natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The recommended pre-exposure period is one to two weeks.
Dacă se utilizează materiale din sticlă, trebuie avut grijă ca peștii să nu se rănească sau să se înghesuie în timpul deplasărilor.
Fish should be fed ad libitum with an appropriate food (Appendix 2) at a sufficient rate to maintain body condition.
Distanța dintre tavă și pereții din sticlă trebuie să fie de cel puțin 3 cm pentru a se asigura că eliberarea gameților nu se realizează în afara tăvii.
Care should be taken to avoid microbial growth and water turbidity.
Ouăle depuse pe tavă cad printre ochiurile sitei și pot fi prelevate la 45-60 de minute după pornirea iluminării.
As a general guidance, the daily ration may be divided into two or three equal portions for multiple feeds per day, separated by at least three hours between each feed.
Ouăle transparente nu sunt adezive și pot fi ușor numărate în condiții de iluminare transversală.
A single larger ration is acceptable particularly for weekends.
Atunci când se utilizează cinci femele pentru fiecare vas, numărul de ouă este considerat mic dacă este de maximum 20 pe zi, mediu dacă este de maximum 100 și mare dacă este peste 100.
Food should be withheld from the fish for 12 hours prior to sampling/necropsy.
Tava de reproducere trebuie îndepărtată, ouăle colectate, iar tava de reproducere reintrodusă în vasul de testare, fie seara la o oră cât mai târzie, fie dimineața foarte devreme.
Fish food should be evaluated for the presence of contaminants such as organochlorine pesticides, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), polychlorinated biphenyls (PCBs).
Perioada până la reintroducere nu trebuie să depășească o oră, întrucât, în caz contrar, semnalul substratului de reproducere poate induce împerecherea individuală și eliberarea gameților într-un moment neobișnuit.
Food with an elevated level of phytoestrogens that would compromise the response of the assay to known oestrogen agonist (e.g. 17β- estradiol) should be avoided.
Dacă situația impune introducerea mai târzie a tăvii de reproducere, aceasta trebuie să se efectueze cu cel puțin 9 ore după pornirea iluminării.
Uneaten food and faecal material should be removed from the test vessels at least twice weekly, e.g. by carefully cleaning the bottom of each tank using a siphon.
La această oră târzie din zi, eliberarea gameților nu mai este indusă.
Prior to initiation of the exposure period, proper function of the chemical delivery system should be ensured.
Apendicele 4B
All analytical methods needed should be established, including sufficient knowledge on the chemical stability in the test system.
SUBSTRATUL DE REPRODUCERE PENTRU PIMEPHALES PROMELAS
During the test, the concentrations of the test chemical are determined at regular intervals, as follows: the flow rates of diluent and toxicant stock solution should be checked preferably daily but as a minimum twice per week, and should not vary by more than 10 % throughout the test.
Două sau trei plăci sau tăvi de reproducere din plastic/ceramică/sticlă sau oțel inoxidabil combinate sunt așezate în fiecare cameră de testare (de exemplu un jgheab semicircular de culoare gri cu o lungime de 80 mm, așezat pe o tavă cu margini ridicate cu o lungime de 130 mm) (a se vedea imaginea).
It is recommended that the actual test chemical concentrations be measured in all vessels at the start of the test and at weekly intervals thereafter.
S-a demonstrat că plăcile din PVC sau din ceramică tratate în mod corespunzător sunt adecvate pentru un substrat de reproducere (Thorpe et al, 2007).
It is recommended that results be based on measured concentrations.
Se recomandă ca plăcile să fie șlefuite pentru a îmbunătăți aderența.
However, if concentration of the test chemical in solution has been satisfactorily maintained within ±20 % of the nominal concentration throughout the test, then the results can either be based on nominal or measured values.
Tava trebuie să fie, de asemenea, prevăzută cu un ecran de protecție pentru a împiedica accesul peștilor la ouăle căzute, cu excepția cazului în care eficiența aderenței ouălor a fost demonstrată pentru substratul de reproducere utilizat.
Samples may need to be filtered (e.g. using a 0,45 μm pore size) or centrifuged.
Baza este concepută pentru a reține toate ouăle care nu aderă la suprafața plăcilor și care, în consecință, ar cădea pe fundul bazinului (sau ouăle depuse direct pe baza plană din plastic).
If needed, then centrifugation is the recommended procedure.
Toate substraturile de reproducere trebuie curățate înainte de utilizare timp de cel puțin 12 ore în apă de diluție.
However, if the test material does not adsorb to filters, filtration may also be acceptable.
Apendicele 5A
During the test, dissolved oxygen, temperature, and pH should be measured in all test vessels at least once per week.
EVALUAREA CARACTERISTICILOR SEXUALE SECUNDARE LA PIMEPHALES PROMELAS PENTRU DETECTAREA ANUMITOR SUBSTANȚE CHIMICE CARE ACȚIONEAZĂ LA NIVEL ENDOCRIN
Daily quantitative observations of spawning should be recorded on a replicate basis.
Produsele și/sau echipamentele specifice pot fi înlocuite cu materiale comparabile aflate la dispoziție.
Egg production should be recorded as the number of eggs/surviving female/day on a replicate basis.
Vizualizarea se realizează cel mai bine cu ajutorul unei lupe iluminate sau al unui microscop de disecție 3X iluminat.
Humane killing of fish
Se numără și se clasifică tuberculii.
Such gross morphological observations may provide useful qualitative and quantitative information to inform potential future fish testing requirements.
Numărul tuberculilor este înregistrat, iar dimensiunea lor poate fi clasificată cantitativ astfel: 0-absent, 1-prezent, 2-mărit și 3-pronunțat pentru fiecare organism (Fig.
However, a high correlation is not sufficient to guarantee adequate prediction of concentration in all ranges.
Localizați dorsal spre ventral în jurul marginii anterioare a ochilor.
In addition to having a sufficiently high correlation for the calibration curve, the concentration of each standard, as calculated from the calibration curve, should all fall between 70 and 120 % of its nominal concentration.
De regulă multipli la masculii maturi din grupul de control, absenți la femelele din grupul de control, dispuși în general în perechi (câte unul lângă fiecare ochi) sau singuri la femelele expuse la androgeni.
If the nominal concentrations trend away from the calibration regression line (e.g. at lower concentrations), it may be necessary to split the calibration curve into low and high ranges or to use a nonlinear model to adequately fit the absorbance data.
B-Tuberculii situați între nări (porii canalelor senzoriale).
If the curve is split, both line segments should have R2 > 0,99.
De regulă dispuși în perechi la masculii din grupul de control la niveluri de dezvoltare mai mari (2- mărit sau 3- pronunțat).
The limit of detection (LOD) is defined as the concentration of the lowest analytical standard, and limit of quantitation (LOQ) is defined as the concentration of the lowest analytical standard multiplied by the lowest dilution factor.
Absenți la femelele din grupul de control, însă uneori prezenți și dezvoltați la femelele expuse la androgeni.
On each day that VTG assays are performed, a fortification sample made using an inter-assay reference standard will be analysed (Appendix 7).
C — Tuberculii situați imediat anterior nărilor, paralel cu gura.
The ratio of the expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
În general măriți sau pronunțați la masculii de control maturi.
Evaluation of gonadal histopathology
Prezenți sau măriți la masculii mai puțin dezvoltați sau la femelele tratate cu androgeni.
Performance of gonadal histopathology may be required by regulatory authorities to study the target organ on the HPG axis following chemical exposure.
D – Tuberculi situați paralel de-a lungul liniei gurii.
In this respect, gonads are fixed either whole body or dissected.
În general clasificați ca dezvoltați la masculii din grupul de control.
When histopathology is required, specific endocrine-related responses on the gonads will be looked for in the assessment of the endocrine activity of the test chemical.
Absenți la femelele din grupul de control, însă prezenți la femelele expuse la androgeni.
These diagnostic responses essentially include the presence of testicular oocytes, Leydig cell hyperplasia, decreased yolk formation, increased spermatogonia and perifollicular hyperplasia.
E – Tuberculii situași pe mandibulă, aproape de gură, de obicei de mici dimensiuni și în general dispuși în perechi.
Other gonadal lesions like oocyte atresia, testicular degeneration, and stage changes, may have various causes.
Variabili la masculii din grupul de control sau la cei tratați și la femelele tratate.
The Guidance document on fish gonadal histopathology specifies procedures that will be used in the dissection, fixation, sectioning and histopathological evaluation of the gonads (22).
F – Tuberculii situați ventral față de E. De regulă de mici dimensiuni și dispuși în perechi.
Where a solvent control is used, an appropriate statistical test should be performed between the dilution water and solvent controls for each endpoint.
Clasificare numerică
Guidance on how to handle dilution water and solvent control data in the subsequent statistical analysis can be found in OECD, 2006c (28).
Dată
All biological response data should be analysed and reported separately by sex.
rezent
If the required assumptions for parametric methods are not met — non-normal distribution (e.g. Shapiro-Wilk's test) or heterogeneous variance (Bartlett's test or Levene's test), consideration should be given to transforming the data to homogenise variances prior to performing the ANOVA, or to carrying out a weighted ANOVA.
Scor Total
Dunnett's test (parametric) on multiple pair-wise comparisons or a Mann-Whitney with Bonferroni adjustment (non-parametric) may be used for non-monotonous dose-response.
ărit
Other statistical tests may be used (e.g. Jonckheere-Terpstra test or Williams test) if the dose-response is approximately monotone.
ronunțat
A statistical flowchart is provided in Appendix 8 to help in the decision on the most appropriate statistical test to be used.
Apendicele 5B
Reporting of test results
Mai jos este prezentată o descriere a măsurării proceselor papilare [1], care sunt caracteristici sexuale secundare la Oryzias latipes.
Study data should include:
După excizia ficatului (apendicele 6), carcasa este așezată într-un tub conic care conține aproximativ 10 ml de formol neutru 10 % tamponat (cu capul în sus și cu coada în jos).
Testing facility:
După ce se introduce corpul peștelui în formol neutru tamponat 10 %, se prinde regiunea anterioară a înotătoarei anale cu ajutorul unei pensete și se pliază timp de 30 de secunde pentru a menține deschisă înotătoarea anală.
Responsible personnel and their study responsibilities
Prinzând înotătoarea anală cu ajutorul unei pensete, se prind câteva nervuri ale înotătoarei din regiunea anterioară cu grijă să nu se zgârie procesele papilare.
Each laboratory should have demonstrated proficiency using a range of representative chemicals
După menținerea deschisă a înotătoarei anale timp de aproximativ 30 de secunde, se introduce corpul peștelui în formol neutru 10 % tamponat la temperatura camerei și se lasă astfel până la măsurarea proceselor papilare (măsurarea trebuie efectuată după fixare timp de cel puțin 24 de ore).
Characterisation of test chemical
Măsurare
Physical nature and relevant physicochemical properties
După fixarea corpului peștelui în formol neutru 10 % tamponat timp de cel puțin 24 de ore, se scoate carcasa peștelui din tubul conic și se șterge formolul cu hârtie de filtru (sau un șervet de hârtie).
Method and frequency of preparation of test concentrations
Se așază peștele cu abdomenul în sus.
Information on stability and biodegradability
Se taie apoi cu grijă înotătoarea anală cu ajutorul unei foarfeci mici de disecție (este de preferat să se taie înotătoarea anală cu puțin pterigiofor).
Characterisation of solvent (nature, concentration used)
Se prinde cu ajutorul unei pensete zona anterioară a înotătoarei anale excizate și se așază pe o lamelă din sticlă cu câteva picături de apă.
Justification of choice of solvent (if other than water)
Se acoperă apoi înotătoarea anală cu o altă lamelă din sticlă.
Species and strain
Se procedează cu grijă pentru a nu zgâria procesele papilare în momentul prinderii înotătoarei anale cu penseta.
Supplier and specific supplier facility
Se determină numărul de plăci comune care prezintă procese papilare cu ajutorul unui contor sub un microscop biologic (microscop drept sau microscop inversat).
Age of the fish at the start of the test and reproductive/spawning status
Procesele papilare sunt recunoscute atunci când o mică formațiune de procese este vizibilă pe marginea posterioară a plăcii comune.
Details of animal acclimation procedure
Se notează pe foaia de lucru numărul de plăci comune care prezintă procese papilare pentru fiecare nervură a înotătoarei (de exemplu, prima nervură: 0, a doua nervură: 10, a treia nervură: 12 etc.) și se notează suma acestor numere în foaia Excel pentru fiecare pește în parte.
Body weight of the fish at the start of the exposure (from a sub-sample of the fish stock)
Dacă este necesar, se fotografiază înotătoarea anală și se determină pe fotografie numărul de plăci comune care prezintă procese papilare.
Test procedure used (test-type, loading rate, stocking density, etc.);
După măsurare, se introduce înotătoarea anală în tubul conic descris la punctul (1) și se depozitează.
Method of preparation of stock solutions and flow-rate;
Figura 1
The nominal test concentrations, weekly measured concentrations of the test solutions and analytical method used, means of the measured values and standard deviations in the test vessels and evidence that the measurements refer to the concentrations of the test chemical in true solution;
Diagramă care ilustrează diferența de formă și de dimensiune a înotătoarei anale între sexe.
Dilution water characteristics (including pH, hardness, alkalinity, temperature, dissolved oxygen concentration, residual chlorine levels, total organic carbon, suspended solids and any other measurements made)
A, mascul; B, femelă.
Water quality within test vessels: pH, hardness, temperature and dissolved oxygen concentration;
Figura 2
Detailed information on feeding (e.g. type of food(s), source, amount given and frequency and analyses for relevant contaminants if available (e.g. PCBs, PAHs and organochlorine pesticides).
A, Procese papilare pe plăcile comune ale înotătoarei anale.
Evidence that the controls met the acceptance criteria of the test;
J.P., placă comună; A.S., spațiu axial; P., proces.
Data on mortalities occurring in any of the test concentrations and control;
B, Extremitatea distală a radiei.
Statistical analytical techniques used, treatment of data and justification of techniques used;
Actinotrichiile (Act.) sunt situate la vârf.
Data on biological observations of gross morphology, including secondary sex characteristics, egg production and VTG;
Figura 3
Results of the data analyses preferably in tabular and graphical form;
Fotografia unui corp de pește care ilustrează locul inciziei atunci când gonada este fixată într-o altă soluție de fixare decât formol neutru 10 % tamponat.
Incidence of any unusual reactions by the fish and any visible effects produced by the test chemical
În acest caz, corpul restant va fi tăiat între zona anterioară a înotătoarei anale și anus cu ajutorul unei lame (linia roșie), iar capul peștelui va fi introdus în soluția de fixare pentru gonade și partea corpului dinspre coadă va fi introdusă în formol neutru 10 % tamponat.
GUIDANCE FOR THE INTERPRETATION AND ACCEPTANCE OF THE TEST RESULTS
Procesele papilare apar în mod normal numai la masculii adulți și sunt situate pe nervurile înotătoarei, pornind de la cea de a doua până la cea de a șaptea sau a opta de la extremitatea posterioară a înotătoarei anale (Figurile 1 și 2).
In setting the range of test concentrations, care should be taken not to exceed the maximum tolerated concentration to allow a meaningful interpretation of the data.
PROCEDURI RECOMANDATE DE PRELEVARE A PROBELOR PENTRU ANALIZA VITELOGENINEI
It is important to have at least one treatment where there are no signs of toxic effects.
Se procedează cu grijă pentru a evita contaminarea încrucișată între probele VTG ale masculilor și femelelor.
Signs of disease and signs of toxic effects should be thoroughly assessed and reported.
Procedura 1A:
For example, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action, e.g. hepatotoxicity.
Pimephales promelas, prelevare de sânge din vena/artera caudală
However, interpretation of effects may be strengthened by other treatment levels that are not confounded by systemic toxicity.
După anesteziere, pedunculul caudal este parțial secționat cu o lamă de bisturiu și se recoltează sânge din vena/artera caudală cu un tub capilar heparinizat microhematocrit.
There are a few aspects to consider for the acceptance of test results.
După prelevarea sângelui, plasma este separată rapid prin centrifugare timp de 3 minute la 15000 g (sau, alternativ, timp de 10 minute la 15000 g la o temperatură de 4 °C).
As a guide, the VTG levels in control groups of males and females should be distinct and separated by about three orders of magnitude in fathead minnow and zebrafish, and about one order of magnitude for medaka.
Dacă se dorește, procentul de hematocrit poate fi determinat în urma centrifugării.
Examples of the range of values encountered in control and treatment groups are available in the validation reports (1, 2, 3, 4).
Plasma este extrasă apoi din tubul microhematocrit și depozitată într-un tub de centrifugare cu 0,13 unități de aprotinină (un inhibitor de protează) la -80°C până va fi posibilă determinarea vitelogeninei.
High VTG values in control males could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect weak oestrogen agonists.
În funcție de dimensiunea peștilor Pimephales promelas (care depinde de sex), volumele de plasmă care pot fi prelevate sunt cuprinse între 5 și 60 microlitri pentru fiecare pește (Jensen et al.
Low VTG values in control females could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect aromatase inhibitors and oestrogen antagonists.
2001).
The validation studies were used to build that guidance.
Procedura 1B:
Concerning the quantification of egg production, this is subject to important variations [the coefficient of variation (CV) may range from 20 to 60 %] that impinge the ability of the assay to detect a significant decrease in egg production smaller than 70 % as the CV approaches 50 % or more.
Pimephales promelas, prelevare de sânge din inimă
When the CV is confined to lower values (around 20-30 %), then the assay will have acceptable power (80 %) to detect 40-50 % decrease in egg production.
Alternativ, sângele poate fi prelevat printr-o puncție cardiacă realizată cu ajutorul unei seringi heparinizate (1000 de unități de heparină/ml).
The test design used for the fathead minnow, including four replicates per treatment level, should allow more power to the fecundity endpoint, compared to a test design with 2 replicates only.
Sângele este transferat în tuburi Eppendorf (ținute pe gheață) și apoi centrifugat (5 minute, 7000 g, la temperatura camerei).
If a laboratory has not performed the assay before or substantial changes (e.g. change of fish strain or supplier) have been made it is advisable that a technical proficiency study is conducted.
Plasma trebuie transferată în tuburi Eppendorf curate (în alicote, dacă volumul de plasmă permite acest lucru) și congelată rapid la – 80 °C până ce este analizată (Panter et al., 1998).
It is recommended that chemicals covering a range of modes of action or impacts on a number of the test endpoints are used.
Procedura 2A:
In practice, each laboratory is encouraged to build its own historical control data for males and females and to perform a positive control chemical for estrogenic activity (e.g. 17β-estradiol at 100 ng/l, or a known weak agonist) resulting in increased VTG in male fish, a positive control chemical for aromatase inhibition (e.g. fadrozole or prochloraz at 300 μg/l) resulting in decreased VTG in female fish, and a positive control chemical for androgenic activity (e.g. 17β-trenbolone at 5 μg/l) resulting in induction of secondary sex characteristics in female fathead minnow and medaka.
Oryzias latipes, excizia ficatului
All these data can be compared to available data from the validation studies (1, 2, 3) to ensure laboratory proficiency.
Extragerea peștilor de testare din camera de testare
In general, VTG measurements should be considered positive if there is a statistically significant increase in VTG in males (p < 0,05), or a statistically significant decrease in females (p < 0,05) at least at the highest dose tested compared to the control group, and in the absence of signs of general toxicity.
Peștii pentru testare trebuie extrași din camera de testare cu ajutorul unui minciog de mici dimensiuni.
A positive result is further supported by the demonstration of a biologically plausible relationship between the dose and the response curve.
Se procedează cu grijă pentru a nu scăpa peștii de testare în alte camere de testare.
As mentioned earlier, the VTG decrease may not entirely be of endocrine origin; however a positive result should generally be interpreted as evidence of endocrine activity in vivo, and should normally initiate actions for further clarification.
În principiu, peștii de testare trebuie scoși în următoarea ordine: din vasul de control, vasul de control cu solvent (dacă este cazul), vasul cu cea mai mică concentrație, vasul cu concentrația medie, vasul cu cea mai mare concentrație și vasul de control pozitiv.
Gonadal histopathology evaluation may be required by regulatory authorities to determine the reproductive fitness of the test animals and to allow a weight of evidence assessment of the test results.
În plus, trebuie extrași toți peștii masculi dintr-o cameră de testare înainte de extragerea femelelor rămase.
Performance of gonadal histopathology may not be necessary in cases where either, VTG or secondary sex characteristics is positive (i.e. VTG increase or decrease, or induction of secondary sex characteristics).
Sexul fiecărui pește pentru testare este identificat pe baza caracteristicilor sexuale secundare externe (de exemplu, forma înotătoarei anale).
OECD (2006b).
Se așază peștii pentru testare într-un container de transport și se transportă la stația de lucru pentru excizia ficatului.
OECD (2007).
Se verifică etichetele camerei de testare și containerul de transport pentru precizie și pentru a confirma faptul că numărul peștilor scoși din camera de testare și numărul peștilor rămași în camera de testare sunt conforme celor preconizate.
Owens JW (2007).
În cazul în care sexul nu poate fi stabilit pe baza aspectului exterior al peștelui, se îndepărtează toți peștii din incinta experimentală.
US EPA (2007).
În acest caz, sexul este identificat prin observarea gonadei sau a caracteristicilor sexuale secundare cu ajutorul unui microscop stereoscopic.
OECD (2008).
Excizia ficatului
Sumpter J.P. and S. Jobling (1995).
Se transferă peștii pentru testare din containerul de transport în soluția anestezică cu ajutorul unui minciog de mici dimensiuni.
Pawlowski S., et al.
Se șterge apa de pe suprafața peștilor pentru testare cu o hârtie de filtru (sau cu un șervet de hârtie).
Andersen L., et al (2006).
Se efectuează apoi o mică incizie transversală între zona ventrală a gâtului și zona de mijloc a abdomenului cu ajutorul unei foarfeci de disecție.
Ankley G.T., et al.
Se introduce foarfeca de disecție în mica incizie și se efectuează o incizie de-a lungul liniei mediane a abdomenului, de la un punct caudal la mantaua branhială până la partea craniană a anusulu.
Panter G.H., et al.
Se procedează cu grijă pentru a nu introduce foarfeca de disecție prea adânc evitându-se astfel distrugerea ficatului și a gonadei.