natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Concurrent negative controls (see paragraph 15), consisting of solvent alone in the treatment medium and treated in the same way as the treatment cultures, should be included for every harvest time.
itrochinolină-N oxid
Concurrent positive controls are needed to demonstrate the ability of the laboratory to identify clastogens under the conditions of the test protocol used and the effectiveness of the exogenous metabolic activation system, when applicable.
Cistozină arabinozidă
Examples of positive controls are given in the table 1 below.
Clastogeni care necesită activare metabolică
Alternative positive control chemicals can be used, if justified.
Benzo(a)piren
Because in vitro mammalian cell tests for genetic toxicity are sufficiently standardized, the use of positive controls may be confined to a clastogen requiring metabolic activation.
Ciclofosfamidă
Provided it is done concurrently with the non-activated test using the same treatment duration, this single positive control response will demonstrate both the activity of the metabolic activation system and the responsiveness of the test system.
PROCEDURA
Long term treatment (without S9) should however have its own positive control as the treatment duration will differ from the test using metabolic activation.
Tratamentul cu substanța chimică de testat
Each positive control should be used at one or more concentrations expected to give reproducible and detectable increases over background in order to demonstrate the sensitivity of the test system (i.e. the effects are clear but do not immediately reveal the identity of the coded slides to the reader), and the response should not be compromised by cytotoxicity exceeding the limits specified in the test method.
Celulele în stadiu de proliferare se tratează cu substanța de testat atât în prezența, cât și în absența unui sistem de activare metabolică.
Reference chemicals recommended for assessing laboratory proficiency and for selection of positive controls
Momentul recoltării culturilor
Category
Pentru o evaluare aprofundată, necesară pentru a încheia un rezultat negativ, toate cele trei condiții experimentale următoare se efectuează cu ajutorul unui tratament de scurtă durată cu și fără activare metabolică, precum și al unui tratament pe termen lung fără activare metabolică (a se vedea punctele 43, 44 și 45):
Clastogens active without metabolic activation
Celulele se expun la substanța chimică de testat fără activare metabolică timp de 36 ore și se procedează la prelevarea probelor după un interval de timp egal cu de 1,5 ori durata ciclului celular normal după inițierea tratamentului (18),
Methyl methanesulphonate
Celulele se expun la substanța de testat în prezența activării metabolice timp de 3-6 ore și se procedează la prelevarea probelor după un interval de timp egal cu de 1,5 ori durata ciclului celular normal de la inițierea tratamentului (18),
Mitomycin C
Celulele se expun în mod continuu fără activare metabolică până la prelevarea de probe la un interval de timp egal cu de 1,5 ori durata ciclului celular normal.
itroquinoline-N-Oxide
Anumite substanțe chimice (de exemplu, nucleotide analoage) pot să fie detectate mai ușor, prin prelungirea timpului de tratament/prelevare a probelor la mai mult de 1,5 ori durata ciclului celular normal (24).
Cytosine arabinoside
În cazul în care oricare dintre condițiile experimentale de mai sus conduce la un rezultat pozitiv, se poate să nu fie necesar să se investigheze niciun alt regim de tratament dintre celelalte.
Clastogens requiring metabolic activation
Prepararea cromozomilor
Benzo(a)pyrene
Culturile celulare se tratează cu colcemid sau colchicină, de regulă timp de una până la trei ore înainte de recoltare.
Cyclophosphamide
Fiecare cultură celulară se recoltează și se prelucrează separat pentru prepararea cromozomilor.
PROCEDURE
Prepararea cromozomilor include tratamentul hipotonic al celulelor, precum și fixarea și colorarea acestora.
Treatment with test chemical
În culturile monostrat pot fi prezente celule mitotice (recunoscute după forma rotundă a acestora și după faptul că se detașează de pe suprafață) la sfârșitul perioadei de tratament de 3-6 ore.
Proliferating cells are treated with the test chemical in the presence and absence of a metabolic activation system.
Deoarece celulele mitotice se detașează ușor, acestea pot fi pierdute în momentul înlăturării mediului care conține substanța chimică de testat.
Culture harvest time
În cazul în care există dovezi privind o creștere substanțială a numărului de celule mitotice în comparație cu martorii, indicând probabil inhibarea fazei mitotice, celulele se colectează prin centrifugare și se adaugă înapoi la culturi pentru a evita pierderea de celule în mitoză și a celor amenințate de aberația cromozomială la momentul recoltării.
For thorough evaluation, which would be needed to conclude a negative outcome, all three of the following experimental conditions should be conducted using a short term treatment with and without metabolic activation and long term treatment without metabolic activation (see paragraphs 43, 44 and 45):
Analiză
Cells should be exposed to the test chemical without metabolic activation for 3-6 hours, and sampled at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths after the beginning of treatment (18),
Toate lamele, inclusiv cele cu martori pozitivi și negativi, trebuie codificate individual înaintea analizei microscopice pentru aberație cromozomială.
Cells should be exposed to the test chemical with metabolic activation for 3-6 hours, and sampled at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths after the beginning of treatment (18),
Deoarece metodele de preparare a lamelor conduc adesea la o proporție de celule în metafază cu pierdere de cromozomi, toate celulele examinate trebuie, prin urmare, să conțină un număr de centromeri egal cu numărul modal +/- 2.
Cells should be continuously exposed without metabolic activation until sampling at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths.
Pentru fiecare concentrație și fiecare martor se examinează cel puțin 300 de celule în metafază bine etalate în vederea stabilirii unei substanțe chimice de testat ca fiind cât mai clar negativă (a se vedea punctul 45).
Certain chemicals (e.g. nucleoside analogues) may be more readily detected by treatment/sampling times longer than 1,5 normal cell cycle lengths (24).
Cele 300 celule se împart în mod egal între culturile duplicat, atunci când sunt utilizate astfel de culturi.
In the event that any of the above experimental conditions lead to a positive response, it may not be necessary to investigate any of the other treatment regimens.
În cazul în care se utilizează culturi unice pentru fiecare concentrație (a se vedea punctul 21), cel puțin 300 de celule în metafază bine etalate trebuie examinate pentru această cultură unică.
Chromosome preparation
Examinarea a 300 de celule prezintă avantajul creșterii puterii statistice a testului și, în plus, valorile nule vor fi rar constatate (se preconizează a fi doar 5 %) (44).
Cell cultures are treated with colcemid or colchicine usually for one to three hours prior to harvesting.
Numărul de celule în metafază examinat poate fi redus în cazul în care se constată un număr ridicat de celule cu aberații cromozomiale, iar substanța chimică de testat este considerată cât mai clar pozitivă.
Each cell culture is harvested and processed separately for the preparation of chromosomes.
Se examinează celulele cu aberație (aberații) cromozomială (cromozomiale) structurală (structurale), incluzând și excluzând lacunele.
Chromosome preparation involves hypotonic treatment of the cells, fixation and staining.
Rupturile și lacunele sunt definite în apendicele 1 în conformitate cu punctele 45 și 46.
In monolayers, mitotic cells (identifiable as being round and detaching from the surface) may be present at the end of the 3-6 hour treatment.
Aberațiile de tip cromatidian și cromozomial se înregistrează în mod separat și se clasifică în funcție de subtipuri (rupturi, schimburi).
Because these mitotic cells are easily detached, they can be lost when the medium containing the test chemical is removed.
Procedurile utilizate în laborator trebuie să asigure că analiza aberațiilor cromozomiale este efectuată de un personal bine instruit și este supusă unei evaluări inter pares, dacă este cazul.
If there is evidence for a substantial increase in the number of mitotic cells compared with controls, indicating likely mitotic arrest, then the cells should be collected by centrifugation and added back to cultures, to avoid losing cells that are in mitosis, and at risk for chromosome aberration, at the time of harvest.
Cu toate că scopul testului este detectarea aberațiilor cromozomiale structurale, este important să se semnaleze cazurile de poliploidie și endoreduplicare, dacă se constată apariția acestora.
Analysis
(A se vedea punctul 2).
All slides, including those of the positive and negative controls, should be independently coded before microscopic analysis for chromosomal aberrations.
Competența de laborator
Since fixation procedures often result in a proportion of metaphase cells which have lost chromosomes, the cells scored should, therefore, contain a number of centromeres equal to the modal number +/- 2.
Pentru a stabili o experiență suficientă în materie de testare înainte de utilizarea acesteia pentru efectuarea testelor de rutină, laboratorul trebuie să fi efectuat o serie de experiențe cu substanțele chimice de referință pozitive acționând prin diferite mecanisme și diferiți martori negativi (utilizând diferiți solvenți/vehicul).
At least 300 well-spread metaphases should be scored per concentration and control to conclude a test chemical as clearly negative (see paragraph 45).
Aceste răspunsuri ale martorilor pozitivi și negativi trebuie să fie în concordanță cu referințele bibliografice.
The 300 cells should be equally divided among the replicates, when replicate cultures are used.
Acest lucru nu se aplică laboratoarelor care au experiență, și anume, cele care au o bază de date anterioară disponibilă, astfel cum este definit la punctul 37.
When single cultures are used per concentration (see paragraph 21), at least 300 well spread metaphases should be scored in this single culture.
O serie de substanțe chimice martor pozitive (a se vedea tabelul 1 de la punctul 26) se investighează cu tratamente de scurtă și lungă durată, fără activare metabolică, precum și cu tratament de scurtă durată în prezența activării metabolice, pentru a demonstra competența de a detecta substanțele chimice clastogene și de a determina eficacitatea sistemului de activare metabolică.
Scoring 300 cells has the advantage of increasing the statistical power of the test and in addition, zero values will be rarely observed (expected to be only 5 %) (44).
O plajă de valori de concentrații ale substanțelor chimice selectate se alege astfel încât să se obțină creșteri reproductibile și legate de concentrație peste nivelul de fond pentru a demonstra sensibilitatea și gama dinamică a sistemului de testare.
The number of metaphases scored can be reduced when high numbers of cells with chromosome aberrations are observed and the test chemical considered as clearly positive.
Date privind martorii testați anterior
Cells with structural chromosomal aberration(s) including and excluding gaps should be scored.
Laboratorul trebuie să stabilească:
Breaks and gaps are defined in Appendix 1 according to (45) (46).
o plajă de valori și o distribuție a martorilor pozitivi testați anterior,
Chromatid- and chromosome-type aberrations should be recorded separately and classified by sub-types (breaks, exchanges).
o plajă de valori și o distribuție a martorilor negativi (netratați, solvenți) testați anterior.
Procedures in use in the laboratory should ensure that analysis of chromosomal aberrations is performed by well-trained scorers and peer-reviewed if appropriate.
La obținerea primelor date pentru o distribuție a martorilor negativi testați anterior, martorii negativi testați în paralel trebuie să fie în concordanță cu datele publicate referitoare la martori, în cazul în care acestea există.
Although the purpose of the test is to detect structural chromosomal aberrations, it is important to record polyploidy and endoreduplication frequencies when these events are seen.
Pe măsură ce tot mai multe date experimentale se adaugă la distribuția martorilor, martorii negativi testați în paralel trebuie să fie, în mod ideal, de până la 95 % din limitele de control ale respectivei distribuții (44) (47).
(See paragraph 2).
Baza de date privind martori negativi testați anterior a laboratorului trebuie să fie construită inițial cu cel puțin 10 experimente, dar ar fi de preferat să conțină cel puțin 20 de experimente efectuate în conformitate cu condiții experimentale comparabile.
Proficiency of the laboratory
Laboratoarele trebuie să utilizeze metode de control al calității precum grafice de control [de exemplu, diagrame C și X-bar (48)] pentru a identifica gradul de variabilitate al datelor privind martorii negativi și pozitivi ale acestora și pentru a dovedi faptul că metodologia se află „sub control” în cadrul respectivului laborator (44).
In order to establish sufficient experience with the test prior to using it for routine testing, the laboratory should have performed a series of experiments with reference positive chemicals acting via different mechanisms and various negative controls (using various solvents/vehicle).
Referințele bibliografice prezintă recomandări suplimentare privind modalitatea în care se pot construi și utiliza datele istorice (și anume, criteriile de includere și excludere a datelor în datele istorice și criteriile de acceptabilitate pentru un anumit experiment) (47).
These positive and negative control responses should be consistent with the literature.
Orice modificare la protocolul experimental se ia în considerare în ceea ce privește coerența acesteia cu bazele de date privind martorii testați anterior existente ale laboratorului.
This is not applicable to laboratories that have experience, i.e. that have an historical data base available as defined in paragraph 37.
Orice inconsecvență majoră trebuie să conducă la stabilirea unei noi baze de date privind martorii testați anterior.
A selection of positive control chemicals (see Table 1 in paragraph 26) should be investigated with short and long treatments in the absence of metabolic activation, and also with short treatment in the presence of metabolic activation, in order to demonstrate proficiency to detect clastogenic chemicals and determine the effectiveness of the metabolic activation system.
Datele privind martorii negativi trebuie să cuprindă incidența celulelor cu aberații cromozomiale de la o cultură unică sau suma dintre culturile duplicat, astfel cum este descris la punctul 21.
A range of concentrations of the selected chemicals should be chosen so as to give reproducible and concentration-related increases above the background in order to demonstrate the sensitivity and dynamic range of the test system.
Martorii negativi testați în paralel trebuie să fie, în mod ideal, de până la limitele de control de 95 % ale distribuției bazelor de date privind martorii negativi testați anterior ale laboratorului (44) (47).
Historical control data
În cazul în care datele privind martorii negativi testați în paralel se situează în afara limitelor de control de 95 %, acestea pot fi acceptabile pentru a fi incluse în distribuția martorilor testați anterior, în măsura în care datele respective nu reprezintă valori aberante extreme și există dovezi că sistemul de testare se află „sub control” (a se vedea punctul 37) și că nu s-au înregistrat defecțiuni tehnice sau umane.
The laboratory should establish:
Prezentarea rezultatelor
A historical positive control range and distribution,
Se evaluează procentul de celule cu aberație (aberații) cromozomială (cromozomiale) structurală (structurale).
A historical negative (untreated, solvent) control range and distribution.
Se întocmește separat o listă cu aberațiile de tip cromatidian și cromozomial clasificate în funcție de subtipuri (rupturi, schimburi), specificând numărul și frecvența acestora pentru culturile experimentale și cele martor.
When first acquiring data for an historical negative control distribution, concurrent negative controls should be consistent with published control data, where they exist.
Lacunele se înregistrează și se prezintă în mod separat, dar nu se includ în frecvența totală a aberațiilor.
As more experimental data are added to the control distribution, concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of that distribution (44) (47).
Procentajul de poliploidie și/sau endoreduplicare celulară este prezentat în cazul în care acestea sunt observate.
The laboratory's historical negative control database should initially be built with a minimum of 10 experiments but would preferably consist of at least 20 experiments conducted under comparable experimental conditions.
Se înregistrează rezultatele determinărilor concomitente de citotoxicitate realizate pentru toate culturile tratate și pentru cele martor negative și pozitive în principalul (principalele) experiment(e) de aberație.
Laboratories should use quality control methods, such as control charts (e.g. C-charts or X-bar charts (48)), to identify how variable their positive and negative control data are, and to show that the methodology is ‘under control’ in their laboratory (44).
Datele se indică individual pentru fiecare cultură.
Further recommendations on how to build and use the historical data (i.e. criteria for inclusion and exclusion of data in historical data and the acceptability criteria for a given experiment) can be found in the literature (47).
În plus, toate datele se sintetizează sub formă de tabel.
Any changes to the experimental protocol should be considered in terms of their consistency with the laboratory's existing historical control databases.
Criterii de acceptabilitate
Any major inconsistencies should result in the establishment of a new historical control database.
Acceptarea unui test se bazează pe următoarele criterii:
Negative control data should consist of the incidence of cells with chromosome aberrations from a single culture or the sum of replicate cultures as described in paragraph 21.
Martorul negativ testat în paralel este considerat acceptabil pentru adăugarea în baza de date privind martorii negativi testați anterior a laboratorului, astfel cum este descris la punctul 39.
Concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of the distribution of the laboratory's historical negative control database (44) (47).
Martorii pozitivi testați în paralel (a se vedea punctul 26) trebuie să determine răspunsuri compatibile cu cele provenite din baza de date privind martorii pozitivi testați anterior și să producă o creștere semnificativă din punct de vedere statistic în comparație cu martorul negativ testat în paralel.
Where concurrent negative control data fall outside the 95 % control limits they may be acceptable for inclusion in the historical control distribution as long as these data are not extreme outliers and there is evidence that the test system is ‘under control’ (see paragraph 37) and evidence of absence of technical or human failure.
Criteriile de proliferare celulară în martorul solvent de control trebuie să fie îndeplinite (punctele 17 și 18).
Presentation of the results
Toate cele trei condiții experimentale au fost testate, cu excepția cazului în care una a condus la rezultate pozitive (a se vedea punctul 28).
The percentage of cells with structural chromosomal aberration(s) should be evaluated.
Se analizează un număr adecvat de celule și concentrații (punctele 31 și 21).
Chromatid- and chromosome-type aberrations classified by sub-types (breaks, exchanges) should be listed separately with their numbers and frequencies for experimental and control cultures.
Criteriile de selecție ale concentrației maxime sunt conforme cu cele descrise la punctele 22, 23 și 24.
Gaps are recorded and reported separately but not included in the total aberration frequency.
Evaluarea și interpretarea rezultatelor
Percentage of polyploidy and/or endoreduplicated cells are reported when seen.
Cu condiția ca toate criteriile de acceptabilitate să fie îndeplinite, o substanță chimică de testat este considerată a fi în mod clar pozitivă în cazul în care, în oricare dintre condițiile experimentale examinate (a se vedea punctul 28):
Concurrent measures of cytotoxicity for all treated, negative and positive control cultures in the main aberration experiment(s) should be recorded.
cel puțin una dintre concentrațiile de testare prezintă o creștere semnificativă din punct de vedere statistic în comparație cu martorul negativ testat în paralel,
Individual culture data should be provided.
b. atunci când este evaluată prin intermediul unui test de stabilire a tendinței corespunzător, creșterea depinde de doză,
Additionally, all data should be summarised in tabular form.
oricare dintre rezultate se află în afara distribuției de date privind martori negativi testați anterior (de exemplu, limite de control de 95 % pe baza distribuției Poisson; a se vedea punctul 39).
Acceptability Criteria
La îndeplinirea tuturor acestor criterii, se consideră că substanța chimică de testat poate produce aberații cromozomiale în celulele de mamifere în cultură în cadrul acestui sistem de testare.
Acceptance of a test is based on the following criteria:
Referințele bibliografice prezintă recomandări pentru cele mai adecvate metode statistice (49) (50) (51).
The concurrent negative control is considered acceptable for addition to the laboratory historical negative control database as described in paragraph 39.
Cu condiția ca toate criteriile de acceptabilitate să fie îndeplinite, o substanță chimică de testat este considerată a fi în mod clar negativă în cazul în care, în toate condițiile experimentale examinate (a se vedea punctul 28):
Concurrent positive controls (see paragraph 26) should induce responses that are compatible with those generated in the historical positive control data base and produce a statistically significant increase compared with the concurrent negative control.
a. niciuna dintre concentrațiile de testare nu prezintă o creștere semnificativă din punct de vedere statistic în comparație cu martorul negativ testat în paralel,
Cell proliferation criteria in the solvent control should be fulfilled (paragraphs 17 and 18).
atunci când este evaluată prin intermediul unui test de stabilire a tendinței, nu se înregistrează nicio creștere legată de concentrație,
All three experimental conditions were tested unless one resulted in positive results (see paragraph 28).
toate rezultatele se situează în interiorul distribuției de date cu privire la martorii negativi testați anterior (de exemplu, limite de control de 95 % pe baza distribuției Poisson; a se vedea punctul 39).
Adequate number of cells and concentrations are analysable (paragraphs 31 and 21).
Prin urmare, substanța chimică de testat este considerată incapabilă să provoace aberații cromozomiale în celulele de mamifere în cultură în cadrul acestui sistem de testare.
The criteria for the selection of top concentration are consistent with those described in paragraphs 22, 23 and 24.
Nu există nicio cerință referitoare la verificarea unui răspuns clar pozitiv sau negativ.
Evaluation and interpretation of results
În cazul în care răspunsul nu este nici în mod clar negativ, nici în mod clar pozitiv astfel cum este descris mai sus sau pentru a asista la stabilirea relevanței biologice a unui rezultat, datele se evaluează de către experți și/sau prin intermediul unor investigații suplimentare.
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered to be clearly positive if, in any of the experimental conditions examined (see paragraph 28):
Examinarea de celule suplimentare (dacă este cazul) sau repetarea experimentului folosind posibile condiții experimentale modificate [de exemplu, intervale dintre concentrații, alte condiții de activare metabolică (și anume, concentrație S9 sau origine S9)] ar putea fi utile.