natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The relative standard deviation of the repeatability, which expresses the variability of independent analytical results obtained by the same operator using the same apparatus under the same conditions on the same test sample and in a short interval of time, should not exceed 2 % relative.
Se determină aria vârfului prin integrare depresiune-la-depresiune.
If two determinations are obtained under these conditions, the relative difference between the two results should not be greater than 6 % of the arithmetic mean of the results.
Grupurile de vârfuri ale PS și PE
Reproducibility
În condițiile descrise (figura 1), PS eluează sub forma a două vârfuri principale parțial incomplete precedate de un vârf minor.
If two determinations are obtained by operators in different laboratories using different apparatus under different conditions for the analysis on the same test sample, the relative difference between the two results should not be greater than 11 % of the arithmetic mean of the results.
PE eluează sub forma a trei vârfuri principale parțial incomplete.
REFERENCES
Se determină întreaga arie a fiecărui grup de vârfuri stabilindu-se linia de bază ca în figura 1.
Resmini P., Pellegrino L., Hogenboom J.A., Sadini V., Rampilli M., ‘Detection of buttermilk solids in skimmilk powder by HPLC quantification of aminophospholipids’.
CALCULAREA ȘI EXPRIMAREA REZULTATELOR
Figure 1
Conținutul de PS și PE din proba de testat se calculează după cum urmează:
HPLC pattern of OPA-derivatives of phosphatidylserine (PS) and phosphatidylethanolamine (PE) in methanol extract of reconstituted skim-milk powder.
unde:
Integration mode for the peaks of PS, PE and tryptamine (internal standard) is reported
C = conținutul de PS sau PE (mg/100 g praf) din proba de testat
Fluorescence (arbitrary units)
A 1 = aria vârfului PEDP a soluției conținând proba-standard (7.3)
Appendix II
A 2 = aria vârfului PS sau PE a soluției conținând proba de testat (7.2)
DETECTION OF RENNET WHEY IN SKIMMED MILK POWDER FOR PUBLIC STORAGE BY DETERMINATION OF CASEINOMACROPEPTIDES HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC)
T 1 = aria vârfului triptaminei a soluției conținând proba-standard (7.3)
SCOPE AND FIELD OF APPLICATION
T 2 = aria vârfului triptaminei a soluției conținând proba de testat (7.2)
This method allows detection of rennet whey in skimmed milk powder intended for public storage by determination of the caseinomacropeptides.
PRECIZIA METODEI
REFERENCE
Notă: Valorile repetabilității au fost calculate conform Standardului Internațional IDF (*).
International Standard ISO 707 - Milk and Milk Products - Guidance on sampling.
Repetabilitatea
The content of rennet whey solids is defined as the percentage by mass as determined by the caseinomacropeptide content by the procedure described.
Derivația standard relativă a repetabilității, care exprimă variabilitatea rezultatelor analitice independente obținute de același operator utilizând aceeași aparatură în aceleași condiții pe aceeași probe de testat și într-un interval de timp scurt nu trebuie să depășească 2 % relativ.
PRINCIPLE
În cazul în care se obțin două determinări în aceste condiții, diferența relativă dintre cele două rezultate nu trebuie să fie mai mare de 6 % din media aritmetică a rezultatelor.
Reconstitution of the skimmed milk powder, removal of fat and proteins with trichloroacetic acid, followed by centrifugation or filtration;
Reproductibilitatea
Determination of the quantity of caseinomacropeptides (CMP) in the supernatant by high-performance liquid chromatography (HPLC);
În cazul în care se obțin două determinări de către operatori din laboratoare diferite care utilizează aparatură diferită în condiții diferite pentru analizarea aceleiași probe de testat, diferența relativă dintre cele două rezultate nu trebuie să fie mai mare de 11 % din media aritmetică a rezultatelor.
Evaluation of the result obtained for the samples by reference to standard samples consisting of skimmed milk powder with or without the addition of a known percentage of whey powder.
REFERINȚE
The water used shall be distilled water or water of at least equivalent purity.
Resmini P., Pellegrino L., Hogenboom J.A., Sadini V., Rampilli M., „Detection of buttermilk solids in skimmilk powder by HPLC quantification of aminophospholipids”.
Trichloroacetic acid solution
Figura 1
Dissolve 240 g of trichloroacetic acid (CCl3COOH) in water and make up to 1000 ml.
Profilul HPLC al derivaților OPA ai fosfatidilserinei (PS) și ai fosfatidiletanolaminei (PE) în extractul de metanol al laptelui praf degresat reconstituit.
The solution should be clear and colourless.
Se raportează modul de integrare a vârfurilor PS, PE și al triptaminei (standard intern)
Eluent solution, pH 6,0
Fluorescență (unități arbitrare)
Dissolve 1,74 g of dipotassium hydrogen phosphate (K2HPO4), 12,37 g of potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) and 21,41 g of sodium sulphate (Na2SO4) in about 700 ml of water.
Apendicele II
Adjust, if necessary, to pH 6,0, using a solution of phosphoric acid or potassium hydroxide.
DETECTAREA ZERULUI ÎNCHEGAT DIN LAPTELE PRAF DEGRESAT DESTINAT DEPOZITĂRII PUBLICE PRIN DETERMINAREA CAZEINMACROPEPTIDELOR PRIN CROMATOGRAFIE ÎN MEDIU LICHID DE ÎNALTĂ PERFORMANȚĂ (HPLC)
Make up to 1000 ml with water and homogenise.
OBIECT ȘI DOMENIU DE APLICARE
Note: The composition of the eluent can be updated to comply with the certificate of the standards or the recommendations of the manufacturer of the column packing material.
Această metodă permite detectarea zerului închegat din laptele praf degresat destinat depozitării publice prin determinarea cazeinmacropeptidelor.
Filter the eluent solution, prior to use, through a membrane filter with a 0,45 μm pore diameter.
REFERINȚĂ
Flushing solvent
Standardul internațional ISO 707 – Lapte și produse lactate – Orientări privind prelevarea de probe.
Mix one volume acetonitrile (CH3CN) with nine volumes water.
Conținutul de materii solide compuse din zer închegat se definește ca procent masic, astfel cum este determinat de conținutul de cazeinmacropeptide prin procedura descrisă.
Filter the mixture prior to use through a membrane filter with a 0,45 μm pore diameter.
PRINCIPIU
Note: Any other flushing solvent with a bactericidal effect which does not impair the columns' resolution efficiency may be used.
Reconstituirea laptelui praf degresat, îndepărtarea lipidelor și a proteinelor cu acid tricloracetic, urmată de centrifugare sau de filtrare;
Standard samples
Determinarea cantității de cazeinmacropeptide (CMP) din supernatant prin cromatografie în mediu lichid de înaltă performanță (HPLC);
Skimmed milk powder meeting the requirements of this Regulation (i.e. [0])
Evaluarea rezultatelor obținute pentru probe în raport cu probele-standard constând din lapte praf degresat cu sau fără adăugarea unui procent cunoscut de pudră de zer.
The same skimmed milk powder adulterated with 5 % (m/m) rennet-type whey powder of standard composition (i.e. [5])
Apa utilizată trebuie să fie apă distilată sau apă de o puritate cel puțin echivalentă.
Analytical balance
Soluție de acid tricloracetic
Optional centrifuge capable of attaining a centrifugal force of 2200 g, fitted with stoppered or capped centrifuge tubes of about 50 ml capacity
Se dizolvă 240 g de acid tricloracetic (CCl3COOH) în apă și se completează până la 1000 ml.
Mechanical shaker
Soluția trebuie să fie limpede și incoloră.
Glass funnels, diameter about 7 cm
Soluția-eluent, pH 6,0
Filter papers, medium filtration, diameter about 12,5 cm
Se dizolvă 1,74 g de fosfat acid de potasiu (K2HPO4), 12,37 g de fosfat diacid de potasiu (KH2PO4) și 21,41 g de sulfat de sodiu (Na2SO4) în aproximativ 700 ml de apă.
Glass filtration equipment with 0,45 μm pore diameter membrane filter
În cazul în care este necesar, se ajustează până la pH 6,0 cu ajutorul unei soluții de acid fosforic sau de hidroxid de potasiu.
Graduated pipettes allowing delivery of 10 ml (ISO 648, Class A, or ISO/R 835) or a dispensing system capable of delivering 10,0 ml in two minutes
Se completează până la 1000 ml cu apă și se omogenizează.
Dispensing system capable of delivering 20,0 ml water at ca.
Notă: Compoziția eluentului poate fi actualizată pentru se conforma certificatului standardelor sau recomandărilor producătorului materialului de umplere a coloanei.
50 °C
Soluția-eluent se filtrează înainte de utilizare printr-o membrană filtrantă având pori cu diametrul de 0,45 μm.
Thermostatic water bath, set at 25 ± 0,5 °C
Solvent de irigare
HPLC equipment, consisting of:
Se amestecă un volum de acetonitril (CH3CN) cu nouă volume de apă.
Pump
Amestecul se filtrează înainte de utilizare printr-o membrană filtrantă având pori cu diametrul de 0,45 μm.
Injector, hand or automatic, with a 15 to 30 μl capacity
Notă: Se poate utiliza orice alt solvent de irigare cu efect bactericid care nu scade eficiența rezoluției coloanei.
Two TSK 2000-SW columns in series (length 30 cm, internal diameter 0,75 cm) or equivalent columns (e.g. single TSK 2000-SWxl, single Agilent Technologies Zorbax GF 250) and a precolumn (3 cm × 0,3 cm) packed with I 125 or material of equivalent effectiveness
Probele-standard
Thermostatic column oven, set at 35 ± 1 °C
Lapte praf degresat care îndeplinește cerințele prezentului regulament (adică [0])
Variable wavelength UV detector, permitting measurements at 205 nm with a sensitivity of 0,008 Å
Același lapte praf degresat, modificat cu 5 % (m/m) zer închegat praf cu compoziție standard (adică [5]).
Integrator capable of valley-to-valley integration
Cântar analitic
Note: Working with columns kept at room temperature is possible, but their power of resolution is slightly lower.
Opțional, centrifugă capabilă să atingă o forță de centrifugare de 2200 g, prevăzută cu tuburi de centrifugare astupate, cu o capacitate de aproximativ 50 ml
In that case, the temperature should vary by less than ± 5 °C in any one range of analyses.
Agitator mecanic
Samples shall be taken in accordance with the procedure laid down in International Standard ISO 707.
Coloane de sticlă, cu diametrul de aproximativ 7 cm
However, Member States may use another method of sampling provided that it complies with the principles of the abovementioned standard
Filtre de hârtie, cu filtrare medie, cu diametrul de aproximativ 12,5 cm
Store the sample in conditions which preclude any deterioration or change in composition
Echipament de filtrare din sticlă prevăzut cu membrană filtrantă cu diametrul porilor de 0,45 μm
Preparation of the test sample
Pipete gradate permițând dozarea a 10 ml (ISO 648, clasa A sau ISO/R 835) sau un sistem de dispersare capabil să furnizeze 10,0 ml în două minute
Transfer the milk powder into a container with a capacity of about twice the volume of the powder, fitted with an airtight lid.
Sistem de dispersare capabil să furnizeze 20,0 ml de apă la o temperatură de aproximativ 50 °C
Close the container immediately.
Baie de apă termostatică, reglată la 25 ± 0,5 °C
Mix the milk powder well by means of repeated inversion of the container.
Echipament pentru HPLC, format din:
Test portion
Pompă
Weight 2,000 ± 0,001 g of test sample into a centrifuge tube (6.2) or a suitable stoppered flask (50 ml).
Injector, manual sau automat, cu o capacitate de 15-30 μl
Removal of fat and proteins
Două coloane TSK 2000-SW în serie (lungime de 30 cm, diametru intern de 0,75 cm) sau coloane echivalente (de exemplu TSK 2000-SWxl singură, Agilent Technologies Zorbax GF 250 singură) și o precoloană (3 cm × 0,3 cm) umplute cu material I 125 sau cu un material cu eficiență echivalentă
Add 20,0 ml of warm water (50 °C) to the test portion.
Cuptor cu coloană termostatic, reglat la 35 ± 1 °C
Dissolve the powder by shaking for five minutes using a mechanical shaker (6.3).
Detector UV cu lungime de undă variabilă care permite măsurători la 205 nm cu o sensibilitate de 0,008 Å
25 °C in two minutes, while stirring vigorously with the aid of the magnetic stirrer (6.4).
În acest caz, temperatura nu trebuie să varieze cu mai puțin de ± 5 °C în nicio serie de analize.
Place the tube in a water bath (6.10) and leave for 60 minutes
Prelevarea probelor se face în conformitate cu procedura prevăzută în standardul internațional ISO 707.
Centrifuge (6.2) for 10 minutes at 2200 g, or filter through paper (6.6), discarding the first 5 ml of filtrate
Totuși, statele membre pot utiliza o altă metodă de prelevare a probelor, cu condiția ca aceasta să fie conformă cu principiile standardului menționat anterior
Chromatographic determination
Probele se depozitează în condiții care împiedică orice deteriorare sau modificare a compoziției
Inject 15 to 30 μl of accurately measured supernatant or filtrate (8.3.3) into the HPLC apparatus (6.11) operating at a flow rate of 1,0 ml of eluent solution (5.2) per minute
Pregătirea probei de testat
Note 1.
Se transferă laptele praf într-un recipient cu o capacitate aproximativ dublă față de volumul laptelui praf, prevăzut cu un capac etanș pentru aer.
Another flow rate may be used, dependent of the internal diameter of the columns used or the instructions of the manufacturer of the column.
Recipientul se închide imediat.
Note 2.
Laptele praf se amestecă bine prin răsturnări repetate ale recipientului.
Rinse the columns with water during each interruption.
Porția de testat
Never leave the eluent solution in them (5.2).
Se cântăresc 2,000 + 0,001 g din proba de testat într-un tub de centrifugare (6.2.) sau într-un flacon astupat în mod corespunzător (50 ml).
Prior to any interruption of more than 24 hours, rinse the columns with water then wash them with solution (5.3) for at least three hours at a flow rate of 0,2 ml per minute.
Îndepărtarea lipidelor și a proteinelor
The results of chromatographic analysis of the test sample [E] are obtained in the form of chromatogram in which each peak is identified by its retention time RT as follows:
Se adaugă 20,0 ml de apă caldă (50 °C) la porția de testat.
Peak II:
Se dizolvă pudra agitându-se timp de cinci minute cu ajutorul unui agitator mecanic (6.3).
The second peak of the chromatogram having an RT of about 12,5 minutes.
Tubul se introduce în baia de apă (6.10) și se lasă să se echilibreze la 25 °C
Peak III:
Se adaugă 10,0 ml de soluție de acid tricloracetic (5.1.) la aproximativ 25 °C în două minute, amestecându-se puternic cu ajutorul agitatorului magnetic (6.4).
The third peak of the chromatogram, corresponding to the CMP, having an RT of 15,5 minutes.
Tubul se introduce într-o baie de apă (6.10) și se lasă timp de 60 de minute
The choice of the column(s) can affect the retention times of the individual peaks considerably.
Se centrifughează (6.2) timp de 10 minute la 2200 g sau se filtrează printr-o hârtie (6.6), eliminându-se primii 5 ml de filtrat
The integrator (6.11.6) automatically calculates the area A of each peak:
Determinarea cromatografică
area of peak II,
Se injectează 15-30 μl de supernatant sau filtrat (8.3.3) măsurate cu precizie în dispozitivul HPLC (6.11) funcționând la un debit de 1,0 ml de soluție-eluent (5.2) per minut
area of peak III,
Soluția-eluent nu se lasă niciodată în coloane (5.2).
It is essential to examine the appearance of each chromatogram prior to quantitative interpretation, in order to detect any abnormalities due either to malfunctioning of the apparatus or the columns, or to the origin and nature of the sample analysed.
Înainte de orice întrerupere care durează mai mult de 24 de ore, coloanele se clătesc cu apă și apoi se spală cu soluție (5.3) timp de cel puțin trei ore la un debit de 0,2 ml per minut.
If in doubt, repeat the analysis.
Rezultatele analizei cromatografice a probei de testat [E] se obțin sub forma unei cromatograme în care fiecare vârf se identifică după timpul său de retenție RT, după cum urmează.
Calibration
Vârful II:
Apply exactly the procedure described from point 8.2 to point 8.4.2 to the standard samples (5.4)
Al doilea vârf al cromatogramei având un RT de aproximativ 12,5 minute.
Use freshly prepared solutions, because CMP degrade in an 8 % trichloroacetic environment.
Vârful III:
The loss is estimated at 0,2 % per hour at 30 °C.
Al treilea vârf al cromatogramei, corespunzând CMP-urilor, având un RT de aproximativ 15,5 minute.
Prior to chromatographic determination of the samples, condition the columns by repeatedly injecting the standard sample (5.4.2) in solution (8.5.1) until the area and retention time of the peak corresponding to the CMP are constant
Alegerea coloanei (coloanelor) poate afecta în mod considerabil timpii de retenție ai fiecărui vârf.
Determine the response factors R by injecting the same volume of filtrates (8.5.1) as used for the samples
Integratorul (6.11.6) calculează automat aria A a fiecărui vârf:
EXPRESSION OF RESULTS
aria vârfului II,
Method of calculation and formulae
aria vârfului III,
Calculation of the response factors R:
Este esențial să se examineze aspectul fiecărei cromatograme înainte de interpretarea cantitativă pentru a se detecta orice anomalii cauzate fie de funcționarea necorespunzătoare a aparaturii sau a coloanelor, fie de originea sau natura probei analizate.
R II = the response factors of peaks II,
În cazul în care există dubii, analiza se repetă.
A II [0] = the areas of peaks II of the standard sample [0] obtained in 8.5.3.
Calibrarea
R III = the response factor of peak III,
Probelor-standard (5.4) li se aplică cu exactitate procedura descrisă de la punctul 8.2 la punctul 8.4.2.
A III [0] and AIII [5] = the areas of peak III in standard samples [0] and [5] respectively obtained in 8.5.3,
Se utilizează soluții proaspăt preparate, întrucât CMP se degradează într-un mediu tricloracetic de 8 %.
S II [E], SIII [E], SIV [E] = the relative areas of peaks II, III and IV respectively in the sample [E],
Factorul de răspuns R se determină prin injectarea aceluiași volum de filtrați (8.5.1) utilizat și pentru probe
A II [E], AIII [E] = the areas of peaks II and III respectively in the sample [E] obtained in 8.4.2,
EXPRIMAREA REZULTATELOR
R II, RIII = the response factors calculated in 9.1.1.
Metodă de calcul și formule
Calculation of the relative retention time of peak III in sample [E]:
Calcularea factorilor de răspuns R:
RRT III [E] = the relative retention time of peak III in sample [E],
R II = factorii de răspuns a vârfurilor II,
RT III [E] = the retention time of peak III in sample [E] obtained in 8.4.2,
A II [0] = ariile vârfurilor II pentru proba-standard [0] obținute la 8.5.3.
RT III [5] = the retention time of peak III in control sample [5] obtained in 8.5.3.
R III = factorul de răspuns al vârfului III,
Experiments have shown that there is a linear relation between the relative retention time of peak III, i.e.
A III [0] și AIII [5] = ariile vârfului III pentru probele-standard [0] și respectiv [5] obținute la 8.5.3.
RRTIII [E] and the percentage of whey powder added up to 10 %
W = cantitatea de zer din proba-standard [5], adică 5.
The RRTIII [E] is < 1,000 when the whey content is > 5 %;
Calcularea ariei relative a vârfurilor probei [E]:
The RRTIII [E] is ≥ 1,000 when the whey content is ≤ 5 %.
S II [E], SIII [E], SIV [E] = ariile relative ale vârfurilor II, III și respectiv IV din proba [E],
The uncertainty allowed for the values of RRTIII is ± 0,002.
A II [E], AIII [E] = ariile vârfurilor II și respectiv III din proba [E] obținute la 8.4.2,
Normally the value of RRTIII [0] deviates little from 1,034.
R II, RIII = factorii de răspuns calculați la 9.1.1.
Depending on the condition of the columns, the value may approach 1,000, but it shall always be greater.
Calcularea timpului relativ de retenție al vârfului III pentru proba [E]:
Calculation of the percentage of rennet whey powder in the sample:
RRT III [E] = timpul relativ de retenție al vârfului III pentru proba [E]
W = SIII[E] – [1, 3 + (SIII[0] – 0,9)]
RT III [E] = timpul de retenție al vârfului III pentru proba [E] obținut la 8.4.2,
W = the percentage m/m of rennet whey in the sample [E];
RT III [5] = timpul de retenție al vârfului III pentru proba de control [5] obținut la 8.5.3,
S III [E] = the relative area of peak III of test sample [E] obtained as in 9.1.2;
RRTIII [E] este < 1,000 în cazul în care conținutul de zer este > 5 %;
1,3 = represents the relative average area of peak III expressed in grams of rennet whey per 100 g determined in non-adulterated skimmed milk powder of various origins.
RRTIII [E] este ≥ 1,000 în cazul în care conținutul de zer este ≤ 5 %.
This figure was obtained experimentally;
Incertitudinea permisă pentru valorile RRTIII este de ± 0,002.
S III [0] = represents the relative area of peak III which is equal to RIII × AIII [0].
În mod normal, valoarea RRTIII [0] deviază puțin de la 1,034.
These values are obtained in 9.1.1 and 8.5.3 respectively;
În funcție de starea coloanelor, valoarea se poate apropia de 1,000, dar întotdeauna trebuie să fie mai mare decât această valoare.
(S III [0] – 0,9) = represents the correction to be made to the relative average area 1,3 when SIII [0] is not equal to 0,9.
Calcularea procentului de zer închegat praf din probă:
Experimentally the relative average area of peak III of the control sample [0] is 0,9.
W = SIII[E] – [1, 3 + (SIII[0] – 0, 9)]
Accuracy of the procedure
W = procentul m/m de zer închegat din proba (E);
The difference between the results of two determinations carried out simultaneously or in rapid succession by the same analyst using the same apparatus on identical test material shall not exceed 0,2 % m/m.
S III [E] = aria relativă a vârfului III a probei de testat [E] obținut ca la punctul 9.1.2;
The difference between two single and independent results, obtained in two different laboratories on identical test material shall not exceed 0,4 % m/m.
1,3 = reprezintă aria medie relativă a vârfului III exprimată în grame de zer închegat per 100 g, determinată pentru lapte praf degresat nemodificat provenit din diverse surse.
Interpretation
Această cifră a fost obținută experimental;
Assume the absence of whey if the relative area of peak III, SIII [E] expressed in grams of rennet whey per 100 g of the product is ≤ 2,0 + (SIII[0] – 0,9)
S III [0] = reprezintă aria relativă a vârfului III care este egală cu RIII × AIII [0].
where
Aceste valori sunt obținute la 9.1.1 și, respectiv, 8.5.3;
is the maximum value allowed for the relative area of peak III taking into account the relative average area of peak III, i.e. 1,3, the uncertainty due to variations in the composition of skimmed milk powder and the reproducibility of the method (9.3.2),
(S III [0] – 0,9) = reprezintă corecția care trebui efectuată la aria medie relativă 1,3 când SIII [0] nu are valoarea 0,9.
is the correction to be made when the area SIII [0] is different from 0,9 (see point 9.2)
În mod experimental, aria medie relativă a vârfului III al probei de control [0] este 0,9.
If the relative area of peak III, SIII [E] is > 2,0 + (SIII[0] – 0,9) and the relative area of peak II, SII [E] ≤ 160, determine the rennet whey content as indicated in point 9.2.
Precizia procedurii
If the relative area of peak III, SIII [E] is > 2,0 + (SIII[0] – 0,9) and the relative area of peak II, SII [E] ≤ 160, determine the total protein content (P %); then examine graphs 1 and 2.
Diferența dintre rezultatele a două determinări efectuate simultan sau în succesiune rapidă de către același analist utilizând aceeași aparatură pe material de testare identic nu trebuie să depășească 0,2 % m/m.
The data obtained after analysis of samples of unadulterated skimmed milk powders with a high total protein content have been assembled in graphs 1 and 2.
Diferența dintre două rezultate singulare și independente, obținute în două laboratoare diferite cu material de testare identic nu trebuie să depășească 0,4 % m/m.
The continuous line represents the linear regression, the coefficients of which are calculated by the least squares method.
Interpretare
The dashed straight line fixes the upper limit of the relative area of peak III with a probability of not being exceeded in 90 % of cases.
Se presupune că zerul este absent în cazul în care aria relativă a vârfului III, SIII [E] exprimată în grame de zer închegat per 100 g de produs este ≤ 2,0 + (SIII[0] – 0,9)
The equations for the dashed straight lines of graphs 1 and 2 are:
unde