natgillin/translations-raw huggingface dataset:
In that case, the remaining body will be cut off between anterior region of anal fin and anal using razor (red bar), and the head side of fish body will be put into the fixing solution for gonad and the tail side of the fish body will be put into the 10 % neutral buffered formalin.
În cazul în care se respinge o placă întreagă, capacitatea de a evalua și de a distinge efectele observate ar putea să fie îngreunată, în special în cazul în care placa respinsă este cea de control cu solvent sau o placă în care embrionii tratați sunt de asemenea afectați.
Papillary processes normally appear only in adult males and are found on fin rays from the second to the seventh or eighth counting from the posterior end of the anal fin (Fig.1 and 2).
În primul caz, testul trebuie repetat.
However, processes rarely appear on the first fin ray from the posterior end of the anal fin.
În cel de al doilea caz, pierderea unui grup/mai multor grupuri supus(e) tratamentului datorită mortalității controlului intern poate să limiteze abilitatea de a evalua efectele și de a determina valorile LC50.
This SOP covers the measurement of processes on the first fin ray (the fin ray number refers to the order from the posterior end of the anal fin in this SOP).
Un control pozitiv la o concentrație fixă de 4 mg/l 3,4-dicloranilină se efectuează pentru fiecare lot de ouă utilizate pentru testare.
RECOMMENDED PROCEDURES FOR SAMPLE COLLECTION FOR VITELLOGENIN ANALYSIS
În cazul în care se utilizează un solvent, un grup suplimentar de 20 de embrioni este expus solventului pe o placă separată cu 24 de godeuri, servind astfel drept probă de control cu solvent.
Care should be taken to avoid cross-contamination between VTG samples of males and females.
Pentru ca testul să fie considerat acceptabil, trebuie să se demonstreze că solventul nu are efecte semnificative asupra momentului de eclozare, asupra supraviețuirii și că nu produce alte efecte adverse asupra embrionilor (a se vedea punctul 8c).
Procedure 1A:
Începerea expunerii și durata testului
Fathead Minnow, Blood Collection from the Caudal Vein/Artery
Testul începe cât mai curând posibil după fertilizarea ouălor și se încheie după 96 de ore de expunere.
After anaesthetisation, the caudal peduncle is partially severed with a scalpel blade and blood is collected from the caudal vein/artery with a heparinised microhematocrit capillary tube.
Embrionii trebuie să fie imersați în soluțiile de testare înainte de diviziunea blastodiscului sau cel târziu până în stadiul diviziunii în 16 celule.
After the blood has been collected, the plasma is quickly isolated by centrifugation for 3 min at 15000 g (or alternatively for 10 min. at 15000 g at 4 °C).
Pentru a începe expunerea cu o întârziere minimă, cel puțin de două ori mai multe ouă necesare pentru fiecare grup supus tratamentului sunt alese aleatoriu și transferate în concentrațiile și controalele respective (de exemplu, în 100 ml de vase de cristalizare; ouăle trebuie să fie complet acoperite) nu mai târziu de 90 de minute după fertilizare.
If desired, percent haematocrit can be determined following centrifugation.
Ouăle fecundate viabile trebuie separate de ouăle nefertilizate și transferate în plăci cu 24 de godeuri condiționate în prealabil timp de 24 de ore și reumplute cu 2 ml/godeu de soluții de testare proaspăt pregătire în cel mult 180 de minute după fertilizare.
The plasma portion is then removed from the microhematocrit tube and stored in a centrifuge tube with 0,13 units of aprotinin (a protease inhibitor) at – 80 °C until determination of VTG can be made.
Cu ajutorul stereomicroscopiei (de preferință cu o capacitate de mărire de ≥30), se vor selecta ouăle fertilizate supuse divizării și care nu prezintă iregularități evidente în timpul divizării (de exemplu, asimetrie, formare de vezicule) sau leziuni ale corionului.
Depending on the size of the fathead minnow (which is sex-dependent), collectable plasma volumes generally range from 5 to 60 microliters per fish (Jensen et al.
Pentru colectarea de ouă și separare, a se vedea apendicele 3 figurile 1 și 3, precum și apendicele 4 figura 2.
2001).
Distribuția de ouă pe plăcile cu 24 de godeuri
Procedure 1B:
Ouăle se distribuie în plăci cu godeuri în următoarele numere (a se vedea, de asemenea, apendicele 4 figura 1)
Fathead Minnow, Blood Collection from Heart
20 de ouă pe o placă pentru fiecare concentrație de testare;
Alternatively, blood may also be collected by cardiac puncture using a heparinised syringe (1000 units of heparin per ml).
20 de ouă ca și control solvent pe o placă (dacă este necesar);
The blood is transferred into Eppendorf tubes (held on ice) and then centrifuged (5 min, 7000 g, room temperature).
20 de ouă ca și control pozitiv pe o placă;
The plasma should be transferred into clean Eppendorf tubes (in aliquots if the volume of plasma makes this feasible) and promptly frozen at – 80 °C, until analysed (Panter et al., 1998).
4 ouă în apă de diluție în calitate de control intern pe fiecare dintre plăcile de mai sus;
Procedure 2A:
24 de ouă în apă de diluție în calitate de control negativ pe o placă.
Japanese Medaka, Excision of the Liver in Medaka
Observațiile apicale efectuate pe fiecare embrion testat includ: coagularea embrionilor, lipsa formării de somite, lipsa desprinderii cozii și lipsa bătăilor inimii (tabelul 1).
Removal of the test fish from the test chamber
Aceste observații sunt utilizate pentru a determina letalitatea: Orice rezultat pozitiv pentru oricare dintre aceste observații indică faptul că embrionul de pește-zebră este mort.
Test fish should be removed from the test chamber using the small spoon-net.
Suplimentar, se înregistrează eclozarea în grupurile supuse tratamentului și în grupurile de control în fiecare zi începând după 48 de ore.
Be careful not to drop the test fish into other test chambers.
Observațiile sunt înregistrate odată la 24 de ore, până la finalul testului.
In principle, the test fish should be removed in the following order: control, solvent control (where appropriate), lowest concentration, middle concentration, highest concentration and positive control.
Observațiile apicale de toxicitate acută la embrionii de pește-zebră la 24-96 de ore după fertilizare
In addition, all males should be removed from one test chamber before the remaining females are removed.
Timpi de expunere
The sex of each test fish is identified on the basis of external secondary sex characteristics (e.g. the shape of the anal fin).
24 de ore
Place the test fish in a container for transport and carry it to the workstation for excision of the liver.
48 de ore
In this case, the sex should be identified by observing the gonad or secondary sex characteristics under a stereoscopic microscope.
Embrioni coagulați
After the test fish is anesthetised, transfer the test fish on the filter paper (or a paper towel) using tweezers (commodity type).
Absența bătăilor inimii
When grasping the test fish, apply the tweezers to the sides of the head to prevent breaking the tail.
Coagularea embrionului: Embrionii coagulați au o culoare alb-lăptos și par întunecați la microscop (a se vedea apendicele 5 figura 1).
Wipe the water on the surface of the test fish on the filter paper (or the paper towel).
Numărul de embrioni coagulați se determină după 24, 48, 72 și 96 de ore.
Then make a small transverse incision partway between the ventral neck region and the mid-abdominal region using dissection scissors.
Mișcările spontane indică formarea de somite.
Insert the dissection scissors into the small incision, and incise the abdomen from a point caudal to the branchial mantle to the cranial side of the anus along the midline of the abdomen.
Absența somitelor se înregistrează după 24, 48, 72 și 96 de ore.
Be careful not to insert the dissection scissors too deeply so as to avoid damaging the liver and gonad.
Lipsa formării de somite după 24 de ore ar putea fi datorată unei întârzieri generale de dezvoltare.
Conduct the following operations under the stereoscopic microscope.
Cel târziu după 48 de ore, formarea de somite ar trebui să fie dezvoltată.
Place the test fish abdomen side up on the paper towel (glass Petri dish or slide glass are also available).
Dacă nu, embrionii sunt considerați morți.
Extend the walls of the abdominal cavity with precision tweezers and exteriorise the internal organs.
Lipsa desprinderii cozii: La un embrion de pește-zebră dezvoltat normal, desprinderea cozii (a se vedea apendicele 5 figura 3) de sac se observă în urma elongării posterioare a corpului embrionic.
It is also acceptable to exteriorise the internal organs by removing one side of the wall of the abdominal cavity if necessary.
Absența desprinderii cozii este înregistrată după 24, 48, 72 și 96 de ore.
Expose the connected portion of the liver and gallbladder using another pair of precision tweezers.
Absența bătăilor inimii: La un embrion de pește-zebră dezvoltat normal la o temperatură de 26 ± 1 °C, pulsul este vizibil după 48 de ore (a se vedea apendicele 5 figura 4).
Then grasp the bile duct and cut off the gallbladder.
Se va acorda o atenție deosebită atunci când se înregistrează acest punct final, având în vedere că bătăile neregulate nu trebuie să fie considerate letale.
Excise the caudal gastrointestinal tract from the anus and remove the tract from the abdominal cavity.
Ratele de eclozare ale tuturor grupurilor supuse tratamentului și ale celor de control trebuie înregistrate și raportate începând după 48 de ore.
Trim the mass of fat and other tissues from the periphery of the liver.
Deși eclozarea nu constituie un punct final folosit pentru calcularea LC50, aceasta asigură expunerea embrionului fără o potențială funcție de blocare a corionului, ceea ce ar putea contribui la interpretarea datelor.
Using the precision tweezers, remove any additional fat and extraneous tissue (e.g. abdominal lining), if needed, from the surface of the liver.
În sistemele de reînnoire în regim semistatic, pH-ul trebuie măsurat înainte și după reînnoirea apei.
Measure the liver weight with 1,5 ml microtube as a tare using an electronic analytical balance.
Se măsoară concentrația de oxigen dizolvat la sfârșitul testului în probele de control negativ și concentrația cea mai mare de testare cu embrioni viabili, unde trebuie să fie în conformitate cu criteriile de validitate a testului (a se vedea punctul 8f).
Record the value on the worksheet (read: 0,1 mg).
În cazul în care există preocupări că temperatura variază în rândul plăcilor cu 24 de godeuri, temperatura este măsurată în trei vase selectate în mod aleatoriu.
Close the cap of the microtube containing the liver.
Într-un sistem static, concentrația substanței chimice de testare trebuie să fie măsurată cel puțin în cea mai scăzută și cea mai mare concentrație de testare, dar de preferință în toate tratamentele, la începutul și la sfârșitul testului.
Store it in a cooling rack (or ice rack).
La testele (de reînnoire) în regim semistatic, în cazul în care concentrația substanței chimice de testare este preconizată să rămână în intervalul de ± 20 % din valorile nominale, se recomandă, cel puțin, ca cea mai mare și cea mai scăzută concentrație de testare să fie analizate atunci când sunt proaspăt pregătite și imediat înainte de reînnoire.
Following the excision of one liver, clean the dissection instruments or replace them with clean ones.
La testele în care concentrația substanței testate nu se preconizează să rămână în intervalul de ± 20 % din valoarea nominală, toate concentrațiile de testare trebuie analizate atunci când sunt proaspăt preparate și imediat înainte de reînnoire.
Remove livers from all of the fish in the transport container as described above.
În cazul unui volum insuficient pentru analiză, se poate dovedi utilă fuzionarea soluțiilor de testare sau utilizarea unor camere surogat din același material și cu același raport volum/suprafață ca plăcile cu 24 de godeuri.
When the livers are donated for pre-treatment shortly after the excision, the specimens are carried to the next workstation in a cooling rack (or ice rack).
Atunci când concentrațiile nu se încadrează în intervalul de 80-120 % din concentrația nominală, concentrațiile de efect trebuie exprimate în legătură cu media geometrică a concentrațiilor măsurate; pentru detalii suplimentare a se vedea capitolul 5 din Documentul de orientare al OCDE privind testarea toxicității acvatice a substanțelor și amestecurilor dificile (28).
Following liver excision, the fish carcass is available for gonad histology and measurement of secondary sex characteristics.
TEST LA VALORI-LIMITĂ
Specimen
Folosind procedurile descrise în această metodă de testare, un test la valori-limită poate fi efectuat la 100 mg/l din substanța chimică de testare sau la limita sa de solubilitate în mediul de testare (oricare este mai scăzută) pentru a demonstra că LC50 este mai mare decât această concentrație.
Store the liver specimens taken from the test fish at ≤ – 70 °C if they are not used for the pre-treatment shortly after the excision.
Testul la valori-limită trebuie să se efectueze folosind 20 de embrioni aflați sub tratament, controlul pozitiv și – dacă este necesar – în controlul solvent și 24 de embrioni în controlul negativ.
A cut is made just anterior to pectoral fins with scissors
În cazul în care procentul de letalitate la concentrația testată depășește mortalitatea în controlul negativ (sau controlul solvent) cu 10 %, se efectuează un studiu complet.
The midline of abdomen is incised with scissors to a point approximately 2 mm cranial to the anus
Trebuie înregistrate toate efectele observate.
The abdominal walls are spread with forceps for exposure of the liver and other internal organs
În cazul în care mortalitatea depășește 10 % în controlul negativ (sau controlul solvent), testul devine nul și trebuie repetat.
(Alternatively, the abdominal walls may be pinned laterally).
În cadrul acestui test, godeurile individuale sunt considerate duplicate independente pentru analiza statistică.
Arrow shows liver
Procentele de embrioni pentru care cel puțin una dintre observațiile apicale este pozitivă în 48 și/sau 96 de ore sunt reprezentate față de concentrațiile de testare.
The liver is bluntly dissected and excised using forceps
Pentru a calcula pantele curbei, valorile LC50 și limitele de încredere (95 %), se vor aplica metode statistice adecvate (38) și se va consulta Documentul de orientare al OCDE privind abordările curente în analiza statistică a datelor de ecotoxicitate (39).
Figure 5
datele de identificare chimică, precum denumirea IUPAC sau CAS, numărul CAS sau codul său InChI, formula structurală, puritatea, identitatea chimică a impurităților, după cum este necesar și fezabil din punct de vedere practic etc. (inclusiv conținutul în carbon organic, dacă este necesar).
The intestines are gently retracted using forceps
Organisme de testare:
Figure 6
procedura de testare utilizată (de exemplu, reînnoire semistatică);
Figure 8
concentrația oxigenului dizolvat, pH, duritate totală, temperatura și conductivitatea soluțiilor de testare la început și după 96 de ore;
The completed procedure
metoda de preparare a soluțiilor stoc și a soluțiilor de testare, precum și frecvența de reînnoire;
Procedure 2 B:
justificarea utilizării unui solvent și justificarea alegerii solventului, dacă este altul decât apa;
Japanese Medaka (Oryzias latipes), Liver Pre-treatment for Vitellogenin Analysis
concentrațiile de testare nominale și rezultatul tuturor analizelor pentru determinarea concentrației substanței de testare în vasele de testare; eficiența de recuperare a metodei și limita de cuantificare (LoQ) trebuie raportate, de asemenea;
Take the bottle of homogenate buffer from the ELISA kit and cool it with crushed ice (temperature of the solution: ≤ 4°C).
date care să demonstreze că s-au îndeplinit criteriile de validitate a ratei de supraviețuire globală în cazul probelor de control;
If homogenate buffer from EnBio ELISA system is used, thaw the solution at room temperature, and then cool the bottle with crushed ice.
rata de fertilizare a ouălor;
Calculate the volume of homogenate buffer for the liver on the basis of its weight (add 50 μl of homogenate buffer per mg liver weight).
rata de eclozare în grupul supus tratamentului și cel de control.
For example, if the weight of the liver is 4,5 mg, the volume of homogenate buffer for the liver is 225 μl.
concentrația maximă care nu provoacă mortalitate pe durata testului;
Prepare a list of the volume of homogenate buffer for all livers.
concentrația minimă care provoacă o mortalitate de 100 % pe durata testului;
Preparation of the liver for pre-treatment
mortalitatea cumulată pentru fiecare concentrație la momentele de observare recomandate;
Take the 1,5 ml microtube containing the liver from the freezer just before the pre-treatment.
valorile LC50 la 96 de ore (și opțional la 48 de ore) pentru mortalitate cu limite de încredere de 95 %, dacă este posibil;
Pre-treatment of the liver from males should be performed before females to prevent vitellogenin contamination.
graficul curbei concentrație-mortalitate la sfârșitul testului;
In addition, the pre-treatment for test groups should be conducted in the following order: control, solvent control (where appropriate), lowest concentration, middle concentration, highest concentration and positive control.
mortalitatea din cadrul probelor de control (controale negative, plăci de control intern, precum și control pozitiv și orice fel de control cu solvent utilizat);
The number of 1,5 ml microtubes containing liver samples taken from the freezer at a given time should not exceed the number that can be centrifuged at that time.
date privind rezultatul fiecăreia dintre cele patru observații apicale;
Arrange the 1,5 ml microtubes containing liver samples in the order of specimen number on the ice rack (no need to thaw the liver).
incidența și descrierea anomaliilor morfologice și fiziologice, dacă este cazul (a se vedea exemplele din apendicele 5 figura 2);
Operation of the pre-treatment
incidente care au survenit pe parcursul testului și care ar fi putut influența rezultatele;
Addition of the homogenate buffer
analiza statistică și interpretarea datelor (analiza probit, modelul de regresie logistică și media geometrică pentru LC50);
Check the list for the volume of the homogenate buffer to be used for a particular sample of liver and adjust the micropipette (volume range: 100-1000 μl) to the appropriate volume.
panta și limitele de încredere ale regresiei curbei (transformate) concentrație-răspuns.
Attach a clean tip to the micropipette.
Orice abatere de la metoda de testare și explicațiile relevante.
Take the homogenate buffer from the reagent bottle and add the buffer to the 1,5 ml microtube containing the liver.
Discutarea și interpretarea rezultatelor.
Add the homogenate buffer to all of 1,5 ml microtubes containing the liver according to the procedure described above.
Series on Testing and Assessment No. 157, OECD, Paris.
There is no need to change the micropipette tip to a new one.
Environmental Toxicology and Chemistry 32: 1768-1783.
However, if the tip is contaminated or suspected to be contaminated, the tip should be changed.
Capitolul C.4 din prezenta anexă: Biodegradabilitate rapidă.
Homogenisation of the liver
Capitolul C.29 din prezenta anexă: Biodegradabilitate rapidă, CO2 în vase sigilate.
Attach a new pestle for homogenisation to the microtube homogeniser.
Capitolul C.48 din prezenta anexă: Test de reproducere cu durată scurtă la pești.
Insert the pestle into the 1,5 ml microtube.
A se vedea apendicele 4a.
Hold the microtube homogeniser to press the liver between the surface of the pestle and the inner wall of the 1,5 ml microtube.
European Union (2010) Directive 2010/63/EU of the European Parliament and Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes.
Operate the microtube homogeniser for 10 to 20 seconds.
OJ L 276, 20.10.2010, p.
Cool the 1,5 ml microtube with crushed ice during the operation.
33.
Lift up the pestle from the 1,5 ml microtube and leave it at rest for about 10 seconds.
Capitolul C.2 din prezenta anexă: Daphnia sp., test de imobilizare acută.
Then conduct a visual check of the state of the suspension.
Detailed review paper „Fish embryo toxicity assays”.
If pieces of liver are observed in the suspension, repeat the operations (3) and (4) to prepare satisfactory liver homogenate.
Punct final apical
Cool the suspended liver homogenate on the ice rack until centrifugation.
care provoacă efecte la nivel de populație.
Change the pestle to the new one for each homogenate.
Blastulă
Homogenise all livers with homogenate buffer according to the procedure described above.
o formațiune celulară în jurul polului animal care acoperă o anumită parte a sacului.
Centrifugation of the suspended liver homogenate
o substanță sau un amestec
Confirm the temperature of the refrigerated centrifuge chamber at ≤ 5 °C.
Epibolie
Insert the 1,5 ml microtubes containing the suspended liver homogenate in refrigerated centrifuge (adjust the balance if necessary).
o proliferare masivă a celulelor predominant epidermale în faza de gastrulație a embrionului și mișcarea acestora dinspre partea dorsală către cea ventrală, prin care straturile celulei entodermale sunt internalizate într-un proces asemănător invaginației, iar sacul este încorporat în embrion.
Centrifuge the suspended liver homogenate at 13000 g for 10 min at ≤ 5 °C.
Test în regim dinamic
However, if the supernatants are adequately separated, centrifugal force and time may be adjusted as needed.
un test cu flux continuu de soluții de testare prin sistemul de testare pe parcursul perioadei de expunere.
Following centrifugation, check that the supernatants are adequately separated (surface: lipid, intermediate: supernatant, bottom layer: liver tissue).
Placă de control intern
If the separation is not adequate, centrifuge the suspension again under the same conditions.
controlul intern constând în 4 godeuri umplute cu apă de diluție per placa cu 24 de godeuri pentru a identifica o potențială contaminare a plăcilor de către producător sau de către cercetător pe durata procedurii, precum și orice efect de placă ce ar putea să influențeze rezultatul testului (de exemplu, gradient de temperatură).
Remove all specimens from the refrigerated centrifuge and arrange them in the order of specimen number on the ice rack.
Uniunea internațională de chimie pură și aplicată
Be careful not to resuspend each separated layer after the centrifugation.
Apa de întreținere
Collection of the supernatant
apa în care are loc creșterea peștelui adult.
Place four 0,5 ml microtubes for storage of the supernatant into the tube rack.
Concentrația letală medie (LC50)
Collect 30 μl of each supernatant (separated as the intermediate layer) with the micropipette and dispense it to one 0,5 ml microtube.
concentrația unui produs chimic de testare care este considerat letal pentru 50 % din organismele testate pe durata testului.
Be careful not to collect the lipid on the surface or the liver tissue in the bottom layer.
Test de reînnoire semistatic
Collect the supernatant and dispense it to other two 0,5 ml microtubes in the same manner as described above.
un test cu reînnoirea periodică a soluțiilor de testare după perioade definite (de exemplu, la fiecare 24 de ore).
Collect the rest of the supernatant with the micropipette (if feasible: ≥ 100 μl).
Specificație pentru înregistrarea simplificată a structurii moleculare sub formă de text liniar.
Then dispense the supernatant to the remaining 0,5 ml microtube.
în procesul de dezvoltare a embrionului vertebrat, somitele constituie mase de mezoderm distribuite lateral de tubul neural, care se vor transforma ulterior în dermă (dermatom), mușchi scheletic (miotom) și vertebre (sclerotom).
Close the cap of the 0,5 ml microtube and write the volume of the supernatant on the label.
Test static
Then immediately cool the microtubes on the ice rack.
un test în care soluțiile de testare rămân neschimbate pe toată durata testului.
Change the tip of the micropipette to the new one for each supernatant.
orice substanță sau amestec testate cu ajutorul prezentei metode de testare.