natgillin/translations-raw huggingface dataset:
No. binucleate cells
DPRA este propus pentru a aborda evenimentul declanșator molecular al AOP al sensibilizării cutanate, și anume reactivitatea proteinelor, prin cuantificarea reactivității substanțelor chimice testate față de peptidele model sintetice care conțin fie lizină, fie cisteină (8).
No. multinucleate cells
Valorile depleției procentului de peptidă cisteină și lizină sunt utilizate ulterior pentru a clasifica o substanță în una dintre cele patru categorii de reactivitate pentru sprijinirea diferențierii între substanțele sensibilizante pentru piele și cele nesensibilizante (9).
Total number of cells
DPRA a fost evaluat într-un studiu principal de validare efectuat într-un laborator de referință al Uniunii Europene pentru metode alternative la testare pe animale (EURL ECVAM) și o revizuire independentă inter pares de către Comitetul științific consultativ (ESAC) din cadrul EURL ECVAM și a fost considerat valabil din punct de vedere științific (10) pentru a fi utilizat ca parte a unei IATA pentru a sprijini diferențierea între substanțele sensibilizante pentru piele și cele nesensibilizante, în scopul clasificării și etichetării pericolelor.
Thus, a CBPI of 1 (all cells are mononucleate) is equivalent to 100 % cytostasis.
Exemple privind utilizarea datelor DPRA în combinație cu alte informații sunt raportate în referințe bibliografice (11) (12) (13) (14).
Cytostasis = 100-RI
Definițiile sunt prevăzute în apendicele I.
T treated cultures
CONSIDERAȚII INIȚIALE, APLICABILITATE ȘI LIMITĂRI
C control cultures
Corelația reactivității proteinelor cu potențialul de sensibilizare cutanată este bine stabilită (15) (16) (17).
Thus, an RI of 53 % means that, compared to the numbers of cells that have divided to form binucleate and multinucleate cells in the control culture, only 53 % of this number divided in the treated culture, i.e. 47 % cytostasis.
Cu toate acestea, întrucât legarea proteinelor reprezintă doar un eveniment cheie, evenimentul declanșator molecular al AOP a sensibilizării cutanate, informațiile cu privire la reactivitatea proteinelor obținute cu metode de testare și metode care nu fac recurs la testări ar putea să nu fie suficiente în sine pentru a concluziona cu privire la absența potențialului de sensibilizare cutanată al substanțelor chimice.
When cytoB is not used, evaluation of cytotoxicity based on Relative Increase in Cell Counts (RICC) or on Relative Population Doubling (RPD) is recommended (69), as both take into account the proportion of the cell population which has divided.
Prin urmare, datele obținute prin această metodă de testare se iau în considerare în contextul unor abordări integrate precum IATA, acestea fiind combinate cu alte informații suplimentare, de exemplu obținute din testele in vitro care abordează alte evenimente importante ale AOP a sensibilizării cutanate, precum și prin metode care nu fac recurs la testări inclusiv extrapolări ale datelor referitoare la substanțe chimice analoage.
Thus, a RICC, or a RPD of 53 % indicates 47 % cytotoxicity/cytostasis.
Această metodă de testare poate fi utilizată, în combinație cu alte informații suplimentare, pentru a sprijini diferențierea între substanțele sensibilizante pentru piele (și anume, categoria 1 din GHS al ONU/Regulamentul CLP) și cele nesensibilizante în contextul IATA.
By using a Proliferation Index (PI), cytotoxicity may be assessed via counting the number of clones consisting of 1 cell (cl1), 2 cells (cl2), 3 to 4 cells (cl4) and 5 to 8 cells (cl8).
Această metodă de testare nu poate fi utilizată în mod independent, nici pentru a subcategoriza substanțele sensibilizante pentru piele în subcategoriile 1A și 1B, astfel cum sunt definite prin GHS al ONU/Regulamentul CLP, nici pentru a se prevedea potența pentru deciziile în materie de evaluare a siguranței.
The PI has been used as a valuable and reliable cytotoxicity parameter also for cell lines cultured in vitro in the absence of cytoB (35) (36) (37) (38) and can be seen as a useful additional parameter.
Cu toate acestea, în funcție de cadrul de reglementare, un rezultat pozitiv obținut prin intermediul DPRA poate fi utilizat în mod independent pentru a clasifica o substanță chimică în categoria 1 din GHS al ONU/Regulamentul CLP.
In any case, the number of cells before treatment should be the same for treated and negative control cultures.
Metoda de testare a DPRA s-a dovedit a fi transferabilă către laboratoare cu experiență în analiza prin cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC).
When using automated scoring systems, for instance, flow cytometry, laser scanning cytometry or image analysis, the number of cells in the formula can be substituted by the number of nuclei.
În prezent, sunt disponibile puține informații cu privire la aplicabilitatea DPRA la amestecuri cu compoziție cunoscută (18) (19).
This test method (TM) is equivalent to the OECD test guideline (TG) 442C (2015).
Actualul model predictiv nu pot fi utilizat pentru amestecuri complexe cu compoziție necunoscută sau pentru substanțe cu compoziție necunoscută sau variabilă, produse de reacție complexă sau materiale biologice (și anume, substanțe UVCB) din cauza raportului molar definit de substanță chimică de testat și peptidă.
A skin sensitiser refers to a substance that will lead to an allergic response following skin contact as defined by the United Nations Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (UN GHS) (1) and Regulation (EC) No 1272/2008 of the European Parliament and Council on Classification, Labelling and Packaging of Substances and Mixtures (CLP) [12].
În acest scop, este necesară dezvoltarea unui nou model predictiv, bazat pe o abordare gravimetrică.
This test method provides an in chemico procedure (Direct Peptide Reactivity Assay — DPRA) to be used for supporting the discrimination between skin sensitisers and non-sensitisers in accordance with the UN GHS and CLP.
În cazul în care poate fi demonstrată existența unor dovezi privind neaplicabilitatea metodei de testare la alte categorii specifice de substanțe chimice, metoda de testare nu trebuie să fie utilizată la respectivele categorii specifice de substanțe chimice.
There is general agreement regarding the key biological events underlying skin sensitisation.
Această metodă de testare este o metodă in chemico care nu cuprinde un sistem metabolic.
The existing knowledge of the chemical and biological mechanisms associated with skin sensitisation has been summarised in the form of an Adverse Outcome Pathway (AOP) (2), from the molecular initiating event through the intermediate events to the adverse effect namely allergic contact dermatitis in humans or contact hypersensitivity in rodents.
Substanțele chimice care necesită bioactivare enzimatică pentru a-și exercita potențialul de sensibilizare cutanată (și anume, prohaptene) nu pot fi detectate prin metoda de testare.
Within the skin sensitisation AOP, the molecular initiating event is the covalent binding of electrophilic substances to nucleophilic centres in skin proteins.
Substanțe chimice care devin sensibilizante în urma transformării abiotice (și anume, prehaptene) sunt raportate în unele cazuri a fi corect identificate prin metoda de testare (18).
The assessment of skin sensitisation has typically involved the use of laboratory animals.
Având în vedere considerațiile de mai sus, rezultatele negative obținute prin metoda de testare se interpretează în contextul limitelor menționate și în legătură cu alte surse de informații în cadrul unei IATA.
The classical methods based on guinea-pigs, the Magnusson Kligman Guinea Pig Maximisation Test (GMPT) and the Buehler Test (TM B.6 (3)), study both the induction and elicitation phases of skin sensitisation.
Substanțele chimice de testat care nu se leagă covalent la peptidă, dar își promovează oxidarea (și anume, dimerizarea cisteinei) ar putea conduce la o posibilă supraestimare a depleției de peptidă, având ca rezultat posibile estimări fals pozitive și/sau atribuirea unei clase de reactivitate mai mare (a se vedea punctele 29 și 30).
A murine test, the Local Lymph Node Assay (LLNA, TM B.42 (4)) and its two non-radioactive modifications, LLNA: DA (TM B.50 (5)) and LLNA: BrdU-ELISA (TM B.51 (6)), which all assess the induction response exclusively, have also gained acceptance since they provide an advantage over the guinea pig tests in terms of animal welfare and an objective measurement of the induction phase of skin sensitisation.
Astfel cum a fost descris, DPRA sprijină diferențierea între substanțele sensibilizante pentru piele și cele nesensibilizante.
More recently, mechanistically based in chemico and in vitro test methods have been considered scientifically valid for the evaluation of the skin sensitisation hazard of chemicals.
Cu toate acestea, acesta poate, de asemenea, să contribuie la evaluarea potenței de sensibilizare (11) atunci când este utilizat în abordări integrate precum IATA.
However, combinations of non-animal methods (in silico, in chemico, in vitro) within Integrated Approaches to Testing and Assessment (IATA) will be needed to be able to fully substitute for the animal tests currently in use given the restricted AOP mechanistic coverage of each of the currently available non-animal test methods (2) (7).
Sunt însă necesare lucrări suplimentare, de preferință pe baza datelor cu privire la oameni, pentru a determina modalitatea în care rezultatele DPRA pot informa evaluarea potenței.
The DPRA is proposed to address the molecular initiating event of the skin sensitisation AOP, namely protein reactivity, by quantifying the reactivity of test chemicals towards model synthetic peptides containing either lysine or cysteine (8).
DPRA este o metodă in chemico care cuantifică concentrația de peptidă cisteină sau lizină rămasă după incubarea timp de 24 de ore cu substanța chimică de testat la 25 ± 2,5 °C.
Cysteine and lysine percent peptide depletion values are then used to categorise a substance in one of four classes of reactivity for supporting the discrimination between skin sensitisers and non-sensitisers (9).
Peptidele sintetice conțin fenilalanină pentru a asista la detecție.
The DPRA has been evaluated in a European Union Reference Laboratory for Alternatives to Animal Testing (EURL ECVAM)-lead validation study and subsequent independent peer review by the EURL ECVAM Scientific Advisory Committee (ESAC) and was considered scientifically valid (10) to be used as part of an IATA to support the discrimination between skin sensitisers and non-sensitisers for the purpose of hazard classification and labelling.
Se măsoară concentrația relativă de peptidă prin cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC) cu eluție în gradient și detecție UV la 220 nm.
Examples on the use of DPRA data in combination with other information are reported in the literature (11) (12) (13) (14).
Valorile depleției procentului de peptidă cisteină și lizină sunt apoi calculate și utilizate într-un model predictiv (a se vedea punctul 29), care permite repartizarea substanței chimice de testat în una dintre cele patru clase de reactivitate utilizate pentru susținerea diferențierii între substanțele sensibilizante de cele nesensibilizante.
Definitions are provided in Appendix I.
Înainte de utilizarea sistematică a metodei descrise în prezenta metodă de testare, laboratoarele trebuie să demonstreze performanțele lor tehnice utilizând cele zece substanțe de verificare menționate în apendicele 2.
INITIAL CONSIDERATIONS, APPLICABILITY AND LIMITATIONS
Această metodă de testare se bazează pe protocolul DPRA DB-ALM nr.
The correlation of protein reactivity with skin sensitisation potential is well established (15) (16) (17).
154 (20), care reprezintă protocolul utilizat pentru studiul de validare coordonat de EURL ECVAM.
Nevertheless, since protein binding represents only one key event, albeit the molecular initiating event of the skin sensitisation AOP, protein reactivity information generated with testing and non-testing methods may not be sufficient on its own to conclude on the absence of skin sensitisation potential of chemicals.
Se recomandă utilizarea acestui protocol atunci când se pune în aplicare și se utilizează metoda în laborator.
Therefore, data generated with this test method should be considered in the context of integrated approaches such as IATA, combining them with other complementary information e.g. derived from in vitro assays addressing other key events of the skin sensitisation AOP as well as non-testing methods including read-across from chemical analogues.
Componentele și procedurile principale pentru DPRA sunt descrise în continuare.
This test method can be used, in combination with other complementary information, to support the discrimination between skin sensitisers (i.e. UN GHS/CLP Category 1) and non-sensitisers in the context of IATA.
În cazul în care se utilizează un alt dispozitiv HPLC, echivalența acestuia cu dispozitivul validat descris în protocol DB-ALM trebuie să fie demonstrată (de exemplu, prin testări ale substanțelor de verificare din apendicele 2).
This test method cannot be used on its own, neither to sub-categorise skin sensitisers into subcategories 1A and 1B as defined by UN GHS/CLP, nor to predict potency for safety assessment decisions.
Pregătirea peptidelor care conțin cisteină sau lizină
However, depending on the regulatory framework, a positive result with the DPRA may be used on its own to classify a chemical into UN GHS/CLP category 1.
Soluțiile mamă de peptide sintetice care conțin cisteină (Ac-RFAACAA-COOH) și lizină (Ac-RFAAKAA-COOH) cu o puritate mai mare de 85 % și de preferință în plaja de valori 90-95 %, sunt proaspăt preparate, chiar înainte de incubarea cu substanța chimică de testat.
The DPRA test method proved to be transferable to laboratories experienced in high-performance liquid chromatography (HPLC) analysis.
Concentrația finală de peptidă cisteină trebuie să fie de 0,667 mM în tampon de fosfat cu pH 7,5 în timp ce concentrația finală de peptidă lizină trebuie să fie de 0,667 mM în tampon de acetat de amoniu cu pH 10,2.
The level of reproducibility in predictions that can be expected from the test method is in the order of 85 % within laboratories and 80 % between laboratories (10).
Secvența de determinare a HPLC se configurează pentru a menține timpul de analiză HPLC sub 30 de ore.
Results generated in the validation study (18) and published studies (19) overall indicate that the accuracy of the DPRA in discriminating sensitisers (i.e. UN GHS/CLP Cat.
Pentru dispozitivul HPLC utilizat în studiul de validare și descris în prezenta metodă de testare, într-o singură determinare HPLC pot fi incluse până la 26 de probe de analiză (care includ substanța chimică de testat, martorul pozitiv și numărul corespunzător de martori solvent în funcție de numărul individual de solvenți utilizați în cadrul testului, fiecare testat în triplicat).
1) from non-sensitisers is 80 % (N=157) with a sensitivity of 80 % (88/109) and specificity of 77 % (37/48) when compared to LLNA results.
Toate probele duplicat analizate în aceeași determinare utilizează soluții mamă de peptidă cisteină și lizină identice.
The DPRA is more likely to under predict chemicals showing a low to moderate skin sensitisation potency (i.e. UN GHS/CLP subcategory 1B) than chemicals showing a high skin sensitisation potency (i.e. UN GHS/CLP subcategory 1A) (18) (19).
Se recomandă testarea loturile individuale de peptide pentru solubilitate adecvată înainte de utilizarea acestora.
However, the accuracy values given here for the DPRA as a stand-alone test method are only indicative since the test method should be considered in combination with other sources of information in the context of an IATA and in accordance with the provisions of paragraph 9 above.
Prepararea substanței chimice de testat
Furthermore when evaluating non-animal methods for skin sensitisation, it should be kept in mind that the LLNA test as well as other animal tests may not fully reflect the situation in the species of interest, i.e. humans.
Solubilitatea substanței chimice de testat într-un solvent adecvat se evaluează înainte de efectuarea testului, urmărind procedura descrisă în protocolul DPRA DB-ALM (20).
On the basis of the overall data available, the DPRA was shown to be applicable to test chemicals covering a variety of organic functional groups, reaction mechanisms, skin sensitisation potency (as determined in in vivo studies) and physico-chemical properties (8) (9) (10) (19).
Un solvent adecvat va dizolva substanța chimică de testat complet.
Taken together, this information indicates the usefulness of the DPRA to contribute to the identification of skin sensitisation hazard.
Având în vedere faptul că în DPRA substanța chimică de testat se incubează în exces fie cu peptidele cisteină, fie cu cele lizină, inspecția vizuală a formării unei soluții clare este considerată suficientă pentru a stabili dizolvarea substanței chimice de testat (și a tuturor componentelor acesteia în cazul testării unei substanțe multicomponente sau un amestec).
The term “test chemical” is used in this test method to refer to what is being tested and is not related to the applicability of the DPRA to the testing of substances and/or mixtures.
Solvenți adecvați sunt acetonitrilul, apă, 1: 1 amestec apă: acetonitril, izopropanol, acetonă sau 1: 1 amestec acetonă: acetonitril.
This test method is not applicable for the testing of metal compounds since they are known to react with proteins with mechanisms other than covalent binding.
Se pot utiliza alți solvenți atât timp cât aceștia nu au un impact asupra stabilității peptidei, astfel cum este monitorizată cu martori de referință C (și anume, probe constituite din peptida singură dizolvată în solvent adecvat; a se vedea apendicele 3).
A test chemical should be soluble in an appropriate solvent at a final concentration of 100 mM (see paragraph 18).
Ca o ultimă opțiune, în cazul în care substanța chimică de testat nu este solubilă în oricare dintre acești solvenți, se încearcă solubilizarea în 300 μl DMSO și se diluează soluția rezultată cu 2700 μl de acetonitril, iar, în cazul în care substanța chimică de testat nu este solubilă în acest amestec, se încearcă solubilizarea aceleiași cantități de substanță chimică de testat în 1500 μl de DMSO și se diluează soluția rezultată cu 1500 μl de acetonitril.
However, test chemicals that are not soluble at this concentration may still be tested at lower soluble concentrations.
Substanța chimică testată se cântărește în prealabil în flacoane de sticlă și se dizolvă imediat înainte de testare într-un solvent adecvat pentru a pregăti o soluție de 100 mM.
In such a case, a positive result could still be used to support the identification of the test chemical as a skin sensitiser but no firm conclusion on the lack of reactivity should be drawn from a negative result.
În cazul amestecurilor și al substanțelor multicomponente cu compoziție cunoscută, se determină o puritate unică din suma proporției componentelor acestora (cu excepția apei) și se determină o masă moleculară unică aparentă prin luarea în considerare a maselor moleculare individuale ale fiecărui component al amestecului (cu excepția apei) și proporțiile lor individuale.
Limited information is currently available on the applicability of the DPRA to mixtures of known composition (18) (19).
Puritatea și greutatea moleculară aparentă rezultate sunt utilizate apoi pentru a calcula cantitatea de substanță chimică de testat necesară pentru a pregăti o soluție de 100 mM.
The DPRA is nevertheless considered to be technically applicable to the testing of multi-constituent substances and mixtures of known composition (see paragraph 18).
În cazul polimerilor a căror masă moleculară predominantă nu poate fi determinată, se poate lua în considerare masa moleculară a monomerului (sau greutatea moleculară a diverșilor monomeri care constituie polimerul) pentru a se prepara o soluție de 100 mM.
Before use of this test method on a mixture for generating data for an intended regulatory purpose, it should be considered whether, and if so why, it may provide adequate results for that purpose.
Cu toate acestea, atunci când se testează amestecuri, substanțe multicomponente sau polimeri cu compoziție cunoscută, se ia în considerare, de asemenea, testarea substanței chimice pure.
Such considerations are not needed when there is a regulatory requirement for testing of the mixture.
În cazul substanțelor lichide, substanța chimică pură se testează ca atare, fără nicio diluție în prealabil prin incubarea la raport molar 1:10 și 1:50 cu peptidele cisteină și, respectiv, peptidele lizină.
The current prediction model cannot be used for complex mixtures of unknown composition or for substances of unknown or variable composition, complex reaction products or biological materials (i.e. UVCB substances) due to the defined molar ratio of test chemical and peptide.
În cazul substanțelor solide, substanța chimică de testat se dizolvă la concentrația maximă solubilă în același solvent utilizat pentru pregătirea soluției aparente de 100 mM.
For this purpose a new prediction model based on a gravimetric approach will need to be developed.
Se testează în continuare ca atare, fără orice diluție suplimentară, prin incubarea la raport 1:10 și 1:50 cu peptidele cisteină și respectiv, peptidele lizină.
In cases where evidence can be demonstrated on the non-applicability of the test method to other specific categories of chemicals, the test method should not be used for those specific categories of chemicals.
Rezultatele concordante (reactive sau nereactive) dintre soluția aparentă de 100 mM și substanța chimică pură permit o concluzie definitivă cu privire la rezultat.
This test method is an in chemico method that does not encompass a metabolic system.
Pregătirea martorilor pozitivi, a martorilor de referință și a martorilor de coeluție
Chemicals that require enzymatic bioactivation to exert their skin sensitisation potential (i.e. pro-haptens) cannot be detected by the test method.
Aldehida cinamică (CAS 104-55-2; de puritate alimentară ≥ 95 %) se utilizează ca martor pozitiv (MP) la o concentrație de 100 mM în acetonitril.
Chemicals that become sensitisers after abiotic transformation (i.e. pre-haptens) are reported to be in some cases correctly detected by the test method (18).
Pot fi utilizați alți martori pozitivi adecvați, de preferință care să furnizeze valori medii de epuizare, în cazul în care sunt disponibile date anterioare pentru a obține criterii comparabile de acceptare a determinării.
In the light of the above, negative results obtained with the test method should be interpreted in the context of the stated limitations and in the connection with other information sources within the framework of an IATA.
În plus, în secvența de determinare HPLC se includ, de asemenea, martori de referință (și anume, probe care conțin doar peptida dizolvată în solventul corespunzător) și aceștia sunt utilizați pentru a verifica caracterul adecvat al sistemului HPLC înainte de analiză (martori de referință A), stabilitatea în timp a martorilor de referință (martori de referință B) și pentru a verifica dacă solventul utilizat pentru a dizolva substanța chimică de testat nu are un impact asupra procentului de depleție de peptidă (martori de referință C) (a se vedea apendicele 3).
Test chemicals that do not covalently bind to the peptide but promote its oxidation (i.e. cysteine dimerisation) could lead to a potential over estimation of peptide depletion, resulting in possible false positive predictions and/or assignement to a higher reactivity class (see paragraphs 29 and 30).
Martorul de referință corespunzător pentru fiecare substanță chimică este utilizat pentru a calcula procentul de depleție de peptidă pentru substanța chimică respectivă (a se vedea punctul 26).
As described, the DPRA supports the discrimination between skin sensitisers and non-sensitisers.
În plus, un martor de coeluție constituit doar din substanța chimică de testat, pentru fiecare dintre substanțele chimice de testat analizate se include în secvență de determinare pentru a detecta posibila coeluție a substanței chimice de testat fie cu peptida lizină, fie cu peptida cisteină.