek by mali zaznamenať hodnoty PI medzi + 25 % a – 25 % a medzi + 95 % a + 105 %.
Failure to be within these limits does not invalidate the plate but does suggest that background colour is developing.
Chyba v rámci týchto limitov neznamená, že je výsledok nesprávny, ale vyjadruje, že sa podkladová farba vyvíja.
The diagnostic threshold (cut-off value) for test sera is 50 % (PI 50 %).
Diagnostickou medznou hodnotou (hodnota cut-off) pri skúšobných sérach je 50 % (PI 50 %).
Samples recording PI values greater than 50 % are recorded as positive.
Vzorky, pri ktorých sa zaznamenali hodnoty PI väčšie než 50 %, sú pozitívne.
Samples recording PI values lower than 50 % are recorded as negative.
Vzorky, pri ktorých sa zaznamenali hodnoty PI nižšie než 50 %, sú zaznamenané ako negatívne.
Samples that record PI values above and below the threshold for the duplicate wells are considered doubtful.
Vzorky, ktoré v dvojiciach jamiek zaznamenávajú hodnoty PI nad alebo pod medznou hodnotou, sa považujú za nejednoznačné.
Such samples may be re-tested in the spot test and by titration.
Takého vzorky je možné opätovne podrobiť kvapkovej skúške alebo titrácii.
Positive samples may also be titrated to provide an indication of the degree of positivity.
Pozitívne vzorky je možné tiež titrovať na stanovenie stupňa pozitivity.
Spot test layout
Nákres kvapkovej skúšky
–ve cont negative control.
ve cont negatívna kontrola.
+ ve cont positive control.
+ ve cont pozitívna kontrola.
GP cont guinea pig control.
GP cont kontrolné morčacie sérum.
Test sera
Skúšobné séra
–ve cont.
ve cont.
Blank
slepý
INDIRECT ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO AFRICAN HORSE SICKNESS VIRUS (AHSV) (PRESCRIBED TEST)
NEPRIAMA ELISA PRE ZISŤOVANIE PROTILÁTOK PROTI VÍRUSU AFRICKÉHO MORU KONÍ (AHSV) (PREDPÍSANÁ SKÚŠKA)
The test described hereinafter is in accordance with the test description in Chapter 2.1.11 of the OIE Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines, fourth edition, 2000.
Opísaná skúška je v súlade so skúškou opísanou v kapitole 2.1.11. Manuálu noriem pre diagnostické skúšky a vakcíny OIE, štvrté vydanie, 2000.
The recombinant VP7 protein has been used as antigen for AHS virus antibody determination with a high index of sensitivity and specificity.
Na stanovenie protilátok proti vírusu AHS sa ako antigén použije rekombinantný VP7 proteín s vysokým indexom citlivosti a osobitosti.
Other advantages are that it is stable and not infective.
Výhodou je aj jeho stabilita a neinfekčnosť.
Solid phase
Fáza tuhosti
ELISA plates are coated with recombinant AHSV-4 VP7 diluted in carbonate/bicarbonate buffer, pH 9,6.
Platničky ELISA pokryte rekombinantným AHSV-4 VP7 rozpusteným v karbonátovom/bikarbonátovom tlmivom roztoku, pH 9,6.
Incubate plates overnight at 4 °C.
Platničky inkubujte cez noc pri teplote 4 °C.
Wash the plates five times with distilled water containing 0,01 % (v/v) Tween 20 (washing solution).
Platničky opláchnite päťkrát destilovanou vodou obsahujúcou 0,01 % (v/v) Tween 20 (čistiaci roztok).
Gently tap the plates onto absorbent material to remove any residual wash.
Na odstránenie zvyšnej vody platničky jemne pritlačte na savý materiál.
Block the plates with phosphate buffered saline (PBS) + 5 % (w/v) skimmed milk (Nestlé Dry Skim MilkTM), 200 μl/well, for 1 hour at 37 °C.
Platničky blokujte fosfátovým slaným tlmivým roztokom (PBS) + 5 % (w/v) odstredeného mlieka (sušené odstredené mlieko NestléTM), 200 μl/jamka 1 hodinu pri teplote 37 °C.
Remove the blocking solution and gently tap the plates onto absorbent material.
Odstráňte blokujúci roztok a jemne pritlačte platničky na savý materiál.
Serum samples to be tested, and positive and negative control sera, are diluted 1 in 25 in PBS + 5 % (w/v) skimmed milk + 0,05 % (v/v) Tween 20, 100 μl per well.
Testované vzorky séra, pozitívne a negatívne kontrolné séra sa rozpustia 1:25 v PBS + 5 % (w/v) odstredeného mlieka + 0,05 % (v/v) Tween 20, 100 μl/jamka.
Incubate for 1 hour at 37 °C.
Inkubujte hodinu pri teplote 37 °C.
For titration, make a twofold dilution series from 1 in 25 (100 μl/well), one serum per plate column, and do the same with positive and negative controls.
Pri titrácii urobte dvojnásobné riedenie 1: 25 (100 μl/jamka), jedno sérum na jeden stĺpec platničky a to isté vykonajte s pozitívnou a negatívnou kontrolou.
Wash the plates as described in step 2.1.1.2.
Platničky premyte tak, ako je to opísané v bode 2.1.1.2.
Conjugate
Konjugácia
Dispense 100 μl/well of horseradish-peroxidase (HRP) -conjugated anti-horse gamma-globulin diluted in PBS + 5 % milk + 0,05 % Tween 20, pH 7,2.
Dajte 100 μl/jamka chrenovej peroxidázy (HRP) konjugovanej s anti-konským gama-globulínom rozpusteným v PBS + 5 % mlieku + 0,05 % Tween 20, pH 7,2.
Cromogen/Substrate
Chromogén/substrát
Add 200 μl/well of chromogen/substrate solution (10 ml of 80,6 mM DMAB (dimethyl aminobenzaldehyde) + 10 ml of 1,56 mM MBTH (3-methyl-2-benzo-thiazoline hydrazone hydrochlorid) + 5 μl H2O2)
Pridajte 200 μl/jamku chromogénového/substrátového roztoku (10 ml 80,6 mM DMAB (dimetyl aminobenzaldehyd) + 10 ml 1,56 mM MBTH (3-metyl-2-benzo-tiazolin hydrazon hydrochlorid) + 5 μl H2O2).
Colour development is stopped by adding 50 μl of 3N H2SO4 after approximately 5 to 10 minutes (before the negative control begins to be coloured).
Vyvolávanie farby sa zastaví pridaním 50 μl 3N H2SO4 po približne 5 až 10 minútach (predtým, ako sa začne sfarbovať negatívna kontrola).
Other chromogens such as ABTS (2,2'-Azino-bis-[3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid]), TMB (tetramethyl benzidine), or OPD (ortho-phenyldiamine) can also be used.
Tiež je možné použiť aj iné chromogény ako ABTS (2,2’-Azino-bis-[3-etylbenzotiazolin-6- kyselina sulfónová], TMB (tetrametyl benzidín) alebo OPD (orto-fenyldiamín).
Read the plates at 600 nm (or 620 nm).
Odčítajte pri 600 nm (alebo 620 nm).
Interpretation of the results
Interpretácia výsledkov
Calculate the cut-off value by adding 0,6 to the value of the negative control (0,6 is the standard deviation derived with a group of 30 negative sera).
Vypočítajte medznú hodnotu pripočítaním 0,6 k hodnote negatívnej kontroly (0,6 je štandardná odchýlka odvodená zo skupiny 30 negatívnych sér).
Test samples giving absorbance values lower than the cut-off are regarded as negative.
Skúšobné vzorky, uvádzajúce absorpčné hodnoty nižšie než je medzná hodnota, sa považujú za negatívne.
Test samples giving absorbance values greater than the cut-off + 0,15 are regarded as positive.
Skúšobné vzorky, uvádzajúce absorpčné hodnoty vyššie než je medzná hodnota + 0,15 sa považujú za pozitívne.
Test samples giving intermediate absorbance values are doubtful and a second technique must be employed to confirm the result.
Skúšobné vzorky, uvádzajúce prostredné absorpčné hodnoty, sú nerozhodné a na potvrdenie výsledku je potrebné použiť inú metódu.
BLOCKING ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO AFRICAN HORSE SICKNESS VIRUS (AHSV) (PRESCRIBED TEST)
BLOKUJÚCA ELISA NA ZISŤOVANIE PROTILÁTOK PROTI VÍRUSU AFRICKÉHO MORU KONÍ (AHSV) (PREDPÍSANÁ SKÚŠKA)
The blocking ELISA is designed to detect specific AHSV antibodies in sera from any susceptible species.
Blokujúca ELISA je určená na zisťovanie špecifických protilátok AHSV v sérach rôznych vnímavých druhov.
is the major, antigenic, viral protein of AHSV, and is conserved within the nine serotypes.
je najvýznamnejším antigénovým vírusovým proteínom AHSV a zachováva sa v rámci deviatich sérotypov.
Because the monoclonal antibody (Mab) is also directed against the VP7, the assay will give a high level of sensitivity and specificity.
Keďže monoklonálna protilátka (Mab) je tiež namierená proti VP7, daná skúška poskytne vysokú hladinu citlivosti a osobitosti.
Further, the recombinant VP7 antigen is completely innocuous and therefore guarantees a high degree of safety.
Rekombinantný VP7 antigén je úplne neškodný, a preto zaručuje vysoký stupeň bezpečnosti.
The principal of the test is the interruption of the reaction between the recombinant VP7, as the antigen bound to the ELISA plate and the conjugated Mab specific for the VP7.
Princípom skúšky je prerušenie reakcie medzi rekombinantným VP7 ako antigénom naviazaným na platničku ELISA a konjugovanou Mab špecifickou pre VP7.
Antibody in the test sera will block the reaction between the antigen and the Mab resulting in a reduction in colour.
Protilátka v skúšobnom sére zablokuje reakciu medzi antigénom a Mab, čo vyústi do zníženia zafarbenia.
The test described hereinafter is carried out in the European Community Reference Laboratory for African horse sickness in Algete, Spain.
Opísaná skúška sa vykonáva v referenčnom laboratóriu Európskeho spoločenstva pre mor koní v Algete v Španielsku.
ELISA plates
Platničky ELISA
Wash the plates five times with phosphate buffered saline (PBS) containing 0,05 % (v/v) Tween 20 (PBST).
Platničky päťkrát premyte vo fosfátovom soľnom tlmivom roztoku (PBS) obsahujúcom 0,05 % (v/v) Tween 20 (PBST).
Stabilise the plate by treatment with a stabilising solution (in order to allow long term storage at 4 °C without loss of activity) and blot dry onto absorbent material.
Stabilizujte platničku stabilizujúcim roztokom (aby sa umožnilo dlhodobé skladovanie pri teplote 4 °C bez straty činnosti) a usušte savým materiálom.
Test samples and controls
Skúšobné vzorky a kontroly
For screening dilute test sera and controls 1 in 10 directly on the plate in PBST to give a final volume 100 μl/well.
Na preverenie rozpustite skúšobné séra a kontroly 1: 10 priamo na platničke v PBST na dosiahnutie konečného objemu 100 μl/jamka.
For titration prepare a twofold dilution series of test sera and positive controls (100 μl/well) from 1 in 10 to 1 in 1280 across eight wells.
Na titráciu pripravte dvojnásobné riedenia skúšobných sér a pozitívnych kontrol (100 μl/jamka) od 1 : 10 do 1 : 1 v 280 cez osem jamiek.
Negative control is tested at 1 in 10 dilution.
Skúška negatívnej kontroly prebieha v roztoku 1 : 10.
Add 50 μl/well of pre-diluted horseradish-peroxidase (HRP) -conjugated Mab (monoclonal antibodies specific for VP7) to each well and mix gently to ensure homogeneity.
Pridajte 50 μl/jamka riedeného Mab (monoklonálne protilátky špecifické pre VP7) konjugovanou s chrenovou peroxidázou (HRP) do každej jamky a jemne premiešajte, aby sa zaistila homogénnosť.
Incubate for 30 minutes at 37 °C.
Inkubujte 30 minút pri teplote 37 °C.
Wash the plates five times with PBST and blot dry as above.
Platničky premyte päťkrát s PBST a usušte tak, ako je to opísané vyššie.
Chromogen/Substrate
Chromogén/substrát
Add 100 μl/well of chromogen/substrate solution (1 ml of ABTS (2,2′-Azino-bis-[3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid]) 5 mg/ml + 9 ml of substrate buffer (0,1 M Phosphate-Citrate buffer of pH 4 containing 0,03 % H2O2] and incubate for 10 minutes at room temperature.
Pridajte 100 μl/jamka chromogénového/substrátového roztoku (1 ml ABTS (2,2’-Azino-bis-[3-etylbenzotiazolin-6-kyselina sulfónová]) 5 mg/ml + 9 ml substrátového tlmivého roztoku (0,1 M fosfátového citrátu pH 4 obsahujúci 0,03 % H2O2) a inkubujte 10 minút pri izbovej teplote.