natgillin/translations-raw huggingface dataset:
If a large amount of lipid becomes attached to the tip, change it to the new one immediately to avoid contamination of the liver extract with fat.
substanțele cu compoziție necunoscută sau variabilă, produși de reacție complexă sau materiale biologice
Dispense all of the centrifuged supernatant to four 0,5 ml microtubes according to the procedure described above.
ÎNTREȚINEREA, REPRODUCEREA ȘI CONDIȚIILE TIPICE PENTRU TESTELE DE TOXICITATE ACUTĂ PE EMBRIONII DE PEȘTE-ZEBRĂ
After dispensing the supernatant to the 0,5 ml microtubes, place all of them in the tube rack with the identification label, and then freeze them in the freezer immediately.
Peștele-zebră (Danio rerio)
If the VTG concentrations are measured immediately after the pre-treatment, keep one 0,5 ml microtube (containing 30 μl of supernatant) cool in the tube rack and transfer it to the workstation where the ELISA assay is conducted.
Originea speciei
In such case, place the remaining microtubes in the tube racks and freeze them in the freezer.
India, Birmania, Malacca, Sumatra
After the collection of the supernatant, discard the residue adequately.
Dimorfism sexual
Storage of the specimen
Femele: abdomen proeminent când poartă ouă
Store the 0,5 ml microtubes containing the supernatant of the liver homogenate at ≤ – 70 °C until they are used for the ELISA.
Masculi: mai subțiri, nuanță portocalie între dungile longitudinale albastre (în special evidentă la înotătoarea anală)
Procedure 3A:
Hrană uscată sub formă de fulgi (maxim 3 % din greutatea peștelui zilnic) de 3-5 ori pe zi; nauplius de Artemis și/sau dafnii de mărime adecvată provenind din sursă necontaminată.
Zebrafish, Blood Collection from the Caudal Vein / Artery
Hrănirea cu hrană vie reprezintă o sursă de îmbogățire a mediului de viață, prin urmare, trebui să se ofere hrană vie ori de câte ori este posibil.
Immediately following anaesthesia, the caudal peduncle is severed transversely, and the blood is removed from the caudal artery/vein with a heparinised microhematocrit capillary tube.
Pentru a garanta o calitate optimă a apei, hrana în exces și materiile fecale trebuie îndepărtate la aproximativ o oră după hrănire.
Blood volumes range from 5 to 15 microliters depending on fish size.
Greutatea aproximativă a peștilor adulți
An equal volume of aprotinin buffer (6 micrograms/ml in PBS) is added to the microcapillary tube, and plasma is separated from the blood via centrifugation (5 minutes at 600 g).
Femele: 0,65 ±0.13 g
Plasma is collected in the test tubes and stored at – 20 °C until analysed for VTG or other proteins of interest.
Masculi: 0,5 ±0,1 g
Procedure 3B:
Întreținerea peștilor părinți
Zebrafish, Blood Collection by Cardiac Puncture
Iluminarea
To avoid coagulation of blood and degradation of protein the samples are collected within Phosphate-buffered saline (PBS) buffer containing heparin (1000 units/ml) and the protease inhibitor aprotinin (2 TIU/ml).
Becuri fluorescente (spectru larg); 10-20 μE/m2/s, 540-1080 lucși sau 50-100 ft-c (niveluri ambientale de laborator); perioadă de expunere la lumină de 12-16 ore
As ingredients for the buffer, heparin, ammonium-salt and lyophilised aprotinin are recommended.
26 ±1 °C
For blood sampling, a syringe (1ml) with a fixed thin needle (e.g. Braun Omnikan-F) is recommended.
Calitatea apei
The syringe should be prefilled with buffer (approximately 100 microliter) to completely elute the small blood volumes from each fish.
O2 ≥80 % saturație, duritate: de exemplu ~30-300 mg/l CaCO3, NO3-: ≤48mg/l, NH4+ și NO2-: <0,001 mg/l, clor rezidual <10 μg/l, clor organic total <25 ng/l, pH = 6,5 – 8,5
The blood samples are taken by cardiac puncture.
Alte criterii de calitate a apei
At first the fish should be anesthetized with MS-222 (100 mg/l).
Particule în suspensie < 20 mg/l, carbon organic total < 2 mg/l, Total pesticide organofosforice totale < 50 ng/l, pesticide organoclorurate totale plus bifenili policlorurați < 50 ng/l
The proper plane of anaesthesia allows the user to distinguish the heartbeat of the zebrafish.
Mărimea rezervorului de întreținere
While puncturing the heart, keep the syringe piston under weak tension.
De exemplu, 180 l, 1 pește/l
Collectable blood volumes range between 20 - 40 microliters.
Epurarea apei
After cardiac puncture, the blood/buffer-mixture should be filled into the test tube.
Permanent (filtrare cu cărbune); alte posibilități includ combinații cu întreținere prin reînnoire semistatică sau în regim dinamic cu reînnoirea continuă a apei
Plasma is separated from the blood via centrifugation (20 min; 5000 g) and should be stored at – 80°C until required for analysis.
Raportul recomandat de masculi și femele pentru reproducere
Procedure 3C:
2:1 (sau eliberare de gameți în masă)
SOP: Zebrafish, homogenisation of head & tail
Bazine pentru eliberarea de gameți
The fish are anaesthetised and euthanised in accordance with the test description.
de exemplu, bazine de 4 l echipate cu un grilaj din oțel la fund și plante artificiale ca stimulent pentru eliberarea de gameți; încălzitoare externe sau eliberare de gameți în masă în cadrul bazinelor de întreținere
The head and tail are cut of the fish in accordance with Figure 1.
Structura și aspectul ouălor
Important: All dissection instruments, and the cutting board should be rinsed and cleaned properly (e.g. with 96 % ethanol) between handling of each single fish to prevent “vitellogenin pollution” from females or induced males to uninduced males.
Corion stabil (adică foarte transparent, ne-lipicios, diametru ~ 0,8-1,5 mm)
For gonad histology
Rata de reproducere
Cut behind
O femelă matură depune cel puțin 50-80 de ouă pe zi.
Cut behind dorsal fin
În funcție de sușă, ratele de depunere a ouălor pot fi considerabil mai mari.
For Vtg analysis
Rata de fertilizare trebuie să fie ≥ 70 %.
The weight of the pooled head and tail from each fish is measured to the nearest mg.
Pentru peștii care eliberează gameți pentru prima dată, ratele de fertilizare a ouălor pot fi mai mici primele dăți.
After being weighed, the parts are placed in appropriate tubes (e.g. 1,5 ml eppendorf) and frozen at – 80 °C until homogenisation or directly homogenised on ice with two plastic pistils.
Reînnoire statică, semi-statică, în regim dinamic, 26 ±1°C, camere de testare condiționate la 24 de ore (de exemplu, plăci cu 24 de godeuri cu 2,5-5 ml per cavitate)
(Other methods can be used if they are performed on ice and the result is a homogenous mass).
DEZVOLTAREA NORMALĂ LA PEȘTELE-ZEBRĂ LA 26 °C
Important: The tubes should be numbered properly so that the head and tail from the fish can be related to their respective body-section used for gonad histology.
Figura 1: Stadii selectate ale dezvoltării timpurii la peștele-zebră (Danio rerio) 0,2-1,75 ore după fertilizare (din Kimmet et.al., 1995, (35)).
When a homogenous mass is achieved, 4 x the tissue weight of ice-cold homogenisation buffer [1] is added.
Succesiunea în timp a dezvoltării normale poate fi utilizată pentru diagnosticarea fertilizării și a viabilității ouălor (a se vedea punctul 26: Selecția de ouă fertilizate).
Keep working with the pistils until the mixture is homogeneous.
Figura 2: Stadii selectate din dezvoltarea târzie a peștelui-zebră (Danio rerio) (embrion fără corion pentru a optimiza vizibilitatea): 22 – 48 ore după fertilizare (din Kimmel et al., 1995 (35)).
Important note: New pistils are used for each fish.
Figura 3: Dezvoltarea normală a embrionilor de pește-zebră (Danio rerio): (1) 0,75 h, stadiul diviziunii în 2 celule; (2) 1 h, stadiul diviziunii în 4 celule; (3) 1,2 h, stadiul diviziunii în 8 celule; (4) 1,5 h, stadiul diviziunii în 16 celule; (5) 4,7 h, începutul epiboliei; (6) 5,3 h, aprox.
The samples are placed on ice until centrifugation at 4 °C at 50000 g for 30 min.
50 % epibolie (din Braunbeck & Lammer 2006 (40)).
Use a pipette to dispense portions of 20 μl supernatant into at least two tubes by dipping the tip of the pipette below the fat layer on the surface and carefully sucking up the supernatant without fat- or pellet fractions.
Dispunerea plăcilor cu 24 de godeuri
The tubes are stored at – 80 °C until use.
1-5 cinci concentrații de testare/substanță chimică;
Homogenisation buffer:(50 mM Tris-HCl pH 7,4; 1 % Protease inhibitor cocktail (Sigma)): 12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl Protease inhibitor cocktail.TRIS: TRIS-ULTRA PURE (ICN) e.g. from Bie & Berntsen, Denmark.Protease inhibitor cocktail: From Sigma (for mammalian tissue) Product number P 8340.NOTE: The homogenisation buffer should be used the same day as manufactured.
Mn control negativ (apa de diluție);
Place on ice during use.
iC control intern reprezentat de placă
VITELLOGENIN FORTIFICATION SAMPLES AND INTER-ASSAY REFERENCE STANDARD
Mp control pozitiv (3,4-DCA 4mg/l);
On each day that VTG assays are performed, a fortification sample made using an inter-assay reference standard will be analysed.
Ms control solvent
The VTG used to make the inter-assay reference standard will be from a batch different from the one used to prepare calibration standards for the assay being performed.
ATLASUL PUNCTELOR FINALE LETALE PENTRU TESTUL DE TOXICITATE ACUTĂ PE EMBRIONII DE PEȘTE-ZEBRĂ
The fortification sample will be made by adding a known quantity of the inter-assay standard to a sample of control male plasma.
Următoarele puncte finale apicale indică toxicitate acută și, prin urmare, decesul peștilor. coagularea embrionului, lipsa desprinderii cozii, lipsa formării de somite și lipsa bătăilor inimii.
The sample will be fortified to achieve a VTG concentration between 10 and 100 times the expected vitellogenin concentration of control male fish.
Au fost selectate următoarele micrografii pentru a ilustra aceste puncte finale:
The sample of control male plasma that is fortified may be from an individual fish or may be a composite from several fish.
Coagularea embrionului
A subsample of the unfortified control male plasma will be analysed in at least two duplicate wells.
În lumină naturală puternică, embrionii de pește-zebră coagulați prezintă o varietate de incluziuni intransparente.
The fortified sample also will be analysed in at least two duplicate wells.
Figura 2
The mean quantity of vitellogenin in the two unfortified control male plasma samples will be added to the calculated quantity of VTG added to fortification the samples to determine an expected concentration.
Lipsa formării de somite
The ratio of this expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
Deși prezintă deja întârzieri în dezvoltare cu aproximativ 10 ore, embrionul de pește-zebră cu vârsta de 24 de ore în (a) prezintă somite bine dezvoltate (→), în timp ce embrionul de la (b) nu prezintă niciun semn de formare de somite (→).
DECISION FLOWCHART FOR THE STATISTICAL ANALYSIS
Deși prezintă un edem pronunțat al sacului vitelin (*), embrionul de pește-zebră cu vârsta de 48 de ore prezintă în (c) o formare distinctă de somite (→), în timp de embrionul de pește-zebră cu vârsta de 96 de ore descris în (d) nu prezintă niciun semn de formare de somite (→).
Rep means normally distributed
A se nota, de asemenea, curbura spinală (scolioză) și edemul pericardic la embrionul prezentat în (d).
Stept-down Jonckheere or Williams' test
(a: → embrion de pește-zebră cu vârsta de 96 de ore).
Normalising transform?
A se remarca, de asemenea, lipsa mugurelui ocular (*).
variance stabilising transform?
Figura 4
Tamhane-Dunnett test on nested ANOVA
Absența bătăilor inimii este, prin definiție, greu de ilustrat prin micrografie.
Dunnett test on nested ANOVA No
Absența bătăilor inimii este indicată prin lipsa convulsiilor inimii (săgeată dublă).
Yes Yes
Imobilitatea celulelor sangvine în, de exemplu, aorta abdominală (→) nu este un indicator pentru lipsa bătăilor inimii.
No >=4 reps per conc
A se remarca, de asemenea, lipsa formării de somite în acest embrion (*, omogen mai degrabă decât apariția segmentară a țesuturilor musculare).
<=3 reps per conc
Durata de observare pentru a înregistra absența bătăilor inimii trebuie să fie de cel puțin un minut, cu o mărire de cel puțin de 80 de ori.
Dunn or Mann-Whitney test on rep means
C.50 Test de toxicitate pe Myriophyllum spicatum fără sediment
Dunn test on rep means Dunn or Mann-Whitney test
Această metodă de testare este echivalentă cu Orientarea OCDE privind testarea nr.
Dunn test <=3 reps per conc
238 (2014).
>=4 reps per conc Tamhane-Dunnett test
Aceasta este concepută pentru a evalua toxicitatea substanțelor chimice asupra Myriophyllum spicatum, o plantă acvatică dicotiledonată submersă, specie din familia peniței.
Nested ANOVA normal
Acesta se bazează pe o metodă de testare existentă ASTM (1) modificată într-un sistem de testare fără sedimente (2) pentru a estima ecotoxicitatea intrinsecă a substanțelor chimice de testare (independent de raportul distribuție-comportament a substanței chimice de testare dintre apă și sediment).
Nested ANOVA not normal
Un sistem de testare fără sediment are o complexitate analitică scăzută (doar în faza apoasă), iar rezultatele pot fi analizate în paralel și/sau comparativ cu cele obținute în urma testului pe Lemna sp.
Rep means normal or not homogenous
Culturile de plante cu creștere continuă de Myriophyllum spicatum (numai în mediu Andrews modificat, a se vedea apendicele 2) se lasă să crească în monoculturi, în concentrații diferite ale substanței de testare, pentru o perioadă de 14 zile într-un sistem de testare fără sediment.
Rep means normal & homogenous
Obiectivul testului este de a cuantifica efectele substanței chimice asupra creșterii vegetative în această perioadă, pe baza evaluărilor variabilelor de măsurare selectate.
Step-down trendtest on replicate means
Creșterea lungimii lăstarilor, a ramurilor laterale și a rădăcinilor, precum și dezvoltarea greutății în stare proaspătă și a greutății uscate a vârtejurilor constituie variabilele de măsurare.
Not monotone
De asemenea, se ține cont de variațiile calitative distinctive ale organismelor de testare, cum ar fi deformarea sau cloroza și necroza sugerate de îngălbenire, înălbire sau colorarea în maro.
Monotone
Pentru cuantificarea efectelor substanțelor chimice, creșterea în soluțiile de testare se compară cu cea a probelor de control, iar concentrația care provoacă o inhibare specificată de x % a creșterii este determinată și exprimată ca ECx: „x” poate avea orice valoare în funcție de cerințele de reglementare, de exemplu, EC10, EC 20, EC 50.
Determine whether Dose-Response is monotone
Trebuie remarcat că estimările valorilor EC10 și EC20 sunt fiabile și adecvate doar în cadrul testelor în care coeficienții de variație ai plantelor de control scad sub nivelul estimat al efectului, și anume coeficienții de variație trebuie să fie <20 % pentru estimarea precisă a unei EC20.
C.49 Fish Embryo Acute Toxicity (FET) Test
Se vor determina atât rata medie specifică de creștere (estimată pe baza evaluărilor lungimii lăstarului principal și a altor trei variabile suplimentare de măsurare), cât și randamentul (estimat pe baza creșterii lungimii lăstarului principal și a altor trei variabile suplimentare de măsurare) la plantele tratate și netratate.
This test method (TM) is equivalent to OECD test guideline (TG) 236 (2013).
Viteza specifică de creștere (r) și randamentul (y) sunt folosite prin urmare ca să determine ErCx (de exemplu, ErC10, ErC20, ErC50) și, respectiv, EyCx (de exemplu, EyC10, EyC20, EyC50).
The FET-test is based on studies and validation activities performed on zebrafish (1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)(9)(10)(11)(12)(13)(14).
Informațiile privind substanța chimică de testare care se pot dovedi utile pentru stabilirea condițiilor de testare includ formula structurală, puritatea și impuritățile, solubilitatea în apă, stabilitatea în apă și la lumină, constanta de disociere (pKa), coeficientul de partiție octanol/apă (Kow), presiunea de vapori și biodegradabilitatea.
The FET-test has been successfully applied to a wide range of chemicals exhibiting diverse modes of action, solubilities, volatilities, and hydrophobicities (reviewed in 15 and 16).
Solubilitatea în apă și presiunea vaporilor pot fi folosite pentru a calcula constanta legii lui Henry, care va arăta dacă sunt probabile pierderi semnificative ale substanței chimice de testare în perioada de testare.
Newly fertilised zebrafish eggs are exposed to the test chemical for a period of 96 hrs.
Aceasta va indica dacă este necesară adoptarea anumitor măsuri pentru limitarea unor astfel de pierderi.
Every 24 hrs, up to four apical observations are recorded as indicators of lethality (6): (i) coagulation of fertilised eggs, (ii) lack of somite formation, (iii) lack of detachment of the tail-bud from the yolk sac, and (iv) lack of heartbeat.
Dacă informațiile privind solubilitatea și stabilitatea substanței de testare sunt incerte, se recomandă ca acestea să fie evaluate în condițiile de testare, și anume mediul de creștere, temperatura și condițiile de iluminare care vor fi folosite la test.
At the end of the exposure period, acute toxicity is determined based on a positive outcome in any of the four apical observations recorded, and the LC50 is calculated.
Controlul pH-ului mediului de testare este deosebit de important, de exemplu în cazul testării unor metale sau substanțe instabile din punct de vedere hidrolitic.
Useful information about substance-specific properties include the structural formula, molecular weight, purity, stability in water and light, pKa and Kow, water solubility and vapour pressure as well as results of a test for ready biodegradability (TM C.4 (17) or TM C.29 (18)).
Îndrumări suplimentare privind substanțele de testare cu proprietăți fizico-chimice care le fac dificil de testat sunt prezentate într-un document de orientare al OCDE (5).
Solubility and vapour pressure can be used to calculate Henry's law constant, which will indicate whether losses due to evaporation of the test chemical may occur.
Pentru ca testul să fie valid, perioada de duplicare a lungimii lăstarului principal din proba de control trebuie să fie mai mică de 14 zile.
A reliable analytical method for the quantification of the substance in the test solutions with known and reported accuracy and limit of detection should be available.
Folosind mediile și condițiile de testare descrise în această metodă de testare, acest criteriu poate fi îndeplinit prin utilizarea unui test semistatic sau static.
If the test method is used for the testing of a mixture, its composition should, as far as possible, be characterised, e.g. by the chemical identity of its constituents, their quantitative occurrence and their substance-specific properties (see paragraph 4).
Coeficientul mediu de variație pentru randament bazat pe măsurători ale greutății lăstarilor în stare proaspătă (și anume, de la începutul și până la sfârșitul testului) și variabilele suplimentare de măsurare (a se vedea punctul 37) în culturile de control nu trebuie să depășească 35 % între duplicate.
Concerning substances that may be activated via metabolism, there is evidence that zebrafish embryos do have biotransformation capacities (19)(20)(21)(22).
Mai mult de 50 % din numărul probelor duplicat din grupul de control se păstrează sterile pe parcursul perioadei de expunere de 14 zile, ceea ce înseamnă lipsa în mod evident a contaminării cu alte organisme precum alge, ciuperci și bacterii (soluție clară).
However, the metabolic capacity of embryonic fish is not always similar to that of juvenile or adult fish.
Notă: Orientări privind modul de evaluare a sterilității sunt prezentate în raportul testului circular (4).
For instance, the protoxicant allyl alcohol (9) has been missed in the FET.
SUBSTANȚA CHIMICĂ DE REFERINȚĂ
Therefore, if there are any indications that metabolites or other transformation products of relevance may be more toxic than the parent compound, it is also recommended to perform the test with these metabolites/transformation products and to also use these results when concluding on the toxicity of the test chemical, or alternatively perform another test which takes metabolism into further account.
Substanța (substanțele) chimică(e) de referință, cum ar fi 3,5-diclorfenol folosit în testul circular (4), poate (pot) fi testată(e) ca metodă de verificare a procedurii de testare; pe baza datelor testului circular, media valorilor EC50 pentru 3,5-DCF pentru variabile de răspuns diferite (a se vedea punctele 37-41 din această metodă de testare) se situează între 3,2 mg/l și 6,9 mg/l (a se vedea raportul testului circular pentru detalii privind intervalul de încredere pentru valorile respective).
For substances with a molecular weight ≥ 3kDa, a very bulky molecular structure, and substances causing delayed hatch which might preclude or reduce the post-hatch exposure, embryos are not expected to be sensitive because of limited bioavailability of the substance, and other toxicity tests might be more appropriate.
SUBSTANȚA CHIMICĂ DE REFERINȚĂ
For the test results to be valid, the following criteria apply:
DESCRIEREA METODEI
The overall fertilisation rate of all eggs collected should be ≥ 70 % in the batch tested.
Toate echipamentele care intră în contact cu mediile de testare trebuie să fie confecționate din sticlă sau alt material chimic inert.
The water temperature should be maintained at 26 ± 1 °C in test chambers at any time during the test.
Recipientele de sticlă folosite pentru cultură și testare trebuie să fie curățate de contaminanții chimici care se pot infiltra în mediul de testare și trebuie să fie sterile.
Overall survival of embryos in the negative (dilution-water) control, and, where relevant, in the solvent control should be ≥ 90 % until the end of the 96 hrs exposure.
Vasele de testare trebuie să fie suficient de lungi pentru ca lăstarii din vasele de control să crească în faza apoasă fără a atinge suprafața mediului de testare la sfârșitul testului.
Exposure to the positive control (e.g. 4,0 mg/l 3,4-dichloroaniline for zebrafish) should result in a minimum mortality of 30 % at the end of the 96 hrs exposure.
Se recomandă tuburi din sticlă borosilicată cu pereți groși fără margine ridicată, cu un diametru interior de aproximativ 20 mm și o lungime de aproximativ 250 mm, cu capace de aluminiu
Hatching rate in the negative control (and solvent control if appropriate) should be ≥ 80 % at the end of 96 hrs exposure.
Întrucât mediul modificat Andrews conține zaharoză (care stimulează creșterea ciupercilor și a bacteriilor), soluțiile de testare trebuie să fie preparate în condiții sterile.
At the end of the 96 hrs exposure, the dissolved oxygen concentration in the negative control and highest test concentration should be ≥ 80 % of saturation.
Toate lichidele, precum și echipamentele sunt sterilizate înainte de utilizare.
An overview of recommended maintenance and test conditions is available in Appendix 2.
Sterilizarea se realizează prin tratarea cu aer cald (210 °C) timp de 4 ore sau la autoclavă timp de 20 minute la 121 °C.
The following equipment is needed:
În plus, toate flacoanele, vasele, bolurile etc. și alte echipamente sunt supuse unui tratament la flacără pe un banc de lucru steril chiar înainte de utilizare.
Fish tanks made of chemically inert material (e.g. glass) and of a suitable capacity in relation to the recommended loading (see “Maintenance of brood fish”, paragraph 14);
Culturile și vasele de testare nu se păstrează în același loc.
Inverted microscope and/or binocular with a capacity of at least 80-fold magnification.
Această condiție poate fi îndeplinită prin folosirea unor încăperi, incubatoare sau camere de creștere care reproduc condițiile de mediu separate.
If the room used for recording observations cannot be adjusted to 26 ± 1 °C, a temperature-controlled cross movement stage or other methods to maintain temperature are necessary;
Iluminarea și temperatura trebuie să fie controlabile și menținute la un nivel constant.
Test chambers; e.g., standard 24-well plates with a depth of approx.
Organismul de testare
20 mm. (see “Test chambers”, paragraph 11);
Myriophyllum spicatum – o plantă acvatică dicotiledonată submersă – este o specie din familia peniței de apă.
e.g., self-adhesive foil to cover the 24-well plates;
Între lunile iunie și august, flori discrete roz-albe își fac apariția la suprafața apei.