natgillin/translations-raw huggingface dataset:
If necessary, it can be successfully performed on extracts stored at –68 to –86 °C under glycerol.
V prípade potreby sa môže úspešne vykonať na extraktoch uskladnených v glyceríne pri teplote –68 až –86 °C.
Glycerol can be removed from the sample by addition of 1 ml pellet buffer (Appendix 4), re-centrifugation for 15 minutes at 7000 g and resuspension in an equal volume of pellet buffer.
Glycerín sa dá zo vzorky odstrániť pridaním 1 ml peletového pufra (dodatok 4), opätovným odstreďovaním počas 15 minút pri odstredivej sile 7000 g a resuspenzii v rovnakom objeme peletového pufra.
This is often not necessary, especially if slides samples are fixed to the slides by flaming (see 2.2).
Často to nie je nevyhnutné, najmä ak sa vzorky upevnia na podložných sklíčkach flambovaním (pozri 2.2).
Prepare separate positive control slides of the homologous strain or any other reference strain of C. m. subsp. sepedonicus, suspended in potato extract, as specified in Appendix 2, and optionally in buffer.
Pripravte osobitné kontrolné pozitívne podložné sklíčka homologického kmeňa alebo akéhokoľvek iného referenčného kmeňa C. m. subsp. sepedonicus, v suspenzii zemiakového extraktu, ako sa uvádza v dodatku 2, a prípadne v pufri.
Naturally infected tissue (maintained by lyophilization or freezing at –16 to –24 °C) should be used where possible as a similar control on the same slide.
Prirodzene infikované pletivo (udržiavané v lyofilizovanej forme alebo zmrazené pri teplote –16 až –24 °C) by sa malo použiť, keď je to možné, ako podobná kontrola na rovnakom podložnom sklíčku.
As negative controls, use aliquots of sample extract which previously tested negative.
Pokiaľ ide o negatívne kontroly, použite alikvotné podiely extraktu vzorky, ktoré mali pri predchádzajúcom testovaní negatívny výsledok.
Use multiwell microscope slides with preferably 10 windows of at least 6 mm diameter.
Použite viacobjektové podložné sklíčka, podľa možnosti s desiatimi jamkami s minimálnym priemerom 6 mm.
Test control material in an identical manner as the sample(s).
Kontrolný materiál otestujeme úplne rovnakým spôsobom ako pri vzorke/vzorkách.
Prepare the test slides by one of the following procedures:
Podložné sklíčka pripravte jedným z nasledujúcich postupov:
For pellets with relatively little starch sediment:
Pri peletoch s relatívne malým škrobovým sedimentom:
Pipette a measured standard volume (15 µl is appropriate for 6 mm window diameter-scale up volume for larger windows) of a 1/100 dilution of the resuspended potato pellet onto the first window.
Odmeraný štandardný objem (15 µl je postačujúci pre jamku s priemerom 6 mm – pri väčších jamkách je potrebné použiť zodpovedajúci väčší objem) 1/100 roztoku resuspendovaného zemiakového peletu do prvej jamky.
Subsequently pipette a similar volume of undiluted pellet (1/1) onto the remaining windows on the row.
Následne naneste pipetou podobný objem nezriedeného peletu (1/1) do zostávajúcich jamiek v rade.
The second row can be used as duplicate or for a second sample as presented in Figure 1.
Ďalší rad sa môže použiť ako duplikát alebo pre druhú vzorku, ako je znázornené na obrázku 1.
For other pellets:
Pre iné pelety:
Prepare decimal dilutions (1/10 and 1/100) of the resuspended pellet in pellet buffer.
Pripravte decimálne riedenia (1/10 a 1/100) resuspendovaného peletu v peletovom pufri.
Pipette a measured standard volume (15 µl is appropriate for 6 mm window diameter-scale up volume for larger windows) of the resuspended pellet and each dilution on a row of windows.
Odmeraný štandardný objem (15 µl je postačujúci pre jamku s priemerom 6 mm – pri väčších jamkách je potrebné použiť zodpovedajúci väčší objem) resuspendovaného peletu a z každého riedenia naneste pipetou na rad jamiek.
The second row can be used as duplicate or for a second sample as presented in Figure 2.
Ďalší rad sa môže použiť ako duplikát alebo pre druhú vzorku, ako je znázornené na obrázku 2.
Dry the droplets at ambient temperatures or by warming at temperature of 40 to 45 °C.
Kvapky nechajte vyschnúť pri teplote okolitého prostredia alebo zohriatím na teplotu 40 až 45 °C.
Fix the bacterial cells to the slide either by heating (15 minutes at 60 °C), flaming, with 95 % ethanol or according to specific instructions from the suppliers of the antibodies.
Baktériové bunky fixujte na podložnom sklíčku buď zahriatím (15 minút pri 60 °C), flambovaním, 95 % etanolom alebo podľa špecifických pokynov od dodávateľov protilátok.
If necessary, fixed slides may then be stored frozen in a desiccated box for as little time as necessary (up to a maximum of 3 months) prior to further testing.
V prípade potreby sa môžu fixované sklíčka potom uskladniť zmrazené vo vysušenej schránke pokiaľ možno čo najkratší čas (maximálne tri mesiace) pred ďalším testovaním.
IF procedure:
Postup pri IF
According to test slide preparation in 4.1(i):
Pri príprave podložného sklíčka podľa 4.1 i):
Prepare a set of twofold dilutions of the antibody in IF buffer.
Pripravte sadu dvojnásobných riedení protilátky v pufri IF.
The first well should have 1/2 of the titre (T/2), the others 1/4 of the titre (T/4), 1/2 of the titre (T/2), the titre (T) and twice the titre (2T).
V prvej jamke by mala byť 1/2 titra (T/2), v ostatných 1/4 titra (T/4), 1/2 titra (T/2), titer (T) a dvojnásobok titra (2T).
According to test slide preparation in 4.1(ii):
Pri príprave podložného sklíčka podľa 4.1 ii):
Prepare the working dilution (WD) of the antibody in IF buffer.
Pripravte pracovné riedenie protilátky v pufri IF.
The working dilution affects the specificity.
Pracovné riedenie ovplyvní špecifickosť.
Dilutions of resuspended pellet
Riedenia resuspendovaného peletu
Dilution of resuspended pellet
Riedenie resuspendovaného peletu
Twofold dilutions of antiserum/antibody
Dvojnásobné riedenia antiséra/protilátky
Sample 1
Vzorka 1
Duplicate of sample 1 or sample 2
Duplikát vzorky 1 alebo vzorka 2
Working dilution of antiserum/antibody
Pracovné riedenie antiséra/protilátky
empty
prázdne
Decimal dilution of resuspended pellet
Decimálne riedenie resuspendovaného peletu
Arrange the slides on moist paper.
Podložné sklíčka položte na vlhký papier.
Cover each test window completely with the antibody dilution(s).
Všetky testovacie jamky úplne pokryte riedeniami protilátky.
The volume of antibody applied on each window must be at least the volume of extract applied.
Objem protilátky nanášaný na každú jamku musí prinajmenšom zodpovedať objemu naneseného extraktu.
The following procedure should be carried out in the absence of specific instructions from the suppliers of the antibodies:
Nasledujúci postup by sa mal vykonať v prípade, že dodávatelia protilátok neposkytli špecifické pokyny:
Incubate the slides on moist paper under a cover for 30 minutes at ambient temperature (18 to 25 °C).
Podložné sklíčka na vlhkom papieri nechajte zakryté počas 30 minút pri teplote okolitého prostredia (18 – 25 °C).
Shake the droplets off each slide and rinse carefully with IF buffer.
Z každého podložného sklíčka opatrne straste kvapky a podložné sklíčka opatrne opláchnite pufrom IF.
Wash by submerging for 5 minutes in IF buffer-Tween (Appendix 3) and subsequently for 5 minutes in IF buffer.
Preplachujte 5 minút v roztoku IF-pufer-Tween (dodatok 3) a potom 5 minút v pufri IF.
Avoid causing aerosols or droplet transfer that could result in cross-contamination.
Zabráňte vytváraniu aerosolu alebo prenosu kvapôčok, ktoré by mohli spôsobiť krížovú kontamináciu.
Carefully remove excess moisture by blotting gently.
Prebytočnú vlhkosť starostlivo odstráňte pijavým papierom.
Cover the test windows with the dilution of FITC conjugate used to determine the titre.
Testovacie jamky pokryte riedením konjugátu FITC použitým na stanovenie titra.
The volume of conjugate applied on the windows must be identical to the volume of antibody applied.
Objem konjugátu nanášaný na jamky musí zodpovedať objemu aplikovanej protilátky.
Shake the droplets of conjugate off the slide.
Kvapky konjugátu opatrne straste z podložného sklíčka.
Rinse and wash as before (4.3.3).
Opláchnite a prepláchnite rovnako ako v bode 4.3.3.
Carefully remove excess moisture.
Prebytočnú vlhkosť starostlivo odstráňte.
Pipette 5 to 10 µl of 0,1M phosphate-buffered glycerol (Appendix 3) or a commercially antifading mountant on each window and apply a coverslip.
Na každú jamku napipetujte 5 – 10 µl 0,1 M glycerínu pufrovaného fosfátom (dodatok 3) alebo komerčnú kryciu kvapalinu na udržanie signálu a priložte krycie sklíčko.
Reading the IF test:
Hodnotenie testu IF:
Examine test slides on an epifluorescence microscope with filters suitable for excitation of FITC, under oil or water immersion at a magnification of 500 to 1000.
Podložné sklíčka prezrite pod epifluorescenčným mikroskopom s filtrami vhodnými pre excitáciu FITC, pod olejovou alebo vodnou imerziou pri zväčšení 500 – 1000.
Scan windows across two diameters at right angles and around the perimeter.
Každé pole mikroskopicky prehliadnite vo dvoch navzájom kolmých priemeroch a taktiež po obvode.
For samples showing no or low number of cells observe at least 40 microscope fields.
V prípade vzoriek, ktoré neukazujú žiadny alebo ukazujú len malý počet buniek, preskúmajte najmenej 40 mikroskopických polí.
Check the positive control slide first.
Najprv prezrite podložné sklíčka s pozitívnou kontrolou.
Cells must be bright fluorescent and completely stained at the determined antibody titre or working dilution.
Bunky musia jasne fluoreskovať a byť úplne sfarbené pri určenom titri protilátky alebo pracovnom riedení.
The IF test (section 4) must be repeated if the staining is aberrant.
Test IF (oddiel 4) sa pri odlišnom sfarbení musí zopakovať.
Observe for bright fluorescing cells with characteristic morphology of C. m. subsp. sepedonicus in the test windows of the test slides (see web site http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).
V testovacích jamkách podložných sklíčok pozorujte jasne fluoreskujúce bunky s charakteristickou morfológiou C. m. subsp. sepedonicus (pozri webovú stránku http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).
The fluorescence intensity must be equivalent or better to the positive control strain at the same antibody dilution.
Intenzita fluorescencie musí byť rovnaká alebo lepšia ako pozitívny kontrolný kmeň pri rovnakom riedení protilátky.
Cells with incomplete staining or with weak fluorescence must be disregarded.
Bunky s neúplným sfarbením alebo so slabou fluorescenciou neberte na zreteľ.
If any contamination is suspected the test must be repeated.
Ak existuje podozrenie na akúkoľvek kontamináciu, test sa musí zopakovať.
This may be the case when all slides in a batch show positive cells due to the contamination of buffer or if positive cells are found (outside of the slide windows) on the slide coating.
Tento prípad môže nastať, keď všetky podložné sklíčka v dávke ukazujú pozitívne bunky kvôli kontaminácii pufra alebo keď sa zistia pozitívne bunky (mimo jamiek podložných sklíčok) na krycej vrstve podložného sklíčka.
There are several problems inherent to the specificity of the immunofluorescence test.
Existuje viacero problémov súvisiacich so špecifickosťou imunofluorescenčného testu.
Background populations of fluorescing cells with atypical morphology and cross reacting saprophytic bacteria with size and morphology similar to C. m. sepedonicus are likely to occur in potato heel end core and stem segment pellets.
Nežiaduce populácie fluoreskujúcich buniek s atypickou morfológiou a saprofytických baktérií spôsobujúcich krížové reakcie s veľkosťou a morfológiou podobnou C. m. sepedonicus sa pravdepodobne vyskytnú v peletoch výrezkov pupkovitých koncov hľúz a segmentov stoniek.
Consider only fluorescing cells with typical size and morphology at the titre or working dilution of the antibodies as in 4.3.
Do úvahy zoberte iba fluoreskujúce bunky s typickou veľkosťou a morfológiou pri titri alebo pracovnom riedení protilátok, ako sa uvádza v bode 4.3.
Interpretation of the IF reading:
Vyhodnotenie výsledkov testu IF:
If bright fluorescing cells with characteristic morphology are found, estimate the average number of typical cells per microscope field and calculate the number of typical cells per ml of resuspended pellet (Appendix 4).
Ak sa zistia jasno fluoreskujúce bunky s charakteristickou morfológiou, odhadnite priemerný počet typických buniek na každé mikroskopické pole a vypočítajte počet typických buniek na ml resuspendovaného peletu (dodatok 4).
The IF reading is positive for samples with at least 5 × 103 typical cells per ml of resuspended pellet.
Výsledok testu IF sa hodnotí ako pozitívny pri vzorkách s najmenej 5 × 103 typických buniek na ml resuspendovaného peletu.
The sample is considered potentially contaminated. and further testing is required.
Vzorka sa považuje za potenciálne kontaminovanú a vyžaduje sa ďalšie testovanie.
The IF reading is negative for samples with less than 5 × 103 cells per ml resuspended pellet and the sample is considered negative.
Výsledok testu IF sa hodnotí ako negatívny pri vzorkách s menej ako 5 × 103 buniek na ml resuspendovaného peletu a vzorka sa považuje za negatívnu.
Further testing is not required.
Ďalšie testovanie sa nevyžaduje.
FISH TEST
TEST FISH
When the FISH test is used as the first screening test and found to be positive, the IF test must be performed as a second compulsory screening test.
Keď sa test FISH používa ako prvý skríningový test a má pozitívny výsledok, musí sa vykonať test IF ako druhý povinný skríningový test.
When the FISH test is used as the second screening test and found to be positive, further testing according to the flow scheme is required to complete the diagnosis.
Keď sa test FISH používa ako druhý skríningový test a má pozitívny výsledok, vyžaduje sa ďalšie testovanie podľa vývojového diagramu na dokončenie diagnostiky.
Use validated C. m. subsp. sepedonicus-specific oligo-probes (Appendix 7).
Použite overené špecifické oligopróby C. m. subsp. sepedonicus (dodatok 7).
Preliminary testing with this method should permit reproducible detection of at least 103 to 104 cells of C. m. subsp. sepedonicus per ml added to sample extracts which previously tested negative.
Predbežné testovanie touto metódou by malo umožniť opakovateľné určenie prítomnosti najmenej 103–104 buniek C. m. subsp. sepedonicus na ml pridaných do extraktov vzoriek, ktoré boli predtým testované s negatívnym výsledkom.
The following procedure should preferably be performed on freshly prepared sample extract but can also be successfully performed on sample extract that has been stored under glycerol at –16 to –24 °C or –68 to –86 °C.
Nasledujúci postup by sa mal podľa možnosti vykonať na čerstvo pripravenom extrakte vzorky, no dá sa úspešne vykonať na extrakte vzorky, ktorý bol uchovaný v glyceríne pri teplote –16 až –24 °C alebo –68 až –86 °C.
As negative controls, use aliquots of sample extract that previously tested negative for C. m. subsp. sepedonicus.
Pokiaľ ide o negatívne kontroly, použite alikvotné podiely extraktu vzorky, ktoré boli predtým testované s negatívnym výsledkom pre C. m. subsp. sepedonicus.
As positive controls prepare suspensions containing 105 to 106 cells per ml of C. m. subsp. sepedonicus (e.g. strain NCPPB 4053, or PD 406) in 0,01M phosphate buffer (PB) from a three to five day culture (preparation see Appendix 2).
Pokiaľ ide o pozitívne kontroly, pripravte suspenzie s obsahom 105 až 106 buniek na ml C. m. subsp. sepedonicus (napr. kmeň NCPPB 4053 alebo PD 406) v 0,01 M fosfátového pufra (PB) z 3 – 5-dňovej kultúry (príprava: pozri dodatok 2).
Prepare separate positive control slides of the homologous strain or any other reference strain of C. m. subsp. sepedonicus, suspended in potato extract, as specified in Appendix 2.
Osobitne pripravte kontrolné pozitívne podložné sklíčka homologického kmeňa alebo akéhokoľvek iného referenčného kmeňa C. m. subsp. sepedonicus v suspenzii zemiakového extraktu, ako sa uvádza v dodatku 2.
The use of the FITC-labelled eubacterial oligo-probe offers a control for the hybridisation process, since it will stain all eubacteria that are present in the sample.
Použitie eubakteriálnej oligopróby s označením FITC umožňuje kontrolovať proces hybridizácie, pretože sfarbí všetky eubaktérie prítomné vo vzorke.
Potato extract fixation
Fixovanie zemiakového extraktu
Prepare fixative solution (see Appendix 7).
Pripravte fixačný roztok (pozri dodatok 7).
Pipette 100 µl of each sample extract into an Eppendorf tube and centrifuge for eight min at 7000 g.
Pipetou naneste 100 µl z každého extraktu vzorky do Eppendorfovej skúmavky a odstreďujte pri odstredivej sile 7000 g počas 8 minút.
Remove the supernatant and dissolve the pellet in 500 µl of fixative prepared < 24 hours previously.
Odoberte supernatant a rozpustite pelet v 500 µl fixatívu pripraveného < 24 hodín vopred.
Vortex and incubate overnight at 4 °C.
Pretrepte a inkubujte cez noc pri teplote 4 °C.
An alternative fixative is 96 % ethanol.
Je možné použiť ako fixatív aj 96 % etanol.
To use this dissolve the pellet from step 5.1.2 in 50 µl 0,01M PB and 50 µl 96 % ethanol.
V taktomto prípade rozpustite pelet opísaný v bode 5.1.2 v zmesi pozostávajúcej z 50 µl 0,01 M PB a 50 µl 96 % etanolu.
Vortex mix and incubate at 4 °C for 30 to 60 minutes.
Zmiešajte pretrepaním a inkubujte pri teplote 4 °C počas 30 až 60 minút.
Centrifuge for 8 min. at 7000 g, remove the supernatant and resuspend the pellet in 75 µl 0,01M PB (see Appendix 3).
Odstreďujte počas 8 minút pri odstredivej sile 7000 g, odoberte supernatant a resuspendujte pelet v 75 µl 0,01M PB (pozri dodatok 3).
The remaining sample solution (49 µl) can be stored at –20 °C after addition of 1 volume of 96 % ethanol.
Zvyšný roztok vzorky (49 µl) sa môže uskladniť pri teplote –20 °C po pridaní 1 objemovej jednotky 96 % etanolu.
In case the FISH assay requires repeating, remove the ethanol by centrifugation and add an equal volume of 0,01M PB (mix by vortexing).
V prípade, že si skúška FISH vyžaduje opakovanie, odstráňte etanol odstredením a pridajte rovnaké množstvo 0,01 M PB (zmiešajte pretrepaním).
Blank
Prázdna
Sample 2
Vzorka 2
window 1
jamka 1
window 2
jamka 2
window 3
jamka 3
window 4
jamka 4
window 5
jamka 5
window 6
jamka 6
window 7
jamka 7
window 8
jamka 8
window 9
jamka 9
window 10
jamka 10
Coverslip 1
Krycie sklíčko 1
Coverslip 2
Krycie sklíčko 2
Air-dry the slides (or on slide dryer at 37 °C) and fix them by flaming.
Nechajte podložné sklíčka usušiť na vzduchu (alebo v sušičke pri teplote 37 °C) a zafixujte ich flambovaním.
At this stage the procedure may be interrupted and the hybridisation continued the following day.
V tomto štádiu je možné postup prerušiť a s hybridizáciou pokračovať nasledujúci deň.
Slides should be stored dust-free and dry at room temperature.
Podložné skíčka by sa mali uložiť na suchom mieste, chránené pred prachom, pri izbovej teplote.
Pre-hybridisation and hybridisation
Predhybridizácia a hybridizácia
Prepare a lysozyme solution containing 10 mg lysozyme (Sigma L–6876) in 10 ml buffer (100 mM Tris-HCl, 50 mM EDTA, pH8.0).
Pripravte lyzozýmový roztok s obsahom 10 mg lyzozýmu (Sigma L-6876) v 10 ml pufri (100 mM Tris-HCl, 50 mM EDTA, pH 8,0).
This solution can be stored but it should only be freeze-thawed once.
Tento roztok je možné uskladniť, no smie sa zmraziť a rozmraziť len raz.
Cover each sample well with approximately 50 µl of lysozyme solution and incubate for 10 minutes at room temperature.
Každú vzorku pokryte približne 50 µl lyzozýmového roztoku a inkubujte počas 10 minút pri izbovej teplote.
Then dip the slides in demineralised water, once only and dry with filter paper.
Potom namočte podložné sklíčka jeden raz do demineralizovanej vody a vysušte pomocou filtračného papiera.
Alternatively, instead of lysozyme add 50 µl of 40 to 400µg ml–1 proteinase K in buffer (20 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, pH 7,4) to each well and incubate at 37 °C for 30 minutes.
Iná možnosť: v každej jamke pridajte namiesto lyzozýmu do pufra 50 µl proteinázy K 40 – 400µg ml–1 (20 mM Tris-HCl, 2mM CaCl2, pH 7,4) a inkubujte pri teplote 37 °C počas 30 minút.
Dehydrate the cells in a graded ethanol series of 50 %, 80 % and 96 % for one minute each.
Dehydratujte bunky postupným ponáraním do etanolu 50 %, 80 % a 96 %, do každého na 1 minútu.
Air dry the slides in a slide-holder.
Podložné sklíčka usušte na vzduchu v stojane.
Prepare a moist incubation chamber by covering the bottom of an air-tight box with tissue or filter paper soaked in 1x hybmix (Appendix 7).
Pripravte vlhkú inkubačnú komoru tak, že vysteliete dno hermetickej škatule absorpčným papierom alebo filtračným papierom nasiaknutým hybmixom 1x (dodatok 7).
Pre-incubate the box in the hybridisation oven at 55 °C for at least 10 minutes.
Predinkubujte škatuľu v hybridizačnej peci pri teplote 55 °C počas najmenej 10 minút.
Prepare the hybridisation solution (Appendix 7) allowing 45 µl per slide, and preincubate for five minutes at 55 °C.
Pripravte hybridizačný roztok (dodatok 7) v množstve 45 µl na každé podložné sklíčko a predinkubujte počas 5 minút pri teplote 55 °C.
Place slides on a hot plate at 45 °C and apply 10 µl of hybridization solution to each of the four wells on the slide(s).
Podložné sklíčka umiestnite na platňu zohriatu na teplotu 45 °C a naneste 10 µl hybridizačného roztoku na každú zo 4 jamiek na podložnom sklíčku (sklíčkach).
Apply two coverslips (24 × 24 mm) to each slide without trapping air.
Každé podložné sklíčko zakryte 2 krycími sklíčkami (24 × 24 mm) tak, aby v nich nezostal vzduch.
Place the slides in the pre-warmed moist chamber and hybridise overnight in the oven at 55 °C in the dark.
Tieto podložné sklíčka umiestnite do predhriatej vlhkej komory a hybridizujte cez noc v peci pri teplote 55 °C v tme.
Prepare three beakers containing 1 l of Ultra pure water (UPW), 1 l of 1x hybmix (334 ml 3x hybmix and 666 ml UPW) and 1 l of 1/2x hybmix (167 ml 3x hybmix and 833 ml UPW).
Pripravte 3 kadičky s obsahom 1 l ultra čistej vody (UPW), 1 l 1x hybmixu (334 ml 3x hybmixu a 666 ml UPW) a 1 l 1/2x hybmixu (167 ml 3x hybmixu a 833 ml UPW).
Pre-incubate each in a waterbath at 55 °C.
Predinkubujte každú z nich vo vodnom kúpeli pri teplote 55 °C.
Remove the coverslips from the slides and place the slides in a slide holder.
Odstráňte krycie sklíčka z podložných sklíčok a podložné sklíčka uložte na stojan.
Wash away excess probe by incubation for 15 mins. in the beaker with 1x hybmix at 55 °C.
Odstráňte zvyšok sondy inkubovaním počas 15 minút v kadičke s 1x hybmix pri teplote 55 °C.
Transfer the slide holder to 1/2 hybmix washing solution and incubate for a further 15 mins.
Presuňte držiak podložného sklíčka do umývacieho roztoku 1/2 hybmix a inkubujte počas ďalších 15 minút.
Dip the slides briefly in UPW and place them on filter paper.
Podložné sklíčka krátko ponorte do UPW a položte ich na filtračný papier.
Remove excess moisture by covering the surface gently with filter paper.
Odstráňte prebytočnú vlhkosť tak, že povrch opatrne pokryjete filtračným papierom.
Pipette 5 to 10 μl of anti-fading mountant solution (e.g. Vectashield, Vecta Laboratories, CA, USA or equivalent) on each window and apply a large coverslip (24 × 60 mm) over the whole slide.
Napipetujte 5 – 10 μl roztoku krycej kvapaliny na udržanie signálu (napr. Vectashield, Vecta Laboratories, CA, USA alebo jej ekvivalent) na každú jamku a položte veľké krycie sklíčko (24 × 60 mm) cez celé podložné sklíčko.
Reading the FISH test
Hodnotenie testu FISH
Observe the slides immediately with a microscope fitted for epifluorescence microscopy at 630 or 1000x magnification under immersions oil.
Podložné sklíčka okamžite preskúmajte mikroskopom prispôsobeným na epifluorescenčnú mikroskopiu pri zväčšení 630 alebo 1000x pod olejovou imerziou.
With a filter suitable for fluorescein isothiocyanate (FITC) eubacterial cells (including most gram negative cells) in the sample are stained fluorescent green.
S filtrom vhodným na fluorescenčný izotiokyanát (FITC) sa eubakteriálne bunky (vrátane väčšiny gram negatívnych buniek) vo vzorke sa sfarbia na fluorescenčnú zelenú.