natgillin/translations-raw huggingface dataset:
A maximum leakage control should also be included in each run to allow for the calculation of FL20 values.
Un sistem care propune clasificarea substanțelor chimice (substanțe și amestecuri) în funcție de tipuri și niveluri standardizate de pericole fizice, de sănătate și de mediu și care abordează elemente de comunicare corespunzătoare, precum pictograme, cuvinte de avertizare, declarații cu privire la pericole, declarații de securitate și fișe tehnice de siguranță astfel încât să transmită informații cu privire efectele adverse ale acestora în scopul protejării populației (inclusiv angajatorii, lucrătorii, transportatorii, consumatorii și cei care se ocupă de serviciile de urgență) și a mediului.
Maximum leakage is determined using a control insert without cells.
Categoria 1 GHS
Determination of fluorescein permeability
Utilizat în contextul GHS al ONU ca însemnând un amestec sau o soluție compusă din două sau mai multe substanțe care nu intră în reacție.
Immediately after removal of the test and control chemicals, 400 μl of 0,1 mg/ml sodium-fluorescein solution (0,01 % (w/v) in calcium-containing [at a concentration of 1,0-1,8 mM], phenol red-free, HBSS) is added to the inserts (e.g. Millicell-HA).
Neclasificat
The cultures are kept for 30 minutes at room temperature.
O substanță chimică care provoacă o modificare reversibilă la nivel ocular în urma aplicării pe suprafața anterioară a ochiului; (b) Substanțe chimice clasificate în categoriile 2A sau 2B din GHS al ONU; categoria 2 din Regulamentul CLP al UE; sau categoriile II sau III de iritanți oculari EPA SUA.
At the end of the incubation with fluorescein, the inserts are carefully removed from each well.
Substanță cu potențial iritant sever
Visual check is performed on each filter and any damage which may have occurred during handling is recorded.
O substanță care provoacă lezarea tisulară la nivel ocular după aplicarea pe suprafața anterioară a ochiului, care nu este reversibilă după 21 de zile de la aplicare sau care provoacă o deteriorare fizică gravă a vederii; (b) Substanțe chimice clasificate în categoria 1 din GHS al ONU; categoria 1 din Regulamentul CLP al UE; sau categoria I EPA SUA.
The amount of fluorescein that leaked through the monolayer and the insert is quantified in the solution which remained in the wells after removal of the inserts.
Martor pozitiv
Measurements are done in a spectrofluorometer at excitation and emission wavelengths of 485 nm and 530 nm, respectively.
O replică ce conține toate componentele unui sistem de testare și care a fost tratată cu o substanță chimică cunoscută pentru faptul că provoacă o reacție pozitivă.
The sensitivity of the spectrofluorometer should be set so that there is the highest numerical difference between the maximum FL (insert with no cells) and the minimum FL (insert with confluent monolayer treated with NC).
Pentru a asigura posibilitatea evaluării variabilității în timp a răspunsului martorului pozitiv, amplitudinea răspunsului pozitiv nu trebuie să fie extremă.
Because of the differences in the used spectrofluorometer, it is suggested that a sensitivity is used which will give fluorescence intensity > 4000 at the maximum fluorescein leakage control.
Substanțe chimice de verificare
The maximum FL value should not be greater than 9999.
Un subset al listei de substanțe chimice de referință care pot fi utilizate de un laborator naiv pentru a demonstra performanțele cu metoda de testare de referință validată.
The maximum fluorescence leakage intensity should fall within the linear range of the spectrofluorometer used.
Relevanța include luarea în considerare a acurateței (conformității) unei metode de testare (8).
Interpretation of results and Prediction model
Test substitutiv
The amount of FL is proportional to the chemical-induced damage to the tight junctions.
Un test conceput să substituie un test care este în utilizare sistemică și acceptat pentru identificarea pericolelor și/sau evaluarea riscurilor și care a fost stabilit pentru a furniza o protecție echivalentă sau îmbunătățită a sănătății umane sau a animalelor sau a mediului, după caz, comparativ cu testul acceptat, pentru toate situațiile de testare și substanțele chimice posibile.
The percentage of FL for each tested concentration of chemical is calculated from the FL values obtained for the test chemical with reference to FL values from the NC (reading from the confluent monolayer of cells treated with the NC) and a maximum leakage control (reading for the amount of FL through an insert without cells).
Proporția tuturor substanțelor chimice pozitive/active clasificate în mod corect în urma testului.
The mean maximum leakage fluorescence intensity = x
Acesta permite măsurarea preciziei unei metode de testare care conduce la rezultate clasificabile în categorii și constituie un aspect important în evaluarea relevanței unei metode de testare (8).
The mean 0 % leakage fluorescence intensity (NC) = y
Reprezintă producerea de leziuni tisulare la nivel ocular sau deteriorarea fizică gravă a vederii în urma aplicării unei substanțe chimice de testat pe suprafața anterioară a ochiului, care nu este complet reversibilă într-un interval de 21 de zile de la aplicare.
i.e. x – y = z
Proporția tuturor substanțelor chimice negative/inactive clasificate în mod corect în urma testului.
The percentage leakage for each fixed dose is obtained by subtracting the 0 % leakage to the mean fluorescence intensity of the three replicate readings (m), and dividing this value by the 100 % leakage, i.e. %FL = [(m-y) / z] × 100 %, where:
Acesta permite măsurarea preciziei unei metode de testare care conduce la rezultate clasificabile în categorii și constituie un aspect important în evaluarea relevanței unei metode de testare.
m the mean fluorescence intensity of the three replicate measurements for the concentration involved
Utilizată în contextul GHS al ONU ca elementele chimice și compușii acestora în stare naturală sau obținuți prin orice proces de producție, inclusiv orice aditiv necesar pentru a menține stabilitatea produsului și orice impuritate rezultată din procesul utilizat, dar cu excepția oricărui solvent care poate fi separat fără a afecta stabilitatea substanței sau fără a-i schimba compoziția.
% FL the percent of the fluorescein which leaks through the cell layer
Este important de semnalat faptul că este posibil ca performanțele unei metode de testare validate să nu fie suficiente din punct de vedere al acurateței și fiabilității astfel încât aceasta să fie considerată acceptabilă pentru scopul propus (8).
The following equation for the calculation of the chemical concentration causing 20 % FL should be applied:
SUBSTANȚE CHIMICE DE VERIFICARE PENTRU METODA DE TESTARE FL
FLD = [(A-B) / (C-B)] × (MC – MB) + MB
Înainte de utilizarea sistematică a acestei metode de testare, laboratoarele trebuie să demonstreze performanțele tehnice proprii prin identificarea corectă a clasificării coroziunii oculare pentru cele 8 substanțe chimice recomandate în tabelul 1.
A % damage (20 % fluorescein leakage)
CAS = Număr de înregistrare al Chemical Abstracts Service
B % fluorescein leakage < A
Nr.
C % fluorescein leakage > A
CAS
Concentration (mg/ml) of C
Coroziv/Iritant sever
Concentration (mg/ml) of B
Clorhidrat de prometazină
The cut-off value of FL20 for predicting chemicals as ocular corrosives/severe irritants is given below:
Amină/ amidină, heterociclic, compus organic de sulf
C&L: classification and labelling.
Hidroxid de sodiu (10 %)
UN GHS C&L
Alcalină
The FL test method is recommended only for the identification of water soluble ocular corrosives and severe irritants (UN GHS Category 1, EU CLP Category 1, U.S. EPA Category I) (see paragraphs 1 and 10).
Acid carboxilic, aldehidă
In order to identify water soluble chemicals (substances and mixtures) (3) (6) (7) as “inducing serious eye damage” (UN GHS/EU CLP Category 1) or as an “ocular corrosive or severe irritant” (U.S. EPA Category I), the test chemical should induce an FL20 value of ≤ 100 mg/ml.
Categoria 2 (A)
Acceptance of results
Necoroziv/Fără potențial iritant sever
The mean maximum fluorescein leakage value (x) should be higher than 4000 (see paragraph 31), the mean 0 % leakage (y) should be equal or lower than 300, and the mean 100 % leakage (z) should fall between 3700 and 6000.
Necoroziv/Fără potențial iritant sever
A test is considered acceptable if the positive control produced 20 % to 40 % damage to the cell layer (measure as % fluorescein leakage).
Categoria 2 (B)
Data
Pe baza rezultatelor din testul in vivo pe ochi de iepure (OCDE TG 405, MT B.5) și prin utilizarea GHS al ONU și a Regulamentului CLP al UE.
For each run, data from individual replicate wells (e.g. fluorescence intensity values and calculated percentage FL data for each test chemical, including classification) should be reported in tabular form.
Pe baza rezultatelor obținute cu FL [Protocolul nr.
In addition, means ± SD of individual replicate measurements in each run should be reported.
71(6) INVITTOX]
Chemical CAS number, if known;
B.62 Testul Comet in vivo pe celule alcaline de mamifere
Purity and composition of the substance or mixture (in percentage(s) by weight), to the extent this information is available;
Această metodă de testare (MT) este echivalentă cu Orientarea OCDE privind testarea (TG) nr.
Physical-chemical properties relevant to the conduct of the study (e.g. physical state, volatility, pH, stability, water solubility, chemical class);
460 (2016).
Treatment of the test/control chemical prior to testing, if applicable (e.g. warming, grinding);
Testul Comet in vivo alcalin (electroforeză în gel pe celule izolate) (denumit în continuare simplu „testul comet”) este utilizat pentru detectarea întreruperilor lanțului ADN în celule sau nuclee unice de la mai multe țesuturi de animale, de regulă rozătoare, care au fost expuse la material (materiale) cu potențial genotoxic.
Storage conditions;
Testul Comet a fost revizuit și recomandări au fost publicate de către diferite grupuri de experți (1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)(9) (10).
Justification of the test method and Protocol Used
Această metodă de testare este parte a unei serii de metode de testare cu privire la toxicologia genetică.
Should include considerations regarding applicability domain and limitations of the test method;
A fost elaborat un document al OCDE care oferă informații succinte privind testarea pentru toxicologia genetică (11) și care trece în revistă modificările efectuate recent asupra orientărilor respective.
Description of cell system used, including certificate of authenticity and the mycoplasma status of the cell line;
Scopul testului Comet este de a identifica substanțele chimice care provoacă lezarea ADN-ului.
Details of test procedure used;
În condiții alcaline (pH >13), testul Comet poate detecta întreruperi simple sau duble ale lanțului, care rezultă, de exemplu, din interacțiuni directe cu ADN-ul, situsuri labile alcaline sau ca o consecință a întreruperilor tranzitorii ale lanțului ADN rezultate în urma procesului de reparare prin excizie a ADN-ului.
Test chemical concentration(s) used;
Aceste întreruperi ale lanțului pot fi reparate, având ca rezultat lipsa efectelor persistente, pot fi letale pentru celulă sau pot fi fixate pe o mutație având ca rezultat o schimbare viabilă permanentă.
Duration of exposure to the test chemical;
Acestea pot conduce, de asemenea, la lezarea cromozomială care este asociată, de asemenea, cu numeroase boli umane, inclusiv cancerul.
Duration of incubation with fluorescein;
Un studiu de validare formală a testului Comet in vivo pe rozătoare a fost efectuat în perioada 2006-2012, sub coordonarea Centrului japonez pentru validarea metodelor alternative (JaCVAM), în colaborare cu Centrul European pentru validarea metodelor alternative (ECVAM), Comitetul de coordonare Interagenții pentru validarea metodelor alternative (ICCVAM) și Programul Național de toxicologie (NTP) al Centrului Interagenții pentru evaluarea metodelor toxicologice alternative (NICEATM) (12).
Description of evaluation criteria used;
Această metodă de analiză include utilizarea și limitările recomandate testului Comet și se bazează pe protocolul final (12) utilizat în studiul de validare, precum și pe date suplimentare relevante publicate și nepublicate (aflate în proprietatea laboratoarelor).
Should include considerations regarding a non-conclusive outcome (paragraph 35: FL20 > 100 mg/ml) and further testing;
Celulele/nucleele izolate integrate în agaroză pe o lamă se lizează cu detergent și o concentrație ridicată de sare.
Conclusions
Această etapă de liză digeră membranele celulare și nucleare și permite eliberarea de bucle încolăcite de ADN, denumite în general nucleotide și fragmente de ADN.
Available at: [http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev03/03files_e.html]
Electroforeza la pH ridicat are ca rezultat structuri asemănătoare cu o cometă, care, prin utilizarea colorării corespunzătoare cu fluoresceină, pot fi observate prin microscopie cu fluorescență; fragmentele de ADN migrează de la „capăt” la „coadă” în funcție de dimensiunile acestora și intensitatea cozii cometei în raport cu intensitatea totală (cap plus coadă) reflectă valoarea întreruperii ADN-ului (13) (14) (15).
Chapter B.5 of this Annex, Acute Eye Irritation/Corrosion
Testul Comet in vivo alcalin este relevant în special pentru evaluarea pericolelor genotoxice prin faptul că răspunsurile testului sunt dependente de ADME (absorbție, distribuție, metabolism și excreție) in vivo și, de asemenea, de procesele de regenerare de ADN.
Available at: [http://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu
Acestea pot să varieze între specii, între țesuturi și între tipurile de lezare la nivel de ADN.
OECD (2005), Guidance Document on the Validation and International Acceptance of New or Updated Test Methods for Hazard Assessment, OECD Series on Testing and Assessment No. 34.
Pentru a îndeplini cerințele în materie de bunăstare a animalelor, în special reducerea utilizării animalelor [principiile 3R – înlocuire, reducere, rafinare (replacement, reduction, refinement)], acest test poate fi integrat, de asemenea, în alte studii toxicologice, de exemplu studii de toxicitate cu doze repetate (10) (16) (17), sau criteriul final poate fi combinat cu alte criterii finale de genotoxicitate precum testul in vivo de micronucleu pe eritrocite de mamifere (18) (19) (20).
DIAGRAM OF MDCK CELLS GROWN ON AN INSERT MEMBRANE FOR THE FL TEST METHOD
Testul Comet este cel efectuat mai adesea la rozătoare, însă a fost aplicat și altor specii de mamifere și nemamifere.
A confluent layer of MDCK cells is grown on the semi-permeable membrane of an insert.
Utilizarea speciilor de nerozătoare trebuie să fie justificată din punct de vedere științific și etic, de la caz la caz și se recomandă cu fermitate ca testul Comet să se efectueze asupra altor specii decât rozătoarele numai ca parte a unui alt studiu de toxicitate și nu ca un test independent.
The inserts are placed into the wells of 24 well plates.
Selecția căii de expunere și a țesutului (țesuturilor) care urmează să fie studiat(e) se determinată pe baza tuturor cunoștințelor disponibile/existente cu privire la substanțele chimice de testat, de exemplu, calea de expunere umană destinată/anticipată, metabolismul și distribuția, potențialul de efecte la punctul de contact, alerte structurale, alte date cu privire la genotoxicitate și toxicitate și scopul studiului.
Figure taken from: Wilkinson, P.J.
Prin urmare, după caz, potențialul genotoxic al substanțelor chimice de testat poate fi testat în țesutul (țesuturile) țintă cu efecte carcinogene și/sau alte efecte toxice.
EPA Category I
Testul este considerat util, de asemenea, la investigarea suplimentară a genotoxicitații detectate printr-un sistem in vitro.
Chemicals that produce corrosive (irreversible destruction of ocular tissue) or corneal involvement or irritation persisting for more than 21 days (2).
Efectuarea unui test Comet in vivo pe un țesut de interes este necesară atunci când se așteaptă în mod rezonabil ca țesutul de interes să fie expus în mod adecvat.
EU CLP (Regulation (EC) No1272/2008 on Classification, Labelling and Packaging of Substances and Mixtures)
Testul a fost validat în mod extensiv pentru țesuturi somatice de șobolani masculi în cadrul unor studii în colaborare precum studiul JaCVAM (12) și Rothfuss et al., 2010 (10).
Implements in the European Union (EU) the UN GHS system for the classification of chemicals (substances and mixtures).
În studiul internațional de validare JaCVAM, a fost utilizat ficat și stomac.
Can be estimated by the determination of the concentration at which the tested chemical causes 20 % of the fluorescein leakage through the cell layer.
Se acordă atenție deosebită pentru a se asigura că astfel de țesuturi nu sunt expuse la concentrații prea ridicate de substanță chimică de testat (21).
Fluorescein leakage
Tehnica se aplică, în principiu, pentru toate țesuturile din care pot fi derivate suspensii cu celule/nuclee unice.
the amount of fluorescein which passes through the cell layer, measured spectrofluorometrically.
Datele care fac obiectul unui drept de proprietate al mai multor laboratoare demonstrează aplicarea cu succes a acesteia la mai multe țesuturi diferite și există mai multe publicații care arată aplicabilitatea tehnicii la organe sau țesuturi, altele decât ficat și stomac, de exemplu jejun (22), rinichi (23)(24), piele (25) (26)sau vezică urinară (27)(28), lavaj de celule din plămâni și branhoalveole (relevante pentru studii asupra substanțelor chimice inhalate) (29) (30) și au fost efectuate teste, de asemenea, în mai multe organe (31) (32).
GHS (Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals by the United Nation (UN))
Cu toate că poate exista un interes cu privire la efectele genotoxice în celule germinale, se remarcă faptul că testul Comet alcalin standard, astfel cum este descris în prezenta metodă de testare, nu este considerat adecvat pentru măsurarea întreruperilor lanțului ADN în celule germinale mature.
A system proposing the classification of chemicals (substances and mixtures) according to standardised types and levels of physical, health and environmental hazards, and addressing corresponding communication elements, such as pictograms, signal words, hazard statements, precautionary statements and safety data sheets, so that to convey information on their adverse effects with a view to protect people (including employers, workers, transporters, consumers and emergency responders) and the environment.
Având în vedere faptul că au fost raportate niveluri de fond ridicate și variabile de lezare a ADN-ului într-o revizuire a literaturii de specialitate cu privire la utilizarea testului Comet pentru genotoxicitatea celulelor germinale (33), se consideră necesară efectuarea de modificări de protocol, împreună cu îmbunătățirea studiilor de standardizare și validare înainte de includerea în metoda de testare a testului Comet pe celule germinale mature (de exemplu, spermatozoidul).
GHS Category 1
În plus, regimul de expunere recomandat descris în această metodă de testare nu este optim și ar fi necesari timpi de expunere sau perioade de prelevare mai lungi pentru o analiză pertinentă a întreruperilor lanțului ADN în spermatozoizii maturi.
Used in the context of the UN GHS as a mixture or solution composed of two or more substances in which they do not react.
În referințele bibliografice au fost descrise efectele genotoxice astfel cum au fost măsurate prin testul Comet pe celule testiculare în diferite etape de diferențiere (34) (35).
Not-classified
Cu toate acestea, se remarcă faptul că gonadele conțin un amestec de celule somatice și germinale.
Chemicals that are not classified as UN GHS Categories 1, 2A, or 2B; EU CLP Categories 1 or 2; or U.S. EPA Categories I, II, or III ocular irritants.
Din acest motiv, rezultate pozitive în întreaga gonadă (testicul) nu reflectă în mod necesar leziunea la nivelul celulei germinale; totuși, acestea indică faptul că substanța (substanțele) chimică(e) de testat și/sau metaboliții acesteia (acestora) a (au) ajuns la gonadă.
A chemical that causes irreversible tissue damage to the eye. (b) Chemicals that are classified as UN GHS Category 1; EU CLP Category 1; or U.S.
Legăturile încrucișate nu pot fi detectate în mod fiabil în condițiile experimentale standard ale testului Comet.
EPA Category I ocular irritants.
În anumite condiții experimentale modificate, legăturile încrucișate ADN- ADN și ADN-proteină și alte modificări de bază precum bazele oxidate ar putea fi detectate (23) (36) (37) (38) (39).
Ocular irritant
Cu toate acestea, ar fi necesare lucrări suplimentare pentru a caracteriza în mod corespunzător modificările necesare de protocol.
A chemical that produces a reversible change in the eye following application to the anterior surface of the eye; (b) Chemicals that are classified as UN GHS Categories 2A, or 2B; EU CLP Category 2; or U.S. EPA Categories II or III ocular irritants.
Prin urmare, detectarea agenților de formare a legăturilor încrucișate nu este scopul principal al testului astfel cum este descris în prezenta metodă de testare.
Ocular severe irritant
Testul nu este adecvat, inclusiv cu modificări, pentru detectarea substanțelor aneugene.
A chemical that causes tissue damage in the eye following application to the anterior surface of the eye that is not reversible within 21 days of application or causes serious physical decay of vision. (b) Chemicals that are classified as UN GHS Category 1; EU CLP Category 1; or U.S.
Având în vedere stadiul actual al cunoștințelor, mai multe limitări suplimentare (a se vedea apendicele 3) sunt asociate cu testul Comet in vivo.
EPA Category I ocular irritants.
Se preconizează faptul că metoda de testare va fi verificată în viitor și, în cazul în care este necesar, va fi revizuită ținând cont de experiența acumulată.
Positive control A replicate containing all components of a test system and treated with a chemical known to induce a positive response.
PRINCIPIUL METODEI
To ensure that variability in the positive control response across time can be assessed, the magnitude of the positive response should not be extreme.
La punctele 36-40 se prezintă o descriere detaliată a dozării și a prelevării de probe.
Proficiency Chemicals
La perioada (perioadele) de prelevare de probe selecționată(e), se disecă țesuturile de interes și se prepară suspensiile de celule/nuclee unice (se poate efectua perfuzarea in situ în cazul în care se consideră util, de exemplu, ficat) și se acoperă în agar moale astfel încât acestea sa fie imobilizate pe lame.
A sub-set of the list of Reference Chemicals that can be used by a naïve laboratory to demonstrate proficiency with the validated reference test method.
Se tratează celule/nucleele cu tampon de lizare pentru a îndepărta membrana celulară și/sau nucleară și se expun la alcalinitate puternică, de exemplu pH ≥ 13 pentru a permite corectarea ADN-ului și eliberarea buclelor și fragmentelor de ADN destinse.
Relevance incorporates consideration of the accuracy (concordance) of a test method (8).
Se supune ulterior electroforezei ADN-ul nuclear în agar.
Replacement test
Moleculele de ADN normale nefragmentate rămân în poziția în care ADN-ul nuclear a fost în agar, în timp ce orice buclă de ADN fragmentată sau destinsă ar migra spre anod.
A test which is designed to substitute for a test that is in routine use and accepted for hazard identification and/or risk assessment, and which has been determined to provide equivalent or improved protection of human or animal health or the environment, as applicable, compared to the accepted test, for all possible testing situations and chemicals.
După electroforeză, se vizualizează ADN-ul prin utilizarea colorării fluorescente corespunzătore.
The proportion of all positive/active chemicals that are correctly classified by the test.
Se analizează preparatele utilizând un microscop și sisteme de analiză a imaginii complete sau semiautomate.
It is a measure of accuracy for a test method that produces categorical results, and is an important consideration in assessing the relevance of a test method (8).
Cantitatea de ADN care a migrat în timpul electroforezei și distanța de migrare reflectă cantitatea și mărimea fragmentelor de ADN.