natgillin/translations-raw huggingface dataset:
the use of a luciferase substrate with sufficient light output to ensure sufficient sensitivity and low variability.
există o relație doză-răspuns generală aparentă pentru inducția de luciferază (sau un răspuns bifazic astfel cum se menționează la punctul 33).
Plates with the cell lysate are then placed in the luminometer for reading which in the KeratinoSensTM assay is programmed to: (i) add the luciferase substrate to each well (i.e. 50 μl), (ii) wait for 1 second, and (iii) integrate the luciferase activity for 2 seconds.
Figura 1
In case alternative settings are used, e.g. depending on the model of luminometer used, these should be justified.
Modelul predictiv utilizat în cadrul testului KeratinoSensTM.
Furthermore, a glow substrate may also be used provided that the quality control experiment of Appendix 3 is successfully fulfilled.
O estimare KeratinoSensTM se ia în considerare în cadrul unei IATA și în conformitate cu dispozițiile de la punctele 9 și 11.
Cytotoxicity Assessment
În cazuri rare, substanțele chimice de testat care induc activitatea luciferazei la un nivel foarte apropiat de nivelurile citotoxice pot fi pozitive în anumite repetări la niveluri necitotoxice [și anume, concentrație determinantă CE1,5 sub nivelul (<) CI30] și în alte repetări numai la niveluri de citotoxicitate [și anume, concentrație determinantă CE1,5 mai mare (>) decât CI30].
For the KeratinoSensTM cell viability assay, medium is replaced after the 48 hour exposure time with fresh medium containing MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, Thiazolyl blue tetrazolium bromide; CAS No. 298-93-1) and cells incubated for 4 hours at 37 °C in the presence of 5 % CO2.
Astfel de substanțe chimice de testat se retestează cu o analiză a relației doză-răspuns mai limitată, utilizând un factor de diluție mai mic [de exemplu, 1,33 sau Ö2 (= 1,41) ori diluția dintre godeuri) pentru a determina dacă a avut loc sau nu inducție la niveluri citotoxice (9).
The MTT medium is then removed and cells are lysed (e.g. by adding 10 % SDS solution to each well) overnight.
Aspectul fizic, solubilitatea în apă, solubilitatea DMSO, masa moleculară și alte proprietăți fizico-chimice relevante, în măsura în care este posibil;
After shaking, the absorption is measured at i.e. 600 nm with a photometer.
Aspectul fizic, solubilitatea în apă, solubilitatea DMSO și alte proprietăți fizico-chimice relevante, în măsura în care este posibil;
The following parameters are calculated in the KeratinoSensTM assay:
Aspectul fizic, solubilitatea în apă, solubilitatea DMSO, masa moleculară și alte proprietăți fizico-chimice relevante, în măsura în care este posibil și dacă este cazul;
the maximal average fold induction of luciferase activity (Imax) value observed at any concentration of the tested chemical and positive control;
Martor negativ (vehicul)
the EC1,5 value representing the concentration for which induction of luciferase activity is above the 1,5 fold threshold (i.e. 50 % enhanced luciferase activity) was obtained; and
Identificare chimică, precum denumirea (denumirile) IUPAC sau CAS, numărul (numerele) CAS și/sau alți identificatori;
the IC50 and IC30 concentration values for 50 % and 30 % reduction of cellular viability.
Aspectul fizic, masa moleculară și proprietățile fizico-chimice relevante suplimentare în cazul în care se utilizează alți martori negativi/vehicule decât cei menționați în această metodă de testare și în măsura în care este posibil;
Fold luciferase activity induction is calculated by Equation 1, and the overall maximal fold induction (Imax) is calculated as the average of the individual repetitions.
Justificarea alegerii solventului pentru fiecare substanță chimică de testat.
Equation 1:
Condițiile metodei de testare
Fold induction
Descrierea metodei de testare utilizate;
Lsample
Linia celulară utilizată, condițiile de depozitare și sursa acesteia (de exemplu, instalația de la care a fost obținută);
Lblank
Numărul de pasaje și nivelul de confluență a celulelor utilizate pentru testare;
Lsolvent
Metoda utilizată pentru numărarea celulelor pentru însămânțare înainte de testare și măsurile luate pentru a asigura distribuția omogenă a numărului de celule (cf. punctul 20);
where
Luminometrul utilizat (de exemplu, modelul), inclusiv reglajele instrumentului, substratul de luciferază utilizat, precum și demonstrarea măsurătorilor corespunzătoare de luminiscență pe baza testului de control descris la apendicele 3;
L sample
Procedura utilizată pentru a demonstra performanțele de laborator la efectuarea metodei de testare (de exemplu, prin testarea unor substanțe de verificare) sau pentru a demonstra performanța reproductibilă a metodei de testare în timp.
is the luminescence reading in the test chemical well
Procedura de testare
L blank
Numărul de repetări și replici utilizate;
is the luminescence reading in the blank well containing no cells and no treatment
Concentrațiile substanței chimice de testat, procedura de aplicare și timpul de expunere utilizate (în cazul în care acestea diferă de cele recomandate)
L solvent
Prezentarea în formă tabelară a valorilor Imax, CE1,5 și ale viabilității (și anume, CI50, CI30) obținute pentru substanța chimică de testat și pentru martorul pozitiv la fiecare repetare, precum și valorile medii (Imax: valoarea medie; valorile CE1,5 și ale viabilității: valoarea medie geometrică) și DS calculate utilizând date din fiecare repetare individuală și o indicație privind clasificarea substanței chimice de testat conform modelului predictiv;
is the average luminescence reading in the wells containing cells and solvent (negative) control
Coeficientul de variație obținut din citirile luminiscenței pentru martorul negativ pentru fiecare experiment;
,5 is calculated by linear interpolation according to Equation 2, and the overall EC1,5 is calculated as the geometric mean of the individual repetitions.
Un grafic care descrie curbele doză-răspuns ale inducției activității luciferazei și viabilității;
Equation 2:
O descriere a oricăror alte observații relevante, dacă este cazul.
is the lowest concentration in μM with > 1,5 fold induction
Discutarea rezultatelor obținute cu ajutorul testului KeratinoSensTM;
is the highest concentration in μM with < 1,5 fold induction
Luarea în considerare a rezultatelor metodei de testare în contextul unei IATA, în cazul în care sunt disponibile alte informații relevante.
is the fold induction measured at the lowest concentration with > 1,5 fold induction (mean of three replicate wells)
Disponibil la: http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev05/05files_e.html.
is the fold induction at the highest concentration with < 1,5 fold induction (mean of three replicate wells)
Capitolul B.42 din prezenta anexă: Sensibilizare dermică: Testul local pe ganglioni limfatici.
Viability is calculated by Equation 3:
Capitolul B.50 din prezenta anexă: Sensibilizare dermică: Testul local pe ganglioni limfatici: DA.
Equation 3:
Capitolul B.51 din prezenta anexă: Sensibilizare dermică: Testul local pe ganglioni limfatici: BrdU-ELISA.
Viability
Recommendation on the KeratinoSensTM assay for skin sensitisation testing, 42 p.
Vsample
Disponibil la: http://ihcp.jrc.ec.europa.eu/our_labs/eurl-ecvam/eurl-ecvam-recommendations/recommendation-keratinosens-skin-sensitisation.
Vblank
DB-ALM (INVITTOX) (2013) Protocol 155: KeratinoSensTM., 17 p.
Vsolvent
Disponibil la: http://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/beta/index.cfm/methodsAndProtocols/index
V sample
Termenul este adesea utilizat în paralel cu termenul „concordanță” pentru a desemna proporția de rezultate corecte ale unei metode de testare (29).
is the MTT-absorbance reading in the test chemical well
Element de răspuns antioxidant (denumite, de asemenea EpRE, element de răspuns elecrofil) este un element de răspuns care se găsește în regiunea promotor amonte a multor gene citoprotective și fază II.
V blank
Atunci când sunt activate de către Nrf2, acestea mediază inducția transcripțională a genelor respective.
is the MTT-absorbance reading in the blank well containing no cells and no treatment
Concentrația interpolată pentru o inducție a luciferazei de 1,5 ori.
V solvent
Concentrație care are ca efect o reducere cu 30 % a viabilității celulare.
is the average MTT-absorbance reading in the wells containing cells and solvent (negative) control
Concentrație care are ca efect o reducere cu 50 % a viabilității celulare.
and IC30 are calculated by linear interpolation according to Equation 4, and the overall IC50 and IC30 are calculated as the geometric mean of the individual repetitions.
Factor maxim de inducție a activității luciferazei în comparație cu martorul solvent (negativ) măsurat la orice concentrație a substanței chimice de testat.
Equation 4:
Proteina 1 kelch asociată cu epiclorhidrina este o proteină senzor care poate reglementa activitatea Nrf2.
X is the % reduction at the concentration to be calculated (50 and 30 for IC50 and IC30)
În condițiilor neinduse, proteina senzor keap 1 declanșează factorul de transcripție Nrf2 pentru ubicuitinarea și degradarea proteolitică în proteazom.
is the lowest concentration in μM with > x % reduction in viability
Modificarea covalentă a reziduurilor reactive de cisteină ale keap 1 în molecule mici poate conduce la o disociere a nrf2 din keap 1 (8) (10) (11).
is the highest concentration in μM with < x % reduction in viability
Factor 2 nuclear rezultat din factorul eritroidului 2 este un factor de transcripție implicat în parcursul răspunsului antioxidant.
is the % viability at the lowest concentration with > x % reduction in viability
Atunci când Nrf2 nu este ubicuitinat, acesta se dezvoltă în citoplasmă și se translocă în nucleu, unde se combină cu ERA în regiunea promotor amonte a mai multor gene citoprotective, inițind transcripția acestora (8) (10) (11).
is the % viability at the highest concentration with < x % reduction in viability
Relevanța include luarea în considerare a acurateței (conformității) unei metode de testare (29).
For each concentration showing > 1,5 fold luciferase activity induction, statistical significance is calculated (e.g. by a two-tailed Student's t-test), comparing the luminescence values for the three replicate samples with the luminescence values in the solvent (negative) control wells to determine whether the luciferase activity induction is statistically significant (p < 0,05).
Aceasta se evaluează prin calcularea reproductibilității în același laborator sau între laboratoare și a repetabilității în același laborator (29).
The lowest concentration with > 1,5 fold luciferase activity induction is the value determining the EC1,5 value.
Acordul dintre rezultatele obținute în urma testării aceleiași substanțe chimice, utilizând același protocol de testare (a se vedea fiabilitatea) (29).
It is checked in each case whether this value is below the IC30 value, indicating that there is less than 30 % reduction in cellular viability at the EC1,5 determining concentration.
Proporția tuturor substanțelor chimice pozitive/active care sunt clasificate în mod corect prin metoda de testare.
It is recommended that data are visually checked with the help of graphs.
Acesta permite măsurarea acurateței unei metode de testare care conduce la rezultate clasificabile în categorii și constituie un aspect important în evaluarea relevanței unei metode de testare (29).
If no clear dose-response curve is observed, or if the dose-response curve obtained is biphasic (i.e. crossing the threshold of 1,5 twice), the experiment should be repeated to verify whether this is specific to the test chemical or due to an experimental artefact.
O replică ce conține toate componentele unui sistem de testare, cu excepția substanței chimice de testat, dar incluzând solventul utilizat.
In case the biphasic response is reproducible in an independent experiment, the lower EC1,5 value (the concentration when the threshold of 1,5 is crossed the first time) should be reported.
Este utilizat pentru a stabili nivelul de bază al reacției pentru probele tratate cu substanța chimică de testat dizolvată în același solvent.
In the rare cases where a statistically non-significant induction above 1,5 fold is observed followed by a higher concentration with a statistically significant induction, results from this repetition are only considered as valid and positive if the statistically significant induction above the threshold of 1,5 was obtained for a non-cytotoxic concentration.
Proporția tuturor substanțelor chimice negative/inactive clasificate corect prin metoda de testare.
Finally, for test chemicals generating a 1,5 fold or higher induction already at the lowest test concentration of 0,98 μM, the EC1,5 value of < 0,98 is set based on visual inspection of the dose-response curve.
Acesta permite măsurarea acurateței unei metode de testare care conduce la rezultate clasificabile în categorii și constituie un aspect important în evaluarea relevanței unei metode de testare (29).
The following acceptance criteria should be met when using the KeratinoSensTM assay.
O metodă de testare nu este niciodată valabilă într-un sens absolut, ci doar în legătură cu un scop definit (29).
First, the luciferase activity induction obtained with the positive control, cinnamic aldehyde, should be statistically significant above the threshold of 1,5 (e.g. using a T-test) in at least one of the tested concentrations (from 4 to 64 μM).
Sensibilizare cutanată in vitro: Metoda de testare a ERA-Nrf2 ale luciferazei
Second, the EC1,5 value should be within two standard deviations of the historical mean of the testing facility (e.g. between 7 μM and 30 μM based on the validation dataset) which should be regularly updated.
Înainte de utilizarea sistematică a acestei metode de testare, laboratoarele trebuie să demonstreze performanțele tehnice proprii prin obținerea în mod corect a estimării KeratinoSens™ pentru cele 10 substanțe de verificare recomandate în tabelul 1 și prin obținerea de valori pentru CE1,5 și CI50 care să se încadreze în plaja de valori de referință corespunzătoare pentru cel puțin 8 dintre cele 10 substanțe de verificare.
In addition, the average induction in the three replicates for cinnamic aldehyde at 64 μM should be between 2 and 8.
Substanțele de verificare au fost selectate pentru a reprezenta intervalul de reacții pentru pericolele sensibilizării cutanate.
If the variability is higher, results should be discarded.
Substanțe de verificare
Interpretation of results and prediction model
Estimare in vivo [1]
A KeratinoSensTM prediction is considered positive if the following 4 conditions are all met in 2 of 2 or in the same 2 of 3 repetitions, otherwise the KeratinoSensTM prediction is considered negative (Figure 1):
Estimare KeratinoSensTM [2]
the Imax is higher than (>) 1,5 fold and statistically significantly different as compared to the solvent (negative) control (as determined by a two-tailed, unpaired Student's t-test);
Interval de referință CE1,5 (μM ) [3]
the cellular viability is higher than (>) 70 % at the lowest concentration with induction of luciferase activity above 1,5 fold (i.e. at the EC1,5 determining concentration);
Interval de referință CI50 (μM ) [3]
there is an apparent overall dose-response for luciferase induction (or a biphasic response as mentioned under paragraph 33).
Nesensibilizant
If in a given repetition, all of the three first conditions are met but a clear dose-response for the luciferase induction cannot be observed, then the result of that repetition should be considered inconclusive and further testing may be required (Figure 1).
Acid salicilic
In addition, a negative result obtained with concentrations < 1000 μM (or < 200 μg/ml for test chemicals with no defined MW) should also be considered as inconclusive (see paragraph 11).
Acid lactic
Figure 1
Alcool cinamilic
Prediction model used in the KeratinoSensTM assay.
Sensibilizant (redus)
A KeratinoSensTM prediction should be considered in the framework of an IATA and in accordance with the provision of paragraphs 9 and 11
25 – 175
In rare cases, test chemicals which induce the luciferase activity very close to the cytotoxic levels can be positive in some repetitions at non-cytotoxic levels (i.e. EC1,5 determining concentration below (<) the IC30), and in other repetitions only at cytotoxic levels (i.e. EC1,5 determining concentration above (>) the IC30).
Etilenglicol dimetacrilat
Such test chemicals shall be retested with more narrow dose-response analysis using a lower dilution factor (e.g. 1,33 or √2 (= 1,41) fold dilution between wells), to determine if induction has occurred at cytotoxic levels or not (9).
5 – 125
Physical appearance, water solubility, DMSO solubility, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties, to the extent available;
ercaptobenzotiazol
Physical appearance, water solubility, DMSO solubility and additional relevant physicochemical properties, to the extent available;
Sensibilizant (moderat)
Physical appearance, water solubility, DMSO solubility, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties, to the extent available and where applicable;
25 – 250
Negative (vehicle) control
Metildibromo-glutaronitril
Chemical identification, such as IUPAC or CAS name(s), CAS number(s), and/or other identifiers;
Sensibilizant (puternic)
Physical appearance, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties in the case other negative controls / vehicles than those mentioned in this test method are used and to the extent available;
20 – 100
Justification for choice of solvent for each test chemical.
etilaminofenol sulfat
Test method conditions
20 – 200
Description of test method used;
2,4- dinitro-clorobenzen
Cell line used, its storage conditions and source (e.g. the facility from which they were obtained);
Sensibilizant (extrem)
Passage number and level of confluence of cells used for testing;
5 – 20
Cell counting method used for seeding prior to testing and measures taken to ensure homogeneous cell number distribution (cf. paragraph 20);
Estimările pericolului in vivo (și potenței) se bazează pe date LLNA (13).
Luminometer used (e.g. model), including instrument settings, luciferase substrate used, and demonstration of appropriate luminescence measurements based on the control test described in Appendix 3;
Potența in vivo se calculează pe baza criteriilor propuse de ECETOC (24).
The procedure used to demonstrate proficiency of the laboratory in performing the test method (e.g. by testing of proficiency substances) or to demonstrate reproducible performance of the test method over time.
O estimare KeratinoSensTM se ia în considerare în cadrul unei IATA și în conformitate cu dispozițiile de la punctele 9 și 11 din prezenta metodă de testare.
Test procedure
Pe baza valorilor anterioare observate (12).
Number of repetitions and replicates used;
CONTROLUL CALITĂȚII PENTRU MĂSURĂTORILE LUMINESCENȚEI
Test chemical concentrations, application procedure and exposure time used (if different than the one recommended)
Experiment de bază pentru asigurarea unor măsurători optime ale luminiscenței în testul KeratinoSens™
Tabulation of Imax, EC1,5 and viability values (i.e. IC50, IC30) obtained for the test chemical and for the positive control for each repetition as well as the mean values (Imax: average; EC1,5 and viability values: geometric mean) and SD calculated using data from all individual repetitions and an indication of the rating of the test chemical according to the prediction model;
Următorii trei parametri sunt esențiali pentru a asigura obținerea unor rezultate fiabile cu ajutorul luminometrului:
Coefficient of variation obtained with the luminescence readings for the negative control for each experiment;
existența unui grad suficient de sensibilitate cu un mediu stabil în godeurile martor;
A graph depicting dose-response curves for induction of luciferase activity and viability;
inexistența unui gradient pentru placa de microtitrare din cauza duratelor lungi de citire; și
Description of any other relevant observations, if applicable.
necontaminarea cu lumină în godeurile adiacente din godeurile foarte active.
Discussion of the results obtained with the KeratinoSensTM assay;
Înainte de testare, se recomandă asigurarea de măsurători corespunzătoare ale luminescenței prin testarea unei plăci de microtitrare martor configurată astfel cum se descrie mai jos (analiză în triplicat).
Consideration of the test method results within the context of an IATA, if other relevant information is available.
Configurația plăcii de microtitrare a primului experiment de pregătire
Available at: http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev05/05files_e.html.
Blanc
OECD Environment, Health and Safety publications, Series on Testing and Assessment No. 168.
EGDMA Etilenglicol dimetacrilat (Nr.
OECD, Paris.
CAS: 97-90-5) o substanță chimică cu inducție puternică
Chapter B.42 of this Annex: Skin sensitization: Local Lymph Node assay.
AC aldehidă cinamică, referință pozitivă (Nr.
Chapter B.50 of this Annex: Skin sensitization: Local Lymph Node assay: DA.
CAS: 104-55-2)
Chapter B.51 of this Annex: Skin sensitization: Local Lymph Node assay: BrdU-ELISA.
Analiza de control al calității trebuie să demonstreze:
Recommendation on the KeratinoSensTM assay for skin sensitisation testing, 42 pp.
o relație doză-răspuns clară în rândul D, cu Imax> 20 ori peste nivelul de bază (în majoritatea cazurilor se ating valori Imax cuprinse între 100 și 300);
Available at: http://ihcp.jrc.ec.europa.eu/our_labs/eurl-ecvam/eurl-ecvam-recommendations/recommendation-keratinosens-skin-sensitisation.
nicio relație doză-răspuns în rândul C și E [nicio valoare de inducție peste 1,5 (în mod ideal, mai mică sau egală cu 1,3)] din cauza unei eventuale contaminări cu lumină, în special lângă godeurile foarte active în rândul EGDMA;
DB-ALM (INVITTOX) (2013) Protocol 155: KeratinoSensTM., 17 pp.
nicio diferență semnificativă din punct de vedere statistic între rândurile A, B, C, E, F și G (și anume, fără gradient pentru placa de microtitrare); și
Available: http://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/beta/index.cfm/methodsAndProtocols/index
variabilitate în oricare dintre rândurile A, B, C, E, F și G și godeurile cu DMSO în rândul H trebuie să fie sub 20 % (și anume, nivel de bază stabil).
OECD Guidelines for Chemical Testing No. 457.
B.61 Metoda de testare a scurgerii de fluoresceină pentru identificarea substanțelor având un caracter coroziv și un potențial iritant sever la nivel ocular
The term is often used interchangeably with “concordance”, to mean the proportion of correct outcomes of a test method (29).
Această metodă de testare (MT) este echivalentă cu Orientarea OCDE privind testarea (TG) nr.
Antioxidant response element (also called EpRE, electrophile response element), is a response element found in the upstream promoter region of many cytoprotective and phase II genes.
460 (2012).
When activated by Nfr2, it mediates the transcriptional induction of these genes.
Metoda de testare a scurgerii de fluoresceină (Fluorescein Leakage – FL) este o metodă de testare in vitro care poate fi utilizată, în anumite circumstanțe și cu anumite limite, pentru clasificarea substanțelor chimice (substanțe și amestecuri) drept substanțe având un caracter coroziv și un potențial iritant sever, astfel cum sunt definite de Sistemul global armonizat de clasificare și etichetare a substanțelor chimice (GHS) al Organizației Națiunilor Unite (ONU) (categoria 1), de Regulamentul (CE) nr.
Interpolated concentration for a 1,5 fold luciferase induction.
1272/2008 privind clasificarea, etichetarea și ambalarea substanțelor și a amestecurilor (CLP) [19] (categoria 1) și de Agenția de protecție a mediului din SUA (EPA) (categoria I) (1) (2).
Concentration effecting a reduction of cellular viability by 30 %.
În scopul acestei metode de testare, substanțele cu potențial iritant ocular sever sunt definite drept substanțe chimice care provoacă lezarea tisulară la nivel ocular, în urma administrării substanței chimice de testat, care nu este reversibilă după 21 de zile sau care provoacă o deteriorare fizică gravă a vederii, în timp ce substanțele având un caracter coroziv sunt substanțe chimice care provoacă leziuni tisulare ireversibile la nivel ocular.