natgillin/translations-raw huggingface dataset:
METHOD FOR THE DETECTION OF COW'S MILK AND CASEINATE IN CHEESES FROM EWE'S MILK, GOAT'S MILK OR BUFFALO MILK OR MIXTURES OF EWE'S MILK, GOAT'S MILK AND BUFFALO MILK
Metodele pentru detectarea cazeinei din lapte de vacă în brânzeturile menționate la punctul 1 pot fi utilizate dacă:
SCOPE
limita de detecție este de maxim 0,5 %; și
Detection of cow's milk and caseinate in cheeses made from ewe's milk, goat's milk, buffalo milk or mixtures of ewe's, goat's and buffalo milk by isoelectric focusing of γ-caseins after plasminolysis.
nu existe rezultate fals pozitive; și
FIELD OF APPLICATION
cazeina din lapte de vacă este detectabilă cu sensibilitatea necesară chiar și după perioade lungi de maturare, cum se poate întâmpla în condiții de comercializare uzuale.
The method is suitable for sensitive and specific detection of native and heat-treated cow's milk and caseinate in fresh and ripened cheeses made from ewe's milk, goat's milk, buffalo milk or mixtures of ewe's, goat's and buffalo milk.
Dacă niciuna dintre cerințele de mai sus nu este îndeplinită, se utilizează metodele prezentate în apendice.
It is not suitable for the detection of milk and cheese adulteration by heat-treated bovine whey protein concentrates.
Apendice
Isolation of caseins from cheese and the reference standards
METODĂ PENTRU DETECTAREA LAPTELUI DE VACĂ ȘI A CAZEINATULUI ÎN BRÂNZETURILE PRODUSE DIN LAPTE DE OAIE, DE CAPRĂ SAU DE BIVOLIȚĂ SAU DIN AMESTECURI DE LAPTE DE OAIE, DE CAPRĂ ȘI DE BIVOLIȚĂ
Dissolving of the isolated caseins and submitting to plasmin (EC.3.4.21.7) cleavage
DOMENIU DE APLICARE
Isoelectric focusing of plasmin-treated caseins in the presence of urea and staining of proteins
Detectarea laptelui de vacă și a cazeinatului în brânzeturile produse din lapte de oaie, de capră, de bivoliță sau din amestecuri de lapte de oaie, de capră și de bivoliță prin focalizarea izoelectrică a γ-cazeinelor după plasminoliză.
Evaluation of stained γ3 and γ2 -casein patterns (evidence of cow's milk) by comparison of the pattern obtained from the sample with those obtained in the same gel from the reference standards containing 0 % and 1 % cow's milk.
APLICAREA ÎN PRACTICĂ
Unless otherwise indicated, analytical grade chemicals shall be used.
Această metodă poate fi utilizată pentru detectarea sensibilă și specifică a laptelui de vacă natural și tratat termic și a cazeinatului în brânzeturile proaspete și maturate produse din lapte de oaie, de capră, de bivoliță sau din amestecuri de lapte de oaie, de capră și de bivoliță.
Where other sizes and types of gel are used, the separation conditions may have to be adjusted.
Dizolvarea cazeinelor izolate și supunerea lor la clivare cu plasmină (EC.3.4.21.7).
Isoelectric focusing
Focalizarea izoelectrică a cazeinelor tratate cu plasmină în prezența ureii și colorarea proteinelor
Reagents for production of the urea containing polyacrylamide gels
Evaluarea profilelor colorate de cazeină γ3 și γ2 (dovadă a prezenței laptelui de vacă) prin compararea profilului obținut din probă cu cele obținute în același gel din standardele de referință conținând 0 % și 1 % lapte de vacă.
Stock gel solution
În afara cazurilor în care se indică altfel, se utilizează produse chimice de calitate analitică.
Dissolve:
Apa trebuie să fie dublu distilată sau de o puritate echivalentă.
4,85 g acrylamide
Notă: Următoarele detalii se aplică gelurilor de poliacrilamide cu conținut de uree preparate în laborator, având dimensiunile de 265 × 125 × 0,25 mm.
0,15 g N, N′-methylene-bis-acrylamide (BIS)
În cazul în care se utilizează geluri de alte dimensiuni sau tipuri, poate fi necesară ajustarea condițiilor de separare.
48,05 g urea
Focalizarea izoelectrică
15,00 g glycerol (87 % w/w),
Reactivi pentru producerea gelurilor de poliacrilamide cu conținut de uree
in water and make up to 100 ml and store in a brown glass bottle in the refrigerator.
Soluție-stoc de gel
Note: A commercially available pre-blended acrylamide/BIS solution may be used in preference to the quoted fixed weights of the neurotoxic acrylamides.
Se dizolvă:
Where such a solution contains 30 % w/v acrylamide and 0,8 % w/v BIS, a volume of 16,2 ml shall be used for the formulation instead of the fixed weights.
4,85 g acrilamidă
The shelf life of the stock solution is a maximum of 10 days; if its conductivity is more than 5 μS, de-ionize by stirring with 2 g Amberlite MB-3 for 30 minutes, then filter through a 0,45 μm membrane.
0,15 g N, N'-metilen-bis-acrilamidă (BIS)
Gel solution
48,05 g uree
Prepare a gel solution by mixing additives and ampholytes (*) with the stock gel solution (see 4.1.1).
15,00 g glicerol (87 % m/m),
9,0 ml stock solution
Notă: În locul cantităților fixe de acrilamide neurotoxice menționate se poate utiliza o soluție de acrilamidă/BIS preamestecată disponibilă în comerț.
24 mg β-alanine
În cazul în care o astfel de soluție conține 30 % m/V acrilamidă și 0,8 % m/V BIS, pentru preparare se utilizează un volum de 16,2 ml de soluție în locul cantităților fixate.
500 μl ampholyte pH 3,5-9,5
Termenul de valabilitate a soluției-stoc este de maxim 10 zile; în cazul în care conductivitatea sa este mai mare de 5 μS, se deionizează prin agitare cu 2 g Amberlite MB-3 timp de 30 minute, apoi se filtrează printr-o membrană cu pori de 0,45 μm.
250 μl ampholyte pH 5-7
Soluția de gel
250 μl ampholyte pH 6-8
Se prepară o soluție de gel amestecând aditivi și amfoliți (*) cu soluția-stoc de gel (a se vedea 4.1.1).
Mix the gel solution and de-gas for two to three minutes in an ultrasonic bath or in vacuum.
9,0 ml soluție-stoc
Note: Prepare the gel solution immediately prior to pouring it (see 6.2).
24 mg β-alanină
Catalyst solutions
500 μl amfolit pH 3,5-9,5
N, N, N′ N′ — tetramethylethylenediamine (Temed)
250 μl amfolit pH 5-7
40 % w/v ammonium persulphate (PER):
250 μl amfolit pH 6-8
Dissolve 800 mg PER in water and make up to 2 ml.
Se amestecă soluția sub formă de gel și se degazează timp de două-trei minute într-o baie cu ultrasunete sau în vid.
Note: Always use freshly prepared PER solution.
Notă: Soluția sub formă de gel se prepară imediat înainte de a o turna (6.2).
Contact fluid
Soluții-catalizator
Kerosene or liquid paraffin
N, N, N′ N′ – tetrametiletilendiamină (Temed)
Anode solution
40 % m/V persulfat de amoniu (PER):
Dissolve 5,77 g phosphoric acid (85 % w/w) in water and dilute to 100 ml.
Se dizolvă 800 mg de PER în apă și se completează până la 2 ml.
Cathode solution
Notă: Întotdeauna se utilizează soluție PER proaspăt preparată.
Dissolve 2,00 g sodium hydroxide in water and dilute to 100 ml with water.
Fluid de contact
Sample preparation
Kerosen sau parafină lichidă
Reagents for protein isolation
Soluție anodică
Dilute acetic acid (25,0 ml of glacial acetic acid made up to 100 ml with water)
Se dizolvă în apă 5,77 g acid fosforic (85 % m/m) și se diluează până la 100 ml.
Dichloromethane
Soluție catodică
Acetone
Se dizolvă în apă 2,00 g hidroxid de sodiu și se diluează până la 100 ml.
Protein dissolving buffer
Pregătirea probei
Dissolve
Reactivi pentru izolarea proteinelor
5,75 g glycerol (87 % w/w)
Se diluează acid acetic (25,0 ml acid acetic glacial completat cu apă până la 100 ml)
24,03 g urea
Diclormetan
250 mg dithiothreitol,
Acetonă
in water and make up to 50 ml
Soluție-tampon pentru dizolvarea proteinelor
Note: Store in a refrigerator, maximum shelf-life one week.
Se dizolvă
Reagents for plasmin cleavage of caseins
5,75 g glicerol (87 % m/m)
Ammonium carbonate buffer
24,03 g uree
Titrate a 0,2 mol/l ammonium hydrogencarbonate solution (1,58 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA, 1,46 g/100 ml with a 0,2 mol/l ammonium carbonate solution (1,92 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l EDTA to pH 8.
250 mg ditiotreitol
Bovine plasmin (EC.
în apă și se completează până la 50 ml
3.4.21.7), activity at least 5 U/ml
Notă: Se păstrează în frigider, termenul de valabilitate maxim fiind de o săptămână.
ε-Aminocaproic acid solution for enzyme inhibition
Reactivi pentru clivarea cu plasmină a cazeinelor
Dissolve 2,624 g ε-aminocaproic acid (6 amino-n-hexanoic acid) in 100 ml of 40 % (v/v) ethanol.
Soluție-tampon de carbonat de amoniu
Standards
Se titrează până la pH 8 o soluție de carbonat acid de amoniu 0,2 mol/l (1,58 g/100 ml apă) conținând acid etilendiaminotetraacetic 0,05 mol/l (EDTA, 1,46 g/100 ml) cu o soluție de carbonat de amoniu 0,2 mol/l (1,92 g/100 ml apă) conținând 0,05 mol/l EDTA.
Certified reference standards of a mixture of renneted ewe's and goat's skimmed milk containing 0 % and 1 % of cow's milk are available from the Commission's Institute for Reference Materials and Measurements, B-2440 Geel, Belgium
Plasmină de bovine (EC.
Preparation of laboratory interim-standards of buffalo's renneted milk containing 0 % and 1 % of cow's milk
3.4.21.7), activitate de minim 5 U/ml
Skimmed milk is prepared by centrifuging of either buffalo or bovine raw bulk milk at 37 °C at 2500 g for 20 minutes.
Soluție de acid ε-aminocaproic pentru inhibarea enzimelor
After cooling the tube and contents rapidly to 6 to 8 °C, the upper fat layer is removed completely.
Se dizolvă 2,624 g acid ε-aminocaproic (acid 6-amino-n-hexanoic) în 100 ml de etanol 40 % (V/V).
For the preparation of the 1 % standard add 5,00 ml of bovine skimmed milk to a 495 ml of buffalo's skimmed milk in a 1 l beaker, adjust the pH to 6,4 by the addition of dilute lactic acid (10 % w/v).
Standarde
Adjust the temperature to 35 °C and add 100 μl of calf rennet (rennet activity 1: 10000, c.
De la Institutul pentru Materiale și Măsurători de Referință al Comisiei, B-2440 Geel, Belgia, pot fi obținute standarde de referință certificate compuse din amestecuri de lapte închegat de oaie și de capră conținând 0 %, respectiv 1 %, lapte de vacă.
3000 U/ml), stir for 1 minute and then leave the beaker covered with an aluminium foil at 35 °C for one hour to allow formation of the curd.
Prepararea standardelor de referință provizorii de laborator din lapte de bivoliță închegat conținând 0 % și 1 % lapte de vacă
After the curd has formed, the whole renneted milk is freeze-dried without prior homogenization or draining of the whey.
Laptele degresat se prepară prin centrifugarea laptelui crud în vrac de bivoliță sau de vacă la 37 °C, la 2500 g, timp de 20 minute.
After freeze-drying it is finely ground to produce a homogeneous powder.
După răcirea rapidă a tubului și a conținutului la 6-8 °C, stratul superior de lipide se îndepărtează complet.
For the preparation of the 0 % standard, carry out the same procedure using genuine buffalo skimmed milk.
Pentru prepararea standardului 1 % se adaugă 5,00 ml de lapte de bovine degresat la 495 ml lapte de bivoliță degresat într-un vas de 1 l, se ajustează pH-ul la 6,4 prin adăugarea de acid lactic diluat (10 % m/V).
The standards shall be stored at – 20 °C.
Se ajustează temperatura la 35 °C și se adaugă 100 μl de cheag de vițel (activitatea cheagului 1: 10000, c.
Note: It is advisable to check the purity of the buffalo milk by isoelectric focusing of the plasmin-treated caseins before preparation of the standards.
3000 U/ml), se amestecă timp de 1 minut, apoi se lasă vasul, acoperit cu o folie de aluminiu, la 35 °C timp de o oră pentru a permite formarea coagulului.
Reagents for protein staining
După formarea acestuia, întregul laptele închegat este liofilizat fără omogenizare prealabilă și fără a se drena zerul.
Fixative
După liofilizare, produsul se macină mărunt până se obține o pulbere omogenă.
Dissolve 150 g trichloroacetic acid in water and make up to 1000 ml.
Pentru prepararea standardului 0 %, se urmează aceeași procedură utilizând lapte degresat de bivoliță autentic.
Destaining solution
Standardele se păstrează la – 20 °C.
Staining solutions
Fixativ
Staining solution (stock solution 1)
Se dizolvă în apă 150 g de acid tricloracetic și se completează până la 1000 ml.
Dissolve 3,0 g Coomassie Brilliant Blue G-250 (C.I. 42655) in 1000 ml 90 % (v/v) methanol using a magnetic stirrer (approximately 45 minutes), filter through two medium-speed folded filters.
Soluție pentru decolorare
Staining solution (stock solution 2)
Se diluează 500 ml de metanol și 200 ml de acid acetic glacial cu apă distilată până la 2000 ml.
Dissolve 5,0 g copper sulphate pentahydrate in 1000 ml 20 % (v/v) acetic acid.
Notă: Se prepară zilnic o soluție proaspătă de decolorare; ea poate fi preparată prin amestecarea unor volume egale de soluții-stoc de metanol 50 % (V/V) și de acid acetic glacial 20 % (V/V).
Staining solution (working solution)
Soluții pentru colorare
Mix together 125 ml of each of the stock solutions (4.11.1, 4.11.2) immediately prior to staining.
Soluție pentru colorare (soluție-stoc 1)
Note: The staining solution should be prepared on the day that it is used.
Se dizolvă 3,0 g Albastru Coomassie Brilliant G-250 (C.I. 42655) în 1000 ml metanol 90 % (V/V) utilizând un agitator magnetic (timp de aproximativ 45 minute), apoi se filtrează prin două filtre pliate de viteză medie.
EQUIPMENT
Soluție pentru colorare (soluție-stoc 2)
Glass plates (265 × 125 × 4 mm); rubber roller (width 15 cm); levelling table
Se dizolvă 5,0 g sulfat de cupru pentahidrat în 1000 ml de acid acetic 20 % (V/V).
Gel carrier sheet (265 × 125 mm)
Soluție pentru colorare (soluție de lucru)
Covering sheet (280 × 125 mm).
Se amestecă câte 125 ml din fiecare soluție-stoc (4.11.1, 4.11.2) imediat înainte de colorare.
Stick on strip of adhesive tape (280 × 6 × 0,25 mm) to each long edge (see Figure 1)
Notă: Soluția pentru colorare se prepară în ziua în care este utilizată.
Electrofocusing chamber with cooling plate (e.g. 265 × 125 mm) and suitable power supply (≥ 2,5 kV) or automatic electrophoresis device
ECHIPAMENTE
Circulation cryostat, thermostatically controlled at 12 ± 0,5 °C
Plăci de sticlă (265 × 125 × 4 mm); rolă de cauciuc (lățime 15 cm); masă reglabilă
Centrifuge, adjustable to 3000 g
Foaie purtătoare de gel (265 × 125 mm)
Electrode strips (≥ 265 mm long)
Cuvă de electrofocalizare cu placă de răcire (de exemplu 265 × 125 mm) cu unitate de alimentare electrică adecvată (≥ 2,5 kV) sau cu dispozitiv automat de electroforeză
Plastic dropping bottles for the anode and cathode solutions
Criostat de circulație, controlat termostatic la 12 ± 0,5 °C
Sample applicators (10 × 5 mm, viscose or low protein-adsorption filter paper)
Centrifugă ajustabilă la 3000 g
Stainless steel or glass staining and destaining dishes (e.g. 280 × 150 mm instrument trays)
Benzi de electrozi (lungime ≥ 265 mm)
Adjustable rod homogenizer (10 mm shaft diameter), rpm range 8000 to 20000
Sticle picurătoare din plastic pentru soluțiile anodice și catodice
Film welder
Aplicatoare de probe (10 × 5 mm, hârtie de filtrare din viscoză sau cu absorbție mică a proteinelor).
25 μl micropipettes
Vase din oțel inoxidabil sau din sticlă pentru colorare și decolorare (de exemplu, tăvi de instrumente de 280 × 150 mm)
Vacuum concentrator or freeze-dryer
Omogenizator ajustabil cu tijă (diametrul tijei 10 mm), intervalul rpm 8000-20000
Thermostatically controlled water bath adjustable to 35 and 40 ± 1 °C with shaker
Aparat de sudat folii
Densitometer equipment reading at λ = 634 nm
Micropipete de 25 μl
Isolation of caseins
Concentrator sub vid sau liofilizator
Weigh the amount equivalent to 5 g dry mass of cheese or the reference standards into a 100 ml centrifuge tube, add 60 ml distilled water and homogenize with a rod homogenizer (8000 to 10000 rpm).
Baie de apă controlată termostatic, ajustabilă la 35 și 40 ± 1 °C, cu agitator
Adjust to pH 4,6 with dil. acetic acid (4.5.1) and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
Echipament de densitometrie cu citire la λ = 634 nm
Decant the fat and whey, homogenize the residue at 20000 rpm in 40 ml distilled water adjusted to pH 4,5 with dil. acetic acid (4.5.1), add 20 ml dichloromethane (4.5.2), homogenize again and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
Izolarea cazeinelor
Remove the casein layer that lies between the aqueous and organic phases (see Figure 2) with a spatula and decant off both phases.
Se cântărește într-un tub de centrifugă de 100 ml echivalentul a 5 g materie uscată de brânză sau standarde de referință, se adaugă 60 ml apă distilată și se omogenizează cu un omogenizator cu tijă (8000-10000 rpm).
Rehomogenise the casein in 40 ml distilled water (see above) and 20 ml dichloromethane (4.5.2) and centrifuge.
Se ajustează la pH de 4,6 cu o soluție de acid acetic diluat (4.5.1) și se centrifughează (5 minute, 3000 g).
Repeat this procedure until both extraction phases are colourless (two to three times).
Se decantează lipidele și zerul, se omogenizează reziduul la 20000 rpm în 40 ml apă distilată ajustată la pH de 4,5 cu acid acetic diluat (4.5.1), se adaugă 20 ml diclormetan (4.5.2), se omogenizează din nou și se centrifughează (5 minute, 3000 g).
Homogenize the protein residue with 50 ml acetone (4.5.3) and filter through a medium-speed folded filter paper.
Se îndepărtează cu o spatulă stratul de cazeină care se află între faza apoasă și cea organică (a se vedea figura 2) și se elimină ambele faze.
Wash the residue on the filter with two separate 25 ml portions of acetone each time and allow to dry in the air or a stream of nitrogen, then pulverize finely in a mortar.
Se reomogenizează cazeina în 40 ml apă distilată (a se vedea mai sus) și în 20 ml diclormetan (4.5.2), apoi se centrifughează.
Note: Dry casein isolates should be kept at –20 °C.
Se repetă procedura până când ambele faze de extracție sunt incolore (de două sau de trei ori).
Plasmin cleavage of β-caseins to intensify γ-caseins
Se omogenizează reziduul proteic cu 50 ml acetonă (4.5.3) și se filtrează printr-o hârtie de filtrare pliată de viteză medie.
Disperse 25 mg of isolated caseins (6.1.1) in 0,5 ml ammonium carbonate buffer (4.7.1) and homogenize for 20 minutes by e.g. using ultrasonic treatment.
Se spală de fiecare dată reziduul de pe filtru cu câte două porții separate de 25 ml acetonă și se lasă să se usuce în aer sau sub jet de azot, apoi se macină fin într-un mojar.
Heat to 40 °C and add 10 μl plasmin (4.7.2), mix and incubate for one hour at 40 °C with continuous shaking.
Notă: Izolatele de cazeină uscată se păstrează la – 20 °C.
To inhibit the enzyme add 20 μl ε-aminoproic acid solution (4.7.3), then add 200 mg of solid urea and 2 mg of dithiothreitol.
Clivarea cu plasmină a ß-cazeinelor pentru intensificarea γ-cazeinelor
Note: To obtain more symmetry in the focused casein bands it is advisable to freeze-dry the solution after adding the ε-aminocaproic acid and then dissolving the residues in 0,5 ml protein dissolving buffer (4.6).
Se dispersează 25 mg cazeine izolate (6.1.1) în 0,5 ml soluție-tampon de carbonat de amoniu (4.7.1) și se omogenizează timp de 20 minute utilizând, de exemplu, tratament ultrasonic.
Preparation of the urea containing polyacrylamide gels
Se încălzește la 40 °C și se adaugă 10 μl plasmină (4.7.2), apoi se amestecă și se incubează timp de o oră la 40 °C, agitând continuu.
With the aid of a few drops of water roll the gel carrier sheet (5.2) onto a glass plate (5.1), removing any extraneous water with paper towel or tissue.
Pentru a inhiba enzima se adaugă 20 μl soluție de acid ε-aminocaproic (4.7.3), apoi se adaugă 200 mg de uree solidă și 2 mg de ditiotreitol.
Roll the cover sheet (5.3) with spacers (0,25 mm) onto another glass plate in the same way.
Notă: Pentru a obține o simetrie mai mare a benzilor de cazeină focalizate se recomandă liofilizarea soluției după adăugarea acidului ε-aminocaproic și apoi dizolvarea reziduurilor în 0,5 ml soluție-tampon pentru dizolvarea proteinelor (4.6).
Lay the plate horizontally on a levelling table.
Prepararea gelurilor poliacrilamidice care conțin uree
Add 10 μl Temed (4.1.3.1) to the prepared and de-aerated gel solution (4.1.2), stir and add 10 μl PER-solution (4.1.3.2), mix thoroughly and immediately pour out evenly onto the centre of the cover sheet.
Cu ajutorul câtorva picături de apă se rulează foaia purtătoare de gel (5.2) pe o placă de sticlă (5.1), îndepărtându-se surplusul de apă cu un șervețel din hârtie sau textil.
Place one edge of the gel carrier plate (sheet side down) on the cover sheet plate and lower it slowly so that a gel film forms between the sheets and spreads out regularly and free of bubbles (Figure 3).
Se rulează în mod similar foaia de acoperire (5.3) cu distanțiere (0,25 mm) pe o altă placă de sticlă.
Carefully lower the gel carrier plate completely using a thin spatula and place three more glass plates on top of it to act as weights.
Se așează placa orizontal pe o masă reglabilă.
After polymerization is complete (about 60 minutes) remove the gel polymerized onto the gel carrier sheet along with the cover sheet by tipping the glass plates.
Se adaugă 10 μl Temed (4.1.3.1) la soluția de gel pregătită și dezaerată (4.1.2), se amestecă și se adaugă 10 μl soluție PER (4.1.3.2), se amestecă minuțios și se toarnă imediat uniform în centrul foii de acoperire.
Clean the reverse of the carrier sheet carefully to remove gel residues and urea.
Se pune o margine a plăcii purtătoare de gel (cu latura foii îndreptată în jos) pe placa de acoperire a foii și se coboară încet astfel încât între foi să se formeze un strat subțire de gel, care se întinde uniform și fără bule (figura 3).
Weld the gel sandwich into a film tube and store in a refrigerator (maximum six weeks).
Se coboară cu grijă placa purtătoare de gel, complet, utilizând o spatulă fină, apoi se așează încă trei plăci de sticlă deasupra ei pentru a acționa ca greutăți.
Note: The cover sheet with the spacers can be re-used.
După încheierea polimerizării (aproximativ 60 minute), se transferă gelul polimerizat pe foaia purtătoare de gel împreună cu foaia de acoperire, înclinând plăcile de sticlă.
The polyacrylamide gel can be cut to smaller sizes, recommended when there are few samples or if an automatic electrophoresis device is used (two gels, size 4,5 × 5 cm).
Se curăță cu grijă reversul foii purtătoare pentru a îndepărta reziduurile de gel și ureea.
lsoelectric focusing
Sandvișul de gel se sudează astfel încât să se obțină un tub cu perete pelicular și se păstrează în frigider (timp de maxim șase săptămâni).
Set the cooling thermostat to 12 °C.
Notă: Foaia de acoperire și distanțierele pot fi reutilizate.
Then roll the gel sandwich, carrier side down, onto it, taking care to avoid bubbles.
Focalizare izoelectrică
Wipe off any excess kerosene and remove the cover sheet.
Se reglează termostatul de răcire la 12 °C.
Soak the electrode strips with the electrode solutions (4.3, 4.4), cut to gel length and place in the positions provided (distance of electrodes 9,5 cm).
Se șterge cu kerosen reversul foii purtătoare de gel, apoi se picură câteva picături de kerosen (4.2) în centrul blocului de răcire.
Conditions for isoelectric focusing:
Apoi se rulează sandvișul de gel, cu partea purtătoare îndreptată în jos, pe el, având grijă să se evite formarea bulelor.
Step
Se îmbibă benzile de electrozi în soluțiile electrodice (4.3, 4.4), se taie după lungimea gelului și se plasează în pozițiile prevăzute (distanța dintre electrozi de 9,5 cm).
Voltage
Condiții pentru focalizarea izoelectrică:
Current
Dimensiunile gelului 265 × 125 × 0,25 mm
Power
Etapă
Volt-hours
Tensiune
Pre-focusing
Intensitate
maximum
Putere
constant 4
Volți-oră
Sample focusing
Prefocalizare
Final focusing
maximă
Note: If thickness or width of the gels are changed, the values for current and power have to be suitably adjusted (e.g. double the values for electric current and power if a 265 × 125 × 0,5 mm gel is used).
Focalizarea probei
Example of a voltage programme for an automatic electrophoresis device (2 gels of 5,0 × 4,5 cm), electrodes without strips applied directly to the gel
Focalizare finală
Temp.
Notă: În cazul în care se modifică grosimea sau lățimea gelurilor, atunci intensitatea și puterea trebuie ajustate în consecință (de exemplu, în cazul în care se utilizează un gel de 265 × 125 × 0,5 mm valorile pentru intensitatea și puterea curentului electric se dublează).
Focusing
Exemplu de program de tensiune pentru un dispozitiv automat de electroforeză (2 geluri de 5,0 × 4,5 cm), cu electrozi fără benzi, aplicați direct pe gel
Place sample applicator in step 2 at 0 Vh.
Focalizare
Remove sample applicator in step 2 at 30 Vh.
Se plasează aplicatorul probei în etapa 2 la 0 Vh.
Protein staining
Se îndepărtează aplicatorul probei în etapa 2 la 30 Vh.
Protein fixation
Colorarea proteinelor