natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Incubator or air-conditioned room with controlled temperature, allowing to maintain 26 ± 1 °C in wells (or test chambers);
Plantele sunt înrădăcinate în sol prin intermediul unui sistem robust de rizomi și pot fi găsite în întreaga emisferă nordică, în apele stătătoare eutrofice dar totuși nepoluate și mai bogate în calciu cu substrat noroios.
Oxygen meter;
Myriophyllum spicatum preferă apa dulce, dar se găsește și în apă salmastră.
Equipment for determination of hardness of water and conductivity;
Pentru testul de toxicitate fără sediment, sunt necesare plante sterile.
Spawn trap: instrument trays of glass, stainless steel or other inert materials; wire mesh (grid size 2 ± 0,5 mm) of stainless steel or other inert material to protect the eggs once laid; spawning substrate (e.g. plant imitates of inert material) (TM C.48, Appendix 4a (23));
În cazul în care laboratorul de testare nu are culturi obișnuite de Myriophyllum spicatum, plante de testare sterile pot fi obținute de la un alt laborator sau pot proveni de pe teren (nesterile) sau de la un furnizor comercial; dacă plantele provin de pe teren, se va lua în considerare o verificare taxonomică a speciei.
Pipettes with widened openings to collect eggs;
Dacă sunt colectate de pe teren sau provin de la un furnizor comercial, plantele trebuie sterilizate (1) și menținute în cultură în același mediu ca cel folosit pentru testare timp de cel puțin opt săptămâni înainte de utilizare.
Glass vessels to prepare different test concentrations and dilution water (beakers, graduated flasks, graduated cylinders and graduated pipettes) or to collect zebrafish eggs (e.g. beakers, crystallisation dishes);
Terenurile de pe care s-au colectat culturile inițiale trebuie să fie lipsite de surse evidente de contaminare.
If alternative exposure systems, such as flow-through (24) or passive dosing (25) are used for the conduct of the test, appropriate facilities and equipment are needed.
Trebuie să se acorde o atenție deosebită pentru a se asigura că se obține specia corectă atunci când se colectează Myriophyllum spicatum de pe teren, în special în regiuni unde aceasta se poate hibridiza cu alte specii de Myriophyllum.
Glass or polystyrene test chambers should be used (e.g. 24-well plates with a 2,5-5 ml filling capacity per well).
Dacă plantele au fost obținute de la un alt laborator, se vor menține în condiții similare timp de cel puțin trei săptămâni.
In case adsorption to polystyrene is suspected (e.g., for non-polar, planar substances with high KOW), inert materials (glass) should be used to reduce losses due to adsorption (26).
Sursa plantelor și a speciilor folosite ca material pentru testare se raportează întotdeauna.
Test chambers should be randomly positioned in the incubator.
Calitatea și uniformitatea plantelor folosite pentru testare vor avea o influență semnificativă asupra rezultatului testului și, prin urmare, se vor selecta cu atenție.
Water and test conditions
Se vor folosi plante tinere, cu creștere rapidă, fără leziuni sau decolorări vizibile (cloroză).
Dilution of the maintenance water is recommended to achieve hardness levels typical of a wide variety of surface waters.
Detalii privind pregătirea organismelor de testare sunt prezentate în apendicele 4.
Dilution water should be prepared from reconstituted water (27).
Cultivarea
The resulting degree of hardness should be equivalent to 100-300 mg/l CaCO3 in order to prevent excessive precipitation of calcium carbonate.
În scopul reducerii frecvenței de întreținere a culturii (de exemplu, în situațiile în care nu sunt prevăzute teste cu Myriophyllum pentru o anumită perioadă), culturile pot fi menținute în condiții de iluminare și temperatură scăzută (50 μE m– 2 s– 1, 20 ± 2 °C).
Other well-characterised surface or well water may be used.
Detalii privind culturile sunt prezentate în apendicele 3.
The reconstituted water may be adapted to maintenance water of low hardness by dilution with deionised water up to a ratio of 1:5 to a minimum hardness of 30-35 mg/l CaCO3.
Cu cel puțin 14-21 de zile înainte de testare, se transferă un număr suficient de organisme de testare în condiții aseptice într-un mediu steril proaspăt și se cultivă timp de 14-21 de zile în condiții similare cu cele ale testului drept precultură.
The water is aerated to oxygen saturation prior to addition of the test chemical.
Detalii privind prepararea unei preculturi sunt prezentate în apendicele 4.
Temperature should be kept at 26 ± 1 °C, in the wells, throughout the test.
Pentru testarea cu Myriophyllum spicatum într-un sistem fără sediment, se recomandă un singur mediu nutritiv, conform descrierii din apendicele 2.
The pH should be in a range between pH 6,5 and 8,5, and not vary within this range by more than 1,5 units during the course of the test.
O modificare a mediului Andrews este recomandată pentru cultura și testarea cu Myriophyllum spicatum, conform descrierii din referința (1).
If the pH is not expected to remain in this range, then pH adjustment should be done prior to initiating the test.
Din cinci soluții stoc nutritive preparate separat cu adaos de 3 % zaharoză, se va pregăti mediul Andrews modificat.
The pH adjustment should be made in such a way that the stock solution concentration is not changed to any significant extent and that no chemical reaction or precipitation of the test chemical is caused.
Detalii cu privire la prepararea mediului sunt prezentate în apendicele 2.
Test solutions of the selected concentrations can be prepared, e.g. by dilution of a stock solution.
Compoziția acestui mediu este prezentată în apendicele 2.
Where a solvent is used to assist in stock solution preparation, its final concentration should not exceed 100 μl/l and should be the same in all test vessels.
Soluțiile stoc ale substanței chimice de testare pot fi sterilizate în autoclavă la 121 °C timp de 20 de minute sau prin filtrare sterilă, cu condiția ca sterilizarea tehnică utilizată să nu denaturizeze substanța chimică de testare.
Maintenance of brood fish
Termostabilitatea și adsorbția pe suprafețe diferite trebuie luate în considerare în momentul alegerii procedurii de sterilizare a soluțiilor stoc ale substanței chimice de testare.
A breeding stock of unexposed, wild-type zebrafish with well-documented fertilisation rate of eggs is used for egg production.
Din acest motiv, se recomandă ca soluțiile stoc să fie preparate în condiții sterile, și anume prin utilizarea de materiale sterile pentru dizolvarea substanței chimice de testare în condiții sterile (de exemplu, sterilizarea la flacără, hote cu flux laminar etc.) în apă sterilă.
Fish should be free of macroscopically discernible symptoms of infection and disease and should not have undergone any pharmaceutical (acute or prophylactic) treatment for 2 months before spawning.
Această tehnică de preparare a soluțiilor stoc sterile este valabilă atât pentru substanțe, cât și pentru amestecuri.
Proficiency Testing
De exemplu, solvenții obișnuiți care nu provoacă fitotoxicitate la concentrații de până la 100 μl/l includ acetona și dimetilformamida.
For any laboratory initially establishing this assay, the reference chemical should be used.
Orientări suplimentare privind folosirea agenților de dispersie sunt prezentate în referința (5).
Zebrafish eggs may be produced via spawning groups (in individual spawning tanks) or via mass spawning (in the maintenance tanks).
În testul final de stabilire a toxicității, trebuie să existe în mod normal între cinci (precum în cadrul testului de inhibare a creșterii Lemna, capitolul C.26 din prezenta anexă) și șapte concentrații de testare dispuse în serie geometrică; acestea trebuie selectate astfel încât valorile NOEC și EC50 să fie cuprinse în intervalul concentrațiilor de testare (a se vedea mai jos).
Since spawning groups of zebrafish may occasionally fail to spawn, the parallel use of at least three spawning tanks is recommended.
Utilizarea a mai puțin de cinci concentrații trebuie justificată.
To avoid genetic bias, eggs are collected from a minimum of three breeding groups, mixed and randomly selected.
Se folosesc cel puțin cinci probe duplicat pentru fiecare concentrație de testare.
For the collection of eggs, spawn traps are placed into the spawning tanks or maintenance tanks before the onset of darkness on the day prior to the test or before the onset of light on the day of the test.
La stabilirea intervalului concentrațiilor de testare (pentru testul de stabilire a intervalului și/sau testul final de stabilire a toxicității), trebuie să se rețină următoarele:
To prevent predation of eggs by adult zebrafish, the spawn traps are covered with inert wire mesh of appropriate mesh size (approx.
Pentru determinarea unei ECx, concentrațiile de testare trebuie să încadreze valoarea ECx în scopul asigurării unui nivel de încredere adecvat.
2 ± 0,5 mm).
De exemplu, dacă se estimează EC50, cea mai mare concentrație de testare trebuie să fie mai mare decât valoarea EC50.
If considered necessary, artificial plants made of inert material (e.g., plastic or glass) can be fixed to the mesh as spawning stimulus (3)(4)(5)(23)(35).
Dacă valoarea EC50 se află în afara intervalului concentrațiilor de testare, intervalele de încredere aferente vor fi mari și există riscul ca evaluarea corectă a adecvării statistice a modelului să nu fie posibilă.
Weathered plastic materials which do not leach (e.g., phthalates) should be used.
Dacă se urmărește estimarea LOEC/NOEC, concentrația cea mai scăzută de testare trebuie să fie suficient de scăzută, astfel încât creșterea să nu fie cu mult mai mică decât cea a probei de control.
Mating, spawning and fertilisation take place within 30 min after the onset of light and the spawn traps with the collected eggs can be carefully removed.
În plus, concentrația cea mai mare de testare trebuie să fie suficient de mare astfel încât creșterea să fie cu mult mai mică decât cea în proba de control.
Rinsing eggs with reconstituted water after collection from spawning traps is recommended.
Dacă nu este cazul, testul se va repeta folosind un interval diferit de concentrații (cu excepția cazului în care cea mai mare concentrație se află la limita solubilității sau la concentrația-limită maximă cerută, de exemplu 100 mg/l).
Egg differentiation
Fiecare test trebuie să includă probe de control constând în același mediu nutritiv, același organism de testare (alegerea materialului vegetal cât mai omogen posibil, ramuri laterale proaspete din preculturi, scurtate la 2,5 cm de la bază), aceleași condiții ambientale și proceduri precum cele din vasele de testare, dar fără substanța chimică de testare.
At 26 °C, fertilised eggs undergo the first cleavage after about 15 min and the consecutive synchronous cleavages form 4, 8, 16 and 32 cell blastomers (see Appendix 3)(35).
Dacă se folosește un solvent sau agent de dispersie suplimentar, se va include un tratament suplimentar de control cu solventul/agentul de dispersie prezent în aceeași concentrație cu cea din vasele de testare cu substanța chimică de testare.
At these stages, fertilised eggs can be clearly identified by the development of a blastula.
Numărul vaselor de control duplicate (și vasele cu solvenți, dacă este cazul) trebuie să fie de cel puțin zece.
Twenty embryos per concentration (one embryo per well) are exposed to the test chemical.
Dacă determinarea NOEC nu este necesară, conceptul de testare poate fi modificată în sensul creșterii numărului de concentrații și al reducerii numărului de probe duplicat per concentrație
Exposure should be such that ± 20 % of the nominal chemical concentration are maintained throughout the test.
Cu toate acestea, în orice caz, numărul de probe duplicat de control trebuie să fie de cel puțin zece.
If this is not possible in a static system, a manageable semi-static renewal interval should be applied (e.g. renewal every 24 hrs).
Expunere
In these cases exposure concentrations need to be verified as a minimum in the highest and lowest test concentrations at the beginning and the end of each exposure interval (see paragraph 36).
Ramurile laterale proaspete din precultură scurtate la 2,5 cm de la bază sunt poziționate aleatoriu în vasele de testare în condiții aseptice; fiecare vas de testare trebuie să conțină o ramură laterală de 2,5 cm care să prezinte un meristem apical la un capăt.
If an exposure concentration of ± 20 % of the nominal concentrations cannot be maintained, all concentrations need to be measured at the beginning and the end of each exposure interval (see paragraph 36).
Materialul vegetal ales trebuie să aibă aceeași calitate în fiecare vas de testare.
Upon renewal, care should be taken that embryos remain covered by a small amount of old test solutions to avoid drying.
Vasele de testare vor fi poziționate aleatoriu în incubator pentru a se minimiza influența diferențelor spațiale de intensitate a luminii sau de temperatură.
The test design can be adapted to meet the testing requirements of specific substances (e.g,. flow-through (24) or passive dosing systems (25) for easily degradable or highly adsorptive substances (29), or others for volatile substances (36)(37)).
Este necesară, de asemenea, o dispunere fixă sau aleatorie a vaselor (sau o repoziționare mai frecventă) atunci când se efectuează observații.
Test chambers should be conditioned at least for 24 hrs with the test solutions prior to test initiation.
În acest caz, plantele se expun unor soluții proaspăt preparate de testare și de control cel puțin o dată în timpul testului (de exemplu, ziua a 7-a).
Test conditions are summarised in Appendix 2.
Frecvența expunerii la un mediu proaspăt va depinde de stabilitatea substanței de testare; pentru menținerea concentrațiilor cât mai aproape de nivelul constant în cazul substanțelor foarte instabile sau volatile, poate fi necesară o frecvență mai mare.
Normally, five concentrations of the test chemical spaced by a constant factor not exceeding 2,2 are required to meet statistical requirements.
Scenariul de expunere prin aplicare foliară (pulverizare) nu este inclus în această metodă de testare.
Justification should be provided, if fewer than five concentrations are used.
Se va folosi o lumină fluorescentă albă, caldă și/sau rece pentru a asigura o intensitate luminoasă cuprinsă în intervalul 100-150 μ E m– 2 s– 1 atunci când este măsurată în radiație activă fotosintetică (400-700 nm) în puncte aflate la distanțe egale de sursa de lumină cu fundul vaselor de testare (echivalent cu 6000 – 9000 lucsi) și un ciclu de lumină și întuneric de 16:8 ore.
The highest concentration tested should preferably result in 100 % lethality, and the lowest concentration tested should preferably give no observable effect, as defined in paragraph 28.
Metoda de detectare și de măsurare a luminii, în special tipul de senzor, va afecta valoarea măsurată.
A range-finding test before the definitive test allows selection of the appropriate concentration range.
Senzorii sferici (care răspund la lumină din toate unghiurile de deasupra și dedesubtul planului de măsurare) și senzorii „cosinus” (care răspund la lumină din toate unghiurile de deasupra planului de măsurare) sunt preferabili senzorilor unidirecționali și vor da valori mai mari pentru o sursă de lumină multipunct de tipul celei descrise aici.
The range-finding is typically performed using ten embryos per concentration.
Temperatura din vasele de testare trebuie să fie de 23 ± 2 oC.
The following instructions refer to performing the test in 24-well plates.
Se va acorda o atenție sporită devierii pH-ului în cazuri speciale, cum ar fi în cazul testării de substanțe chimice instabile sau de metale; pH-ul trebuie să rămână în intervalul 6-9.
If different test chambers (e.g. small Petri dishes) are used or more concentrations are tested, instructions have to be adjusted accordingly.
Pentru alte orientări, a se vedea referința (5).
Details and visual instructions for allocation of concentrations across 24-well plates are available in paragraph 27 and Appendix 4, Figure 1.
Testul se încheie după 14 zile de la transferul plantelor în vasele de testare.
Dilution water controls are required both as negative control and as internal plate controls.
Măsurători și determinări analitice
If more than 1 dead embryo is observed in the internal plate control, the plate is rejected, thus reducing the number of concentrations used to derive the LC50.
La începutul testului, lungimea lăstarului principal al organismului de testare este de 2,5 cm (a se vedea punctul 29); acesta este măsurat cu o riglă (a se vedea apendicele 4) sau pe baza analizei fotografiei sau a imaginii.
If an entire plate is rejected the ability to evaluate and discern observed effects may become more difficult, especially if the rejected plate is the solvent control plate or a plate in which treated embryos are also affected.
Lungimea lăstarului principal al organismului de testare aparent normal sau anormal trebuie sa fie stabilită la începutul testului, cel puțin o dată în timpul perioadei de 14 zile, precum și la sfârșitul testului.
In the first case the test must be repeated.
Notă: Ca o alternativă în cazul în care nu există o analiză a imaginilor, dacă bancul de lucru este sterilizat înainte de adăugarea plantelor în vasele de testare, se poate utiliza, de asemenea, o riglă sterilă pentru a măsura lungimea lăstarului principal la începutul și în timpul testului.
In the second one the loss of an entire treatment group(s) due to internal control mortality may limit the ability to evaluate effects and determine LC50 values.
Se înregistrează modificările în dezvoltarea plantei, de exemplu deformări ale lăstarilor, aspectul, indicațiile de necroză, cloroză sau pierderea de flotabilitate, precum și cele privind lungimea și aspectul rădăcinii.
A positive control at a fixed concentration of 4 mg/l 3,4-dichloroaniline is performed with each egg batch used for testing.
Se înregistrează, de asemenea, caracteristicile semnificative ale mediului de testare (de exemplu, prezența de material nedizolvat, creșterea de alge, ciuperci și bacterii în vasele de testare).
In case a solvent is used, an additional group of 20 embryos is exposed to the solvent on a separate 24-well plate, thus serving as a solvent control.
Pe lângă determinările lungimii lăstarului principal, se evaluează, de asemenea, efectele substanței chimice de testare asupra a trei (sau mai multe) dintre următoarele variabile de măsurare:
To consider the test acceptable, the solvent should be demonstrated to have no significant effects on time to hatch, survival, nor produce any other adverse effects on the embryos (cf. paragraph 8c).
Lungimea totală a ramurilor laterale
Start of exposure and duration of test
Lungimea totală a lăstarilor
The test is initiated as soon as possible after fertilisation of the eggs and terminated after 96 hrs of exposure.
Lungimea totală a rădăcinii
The embryos should be immersed in the test solutions before cleavage of the blastodisc commences, or, at latest, by the 16 cell-stage.
Greutatea în stare proaspătă
To start exposure with minimum delay, at least twice the number of eggs needed per treatment group are randomly selected and transferred into the respective concentrations and controls (e.g. in 100 ml crystallisation dishes; eggs should be fully covered) not later than 90 minutes post fertilisation.
Greutatea uscată
Viable fertilised eggs should be separated from unfertilised eggs and be transferred to 24-well plates pre-conditioned for 24 hrs and refilled with 2 ml/well freshly prepared test solutions within 180 minutes post fertilisation.
Numărul vârtejurilor
By means of stereomicroscopy (preferably ≥30-fold magnification), fertilised eggs undergoing cleavage and showing no obvious irregularities during cleavage (e.g. asymmetry, vesicle formation) or injuries of the chorion are selected.
Nota 1:
For egg collection and separation, see Appendix 3, Fig. 1 and 3 and Appendix 4, Fig.
Observațiile făcute în timpul testului de stabilire a intervalului pot contribui la selectarea măsurătorilor suplimentare relevante dintre cele șase variabile enumerate mai sus.
2.
Nota 2: Se recomandă determinarea greutății în stare proaspătă și a greutății uscate (parametri iv și v).
Distribution of eggs over the 24-well plates
Nota 3: Datorită faptului că zaharoza și lumina (expunerea rădăcinilor la lumină în timpul testului) ar putea să influențeze transportatorii de auxină (hormon de creștere a plantelor) și că unele substanțe chimice ar putea să aibă un mod de acțiune de tipul auxinei, incluziunea punctelor finale legate de rădăcină (parametrul iii) este discutabilă.
Eggs are distributed to well plates in the following numbers (see also Appendix 4, Fig.
Rezultatele testului circular arată coeficienți mari de variație (> 60 %) pentru lungimea totală a ramurilor laterale (parametrul i).
1)
Lungimea totală a ramurilor laterale este cuprinsă în orice caz în măsurarea lungimii totale a lăstarilor (parametrul ii) care prezintă coeficienți de variație mai acceptabili de < 30 %.
20 eggs on one plate for each test concentration;
Nota 5:
20 eggs as solvent control on one plate (if necessary);
Pe baza considerațiilor de mai sus, principalele puncte finale de măsurare recomandate sunt: lungimea totală a lăstarilor, greutatea în stare proaspătă și greutatea uscată (parametrii ii, iv și v); parametrul vi – numărul vârtejurilor – va fi stabilit de cel care efectuează testul.
20 eggs as positive control on one plate;
Lungimea lăstarului principal și numărul de vârtejuri prezintă un avantaj în sensul că pot fi determinate pentru fiecare vas de testare și de control la începutul, în timpul și la sfârșitul testului pe baza analizei fotografiilor și a imaginilor, deși se poate folosi, de asemenea, o riglă (sterilă).
4 eggs in dilution water as internal plate control on each of the above plates;
Lungimea totală a ramurilor, lungimea totală a rădăcinilor (ca sumă a tuturor ramurilor laterale și a rădăcinilor) și lungimea totală a lăstarilor (ca sumă a lungimii lăstarului principal și a lungimii totale a ramurilor laterale) pot fi măsurate cu o riglă la sfârșitul expunerii.
24 eggs in dilution water as negative control on one plate.
Greutatea în stare proaspătă și/sau greutatea uscată trebuie determinate la începutul testului pe baza unui eșantion din precultură reprezentativ pentru substanța folosită la începutul testului, iar la sfârșitul testului, utilizând materialul vegetal din fiecare vas de testare și de control.
Apical observations performed on each tested embryo include: coagulation of embryos, lack of somite formation, non-detachment of the tail, and lack of heartbeat (Table 1).
Lungimea totală a ramurilor laterale, lungimea totală a lăstarilor, lungimea totală a rădăcinii, greutatea în stare proaspătă, greutatea uscată și numărul vârtejurilor pot fi determinate după cum urmează:
These observations are used for the determination of lethality: Any positive outcome in one of these observations means that the zebrafish embryo is dead.
Lungimea ramurilor laterale poate fi determinată prin măsurarea tuturor ramurilor laterale cu o riglă la sfârșitul perioadei de expunere.
Additionally, hatching is recorded in treatment and control groups on a daily basis starting from 48 hrs.
Lungimea totală a ramurilor laterale reprezintă suma tuturor ramurilor laterale din fiecare vas de testare și de control.
Observations are recorded every 24 hrs, until the end of the test.
Lungimea lăstarului principal poate fi determinată prin analiza imaginilor sau folosind o riglă.
Apical observations of acute toxicity in zebrafish embryos 24-96 hrs post fertilisation
Lungimea totală a lăstarilor reprezintă suma lungimii totale a ramurilor laterale și a lungimii lăstarului principal din fiecare vas de testare și de control la sfârșitul perioadei de expunere.
Exposure times
Lungimea rădăcinii poate fi determinată prin măsurarea tuturor rădăcinilor cu ajutorul unei rigle la sfârșitul perioadei de expunere.
24 hrs
Lungimea totală a rădăcinii este suma tuturor rădăcinilor din fiecare vas de testare și de control.
48 hrs
Greutatea în stare proaspătă poate fi determinată prin cântărirea organismelor de testare la sfârșitul perioadei de expunere.
72 hrs
Toate materiale vegetale din fiecare vas de testare și de control vor fi spălate cu apă distilată și uscate ușor cu hârtie din celuloză.