natgillin/translations-raw huggingface dataset:
ASSESSMENT OF SECONDARY SEX CHARACTERISTICS IN FATHEAD MINNOW FOR THE DETECTION OF CERTAIN ENDOCRINE ACTIVE CHEMICALS
Testul FET se bazează pe studii și activități de validare efectuate asupra peștelui-zebră (1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)(9)(10)(11)(12)(13)(14).
Overview
Testul FET a fost aplicat cu succes unei game largi de substanțe chimice care prezintă diferite moduri de acțiune și grade de volatilitate, solubilitate și hidrofobicitate (trecute în revistă în notele 15 și 16).
Potentially important characteristics of physical appearance in adult fathead minnows in endocrine disrupter testing include body colour (i.e., light/dark), coloration patterns (i.e., presence or absence of vertical bands), body shape (i.e., shape of head and pectoral region, distension of abdomen), and specialised secondary sex characteristics (i.e., number and size of nuptial tubercles, size of dorsal pad and ovipositor).
Ouăle de pește-zebră nou fertilizate sunt expuse unei substanțe chimice pentru o perioadă de 96 de ore.
Nuptial tubercles are located on the head (dorsal pad) of reproductively-active male fathead minnows, and are usually arranged in a bilaterally-symmetric pattern (Jensen et al.
La fiecare 24 de ore, se înregistrează până la patru observații apicale drept indicatori de letalitate (6): (i) coagularea ouălor fertilizate, (ii) lipsa formării de somite, (iii) lipsa desprinderii mugurelui caudal de sacul vitelin și (iv) lipsa bătăilor inimii.
2001).
La finalul perioadei de expunere, toxicitatea acută se determină pe baza unui rezultat pozitiv în oricare dintre cele patru observații apicale înregistrate și se calculează LC50.
Control females and juvenile males and females exhibit no tubercle development (Jensen et al.
CONSIDERAȚII INIȚIALE 4.
2001).
Informațiile utile privind proprietățile specifice substanței includ formula structurală, greutatea moleculară, puritatea, stabilitatea în apă și la lumină, pKa și Kow, solubilitatea în apă și presiunea vaporilor, precum și rezultatele unui test de biodegradabilitate rapidă [MT C.4 (17) sau MT C.29 (18)].
There can be up to eight individual tubercles around the eyes and between the nares of the males.
În cazul în care metoda de testare este utilizată pentru testarea unui amestec, compoziția acestuia trebuie să fie caracterizată, pe cât posibil, de exemplu prin identitatea chimică a constituenților săi, prezența lor cantitativă și proprietățile specifice substanței (a se vedea punctul 4).
The greatest numbers and largest tubercles are located in two parallel lines immediately below the nares and above the mouth.
În ceea ce privește substanțele care pot fi activate prin intermediul metabolismului, există dovezi conform cărora peștii-zebră au într-adevăr capacități de biotransformare (19)(20)(21)(22).
In many fish there are groups of tubercles below the lower jaw; those closest to the mouth generally occur as a single pair, while the more ventral set can be comprised of up to four tubercles.
Cu toate acestea, capacitatea metabolică a peștilor în stadiu embrionar nu este întotdeauna similară cu cea a peștilor alevini sau adulți.
The actual numbers of tubercles is seldom more than 30 (range, 18-28; Jensen et al.
De exemplu, alcoolul alilic cu efect toxic (9) nu a fost inclus în testul FET.
2001).
Prin urmare, în cazul în care există indicii că metaboliții sau alți produși de transformare relevanți pot fi mai toxici decât compusul părinte, se recomandă, de asemenea, efectuarea testului cu acești metaboliți/produși de transformare, precum și utilizarea rezultatelor la elaborarea concluziilor despre toxicitatea substanței chimice de testare sau, alternativ, se efectuează un alt test care ia în considerare, de asemenea, metabolismul.
The predominant tubercles (in terms of numbers) are present as a single, relatively round structure, with the height approximately equivalent to the radius.
În cazul substanțelor cu o greutate moleculară ≥ 3kDa, cu o structură moleculară foarte voluminoasă și în cazul substanțelor care provoacă o eclozare întârziată care ar putea împiedica sau reduce expunerea după eclozare, nu se așteaptă ca embrionii să fie sensibili din cauza biodisponibilității limitate a substanței și se recomandă alte teste de toxicitate mai adecvate.
Most reproductively-active males also have, at least some, tubercles which are enlarged and pronounced such that they are indistinguishable as individual structures.
Pentru ca rezultatele testului să fie valide, se aplică următoarele criterii:
Some types of endocrine-disrupting chemicals can cause the abnormal occurrence of certain secondary sex characteristics in the opposite sex; for example, androgen receptor agonists, such as 17α-methyltestosterone or 17β-trenbolone, can cause female fathead minnows to develop nuptial tubercles (Smith 1974; Ankley et al.
Rata generală de fertilizare a ouălor colectate trebuie să fie ≥ 70 % în lotul testat.
2001; 2003), while oestrogen receptor agonists may decrease number or size of nuptial tubercles in males (Miles-Richardson et al.
Temperatura apei trebuie să fie menținută la 26 ± 1 °C în camerele de testare în orice moment al testului.
1999; Harries et al.
Supraviețuirea generală a embrionilor din controlul negativ (apă de diluție) și, după caz, din controlul solvent trebuie să fie ≥ 90 % până la sfârșitul perioadei de expunere de 96 de ore.
2000).
Expunerea la controlul pozitiv (de exemplu, 4,0 mg/l 3,4 dichloroanilină pentru peștele-zebră) trebuie să aibă ca rezultat o mortalitate de cel puțin 30 % la sfârșitul perioadei de expunere de 96 de ore.
Below is a description of the characterisation of nuptial tubercles in fathead minnows based on procedures used at the U.S. Environmental Protection Agency lab in Duluth, MN.
Rata de eclozare în controlul negativ (și controlul cu solvent, dacă este cazul) trebuie să fie ≥ 80 % la sfârșitul expunerii de 96 de ore.
Specific products and/or equipment can be substituted with comparable materials available.
La sfârșitul perioadei de expunere de 96 de ore, concentrația de oxigen dizolvat în controlul negativ și concentrația cea mai mare de testare trebuie să fie ≥ 80 % din saturație.
Viewing is best accomplished using an illuminated magnifying glass or 3X illuminated dissection scope.
O prezentare generală a condițiilor de întreținere și de testare recomandate este disponibilă în apendicele 2.
View fish dorsally and anterior forward (head toward viewer).
Următoarele echipamente sunt necesare:
Place fish in small Petri dish (e.g. 100 mm in diameter), anterior forward, and ventral down.
Bazine din material chimic inert (de exemplu sticlă) și cu o capacitate adecvată în raport cu încărcarea recomandată (a se vedea „Menținerea peștilor reproducători”, punctul 14).
Focus viewfinder to allow identification of tubercles.
Microscop inversat și/sau binocular cu o capacitate de mărire de cel puțin 80 de ori.
Gently and slowly roll fish from side to side to identify tubercle areas.
În cazul în care temperatura din încăperea utilizată pentru înregistrarea de observații nu poate fi ajustată la 26 ± 1 °C, este necesar un stadiu de mișcare încrucișată cu temperatură controlată sau utilizarea altor metode de menținere a temperaturii;
Count and score tubercles.
Camere de testare; de exemplu, plăci standard cu 24 de godeuri cu o adâncime de aproximativ 20 mm. (a se vedea „Camere de testare”, punctul 11);
Repeat the observation on the ventral head surface by placing the fish dorsal anterior forward in the Petri dish.
de exemplu, folie autoadezivă pentru a acoperi plăcile cu 24 de godeuri;
Observations should be completed within 2 min for each fish.
Incubator sau cameră climatizată cu temperatură controlată, care să permită menținerea unei temperaturi de 26 ± 1 °C în godeuri (sau în camerele de testare);
Tubercle Counting and Rating
Aparat pentru măsurarea oxigenului;
Six specific areas have been identified for assessment of tubercle presence and development in adult fathead minnows.
Echipament pentru determinarea durității și conductivității apei;
A template was developed to map the location and quantity of tubercles present (see end of this appendix).
Captor de gameți: tăvi instrumentare din sticlă, oțel inoxidabil sau alte materiale inerte; plasă metalică (mărimea grilajului 2 ± 0,5 mm) din oțel inoxidabil sau alt material inert care să protejeze ouăle după ce sunt depuse; substrat de reproducere (de exemplu, imitații de plante din material inert) [MT C.48, apendicele 4a (23)];
The number of tubercles is recorded and their size can be quantitatively ranked as: 0- absence, 1-present, 2-enlarged and 3-pronounced for each organism (Fig.
Pipete cu deschideri lărgite pentru a colecta ouă;
1).
Vase din sticlă pentru a pregăti diferite concentrații de testare și apa de diluție (pahare de laborator, flacoane gradate, cilindri gradați și pipete gradate) sau pentru a colecta ouă de la peștele-zebră (de exemplu, pahare de laborator, vase de cristalizare);
Rate 0 — absence of any tubercle.
În cazul în care pentru efectuarea testului sunt utilizate sisteme alternative de expunere, cum ar fi dozarea dinamică (24) sau pasivă (25), sunt necesare facilități și echipamente adecvate.
Rating 1 — present, is identified as any tubercle having a single point whose height is nearly equivalent to its radius.
Se utilizează camere de testare din sticlă sau polistiren (de exemplu, plăci cu 24 de godeuri, cu o capacitate de umplere de 2,5-5 μl per godeu).
Rating 2 — enlarged, is identified by tissue resembling an asterisk in appearance, usually having a large radial base with grooves or furrows emerging from the centre.
În cazul în care se suspectează adsorbția la polistiren (de exemplu, pentru substanțe plane, nepolare cu KOW ridicat), se vor folosi materiale inerte (sticlă) pentru a reduce pierderile datorate adsorbției (26).
Tubercle height is often more jagged but can be somewhat rounded at times.
Camerele de testare trebuie să fie poziționate aleatoriu în incubator.
Rating 3 — pronounced, is usually quite large and rounded with less definition in structure.
Apa și condițiile de testare
At times these tubercles will run together forming a single mass along an individual or combination of areas (B, C and D, described below).
Diluarea apei de întreținere se recomandă în vederea obținerii unor niveluri de duritate tipice pentru mai multe tipuri de apă de suprafață.
Coloration and design are similar to rating 2 but at times are fairly indiscriminate.
Apa de diluție trebuie să fie preparată din apă reconstituită (27).
Using this rating system generally will result in overall tubercle scores of < 50 in a normal control male possessing a tubercle count of 18 to 20 (Jensen et al.
Gradul de duritate rezultat trebuie să fie echivalent cu 100-300 mg/l CaCO3 pentru a preveni precipitarea excesivă a carbonatului de calciu.
2001).
Poate fi utilizată, de asemenea, apă de fântână sau un alt tip de apă cu caracteristici similare.
The actual number of tubercles in some fish may be greater than the template boxes for a particular rating area.
Apa reconstituită poate fi adaptată în apă de întreținere cu duritate scăzută prin diluarea cu apă deionizată până la un raport de 1:5 până la o duritate minimă de 30-35 mg/l CaCO3.
If this happens, additional rating numbers may be marked within, to the right or to the left of the box.
Apa se aerează la saturația oxigenului înaintea adăugării substanței chimice de testare.
The template therefore does not need to display symmetry.
Temperatura trebuie menținută la 26 ± 1 °C, în toate godeurile, pe întreaga durată a testului.
An additional technique for mapping tubercles which are paired or joined vertically along the horizontal plane of the mouth could be done by double-marking two tubercle rating points in a single box.
Valoarea pH-ului trebuie să se situeze între 6,5 și 8,5 și să nu varieze cu mai mult de 1,5 unități pe parcursul testului.
Mapping regions:
Dacă nu se estimează că pH-ul va rămâne în acest interval, ajustarea pH-ului trebuie realizată înainte de începutul testului.
A — Tubercles located around eye.
Se recomandă ca reglarea pH-ului să se efectueze astfel încât concentrația soluției stoc să nu fie schimbată semnificativ și să nu apară nicio reacție chimică sau precipitare a substanței chimice de testare.
Mapped dorsal to ventral around anterior rim of eye.
Se recomandă utilizarea de hidrogen clorurat (HCl) și hidroxid de sodiu (NaOH) pentru corectarea pH-ului în soluțiile care conțin substanța chimică de testare.
Commonly multiple in mature control males, not present in control females, generally paired (one near each eye) or single in females exposed to androgens.
Soluțiile de testare a concentrațiilor selectate pot fi preparate, de exemplu, prin diluarea unei soluții stoc.
B — Tubercles located between nares, (sensory canal pores).
Soluțiile stoc se prepară de preferință prin simpla amestecare sau agitare a substanței chimice de testare în apa de diluție prin mijloace mecanice (de exemplu, agitare și/sau ultrasunete).
Normally in pairs for control males at more elevated levels (2- enlarged or 3- pronounced) of development.
În cazul în care substanța chimică de testare este greu de dizolvat în apă, se vor respecta procedurile descrise în Documentul de orientare al OCDE nr.
Not present in control females with some occurrence and development in females exposed to androgens.
23 privind manipularea substanțelor și amestecurilor dificile (28).
C — Tubercles located immediately anterior to nares, parallel to mouth.
Utilizarea solvenților trebuie evitată, dar aceștia pot fi necesari în anumite situații pentru a produce o soluție stoc cu o concentrație corespunzătoare.
Generally enlarged or pronounced in mature control males.
În cazul în care se utilizează un solvent pentru a contribui la prepararea soluției stoc, concentrația sa finală nu trebuie să depășească 100 μl/l și trebuie să fie aceeași în toate vasele de testare.
Present or enlarged in less developed males or androgen-treated females.
Dacă se utilizează un solvent, este necesar un grup de control suplimentar cu solvent.
D — Tubercles located parallel along mouth line.
Întreținerea peștilor reproducători
Generally rated developed in control males.
Pentru producția de ouă, se folosește un efectiv de reproducere de pești-zebră neexpuși de tip sălbatic, cu o rată de fertilizare a ouălor bine documentată.
Absent in control females but present in androgen-exposed females.
Peștii nu trebuie să prezinte simptome de infecție și de maladie sesizabile din punct de vedere macroscopic și nu trebuie să fi fost supuși unui tratament medicamentos (pentru afecțiuni acute sau profilactic) timp de 2 luni înainte de eliberarea gameților.
E — Tubercles located on lower jaw, close to mouth, usually small and commonly in pairs.
Peștii reproducători sunt ținuți în acvarii cu o capacitate de încărcare recomandată de 1 l de apă per pește și o perioadă fixă de expunere la lumină de 12-16 ore (29)(30)(31)(32)(33).
Varying in control or treated males, and treated females.
Ratele optime de filtrare trebuie ajustate; se vor evita ratele de filtrare excesive care determină perturbarea masivă a apei.
F — Tubercles located ventral to E. Commonly small and paired.
Pentru condițiile de hrănire, a se vedea apendicele 2.
Present in control males and androgen-exposed females.
Surplusul de hrană trebui evitat, iar calitatea apei și curățenia acvariilor trebui monitorizate regulat și readuse la starea inițială, dacă este necesar.
Tubercle Template:
Testarea competenței
Numerical Rating
Ca substanță de referință, 3,4-dicloranilina [utilizată în studiile de validare (1)(2)] trebuie testată într-un interval complet concentrație-răspuns pentru a verifica sensibilitatea sușei de pește utilizată, de preferință de două ori pe an.
Date
Pentru orice laborator care stabilește inițial această determinare, se va folosi substanța chimică de referință.
resent
Un laborator poate utiliza această substanță chimică pentru a-și demonstra competența tehnică în ceea ce privește efectuarea determinării înainte de transmiterea datelor în scopuri de reglementare.
Total Score
Producția de ouă
nlarged
Ouăle de pește-zebră pot fi produse prin grupurile de eliberare a gameților (în acvarii individuale de eliberare a gameților) sau prin eliberarea de gameți în masă (în bazine de întreținere).
ronounced
În cazul grupurilor de eliberare a gameților, masculii și femelele (de exemplu, într-un raport de 2:1) dintr-un grup de reproducere sunt plasați în bazine de eliberare a gameților cu câteva ore înainte de apusul soarelui, în ziua anterioară testului.
Appendix 5B
Întrucât grupurile de pești-zebră de eliberare a gameților ar putea ocazional să nu poată elibera gameți, este recomandată utilizarea în paralel a cel puțin trei acvarii de eliberare a gameților.
ASSESSMENT OF SECONDARY SEX CHARACTERISTICS IN MEDAKA FOR THE DETECTION OF CERTAIN ENDOCRINE ACTIVE CHEMICALS
Pentru a evita influențele genetice, ouăle sunt colectate de la cel puțin trei grupuri de reproducere, amestecate și selectate în mod aleatoriu.
Below is a description of the measurement of papillary processes [1], which are the secondary sex characteristics in medaka (Oryzias latipes).
Pentru colectarea ouălor, se plasează captoare de gameți în bazinele de eliberare a gameților sau în bazinele de întreținere înainte de apusul soarelui în ziua anterioară testului sau înainte de răsăritul soarelui în ziua testului.
After the excision of the liver (Appendix 6), the carcass is placed into a conical tube containing about 10 ml of 10 % neutral buffered formalin (upside: head, downside: tail).
Pentru a preveni prădarea ouălor de către peștii-zebră adulți, captoarele de gameți sunt acoperite cu plasă metalică inertă cu o dimensiune adecvată a ochiurilor (aproximativ 2 ± 0,5 mm).
If the gonad is fixed in a solution other than 10 % neutral buffered formalin, make a transverse cut across the carcass between anterior region of anal fin and anus using razor, taking care not to harm the gonopore and gonad itself (Fig.3).
Dacă se consideră că este necesar, de plasa metalică se fixează plante artificiale din materiale inerte (de exemplu, plastic sau sticlă) ca stimuli pentru eliberarea de gameți (3)(4)(5)(23)(35).
Place the cranial side of the fish body into the fixative solution to preserve the gonad, and the tail side of the fish body into the 10 % neutral buffered formalin as described above.
Trebuie folosite materiale din plastic alterat care nu dezalcalinizează (de exemplu, ftalați).
After placing the fish body into 10 % neutral buffered formalin, grasp the anterior region of the anal fin with tweezers and fold it for about 30 seconds to keep the anal fin open.
Împerecherea, eliberarea de gameți și fertilizarea au loc în primele 30 de minute după răsăritul soarelui, iar captoarele de gameți cu ouăle colectate pot fi îndepărtate cu grijă.
When grasping the anal fin with tweezers, grasp a few fin rays in the anterior region with care not to scratch the papillary processes.
Se recomandă clătirea ouălor cu apă reconstituită după colectarea acestora din captoare.
After keeping the anal fin open for about 30 seconds, store the fish body in 10 % neutral buffered formalin at room temperature until the measurement of the papillary processes (measurement should be conducted after fixing for at least 24 hours).
Diferențierea ouălor
Measurement
La 26 °C, ouăle fertilizate sunt supuse primei divizări după aproximativ 15 minute, iar divizările consecutive sincrone formează 4, 8, 16 și 32 de blastomere (a se vedea apendicele 3) (35).
After fixing the fish body in the 10 % neutral buffered formalin for at least 24 hours, pick up the fish carcass from the conical tube and wipe the formalin on the filter paper (or paper towel).
În aceste etape, ouăle fertilizate pot fi identificate în mod clar prin dezvoltarea unei blastule.
Place the fish abdomen side up.
Douăzeci de embrioni per concentrație (un embrion per godeu) sunt expuși substanței chimice de testare.
Then cut the anal fin using small dissection scissors carefully (it is preferable to cut the anal fin with small amount of pterygiophore).
Expunerea trebuie să fie de așa natură încât ± 20 % din concentrația chimică nominală să se mențină pe toată durata testului.
Grasp the anterior region of the severed anal fin with tweezers and put it on a glass slide with a several drops of water.
Dacă acest lucru nu este posibil într-un sistem static, se va aplica un interval de reînnoire semistatic flexibil (de exemplu, reînnoire la fiecare 24 de ore).
Then cover the anal fin with a cover glass.
În aceste cazuri, concentrațiile de expunere trebuie să fie verificate ca un minim în concentrația cea mai mare și cea mai scăzută la începutul și la sfârșitul fiecărui interval de expunere (a se vedea punctul 36).
Be careful not to scratch the papillary processes when grasping the anal fin with tweezers.
Dacă nu se poate menține o concentrație de expunere de ± 20 % din concentrațiile nominale, toate concentrațiile trebuie măsurate la începutul și la sfârșitul fiecărui interval de expunere (a se vedea punctul 36).
Count the number of the joint plate with papillary processes using the counter under a biological microscope (upright microscope or inverted microscope).
În momentul reînnoirii, trebuie avut grijă ca embrionii să rămână acoperiți de o cantitate mică din vechile soluții de testare pentru a preveni uscarea lor.
The papillary processes are recognised when a small formation of processes is visible on the posterior margin of joint plate.
Conceptul de testare poate fi adaptat astfel încât să îndeplinească cerințele de testare ale substanțelor respective (de exemplu, sisteme de dozare în regim dinamic (24) sau pasive (25) pentru substanțe ușor degradabile sau cu o capacitate mare de adsorbție (29), sau altele pentru substanțe volatile (36)(37)).
Write the number of joint plate with papillary processes in each fin ray to the worksheet (e.g. first fin ray: 0, second fin ray: 10, third fin ray: 12, etc.) and enter the sum of this number on the Excel spreadsheet by individual fish.
În orice caz, trebuie luate măsuri pentru a reduce la minimum orice tip de stres asupra embrionilor.
If necessary, take a photograph of the anal fin and count the number of joint plate with papillary processes on the photograph.
Camerele de testare trebuie să fie condiționate timp de cel puțin 24 de ore cu soluțiile de testare înainte de începerea testului.
After the measurement, put the anal fin into the conical tube described in (1) and store it.
Condițiile de testare sunt prezentate pe scurt în apendicele 2.
Fig.1.
În mod normal, sunt necesare cinci concentrații ale substanței chimice de testare, spațiate de un factor constant care nu depășește 2,2 pentru a îndeplini cerințele statistice.
Diagram showing sexual difference in shape and size of the anal fin.
În cazul în care se utilizează mai puțin de cinci concentrații, se va prezenta justificarea alegerii.
A, male; B, female.
Cele mai mari concentrații de testare trebuie să aibă, de preferință, drept rezultat o letalitate de 100 %, iar cea mai scăzută concentrație de testare trebuie de preferință să nu producă niciun efect observabil, astfel cum este definit la punctul 28.
Fig.2.
Un test de stabilire a intervalului înainte de testul definitiv permite selectarea unui interval adecvat de concentrații.
A, Processes on joint plates of anal fin-ray.
Stabilirea intervalului se efectuează în mod obișnuit folosind zece embrioni per concentrație.
J.P., joint plate; A.S., axial space; P., process.
Următoarele instrucțiuni se referă la efectuarea testului pe plăci cu 24 de godeuri.
B, Distal extremity of fin-ray.
În cazul în care se folosesc camere de testare diverse (de exemplu, vase mici Petri) sau se testează mai multe concentrații, instrucțiunile trebuie ajustate corespunzător.
Actinotrichia (Act.) are on the tip.
Detalii și instrucțiuni vizuale pentru alocarea concentrațiilor pe plăcile cu 24 de godeuri sunt disponibile la punctul 27 și în apendicele 4 figura 1.
Fig.3.
Sunt necesare controale cu apă de diluție în calitate de control negativ și plăci de control intern.
Photograph of fish body showing the cut site when the gonad is fixed in the fixing solution other than 10 % neutral buffered formalin.
Dacă se observă mai mult de 1 embrion mort în placa de control intern, placa este respinsă, reducând astfel numărul de concentrații utilizate pentru a deriva LC50.