natgillin/translations-raw huggingface dataset:
1999, Seber and Wild, 2003, Motulsky and Christopoulos 2004, Huet et al.
Comportament și aspect
2003).
Trebuie notat orice comportament anormal (în raport cu grupul de control); acesta ar putea include semne ale toxicității generale, inclusiv hiperventilație, înotul necoordonat, pierderea echilibrului, imobilitate sau hrănire atipice.
Any transformation of responses prior to analysis should preserve the independence of the observations and ECx and its confidence bounds should be expressed in the original units of measurement, rather than in transformed units.
De asemenea, trebuie observate anomaliile externe (precum hemoragia, modificările de culoare).
For example, a 20 % change in the logarithm of length is not equivalent to a 20 % change in length (Lyles et.al 2008, Draper and Smith 1999).
Astfel de semne de toxicitate trebuie luate în considerare cu atenție în timpul interpretării datelor, întrucât acestea pot indica concentrații la care biomarkerii activității endocrine nu sunt fiabili.
The flowchart in figure 4 gives an overview for ECx estimations.
Observațiile referitoare la comportament pot furniza, de asemenea, informații calitative utile pentru a sta la baza unor posibile viitoare cerințe în materie de testare a peștilor.
The details are described in the text below.
De exemplu, a fost observată o agresivitate teritorială la masculii normali sau la femele masculinizate de Pimephales promelas prin expunere la androgenice; în cazul peștelui-zebră, comportamentul caracteristic de împerechere și de eliberare de gameți după răsăritul soarelui este redus sau afectat de expunerea la estrogenice sau la antiandrogenice.
Figure 4
Deoarece anumite elemente legate de aspect (în primul rând culoarea) se pot modifica rapid în timpul manipulării, este important să se realizeze observații calitative înainte de eliminarea animalelor din sistemul de testare.
Flow chart for ECx Estimation of Replicate Mean Length, Weight, or Proportion of Egg Hatch or Larval Mortality, see text for more details Select a larget value of x or a different model
Experiența de până în prezent în ceea ce privește Pimephales promelas sugerează că anumite substanțe chimice care acționează la nivel endocrin pot induce inițial modificări ale următoarelor caracteristici exterioare: culoarea corpului (deschisă sau închisă), modele de colorație (prezența unor dungi verticale) și forma corpului (regiunea capului și regiunea pectorală).
Is (a) predicted response at ECx within CI for control, or (b) predicted response within CI for predicted response at ECx or (c) CI for ECx too wide?
Prin urmare, trebuie realizate observații privind aspectul fizic al peștilor pe parcursul testului și la încheierea studiului.
Compute 95 % CI for predicted response at control and at Ecx, Compute 95 % CI for ECx.
Fecunditate
Compare models using AICc criteria or professional judgement and select best fit
Trebuie înregistrate observații cantitative zilnice legate de eliberarea de gameți per duplicat.
Assess goodness of fit of models: (a) visually, (b) compare predicted % effect to observed % effect, (c) compare control mean response to predicted mean response, (d) compare regression residual SS to pure error SS using F-test.
Producția de ouă trebuie să fie înregistrată ca numărul de ouă/femelă supraviețuitoare/zi per duplicat.
Reject poorly fitting models.
Ouăle vor fi îndepărtate zilnic din camerele de testare.
8 or more concentrations plus control 6 or 7 concentrations plus control 5 concentrations plus control
Substraturile de reproducere trebuie amplasate în camera de testare în cazul Pimephales promelas și în cazul peștelui-zebră pentru a permite peștilor să elibereze gameți în condiții normale.
Report model, ECx and its CI If no model and acceptable x can be found, report NOEC No Yes
Apendicele 4 oferă detalii suplimentare privind substraturile de reproducere recomandate pentru peștele-zebră (apendicele 4a) și pentru Pimephales promelas (anexa 4b).
If no indication of extra-binominal variance, probit model can be fit to proportion data Also fit Brain-Cousins Hormetic model
Nu se consideră necesar să se prevadă un substrat de reproducere în cazul Oryzias latipes.
Also fit OECD 4 & 5, Hill, Michaelis-Menton or other 3-5 parm model
Eutanasierea peștilor
For Bruce-Versteeg, simple exponential (OECD2), simple exponential w/shape parameter (OECD3) or other 2-3 parm model
În ziua 21, și anume la încheierea perioadei de expunere, peștii trebuie eutanasiați cu ajutorul unor cantități corespunzătoare de tricaină (metan sulfonat de tricaină, metacaină, MS-222 (CAS 886-86-2), 100-500 mg/l tamponată cu 300 mg/l NaHCO3 (bicarbonat de sodiu, CAS 144-55-8) pentru a reduce iritația mucoaselor; apoi sunt prelevate probe de sânge sau de țesut pentru determinarea vitelogeninei, conform explicațiilor din secțiunea privind vitelogenina.
Considerations for Egg Hatch and Larval Mortality
Observarea caracteristicilor sexuale secundare
For egg hatch and larval mortality, it is generally best to fit a decreasing model unless one is fitting a probit model as described below.
Anumite substanțe chimice care acționează la nivel endocrin pot induce modificări ale caracteristicilor sexuale secundare specializate (numărul de tuberculi nupțiali la masculul Pimephales promelas, procesele papilare la masculul de Oryzias latipes).
That is, one should model the proportion of eggs that do not hatch or larvae that die.
În special, substanțele chimice cu anumite moduri de acțiune pot cauza apariția anormală a unor caracteristici sexuale secundare la animalele de sex opus; de exemplu, agoniști ai receptorilor androgenici, cum ar fi trenbolonul, metiltestosteronul și dihidrotestosteronul pot cauza dezvoltarea de tuberculi nupțiali proeminenți la femelele de Pimephales promelas sau dezvoltarea de procese papilare la femelele de Oryzias latipes (11, 20, 21).
The reason for this is that ECx refers to a concentration at which there is a change equal to x % of the control mean response.
De asemenea, s-a raportat faptul că agoniștii receptorilor estrogenici pot reduce numărul de tuberculi nupțiali și dimensiunea depozitelor subcutanate dorsale ale masculilor adulți de Pimephales promelas (26, 27).
If there are 5 % control eggs that fail to hatch and one models failure to hatch, then EC20 refers to a concentration at which there is a change equal to 20 % of the 5 % control failure to hatch, and that is a change of 0,2 × 0,05 = 0,01 or 1 percentage point to 6 % failure to hatch.
Aceste observații morfologice macroscopice pot furniza informații calitative și cantitative utile pentru a sta la baza unor posibile viitoare cerințe privind testarea peștilor.
Such a small change cannot be estimated in any meaningful way from the data available and is not biologically important.
Numărul și dimensiunea tuberculilor nupțiali ai Pimephales promelas și ale proceselor papilare ale Oryzias latipes pot fi cuantificate direct sau, mai practic, în eșantioanele conservate.
Whereas if one models the proportion of eggs that hatch, the control proportion would be 95 % in this example and a 20 % reduction from the control mean would be a change of 0,95 × 0,2 = 0,18, so from 95 % hatch success to 77 % (= 95 – 18) hatching success and that effects concentration can be estimated and is presumably of greater interest.
Procedurile recomandate pentru evaluarea caracteristicilor sexuale secundare la Pimephales promelas și la Oryzias latipes sunt disponibile în apendicele 5A și, respectiv, apendicele 5B.
This is not an issue with size measurements, though adverse effects on size generally mean a decrease in size.
Vitelogenina (VTG)
Models for Size (length or weight) and Egg Hatch Success or Larval Survival.
Se prelevează sânge din artera/vena caudală cu un tub capilar microhematocrit heparinizat sau, alternativ, printr-o puncție cardiacă cu ajutorul unei seringi.
Except for the Brain-Cousens hormetic model, all of these models are described and recommended in OECD (2006).
În funcție de mărimea peștelui, volumul de sânge prelevat se încadrează în general între 5 și 60 μl pe individ în cazul Pimephales promelas și între 5 și 15 μl pe individ în cazul peștelui-zebră.
What are called OECD 2-5, are also discussed for ecotoxicity experiments in Slob (2002).
Plasma este separată de sânge prin centrifugare și este depozitată cu inhibitori de protează la o temperatură de – 80 °C până când este analizată pentru a măsura vitelogenina.
There are, of course, many other models that might be useful.
Alternativ, în cazul Oryzias latipes se va utiliza ficatul, iar în cazul peștelui-zebră, omogenatul de cap/coadă poate fi utilizat ca țesut-sursă pentru determinarea vitelogeninei (apendicele 6).
Bunke, et al.
Măsurarea VTG trebuie să se bazeze pe o metodă ELISA omoloagă validată, utilizând un standard omolog de VTG și anticorpi omologi.
lists numerous models not included here and references to other models are plentiful.
Se recomandă utilizarea unei metode capabile să detecteze nivelurile de VTG de ordinul a câteva ng/ml de plasmă (sau ng/mg de țesut), care reprezintă nivelul de fond la masculii neexpuși.
Those listed below are suggested as particularly appropriate in ecotoxicity experiments and widely used.
Controlul calității măsurării vitelogeninei se va realiza prin utilizarea de soluții standard, de probe-martor și cel puțin de analize duplicat.
With 5 test concentrations plus control
Pentru fiecare metodă ELISA, trebuie efectuat un test al efectului matricial (efectul de diluție a probei) pentru a determina factorul de diluție minimă a probei.
Simple Exponential (OECD 2)
Vor fi analizate cel puțin două alicote (duplicate godeu) din fiecare diluție a probei.
Exponential with shape parameter (OECD 3)
Duplicatele godeu care diferă cu un procent mai mare de 20 % trebuie reanalizate.
Simple Exponential with Lower Bound (OECD 4)
Coeficientul de corelație (R2) al curbelor de calibrare trebuie să fie mai mare de 0,99.
With 6 or more test concentrations plus control
Cu toate acestea, o corelație mare nu este suficientă pentru a garanta o predicție adecvată a concentrației pentru toate intervalele.
Exponential with shape parameter and lower bound (OECD 5)
Pe lângă o corelație suficient de mare pentru curba de calibrare, concentrația fiecărei soluții standard, calculată pornind de la curba de calibrare, trebuie să se încadreze între 70 % și 120 % din concentrația sa nominală.
Where there is visual evidence of hormesis (unlikely with egg hatch success or larval survival, but sometimes observed in size observations)
În cazul în care concentrațiile nominale tind să se îndepărteze de linia de regresie a calibrării (de exemplu, spre concentrații mai mici), poate fi necesară împărțirea curbei de calibrare în intervale de concentrații mici și mari sau utilizarea unui model neliniar pentru a ajusta în mod adecvat datele privind absorbanța.
Brain-Cousens Hormetic; Brain and Cousens (1989)
În cazul împărțirii curbei, ambele segmente de linie trebuie să aibă valoarea R2 > 0,99.
Alternative models for egg hatch failure and larval mortality
Limita de detecție (LOD) este definită ca fiind cea mai mică concentrație a soluției standard analitice, iar limita de cuantificare (LOQ) este definită ca fiind cea mai mică concentrație a soluției standard analitice înmulțită cu cel mai mic factor de diluție.
Increasing models for these responses can be fit by probit (or logistic) models if there is no evidence of extra-binomial variance and control incidence is estimated in the model fit.
În fiecare zi în care sunt efectuate măsurări ale vitelogeninei se va analiza o probă fortificată utilizând un standard de referință intertest (apendicele 7).
This is not the preferred method, as it treats the individual, not the replicate, as the unit of analysis (Morgan 1992, O'Hara Hines and Lawless 1993, Collett 2002, 2003).
Raportul dintre concentrația preconizată și concentrația măsurată va fi raportat împreună cu rezultatele fiecărui set de teste efectuate în ziua respectivă.
Goodness of fit of a single model
Evaluarea histopatologică a gonadelor
Visually compare observed and predicted percent decrease at each test concentration (Motulsky and Christopoulos 2004, Draper and Smith 1999).
Autoritățile de reglementare pot solicita efectuarea unei analize histopatologice a gonadelor în vederea studierii organului țintă pe axul HPG în urma expunerii la substanța chimică.
Compare regression error mean square against the pure error mean square using an F-test (Draper and Smith 1999).
În acest sens, gonadele sunt fixate fie în întregime, fie disecate.
Check that every term in the model is significantly different from zero (i.e., determine whether all model terms are important), (Motulsky and Christopoulos 2004).
În cazul în care examenul histopatologic este necesar, se vor căuta anumite răspunsuri cu caracter endocrin în evaluarea activității endocrine a substanței chimice testate.
Plots of residuals from regression vs. test concentration, possibly on a log(conc) scale.
Aceste răspunsuri de diagnosticare includ, în principal, prezența oocitelor testiculare, hiperplazia celulei Leydig, spermatogonie mărită și hiperplazia zonei perifoliculare.
There should be no pattern to this plot; the points should be randomly scattered about a horizontal line at zero height.
Alte leziuni ale gonadei precum atrezia oocitelor, degenerarea testiculară și schimbările de stadiu pot avea la bază cauze diverse.
The data should be evaluated for normality and variance homogeneity in the same way as indicated in Appendix 5.
Documentul de orientare privind examinarea histopatologică a gonadelor de pește precizează procedurile care vor fi utilizate la disecția, fixarea, secționarea și examinarea histopatologică a gonadelor (22).
In addition, normality of the residuals about the regression model should be assessed using the same methods indicated in Appendix 5 for the residuals from ANOVA
Evaluarea răspunsurilor biomarkerilor prin analiza varianței (ANOVA)
Compare models
Pentru a identifica activitatea potențială a unei substanțe chimice, răspunsurile grupurilor tratate sunt comparate cu cele ale grupurilor de control utilizând analiza varianței (ANOVA).
Use Akiake's AICc criteria.
În cazul în care se utilizează un solvent de control, trebuie efectuat un test statistic corespunzător între apa de diluție și solventul de control pentru fiecare parametru final studiat.
Smaller AICc values denote better fits and if AICc(B)-AICc(A)≥10, the model A is almost certainly better than model B (Motulsky and Christopoulos (2004).
Orientări cu privire la interpretarea datelor referitoare la apa de diluție și solventul de control în cadrul analizei statistice ulterioare sunt disponibile în OCDE, 2006c (28).
Compare the two models visually by how well they meet the single model criteria above.
Toate datele privind răspunsurile biologice trebuie analizate și raportate separat per sex.
The confidence interval (CI) for ECx should not be too wide.
Pot fi utilizate alte teste statistice (de exemplu, testul Jonckheere-Terpstra sau testul Williams) în cazul în care raportul doză-răspuns este aproximativ monoton.
Statistical judgment is needed in deciding how wide the confidence interval can be and ECx still be useful.
În apendicele 8 este furnizată o diagramă statistică pentru a contribui la luarea unei decizii cu privire la alegerea testului statistic cel mai adecvat pentru a fi utilizat.
Simulations for regression models fit to egg hatching and size data show that about 75 % of confidence intervals for ECx (x = 10, 20 or 30) span no more than two test concentrations.
Informații suplimentare pot fi obținute, de asemenea, din Documentul OCDE privind metodele actuale de analiză statistică a datelor de ecotoxicitate (28).
This provides a general guide for what is acceptable and a practical guide for what is achievable.
Raportarea rezultatelor testului
Numerous authors assert the need to report confidence intervals for all model parameters and that wide confidence intervals for model parameters indicate unacceptable models (Ott and Longnecker 2008, Alvord and Rossio 1993, Motulsky and Christopoulos 2004, Lyles et al.
Datele studiului trebuie să includă:
2008, Seber and Wild 2003, Bunke et al.
Facilitatea de testare:
1999, Environment Canada 2005).
Personalul responsabil și responsabilitățile sale în cadrul studiului
The CI for ECx (or any other model parameter) should not contain zero (Motulsky and Christopoulos 2004).
Fiecare laborator trebuie să își fi demonstrat competența prin utilizarea unei game de substanțe chimice reprezentative
This is the regression equivalent the minimum significant difference that is often cited in hypothesis testing approaches (e.g. Wang et al 2000).
Caracterizarea substanței chimice de testare
It also corresponds to the confidence interval for the mean responses at the LOEC not contain the control mean.
Natura fizică și proprietățile fizico-chimice relevante
One should wonder whether the parameter estimates are scientifically plausible.
Metoda și frecvența preparării concentrațiilor de testare
E.g. if the confidence interval for y0 is ± 20 %, no EC10 estimate is plausible.
Informații privind stabilitatea și biodegradabilitatea
If the model predicts a 20 % effect at a concentration C and the maximum observed effect at C and lower concentrations is 10 %, then the EC20 is not plausible (Motulsky and Christopoulos 2004, Wang et al.
Caracterizarea solventului (natura, concentrația utilizată)
2000, Environment Canada 2005).
Justificarea alegerii solventului (în cazul în care acesta nu este apa)
ECx should not require extrapolation outside the range of positive concentrations (Draper and Smith 1999, OECD 2006).
Specia și subspecia
For example, a general guide might be for ECx to be no more than about 25 % below the lowest tested concentration or above the highest tested concentration.
Furnizorul și unitatea specifică a furnizorului
Brain P. and Cousens R. (1989); An equation to describe dose responses where there is stimulation of growth at low doses.
Vârsta peștilor la începutul testului și stadiul de reproducere/de eliberare a gameților
Weed res.
Detalii cu privire la procedura de aclimatizare a animalelor
29: 93-96.
Greutatea corporală a peștilor la începutul expunerii (dintr-un subeșantion din stocul de pești)
OECD (2006); Current approaches in the statistical analysis of ecotoxicity data: A guidance to application.
Procedura de testare utilizată (tipul testului, rata de încărcare, densitatea populației etc.);
Series Testing and Assessment, No. 54, Organisation for Economic Co-operation and Development, OECD, Paris.
Metoda de preparare a soluțiilor stoc și debitul;
C.48 Fish Short Term Reproduction Assay
Concentrațiile nominale de testare, concentrațiile soluțiilor de testare testate săptămânal și metoda analitică utilizată, mediile valorilor măsurate și deviațiile standard în vasele de testare și dovada faptului că măsurătorile se referă la concentrațiile substanței chimice de testare în soluție reală;
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 229 (2012).
Caracteristicile apei de diluție (incluzând pH, duritate, alcalinitate, temperatură, concentrația oxigenului dizolvat, nivelurile de clor rezidual, carbonul organic total, solidele în suspensie și orice altă măsurătoare efectuată)
The need to develop and validate a fish assay capable of detecting endocrine active chemicals originates from the concerns that environmental levels of chemicals may cause adverse effects in both humans and wildlife due to the interaction of these chemicals with the endocrine system.
Calitatea apei din vasele de testare: pH, duritate, temperatură și concentrația oxigenului dizolvat;
In 1998, the OECD initiated a high-priority activity to revise existing guidelines and to develop new guidelines for the screening and testing of potential endocrine disruptors.
Informații detaliate privind hrănirea [de exemplu, tipul de aliment (alimente), sursa, cantitatea furnizată, frecvența și analizele privind contaminanți relevanți, dacă sunt disponibile (de exemplu, BPC, HAP și pesticide organoclorurate)].
One element of the activity was to develop a test guideline for the screening of chemicals active on the endocrine system of fish species.
Dovada că soluțiile de control îndeplinesc criteriile de acceptare a testului;
The Fish Short Term Reproduction Assay underwent an extensive validation programme consisting of inter-laboratory studies with selected chemicals to demonstrate the relevance and reliability of the assay for the detection of chemicals that impact reproduction in fish by various mechanisms including endocrine modalities (1, 2, 3, 4, 5).
Datele privind mortalitățile pentru fiecare nivel de concentrație de testare și pentru fiecare control;
All endpoints of the OECD test guideline have been validated on the fathead minnow, and a subset of endpoints has been validated in the Japanese medaka (i.e. vitellogenin and secondary sex characteristics) and the zebrafish (i.e. vitellogenin).
Tehnicile de analiză statistică utilizate, prelucrarea datelor și justificarea tehnicilor utilizate;
The validation work has been peer-reviewed by a panel of experts nominated by the National Coordinators of the OECD Test Guideline Programme (6) in part, and by an independent panel of experts commissioned by the United States Environmental Protection Agency (29).
Datele privind observațiile biologice de morfologie macroscopică, inclusiv caracteristicile sexuale secundare, producția de ouă și vitelogenina;
The assay is not designed to identify specific mechanisms of hormonal disruption because the test animals possess an intact hypothalamic-pituitary-gonadal (HPG) axis, which may respond to chemicals that impact on the HPG axis at different levels.
Rezultatele analizelor datelor, de preferință sub formă de tabele și de grafice;
This test method describes an in vivo screening assay where sexually mature male and spawning female fish are held together and exposed to a chemical during a limited part of their life-cycle (21 days).
Incidența oricărei reacții neobișnuite a peștilor și a oricărui efect vizibil provocat de substanța chimică de testare
At termination of the 21-day exposure period, two biomarker endpoints are measured in males and females as indicators of endocrine activity of the test chemical; these endpoints are vitellogenin and secondary sexual characteristics.
ORIENTĂRI PENTRU INTERPRETAREA ȘI ACCEPTAREA REZULTATELOR TESTULUI
Vitellogenin is measured in fathead minnow, Japanese medaka and zebrafish, whereas secondary sex characteristics are measured in fathead minnow and Japanese medaka.
Această secțiune include unele considerații care trebuie avute în vedere pentru interpretarea rezultatelor testului în ceea ce privește diferiții parametri măsurați.
Additionally, quantitative fecundity is monitored daily throughout the test.
Rezultatele trebuie interpretate cu precauție în cazul în care substanța chimică de testare pare a cauza semne evidente de toxicitate sau a afecta starea generală a animalului testat.
Gonads are also preserved and histopathology may be evaluated to assess the reproductive fitness of the test animals and to add to the weight of evidence of other endpoints.
La stabilirea intervalului de concentrații de testare, nu trebuie să se depășească concentrația maximă tolerată pentru a permite o interpretare corespunzătoare a datelor.
This bioassay serves as an in vivo reproductive screening assay and its application should be seen in the context of the “OECD Conceptual Framework for the Testing and Assessment of Endocrine Disrupting Chemicals” (30).
Este important să se aplice cel puțin un tratament care să nu prezinte semne ale unor efecte toxice.
In this Conceptual Framework the Fish Short Term Reproduction Assay is proposed at Level 3 as an in vivo assay providing data about selected endocrine mechanism(s)/pathway(s).
Semnele de boală și semnele unor efecte toxice trebuie evaluate și raportate în detaliu.
Vitellogenin (VTG) is normally produced by the liver of female oviparous vertebrates in response to circulating endogenous oestrogen.
De exemplu, producția de VTG la femele poate fi afectată, de asemenea, de toxicitatea generală și de modurile de acțiune toxice non-endocrine, de exemplu hepatotoxicitate.