natgillin/translations-raw huggingface dataset:
A test with regular renewal of the test solutions after defined periods (e.g., every 24 hrs).
Discutarea rezultatelor, inclusiv orice influență asupra rezultatului testului rezultată din abaterile de la această metodă de testare.
Simplified Molecular Input Line Entry Specification
Capitolul C.26 din prezenta anexă: Lemna sp., test de inhibare a creșterii.
Somite
OECD (2014), „Myriophyllum spicatum Toxicity Test: Results of an inter-laboratory ring test using a sediment-free test system”, OECD Environment, Health and Safety Publications (EHS), Series Testing and Assessment, No.
In the developing vertebrate embryo, somites are masses of mesoderm distributed laterally to the neural tube, which will eventually develop dermis (dermatome), skeletal muscle (myotome), and vertebrae (sclerotome).
205, OECD Publishing, Paris.
Static test
OECD (2000), „Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures”, OECD Environment, Health and Safety Publications (EHS), Series on Testing and Assessment, No.
A test in which test solutions remain unchanged throughout the duration of the test.
23, OECD Publishing, Paris.
Any substance or mixture tested using this test method
Capitolul C.51 din prezenta anexă: Test de toxicitate asupra Myriophyllum spicatum într-un sistem apă-sediment.
Substances of unknown or variable composition, complex reaction products or biological materials
OECD (2006), „Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data: A Guidance to Application”, OECD Environment, Health and Safety Publications (EHS), Series on Testing and Assessment, No. 54, OECD Publishing, Paris.
MAINTENANCE, BREEDING AND TYPICAL CONDITIONS FOR ZEBRAFISH EMBRYO ACUTE TOXICITY TESTS
Biomasă înseamnă greutatea uscată a materiei vii prezentă într-o populație.
Zebrafish (Danio rerio)
În acest test, biomasa este suma lăstarului principal, a ramurilor laterale și a tuturor rădăcinilor.
Origin of species
Cloroză înseamnă schimbarea de colorit de la verde la galben a organismului de testare, în special a vârtejurilor.
India, Burma, Malakka, Sumatra
ECx înseamnă concentrația substanței chimice de testare dizolvată în mediul de testare din care rezultă o reducere de x % (de exemplu, 50 %) a creșterii Myriophyllum spicatum într-o anumită perioadă de expunere (care se menționează explicit în cazul în care există abateri de la durata completă sau normală a testului).
Sexual dimorphism
Pentru a reprezenta în mod clar o valoare EC derivată din viteza de creștere sau din randament, se folosesc simbolurile „ErC” pentru viteza de creștere și, respectiv, „EyC” pentru randament, urmate de variabila de măsurare folosită, de exemplu ErC (lungimea lăstarului principal).
Females: protruding belly, when carrying eggs
Creștere înseamnă o mărire a variabilei de măsurare, cum ar fi lungimea lăstarului principal, lungimea totală a ramurilor laterale, lungimea totală a lăstarilor, lungimea totală a rădăcinii, greutatea în stare proaspătă, greutatea uscată sau numărul vârtejurilor, de-a lungul perioadei de testare.
Males: more slender, orange tint between blue longitudinal stripes (particularly evident at the anal fin)
Viteză de creștere (viteza medie specifică de creștere) înseamnă creșterea logaritmică a variabilei de măsurare în timpul perioadei de expunere.
Dry flake food (max.
Notă: Variabilele de răspuns legate de viteza de creștere sunt independente de durata testului atât timp cât tendința de creștere a organismelor de control neexpuse este exponențială.
3 % fish weight per day) 3 - 5 times daily; additionally brine shrimp (Artemia spec.) nauplii and/or small daphnids of appropriate size obtained from an uncontaminated source.
Concentrația cea mai scăzută pentru care este observat un efect (LOEC) înseamnă cea mai scăzută concentrație de testare la care se observă că substanța chimică are un efect de reducere semnificativ din punct de vedere statistic asupra creșterii (la p < 0,05) în comparație cu proba de control, într-un anumit timp de expunere.
Feeding live food provides a source of environmental enrichment and therefore live food should be given wherever possible.
Variabile de măsurare înseamnă orice tip de variabile care sunt măsurate pentru a exprima punctul final de testare folosind una sau mai multe variabile de răspuns.
To guarantee for optimal water quality, excess food and faeces should be removed approx. one hour after feeding.
În această metodă de testare, lungimea lăstarului principal, lungimea totală a ramurilor laterale, lungimea totală a lăstarilor, lungimea totală a rădăcinii, greutatea în stare proaspătă, greutatea uscată și numărul vârtejurilor reprezintă variabile de măsurare.
Approximate weight of adult fish
Monocultură înseamnă o cultură cu o singură specie de plante.
Females: 0,65 ± 0,13 g
Necroză înseamnă un țesut mort (și anume, alb sau maro închis) al organismului de testare.
Males: 0,5 ± 0,1 g
Concentrație la care nu se observă niciun efect (NOEC) înseamnă concentrația de testare situată imediat sub LOEC.
Maintenance of parental fish
Variabilă de răspuns înseamnă orice variabilă pentru estimarea toxicității derivate din orice variabilă măsurată care descrie biomasa prin diferite metode de calcul.
Illumination
Pentru această metodă de testare, viteza de creștere și randamentul sunt variabile de răspuns derivate din variabile de măsurare precum lungimea lăstarului principal, lungimea totală a lăstarilor, greutatea în stare proaspătă, greutatea uscată sau numărul de vârtejuri.
Fluorescent bulbs (wide spectrum); 10-20 μE/m2/s, 540-1080 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels); 12-16 hrs photoperiod
Test (de reînnoire) semistatic înseamnă un test în care soluția de testare se înlocuiește periodic, la intervale specifice pe durata testului.
26 ± 1 °C
Test static înseamnă o metodă de testare care nu presupune reînnoirea soluției de testare pe durata testului.
Water quality
Punctul final de testare descrie factorul general care va fi modificat de substanța chimică de testare în comparație cu proba de control, acesta fiind obiectivul testului.
O2 ≥ 80 % saturation, hardness: e.g. ~30-300 mg/l CaCO3, NO3-: ≤ 48mg/l, NH4+ and NO2-: < 0,001 mg/l, residual chlorine < 10 μg/l, total organic chlorine < 25 ng/l, pH = 6,5 – 8,5
În această metodă de testare, punctul final de testare este inhibarea creșterii, care poate fi exprimată prin diferite variabile de răspuns bazate pe una sau mai multe variabile de măsurare.
Further water quality criteria
Mediu de testare înseamnă mediul de cultură sintetic complet în care cresc plantele testate atunci când sunt expuse la substanța chimică de testare.
Particulate matter < 20 mg/l, total organic carbon < 2 mg/l, total organophosphorus pesticides < 50 ng/l, total organochlorine pesticides plus polychlorinated biphenyls < 50 ng/l
În mod normal, substanța chimică de testare va fi dizolvată în mediul de testare.
Tank size for maintenance
UVCB este o substanță cu compoziție necunoscută sau variabilă, produs de reacție complexă sau material biologic.
e.g. 180 l, 1 fish/l
Randament reprezintă valoarea unei variabile de măsurare pentru exprimarea biomasei la sfârșitul perioadei de expunere minus variabila de măsurare la începutul perioadei de expunere.
Water purification
Notă: În cazul în care tendința de creștere a organismelor neexpuse este exponențială, variabilele de răspuns bazate de randament vor descrește odată cu durata testului.
Permanent (charcoal filtered); other possibilities include combinations with semi-static renewal maintenance or flow-through system with continuous water renewal
MEDIU ANDREWS MODIFICAT PENTRU CULTURA ȘI PRECULTURA STOC
Recommended male to female ratio for breeding
Din cinci soluții stoc de nutrienți preparate separat modificate, va fi pregătit mediul Andrews modificat necesar pentru cultura și precultura stoc, cu un adaos de 3 % zaharoză.
2:1 (or mass spawning)
Tabelul 1
Spawning tanks
Compoziția soluției nutritive Andrews: (Desemnare ASTM E 1913-04)
e.g. 4 l tanks equipped with steel grid bottom and plant dummy as spawning stimulant; external heating mats, or mass spawning within the maintenance tanks
Producția de soluții stoc nutritive
Egg structure and appearance
Producția de soluție nutritivă
Stable chorion (i.e. highly transparent, non-sticky, diameter ~ 0,8–1,5 mm)
Soluție stoc
Spawning rate
Greutate inițială per 1000 ml
A single mature female spawns at least 50-80 eggs per day.
ml per 5 l soluție nutritivă
Depending on the strain, spawning rates may be considerably higher.
74,6 mg
The fertilisation rate should be ≥ 70 %.
A se vedea mai jos soluție stoc 3.1
For first time spawning fish, fertilisation rates of the eggs may be lower in the first few spawns.
Soluțiile stoc pot fi păstrate în frigider timp de 6 luni (la o temperatură de 5-10 °C).
Static, semi-static renewal, flow-through, 26 ± 1 °C, 24 hrs conditioned test chambers (e.g. 24-well plates 2,5-5 ml per cavity)
Numai soluția stoc 5 are o valabilitate redusă (două luni).
NORMAL ZEBRAFISH DEVELOPMENT AT 26 °C
Producția de soluție stoc 3.1 pentru prepararea soluției stoc 3
Fig.
Greutatea inițială g/100 ml
1: Selected stages of early zebrafish (Danio rerio) development: 0,2 – 1,75 hrs post-fertilisation (from Kimmel et al., 1995 (35)).
După prepararea soluției stoc 3.1 (tabelul 2), soluția se congelează în aproximativ 11 mlalicote (la cel puțin – 18°C).
The time sequence of normal development may be taken to diagnose both fertilisation and viability of eggs (see paragraph 26: Selection of fertilised eggs).
Porțiile congelate au o perioadă de valabilitate de cinci ani.
Fig.
Pentru a produce o soluție stoc 3, se decongelează soluția stoc 3.1, se pun 10 ml din aceasta într-un flacon volumetric și se adaugă apă ultrapură până la semnul de pe flacon.
2: Selected stages of late zebrafish (Danio rerio) development (de-chorionated embryo to optimise visibility): 22 – 48 hrs after fertilisation (from Kimmel et al., 1995 (35)).
Se adaugă apoi 150 g zaharoză dizolvată (3 % per 5 l); ulterior, se umple flaconul volumetric cu apă ultrapură până la semn.
Fig.
În cele din urmă, soluția nutritivă se toarnă în flacoane Schott de 1 l și se bagă la autoclavă la 121 °C timp de 20 de minute.
3: Normal development of zebrafish (Danio rerio) embryos: (1) 0,75 hrs, 2-cell stage; (2) 1 hr, 4-cell stage; (3) 1,2 hrs, 8-cell stage; (4) 1,5 hrs, 16-cell stage; (5) 4,7 hrs, beginning epiboly; (6) 5,3 hrs, approx.
Soluția nutritivă astfel produsă poate fi păstrată sterilă la frigider (la 5-10 °C) timp de trei luni.
50 % epiboly (from Braunbeck & Lammer 2006 (40)).
Mediu Andrews modificat pentru testul de toxicitate fără sediment
Layout of 24-well plates
Din cele cinci soluții stoc nutritive deja menționate în tabelele 1 și 2, se prepară un mediu Andrews modificat, concentrat de zece ori în vederea obținerii soluțiilor de testare, cu adaos de 30 % zaharoză.
1-5 five test concentrations/chemical;
În acest scop, se toarnă aproximativ 100 ml de apă ultrapură într-un flacon volumetric de 1 l.
Scheme of the zebrafish embryo acute toxicity test procedure (from left to right): production of eggs, collection of the eggs, pre-exposure immediately after fertilisation in glass vessels, selection of fertilised eggs with an inverted microscope or binocular and distribution of fertilised eggs into 24-well plates prepared with the respective test concentrations/controls, n = number of eggs required per test concentration/control (here 20), hpf = hours post-fertilisation.
MENȚINEREA CULTURII STOC
Waste
În prezentul apendice 3 este descrisă cultura stoc de Myriophyllum spicatum L [1], o plantă acvatică dicotiledonată submersă din familia peniței.
24 h pre-conditioning n fertilised eggs per test concentration/ control Selection of fertilised eggs & fertilisation rate determination Glass vessel with respective test concentrations/ controls at volumes to fully cover eggs
Pentru a obține o cultură stoc fără sediment în condiții de laborator, sunt necesare plante sterile.
eggs per conc./ control
Plantele sterile pot fi procurate de la laboratorul german Umweltbundesamt (Agenția Federală de Mediu din Germania).
Spawning unit
În mod alternativ, organismele de testare pot fi preparate pornind de la plante nesterile în conformitate cu denumirea ASTM E 1913-04.
ATLAS OF LETHAL ENDPOINTS FOR THE ZEBRAFISH EMBRYO ACUTE TOXICITY TEST
A se vedea mai jos – extras din Ghidul Standard ASTM – procedura de cultivare a Myriophyllum sibiricum colectată de pe teren:
The following apical endpoints indicate acute toxicity and, consequently, death of the embryos: coagulation of the embryo, non-detachment of the tail, lack of somite formation and lack of heartbeat.
Întrucât mediul Andrews modificat conține zaharoză (mediu care stimulează creșterea ciupercilor și a bacteriilor), toate materialele, soluțiile și culturile se efectuează în condiții sterile.
The following micrographs have been selected to illustrate these endpoints.
În plus, toate flacoanele, vasele, bolurile etc. și alte echipamente sunt supuse tratamentului la flacără pe un banc de lucru steril chiar înainte de utilizare.
Coagulation of the embryo:
Culturile stoc pot fi menținute în condiții de temperatură și iluminare reduse (50 μE m– 2 s– 1, 20 ± 2 °C) pentru perioade mai îndelungate fără a fi nevoie să fie restabilite.
Under bright field illumination, coagulated zebrafish embryos show a variety of intransparent inclusions.
Mediul de creștere pentru Myriophyllum trebuie să fie același cu mediul folosit pentru testare, dar pentru culturile stoc se poate folosi orice alt mediu bogat în nutrienți.
Figure 2
Segmentele vegetale sunt distribuite în mod axenic în mai multe flacoane Erlenmeyer de 500 ml și/sau Fernbach de 2000 ml, fiecare umplut cu aproximativ 450 respectiv 1000 ml de mediu Andrews modificat.
Lack of somite formation:
Ulterior, flacoanele sunt acoperite în condiții axenice cu dopuri de celuloză.
Although retarded in development by approx.
În plus, este absolut necesar un tratament amănunțit cu flacără al echipamentului la un banc de lucru steril înainte de utilizare.
10 hrs, the 24 hrs old zebrafish embryo in (a) shows well-developed somites (→), whereas the embryo in (b) does not show any sign of somite formation (→).
În funcție de număr și de dimensiune, plantele urmează să fie transferate în soluție nutritivă proaspătă la intervale de aproximativ trei săptămâni.
Although showing a pronounced yolk sac oedema (*), the 48 hrs old zebrafish embryo in (c) shows distinct formation of somites (→), whereas the 96 hrs old zebrafish embryo depicted in (d) does not show any sign of somite formation (→).
Pentru această cultură reînnoită se pot folosi vârfurile, precum și segmente din partea centrală a tulpinii.
Note also the spinal curvature (scoliosis) and the pericardial oedema (*) in the embryo shown in (d).
Numărul și dimensiunea plantelor transferate (sau segmente de plante) depind de cât de multe plante sunt necesare.
Bud in lateral view (a: →; 96 hrs old zebrafish embryo).
De exemplu, se pot transfera cinci segmente de lăstar într-un flacon Fernbach și trei segmente de lăstar într-un flacon Erlenmayer, fiecare cu o lungime de 5 cm.
Note also the lack of the eye bud (*).
Se înlătură orice parte cu rădăcini, cu floare, moartă sau care se remarcă în alt fel.
Figure 4
Tăierea plantelor pentru cultura stoc și precultură după 3 săptămâni de la cultivare.
Lack of heartbeat is, by definition, difficult to illustrate in a micrograph.
deșeuri
Lack of heartbeat is indicated by non-convulsion of the heart (double arrow).
precultură
Immobility of blood cells in, e.g. the aorta abdominalis (→ in insert) is not an indicator for lack of heartbeat.
cultură stoc
Note also the lack of somite formation in this embryo (*, homogenous rather than segmental appearance of muscular tissues).
Cultura plantelor trebuie să fie realizată în flacoane Erlenmayer de 500 ml și Fernbach de 2000 ml într-un incubator de răcire la 20 ± 2 °C cu o lumină continuă la aproximativ 100150 μE m– 2 s– 1 sau 6000-9000 lucși (emisă de iluminarea camerei cu temperatură de culoare „lumină albă caldă”).
The observation time to record an absence of heartbeat should be at least of one minute with a minimum magnification of 80×.
Cultura plantelor într-un incubator de răcire cu iluminare.
C.50 Sediment-free Myriophyllum spicatum toxicity test
Se folosesc vase de cultură din sticlă curate din punct de vedere chimic (curățate cu acid) și sterile, precum și tehnici de manipulare aseptică.
This test method is equivalent to OECD test guideline 238 (2014).
În eventualitatea contaminării culturii stoc, de exemplu cu alge, ciuperci și/sau bacterii, se va prepara o cultură nouă sau se va reînnoi cultura cu o cultură stoc de la un alt laborator.
It is designed to assess the toxicity of chemicals to Myriophyllum spicatum, a submersed aquatic dicotyledon, a species of the water milfoils family.
Carl von Linné (* May, 23th, 1707 in Råshult /Älmhult; † January, 10th, 1778 in Uppsala).
It is based on an ASTM existing test method (1) modified as a sediment-free test system (2) to estimate the intrinsic ecotoxicity of test chemicals (independent of the distribution-behaviour of the test chemical between water and sediment).
ÎNTREȚINEREA PRECULTURII ȘI PREGĂTIREA ORGANISMULUI DE TESTARE PENTRU TESTARE
A test system without sediment has a low analytical complexity (only in the water phase) and the results can be analysed in parallel and/or comparison with those obtained in Lemna sp. test (3); in addition, the required sterile conditions allow to keep the effects of microorganisms and algae (chemical uptake/ degradation, etc.) as low as possible.
Pentru a obține o precultură, se taie lăstarii din cultura stoc în segmente cu câte două vârtejuri fiecare; se pun segmentele în flacoane Fernbach umplute cu mediu Andrews modificat (cu 3 % zaharoză).
This test does not replace other aquatic toxicity tests; it should rather complement them so that a more complete aquatic plant hazard and risk assessment is possible.
Fiecare flacon poate conține până la 50 de segmente de lăstar.
The test method has been validated by a ring-test (4).
Cu toate acestea, trebuie avut grijă ca segmentele să fie vitale și să nu aibă rădăcini și ramuri laterale sau muguri (a se vedea figura 1 din apendicele 3).
Details of testing with renewal (semi-static) and without renewal (static) of the test solution are described.
Organismele de precultură sunt cultivate timp de 14-21 de zile în condiții sterile într-o cameră cu condiții ambientale care alternează fazele de lumină/întuneric de 16/8 ore.
Depending on the objectives of the test and the regulatory requirements, the use of semi-static method is recommended, e.g. for substances that are rapidly lost from solution as a result of volatilisation, adsorption, photodegradation, hydrolysis, precipitation or biodegradation.
Intensitatea luminii este selectată din intervalul de 100-150 μE m-2 s-1.
Further guidance is given in (5).
Întrucât mediul modificat Andrews conține zaharoză (mediu care stimulează creșterea de alge, ciuperci și bacterii), prepararea substanțelor de testare și cultura trebuie efectuate în condiții sterile.
This test method applies to substances, for which the test method has been validated, (see details in the ring-test report (4)) or to formulations, or known mixtures; if a mixture is tested, its constituents should be as far as possible identified and quantified.
Sterilizarea se realizează prin tratarea cu aer încălzit (210 oC) timp de 4 ore sau la autoclavă timp de 20 de minute la 121 oC.
The sediment-free Myriophyllum spicatum test method complements the water-sediment Myriophyllum spicatum Toxicity Test (6).
În plus, toate flacoanele, vasele, bolurile etc. și alte echipamente sunt supuse tratamentului la flacără la un banc de lucru steril chiar înainte de utilizare.
Before use of the test method for the testing of a mixture intended for a regulatory purpose, it should be considered whether, and if so why, it may provide adequate results for that purpose.
Lăstarii sunt înlăturați pe cale axenică din flacoanele de precultură, alegând un material cât se poate de omogen.
Continuously growing plant cultures of Myriophyllum spicatum (only in modified Andrews' medium, see Appendix 2) are allowed to grow as monocultures in different concentrations of the test chemical over a period of 14 days in a sediment-free test system.
Fiecare testare necesită cel puțin 60 de organisme de testare (testare cu opt concentrații chimice de testare).
The objective of the test is to quantify chemical-related effects on vegetative growth over this period based on assessments of selected measurement variables.
Pentru testare, se iau ramuri laterale proaspete din preculturi, se scurtează la 2,5 cm de la bază (măsurate cu rigla) și se transferă într-un pahar de laborator care conține un mediu Andrews modificat steril.
Growth of shoot length, of lateral branches and roots as well as development of fresh and dry weight and increase of whorls are the measurement variables.
Aceste ramuri laterale proaspete pot fi folosite pentru testul de toxicitate pe Myriophyllum spicatum într-un sistem fără sediment.
In addition, account is taken of distinctive qualitative changes in test organisms, such as disfigurement or chlorosis and necrosis indicated by yellowing or white and brown colouring.
Tăierea plantelor din precultură pentru testul de toxicitate pe Myriophyllum spicatum într-un sistem fără sediment.
To quantify chemical-related effects, growth in the test solutions is compared with that of the controls and the concentration bringing about a specified x % inhibition of growth is determined and expressed as the ECx; “x” can be any value depending on the regulatory requirements, e.g. EC10, EC20, EC50.
ramuri laterale proaspete pentru test
It should be noted that estimates of EC10 and EC20 values are only reliable and appropriate in tests where coefficients of variation in control plants fall below the effect level being estimated, i.e. coefficients of variation should be < 20 % for robust estimation of an EC20.
deșeuri sau cultivare suplimentară
Both average specific growth rate (estimated from assessments of main shoot length and three additional measurement variables) and yield (estimated from the increase in main shoot length and three additional measurement variables) of untreated and treated plants should be determined.
C.51 Test de toxicitate pe Myriophyllum spicatum într-un sistem apă-sediment
Specific growth rate (r) and yield (y) are subsequently used to determine the ErCx (e.g. ErC10, ErC20, ErC50) and EyCx (e.g. EyC10, EyC20, EyC50), respectively.
Această metodă de testare este echivalentă cu Orientarea OCDE privind testarea (TG) nr. 239 (2014).
In addition, the lowest observed effect concentration (LOEC) and the no observed effect concentration (NOEC) may be statistically determined.
Metodele de testare sunt valabile pentru planta acvatică monocotiledonată plutitoare, specia Lemna (1) și pentru speciile de alge.
An analytical method, with adequate sensitivity for quantification of the test chemical in the test medium, should be available.
Aceste metode sunt utilizate în mod obișnuit pentru a genera date care să permită evaluarea riscului substanțelor chimice de testare, în special celor cu activitate de erbicid, pentru speciile de plante acvatice nevizate.
Information on the test chemical which may be useful in establishing the test conditions includes the structural formula, purity and impurities, water solubility, stability in water and light, acid dissociation constant (pKa), partition coefficient octanol-water (Kow), vapour pressure and biodegradability.
Cu toate acestea, în unele cazuri pot fi necesare date pentru specii macrofite suplimentare.