natgillin/translations-raw huggingface dataset:
cultures that receive no treatment (i.e. no test chemical nor solvent) but are processed concurrently in the same way as the cultures receiving the test chemical.
În orice caz, se măsoară numărul de celule înainte de tratament, iar același lucru se efectuează atât pentru culturile tratate, cât și pentru cele martor negative.
Appendix 2
În timp ce RICC (și anume, numărul de celule în culturile tratate/numărul de celule în culturile martor) a fost utilizată ca parametru de citotoxicitate în trecut, aceasta nu mai este recomandată deoarece poate subestima citotoxicitatea.
FORMULAS FOR CYTOTOXICITY ASSESSMENT
În culturile martor negative, dublarea populației trebuie să fie compatibilă cu cerința prelevării de probe a celulelor după tratament la un interval de timp egal cu de 1,5 ori durata ciclului celular normal și indicele mitotic trebuie să fie destul de crescut pentru a obține un număr suficient de celule în mitoză și pentru a calcula într-un mod fiabil o reducere de 50 %.
Mitotic index (MI):
În partea B, capitolul B.11 se înlocuiește cu următorul text:
Number of mitotic cells
Test de aberație cromozomială în măduva osoasă de mamifere
Total number of Cells scored
Această metodă de testare este echivalentă cu Orientarea nr.
Relative Increase in Cell Counts (RICC) or Relative Population Doubling (RPD) is recommended, as both take into account the proportion of the cell population which has divided.
475 a OCDE (2016).
Increase in number of cells in treated culturesfinal-starting
Testul in vivo de aberație cromozomială pe măduva osoasă de mamifere este relevant în special pentru evaluarea genotoxicității deoarece, în pofida faptului că pot varia între specii, factorii de metabolism in vivo, farmacocinetica și procesele de regenerare de ADN sunt active și contribuie la răspunsuri.
Increase in numbers of cells in control culturesfinal-starting
Un test in vivo este util, de asemenea, pentru investigarea suplimentară a genotoxicității detectate de un sistem in vitro.
No.of Population doublings in treated cultures
Testul in vivo de aberație cromozomială la mamifere este utilizat pentru detectarea aberațiilor cromozomiale provocate de substanțele chimice de testat în structura celulelor din măduva osoasă a mamiferelor, de regulă, rozătoare (2) (3) (4) (5).
No.of population doublings in control cultures
Aberații cromozomiale structurale pot fi de două tipuri, cromozomiale sau cromatidice.
where:
În timp ce majoritatea aberațiilor induse prin substanța chimică sunt de tip cromatidic, se produc, de asemenea aberații de tip cromozomial.
Population Doubling = [log (Post-treatment cell number ÷ Initial cell number)] ÷ log 2
Leziunile cromozomiale și fenomenele conexe sunt cauza multor maladii genetice umane și există dovezi substanțiale că, atunci când aceste leziuni și fenomene conexe provoacă modificări ale oncogenelor și ale genelor supresoare de tumori, acestea sunt implicate în inducerea cancerului la oameni și în sistemele experimentale.
For example, a RICC, or a RPD of 53 % indicates 47 % cytotoxicity/cytostasis and 55 % cytotoxicity/cytostasis measured by MI means that the actual MI is 45 % of control.
Poliploidia (inclusiv endoreduplicarea) ar putea apărea în testele in vivo de aberație cromozomială.
In any case, the number of cells before treatment should be measured and the same for treated and negative control cultures.
Cu toate acestea, o creștere a numărului de celule poliploide în sine nu indică potențial aneugenic și poate indica pur și simplu perturbarea ciclului celular sau citotoxicitate.
While RCC (i.e. Number of cells in treated cultures/Number of cells in control cultures) had been used as cytotoxicity parameter in the past, is no longer recommended because it can underestimate cytotoxicity
Un test in vivo de micronucleu pe eritrocite de mamifere (capitolul B.12 din prezenta anexă) sau testul in vitro de micronucleu pe celule de mamifere (capitolul B.49 din prezenta anexă) ar fi testele in vivo și, respectiv, in vitro recomandate pentru detectarea aneuploidiei.
In the negative control cultures, population doubling should be compatible with the requirement to sample cells after treatment at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle length and mitotic index should be higher enough to get a sufficient number of cells in mitosis and to reliably calculate a 50 % reduction.
Definiții ale terminologiei utilizate sunt prevăzute în apendicele 1.
In Part B, Chapter B.11 is replaced by the following:
Rozătoarele sunt utilizate în mod obișnuit în acest test, dar utilizarea altor specii poate fi adecvată în unele cazuri, dacă este justificată din punct de vedere științific.
Mammalian Bone Marrow Chromosomal Aberration Test
Țesutul-țintă în acest test este măduva osoasă, întrucât este un țesut puternic și conține o populație de celule cu ciclu rapid care se pot izola și prelucra ușor.
This test method is equivalent to OECD test guideline 475 (2016).
Justificarea științifică pentru utilizării altor specii decât șobolani și șoareci trebuie furnizată în raport.
The mammalian in vivo bone marrow chromosomal aberration test is especially relevant for assessing genotoxicity because, although they may vary among species, factors of in vivo metabolism, pharmacokinetics and DNA-repair processes are active and contribute to the responses.
În cazul în care sunt utilizate alte specii decât rozătoare, se recomandă ca măsurarea aberației cromozomiale în măduva osoasă să fie integrată în alt test de toxicitate corespunzător.
An in vivo assay is also useful for further investigation of genotoxicity detected by an in vitro system.
În cazul în care există dovezi că substanța (substanțele) chimică(e) de testat sau metabolitul (metaboliții) specific(i) nu va (vor) ajunge la țesutul țintă, utilizarea acestui test ar putea să nu fie potrivită.
The mammalian in vivo chromosomal aberration test is used for the detection of structural chromosome aberrations induced by test chemicals in bone marrow cells of animals, usually rodents (2) (3) (4) (5).
PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE
Structural chromosomal aberrations may be of two types, chromosome or chromatid.
Animalele sunt expuse la substanța chimică de testat printr-o cale de expunere corespunzătoare și sunt eutanasiate în condiții umane la momentul corespunzător după tratament.
While the majority of genotoxic chemical-induced aberrations are of the chromatid-type, chromosome-type aberrations also occur.
Înainte de eutanasiere, animalele se supun tratamentului cu un agent de inhibare a metafazei (de exemplu, colchicină sau colcemid).
Chromosomal damage and related events are the cause of many human genetic diseases and there is substantial evidence that, when these lesions and related events cause alterations in oncogenes and tumour suppressor genes, they are involved in cancer in humans and experimental systems.
Ulterior, din celulele de măduvă osoasă se realizează preparate cromozomiale care se colorează și celulele în metafază se examinează pentru a pune în evidență aberațiile cromozomiale.
Polyploidy (including endoreduplication) could arise in chromosome aberration assays in vivo.
VERIFICAREA COMPETENȚEI LABORATORULUI
However, an increase in polyploidy per se does not indicate aneugenic potential and can simply indicate cell cycle perturbation or cytotoxicity.
Verificările de competență
An in vivo mammalian erythrocyte micronucleus test (Chapter B.12 of this Annex) or the in vitro mammalian cell micronucleus test (Chapter B.49 of this Annex) would be the in vivo and in vitro tests, respectively, recommended for the detection of aneuploidy.
Pentru a stabili experiența suficientă în efectuarea testului înainte de a-l utiliza pentru testele de rutină, laboratorul trebuie să fi demonstrat capacitatea de a reproduce rezultatele așteptate în urma informațiilor publicate [de exemplu, (6)] pentru frecvențe de aberații cromozomiale cu un minim de două substanțe chimice martor pozitive (inclusiv răspunsurile slabe cauzate de doze scăzute de martori pozitivi) precum cele enumerate în tabelul 1 și cu martori vehicul/solvent compatibili (a se vedea punctul 22).
Definitions of terminology used are set out in Appendix 1.
Aceste experimente utilizează doze care produc creșteri reproductibile și legate de doză și demonstrează sensibilitatea și gama dinamică a sistemului de testare în țesutul de interes (măduva osoasă) utilizând metoda de examinare care urmează să fie utilizată în cadrul laboratorului.
Rodents are routinely used in this test, but other species may in some cases be appropriate if scientifically justified.
Această cerință nu se aplică laboratoarelor care au experiență, și anume, cele care dețin o bază de date anterioare disponibilă astfel cum este definit la punctele 10-14.
Bone marrow is the target tissue in this test since it is a highly vascularised tissue and it contains a population of rapidly cycling cells that can be readily isolated and processed.
Date privind martorii testați anterior
The scientific justification for using species other than rats and mice should be provided in the report.
Pe parcursul verificărilor de competență, laboratorul trebuie să stabilească:
If species other than rodents are used, it is recommended that the measurement of bone marrow chromosomal aberration be integrated into another appropriate toxicity test.
o plajă de valori și o distribuție a martorilor pozitivi testați anterior și
If there is evidence that the test chemical(s), or its metabolite(s), will not reach the target tissue, it may not be appropriate to use this test.
o plajă de valori și o distribuție a martorilor negativi testați anterior.
PRINCIPLE OF THE TEST METHOD
La obținerea primelor date pentru o distribuție a martorilor negativi testați anterior, martorii negativi testați în paralel trebuie să fie în concordanță cu datele publicate referitoare la martori, în cazul în care acestea există.
Animals are exposed to the test chemical by an appropriate route of exposure and are humanely euthanised at an appropriate time after treatment.
Pe măsură ce tot mai multe date experimentale sunt adăugate la distribuția martorilor testați anterior, martorii negativi testați în paralel trebuie să fie, în mod ideal, de până la 95 % din limitele de control ale respectivei distribuții.
Prior to euthanasia, animals are treated with a metaphase-arresting agent (e.g. colchicine or colcemid).
Baza de date privind martorii negativi testați anterior trebuie să fie solidă din punct de vedere statistic pentru a asigura capacitatea laboratorului de a evalua distribuția datelor sale privind martorii negativi.
Chromosome preparations are then made from the bone marrow cells and stained, and metaphase cells are analysed for chromosomal aberrations.
Referințele bibliografice sugerează că poate fi necesar un minim de 10 de experimente, dar ar trebui, de preferință, ca baza de date să fie constituită din cel puțin 20 experimente efectuate în conformitate cu condiții experimentale comparabile.
VERIFICATION OF LABORATORY PROFICIENCY
Laboratoarele trebuie să utilizeze metode de control al calității, cum ar fi grafice de control [de exemplu, diagrame C sau X-bar (7)], pentru a identifica gradul de variabilitate al datelor lor și pentru a dovedi faptul că metodologia se află „sub control” în respectivul laborator.
Proficiency Investigations
Referințele bibliografice prezintă recomandări suplimentare privind modalitatea în care se pot construi și utiliza datele anterioare (și anume, criteriile de includere și de excludere a datelor în datele istorice și criteriile de acceptabilitate pentru un anumit experiment) (8).
In order to establish sufficient experience with the conduct of the assay prior to using it for routine testing, the laboratory should have demonstrated the ability to reproduce expected results from published data (e.g. (6)) for chromosomal aberration frequencies with a minimum of two positive control chemicals (including weak responses induced by low doses of positive controls), such as those listed in Table 1 and with compatible vehicle/solvent controls (see paragraph 22).
În cazul în care laboratorul nu completează un număr suficient de experimente pentru a stabili o distribuție a martorilor negativi solidă din punct de vedere statistic (a se vedea punctul 11) în timpul verificărilor de competență (descrise la punctul 9), se acceptă posibilitatea elaborării distribuției în timpul primelor teste de rutină.
These experiments should use doses that give reproducible and dose related increases and demonstrate the sensitivity and dynamic range of the test system in the tissue of interest (bone marrow) and using the scoring method to be employed within the laboratory.
Această abordare trebuie să respecte recomandările stabilite în referințele bibliografice (8), iar rezultatele martorilor negativi obținute în aceste experimente trebuie să rămână în conformitate cu datele publicate cu privire la martorii negativi.
This requirement is not applicable to laboratories that have experience, i.e. that have a historical database available as defined in paragraphs 10-14.
Orice modificare la protocolul experimental se ia în considerare în ceea ce privește impactul acesteia asupra datelor rezultate, care trebuie să fie în conformitate cu baza de date existentă privind martorii testați anterior a laboratorului.
Historical Control Data
Doar inconsecvențele majore conduc la stabilirea unei noi baze de date privind martorii testați anterior, în cazul în care opiniile experților stabilesc faptul că acestea diferă față de distribuția anterioară (a se vedea punctul 11).
During the course of the proficiency investigations, the laboratory should establish:
În timpul procesului de restabilire, o bază completă de date cu privire la martorii negativi nu este neapărat necesară pentru a permite efectuarea unui test propriu-zis, cu condiția ca laboratorul să poată demonstra că valorile martor negative ale acestuia rămân consecvente fie cu bazele de date anterioare aferente, fie cu datele publicate corespunzătoare.
A historical positive control range and distribution, and
Datele cu privire la martorii negativi trebuie să cuprindă incidența aberațiilor cromozomiale structurale (cu excepția lacunelor) pentru fiecare animal.
A historical negative control range and distribution.
Martorii negativi testați în paralel trebuie să fie, în mod ideal, de până la 95 % din limitele de control ale distribuției bazei de date privind martorii negativi testați în paralel a laboratorului.
When first acquiring data for a historical negative control distribution, concurrent negative controls should be consistent with published control data, where they exist.
În cazul în care datele privind martorii negativi testați în paralel se situează în afara limitelor de control de 95 %, acestea pot fi acceptabile pentru a fi incluse în distribuția de martori testați anterior în măsura în care datele respective nu reprezintă valori aberante extreme și există dovezi că sistemul de testare se află „sub control” (a se vedea punctul 11) și că nu s-au înregistrat defecțiuni tehnice sau umane.
As more experimental data are added to the historical control distribution, concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of that distribution.
Selecția speciilor de animale
The laboratory's historical negative control database should be statistically robust to ensure the ability of the laboratory to assess the distribution of their negative control data.
Se utilizează șușe de laborator utilizate în mod curent, alegându-se animale adulte, tinere, sănătoase.
The literature suggests that a minimum of 10 experiments may be necessary but would preferably consist of at least 20 experiments conducted under comparable experimental conditions.
Se utilizează, de regulă, șobolani, cu toate că se pot utiliza și șoareci.
Laboratories should use quality control methods, such as control charts (e.g. C-charts or X-bar charts (7)), to identify how variable their data are, and to show that the methodology is ‘under control’ in their laboratory.
Orice altă specie adecvată de mamifere poate fi utilizată, în cazul în care se furnizează justificarea științifică în raport.
Further recommendations on how to build and use the historical data (i.e. criteria for inclusion and exclusion of data in historical data and the acceptability criteria for a given experiment) can be found in the literature (8).
Condiții de adăpostire și de hrănire a animalelor
Where the laboratory does not complete a sufficient number of experiments to establish a statistically robust negative control distribution (see paragraph 11) during the proficiency investigations (described in paragraph 9), it is acceptable that the distribution can be built during the first routine tests.
În cazul rozătoarelor, temperatura sălii în care se află animalele trebuie să fie de 22 °C (± 3 °C).
This approach should follow the recommendations set out in the literature (8) and the negative control results obtained in these experiments should remain consistent with published negative control data.
Cu toate că umiditatea relativă este, în mod ideal, de 50-60 %, aceasta trebuie să fie de cel puțin 40 % și să nu depășească, de preferință,70 %, cu excepția momentelor în care se curăță spațiul.
Any changes to the experimental protocol should be considered in terms of their impact on the resulting data remaining consistent with the laboratory's existing historical control database.
Pentru alimentație, se poate utiliza hrană convențională de laborator, cu furnizarea unei cantități nelimitate de apă potabilă.
Only major inconsistencies should result in the establishment of a new historical control database, where expert judgement determines that it differs from the previous distribution (see paragraph 11).
Alegerea regimului alimentar poate fi influențată de necesitatea de a asigura o proporție adecvată de substanță chimică de testat în cazul alegerii acestei căi de administrare.
During the re-establishment, a full negative control database may not be needed to permit the conduct of an actual test, provided that the laboratory can demonstrate that their concurrent negative control values remain either consistent with their previous database or with the corresponding published data.
Rozătoarele se adăpostesc în grupuri mici (cel mult cinci pentru fiecare cușcă), de același sex și grup supus tratamentului, în cazul în care nu se preconizează niciun comportament agresiv, de preferință în cuști cu pardoseală solidă cu îmbogățire adecvată a mediului de viață.
Negative control data should consist of the incidence of structural chromosomal aberration (excluding gaps) in each animal.
Animalele pot fi adăpostite individual în cazul în care acest lucru este justificat din punct de vedere științific.
Concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of the distribution of the laboratory's historical negative control database.
Pregătirea animalelor
Where concurrent negative control data fall outside the 95 % control limits, they may be acceptable for inclusion in the historical control distribution as long as these data are not extreme outliers and there is evidence that the test system is ‘under control” (see paragraph 11) and no evidence of technical or human failure.
Se utilizează în mod normal animale adulte, tinere, sănătoase (pentru rozătoare, de preferință, de 6-10 săptămâni la începutul tratamentului, cu toate că animale puțin mai în vârstă sunt, de asemenea, acceptabile), care sunt distribuite în mod aleatoriu în grupe martor și grupe de tratament.
Selection of animal species
Animalele se identifică în mod individual prin utilizarea unei metode umane, foarte puțin invazive (de exemplu, prin aplicarea de inele, crotaliere, microcipare sau identificare biometrică, dar nu prin secționarea urechii sau a degetului) și se aclimatizează la condițiile de laborator timp de minimum cinci zile.
Commonly used laboratory strains of healthy young adult animals should be employed.
Cuștile trebuie dispuse astfel încât posibilele efecte datorate amplasării în cușcă să fie reduse la minim.
Rats are commonly used, although mice may also be appropriate.
Se evită contaminarea încrucișată dintre martorul pozitiv și substanța chimică de testat.
Any other appropriate mammalian species may be used, if scientific justification is provided in the report.
La începutul studiului, greutatea animalelor trebuie să prezinte o variație minimă și să nu depășească ± 20 % din greutatea medie a fiecărui sex.
Animal housing and feeding conditions
Pregătirea dozelor
For rodents, the temperature in the animal room should be 22 °C (± 3 °C).
Substanțele de testat în stare solidă se dizolvă sau se pun în suspensii în solvenți sau vehicule corespunzătore sau se amestecă în alimente sau în apa de băut înainte de a fi administrate animalelor.
Although the relative humidity ideally should be 50-60 %, it should be at least 40 % and preferably not exceed 70 % other than during room cleaning.
Substanțele chimice de testat în stare lichidă se pot administra direct sau se pot dilua înainte de administrare.
For feeding, conventional laboratory diets may be used with an unlimited supply of drinking water.
Pentru expunerile prin inhalare, substanțele chimice de testat pot fi administrate sub formă de gaz, vapori sau aerosol solid/lichid, în funcție de proprietățile fizico-chimice ale acestora.
The choice of diet may be influenced by the need to ensure a suitable admixture of a test chemical when administered by this route.
Se utilizează preparate proaspete de substanță chimică de testat, cu excepția cazului în care datele de stabilitate demonstrează caracterul acceptabil al depozitării și definesc condiții de depozitare corespunzătoare.
Rodents should be housed in small groups (no more than five per cage) of the same sex and treatment group if no aggressive behaviour is expected, preferably in solid floor cages with appropriate environmental enrichment.
Trimitere la rezultatele anterioare ale martorilor pozitivi care să demonstreze criterii adecvate de acceptare a determinării, dacă este cazul.
Animals may be housed individually only if scientifically justified.
Solventul/vehiculul nu trebuie să producă efecte toxice la volumele de doză utilizate și nu trebuie să existe suspiciunea reacției chimice a acestuia cu substanțele chimice de testat.
Preparation of the animals
În cazul în care se utilizează alți solvenți/vehicule decât cei recunoscuți, includerea acestora trebuie să fie justificată cu date de referință care să demonstreze compatibilitatea acestora.
Healthy young adult animals (for rodents, ideally 6-10 weeks old at start of treatment, though slightly older animals are also acceptable) are normally used, and are randomly assigned to the control and treatment groups.
Se recomandă ca, ori de câte ori este posibil, să se ia în considerare mai întâi utilizarea unui solvent/vehicul apos.
The individual animals are identified uniquely using a humane, minimally invasive method (e.g. by ringing, tagging, micro-chipping or biometric identification, but not ear or toe clipping) and acclimated to the laboratory conditions for at least five days.
Exemple de solvenți/vehicule compatibili utilizați în mod obișnuit includ apa, soluția fiziologică salină, soluția de metilceluloză, soluția de carboximetilceluloză sare de sodiu, uleiul de măsline și uleiul de porumb.
Cages should be arranged in such a way that possible effects due to cage placement are minimised.
În absența unor date anterioare sau publicate cu privire la martori care să ateste faptul că nicio aberație cromozomială de structură sau alte efecte vătămătore nu sunt induse de un anumit solvent/vehicul atipic, se efectuează un studiu inițial pentru a stabili acceptabilitatea martorului tratat cu solvent/vehicul.
Cross contamination by the positive control and the test chemical should be avoided.
Martori pozitivi
At the commencement of the study, the weight variation of animals should be minimal and not exceed ± 20 % of the mean weight of each sex.
Pentru fiecare test se include, în mod normal, un grup de animale tratate cu o substanță chimică martor pozitivă.
Preparation of doses
Acest lucru poate fi eliminat în cazul în care laboratorul de testare a demonstrat competență în efectuarea testului și a stabilit un interval de martori pozitivi testați anterior.