natgillin/translations-raw huggingface dataset:
A target, nominal test concentration in the treated fish food is set, for example 500 μg test substance/g food.
Specia care urmează să fie utilizată în test este Daphnia magna Straus [57].De preferință, clonul trebuie să fi fost identificat după genotip.
The appropriate quantity (by molar mass or specific radioactivity) of neat test substance is added to a known mass of fish food in a glass jar or rotary evaporator bulb.
Studiul (1) a arătat că performanța de reproducere a clonului A (care provine din IRCHA din Franța) (5) satisface complet criteriile de validitate pentru o medie de ≥ 60 descendenți vii per animal părinte supraviețuitor atunci când se cultivă în condițiile descrise în prezenta metodă.
The mass of fish food should be sufficient for the duration of the uptake phase (taking into account the need for increasing quantities at each feed owing to fish growth).
Cu toate acestea, se acceptă și alți cloni, cu condiția să se indice îndeplinirea de către cultura de dafnia a criteriilor de validitate pentru test.
The fish feed/test substance should be mixed overnight by slow tumbling (e.g. using a roto-rack mixer or by rotation if a rotary evaporator bulb is used).
La începutul testului, animalele trebuie să fie mai tinere de 24 de ore și nu trebuie să fie prima generație.
The spiked diet should be stored under conditions that maintain stability of the test substance within the feed mix (e.g. refrigeration) until use.
Acestea trebuie să provină dintr-o colonie sănătoasă (și anume, fără semne de stres, cum ar fi mortalitatea mare, prezența masculilor și ephippia, întârziere în producerea primilor descendenți, animale decolorate etc.).
Fish food preparation with a corn or fish oil vehicle
Animalele din colonie se mențin în condiții de cultură (lumină, temperatură, mediu, hrană și număr de animale per unitate de volum) similare cu cele utilizate în test.
Solid test substances should be ground in a mortar to a fine powder.
În cazul în care mediul de cultură care urmează să fie utilizat în test este diferit de cel pentru cultura obișnuită de dafnia, este o bună practică să se includă o perioadă de aclimatizare înaintea testului, de regulă de aproximativ trei săptămâni (și anume, o generație) pentru a evita stresarea animalelor părinți.
Liquid test substances can be added directly to the corn or fish oil.
Mediul de testare
The test substance is dissolved in a known quantity of corn or fish oil (e.g. 5-15 ml).
În cadrul acestui test, se recomandă utilizarea unui mediu bine definit.
The dosed oil is quantitatively transferred into a rotary evaporation bulb of suitable size.
Acesta poate să evite utilizarea aditivilor (de exemplu, plante de mare, extract de sol) a căror caracterizare este dificilă și, prin urmare, se îmbunătățesc posibilitățile de standardizare între laboratoare.
The flask used to prepare the dosed oil should be flushed with two small aliquots of oil and these added to the bulb to make sure all dissolved test substance is transferred.
S-a dovedit că mediile Elendt M4 (6) și M7 (a se vedea apendicele 2) sunt potrivite în acest sens.
To ensure complete dissolution/dispersion in the oil (or if more than one test substance is being used in the study), a micro-stirrer is added, the flask stoppered and the mixture stirred rapidly overnight.
De asemenea, se recomandă ca valorile COT în mediu (și anume, înainte de adăugarea algelor) să fie mai mici de 2 mg/l (9).
An appropriate quantity of fish diet (usually in pellet form) for the test is added to the bulb, and the bulb's contents are mixed homogeneously by continuously turning the glass bulb for at least 30 minutes, but preferably overnight.
Atunci când se testează substanțe chimice cu conținut de metale, este important să se admită că proprietățile mediului de testare (de exemplu, duritatea, capacitatea de chelatizare) ar putea avea legătură cu toxicitatea substanței studiate.
Thereafter, the spiked food is stored appropriately (e.g. refrigerated) to ensure test substance stability in the food until use.
Din acest motiv, este de preferat un mediu bine caracterizat.
Fish food preparation with an organic solvent
Cu toate acestea, în prezent, singurele medii bine caracterizate care se cunosc ca fiind optime pentru cultura pe termen lung a Daphnia magna sunt Elendt M4 și M7.
An appropriate quantity of test substance (by molar mass or specific radioactivity) sufficient to achieve the target dose is dissolved in a suitable organic solvent (e.g. cyclohexane or acetone; 10-40 ml, but a greater volume if necessary depending on the quantity of food to spike).
Ambele medii conțin agentul de chelatizare EDTA.
Either an aliquot, or all (added portion wise), of this solution is mixed with the appropriate mass of fish food sufficient for the test to achieve the required nominal dose level.
Cercetările (2) arată că „toxicitatea aparentă” a cadmiului este în general mai mică atunci când testul de reproducere se realizează în mediile M4 și M7 decât în mediile cu conținut de EDTA.
The food/test substance can be mixed in a stainless steel mixing bowl and the freshly-dosed fish food left in the bowl in a laboratory hood for two days (stirred occasionally) to allow the excess solvent to evaporate, or mixed in a rotary evaporator bulb with continuous rotation.
Prin urmare, M4 și M7 nu se recomandă pentru testarea substanțelor chimice ce conțin metale și se evită, de asemenea, utilizarea altor medii ce conțin agenți de chelatizare cunoscuți.
The excess solvent can be “blown” off under a stream of air or nitrogen if necessary.
Pentru substanțele cu conținut de metale, se poate recomanda utilizarea unui mediu alternativ precum, de exemplu, apa dură proaspătă reconstituită conform ASTM (9) care nu conține EDTA.
Care should be taken to ensure that the test substance does not crystallise as the solvent is removed.
Combinația de apă dură proaspătă reconstituită conform ASTM și extract de plante de mare este potrivită pentru cultura pe termen lung a Dahnia magna (2).
The spiked diet should be stored under conditions (e.g. refrigeration) that maintain stability of the test substance within the feed mix until use.
Concentrația oxigenului dizolvat trebuie să fie mai mare de 3 mg/l la începutul și în timpul testului.
CALCULATION OF ASSIMILATION EFFICIENCY AND BIOMAGNIFICATION FACTOR To calculate the assimilation efficiency, the overall depuration rate constant should first be estimated according to section 4 of Appendix 5 (using the “sequential method”, i.e. standard linear regression) using mean sample concentrations from the depuration phase.
PH-ul trebuie să aibă valori în intervalul 6-9 și, în mod normal, nu trebuie să varieze cu mai mult de 1,5 unități în oricare din teste.
The feeding rate constant, I, and uptake duration, t, are known parameters of the study.
Se recomandă o duritate mai mare de 140 mg/l (exprimată în CaCO3).
Cfood, the mean measured concentration of the test substance in the food is a measured variable in the study.
Testele efectuate la această valoare și la valori mai mari au demonstrat o performanță a reproducerii conformă cu criteriile de validitate (11) (12).
C0,d, the test substance concentration in the fish at the end of the uptake phase, is usually derived from the intercept of a plot of ln(concentration) vs. depuration day.
Se prepară, de regulă, soluții de testat în concentrațiile alese prin diluarea unei soluții stoc.
The substance assimilation efficiency (a, absorption of test substance across the gut) is calculated as: α C 0,d k 2 I C food 1 1 e k 2 t [Equation A7.1] where: C0,d derived concentration in fish at time zero of the depuration phase (mg kg– 1); k2 overall (not growth-corrected) depuration rate constant (day– 1), calculated according to equations in Appendix 5, Section 3; I food ingestion rate constant (g food g– 1 fish day– 1); Cfood concentration in food (mg kg– 1 food); t duration of the feeding period (day) However, the feeding rate, I, used in the calculation may need to be adjusted for fish growth to give an accurate assimilation efficiency, a.
Soluțiile mamă se prepară de preferință, fără utilizarea oricăror solvenți sau agenți de dispersie, dacă este posibil, prin amestecarea sau agitarea substanței chimice de testat în mediul de testat utilizând mijloace mecanice precum agitarea, amestecarea sau ultrasonarea sau alte metode adecvate.
In a test where fish grow significantly during the uptake phase (in which no correction of feed quantities is made to maintain the set feeding rate), the effective feeding rate as the uptake phase progresses will be lower than that set, resulting in a higher 'real' assimilation efficiency.
Este de preferat să se expună sistemele de testat la concentrații ale substanței chimice de testat care urmează să fie utilizate în studiu atât timp cât este necesar pentru a demonstra menținerea concentrațiilor de expunere stabile înainte de introducerea organismelor de testat.
(Note this is not important for the overall calculation of BMF as the I terms effectively cancel out between Equation A7.1 and Equation A7.4).
În cazul în care substanța chimică de testat se dizolvă greu în apă, se urmează procedurile descrise în Orientările OCDE pentru manipularea substanțelor dificile (13).
The mean feeding rate corrected for growth dilution, Ig, can be derived in several ways, but a straightforward and rigorous one is to use the known growth rate constant (kg) to estimate the test fish weights at time points during the uptake phase, i.e.:
Se evită utilizarea solvenților sau a agenților de dispersie, dar aceasta poate fi necesară în anumite cazuri pentru a produce o soluție stoc cu o concentrație corespunzătoare de dozare.
Wf,0 ek g t
O apă de diluție martor cu replici adecvate și, dacă nu se poate evita, un solvent martor cu replici adecvate se efectuează în plus față de concentrațiile de testare.
[Equation A7.2] where Wf(t) mean fish weight at uptake day t Wf,0
Numai solvenții sau agenții de dispersie care au fost investigați a nu avea efecte semnificative sau a avea doar efecte minime asupra variabilei de răspuns se utilizează în test.
As the feeding rate was set based on Wf,0, the effective feeding rate for each day of uptake can be calculated using these two weight values.
La referința (13) se furnizează exemple de solvenți adecvați (de exemplu, acetona, etanolul, metanolul, dimetilformamida și trietilen glicolul) și agenți de dispersie (de exemplu Cremophor RH40, metilceluloza 0,01 % și HCO- 40).
The growth-corrected feeding rate, Ig (g food g-1 fish day– 1), to use instead of I in cases of rapid growth during the uptake phase, can then be calculated as
În cazul în care se utilizează un solvent sau agent de dispersie, concentrația finală a acestuia nu trebuie să depășească 0,1 ml/l (13) și trebuie să fie aceeași concentrație în toate vasele de testare, cu excepția martorului de apă de diluție.
[Equation A7.3]
Cu toate acestea, se depun toate eforturile pentru a menține la minimum concentrației solventului.
Once the assimilation efficiency has been obtained, the BMF can be calculated by multiplying it with the feeding rate constant I (or Ig, if used to calculate α) and dividing the product by the overall depuration rate constant k2:
Durată
[Equation A7.4]
Animalele părinți se țin individual, câte unul pentru fiecare vas de testare, de regulă cu 50100 ml (pentru Daphnia magna, pot fi posibile volume mai mici, în special pentru dafniile mai mici, de exemplu, Ceriodaphnia dubia) de mediu în fiecare vas de testare, cu excepția cazului în care un model de testare în flux continuu este necesar pentru testare.
The growth-corrected biomagnification factor should also be calculated in the same way, using the growth corrected depuration rate constant (as derived according to section 7 in Appendix 5).
Uneori, ar putea să fie necesare volume mai mari pentru a satisface condițiile procedeului analitic utilizat pentru determinarea concentrației substanței chimice de testat, cu toate că reunirea replicilor pentru analiza chimică este permisă, de asemenea.
Again, if Ig has been used to calculate α, it should also be used here instead of I:
În cazul în care se utilizează volume mai mari de 100 ml, rația furnizată pentru dafnia ar putea necesita creștere pentru a asigura disponibilitatea alimentației adecvate și respectarea criteriilor de validitate.
[Equation A7.5]
Animalele de experiență
assimilation efficiency (absorption of test substance across the gut);
Pentru testele semistatice, sunt necesare cel puțin 10 animale ținute fiecare la fiecare concentrație de testat și cel puțin 10 animale ținute fiecare în seria martor.
overall (not growth-corrected) depuration rate constant (day– 1), calculated according to equations in Appendix 5, Section 3;
Pentru testele în flux continuu, s-a dovedit că sunt necesare 40 de animale împărțite în patru grupe de câte 10 animale pentru fiecare concentrație de testat (1).
growth-corrected depuration rate constant (day– 1);
Se pot utiliza mai puține organisme de testat și se recomandă un minimum de 20 de animale per concentrație, împărțite în două sau mai multe replici cu un număr egal de animale (de exemplu patru replici, fiecare cu câte cinci dafnii).
food ingestion rate constant (g food g– 1 fish day– 1);
De reținut faptul că, pentru testele în care animalele sunt ținute în grupe, nu va fi posibil să se excludă descendenții de la analiza statistică în cazul în care se produce mortalitatea parentală inadvertentă/accidentală atunci când reproducerea a început și, prin urmare, în aceste cazuri, capacitatea de reproducere se exprimă în numărul total de descendenți vii produși per părinte prezent la începutul testului.
The growth-corrected half-life (t1/2) is calculated as follows.
Tratamentele se repartizează tuturor vaselor de testat și toată manipularea ulterioară a vaselor de testat se face în mod aleatoriu.
[Equation A7.6]
Nerespectarea acestui principiu poate să aducă prejudicii care pot fi interpretate ca fiind un efect al concentrației.
The substance assimilation efficiency from the diet can also be estimated if tissue residues are determined during the linear phase of the uptake phase (between days 1 and 3).
În special, dacă unitățile experimentale sunt manipulate în ordinea tratamentului sau a concentrației, atunci unele efecte care depind de timp, cum ar fi oboseala operatorului sau altă eroare, ar putea să genereze efecte mai mari la concentrații mai mari.
In this case the substance assimilation efficiency (α) can be determined as follows
În plus, dacă există posibilitatea ca rezultatele testului să fie influențate de o condiție inițială sau de mediu a testului, precum poziția în laborator, atunci se ia în vedere blocarea testului.
[Equation A7.7]
Pentru testele semistatice, hrana se administrează de preferință zilnic, dar cel puțin de trei ori pe săptămână (și anume, corespunzător modificărilor mediilor).
the concentration of test substance in the fish at time t (mg kg– 1 wet weight).
Se ia în considerare posibila diluare a concentrațiilor de expunere prin adăugarea de produse alimentare și se evită cât mai mult posibil în cazul suspensiilor de alge bine concentrate.
LIPID CORRECTION
Se consemnează orice abatere de la această regulă (de exemplu, pentru testele în flux continuu).
Assimilation efficiency (Equation A7.1) can then be calculated on a lipid basis, using Cfood on a lipid basis (i.e. Cfood is multiplied by the mean lipid fraction of the food).
Chlorella, Pseudokirchneriella subcapitata (înainte Selenastrumcapricornutum) și Desmodesmus subspicatus (înainte Scenedesmussubspicatus).
Subsequent calculation using Equation A7.4 and Equation A7.5 will give the lipid-corrected (and growth-dilution corrected) BMF directly.
Regimul alimentar se bazează pe cantitatea de carbon organic (C) administrat pentru fiecare animal părinte.
Otherwise, the mean lipid fraction (w/w) in the fish and in the food are derived for both treatment and control groups (for food and control group fish this is usually from data measured at exposure start and end; for treatment group fish this is usually from data measured at end of exposure only).
Cercetările (14) au arătat că, pentru Daphnia magna, rațiile cuprinse între 0,1 și 0,2 mg C/dafnia/zi sunt suficiente pentru obținerea numărului necesar de descendenți care să satisfacă criteriile de validitate a testului.
In some studies, fish lipid content may increase markedly; in such cases it is more appropriate to use a mean test fish lipid concentration calculated from the measured values at the end of exposure and end of depuration.
Rația se poate administra fie sub forma unei rate constante pe toată perioada testului sau, dacă se dorește, se administrează o porție mai mică la început și apoi se crește în timpul testului, ținând cont de creșterea animalelor părinți.
In general, data from the treatment group only should be used to derive both of the lipid fractions.
În acest caz, rația trebuie să rămână totuși în valorile recomandate de 0,1-0,2 mg C/dafnia/zi tot timpul.
The lipid-correction factor (Lc) is calculated as:
În cazul în care urmează să se utilizeze măsuri înlocuitoare, de exemplu, numărul de celule de alge sau absorbanța luminii, la administrarea rației (și anume, pentru ușurință, deoarece măsurarea conținutului de carbon durează mult), fiecare laborator trebuie să-și realizeze propria nomogramă referitoare la măsura înlocuitoare pentru conținutul de carbon al culturii de alge (a se vedea apendicele 3 pentru recomandarea privind realizarea nomogramei).
[Equation A7.8]
Nomogramele se verifică cel puțin anual și mai frecvent dacă au fost schimbate condițiile de cultură ale algelor.
where Lfish and Lfood are the mean lipid fractions in fish and food, respectively.
S-a constatat că absorbanța luminii este un înlocuitor mai bun pentru conținutul de carbon decât numărul de celule (15).
The lipid-correction factor is used to calculate the lipid-corrected biomagnification factor (BMFL):
Pentru a minimiza volumul mediului de cultură de alge transferat în vasele de testare se administrează o suspensie de alge concentrată pentru dafnia.
[Equation A7.9]
Concentrația de alge se poate obține prin centrifugare urmată de resuspensie în mediu de cultură pentru dafnia.
EVALUATION OF DIFFERENCES BETWEEN MEASURED TIME ZERO CONCENTRATION (C0,M) AND DERIVED TIME ZERO CONCENTRATION (C0,D)
Lumină
The measured time zero concentration (C0,m) and derived time zero concentration (C0,d) should be compared.
16 ore de lumină la o intensitate de maximum 15-20 μE · m– 2 · s– 1 măsurată la suprafața apei vasului.
If they are very similar, then this supports the first order model used to derive the depuration parameters.
În cazul instrumentelor de măsurare a luminii calibrate în lucși, un interval echivalent de 1000-1500 lucși pentru lumină albă rece corespunde aproximativ intensității luminoase recomandate 15-20 μE·m-2·s-1.
In some studies there may be a marked difference between the derived time zero value, C0,d, and the mean measured time zero concentration.
Temperatura mediilor de testare trebuie să fie cuprinsă între valorile 18- 22 °C.
C0,m (see last bullet point of paragraph 159 of this test method).
Cu toate acestea, pentru niciun test temperatura nu trebuie să varieze, dacă se poate, cu mai mult de 2 °C în limitele specificate (de exemplu 18-20, 19-21 sau 20-22 °C).
If C0,d is very much lower than C0,m (C0,d << C0,m), the difference may suggest the presence of undigested spiked food in the gut.
Utilizarea unui vas de testare suplimentar ar putea să fie necesară pentru urmărirea temperaturii.
This may be tested experimentally by conducting separate analysis on the excised gut if additional (whole fish) samples were taken and stored at the end of the uptake phase.
Aerarea
Otherwise, if a statistically valid outlier test applied to the depuration phase linear regression indicates that the first sample point of depuration is erroneously elevated, carrying out the linear regression to derive k2 but omitting the first depuration concentration point may be appropriate.
Vasele de testare nu se aerează în timpul testului.
In such cases, if the uncertainty in the linear regression is greatly decreased, and it is clear that approximately first order depuration kinetics were obeyed, it may be appropriate to use the resulting C0,d and k2 values in the assimilation efficiency calculation.
Modelul testului
This should be fully justified in the report.
Testul de stabilire a intervalului
It is also possible that non-first order kinetics were operating in the depuration phase.
Atunci când este necesar, se desfășoară un test de stabilire a intervalului cu, de exemplu, cinci concentrații de substanță chimică de testat și două replici pentru fiecare tratament și martor.
If this is likely (i.e. the natural logarithm transformed data appear to follow a curve compared with the straight-line linear regression plot), then the calculations of k2 and C0,d are unlikely to be valid and the advice of a biostatician should be sought.
Informații suplimentare, obținute din testele cu substanțe chimice similare sau din literatura de specialitate, privind toxicitatea acută pentru dafnie și/sau alte organisme acvatice pot fi utile, de asemenea, pentru a lua decizii cu privire la intervalul de concentrații care urmează să fie utilizate în testul de stabilire a intervalului.
If C0,d is very much higher than the measured value (C0,d >> C0,m) this may indicate: that the substance was depurated very fast (i.e. sampling points approached the limit of quantification of the analytical method very early in the depuration phase, cf.
Durata testului de stabilire a intervalului este de 21 de zile sau o perioadă suficientă de a estima în mod fiabil nivelurile de efecte.
Section 6 below); that there was a deviation from first order depuration kinetics; that the linear regression to derive k2 and C0,d is flawed; or that a problem with the measured concentrations in the study occurred at some sampling time points.
La sfârșitul testului, se evaluează reproducerea dafniei.
In such cases the linear regression plot should be scrutinised for evidence of samples at or near the limit of quantification, for outliers and for obvious curvature (suggestive of non-first order kinetics), and highlighted in the report.
Se înregistrează numărul părinților și apariția descendenților.
Any subsequent re-evaluation of the linear regression to improve estimated values should be described and justified.
Testul definitiv
If marked deviation from first order kinetics is observed, then the calculations of k2 and C0,d are unlikely to be valid and the advice of a biostatician should be sought.
În mod normal, trebuie să existe cel puțin cinci concentrații de testat care să delimiteze concentrația efectivă (de exemplu, CEx) și aranjate într-o serie geometrică cu un factor de separare, de preferință, de maximum 3,2.
GUIDANCE FOR VERY FAST DEPURATING TEST SUBSTANCES
Se utilizează un număr adecvat de replici pentru fiecare concentrație de testat (a se vedea punctele 24-25).
As discussed in paragraph 129 of the test method, some substances may depurate so fast that a reliable time zero concentration, C0,d, and k2 cannot be derived because in samples very early in the depuration phase (i.e. from the second depuration sample onwards) the substance is effectively no longer measured (concentrations reported at the limit of quantification).
În cazul în care se utilizează mai puțin de cinci concentrații, se va oferi o justificare pentru această alegere.
This situation was observed in the ring test carried out in support of this test method with benzo[a]pyrene, and has been documented in the validation report for the method.
Substanțele chimice nu se testează la concentrații mai mari decât limita de solubilitate a acestora în mediul de testare.
In such cases linear regression cannot be carried out reliably, and is likely to give an unrealistically high estimate of C0,d, resulting in an apparent assimilation efficiency much greater than 1.
Înainte de a desfășura experimentul, este necesar să se ia în considerare puterea statistică a modelelor de testare și utilizarea de metode statistice adecvate (4).
It is possible to calculate a conservative estimate of k2 and an “upper bound” BMF in these instances.
La stabilirea intervalului de concentrații, se rețin următoarele: